ES2654094T3 - Compuestos piridinilpirazoloquinolina - Google Patents

Compuestos piridinilpirazoloquinolina Download PDF

Info

Publication number
ES2654094T3
ES2654094T3 ES14780073.4T ES14780073T ES2654094T3 ES 2654094 T3 ES2654094 T3 ES 2654094T3 ES 14780073 T ES14780073 T ES 14780073T ES 2654094 T3 ES2654094 T3 ES 2654094T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
methyltetrahydro
methoxy
dimethylpyridin
compound
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14780073.4T
Other languages
English (en)
Inventor
Yoshihiko Norimine
Nobuaki Sato
Yuki Ishihara
Kunitoshi Takeda
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eisai R&D Management Co Ltd
Original Assignee
Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai R&D Management Co Ltd filed Critical Eisai R&D Management Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2654094T3 publication Critical patent/ES2654094T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Un compuesto representado por la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:**Fórmula** donde R1 es un grupo representado por la fórmula:**Fórmula** un grupo representado por la fórmula:**Fórmula** o un grupo representado por la fórmula:**Fórmula** y R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
DESCRIPCION
Compuestos piridinilpirazoloquinolina Campo técnico
La presente invención se refiere a compuestos piridinilpirazoloquinolina con actividad inhibidora contra la fosfodiesterasa 9 (PDE9), y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y aplicaciones farmacéuticas de los mismos.
Antecedentes de la Tecnología
Se sabe que el guanosin monofosfato cíclico (que de aquí en adelante se denominará GMPc) que funciona como un segundo mensajero en las células desempeña un importante papel en diversas funciones fisiológicas que incluyen a los comportamientos relacionados con el aprendizaje y la memoria.
En el sitio postsináptico de los circuitos neuronales del cerebro, el monóxido de nitrógeno (que de aquí en adelante se denominará NO) biosintetizado por una monóxido de nitrógeno sintetasa activa una guanilato ciclasa, que es una GMPc sintetasa. La guanilato ciclasa activada biosintetiza al GMPc a partir de guanosin trifosfato. La GMPc activa una proteína quinasa dependiente de GMPc (que de aquí en adelante se denominará PKG) para que fosforile diversas proteínas que participan en la plasticidad de las sinapsis. Se sabe que la activación de la cascada NO/GMPc/PKG participa en la inducción de la plasticidad de las sinapsis (potenciación a largo plazo; que de aquí en adelante se denominará LTP, por las iniciales en inglés de Long Term Potentiation) del hipocampo que se conoce como sustrato neuronal de comportamientos relacionados con el aprendizaje y la memoria (por ejemplo, véase la Literatura No Patente 1). Se sabe que un medicamento que activa la transmisión de la señal de la cascada mejora la LTP del hipocampo y el comportamiento de aprendizaje de los animales, mientras que se sabe que un medicamento que inhibe la cascada exhibe la acción opuesta (Literatura No Patente 2). Por lo tanto, de dichos descubrimientos, se anticipa que un incremento de la GMPc en el cerebro lleva a una mejora de los comportamientos relacionados con el aprendizaje y la memoria.
La GMPc se metaboliza a 5'-GMP sin que haya una acción de activación de la PKG por una fosfodiesterasa (que de aquí en adelante se denominará PDE). Se sabe que las PDE forman 11 familias, y se sabe que la PDE9 metaboliza específicamente al GMPc, y que se expresa en el cerebro, el bazo, el intestino delgado y otros similares (por ejemplo, véase la Literatura No Patente 3). Es decir, la se anticipa que la inhibición de la PDE9 incrementa el contenido de GMPc en el cerebro. Se informa que un inhibidor de pDE9 efectivamente mejora la LTP del hipocampo, y mejora los comportamientos relacionados con el aprendizaje y la memoria en una prueba de reconocimiento de objetos nuevos/prueba de aprendizaje de evitación pasiva u otra similar en animales (Literatura No Patente 4). Clínicamente, la actividad de la guanilato ciclasa disminuye y se indica la posibilidad de una reducción del nivel de GMPc en la corteza temporal superior de pacientes de la enfermedad de Alzheimer, (Literatura No Patente 5). Por lo tanto, la PDE9 tiene una posibilidad de tener muchas relaciones cercanas con las patologías de enfermedades neurodegenerativas y enfermedades psiquiátricas, en particular con patologías de disfunciones cognitivas y otros trastornos similares en la enfermedad de Alzheimer, como por ejemplo la enfermedad de Alexander, la enfermedad de Alpers, la enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ALS; que se conoce como enfermedad de Lou Gehrig o enfermedad de la neurona motora), ataxia-telangiectasia, enfermedad de Batten (que también se conoce como enfermedad de Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten), demencia de Binswanger (encefalopatía angioesclerótica subcortical), trastorno bipolar, encefalopatía espongiforme bovina (BSE), enfermedad de Canavan, demencia inducida por quimioterapia, síndrome de Cockayne, degeneración corticobasal, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, depresión, síndrome de Down, degeneración del lóbulo frontotemporal (que incluye demencia frontotemporal, demencia semántica y afasia progresiva no fluente), enfermedad de Gerstmann-Straussler-Scheinker, glaucoma, enfermedad de Huntington (corea), demencia relacionada con VIH, hiperquinesis, enfermedad de Kennedy, síndrome de Korsakoff (síndrome amnésico-confabulación), enfermedad de Krabbe, demencia de cuerpos de Lewy, afasia progresiva logopénica, enfermedad de Machado-Joseph (ataxia espinocerebelosa de tipo 3), esclerosis múltiple, atrofia múltiple (atrofia olivopontocerebelosa), miastenia gravis, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedad de Pick, demencia presenil (deficiencia cognitiva leve), esclerosis lateral primaria, afasia progresiva primaria, demencia inducida por radiación, enfermedad de Refsum (enfermedad de almacenamiento de ácido fitánico), enfermedad de Sandhoff, enfermedad de Schilder, esquizofrenia, demencia semántica, demencia senil, síndrome de Shy-Drager, ataxia espinocerebelosa, atrofia muscular espinal, enfermedad de Steele-Richardson-Olszewski (parálisis supranuclear progresiva), y amiloidosis vascular y demencia vascular (demencia por multi-infartos).
Recientemente, se ha sabido que los siguientes compuestos tienen actividad inhibidora de la PDE9 y tienen un propósito de prevención o terapia de la enfermedad de Alzheimer (Literatura de Patentes 1).
imagen1
El anterior compuesto es un derivado de pirazolopirimidina, y un compuesto con una estructura totalmente diferente de un esqueleto pirazoloquinolina.
Por otro lado, como compuestos con un esqueleto pirazoloquinolina, se conocen los siguientes compuestos 5 descritos en la Literatura de Patentes 2.
imagen2
donde un anillo A es un anillo benceno u otro similar; y R6 es un enlace directo u otro tipo similar.
Sin embargo, un anillo B en el anterior compuesto denota a un anillo benceno u otro similar. Aunque se especifica que el anterior compuesto tiene actividad inhibidora de la PDE4 y se utiliza para diversos tipos de enfermedades 10 inflamatorias, no hay una descripción sobre la repercusión de la actividad inhibidora de la PDE9, ni otras similares.
Como compuestos con actividad inhibidora de la PDE9, se conocen los siguientes compuestos descritos en la Literatura de Patentes 3 y la Literatura de Patentes 4.
imagen3
15 Cualquiera de los anteriores compuestos es un derivado quinoxalina, y es un compuesto con una estructura totalmente diferente de un esqueleto pirazoloquinolina.
Como un compuesto con un esqueleto pirazoloquinolina y con actividad inhibidora de la PDE9, se conocen los siguientes compuestos descritos en la Literatura de Patentes 5.
5
10
15
20
25
30
imagen4
R6
(I)
donde ya sea R1 o R2 es un grupo representado por la fórmula
imagen5
(II)
La estructura del anterior compuesto está restringida en R1 y R2, por lo tanto el compuesto es un compuesto con una estructura totalmente diferente del compuesto de la presente invención.
Lista de citas
Literatura de Patentes
[Literatura de Patentes 1] WO 2008/139293
[Literatura de Patentes 2] WO 2007/032466
[Literatura de Patentes 3] WO 2008/072779
[Literatura de Patentes 4] WO 2010/101230
[Literatura de Patentes 5] WO 2012/033144
Literatura No Patente
[Literatura No Patente 1] Domek-Lopacinska et al., “Cyclic GMP metabolism and its role in brain physiology”, J Physiol Pharmacol., vol. 56, Suppl 2: pp. 15-34, 2005
[Literatura No Patente 2] Wang X., “Cyclic GMP-dependent protein kinase and cellular signaling in the nervous system”, J. Neurochem., vol. 68, pp. 443-456, 1997
[Literatura No Patente 3] Fisher et al., “Isolation and characterization of PDE9A, a novel humane cGMP-specific phosphodiesterase”, J. Biol. Chem., vol. 273: pp. 15559-15564, 1998
[Literatura No Patente 4] van der Staay et al., “The novel selective PDE9 inhibitor BAY 73-6691 improves learning and memory in rodents”, Neuropharmacology, vol. 55: pp. 908-918, 2008
[Literatura No Patente 5] Bonkale et al., “Reduced nitric oxide responsive soluble guanylyl cyclase activity in the superior temporal cortex of patients with Alzheimer's disease”, Neurosci. Lett., vol 187, pp. 5-8, 1995
Síntesis de la invención
Problema técnico
Un objeto de la presente invención consiste en proveer un compuesto novedoso o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con acción inhibitoria de la PDE9, y una composición farmacéutica que la contiene.
Solución al problema
Como un resultado de estudios exhaustivos para resolver los problemas mencionados anteriormente, los inventores de la presente han descubierto un novedoso compuesto de piridinilpirazoloquinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo con acción inhibitoria de la PDE9.
Es decir, la presente invención se refiere a las siguientes <1> a <14>.
<1> un compuesto representado por la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
O
imagen6
(I)
representado por la fórmula:
N^
O^
un grupo representado por la fórmula:
5
O
N
o un grupo representado por la fórmula:
N O
y R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.
<2> un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con <1>, donde el compuesto 10 está representado por la fórmula (II):
O
imagen7
(II)
donde R3 es un grupo representado por la fórmula:
imagen8
O N'
o un grupo representado por la fórmula:
15 '""^N^'O^
<3> un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con <1>, donde el compuesto está representado por la fórmula (III):
5
10
O
imagen9
(III)
donde R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.
<4> (-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
4(5H)-ona ((-)-cis) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
O
imagen10
<5> (-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
4(5H)-ona ((-)-trans) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
O
imagen11
<6> (-)-7-(2-Metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
4(5H)-ona ((-)-trans) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
O
imagen12
<7> (-)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
4(5H)-ona ((-)-cis) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
5
10
15
20
25
30
35
imagen13
* estereoquímica quiral relativa.
<8> 7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-(trans-4-metoxicidohexil)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
<9> una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable de acuerdo con <1> como ingrediente activo.
<10> una composición farmacéutica de acuerdo con <9>, que es un inhibidor de PDE9.
<11> una composición farmacéutica de acuerdo con <9> para incrementar la concentración intracerebral de GMPc.
<12> Un agente para mejorar deficiencias cognitivas en la enfermedad de Alzheimer, que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con <1>.
<13> un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con <1> para utilizar en la mejora de una deficiencia cognitiva en la enfermedad de Alzheimer.
Efectos ventajosos de la invención
Los compuestos piridinilpirazoloquinolina (que de aquí en adelante se denominarán compuesto (I)) representados por la fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de acuerdo con la presente invención tienen una acción inhibitoria de la PDE9 según se muestra en los datos de actividad en el Ejemplo de prueba farmacológica que se describe más adelante. El compuesto (I) de acuerdo con la presente invención exhibe principalmente un valor IC50 de 1,000 nM o menor como acción inhibitoria de la PDE9, y es preferible un compuesto que exhiba un valor IC50 de 100 nM o menor.
El compuesto (I) de acuerdo con la presente invención tiene acción inhibitoria de la PDE9, de manera tal que se anticipa que la concentración intracerebral de GMPc se elevará. La acción inhibitoria de la PDE9 y el incremento de GMPc lleva a la mejora de los comportamientos relacionados con el aprendizaje y la memoria, y el compuesto (I) tiene un potencial uso como agente terapéutico para disfunciones cognitivas y otros problemas similares en la enfermedad de Alzheimer.
Descripción de las formas de realización
De aquí en adelante, se describirá en detalle el contenido de la presente invención.
