ES2632392T3

ES2632392T3 - Depsipéptidos cíclicos

Info

Publication number: ES2632392T3
Application number: ES08803036.6T
Authority: ES
Inventors: Philipp Krastel; Brigitta-Maria Liechty; Josef Gottfried Meingassner; Esther Schmitt; Erwin Paul Schreiner
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2007-08-17
Filing date: 2008-08-14
Publication date: 2017-09-12
Anticipated expiration: 2028-08-14
Also published as: CU20130063A7; EA201000329A1; CN103298827B; CU20100032A7; EP2183273A1; UA98658C2; PE20091007A1; EP2183273B1; AR068343A1; ZA201000776B; MX2010001849A; CR11251A; US8178650B2; US20090156472A1; BRPI0815547A2; AU2008290567A1; BRPI0815547B1; CL2008002394A1; AU2008290567B2; KR20100044893A

Abstract

Un depsipéptido cíclico que tiene la estructura de la fórmula (I): **Fórmula** en donde se forma un enlace éster entre un grupo carboxilo de A7 y un grupo hidroxilo de A2, en donde el residuo acilo X es CH3CH2CH(CH3)CO o (CH3)2CHCO, A1 es glutamina, ácido glutámico, o un derivado del mismo, seleccionado de nitrilo glutámico, éster de alquilo de 1 a 12 átomos de carbono de ácido glutámico o éster de arilo de 6 a 24 átomos de carbono de ácido glutámico, A2 es treonina, A3 es leucina, A4 es Ahp, en donde AHP es 3-amino-6-hidroxi-pipiridin-2-ona, 3-amino-piperidin-2-ona, prolina, 5- hidroxiprolina o un derivado del mismo, seleccionado de 3-amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona, **Fórmula** en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 átomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 átomos de carbono) alquilo (con de 1 a 12 átomos de carbono), alcoxilo (con de 2 a 12 átomos de carbono) alcoxialquilo (con de 1 a 12 átomos de carbono) de 1 a 12 átomos de carbono, hidroxialquilo de 1 a 12 átomos de carbono, fenilo y fenilo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono., A5 es isoleucina, A6 es tirosina, N-Me-tirosina o un derivado del mismo, seleccionado de N-Me-tirosina donde el grupo OH de la tirosina o N-Me-tirosina es OR, en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 átomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 átomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 átomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 12 átomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 átomos de carbono) carbonilo alquilo, alquilaminocarbonilo de 1 a 12 átomos de carbono, en donde las fracciones alquilo, alquenilo y alquinilo de los grupos R pueden estar no sustituidos o sustituidos adicionalmente por arilo, arilalquilo de 2 a 12 átomos de carbono, arilalquenilo de 2 a 12 átomos de carbono o arilalquinilo de 2 a 12 átomos de carbono, heterociclilo y heterociclilalquilo de 1 a 12 átomos de carbono, A7 es isoleucina o valina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

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Depsipeptidos cfclicos Campo de la Invencion

La presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos.

Antecedentes de la Invencion

La calicrefna 7 es una proteasa de serina S1 de la familia de genes de calicrefna que exhibe una actividad tipo quimotripsina. La calicrefna humana 7 (hK7, KLK7 o enzima quimotrfptica del estrato corneo (SCCE), Swissprot P49862) representa un papel importante en la fisiologfa de la piel (1, 2, 3). Principalmente se expresa en la piel y se ha reportado que representa un papel importante en la fisiologfa de la piel. La hK7 participa en la degradacion de las estructuras cohesivas intracelulares en epitelios escamosos cornificados en el proceso de descamacion. El proceso de descamacion esta bien regulado y delicadamente equilibrado con la produccion de novo de corneocitos para mantener un grosor constante del estrato corneo, la capa mas exterior de la piel que participa crfticamente en la funcion de barrera de la piel. Respecto a esto, se reporta que la hK7 es capaz de disociar las protefnas corneodesmosomales corneodesmosina y desmocolina 1 (4, 5, 6). La degradacion de ambas corneodesmosomas se requiere para la descamacion. Ademas, muy recientemente se ha mostrado que las dos enzimas de procesamiento de Ifpidos p -glucocerebrosidasa y la esfingomielinasa acida pueden ser degradadas por la hK7 (7). Ambas enzimas de procesamiento de lfpidos son co-secretadas con sus sustratos glucosilceramidas y esfingomielina y procesan los precursores lfpidos polares en sus productos mas no polares, por ejemplo ceramidas, las cuales posteriormente se incorporan en las membranas laminares extracelulares. La arquitectura de la membrana laminar es crftica para una barrera de la piel funcional. Finalmente, se ha mostrado que la hK7 activa el precursor de interleucina-1p (IL-1p) a su forma activa in vitro (8). Como los queratinocitos expresan la IL-1p pero no la forma activa de la enzima especffica que convierte la IL-1p (ICE o caspasa 1), se propone que la activacion de la IL-1p en la epidermis humana se presenta via otra proteasa, siendo un candidato potencial la hK7.

Los estudios recientes relacionan una actividad aumentada de la hK7 con las enfermedades inflamatorias de la piel como la dermatitis atopica, la soriasis o el sfndrome de Netherton. Esto podrfa conducir a una degradacion no controlada de las corneodesmosomas dando como resultado una descamacion mal reguladan, una degradacion aumentada de las enzimas que procesan lfpidos dando como resultado una arquitectura de membrana laminar perturbada o una activacion no controlada de la citocina IL-1p proinflamatoria. El resultado neto serfa una funcion de barrera de la piel deficiente y la inflamacion (tambien vease la publicacion internacional WO-A-2004/108139).

Debido al hecho de que la actividad de la hK7 esta controlada a varios niveles, distintos factores podrfan ser responsables de una actividad aumentada de la hK7 en las enfermedades inflamatorias de la piel. En primer lugar, la cantidad de proteasa que se esta expresando podrfa estar influenciada por factores geneticos. Recientemente se describio un tal enlace genetico, un polimorfismo en el 3'-UTR en el gen hK7 (9). Los autores lanzan la hipotesis de que la insercion descrita de 4 pares de bases en el 3'-UTR del gen de la calicrefna 7 estabiliza el ARNm de la hK7 y da como resultado una sobreexpresion de la hK7. En segundo lugar, ya que la hK7 es secretada via los cuerpos laminares al espacio extracelular del estrato corneo como cimogeno y no es capaz de autoactivarse, necesita ser activado por otra proteasa por ejemplo la hK5 (5). La actividad no controlada de esta enzima de activacion podrfa resultar en una sobreactivacion de la hK7. En tercer lugar, la hK7 activada podrfa ser inhibida por inhibidores naturales como LEKTI, ALP o elafina (10, 11). La expresion disminuida o la falta de estos inhibidores podrfa dar como resultado una actividad aumentada de la hK7. Recientemente se encontro que las mutaciones en el gen spink5, que codifica para LEKTI, son causas del sfndrome de Netherton (12) y una mutacion de un solo punto en el gen se relaciona con la dermatitis atopica (13, 14). Finalmente, otro nivel de controlar la actividad de la hK7 es el pH. La hK7 tiene un pH neutro a ligeramente alcalino optimo (2) y hay un gradiente de pH de neutro a acido de las capas de la mas interna a la mas externa en la piel. Los factores ambientales como el jabon podrfan dar como resultado un aumento del pH en las capas mas exteriores del estrato corneo hacia el pH optimo de la hK7 mediante lo cual se aumenta la actividad de la hK7.

La hipotesis de que una actividad aumentada de hK7 se relaciona con enfermedades de la piel con una barrera de la piel deficiente incluyendo enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas de la piel es apoyada por los siguientes estudios: en primer lugar, los pacientes con sfndrome de Netherton muestran un fenotipo dependiente del aumento en la actividad de la proteasa de serina, una disminucion en las corneodesmosomas, una disminucion en las enzimas que procesan lfpidos p-glucocerebrosidasa y esfingomielinasa acida, y una funcion de barrera deficiente (15, 16). En segundo lugar, ratones transgenicos que sobreexpresan calicrefna 7 humana muestran un fenotipo de piel similar al encontrado en pacientes con dermatitis atopica (17, 18, 19). En tercer lugar, en la piel de pacientes con dermatitis atopica y soriasis se describieron elevados niveles de hK7 (17, 20). Ademas, la actividad aumentada de K7 y de este modo el mal funcionamiento de la barrera epitelial tambien puede representar un papel importante en la patologfa de otras

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enfermedades epiteliales tales como la enfermedad inflamatoria del intestino y la enfermedad de Crohn.

Por lo tanto, se considera que la hK7 es un objetivo potencial para el tratamiento de enfermedades que participan en la mal funcionamiento epitelial tales como las enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas como la dermatitis atopica, la soriasis, el sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como la enfermedad inflamatoria del intestino y la enfermedad de Crohn y hay una necesidad de moduladores especfficos (agonistas o inhibidores) de los mismos.

La elastasa de neutrofilos humanos (HNE, tambien conocido como elastasa de leucocitos humanos, HLE) pertenece a la familia de la quimotripsina de las proteinasas serinas. Su actividad catalftica es optima alrededor del pH 7, y el sitio catalftico esta compuesto de tres residuos de aminoacidos enlazados a hidrogeno: His57, Asp102, y Ser195 (en numeracion de quimotripsina), los cuales forman la conocida como triada catalftica. La enzima esta compuesta de una sola cadena de peptidos de 218 residuos de aminoacidos y cuatro puentes disulfuro. Muestra una identificacion de secuencia del 30 al 40 % con otras proteinasas de serinas elastinolfticas o no elastinolfticas. La HNE de preferencia disocia la cadena de insulina B oxidada con Val en la posicion P1, pero tambien hidroliza enlaces con Ala, Ser, o Cys en la posicion P1.

La HNE se localiza en los granulos azurofflicos de leucocitos polimorfonucleares (PMNL), donde la concentracion de HNE es bastante alta (3 microgramos de enzima/106 celulas). La principal funcion fisiologica es digerir bacterias y complejos inmunes y tomar parte en el proceso de defensa del anfitrion. La HNE ayuda en la migracion de neutrofilos desde la sangre a varios tejidos tales como las vfas respiratorias como respuesta a factores quimiotacticos. La HNE tambien toma parte en la cicatrizacion de heridas, la reparacion del tejido, y en la apoptosis de los PMNLs.

Ademas de la elastina (componente muy flexible y muy hidrofobo del tejido conectivo del pulmon, arterias, piel, y ligamentos), la HNE disocia muchas protefnas con importantes funciones biologicas, incluyendo diferentes tipos de colagenos, protefnas de membrana, y proteoglicanos de cartflago. La HNE tambien indirectamente favorece la descomposicion de protefnas de matriz extracelular activando la procolagenasa, prostomelisina, y progelatinasa. La HNE inactiva varios inhibidores de proteinasa endogena tales como a2- antiplasmina, a1-antiquimotripsina, antitrombina, y el inhibidor de tejido de las metaloproteinasas. La actividad extracelular de la elastasa esta fntimamente controlada en el sistema pulmonar por el inhibidor de a1- proteasa (a1PI), responsable de la proteccion de las vfas respiratorias inferiores del dano elastolftico, mientras que el inhibidor de proteinasa de leucocito secretor protege principalmente las vfas respiratorias superiores. En varios estados patofisiologicos pulmonares, por ejemplo, enfisema pulmonar, bronquitis cronica, y fibrosis qufstica, los inhibidores de elastasa endogena son ineficientes para regular la actividad de HNE.

La HNE se considera que es la principal fuente de dano de tejido asociada con enfermedades inflamatorias tales como el enfisema pulmonar, el sfndrome de insuficiencia respiratoria de adultos (ARDS), la bronquitis cronica, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), la hipertension pulmonar, y otras enfermedades inflamatorias asf como displasia broncopulmonar en neonatos prematuros. La HNE se presenta en la patogenesis de las secreciones aumentadas y anormales de las vfas respiratorias comunmente asociadas con las enfermedades inflamatorias de las vfas respiratorias. De este modo, el fluido del lavado broncoalveolar (BAL) de los pacientes con bronquitis cronica y fibrosis qufstica tiene actividad aumentada de la HNE. Ademas, se ha propuesto que la elastasa excesiva contribuye no solo a estas enfermedades inflamatorias, sino tambien a las enfermedades inflamatorias agudas tales como ARDS y el choque septico.

Por lo tanto, se considera que la HNE es un objetivo potencial para el tratamiento de las enfermedades relacionadas con la actividad de HNE tales como las enfermedades inflamatorias como el enfisema pulmonar, el sfndrome de insuficiencia respiratoria de adultos (ARDS), la bronquitis cronica, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), la hipertension pulmonar, y otras enfermedades inflamatorias asf como la displasia broncopulmonar en los neonatos prematuros, y las enfermedades relacionadas con secreciones aumentadas y anormales de las vfas respiratorias asf como enfermedades inflamatorias agudas. De este modo hay una necesidad de moduladores especfficos (agonistas o inhibidores) de la HNE. El tratamiento puede ser local o la aplicacion sistemica tal como cremas, unguentos y supositorios o mediante aplicacion oral o subcutanea o intravenosa o por inhalacion, respectivamente.

Las Chondromyces son un genero en la familia de Poliangiaceae, que pertenece al orden de los Myxococcales dentro de la Delta-proteobacteria. Las bacterias del orden de Myxococcales, tambien llamadas mixobacterias o bacterias mixtas, son bacterias en forma de baston gram negativas con dos caracterfsticas que las distinguen de la mayorfa de las demas bacterias. Ellas se enjambran en superficies solidas usando un mecanismo de deslizamiento activo y se agregan para formar cuerpos fructificados contra la inanicion (Kaiser (2003)). Los presentes inventores han identificado depsipeptido cfclico producido por Chondromyces que son capaces de modular especfficamente la calicrefna 7.

Resumen de la Invencion

En un aspecto, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos, que tienen la estructura de formula (I):

A3 A4 A5 A6

I

X—A—A------O------A7

5 en donde un enlace ester se encuentra entre el grupo carboxilo de A7 y el grupo hidroxilo de A2, en donde el residuo acilo X es CH3CH2CH(CH3)CO o (CH3)2CHCO,

Ai es glutamina, acido glutamico, o un derivado del mismo, seleccionado de nitrilo glutamico, acido glutamico alquil ester de 1 a 12 atomos de carbono o aril ester de 6 a 24 atomos de carbono de acido glutamico

A2 es treonina,

10 A3 es leucina,

A4 es Ahp, 3-amino-piperidin-2-ona, prolina, 5-hidroxi-prolina o un derivado del mismo, seleccionado de 3- amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona,

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15 en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono,

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alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) alquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono),alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) alcoxialquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) de 1 a 12 atomos de carbono, hidroxialquilo de 1 a 12 atomos de carbono, fenilo y fenilo alquilo de 1 a 6 atomos de carbono,

A5 es isoleucina,

A6 es tirosina, N-Me-tirosina o un derivado del mismo, seleccionado de N-Me-tirosina donde el grupo OH de la tirosina o N-Me-tirosina es OR, en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) carbonilo alquilo, alquilaminocarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, en donde las fracciones de alquilo, alquenilo y alquinilo de los grupos R pueden estar no sustituidos o sustituidos ademas por arilo, arilalquilo de 1 a 6 atomos de carbono, arilalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono o arilalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, heterociclilo y heterociclilalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, A7 es isoleucina o valina,

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

La presente invencion tambien se relaciona con los depsipeptidos cfclicos descritos anteriormente para uso como un medicamento. Por ejemplo, para el tratamiento del cancer, en particular cancer de ovario, o para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas de la piel tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatoses prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tal como la piel avejentada, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria de adultos, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, soriasis, asma.

En una realizacion, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos descritos anteriormente, para uso como un medicamento para el tratamiento de enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatoses prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tal como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario.

En otra realizacion, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos descritos anteriormente, para uso como como un medicamento para el tratamiento de fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria de adultos, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, soriasis, asma.

En todavfa otra realizacion, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos descritos anteriormente, para uso como como un medicamento para el tratamiento de enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos.

La presente invencion tambien abarca procesos para producir el depsipeptido cfclico de la invencion, por ejemplo mediante el cultivo de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o mutante de la misma, en un medio conveniente, y la derivacion qufmica opcional del depsipeptido cfclico asf producido, o mediante la expresion de los genes de biosfntesis de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante mutante de la misma, en una cepa anfitriona microbiana heterologa, y la derivacion qufmica opcional del depsipeptido cfclico asf producido.

La presente invencion entonces tambien se relaciona con microorganismos Chondromyces aislados depositados bajo el numero de acceso DSM 19329 y con los depsipeptidos cfclicos, producidos por los microorganismos Chondromyces aislados.

Descripcion de las Figuras

Figura 1: espectro de RMN 1H del compuesto de la formula (II) (600 MHz, d6-DMSO)

Figura 2: espectro de RMN 13C del compuesto de la formula (II) (150 MHz, d6-DMSO)

Figura 3: espectro de RMN 1H del compuesto de la formula (VIII) (600 MHz, d6-DMSO)

Figura 4: espectro de RMN 13C del compuesto de la formula (VIII) (150 MHz, d6-DMSO)

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Figura 5: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde el Ahp se ha convertido en 3-amino-piperidin-2-ona (Ejemplo 4).

Figura 6: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 5. (500 MHz, da-DMSO)

Figura 7: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 19. (500 MHz, d6-DMSO)

Figura 8: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 21. (500 MHz, d6-DMSO)

Figura 9: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 26. (500 MHz, d6-DMSO)

Figura 10: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 32. (500 MHz, d6-DMSO)

Figura 11: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 44. (500 MHz, d6-DMSO)

Figura 12: espectro de RMN 1H de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 45. (500 MHz, d6-DMSO)

Descripcion detallada de la Invencion

La presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos, que tienen la estructura de la formula (I):

A3 A4 A5 A6

I

X—A—A------o--------a7

en donde un enlace ester se encuentra entre el grupo carboxilo de A7 y el grupo hidroxilo de A2, en donde el residuo acilo X es CH3CH2CH(CH3)CO o (CH3)2CHCO,

A1 es glutamina, acido glutamico, o un derivado del mismo, seleccionado de nitrilo glutamico, acido glutamico alquil ester de 1 a 12 atomos de carbono o aril ester de 6 a 24 atomos de carbono de acido glutamico,

A2 es treonina,

A3 es leucina,

A4 es Ahp, 3-amino-piperidin-2-ona, prolina, 5-hidroxi-prolina o un derivado del mismo, seleccionado de 3- amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona

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en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) alquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono), alcoxilo (con de 2 a 12 5 atomos de carbono) alcoxialquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) de 1 a 12 atomos de carbono, hidroxialquilo de 1 a 12 atomos de carbono, fenilo y fenilo alquilo de 1 a 6 atomos de carbono.,

A5 es isoleucina,

A6 es tirosina, N-Me-tirosina o un derivado del mismo, seleccionado de N-Me-tirosina donde el grupo OH de la tirosina o N-Me-tirosina es OR, en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 10 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) carbonilo alquilo, alquilaminocarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, en donde las fracciones de alquilo, alquenilo y alquinilo de los grupos R pueden estar no sustituidos o sustituidos ademas por arilo, arilalquilo de 15 2 a 12 atomos de carbono, arilalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono o arilalquinilo de 2 a 12 atomos de

carbono, heterociclilo y heterociclilalquilo de 1 a 12 atomos de carbono,

A7 es isoleucina o valina,

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo

En algunas realizaciones de los depsipeptidos cfclicos de la invencion A4 puede ser el derivado Ahp 3-amino- 20 piperidin-2-ona, Ahp-I o Ahp-II.

En otra realizacion, A4 es Ahp y A5 es isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la

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reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es Ahp-I y A5 es isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es Ahp-II y A5 es isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es Ahp, A5 y A7 son isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es Ahp-I, A5 y A7 son isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es Ahp-II, A5 y A7 son isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En otra realizacion, A4 es 5-hidroxiprolina, A5 y A7 son isoleucina, y el resto de las variables son como se definen en la reivindicacion 1.

