ES2632429T3 - Vacunas subunitarias de rotavirus y procedimientos para la fabricación y utilización de las mismas - Google Patents

Abstract

Composición inmunológica, que comprende: a) polipéptidos de rotavirus NSP4, VP4 y VP6; y b) un vehículo, diluyente o excipiente farmacéutica o veterinariamente aceptable.

Description

DESCRIPCIÓN

Vacunas subunitarias de rotavirus y procedimientos para la fabricación y utilización de las mismas

5 CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La presente solicitud reivindica prioridad de la solicitud de patente provisional No. de serie USSN 61/598.624, presentada el 14 de febrero de 2012.

10 CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0002] La presente invención se refiere en general a vacunas subunitarias, en particular aquellas que comprenden péptidos de rotavirus que han sido diseñados para ser genética y antigénicamente casi idénticos a los expresados por los virus que infectan a una población diana de animales. Los plásmidos que expresan los péptidos antigénicos o

15 proteína o proteínas de subunidades se mantienen en la población celular bacteriana por medio de un sistema de selección de toxina/antídoto. Las células bacterianas producen una proteína tóxica, que es contrarrestada por una proteína antídoto codificada por el plásmido que porta los péptidos, haciendo que las células no transformadas sean no viables.

20 ANTECEDENTES

[0003] El rotavirus es la causa más común de diarrea grave en lactantes y niños pequeños (Dennehy PH, 2000), y es uno de varios virus que causan infecciones a menudo llamadas gripe estomacal, a pesar de no tener ninguna relación con la gripe. Es un género de virus de ARN de doble cadena en la familia Reoviridae. Hay cinco especies de

25 este virus, denominados A, B, C, D, y E (ICTV Virus Taxonomy: 2009 Release). La Tabla 1 proporciona un resumen de las proteínas de rotavirus conocidas. El rotavirus A, el más común, causa más de 90% de las infecciones en los seres humanos. El virus se transmite por vía fecal-oral, e infecta y daña las células que recubren el intestino delgado y causa la gastroenteritis. Además de su impacto en la salud humana, el rotavirus también infecta a los animales, y es un patógeno del ganado (Dubovi EJ, 2010).

30 [0004] Por ejemplo, según un estudio reciente, se encontró rotavirus habitualmente (65%) en las heces o contenido intestinal de cerdos con diarrea. La mayoría de los animales fueron infectados por un solo grupo (A, B, C) aunque la infección concurrente por más de un grupo rotavirus no tiene lugar (Yoon, KJ, Epidemiology of rotaviruses, ISUVDL submissions, 2010-2011, Iowa State). Cerca de un tercio de los animales estaban infectados por lo menos por el

35 Rotavirus del Grupo C. Hasta ahora, la prevención del rotavirus en cerdos había implicado prácticas arcanas, tales como la alimentación de de tejido infectado de lechosnes a cerdos sanos. Esta práctica fue necesaria porque el rotavirus del Grupo C no puede cultivarse in vitro, evitando así la producción de las vacunas convencionales inactivadas/atenuadas de virus enteros. Por lo tanto, existe una necesidad clara y urgente de medidas preventivas más efectivas y seguras.

40 Tabla 1. Resumen de proteínas de rotavirus

Segmento de ARN (gen)

Tamaño (pb, en base a cepa de Rota C humano) Proteína Peso molecular kDa Localización Copias por partícula Función

1

3309 VP1 125 En los vértices del núcleo <25 ARN polimerasa dependiente de ARN

2

2736 VP2 102 forma capa protectora interna del núcleo 120 estimula ARN replicasa viral

3

2283 VP3 88 En los vértices del núcleo <25 Enzima de bloqueo de ARNm de guanilil transferasa

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2166 VP4 87 Espícula de la superficie 120 unión celular, virulencia

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1353 NSP1 59 No estructural 0 unión a 5’ARN

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1350 VP6 45 Cápside interna 780 antígeno estructural y específico de

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644 Directo de deleción del gen de AMPR

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645 Inverso de deleción del gen de AMPR

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660 Directo de verificación de PCR

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661 Inverso de verificación de PCR

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652 Directo de NSP4 con sitio BamHI

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653 Inverso de NSP4 con sitio HindIII

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654 Directo de VP4 con sitio BamHI

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655 Inverso de VP4 con sitio HindIII

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656 Directo de VP6 con sitio BamHI

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657 Inverso de VP6 con sitio HindIII

