ES2643758T3

ES2643758T3 - Sellantes compuestos y separadores de plasma para tubos de recogida de sangre

Info

Publication number: ES2643758T3
Application number: ES14190680.0T
Authority: ES
Inventors: Jane F. Emerson
Original assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Current assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Priority date: 2014-10-28
Filing date: 2014-10-28
Publication date: 2017-11-24
Anticipated expiration: 2034-10-28
Also published as: US11318460B2; HRP20171596T1; KR20170072337A; AU2015339569B2; EP3015168A1; JP6706256B2; HK1221933A1; CA2966331A1; HUE036632T2; CN107107060A; WO2016069468A1; CA2966331C; EP3015168B1; PT3015168T; PL3015168T3; LT3015168T; BR112017009063A2; AU2015339569A1; SI3015168T1; JP2018502610A

Description

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DESCRIPCION

Sellantes compuestos y separadores de plasma para tubos de recogida de sangre Campo de la invencion

El campo de la invencion son tecnologfas de separacion de muestras.

Antecedentes

El analisis de muestras de sangre a menudo requiere la separacion de sangre completa en una fraccion de suero y una fraccion que contiene celulas. En la tecnica se sabe bien que la separacion de sangre completa se puede realizar mediante centrifugacion disponiendo sangre completa en un tubo de recogida de sangre, colocando el tubo en una centrifugadora, y haciendo girar la sangre.

Desafortunadamente, una vez se separa la sangre, las fracciones de la sangre completa se pueden remezclar provocando contaminacion de las fracciones a traves de difusion, agitacion, extraccion de muestra, u otra interaccion no deseable. Idealmente, las dos fracciones deben permanecer aisladas para asegurar que no ocurre contaminacion cuando se accede a la fraccion deseada.

En un intento por vencer los problemas tratados anteriormente, se han realizado esfuerzos para proporcionar geles separadores dispuestos en una parte inferior de un tubo. Estos geles separadores estan pensados para ayudar a conservar la estabilidad de analitos, disminuir la mano de obra manual (pipeteo a un tubo secundario), y permitir un procesamiento retrasado que puede ser el resultado de la necesidad de trasportar muestras desde ubicaciones de extraccion a instalaciones de ensayos. Algunas propiedades funcionales y de prestaciones de los geles tipicamente incluyen las siguientes: (1) las propiedades de gel impiden el flujo antes del uso para eliminar el potencial de reflujo durante la extraccion de sangre; (2) el gel tiene un valor de densidad entre celulas y suero/plasma (gravedad espedfica de aproximadamente 1,04); (3) el gel es tixotropico (adelgazamientos por cizalladura en centrifugadora bajo protocolos ordinarios de laboratorios clmicos); (4) el gel se licua y fluye pasando celulas sangumeas y protemas durante la centrifugacion; y (5) el gel licuado vuelve a gel en una capa entre celulas y suero despues de la centrifugacion y se adhiere a la pared de tubo. Ademas, los componentes del gel generalmente no deben interferir con componentes sangumeos o analisis usados en un laboratorio clmico.

Desafortunadamente, geles separadores conocidos padecen una o mas desventajas directas e indirectas, incluidas por ejemplo: interferencia (ciertos analisis se conocen por ser problematicos); deriva de analito debido a permeabilidad, atrapamiento de celulas en o sobre la superficie del gel; contaminacion ffsica de sondas de analizador o con geles de electroforesis; imprecisiones provocadas por volver a girar; la necesidad de dividir en partes alfcuotas (con costes de mano de obra manual presente y el potencial de errores de reetiquetado); aspiracion incompleta que afecta negativamente a la estandarizacion y que da como resultado desechos; y asuntos de almacenamiento/envfo tales como desprendimiento de gel, asuntos de congelacion-descongelacion, y la imposibilidad de remezclar una muestra con una barrera de gel blando.

En un intento por vencer algunos de los problemas asociados con geles separadores, se ha realizado un esfuerzo para tratar de proporcionar composiciones y metodos para separacion de sangre completa que asegure que las fracciones separadas de sangre completa son protegidas eficazmente contra contaminacion debido a interacciones no deseadas de muestras. Por ejemplo, el solicitante ha obtenido varias patentes por esfuerzos anteriores dirigidos hacia separadores y metodos de suero de fotopolfmero (p. ej., patentes de EE. UU. n.os 7.674.388, 7.673.758, 7.775.962, 7.971.730, 7.780.861, 8.206.638, 8.282.540). Los separadores de suero de fotopolfmero pueden ser ventajosos para proporcionar una interfaz solida (cuando se polimeriza el gel de fotopolfmero) entre celulas y suero o plasma, lo que permite una aspiracion completa de la muestra. Adicionalmente, un tubo que comprende algunos geles separadores de fotopolfmero (antes de la polimerizacion para formar un solido) se pueden enviar, refrigerar o congelar con ciclos repetidos de congelacion-descongelacion. Todavfa aun mas, el tubo se puede mezclar sin perturbar la barrera para asegurar un muestreo uniforme de la fraccion de prueba (p. ej., no se remezcla sangre cuando se agitan los tubos), el tubo esta libre de material de gel blando (tras la polimerizacion) que puede obstruir puntas de pipetas o sondas de analizador, o entrar en contacto con fraccion de prueba para interferir con metodos de analisis de laboratorio susceptibles (p. ej., electroforesis, etc.).

Desafortunadamente, algunas composiciones de separador y metodos conocidos han sido problematicos por diversas razones, incluido el alto coste de composiciones fotocurables, la necesidad de formular una composicion tixotropica, el calor producido en reacciones exotermicas de polimerizacion que puede afectar al analito, imposibilidad de esterilizar por medio de irradiacion al tiempo que se mantiene la capacidad de fluidez de las composiciones de separador para el subsiguiente curado por UV (p. ej., tras el envfo de la composicion esterilizada en tubos de recogida de muestras), y requisitos de exposicion a luz UV dependiente del volumen.

Asf, todavfa existe la necesidad de mejores tecnologfas de separacion.

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Compendio de la invencion

La presente invencion proporciona un tubo de recogida de muestras y un metodo para producir un tubo de recogida de muestras como se define en las reivindicaciones adjuntas. En esta memoria se describen generalmente aparatos, composiciones, sistemas y metodos que tratan de resolver problemas descritos anteriormente proporcionando un tubo de recogida de muestras segun la invencion. En algunos aspectos, cada uno del material de capa de componente de gel y el material de capa de componente de sellante fotocurable podna comprender capas separadas (p. ej., antes de esterilizacion por irradiacion, antes de centrifugacion, antes de curado, despues de esterilizacion por irradiacion, despues de centrifugacion, despues de curado, antes y despues de esterilizacion por irradiacion, antes y despues de centrifugacion, antes y despues de curado). Adicionalmente o como alternativa, el material de capa de componente de gel y el material de capa de componente de sellante fotocurable podnan comprender una mezcla.

