ES2666152T3 - Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR - Google Patents

Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR Download PDF

Info

Publication number
ES2666152T3
ES2666152T3 ES10744821.9T ES10744821T ES2666152T3 ES 2666152 T3 ES2666152 T3 ES 2666152T3 ES 10744821 T ES10744821 T ES 10744821T ES 2666152 T3 ES2666152 T3 ES 2666152T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
h7cr
native
polypeptide
cancer
nucleic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES10744821.9T
Other languages
English (en)
Inventor
Lieping Chen
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Johns Hopkins University
Original Assignee
Johns Hopkins University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Johns Hopkins University filed Critical Johns Hopkins University
Application granted granted Critical
Publication of ES2666152T3 publication Critical patent/ES2666152T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Composición farmacéutica que comprende: (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 en una cantidad eficaz para modular la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR, en la que la unión del anticuerpo a B7-H7CR agoniza la interacción entre B7-H7 definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y B7-H7CR, y potencia la proliferación de linfocitos T; y (b) un portador farmacéuticamente aceptable.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCIÓN
Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
Esta invención se realizó, en parte, con el apoyo del gobierno de los Estados Unidos con los números de subvención R01 CA97085 y R01 A172592 de los Institutos Nacionales de Salud (NIH). El gobierno de los Estados Unidos puede tener determinados derechos en esta invención.
1. Introducción
Se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que modulan una o más funciones inmunitarias y usos de tales agentes terapéuticos en la prevención, el tratamiento y la gestión de enfermedades. En un aspecto, los agentes terapéuticos modulan una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7- H7CR. En otro aspecto, los agentes terapéuticos modulan la unión de B7-H7 a B7-H7CR. Los agentes terapéuticos pueden usarse en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de enfermedades en las que puede ser útil modular una o más funciones inmunitarias (por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, enfermedad autoinmunitaria y rechazo de trasplante).
2. Antecedentes
La activación de células T es un aspecto importante del sistema inmunitario. La activación de células T se requiere para respuestas inmunitarias específicas contra agentes infecciosos. La activación de células T también desempeña un papel importante en la inmunidad tumoral y en trastornos autoinmunitarios e inflamatorios. La activación de células T se inicia cuando los receptores de antígeno de células T (TCR) de células T reconocen su antígeno (Ag) específico en el contexto de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH). Aunque se requiere transducción de señales de TCR para la activación de células T sin tratamiento previo, la activación de TCR sola no es suficiente para generar una respuesta inmunitaria. Se necesita una señal secundaria, conocida como coestimulación, para la activación óptima de células T sin tratamiento previo. En particular, se requiere la transducción de señales a través del TCR y CD28, conocido como receptor coestimulador, para la activación de células T sin tratamiento previo. B7-1 (CD80) y B7-2 (CD86), conocidos como moléculas coestimuladoras, son dos ligandos para CD28. B7-1 y B7-2 se expresan normalmente en células presentadoras de antígenos (APC) profesionales. Además de la unión a CD28, B7-1 y B7-2 también se unen al receptor coestimulador conocido como CTLA-4 (CD152) en células T. Otro receptor coestimulador encontrado en células T es ICOS.
Las moléculas B7 median en tanto señales positivas como negativas para células T mediante la unión a receptores coestimuladores en células T. CD28 es el receptor más ampliamente estudiado que acepta una señal secundaria de B7-1 (CD80) y B7-2 (CD86, B70) para coestimular células T sin tratamiento previo para su activación completa en presencia de señalización de receptor de células T (Linsley et al, 1990, PNAS USA 87: 5031-5035). Por otro lado, CTLA-4, un homólogo de CD28 expresado en células T activadas y que interactúa con el mismo conjunto de ligandos, atenúa las respuestas de células T (Krummel et al., 1995, J. Exp. Med. 182: 469-465; Walnus et al., 1994, Immunity 1: 405-413). ICOS, otro homólogo de CD28, se expresa en células T activadas y coestimula la activación de células T tras la unión de un ligando distinto B7-H2 (ICOSLG, GL50, B7RP1, CD275, ICOSL, LICOS) (Hutloff et al., 1999, Nature 397: 263-266; Yoshinaga et al., 1999, Nature 402: 827-832). CD28, CTLA-4 e ICOS forman una agrupación génica estrecha en el cromosoma humano 2q33 y en el cromosoma de ratón 1, lo que sugiere que se originaron mediante una duplicación génica durante la evolución (Swallow et al., 1999, Immunity 11: 423-432). Aunque CD28 e ICOS tienen ligandos distintos, comparten una redundancia funcional significativa incluyendo su capacidad para coestimular el crecimiento, la supervivencia y la diferenciación de células T así como su requisito para la respuesta de anticuerpos (Ling et al., 2000, J. Immunol. 164: 1653-1657; Ling et al., 2001, Genomics 78: 155-168; Dong et al., 2001, Nature 409: 97-101; McAdam et al., 2001, Nature 409: 102-105; Tafuri et al., 2001, Nature 409: 105-109; Linterman et al., 2009, Immunity 30: 228-241). Se ha demostrado que tanto las señales de CD28 como de ICOS coestimulan una matriz de citocinas. Sin embargo, sólo la señal de CD28 induce un alto nivel de IL-2, mientras que ICOS estimula preferentemente IL-10 (Hutloff et al., 1999, Nature 397: 263-266).
La modulación de moléculas coestimuladoras y sus receptores permite la modulación de diversas funciones inmunitarias. Los agentes que modulan la interacción entre moléculas coestimuladoras y sus receptores pueden tener un uso beneficioso en una variedad de aplicaciones, incluyendo, por ejemplo, usos terapéuticos y profilácticos y vacunaciones. La presente invención satisface estas y otras necesidades. El documento WO 2007/149067 se refiere a polipéptidos del correceptor PHHLA2 y a sus métodos de uso. El documento US 2007/041963 se refiere a polipéptidos humanos secretados útiles para diagnosticar y tratar trastornos relacionados con proteínas humanas secretadas.
3. Sumario
En otro aspecto, se presentan en el presente documento métodos para modular una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno o más de sus ligandos. En una realización específica, se presentan en el presente documento métodos para modular una o más rutas de transducción de señales inducidas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
por la unión de B7-H7CR a B7-H7.
Se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que se basan, en parte, en el descubrimiento de la interacción receptor-ligando entre B7-H7 y B7-H7CR. Los agentes terapéuticos o composiciones de los mismos pueden usarse en cultivo celular para modular funciones de células inmunitarias (por ejemplo, proliferación de linfocitos, producción de citocinas o producción de anticuerpos). En particular, una célula puede ponerse en contacto con un agente terapéutico para modular una o más funciones de células inmunitarias. Además, pueden administrarse agentes terapéuticos a un sujeto para prevenir, tratar o gestionar determinadas enfermedades, tales como cáncer, una enfermedad infecciosa, una enfermedad autoinmunitaria, una enfermedad inflamatoria y rechazo de trasplante.
En determinadas realizaciones, se presentan en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden un agente terapéutico, y un portador farmacéuticamente aceptable. En realizaciones específicas, el agente terapéutico está presente en la composición farmacéutica en una cantidad eficaz para modular la proliferación de linfocitos T, modular una o más funciones inmunitarias, o para prevenir, tratar o gestionar cáncer, una enfermedad infecciosa, un trastorno autoinmunitario, un trastorno antiinflamatorio, enfermedad de injerto contra huésped o rechazo de trasplante de órgano. En algunas realizaciones, se presentan en el presente documento métodos para modular la proliferación de linfocitos T, modular una o más funciones inmunitarias, o prevenir, tratar o gestionar cáncer, una enfermedad infecciosa, un trastorno autoinmunitario, un trastorno antiinflamatorio, enfermedad de injerto contra huésped, o rechazo de trasplante de órgano utilizando una cantidad eficaz de agente terapéutico.
En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende: (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 en una cantidad eficaz para modular la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR, en la que la unión del anticuerpo a B7-H7CR agoniza la interacción entre B7-H7 definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y B7-H7CR, y potencia la proliferación de linfocitos T; y (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
En otra realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende: (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 en una cantidad eficaz para modular la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR, en la que la unión del anticuerpo a B7-H7CR antagoniza la interacción entre B7-H7 definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y B7-H7CR, e inhibe la proliferación de linfocitos T; y (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
3.1 TERMINOLOGÍA
Tal como se usa en el presente documento, el término “anómalo” en el contexto de expresión de un agente proteínico se refiere a un agente proteínico para el cual la expresión aumenta o disminuye en al menos el 5%, el 10%, el 20%, el 25%, el 50%, el 75%, el 85%, el 90%, o el 95%, o del 5% al 10%, del 5% al 25%, del 10% al 25%, del 10% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 75%, del 50% al 95%, del 75% al 95% con respecto a la expresión del agente proteínico por un sujeto o población normal (por ejemplo, 5 o más sujetos normales).
Tal como se usa en el presente documento, los términos “alrededor de” y “aproximadamente”, cuando se usan para modificar un valor numérico o intervalo numérico, indican que las desviaciones del 5% al 15% por encima y del 5% al 15% por debajo del valor o intervalo permanecen dentro del significado previsto del valor o intervalo citado.
Tal como se usa en el presente documento, el término “agonista(s)” se refiere a una(s) molécula(s) que se une(n) a otra molécula e induce(n) una reacción biológica. En una realización específica, un agonista es una molécula que se une a un receptor en una célula y desencadena una o más rutas de transducción de señales. Por ejemplo, un agonista incluye un anticuerpo o ligando que se une a un receptor en una célula e induce una o más rutas de transducción de señales. En determinadas realizaciones, el anticuerpo o ligando se une a un receptor en una célula, induce una o más rutas de transducción de señales, y bloquea o evita que un ligando nativo del receptor se una al receptor. En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es un agonista de la transducción de señales normalmente mediada mediante la unión de un ligando nativo (por ejemplo, B7-H7) a B7-HCR.
Tal como se usa en el presente documento, el término “agente(s) terapéutico(s) inmunoestimulante(s)” se refiere a un/unos agente(s) terapéutico(s) que induce(n), activa(n) o potencia(n) una o más respuestas o funciones inmunitarias.
Tal como se usa en el presente documento, el término “antagonista(s)” se refiere a una(s) molécula(s) que inhibe(n) la acción de otra molécula sin provocar una respuesta biológica en sí misma. En una realización específica, un antagonista es una molécula que se une a un receptor en una célula y bloquea o atenúa la actividad biológica de un agonista. Por ejemplo, un antagonista incluye un anticuerpo o ligando que se une a un receptor en una célula y bloquea o atenúa la unión del ligando nativo a la célula sin inducir una o más rutas de transducción de señales. Otro ejemplo de un antagonista incluye un anticuerpo o receptor soluble que compite con el receptor nativo en células por la unión al ligando nativo, y por tanto, bloquea o atenúa una o más rutas de transducción de señales inducidas cuando el receptor nativo se une al ligando nativo. En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es un
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
antagonista de la transducción de señales normalmente mediada mediante la unión de un ligando nativo (por ejemplo, B7-H7) a B7-HCR.
Tal como se usa en el presente documento, el término “agente(s) terapéutico(s) inhibidor(es)” se refiere a un/unos agente(s) terapéutico(s) que suprime(n) o reduce(n) una o más respuestas o funciones inmunitarias.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “anticuerpo” y “anticuerpos” se refieren a moléculas que contienen un sitio de unión a antígeno, por ejemplo, inmunoglobulinas. Los anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales, anticuerpos biespecíficos, anticuerpos multiespecíficos, anticuerpos humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos sintéticos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos policlonales, anticuerpos de un único dominio, anticuerpos camelizados, Fv de cadena sencilla (scFv), anticuerpos de cadena sencilla, fragmentos Fab, fragmentos F(ab’), Fv biespecíficos unidos por disulfuro (sdFv), intracuerpos y anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id) (incluyendo, por ejemplo, anticuerpos anti-Id y anti-anti-Id frente a anticuerpos), y fragmentos de unión a epítopo de cualquiera de los anteriores. En particular, los anticuerpos incluyen moléculas de inmunoglobulina y fragmentos inmunológicamente activos de moléculas de inmunoglobulina. Las moléculas de inmunoglobulina pueden ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase. En una realización específica, un anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humano o humanizado.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “B7-H7” se refiere o bien a un B7-H7 nativo, a un derivado de B7-H7, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “polipéptido de B7- H7” se refiere o bien a un B7-H7 nativo, a un derivado de B7-H7, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “B7-H7CR” se refiere o bien a un B7-H7CR nativo, a un derivado de B7-H7CR, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “polipéptido de B7- H7CR” se refiere o bien a un B7-H7CR nativo, a un derivado de B7-H7CR, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, los términos “complejo de B7- H7/B7-H7CR” y “complejo de B7-H7CR/B7-H7” se refieren a complejos formados como resultado de la interacción entre un B7-H7 nativo y un B7-H7CR nativo, un B7-H7 nativo y un derivado de B7-H7CR, un derivado de B7-H7 y un B7-H7CR nativo, o un derivado de B7-H7 y un derivado de B7-H7CR.
Tal como se usa en el presente documento, el término “derivado” en el contexto de proteínas o polipéptidos se refiere a: (a) un polipéptido que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el
80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al
90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntico a un polipéptido nativo; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al
90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a una secuencia de ácido nucleico
que codifica para un polipéptido nativo; (c) un polipéptido que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o de 2 a 5, de 2 a 10, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20, de 10 a 15 o de 15 a 20 mutaciones de aminoácido (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relación con un polipéptido nativo; (d) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido nativo; (e) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una secuencia de ácido nucleico que codifica para un fragmento de un polipéptido nativo de al menos 20 aminoácidos contiguos, al menos 30 aminoácidos contiguos, al menos 40 aminoácidos contiguos, al menos 50 aminoácidos contiguos, al menos 75 aminoácidos contiguos, al menos 100 aminoácidos contiguos, al menos 125 aminoácidos contiguos, al menos 150 aminoácidos contiguos, o de 20 a 50, de 25 a 75, de 25 a 100, de 25 a 150, de 50 a 75, de 50 a 100, de 75 a 100, de 50 a 150, de 75 al 150, de 100 a 150, o de 100 a 200 aminoácidos contiguos; o (f) un fragmento de un polipéptido nativo. Los derivados también incluyen un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de una forma madura que se produce de manera natural de un polipéptido de mamífero y una secuencia de aminoácidos de péptido señal heterólogo. Además, los derivados incluyen polipéptidos que se han modificado químicamente mediante, por ejemplo, glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivatización mediante grupos protectores/de bloqueo conocidos, escisión proteolítica, unión a un ligando celular u otro resto de proteína, etc. Además, los derivados incluyen polipéptidos que comprenden uno o más aminoácidos no clásicos. En una realización, un derivado se aísla o se purifica. En realizaciones específicas, un derivado conserva una o más funciones del polipéptido nativo del que se derivó.
El porcentaje de identidad puede determinarse usando cualquier método conocido por un experto en la técnica. En una realización específica, el porcentaje de identidad se determina usando el programa “Best Fit” o “Gap” del
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
paquete de software de análisis de secuencias (versión 10; Genetics Computer Group, Inc., University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wisconsin). Se ha descrito información referente a las condiciones de hibridación (por ejemplo, condiciones de rigurosidad alta, moderada y típica), véase, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente estadounidense n.° US 2005/0048549 (por ejemplo, párrafos 72-73).
Tal como se usa en el presente documento, los términos “enfermedad” y “trastorno” se usan de manera intercambiable para referirse a un estado, en particular, un estado patológico.
Tal como se usa en el presente documento, el término “ser humano anciano” se refiere a un ser humano de 65 años o más.
Tal como se usa en el presente documento, el término “cantidad eficaz” en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refiere a la cantidad de una terapia que logra un efecto profiláctico o terapéutico deseado. Se proporcionan ejemplos de cantidades eficaces en la sección 5.8.2, a continuación.
Tal como se usa en el presente documento, el término “fragmento” en el contexto de una secuencia de nucleótidos se refiere a una secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de ácido nucleico de al menos 5 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 10 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 15 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 20 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 25 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 40 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 50 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 60 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 70 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 80 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 90 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 100 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 125 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 150 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 175 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 200 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 250 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 300 bases de ácido nucleico contiguas, al menos 400 bases de ácido nucleico contiguas, o al menos 500 bases de ácido nucleico contiguas, o en el intervalo de entre 5 y 25 bases de ácido nucleico contiguas, 5 y 50 bases de ácido nucleico contiguas, 5 y 100 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 50 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 75 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 100 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 150 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 200 bases de ácido nucleico contiguas, 25 y 250 bases de ácido nucleico contiguas, 50 y 250 bases de ácido nucleico contiguas, 50 y 300 bases de ácido nucleico contiguas, 50 y 500 bases de ácido nucleico contiguas, 100 y 250 bases de ácido nucleico contiguas, 100 y 500 bases de ácido nucleico contiguas o 250 y 500 bases de ácido nucleico contiguas de la secuencia de nucleótidos del gen de interés, por ejemplo, el gen de B7-H2, B7-H7, ICOS, B7-H7CR, CD28 o CTLA-4 o la región codificante de los mismos. El ácido nucleico puede ser ARN, ADN, o una variante químicamente modificada del mismo. En una realización específica, el fragmento es un fragmento del gen de B7-H2, B7-H7, ICOS, B7-H7CR, CD28 o CTLA-4. En otra realización específica, el fragmento es un fragmento de la región codificante del gen de B7-H2, B7-H7, ICOS, B7-H7CR, CD28 o CTLA-4. En determinadas realizaciones, el fragmento de la secuencia de ácido nucleico de interés codifica para un polipéptido que conserva una o más funciones del polipéptido codificado por la secuencia de ácido nucleico de interés, es decir, es un fragmento funcional. Por ejemplo, el polipéptido conserva la capacidad de interaccionar con otra proteína o de inducir una o más rutas de transducción de señales.
Tal como se usa en el presente documento, el término “fragmento” en el contexto de un fragmento de un agente proteínico (por ejemplo, una proteína) se refiere a un fragmento que es de 8 o más aminoácidos contiguos, 10 o más aminoácidos contiguos, 15 o más aminoácidos contiguos, 20 o más aminoácidos contiguos, 25 o más aminoácidos contiguos, 50 o más aminoácidos contiguos, 75 o más aminoácidos contiguos, 100 o más aminoácidos contiguos, 150 o más aminoácidos contiguos, 200 o más aminoácidos contiguos, o en el intervalo de entre 10 y 300 aminoácidos contiguos, 10 y 200 aminoácidos contiguos, 10 y 250 aminoácidos contiguos, 10 y 150 aminoácidos contiguos, 10 y 100 aminoácidos contiguos, 10 y 50 aminoácidos contiguos, 50 y 100 aminoácidos contiguos, 50 y 150 aminoácidos contiguos, 50 y 200 aminoácidos contiguos, 50 y 250 aminoácidos contiguos, 50 y 300 aminoácidos contiguos, 25 y 50 aminoácidos contiguos, 25 y 75 aminoácidos contiguos, 25 y 100 aminoácidos contiguos o 75 y 100 aminoácidos contiguos de un agente proteínico, por ejemplo, polipéptidos de B7-H7, B7-H7CR, B7-H2, ICOS, CD28 o CTLA-4. En una realización específica, un fragmento de un agente proteínico conserva una o más funciones del agente proteínico, es decir, es un fragmento funcional. Por ejemplo, un fragmento de un agente proteínico conserva la capacidad de interaccionar con otra proteína o de inducir una o más rutas de transducción de señales.
Tal como se usa en el presente documento, el término “fragmento funcional”, en el contexto de un agente proteínico, se refiere a una porción de un agente proteínico que conserva una o más actividades o funciones del agente proteínico. Por ejemplo, un fragmento funcional de un polipéptido de B7-H7 puede conservar la capacidad de unirse a uno o más de sus receptores (por ejemplo, B7-H7CR) y/o inducir o activar una o más rutas de transducción de señales mediadas por la unión del polipéptido de B7-H7 a uno o más de sus receptores (por ejemplo, B7-H7CR).
Tal como se usa en el presente documento, el término “heterólogo” se refiere a una entidad que no se halla en la naturaliza asociada con otra entidad.
Tal como se usa en el presente documento, el término “adulto humano” se refiere a un ser humano que tiene 18
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
años o más.
Tal como se usa en el presente documento, el término “niño humano” se refiere a un ser humano que tiene de 1 año a 18 años.
Tal como se usa en el presente documento, el término “lactante humano” se refiere a un ser humano recién nacido a de 1 año.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “ICOS” se refiere o bien a ICOS nativo, a un derivado de ICOS, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento y a menos que se especifique lo contrario, el término “polipéptido de ICOS” se refiere o bien a ICOS nativo, a un derivado de ICOS, o bien a ambos.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “se une inmunoespecíficamente”, “reconoce inmunoespecíficamente”, “se une específicamente” y “reconoce específicamente” son términos análogos en el contexto de anticuerpos y se refieren a moléculas que se unen específicamente a un antígeno (por ejemplo, epítopo o complejo inmunitario) tal como entiende un experto en la técnica. Una molécula que se une específicamente a un antígeno puede unirse a otros péptidos o polipéptidos con menor afinidad tal como se determina mediante, por ejemplo, inmunoensayos (por ejemplo, ELISA), resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, BIAcore®), un ensayo KinEx (usando, por ejemplo, un instrumento KinExA 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, ID)), u otros ensayos conocidos en la técnica. En una realización específica, las moléculas que se unen específicamente a un antígeno se unen al antígeno con una constante de disociación (es decir, Ka) que es al menos de 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log o mayor que la Ka cuando las moléculas se unen a otro antígeno. En otra realización específica, las moléculas que se unen específicamente a un antígeno no reaccionan de manera cruzada con otras proteínas.
Tal como se usa en el presente documento, el término “en combinación” se refiere al uso de más de una terapia (por ejemplo, uno o más agentes profilácticos y/o terapéuticos). El uso del término “en combinación” no limita el orden en el que se administran las terapias a un sujeto con una enfermedad o trastorno, o la vía de administración. Puede administrarse una primera terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico) antes de (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas antes), de manera concomitante con, o posterior a (por ejemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas o 12 semanas después) la administración de una segunda terapia (por ejemplo, un agente profiláctico o terapéutico) a un sujeto con una enfermedad o trastorno o un síntoma de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “gestionar” “que gestiona” y “gestión”, en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto, se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de una terapia, que no da como resultado la cura de una enfermedad. En determinadas realizaciones, a un sujeto se le administran una o más terapias para “gestionar” una enfermedad o trastorno para prevenir la evolución o el empeoramiento de los síntomas asociados con una enfermedad.
Tal como se usa en el presente documento, el término “B7-H7 nativo” en el contexto de proteínas o polipéptidos se refiere a cualquier secuencia de aminoácidos de B7-H7 que se produce de manera natural, incluyendo formas maduras e inmaduras o precursoras. Los ejemplos no limitativos de los n.os de registro para la secuencia de aminoácidos de B7-H7 de mamífero nativo incluyen: O9UM44-1 (Homo sapiens), NP_009003 (GI: 5901964, Homo sapiens) y AAD48396 (GI: 15726285, Homo sapiens). Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de la forma inmadura/precursora de B7-H7 humano nativo, que comprende el péptido señal (subrayado) y el B7-H7 nativo humano maduro (la secuencia de aminoácidos tras el péptido señal):
MKAOTALSFFLILITSLSGSOGIFPLAFFIYYPMNEQIYIGRLDEDTTTiPSSFERGSEVVT
HWKYQDSYKVHSYYKGSDHLESQDPRYANRTSLFYNEIQNGNASLFFRRVSZZZ>
EGIYTCYVGTAIQVITNKVVLKVGVFLTPVMKYEKRNTNSFLICSVLSVYPRPIITWKMD
NTPISENNMEETGSLDSFSINSPLNITGSNSSYECTIENSLLKQTWTGRWTMKDGYH
KMQSEHVSLSCQPVNDYFSPNQDFKVTWSRMKSGTFSVFAYYFSSSQNTIINESR
FSWNKEFINQSDFSMNFMDFNFSDSCEYFCNISSDEYTFFTIHTVHVEPSQETASH
NKGLWILVPSAILAAFLLIWSVKCCRAOLEARRSRHPADGAOOERCCVPPGERCPS
APDNGEENVPLSGKV
(SEQ ID NO: 3).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
En algunas realizaciones, B7-H7 nativo es la forma inmadura o precursora de un B7-H7 de mamífero que se produce de manera natural. En otras realizaciones, B7-H7 nativo es la forma madura de un B7-H7 de mamífero que se produce de manera natural. En una realización específica, B7-H7 nativo es la forma precursora de B7-H7 humano que se produce de manera natural. En otra realización, B7-H7 nativo es la forma madura de B7-H7 humano que se produce de manera natural. En una realización, la proteína/el polipéptido de B7-H7 nativo se aísla o se purifica.
El polipéptido de B7-H7 humano se denomina de otro modo proteína 2 de asociación a repetición terminal larga retrovirus endógeno humano-H (HHLA2) en la bibliografía/bases de datos pero la función de B7-H7 no se identificó previamente. El polipéptido de B7-H7 humano tiene 414 aminoácidos de longitud y se ha notificado que contiene lo siguiente: una secuencia señal, un dominio extracelular, 3 dominios de tipo inmunoglobulina (tipo Ig), un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático. En particular, se ha notificado que el polipéptido de B7-H7 humano contiene un dominio 1 de tipo V de tipo Ig, un dominio de tipo C-1 de tipo Ig y un dominio 2 de tipo V de tipo Ig. Se ha notificado que el B7-H7 humano contiene lo siguiente: una secuencia señal en los residuos de aminoácido 1 a 22 de la secuencia en el n.° de registro O9UM44-1, un dominio 1 de tipo V de tipo Ig en los residuos de aminoácido 61 a 131 de la secuencia en el n.° de registro O9UM44-1, un dominio de tipo C-1 de tipo Ig en los residuos de aminoácido 138 a 222 de la secuencia en el n.° de registro O9UM44-1, un dominio 2 de tipo V de tipo Ig en los residuos de aminoácido 235 a 328 de la secuencia en el n.° de registro O9UM44-1 y un dominio transmembrana en los residuos de aminoácido 345 a 365 de la secuencia en el n.° de registro O9UM44-1. La superficie de contacto de dímero predicha para el polipéptido de B7-H7 humano son los residuos de aminoácido 141-144, 156, 158, 160, 162, 193196, 198, 200, 201, 224 y 225. Los sitios de glicosilación con unión a N predichos para el polipéptido de B7-H7 humano se encuentran en los residuos de aminoácido 90, 103 y 318. Las variaciones naturales de polipéptido de B7-H7 humano incluyen I30T, N344K y S346R (UniProt Q9UM44). Con respecto a SEQ ID NO: 3 anterior, el péptido señal notificado está subrayado (péptido señal), los dominios de IgV están en negrita (dominios de IgV), el dominio de IgC está en cursiva y en negrita (dominio de IgC), el solapamiento de dominios de IgV/IgC está en cursiva (solapamiento de IgV/IgC), el dominio transmembrana está subrayado y en negrita (dominio transmembrana). Los dominios de Ig de B7-H7 humano comprenden un par de cisteínas conservadas que pueden formar un enlace disulfuro. Los residuos de Cys en las posiciones 159 y 210 del dominio de IgC pueden formar tales enlaces disulfuro. Los residuos de Cys en las posiciones 243 y 317 del segundo dominio IgV pueden formar tales enlaces disulfuro.
Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de la forma inmadura/precursora de B7-H7 de Pan troglodytes nativo, que comprende el péptido señal (subrayado) y el B7-H7 de Pan troglodytes nativo (la secuencia de aminoácidos tras el péptido señal):
MKAOTALSFFLILITSLSGSOAIFPMAFSTYVPVNEOIVIGRLDEDUFPSSFFRGSFVV
IHWKYQDSYKVHSYYKGSDHLESQDPRYTNRTSLFYNEIQGNASLFSPRVSZLDA
GIYTCYVGTAIQVITNKVVLKVGVFLTPVIIIKYEKRNTNSFLICSVLSVYPRPIITWKMDN
TPISENNMEETGSLDSFSINSPLNITGSNSSYECTIENSLLKQTWTGRWTMKDGYHK
MQSEHVSLSCQPVNDYFSPNQDFICVTWSRMKSGTFSILAYYLSSSQNTIINESRFS
WNKELINQSDFSMNLIVIDLNLSDSGEYLCNISSDEVTLLTIHTVHVEPSQETASHN
KGLWILVPSVILAAFLLIWTVKRCRAOPEARRSRHPADGAOOERYCVPPGEHCPSA
PDNGEENYRSVSGKV (SEQ ID NO: 17)
Con respecto a SEQ ID NO: 17, la señal notificada está subrayada (péptido señal), los dominios de IgV están en negrita (dominios de IgV), el dominio de IgC está en cursiva y en negrita (dominio de IgC), el solapamiento de IgV/IgC está en cursiva (solapamiento de IgV/IgC), y el dominio transmembrana está subrayado y en negrita (dominio transmembrana).
Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de la forma inmadura/precursora de B7-H7 de Macaca mulatta nativo, que comprende el péptido señal (subrayado) y el B7-H7 de Macaca mulatta nativo (la secuencia de aminoácidos tras el péptido señal):
MKAOTSFFLILISSLSGSOGIFLSAFFTYVPMNEOIIIGRLGEDTTEPSSEERGSEWTH
WKY QDS YN S YN VHS Y YKGS GRLES QD TRYANRTSLF YNEIQN GN ASLFFRRL.SX
LDEGIYTCYVGTAIQAITNKWLKVGVFLTPMMKYEKRNTNSFLICNVLSVYPRPHTWK
MDNTPISENNMQETGSLGPFSINSTLNITGSNSSYECTIENSLLKQTWTGRWTMKDG
LHKMQSEHVSLSCELVNDYFSPNQDFKVTWSRMESGISSILAYYLSSSQNTTFYE
SRFSWNKELKNQSDFSMNLTDLSLSDSGEYLCNISSDEYTLLTIHTVHVEPSQETA
SDNKGLWILVASLILVLCLIWLIWKVKCSTAOIEARRSRYPADGAO (SEQ ID NO:18)
Con respecto a SEQ ID NO: 18, la señal notificada está subrayada (péptido señal), los dominios de IgV están en negrita (dominios de IgV), el dominio de IgC está en cursiva y en negrita (dominio de IgC), el solapamiento de
IgV/IgC está en cursiva (dominio de IgV/IgC), y el dominio transmembrana está subrayado y en negrita (dominio transmembrana).
Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa que comprende una secuencia parcial del B7-H7 5 bovino nativo:
MNEQTVTGRLGEDVILPCSFESGPNWTHWKNQDTNVYSYYRDSDQLEKQDPRYVN RISLFHGEIHNGNASLSFRRLTLQDEGIYVCYVGTSLGKITKKIVLKVGAFVTPVMKY EKNTTNSFLICNYLS YFPYPIIT WKYDNNTSISENN GKE YGSLGPFHIN SRVNETGSN S S Y QCEIENPLLKQTWT GRWTRKDKERNTKRKEMHLQ S SLEVKQIFS VNLHT VDLQYY FSIK (SEQ ID NO: 19)
La figura 23 muestra una alineación de las secuencias de aminoácidos de B7-H7 humano nativo representativo, B7- 10 H7 de Pan troglodytes nativo y B7-H7 de Macaca mulatta nativo.
15
20
Tal como se usa en el presente documento, los términos “B7-H7 nativo” en el contexto de ácidos nucleicos se refieren a cualquier secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para B7-H7, incluyendo las formas maduras e inmaduras o precursoras. Los ejemplos no limitativos de n.os de registro para la secuencia de nucleótidos de B7-H7 de mamífero nativo incluyen: BC035971 (GI:23272002; Homo sapiens) y AK126162 (GT:5726284; Homo sapiens). Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para la forma inmadura/precursora de B7-H7 humano nativo, que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica para el péptido señal (subrayado) y la secuencia de nucleótidos que codifica para el B7-H7 nativo humano maduro (en cursiva):
1 agttctcttc 61 ccctaattca
aagtcatgta atcgactttt
agttgggaac acttcatttt
ttgaattagt tttcagtttc attttgtttt
ccccaattca agttgggaac acttccttgg
121 181 241 301 361 421
tatttccttg aggctgaggc agttttactg ggaaggagag tactaaagcc gcacagacag ctacatggac aggagaatcg ttggaagcct catgtaggag tagaacgcac cactgtcttt tttagcaaat cttgaacccg aactcacagg aatactaacc ctcctctgca cttcctcatt gctactttac ggaggcggag agagattatg ctgcacagat tgactaatat ctcataacat tctccttcca gttacagtga caatacagtc tgtgatggtg gttctgcaca ctctgagtgg gctactcagg gccttttcct ctgaagtcaa atgtggaata agacatgaag atctcaaggc
481
a tattccctt tggctttctt catttatgtt cctatgaatg aacaaatcgt cattggaaga
541
cttgatgaag atataattct cccttcttca tttgagaggg gatccgaagt cgtaatacac
601
tggaagtatc aagatagcta taaggttcat agttactaca aaggcagtga ccatttggaa
661
agccaagatc ccagatatgc aaacaggaca tcccttttct ataatgagat tcaaaatggg
721
aatgcgtcac tatttttcag aagagtaagc cttctggacg aaggaattta cacctgctat
781
gtaggaacag caattcaagt gattacaaac aaagtggtgc taaaggtggg agtttttctc
841
acacccgtga tgaagtatga aaagaggaac acaaacagct tcttaatatg cagcgtgtta
901
agtgtttatc ctcgtccaat tatcacgtgg aaaatggaca acacacctat ctctgaaaac
961
aacatggaag aaacagggtc tttggattct ttttctatta acagcccact gaatattaca
1021
ggatcaaatt catcttatga atgtacaatt gaaaattcac tgctgaagca aacatggaca
1081
gggcgctgga cgatgaaaga tggccttcat aaaatgcaaa gtgaacacgt ttcactctca
1141
tgtcaacctg taaatgatta tttttcacca aaccaagact tcaaagttac ttggtccaga
1201
atgaaaagtg ggactttctc tgtcctggct tactatctga gctcctcaca aaatacaatt
1261
atcaatgaat cccgattctc atggaacaaa gagctgataa accagagtga cttctctatg
1321
aatttgatgg atcttaatct ttcagacagt ggggaatatt tatgcaatat ttcttcggat
1381
gaatatactt tacttaccat ccacacagtg catgtagaac cgagccaaga aacagcttcc
1441
cataacaaag gcttatggat tttggtgccc tctgcgattt tggcagcttt tctgctgatt
1501
tggagcgtaa aatgttgcag agcccagcta gaagccagga ggagcagaca ccctgctgat
1561
ggagcccaac aagaaagatg ttgtgtccct cctggtgagc gctgtcccag tgcacccgat
1621
aatggcgaag aaaatgtgcc tctttcagga aaagtatagg aaatgagaga agactgtgac
1681
aactcatgac ctgcatcctt aatatccagt gacttcatct cccctttctt caccacaatt
1741
ccaggcaatg gcctgtcgga ccagacaatt ctaccactgc aaagagttgt aaccattttc
1801
tggtatcaca tttatttttc aagacatact tttcaagaca tcattcactg acccactacc
1861
tgcattgagt ataaatgcct ggatgttaag gattccaatt taactttgaa aagaactgtc
1921
tcattcattt acatttctgt tacagtcagc ccaggaggtt acagtgagct ctccactaag
1981
aatctggaag aaatgcatca ctaggggttg attcccaatc tgatcaactg ataatgggtg
2041
agagagcagg taagagccaa agtcacctta gtggaaaggt taaaaaccag agcctggaaa
2101
ccaagatgat tgatttgaca aggtatttta gtctagtttt atatgaacgg ttgtatcagg
2161
gtaaccaact cgatttggga tgaatcttag ggcaccaaag actaagacag tatctttaag
2221
attgctaggg aaaagggccc tatgtgtcag gcctctgagc ccaagccaag catcgcatcc
2281
cctgtgattt gcacgtatac atccagatgg cctaaagtaa ctgaagatcc acaaaagaag
2341
taaaaatagc cttaactgat gacattccac cattgtgatt tgttcctgcc ccaccctaac
2401
tgatcaatgt actttgtaat ctcccccacc cttaagaagg tactttgtaa tcttccccac
2461
ccttaagaag gttctttgta attctcccca cccttgagaa tgtactttgt gagatccacc
2521
ctgcccacaa aacattgctc ttaacttcac cgcctaaccc aaaacctata aciaactaatg
2581
ataatccatc acccttcgct gactctcttt tcggactcag cccacctgca cccaggtgaa
2641
ataaacagct ttattgctca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa
(SEQ ID NO: 4).
Se proporciona otra secuencia de nucleótidos representativa que codifica para el B7-H7 humano nativo:
AT GAAGGC AC AG AC AGC ACT GT CTTTCTTCCT C ATTCT C AT AAC AT CTCT G AGT GG A T CT CAAGGCAT ATTCCCTTT GGCTTT CTT CATTT AT GTT CCT AT GAAT GAACAAAT CG T C ATT GGAAG ACTT G AT GAAG AT AT AATT CTCCCTTCTT C ATTT G AG AGGGG AT CCG 5 AAGTCGTAATACACTGGAAGTATCAAGATAGCTATAAGGTTCACAGTTACTACAAA
GGCAGTGACCATTTGGAAAGCCAAGATCCCAGATATGCAAACAGGACATCCCITTIC T AT AAT G AG ATT C AAAAT GGG A ATGCGT CGCT ATTTTT C AGAAG AGT AAGCCTT CTG G ACGAAGGAATTT AC ACCT GCT AT GT AGG A AC AGC AATT CAAGT G ATT AC AAACAA AGT GGIGCT AAAGGT GGG AGTITTICT C AC ACCCGT GAT GAAGT AT GAAA AG AGGAA C ACAAAC AGCTT CTT AAT AT GC AGCGT GTT AAGT GTTT AT CCT CGTCCAATT AT C ACG T GGAAAAT GGAC AACACACCT AT CT CT GAAAACAACAT GGAAGAAAC AGGGTCTTT GG ATT CTTTTTCT ATT AAC AGCCC ACT G A AT ATT AC AGG AT C AAATT C AT CTT AT GAA T GT AC AATT GAAAATT C ACT GCT GAAGC AAAC AT GG AC AGGGCGCT GG ACG AT G A A AG AT GGCCTT C AT AAAATGCAA AGT GAAC ACGTTT C ACTCT C AT GT C A ACCT GT AAA T G ATT ATTTTT C ACCAAACCAAGACTT CAAAGTT ACTT GGT CC AGAAT GAAAAGTGG G ACTTT CT CT GT CCTGGCTT ACT AT CT G AGCTCCT C ACAAA AT AC AATT AT C AAT GAA TCCCG ATT CT C AT GGAAC AAAG AGCT GAT AA ACC AG AGT G ACTT CTCT AT G AATTT G ATGGATCTTAATCTTTCAGACAGIGGGGAATATTTATGCAATATTICTICGGATGAATA T ACTIT ACTT ACC AT CC AC ACAGTGCAT GTAGAACCGAGCCAAG AAAC AGCTT CCCA T AACAAAGGCTTATGG ATTTTGGTGCCCTCTGCGATTTTGGCAGCTTTTCT GCT GATT T GG AGC GT AAAAT GTT GCAG AGCCC AGCT AG AAGCC AGG AGG AGC AG AC ACCCT GC T GAT GGAGCCCAACAAGAAAGAT GTTGT GT CCCT CCT GGT GAGCGCT GT CCCAGT GC ACCCG AT AAT GGCGAAG AAAAT GT G AGGT CT GTTT CT GGGAAAGT G (SEQ ID NO:
13)
Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para Pan trolodytes:
AT GAAGGC AC AGAC AGCACT GTCTTT CTTCCT CATT CT C AT AAC AT CT CT GAGT GGA T CT C AAG CC AT ATT CCCT AT GGCTTT CTCC ACTT AT GTTCCT GT GAAT GAAC AAAT CG T CATT GGAAGACTT GAT GAAGAT ATAATT CT CCCTT CTT CATTT GAG AGGGGATCGG AAGT CGT AAT AC ACT GGAAGT AT CAAG AT AGCT ATAAGGTT C AC AGTT ACT ACAAA GGCAGTGACCATTTGGAAAGCCAAGATCCCAGATATACAAACAGGACATCCCTTTTC T AT AAT GAG ATT C A AGGGAAT GCGT CGCT ATTTT CCCC AAG AGT AAGCCTT CT GGAC GAAGGAATTTACACCTGCTATGTAGGAACAGCAATTCAAGTGATTACAAACAAAGT GGTGCT AAAGGT GGG AGTTTTT CT CAC ACCCGT GAT GAAGT AT GAAAAG AGGAAC A C AAAC AGCTT CTT AAT AT GC AGCGT GTT AAGT GTTT AT CCT CGTCCAATT AT C ACGT G GAAA AT GGAC AAC AC ACCT AT CTCT G AAAAC AAC ATGGAAGAA AC AGGGT CTTTGG ATT CTTTTTCT ATT AAC AGCCC ACT GAAT ATT AC AGG AT C AAATT C AT CTT AT GAAT G T ACA ATT GAAAATT C ACT GCT G AAGCAA AC AT GGAC AGGGCGCT GG ACAAT GAAAG AT GGCCTTC AT AAAAT GCAAAGT GAACACGTTTC ACTCT CAT GT CAACCT GTAAAT G ATT ATTTTT C ACCAAACCAAGACTT CAAAGTT ACTT GGT CC AGAAT G AAAAGT GGG A CTTTCTCT ATCCIGGCTT ACT AT CT G AGCTCCT CAC AAAAT AC AATT AT CAAT GAAT C CCGATICT CAT GGAAC AAAG AGCT GATAAACC AGAGT GACTT CT CT AT GAATTTGAT GG AT CTT AAT CTTT C AGAC AGT GGGG A AT ATTT AT GC A AT ATTT CTT C AG AT GAAT A TACTTTACTTACCATCCACACAGTGCATGTAGAACCAAGCCAAGAAACAGCTTCCCA T AAC AAAGGCTT ATGG ATTTT GGT GCCCTCT GT G ATTTT GGCAGCTTTT CTGCT GATT T GGAC AGT AAAACGTT GCAGAGCCCAGCCAGAAGCCAGGAGGAGC AGAC ACCCT G CT GAT GGAGCCCAACAAGAAAGAT ATT GT GT CCCT CCTGGTG AGCACT GTCCC AGT G C ACCCG AT AAT GGC GAAG AAAAT GT G AGGT CT GTTT CT GGGAAAGT G (SEQ ID NO:
5 14)
Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para Macaca mulatta:
5
10
15
AT GAAGGC AC AG ACGT CTTTCTTCCT C ATTCT C AT AT C AT CT CT G AGT GG AT CT CAAG GC ATATT CCTTTC AGCTTT CTT CACTT ACGTTCCTAT GAATGAACAAAT CAT C ATT GG AAG ACTT GGT GAAG AT AT AATT CTCCCTTCTT C ATTT G AG AGGGG AT CCG A AGTT GT AAT AC ACT GG A AGT AT C AAG AC AGCT AC AAT AGCT AC A AT GTIC AC AGTT ACT ACAA AGGCAGTGGCCGTTTGGAAAGCCAAGATACCAGATATGCAAACAGGACATCCCTTT T CT AT AAT G AG ATT C AAAATGGGAAT GCGT CT CT ATTTTT C AG AAG ATT AAGCCTT C TGGATGAAGGAATTT AT ACCTGCT AT GT AGGAAC AGCAATTCAAGCGATT ACAAAC AAAGT GGT GCT AAAGGT GGG AGTTTTT CT C AC ACCC AT G AT G AAGT AT GAAAAG AG GAAC ACAAAC AGCTT CTT AAT AT GCAACGT GTTAAGT GTTT AT CCTCGTCCAATT AT C ACGT GG AAAAT GG AC A AC AC ACCT AT CT CT GAAA ACAAT AT GC AAGAAAC AGGGT CTTT GGGTCCTTTTTCG ATT AAC AGC ACGCT GAAT ATT AC AGG AT C AAATT CAT CTT A T GAAT GTACAATT GAAAATT CACTT CT GAAGCAAAC AT GGACAGGGCGCT GGAC AA T GAAAG AT GGCCTT CAT AAAAT GC AAAGT G A AC AT GTTT C ACT CT CAT GT GAACTT G T AAAT G ATT ATTTTT CACCAAACC AAG ACTT CAAAGTT ACTTGGTCC AGAAT GGAAA GT GGG ATTT CCTCT ATCCT GGCTT ACT AT CT G AGCTCCT C ACAAAAT AC AACTTT CT A T GAAT CC CG ATT CT CAT GGAAC AAAG AGCT GAAAAACC AG AGT G ACTT CTCT AT G A ATTT G ACGG AT CTT AGT CTTTC AG AC AGT GGGGAAT ATTT GT GC AAT ATTT CTTCGG A T GAAT AT ACTTT ACT C ACC AT AC AC ACGGT GC ACGT AGAACC AAGCC AAG AAAC AG CTTCCG AT AAC AAAGGCTT AT GG ATTTT GGT GGCC AGT CT G ATTTT GGTGCTCT GT CT GATTT GGCTG ATTT GGAAAGT AAAAT GTTCCAC AGCCCAAATAG AAGCC AGGAGGA GCAGATACCCTGCTGATGGAGCCCAA (SEQ ID NO: 15)
Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para bovino:
AT GAAT GAGC AAATCGTC ACTGGAAGACTAGGTGAAGATGTCATTCTCCCTTGCTC A TTT GAGAGT GGACCC AAT GT CGTAATTCACT GGAAGAACCAAGAT ACCAAT GTTTAC T CAT ACT ACAGAGAC AGCGACCAGTIGGAAAAGCAAGATCCC AGAT AT GTAAACAG G AT AT CCCT CTICC AT GGT G AG ATT C ACAAT GGGAAT GCCTCCCTGTCTTT C AGAAG A TTAACCCTT C AGG AT GAAGG AAT CT ACGT AT GCT AT GT GGG AAC AT CACTT GG AAAA AT CAC AAAG AAAAT AGTCCT AAAAGT GGG AGCTTTT GT C AC ACCT GT G AT G A AGT AT GAAAAG AAT ACC ACC AAC AGCTT CTT AAT AT GC A AT GT GTT AAGT GTTTTTCCTT AT CC AATT AT C AC ATGG AAAGT GG AT AAT AAT AC AT CT AT CTCT G AAAAC AATGGG AA AGAAGTT GG AT CTTTGGGTCCTTTT CAT AT AAAC AGC AG AGT AAAT ATT AC AGG AT C AAATT CAT CAT AT C AGT GT G AAATT G AAAACCC ACT GCT G A AGC AAAC AT GG AC AG GAAGATGGACAAGGAAAGATAAAGAAAGGAATACAAAAAGGAAGGAAATGCATTT GC AG AGTT C ACT AGAAGT AAAGC AAATTTTTT CT GT AAAT CTCC AT AC AGTGG ACTT AC AAT ATT AT TT C AGT AT AAAA (SEQ ID NO: 16)
En una realización específica, el ácido nucleico es un ácido nucleico aislado o purificado. En algunas realizaciones, los ácidos nucleicos codifican para la forma inmadura o precursora de un B7-H7 de mamífero que se produce de manera natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos codifican para la forma madura de un B7-H7 de mamífero que se produce de manera natural. En una realización específica, los ácidos nucleicos que codifican para B7-H7 nativo codifican para la forma precursora de B7-H7 humano que se produce de manera natural. En otra realización, los ácidos nucleicos que codifican para B7-H7 nativo codifican para la forma madura de B7-H7 humano que se produce de manera natural.
Tal como se usa en el presente documento, el término “B7-H7CR nativo” en el contexto de proteínas o polipéptidos se refiere a cualquier secuencia de aminoácidos de B7-H7CR que se produce de manera natural, incluyendo formas maduras e inmaduras o precursoras. Los ejemplos no limitativos de n.os de registro para la secuencia de aminoácidos de B7-H7CR de mamífero nativo incluyen: Q96BF3-1 (Homo sapiens), Q96BF3-2 (Homo sapiens) y NP_653216.1 (GI: 21389429; Homo sapiens). Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de la forma inmadura/precursora de una isoforma de B7-H7 humano nativo, que comprende el péptido señal (subrayado) y el B7-H7CR nativo humano maduro (en cursiva):
5
10
15
20
25
30
35
MGSPGMYLGL LVOIWALOEA SSLSVOOGPNLLOVROGSOA TLVCQVDQAT A WERLRVKWT KDGAILCQPYITNGSLSLGV CGPQGRLSWQ APSHLTLQLD PVSLNHSGA Y VCWAA VEIPE LEEAEGNITR LFVDPDDPTQ NRNRIASFPG FLFVLLGVGSMGVAAIVWGA WFWGRRSCQQ RDSGNSPGNA FYSNVLYRPR GAPKKSEDCS GEGKDQRGQSIYSTSFPQPA PRQPIILASRP CPSPRPCPSP RPGHPVSMVR VSPRPSPTQQ PRPKGFPKVG EE
(SEQ ID NO: 5). La secuencia de aminoácidos de una segunda isoforma de B7-H7 humano nativo difiere de esta primera isoforma en que los residuos de aminoácido 186 a 189 de SEQ ID NO: 5 faltan en la segunda isoforma.
Se proporciona otra secuencia de aminoácidos representativa de B7-H7 humano nativo:
MGSPGMVLGLLVQIWALQEASSLSVQQGPNLLQVRQGSQATLVCQVDQATAWERL RVKWTKDGAILCQPYITNGSLSLGVCGPQGRLSWQAPSHLTLQLDPVSLNHSGAYV CWAAVEIPELEEAEGNITRLFVDPDDPTQNRNRIASFPGFLFVLLGVGSMGVAAIVW GAWFWGRRSCQQRDSGNSPGNAFYSNVFYRPRGPPKKSEDCSGEGKDQRGQSIYST SFPQPAPRQPHFASRP CPSPRPCPSPRPGHPVSMVRVSPRPSPTQQPRPKGFPKVGEE (SEQ ID NO: 20)
Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de B7-H7CR de Pan troglodytes nativo:
MGSPGMYFGEFYQIWAFQEASSFSYQQGPNEFQYRQGSQATFYCQYDQAPAWERF RVKWTKDGAIFCQPYITNGSESFGVCGPQGRFSWQAPSHFTEQFDPVNFNHSGAYV C WA AVEIPEFEE AE SNITRFF VDPDDPT QNRNRIT SFPGFFF VFFG V G S G AVAAIVEG AWFWGRRSCQQRDSGNSPGNAFYSNVLYRPRGAPKKSEDCSGEGKDQRGQSIYSTS FPQPATRQPHLAPRPCPSPRPCPSPRPGHPVSMVRVSPRPSPTQQPRPKGFPKVG EE (SEQ ID NO: 21)
Se proporciona una secuencia de aminoácidos representativa de B7-H7CR de Bos taurus nativo:
MGSPGTVFVFFVQFWVFQGVTGFTVQQAPKFFQVRQDSQVTRACQVMHAQAWEW
FRVEWIKDADIFCQTHIINGSFSKDVCGPQGWFSWQPPGNFTFQFNHVSFNDSGFYV
CGATVE1PVWEEAQGNGTQFFVERGVWFQDHSFSGFYFAPFVTGAVAVAVFAFGA
GIWGRRRCRNGDAGSPIYSNVFYRPRRAARKKAWPVERKVFDSEDQKGQSFYSISFP
QRPKSHMAPKFCPSPRPIHPISAVRISPGPGSSGQPRSRGFFEVGREIRTAGEPEKT
YPQRFYKDVTYS (SEQ ID NO: 22)
La figura 24 muestra una alineación de las secuencias de aminoácidos de B7-H7CR humano nativo, B7-H7CR de Pan troglodytes nativo y B7-H7CR de Bos taurus nativo representativas.
En algunas realizaciones, B7-H7CR nativo es la forma inmadura o precursora de un B7-H7CR de mamífero que se produce de manera natural. En otras realizaciones, B7-H7CR nativo es la forma madura de un B7-H7CR de mamífero que se produce de manera natural. En una realización específica, B7-H7CR nativo es la forma precursora de B7-H7CR humano que se produce de manera natural. En otra realización, B7-H7CR nativo es la forma madura de B7-H7CR humano que se produce de manera natural. En una realización, la proteína/el polipéptido de B7-H7 nativo se aísla o se purifica.
El polipéptido de B7-H7CR humano se denomina de otro modo proteína 2 que contiene dominio transmembrana y de inmunoglobulina (TMIGD2) en la bibliografía/bases de datos pero la función de B7-H7CR no se dilucidó previamente. Al menos una isoforma de polipéptido de B7-H7CR humano tiene 282 aminoácidos de longitud y se ha notificado que contiene lo siguiente: una señal de secuencia, un dominio de tipo inmunoglobulina (tipo Ig), un dominio transmembrana y un dominio citoplasmático. En particular, al menos una isoforma de B7-H7CR humano se ha notificado que contiene lo siguiente: una señal de secuencia en los residuos de aminoácido 1 a 22 de la secuencia en el n.° de registro Q96BF3-1, un dominio de tipo Ig en los residuos de aminoácido 23 a 129 de la secuencia en el n.° de registro Q96BF3-1, un dominio extracelular en los residuos de aminoácido 23 a 150 de la secuencia en el n.° de registro Q96BF3-1, un dominio transmembrana en los residuos de aminoácido 151 a 171 de la secuencia en el n.° de registro Q96BF3-1 y un dominio citoplasmático en los residuos de aminoácido 172 a 282 de la secuencia en el n.° de registro Q96BF3-1. El dominio citoplasmático de B7-H7CR humano incluye una región rica
en prolina (residuos de aminoácido 227-277), que puede estar implicada en la unión a proteínas adaptadoras que contienen el dominio SH3. El dominio citoplasmático de B7-H7CR humano incluye un residuo de serina (S220), que puede fosforilarse. También se predice que B7-H7CR tiene sitios de glicosilación con unión a N en los residuos de aminoácido 73, 105 y 127. El dominio de IgV de B7-H7CR humano comprende un par de cisteínas conservadas en 5 las posiciones 44 y 112 que pueden formar un enlace disulfuro. Los residuos de Cys en las posiciones 67 y 81 también pueden formar enlaces disulfuro estructuralmente importantes. Además, se encuentran residuos de tirosina de importancia en las posiciones 192, 197 y 222 de B7-H7 humano nativo (por ejemplo, SEQ ID NO: 5).
Se han predicho dos formas de corte y empalme de B7-H7CR humano siendo la diferencia entre las formas de corte 10 y empalme la presencia o ausencia de los residuos de aminoácido 186-189. Hay dos variantes conocidas que se producen de manera natural de B7-H7CR humano (W168L y A202P).
Tal como se usa en el presente documento, el término “B7-H7CR nativo” en el contexto de ácidos nucleicos se refiere a cualquier secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para B7-H7CR, 15 incluyendo las formas maduras e inmaduras o precursoras. Los ejemplos no limitativos de n.os de registro para la secuencia de nucleótidos de B7-H7CR de mamífero nativo incluyen: AK358964 (Homo sapiens) y BC015655 (Homo sapiens). Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para la forma inmadura/precursora de B7-H7 humano nativo, que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica para el péptido señal (subrayado) y la secuencia de nucleótidos que codifica para el B7-H7CR nativo humano maduro (en 20 cursiva):
ggaagtctgt catggtgctg
caactgggag ggcctcctgg ggggagaggg tgcagatctg
gcagcagggg
cccaacttgc tgcaggtgag
gytyvaccag
gccacagcct gggaacggct
cctgtgtcaa
ccgtacatca ccaacggcag
acggctctcc
tggcaggcac ccagccatct
ccacagcggg
gcgtacgtgt gctgggcggc
gggcaacata
acaaggctct ttgtggaccc
cgcaagcttc
ccaggattcc tcttcgtgct
gatcgtgtgg
ggtgcctggt tctggggccg
cagcccagga
aatgcattct acagcaacgt
gagtgaggac
tgctctggag aggggaagga
cttcccgcaa
ccggcccccc gccagccgca
accctgcccc
agccccaggc ccggccaccc
aagccccacc
cagcagccga ggccaaaagg
cccaggagac
ctcaacagga ccccacccat
cagacacggt
ggctcacgcc tgtaatccca
cttgaggtca
ggggtttgag accagcctgg
gccgagattg
cgccactgca ctccagcctg
aacaaaaagc
aggaggattg ggagcctgtc
tgtaatgatg
gatctcgctc ccactttccc
aaaaaaaaaa
aaaaaa
(SEQ ID NO: 6).
gggtgatggg
ccaggaatgg ggtccccggg 60
ggccctgcaa
gaagcctcaa gcct mscgt 120
gcagggcagt
caggcgaccc tggtctgcca 180
ccgtgttaag
tggacaaagg atggggccat 240
cctcagcctg
ggggtctgcg ggccccaggg 300
caccctgcag
ctggaccctg tgagcctcaa 360
cgtagagatt
cctgagttgg aggaggctga 420
agatgacccc
acacagaaca gaaaccggat 480
gctgggggtg
ggaagcatgg gtgtggctgc 540
ccgcagctgc
cagcaaaggg actcaggtaa 600
cctataccgg
ccccgggggc ccccaaagaa 660
ccagaggggc
cagagcattt attcaacctc 720
cctggcgtca
agaccctgcc ccagcccgag 780
cgtctctatg
gtcagggtct ctcctagacc 840
gttccccaaa
gtgggagagg agtgag&g&t 900
aggtacacac
aaaaaagggg ggatcgaggc 960
gcagtttggg
aagccgaggc gggtggaaca 1020
cttgaacctg
ggaggcggag gttgcagtga 1080
ggcgacagag
tgagactccg tctcaaaaaa 1140
agccccatcc
tgagaccccg tcctcatttc 1200
ccaagaacct
aataaaggct tgtgaagaaa 1260
Se proporciona otra secuencia de nucleótidos representativa que codifica para un B7-H7 humano nativo: 25
1 atggggtccc cgggcatggt gctgggcctc ctggtgcaga tctgggccct gcaagaagcc 61 tcaagcctga gcgtgcagca ggggcccaac ttgctgcagg tgaggcaggg cagtcaggcg 121 accctggtct gccaggtgga ccaggccaca gcctgggaac ggctccgtgt taagtggaca
181 aaggatgggg ccatcctgtg tcaaccgtac atcaccaacg gcagcctcag cctgggggtc 241 tgcgggcccc agggacggct ctcctggcag gcacccagcc atctcaccct gcagctggac 301 cctgtgagcc tcaaccacag cggggcgtac gtgtgctggg cggccgtaga gattcctgag 361 ttggaggagg ctgagggcaa cataacaagg ctctttgtgg acccagatga ccccacacag 421 aacagaaacc ggatcgcaag cttcccagga ttcctcttcg tgctgctggg ggtgggaagc 481 atgggtgtgg ctgcgatcgt gtggggtgcc tggttctggg gccgccgcag ctgccagcaa 541 agggactcag gtaacagccc aggaaatgca ttctacagca acgtcctata ccggccccgg 601 gggcccccaa agaagagtga ggactgctct ggagagggga aggaccagag gggccagagc 661 atttattcaa cctccttccc gcaaccggcc ccccgccagc cgcacctggc gtcaagaccc 721 tgccccagcc cgagaccctg ccccagcccc aggcccggcc accccgtctc tatggtcagg 781 gtctctccta gaccaagccc cacccagcag ccgaggccaa aagggttccc caaagtggga 841 gaggagtga (SEQ ID NO: 23)
Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para Pan troglodytes nativo:
1
atggggtecc cgggcatggt gctgggcctc ctggtgcaga tctgggccct gcaagaagcc
61
tcaagcctga gcgtgcagca ggggcccaac ttgctgcagg tgaggcaggg cagtcaggcg
121
accctggtct gccaggtgga ccaggcccca gcctgggaac ggctccgtgt taagtggaca
181
aaggatgggg ccatcctgtg tcaaccgtac atcaccaacg gcagcctcag cctgggggtc
241
tgcgggcccc agggacggct ctcctggcag gcacccagcc atctcaccct gcagctggac
301
cctgtgaacc tcaaccacag cggggcgtac gtgtgctggg cggccgtaga gattcctgag
361
ttggaggagg ctgagggcaa cataacaagg ctctttgtgg acccagatga ccccacacag
421
aacagaaacc ggatcacaag cttcccagga ttcctcttcg tgctgctggg ggtgggaagc
481
ggggctgtgg ccgcgatcgt gttgggtgcc tggttctggg gccgccgcag ctgccagcaa
541
agggactcag gtaacagccc aggaaatgca ttctacagca acgtcctata ccggccccgg
601
ggggccccaa agaagagtga ggactgctct ggagagggga aggaccagag gggccagagc
661
atttattcaa cctccttccc gcaaccggcc acccgccagc cgcacctggc gccaagaccc
721
tgccccagcc cgagaccctg ccccagcccc aggcccggcc accccgtctc tatggtcagg
781
gtctctccta gaccaagccc cacccagcag ccgaggccaa aagggttccc caaagtggga
841
gaggagtaa (SEQ ID NO: 24)
Se proporciona una secuencia de nucleótidos representativa que codifica para Bos taurus nativo:
1
atggggtecc cgggcacagt gctggtcctc ctggtgcagt tctgggtcct acaaggagtc
61
acaggcctga ctgtgcagca ggcaccgaag ttgctgcagg tgagacagga cagccaggtg
121
actttggcct gccaggtgat gcacgcccag gcctgggagt ggctccgtgt cgagtggatc
181
aaggatgctg acatcttttg ccagacacac atcatcaatg gcagtctgag caaggatgtc
241
tgtgggcctc agggatggct atcctggcag ccgcctggca acctcaccct gcagctgaac
301
cacgtgagcc tcaatgacag tggactctat gtgtgtgggg caaccgtgga gatccctgtt
361
tgggaggagg cccagggcaa cgggacgcag ctcctggtgg agagaggtgt ctggctgcag
421
gaccacagct tctcaggcct ctacttcgcg ccgctggtga cgggggccgt ggccgttgcc
481
gttttcgctc tgggcgctgg gatctggggc cgccgccgct gccggaacgg ggatgcaggc
541
agtccaatct acagcaacgt cctataccgg ccccggagag ccgcaaggaa gaaggcatgg
601
cctgtggaaa ggaaggtgct ggacagtgag gatcagaagg gccaaagctt ctactcgatc
661
tctttccccc agcgccccaa gtcgcatatg gctcccaaat tttgccccag tcccagaccc
721
attcacccca tctctgcagt cagaatctct cctggcccag gctcctctgg gcagccaagg
781
tcaagagggt tccttgaagt gggaagagaa atcagaaccg caggagagcc agagaagacc
841
tacccccagc gactatataa agatgtgact tattcctag (SEQ ID NO: 25)
10
Se incluye una alineación de ácido nucleico de B7-H7CR humano nativo representativo, B7-H7CR de Pan troglodytes nativo y B7-H7CR de Bos taurus nativo como figura 25.
En una realización específica, el ácido nucleico es un ácido nucleico aislado o purificado. En algunas realizaciones, 15 los ácidos nucleicos codifican para la forma inmadura o precursora de un B7-H7CR de mamífero que se produce de manera natural. En otras realizaciones, los ácidos nucleicos codifican para la forma madura de un B7-H7CR de mamífero que se produce de manera natural. En una realización específica, ácidos nucleicos que codifican para B7- H7CR nativo codifican para la forma precursora de B7-H7CR humano que se produce de manera natural. En otra realización, los ácidos nucleicos que codifican para B7-H7CR nativo codifican para la forma madura de B7-H7CR 20 humano que se produce de manera natural.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Tal como se usa en el presente documento, el término “ligando nativo” se refiere a cualquier ligando que se produce de manera natural que se une a un receptor que se produce de manera natural. En una realización específica, el ligando es un ligando de mamífero. En otra realización específica, el ligando es un ligando humano.
Tal como se usa en el presente documento, el término “receptor nativo” se refiere a cualquier receptor que se produce de manera natural que se une a un ligando que se produce de manera natural. En una realización específica, el receptor es un receptor de mamífero. En otra realización específica, el receptor es un receptor humano.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “ácido nucleico”, “nucleótido” y “polinucleótido” se refieren a desoxirribonucleótidos, ácidos desoxiribunucleicos, ribonucleótidos y ácidos ribonucleicos, y formas poliméricas de los mismos, e incluyen o bien formas monocatenarias o bien bicatenarias. Los ácidos nucleicos incluyen ácidos nucleicos que se producen de manera natural, tales como ácido desoxirribonucleico (“ADN”) y ácido ribonucleico (“ARN”) así como análogos de ácido nucleico. Los análogos de ácido nucleico incluyen aquellos que incluyen bases que no se producen de manera natural, nucleótidos que participan en uniones con otros nucleótidos distintos del enlace fosfodiéster que se produce de manera natural o que incluyen bases unidas a través de uniones distintas de enlaces fosfodiéster. Por tanto, los análogos de ácido nucleico incluyen, por ejemplo y sin limitación, fosforotioatos, fosforoditioatos, fosforotriésteres, fosforamidatos, boranofosfatos, metilfosfonatos, fosfonatos de metilo quiral, 2-O- metil-ribonucleótidos, ácidos nucleicos peptídicos (PNA), ácidos nucleicos bloqueados (LNA), y similares.
Tal como se usa en el presente documento, el término “lactante humano prematuro” se refiere a un lactante humano nacido a menos de 37 semanas de edad gestacional.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “prevenir”, “que previene” y “prevención” en el contexto de administrar una terapia a un sujeto se refiere al efecto profiláctico que un sujeto obtiene al recibir una terapia. En una realización específica, tales términos se refieren a la inhibición del desarrollo o inicio de una enfermedad o un síntoma asociado con la misma, o inhibición de la recaída de una enfermedad o un síntoma de la misma.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “purificado” y “aislado” en el contexto de un agente (incluyendo, por ejemplo, agentes proteínicos tales como anticuerpos) que se sintetiza químicamente se refiere a un agente que está sustancialmente libre de precursores químicos u otras sustancias químicas cuando se sintetiza químicamente, es decir, se separa de precursores químicos u otras sustancias químicas que están implicados en la síntesis de la proteína. En una realización específica, el agente está el 60%, el 65%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95% o el 99% libre (en peso seco) de otros compuestos o agentes diferentes.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “purificado” y “aislado” cuando se usan en el contexto de un agente (incluyendo agentes proteínicos tales como anticuerpos y polipéptidos) que puede obtenerse a partir de una fuente natural, por ejemplo, células, se refiere a un agente que está sustancialmente libre de materiales contaminantes de la fuente natural, por ejemplo, partículas del suelo, minerales, sustancias químicas del entorno y/o materiales celulares de la fuente natural, tales como pero sin limitarse a residuos celulares, materiales de la pared celular, membranas, orgánulos, el volumen de los ácidos nucleicos, hidratos de carbono, proteínas y/o lípidos presentes en las células. La expresión “sustancialmente libre de materiales de la fuente natural” se refiere a preparaciones de un agente que se separado del material (por ejemplo, componentes celulares de las células) del que se aísla. Por tanto, un agente que está aislado incluye preparaciones de un compuesto o agente que tiene menos de aproximadamente el 30%, el 20%, el 10%, el 5%, el 2% o el 1% (en peso seco) de materiales celulares y/o materiales contaminantes.
Una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos “aislada” es una que se separa de otras moléculas de ácido nucleico que están presentes en una fuente natural de la secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos. Además, una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos “aislada”, tal como una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente libre de otro material celular o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas recombinantes, o sustancialmente libre de precursores químicos cuando se sintetiza químicamente. En determinadas realizaciones, una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos “aislada” es una secuencia de ácido nucleico o secuencia de nucleótidos que se expresa de manera recombinante en una célula heteróloga.
Tal como se usa en el presente documento, a menos que se especifique lo contrario, los términos “proteína(s)” y “polipéptido(s)” se usan de manera intercambiable para referirse a una cadena de aminoácidos unidos entre sí mediante enlaces peptídicos. En algunas realizaciones, los términos “proteína(s)” y “polipéptido(s)” se refieren a una macromolécula que comprende aminoácidos que están unidos entre sí mediante enlaces peptídicos.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “sujeto” y “paciente” se usan de manera intercambiable y se refieren a un animal. En una realización específica, tales términos se refieren a una mamífero tal como un no primate (por ejemplo, vacas, cercos, caballos, gatos, perros, ratas etc.) y un primate (por ejemplo, mono y ser humano), lo más preferiblemente un ser humano. En determinadas realizaciones, tales términos se refieren a un animal no humano (por ejemplo, un animal no humano tal como un cerdo, caballo, vaca, gato o perro). En algunas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
realizaciones, tales términos se refieren a una mascota o a un animal de granja. En realizaciones específicas, tales términos se refieren a un ser humano.
Tal como se usa en el presente documento, el término “agente(s) terapéutico(s)” se refiere a un/unos agente(s) que modula(n) una o más funciones o respuestas del sistema inmunitario. En una realización específica, un agente terapéutico modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un ligando nativo se une a un receptor nativo. En otra realización específica, un agente terapéutico modula la interacción entre un receptor nativo y uno o más de sus ligandos nativos. En otra realización específica, un agente terapéutico modula la expresión de un receptor nativo o un ligando nativo. En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un agonista. En otras realizaciones, un agente terapéutico es un antagonista.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “terapias” y “terapia” pueden referirse a cualquier protocolo, método, composición, formulación y/o agente que puede usarse en la prevención, el tratamiento, la gestión o la mejora de una enfermedad, por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, enfermedad autoinmunitaria, enfermedad de injerto contra huésped y rechazo de trasplante, o un síntoma asociado con los mismos. En determinadas realizaciones, los términos “terapias” y “terapia” se refieren a farmacoterapia, terapia adyuvante, radiación, cirugía, terapia biológica, terapia de apoyo y/u otras terapias útiles en el tratamiento, la gestión, la prevención o la mejora de un estado o trastorno o un síntoma de los mismos. En una realización específica, una terapia incluye el uso de un agente terapéutico como terapia adyuvante. Por ejemplo, el uso de un agente terapéutico junto con una farmacoterapia, terapia biológica, cirugía y/o terapia de apoyo. En una realización específica, una terapia incluye un agente terapéutico.
En una realización, una terapia incluye un agente terapéutico inmunoestimulante. En una realización alternativa, una terapia incluye un agente terapéutico inhibidor. En otra realización, una terapia no es un agente terapéutico inmunoestimulante. En una realización alternativa, una terapia no es un agente terapéutico inhibidor.
Tal como se usa en el presente documento, los términos “tratar”, “que trata” y “tratamiento” en el contexto de la administración de una terapia a un sujeto se refieren a los efectos beneficiosos que un sujeto obtiene de una terapia. En determinadas realizaciones, el tratamiento de un sujeto con un agente terapéutico logra uno, dos, tres, cuatro o más de los siguientes efectos: (i) reducción o mejora de la gravedad de una enfermedad o síntoma asociado con la misma; (ii) reducción en la duración de un síntoma asociado con una enfermedad; (iii) prevención de la evolución de una enfermedad o síntoma asociado con la misma; (iv) regresión de una enfermedad o síntoma asociado con la misma; (v) prevención del desarrollo o inicio de un síntoma asociado con una enfermedad; (vi) prevención de la recaída de un síntoma asociado con una enfermedad; (vii) reducción en la hospitalización de un sujeto; (viii) reducción en la duración de la hospitalización; (ix) un aumento en la supervivencia de un sujeto con una enfermedad; (x) una reducción en el número de síntomas asociados con una enfermedad; (xi) una potenciación, una mejora, una suplementación, una complementación o un aumento del/de los efecto(s) profiláctico(s) o terapéutico(s) de otra terapia.
4. Descripción de la tabla y las figuras
Tabla 1. Lista de la colección de clones de ADNc usada en el proteoma de receptor-ligando. Se incluyen más de 1.900 genes humanos que codifican para ADNc de membrana plasmática de longitud completa en un vector de expresión de mamífero en este sistema de proteoma para el examen de interacciones de receptor y ligando.
Figura 1. Vista esquemática del proteoma de receptor-ligando. Se coloca un conjunto de ~ 1.900 plásmidos que codifican para genes transmembrana humanos de manera individual en cinco placas de 384 pocillos y se transfieren en células 293T mediante lipofectamina. Posteriormente, se añaden una proteína de fusión diana y un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia a las células transfectadas tras ocho horas. Veinticuatro horas después, el sistema de detección celular Applied Biosystem 8200 (CDS) realiza el barrido sobre la superficie celular para detectar pocillos positivos. Se recogerán plásmidos individuales dentro de cada pocillo con resultados positivos y se estudiarán adicionalmente para su validación.
Figura 7. Homología de secuencia de B7-H7 con respecto a moléculas de la familia B7 descritas previamente. Se alineó la secuencia de proteína B7-H7 humana mediante el programa ClustalW con otros miembros de la familia de ligandos B7 incluyendo B7-1, B7-2, B7-H1, B7-DC, B7-H3 y B7-H4.
Figura 8. Identificación de la interacción de B7-H7 y B7-H7R mediante el sistema CDS. Usando el procedimiento idéntico al descrito en la figura 2, se añadieron B7-H7Ig y anticuerpo secundario anti-mIg FMAT blue a las placas de 384 pocillos 8 horas tras la transfección. Se leyeron las placas mediante el sistema de detección celular Applied Biosystems 8200 y se analizaron mediante el software CDS 8200 24 h tras la transfección. Se identificó B7-H7CR humano (J18) como un resultado positivo además de los controles positivos, FcR (05) y OLN (P1).
Figura 9. Homología de secuencia de B7-H7CR con respecto a miembros de la familia CD28 descritos previamente. Se alineó la secuencia de proteína B7-H7CR humana mediante el programa ClustalW con otros miembros de la familia de CD28 incluyendo CD28, CTLA-4, PD-1 e ICOS.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Figuras 10A-10F. identificación y caracterización de una ruta coestimuladora de células T novedosa a través de la interacción de B7-H7 y B7-H7CR.
(A) Unión de B7-H7CR mediante B7-H7Ig en células transfectadas. Se transfectaron células 293T de manera transitoria con el plásmido que contiene ADNc de B7-H7CR humano o plásmido de vector, y se tiñeron posteriormente mediante AcM específico para B7-H7CR (clon 4-5, paneles superiores) o B7-H7Ig (paneles inferiores). Se analizaron los datos mediante una citometría de flujo FACScan.
(B) Expresión constitutiva e inducible de B7-H7 en macrófagos y células dendríticas. Se purificaron monocitos humanos a partir de sangre de donantes sanos y se cultivaron in vitro durante una semana en presencia de GM- CSF o GM-CSF + IL-4 para que se diferenciaran en macrófagos (M) o células dendríticas (DC), respectivamente. También se trataron las células sin (ninguno) o con IFN-y, poli I:C o Listeria monocytogenes inactivada por calor (HKLM) durante 24 h y posteriormente se tiñeron mediante un AcM anti-B7-H7 (clon 2D3). Se analizaron los datos mediante una citometría de flujo FACScan.
(C) Expresión constitutiva e inducible de B7-H7CR en linfocitos. Se purificaron células mononucleares de sangre periférica humana y se tiñeron mediante AcM específico contra CD3, CD19, CD56 y CD16 junto con AcM anti-B7- H7CR (clon 4-5). Se analizaron los datos mediante una citometría de flujo FACScan.
(D) B7-H7Ig coestimula la proliferación de células T CD4+ y la producción de citocinas. Se seleccionaron de manera negativa células T CD4+ de sangre periférica de donante sano y se purificaron mediante columna de afinidad. Se estimularon células T CD4+ purificadas a 2,5x105 células/pocillo con AcM anti-CD3 humano inmovilizado (OKT3) a las concentraciones indicadas y B7-H7Ig 5 pg/ml o Ig de control (Ig de ctl). Se añadió 3HTdR durante las seis horas finales de cultivo y se determinó la incorporación de 3HTdR mediante un contador de centelleo. En un experimento paralelo, se recogieron sobrenadantes del cultivo y se midieron las citocinas mediante kits de ELISA de tipo sándwich con pares específicos de AcM.
(E, F) Coestimulación de la proliferación de células T CD4+ mediante AcM frente a B7-H7CR agonista. (E) Se purificaron y se estimularon células T CD4+ tal como se describió en (D). En lugar de B7-H7Ig, se coinmovilizó un AcM anti-B7-H7CR (clon 4-5) con AcM anti-CD3 en la placa (panel izquierdo). Para someter a prueba el efecto sinérgico con coestimulación de CD28, se añadió un AcM frente a CD28 (clon CD28.2, 1 pg/ml) al cultivo junto con AcM frente a B7-H7CR (panel derecho). (F) Se coestimularon células T CD4+ humanas con B7-H7Ig y AcM anti- CD3 inmovilizados en placa tal como se describió en (E) en presencia de B7-H7CRIg o AcM frente a B7-H7 soluble 10 pg/ml. Se añadió 3HTdR durante las seis horas finales de cultivo y se determinó la incorporación de 3HTdR mediante un contador de centelleo.
Figura 11. El AcM frente a B7-H7 2D3 bloquea completamente la unión de B7-H7CR a células B7-H7+. Se transfectaron células CHO con el plásmido que codifica para B7-H7 humano y se tiñeron posteriormente mediante B7-H7CRIg 10 pg/ml sin (panel izquierdo) o con (panel derecho) un AcM frente a B7-H7 (clon 2D3) a 20 pg/ml tal como se describió anteriormente.
Figura 12. B7-H7CR se une específicamente a B7-H7 pero no a otros miembros de la familia B7. Se transfectaron células 293T con miembros de la familia B7 individuales incluyendo B7-1, B7-2, B7-H1, B7-DC, B7-H2, B7-H3 (tanto forma 2Ig como 4 Ig) y B7-H4. Tras teñir con B7-H7CRIg a 10 pg/ml y AcM secundario marcado con fluorescencia, se analizaron las células mediante citometría de flujo y los datos se muestran como densidad de fluorescencia.
Figura 13. Detección de ARNm de B7-H7 y B7-H7CR humano en tejidos. Se usaron alineamientos de ADNc de tejido humano (Clontech) como moldes con los pares de cebadores específicos de B7-H7 y B7-H7CR, respectivamente, para realizar RT-PCR. Los pares de cebadores de G3PDH sirven como controles.
Figura 14. Fallo al detectar B7-H7 de superficie celular en células T, B, NK y monocitos. Se purificaron células mononucleares de sangre periférica humana y se tiñeron conjuntamente con AcM anti-B7-H7 y anticuerpo específico de tipo celular contra células T (CD3), células B (CD 19), células NK (CD56) y monocitos (CD14). Tras la tinción, se analizaron las células mediante citometría de flujo y los datos se muestran como densidad de fluorescencia.
Figuras 15A-15B. Ilustración de nuevas rutas coestimuladoras. (A) Intersección entre las rutas de B7-CD28 y B7- H2/ICOS. Las interacciones descritas previamente están indicadas en líneas negras, y las interacciones recién descritas se muestran en negrita. (B) Interacciones recién descritas entre B7-H7 y B7-H7CR.
Figura 22. Comparación de la producción de citocinas inducida por la coestimulación de B7-1 y B7-2. Se estimularon células T CD4+ purificadas de PBMC de un donante sano a 2,5 x 105 células/pocillo mediante AcM frente a CD3 y B7-1 Ig o B7-2Ig inmovilizados. Se recogieron los sobrenadantes diariamente hasta tres días. Se midieron los niveles de citocinas mediante kit de citocinas Th1/Th2 humanas de matriz de perlas citométrica (CBA) BD y conjunto CBA IL-17A Flex, y se analizaron mediante software de matriz FCAP. Cada punto de datos es un promedio de triplicados.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Figura 23. Una alineación de secuencias de aminoácidos de B7-H7 humano nativo, B7-H7 de Pan troglodytes nativo y B7-H7 de Macaca mulatta nativo representativos.
Figura 24. Una alineación de las secuencias de aminoácidos de B7-H7CR humano nativo, B7-H7CR de Pan troglodytes nativo y B7-H7CR de Bos taurus nativo representativos.
Figura 25. Una alineación de las secuencias de ácido nucleico de B7-H7CR humano nativo, B7-H7CR de Pan troglodytes nativo y B7-H7CR de Bos taurus nativo representativos.
5. Descripción detallada
En un aspecto, se describe en el presente documento el descubrimiento de B7-H7CR como receptor coestimulador y la modulación de una o más rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7CR a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7). En otro aspecto, se describen en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a B7-H7, B7-H7CR o el complejo de B7-H7 y B7-HCR. En otro aspecto, se describen en el presente documento agentes terapéuticos que modulan la interacción entre determinados receptores coestimuladores y uno o más de sus ligandos, y el uso de tales agentes terapéuticos para modular una o más funciones del sistema inmunitario. Los agentes terapéuticos descritos en el presente documento se basan, en parte, en el descubrimiento de nuevas interacciones receptor-ligando coestimuladoras. Los agentes terapéuticos pueden usarse en cultivo celular para modular funciones de células inmunitarias (por ejemplo, proliferación de linfocitos, producción de citocinas o producción de anticuerpos). En particular, una célula puede ponerse en contacto con un agente terapéutico para modular una o más funciones de células inmunitarias. Además, un agente terapéutico puede administrarse a un sujeto para prevenir, tratar o gestionar determinadas enfermedades, tales como cáncer, una enfermedad infecciosa, una enfermedad autoinmunitaria y una enfermedad inflamatoria.
En otro aspecto, se describen en el presente documento métodos de identificación de interacciones receptor- ligando. Tales métodos pueden usarse para identificar interacciones entre ligandos coestimuladores y receptores coestimuladores.
5.1 ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA B7-H7 O B7-H7CR
En un aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7. En una realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7 humano. En otra realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7 nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7 humano nativo) e inhiben o reducen la unión del polipéptido de B7-H7 nativo a uno o más receptores de B7-H7 (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR nativo). En una realización más específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7 nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7 humano nativo) e inhiben o reducen la unión de polipéptido de B7-H7 nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7 humano nativo) a un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR humano nativo). Tales anticuerpos, según estas realizaciones, pueden bloquear (estérica o no estéricamente) la unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, un anticuerpo reduce la unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR en al menos el 10%, el 15%, el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 10% y el 50%, el 10% y el 75%, el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 98% o el 75% y el 100% en relación con un control negativo (por ejemplo, unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR en ausencia del anticuerpo o en presencia de un anticuerpo de control negativo que se sabe que no se une a B7-H7) tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, ensayos basados en células incluyendo citometría de flujo, ensayo KinEx A y ensayo de resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, ensayo BIAcore®).
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR humano. En otra realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un B7-H7 humano nativo) e inhiben o reducen la unión del B7-H7CR nativo a uno o más ligandos de B7-H7CR (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7 nativo). En una realización más específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7- H7CR humano nativo) e inhiben o reducen la unión de un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR humano nativo) a un polipéptido de B7-H7 nativo (por ejemplo, polipéptido de B7-H7 humano nativo). Tales anticuerpos, según estas realizaciones, pueden bloquear (estérica o no estéricamente) la unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, un anticuerpo reduce la unión del B7-H7 al B7-H7CR en al menos el 10%, el 15%, el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 10% y el 50%, el 10% y el 75%, el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 98% o el 75% y el 100% en relación con un control
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
negativo (por ejemplo, unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR en ausencia del anticuerpo o en presencia de un anticuerpo de control negativo que se sabe que no se une a B7-H7) tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, ensayos basados en células incluyendo citometría de flujo, ensayo KinEx A y ensayo de resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, ensayo BIAcore®). En determinadas realizaciones, el anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR polipéptido es un agonista. En otras realizaciones, el anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR es un antagonista.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente al complejo de B7-H7CR/B7-H7. En una realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente al complejo de B7-H7CR humano/B7-H7 humano. En otra realización específica, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un complejo de B7-H7CR nativo/B7-H7 nativo (por ejemplo, un complejo de B7-H7 humano nativo/B7-H7 humano nativo) e inhiben o reducen la unión de un polipéptido de B7-H7CR nativo a uno o más ligandos de B7-H7CR. Tales anticuerpos, según esta realización, pueden bloquear (estérica o no estéricamente) el B7-H7CR nativo para uno o más ligandos de B7-H7CR. En una realización específica, el anticuerpo reduce la unión del polipéptido de B7-H7CR nativo para uno o más ligandos de B7-H7CR nativo en al menos el 10%, el 15%, el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 10% y el 50%, el 10% y el 75%, el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 98% o el 75% y el 100% en relación con un control negativo (por ejemplo, unión del polipéptido de B7-H7CR nativo a uno o más ligandos de B7-H7CR nativo en ausencia del anticuerpo o en presencia de un anticuerpo de control negativo que se sabe que no se une a B7-H7) tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, ensayos basados en células incluyendo citometría de flujo, ensayo KinEx A y ensayo de resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, ensayo BIAcore®). En determinadas realizaciones, un anticuerpo que se une específicamente a un complejo de B7-H7CR/B7-H7 inhibe o reduce la unión de B7-H7 nativo a uno o más de sus receptores. Tales anticuerpos pueden bloquear (estérica o no estéricamente) la unión de B7-H7 nativo a uno o más de sus receptores.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen a B7-H7 y neutralizan B7-H7. En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen a B7-H7CR y neutralizan B7-H7CR.
En determinadas realizaciones, un anticuerpo descrito en esta sección comprende un dominio Fc modificado. Se describen modificaciones del dominio Fc a modo de ejemplo en Mueller et al., 1997, Molecular Immunology 34(6):441-452; Swann et al., 2008, Current Opinion in Immunology 20:493-499; y Presta, 2008, Current Opinion in Immunology 20:460-470.
En algunos aspectos, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen a B7-H7 y aumentan la degradación.
Los anticuerpos que se unen específicamente al polipéptido de B7-H7, polipéptido de B7-H7CR o al complejo de B7- H7/B7-H7CR pueden producirse mediante cualquier método bien conocido en la técnica, por ejemplo, tal como se describe en las patentes estadounidenses n.os 5.807.715, 6.331.415 y 6.818.216; las publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os US 2002/0098189, US 2004/0028685, US 2005/0019330, US 2006/0115485 y US 2007/0086943; las publicaciones internacionales n.os WO 02/46237 y WO 04/010935; y Harlow et al., Antibodies. A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed. 1988); Hammerling, et al., en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981) (dichas referencias se incorporan como referencia en el presente documento en su totalidad).
En una realización específica, se presenta en el presente documento el anticuerpo monoclonal designado 2D3. Este anticuerpo, tal como se comenta en la sección de ejemplos a continuación, se generó a partir de un hibridoma derivado de la fusión de mieloma SP2 con células B de un ratón inmunizado con B7-H7-Ig humano. En otra realización específica, se presenta en el presente documento el anticuerpo monoclonal designado 4-5. Este anticuerpo, tal como se comenta en la sección de ejemplos, se generó a partir de un hibridoma derivado de la fusión de mieloma SP2 con células B de un hámster inmunizado con B7-H7CR-Ig humano. En el presente documento se abarcan fragmentos de unión a antígeno (por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos F(ab’)2, fragmentos F(ab’)2) del anticuerpo designado 2D3 o 4-5.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos (tales como anticuerpos monoclonales) que compiten con el anticuerpo 2D3 o el anticuerpo 4-5 por la unión a un polipéptido de B7-H7 nativo o un polipéptido de B7-H7CR nativo, respectivamente. Pueden usarse ensayos de competición conocidos por un experto en la técnica para evaluar la competición del anticuerpo 2D3 o el anticuerpo 4-5 por la unión a un polipéptido de B7-H7 nativo o polipéptido de B7-H7CR nativo, respectivamente. Por ejemplo, puede usarse un inmunoensayo (por ejemplo, un ELISA) en un formato competitivo.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7 que comprenden una cadena ligera variable (VL) y/o una cadena pesada variable (VH) del anticuerpo 2D3. En una realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende la cadena VL o cadena VH del anticuerpo 2D3. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
B7-H7 comprende la cadena VL del anticuerpo 2D3 y la cadena VH de otro anticuerpo. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende la cadena VH del anticuerpo 2D3 y la cadena VL de otro anticuerpo. En una realización específica, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende la cadena VL del anticuerpo 2D3 y la cadena VH del anticuerpo 2D3.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7 que comprenden un dominio VL y/o un dominio VH del anticuerpo 2D3. En una realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende el dominio VL o dominio VH del anticuerpo 2D3. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende el dominio VL del anticuerpo 2D3 y el dominio VH de otro anticuerpo. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende el dominio VH del anticuerpo 2D3 y el dominio VL de otro anticuerpo. En una realización específica, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 comprende el dominio VL del anticuerpo 2D3 y el dominio VH del anticuerpo 2D3.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR que comprenden una cadena VL y/o una cadena VH del anticuerpo 4-5. En una realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende la cadena VL o cadena VH del anticuerpo 4-5. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR
comprende la cadena VL del anticuerpo 4-5 y la cadena VH de otro anticuerpo. En otra realización, un anticuerpo
que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende la cadena VH del anticuerpo 4-5 y la cadena VL de otro anticuerpo. En una realización específica, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende la cadena VL del anticuerpo 4-5 y la cadena VH del anticuerpo 4-5.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR que comprenden un dominio VL y/o un dominio VH del anticuerpo 4-5. En una realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende el dominio VL o dominio VH del anticuerpo 4-5. En otra realización, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR
comprende el dominio VL del anticuerpo 4-5 y el dominio VH de otro anticuerpo. En otra realización, un anticuerpo