En una realizacion de los depsipeptidos cfclicos de la invencion, el atomo de nitrogeno del enlace amida entre A5 y A6 es sustituido con un metilo y el grupo OH de la tirosina es OR, en donde R es seleccionado del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) carbonilo alquilo, alquilaminocarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, no sustituido o sustituido ademas por arilo, arilalquilo, arilalquenilo o arilalquinilo, heterociclilo y heterociclilalquilo.

En una realizacion de los depsipeptidos cfclicos de la invencion A1 es acido glutamico, o un derivado del mismo seleccionado de nitrilo glutamico, ester de acido glutamico seleccionado de alquil ester de 1 a 12 atomos de carbono o aril ester de 6 a 24 atomos de carbono.

La presente invencion tambien se relaciona con los depsipeptidos cfclicos para uso como como un medicamento. Por ejemplo para el tratamiento del cancer, en particular del cancer de ovario, o para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas de la piel tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, sfndrome de Netherton u otras dermatoses prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tal como enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis.

Un depsipeptido de la reivindicacion 1, que es un compuesto de acuerdo con las formulas A o B,

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en donde X y A1 son como se define en la reivindicacion 1, y en donde

R2 es metilo,

R3 la cadena lateral de leucina,

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R5 es la cadena lateral del aminoacido isoleucina,

R6 es la cadena lateral de tirosina opcionalmente derivado en su grupo hidroxilo como se define en la reivindicacion 2, R7 es la cadena lateral del aminoacido isoleucina o valina,

Y es ya sea hidrogeno o un metilo.

El depsipeptido cfclico de cualquuera de las reivindicaciones 1-6 en donde Ai, A2, A3, A5, A6 y A7 son L- aminoacidos.

El depsipeptido cfclico de cualquuera de las reivindicaciones 1-7 en donde A4 es 3S,6R Ahp.

Una composicion farmaceutica que comprende un depsipeptido cfclico de la invencion junto con un vehfculo y/o ingrediente farmaceuticamente aceptable.

El depsipeptido cfclico de la invencion para uso como un medicamento.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a depsipeptidos cfclicos de la invencion para uso en un metodo de tratamiento de un sujeto que sufre de enfermedades inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas de la piel tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, psoriasis, psoriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, picazon no especificada de los ancianos, asf como otras enfermedades con disfuncion de la barrera epitelial tales como piel envejecida, enfermedad inflamatoria intestinal y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis o de cancer, en particular el cancer de ovario, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de dificultad respiratoria del adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, psoriasis y asma.

En una realizacion, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos de la invencion para uso en un metodo para el tratamiento de sujetos que sufren de enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria adulta, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoides, IBD, soriasis, asma.

En una realizacion, la presente invencion se relaciona con los depsipeptidos cfclicos de la invencion para uso en un metodo para el tratamiento de un sujeto, en donde el sujeto dufre de queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos, asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a depsipeptidos cfclicos de la invencion para uso en un metodo de tratamiento de un sujeto en el que el sujeto padece queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, psoriasis, psoriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis pruriginosas tales como prurigo nodularis, picazon no especificada de los ancianos, asf como otras enfermedades con disfuncion de la barrera epitelial, como piel envejecida.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a depsipeptido cfclicos de la invencion para uso en un metodo de tratamiento de un sujeto, en donde el sujeto sufre de fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, Sfndrome de dificultad respiratoria del adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, psoriasis, asma.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a un procedimiento para producir el depsipeptido cfclico de la invencion que comprende el cultivo de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o un mutante del mismo, en un medio adecuado, y opcionalmente derivacion qufmica del depsipeptido cfclico asf producidos.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a un procedimiento para producir el depsipeptido cfclico de la invencion que comprende expresar los genes de biosfntesis de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o mutante del mismo, en una cepa huesped microbiana heterologa, y opcionalmente derivacion qufmica del depsipeptido cfclico asf producido. En una realizacion, la presente invencion se refiere a un microorganismo de Chondromyces aislado que produce el depsipeptido cfclico de la invencion, depositado bajo el numero de acceso DSM 19329.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a un depsipeptido cfclico de la invencion producido por el

microorganismo Chondromyces aislado en donde la cepa es Chondromyces crocatus (DSM 19329) obtenido por un proceso que comprende expresar los genes de biosmtesis de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o un mutante del mismo, en una cepa huesped microbiana heterologa, y opcionalmente derivacion qmmica del depsipeptido dclico asf producido.

5 En una realizacion, la presente invencion se refiere a un procedimiento para la preparacion de un depsipeptido dclico de la invencion que comprende alternativamente

a) - la preparacion de un depsipeptido dclico de la invencion en donde A4 es

10

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mediante tratamiento de un compuesto en donde A4 es

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con un acido organico o inorganico, o un acido de Lewis a una temperatura entre -78 °C y 150 °C;

b) - la preparacion de un depsipeptido dclico de la invencion en donde A4 es

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mediante tratamiento de un compuesto en donde A4 es

5

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con hidrogeno molecular o fuente del mismo en presencia de un catalizador en un solvente a una temperatura entre -50 y 100 °C;

c) - la preparacion de un depsipeptido cfclico de la invencion en donde A4 es

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con un acido organico o inorganico o un acido de Lewis, en presencia de un agente reductor a una temperatura entre -78 °C y 150 °C; o

d) - la preparacion de un depsipeptido cfclico de la invencion en donde A4 es

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mediante tratamiento de un compuesto en donde A4 es

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con un alcanol sustituido o no sustituido y un acido organico o inorganico, o un acido de Lewis, a una temperatura entre -78 °C y 150 °C;

5 e) - la preparacion de un depsipeptido ciclico de la invencion en donde A1 es

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en donde n = 2 y A4 es

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10 en donde R preferencialmene es H, alquilo, alquilo sustituido, mediante tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln y A4 es

5

10

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en donde R preferiblemente es H, alquilo, alquilo sustituido, con un alcanol sustituido o no sustituido y un acido organico o inorganico o un acido de Lewis en un solvente o sin un solvente a una temperatura entre -78 °C y 150 °C;

f) - la preparacion de un depsipeptido cfclico de la invencionen donde A1 es

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en donde R preferiblemente es H, OH, O-alquilo, O-alquilo sustituido, O-acilo, mediante tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln y A4 es

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con un agente deshidratante en un solvente o sin un solvente a una temperatura entre -78 °C y 150 °C; g) - la preparacion de un depsipeptido cfclico de la invencionen donde A4 es

5

H 2 N

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y A6 es

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en donde R preferiblemente es alquilo, alquilo susittuido, acilo, alcoxicarbonilo mediante tratamiento de un compuesto en donde A4 es

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y A6 es Tyr, con un agente alquilante o un agente acilante en un disolvente o sin un disolvente a una temperatura entre -78 °C y 150°C.

En una realizacion, la presente invencion se refiere a un depsipeptido cfclico o una sal farmaceuticamente 5 aceptable del mismo, en particular y esencialmente como se describe en la descripcion y/o los ejemplos de trabajo.

Realizaciones especfficas de los depsipeptidos cfclicos de la invencion son:

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Formula (II)

Formula (III)

Formula (IV)

Formula (V)

Formula (VII)

Formula (XI)

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Otros depsipeptidos cfclicos especificos aqui descritos son:

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Los depsipeptidos cfclicos de formula (II)-(VII), (XI)-(XIV) y (XVII) pueden ser producidos mediante la cepa de 5 Chondromyces crocatus de la invencion (DSM 19329).

Otros depsipeptidos cfclicos especificos aqui descritos son:

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Los depsipeptidos cfclicos de formula (VIII)-(X) pueden ser producidos por el Chondromyces robustus (DSM 19330).

Otros depsipeptidos cfclicos especfficos aquf descritos son:

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Los depsipeptidos cfclicos de formula (XV)-(XVI) pueden ser producidas por el Chondromyces apiculatus de la invencion (DSM 21595).

Lista de Abreviaturas

Ahp 3-amino-6-hidroxi-2-piperidona

DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH

hK7 Calicrefna humana 7

HPLC Cromatograffa lfquida de alto rendimiento/presion

HTS Seleccion de alto rendimiento

5

10

15

20

25

30

35

40

IC Cultivo intermediario

ID Identificacion

MB Mixobacteria

MC Cultivo principal

PC Precultivo

pO2 Presion parcial de oxfgeno en estado de cultivo (100% = saturacion con aire)

Rpm Rotaciones por minuto

SCCE Enzima quimotrfptica del estrato corneo

SPEX Extraccion de fase solida

Vvm fndice de aireacion (volumen de aire por volumen de cultivo y por minuto)

Un "residuo qufmico" puede ser cualquier fraccion qufmica organica y anorganica. La expresion "residuo qufmico" incluye, pero no se limita a un grupo alifatico sustituido o no sustituido, por ejemplo alquilo de 1 a 3 atomos de carbono, alquilo de 1 a 6 atomos de carbono, o alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, arilo sustituido o no sustituido, arilalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, o halogeno. Por ejemplo, un residuo qufmico como se define en las reivindicaciones puede ser cualquiera de los grupos qufmicos descritos en la presente mas adelante.

La expresion "residuo qufmico" incluye, pero no se limita a aminoacidos, peptidos, polipeptidos, protefnas y similares.

Ejemplos de fraccion qufmica anorganica son por ejemplo los halogenos, tales como bromo o cloro.

Un "grupo alifatico" es una fraccion no aromatica que puede contener cualquier combinacion de atomos de carbono, atomos de hidrogeno, atomos de halogeno, oxfgeno, nitrogeno u otros atomos, y opcionalmente contiene una o mas unidades de insaturacion, por ejemplo, dobles y triples enlaces. Un grupo alifatico puede ser de cadena recta, ramificado, o cfclico y de preferencia contener entre aproximadamente 1 y aproximadamente 24 atomos de carbono, mas tfpicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 12 atomos de carbono. Ademas para los grupos de hidrocarburo alifatico, los grupos alifaticos incluyen, por ejemplo, polialcoxialquilos, tales como polialquilenglicoles, poliaminas, y poli-iminas, por ejemplo. Estos grupos alifaticos se pueden sustituir adicionalmente.

Los terminos "alquilo de 1 a 3 atomos de carbono", "alquilo de 1 a 6 atomos de carbono", o "alquilo de 1 a 12 atomos de carbono", como se usa en la presente, se refieren a radicales de hidrocarburos saturados, de cadena recta o ramificada que contienen entre uno y tres, uno y doce, o uno y seis atomos de carbono, respectivamente. Los ejemplos de radicales de alquilo de 1 a 3 atomos de carbono incluyen metilo, etilo, propilo y radicales isopropilo; los ejemplos de radicales de alquilo de 1 a 6 atomos de carbono incluyen, pero no se limitan a, radicales metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, ter-butilo, sec-butilo, n-pentilo, neopentilo y n-hexilo; y ejemplos de radicales alquilo de 1 a 12 atomos de carbono incluyen, pero no se limitan a radicales etilo, propilo, isopropilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, indecilo, dodecilo y similares.

El termino "alquilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un alquilo, tal como un grupo alquilo de 1 a 12 atomos de carbono o alquilo de 1 a 6 atomos de carbono, sustituidos por uno, dos, tres o mas sustituyentes alifaticos. Los sustituyentes alifaticos convenientes incluyen, pero no se limitan a -F, --Cl, --Br, -I, --OH, hidroxilo protegido, eteres alifaticos, eteres aromaticos, oxo, --NO2, --CN, --alquilo de 1 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido por halogeno (tales como perhaloalquilos), alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido con halogeno, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido con halogeno, --NH2, amino protegido, --NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NH-arilo, --NH-heteroarilo, --NH-heterocicloalquilo, -dialquilamino, -diarilamino, - diheteroarilamino, --O—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --O—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, -- O—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --O—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --O-arilo, --O- heteroarilo, --O-heterocicloalquilo, --C(O)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --C(O)—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(O)—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(O)—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --C(O)-arilo, --C(O)-heteroarilo, --C(O)-heterocicloalquilo, --CONH2, --CONH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --CONH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CONH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CONH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --CONH-arilo, --CONH-heteroarilo, --CONH- heterocicloalquilo, --CO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --CO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CO2—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, -- CO2-arilo, --CO2-heteroarilo, --CO2-heterocicloalquilo, --OCO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --

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OCO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCO2— cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --OCO2-arilo,--OCO2-heteroarilo, --OCO2-heterocicloalquilo, -- OCONH2,--OCONH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --OCONH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCONH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCONH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --OCONH-arilo, --OCONH-heteroarilo, --OCONH-heterocicloalquilo, --nHc(O)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC (O)—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(o)—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)-arilo, --NHC(O)- heteroarilo, --NHC(O)-heterocicloalquilo, --NHCO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHCO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHCO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHCO2—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHCO2-arilo, --NHCO2-heteroarilo, --NHCO2-heterocicloalquilo, --nHc(0)NH2, NHC(O)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, -- NHC(o)NH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NhC(0)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)NH-arilo, --NHC(O)NH-heteroarilo, --NHC(O)NH-heterocicloalquilo, NHC(S)NR2, NHC(S)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHc(S)NH-arilo, -- NHC(S)NR-heteroarilo, --NHC(S)NH-heterocicloalquilo, --NHC(NH)NH2, NHC(NH)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(Nh)nH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)NH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NhC(NH)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)NH-arilo, -- NHC(NH)NH-heteroarilo,--NHC(NH)NH-heterocicloalquilo, NHC(NH)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, -- NHC(nH)—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, -- NHc(nh)—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHc(NH)-arilo, --NHC(NH)-heteroarilo, --NHC(NH)- heterocicloalquilo, --C(NR)NH-- alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(NR)NH--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH-arilo, --C(NH)NH-heteroarilo, --C(NH)NH-heterocicloalquilo, --S(O)--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --S(O)--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S(O)--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S(O)--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --S(O)-arilo, --S(O)-heteroarilo, --S(O)- heterocicloalquilo-SO2NH2, --SO2NH--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --SO2NH-arilo, --SO2NH-heteroarilo, --SO2NH-heterocicloalquilo, --NHSO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHSO2-arilo, --NHSO2-heteroarilo, -- NHSO2-heterocicloalquilo, --CH2NH2, --CH2SO2CH3-arilo, -arilalquilheteroarilo, -heteroarilalquilo, -

heterocicloalquilo, --C3-C12-cicloalquilo, polialcoxialquilo, polialcoxilo, -metoxietoxilo, --SH, --S--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --S—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, —S—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --S-arilo, --S-heteroarilo, -S-heterocicloalquilo, o metiltiometilo. Se entiende que los arilos, heteroarilos, alquilos y similares se pueden sustituir adicionalmente.

Los terminos "alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono" o "alquenilo de 2 a 6 atomos de carbono", como se usa en la presente, denotan un grupo monovalente derivado de una fraccion de hidrocarburo que contiene de dos a doce o de dos a seis atomos de carbono que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono mediante la remocion de un solo atomo de hidrogeno. Los grupos alquenilo incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-2-buten-1-ilo, alcadienos y similares.

El termino "alquenilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a "alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono" o grupo "alquenilo de 2 a 6 atomos de carbono" como se definio anteriormente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes alifaticos. Los terminos "alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono" o "alquinilo de 2 a 6 atomos de carbono", como se usa en la presente, denotan un grupo monovalente derivado de una fraccion de hidrocarburo que contiene de dos a doce o de dos a seis atomos de carbono que tienen al menos un triple enlace carbono-carbono mediante la remocion de un solo atomo de hidrogeno. Los grupos alquinilo representativos incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, etinilo, 1 -propinilo, 1-butinilo, y similares.

El termino "alquinilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a "alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono" o grupo "alquinilo de 2 a 6 atomos de carbono" como se definio previamente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes alifaticos. El termino "alcoxilo de 1 a 6 atomos de carbono", como se usa en la presente, se refiere a un grupo alquilo de 1 a 6 atomos de carbono, como se define previamente, unido a una fraccion molecular progenitora a traves de un atomo de oxfgeno. Los ejemplos de alcoxilo de 1 a 6 atomos de carbono incluyen, pero no se limitan a, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo, sec-butoxilo, ter- butoxilo, n-pentoxilo, neopentoxilo y n-hexoxilo.

Los terminos "halo" y "halogeno", como se usa en la presente, se refieren a un atomo seleccionado de entre fluor, cloro, bromo y yodo.

El termino "arilo", como se usa en la presente, se refiere a un sistema de anillo carbocfclico mono o bicfclico que tiene uno o dos anillos aromaticos incluyendo, pero sin limitarse a, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, idenilo y similares.

El termino "arilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo arilo, como se definio

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previamente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes aromaticos.

Los sustituyentes aromaticos incluyen, pero no se limitan a, -F, --Cl, --Br, --I, --OH, hidroxilo protegido, eteres alifaticos, eteres aromaticos, oxo, --NO2, --CN, —alquilo de 1 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido con halogeno (tales como perhaloalquilos), alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido con halogeno, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono opcionalmente sustituido con halogeno, --NH2, amino protegido, --NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NH— alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NH-arilo, --NH- heteroarilo, --NH-heterocicloalquilo, -dialquilamino, -diarilamino, -diheteroarilamino,--O—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --O—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --O—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --O—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --O-arilo, --O-heteroarilo, --O-heterocicloalquilo, -- C(O)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --C(O)—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(O)— alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(O)—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --C(O)-arilo, --C(O)- heteroarilo, --C(O)-heterocicloalquilo, --CONH2, --CONH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --CONH— alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CONH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CONH— cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --CONH-arilo, --CONH-heteroarilo, --CONH-heterocicloalquilo, -- CO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --CO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --CO2—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --CO2-arilo, --CO2-heteroarilo, --CO2-heterocicloalquilo, --OCO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --OCO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCO2—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --OCO2-arilo,--OCO2-heteroarilo,--OCO2-heterociclo-alquilo, --OCONH2, --OCONH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --OCONH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCONH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --OCONH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --OCONH-arilo, --OCONH- heteroarilo, --OCONH-heterocicloalquilo, --NHC(O)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC (O)— alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)— cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)-arilo, --NHC(O)-heteroarilo, --NHC(O)-heterocicloalquilo, - -NHCO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHCO2—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, -- NHCO2—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHCO2—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, -- NHCO2-arilo, --NHCO2-heteroarilo, --NHCO2-heterocicloalquilo, --NHC(O)NH2, NHC(O)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)Nh—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --nHc(O)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(O)NH-arilo, -- NHC(O)NH-heteroarilo, --NHC(O)NH-heterocicloalquilo, NHC(S)NR2, NHC(S)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NhC(S)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(S)NH-arilo, --NHC(S)NR- heteroarilo, --NHC(S)NH-heterociclo-alquilo, --NHC(NH)NH2, NHC(NH)NH—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)Nh—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)NH—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)NH—cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)NH-arilo, --NHC(NH)NH- heteroarilo,--NHC(NH)NH-hetero-cicloalquilo, NHC(NH)—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)— alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)— cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHC(NH)-arilo, --NHC(NH)-heteroarilo, --NHC(NH)- heterocicloalquilo, --C(NR)NH-- alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(NR)NH--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --C(NH)NH-arilo, --C(NH)NH-heteroarilo, --C(NH)NH-heterocicloalquilo, --S(O)--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --S(O)--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S(O)--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S(O)--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --S(O)-arilo, --S(O)-heteroarilo, --S(O)- heterocicloalquilo-SO2NH2, --SO2NH--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --SO2NH--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --SO2NH-arilo, --SO2NH-heteroarilo, --SO2NH-heterocicloalquilo, --NHSO2—alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --NHSO2--cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --NHSO2-arilo, --NHSO2-heteroarilo, -- NHSO2-heterocicloalquilo, --C2NH2, --C2SO2C3-arilo, -arilalquilheteroarilo, -heteroarilalquilo, -heterocicloalquilo, --C3-C12-cicloalquilo, polialcoxialquilo, polialcoxilo, -metoxietoxilo, --SH, --S--alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, --S—alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, —S—alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, --S— cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono, --S-arilo, --S-heteroarilo, -S-heterocicloalquilo, o metiltiometilo. Se entiende que los arilos, heteroarilos, alquilos y similares se pueden sustituir adicionalmente.

