ES2624626T3 - Ligadores basados en tirosina para la conexión desprendible de péptidos - Google Patents

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Nils Griebenow
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Ursula Krenz
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Abstract

Un compuesto de fórmula**Fórmula** en la que n representa el número 0, 1, 2, 3 o 4, m representa el número 0, 1, 2, 3 o 4, en la que m y n son juntos son el número 1, 2, 3, 4, 5 o 6, R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, R2 representa terc-butiloxicarbonilo, R3 representa hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo, R4 representa un grupo de fórmula

Description

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DESCRIPCION
Ligadores basados en tirosina para la conexion desprendible de peptidos
La invencion se refiere a novedosos ligadores basados en tirosina que permiten la conexion desprendible de peptidos o proteinas con otras entidades moleculares, por ejemplo, polietilenglicol, para procesos para su preparacion y su uso para preparar medicamentos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
Muchos peptidos o proteinas terapeuticamente activos sufren alta eliminacion in vivo. Existen varios enfoques para formar una preparacion de liberacion prolongada inyectable de tales farmacos que implique el uso de macromoleculas.
Las matrices de polimero que contienen una molecula de farmaco en un estado no covalentemente unido son muy conocidas. Estas tambien pueden ser inyectables como hidrogeles, microparticulas o micelas. La liberacion cinetica de tales productos de farmaco puede ser bastante poco fidedigna con alta variabilidad entre pacientes. La produccion de tales polimeros puede danar el principio activo sensible o puede experimentar reacciones secundarias con el polimero durante su degradacion (D.H. Lee y col., J. Contr. Rel., 2003, 92, 291 -299).
La PEGilacion permanente de peptidos o proteinas para potenciar su solubilidad, reducir la inmunogenicidad y aumentar la semivida reduciendo la eliminacion renal es un concepto muy conocido ya desde principios de los anos 80 (Caliceti P., Veronese F.M., Adv. Drug Deliv. Rev, 2003, 55, 1261-1277). Para varios farmacos esto se ha usado con exito, pero con muchos ejemplos la PEGilacion reduce la eficacia del principio activo a un grado al que este concepto ya no es adecuado (T. Peleg-Shulman y col., J. Med. Chem., 2004, 47, 4897-4904).
Una alternativa adecuada son profarmacos basados en polimeros. Las actuales definiciones para profarmacos por la IUPAC establecen los siguientes terminos (International Union of Pure and Applied Chemistry and International Union of Biochemistry: GLOSSARY OF TERMS USED IN MEDICINAL CHEMISTRY (Recommendations 1998); en Pure & Appl. Chem. Vol 70, n2 5, 1998, pag. 1129-1143):
Profarmaco: Un profarmaco es cualquier compuesto que experimenta biotransformacion antes de presentar sus efectos farmacologicos. Los profarmacos pueden asi visualizarse como farmacos que contienen grupos protectores no toxicos especializados usados de una manera transitoria para alterar o para eliminar propiedades no deseables en la molecula parental.
Profarmaco enlazado a vehiculo (profarmaco-vehiculo): Un profarmaco enlazado a vehiculo es un profarmaco que contiene un enlace temporal de un principio activo dado con un grupo de vehiculo transitorio que produce propiedades fisicoquimicas o farmacocineticas mejoradas y que pueden eliminarse facilmente in vivo, normalmente por una escision hidrolitica.
Profarmaco en cascada: Un profarmaco en cascada es un profarmaco para el que la escision del grupo de vehiculo se vuelve eficaz solo despues del desenmascaramiento de un grupo activante.
Existen varios ejemplos de profarmacos de vehiculo basados en PEG, la mayoria de ellos con la necesidad de activacion enzimatica del ligador entre el farmaco activo y el vehiculo, principalmente iniciada por hidrolisis enzimatica. Como los esteres se escinden muy facilmente e impredeciblemente in vivo, los ligadores de ester directos para profarmaco de vehiculo tienen limitaciones a su capacidad de uso (J. Rautio y col., Nature Reviews Drug Discovery, 2008, 7 255-270).
Enfoques alternativos comunmente usados son ligadores en cascada unidos a una funcionalidad amina en el peptido o proteina. En los ligadores en cascada un grupo de enmascaramiento tiene que eliminarse como etapa limitante de la velocidad en la cascada. Esto activa el ligador para descomponerse en una segunda posicion para liberar el peptido o proteina. Comunmente el grupo de enmascaramiento puede eliminarse por un mecanismo enzimatico (R. B. Greenwald y col. en el documento WO2002/089789, Greenwald y col., J. Med. Chem. 1999, 42, 3657-3667, F.M.H. DeGroot y col. en los documentos WO2002/083180 y WO2004/043493, y D. Shabat y col. en el documento WO2004/019993).
Una alternativa que no se basa en la activacion enzimatica es el concepto de U. Hersel y col. en el documento WO2005/099768. En su enfoque el grupo de enmascaramiento sobre un fenol se elimina en un modo puramente dependiente del pH por el ataque de un nucleofilo interno. Esto activa el ligador para la descomposicion adicional.
Como se ha mencionado por U. Hersel y col. en el documento WO2005/099768, “La desventaja en el sistema de profarmacos anteriormente mencionado descrito por Greenwald, DeGroot y Shabat es la liberacion de productos secundarios de molecula pequena aromaticos potencialmente toxicos como metidas de quinona despues de la escision del enlace temporal. Las entidades potencialmente toxicas son liberadas en una estequiometria 1:1 con el farmaco y pueden asumir altas concentraciones in vivo". Tambien se mantiene el mismo problema para el sistema por Hersel y col.
Para moleculas organicas pequenas existe una pletora de diferentes enfoques de profarmacos (J. Rautio y col., Nature Reviews Drug discovery, 2008, 7 255-270). El enfoque usado por U. Hersel y col. como mecanismo de liberacion para su grupo de enmascaramiento se ha usado como enfoque de profarmaco para grupos fenolicos de moleculas pequenas desde finales de los 80 (W.S. Saari en el documento EP 0296 811 y W.S. Saari y col., J. Med. 5 Chem. 1990, vol. 33, n2 1, pag. 97-101).
Los sistemas de profarmacos basados en aminas alternativos se basan en la lenta hidrolisis de bis-hidroxietilglicina como profarmaco en cascada. Los grupos hidroxi de la bis-hidroxietilglicina estan enmascarados por esteres que tienen tendencia a hidrolisis por esterasas (R. Greenwald y col., J. Med. Chem. 2004, 47, 726-734 y D. Vetter y col. en el documento WO 2006/136586).
10 A diferencia de los enfoques de profarmaco enumerados anteriormente, que se basan todos en funcionalidades de amina de enmascaramiento, la presente invencion se basa en enmascarar el grupo fenolico de una tirosina en peptidos o proteinas. Se usa un profarmaco enlazado a vehiculo, basandose en la escision asistida por nucleofilo interno de un carbamato sobre ese grupo fenolico. La ventaja clave con respecto a otras clases de profarmacos mencionadas anteriormente es la inocuidad toxicologica del producto de descomposicion del ligador, una urea ciclica 15 permanentemente unida al vehiculo. Ademas, la descomposicion del profarmaco no depende de mecanismos enzimaticos que podrian producir una alta variabilidad entre pacientes de la escision cinetica. El mecanismo de escision es unicamente dependiente del pH ya que una amina interna que esta protonada a pH acido se activa a mayor pH (neutro) para actuar de nucleofilo que ataque el carbamato fenolico basado en la tirosina.
En el contexto de la presente invencion, los compuestos que ahora se describen engloban entidades moleculares 20 basadas en el aminoacido tirosina que permiten la construccion de dichos profarmacos de ligador de vehiculo de cualquier peptido o proteina que contiene al menos una tirosina.
La presente invencion proporciona compuestos de formula
imagen1
(I)
en la que
25 n m
R1
R2
R3
R4
representa el numero 0, 1,2, 3 o 4,
representa el numero 0, 1,2, 3 o 4,
en la que m y n son juntos el numero 1,2, 3, 4, 5 o 6,
representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
representa terc-butiloxicarbonilo,
representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo, representa un grupo de formula
5
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20
25
imagen2
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1, 2, 3, 4 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, alquil (C1-C4)-aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o un grupo de formula
imagen3
en las que
# es el punto de union al atomo de carbono,
o representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
R15 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
R16 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
R17 representa el grupo lateral de un a-aminoacido natural o sus homologos o isomeros,
y
R18 representa hidrogeno o metilo,
R6 representa —S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
R9 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
R10 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
R11 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R12 representa -S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
R13 representa el grupo lateral de un a-aminoacido natural o sus homologos o isomeros, y
R14 representa hidrogeno o metilo,
y sales de los mismos, solvatos de los mismos y los solvatos de sales de los mismos.
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Los compuestos segun la invencion son los compuestos de formula (I) y las sales de los mismos, solvatos de los mismos y solvatos de las sales de los mismos, los compuestos que estan englobados por la formula (I) y son de las formulas especificadas mas adelante y las sales de los mismos, solvatos de los mismos y solvatos de las sales de los mismos, y los compuestos que estan englobados por la formula (I) y se especifican mas adelante como ejemplos de trabajo y sales de los mismos, solvatos de los mismos y solvatos de las sales de los mismos, si los compuestos que estan englobados por la formula (I) y se especifican mas adelante no son ya sales, solvatos y solvatos de las sales.
Dependiendo de su estructura, los compuestos segun la invencion pueden existir en formas estereoisomericas (enantiomeros, diaestereomeros). Por tanto, la invencion engloba los enantiomeros o diaestereomeros y las mezclas particulares de los mismos. Los constituyentes estereoisomericamente homogeneos pueden aislarse de una manera conocida de tales mezclas de enantiomeros y/o diaestereomeros.
Cuando los compuestos segun la invencion pueden producirse en formas tautomeras, la presente invencion engloba todas las formas tautomeras.
En el contexto de la presente invencion, sales preferidas son sales fisiologicamente aceptables de los compuestos segun la invencion. Tambien estan incluidas sales que no son adecuadas por si mismas para aplicaciones farmaceuticas pero, por ejemplo, pueden usarse para el aislamiento o purificacion de los compuestos segun la invencion.
Las sales fisiologicamente aceptables de los compuestos segun la invencion incluyen sales de adicion de acido de acidos minerales, acidos carboxilicos y acido sulfonicos, por ejemplo, sales de acido clorhidrico, acido bromhidrico, acido sulfurico, acido fosforico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido toluenosulfonico, acido bencenosulfonico, acido naftalenodisulfonico, acido acetico, acido trifluoroacetico, acido propionico, acido lactico, acido tartarico, acido maleico, acido citrico, acido fumarico, acido maleico y acido benzoico.