que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende el dominio VH del anticuerpo 4-5 y el dominio VL de otro anticuerpo. En una realización específica, un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR comprende el dominio VL del anticuerpo 4-5 y el dominio VH del anticuerpo 4-5.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a B7-H7 que comprenden una, dos o tres regiones determinantes de complementariedad (CDR) de la cadena pesada variable (CDR de VH) del anticuerpo 2D3 y/o una, dos o tres CDR de la cadena ligera variable (CDR de VL) del anticuerpo 2D3. En determinadas realizaciones, un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7, comprende (o alternativamente, consiste en) una CDR1 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH y una CDR1 de VL; CDR2 de VH y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH y una CDR3 de VL; una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR3 de VH y una CDR2 de VL; una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH1, una CDR2 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; o cualquier combinación de las mismas de las CDR de VH y CDR de VL del anticuerpo 2D3.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento anticuerpos que se unen específicamente a un polipéptido de B7-H7CR que comprenden una, dos o tres regiones determinantes de complementariedad (CDR) de la cadena pesada variable (CDR de VH) del anticuerpo 4-5 y/o una, dos o tres CDR de la cadena ligera variable (CDR de VL) del anticuerpo 4-5. En determinadas realizaciones, un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR, comprende (o alternativamente, consiste en) una CDR1 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH y una cDr3 de VL; una CDR2 de VH y una CDR1 de VL; CDR2 de VH y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH y una CDR3 de VL; una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR3 de VH y una CDR2 de VL; una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH1, una CDR2 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
una CDR2 de VH y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR1 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR2 de vL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR2 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR2 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR1 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; una CDR2 de VH, una CDR3 de VH, una CDR1 de VL, una CDR2 de VL y una CDR3 de VL; o cualquier combinación de las mismas de las CDR de VH y CDR de VL del anticuerpo 4-5.
Las secuencias del anticuerpo 2D3 y 4-5 pueden determinarse usando técnicas convencionales conocidas por un experto en la técnica y la cadena VH, cadena VL, dominio VH, dominio VL, CDR de VH y CDR de VL pueden determinarse usando, por ejemplo, el sistema de numeración de Kabat (tal como el índice UE en Kabat).
Los anticuerpos presentados en el presente documento incluyen derivados que están químicamente modificados mediante, por ejemplo, la unión covalente y no covalente de cualquier tipo de molécula al anticuerpo. Los derivados de anticuerpo también incluyen anticuerpos que se han modificado químicamente mediante, por ejemplo, glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, derivatización por grupos protectores/de bloqueo conocidos, escisión proteolítica, unión a un ligando celular u otra proteína, etc. Puede llevarse a cabo cualquiera de las numerosas modificaciones químicas mediante técnicas conocidas, incluyendo pero sin limitarse a escisión química específica, acetilación, formilación, síntesis metabólica de tunicamicina, etc. Adicionalmente, el derivado puede contener uno o más aminoácidos no clásicos.
Los anticuerpos proporcionados en el presente documento presentados en el presente documento pueden comprender una región de entramado conocida por los expertos en la técnica (por ejemplo, un fragmento humano o no humano). La región de entramado puede ser regiones de entramado que se producen de manera natural o de consenso.
En otro aspecto, se presentan en el presente documento ácidos nucleicos que codifican para los anticuerpos presentados en el presente documento. En algunas realizaciones, se aísla(n) una(s) molécula(s) de ácido nucleico que codifica(n) para un anticuerpo presentado en el presente documento. En otras realizaciones, no se aísla(n) un/unos ácido(s) nucleico(s) que codifica(n) para un anticuerpo presentado en el presente documento o generado según los métodos proporcionados en el presente documento. En aún otras realizaciones, se integra(n) un/unos ácido(s) nucleico(s) que codifica(n) para un anticuerpo presentado en el presente documento, por ejemplo, en ADN cromosómico o un vector de expresión. En una realización específica, un/unos ácido(s) nucleico(s) presentado(s) en el presente documento codifica(n) para el anticuerpo 2D3, el anticuerpo 4-5 o un fragmento de los mismos (en particular, un fragmento de unión a antígeno de los mismos).
Los anticuerpos descritos en el presente documento pueden madurarse por afinidad usando técnicas conocidas por un experto en la técnica. Los anticuerpos monoclonales descritos en el presente documento pueden quimerizarse usando técnicas conocidas por un experto en la técnica. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la que se derivan diferentes porciones del anticuerpo a partir de diferentes moléculas de inmunoglobulina. En la técnica se conocen métodos para producir anticuerpos quiméricos. Véanse, por ejemplo, Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, Biotechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; y las patentes estadounidenses n.os 5.807.715, 4.816.567, 4.816.397 y 6.331.415, que se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad.
Los anticuerpos monoclonales descritos en el presente documento pueden humanizarse. Un anticuerpo humanizado es un anticuerpo que puede unirse a un antígeno predeterminado y que comprende una región de entramado que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina humana y una CDR que tiene sustancialmente la secuencia de aminoácidos de una inmunoglobulina no humana. Un anticuerpo humanizado comprende sustancialmente todos de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables (Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv) en los que todas o sustancialmente todas las regiones de CDR se corresponden con las de una inmunoglobulina no humana (es decir, anticuerpo donador) y todas o sustancialmente todas las regiones de entramado son las de una secuencia consenso de inmunoglobulina humana. Preferiblemente, un anticuerpo humanizado también comprende al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), normalmente la de una inmunoglobulina humana. Normalmente, el anticuerpo contendrá tanto la cadena ligera así como al menos el dominio variable de una cadena pesada. El anticuerpo también puede incluir las regiones CH1, bisagra, CH2, CH3 y CH4 de la cadena
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
pesada. El anticuerpo humanizado puede seleccionarse de cualquier clase de inmunoglobulinas, incluyendo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo, incluyendo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Habitualmente, el dominio constante es un dominio constante de fijación de complemento donde se desea que el anticuerpo humanizado presente actividad citotóxica, y la clase es normalmente IgG1. Cuando tal actividad citotóxica no es deseable, el dominio constante puede ser de la clase IgG2. Los ejemplos de dominios constantes VL y VH que pueden usarse en determinadas realizaciones incluyen, pero no se limitan a, C-kappa y C-gamma-1 (nGlm) descritos en Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224 y los descritos en la patente estadounidense n.° 5.824.307. El anticuerpo humanizado puede comprender secuencias de más de una clase o isotipo, y la selección de dominios constantes particulares para optimizar funciones efectoras deseadas está dentro de la experiencia habitual en la técnica. La región de entramado y las regiones CDR de un anticuerpo humanizado no han de corresponderse de manera precisa con las secuencias originales, por ejemplo, la CDR donadora o la región de entramado de consenso pueden mutagenizarse mediante sustitución, inserción o deleción de al menos un residuo de modo que el residuo de región de entramado o CDR en el sito no se corresponde con o bien el anticuerpo de consenso o bien el anticuerpo de importación. Tales mutaciones, sin embargo, no serán extensivas. Habitualmente, al menos el 75% de los residuos del anticuerpo humanizado se corresponderán con los de la región de entramado (FR) y secuencias CDR originales, más a menudo el 90%, y lo más preferiblemente más del 95%. Pueden producirse anticuerpos humanizados usando una variedad de técnicas conocidas en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, injerto de CDR (patente europea n.° EP 239.400; publicación internacional n.° WO 91/09967; y patentes estadounidenses n.os 5.225.539, 5.530.101 y 5.585.089), remodelación de superficie o modelación de superficie (patentes europeas n.os EP 592.106 y EP 519.596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805- 814; y Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973), intercambio de cadenas (patente estadounidense n.° 5.565.332) y técnicas dadas a conocer en, por ejemplo, la patente estadounidense n.° 6.407.213, la patente estadounidense n.° 5.766.886, el documento wO 9317105, Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Métodos 20(3):267 79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 sup.): 5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994) y Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994). Véase también la publicación de patente estadounidense n.° US 2005/0042664 A1 (24 de febrero de 2005), que se incorpora como referencia en el presente documento en su totalidad. A menudo, se sustituirán residuos de región de entramado en las regiones de entramado por el residuo correspondiente del anticuerpo donador de CDR para alterar, preferiblemente mejorar, la unión a antígeno. Estas sustituciones de región de entramado se identifican mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, mediante modelado de las interacciones de las CDR y residuos de región de entramado para identificar residuos de región de entramado importantes para la unión a antígeno y comparación de secuencias para identificar residuos de región de entramado inusuales en posiciones particulares. (Véanse, por ejemplo, Queen et al., patente estadounidense n.° 5.585.089; y Reichmann et al., 1988, Nature 332:323, que se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad.)
5.1.1 Semivida aumentada
En un aspecto, los anticuerpos presentados en el presente documento se modifican para que tengan una semivida prolongada (o aumentada) in vivo. En una realización, se presentan en el presente documento anticuerpos que tienen una semivida en un sujeto, preferiblemente un mamífero y lo más preferiblemente un ser humano, de desde aproximadamente 3 días hasta aproximadamente 180 días (o más), y en algunas realizaciones mayor de 3 días, mayor de 7 días, mayor de 10 días, mayor de 15 días, mayor de 20 días, mayor de 25 días, mayor de 30 días, mayor de 35 días, mayor de 40 días, mayor de 45 días, mayor de 50 días, al menos aproximadamente 60 días, mayor de 75 días, mayor de 90 días, mayor de 105 días, mayor de 120 días, mayor de 135 días, mayor de 150 días, mayor de 165 días o mayor de 180 días.
En una realización específica, se generan anticuerpos modificados que tienen una semivida aumentada in vivo introduciendo una o más modificaciones de aminoácido (es decir, sustituciones, inserciones o deleciones) en un dominio constante de IgG, o fragmento de unión a FcRn del mismo (preferiblemente un fragmento de dominio Fc o Fc bisagra). Véanse, por ejemplo, las publicaciones internacionales n.os WO 02/060919; WO 98/23289; y WO 97/34631; y la patente estadounidense n.° 6.277.375; cada una de las cuales se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad. En una realización específica, los anticuerpos pueden tener una o más modificaciones de aminoácido en el segundo dominio constante (es decir, el dominio CH2 en, por ejemplo, los residuos 231-340 de IgG1 humana) y/o el tercer dominio constante (es decir, el dominio CH3 en, por ejemplo, los residuos 341-447 de IgG1 humana), con numeración según el sistema de numeración de Kabat (por ejemplo, el índice UE en Kabat).
En algunas realizaciones, para prolongar la circulación sérica in vivo de anticuerpos, se unen moléculas de polímero inertes tales como polietilenglicol de alto peso molecular (PEG) a los anticuerpos con o sin un ligador multifuncional o bien a través de conjugación específica de sitio del PEG al extremo N- o C-terminal de los anticuerpos o bien mediante grupos épsilon-amino presentes en los residuos de lisina. Se usará la derivatización de polímeros lineales o ramificados que da como resultado pérdidas mínimas de actividad biológica. El grado de conjugación puede monitorizarse estrechamente mediante SDS-PAGE y espectrometría de masas para garantizar una conjugación adecuada de moléculas de PEG a los anticuerpos. Puede separarse PEG sin reaccionar de conjugados de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
anticuerpo-PEG mediante exclusión molecular o mediante cromatografía de intercambio iónico. Pueden someterse a prueba anticuerpos derivatizados con PEG para determinar la actividad de unión así como para determinar la eficacia in vivo usando métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, mediante inmunoensayos descritos en el presente documento.
En otra realización, los anticuerpos se conjugan con albúmina con el fin de hacer que el anticuerpo sea más estable in vivo o para que tenga una semivida in vivo más larga. Las técnicas se conocen bien en la técnica, véanse, por ejemplo, las publicaciones internacionales n.os WO 93/15199, WO 93/15200 y WO 01/77137; y la patente europea n.° EP 413.622, todas las cuales se incorporan en el presente documento como referencia.
5.1.2 Conjugado de anticuerpo
En algunas realizaciones, los anticuerpos se conjugan o fusionan de manera recombinante con un agente de diagnóstico, detectable o terapéutico o cualquier otra molécula. Cuando se desea aumentar la semivida in vivo, dichos anticuerpos puede modificarse. Los anticuerpos conjugados o fusionados de manera recombinante pueden ser útiles, por ejemplo, para detectar tejidos o células que expresan polipéptido de B7-H7 o polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, un método para detectar células o tejido que expresan B7-H7, comprende poner en contacto un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7 con células o tejidos de un sujeto y detectar las células o tejidos a los que se une el anticuerpo. En una realización específica, un método para detectar células o tejido que expresan B7-H7CR, comprende poner en contacto un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR con células o tejidos del sujeto y detectar las células o tejidos a los que se une el anticuerpo. Según tales realizaciones, el anticuerpo puede conjugarse con un resto detectable y la unión de un anticuerpo a células o tejidos puede detectarse mediante la detección de la presencia del resto detectable. Alternativamente, la unión del anticuerpo a células o tejidos puede detectarse mediante la detección usando un anticuerpo secundario marcado que se une al anticuerpo y detectando la presencia del anticuerpo secundario marcado. En determinadas realizaciones, después de incubar células o tejido con el anticuerpo adecuado, se elimina el anticuerpo no unido mediante uno o más lavados antes de detectar las células o tejido a los que se une el anticuerpo. En algunas realizaciones, los métodos para detectar células o tejidos que expresan B7-H7 o B7-H7CR incluyen el uso de controles positivos y/o negativos. Por ejemplo, pueden usarse células o tejidos que se sabe que expresan B7-H7 o B7-H7CR en los métodos como control positivo y pueden usarse células o tejidos que se sabe que no expresan B7-H7 o B7-H7CR en los métodos como control negativo. Los ejemplos de restos detectables incluyen, pero no se limitan a, diversas enzimas, tales como, pero sin limitarse a, peroxidasa del rábano, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa o acetilcolinesterasa; grupos prostéticos, tales como, pero sin limitarse a, estreptavidina/biotina y avidina/biotina; materiales fluorescentes, tales como, pero sin limitarse a, umbeliferona, fluoresceína, isotiocinato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina, fluoresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; materiales luminiscentes, tales como, pero sin limitarse a, luminol; materiales bioluminiscentes, tales como pero sin limitarse a, luciferasa, luciferina y aecuorina;
' 1«1 19C lOI H ¿ oc* o
materiales radiactivos, tales como, pero sin limitarse a, yodo (I, I y I), carbono ( C), azufre ( S), tritio ( H), indio (115In, 112In y 111In), tecnecio (99Tc), talio (201Ti), galio (68Ga, 67gA), paladio (103pD), molibdeno (88Mo), xenón (133Xe), flúor (18F), 153Sm, 177Lu, 199Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge,
57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn y 117Sn, y metales que emiten positrones que usan diversas tomografías de emisión de positrones, e iones de metales paramagnéticos no radiactivos.
En el presente documento se abarcan anticuerpos fusionados de manera recombinante o conjugados químicamente (incluyendo tanto conjugaciones covalentes como no covalentes) con una proteína o polipéptido heterólogo (o fragmento del mismo, preferiblemente con un polipéptido de aproximadamente 5, aproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70, aproximadamente 80, aproximadamente 90 o aproximadamente 100 aminoácidos) para generar proteínas de fusión. En particular, se proporcionan en el presente documento proteínas de fusión que comprenden un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo monoclonal (por ejemplo, un fragmento Fab, fragmento Fd, fragmento Fv, fragmento F(ab)2, un dominio VH, una CDR de VH, un dominio VL o una CDR de VL) y una proteína, polipéptido o péptido heterólogo. En una realización específica, la proteína, polipéptido o péptido heterólogo con el que se fusiona el anticuerpo es útil para dirigir el anticuerpo a un tipo de célula particular.
En el presente documento se abarcan usos de los anticuerpos conjugados o fusionados de manera recombinante con un resto terapéutico o resto de fármaco que modifica una respuesta biológica dada. Los restos terapéuticos o restos de fármaco no han de interpretarse como limitados a los agentes terapéuticos químicos clásicos. Por ejemplo, el resto de fármaco puede ser un péptido o polipéptido que presenta una actividad biológica deseada. Tales proteínas pueden incluir, por ejemplo, interferón-y, interferón-p, interferón-a, interleucina-2 (“IL-2”), interleucina-7 (“IL- 7”), interleucina 9 (“IL-9”), interleucina-10 (“IL-10”), interleucina-12 (“IL-12”), interleucina-15 (“IL-15”), interleucina-23 (“IL-23”), factor estimulante de colonias de macrófagos y granulocitos (“GM-CSF”), factor estimulante de colonias de granulocitos (“G-CSF”)) o un factor de crecimiento. El resto terapéutico o fármaco conjugado o fusionado de manera recombinante con un anticuerpo debe elegirse para lograr el/los efecto(s) profiláctico(s) o terapéutico(s) deseado(s). Un médico u otro personal médico debe considerar lo siguiente a la hora de decir qué resto terapéutico o fármaco conjugar o fusionar de manera recombinante con un anticuerpo: la naturaleza de la enfermedad, la gravedad de la enfermedad y el estado del sujeto.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Además, los anticuerpos pueden fusionarse con secuencias de marcador, tales como un péptido para facilitar la purificación. En realizaciones preferidas, la secuencia de aminoácidos de marcador es un péptido de hexa-histidina, tal como la etiqueta proporcionada en un vector pQE (QIAGEN, Inc.), entre otros, muchos de los cuales están disponibles comercialmente. Tal como se describe en Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824, por ejemplo, la hexa-histidina proporciona una purificación conveniente de la proteína de fusión. Otras etiquetas de péptido útiles para la purificación incluyen, pero no se limitan a, la etiqueta hemaglutinina (“HA”), que se corresponde con un epítopo derivado de la proteína hemaglutinina de la gripe (Wilson et al., 1984, Cell 37:767), y la etiqueta “flag”.
Los métodos para fusionar o conjugar restos terapéuticos (incluyendo polipéptidos) con anticuerpos se conocen bien, véanse, por ejemplo, Arnon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), págs. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, en Controlled Drug Delivery (2a ed.), Robinson et al. (eds.), págs. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, en Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (ed.), págs. 475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (ed.), págs. 303-16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; patentes estadounidenses n.os 5.336.603, 5.622.929, 5.359.046, 5.349.053, 5.447.851, 5.723.125, 5.783.181, 5.908.626, 5.844.095 y 5.112.946; documentos EP 307.434; EP 367.166; EP 394.827; publicaciones internacionales n.os WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631 y Wo 99/04813; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992; que se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad.
En particular, pueden generarse proteínas de fusión, por ejemplo, a través de las técnicas de intercambio génico, intercambio de motivos, intercambio de exones y/o intercambio de codones (denominados conjuntamente “intercambio de ADN”). Puede emplease intercambio de ADN para alterar las actividades de los anticuerpos monoclonales descritos en el presente documento o generados según los métodos proporcionados en el presente documento (por ejemplo, anticuerpos con mayores afinidades y menores tasas de disociación). Véanse, en general, las patentes estadounidenses n.os 5.605.793, 5.811.238, 5.830.721, 5.834.252 y 5.837.458; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson, et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; y Lorenzo y Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-313 (cada una de estas y publicaciones se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad). Pueden alterarse anticuerpos, o los anticuerpos codificados, sometiéndolos a mutagénesis aleatoria mediante PCR propensa a errores, inserción de nucleótidos aleatoria u otros métodos antes de la recombinación. Un polinucleótido que codifica para un anticuerpo monoclonal descrito en el presente documento o generado según los métodos proporcionados en el presente documento puede recombinarse con uno o más componentes, motivos, secciones, partes, dominios, fragmentos, etc. de una o más moléculas heterólogas.
Un anticuerpo también puede conjugarse con un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpo tal como se describe por Segal en la patente estadounidense n.° 4.676.980, que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad.
Un anticuerpo también puede unirse a dos, tres o más anticuerpos para formar un anticuerpo biespecífico o multiespecífico.
Un anticuerpo también puede unirse a soportes sólidos, que son particularmente útiles para inmunoensayos o purificación de un antígeno. Tales soportes sólidos incluyen, pero no se limitan a, vidrio, celulosa, poliacrilamida, nailon, poliestireno, poli(cloruro de vinilo) o polipropileno.
En determinadas realizaciones, un anticuerpo descrito en esta sección comprende un dominio Fc modificado. Se describen modificaciones del dominio Fc a modo de ejemplo en Mueller et al., 1997, Molecular Immunology 34(6):441-452; Swann et al., 2008, Current Opinion in Immunology 20:493-499; y Presta, 2008, Current Opinion in Immunology 20:460-470.
5.2 AGENTES TERAPÉUTICOS QUE MODULAN LA INTERACCIÓN DE B7-H7 Y B7-H7CR
En un aspecto, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que modulan una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por un polipéptido de B7-H7 nativo que se une a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7CR). En otro aspecto, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que modulan una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por un B7-H7CR nativo que se une a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7). En una realización específica, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que modulan una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 nativo se une a un polipéptido de B7-H7CR nativo. En otra realización específica, un agente terapéutico modula la interacción entre un polipéptido de B7-H7CR nativo y un polipéptido de B7-H7 nativo. En otro aspecto, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que modulan la expresión de un polipéptido
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
de B7-H7CR nativo o un polipéptido de B7-H7 nativo. En una realización específica, un agente terapéutico modula selectivamente la expresión de un polipéptido de B7-H7CR nativo o un polipéptido de B7-H7 nativo. Véanse las secciones 5.2.1 a 5.2.6, más adelante, para ejemplos específicos de agentes terapéuticos.
En una realización específica, se modulan una o más rutas de transducción de señales poniendo en contacto un
agente terapéutico con una célula inmunitaria o una población de células inmunitarias. En otra realización, se
modula la interacción entre B7-H7 y uno o más de sus receptores (por ejemplo, B7-H7CR) poniendo en contacto un
agente terapéutico con una célula inmunitaria o una población de células inmunitarias. En otra realización, se
modula la interacción entre B7-H7CR y sus ligandos (por ejemplo, B7-H7) poniendo en contacto un agente terapéutico con una célula inmunitaria o una población de células inmunitarias. En otra realización, se modula la expresión de B7-H7 o B7-H7CR poniendo en contacto un agente terapéutico con una célula inmunitaria o una población de células inmunitarias que expresan B7-H7 o B7-HCR, respectivamente.
En una realización específica, un agente terapéutico modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En determinadas realizaciones, un agente terapéutico modula selectivamente una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En determinadas realizaciones, un agente terapéutico induce selectivamente una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En realizaciones específicas, un agente terapéutico induce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico. En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) induce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no induce, o induce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) induce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no induce, o induce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico activa o potencia selectivamente una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En realizaciones específicas, un agente terapéutico activa o potencia una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico. En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) activa o potencia una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no activa ni potencia, o activa o potencia una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) activa o potencia una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no activa ni potencia, o activa o potencia una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En algunas realizaciones, un agente terapéutico inhibe o reduce selectivamente una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En realizaciones específicas, un agente terapéutico inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico. En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no inhibe ni reduce, o inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En realizaciones específicas, un agente terapéutico: (i) inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico; y (ii) no inhibe ni reduce, o inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En otra realización, un agente terapéutico modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7- H7CR. En determinadas realizaciones, el agente terapéutico modula selectivamente la interacción de B7-H7 y B7- H7CR. En otra realización, un agente terapéutico inhibe o reduce la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico. En otra realización, un agente terapéutico: (i) inhibe o reduce la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico, y (ii) no inhibe ni reduce, o inhibe o reduce la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la unión de B7-H7 a uno o más de otros receptores de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En otra realización, un agente terapéutico: (i) inhibe o reduce la unión de B7-H7 a B7-H7CR en al menos el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 95%, el 75% y el 95% o el 75% y el 100% en relación con la unión de B7-H7 a B7-H7CR en ausencia del agente terapéutico, y (ii) no inhibe ni reduce, o inhibe o reduce la unión de B7-H7CR a uno más de otros ligandos en menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 5%, el 2% y el 10%, el 5% y el 10%, el 5% y el 15%, el 5% y el 20%, el 10% y el 15% o el 15% y el 20% en relación con la unión de B7-H7CR a uno o más de otros ligandos de este tipo en ausencia del agente terapéutico.
En determinadas realizaciones, los agentes terapéuticos inducen, activan o potencian una o más respuestas o funciones inmunitarias (es decir, los agentes son agentes terapéuticos inmunoestimulantes). En otras realizaciones, los agentes terapéuticos suprimen o reducen una o más respuestas o funciones inmunitarias (es decir, los agentes son agentes terapéuticos inhibidores). La modulación de una o más respuestas o funciones inmunitarias puede estar en forma de, por ejemplo, una respuesta de anticuerpos (respuesta humoral) o una respuesta inmunitaria celular, por ejemplo, secreción de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma), actividad auxiliar o citotoxicidad celular. En una realización, se modula la secreción de citocinas, producción de anticuerpos, función efectora, proliferación de células T y/o proliferación de células NK tras el contacto con un agente terapéutico. En una realización específica, se
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
modulan una o más respuestas o funciones inmunitarias poniendo en contacto un agente terapéutico con una célula inmunitaria o una población de células inmunitarias.
5.2.1 Anticuerpos específicos para B7-H7 o B7-H7CR
En un aspecto, el agente terapéutico es un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 nativo y modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por la unión del polipéptido de B7-H7 nativo a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7CR). En otro aspecto, el agente terapéutico es un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR nativo y modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por el polipéptido de B7-H7CR nativo que se une uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7- H7). En algunas realizaciones, el agente terapéutico activa, potencia o induce una o más de las rutas de transducción de señales. En otras realizaciones, el agente terapéutico inhibe o reduce una o más de las rutas de transducción de señales. En otro aspecto, el agente terapéutico es un anticuerpo que modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, un agente terapéutico es un anticuerpo que modula la interacción entre B7-H7CR y B7- H7. En una realización específica, el agente terapéutico es un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 e inhibe o reduce la unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR. En otra realización específica, el agente terapéutico es un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 e inhibe o reduce la unión del polipéptido de B7-H7CR al polipéptido de B7-H7. Véase la sección 5.1 y siguientes, anteriormente, para anticuerpos y conjugados o fusión de los mismos que modulan la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En algunas realizaciones, tales anticuerpos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, tales anticuerpos son agentes terapéuticos inhibidores.
En algunas realizaciones, un anticuerpo que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7- H7CR induce al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo se une a un receptor nativo de polipéptido de B7-H7 (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR nativo), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, un anticuerpo que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR activa o potencia en al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo se une a un receptor nativo de polipéptido de B7-H7 (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR nativo), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En otras realizaciones, un anticuerpo que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR no induce o induce menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo se une a un receptor de polipéptido de B7-H7 (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR nativo), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. La una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, polipéptido de B7- H7CR) a un polipéptido de B7-H7 pueden medirse, por ejemplo, evaluando la activación de un resto de transducción de señales (por ejemplo, activación de cinasa Jun, activación de cinasa MAP, activación de PKC), la translocación de un factor de transcripción (por ejemplo, NF-kappa B o Stat1) y la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17, interferón-gamma o factor de necrosis tumoral alfa) usando técnicas tales como ELISA, inmunotransferencias de tipo Western, ensayos de desplazamiento de electromovilidad y otros inmunoensayos.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es el anticuerpo designado 2D3, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o una forma humana o humanizada del mismo. En algunas realizaciones, un agente terapéutico es el anticuerpo designado 4-5, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, o una forma humana o humanizada del mismo.
En determinadas realizaciones, un anticuerpo descrito en esta sección comprende un dominio Fc modificado. Se describen modificaciones del dominio Fc a modo de ejemplo en Mueller et al., 1997, Molecular Immunology 34(6):441-452; Swann et al., 2008, Current Opinion in Immunology 20:493-499; y Presta, 2008, Current Opinion in Immunology 20:460-470.
5.2.2 Polipéptidos y derivados
5.2.2.1 Polipéptidos y derivados de B7-H7
En un aspecto, un agente terapéutico es un polipéptido de B7-H7. En una realización, un agente terapéutico de este tipo modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7CR. En una realización, la proteína de B7-H7 se une a y agoniza la transducción de señales a través B7-H7CR. En otra realización, la proteína de B7-H7 se une a B7-H7CR y antagoniza la transducción de señales bloqueando la unión de un ligando nativo (por ejemplo, B7-H7). En una realización específica, un agente terapéutico de este tipo modula una o más de las rutas de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En otra realización específica, un agente terapéutico de este tipo modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR.
En otro aspecto, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7. En una realización, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7 que modula una o más rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7CR. En una realización específica, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7 que modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En otra realización, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7 que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En determinadas realizaciones, el derivado de B7-H7 es un agente terapéutico inmunoestimulante. En otras realizaciones, el derivado de B7-H7 es un agente terapéutico inhibidor.
En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7 es: (a) un polipéptido que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntico a un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo; (c) un polipéptido que contiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más o de 2 a 5, de 2 a 10, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20, de 10 a 15 o de 15 a 20 mutaciones de aminoácido (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relación con un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo; (d) un polipéptido codificado por ácidos nucleicos puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con ácidos nucleicos que codifican para un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo; (e) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una secuencia de ácido nucleico que codifica para un fragmento de un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo de al menos 20 aminoácidos contiguos, al menos 30 aminoácidos contiguos, al menos 40 aminoácidos contiguos, al menos 50 aminoácidos contiguos, al menos 75 aminoácidos contiguos, al menos 100 aminoácidos contiguos, al menos 125 aminoácidos contiguos o al menos 150 aminoácidos contiguos, o de 20 a 50, de 25 a 75, de 25 a 100, de 25 a 150, de 50 a 75, de 50 a 100, de 75 a 100, de 50 a 150, de 75 al 150, de 100 a 150 o de 100 a 200 aminoácidos contiguos; o (f) un fragmento de un polipéptido de B7-H7 de mamífero nativo. Los derivados de B7-H7 también incluyen un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de una forma madura que se produce de manera natural de un polipéptido de B7-H7 de mamífero y una secuencia de aminoácidos de péptido señal heterólogo.
En una realización, un derivado de B7-H7 es un derivado de un polipéptido de B7-H7 humano nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7 es un derivado de una forma inmadura o precursora de un polipéptido de B7-H7 humano que se produce de manera natural. En otra realización, un derivado de B7-H7 es un derivado de una forma madura de polipéptido de B7-H7 humano que se produce de manera natural. En una realización específica, un derivado de B7-H7 se aísla o se purifica.
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7 nativo con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50, de 25 a 75 mutaciones (por ejemplo, sustituciones, inserciones y/o deleciones de aminoácido). En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una o más mutaciones que aumentan la afinidad de B7-H7 por uno o más de sus receptores, por ejemplo, B7-H7CR (en particular, B7-H7CR nativo). En otras realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una o más mutaciones que disminuyen la afinidad de B7-H7 por uno o más de sus receptores, por ejemplo, B7-H7CR (en particular, B7-H7CR nativo). En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una o más mutaciones en uno más de los dominios de tipo V de tipo Ig y/o dominios de tipo C-1 de tipo Ig de B7-H7 nativo y tales mutaciones cambian (por ejemplo, aumentan) la afinidad de B7-H7 por B7-H7CR. En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una o más mutaciones en uno o más de los siguientes residuos de aminoácido de B7-H7 nativo: 141-144, 156, 158, 160, 162, 193-196, 198, 200, 201, 224 y/o 225. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una o más mutaciones en uno o más de los siguientes residuos de aminoácido que se predice que son sitios de glicosilación con unión a N: 90, 103 y/o 127. Pueden introducirse mutaciones en posiciones específicas con B7-H7 nativo usando, por ejemplo, técnicas de mutagénesis dirigida al sitio y/o técnicas de mutagénesis mediada por PCR. También pueden introducirse mutaciones aleatoriamente a lo largo de toda o parte de la secuencia codificante usando, por ejemplo, técnicas de mutagénesis de saturación. En realizaciones específicas, las mutaciones son sustituciones de aminoácido conservativas.
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7 nativo con 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50 o de 25 a 75 sustituciones de aminoácido. Tales sustituciones de aminoácido pueden ser o bien conservativas, no conservativas, o bien una combinación de ambas. En una realización específica, las sustituciones de aminoácido son sustituciones de aminoácido conservativas, y en determinadas realizaciones, se introducen en uno o más residuos de aminoácido no esenciales predichos. Una sustitución de aminoácido conservativa es una en la que el residuo de aminoácido se reemplaza por un residuo de aminoácido que
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
tiene una cadena lateral con una carga similar. Las familias de residuos de aminoácido que tienen cadenas laterales con cargas similares se han definido en la técnica. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales apolares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales con ramificación beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina).
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) una o más mutaciones en el dominio 2 de tipo
V de tipo Ig. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7 nativo con 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50 o de 25 a 75 sustituciones de aminoácido en el dominio 2 de tipo
V de tipo Ig. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) una o más mutaciones en el dominio 1 de tipo C de tipo Ig. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7 nativo con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50 o de 25 a 75 sustituciones de aminoácido en el dominio 1 de tipo C de tipo Ig.
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende un fragmento de B7-H7 nativo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 280, 23 a 275, 23 a 250, 23 a 225, 23 a 200, 23 a 175, 23 a 150, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 95, 23 a 75, 23 a 70, 23 a 65, 23 a 60, 23 a 50, 15 a 30 ó 5 a 25 de B7-H7 nativo de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc).
En una realización, un derivado de B7-H7 es una forma soluble de B7-H7. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7 nativo, o el dominio extracelular de B7-H7 nativo que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más sustituciones, deleciones, y/o adiciones de aminoácido. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 344 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) un fragmento del dominio extracelular de B7-H7 nativo, o un fragmento del dominio extracelular de B7-H7 nativo que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más mutaciones (por ejemplo, sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácido). En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) al menos 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300 ó 325 aminoácidos del dominio extracelular de B7-H7 nativo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 340, 23 a 325, 23 a 300, 23 a 275, 23 a 250, 23 a 225, 23 a 200, 23 a 175, 23 a 150, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 75 ó 23 a 50 de B7-H7 nativo. En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 375, 23 a 350, de 23 a 340, 23 a 325, 23 a 300, 23 a 275, 23 a 250, 23 a 225, 23 a 200, 23 a 175, 23 a 150, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 75, 23 a 50, 15 a 30 ó 5 a 25 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc).
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio 1 de tipo V de tipo Ig de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 61 a 131 ó 61 a 122 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio de tipo C-1 de tipo Ig de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 138 a 222 ó 140 a 225 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio 2 de tipo V de tipo Ig de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 235 a 328 ó 239 a 317 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 140 a 222 de B7-H7 nativo.
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los dominios de tipo C-1 de tipo Ig y 1 de tipo V de tipo Ig de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 61 a 222 ó 61 a 225 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los dominios de tipo C-1 de tipo Ig y 2 de tipo V de tipo Ig del dominio extracelular de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 138 a 328 ó 140 a 317 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio 1 de tipo V tipo Ig y el dominio 2 de tipo V tipo Ig del dominio extracelular de B7-H7 nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los dominios 1 de tipo V tipo Ig, tipo C-1 de tipo Ig y 2 tipo V tipo Ig del dominio extracelular de B7-H7 nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 61 a 317 ó 61 a 328 de la secuencia encontrada en el n.° de registro O9UM44-1 (UniParc).
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende una sustitución de aminoácido en una, dos o más de las siguientes posiciones: 159, 210, 243 ó 317 de B7-H7 nativo (por ejemplo, B7-H7 humano nativo).
En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los dominios extracelulares y citoplasmáticos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
de B7-H7 nativo o fragmentos del mismo. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) los dominios extracelulares y citoplasmáticos de B7-H7 nativo o fragmentos del mismo que contienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más o de 5 a 15, de 5 a 20, de 2 a 10 ó de 2 a 5 sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácido. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) un fragmento del dominio extracelular de B7-H7 nativo y el dominio citoplasmático de B7-H7 nativo o un fragmento del mismo. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7 nativo y un fragmento del dominio citoplasmático de B7-H7 nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7 carece del dominio transmembrana de B7-H7 nativo o un fragmento del mismo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 comprende un dominio transmembrana heterólogo en lugar del dominio transmembrana de B7-H7 nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7 comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7 nativo o un fragmento del mismo y el dominio transmembrana de B7-H7 nativo o un fragmento del mismo.
La actividad biológica de derivados de B7-H7 puede evaluarse usando técnicas conocidas por los expertos en la técnica, o descritas en el presente documento. Por ejemplo, la capacidad de un derivado de B7-H7 para unirse a uno o más receptores puede evaluarse usando técnicas descritas en el presente documento, o conocidas por los expertos en la técnica. Más específicamente, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7-H7 para unirse a B7-H7CR. Además, la capacidad de un derivado de B7-H7 para unirse a uno o más receptores e inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 nativo al uno o más receptores puede evaluarse usando técnicas descritas en el presente documento, o conocidas por los expertos en la técnica. Más específicamente, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7-H7 para unirse a B7-H7CR e inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, un derivado de B7-H7 conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a B7-H7CR.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con una afinidad mayor que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, ensayos basados en células incluyendo citometría de flujo, ensayo KinEx A, ensayo de resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, ensayo Biacore®) o inmunoprecipitación conjunta. En una realización, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con un 50%, un 75%, un 80%, un 85%, un 90%, un 95% o un 98%, o del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% más de afinidad que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En una realización específica, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log más de afinidad que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta.
En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con una afinidad menor que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica. En una realización, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con un 50%, un 75%, un 80%, un 85%, un 90%, un 95%, o un 98%, o del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% menos de afinidad que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor tal como se mide mediante ensayos/técnicas conocidos en la técnica. En otra realización, un derivado de B7-H7 se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log menos afinidad que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica.
En otras realizaciones determinadas, un derivado de B7-H7 conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, ensayos basados en células incluyendo citometría de flujo, ensayo KinEx A, ensayo de resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, ensayo Biacore®) o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, un derivado de B7-H7 conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a B7-H7CR.
En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7 conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 nativo se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. La una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) a un polipéptido de B7-H7 pueden medirse, por ejemplo, evaluando la activación de un resto de transducción de señales (por ejemplo, activación de Jun cinasa, activación de MAP cinasa, activación de PKC), la translocación de un factor de transcripción (por ejemplo, NF-kappa B o Stat1) y la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-5, ILK-10, IL-17, interferón-gamma o factor de necrosis tumoral alfa) usando técnicas tales como ELISA, inmunotransferencias de tipo Western, ensayos de desplazamiento de electromovilidad y otros inmunoensayos. En una realización específica, un derivado de B7-H7 conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un polipéptido de B7-H7 nativo a B7-H7CR.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7 se une a su receptor nativo (por ejemplo, B7-H7CR nativo) e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7 nativo al receptor nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7 se une a B7-H7CR nativo e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la activación o inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7 se une a B7-H7CR nativo e induce al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75%, el 50% y el 98% o el 75% y el 100% de más de nivel de actividad que la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la activación o inducción de una o más moléculas de transducción de señales.
En algunas otras realizaciones, un derivado de B7-H7 conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 nativo se une a un receptor de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En una realización específica, un derivado de B7-H7 conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un polipéptido de B7-H7 nativo a B7-H7CR.
5.2.2.2 Polipéptidos y derivados de B7-H7CR
En un aspecto, un agente terapéutico es un polipéptido de B7-H7CR. En una realización, un agente terapéutico es un polipéptido de B7-H7CR que modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7. En una realización la proteína de B7-H7CR se une a y agoniza la transducción de señales a través del B7-H7. En otra realización la proteína de B7-H7CR se une a B7-H7 y bloquea la unión a B7-H7CR. En una realización específica, un agente terapéutico es un polipéptido de B7-H7CR que modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En otra realización específica, un agente terapéutico es un polipéptido de B7-H7CR que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR.
En otro aspecto, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7CR. En una realización, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7CR que modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7. En una realización específica, un agente terapéutico es un derivado de B7-H7CR que modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En otra realización, un agente terapéutico de este tipo modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En determinadas realizaciones, el derivado de B7-H7 es un agente terapéutico inmunoestimulante. En otras realizaciones, el derivado de B7-H7 es un agente terapéutico inhibidor.
En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7CR es: (a) un polipéptido que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntico a un polipéptido de B7-H7CR nativo; (b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo; (c) un polipéptido que contiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o de 2 a 5, de 2 a 10, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20, de 10 a 15 o de 15 a 20 mutaciones de aminoácido (es decir, adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relación con un polipéptido de B7-H7CR nativo; (d) un polipéptido codificado por ácidos nucleicos puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con ácidos nucleicos que codifican para un polipéptido de B7-H7CR nativo; (e) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucleico que puede hibridarse en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
secuencia de ácido nucleico que codifica para un fragmento de un polipéptido de B7-H7CR nativo de al menos 20 aminoácidos contiguos, al menos 30 aminoácidos contiguos, al menos 40 aminoácidos contiguos, al menos 50 aminoácidos contiguos, al menos 75 aminoácidos contiguos, al menos 100 aminoácidos contiguos, al menos 125 aminoácidos contiguos o al menos 150 aminoácidos contiguos o de 20 a 50, de 25 a 75, de 25 a 100, de 25 a 150, de 50 a 75, de 50 a 100, de 75 a 100, de 50 a 150, de 75 al 150, de 100 a 150 o de 100 a 200 aminoácidos contiguos; o (f) un fragmento de un polipéptido de B7-H7CR nativo. Los derivados de B7-H7CR también incluyen un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de una forma madura que se produce de manera natural de un polipéptido de B7-H7CR de mamífero y una secuencia de aminoácidos de péptido señal heterólogo. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR es un derivado de un polipéptido de B7-H7CR humano nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR es un derivado de una forma inmadura o precursora de un polipéptido de B7-H7CR humano que se produce de manera natural. En otra realización, un derivado de B7-H7CR es un derivado de una forma madura de polipéptido de B7-H7CR humano que se produce de manera natural. En una realización, un derivado de B7-H7CR se aísla o se purifica.
En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7CR nativo con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50, de 25 a 75 mutaciones (por ejemplo, sustituciones, inserciones y/o deleciones de aminoácido). En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende una o más mutaciones que aumentan la afinidad de B7-H7CR por uno o más de sus ligandos, por ejemplo, B7-H7 (en particular, B7-H7 nativo). En otras realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende una o más mutaciones que disminuyen la afinidad de B7-H7CR por uno o más de sus ligandos, por ejemplo, B7-H7 (en particular, B7-H7 nativo). En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7CR comprende una o más mutaciones en el dominio de tipo V de tipo Ig de B7-H7CR nativo y tales mutaciones aumentan la afinidad de B7-H7CR por B7-H7. Pueden introducirse mutaciones en posiciones específicas con B7-H7CR nativo usando, por ejemplo, técnicas de mutagénesis dirigida al sitio y/o técnicas de mutagénesis mediada por PCR. También pueden introducirse mutaciones aleatoriamente a lo largo de toda o parte de la secuencia codificante usando, por ejemplo, técnicas de mutagénesis de saturación.
En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) la secuencia de aminoácidos de B7-H7CR nativo con 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o en el intervalo de 1 a 5, de 1 a 10, de 2 a 15, de 5 a 20, de 5 a 30, de 10 a 50 o de 25 a 75 sustituciones de aminoácido. Tales sustituciones de aminoácido pueden ser o bien conservativas, no conservativas, o bien una combinación de ambas. En una realización específica, las sustituciones de aminoácido son sustituciones de aminoácido conservativas, y en determinadas realizaciones, se introducen en uno o más residuos de aminoácido no esenciales predichos.
En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende un fragmento de B7-H7CR nativo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 280, 23 a 275, 23 a 250, 23 a 225, 23 a 200, 23 a 175, 23 a 150, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 95, 23 a 75, 23 a 70, 23 a 65, 23 a 60, 23 a 50, 15 a 30 ó 5 a 25 de B7-H7CR nativo de la secuencia encontrada en el n.° de registro Q96BF3-1 (UniParc). En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR tiene una o más mutaciones en los residuos de aminoácido 227-277. En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7CR tiene una o más mutaciones en los sitios de glicosilación con unión a N (residuos de aminoácido 73, 105 y 127). En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR tiene una mutación (por ejemplo, una sustitución) en el residuo de serina 220.
En una realización, un derivado de B7-H7CR es una forma soluble de B7-H7CR. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7CR nativo, o el dominio extracelular de B7-H7CR nativo que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más o de 2 a 5, de 5 a 10, de 5 a 15 o de 10 a 20 sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácido. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 150 de la secuencia encontrada en el n.° de registro Q9BF3-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) un fragmento del dominio extracelular de B7-H7CR nativo, o un fragmento del dominio extracelular de B7-H7CR nativo que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más mutaciones (por ejemplo, sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácido). En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) al menos 25, 50, 75, 100 ó 125 aminoácidos del dominio extracelular de B7-H7CR nativo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 145, 23 a 140, 23 a 130, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 95, 23 a 75, 23 a 70, 23 a 65, 23 a 60 ó 23 a 50 de B7-H7CR nativo. En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) 23 a 145, 23 a 140, 23 a 130, 23 a 125, 23 a 100, 23 a 95, 23 a 75, 23 a 70, 23 a 65, 23 a 60 ó 23 a 50 residuos de aminoácido de la secuencia encontrada en el n.° de registro Q96BF3-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) el dominio tipo Ig de B7-H7CR nativo. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 129 de la secuencia encontrada en el n.° de registro Q96BF3-1 (UniParc). En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los residuos de aminoácido 23 a 129, 23 a 150 o 129 a 150 de la secuencia Q96BF3-1.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende una sustitución de aminoácido en una, dos o más de las siguientes posiciones: 44, 67, 81, 112, 192, 197 ó 222 de B7-H7CR nativo (por ejemplo, B7-H7 humano
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
nativo).
En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los dominios extracelulares y citoplasmáticos de B7-H7CR nativo o fragmentos del mismo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) los dominios extracelulares y citoplasmáticos de B7-H7CR nativo o fragmentos del mismo que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 o más, o de 2 a 5, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20 o de 10 a 20 sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácido. En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) un fragmento del dominio extracelular de B7-H7CR nativo y el dominio citoplasmático de B7-H7CR nativo o un fragmento del mismo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7CR nativo y un fragmento del dominio citoplasmático de B7-H7CR nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR carece del dominio transmembrana de B7-H7CR nativo o un fragmento del mismo. En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR comprende un dominio transmembrana heterólogo en lugar del dominio transmembrana de B7-H7CR nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR comprende (o consiste en) el dominio extracelular de B7-H7CR nativo o un fragmento del mismo y el dominio transmembrana de B7-H7CR nativo o un fragmento del mismo.
La actividad biológica de derivados de B7-H7CR puede evaluarse usando técnicas conocidas por los expertos en la técnica, o descritas en el presente documento. Por ejemplo, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7- H7CR para unirse a uno o más ligandos usando técnicas descritas en el presente documento, o conocidas por los expertos en la técnica. Más específicamente, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7-H7CR para unirse a B7-H7. Además, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7-H7CR para unirse a uno o más ligandos e inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7CR nativo al uno o más ligandos usando técnicas descritas en el presente documento, o conocidas por los expertos en la técnica. Más específicamente, puede evaluarse la capacidad de un derivado de B7-H7CR para unirse a B7-H7 e inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7), tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a B7-H7.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7- H7) con una afinidad mayor que con la que B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) con un 25%, un 50%, un 75%, un 80%, un 85%, un 90%, un 95%, o del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% de más afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas conocidos. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) con una 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log más afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR con una afinidad menor que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En una realización, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR con el 25%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% de menos afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En otra realización, un derivado de B7-H7CR se une a un ligando nativo de B7-H7CR con una 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 menos afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos.
En otras realizaciones determinadas, un derivado de B7-H7CR conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7), tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a B7-H7.
En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7CR conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) se une a un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR de mamífero nativo), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. La una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un ligando nativo de B7-H7CR a un polipéptido de B7-H7CR pueden medirse, por ejemplo, evaluando la activación de un resto de transducción de señales (por ejemplo, activación de Jun cinasa, activación de MAP cinasa, activación de PKC), la translocación de un factor de transcripción (por ejemplo, NF-kappa B o Stat1) y la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL- 17, interferón-gamma o factor de necrosis tumoral alfa) usando técnicas tales como ELISA, inmunotransferencias de tipo Western, ensayos de desplazamiento de electromovilidad y otros inmunoensayos. En una realización específica, un derivado de B7-H7CR conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a un polipéptido de B7-H7CR nativo.
En determinadas realizaciones, un derivado de B7-H7CR se une a su ligando nativo (por ejemplo, B7-H7 nativo) e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7CR nativo al ligando nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En realizaciones específicas, un derivado de B7-H7CR se une a B7-H7 nativo e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7CR nativo a B7-H7 nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En algunas realizaciones, un derivado de B7-H7CR se une a B7-H7 e induce al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75%, el 50% y el 98% o el 75% y el 90% de más nivel de actividad que la unión de B7-H7CR nativo a B7-H7 nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales.
En algunas otras realizaciones, un derivado de B7-H7CR conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un ligando nativo (por ejemplo, B7- H7) se une a un polipéptido de B7-H7CR nativo (por ejemplo, un polipéptido de B7-H7CR de mamífero nativo), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En una realización específica, un derivado de B7- H7CR conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a un polipéptido de B7-H7CR nativo.
5.2.3 Proteínas de fusión
En un aspecto, un agente terapéutico es una proteína que comprende un polipéptido de B7-H7 y una molécula heteróloga (por ejemplo, una secuencia de aminoácidos heteróloga). En una realización, un agente terapéutico de este tipo modula una o más de las rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7CR. En una realización el agente terapéutico se une a y agoniza la transducción de señales a través del receptor B7-H7CR. En otra realización el agente terapéutico se une a B7-H7CR y antagoniza la transducción de señales bloqueando la unión de un ligando nativo (por ejemplo, B7-H7). En una realización específica, un agente terapéutico de este tipo modula una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a B7-H7CR. En otra realización específica, un agente terapéutico de este tipo modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En una realización, un agente terapéutico comprende B7-H7 nativo y una molécula heteróloga. En otra realización, un agente terapéutico comprende un derivado de B7-H7 y una secuencia de aminoácidos heteróloga. Véase la sección 5.2.2.1, anteriormente, para derivados de B7-H7. En algunas realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inhibidores.
En una realización específica, un agente terapéutico es una proteína de fusión que comprende un polipéptido de B7- H7 y una secuencia de aminoácidos heteróloga. En una realización, un agente terapéutico es una proteína de fusión que comprende un polipéptido de B7-H7 y una región constante de una inmunoglobulina o un fragmento de la misma (por ejemplo, CH1, CH2 y/o CH3). Pueden usarse regiones de Fc de, por ejemplo, IgG1, IgG2 o IgG4 nativa para producir una proteína de fusión de este tipo. Además, pueden usarse dominios Fc de IgG1/IgG4 híbridos para producir una proteína de fusión de este tipo como también dominios Fc de IgG1 modificada (por ejemplo, IgG1 modificada para mejorar la unión a determinados receptores de Fc gamma; IgG1 modificada para minimizar la función efectora; IgG1 con o sin glicano alterado; e IgG1 con unión a FcRn alterada dependiente del pH) y dominios Fc de IgG4 modificada (por ejemplo, IgG4 modificada para evitar la unión a receptores de Fc gamma y/o complemento). Se describen modificaciones del dominio Fc a modo de ejemplo en Mueller et al., 1997, Molecular Immunology 34(6):441-452; Swann et al., 2008, Current Opinion in Immunology 20:493-499; y Presta, 2008, Current Opinion in Immunology 20:460-470. En una realización específica, un agente terapéutico es la proteína de fusión B7- H7-Ig descrita en el ejemplo 6, más adelante. En algunas realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inhibidores.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es una proteína de fusión o un conjugado que comprende un polipéptido de B7-H7 y una molécula orgánica de interés. Según estas realizaciones, el polipéptido de B7-H7 puede usarse como resto de direccionamiento para dirigir la molécula orgánica con la que está fusionado o conjugado a órganos o tejidos particulares (por ejemplo, órganos o tejidos linfoides). Los ejemplos a continuación proporcionan información referente a los órganos y tejidos que expresan B7-H7. En realizaciones específicas, el polipéptido de B7-H7 comprende el dominio extracelular de B7-H7 nativo o un fragmento del mismo que conserva la capacidad para unirse a uno o más receptores de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR). En determinadas realizaciones, el polipéptido de B7-H7 es un derivado de B7-H7 nativo. La molécula orgánica fusionada conjugada con el polipéptido de B7-H7 puede ser una molécula que un experto en la técnica está interesado en dirigir a un/unos órgano(s) o tejido(s) particular(es) (por ejemplo, órganos o tejidos linfoides) (por ejemplo, una citocina, fármaco, marcador, etc.).
En otro aspecto, un agente terapéutico es una proteína que comprende un polipéptido de B7-H7CR y una molécula heteróloga. En una realización, un agente terapéutico de este tipo modula una o más rutas de transducción de señales mediadas por B7-H7. En una realización el agente terapéutico se une a y agoniza la transducción de señales a través del B7-H7. En otra realización el agente terapéutico se une a B7-H7 nativo y bloquea la unión a B7- H7CR. En una realización específica, un agente terapéutico de este tipo modula la interacción de B7-H7 y B7-H7CR. En una realización, un agente terapéutico comprende B7-H7CR nativo y una molécula heteróloga. En otra realización, un agente terapéutico comprende un derivado de B7-H7CR y una secuencia de aminoácidos heteróloga. Véase la sección 5.2.2.2, anteriormente, para derivados de B7-H7CR. En algunas realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inhibidores.
En una realización específica, un agente terapéutico es una proteína de fusión que comprende B7-H7CR y una molécula heteróloga. En una realización, un agente terapéutico es una proteína de fusión que comprende un polipéptido de B7-H7 y una región constante de una inmunoglobulina o un fragmento de la misma (por ejemplo, CH1, CH2 y/o CH3). Pueden usarse regiones de Fc de, por ejemplo, IgG1, IgG2 o IgG4 nativa para producir una proteína de fusión de este tipo. Además, pueden usarse dominios Fc de IgG1/IgG4 híbridos para producir una proteína de fusión de este tipo como también dominios Fc de IgG1 modificados (por ejemplo, IgG1 modificada para mejorar la unión a determinados receptores de Fc gamma; IgG1 modificada para minimizar la función efectora; IgG1 con o sin glicano alterado; e IgG1 con unión a FcRn alterada dependiente del pH) y dominios Fc de IgG4 modificada (por ejemplo, IgG4 modificada para evitar la unión a receptores de Fc gamma y/o complemento). Se describen modificaciones del dominio Fc a modo de ejemplo en Mueller et al., 1997, Molecular Immunology 34(6):441-452; Swann et al., 2008, Current Opinion in Immunology 20:493-499; y Presta, 2008, Current Opinion in Immunology 20:460-470. En una realización específica, un agente terapéutico es la proteína de fusión B7-H7CR descrita en el ejemplo 6, más adelante. En algunas realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, tales agentes terapéuticos son agentes terapéuticos inhibidores.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es una proteína de fusión o un conjugado que comprende un polipéptido de B7-H7CR y una molécula orgánica. Según estas realizaciones, el polipéptido de B7-H7CR puede usarse como resto de direccionamiento para dirigir la molécula orgánica con la que está fusionado o conjugado a órganos o tejidos particulares (por ejemplo, órganos o tejidos linfoides). Los ejemplos a continuación proporcionan información referente a órganos y tejidos que expresan B7-H7CR. En realizaciones específicas, el polipéptido de B7- H7CR comprende el dominio extracelular de B7-HCR nativo o un fragmento del mismo que conserva la capacidad para unirse a uno o más ligandos de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7). En determinadas realizaciones, el polipéptido de B7-H7CR es un derivado de B7-H7CR nativo. La molécula orgánica fusionada conjugada con el polipéptido de B7-H7CR puede ser cualquier molécula que un experto en la técnica está interesado en dirigir a órganos o tejidos particulares (por ejemplo, testículos, colon, pulmón, riñón, páncreas, intestino delgado, hígado o músculo esquelético) (por ejemplo, una citocina, fármaco, marcador, etc.).
El polipéptido de B7-H7 o polipéptido de B7-H7CR puede unirse de manera covalente o no covalente a una molécula heteróloga. En determinadas realizaciones, el polipéptido de B7-H7 o el polipéptido de B7-H7CR se une de manera covalente o no covalente directamente a una molécula heteróloga (por ejemplo, combinando secuencias de aminoácidos mediante enlaces peptídicos). En otras realizaciones, el polipéptido de B7-H7 o el polipéptido de B7- H7CR se une a una molécula heteróloga usando uno o más ligadores. Los ligadores adecuados para conjugar el polipéptido de B7-H7 o el polipéptido de B7-H7CR con una molécula heteróloga comprenden péptidos, grupos alquilo, grupos alquilo químicamente sustituidos, polímeros o cualquier otra sustancia química unida de manera covalente o unida de manera no covalente que puede unir entre sí dos o más componentes. Los ligadores de polímero comprenden cualquier polímero conocido en la técnica, incluyendo polietilenglicol (“PEG”). En algunas realizaciones, el ligador es un péptido que tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más aminoácidos de longitud. En una realización específica, el ligador es lo suficientemente largo como para conservar la capacidad del polipéptido de B7-H7 para unirse al polipéptido de B7-H7CR. En otras realizaciones, el ligador es lo suficientemente largo como para conservar la capacidad del polipéptido de B7-H7 para unirse al polipéptido de B7-H7CR e inducir una o más rutas de transducción de señales inducidas por la interacción entre el polipéptido de B7-H7 nativo y el polipéptido de B7-H7CR nativo. En realizaciones específicas, el ligador conserva la formación de enlaces disulfuro.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es el dominio Fc de una inmunoglobulina IgG o un fragmento del mismo. En determinadas realizaciones, la molécula heteróloga es polietilenglicol (PEG). En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un resto terapéutico que presenta una actividad biológica deseada. En determinadas realizaciones, la molécula heteróloga es interferón-y, interferón-p, interferón-a, interleucina-2 (“IL-2”), interleucina-7 (“IL-7”), interleucina 9 (“IL-9”), interleucina-10 (“IL-10”), interleucina-12 (“IL-12”), interleucina-15 (“IL-15”), interleucina- 23 (“IL-23”), factor estimulante de colonias de macrófagos y granulocitos (“GM-CSF”), factor estimulante de colonias de granulocitos (“G-CSF”)) o un factor de crecimiento.
En algunas realizaciones, la molécula heteróloga aumenta la estabilidad de la proteína. Los ejemplos no limitativos de tales moléculas incluyen polietilenglicol (PEG), dominio Fc de una inmunoglobulina IgG, un fragmento del mismo o forma modificada del mismo, o albúmina que aumentan la semivida de B7-H7 o B7-H7CR in vivo. Véase, por ejemplo, la sección 5.1.1 para una descripción respecto a dominios Fc modificados. En determinadas realizaciones, las moléculas heterólogas no son un dominio Fc de una molécula de inmunoglobulina o un fragmento del mismo. En otras realizaciones, las moléculas heterólogas reducen la unión a receptores de Fc, por ejemplo, la molécula heteróloga es un dominio Fc de una inmunoglobulina o un fragmento del mismo con afinidad reducida por un receptor de Fc (por ejemplo, FcRn).
En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es un resto detectable. Los ejemplos no limitativos de restos detectables incluyen diversas enzimas, tales como, pero sin limitarse a, peroxidasa del rábano, fosfatasa alcalina, beta-galactosidasa o acetilcolinesterasa; grupos prostéticos, tales como, pero sin limitarse a, estreptavidina/biotina y avidina/biotina; materiales fluorescentes, tales como, pero sin limitarse a, umbeliferona, fluoresceína, isotiocinato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina, fluoresceína, cloruro de dansilo o ficoeritrina; materiales luminiscentes, tales como, pero sin limitarse a, luminol; materiales bioluminiscentes, tales como pero sin limitarse a, luciferasa,
1 1Q1 ioc ico 191
luciferina y aecuorina; materiales radiactivos, tales como, pero sin limitarse a, yodo (I, I, I y I), carbono (14C), azufre (35S), tritio (3H), indio (115In, 113In, 112In y 111In,), tecnecio (99Tc), talio (201Ti), galio (68Ga, 67Ga), paladio
(102Pd), molibdeno (99Mo), xenón (133Xe), flúor (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn y 117Sn; y metales que emiten positrones que usan diversas tomografías de emisión de positrones, e iones de metales paramagnéticos no radiactivos.
En algunas realizaciones, la molécula heteróloga es una secuencia de aminoácidos de marcador o un péptido penetrante. Las secuencias de aminoácidos de marcador puede facilitar la purificación de una proteína. Los ejemplos de secuencias de aminoácidos de marcador incluyen, pero no se limitan a, un péptido de hexa-histidina (tal como la etiqueta proporcionada en un vector pQE (QIAGEN, Inc.)), una etiqueta de hemaglutinina (“HA”) (que se corresponde con un epítopo derivado de la proteína hemaglutinina de la gripe (Wilson et al., 1984, Cell 37:767)), el dominio Fc de una inmunoglobulina y la etiqueta “flag”.
5.2.4 Ácidos nucleicos
5.2.4.1 Ácidos nucleicos de B7-H7
En un aspecto, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que son ácidos nucleicos que codifican para B7-H7. En una realización, el B7-H7 codificado por el ácido nucleico puede unirse a uno o más receptores de B7-H7 nativo (por ejemplo, B7-H7CR). En una realización específica, el B7-H7 codificado por los ácidos nucleicos puede unirse a B7-H7CR. En realizaciones específicas, el B7-H7 codificado por los ácidos nucleicos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones específicas, el B7-H7 codificado por los ácidos nucleicos son agentes terapéuticos inhibidores.
En la técnica se conocen secuencias de ácido nucleico que codifican para B7-H7 nativo y se han descrito en la bibliografía. Por ejemplo, las secuencias de ácido nucleico que codifican para B7-H7 nativo pueden encontrarse en publicaciones y bases de datos públicamente disponibles, por ejemplo, el sitio web del National Center for Biotechnology Information en ncbi.nlm.nih.gov. Pueden usarse técnicas de clonación bien conocidas en la técnica para generar ácidos nucleicos que codifican para B7-H7. Véanse, por ejemplo, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley y Sons, Inc. (1995); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2a ed.), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989); Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual, volúmenes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1997-1999).
En una realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para B7-H7 nativo. En otra realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para una proteína de fusión descrita en la sección 5.2.3, anteriormente. En otra realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para un derivado de B7-H7. Véase la sección 5.2.2.1, anteriormente, para derivados de B7-H7 que los ácidos nucleicos pueden codificar.
En realizaciones específicas, los ácidos nucleicos que codifican para B7-H7 incluyen: (a) una secuencia de ácido nucleico que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 nativo; (b) una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de B7-H7 nativo; (c) una secuencia de ácido nucleico que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o de 2 a 5, de 2 a 10, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20, de 10 a 15 o de 15 a 20 mutaciones de bases de ácido nucleico (por ejemplo, adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relación con la secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 nativo; (d) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 nativo; (e) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con un fragmento de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 nativo; y (f) una secuencia de ácido nucleico que codifica para un fragmento de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 nativo.
En una realización específica, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7 es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7 humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7- H7 es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma inmadura o precursora de un polipéptido de B7-H7 humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7 es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma madura de un polipéptido de B7-H7 humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico codifica para un derivado de B7-H7 descrito en la sección 5.2.2.1, anteriormente. En determinadas realizaciones, la secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7 incluye residuos que no se producen de manera natural.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico incluyen secuencias de ácido nucleico con codones optimizados que codifican para el polipéptido de B7-H7 nativo, incluyendo formas maduras e inmaduras del polipéptido de B7-H7. En otras realizaciones, las secuencias de ácido nucleico incluyen ácidos nucleicos que codifican para transcritos de ARN de B7-H7 que contienen mutaciones que eliminan posibles sitios de corte y empalme y elementos de inestabilidad (por ejemplo, elementos ricos en A/T o A/U) sin afectar a la secuencia de aminoácidos para aumentar la estabilidad de los transcritos de ARN de B7-H7.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a un receptor nativo de polipéptido de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a B7-H7CR.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que tiene una afinidad mayor por un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR nativo) que B7-H7 nativo por el mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con el 25%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, o del 25% al 50%, del 50% al 75%, del 75% al 95% o del 50% al 95% de más afinidad que B7- H7 nativo por el mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas conocidos. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log más afinidad que con la que el B7- H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a un receptor nativo de B7-H7 con una afinidad menor que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En una realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a un receptor nativo de B7-H7 con el 25%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% de menos afinidad que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En otra realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a un receptor nativo de B7-H7 con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log menos afinidad
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
que con la que el B7-H7 nativo se une al mismo receptor, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos.
En otras realizaciones determinadas, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7 nativo para unirse a B7-H7CR.
En algunas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) se une a un polipéptido de B7-H7 nativo, tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. La una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un polipéptido de B7-H7 a un receptor de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR) pueden medirse, por ejemplo, evaluando la activación de un resto de transducción de señales (por ejemplo, activación de Jun cinasa, activación de MAP cinasa, activación de PKC), la translocación de un factor de transcripción (por ejemplo, NF-kappa B o Stat1) y la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17, interferón- gamma o factor de necrosis tumoral alfa) usando técnicas tales como ELISA, inmunotransferencias de tipo Western, ensayos de desplazamiento de electromovilidad y otros inmunoensayos. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un polipéptido de B7-H7 nativo a B7-H7CR.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a su receptor nativo (por ejemplo, B7-H7CR nativo) e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7 nativo al receptor nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la activación o inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En realizaciones específicas, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a B7-H7CR e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la activación o inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En algunas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que se une a B7-H7CR e induce al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75%, el 50% y el 98% o el 75% y el 90% de más nivel de actividad que la unión de B7-H7 nativo a B7-H7CR nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la activación o inducción de una o más moléculas de transducción de señales.
En algunas otras realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un polipéptido de B7-H7 nativo se une a un receptor de un receptor nativo de B7-H7 (por ejemplo, B7-H7CR), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7 que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un polipéptido de B7-H7 nativo a B7-H7CR.
5.2.4.2 Ácidos nucleicos de B7-H7CR
En un aspecto, se presentan en el presente documento agentes terapéuticos que son ácidos nucleicos que codifican para B7-H7CR. En una realización, el B7-H7CR codificado por los ácidos nucleicos puede unirse a uno o más ligandos de B7-H7CR nativo (por ejemplo, B7-H7). En una realización específica, el B7-H7CR codificado por los ácidos nucleicos puede unirse a B7-H7. En realizaciones específicas, el B7-H7CR codificado por los ácidos nucleicos son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones específicas, el B7-H7CR codificado por los ácidos nucleicos son agentes terapéuticos inhibidores.
En la técnica se conocen secuencias de ácido nucleico que codifican para B7-H7CR nativo y se han descrito en la bibliografía. Por ejemplo, las secuencias de ácido nucleico que codifican para B7-H7CR nativo pueden encontrarse en publicaciones y bases de datos públicamente conocidas, por ejemplo, el sitio web del National Center for Biotechnology Information en ncbi.nlm.nih.gov. Pueden usarse técnicas de clonación bien conocidas en la técnica
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
para generar ácidos nucleicos que codifican para B7-H7CR. Véase, por ejemplo, Ausubel et al., Current Protocols in Biología molecular, John Wiley y Sons, Inc. (1995); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2a ed.), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989); Birren et al., Genome Analysis: A Laboratory Manual, volúmenes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1997-1999).
En una realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para B7-H7CR nativo. En otra realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para una proteína de fusión descrita en la sección 5.2.3, anteriormente. En otra realización, el agente terapéutico comprende ácidos nucleicos que codifican para un derivado de B7-H7CR. Véase la sección 5.2.2.2, anteriormente, para derivados de B7-H7CR que los ácidos nucleicos pueden codificar.