En algunos aspectos, el componente de sellante fotocurable podna ser opcionalmente antitixotropico. Adicionalmente o como alternativa, el componente de sellante fotocurable se podna formular para polimerizarse en menos de diez minutos a una dureza de al menos 1 en la escala de dureza Shore 00 cuando es activado por una fuente de energfa adecuada (p. ej., luz UV, etc.). Visto desde otra perspectiva, el componente de sellante fotocurable podna comprender un promotor para permitir la polimerizacion en menos de diez minutos a al menos 1 en la escala de dureza Shore 00 cuando es activado por una fuente de energfa adecuada. Adicionalmente o como alternativa, el componente de sellante fotocurable se podna formular para polimerizarse en menos de diez minutos a al menos 10 en al menos una de la escala de dureza Shore A y la escala de dureza Shore D cuando es activado por una fuente de energfa adecuada. Visto desde incluso otra perspectiva, se contempla que el componente de sellante fotocurable, despues de la polimerizacion activado por una fuente de energfa adecuada, podna ser un solido con respecto a una sonda.

En esta memoria se describen ademas aparatos, sistemas y metodos en los que un tubo de recogida incluye una sustancia separadora que podna mantener niveles de analito (p. ej., niveles de potasio y niveles de glucosa, etc.) dentro de umbrales aceptables durante periodos de tiempo prolongados. En un aspecto, los niveles de potasio son estables dentro del 10% de un nivel inicial antes de centrifugacion y niveles de glucosa son estables dentro del 5%. Visto desde otra perspectiva, uno o ambos del componente de gel y el componente de sellante fotocurable (p. ej., la sustancia separadora entera) se podnan formular para mantener un nivel de potasio de una muestra dispuesta en el tubo dentro del 25%, dentro del 15%, dentro del 10%, o incluso dentro del 5% de un nivel inicial de potasio durante al menos cuatro dfas. Tambien se contempla que uno o ambos del componente de gel y el componente de sellante fotocurable se podnan formular para mantener un nivel de glucosa de una muestra dispuesta en el tubo dentro del 25%, dentro del 15%, dentro del 10%, o incluso dentro del 5% de un nivel inicial de potasio durante al menos cuatro dfas, mas preferiblemente durante al menos cinco dfas.

Adicionalmente o como alternativa, la sustancia separadora podna ser ventajosamente biocompatible con sangre completa, y formularse para tener una densidad entre una densidad media de una fraccion suero / plasma de sangre completa y una fraccion que contiene celulas de sangre completa (p. ej., aproximadamente 1,04 g/cm3). El componente de sellante fotocurable tipicamente tiene una densidad que es ligeramente inferior que el componente de gel de manera que, al curarse, el componente de sellante fotocurable se asienta en la parte superior del componente de gel y proporciona una barrera clara. Adicionalmente o como alternativa, la sustancia separadora podna ser fluible en sangre completa antes del curado, e inmovilizarse despues del curado formando una capa sellante solida.

Visto desde otra perspectiva, el tema de asunto inventivo incluye metodos segun se define en las reivindicaciones adjuntas. Una etapa contemplada de los metodos descritos en esta memoria podna incluir disponer un material de capa de componente de sellante fotocurable en una luz del tubo. Una etapa adicional podna incluir disponer un material de capa de componente de gel separador en la luz del tubo. Las etapas mencionadas anteriormente podnan completarse en cualquier orden adecuado de manera que el componente de gel se podna disponer encima o debajo del componente de sellante fotocurable. En algunos metodos, el material de capa de componente de sellante fotocurable se deposita antes/debajo del material de capa de componente de gel, y se configura para formar una capa selladora solida encima del material de capa de componente de gel al curarse. En algunos metodos contemplados, el componente de gel se coloca primero en un tubo, seguido por un componente de sellante fotocurable. Al centrifugar, el componente de sellante podna subir por encima del componente de gel para formar una capa selladora que actua como barrera entre el componente de gel y una fraccion de plasma, suero, u otra muestra. Se debe apreciar que el componente de gel y el componente de sellante fotocurable componen una sustancia separadora compuesta como se ha descrito anteriormente.

Algunos metodos contemplados podnan comprender adicionalmente disponer una muestra (p. ej., sangre, etc.) en la luz del tubo, y centrifugar el tubo de recogida de muestras con la sustancia separadora compuesta y la muestra dispuestas en el mismo. Adicionalmente o como alternativa, el tubo de recogida de muestra se podna exponer a luz UV (p. ej., durante o despues de la centrifugacion) para solidificar el componente de sellante fotocurable. Adicionalmente o como alternativa, cuando se dispone sangre completa en el tubo, un metodo del tema de asunto inventivo podna comprender separar una fraccion que contiene celulas de la sangre completa de la fraccion de suero (p. ej., retirando ffsicamente una fraccion por medio de una pipeta, etc.) despues de exponer el tubo a luz UV u otra

fuente de ene^a adecuada para iniciar la polimerizacion del componente de sellante fotocurable.

Otras etapas opcionales de algunos metodos contemplados incluyen, entre otras cosas, esterilizar un tubo de recogida antes o despues de disponer una sustancia separadora compuesta en el mismo, e introducir vado en una luz del tubo. La etapa de esterilizar se podna realizar de cualquier manera adecuada, incluida por ejemplo, 5 irradiacion gamma o esterilizar los componentes exponiendo a calor (p. ej., a al menos 250 grados Celsius, etc.). La etapa de introducir vado se podna realizar de cualquier manera adecuada, incluida por ejemplo, descomprimiendo el volumen de la luz usando cualquier bomba adecuada. La expresion “vado” como se emplea en esta memoria significa un vado parcial que tiene una presion inferior a la presion externa al tubo.

Se debe apreciar que un tubo de recogida de muestras del tema de asunto inventivo se podna usar para 10 fraccionamiento de cualquier muestra adecuada, incluida por ejemplo, sangre completa. Sustancias separadoras adecuadas se formulan para tener una densidad adecuada intermedia a las fracciones del lfquido que se esta separando. Cuando el lfquido que se esta separando es sangre completa, por ejemplo, la sustancia separadora se podna formular para tener una densidad entre una densidad media de una fraccion de suero de sangre completa y una fraccion que contiene celulas de sangre completa, y para ser fluible en sangre completa. Una vez la sustancia 15 separadora separa fracciones del lfquido que se esta separando, la capa/componente de sellante fotocurable se puede endurecer a traves de polimerizacion.

Ventajosamente se podnan incluir otros componentes en un tubo del tema de asunto inventivo, incluido por ejemplo, un anticoagulante (p. ej., cuando una muestra comprende plasma) o un coagulo activador (p. ej., cuando una muestra comprende suero).