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760 KSN760 – inverso de VP4

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761 KSN761 – directo de VP4

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762 KSN762 – inverso de VP4

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763 KSN763 – directo de VP4

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772 Cebador 1 para insertar la etiqueta de His en pNPL1

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773 Cebador 2 para insertar la etiqueta de His en pNPL1

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774 Directo de NSP4 de Rota C para pNPL3

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775 Inverso de NSP4 de Rota C para pNPL3 o pNPL1

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776 Directo de VP4 de Rota C para pNPL3

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777 Inverso de VP4 de Rota C para pNPL3 o pNPL1

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778 Directo de VP6 de Rota C para pNPL3

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779 Inverso de VP6 de Rota C para pNPL3 o pNPL1

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780 Directo de NSP4 de Rota C para pNPL1

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781 Directo de VP4 de Rota C para pNPL1

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782 Directo de VP6 de Rota C para pNPL1

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783 Directo de VP7 de Rota C para pNPL3

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784 Inverso de VP7 de Rota C para pNPL3 p pNPL1

[0046] Los polipéptidos o proteínas antigénicos según la presente invención son capaces de proteger contra rotavirus. Es decir, que son capaces de estimular una respuesta inmune en un animal. Por "antígeno" o "inmunógeno" se entiende una sustancia que induce una respuesta inmune específica en un animal huésped. El antígeno puede comprender un organismo completo, muerto, atenuado o vivo; una subunidad o parte de un organismo; un vector recombinante que contiene un inserto con propiedades inmunogénicas; un trozo o fragmento de ADN capaz de inducir una respuesta inmune tras la presentación a un animal huésped; un polipéptido, un epítopo, un hapteno, o cualquier combinación de los mismos. Alternativamente, el inmunógeno o antígeno puede comprender una toxina o antitoxina.

[0047] El términos "proteína", "péptido", "polipéptido" y "fragmento de polipéptido" se usan indistintamente en este documento para referirse a polímeros de residuos de aminoácidos de cualquier longitud. El polímero puede ser lineal

o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados o análogos de aminoácidos, y puede estar interrumpido por restos químicos distintos de aminoácidos. Los términos también abarcan un polímero de aminoácidos que ha sido modificado naturalmente o mediante intervención; por ejemplo la formación de enlaces disulfuro, glicosilación, lipidación, acetilación, fosforilación, o cualquier otra manipulación o modificación, tal como conjugación con un componente de marcaje o bioactivo.

[0048] El término "polipéptido inmunogénico o antigénico", como se usa en el presente documento incluye polipéptidos que son inmunológicamente activos en el sentido de que una vez que se administra al huésped, es capaz de evocar una respuesta inmune de tipo humoral y/o celular dirigida contra la proteína. Preferiblemente, el fragmento de proteína es tal que tiene sustancialmente la misma actividad inmunológica que la proteína total. Por lo tanto, un fragmento de proteína según la invención comprende o consiste esencialmente en o consiste en al menos un epítopo o determinante antigénico. Una proteína o polipéptido "inmunogénico", como se usa en el presente documento, incluye la secuencia de longitud completa de la proteína, análogos de la misma, o fragmentos inmunogénicos de la misma. Por "fragmento inmunogénico" se entiende un fragmento de una proteína que incluye uno o más epítopos y de este modo provoca la respuesta inmunológica descrita anteriormente. Tales fragmentos pueden ser identificados usando cualquier técnica de mapeo de epítopos, bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996). Por ejemplo, los epítopos lineales pueden determinarse, por ejemplo, sintetizando simultáneamente gran cantidad de péptidos sobre soportes sólidos, los péptidos correspondientes a porciones de la molécula de proteína, y haciendo reaccionar los péptidos con anticuerpos mientras los péptidos están todavía unidos a los soportes. Tales técnicas se conocen en el sector y se describen en, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos. No. 4.708.871; Geysen et al., 1984; Geysen et al., 1986. De manera similar, los epítopos conformacionales son fácilmente identificados mediante la determinación de la conformación espacial de aminoácidos, tales como mediante, por ejemplo, cristalografía de rayos X y resonancia magnética nuclear de 2 dimensiones. Véase, por ejemplo, Epitope Mapping Protocols,

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[0055] La presente invención se refiere a una vacuna o composición contra el rotavirus que pueden comprender un polipéptido, antígeno, epítopo o inmunógeno de rotavirus y un portador, excipiente o vehículo farmacéutica o veterinariamente aceptable. El polipéptido, proteína, antígeno, epítopo o inmunógeno de rotavirus pueden ser cualquier polipéptido, proteína, antígeno, epítopo o inmunógeno de rotavirus, tal como, pero no limitado a, una proteína, péptido o fragmento de la misma, que provoca, induce o estimula una respuesta en un animal.