En realizaciones específicas, los ácidos nucleicos que codifican para B7-H7CR incluyen: (a) una secuencia de ácido nucleico que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo; (b) una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es al menos el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o es del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% idéntica a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de B7-H7CR nativo; (c) una secuencia de ácido nucleico que contiene 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más, o de 2 a 5, de 2 a 10, de 5 a 10, de 5 a 15, de 5 a 20, de 10 a 15 o de 15 a 20 mutaciones de bases de ácidos nucleicos (por ejemplo, adiciones, deleciones y/o sustituciones) en relación con la secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo; (d) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo; (e) una secuencia de ácido nucleico que se hibrida en condiciones de hibridación de rigurosidad alta, moderada o típica con un fragmento de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo; y (f) una secuencia de ácido nucleico que codifica para un fragmento de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR nativo.
En una realización específica, un derivado de B7-H7CR en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR humano. En otra realización, un derivado de B7-H7CR en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma inmadura o precursora de un polipéptido de B7-H7CR humano nativo. En otra realización, un derivado de B7-H7CR en el contexto de ácidos nucleicos es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma madura de un polipéptido de B7-H7CR humano nativo.
En una realización específica, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7CR es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para un polipéptido de B7-H7CR humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7CR es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma inmadura o precursora de un polipéptido de B7-H7CR humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7CR es un derivado de una secuencia de ácido nucleico que se produce de manera natural que codifica para una forma madura de un polipéptido de B7-H7 humano nativo. En otra realización, una secuencia de ácido nucleico codifica para un derivado de B7-H7CR descrito en la sección 5.2.2.2, anteriormente. En determinadas realizaciones, la secuencia de ácido nucleico que codifica para un polipéptido de B7-H7CR incluye residuos que no se producen de manera natural.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico incluyen secuencias de ácido nucleico con codones optimizados que codifican para polipéptido de B7-H7CR nativo, incluyendo formas maduras e inmaduras del polipéptido de B7-H7CR. En otras realizaciones, las secuencias de ácido nucleico incluyen ácidos nucleicos que codifican para transcritos de ARN de B7-H7CR que contienen mutaciones que eliminan posibles sitios de corte y empalme y elementos de inestabilidad (por ejemplo, elementos ricos en A/T o A/U) sin afectar a la secuencia de aminoácidos para aumentar la estabilidad de los transcritos de ARN de B7-H7CR de mamífero.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a B7-H7.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que tiene una afinidad mayor por un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7 nativo) que B7-H7CR nativo por el mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) con el 25%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, o del 25% al 50%, del 50% al 75%, del 75% al 95% o del 50% al 95% de más afinidad que B7-H7CR nativo por el mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas conocidos. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log más afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a un ligando nativo de B7-H7CR con una afinidad menor que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En una realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a un ligando nativo de B7-H7CR con el 25%, el 50%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 75%, del 50% al 95% o del 75% al 95% de menos afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos. En otra realización, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a un ligando nativo de B7-H7CR con 0,5 log, 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log o 3 log menos afinidad que con la que el B7-H7CR nativo se une al mismo ligando, tal como se mide mediante ensayos/técnicas bien conocidos.
En otras realizaciones determinadas, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7), tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ELISA, Biacore o inmunoprecipitación conjunta. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la función de un polipéptido de B7-H7CR nativo para unirse a B7-H7.
En algunas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un ligando nativo de B7-H7CR (por ejemplo, B7-H7) se une a un polipéptido de B7-H7CR nativo, tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. La una o más rutas de transducción de señales inducidas por la unión de un ligando de polipéptido de B7-H7CR a un polipéptido de B7-H7CR pueden medirse, por ejemplo, evaluando la activación de un resto de transducción de señales (por ejemplo, activación de Jun cinasa, activación de MAP cinasa, activación de PKC), la translocación de un factor de transcripción (por ejemplo, NF-kappa B o Stat1) y la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17, interferón- gamma o factor de necrosis tumoral alfa) usando técnicas tales como ELISA, inmunotransferencias de tipo Western, ensayos de desplazamiento de electromovilidad y otros inmunoensayos. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico de derivado de B7-H7CR codifican para una proteína o polipéptido que conserva al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75% o el 75% y el 100% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a un polipéptido de B7-H7CR nativo.
En determinadas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a su ligando nativo (por ejemplo, B7-H7 nativo) e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7CR nativo al ligando nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En realizaciones específicas, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a B7-H7 e induce un nivel mayor de actividad que la unión de B7-H7CR nativo a B7-H7 nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales. En algunas realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que se une a B7-H7 e induce al menos el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 25% y el 98%, el 50% y el 75%, el 50% y el 98% o el 75% y el 90% de más nivel de actividad que la unión de B7-H7CR nativo a B7-H7 nativo tal como se evalúa mediante, por ejemplo, la inducción de una o más moléculas de transducción de señales.
En algunas otras realizaciones, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas cuando un ligando nativo (por ejemplo, B7-H7) se une a un polipéptido de B7-H7CR nativo, tal como se mide mediante ensayos bien conocidos en la técnica. En una realización específica, las secuencias de ácido nucleico codifican para un polipéptido de B7-H7CR que conserva menos del 20%, el 15%, el 10%, el 5% o el 2%, o en el intervalo de entre el 2% y el 20%, el 2% y el 15%, el 2% y el 10% o el 2% y el 5% de la capacidad para activar o inducir una o más de las rutas de transducción de señales inducidas por la unión de B7-H7 a un polipéptido de B7-H7CR nativo.
5.2.4.3 Ácidos nucleicos que codifican para anticuerpos
En un aspecto, un agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que modula la interacción entre B7-H7 y uno o más de sus receptores (por ejemplo, B7-H7CR). En otro aspecto, un agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que modula la interacción entre B7-H7CR y uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7). En una realización específica, un agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que modula la interacción del polipéptido de B7-H7 y el polipéptido de B7-H7CR. En una realización específica, el agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7 e inhibe o reduce la unión del polipéptido de B7-H7 al polipéptido de B7-H7CR. En otra realización específica, un agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de B7-H7CR e inhibe o reduce la unión del polipéptido de B7-H7CR al polipéptido de B7-H7. En realizaciones específicas, un agente terapéutico es un anticuerpo (incluyendo conjugados de anticuerpo o proteínas de fusión) descrito en la sección 5.1, anteriormente o la sección 5.2.1, anteriormente. En algunas realizaciones, los anticuerpos codificados por las secuencias de ácido nucleico son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, los anticuerpos codificados por las secuencias de ácido nucleico son agentes terapéuticos inhibidores.
5.2.4.4 Constructos y expresión recombinante
Los ácidos nucleicos que codifican para una proteína pueden insertarse en constructos de ácido nucleico para la expresión en células de mamífero, células de animales distintos de mamífero, células de insecto, células vegetales, bacterias, hongo, levadura y virus.
Los constructos de ácido nucleico pueden comprender uno o más elementos de regulación transcripcional operativamente unidos a la secuencia codificante de una proteína. Los elementos de regulación transcripcional se encuentran normalmente en 5’ con respecto a la secuencia codificante y dirigen la transcripción de los ácidos nucleicos que codifican para una proteína. En algunas realizaciones, se usan uno o más de los elementos de regulación transcripcional que se encuentra en la naturaleza que regulan la transcripción del gen nativo para controlar la transcripción. En otras realizaciones, se usan uno o más elementos de regulación transcripcional que son heterólogos con respecto al gen nativo para controlar la transcripción. Puede usarse cualquier elemento de regulación transcripcional conocido por un experto en la técnica. Los ejemplos no limitativos de los tipos de elemento(s) de regulación transcripcional(es) incluyen un promotor constitutivo, un promotor específico de tejido y un promotor inducible. En una realización específica, se controla la transcripción, al menos en parte, mediante un/unos elemento(s) de regulación transcripcional(es) de mamífero (en algunas realizaciones, ser humano). En una realización específica, se controla la transcripción, al menos en parte, mediante un promotor fuerte, por ejemplo, CMV.
Los ejemplos específicos de promotores que pueden usarse para controlar la transcripción incluyen, pero no se limitan a, la región promotora temprana de SV40 (Bernoist & Chambon, 1981, Nature 290:304-310), el promotor contenido en la repetición terminal larga en 3’ del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787- 797), el promotor de la timidina cinasa del herpes (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:1441-1445), las secuencias reguladoras del gen de la metalotioneína (Brinster et al., 1982, Nature 296:39-42); adenovirus (ADV), citomegalovirus (CMV), virus del papiloma bovino (BPV), promotor de parovirus B19p6, vectores de expresión procariota tales como el promotor de beta-lactamasa (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731) o el promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21 -25); véase también “Useful proteins from recombinant bacteria” en Scientific American, 1980, 242:74-94; vectores de expresión de plantas que comprenden la región promotora de nopalina sintetasa (Herrera-Estrella et al., Nature 303:209-213) o el promotor de ARN 35S del virus del mosaico de la coliflor (Gardner, et al., 1981, Nucl. Acids Res. 9:2871), y el promotor de la enzima fotosintética ribulosa bifosfato carboxilasa (Herrera-Estrella et al., 1984, Nature 310:115-120); elementos promotores de levadura u otros hongos tales como el promotor Gal 4, el promotor de la ADC (alcohol deshidrogenasa), promotor de la PGK (fosfoglicerol cinasa), promotor de la fosfatasa alcalina, y las siguientes regiones de control de la transcripción animal, que presentan especificidad de tejido y se han utilizado en animales transgénicos: región de control del gen de la elastasa I que es activa en células pancreáticas acinares (Swift et al.,
1984, Cell 38:639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515); región de control del gen de la insulina que es activa en células pancreáticas beta (Hanahan,
1985, Nature 315:115-122), región de control del gen de la inmunoglobulina que es activa en células linfoides (Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658; Adames et al., 1985, Nature 318:533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444), región de control del virus de tumor mamario de ratón que es activa en células testiculares,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
de mama, linfoides y mastocitos (Leder et al., 1986, Cell 45:485-495), región de control del gen de la albúmina que es activa en el hígado (Pinkert et al., 1987, Genes y Devel. 1:268-276), región de control del gen de la alfa- fetoproteína que es activa en el hígado (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 235:53-58; región de control del gen de la alfa 1 -antitripsina que es activa en el hígado (Kelsey et al., 1987, Genes y Devel. 1:161-171), región de control del gen de la beta-globina que es activa en células mieloides (Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94; región de control del gen de la proteína básica de la mielina que es activa en células oligodendrocíticas en el cerebro (Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); región de control del gen de la cadena ligera 2 de miosina que es activa en el músculo esquelético (Sani, 1985, Nature 314:283-286) y región de control del gen de la hormona liberadora gonadotrópica que es activa en el hipotálamo (Mason et al., 1986, Science 234:1372-1378). En otros aspectos, puede usarse un promotor inducible.
Los constructos de ácido nucleico también pueden comprender uno o más elemento(s) de regulación postranscripcional operativamente unido(s) a la secuencia codificante de una proteína. Los elementos de regulación postranscripcional pueden estar en 5’ y/o 3’ con respecto a la secuencia codificante y dirigir la regulación postranscripcional de la traducción de transcritos de ARN que codifican para una proteína.
En otro aspecto, el constructo de ácido nucleico puede ser un vector de direccionamiento génico que reemplaza a una región reguladora existente de un gen por una secuencia reguladora aislada de un gen diferente o una secuencia reguladora novedosa tal como se describe, por ejemplo, en las publicaciones internacionales n.os WO 94/12650 y WO 01/68882, que se incorporan como referencia en el presente documento en su totalidad.
El constructo de ácido nucleico elegido dependerá de una variedad de factores, incluyendo, sin limitación, la resistencia de los elementos de regulación transcripcional y la célula que va a usarse para expresar una proteína. Los constructos de ácido nucleico pueden ser un plásmido, fagémido, cósmido, vector viral, fago, cromosoma artificial, y similares. En un aspecto, los vectores pueden ser vectores episomales, de integración homóloga o no homóloga, que pueden introducirse en las células adecuadas mediante cualquier medio adecuado (transformación, transfección, conjugación, fusión de protoplastos, electroporación, precipitación con fosfato de calcio, microinyección directa, etc.) para transformarlas.
Los constructos de ácido nucleico pueden ser un plásmido o un vector de integración estable para la expresión transitoria o estable de una proteína en células. Para la expresión estable, el vector puede mediar en la integración cromosómica en un sitio diana o un sitio cromosómico aleatorio. Los ejemplos no limitativos de sistemas de célula- vector que pueden usarse para expresar una proteína incluyen sistemas de células de mamífero infectadas con virus (por ejemplo, virus de vaccinia, adenovirus, retrovirus, lentivirus, etc.); sistemas de células de insecto infectadas con virus (por ejemplo, baculovirus); microorganismos tales como levadura que contiene vectores de levadura, o bacterias transformadas con bacteriófago, ADN, ADN plasmídico o ADN cósmido; y líneas celulares estables generadas mediante transformación usando un marcador seleccionable. En algunas realizaciones, los constructos de ácido nucleico incluyen un gen marcador seleccionable incluyendo, pero sin limitarse a, neo, gpt, dhfr, ada, pac, hyg, CAD e hisD.
Los constructos de ácido nucleico pueden ser monocistrónicos o multicistrónicos. Un constructo de ácido nucleico multicistrónico puede codificar para 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más, o en el intervalo de 2-5, 5-10 o 10-20 genes/secuencias de nucleótidos. Por ejemplo, un constructo de ácido nucleico bicistrónico puede comprender en el siguiente orden un promotor, un primer gen y un segundo gen. En un constructo de ácido nucleico de este tipo, la transcripción de ambos genes está dirigida por el promotor, mientras que la traducción del ARNm del primer gen es mediante un mecanismo de barrido dependiente de cap y la traducción del ARNm del segundo gen es mediante un mecanismo independiente de cap, por ejemplo, mediante un IRES.
Las técnicas para poner en práctica los aspectos de esta invención dependerán, a menos que se indique lo contrario, de técnicas convencionales de biología molecular, microbiología y manipulación y producción de ADN recombinante, que un experto en la técnica pone en práctica de manera rutinaria. Véanse, por ejemplo, Sambrook, 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, segunda edición; DNA Cloning, volúmenes I y II (Glover, Ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (Gait, Ed. 1984); Nucleic Acid Hybridización (Hamel & Higgins, Eds. 1984); Transcription and Translation (Hanes & Higgins, Eds. 1984); Animal Cell Culture (Freshney, Ed. 1986); Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Miller & Calos, eds. 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods in Enzymology, volúmenes 154 y 155 (Wu & Grossman, y Wu, eds., respectivamente), (Mayer & Walquer, eds., 1987); Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London, Scopes, 1987), Expression of Proteins in Mammalian Cells Using Vaccinia Viral Vectors in Current Protocols in Molecular Biology, volumen 2 (Ausubel et al., Eds., 1991).
Los constructos de ácido nucleico que comprenden ácidos nucleicos que codifican para una proteína pueden administrarse in vivo a un mamífero o transfectarse en células primarias o inmortalizadas en cultivo. En determinados aspectos, los constructos de ácido nucleico que comprenden ácidos nucleicos que codifican para una proteína se administran a un mamífero para la expresión recombinante de una proteína in vivo. En otros aspectos, las células transfectadas con los constructos de ácido nucleico ex vivo se trasplantan o se implantan en un sujeto.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Por tanto, en determinadas realizaciones, un constructo de ácido nucleico es un agente terapéutico. En otras realizaciones, las células trasplantadas con un constructo de ácido nucleico son el agente terapéutico.
En otro aspecto, los ácidos nucleicos que codifican para una proteína pueden usarse para generar células de mamífero que expresan de manera recombinante una proteína en altas cantidades para el aislamiento y la purificación. La producción y purificación de proteína recombinante se conocen bien en la técnica, por ejemplo, véase la publicación internacional n.° WO 07/070488, que se incorpora como referencia en el presente documento en su totalidad. En resumen, el polipéptido puede producirse de manera intracelular, en el espacio periplásmico o secretarse directamente al medio. El sobrenadante o lisado celular que comprende el polipéptido puede purificarse usando, por ejemplo, cromatografía de hidroxiapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía de afinidad. También están disponibles otras técnicas para la purificación de proteínas tales como fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, precipitación con etanol, HPLC de fase inversa, cromatografía sobre sílice, cromatografía sobre heparina SEpHAROSE™ (sustancia de filtración en gel; Pharmacia Inc., Piscataway, Nueva Jersey), cromatografía en una resina de intercambio aniónico o catiónico (tal como una columna de poli(ácido aspártico)), cromatoenfoque, SDS-PAGE y precipitación con sulfato de amonio.
5.2.5 Células
Las células pueden modificarse mediante ingeniería genética para que expresen la(s) proteína(s) codificada(s) por los ácidos nucleicos y constructos de ácido nucleico descritos en la sección 5.2.4, anteriormente (por ejemplo, sección 5.2.4.4, anteriormente). En una realización, tales células expresan cantidades de proteína que son al menos 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces o más de 50 veces mayores que las cantidades de proteína expresadas endógenamente por células de control (por ejemplo, células que no se han modificado por ingeniería genética para expresar de manera recombinante proteína, o células que comprenden un vector vacío). Además, las células pueden modificarse mediante ingeniería genética para que expresen los anticuerpos descritos en las secciones 5.1 y 5.2.1 anteriormente, usando técnicas bien conocidas por un experto en la técnica, véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.os 5.807.715, 6.331.415 y 6.818.216; las publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os US 2002/0098189, US 2004/0028685, US 2005/0019330 y US 2007/0086943; la publicación internacional n.2 WO 02/46237; y Harlow et al., Antibodies. A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed. 1988); Hammerling, et al., en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981) (dichas referencias se incorporan como referencia en el presente documento en su totalidad). Las células elegidas para la expresión de ácidos nucleicos dependerán del uso previsto de las células. Pueden considerarse factores tales como si una célula glicosila de manera similar a células que expresan endógenamente una proteína para seleccionar las células.
Los ejemplos no limitativos de células que pueden usarse para expresar la(s) proteína(s) codificadas por los constructos de ácido nucleico descritos en la sección 5.2.4.4, anteriormente, o los anticuerpos descritos en las secciones 5.1 y 5.2.1, anteriormente, incluyen células de mamífero, células de animales distintos de mamífero, células bacterianas, células fúngicas, células de levadura, células primarias, células imortalizada, células vegetales y células de insecto. En una realización específica, las células son una línea celular de mamífero. Los ejemplos de líneas celulares de mamífero incluyen, pero no se limitan a, células COS, CHO, HeLa, NIH3T3, HepG2, MCF7, HEK, 293T, RD, PC12, hibridomas, células pre-B, 293, 293H, K562, SkBr3, BT474, A204, M07Sb, Raji, Jurkat, MOLT-4, CTLL-2, MC-IXC, SK-N-MC, SK-N-MC, SK-N-DZ, SHSY5Y, C127, N0 y BE(2)-C. En la técnica se conocen otras líneas celulares de mamífero disponibles como huéspedes para la expresión e incluyen muchas líneas celulares inmortalizadas disponibles de la Colección americana de cultivos tipo (ATCC). En otra realización, las células son líneas celulares inmortalizadas derivadas de un sujeto. En otra realización, las células son células primarias o secundarias de un sujeto. En una realización particular, las células son células cancerosas. En otra realización, las células son células fetales/embrionarias. En algunas realizaciones, las células son células progenitoras. En algunas realizaciones, las células son linfocitos (por ejemplo, células T y células B). En otra realización, las células son células madre. En aún otra realización, las células modificadas mediante ingeniería genética para expresar los constructos de ácido nucleico de la sección 5.2.4.4, anteriormente, son de un adulto.
En una realización específica, la referencia a una célula transfectada con ácidos nucleicos incluye la célula objeto particular transfectada con los ácidos nucleicos y la progenie o posible progenie de un célula de este tipo. La progenie de una célula de este tipo puede no ser idéntica a la célula original transfectada con la molécula de ácido nucleico debido a mutaciones o influencias ambientales que pueden producirse en generaciones sucesivas o la integración de la molécula de ácido nucleico en el genoma celular.
En algunas realizaciones, se utilizan células aisladas en el presente documento. En una realización específica, las células aisladas están al menos el 80%, el 90%, el 95% o el 98% libres de un tipo de célula diferente tal como se mide mediante una técnica conocida por un experto en la técnica, tal como citometría de flujo. En otras palabras, al menos el 80%, el 90%, el 95% o el 98% de las células aisladas son del mismo tipo celular.
Puede usarse cualquier técnica conocida por un experto en la técnica para transfectar o transducir células con ácidos nucleicos incluyendo, por ejemplo, transformación, transfección, conjugación, fusión de protoplastos,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
electroporación, precipitación con fosfato de calcio, microinyección directa e infección con virus, incluyendo pero sin limitarse a adenovirus, lentivirus y retrovirus. En una realización, las células se transfectan de manera transitoria con ácidos nucleicos. En otra realización, las células se transfectan de manera estable con ácidos nucleicos.
Para la producción de alto rendimiento a largo plazo de una proteína recombinante, pueden generarse líneas celulares estables. Por ejemplo, pueden transformarse líneas celulares usando los constructos de ácido nucleico de la sección 5.2.4.4 que pueden contener un gen marcador seleccionable en los mismos o en un constructo de ácido nucleico diferente. El gen marcador seleccionable puede introducirse en la misma célula mediente cotransfección. Tras la introducción del vector, se permite que las células crezcan durante 1-2 días en medios enriquecidos antes de cambiarlas a medios selectivos para permitir el crecimiento y la recuperación de células que expresan satisfactoriamente los ácidos nucleicos introducidos. Pueden proliferar clones resistentes de células transformadas de manera estable usando técnicas de cultivo tisular bien conocidas en la técnica que son adecuadas para el tipo celular. En una realización particular, la línea celular se ha adaptado para crecer en medio libre de suero. En una realización, la línea celular se ha adaptado para crecer en medio libre de suero en matraces agitadores. En una realización, la línea celular se ha adaptado para crecer en matraces de agitación o rotación. En determinadas realizaciones, la línea celular se cultiva en suspensión.
En una realización específica, un método particularmente preferido de producción de alto rendimiento de un polipéptido recombinante de la presente invención es a través del uso de amplificación de dihidrofolato reductasa (DHFR) en células CHO deficientes en DHFR, mediante el uso de niveles sucesivamente crecientes de metotrexato tal como se describe en la patente estadounidense n.° 4.889.803, que se incorpora como referencia en el presente documento en su totalidad. El polipéptido obtenido de tales células puede estar en una forma glicosilada.
En una realización específica, los constructos de ácido nucleico son adecuados para la introducción y la expresión en células primarias aisladas de un sujeto. Las células primarias se modifican mediante ingeniería genética para expresar una proteína. En una realización específica, las células primarias aisladas de un sujeto se modifican mediante ingeniería genética adicionalmente para expresar de manera recombinante otro polipéptido terapéutico, por ejemplo, una citocina (por ejemplo, IL-1, IL-2, IL-6, IL-11, IL-12, I-13, TNF-alfa, GM-CSF, interferón-a, interferón- P o interferón-y), CD3, un factor de crecimiento o un fragmento o derivado del mismo. En una realización específica, las células primarias aisladas de un sujeto se modifican mediante ingeniería genética adicionalmente para expresar de manera recombinante un antígeno de un cáncer.
En determinadas realizaciones, se usan células modificadas mediante ingeniería genética para expresar una proteína como un agente terapéutico y se implantan o se trasplantan en un sujeto para prevenir, tratar o gestionar una enfermedad.
5.2.6 Compuestos
En otro aspecto, un agente terapéutico es un compuesto (por ejemplo, una molécula pequeña). En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un compuesto que modula la interacción entre B7-H7 y uno o más de sus receptores (por ejemplo, B7-H7CR). En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es un compuesto que modula la interacción entre B7-H7CR y uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H7). En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un compuesto que modula la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR. En otras realizaciones, un agente terapéutico es un compuesto que modula la expresión de B7-H7 o B7-H7CR. En realizaciones específicas, un agente terapéutico es un agente terapéutico inmunoestimulante. En otras realizaciones específicas, un agente terapéutico es un agente terapéutico inhibidor. Los ejemplos de compuestos incluyen, pero no se limitan a, péptidos; proteínas; peptoides; biooligómeros aleatorios; diversómeros tales como hidantoínas, benzodiazepinas, dipéptidos; polipéptidos vinílogos; peptidomiméticos no peptídicos; oligocarbamatos; peptidilfosfonatos; ácidos nucleicos (por ejemplo, iARN, antisentido y microARN); anticuerpos; e hidratos de carbono. En una realización específica, un agente terapéutico es una molécula pequeña.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico es una molécula de ácido nucleico antisentido que inhibe o reduce la expresión de B7-H7 o B7-H7CR. Una molécula antisentido puede unirse mediante hidrógeno a un ácido nucleico sentido. El ácido nucleico antisentido puede ser complementario a toda una hebra codificante, o a sólo un fragmento de la misma, por ejemplo, toda o parte de la región codificante de proteínas (o marco de lectura abierto). Una molécula de ácido nucleico antisentido puede ser antisentido con respecto a toda o parte de una región no codificante de la hebra codificante de una secuencia de nucleótidos que codifica para una proteína. Las regiones no codificantes (“regiones no traducidas en 5’ y 3’”) son las secuencias en 5’ y 3’ que flanquean la región codificante y no se traducen en aminoácidos.
Una molécula de ácido nucleico antisentido puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ó 50, o de 5 a 25, de 5 a 50, de 10 a 25, de 10 a 50, de 15 a 25, de 15 a 50, de 20 a 30, de 20 a 40, de 20 a 50, de 25 a 40 o de 25 a 50 nucleótidos o más de longitud. Una molécula de ácido nucleico antisentido puede construirse usando reacciones de síntesis química y ligación enzimática usando procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, un ácido nucleico antisentido (por ejemplo, un oligonucleótido antisentido) puede sintetizarse químicamente usando nucleótidos que se producen de manera natural o nucleótidos modificados de manera diversa
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
diseñados para aumentar la estabilidad biológica de las moléculas o para aumentar la estabilidad física del dúplex formado entre los ácidos nucleicos antisentido y sentido, por ejemplo, pueden usarse derivados de fosforotioato y nucleótidos sustituidos con acridina. Los ejemplos de nucleótidos modificados que pueden usarse para generar la molécula de ácido nucleico antisentido incluyen 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-clorouracilo, 5-yodouracilo, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5-(carboxihidroxilmetil)uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5- carboximetilaminometiluracilo, dihidrouracilo, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1- metilguanina, 1-metilinosina, 2,2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6- adenina, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouracilo, beta-D-manosilqueosina, 5’- metoxicarboximetiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v), wibutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, éster metílico de ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v), 5-metil-2-tiouracilo, 3-(3-amino-3-N-2- carboxipropil)uracilo, (acp3)w y 2,6-diaminopurina. Alternativamente, el ácido nucleico antisentido puede producirse biológicamente usando un vector de expresión en el que un ácido nucleico se ha subclonado en una orientación antisentido (es decir, el ARN transcrito del ácido nucleico insertado estará en una orientación antisentido con respecto a un ácido nucleico de interés diana, descrito adicionalmente en la siguiente subsección). Los expertos en la técnica conocen técnicas para generar moléculas de ácido nucleico antisentido.
En algunas realizaciones, un agente terapéutico es una ribozima que es específica para los ácido nucleicos de B7- H7 o B7-H7CR. Las ribozimas son moléculas de ARN catalíticas con actividad ribonucleasa que pueden escindir un ácido nucleico monocatenario, tal como un ARNm, con el que tienen una región complementaria. Por tanto, pueden usarse ribozimas (por ejemplo, ribozimas en cabeza de martillo (descritas en Haselhoff y Gerlach (1988) Nature 334:585-591)) para escindir catalíticamente transcritos de ARNm para inhibir de ese modo la traducción de la proteína codificada por el ARNm. Puede diseñarse una ribozima que tiene especificidad por una molécula de ácido nucleico que codifica para un polipéptido basándose en la secuencia de nucleótidos de un ADNc dado a conocer en el presente documento. Por ejemplo, puede construirse un derivado de un ARN de IVS L-19 de Tetrahymena en el que la secuencia de nucleótidos del sitio activo es complementaria a la secuencia de nucleótidos que va a escindirse en Cech et al., patente estadounidense n.° 4.987.071; y Cech et al., patente estadounidense n.° 5.116.742. Alternativamente, puede usarse un ARNm que codifica para un polipéptido para seleccionar un ARN catalítico que tiene una actividad ribonucleasa específica de un conjunto de moléculas de ARN. Véase, por ejemplo, Bartel y Szostak (1993) Science 261:1411-1418.
En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un ARN de interferencia pequeño (ARNip) que inhibe o reduce la expresión de B7-H7 o B7-H7CR. En la técnica se conocen técnicas para generar y usar ARNip. Véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.os 7.651.541, 7.608.707 y 7.056.704; Lopez-Fraga et al., 2009, BioDrugs 23(5): 305-332; Hajeri et al., 2009, Drug Discov Today 14(17-18):851 -8; y Tilesi et al., 2009, Curr Opin Mol Ther. 11 (2): 156-64 para información respecto a ARNip.
En algunas realizaciones, los anticuerpos descritos en esta sección 5.3.1 y siguientes están conjugados o fusionados de manera recombinante con un agente de diagnóstico, detectable o terapéutico o cualquier otra molécula. Véase la sección 5.1.2 para una descripción de conjugados de anticuerpo. Las realizaciones descritas en las secciones 5.1.1 y 5.1.2 pueden aplicarse también a los anticuerpos descritos en esta sección.
5.3.4.5 Ácidos nucleicos que codifican para anticuerpos
En un aspecto, un agente terapéutico es una secuencia de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo descrito en la sección 5,3.1, anteriormente (incluyendo conjugado de anticuerpo o proteínas de fusión). En algunas realizaciones, los anticuerpos codificados por las secuencias de ácido nucleico son agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En otras realizaciones, los anticuerpos codificados por las secuencias de ácido nucleico son agentes terapéuticos inhibidores.
5.3.4.6 Constructos y expresión recombinante
Los ácidos nucleicos que codifican para una proteína pueden insertarse en constructos de ácido nucleico para la expresión en células de mamífero, bacterias, levadura y virus. Véase la sección 5.2.4.4 con respecto a información relacionada con constructos para la expresión de ácidos nucleicos. Las realizaciones descritas en esa sección también pueden aplicarse en este caso.
5.3.5 Células
Pueden modificarse mediante ingeniería genética células para expresar la(s) proteína(s) codificada(s) por los constructos de ácido nucleico descritos en la sección 5.2.5, anteriormente. En una realización, tales células expresan cantidades de proteína que son al menos 1 vez, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces, 7 veces, 8 veces, 9 veces, 10 veces, 20 veces, 30 veces, 40 veces, 50 veces o más de 50 veces mayores que las cantidades de proteína expresadas de manera endógena por células de control (por ejemplo, células que no se han modificado mediante ingeniería genética para expresar de manera recombinante proteína, o células que comprenden un vector vacío). Además, las células pueden modificarse mediante ingeniería genética para expresar los anticuerpos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
descritos en la sección 5.3.1 y siguientes, anteriormente, usando técnicas bien conocidas por un experto en la técnica, véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.os 5.807.715, 6.331.415 y 6.818.216; las publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os US 2002/0098189, US 2004/0028685, US 2005/0019330 y US 2007/0086943; la publicación internacional n.° WO 02/46237; y Harlow et al., Antibodies. A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2a ed. 1988); Hammerling, et al., en: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981) (dichas referencias se incorporan como referencia en el presente documento en su totalidad). Las células elegidas para la expresión de ácidos nucleicos dependerán del uso previsto de las células. Pueden considerarse factores tales como si una célula glicosila de manera similar a células que expresan de manera endógena una proteína para seleccionar las células. Véase la sección 5.2.5 anterior para información con respecto a células modificadas mediante ingeniería genética para expresar de manera recombinante una proteína. Las realizaciones descritas en esa sección también pueden aplicarse en este caso.
5.4 COMPOSICIONES
Se presentan en el presente documento composiciones que comprenden uno o más agentes terapéuticos, incluyendo agentes terapéuticos inmunoestimulantes y agentes terapéuticos inhibidores. Las composiciones incluyen composiciones de fármaco a granel útiles en la fabricación de composiciones (por ejemplo, composiciones impuras o no estériles) y composiciones farmacéuticas (es decir, composiciones que son adecuadas para su administración a un sujeto o paciente) que pueden usarse en la preparación de formas de dosificación unitarias. Las composiciones comprenden una cantidad eficaz de un agente terapéutico o una combinación de agentes terapéuticos y un portador farmacéuticamente aceptable. En realizaciones específicas, las composiciones comprenden una cantidad eficaz de uno o más agentes terapéuticos y un portador farmacéuticamente aceptable. En realizaciones específicas, una composición farmacéutica comprende una cantidad de un agente terapéutico que es eficaz para lograr el efecto deseado (por ejemplo, modulación de la proliferación de linfocitos T, modulación de la función inmunitaria, o prevención, tratamiento o gestión de una enfermedad). En algunas realizaciones, la composición comprende además una terapia/agente terapéutico adicional, por ejemplo, agente anticancerígeno, agente antiviral, agente antiinflamatorio, adyuvante. Los ejemplos no limitativos de tales terapias/agentes terapéuticos se proporcionan en la sección 5.7 y siguientes, a continuación.
En una realización específica, el término “farmacéuticamente aceptable” significa aprobado por una autoridad reguladora del gobierno federal o estatal o enumerado en la farmacopea estadounidense u otra farmacopea generalmente aceptada para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos. El término “portador” se refiere a un diluyente, adyuvante (por ejemplo, adyuvante de Freund (completo e incompleto) o, más preferiblemente, adyuvante MF59C.1 disponible de Chiron, Emeryville, CA), excipiente o vehículo con el que se administra el agente terapéutico. Tales portadores farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, tal como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. En una realización, el agua es un portador cuando la composición farmacéutica se administra por vía intravenosa. También pueden emplearse soluciones salinas y disoluciones de glicerol y dextrosa acuosas como portadores líquidos, particularmente para disoluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, caliza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propilenglicol, agua, etanol y similares. La composición, si se desea, también puede contener pequeñas cantidades de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes de tamponamiento del pH. Estas composiciones pueden adoptar la forma de disoluciones, suspensiones, emulsión, comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida, y similares.
Las composiciones farmacéuticas para su uso según los métodos descritos en el presente documento pueden formularse de cualquier manera convencional usando uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.
Generalmente, los componentes de las composiciones farmacéuticas que comprenden agentes terapéuticos se proporciona o bien por separado o bien mezclados juntos en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como un polvo seco liofilizado o concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado tal como una ampolla o sobre que indica la cantidad de agente activo. Cuando el agente terapéutico va a administrarse mediante infusión, puede dispensarse con un frasco de infusión que contiene solución salina o agua de calidad farmacéutica estéril (por ejemplo, PBS). Cuando el agente terapéutico se administra mediante inyección, puede proporcionarse una ampolla de agua estéril para inyección o solución salina de modo que los componentes pueden mezclarse antes de la administración.
En algunas realizaciones, los agentes terapéuticos pueden formularse para su administración mediante cualquier método conocido por un experto en la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, inhalación, insuflación (a través de o bien la boca o bien la nariz), administración oral, intradérmica, transdérmica, intraparenteral, intravenosa, subcutánea, intramuscular, intratumoral y mucosa (tal como bucal, vaginal, rectal, sublingual).
En una realización específica, los agentes terapéuticos se formulan para administración parenteral local o sistémica. En una realización, los agentes terapéuticos se formulan en una disolución farmacéuticamente compatible.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Para la administración oral, las composiciones farmacéuticas que comprenden agentes terapéuticos que son polipéptidos o ácidos nucleicos pueden adoptar la forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparados por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes de unión (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de patata o glicolato sódico de almidón); o agentes humectantes (por ejemplo, laurilsulfato de sodio). Los comprimidos pueden recubrirse mediante métodos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, disoluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden prepararse mediante medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas hidrogenadas comestibles); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, metil o propil-p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales de tampón, agentes aromatizantes, colorantes y edulcorantes según sea apropiado. Las preparaciones para administración oral pueden formularse de manera adecuada para dar una liberación controlada del agente terapéutico o composiciones del mismo. Para la administración bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de comprimidos o pastillas para chupar formulados de manera convencional.
Para la administración mediante inhalación, los agentes terapéuticos se administran de manera conveniente en forma de una presentación de pulverizador de aerosol a partir de envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para administrar una cantidad dosificada. Las cápsulas y los cartuchos de, por ejemplo, gelatina para su uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para que contengan una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Los agentes terapéuticos pueden formularse para administración parenteral mediante inyección, por ejemplo, mediante inyección en bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o recipientes de múltiples dosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Alternativamente, el agente terapéutico puede estar en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso.
Los agentes terapéuticos también pueden formularse en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones descritas previamente, los agentes terapéuticos también pueden formularse para su implantación (por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular) o mediante inyección intramuscular.
En una realización específica, se conocen en la técnica la formulación y administración de diversos agentes terapéuticos quimioterápicos, biológicos/inmunoterápicos y hormonales para su uso en combinación con agentes terapéuticos y se describen en el Physician’s Desk Reference, 63a ed. (2009). En algunas realizaciones, los agentes terapéuticos se formulan con otras terapias, tales como las descritas en la sección 5.7 y siguientes, a continuación. En algunas realizaciones, los agentes terapéuticos que comprenden células que expresan de manera recombinante B7-H7, B7-H7CR, B7-H2, ICOS, CD28 o CTLA-4 se formulan como composiciones farmacéuticas.
5.5 USOS PROFILÁCTICOS Y TERAPÉUTICOS DE AGENTES TERAPÉUTICOS QUE POTENCIAN LA FUNCIÓN INMUNITARIA
5.5.1 Potenciación de la función inmunitaria
En un aspecto, se presentan en el presente documento métodos para potenciar una o más respuestas o funciones inmunitarias en un sujeto, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo. En una realización específica, se presentan en el presente documento métodos para prevenir, tratar y/o gestionar enfermedades en las que es deseable activar o potenciar una o más respuestas o funciones inmunitarias, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo. En otras realizaciones específicas, el método comprende terapia de combinación, en el que el agente terapéutico inmunoestimulante se administra a un sujeto en combinación con otra terapia, tal como las descritas a continuación, para activar o potenciar una o más respuestas o funciones inmunitarias. En determinadas realizaciones, el agente terapéutico inmunoestimulante se administra como un adyuvante en combinación con una composición antigénica. En una realización particular, el agente terapéutico inmunoestimulante se administra en combinación con una composición de vacuna para inducir o activar o potenciar
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
la respuesta inmunitaria provocada por la composición de vacuna.
Los ejemplos no limitativos de enfermedades que pueden prevenirse, tratarse o gestionarse mediante una potenciación de la función inmunitaria incluyen, pero no se limitan a, cáncer, enfermedades infecciosas, enfermedades caracterizadas por macrófagos infiltrantes o aterosclerosis. Se describen a continuación diversos cánceres y enfermedades infecciosas. En una realización específica, un agente terapéutico inmunoestimulante descrito en el presente documento puede usarse para tratar o gestionar un estado asociado con cáncer o un estado que resulta de la administración de una terapia anticancerígena (tal como, por ejemplo, quimioterapia o radiación). En una realización particular, puede usarse un agente terapéutico inmunoestimulante para tratar o gestionar linfocitopenia. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un paciente diagnosticado con cáncer para aumentar la proliferación y/o función efectora de una o más poblaciones de células inmunitarias en el paciente.
En una realización específica, un agente terapéutico inmunoestimulante activa o potencia o induce una o más respuestas o funciones inmunitarias en un sujeto en al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75% o el 75% y el 95% en relación con la función inmunitaria en un sujeto al que no se le ha administrado el agente terapéutico inmunoestimulante usando ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ensayos de ELISPOT, ELISA y de proliferación celular. En una realización específica, la función inmunitaria es liberación de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma, IL-2, IL-5, IL- 10, IL-12 o factor de crecimiento transformante (TGF) - beta). En una realización, la función inmunitaria es proliferación de células NK, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de células que expresan marcadores de células NK (por ejemplo, CD56). En una realización, la función inmunitaria es proliferación de células T, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de células que expresan marcadores de células T (por ejemplo, CD3, CD4 o CD8). En otra realización, la función inmunitaria es producción de anticuerpos, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante ELISA. En algunas realizaciones, la función inmunitaria es función efectora, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante un ensayo de citotoxicidad u otros ensayos bien conocidos en la técnica. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th1. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th2. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th17. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th22. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta de memoria.
En realizaciones específicas, los ejemplos no limitativos de funciones inmunitarias que pueden potenciarse mediante el agente terapéutico inmunoestimulante son proliferación/expansión de linfocitos (por ejemplo, aumento en el número de linfocitos), inhibición de la apoptosis de linfocitos, activación de células dendríticas (o células presentadoras de antígenos) y presentación de antígenos. En realizaciones particulares, una función inmunitaria potenciada por el agente terapéutico inmunoestimulante es proliferación/expansión en el número de o la activación de células T CD4+ (por ejemplo, células T auxiliares Th1 y Th2), células T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, células T alfa/beta y células T gamma/delta), células B (por ejemplo, células plasmáticas), células T de memoria, células B de memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígenos, macrófagos, mastocitos, células T citolíticas naturales (células NKT), células T residentes en tumores, células T CD122+ o células citolíticas naturales (células NK). En una realización, el agente terapéutico inmunoestimulante activa o potencia la proliferación/expansión o el número de progenitores de linfocitos. En determinadas realizaciones, el agente terapéutico inmunoestimulante reduce la proliferación/expansión de Treg. En algunas realizaciones, un agente terapéutico inmunoestimulante aumenta el número de células T CD4+ (por ejemplo, células T auxiliares Th1 y Th2), células T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, células T alfa/beta y células T gamma/delta), células B (por ejemplo, células plasmáticas), células T de memoria, células B de memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígenos, macrófagos, mastocitos, células T citolíticas naturales (células NKT), células T residentes en tumores, células T CD122+ o células citolíticas naturales (células NK) en aproximadamente al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75% o el 75% y el 95% en relación con un control negativo (por ejemplo, número de las células respectivas no tratadas, cultivadas ni puestas en contacto con un agente terapéutico inmunoestimulante).
En determinadas realizaciones, se trata o se gestiona una enfermedad crónica (por ejemplo, infección con VIH o VHC, cáncer, etc.) administrando un agente terapéutico inmunoestimulante de este tipo.
En determinadas realizaciones, se trata o se gestiona una enfermedad aguda (por ejemplo, una infección aguda) administrando un agente terapéutico inmunoestimulante de este tipo.
5.5.1.1 Cáncer
En un aspecto específico, se presentan en el presente documento métodos para prevenir, tratar y/o gestionar cáncer, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de un agente terapéutico
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
inmunoestimulante o una composición del mismo. En una realización específica, un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo es el único agente activo administrado a un sujeto (es decir, monoterapia).
El efecto de un agente terapéutico inmunoestimulante sobre la proliferación de células cancerosas puede detectarse mediante ensayos de rutina, tal como mediante ensayos que miden la captación de timidina radiomarcada. Alternativamente, la viabilidad celular puede medirse mediante ensayos que miden la lactato deshidrogenasa (LDH), una enzima citosólica estable que se libera tras la lisis celular, o mediante la liberación de [51Cr] tras la lisis celular. En una realización, la necrosis se mide mediante la capacidad o incapacidad de una célula para captar un colorante tal como rojo neutro, azul trípano o azul ALAMARTM (Page et al., 1993, Intl. J. of Oncology 3:473 476). En un ensayo de este tipo, las células se incuban en medios que contienen el colorante, las células se lavan y el colorante restante, que refleja la captación celular del colorante, se mide espectrofotométricamente.
En otra realización, el colorante es sulforodamina B (SRB), cuya unión a proteínas puede usarse como una medida de la citotoxicidad (Skehan et al., 1990, J. Nat’l Cancer Inst. 82:1107 12). En aún otra realización, se usa una sal de tetrazolio, tal como MTT, en un ensayo colorimétrico cuantitativo para la supervivencia y proliferación de células de mamífero detectando células vivas, pero no muertas (véase, por ejemplo, Mosmann, 1983, J. Immunol. Methods 65:55 63).
En otras realizaciones, se miden las células apoptóticas en los compartimentos tanto unido como “flotante” de los cultivos. Ambos compartimentos se recogen eliminando el sobrenadante, tripsinizando las células unidas y combinando ambas preparaciones tras una etapa de lavado por centrifugación (10 minutos, 2000 rpm). El protocolo para tratar cultivos de células tumorales con sulindaco y compuestos relacionados para obtener una cantidad significativa de apoptosis se ha descrito en la bibliografía (véase, por ejemplo, Piazza et al., 1995, Cancer Research 55:3110 16). Las características de este método incluyen recoger tanto las células flotantes como las unidas, la identificación de los tiempos de tratamiento y el intervalo de dosis óptimos para observar apoptosis, y la identificación de condiciones de cultivo celular óptimas.
En otra realización, la apoptosis se cuantifica midiendo la fragmentación del ADN. Están disponibles métodos fotométricos comerciales para la determinación in vitro cuantitativa de la fragmentación del ADN. Ejemplos de tales ensayos, incluyendo ensayos basados en TUNEL (que detecta la incorporación de nucleótidos marcados en ADN fragmentado) y ELISA, se describen en Biochemica, 1999, n.° 2, págs. 34 37 (Roche Molecular Biochemicals). En aún otra realización, la apoptosis puede observarse morfológicamente.
Las líneas de células cancerosas sobre las que pueden realizarse tales ensayos las conocen bien los expertos en la técnica. También pueden realizarse ensayos de apoptosis, necrosis y proliferación sobre células primarias, por ejemplo, un explante tisular.
En una realización específica, la proliferación o viabilidad de células cancerosas puestas en contacto con un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante se inhibe o se reduce en al menos 2 veces, preferiblemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 4 a 7 veces, de 4 a 10 veces o de 7 a 10 veces en relación con la proliferación de las células cancerosas cuando se ponen en contacto con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ensayos de proliferación celular usando CSFE, BrdU e incorporación de 3H-timidina. En otra realización, la proliferación de células cancerosas puestas en contacto con un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante se inhibe o se reduce en al menos el 25%, al menos el 30%, al menos el 35%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 50%, al menos el 55%, al menos el 60%, al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90% o al menos el 95% o del 25% al 65%, del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% en relación con células cancerosas puestas en contacto con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ensayos de proliferación celular usando CSFE, BrdU e incorporación de 3H-timidina, o los ensayos descritos anteriormente.
En realizaciones específicas, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer) logra al menos uno, dos, tres, cuatro o más de los siguientes efectos: (i) la reducción o mejora de la gravedad de uno o más síntomas de cáncer; (ii) la reducción en la duración de uno o más síntomas asociados con cáncer; (iii) la prevención en la recaída de un síntoma asociado con cáncer; (iv) la reducción en la hospitalización de un sujeto; (v) una reducción en la duración de la hospitalización; (vi) el aumento en la supervivencia de un sujeto; (vii) la potenciación o mejora del efecto terapéutico de otra terapia; (viii) un aumento en la tasa de supervivencia de pacientes; (xiii) una disminución en la tasa de hospitalización; (ix) la prevención del desarrollo o la aparición de uno o más síntomas asociados con cáncer; (x) la reducción en el número de síntomas asociados con cáncer; (xi) un aumento en la supervivencia libre de síntomas de pacientes con cáncer; (xii) una mejora en la calidad de vida tal como se evalúa mediante métodos bien conocidos en la técnica; (xiii) la prevención de la recaída de un tumor; (xiv) la regresión de tumores y/o uno o más síntomas asociados con los mismos; (xvii) la inhibición de la evolución de tumores y/o uno o más síntomas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
asociados con los mismos; (xviii) una reducción en el crecimiento de un tumor; (xix) una diminución en el tamaño tumoral (por ejemplo, volumen o diámetro); (xx) una reducción en la formación de un tumor recién formado; (xxi) erradicación, eliminación o control de tumores primarios, regionales y/o metastásicos; (xxii) una disminución en el número o el tamaño de las metástasis; (xxiii) una reducción en la mortalidad; (xxiv) un aumento en la tasa de supervivencia libre de tumor de los pacientes; (xxv) un aumento en la supervivencia libre de recidiva; (xxvi) un aumento en el número de pacientes en remisión; (xxvii) el tamaño del tumor se mantiene y no aumenta o aumenta menos que el aumento de un tumor tras la administración de una terapia convencional tal como se mide mediante métodos convencionales disponibles para un experto en la técnica, tales como obtención de imágenes por resonancia magnética (MRI), MRI de contraste potenciado dinámica (DCE-MRI), rayos X y exploración por tomografía computarizada (CT), o una exploración por tomografía por emisión de positrones (PET); y/o (xxviii) un aumento en la duración de la remisión en los pacientes.
En una realización específica, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer) inhibe o reduce el crecimiento de un tumor en al menos 2 veces, preferiblemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 4 a 7 veces, de 4 a 10 veces o de 7 a 10 veces en relación con el crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, en el mismo modelo animal para cáncer) al que se le ha administrado un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica. En otra realización, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer) inhibe o reduce el crecimiento de un tumor en al menos el 25%, al menos el 30%, al menos el 35%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 50%, al menos el 55%, al menos el 60%, al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90% o al menos el 95%, o del 25% al 65%, del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% en relación con el crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, en el mismo modelo animal para cáncer) al que se le ha administrado un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica.
En una realización específica, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer) reduce el tamaño de un tumor en al menos 2 veces, preferiblemente al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 7 veces o al menos 10 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 4 a 7 veces, de 4 a 10 veces o de 7 a 10 veces en relación con el crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, el mismo modelo animal para cáncer) al que se le ha administrado un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica. En otra realización, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, un modelo animal para cáncer) reduce el tamaño de un tumor en al menos el 10%, al menos el 25%, al menos el 30%, al menos el 35%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 50%, al menos el 55%, al menos el 60%, al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90% o al menos el 95%, o del 10% al 25%, del 25% al 50%, del 25% al 75%, del 50% al 75%, del 75% al 95%, del 75% al 100% en relación con el crecimiento de un tumor en un sujeto con cáncer (en algunas realizaciones, el mismo modelo animal para cáncer) al que se le ha administrado un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica.
En determinadas realizaciones, se administran dos o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes diferentes a un sujeto. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias, por ejemplo, agentes anticancerígenos, citocinas, vacunas celulares o agentes antihormonales, para tratar y/o gestionar cáncer. Se proporcionan ejemplos no limitativos de otras terapias en la sección 5.7 y siguientes, más adelante. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico aditivo en relación con los efectos terapéuticos del agente terapéutico inmunoestimulante solo o la una o más de otras terapias. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona más de un efecto terapéutico aditivo en relación con los efectos terapéuticos del agente terapéutico inmunoestimulante solo o la una o más de otras terapias solas. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico sinérgico en relación con los efectos terapéuticos del agente terapéutico inmunoestimulante solo o la una o más de otras terapias solas.
En una realización específica, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante en combinación con radioterapia que comprende, por ejemplo, el uso de rayos x, rayos gamma y otras fuentes de radiación para destruir las células cancerosas. En realizaciones específicas, el tratamiento de radiación se administra como una radiación de haz externo o teleterapia en el que la radiación se dirige desde una fuente remota. En otras realizaciones, el tratamiento de radiación se administra como una terapia interna o braquiterapia en la que se coloca una fuente radiactiva dentro del cuerpo cerca de las células cancerosas o una masa tumoral. En un aspecto, el agente terapéutico inmunoestimulante puede activar o potenciar la función inmunitaria para la respuesta en un paciente con cáncer con un sistema inmunitario comprometido debido a una terapia anticancerígena. En otra realización, un
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
agente terapéutico inmunoestimulante se administra a un sujeto en combinación con quimioterapia. En una realización, un agente terapéutico inmunoestimulante puede usarse antes, durante o después de la radioterapia o quimioterapia. En otra realización, un agente terapéutico inmunoestimulante puede usarse antes, durante o después de la cirugía. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias que seleccionan como diana diferentes rutas inmunoestimulanteas. En una realización, el agente terapéutico inmunoestimulante se administra a un sujeto en combinación con B7-DC-Ig (por ejemplo, Amp-224 (Amplimmune, Rockville, Maryland)), anti-PD-1, anti-B7-1, anti-B7-2 o anti-CTLA4 (Ipilimumab o Tremelimumab). En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con anti-CD28 agonista (TGN1412). En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con ciclofosfamida o un derivado de la misma. En una realización específica, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con TGN1412 de dosis baja. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con un agente anti-hormonal, un inhibidor de aromatasa, una ribozima, una vacuna, etc.
Ejemplos no limitativos de agentes anticancerígenos que pueden administrarse a un sujeto en combinación con un agente terapéutico inmunoestimulante son agentes antihormonales que actúan regulando o inhibiendo la acción de hormonas sobre tumores, tales como antiestrógenos y moduladores selectivos de receptores de estrógenos (SERM), incluyendo, por ejemplo, tamoxifeno (incluyendo tamoxifeno NOLVADEX®), raloxifeno, droloxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y toremifeno FARESTON; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimidas, acetato de megestrol MEGASE®, exemestano AROMASIN®V, formestano, fadrozol, vorozol RIVISOR®, letrozol FEMARA® y anastrozol aRiMIDEX®D; y antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida y goserelina; así como troxacitabina (un análogo de citosina nucleosídico de 1,3-dioxolano); oligonucleótidos antisentido, particularmente los que inhiben la expresión de genes en rutas de señalización implicadas en la proliferación celular aberrante, tales como, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras; ribozimas tales como un inhibidor de la expresión de VEGF (por ejemplo, ribozima ANGIOZYME®) y un inhibidor de la expresión de HER2; vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo, vacuna ALLOVECTIN®, vacuna LEUVECTIN® y vacuna VAXID®; rIL-2 PROLEUKIN®; inhibidor de topoisomerasa 1 LURTOTECAN®; rmRH ABARELX®; vinorelbina y esperamicinas (véase la patente estadounidense n.° 4.675.187), y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos o derivados de cualquiera de los anteriores. Otros agentes anticancerígenos incluyen ciclofosfamida. La ciclofosfamida (CTX, Cytoxan® o Neosar®) es un fármaco de oxazahosforina y los análogos incluyen ifosfamida (IFO, Ifex), perfosfamida, trofosfamida (trofosfamida; Ixoten), y sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, profármacos y metabolitos de los mismos (solicitud de patente estadounidense 20070202077 que se incorpora en su totalidad). La ifosfamida (MITOXANA®) es un análogo estructural de la ciclofosfamida y su mecanismo de acción se considera que es idéntico o sustancialmente similar al de la ciclofosfamida. La perfosfamida (4-hidroperoxiciclofosfamida) y trofosfamida son también agentes alquilantes, que están estructuralmente relacionados con la ciclofosfamida. Por ejemplo, la perfosfamida alquila el ADN, inhibiendo de ese modo la replicación del ADN y la síntesis de ARN y proteínas. Se han diseñado y evaluado nuevos derivados de oxazafosforinas en un intento de mejorar la selectividad y respuesta con toxicidad reducida para el huésped (Liang J, Huang M, Duan W, Yu XQ, Zhou S. Design of new oxazafosforine anticancer drugs. Curr Pharm Des. 2007; 13(9):963-78. Revisión). Estos incluyen mafosfamida (NSC 345842), glufosfamida (D19575, mostaza de beta-D-glucosilisofosforamida), S-(-)-bromofosfamida (CBM-11), NSC 612567 (aldofosfamida perhidrotiazina) y NSC 613060 (aldofosfamida tiazolidina). La mafosfamida es un análogo de oxazafosforina que es una sal de ácido 4-tioetanosulfónico químicamente estable de 4-hidroxi-CPA. La glufosfamida es un derivado de IFO en el que la mostaza de isofosforamida, el metabolito alquilante de IFO, está unida glicosídicamente a una molécula de beta-D-glucosa. Se describen análogos de ciclofosfamida adicionales en la patente estadounidense 5.190.929 titulada “Cyclophosphamide analogs useful as anti-tumor agents” que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad. En otras realizaciones, el agente anticancerígeno reduce la actividad y/o el número de linfocitos T reguladores (T-regs), preferiblemente sunitinib (SUTENT®), anti-TGFp o imatinib (GLEEVAC®). Los agentes anticancerígenos útiles también incluyen inhibidores de la mitosis, tales como paclitaxol, inhibidores de aromatasa (por ejemplo letrozol) e inhibidores de la angiogénesis (inhibidores de VEGF, por ejemplo Avastin, VEGF-Trap) (véase, por ejemplo, Li et al., Vascular endothelial growth factor blockade reduces intratumoral regulatory cells T and enhances the efficacy of a GM-CSF-secreting cancer immunotherapy. Clin Cancer Res. 15 de noviembre de 2006; 12(22):6808-16.), antraciclinas, oxaliplatino, doxorubicina, antagonistas de TLR4 y antagonistas de IL-18.
5.5.1.1.1 Tipos de cánceres
Los cánceres y trastornos relacionados que pueden prevenirse, tratarse o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: leucemias incluyendo, pero sin limitarse a, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemias mielocíticas agudas tales como leucemia mieloblástica, promielocítica, mielocítica, monocítica, erotroleucemia y síndrome mielodisplásico, leucemias crónicas tales como pero sin limitarse a, leucemia mielocítica crónica (granulocítica) y leucemia linfocítica crónica, tricoleucemia; policitemia vera; linfomas tales como pero sin limitarse a enfermedad de Hodgkin y enfermedad no Hodgkin; mielomas múltiples tales como pero sin limitarse a mieloma múltiple latente, mieloma no secretor, mieloma osteoesclerótico, leucemia de células plasmáticas, plasmacitoma solitario y plasmacitoma extramedular;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
macroglobulinemia de Waldenstrom; gammopatía monoclonal de significación indeterminada; gammopatía monoclonal benigna; enfermedad de las cadenas pesadas; sarcoma de tejidos óseo y conjuntivo tal como pero sin limitarse a sarcoma óseo, osteosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, tumor de células gigantes maligno, fibrosarcoma de huesos, cordoma, sarcoma perióstico, sarcomas de tejidos blandos, angiosarcoma (hemangiosarcoma), fibrosarcoma, sarcoma de Kaposi, leiomiosarcoma, liposarcoma, linfangiosarcoma, neurilemoma, rabdomiosarcoma y sarcoma sinovial; tumores cerebrales incluyendo pero sin limitarse a, glioma, astrocitoma, glioma de tronco encefálico, ependimoma, oligodendroglioma, tumor no glial, neurinoma acústico, craneofaringioma, meduloblastoma, meningioma, pineocitoma, pineoblastoma y linfoma cerebral primario; cáncer de mama incluyendo, pero sin limitarse a, adenocarcinoma, carcinoma lobular (de células pequeñas), carcinoma intraductal, cáncer de mama medular, cáncer de mama mucinoso, cáncer de mama tubular, cáncer de mama papilar, enfermedad de Paget y cáncer de mama inflamatorio; cáncer suprarrenal, incluyendo pero sin limitarse a, feocromocitoma y carcinoma corticosuprarrenal; cáncer de tiroides tal como pero sin limitarse a cáncer de tiroides papilar o folicular, cáncer de tiroides medular y cáncer de tiroides anaplásico; cáncer pancreático, incluyendo pero sin limitarse a, insulinoma, gastrinoma, glucagonoma, vipoma, tumor secretor de somatostatina, y tumor carcinoide o insulinoma; cánceres hipofisarios incluyendo pero sin limitarse a, enfermedad de Cushing, tumor secretor de prolactina, acromegalia y diabetes insípida; cánceres de ojo incluyendo pero sin limitarse a, melanoma ocular tal como melanoma de iris, melanoma coroideo y melanoma de cuerpo ciliar, y retinoblastoma; cánceres vaginales, incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma y melanoma; cáncer vulvar, incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células escamosas, melanoma, adenocarcinoma, carcinoma de células basales, sarcoma y enfermedad de Paget; cánceres de cuello uterino incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma; cánceres uterinos incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma endometrial y sarcoma uterino; cánceres de ovarios incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma epitelial ovárico, tumor limítrofe, tumor de células germinales y tumor estromal; cánceres esofágicos incluyendo pero sin limitarse a, cáncer escamoso, adenocarcinoma, carcinoma quístico adenoide, carcinoma mucoepidermoide, carcinoma adenoescamoso, sarcoma, melanoma, plasmacitoma, carcinoma verrugoso y carcinoma de células en grano de avena (de células pequeñas); cánceres de estómago incluyendo pero sin limitarse a, adenocarcinoma, fungante (polipoide), ulcerante, que se propaga superficialmente, que se propaga de manera difusa, linfoma maligno, liposarcoma, fibrosarcoma y carcinosarcoma; cánceres de colon; cánceres rectales; cánceres de hígado incluyendo pero sin limitarse a carcinoma hepatocelular y hepatoblastoma; cánceres de vesícula biliar incluyendo pero sin limitarse a, adenocarcinoma; colangiocarcinomas incluyendo pero sin limitarse a, papilar, nodular y difuso; cánceres de pulmón incluyendo pero sin limitarse a, cáncer de pulmón de células no pequeñas, carcinoma de células escamosas (carcinoma epidermoide), adenocarcinoma, carcinoma de células grandes y cáncer de pulmón de células pequeñas; cánceres testiculares incluyendo pero sin limitarse a, tumor germinal, seminoma, anaplásico, espermatocítico, no seminoma, carcinoma embrionario, carcinoma por teratoma, coriocarcinoma (tumor de saco vitelino); cánceres de próstata incluyendo pero sin limitarse a, adenocarcinoma, leiomiosarcoma y rabdomiosarcoma; cánceres de pene; cánceres bucales incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células escamosas; cánceres basales; cánceres de glándulas salivares incluyendo pero sin limitarse a, adenocarcinoma, carcinoma mucoepidermoide y carcinoma adenoide quístico; cánceres de faringe incluyendo pero sin limitarse a, cáncer de células escamosas y verrugoso; cánceres de piel incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas y melanoma, y melanoma que se propaga superficialmente, melanoma nodular, melanoma maligno por léntigo, melanoma lentiginoso acral; cánceres de riñón incluyendo pero sin limitarse a, cáncer de células renales, cáncer renal, adenocarcinoma, hipernefroma, fibrosarcoma y cánceres de células de transición (pelvis renal y/o útero); tumor de Wilms; cánceres de vejiga incluyendo pero sin limitarse a, carcinoma de células de transición, cáncer de células escamosas, adenocarcinoma y carcinosarcoma. Además, los cánceres incluyen mixosarcoma, sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma, sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistoadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar y adenocarcinomas papilares (para una revisión de tales trastornos, véase Fishman et al., 1985, Medicine, 2a ed., J.B. Lippincott Co., Filadelfia y Murphy et al., 1997, Informed Decisions: The Complete Book of Cancer Diagnosis, Treatment, and Recovery, Viking Penguin, Penguin Books EE.UU., Inc., Estados Unidos de América).
En una realización, el cáncer es benigno, por ejemplo, pólipos y lesiones benignas. En otras realizaciones, el cáncer es metastásico. Los agentes terapéuticos inmunoestimulantes pueden usarse en el tratamiento de estados premalignos así como malignos. Los estados premalignos incluyen hiperplasia, metaplasia y displasia. El tratamiento de estados malignos incluye el tratamiento de tumores primarios así como metastásicos. En una realización específica el cáncer es melanoma, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de hígado, cáncer testicular, cáncer de cerebro, cáncer pancreático o cáncer renal.
5.5.1.1.2 Población de pacientes
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto que padece o se le diagnostica cáncer. En otras realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto predispuesto o susceptible a desarrollar cáncer. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
que vive en una región en donde hay una alta tasa de recaída de cáncer. En una realización específica, el cáncer se caracteriza por un tumor premaligno o un tumor maligno.
En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un mamífero. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un animal de granja o ganado, por ejemplo, cerdos, vacas, caballos, pollos, etc.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano en riesgo de desarrollar cáncer. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano con cáncer. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano diagnosticado con cáncer. En determinadas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 5 a 12 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 13 a 19 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 20 a 65 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un lactante humano o un lactante humano prematuro. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un niño humano. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un adulto humano. En aún otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un anciano humano.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un primate, preferiblemente un ser humano, u otro mamífero, tal como un cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, en un estado inmunocomprometido o estado inmunosuprimido o en riesgo de llegar a estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que recibe o se recupera de una terapia inmunosupresora. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene o corre el riesgo de contraer SIDA, una infección viral o una infección bacteriana. En determinadas realizaciones, un sujeto que se somete, se someterá o se ha sometido a cirugía, quimioterapia y/o radioterapia. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que vive en una residencia, un hogar grupal (es decir, un hogar para 10 o más sujetos) o una prisión.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene niveles de expresión anómalos de uno o más de los siguientes: B7-H2, ICOS, CD28 o CTLA-4. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene niveles de expresión anómalos de o bien B7- H7, B7-H7CR o bien ambos.
En algunas realizaciones, se le administra a un paciente un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación antes de que se desarrolle cualquier efecto adverso o intolerancia a terapias distintas de agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a pacientes resistentes. En una determinada
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
realización, un paciente resistente es un paciente resistente a una terapia anticancerígena convencional. En determinadas realizaciones, un paciente con cáncer es resistente a una terapia cuando el cáncer no se ha erradicado significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente puede hacerse o bien in vivo o bien in vitro mediante cualquier método conocido en la técnica para someter a ensayo la eficacia de un tratamiento, usando los significados aceptados en la técnica de “resistente” en tal contexto. En diversas realizaciones, un paciente con cáncer es resistente cuando un tumor canceroso no ha disminuido o ha aumentado.
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente para prevenir la aparición o recaída de cáncer en un paciente en riesgo de desarrollar tal cáncer. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente que es susceptible a reacciones adversas a terapias convencionales.
En algunas realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente que se ha comprobado que es resistente a terapias distintas de los agentes terapéuticos inmunoestimulantes, pero que ya no sigue estas terapias. En determinadas realizaciones, los pacientes que están gestionándose o tratándose según los métodos descritos en el presente documento son pacientes que ya están tratándose con antibióticos, agentes anticancerígenos u otra terapia biológica/inmunoterapia. Entre estos pacientes están pacientes resistentes, pacientes que son demasiado jóvenes para terapias convencionales y pacientes con infecciones virales recurrentes a pesar de la gestión o el tratamiento con terapias existentes.
En algunas realizaciones, el sujeto al que están administrándose uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación no ha recibido una terapia antes de la administración de los agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación. En otras realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto que ha recibido una terapia antes de la administración de uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto al que se le administra un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante era resistente a una terapia previa o experimentaba efectos secundarios adversos a la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles inaceptables de toxicidad para el sujeto.
5.5.1.2 Enfermedades infecciosas
En un aspecto específico, se presentan en el presente documento métodos para prevenir, tratar y/o gestionar una enfermedad infecciosa, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo. En una realización específica, un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo es el único agente activo administrado a un sujeto.
Las enfermedades infecciosas que pueden tratarse, prevenirse y/o gestionarse por agentes terapéuticos inmunoestimulantes están provocadas por agentes infecciosos incluyendo pero sin limitarse a bacterias, hongos, protozoos y virus. Las enfermedades virales que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, las provocadas por hepatitis tipo A, hepatitis tipo B, hepatitis tipo C, gripe (por ejemplo, gripe A o gripe B), varicela, adenovirus, herpes simple tipo I (VHS-I), herpes simple tipo II (VHS-II), peste bovina, rinovirus, virus ECHO, rotavirus, virus respiratorio sincicial, virus del papiloma, papovavirus, citomegalovirus, equinovirus, arbovirus, huntavirus, virus de Coxsackie, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la rubéola, virus de la poliomielitis, viruela, virus de Epstein Barr, virus de la inmunodeficiencia humana tipo I (VIH-I), virus de la inmunodeficiencia humana tipo II (VIH-II) y agentes de enfermedades virales tales como miningitis viral, encefalitis, dengue o viruela.
Las enfermedades bacterianas provocadas por bacterias (por ejemplo, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans y Pseudomonas aeruginosa) que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, micobacterias, Rickettsia, Mycoplasma, Neisseria, S. pneumonía, Borrelia burgdorferi (enfermedad de Lyme), Bacillus antracis (carbunco), tétanos, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, tosferina, cólera, peste, difteria, Chlamydia, S. aureus y Legionella.
Las enfermedades protozoarias provocadas por protozoos que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, Leishmania, Kokzidioa, Trypanosoma, Schistosoma o malaria. Las enfermedades parasitarias provocadas por parásitos que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, Chlamydia y Rickettsia.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Las infecciones fúngicas que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, infecciones con Candida, cigomicosis, mastitis por Candida, tricosporonosis diseminada progresiva con tricosporonemia latente, candidiasis diseminada, paracoccidioidomicosis pulmonar, aspergilosis pulmonar, neumonía por Pneumocystis carinii, meningitis por criptococos, meningoencefalitis por coccidioides y vasculitis cerebroespinal, infección con Aspergillus niger, queratitis por Fusarium, micosis del seno paranasal, endocarditis por Aspergillus fumigatus, discondroplasia de la tibia, vaginitis por Candida glabrata, candidiasis orofaringea, enfermedad granulomatosa crónica ligada al cromosoma X, tiña del piel, candidiasis cutánea, placentitis micótica, tricosporonosis diseminada, aspergilosis broncopulmonar alérgica, queratitis micótica, infección con Cryptococcus neoformans, peritonitis fúngica, infección con Curvularia geniculata, endoftalmitis por Staphylococcus, esporotricosis y dermatofitosis.
En determinadas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición del mismo a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) logra uno, dos, tres, cuatro o más de los siguientes efectos: (i) reducción o mejora de la gravedad de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (ii) reducción en la duración de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (iii) prevención de la evolución de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (iv) regresión de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (v) prevención del desarrollo o la aparición de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (vi) prevención de la recaída de una enfermedad infecciosa o síntoma asociado con la misma; (vii) reducción o prevención de la propagación de un agente infeccioso de una célula a otra célula, de un tejido a otro tejido o de un órgano a otro órgano; (viii) prevención o reducción de la propagación/transmisión de un agente infeccioso de un sujeto a otro sujeto; (ix) reducción en la insuficiencia orgánica asociada con una enfermedad infecciosa; (x) reducción en la hospitalización de un sujeto; (xi) reducción en la duración de la hospitalización; (xii) un aumento en la supervivencia de un sujeto con una enfermedad infecciosa;
(xiii) eliminación de una enfermedad infecciosa; (xiii) inhibición o reducción en la replicación de un agente infeccioso;
(xiv) inhibición o reducción en la entrada de un agente infeccioso en una(s) célula(s); (xv) inhibición o reducción de la replicación del genoma de un agente infeccioso; (xvi) inhibición o reducción en la síntesis de proteínas del agente infeccioso; (xvii) inhibición o reducción en el ensamblaje de agentes infecciosos; (xviii) inhibición o reducción en la liberación de agentes infecciosos de una(s) célula(s); (xviii) reducción en el número o título de un agente infeccioso; (xix) la reducción en el número de síntomas asociados con una enfermedad infecciosa; (xx) potenciación, mejora, suplementación, complementación o aumento del/de los efecto(s) profiláctico(s) o terapéutico(s) de otra terapia; y (xxi) prevención de la aparición o evolución de una infección secundaria asociada con una enfermedad infecciosa.
En determinadas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en al menos el 20%, el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, o el 95%,

