ES2679245T3 - Vacuna contra la infección por beta-herpesvirus y uso de la misma - Google Patents

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Abstract

Un beta-herpesvirus humano para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en propagación y en donde el beta-herpesvirus es endoteliotrópico y /o tiene una superficie de virión de tipo salvaje, en donde el beta-herpesvirus es adecuado para o capaz de inducir una respuesta inmune, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico implicado en la envoltura primaria y/o secundaria, en donde al menos un producto génico implicado en la envoltura primaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL50 y UL53 y homólogos de cada uno de los mismos, y en donde al menos un producto génico implicado en la envoltura secundaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL94 y UL99 y homólogos de cada uno de los mismos.

Description

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DESCRIPCION
Vacuna contra la infección por beta-herpesvirus y uso de la misma
La presente invención se refiere a un beta-herpesvirus humano para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano, un ácido nucleico que codifica el beta-herpesvirus humano para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano, y una composición farmacéutica que comprende el beta-herpesvirus humano, la molécula de ácido nucleico y/o un vector que comprende el ácido nucleico , para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano.
El citomegalovirus humano (CMV), un miembro de la subfamilia de beta-herpesvirus es el herpesvirus médicamente más significativo que infecta a los humanos (Arvin et al. 2004 Clin. Infect. Dis. 39:233-239; Stratton et al. 1999 Vaccines for the 21st Century: A Tool for Decision making, National Academy Press). La mayor parte de la infección humana por CMV se adquiere sin enfermedad sintomática a través de la lactancia o el contacto entre la saliva y la orina en la primera infancia. Esto resulta en casi el 100% de prevalencia de HCMV en los países en desarrollo. En los países industrializados, alrededor del 30% de la población se infecta en la infancia y la prevalencia de la infección humana por CMV aumenta hasta el -50% al inicio de la edad adulta.
El CMV humano también puede transmitirse de la madre al feto durante el embarazo, lo que produce retraso mental y discapacidades del desarrollo en el niño infectado. El CMV humano es el agente causal más importante de las infecciones congénitas en los países industrializados con uno de cada 1000 recién nacidos afectados. Hasta la fecha, anualmente nacen entre 30.000 y 40.000 bebés con infección por citomegalovirus congénito en los Estados Unidos, lo que hace que el citomegalovirus sea por lejos la infección más común e importante de todas las infecciones congénitas. La probabilidad de infección congénita y el grado de la enfermedad en el recién nacido dependen del estado inmune de la madre. Si la infección materna primaria ocurre durante el embarazo, la tasa promedio de transmisión al feto es del 40%; aproximadamente el 65% de estos recién nacidos tendrá enfermedad de inclusión congénita (CID). Con la infección materna recurrente junto con la reactivación de la latencia, el riesgo de transmisión al feto es menor, oscilando solo entre 0,5 y 1,5% y la mayoría de estos bebés también serán asintomáticos. Aunque las infecciones naturales antes del embarazo causan un riesgo de reactivación asociada a la transmisión feto-materna, la inmunidad inducida es un factor de protección importante contra la CID.
La infección al nacer conlleva el riesgo de complicaciones graves; la infección primaria con HCMV generalmente es asintomática en individuos inmunológicamente competentes. Los principales grupos de riesgo comprenden receptores de trasplantes de órganos y pacientes con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en los que el CMV humano induce enfermedades inflamatorias potencialmente mortales con alta probabilidad. Además, después de la infección primaria a cualquier edad, el CMV establece una latencia de por vida, dejando a las personas infectadas en peligro de una reactivación posterior con inmunosupresión.
Aunque recientemente se ha realizado un enorme progreso en biología molecular e inmunología de citomegalovirus (Murphy et al. 2008 Curr. Top. Microbiol. Immunol. 325:1-19), hasta la fecha no hay vacuna comercialmente disponible y la quimioterapia de un solo objetivo es la única forma de controlar la infección aguda por HCMV (Mocarski et al. 2007, p. 2701-2772 in D. M. Knipe y P. M. Howley (eds.), Fields Virology, Lippincott Williams y Wilkins, a Wolters Kluwer Business, Philadelphia, PA.). Esta quimioterapia causa efectos secundarios graves y la aplicación a menudo se restringe a los casos más graves.
El desarrollo de vacunas contra la infección por CMV se revisa en Schleiss et al. (Schleiss et al. 2005 Herpes. 12:66-75; Schleiss et al. 2008 Curr. Top. Microbiol. Immunol. 325:361-382.).
Una estrategia para el desarrollo de una vacuna contra el CMV humano es el uso de HCMV atenuado vivo. Los CMV atenuados vivos se generan mediante múltiples pasajes de cultivo celular. De acuerdo con esto, en las vacunas vivas atenuadas, los virus administrados son infecciosos. Sin embargo, debido a la adaptación al cultivo celular, se produce una pérdida de genes funcionales por lo que los genes perdidos no son necesarios para la propagación del virus in vitro, pero son importantes para la infección del virus in vivo. Tal CMV atenuado vivo es, por lo tanto, menos patógeno para el huésped.
El primer candidato de vacuna contra el CMV humano que se probó en ensayos clínicos fue una vacuna viva atenuada. Esta era la cepa AD169 de HCMV que se atenuó mediante pasajes extensos de cultivo tisular en fibroblastos primarios humanos. Esta atenuación es el resultado de una adaptación selectiva del virus a las condiciones de la célula y el cultivo celular. Es probable que la pérdida de virulencia sea el resultado de afectar genes que no son relevantes para la situación in vitro pero que son importantes para el virus en su huésped natural. Por lo tanto, no es sorprendente que AD169, sometido a pases extensos en fibroblastos, haya perdido su capacidad de infectar células endoteliales y monocitos. La mayoría de los adultos seronegativos inoculados con la vacuna AD169 desarrollaron una respuesta inmune específica de HCMV. Se encontró que esta vacuna era segura y generalmente bien tolerada. Sin embargo, las reacciones en el sitio de inyección fueron frecuentes y varios pacientes desarrollaron síntomas sistémicos leves que consistieron en fiebre, dolor de cabeza, fatiga y mialgia.
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Como la cepa AD169 era demasiado agresiva, se desarrolló una preparación más atenuada de HCMV adaptado a laboratorio, la cepa Towne, de una manera similar a AD169 como una vacuna potencial atenuada viva. Esta cepa se sometió a un pasaje más extenso en cultivo celular e in vitro pareció ser también fenotípicamente similar a AD169.