20 Ademas en esta memoria se describen aparatos, composiciones, sistemas y metodos para proporcionar composiciones polimerizables que son esterilizables por medio de irradiacion o aplicacion de calor, mientras se mantiene una capacidad de fluidez predeterminada eficaz para permitir la sedimentacion de la composicion bajo una fuerza centnfuga a una posicion entre una fase vada de celulas de sangre completa y una fase enriquecida con celulas de sangre completa. En algunos aspectos, la composicion polimerizable comprende un oligomero, un 25 fotoiniciador, un estabilizador y un antioxidante, y se puede disponer dentro de una luz de un tubo de recogida de muestras. Cuando el tubo y la composicion polimerizable se esterilizan por medio de irradiacion o calor, la capacidad de fluidez predeterminada de la composicion se mantiene preferiblemente de una manera que permite la subsiguiente polimerizacion de la composicion por medio de curado por UV. Diversos objetos, caractensticas, aspectos y ventajas del tema de asunto inventivo se haran mas evidentes a partir de la siguiente descripcion 30 detallada de realizaciones preferidas, junto con los dibujos adjuntos en los que numerales semejantes representan componentes semejantes.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 muestra un tubo separador de plasma disponible comercialmente (BD vacutainer) como control y con un sellante de fotopolfmero.

35 La figura 2 es una vista en seccion transversal de un tubo separador que comprende un separador de fotopolfmero del tema de asunto inventivo.

Descripcion detallada

La siguiente explicacion proporciona muchos ejemplos de realizaciones del tema de asunto inventivo.

Sustancias separadoras del tema de asunto inventivo son ventajosas sobre sustancias separadoras existentes al 40 menos por las siguientes razones:

• La posibilidad de separar atrapamientos de celulas que pueden ocurrir dentro del gel desde la fraccion de prueba.

• Reducir la intensidad de luz UV y el tiempo de exposicion requeridos para curar (solidificar) completamente la barrera, al menos porque se reduce el volumen del componente de sellante fotocurable requerido. Esta reduccion

45 tiene los beneficios adicionales de disminuir el efecto de UV en pigmentos sensibles a la luz, mejorar el flujo de trabajo al disminuir el tiempo de procesamiento, y disminuir la produccion de calor exotermico durante el curado, lo que puede afectar a ciertos componentes sangumeos tales como las enzimas.

• Permite una aspiracion completa de una muestra sin substancial contaminacion, si acaso, desde el componente de gel, al menos porque el componente de sellante fotocurable solidificado actua como barrera contra el componente

50 de gel.

• Permite mezclar una fraccion libre de celulas de sangre completa para asegurar un muestreo uniforme.

• Impide remezclar sangre que puede ocurrir cuando separadores de gel blandos son perturbados ffsicamente por agitacion, por ejemplo, durante envfo o mezcla.

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• Disminuye la interferencia del componente de gel o fraccion celular de sangre completa.

• Permite repetidos ciclos de congelacion/descongelacion del tubo. La congelacion de suero o plasma es una practica comun, por ejemplo, para futuros ensayos o para cumplimiento de ciertos requisitos reguladores. Cuando se usa un gel separador para separar fracciones de una muestra, la fraccion por debajo del separador tipicamente se congelara antes que el gel, expandiendo y distorsionando de ese modo la forma de la barrera de gel separador. Como una sustancia separadora del tema de asunto inventivo incluye un componente de sellante fotocurable que se formula para solidificarse al exponerse a una fuente de energfa adecuada, algunos o todos los problemas tipicamente asociados con congelacion y descongelacion de tubos separadores se reducen significativamente o incluso se eliminan.

• La capa fotocurable se puede minimizar en volumen reduciendo de ese modo el coste.

• No es necesario que la capa fotocurable sea tixotropica dado que se carga gel blando tixotropico en el tubo por encima de la capa fotocurable y no dara como resultado flujo antes del uso. Esto permite composiciones simples con menos atrapamiento de celulas, y elimina la necesidad de aditivos que puedan contribuir a degradar celulas sangumeas o interferencia con analisis de laboratorio.

• Disminuye los costes de mano de obra asociados con retirar suero o plasma a un tubo secundario.

• Disminuye el potencial de errores de reetiquetado asociados con retirar suero o plasma a un tubo secundario.

Se ha demostrado factibilidad usando un sellante fotocurable que comprende: (1) al menos uno de un monomero, y un oligomero (p. ej., una combinacion (p. ej., Ebecryl, Cytec) de los mismos), con (2) un fotoiniciador (p. ej., Additol® BDK, Additol® TPO) y (3) un estabilizador (fenotiazina). Se debe apreciar que se puede usar cualquier componente de sellante fotocurable comercialmente adecuado. Componentes sellantes fotocurables adecuados son tfpicamente al menos uno de un gel (p. ej., cuando se anade un agente gelificante (p. ej., DBS o sflice, etc.)) y fluible (con sangre completa) antes de la polimerizacion, y se puede solidificar cuando se expone a una fuente de energfa adecuada (p. ej., luz UV, etc.). Ejemplos de sellantes fotocurables adecuados pueden incluir, entre otras cosas, MLA (p. ej., M1L1A1), MLAI (p. ej., M1L1A1 y fenotiazina), MAI (p. ej., M1A1 y fenotiazina), LAI (p. ej., L1A1 y fenotiazina), y LMA (p. ej., L1M1A1). Tal como se emplea en esta memoria, M = un monomero (p. ej., M1, que es un monomero trimetilolpropano propoxilato triacrilato de Sigma-Aldrich Cat. n.° 407577, etc.); L = un oligomero (p. ej., L1 = Ebecryl 230 de Allnex, anteriormente de Cytec Industries, Inc., etc.); A = a fotoiniciador (p. ej., A1 = Additol BDK); I = a estabilizador (p. ej., fenotiazina, etc.). Vease la Tabla 1 a continuacion. Se puede incluir LAI (p. ej., L1, A1 y fenotiazina) en algunos componentes sellantes fotocurables especialmente preferidos, ya que puede tener el intervalo de densidad deseado de 1,00-1,09 g/cm3.

Otros ejemplos de sellantes fotocurables incluyen LAIR, LAIE (p. ej., L1, A1, fenotiazina y tocoferol), y LAIER, en donde R = un agente gelificante (p. ej., DBS, sflice, etc.), y E = al menos uno de un antioxidante y un neutralizante de radicales (p. ej., Vitamina E, hidroxitolueno butilado (BHT), hidroxianisol butilado (BHA), caroteno, bilirrubina, acido ascorbico, etc.) Si bien R y E generalmente no son necesarios, cada uno puede proporcionar caractensticas ventajosas al sellante fotocurable. Mas espedficamente, un agente gelificante generalmente no es un componente necesario del sellante fotocurable porque se puede cargar un gel tixotropico blando en el tubo encima de la capa fotocurable de manera que no haya como resultado flujo antes del uso. No obstante, puede ser deseable tener un sellante tixotropico, por ejemplo, cuando es deseable tener el sellante dispuesto en el tubo en parte superior del componente de gel blando. Adicionalmente, un neutralizante de radicales tal como compuestos que tienen actividad de Vitamina E (p. ej., tocoferol), si bien no es necesario, puede permitir al sellante fotocurable ser esterilizado por medio de irradiacion sin curado (p. ej., cambiando las propiedades de densidad), en lugar de requerir esterilizacion por calor para mantener una capacidad de fluidez eficaz para permitir la sedimentacion entre dos fracciones de una muestra.