[0056] Se describe en el presente documento una vacuna o composición contra el rotavirus que pueden comprender un polipéptido de rotavirus VP1, VP2, VP3, VP4, NSP1, VP6, NSP3, NSP2, VP7, NSP4, NSP5, o NSP6 y un portador, excipiente o vehículo farmacéutica o veterinariamente aceptable. En una realización, el vector de expresión puede comprender además un polinucleótido que codifica los polipéotidos VP4, VP6 o NSP4, o combinaciones de los mismos. En una realización particular, el polinucleótido comprende la secuencia tal como se expone en SEQ ID NO: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, o combinaciones de las mismas.

[0057] En otra realización, el portador, excipiente o vehículo farmacéutica o veterinariamente aceptable puede ser una emulsión de agua-en-aceite. En aún otra realización, la emulsión de agua-en-aceite puede ser una emulsión triple de agua/aceite/agua (W/O/W).

[0058] En una realización, el polipéptido de rotavirus, antígeno o fragmento o variante del mismo comprenden un polipéptido de rotavirus o fragmento o variante del mismo. En un aspecto de esta realización, el polipéptido de rotavirus o fragmento o variante del mismo es un polipéptido recombinante producido por un gen de rotavirus. En otro aspecto de esta realización, el gen de rotavirus tiene al menos un 70% de identidad con la secuencia tal como se expone en SEQ ID NO: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, o combinaciones de las mismas. En otro aspecto de esta realización, el polipéptido de rotavirus o fragmento o variante del mismo tiene al menos un 80% de identidad con la secuencia tal como se expone en SEQ ID NO: 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, o 71, donde el polipéptido o fragmento o variante del mismo tienen el mismo papel funcional (es decir, el polipéptido es el polipéptido de rotavirus VP4, VP6, o NSP4 que pertenece a una cepa diferente del rotavirus del Grupo C).

[0059] Los antígenos sintéticos también se incluyen dentro de la definición, por ejemplo, poliepítopos, epítopos flanqueantes, y otros antígenos recombinantes o derivados sintéticamente. Véase, por ejemplo, Bergmann et al., 1993; Bergmann et al., 1996; Suhrbier, 1997; Gardner et al., 1998. Los fragmentos inmunogénicos, para los propósitos de la presente invención, incluirán generalmente al menos aproximadamente 3 aminoácidos, al menos aproximadamente 5 aminoácidos, al menos aproximadamente 10-15 aminoácidos, o aproximadamente 15-25 aminoácidos o más aminoácidos, de la molécula. No hay límite superior crítico para la longitud del fragmento, que puede comprender casi la longitud completa de la secuencia de la proteína, o incluso una proteína de fusión que comprende al menos un epítopo de la proteína.

[0060] Por consiguiente, una estructura mínima de un polinucleótido que expresa un epítopo es el que comprende o consiste esencialmente en o consiste en nucleótidos que codifican un epítopo o determinante antigénico de un polipéptido de rotavirus. Un polinucleótido que codifica un fragmento de un polipéptido de rotavirus puede comprender o consistir esencialmente en o consistir en un mínimo de 15 nucleótidos, aproximadamente 30-45 nucleótidos, aproximadamente 45-75, o al menos 57, 87 o 150 nucleótidos consecutivos o contiguos de la secuencia que codifica el polipéptido. Los procedimientos de determinación de epítopo, tales como, la generación de bibliotecas de péptidos que se solapan, Pepscan (Geysen et al, 1984 (Hemmer et al., 1998); Geysen y col., 1985; Van der Zee. R. et al, 1989; Geysen., 1990; Multipin.RTM Peptide Synthesis Kits de Chiron) y algoritmos (de Groot et al, 1999; PCT/US2004/022605) se pueden utilizar en la práctica de la invención.