El termino "arilalquilo", como se usa en la presente, se refiere a un grupo arilo unido al compuesto progenitor via un residuo alquilo de 1 a 3 atomos de carbono o alquilo de 1 a 6 atomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, bencilo, fenetilo y similares.

El termino "arilalquilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo arilalquilo, como se definio previamente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes aromaticos.

El termino "heteroarilo", como se usa en la presente, se refiere a un radical o anillo aromatico mono-, bi-, o tri- cfclico que tiene de cinco a diez atomos de anillo de los cuales al menos un atomo de anillo se selecciona entre S, O y N; cero, uno o dos atomos de anillo son heteroatomos adicionales independientemente seleccionados de entre S, O y N; y el resto de los atomos de anillo son carbono, en donde cualquier N o S

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contenido dentro del anillo puede oxidarse opcionalmente. El heteroarilo incluye, pero no se limita a, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, iso-oxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, benzo-oxazolilo, quinoxalinilo, y similares. El anillo heteroaromatico puede estar unido a la estructura qufmica a traves de un atomo de carbono o un heteroatomo.

El termino "heteroarilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo heteroarilo como se definio previamente sustituido por uno, dos, tres o cuatro sustituyentes aromaticos.

El termino "cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono", como se usa en la presente, denota un grupo monovalente derivado de un anillo carbocfclico, monocfclico o bicfclico saturado compuesto por la remocion de un solo atomo de hidrogeno. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, biciclo[2.2.1]heptilo, y biciclo[2.2.2]octilo.

El termino "cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo cicloalquilo de 3 a 12 atomos de carbono como se definio previamente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes alifaticos.

El termino "heterocicloalquilo", como se usa en la presente, se refiere a un anillo de 5, 6 o 7 miembros no aromaticos o un sistema fusionado de grupo bi o tricfclico, en donde (i) cada anillo contiene entre uno y tres heteroatomo seleccionados independientemente entre oxfgeno, azufre y nitrogeno, (ii) cada anillo de 5 miembros tiene 0 a 1 enlace doble y cada anillo de 6 miembros tiene de 0 a 2 dobles enlaces, (iii) los heteroatomos de nitrogeno y azufre opcionalmente pueden estar oxidados, (iv) el heteroatomo de nitrogeno opcionalmente puede ser cuaternizado, (iv) cualquiera de los anillos anteriores puede fusionarse a un anillo benceno, y (v) los atomos del anillo restante son atomos de carbono que opcionalmente pueden ser oxo- sustituidos. Los grupos heterocicloalquilo representativos incluyen, pero no se limitan a, [1,3]dioxolano, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, quinoxalinilo, piridazinonilo, y tetrahidrofurilo.

El termino "heterocicloalquilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo heterocicloalquilo, como se definio previamente, sustituido por uno, dos, tres o mas sustituyentes alifaticos.

El termino "heteroarilalquilo", como se usa en la presente, para un grupo heteroarilo unido al compuesto progenitor via un alquilo de 1 a 3 atomos de carbono o un residuo alquilo de 1 a 6 atomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, piridinilmetilo, pirimidiniletilo y similares.

El termino "heteroarilalquilo sustituido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo heteroarilalquilo, como se definio previamente, sustituido por el reemplazo independiente de uno, dos, o tres o mas sustituyentes aromaticos.

El termino "alquilamino de 1 a 3 atomos de carbono", como se usa en la presente, se refiere a uno o dos grupos alquilo de 1 a 3 atomos de carbono, como se definio previamente, unidos a la fraccion molecular progenitora a traves de un atomo de nitrogeno. Los ejemplos de alquilamino de 1 a 3 atomos de carbono incluyen, pero no se limitan a, metilamino, dimetilamino, etilamina, dietilamino, y propilamino.

El termino "alquilamino" se refiere a un grupo que tiene la estructura --NH(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono) en donde el alquilo de 1 a 12 atomos de carbono es como se definio previamente.

El termino "dialquilamino" se refiere a un grupo que tiene la estructura --N(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono) (alquilo de 1 a 12 atomos de carbono), en donde el alquilo de 1 a 12 atomos de carbono es como se definio previamente. Los ejemplos de dialquilamino son, pero no se limitan a, dimetilamino, dietilamino, metiletilamino, piperidino, y similares.

El termino "alcoxicarbonilo" representa un grupo ester, es decir, un grupo alcoxilo, unido a la fraccion molecular progenitora a traves de un grupo carbonilo tal como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, y similares.

El termino "carboxialdehfdo", como se usa en la presente, se refiere a un grupo de la formula -CHO.

El termino "carboxilo", como se usa en la presente, se refiere a un grupo de la formula -COOH.

El termino "carboxamida", como se usa en la presente, se refiere a un grupo de la formula --C(O)NH(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono) o --C(O)N(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono)-(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono), --C(O)NH2, NHC(O)(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono), N(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono) C(O)(alquilo de 1 a 12 atomos de carbono) y similares.

El termino "grupo de proteccion hidroxilo", como se usa en la presente, se refiere a una fraccion qufmica labil que se conoce en la tecnica por proteger un grupo hidroxilo contra reacciones indeseadas durante los procedimientos sinteticos. Despues del o de los procedimientos sinteticos, el grupo protector hidroxilo como se describe en la presente se puede remover selectivamente. Los grupos de proteccion hidroxilo como se

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sabe en la tecnica, se describen generalmente en T. H. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3era edicion, John Wiley & Sons, New York (1999). Los ejemplos de los grupos de proteccion hidroxilo incluyen benciloxicarbonilo, 4-nitrobenciloxicarbonilo, 4-bromo-benciloxicarbonilo, 4- metoxibenciloxicarbonilo, metoxicarbonilo, ter-butoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, difenilmetoxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo, 2-furfuriloxicarbonilo, aliloxicarbonilo, acetilo, formilo, cloroacetilo, trifluoroacetilo, metoxiacetilo, fenoxiacetilo, benzoilo, metilo, t-butilo, 2,2,2-tricloroetilo, 2- trimetilsililetilo, 1,1-dimetil-2-propenilo, 3-metil-3-butenilo, alilo, bencilo, para-metoxibencildifenilmetilo, trifenil- metil-(trietilo), tetrahidrofurilo, metoximetilo, metiltiometilo, benciloximetilo, 2,2,2-tricloroetoximetilo, 2- (trimetilsilil)-etoximetilo, metanosulfonilo, para-toluenosulfonilo, trimetilsililo, trietilsililo, tri-isopropilsililo, y similares. Los grupos de proteccion de hidroxilo preferidos para la presente invencion son acetil (Ac o -- C(O)C3), benzoilo (Bn o --C(O)C6H5), y trimetilsililo (TMS o --Si(C3)3).

El termino “hidroxilo protegido”, como se usa en la presente, se refiere a un grupo hidroxilo protegido con un grupo de proteccion hidroxilo, como se define anteriormente, incluyendo benzoilo, acetilo, trimetilsililo, trietilsililo, grupos metoximetilo, por ejemplo.

El termino "grupo de proteccion amino", como se usa en la presente, se refiere a una fraccion qufmica labil que se conoce en la tecnica al proteger un grupo amino contra reacciones indeseadas durante los procedimientos sinteticos. Despues de el o los procedimientos sinteticos, el grupo de proteccion amino como se describe en la presente se puede remover selectivamente. Los grupos de proteccion amino como se conocen en la tecnica, se describen generalmente en T. H. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3era edicion, John Wiley & Sons, New York (1999). Los ejemplos de grupos de proteccion amino incluyen, pero no se limitan a, t-butoxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, y similares.

El termino "amino protegido", como se usa en la presente, se refiere a un grupo amino protegido con un grupo de proteccion amino como se define anteriormente.

El termino "acilo" incluye residuos derivados de acidos, incluyendo pero sin limitarse a acidos carboxflicos, acidos carbamicos, acidos carbonicos, acidos sulfonicos, y acidos fosforosos. Los ejemplos incluyen carbonilos alifaticos, carbonilos aromaticos, sulfonilos alifaticos, sulfinilos aromaticos, sulfinilos alifaticos, sulfonilos aromaticos, sulfamilos alifaticos, sulfamilos aromaticos, fosfatos aromaticos y fosfatos alifaticos.

Un "aminoacido" es una molecula que contiene tanto grupos funcionales amina como carboxilo con la formula general NH2CHRCOOH. El termino aminoacido incluye aminoacidos estandares y aminoacidos no estandares.

Los "aminoacidos estandares" son alanina, arginina, asparagina, acido aspartico, cistefna, acido glutamico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, y valina.

Un "aminoacido estandar que no es acido aspartico" se selecciona entre el grupo que consiste de alanina, arginina, asparagina, cistefna, acido glutamico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, y valina. En el caso de la glutamina o el acido glutamico, un "derivado del mismo" es por ejemplo un nitrilo o un ester, tal como por ejemplo nitrilo de glutamina, ester de acido glutamico.

Los "aminoacidos no estandares" son aminoacidos (moleculas que contienen tanto grupos funcionales amina como carboxilo) que no son uno de los aminoacidos estandares. Los ejemplos de los mismos son selenocistefna (incorporado en algunas protefnas en un codon UGA), pirrolisina (usado por algunas bacterias metanogenicas en enzimas para producir metano y codificadas con el codon UAG), lantionina, acido 2- aminoisobutfrico, deshidroalanina, 3-amino-6-hidroxi-2-piperidona, acido gamma-aminobutfrico, ornitina, citrulina, homocistefna, dopamina o hidroxiprolina.

Los "aminoacidos estandares no basicos" son alanina, asparagina, acido aspartico, cistefna, acido glutamico, glutamina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, y valina.

"Ahp" (3-amino-6-hidroxi-piperidin-2-ona) es un aminoacido no estandar encontrado por ejemplo en cianobacterias. Los "derivados de Ahp" incluyen, pero no se limitan a 3-amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona (deshidro-AHP), 3-amino-piperidin-2-ona y "derivados eter y ester de AHP. Los derivados Ahp preferidos son 3-amino-piperidin-2-ona, o Ahp-I o Ahp-II, o como se representa mas adelante en donde R se selecciona entre el grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo de 1 a 12 atomos de carbono-alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo de 1 a 12 atomos de carbono-alcoxilo de 1 a 12 atomos de carbono-alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, hidroxialquilo de 1 a 12 atomos de carbono, fenilo y fenilalquilo de 1 a 6 atomos de carbono.

Diferentes miembros de esta familia de aminoacidos no estandares son:

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O

NH

3-amino-6-hidroxi-piperidin-2-ona (Ahp)

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Ahp-I

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Ahp-II

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NH

3-amino-3,4-dihidro-1 H-piridin-2-ona (dehidro-AHP)

3-amino-piperidin-2-ona

El derivado de prolina incluye por ejemplo 5-hidroxiprolina.

5 Los "derivados de aminoacidos" incluyen, pero no se limitan a, O-alquilo, O-arilo, O-acilo, S-alquilo, S-arilo, S- S-alquilo, alcoxicarbonilo, O-carbonil-alcoxilo, carbonato, O-carbonil-ariloxilo, O-carbonil-alquilamino, O- carbonil-arilamino, N-alquilo, N-dialquilo, N-trialquilamonio, N-acilo, N-carbonil-alcoxilo, N-carbonil-ariloxilo, N- carbonil-alquilamino, N-carbonil-arilamino, N-sulfonilalquilo, o N-sulfonilarilo.

Los derivados de aminoacidos estandares no basicos" incluyen, pero no se limitan a, O-alquilo, O-arilo, O- 10 acilo, S-alquilo, S-arilo, S-S-alquilo, alcoxicarbonilo, O-carbonil-alcoxilo, carbonato, O-carbonil-ariloxilo, O- carbonilo-alquilamino, O-carbonil-arilamino, N-alquilo, N-dialquilo, N-trialquilamonio, N-acilo, N-carbonil- alcoxilo, N-carbonil-ariloxilo, N-carbonil-alquilamino, N-carbonil-arilamino, N-sulfonilalquilo, o N-sulfonilarilo.

"Derivado de tirosina" incluye, pero no se limita a, e los depsipeptidos cfclicos de la invencion son, O-alquilo, O-arilo, O-heteroarilo, O-acilo, O-PO3H y O-SO3H, asf como halogenacion, en la posicion orto o meta.

15 El grupo OH en la tirosina puede ser OR, en donde R se selecciona entre el grupo que consiste en hidrogeno, alquilo de 1 a 12 atomos de carbono,

alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono,

haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 20 12 atomos de carbono,

alcoxicarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono-alquilo de 1 a 12 atomos de carbono,

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alquilaminocarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, insustituido o sustituido adicionalmente por arilo, arilalquilo, arilalquenilo o arilalquinilo, heterociclilo y heterociclilalquilo.

"Derivado depsipeptido" incluye pero no se limita a, depsipeptidos modificados como se describe en la presente y los especfficamente descritos en los ejemplos mas adelante. Estos derivados se pueden preparar usando metodos bien conocidos en la tecnica.

La invencion ademas se relaciona con sales farmaceuticamente aceptables y derivados de los compuestos de la presente invencion y a los metodos para obtener estos compuestos. Un metodo para obtener el compuesto es cultivando una cepa de Chondromyces crocatus (DSM 19329) de la invencion, o un mutante o una variante de la misma, bajo condiciones convenientes, de preferencia utilizando el protocolo de fermentacion descrito en la presente mas adelante.

"Sales" de los compuestos de la presente invencion que tienen al menos un grupo que forma sal se pueden preparar de una manera conocida en si. Por ejemplo, las sales de los compuestos de la presente invencion que tienen grupos acidos se pueden formar, por ejemplo, tratando los compuestos con compuestos de metal, tales como sales de metales alcalinos de acidos carboxflicos organicos convenientes, por ejemplo, la sal de sodio del acido 2-etil-hexanoico, con compuestos de metal alcalino organico o de metal alcalinoterreo, tal como los hidroxidos, carbonatos o carbonatos de hidrogeno correspondientes, tales como hidroxido, carbonato o carbonato acido de sodio o potasio, con los compuestos de calcio correspondientes o con amoniaco o una amina organica conveniente, cantidades estequiometricas o solamente un pequeno excedente del agente que forma sal de preferencia es lo que se usa. Las sales de adicion acida de los compuestos de la presente invencion se obtienen de manera acostumbrada, por ejemplo, tratando los compuestos con un reactivo acido o con un intercambio de aniones conveniente. Las sales internas de los compuestos de la presente invencion que contienen grupos que forman sal acida y basica, por ejemplo, un grupo carboxilo libre y un grupo amino libre, se pueden formar, por ejemplo, mediante la neutralizacion de las sales, tales como las sales de adicion acida, hasta el punto isoelectrico, por ejemplo, con bases debiles, o mediante tratamiento con intercambiadores de iones.

Las sales se pueden convertir de la manera acostumbrada en compuestos libres; las sales de metal y de amonio se pueden convertir, por ejemplo, mediante el tratamiento con acidos convenientes, y las sales de adicion acida, por ejemplo, mediante el tratamiento con un agente basico conveniente.

Las mezclas de los isomeros obtenibles de acuerdo con la invencion se pueden separar de manera conocida en si en isomeros individuales; diastereoisomeros se pueden separar, por ejemplo, partiendo entre mezclas de solventes polifasicos, recristalizacion y/o separacion cromatografica, por ejemplo sobre gel de sflice o mediante, por ejemplo, cromatograffa lfquida de presion media sobre una columna de fase inversa, y los racematos se pueden separar, por ejemplo, mediante la formacion de sales con reactivos que forman sal opticamente pura y la separacion de la mezcla de los diastereoisomeros asf obtenible, por ejemplo, por medio de cristalizacion fraccional, o mediante cromatograffa sobre materiales de columna opticamente activa.

Los productos intermediarios y los productos finales se pueden seguir trabajando y/o purificando de acuerdo con los metodos estandares, por ejemplo, usando metodos cromatograficos metodos de distribucion, (re- )cristalizacion, y similares.

Los depsipeptidos cfclicos de la invencion pueden inhibir proteasas parecidas a quimotripsinas. Los ejemplos de proteasas parecidas a quimotripsinas son las elastasas y la calicrefna 7. En particular, los depsipeptidos cfclicos de la invencion son excelentes inhibidores de la calicrefna 7.

Un "inhibidor" es un depsipeptido cfclico que inhibe una reaccion enzimatica con una medicion IC50 menor de 100 pM, por ejemplo 50 pM, 30 pM, 20 pM o 10 pM. Particularmente se prefieren los depsipeptidos cfclicos con un IC50 menor de 30pM para la calicrefna 7 humana, por ejemplo los depsipeptidos cfclicos con un IC50 menor de 10 pM, 1 pM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, o menos. Por ejemplo, los compuestos de los ejemplos 5, 19 y 33 muestran valores IC50 de 0.009 pM, 0.007 pM, 0.005 pM, respectivamente. El IC50 para la calicrefna humana se puede medir usando sustrato de temple de fluorescencia Ac-Glu-Asp (EDANS)- Lys-Pro-Ile-Leu-PheAArg-Leu-Gly-Lys (DABCYL)-Glu-NH2 (en donde el A indica que el enlace escindible, identificado mediante analisis MS) que se puede comprar en Biosyntan (Berlin, Alemania). Las reacciones enzimaticas se llevan a cabo en un regulador de citrato de sodio 50 a un pH de 5.6 que contiene 150 mM de NaCl y 0.05 % (peso/volumen) CHAPS. Para la determinacion de los valores de IC50 el ensayo se realiza a temperatura ambiente en placas de 384 pozos. Todos los volumenes finales de ensayo son de 30 microlitros. Los compuestos de prueba se disuelven en 90 % (volumen/volumen) DMSO/agua y se diluyen en agua (que contiene 0.05 % (peso/volumen) de CHAPS) hasta 3 veces la concentracion deseada del ensayo. Las 11 concentraciones del compuesto final son: 0.3 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 pM, 3 pM, 10 pM y 30 pM. Para cada ensayo, se anaden 10 microlitros de agua/CHAPS (+ el compuesto de prueba) por pozo, seguido de 10 microlitros de solucion de proteasa (diluida con 1.5x regulador del ensayo). La concentracion de proteasa en la solucion final del ensayo es de 0.2 nM (de acuerdo con las concentraciones de enzima determinadas por el metodo Bradford). Despues de 1 hora de incubacion a temperatura ambiente,

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la reaccion se inicia mediante la adicion de 10 microlitros de solucion en sustrato (de sustrato disuelto en regulador de ensayo 1.5x, la concentracion final es de 2 jM). El efecto del compuesto sobre la actividad enzimatica se obtiene de las curvas de progreso lineal y se determinan a partir de dos lecturas, la primera tomada directamente despues de la adicion del sustrato (t = 0 minutos) y la segunda despues de 1 hora (t = 60 minutos). El valor IC50 se calcula de la graficacion del porcentaje de inhibicion contra la concentracion del inhibidor usando software de analisis de regresion no lineal (xLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, RU).

