ES2632767T3 - Preparación para la protección contra el envejecimiento extrínseco e intrínseco de la piel - Google Patents

Preparación para la protección contra el envejecimiento extrínseco e intrínseco de la piel Download PDF

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Abstract

Preparación cosmética o dermatológica, que comprende (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia y/o (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina.

Description

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DESCRIPCION
Preparacion para la proteccion contra el envejecimiento extrlnseco e intrlnseco de la piel
La presente invencion se refiere a una preparacion cosmetica o dermatologica que comprende uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia (saxlfraga purpura) y/o de Soldanella alpina (lunaria menor de flores azules), as! como a su uso contra el envejecimiento de la piel extrlnseco e intrlnseco.
Como envejecimiento de la piel se hace referencia al proceso biologico complejo de la modificacion de la piel que viene acompanada de la edad. En este caso se diferencia entre el envejecimiento de la piel intrlnseco, debido a factores internos fisiologicos y geneticos, y el envejecimiento de la piel extrlnseco.
El envejecimiento extrlnseco de la piel se debe a factores externos, como por ejemplo, factores del entorno, como luz UV, reactivos qulmicos, carga mecanica, humo de cigarrillos, estres o contamination del aire. Dado que la radiation UV representa la causa principal para el envejecimiento de la piel extrlnseco, se habla tambien de “fotoenvejecimiento”.
Los factores extrlnsecos conducen por ejemplo, a la formation de arrugas, a la flacidez de la piel, a la perdida de elasticidad y a la apariencia seca de la piel.
El envejecimiento intrlnseco, denominado tambien envejecimiento cronologico, esta causado por factores fisiologicos y geneticos internos y refleja procesos de degradation en la piel. Estos procesos se deben principalmente a una actividad de proliferation reducida de las celulas de la piel, a una slntesis reducida de la protelna matriz y a un aumento de la expresion de enzimas degradantes de la matriz.
Las celulas envejecidas muestran una resistencia contra senales apoptoticas, que conduce a la acumulacion en el tejido de celulas envejecidas que no proliferan con patron de expresion genetica modificado.
Durante el envejecimiento de la piel se da a menudo la conformation de arruguitas y llneas y la perdida de elasticidad y tonicidad de la piel.
El envejecimiento de la piel y la conformacion de arrugas pueden retrasarse de manera decisiva mediante correspondiente proteccion de la piel. En el estado de la tecnica se presentan para ello muchos tipos de posibilidades, como por ejemplo, desde el cambio a un modo de vida saludable, hasta preparaciones cosmeticas y dermatologicas que pueden aplicarse topicamente.
La Saxifraga oppositifolia es una planta, la cual se encuentra preferentemente en las latitudes templadas en pastos pedregosos y morrenas a alturas de entre 1.600 y 4.500 metros y que representa de esta manera la fanerogama a mas altura en Europa.
Las hojas perennes soportan temperaturas de hasta -40 °C sin danos. Las hojas dispuestas de forma opuesta en pequenas rosetas perennes presentan desde forma ovalada invertida hasta forma de lanceta longitudinal y tienen una longitud de 2,5 a 5 mm.
En el documento US 6406682 B1 se describe la especie vegetal Saxifraga como componente o como preparacion autobronceadora.
El documento EP 1104670 A2 describe mascarillas cosmeticas tipo pellcula, las cuales comprenden un pollmero soluble en agua, un extracto de Saxifraga y agua como agente disolvente. El extracto de Saxifraga usado en este caso se produce mediante la extraction de la hoja sin triturar de Saxifraga (Saxifraga stolonifera Meerb.) con agua purificada, etanol, 1,3-Butilenglicol o simulares, y es un extracto, el cual se produce mediante la concentration de la solution extralda o de un polvo producido mediante el secado de la solution de extracto y pulverization del extracto secado.
La Soldanella alpina es una planta de las primulaceas. Su emplazamiento preferente es la sombra parcial en substratos humedos. Las hojas son redondeadas y perennes.
En el documento US 2009/0104295 A1 se indica la Soldanella alpina como una posible fuente de una clase de substancia activa como aditivo al complejo de crecimiento de cabello de base. Los documentos JP2009185007 y JP2006104117 divulgan el uso de extractos de Saxifraga/Saxifraga stolonifera. Es deseable poner a la disposition preparaciones, las cuales sean eficaces contra el envejecimiento de la piel extrlnseco e intrlnseco.
La presente invencion pone a disposicion una preparacion cosmetica o dermatologica, la cual comprende (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia (saxifraga purpura) y/o (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina (lunaria menor de flores azules). Preferentemente la preparacion contiene al menos respectivamente al menos un extracto de Saxifraga oppositifolia y de Soldanella alpina.
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Es particularmente preferente que la preparacion comprenda respectivamente solo un extracto de Saxifraga oppositifolia y de Soldanella alpina, en particular solo estos dos extractos, y ningun otro extracto de planta.
Es igualmente preferente, que la preparacion comprenda o bien solo uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia o solo uno o varios extractos de Soldanella alpina. La preparacion comprende en particular entonces solo este uno o varios extractos y ningun otro extracto de planta.
Es preferente ademas de ello, que la preparacion segun la invencion comprenda adicionalmente uno o varios extractos del genero Chlamydomonas (llamado tambien Chlamydocapsa sp. (alga nieve)).
La totalidad de la divulgacion del documento WO 2012/069073 A1 se recoge aqul de forma expresa mediante referencia.
La preparacion segun la invencion comprende ventajosamente de forma correspondiente uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia, Soldanella alpina y Chlamydomonas sp., de manera que correspondientemente uno o varios extractos de las tres plantas estan contenidos en la preparacion segun la invencion y pueden retrasar e incluso detener mediante sus efectos de protection de la piel, el proceso de envejecimiento de la piel extrlnseco e intrlnseco.