[0061] El término "ácido nucleico" y "polinucleótido" se refiere a ARN o ADN que es lineal o ramificado, monocatenario o bicatenario, o un híbrido de los mismos. El término también abarca híbridos de ARN/ADN. Los siguientes son ejemplos no limitativos de polinucleótidos: un gen o fragmento de gen, exones, intrones, ARNm, ARNt, ARNr, ribozimas, ADNc, polinucleótidos recombinantes, polinucleótidos ramificados, plásmidos, vectores, ADN aislado de cualquier secuencia, ARN aislado de cualquier secuencia, sondas de ácidos nucleicos y cebadores. Un polinucleótido puede comprender nucleótidos modificados, tales como nucleótidos metilados y análogos de nucleótidos, uracilo, otros azúcares y grupos de unión, tales como fluororibosa y tiolato, y ramas de nucleótidos. La secuencia de nucleótidos se puede modificar adicionalmente después de la polimerización, tal como mediante conjugación, con un componente de marcaje. Otros tipos de modificaciones incluidas en esta definición son los agentes de bloqueo, sustitución de uno o más de los nucleótidos naturales por un análogo, y la introducción de medios para unir el polinucleótido a proteínas, iones metálicos, componentes de marcaje, otros polinucleótidos o soporte sólido. Los polinucleótidos se pueden obtener por síntesis química o derivados de un microorganismo.

[0062] El término "gen" se utiliza ampliamente para referirse a cualquier segmento de polinucleótido asociado con una función biológica. Por lo tanto, los genes incluyen intrones y exones como en la secuencia genómica, o sólo las secuencias de codificación como en ADNc y/o las secuencias reguladoras requeridas para su expresión. Por

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de refuerzo posterior. La administración de sensibilización puede comprender una o más administraciones. Del mismo modo, la administración de refuerzo puede comprender una o más administraciones.

[0098] El volumen de dosis de composiciones para especies diana que son mamíferos, por ejemplo, el volumen de dosis de composiciones de cerdos o cochinos, basado en vectores virales, por ejemplo, composiciones basadas en vectores virales no poxvirus es generalmente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 2,0 ml, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1,0 ml, y de aproximadamente 0,5 ml a aproximadamente 1,0 ml.

[0099] La eficacia de las vacunas puede probarse aproximadamente de 2 a 4 semanas después de la última inmunización mediante la estimulación de animales, tales como porcinos, con una cepa virulenta de rotavirus. Ambas cepas homólogas y heterólogas se utilizan para la estimulación para probar la eficacia de la vacuna. El animal puede estimularse por inyección IM o SC, aerosol, vía intra-nasal, intra-ocular, intra-traqueal, y/o por vía oral. El virus de la estimulación puede ser de aproximadamente 105-8 EID50, TCID50 o 103-8 equivalentes de genoma tal como se determina por qPCR en un volumen dependiendo de la vía de administración. Por ejemplo, si la administración es por pulverización, una suspensión de virus se aerosoliza para generar gotitas de aproximadamente 1 a 100 µm, si la administración es intra-nasal, intratraqueal u oral, el volumen del virus de estimulación es de aproximadamente 0,5 ml, 1-2 ml, y 5-10 ml, respectivamente. Los animales pueden ser observados diariamente durante 14 días después de la estimulación para detectar signos clínicos, por ejemplo, deshidratación, diarrea, heces pastosas a acuosa, muerte y/o pérdida de peso, retraso en el desarrollo, eliminación del virus. Además, los grupos de animales pueden ser sometidos a eutanasia y evaluar los hallazgos patológicos de la enfermedad intestinal, atrofia de las vellosidades. Se pueden recoger hisopos rectales o fecales de todos los animales tras la estimulación para el aislamiento o cuantificación o detección del virus. La presencia o ausencia de antígenos virales en los tejidos o las heces intestinales pueden ser evaluados mediante la reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa inversa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR). Las muestras de sangre pueden recogerse antes y después de la estimulación y pueden ser analizadas para analizar la presencia de anticuerpos específicos de rotavirus.

[0100] Las composiciones que comprenden los polipéptidos antigénicos recombinantes de la invención usados en los protocolos de sensibilización-refuerzo están contenidas en un vehículo diluyente o excipiente farmacéutica o veterinariamente aceptable. Los protocolos de la invención protegen el animal del rotavirus y/o previenen la progresión de la enfermedad en un animal infectado.

[0101] Las diversas administraciones se realizan preferiblemente con de 1 a 6 semanas de diferencia. El intervalo de tiempo preferido es de 3 a 5 semanas, y óptimamente 4 semanas. Según una realización, también se prevé un refuerzo anual. Los animales, por ejemplo, cerdos, pueden tener al menos 8 semanas de vida en el momento de la primera administración.

[0102] Se debe entender por un experto en la técnica que la presente descripción se proporciona a modo de ejemplo y la presente invención no se limita a ello. A partir de la descripción de este documento y el conocimiento en la técnica, el experto en la materia puede determinar el número de administraciones, la vía de administración, y las dosis a utilizar para cada protocolo de inyección, sin gran experimentación.