"Enfermedades" y "trastornos" que se pueden tratar o prevenir por lo tanto usando los depsipeptidos cfclicos, son las enfermedades que se sabe que estan relacionadas con las proteasas parecidas a la quimotripsina. Se prefieren las enfermedades conocidas que se relacionan con las elastasas o con la actividad de la calicrefna 7. Igualmente se prefieren enfermedades que se sabe que se relacionan con la elastasa de neutrofilos humanos. Las enfermedades y los trastornos que por lo tanto se pueden tratar o prevenir usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen dolor, inflamacion aguda, inflamacion cronica, artritis, articulaciones inflamadas, bursitis, osteoartritis, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis septica, fibromialgia, lupus eritematoso sistemico, flebitis, tendinitis, salpullido, soriasis, acne, eczema, eczema seborreico facial, eczema de las manos, cara o cuello, infecciones del prepucio, pie de atleta, infecciones de fistulas, ulceras topicas infectadas, infecciones del ombligo del recien nacido, arrugas, escaras, queloides, furunculos, verrugas, y comezon alergica, hemorroides, heridas, infecciones de las heridas, heridas de quemaduras, una infeccion fungica y un trastorno inmunologico que incluye una enfermedad autoinmune. Las enfermedades preferidas que se pueden tratar o prevenir usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen enfermedad pulmonar obstructiva cronica (incluyendo enfisema pulmonar y bronquitis cronica), neumonfa intersticial cronica y aguda, neumonfa intersticial idiomatica (IIP), panbronquiolitis difusa, fibrosis qufstica de pulmon, lesion pulmonar aguda (ALI)/sfndrome de insuficiencia respiratoria aguda (ARDS), bronquioectasis, asma, pancreatitis, nefritis, hepatitis (falla hepatica), artritis reumatoide cronica, arterosclerosis, osteoartritis, soriasis, enfermedad periodontal, ateroesclerosis, rechazo al trasplante de organos, lesion del tejido causado por isquemia/repercusion, choque, septicemia, coagulopatfa de sangre incluyendo coagulaciones intravasculares diseminadas (DIC) y trombosis de venas profundas, conjuntivitis, queratitis, ulcera de cornea, enfermedad de Crohn, lupus eritematoso sistemico. Se prefieren mas las enfermedades y los trastornos que se pueden tratar o prevenir usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion que son "mal funcionamiento epitelial" o "enfermedad epitelial" incluyendo, pero sin limitarse a, enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como la enfermedad inflamatoria del intestino y la enfermedad de Crohn, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria de adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoides, IBD, soriasis, asma. En otra realizacion preferida, los depsipeptidos cfclicos de la invencion se pueden usar para tratar cancer, en particular cancer de ovario.

Las enfermedades y trastornos que por lo tanto preferiblemente se tratan o previenen usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen enfermedades de la piel inflamatorias y/o hiperproliferativas y prurfticas tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria de adultos, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoides, IBD, soriasis, asma.

Las enfermedades y trastornos que por lo tanto se pueden usar mas preferiblemente para tratar o prevenir usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tal como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario.

Las enfermedades y los trastornos que por lo tanto igualmente es preferible tratar o prevenir usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de insuficiencia respiratoria de adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoides, IBD, soriasis, asma.

Las enfermedades y los trastornos que todavfa mas preferiblemente se tratan o previenen usando los depsipeptidos cfclicos de la invencion incluyen queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, soriasis, soriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, comezon inespecffica de los ancianos, asf como otras enfermedades con mal funcionamiento de la barrera epitelial tales como la piel envejecida.

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La calicrefna 7 humana (hK7) es una enzima con actividad proteasa de serina localizada en la piel humana. Primero se describio como la enzima quimotrfptica del estrato corneo (SCCE) y puede representar un papel en la descamacion del estrato corneo disociando protefnas del estrato corneo (por ejemplo, la corneodesmosina y la placoglobina). El estrato corneo es la capa mas exterior que forma barrera de la epidermis y consiste en celulas epiteliales cornificadas rodeadas por lfpidos altamente organizados. Continuamente se esta formando por la diferenciacion epidermica y en la epidermis normal el grosor constante del estrato corneo se mantiene por un equilibrio entre la proliferacion de los queratinocitos y la descamacion. La expresion aumentada de la SCCE en la enfermedad inflamatoria de la piel puede tener importancia etiologica (Hansson y colaboradores, (2002)). Los ratones transgenicos que expresan calicrefna humana 7 en los queratinocitos epidermicos se encontro que desarrollan cambios patologicos en la piel con grosor epidermico aumentado, hiperqueratosis, inflamacion dermica, y prurito severo. Se ha reportado una asociacion genetica entre la insercion de 4 pares de bases (AACC) en el 3'UTR del gen de la enzima quimiotrfptica del estrato corneo y la dermatitis atopica (Vasilopoulos, y colaboradores, (2004)), sugiriendo que la enzima podrfa tener un papel importante en el desarrollo de la dermatitis atopica. La dermatitis atopica es una enfermedad con una barrera de la piel deficiente que afecta del 15 al 20 % de los ninos.

En un aspecto, los depsipeptidos de acuerdo con la invencion se obtienen cultivando una cepa de Chondromyces crocatus que fue depositada el 24 de abril de 2007 con DSMZ (DSM 19329) o se obtiene cultivando una cepa de Chondromyces robustus que fue depositada el 24 de abril de 2007 con el DSMZ (DSM 19330) o se obtiene cultivando una cepa de Chondromyces apiculatus que se deposito el 23 de junio de 2008 con el DSMZ (DSM 21595).

El deposito de la cepa se hizo bajo los terminos del Tratado de Budapest en el Reconocimiento Internacional del Deposito de Microorganismos para Propositos de Procedimientos de Patentes. Las cepas depositadas seran irrevocablemente y sin restriccion o condicion liberadas al publico despues de la emision de la patente. Las cepas depositadas se proporcionan unicamente como conveniencia para los expertos en la tecnica y no son la admision de que un deposito se requiera para habilitacion.

Se entendera que la presente invencion no se limita al cultivo de las cepas particulares Chondromyces crocatus y Chondromyces robustus y Chondromyces apiculatus. En vez de eso, la presente invencion contempla el cultivo de otros organismos capaces de producir depsipeptidos, tales como mutantes o variantes de las cepas que se pueden derivar de este organismo por medios conocidos tales como irradiacion por rayos X, irradiacion ultravioleta, tratamiento con mutagenos qufmicos, exposicion a fagos, seleccion de antibioticos y similares.

Los depsipeptidos de la presente invencion se pueden biosintetizar mediante diversos microorganismos. Los microorganismos que pueden sintetizar los compuestos de la presente invencion incluyen, pero no se limitan a bacterias del orden de Myxococcales, tambien conocidos como mixobacterias. Ejemplos no limitantes de los miembros que pertenecen a los generos de las mixobacterias incluyen Chondromyces, Sorangium, Polyangium, Byssophaga, Haploangium, Jahnia, Nannocystis, Koffleria, Myxococcus, Corallococcus, Cystobacter, Archangium, Stigmatella, Hyalangium, Melittangium, Pyxicoccus. La taxonomfa de las mixobacterias es compleja y se hace referencia en Garrity GM, Bell JY, Lilburn TG (2004) Taxonomic outline of the prokaryotes, Bergey's manual of systematic bacteriology, 2da edicion, reimpresion 5 de Mayo de 2004. (
http://141.150.157.80/bergeysoutline/main.htm).

Los compuestos de las formulas estructurales (I-XVII) se producen por la fermentacion aerobia de un medio conveniente bajo condiciones controladas via la inoculacion con un cultivo de Chondromyces crocatus o Chondromyces robustus o Chondromyces apiculatus. El medio conveniente de preferencia es acuoso y contiene fuentes de carbono, nitrogeno y sales inorganicas asimilables.

Los medios convenientes incluyen, sin limitacion, el medio de cultivo mencionado mas adelante en los ejemplos 1 y 2. La fermentacion se lleva a cabo durante aproximadamente 3 a 20 dfas a temperaturas que varfan desde 10°C hasta aproximadamente 40°C; sin embargo, para optimos resultados, se prefiere conducir la fermentacion a aproximadamente 30°C. El pH del medio nutriente durante la fermentacion puede estar aproximadamente 6.0 hasta aproximadamente 9.0.

El medio de cultivo inoculado con los depsipeptidos que producen los microorganismos se puede incubar bajo condiciones aerobias usando, por ejemplo, un agitador giratorio o un fermentador de tanque agitado. La aireacion se puede lograr mediante la inyeccion de aire, oxfgeno o una mezcla gaseosa adecuada para el medio de cultivo inoculado durante la incubacion. Tan pronto como una cantidad suficiente de los compuestos de depsipeptidos se han acumulado, se pueden concentrar y aislar del cultivo de manera convencional y usual, por ejemplo por extraccion- y metodos cromatograficos, precipitacion o cristalizacion, y/o de una manera descrita en la presente. Como un ejemplo para la extraccion, el cultivo se puede mezclar y agitar con un solvente organico conveniente tal como n-butanol, acetato de etilo, ciclohexano, n-hexano, tolueno, acetato de n-butilo o 4-metil-2-pentanona, los compuestos de depsipeptido en la capa organica se pueden recuperar por remocion del solvente bajo presion reducida. El residuo resultante opcionalmente se puede reconstituir con por ejemplo agua, etanol, metanol o una mezcla de los mismos, y re-extraer con un solvente organico

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conveniente tal como hexano, tetracloruro de carbono, diclorometano o una mezcla de los mismos. Despues de la remocion del solvente, los compuestos se pueden purificar adicionalmente por ejemplo mediante metodos cromatograficos. Como un ejemplo de cromatograffa, fases estacionarias tales como gel de sflice o de oxido de aluminio se pueden aplicar, con solventes de elusion organica o mezclas de los mismos, incluyendo eteres, cetonas, esteres, hidrocarburos halogenados o alcoholes, o cromatograffa en fase inversa sobre gel de sflice modificada que tiene varios grupos funcionales y fluyendo con solventes organicos o mezclas acuosas de los mismos, como acetonitrilo, metanol o tetrahidrofurano a diferente pH. Otro ejemplo es la cromatograffa de particion, por ejemplo en el modo solido-lfquido o en el modo lfquido-lfquido. Tambien se puede aplicar la cromatograffa por exclusion de tamano, por ejemplo usando Sephadex LH-20 (Sigma-Aldrich) y fluyendo con diferentes solventes, de preferencia con alcoholes.

Como es usual en este campo, la produccion asf como la recuperacion y el proceso de purificacion se puede monitorizar mediante una variedad de metodos analfticos, incluyendo bioensayos, TLC, HPLC o una combinacion de los mismos, y aplicando diferentes metodos de deteccion, para TLC tfpicamente luz ultravioleta, vapor de yodo o rociando reactivos colorantes, para la HPLC tfpicamente luz ultravioleta, en metodos de dispersion de luz o sensibles a la masa. Por ejemplo, una tecnica de HPLC se representa usando una columna en fase inversa con un gel de sflice funcionalizado y aplicando un eluyente que es una mezcla gradiente lineal de un solvente miscible en agua polar y agua a un pH especffico, y un metodo de deteccion con luz ultravioleta a diferentes longitudes de onda y un detector sensible de masa.

Los depsipeptidos biosintetizados por microorganismos opcionalmente se pueden someter a modificaciones qufmicas aleatorias y/o dirigidas para formar compuestos que son derivados o analogos estructurales. Estos derivados o analogos estructurales tienen actividades funcionales semejantes y estan dentro del alcance de la presente invencion. Los depsipeptidos opcionalmente se pueden modificar utilizando metodos muy conocidos en la tecnica y descritos en la presente.

Por ejemplo, los derivados de los depsipeptidos de la invencion se pueden preparar mediante la derivacion de los depsipeptidos cfclicos de la formula

A3 A4 A5 A6

I

X—A—A-------o---------a7

que comprende

a)- la preparacion de los compuestos, en donde A4 es

imagen30

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

imagen31

O

NH

2

con un acido organico o inorganico, por ejemplo, acido trifluoroacetico, acido sulfurico, acido clorhfdrico, o un acido de Lewis, por ejemplo, eterato de borotrifluoruro en un solvente, por ejemplo diclorometano, THF, o sin solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, de preferencia entre -3o°C y la temperatura ambiente.

b)- la preparacion de los compuestos, en donde A4 es

imagen32

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

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O

NH

5 con hidrogeno molecular o una fuente del mismo, por ejemplo ciclohexeno, formiato de amonio, en presencia de un catalizador, por ejemplo paladio en un solvente, por ejemplo 2-propanol a una temperatura entre -50 y 100°C, de preferencia a temperatura ambiente.

c)- la preparacion de los compuestos, en donde A4 es

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10 mediante el tratamiento de un compuesto, en donde A4 es

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O

NH

con un acido organico o inorganico, por ejemplo acido sulfurico, acido clorhfdrico o un acido de Lewis, por ejemplo eterato de trifluoruro de boro en presencia de un agente reductor, por ejemplo trietilsilano, un solvente, por ejemplo diclorometano, THF, o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, de 15 preferencia entre -50°C y la temperatura ambiente.

d)- La preparacion de compuestos, en donde A4 es

O

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O

R'

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

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O

NH

2

con un alcanol sustituido o no sustituido con un acido organico o inorganico, por ejemplo acido trifluoroacetico, 5 acido sulfurico, acido clorhfdrico, o un acido de Lewis, por ejemplo sales de metales en un solvente, por ejemplo alcanoles sustituidos y no sustituidos, THF, diclorometano, de preferencia alcanoles sustituidos y no sustituidos, o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, de preferencia entre -30°C y 50°C.

e)- La preparacion de compuestos en donde A1 es

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10

en donde n = 1, 2 y A4 es

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O

R

en donde R de preferencia es H, alquilo, alquilo sustituido, mediante el tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln o Asn y A4 es

O

imagen40

O NH

en donde R de preferencia es H, alquilo, alquilo sustituido, con un alcanol sustituido o no sustituido y un acido organico o inorganico, por ejemplo acido trifluoroacetico, acido sulfurico, acido clorhidrico, o un acido de Lewis, por ejemplo eterato de trifluoruro de boro en un solvente, por ejemplo alcanoles sustituidos y no 5 sustituidos, THF, diclorometano, de preferencia alcanoles sustituidos y no sustituidos, o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, de preferencia entre -30°C y la temperatura ambiente.

f)- La preparacion de compuestos, en donde A1 es

imagen41

10 en donde n = 1, 2 y A4 es

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en donde R de preferencia es H, OH, O-alquilo, O-alquilo sustituido, O-acilo, mediante tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln o Asn y A4 es

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5

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25

con un agente deshidratante, por ejemplo anhfdrido de acido trifluoroacetico en presencia de una base, por ejemplo diisopropiletilamina (DiPEA), en un solvente, por ejemplo diclorometano o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, preferiblemente entre -30°C y la temperatura ambiente.

g)- La preparacion de compuestos en donde A4 es

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y A6 es

O

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R

en donde R de preferencia es alquilo, alquilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

imagen46

y A6 es Tyr,

con un agente alquilante, por ejemplo yoduro de metilo, bromuro de bencilo, bromuro de proargilo o un agente acilante, por ejemplo cloroformiato de etilo o un isocianato de alquilo o arilo en presencia de una base, por ejemplo carbonato de sodio en un solvente, por ejemplo DMF o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C, preferentemente entre -30°C y la temperatura, de preferencia promovido por ultrasonido.

A menos que se indique otra cosa, todos los numeros que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como peso molecular, condiciones de la reaccion, IC50 y asf sucesivamente usados en la especificacion y en las reivindicaciones se entendera que se modificaran en todos los casos por el termino "aproximadamente". De conformidad con lo anterior, a menos que se indique lo contrario, los parametros numericos presentados en la presente especificacion y en las reivindicaciones anexas son aproximaciones. En ultima instancia, y no como un intento para limitar la solicitud de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parametro numerico debera al menos considerarse a la luz del numero de cifras significativas y aplicando tecnicas de redondeo ordinarias. Independientemente de que las variaciones numericas y de los parametros presentan el alcance amplio de la invencion son aproximaciones, los valores numericos puestos en los ejemplos, en las tablas y en las figuras se reportan tan precisamente como sea posible. Cualquier valor numerico inherentemente puede contener ciertos errores resultantes de variaciones en los experimentos, mediciones de prueba, analisis estadfsticos y asf.

A menos que se defina otra cosa, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados en la presente tienen el mismo significado que lo entiende comunmente una persona experta en la tecnica a la cual pertenece esta invencion. Aunque los metodos y materiales semejantes o equivalentes a los descritos en la presente se pueden usar en la practica o para probar la presente invencion, metodos y materiales convenientes se 5 describen mas adelante. En caso de conflicto, la presente especificacion, incluyendo definiciones, tendra el control. Ademas, los materiales, metodos y ejemplos son ilustrativos solamente y no pretenden ser limitantes.

Ejemplos

Ejemplo 1

Produccion de los compuestos

10 Ejemplo 1.1.- Produccion de los compuestos de formula (II)-(VII), (XI)-(XIV) y (XVII), en donde los compuestos de formula (VI), (XII) y (XVII) son ejemplos de referencia

Cepa: La cepa de Chondromyces crocatus se aislo de una muestra ambiental, de madera podrida de arbol de castana, en los laboratorios de los solicitantes.

La cepa se identifico sin lugar a dudas como Chondromyces crocatus basandose en la morfologfa de los 15 cuerpos fructificados asf como de la secuencia parcial del gen de 16S-ARN. A la C. crocatus se le asigno el

grupo de riesgo biologico 1 por el DSMZ (DSMZ (2007)). Chondromyces es un genero de la familia de Poliangiaceae, que pertenece al orden de las Myxoccocales con la delta-proteobacterias. Las bacterias del orden de los Myxoccocales, tambien llamadas mixobacterias, son bacterias en forma de baston gram- negativas con dos caracterfsticas que los distinguen de la mayorfa de las demas bacterias. Pululan en 20 superficies solidas usando un mecanismo de deslizamiento activo y se agregan para formar cuerpos

fruvtosados contra la inanicion (Kaiser (2003)).

La cepa de Chondromyces crocatus de la invencion ha sido depositada en el DSMZ bajo el numero de acceso 19329.

La cepa de Chondromyces crocatus de la invencion no es viable como cultivo puro y no se puede mantener 25 sin una cepa de companfa. La cepa de companfa se puede obtener y mantener como un cultivo puro rayando

una alfcuota de un cocultivo de fermentacion en placas de agar (medio LB). Una observacion similar fue hecha pro el grupo Reichenbach (Jacobi, y colaboradores (1996), Jacobi, y colaboradores (1997)). Basado en una secuencia de ADN parcial del gen 16S-ARNr de la cepa de companfa del Chondromyces crocatus de esta invencion, la coincidencia mas cercana es Bosea thiooxidans del orden de los Rhizobiales dentro de la alfa- 30 proteobacteria. El fragmento de la secuencia de 424 pares de bases 16S-ARNr investigado tiene

aproximadamente 98 % de identificacion (al menos 8 intercambios de nucleotidos) con la secuencia AF508112 (B. thiooxidans) del banco de genes. B. thiooxidans se aislo de muestras de tierra recolectadas de diferentes campos agrfcolas alrededor de Calcuta, India. Es capaz de oxidar compuestos de azufre inorganico reducidos en presencia de algunos sustratos organicos y se describio como una especie nueva y un genero 35 nuevo en 1996 (Das, y colaboradores (1996)). Un arbol filogenetico derivado de la secuencia 16S-ARN parcial

de las 5 especies de Bosea descritas, indica una posicion separada para la cepa de companfa Bosea aislada de C. crocatus.

Cultivo: se realizaron 100 litros de cultivos de fermentacion de acuerdo con el siguiente protocolo:

Los precultivos se iniciaron mediante la inoculacion de 5 mililitros (=10 %) de un cultivo lfquido de la cepa de

40 Chondromyces crocatus de la invencion en 50 mililitros de medio MD1 (adaptado segun Bode y colaboradores

2003, vease la tabla 6) en un matraz de agitacion de desviacion de 200 mililitros. Despues de 11 dfas de incubacion a 30°C y 120 rpm en un agitador giratorio se inicio un primer cultivo intermedio mediante la inoculacion de 10 mililitro cada uno (=10 %) del precultivo en 5x 100 mililitros de medio MD1 en matraces de agitacion de desviacion de 500 mililitros. Despues de 7 dfas de incubacion a 30°C y 120 rpm en un agitador 45 giratorio se inicio un segundo cultivo intermedio mediante la inoculacion de 25 mililitro cada uno (=5 %) del primer cultivo intermedio en 19x 500 mililitro de medio MD1 en matraces de agitacion no de desviacion de 2 litros. Despues de 6 dfas de incubacion a 30°C y 150 rpm en un agitador giratorio el segundo cultivo intermedio entero (9.5 litros = 9.5 %) se uso para inocular 100 litros de medio de produccion POL1 (adaptado segun Kunze y colaboradores 1995, vease la tabla 7). Este cultivo principal de 100 litros se realizo en un 50 fermentador de tanque de acero a escala de 100 litros. La temperatura se controlo a 30°C, la aeracion fue de

20 litros/minuto (= 0.2 vvm) y la velocidad de agitacion fue de 50 rpm. Se mantuvo una ligera sobrepresion de

0.5 bar dentro del recipiente fermentador. El pH del cultivo se mantuvo a 6.9-7.1 mediante la adicion controlada de 3N H2SO4 o 3N NaOH. Despues de una fase de espera de aproximadamente 1 dfa, el consumo de oxfgeno se acelero durante aproximadamente 4 dfas indicando el crecimiento exponencial del cultivo.