No hay contenidos entonces preferentemente otros extractos de planta en las preparaciones segun la invencion, de manera que solo hay contenidos uno o varios extractos de planta de Saxifraga oppositifolia, Soldanella alpina y del genero Chlamydomonas.
En el caso de los extractos contenidos en la preparacion segun la invencion, puede tratarse tanto de extractos solubles en aceite como tambien en agua de Saxifraga oppositifolia y Soldanella alpina. Este tipo de extractos pueden producirse por ejemplo, segun los siguientes o procedimientos parecidos.
Material vegetal:
La biomasa de las plantas se obtiene mediante la plantation de estas plantas en invernaderos o al aire libre. Las plantas pueden o bien plantarse mediante semillas (Soldanella) o multiplicarse mediante plantones (Saxifraga), en cuanto que se plantan en substratos adecuados. Tan pronto como hay disponibles plantas adultas, las plantas madre pueden separarse en plantas hijas mas pequenas. El material vegetal se cultiva como biomasa como maximo a comienzos del verano. Para garantizar un cultivo sostenible y evitar la destruction de las plantas, se usan preferentemente solo partes de la planta que crecen por encima de la tierra y de manera particularmente preferente solo ramas (tallos) y/u hojas de las plantas, aunque pueden usarse igualmente tambien por ejemplo, flores (en particular adicionalmente).
Las partes de la planta que crecen por encima de la tierra se cortan, y tras ello, en la medida de lo posible se secan directamente, por ejemplo, en un horno adecuado mediante aire de circulation caliente o en un armario de secado de vaclo. La temperatura de secado se encuentra preferentemente entre 40 y 45 °C, para cargar en la menor medida posible termicamente los productos naturales sensibles a la temperatura.
Mediante el secado se reduce el contenido de humedad del material a preferentemente menos del 10 %. Tras ello, el material secado se corta por ejemplo, en una trituradora, para reducir su tamano a preferentemente unos pocos millmetros. El material deberla almacenarse entonces hasta su procesamiento posterior en un lugar fresco y seco.
Productos solubles en aceite:
La production de extractos solubles en aceite puede producirse por ejemplo mediante extraction supercrltica con dioxido de carbono (Supercritical Fluid Extraction, SFE). En este caso se extraen mediante SFE con dioxido de carbono principios activos solubles en aceite del material vegetal secado. El recipiente de extraccion se llena con el material vegetal secado y el material se compacta para eliminar canales de aire. La presion del gas es de por ejemplo hasta aproximadamente 200 bares en el caso de una temperatura de por ejemplo, 40 °C. En estas condiciones, la extraccion dinamica se lleva a cabo habitualmente durante por ejemplo, 60 minutos. Tras ello se libera de tension el dioxido de carbono supercrltico y se realimenta, y se recoge el extracto lipofilo en un recipiente de acumulacion. Los extractos de varias pasadas se purifican y se disuelven por ejemplo, en una correspondiente cantidad de aceite vegetal (por ejemplo, aceite de jojoba) mediante agitation durante una hora a aproximadamente 50 °C. Tras el enfriamiento, la solution se gula a traves de un filtro de 5 pm y un filtro de 4 pm. La solution filtrada se corresponde con el producto de extracto soluble en aceite. De esta manera, 1500 g de Saxifraga secada dan por ejemplo aproximadamente 15 kg de producto (la extraccion alcanzada es de aproximadamente 5-10 %), mientras que 900 g de Soldanella dan por ejemplo, 15 kg de producto (la extraccion alcanzada es de aproximadamente 2-5 %).
El material vegetal extraldo puede recogerse y usarse por ejemplo, para la extraccion hidroalcoholica que se describe a continuacion.
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Productos solubles en agua:
1. Extraccion hidroetanolica
El material vegetal se mezcla con una cantidad suficiente de agua y de etanol (1:1 peso/peso). El lodo se agita durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente y tras ello, se gula a traves de un filtro de 1 pm. El material vegetal solvatado puede exprimirse para obtener mas extracto. El filtrado se diluye con aproximadamente 1,5 veces el peso de agua y se almacena durante varios dlas a 4 °C. Tras ello se gula el producto por un filtro de 4 pm y un filtro de 0,6 pm, y a continuation, se somete a una granulation por pulverization.
2. Granulacion por pulverizacion
La solution de extraccion se mezcla antes del granulado por pulverizacion con maltodextrina. Se producen por ejemplo, con 10 kg de la materia prima de Saxifraga secada (< 10 % de contenido en agua) y cortada, aproximadamente 100 kg de granulado de pulverizacion y con 6 kg de la materia prima de Soldanella secada y cortada, aproximadamente 100 kg de granulado de pulverizacion.
La solucion mezclada con maltodextrina puede granularse por pulverizacion en un dispositivo de granulacion de lecho fluidizado, por ejemplo, en las siguientes condiciones:
Granulacion:
Aire entrante: 80 °C / 250 a 800 m3 / h Proportion de pulverizacion: 3 bares / 150 - 200 ml Aire saliente: 30 - 50 °C Secado:
Aire entrante: 80 °C / 250 a 800 m3 / h / 5 - 10 minutos Aire saliente: 55 °C
Periodo de tiempo: varias horas, dependiendo del tamano del lote.
Los procedimientos de production anteriores solo a modo de ejemplo, representan las formas preferentes de la puesta a disposition de los extractos solubles en agua o en aceite segun la invention, de Saxifraga oppositifolia y Soldanella alpina. Como se ha mencionado arriba, se usan en este caso preferentemente en particular solo las hojas
y los tallos de las plantas, pero no las flores ni en particular las ralces de las plantas.
Dado que los extractos pueden producirse y usarse tanto en forma soluble en aceite, como tambien en agua, se da una amplia libertad para la formulation de preparados cosmeticos y farmaceuticos.
