ES2637214T3 - Anticuerpo monoclonal humano específico para cada tumor - Google Patents

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Abstract

Un anticuerpo humano, humanizado, xenogénico o quimérico humano-murino o fragmento de unión del mismo, que es capaz de reconocer antígeno asociado a tumores NY-ESO-1 y que se une a un epitopo definido por una secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID Nº 11, que comprende en su región de cadena pesada variable que comprende en su región de cadena pesada variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC. n.º: 5, CDR2 de ID SEC n.º: 6 y CDR3 de ID SEC n.º: 7, y en su región de cadena ligera variable las regiones determinantes de complementariedad CDR1 de ID SEC n.º: 8, CDR2 de ID SEC n.º: 9 y CDR3 de ID SEC n.º: 10, o una CDR2 y CDR3 que difieren solamente en uno, dos o tres aminoácidos de las SEC ID Nº 6, 7, 9 ó 10.

Description

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anticuerpo o un fragmento de unión de los mismos, comprendiendo dicho método:
(a) cultivar una célula según se ha descrito anteriormente; y
5 (b) aislar del cultivo dicho anticuerpo o fragmento de unión de los mismos.
Los hospedantes transformados se pueden desarrollar en fermentadores y cultivar de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica para alcanzar un crecimiento celular óptimo. Una vez expresados, los anticuerpos completos, sus dímeros, cadenas ligeras y pesadas individuales, u otras formas de inmunoglobulina de la presente invención, se pueden purificar de acuerdo con procedimientos convencionales de la técnica, incluyendo precipitación con sulfato de amonio, columnas de afinidad, cromatografía en columna, electroforesis en gel y similares; véase, Scopes, "Protein Purification", Springer Verlag, N.Y. (1982). El anticuerpo o su(s) cadena(s) correspondiente(s) de inmunoglobulina de la invención se pueden aislar a continuación con respecto al medio de crecimiento, lisados celulares, o fracciones de la membrana celular. El aislamiento y purificación, por ejemplo, de los anticuerpos
15 expresados de forma recombinante o las cadenas de inmunoglobulina de la invención pueden ser a través de cualesquiera medios convencionales tales como, por ejemplo, separaciones cromatográficas preparativas y separaciones inmunológicas tales como aquellas que implican el uso de anticuerpos monoclonales o policlonales dirigidos, por ejemplo, contra la región constante del anticuerpo de la invención. Se pondrá de manifiesto para los expertos en la técnica que los anticuerpos de la invención se pueden acoplar además a otras fracciones, por ejemplo, para aplicaciones dirigidas a fármacos y formación de imágenes. Este acoplamiento se puede llevar a cabo químicamente después de la expresión del anticuerpo o antígeno al sitio de fijación, o el producto de acoplamiento se puede modificar por ingeniería genética en el anticuerpo o antígeno de la invención al nivel del ADN. Los ADNs se expresan a continuación en un sistema hospedante adecuado, y las proteínas expresadas se extraen y se renaturalizar, si es necesario.
25 Se prefieren inmunoglobulinas sustancialmente puras con una homogeneidad de por lo menos aproximadamente entre el 90 y el 95%, y con la mayor preferencia una homogeneidad de entre el 98 y el 99% o mayor, para usos farmacéuticos. Una vez purificados, parcialmente o hasta la homogeneidad según se desee, los anticuerpos se pueden utilizar a continuación terapéuticamente (incluyendo extracorporalmente) o en el desarrollo y realización de procedimientos de ensayo.
La presente exposición también implica un método para producir células capaces de expresar un anticuerpo de la invención o su(s) cadena(s) correspondiente(s) de inmunoglobulina, que comprende modificar por ingeniería genética células con el polinucleótido o con el vector de la invención. Las células obtenibles mediante el método de
35 la exposición se pueden utilizar, por ejemplo, para someter a prueba la interacción del anticuerpo de la invención con su antígeno.