El ensayo humano inicial mostró que, como se esperaba, la cepa Towne se toleró mucho mejor que AD169. Después de esta prueba inicial positiva, se estudió ampliamente la eficacia de la vacuna Towne. Estos estudios demostraron que la vacuna Towne es segura y bien tolerada en humanos e induce inmunidad humoral y celular específica para el CMV humano. Aunque la vacuna Towne parece proporcionar cierta protección contra la enfermedad por CMV humano en ciertos entornos, desafortunadamente, la vacunación es menos protectora que la inmunidad natural. Por lo tanto, es muy probable que la cepa de Towne esté demasiado atenuada, lo que la hace de una eficacia subóptima como vacuna.
En consecuencia, se han producido nuevas cepas CMV de humano con atenuación intermedia. Los virus quiméricos se han construido por recombinación genética entre la cepa Towne y la cepa Toledo, que es un tipo salvaje como el aislado clínico de CMV humano no atenuado mediante los pasajes de cultivo tisular.
De forma interesante, una característica esencial de la cepa Towne y la vacuna basada en ella es su incapacidad para infectar eficazmente las células endoteliales. Además, la vacunación con la cepa Towne no induce anticuerpos que sean capaces de neutralizar la infección endoteliotrópica por CMV, más específicamente, Towne no induce anticuerpos contra cepas de CMV humano endotelialotrófico (Cui et al., 2008 Vaccine 26: 5760-5766).
Para diferenciar entre la neutralización de virus endoteliotrópicos y no endoteliotrópicos, Gerna et al. (Gerna et al., 2008 J Gen Virol 89: 853-865) propuso la prueba de sueros humanos y la cuantificación de la potencia neutralizante contra aislados clínicos de CMV humano mediante propagación y prueba en células endoteliales (o epiteliales) y contra el mismo virus que infecta los fibroblastos humanos (Gerna et al., supra).
Es importante señalar que, además de la incapacidad de la cepa Towne para infectar células endoteliales y la incapacidad de la cepa Towne para inducir anticuerpos que sean capaces de neutralizar la infección por CMV humano endoteliotrópico, la cepa Towne carece de genes en comparación con aislados clínicos de CMV humano de tipo salvaje. Más específicamente, la cepa Towne carece de los genes UL133, UL134, UL135, UL136, UL137, UL138, UL139, UL140, UL141, UL142, UL143, UL144 y UL145 como también describen Cha et al. (Cha y col., 1996 J. Virol Vol. 70, No. 1, páginas 78-83).
Una estrategia adicional para desarrollar una vacuna contra HCMV se basa en la eliminación de un gen esencial de un genoma viral y se describió para muchos virus tales como adenovirus, alfa-herpesvirus y retrovirus. Los ensayos de inmunización que utilizaron virus de ciclo único o con defectos en la replicación como vacunas contra herpesvirus fueron, hasta la fecha, solo descritos para alfa-herpesvirus (Dudek et al., 2006 Virology 344: 230-239). La propagación de estos virus se ve facilitada por las células complementarias que expresan los genomas faltantes y apoyan el crecimiento de los virus defectuosos. La propagación de tales virus con la eliminación de un gen en las células complementarias da como resultado partículas de virus de vacuna que poseen una superficie de virión de tipo salvaje y un tropismo como el virus de tipo salvaje para las primeras células diana. Estos virus son infecciosos al vacunarse para las células diana de primera línea. En dichas células diana de primera línea, el gen eliminado o inactivado conduce a la abrogación de la replicación del virus o a la formación de partículas de virus con infectividad o tropismo disminuidos.
El diseño de una vacuna contra el alfa-herpesvirus por supresión de un gen esencial para la replicación del ADN o la abrogación de la producción de partículas infecciosas mediante la eliminación del complejo dirigido, a saber, la glicoproteína gB, se revisa en Dudek et al. (Dudek et al., Supra). Se describieron dos tipos de estos virus: los llamados virus "con defectos en la replicación" y los llamados virus de "ciclo único”.
Los alfa-herpesvirus con defectos en la replicación se generaron mediante la eliminación de genes esenciales para el ciclo de replicación del ADN. La deleción de genes esenciales para la replicación del ADN vírico, por ejemplo, la principal proteína de unión a ADN ICP8, se usó para generar respectivos virus de deleción. Dichos virus pueden propagarse in vitro usando células transformadas de forma estable que complementan el producto del gen faltante (Forrester y col., 1992 J Virol 66: 341-348). Varias publicaciones de Knipe y sus colegas demuestran que tales virus pueden inducir respuestas inmunes protectoras (véase Morrison y col., 1998 Virology 243: 178-187; Morrison y col., 1994 J Virol 68: 689-696, Morrison y col., 1996 Virology 220). : 402 - 413; Morrison y col., 1997 Virology 239: 315 - 326.).
Los virus de ciclo único carecen de glicoproteínas de complejos de direccionamiento, por ejemplo glicoproteína gB o complejos de fusión, por ejemplo gH/gL (Dudek et al., supra). Tales mutantes de virus se describen en el documento US 7.374.768 por Inglis et al. Dichos complejos se describen como importantes para la unión a la célula y/o la fusión del virus y la célula, como pasos de iniciación para la infección de esta célula. La eliminación de dichas glicoproteínas generará partículas de virus de vacuna de ciclo único que infectan células diana de primera línea. Es importante observar que dichas células en el huésped forman partículas de virus que no poseen una superficie de
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virión de tipo salvaje ya que carecen de la glicoproteína mencionada anteriormente. Estas partículas que carecen de la glicoproteína no son infecciosas o al menos poseen un tropismo o infectividad limitados para que las próximas células se infecten. Además, la deleción de dicha glicoproteína conduce a una expresión faltante de dicha glicoproteína que es preferiblemente efectiva como un antígeno en la célula infectada.
Debido a los costos de la sociedad causados por la infección humana por CMV en ambos grupos de morbilidad y la emergente situación epidemiológica, el Comité Nacional de Vacunas del Instituto de Medicina (EE.UU.) (Stratton et al. supra) ha enfatizado el desarrollo de una vacuna eficaz contra el CMVH como prioridad de más alto nivel.
Bubeck A et al. (Journal of Virology, Aug. 2004, vol 78(15), págs. 8026-8035) informan sobre un análisis mutacional completo de un gen de herpesvirus en el contexto del genoma viral que revela una región esencial para la replicación del virus.
Rupp B et al. (Journal of Virology, Jan. 2005, vol. 79(1), páginas 486-494) publica nuevamente sobre la replicación condicional de citomegalovirus in vitro e in vivo.