Los extractos pueden usarse en concentration cualquiera en preparaciones cosmeticas o dermatologicas.
Preferentemente, la concentracion de uno o de varios extractos de una planta (Saxifraga oppositifolia, Soldanella alpina y de cualquier otra planta, cuyo(s) extracto(s) esta(n) contenido(s) eventualmente en la preparation, como por ejemplo, de Chlamydocapsa sp.) es en la preparacion, de manera correspondientemente independiente, de no mas de 15 % en peso, por ejemplo, de no mas de 5 % en peso, de no mas de 1 % en peso, de no mas de 0,5 % en peso,
de no mas de 0,1 % en peso, o de no mas de 0,01 % en peso, pero preferentemente, de al menos 0,0001 % en
peso, por ejemplo, de al menos 0,0005 % en peso, de al menos 0,001 % en peso o de al menos 0,002 % en peso. El correspondiente rango de concentracion para el/los extracto(s) de cada una de las plantas, es habitualmente de 0,0001 a 0,5 % en peso, referido respectivamente a la masa total de la preparacion.
Las anteriores indicaciones de concentracion de los extractos usados segun la invencion se refieren a la masa del extracto puro (normalmente en forma de polvo), sin agentes disolventes ni agentes de extraccion.
Los extractos usados segun la invencion se producen por ejemplo, en forma de los productos AlpinEffect Saxifraga SFE OS (0,2 % en peso de extracto seco, resto aceite de jojoba), AlpinEffect Saxifraga WS (0,3 % en peso de extracto seco, > 91 % en peso de maltodextrina, resto preferentemente agua), AlpinEffect Soldanella SFE Os (0,08 % en peso de extracto seco, resto aceite de jojoba) y AlpinEffect Soldanella WS (0,4 % en peso de extracto seco, > 91 % en peso de maltodextrina, resto preferentemente agua) de la empresa Mibelle (Suiza).
Si se usa por ejemplo, un 1 % en peso de AlpinEffect Soldanella WS en la preparacion, entonces la proporcion de extracto de Soldanella alpina real es de aproximadamente 0,004 % en peso en la preparacion, referido a la masa
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total de la preparacion.
Las preparaciones segun la invencion comprenden preferentemente al menos dos de los extractos de planta elegidos del grupo (i) Saxifraga oppositifolia, (ii) Soldanella alpina y (iii) Chlamydocapsa sp..
Las preparaciones preferentes segun la invencion comprenden de esta manera
- un extracto de (i) Saxifraga oppositifolia y un extracto de (ii) Soldanella alpina,
- un extracto de (i) Saxifraga oppositifolia y un extracto de (iii) Chlamydocapsa sp.,
- un extracto de (ii) Soldanella alpina y un extracto de (iii) Chlamydocapsa sp. o
- un extracto de (i) Saxifraga oppositifolia, un extracto de (ii) Soldanella alpina y un extracto de (iii) Chlamydocapsa
sp..
Las preparaciones segun la invencion pueden presentarse en las formas y tipos conocidos.
Preferentemente se trata de una preparacion topica.
Una forma de las preparaciones se conoce como preparaciones que de permanencia, como por ejemplo, crema, locion o leche corporal. Estas preparaciones se formulan a menudo como emulsiones, en particular emulsiones W/O (agua en aceite), O/W (aceite en agua), O/W/O (aceite/agua/aceite) o W/O/W (agua/aceite/agua). Las preparaciones pueden representar igualmente microemulsiones, dispersiones, geles, soluciones acuosas o alcoholicas, serums, aceites, agentes de impregnacion, tinturas o pomadas. Los extractos pueden aplicarse sobre la piel ventajosamente tambien aplicados sobre o integrados en panuelos, apositos, vendas, parches o almohadillas.
La preparacion segun la invencion se presenta ventajosamente en forma de una emulsion.
Las preparaciones cosmeticas o dermatologicas segun la invencion pueden contener eventualmente otros componentes activos. Se mencionan aqul solo a modo de ejemplo otros extractos como por ejemplo, uno o varios extractos de Artemisia umbelliformis, Rubus idaeus (frambuesa), Plantago lanceolata (extracto de hoja), Saccharomyces cerevisiae, ralz de Panax ginseng, Equisetum arvense, y Evernia furfuracea (musgo de arbol). Otros ejemplos de componentes activos adicionales preferentes incluyen biopollmeros, glicoprotelnas, vitaminas y antioxidantes.
Las preparaciones cosmeticas o dermatologicas segun la invencion pueden contener ademas de ello, excipientes y substancias activas adicionales, como se usan habitualmente en este tipo de preparaciones, por ejemplo, agentes conservantes, agentes auxiliares conservantes, bactericidas, substancias para impedir el espumado, colorantes y pigmentos de color, espesantes, substancias humectantes o de conservacion de la humedad, grasas, aceites, ceras u otros componentes habituales de una formulacion cosmetica o dermatologica, como alcoholes, polioles, pollmeros, estabilizadores de la espuma, electrolitos, agentes disolventes organicos o derivados de silicona, autobronceadores, soluciones tampon, reguladores del pH, tensioactivos, gases propelentes, polvos, substancias de absorcion de sebo, filtros UV, substancias activas como por ejemplo, agentes antienvejecimiento, anticelullticos, anti acne, anti rosacea, anti neurodermitis, antioxidantes, hidratantes, quelantes, antitranspirantes, aclarantes y colorantes, siempre y cuando la adicion no influya negativamente de forma significativa en o queden excluidas las propiedades requeridas en lo que se refiere a la estabilidad requerida, propiedades sensoriales y sobre todo, en lo que se refiere a la funcion de proteccion, as! como a la compatibilidad con la piel y el pelo.