Sales fisiologicamente aceptables de los compuestos segun la invencion tambien incluyen sales de bases usuales, por ejemplo y con preferencia sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio y potasio), sales de metales alcalinoterreos (por ejemplo, sales de calcio y magnesio) y sales de amonio derivadas de amoniaco o aminas organicas que tienen 1 a 16 atomos de carbono, por ejemplo y con preferencia etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaina, dibencilamina, W-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina y W-metilpiperidina.
En el contexto de la invencion, solvatos se refiere a aquellas formas de los compuestos segun la invencion que, en el estado solido o liquido, forman un complejo por coordinacion con moleculas de disolvente. Los hidratos son una forma especifica de los solvatos, en los que la coordinacion es con agua. Solvatos preferidos en el contexto de la presente invencion son hidratos.
En el contexto de la presente invencion, los sustituyentes tienen el siguiente significado, a menos que se especifique de otro modo:
Alquilo (C1-C4) son en el contexto de la invencion un radical alquilo de cadena lineal o ramificado que tiene respectivamente 1 a 4 atomos de carbono. Ejemplos que pueden mencionarse preferentemente son: metilo, etilo, n- propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo.
Alquil (C1-C4)-aminocarbonilo en el contexto de la invencion representa un grupo aminocarbonilo con un sustituyente alquilo de cadena lineal o ramificado que contiene 1 a 4 atomos de carbono. Ejemplos que pueden mencionarse preferentemente son: metilaminocarbonilo, etilaminocarbonilo, n-propilaminocarbonilo, isopropilaminocarbonilo, n- butilaminocarbonilo, iso-butilaminocarbonilo, sec-butilaminocarbonilo, terc-butilaminocarbonilo.
El grupo lateral de un a-aminoacido en el significado de R13 y R17 engloba tanto los grupos laterales de a- aminoacidos que se producen naturalmente como los grupos laterales de homologos e isomeros de estos a-aminoacidos. El a-aminoacido puede tener a este respecto tanto la configuracion L como la D o incluso ser una mezcla de la forma L y la forma D. Ejemplos de grupos laterales que pueden mencionarse son: hidrogeno (glicina), metilo (alanina), propan-2-ilo (valina), propan-1-ilo (norvalina), 2-metilpropan-1-ilo (leucina), 1-metilpropan-1-ilo (isoleucina), butan-1-ilo (norleucina), fenilo (2-fenilglicina), bencilo (fenilalanina), p-hidroxibencilo (tirosina), indol-3- ilmetilo (triptofano), imidazol-4-ilmetilo (histidina), hidroximetilo (serina), 2-hidroxietilo (homoserina), 1 -hidroxietilo (treonina), mercaptometilo (cisteina), metiltiometilo (S-metilcisteina), 2-mercaptoetilo (homocisteina), 2-metiltioetilo (metionina), carbamoilmetilo (asparagina), 2-carbamoiletilo (glutamina), carboximetilo (acido aspartico), 2-carboxietilo (acido glutamico), 4-aminobutan-1-ilo (lisina), 4-amino-3-hidroxibutan-1-ilo (hidroxilisina), 3-aminopropan-1-ilo (ornitina), 3-guanidinopropan-1-ilo (arginina), 3-ureidopropan-1-ilo (citrulina). Grupos laterales de a-aminoacidos preferidos en el significado de R2 son hidrogeno (glicina), metilo (alanina), propan-2-ilo (valina), propan-1-ilo (norvalina), imidazol-4-ilmetilo (histidina), hidroximetilo (serina), 1 -hidroxietilo (treonina), carbamoilmetilo (asparagina), 2-carbamoiletilo (glutamina), 4-aminobutan-1-ilo (lisina), 3-aminopropan-1-ilo (ornitina), 3-guanidinopropan-1-ilo (arginina). La configuracion L se prefiere en cada caso.
En el contexto de la invencion, modificador significa otras entidades moleculares, por ejemplo, polietilenglicol.
5
5
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30
En las formulas del grupo que pueden representar R4, el punto final de la linea que esta marcado por un * no es un atomo de carbono o un grupo CH2, sino que es parte del enlace con el atomo al que R4 esta unido.
En las formulas del grupo que pueden representar R5, el punto final de la linea que esta marcado por una # no es un atomo de carbono o un grupo CH2, sino que es parte del enlace con el atomo al que R5 esta unido.
Se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que
n representa el numero 0, 1,2 o 3,
m representa el numero 0, 1,2 o 3,
en la que m y n son juntos el numero 1,2, 3 o 4,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen4
en las que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que
n
representa el numero 2 o 3,
y
m
representa el numero 0,
o
n
representa el numero 0,
y
m
representa el numero 2 o 3,
R1
R2
R3
R4
5
P
R5
10 R6
R7 R8 R9
representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, representa terc-butiloxicarbonilo,
representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo, representa un grupo de formula
imagen5
en las que
es el punto de union al nitrogeno, representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
representa hidrogeno, aminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
representa -S-tritilo,
representa hidrogeno o aminocarbonilo,
representa -S-tritilo,
representa hidrogeno,
15
20
25
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 o 3,
m representa el numero 0,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen6
en las que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
5
10
15
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30
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0,
m representa el numero 2 o 3,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen7
en las que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 o 3,
m representa el numero 0,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
*
O
O
O
N
5
10
15
20
25
30
en la que
* es el punto de union al nitrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0, 1,2 o 3,
m representa el numero 0, 1,2 o 3,
en la que m y n son juntos el numero 1,2, 3 o 4,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen8
en las que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 o 3, y
m representa el numero 0,
o
n representa el numero 0,
y
m representa el numero 2 o 3,
o
n representa el numero 0,
10
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25
y
m representa el numero 1,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen9
en las que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 o 3,
m representa el numero 0,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen10
en la que
* es el punto de union al nitrogeno,
5
10
15
20
25
30
p representa el numero 1 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0,
m representa el numero 2 o 3,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
imagen11
en la que
* es el punto de union al nitrogeno,
p representa el numero 1 o 5,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
R6 representa -S-tritilo,
R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
R8 representa -S-tritilo,
R9 representa hidrogeno,
y
R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0,
m representa el numero 1,
R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
R3 representa hidrogeno o metilo,
R4 representa un grupo de formula
5
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30
R
R
en la que
* es el punto de union al nitrogeno,
R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
y
R6 representa -S-tritilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 o 3 y m representa el numero 0.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 2 y m representa el numero 0.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 3 y m representa el numero 0.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0 y m representa el numero 2 o 3.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que n representa el numero 0 y m representa el numero 1.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que R1 representa terc-butiloxi-carbonilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que R3 representa hidrogeno o metilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que
R4 representa un grupo de formula
R
5
R
6
en la que
* es el punto de union al nitrogeno,
R5 representa aminocarbonilo,
y
R6 representa -S-tritilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que R6 representa -S-tritilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que R8 representa -S-tritilo.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que R9 representa hidrogeno y R10 representa hidrogeno.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) en la que el atomo de carbono al que el sustituyente -NHR1 esta unido tiene configuracion S.
Tambien se da preferencia a compuestos de formula (I) que tienen la estructura de formula (Ia)
O
imagen12
.R4
R
3
(Ia).
Las definiciones de radicales especificas facilitadas en las combinaciones particulares o combinaciones preferidas de radicales tambien se sustituyen, independientemente de la combinacion particular del radical especificado, con cualquier definicion de radical de otras combinaciones.
5 Se da preferencia muy particular a combinaciones de dos o mas de los intervalos preferidos anteriormente mencionados.
La invencion proporciona ademas un procedimiento para preparar los compuestos de formula (I), o sales de los mismos, solvatos de los mismos o los solvatos de sales de los mismos, en el que los compuestos de formula (II)
O
imagen13
.R
3
(II),
10 en la que
n, m, R1, R2, R3 y R4 son cada uno como se han definido anteriormente, se hacen reaccionar con una fuente de paladio (0) y un agente reductor.
La reaccion se efectua generalmente en disolventes inertes, opcionalmente en presencia de una base debil, preferentemente en un intervalo de temperatura de 0 °C a 50 °C a presion estandar.
15 Los disolventes inertes son, por ejemplo, halohidrocarburos tales como diclorometano, triclorometano o 1,2- dicloroetano, eteres tales como dioxano, tetrahidrofurano o 1,2-dimetoxietano, u otros disolventes tales como acetona, dimetilformamida, dimetilacetamida, 2-butanona o acetonitrilo. Es igualmente posible usar mezclas de los disolventes. Se da preferencia a tetrahidrofurano.
Las fuentes de paladio (0) son, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) 20 o fuentes de paladio (II) que se reducen in situ a paladio (0) durante la reaccion, dandose preferencia a tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0).
Los agentes reductores son, por ejemplo, acido formico o trietilsilano, dandose preferencia a acido formico.
5
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Las bases son, por ejemplo, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina o solucion de fosfato de potasio, dandose preferencia a trietilamina.
Los compuestos de formula (II) son conocidos o pueden prepararse haciendo reaccionar compuestos de formula (III)
O
imagen14
3
(III),
en la que
n, m, R1, R2 y R3 son cada uno como se han definido anteriormente, con compuestos de formula (IV)
h2n-r4
(IV)
en la que
R4 son como se han definido anteriormente.
La reaccion se efectua generalmente en disolventes inertes, en presencia de un reactivo deshidratante, opcionalmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente a 70 °C a presion estandar.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, halohidrocarburos tales como diclorometano, triclorometano o 1,2- dicloroetano, eteres tales como dioxano, tetrahidrofurano o 1,2-dimetoxietano, u otros disolventes tales como acetona, dimetilformamida, dimetilacetamida, 2-butanona o acetonitrilo. Es igualmente posible usar mezclas de los disolventes. Se da preferencia a diclorometano.
Reactivos deshidratantes adecuados en este contexto son, por ejemplo, carbodiimidas, por ejemplo, N,N'-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilaminoisopropil)-N'-
etilcarbodiimida (EDC), N-ciclohexilcarbodiimida-N'-propiloximetilpoliestireno (PS-carbodiimida), o compuestos de carbonilo tales como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tales como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2- oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metilisoxazolio, o compuestos de acilamino tales como 2-etoxi-1-etoxicarbonil- 1,2-dihidroquinolina, o anhidrido propanofosfonico, o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3- oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitri(dimetilamino)fosfonio, o hexafluorofosfato de O- (benzotriazol-1-il)-N,N,N',N -tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de benzotriazol-1-il-N-tetrametil-uronio
(TBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU) o hexafluorofosfato de O-(7- azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio (BOP), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1 -iloxitris(pirrolidino)fosfonio (PYBOP), o N-hidroxisuccinimida, o mezclas de estos con bases.