Tabla 1

ABREVIATURA: NOMBRE

R: Agente gelificante (p. ej., DBS, sflice, etc.)

M: Monomero

M1: Trimetilolpropano propoxilato triacrilato

L: Oligomero

L1: Ebecryl 230 de Allnex

A: Fotoiniciador

A1: Additol BDK

I: Estabilizador

ABREVIATURA: NOMBRE

I1: Fenotiazina

E: Antioxidante / neutralizante de radicales (p. ej., Vitamina E, BHT, BHA, carotona, bilirrubina, acido ascorbico, etc.)

D: Ajustador de densidad (p. ej., Ebecryl 113 de Cytec, etc.)

Se contempla que separadores compuestos del tema de asunto inventivo, en uno o ambos componentes fotocurable y de gel, podnan incluir un poUmero tal como aceite de silicio, poliamidas, poKmeros olefrnicos, poliacrilatos, poliesteres y copolfmeros del mismo, polisilanos y poliisoprenos. Adicionalmente o como alternativa, separadores compuestos podnan incluir un relleno (p. ej., sflice, latex u otro material inerte) para ajustar una densidad del 5 separador o componente del mismo. Adicionalmente o como alternativa, separadores compuestos podnan incluir materiales o reactivos adicionales para lograr una finalidad deseada (p. ej., EDTA (agente quelante), o heparina, citrato, dextrosa (anticoagulantes)).

De manera similar, se debe apreciar que cualquier componente de gel adecuado se puede disponer en un tubo del tema de asunto inventivo. Componentes de gel adecuados incluyen los que se licuan durante la centrifugacion y se 10 vuelven gel despues de eso, y pueden incluir, por ejemplo, geles comerciales (p. ej., tubos de recogida de sangre BD Vacutainer® SST™, BD Vacutainer® PST™, Vacuette® con geles separadores, tubos de gel separador de suero de PPMA, tubos de gel separador de suero de polipropileno, etc.), o cualquier otro gel comercialmente adecuado que se formule, al centrifugar, para ubicarse entre dos fracciones de una muestra (p. ej., entre un suero y un coagulo de sangre, entre suero y fraccion que contiene celulas de sangre completa, etc.).

15 La figura 1 muestra un tubo separador de plasma disponible comercialmente (BD vacutainer) como control 110A y con un sellante de fotopolfmero 110B. El fotosellante 120 sin agentes gelificantes o constituyentes que modifican la tixotropfa es claro y esta libre de atrapamiento de celulas antes y despues de la centrifugacion y curado con UV. El atrapamiento de celulas no es deseable debido a lixiviacion de analito en la fraccion de ensayo. Las celulas frecuentemente se adhieren a la capa superior de geles blandos 110 como se muestra en la figura 1. Sin embargo, 20 pueden ser separados del plasma por el fotosellante 120.

Los siguientes datos muestran una mejor estabilidad de analitos usando un separador compuesto del tema de asunto inventivo (tubo separador de plasma de fotogel) cuando se compara con usar un gel blando solo.

Panel metabolico completo: Tubo separador de plasma de BD Tubo separador de plasma de fotogel

: Giro inmediato 24 Horas 5 dfas Congelar/ Descongelar Giro inmediato 24 Horas 5 dfas Congelar/ Descongelar

sodio mEq/L: 142 139 140 143 140 140 142 143

potasio mEq/L: 3,7 3,7 4,1 4,5 3,6 3,6 3,7 3,8

cloruros mEq/L: 106 104 105 108 106 105 107 108

CO2 mEq/L: 29 27 26 22 27 25 25 22

glucosa mg/dL: 102 100 93 91 104 105 102 106

nitrogeno de urea mg/dL: 16 15 16 16 17 16 16 16

creatinina mg/dL: 0,6 0,8 0,8 0,8 0,7 0,8 0,8 0,5

calcio mg/dL: 9,4 9,3 9,5 9,7 9,2 9,4 9,5 9,6

protema total g/dL: 6,8 6,8 6,4 7 6,8 7 6,7 7

albumina g/dL: 4 4 4 4 4 4,1 4,1 4

fosfatasa alcalina IU/L: 37 39 36 38 36 38 39 37

AST IU/L: 17 15 19 26 17 17 18 16

ALT IU/L: 15 16 19 16 16 17 17 13

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bilirrubina mg/dL: 0,6 0,7 0,6 0,5 0,5 0,6 0,6 0,4

Un tubo de recogida de muestras del tema de asunto inventivo generalmente comprende un tubo, un tapon y una sustancia separadora que tiene un capa/componente de gel y un capa/componente de sellante fotocurable dispuestos en una luz del tubo. El tubo de recogida preferiblemente se puede fabricar de un material adecuadamente ngido para soportar un vado dentro de la luz. Ejemplos de materiales incluyen plasticos duros, vidrio, u otros materiales similares. La luz es preferiblemente de suficiente volumen para sostener una muestra deseable de sangre completa u otro lfquido. Volumenes tfpicos van de unos pocos ml a 10 ml o mayores. El tapon podna encajar suficientemente ajustado en el tubo para mantener el vado dentro de la luz. Un ejemplo de un tubo aceptable que se puede usar para producir un tubo de recogida del tema de asunto inventivo incluye los productos de recogida de muestras Vacutainer® desarrollados por Becton, Dickenson y Company (Franklin Lakes, NJ USA 07417).

El termino “tubo” se usa eufemfsticamente para referirse a envases que tienen una cavidad. Aunque una realizacion preferida incluye un tubo, se debe apreciar que tambien se pueden usar otros envases que tienen una cavidad mientras todavfa se esta dentro del alcance del tema de asunto inventivo. Por ejemplo, se contempla que el tubo de recogida pueda ser sustituido por otros envases que pueden contener un lfquido u opcionalmente soportar el vado. Ejemplos alternativos de vasos incluyen frascos, jarras, vasos de precipitado, botellas, bolsas de recogida de sangre, o botellas pequenas. Envases mas alla de meros tubos tambien tienen utilidad cuando el tema de asunto inventivo se aplica a mercados alternativos mas alla recogida de sangre.

En una realizacion preferida, se produce un tubo de recogida disponiendo un separador compuesto dentro de una luz del tubo, e introduciendo un vado dentro de luz en preparacion para la venta. Generalmente se prefiere no disponer mas de aproximadamente 1 ml, o aproximadamente 1 gramo, de la sustancia separadora en la luz para un tubo de recogida tfpico de 10 ml. Adicionalmente o como alternativa, generalmente se prefiere que no mas del 50%, mas preferiblemente no mas del 25%, e incluso mas preferiblemente no mas del 10% de la sustancia separadora comprenda la capa de sellante fotocurable. Se contempla que en algunas realizaciones se puedan usar otras cantidades de la sustancia separadora (o capa del mismo) para encajar en un caso de uso espedfico. Por ejemplo, una version mas pequena de un tubo que requerina menos de una sustancia separadora, mientras que una version mas grande podna requerir mas para hacer una barrera sellada adecuada.