o del 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, del al menos el 35% al

40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al

60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al
80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces, o de 5 a 20 veces en relación con control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En otras realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso inhibe o reduce la replicación del agente infeccioso en 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log, 5 log o más en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso reduce el título del agente infeccioso en al menos el 20%, el 25%, el 30%, el 35%, el 40%, el 45%, el 50%, el 55%, el 60%, el 65%, el 70%, el 75%, el 80%, el 85%, el 90%, o el 95%, o del 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso reduce el título del agente infeccioso en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En otras realizaciones, la administración de un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) infectado con un agente infeccioso reduce el título del agente infeccioso en 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log, 5 log o más en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones, se administran dos o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes diferentes a un sujeto. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias. Se describen ejemplos no limitativos de otras terapias que pueden usarse en combinación con agentes terapéuticos inmunoestimulantes en las secciones 5.7 y siguientes. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico aditivo en relación con los efectos terapéuticos del agente terapéutico inmunoestimulante solo o las una o más de otras terapias solas. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona más de un efecto terapéutico aditivo en relación con los efectos terapéuticos del agente terapéutico inmunoestimulante solo o la una o más de otras terapias solas. En una realización, la combinación de un agente terapéutico inmunoestimulante y una o más de otras terapias proporciona un efecto terapéutico sinérgico en relación con el efecto terapéutico del agente terapéutico inmunoestimulante solo o las una o más de otras terapias solas.
En una realización específica, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con uno o más antibióticos. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante en combinación con uno o más antivirales. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante en combinación con uno o más antifúngicos. En otra realización, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante en combinación con B7-DC Ig, (por ejemplo, Amp-224 (Amplimmune; Rockville, Maryland)).
5.5.1.2.1 Población de pacientes
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto que padece una enfermedad infecciosa provocada por agentes infecciosos incluyendo, pero sin limitarse a bacterias, hongos, protozoos y virus. En determinadas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto al que se le diagnostica que tiene una enfermedad infecciosa provocada por agentes infecciosos incluyendo, pero sin limitarse a bacterias, hongos, protozoos y virus. En otras realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto predispuesto o susceptible a una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto que vive en una región en donde ha habido o puede haber un brote con infecciones por agentes infecciosos. En algunas realizaciones, la infección es una infección latente. En otras realizaciones, la infección por el agente infeccioso es una infección activa. En determinadas realizaciones, la infección por el agente infeccioso es una infección aguda. En aún otras realizaciones, la infección por el agente infeccioso es una infección crónica.
En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un mamífero. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un animal de granja o ganado, por ejemplo, cerdos, vacas, caballos, pollos, etc. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ave, por ejemplo, patos o pollos.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano en riesgo de una enfermedad infecciosa. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano con una enfermedad infecciosa. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un ser humano al que se le ha diagnosticado que tiene una enfermedad infecciosa. En determinadas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 5 a 12 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 13 a 19 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 20 a 65 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un lactante humano o lactante humano prematuro. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un niño humano. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un adulto humano. En aún otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un anciano humano.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un primate, preferiblemente un ser humano u otro mamífero, tal como un cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, en un estado inmunocomprometido o estado inmunosuprimido o en riesgo de llegar a estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que recibe o se recupera de una terapia inmunosupresora. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene o corre el riesgo de contraer cáncer, SIDA, otra infección o una infección bacteriana. En determinadas realizaciones, un sujeto que se somete, se someterá o se ha sometido a cirugía, quimioterapia y/o radioterapia. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene fibrosis quística, fibrosis pulmonar u otra enfermedad que hace que el sujeto sea susceptible a una infección. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene, tendrá o tuvo un trasplante de tejido. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que vive en una residencia, un hogar grupal (es decir, un hogar para 10 o más sujetos) o una prisión. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que asiste a una escuela (por ejemplo, escuela primaria, escuela secundaria, instituto o universidad) o guardería. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que trabaja en un área de atención sanitaria, tal como un médico o una enfermera, o en un hospital. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a una paciente que está embarazada o que quedará embarazada.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene niveles de expresión anómalos de uno o más de los siguientes: B7-H2, ICOS, CD28 o CTLA-4. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación a un sujeto que tiene niveles de expresión anómalos de o bien B7- H7, B7-H7CR o bien ambos.
En algunas realizaciones, se le administra a un paciente un agente terapéutico inmunoestimulante, una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante o una terapia de combinación antes de que se desarrolle cualquier efecto adverso o intolerancia a terapias distintas de agentes terapéuticos inmunoestimulantes. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a pacientes resistentes. En una determinada realización, un paciente resistente es un paciente resistente a una terapia convencional. En determinadas realizaciones, un paciente con una enfermedad infecciosa es resistente a una terapia cuando la enfermedad infecciosa no se ha erradicado significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente puede hacerse o bien in vivo o bien in vitro mediante cualquier método conocido en la técnica para someter a ensayo la eficacia de un tratamiento de una enfermedad infecciosa, usando los significados aceptados en la técnica de “resistente” en tal contexto. En diversas realizaciones, un paciente con una infección es resistente cuando la replicación del agente infeccioso no ha disminuido o ha aumentado.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente para prevenir la aparición o recaída de una enfermedad infecciosa en un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad de este tipo. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente que es susceptible a reacciones adversas a terapias convencionales.
En algunas realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un paciente que se ha comprobado que es resistente a terapias distintas de agentes terapéuticos inmunoestimulantes, pero que ya no sigue estas terapias. En determinadas realizaciones, los pacientes que están gestionándose o tratándose según los métodos de esta invención son pacientes que ya están tratándose con antibióticos, antivirales, antifúngicos u otra terapia biológica/inmunoterapia. Entre estos pacientes están pacientes resistentes, pacientes que son demasiado jóvenes para terapias convencionales y pacientes con infecciones virales recurrentes a pesar de la gestión o el tratamiento con terapias existentes.
En algunas realizaciones, el sujeto al que están administrándose uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación no ha recibido una terapia antes de la administración de los agentes terapéuticos inmunoestimulantes, las composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o las terapias de combinación. En otras realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación a un sujeto que ha recibido una terapia antes de la administración de uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes o composiciones que comprenden uno o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto al que se le administra un agente terapéutico inmunoestimulante o una composición que comprende un agente terapéutico inmunoestimulante era resistente a una terapia previa o experimentaba efectos secundarios adversos a la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles inaceptables de toxicidad para el sujeto.
5.6 USOS PROFILÁCTICOS Y TERAPÉUTICOS DE AGENTES TERAPÉUTICOS QUE SUPRIMEN LA FUNCIÓN INMUNITARIA
5.6.1 Supresión de la función inmunitaria
En un aspecto, se presentan en el presente documento métodos para suprimir una o más funciones o respuestas del sistema inmunitario en una función del sujeto en un sujeto, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita un agente terapéutico inhibidor o una composición del mismo. En una realización específica, se presentan en el presente documento métodos para prevenir, tratar y/o gestionar enfermedades en las que es deseable suprimir la función inmunitaria, que comprenden administrar a un sujeto que lo necesita un agente terapéutico inhibidor o una composición del mismo. En realizaciones específicas, puede administrarse un agente terapéutico inhibidor a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias para suprimir la función o respuesta inmunitaria.
Los ejemplos no limitativos de enfermedades que pueden prevenirse, tratarse o gestionarse suprimiendo la función inmunitaria incluyen, pero no se limitan a, enfermedad autoinmunitaria, trastornos inflamatorios, enfermedad de injerto contra huésped y rechazo de trasplante.
En una realización específica, un agente terapéutico inhibidor suprime una o más respuestas o funciones inmunitarias en un sujeto en al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75%, o el 75% y el 95% en relación con la función inmunitaria en un sujeto al que no se le administra el agente terapéutico inmunoestimulante usando ensayos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, ensayos de ELISPOT, ELISA y proliferación celular. En una realización específica, la función inmunitaria es liberación de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma, IL-2, IL-5 o IL-12). En una realización, la función inmunitaria es proliferación de células Nk, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de células que expresan marcadores de células NK (por ejemplo, CD56). En una realización, la función inmunitaria es proliferación de células T, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante citometría de flujo para detectar el número de células que expresan marcadores de células T (por ejemplo, CD3, CD4 o CD8). En otra realización, la función inmunitaria es producción de anticuerpos, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante ELISA. En algunas realizaciones, la función inmunitaria es función efectora, que puede someterse a ensayo, por ejemplo, mediante un ensayo de citotoxicidad u otros ensayos bien conocidos en la técnica. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th1. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th2. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th17. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta Th22. En otra realización, la función inmunitaria es una respuesta de Treg.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En realizaciones específicas, ejemplos no limitativos de funciones inmunitarias que pueden suprimirse mediante el agente terapéutico inhibidor son proliferación/expansión de linfocitos (por ejemplo, aumento en el número de linfocitos), inhibición de la apoptosis de linfocitos, activación de células dendríticas (o células presentadoras de antígenos) y presentación de antígenos. En realizaciones particulares, una función inmunitaria suprimida por el agente terapéutico inhibidor es proliferación/expansión en el número de o la activación de células T CD4+ (por ejemplo, células T auxiliares Th1 y Th2), células T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, células T alfa/beta y células T gamma/delta), células B (por ejemplo, células plasmáticas), células T de memoria, células B de memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígenos, macrófagos, mastocitos, células T citolíticas naturales (células NKT), células T residentes en tumores, células T CD122+’ Treg o células citolíticas naturales (células NK). En una realización, el agente terapéutico inhibidor suprime la proliferación/expansión o el número de progenitores de linfocitos. En algunas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor disminuye el número de células T CD4+ (por ejemplo, células T auxiliares Th1 y Th2), células T CD8+ (por ejemplo, linfocitos T citotóxicos, células T alfa/beta y células T gamma/delta), células B (por ejemplo, células plasmáticas), células T de memoria, células B de memoria, células dendríticas (inmaduras o maduras), células presentadoras de antígenos, macrófagos, mastocitos, células T citolíticas naturales (células NKT), células T residentes en tumores, células T CD122+ o células citolíticas naturales (células NK) en aproximadamente al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75% o el 75% y el 95% en relación con un control negativo (por ejemplo, número de las respectivas células no tratadas, cultivadas ni puestas en contacto con un agente terapéutico inhibidor).
En determinadas realizaciones, algunas funciones del sistema inmunitario, tales como proliferación o actividad de Treg, aumentan cuando la respuesta inmunitaria disminuye.
A continuación se proporcionan diversas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor potencia, activa o induce una o más rutas de transducción de señales mediadas por la unión a CTLA-4 a no o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-1, B7-2 o B7- H2). En algunas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor inhibe o reduce la unión de CTLA-4 nativo a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-1, B7-2 o B7-H2) tal como se describe en el presente documento. En una realización específica, un agente terapéutico inhibidor es un polipéptido de B7-H2-Ig agonista o derivado del mismo descrito en el presente documento.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor inhibe o reduce una o más rutas de transducción de señales mediadas por la unión de CD28 a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-1, B7-2 o B7-H2). En algunas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor inhibe o reduce la unión de CD28 nativo a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-1, B7-2 o B7-H2) tal como se describe en el presente documento. En una realización específica, un agente terapéutico inhibidor es un polipéptido de B7-H2-Ig antagonista o derivado del mismo descrito en el presente documento.
En determinadas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor inhibe o reduce una o más rutas de transducción de señales mediadas por la unión de ICOS a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H2). En algunas realizaciones, un agente terapéutico inhibidor inhibe o reduce la unión de ICOS nativo a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, B7-H2) tal como se describe en el presente documento. En una realización específica, un agente terapéutico inhibidor es un polipéptido de B7-H2-Ig antagonista o derivado del mismo descrito en el presente documento.
5.6.1.1 Trastornos autoinmunitarios e inflamatorios
En una realización específica, se presenta en el presente documento un método para tratar, prevenir y/o gestionar un trastorno autoinmunitario o trastorno inflamatorio en un sujeto, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de un agente terapéutico inhibidor o una composición del mismo. En otra realización, se presenta en el presente documento un método para reducir la inflamación en un sujeto, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de un agente terapéutico inhibidor o una composición del mismo. Los ejemplos no limitativos de trastornos autoinmunitarios y trastornos inflamatorios incluyen rechazo de trasplante y enfermedad de injerto contra huésped (GVHD). Se produce GVHD cuando las células inmunitarias de un donante (por ejemplo, células T de un donante) atacan a células en el cuerpo del sujeto receptor. El rechazo de trasplante se produce cuando un órgano o tejido trasplantado no es aceptado por el cuerpo del receptor del trasplante. En general, el rechazo de trasplante se debe al sistema inmunitario del receptor (por ejemplo, células T del receptor) que ataca al órgano o tejido trasplantado.
En determinadas realizaciones, la administración de un agente terapéutico inhibidor o una composición del mismo a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) logra uno, dos, tres, cuatro o más de los siguientes efectos: (i) reducción o mejora de la gravedad de un trastorno autoinmunitario o inflamatorio o síntoma asociado con el
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
mismo; (ii) reducción en la duración de un síntoma asociado con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (iii) prevención de la evolución de un trastorno autoinmunitario o inflamatorio, o síntoma asociado con el mismo; (iv) regresión de un trastorno autoinmunitario o inflamatorio, o síntoma asociado con el mismo; (v) prevención del desarrollo o la aparición de un síntoma asociado con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (vi) prevención de la recaída de un síntoma asociado con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (vii) reducción en la insuficiencia orgánica asociada con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (viii) reducción en la hospitalización de un sujeto; (ix) reducción en la duración de la hospitalización; (x) un aumento en la supervivencia de un sujeto con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (xi) una reducción en el número de síntomas asociados con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (xii) una reducción en la inflamación de células inflamatorias; (xiii) una reducción en citocinas inflamatorias; (xiv) una reducción en la inflamación asociada con un trastorno autoinmunitario o inflamatorio; (xv) mejora de la esperanza de vida; (xvi) aumento de la supervivencia libre de síntomas; (xvii) aumento de la duración de la remisión libre de síntomas; y/o (xviii) una potenciación, una mejora, una suplementación, una complementación o un aumento del/de los efecto(s) terapéutico(s) o profiláctico(s) de otra terapia.
En una realización específica, la administración de un agente terapéutico inhibidor o composición que comprende un agente terapéutico inhibidor a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) reduce la inflamación en un sujeto en al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos el 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75% o el 75% y el 95% en relación con la inflamación en un sujeto al que no se le ha administrado el agente terapéutico inhibidor usando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la reducción en la inflamación puede medirse mediante la reducción en la secreción de citocinas (por ejemplo, factor de necrosis tumoral alfa, interferón gamma). En una realización específica, la administración de un agente terapéutico inhibidor o composición que comprende un agente terapéutico inhibidor a un sujeto (en algunas realizaciones, un modelo animal) reduce la producción y/o secreción de citocinas inflamatorias en un sujeto en al menos el 99%, al menos el 95%, al menos el 90%, al menos el 85%, al menos el 80%, al menos el 75%, al menos el 70%, al menos el 60%, al menos el 50%, al menos el 45%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 35%, al menos el 30%, al menos 25%, al menos el 20% o al menos 10%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 25% y el 50%, el 50% y el 75% o el 75% y el 95% en relación con la producción y/o secreción de de citocinas inflamatorias en un sujeto al que no se le ha administrado el agente terapéutico inhibidor usando métodos conocidos en la técnica.
En otras realizaciones, puede administrarse un agente terapéutico inhibidor en combinación con una o más de otras terapias para suprimir la función o respuesta inmunitaria en un sujeto. En determinadas realizaciones, se administran dos o más agentes terapéuticos inmunoestimulantes diferentes a un sujeto. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inmunoestimulante a un sujeto en combinación con una o más de otras terapias. Pueden usarse diversos agentes antiinflamatorios conocidos en la técnica en combinación con agentes terapéuticos inhibidores. Véase la sección 5.7 y siguientes para ejemplos de terapias. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor en combinación con CTLA-4-Ig (por ejemplo, abatacept, belatacept), un anticuerpo anti-TNF alfa (por ejemplo, Remicade) o TNFR-Ig (por ejemplo, Enbrel).
5.6.1.1.1 Tipos de enfermedades
Los ejemplos de trastornos autoinmunitarios que pueden prevenirse, tratarse y/o gestionarse según los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, celiaquía (enfermedad celíaca), alopecia areata, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolípidos, enfermedad de Addison autoinmunitaria, enfermedades autoinmunitarias de la glándula suprarrenal, anemia hemolítica autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria, ooforitis y orquitis autoinmunitaria, trombocitopenia autoinmunitaria, enfermedad de Behcet, pénfigo vesicular, miocardiopatía, esprúe celíaco-dermatitis, síndrome de fatiga crónica y disfunción inmunitaria (CFIDS), polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, síndrome CREST, enfermedad de crioaglutinina, enfermedad de Crohn, lupus discoide, crioglobulinemia mixta esencial, fibromialgiafibromiositis, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, fibrosis pulmonar idiopática, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), neuropatía por IgA, artritis juvenil, liquen plano, lupus eritematoso, enfermedad de Méniere, enfermedad de tejido conjuntivo mixto, esclerosis múltiple, diabetes mellitus tipo 1 o mediada inmunitariamente, miastenia grave, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarteritis nudosa, policondritis, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis, agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, psoriasis, artritis psoriásica, fenómeno de Raynauld, síndrome de Reiter, artritis reumatoide, sarcoidosis, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome del hombre rígido, lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso, arteritis de Takayasu, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, colitis ulcerosa, uveítis, vasculitis tales como vasculitis por dermatitis herpatiforme, vitiligo y granulomatosis de Wegener. Los ejemplos de trastornos inflamatorios incluyen, pero no se limitan a, asma, encefalitis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), trastornos alérgicos, choque séptico, fibrosis pulmonar, espondiloartropatía indiferenciada, artropatía indiferenciada, artritis, osteólisis inflamatoria e inflamación crónica que resulta de infecciones bacterianas o virales crónicas. Algunos trastornos autoinmunitarios están asociados con un estado inflamatorio. Por tanto, hay un solapamiento entre lo que se considera un trastorno autoinmunitario y un trastorno antiinflamatorio. Por tanto, algunos trastornos autoinmunitarios pueden caracterizarse también como trastornos inflamatorios.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
5.6.1.1.2 Población de pacientes
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación a un sujeto que padece una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio. En otras realizaciones, se administran agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación a un sujeto predispuesto o susceptible a desarrollar una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un mamífero. En realizaciones específicas, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación se administra a un mamífero que tiene de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un ser humano en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un ser humano con una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un humano al que se le diagnostica que tiene una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio. En determinadas realizaciones, el paciente es un ser humano de 0 a 6 meses de edad, de 6 a 12 meses de edad, de 1 a 5 años de edad, de 5 a 10 años de edad, de 5 a 12 años de edad, de 10 a 15 años de edad, de 15 a 20 años de edad, de 13 a 19 años de edad, de 20 a 25 años de edad, de 25 a 30 años de edad, de 20 a 65 años de edad, de 30 a 35 años de edad, de 35 a 40 años de edad, de 40 a 45 años de edad, de 45 a 50 años de edad, de 50 a 55 años de edad, de 55 a 60 años de edad, de 60 a 65 años de edad, de 65 a 70 años de edad, de 70 a 75 años de edad, de 75 a 80 años de edad, de 80 a 85 años de edad, de 85 a 90 años de edad, de 90 a 95 años de edad o de 95 a 100 años de edad. En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un lactante humano o lactante humano prematuro. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un niño humano. En otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un adulto humano. En aún otras realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un anciano humano.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a una mascota, por ejemplo, un perro o un gato. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un animal de granja o ganado, por ejemplo, cerdos, vacas, caballos, pollos, etc.
En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un primate, preferiblemente un ser humano, u otro mamífero, tal como un cerdo, vaca, caballo, oveja, cabra, perro, gato y roedor, en un estado inmunocomprometido o estado inmunosuprimido o en riesgo de llegar a estar inmunocomprometido o inmunosuprimido. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un sujeto que recibe o que se recupera de una terapia inmunosupresora. En determinadas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un sujeto que tiene o corre el riesgo de contraer SIDA, una infección viral o una infección bacteriana. En determinadas realizaciones, un sujeto que se somete, se someterá o se ha sometido a cirugía, quimioterapia y/o radioterapia.
En algunas realizaciones, se administra un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación a un sujeto que tiene niveles de expresión anómalos de o bien B7-H7, B7-H7CR o bien ambos.
En algunas realizaciones, se le administra a un paciente un agente terapéutico inhibidor, una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor o una terapia de combinación antes de que se desarrolle cualquier efecto adverso o intolerancia a terapias distintas de agentes terapéuticos inhibidores. En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
terapias de combinación a pacientes resistentes. En una determinada realización, un paciente resistente es un paciente resistente a una terapia convencional. En determinadas realizaciones, un paciente con una enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio es resistente a una terapia cuando la enfermedad autoinmunitaria o trastorno inflamatorio, respectivamente, no se ha erradicado significativamente y/o los síntomas no se han aliviado significativamente. La determinación de si un paciente es resistente puede hacerse o bien in vivo o bien in vitro mediante cualquier método conocido en la técnica para someter a ensayo la eficacia de un tratamiento, usando los significados aceptados en la técnica de “resistente” en tal contexto. En diversas realizaciones, un paciente con un trastorno inflamatorio es resistente cuando la inflamación no ha disminuido o ha aumentado.
En algunas realizaciones, se administran agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación a un paciente que es susceptible a reacciones adversas a terapias convencionales.
En algunas realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación a un paciente que se ha comprobado que es resistente a terapias distintas de agentes terapéuticos inhibidores, pero que ya no sigue estas terapias. En determinadas realizaciones, los pacientes que están gestionándose o tratándose según los métodos descritos en el presente documento son pacientes que ya se han tratado con antibióticos, agentes anticancerígenos, agentes antiinflamatorios u otra terapia biológica/inmunoterapia. Entre estos pacientes están pacientes resistentes, pacientes que son demasiado jóvenes para terapias convencionales.
En algunas realizaciones, el sujeto al que están administrándose uno o más agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación no ha recibido una terapia previa a la administración de los agentes terapéuticos inhibidores, las composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o las terapias de combinación. En otras realizaciones, se administran uno o más agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación a un sujeto que ha recibido una terapia previa a la administración de uno o más agentes terapéuticos inhibidores, composiciones que comprenden agentes terapéuticos inhibidores o terapias de combinación. En algunas realizaciones, el sujeto al que se le ha administrado un agente terapéutico inhibidor o una composición que comprende un agente terapéutico inhibidor era resistente a una terapia previa o experimentaba efectos secundarios adversos a la terapia previa o la terapia previa se interrumpió debido a niveles inaceptables de toxicidad para el sujeto.
5.7 TERAPIAS DE COMBINACIÓN
Otras terapias que pueden usarse en combinación con agentes terapéuticos (es decir, agentes terapéuticos inmunoestimulantes y/o agentes terapéuticos inhibidores) para la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una enfermedad que se ve afectada por la respuesta o función inmunitaria, por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, enfermedad autoinmunitaria e inflamatoria y rechazo de trasplante, incluyen, pero no se limitan a, moléculas pequeñas, fármacos sintéticos, péptidos (incluyendo péptidos cíclicos), polipéptidos, proteínas, ácidos nucleicos (por ejemplo, nucleótidos de ADN y ARN incluyendo, pero sin limitarse a, secuencias de nucleótidos antisentido, hélices triples, iARN y secuencias de nucleótidos que codifican para proteínas, polipéptidos o péptidos biológicamente activos), anticuerpos, moléculas inorgánicas sintéticas o naturales, agentes miméticos y moléculas orgánicas sintéticas o naturales. Los ejemplos específicos de tales terapias incluyen, pero no se limitan a, agentes inmunomoduladores (por ejemplo, interferón), agentes antiinflamatorios (por ejemplo, adrenocorticoides, corticosteroides (por ejemplo, beclometasona, budesonida, flunisolida, fluticasona, triamcinolona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, hidrocortisona), glucocorticoides, esteroides y fármacos antiinflamatorios no esteroideos (por ejemplo, aspirina, ibuprofeno, diclofenaco e inhibidores de COX-2), analgésicos, antagonistas de leucotrienos (por ejemplo, montelukast, metilxantinas, zafirlukast y zileuton), agonistas beta2 (por ejemplo, albuterol, biterol, fenoterol, isoetarina, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, terbutalina formoterol, salmeterol y salbutamol terbutalina), anticuerpos anti-PD1, inhibidores de PD1, agentes anticolinérgicos anti-B7-H1, anti-CTLA-4, CTLA-4-Ig (por ejemplo, bromuro de ipratropio y bromuro de oxitropio), sulfasalazina, penicilamina, dapsona, antihistamínicos, agentes antipalúdicos (por ejemplo, hidroxicloroquina), agentes antivirales (por ejemplo, análogos de nucleósidos (por ejemplo, zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina y ribavirina), foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, ritonavir y AZT) y antibióticos (por ejemplo, dactinomicina (anteriormente actinomicina), bleomicina, eritromicina, penicilina, mitramicina y antramicina (AMC)).
En determinadas realizaciones, se usan anticuerpos anti-TNF alfa (por ejemplo, Remicade), CTLA-4-Ig (por ejemplo, orencia) y/o TNFR-Ig (por ejemplo, Enbrel) en combinación con un agente terapéutico para prevenir, tratar y/o gestionar una enfermedad autoinmunitaria, enfermedad inflamatoria, artritis reumatoide y/o rechazo de trasplante.
Cualquier terapia que se sepa que es útil, o que se ha usado o está usándose actualmente para la prevención, la gestión y/o el tratamiento de una enfermedad que se ve afectada por la respuesta o función inmunitaria puede usarse en combinación con agentes terapéuticos. Véanse, por ejemplo, Gilman et al., Goodman and Gilman’s: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10a ed., McGraw-Hill, Nueva York, 2001; The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Berkow, M.D. et al. (eds.), 17a ed., Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, Rahway, NJ, 1999;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Cecil Textbook of Medicine, 20a ed., Bennett y Plum (eds.), W.B. Saunders, Filadelfia, 1996, y Physicians’ Desk Reference (61 a ed. 2007) para información referente a terapias (por ejemplo, agentes profilácticos o terapéuticos) que se han usado o están usándose actualmente para prevenir, tratar y/o gestionar una enfermedad o trastorno.
5.7.1 Agentes anticancerígenos/agentes inmunomoduladores
Los ejemplos no limitativos de una o más de otras terapias que pueden usarse en combinación con un agente terapéutico incluyen agentes inmunomoduladores, tales como pero sin limitarse a, agentes quimioterápicos y agentes inmunomoduladores no quimioterápicos. Los ejemplos no limitativos de agentes quimioterápicos incluyen ciclofosfamida, metotrexato, ciclosporina A, leflunomida, cisplatino, ifosfamida, taxanos tales como taxol y paclitaxol, inhibidores de topoisomerasa I (por ejemplo, CPT-11, topotecán, 9-AC y GG-211), gemcitabina, vinorelbina, oxaliplatino, 5-fluorouracilo (5-FU), leucovorina, vinorelbina, temodal, citocalasina B, gramicidina D, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorubicina, daunorubicina, dihidroxiantracindiona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol y homólogos de puromicina, y citoxano. Los ejemplos de agentes inmunomoduladores no quimioterápicos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos anti-receptor de células T (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 (por ejemplo, cM-T412 (Boeringer), IDEC-CE9.1® (IDEC y SkB), AcM 4162W94, Orthoclone y OKTcdr4a (Janssen-Cilag)), anticuerpos anti-CD3 (por ejemplo, Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson) o Rituxan (IDEC)), anticuerpos anti-CD5 (por ejemplo, un inmunoconjugado anti-CD5 unido a ricina), anticuerpos anti-CD7 (por ejemplo, CHH-380 (Novartis)), anticuerpos anti-CD8, anticuerpos monoclonales anti-ligando de CD40 (por ejemplo, IDEC-131 (IDEC)), anticuerpos anti-CD52 (por ejemplo, CaMpATH 1H (Ilex)), anticuerpos anti-CD2 (por ejemplo, MEDI-507 (MedImmune, Inc., publicaciones internacionales n.os WO 02/098370 y WO 02/069904), anticuerpos anti-CD11a (por ejemplo, Xanelim (Genentech)) y anticuerpos anti-B7 (por ejemplo, IDEC-114) (IDEC)); anticuerpos anti-receptor de citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-receptor de IFN, anticuerpos anti-receptor de IL-2 (por ejemplo, Zenapax (Protein Design Labs)), anticuerpos anti-receptor de IL-4, anticuerpos anti-receptor de IL-6, anticuerpos anti-receptor de IL-10 y anticuerpos anti-receptor de IL-12), anticuerpos anti- citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-IFN, anticuerpos anti-TNF-alfa, anticuerpos anti-IL-1-alfa, anticuerpos anti-IL- 6, anticuerpos anti-IL-8 (por ejemplo, ABX-TL-8 (Abgenix)), anticuerpos anti-IL-12 y anticuerpos anti-IL-23)); CTLA4- inmunoglobulina; LFA-3TIP (Biogen, publicación internacional n.° WO 93/08656 y patente estadounidense n.° 6.162.432); receptores de citocinas solubles (por ejemplo, el dominio extracelular de un receptor de TNF-alfa o un fragmento del mismo, el dominio extracelular de un receptor de IL-1 alfa o un fragmento del mismo y el dominio extracelular de un receptor de IL-6 o un fragmento del mismo); citocinas o fragmentos de las mismas (por ejemplo, interleucina (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, IL-23, INF-alfa, INF-beta, interferón (IFN)-alfa, IFN-beta, IFN-gamma y GM-CSF); y anticuerpos anti-citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-IL-2, anticuerpos anti-IL-4, anticuerpos anti-IL-6, anticuerpos anti-IL-10, anticuerpos anti-IL-12, anticuerpos anti-IL-15, anticuerpos anti-TNF-alfa y anticuerpos anti-IFN-gamma), y anticuerpos que se unen de manera inmunoespecífica a antígenos asociados a tumor (por ejemplo, Herceptin®). En determinadas realizaciones, un agente inmunomodulador es un agente inmunomodulador distinto de un agente quimioterápico. En otras realizaciones un agente inmunomodulador es un agente inmunomodulador distinto de una citocina o un factor hematopoyético tal como IL-1, IL-2, IL-4, IL-12, IL-15, TNF, IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gamma, M-CSF, G-CSF, IL-3 o eritropoyetina. En aún otras realizaciones, un agente inmunomodulador es un agente distinto de un agente quimioterápico y una citocina o un factor hematopoyético.
Los ejemplos no limitativos de agentes anticancerígenos que pueden usarse como terapias en combinación con agentes terapéuticos, incluyen, pero no se limitan a: acivicina; aclarubicina; clorhidrato de acodazol; acronina; adozelesina; aldesleucina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; aminoglutetimida; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlina; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; clorhidrato de bisantreno; dimesilato de bisnafida; bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sódico; bropirimina; busulfano; cactinomicina; calusterona; caracemida; carbetímero; carboplatino; carmustina; clorhidrato de carubicina; carzelesina; cedefingol; clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorubicina; decitabina; dexormaplatino; dezaguanina; mesilato de dezaguanina; diazicuona; docetaxel; doxorubicina; clorhidrato de doxorubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; clorhidrato de epirubicina; erbulozol; clorhidrato de esorubicina; estramustina; fosfato sódico de estramustina; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; fostriecina sódica; gemcitabina; clorhidrato de gemcitabina; hidroxiurea; clorhidrato de idarubicina; ifosfamida; ilmofosina; interleucina II (incluyendo interleucina recombinante II, o rIL2), interferón alfa-2a; interferón alfa-2b; interferón alfa- n1; interferón alfa-n3; interferón beta-Ia; interferón gamma-Ib; iproplatino; clorhidrato de irinotecán; acetato de lanreotida; letrozol; acetato de leuprolida; clorhidrato de liarozol; lometrexol sódico; lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol; maitansina; clorhidrato de mecloretamina; acetato de megestrol; acetato de melengestrol; melfalán; menogarilo; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sódico; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogilina; mitomalcina; mitomicina; mitosper; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona; ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisurano; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina; sulfato de peplomicina; perfosfamida; pipobromano; piposulfano; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfímero sódico; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
puromicina; pirazofurina; riboprina; rogletimida; safingol; clorhidrato de safingol; semustina; simtrazeno; esparfosato sódico; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; talisomicina; tecogalán sódico; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfina; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno; acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; glucuronato de trimetrexato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina; sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; sulfato de vinglicinato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; clorhidrato de zorubicina. Otros fármacos anticancerígenos incluyen, pero no se limitan a: 20-epi-1,25-dihidroxivitamina D3; 5-etiniluracilo; abiraterona; aclarubicina; acilfulveno; adecipenol; adozelesina; aldesleucina; antagonistas de ALL-TK; altretamina; ambamustina; amidox; amifostina; ácido aminolevulínico; amrubicina; amsacrina; anagrelida; anastrozol; andrografolida; inhibidores de la angiogénesis; antagonista D; antagonista G; antarelix; proteína morfogenética anti-dorsalización-1; antiandrógeno, carcinoma prostático; antiestrógeno; antineoplastón; oligonucleótidos antisentido; glicinato de afidicolina; moduladores de genes de apoptosis; reguladores de la apoptosis; ácido apurínico; ara-CDP-DL-PTBA; arginina desaminasa; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1; axinastatina 2; axinastatina 3; azasetrón; azatoxina; azatirosina; derivados de bacatina III; balanol; batimastat; antagonistas de BCR/ABL; benzoclorinas; benzoilestaurosporina; derivados de beta-lactama; beta-aletina; betaclamicina B; ácido betulínico; inhibidor de bFGF; bicalutamida; bisantreno; bisaziridinilespermina; bisnafida; bistrateno A; bizelesina; breflato; bropirimina; budotitano; butionina sulfoximina; calcipotriol; calfostina C; derivados de camptotecina; IL-2 de viruela de los canarios; capecitabina; carboxamida-aminotriazol; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibidor derivado de cartílago; carzelesina; inhibidores de caseína cinasa (ICOS); castanospermina; cecropina B; cetrorelix; clorinas; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis-porfirina; cladribina; análogos de clomifeno; clotrimazol; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; análogo de combretastatina; conagenina; crambescidina 816; crisnatol; criptoficina 8; derivados de criptoficina A; curacina A; ciclopentantraquinonas; cicloplatamo; cipemicina; ocfosfato de citarabina; factor citolítico; citostatina; dacliximab; decitabina; deshidrodidemnina B; deslorelina; dexametasona; dexifosfamida; dexrazoxano; dexverapamilo; diazicuona; didemnina B; didox; dietilnorespermina; dihidro-5- azacitidina; dihidrotaxol, 9-; dioxamicina; difenilespiromustina; docetaxel; docosanol; dolasetrón; doxifluridina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebselen; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornitina; elemeno; emitefur; epirubicina; epristerida; análogo de estramustina; agonistas de estrógenos; antagonistas de estrógenos; etanidazol; fosfato de etopósido; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinida; filgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; clorhidrato de fluorodaunorunicina; forfenimex; formestano; fostriecina; fotemustina; gadolinio texapirina; nitrato de galio; galocitabina; ganirelix; inhibidores de gelatinasa; gemcitabina; inhibidores de glutatión; hepsulfamo; heregulina; bisacetamida de hexametileno; hipericina; ácido ibandrónico; idarubicina; idoxifeno; idramantona; ilmofosina; ilomastat; imidazoacridonas; imiquimod; péptidos inmunoestimulantes; inhibidor del receptor del factor de crecimiento similar a la insulina-1; agonistas de interferón; interferones; interleucinas; iobenguano; yododoxorubicina; ipomeanol, 4-; iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrina B; itasetrón; jasplakinolida; kahalalida F; triacetato de lamelarina-N; lanreotida; leinamicina; lenograstim; sulfato de lentinano; leptolestatina; letrozol; factor de inhibición de leucemia; interferón alfa de leucocitos; leuprolida+estrógeno+progesterona; leuprorelina; levamisol; liarozol; análogo de poliamina lineal; péptido de disacárido lipófilo; compuestos de platino lipófilos; lisoclinamida 7; lobaplatino; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; inhibidor de HMG-CoA reductasa (tal como pero sin limitarse a, lovastatina, pravastatina, fluvastatina, estatina, simvastatina y atorvastatina); loxoribina; lurtotecán; lutecio texafirina; lisofilina; péptidos líticos; maitansina; manostatina A; marimastat; masoprocol; maspina; inhibidores de matrilisina; inhibidores de metaloproteinasas de la matriz; menogarilo; merbarona; meterelina; metioninasa; metoclopramida; inhibidor de MIF; mifepristona; miltefosina; mirimostim; ARN bicatenario desapareado; mitoguazona; mitolactol; análogos de mitomicina; mitonafida; mitotoxina- factor de crecimiento de fibroblastos-saporina; mitoxantrona; mofaroteno; molgramostim; anticuerpo monoclonal, gonadotropina coriónica humana; monofosforil lípido A+pared celular de Mycobacterium sk; mopidamol; inhibidor de gen de resistencia a múltiples fármacos; terapia basada en supresor de tumores múltiples 1; agente anticancerígeno de mostaza; micaper-óxido B; extracto de pared celular de micobacterias; miriaporona; N-acetildinalina; benzamidas N-sustituidas; nafarelina; nagrestip; naloxona+pentazocina; napavina; nafterpina; nartograstim; nedaplatino; nemorubicina; ácido neridrónico; endopeptidasa neutra; nilutamida; nisamicina; moduladores de óxido nítrico; antioxidante de nitróxido; nitrulina; O6-bencilguanina; octreotida; oquicenona; oligonucleótidos; onapristona; ondansetrón; ondansetrón; oracina; inductor de citocina oral; ormaplatino; osaterona; oxaliplatino; oxaunomicina; paclitaxel; análogos de paclitaxel; derivados de paclitaxel; palauamina; palmitoilrizoxina; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifeno; parabactina; pazeliptina; pegaspargasa; peldesina; polisulfato sódico de pentosano; pentostatina; pentrozol; perflubrón; perfosfamida; alcohol perilílico; fenazinomicina; acetato de fenilo; inhibidores de fosfatasa; picibanilo; clorhidrato de pilocarpina; pirarubicina; piritrexim; placetina A; placetina B; inhibidor de activador de plasminógeno; complejo de platino; compuestos de platino; complejo de platino-triamina; porfímero sódico; porfiromicina; prednisona; propil-bis-acridona; prostaglandina J2; inhibidores del proteosoma; modulador inmunitario basado en proteína A; inhibidor de proteína cinasa C; inhibidores de proteína cinasa C, microalgal; inhibidores de proteína tirosina fosfatasa; inhibidores de purina nucleósido fosforilasa; purpurinas; pirazoloacridina; conjugado de hemoglogina-polioxietileno piridoxilado; antagonistas de raf; raltitrexed; ramosetrón; inhibidores de ras farnesil proteína transferasa; inhibidores de ras; inhibidor de ras-GAP; reteliptina desmetilada; renio Re 186 etidronato; rizoxina; ribozimas; RII retinamida; rogletimida; rohituquina; romurtida; roquinimex; rubiginona B1; ruboxilo; safingol; saintopina; SarCNU; sarcofitol A; sargramostim; miméticos de Sdi 1; semustina; inhibidor 1 derivado de senescencia; oligonucleótidos sentido; inhibidores de la transducción de señales; moduladores de la transducción de señales;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
proteína de unión a antígeno de cadena sencilla; sizofirán; sobuzoxano; borocaptato de sodio; fenilacetato de sodio; solverol; proteína de unión a somatomedina; sonermina; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; esplenopentina; espongistatina 1; escualamina; inhibidor de células madre; inhibidores de la división de células madre; estipiamida; inhibidores de estromelisina; sulfinosina; antagonista de péptido intestinal vasoactivo superactivo; suradista; suramina; swainsonina; glicosaminoglicanos sintéticos; talimustina; tamoxifeno metiodida; tauromustina; tazaroteno; tecogalán sódico; tegafur; telurapirilio; inhibidores de telomerasa; temoporfina; temozolomida; tenipósido; tetraclorodecaóxido; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoyetina; mimético de trombopoyetina; timalfasina; agonista de receptor de timopoyetina; timotrinano; hormona estimulante del tiroides; etiletiopurpurina de estaño; tirapazamina; bicloruro de titanoceno; topsentina; toremifeno; factor de células madre totipotentes; inhibidores de la traducción; tretinoína; triacetiluridina; triciribina; trimetrexato; triptorelina; tropisetrón; turosterida; inhibidores de tirosina cinasa; tirfostinas; inhibidores de UBC; ubenimex; factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital; antagonistas del receptor de urocinasa; vapreotida; variolina B; sistema de vector, terapia génica de eritrocitos; velaresol; veramina; verdinas; verteporfina; vinorelbina; vinxaltina; Vitaxin®; vorozol; zanotcrona; zeniplatino; zilascorb; y estimalámeero de zinostatina. Fármacos anticancerígenos adicionales son 5- fluorouracilo y leucovorina. Estos dos agentes son particularmente útiles cuando se usan en métodos que emplean talidomida y un inhibidor de topoisomerasa. En realizaciones específicas, un agente anticancerígeno no es un agente quimioterápico.
En determinadas realizaciones, ciertas de las terapias descritas en esta sección 5.7.1 se usan en combinación con un agente terapéutico para prevenir, tratar o gestionar una enfermedad autoinmunitaria, enfermedad inflamatoria y/o rechazo de trasplante.
5.7.2 Agentes antivirales
Los agentes antivirales que pueden usarse en combinación con agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleosídicos, inhibidores de la transcriptasa inversa nucleosídicos, inhibidores de la proteasa e inhibidores de la fusión. En una realización, el agente antiviral se selecciona del grupo que consiste en amantadina, fosfato de oseltamivir, rimantadina y zanamivir. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la transcriptasa inversa no nucleosídico seleccionado del grupo que consiste en delavirdina, efavirenz y nevirapina. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la transcriptasa inversa nucleosídico seleccionado del grupo que consiste en abacavir, didanosina, emtricitabina, emtricitabina, lamivudina, estavudina, tenofovir DF, zalcitabina y zidovudina. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la proteasa seleccionado del grupo que consiste en amprenavir, atazanavir, fosamprenav, indinavir, lopinavir, nelfinavir, ritonavir, y saquinavir. En otra realización, el agente antiviral es un inhibidor de la fusión tal como enfuvirtida.
Los ejemplos adicionales, no limitativos de agentes antivirales para su uso en combinación con agentes terapéuticos incluyen los siguientes: rifampicina, inhibidores de la transcriptasa inversa nucleosídicos (por ejemplo, AZT, ddI, ddC, 3TC, d4T), inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleosídicos (por ejemplo, delavirdina, efavirenz, nevirapina), inhibidores de la proteasa (por ejemplo, aprenavir, indinavir, ritonavir y saquinavir), idoxuridina, cidofovir, aciclovir, ganciclovir, zanamivir, amantadina y palivizumab. Otros ejemplos de agentes antivirales incluyen pero no se limitan a acemanano; aciclovir; aciclovir sódico; adefovir; alovudina; alvircept sudotox; clorhidrato de amantadina (SYMMETRELTM); aranotina; arildona; mesilato de atevirdina; avridina; cidofovir; cipamfilina; clorhidrato de citarabina; mesilato de delavirdina; desciclovir; didanosina; disoxarilo; edoxudina; enviradeno; enviroxima; famciclovir; clorhidrato de famotina; fiacitabina; fialuridina; fosarilato; foscarnet sódico; fosfonet sódico; ganciclovir; ganciclovir sódico; idoxuridina; cetoxal; lamivudina; lobucavir; clorhidrato de memotina; metisazona; nevirapina; fosfato de oseltamivir (TAMIFLUTM); penciclovir; pirodavir; ribavirina; clorhidrato de rimantadina (FLUMADINETM); mesilato de saquinavir; clorhidrato de somantadina; sorivudina; estatolona; estavudina; clorhidrato de tilorona; trifluridina; clorhidrato de valaciclovir; vidarabina; fosfato de vidarabina; fosfato sódico de vidarabina; viroxima; zalcitabina; zanamivir (RELENZATM); zidovudina; y zinviroxima.
5.7.3 Agentes antibacterianos
Los agentes antibacterianos, incluyendo antibióticos, que pueden usarse en combinación con agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, antibióticos de aminoglicósidos, glicopéptidos, antibióticos de amfenicol, antibióticos de ansamicina, cefalosporinas, cefamicinas oxazolidinonas, penicilinas, quinolonas, estreptogaminas, tetraciclinas y análogos de los mismos. En algunas realizaciones, se administran antibióticos en combinación con un agente terapéutico para prevenir y/o tratar una infección bacteriana.
En una realización específica, se usan agentes terapéuticos en combinación con otros inhibidores de la síntesis de proteínas, incluyendo pero sin limitarse a, estreptomicina, neomicina, eritromicina, carbomicina y espiramicina.
En una realización, el agente antibacteriano se selecciona del grupo que consiste en ampicilina, amoxicilina, ciprofloxacino, gentamicina, kanamicina, neomicina, penicilina G, estreptomicina, sulfanilamida y vancomicina. En otra realización, el agente antibacteriano se selecciona del grupo que consiste en azitromicina, cefonicid, cefotetán, cefalotina, cefamicina, clortetraciclina, claritromicina, clindamicina, cicloserina, dalfopristina, doxiciclina, eritromicina, linezolid, mupirocina, oxitetraciclina, quinupristina, rifampina, espectinomicina y trimetoprim.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Los ejemplos adicionales, no limitativos de agentes antibacterianos para su uso en combinación con agentes terapéuticos incluyen los siguientes: antibióticos de aminoglicósidos (por ejemplo, apramicina, arbekacina, bambermicinas, butirosina, dibekacina, neomicina, neomicina, undecilenato, netilmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina y espectinomicina), antibióticos de amfenicol (por ejemplo, azidamfenicol, cloramfenicol, florfenicol y tiamfenicol), antibióticos de ansamicina (por ejemplo, rifamida y rifampina), carbacefemos (por ejemplo, loracarbef), carbapenemos (por ejemplo, biapenem e imipenem), cefalosporinas (por ejemplo, cefaclor, cefadroxilo, cefamandol, cefatrizina, cefazedona, cefozoprán, cefpimizol, cefpiramida y cefpiroma), cefamicinas (por ejemplo, cefbuperazona, cefmetazol y cefminox), análogos de ácido fólico (por ejemplo, trimetoprim), glicopéptidos (por ejemplo, vancomicina), lincosamidas (por ejemplo, clindamicina y lincomicina), macrólidos (por ejemplo, azitromicina, carbomicina, claritomicina, diritromicina, eritromicina y acistrato de eritromicina), monobactamas (por ejemplo, aztreonam, carumonam y tigemonam), nitrofuranos (por ejemplo, furaltadona y cloruro de furazolio), oxacefemos (por ejemplo, flomoxef y moxalactam), oxazolidinonas (por ejemplo, linezolid), penicilinas (por ejemplo, amdinocilina, amdinocilina pivoxilo, amoxicilina, bacampicilina, ácido bencilpenicilínico, bencilpenicilina sódica, epicilina, fenbenicilina, floxacilina, penamcilina, yodhidrato de penetamato, penicilina o benetamina, penicilina 0, penicilina V, penicilina V benzatina, penicilina V hidrabamina, penimepiciclina y fencihicilina potásica), quinolonas y análogos de las mismas (por ejemplo, cinoxacino, ciprofloxacino, clinafloxacino, flumequina, grepagloxacino, levofloxacino y moxifloxacino), estreptograminas (por ejemplo, quinupristina y dalfopristina), sulfonamidas (por ejemplo, acetilsulfametoxipirazina, bencilsulfamida, noprilsulfamida, ftalilsulfacetamida, sulfacrisoidina y sulfacitina), sulfonas (por ejemplo, diatimosulfona, glucosulfona sódica y solasulfona) y tetraciclinas (por ejemplo, apiciclina, clortetraciclina, clomociclina y demeclociclina). Los ejemplos adicionales incluyen cicloserina, mupirocina, tuberina amfomicina, bacitracina, capreomicina, colistina, enduracidina, enviomicina y 2,4-diaminopirimidinas (por ejemplo, brodimoprim).
5.8 ADMINISTRACIÓN Y DOSIFICACIÓN DE AGENTES TERAPÉUTICOS
5.8.1 MODO DE ADMINISTRACIÓN DE AGENTES TERAPÉUTICOS
Pueden administrarse agentes terapéuticos por medio de cualquier vía conocida en la técnica. Pueden administrarse agentes terapéuticos o composiciones de los mismos por vía oral, o por cualquier otra vía conveniente, por ejemplo, mediante infusión o inyección en bolo, mediante absorción a través de los revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, rectal y mucosa intestinal) y pueden administrarse junto con otro agente biológicamente activo. La administración puede ser sistémica o local. Se conocen diversos sistemas de administración, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, cápsulas, y pueden usarse para administrar los agentes terapéuticos o composiciones de los mismos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los métodos de administración incluyen pero no se limitan a parenteral, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural, oral, sublingual, intranasal, intracerebral, intravaginal, transdérmica, por vía rectal, mediante inhalación, por vía intratumoral o por vía tópica, particularmente a los oídos, la nariz, los ojos o la piel. El modo de administración se deja al criterio del profesional médico. En algunas realizaciones, la administración dará como resultado la liberación de un agente terapéutico en el torrente sanguíneo.
En realizaciones específicas, puede ser deseable administrar un agente terapéutico localmente. Esto puede lograrse, por ejemplo, y no a modo de limitación, mediante infusión local, aplicación tópica, por ejemplo, conjuntamente con un apósito de heridas, mediante inyección, por medio de un catéter, por medio de un supositorio o por medio de un implante, siendo dicho implante de un material poroso, no poroso o gelatinoso, incluyendo membranas, tales como membranas silásticas, o fibras.
En determinadas realizaciones, puede ser deseable introducir un agente terapéutico en el sistema nervioso central por cualquier vía adecuada, incluyendo inyección intraventricular, intratecal y epidural. La inyección intraventricular puede facilitarse mediante un catéter intraventricular, por ejemplo, unido a un depósito, tal como un depósito Ommaya.
También puede emplearse administración pulmonar, por ejemplo, mediante el uso de un inhalador o nebulizador, y formulación con un agente de aerosolización, o por medio de perfusión en un fluorocarbono o tensioactivo pulmonar sintético.
En determinadas realizaciones, se formula un agente terapéutico como un supositorio, con vehículos y aglutinantes tradicionales tales como triglicéridos.
Para infecciones virales o melanoma con manifestaciones cutáneas, el agente terapéutico puede administrarse por vía tópica.
En otra realización, se administra un agente terapéutico en una vesícula, en particular un liposoma (véanse Langer, 1990, Science 249:1527 1533; Treat et al., en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Bacterial Infection, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, Nueva York, págs. 353 365 (1989); Lopez Berestein, ibid., págs. 317
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En otra realización, se administra un agente terapéutico en un sistema de liberación controlada (véase, por ejemplo, Goodson, en Medical Applications of Controlled Release, citado anteriormente, vol. 2, págs. 115 138 (1984)). Pueden usarse ejemplos de sistemas de liberación controlada comentados en la revisión de Langer, 1990, Science 249:1527 1533. En una realización, puede usarse una bomba (véanse Langer, citado anteriormente; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). En otra realización, pueden usarse materiales poliméricos (véanse Medical Applications of Controlled Release, Langer y Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley, Nueva York (1984); Ranger y Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; véanse también Levy et al., 1985, Science 228:190; Durante et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105). En una realización específica, un sistema de liberación controlada que comprende un agente terapéutico se coloca en proximidad estrecha al tejido afectado por la enfermedad que va a prevenirse, tratarse y/o gestionarse. Según esta realización, la proximidad estrecha del sistema de liberación controlada al tejido afectado puede dar como resultado sólo una fracción de la dosis del agente terapéutico requerido si se administra de manera sistémica.
5.8.2 DOSIFICACIÓN DE AGENTES TERAPÉUTICOS
La cantidad de un agente terapéutico, o la cantidad de una composición que comprende un agente terapéutico, que será eficaz en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una enfermedad puede determinarse mediante técnicas clínicas convencionales. Opcionalmente, pueden emplearse ensayos in vitro o in vivo para ayudar a identificar intervalos de dosificación óptimos. La dosis precisa que va a emplearse también dependerá, por ejemplo, de la vía de administración, el tipo de síntomas y la gravedad de los síntomas, y debe decidirse según el juicio del profesional sanitario y las circunstancias de cada paciente o sujeto.
En algunas realizaciones, la dosificación de un agente terapéutico o composiciones del mismo se determina mediante extrapolación a partir del nivel eficaz sin efecto adverso observado (NOAEL), tal como se determina en estudios con animales. Esta dosificación extrapolada es útil en la determinación de la dosis de partida recomendada máxima para ensayos clínicos en seres humanos. Por ejemplo, los NOAEL pueden extrapolarse para determinar dosificaciones equivalentes en seres humanos (HED). Normalmente, se extrapola HED a partir de una dosificación en un animal no humano basándose en las dosis que se normalizan con respecto al área de superficie corporal (es decir, mg/m2). En realizaciones específicas, los NOAEL se determinan en ratones, hámsteres, ratas, hurones, cobayas, conejos, perros, primates, primates (monos, titíes, monos ardilla, babuinos), microcerdos o minicerdos. Para una discusión sobre el uso de NOAEL y su extrapolación para determinar dosis equivalentes en seres humanos, véase Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Pharmacology and Toxicology, julio de 2005. En una realización, un agente terapéutico o composición del mismo se administra a una dosis que es menor que la dosificación equivalente en seres humanos (HED) del NOAEL a lo largo de un periodo de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, tres meses, cuatro meses, seis meses, nueve meses, 1 año, 2 años, 3 años, 4 años o más.