Las preparaciones segun la invencion comprenden preferentemente de forma adicional uno o varios agentes de hidratacion de la piel. Es ventajosa tambien la adicion de uno o varios filtros de proteccion contra la luz.
Segun la invencion, pueden usarse uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia (saxifraga purpura) y/o de Soldanella alpina (lunaria menor de flores azules) en preparaciones cosmeticas o dermatologicas para la reduccion o la prevention de danos en la piel debidos a factores extrlnsecos y/o intrlnsecos o pueden usarse para la fabrication de preparaciones farmaceuticas, en particular dermatologicas, y servir para reducir o prevenir danos en la piel debidos a factores extrlnsecos y/o intrlnsecos.
Es ventajoso el uso no terapeutico de preparaciones cosmeticas comprendiendo (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia y/o (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina, asi como eventualmente uno o varios extractos de Chlamydocapsa sp., para reducir o prevenir danos en la piel debidos a factores extrlnsecos y/o intrlnsecos.
La preparacion comprende en este caso preferentemente al menos dos de los extractos.
Un procedimiento para reducir o evitar danos en la piel debidos a factores extrlnsecos y/o intrlnsecos, el cual comprende la aplicacion topica de la preparacion segun la invencion sobre la piel, forma igualmente parte de la invencion.
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Es igualmente parte de la invencion un procedimiento para el retraso del envejecimiento de la piel intrlnseco e/o extrlnseco, el cual comprende la aplicacion topica de una preparation segun la invencion sobre la piel.
Las preparaciones segun la invencion ayudan a la piel a protegerse frente a los signos visibles del envejecimiento de la piel prematuro, a reducir el estres inducido por la radiation UV, a alisar arrugas, a volver a establecer la barrera de humedad y a hacer debido a ello la piel mas resistente en comparacion con piel sin el uso segun la invencion.
Los extractos segun la invencion estan contenidos preferentemente en preparaciones que pueden ser aplicadas topicamente. La preparacion que puede ser aplicada topicamente es en particular una preparacion cosmetica.
Uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia y/o de Soldanella alpina pueden usarse de esta manera tambien para la production de preparaciones farmaceuticas, en particular, dermatologicas.
Los extractos segun la invencion se usan preferentemente en combination con uno o con varios extractos de Chlamydocapsa sp. (alga de nieve).
En otra forma de realization, las preparaciones segun la invencion comprenden adicionalmente uno o varios extractos elegidos de los siguientes extractos: extracto de Artemisia umbelliformis, extracto de Rubus idaeus (frambuesa), extracto de hoja de Plantago lanceolata, extracto de Saccharomyces cerevisiae, extracto de ralz de Panax ginseng, extracto de Equisetum arvense, extracto de Evernia furfuracea (musgo de arbol).
La extraction puede llevarse a cabo en este caso segun procedimientos conocidos y mediante la ayuda de agentes auxiliares de extraccion conocidos. En la tecnologla de la extraccion pueden usarse diferentes procedimientos, por ejemplo, maceration, dimaceracion, digestion, re/percolacion, procedimiento de Soxhlet, extraccion segun Twisselmann, turbo extraccion (torbellino), Turrax, de ultrasonidos, de corriente contraria y extraccion mediante extractor centrlfugo.
La preparacion segun la invencion puede comprender ademas de ello, adicionalmente al menos un aminoacido.
En lo sucesivo se ilustran las propiedades ventajosas de la preparacion segun la invencion mediante los resultados de diferentes pruebas. En las pruebas se usaron a modo de ejemplo los productos de extracto solubles en agua AlpinEffect Saxifraga WS y AlpinEffect Soldanella WS mencionados mas arriba, para los extractos segun la invencion. Las indicaciones de porcentajes se refieren a extracto usado en efecto (es decir, sin los aditivos contenidos en estos productos, como por ejemplo, maltodextrina).
1. Funcion mitocondrial en condiciones de estres oxidativo
Es conocido que las mitocondrias se ocupan de la generation de energla para las celulas humanas. Se encuentran en el citoplasma y les sirven a las celulas como “baterlas”, para producir, almacenar y distribuir energla. La celula humana contiene por termino medio 1500 mitocondrias. Las celulas con un alto rendimiento metabolico (por ejemplo, los musculos o el hlgado) contienen mas mitocondrias. Las mitocondrias se mueven en el citoplasma dependiendo de la necesidad de la celula. Estan dotadas de su propio ADN y pueden reproducirse de manera autonoma debido a ello independientemente de la division de la celula. Sin las mitocondrias, la celula es incapaz de funcionar y no es posible ningun tipo de vida. Cuando estas centrales de energla de las celulas no funcionan libres de fallos, estos pueden acelerar los procesos de envejecimiento en la piel. Los defectos en las mitocondrias, en particular tambien en el ADN mitocondrial, pueden acelerar por lo tanto, el envejecimiento.
La protection de la funcionalidad mitocondrial frente a factores daninos extrlnsecos, por ejemplo, frente a radiacion UV y estres oxidativo, o la garantla de la integridad de las mitocondrias es por lo tanto una proteccion eficaz frente al envejecimiento de la piel.
La siguiente prueba muestra que 10 mM de solution de peroxido de hidrogeno reduce el potencial de membrana de las mitocondrias como medida para celulas cutaneas sanas, activas metabolicamente, a razon de un 50 %. El peroxido de hidrogeno es de esta manera un ejemplo de factor danino extrlnseco.
En presencia tanto del extracto de Saxifraga, como tambien del de Soldanella, la reduction del potencial de membrana debida a peroxido de hidrogeno es solo aproximadamente 25 %, es decir, los extractos segun la invencion protegen las celulas cutaneas de manera eficaz frente a estres oxidativo y con ello frente a envejecimiento de la piel extrlnseco.