Durante toda la presente memoria descriptiva, las fórmulas estructurales de los compuestos solo mostrarán un isómero específico por conveniencia, pero la invención incluye a todos los isómeros por ejemplo a los como isómeros geométricos, isómeros ópticos, estereoisómeros y tautómeros incluidos en las estructuras del compuesto, así como sus mezclas de isómeros, y por lo tanto los compuestos pueden ser cualquiera de los isómeros o mezclas de los mismos en cualquier proporción que se desee, sin limitarse a las fórmulas que se muestran por conveniencia. Por lo tanto, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden existir como formas ópticamente activas o mezclas racémicas, todas las cuales se incluyen sin limitaciones de acuerdo con la invención, y, ya sean mezclas racémicas o formas ópticamente activas, las mismas se pueden utilizar como mezclas con las formas ópticamente activas en
7
O
imagen14
cualquier proporción que se desee. Sin embargo, se comprenderá que algunos isómeros o mezclas racémicas u otras mezclas de isómeros pueden mostrar más actividad que otros.
También pueden existir cristales polimórficos, y se puede utilizar cualquier forma cristalina o una mezcla de las mismas sin ningún tipo de restricciones, así como formas amorfas, y los compuestos de la invención también 5 incluyen tanto anhidratos como solvatos (especialmente hidratos).
10
En la presente invención también se incluyen compuestos de fórmula (I) marcados con isótopos. Un compuesto marcado con un isótopo es el mismo que el compuesto (I), excepto que uno o más átomos han sido reemplazados por átomos con masas atómicas o números de masa diferentes de los que usualmente se encuentran en la
naturaleza. Los isótopos que se pueden incorporar en el compuesto de acuerdo con la presente invención son isótopos, por ejemplo, de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor, fósforo, azufre, yodo, y cloro, e incluyen a:
2H, 3H, 11C, 14C
5N, 18O, 18F,
32p 35g
123I y 125I
Los anteriores compuestos marcados con isótopos, por ejemplo, compuestos en los cuales se han incorporado radioisótopos tales como 3H, y/o 14C, son útiles para los ensayos de distribución en tejidos de los medicamentos y/o sustratos. 3H y 14C se consideran útiles para facilidad de la preparación y la detección de los mismos. Los isótopos 15 11C y 18F se consideran útiles para la pEt (tomografía de emisión de positrones); y un isótopo 125I se considera útil
para la SPECT (tomografía computada de emisión de un único fotón); y todos son útiles para la obtención de imágenes del cerebro. El reemplazo por un isótopo más pesado tal como 2H causa cierto tipo de ventajas terapéuticas que incluyen un incremento del período de vida media in vivo o una reducción en la dosis necesaria debido una mayor estabilidad metabólica, y por lo tanto, se considera útil en ciertas situaciones. Los anteriores 20 compuestos marcados con isótopos se pueden preparar de manera similar llevando a cabo procedimientos que se divulgan en los siguientes Ejemplos usando reactivos marcados con isótopos que se pueden utilizar fácilmente en vez de reactivos no marcados con un isótopo.
De aquí en adelante se describirán los significados de términos, símbolos y otros, que se usan en la presente memoria descriptiva, y se describirá la presente invención en detalle.
25 A continuación se explicarán las definiciones y los ejemplos preferidos de R1 y R2 en el compuesto representado por la fórmula (I).
R1 es un grupo representado por la fórmula:
imagen15
un grupo representado por la fórmula:
30
O'
N
o un grupo representado por la fórmula:
^ N O .
R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.
En la presente memoria descriptiva, una “sal farmacéuticamente aceptable” no está limitada especialmente con la 35 condición de que sea una sal formada con el compuesto de acuerdo con la presente invención, y algunos ejemplos específicos incluyen a las sales de ácidos inorgánicos, sales de ácidos orgánicos, sales de bases inorgánicas, sales de bases orgánicas, y sales de aminoácidos ácidas o básicas.
Si en la presente memoria descriptiva una “sal farmacéuticamente aceptable” solo es una sal formada en una proporción apropiada a no ser que haya alguna descripción especialmente limitante, el número de moléculas de 40 ácido por cada molécula del compuesto en una sal formada, aunque no esté limitado especialmente, es
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
preferiblemente de entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 5 moléculas, más preferiblemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 2 moléculas, y aún más preferiblemente de aproximadamente 0.5, aproximadamente 1 o aproximadamente 2 moléculas, por una molécula del compuesto.
Los ejemplos preferidos de sales de ácidos inorgánicos incluyen clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, nitratos y fosfatos, y los ejemplos preferidos de sales de ácidos orgánicos incluyen acetatos, succinatos, fumaratos, maleatos, tartratos, citratos, lactatos, estearatos, benzoatos, metanosulfonatos, p-toluensulfonatos y bencenosulfonatos.
Los ejemplos preferidos de sales de bases inorgánicas incluyen sales de metal alcalino tales como sales de sodio y sales de potasio, sales de metal alcalino térreo tales como sales de calcio y sales de magnesio, sales de aluminio, y sales de amonio, y los ejemplos preferidos de sales de bases orgánicas incluyen sales de dietilamina, sales de dietanolamina, sales de meglumina y sales de N,N'-dibenciletilendiamina.
Los ejemplos preferidos de sales ácidas de aminoácidos incluyen aspartatos y glutamatos, y los ejemplos preferidos de sales básicas de aminoácidos incluyen sales de arginina, sales de lisina y sales de ornitina.
[Preparado farmacéutico] Se puede hacer un preparado farmacéutico de un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo por un método convencional, y la forma de dosificación puede ser, por ejemplo, un preparado oral, (comprimido, gránulo, polvo, cápsula, jarabe, u otra forma similar), una inyección (para administración intravenosa, para administración intramuscular, para administración subcutánea, para administración intraperitoneal, y para otros tipos de administración), y un preparado para uso externo (preparado dérmico (ungüento, parche, y otros similares), gotas para los ojos, gotas nasales, supositorios, y otros similares).
En el caso de producir un preparado sólido oral, a un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según sea necesario, se le agrega un excipiente, un aglutinante, un desintegrante, un lubricante, un colorante y otros similares, y se puede producir un comprimido, un gránulo, un polvo y una cápsula por métodos convencionales. El comprimido, gránulo, polvo, cápsula y otros similares, según sea necesario, se puede recubrir con una película.
Los ejemplos del excipiente incluyen lactosa, almidón de maíz y celulosa cristalina; los ejemplos del aglutinante incluye hidroxipropil celulosa y hidroxipropil metil celulosa; los ejemplos del desintegrante incluyen carboximetil celulosa cálcica y croscarmellosa de sodio; los ejemplos del lubricante incluyen estearato de magnesio y estearato de calcio; los ejemplos del colorante incluyen óxido de titanio; y los ejemplos del agente de recubrimiento de película incluyen hidroxipropil celulosa, hidroxipropil metil celulosa y metil celulosa, pero dichos aditivos por supuesto no se limitan a dichos ejemplos.
Cada uno de dichos preparados sólidos tales como comprimidos, cápsulas, gránulos y polvos puede contener usualmente entre 0.001 y 99.5% en peso, preferiblemente entre 0.01 y 90% en peso u otro rango similar, de un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En el caso de producir una inyección (para administración intravenosa, para administración intramuscular, para administración subcutánea, para administración intraperitoneal, y para otros tipos de administración), a un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según sea necesario, se le agregan un regulador de pH, un agente amortiguador de pH, un agente de suspensión, un solubilizante, un antioxidante, un conservante (antiséptico), un agente isotónico, y otros similares, y se puede producir una inyección por un método convencional. Los preparados se pueden liofilizar para hacer preparados liofilizados de disolución extemporánea.
Los ejemplos del regulador de pH y el agente amortiguador de pH incluyen a los ácidos orgánicos o ácido inorgánicos o sales de los mismos; los ejemplos del agente de suspensión incluyen metil celulosa, Polisorbate 80 y carboximetil celulosa sódica; los ejemplos del solubilizante incluyen Polisorbate 80 y monolaurato de polioxietilen sorbitán; los ejemplos del antioxidante incluyen a-tocoferol; los ejemplos del conservante incluyen paraoxibenzoato de metilo y paraoxibenzoato de etilo; y los ejemplos del agente isotónico incluyen glucosa, cloruro de sodio y manitol, pero por supuesto dichos aditivos no se limitan a dichos ejemplos.
Cada una de dichas inyecciones puede contener usualmente entre 0.000001 y 99.5% en peso, preferiblemente entre 0.00001 y 90% en peso u otro rango similar, de un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En el caso de producir un preparado para uso externo, se agrega una materia prima de base a un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y según sea necesario, se agregan por ejemplo el conservante, un estabilizante, el regulador de pH, el antioxidante, el colorante y otros similares, y por ejemplo, se puede producir un preparado dérmico (ungüento, parche, y otros similares), gotas para los ojos, gotas nasales, supositorio, y otros similares por métodos convencionales.
Como materia prima de bases para usar, se pueden utilizar diversas materias primas que se usan habitualmente, por ejemplo, para medicamentos, cuasi-drogas y cosméticos. Algunos ejemplos específicos de los mismos incluyen: materias primas tales como aceites animales y vegetales, aceites minerales, aceites de ésteres, ceras,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
emulsionantes, alcoholes superiores, ácidos grasos, aceites de silicona, tensioactivos, fosfolípidos, alcoholes, alcoholes poliédricos, polímeros solubles en agua, minerales de arcilla y agua purificada.
Cada uno de dichos preparados para uso externo puede contener usualmente entre 0.000001 y 99.5% en peso, preferiblemente entre 0.00001 y 90% en peso u otro rango similar, de un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El compuesto de acuerdo con la presente invención se puede usar para hacer una sonda química para atrapar a una proteína objetivo de un compuesto fisiológicamente activo de bajo peso molecular. Es decir, el compuesto de acuerdo con la presente invención se puede convertir en una sonda para cromatografía de afinidad, una sonda para fotoafinidad y otros similares por introducción de un grupo marcador, un conector u otro grupo similar a una unidad diferente de una unidad estructural esencial para desarrollar la actividad del compuesto, por la técnica descrita en J. Mass Spectrum. Soc. Jpn., Vol. 51, No. 5, 2003, p. 492-498, WO2007/139149, u otra similar.
Los ejemplos del grupo marcador, el conector u otro tipo de grupo similar que se utiliza en una sonda química incluye a los grupos que se muestran en el grupo que consiste en las siguientes (1) a (5):
(1) grupos marcadores de proteínas tales como grupos marcadores de fotoafinidad (por ejemplo, un grupo benzoílo, un grupo benzofenona, un grupo azido, un grupo carbonil azido, un grupo diaziridina, un grupo enona, un grupo diazo y un grupo nitro), y grupos de quimioafinidad (por ejemplo, grupos cetona cuyo átomo de carbono alfa ha sido reemplazado por a átomo de halógeno, un grupo carbamoílo, un grupo éster, un grupo alquiltio, un aceptor de Michael de una cetona a,p-insaturada, un éster u otro grupo similar, y un grupo oxirano);
(2) conectores clivables tales como -S-S-, -O-Si-O-, monosacáridos (un grupo glucosa, un grupo galactosa, y otros similares), y disacáridos (lactosa y otros similares), y conectores oligopéptidos clivables por una reacción enzimática;
(3) grupos marcadores FISH [Fluorescence In Situ Hybridization] tales como biotina y un grupo 3-(4,4- difluoro-5,7-dimetil-4H-3a,4a-diaza-4-bora-s-indacen-3-il)propionilo;
(4) grupos marcadores radioactivos con I, P, H, C u otros similares; grupos marcadores fluorescentes tales como fluoresceína, rodamina, dansilo, umbeliferona, 7-nitrofurazanilo, y grupos 3-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4H- 3a,4a-diaza-4-bora-s-indecen-3-il)propionilo, grupos quimioluminiscentes tales como luciferina y luminol; y marcadores capaces de detectar iones de metales pesados tales como iones de metales lantánidos e iones de radio; y
(5) grupos de unión con vehículos sólidos tales como cuentas de vidrio, lechos de vidrio, placas de microtítulo, cuentas de agarosa, lechos de agarosa, cuentas de poliestireno, lechos de poliestireno, cuentas de Nylon y lechos de Nylon.
Las sondas preparadas por introducción de grupos marcadores se seleccionan entre el grupo que consiste en los anteriores (1) a (5), u otros similar, en el compuesto de acuerdo con la presente invención por métodos descritos en la literatura citada anteriormente u otra similar se pueden utilizar como sondas químicas para identificar proteínas marcadas útiles para la búsqueda y otros tipos de investigación para el descubrimiento de nuevas drogas.
Ejemplos
El compuesto (I) de acuerdo con la presente invención se puede producir, por ejemplo, por métodos descritos en los siguientes Ejemplos, y los efectos del compuesto se pueden verificar por métodos descritos en los siguientes Ejemplos de Prueba. Sin embargo, los mismos son solo ejemplos, y la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos específicos en ningún caso, y se pueden realizar cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la presente invención.
