ES2614864T3 - Tratamientos para trastornos gastrointestinales - Google Patents

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Angelika Fretzen
Hong Zhao
Robert SOLINGA
Vladimir VOLCHENOK
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Abstract

Un péptido o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde el péptido comprende la estructura de aminoácidos de:**Fórmula**

Description

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DESCRIPCION
Tratamientos para trastornos gastrointestinales Campo de la invencion
Esta invencion se refiere a peptidos, composiciones y su uso en el tratamiento de trastornos gastrointestinales. Antecedentes
Los trastornos gastrointestinales (GI) incluyen el smdrome del intestino irritable (SII) que es un trastorno cronico comun del intestino que afecta de 20 a 60 millones de personas solo en EE.UU. (Lehman Brothers, "Global Healthcare-Irritable bowel syndrome industry update", Septiembre 1999). El SII es el trastorno mas comun diagnosticado por gastroenterologos y da cuenta de 12% de las visitas a medicos de atencion primaria (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668). En los EE.UU. el impacto economico del SII se calcula en 25 mil millones de dolares anuales, por costes directos de atencion sanitaria y costes indirectos de absentismo laboral (Talley 1995, Gastroenterology 109:1736-1741). Los pacientes con SII tienen tres veces mas absentismo laboral y refieren una calidad de vida reducida. Hay una gran necesidad medica no satisfecha para los pacientes que sufren SII, puesto que existen pocas opciones de prescripcion para tratar el SII.
Los pacientes con SII sufren dolor abdominal y un patron intestinal alterado. Se han definido tres subgrupos de pacientes con SII basados en el habito intestinal predominante: smdrome del intestino irritable con estrenimiento predominante (SII-e), smdrome del intestino irritable con diarrea predominante (SII-d) o alternancia entre los dos smdromes de intestino irritable (SII-a). Los calculos de los individuos que padecen SII-e esta en el intervalo de 2050% de los pacientes con SII con el 30% citado con frecuencia. A diferencia de los otros dos subgrupos que tienen una proporcion similar por genero, el SII-e es mas comun en mujeres (proporcion 3:1) (Talley et al. 1995, Am J Epidemiol 142:76-83).
La definicion y los criterios de diagnostico para el SII se han formalizado en los "Criterios de Roma" (Drossman et al. 1999, Gut 45:Suppl II: 1-81), que estan bien aceptados en la practica clmica. Recientemente, ha habido una creciente evidencia de una funcion de la inflamacion en la etiologfa del SII. Los informes indican que los subconjuntos de pacientes con SII tienen aumentos pequenos pero significativos de celulas inflamatorias colonicas y mastocitos, oxido mtrico (NO) y sintasa inducible (iNO) mayores, y expresion alterada de citoquinas inflamatorias (revisado por Talley 2000, Medscape Coverage of DDW week).
Los trastornos gastrointestinales tambien pueden incluir estrenimiento, en donde tanto como 34 millones de americanos sufren smtomas asociados con estrenimiento cronico (EC) y 8,5 millones de pacientes han buscado tratamiento. Los pacientes con EC a menudo experimentan heces duras y grumosas, esfuerzo durante la defecacion, una sensacion de evacuacion incompleta, y menos de tres movimientos intestinales a la semana. La incomodidad e hinchamiento del EC afectan significativamente a la calidad de vida de los pacientes, alterando su capacidad de trabajo y participacion en actividades diarias tfpicas.
La mitad de los pacientes con EC no estan satisfechos con los tratamientos actualmente disponibles para el EC. Por lo tanto, siguen siendo necesarios nuevos compuestos y metodos para tratar el EC.
Las patentes de EE.UU. 7.304.036 y 7.371.727 describen peptidos que actuan como agonistas del receptor de la guanilato ciclasa C (GC-C) para el tratamiento de trastornos gastrointestinales. Un peptido particular descrito es la linaclotida, que consiste en la siguiente secuencia de aminoacidos: Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr. Estas patentes tambien describen metodos para preparar la linaclotida y peptidos relacionados.
La linaclotida tiene la estructura de aminoacidos de:
imagen1
La linaclotida se administra por via oral, y actualmente esta en ensayos clmicos para el tratamiento del smdrome del intestino irritable con estrenimiento (SII-e) y el estrenimiento cronico (EC), tiene numerosos efectos en la fisiologfa GI que incluyen: (1) menor dolor visceral, (2) menor hinchamiento, y (3) mayor transito GI, lo que puede conducir a mayor frecuencia de heces y mejor consistencia de las heces. Administrada por via oral, la linaclotida actua localmente activando la gC-C en la superficie luminal; no hay niveles detectables de linaclotida vistos sistemicamente despues de la administracion oral en niveles de dosis terapeuticos. Por lo tanto, los resultados de los ensayos clmicos de la linaclotida, asf como los estudios preclmicos que se han hecho con linaclotida y peptidos relacionados, sugieren que se pueden usar agonistas del peptido GC-C de forma terapeutica.
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La presente invencion presenta peptidos que estan modificados en sus grupos a-amina en derivados de cetona, que son capaces de activar y/o unirse a receptores de guanilato ciclasa C (GC-C) con diferentes afinidades. La presente invencion tambien presenta peptidos que pueden estar modificados en sus enlaces cistema con atomos de azufre adicionales y que se pueden modificar adicionalmente en sus grupos a-amina. La GC-C es un regulador clave en mairnferos de la funcion intestinal, aunque se han detectado niveles bajos de GC-C en otros tejidos. La GC-C responde a las hormonas endogenas, guanilina y uroguanilina, y a peptidos bacterianos entericos de la familia de enterotoxinas termoestables (peptido ST). Cuando los agonistas se unen a la GC-C, hay un aumento del segundo mensajero, GMP dclico (c-GMP), y un aumento de la secrecion de cloruro y bicarbonato, dando como resultado un aumento en la secrecion de fluido intestinal. En algunos ejemplos de la presente invencion, los peptidos descritos en la presente memoria pueden producir un aumento mayor de los niveles de c-GMP y proporcionar una opcion terapeutica para tratar trastornos gastrointestinales.
Resumen
La presente invencion describe peptidos, composiciones, y su uso en el tratamiento de trastornos y afecciones gastrointestinales, que incluyen, pero no se limitan al smdrome del intestino irritable (SII) trastornos de motilidad gastrointestinal, estrenimiento, trastornos gastrointestinales funcionales, enfermedad de reflujo gastroesofagico (GERD), reflujo duodenogastrico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria intestinal, acidez estomacal funcional, dispepsia, dolor visceral, gastroparesia, pseudoobstruccion intestinal cronica (o pseudoobstruccion colonica), y otras afecciones y trastornos descritos en la presente memoria que usan peptidos y composiciones que activan el receptor de la guanilato ciclasa C (GC-C).
Un aspecto de la presente invencion proporciona un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptable, en donde el peptido comprende la secuencia de aminoacidos Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde la a-amina del aminoacido Cys1 del peptido se desamina por reacciones oxidativas o enzimaticas (el "peptido Cys'-a-cetona").
En una realizacion, el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen2
o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
En otra realizacion, el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen3
o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
Los detalles de una o mas realizaciones de la invencion se exponen en la descripcion adjunta.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1 muestra la union espedfica de peptidos de ejemplo de la presente invencion a receptores GC-C de superficie celular en celulas T84 en un ensayo de union competitiva de radioligando.
La figura 2 muestra la respuesta a la dosis de peptidos de ejemplo de la presente invencion en un ensayo de cGMP en celulas T84.
La figura 3 demuestra un ejemplo de un analisis de peptidos de ejemplo por RP-HPLC, en donde "Cys1-a- cetona" se refiere al derivado cetonico de linaclotida modificado en su grupo a-amina N-terminal.
Las figuras se proporcionan a modo de ejemplo y no se pretende que limiten el alcance de la presente invencion.
Descripcion detallada
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La guanilato ciclasa C (GC-C) es un receptor transmembrana que esta situado en la superficie apical de las celulas epiteliales en el estomago y el intestino. El receptor tiene un dominio de union del ligando extracelular, una sola region transmembrana y un dominio de guanilil ciclasa C-terminal. Cuando un ligando se une al dominio extracelular de la GC-C, el dominio catalftico intracelular cataliza la produccion de cGMP a partir de GTP. In vivo, este aumento del cGMP intracelular inicia una cascada de sucesos que conduce a una mayor secrecion de cloruro y bicarbonato en la luz intestinal, mayor pH luminal, menos absorcion de sodio luminal, mayor secrecion de fluidos y aceleracion del transito intestinal. El cGMP es secretado bidireccionalmente desde el epitelio a la mucosa y la luz. Los peptidos y composiciones de la presente invencion se unen al receptor GC-C intestinal que es un regulador del equilibrio de fluidos y electrolftico en el intestino.
En algunas circunstancias puede ser conveniente tratar a los pacientes con un peptido variante o modificado que se une a y activa los receptores GC-C intestinales, pero es menos activo o mas activo que la forma no variante de un peptido. La actividad reducida puede venir de la menor afinidad por el receptor o una menor capacidad para activar el receptor una vez unido o menor estabilidad del peptido. La mayor actividad puede venir de la mayor afinidad por el receptor o una mayor capacidad para activar el receptor una vez unido o mayor estabilidad del peptido.
Descripcion de peptidos de ejemplo:
En diferentes realizaciones, un peptido comprende la secuencia de aminoacidos Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde la a-amina del aminoacido Cys1 del peptido se desamina por reacciones oxidativas o catalisis enzimatica. Este peptido se puede producir, por ejemplo, por desaminacion oxidativa de la linaclotida, que implica el ataque nucleofilo de la a-amina del aminoacido Cys1 que forma un producto base de Schiff, seguido de la tautomerizacion prototropica de la base de Schiff, y finalmente hidrolisis en acido para dar la cetona a- Cys1 y su hidrato en equilibrio. Esta mezcla de los dos peptidos se denominara "Cys1-a-cetona" o "Cys1-cetona". Estos peptidos pueden ser tautomeros y las diferentes mezclas tautomeras de diferentes proporciones pueden ser utiles y estan dentro del alcance de la presente invencion.
En varias realizaciones, el peptido comprende la secuencia de aminoacidos Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde la a-amina del aminoacido Cys1 del peptido esta desaminado.
En una realizacion, el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen4
o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
En otra realizacion, el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen5
o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
Un experto en la tecnica reconocera que el peptido que comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen6
podna estar en equilibrio con su forma de diol geminal monohidrato que comprende la estructura de aminoacidos de:
imagen7
Como se usa en la presente memoria, la expresion "peptido Cys1-a-cetona" de estructura
imagen8
se pretende que incluya tanto la estructura de Cys1-a-cetona como la forma de diol geminal monohidrato.