55 Durante los ultimos 2 dfas el consumo de oxfgeno se redujo ligeramente indicando una fase estacionaria del cultivo. Despues de 7 dfas, el cultivo fue cosechado con un titulador de 5.3 miligramos/litro de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la Formula II.

Extraccion: El caldo de fermentacion entero fue transferido a un recipiente de acero de 1600 litros y fue decantado durante 1 hora. El aglomerado de celulas mojadas (200 gramos) se cosecho de la fraccion del fondo mediante filtracion a traves de un papel filtro. El aglomerado celular se extrajo 3 veces mediante turaxing 30 minutos cada una con 10 litros de acetato de etilo. Luego el agua residual se separo de la fase 5 solvente. La fase solvente se lavo con 5 litros de agua y luego se evaporo para obtener un extracto seco conocido como "extracto celular".

El filtrado del cultivo se extrajo con 200 litros de acetato de etilo. Despues de 2 horas de tiempo de contacto, incluyendo 1 hora de turaxing, se separo la fase organica, se lavo con 20 litros de agua y finalmente se evaporo para obtener un extracto seco conocido como el "extracto del filtrado de cultivo".

10 Aislamiento del compuesto: El extracto del filtrado (4.4 gramos) se disolvio en 80 mililitros de metanol. Los ingredientes insolubles se removieron mediante centrifugacion y se evaporo el sobrenadante para secarlo produciendo 3.3 gramos de extracto. El extracto se disolvio en 7.5 mililitros de MeOH, 3 mililitros de DMSO y

0. 5 mililitros de diclorometano y se purifico mediante cromatograffa en fase inversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando 0.01 % de acido formico (solvente A), y acetonitrilo que contenfa 0.1 % de acido

15 formico (solvente B) como solventes. El gasto fue de 50 mililitros/minuto. El gradiente se muestra en la Tabla

1. El material se purifico en 7 ciclos cromatograficas. De cada ciclo, las fracciones recolectadas se analizaron mediante HPLC, las fracciones que contenfan el depsipeptido cfclico de acuerdo con la invencion se combinaron y evaporaron en vacfo para secarlo. La cromatograffa produjo 134 miligramos de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) con una pureza de >97 % y 80 miligramos con una pureza de 90 %.

20 Tabla 1

Gradiente de HPLC usado para la purificacion del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II)

Tiempo (min): Solvente A (%) Solvente B (%)

0.0: 90 10

1.0: 90 10

23.0: 50 50

23.1: 0 100

27.0: 0 100

27.1: 90 10

30.0: 90 10

Tabla 2

Gradiente usado para la separacion de fase normal

Tiempo (min): Ciclohexano (%) Acetato de etilo (%) Metanol (%)

0: 75 25
0

10: 75 25 0

Gradiente usado para la separacion de fase normal

Tiempo (min): Ciclohexano (%) Acetato de etilo (%) Metanol (%)

33: 25 75 0

56: 20 70 10

79: 0 50 50

93: 0 50 50

El extracto de celulas (6.67 gramos) se disolvio en diclorometano/metanol 4:1. La solucion se filtro y el filtrado se adsorbio en diatom (2 gramos de diatom/1 gramo de extracto, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, RU) seguido por evaporacion. El residuo solido se cargo en una columna de gel de 5 sflice previamente empacada (4x18 centfmetros, 90 gramos de gel de sflice 40-63) y se eluyo con un gradiente de ciclohexano, acetato de etilo y metanol. El gradiente se muestra en la Tabla 2, el gasto fue de 28 mililitros/minuto. Se recolectaron fracciones en volumenes de 28 mililitros. Las fracciones se combinaron de acuerdo con los picos visibles en la traza ultravioleta produciendo 12 fracciones combinadas (A-L). Las fracciones que contenfan los depsipeptidos (H-J) se purificaron adicionalmente usando cromatograffa en fase 10 inversa. El metodo cromatografico y el procedimiento de trabajo son identicos al metodo de purificacion descrito para el filtrado del cultivo. En total se aislaron 46.1 miligramos de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II), 17.9 miligramos de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (III) y 6.1 miligramos de una mezcla 1:1 de los depsipeptidos de acuerdo con la formula (VI) y (VII). La asignacion de las estructuras del compuesto (VI) y (VII) se basa en MS de alta resolucion y la comparacion de los datos de la RMN 1H de la 15 mezcla del compuesto (VI) y (VII) con los datos de la RMN 1H del compuesto (II).

Otro depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) tambien se encontro a concentracion menor en el extracto celular. Entre estos otros depsipeptidos cfclicos estuvieron aquellos de acuerdo con la formula (IV), (V) y (XI)-(XV) y (XVII).

Caracterizacion de los compuestos:

20 Datos ffsicos del compuesto de formula (II)

IR (KBr aglomerado): 3337, 3297, 3062, 2966, 2936, 2877, 1736, 1659, 1533, 1519, 1464, 1445, 1410, 1385, 1368, 1249, 1232, 1205, 989, 832 cm-1

25

30

FT-MS (9.4 T APEX-III): 951.5165; calculado para C46H72N8O12 + Na: 951.5162

RMN 1H (600 MHz, da-DMSO) 8: -0.10 (3H, d, J =7.0 Hz), 0.65 (4H, m), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.02 (1H, m), 1.03 (6H, 2 x d, J = 7.0 Hz), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.52 (1H, m), 1.76 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.93 (1H, m), 2.15 (2H, m), 2.48 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.69 (1H, m), 2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (2H, m), 4.44 (2H, m), 4.64 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, s), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.08 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.65 (2H, d, J = 8.4), 6.74 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.27 (1H, s), 7.36 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.74 (1H, d, J = 8.8 Hz), 8.02 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.43 (1H, d, J = 8.1 Hz), 9.19 (1H, s).

RMN l3C (150 MHz) da-DMSO 8: 10.35, CH3; 11.22, CH3; 13.79, CH3; 16.00, CH3; 17.63, CH3; 19.49, 2 x CH3; 20.83, CH3; 21.72, CH2 ; 23.30, CH3; 23.70, CH2; 24.16, CH; 24.41, CH2; 27.35, CH2; 29.74, CH2; 30.07, CH3;

31.44, CH2; 33.13, CH; 33.19, CH2; 33.68, CH; 37.39, CH; 39.05, CH2; 48.75, CH; 50.59, CH; 52.01, CH;

54.11, CH; 54.65, CH; 55.24, CH; 60.60, CH; 71.86 CH; 73.89, CH; 115.28, 2 x CH; 127.31, Cq; 130.35, 2 x

CH; 156.25, Cq; 169.09, Cq; 169.25, Cq; 169.34, Cq; 169.74, Cq; 170.60, Cq; 172.41, Cq; 172.52, Cq; 173.78,

Cq; 176.32, Cq

Datos ffsicos del compuesto de la formula (III)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 965.5318; calculado para C47H74N8O12 + Na: 965.5318

RMN 1H (600 MHz) d6-DMSO 8: -0.10 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.64 (4H, m), 0.78 (3H,d, J = 7.0 Hz), 0.82 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.1 Hz),

1.04 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.25 (1H, m), 1.32 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.53 (2H, m),

5 1.77 (6H, m), 1.84 (1H, m), 1.92 (1H, m), 2.12 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.28 (1H, m), 2.59 (1H, m), 2.68 (1H, m),

2.72 (3H, s), 3.17 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.43 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.46 (1H, m), 4.63 (1H, d, J =

9.5 Hz), 4.71 (1H, m), 4.94 (1H, m), 5.06 (1H, m), 5.49 (1H, m), 6.11 (1H, s, amplio), 6.65 (2H, d, J = 8.8 Hz),

6.73 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.27 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = 10.2 Hz), 7.75 (1H, d, J = 9.7 Hz), 8.07 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.45 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.24 (1H, amplio)

10 Datos ffsicos para el compuesto de formula (IV)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 947.5196; calculado para C47H72N8O11 + Na: 947.5213

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.84 (1H, m), 0.87 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.99 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.18 (1H, m), 1.31 (2H, m), 1.43 (1H, m), 1.51 (1H, 15 m), 1.54 (1H, m), 1.76 (2H, m), 1.90 (1H, m), 1.94 (1H, m), 2.01 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.16 (1H, m), 2.26 (1H,

m), 2.46 (2H, m), 2.73 (1H, m), 2.74 (3H, s), 3.19 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.36 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 10.0 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.44 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.3 Hz), 6.33 (1H, d, J = 8.8 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.32 (1H, d, J = 8.8 Hz), 7.91 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.57 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.38 (1H, 20 amplio)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (V)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 933.5053; calculado para C46H70N8O11 + Na: 953.5056

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8H: 0.08 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.68 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.71 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.79 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (1H, m), 0.88 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.89 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.0 25 Hz), 1.03 (3H, d, J = 7.0 Hz) 1.08 (1H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.20 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.42 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.74 (2H, m), 1.91 (2H, m), 2.02 (1H, m), 2.10 (1H, m), 2.15 (1H, m), 2.46 (3H, m), 2.75 (3H, s), 2.76 (1H, m), 3.19 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.34 (1H, m), 4.51 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.79 (1H, d, J = 11.0 Hz), 5.19 (1H, m), 5.28 (1H, m), 5.43 (1H, m), 6.25 (1H, d, J = 7.0 Hz), 6.33 (1H, d, J =

8.5 Hz), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.31 (1H, d, J = 8.8 Hz),

30 7.90 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.99 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.52 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.30 (1H, amplio)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (XI)

ESI-MS: modo positivo: m/z = 951.5 (M+Na), modo negativo: m/z = 927.5 (M-H); MW monoisotopico 928.5,

C46H72N8O12

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8: -0.11 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.64 (4H, m), 0.77 (3H,d, J = 6.6 Hz), 0.83 (3H, m), 35 0.85 (3H, m), 0.87 (3H, m), 0.89 (3H, m), 1.01 (3H, m), 1.10 (1H, m), 1.21 (3H, d, J = 5.9 Hz), 1.32 (1H, m),

1.40 (1H, m), 1.52 (2H, m), 1.75 (5H, m), 1.84 (1H, m), 1.91 (1H, m), 2.05 (1H, m), 2.15 (2H, m), 2.27 (1H, m),

2.59 (1H, m), 2.68 (1H, m), 2.73 (3H, s), 3.16 (1H, m), 4.31 (1H, m), 4.37 (1H, m), 4.43 (1H, m), 4.45 (1H, m),

4.63 (1H, d, J = 8.8 Hz), 4.69 (1H, m), 4.94 (1H, m), 5.05 (1H, m), 5.50 (1H, m), 6.15 (1H, s, amplio), 6.65 (2H, d, J = 8.1 Hz), 6.75 (1H, s), 7.00 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.29 (1H, s), 7.37 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.64 (1H, d, J = 9.5 40 Hz), 7.78 (1H, d, J = 8.8 Hz), 8.09 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.49 (1H, d, J = 9.5 Hz), (OH de tirosina no visible)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (XII)

ESI-MS: modo positivo: m/z = 923.5 (M+Na), modo negativo: m/z = 899.5 (M-H); MW monoisotopico 900.5,

C44H68N8O12

RMN 1H (500 MHz) da-DMSO 8: -0.11 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.63 (4H, m), 0.75 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.83 (6H, d, J 45 = 7.0 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.03 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.20 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.25 (1H, m), 1.38 (1H,

m), 1.50 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.75 (2H, m), 1.77 (1H, m), 1.79 (3H, m), 1.85 (3H, s), 1.85 (1H, m), 2.12 (1H,

m), 2.16 (1H, m), 2.55 (1H, m), 2.67 (1H, m), 2.70 (3H, s), 3.13 (1H, m), 4.30 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.43 (2H,

m), 4.59 (1H, d, J = 9.5 hz), 4.71 (1H, m), 4.92 (1H, m), 5.02 (1H, m), 5.46 (1H, m), 6.08 (1H, s, amplio), 6.62 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.71 (1H, s), 6.97 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.22 (1H, s), 7.34 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.64 (1H, d, J = 50 9.5 Hz), 7.93 (1H, d, J = 9.2 Hz), 8.06 (1H, d, J = 7.6 Hz), 8.39 (1H, d, J = 8.5 Hz), 9.06 (1H, s, amplio)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (XIII)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 961.5039; calculado para C49H70N8O12 + Na: 985.5005

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

RMN 1H (500 MHz) da-DMSO 8: -0.12 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.62 (4H, m), 0.75 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.81 (4H, m), 0.87 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.08 (1H, m), 1.20 (3H, m), 1.22 (3H, m), 1.38 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.50 (1H, m), 1.71 (1H, m), 1.73 (2H, m), 1.76 (2H, m), 1.82 (1H, m), 1.94 (1H, m), 2.01 (1H, m), 2.23 (2H, m), 2.56 (1H, m), 2.66 (1H, m), 2.69 (3H, s), 3.13 (1H, m), 4.30 (1H, m), 4.41 (2H, m), 4.55 (1H, m), 4.65 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.70 (1H, m), 4.92 (1H, m), 5.04 (1H, m), 5.48 (1H, m), 6.09 (1H, s, amplio), 6.64 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.81 (1H, s), 6.97 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.33 (1H, s), 7.35 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.46 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.53 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.66 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.88 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.95 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.46 (1H, d, J = 8.5 Hz), 8.71 (1H, d, J = 7.3 Hz); (OH de tirosina no visible)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (XIV)

ESI-MS: modo positivo: m/z = 927.5 (M+H), modo negativo: m/z = 925.5 (M-H); MW monoisotopico 926.5,

C47H74N8O11

RMN 1H (500 MHz) da-DMSO 8: 0.00 (1H, m), 0.48 (3H, t, J = 7.5 Hz), 0.70 (3H,d, J = 7.0 Hz), 0.73 (3H, t, J =

7.0 Hz), 0.76 (3H, d, J = 7.3 Hz), 0.79 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.83 (6H, d, J = 6.4 Hz), 0.89 (1H, m), 0.95 (1H, m),

0.98 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.04 (3H, d, J = 6.1 Hz), 1.09 (1H, m), 1.17 (1H, m), 1.28 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.36

(1H, m), 1.38 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.61 (1H, m), 1.68 (1H, m), 1.79 (1H, m), 1.82 (1H, m), 1.95 (2H, m), 2.15

(3H, m), 2.25 (1H, m), 2.66 (3H, s), 2.76 (1H, m), 3.14 (1H, m), 3.40 (1H, m), 3.42 (1H, m), 4.33 (1H, m), 4.36

(1H, m), 4.45 (2H, m), 4.55 (2H, m), 4.69 (1H, m), 5.06 (1H, m), 6.63 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.71(1H, s, amplio),

7.01 (2H, d, J = 8.2 Hz), 7.27 (1H, s, amplio), 7.36 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.00 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.17 (1H, d, J = 4.00 Hz), 8.22 (1H, d, J = 7.3 Hz), 8.53 (1H, d, J = 9.5 Hz), 9.14 (1H, s, amplio)

Datos ffsicos del compuesto de formula (XVII)

ESI-MS: modo positivo: m/z = 985.4 (M+Na), modo negativo: m/z = 961.5 (M-H); MW monoisotopico 962.5,

C45H70N8O13S

RMN 1H (600 MHz) d6-DMSOH 8H:). 8H: no asignacion de cambios qufmicos (mezcla de dos diastereomeros, asignacion de estructura a traves de la comparacion con otros compuestos relacionados, por ejemplo, el compuesto (II).

Ejemplo de referenda 1.2: Produccion del compuesto de formula (VIII, IX, X)

Cepa:

La cepa Chondromyces robustus se aislo de una muestra de estiercol. La cepa de Chondromyces robustus de la invencion se ha identificado como un Chondromyces robustus basado en la morfologfa de los cuerpos de frutas asf como de la secuencia parcial del gen de 16S-ARN. A la C. robustus se le asigno el grupo 1 de riesgo biologico por el DSMZ (DSMz (2007)). Chondromyces es un genero en la familia de poliangiaceae, que pertenece al orden de los mixococales dentro de las delta-proteobacterias. Las bacterias del orden de los mixococales, tambien llamados mixobacterias, son bacterias en forma de baston gram-negativas con dos caracterfsticas que las distinguen de la mayorfa de las demas bacterias. Pululan sobre superficies solidas usando un mecanismo de deslizamiento activo y se agregan para formar cuerpos fructificados contra la inanicion (Kaiser (2003)).

La cepa de Chondromyces robustus de la invencion se ha depositado en el DSMZ bajo el numero de acceso 19330.

Cultivo:

se realizaron cultivos en 100 litros de fermentacion de acuerdo con el siguiente protocolo:

Los precultivos se iniciaron mediante la inoculacion de 20 mililitros cada uno (=20 %) de un cultivo lfquido de la cepa de Chondromyces robustus de la invencion en 6x 100 mililitros de medio MD1 (adaptado segun Bode y colaboradores 2003) en matraces de desviacion de 500 mililitros. Despues de 1 dfa de incubacion a 30°C y 120 rpm en un agitador giratorio se inicio un primer cultivo intermedio mediante la inoculacion de 100 mililitros cada uno (=25 %) del precultivo en 6x 400 mililitros de medio MD1 en matraces de agitacion con desviacion de 2 litros. Despues de 3 dfas de incubacion a 30°C y 120 rpm en un agitador giratorio se inicio un segundo cultivo intermedio mediante la inoculacion de 3 litros (=20 %) del primer cultivo intermedio en un fermentador tanque de acero de 20 litros que contenfa 15 litros de medio MD1. la temperatura se controlo a 30°C, la aeracion fue de 20 litros/minuto (= 1.0 vvm) y la velocidad de agitacion fue de 80 rpm. Se mantuvo una ligera sobrepresion de 0.5 bar dentro del recipiente fermentador. Aunque no hubo control del pH, el pH del cultivo disminuyo solo ligeramente del pH 6.95 al iniciar al pH 6.88 el dfa 7. despues de 7 dfas, el segundo cultivo intermedio (18 litros = 20 %) se uso para inocular 90 litros de medio de produccion POL1 (adaptado segun Kunze y colaboradores 1995) (volumen inicial = 108 litros). El cultivo principal se llevo a cabo en un fermentador tanque de acero en escala de 100 litros. La temperatura se controlo a 30°C, la aeracion fue de 30 litros/minuto (= 0.3 vvm) y la velocidad de agitacion estuvo al principio en 50 rpm y despues de 4 dfas, 80 rpm.

5

10

15

20

25

30

35

Se mantuvo una ligera sobrepresion de 0.5 bar dentro del recipiente fermentor. El pH del cultivo se mantuvo a 6.8-7.2 mediante la adicion controlada de 2N H2SO4 o 1.5N NaOH. Despues de 14 dfas, el cultivo fue cosechado con un titulador de 3 miligramos/litro.

Extraccion: el caldo de fermentacion entero se transfirio a un recipiente de acero de 1600 litros y se decanto durante 1 hora. El aglomerado de celulas mojadas (aproximadamente 200 gramos) se cosecho de la fraccion del fondo mediante filtracion a traves de un filtro de papel. El aglomerado celular se extrajo 3 veces mediante turaxing 30 minutos cada vez con 10 litros de acetato de etilo. Luego, se separo el agua residual de la fase solvente. La fase solvente se lavo con 5 litros de agua y luego se evaporo para obtener 11.9 gramos de extracto seco conocido como "extracto celular".