En algunas realizaciones, los tubos de recogida se esterilizan antes de ser vendidos. Por ejemplo, se pueden esterilizar tubos (preferiblemente sin polimerizacion de la sustancia separadora o parte del mismo) usando radiacion gamma o un calor entre 100 a 250 grados Celsius o incluso mas. Se puede introducir un vado opcional simplemente descomprimiendo el volumen de la luz del tubo usando una bomba adecuada.

Tambien se contempla que un usuario pueda anadir una o mas sustancias separadoras a un tubo de recogida tras la adquisicion, a diferencia de tener una sustancia separadora predispuesta dentro del tubo.

Cuando se anade una muestra (p. ej., sangre completa) a un tubo de recogida del tema de asunto inventivo, centrifugacion podna separar la sangre completa en una fraccion de suero y una fraccion que contiene celulas. Cuando cada capa (gel/sellante fotocurable) de la sustancia separadora tiene una densidad que es intermedia a la de la fraccion de suero y la fraccion que contiene celulas, migra entre las dos fracciones durante la centrifugacion, aislando de ese modo las fracciones entre sf. La sustancia separadora puede ser endurecida rapidamente a traves de polimerizacion cuando es activada por una fuente de energfa adecuada para proporcionar una barrera solida entre las dos fracciones.

En algunos aspectos del tema de asunto inventivo, un tubo separador puede estar provisto de (1) una composicion polimerizable y un gel tixotropico, como se muestra en la figura 1, o (2) una composicion polimerizable sola, como se muestra en la figura 2. Como se ilustra, el tubo de recogida 200 de muestras comprende una composicion polimerizable 210 del tema de asunto inventivo (p. ej., LAIE) dispuesta en el mismo y curada tras centrifugacion a una posicion entre una fase vada de celulas 220 y una fase enriquecida con celulas 230 de sangre completa.

La composicion polimerizable preferiblemente comprende al menos tres de los siguientes componentes: un oligomero (L) (p. ej., un acrilato que contiene oligomero y un metacrilato que contiene oligomero, etc.), un fotoiniciador (A), un estabilizador (I) y al menos uno de un neutralizante de radicales y un antioxidante (E).

La composicion polimerizable puede tener ventajosamente una composicion eficaz para permitir la esterilizacion por irradiacion sin perdida de una capacidad de fluidez predeterminada (p. ej., eficaz para permitir la sedimentacion de la composicion bajo una fuerza centnfuga a una posicion entre dos fases de una muestra (p. ej., una fase vada de celulas y una fase enriquecida con celulas de sangre completa, etc.)). Visto desde otra perspectiva, la composicion

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puede ser eficaz para permitir irradiacion o esterilizacion por calor sin curar la composicion mas del 40%, mas preferiblemente sin curar la composicion mas del 30%, y para permitir subsiguiente polimerizacion por medio de UV u otro curado. La subsiguiente polimerizacion por medio de curado por UV podna ocurrir minutos (p. ej., mas de 30 minutos), horas (p. ej., mas de 1 hora, mas de 2 horas, mas de 5 horas, mas de 10 horas), dfas (mas de 1 dfa, mas de 5 dfas, mas de 10 d^as, mas de 15 dfas, mas de 20 dfas, mas de 25 dfas), meses (mas de 1 mes, mas de 2 meses, mas de 6 meses, mas de 9 meses) o incluso anos (mas de 1 ano, mas de 2 anos, mas de 3 anos, mas de 5 anos o incluso mas tiempo) tras ocurrir la esterilizacion por irradiacion. En algunas realizaciones, la composicion polimerizable se puede someter a una dosis de radiacion entre 5 y 35 kGy, inclusive, mas preferiblemente una dosis de radiacion entre 10 y 30 kGy, inclusive, e incluso mas preferiblemente una dosis de radiacion entre 10 y 20 kGy, inclusive, sin perdida de la capacidad de fluidez predeterminada. Visto desde una perspectiva diferente, la composicion polimerizable se puede someter a una dosis de radiacion de menos de 30 kGy, mas preferiblemente menos de 20 kGy, e incluso mas preferiblemente menos de 17 kGy para (1) permitir la esterilizacion por irradiacion sin perdida de la capacidad de fluidez predeterminada, y (2) permitir la subsiguiente polimerizacion por medio de curado por UV.

Se contempla que pueda estar presente un fotoiniciador (p. ej., Azobisisobutironitrilo, peroxido de benzoilo, canforquinona, un fotoiniciador de oxido de fosfina, un fotoiniciador con base de cetona, un fotoiniciador de eter benzoina, etc.) en la composicion polimerizable en cualquier concentracion. En algunas realizaciones preferidas, el fotoiniciador esta presente en la composicion en una concentracion de menos del 5% en peso, mas preferiblemente en una concentracion de menos del 2% en peso, e incluso mas preferiblemente en una concentracion de menos del 1,5% en peso. Adicionalmente o como alternativa, una composicion polimerizable del tema de asunto inventivo podna comprender un fotoinhibidor.

Cabe senalar que un neutralizante de radicales o antioxidante no es necesario en todas composiciones polimerizables contempladas. Sin embargo, cuando se incluye (p. ej., para facilitar mantener la capacidad de fluidez a traves de esterilizacion por irradiacion por medio de haz gamma o haz de electrones), se contempla que el al menos uno del neutralizante de radicales y el antioxidante (p. ej., tocoferol, etc.) puede estar presente en la composicion polimerizable en cualquier concentracion molar adecuada. El solicitante encontro sorprendentemente que cuando se incluye un neutralizante de radicales tal como tocoferol, algunas composiciones del tema de asunto inventivo (p. ej., LAlE) mantienen la capacidad de fluidez durante la esterilizacion por irradiacion para una dosificacion de radiacion de mas de 3kG, mientras algunas otras composiciones (p. ej., LAI) no mantienen la capacidad de fluidez bajo la misma dosificacion de radiacion. Visto desde otra perspectiva, se encontro que LAI unicamente mantiene la capacidad de fluidez durante la esterilizacion por irradiacion hasta una dosificacion de radiacion de aproximadamente 3 kG. En algunas realizaciones preferidas, el al menos uno del neutralizante de radicales y el antioxidante comprende tocoferol y esta presente en la composicion en una concentracion molar de al menos 75 mM, mas preferiblemente al menos 100 mM, e incluso mas preferiblemente al menos 135 mM.

Adicionalmente o como alternativa, la composicion polimerizable podna ser polimerizable por curado por UV (p. ej., tras esterilizacion por irradiacion (gamma, e-beam (haz de electrones), etc.)) a cualquier polfmero adecuado, incluido por ejemplo, un polfmero de acrilato, un polfmero de metacrilato, un polfmero de epoxi, un poliuretano, o un polfmero tiol-eno.