Las bases son, por ejemplo, carbonatos de metal alcalino, por ejemplo, carbonato sodico o carbonato de potasio, o hidrogenocarbonato de sodio o hidrogenocarbonato de potasio, o bases organicas tales como trialquilaminas, por ejemplo, trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina o N,N-diisopropiletilamina, dandose preferencia a N,N-diisopropiletilamina.
Preferentemente, la condensacion se lleva a cabo con HATU en presencia de N,N-diisopropiletilamina.
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Los compuestos de formula (III) y (IV) son conocidos o pueden sintetizarse por procedimientos conocidos a partir de los compuestos de partida apropiados.
La preparacion de los compuestos segun la invencion puede ilustrarse por el siguiente esquema de sintesis: Esquema 1
imagen15
Los compuestos segun la invencion pueden usarse como conexion desprendible de peptidos o proteinas con otras entidades moleculares, por ejemplo, polietilenglicol u otros modificadores, para formar un profarmaco de dichos peptidos o proteinas.
El principio activo de estos derivados de tirosina es un carbamato entre el grupo OH fenolico de una tirosina en una secuencia de peptidos o de proteinas y una funcionalidad amina de un diaminoacido. La segunda amina del diaminoacido esta protonada en condiciones acidas. Pero a condiciones neutras o basicas actua de nucleofilo que ataca el carbamato. Esto conduce a la formacion de una urea ciclica y liberacion de la tirosina sin modificar. La funcionalidad acido del diaminoacido se usa como punto de union para un modificador. Pueden preverse muchos enfoques diferentes para unir un modificador en esta funcionalidad. Una metodologia comun para unir modificadores tales como polietilenglicol a un peptido es haciendo reaccionar PEG-maleimidas con residuos de cisteina u otros tioles. Por tanto, una forma directa para conseguir la tarea deseada es la union de un residuo de cisteina mediante su funcionalidad amina al grupo carboxi del diaminoacido. El extremo carboxi de la cisteina podria ser, por ejemplo, una amida primaria, pero tambien son posibles muchas otras modificaciones sobre su extremo C. Entre el diaminoacido y la cisteina o cualquier otra funcionalidad tiol, en la que se preve facilmente que una pletora de grupos espaciadores seria adecuada sin cambiar el caracter de este concepto de enlace, ya que toda esta construccion molecular sigue entre la urea ciclica formada a partir del diaminoacido sobre un extremo y el modificador sobre el otro extremo. El peptido o proteina liberado no esta cambiado de ningun modo. Tambien la quimica para unir modificadores al ligador no se limita a la reaccion de una funcionalidad tiol con una maleimida. Otros procedimientos muy conocidos para enlazar modificadores tales como PEG a un tiol son igualmente adecuados. Tambien son alternativas muchas otras metodologias de enlace sin tiol tales como quimica “clic” o formaciones de enlaces sencillos de amida a un modificador funcionalizado con amina. El Esquema 2 muestra una union de ejemplo de un modificador a un peptido que incorpora el derivado de aminoacido basado en tirosina.
Esquema 2
imagen16
acoplamiento de amida
de amida
desproteccidn acida
union del modificador
N-modificador
N —modificador
H.N—R
1) desproteccion
2) acoplamiento
HOOC—R
Los peptidos o proteinas son liberados de dicho profarmaco en una manera dependiente del pH. Los profarmacos son estables a aproximadamente pH 4, pero liberan el farmaco activo a pH fisiologico. Despues de la liberacion del 5 peptido o proteina del profarmaco todo lo que queda en el peptido o proteina es una tirosina no modificada en el primer punto de union del ligador. Por lo tanto, todos los peptidos o proteinas que contienen al menos una tirosina son potencialmente susceptibles a tal modificacion.
La escision dependiente del pH del profarmaco para liberar el peptido o proteina ayuda a disenar una degradacion controlada de tal profarmaco con cinetica de farmaco predecible.
10 Los compuestos segun la invencion pueden incorporarse en un peptido o proteina segun protocolos de sintesis de peptidos en disolucion, ademas de en fase solida.
Proteinas y peptidos adecuados que contienen al menos un aminoacido de tirosina son, pero no se limitan a, adenosina desaminasa, adiponectina, hormona adrenocorticotropica (ACTH), adrenomedulina (ADM), agalsidasa, albumina, inhibidor de proteinasa alfa-1 (API), alfa-I antitripsina b (AAT), alteplasa, serina ancrod, angiotensina, 15 angiotensinogeno, angiotensina, anistreplasa, hormona antimulleriana, antitrombina III, antitripsinas, aprotinina,
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asparaginasas, atriopeptina, bifalina, bradiquina, calcitonina, colecistoquinina, coriogonadotropina, coriomamotropina, colagenasa, corticoliberina, corticotropina, DNasa, endorfinas, encefalinas, enoxacina, eritropoyetinas, factor II, factor IIa, factor IX, factor IXa, factor VII, factor VIIa, factor VIII, factor VIIIa, factor X, factor Xa, factor XI, factor XIa, fibrinolisina, fibrinolisina, foliberina, hormonas estimulantes del foliculo, folitropina, Fsh, galactosidasa, gastrina, grelina, glucagon, peptidos similares al glucagon (GLP-1), glucocerebrosidasa, glumitocina f, gonadoliberina c, gonadotropina, hormona liberadora de gonadotropina, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrofagos (GM-CSF), factores de crecimiento, hormona liberadora de hormonas del crecimiento, hormonas del crecimiento, hemoglobinas, vacunas para la hepatitis B, hirudina, gonadotropina corionica humana, lactogeno placentario humano, hialuronidasas, idarubicina, idurnonidasa, inmunoglobulinas, vacunas contra la gripe, inhibina, insulinas, interferones, interleucinas, isotocina g, kalidina, factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), lactasa, leptina, leuprolida, levotiroxina, lipotropina, lisinoprilo, luliberina, hormona luteinizante, lutropina, hormona estimulante de melanocitos, melanoliberina, melanostatina, melanotropina, peptido natriuretico, orexina, hormona liberadora de corticotropina, oxitocina, pancrelipasa, pancreozimina, papaina, hormona paratiroidea, pepsina, proteina activante de fosfolipasa (PLAP), factor activante de plaquetas-acetilhidrolasa (PAF-AH), proangiotensina, prolactina, prolactoliberina, prolactostatina, proteasas, proteina C, relaxina, secretina, senorelina, somatoliberina, somatomedina, somatropinas, estreptocinasa, sucrasa, superoxido dismutasa (SOD), trombopoyetina, timopoyetinano, timosina, hormona estimulante tiroidea, tiroliberina, tirotropina, hormona liberadora de tirotropina, tilactasa, activador tisular del plasminogeno (tPA), factor de necrosis tumoral (TNF), urato oxidasa, urogonadotropina k, urocinasa, vacunas, vasopresina, vasotocina, a-1 antitripsina. Tambien estan incluidas versiones mutantes de peptidos o proteinas enumerados anteriormente o todas las otras proteinas preparadas por metodologias recombinantes tales como anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, proteinas de union monocatenarias y proteinas de fusion. Tambien estan incluidos cualquier peptido sintetico o proteinas con actividad biologica.
Los compuestos segun la invencion son adecuados para su uso para la preparacion de profarmacos que son adecuados para su uso como medicamentos para el tratamiento y/o la prevencion de enfermedades en seres humanos y animales.
Los compuestos segun la invencion son adecuados para su uso para la preparacion de profarmacos liberadores de adrenomedulina (ADM) especificos.
La presente invencion proporciona ademas el uso de los compuestos segun la invencion para la preparacion de profarmacos para el tratamiento y/o la prevencion de trastornos.
Los profarmacos preparados con los compuestos segun la invencion pueden actuar sistemicamente y/o localmente. Para este fin, pueden administrarse de una forma adecuada, por ejemplo, por la via parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, dermica, transdermica, conjuntiva, optica o como implante o protesis endovascular.
Los profarmacos preparados con los compuestos segun la invencion pueden administrarse en formas de administracion adecuadas para estas vias de administracion.
La administracion parenteral puede tener lugar evitando una etapa de absorcion (por ejemplo, intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o con inclusion de una absorcion (por ejemplo, intramuscular, subcutanea, intracutanea, percutanea o intraperitoneal). Las formas de administracion adecuadas para administracion parenteral incluyen preparaciones para inyeccion e infusion en forma de disoluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos esteriles.
Para las otras vias de administracion son adecuadas, por ejemplo, formas farmaceuticas para inhalacion (que incluyen inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas nasales, colirios, disoluciones o esprays; peliculas/obleas o suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipofilas, pomadas, cremas, sistemas terapeuticos transdermicos (por ejemplo, parches), leche, pastas, espumas, polvos para extender sobre la piel, implantes o protesis endovasculares.
Se prefiere administracion parenteral, especialmente administracion intravenosa.
Los profarmacos preparados con los compuestos segun la invencion pueden convertirse en las formas de administracion establecidas. Esto puede tener lugar de un modo en si conocido mezclando con excipientes farmaceuticamente adecuados no toxicos inertes. Estos excipientes incluyen vehiculos (por ejemplo, celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ejemplo, polietilenglicoles liquidos), emulsionantes y dispersantes o humectantes (por ejemplo, dodecilsulfato de sodio, oleato de polioxisorbitano), aglutinantes (por ejemplo, polivinilpirrolidona), polimeros sinteticos y naturales (por ejemplo, albumina), estabilizadores (por ejemplo, antioxidantes, por ejemplo, acido ascorbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorganicos, por ejemplo, oxidos de hierro) y aromas y/u olores de enmascaramiento.
Se ha encontrado generalmente que es ventajoso, en el caso de administracion parenteral, administrar cantidades de aproximadamente 0,001 a 5 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,01 a 1 mg/kg, de peso corporal para lograr resultados eficaces.
Sin embargo, en algunos casos puede ser necesario desviarse de las cantidades establecidas, en particular en funcion del peso corporal, via de administracion, respuesta individual al principio activo, naturaleza de la preparacion y tiempo o intervalo durante el que tiene lugar la administracion. Por ejemplo, en algunos casos puede ser suficiente menos de la cantidad minima anteriormente mencionada, mientras que en otros casos el limite superior establecido 5 debe superarse. En el caso de la administracion de cantidades mayores puede ser aconsejable dividir estas en una pluralidad de dosis individuales durante el dia.
Los siguientes ejemplos de trabajo ilustran la invencion. La invencion no se limita a los ejemplos.
Los porcentajes de las siguientes pruebas y ejemplos son, a menos que se establezca de otro modo, porcentajes en peso; partes son partes en peso. Las relaciones de disolventes, relaciones de dilucion y datos de concentracion para 10 las disoluciones lfquido/lfquido estan cada una basadas en volumen.