El filtrado del cultivo se extrajo con 200 litros de acetato de etilo. Despues de 2 horas de tiempo de contacto, incluyendo 1 hora de turaxing, se separo la fase organica, se lavo con 20 litros de agua y finalmente se evaporo para obtener 12.5 gramos de extracto seco conocido como "extracto de filtrado de cultivo".

Aislamiento del compuesto:

cada extracto (del micelio y del filtrado de cultivo) se disolvio en diclorometano/metanol 4:1. La solucion se filtro y el filtrado se adsorbio en diatom (2 gramos diaton/1 gramo extracto, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, RU) seguido por evaporacion. El residuo solido se cargo en una columna de gel de sflice pre-empacada (4x18 centfmetros, 100 gramos de gel de sflice 40-63) y se eluyo con un gradiente de ciclohexano, acetato de etilo y metanol. El gradiente se muestra en la Tabla 4, el gasto fue de 28 mililitros/minuto. Las fracciones en volumenes de 28 mililitros se recolectaron. Las fracciones se combinaron de acuerdo con los picos visibles en la traza de ultravioleta. La fraccion que contenfa el depsipeptido cfclico de la invencion se purifico adicionalmente usando cromatograffa en fase inversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando 0.01 % de acido formico (solvente A), y acetonitrilo que contenfa 0.1 % de acido formico (solvente B) como solventes. El gasto fue de 50 mililitros/minuto. El gradiente se muestra en la Tabla 5. Para inyeccion, el material se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 (concentracion 200 miligramos/mililitro). Las fracciones recolectadas se analizaron mediante HPLC, las fracciones que contenfan el % de la invencion se combinaron y se evaporaron en vacfo hasta secarlos. La cromatograffa del extracto producido en 52 miligramos de depsipeptido cfclico puro (>97 %) de acuerdo con la formula (VIII). Se pudo aislar un total de 85 miligramos de depsipeptido cfclico puro de acuerdo con la formula (VIII) de los extractos combinados.

Otro depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (VIII) tambien se encontro a concentracion menor en el extracto celular. Entre estos otros depsipeptidos cfclicos estuvieron aquellos de acuerdo con la formula (IX) y (X).

Tabla 4

Gradiente usado para la separacion de fase normal

Tiempo (min): Ciclohexano (%) Acetato de etilo (%) Metanol (%)

0: 75 25
0

10: 75 25 0

33: 25 75 0

56: 20 70 10

79: 0 50 50

93: 0 50 50

Gradiente de HPLC utilizado para la purificacion del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (VIII)

Tiempo (min): Solvente A (%) Solvente B (%)

0.0: 75 25

1.0: 75 25

23.0: 55 45

23.1: 0 100

27.0: 0 100

27.1: 75 25

30.0: 75 25

Media (ajustado a pH 7.0 con 50 mM HEPES) Tabla 6

MD1 (medio de precultivo)

Sustancia: Concentracion [g/L]

Casitona: 3

CaCl2 x 2 H2O: 0.5

MgSO4 x 7 H2O: 2

D(+)-Glucosa sin agua: 1

Cianocobalamina: 0.5 mg

Antiespumante B: 0.2 mL

Solucion de ferrioxamina [100 ng/mL]: 1 mL

5

10

15

20

25

POL1 (medio de produccion)

Sustancia: Concentracion [g/L]

Protema de patata: 4

Almidon soluble: 3

CaCl2 x 2 H2O: 0.5

MgSO4 x 7 H2O: 2

Cianocobalamina: 0.25 mg

HEPES: 12

Solucion elemento de traza estandar 1901: 1 mL

XAD16: 35

Caracterizacion de los compuestos:

Datos ffsicos del compuesto de formula (VI11)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 985.5007; calculado para C49H70N8O12 + Na: 985.5005.

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8: 0.74 (6H, d, J = 7.0 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.88 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.89 (6H, d, J = 7.0 Hz), 1.18 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.32 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.57 (2H, m), 1.72 (3H, m), 1.81 (1H, m), 1.88 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.02 (2H, m), 2.11 (3H, m), 2.42 (1H, m), 2.73 (1H, m), 2.77 (3H, s), 2.87 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.64 (1H, m), 4.23 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.58 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.75 (2H, m), 4.93 (1H, m), 5.07 (1H, s), 5.40 (1H, m), 6.03 (1H, s), 6.74 (1H, s), 6.79 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.84 (2H, d, J = 7.8 Hz),

7.02 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.10 (1H, d, J = 9.3 Hz), 7.14 (1H, t, J = 7.8 Hz), 7.19 (2H, t, J = 7.8 Hz), 7.26 (1H, s), 7.42 (1H, d, J = 9.8 Hz), 7.89 (1H, d, J = 9.2 Hz), 8.03 (1H, d, J = 7.9 Hz), 8.38 (1H, d, J = 8.9 Hz), 9.40 (1H, s)

RMN 13C (150 MHz) da-DMSO 8: 17.13, CH3; 17.63, CH3; 19.32, CH3; 20.90, CH3; 21.64, CH2; 22.34, CH3; 22.34, CH3; 23.32, CH3; 24.10, CH; 25.63, CH; 27.63, CH2; 29.30, CH2; 30.37, CH3; 30.86, CH; 31.52, CH2; 32.83, CH2; 35.33, CH2; 38.98, CH2; 44.42, CH2; 48.52, CH; 50.19, CH; 50.24, CH; 51.99, CH; 54.62, CH; 55.63, CH; 60.90, CH; 71.86 CH; 73.70, CH; 115.32, 2 x CH; 126.21, CH; 127.50, Cq; 127.74, 2 x CH; 129.42, 2 x CH; 130.43, 2 x CH; 136.72, Cq; 156.23, Cq; 168.93, Cq; 169.18, Cq; 169.18, Cq; 170.18, Cq; 170.39, Cq; 171.72, Cq; 171.96, Cq; 172.50, Cq; 173.82, Cq

Datos ffsicos para el compuesto de formula (IX)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 969.5058; calculado para C49H70N8O11 + Na; 969.5056.

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8:): 0.53 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.73 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.74 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.81 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.86 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.08 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.20 (1H, m), 1.33 (3H, m), 1.52

(1H, m), 1.64 (1H, m), 1.80 (2H, m), 2.01 (1H, m), 2.04 (2H, m), 2.15 (4H, m), 2.25 (1H, m), 2.30 (1H, m), 2.74

(3H, s), 2.83 (1H, m), 3.12 (1H, m), 3.32 (1H, m), 3.38 (1H, m), 4.14 (1H, m), 4.27 (1H, m), 4.40 (1H, m), 4.59

(1H, m), 4.61 (1H, m), 4.94 (1H, m), 4.99 (1H, m), 5.10 (1H, m), 6.42 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.75 (1H, s), 7.04

(2H, d, J = 8.8 Hz),7.10 (1H, t, J = 7.3 Hz), 7.15 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.23 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.30 (1H, s), 7.41

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

(1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.23 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.47 (1H, d, J = 4.4 Hz), 8.71 (1H, d, J =

10.2 Hz). (Serial de proton del grupo hidroxilo de tirosina no visible)

Datos ffsicos para el compuesto de formula (X)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 955.4896; calculado para C48H68N8O11 + Na: 955.4900.

RMN 1H (600 MHz) d6-DMSO 8:): no asignacion de cambios qmmicos (mezcla de rotameros, asignacion de estructura basada en comparacion de datos de RMN (faltando el grupo N-metilo) con datos de RMN del compuesto (IX).

Ejemplo de referencia 1.3: Produccion de compuestos de formula (XV-XVI)

Cepa:

La cepa Chondromyces apiculatus se aislo de una muestra de tierra. La cepa de Chondromyces de la invencion se ha identificado como un Chondromyces apiculatus basado en la secuencia parcial del gen de 16S-ARN. A la C. apiculatus se le asigno el grupo de riesgo biologico 1 por el DSMZ (DSMZ (2007)). Chondromyces es un genero en la familia poliangiaceae, que pertenece al orden de los mixococales dentro de las delta-proteobacterias. Las bacterias del orden de mixococales, tambien conocidas como mixobacterias, son bacterias en forma de baston gram-negativas con dos caractensticas que las distinguen de la mayona de las demas bacterias. Pululan en superficies solidas usando un mecanismo de deslizamiento activo y se agregan para formar cuerpos fructificados contra la inanicion (Kaiser (2003)).

La cepa de Chondromyces robustus de la invencion se ha depositado en el DSMZ bajo el numero de acceso DSM 21595.

Cultivo:

Los precultivos se iniciaron mediante la inoculacion de 20 mililitros cada uno (=20 %) de un cultivo lfquido de la cepa de Chondromyces apiculatus de la invencion en 10x 100 mililitros de medio MD1 (adaptado segun Bode y colaboradores 2003) en 500 mililitros en matraces de agitacion con desviacion. Despues de 6 dfas de incubacion a 30°C y 120 rpm en un agitador giratorio los cultivos con volumen total de 1 litro se transfirieron en una bolsa Wave® de 50 litros junto con 5 litros de medio MD1. Despues de 7 dfas de incubacion en un reactor BioWave 200 SPS (Wave Biotec AG, Suiza) se anadieron 40 litros de medio M7/14 a la bolsa para iniciar la produccion. El cultivo fue cosechado despues de 19 dfas.

Extraccion:

Para cosechar el aire en el espacio superior de la bolsa Wave se removio al vacfo y la bolsa se colgo para permitir la sedimentacion de la resina y las celulas. Despues de 1 hora de experimentacion, se removieron y se descartaron 43 litros de sobrenadante. Los 7 litros residuales conteman las celulas y la resina fue congelada durante la noche. Despues de descongelacion, las celulas y la resina fueron ganadas por filtracion a traves del papel filtro. El filtrado se descarto. El aglomerado de celula/resina (peso mojado de aproximadamente 3 kilogramos) se transfirio a un recipiente de metal y se extrajo dos veces con 15 litros de acetato de etilo, con 5 minutos de turaxing durante la primera extraccion. Las mezclas de ambos lotes se separaron a traves de filtracion en papel y los filtrados se unificaron. Despues de separar la fase solvente organica de la fase de agua, la fase de solvente se lavo con 2 litros de agua pura y luego se evaporo hasta estar seco. Las fases de agua se descartaron.

Aislamiento del compuesto:

El extracto (5 gramos) se disolvio en diclorometano/metanol 4:1. La solucion se filtro y el filtrado se adsorbio en diatom (2 gramos de diatom/1 gramo de extracto, Isolute®, International Sorbent Technology Ltd., Hengoed Mid Glam, RU) seguido por evaporacion. El residuo solido se cargo en una columna de gel de sflice pre-empacada (4x18 centfmetros, 100 gramos de gel de sflice 40-63) y se eluyo con un gradiente de ciclohexano, acetato de etilo y metanol. El gradiente se muestra en la Tabla 2, el gasto fue de 28 mililitros/minuto. Las fracciones en volumenes de 28 mililitros se recolectaron. Las fracciones se combinaron de acuerdo con los picos visibles en la traza de ultravioleta. La fraccion que contema los depsipeptidos dclicos de la invencion se purificaron adicionalmente utilizando cromatograffa en fase inversa (Waters Sunfire RP18 10pm, 30x150 mm) usando 0.01 % de acido formico (solvente A), y acetonitrilo que contema 0.1 % de acido formico (solvente B) como solventes. El gasto fue de 50 mililitros/minuto. El gradiente se muestra en la Tabla 1. Para inyeccion, el material fue disuelto en a.6 mililitros MeOH/DMSO 1:1. Las fracciones recolectadas se analizaron mediante HPLC, las fracciones que conteman el depsipeptido cfclico de la invencion se combinaron y evaporaron en vacfo hasta secarlos. La cromatograffa del extracto produjo en 7 miligramos de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (XV) y 1.2 gramos de depsipeptido cfclico puro de acuerdo con la formula (XVI).

Medios

MD1 (medio de precultivo)

Sustancia: Concentracion [g/L]

Casitona: 3

CaCl2 x 2 H2O: 0.5

MgSO4 x 7 H2O: 2

D(+)-Glucosa sin agua: 1

Cianocobalamina: 0.5 mg

Antiespumante B: 0.2 mL

Solucion de ferrioxamina [100ng/mL]: 1 mL

(Ajustado a un pH de 7.0 con HEPES 50 mM)

5 Tabla 9

M7/14 (medio de produccion)

Sustancia: Concentracion [g/L]

Extracto de levadura: 1

CaCl2 x 2 H2O: 1

MgSO4 x 7 H2O: 1

Almidon de patata: 5

HEPES: 12

Protefna de patata: 5

D(+)-Glucosa sin agua: 2

5

10

15

20

25

30

M7/14 (medio de produccion)

Sustancia: Concentracion [g/L]

Cianocobalamina: 0.1 mg

Antiespumante B: 0.2 mL

Solucion de ferrioxamina [100ng/mL]: 3 mL

Resina XAD-16: 35

(Ajustado a Ph 7.4)

Caracterizacion de compuestos:

Datos ffsicos del compuesto de formula (XV)

FT-MS (9.4 T APEX-III): Encontrado: 1014.5272; Calculado para C50H73N9O12 + Na: 1014.5276.

RMN 1H (600 MHz) d6-DMSO 8: 0.72 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.82 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.85 (6H, d, J = 6.6 Hz),

1.01 (1H, m), 1.02 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.17 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.21 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.36 (2H, m), 1.42

(1H, m), 1.49 (1H, m), 1.54 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.69 (3H, m), 1.79 (1H, m), 1.81 (1H, m), 2.40 (1H, m), 2.48

(1H, m), 2.73 (1H, m), 2.76 (3H, s), 2.87 (1H, m), 2.91 (1H, m), 2.98 (1H, m), 3.10 (1H, m), 3.63 (1H, m), 4.22

(1H, m), 4.42 (1H, td, J = 8.1, 5.1 Hz), 4.58 (1H, m), 4.75 (2H, m), 4.90 (1H, m), 5.06 (1H, m), 5.38 (1H, m), 5.42 (2H, amplio), 5.96 (1H, t, J = 5.5 Hz), 6.06 (1H, s, amplio), 6.78 (2H, d, J = 8.1 Hz), 6.83 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.00 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.10 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.14 (1H, t , J = 7.3 Hz), 7.19 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.46

(1H, d, J = 9.5 Hz), 7.77 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.97 (1H, d , J = 8.1 Hz), 8.37 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.50 (1H, s,

amplio)

Datos ffsicos del compuesto de la formula (XVI)

ESI-MS: modo positivo: m/z = 1004.4 (M+Na), modo negativo: m/z = 976.5 (M-H); MW monoisotopico 977.5,

C49H71N9O12

RMN 1H (600 MHz) da-DMSO 8H: 0.72 (6H, d, J = 6.6 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.6 Hz),

1.01 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.17 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.30 (1H, m), 1.35 (2H, m), 1.43 (1H, m), 1.48 (1H, m), 1.56

(1H, m), 1.57 (1H, m), 1.69 (1H, m), 1.71 (2H, m), 1.79 (1H, m), 2.08 (1H, m), 2.41 (1H, m), 2.48 (1H, m), 2.77

(3H, s), 2.87 (1H, m), 2.92 (1H, m), 2.98 (1H, m), 3.09 (1H, m), 3.63 (1H, m), 4.22 (1H, m), 4.42 (1h, td, J =

8.1, 5.1 Hz), 4.57 (1H, m), 4.74 (1, m), 4.76 (1H, m), 4.91 (1H, m), 5.06 (1H, s), 5.39 (1H, m), 5.43 (2H, s,

amplio), 5.96 (1H, t, J = 5.5 Hz), 6.07 (1H, s, amplio), 6.78 (2H, d, J = 8.1 Hz), 6.84 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.00 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.11 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.15 (1H, t , J = 7.3 Hz), 7.19 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.42 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.78 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.98 (1H, d , J = 8.1 Hz), 8.39 (1H, d, J = 8.8 Hz), 9.52 (1H, s, amplio)

Ejemplo 2: Determinacion de la actividad biologica in vitro

Los compuestos de la presente invencion, por ejemplo incluyendo un compuesto de la formula II-X, exhiben una actividad farmacologica y por lo tanto son utiles como productos farmaceuticos. Por ejemplo, se encuentra que los compuestos de la presente invencion inhiben la actividad de calicrefna 7 y la actividad HNE.

Los compuestos de la presente invencion tienen valores IC50 entre 1 nM y 10 pM como se determina en el siguiente ensayo:

Ejemplo 2.1: Actividad inhibidora de calicrefna-7 in vitro Materiales y reguladores

El sustrato de fluorescencia amortiguada Ac-Glu-Asp(EDANS)-Lys-Pro-Ile-Leu-PheAArg-Leu-Gly- Lys(DABCYL)-Glu-NH2 (en donde a indica que el enlace escindible, identificado mediante analisis MS) se

compro de Biosyntan (Berlin, Alemania) y se mantuvo como solucion de cultivo 5 mM en DMSO a -20°C. Todos los demas productos quimicos son de grado analftico.

Las reacciones enzimaticas se llevaron a cabo en 50 mM de regulador de citrato de sodio a pH 5.6 que contenfa 150 mM de NaCl y 0.05 % (peso/volumen) de CHAPS.

5 Todas las soluciones que contenfan protefna y peptido se manejaron en tubos siliconizados (Life Systems Design, Merenschwand, Suiza). Las soluciones de compuestos asf como la enzima y las soluciones de sustrato se transfirieron a placas de 384 pozos (Cliniplate negra; numero de catalogo 95040020 Labsystems Oy, Finlandia) por medio de un pipetor de 96 canales CyBi-Well (CyBio AG, Jena, Alemania).

Instrumentacion para mediciones FI

10 Para las mediciones de intensidad de fluorescencia (FI) se uso un lector Ultra Evolution (TECAN, Maennedorf,

Suiza). El instrumento se equipa con una combinacion de 350 nm (20 nm de anchura de banda) y un filtro de paso de banda de 500 nm (anchura de banda 25 nm) para la excitacion de la fluorescencia y adquisicion de la emision, respectivamente. Para aumentar la proporcion serial: fondo, se emplea un espejo dicroico apropiado. Los filtros opticos y el espejo dicroico se compraron de TECAN. Los fluoroforos en cada pozo fueron excitados 15 por tres destellos para su medicion.

Determinacion de valores IC50

Para la determinacion de los valores IC50 se realizo la prueba a temperatura ambiente en placas de 384 pozos. Todos los volumenes de ensayos finales fueron de 30 microlitros. Los compuestos de prueba se disolvieron en 90 % (volumen/volumen) de DMSO/agua y se diluyeron en agua (que contiene 0.05 % 20 (peso/volumen) CHAPS) hasta 3 veces la concentracion deseada del ensayo. Las concentraciones del

compuesto final de 1 litro fueron: 0.3 nM, 1 nM, 3 nM, 10 nM, 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 pM, 3 pM, 10 pM y 30 pM. Para cada ensayo, se anadieron 10 microlitros de agua/CHAPS (+ el compuesto de prueba) por pozo, seguido por 10 microlitros de solucion de proteasa (diluida con 1.5x regulador del ensayo). La concentracion de proteasa en la solucion final del ensayo es 0.2 nM (de acuerdo con las concentraciones de enzimas 25 determinadas por el metodo Bradford). Despues de 1 hora de incubacion a temperatura ambiente, la reaccion comenzo mediante la adicion de 10 microlitros de solucion de sustrato (sustrato disuelto en 1.5x regulador de ensayo, la concentracion final fue de 2 pM). El efecto del compuesto sobre la actividad enzimatica se obtiene de las curvas de progreso lineal y se determina de dos lecturas, la primera tomada directamente despues de la adicion del sustrato y la segunda despues de 1 hora. El valor IC50 se calcula de la graficacion del porcentaje 30 de inhibicion contra concentracion de inhibidor utilizando software de analisis de regresion no lineal (XLfit, Vers. 4.0; ID Business Solution Ltd., Guildford, Surrey, RU).

Los depsipeptidos cfclicos inhibidos por hCalicrefna 7 con valores IC50 como se indican en la tabla 11.

Tabla 10

: Depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) Depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (III)

Enzima: IC50 pM IC50 pM

hCalicrefna7: 0.001 0.0004

35 Tabla 11

Depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula:: Elastasa de neutrofilo humano IC 50 [pM] hCalicrefna7 IC 50 [pM]

formula II: 0.01 0.001

formula III: 0.01 0.0004

Depsipeptido cfclico de acuerdo: Elastasa de neutrofilo humano hCalicrefna7

con la formula:: IC 50 [pM] IC 50 [pM]

formula IV: 0.07 0.005

formula V: 0.06 0.006

formula IX: 0.01 0.001

formula X: 0.2 0.02

formula XII: 0.05 0.004

formula XIII: 0.03 0.0007

formula XIV: 2.7 0.2

formula XV: 0.08 0.004

ejemplo 4: 0.055 0.006

ejemplo 5: 0.005 0.008

ejemplo 6: 0.055 0.095

ejemplo 7: 0.006 0.050

ejemplo 9: 0.003 0.002

ejemplo 10: 0.009 0.0035

ejemplo 11: 0.012 0.006

ejemplo 12: 0.006 0.0085

ejemplo 13: 0.004 0.006

ejemplo 14: 0.005 0.01

ejemplo 15: 0.005 0.015

Depsipeptido cfclico de acuerdo: Elastasa de neutrofilo humano hCalicrefna7

con la formula:: IC 50 [pM] IC 50 [pM]

ejemplo 16: 0.005 0.015

ejemplo 17: 0.0075 0.003

ejemplo 18: 0.0025 0.005

ejemplo 19: 0.0135 0.0065

ejemplo 20: 0.008 0.0015

ejemplo 21: 0.009 0.0025

ejemplo 22: 0.04 0.006

ejemplo 23: 0.003 0.005

ejemplo 24: 0.004 0.007

ejemplo 25: 0.0025 0.00375

ejemplo 26: 0.0045 0.00085

ejemplo 27: 0.02 0.003

ejemplo 28: 0.03 0.0025

ejemplo 29: 0.025 0.003

ejemplo 30: 4.55 1.05

ejemplo 31: 0.3 0.2

ejemplo 32: 0.03 0.1

ejemplo 33: 0.035 0.0045

ejemplo 34: 0.005 0.004

ejemplo 35: 0.003 0.0085

Depsipeptido cfclico de acuerdo: Elastasa de neutrofilo humano hCalicrefna7

con la formula:: IC 50 [pM] IC 50 [pM]

ejemplo 36: 0.0035 0.0085

ejemplo 37: 0.0025 0.0045

ejemplo 38: 0.0015 0.004

ejemplo 39: 0.0035 0.0085

ejemplo 40: 0.0025 0.0065

ejemplo 41: 0.001 0.002

ejemplo 42: 0.001 0.001

ejemplo 43: 0.001 0.0002

ejemplo 44: 0.009 0.0035

ejemplo 45: 0.003 0.002

ejemplo 46: 0.1 0.01

ejemplo 47: 0.01 0.1

Ejemplo 2.2: Actividad inhibidora de HNE in vitro Materiales y reguladores

La elastasa de neutrofilos humanos (numero de catalogo SE563) se compra de Elastin Products Company, 5 Inc. (EPC, Owensville, EUA). El polvo seco (pureza >95 % segun el proveedor) se disuelve en 20 mM de regulador de acetato de sodio, pH 5.0, 50 % (volumen/volumen) glicerol, y se congela a -80°C en alfcuotas.

El sustrato desviado con fluorescencia (DABCYL-Ser-Glu-ValAAsn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-EDANS, en donde A indica el enlace escindible, identificado por analisis MS) fue comprada en Bachem AG (Bubendorf, Suiza), y se mantuvo en una solucion de caldo de 5 mM en DMSO a -20°C. Todos los demas productos qufmicos 10 fueron de grado analftico.

Las reacciones enzimaticas se llevaron a cabo en 100 mM de regulador Tris/HCl a pH 7.5, que contenfa 500 mM NaCl, y 0.05 % (peso/volumen) de CHAPS.

Todas las soluciones que contenfan protefnas y peptidos se manejaron en tubos siliconizados (Life Systems Design, Merenschwand, Suiza).

15 Las soluciones de compuestos asf como las soluciones de enzimas y sustratos se transfirieron a placas de

5

10

15

20

25

30

35

40

384 pozos (Cliniplate negro; numero de catalogo 95040020 Labsystems Oy, Finlandia) por medio de un pipetor de 96 canales CyBi-Well (CyBio AG, Jena, Alemania).

Instrumentacion para las mediciones de FI

Para las mediciones de la intensidad de fluorescencia (FI) se uso un lector Ultra Evolution (TECAN, Maennedorf, Suiza). El instrumento se ha equipado con una combinacion de 350 nm (20 nm de anchura de banda) y un filtro de paso de banda de 500 nm (25 nm de anchura de banda) para la excitacion de fluorescencia y la adquisicion de la emision, respectivamente. Para aumentar la proporcion serial: fondo, se emplea un espejo dicroico apropiado. Los filtros opticos y el espejo dicroico se compran en TECAN. Los fluoroforos en cada pozo se excitan mediante tres destellos por medicion.

Los depsipeptidos cfclicos inhibieron la elastasa de neutrofilos humanos con los valores IC50 como se indica en la Tabla 11.

Ademas los depsipeptidos cfclicos inhibieron la quimotripsina humana con un IC50 variante de 0.001 pM hasta 0.02 pM.

La actividad biologica del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (VIII) se determino con calicrefna 7. Este depsipeptido cfclico de la invencion inhibe la calicrefna humana 7 con un IC50 menor de 3 nM. Este depsipeptido cfclico inhibio la quimotripsina humana y la elastasa de neutrofilos humanos con un IC50 alrededor de 0.004 pM y alrededor de 0.0025 pM, respectivamente.

Ejemplo 3: Determinacion de la actividad inhibidora de calicrefna 7 en vivo

A) Prueba en recuperacion de la interrupcion de la barrera de la piel en ratones.

Metodo: La interrupcion de la barrera de la piel se logra en grupos de ratones SKH1 sin pelo con peladura repetida de la piel con discos de muestra de piel S-Sqame®. El procedimiento se completo cuando se logro la perdida de agua transepidermica (TEWL) > 40 miligramos/centfmetro cuadrado/hora. La TEWL fue valorada con un Tewameter TM210 (Courage Khazaka, Cologne, DE). Inmediatamente despues de la interrupcion de barrera, 30 microlitros del compuesto de prueba se aplico a una concentracion de 10 mM. Los animales de control fueron tratados igualmente con el solvente (etanol/propilenglicol, 3/7 (volumen/volumen)) solo. La TEWL se midio antes, inmediatamente despues y 3 horas despues de la interrupcion de barrera. En cada animal, la recuperacion porcentual se calculo usando la formula: (1-[TEWL a las 3 horas - lfnea base TEWL]/[TEWL inmediatamente despues del pelado - lfnea base TEwL]) x 100%.

Resultados:

Una sola aplicacion del compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula II) acelero la reparacion de barrera en un 57 % en comparacion con la reparacion en los ratones tratados con el solvente solamente (p < 0.05), Tabla 12.

Tabla 12

% recuperacion en interrupcion de Animales barrera Media (valores dE), n: 4

animales por grupo)

Tratado con compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula II) a 10 mM

72.0 (9.1)

Tratado con solvente solo

45.8 (8.0)

B) Pruebas sobre la actividad anti-inflamatoria en modelo murino de dermatitis alergica de contacto (ACD).

Metodos: Ratones Crl: NMRI se sensibilizaron sobre el abdomen rasurado con 50 microlitros del 2 % de oxazolona el dfa 1 y se estimularon con 10 microlitros de oxazolona sobre la superficie interna de la oreja derecha en el dfa 8. Las orejas izquierdas en cambio sirvieron como controles normales y se evaluo la dermatitis de la diferencia en el peso auricular (tomado como una medida de la hinchazon inflamatoria) en el dfa 9. Los animales fueron tratados topicamente con 10 microlitros del compuesto de prueba o del solvente solamente 30 minutos despues del estfmulo. La eficacia del tratamiento se calculo como la inhibicion porcentual de la hinchazon auricular inflamatoria relativa a los animales tratados con el vehfculo solamente.

Resultados: Una sola aplicacion del compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula

II) inhibio la hinchazon inflamatoria en ACD en el 40 % a 10 mM) y por 46 % a 30 mM de concentracion (p < 0.001 contra los animales tratados con solvente (Tabla 13/14).

Tabla 13

Animales: A Media de Pesos auriculares (DE), % Inhibicion de hinchazon inflamatoria

: n: 8 animales por grupo Media ± DE

Tratado con compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula II) a 30 mM: 15.3 (5.4) 46 ± 7.5

Tratado con compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula II) a 10 mM: 17.0 (4.8) 40 ± 6.9

Tratado con solvente+ solo: 28.1 (4.6) -

+: Mezcla de dimetilacetamida/etanol/acetona (1/2/2)

5

Tabla 14

: % Inhibicion de hinchazon inflamatoria % Inhibicion de hinchazon inflamatoria

: Concentracion del compuesto de prueba Concentracion del compuesto de prueba

Compuesto de acuerdo con la formula: 30 mM 10 mM

ejemplo 9: 38 42

ejemplo 10: 25 22

ejemplo 23: 40 48

ejemplo 25: 38 39

ejemplo 43: 55 42

C) Prueba sobre la actividad antiinflamatoria en el modelo de cerdo de dermatitis alergica de contacto (ACD)

Ocho dfas antes de la provocacion de la ACD, 500 microlitros de 10 % de 2,4-dinitrofluorobenceno (DNFB, disuelto en DMSO/acetona/aceite de oliva [1/5/3, v/v/v]) se aplicaron epicutaneamente en volumenes divididos 5 sobre la base de ambas orejas y sobre ambas ingles (100 microlitros/sitio) para sensibilizacion. Las reacciones de esffmulo fueron provocadas con 15 microlitros de DNFB (1.0 %) en sitios de prueba contralateral (cada uno de unos 7 cenffmetros cuadrados) del lomo dorsolateral rasurado. Para el tratamiento, el compuesto de prueba y el placebo (solvente solamente) se aplicaron contralateralmente en 2 sitios de prueba en cada animal 0.5 y 6 horas despues del esffmulo. Los sitios de prueba se examinaron clmicamente 10 24 horas despues del esffmulo cuando la inflamacion alcanzo su maximo. Los cambios se calificaron en una

escala del 0 al 4 (Tabla 15), permitiendo una calificacion maxima combinada de 12 por sitio designado. El enrojecimiento de la piel se midio reflectometricamente usando valores a*.

Tabla 15: Calificacion de signos clmicos de los sitios de prueba afectados con ACD

Calificacion: Eritema/ intensidad Eritema/ extension Induracion

0: Ausente Ausente Ausente

1: Diffcilmente visible Pequenos puntos diffcilmente palpable

2: Regular Grandes manchas Endurecimiento ligero

3: Pronunciado Confluente Endurecimiento pronunciado

4: Severo (o descoloramiento ffvido) Enrojecimiento homogeneo Endurecimiento pronunciado y elevado

15 Resultados: El tratamiento de los sitios de prueba afectados con ACD dos veces con una solucion al 1 % del compuesto de prueba (el depsipeptido dclico de acuerdo con la formula II) inhibio los cambios inflamatorios clmicos en 30 % (p < 0.01) y medida el enrojecimiento de la piel en 27 % (p < 0.05) (Tabla 16).

5

10

15

20

25

30

35

Tabla 16

: Calificacion clfnica Valor A*

Sitios de prueba: (Media, DE, n: 8+) (Media, DE, n: 8+)

Tratado con 1% de compuesto de prueba (el depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula II): 5.1 (1.7) 8.6 (1.4)

Tratado con placebo (solvente): 7.2 (1.9) 12.0 (2.5)

Inhibicion contra sitios tratados con placebo: 29.9 (11.7) 27.0 (2.5)

+: 2 sitios de prueba en cada 4 animales.

Ejemplo 4: Derivacion del depsipeptido cfclico de la invencion

a) Procedimiento de un solo paso: A una solucion de 20 miligramos de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) y 0.027 mililitros de trietilsilano en 2 mililitros de diclorometano/acetonitrilo (1:1) a -50 °C 0.014 mililitros de eterato de trifluoruro de boro se anadieron lentamente. La mezcla de la reaccion se dejo calentarse hasta -5°C y se mantuvo a esa temperatura durante 30 minutos adicionales. Se vertio en una solucion de NaHCO3 saturada, y se extrajo con EtOAc. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio y el solvente se removio al vacfo. La purificacion del residuo obtenido mediante HPLC (XTerra [5 centimetrosj; regulador acetonitrilo/carbonato de amonio pH 10 gradiente) proporciona 9.8 miligramos de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde Ahp se ha convertido en 3-amino-piperidin-2-ona. ESI MS: 935.36 [M+Na]+.

b) Procedimiento de dos pasos: A una solucion de 1 gramo de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en 300 mililitros de diclorometano/acetonitrilo (1:1) a -50 °C se anadio lentamente 0.68 mililitros de eterato de trifluoruro de boro. La mezcla de la reaccion se dejo calentarse hasta -20°C. Luego lentamente se anadieron 0.68 mililitros de eterato de trifluoruro de boro, la mezcla de la reaccion se mantuvo a esa temperatura hasta que no se pudo observar mas material inicial (HPLC). Luego, la mezcla de la reaccion se vertio en una solucion de NaHCO3 saturada, y se extrajo con EtOAc. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio y el solvente se removio al vacfo proporcionando un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde Ahp se ha convertido en 3-amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona. ESI MS: 933.28 [M+Na]+.

El material crudo se disolvio en 400 mililitros de 2-propanol, 115 miligramos de Pd/C (10 %) se anadieron y la mezcla se hidrogeno bajo presion atmosferica hasta que el material inicial fue consumido (HPLC). El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa (SiO2; cHex/EtOAc (1:1) + 10 % MeOH) proporcionando 684 miligramos del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde Ahp se ha convertido en 3-amino- piperidin-2-ona.

Ejemplo 5: Derivacion de un depsipeptido cfclico de la invencion

A una solucion de 75 miligramo (0.081 mmol) del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en 5 mililitros de 1-PrOH 30 microlitros de acido sulfurico se anadieron y la mezcla de la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 48 horas. Para preparar la mezcla de la reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con una solucion de bicarbonato saturada. Despues de secar la capa organica sobre sulfato de sodio, el solvente se removio y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa sobre gel de (cHex/EtOAc (1:1) + 10% MeOH). Rendimiento: 65 miligramos (83 %) de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde Ahp se ha convertido en 3-amino-6-propoxi-piperidin-2-ona. ESI MS: 993.37 [M+Na]+.

De manera semejante, el tratamiento con el alcohol correspondientes proporciono los siguientes compuestos:

O

imagen47

Tabla 17

2

Ejemplo: R ESI MS [M+Na]+

6: 1-octilo 1063.41

7: 2,2,2-trifluoroetilo 1033.30

8: 2-propilo 993.43

9: bencilo 1041.16

10: etilo 979.22

11: 1-butilo 1007.29

12: isobutilo 1007.35

13: 2-metoxietilo 1009.31

14: 2-hidroxietilo 995.28

15: 2-(2-hidroxietoxil)etilo 1039.31

16: 2-(2-metoxietoxi)etilo 1053.33

17: metilo 965.27

Ejemplo: R ESI MS [M+Na]+

18: Propargilo 989.21

Simultaneamente, los compuestos del siguiente tipo se obtuvieron bajo las mismas condiciones:

5

imagen48

O

R2>

imagen49

Tabla 18

Ejemplo: R1, R2 ESI MS [M+Na]+

19: 1 -propilo 1136.33

20: Metilo 980.21

Ejemplo 21: Derivacion de un depsipeptido cfclico de la invencion

Una solucion de 25 miligramos (0.027 mmol) de depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en 2 mililitros de diclorometano se enfrio a 0°C. Despues se anadieron DIPEA y anhfdrido de acido trifluoroacetico (TFAA). La mezcla de la reaccion se calento lentamente hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 10 horas adicionales. Para preparar la mezcla de la reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con acido clorhfdrico y una solucion de bicarbonato saturada. Despues de secar sobre sulfato de sodio, el solvente se removio y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa sobre gel de sflice (cHex/EtOAc (1:1) + 10 % MeOH). Produccion: 14 miligramos (57 %) de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde la amida y la cadena lateral de A1 se ha convertido en un nitrilo. ESI MS: 933.30 [M+Na]+.

15 Similarmente, los compuestos del siguiente tipo se obtuvieron:

imagen50

Tabla 19

Ejemplo: R ESI MS [M+Na]+

22: H 917.30

23: Etilo 961.20

24: 1 -propilo 975.29

25: Bencilo 1023.14

Ejemplo 26: Derivacion de un depsipeptido cfclico de la invencion

5 Una solucion de 25 miligramos (0.027 mmol) de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en 2 mililitros de diclorometano (MC) se enfrio a 0°C. Despues 24 microlitros de DIPEA y 14 microlitros de cloroformiato de hexilo se anadieron lentamente. La mezcla de la reaccion se dejo calentarse a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas adicionales. Para preparar la mezcla de la reaccion se diluyo con diclorometano y se lavo con acido clorhfdrico y una solucion de bicarbonato saturada, y salmuera. Despues de 10 secarse sobre sulfato de sodio, el solvente se removio y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa sobre gel de sflice (cHex/EtOAc (1:1) + 10 % MeOH). Produccion: 20 miligramos (70 %) de un derivado del depsipeptido cfclico de acuerdo con la formula (II) en donde la fraccion fenol de A6 se ha transformado en el ester hexflico de acido carbonico correspondiente. ESI MS: 1079.41 [M+Na]+.

Analogamente, usando un compuesto descrito en el Ejemplo 4 como material inicial, se obtuvieron los 15 siguientes compuestos:

imagen51

O

imagen52

Tabla 20

Ejemplo: R ESI MS [M+Na]+

27: isobutilo 1035.38

28: 2-metoxietilo 1037.36

29: etilo 1007.35

30: 1347.63

31: 1-octilo 1091.42

*Ejemplo de referencia

Ejemplo 32: Derivacion de un depsipeptido cfclico de la invencion

5 A una mezcla de 200 miligramos (0.21 mmol) del depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 5, 57.5 miligramos (0.41 mmol) de K2CO3 en 2 mililitros de acetona seca 60.5 miligramos (0.31 mmol) de bromuro de (E)-3-fenil-2-propenilo se anadieron y se trataron con ultrasonido durante la noche (la temperatura se elevo hasta aproximadamente 50°C). Para preparar la mezcla de la reaccion, se diluyo con diclorometano y se lavo con agua. Despues de secar la capa organica sobre sulfato de sodio, se removio el solvente y el residuo se 10 obtuvo purificado mediante HPLC (15 centfmetros Zorbax; acetonitrilo/Regulador NHUOAc acuoso: 20^95%). Produccion: 100 miligramos (45 %) de un derivado de depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 5 presentando O-((E)-3-fenil-2-propen-1-il)-L-tirosina en A6. ESI MS: 1109.37 [M+Na]+.

Analogamente, el tratamiento de los depsipeptidos cfclicos de acuerdo con el Ejemplo 4 o 5, con el agente alquilante apropiado, proporciona los siguientes compuestos:

O

imagen53

O

Tabla 21

Ejemplo: R1 R2 ESI MS [M+Na]+

33: H t-butoxicarbonilmetilo 1049.33

34: Propoxi t-butoxicarbonilmetilo 1107.33

35: Propoxi 1-(E)-pent-2-enilo 1061.36

36: Propoxi 1-(E)-4,4,4-trifluoro-but-2-enilo 1101.25

37: Propoxi metilo 1007.29

38: propoxi 3-metil-but-2-enilo 1061.36

39: Propoxi Bencilo 1083.38

40: Propoxi Alilo 1033.37

41: Propoxi Propargilo 1031.25

Ejemplo de referencia 42: Derivacion de un depsipeptido cfclico de la invencion

5 A una mezcla de 200 miligramos (0.21 mmol) de depsipeptido cfclico de acuerdo con el Ejemplo 5, se anadieron 46.5 miligramos (0.31 mmol) de yoduro de sodio, y 57.5 miligramos (0.41 mmol) de K2CO3 en 2 mililitros de acetona seca 44 miligramos (0.31 mmol) de 3-(clorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol y se trataron con ultrasonido durante la noche (la temperatura se eleva a aproximadamente 50°C). Para preparar la mezcla de

5

10

15

20

25

30

la reaccion, se diluyo con diclorometano y se lavo con agua. Despues de secar la capa organica sobre sulfato de sodio, el solvente se removio y el residuo obtenido se purifico mediante HPLC (15 centimetros de Zorbax; acetonitrilo/regulador NH4OAC acuoso: 20^95%). Produccion: 90 miligramos (40.5 %) de un derivado de depsipeptido ciclico de acuerdo con el Ejemplo 5 presentando O-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il)metil-L-tirosina en A6. ESI MS: 1101.39 [M+Na]+.

Ejemplo de referenda 43:

Analogamente, el tratamiento del depsipeptido ciclico del depsipeptido ciclico de acuerdo con la formula (II) con 3-(clorometil)-1,5-dimetil-1H-pirazol proporciona un compuesto que presenta O-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3- il)metil-L-tirosina en A6. ESI MS: 1059.19 [M+Na]+.

Ejemplo de referenda 44: Derivacion de un depsipeptido ciclico de la invencion

imagen54

O

imagen55

imagen56

,O. .O

O

imagen57

O

2

A una solucion de 17 miligramos (0.0165 mmol) de depsipeptido ciclico de acuerdo con el Ejemplo 33 en 2 mililitros de diclorometano, se anadieron 845 microlitros de acido trifluoroacetico y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de la reaccion se diluyo con tolueno y el solvente se removio al vacio proporcionando 22.5 miligramos del acido crudo correspondiente.

20 miligramos del acido antes mencionado, 6.81 miligramos (0.031 mmol) de ter-butilester del acido 8-amino- 3,6-dioxaoctanoico, y 15.8 miligramos (0.041 mmol) de HATU se disolvieron en 2 mililitros de DMF seco y 11 microlitros de DIEPA se anadieron y se agitaron a temperatura ambiente durante la noche. Para preparacion, la mezcla de la reaccion se diluyo con EtOAc y se lavo con soluciones NaHSO4 saturada y NaHCO3 y salmuera. Despues de secar la capa organica sobre sulfato de sodio, el solvente se removio y el residuo obtenido se purifico mediante HPLC (15 centimetros de Zorbax; acetonitrilo/regulador NH4OAc acuoso: 20^95 %). Produccion: 7 miligramos (29 %) del compuesto del titulo. ESI MS: 1194.32 [M+Na]+.

Ter-butilester de acido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico

100 miligramos (0.226 mmol) de ter-butilester del acido 8-(9-fluorenilmetoxicarbonilamino)-3,6-dioxaoctanoico en 1 mililitro de DMF seco se trataron con piperidina (89.5 microlitros; 0.862 mmol) a temperatura ambiente durante 3 horas. El solvente se evaporo y el residuo se purifico mediante cromatografia sobre gel de silice con un gradiente cHex^EtOAc^EtoAc/MeOH(1:1) + 3 % MeOH. Produccion: 12 miligramos (24 %) del compuesto del titulo. ESI MS: 220.08 [M+H]+.

Ter-butilester de acido 8-(9-fluorenilmetoxicarbonilamino)-3,6-dioxaoctanoico

Una solucion de 150 miligramos (0.389 mmol) del acido 8-(9-fluorenilmetoxicarbonilamino)-3,6- dioxaoctanoico, 546 miligramos (9.73 mmol) isobutileno, y 4.3 microlitros de 95-98 % de H2SO4 se agito a temperatura ambiente durante 3 dias. Para preparar la solucion de la reaccion, se diluyo con diclorometano y se lavo con solucion de bicarbonato saturada. Despues de secarse sobre sulfato de sodio, el solvente se

removio y el residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en gel de sflice con gradiente cHex/EtOAc proporcionando 145 miligramos (84.4 %) del compuesto del titulo. ESI MS: 464.12 [M+Na]+.

Ejemplo de referencia 45: Derivacion del depsipeptido ciclico de la invencion

N

\\

N

w

N

\

+

imagen58

O

H2N

imagen59

imagen60

imagen61

5 A una mezcla de 101 miligramos (0.1 mmol) de un compuesto del Ejemplo 41 y 40 miligramos Cul en 11 mililitros de tolueno/DMF (10:1) 50 litros de DIEPA y 1 mililitro de una solucion de 1M de 1 -azido-2-[2-(2-azido- etoxi)-etoxi]-etano se anadio y se agito a 45°C durante 6 horas. Luego la mezcla de la reaccion se lavo con una solucion de NaH2PO4 saturada, se seco sobre sulfato de sodio, y el solvente se evaporo. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa (SiO2; cHex/EtOAc (1:1) + 20 % MeOH) proporcionando 14 10 miligramos (11.7 %) del compuesto del titulo. ESI MS: 1231.34 [M+Na]+.

Ejemplo 46: Derivacion de un depsipeptido ciclico de la invencion

imagen62

Una solucion de 25 miligramos de depsipeptido de acuerdo con la formula (II) en 25 mililitro de agua se agito a temperatura ambiente. En esta solucion, se observo un pico adicional en el analisis HPLC, el cual forma un

equilibrio con el depsipeptido de acuerdo con la formula (II). Despues de 20 dfas, la solucion se seco usando liofilizacion y el pico adicional se aislo usando cromatograffa en fase inversa como se describe en el Ejemplo 1. Esto proporciono 0.75 miligramos de depsipeptido ciclico de acuerdo con el Ejemplo 46, en donde Ahp se ha convertido en 5-hidroxiprolina.

5 ESI-MS: modo positivo: m/z = 951.5 (M+Na), modo negativo: m/z = 927.4 (M-H); MW monoisotopico 928.5,

C46H72N8O12

RMN 1H (600 MHz) d6-DMSO 8: 0.00 (1H, m), 0.50 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.71 (3H, m), 0.76 (3H, t, J = 7.0 Hz), 0.76 (3H, d, J = 7.3 Hz), 0.85 (6H, d, J = 6.6 Hz), 0.88 (1H, m), 1.00 (1H, m), 1.03 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.06 (6H, d, J = 6.6 Hz), 1.10 (1H, m), 1.16 (1H, m), 1.26 (1H, m), 1.36 (1H, m), 1.43 (1H, m), 1.51 (2H, m), 1.79 10 (1H, m), 1.83 (1H, m), 1.97 (1H, m), 1.99 (1H, m), 2.17 (2H, t, J = 7.7 Hz), 2.39 (1H, m), 2.48 (1H, m), 2.67

(3H, s), 2.78 (1H, m), 3.43 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.33 (1H, m), 4.45 (1H, m), 4.48 (1H, m), 4.58 (1H, m), 4.61 (1H, m), 4.67 (1H, m), 5.09 (1H, m), 5.47 (1H, m), 6.66 (2H, d, J = 8.1 Hz), 6.74 (1H, s, amplio), 7.03 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.31 (1H, s, amplio), 7.33 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.04 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.17 (1H, d, J = 8.1 Hz), 8.23 (1H, d, J = 2.9 Hz), 8.43 (1H, d, J = 9.5 Hz), 9.25 (1H, s, amplio), (grupo OH de hidroxiprolina no visible).

15 Ejemplo 47: Derivacion de un depsipeptido ciclico de la invencion

O

HO

imagen63

Una solucion de 25 miligramos de depsipeptido de acuerdo con la formula (II) en 25 mililitro 0.5 N HCl se agito a 50°C durante 24 horas. Para separar el pH de la mezcla de la reaccion, se ajusto a pH 7 con 5 N de NaOH y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio y el solvente se removio al 20 vacfo. El residuo obtenido se purifico mediante cromatograffa en fase inversa (las mismas condiciones como

se describen en el Ejemplo 1) proporcionando 17 miligramos de depsipeptido ciclico de acuerdo con el Ejemplo 47, en donde la glutamina en A1 se ha reemplazado por acido glutamico.

ESI-MS: modo positivo: m/z = 952.8 (M+Na), modo positivo: m/z = 928.5 (M-H); MW monoisotopico 929.5,

C46H71N7O13

25 RMN 1H (600 MHz, da-DMSO) 8: -0.11 (3H, d, J =6.6 Hz), 0.64 (4H, m), 0.77 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.81 (3H, t, J = 7.3 Hz), 0.84 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.02 (6H, m), 1.05 (1H, m), 1.10 (1H, m), 1.19 (3H, d, J = 5.9 Hz), 1.24 (1H, m), 1.40 (1H, m), 1.51 (1H, m), 1.75 (1H, m), 1.78 (5H, m), 1.85 (2H, m), 2.10 (2H, m), 2.45 (1H, m), 2.60 (1H, m), 2.67 (1H, m), 2.71 (3H, s), 3.20 (1H, m), 4.28 (1H, m), 4.29 (1H, m), 4.44 (2H, m), 4.63 (1H, d, J = 9.5 Hz), 4.69 (1H, m), 4.93 (1H, m), 5.04 (1H, m), 5.47 (1H, m), 6.24 (1H, s, amplio), 6.64 (2H,

30 d, J = 8.8), 6.99 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.37 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.69 (1H, d, J = 9.5 Hz), 7.80 (1H, d, J = 9.5 Hz),

8.51 (1H, d, J = 8.8 Hz), 8.57 (1H, d, J = 5.1 Hz), grupo OH de tirosina y acido glutamico no visible)

Referencias

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5

10

15

20

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Claims

1. Un depsipeptido cfclico que tiene la estructura de la formula (I):

imagen1

en donde se forma un enlace ester entre un grupo carboxilo de A7 y un grupo hidroxilo de A2,

5 en donde el residuo acilo X es CH3CH2CH(CH3)CO o (CH3)2CHCO,

Ai es glutamina, acido glutamico, o un derivado del mismo, seleccionado de nitrilo glutamico, ester de alquilo de 1 a 12 atomos de carbono de acido glutamico o ester de arilo de 6 a 24 atomos de carbono de acido glutamico,

A2 es treonina,

10 A3 es leucina,

A4 es Ahp, en donde AHP es 3-amino-6-hidroxi-pipiridin-2-ona, 3-amino-piperidin-2-ona, prolina, 5- hidroxiprolina o un derivado del mismo, seleccionado de 3-amino-3,4-dihidro-1H-piridin-2-ona,

imagen2

15 en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) alquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono), alcoxilo (con de 2 a 12

5

10

15

20

25

30

35

atomos de carbono) alcoxialquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) de 1 a 12 atomos de carbono, hidroxialquilo de 1 a 12 atomos de carbono, fenilo y fenilo alquilo de 1 a 6 atomos de carbono.,

A5 es isoleucina,

A6 es tirosina, N-Me-tirosina o un derivado del mismo, seleccionado de N-Me-tirosina donde el grupo OH de la tirosina o N-Me-tirosina es OR, en donde R es seleccionado del grupo que consiste en alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxicarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) carbonilo alquilo, alquilaminocarbonilo de 1 a 12 atomos de carbono, en donde las fracciones alquilo, alquenilo y alquinilo de los grupos R pueden estar no sustituidos o sustituidos adicionalmente por arilo, arilalquilo de 2 a 12 atomos de carbono, arilalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono o arilalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, heterociclilo y heterociclilalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, A7 es isoleucina o valina,

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. El depsipeptido de la reivindicacion 1, en donde el atomo de nitrogeno del enlace amida entre A5 y A6 se sustituye con un metilo y el grupo OH de la tirosina es OR, en donde R se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo de 1 a 12 atomos de carbono, alquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, alquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquilo de 1 a 12 atomos de carbono, haloalquenilo de 2 a 12 atomos de carbono, haloalquinilo de 2 a 12 atomos de carbono, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) carbonilo, alcoxilo (con de 1 a 12 atomos de carbono)carbonilo alquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono), alquilo (con de 1 a 12 atomos de carbono) aminocarbonilo, no sustituido o sustituido adicionalmente por arilo, arilalquilo, arilalquenilo o arilalquinilo, heterociclilo y heterociclilalquilo.

3. El depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde A1 es acido glutamico, o un derivado del mismo seleccionado de nitrilo glutamico, ester de acido glutamico seleccionado de alquil ester de 1 a 12 atomos de carbono o aril ester de 6 a 24 atomos de carbono

4. Un depsipeptido de la reivindicacion 1, el cual es un compuesto de acuerdo con las formulas A o B,

imagen3

imagen4

O

A

A B

en donde X y A1 son como se definen en la reivindicacion 1, y en donde R2 es metilo,

R3 es la cadena lateral de leucina,

R5 es la cadena lateral del aminoacido isoleucina,

R6 es la cadena lateral de tirosina opcionalmente derivado en su grupo hidroxilo como se define en la reivindicacion 2,

R7 es la cadena lateral del aminoacido isoleucina o valina,

Y es ya sea hidrogeno o metilo.

5. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 4 en donde X es (CH3)2CHCO.

6. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 4 en donde R7 es la cadena lateral del aminoacido isoleucina.

7. El depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde A1, A2, A3, A5, A6 y A7 son aminoacidos L.

8. El depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde A4 es 3S,6R Ahp.

9. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 1 seleccionado de

imagen5

imagen6

Formula (IV)

Formula (V)

Formula (XIV)

Ejemplo 46

Ejemplo47

Ejemplo: R

6: 1-octilo

7: 2,2,2-trifluoroetilo

8: 2-propilo

9: bencilo

10: etilo

11: 1-butilo

12: isobutilo

13: 2-metoxietilo

14: 2-hidroxietilo

16: 2-(2-metoxietoxi)etilo

17: metilo

18: propargilo

imagen7

5 en donde R y R2 son seleccionados de:

Ejemplo: R, R2

19: 1-propilo

20: metilo

imagen8

en donde R1 es seleccionado de:

Ejemplo: R1

22: H

23: etilo

24: 1-propilo

25: bencilo

5

en donde R3 es seleccionado de:

Ejemplo: R3

27: isobutilo

28: 2-metoxietilo

29: etilo

31: 1-octilo

imagen9

imagen10

en donde R1 y R4 son seleccionados de:

Ejemplo: R1 R4

33: H t-butoxicarbonilmetilo

34: propoxi t-butoxicarbonilmetilo

35: propoxi 1-(E)-pent-2-enilo

36: propoxi 1-(E)-4,4,4-trifluoro-but-2-enilo

37: propoxi metilo

38: propoxi 3-metilo-but-2-enilo

39: propoxi bencilo

40: propoxi alilo

41: propoxi propargilo

5 10. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 1 seleccionado de

imagen11

imagen12

imagen13

imagen14

12. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 1 seleccionado de

5 13. El depsipeptido cfclico de la reivindicacion 1 seleccionado de

5

10

15

20

25

30

35

imagen15

15. Una composicion farmaceutica que comprende un depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en combinacion con un vehfculo y/o ingrediente farmaceuticamente aceptable.

16. El depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 14 para uso como un medicamento.

17. Uso de depsipeptidos de cualquiera de las reivindicaciones 1 - 14 en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento en una enfermedad o trastorno seleccionado de enfermedades pruriginosas de la piel tales como queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, psoriasis, psoriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, picazon no especificada de los ancianos, asf como otras enfermedades con disfuncion de la barrera epitelial tales como piel envejecida, enfermedad inflamatoria intestinal y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario, fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de dificultad respiratoria del adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, psoriasis y asma.

18. Uso de acuerdo con la reivindicacion 17, para el tratamiento de queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, psoriasis, psoriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, picazon no especificada de los ancianos, asf como otras enfermedades con disfuncion de la barrera epitelial tal como piel envejecida, enfermedad inflamatoria del intestino y enfermedad de Crohn, asf como pancreatitis, o de cancer, en particular cancer de ovario.

19. Uso de acuerdo con la reivindicacion 18 para el tratamiento de queloides, cicatrices hipertroficas, acne, dermatitis atopica, psoriasis, psoriasis pustular, rosacea, sfndrome de Netherton u otras dermatosis prurfticas tales como prurigo nodularis, picazon no especificada de los ancianos, asf como otras enfermedades con disfuncion de la barrera epitelial, tal como piel envejecida.

20. Uso de acuerdo con la reivindicacion 17, para el tratamiento de la fibrosis qufstica (CF), enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD), fibrosis pulmonar, sfndrome de dificultad respiratoria del adulto, bronquitis cronica, enfisema hereditario, artritis reumatoide, IBD, psoriasis y asma.

21. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 17-20, en donde el tratamiento es por aplicacion local o sistemica, tales como cremas, unguentos y supositorios, o por aplicacion oral o por via intravenosa o por inhalacion, respectivamente.

22. Un procedimiento para producir El depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones 1-14 que comprende el cultivo de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o un mutante del mismo, en un medio adecuado, y opcionalmente derivacion qufmica del depsipeptido cfclico asf producido.

23. Un procedimiento para producir el depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones 1-14 que comprende expresar los genes de biosfntesis de Chondromyces crocatus (DSM 19329), una variante o un mutante del mismo, en una cepa huesped microbiana heterologa, y opcionalmente derivacion qufmica del depsipeptido cfclico asf producido.

24. Un microorganismo de Chondromyces aislado que produce el depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, depositado bajo el numero de acceso DSM 19329.

25. Un depsipeptido cfclico de cualquiera de las reivindicaciones 1-14 producido por el microorganismo Chondromyces aislado de la reivindicacion 25 de aislado o obtenido mediante un proceso de acuerdo con las reivindicaciones 23-24.

26. Un proceso para la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1, el cual comprende alternativamente

a) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde A4 es

imagen16

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

imagen17

O

NH

10

con un acido organico o inorganico, o un acido de Lewis a una temperatura entre -78°C y 150°C;

b) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1 en donde A4 es

h2n

imagen18

O

NH

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

h2n

imagen19

O

NH

15

con el hidrogeno molecular o fuente del mismo en presencia de un catalizador en un solvente a una temperatura entre -50 y 100°C;

c) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1, en donde A4 es

imagen20

NH

mediante el tratamiento de un compuesto, en donde A4 es

10

imagen21

O

NH

con un acido organico o inorganico o un acido de Lewis, en presencia de un agente de reduccion a una temperatura de entre -78°C y 150°C; o

d) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1 en donde A4 es

imagen22

mediante el tratamiento de un compuesto en donde A4 es

imagen23

O

NH

con un alcanol sustituido o no sustituido y un acido organico o inorganico, o un acido de Lewis, a una temperatura entre -78°C y 150°C;

e) la preparacion de un depsipeptido ciclico de acuerdo con la reivindicacion 1 en donde A1 es

O

H2N

imagen24

OH

CH)n

COOR

en donde n = 2 y A4 es

O

imagen25

O NH

en donde R es H, alquilo, alquilo sustituido, mediante el tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln o Asn y A4 es

imagen26

O

R

5 en donde R es H, alquilo, alquilo sustituido, con un alcanol sustituido o no sustituido y un acido organico o inorganico o un acido de Lewis en un solvente o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C;

f) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1 en donde A1 es

O

h2n

imagen27

OH

imagen28

10

en donde R es H, OH, O-alquilo, O-alquilo sustituido, O-acilo, mediante tratamiento de un compuesto en donde A1 es Gln o Asn y A4 es

imagen29

con un agente deshidratante en un solvente o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C;

g) la preparacion de un depsipeptido cfclico de acuerdo con la reivindicacion 1 en donde A4 es

y A6 es

imagen30

O

imagen31

R

en donde R es alquilo, alquilo sustituido, acilo, alcoxicarbonilo mediante tratamiento de un compuesto en 5 donde A4 es

imagen32

y A6 es Tyr, en donde un agente alquilante o un agente acilante en un solvente o sin un solvente a una temperatura entre -78°C y 150°C.