[0103] La presente invención contempla al menos una administración a un animal de una cantidad suficiente de la composición terapéutica producida según la invención. Por ejemplo, la cantidad suficiente puede ser de aproximadamente 10 µg a aproximadamente 300 µg de proteína. En una realización, aproximadamente 100 µg de cada una de tres proteínas diferentes de rotavirus del grupo C están presentes en una cantidad suficiente de la composición terapéutica. El animal puede ser macho, hembra, hembra embarazada y recién nacido. Esta administración puede ser a través de diversas rutas incluyendo, pero no limitado a, inyección intramuscular (IM), intradérmica (ID), intraperitoneal (IP) o subcutánea (SC) o mediante administración intranasal o por vía oral. La composición terapéutica según la invención también se puede administrar mediante un aparato sin aguja (como, por ejemplo, Pulse Needle Free, Pulse Needlefree, Lenexa, KS, EE.UU., Pigjet, Dermojet, Biojector, Avijet (Merial, GA, EE.UU.), aparato Vetjet o Vitajet (Bioject, Oregon, EE.UU.)). Otro enfoque para la administración de composiciones de plásmidos es usar electroporación (véase, por ejemplo Tollefsen et al, 2002; Tollefsen et al, 2003; Babiuk et al, 2002; solicitud PCT No. WO99/01158). En otra realización, la composición terapéutica se administra al animal mediante pistola de genes o bombardeo de partículas de oro. En una realización ventajosa, el animal es un cerdo, perro, hurón o foca.

[0104] Se describe en el presente documento un kit para realizar un procedimiento de producir o inducir una respuesta inmunológica o protectora contra rotavirus en un animal que comprende una composición inmunológica o vacuna subunitaria de rotavirus y las instrucciones para realizar el procedimiento de liberación en una cantidad eficaz para provocar una respuesta inmune en el animal.

[0105] Se describe en el presente documento un kit para realizar un procedimiento de inducir una respuesta inmunológica o protectora contra rotavirus en un animal que comprende una composición o vacuna que comprende un polipéptido o antígeno de rotavirus de la invención, e instrucciones para realizar el procedimiento de liberación en una cantidad eficaz para provocar una respuesta inmune en el animal.

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durante 15 -30 minutos o por filtración usando un filtro de 0,1-0,4 micras. Después de suspender en urea 8 M (Sigma-Aldrich, nº de catálogo U6504 o equivalente) y agitación o movimiento durante 0,5-2 horas, la suspensión final se diluyó con PBS estéril.

[0133] Formulaciones de vacuna. Después de la recogida, las subunidades de rotavirus se formularon con TRIGEN (aceite en agua) y conservantes (gentamicina a una concentración de <30,0 µg/ml y anfotericina B a una concentración de < 2,50 µg/ml o polimixina B a una concentración de < 30 µg/ml). Se añadió a la mezcla a) gel de hidróxido de aluminio (ALHYDROGEL® "85", fabricado por Brenntag Biosector, Cat. No. EMS 2485-2 o REHYDRAGEL® HPA, Reheis Cat. No. 203130070600, REHYDRAGEL LV, Reheis Cat. No. 203120070602 o equivalente) que proporciona de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,5% de Al2O3 en el producto final. Alternativamente, el adyuvante Quil A estaba presente en las formulaciones en una proporción de 0,5 a 2,5% de los fluidos inactivados con aceite en adyuvante agua. Los adyuvantes comprenden desde aproximadamente 10 a aproximadamente 50% del producto final.

Ejemplo 3 -Inmunización de cerdas utilizando vacunas subunitarias de rotavirus autógenas

[0134] Resumen. 48 cerdas de investigación, con infección crónica por rotavirus C y de paridad similar se utilizaron en el estudio de eficacia de la vacuna. Veintiséis (26) animales fueron controles vacunados con placebo, mientras que 22 animales recibieron vacuna subunitaria de rotavirus que comprendía una mezcla de VP4, VP6, NSP4, y de emulsión/adyuvantes adicionales. La vacuna se formula de tal manera que hay aproximadamente 100 microgramos de cada proteína (un total de 300 microgramos de proteína) y Trigen al 10% por cada dosis de vacuna. Las vacunas se administraron por vía intramuscular a las 6 y 3 semanas antes del parto. Se recogió suero de la sangre de cerdas antes de la vacunación y del parto, y posteriormente se recogió suero de sangre de lechones a los 7 días después del parto.