En determinadas realizaciones, un régimen de dosificación para un sujeto humano puede extrapolarse a partir de estudios de modelos animales usando la dosis a la que el 10% de los animales mueren (DL10). En general, la dosis de partida de un ensayo clínico de fase I se basa en pruebas preclínicas. Una medida convencional de la toxicidad de un fármaco en pruebas preclínicas es el porcentaje de animales que mueren debido al tratamiento. Está bien dentro de la experiencia en la técnica correlacionar la DL10 en un estudio con animales con la dosis tolerada máxima (MTD) en seres humanos, ajustada para el área de superficie corporal, como base para extrapolar una dosis en seres humanos de partida. En algunas realizaciones, la interrelación de las dosificaciones para un modelo con animales puede convertirse para su uso en otro animal, incluyendo seres humanos, usando factores de conversión (basándose en miligramos por metro cuadrado de superficie corporal) tal como se describe, por ejemplo, en Freireich et al., Cancer Chemother. Rep., 1966, 50:219-244. El área de superficie corporal puede determinarse aproximadamente a partir de la altura y el peso del paciente. Véase, por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardley, N. Y., 1970, 537. En determinadas realizaciones, el ajuste del área de superficie corporal incluye factores del huésped tales como, por ejemplo, área de superficie, peso, metabolismo, distribución tisular, tasa de absorción y tasa de excreción. Además, la vía de administración, el uso de excipientes y la enfermedad o el virus específico que va a seleccionarse como diana también son factores a considerar. En una realización, la dosis de partida conservativa convencional es aproximadamente 1/10 de la DL10 murina, aunque puede ser incluso menor si otras especies (es decir, perros) eran más sensibles al agente terapéutico. En otras realizaciones, la dosis de partida conservativa convencional es aproximadamente 1/100, 1/95, 1/90, 1/85, 1/80, 1/75, 1/70, 1/65, 1/60, 1/55, 1/50, 1/45, 1/40, 1/35, 1/30, 1/25, 1/20, 1/15, 2/10, 3/10, 4/10 o 5/10 de la DL10 murina. En otras realizaciones, una cantidad de dosis de partida de un agente terapéutico en un ser humano es menor que la dosis extrapolada a partir de estudios de modelos animales. En otra realización, una cantidad de dosis de partida de un agente terapéutico en un humano es mayor que la dosis extrapolada a partir de estudios de modelos animales. Está bien dentro de la experiencia de la técnica iniciar las dosis de la composición activa a niveles relativamente bajos, y aumentar o
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
disminuir la dosificación según sea necesario para lograr el efecto deseado con toxicidad mínima.
Las dosis a modo de ejemplo de agentes terapéuticos que comprenden polipéptidos o anticuerpos o composiciones de los mismos incluyen cantidades de miligramos o microgramos por kilogramo de peso de sujeto o muestra (por ejemplo, de aproximadamente 1 microgramo por kilogramo a aproximadamente 500 miligramos por kilogramo, de aproximadamente 5 microgramos por kilogramo a aproximadamente 100 miligramos por kilogramo, o de aproximadamente 1 microgramo por kilogramo a aproximadamente 50 microgramos por kilogramo). En realizaciones específicas, una dosis diaria es de al menos 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 250 mg, 500 mg, 750 mg o al menos
1 g.
En una realización, la dosificación es una concentración de 0,01 a 5000 mM, de 1 a 300 mM, de 10 a 100 mM y de 10 mM a 1 M. En otra realización, la dosificación es una concentración de al menos 5 pM, al menos 10 pM, al menos 50 pM, al menos 100 pM, al menos 500 pM, al menos 1 mM, al menos 5 mM, al menos 10 mM, al menos 50 mM, al menos 100 mM o al menos 500 mM.
En una realización, la dosificación es una concentración de 0,01 a 5000 mM, de 1 a 300 mM, de 10 a 100 mM y de 10 mM a 1 M. En otra realización, la dosificación es una concentración de al menos 5 pM, al menos 10 pM, al menos 50 pM, al menos 100 pM, al menos 500 pM, al menos 1 mM, al menos 5 mM, al menos 10 mM, al menos 50 mM, al menos 100 mM o al menos 500 mM. En una realización específica, la dosificación es de 0,25 pg/kg o más, preferiblemente 0,5 pg/kg o más, 1 pg/kg o más, 2 pg/kg o más, 3 pg/kg o más, 4 pg/kg o más, 5 pg/kg o más, 6 pg/kg o más, 7 pg/kg o más, 8 pg/kg o más, 9 pg/kg o más, o 10 pg/kg o más, 25 pg/kg o más, preferiblemente 50 pg/kg o más, 100 pg/kg o más, 250 pg/kg o más, 500 pg/kg o más, 1 mg/kg o más, 5 mg/kg o más, 6 mg/kg o más, 7 mg/kg o más, 8 mg/kg o más, 9 mg/kg o más, o 10 mg/kg o más de peso corporal de un paciente.
En otra realización, la dosificación es una dosis unitaria de 1 mg, preferiblemente 2 mg, 5 mg, 10 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg, 800 mg o más. En otra realización, la dosificación es una dosis unitaria que oscila entre aproximadamente 5 mg y aproximadamente 100 mg, aproximadamente 100 mg y aproximadamente 200 pg, aproximadamente 150 mg y aproximadamente 300 mg, aproximadamente 150 mg y aproximadamente 400 mg, 250 pg y aproximadamente 500 mg, aproximadamente 500 mg y aproximadamente 800 mg, aproximadamente 500 mg y aproximadamente 1000 mg, o aproximadamente 5 mg y aproximadamente 1000 mg.
Las dosis a modo de ejemplo de agentes terapéuticos que comprenden ácidos nucleicos o composiciones de los mismos incluyen 0,1 pg, 0,5 pg, 1 pg, 1,5 pg, 2 pg, 3 pg, 4 pg, 5 pg, 6 pg, 7 pg, 8 pg, 9 pg, 10 pg, 15 pg, 20 pg, 25 pg, 30 pg, 35 pg, 40 pg, 45 pg, 50 pg o 60 pg de ácidos nucleicos por dosis. En una realización específica, la dosis está en el intervalo de 10 ng a 100 mg, o de 50 ng a 100 mg, o de 100 ng a 100 mg de ácidos nucleicos por dosis. En algunas realizaciones específicas, la dosis está en el intervalo de 10 pg a 100 mg, o de 50 pg a 100 mg, o de 100 pg a 100 mg, o de 100 pg a 100 ng de ácidos nucleicos por dosis.
En determinadas realizaciones, intervalos de dosificación adecuados para la administración oral son de aproximadamente 0,001 miligramos a aproximadamente 500 miligramos de un agente terapéutico, por kilogramo de peso corporal al día. En realizaciones específicas, la dosis oral es de aproximadamente 0,01 miligramos a aproximadamente 100 miligramos por kilogramo de peso corporal al día, de aproximadamente 0,1 miligramos a aproximadamente 75 miligramos por kilogramo de peso corporal al día o de aproximadamente 0,5 miligramos a 5 miligramos por kilogramo de peso corporal al día. Las cantidades de dosificación descritas en el presente documento se refieren a las cantidades totales administradas; es decir, si se administra más de un agente terapéutico, entonces, en algunas realizaciones, las dosificaciones corresponden a la cantidad total administrada. En una realización específica, las composiciones orales contienen de aproximadamente el 10% a aproximadamente el 95% de un agente terapéutico en peso.
Intervalos de dosificación adecuados para administración intravenosa (i.v.) son de aproximadamente 0,01 miligramos a aproximadamente 100 miligramos por kilogramo de peso corporal al día, de aproximadamente 0,1 miligramos a aproximadamente 35 miligramos por kilogramo de peso corporal al día, y de aproximadamente 1 miligramo a aproximadamente 10 miligramos por kilogramo de peso corporal al día. En algunas realizaciones, intervalos de dosificación adecuados para administración intranasal son de aproximadamente 0,01 pg/kg de peso corporal al día a aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal al día. Los supositorios contienen generalmente de aproximadamente 0,01 miligramos a aproximadamente 50 miligramos de un agente terapéutico por kilogramo de peso corporal al día y comprenden principio activo en el intervalo de aproximadamente el 0,5% a aproximadamente el 10% en peso.
Dosificaciones recomendadas para administración intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, epidural, sublingual, intracerebral, intravaginal, transdérmica o administración mediante inhalación están en el intervalo de aproximadamente 0,001 miligramos a aproximadamente 500 miligramos por kilogramo de peso corporal al día. Las dosis adecuadas para administración tópica incluyen dosis que están en el intervalo de aproximadamente 0,001 miligramos a aproximadamente 50 miligramos, dependiendo del área de administración.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En otra realización, se le administra a un sujeto una o más dosis de una cantidad eficaz de un agente terapéutico o una composición del mismo, en el que la cantidad eficaz no es la misma para cada dosis. En otra realización, se le administra a un sujeto una o más dosis de una cantidad eficaz de un agente terapéutico o una composición del mismo, en la que la dosis de una cantidad eficaz administrada a dicho sujeto aumenta en, por ejemplo, 0,011 pg/kg, 0,02 pg/kg, 0,04 pg/kg, 0,05 pg/kg, 0,06 pg/kg, 0,08 pg/kg, 0,1 pg/kg, 0,2 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg, 20 pg/kg, 25 pg/kg, 30 pg/kg, 35 pg/kg, 40 pg/kg, 45 pg/kg o 50 pg/kg, a medida que avanza el tratamiento. En otra realización, se le administra a un sujeto una o más dosis de una cantidad eficaz de un agente terapéutico o composición del mismo, en el que la dosis disminuye en, por ejemplo, 0,01 pg/kg, 0,02 pg/kg, 0,04 pg/kg, 0,05 pg/kg, 0,06 pg/kg, 0,08 pg/kg, 0,1 pg/kg, 0,2 pg/kg, 0,25 pg/kg, 0,5 pg/kg, 0,75 pg/kg, 1 pg/kg, 1,5 pg/kg, 2 pg/kg, 4 pg/kg, 5 pg/kg, 10 pg/kg, 15 pg/kg, 20 pg/kg, 25 pg/kg, 30 pg/kg, 35 pg/kg, 40 pg/kg, 45 pg/kg o 50 pg/kg, a medida que avanza el tratamiento.
Para agentes terapéuticos que comprenden células que expresan B7-H7, B7-H7CR, B7-H2, ICOS, CD28 o CTLA-4 en altas cantidades, el intervalo de dosificación adecuado mediante cualquier vía de administración puede ser de al menos 100, 200, 300, 400, 500, 700, 1.000, 5.000, 10.000, 25.000, 50.000 o 100.000 células. En realizaciones específicas, el número de células es de al menos 100, 200, 300, 400, 500 células. En otras realizaciones, el número de células es de al menos 300, 400, 500, 700, 1.000 células. En aún otras realizaciones específicas, el número de células es de al menos 700, 1.000, 5.000, 10.000 células. En algunas realizaciones, el número de células es de al menos 5.000, 10.000, 25.000, 50.000 o 100.000 células. En aún otra realización, el número de células es de al menos 50.000 o 100.000 células. En otras realizaciones, el número de células es de al menos 1x106, 5x106, 1x107, 5x107, 1x108, 5x108 o más células. En realizaciones específicas, el número de células es de entre 1x104 y 1x104, 5x104 y 5x106, 1x105 y 1x107, 1x105 y 5x108, 1x106 y 1x108, o 1x106 y 1x107 o 1x104 y 1x105 células.
En determinadas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir síntomas asociados con una enfermedad o trastorno en al menos el 25%, al menos el 30%, al menos el 35%, al menos el 40%, al menos el 45%, al menos el 50%, al menos el 55%, al menos el 60%, al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90% o al menos el 95% o de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En determinadas realizaciones para tratar, se le administra a un sujeto un agente terapéutico o una composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir síntomas asociados con una enfermedad o trastorno en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otro conocido por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones para tratar o gestionar una enfermedad infecciosa, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir la replicación de un agente infeccioso en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En determinadas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir la replicación de un agente infeccioso en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces, o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En otras realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir la replicación de un agente infeccioso en al menos 1 log, 1,5 log, 2 log, 2,5 log, 3 log, 3,5 log, 4 log, 5 log o más en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones para prevenir, tratar y/o gestionar cáncer, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir el crecimiento tumoral o la proliferación de células cancerosas en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inhibir o reducir el crecimiento tumoral o la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
proliferación de células cancerosas en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces, o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones para tratar o gestionar enfermedades autoinmunitarias o inflamatorias, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inhibidor o composición del mismo en una cantidad eficaz para suprimir o reducir determinados aspectos de la función inmunitaria en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inhibidor o composición del mismo en una cantidad eficaz para suprimir o reducir determinados aspectos de la función inmunitaria en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces, o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inducir o potenciar una respuesta inmunitaria en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para inducir o potenciar una respuesta inmunitaria en al menos 1,5 veces, 2 veces, 2,5 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 8 veces, 10 veces, 15 veces, 20 veces, o de 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces, o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica.
En determinadas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para aumentar o potenciar el número de linfocitos (en algunas realizaciones, en un compartimento corporal diana específico) en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al
30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al
50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al
70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control
negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inmunoestimulante o composición del mismo en una cantidad eficaz para aumentar o potenciar el número de linfocitos (en algunas realizaciones, en un compartimento corporal diana específico) en al menos 1,5 veces, al menos 2 veces, al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 8 veces, al menos 10 veces, al menos 15 veces, o al menos 20 veces; o en de aproximadamente 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces o de 5 a 20 veces en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se aumenta o se potencia mediante un agente terapéutico inmunoestimulante es el pulmón, el estómago, el corazón, el riñón, el hígado, el intestino delgado, el intestino grueso, la mama, la próstata o la vejiga. En realizaciones particulares, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se aumenta o se potencia es el compartimento corporal afectado por una enfermedad o trastorno (por ejemplo, cáncer o enfermedad infecciosa). En algunas realizaciones, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se aumenta o se potencia es el ganglio linfático, el bazo o la sangre periférica.
En determinadas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inhibidor o composición del mismo en una cantidad eficaz para reducir el número de linfocitos (en algunas realizaciones, en un compartimento corporal diana específico) en de al menos el 20% al 25%, preferiblemente de al menos el 25% al 30%, de al menos el 30% al 35%, de al menos el 35% al 40%, de al menos el 40% al 45%, de al menos el 45% al 50%, de al menos el 50% al 55%, de al menos el 55% al 60%, de al menos el 60% al 65%, de al menos el 65% al 70%, de al menos el 70% al 75%, de al menos el 75% al 80%, o hasta al menos el 85% en relación con un control negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, se le administra a un sujeto un agente terapéutico inhibidor o composición del mismo en una cantidad eficaz para reducir el número de linfocitos (en algunas realizaciones, en un compartimento corporal diana específico) en al menos 1,5 veces, al menos 2 veces, al menos 2,5 veces, al menos 3 veces, al menos 4 veces, al menos 5 veces, al menos 8 veces, al menos 10 veces, al menos 15 veces, o al menos 20 veces; o en de aproximadamente 2 a 5 veces, de 2 a 10 veces, de 5 a 10 veces o de 5 a 20 veces en relación con un control
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
negativo tal como se determina usando un ensayo descrito en el presente documento u otros conocidos por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se reduce mediante un agente terapéutico inhibidor es el pulmón, el estómago, el corazón, el riñón, el hígado, el intestino delgado, el intestino grueso, la mama, la próstata o la vejiga. En realizaciones particulares, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se aumenta o se potencia es el compartimento corporal afectado por una enfermedad o trastorno (por ejemplo, cáncer o enfermedad infecciosa). En algunas realizaciones, el compartimento corporal diana específico en donde el número de linfocitos se aumenta o se potencia es el ganglio linfático, el bazo o la sangre periférica.
En determinadas realizaciones, se administra una dosis de un agente terapéutico o composición del mismo a un sujeto cada día, un día sí y otro no, cada par de días, cada tres días, una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana o una vez cada dos semanas. En otras realizaciones, se administran dos, tres o cuatro dosis de un agente terapéutico o composición del mismo a un sujeto cada día, cada par de días, cada tres días, una vez a la semana o una vez cada dos semanas. En algunas realizaciones, se administra(n) una(s) dosis de un agente terapéutico o composición del mismo durante 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días o 21 días. En determinadas realizaciones, se administra una dosis de un agente terapéutico o composición del mismo durante 1 mes, 1,5 meses, 2 meses, 2,5 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses o más.
Las dosificaciones de agentes profilácticos o terapéuticos que se han usado o se usan actualmente para la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una enfermedad o trastorno, tal como, por ejemplo, cáncer, enfermedad infecciosa, enfermedad autoinmunitaria e inflamatoria y rechazo de trasplante, pueden determinarse usando referencias disponibles para un médico tal como, por ejemplo, el Physicians’ Desk Reference (63a ed. 2009). Preferiblemente, se utilizan dosificaciones inferiores a las que se han usado o están usándose actualmente para prevenir, tratar y/o gestionar la enfermedad o trastorno en combinación con uno o más agentes terapéuticos o composiciones de los mismos.
Los programas de administración descritos anteriormente se proporcionan para fines ilustrativos sólo y no deben considerarse limitativos. Un experto habitual en la técnica comprenderá fácilmente que todas las dosis están dentro del alcance de la invención.
5.9 ENSAYOS BIOLÓGICOS
5.9.1 Ensayos para evaluar las características de unión de agentes terapéuticos
Pueden evaluarse agentes terapéuticos que se unen específicamente al B7-H7, B7-H7CR o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR, usando cualquier método bien conocido en la técnica, por ejemplo, ELISA, coinmunoprecipitación, ensayos Biacore y ensayos KinEx A.
Pueden usarse ensayos de unión para determinar la afinidad de unión de un agente terapéutico por B7-H7, B7- H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR. Pueden realizarse ensayos de unión o bien como ensayos de unión directa o bien como ensayos de unión de competición. La unión puede detectarse usando ensayos ELISA convencionales o de citrometría de flujo convencionales. En un ensayo de unión directa, se somete a prueba un agente terapéutico para determinar la unión al B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR, o B7-H2 y o bien ICOS, CD28 o bien CTLA-4.
Los ensayos de unión de competición, por otro lado, evalúan la capacidad de un agente terapéutico para competir con un agente conocido (por ejemplo, anticuerpos u otro compuesto) que se une a B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR.
En un ensayo de unión directa, se pone en contacto B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR con un agente terapéutico en condiciones que permiten la unión del agente terapéutico al B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR+. La unión puede tener lugar en disolución o sobre una superficie sólida. Preferiblemente, el anticuerpo candidato se marca previamente para su detección. Puede usarse cualquier compuesto detectable para el marcaje, tal como pero sin limitarse a, un isótopo luminiscente, fluorescente o radioactivo o grupo que contiene el mismo, o un marcador no isotópico, tal como una enzima o colorante. Tras un periodo de incubación suficiente para que tenga lugar la unión, se expone la reacción a condiciones y manipulaciones que eliminan el anticuerpo en exceso o no específicamente unido. Normalmente, implica lavar con un tampón apropiado. Finalmente, se detecta la presencia de un agente terapéutico unido a B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR.
En un ensayo de unión de competición, se evalúa un agente terapéutico para determinar su capacidad para inhibir o desplazar la unión de un agente conocido (por ejemplo, un anticuerpo u otro compuesto) al B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR. Puede mezclarse un agente de unión conocido marcado de B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR, y colocarse en condiciones en las que la interacción entre ellos se produciría normalmente, con y sin la adición del agente terapéutico. La cantidad de agente de unión conocido marcado que se une al B7-H7, B7-H7CR o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR puede compararse con la cantidad unida en presencia o ausencia del agente terapéutico.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En una realización, el ensayo de unión se lleva a cabo con uno o más componentes inmovilizados sobre una superficie sólida para facilitar la formación y detección de complejos de anticuerpo-antígeno. En diversas realizaciones, el soporte sólido podría ser, pero no se restringe a, policarbonato, poliestireno, polipropileno, polietileno, vidrio, nitrocelulosa, dextrano, nailon, poliacrilamida y agarosa. La configuración del soporte puede incluir perlas, membranas, micropartículas, la superficie interior de un recipiente de reacción tal como una placa de microtitulación, tubo de ensayo u otro recipiente de reacción. La inmovilización de B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR, u otro componente, puede lograrse a través de uniones covalentes o no covalentes. En una realización, la unión puede ser indirecta, es decir, a través de un anticuerpo unido. En otra realización, el B7-H7, B7- H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR y controles negativos se etiquetan con un epítopo, tal como glutatión S- tranferasa (GST) de modo que la unión a la superficie sólida puede estar mediada por un anticuerpo disponible comercialmente tal como anti-GST (Santa Cruz Biotechnology).
Por ejemplo, un ensayo de unión de afinidad de este tipo puede realizarse usando el B7-H7, B7-, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR que se inmoviliza en un soporte sólido. Normalmente, el componente no inmovilizado de la reacción de unión, en este caso el agente terapéutico, se marca para permitir la detección. Están disponibles una variedad de métodos de marcaje y pueden usarse, tal como un agente luminiscente, cromóforo, fluorescente o isótopo radiactivo o grupo que contiene el mismo, y marcadores anisotópicos, tales como enzimas o colorantes. En una realización, el agente terapéutico se marca con un fluoróforo tal como isotiocianato de fluoresceína (FITC, disponible de Sigma Chemicals, St. Louis). Un ensayo de unión de afinidad de este tipo puede realizarse usando el B7-H7, B7-H7CR, o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR inmovilizado sobre una superficie sólida. Entonces se incuban agentes terapéuticos con el B7-H7, B7-H7CR o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR y se detecta la unión específica de agentes terapéuticos mediante métodos conocidos en la técnica incluyendo, pero sin limitarse a, análisis BiaCore, métodos de ELISA, FMET y RIA.
Finalmente, el marcador que queda sobre la superficie sólida puede detectarse mediante cualquier método de detección conocido en la técnica. Por ejemplo, si el agente terapéutico está marcado con un fluoróforo, puede usarse un fluorímetro para detectar complejos.
En una realización, el agente terapéutico se añade a células intactas que expresan B7-H7, B7-H7CR, B7-H2, o membranas aisladas que contienen B7-H7, B7-H7CR. Por tanto, puede someterse a ensayo la unión directa de un agente terapéutico en células intactas en cultivo o en modelos animales. Puede mezclarse un agente terapéutico marcado con células que expresan B7-H7 o B7-H7CR, o con extractos en bruto obtenidos a partir de tales células. Pueden usarse membranas aisladas para identificar agentes terapéuticos que interaccionan con B7-H7 o B7-H7CR. Por ejemplo, en un experimento típico usando membranas aisladas, pueden modificarse por ingeniería genética células para que expresen B7-H7 o B7-H7CR. Pueden recogerse membranas mediante técnicas convencionales y usarse en un ensayo de unión in vitro. El agente terapéutico marcado (por ejemplo, anticuerpo marcado fluorescente) se une a las membranas y se somete a ensayo para determinar su actividad específica; se determina la unión específica mediante comparación con ensayos de unión realizados en presencia de agente terapéutico no marcado (frío) en exceso. Alternativamente, puede expresarse de manera recombinante B7-H7 o B7-H7CR soluble y utilizarse en ensayos no basados en células para identificar agentes terapéuticos que se unen a B7-H7 o B7-H7CR.
Alternativamente, la reacción de unión puede llevarse a cabo en disolución. En este ensayo, se permite que el componente marcado interaccione con su(s) pareja(s) de unión en disolución. Si las diferencias de tamaño entre el componente marcado y su(s) pareja(s) de unión permiten una separación de este tipo, la separación puede lograrse haciendo pasar los productos de la reacción de unión a través de un ultrafiltro cuyos poros permiten el paso de componente marcado no unido pero no de su(s) pareja(s) de unión o de componente marcado unido a su(s) pareja(s). La separación puede lograrse también usando cualquier reactivo capaz de capturar una pareja de unión del componente marcado de la disolución, tal como un anticuerpo contra la pareja de unión y así sucesivamente.
Diversos métodos descritos anteriormente o conocidos en la técnica pueden adaptarse para someter a ensayo la afinidad de unión de un agente terapéutico por B7-H7, B7-H7CR o un complejo de B7-H7 y B7-H7CR.
5.9.2 Ensayos para evaluar la función de los agentes terapéuticos
Pueden usarse diversos ensayos conocidos en la técnica para evaluar si un agente terapéutico activa, potencia, suprime o reduce la función inmunitaria. En un aspecto, el agente terapéutico aumenta una respuesta inmunitaria que puede ser, por ejemplo, una respuesta de anticuerpos (respuesta humoral) o una respuesta inmunitaria celular, por ejemplo, secreción de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma), actividad auxiliar o citotoxicidad celular. En una realización, la respuesta inmunitaria aumentada es aumento de la secreción de citocinas, producción de anticuerpos, función efectora, proliferación de células T y/o proliferación de células NK. En otro aspecto, el agente terapéutico suprime una respuesta inmunitaria que puede ser, por ejemplo, una respuesta de anticuerpos (respuesta humoral) o una respuesta inmunitaria celular, por ejemplo, secreción de citocinas (por ejemplo, interferón-gamma), actividad auxiliar o citotoxicidad celular. En una realización, la respuesta inmunitaria disminuida es disminución de la secreción de citocinas, producción de anticuerpos, función efectora, proliferación de células T y/o proliferación de células NK. Se conocen bien en la técnica diversos ensayos para medir tales actividades, y se proporcionan a continuación
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
descripciones a modo de ejemplo de tales ensayos.
La proliferación de determinadas células inmunitarias puede evaluarse mediante la incorporación de 3H-timidina. Puede usarse el ensayo de “tinción de tetrámeros” (Altman et al., 1996, Science 274: 94-96) para identificar células T específicas de antígeno y para evaluar cómo los agentes terapéuticos modulan (por ejemplo, activan, potencian, reducen o suprimen) respuestas de células T específicas de antígeno. Por ejemplo, una molécula de CMH que contiene un antígeno peptídico específico, tal como un antígeno específico de tumor, se multimeriza para preparar tetrámeros peptídicos solubles y se marca, por ejemplo, mediante complejación con estreptavidina. El complejo de CMH-antígeno peptídico se mezcla entonces con una población de células T obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado una composición inmunogénica sola o en combinación con un agente terapéutico. Entonces se usa biotina para teñir células T que expresan el antígeno específico de tumor de interés.
Además, usando el ensayo de cultivo diana de linfocitos mixtos, la citotoxicidad de las células T puede someterse a prueba en un ensayo de liberación de 51Cr tal como se describe, por ejemplo, en Palladino et al., 1987, Cancer Res. 47:5074-5079. En resumen, el cultivo de linfocitos mixtos se añade a una suspensión de células diana para dar diferentes razones de efector:diana (E:T) (habitualmente de 1:1 a 40:1). Las células diana se marcan previamente incubando 1x106 células diana en medio de cultivo que contiene 500 pCi de 51Cr por ml durante una hora a 37°C. Se lavan las células tres veces tras el marcaje. Cada punto del ensayo (razón de E:T) se realiza por triplicado y se incorporan los controles apropiados para medir la liberación de 51Cr espontánea (sin linfocitos añadidos al ensayo) y el 100% de liberación (células lisadas con detergente). Tras incubar las mezclas de células durante 4 horas, se sedimentan las células mediante centrifugación a 200 g durante 5 minutos. Se mide la cantidad de 51Cr liberada en el sobrenadante mediante un contador gamma. Se mide el porcentaje de citotoxicidad como cpm en la muestra de prueba menos las cpm liberadas espontáneamente divididas entre las cpm liberadas por el detergente totales menos las cpm liberadas espontáneamente.
Puede usarse un ensayo de ELISPOT para medir la liberación de citocinas in vitro por células T tras la administración de una cantidad eficaz de un agente terapéutico a un sujeto. La liberación de citocinas se detecta mediante anticuerpos que son específicos para una citocina particular, por ejemplo, interleucina-2, factor de necrosis tumoral-a o interferón-y (véase, por ejemplo, Scheibenbogen et al., 1997, Int. J. Cancer 71:932-936). El ensayo se lleva a cabo en una placa de microtitulación que se ha recubierto previamente con un anticuerpo específico para una citocina de interés que captura la citocina secretada por las células T. Tras la incubación de células T durante 24-48 horas en los pocillos recubiertos, se eliminan las células T y se reemplazan por un segundo anticuerpo marcado que reconoce un epítopo diferente sobre la citocina. Tras un lavado extenso para eliminar el anticuerpo no unido, se añade a la placa un sustrato enzimático que produce un producto de reacción coloreado. Se cuenta el número de células productoras de citocinas bajo un microscopio. Esto método tiene las ventajas de un tiempo de ensayo corto, y sensibilidad sin la necesidad de un gran número de células T citotóxicas.
En realizaciones específicas, los ensayos descritos en los ejemplos 6 y 7, más adelante, pueden usarse para evaluar el efecto de un agente terapéutico sobre la función inmunitaria. Por ejemplo, el efecto de un agente terapéutico sobre la función inmunitaria puede evaluarse usando el ensayo de coestimulación de células T descrito en los ejemplos 6 y 7 más adelante.
Se conocen bien en la técnica ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas (ELISA) y se describen, por ejemplo, en la sección 2.1 de Current Protocols in Immunology, Coligan et al. (eds.), John Wiley y Sons, Inc. 1997.
En algunos aspectos, la respuesta inmunitaria inducida o potenciada por un agente terapéutico inmunoestimulante se potencia o se aumenta en al menos el 10%, el 15%, el 20%, el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 70%, el 75%, el 80%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 10% y el 50%, el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 90%, el 75% y el 90%, el 75% y el 100% en relación con una respuesta inmunitaria provocada por un control negativo tal como se determina mediante cualquier ensayo conocido en la técnica. En determinadas realizaciones, la respuesta inmunitaria inducida por el agente terapéutico inmunoestimulante se potencia en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con la respuesta inmunitaria inducida por un control negativo tal como se somete a ensayo mediante cualquier método conocido en la técnica. En realizaciones específicas, el ensayo usado para evaluar la respuesta inmunitaria mide el nivel de producción de anticuerpos, producción de citocinas o citotoxicidad celular, y tales ensayos se conocen bien en la técnica. En algunas realizaciones, el ensayo usado para medir la respuesta inmunitaria es un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) que determina los niveles de anticuerpo o citocina, un ensayo de ELISPOT que determina la liberación de citocinas o un ensayo de liberación de 51Cr que determina la citotoxicidad celular.
En realizaciones específicas, el agente terapéutico inmunoestimulante induce o potencia una respuesta inmunitaria en un sujeto que se mide mediante el título de anticuerpos en el suero del sujeto, y el título de anticuerpos es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o 500 a 2.000 veces superior en comparación con el título de anticuerpos en el suero de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo. En realizaciones específicas, el título de anticuerpos en suero medio
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
contra el antígeno en el sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inmunoestimulante aumenta en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con el título de anticuerpos en suero medio en el sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica.
En otra realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inmunoestimulantes para modular el nivel de producción o secreción de citocinas en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo.
En una realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inmunoestimulantes para inducir o potenciar el nivel de producción o secreción de citocinas, por ejemplo, interferón-y, (que puede ser de 0,5 a 500 veces superior) en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico inmunoestimulante induce o potencia una respuesta inmunitaria que se mide por una liberación de citocinas aumentada, y la concentración de citocinas es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces, o de 500 a 2.000 veces superior en comparación con la concentración de citocinas de un control negativo. En realizaciones específicas, la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inmunoestimulante aumenta en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, el control negativo puede ser muestras del sujeto antes de la administración del agente terapéutico inmunoestimulante.
En una realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inmunoestimulantes para disminuir el nivel de producción o secreción de citocinas en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico inmunoestimulante induce o potencia una respuesta inmunitaria que se mide por una liberación de citocinas disminuida, y la concentración de citocinas es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces inferior en comparación con la concentración de citocinas de un control negativo. En realizaciones específicas, la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inmunoestimulante disminuye en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, el control negativo puede ser muestras del sujeto antes de la administración del agente terapéutico inmunoestimulante.
En realizaciones específicas, el agente terapéutico inmunoestimulante induce o potencia la proliferación de células NK en un sujeto en al menos de 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en relación con la proliferación de células NK en un control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico agonista induce o potencia la proliferación de células T en un sujeto en al menos de 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en relación con la proliferación de células T en un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, citometría de flujo, tinción con CSFE, incorporación de 3H-timidina.
El aumento en la respuesta inmunitaria de anticuerpos (humoral) o celular inducida por una cantidad eficaz del agente terapéutico puede evaluarse usando diversos métodos bien conocidos en la técnica.
En algunos aspectos, la respuesta inmunitaria suprimida por un agente terapéutico inhibidor se reduce en al menos el 10%, el 15%, el 20%, el 25%, el 30%, el 40%, el 50%, el 60%, el 70%, el 75%, el 80%, el 90%, el 95%, el 98% o el 99%, o en el intervalo de entre el 10% y el 25%, el 10% y el 50%, el 25% y el 50%, el 25% y el 75%, el 50% y el 75%, el 50% y el 90%, el 75% y el 90%, el 75% y el 100% en relación con una respuesta inmunitaria provocada por un control negativo tal como se determina mediante cualquier ensayo conocido en la técnica. En determinadas realizaciones, la respuesta inmunitaria reducida por el agente terapéutico inhibidor se potencia en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con la respuesta inmunitaria inducida por un control negativo tal como se somete a ensayo mediante cualquier método conocido en la técnica. En realizaciones específicas, el ensayo usado para evaluar la respuesta inmunitaria mide el nivel de producción de anticuerpos, producción de citocinas o citotoxicidad celular, y tales ensayos se conocen bien en la técnica. En algunas realizaciones, el ensayo usado para medir la respuesta inmunitaria es un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) que determina los niveles de anticuerpos o citocinas, un ensayo de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ELISPOT que determina la liberación de citocinas o un ensayo de liberación de 51Cr que determina la citotoxicidad celular.
En realizaciones específicas, el agente terapéutico inhibidor reduce una respuesta inmunitaria en un sujeto que se mide mediante el título de anticuerpos en el suero del sujeto, y el título de anticuerpos es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en comparación con el título de anticuerpos en el suero de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo. En realizaciones específicas, el título de anticuerpos en suero medio contra el antígeno en el sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inhibidor disminuye en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con título de anticuerpos en suero medio en el sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica.
En otra realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inhibidores para modular el nivel de producción o secreción de citocinas en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo.
En otra realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inhibidores para disminuir el nivel de producción o secreción de citocinas, por ejemplo, interferón-y, (que puede ser de 0,5 a 500 veces superior) en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico inhibidor reduce una respuesta inmunitaria que se mide por una liberación de citocinas disminuida, y la concentración de citocinas es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces inferior en comparación con la concentración de citocinas de un control negativo. En realizaciones específicas, la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inhibidor disminuye en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400-500 veces en relación con la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, el control negativo puede ser muestras del sujeto antes de la administración del agente terapéutico inhibidor.
En otra realización específica, se presentan en el presente documento métodos de administración de agentes terapéuticos inhibidores para inducir o potenciar el nivel de producción o secreción de citocinas en comparación con el nivel de producción o secreción de citocinas en una muestra de control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico inhibidor induce o potencia una respuesta inmunitaria que se mide mediante una liberación de citocinas aumentada, y la concentración de citocinas es de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en comparación con la concentración de citocinas de un control negativo. En realizaciones específicas, la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado el agente terapéutico inhibidor aumenta en al menos 0,5-2 veces, al menos 2-5 veces, al menos 5-10 veces, al menos 10-50 veces, al menos 50-100 veces, al menos 100-200 veces, al menos 200-300 veces, al menos 300-400 veces o al menos 400500 veces en relación con la concentración de citocinas en suero media de muestras obtenidas de un sujeto al que se le ha administrado un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, el control negativo puede ser muestras del sujeto antes de la administración del agente terapéutico inhibidor.
En realizaciones específicas, el agente terapéutico inhibidor reduce la proliferación de células NK en un sujeto en al menos de 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en relación con la proliferación de células NK en un control negativo. En realizaciones específicas, el agente terapéutico inhibidor reduce la proliferación de células T en un sujeto en de al menos 0,2 a 5 veces, de 5 a 20 veces, de 10 a 30 veces, de 20 a 50 veces, de 50 a 200 veces, de 100 a 500, de 200 a 1000 veces o de 500 a 2.000 veces superior en relación con la proliferación de células T en un control negativo tal como se determina mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, citometría de flujo, tinción con CSFE, incorporación de 3H-timidina.
5.9.3 Ensayos de citotoxicidad
La toxicidad y/o eficacia de las terapias descritas en el presente documento puede determinarse mediante procedimientos farmacéuticos convencionales en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la DL50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la DE50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La razón de dosis entre efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico y puede expresarse como la razón DL50/DE50. Se prefieren terapias que presentan índices terapéuticos grandes. Aunque pueden usarse terapias que presentan efectos secundarios tóxicos, debe tenerse cuidado para diseñar un sistema de administración que dirija tales agentes al sitio de tejido afectado con el fin de minimizar el posible daño a células no
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
infectadas y, de ese modo, reducir los efectos secundarios.
Los datos obtenidos a partir de los ensayos de cultivo celular y estudios con animales pueden usarse en la formulación de un intervalo de dosificación de los agentes profilácticos y/o terapéuticos para su uso en seres humanos. La dosificación de tales agentes se encuentra preferiblemente dentro de un intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la DE50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. Para cualquier terapia usada en el método, por ejemplo, tal como se describe en el presente documento, la dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivo celular. Puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración en plasma circulante que incluye la CI50 (es decir, la concentración del agente terapéutico que logra la mitad de la inhibición máxima de los síntomas) tal como se determina en cultivo celular. Tal información puede usarse para determinar de manera más precisa dosis útiles en seres humanos. Los niveles en plasma pueden medirse, por ejemplo, mediante cromatografía de líquidos de alta resolución.
En determinadas realizaciones, la citotoxicidad de un agente terapéutico puede determinarse midiendo el nivel de apoptosis de células en un cultivo celular expuesto al agente terapéutico. En una realización, la apoptosis puede cuantificarse midiendo la fragmentación del ADN. Están disponibles métodos fotométricos comerciales para la determinación in vitro cuantitativa de la fragmentación del aDn. Ejemplos de tales ensayos, incluyendo ensayos basados en TUNEL (que detecta la incorporación de nucleótidos marcados en ADN fragmentados) y ELISA, se describen en Biochemica, 1999, n.° 2, págs. 34 37 (Roche Molecular Biochemicals). En aún otra realización, la apoptosis puede observarse morfológicamente.
Las líneas celulares sobre las que pueden realizarse tales ensayos las conocen bien los expertos en la técnica. También pueden realizarse ensayos de apoptosis, necrosis y proliferación en células primarias, por ejemplo, un explante tisular.
5.9.4 Modelos animales
Los agentes terapéuticos se someten a ensayo preferiblemente in vivo para detectar la actividad terapéutica o profiláctica deseada antes de su uso en seres humanos. Por ejemplo, en una realización, un agente terapéutico puede administrarse al animal al mismo tiempo que la aparición de una enfermedad o trastorno en el animal. En otra realización, un agente terapéutico puede administrarse al animal antes de la aparición de una enfermedad o trastorno en el animal. En otra realización, un agente terapéutico puede administrarse al animal posteriormente a la aparición de una enfermedad o trastorno en el animal. En una realización específica, el agente terapéutico se administra al animal más de una vez. En otra realización específica, el agente terapéutico se administra en combinación con otra terapia.
Los agentes terapéuticos pueden someterse a prueba en sistemas de modelos animales incluyendo, pero sin limitarse a, ratas, ratones, pollos, vacas, monos, cerdos, cabras, ovejas, perros, conejos, cobayas, etc. En una realización específica, los agentes terapéuticos se someten a prueba en un sistema de modelo de ratón. Tales sistemas de modelo se usan ampliamente y los conoce bien el experto en la técnica. En una realización específica, los agentes terapéuticos se someten a prueba en animales deficientes para la restauración de la función. Por ejemplo, puede usarse un animal deficiente en B7-H2 para someter a prueba la restauración de determinadas funciones relacionadas con B7-H2 por determinados agentes terapéuticos.
La actividad anticancerígena del agente terapéutico puede determinarse usando diversos modelos animales experimentales para el estudio del cáncer bien conocidos en la técnica tal como se describe en, por ejemplo, Relevance of Tumor Models for Anticancer Drug Development (1999, eds. Fiebig y Burger); Contributions to Oncology (1999, Karger); The Nude Mouse in Oncology Research (1991, eds. Boven y Winograd); y Anticancer Drug Development Guide (1997 ed. Teicher), incorporados en el presente documento como referencia en su totalidad.
Los modelos animales para cáncer pueden usarse para evaluar la eficacia de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico. Los ejemplos no limitativos de modelos animales para cáncer de pulmón incluyen, pero no se limitan a, modelos animales de cáncer de pulmón descritos por Zhang & Roth (1994, In vivo 8(5):755-69) y un modelo de ratón transgénico con función de p53 alterada (véase, por ejemplo, Morris et al., 1998, J La State Med Soc 150(4):179-85). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de mama incluye, pero no se limita a, un ratón transgénico que sobreexpresa ciclina D1 (véase, por ejemplo, Hosokawa et al., 2001, Transgenic Res 10(5):471-8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer de colon incluye, pero no se limita a, un ratón deficiente doble en TCR-y y p53 (véase, por ejemplo, Kado et al., 2001, Cancer Res 61(6):2395-8). Los ejemplos de modelos animales para cáncer pancreático incluyen, pero no se limitan a, un modelo metastásico de adenocarcinoma pancreático murino Panc02 (véase, por ejemplo, Wang et al., 2001, Int J Pancreatol 29(1):37-46) y ratones nu-nu generados en tumores pancreáticos subcutáneos (véase, por ejemplo, Ghaneh et al., 2001, Gene Ther 8(3):199-208). Los ejemplos de modelos animales para linfoma no Hodgkin incluyen, pero no se limitan a, un ratón con inmunodeficiencia combinada grave (“SCID”) (véase, por ejemplo, Bryant et al., 2000, Lab Invest 80(4):553-73) y un ratón transgénico IgHmu-HOX11 (véase, por ejemplo, Hough et al., 1998, Proc Natl Acad Sci USA 95(23): 13853-8). Un ejemplo de un modelo animal para cáncer esofágico incluye, pero no
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
se limita a, un ratón transgénico para el oncogén E7 del virus del papiloma humano tipo 16 (véase, por ejemplo, Herber et al., 1996, J Virol 70(3):1873-81). Los ejemplos de modelos animales para carcinomas colorrectales incluyen, pero no se limitan a, modelos de ratón Apc (véase, por ejemplo, Fodde & Smits, 2001, Trends Mol Med 7(8):369-73 y Kuraguchi et al., 2000, Oncogene 19(50):5755-63).
Para modelos animales de enfermedades infecciosas, la eficacia de un agente terapéutico en relación con un control negativo puede evaluarse en animales infectados con virus. Pueden someterse a prueba muestras obtenidas de estos animales (por ejemplo, muestra de suero, orina, esputos, semen, saliva, plasma o tejido) para determinar la potenciación de la función inmunitaria, por ejemplo, potenciación de la liberación de citocinas, potenciación de la producción de anticuerpos, proliferación de células T, proliferación de células NK, con métodos bien conocidos en la técnica y descritos en el presente documento. También pueden someterse a prueba muestras obtenidas de estos (por ejemplo, muestra de suero, orina, esputos, semen, saliva, plasma o tejido) para determinar la reducción en la replicación viral por medio de métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, los que miden la replicación viral alterada (tal como se determina, por ejemplo, mediante formación de placas) o la producción de proteínas virales (tal como se determina, por ejemplo, mediante análisis e inmunotransferencia de tipo Western, ELISA o citometría de flujo) o ácidos nucleicos virales (tal como se determina, por ejemplo, mediante RT-PCR, análisis de transferencia de tipo Northern o análisis de transferencia de tipo Southern). Para la cuantificación de virus en muestras de tejido, se homogenizan las muestras de tejido en solución salina tamponada con fosfato (PBS), y se adsorben diluciones de homogenados clarificados durante 1 hora a 37°C sobre monocapas de células (por ejemplo, células Vero, CEF o MDCK). En otros ensayos, se realizan evaluaciones histopatológicas tras la infección, preferiblemente evaluaciones del/de los órgano(s) que se sabe que el virus selecciona como diana para la infección. Puede realizarse inmunohistoquímica de virus usando un anticuerpo monoclonal específico de virus. Los modelos animales a modo de ejemplo no limitativos descritos a continuación pueden adaptarse para otros sistemas virales.
Pueden emplearse diversos modelos animales para enfermedades infecciosas que se conocen bien en la técnica para evaluar la eficacia de agentes terapéuticos en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de enfermedades infecciosas, por ejemplo: se describen modelos de ratón de virus del herpes simple (VHS) en Crute et al., Nature Medicine, 2002, 8:386-391 y Bolger et al., Antiviral Res., 1997, 35:157-165; se describen modelos de cobaya de VHS en Chen et al., Virol. J, 23 de noviembre de 2004, 1:11; se describen modelos animales de citomegalovirus de ratón (MCMV) y citomegalovirus humano (HCMV) en Kern et al., Antimicrob. Agents Chemother., 2004, 48:4745- 4753; se describen modelos de cobaya de CMV en Bourne et al., Antiviral Res., 2000, 47:103-109, Bravo et al., Antiviral Res., 2003, 60:41-49 y Bravo et al, J. Infectious Diseases, 2006, 193:591-597; se describen modelos animales de virus de la gripe en Sidwell et al., Antiviral Res., 2000, 48:1-16; y McCauley et al., Antiviral Res., 1995, 27:179-186; se describen modelos de ratón de virus de la hepatitis B (VHB) en Cavanaugh et al., J. Virol., 1997, 71:3236-3243 y Guidotti et al., J. Virol., 1995, 69:6158-6169; se describen modelos de ratón de virus de la hepatitis C (VHC) en Zhu et al., Antimicrobial Agents and Chemother., 2006, 50:3260-3268, Bright et al., Nature, 2005, 436:973-978, Hsu et al., Nat. Biotechnol., 2003, 21:519-525, Ilan et al., J. Infect. Dis. 2002, 185:153-161, Kneteman et al., Hepatology, 2006, 43:1346-1353, Mercer et al., Nat. Med., 2001, 7:927-933 y Wu et al., Gastroenterology, 2005, 128:1416-1423; se describen modelos animales de VIH en Ayash-Rashkovsky et al., FASEB J., 2005, 19:1149-1151, Mosier et al., Semin Immunol., 1996, 8:255-262, Mosier et al., Hosp. Pract. (Off Ed). 1996, 31:41-48, 53-55, 59-60, Bonyhadi et al., Mol. Med. Today, 1997, 3:246-253, Jolicoeur et al., Leukemia, 1999, 13:S78-S80, Browning et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94:14637-14641, y Sawada et al., J. Exp. Med., 1998, 187:1439- 1449, y Schito et al., Curr. HIV Res., 2006, 4:379-386.
Otros modelos animales para infecciones virales también pueden usarse para evaluar la eficacia de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico, por ejemplo, se han desarrollado modelos animales para infecciones virales tales como enfermedades asociadas con VEB, virus del herpes gamma, mononucleosis infecciosa, virus de la inmunodeficiencia de simios (“VIS”), infección con virus de la enfermedad de Borna, hepatitis, infección con virus de la varicela, neumonitis viral, patogenia del virus de Epstein-Barr, virus de la inmunodeficiencia felina (“VIF”), infección con VLTH de tipo 1, rotavirus humanos y herpes genital (véanse, por ejemplo, Hayashi et al., 2002, Histol Histopathol 17(4):1293-310; Arico et al., 2002, J Interferon Cytokine Res 22(11):1081 -8; Flano et al., 2002, Immunol Res 25(3):201-17; Sauermann, 2001, Curr Mol Med 1 (4):515-22; Pletnikov et al., 2002, Front Biosci 7:d593-607; Engler et al., 2001, Mol Immunol 38(6):457-65; White et al., 2001, Brain Pathol 11(4):475-9; Davis & Matalon, 2001, News Physiol Sci 16:185-90; Wang, 2001, Curr Top Microbiol Immunol. 258:201-19; Phillips et al., 2000, J Psychopharmacol. 14(3):244-50; Kazanji, 2000, AIDS Res Hum Retroviruses. 16(16):1741 -6; Saif et al., 1996, Arch Virol Suppl. 12:153-61; y Hsiung et al., 1984, Rev Infect Dis. 6(1):33-50).
Otros modelos animales para infecciones respiratorias virales incluyen, pero no se limitan a, P1V (véase, por ejemplo, Shephard et al., 2003 Res Vet Sci 74(2): 187-190; Ottolini et al., 2002 J Infect Dis 186(12): 1713-1717), y RSV (véase, por ejemplo, Culley et al., 2002 J Exp Med 196(10): 1381-1386; y Curtis et al., 2002 Exp Biol Med 227(9): 799-802).
El agente terapéutico, composición del mismo o terapia de combinación que comprende el agente terapéutico puede someterse a prueba para determinar su capacidad para disminuir el transcurso de tiempo de la infección viral.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
También pueden usarse modelos animales para infecciones bacterianas para evaluar la eficacia de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico. Se han desarrollado modelos animales para infecciones bacterianas tales como infección con H. pylori, micoplasmosis genital, colangitis esclerosante primaria, cólera, infección pulmonar crónica con Pseudomonas aeruginosa, enfermedad del legionario, enfermedad de úlcera gastroduodenal, meningitis bacteriana, infección gástrica con Helicobacter, otitis media por neumococos, neuritis alérgica experimental, neuropatía leprosa, infección por micobacterias, endocarditis, enteritis asociada a Aeromonas, infección con Bacteroides fragilis, sífilis, endocarditis por estreptococos, osteomielitis hematógena aguda, tifus scrub humano, síndrome de choque tóxico, infecciones anaerobias, infecciones con Escherichia coli e infecciones con Mycoplasma pneumoniae (véanse, por ejemplo, Sugiyama et al, 2002, J Gastroenterol. 37 Suppl 13:6-9; Brown et al., 2001, Am J Reprod Immunol. 46(3):232-41; Vierling, 2001, Best Pract Res Clin Gastroenterol. 15(4):591 -610; Klose, 2000, Trends Microbiol. 8(4):189-91; Stotland et al., 2000, Pediatr Pulmonol. 30(5):413-24; Brieland et al., 2000, Immunopharmacology 48(3):249-52; Lee, 2000, Baillieres Best Pract Res Clin Gastroenterol. 14(1 ):75-96; Koedel & Pfister, 1999, Infect Dis Clin North Am. 13(3):549-77; Nedrud, 1999, FEMS Immunol Med Microbiol. 24(2):243-50; Prellner et al., 1999, Microb Drug Resist. 5(1):73-82; Vriesendorp, 1997, J Infect Dis. 176 Suppl 2:S164-8; Shetty & Antia, 1996, Indian J Lepr. 68(1):95-104; Balasubramanian et al, 1994, Immunobiology 191(4-5):395-401; Carbon et al., 1994, Int J Biomed Comput. 36(1 - 2):59-67; Haberberger et al., 1991, Experientia. 47(5):426-9; Onderdonk et al., 1990, Rev Infect Dis. 12 Suppl 2:S169-77; Wicher & Wicher, 1989, Crit Rev Microbiol. 16(3):181 -234; Scheld, 1987, J Antimicrob Chemother. 20 Suppl A:71-85; Emslie & Nade, 1986, Rev Infect Dis. 8(6):841-9; Ridgway et al., 1986, Lab Anim Sci. 36(5):481-5; Quimby & Nguyen, 1985, Crit Rev Microbiol. 12(1 ):1 -44; Onderdonk et al., 1979, Rev Infect Dis. 1 (2):291 -301; Smith, 1976, Ciba Found Symp. (42):45-72, y Tailor-Robinson, 1976, Infection. 4(1 Suppl): 4-8).
El agente terapéutico, composición del mismo o terapia de combinación que comprende el agente terapéutico puede someterse a prueba para determinar su capacidad para disminuir el transcurso temporal de la infección bacteriana, por ejemplo, una infección respiratoria bacteriana en al menos el 25%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 75%, al menos el 85%, al menos el 95%, o al menos 99% o del 25% al 65%, del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% en relación con un control negativo usando métodos bien conocidos en la técnica.
La eficacia de los agentes terapéuticos, composiciones de los mismos o terapias de combinación que comprenden agentes terapéuticos para la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una infección fúngica puede evaluarse en modelos animales para tales infecciones. Se han desarrollado modelos animales para infecciones fúngicas tales como infecciones con Candida, cigomicosis, mastitis por Candida, triconosporosis diseminada progresiva con tricosporonemia latente, candidiasis diseminada, paracoccidioidomicosis pulmonar, aspergilosis pulmonar, neumonía por Pneumocystis carinii, meningitis por criptococos, meningoencefalitis por coccidioides y vasculitis cerebroespinal, infección con Aspergillus niger, queratitis por Fusarium, micosis del seno paranasal, endocarditis por Aspergillus fumigatus, discondroplasia de la tibia, vaginitis por Candida glabrata, candidiasis orofaringea, enfermedad granulomatosa crónica ligada al cromosoma X, tiña del piel, candidiasis cutánea, placentitis micótica, tricosporonosis diseminada, aspergilosis broncopulmonar alérgica, queratitis micótica, infección con Cryptococcus neoformans, peritonitis fúngica, infección con Curvularia geniculata, endoftalmitis por Staphylococcus, esporotricosis y dermatofitosis (véanse, por ejemplo, Arendrup et al., 2002, Infection 30(5):286-91; Kamei, 2001, Mycopathologia 152(1 ):5-13; Guhad et al, 2000, FeMS Microbiol Lett.192(1 ):27-31; Yamagata et al, 2000, J Clin Microbiol. 38(9):32606; Andrutis et al, 2000, J Clin Microbiol. 38(6):2317-23; Cock et al, 2000, Rev Inst Med Trop Sao Paulo 42(2):59-66; Shibuya et al, 1999, Microb Pathog. 27(3):123-31; Beers et al, 1999, J Lab Clin Med. 133(5):423-33; Najvar et al, 1999, Antimicrob Agents Chemother. 43(2):413-4; Williams et al., 1988, J Infect Dis. 178(4):1217-21; Yoshida, 1988, Kansenshogaku Zasshi. Junio de 1998; 72(6):621-30; Alexandrakis et al, 1998, Br J Ophthalmol. 82(3):306-11; Chakrabarti et al, 1997, J Med Vet Mycol. 35(4):295-7; Martin et al, 1997, Antimicrob Agents Chemother. 41 (1):13-6; Chu et al, 1996, Avian Dis. 40(3):715-9; Fidel et al., 1996, J Infect Dis. 173(2):425-31; Cole et al, 1995, FEMS Microbiol Lett. 15; 126(2):177-80; Pollock et al, 1995, Nat Genet. 9(2):202-9; Uchida et al, 1994, Jpn J Antibiot. 47(10):1407-12; Maebashi et al., 1994, J Med Vet Mycol. 32(5):349-59; Jensen & Schonheyder, 1993, J Exp Anim Sci. 35(4):155-60; Gokaslan & Anaissic, 1992, Infect Immun. 60(8):3339-44; Kurup et al, 1992, J Immunol. 148(12):3783-8; Singh et al., 1990, Mycopathologia. 112(3): 127-37; Salcowski & Balish, 1990, Infect Immun. 58(10):3300-6; Ahmad et al, 1986, Am J Kidney Dis. 7(2):153-6; Alture-Werber E, Edberg SC, 1985, Mycopathologia. 89(2):69-73; Kane et al., 1981, Antimicrob Agents Chemother. 20(5):595-9; Barbee et al, 1977, Am J Pathol. 86(1 ):281 -4; y Maestrone et al, 1973, Am J Vet Res. 34(6):833-6). Modelos animales para infecciones respiratorias fúngicas tales como Candida albicans, Aspergillus fumigatus, aspergilosis pulmonar invasiva, Pneumocystis carinii, criptococosis pulmonar, Pseudomonas aeruginosa, Cunninghamella bertholletia (véanse, por ejemplo, Aratani et al., 2002 Med Mycol 40(6):557-563; Bozza et al., 2002 Microbes Infect 4(13): 1281-1290; Kurup et al, 2002 Int Arch Allergy Immunol 129(2):129-137; Hori et al, 2002 Eur J Immuno 32(5): 1282-1291; Rivera et al, 2002 J Immuno 168(7): 3419-3427; Vassallo et al, 2001, Am J Respir Cell Mol Biol 25(2): 203-211; Wilder et al, 2002 Am J Respir Cell Mol Biol 26(3): 304-314; Yonezawa et al, 2000 J Infect Chemother 6(3): 155-161; Cacciapuoti et al, 2000 Antimicrob Agents Chemother 44(8): 2017-2022; y Honda et al, 1998 Mycopathologia 144(3):141-146).
Los agentes terapéuticos, composiciones de los mismos o terapias de combinación que comprenden agentes terapéuticos pueden someterse a prueba para determinar su capacidad para disminuir el transcurso temporal de la infección fúngica (por ejemplo, una infección respiratoria fúngica) en al menos el 25%, al menos el 50%, al menos el
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
60%, al menos el 75%, al menos el 85%, al menos el 95%, o al menos el 99% o del 25% al 65%, del 40% al 65%, del 50% al 90%, del 65% al 90%, del 70% al 90%, del 75% al 95%, del 80% al 95% o del 85% al 99% en relación con un control negativo (por ejemplo, PBS) tal como se mide usando ensayos bien conocidos en la técnica. Pueden usarse técnicas conocidas por los expertos en la técnica para analizar la función de los agentes terapéuticos, composiciones de los mismos o terapias de combinación que comprenden agentes terapéuticos in vivo.
También pueden usarse modelos animales para trastornos autoinmunitarios para evaluar la eficacia de un agente terapéutico, composición del mismo o terapia de combinación que comprende un agente terapéutico. Se han desarrollado modelos animales para trastornos autoinmunitarios tales como diabetes tipo 1, autoinmunidad del tiroides, lupus eritematoso sistémico y glomerulonefritis (Flanders et al., 1999, Autoimmunity 29:235-246; Krogh et al., 1999, Biochimie 81:511-515; Foster, 1999, Semin. Nephrol. 19:12-24).
La eficacia en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de un trastorno autoinmunitario puede demostrarse, por ejemplo, detectando la capacidad de un agente terapéutico, una composición o una terapia de combinación descrito en el presente documento para reducir uno o más síntomas del trastorno autoinmunitario, para reducir los recuentos de linfocitos absolutos medios, para disminuir la activación de células T, para disminuir la proliferación de células T, para reducir la producción de citocinas o para modular uno o más perfiles de citocinas particulares. La eficacia en la prevención o el tratamiento de la psoriasis puede demostrarse, por ejemplo, detectando la capacidad de un agente terapéutico o composición del mismo para reducir uno o más síntomas de psoriasis, para reducir los recuentos de linfocitos absolutos medios, para reducir la producción de citocinas, para modular uno o más perfiles de citocinas particulares, para disminuir la descamación, para disminuir el eritema, para disminuir la elevación de placas, para disminuir la activación de células T en la dermis o epidermis de una zona afectada, para disminuir la infiltración de células T en la dermis o epidermis de una zona afectada, para reducir PASI, para mejorar la puntuación de evaluación global del médico o para mejorar la calidad de vida.