Como se ha mencionado anteriormente, la inmunoglobulina o sus ADNc de codificación se pueden modificar adicionalmente. De esta forma, en una realización adicional el método de la presente exposición comprende una cualquiera de la(s) etapa(s) para producir un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo monocatenario, un fragmento Fab, un anticuerpo bi-específico, un anticuerpo de fusión, un anticuerpo marcado o un análogo de uno cualquiera de los mencionados. Los métodos correspondientes son conocidos por los expertos en la técnica y se describen, por ejemplo, en Harlow y Lane "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988. Cuando se obtienen derivados de dichos anticuerpos mediante la técnica de presentación en fagos, 45 se puede utilizar resonancia de plasmón superficie tal como se usa en el sistema BIAcore para aumentar la eficacia de los anticuerpos de fagos que se unen al mismo epítopo que el correspondiente de uno cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente (Schier, Human Antibodies Hybridomas 7 (1996), 97-105; Malmborg, J. Immunol. Methods 183 (1995), 7-13). La producción de anticuerpos quiméricos se describe, por ejemplo, en la solicitud internacional WO89/09622. Los métodos para la producción de anticuerpos humanizados se describen en, por ejemplo, la solicitud europea EP-A1 0 239 400 y la solicitud internacional WO90/07861. Fuentes adicionales de anticuerpos a usar de acuerdo con la presente invención son los denominados anticuerpos xenogénicos. El principio general para la producción de anticuerpos xenogénicos como anticuerpos humanos en ratones se describe, por ejemplo, en las solicitudes internacionales WO91/10741, WO94/02602, WO96/34096 y WO 96/33735. Como se descrito anteriormente, el anticuerpo de la invención puede existir en una variedad de formas además de
55 anticuerpos completos; incluyendo, por ejemplo, Fv, Fab y F(ab)2, así como en cadenas individuales; véase por ejemplo, la solicitud internacional WO88/09344.
Los anticuerpos de la presente invención o su(s) cadena(s) correspondiente(s) de inmunoglobulina se pueden modificar adicionalmente utilizando técnicas convencionales conocidas en la materia, por ejemplo, usando supresión(es), inserción(es), sustitución(es), adición(es), y/o recombinación(es) de aminoácidos y/o cualquiera otra(s) modificación(es) conocida(s) en la técnica o bien de manera individual o bien combinadas. Los métodos para introducir dichas modificaciones en la secuencia de ADN que subyace bajo la secuencia de aminoácidos de una cadena de inmunoglobulina son bien conocidos para los expertos en la técnica; véase, por ejemplo, Sambrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N.Y. y Ausubel, Current Protocols in 65 Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1994). Las modificaciones del anticuerpo de la invención incluyen derivaciones químicas y/o enzimáticas en uno o más aminoácidos
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muchos vehículos diferentes y se pueden utilizar para aislar células específicamente unidas a los mismos. Los ejemplos de vehículos bien conocidos incluyen vidrio, poliestireno, cloruro de polivinilo, polipropileno, polietileno, policarbonato, dextrano, nailon, amilosas, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamidas, agarosas, y magnetita. La naturaleza del vehículo puede ser o bien soluble o bien insoluble a efectos de la invención. Existen muchas
5 marcas y métodos de marcación diferentes conocidos por aquellos con conocimientos habituales en la técnica. Los ejemplos de los tipos de marcas que se pueden utilizar en la presente invención incluyen enzimas, radioisótopos, metales coloidales, compuestos fluorescentes, compuestos quimioluminiscentes, y compuestos bioluminiscentes; véanse también las realizaciones que se han descrito anteriormente en la presente.
Mediante una realización adicional, los anticuerpos de unión de la presente invención también se pueden utilizar en un método para el diagnóstico de un tumor en un individuo al obtener una muestra de flujo corporal del individuo sometido a prueba, que puede ser una muestra sanguínea, una muestra linfática o cualquier otra muestra de flujo corporal, y poner en contacto la muestra de flujo corporal con un anticuerpo de la presente invención bajo condiciones que permitan la formación de complejos de anticuerpo-antígeno. El nivel de estos complejos se
15 determina a continuación mediante métodos conocidos en la técnica, un nivel significativamente mayor que el formado en una muestra de control que indica el tumor en el individuo bajo prueba. De la misma forma, también se puede utilizar el antígeno específico unido por los anticuerpos de la invención. De esta forma, la presente descripción se refiere a un inmunoensayo in vitro que comprende el anticuerpo o el antígeno de la invención. Una realización preferida de la presente descripción se refiere a la determinación de cáncer, melanoma y cáncer de mama en particular. Los métodos implican realizar ensayos en relación con el NY-ESO-1.