Visto desde una perspectiva diferente, una composicion polimerizable del tema de asunto inventivo podna comprender uno o mas de un polfmero que contiene un terminal grupo epoxi, un polfmero que contiene un radical pendiente epoxi, un resina epoxi-siloxano, un epoxi-poliuretano, un epoxi-poliester, epiclorohidrina, un diol polihndrico, un poliol polihndrico, un polfmero que comprende un terminal o radical pendiente isocyanato, un polfmero que comprende al menos dos grupos hidroxilo, un diol polihfdrico, un poliol polihfdrico, un politiol monomerico alifatico, un ditiol alifatico, un ditiol aromatico, un politiol polimerico, un acrilato, un metacrilato, un alquenilo y un cicloalquenilo. Cuando una composicion polimerizable del tema de asunto inventivo se somete a una fuente de energfa adecuada (p. ej., una fuente de energfa UV, etc.), se contempla que la composicion se pueda curar hasta una dureza de al menos 1 (p. ej., una dureza de al menos 10, etc.) en una escala de dureza Shore A en un periodo de menos de diez minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 5 minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 60 segundos, e incluso mas preferiblemente, un periodo de menos de 20 segundos. Visto desde otra perspectiva, se contempla que la composicion se pueda curar hasta una dureza de al menos 1 (p. ej., una dureza de al menos 10, etc.) en la escala de dureza Shore 00 en menos de al menos 10 minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 5 minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 60 segundos, e incluso mas preferiblemente, un periodo de menos de 20 segundos. Visto desde incluso otra perspectiva, se contempla que la composicion se puede curar hasta una dureza de al menos 1 (p. ej., una dureza de al menos 10, etc.) en una escala de dureza Shore D en un periodo de menos de diez minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 5 minutos, mas preferiblemente un periodo de menos de 60 segundos, e incluso mas preferiblemente, un periodo de menos de 20 segundos.

Experimentos

Se ensayaron diversas composiciones candidatas que comprendfan variablemente un oligomero o un monomero (o ambos), un fotoiniciador, un estabilizador, un antioxidante, un ajustador de densidad o agente gelificante (o ambos) para determinar, entre otras cosas, si se podna mantener una capacidad de fluidez predeterminada durante

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esterilizacion por irradiacion (e-beam o gamma) con diversas dosis de radiacion y durante diversos periodos de tiempo. Mas espedficamente, las composiciones se ensayaron con respecto a lo siguiente:

a. Densidad Final - ensayada por picnometna y prestaciones en sangre completa durante la centrifugacion.

b. Interferencia con ensayos de laboratorio - ensayado comparando resultados con los obtenidos en sangre recogida en tubos de BD. No se infirio interferencia cuando las medias de las mediciones estaban dentro de CV (coeficientes de variabilidad) de analisis. La comparacion de ensayos de laboratorio inclma el proceso completo de usar el separador en la centrifugadora y curado con UV. Tambien se ensayaron monomeros y oligomeros con respecto a dejar la sangre en contacto con el fotopolfmero de curado hasta 8 dfas en busca de interferencia retrasada.

i. Panel metabolico completo (sodio, potasio, cloruro, CO2, creatina, bilirrubina, protema total, AST, ALT, fosfatasa alcalina, glucosa, nitrogeno de urea, albumina)

ii. Inmunoensayos (PSA, testosterona, estradiol, TSH, T4 libre, ferritina,

iii. Electroforesis (electroforesis de protema de suero, paneles lfpidos por electroforesis)

iv. Lfpidos (colesterol total, LDL-c, HDL-c, VLDL-c, Lp(a), trigliceridos)

v. Ensayos moleculares (ADN, ARN exosoma)

c. Hemolisis - medida por indizacion en analizadores automatizados, evaluacion visual y niveles elevados de potasio.

d. Tiempos de curado lamparas UV (lamparas de arco, bombillas de energfa de microondas, ledes)

i. El aumento de concentracion de antioxidante mas alla (por ejemplo sobre 500 mM de tocoferol) afecta negativamente a los tiempos de curado (prolonga). El aumento de concentracion de fotoiniciador mas alla de aproximadamente el 3% para compensar este efecto afecta negativamente a la funcion del antioxidante para conservar el compuesto a traves de la irradiacion de esterilizacion.

e. Produccion de calor cuando se cura.

f. Contraccion cuando se cura.

g. Capacidad a esterilizarse por calor o irradiacion (e-beam y gamma para diversas dosis y esquemas de administracion de dosis).

i. Para esterilizacion por calor, no se requirieron antioxidantes y varias combinaciones de L1 y M1 satisfacen los requisitos de prestaciones.

ii. Para esterilizacion por irradiacion, una composicion dada es mas propensa a funcionar si la dosis se administra rapidamente (por ejemplo por e-beam en lugar de por gamma).

1. LAI se puede esterilizar con hasta a 3 kGy sin un antioxidante.

Los monomeros ensayados (algunos en combinacion para ajuste de densidad) incluyeron M1, 1,6 hexanediol etoxilato diacrilato, Poli(etilenglicol) metacrilato de metileter, Poli(etilenglicol) diacrilato (Cat. n.° 437441), poli(etilenglicol) diacrilato (Cat. n.° 475629), Trimetilolpropano propoxilato triacrilato, y 1,6-Hexanediol etoxilato diacrilato (Cat. n.° 497134). De los monomeros ensayados, M1 funciono mejor. Desafortunadamente, composiciones que incluyen M1 dieron como resultado contraccion tras curado y por lo tanto no se consideraron optimas para uso en composiciones de sellante.

Los oligomeros ensayados fueron todos de la serie Ebecryl, e incluyeron L1-L10 (diversos oligomeros obtenidos de Cytec). De los oligomeros ensayados, L1, L2, L6, L8, L9 y L10 fueron mas adecuados para mantener la capacidad de fluidez comparados con L3-L5 y L7. L1 se comporto el que mejor con respecto a, por ejemplo, menos generacion de calor durante el curado, menos contraccion (si la hay), densidad, viscosidad, menos atrapamiento de burbujas, y menos interferencia exhibida usando ensayos de suero estandar, y los otros oligomeros se abandonaron rapidamente por no cumplir los criterios. L8 y L9 dieron como resultado la mayor interferencia con enzimas que L1, mientras L10 dio como resultado una interaccion visible con materiales curados. El plasma visiblemente diseccionado en la capa superior de la barrera.