La actividad antiinflamatoria de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico puede determinarse usando diversos modelos animales experimentales de artritis inflamatoria conocidos en la técnica y descritos en Crofford L.J. y Wilder R.L., “Arthritis and Autoimmunity in Animals”, en Arthritis and Allied Conditions: A Textbook of Rheumatology, McCarty (eds.), capítulo 30 (Lee y Febiger, 1993). También pueden usarse modelos animales experimentales y espontáneos de artritis inflamatoria y enfermedades reumáticas autoinmunitarias para evaluar la actividad antiinflamatoria de los agentes terapéuticos, composiciones de los mismos o terapias de combinación que comprenden agentes terapéuticos.
La actividad antiinflamatoria de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico también puede evaluarse midiendo la inhibición de edema de las garras inducido por carragenanos en la rata, usando una modificación del método descrito en Winter C. A. et al., “Carrageenan Induced Edema in Hind Paw of the Rat as an Assay for Anti-inflammatory Drugs” Proc. Soc. Exp. Biol Med. 111, 544-547, (1962). Este ensayo se ha usado como examen in vivo primario para determinar la actividad antiinflamatoria de la mayoría de los AINE, y se considera predictivo de la eficacia en seres humanos. La actividad antiinflamatoria de las terapias de prueba (por ejemplo, los agentes terapéuticos, composiciones de los mismos o terapias de combinación que comprenden agentes terapéuticos) se expresa como el porcentaje de inhibición del aumento del peso de las garras traseras del grupo de prueba en relación con el grupo de control al que se le dosificó vehículo.
En una realización específica en donde el modelo animal experimental usado es modelo de rata con artritis inducida por adyuvante, el peso corporal puede medirse en relación con un grupo de control para determinar la actividad antiinflamatoria de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación.
Se conocen en la técnica modelos animales para alergias y asma, tales como inflación de flujo constante con oclusión inspiratoria final descrita en Ewart et al., 1995 J Appl Physiol 79(2):560-566 y otros ensayos descritos en, por ejemplo, Komai et al., 2003 Br J Pharmacol 138(5): 912-920; Kenyon et al., 2003 Toxicol Appl Pharmacol 186(2): 90-100; Path et al., 2002 Am J Resp & Critical Care Med 166(6): 818-826; Martins et al., 1990 Crit Care Med 19:515- 519; Nicolaides et al., 1997 Proc Natl Acad Sci USA 94:13175-13180; McLane et al., 1998 19:713-720; y Temann et al., 1998 J Exp Med 188(7): 1307-1320. Por ejemplo, el modelo de transferencia adoptiva murino es un modelo animal usado para evaluar la eficacia de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación para la prevención, el tratamiento y/o la gestión de asma. En el modelo de transferencia adoptiva murino, la estimulación con aeroalérgenos de ratones receptores TH1 o TH2 da como resultado la migración de células efectoras TH a las vías respiratorias y está asociada con una respuesta inflamatoria mucosa pulmonar neutrófila (TH1) y eosinófila (TH2) intensa (Cohn et al., 1997, J. Exp. Med. 1861737-1747). Puede inducirse hipersensibilidad de las vías respiratorias en ratones mediante ovoalbúmina (Tomkinson et al., 2001, J. Immunol. 166:5792-5800) o antígeno de huevos de Schistosoma mansoni (Tesciuba et al., 2001, J. Immunol. 167:1996-2003).
La eficacia en la prevención o el tratamiento de un trastorno antiinflamatorio puede demostrarse, por ejemplo, detectando la capacidad de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico para reducir uno o más síntomas del trastorno inflamatorio, para disminuir la activación de células T, para disminuir la proliferación de células T, para modular uno o más perfiles de citocinas,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
para reducir la producción de citocinas, para reducir la inflamación de una articulación, un órgano o un tejido o para mejorar la calidad de vida.
También pueden evaluarse los cambios en la actividad de enfermedades inflamatorias a través del recuento de articulaciones doloridas e hinchadas, las puntuaciones globales del paciente y el médico para dolor y actividad de la enfermedad, y el ESR/CRP. La progresión del daño articular estructural puede evaluarse mediante puntuación cuantitativa de rayos X de las manos, las muñecas y los pies (método de Sharp). Los cambios en el estado funcional en seres humanos con trastornos inflamatorios pueden evaluarse usando el cuestionario de evaluación de la salud (HAQ), y los cambios en la calidad de vida se evalúan con el SF.
La eficacia de un agente terapéutico, una composición del mismo o una terapia de combinación que comprende un agente terapéutico en la prevención, el tratamiento y/o la gestión de una reacción alérgica de tipo I puede evaluarse mediante su capacidad para inducir anticuerpos anti-IgE que inhiben la unión de IgE a su receptor en mastocitos o basófilos in vitro. Los niveles de IgE pueden someterse a ensayo mediante inmunoensayos, electroforesis en gel seguida por visualización, prueba de radioinmunoabsorción (RIST), prueba de radioalergosorbente (RAST) o cualquier otro método conocido por los expertos en la técnica.
5.10 KITS
Se proporciona en el presente documento un kit o envase farmacéutico que comprende uno o más recipientes llenos de uno o más de los componentes de las composiciones descritas en el presente documento, tales como uno o más anticuerpos proporcionados en el presente documento, o uno o más agentes terapéuticos proporcionados en el presente documento. Opcionalmente asociado con tal(es) recipiente(s) puede estar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, el uso o la venta de productos farmacéuticos o productos biológicos, aviso que refleja la aprobación por la agencia de la fabricación, el uso o la venta para su administración a seres humanos. Además, el kit o envase farmacéutico puede incluir instrucciones para el uso de un anticuerpo o agente terapéutico descrito en el presente documento.
Los kits englobados en el presente documento pueden usarse en los métodos anteriores. En una realización, un kit comprende un anticuerpo descrito en el presente documento, preferiblemente un anticuerpo aislado, en uno o más recipientes. En otra realización, un kit comprende un agente terapéutico descrito en el presente documento, en uno o más recipientes.
En determinadas realizaciones, se engloban en el presente documento kits de diagnóstico para evaluar el nivel de expresión de un receptor nativo o ligando nativo. En algunas realizaciones, uno o más de los agentes terapéuticos descritos en el presente documento pueden usarse para evaluar el nivel de expresión de un receptor nativo o ligando nativo. Por consiguiente, se proporcionan en el presente documento kits de diagnóstico que comprenden un agente terapéutico descrito, en un recipiente. En algunas realizaciones, se incluyen con el kit instrucciones sobre cómo usar el agente terapéutico para evaluar el nivel de expresión de un receptor nativo o ligando nativo. En particular, las instrucciones incluidas pueden describir la puesta en contacto de una muestra de un paciente (por ejemplo, células, fluidos, etc.) con un agente terapéutico y la detección del agente terapéutico unido a la muestra. El agente terapéutico podría estar marcado con un resto detectable o podría usarse un agente secundario marcado que reconoce al agente terapéutico (y por tanto, puede incluirse en el kit).
5.11 ENSAYO DE EXAMEN PARA IDENTIFICAR INTERACCIONES RECEPTOR/LIGANDO
En un aspecto, se presentan en el presente documento métodos para identificar una interacción receptor-ligando. En una realización, se presenta en el presente documento un método para identificar una interacción receptor-ligando, que comprende: (a) poner en contacto una proteína de fusión o un conjugado con una célula modificada por ingeniería genética para expresar o que expresa una proteína de interés en condiciones que permiten que la proteína de fusión o el conjugado y la proteína de interés formen un complejo, en el que la proteína de fusión comprende una proteína diana o un fragmento de la misma y una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, un péptido penetrante o una molécula pequeña distinta de una molécula orgánica; y (b) detectar la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés, en el que la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés indica que la proteína diana y la proteína de interés tienen una interacción receptor-ligando. En otra realización, se presenta en el presente documento un método para identificar una interacción receptor-ligando, que comprende: (a) poner en contacto una proteína de fusión o un conjugado con una célula modificada por ingeniería genética para expresar o que expresa 2, 4, 6, 8, 10, 12 o más proteínas de interés, o entre 2 y 5, 2 y 8, 5 y 8, 5 y 10 o 10 y 12 proteínas de interés en condiciones que permiten que la proteína de fusión o conjugado y una proteína de interés formen un complejo, en el que la proteína de fusión o conjugado comprende una proteína diana o un fragmento de la misma y una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, un péptido penetrante o una molécula pequeña distinta de una molécula orgánica; y (b) detectar la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés, en el que la presencia de un complejo de proteína de fusión- proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés indica que la proteína diana y la proteína de interés tienen una interacción receptor-ligando.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En otra realización, se presenta en el presente documento un método para identificar una interacción receptor- ligando, que comprende: (a) poner en contacto una biblioteca de proteínas de fusión o una biblioteca de conjugados con una célula modificada por ingeniería genética para expresar o que expresa una proteína de interés en condiciones que permiten que una proteína de fusión o conjugado y la proteína de interés formen un complejo, en el que la proteína de fusión o conjugado comprende una proteína diana o un fragmento de la misma y una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, un péptido penetrante o una molécula pequeña distinta de una molécula orgánica; y (b) detectar la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés, en el que la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés indica que la proteína diana y la proteína de interés tienen una interacción receptor-ligando. En otra realización, se presenta en el presente documento un método para identificar una interacción receptor-ligando, que comprende: (a) poner en contacto una proteína de fusión o conjugado con una biblioteca de células modificadas por ingeniería genética para expresar o que expresan una proteína de interés diferente en condiciones que permiten que la proteína de fusión o conjugado y una proteína de interés formen un complejo, en el que la proteína de fusión o conjugado comprende una proteína diana o un fragmento de la misma y una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, un péptido penetrante o una molécula pequeña distinta de una molécula orgánica; y (b) detectar la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés, en el que la presencia de un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés indica que la proteína diana y la proteína de interés tienen una interacción receptor-ligando.
En determinadas realizaciones, la proteína diana se expresa mediante una célula de mamífero. En una realización específica la proteína diana se expresa mediante una célula hematopoyética. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante una célula muscular. En otra realización la proteína diana se expresa mediante un fibroblasto. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante una célula epitelial. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante una célula endotelial. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante un linfocito. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante un macrófago o un fragmento del mismo. En otra realización, la proteína diana se expresa mediante una célula dendrítica. En otra realización, la proteína diana es una molécula coestimuladora (por ejemplo, un receptor o ligando coestimulador). En otra realización, la proteína diana es una citocina o un receptor de citocinas. En una realización específica, la proteína diana es una proteína humana. En otra realización específica, la proteína diana es una proteína transmembrana de longitud completa. En otra realización, la proteína diana es un receptor huérfano o ligando huérfano.
Los ejemplos no limitativos de etiquetas de péptido y otros marcadores de polipéptido incluyen: un péptido de hexa- histidina, una etiqueta de HA, una etiqueta flag, el dominio Fc de un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo de IgG tal como IgG1 o IgG2) y una región del dominio Fc de un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo de IgG). En determinadas realizaciones, una proteína de fusión comprende tanto una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido como un péptido penetrante.
Pueden usarse técnicas de biología molecular convencionales para generar ácidos nucleicos que codifican para una proteína de fusión, expresar la proteína de fusión y aislarla o purificarla del cultivo celular. Los ácidos nucleicos que codifican para el dominio extracelular de una proteína diana o un fragmento de la misma así como los ácidos nucleicos que codifican para etiquetas de péptido u otros marcadores de polipéptido, o péptidos penetrantes pueden estar pública o comercialmente disponibles. Pueden modificarse por ingeniería genética ácidos nucleicos en constructos usando técnicas de biología molecular convencionales. Véanse las secciones 5.2.4 y 5.3.4, anteriormente, que se refieren a ácidos nucleicos. Los constructos de ácido nucleico descritos en esa sección también pueden usarse para producir constructos de ácido nucleico para la transfección en células para su uso en los métodos descritos en esta sección.
En determinadas realizaciones, la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula de mamífero. En una realización específica la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula hematopoyética. En otra realización, la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula muscular. En otra realización la proteína de interés es una proteína expresada mediante un fibroblasto. En otra realización, la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula epitelial. En otra realización, la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula endotelial. En otra realización, la proteína de interés es una proteína expresada mediante un linfocito. En otra realización, la proteína de interés es una proteína expresada mediante una célula dendrítica. En otra realización, la proteína de interés es una proteína que es una molécula coestimuladora (por ejemplo, un receptor o ligando coestimulador). En otra realización, la proteína de interés es una citocina o un receptor de citocinas. En una realización específica, la proteína de interés es una proteína humana. En otra realización específica, la proteína de interés es una proteína transmembrana de longitud completa. En otra realización, la proteína de interés es un receptor huérfano o ligando huérfano. Véase la tabla 1, ejemplos no limitativos de proteínas de interés.
Los ácidos nucleicos que codifican para una proteína de interés o un fragmento de la misma pueden estar pública o comercialmente disponibles. Pueden modificarse por ingeniería genética ácidos nucleicos en constructos usando técnicas de biología molecular convencionales. Véanse las secciones 5.2.4 y 5.3.4, anteriormente, que se refieren a
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ácidos nucleicos. Los constructos de ácido nucleico descritos en esa sección también pueden usarse para producir constructos de ácido nucleico para la transfección en células para su uso en los métodos descritos en esta sección.
Pueden transfectarse de manera estable o transitoria células con una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína de interés o un constructo de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica para una proteína de interés. Véase la sección 5.3.5 anteriormente para métodos para transfectar células con secuencias de ácido nucleico. Los ejemplos no limitativos de células que pueden usarse para expresar la(s) proteína(s) de fusión incluyen células de mamífero, células bacterianas, células de levadura, células primarias, células inmortalizadas y células de insecto. En determinadas realizaciones, las células son una línea celular de mamífero. Los ejemplos de líneas celulares de mamífero incluyen, pero no se limitan a, células COS, CHO, HeLa, NIH3T3, HepG2, MCF7, HEK, 293T, RD, PC12, hibridomas, células pre-B, 293, 293H, K562, SkBr3, BT474, A204, M07Sb, TFy, Raji, Jurkat, MOLT-4, CTLL-2, MC-IXC, SK-N-MC, SK-N-MC, SK-N-DZ, SHSY5Y, C127, N0 y BE(2)-C. Otras líneas celulares de mamífero disponibles como huéspedes para la expresión se conocen en la técnica e incluyen muchas líneas celulares inmortalizadas disponibles de la Colección americana de cultivos tipo (ATCC). En otra realización, las células son líneas celulares inmortalizadas derivadas de un sujeto. En otra realización, las células son células primarias o secundarias de un sujeto. En una realización particular, las células son células cancerosas. En otra realización, las células son células fetales/embrionarias. En algunas realizaciones, las células son células progenitoras. En algunas realizaciones, las células son linfocitos (por ejemplo, células T y células B). En otra realización, las células son células madre. En una realización específica, las células son células 293T.
En realizaciones específicas, las células transfectadas con ácidos nucleicos que codifican para una proteína de interés tienen un alto nivel de expresión.
En determinadas realizaciones, se pone en contacto una proteína de fusión o conjugado con una célula que expresa una proteína de interés en un pocillo de una placa. En realizaciones particulares, se pone en contacto una proteína de fusión o conjugado con una célula que expresa una proteína de interés en una placa de microtitulación. En una realización específica, la placa de microtitulación es una placa de microtitulación de 12 pocillos, 96 pocillos o 384 pocillos.
En determinadas realizaciones, se incuba una célula que expresa una proteína de interés con una proteína de fusión o conjugado en condiciones fisiológicas. En algunas realizaciones, se incuba una célula que expresa una proteína de interés con una proteína de fusión o conjugado a aproximadamente 22°C, 25°C, 32°C o 37°C, o de aproximadamente 22°C a aproximadamente 25°C, de aproximadamente 22°C a aproximadamente 27°C, de aproximadamente 25°C a aproximadamente 27°C, de aproximadamente 32°C a aproximadamente 35°C o de 32°C a aproximadamente 37°C. En determinadas realizaciones, se pone en contacto una célula que expresa una proteína de interés con una proteína de fusión o conjugado durante aproximadamente 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 16 horas, 18 horas, 1 día, 2 días o más. En algunas realizaciones, tras poner en contacto la proteína de fusión o conjugado con una proteína de interés, pueden realizarse una o más etapas de lavado para eliminar la proteína de fusión no unida o conjugado no unido. En realizaciones alternativas, puede no realizarse etapas de lavado para eliminar la proteína de fusión no unida o conjugado no unido.
En algunas realizaciones, se usa un anticuerpo que se une específicamente a una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, o un péptido penetrante para detectar un complejo de proteína de fusión-proteína de interés o complejo de conjugado-proteína de interés. En algunas realizaciones, el anticuerpo se pone en contacto con las células a aproximadamente 22°C, 25°C, 32°C o 37°C, o de aproximadamente 22°C a aproximadamente 25°C, de aproximadamente 22°C a aproximadamente 27°C, de aproximadamente 25°C a aproximadamente 27°C, de aproximadamente 32°C a aproximadamente 35°C o de 32°C a aproximadamente 37°C. En algunas realizaciones, el anticuerpo se pone en contacto con las células durante aproximadamente 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas, 16 horas, 18 horas, 1 día, 2 días o más. En algunas realizaciones, tras poner en contacto el anticuerpo con las células, pueden realizarse una o más etapas de lavado para eliminar el anticuerpo no unido. En realizaciones alternativas, pueden no realizarse etapas de lavado para eliminar el anticuerpo no unido.
En realizaciones específicas, un anticuerpo que se une específicamente a una etiqueta de péptido u otro marcador de polipéptido, o un péptido penetrante se marca con un resto detectable. Pueden encontrarse ejemplos no limitativos de restos detectables en la sección 5.1.2 y 5.2.3, anteriormente. En una realización específica, el anticuerpo se marca con un resto fluorescente. En determinadas realizaciones, puede usarse el sistema de detección celular (CDS) Applied BioSystem 8200 para detectar la fluorescencia del anticuerpo unido al complejo de proteína de fusión-proteína de interés. En una realización específica, el CDS explora el pocillo de una placa de microtitulación a una profundidad de aproximadamente 75 pm, aproximadamente 90 pm, aproximadamente 95 pm, aproximadamente 100 pm, aproximadamente 105 pm, aproximadamente 110 pm, aproximadamente 115 pm o aproximadamente 120 pm. En algunas realizaciones, se usa polarización de fluorescencia para detectar un complejo de proteína de fusión-proteína de interés.
Una vez que se ha identificado una interacción receptor-ligando usando un método descrito en esta sección, la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
interacción receptor-ligando puede evaluarse usando otro ensayo biológico descrito en el presente documento (por ejemplo, afinidad de unión, un ensayo de proliferación, etc.).
Los ensayos descritos en esta sección pueden aplicarse para identificar una interacción entre una molécula pequeña y otra molécula orgánica, tal como un péptido que comprende determinados residuos de interés de una proteína particular (por ejemplo, residuos de tirosina).
6. EJEMPLO: IDENTIFICACIÓN DE INTERACCIONES ESTIMULADORAS DE LINFOCITOS MEDIANTE UN PROTEOMA DE RECEPTORES HUMANOS
El siguiente ejemplo se ofrece a modo de ilustración, y no a modo de limitación.
6.1 MATERIALES Y MÉTODOS
6.1.1 Plásmidos, proteínas de fusión y anticuerpos monoclonales
Se adquirió un conjunto de ADNc de membrana plasmática de longitud de completa humano (MHS5007) de Open Biosystems Inc. (Huntsville, AL), y se incluyeron -800 genes del conjunto que está en un vector de expresión de mamíferos pCMV-SPORT6. Se clonaron aproximadamente 1.000 genes en los plásmidos pcDNA3.2/V5-DEST o pcDNA6.2/V5-DEST de vector de expresión no de mamíferos en el vector pcDNA3 usando el sistema de clonación Gateway basado en recombinación homóloga (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se clonan otros genes en el plásmido pcDNA3 mediante una técnica de clonación por RT-PCR convencional y se validaron las secuencias de ADNc mediante la secuenciación.
Se adquirieron las proteínas de fusión humanas CD28Ig, CTLA4Ig, ICOSIg, PD-1 Ig, B7-1Ig, B7-2Ig, B7-H1 Ig, B7- DCIg y B7-H2Ig de R&D Systems (Mineápolis, MN). Se adquirió CTLA4Ig (Orencia) de Bristol-Myers Squibb (Nueva York, NY). Se prepararon las proteínas de fusión B7-H7Ig, B7-H67CRIg y FLAG-Ig transfectando de manera transitoria células 293T con los constructos en plásmidos pMIgV o pHIgV, y se purificaron mediante columnas de proteína A tal como se describió anteriormente (1).
Se adquirieron AcM de ratón anti-CD3 humano OKT3, AcM de ratón anti-CD28 humano CD28.6 (bloqueante), AcM de ratón anti-CD28 humano CD28.2 (coestimulador), AcM de ratón anti-CTLA-4 humano 14D3 y AcM de ratón anti- B7-H2 humano MIH12 de eBioscience (San Diego, Ca). Se adquirieron AcM de ratón anti-ICOS humano C398.4A y AcM de ratón anti-B7-H2 humano 9F.8A4 de BioLegend (San Diego, CA). Se adquirieron anticuerpo anti-Ig humana y anti-Ig de ratón FMAT blue de Applied Biosystems (Foster City, CA). Se adquirió IgG humana de control (Synagis®) de MedImmune (Rockville, MD). Se adquirió IgG de hámster de control, de hámster anti-TNP de ratón de eBioscience. Se generó AcM de ratón anti-B7-H7 humano a partir de un hibridoma derivado de la fusión de mieloma SP2 con células B de un ratón inmunizado con B7-H7Ig humana. Se generó AcM de hámster anti-B7-H7CR humano a partir de un hibridoma derivado mediante fusión de mieloma SP2 con células B de un hámster inmunizado con B7- H7CRIg humana tal como se describe en otra parte (2). Todos los demás anticuerpos usados en la citometría de flujo se adquirieron de BD Bioscience (San José, CA) o eBioscience.
6.1.2 Examen y transfección de alto rendimiento
Se diluyeron los plásmidos con genes transmembrana humanos mediante medio OPTI-MEM y se colocaron individualmente en cinco placas de 384 pocillos a 30 ng/pocillo. Se añadió Lipofectamine 2000 a cada pocillo y se mezcló con los plásmidos durante 30 minutos. Se añadieron posteriormente diez mil células 293T a los pocillos para realizar la transfección transitoria. Ocho horas tras la transfección, se añadieron a los pocillos CD28Ig humana y anticuerpo secundario anti-Ig humana FMAT blue, o B7-H7CRIg humana y anticuerpo secundario anti-Ig de ratón FMAT blue. Se leyeron las placas veinticuatro horas tras la transfección mediante el sistema de detección celular Applied Biosystems 8200 y se analizaron mediante el software CDS 8200. Se recogieron los plásmidos en los pocillos positivos y se transfectaron posteriormente en células 293T para su validación adicional.
6.1.3 Resonancia de plasmón superficial
Se midieron y analizaron las interacciones de proteínas en un instrumento BIAcore 3000 (BIAcore AB, Uppsala, Suecia) realizado a 25°C tal como se describió anteriormente (3). Se usó Hepes 0,1 M, pH 7,4, que contenía NaCl 0,15 M, tensioactivo P20 al 0,005% (HBS) como tampón de ejecución. Se adquirieron B7-H2Ig, CD28Ig y CTLA-4Ig humanas de R&D Systems. Todos los demás reactivos se adquirieron de BIAcore. Se acopló covalentemente B7- H2Ig a un chip sensor CM5 (BIAcore AB) reticulando grupos amina primaria a la matriz de dextrano carboximetilado. Se activó una célula de flujo sobre el chip CM5 con una mezcla 1:1 de N-etil-N-dimetilaminopropilcarbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS), seguido por inyección de B7-H2Ig 20 pg/ml diluida en tampón acetato de sodio 10 mM, pH 5,0, hasta que se lograron las unidades de respuesta (RU) deseadas. Otra célula de flujo activada sobre el mismo chip, que no recibió ninguna proteína de fusión, se usó como superficie de sensor de control. Los grupos carboxilo activados restantes se bloquearon con etanolamina 1 M (pH 8,5). Posteriormente, se lavaron extensamente las células de flujo con hBs para generar un nivel inicial estable. Se inyectaron los analitos, ICOSIg,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
CD28Ig y CTLA4Ig, en diluciones en serie sobre la superficie de sensor por triplicado a una velocidad de flujo de 2030 pl/min durante 3 min, y luego se permitió la disociación durante 5 min. Se regeneraron las células de flujo mediante dos pulsos consecutivos de 10 segundos con NaOH 10 mM. Se analizaron los datos mediante el software BIAevaluation 4.1 (BIAcore).
6.1.4 Ensayo de coestimulación de células T
Las placas de 96 pocillos se recubrieron previamente con AcM OKT (anti-CD3 humano) a las concentraciones indicadas. También se inmovilizaron en los pocillos B7-H2Ig, B7-H7Ig, anti-B7-H7CR o Ig de control a 5 pg/ml. Se seleccionaron negativamente células T de sangre periférica humana y se purificaron mediante un kit de selección de todas las células T humanas o un kit de selección de células T CD4 humanas (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Se añadieron células T humanas sin tratamiento previo a cada pocillo a 2,5-3x105 células/pocillo y se cultivaron durante tres días. En algunos experimentos, se añadieron anticuerpos coestimuladores anti-CD28 humano o bloqueantes anti-CD28 humano y anti-ICOS humano al comienzo del cultivo. Se añadió 3HTdR durante el cultivo de seis horas final. Se contó la incorporación de 3H-TdR con un contador de centelleo líquido MicroBeta Trilux (Wallac).
6.1.5 Células dendríticas y macrófagos derivados de monocitos humanos
Se aislaron PBMC humanas mediante centrifugación en gradiente de densidad. Se adhirieron cincuenta millones de PBMC sobre una placa de cultivo tisular de 100 mm durante 45 min en un incubador a 37°C. Se cultivaron células adherentes a 0,5x106 células/ml en 10 ml de medio RPMI completo al 10%. Se complementó el medio con GM-CSF 1.000 U/ml para la generación de macrófagos, o IL-4 500 U/ml y GM-CSF 1000 U/ml para la diferenciación de células dendríticas. El día 2, 4 y 6, se tomó la mitad del medio y se cambió por medio nuevo con citocinas. El día 7, se recogieron los macrófagos y las células dendríticas inmaduras.
6.1.6 ELISA
Se recogieron los sobrenadantes del ensayo de coestimulación de células T. Se detectaron IFN-y, IL-2 e IL-10 humanos mediante métodos de ELISA de tipo sándwich según las instrucciones del fabricante (BD PharMingen o eBioscience).
6.2 RESULTADOS
Los receptores de membrana plasmática sobre células inmunitarias han evolucionado para mediar en amplias funciones biológicas incluyendo la detección de patógenos, la adhesión celular, el reconocimiento de antígenos y la transmisión de señales extracelulares al interior de las células. Por tanto, las interacciones entre receptores inmunitarios y sus ligandos (o contrarreceptor) son fundamentales para la comunicación e integración celulares que conducen a la ejecución de las respuestas inmunitarias. Mediante una búsqueda en bases de datos del genoma humano, se predice que más de 3.000 secuencias de ADN únicas, que codifican para dominio extracelular hidrófilo y dominio transmembrana hidrófobo, pueden codificar para proteínas de membrana celular (4, 5). Sin embargo, se han identificado menos de 500 proteínas como contrarreceptores y esto se debe en gran medida a una limitación de los métodos sensibles. Muchas proteínas de superficie celular o su ARNm tienen una abundancia baja y sus expresiones varían según claves ambientales. Además, la mayoría de las interacciones moleculares de la superficie celular están en un modo de activación rápida e inactivación rápida con afinidad débil. Aunque esta característica permite un control máximo de la señalización y su efecto en respuestas inmunitarias, aumenta la dificultad para identificar las interacciones mediante los métodos actuales incluyendo clonación por expresión y microsecuenciación de proteínas.
Se han obtenido más de 1.900 genes transmembrana humanos de longitud completa basándose en su expresión en células hematopoyéticas (tabla 1). Estos genes incluyen las moléculas de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IgSF), la superfamilia de factor de necrosis tumoral (TNFRSF), la superfamilia de lectina de tipo C, la superfamilia de receptores acoplados a proteínas G (GPCR), así como la mayoría de las lectinas, integrinas y receptores de eliminación. Mediante transfección de plásmidos individuales en células 293T en placas de 384 pocillos, se demostró la expresión de alto nivel de genes en el 50-70% de las células 293T a partir de muestras seleccionadas aleatoriamente en este proteoma. La expresión de alto nivel de proteínas individuales sobre la superficie celular aumenta la avidez de la interacción con sus contrarreceptores. Para el examen de un contrarreceptor desconocido de una proteína diana, el dominio extracelular del gen diana se fusiona genéticamente con un gen de etiqueta (Fc de IgG2a de ratón, Fc de IgG1 humana, FLAG o 6xHIS), y la proteína de fusión recombinante, que se genera mediante transfección transitoria del plásmido en 293T, se usa para la detección mediante unión al proteoma. Se aplica un anticuerpo secundario marcado con fluorescencia contra la etiqueta para detectar la unión de proteína diana al proteoma. Se adaptó el sistema de detección celular (CDS) Applied Biosystem 8200 para un examen rápido de la actividad de fluorescencia de la unión (figura 1). El CDS permite la exploración de sólo la parte inferior de un pocillo de la microplaca a una profundidad de 100 pm de modo que se ignora el anticuerpo secundario que no se une, dando como resultado una alta razón de señal con respecto a ruido que elimina todas las etapas de lavado. La combinación de una interacción de avidez aumentada y un sistema de detección altamente sensible permite la identificación de interacciones receptor-ligando que no pueden detectarse en células primarias mediante otros
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
métodos tales como citometría de flujo. El descubrimiento de las Interacciones B7-H2-CD28 y B7-H2-CTLA4 validó, por tanto, este sistema proteómico como una herramienta para descubrir interacciones novedosas incluso entre moléculas bien estudiadas.
Se exploró el uso de este sistema de proteoma para identificar el receptor para ligandos huérfanos usando B7-H7 como ejemplo. Se describió previamente B7-H7 como una proteína 2 de asociación a repetición terminal larga de retrovirus endógeno humano-H (HHLA2) sin función biológica identificada (17), aunque se indicó como un posible miembro de la familia B7 mediante búsqueda de homología (18). Mediante comparación de sus secuencias de nucleótidos y proteína, se demostró su homología con otros miembros de B7 humanos conocidos incluyendo B7-1, B7-2, B7-H1, B7-DC, B7-H2, B7-H3 y B7-H4, con la mayor homología con B7-H4 (figura 7). Por tanto, se le asignó el nombre B7-H7. El gen está ubicado en el cromosoma 3q 13.13, inmediatamente adyacente a B7-1 y B7-2, y codifica para una proteína transmembrana de tipo I de 414 aminoácidos de longitud con una masa molecular predicha de ~45 KD. B7-H7 tiene 3 conjuntos de inmunoglobulina (Ig) distintivos (IgV-IgC-IgV) en su dominio extracelular y comparte -20% de homología en la secuencia de proteína con otras moléculas de la familia B7. B7-H7 tiene también un dominio intracelular irregular sin ninguna homología significativa con otras moléculas de la familia B7 y sin motivos obvios de transducción de señales, un rasgo distintivo de las moléculas de la familia B7.
Mediante el examen del proteoma de receptor-ligando con B7-H7Ig, se identificó una pareja de unión a B7-H7 denominada proteína 2 que contiene dominio transmembrana y de inmunoglobulina (TMIGD2) (ID de gen 126259) (figura 8). Similar a B7-H7, no se le ha asignado función a este gen. En el presente documento este producto génico se renombró el contrarreceptor para B7-H7 (B7-H7CR). B7-H7CR está ubicado en el cromosoma 19p13.3 y codifica para una proteína transmembrana con un único dominio de IgV extracelular y un dominio intracelular largo, que es estructuralmente similar a otros receptores de la familia B7 conocidos. Notablemente, el dominio intracelular de B7- H7CR también contiene tres residuos de tirosina, que son potencialmente sitios de acoplamiento para la transducción de la señalización. Globalmente, B7-H7CR comparte aproximadamente el 10% de homología de la secuencia de proteína con CD28, CTLA-4, ICOS y PD-1 (figura 9). Se generó un AcM específico para tanto B7-H7 como B7-H7CR humano. Mediante transfección de células 293T con el gen de B7-H7CR, se demostró que la expresión de B7-H7CR en la superficie celular mediante tinción con AcM anti-B7-H7CR (clon 4-5) en análisis de citometría de flujo B7-H7Ig se unía fuertemente a células 293T B7-H7CR+ pero no a células transfectadas de manera simulada (figura 10A). De manera similar, B7-H7CRIg también se unía a células que se transfectaron con el gen de B7-H7, pero no a células transfectadas de manera simulada. La inclusión de AcM frente a B7-H7 (clon 2D3) bloqueó completamente esta interacción (figura 11). Se excluyó la posible reactividad cruzada entre B7-H7CR y otros ligandos de la familia B7 conocidos mediante tinción con B7-H7CRIg de células 293T transfectadas con B7-1, B7-2, B7-H1, B7-DC, B7-H2, B7-H3 (formas tanto 2Ig como 4Ig) y B7-H4 humanas (figura 12). Estos resultados indican tanto que B7-H7 se une específicamente a B7-H7CR y pueden representar un nuevo par en la familia B7- CD28.
El ARNm de B7-H7 es abundante en testículos, colon, pulmón, riñón y páncreas mientras que muestra niveles bajos en intestino delgado, hígado y músculo esquelético. En cambio, se encontró principalmente ARNm de B7-H7CR en órganos linfoides (figura 13); en timo y bazo lo más abundantemente, con linfocitos de sangre periférica (PBL) e hígado en segundo lugar. Consecuente con estos hallazgos, no se detectó B7-H7 en la superficie celular mediante AcM específico en células T, B, NK o neutrófilos en PBL humanos (figura 14). Sin embargo, macrófagos derivados de monocitos expresaban de manera constante B7-H7, y la activación de macrófagos con LPS, poli I:C, Listeria monocytogenes inactivada por calor (HKLM) o interferón-gamma reguló por incremento adicionalmente la expresión (figura 10B). También podrían inducirse células dendríticas (DC) inmaduras derivadas de monocitos mediante poli I:C o HKLM para que expresen B7-H7. Por otro lado, B7-H7CR se expresa de manera constitutiva en la mayoría de células T y NK, pero no en células B (figura 10C). Tomados conjuntamente, los patrones de expresión de B7-H7 y su contrarreceptor sugieren sus papeles en la interacción de células presentadoras de antígenos profesionales con células T y NK.
Un rasgo distintivo de las moléculas de la familia B7 es su capacidad para coestimular o coinhibir respuestas de células T en presencia de antígeno (6). La B7-H7Ig que recubre la placa promovió fuertemente la proliferación de células T CD4+ así como la producción de IL-2, IFN-y e IL-10 en presencia de dosis subóptimas de AcM anti-CD3 (OKT3) (figura 10D). Además, el AcM frente a B7-H7CR en forma inmovilizada podía imitar el papel de B7-H7 potenciando la proliferación de células T o bien solo o bien en sinergia con el AcM frente a CD28 (figura 10E), sugiriendo una característica agonista de este AcM frente a B7-H7CR. Además, la inclusión de AcM frente a B7-H7 soluble (2D3) o B7-H7CRIg suprimió el efecto coestimulador de B7-H7 (figura 10F). Combinados juntos, estos resultados respaldan que la interacción de B7-H7 y B7-H7CR representa una ruta coestimuladora de células T novedosa que promueve el crecimiento de células T humanas.
Los mecanismos de estas parejas coestimuladoras recién descritas en la regulación de las respuestas inmunitarias aún tiene que dilucidarse (figura 15), especialmente en el contexto de otras rutas estimuladoras y coinhibidoras previamente descritas. Sin embargo, este sistema proteómico de receptor-ligando representa un enfoque prometedor para descubrir nuevas interacciones moleculares sobre la superficie celular. Con la expansión del proteoma para incluir todas las proteínas de la membrana plasmática, este sistema podría utilizarse para identificar cualquier par de receptor-ligando de la superficie celular en cuestión y entonces la significación debe estar más allá
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
de una mera comprensión del sistema inmunitario.
6.3 Bibliografía
A continuación está la lista de referencias mencionadas en la sección 6.
1. Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., y Chen, L. 1999. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat Med 5:1365-1369.
2. Tamura, H., Dong, H., Zhu, G., Sica, G.L., Flies, D.B., Tamada, K., y Chen, L. 2001. B7-H1 costimulation preferentially enhances CD28-independent T-helper cell function. Blood 97:1809-1816.
3. Wang, S., Bajorath, J., Flies, D.B., Dong, H., Honjo, T., y Chen, L. 2003. Molecular modeling and functional mapping of B7-H1 and B7-DC uncouple costimulatory function from PD-1 interaction. J Exp Med 197:1083-1091.
4. Lander, E.S., Linton, L.M., Birren, B., Nusbaum, C., Zody, M.C., Baldwin, J., Devon, K., Dewar, K., Doyle, M., FitzHugh, W., et al. 2001. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature 409:860-921.
5. Venter, J.C., Adams, M.D., Myers, E.W., Li, P.W., Mural, R.J., Sutton, G.G., Smith, H.O., Yandell, M., Evans, C.A., Holt, R.A., et al. 2001. The sequence of the human genome. Science 291:1304-1351.
6. Chen, L. 2003. The B7-CD28 family molecules. Nueva York, N.Y.: Landes Bioscience/Eurekah.com; Kluwer Academic/Plenum. 141 pp.
7. Chen, L. 2004. Co-inhibitory molecules of the B7-CD28 family in the control of T-cell immunity. Nat Rev Immunol 4:336-347.
8. Sharpe, A.H., y Freeman, G.J. 2002. The B7-CD28 superfamily. Nat Rev Immunol 2:116-126.
9. Linsley, P.S., Clark, E.A., y Ledbetter, J.A. 1990. T-cell antigen CD28 mediates adhesion with B cells by interacting with activation antigen B7/BB-1. Proc Natl Acad Sci U S A 87:5031-5035.
10. Yoshinaga, S.K., Whoriskey, J.S., Khare, S.D., Sarmiento, U., Guo, J., Horan, T., Shih, G., Zhang, M., Coccia, M.A., Kohno, T., et al. 1999. T-cell co-stimulation through B7RP-1 and ICOS. Nature 402:827-832.
11. Hutloff, A., Dittrich, A.M., Beier, K.C., Eljaschewitsch, B., Kraft, R., Anagnostopoulos, I., y Kroczek, R.A. 1999. ICOS is an inducible T-cell co-stimulator structurally and functionally related to CD28. Nature 397:263-266.
12. Krummel, M.F., y Allison, J.P. 1995. CD28 and CTLA-4 have opposing effects on the response ofT cells to stimulation. J Exp Med 182:459-465.
13. Walunas, T.L., Lenschow, D.J., Bakker, C.Y., Linsley, P.S., Freeman, G.J., Green, J.M., Thompson, C.B., y Bluestone, J.A. 1994. CTLA-4 can function as a negative regulator of T cell activation. Immunity 1:405-413.
14. van der Merwe, P.A., Bodian, D.L., Daenke, S., Linsley, P., y Davis, S.J. 1997. CD80 (B7-1) binds both CD28 and CTLA-4 with a low affinity and very fast kinetics. J Exp Med 185:393-403.
15. Freeman, G.J., Gribben, J.G., Boussiotis, V.A., Ng, J.W., Restivo, V.A., Jr., Lombard, L.A., Gray, G.S., y Nadler, L.M. 1993. Cloning of B7-2: a CTLA-4 counter-receptor that costimulates human T cell proliferation. Science 262:909-911.
16. Chattopadhyay, K., Bhatia, S., Fiser, A., Almo, S.C., y Nathenson, S.G. 2006. Structural basis of inducible costimulator ligand costimulatory function: determination of the cell surface oligomeric state and functional mapping of the receptor binding site of the protein. J Immunol 177:3920-3929.
17. Carreno, B.M., y Collins, M. 2002. The B7 family of ligands and its receptors: new pathways for costimulation and inhibition of immune responses. Annu Rev Immunol 20:29-53.
18. Fahrer, A.M., Bazan, J.F., Papathanasiou, P., Nelms, K.A., y Goodnow, C.C. 2001. A genomic view of immunology. Nature 409:836-838.
Tabla 1. Lista de clones de ADNc usados en el proteoma de receptor-ligando.
N.2
Lista de genes
1
ABCA1
2
ABCA3
3
ABCC4
4
ABCD3
5
ABCG1
6
ABCG2
7
ABI1
8
ACCN4
9
ACE
10
ACE2
11
ACSL3
12
ACTL6A
13
ACTN1
14
ACTN2
15
ACVR1
16
ACVR1B
17
ACVRL1
18
ACY3
19
ADAM10
20
ADAM17
21
ADAM2
22
ADAM23
23
ADAM8
24
ADCY7
25
ADD1
26
ADD2
27
ADD3
28
ADI1
29
ADORA2A
30
ADORA2B
31
ADORA3
32
ADRA2A
33
ADRB2
34
ADRM1
35
AGER
36
AGPAT3
37
AGPAT5
38
AGTRL1
39
AHCY
40
AIFM3
41
AIG1
42
AKAP7
43
AKR1A1
44
AKT1
45
AKTIP
46
ALCAM
47
ALDH3A2
48
ALEX1
49
ALG5
50
ALOX15
51
ALPL
52
ALPP
53
ALPPL2
54
AMBP
55
AMD
56
AMFR
57
AMICA1
58
AMIGO1
59
AMIGo2
60
AMIGo3
61
AMOTL2
62
AMPH
63
ANK1
64
ANKH
65
ANPEP
66
ANTXR2
67
ANXA1
68
ANXA2
69
AOC3
70
APIg1
71
APIg2
72
AP1M1
73
AP1M2
74
AP1S1
75
AP1S2
76
AP1S3
77
AP2A1
78
AP2A2
79
AP2B1
80
AP2M1
81
AP2S1
82
AP3B1
83
AP4B1
84
AP4M1
85
AP4S1
86
APBB1IP
87
APH1A
88
APLP1
89
APLP2
90
APOE
91
APOM
92
APP
93
APR-3
94
AQP3
95
AQP4
96
AQP7
97
AQP8
98
AQP9
99
ARC
100
ARC1
101
ARF5
102
ARF6
103
ARFIP2
104
ARHGAP1
105
ARHGAP17
106
ARHGEF1
107
ARRB1
108
ARRB2
109
ARSA
110
ART3
111
ART4
112
ASAM
113
ASGR1
114
ASGR2
115
ATIg 16170
116
ATF4
117
ATP12A
118
ATP1A1
119
ATP1A2
120
ATP1A3
121
ATP1A4
122
ATP1B1
123
ATP1B2
124
ATP1B3
125
ATP2A2
126
ATP2A3
127
ATP2B4
128
ATP5G1
129
ATP6AP2
130
ATP6VOB
131
ATP6VOC
132
ATP6V1A
133
ATP6V1B1
134
ATP6V1E1
135
AUK1
136
AXIN1
137
AXL
138
AZGP1
139
B2M
140
B3GALT2
141
B3GALT3
142
B3GAT1
143
B3GAT3
144
B3GNT1
145
B3GNT3
146
B4GALT4
147
B7-DC
148
B7-H1
149
B7-H2
150
B7-H3
151
B7-H4
152
bA16L21.2.1
153
BACE1
154
BAIAP2
155
BASP1
156
BBP
157
BBS2
158
BCAM
159
BCAN
160
BCAP31
161
BCAR1
162
BCL10
163
BDKRB1
164
BEST1
165
BEST3
166
BFAR
167
BLCAP
168
BMPR1B
169
BMPR2
170
BNIP3
171
BNIP3L
172
BOC
173
BPI
174
BRI3
175
BSG
176
BST1
177
BST2
178
BTBD10
179
BTLA
180
BTN1A1
181
BTN2A1
182
BTN2A2
183
BTN2A3
184
BTN3A1
185
BTN3A2
186
BTN3A3
187
BTNL2
188
BTNL3
189
BTNL8
190
BTNL9
191
BZRP
192
C11orf90
193
C14or1100
194
C18orf1
195
C18orf55
196
C1orf27
197
C1QBP
198
C22orf29
199
C2orf63
200
C3HC4
201
C5AR1
202
C5orf15
203
C9
204
C9orf58
205
CA12
206
CA9
207
CABP1
208
CACNAIg
209
CACNG3
210
CACNG4
211
CACNG6
212
CADM1
213
CADM2
214
CADM3
215
CADM4
216
CADPS
217
CALCYON
218
CALM1
219
CALM2
220
CALM3
221
CALR
222
CALY
223
CAMKIg
224
CANX
225
CAP1
226
CAP2
227
CAPN1
228
CAPN2
229
CAPNS1
230
CAPNS2
231
CAPRIN1
232
CARD14
233
CARKD
234
CAV1
235
CAV2
236
CCBP2
237
CCDC8
238
CCKBR
239
CCL14
240
CCNB1IP1
241
CCR1
242
CCR2
243
CCR3
244
CCR4
245
CCR5
246
CCR6
247
CCR7
248
CCR8
249
CCR9
250
CD14
251
CD151
252
CDR160
253
CD163
254
CD163L1
255
CD164
256
CD177
257
CD2180
258
CD19
259
CD1A
260
CR1B
261
CD1C
262
CH1D
263
CD1E
264
CD2
265
CD200
266
CD200R1
267
CD207
268
CD209
269
CD22
270
CD226
271
CD24
272
CD244
273
CD247
274
CD248
275
CD28
276
CD300A
277
CD300C
278
CD300LB
279
CD300LD
280
CD300LE
281
CD300LF
282
CD300LG
283
CD302
284
CD33
285
CD34
286
CD36
287
CD37
288
CD38
289
CD3D
290
CD3E
291
CD3G
292
CD4
293
CD44
294
CD45
295
CD47
296
CD48
297
CD5
298
CD52
299
CD53
300
CD55
301
CD58
302
CD59
303
CD5L
304
CD6
305
CD63
306
CD68
307
CD69
308
CD7
309
CD72
310
CD74
311
CD79A
312
CD79B
313
CD80
314
CD281
315
CD82
316
CD83
317
CD84
318
CD86
319
CD8A
320
CD8B
321
CD9
322
CD90
323
CD93
324
CD96
325
CD97
326
CD99
327
CDC42
328
CDC42EP2
329
CDC42EP5
330
CDC42SE1
331
CDCP1
332
CDH1
333
CDH11
334
CDH12
335
CDH15
336
CDH16
337
CDH18
338
CDH19
339
CDH2
340
CDH23
341
CDH24
342
CDH3
343
CDH5
344
CDH6
345
CDH7
346
CDH8
347
CDH9
348
CDIPT
349
CDON
350
CDS1
351
CDSN
352
CEACAM1
353
CEACAM19
354
CEACAM21
355
CEACAM3
356
CEACAM4
357
CEACAM5
358
CEACAM6
359
CEACAM7
360
CEACAM8
361
CECR1
362
CENTA1
363
CENTA2
364
CENTD3
365
CERCAM
366
CHAF1B
367
CHIC2
368
CHL1
369
CHRM1
370
CHRM3
371
CHRNA1
372
CHRNA3
373
CHRNA5
374
CHRNA6
375
CHRNA7
376
CHRNB1
377
CHST10
378
CILP1
379
CISH
380
CKLFSF6
381
CLCA2
382
CLCN2
383
CLCN7
384
CLCNKA
385
CLCNKB
386
CLDN1
387
CLDN10
388
CLDN11
389
CLDN14
390
CLDN15
391
CLDN19
392
CLDN2
393
CLDN3
394
CLDN4
395
CLDN5
396
CLDN6
397
CLDN7
398
CLDN8
399
CLDN9
400
CLEC10A
401
CLEC12A
402
CLEC1A
403
CLEC2B
404
CLEC2D
405
CLEC4C
406
CLEC4M
407
CLEC9A
408
CLIC1
409
CLIC2
410
CLIC4
411
CLMN
412
CLN3
413
CLPTM1
414
CLSTN3
415
CLTA
416
CLTB
417
CLTC
418
CNIH
419
CNKSR1
420
CNN2
421
CNNM3
422.
CNPY2
423
CNTFR
424
CNTFR
425
CNTN1
426
CNTN2
427
CNTN4
428
CNTN6
429
COMT
430
COX10
431
COX4I1
432
COX6C
433
COX7A2L
434
CPE
435
CPEB1
436
CPM
437
CPR8
438
CR2
439
CRB3
440
CREG
441
CRIPT
442
CRK
443
CRLF1
444
CRTAC1
445
CRTAM
446
CSF1
447
CSF1R
448
CSF2RA
449
CSF2RB
450
CSF3R
451
CSK
452
CSNK2A1
453
CTGF
454
CTLA4
455
CTNNA1
456
CTNNA2
457
CTNNA3
458
CTNNAL1
459
CTNNB1
460
CTNND1
461
CTNS
462
CTSB
463
CUTL1
464
CUX1
465
CX3CL1
466
CX3CR1
467
CXADR
468
CXCL16
469
CXCR3
470
CXCR4
471
CXCR5
472
CXCR6
473
CXorf61
474
CYB561
475
CYB5R1
476
CYBB
477
CYFIP1
478
CYFIP2
479
CYP2J2
480
CYP39A1
481
CYSLTR1
482
DAB2
483
DAD1
484
DAG1
485
DARC
486
DCBLD2
487
DDR1
488
DEAF1
489
DEF6
490
DEGS1
491
DES
492
DGKA
493
DHCR7
494
DIAPH1
495
D103
496
DIRAS2
497
DIXDC1
498
DKFZp686024166
499
DKK1
500
DLG2
501
DLG5
502
DLGAP1
503
DNAJD1
504
DNM1
505
DNM2
506
DOC2A
507
Dok2
508
DPAGT1
509
DPEP1
510
DPP4
511
DRD2
512
DRD5
513
DTNA
514
DTNBP1
515
DUSP15
516
EB12
517
EB 13
518
ECEL1
519
ECRG4
520
EDAR
521
EDG1
522
EDNRB
523
EEF1A2
524
EFNA1
525
EFNA3
526
EFNA5
527
EFNB1
528
EFNB3
529
EHD2
530
EI24
531
EIF2B1
532
ELMO1
533
ELTD1
534
EMB
535
EMCN
536
EMP1
537
EMR2
538
ENAH
539
ENDOGL1
540
ENG
541
ENO1
542
ENO1P
543
ENO2
544
ENOX2
545
ENPEP
546
ENPP4
547
ENPP5
548
ENTPD1
549
ENTPD3
550
ENTPD8
551
EPB41
552
EPB41L2
553
EPB41L3
554
EPHA10
555
EPHA2
556
EPHA4
557
EPHA8
558
EPHB3
559
EPHB4
560
EPN1
561
ERBB2
562
ERBB3
563
ERMAP
564
ESAM
565
EVI2A
566
EVI2B
567
EVL
568
EXOC7
569
EXTL1
570
F2R
571
F2RL1
572
F3
573
FACT5
574
FADS2
575
FAF1
576
FAIM2
577
FAIM3
578
FAM118B
579
FAM127A
580
FAM20B
581
FAM57A
582
FAM62B
583
FBLIM1
584
FBXW7
585
FCAR
586
FCER1A
587
FCERIg
588
FCER2
589
FCG3A
590
FCGR1A
591
FCGR2A
592
FCGR2B
593
FCGR3A
594
FCGR3B
595
FCGRT
596
FCRL1
597
FCRL2
598
FCRL3
599
FCRL4
600
FCRL5
601
FCRLA
602
FERMT1
603
FEZ1
604
FFAR3
605
FGFBP1
606
FGFR1
607
FGFR1
608
FGFR2
609
FGFR4
610
FGRL1
611
FLOT1
612
FLOT2
613
FLRT1
614
FLRT3
615
FLT1
616
FLT3
617
FLT3LG
618
FLVCR1
619
FLVCR2
620
FNBP1
621
FOLH1
622
FOLR1
623
FPR1
624
FPR2
625
FRAS1
626
FRS2
627
FTH1
628
FURIN
629
FUT3
630
FUT9
631
FXYD1
632
FXYD2
633
FXYD3
634
FXYD5
635
FXYD6
636
FYN
637
FZD6
638
FZD7
639
G3BP1
640
GABARAPL1
641
GABARAPL2
642
GABBR1
643
GABRA1
644
GABRA5
645
GABRB3
646
GABRD
647
GABRG2
648
GAK
649
GAL3ST1
650
GAP43
651
GAPDH
652
GBA2
653
GBAS
654
GBP1
655
GBP2
656
GBP5
657
GCA
658
GDPD2
659
GFRA1
660
GFRA2
661
GFRA3
662
GI24
663
GJA4
664
GJA5
665
GJB1
666
GJB2
667
GJB3
668
GJB4
669
GJB5
670
GJB6
671
GLRA2
672
GLRB
673
GM2A
674
GNA11
675
GNA14
676
GNA15
677
GNAS
678
GNAT2
679
GNAZ
680
GNB1
681
GNB1L
682
GNB2
683
GNB2L1
684
GNB3
685
GNB4
686
GNB5
687
GNG10
688
GNG11
689
GNG12
690
GNG3
691
GNG5
692
GNG7
693
GNGT1
694
GNGT2
695
GOLGA5
696
GOLM1
697
GOPC
698
GOT2
699
GP1BA
700
GP2
701
GP6
702
GP9
703
GPA33
704
GPAA1
705
GPBAR1
706
GPC1
707
GPC2
708
GPC3
709
GPC4
710
GPC5
711
GPD2
712
GPER
713
GPLD1
714
GPNMB
715
GPR1
716
GPR109A
717
GPR109B
718
GPR114
719
GPR132
720
GPR137B
721
GPR146
722
GPR153
723
GPR157
724
GPR160
725
GPR161
726
GPR162
727
GPR17
728
GPR171
729
GPR173
730
GPR176
731
GPR18
732
GPR182
733
GPR21
734
GPR3
735
GPR32
736
GPR34
737
GPR37
738
GPR39
739
GPR4
740
GPR45
741
GPR52
742
GPR55
743
GPR56
744
GPR61
745
GPR63
746
GPR64
747
GPR65
748
GPR75
749
GPR77
750
GPR82
751
GPR83
752
GPR87
753
GPR97
754
GPRC5A
755
GPRC5C
756
GRASP
757
GRB10
758
GRIA2
759
GRIK2
760
GYPA
761
GYPB
762
GYPC
763
GZMA
764
GZMB
765
HAPLN1
766
HAPLN2
767
HAPLN3
768
HAS1
769
HAS3
770
HBEGF
771
HDAC11
772
HDLBP
773
HEPACAM
774
HEPACAM2
775
HEXB
776
HFE2
777
HHAT
778
HHIP
779
HHLA2
780
HIG1
781
HIGD1A
782
HIP1R
783
HLA-A
784
HLA-B
785
HLA-C
786
HLA-DMA
787
HLA-DMB
788
HLA-DOA
789
HLA-DOB
790
HLA-DPA1
791
HLA-DPB1
792
HLA-DQA1
793
HLA-DQB1
794
HLA-DQB2
795
HLA-DQB3
796
HLA-DRA
797
HLA-DRB1
798
HLA-DRB3
799
HLA-E
800
HLA-F
801
HLA-G
802
HMOX1
803
HMOX2
804
HNRNPM
805
HNT
806
HOMER1
807
HOMER2
808
HOMER3
809
HPN
810
HPS1
811
HRAS
812
HRH2
813
HSD11B1
814
HSD17B10
815
HSP90B1
816
HSPC154
817
HT017
818
HTGN29
819
HTR1D
820
HTR2A
821
HTR2B
822
HTR3A
823
HYAL2
824
I11RA
825
ICAM1
826
ICAM2
827
ICAM3
828
ICAM4
829
ICAM5
830
ICOS
831
IFITM3
832
IFNAR1
833
IFNAR2
834
IFNGR1
835
IFT140
836
IGDCC3
837
IGF1R
838
IGHA1
839
IGLL1
840
IGSF1
841
IGSF2
842
IGSF3
843
IGSF6
844
IGSF8
845
IGSF9
846
IL10RA
847
IL10RB
848
IL11RA
849
IL12RB1
850
IL13RA1
851
IL15
852
IL17RA
853
IL17RB
854
IL17RC
855
IL18R1
856
IL1R1
857
IL1R2
858
IL1RAP
859
IL1RAPL1
860
IL1RAPL2
861
IL1RL1
862
IL1RL2
863
IL27RA
864
IL2RA
865
IL2RB
866
IL2RG
867
IL3RA
868
IL5RA
869
IL6R
870
IL6RB
871
IL7R
872
IL8RA
873
IL8RB
874
IL9R
875
ILK
876
INSIG1
877
IRAK1
878
ISLR
879
ISLR2
880
ISY1
881
ITFG1
882
ITFG2
883
ITFG3
884
ITGA2B
885
ITGA3
886
ITGA5
887
ITGA7
888
ITGA9
889
ITGAE
890
ITGAM
891
ITGAX
892
ITGB21
893
ITGB2
894
ITGB3
895
ITGB5
896
ITGB6
897
ITGB7
898
ITGB8
899
ITGBL1
900
ITM2A
901
ITM2B
902
JAG1
903
JAM1
904
JAM2
905
JAM3
906
JM4
907
JMJD6
908
JPH3
909
JTB
910
JUB
911
JUP
912
KAZALD1
913
KCNA2
914
KCN D2
915
KCNE1
916
KCNE1L
917
KCNE3
918
KCNRG1
919
KCNG4
920
KCN H2
921
KCNIP1
922
KCNIP2
923
KCNIP3
924
KCNIP4
925
KCNJ11
926
KCNJ12
927
KCNJ14
928
KCNJ15
929
KCNJ8
930
KCNK1
931
KCNK6
932
KCNMB1
933
KCNMB2
934
KCNMB4
935
KCNN3
936
KCNN4
937
KCNQ2
938
KCNRG
939
KCNS2
940
KCNS3
941
KCTD10
942
KCTD110
943
KCTD12
944
KCTD15
945
KCTD17
946
KCTD20
947
KCTD5
948
KCTD6
949
KCTD9
950
KDELC1
951
KDELR2
952
KDR
953
KDSR
954
KEL
955
KIR2DL1
956
KIR2DL3
957
KIR2DL4
958
KIR2DS2
959
KIR2DS4
960
KIR3DL1
961
KIRREL
962
KIRREL2
963
KIRREL3
964
KISSIR
965
KIT
966
KITLG
967
KLRB1
968
KLRC1
969
KLRD1
970
KLRK1
971
KRAS
972
KRT19
973
KRT8
974
L1CAM
975
LAG3
976
LAIR1
977
LAIR2
978
LAMP1
979
LAMP2
980
LAPTM5
981
LAT
982
LAT2
983
LBR
984
LCK
985
LCP1
986
LDLRAP1
987
LEPR
988
LEPROT
989
LEPROTL1
990
LETM1
991
LETMD1
992
LFA3
993
LGALS3
994
LGALS4
995
LGR6
996
LILRA1
997
LILRA2
998
LILRA3
999
LILRA4
1000
LILRA5
1001
LILRB1
1002
LILRB2
1003
LILRB3
1004
LILRB4
1005
LILRB5
1006
LIMA1
1007
LIME1
1008
LIMS1
1009
LIMS2
1010
LIN7C
1011
LINGO1
1012
LINGO2
1013
LINGO4
1014
LMBRIL
1015
LOC100128783
1016
L0051233
1017
L00552891
1018
LOC727811
1019
LPAR1
1020
LPAR2
1021
LPAR4
1022
LPAR5
1023
LPHN1
1024
LPL
1025
LR8
1026
LRFN1
1027
LRFN2
1028
LRFN3
1029
LRFN4
1030
LRFN5
1031
LRIG1
1032
LRIG2
1033
LRIG3
1034
LRIT1
1035
LRIT3
1036
LRMP
1037
LRP10
1038
LRP12
1039
LRP3
1040
LRRC4
1041
LRRC4C
1042
LRRC5
1043
LRRC59
1044
LRRN1
1045
LRRN2
1046
LRRN3
1047
LRRN4
1048
LRRTM2
1049
LSAMP
1050
LSP1
1051
LSR
1052
LST1
1053
LTB
1054
LTB4R
1055
LY6D
1056
LY6G6F
1057
LY6H
1058
LY86
1059
LY9
1060
LY96
1061
LYNX1
1062
LYPD1
1063
LYVE1
1064
M6PR
1065
MADCAM1
1066
MAEA
1067
MAG
1068
MAGEA1
1069
MAGED1
1070
MAGEE1
1071
MAGEH1
1072
MAL
1073
MAL2
1074
MALL
1075
MAMC1
1076
MAOB
1077
MAP4K2
1078
MAP7
1079
MARCKS
1080
MARCKSL1
1081
MARK2
1082
MARVELD2
1083
MAST1
1084
MBP
1085
MC1R
1086
MC2R
1087
MCAM
1088
MCF2L
1089
MCHR1
1090
MCL1
1091
MCOLN1
1092
MDK
1093
MDS032
1094
MEGF10
1095
MERTK
1096
MEST
1097
MF12
1098
MFA3L
1099
MFAP3
1100
MGAT4B
1101
MGC31957
1102
MGEA6
1103
MICA
1104
MICB
1105
MIR16
1106
MLANA
1107
MMD
1108
MME
1109
MMP14
1110
MMP15
1111
MOG
1112
MPZ1
1113
MPP2
1114
MPP3
1115
MPP6
1116
MPV17
1117
MPZ
1118
MPZL1
1119
MPZL2
1120
MPZL3
1121
MR1
1122
MRAP
1123
MRAS
1124
MRC2
1125
MRGPRF
1126
MRGPRX2
1127
MRGPRX3
1128
MS4A1
1129
MSLN
1130
MSR1
1131
MTFR1
1132
MTUS1
1133
MUC1
1134
MUC18
1135
MUC20
1136
MUPCDH
1137
MUSK
1138
MXRA8
1139
MYCBP
1140
MYH9
1141
MYOP1C
1142
N2DL1
1143
N2DL2
1144
NAE1
1145
NCAM1
1146
NCAM2
1147
NCF4
1148
NCKAP1
1149
NCKAP1L
1150
NCR1
1151
NCR2
1152
NCR3
1153
NDRG1
1154
NDUFA3
1155
NDUFA4
1156
NDUFB1
1157
NDUFB6
1158
NDUFB8
1159
NECAP1
1160
NECAP2
1161
NEGR1
1162
NELF
1163
NELL2
1164
NEO1
1165
NEU1
1166
NF2
1167
NFAM1
1168
NFE2L3
1169
NINJ2
1170
NKD1
1171
NKD2
1172
NKG2C
1173
NKG2D
1174
NKG7
1175
NLE1
1176
NLGN1
1177
NLGN4Y
1178
NMUR1
1179
NMUR2
1180
NOSTRIN
1181
NOTCH2NL
1182
NOTCH4
1183
NOX4
1184
NOXA1
1185
NOXO1
1186
NPBWR2
1187
NPC1
1188
NPHP1
1189
NPHS2
1190
NPTN
1191
NPY1R
1192
NPY5R
1193
NRAS
1194
NRCAM
1195
NRG1
1196
NRN1
1197
NRP1
1198
NT5E
1199
NTM
1200
NTNG1
1201
NTNG2
1202
NTRK1
1203
NTRK2
1204
NTRK3
1205
NTT73
1206
NUMB
1207
NUP85
1208
OCLN
1209
OLR1
1210
OMG
1211
OPCML
1212
OPN3
1213
OPRL1
1214
OPRS1
1215
OR2L13
1216
OR51E1
1217
ORS1E2
1218
OR9Q1
1219
ORAI1
1220
ORMDL1
1221
OSMR
1222
OSTM1
1223
P24B
1224
P2RX4
1225
P2RX5
1226
P2RX6
1227
P2RX7
1228
P2RY10
1229
P2RY11
1230
P2RY12
1231
P2RY13
1232
P2RY2
1233
P2RY6
1234
P2RY8
1235
PACSIN3
1236
PAG
1237
PAG1
1238
PALM
1239
PAM
1240
PANX1
1241
PAPLN
1242
PARD3
1243
PARD3B
1244
PARD6A
1245
PARVA
1246
PARVB
1247
PARVG
1248
PCDH1
1249
PCDH12
1250
PCDH17
1251
PCDH20
1252
PCDHA4
1253
PCDHB10
1254
PCDHB13
1255
PCDHB15
1256
PCDHB16
1257
PCDHB2
1258
PCDHB3
1259
PCDHB4
1260
PCDHB5
1261
PCDHB8
1262
PCDHGA2
1263
PCDHGB7
1264
PCDHGC3
1265
PCDHGC4
1266
POLO
1267
PCSK1N
1268
PDCD1
1269
PDE6A
1270
PDGFRA
1271
PDGFRB
1272
PDPK1
1273
PDPN
1274
PDZD3
1275
PECAM1
1276
PERP
1277
PEX11B
1278
PEX3
1279
PGRMC1
1280
PGRMC2
1281
PHB
1282
PHCA
1283
PHKA2
1284
PHKB
1285
PI4K2A
1286
PICALM
1287
PICK1
1288
PIGF
1289
PIGH
1290
PIGR
1291
PIGR3
1292
PIGY
1293
PILRB
1294
PIM1
1295
PIP4K2B
1296
PIP5K1A
1297
PIPSK1C
1298
PIP5K3
1299
PITPNC1
1300
PKP3
1301
PLAUR
1302
PLD2
1303
PLEKHA1
1304
PLSCR1
1305
PLSCR3
1306
PMEPA1
1307
PMP22
1308
PNN
1309
PNPLA2
1310
PODXL2
1311
POU2F1
1312
PP1201
1313
PPAN
1314
PPAP2A
1315
PPAP2B
1316
PPAP2C
1317
PPFIBP1
1318
PPP1R16A
1319
PPP2CA
1320
PPT1
1321
PRKAR2A
1322
PRKCZ
1323
PRMT7
1324
PRNP
1325
PROCR
1326
PROM1
1327
PRRG2
1328
PRSS8
1329
PRTG
1330
PSCA
1331
PSCD1
1332
PSCD2
1333
PSCD3
1334
PSD3
1335
PSD4
1336
PSEN1
1337
PSEN2
1338
PSENEN
1339
PSKH1
1340
PSMG1
1341
PTDSS1
1342
PTGDR
1343
PTGER1
1344
PTGFR
1345
PTGFRN
1346
PTGIR
1347
PTGS2
1348
PTH2R
1349
PTHR1
1350
PTK2
1351
PTK2B
1352
PTK7
1353
PTN
1354
PTOV1
1355
PTP4A1
1356
PTP4A2
1357
PTP4A3
1358
PTPNS1
1359
PTPRA
1360
PTPRB
1361
PTPRC
1362
PTPRCAP
1363
PTPRD
1364
PTPRE
1365
PTPRF
1366
PTPRG
1367
PTPRH
1368
PTPRJ
1369
PTPRK
1370
PTPRN
1371
PTPRN2
1372
PTPRO
1373
PTPRR
1374
PTPRS
1375
PTPRT
1376
PTPRU
1377
PTRF
1378
PVR
1379
PVRL1
1380
PVRL2
1381
PVRL3
1382
PVRL4
1383
PXK
1384
PXMP3
1385
PXN
1386
RAB10
1387
RAB11A
1388
RAB13
1389
RAB14
1390
RAB18
1391
RAB1B
1392
RAB22A
1393
RAB23
1394
RAB25
1395
RAB26
1396
RAB2B
1397
RAB30
1398
RAB31
1399
RAB33A
1400
RAB35
1401
RAB38
1402
RAB39
1403
RAB39B
1404
RAB3A
1405
RAB3B
1406
RAB3C
1407
RAB3D
1408
RAB43
1409
RAB4B
1410
RAB5A
1411
RAB5B
1412
RAB5C
1413
RAB7L1
1414
RAB8B
1415
RAB9A
1416
RABAC1
1417
RAC1
1418
RAGE
1419
RALA
1420
RALB
1421
RAMP1
1422
RAMP2
1423
RAMP3
1424
RAP1A
1425
RAP1B
1426
RAP2B
1427
RAP2C
1428
RAPSN
1429
RASA3
1430
RASD1
1431
RASGRF1
1432
RASGRP3
1433
RASL10A
1434
RASL1OB
1435
rbr-2
1436
RCP9
1437
RELL2
1438
RELT
1439
REM2
1440
RFTN2
1441
RGMA
1442
RGR
1443
RGS1
1444
RGS11
1445
RGS13
1446
RGS19
1447
RHAG
1448
RHBG
1449
RHCE
1450
RHCG
1451
RHD
1452
RHEB
1453
RHOB
1454
RHOC
1455
RHOD
1456
RHOF
1457
RHOH
1458
RHOJ
1459
RHOQ
1460
RIMBP2
1461
RIMS3
1462
RIN1
1463
RNASE1
1464
RNASE6
1465
RNF130
1466
RNF139
1467
RNF5
1468
RNPEP
1469
ROBO1
1470
ROBO2
1471
ROBO3
1472
ROBO4
1473
ROM1
1474
ROR1
1475
ROR2
1476
RP2
1477
RPH3A
1478
RPL21
1479
RPLPO
1480
RPS10
1481
RPS6KB1
1482
RPSA
1483
RRAGC
1484
RRAS
1485
RRAS2
1486
RTN4R
1487
RTP1
1488
RTP2
1489
RUNX1T1
1490
S100A7
1491
S1PR1
1492
S1PR4
1493
S1PR5
1494
SC4MOL
1495
SC5DL
1496
SCAMP1
1497
SCAMP3
1498
SCAMP5
1499
SCARB2
1500
SCN1B
1501
SCN2B
1502
SCN3B
1503
SCNN1A
1504
SCNN1B
1505
SCNN1D
1506
SCRG1
1507
SCTR
1508
SDC1
1509
SDC2
1510
SDCBP
1511
SDCBP2
1512
SDFR1
1513
SDPR
1514
SEC11A
1515
SEC6Ig
1516
SECTM1
1517
SELE
1518
SELL
1519
SELP
1520
SELPLG
1521
SEMA3A
1522
SEMA3B
1523
SEMA3C
1524
SEMA3F
1525
SEMA4A
1526
SEMA4B
1527
SEMA4C
1528
SEMA4D
1529
SEMA4F
1530
SEMA4G
1531
SEMA5A
1532
SEMA6A
1533
SEMA6B
1534
SEMA7A
1535
SEPW1
1536
SERINC3
1537
SERP1
1538
SGCA
1539
SGCB
1540
SGCD
1541
SGMS1
1542
SH3BP4
1543
SH3KBP1
1544
SHC1
1545
SIGIRR
1546
SIGLEC1
1547
SIGLEC10
1548
SIGLEC11
1549
SIGLEC12
1550
SIGLEC5
1551
SIGLEC6
1552
SIGLEC7
1553
SIGLEC8
1554
SIGLEC9
1555
SILV
1556
SIRPA
1557
SIRPA1
1558
SIRPB2
1559
SIRPD
1560
SIRPG
1561
SIVA1
1562
SKAP2
1563
SLA2
1564
SLAMF1
1565
SLAMF5
1566
SLAMF6
1567
SLAMF7
1568
SLAMF8
1569
SLAMF9
1570
SLC11A1
1571
SLC11A2
1572
SLC12A1
1573
SLC12A4
1574
SLC12A7
1575
SLC14A1
1576
SLC16A14
1577
SLC16A4
1578
SLC16A5
1579
SLC16A6
1580
SLC17A5
1581
SLC17A7
1582
SLC18A3
1583
SLC19A1
1584
SLC1A2
1585
SLC1A3
1586
SLC1A4
1587
SLC1A5
1588
SLC1A6
1589
SLC20A1
1590
SLC20A2
1591
SLC22A11
1592
SLC22A12
1593
SLC22A18
1594
SLC22A2
1595
SLC22A4
1596
SLC22A5
1597
SLC22A6
1598
SLC22A7
1599
SLC22A8
1600
SLC23A1
1601
SLC23A2
1602
SLC25A11
1603
SLC25A12
1604
SLC25A13
1605
SLC25A17
1606
SLC25A3
1607
SLC25A4
1608
SLC25A5
1609
SLC26A2
1610
SLC26A6
1611
SLC29A1
1612
SLC29A2
1613
SLC2A2
1614
SLC2A3
1615
SLC2A4
1616
SLC2A5
1617
SLC2A6
1618
SLC2A8
1619
SLC2A9
1620
SLC30A5
1621
SLC30A9
1622
SLC31A1
1623
SLC31A2
1624
SLC33A1
1625
SLC34A1
1626
SLC35A1
1627
SLC35E3
1628
SLC38A1
1629
SLC38A2
1630
SLC38A3
1631
SLC38A5
1632
SLC39A1
1633
SLC39A4
1634
SLC39A5
1635
SLC39A6
1636
SLC40A1
1637
SLC41A2
1638
SLC41A3
1639
SLC43A1
1640
SLC44A1
1641
SLC46A1
1642
SLC46A2
1643
SLC47A1
1644
SLC4A1
1645
SLC4A4
1646
SLC5A6
1647
SLC6A13
1648
SLC6A15
1649
SLC6A18
1650
SLC6A6
1651
SLC6A8
1652
SLC7A1
1653
SLC7A10
1654
SLC7A11
1655
SLC7A3
1656
SLC7A5
1657
SLC7A6
1658
SLC7A7
1659
SLC7A8
1660
SLC7A9
1661
SLC9A3R1
1662
SLC9A3R2
1663
SLCO2A1
1664
SLIT1
1665
SMAD3
1666
SMAP1
1667
SMBP
1668
SMPD2
1669
SMPD3
1670
SNAP23
1671
SNAP25
1672
SNAP29
1673
SNN
1674
SNPH
1675
SNTB2
1676
SOD1
1677
SORBS3
1678
SPACA4
1679
SPC18
1680
SPCS1
1681
SPN
1682
SPRY2
1683
SQLE
1684
SRD5A1
1685
SREB3
1686
SRI
1687
SSFA2
1688
SSH1
1689
SSPN
1690
SSR1
1691
SSR2
1692
SSTR1
1693
SSTR2
1694
SSX2IP
1695
ST14
1696
ST3GAL5
1697
ST6GAL1
1698
ST6GALNAC6
1699
ST7
1700
STBD1
1701
STCH
1702
STEAP1
1703
STEAP4
1704
STIM1
1705
STOM
1706
STOML3
1707
STRA6
1708
STT3A
1709
STX12
1710
STX17
1711
STX1A
1712
STX1B
1713
STX3
1714
STX4
1715
STX6
1716
STX7
1717
STX8
1718
STXBP5
1719
STYK1
1720
SUCNR1
1721
SV2A
1722
SVOP
1723
SWAP70
1724
SYK
1725
SYMPK
1726
SYN2
1727
SYNGR1
1728
SYNGR2
1729
SYNGR3
1730
SYP
1731
SYPL1
1732
SYT1
1733
SYT11
1734
SYT12
1735
SYT15
1736
SYT5
1737
SYT6
1738
SYT9
1739
SYTL1
1740
SYTL2
1741
SYTL4
1742
TACSTD1
1743
TACSTD2
1744
TAOK3
1745
TAP2
1746
TAPBP
1747
TAPBPL
1748
TBL2
1749
TCIRG1
1750
TCP10
1751
TDGF1
1752
TDRKH
1753
TEGT
1754
TEX101
1755
TFG
1756
TFRC
1757
TGFA
1758
TGFB1I1
1759
TGFBR3
1760
TGM1
1761
TGM2
1762
TGOLN2
1763
THBD
1764
THEM4
1765
TIE1
1766
TIE2
1767
TIGIT
1768
TIMD1
1769
TIMD3
1770
TIMD4
1771
TJAP1
1772
TLR1
1773
TLR2
1774
TLR3
1775
TLR4
1776
TLR6
1777
TLR9
1778
TM4SF1
1779
TM4SF11
1780
TM4SF20
1781
TM4SF4
1782
TM7SF2
1783
TM7SF3
1784
TM9SF1
1785
TM9SF2
1786
TMBIM1
1787
TMED1
1788
TMED10
1789
TMED2
1790
TMED5
1791
TMEM106B
1792
TMEM11
1793
TMEM126B
1794
TMEM14A
1795
TMEM14C
1796
TMEM15
1797
TMEM150
1798
TMEM204
1799
TMEM25
1800
TMEM33
1801
TMEM46
1802
TMEM5
1803
TMEM50A
1804
TMEM5OB
1805
TMEM8
1806
TMEM81
1807
TMEM86A
1808
TMEM9
1809
TMEPAI
1810
TMIGD1
1811
TMIGD2
1812
TMPRSS2
1813
TNFAIPI
1814
TNFRSF10A
1815
TNFRSF10B
1816
TNFRSF10C
1817
TNFRSF11A
1818
TNFRSF12A
1819
TNFRSF13B
1820
TNFRSF14
1821
TNFRSF16
1822
TNFRSF17
1823
TNFRSF18
1824
TNFRSF19
1825
TNFRSF1A
1826
TNFRSF1B
1827
TNFRSF21
1828
TNFRSF25
1829
TNFRSF27
1830
TNFRSF3
1831
TNFRSF4
1832
TNFRSF5
1833
TNFRSF6
1834
TNFRSF7
1835
TNFRSF8
1836
TNFRSF9
1837
TNFSF10
1838
TNFSF 11
1839
TNFSF12
1840
TNFSF13
1841
TNFSF13B
1842
TNFSF14
1843
TNFSF15
1844
TNFSF18
1845
TNFSF4
1846
TNFSF5
1847
TNFSF6
1848
TNFSF7
1849
TNFSF8
1850
TNFSF9
1851
TNK2
1852
TNS3
1853
TNS4
1854
TOLLIP
1855
TOMM20
1856
TOMM22
1857
TPARL
1858
TPSB2
1859
TRA
1860
TRAF7
1861
TRAJ17
1862
TRAT1
1863
TRAV20
1864
TRDV2
1865
TREM1
1866
TREM2
1867
TREM4b
1868
TREML1
1869
TREML2
1870
TREML4
1871
TRIM13
1872
TRIM27
1873
TRIP10
1874
TRIP6
1875
TRO
1876
TRPV2
1877
TRPV5
1878
TRPV6
1879
TSHR
1880
TSPAN13
1881
TSPAN15
1882
TSPAN2
1883
TSPAN-2
1884
TSPAN31
1885
TSPAN4
1886
TSPAN7
1887
TSPAN8
1888
TSPAN9
1889
TSPO
1890
TTYH1
1891
TTYH2
1892
TUBB3
1893
TUBB4
1894
TULP3
1895
TWF2
1896
TYRO3
1897
TYROBP
1898
TYRP1
1899
UBE2B
1900
UBE2J1
1901
UBL3
1902
UFO
1903
ULBP2
1904
UMOD
1905
UNC5A
1906
UNC5B
1907
UNC5C
1908
UNC5CL
1909
USE1
1910
USH1C
1911
VAMP1
1912
VAMP2
1913
VAMP3
1914
VAMP5
1915
VAPA
1916
VAPB
1917
VASP
1918
VCAM1
1919
VCL
1920
VDAC1
1921
VDAC2
1922
VDAC3
1923
VEPH1
1924
VIP
1925
VIPR1
1926
VIPR2
1927
VN1R1
1928
VPRE3
1929
VPREB1
1930
VSIG1
1931
VSIG2
1932
VSIG4
1933
VSIG8
1934
VSTM1
1935
WDR5
1936
WFIKKN2