Snyder C Metal. (Plos One, vol 5 (3), enero de 2010, págs. E9681) informan que la presentación cruzada de una MCMC con defectos de propagación es suficiente para cebar la mayoría de células T CD8+ específicas de virus.
Dunn W (Proc. Natl. Acad. Sci., Volumen 100 (24), enero de 2003, págs. 14223-14228) informan sobre el perfil funcional de un genoma de citomegalovirus humano.
Yu D et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., Volumen 100 (21), octubre de 2003, páginas 12396-12401) informan sobre el mapeo funcional del citomegalovirus humano AD169 definido por análisis mutacional global.
El documento WO 2005/12545 A2 se refiere a la función del gen de citomegalovirus y a métodos para desarrollar antivirales, vacunas anti CMV y vectores basados en CMV.
Por lo tanto, el problema subyacente de la presente invención fue proporcionar una vacuna contra HCMV eficaz y un beta-herpesvirus contenido en dicha vacuna, respectivamente.
Este problema se resuelve mediante las reivindicaciones independientes adjuntas. Las realizaciones preferidas pueden tomarse de las reivindicaciones dependientes adjuntas.
Más específicamente, el problema subyacente de la presente invención se resuelve en un primer aspecto por un beta-herpesvirus humano para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano, en el que el beta-herpesvirus es deficiente en propagación y en el que el beta-herpesvirus es endoteliotrópico y/o tiene una superficie de virión de tipo salvaje, en el que el beta-herpesvirus es apropiado para o puede inducir una respuesta inmune, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico implicado en envoltura primaria y/o secundaria, en el que al menos un producto génico implicado en envoltura primaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL50 y UL53 y homólogos de cada uno de ellos, y el al menos un producto génico implicado en la envoltura secundaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL94 y UL99 y homólogos cada uno de los mismos.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es endoteliotrópico tiene una superficie de virión de tipo salvaje.
En una realización del primer aspecto, la respuesta inmune comprende anticuerpos neutralizantes contra beta-herpesvirus y células T CD4+ y CD8+ dirigidos contra epítopos de beta-herpesvirus.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es un citomegalovirus humano.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 23.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo, en donde al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo se selecciona del grupo que consiste en un producto génico que regula la presentación de MHC clase I y un producto génico que regula la respuesta de células NK, en donde el producto génico que regula la presentación de mHc clase I se selecciona del grupo que consiste en US6, US3, US2, UL18, US11, UL83 y UL40, y en donde el producto génico que regula la respuesta de células NK se selecciona del grupo que consiste en productos génicos codificados por genes UL40, UL16 y UL18.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus codifica un ácido nucleico heterólogo, en donde el ácido nucleico heterólogo es un ácido nucleico funcional, preferentemente seleccionado del grupo que comprende
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moléculas antisentido, ribozimas y ácidos nucleicos mediadores de interferencia de ARN, o en donde el ácido nucleico heterólogo es un ácido nucleico que codifica un péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína.
En una realización del primer aspecto, el péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína comprende al menos un antígeno.
El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un segundo aspecto mediante un ácido nucleico que codifica un beta-herpesvirus de acuerdo al primer aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo, para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano.
El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un tercer aspecto mediante una composición farmacéutica que comprende un beta-herpesvirus según lo definido en conexión con el primer aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo, un ácido nucleico de acuerdo a lo definido en conexión con el segundo aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo, y/o un vector que comprende dicho ácido nucleico, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, por lo que la composición farmacéutica es para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano.
En una realización del primer aspecto, la respuesta inmune comprende anticuerpos neutralizantes, en donde se previene que el beta-herpesvirus infecte células endoteliales y/o células epiteliales mediante los anticuerpos neutralizantes.
En una realización del primer aspecto, beta-herpesvirus que se previene que infecte células endoteliales y/o células epiteliales mediante los anticuerpos neutralizantes, es un patógeno, preferentemente un patógeno humano.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es un citomegalovirus.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es un citomegalovirus humano.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico está implicado en la envoltura primaria
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico está implicado en la envoltura secundaria.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:34.
En una realización preferente del primer aspecto, el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34, en donde el nucleótido 252 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 131243 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una cuarta secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a
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233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 131243 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 131243 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una cuarta secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una quinta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 y una sexta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 35.
En una realización preferente del primer aspecto, el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34, en donde el nucleótido 252 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 35, en donde el nucleótido 67 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:35 está covalentemente unido al nucleótido 131243 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20, y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a
58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos
representada por los nucleótidos 59623 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a
58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos
representada por los nucleótidos 59623 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32.
En una realización preferente del primer aspecto, el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32, en donde el nucleótido 179 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a
62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos
representada por los nucleótidos 63261 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a
62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos
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representada por los nucleótidos 63261 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33.
En una realización preferente del primer aspecto, el nucléotido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33, en donde el nucleótido 38 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33 está covalentemente unido al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 632161 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y una cuarta secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 63261 a 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una cuarta secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 189192 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una quinta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 y una sexta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33.
En una realización preferente del primer aspecto, el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32, en donde el nucleótido 179 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33, en donde el nucleótido 38 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:33 está covalentemente unido al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20, y en donde el nucleótido 181652 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 189192 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus comprende uno o más genes seleccionados del grupo que comprende UL133, UL134, UL135, UL136, UL137, UL138, UL139, UL140, UL141, UL142, UL143, UL144 y UL145
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo.
En una realización preferente del primer aspecto, al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo se selecciona del grupo que comprende productos génicos que regulan la presentación de MHC clase I y productos génicos que regulan la respuesta de células NK.
En una realización más preferente del primer aspecto, al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo es un producto génico que regula la presentación de MHC clase I.
En una realización más preferente alternativa del primer aspecto, el producto génico que regula la presentación de MHC clase I se selecciona del grupo que comprende US6, US3, US2, UL18, US11, UL83 y UL40.
En una realización del primer aspecto, al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo es un producto génico que regula la respuesta de células nK.
En una realización preferente del primer aspecto, el producto génico que regula la respuesta de células NK se
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selecciona del grupo que comprende productos génicos codificados por los genes UL40, UL16 y UL18.
En una realización del primer aspecto, el beta-herpesvirus codifica un ácido nucleico heterólogo.
En una realización preferente del primer aspecto, el ácido nucleico heterólogo es un ácido nucleico funcional, preferentemente seleccionado del grupo que comprende moléculas antisentido, ribozimas y ácidos nucleicos mediadores de interferencia de ARN.
En una realización del primer aspecto, el ácido nucleico es un ácido nucleico que codifica un péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína.
En una realización preferente del primer aspecto, el péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína comprende al menos un antígeno.