Se indica que los compuestos que se describen con nombres que figuran en la literatura u otros similares se produjeron de acuerdo con la literatura u otros procedimientos similares.
Las abreviaturas que se utilizan en la presente memoria descriptiva son las comunes y son bien conocidas por aquellos con experiencia en el arte. En la presente memoria descriptiva se utilizarán las siguientes abreviaturas.
CDI: 1,1'-carbonildiimidazol
DCM: diclorometano
DIPEA: N,N-diisopropiletilamina
DMF: N,N-dimetilformamida
DMF-DMA: N,N-dimetilformamida dimetil acetal
DMSO: dimetilsulfóxido DTT: ditiotreitol
EDC: clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil)carbodiimida EDTA: ácido etilendiaminatetraacético 5 EGTA: éter glicol del ácido diamina tetraacético
HOBT: 1-hidroxibenzotriazol KTB: tert-butóxido de potasio MTBE: t-butilmetiléter n-: normal 10 p-: para
Complejo Pd(dppf)Cl2 DCM: complejo [1,1'-bis(difenilfosfina)ferroceno]dicloropaladio(II) DCM Pd(PPh3)4: tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) t-: terciario TEA: trietilamina 15 TFA: ácido trifluoroacético
THF: tetrahidrofurano Tris: tris-hidroximetilaminometano
1H-RMN: espectrometría de resonancia magnética nuclear de protones LC-MS: cromatografía líquida-espectrometría de masas
20 “Temperatura ambiente” en los siguientes Ejemplos y Ejemplos de Preparación indica usualmente entre aproximadamente 10°C y aproximadamente 35°C. A no ser que se especifique otra cosa, % indica porcentaje en peso.
El desplazamiento químico del espectro de resonancia magnética nuclear de protones se registra en unidades 8 (ppm) respecto del tetrametilsilano; y la constante de acoplamiento se registra en Hertz (Hz). Las abreviaturas de los 25 patrones de división son las siguientes: s: singlete, d: doblete, t: triplete, q: cuarteto, m: multiplete, brs: singlete amplio y brd: doblete amplio.
Para la resolución óptica de un compuesto, se utilizó el equipo Parallex Flex®, hecho por Biotage, (columna: una de CHIRALPAK® AD-H, IA, IB y IC hecha por Daicel Corp., y CHIRALCEL® OD-H y OJ-H hecha por Daicel Corp.; tamaño de columna 2 cm O x 25 cm). La rotación óptica (+/-) se midió con un detector quiral OR-2090 (lámpara de 30 Hg-Xe, 150W) hecho por JASCO.
Con respecto a la cromatografía, en el caso donde se la describe como cromatografía en columna de gel de sílice, se utilizó una Parallel Prep, hecha por Yamazen Corp., (columna: Columna Hi-Flash® (Gel de sílice), hecha por Yamazen Corp., tamaño: una de S (16 x 60 mm), M (20 x 75 mm), L (26 x 100 mm), 2L (26 x 150 mm), y 3L (46 x 130 mm)) o gel de sílice de forma esférica para cromatografía PSQ60B® hecha por Fuji Silysia Chemical Ltd., gel de 35 sílice para cromatografía BW-300® hecha por Fuji Silysia Chemical Ltd., Wakogel® C-200 hecha por Wako Pure Chemical Industries, Ltd. o Gel de sílice 60® (malla 70-230) hecha por Merck Ltd. de Japón. En el caso donde hay una descripción como cromatografía en columna de NH gel de sílice, se utilizó una Parallel Prep, hecha por Yamazen Corp., (columna: Columna Hi-Flash® (Amino), hecha por Yamazen Corp., tamaño: una de S (16 x 60 mm), M (20 x 75 mm), L (26 x 100 mm), 2L (26 x 150 mm), y 3L (46 x 130 mm)) o NH gel de sílice (malla 200-350) hecha 40 por Fuji Silysia Chemical Ltd.
(+)- indica una mezcla racémica, y (+)- y (-)- indican respectivamente el tipo (+) y el tipo (-) de un enantiómero.
Los nombres de los siguientes compuestos se utilizaron como aquellos que se indican en el “E-notebook” ver. 12 (Perkin Elmer) excepto por los reactivos que se utilizan comúnmente.
5
10
15
20
25
30
35
Ejemplo de Producción 1
Síntesis de 3-bromo-6-metoxi-2,4-dimetilpiridina
imagen16
(1) Síntesis de 5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2-ol
Se disolvió 2-amino-5-bromo-4,6-dimetilpiridina (15 g) en una solución sometida a mezcla de ácido sulfúrico (14.2 ml) y agua (212 ml). Se agregó una solución de nitrito de sodio (6.18 g) en agua (31 ml) a la solución a 0°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a la temperatura ambiente y se extrajo con cloroformo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida, se agregó MTBE al residuo, y el sólido que precipitó se depositó y luego se separó por filtración. El sólido que se obtuvo se enjuagó con MTBE para obtener el compuesto del título (13.7 g).
ESI-MS m/z 204 [M+H]+
(2) Síntesis de 3-bromo-6-metoxi-2,4-dimetilpiridina
Una mezcla de 5-bromo-4,6-dimetilpiridin-2-ol (7 g), yoduro de metilo (21.6 ml) y carbonato de plata (19.1 g) en cloroformo (140 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 36 horas. La mezcla de reacción se aplicó en una capa de gel de sílice, y se eluyó con un solvente mixto (acetato de etilo:n-heptano = 2:8). La fracción que se obtuvo se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (6.98 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCls) 5 (ppm): 2.32-2.35 (m, 3H), 2.56-2.58 (m, 3H), 3.88 (s, 3H), 6.43-6.48 (m, 1H).
ESI-MS m/z 216 [M+H]+
[0010]
Ejemplo de Producción 2
Síntesis de 3-bromo-2-metoxi-4,6-dimetilpiridina
imagen17
(1) Síntesis de 3-bromo-2-cloro-4,6-dimetilpiridina
Se disolvió 2-cloro-4,6-dimetilpiridina-3-amina (2.85 g) en ácido bromhídrico (15 ml, solución acuosa al 48%), y se enfrió a 0°C. Luego, a la solución se le agregó lentamente una solución de nitrito de sodio (1.51 g) en agua (2 ml) gota a gota, y se agitó la mezcla a 0°C durante 15 minutos. A esta solución se le agregó gota a gota una suspensión de bromuro de cobre(I) (4.18 g) en ácido bromhídrico (5 ml, solución acuosa al 48%), y luego de agitar a 0°C durante 10 minutos, se continuó agitando a 60°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y luego se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se aplicó directamente en una capa de NH-gel de sílice y se eluyó con acetato de etilo. La fracción que se obtuvo se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de NH gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, de 0% a 30%) para obtener el compuesto del título (2.97 g).
ESI-MS m/z 220 [M+H]+
(2) Síntesis de 3-bromo-2-metoxi-4,6-dimetilpiridina
10
15
20
25
30
35
40
Se agitó una mezcla de 3-bromo-2-doro-4,6-dimetNpiridina (2.97 g), una solución al 28% de metóxido de sodio en metanol (11.0 ml) y DMF (30 ml) a 80°C durante 36 horas. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se extrajo con dietil éter. La fase orgánica se concentró bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, de 0% a 10%) para obtener el compuesto del título (2.33 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCh) 5 (ppm): 2.33-2.34 (m, 3H), 2.36-2.38 (m, 3H), 3.98 (s, 3H), 6.61-6.64 (m, 1H).
ESI-MS m/z 216 [M+H]+
Ejemplo de Producción 3
Síntesis de ácido (2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)borónico
imagen18
(1) Síntesis de 2-fluoro-3-yodo-5-metilpiridina
Se agregó gota a gota una solución 2.69 M de n-butil-litio en hexano (224 ml) a una mezcla de diisopropilamina (92 ml) y THF (1.2 L) a -18°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Al completar el agregado gota a gota, se agitó la mezcla mientras se elevaba la temperatura hasta -5°C durante el transcurso de un período de 20 minutos. La mezcla de reacción se enfrió a -73°C, y luego se agregó gota a gota a la misma una solución de 2-fluoro-5-metilpiridina (61 g) en THF (240 ml). La mezcla de reacción se agitó a -75°C durante 3.5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó gota a gota una solución de yodo (139 g) en THF (24 ml). La mezcla de reacción se agitó a -75°C durante 1 hora y 55 minutos. Al completarse la reacción, se agregó agua (220 ml) a la mezcla de reacción a la misma temperatura. Se agitó la mezcla durante 5 minutos a la misma temperatura. La mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente, y luego se agregó agua (1.2 L). Se agregaron a la mezcla una solución acuosa de pentahidrato de tiosulfato de sodio (136 g) (300 ml) y agua (300 ml), y la mezcla resultante se agitó durante 10 minutos. La mezcla se extrajo con MTBE (1.2 L). La fase orgánica se lavó con salmuera (500 ml). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con MTBE (1 L). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. El desecante se separó por filtración, y el filtrado se concentró bajo presión reducida. Luego de agregar n-heptano al residuo, la mezcla se enfrió. El sólido que precipitó se separó por filtración, y luego se enjuagó con n-heptano. El filtrado se enfrió y el sólido que precipitó se separó por filtración. Este procedimiento se repitió 5 veces para obtener el compuesto del título (109.69 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCh) 5 (ppm): 2.29-2.31 (m, 3H), 7.93-8.14 (m, 2H).
ESI-MS m/z 238 [M+H]+
(2) Síntesis de 2-fluoro-4-yodo-3,5-dimetilpiridina
Se agregó gota a gota una solución 2.69 M de n-butil-litio en hexano (215 ml) a una mezcla de diisopropilamina (88 ml) y THF (1.2 L) a -18°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Al completar el agregado gota a gota, se agitó la mezcla mientras se elevaba la temperatura a -5°C durante el transcurso de un período de 30 minutos. La mezcla de reacción se enfrió a -72°C, y luego se agregó gota a gota a la misma una solución de 2-fluoro-3-yodo-5-metilpiridina (109.69 g) en THF (240 ml). La mezcla de reacción se agitó a -74°C durante 1.5 horas. A la mezcla de reacción se le agregó gota a gota una solución de yoduro de metilo (36 ml) en THF (160 ml). La mezcla de reacción se agitó a entre -70°C y -74°C durante 2 horas. Al completarse la reacción, se agregó agua (200 ml) a la mezcla de reacción a la misma temperatura. Se agitó la mezcla durante 2 minutos a la misma temperatura. La mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente, y luego se agregó agua (1.2 L). La mezcla que se obtuvo se agitó durante 3 minutos, y se agregó más agua (300 ml) a la misma. La mezcla se extrajo con MTBE (1.2 L). La fase orgánica se lavó con salmuera (500 ml). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con MTBE (1 L). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. El desecante se separó por filtración, y el filtrado se concentró bajo presión reducida. Luego de agregar n-heptano (100 ml) al residuo, la mezcla se enfrió. El sólido que precipitó se separó por filtración, y luego se enjuagó con n-heptano. El filtrado se enfrió y el sólido que precipitó se separó por filtración. Este procedimiento se repitió 2 veces para obtener el compuesto del título (86.9 g).
5
10
15
20
25
30
35
40
1H-RMN (400 MHz, CDCI3) 8 (ppm): 2.39-2.40 (m, 6H), 7.80-7.82 (m, 1H). ESI-MS m/z 252 [M+H]+
(3) Síntesis de 4-vodo-2-metoxi-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡na
A una soluc¡ón de 2-fluoro-4-vodo-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡na (97.4 g) en THF (954 ml) se le agregó una soluc¡ón al 28% de metóx¡do de sod¡o en metanol (185 ml) a 20°C. Se ag¡tó la mezcla a entre 55°C y 65°C durante 2 horas. Luego de enfr¡ar la mezcla de reacc¡ón, se agregaron MTBE (1 L) y agua (1 L) para la separac¡ón. La fase orgán¡ca se lavó con salmuera. Las capas acuosas comb¡nadas se extrajeron con MTBE (500 ml * 2). Las fases orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. El desecante se separó por f¡ltrac¡ón, y el f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Luego de agregar n-heptano (50 ml) al res¡duo, se ag¡tó la mezcla a 0°C durante 1 hora. El sól¡do que prec¡p¡tó se separó por f¡ltrac¡ón. El sól¡do se enjuagó con n-heptano frío (10 ml) para obtener el compuesto del título (42.6 g). El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Luego de agregar n-heptano (5 ml) al res¡duo, se ag¡tó la mezcla a 0°C durante 30 m¡nutos. El sól¡do que prec¡p¡tó se separó por f¡ltrac¡ón. El sól¡do se enjuagó con n-heptano frío (2 ml) para obtener el compuesto del título (20.2 g). El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Luego de agregar n-heptano (5 ml) al res¡duo, se ag¡tó la mezcla a 0°C durante 30 m¡nutos. El sól¡do que prec¡p¡tó se separó por f¡ltrac¡ón. El sól¡do se enjuagó con n-heptano frío (2 ml) para obtener el compuesto del título (10.7 g). Este se comb¡nó para obtener el compuesto del título (73.5 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 2.33-2.34 (m, 3H), 2.36-2.38 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 7.76 (s, 1H).
ESI-MS m/z 264 [M+H]+
(4) Síntes¡s de ác¡do (2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)borón¡co
Se agregó gota a gota una soluc¡ón 2.69 M de n-but¡l-l¡t¡o en hexano (6.5 ml) a una mezcla de 4-yodo-2-metox¡-3,5- d¡met¡lp¡r¡d¡na (2.0 g) y THF (40 ml) a -78°C durante el transcurso de un período de 10 m¡nutos. Se ag¡tó la mezcla a -78°C durante 20 m¡nutos. Se agregó gota a gota borato de tr¡¡soprop¡lo (5.26 ml) a la mezcla durante el transcurso de un período de 5 m¡nutos. Se ag¡tó la mezcla m¡entras se la calentaba a 20°C durante el transcurso de un período de 1.5 horas. Se agregó agua a la mezcla de reacc¡ón y la mezcla que se obtuvo como resultado se extrajo con acetato de et¡lo. La capa acuosa que se obtuvo se neutral¡zó con ác¡do cítr¡co, y se extrajo con acetato de et¡lo. Las fases orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. El desecante se separó por f¡ltrac¡ón, y el f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Se agregó MTBE al res¡duo para la tr¡turac¡ón. El sól¡do que prec¡p¡tó se separó por f¡ltrac¡ón. D¡cho sól¡do se ut¡l¡zó como pr¡meros cr¡stales. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Se agregó MTBE al res¡duo para la tr¡turac¡ón. El compuesto del título que prec¡p¡tó (551 mg) se separó por f¡ltrac¡ón. Los pr¡meros cr¡stales se suspend¡eron en acetato de et¡lo. Se agregó una pequeña cant¡dad de MTBE para la tr¡turac¡ón. El compuesto del título que prec¡p¡tó (553.3 mg) se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Se agregó MTBE al res¡duo para la tr¡turac¡ón. El compuesto del título que prec¡p¡tó (121.1 mg) se separó por f¡ltrac¡ón. Este se comb¡nó para obtener el compuesto del título (1.23 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 2.19-2.20 (m, 3H), 2.23-2.24 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 4.94 (brs, 2H), 7.74 (s, 1H). ESI-MS m/z 182 [M+H]+
Ejemplo de Producc¡ón 4
Síntes¡s de 1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-5-[2-n¡tro-4-(4.4.5.5-tetramet¡l-1.3.2-d¡oxaborolan-2-¡l)fen¡l1-1H-p¡razol- 4-carbox¡lato de et¡lo
imagen19
(1) Síntesis de 5-(4-bromo-2-n¡trofen¡l)-1-(3-met¡ltetrahidro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se agregó cloruro de t¡on¡lo (1.9 ml) a una mezcla de ác¡do 4-bromo-2-n¡trobenzo¡co (6 g) y aceton¡tr¡lo (60 ml), y se ag¡tó la mezcla a 50°C durante 2 horas. Se agregaron gota a gota tr¡et¡lam¡na (6.8 ml) y 3-d¡met¡lam¡noacr¡lato de et¡lo (3.9 ml) a la mezcla de reacc¡ón enfr¡ando con h¡elo. Luego de ag¡tar a la temperatura amb¡ente durante 2 5 horas, se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Se agregó acetato de et¡lo al res¡duo, la suspens¡ón que se obtuvo se f¡ltró y el f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Este proced¡m¡ento se rep¡t¡ó otras dos veces. El f¡ltrado que se obtuvo se concentró bajo pres¡ón reduc¡da para obtener 2-(4-bromo-2- n¡trobenzo¡l)-3-(d¡met¡lam¡no)acr¡lato de et¡lo (11 g) como un producto crudo. Este 2-(4-bromo-2-n¡trobenzo¡l)-3- (d¡met¡lam¡no)acr¡lato de et¡lo (2.95 g) se d¡solv¡ó en aceton¡tr¡lo (20 ml). A esta soluc¡ón se le agregaron clorh¡drato 10 de (3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)h¡draz¡na (1.3 g) (s¡ntet¡zado de acuerdo con G¡ovann¡n¡, R¡ccardo et al., PCT Int. Appl.(2009), WO2009121919, Ejemplos 8cA, 8CB) y agua (2 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante toda la noche a la temperatura amb¡ente y luego se ag¡tó a 90°C durante 2 horas. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y luego se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. Se agregaron al res¡duo acetato de et¡lo y agua, y se separó la fase orgán¡ca. La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo. Las fases orgán¡cas comb¡nadas se 15 secaron sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y el desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna de gel de síl¡ce (acetato de et¡lo/n-heptano, 10- 100%) para obtener el compuesto del título (1.4 g).
ESI-MS m/z 460 [M+Na]+
20 (2) Síntes¡s de 1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-5-[2-n¡tro-4-(4.4.5.5-tetramet¡l-1.3.2-d¡oxaborolan-2-¡l)fen¡l1-1H-
p¡razol-4-carbox¡lato de et¡lo
Se agregaron 5-(4-bromo-2-n¡trofen¡l)-1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de et¡lo (398 mg), b¡s(p¡nacolato)d¡boro (277 mg), acetato de potas¡o (267 mg) y complejo Pd(dppf)ChDCM (37.1 mg) a 1,4-d¡oxano (10 ml). Esta mezcla se ag¡tó durante 2 horas a 90°C bajo una atmósfera de n¡trógeno. La mezcla de reacc¡ón se 25 enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y luego se f¡ltró con Cel¡te. Se agregaron acetato de et¡lo (50 ml) y agua (50 ml) al f¡ltrado, y se separaron la fase orgán¡ca y la capa acuosa. La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo (50 ml). Las fases orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro, y el desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna de gel de síl¡ce (acetato de et¡lo/n-heptano, 10-80%) para obtener el compuesto del título 30 (441.0 mg) como un producto crudo.
ESI-MS m/z 405 [M-C6H10+HI+
La estructura de 4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolano del compuesto del título se descompuso y se detectó el peso molecular del compuesto de ác¡do borón¡co (B(OH)2).
35 Ejemplo de Producc¡ón 5
Síntes¡s de clorh¡drato de (1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)h¡draz¡na
\=/
HN—NH2 /'-0
\=/ O-f
(1)
0
HN—NH
(2)
H2N-NH HCl
0
(1) Síntes¡s de 2-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)h¡draz¡na carbox¡lato de benc¡lo
40 A una soluc¡ón de 1,4-c¡clohexanod¡ona monoet¡leno acetal (CAS No. 4746-97-8, 5.0 g) en metanol (100 ml) se le agregó carbazato de benc¡lo (CAS No. 5331-43-1, 5.32 g), y se ag¡tó la mezcla a la temperatura amb¡ente durante 1 hora. Luego se concentró la mezcla de reacc¡ón. El res¡duo que se obtuvo se d¡solv¡ó en THF y se volv¡ó a concentrar. Se agregó Boroh¡druro de sod¡o (2.42 g) a una soluc¡ón del res¡duo que se obtuvo en THF (80 ml) a la temperatura amb¡ente, y luego la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 15 m¡nutos a la misma temperatura. Luego de
45 enfr¡ar con h¡elo la mezcla de reacc¡ón, a la mezcla de reacc¡ón se le agregó gota a gota metanol (10 ml) durante el transcurso de un período de 30 m¡nutos, la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a la temperatura amb¡ente durante 1.5 horas. Luego, a la mezcla de reacc¡ón se le agregó gota a gota agua (15 ml) durante el transcurso de un período de
5
10
15
20
25
30
35
15 minutos, y la mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos a la temperatura ambiente. Se agregó más agua (15 ml) a la mezcla de reacción, y la mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 10 minutos. El THF se separó por destilación de la mezcla de reacción bajo presión reducida. Se agregó acetato de etilo al residuo que se obtuvo, y luego de agitar la mezcla durante 15 minutos, se separó la fase orgánica. La fase orgánica que se obtuvo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El desecante se separó por filtración y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo que se obtuvo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 50%) y se trituró con un solvente mixto de MTBE y hexano (1:1). El polvo que se obtuvo se filtró y secó bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (7.52 g).
1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 1.40-1.55 (m, 4H), 1.70-1.85 (m, 4H), 2.84 (brs, 1H), 3.90 (s, 4H), 5.10 (s, 2H), 7.24-7.40 (m, 5H).
ESI-MS m/z 329 [M+Na]+
(2) Síntesis de clorhidrato de (1,4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)h¡drazina
A una suspensión de 2-(1,4-dioxaspiro[4,51decan-8-il)hidrazina carboxilato de bencilo (4.0 g) en etanol (40 ml)- cloroformo (3.16 ml) se le agregó 10% de paladio sobre carbono (contenido de agua: 50%, 400 mg), y se agitó la mezcla durante 23.5 horas a la temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno. El paladio sobre carbono se separó por filtración de la mezcla de reacción. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (3.06 g).
1H-RMN (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 1.57-1.90 (m, 8H), 3.06 (brs, 1H), 3.91 (s, 4H).
Ejemplo 1a
Síntesis de (+)-7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-
c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((+)-cis)
Ejemplo 1b
(-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-cis)
Ejemplo 1c
(+)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-trans)
Ejemplo 1d
(-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
imagen20
N (1)
imagen21
imagen22
imagen23
(2)
imagen24
(3)
N ^
O
hn"|[
'"H
O
imagen25
O
O
O
O
O
O
ON
(1) Síntesis de 5-[4-(6-metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-2-n¡trofen¡l1-1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razol-4-
carboxilato de etilo
Se agregaron el 1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-5-[2-nitro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil]-1H- pirazol-4-carboxilato de etilo que se obtuvo en el Ejemplo de Producción 4 (220 mg), la 3-bromo-6-metoxi-2,4- dimetilpiridina que se obtuvo en el Ejemplo de Producción 1 (196 mg) y carbonato de sodio (144 mg) a una mezcla líquida de 1,4-dioxano (3.9 ml) y agua (0.8 ml) a 20°C. Luego de agregar Pd(PPh3)4 (52.4 mg) a la mezcla líquida, se 5 la agitó a 110°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y luego se agregó acetato de etilo a la mezcla de reacción. Se separaron la fase orgánica y la capa acuosa. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 30-70%) para obtener el compuesto del título 10 (137 mg).
ESI-MS m/z 495 [M+H]+
(2) Síntesis de 7-(6-metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-il)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona
15 Se disolvió 5-[4-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-2-nitrofenil1-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4- carboxilato de etilo (135 mg) en ácido acético (1.6 ml). Se agregó polvo de hierro (45.7 mg) a la solución a 20°C. La mezcla de reacción se agitó a 90°C durante 4 horas. Se agregó acetato de etilo (10 ml) a la mezcla de reacción para diluirla, y se agregó una solución acuosa de bicarbonato de sodio para la neutralización. Se separaron la fase orgánica y la capa acuosa. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (25 ml * 2). Las fases orgánicas
20 combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 50-100%) para obtener el compuesto del título (76 mg).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
25 (3) Síntesis de (+)-7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-
c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona.________(-)-7-(6-metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4R )-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-
p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona. (+)-7-(6-metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4S )-3-iTiet¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)- 1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona y (-)-7-(6-metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4S )-3-metiltetrahidro-2H-piran- 4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
30 Se disolvió 7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona
(12 mg) en etanol (10 ml). La solución se purificó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol). Como la primera fracción se obtuvo una mezcla (8 mg) de (+)-7-(6-metoxi-2,4- d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R*,4S*)-3-met¡lteti'ahidro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4,3-c]qu¡nol¡na-4(5H)-ona (trans) y (-)-7-(6- metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinplina-4(5H)-ona 35 (trans). Como la segunda fracción se obtuvo (+)-7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H- piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]puinplina-4(5H)-ona ((+)-cis) (3 mg). Como la tercera fracción se obtuvo (-)-7-(6-metox¡- 2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((-)-c¡s) (3 mg). La mezcla de los isómeros trans (8 mg) se separó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALCEL® oD- H de Daicel, fase móvil: etanol). Como la primera fracción se obtuvo (-)-7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1- 40 ((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((-)-trans) (1 mg), y como la segunda
fracción se obtuvo (+)-7-(6-metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3- c]quinolina-4(5H)-ona ((+)-trans) (1 mg).
(+)-7-(6-Metox¡-2.4-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R*.4R*)-3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona ((+)-cis)
45 1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 2.01-2.09 (m, 4H), 2.21-2.23 (m, 3H), 2.45-2.54 (m,
1H), 2.93-3.07 (m, 1H), 3.63-3.73 (m, 1H), 3.82-3.89 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.98-4.03 (m, 1H), 4.23-4.31 (m, 1H), 5.18-5.26 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 7.12 (dd, J = 8.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.18-7.31 (m, 1H), 8.01 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 10.15 (brs, 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
50 Columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol, tiempo de retención: 17.1 minutos.
(-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)- ona ((-)-cis)
Columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol, tiempo de retención: 20.4 minutos.
5
10
15
20
25
30
Los datos de 1H-RMN para el isómero (-)-cis fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (+)-cis.
(-)-7-(6-Metoxi-2.4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
1H-RMN (400 MHz. CDCl3) 8 (ppm): 0.76 (d. J = 6.6 Hz. 3H). 2.02-2.05 (m, 3H). 2.10-2.18 (m, 1H). 2.21-2.24 (m, 3H). 2.34-2.48 (m. 1H). 2.79-2.92 (m. 1H). 3.31 (t. J = 11.5 Hz. 1H). 3.66-3.75 (m. 1H). 3.97 (s. 3H). 4.13 (dd. J = 11.9 Hz. 4.5 Hz. 1H). 4.18-4.26 (m. 1H). 4.68 (td. J = 10.9 Hz. 4.3 Hz. 1H). 6.55 (s. 1H). 7.12 (dd. J = 8.2 Hz. 1.6 Hz. 1H). 7.26 (d. J = 1.6 Hz. 1H). 8.08 (d. J = 8.2 Hz. 1H). 8.36 (s. 1H). 10.57 (brs. 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
Columna: CHIRALCEL® OD-H de Daicel. fase móvil: etanol. tiempo de retención: 13.3 minutos.
(+)-7-(6-Metoxi-2.4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-trans)
Columna: CHIRALCEL® OD-H de Daicel. fase móvil: etanol. tiempo de retención: 19.7 minutos.
Los datos de 1H-RMN para el isómero (+)-trans fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (-)-trans.
Ejemplo 2a
Síntesis de (+)-7-(2-metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-
c1quinol¡na-4(5H)-ona ((+)-trans)
Ejemplo 2b
(-)-7-(2-Metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-cis)
Ejemplo 2c
(+)-7-(2-Metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-cis)
Ejemplo 2d
(-)-7-(2-Metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
imagen26
(1)
imagen27
imagen28
(3)
imagen29
O
O
O
O
O
O
O
(1) Síntesis de 5-[4-(2-metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-2-nitrofenil1-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4-
carboxilato de etilo
Se agregaron el 1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-5-[2-nitro-4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2-il)fenil1-1H- pirazol-4-carboxilato de etilo que se obtuvo en el Ejemplo de Producción 4 (220 mg). la 3-bromo-2-metoxi-4.6-
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
dimetilpiridina que se obtuvo en el Ejemplo de Producción 2 (196 mg) y carbonato de sodio (144 mg) a una mezcla líquida de 1,4-dioxano (3.9 ml) y agua (0.8 ml) a 20°C. Luego de agregar Pd(PPh3)4 (52.4 mg) a la mezcla líquida, se la agitó a 110°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y luego se agregó acetato de etilo a la mezcla de reacción. Se separaron la fase orgánica y la capa acuosa. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 30-70%) para obtener el compuesto del título (133 mg).
ESI-MS m/z 495 [M+H]+
(2) Síntesis de 7-(2-metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-il)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona
Se disolvió 5-[4-(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-2-nitrofenil1-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4- carboxilato de etilo (133 mg) en ácido acético (1.5 ml). Se agregó polvo de hierro (45.1 mg) a la solución a 20°C. La mezcla de reacción se agitó a 90°C durante 4 horas. Se agregó acetato de etilo (10 ml) a la mezcla de reacción para diluirla, y se agregó una solución acuosa de bicarbonato de sodio para la neutralización. Se separaron la fase orgánica y la capa acuosa. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (25 ml * 2). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 50-100%) para obtener el compuesto del título (73 mg).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
(3) Síntesis de (+)-7-(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3- c1quinol¡na-4(5H)-ona ((+)-trans), (-)-7-(2-metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4R )-3-mgt¡ltetrahidro-2H-p¡ran-4-¡l)-
1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((-)-cis), (-)-7-(2-metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4S )-3-metiltetrahidro-2H- p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((-)-trans) y (+)-7-(2-metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R ,4R )-3- met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((+)-cis)
Se disolvió 7-(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona (30 mg) en etanol (5 ml). La solución se purificó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALPAK® AD-H de Daicel, fase móvil: etanol). Como la primera fracción se obtuvo una mezcla (14 mg) de (+)-7-(2-metoxi-4,6- dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona (cis) y (-)-7-(2- metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinplina-4(5H)-ona (trans). Como la segunda fracción se obtuvo (+)-7-(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H- piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((+)-trans) (3 mg). Como la tercera fracción se obtuvo (-)-7-(2- metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R )-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((-)-
cis) (3 mg). La mezcla (14 mg) descrita anteriormente se separó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALCEL® OD-H de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (70%)). Como la primera fracción se obtuvo (-)-7-(2- metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona J(-)- trans) (5 mg), y como la segunda fracción se obtuvo (+)-7-(2-metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3- metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((+)-cis) (5 mg).
(+)-7-(2-Metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R*.4S*)-3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona ((+)-trans) 1
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 0.75 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.11-2.19 (m, 1H), 2.29-2.49 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.78-2.89 (m, 1H), 3.29 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 3.64-3.71 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 4.08-4.15 (m, 1H), 4.17-4.25 (m, 1H), 4.62-4.71 (m, 1H), 6.74 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 10.03 (brs, 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
Columna: CHIRALPAK® AD-H de Daicel, fase móvil: etanol, tiempo de retención: 23.8 minutos.
(-)-7-(2-Metox¡-4.6-d¡met¡lp¡r¡d¡n-3-¡l)-1-((3R*.4R*)-3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona ((-)-cis)
ESI-MS m/z 419[M+H]+
Columna: CHIRALPAK® AD-H de Daicel, fase móvil: etanol, tiempo de retención: 31.4 minutos.
5
10
15
20
25
30
Los datos de 1H-RMN para el isómero (+)-cis fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (-)-cis.
(-)-7-(2-Metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
Columna: CHIRALCEL® OD-H de Daicel. fase móvil: etanol/n-hexano (70%). tiempo de retención: 13 minutos.
Los datos de 1H-RMN para el isómero (-)-trans fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (+)-trans.
(+)-7-(2-Metoxi-4.6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*.4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-cis)
1H-RMN (400 MHz. CDCla) 8 (ppm): 0.90 (d. J = 7.2 Hz. 3H). 2.00-2.09 (m. 1H). 2.10 (s. 3H). 2.49 (s. 3H). 2.48-2.55 (m. 1H). 2.94-3.05 (m. 1H). 3.64-3.71 (m. 1H). 3.77-3.89 (m. 1H). 3.86 (s. 3H). 3.96-4.00 (m. 1H). 4.24-4.30 (m. 1H). 5.19-5.24 (m. 1H). 6.74 (s. 1H). 7.19 (dd. J = 8.4 Hz. 1.6 Hz. 1H). 7.31 (d. J = 1.6 Hz. 1H). 7.98 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 8.29 (s. 1H). 10.43(brs. 1H).
Columna: CHIRALCEL® OD-H de Daicel. fase móvil: etanol/n-hexano (70%). tiempo de retención: 14.9 minutos.
Ejemplo 3a
Síntesis de (-)-7-(2-metoxi-3.5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*.4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-
c1quinol¡na-4(5H)-ona ((-)-cis)
Ejemplo 3b
(+)-7-(2-Metoxi-3.5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*.4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-cis)
Ejemplo 4a
(-)-7-(2-Metoxi-3.5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
Ejemplo 4b
(+)-7-(2-Metoxi-3.5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*.4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolor4.3-c1quinolina-4(5H)- ona ((+)-trans) 1
imagen30
(1) Síntesis de 5-(4-bromo-2-n¡trofen¡l)-1-(3-met¡ltetrahidro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Se disolvió ácido 4-bromo-2-nitrobenzoico (6 g) en acetonitrilo (60 ml). Se agregó a la solución cloruro de tionilo (1.9 ml). y se agitó la mezcla a 50°C durante 2 horas. A la mezcla de reacción se le agregó gota a gota trietilamina (6.8
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
ml) enfriando con hielo. A la mezcla de reacción también se le agregó 3-dimetilaminoacrilato de etilo (3.9 ml) gota a gota. Luego de agitar a la temperatura ambiente durante 2 horas, se filtró la mezcla de reacción. El filtrado se concentró bajo presión reducida. Se agregó acetato de etilo al residuo, y la suspensión que se produjo se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. Se agregó acetato de etilo al residuo, la suspensión que se produjo se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. Se agregó acetato de etilo al residuo, la suspensión que se produjo se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener 2- (4-bromo-2-nitrobenzoil)-3-(dimetilamino)acrilato de etilo (11 g) como un producto crudo. El 2-(4-bromo-2- nitrobenzoil)-3-(dimetilamino)acrilato de etilo (2.95 g) que se obtuvo se disolvió en acetonitrilo (20 ml). Se agregaron a la solución clorhidrato de (3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)hidrazina (1.3 g) (sintetizado de acuerdo con Giovannini, Riccardo et al., PCT Int. Appl.(2009), WO2009121919, Ejemplos 8CA, 8CB) y agua (2 ml). La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a la temperatura ambiente y luego se agitó a 90°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y luego se concentró bajo presión reducida. Se agregaron al residuo acetato de etilo y agua. Se separó la fase orgánica. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 10-100%) para obtener el compuesto del título (1.4 g).
ESI-MS m/z 460 [M+Na]+
(2) Síntesis de 5-[4-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-2-n¡trofen¡l1-1-(3-metiltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razol-4-
carboxilato de etilo
Luego de agregar el ácido (2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)borónico que se produjo en el Ejemplo de Producción 3 (265 mg), Pd(PPh3)4 (85 mg) y carbonato de cesio (715 mg) a una mezcla líquida de 5-(4-bromo-2-nitrofenil)-1-(3- metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (320.8 mg), 1,4-dioxano (5 ml) y agua (1.5 ml), la mezcla de reacción se agitó a 110°C durante 2 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. Luego de enfriar la mezcla de reacción a la temperatura ambiente, se la concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó parcialmente por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 10-100%) para obtener el compuesto del título (382.8 mg) como un producto crudo.
ESI-MS m/z 495 [M+H]+
(3) Síntesis de 7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(3-met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)- ona
Luego de disolver 5-[4-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-2-nitrofenil]-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazol-4- carboxilato de etilo (112.3 mg) en ácido acético (2.5 ml) y agua (0.25 ml), se agitó la mezcla a 80°C durante 15 minutos bajo una atmósfera de nitrógeno. Inmediatamente, se agregó polvo de hierro (76 mg) a la mezcla de reacción, y luego de agitar la mezcla de reacción a 80°C durante 2 horas bajo una atmósfera de nitrógeno, se la agitó durante toda la noche a 90°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Luego de enfriar la mezcla de reacción a la temperatura ambiente, se la diluyó con acetato de etilo y se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con cloroformo y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía rápida en columna de gel de sílice (acetato de etilo) para obtener el compuesto del título (91.2 mg).
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 0.75-0.94 (m, 3H), 1.93-2.00 (m, 6H), 2.05-2.23 (m, 1H), 2.30-2.55 (m, 1H), 2.80-3.08 (m, 1H), 3.32 (t, J = 12 Hz, 0.33H), 3.65-3.75 (m, 1H), 3.83-3.90 (m, 0.66H), 3.97-4.00 (m, 0.66H), 4.01 (s, 3H), 4.10-4.15 (m, 0.33H), 4.17-4.32 (m, 1H), 4.63-4.73 (m, 0.33H), 5.20-5.27 (m, 0.66H), 7.07-7.10 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.03-8.13 (m, 1H), 8.31 (s, 0.66H), 8.36 (s, 0.33H), 11.92-11.96 (m, 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
(4) Síntesis de (-)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3- c1quinol¡na-4(5H)-ona ((-)-cis), (+)-7-(2-metox¡-3,5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-((3R ,4R )-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H- p¡razolo[4,3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((+)-cis), (-)-7-(2-metox¡-3,5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-((3R ,4S )-3-metiltetrahidro-2H-
p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4,3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((-)-trans) y (+)-7-(2-metox¡-3,5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-((3R ,4S )-3- met¡ltetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-1H-p¡razolo[4,3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona ((+)-trans)
5
10
15
20
25
30
35
40
Se disolvió 7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-(3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona (91.2 mg) en 5% cloroformo/etanol (10.5 ml). La solución se purificó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (50%)J. Como la primera fracción se obtuvo una mezcla (17.7 mg) de (-)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R ,4S*)-3-metNtetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3- c]quinolina-4(5H)-ona y (+)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-
pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((±)-trans). Como la segunda fracción se obtuvo (+)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin- 4-il)-1-((3R*,4R )-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((+)-cis) (25.9 mg). Como la tercera fracción se obtuvo (-)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R )-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H- pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((-)-cis) (25.9 mg).
La mezcla de isómeros (±)-trans (17.7 mg) se separó en condiciones de HPLC quiral (columna: CHIRALPAK® IB de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (15%)). Como la primera fracción se obtuvo (-)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)- 1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((-)-trans) (3.7 mg), y como la segunda fracción se obtuvo (+)-7-(2-metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H- pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona ((+)-trans) (3.6 mg).
(-)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetral'iidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)- ona ((-)-cis)
1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 (ppm): 0.88-0.95 (m, 3H), 1.91-2.00 (m, 6H), 2.03-2.13 (m, 1H), 2.45-2.55 (m, 1H), 2.95-3.07 (m, 1H), 3.65-3.73 (m, 1H), 3.83-3.89 (m, 1H), 3.97-4.00 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 4.24-4.32 (m, 1H), 5.20-5.27 (m, 1H), 7.07-7.10 (m, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 11.47 (brs, 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
Columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (20%), tiempo de retención: 15 minutos.
(+)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetral'iidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)- ona ((+)-cis)
Columna: CHIRALPAK® IA de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (20%), tiempo de retención: 12.5 minutos.
Los datos de 1H-RMN para el isómero (+)-cis fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (-)-cis.
(-)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetral'iidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)- ona ((-)-trans)
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 0.75-0.77 (m, 3H), 1.93-1.98 (m, 6H), 2.09-2.18 (m, 1H), 2.34-2.48 (m, 1H), 2.78-2.92 (m, 1H), 3.31 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 3.60-3.75 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 4.08-4.17 (m, 1H), 4.20-4.25 (m, 1H), 4.63-4.70 (m, 1H), 7.06-7.08 (m, 1H), 7.16-7.18 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 8.11 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 10.12 (brs, 1H).
ESI-MS m/z 419 [M+H]+
Columna: CHIRALPAK® IB de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (10%), tiempo de retención: 6.3 minutos.
(+)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetral'iidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)- ona ((+)-trans)
Columna: CHIRALPAK® IB de Daicel, fase móvil: etanol/n-hexano (10%), tiempo de retención: 7.8 minutos.
Los datos de 1H-RMN para el isómero (+)-trans fueron idénticos a los datos de 1H-RMN para el correspondiente isómero (-)-trans.
Ejemplo 5a
Síntesis de 7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(c¡s-4-metox¡c¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona Ejemplo 5b
Síntesis de 7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(trans-4-metox¡c¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
5
10
15
20
25
imagen31
OH (1)
O
XX1'
l
(2)
imagen32
(3)
imagen33
O^V\, (5)
imagen34
OH
Br
(1) Síntesis de 3-(4-bromo-2-fluorofenil)-3-oxopropanoato de etilo
Luego de agregar CDI (8.88 g) a una suspensión de ácido 4-bromo-2-fluorobenzoico (CAS No. 112704-79-7) (10 g) en DCM (97 ml), se agitó la mezcla a la temperatura ambiente durante 3.5 horas. Esta solución se utilizó como “solución 1”.
Se agregaron en forma consecutiva TEA (15.9 ml) y cloruro de magnesio (10.9 g) a una suspensión de malonato de etilo y potasio (15.5 g) en acetonitrilo (303 ml) en un matraz separado, y la mezcla que se obtuvo se agitó durante 3 horas y 10 minutos a la temperatura ambiente. A la mezcla de reacción se le agregó gota a gota la “solución 1” preparada anteriormente, durante el transcurso de un período de 25 minutos, y luego la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a la mitad la cantidad original bajo presión reducida. El residuo que se obtuvo se diluyó con acetato de etilo (500 ml) y se agregó ácido clorhídrico 5N (250 ml) enfriando con hielo, y luego se agitó la mezcla durante 1 hora a la temperatura ambiente. Se separó la fase orgánica. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo que se obtuvo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 5-20%) para obtener el compuesto del título (12.8 g).
ESI-MS m/z 291 [M+H]+
(2) Síntesis de 5-(4-bromo-2-fluorofen¡l)-1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-il)-1H-p¡razol-4-carbox¡lato de etilo
Una solución de 3-(4-bromo-2-fluorofenil)-3-oxopropanoato de etilo (1.5 g) en DMF-DMA (6.89 ml) se agitó a 50°C durante 2.5 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en tolueno (7 ml), la solución que se obtuvo se concentró bajo presión reducida, y se repitió este procedimiento. Se agregó una solución del residuo en etanol (10 ml) a una solución del clorhidrato de (1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-¡l)h¡draz¡na que se obtuvo en el Ejemplo de Producción 5 (3.06 g) y TEA (3 ml) en etanol (30 ml). Luego de agitar la mezcla de reacción a 80°C durante 2.5 horas, la misma se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. Se agregaron acetato de etilo y agua al residuo, y se distribuyó la fase orgánica. La fase orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y salmuera en dicho orden, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/n-heptano, 15%) para obtener el compuesto del título (2.10 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCls) 8 (ppm): 1.18 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.49-1.60 (m, 2H), 1.73-1.94 (m, 4H), 2.30-2.45 (m, 2H), 3.79-3.89 (m, 1H), 3.90-4.00 (m, 4H), 4.15 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 7.19 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40-7.46 (m, 2H), 8.03 (s, 1H).
ESI-MS m/z 475 [M+Na]+
(3) Síntesis de ácido 5-(4-bromo-2-fluorofen¡l)-1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-il)-1H-p¡razol-4-carboxíl¡co
Se agregó una solución acuosa de hidróxido de sodio 5N (2.78 ml) a una suspensión de 5-(4-bromo-2-fluorofenil)-1- (1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-il)-1H-pirazol-4-carboxilato de etilo (2.1 g) en etanol (20 ml) y se agitó la mezcla a 50°C durante 6 horas. Luego de enfriar la mezcla de reacción a la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. Se agregaron agua y MTBE al residuo acuoso que se obtuvo, y se separó la capa acuosa. La capa acuosa que se obtuvo se acidificó con ácido clorhídrico 5N y se extrajo con acetato de etilo (dos veces). Las capas de extracción con acetato de etilo combinadas se lavaron con agua y salmuera en dicho orden, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (2.03 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 (ppm): 1.48-1.60 (m, 2H), 1.72-1.94 (m, 4H), 2.28-2.45 (m, 2H), 3.77-3.88 (m, 1H), 3.90-3.99 (m, 4H), 7.18 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39-7.45 (m, 2H), 8.07 (s, 1H).
ESI-MS m/z 449 [M+Na]+
(4) Síntesis de 5-(4-bromo-2-fluorofenil)-N-(2,4-dimetoxibencil)-1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-il)-1H-pirazol-4- carboxamida
Luego de agregar 2,4-dimetoxibencilamina (747 mg), DIPEA (1.56 ml), HOBT (724 mg) y EDC (1.03 g) a una solución de ácido 5-(4-bromo-2-fluorofenil)-1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-il)-1H-pirazol-4-carboxílico (1.90 g) en DMF (40 ml) en dicho orden, la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta aproximadamente 1/3 de la cantidad original bajo presión reducida. Se agregaron acetato de etilo, agua y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al residuo que se obtuvo, y se separó la fase orgánica. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera en dicho orden, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (2.51 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCh) 8 (ppm): 1.45-1.60 (m, 2H), 1.65-1.94 (m, 4H), 2.23-2.45 (m, 2H), 3.70-3.80 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.90-3.99 (m, 4H), 4.36 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 5.86 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.38-6.44 (m, 2H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34-7.41 (m, 2H), 7.87 (s, 1H).
ESI-MS m/z 574 [M+H]+
(5) Síntesis de 7-bromo-5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
Luego de agregar KTB (735 mg) a una solución de 5-(4-bromo-2-fluorofenil)-N-(2,4-dimetoxibencil)-1-(1,4- dioxaspiro[4.5]decan-8-il)-1H-pirazol-4-carboxamida (2.51 g) en THF (30 ml) enfriando con hielo, se agitó la mezcla a la misma temperatura durante 5 minutos y luego a la temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó más KTB (400 mg) a la mezcla de reacción y se agitó la mezcla durante 40 minutos. Se agregaron a la mezcla de reacción una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, acetato de etilo y agua en dicho orden, y se separó la fase orgánica. La capa acuosa se extrajo nuevamente con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, y el desecante se separó por filtración y el filtrado se concentró bajo presión reducida. Al residuo que se obtuvo se le agregaron acetato de etilo (3 ml) y MTBE (9 ml). El sólido que se obtuvo se filtró y secó bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (2.04 g).
1H-RMN (400 MHz, CDCh) 8 (ppm): 1.81 (td, J = 14.0, 4.0 Hz, 2H), 1.97-2.06 (m, 2H), 2.15-2.24 (m, 2H), 2.43-2.55 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 4.01 (s, 7H), 4.73-4.83 (m, 1H), 5.50 (brs, 2H), 6.34 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H).
ESI-MS m/z 576 [M+Na]+
(6) Síntesis de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)-1H- p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
Se agregaron agua (2.5 ml), Pd(PPh3)4 (313 mg) y carbonato de ces¡o (2.64 g) a una soluc¡ón del ác¡do (2-metox¡- 3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡na)borón¡co que se obtuvo en el Ejemplo de Producc¡ón 1 (783 mg) y 7-bromo-5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)- 5 1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona (1.5o g) en 1.4-d¡oxano (10 ml). La mezcla de
reacc¡ón se ag¡tó a 130°C durante 3 horas usando un reactor de m¡croondas. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente. y luego se agregaron a la mezcla de reacc¡ón acetato de et¡lo y agua y se separó la fase orgán¡ca. La fase orgán¡ca se lavó con salmuera. se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. y el desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en 10 columna de gel de síl¡ce (acetato de et¡lo/n-heptano. 40%). Al res¡duo concentrado se le agregaron acetato de et¡lo y MTBE. El sól¡do que se obtuvo se f¡ltró y secó bajo pres¡ón reduc¡da para obtener el compuesto del título (1.52 g).
1H-RMN (400 MHz. CDCls) 8 (ppm): 1.73 (s. 3H). 1.76 (s. 3H). 1.87 (td. J = 14.0.4.0 Hz. 2H). 2.00-2.08 (m. 2H). 2.222.32 (m. 2H). 2.49-2.62 (m. 2H). 3.68 (s. 3H). 3.73 (s. 3H). 3.97 (s. 3H). 4.02 (s. 4H). 4.85-4.95 (m. 1H). 5.40-5.60 (m. 2H). 6.29 (dd. J = 8.4. 2.4 Hz. 1H). 6.42 (d. J = 2.4 Hz. 1H). 6.83 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 7.05 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 7.24 (s. 15 1H). 7.87 (s. 1H). 8.07 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 8.33 (s. 1H).
ESI-MS m/z 611 [M+H]+
(7) Síntes¡s de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(4-oxoc¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3- c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
20 Luego de agregar ác¡do clorhídr¡co 2N (20 ml) a una soluc¡ón de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n- 4-¡l)-1-(1.4-d¡oxasp¡ro[4.51decan-8-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona (1.30 g) en THF (20 ml). la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a la temperatura amb¡ente durante 19.5 horas. Luego de verter la mezcla de reacc¡ón en una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato de sod¡o (60 ml). se la extrajo con acetato de et¡lo. La fase orgán¡ca que se obtuvo se lavó con salmuera. se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. y el desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El 25 f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da para obtener el compuesto del título (1.12 g).
1H-RMN (400 MHz. CDCla) 8 (ppm): 1.73 (s. 3H). 1.76 (s. 3H). 2.52-2.87 (m. 8H). 3.68 (s. 3H). 3.74 (s. 3H). 3.97 (s. 3H). 5.27-5.37 (m. 1H). 5.37-5.62 (m. 2H). 6.29 (dd. J = 8.8. 2.4 Hz. 1H). 6.42 (d. J = 2.4 Hz. 1H). 6.84 (d. J = 8.8 Hz. 1H). 7.06 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 7.28 (s. 1H). 7.88 (s. 1H). 8.10 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 8.35 (s. 1H).
ESI-MS m/z 567 [M+H1+
30
(8) Síntes¡s de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-1-(4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3- c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
Se agregó boroh¡druro de sod¡o (57.1 mg) a una soluc¡ón de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4- ¡l)-1-(4-oxoc¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona (570 mg) en THF (20 ml)-metanol (10 ml) enfr¡ando con 35 h¡elo. y se ag¡tó la mezcla a la m¡sma temperatura durante 5 m¡nutos y luego a la temperatura amb¡ente durante 1 hora. La mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó sobre h¡elo. y se agregó ác¡do clorhídr¡co 1N (2 ml) a la mezcla de reacc¡ón. Luego de concentrar la mezcla de reacc¡ón hasta aprox¡madamente 1/4 de la cant¡dad or¡g¡nal. se agregaron al res¡duo acetato de et¡lo y agua y se separó la fase orgán¡ca. La fase orgán¡ca se lavó con una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato de sod¡o y salmuera en d¡cho orden. se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. y el 40 desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se somet¡ó a una cromatografía ráp¡da en columna de gel de síl¡ce (acetato de et¡lo) para obtener el compuesto del título (597 mg).
ESI-MS m/z 569 [M+H1+
(9) Síntes¡s de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(4-metox¡c¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3- 45 c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona
Luego de agregar h¡druro de sod¡o al 60% (d¡spers¡ón en ace¡te. 31.7 mg) a una soluc¡ón de 5-(2.4-d¡metox¡benc¡l)-1- (4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c1qu¡nol¡na-4(5H)-ona (300 mg) en THF (5 ml) a 0°C. se ag¡tó la mezcla a la temperatura amb¡ente durante 10 m¡nutos. Se agregó yodometano (0.1 ml) a la mezcla de reacc¡ón. y se ag¡tó la mezcla a la temperatura amb¡ente durante 1.5 horas y a 50°C durante 2 horas. Luego. se 50 agregó yodometano (0.1 ml) a la mezcla de reacc¡ón y se la ag¡tó durante toda la noche a 50°C. Se agregaron agua y acetato de et¡lo a la mezcla de reacc¡ón. y se separó la fase orgán¡ca. La capa acuosa se extrajo nuevamente con acetato de et¡lo. Las fases orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera y se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro. el desecante se separó por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo que se
obtuvo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (metanol/cloroformo, 2%) para obtener el compuesto del título (110 mg).
ESI-MS m/z 583 [M+H]+
5 (10) Síntesis de 7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(c¡s-4-metox¡c¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c]qu¡nol¡na-4(5H)-ona y
7-(2-metox¡-3.5-d¡met¡lp¡r¡d¡n-4-¡l)-1-(trans-4-metox¡c¡clohex¡l)-1H-p¡razolo[4.3-c]qu¡nol¡na-4(5H)-ona
Se agregó trietilsilano (0.09 ml) a una solución de 5-(2.4-dimetoxibencil)-7-(2-metoxi-3.5-dimetilpiridin-4-il)-1-(4- metoxiciclohexil)-1H-pirazolo[4.3-c]quinolina-4(5H)-ona (109 mg) en TFA (1.5 ml). y la mezcla de reacción se agitó a 60°C durante 4.25 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. Se agregaron al residuo 10 cloroformo y una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. y se separó la fase orgánica. La capa acuosa se extrajo nuevamente con cloroformo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro. y el desecante se separó por filtración. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo que se obtuvo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (cloroformo seguido de acetato de etilo) para obtener el compuesto del título como una mezcla de isómeros cis e isómeros trans (68 mg).
15 La mezcla se disolvió en cloroformo (1.1 ml)-etanol (4.4 ml) y se filtró con un filtro Millipore. El filtrado se purificó usando una columna CHIRALCEL® IB (20 mm O * 250 mm) de Daicel en condiciones de etanol al 100%. 10 ml/min. para obtener el isómero cis del compuesto del título (10.1 mg) y el isómero trans del compuesto del título (47.0 mg).
Isómero cis
1H-RMN (400 MHz. CDCls) 8 (ppm): 1.63-1.74 (m. 2H). 1.94 (s. 3H). 1.97 (s. 3H). 2.00-2.09 (m. 2H). 2.22-2.30 (m. 20 2H). 2.47-2.60 (m. 2H). 3.39 (s. 3H). 3.60 (brs. 1H). 4.00 (s. 3H). 4.80-4.89 (m. 1H). 7.06 (dd. J = 8.4.1.6 Hz. 1H).
7.20 (d. J = 1.6 Hz. 1H). 7.94 (s. 1H). 8.06 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 8.30 (s. 1H). 10.42 (brs. 1H).
ESI-MS m/z 433 [M+H]+
Isómero trans
1H-RMN (400 MHz. CDCla) 8 (ppm): 1.48-1.60 (m. 2H). 1.94 (s. 3H). 1.97 (s. 3H). 2.17-2.40 (m. 6H). 3.32-3.42 (m. 25 1H). 3.43 (s. 3H). 4.01 (s. 3H). 4.79-4.89 (m. 1H). 7.08 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 7.25 (s. 1H). 7.94 (s. 1H). 8.04 (d. J = 8.4
Hz. 1H). 8.29 (s. 1H). 10.95 (brs. 1H).
ESI-MS m/z 433 [M+H]+
[Ejemplos de pruebas farmacológicas]
Ejemplo de ensayo de actividad inhibidora de la PDE9
30 1) Preparación de una proteína PDE9 recombinante humana
Se amplificó un fragmento 1ADNc de hsPDE9A basándose en una secuencia de bases (No. de Acceso: AF048837) de la hsPDE9A1 registrada en la base de datos GenBank. y usando las siguientes secuencias (Hokkaido System Science Co.. Ltd.) como cebador y biblioteca de ADNc de hipocampo humano (Clontech Laboratories. Inc.) como molde de ADN. y usando ADN polimerasa Pfu50 (Invitrogen Corp.). y mediante una reacción en cadena de 35 polimerasa (PCR) en las siguientes condiciones.
Un cebador hPDE9-1: AGGATGGGATCCGGCTCCTCCA (SEQ No. 1)
Un cebador hPDE9A-3: CAGGCACAGTCTCCTTCACTG (SEQ No. 2)
Condiciones de la PCR: [96°C. 5 min] x 1 ciclo. [(96°C. 10 seg). (57°C. 5 seg). (72°C. 2 min)] x 30 ciclos
El fragmento que se obtuvo de 1ADNc de hsPDE9A se incorporó en un vector de clonación TOPO-TA (Invitrogen 40 Corp.). y se controló la secuencia de bases; y luego de eso. el resultado se transfectó en un vector pcADN 3.1/myc His-tag (Invitrogen Corp.) para hacer de esa manera un vector de expresión de PDE9 humana para células de mamífero. El vector de expresión de PDE9 humana para células de mamífero se transfectó con expresión transitoria a una célula HEK293 usando un Reactivo LIPOFETAMINE 2000 (Gibco). Se confirmó por el método de transferencia de Western que la PDE9A se expresaba en la célula HEK293. y luego. el fragmento de PDE9A 1ADNc humano se 45 transfectó en un vector pYNG (Katakura Industries Co.. Ltd.) para hacer de esa manera un vector de expresión para células de insecto. Un sobrenadante de gusano de seda homogeneizado en el cual se había expresado una gran cantidad de PDE9 se purificó con una columna Ni equilibrada usando una solución amortiguadora de pH A (20 mmol/L Tris-HCl. pH: 8.0. 1 mmol/L de DTT. 10 mmol/L de imidazol). Luego de 1 hora de mezcla del sobrenadante y la columna de Ni. se llevó a cabo la limpieza usando una solución amortiguadora de pH B (20 mmol/L Tris-HCl. pH: 50 8.0. 1 mmol/L de DTT). y se llevó a cabo la elución usando una solución amortiguadora de pH C (20 mmol/L Tris-
5
10
15
20
25
HCl, pH: 8.0, 1 mmol/L de DTT, 100 mmol/L de imidazol). Se recolectó de manera preparativa una fracción elución para obtener de esa manera una solución de la enzima PDE9.
2) Medición de la acción inhibitoria de la PDE9
A 100 |iL de una solución amortiguadora de pH D (40 mmol/L Tris-HCl, pH: 7.4, 10 mmol/L MgCh, 1 mM DTT, 2 |iM GMPc) se agregaron enfriando con hielo una solución que contenía [3H]-GMPc (0.5 |iCi/ml), 10 |iL de una solución del compuesto para su evaluación (una solución en la cuales se disolvió un compuesto en DMSO y diluida de manera tal que la concentración del DMSO fuese del 5%) y 90 |iL de una solución preparada diluyendo la solución de la enzima PDE9 preparada anteriormente, con una solución amortiguadora de pH E (40 mmol/L Tris-HCl, pH: 7.4, 10 mmol/L MgCh, 1 mM DTT, 1 mmol/L EGTA). La solución que se obtuvo como resultado se sometió a mezcla y se incubó a 30°C durante 10 min, y luego de eso, se calentó durante 2 min en agua hervida para detener la reacción de la enzima de la PDE9. Luego, el resultado se retornó a la temperatura ambiente; se agregaron 50 |iL de 5'- Nucleotidasa (Biomol GmbH, 10 unidades/ml); y la mezcla que se obtuvo como resultado se incubó a 30°C durante 10 min para convertir de esa manera a [3H]-guanosina al [3H]-5'-GMP formado en la reacción anterior. Al líquido de reacción que se obtuvo como resultado se le agregaron 500 |iL de una resina de intercambio aniónico (Bio-Rad AG1- X2 resina, tamaño de malla: 200-400, H2O: resina = 2 : 1), y se dejó en reposo durante 10 min, y luego de eso, se centrifugó (2,000 rpm, 10 min); y el sobrenadante en el que estaba presente la [3H]-guanosina se transfirió a una LumaPlate (PerkinElmer, Inc.), y se midió la radioactividad con un contador de centelleo y luminiscencia en microplacas TopCount NXT (PerkinElmer, Inc.).
El porcentaje de inhibición del compuesto sometido a evaluación se calculó usando la siguiente expresión, tomando la radioactividad de un control que no contiene al compuesto sometido a evaluación como (A), la radioactividad de un blanco que no contiene enzima como (B), y la radioactividad del compuesto sometido a evaluación como (C).
Porcentaje de inhibición = 100 - {[(C) - (B)] / [(A) - (B)]} x 100 (%)
Se determinó el valor IC50 para la PDE9 del compuesto sometido a evaluación a partir del porcentaje de inhibición para diversas concentraciones. En la siguiente tabla 1 se muestra el valor IC50 en cada compuesto sometido a evaluación.
PDE9 IC50
Ejemplo No.
|JM
1a
0.0480
1b
0.0136
1c
0.0872
1d
0.0069
2a
0.0116
2b
0.0037
2c
0.0123
2d
0.0013
3a
0.0069
3b
0.0256
4a
0.0058
4b
0.0391
5a
0.0098
5b
0.0127
3) Efecto sobre el GMPc del fluido cerebroespinal de roedor
El compuesto de prueba se administró a ratones ICR machos (Charles River Laboratories Japón, Inc.), ratas Sprague-Dawley macho (SD) (Charles River Laboratories Japón, Inc.) o ratas Long-Evans macho (LE) (Institute for
27
Animal Reproduction), y luego se recolectó el fluido cerebroespinal bajo anestesia con pentobarbital y se almacenó a -20°C. El GMPc del fluido cerebroespinal se midió de acuerdo con el procedimiento de EIA con acetilación para GMPc con un conjunto de elementos de EIA (GE Healthcare) o el conjunto de elementos de EIA sin acetilación para GMPc (Cayman). El resultado fue un incremento (C) en la cantidad de GMPc del grupo (B) al que se administró el 5 compuesto de prueba respecto de la cantidad de GMPc del grupo al que se le administró vehículo (A), y se calculó usando las siguientes fórmula.
Incrementa de GMPc (C) = [(B) - (A)] / (A) x 100 (%)
En la siguiente tabla 2 se muestran los resultados.
[Tabla 2]
Ejemplo No.