Al llevarse a cabo las pruebas, se usaron queratinocitos epidermicos humanos primarios, mas exactamente "transit amplifying cells" (celulas de amplification transitoria).
Para analizar la influencia del extracto en la funcionalidad mitocondrial tras una carga oxidativa, se llevo a cabo un ensayo de potencial de membrana mitocondrial JC-1. En las celulas sanas, el potencial mitocondrial activo metabolicamente es alto y el colorante JC-1 conforma espontaneamente complejos (agregados J) y muestra debido
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a ello una fluorescencia roja intensa. Por otro lado, el colorante JC-1 se mantiene en las celulas danadas con un potencial de membrana bajo, en la forma sencilla monomera. La proporcion de la intensidad de la fluorescencia de agregados J con respecto a monomeros JC-1 sirve como medida para la funcionalidad de la celula.
En las figuras 1 y 2 se representan graficamente los resultados de las pruebas. Estas figuras muestran la efectividad y la funcion de proteccion de los extractos segun la invencion contra factores daninos extrlnsecos.
La concentracion de Saxifraga oppositifolia usada en la prueba fue de 0,00024 % en peso y aquella de Soldanella alpina fue de 0,00024 % en peso (referido al peso de medio celular).
2. Proteccion de ADN mitocondrial en caso de radiacion UV
El siguiente ensayo muestra el efecto de proteccion de los extractos segun la invencion en lo referente al ADN mitocondrial en caso de radiacion UV.
En el ADN mitocondrial (ADNmt) se encuentran algunos, sin embargo, no todos, los genes para las enzimas de la cadena respiratoria, as! como los genes, los cuales son responsables de la estructura y la reproduccion de las mitocondrias. Pueden aparecer muy facilmente danos en el ADNmt, dado que este se presenta sin proteccion en las mitocondrias y esta expuesto all! a los radicales libres, que pueden hacer su aparicion durante la production de energla. Los danos en el ADNmt pueden conducir por lo tanto a una fuerte influencia negativa en la obtencion de energla celular.
Uno de los danos mas frecuentes del ADNmt, que se detecta en el siguiente ensayo, se denomina "common deletion" (deletion comun).
Las celulas HaCaT son celulas de una llnea celular de queratinocitos humana especlfica. Los queratinocitos cultivados (HaCaT) se incuban durante 48 h con diferentes compuestos, y a continuation, se estresan durante 1 h con radiacion UVB (1,5 mJ/cm2). Las celulas se recogen entonces y se lisan con el fin de la extraction de ADN. Con la ayuda de la intensidad de la banda de delecion comun, expresada como proporcion de la delecion comun frente al estandar, puede determinarse la proteccion frente a dano por luz UV.
Se examinaron los siguientes compuestos:
Extractos de plantas
Proporcion % en peso % de reduction de los danos de ADN inducidos por UVB (pruebas de delecion comun) Figura
Saxifraga oppositifolia
0,002 % - 46 % 3a
Soldanella alpina
0,002 % - 52 % 3a
Saxifraga + Soldanella
Saxifraga = 0,0003 % Soldanella = 0,00036 % - 100 % 3b
Saxifraga + Soldanella + Algas nieve
Saxifraga = 0,00033 % Soldanella = 0,0004 % Algas nieve = 0,0022 % - 92 % 3c
La figura 3a muestra que el extracto de Soldanella alpina reduce los danos inducidos por UV del ADN mitocondrial en queratinocitos (celulas HaCaT) a razon de un 52 % y el extracto de Saxifraga oppositifolia a razon del 46 % en relation con la muestra de control.
La combination de los extractos de Saxifraga oppositifolia y Soldanella alpina reduce los danos inducidos por UV a razon del 100 % (imagen 3b). Incluso con una proporcion del 0,0003 % - 0,00036 % de extractos usados segun la invencion, se observa una proteccion significativa, que como muestra la figura 3b, en caso de aumento de la concentracion y combinacion de los extractos puede aumentar hasta el 100 %.
Tambien la combinacion con otro extracto de alga o de planta usado preferentemente, Chlamydomonas (Chlamydocapsa sp. (alga nieve)), conduce a una proteccion de casi el 100 % frente a los danos inducidos por radiacion UV (figura 3c).
3. Proteccion de ADN celular en caso de radiacion UV
Los danos en el ADN conducen a una influencia negativa en las funciones celulares y finalmente al envejecimiento de la piel. La radiacion UV es el factor esencial en el caso de envejecimiento de la piel prematuro (extrlnseco).
Se examinaron cultivos epidermicos en 3D mediante el uso de queratinocitos humanos primarios y medio de cultivo excelente 3D. Tras 18 dlas se trataron los cultivos durante una hora con 100 pm de o bien una solution de extracto de Soldanella alpina en medio o medio solo (muestras de control no tratadas). En caso de una radiacion de 1200
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mJ/cm2 (totalidad UV) se expusieron las muestras entonces durante cuatro horas a luz UVB /UVA (20 % / 80 %). Entonces se fijaron las muestras, se incorporaron en parafina, se cortaron y se tineron mediante el uso de un anticuerpo monoclonal con dlmeros de timina. A continuacion, se grabaron imagenes con un microscopio de fluorescencia.
Resultado:
En la muestra de control sin tratar no se observaron dlmeros de timina. En las muestras de control expuestas a UV pudieron verse claramente dlmeros de timina nucleares en las capas inferiores de las muestras. A diferencia de ello, en las celulas tratadas con Soldanella alpina (0,1 %) y UV no pudieron verse dlmeros. Esto muestra, que el extracto de Soldanella alpina impide la formacion de danos de ADN inducidos por UV en las celulas de un modelo de piel tridimensional epidermico y con ello previene el envejecimiento de la piel prematuro o el fotoenvejecimiento.