En una realización más preferente del primer aspecto, el antígeno es un antígeno seleccionado del grupo que comprende antígenos virales, antígenos bacterianos y antígenos de parásitos.
En una realización del primer aspecto, el humano padece una enfermedad o está en riesgo de padecer una enfermedad.
En una realización del primer aspecto, la vacunación es una vacunación contra una enfermedad.
En una realización del primer aspecto, la enfermedad es una enfermedad o afección que está asociada con la infección por beta-herpesvirus, preferentemente infección por citomegalovirus humano.
En una realización del primer aspecto, la enfermedad o afección se selecciona del grupo que comprende enfermedad de inclusión congénita.
En una realización del primer aspecto, el ser humano es una mujer embarazada o una mujer en edad reproductiva, preferiblemente una mujer embarazada o una mujer en edad reproductiva.
En una realización del primer aspecto, el tratamiento es o es adecuado o es capaz de prevenir la transferencia de un beta-herpesvirus, preferiblemente citomegalovirus humano, de la mujer a un feto y/o a un embrión portado o a ser portado en el futuro por la mujer.
En una realización del primer aspecto, el tratamiento es para o es adecuado para la generación de o capaz de generar una respuesta inmune en el cuerpo femenino o la respuesta inmune en el cuerpo femenino, por lo que preferiblemente dicha respuesta inmune confiere protección a un feto y/o a un embrión portado o a ser portado en el futuro por la mujer contra el beta-herpesvirus, preferiblemente el citomegalovirus humano, y/o una enfermedad o afección asociada con la infección por beta-herpesvirus, preferiblemente la infección por citomegalovirus humano.
También se divulga un vector que comprende el ácido nucleico de acuerdo al segundo aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 123688 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 y una tercera secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34.
En un ejemplo preferente, el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 y en donde el nucleótido 252 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos
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representada por los nucleótidos 131243 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 y en donde el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 131243 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 123668 a 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 131243 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 y una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 35.
En un ejemplo preferente, el nucleótido 122630 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34, en donde el nucleótido 252 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 34 está covalentemente unido al nucleótido 123668 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 130670 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 35 y en donde el nucleótido 67 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:35 está covalentemente unido al nucleótido 131243 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 y una tercera secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32.
En un ejemplo preferente, el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 y en donde el nucleótido 179 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 63261 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 63261 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 y una tercera secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33.
En un ejemplo preferente, el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33 y en donde el nucleótido 38 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33 está covalentemente unido al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 63261 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 y en donde el nucleótido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 y en donde el nucleótido 62129 de la
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secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está unido covalentemente al nucleótido 63261 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20.
En un ejemplo, el vector comprende una secuencia de nucleótidos, en donde la secuencia de nucleótidos comprende una primera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 1 a 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una segunda secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 59623 a 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una tercera secuencia de nucleótidos representada por los nucleótidos 63261 a 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, una cuarta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 y una quinta secuencia de nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33.
En un ejemplo preferente, el nucléotido 58442 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32, en donde el nucleótido 179 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 32 está covalentemente unido al nucleótido 59623 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20, en donde el nucleótido 62129 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 33 y en donde el nucleótido 38 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:33 está covalentemente unido al nucleótido 632161 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20.
También se divulga una célula huésped que comprende un ácido nucleico de acuerdo al segundo aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo o un vector según lo divulgado en la presente memoria, incluyendo cualquier ejemplo del mismo.
También se divulga una composición farmacéutica que comprende un beta-herpesvirus de acuerdo a el primer aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo, un ácido nucleico de acuerdo al segundo aspecto, incluyendo cualquier realización del mismo y/o un vector según lo divulgado en la presente memoria, incluyendo cualquier ejemplo del mismo, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico.
Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que la infección de células endoteliales de un organismo huésped tal como el hombre por el beta-herpesvirus y más específicamente el CMV de la invención dará como resultado la provocación de una respuesta inmune contra el CMV. Más específicamente, la respuesta inmune es una respuesta anti-CMV que comprende anticuerpos neutralizantes contra beta-herpesvirus y células T CD4+ y CD8+ dirigidos contra epítopos de beta-herpesvirus. Además, los presentes inventores han descubierto sorprendentemente que dicha respuesta inmune puede ser provocada por el beta-herpesvirus y más específicamente el citomegalovirus humano de la invención que es deficiente en propagación. Debe reconocerse que cualquier rasgo característico, realización de y cualquier declaración hecha en relación con beta-herpesvirus tal como el CMV murino, se aplica igualmente al CMV humano. Además, se reconocerá que el beta-herpesvirus de acuerdo con la presente invención presentará, en una realización preferente, las siguientes características observadas para CMV humano y murino, respectivamente: se producen infecciones múltiples con CMV de ratón y humano, en ratón y humano, respectivamente, (Boppana, S. B. et al., 2001. Intrauterine transmission of citomegalovirus to infants of women with preconceptional immunity. N. Engl. J Med 344:1366-1371; Cicin-Sain, L. et al., 2005. Frequent coinfection of cells explains functional in vivo complementation entre citomegalovirus variants in the multiply infected host. J Virol 79:9492-9502.); una respuesta inusualmente alta de anticuerpos neutralizantes contra el CMV es causada por la infección con CMV de ratón y humano, en ratón y humano, respectivamente (Farrell, H. E. y G. R. Shellam, 1990. Characterization of neutralizing monoclonal antibodies to murine citomegalovirus. J. Gen. Virol. 71 (Pt 3):655-664; Farrell, H. E. y G. R. Shellam, 1991. Protection against murine citomegalovirus infection by passive transfer of neutralizing y non-neutralizing monoclonal antibodies. J. Gen. Virol. 72 (Pt 1):149-156; Gerna, G., A. et al., 2008. Citomegalovirus humano serum neutralizing antibodies block virus infection of endothelial/epithelial cells, but not fibroblasts, early during primary infection. J. Gen. Virol. 89:853-865); inflado de memoria, que representa una respuesta de células T CD8 + muy característica, es causado por la infección con CMV de ratón y humano, en ratón y ser humano, respectivamente, y tiene una cinética casi idéntica (Karrer, U. et al., 2003. Memory inflation: continuous accumulation of antiviral CD8+ T cells over time. J. Immunol. 170:2022-2029; Karrer, U. et al. 2004. Expansion of protective CD8+ T-cell responses driven by recombinant citomegaloviruses. J. Virol. 78:2255-2264; Klenerman, P. y P. R. Dunbar, 2008. CMV y the art of memory maintenance. Immunity. 29:520-522; Komatsu, H. et al., 2003. Population analysis of antiviral T cell responses using MHC class I-péptido tetramers. Clin. Exp. Immunol. 134:9-12;). En conexión con la presente invención una persona experta en la técnica también reconocerá que un gen de CMV murino puede reemplazar a un homólogo de dicho gen de CMV murino en un CMV humano. (Schnee, M. et al., 2006. Common y specific properties of herpesvirus UL34/UL31 protein family members revealed by protein complementation assay. J Virol 80:11658-11666).