[0135] Resultados. Los lechones nacidos de cerdas no vacunadas tuvieron una tasa de mortalidad del 21%, en comparación con los lechones nacidos de cerdas vacunadas, que tenían una tasa de mortalidad del 14% (es decir, un 33% de disminución). La morbidez también se redujo significativamente en los cerdos nacidos de cerdas vacunadas. Los lechones de cerdas vacunadas también tenían significativamente (p <0,05) títulos de anticuerpos más altos que los lechones de control (Figura 9).

Ejemplo 4 -Eficacia de una nueva vacuna de Rotavirus C en la reducción de la incidencia de diarrea en el lechóncerdo y mejora del rendimiento

[0136] Resumen. Se seleccionó una raza de 3600 cerdas de un grupo de destete para evaluar la eficacia de una nueva vacuna contra el rotavirus C. El grupo consistía en hembras PIC L03 cruzadas con jabalíes de línea 02. Todas las dietas suministradas en la granja se formulan para cumplir o exceder los requerimientos de nutrientes (NRC, 1998). Las cerdas y cerdas jóvenes fueron asignadas aleatoriamente a uno de dos tratamientos (control (CON) o vacuna RS de Rota C (VACC) basándose en el día de la reproducción y dentro de la paridad. Los animales en el grupo VACC asignado recibieron 2 ml de vacuna por vía intramuscular a las 3 semanas; 3 y 5 semanas; o 3, 5, y 8 semanas antes del parto. Todas las crías de estos animales se alimentaron de forma cruzada en 24 horas del nacimiento mediante tratamiento. Las puntuaciones de la diarrea se realizaron diariamente desde el día de nacimiento hasta el día 5. Se dio una puntuación de 0 (sin diarrea), 1 (poca diarrea), 2 (50% de las crías con diarrea), o 3 (más del 50% de las crías con diarrea). Se registraron los cerdos extraídos de las crías originales debido a la mortalidad asociada con la diarrea. No hubo diferencias en las puntuaciones de la diarrea o la mortalidad asociada con la diarrea cuando se utilizaron los programas de vacunación de la semana 3 o las semanas 3, 5 y 8. Sin embargo, las puntuaciones de la diarrea se redujeron entre los tratamientos CON y VACC (3 y 5 semanas) (0,56 vs. 0,41, P <0,05). Además, el porcentaje de crías con diarrea se redujo del día 1 hasta el día 5 con el tratamiento VACC (semanas 3 y 5) frente al CON. En conclusión, la nueva vacuna contra el rotavirus C no alteró la incidencia de diarrea de cerdos lechones o la mortalidad cuando las cerdas se vacunaron una vez o tres veces. Sin embargo, el uso de la vacuna novedosa pareció reducir la incidencia de diarrea cuando se les administra a las 3 y 5 semanas antes del parto.

[0137] Tratamientos. Las cerdas y cerdas jóvenes fueron asignados aleatoriamente a uno de cuatro tratamientos (control (CON) o tratamientos de vacunas Newport 1-3 (VACC) basándose en el día de la reproducción y dentro de paridad. La formulación fue de 100 microgramos de cada polipéptido: VP4 (SEQ ID NO: 42), VP6 (SEQ ID NO: 52) y NSP4 (SEQ ID NO: 18), que se originó a partir de la muestra aislada 1 de rotavirus. Estas subunidades de la proteína se combinaron con TRIGEN al 10% (compuesto aproximadamente de 1,6% de monooleato de sorbitán polioxietilenado, 10% gel de hidróxido de aluminio, 38% solución acuosa/salina, 45% de aceite mineral purificado, y 5% de monooleato de sorbitán) formulado para una dosis de 2 cc. Los animales en el grupo 1 de tratamiento VACC asignado recibieron 2 ml de vacuna por vía intramuscular a las 3 semanas antes del parto, los animales en el grupo 2 de tratamiento VACC asignado recibieron 2 ml de vacuna por vía intramuscular a las 5 semanas antes del parto y de nuevo otra vez 3 semanas antes del parto, los animales en el grupo 3 de tratamiento VACC asignado recibieron 2 ml de vacuna por vía intramuscular a las 7 semanas antes del parto, 5 semanas antes del parto, y de nuevo 3 semanas antes del parto. Todas las crías de estos animales se alimentaron de forma cruzada dentro de las 24 horas del nacimiento mediante tratamiento.

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