5 Se describe un peptido que comprende la secuencia de aminoacidos Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr en donde un atomo de azufre adicional puede estar unido a uno cualquiera de los seis azufres de cisteinilo.
El peptido puede comprender un producto trisulfuro de linaclotida que se forma por la adicion de un solo atomo de azufre a uno de los tres enlaces disulfuro de cisteinilos en la linaclotida (denominado en la presente memoria el 10 "producto trisulfuro de la linaclotida" o el "peptido trisulfuro de linaclotida").
El peptido puede comprender la estructura de aminoacidos seleccionada de:
imagen9
imagen10
y
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En una realizacion adicional, el peptido consiste en la secuencia de aminoacidos Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr, en donde la a-amina del aminoacido Cys1 del peptido esta desaminado.
En una realizacion, el peptido consiste en la estructura de aminoacidos de:
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imagen12
o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
En una realizacion, el peptido consiste en la estructura de aminoacidos de:
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o una de sus sales farmaceuticamente aceptables.
El peptido puede consistir en la secuencia de aminoacidos de Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr en donde un atomo de azufre adicional puede estar unido a uno cualquiera de los seis azufres de cisteinilos.
El peptido puede consistir en la estructura de aminoacidos seleccionada de:
imagen14
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imagen16
En algunas realizaciones, el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable activa el receptor guanilato ciclasa C.
En otras realizaciones, el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende 30 o menos aminoacidos.
En realizaciones adicionales, el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende 20 o menos aminoacidos.
En otras realizaciones, el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende un peptido en donde preceden menos de cinco aminoacidos al primer resto de Cys de la secuencia de aminoacidos.
En algunas realizaciones, se afsla el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable.
En otras realizaciones, se purifica el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable.
En algunas realizaciones, se proporciona una sal farmaceuticamente aceptable del peptido. En algunos casos, la sal farmaceuticamente aceptable es una sal de cloruro.
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Peptidos variantes o modificados
El peptido puede incluir dos Cys que forman un enlace disulfuro, el peptido incluye cuatro Cys que forman dos
enlaces disulfuro, o el peptido incluye seis Cys que forman tres enlaces disulfuro.
El peptido puede incluir dos Cys que forman un enlace trisulfuro, el peptido incluye cuatro Cys que forman dos
enlaces trisulfuro, o el peptido incluye seis Cys que forman tres enlaces trisulfuro.
En algunos peptidos, uno o ambos miembros de uno o ambos pares de restos Cys que normalmente forman un enlace disulfuro se pueden sustituir por homocistema, penicilamina, 3-mercaptoprolina (Kolodziej et al. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); p,p-dimetilcistema (Hunt et al. 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) o acido diaminopropionico (Smith et al. 1978 J Med Chem 21:117) para formar entrecruzamientos internos alternativos en las posiciones de los enlaces disulfuro normales. Los enlaces disulfuro se pueden sustituir por entrecruzamiento de hidrocarburos (Schafmeister et al. 2000 J Am Chem Soc 122:5891, Patgiri et al. 2008 Acc Chem Res 41:1289, Henchey et al. 2008 Curr Opin Chem Biol 12:692).
Produccion de peptidos
Los peptidos o precursores de peptidos de la invencion se pueden producir de forma recombinante en cualquier sistema de expresion de protemas conocido, incluyendo, sin limitacion, bacterias (p. ej., E. coli o Bacillus subtilis), sistemas de celulas de insecto (p. ej., sistema de celulas Sf9 de Drosophila), sistemas de celulas de levadura (p. ej., S. cerevisiae, S. saccharomyces) o sistemas de expresion de hongos filamentosos o sistemas de expresion de celulas animales (p. ej., sistemas de expresion de celulas de mairnfero). Los peptidos producidos de forma recombinante se pueden modificar qmmicamente despues de ser expresados para formar los peptidos de la invencion.
Si el peptido o variante del peptido se va a producir de forma recombinante, p. ej., E. coli, la molecula de acido nucleico que codifica el peptido puede codificar tambien una secuencia lfder que permite la secrecion del peptido maduro de la celula. Por lo tanto, la secuencia que codifica el peptido puede incluir la presecuencia y la prosecuencia, por ejemplo, de un peptido ST bacteriano que se encuentra de forma natural. El peptido maduro secretado se puede purificar del medio de cultivo.
La secuencia que codifica un peptido descrito en la presente memoria, se puede insertar en un vector capaz de suministrar y mantener la molecula de acido nucleico en una celula bacteriana. La molecula de ADN se puede insertar en un vector de replicacion autonoma (los vectores adecuados incluyen, por ejemplo, pGEM3Z y pcDNA3, y derivados de los mismos). El acido nucleico vector puede ser un ADN bacteriano o de bacteriofago tal como bacteriofago lambda o M13 y derivados de los mismos. La construccion de un vector que contiene un acido nucleico descrito en la presente memoria puede ir seguida de la transformacion de una celula hospedante tal como una bacteria. Los hospedantes bacterianos adecuados incluyen, pero no se limitan a E. coli, B. subtilis, Pseudomonas y Salmonella. La construccion genetica tambien incluye, ademas de la molecula de acido nucleico codificante, elementos que permiten la expresion, tales como un promotor y secuencias reguladoras. Los vectores de expresion pueden contener secuencias de control transcripcional que controlan el inicio de la transcripcion, tales como secuencias promotoras, potenciadoras, operadoras y represoras. Los expertos en la tecnica conocen bien una variedad de secuencias de control transcripcional. El vector de expresion tambien puede incluir una secuencia reguladora de la transcripcion (p. ej., una secuencia 5' no traducida, una secuencia 3' no traducida o un sitio de entrada al ribosoma interno). El vector puede ser capaz de replicacion autonoma o se puede integrar en el ADN del hospedante para asegurar la estabilidad durante la produccion del peptido.
La secuencia codificante de protema que incluye un peptido descrito en la presente memoria, tambien se puede fusionar con un acido nucleico que codifica un marcador de afinidad peptfdica, p. ej., glutation S-transferasa (GST), protema de union E a maltosa, protema A, marcador FLAG, hexa-histidina, marcador myc o el marcador HA de influenza, con el fin de facilitar la purificacion. La fusion del marcador de afinidad o indicador une el marco de lectura del peptido de interes con el marco de lectura del gen que codifica el marcador de afinidad de modo que se genera una fusion traduccional. La expresion del gen de fusion da como resultado la traduccion de un solo peptido que incluye tanto el peptido de interes como el marcador de afinidad. En algunos casos donde se usan marcadores de afinidad, la secuencia de ADN que codifica un sitio de reconocimiento de proteasa se fusionara entre los marcos de lectura para el marcador de afinidad y el peptido de interes.
Las construcciones geneticas y metodos adecuados para la produccion de formas inmaduras y maduras de los peptidos y variantes descritas en la presente memoria en sistemas de expresion de protemas distintos de bacterias, y bien conocidos para los expertos en la tecnica, tambien se pueden usar para producir peptidos en un sistema biologico.
En otras realizaciones, los peptidos que contienen aminoacidos no incorporados normalmente por la maquinaria de traduccion y descritos anteriormente se pueden producir de forma recombinante por metodos de modificacion del ARNt. Los metodos para la modificacion del ARNt incluyen, pero no se limitan a modificar el anticodon, el sitio de union del aminoacido y/o el brazo aceptor para permitir la incorporacion de aminoacidos no naturales y/o arbitrarios, son bien conocidos en la tecnica (Biochem. Biophys. Res. Comm. (2008) 372: 480-485; Chem. Biol. (2009) 16:3237
36; Nat. Methods (2007) 4:239-44; Nat. Rev. Mol. Cell Biol. (2006) 7:775-82; Methods (2005) 36:227-238; Methods (2005) 36:270-278; Annu. Rev. Biochem. (2004) 73:147-176; Nuc. Acids Res. (2004) 32:6200-6211; Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2003) 100:6353-6357; Royal Soc. Chem. (2004) 33:422-430).
Los peptidos se pueden producir qmmicamente. Los peptidos se pueden sintetizar por una serie de metodos 5 diferentes que incluyen smtesis en solucion y en fase solida, usando la proteccion con BOC o FMOC tradicional. Por ejemplo, el peptido se puede sintetizar en resina de 2-clorotritilo o de Wang usando acoplamientos de aminoacidos consecutivos. Se pueden usar los siguientes grupos protectores: fluorenilmetiloxicarbonilo o terc-butiloxicarbonilo (grupos alfa-amino, extremo N); tritilo o terc-butilo (grupos tiol de Cys); terc-butilo (Y-carboxilo del acido glutamico y el grupo hidroxilo de la treonina, si estan presentes); y tritilo (funcion p-amida de la cadena lateral de la asparagina y 10 el grupo fenolico de la tirosina, si estan presentes). El acoplamiento se puede realizar con DIC y HOBt en presencia de una amina terciaria, y el peptido se puede desproteger y escindir del soporte solido usando el coctel K (acido trifluoroacetico al 81%, fenol al 5%, tioanisol al 5%, 1,2-etanoditiol al 2,5%, agua al 3%, sulfuro de dimetilo al 2%, yoduro amonico al 1,5% en p/p). Despues de eliminar el acido trifluoroacetico y otros productos volatiles, el peptido se puede precipitar usando un disolvente organico. Los enlaces disulfuro entre restos de Cys se pueden formar 15 usando sulfoxido de dimetilo (Tam et al. (1991) J. Am. Chem. Soc. 113:6657-62) o usando una estrategia de oxidacion. El peptido resultante se puede purificar por cromatograffa de fase inversa y liofilizar. Los peptidos sintetizados qmmicamente se pueden modificar qmmicamente despues de sintetizarlos para formar los peptidos de la invencion.
Estos peptidos se pueden hacer, aislar o usar en forma de la base o como sus sales farmaceuticamente aceptables. 20 Los ejemplos de sales incluyen, sin limitacion, sales de acetato, cloruro, sulfato y fosfato del peptido.
Composiciones de peptidos y agonistas del receptor GC-C
En otro aspecto, se proporcionan composiciones farmaceuticas en donde los peptidos, solos o en combinacion, se pueden combinar con cualquier medio o vehfculo farmaceuticamente aceptable.
En algunas realizaciones, la composicion farmaceutica comprende un peptido o su sal farmaceuticamente aceptable 25 como se describe en la presente memoria. La composicion farmaceutica puede comprender dos o mas peptidos o sus sales farmaceuticamente aceptables descritos en la presente memoria.
En algunas realizaciones, la composicion farmaceutica comprende dos o mas peptidos seleccionados de:
i. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
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ii. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
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o
35 iii. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la
estructura de aminoacidos de:
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5
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25
En otras realizaciones, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
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y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
imagen21
y en donde la composicion farmaceutica comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0,5% en peso del peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
imagen22
y en donde la composicion farmaceutica comprende aproximadamente 0,01-9% en peso (p. ej., aproximadamente 0,01-8% en peso, aproximadamente 0,01-7% en peso, aproximadamente 0,01-6% en peso, aproximadamente 0,015% en peso, aproximadamente 0,01-4% en peso, aproximadamente 0,01-3% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-1% en peso) del peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comparado con el peso de la linaclotida.