En una realización preferente de la invención según lo definido en las reivindicaciones el beta-herpesvirus de acuerdo a la presente invención es diferente de la cepa Towne según lo descrito por Liu et al. en la Patente Estadounidense 7.407.744, es decir, una cepa Towne donde los genes UL133, UL134, UL135, UL136, UL137, UL138, UL139, UL140, UL141, UL142, UL143, UL144 y UL145 se eliminan, preferiblemente en comparación con el tipo salvaje. Una persona experta en la técnica reconocerá además que la cepa Towne no es endoteliotrópica y tiene
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también un complejo gH/gL defectuoso.
En todavía otra realización preferida, el beta-herpesvirus de acuerdo a la presente invención es diferente de la cepa Toledo.
Deficiente en propagación como se usa en el presente documento, preferiblemente significa que el virus que es deficiente en propagación infecta una célula y no se libera partícula viral de la célula infectada, por la que el ADN viral se replica, las proteínas virales excepto las que se eliminan de acuerdo con la presente invención se expresan en la célula infectada, preferiblemente se expresan todas las glicoproteínas virales, más preferiblemente se expresan todas las glicoproteínas virales, que median la entrada del virus en una célula, por lo que, preferentemente, la célula es una célula endotelial y/o epitelial. El ensayo que se usa preferiblemente de acuerdo con la presente invención para determinar si un virus es deficiente en propagación, se describe aquí como el Ejemplo 1.
Una cepa de CMV de tipo salvaje como se usa preferiblemente en este documento significa que el virus es una cepa de beta-herpesvirus que se ha aislado de su huésped nativo y que ha mantenido su capacidad de infectar células endoteliales en cultivo de tejidos. Más específicamente, la cepa de CMV humano de tipo salvaje como se usa preferiblemente en la presente contiene, entre otros, los genes UL133, UL134, UL135, UL136, UL137, UL138, UL139, UL140, UL141, UL142, UL143, UL144 y UL145 (Cha et al. supra) y más específicamente la cepa de CMV de tipo salvaje como se usa preferiblemente en la presente es TB40/E y FIX- BAC (Sinzger et al. 1999 Journal of General Virology, 80, 2867-2877; Hahn et al. 2002 J Virol. 76(18): 9551-9555) y/o TB40E-BAC4-FRT (SEC ID NO:20) (Scrivano, L. et al., 2011. HCMV spread y cell tropism are determined by distinct virus populations. PLoS. Pathog. 7: e1001256) para CMV humano o sepa Smith para MCMV (Rawlinson et al. 1996 J Virol 70:8833-8849). En una realización preferida de la presente invención según lo definido en las reivindicaciones, la cepa de CMV de tipo salvaje tal como se usa preferiblemente en la presente memoria comprende una secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 23. La secuencia del pTB40E-BAC4-FRT, que es el plásmido BAC infeccioso molecular de acuerdo a TB40E-BAC4-FRT, tiene la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20.
Dicho pTB40E-BAC4-FRT consiste en secuencias virales codificadas por nt 1-181652 y por nt 189192-233681, así como secuencias BAC representadas por nt 181653-189191. Una persona experta en la técnica reconocerá que un plásmido BAC tal como pTB40E-BAC4-FRT que comprende un genoma de virus tal como el genoma de virus de TB40E-BAC4-FRT es circular en E. coli, por lo tanto el nucleótido 233681 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20 está covalentemente unido al nucleótido 1 de la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO: 20. Una persona experta en la técnica conocerá métodos para reconstituir un virus de un plásmido BAC que comprende el genoma viral de dicho virus, por ejemplo para reconstituir TB40E-BAC4-FRT de pTB40E-BAC4-FRT que comprende el genoma viral de TB40E-BAC4-FRT. Tales métodos comprenden, entre otros, la transfección de células, que comprende células complementarias.
Como se utiliza en la presente memoria, el término "deficiente en al menos un producto génico" preferiblemente significa que al menos un producto génico que es un material bioquímico tal como un ácido nucleico, ADN, ARN o un péptido, polipéptido o proteína, resultante de la expresión del gen no muestra al menos una de las funciones mostradas por dicho producto génico en la cepa de tipo salvaje. Preferiblemente, dicha al menos una de las funciones no mostradas es la función que es responsable de la propagación del beta-herpesvirus. También preferiblemente, no se muestran todas las funciones de dicho producto génico en la cepa de tipo salvaje. Esto puede ser el resultado de una deleción o mutación completa o parcial del gen que codifica dicho producto génico, de una deleción total o parcial de una mutación, del ácido nucleico que controla la expresión de la codificación genética de dicho producto génico, de un truncamiento de dicho producto génico, o de la inhibición del producto génico que de otro modo compite.
Como se usa en la presente memoria, el término "ADN se replica" preferiblemente significa que la replicación ocurre como replicación de un virus de tipo salvaje.
Como se utiliza en la presente memoria, una superficie de virión de tipo salvaje es preferiblemente una superficie mostrada por un beta-herpesvirus del tipo salvaje según lo definido en la presente memoria, más específicamente por una cepa de tipo salvaje de citomegalovirus según se define en a presente memoria. Las moléculas que se usan para definir la superficie mostrada por un beta-herpesvirus de tipo salvaje son glicoproteínas expresadas por dicho virus de tipo salvaje que median la entrada de dicho virus de tipo salvaje en una célula, preferiblemente una célula endotelial. En otras palabras, un virus de acuerdo con la invención que tiene una superficie de virión de tipo salvaje tiene una superficie de virión que, después de la infección de fibroblastos primarios, muestra o expresa las mismas glicoproteínas idénticas a, esencialmente idénticas o al menos no significativamente diferentes del virus de tipo salvaje en base al cual las deleciones fueron o pueden ser generadas para generar el virus de la presente invención. La determinación de la expresión de glicoproteínas es conocida por los expertos en la técnica y puede realizarse mediante una RT-PCR cuantitativa o espectrometría de masas (Britt y col., 1990. J Virol 64: 1079-1085) aunque otros métodos adecuados para tales propósito son conocidos por la persona experta en la técnica.