Los fotoiniciadores ensayados con 1% en peso de concentracion en M1, incluyeron (Azobisisobutilonitrilo): 254 nm; Benzofenona: 254 nm; 4-(Dimetilamino)benzofenona: 356 nm; 4,4'-Bis(dimetilamino)benzofenona: 370 nm; 4,4'- Bis(dietilamino)benzofenona: 379 nm; and A1: 365nm. La longitud de onda del fotoiniciador se eligio por trasmision a traves de tubos de PET que se usanan. Que encontro que A1 tema prestaciones superiores, usando criterios que incluyen, compatibilidad con sangre, tiempos de curado, generacion de calor, y miscibilidad con oligomeros y monomeros. Se encontro que A1 tema las mejores prestaciones.

Se ensayo A1 en diversas concentraciones en L1 (entre el 1-8% en peso, inclusive). Se encontro que el 1% ± 0,5%

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era el optimo cuando hada presentes antioxidantes. Tambien se ensayo Additol TPO, que como absorcion de longitudes de onda mayores para coincidir con UV fuentes seleccionadas, en diversas concentraciones en L1. Cuando se ensayo Additol TPO en concentracion del 1% con L1, I1 y vitamina E en concentracion de 200-300 mM, el tiempo de curado era en cierto modo mejor que cuando se ensayo A1 en concentracion del 1% con L1, I1 y vitamina E en concentracion de 200-300 mM. Ademas, no se observo interferencia usando un panel metabolico completo.

El estabilizador ensayado es fenotiazina en concentracion del 0,1% en peso. Este estabilizador estaba presente en todas las muestras. Sin embargo, se contempla que se pueda usar cualquier estabilizador adecuado, incluido por ejemplo, estabilizadores adecuados que funcionanan en una atmosfera vaciada (bajo O2).

Loa antioxidantes ensayados incluyeron alfa-tocoferol - 2 mM-500 mM, caroteno, bilirrubina, BHT, BHA, tempo, y 4- OH-tempo. Si bien el tocoferol, el tempo y el 4-OH-tempo mantuvieron la capacidad de fluidez durante la irradiacion en dosis superiores a 15 kGy (caroteno, bilirrubina, bHt y BHA no lo hicieron), Tempo y 4-OH-tempo provocaron hemolisis e interferencia de laboratorio. Se encontro que el tocoferol tema las mejores prestaciones.

Los ajustadores de densidad ensayados incluyeron Ebecryl 113 de CYTEC. Se ensayo una formulacion de gel ffsica denotada LARID (D = Ebecryl 113 de Cytec) y demostro tener un buen tiempo de curado y poca o nada interferencia con la mayona de ensayos de laboratorio. LARID comprende:

a. 30% L= EBECRYL 230 y 70% D

b. en donde:

i. 1% (de L+D) A1 (Additol BDK);

ii. 8,19% (de L+D) R, sflice ahumado R1 (AEROSIL R805 de Degussa); y

iii. 0,1% (de L+D) I (fenotiazina de Sigma).

Se encontro que la formulacion LARID no era esterilizable por irradiacion (manteniendo la capacidad de fluidez) porque no estaba presente antioxidante.

Los agentes gelificantes ensayados incluyeron sflice y DBS (1,3:2,4-dibenziliden sorbitol) y cosolvente NMP (N- Metilpirrolidona). DBS se comporto peor que la sflice desde el punto de vista de esterilizacion por irradiacion manteniendo la capacidad de fluidez. Con 0,6% DBS y 1,8% NMP, los geles de sistema L1A1I1. Diluye por esfuerzo cortante y tiene una densidad inferior a un gel BD. El tiempo de curado con UV fue aproximadamente el mismo que L1A1I1R1 y el gel curado pudo sobrevivir una ronda con un ensayo en nitrogeno lfquido-agua caliente, lo que significa que el gel curado podna sobrevivir muchas rondas de ciclos de congelacion-descongelacion.

Ejemplos

Se proporcionan los siguientes datos experimentales para ilustrar ejemplarmente diversos aspectos del tema de asunto inventivo presentado en esta memoria. Mas espedficamente, los datos ilustran los sorprendentes efectos del tocoferol y Additol BDK en concentraciones especificadas para mantener la capacidad de fluidez de una composicion (para permitir la sedimentacion entre dos fases de sangre completa al centrifugar) tras esterilizacion por irradiacion con dosis de radiacion especificadas. Como se muestra, composiciones que comprenden un oligomero (EBECRYL 230), un fotoiniciador, Additol BDK, en una concentracion de menos del 2% en peso, y un neutralizante de radicales, tocoferol, en una concentracion de al menos 100 mM mantuvieron sorprendentemente la capacidad de fluidez tras esterilizacion por irradiacion (gamma o e-beam) con una dosificacion de menos de 20 kGy. En contraste, composiciones carentes de un neutralizante de radicales y composiciones que tienen una concentracion de fotoiniciador superior al 5% en peso no pudieron mantener la capacidad de fluidez tras esterilizacion por irradiacion.

Composicion: Conc. de tocoferol Conc. de fotoiniciador Dosis (kGy) Metodo de esterilizacion Calor posesterilizacion Pasa (mantiene la capacidad de fluidez) o falla

: (mM) (% en peso)

L1A1I1-DBS (L1A1I1 = Ebecryl 230, Additol BDK, fenotiazina) (DBS = dibenciliden sorbitol): 0 1 0 Gamma Ninguno Fallo (Fallo peor con mayor DBS)

: (mM) (% en peso)

L1A1I1: 0 1 17 Haz de electrones Ninguno Fallo

L1A1I1: 0 1 15 Gamma Ninguno Fallo

L1A1I1: 0 1 10 Gamma Ninguno Fallo

(LAIE = Ebecryl 230, Additol BDK, fenotiazina, tocoferol): 0,1-2,0 1 25 Gamma Ninguno Fallo

LAIE: 10, 20 1 25 Gamma Ninguno Fallo

LAIE: 100, 120, 140 1 16,1 e-beam Ninguno Casi

LAIE: 120 1 16,1 Gamma 70 C 60 min Fallo

LAIE: 140 1 16,1 e-beam 70 C 60 min Pasa

LAIE: 145 1 16 e-beam 50 C 2 horas Fallo

LAIE: 145 1 12 e-beam o Gamma 70 C 60 min Pasa

LAIE: 145 1 16 e-beam o Gamma 70 C 60 min Pasa

LAIE: 200 5 15-20 e-beam o Gamma Ninguno Fallo

LAIE: 140-200 2-5 15-20 e-beam o Gamma Ninguno Fallo

LAIE: 140 2-3 17 e-beam Ninguno Fallo

LAIE: 140 1 16 e-beam Ninguno Cerca

LAIE: 140, 200 1 16 e-beam 60-70 C 60 min Pasa

LARID: 140 1 16 e-beam Ninguno Fallo

LAIE: 140 1,5 12 e-beam 50 C 60 min

Como se ilustra en esta memoria, un efecto tecnico de algunos aspectos del tema de asunto inventivo es que el tocoferol incluido en una composicion de sellante en un intervalo de concentracion adecuado (p. ej., entre 100 - 200 mM) puede (1) neutralizar o interferir con radicales producidos durante la esterilizacion por irradiacion (p. ej., e-beam o gamma), y (2) no neutralizar ni interferir con radicales producidos durante polimerizacion inducida por UV. Visto 5 desde una perspectiva diferente, el tocoferol puede estar presente en una cantidad que sea eficaz para impedir autoaceleracion de polimerizacion cuando se producen radicales durante esterilizacion con e-beam o gamma, pero no es eficaz para impedir la polimerizacion en presencia de UV u otra fuente de energfa adecuada.

En algunas realizaciones del tema de asunto inventivo, en una composicion de separador se incluyen dos tipos de neutralizantes de radicales. Un primer neutralizante de radicales (p. ej., E) puede ser sensible a radicales que 10 activan la polimerizacion que se producen por irradiacion con e-beam o gamma. Un segundo neutralizante de radicales (p. ej., I) puede ser sensible a radicales que activan la polimerizacion que son producidos por un fotoiniciador. Por lo tanto, si bien no se desea quedar limitado a ninguna teona o lfmite particulares del alcance del tema de asunto inventivo, un efecto tecnico de algunos aspectos del tema de asunto inventivo es que se puede usar E (p. ej., tocoferol) para mantener un balance apropiado entre A (fotoiniciador) e I (estabilizador) requeridos para 15 endurecer L (oligomero) en presencia de formacion de radicales inducida por irradiacion. En otras palabras, si hubiera un aumento en I en una cantidad apropiada para neutralizar radicales durante la esterilizacion por irradiacion (superior a 3 kG), I en la composicion superana a A, y la composicion no se curana con exposicion a una fuente de

ene^a UV. Composiciones del tema de asunto inventivo podna comprender I en una cantidad inferior que permite curar/endurecer la composicion por exposicion a una fuente de energfa UV debido a la presencia de E. Visto desde otra perspectiva, E se puede considerar un antioxidante a sacrificar que se puede dispensar y que no interfiere con una reaccion de polimerizacion inducida por A.

5 Si bien los datos anteriores se basan en que L es L1, se debe apreciar que se espera que otros oligomeros (p. ej., un acrilato que contiene oligomero y un metacrilato que contiene oligomero) funcionen en lugar de L1 debido a su composicion qmmica similar y se usen en polimerizacion de radicales libres. De manera similar, si bien los datos anteriores se basan en que A es A1 (Additol BDK), se espera que otros fotoiniciadores funcionen en lugar de A1 (p. ej., un fotoiniciador de oxido de fosfina, un fotoiniciador con base de cetona, y un fotoiniciador de eter benzoina) 10 debido a su capacidad de descomponerse en radicales libres cuando se exponen a luz, y la capacidad de promover reacciones de polimerizacion.

Adicionalmente o como alternativa, se podnan usar otros estabilizadores en lugar de fenotiazina (p. ej., hidroquinona) ya que se esperana que prolonguen de manera similar la vida en almacenamiento y estante de la composicion. Tambien se espera que otros neutralizantes de radicales funcionen en lugar del tocoferol; sin embargo, 15 otros neutralizantes de radicales ensayados (p. ej., BHA, BHT, caroteno, acido ascorbico, bilirrubina, acido galico, y nitroxido de tempo) demostraron que interfenan con algunos ensayos de laboratorio. No obstante, estos neutralizantes se pueden usar si los tipos de ensayos usados se limitan a ensayos de laboratorio clmico espedfico. Por ejemplo, se encontro que ciertos antioxidantes interfieran con la medicion de algunos inmunoensayos pero no con ensayo molecular.

20 Todos los metodos descritos en esta memoria se pueden realizar en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otro modo en esta memoria o sea contradicho de otro modo claramente por el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o lenguaje ejemplar (p. ej. “tales como”) proporcionados con respecto a ciertas realizaciones en esta memoria esta pensado para ilustrar mejor la invencion.

Claims

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REIVINDICACIONES

1. Un tubo de recogida de muestras, que comprende: un tubo que tiene un luz; y

una sustancia separadora dispuesta dentro de la luz que tiene:

un material de capa de componente de gel, en donde el componente de gel comprende un gel tixotropico; y

adicionalmente un material de capa de componente de sellante fotocurable que es distinto de la capa de componente de gel y comprende (1) un oligomero, con (2) un fotoiniciador y (3) un estabilizador.
2. El tubo de la reivindicacion 1, en donde el material de capa de componente de gel y el material de capa de componente de sellante fotocurable tienen cada uno una densidad entre 1,00 y 1,09 g/cm3, inclusive.
3. El tubo de la reivindicacion 1 o 2, en donde la sustancia separadora tiene una densidad entre una densidad media de sangre completa vada de celulas y una fraccion enriquecida con celulas de sangre completa, y es fluible en sangre completa.
4. El tubo de la reivindicacion 3, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable comprende un antioxidante y es esterilizable por irradiacion sin perdida de capacidad de fluidez para sedimentacion de la sustancia separadora bajo una fuerza centnfuga a una posicion entre la fase vada de celulas de sangre completa y la fase enriquecida con celulas de sangre completa, y para subsiguiente polimerizacion por medio de curado por UV.
5. El tubo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable mantiene al menos uno de un nivel de potasio de la muestra dentro de 10% de un nivel inicial de potasio y un nivel de glucosa de la muestra dentro del 5% de un nivel de glucosa inicial durante al menos cuatro dfas.
6. El tubo de la reivindicacion 1, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable es antitixotropico.
7. Un metodo para producir un tubo de recogida de muestras, que comprende:

disponer un material de capa de componente de gel separador, en donde el componente de gel comprende un gel tixotropico en la luz de un tubo; y

disponer un material de capa de componente de sellante fotocurable que comprende (1) un oligomero, con (2) un fotoiniciador y (3) un estabilizador en la luz del tubo; y

exponer el componente fotocurable a una fuente de energfa adecuada, en donde la fuente de energfa es luz UV, de manera que el componente fotocurable se polimeriza en menos de 10 minutos a al menos 1 en la escala de dureza Shore 00.
8. El metodo de la reivindicacion 7, que comprende ademas disponer una muestra en la luz del tubo, y centrifugar el tubo de recogida de muestras con la muestra, el material de capa de componente de gel separador y el material de capa de componente de sellante fotocurable.
9. El metodo de la reivindicacion 7 u 8, que comprende ademas esterilizar el tubo de recogida de muestras con el material de capa de componente de gel separador y el material de capa de componente de sellante fotocurable dispuesto en el mismo por medio de esterilizacion por irradiacion.
10. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable comprende un promotor.
11. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable y el material de capa de componente de gel separador tienen cada uno una densidad entre una densidad media de una fraccion de suero de sangre completa y una fraccion que contiene celulas de sangre completa, y ademas es fluible en sangre completa.
12. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, que comprende ademas calentar el tubo de recogida de muestras a al menos 250 grados Celsius para esterilizar el tubo de recogida de muestras.
13. El metodo de la reivindicacion 7, en donde el material de capa de componente de sellante fotocurable es antitixotropico.