En una realización, la presente descripción se refiere a un método para determinar el estado de una condición cancerosa, por ejemplo, regresión, progresión de aparición de una condición cancerosa en un paciente con un tumor que exprese el antígeno del (asociado al) tumor NY-ESO-1, que comprende someter a ensayo una muestra tomada
25 de dicho paciente en relación con anticuerpos que se unen específicamente a dicho antígeno, y comparar un valor obtenido con un valor anterior obtenido tras el ensayo de una muestra anterior tomada de dicho paciente, de manera que cualquier diferencia entre ellas es indicativa de un cambio en el estado de dicha condición cancerosa. Un método correspondiente que se puede utilizar de acuerdo con la presente descripción se da a conocer en la solicitud internacional WO01/07917. Alternativamente, dicho método se puede llevar a cabo con un anticuerpo de la presente invención.
En otra realización, la presente descripción se refiere a un método para determinar células cancerosas, por ejemplo, células de cáncer de mama en una muestra que comprende someter a ensayo dicha muestra en relación con la expresión de NY-ESO-1 realizando ensayos en relación con la presencia de la proteína NY-ESO-1 con un
35 anticuerpo de la presente invención, en donde la expresión de NY-ESO-1 es indicativa de la presencia de células cancerosas en dicha muestra. Un método similar que se puede adaptar de acuerdo con la presente descripción se describe en la patente US n.º 6.338.947 para SCP-1, NY-ESO-1 y SSX-2.
En este contexto, la presente exposición se refiere también medios específicamente diseñados para este fin. Por ejemplo, se puede utilizar una matriz basada en proteínas o anticuerpos, que por ejemplo se carga con el antígeno de la presente exposición con el fin de detectar anticuerpos que pueden estar presentes en pacientes que padecen un tumor, en particular metástasis, o con anticuerpos o fragmentos de unión de la presente invención. El diseño de inmunoensayos con micromatrices se resume en Kusnezow et al., Mol. Cell Proteomics 5 (2006), 1681-1696. Por consiguiente, la presente exposición se refiere también a micromatrices cargadas con anticuerpo o antígeno de la
45 presente exposición.
La presente invención también proporciona un envase o estuche de ensayo farmacéutico y diagnóstico, respectivamente, que comprende uno o más recipientes llenos con uno o más de los ingredientes descritos anteriormente, es decir anticuerpo o fragmento del mismo de unión, polinucleótido, vector o célula de la presente invención. Asociado a dicho(s) recipiente(s) se puede encontrar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, reflejando dicho aviso la aprobación, por parte de la agencia, de la fabricación, el uso o venta para administración humana. Además, o alternativamente, el estuche de ensayo comprende reactivos y/o instrucciones para su uso en ensayos diagnósticos adecuados. Evidentemente, la composición, es decir, el estuche de ensayo de la presente invención particularmente
55 adecuado para el diagnóstico, prevención y tratamiento de un trastorno al que acompañe la presencia del antígeno asociado a tumor NY-ESO, en particular aplicable para el tratamiento de tumores según se ha mencionado anteriormente.
Los términos "tratamiento", "tratar" y similares se utilizan en la presente para significar en general la obtención de un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. El efecto puede ser profiláctico en términos de prevenir total o parcialmente una enfermedad o síntoma de la misma y/o puede ser terapéutico en términos de curar parcial o totalmente una enfermedad y/o un efecto adverso atribuido a la enfermedad. El término "tratamiento" en el sentido en que se utiliza en la presente cubre cualquier tratamiento de una enfermedad en un mamífero, en particular un humano, e incluye: (a) prevenir que aparezca la enfermedad en un sujeto que pueda estar predispuesto a la misma 65 pero cuya presencia no hay sido diagnosticada todavía; (b) inhibir la enfermedad, es decir detener su desarrollo; o
(c) aliviar la enfermedad, es decir provocar la regresión de la enfermedad. Además, el término "sujeto" o "paciente"
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