4. Retraso del proceso de envejecimiento de queratinocitos humanos (envejecimiento de la piel intrfnseco)
Ademas de la funcion de proteccion de factores extrlnsecos, los extractos usados segun la invencion tambien muestran una eficacia en lo que se refiere al retraso del proceso de envejecimiento de queratinocitos humanos (envejecimiento de la piel intrlnseco).
Para ilustrar esto, se incubaron queratinocitos humanos en una fase de crecimiento temprana (celulas de amplificacion transitoria) en un medio definido, en cuanto que estas celulas envejecen en cuatro semanas, con y sin extracto se Soldanella y se determino la tasa de proliferation de las celulas como medida de su envejecimiento.
Para la evaluation de la funcion antienvejecimiento intrlnseca de los extractos, se cultivaron las celulas en medio CnT-07 (medio destinado a celulas progenitoras) o en medio CnT-AG1, un medio de envejecimiento completamente definido, en el cual los queratinocitos envejecen durante un periodo de tiempo de 4 semanas. Los signos del envejecimiento comprenden una reduction de la tasa de proliferacion. La proliferacion se midio cada semana con un contador de celulas automatizado. Durante las dos primeras semanas del envejecimiento las tasas de proliferacion de los queratinocitos, los cuales se trataron con extractos de plantas, eran parecidas a aquellas de las celulas de crecimiento autonomo en medio CnT-AG1. Tras proceso de envejecimiento de 3 a 4 semanas aumentaron no obstante, las diferencias. En la cuarta semana, la tasa de proliferacion de las celulas con extracto de Soldanella alpina (0,00024 %) fue a razon de un 40 % mayor en comparacion con la muestra de control de CnT-AG1.
La figura 4 muestra que la proliferacion de las celulas en el medio de envejecimiento en presencia del extracto de Soldanella alpina es tras 2 y 4 semanas mayor que en el medio de envejecimiento sin extracto. Dado que las celulas envejecidas ya no se multiplican tan rapidamente y de esta manera presentan una tasa de proliferacion menor que las celulas jovenes, esto muestra, que el envejecimiento intrlnseco de las celulas es ralentizado mediante el extracto se Soldanella alpina.
5. Formacion de piel epidermica tras radiacion UV
Mediante la radiacion UV tambien queda danada la nueva formacion de piel epidermica.
La renovation de la epidermis se asegura mediante las celulas madre epidermicas y sus descendientes directos, las “celulas de amplificacion transitoria”. Si estas celulas pierden su capacidad para la renovacion de la piel, ya sea debido a envejecimiento o debido a estres externo, por ejemplo, radiacion UV, entonces se ralentiza la renovacion de la piel en general y la calidad, es decir, el grosor de la epidermis se reduce, y se hacen visibles signos del envejecimiento.
Diseno de prueba:
Un indicador importante de la funcion de celulas progenitoras de queratinocitos, es la posibilidad de formar una estructura epidermica en 3D, estratificada. Para evaluar la capacidad de proteccion de los extractos de plantas usados segun la invencion, frente a la perdida de la funcion de las celulas progenitoras, se dejaron crecer queratinocitos hasta un 80 % de confluencia en medio de cultivo y se trataron entonces durante 24 horas con 0,002 % de extracto de Soldanella alpina o con 0,002 % de extracto de Saxifraga oppositifolia. Las celulas se expusieron entonces a luz UVB / UVA. Las muestras sin exposition a la luz sirvieron como muestra de control negativa. Una hora tras el tratamiento de UV, se sembraron las celulas para la estructuracion de modelos 3D mediante el uso del protocolo estandar. El decimoctavo dla del cultivo de agitation por aire se extrajeron muestras de modelo 3D, se dispusieron en formalina, se fijaron en parafina, se cortaron y se tineron. Las secciones histologicas se evaluaron a continuacion bajo el microscopio de luz. Se grabaron imagenes duplicadas y se midio para cada estado el grosor epidermico (desde la capa basal hacia abajo hacia la capa cornea). Como resultado pudo determinarse, que ambos extractos usados segun la invencion mantienen el potencial de renovacion de la piel de celulas cutaneas humanas sometidas a estres inducido por la radiacion UV. Sin un tratamiento previo de las celulas cutaneas con uno de los dos extractos, las celulas pierden su capacidad de conformar in vitro una epidermis tridimensional intacta, cuando se exponen a radiacion UV. Los extractos protegen por lo tanto la capacidad de las “celulas de amplificacion transitoria”
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de renovacion de piel en condiciones de estres inducido por la radiacion UV. El grosor epidermico de la piel se mantiene, como se representa en las figuras 5 y 6.
6. Activacion del proteasoma en celulas HaCaT tras estres inducido por la radiacion UV
En otro ensayo se examino la activacion del proteasoma en celulas HaCaT tras estres inducido por la radiacion UV.
El proteasoma es un complejo protelnico, el cual degrada en el citoplasma y en el nucleo celular (en el caso de eucariotas) defectos y protelnas ya no necesarias en fragmentos. El proteasoma es de esta manera un componente del control de calidad de las protelnas.
El estres inducido por la radiacion UV inhibe la actividad proteolltica del proteasoma, lo cual conduce a la acumulacion de protelnas defectuosas o ya no necesarias e influye finalmente de forma desventajosa en las funciones celulares. En caso de que se agreguen las protelnas defectuosas u oxidadas, esto puede conducir a la conformacion del pigmento de envejecimiento lipofuscina.
En la figura 7 se muestran los resultados tras el tratamiento de los proteasomas con la combinacion segun la invencion de tres extractos de plantas (Saxifraga oppositifolia, Soldanella alpina y Chlamydocapsa sp.): la actividad de los proteasomas en las celulas HaCaT tras la radiacion UV (70 mJ/cm2 UVB + 10 J/cm2 UVA) vuelve a aumentar y a reactivarse, y en concreto a razon del 48 %.