A. Ejemplos
Abreviaturas
AA
aminoacido
Acm
acetamidometilo
aprox.
aproximadamente
Boc
ferc-butiloxicarbonilo
CDI
carbonildiimidazol
d
dia(s), doblete (en RMN)
CCF
cromatografia en capa fina
DCI
ionizacion quimica directa (en EM)
dd
doblete de dobletes (en RMN)
DIEA
N,N-diisopropiletilamina
DMAP
4-dimetilaminopiridina
DMF
W,W-dimetilformamida
DMSO
sulfoxido de dimetilo
d.t.
del teorico (en rendimiento)
eq.
equivalente(s)
ESI
ionizacion por electropulverizacion (en EM)
Fmoc
(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo
h
hora(s)
HATU
hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HPLC
cromatografia liquida de alta resolucion a alta presion
EM-CL
espectroscopia de masas acoplada a cromatografia de liquidos
m
multiplete (en RMN)
min
minuto(s)
EM
espectroscopia de masas
RMN
espectroscopia de resonancia magnetica nuclear
RP
fase inversa (en HPLC)
TA
temperatura ambiente
5
10
15
20
25
Rt
tiempo de retencion (en HPLC)
s
singlete (en RMN)
TBTU
tetrafluoroborato de benzotriazol-1-il-N-tetrametil-uronio
tBu
terc-butilo
TFA
acido trifluoroacetico
THF
tetrahidrofurano
Trt
tritilo
Procedimientos de EM-CL y EM
Procedimiento 1 (EM-CL): Tipo de instrumento: Waters ACQUITY SQD UPLC System; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 p 50 mm x 1 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,25 ml de acido formico al 99 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,25 ml de acido formico al 99 % de concentracion; gradiente: 0,0 min 90 % de A ^ 1,2 min 5 % de A ^ 2,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; flujo: 0,40 ml/min; deteccion de UV: 210 - 400 nm.
Procedimiento 2 (EM-CL): Instrumento de EM: tipo: Waters (Micromass) Quattro Micro; tipo de instrumento de HPLC: Agilent 1100 series; columna: Thermo Hypersil GOLD 3 p 20 mm x 4 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion; gradiente: 0,0 min 100 % de A ^ 3,0 min 10 % de A ^ 4,0 min 10 % de A; horno: 50 °C; flujo: 2,0 ml/min; deteccion de UV: 210 nm.
Procedimiento 3 (HPLC): Tipo de instrumento: HP 1200 Series; UV DAD; columna: Phenomenex Luna 5 pm C5 100A, 150 mm x 4,6 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion; gradiente: 0,0 min 95 % de A ^ 5 min 5 % de A; ^ 5,8 min 95 % de A ^ 6,2 min 95 % de A; velocidad de flujo: 2,5 ml/min; horno: TA; deteccion UV: 210 nm.
Procedimiento 4 (HPLC): Tipo de instrumento: HP 1200 Series; UV DAD; columna: Merck Chromolith Fastgradient RP18 50 mm x 2 mm; fase movil A: 1 l de agua + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion, fase movil B: 1 l de acetonitrilo + 0,5 ml de acido formico al 50 % de concentracion; gradiente: 0,0 min 95 % de A ^ 2,9 min 5 % de A ^ 3,2 min 5 % de A; velocidad de flujo: 3 ml/min; horno: TA; deteccion UV: 210 nm.
Sintetizador de microondas: sintetizador Biotage Emrys Iniciator II, con tamano de vial variable hasta 20 ml de volumen de reaccion y procesador de muestras “Robot 60”.
Tampon citrato a pH 4: Fluka n° 82566; tampon citrato a pH 4, estabilizado con composicion de azida de sodio: acido citrico, ~0,056 M; azida de sodio, ~0,05 %; cloruro sodico, ~0,044 M; hidroxido sodico, ~0,068 M.
Compuestos de partida
Ejemplo 1A
Alil-N-(terc-butoxicarbonil)-O-[(4-nitrofenoxi)carbonil]-L-tirosinato
O
O
imagen17
imagen18
O
H
imagen19
CH3 O ch2
36,7 g (114,3 mmoles) de ester alilico de N-Boc-L-tirosina, 23,0 g (114,3 mmoles) de cloroformiato de 4-nitrofenilo, 17,5 ml (125,7 mmoles) de trietilamina y 1,40 g (11,4 mmoles) de 4-dimetilaminopiridina se combinaron en 1000 ml de diclorometano y se agitaron a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reaccion se extrajo con aprox. 500 ml de agua y con aprox. 250 ml de salmuera y se seco sobre aprox. 100 g de sulfato de sodio. El disolvente se 5 elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min) y el producto se disolvio en eter dietilico caliente y cristalizo durante la noche a 4 °C. Los cristales se filtraron, se lavaron con eter dietilico frio y se secaron en alto vacio (aprox. 0,1 mbar, 18 h). El rendimiento fue 29,86 g (59,6 mmoles, 52% del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,23 min, m/z = 487 (M+H)+
10 Ejemplo 2A
Acido (2S)-4-{[(4-{(2S)-3-(aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-amino}-2-[(terc-
butoxicarbonil)amino]butanoico
CH
HsC^
O ch3
O O NH
O N H
O
imagen20
OH
O
V
imagen21
H3C
h3c .
3 \ ^nh
O
imagen22
T
CH3 O
CH
4,0 g (8,22 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 60 ml de diclorometano. Se anadieron 1,795 15 (8,22 mmoles) de acido (2S)-4-amino-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoico y 1,43 ml (8,22 mmoles) de N,N-
diisopropiletilamina. La mezcla de reaccion se fracciono en 3 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 75 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 600 ml de gel de silice. Los disolventes usados 20 fueron diclorometano/acetato de etilo 4/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1, diclorometano/metanol 4/1 y diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 4,02 g (6,54 mmoles, 80 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,07 min, m/z = 564 (M-H)-
Ejemplo 3A
25 Alil-O-({(3S)-4-{[(2R)-1-Amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxi-carbonil)amino]-4- oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosinato
H3C^
CH
O CH
X
O O NH
imagen23
imagen24
2,50 g (4,42 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 100 ml de diclorometano. Se anadieron 1,602 g (4,42 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,77 ml (4,42 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 1,68 g (4,42 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se fracciono en 5 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un 5 tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 600 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 2/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1, diclorometano/metanol 20/1 y diclorometano/metanol 10/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a 10 presion reducida. Esto dio 4,12 g (3,30 mmoles, 75 % del teorico, pureza del 73 %) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,36 min, m/z = 911 (M+H)+
Ejemplo 4A
Metil(2-oxotetrahidrofurano-3-il)carbamato de terc-butilo
imagen25
15 El compuesto se sintetizo segun Alberico, Dino; Paquin, Jean-Francois; Lautens, Mark; Tetrahedron, 2005, vol. 61, pag. 6283 - 6297.
5,18 g (25,7 mmoles) de (tetrahidro-2-oxo-3-furanil)carbamato de terc-butilo, 4,81 ml (77,2 mmoles) de yodometano se disolvieron en 100 ml de dimetilformamida seca. La solucion se enfrio a 0 °C y se anadieron 1,34 g (60 % en aceite mineral, 33,5 mmoles) de hidruro de sodio. La reaccion se calento hasta temperatura ambiente y se agito 20 durante la noche. La mezcla de reaccion se anadio a aprox. 400 ml de agua y la mezcla se extrajo tres veces con aprox. 300 ml de acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 8,70 g (25,7 mmoles, 100 % del teorico, pureza del 63 %) del producto deseado.
Los datos analiticos fueron segun la bibliografia. El producto se uso en la siguiente etapa sintetica sin mas 25 purificacion.
Ejemplo 5A
Acido 2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]-4-(1,3-dioxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)butanoico
O
imagen26
8,70 g (aprox. 25 mmoles, pureza de aprox. el 63%) del compuesto del Ejemplo 4A se disolvieron en 560 ml de dimetilformamida. Se anadieron 8,23 g (44,4 mmoles) de ftalimida de potasio y la mezcla de reaccion se calento a 5 150 °C durante 7 h. Se eliminaron aprox. 400 ml del disolvente mediante evaporacion rotatoria (aprox. 60 °C, aprox.
10 mbar, aprox. 30 min). La mezcla de reaccion se vertio en una mezcla de aprox. 100 ml de agua, 200 g de hielo y 15 ml de acido acetico. Despues de fundir el hielo restante la mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se extrajo 3 veces con aprox. 100 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a 10 cromatografia sobre aprox. 70 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 9/1 a diclorometano/acetato de etilo 6/4. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 2,39 g (6,04 mmoles, 24 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,92 min, m/z = 363 (M+H)+
Ejemplo 6A
15 Acido 4-amino-2-[(terc-butoxicarbonil)(metil)amino]butanoico
O
imagen27
11,8 g (32,6 mmoles) del compuesto del Ejemplo 5A se disolvieron en aprox. 640 ml de etanol y 23,8 ml (488 mmoles) de hidracina hidratada se anadieron a la mezcla de reaccion. Despues de agitar durante la noche, la mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio
20 en etanol y se anadieron aprox. 50 g de gel de silice, el disolvente se elimino a presion reducida. El solido resultante se anadio sobre una columna de gel de silice de aprox. 500 g y se sometio a cromatografia. Los disolventes usados fueron diclorometano/metanol 9/1 a diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 2,98 g (12,8 mmoles, 39 % del teorico) de producto.