Para determinar si el beta-herpesvirus de la invención y particularmente el citomegalovirus humano de la invención es endoteliotrópico, preferiblemente, se usa el ensayo como se describe en el Ejemplo 2.
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A fin de determinar si la respuesta inmune provocada por el beta-herpesvirus de la invención y particularmente el citomegalovirus humano de la invención comprende al menos un anticuerpo neutralizante, y mediante el cual el anticuerpo neutralizante al menos impide que dichos virus infecten las células endoteliales y/o células epiteliales, puede usarse preferiblemente el ensayo descrito por Cui et al. (Cui et al., Supra).
Se reconocerá que la replicación del ADN vírico es abrogada en mutantes de virus con defectos de replicación y, por lo tanto, la expresión génica no explota el conjunto total de epítopos víricos. Especialmente las glicoproteínas y los componentes estructurales del virión no se expresan.
Para ilustrar mejor la presente invención, la biología del citomegalovirus humano se describirá a continuación.
El citomegalovirus humano es uno de los ocho herpesvirus humanos, que están agrupados en tres subfamilias (alfa (a), beta (p), gamma (y)) en base a propiedades biológicas y relaciones filogenéticas moleculares con otros herpesvirus. El citomegalovirus pertenece a la subfamilia beta-herpesvirus y posee el genoma más grande en las familias del herpesvirus: su genoma de 240 kbp es capaz de codificar más de 200 productos génicos potenciales (Murphy et al., Supra).
La partícula viral de citomegalovirus consiste en tres constituyentes principales, a saber, la cápside icosaédrica interna, que empaqueta el genoma de ADN lineal bicatenario; el tegumento, que es un trabajo de malla de proteínas menos organizado que rodea la cápside; y la envoltura más externa, que es una bicapa lipídica incrustada con complejos de glicoproteína viral.
La infección de una célula huésped por las partículas de virus está mediada por el contacto de las glicoproteínas virales con las estructuras moleculares de la superficie de la célula huésped. Los CMV pueden infectar muchos tipos de células diferentes y se sabe que el mecanismo de entrada de virus depende del tipo de célula específico y puede ocurrir a través de dos rutas principales: (a) las partículas de virus libres, es decir, no asociadas a células pueden encontrarse directamente con la célula huésped , o (b) el virus se transfiere de la célula infectada a una no infectada por un contacto célula-célula preformado, es decir, no inducido por virus, o contacto célula-célula inducido por virus, la denominada propagación célula a célula.
Después de la unión con alta afinidad a un conjunto de receptores celulares, las glicoproteínas virales inducen la fusión entre la envoltura viral y la membrana de la célula huésped. Después de la entrada de una partícula CMV en la célula huésped, el genoma del HCMV se dirige al núcleo donde establece la latencia que se caracteriza por un mantenimiento asintomático del genoma más o menos silencioso o induce una infección lítica que conduce a la propagación de nuevas partículas de CMV infecciosas.
El ciclo de replicación lítica del CMV se divide en tres fases de expresión génica regulada: inmediata temprana, temprana y tardía. Las características de las etapas de replicación son los grupos de genes específicos que se expresan con cinética de características. La transcripción inmediata temprana de genes ocurre al principio y conduce a la síntesis de reguladores principales virales que reprograman la célula huésped de acuerdo con las necesidades de producción de virus. Después de la síntesis des productos génicos inmediatos tempranos, se transcriben los genes tempranos. Los productos génicos tempranos incluyen proteínas de replicación de ADN y reguladores y enzimas que son importantes en el metabolismo de los nucleótidos. Finalmente, los genes tardíos se transcriben después del inicio de la replicación D, y los productos génicos de dichos genes tardíos son principalmente proteínas estructurales que están involucradas en el ensamblaje y salida de nuevas partículas de virus infecciosas.
Los productos génicos tardíos comprenden muchos antígenos virales, incluyendo las glicoproteínas virales, tales como gB y el complejo gH/gL, que son los objetivos principales de anticuerpos neutralizantes contra CMV (Schleiss et al., 2008 supra) y la principal proteína del tegumento, la fosfoproteína 65 (pp65) y la proteína temprano inmediato 1, que son los objetivos principales de la respuesta inmune celular al CMV.
Una etapa adicional en el ciclo de replicación lítica de CMV es la maduración de nuevas partículas de virus infecciosas que comprende etapas de la envoltura de la partícula de virus pre-madura con estructuras de membrana. Las etapas de envoltura comprenden una envoltura primaria, una des-envoltura y una envoltura secundaria.
La envoltura primaria en las membranas del núcleo es crucial para la salida de cápsidas de virus del núcleo. Las proteínas como parte del complejo de proteínas que también se conoce como complejo de egreso nuclear (NEC) que juegan un papel esencial en esta envoltura primaria, se identificaron recientemente como M50 y M53 de CMV de ratón (Lotzerich et 2006 J Virol 80:73-84.) o como UL50 y UL53 que son homólogos en el CMV humano.
Un gen homólogo c como se utiliza en la presente memoria es preferiblemente el gen de un herpesvirus al que se hace referencia como homólogo del gen de otro herpesvirus de acuerdo a Fossum et al. (Fossum et al. PLoS Pathog. septiembre de 2009; 5(9): e1000570) o Davison et al. (Davison et al. (2010) Vet Microbiol. 11 de febrero de 2010. Herpesvirus systematics; y Davison et al. 20 Compendium of Human Herpesvirus gene names; Reno).
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Además, los homólogos de UL50 se detallan en la base de datos EMBL-EBI InterPro (
http://www.ebi.ac.uk/interpro/) con número de acceso IPR007626 y los homólogos de UL53 se encuentran en forma similar con entrada IPR021152.
La envuelta secundaria se produce en las membranas del aparato de Golgi y/o el retículo endoplasmático. En conexión con dicha envoltura secundaria se identificó un complejo de proteína que también se denomina complejo de envoltura secundario (SEC), que comprende al menos el producto génico de M94 de CMV de ratón o su CMV humano homólogo, es decir, UL94. El gen UL94 de HCMV se conserva en todas las subfamilias de herpesvirus ((Chee et al. 1991 Transplant Proc 23:174-80; Chee et al. 1990 Curr Top Microbiol Immunol 154:125-169; Higgins et al. 1989 Comput. Appl. Bios 5:151-153) y se encontró solo en una etapa tardía de infección (Scott et al., 2002 Virus Genes 24: 39 - 48; Wing et al., 1991 Virol 70: 3339 - 3355). Recientemente se demostró que Ul94 es parte del virión (Kalejta et al. 2008 Microbiol Mol Biol R 72:249-65; Kattenhorn et al. 2004 J Virol 78:11187-11197; Wing et al. op.cit). UL94 es esencial en la infección de la cepa Towne de HCMV mostrada por mutagénesis mediada por transposón (Dunn y col., 2003 Proc Natl Acad Sci US 100: 14223-14228). En la presente memoria en la parte de ejemplos se describe que M94 es esencial en la infección por CMV de ratón.
Los homólogos de UL94 se detallan en la base de datos EMBL-EBI InterPro (
http://www.ebi.ac.uk/interpro/) con número de acceso IPR004286.
La alta carga viral de CMV en las glándulas salivales indica la transmisión de CMV por contacto directo a través de secreciones. Después de la replicación inicial en las primeras células diana en el sitio de entrada, el CMV se disemina a través del cuerpo por la sangre y la linfa. Lo más probable es que el virus sea absorbido por los glóbulos blancos que transportan el virus desde el sitio de infección primaria a casi cualquier órgano interno.
La interacción entre el CMV y su huésped, es decir, humanos o ratones, es muy compleja. Por un lado, la respuesta inmune del huésped está controlando la replicación del virus de manera muy eficiente. Por lo tanto, la mayoría de las infecciones por CMV son asintomáticas, lo que significa que la replicación del virus se controla antes de que el daño del tejido alcance un nivel patológico observable de inflamación local o sistémica. Por otro lado, el virus mismo está controlando la respuesta inmune dando como resultado la eliminación eficiente del virus del huésped. En casi todos los casos de competencia inmune, la infección natural por CMV termina con una situación en la que el virus es controlado por el sistema inmune sin ser totalmente eliminado del huésped (Reddehase y col., 2002 J Clin Virol 25 Suppl 2: S23-S36).
En los últimos años, se generó un impresionante cuerpo de conocimiento al estudiar los mecanismos moleculares de las funciones inmunosupresoras del CMV. Se reconoce que más de la mitad de los genes CMV codifican productos génicos que interfieren con diferentes mecanismos inmunes en todas las etapas del sistema inmune, los llamados genes inmuno evasivos. Hay evidencia de que ni la respuesta humoral ni inmune celular por sí sola son suficientes para controlar la infección por CMV; se necesita una acción concertada de ambos para mantener el equilibrio con la evasión inmune viral (Adler y col., 1995 J Infect D 171: 26-32; Reddehase y col., 1987 J Virol 61: 3102-3108).
Las enfermedades y afecciones de un sujeto que está infectado por el beta-herpesvirus y el CMV humano, respectivamente, son, entre otros, síntomas similares a la mononucleosis, esplenomegalia, neumonitis, ceguera, pérdida de la audición, enfermedad de inclusión congénita y daño orgánico y fallo orgánico, respectivamente, del órgano infectado por HCMV. Debe tenerse en cuenta que dichas enfermedades y afecciones son enfermedades y afecciones que pueden tratarse y/o prevenirse mediante el herpesvirus de la presente invención.
Típicamente, la infección por CMV humano se vuelve clínicamente aparente solo si el sistema inmune del huésped es vulnerable o suprimido. Hay varios grupos de riesgo importantes de importancia para la salud pública.
Una situación en la que el sistema inmunitario del huésped es vulnerable es cuando las mujeres no embarazadas en edad reproductiva o las mujeres embarazadas se infectan con el CMV humano. Si la infección por CMV humano se transmite de la madre al feto y embrión, respectivamente, durante el embarazo, debido al sistema inmune inmaduro del feto y embrión, respectivamente, puede desarrollarse una patología citotóxica directa de la infección por CMV humano, que se denomina enfermedad de inclusión congénita (CID). Los síntomas del CID están dominados por la causa de que el CMV humano infecta el sistema nervioso central que comprende microcefalia, atrofia cerebral, coriorretinitis y pérdida auditiva neurosensorial, que se combinan típicamente con las consecuencias de la infección de otros órganos viscerales, incluido el retraso del crecimiento intrauterino, osplenomegalia, anomalías hematológicas tales como trombocitopenia, y diversas manifestaciones cutáneas que aparecen como erupciones, es decir, petequias y púrpura. CID es el trastorno congénito infeccioso más frecuente en los países desarrollados. Además, la infección por CMV humano es la principal causa de pérdida de audición adquirida después de la infección viral.
Un segundo escenario de infección por CMV humano clínicamente significativa está formado por pacientes inmunocomprometidos o inmunodeprimidos. Este tipo de paciente es, por ejemplo, un paciente VIH positivo o un receptor de trasplante. En estos pacientes, las manifestaciones de la enfermedad varían según la calidad y el grado de disfunción inmune. La infección ocurre principalmente debido a la reactivación de la infección viral latente, sin
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embargo, también puede ser adquirida recientemente a través de la reactivación de un órgano o trasplante de médula ósea obtenido de un donante ya infectado en el caso de un receptor de trasplante.
En ausencia de suficiente control inmunológico, la infección por CMV conduce a enfermedades inflamatorias de diversos órganos. En relación con esto, las manifestaciones clínicas más frecuentes consisten en neumonitis, enfermedades gastrointestinales, hepatitis y retinitis. En los receptores de trasplante de médula ósea, la neumonitis por HCMV ocurre con tasas de mortalidad del 90%. Debe reconocerse que dichas enfermedades y afecciones son enfermedades y afecciones que pueden tratarse y/o prevenirse mediante el beta-herpesvirus de la presente invención.
En pacientes con SIDA, la infección por CMV humano oportunista es común y se produce con una frecuencia de casi el 100%, si falla la terapia antirretroviral o no es aplicable/disponible. Este es todavía el caso en países no industrializados donde todavía no está disponible una terapia efectiva. Antes de la disponibilidad de la terapia antirretroviral altamente activa para la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la retinitis por CMVH era la causa más común de ceguera en pacientes adultos con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), con una prevalencia general de más de 90 %.
De acuerdo a la invención según lo definido en las reivindicaciones el beta-herpesvirus es para su uso como una vacuna y/o un vector. En una realización adicional del mismo, dicho beta-herpesvirus codifica un ácido nucleico heterólogo. Preferiblemente, dicho ácido nucleico heterólogo codifica un antígeno, más preferiblemente un antígeno de un patógeno. Debido a esto, dicha vacuna y vector, respectivamente, es adecuado para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad causada por o asociada con dicho patógeno. Dichos patógenos preferiblemente comprenden virus y bacterias. En una realización, el antígeno es NP-NT60 de Influenza, por lo que el vector es útil en el tratamiento de la gripe. En una realización adicional, el antígeno es ORF Rv3407 de la cepa H37Rv de Mycobacterium tuberculosis, por lo que el vector es útil en el tratamiento de la tuberculosis.
En una realización de la invención según lo definido en las reivindicaciones, el beta-herpesvirus de la presente invención es un beta-herpesvirus recombinante.
En otra realización de la invención según lo definido en las reivindicaciones el beta-herpesvirus de la presente invención es un beta-herpesvirus humano, preferentemente un beta-herpesvirus humano recombinante.
En una realización preferente de la invención según lo definido en las reivindicaciones los nucleótidos individuales del beta-herpesvirus de la invención están unidos, preferiblemente unidos covalentemente, a través de enlaces fosfodiéster. Tales enlaces fosfodiéster son aquellos enlaces fosfodiéster que están contenidos en moléculas de ácido nucleico contenidas o producidas en material biológico tales como células. Se reconocerá que el beta-herpesvirus de la presente invención forma parte de una composición farmacéutica. Preferentemente, dicha composición farmacéutica contiene, una parte del beta-herpesvirus de la presente invención y/o un ácido nucleico que codifica el mismo, un vehículo aceptable para uso farmacéutico. Los ingredientes de tal composición farmacéutica y sus respectivos contenidos son conocidos por una persona experta en la técnica. Se reconocerá además que tal composición farmacéutica es para o es para uso en el tratamiento de las enfermedades y afecciones según lo divulgado en la presente memoria en conexión con el beta-herpesvirus de la presente invención.
Un experto en la técnica reconocerá que la evidencia experimental proporcionada en la parte de ejemplos de la presente solicitud se basa en CMV murino, pero que dicha evidencia puede transferirse directamente e inmediatamente a HCMV, de modo que la presente la invención es plausible para una persona experta en la técnica. La razón de esto es que los genomas de diferentes cepas de herpesvirus que incluyen CMV están correlacionados linealmente y el modo de acción del CMV humano en un huésped humano y de CMV de ratón en un huésped murino es esencialmente idéntico.
Las diversas SEC.ID. Nos., la naturaleza química de las moléculas de ácido nucleico, las proteínas y los péptidos de acuerdo con la presente invención, la secuencia real de los mismos y el número de referencia interno se resumen en la siguiente tabla. En la medida en que las secuencias particulares no se muestran en esta tabla, están contenidas en la lista de secuencias adjunta, que es parte de la presente especificación.

Claims (12)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    1. Un beta-herpesvirus humano para su uso en un método para la vacunación de un ser humano y/o para su uso en un método para el tratamiento de un ser humano, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en propagación y en donde el beta-herpesvirus es endoteliotrópico y /o tiene una superficie de virión de tipo salvaje, en donde el beta-herpesvirus es adecuado para o capaz de inducir una respuesta inmune, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico implicado en la envoltura primaria y/o secundaria, en donde al menos un producto génico implicado en la envoltura primaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL50 y UL53 y homólogos de cada uno de los mismos, y en donde al menos un producto génico implicado en la envoltura secundaria está codificado por un gen seleccionado del grupo que consiste en UL94 y UL99 y homólogos de cada uno de los mismos.
  2. 2. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el beta-herpesvirus es endoteliotrópico y tiene una superficie de virión de tipo salvaje.
  3. 3. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la respuesta inmune comprende anticuerpos neutralizantes contra beta-herpesvirus y CD4+ y CD8+ células T dirigidos contra epítopos de beta-herpesvirus.
  4. 4. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el beta-herpesvirus es un citomegalovirus humano.
  5. 5. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el beta-herpesvirus comprende la secuencia de nucleótidos de acuerdo a SEC ID NO:23.
  6. 6. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el beta-herpesvirus es deficiente en al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo, en donde al menos un producto génico codificado por un gen inmuno evasivo se selecciona del grupo que consiste en un producto génico que regula la presentación de MHC clase I y un producto génico que regula la respuesta de células NK, en donde el producto génico que regula la presentación de MHC clase I se selecciona del grupo que consiste en US6, US3, US2, UL18, US11, UL83 y UL40, y en donde el producto génico que regula la respuesta de células NK se selecciona del grupo que consiste en productos génicos codificados por genes UL40, UL16 y UL18.
  7. 7. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el beta-herpesvirus codifica un ácido nucleico heterólogo, en donde el ácido nucleico heterólogo es un ácido nucleico funcional, preferentemente seleccionado del grupo que comprende moléculas antisentido, ribozimas y ácidos nucleicos mediadores de interferencia de ARN, o en donde el ácido nucleico heterólogo es un ácido nucleico que codifica un péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína.
  8. 8. El beta-herpesvirus para su uso de acuerdo a la reivindicación 7, en donde el péptido, oligopéptido, polipéptido o proteína comprende al menos un antígeno.
  9. 9. Un ácido nucleico que codifica un beta-herpesvirus de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en un método según lo descrito en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
  10. 10. Una composición farmacéutica que comprende a beta-herpesvirus de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, un ácido nucleico de acuerdo a la reivindicación 9 y/o un vector que comprende el ácido nucleico de acuerdo a la reivindicación 9, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde la composición farmacéutica es para su uso en un método según lo descrito en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
    imagen1
    TRE \M94\
    pSM3fr-LM94
    IE,E ADN rep
    Al ‘ r '
    ..ensamblaje
    ie, e ■;
    ADN rep
    ... ■■
    fe ¿ensamblaje
    Figura 1
    E.coli
    línea celular complementaria
    primera célula diana
    sin progenie de
    V 1,5
    SM31r
    M94
    imagen2
    imagen3
    224
    específica de OVA ,/CD3+ [%] .
    s
    Ln
    tn
    ¡B 5
    V) 01
    £ 5
    imagen4
    cq'
    Q)
    -F^
    PFU/gramo de órgano [log10]
    imagen5
    imagen6
    imagen7
    Figura 6
    infección
    provocación
    supervivencia
    días
    BS.IFNcBR^
    wt
    O A M94
    2x105 PFUsgMCMV-u/f
    O PBS
    B6 A PBS
    25 -
    días posteriores a la provocación
    infección
    provocación
    supervivencia
    días
    28
    129JFNOBR
    vrfUV
  11. 2.5x10s TClDcn wt
    O AM94
  12. 2.5x106 TCIDc„ wt
    A AM94
    75
    50
    25-
    dias posteriores a la provocación
    imagen8
    Figura 8
    imagen9
    día 5 mayor magnifgicación de MCMV-A/W94 NIH/3T3 NT/M94-7 MHEC5-T
    imagen10
    imagen11
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