Las concentraciones (% en peso) de los extractos fueron de: Saxifraga 0,00033 %, Soldanella 0,00044 % y Chlamydocapsa 0,0022 %.
7. Inhibicion de la liberacion de las metaloproteinasas de matriz MMP-1 y MMP-3 tras estres inducido por la radiacion UVA en fibroblastos dermicos humanos
Se llevaron a cabo pruebas adicionales en lo que se refiere a la inhibicion de la liberacion de las metaloproteinasas de matriz MMP-1 y MMP-3 tras estres inducido por la radiacion UVA en fibroblastos dermicos humanos.
Las metaloproteinasas de matriz son proteasas, las cuales degradan componentes de la matriz extracelular. La luz UV puede estimular la expresion de metaloproteinasas de matriz.
MMP-1 es una colagenasa, es decir, una proteinasa de degradacion de colageno. MMP-3 degrada ademas de diferentes colagenasas, tambien fibronectina, elastina y laminina y tiene una importancia central en la modulacion del tejido conjuntivo y en la sanacion de las heridas.
Una preparacion segun la invencion, la cual comprende una combinacion de extractos de Saxifraga oppositifolia (0,00135 %) y Soldanella alpina (0,0018 %), inhibe la expresion inducida por UV de MMP-1 y de MMP-3 de forma significativa y previene debido a ello el envejecimiento de la piel inducido por la luz, como queda claro a partir de las figuras 8a y 8b.
8. Formacion de colonias mediante celulas progenitoras de queratinocitos epidermicos primarios tras radiacion UV o tratamiento con peroxido de hidrogeno
La combinacion segun la invencion de los extractos de Saxifraga oppositifolia, Soldanella alpina y/o Chlamydomonas sp., en particular la combinacion de los tres extractos, protege el potencial de proliferation de celulas madre en caso de estres inducido por la radiacion UV u oxidativo, como se mide en la capacidad de las celulas, de conformar colonias in vitro (Colony Forming Efficiency = CFE, eficiencia de conformacion de colonias). Para ello se llevaron a cabo los siguientes experimentos:
Radiacion UV:
Se sembraron celulas progenitoras de queratinocitos epidermicos primarios en presencia de la combinacion de extractos en medio de cultivo CnT-07 y se dejaron crecer durante 48 horas. Cada muestra fue expuesta entonces a una radiacion de una fuente de luz UVA y UVB (1200 mJ o 1800 mJ). Se llevo a cabo igualmente una prueba con una muestra no expuesta a radiacion. Tras la exposition a la luz, se sembraron las celulas para los ensayos CFE con una densidad reducida y se cultivaron. Los cultivos fueron entonces fijados y tenidos y se contaron las colonias. Las evaluaciones CFE se llevaron a cabo tres veces. Las celulas no tratadas se usaron como muestra de control.
Peroxido de hidrogeno:
Con un diseno experimental parecido al descrito para la radiacion UV, se evaluo la CFE en caso de carga de peroxido de hidrogeno.
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Tal como muestran los resultados representados graficamente en la figura 9a, la combinacion de extractos usada segun la invencion protege el potencial de proliferacion de las celulas madre epidermicas de forma significativa frente a la radiacion UV. De esta manera, la cantidad de las colonias conformadas en presencia de los extractos se duplica en comparacion con la muestra de control sin tratar en 1200 mJ/cm2. Los extractos protegen igualmente frente a las influencias negativas de los peroxidos (10 pm) sobre la capacidad de proliferacion de las celulas madre epidermicas (Fig. 9b).
9. Formation de colonias esfericas mediante celulas progenitoras dermicas tras radiacion UV
Los extractos de plantas usados segun la invencion no solo protegen celulas madre epidermicas, sino tambien dermicas frente a los efectos negativos de radiacion UV en su capacidad de proliferacion.
Las celulas progenitoras dermicas (aisladas de papila dermica) se cultivaron en monocapas en presencia o en ausencia de los extractos durante un periodo de tiempo de 2 dlas y se irradiaron entonces con una fuente de luz UVA y UVB con una dosis de 1200 mJ o 1800 mJ. La conformacion de colonias esfericas se evaluo tras aproximadamente 5 dlas de cultivo.
La capacidad de proliferacion de las celulas madre dermicas se determino mediante su capacidad de conformar colonias esfericas (esferas). Mientras que en la muestra de control (sin extractos) la cantidad de las esferas conformadas bajo radiacion UV (1200 mJ o 1800 mJ) se redujo a razon del 50 % o del 62 %, la cantidad de las esferas aumento en presencia de los extractos a razon de hasta un 100 % (figura 10).
Las celulas madre, epidermicas o dermicas, o sus descendientes participan de manera esencial en el mantenimiento rutinario o la renovacion de la correspondiente capa cutanea. La proteccion de estas celulas frente a factores de estres como la radiacion UV o los radicales libres contribuye de esta manera de forma esencial al mantenimiento de una piel joven, sana y bonita.
Los siguientes ejemplos no limitadores, han de aclarar adicionalmente la presente invencion.
Ejemplo 1
Preparacion de cuidado con contenido de aceite
INCI
% en peso
PRUNUS AMYGDALUS DULCIS (SWEET ALMOND) OIL
91,0370
HELIANTHUS ANNUUS (SUNFLOWER) SEED OIL
4,0000
SIMMONDSIA CHINENSIS (JOJOBA) SEED OIL
1,1000
SILYBUM MARIANUM ETHYL ESTER
1,0000
FRAGRANCE(PARFUM)
1,5000
PHENOXYETHANOL
0,6000
CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE
0,5000
TOCOPHERYL ACETATE
0,1000
C 10-18 TRIGLYCERIDES
0,0995
BRASSICA CAMPESTRIS (RAPESEED) SEED OIL
0,0495
ALGAE EXTRACT
0,0100
SAXIFRAGA OPPOSITIFOLIA EXTRACT
0,0040
SOLDANELLA ALPINA EXTRACT
0,0016
100,0000
La composicion puede ser completada ventajosamente con otros aceites vegetales, vitaminas solubles en aceite y/o antioxidantes.
Ejemplo 2
Emulsion agua en aceite
INCI
% en peso
WATER (AQUA)
42,400
GLYCERIN
15,170
CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE
10,500
BUTYLENE GLYCOL
6,150
COCO-CAPRYLATE/CAPRATE
4,000
CYCLOPENTASILOXANE
3,500
DIMETHICONE
3,000
GLYCERYL STEARATE
2,000
CETYL ALCOHOL
2,000
MALTODEXTRIN
1,900
PEG-40 STEARATE
1,800
POTASSIUM CETYL PHOSPHATE
1,600
BUTYROSPERMUM PARKII (SHEA BUTTER)
1,500
PHENOXYETHANOL
0,900
SORBITAN TRISTEARATE
0,700
CARBOMER
0,500
FRAGRANCE(PARFUM)
0,350
CALCIUM ALUMINUM BOROSILICATE
0,338
ETHYLHEXYLGLYCERIN
0,300
SODIUM ACRYLATE/SODIUM ACRYLOYLDIMETHYL TAURATE COPOLYMER
0,247
PROPANEDIOL
0,200
SODIUM HYDROXIDE
0,176
ISOHEXADECANE
0,163
PENTYLENE GLYCOL
0,150
TITANIUM DIOXIDE
0,135
ISOMALT
0,092
SODIUM HYALURONATE
0,070
TRITICUM VULGARE (WHEAT) FLOUR LIPIDS
0,050
POLYSORBATE 80
0,046
PEG-8
0,025
SILICA
0,023
CHLAMYDOMONAS EXTRACT
0,006
SOLDANELLA ALPINA EXTRACT
0,004
SAXIFRAGA OPPOSITIFOLIA EXTRACT
0,003
CITRIC ACID
0,002
POTASSIUM SORBATE
0,001
100,000
Los extractos solubles en aceite y en agua usados en los ejemplos muestran ambos las ventajas mencionadas en lo que se refiere a la funcion de proteccion frente a factores de influencia extrlnsecos e intrlnsecos.
5 Esta preparacion puede contener ventajosamente de forma adicional uno o varios de los siguientes componentes:
Cellular Complex (La Prairie), peptidos, extractos de plantas, extractos de celulas madre vegetales, biopollmeros, vitaminas, antioxidantes.
El Cellular Complex comprende una combinacion de
10
a) glicoprotelna 1, que puede obtenerse a partir de la fraccion citoplasmatica purificada de levaduras (Saccharomyces),
b) glicoprotelna 2, que puede obtenerse a partir de la fraccion citoplasmatica de Lactobacillus,
c) extracto de ginseng y
15 d) extracto de cola de caballo (horsetail extract, Equisetum Arvense extract)
en correspondencia con el documento US 5840309.

Claims (20)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    REIVINDICACIONES
    1. Preparacion cosmetica o dermatologica, que comprende (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia y/o (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina.
  2. 2. Preparacion segun la reivindicacion 1, que comprende al menos (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia.
  3. 3. Preparacion segun la reivindicacion 1, que comprende al menos (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina.
  4. 4. Preparacion segun la reivindicacion 1, que comprende tanto (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia, como tambien (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina.
  5. 5. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores que, referida a la masa total de la preparacion, no contiene mas del 15 % en peso, preferentemente no mas del 5 % en peso y en particular del 0,0001 al 0,5 % en peso de respectivamente (i) y/o (ii).
  6. 6. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual (i) y/o (ii) comprenden al menos un extracto soluble en agua.
  7. 7. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual (i) y/o (ii) comprenden al menos un extracto soluble en aceite.
  8. 8. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual todos los extractos (i) y/o (ii) son o bien solubles en agua o solubles en aceite.
  9. 9. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual (i) y/o (ii) se obtuvieron mediante extraccion de hojas de planta y/o de tallos de planta.
  10. 10. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente (iii) uno o varios extractos de Chlamydocapsa sp.
  11. 11. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente al menos un extracto diferente de (i), (ii) y (iii).
  12. 12. Preparacion segun la reivindicacion 11, que comprende adicionalmente uno o varios extractos elegidos de los siguientes extractos: extracto de Artemisia umbelliformis, extracto de Rubus idaeus (frambuesa), extracto de hoja de Plantago lanceolata, extracto de Saccharomyces cerevisiae, extracto de ralz de Panax ginseng, extracto de Equisetum arvense, extracto de Evernia furfuracea (musgo de arbol).
  13. 13. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores 1 a 10, que no contiene extractos de plantas adicionales.
  14. 14. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente al menos un aminoacido.
  15. 15. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se presenta en forma de una emulsion.
  16. 16. Preparacion segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en cuyo caso se trata de una preparacion topica.
  17. 17. Uso de uno o de varios extractos de Soldanella alpina para la produccion de preparaciones farmaceuticas, en particular dermatologicas.
  18. 18. Uso segun la reivindicacion 17, en el que se usa adicionalmente al menos un extracto de Saxifraga oppositifolia y/o de Chlamydocapsa sp.
  19. 19. Uso no terapeutico de preparaciones cosmeticas, que comprenden (i) uno o varios extractos de Saxifraga oppositifolia y/o (ii) uno o varios extractos de Soldanella alpina, as! como eventualmente uno o varios extractos de Chlamydocapsa sp., para reducir o para evitar danos en la piel debidos a factores extrlnsecos y/o intrlnsecos.
  20. 20. Uso segun la reivindicacion 19, caracterizado por que la preparacion comprende al menos dos de los extractos.
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