En otras realizaciones, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
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y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
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y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0,5% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales 5 farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
imagen25
y en donde la composicion farmaceutica comprende aproximadamente 0,01-9% en peso (p. ej., aproximadamente 0,01-8% en peso, aproximadamente 0,01-7% en peso, aproximadamente 0,01-6% en peso, aproximadamente 0,015% en peso, aproximadamente 0,01-4% en peso, aproximadamente 0,01-3% en peso, aproximadamente 0,01-2% 10 en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-1% en peso) del peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comparado con el peso de la linaclotida.
En otras realizaciones, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido consiste en la estructura de aminoacidos de:
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15 y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o en peso comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido consiste en una estructura de aminoacidos de:
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20 y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0,5% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
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y en donde la composicion farmaceutica comprende aproximadamente 0,01-9% en peso (p. ej., aproximadamente 0,01-8% en peso, aproximadamente 0,01-7% en peso, aproximadamente 0,01-6% en peso, aproximadamente 0,015% en peso, aproximadamente 0,01-4% en peso, aproximadamente 0,01-3% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-1% en peso) del peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comparado con el peso de la linaclotida.
En otras realizaciones, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido consiste en una estructura de aminoacidos de:
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y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido consiste en una estructura de aminoacidos de:
imagen30
y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% o 0,5% en peso comparado con el peso de la linaclotida.
En realizaciones adicionales, la composicion farmaceutica comprende linaclotida y un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido consiste en una estructura de aminoacidos de:
imagen31
y en donde la composicion farmaceutica comprende aproximadamente 0,01-9% en peso (p. ej., aproximadamente 0,01-8% en peso, aproximadamente 0,01-7% en peso, aproximadamente 0,01-6% en peso, aproximadamente 0,015% en peso, aproximadamente 0,01-4% en peso, aproximadamente 0,01-3% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-2% en peso, aproximadamente 0,01-1% en peso) del peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comparado con el peso de la linaclotida.
En algunas realizaciones, el peptido Cys1-a-cetona comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido Cys1-a-cetona comprende de aproximadamente 0,01% a
aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion, o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion. En realizaciones de ejemplo adicionales, el peptido Cys1-a-cetona comprende de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 2% en peso de la 5 composicion.
En realizaciones adicionales, se proporciona un metodo de tratamiento de un trastorno gastrointestinal en un paciente que lo necesite, que comprende administrar una composicion farmaceutica que comprende linaclotida y un peptido Cys1-a-cetona.
Se describe una composicion farmaceutica que comprende linaclotida y un producto de trisulfuro de linaclotida. El 10 producto de trisulfuro de linaclotida se forma en la adicion de un solo atomo de azufre a uno de los tres enlaces disulfuro de cisteinilo en la linaclotida. Se representan a continuacion tres potenciales estructuras del producto, aunque un experto en la tecnica reconocera que el atomo de azufre puede estar unido a uno cualquiera de los seis azufres de cisteinilo:
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Puede haber una adicion de mas de un atomo de azufre a la linaclotida, que aumentana su peso molecular en 32 UA por atomo de azufre anadido.
En producto de trisulfuro de linaclotida comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, 20 menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion.
En otras realizaciones de ejemplo, el producto de trisulfuro de linaclotida comprende de aproximadamente 0,01% a 25 aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion, o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion. En realizaciones de ejemplo adicionales, el producto de trisulfuro de linaclotida comprende de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 2% en peso de la composicion.
30 Se describe un metodo de tratamiento de un trastorno gastrointestinal en un paciente que lo necesite, que comprende administrar una composicion farmaceutica que comprende linaclotida y un producto de trisulfuro de linaclotida.
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En otras realizaciones, la composicion farmaceutica consiste esencialmente en un peptido o su sal farmaceuticamente aceptable, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
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La expresion "consiste esencialmente en", y variantes de la misma, cuando se usa para referirse a la composicion, se usan en la presente memoria para indicar que la composicion incluye un solo peptido activo y otros aditivos, excipientes y/o componentes farmaceuticamente inactivos (p. ej., polfmeros, aminas primarias con impedimento esterico, cationes, agentes de carga, aglutinantes, vehfculos, excipientes, diluyentes, aditivos disgregantes, lubricantes, disolventes, dispersantes, aditivos de recubrimiento, aditivos de promocion de la absorcion, aditivos de liberacion controlada, aditivos antiapelmazantes, aditivos antimicrobianos, conservantes, aditivos edulcorantes, colorantes, aromas, descantes, plastificantes, colorantes, o similares), y no otro u otros ingredientes farmaceuticamente activos.
En algunas realizaciones, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende linaclotida, un peptido Cys1- a-cetona como se describe en la presente memoria, y uno o mas peptidos seleccionados de:
i. un peptido ("Cys1-IMD") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
hf O
[ Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr
-----------------s—S-----------------1
ii. un peptido de hidrolisis ("Asp7") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
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iii. un peptido de acetilacion ("Cys1-N-Acetilo") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
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iv. un peptido de trisulfuro de linaclotida o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la secuencia de aminoacidos de Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr en donde un atomo de azufre adicional se puede unir a uno cualquiera de los seis azufres de cisteinilos; y
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v. un peptido ("Des-Tyr14") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
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En algunas realizaciones, el peptido Cys1-a-cetona comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 1,5% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido de Cys1- a-cetona comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion, o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En algunas realizaciones, el peptido Cys1-IMD comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3,5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido Cys1-IMD comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En otras realizaciones, el peptido de hidrolisis ("Asp7") comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3,5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido de hidrolisis ("Asp7") comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En algunas realizaciones, el peptido de acetilacion ("Cys1-N-Acetilo") comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3,5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido de acetilacion ("Cys1-N-Acetilo") comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En algunas realizaciones, el peptido de trisulfuro de linaclotida comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3,5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido trisulfuro de linaclotida comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion, o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En algunas realizaciones, el peptido Des-Tyr14 comprende menos de aproximadamente 15% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 10% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 7% en
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peso de la composicion, menos de aproximadamente 5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 4% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3,5% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 3% en peso de la composicion, menos de aproximadamente 2% en peso de la composicion, o menos de aproximadamente 1% en peso de la composicion. En otras realizaciones de ejemplo, el peptido Des-Tyr14 comprende de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 15% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 10% en peso de la composicion, de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 7% en peso de la composicion o de aproximadamente 0,05% a aproximadamente 5% en peso de la composicion.
En algunas realizaciones, la composicion farmaceutica comprende linaclotida, un peptido Cys1-a-cetona, y cualquier concentracion deseada de multfmeros unidos por disulfuro.
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 10% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 7% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 6% en peso de multfmero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 5% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 4% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 3% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 2% en peso de multimero(s).
En algunas realizaciones, la composicion comprende menos de 1% en peso de multimero(s).
Los peptidos descritos en la presente memoria se pueden combinar con cualquier vehmulo o medio farmaceuticamente tolerable, p. ej., disolventes, dispersantes, recubrimientos, agentes de promocion de la absorcion, agentes de liberacion controlada, y uno o mas excipientes inertes que incluyen almidones, polioles, agentes de granulacion, celulosa microcristalina (p. ej., celphere, Celphere beads®), diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes, y similares), etc. Si se desea las dosificaciones en comprimidos de las composiciones descritas se pueden recubrir por tecnicas acuosas o no acuosas convencionales.
Los ejemplos de excipientes para usar como los vehmulos farmaceuticamente aceptables y los vehmulos inertes farmaceuticamente aceptables y los ingredientes adicionales mencionados antes, incluyen, pero no se limitan a aglutinantes, cargas, disgregantes, lubricantes, agentes antimicrobianos y agentes de recubrimiento.
Como se usa en la presente memoria, el termino "aglutinante" se refiere a cualquier aglutinante farmaceuticamente aceptable que se pueda usar en la practica de la invencion. Los ejemplos de aglutinantes farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitacion, un almidon (p. ej., almidon de mafz, almidon de patata y almidon pregelatinizado (p. ej., STARCH 1500® y STARCH 1500 LM®, vendido por Colorcon, Ltd.) y otros almidones), maltodextrina, gelatina, gomas naturales y sinteticas tales como goma arabiga, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa o eter de celulosa y sus derivados (p. ej., metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hdroxietilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa (hipromelosa), etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa, celulosa microcristalina (p. ej. AVICEL™, tal como, AVICEL-PH- 101™, -103™ y -105™, vendido por FMC Corporation, Marcus Hook, PA, EE.UU.)), poli(alcohol vimlico), polivinilpirrolidona (p. ej., polivinilpirrolidona K30, povidona), eter de celulosa y mezclas de los mismos.
Como se usa en la presente memoria, el termino "carga" se refiere a cualquier carga farmaceuticamente aceptable, que se pueda usar en la practica de la invencion. Los ejemplos de cargas farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitacion, talco, carbonato calcico (p. ej., granulos o polvo), fosfato calcico dibasico, fosfato calcico tribasico, sulfato calcico (p. ej., granulos, o polvo), celulosa microcristalina (p. ej., Avicel PH101 o Celphere CP-305), celulosa en polvo, dextratos, caolm, manitol, acido silfcico, sorbitol, almidon (p. ej., Starch 1500), almidon pregelatinizado, lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, isomalt, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, xilitol, mioinositol, y mezclas de los mismos.
Los ejemplos de cargas farmaceuticamente aceptables que se pueden usar en particular para el recubrimiento de peptidos incluyen, sin limitacion, talco, celulosa microcristalina (p. ej., Avicel PH101 o Celphere CP-305), celulosa microfina, celulosa en polvo, dextratos, caolm, manitol, acido silfcico, sorbitol, almidon, almidon pregelatinizado, lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, isomalt, fosfato calcico dibasico, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, xilitol, manitol, mioinositol, y mezclas de los mismos.
Como se usa en la presente memoria, el termino "aditivos" se refiere a cualquier aditivo farmaceuticamente aceptable. Los aditivos farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitacion, disgregantes, aditivos dispersantes, lubricantes, deslizantes, antioxidantes, aditivos de recubrimiento, diluyentes, tensioactivos, aditivos de sabor, humectantes, aditivos que promueven la absorcion, aditivos de liberacion controlada, aditivos antiapelmazantes, agentes antimicrobianos (p. ej., conservantes), colorantes, desecantes, plastificantes y tintes. Como se usa en la presente memoria, un "excipiente" es cualquier aditivo, carga, aglutinante o agente farmaceuticamente aceptable.
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Las composiciones de la presente invencion tambien pueden incluir opcionalmente otros ingredientes terapeuticos, agentes antiapelmazantes, conservantes, agentes edulcorantes, colorantes, aromas, desecantes, plastificantes tintes, deslizantes, antiadherentes, agentes antiestaticos, tensioactivos (agentes humectantes), antioxidantes, agente de recubrimiento-pelfcula, y similares. Cualquiera de dichos ingredientes opcionales debe ser compatible con el compuesto descrito en la presente memoria, para asegurar la estabilidad de la formulacion. La composicion puede contener otros aditivos segun sea necesario, incluyendo, por ejemplo lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, almidon, xilitol, manitol, mioinositol, y similares, e hidratos de los mismos, y aminoacidos, por ejemplo, alanina, glicina y betama, y peptidos y protemas, por ejemplo, albumen.
Las composiciones pueden incluir, por ejemplo, diferentes disolventes adicionales, dispersantes, recubrimientos, aditivos de promocion de la absorcion, aditivos de liberacion controlada, y uno o mas aditivos inertes (que incluyen, por ejemplo, almidones, polioles, aditivos de granulacion, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, aditivos disgregantes, y similares) etc. Si se desea, las dosificaciones en comprimidos de las composiciones descritas se pueden recubrir por tecnicas acuosas o no acuosas convencionales. Las composiciones tambien pueden incluir, por ejemplo, aditivos antiapelmazantes, conservantes, aditivos edulcorantes, colorantes, aromas, desecantes, plastificantes, tintes y similares.
Los disgregantes adecuados incluyen, por ejemplo, agar-agar, carbonato calcico, celulosa microcristalina, croscarmelosa sodica, crospovidona, povidona, polacrilina potasica, glicolato sodico de almidon, almidon de patata o tapioca, otros almidones, almidon pregelatinizado, arcillas, otras alginas, otras celulosa, gomas, y mezclas de los mismos.
Los lubricantes adecuados incluyen, por ejemplo, estearato calcico, estearato magnesico, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, acido estearico, laurilsulfato sodico, talco, aceite vegetal hidrogenado (p. ej., aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de girasol, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja), estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar, gel de sflice Syloid (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD EE.UU.), un aerosol coagulado de sflice sintetica (Evonik Degussa Co., Plano, TX EE.UU.), un dioxido de silicio pirogenico (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA EE.uU.), y mezclas de los mismos.
Los agentes deslizantes incluyen, por ejemplo, leucina, dioxido de silicio coloidal, trisilicato magnesico, celulosa en polvo, almidon, talco y fosfato calcico tribasico.
Los aditivos antiapelmazantes adecuados incluyen, por ejemplo, silicato de calcio, silicato de magnesio, dioxido de silicio, dioxido de silicio coloidal, talco y mezclas de los mismos.
Los aditivos antimicrobianos adecuados que se pueden usar, p. ej., como conservantes para las composiciones de peptidos, incluyen, por ejemplo, cloruro de benzalkonio, cloruro de benzetonio, acido benzoico, alcohol bendlico, butilparabeno, cloruro de cetilpiridinio, cresol, clorobutanol, acido deshidroacetico, etilparabeno, metilparabeno, fenol, alcohol feniletilico, fenoxietanol, acetato fenilmercurico, nitrato fenilmercurico, sorbato potasico, propilparabeno, benzoato sodico, deshidroacetato sodico, propionato sodico, acido sorbico, timersol, timol, y mezclas de los mismos.
Los antioxidantes adecuados incluyen, por ejemplo, BHA (hidroxianisol butilado), BHT (hidroxitolueno butilado), vitamina E, galato de propilo, acido ascorbico y sales o esteres de los mismos, tocoferol y esteres de los mismos, acido alfa-lipoico y beta-caroteno.
Los aditivos de recubrimiento adecuados incluyen, por ejemplo carboximetilcelulosa sodica, acetato-ftalato de celulosa, etilcelulosa, gelatina, esmalte farmaceutico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, metilcelulosa, polietilenglicol, poli(acetato-ftalato de vinilo), laca, sacarosa, dioxido de titanio, cera de carnauba, cera microcristalina y mezclas de los mismos. Los recubrimientos protectores adecuados incluyen Aquacoat (p. ej. dispersion acuosa de etilcelulosa Aquacoat, 15% en p/p, FMC Biopolymer, ECD-30), Eudragit (p. ej., Eudragit E PO PE-EL, Roehm Pharma Polymers) y Opadry (p. ej., dispersion de Opadry AMB, 20% en p/p, Colorcon).
En algunas realizaciones, los aditivos adecuados para la composicion de peptidos incluyen uno o mas de sacarosa, talco, estearato magnesico, crospovidona o BHA.
Las composiciones de la presente invencion tambien pueden incluir otros excipientes, agentes y categonas de los mismos, incluyendo, pero no limitado a L-histidina, Pluronic®, poloxameros (tales como Lutrol® y Poloxamero 188), acido ascorbico, glutation, potenciadores de la permeabilidad (p. ej., lfpidos, colato sodico, acilcarnitina, salicilatos, sales biliares mixtas, micelas de acidos grasos, quelantes, acido graso, tensioactivos, gliceridos de cadena media), inhibidores de proteasa (p. ej., inhibidor de tripsina de soja, acidos organicos), agentes de disminucion del pH y potenciadores de la absorcion eficaces para promover la biodisponibilidad (incluyendo, pero no limitado a los descritos en los documentos US6086918y US5912014), materiales para comprimidos masticables (como dextrosa, fructosa, lactosa monohidrato, lactosa y aspartamo, lactosa y celulosa, maltodextrina, maltosa, manitol, celulosa microcristalina y goma guar, sorbitol cristalino); agentes parenterales (como manitol y povidona); plastificantes (como
sebazato de dibutilo, plastificantes para recubrimientos, poli(acetato-ftalato de vinilo); lubricantes en polvo (como behenato de glicerilo); capsulas de gelatina blanda (como solucion especial de sorbitol); esferas para el recubrimiento (como esferas de azucar); agentes de esferonizacion (como behenato de glicerilo y celulosa microcristalina); agentes de suspension/gelificantes (como carragenano, goma de gelano, manitol, celulosa 5 microcristalina, povidona, glicolato sodico de almidon, goma de xantano); edulcorantes (como aspartamo, aspartamo y lactosa, dextrosa, fructosa, miel, maltodextrina, maltosa, manitol, melazas, sorbitol cristalino, solucion especial de sorbitol, sacarosa); agentes de granulacion en humedo (como carbonato de calcio, lactosa anhidra, monohidrato de lactosa, maltodextrina, manitol, celulosa microcristalina, povidona, almidon), caramelo, carboximetilcelulosa sodica, sabor crema de cereza y sabor cereza, acido cftrico anhidro, acido cftrico, azucar de confitena, rojo DyC n° 33, laca 10 alummica amarillo DyC n° 10, edetato disodico, alcohol etilico al 15%, laca alummica amarillo FDyC n° 6, laca
alummica azul FDyC n° 1, azul FDyC n° 1, laca alummica azul FDyC n° 2, verde FDyC n° 3, rojo FDyC n° 40, laca alummica amarillo FDyC n° 6, amarillo FDyC n° 6, amarillo FDyC n° 10, palmitoestearato de glicerol, monoestearato de glicerol, carmm de mdigo, lecitina, manitol, metil y propilparabenos, glicirrizinato monoamonico, aroma de naranja natural y artificial, esmalte farmaceutico, poloxamero 188, polidextrosa, polisorbato 20, polisorbato 80, polividona, 15 almidon de mafz pregelatinizado, almidon pregelatinizado, oxido de hierro rojo, sacarina sodica, eter carboximetilico sodico, cloruro sodico, citrato sodico, fosfato sodico, aroma de fresa, oxido de hierro negro sintetico, oxido de hierro rojo sintetico, dioxido de titanio y cera blanca.
En algunas realizaciones, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un peptido descrito en la presente memoria y uno o mas agentes seleccionados de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, una combinacion de 20 los mismos, y/o una amina primaria con impedimento esterico.
En realizaciones adicionales, el agente es Mg2+, Ca2+ o Zn2+ o una combinacion de los mismos. En algunas realizaciones, el cation se proporciona, sin limitacion, como acetato magnesico, cloruro magnesico, fosfato magnesico, sulfato magnesico, acetato calcico, cloruro calcico, fosfato calcico, sulfato calcico, acetato de zinc, cloruro de zinc, fosfato de zinc, sulfato de zinc, acetato de manganeso, cloruro de manganeso, fosfato de 25 manganeso, sulfato de manganeso, acetato potasico, cloruro potasico, fosfato potasico, sulfato potasico, acetato sodico, cloruro sodico, fosfato sodico, sulfato sodico, acetato de aluminio, cloruro de aluminio, fosfato de aluminio o sulfato de aluminio. En realizaciones adicionales, el cation se proporciona como cloruro magnesico, cloruro calcico, fosfato calcico, sulfato calcico, acetato de zinc, cloruro de manganeso, cloruro potasico, cloruro sodico o cloruro de aluminio. En otras realizaciones, el cation se proporciona como cloruro de calcio, cloruro de magnesio o acetato de
En otra realizacion, el agente es una amina primaria con impedimento esterico.
En una realizacion adicional, la amina primaria con impedimento esterico es un aminoacido.
En una realizacion adicional mas, el aminoacido es un aminoacido que se encuentra de forma natural.
En una realizacion adicional todavfa, el aminoacido que se encuentra de forma natural, se selecciona del grupo que 35 consiste en: histidina, fenilalanina, alanina, acido glutamico, acido aspartico, glutamina, leucina, metionina, asparagina, tirosina, treonina, isoleucina, triptofano, glicina y valina; ademas todavfa, el aminoacido que se encuentra de forma natural es leucina, isoleucina, alanina o metionina.
En una realizacion adicional mas, el aminoacido que se encuentra de forma natural es leucina. En otra realizacion, la amina primaria con impedimento esterico es un aminoacido que no se encuentra de forma natural (p. ej., acido 140 aminociclohexanocarboxflico, lantanina o teanina).
En una realizacion adicional, la amina primaria con impedimento esterico es la ciclohexilamina, 2-metilbutilamina o una amina polimerica (p. ej., chitosan).
En otra realizacion, se pueden usar una o mas aminas primarias con impedimento esterico en una composicion.
En algunos casos, la amina primaria con impedimento esterico tiene la formula:
en donde R1, R2y R3 se seleccionan independientemente de: H, C(O)OH, alquilo C1-C6, eter de alquilo C1-C6, tioeter de alquilo C1-C6, acido (alquil Ci-C6)-carboxflico, (alquil C1-C6)-carboxilamida y alquilarilo, en donde cualquier grupo puede estar sustituido una vez o multiples veces con: halogeno o amino, y con la condicion de que no mas de dos de R1, R2 y R3 son H.
50 En otra realizacion, no mas de uno de R1, R2 y R3 es H.
30 zinc.
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En otras realizaciones, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un vehfculo farmaceuticamente aceptable, peptido, un cation seleccionado de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+, o una mezcla de los mismos, y una amina primaria con impedimento esterico.
En una realizacion, el cation es Mg2+, Ca2+ o Zn2+ o una mezcla de los mismos.
En una realizacion adicional, la composicion farmaceutica comprende ademas un aglutinante farmaceuticamente aceptable y/o un deslizante, lubricante o aditivo farmaceuticamente aceptable que actua tanto como deslizante como lubricante y/o un antioxidante.
En algunas realizaciones, la composicion farmaceutica se aplica a un vehuculo.
En algunas realizaciones, el vehuculo es una carga.
En algunos casos, la relacion molar de cation:amina primaria con impedimento esterico:peptido en la solucion acuosa aplicada al vehfculo es 5-100:5-50:1. En algunos casos, la relacion molar del cation:amina primaria con impedimento esterico puede ser igual o mayor que 2:1 (p. ej., entre 5:1 y 2:1). Por lo tanto, en algunos casos, la relacion molar de cation:amina primaria con impedimento esterico:peptido, aplicada al vehfculo es 100:50:1, 100:30:1, 80:40:1, 80:30:1, 80:20:1, 60:30:1, 60:20:1, 50:30:1, 50:20:1, 40:20:1, 20:20:1, 10:10:1, 10:5:1 o 5:10:1. Cuando un aglutinante, p. ej., metilcelulos, esta presente en la solucion de peptido agonista de la GC-C aplicada al vehuculo, puede estar presente en 0,5% - 2,5% en peso (p. ej., 0,7%-1,7% o 0,7% -1% o 1,5% o 0,7%).
En una realizacion adicional, la composicion farmaceutica comprende ademas un aglutinante o aditivo farmaceuticamente aceptable y/o un deslizante, lubricante o aditivo farmaceuticamente aceptable que actua tanto como deslizante como lubricante y/o un antioxidante.
Las composiciones farmaceuticas adecuadas de acuerdo con la invencion, en general incluiran una cantidad del o de los compuestos activos con un diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable, tal como una solucion acuosa esteril, para dar un intervalo de concentraciones finales, dependiendo del uso previsto. Las tecnicas de preparacion en general son bien conocidas en la tecnica, como se ilustra en Remington's Pharmaceutical Sciences (18a edicion, Mack Publishing Company, 1995).
Las composiciones descritas en la presente memoria se pueden administrar por via sistemica o local, p. ej.: via oral (p. ej. usando capsulas, polvos, soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos sublinguales y similares), por inhalacion (p. ej. con un aerosol, gas, inhalador, nebulizador o similares), en el ofdo (p. ej. usando gotas para el ofdo), via topica (p. ej. usando cremas, geles, linimentos, pomadas, pastas, parches transdermicos, etc.), via oftalmica (p. ej. con colirios, geles oftalmicos, pomadas oftalmicas), via rectal (p. ej. usando enemas o supositorios), nasal, bucal, vaginal (p. ej. usando duchas vaginales, dispositivos intrauterinos, supositorios vaginales, anillos o comprimidos vaginales, etc.), por un deposito implantado o similares, o por via parenteral dependiendo de la gravedad y tipo de enfermedad que se este tratando. El termino "parenteral" como se usa en la presente memoria, incluye, pero no se limita a inyeccion subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepatica, intralesional e intracraneal o tecnicas de infusion. Preferiblemente, las composiciones se administran por via oral, intraperitoneal o intravenosa.
Para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, los peptidos, descritos en la presente memoria se administran preferiblemente por via oral, p. ej., como un comprimido, capsula, sobres que contienen una cantidad predeterminada de microgranulos del principio activo, gel, pasta, jarabe, bolo, electuario, suspension, polvo, polvo liofilizado, granulos, en forma de una solucion o suspension en un lfquido acuoso o un lfquido no acuoso; como una emulsion lfquida de aceite en agua o una emulsion lfquida de agua en aceite, por una formulacion liposomica (vease, p. ej., el documento EP 736299) o en algunas otras formas. Administradas por via oral, las composiciones pueden incluir aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, agentes de lubricacion, tensioactivos o dispersantes, agentes de sabor y humectantes. Las formulaciones administradas por via oral tales como los comprimidos, se puede recubrir o ranurar opcionalmente y se pueden formular para asf proporcionar liberacion sostenida, retrasada o controlada del principio activo en la misma.
Los peptidos se pueden coadministar con otros agentes usados para tratar trastornos gastrointestinales que incluyen, pero no se limitan a los agentes descritos en la presente memoria.
En otro aspecto, las composiciones farmaceuticas adecuadas pueden comprender uno o mas agentes terapeuticos. Dichos agentes terapeuticos incluyen, sin limitacion, agentes analgesicos; agentes antisecrecion, incluyendo inhibidores de la bomba de protones, antagonistas de la bomba de acido, antagonistas del receptor H2; inhibidores de PDE5; antagonistas de GABA-B; secuestrantes de acidos biliares; agentes procineticos y promotilidad; antidepresivos; antibioticos; antiemeticos; y agentes protectores de la mucosa.
Metodos de tratamiento
En diferentes realizaciones, los peptidos y composiciones descritos en la presente memoria, son utiles para el tratamiento de un trastorno gastrointestinal de un paciente.
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En algunas realizaciones, el trastorno gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en el smdrome del intestino irritable (SII), estrenimiento, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad de reflujo gastroesofagico, acidez estomacal funcional, dispepsia, dolor visceral, gastroparesia, pseudoobstruccion intestinal cronica, pseudoobstruccion colonica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enfermedad intestinal inflamatoria.
En una realizacion adicional, el trastorno gastrointestinal es el estrenimiento. El estrenimiento puede ser estrenimiento cronico, estrenimiento idiopatico, debido a fleo postoperatorio, o causado por el uso de opiaceos. Los criterios clmicamente aceptados que definen el estrenimiento incluyen la frecuencia de movimientos intestinales, la consistencia de las heces y la facilidad del movimiento intestinal. Una definicion comun de estrenimiento es menos de tres movimientos intestinales por semana. Otras definiciones incluyen heces anormalmente duras o defecacion que requiere esfuerzo excesivo (Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763). El estrenimiento puede ser idiopatico (estrenimiento funcional o estrenimiento de transito lento) o secundario de otras causas que incluyen trastornos neurologicos, metabolicos o endocrinos. Estos trastornos incluyen la diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipocalcemia, esclerosis multiple, enfermedad de Parkinson, lesiones de la medula espinal, neurofibromatosis, neuropatfa autonomica, enfermedad de Chagas, enfermedad de Hirschsprung y fibrosis qmstica. El estrenimiento puede se resultado tambien de cirugfa (fleo postoperatorio) o debido al uso de farmacos tales como analgesicos (como opiaceos), antihipertensivos, anticonvulsivos, antidepresivos, antiespasmodicos y antipsicoticos.
En otras realizaciones, el trastorno gastrointestinal es el smdrome del intestino irritable (SII). El smdrome del intestino irritable puede ser smdrome del intestino irritable con estrenimiento predominante (SII-e), smdrome del intestino irritable con diarrea predominante (SII-d) o alternancia entre los dos smdromes de intestino irritable (SII-a).
En otras realizaciones, el trastorno gastrointestinal es la dispepsia.
En otras realizaciones, el trastorno gastrointestinal es la gastroparesia. La gastroparesia se puede seleccionar de gastroparesia idiopatica, diabetica o posquirurgica.
En otras realizaciones mas, el trastorno gastrointestinal es la pseudoobstruccion intestinal cronica.
En otras realizaciones, el trastorno gastrointestinal es la enfermedad de Crohn.
En algunas realizaciones, el trastorno gastrointestinal es la colitis ulcerosa.
En algunas realizaciones, el trastorno gastrointestinal es la enfermedad intestinal inflamatoria.
En otra realizacion, el trastorno gastrointestinal es el dolor visceral.
En una realizacion adicional, la presente invencion presenta un metodo par disminuir el dolor gastrointestinal o dolor visceral en un paciente, comprendiendo el metodo, administrar al paciente una composicion farmaceutica que comprende un peptido descrito en la presente memoria. Los agonistas peptfdicos descritos en la presente memoria se pueden usar solos o en terapia de combinacion, para el tratamiento, prevencion o reduccion del dolor visceral asociado con un trastorno gastrointestinal o dolor asociado con otro trastorno.
En otra realizacion, la invencion presenta un metodo para tratar la inflamacion, que incluye la inflamacion del tracto gastrointestinal, p. ej., inflamacion asociada con un trastorno o infeccion gastrointestinal o algun otro trastorno, comprendiendo el metodo administrar a un paciente una composicion farmaceutica que comprende un peptido purificado descrito en la presente memoria.
En otra realizacion, la invencion presenta un metodo para tratar un trastorno gastrointestinal que comprende administrar un agonista del receptor guanilato ciclasa (GC-C) intestinal sea por via oral, por supositorio rectal o parenteral.
En otra realizacion mas, la invencion presenta un metodo para tratar un trastorno gastrointestinal que comprende administrar un agonista del receptor guanilato ciclasa (GC-C) intestinal.
En otra realizacion mas, la invencion presenta un metodo de aumento de la actividad del receptor guanilato ciclasa C (GC-C) en una muestra biologica, tejido (p. ej., la mucosa intestinal), o celula (p. ej., una celula que lleva el receptor GC-A), u organismo entero.
En otro aspecto, la invencion presenta un metodo de aumento del nivel del 3'-monofosfato dclico de guanosina (cGMP) en una muestra biologica, tejido (p. ej., la mucosa intestinal), o celula (p. ej., una celula que lleva el receptor GC-A), u organismo entero, poniendo en contacto la muestra, tejido u organismo con peptidos descritos en la presente memoria.
Los agonistas de receptores GC-C peptfdicos descritos en la presente memoria se pueden administrar en combinacion con otros agentes. Por ejemplo, los peptidos se pueden administrar con un peptido o compuesto analgesico. El peptido o compuesto analgesico se puede unir covalentemente a un peptido descrito en la presente memoria o puede ser un agente separado que se administra junto con o secuencialmente con un peptido descrito en la presente memoria, en una terapia de combinacion. Los peptidos descritos en la presente memoria se pueden
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administrar en combinacion con otros agentes usados para tratar trastornos GI, que incluyen antidepresivos, agentes promotilidad o procineticos, antiemeticos, antibioticos, inhibidores de la bomba de protones, bloqueadores de acidos (p. ej., antagonistas del receptor de histamina H2), antagonistas de la bomba de acido, inhibidores de PDE5, agonistas de GABA-B, secuestrantes de acidos biliares y agentes protectores de la mucosa.
En algunas realizaciones, los agentes analgesicos utiles que se pueden usar con los peptidos descritos en la presente memoria incluyen bloqueadores de canales de Ca (p. ej., ziconotida), antagonistas de receptores de 5HT (p. ej., antagonistas de receptores 5HT3, 5HT4 y 5HT1), agonistas de 5HT4 (p. ej., tegaserod [Zelnorm®], mosaprida, zacoprida, cisaprida, renzaprida, prucaloprida [Resolor®], derivados de bencimidazolona tales como BIMU 1 y BIMU 8, y lirexaprida), agonistas de 5HT1 (p. ej., sumatriptan y buspirona), agonistas de receptores de opiaceos (p. ej., loperamida, fedotozina, pentapeptido encefalina, morfina, difeniloxilato, frakefamida, trimebutina y fentanilo), agonistas del receptor de CCK (p. ej., loxiglumida y dexloxiglumida), antagonistas del receptor de NK1 (p. ej., aprepitant, vofopitant, ezlopitant, R-673 (Hoffinann-La Roche Ltd), SR-48968 y SR-14033, (Sanofi Synthelabo), CP-122,721 (Pfizer, Inc.), GW679769 (Glaxo Smith Kline) y TAK-637 (Takeda/Abbot)), antagonistas del receptor de NK2 (p. ej., nepadutant, saredutant, GW597599 (Glaxo Smith Kline), SR-144190 (Sanofi-Synthelabo) y UK-290795 (Pfizer Inc)), antagonistas del receptor de NK3 (p. ej., osanetant (SR-142801; Sanofi-Synthelabo), Sr-241586 y talnetant), inhibidores de la recaptacion de norepinefrina-serotonina (NSRI) (p. ej., milnacipran), antagonistas de receptores de dopamina selectivos y mixtos (p. ej.--metoclopramida, itoprida, domperidona), agonistas del receptor vainilloide y canabinoide, sialorfina y peptidos relacionados con la sialorfina. Se describen agentes analgesicos de las diferentes clases en la bibliograffa.
En algunas realizaciones, se pueden usar uno o mas de otros agentes terapeuticos en combinacion con los peptidos descritos en la presente memoria. Dichos agentes incluyen antidepresivos, agentes promotilidad o procineticos, antiemeticos, antibioticos, inhibidores de la bomba de protones, bloqueadores de acidos (p. ej., antagonistas del receptor de histamina H2), antagonistas de la bomba de acido, inhibidores de PDE5, agonistas de GABA-B, secuestrantes de acidos biliares y agentes protectores de la mucosa.
Los ejemplos de antidepresivos incluyen, sin limitacion, antidepresivos tridclicos tales como amitriptilina (Elavil®), desipramina (Norpramin®), imipramina (Tofranil®), amoxapina (Asendin®), nortriptilina; los inhibidores selectivos de la recaptacion de serotonina (SSRI) tales como paroxetina (Paxil®), fluoxetina (Prozac®), sertralina (Zoloft®), y citralopram (Celexa®); y otros tales como doxepina (Sinequan®) y trazodona (Desyrel®).
Los ejemplos de agentes promotilidad y procineticos incluyen, sin limitacion, itoprida, octreotida, betanecol, metoclopramida (Reglan®), domperidona (Motilium®), eritromicina (y sus derivados) y cisaprida (Propulsid®). Un ejemplo de antiemeticos incluye, sin limitacion, proclorperazina.
Los ejemplos de antibioticos que se pueden usar incluyen los que se pueden usar para tratar infecciones por Heliobacter pylori, tales como amoxicilina, tetraciclina, metronidazol o claritromicina. Otros antibioticos tales como la eritromicina y sus derivados, tambien se pueden usar en combinacion con los peptidos descritos en la presente memoria.
Los ejemplos de inhibidores de la bomba de protones incluyen, sin limitacion, omeprazol (Prilosec®), esomeprazol (Nexium®), lansoprazol (Prevacid®), pantoprazol (Protonix®) y rabeprazol (Aciphex®). Los ejemplos de bloqueadores del receptor de H2 incluyen, sin limitacion, cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina. Los ejemplos de antagonistas de la bomba de acido incluyen, sin limitacion, revaprazan, CS-526 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2007) 323:308-317), PF-03716556 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2009) 328(2):671-9), y YH1885 (Drug Metab. Dispos. (2001) 29(1):54-9).
Los ejemplos de inhibidores de la PDE5 incluyen, sin limitacion, avanafilo, lodenafilo, mirodenafilo, citrato de sildenafilo, tadalafilo, vardenafilo y udenafilo. Los agonistas de GABA-B incluyen, sin limitacion, baclofeno y XP19986 (n° de registro CAS 847353-30-4). Los ejemplos de secuestrantes de acidos biliares incluyen, sin limitacion, GT102-279, colestiramina, colesevelam, hidrocloruro de colesevelam, acido ursodesoxicolico, colestipol, colestilan, sevelamer, polidialilamina reticulada con epiclorhidrina, derivados de dialquilaminoalquilo de un dextrano reticulado, y N-(cicloalquil)alquilaminas. Los ejemplos de agentes protectores de la mucosa incluyen, sin limitacion, sucralfato (Carafate), teprenona, polaprezinc, cetraxato y subsalicilato de bismuto.
La terapia de combinacion se puede lograr administrando dos o mas agentes, p. ej., un peptido descrito en la presente memoria y otro peptido o compuesto terapeutico, cada uno de los cuales se formula y administra por separado, o administrando dos o mas agentes en una sola formulacion. Tambien estan abarcadas otras combinaciones para la terapia de combinacion. Por ejemplo, dos agentes se pueden formular juntos y administrar en conjunto con una formulacion separada que contiene un tercer agente. Aunque los dos o mas agentes en la terapia de combinacion se pueden administrar simultaneamente, no es necesario hacerlo. Por ejemplo, la administracion de un primer agente (o combinacion de agentes) puede preceder a la administracion de un segundo agente (o combinacion de agentes) en minutos, horas, dfas o semanas. Por lo tanto, dos o mas agentes se pueden administrar en el espacio de minutos uno de otro o en el espacio de 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18, o 24 horas uno de otro, o en el espacio de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 dfas uno de otro, o en el espacio de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 semanas uno de otro. En algunos casos son posibles intervalos incluso mayores. Aunque en algunos casos es conveniente
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que dos o mas agentes usados en una terapia de combinacion esten presentes en el cuerpo del paciente al mismo tiempo, no es necesario que esto sea asu
Dosis
El intervalo de dosis para seres humanos adultos puede ser en general de 5 |jg a 100 mg/dfa por via oral de los peptidos descritos en la presente memoria. Los comprimidos, capsulas u otras formas de presentacion proporcionadas en unidades discretas pueden contener convenientemente, una cantidad de compuesto descrito en la presente memoria que es eficaz en dicha dosis o como un multiplo de la misma, por ejemplo, unidades que contienen de 25 jg a 2 mg o aproximadamente de 100 jg a 1 mg. La cantidad precisa de compuesto prescrito a un paciente sera responsabilidad del medico que atiende. Sin embargo, la dosis usada dependera de una serie de factores, que incluyen la edad y sexo del paciente, el trastorno preciso que se esta tratando y su gravedad.
En otras realizaciones, la dosis es 50 jg, 67.5 jg, 100 jg, 133 jg, 145 jg, 150 jg, 200 jg, 266 jg, 290 jg, 300 jg, 400 jg, 500 jg o 600 jg al dfa, por via oral.
En diferentes realizaciones, la unidad de dosificacion se administra con alimento en cualquier momento del dfa, sin alimento en cualquier momento del dfa, con alimento despues de ayunar durante la noche (p. ej., con el desayuno), a la hora de acostarse despues de una comida ligera baja en grasas.
En una realizacion particular, la unidad de dosificacion se administra antes o posteriormente al consumo de alimento (p. ej., una comida).
En una realizacion adicional, la unidad de dosificacion se administra aproximadamente 15 minutos o 1 hora antes del consumo de alimento.
En diferentes realizaciones, la unidad de dosificacion se administra una vez al dfa, dos veces al dfa, tres veces al dfa, cuatro veces al dfa, cinco veces al dfa o seis veces al dfa. En algunas realizaciones, la unidad de dosificacion y la dosis diaria son equivalentes.
La cantidad precisa de cada uno de los dos o mas principios activos en una unidad de dosificacion dependera de la dosis deseada de cada componente. Por lo tanto, puede ser util crear una unidad de dosificacion que cuando se administre de acuerdo con una pauta posologica particular (p. ej., una pauta posologica que especifica un determinado numero de unidades y un tiempo particular para la administracion), suministrara la misma dosis de cada componente que se administrana si el paciente fuera tratado solo con un componente unico.
En otras circunstancias, puede ser conveniente crear una unidad de dosificacion que suministrara una dosis de uno o mas componentes que es menor que la que se administrana si el paciente se tratara solo con un componente unico.
Finalmente, puede ser conveniente crear una unidad de dosificacion que suministrara una dosis de uno o mas componentes que es mayor que la que se administrana si el paciente se tratara solo con un componente unico.
La composicion farmaceutica puede incluir ingredientes adicionales que incluyen, pero no se limitan, a los excipientes descritos en la presente memoria. En algunas realizaciones, uno o mas agentes terapeuticos de la unidad de dosificacion pueden existir en una formulacion de liberacion prolongada o controlada y pueden no existir agentes terapeuticos adicionales en la formulacion de liberacion prolongada. Por ejemplo, un peptido o agonista descrito en la presente memoria puede existir en una formulacion de liberacion controlada o formulacion de liberacion prolongada en la misma unidad de dosificacion con otro agente que puede estar o puede no estar en una formulacion de liberacion controlada o liberacion prolongada. Por lo tanto, en algunas realizaciones, puede ser conveniente proporcionar la liberacion inmediata de uno o mas de los agentes descritos en la presente memoria, y la liberacion controlada de uno o mas de otros agentes.
EJEMPLOS
Los peptidos agonistas de la GC-C o sus sales farmaceuticamente aceptables, como se describe en la presente memoria, fueron preparados por smtesis qmmica en fase solida y plegado natural (oxidacion al aire) por la American Peptide Company (Sunnyvale, CA). En algunos casos, los peptidos se modificaron despues de la smtesis como se describe en la presente memoria. El peptido Cys1-a-cetona se sintetizo, por ejemplo, por adicion de 1,5 litros de metanol/dimetilformamida (9:1 v/v) y 28,8 g de 3,5-di-terc-butil-1,2-benzoquinona (10 equivalentes) a 20 g (13,1 mmol) de linaclotida y se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La formacion de la base de Schiff se siguio por HPLC. Una vez consumida toda la linaclotida se anadieron 17 litros de HCl 0,1 M y la mezcla de reaccion se agito durante 2 dfas. La mezcla de reaccion se filtro, se extrajo dos veces con diclorometano, y la solucion acuosa resultante se aplico a una columna C-18 de HPLC de fase inversa a escala preparativa, para purificar el Cys1-a- cetona. La columna de HPLC usada en la HPLC preparativa era una columna C-is de 5,08 cm (2 pulgadas) de diametro equilibrada con fase movil A (acido acetico al 0,05% en agua). El material no unido se lavo con fase movil A con un caudal de 100 ml/min y se eluyo el material relacionado con el peptido con un gradiente lineal de fase movil
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B (acetonitrilo) de 10% a 40% a lo largo de 60 minutos. Las fracciones que coteman Cysl-cetona se mezclaron seguido de eliminacion del disolvente por liofilizacion.
Ejemplo 1: Acumulacion de cGMP en celulas T84 para el analisis de la actividad de la GC-C
Celulas T84, una lmea de celulas de carcinoma de colon humano, se obtuvieron de ATCC (P/N CCL-248) y se cultivaron en matraces T-150 hasta 60-70% de confluencia. Las monocapas se elevaron con tripsina y se usaron para sembrar placas de cultivo tisular de 96 pocillos (Costar, P/N 3596) a una densidad celular de 2,0 x 105 celulas/pocillo, que se desarrollaron durante la noche en un entorno de dioxido de carbono al 5% con mezcla nutriente de medio Eagle modificado por Dulbecco 2 mM (DMEM)/F-12 50/50 complementado con suero bovino fetal al 5% (FBS) y L-glutamina (Mediatech, P/Ns 10-092-CV, 35-0150CV, y 25-005-Cl, respectivamente).
Despues de incubacion durante la noche, las placas de 96 pocillos se sembraron con 2,0 x 105 celulas/pocillo, se lavaron dos veces con 0,2 ml de DMEM (Mediatech, P/N 10-013-CV) sin complementos anadidos. Para inhibir cualquier actividad de fosfodiesterasa, las celulas se incubaron con 0,180 ml de 3-isobutil-1-metil-xantina 1 mM (IBMX; Sigma P/N I5879) en DMEM durante 10 min a 37°C. Se prepararon curvas patron en el intervalo de 0,1 a 10.000 nM (concentracion final) para cada artfculo de ensayo usando un Hamilton Microlab Robot (Model STARlet). En ensayo de actividad de la gC-C se llevo a cabo incubando 0,02 ml de cada referencia con 0,180 ml de IBMX 1 mM en DMEM en una placa de 96 pocillos durante 30 minutos a 37°C. Despues de la incubacion, se separaron los lfquidos sobrenadantes y las celulas se lisaron con acido clortndrico (HCl) 0,1 M fno durante 30 min sobre hielo. Se transfirio un volumen de 175 pl/pocillo de cada lisato a nuevas placas de 96 pocillos (Waters, P/N 186002481) y se centrifugaron a 1.000 x g durante 10 min para separar cualquier residuo celular. Los lfquidos sobrenadantes resultantes se transfirieron en partes alfcuotas de 90 pl a nuevas placas de 96 pocillos y se neutralizaron a pH 7 con 90 pl de acetato amonico 1 M. Los lisatos de celulas T84 centrifugados y neutralizados, se analizaron usando cromatograffa de lfquidos con deteccion por espectrometna de masas en tandem (LC/MS/MS). El metodo indicado en la tabla 1 se uso para cuantificar la concentracion del 3',5'-monofosfato dclico de guanosina (cGMP) en cada muestra de lisato celular. Se uso el GMP dclico adquirido en Sigma (P/N G6129) para preparar una curva patron en HCl 0,1 M. Cada referencia se neutralizo con un volumen igual de acetato amonico, dando como resultado una curva patron de cGMP en el intervalo de 1 a 1.024 nM (concentracion final).
Las concentraciones de GMP dclico se determinaron a partir de cada muestra usando las condiciones de LC/MS (tabla 1 a continuacion) y la curva patron calculada. Las areas de los picos de los analitos se usaron para generar una curva de calibracion lineal ponderada 1/x2, que se uso para extrapolar la concentracion de cGMP en cada muestra. El valor de la mitad de la concentracion maxima eficaz (CE50) para cada artfculo de ensayo se genero usando GraphPad Prism Version 5.01 (programa GraphPad, San Diego, CA). Para determinar si las diferencias en los valores de CE50 eran estadfsticamente significativas, la curva de actividad promedio de cada degradante de farmaco se comparo con un control de linaclotida usando F-test en el programa GraphPad. Para estas comparaciones, se determino un p valor, con un valor < 0,05 indicando una diferencia significativa en la actividad de agonista de la GC-C.
Tabla 1: Parametros de LC/MS para la cuantificacion del cGMP en celulas T84
MS:
Thermo Quantum
Modo iones:
Electropulverizacion, modo positivo (ESI+)
Tipo de barrido:
Seguimiento de reacciones multiples (MRM)
Compuesto: cGMP
Transicion
346>152
Tiempo de lectura (ms)
100
Energfa de colision (V)
28
Tubo de lentes
139
Tiempo de retencion (min)
0,8
LLOQ
(nM)
1
HPLC:
Waters Acquity UPLC
Columna:
Hypersil Gold C18, 2,1 x 50 mm, 1,9 um
Precolumna:
Hypersil Gold, 2,1 x 10 mm, 1,9 um
Caudal:
400 pl/min
Temperatura de la columna:
Temperatura ambiente
Temperatura del muestreador automatico:
6°C
Volumen de inyeccion:
20 pl
Fases moviles:
A = acido formico al 0,1% en agua/acetonitrilo 98/2, B = acido formico al 0,1% en agua/acetonitrilo 2/98
Tiempo (min)
%A %B
0
100
0
0,5
60 40
1,1
60 40
1,75
5 95
2,5
5 9
2,6
100 0
Gradiente:
Ejemplo 2: Afinidad de union relativa de peptidos de ejemplo al receptor GC-C de celulas T84
Se determinaron las afinidades de union relativas de la linaclotida y Cys1-a-cetona al receptor guanilato ciclasa C 5 (GC-C) usando un ensayo de union competitiva en el que los peptidos competfan con un agonista de GC-C conocido, la enterotoxina termoestable de origen porcino (pSTa), por los sitios de union en los receptores GC-C de superficie celular en celulas epiteliales colonicas humanas (T84). La pSTa, es decir, MM 416251, se radiomarco con 125I para permitir la medicion de su union al receptor. El ensayo de union competitiva se llevo a cabo por adicion de diferentes concentraciones de cada peptido (de 0,1 a 3.000 nM) a 0,20 ml de mezclas de reaccion que conteman 10 medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM), albumina de suero bovino al 0,5% (BSA), 2,0 x 105 celulas T84 y [125I]-pSTa 170 pM (200.000 cpm). Despues de incubacion a 37°C durante 60 min, las mezclas de reaccion se aplicaron a filtros de fibra de vidrio por filtracion con vado para aislar el material unido al receptor. La concentracion del radioligando unido atrapado en el filtro se midio despues por recuento de centelleo. Para cada peptido, se uso la reaccion con la menor cantidad de competidor para determinar la union espedfica maxima del radioligando. La union 15 no espedfica de [125I]-pSTa se midio en las reacciones que conteman 3.000 nm de cada peptido. Los datos se usaron para construir curvas de union a radioligando competitivas y determinar las afinidades de union relativas de la linaclotida y Cys1-a-cetona, medido por sus valores de CI50 y K
Tanto la linaclotida como el Cys1-a-cetona inhibfan de forma competitiva la union espedfica de [125I]-pSTa a los receptores GC-C de superficie celular en celulas T84. Sus afinidades de union relativas, medidas por sus constantes 20 de inhibicion (K,), eran las siguientes: Linaclotida K = 3,9 ± 1,6 nM y Cys1-a-cetona K = 5,2 ± 0,9 nM (Figura 1).
Ejemplo 3: Respuesta de cGMP en celulas T84 inducida por peptidos de ejemplo
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10
15
20
25
30
35
40
45
Se ensayo en la linaclotida y Cys1-a-cetona la actividad agonista de la guanilato ciclasa-C (GC-C) en celulas T84 como sigue. En cada pocillo de una placa de 96 pocillos, se incubaron primero aproximadamente 200.000 celulas T84/pocillo con 3-isobutil-1-metil-xantina 1 mM (IbMx) en 0,18 ml de medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) durante 10 minutos a 37°C. Cada peptido se diluyo a concentraciones finales en el intervalo de 0,1 a 10.000 nM, y se anadieron 0,02 ml de cada dilucion por duplicado a una placa de 96 pocillos que contema celulas T84, para un volumen final de 0,2 ml por pocillo. Las reacciones de los peptidos se incubaron durante 30 min a 37°C. Despues de la incubacion, se separaron los ffquidos sobrenadantes y se descartaron y las celulas se lisaron con acido clorlmdrico (HCl) 0,1 M fno durante 30 min sobre hielo. Los residuos celulares se separaron por centrifugacion y se determino la concentracion de 3',5'-monofosfato dclico de guanosina (GMP dclico) en cada lisato usando cromatograffa ffquida con espectrometna de masas en tandem. Los datos se usaron para construir curvas de dosis-respuesta y calcular la mitad de la concentracion eficaz maxima (CE50) para cada arffculo de ensayo.
La linaclotida y Cys1-a-cetona mostraron actividad agonista de la GC-C en celulas T84, medido por el aumento en el cGMP intracelular (Figura 2). Los valores de CE50 para la linaclotida y Cys1-a-cetona eran 315 ± 105 nM y 352 ± 55 nM, respectivamente. La comparacion de la curva de dosis-respuesta de la linaclotida con la de la Cys1-a-cetona usando el F-test indicaba que los valores de CE50 no son estadfsticamente significativos (p=0,8884).
Ejemplo 4: Medicion del contenido y pureza de peptidos de ejemplo
Peptido Cys1-a-cetona
El farmaco linaclotida (descrito en el documento US 2010/0048489, incorporado por referencia en la presente memoria) se sometio a estres por incubacion de 20 g de perlas de farmaco que conteman 1 mg de linaclotida pulverizada sobre perlas de 224 mg de Avicel durante 2 meses a 40°C con 75% de HR. El material relacionado con el peptido se extrajo de las perlas con 20 ml de HCl 0,1 N y agitacion suave en una mezcladora vorticial durante una hora a temperatura ambiente. La suspension resultante se centrifugo a 1.000 x g durante 5 minutos para sedimentar las perlas y el ffquido sobrenadante que contema los peptidos extrafdos se liofilizo. La muestra seca se reconstituyo en 2,5 ml de HCl 0,1 N y el Cys-a-cetona se aislo y purifico por HPLC preparativa usando el siguiente metodo: se usa una columna C18 A YMC Pro™ (dimensiones: 3,0 x 150 mm, 3,5 um, 120 A; Waters Corp., Milford, MA) o equivalente y se mantiene a 40°C. La fase movil A (FMA) consiste en agua/acetonitrilo 98:2 que contiene acido trifluoroacetico al 0,1%, mientras que la fase movil B (FMB) consiste en agua/acetonitrilo 5:95 que contiene acido trifluoroacetico al 0,1%. La elucion de los peptidos se realiza con un gradiente de 82% a 78% de FMA y de 18% a 22% de FMB en 12 minutos, seguido de una rampa a 50% de FMA y 50% FMB en 1 minuto, con un mantenimiento de 3 minutos con 50% de FMA y 50% de FMB, seguido de un lavado de 82% de FMA y 18% de FMB durante 7 minutos. El caudal es 0,6 ml/min y la deteccion se llevo a cabo por UV a 220 nm.
Las fracciones se recogieron manualmente, y las que conteman Cys1-a-cetona se mezclaron y se liofilizaron hasta sequedad. El residuo seco se reconstituyo en 1,6 ml de agua para dar una concentracion final de 0,5 mg/ml y se almaceno congelado a -20°C. Se ensayo una parte affcuota del Cys1-a-cetona purificado por HPLC anafftica con el metodo descrito a continuacion, y se determino que la pureza era 90,7%.
El contenido y pureza de los peptidos de la presente invencion se pueden determinar por cromatograffa ffquida de fase inversa con gradiente usando un sistema Agilent Series 1100 Lc con el programa Chemstation Rev A.09.03 o equivalente. Se usa una columna C18 A YMC Pro™ (dimensiones: 3,0 x 150 mm, 3,5 um, 120 A; Waters Corp., Milford, MA) o equivalente y se mantiene a 40°C. La fase movil A (FMA) consiste en agua con acido trifluoroacetico al 0,1% mientras que la fase movil B (FMB) consiste en 95% de acetonitrilo:5% de agua con acido trifluoroacetico al 0,1%. La elucion de los peptidos se lleva a cabo con un gradiente de 0% de FMB durante 4 minutos seguido de 10% de FMB durante 5 minutos, seguido de 23% de FMB durante 34 minutos, seguido de 34% de FMB durante 6 minutos, seguido de 80% de FMB durante 10 minutos. El reequilibrado de la columna se lleva a cabo volviendo a 0% de FMB en 1 minutos seguido de un mantenimiento de 7 minutos a 100% de FMA. El caudal es 0,6 ml/min y la deteccion se llevo a cabo por UV a 220 nm.
Un ejemplo de un analisis de la linaclotida y el producto Cys1-a-cetona por RP-HPLC se muestra en la figura 3.
El contenido de los peptidos purificados se midio determinando la concentracion de peptido en la muestra preparada frente a una referencia de peptido externa preparada de forma similar.

Claims (29)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen1
    5 2. Un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de
    aminoacidos de:
    imagen2
  2. 3. El peptido o su sal farmaceuticamente aceptable segun la reivindicacion 1, en donde el peptido consiste en la estructura de aminoacidos de:
    10
  3. 4. El peptido o su sal farmaceuticamente aceptable segun la reivindicacion 2, en donde el peptido consiste en la estructura de aminoacidos de:
    imagen3
    imagen4
  4. 5. El peptido o su sal farmaceuticamente aceptable segun la reivindicacion 1 o reivindicacion 2, en donde el peptido 15 activa el receptor guanilato ciclasa C.
  5. 6. El peptido o su sal farmaceuticamente aceptable segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicho peptido o su sal farmaceuticamente aceptable se afsla o purifica.
  6. 7. Una composicion farmaceutica que comprende un peptido o su sal farmaceuticamente aceptable segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
    20 8. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde la composicion farmaceutica comprende dos o mas
    peptidos seleccionados de:
    i. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen5
    ii. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
    imagen6
    5 y
    iii. un peptido o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen7
  7. 9. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde la composicion farmaceutica comprende linaclotida, 10 el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
    imagen8
    y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende: (i) menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de linaclotida; o (ii) menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, o 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.
    15 10. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde el peptido consiste en la estructura de
    aminoacidos de:
    imagen9
    y el peptido comprende al menos 90% en peso comparado con el peso de linaclotida u otro agonista de la guanilato ciclasa C.
    20 11. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde la composicion farmaceutica consiste en el peptido
    o su sal farmaceuticamente aceptable, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen10
    y el peptido comprende al menos 90% en peso comparado con el peso de linaclotida u otro agonista de la guanilato ciclasa C.
    5
  8. 12. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde la composicion farmaceutica comprende linaclotida, el peptido comprende una estructura de aminoacidos de:
    imagen11
    y el peptido o su sal farmaceuticamente aceptable comprende: (i) menos de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% en peso comparado con el peso de linaclotida; o (ii) menos de 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, o 1% en peso comparado con el peso de linaclotida.
    10 13. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde el peptido consiste en la estructura de
    aminoacidos de:
    imagen12
    y el peptido comprende al menos 90% en peso comparado con el peso de linaclotida u otro agonista de la guanilato ciclasa C.
    15 14. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 7, en donde la composicion farmaceutica consiste en el peptido
    o su sal farmaceuticamente aceptable, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen13
    y el peptido comprende al menos 90% en peso comparado con el peso de linaclotida u otro agonista de la guanilato ciclasa C.
    20 15. Una composicion farmaceutica que comprende linaclotida, un peptido o su sal farmaceuticamente aceptable
    segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, y uno o mas peptidos seleccionados de:
    i. un peptido ("Cys1-IMD") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    imagen14
    ii. un peptido de hidrolisis ("Asp7") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    H-Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asp-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr-OH
    s-s---------1
    ----------s-s-------- .
    iii. un peptido de acetilacion ("Cys1-N-Acetilo") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen15
    iv. un peptido de trisulfuro de linaclotida o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la secuencia de aminoacidos de Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr en donde un atomo de azufre adicional se puede unir a uno cualquiera de los seis azufres de cisteinilos; y
    v. un peptido ("Des-Tyr14") o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en donde el peptido comprende la estructura de aminoacidos de:
    imagen16
  9. 16. La composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 15, que ademas comprende uno o mas agentes seleccionados de: (i) un cation seleccionado de Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+; y (ii) una amina primaria con impedimento esterico.
  10. 17. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, en donde dicho Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+ se proporciona como acetato magnesico, cloruro magnesico, fosfato magnesico, sulfato magnesico, acetato calcico, cloruro calcico, fosfato calcico, sulfato calcico, acetato de zinc, cloruro de zinc, fosfato de zinc, sulfato de zinc, acetato de manganeso, cloruro de manganeso, fosfato de manganeso, sulfato de manganeso, acetato potasico, cloruro potasico, fosfato potasico, sulfato potasico, acetato sodico, cloruro sodico, fosfato sodico, sulfato sodico, acetato de aluminio, cloruro de aluminio, fosfato de aluminio o sulfato de aluminio.
  11. 18. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 16, en donde dicho agente es una amina primaria con impedimento esterico.
  12. 19. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 18, en donde la amina primaria con impedimento esterico es un aminoacido, en donde dicho aminoacido es opcionalmente un aminoacido que se encuentra de forma natural, un aminoacido que no se encuentra de forma natural, o un derivado de aminoacido.
  13. 20. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 19, en donde el aminoacido que se encuentra de forma natural es histidina, fenilalanina, alanina, acido glutamico, acido aspartico, glutamina, leucina, metionina, asparagina, tirosina, treonina, isoleucina, triptofano o valina, o el aminoacido que no se encuentra de forma natural es acido 1- aminociclohexanocarboxflico, lantanina o teanina.
  14. 21. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 18, en donde dicha composicion farmaceutica comprende ademas Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, K+, Na+ o Al3+.
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    10
    15
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    25
    30
    35
    40
  15. 22. La composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 21, que ademas comprende un antioxidante, un aglutinante o aditivo farmaceuticamente aceptable, una carga farmaceuticamente aceptable, o un agente terapeutico adicional.
  16. 23. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 22, en donde dicho antioxidante es BHA, vitamina E o galato de propilo.
  17. 24. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 22, en donde el aglutinante o aditivo farmaceuticamente aceptable se selecciona de poli(alcohol vimlico), polivinilpirrolidona (povidona), un almidon, maltodextrina y un eter de celulosa.
  18. 25. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 24, en donde el eter de celulosa se selecciona de: metilcelulosa, etilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxietilmetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa e hidroxipropilmetilcelulosa.
  19. 26. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 22, en donde la carga farmaceuticamente aceptable es celulosa, isomalt, manitol o fosfato calcico dibasico.
  20. 27. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 26, en donde la celulosa se selecciona de celulosa microfina y celulosa microcristalina.
  21. 28. La composicion farmaceutica segun la reivindicacion 22, en donde dicho agente terapeutico adicional se selecciona de uno o mas de un agente analgesico, un antidepresivo, un agente promotilidad o procinetico, un antiemetico, un antibiotico, un inhibidor de la bomba de protones, un bloqueante de acido, un inhibidor de PDE5, un antagonista de la bomba de acido, un agonista de GABA-B, un secuestrante de acidos biliares y un agente protector de la mucosa.
  22. 29. Una unidad de dosificacion que comprende una composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 28.
  23. 30. La unidad de dosificacion segun la reivindicacion 29, en donde dicha unidad de dosificacion es una capsula o comprimido.
  24. 31. La unidad de dosificacion segun la reivindicacion 30, en donde dicha unidad de dosificacion comprende de 5 |jg a 1 mg de linaclotida, 290 jg de linaclotida o 145 jg de linaclotida.
  25. 32. Una composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 28 para usar en un metodo de tratamiento de un trastorno gastrointestinal.
  26. 33. La composicion farmaceutica para usar de la reivindicacion 32, en donde el trastorno gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en: smdrome del intestino irritable (SII), estrenimiento, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad de reflujo gastroesofagico, acidez estomacal funcional, dispepsia, dolor visceral, gastroparesia, pseudoobstruccion intestinal cronica, pseudoobstruccion colonica, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enfermedad intestinal inflamatoria.
  27. 34. La composicion farmaceutica para usar de la reivindicacion 33, en donde el estrenimiento es estrenimiento cronico, estrenimiento idiopatico, debido a fleo postoperatorio, o causado por uso de opiaceos.
  28. 35. La composicion farmaceutica para usar de la reivindicacion 33, en donde el smdrome del intestino irritable es un smdrome del intestino irritable con estrenimiento predominante (SII-e), smdrome del intestino irritable con diarrea predominante (SII-d) o alternancia entre los dos smdromes de intestino irritable (SII-a).
  29. 36. Una composicion farmaceutica segun una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 28, para usar en un metodo de aumento de la motilidad intestinal en un paciente.
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