% de incremento de GMPc en fluido cerebroespinal respecto del control con vehículo Especies Dosis (mg/kg p.o.) Tiempo de muestreo (hr)
1b
147 rata (LE) 10 2
1d
206 rata (LE) 10 2
2d
183 rata (LE) 10 2
3a
200 rata (LE) 10 2
5b
167 rata (LE) 10 2
10 4) Efecto sobre GMPc de hipocampo en roedores
El compuesto de prueba se administró a ratas Sprague-Dawley macho (Charles River Laboratories Japón, Inc.) o ratas Long-Evans macho (Institute for Animal Reproduction) y luego los animales se sacrificaron con microondas bajo anestesia con pentobarbital, y se les extrajo el hipocampo. Luego de medir el peso húmedo, el hipocampo se congeló con nitrógeno líquido y se almacenó a -80°C. En la medición de GMPc en el hipocampo, se agregó una 15 solución de ácido perclórico 0.5 M/EDTA 1 mM en un 5% (peso en volumen) en base al peso húmedo, y se homogeneizó la mezcla. Luego de la homogenización, se centrifugó el homogenato (10000 rpm, 15 min), y se recolectó el sobrenadante. El sobrenadante que se recolectó se neutralizó con una solución de bicarbonato de potasio 2 M y se centrifugó (13000 rpm, 10 min). La concentración de GMPc en el sobrenadante se midió de acuerdo con el procedimiento de EIA sin acetilación de GMPc con un conjunto de elementos de EIA (GE Healthcare). El 20 resultado fue un incremento (C) en la cantidad de GMPc de grupo al que se le administró el compuesto de prueba (B) respecto de la cantidad de GMPc del grupo al que se le administró el vehículo (A), y se calculó usando la siguiente fórmula.
Incremento de GMPc (C) = [(B) - (A)] / (A) x 100 (%)
En la siguiente tabla 3 se muestran los resultados.
25 [Tabla 3]
Ejemplo No.
% de incremento de GMPc en el hipocampo respecto del control con vehículo Especies Dosis (mg/kg p.o.) muestreo time (hr)
1b
44 rata (LE) 10 2
1d
61 rata (LE) 10 2
2d
23 rata (LE) 10 2
3a
58 rata (LE) 10 2
5b
41 rata (LE) 10 2

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto representado por la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    imagen1
    donde R1 es un grupo representado por la fórmula:
    N^
    5
    un grupo representado por la fórmula:
    imagen2
    O N'
    o un grupo representado por la fórmula:
    N O
    10 y R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto está representado por la fórmula (II):
    O
    imagen3
    (II)
    donde R3 es un grupo representado por la fórmula:
    imagen4
    ON
    o un grupo representado por la fórmula:
    imagen5
    5
    10
  3. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto está representado por la fórmula (III):
    O
    imagen6
    donde R2 es un grupo 3-metiltetrahidro-2H-piran-4-ilo o un grupo 4-metoxiciclohexilo.
  4. 4. (-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
    4(5H)-ona ((-)-cis) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
    O
    imagen7
  5. 5. (-)-7-(6-Metoxi-2,4-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
    4(5H)-ona ((-)-trans) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
    O
    imagen8
  6. 6. (-)-7-(2-Metoxi-4,6-dimetilpiridin-3-il)-1-((3R*,4S*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
    4(5H)-ona ((-)-trans) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
    O
    imagen9
  7. 7. (-)-7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-((3R*,4R*)-3-metiltetrahidro-2H-piran-4-il)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-
    4(5H)-ona ((-)-cis) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
    O
    imagen10
  8. 8. 7-(2-Metoxi-3,5-dimetilpiridin-4-il)-1-(trans-4-metoxicidohexil)-1H-pirazolo[4,3-c]quinolina-4(5H)-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma:
    O
    imagen11
    5 9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal
    farmacéuticamente aceptable del mismo, como ingrediente activo.
  9. 10. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, que es un inhibidor de PDE9.
  10. 11. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9 para utilizar en el incremento de la concentración intracerebral de GMPc.
    10 12. Un agente para mejorar deficiencias cognitivas en la enfermedad de Alzheimer, que comprende un
    compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  11. 13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para utilizar en la mejora de una deficiencia cognitiva en la enfermedad de Alzheimer.
ES14780073.4T 2013-04-05 2014-04-03 Compuestos piridinilpirazoloquinolina Active ES2654094T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361809118P 2013-04-05 2013-04-05
US201361809095P 2013-04-05 2013-04-05
US201361809095P 2013-04-05
US201361809118P 2013-04-05
PCT/JP2014/059852 WO2014163146A1 (ja) 2013-04-05 2014-04-03 ピリジニルピラゾロキノリン化合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2654094T3 true ES2654094T3 (es) 2018-02-12

Family

ID=51658437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14780073.4T Active ES2654094T3 (es) 2013-04-05 2014-04-03 Compuestos piridinilpirazoloquinolina

Country Status (20)

Country Link
US (1) US9550776B2 (es)
EP (1) EP2982674B1 (es)
JP (1) JP6244353B2 (es)
KR (1) KR102234131B1 (es)
CN (1) CN105189496B (es)
AU (1) AU2014250391B2 (es)
BR (1) BR112015024075B1 (es)
CA (1) CA2904820C (es)
CL (1) CL2015002837A1 (es)
ES (1) ES2654094T3 (es)
HK (1) HK1219100A1 (es)
IL (1) IL241695B (es)
MX (1) MX363258B (es)
PE (1) PE20151718A1 (es)
PH (1) PH12015502178A1 (es)
RU (1) RU2655172C2 (es)
SG (1) SG11201507733YA (es)
TW (1) TW201439091A (es)
WO (1) WO2014163146A1 (es)
ZA (1) ZA201507044B (es)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201406486D0 (en) 2014-04-10 2014-05-28 Redx Pharma Ltd Antibacterial compounds
WO2017046606A1 (en) * 2015-09-18 2017-03-23 Redx Pharma Plc Antibacterial compounds
KR20200010220A (ko) 2017-06-01 2020-01-30 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 피라졸로퀴놀린 유도체를 함유하는 루이소체 질병 치료제
MY202326A (en) 2017-09-14 2024-04-24 Daiichi Sankyo Co Ltd Compound having cyclic structure
WO2021150613A1 (en) 2020-01-20 2021-07-29 Incyte Corporation Spiro compounds as inhibitors of kras
US11739102B2 (en) 2020-05-13 2023-08-29 Incyte Corporation Fused pyrimidine compounds as KRAS inhibitors
US11999752B2 (en) 2020-08-28 2024-06-04 Incyte Corporation Vinyl imidazole compounds as inhibitors of KRAS
US11767320B2 (en) 2020-10-02 2023-09-26 Incyte Corporation Bicyclic dione compounds as inhibitors of KRAS
WO2022204112A1 (en) 2021-03-22 2022-09-29 Incyte Corporation Imidazole and triazole kras inhibitors
MX2024000357A (es) 2021-07-07 2024-02-12 Incyte Corp Compuestos triciclicos como inhibidores de homologo de oncogen viral de sarcoma de rata kirsten (kras).
WO2023287896A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Incyte Corporation Tricyclic compounds as inhibitors of kras
US12441742B2 (en) 2021-08-31 2025-10-14 Incyte Corporation Naphthyridine compounds as inhibitors of KRAS
WO2023049697A1 (en) 2021-09-21 2023-03-30 Incyte Corporation Hetero-tricyclic compounds as inhibitors of kras
CA3234375A1 (en) 2021-10-01 2023-04-06 Incyte Corporation Pyrazoloquinoline kras inhibitors
CA3235146A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Incyte Corporation Quinoline compounds as inhibitors of kras

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05132484A (ja) 1991-04-26 1993-05-28 Otsuka Pharmaceut Factory Inc ピラゾロキノリン及びピラゾロナフチリジン誘導体
EP0760819B1 (en) 1994-05-24 2000-07-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Tricyclic dicarbonyl derivatives
DE102004004142A1 (de) * 2003-05-09 2004-11-25 Bayer Healthcare Ag 6-Cyclylmethyl- und 6-Alkylmethyl-substituierte Pyrazolopyrimidine
US20060035920A1 (en) 2004-05-28 2006-02-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Chk-1 inhibitors
JP2006045118A (ja) 2004-08-04 2006-02-16 Mochida Pharmaceut Co Ltd 新規ピラゾロキノロン誘導体
KR20080046728A (ko) 2005-09-15 2008-05-27 아스카 세이야쿠 가부시키가이샤 복소환 화합물, 그의 제조 방법 및 용도
JP2009184924A (ja) 2006-05-31 2009-08-20 Eisai R & D Management Co Ltd 生物学的試薬用化合物
US8299080B2 (en) 2006-12-13 2012-10-30 Aska Pharmaceutical Co., Ltd. Substituted imidazo[1,5-A] quinoxalines as a PDE9 inhibitor
RS52166B (sr) * 2007-05-11 2012-08-31 Pfizer Inc. Amino-heterociklična jedinjenja
UA105362C2 (en) 2008-04-02 2014-05-12 Бьорингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх 1-heterocyclyl-1, 5-dihydro-pyrazolo [3, 4-d] pyrimidin-4-one derivatives and their use as pde9a modulators
MX2011009314A (es) * 2009-03-05 2011-10-11 Astellas Pharma Inc Compuesto de quinoxalina.
PT2414363E (pt) 2009-03-31 2014-02-26 Boehringer Ingelheim Int Derivados de 1-heterociclil-1,5-di-hidro-pirazolo[3,4- d]pirimidin-4-ona e sua utilização como moduladores de pde9a
RS54834B1 (sr) 2010-09-07 2016-10-31 Astellas Pharma Inc Jedinjenja pirazolokvinolina
JP6042060B2 (ja) 2011-09-26 2016-12-14 サノフイ ピラゾロキノリノン誘導体、その調製および治療上の使用
SI2573073T1 (sl) * 2011-09-26 2015-02-27 Sanofi Pirazolokinolinonski derivati, njihova priprava in njihova terapevtska uporaba
JO3116B1 (ar) * 2011-10-07 2017-09-20 Eisai R&D Man Co Ltd مشتق بيرازولوكينولين كمثبطات ل pde9

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201507733YA (en) 2015-10-29
PE20151718A1 (es) 2015-11-22
HK1219100A1 (en) 2017-03-24
US20160289225A1 (en) 2016-10-06
ZA201507044B (en) 2017-02-22
KR102234131B1 (ko) 2021-04-01
TW201439091A (zh) 2014-10-16
CN105189496B (zh) 2017-03-29
EP2982674A4 (en) 2016-08-31
IL241695B (en) 2019-06-30
RU2655172C2 (ru) 2018-05-24
AU2014250391A1 (en) 2015-10-15
BR112015024075A2 (pt) 2017-10-24
PH12015502178A1 (en) 2016-01-25
BR112015024075B1 (pt) 2022-05-03
AU2014250391B2 (en) 2017-11-02
RU2015140669A (ru) 2017-05-11
MX363258B (es) 2019-03-19
EP2982674A1 (en) 2016-02-10
WO2014163146A1 (ja) 2014-10-09
US9550776B2 (en) 2017-01-24
KR20150138204A (ko) 2015-12-09
CL2015002837A1 (es) 2016-04-22
EP2982674B1 (en) 2017-10-25
MX2015013446A (es) 2016-01-12
JP6244353B2 (ja) 2017-12-06
JPWO2014163146A1 (ja) 2017-02-16
CA2904820C (en) 2021-05-18
CN105189496A (zh) 2015-12-23
RU2015140669A3 (es) 2018-03-21
CA2904820A1 (en) 2014-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2654094T3 (es) Compuestos piridinilpirazoloquinolina
AU2012319549B2 (en) Pyrazoloquinoline derivative
US9573947B2 (en) Salt of pyrazoloquinoline derivative, and crystal thereof
JP2013515734A (ja) ポロ様キナーゼの阻害薬としてのプテリジノン
WO2016127133A1 (en) [9,10-dimethoxy-3-(2-methylpropyl)-1h,2h,3h,4h,6h,7h,11bh-pyrido-[2,1-a]isoquinolin-2-yl]methanol and compounds, compositions and methods relating thereto
CN1972945A (zh) A2a腺苷受体的选择性拮抗剂
WO2023150681A1 (en) Inhibitors of raf kinases
UA111696C2 (uk) Похідні імідазотриазину як інгібітори рde10
WO2021113633A1 (en) Fused tricyclic heterocyclic compounds as inhibitors of pikfyve kinase useful for the treatment of neurological diseases
KR20140068079A (ko) 신경원성 니코틴 아세틸콜린 수용체 리간드인 1,4-디아자비시클로[3.2.2]노난
JP6471169B2 (ja) 神経学的障害の処置のための（ヘテロ）アリールイミダゾール類／ピラゾール類
HK1199018B (en) Pyrazoloquinoline derivative as pde9 inhibitors
NZ622594B2 (en) Pyrazoloquinoline derivative
HK1219071B (en) New compounds