25 EM-CL (Procedimiento 2): Rt = 0,21 min, m/z = 233 (M+H)+
EM-DCI (Procedimiento 5): m/z = 233 (M+H)+
Ejemplo 7A
Acido 4-{[(4-{(2S)-3-(aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-amino}-2-[(terc-
butoxicarbonil)(metil)amino]butanoico
CH
H3C>k
O ch3
CH
H3C
imagen28
imagen29
OH
h3c
3 ' O /NH
ch3 o
ch2
0,931 g (1,92 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 30 ml de diclorometano. Se anadieron 0,455 g (1,92 mmoles) del compuesto del Ejemplo 6A. La mezcla de reaccion se fracciono en 2 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 80 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de 5 reaccion combinada el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 0,523 g (0,85 mmoles, 44 % del teorico) del producto deseado como una mezcla de 2 diaestereomeros.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,08 y 1,11 min, m/z = 578 (M-H)-
10 Ejemplo 8A
Alil-O-[(4-{[(2R)-1-amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxicarbonil)-(metil)amino]-4-
oxobutil)carbamoil]-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosinato
imagen30
2,24 g (3,86 mmoles) del compuesto del Ejemplo 7A se disolvieron en 100 ml de diclorometano. Se anadieron 1,401 g (3,86 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,67 ml (3,86 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 1,47 g (3,86 mmoles)
de HATU. La mezcla de reaccion se fracciono en 5 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que 5 contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 3,26 g (2,75 mmoles, 71 % del teorico, 78% pureza) del producto deseado como una mezcla de diaestereomeros.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,41 y 1,43 min, m/z = 924 (M+H)+
Ejemplo 9A
N5-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-N2-(terc-butoxicarbonil)-L-ornitina
10
O
O
imagen31
OH
3
6,00 g (12,33 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 120 ml de diclorometano. Se anadieron 2,57 g (12,33 mmoles) de N2-(terc-butoxicarbonil)-L-ornitina. La mezcla de reaccion se fracciono en 6 porciones. Las porciones se calentaron durante 90 min en un tubo cerrado a 75 °C en un sintetizador de microondas. La mezcla de reaccion combinada se extrajo con aprox. 100 ml de solucion saturada de cloruro de amonio. La fase acuosa se 15 retroextrajo dos veces con aprox. 30 ml de diclorometano cada vez. Las fases organicas combinadas se extrajeron con aprox. 50 ml de salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 600 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 40/1 a diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 2,63 g 20 (4,06 mmoles, 33 % del teorico, 89% pureza) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,03 min, m/z = 578 (M-H)
Ejemplo 10A
N5-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-N2-(terc-butoxicarbonil)-L-ornitil-S-
tritil-L-cisteinamida
H
O O
imagen32
imagen33
1,20 g (2,07 mmoles) del compuesto del Ejemplo 9A se disolvieron en 48 ml de diclorometano. Se anadieron 0,750 g (2,07 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,36 ml (2,07 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 0,787 g (2,07 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se fracciono en 3 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un 5 tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 400 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 2/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 1,30 g (1,5 mmoles, 56 % del teorico, 82% 10 pureza) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,35 min, m/z = 924 (M+H)+
Ejemplo 11A
N2-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-N5-(terc-butoxicarbonil)ornitina
imagen34
15 3,00 g (6,16 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 60 ml de diclorometano. Se anadieron 1,43 g
(6,16 mmoles) de N5-(terc-butoxicarbonil)-L-ornitina. La mezcla de reaccion se fracciono en 3 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 75 °C en un sintetizador de microondas. La mezcla de reaccion combinada se extrajo con aprox. 500 ml de solucion saturada de cloruro de amonio. La fase acuosa se retroextrajo dos veces con aprox. 30 ml de diclorometano cada vez. Las fases organicas combinadas se extrajeron 20 con aprox. 50 ml de salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 500 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 20/1 a diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 2,29 g (3,50 mmoles, 57 % del teorico, 89% pureza) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,07 min, m/z = 578 (M-H)- Ejemplo 12A
N2-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-N5-(terc-butoxicarbonil)-L-omitil-S-
tritil-L-cisteinamida
imagen35
1,50 g (2,59 mmoles) del compuesto del Ejemplo 11A se disolvieron en 60 ml de diclorometano. Se anadieron 0,940 g (2,59 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,45 ml (2,60 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 0,984 g (2,59 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se fracciono en 3 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se
10 elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 400 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 2/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 1,72 g (1,64 mmoles, 63 % del teorico, 88% pureza) del producto deseado.
15 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,35 min, m/z = 924 (M+H)+
Ejemplo 13A
Acido (2S)-2-{[(4-{(2S)-3-(aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-amino}-4-[(terc-
butoxicarbonil)amino]butanoico
O ch3
x
HN O' \'CH
imagen36
CH3 3
OH
7,50 g (15,4 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 150 ml de diclorometano. Se anadieron 3,36 g (15,4 mmoles) de acido (2S)-2-amino-4-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoico. La mezcla de reaccion se fracciono en 10 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 75 °C en un sintetizador de 5 microondas. La mezcla de reaccion combinada se extrajo con aprox. 100 ml de solucion saturada de cloruro de amonio. La fase acuosa se retroextrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano cada vez. Las fases organicas combinadas se extrajeron con aprox. 50 ml de salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 1 l de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 4/1, diclorometano/metanol 10/1 a 10 diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 8,70 g (10,8 mmoles, 70 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,06 min, m/z = 564 (M-H)-
Ejemplo 14A
Alil-N-(terc-butoxicarbonil)-O-{[(4R,7S)-4-carbamoil-13,13-dimetil-6,11 -dioxo-1,1,1 -trifenil-12-oxa-2-tia-5,10- 15 diazatetradecan-7-il]carbamoil}-L-tirosinato
imagen37
3,00 g (5,30 mmoles) del compuesto del Ejemplo 13A se disolvieron en 120 ml de diclorometano. Se anadieron 1,92 g (5,30 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,92 ml (5,30 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 2,02 g (5,30 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se fracciono en 6 porciones. Las porciones se calentaron durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion combinada el disolvente se elimino 5 mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 800 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/acetato de etilo 2/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 4,91 g (3,73 mmoles, 70 % del teorico, 69% pureza) del producto deseado.
10 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,35 min, m/z = 910 (M+H)+
Ejemplo 15A
Alil-N-(terc-butoxicarbonil)-O-{[(3S)-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-oxo-4-{[2-(tritilsulfanil)etil]amino}butil]carbamoil}-
L-tirosinato
H3C
O
CH3
CH
O O' NH
imagen38
imagen39
15 351 mg (0,63 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 15 ml de diclorometano. Se anadieron 200
mg (0,63 mmoles) de 2-(tritilsulfanil)etanamina, 0,11 ml (0,63 mmoles) de N,N-diisopropiletil-amina y 238 mg (0,63 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones 20 que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 98 mg (0,110 mmoles, 16 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,45 min, m/z = 867 (M+H)+
Ejemplo 16A
N-{(2S)-4-{[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)-carbonil]amino}-2-[(terc- 25 butoxicarbonil)amino]butanoil}-S-tritil-L-cisteinglicinamida
imagen40
173 mg (0,31mmol) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 10 ml de diclorometano. Se anadieron 128 mg (0,31 mmoles) de S-tritil-L-cisteinglicinamida, 53 pl (0,31 mmoles) de N,N-diisopropiletil-amina y 116 mg (0,31 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador 5 de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 57 mg (0,02 mmoles, 18 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,31 min, m/z = 968 (M+H)+
10 Ejemplo 17A
N-[(9H-Fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicil-S-tritil-L-cisteinamida
imagen41
imagen42
1,00 g (3,36 mmoles) de N-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]glicina se disolvio en 30 ml de diclorometano. Se anadieron 1,41 g (3,36 mmoles) de S-tritil-L-cisteinglicinamida, 0,59 ml (3,36 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 15 1,28 g (3,36 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un
sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 300 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 20/1, diclorometano/metanol 10/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 1,63 g (2,06 mmoles, 20 81 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,31 min, m/z = 642 (M+H)+
Ejemplo 18A
Glicil-S-tritil-L-cisteinamida
imagen43
1,53 g (2,38 mmoles) del compuesto del Ejemplo 17A se disolvieron en 18 ml de dimetilformamida y se anadieron 5 0,47 ml (4,79 mmoles) de DIEA. Despues de un tiempo de reaccion de una hora, el producto en bruto se purifico por
RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 416 mg (0,97 mmoles, 40 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,76 min, m/z = 418 (M-H)-
10 Ejemplo 19A
N-{(2S)-4-{[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)-carbonil]amino}-2-[(terc-
butoxicarbonil)amino]butanoil}glicil-S-tritil-L-cisteinamida
CH
H3CA
o ch3
O O NH
imagen44
H
N
imagen45
559 mg (0,99 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 15 ml de diclorometano. Se anadieron 415 15 mg (0,99 mmoles) del compuesto del Ejemplo 18A, 173 pl (0,99 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 376 mg (0,99 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 70 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 20/1 a diclorometano/metanol 5/1. Las fracciones que contenian 20 producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 860 mg (0,69 mmoles, 70 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,30 min, m/z = 968 (M+H)+
Ejemplo 20A
9H-Fluoren-9-ilmetil-(6-{[(2R)-1-amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-6-oxohexil)carbamato
imagen46
5 500 mg (1,42 mmoles) de acido 6-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}hexanoico se disolvieron en 18 ml de
diclorometano. Se anadieron 513 mg (1,42 mmoles) de S-tritil-L-cisteinglicinamida, 246 pl (1,42 mmoles) de N,N- diisopropiletilamina y 537 m g (1,42 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de 10 agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 678 mg (0,70 mmoles, 49 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,38 min, m/z = 698 (M+H)+
Ejemplo 21A
6-Amino-N-[(2R)-1-amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]hexanamida
15
imagen47
678 mg (0,97 mmoles) del compuesto del Ejemplo 20A se disolvieron en 7 ml de dimetilformamida y se anadieron 0,19 ml (1,94 mmoles) de DIEA. Despues de un tiempo de reaccion de una hora, el producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 457 mg (0,93 20 mmoles, 95 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,85 min, m/z = 476 (M+H)+
Ejemplo 22A
Alil-O-({(3S)-4-[(6-{[(2R)-1-amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-6-oxohexil)-amino]-3-[(terc-
butoxicarbonil)amino]-4-oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosinato
CH„
H3C>L
O CH
X
O ONH
h3c
imagen48
O
imagen49
O
CH
imagen50
457 mg (0,81 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 15 ml de diclorometano. Se anadieron 384 mg (0,81 mmoles) del compuesto del Ejemplo 21a, 141 pl (0,81 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 307 mg (0,81 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador 5 de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico en dos porciones por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 255 mg (0,22 mmoles, 28 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,31 min, m/z = 1032 (M+H)+
10 Ejemplo 23A
Alil-O-({(14S)-1 -azido-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-13-oxo-3,6,9-trioxa-12-azahexadecan-16-il}carbamoil)-N-(terc- butoxicarbonil)-L-tirosinato
CH
O ch3
X
O O^ NH
cA
I H
h3C3Vvnh
imagen51
CH3 O
CH
O
N
11 + N II N
518 mg (0,92 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 15 ml de diclorometano. Se anadieron 200 15 mg (0,92 mmoles) de 2-{2-[2-(2-azidoetoxi)etoxi]etoxi}etanamina, 160 pl (0,92 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 348 mg (0,92 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 20 276 mg (0,34 mmoles, 37 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,15 min, m/z = 766 (M+H)+
32
Ejemplo 24A
N-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-L-
alanina
imagen52
CH
3
3
5 2,45 g (5,0 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1A se disolvieron en 40 ml de dicloroetano. Se anadieron 1,03 g (5,0
mmoles) de 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-L-alanina. La mezcla de reaccion se calento a 85 °C durante 2 h. El disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 150 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/metanol 20/1 a diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a 10 presion reducida. Esto dio 1,23 g (2,2 mmoles, 44 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,06 min, m/z = 550 (M-H)-
Ejemplo 25A
N-[(4-{(2S)-3-(Aliloxi)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-L-
alanil-S-tritil-L-cisteinamida
15
O
<A
H
H3C
O^^„-'O^,/CH3
NH CH3 O
imagen53
N
NH
O
imagen54
o O
O
'S
^ //
H^ONH ^
Y 1
ch3 o ch2
1,23 g (2,23 mmoles) del compuesto del Ejemplo 24A se disolvieron en 25 ml de diclorometano. Se anadieron 0,81 g (2,23 mmoles) de S-tritil-L-cisteinamida, 0,39 ml (2,23 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 0,85 g (2,23 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3 h. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino mediante evaporacion rotatoria (aprox. 40 °C, aprox. 200 mbar, aprox. 30 min). El producto en 20 bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 70 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/metanol 20/1 a diclorometano/metanol 5/1. Las fracciones que contenian producto se
combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 2,38 g (2,03 mmoles, 91 % del teorico, 76% pureza) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,37 min, m/z = 897 (M+H)+
Ejemplo 26A
5 Alil-O-({(3S)-4-{[(2R)-1-anilino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4- oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosinato
imagen55
456 mg (0,68 mmoles) del compuesto del Ejemplo 2A se disolvieron en 8 ml de diclorometano. Se anadieron 300 mg (0,68 mmoles) de N-fenil-S-tritil-L-cisteinamida, 0,12 ml (0,68 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina y 260 mg (0,68
10 mmoles) de HATU. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 4 h. De la mezcla de reaccion el disolvente se elimino a presion reducida. El producto en bruto se purifico en dos porciones por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol de 9/1 a 1/9. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 361 mg (0,37 mmoles, 53 % del teorico) del producto deseado.