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Composición farmacéutica que comprende:
    5 (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos de
    SEQ ID NO: 5 en una cantidad eficaz para modular la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR, en la que la unión del anticuerpo a B7-H7CR agoniza la interacción entre B7-H7 definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y B7-H7CR, y potencia la proliferación de linfocitos T; y
    10 (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
  2. 2. Composición farmacéutica que comprende:
    (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos de
    15 SEQ ID NO: 5 en una cantidad eficaz para modular la interacción entre B7-H7 y B7-H7CR, en la que la
    unión del anticuerpo a B7-H7CR antagoniza la interacción entre B7-H7 definido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y B7-H7CR, e inhibe la proliferación de linfocitos T; y
    (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
    20
  3. 3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento de cáncer o una enfermedad infecciosa.
  4. 4. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 3, en la que se ponen en contacto células
    25 inmunitarias de un sujeto que expresan o se inducen para expresar B7-H7CR con dicha composición
    farmacéutica.
  5. 5. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 3, en la que dicho uso comprende poner en contacto dichas células inmunitarias del sujeto con dicha composición farmacéutica in vitro.
    30
  6. 6. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 3, en la que dicho uso comprende poner en contacto dichas células inmunitarias con dicha composición farmacéutica administrando dicha composición a un sujeto.
    35 7. Composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, en la que dicha
    composición farmacéutica trata un cáncer, y dicho cáncer es leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia crónica, linfoma, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de las cadenas pesadas, sarcoma de tejido óseo y conjuntivo, un tumor cerebral, cáncer de mama, cáncer suprarrenal, cáncer de tiroides, cáncer pancreático, cáncer hipofisario, cáncer
    40 ocular, cáncer vaginal, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, melanoma, cáncer vulvar,
    cáncer de cuello uterino, cáncer uterino, cáncer de ovarios, cáncer esofágico, sarcoma, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de hígado, cáncer de vesícula biliar, cáncer de pulmón, cáncer testicular, cáncer de próstata, cáncer de pene, cáncer bucal, cáncer basal, cáncer de glándulas salivales, cáncer de faringe, cáncer de piel, cáncer de riñón, tumor de Wilms, cáncer de vejiga,
    45 mixosarcoma, sarcoma osteogénico, endoteliosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, mesotelioma,
    sinovioma, hemangioblastoma, carcinoma epitelial, cistoadenocarcinoma, carcinoma broncogénico, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar o adenocarcinoma papilar.
    50 8. Composición farmacéutica para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 3-6, en la que dicha
    composición farmacéutica trata una enfermedad infecciosa, y dicha enfermedad infecciosa es:
    (A) una enfermedad viral provocada por: hepatitis tipo A, hepatitis tipo B, hepatitis tipo C, gripe, varicela, adenovirus, herpes simple tipo I (VHS-I), herpes simple tipo II (VHS-II), peste bovina, rinovirus, virus ECHO,
    55 rotavirus, virus respiratorio sincitial, virus del papiloma, papovavirus, citomegalovirus, equinovirus, arbovirus,
    hantavirus, virus de Coxsackie, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la rubéola, virus de la poliomielitis, viruela, virus de Epstein-Barr, virus de la inmunodeficiencia humana tipo I (VIH-I) o virus de la inmunodeficiencia humana tipo II (VIH-II);
    60 (B) una enfermedad bacteriana producida por: micobacterias, Rickettsia, Mycoplasma, Neisseria, S.
    pneumonia, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Bacillus tetani, Streptococcus, Staphylococcus, Mycobacterium, tosferina, Vibrio cholera, Pasteurella pestis, Corynebacterium diphtheriae, Chlamydia, S. aureus o Legionella; o
    65 (C) una enfermedad protozooaria o infección fúngica provocada por: Leishmania, Kokzidioa, Trypanosoma,
    Schistosoma o Plasmodia, Candida, neumonía por Pneumocystis carinii, Cryptococcus, coccidios,
    Aspergillus niger, Fusaría, Aspergillus fumigatus o Curvularia.
  7. 9. Composición farmacéutica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 3-8, en la que dicho sujeto es un ser humano.
  8. 10. Composición farmacéutica según la reivindicación 2, para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o una enfermedad inflamatoria.
    10
    15
    20
    25
    30
    35
  9. 11. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 10, en la que se ponen en contacto células inmunitarias que expresan o se inducen para expresar B7-H7CR con dicha composición farmacéutica.
  10. 12. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 10 o la reivindicación 11, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria es celiaquía (enfermedad celíaca), alopecia areata, espondilitis anquilosante, síndrome antifosfolípidos, enfermedad de Addison autoinmunitaria, enfermedades autoinmunitarias de la glándula suprarrenal, anemia hemolítica autoinmunitaria, hepatitis autoinmunitaria, ooforitis y orquitis autoinmunitaria, trombocitopenia autoinmunitaria, enfermedad de Bechet, pénfigo vesicular, miocardiopatía, esprué celíaco-dermatitis, síndrome de fatiga crónica y disfunción inmunitaria (CFIDS), polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, síndrome de Churg-Strauss, penfigoide cicatricial, síndrome CREST, enfermedad de crioaglutinina, enfermedad de Crohn, lupus discoide, crioglobulinemia mixta esencial, fibromialgia-fibromiositis, glomerulonefritis, enfermedad de Graves, Guillain-Barre, tiroiditis de Hashimoto, fibrosis pulmonar idiopática, púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), neuropatía por IgA, artritis juvenil, liquen plano, lupus eritematoso, enfermedad de Meniere, enfermedad de tejido conjuntivo mixto, esclerosis múltiple, diabetes mellitus tipo 1 o mediada inmunitariamente, miastenia grave, pénfigo vulgar, anemia perniciosa, poliarteritis nudosa, policondritis, síndromes poliglandulares, polimialgia reumática, polimiositis y dermatomiositis, agammaglobulinemia primaria, cirrosis biliar primaria, psoriasis, artritis psoriásica, fenómeno de Raynauld, síndrome de Reiter, artritis reumatoide, sarcoidosis, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome del hombre rígido, lupus eritematoso sistémico, lupus eritematoso, arteritis de Takayasu, arteritis temporal/arteritis de células gigantes, colitis ulcerosa, uveítis, vasculitis, vitiligo y granulomatosis de Wegener.
  11. 13. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 10 o la reivindicación 11, en la que dicha enfermedad inflamatoria es un trastorno alérgico.
  12. 14. Composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 10 o la reivindicación 11, en la que dicha enfermedad inflamatoria es una enfermedad de injerto contra huésped o un rechazo de trasplante de órgano.
ES10744821.9T 2009-08-13 2010-08-13 Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR Active ES2666152T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US23365009P 2009-08-13 2009-08-13
US233650P 2009-08-13
US28995109P 2009-12-23 2009-12-23
US289951P 2009-12-23
PCT/US2010/045479 WO2011020024A2 (en) 2009-08-13 2010-08-13 Methods of modulating immune function