15 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,48 min, m/z = 987 (M+H)+
Ejemplo 1B
terc-Butil-[(2S)-1-{[(2R)-1-amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-4-{[(4-{(2S)-3-anilino-2-[(terc-
butoxicarbonil)amino]-3-oxopropil}fenoxi)carbonil]amino}-1-oxobutan-2-il]carbamato
O CH
O O' NH
H3C
imagen56
imagen57
3
H
3
250 mg (0,29 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1 se disolvieron en 10 ml de diclorometano. Se anadieron 40 mg (0,43 mmoles) de anilina, 164 mg (0,43 mmoles) de HATU y 75 pl (0,43 mmoles) de DIEA. La mezcla de reaccion se calento durante 30 min en un tubo cerrado a 60 °C en un sintetizador de microondas. El producto en bruto se concentro a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en metanol y se purifico por RP-HPLC 5 preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 271 mg de producto (88 % del teorico).
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,31 min, m/z = 945 (M+H)+
Usando los acidos carboxilicos apropiados (Ejemplos de trabajo 2 a 12), los ejemplos de la siguiente tabla se preparan analogamente al Ejemplo 1B.
10
imagen58
imagen59
Ejemplo
Estructura Caracterizacion
6B
CH3 /—\ H3CA { // (^ 0 ch3 v—f T 3 YYY O O^^NH ,, S"\ ?ArVNj O rS 0 O 'sAnH hYyY CH3 0 kY EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,43 min, m/z = 903 (M+H)+
7B
H3C>k 1 / [^| 0 ch3 X 3 0 ^N^ S"\ /'n~Vnyj O AX 0 X^NH j 0 V0 YnC NH2 H3WnhX h3cX Y rii ch3 0 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,29 min, m/z = 1002 (M+H)+
imagen60
imagen61
Ejemplo
Estructura Caracterizacion
12B
ch3 /—\ H3C>k 1 / [^| O ch3 X 3 O O^NH ,, S"\ /'n~Vnyj o Ij-X O X^NH I O |Al V^NH ^ HX^nhA h3cX Y rii ch3 O EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,48 min, m/z = 1022 (M+H)+
Ejemplo 1C
O-{[(3S)-3-Amino-4-({(2R)-1-amino-3-[(1-bencil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)sulfanil]-1-oxopropan-2-il}amino)-4- 5 oxobutil]carbamoil}-N-fenil-L-tirosinamida
O
imagen62
238 mg (0,25 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1B se disolvieron en 10 ml de dicloroetano. Se anadieron 0,12 ml de trietilsilano, aprox. 10 ml de acido trifluoroacetico y aprox. 0,5 ml de agua. La mezcla de reaccion se agito durante aprox. 30 min a temperatura ambiente. Se anadieron 100 ml de dicloroetano y la mezcla de reaccion se evaporo a 10 presion reducida a aprox. 1 ml de volumen de disolvente. Se anadieron aprox. 100 ml de agua y la mezcla de reaccion se extrajo tres veces con aprox. 50 ml de diclorometano. A la fase acuosa se anadieron 15 ml de acido acetico. La fase acuosa se congelo y se liofilizo. Los liofilizados se disolvieron en aprox. 50 ml de metanol y se anadieron 0,183 mg (0,98 mmoles) de N-bencilmaleimida. La mezcla de reaccion se agito durante la noche a
temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad y se redisolvio en aprox. 5 ml de metanol y se purified por RP-HPLC preparativa sobre C18 con un gradiente de agua/metanol. Las fracciones se recogieron en tubos de ensayo de 20 ml en un colector de fracciones automatico. Para garantizar acidez suficiente, cada vial se lleno con 0,5 ml de acido acetico antes de la recogida. Todas las fracciones que contenian el compuesto del Ejemplo 5 1C se combinaron. Se elimino acetonitrilo parcialmente sobre un evaporador rotatorio a 30 °C de temperatura del bano de agua y aprox. 50 mbar durante aprox. 30 min. Despues de la adicion de 0,5 ml de acido acetico, la solucion restante se liofilizo. El rendimiento total fue 168 mg (0,24 mmoles, 98 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,55 min, m/z = 690 (M+H)+
Usando los precursores apropiados (Ejemplos 2B a 9B), los ejemplos de la siguiente tabla se preparan 10 analogamente al Ejemplo 1C.
imagen63
imagen64
imagen65
imagen66
Ejemplo 10Ca
N-alfa-(terc-butoxicarbonil)-O-{[(14S)-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-13-oxo-1 -(4-fenil-1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-3,6,9- 5 trioxa-12-azahexadecan-16-il]carbamoil}-N-fenil-L-tirosinamida
CH
H3C>k
O ch3
O O^ NH
imagen67
O
O
O
N-\
N-J \ )
40 mg (0,05 mmoles) del compuesto del Ejemplo 10B se disolvieron en una mezcla de 4 ml de DMSO y 1 ml de agua. Se anadieron 10 mg (0,10 mmoles) de fenilacetileno, 0,8 mg de sulfato de cobre (II) (0,005 mmoles), 445 mg (2,25 mmoles) de ascorbato de sodio y 1,8 mg (0,01 mmoles) de 1,10-fenantrolina. El pH de la mezcla de reaccion se ajusto a 4 mediante la adicion de 3 a 4 gotas de acido sulfurico al 10 % y la mezcla de reaccion se agito durante 5 la noche. La mezcla de reaccion se diluyo con aprox. 10 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 10 ml de acetato de etilo. Las fases organicas combinadas se evaporaron a sequedad y se redisolvieron en aprox. 5 ml de metanol y se purificaron por RP-HPLC preparativa sobre C18 con un gradiente de agua/metanol. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 36 mg (0,04 mmoles, 79 % del teorico) del producto deseado.
10 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,12 min, m/z = 903 (M+H)+
Ejemplo 10Cb
O-{[(14S)-14-Amino-13-oxo-1 -(4-fenil-1 H-1,2,3-triazol-1 -il)-3,6,9-trioxa-12-azahexadecan-16-il]carbamoil}-N-fenil-L- tirosinamida
O
NH
imagen68
'O
O>
'O
N=\
15 36 mg (0,04 mmoles) del compuesto del Ejemplo 10Ca se disolvieron en 2,5 ml de dicloroetano. Se anadieron 0,02
ml de trietilsilano, aprox. 2,5 ml de acido trifluoroacetico y aprox. 0,1 ml de agua. La mezcla de reaccion se agito durante aprox. 30 min a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, y se redisolvio en aprox. 15 ml de agua. La mezcla de reaccion se extrajo tres veces con aprox. 10 ml de diclorometano. Despues de anadir aprox. 0,5 ml de acido acetico, la fase acuosa se liofilizo. El liofilizado se redisolvio en aprox. 5 ml de metanol 20 y se purifico por RP-HPLC preparativa sobre C18 con un gradiente de agua/metanol. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 13 mg (0,02 mmoles, 45 % del teorico) del producto deseado.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,57 min, m/z = 703 (M+H)+
Usando los precursores apropiados (Ejemplos 11B y 12B), los ejemplos de la siguiente tabla se preparan 25 analogamente al Ejemplo 1C.
imagen69
Ejemplos de trabajo Ejemplo 1
O-({(3S)-4-{[(2R)-1-Amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxicarbonil)-amino]-4- 5 oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosina
imagen70
4,14 g (4,55 mmoles) del compuesto del Ejemplo 3A se disolvieron en 90 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 3,17 ml (22,8 mmoles) de trietilamina, 0,86 ml (22,8 mmoles) de acido formico y 0,526 g (0,455 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La 5 reaccion se diluyo con aprox. 100 ml de agua, y se extrajo dos veces con aprox. 100 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 500 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 20/1 y diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a 10 presion reducida. Esto dio 2,62 g de producto en bruto con una pureza del 94,5 %. El producto se purifico adicionalmente por RP-HPLC preparativa sobre C18 con un gradiente de agua/metanol dando 2,35 g (2,70 mmoles, 59 % del teorico) de producto puro.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,22 min, m/z = 871 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8ppm): 8 = 7,92 (d, 1H), 7,65 (t, 1H), 7,28-7,35 (m, 12H), 7,25-7,28 (t, 3H), 7,15-7,20 15 (m, 4H), 6,95 (d, 2H), 4,29 (q, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,11 (m, 3H), 2,90 (m, 1H), 2,36 (m, 2H), 1,84 (m, 1H),
1,68 (m, 1H), 1,34 (d, 18H).
Ejemplo 2
O-[(4-{[(2R)-1-Amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxicarbonil)-(metil)amino]-4-
oxobutil)carbamoil]-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosina
imagen71
2,2 g (2,38 mmoles) del compuesto del Ejemplo 8A se disolvieron en 48 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 1,66 ml (11,9 mmoles) de trietilamina, 0,45 ml (11,9 mmoles) de acido formico y 0,275 g (0,238 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 50 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano. Las fases 5 organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 100 g de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 50/1 y diclorometano/metanol 4/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 1,44 g (1,61 mmoles, 68 % del teorico) de producto como una mezcla de 10 diaestereomeros.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,20 y 1,24 min, m/z = 884 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 8ppm): 8 = 8,00 (m, 1H), 7,65-7,90 (m, 4H), 7,18-7,35 (m, 18H), 7,10 (m, 2H), 6,96 (m, 4H), 4,60 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,30 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 3,00 (m, 4H), 2,75 (m, 6H), 2,36 (m, 3H), 2,00 (m, 2H), 1,82 (m, 2H), 1,40 (m, 3H), 1,35 (s, 18H).
15 Ejemplo 3
N2-(terc-Butoxicarbonil)-N5-[(4-{(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-carboxietil}fenoxi)-carbonil]-L-ornitil-S-tritil-L-
cisteinamida
O O
imagen72
imagen73
3,06 g (2,33 mmoles) del compuesto del Ejemplo 10A se disolvieron en 46 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 1,63 20 ml (11,6 mmoles) de trietilamina, 0,44 ml (11,6 mmoles) de acido formico y 0,265 g (0,233 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 50 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 500 25 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 40/1 y diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. Esto dio 1,40 g de producto en bruto con una pureza del 86 %. El producto se purifico adicionalmente por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 2 fracciones: 0,93 g de producto (45 % del teorico).
30 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,18 min, m/z = 885 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8ppm): 8 = 7,89 (d, 1H), 7,65 (t, 1H), 7,25-7,35 (m, 12H), 7,20-7,25 (m, 6H), 7,10-7,20 (m, 3H), 6,95 (d, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,11 (d, 1H), 3,00 (m, 4H), 2,75 (m, 2H), 2,36 (m, 3H), 1,64 (m, 1H), 1,51 (m, 3H), 1,36 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
Ejemplo 4
35 N5-(terc-Butoxicarbonil)-N2-[(4-{(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-carboxietil}fenoxi)-carbonil]-L-ornitil-S-tritil-L-
cisteinamida
imagen74
imagen75
5,27 g (5,65 mmoles) del compuesto del Ejemplo 12A se disolvieron en aprox. 60 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 2,1 ml (15,2 mmoles) de trietilamina, 0,57 ml (15,2 mmoles) de acido formico y 0,35 g (0,30 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La 5 reaccion se diluyo con aprox. 60 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 500 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 20/1 y diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a 10 presion reducida. El producto en bruto se purifico adicionalmente por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 1,37 g (24 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,17 min, m/z = 885 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 8ppm): 8 = 12,6 (sa, 1H), 8,05 (d, 1H), 7,97 (d, 1H), 7,06 - 7,39 (m, 20H), 6,97 (d, 2H), 6,79 (t, 1H), 4,30 (dd, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 2,85 - 3,04 (m, 3H), 2,30 - 2,40 (m, 2H), 1,65 (m, 1H), 1,41 - 15 1,60 (m, 4H), 1,37 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
Ejemplo 5
N-(terc-Butoxicarbonil)-O-{[(4R,7S)-4-carbamoil-13,13-dimetil-6,11 -dioxo-1,1,1 -trifenil-12-oxa-2-tia-5,10- diazatetradecan-7-il]carbamoil}-L-tirosina
imagen76
4,91 g (5,40 mmoles) del compuesto del Ejemplo 14A se disolvieron en aprox. 110 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 3,8 ml (27 mmoles) de trietilamina, 1,02 ml (27 mmoles) de acido formico y 0,62 g (0,54 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 60 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano. Las fases 5 organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 500 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano, diclorometano/metanol 40/1 y diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se purifico adicionalmente por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 10 con un gradiente de agua/metanol dando 1,96 g (42 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,20 min, m/z = 871 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 8/ppm): 8 = 12,6 (sa, 1H), 8,05 (t, 2H), 7,16 - 7,39 (m, 19H), 7,12 (d, 1H), 6,98 (d, 2H), 6,83 (t, 1H), 4,32 (dd, 1H), 4,00 - 4,11 (m, 2H), 2,92 - 3,12 (m, 3H), 2,81 (m, 1H), 2,30 - 2,40 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 1,67 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
15 Ejemplo 6
N-(terc-Butoxicarbonil)-O-{[(3S)-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-oxo-4-{[2-(tritilsulfanil)-etil]amino}butil]carbamoil}-L-
tirosina
imagen77
ch3 o
98 mg (0,1 mmoles) del compuesto del Ejemplo 15A se disolvieron en aprox. 4 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 20 70 pl (0,5 mmoles) de trietilamina, 19 pl (0,5 mmoles) de acido formico y 11 mg (0,01 mmoles) de
tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 5 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 5 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un 25 gradiente de agua/metanol dando 67 mg (79 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,32 min, m/z = 827 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8/ppm): 8 = 12,6 (sa, 1H), 7,85 (t, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,29 - 7,37 (m, 12H), 7,18 - 7,27 (m, 5H), 7,07 (sa, 1H), 6,98 (d, 2H), 6,88 (d, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 2,93 - 3,09 (m, 5H), 2,81 (m, 1H), 2,20 (t, 2H), 1,78 (m, 1H), 1,64 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
30 Ejemplo 7
N-[(2S)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-4-{[(4-{(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-
carboxietil}fenoxi)carbonil]amino}butanoil]-S-tritil-L-cisteinglicinamida
imagen78
60 mg (0,031 mmoles) del compuesto del Ejemplo 16A se disolvieron en aprox. 3 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 22 pl (0,16 mmoles) de trietilamina, 6 pl (0,16 mmoles) de acido formico y 4 mg (0,003 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La 5 reaccion se diluyo con aprox. 5 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 5 ml de diclorometano. Las fases
organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad
a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 26 mg (86 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 2): Rt = 2,55 min, m/z = 927 (M+H)+
10 RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8/ppm): 8 = 12,6 (sa, 1H), 8,08 (m, 2H), 7,63 (t, 1H), 7,18 - 7,38 (m, 18H), 7,03 - 7,15
(m, 3H), 6,99 (d, 2H), 4,28 (dd, 1H), 3,95 - 4,10 (m, 2H), 3,64 (dd, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,04 - 3,13 (m, 2H), 3,00 (dd,
1H), 2,81 (m, 1H), 2,42 (d, 2H), 1,84 (m, 1H), 1,67 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
Ejemplo 8
N-[(2S)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-4-{[(4-{(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2- 15 carboxietil}fenoxi)carbonil]amino}butanoil]glicil-S-tritil-L-cisteinamida
CH
H3CA
i CH3
O O^NH ,,
A.^ A .N
O
1 H O
O
imagen79
H3C
H3C .a mh
OH
AY
CH3 O
O
imagen80
860 mg (0,89 mmoles) del compuesto del Ejemplo 19A se disolvieron en aprox. 20 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 620 pl (4,45 mmoles) de trietilamina, 168 pl (4,45 mmoles) de acido formico y 103 mg (0,089 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 50 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 50 ml de diclorometano. Las fases 5 organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad
a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 329 mg (38 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,16 min, m/z = 927 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 8/ppm): 8 = 8,16 (d, 1H), 8,04 (t, 1H), 7,64 (t, 1H), 7,20 - 7,39 (m, 15H), 7,15 (d, 3H), 10 7,07 (d, 1H), 6,95 (d, 2H), 4,28 (dd, 1H), 4,02 (dd, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,76 (m, 2H), 2,99 - 3,15 (m, 3H), 2,88 (m, 1H),
2,29 - 2,42 (m, 2H), 1,86 (m, 1H), 1,68 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,33 (s, 9H).
Ejemplo 9
O-({(3S)-4-[(6-{[(2R)-1-Amino-1-oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-6-oxohexil)amino]-3-[(terc-
butoxicarbonil)amino]-4-oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosina
15
CH
H3C
O CH
3
O
O NH
imagen81
imagen82
250 mg (0,24 mmoles) del compuesto del Ejemplo 22A se disolvieron en aprox. 5 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 170 pl (1,22 mmoles) de trietilamina, 48 pl (1,22 mmoles) de acido formico y 28 mg (0,024 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 20 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 20 ml de diclorometano. Las fases 20 organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad
a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 167 mg (65 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,19 min, m/z = 983 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8/ppm): 8 = 12,6 (sa, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,75 (t, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,18 - 7,37 (m, 19H), 25 7,12 (d, 1H), 7,08 (s, 1H), 7,00 (d, 2H), 4,31 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 2,92 - 3,11 (m, 6H), 2,81 (dd, 1H),
2,30 (m, 2H), 2,10 (t, 2H), 1,79 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,40 - 1,54 (m, 3H), 1,37 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 1,23 (m, 2H).
Ejemplo 10
O-({(14S)-1 -Azido-14-[(terc-butoxicarbonil)amino]-13-oxo-3,6,9-trioxa-12-azahexadecan-16-il}carbamoil)-N-(terc- butoxicarbonil)-L-tirosina
CH
AA
O CH
O O NH
imagen83
O
O
N
11 + N II N
O
276 mg (0,344 mmoles) del compuesto del Ejemplo 23A se disolvieron en aprox. 15 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 235 pl (1,68 mmoles) de trietilamina, 63 pl (1,68 mmoles) de acido formico y 39 mg (0,034 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La 5 reaccion se diluyo con aprox. 20 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 20 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 167 mg (65 % del teorico) de producto.
EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 0,98 min, m/z = 726 (M+H)+
10 RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8/ppm): 8 = 7,85 (t, 1H), 7,61 (t, 1H), 7,15 (d, 2H), 6,91 - 6,99 (m, 3H), 3,96 (m, 1H), 3,86 (sa, 1H), 3,59 (dd, 2H), 3,46 - 3,57 (m, 9H), 3,40 (m, 4H), 3,13 - 3,29 (m, 2H), 2,98 - 3,11 (m, 3H), 2,82 - 2,92 (m, 1H), 1,79 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,34 (s, 9H).
Ejemplo 11
3-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-N-[(4-{(2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-carboxietil}-fenoxi)carbonil]-L-alanil-S-tritil- 15 L-cisteinamida
O
A.
h3c
O^s/O^/CH3
NH CH3 O
ON H
imagen84
N
NH
2
O
imagen85
Hln NH
H3C^ Y
CH3 O
O O
OH
'S
\\ /
2,38 g (2,03 mmoles) del compuesto del Ejemplo 25A se disolvieron en aprox. 35 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 1,42 ml (10 mmoles) de trietilamina, 0,38 ml (10 mmoles) de acido formico y 0,24 g (0,20 mmoles) de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 20 ml de agua y se extrajo dos veces con aprox. 30 ml de diclorometano. Las fases 5 organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en diclorometano y se sometio a cromatografia sobre aprox. 70 ml de gel de silice. Los disolventes usados fueron diclorometano/metanol 10/1 a diclorometano/metanol 1/1. Las fracciones que contenian producto se combinaron y se concentraron a sequedad a presion reducida dando 0,72 g (41 % del teorico) de producto.
10 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,18 min, m/z = 855 (M-H)-
RMN 1H (400 MHz, DMSO-da, 8ppm): 8 = 8,15 (m, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,16 - 7,39 (m, 19H), 6,99 (d, 2H), 6,80 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), ), 4,13 (m, 2H), ), 4,00 (m, 2H), 2,92 - 3,12 (m, 3H), 2,81 (m, 1H), 2,40 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 1,10 (m, 4H).
Ejemplo 12
15 O-({(3S)-4-{[(2R)-1 -Anilino-1 -oxo-3-(tritilsulfanil)propan-2-il]amino}-3-[(terc-butoxicarbonil)-amino]-4-
oxobutil}carbamoil)-N-(terc-butoxicarbonil)-L-tirosina
imagen86
405 mg (0,41 mmoles) del compuesto del Ejemplo 26A se disolvieron en 10 ml de tetrahidrofurano. Se anadieron 0,29 ml (2,05 mmoles) de trietilamina, 78 pl (2,05 mmoles) de acido formico y 47 mg (0,04 mmoles) de 20 tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a temperatura ambiente. La reaccion se diluyo con aprox. 10 ml de agua, y se extrajo dos veces con aprox. 10 ml de diclorometano. Las fases organicas combinadas se extrajeron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a sequedad a presion reducida. El producto en bruto se purifico por RP-HPLC preparativa sobre una columna C18 con un gradiente de agua/metanol dando 306 mg (79 % del teorico) de producto.
25 EM-CL (Procedimiento 1): Rt = 1,39 min, m/z = 947 (M+H)+
RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6, 8ppm): 8 = 8,08 (d, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,28-7,35 (m, 16H), 7,22-7,6 (m, 4H), 7,07 (m, 2H), 6,92 (m, 2H), 4,60(m, 1H), 4,05 (m, 4H), 2,85-3,20 (m, 4H), 2,80 (m, 1H), 2,45 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,66 (m, 1H), 1,35 (d, 18H) , 1,28 (m, 2H).
B. Evaluacion de la actividad de ligador del vehi'culo
30 La idoneidad de los compuestos segun la invencion para su uso como ligador de vehiculo puede demostrarse usando los siguientes sistemas de ensayo. Para ilustrar la diferente cinetica de diferentes ligadores, derivados simples de la molecula basada en tirosina se sintetizaron y se monitorizo la escision en diferentes momentos de tiempo en tampon a pH 4 y pH 7,4. Basandose en la composicion exacta de la estructura de ligador basado en tirosina, la formacion de la urea ciclica con liberacion concomitante del grupo OH de tirosina libre tiene diferente 35 escision cinetica. Esto puede medirse facilmente in vitro y usarse como indicador para la cinetica in vivo. El Esquema 3 muestra a modo de ejemplo la descomposicion de un profarmaco que libera la tirosina que contiene peptido y un derivado de urea ciclico basandose en el anterior ligador con el modificador unido.
imagen87
,N-modificador
pH 4: estable
pH aprox. 7 a 7,5: descomposicion lenta
N-modificador
3/
peptido o proteina libre que incorpora
derivado de urea ciclica basado en el primer
ligador con modificador unido
una tirosina en el primer sitio de union al
ligador/modificador
Con el Ejemplo 1C, O-{[(3S)-3-amino-4-({(2R)-1-amino-3-[(1-bencil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)sulfanil]-1-oxopropan-2- il}amino)-4-oxobutil]carbamoil}-N-fenil-L-tirosinamida, la reaccion de escision es del siguiente modo:
Esquema 4
imagen88
OH
imagen89
imagen90
O
O
+
5
1) Descripcion de la prueba (in vitro)
Para los estudios cineticos con respecto a la estabilidad de los diferentes ligadores, 0,3 mg del compuesto de prueba seco se disuelven en 0,5 ml de acetonitrilo. Para una mejor dilucion la muestra se sonica durante aproximadamente 10 segundos. Luego se anade 1,0 ml de las disoluciones de tampon y las muestras se sonican de nuevo.
10 Composicion quimica de la solucion/tampon que se usan:
pH 4: 1 litro de agua desionizada se ajusto a pH 4 con acido clorhidrico 1 N
pH 7,4: 90 g de cloruro sodico, 13,61 g de dihidrogenofosfato de potasio y 83,35 g de solucion de hidroxido
sodico 1 M se disolvieron en 1 litro de agua desionizada. Esta solucion se diluyo con agua a la tasa de 1:10.
La concentracion del compuesto de prueba se analiza por HPLC cada hora durante 24 horas a temperatura ambiente. La cantidad del compuesto de prueba se determina por las areas de los picos.
Procedimiento de HPLC: Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (g1312A), inyector automatico (G1329A), termostato de la columna (G1330B), columna: Kromasil 100 C18 / 250 mm x 4 mm / 5 pm, temperatura de la 5 columna: 30 °C, eluyente A: agua + 5 ml de acido perclorico/l, eluyente B: acetonitrilo, gradiente: 0-1,0 min 90 % de A, 10 % de B; 1,0-20,0 min 10 % de A, 90 % de B; 20,0-21,0 min 10 % de A, 90 % de B; 21,0-23,0 min 90 % de A, 10 % de B; 23,0-25,0 min 90 % de A, 10 % de B; velocidad de flujo: 1,5 ml/min, deteccion: 210 nm, volumen de inyeccion: 10 pl.
Los resultados de la escision de los compuestos de prueba se muestran en la Tabla 1.
10 Tabla 1:
Ejemplo n°
% escindido % escindido % escindido % escindido % escindido
pH 4, 0 h pH 4, 24 h pH 7,4, 0 h pH 7,4, 6 h pH 7,4, 24 h
1C
0 1 0 7 21
2C
0 0 0 6 21
3C
0 0 0 2 11
4C
0 0 0 23 65
5C
0 0 0 75 100
6C
0 0 0 6 20
7C
0 0 0 6 23
8C
0 0 0 6 23
9C
0 0 0 7 25
10Cb
0 0 0 4 14
11C
0 19 0 100 100
12C
0 0 0 29 76
Los datos muestran que el Ejemplo 11C se escinde muy rapidamente, incluso a pH 4. Los Ejemplo 4C, Ejemplo 5C y Ejemplo 12C se escinden rapidamente mientras que el Ejemplo 3C y el Ejemplo 10Cb se escinden lentamente. Todos los otros tienen una cinetica de escision moderada.
15 C. Realizaciones a modo de ejemplo de composiciones farmaceuticas
Los compuestos segun la invencion pueden convertirse en preparaciones farmaceuticas de los siguientes modos: Solucion i.v.:
Un compuesto segun la invencion se disuelve a una concentracion por debajo de la solubilidad de saturacion en un disolvente fisiologicamente aceptable (por ejemplo, tampones de pH 4 a pH 7, solucion isotonica de cloruro sodico, 20 solucion de glucosa al 5% y/o solucion de PEG 400 al 30%). La solucion se esteriliza por filtracion y se envasa en recipientes para inyeccion esteriles y libres de pirogenos.
Disolucion s.c.:
Un compuesto segun la invencion se disuelve a una concentracion por debajo de la solubilidad de saturacion en un disolvente fisiologicamente aceptable (por ejemplo, tampones de pH 4 a pH 7, solucion isotonica de cloruro sodico, 25 solucion de glucosa al 5% y/o solucion de PEG 400 al 30%). La solucion se esteriliza por filtracion y se envasa en recipientes para inyeccion esteriles y libres de pirogenos.

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES
    5
    10
    15
    1. Un compuesto de formula
    imagen1
    (I)
    en la que
    n representa el numero 0, 1,2, 3 o 4,
    m representa el numero 0, 1,2, 3 o 4,
    en la que m y n son juntos son el numero 1,2, 3, 4, 5 o 6,
    R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
    R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
    R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
    R4 representa un grupo de formula
    imagen2
    * es el punto de union al nitrogeno,
    p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
    R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, alquilo (C1-C4)-aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o un
    grupo de formula
    imagen3
    en las que
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    # es el punto de union al atomo de carbono,
    o representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
    R15 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
    R16 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
    R17 representa el grupo lateral de un a-aminoacido natural o sus homologos o isomeros,
    y
    R18 representa hidrogeno o metilo,
    R6 representa -S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
    R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
    R8 representa -S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
    R9 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
    R10 representa hidrogeno o alquilo (C1-C4),
    R11 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
    R12 representa -S-tritilo, tiolilo, azidilo, acetilenilo, hidroxicarbonilo o amina,
    R13 representa el grupo lateral de un a-aminoacido natural o sus homologos o isomeros,
    y
    R14 representa hidrogeno o metilo,
    o una de las sales del mismo, solvatos del mismo o los solvatos de sales del mismo.
  2. 2. Un compuesto segun la reivindicacion 1, caracterizado porque n representa el numero 0, 1,2 o 3,
    m representa el numero 0, 1,2 o 3,
    en la que m y n son juntos el numero 1,2, 3 o 4,
    R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
    R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
    R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
    R4 representa un grupo de formula
    imagen4
    en las que
    * es el punto de union al nitrogeno,
    p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
    R6 representa -S-tritilo,
    R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
    R8 representa -S-tritilo,
    R9 representa hidrogeno,
    y
    R10 representa hidrogeno.
  3. 3. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque n representa el numero 2 o 3,
    y
    m representa el numero 0, o
    n representa el numero 0,
    y
    m representa el numero 2 o 3, o
    n representa el numero 0,
    y
    m representa el numero 1,
    R1 representa terc-butiloxicarbonilo o (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo,
    R2 representa terc-butiloxicarbonilo,
    R3 representa hidrogeno, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo o bencilo,
    R4 representa un grupo de formula
    imagen5
    en las que
    * es el punto de union al nitrogeno,
    p representa el numero 1,2, 3, 4 o 5,
    R5 representa hidrogeno, aminocarbonilo, fenilaminocarbonilo o -(C=O)NHCH2(C=O)NH2,
    R6 representa -S-tritilo,
    R7 representa hidrogeno o aminocarbonilo,
    10
    R8
    representa —S-tritilo,
    R9
    representa hidrogeno,
    y R10
    representa hidrogeno.
  4. 4. Un procedimiento de preparacion de un compuesto de formula (I) o una de las sales del mismo, solvatos del mismo o los solvatos de sales del mismo segun la reivindicacion 1, caracterizado porque un compuesto de formula (II)
    O
    imagen6
    R4
    3
    (II),
    en la que
    n, m, R1, R2, R3 y R4 son cada uno como se define en la reivindicacion 1, se hace reaccionar con una fuente de paladio (0) y un agente reductor.
  5. 5. Un compuesto segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparacion de profarmacos para el tratamiento y/o la prevencion de enfermedades.
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