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2666152T3 true ES2666152T3 (es) 2018-05-03

Family

ID=43297014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10744821.9T Active ES2666152T3 (es) 2009-08-13 2010-08-13 Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR

Country Status (7)

Country Link
US (3) US8840889B2 (es)
EP (2) EP2464661B1 (es)
JP (1) JP5883384B2 (es)
AU (2) AU2010282340B2 (es)
CA (1) CA2769822C (es)
ES (1) ES2666152T3 (es)
WO (1) WO2011020024A2 (es)

Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100266495A1 (en) * 2004-05-21 2010-10-21 Brigham Young University Anti-Cancer Activity of an Anti-Thymidine Kinase Monoclonal Antibody
US7520860B2 (en) 2005-04-13 2009-04-21 Marie G. Johnson Detection of coronary artery disease using an electronic stethoscope
WO2009032845A2 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Compugen, Ltd. Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof as a drug target for producing drugs and biologics
ES2666152T3 (es) * 2009-08-13 2018-05-03 The Johns Hopkins University Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
WO2011146313A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Pyrazolopyrimidine compounds for the treatment of cancer
WO2013001517A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Compugen Ltd. Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection
BR112014007788A2 (pt) 2011-10-03 2017-04-18 Univ North Carolina Chapel Hill compostos de pirrolopirimidina para tratamento do câncer
KR20140126357A (ko) 2012-02-01 2014-10-30 컴퓨젠 엘티디. C1orf32 항체 및 이의 암 치료를 위한 용도
US9428813B2 (en) 2012-03-26 2016-08-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health & Human Services DNA methylation analysis for the diagnosis, prognosis and treatment of adrenal neoplasms
CN104302627A (zh) 2012-05-22 2015-01-21 北卡罗来纳大学教堂山分校 用于治疗癌症的嘧啶化合物
TWI556194B (zh) * 2012-06-29 2016-11-01 希科母股份有限公司 對象檢出裝置、對象檢出方法及對象檢出用電腦程式
WO2014062774A1 (en) 2012-10-17 2014-04-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Pyrazolopyrimidine compounds for the treatment of cancer
US9771330B2 (en) 2012-11-27 2017-09-26 The University Of North Carolina At Chapel Hill Pyrimidine compounds for the treatment of cancer
MX2015008117A (es) * 2012-12-21 2016-03-31 Amplimmune Inc Anticuerpos anti-h7cr.
US20140205609A1 (en) * 2013-01-24 2014-07-24 Fred T. Valentine Methods for inducing systemic immune responses to cancer
WO2014133728A2 (en) 2013-03-01 2014-09-04 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Hhla2 as a novel inhibitor of human immune system and uses thereof
EP2986306A4 (en) 2013-04-18 2016-12-07 Armo Biosciences Inc METHOD FOR USE OF INTERLEUKIN-10 FOR THE TREATMENT OF ILLNESSES AND SUFFERING
BR112015029395A2 (pt) * 2013-05-24 2017-09-19 Medimmune Llc Anticorpos anti-b7-h5 e seus usos
EP3068425B1 (en) * 2013-11-11 2021-01-27 Armo Biosciences, Inc. Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US20150291606A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 The University Of North Carolina At Chapel Hill Mertk-specific pyrrolopyrimidine compounds
US10280208B2 (en) * 2014-04-30 2019-05-07 Albert Einstein College Of Medicine TMIGD2 and its derivatives as blockers or binders of cancer-expressed HHLA2 for immunotherapies
SG10201912986PA (en) 2014-05-28 2020-02-27 Agenus Inc Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
WO2015187359A1 (en) * 2014-06-04 2015-12-10 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for targeting a pathway
JP2018503373A (ja) * 2014-12-30 2018-02-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの予後診断及び治療のための方法及び組成物
MA41414A (fr) 2015-01-28 2017-12-05 Centre Nat Rech Scient Protéines de liaison agonistes d' icos
BR112017016681A2 (pt) * 2015-02-06 2018-04-10 Heat Biologics Inc vetor de coexpressão de vacina e moléculas coestimulatórias
TWI719970B (zh) * 2015-03-23 2021-03-01 美商永斯醫療股份有限公司 針對ｉｃｏｓ之抗體
KR102658190B1 (ko) * 2015-04-13 2024-04-17 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화된 sirpa-il15 녹인 마우스 및 이의 이용 방법
EP3283508B1 (en) * 2015-04-17 2021-03-17 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins with tunable affinities
ITUB20151014A1 (it) 2015-05-27 2016-11-27 Univ Degli Studi Del Piemonte Orientale Amedeo Avogadro Ligandi del recettore b7h nel trattamento di osteopenia e osteoporosi
MA44594B1 (fr) 2015-05-29 2020-09-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorps anti-ctla-4 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
EP3365372A1 (en) 2015-10-22 2018-08-29 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
IL299072A (en) 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them
US11547739B2 (en) * 2015-12-16 2023-01-10 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Peptides and methods related to ICOS signaling
US10709708B2 (en) 2016-03-17 2020-07-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of treating cancer with a combination of MER tyrosine kinase inhibitor and an epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitor
IL262365B2 (en) 2016-04-15 2024-11-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins ICOS ligand variants and uses thereof
EP4706777A2 (en) 2016-04-15 2026-03-11 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR102379464B1 (ko) 2016-06-20 2022-03-29 키맵 리미티드 항-pd-l1 항체
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
WO2018029474A2 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Kymab Limited Anti-icos antibodies
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20260030924A (ko) 2016-08-09 2026-03-06 키맵 리미티드 항-icos 항체
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
WO2018106862A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Agenus Inc. Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
CN106755372B (zh) * 2016-12-12 2020-03-31 青岛泱深生物医药有限公司 一种分子标志物在口腔鳞状细胞癌诊断和治疗中的应用
US11192933B2 (en) * 2017-02-27 2021-12-07 Shattuck Labs, Inc. VSIG8-based chimeric proteins
JP2020511144A (ja) 2017-03-16 2020-04-16 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｐｄ−ｌ２バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
GB201709808D0 (en) 2017-06-20 2017-08-02 Kymab Ltd Antibodies
WO2019005817A2 (en) * 2017-06-26 2019-01-03 Bio-Techne Corporation HYBRIDOMIC CLONES, MONOCLONAL ANTIBODIES DIRECTED AGAINST VSIG-4, AND METHODS OF MAKING AND USING SAME
EP3672990A1 (en) 2017-08-25 2020-07-01 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
KR102813968B1 (ko) 2017-10-10 2025-05-29 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Ctla-4 변이체 면역조절 단백질 및 이의 용도
SMT202600062T1 (it) * 2017-10-18 2026-03-09 Alpine Immune Sciences Inc Proteine immunomodulatrici del ligando di icos variante e composizioni e metodi correlati
EP3728314A1 (en) 2017-12-19 2020-10-28 Kymab Limited Bispecific antibody for icos and pd-l1
GB201721338D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Kymab Ltd Anti-icos Antibodies
SG11202006148UA (en) 2018-01-03 2020-07-29 Alpine Immune Sciences Inc Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
US20190216840A1 (en) * 2018-01-12 2019-07-18 Genome And Company Novel use of kirrel2 and kirrel2 inhibitor
JP2021514379A (ja) 2018-02-21 2021-06-10 ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｂ７−ｈ４抗体製剤
MA52416A (fr) 2018-03-02 2021-04-21 Five Prime Therapeutics Inc Anticorps b7-h4 et leurs procédés d'utilisation
KR20210007959A (ko) * 2018-04-06 2021-01-20 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. Hhla2 수용체로서의 kir3dl3, 항-hhla2 항체, 및 이들의 용도
CN108872588B (zh) * 2018-06-14 2021-05-28 华南农业大学 一种与种公猪繁殖性能密切相关的精子蛋白标记spaca4及其应用
US12065476B2 (en) 2018-06-15 2024-08-20 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3850009A1 (en) * 2018-08-21 2021-07-21 NGM Biopharmaceuticals, Inc. B7-h7-binding agents and methods of use thereof
US12331320B2 (en) 2018-10-10 2025-06-17 The Research Foundation For The State University Of New York Genome edited cancer cell vaccines
WO2020113141A2 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20210143868A (ko) * 2019-03-26 2021-11-29 포티 세븐, 인코포레이티드 암 치료용 다중특이성 제제
GB202007099D0 (en) 2020-05-14 2020-07-01 Kymab Ltd Tumour biomarkers for immunotherapy
US20220396623A1 (en) 2021-05-18 2022-12-15 Kymab Limited Uses of anti-icos antibodies
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
CN119040454B (zh) * 2024-09-27 2026-04-21 华南农业大学 Slc26a2基因作为肉鸡胫骨软骨发育不良标志物的应用

Family Cites Families (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4675187A (en) 1983-05-16 1987-06-23 Bristol-Myers Company BBM-1675, a new antibiotic complex
US6054561A (en) 1984-02-08 2000-04-25 Chiron Corporation Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens
IL71691A (en) 1984-04-27 1991-04-15 Yeda Res & Dev Production of interferon-ypsilon
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5116742A (en) 1986-12-03 1992-05-26 University Patents, Inc. RNA ribozyme restriction endoribonucleases and methods
US4987071A (en) 1986-12-03 1991-01-22 University Patents, Inc. RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
US5190929A (en) 1988-05-25 1993-03-02 Research Corporation Technologies, Inc. Cyclophosphamide analogs useful as anti-tumor agents
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5552391A (en) 1990-01-16 1996-09-03 La Jolla Pharmaceutical Company Chemically-defined non-polymeric valency platform molecules and conjugates thereof
US6641809B1 (en) * 1990-03-26 2003-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Method of regulating cellular processes mediated by B7 and CD28
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
DE69123241T2 (de) 1990-12-14 1997-04-17 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
DE69226871T3 (de) * 1991-06-27 2009-09-24 Bristol-Myers Squibb Co. CTL4A-Rezeptor, ihn enthaltenden Fusionsproteine und deren Verwendung
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US6162432A (en) 1991-10-07 2000-12-19 Biogen, Inc. Method of prophylaxis or treatment of antigen presenting cell driven skin conditions using inhibitors of the CD2/LFA-3 interaction
DE4135070C1 (es) 1991-10-24 1993-05-19 Institut Fuer Rundfunktechnik Gmbh, 8000 Muenchen, De
EP1291360A1 (en) 1991-12-13 2003-03-12 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
FR2686901A1 (fr) 1992-01-31 1993-08-06 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides antithrombotiques, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
TW402639B (en) 1992-12-03 2000-08-21 Transkaryotic Therapies Inc Protein production and protein delivery
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5532159A (en) 1994-04-01 1996-07-02 The Ohio State University Monoclonal antibody to canine placental oncofetal protein for detecting cancer
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
JPH10503371A (ja) 1994-07-29 1998-03-31 スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー 新規化合物
EP1323346B1 (en) 1995-01-17 2006-06-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US7411051B2 (en) * 1997-03-07 2008-08-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to HDPPA04 polypeptide
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
JP3868740B2 (ja) 1998-03-10 2007-01-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド 新規なポリペプチド及びそれをコードする核酸
AU4640600A (en) 1999-05-11 2000-11-21 Eli Lilly And Company Amyloid precursor protein protease and related nucleic acid compounds
EP1514933A1 (en) 1999-07-08 2005-03-16 Research Association for Biotechnology Secretory protein or membrane protein
EP1210428B1 (en) 1999-08-23 2015-03-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
US6429303B1 (en) 1999-09-03 2002-08-06 Curagen Corporation Nucleic acids encoding members of the human B lymphocyte activation antigen B7 family and methods of using the same
CA2389916A1 (en) 1999-09-03 2001-03-15 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
PT1218504E (pt) * 1999-09-21 2007-10-22 Genetics Inst Llc Novas moléculas gl50 e suas utilizações
EP2341075A1 (en) 2000-03-01 2011-07-06 MedImmune, LLC Antibodies binding to the f protein of a respiratory syncytial virus (rsv)
US6569681B1 (en) 2000-03-14 2003-05-27 Transkaryotic Therapies, Inc. Methods of improving homologous recombination
US6416999B1 (en) 2000-04-07 2002-07-09 Raven Biotechnologies, Inc. Human Müllerian duct-derived epithelial cells and methods of isolation and uses thereof
US6987024B1 (en) 2000-04-10 2006-01-17 Raven Biotechnologies, Inc. Human ovarian mesothelial cells and methods of isolation and uses thereof
US6436704B1 (en) 2000-04-10 2002-08-20 Raven Biotechnologies, Inc. Human pancreatic epithelial progenitor cells and methods of isolation and use thereof
EP2206720A1 (en) 2000-04-12 2010-07-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US20060154313A1 (en) 2000-04-13 2006-07-13 Immunex Corporation Human B7 polypeptide B7-H3A
JP3597140B2 (ja) * 2000-05-18 2004-12-02 日本たばこ産業株式会社 副刺激伝達分子ａｉｌｉｍに対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
AU2001264747A1 (en) 2000-05-22 2001-12-03 Idec Pharmaceuticals Corporation Identification of unique binding interactions between certain antibodies and thehuman b7.1 and b7.2 co-stimulatory antigens
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
EP1892251A3 (en) 2000-06-06 2008-12-31 Brystol-Myers Squibb Company B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation
CA2412377A1 (en) 2000-06-06 2001-12-13 Bristol-Myers Squibb Company B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation
AU7298201A (en) * 2000-06-23 2002-01-08 Biogen Inc Gp286 nucleic acids and polypeptides
CA2406649A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US6635750B1 (en) 2000-07-20 2003-10-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. B7-H2 nucleic acids, members of the B7 family
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
AU2001286205A1 (en) 2000-09-12 2002-03-26 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel dendritic cell wall membrane and use thereof
US20030134283A1 (en) 2000-10-03 2003-07-17 Peterson David P. Genes regulated in dendritic cell differentiation
EP1399187A4 (en) 2000-10-18 2005-09-21 Sloan Kettering Inst Cancer APPLICATIONS OF MONOCLONAL ANTIBODY 8H9
US6818216B2 (en) 2000-11-28 2004-11-16 Medimmune, Inc. Anti-RSV antibodies
US20040259247A1 (en) 2000-12-01 2004-12-23 Thomas Tuschl Rna interference mediating small rna molecules
TWI255272B (en) 2000-12-06 2006-05-21 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
US7651541B2 (en) 2001-01-10 2010-01-26 State Line Holdings, LLC Chemical change agent
WO2002098370A2 (en) 2001-03-02 2002-12-12 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing cd2 antagonists for the prevention and treatment of autoimmune disorders or inflammatory disorders
EP1401999A4 (en) 2001-05-25 2005-09-14 Amgen Inc PROTEIN-2 MOLECULES ASSOCIATED WITH B7 AND USE THEREOF
US20070015144A9 (en) 2001-05-25 2007-01-18 Genset, S.A. Human cDNAs and proteins and uses thereof
EP1390497A2 (en) 2001-05-25 2004-02-25 Genset Human cdnas and proteins and uses thereof
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
WO2003014293A2 (en) 2001-08-02 2003-02-20 Eli Lilly And Company Novel polypeptide analogs and fusions and their methods of use
CA2475356A1 (en) 2002-02-12 2003-08-21 Raven Biotechnologies, Inc. Human fetal bladder-derived epithelial cells
US20040162236A1 (en) 2002-04-01 2004-08-19 John Alsobrook Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
WO2004014292A2 (en) 2002-05-10 2004-02-19 Purdue Research Foundation EphA2 AGONISTIC MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
US20040028685A1 (en) 2002-05-10 2004-02-12 Kinch Michael S. EphA2 monoclonal antibodies and methods of use thereof
MXPA04012664A (es) 2002-06-19 2005-08-15 Raven Biotechnologies Inc Objetivo de superficie celular raag10 novedoso y una familia de anticuerpos que reconocen ese objetivo.
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
WO2004001004A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Johns Hopkins University School Of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
WO2004010935A2 (en) 2002-07-25 2004-02-05 Medimmune, Inc. Methods of treating and preventing rsv, hmpv, and piv using anti-rsv, anti-hmpv, and anti-piv antibodies
EP2305812A3 (en) 2002-11-14 2012-06-06 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
WO2005035575A2 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
AU2005302453A1 (en) 2004-10-29 2006-05-11 Medimmune, Llc Methods of preventing and treating RSV infections and related conditions
CA2606334A1 (en) * 2005-05-12 2006-11-12 Zymogenetics, Inc. Methods of using phhla2 to co-stimulate t-cells
EP2345412A1 (en) 2005-12-02 2011-07-20 The Johns Hopkins University Use of high-dose oxazaphosphorine drugs for treating immune disorders
US8021668B2 (en) 2005-12-12 2011-09-20 Immune Disease Institute, Inc. Integrin alpha L I domain mutants with increased binding affinity
EP2109455A2 (en) * 2006-12-27 2009-10-21 The Johns Hopkins University Compositions and methods for stimulating an immune response
WO2009089149A1 (en) 2008-01-03 2009-07-16 The Johns Hopkins University B7-h1 (cd274) antagonists induce apoptosis of tumor cells
ES2666152T3 (es) * 2009-08-13 2018-05-03 The Johns Hopkins University Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
MX2015008117A (es) * 2012-12-21 2016-03-31 Amplimmune Inc Anticuerpos anti-h7cr.

Also Published As

Publication number Publication date
US20120219559A1 (en) 2012-08-30
AU2016266078A1 (en) 2016-12-22
WO2011020024A3 (en) 2011-06-23
AU2010282340B2 (en) 2016-12-22
AU2010282340A1 (en) 2012-03-01
US20160002336A1 (en) 2016-01-07
EP3381937A2 (en) 2018-10-03
JP5883384B2 (ja) 2016-03-15
CA2769822C (en) 2019-02-19
JP2013501814A (ja) 2013-01-17
US20160024211A1 (en) 2016-01-28
US9676856B2 (en) 2017-06-13
WO2011020024A2 (en) 2011-02-17
EP2464661A2 (en) 2012-06-20
US8840889B2 (en) 2014-09-23
CA2769822A1 (en) 2011-02-17
EP2464661B1 (en) 2018-01-17
EP3381937A3 (en) 2018-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2666152T3 (es) Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
US11045546B1 (en) Methods of treating coronavirus infection
ES3042082T3 (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
KR101532797B1 (ko) 인터페론 알파 유도성 약력학적 마커
US10774388B2 (en) Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof
JP2023036929A (ja) 改変された免疫細胞およびその使用
JP2021521137A (ja) 腫瘍微小環境の特性を使用するキメラ受容体ｔ細胞治療
JP2020517302A (ja) Ｃｄ１９に対するヒト化抗原結合ドメイン及び使用方法
US11957695B2 (en) Methods and compositions targeting glucocorticoid signaling for modulating immune responses
JP7727326B2 (ja) 免疫細胞の機能を向上させる強化受容体
TW201713694A (zh) 抗ｏｘ４０抗體及其使用方法
JP2022166297A (ja) 最適化された多機能性ｔ細胞を含むキメラ受容体ｔ細胞を使用する治療
US20210100774A1 (en) Methods and compositions for enhancing anti-tumor immunity by targeting steroidogenesis
CA3177550A1 (en) Bispecific molecules for selectively modulating t cells
AU2023272108A1 (en) Methods for ablating myeloid derived suppressor cells using neo-201 antibody
JP2018526034A (ja) 腫瘍治療薬の配列決定により導かれる選択
EP4197545A1 (en) Pharmaceutical composition including cell expressing chimeric receptor
EP4642806A2 (en) Tcr-vbeta specific therapeutic molecules and uses thereof
HK1261775A1 (en) Methods of modulating immune function
HK1171459B (en) Methods of modulating immune function with anti-b7-h7cr antibodies
HK1171459A (en) Methods of modulating immune function with anti-b7-h7cr antibodies
HK40121113A (zh) 使用neo-201抗体消除髓系来源抑制细胞的方法
HK1237869A1 (en) Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof