ES2682596T3

ES2682596T3 - Anticuerpos neutralizantes del citomegalovirus humano y uso de los mismos

Info

Publication number: ES2682596T3
Application number: ES15194590.4T
Authority: ES
Inventors: Antonio Lanzavecchia; Annalisa Macagno
Original assignee: Inst Res Biomedicine; Institute for Research in Biomedicine IRB
Current assignee: Inst Res Biomedicine; Institute for Research in Biomedicine IRB
Priority date: 2008-07-16
Filing date: 2009-07-15
Publication date: 2018-09-21
Anticipated expiration: 2029-07-15
Also published as: US8603480B2; US20160280769A1; BRPI0916443A2; US20170129940A1; US20170129939A1; US20210087257A1; CL2016001340A1; IL232862A0; JP2018139611A; US10889632B2; CN106924729A; US20150353627A1; MX338067B; IL238421A0; GT201100011CA; PL3009449T3; CA2730776A1; HK1220981A1; EP2352759B1; JP5807050B2

Abstract

Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une a un epítopo formado por las proteínas del citomegalovirus humano (hCMV) UL130 y UL131A, en el que el anticuerpo o fragmento neutraliza la infección de células epiteliales humanas por el hCMV y comprende regiones variables de la cadena pesada y ligera que tienen secuencias de aminoácidos al menos un 85 % idénticas a las SEQ ID NOs: 61 y 62, respectivamente.

Description

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DESCRIPCION

Anticuerpos neutralizantes del citomegalovirus humano y uso de los mismos Antecedentes

El citomegalovirus humano (hCMV) es un patogeno ampliamente distribuido que puede causar una patologfa grave en adultos inmunodeprimidos y tras la infeccion del feto y que se ha visto implicado en enfermedades cronicas como la aterosclerosis. El hCMV infecta multiples tipos de celulas, incluidos fibroblastos, celulas endoteliales, epiteliales y hematopoyeticas [1]. In vitro, las cepas atenuadas propagadas de hCMV, que se estan desarrollando como vacunas candidatas, han perdido el tropismo por las celulas endoteliales, al tiempo que conservan la capacidad de infectar fibroblastos [2]. Se cree que dos complejos de glicoprotefnas vfricas controlan el tropismo celular del hCMV. Parece ser necesario un complejo de glicoprotefnas como gH, gL y gO para la infeccion de fibroblastos, mientras que un complejo de gH, gL y protefnas codificadas por los genes UL131-UL128 esta implicado en la infeccion de celulas endoteliales, celulas epiteliales y celulas dendrfticas [2-8].

Las globulinas hiperinmunitarias ya se comercializan para la profilaxis de la enfermedad por hCMV asociada con el trasplante y los datos recientes indican que tienen un efecto terapeutico en mujeres embarazadas [9]. Este enfoque terapeutico esta limitado por la baja cantidad de anticuerpo neutralizante que puede transferirse y, por esta razon, serfa altamente deseable la disponibilidad de anticuerpos humanos (tales como anticuerpos monoclonales humanos) con alta capacidad neutralizante. Aunque algunos anticuerpos contra los productos de los genes gH, gB y UL128 y UL130 han demostrado in vitro actividades neutralizantes [7, 10, 11] y un anticuerpo contra gH se ha evaluado en ensayos clfnicos (que se interrumpieron debido a la falta de efectos terapeuticos), la potencia neutralizante de los anticuerpos aislados hasta el momento es modesta. La neutralizacion por estos anticuerpos se observo a concentraciones de anticuerpo que varfan de 0,5 a 20 pg/ml. Ademas, los metodos actuales generalmente miden la potencia neutralizante de anticuerpos anti-hCMV usando fibroblastos como celulas diana. Sin embargo, tambien se sabe que el hCMV causa patologfa al infectar otros tipos de celulas tales como celulas endoteliales, epiteliales y leucocitos. Los anticuerpos conocidos contra UL128 y UL130 muestran una potencia muy baja para neutralizar la infeccion de celulas endoteliales [7] y no parece haber ningun anticuerpo monoclonal disponible que sea capaz de neutralizar la infeccion de celulas diana no fibroblasticas con alta potencia.

Por lo tanto, existe la necesidad de anticuerpos que neutralicen la infeccion por hCMV, particularmente la infeccion por hCMV de celulas diana no fibroblasticas, con alta potencia, asf como la elucidacion de las dianas a las que se unen dichos anticuerpos.

Sumario de la invencion

La invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de nuevos anticuerpos que neutralizan la infeccion por hCMV con alta potencia, asf como nuevos epftopos a los que se unen los anticuerpos de la invencion. Por consiguiente, en un aspecto, la invencion comprende un anticuerpo y fragmentos de union al antfgeno del mismo que tiene una alta potencia en la neutralizacion del hCMV.

La invencion proporciona un anticuerpo aislado, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas del citomegalovirus humano (hCMV) UL130 y UL131A, en el que el anticuerpo o fragmento neutraliza la infeccion de las celulas epiteliales humanas por el hCMV y comprende regiones variables de la cadena pesada y ligera que tienen secuencias de aminoacidos al menos 85 % identicas a las SEQ ID NOs: 61 y 62, respectivamente.

En una realizacion, el anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la invencion comprende las secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada como se expone en las SEQ ID NOs: 49, 50 y 51, respectivamente, y las secuencias de CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera como se expone en las SEQ ID NOs: 52, 53 y 54, respectivamente.

El anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la invencion puede comprender secuencias de la region variable de la cadena pesada y ligera como se expone en las SEQ ID NOs: 61 y 62, respectivamente.

El anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la invencion puede ser un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monoclonal humano, un anticuerpo monocatenario, Fab, Fab', F(ab')2, Fv o scFv.

La invencion proporciona ademas:

- una molecula de acido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la invencion;

- un vector de expresion que comprende un acido nucleico de la invencion;

- una celula transformada con un vector de expresion de la invencion; y

- una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la invencion

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y un diluyente o vehfculo farmaceuticamente aceptable.

En una realizacion, la composicion farmaceutica comprende ademas un segundo anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que neutraliza la infeccion por hCMV.

La composicion farmaceutica de la composicion puede comprender ademas un segundo anticuerpo o fragmento de union al antfgeno del mismo que se une a una protefna gH del hCMV, una protefna gB del hCMV gB, una protefna UL128 del hCMV, un segundo epftopo formado por ambas protefnas UL130 y UL131A del hCMV, un epftopo formado por las protefnas UL128, UL130 y UL131A del hCMV, un epftopo formado por las protefnas gH, gL, UL128 y UL130 del hCMV o un epftopo formado por las protefnas gM y gN del hCMV.

La invencion proporciona ademas:

- un anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la invencion o una composicion farmaceutica de la invencion para su uso en un metodo de tratamiento o prevencion de la infeccion por hCMV;

- el uso anticuerpo o fragmento de union al antfgeno del mismo de la invencion en la fabricacion de un medicamento para tratar o prevenir la infeccion por hCMV; y

- un metodo para producir anticuerpos de la invencion, que comprende (i) cultivar una celula de la invencion y (ii) aislar los anticuerpos.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 muestra la tincion de celulas HEK293T transfectadas con los genes del hCMV UL128, UL130, UL131A, gH y gL, solos o en diferentes combinaciones, mediante anticuerpos monoclonales representativos (15D8, 2C12 y 8I21).

La Figura 2 muestra experimentos de competicion cruzada en los que las celulas HEK293T transfectadas con el gen del hCMV gH (A) o gB (B) se incubaron primero con un anticuerpo competidor no marcado seguido de tincion con un anticuerpo anti-gH o anti-gB biotinilado.

La Figura 3 muestra la tincion de celulas HEK293T que expresan el gen UL128 VR1814 de tipo silvestre o un gen UL128 pan-mutado por el anticuerpo monoclonal humano 15D8 y un anticuerpo monoclonal de raton anti- UL128 no competitivo. El gen UL128 pan-mutado contiene sustituciones de la secuencia de VR1814 de tipo silvestre con variantes conocidas descritas en otros aislados clfnicos y cepas de laboratorio del hCMV.

Descripcion detallada de la invencion

La invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de nuevos anticuerpos que neutralizan la infeccion por hCMV con alta potencia, asf como nuevos epftopos a los que se unen los anticuerpos de la invencion. Tales anticuerpos son deseables, ya que solo se requieren bajas concentraciones para neutralizar una cantidad dada de virus. Esto facilita niveles mas altos de proteccion a la vez que se administran cantidades mas bajas de anticuerpos. Por consiguiente, en un aspecto, la invencion comprende un anticuerpo neutralizante y fragmentos de union al antfgeno del mismo que tienen alta potencia para neutralizar la infeccion por hCMV. Tambien se divulgan anticuerpos monoclonales humanos y los clones de linfocitos B inmortalizados que secretan tales anticuerpos.

Como se usa en la presente memoria, el termino “fragmento” y las expresiones “fragmento de union al antfgeno” y “fragmento de anticuerpo” se usan indistintamente para referirse a cualquier fragmento de un anticuerpo que conserve la actividad de union al antfgeno de los anticuerpos. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, un anticuerpo monocatenario, Fab, Fab', F(ab')2, Fv o scFv.

Como se usa en la presente memoria, la expresion “alta potencia” se usa para referirse a un anticuerpo o un fragmento de union al antfgeno del mismo que neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, (es decir, la concentracion de anticuerpo requerida para la neutralizacion del 90 % de un aislado clfnico de hCMV es aproximadamente 2 pg/ml o menos, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1 o 1,05 pg/ml o menos). El anticuerpo, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede tener una CI90 de 1 pg/ml o menos (es decir 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,05, 0,01 pg/ml o menos). El anticuerpo, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede tener una CI90 de 0,16 pg/ml o menos (es decir 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002 pg/ml o menos). El anticuerpo puede neutralizar la infeccion por hCMV a una concentracion de 0,016 pg/ml o menos (es decir a 0,015, 0,013, 0,01, 0,008, 0,005, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos). Esto significa que se requieren solamente concentraciones muy bajas de anticuerpos para una neutralizacion del 90 % de un aislado clfnico de hCMV in vitro comparado con la concentracion requerida de los anticuerpos conocidos, por ejemplo, MSL-109, 8F9 o 3E3, para la neutralizacion del mismo tftulo de hCMV. La potencia se puede medir usando un ensayo de neutralizacion convencional como es conocido por un experto en la materia.

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La divulgacion proporciona un anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo monoclonal humano, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo de la protefna UL128 del hCMV y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas gH, gL, UL128 y UL130 del hCMV y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de

menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1,

0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas UL128, UL130 y UL131A del hCMV, y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas UL130 y UL131A del hCMV, y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo de la protefna gH del hCMV y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo de la protefna gB del hCMV y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

La divulgacion proporciona un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas gM y gN del hCMV y neutraliza la infeccion por hCMV con una CI90 de menos de aproximadamente 2 pg/ml, por ejemplo 1,9, 1,8, 1,75, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,25, 1,2, 1,15, 1,1, 1,05, 1, 0,95, 0,9, 0,85, 0,8, 0,75, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002, 0,001, 0,0005 pg/ml o menos.

Anticuerpos de la invencion

Los anticuerpos de la invencion se definen en las reivindicaciones. Los anticuerpos tienen una potencia particularmente alta para neutralizar el hCMV. Como se usa en la presente memoria, un “anticuerpo que neutraliza” es aquel que previene, reduce, retrasa o interfiere con la capacidad de un patogeno, por ejemplo, el hCMV, para iniciar y/o perpetuar una infeccion en un hospedador. Los anticuerpos de la invencion y los fragmentos de union al antfgeno de los mismos son capaces de neutralizar la infeccion por hCMV de diversos tipos de celulas. En una realizacion, un anticuerpo de acuerdo con la invencion neutraliza la infeccion de celulas epiteliales, celulas retinianas, celulas endoteliales, celulas mieloides y celulas dendrfticas. Las composiciones de la invencion tambien pueden neutralizar la infeccion por hCMV de los fibroblastos y celulas del estroma mesenquimales. Estos anticuerpos y composiciones pueden usarse como agentes profilacticos o terapeuticos con una formulacion apropiada, o como una herramienta de diagnostico, como se describe en la presente memoria.

Los anticuerpos de la invencion pueden ser anticuerpos monoclonales, anticuerpos humanos o anticuerpos recombinantes. En una realizacion, los anticuerpos de la invencion son anticuerpos monoclonales, por ejemplo, anticuerpos monoclonales humanos. La invencion tambien proporciona fragmentos de los anticuerpos de la invencion que conservan la actividad de union al antfgeno de los anticuerpos y neutralizan la infeccion por hCMV. Aunque la memoria descriptiva, incluidas las reivindicaciones, puede referirse en algunos sitios explfcitamente a fragmento(s) de anticuerpo, variante(s) y/o derivado(s) de anticuerpos, se entiende que el termino “anticuerpo” incluye todas las categorfas de anticuerpos, concretamente, fragmento(s) de anticuerpo, variante(s) y derivado(s) de anticuerpos.

Los anticuerpos de la divulgacion y los fragmentos de union al antfgeno de los mismos se pueden unir a una o mas protefnas del hCMV. Los anticuerpos se pueden unir a un epftopo formado por una sola protefna del hCMV o por

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una combinacion de dos o mas protefnas del hCMV. Ejemplos de protefnas del hCMV incluyen, pero no se limitan a, productos de genes vfricos UL55 (glicoprotefna B de la envuelta, “gB”), UL75 (glicoprotefna H de la envuelta, “gH”), UL100 (glicoprotefna M, “gM”), uL73 (glicoprotefna N, “gN”), UL115 (glicoprotefna L, “gL”), UL74 (glicoprotefna O, “gO”), UL128 (glicoprotefna UL128, “UL128”), UL130 (glicoprotefna UL130, “UL130”) o UL131A (glicoprotefna UL131A, “UL131A”). Los anticuerpos se pueden unir a un epftopo formado por una sola protefna del hCMV. Los anticuerpos se pueden unir a un epftopo formado por la combinacion de 2, 3 o mas protefnas del hCMV.

La invencion comprende un anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, que se une a un epftopo formado por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A. Como se usa en la presente memoria, un epftopo formado por UL130 y UL131A significa que el epftopo esta formado por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A.

En un ejemplo de realizacion, el anticuerpo, o fragmento de anticuerpo, de la invencion esta presente en una composicion con un segundo anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, que se une a un epftopo de la protefna UL128 del hCMV, o a un epftopo formado por las protefnas UL128, UL130 y UL131A del hCMV, o a un epftopo formado por las protefnas gH, gL, UL128 y UL130 del hCMV, o a un epftopo de la protefna gH del hCMV, o la protefna gB del hCMV o a un epftopo formado por las protefnas gM y gN del hCMV.

En una realizacion, el segundo anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo se une a un epftopo de UL128. En otra realizacion, el segundo anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, se une a un epftopo formado por UL128, UL130 y UL131A. Como se usa en la presente memoria, un epftopo formado por UL128, UL130 y UL131A significa que el epftopo puede estar formado por las tres protefnas (UL128, UL130 y UL131A) o puede estar formado por una o mas protefnas, siendo necesaria la presencia de la otra protefna(s) para la union del anticuerpo. En otra realizacion mas, el segundo anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, se une a un epftopo formado por gH, gL, UL128 y UL130. Como se usa en la presente memoria, un epftopo formado por gH, gL, UL128 y UL130 significa que el epftopo puede estar formado por las cuatro protefnas (gH, gL, UL128 y UL130) o puede estar formado por una o mas de las cuatro protefnas, siendo necesaria la presencia de la otra protefna(s) para la union del anticuerpo. En otra realizacion mas, el segundo anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo del mismo, se une a un epftopo formado por gM y gN. Como se usa en la presente memoria, un epftopo formado por gM y gN significa que el epftopo puede estar formado tanto por gM como por gN o puede estar formado por una de las dos protefnas, siendo necesaria la presencia de la otra protefna para la union del anticuerpo.

Se han determinado las secuencias de las cadenas pesadas y las cadenas ligeras de varios ejemplos de anticuerpos, comprendiendo cada una tres CDR en la cadena pesada y tres CDR en la cadena ligera. La posicion de los aminoacidos de las CDR se define de acuerdo con el sistema de numeracion IMGT [12, 13, 14]. Las secuencias de las CDR, las cadenas pesadas, las cadenas ligeras, asf como las secuencias de las moleculas de acido nucleico que codifican las CDR, las cadenas pesadas y las cadenas ligeras se divulgan en la lista de secuencias. La Tabla 1 proporciona las SEQ ID NOs de las secuencias de las seis CDR de los ejemplos de anticuerpos. Las Tablas 2 y 3 proporcionan las SEQ ID NOs de las secuencias de las cadenas pesada y ligera, respectivamente, de los anticuerpos de ejemplo y la Tabla 4 proporciona las SEQ ID NOs de las secuencias de las moleculas de acido nucleico que codifican las CDR, las cadenas pesadas y las cadenas ligeras de los anticuerpos.

Tabla 1

Anticuerpo: SEQ ID NOs de CDRH1, CDRH2, CDRH3 SEQ ID NOs de CDRL1, CDRL2, CDRL3

15D8: 188, 189, 190 191, 192, 193

15D8 variante 1: 188, 204, 205 191, 192, 193

15D8 variante 2: 188, 189, 210 191, 192, 193

4N10: 1, 2, 3 4, 5, 6

10F7: 17, 18, 19 20, 21, 22

10P3: 33, 34, 35 36, 37, 38

4I22: 49, 50, 51 52, 53, 54

8L13: 113, 114, 115 116, 117, 118

2C12: 65, 66, 67 68, 69, 70

8C15: 81, 82, 83 84, 85, 86

916: 97, 98, 99 100, 101, 102

7B13: 129, 130, 131 132, 133, 134

8J16: 145, 146, 147 148, 149, 150

8I21: 174, 175, 176 177, 149, 178

7I13: 113, 161, 162 163, 149, 164

7H3: 316, 317, 318 319, 320, 321

7H3 variante 1: 316, 317, 332 319, 320, 321

6B4: 336, 337, 338 339, 340, 341

5F1: 278, 279, 280 281, 282, 283

10C6: 352, 279, 280 281, 282, 283

4H9: 296, 297, 298 299, 300, 301

4H9 variante 1: 296, 312, 298 299, 300, 301

11B12: 232, 233, 234 235, 149, 236

13H11: 216, 217, 218 219, 220, 221

3G16: 246, 247, 248 249, 250, 251

2B11: 360, 279, 280 281, 282, 361

6L3: 262, 263, 264 265, 266, 267

Tabla 2

Anticuerpo: SEQ ID NOs de las cadenas pesadas

15D8: 200

15D8 variante 1: 208

15D8 variante 2: 212

4N10: 13

10F7: 29

10P3: 45

4122: 61

8L13: 125

2C12: 77

8C15: 93

9I6: 109

7B13: 141

8J16: 157

8121: 184

7113: 170

7H3: 328

7H3 variante 1: 334

6B4: 348

5F1: 290

5F1 variante 1: 294

10C6: 357

4H9: 308

4H9 variante 1: 314

11B12: 242

13H11: 228

3G16: 258

2B11: 367

6L3: 274

Tabla 3

Anticuerpo: SEQ ID NO de las cadenas ligeras

15D8: 201

15D8 variante 1: 201

15D8 variante 2: 213

4N10: 14

10F7: 30

10P3: 46

4I22: 62

8L13: 126

2C12: 78

8C15: 94

916: 110

7B13: 142

8J16: 158

8I21: 185

7I13: 171

7H3: 329

7H3 variante 1: 329

6B4: 349

5F1: 291

5F1 variante 1: 291

5

10

15

20

25

10C6: 291

4H9: 309

4H9 variante 1: 309

11B12: 243

13H11: 229

3G16: 259

2B11: 368

6L3: 275

Tabla 4

Anticuerpo: SEQ ID NO de los acidos nucleicos que codifican las CDR, cadenas pesadas, cadenas ligeras y variantes (CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, CDRL3 y variantes; cadenas pesadas y variantes; y cadenas ligeras y variantes)

15D8: 194-199 y 206, 207, 211; 202 y 209, 214; 203 y 215

4N10: 7-12; 15; 16

10F7: 23-28; 31; 32

10P3: 39-44; 47; 48

4I22: 55-60; 63; 64

8L13: 119-124; 127; 128

2C12: 71-76; 79; 80

8C15: 87-92; 95; 96

9I6: 103-108, 111, 112

7B13: 135-140; 143; 144

8J16: 151-156; 159; 160

8I21: 179-182,155,183; 186; 187

7I13: 165, 166, 167, 168, 155, 169; 172; 173

7H3: 322-327 y 333; 330 y 335; 331

6B4: 342-347; 350; 351

5F1: 284-289; 292 y 295; 293

10C6: 353-355, 287, 288, 356; 358; 359

4H9: 302-307 y 313; 310 y 315; 311

11B12: 237-240, 155, 241; 244; 245

13H11: 222-227; 230; 231

3G16: 252-257; 260; 261

2B11: 362-364; 287,365,366; 369; 370

6L3: 268-273; 276; 277

Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una o mas CDR de la cadena pesada o ligera de los anticuerpos de ejemplo de la divulgacion. Los ejemplos de anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 188-193, 204-205, 210, 1-6, 17-22, 33-38, 49-54, 113-118, 65-70, 81-86, 97-102, 129134, 145-150, 174-178, y 161-164.

En una realizacion, los anticuerpos de la invencion comprenden una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoacidos de una o mas de las SEQ ID NOs: 49-51. Por ejemplo, los anticuerpos de la invencion comprenden una cadena pesada que comprende la SEQ ID NO 49 de CHRH1, SeQ ID NO: 50 de CHRH2, y SEQ ID nO: 51 de CDRH3;

En otra realizacion mas, los anticuerpos de la invencion comprenden una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoacidos de una o mas de las SEQ ID NOs: 52-54. Por ejemplo, los anticuerpos de la invencion comprenden una cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 52 para CDRL1, la SEQ ID NO: 53 para CDRL2, y la SEQ ID NO: 54 para CDRL3. Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena pesada con una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 % identica a la de las SEQ iD NOs: 200, 208, 212, 13, 29, 45, 61, 125, 77, 93, 109, 141, 157, 184 o 170, y neutralizan la infeccion por hCMV. En una realizacion, el anticuerpo se une a un epftopo en la protefna UL128 del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 200, 208 o 212, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en las SEQ ID NO: 200, 208 o 212, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la invencion se une a un epftopo formado por las protefnas UL130 y UL131A del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 61, y

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neutraliza la infeccion por hCMV. En una realizacion, un anticuerpo de acuerdo con la invencion comprende una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 61, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo formado por las protefnas UL128, UL130 y UL131A del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 % o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 77, 93, 109, 141, 157 o 170 y neutraliza la infeccion por hCMV . Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en las SEQ ID NO: 77, 93, 109, 141, 157 o 170, y neutralizar la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo formado por las protefnas gH, gL, UL128 y UL130 del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, a al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 184, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 184, y neutraliza la infeccion por hCMV.

Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena ligera con una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 % identica a las de las SEQ ID NOs: 201, 213, 14, 30, 46, 62, 126, 78, 94, 110, 142, 158, 185 o 171, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo en la protefna UL128 del hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 201 o 213, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 201 o 213, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la invencion se une a un epftopo formado por las protefnas hCMV UL130 y UL131A y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 % o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 62, y neutraliza la infeccion por hCMV. En una realizacion, un anticuerpo de acuerdo con la invencion comprende una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 62, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo formado por las protefnas UL128, UL130 y UL131A del hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 78, 94, 110, 142, 158 o 171, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 78, 94, 110, 142, 158 o 171, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se une a un epftopo formado por las protefnas gH, gL, UL128 y UL130 del hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID N°: 185, y neutraliza la infeccion por CMVh. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 185, y neutralizar la infeccion por hCMV.

Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una o mas CDR de la cadena pesada o ligera de los anticuerpos a modo de ejemplo de la divulgacion. Los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una secuencia de aminoacidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NOs: 316-321, 332, 336-341, 278-283, 352, 296-301, 312, 232-236, 149, 216-221, 246-251, 360, 361 y 262-267, y neutraliza la infeccion por hCMV.

Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoacidos de una o mas de las SEQ ID NOs: 316-318, 332, 336-338, 278-280, 352, 296-298, 312, 232-234, 216218, 246-248, 360, 361 y 262-264. Por ejemplo, los anticuerpos de la divulgacion comprenden una cadena pesada que comprende SEQ ID NO: 316 para CDRH1, SEQ ID NO: 317 para CDRH2, SEQ ID NO: 318 para CDRH3; SEQ ID NO: 316 para CDRH1, SEQ ID NO: 317 para CDRH2, y SEQ ID NO: 332 para CDRH3; SEQ ID NO: 336 para CDRH1, SEQ ID NO: 337 para CDRH2, SEQ ID NO: 338 para CDRH3; SEQ ID NO: 278 para CDRH1, SEQ ID NO: 279 para CDRH2, SEQ ID NO: 280 para CDRH3; SEQ ID NO: 352 para CDRH1, SEQ ID NO: 279 para CDRH2, SEQ ID NO: 280 para CDRH3; SEQ ID NO: 296 para CDRH1, SEQ ID NO: 297 para CDRH2, SEQ ID NO: 298 para CDRH3; SEQ ID NO: 296 para CDRH1, SEQ ID NO: 312 para CDRH2, SEQ ID NO: 298 para CDRH3; SEQ ID NO: 232 para CDRH1, SEQ ID NO: 233 para CDRH2, SEQ ID NO: 234 para CDRH3; SEQ ID NO: 216 para CDRH1, SEQ ID NO: 217 para CDRH2, SEQ ID NO: 218 para CDRH3; SEQ ID NO: 246 para CDRH1, SEQ ID NO: 247 para CDRH2, SEQ ID NO: 248 para CDRH3; y SEQ ID NO: 360 para CDRH1, SEQ ID NO: 279 para CDRH2, SEQ ID

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NO: 280 para CDRH3; y SEQ ID NO: 262 para CDRH1, SEQ ID NO: 263 para CDRH2, SEQ ID NO: 264 para CDRH3.

Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoacidos de una o mas de las SEQ ID NOs: 319-321, 339-341, 281-283, 299-301, 149, 235, 236, 219-221, 249251, 265-267. Por ejemplo, los anticuerpos de la divulgacion comprenden una cadena ligera que comprende la SEQ ID NO: 319 para CDRL1, SEQ ID NO: 320 para CDRL2, SEQ ID NO: 321 para CDRL3; SEQ ID NO: 339 para CDRL1, SEQ ID NO: 340 para CDRL2, SEQ ID NO: 341 para CDRL3; SEQ ID NO: 281 para CDRL1, SEQ ID NO: 282 para CDRL2, SEQ ID NO: 283 para CDRL3; SEQ ID NO: 299 para CDRL1, SEQ ID NO: 300 para CDRL2, SEQ ID NO: 301 para CDRL3; SEQ ID NO: 235 para CDRL1, SEQ ID NO: 149 para CDRL2, SEQ ID NO: 236 para CDRL3; SEQ ID NO: 219 para CDRL1, SEQ ID NO: 220 para CDRL2, SEQ ID NO: 221 para CDRL3; SEQ ID NO: 249 para CDRL1, SEQ ID NO: 250 para CDRL2, SEQ ID NO: 251 para CDRL3; y SEQ ID NO: 281 para CDRL1, SEQ ID NO: 282 para CDRL2, SEQ ID NO: 361 para CDRL3; y SEQ ID NO: 265 para CDRL1, SEQ ID NO: 266 para CDRL2, SEQ ID NO: 267 para CDRL3.

Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena pesada con una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 % identica a la de las SEQ ID NOs: 328, 334, 348, 290, 294, 357, 308, 314, 242, 228, 258, 367 o 274, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo en la protefna gB del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 328, 334, 348, 290, 294, 308, 357, 314 o 367, y neutraliza la infeccion por hCMV Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en las sEq ID NO: 328, 334, 348, 290, 294, 308, 357, 314 o 367 y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion puede unirse a un epftopo en la protefna gH del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 242, 228 o 258, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 242, 228 o 258, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo formado por las protefnas gM y gN del hCMV y comprende una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 274, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 274, y neutraliza la infeccion por hCMV.

Los anticuerpos de la divulgacion pueden comprender una cadena ligera con una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 % identica a la de las SEQ ID NOs: 329, 349, 291, 309, 243, 229, 259, 368 o 275, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion puede unirse a un epftopo en la protefna gB del hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de las SEQ ID NO: 329, 349, 291, 309 o 368 y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en las SEQ ID NO: 329, 349, 291, 309 o 368, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion puede unirse a un epftopo en la protefna gH de hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 243, 229 o 259, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en las SEQ ID NO: 243, 229 o 259, y neutraliza la infeccion por hCMV.

El anticuerpo de la divulgacion se puede unir a un epftopo formado por las protefnas gM y gN del hCMV y comprende una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoacidos que es al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos un 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 275, y neutraliza la infeccion por hCMV. Un anticuerpo de acuerdo con la divulgacion puede comprender una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEQ ID NO: 275, y neutraliza la infeccion por hCMV.

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El anticuerpo de la invencion no es MSL-109, 8F9, 3E3 o R551A. El anticuerpo de la invencion no es 1F11, 2F4, 5A2 o 6G4, divulgados en las solicitudes de los Estados Unidos numeros 11/969.104 y 12/174.568.

Ejemplos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4122, 8L13, 2C12, 8C15, 916, 7B13, 8J16, 8121, 7113, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 2B11, 11B12, 13H11, 3G16 y 6L3. Un ejemplo de anticuerpo de la invencion es 4122.

Las variantes de 15D8 que neutralizan la infeccion por hCMV consisten en una variante de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SeQ ID NO: 208 (“variante 1 de 15D8”) y la SEQ ID NO: 212 (“variante 2 de 15D8”) y una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 213 (variante 2 de 15D8). Las secuencias de acido nucleico que codifican las variantes de la cadena pesada se indican en la SEQ ID NO: 209 (variante 1 de 15D8) y en la SeQ ID NO: 214 (variante 2 de 15D8). El acido nucleico que codifica la cadena ligera variante se indica en la SEQ ID NO: 215 (variante 2 de 15D8). Por lo tanto, se divulgan anticuerpos que comprenden las cadenas pesadas variantes de 15D8 (SEQ ID NOs: 208, 212) y la cadena ligera variante (SeQ ID NO: 213) que neutralizan la infeccion por hCMV.

Como se usa en la presente memoria, el termino “15D8” se utiliza para referirse a cualquiera y/o todas las variantes de 15D8 que neutralizan la infeccion por hCMV, por ejemplo, aquellas con las cadenas pesadas que corresponden a las SEQ iD NOs: 208 y 212 y con las cadenas ligeras que corresponden a la SEQ ID nO: 213.

Una variante de 7H3 que neutraliza la infeccion por hCMV consiste en una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 334 (“variante 1 de 7H3”). La secuencia de acido nucleico que codifica la cadena pesada variante se indica en la SEQ ID NO: 335. Por lo tanto, se divulgan los anticuerpos que comprenden la cadena pesada variante de 7H3 (SEQ ID NO: 334) que neutralizan la infeccion por hCMV.

Como se usa en la presente memoria, el termino “7H3” se usa para referirse a cualquiera y/o todas las variantes de 7H3 que neutralizan la infeccion por hCMV, por ejemplo, aquellas con las cadenas pesadas que corresponden a la SEQ ID NO: 334.

Una variante de 5F1 que neutraliza la infeccion por hCMV consiste en una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 294 (“variante 1 de 5F1”). La secuencia de acido nucleico que codifica la cadena pesada variante se indica en la SEQ ID NO: 295. Por lo tanto, se divulgan los anticuerpos que comprenden la cadena pesada variante de 5F1 (SEQ ID NO: 294) que neutralizan la infeccion por hCMV.

Como se usa en la presente memoria, el termino “5F1” se usa para referirse a cualquiera y/o todas las variantes de 5F1 que neutralizan la infeccion por hCMV, por ejemplo, aquellas con las cadenas pesadas que corresponden a la SEQ ID NO: 294.

Una variante de 4H9 que neutraliza la infeccion por hCMV consiste en una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoacidos indicada en la SEQ ID NO: 314 (“variante 1 de 4H9”). La secuencia de acido nucleico que codifica la cadena pesada variante se indica en la SEQ ID NO: 315. Por lo tanto, se divulgan los anticuerpos que comprenden la cadena pesada variante de 4H9 (SEQ ID NO: 314), que neutralizan la infeccion por hCMV.

Como se usa en la presente divulgacion, el termino “4H9” se usa para referirse a cualquiera y/o a todas las variantes de 4H9 que neutralizan la infeccion por hCMV, por ejemplo, aquellas con las cadenas pesadas que corresponden a la SEQ ID NO: 314.

Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 15D8 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR de la variante 1 del anticuerpo 15D8 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR de la variante 2 del anticuerpo 15D8 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 8121 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano.

Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 4N10 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 10F7 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del

anticuerpo 10P3 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un

anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del

anticuerpo 4122 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un

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anticuerpo 8L13 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano.

Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antigeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 2C12 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 8C15 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del

anticuerpo 916 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un

anticuerpo 7B13 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un

anticuerpo 8J16 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, comprende todas las CDR del anticuerpo 7113 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano.

Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 7H3 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR de la variante 1 del anticuerpo 7H3 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo puede comprender todas las CDR del anticuerpo 6B4 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion o fragmento de union al antfgeno del mismo puede comprender todas las CDR del anticuerpo 5F1 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 10C6 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 4H9 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR de la variante 1 del anticuerpo 4H9 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 2B11 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano.

Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 11B12 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 13H11 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 3G16 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano. Un anticuerpo de la divulgacion, o fragmento de union al antfgeno del mismo, puede comprender todas las CDR del anticuerpo 6L3 como se indica en la Tabla 1, y neutraliza la infeccion por hCMV en un hospedador humano.

La divulgacion comprende ademas un anticuerpo, o fragmento del mismo, que se une a un epftopo capaz de unirse a un anticuerpo de la invencion, o un anticuerpo que compite con un anticuerpo de la invencion.

Los anticuerpos de la divulgacion tambien incluyen moleculas de anticuerpos hfbridos que comprenden una o mas CDR de un anticuerpo de la invencion y una o mas CDR de otro anticuerpo para el mismo epftopo. En una realizacion, dichos anticuerpos hforidos comprenden tres CDR de un anticuerpo de la invencion y tres CDR de otro anticuerpo para el mismo epftopo. Ejemplos de anticuerpos hfbridos comprenden i) las tres CDR de la cadena ligera de un anticuerpo de la invencion y las tres CDR de la cadena pesada de otro anticuerpo para el mismo epftopo, o ii) las tres CDR de la cadena pesada de un anticuerpo de la divulgacion y las tres CDR de la cadena ligera de otro anticuerpo para el mismo epftopo.

En otro aspecto, la invencion tambien incluye secuencias de acido nucleico que codifican las cadenas ligeras y pesadas y las CDR de los anticuerpos de la presente invencion. Las secuencias de acido nucleico de acuerdo con la divulgacion incluyen secuencias de acido nucleico que tienen al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 98 %, o al menos 99 % de identidad con el acido nucleico que codifica una cadena pesada o ligera de un anticuerpo de la invencion. Una secuencia de acido nucleico de la divulgacion puede tener la secuencia de un acido nucleico que codifica una CDR de cadena pesada o ligera de un anticuerpo de la invencion. Por ejemplo, se divulga una secuencia de acido nucleico de acuerdo con la invencion comprende las secuencias de acido nucleico de las SEQ ID NOs: 55-60, 63 y 64. Una secuencia de acido nucleico que comprende una secuencia que es al menos 80 %, al menos 85 %, al menos 90 %, al menos 95 %, al menos 97 %, al menos 98 %, o al menos 99 % identica a las secuencias de acidos nucleicos de las SEQ ID NOs mencionadas anteriormente.

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Debido a la redundancia del codigo genetico, existiran variantes de estas secuencias que codifican las mismas secuencias de aminoacidos. Estas variantes estan incluidas dentro del alcance de la invencion.

Tambien se divulgan anticuerpos variantes que neutralizan la infeccion por hCMV. Por consiguiente, tambien se divulgan las variantes de las secuencias mencionadas en la solicitud. Tales variantes incluyen variantes naturales generadas por mutacion somatica in vivo durante la respuesta inmunitaria o in vitro tras el cultivo de clones de linfocitos B inmortalizados. En otra alternativa, pueden surgir variantes debido a la degeneracion del codigo genetico, como se ha mencionado anteriormente o pueden producirse debido a errores en la transcripcion o traduccion.

Se pueden obtener variantes adicionales de las secuencias de anticuerpo que tienen una afinidad y/o potencia mejoradas usando metodos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, las sustituciones de aminoacidos se pueden usar para obtener anticuerpos con afinidad mejorada adicional. En otra alternativa, se puede usar la optimizacion de codones de la secuencia de nucleotidos para mejorar la eficacia de la traduccion en los sistemas de expresion para la produccion del anticuerpo. Ademas, tambien se divulgan polinucleotidos que comprenden una secuencia optimizada para la especificidad del anticuerpo o actividad neutralizante mediante la aplicacion de un metodo de evolucion dirigida a cualquiera de las secuencias de acido nucleico de la invencion.

Las secuencias variantes de los anticuerpos que neutralizan la infeccion por hCMV pueden compartir el 70 % o mas (es decir 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o mas) de identidad de secuencia de aminoacidos con las secuencias presentadas en la solicitud. Dicha identidad de secuencia se puede calcular con respecto a la longitud completa de la secuencia de referencia (es decir la secuencia presentada en la solicitud). El porcentaje de identidad, como se menciona en la presente memoria, se puede determinar utilizando la version 2.1.3 de BLAST con los parametros predeterminados especificados por el NCBl (Centro Nacional de Informacion Biotecnologica) [matriz Blosum 62; penalizacion por apertura de hueco = 11 y penalizacion por extension de hueco = 1].

Ademas se incluyen dentro del alcance de la invencion los vectores de expresion, que comprenden una secuencia de acido nucleico de acuerdo con la invencion. Las celulas transformadas con tales vectores tambien se incluyen dentro del alcance de la invencion. Los ejemplos de tales celulas incluyen, pero no se limitan a, celulas eucariotas, por ej., celulas de levadura, celulas animales o celulas de plantas. En una realizacion, las celulas son de mamffero, por ej., celulas humanas, CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, mieloma o hibridoma.

La divulgacion tambien se refiere a anticuerpos monoclonales que se unen a un epftopo capaz de unirse a los anticuerpos de la invencion, que incluyen, pero no se limitan a, un anticuerpo monoclonal seleccionado del grupo que consiste en 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4122, 8L13, 2C12, 8C15, 916, 7B13, 8J16, 8121, 7113, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 11B12, 13H11, 3G16, 2B11 y 6L3.

Los anticuerpos monoclonales y recombinantes son particularmente utiles en la identificacion y purificacion de los polipeptidos individuales u otros antfgenos contra los que estan dirigidos. Los anticuerpos tienen una utilidad adicional y es que pueden emplearse como reactivos en inmunoensayos, radioinmunoensayos (RIA) o ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA). En estas aplicaciones, los anticuerpos se pueden marcar con un reactivo detectable analfticamente tal como un radioisotopo, una molecula fluorescente o una enzima. Los anticuerpos tambien se pueden usar para la identificacion y caracterizacion molecular (mapeo de epftopos) de antfgenos.

Los anticuerpos se pueden acoplar a un farmaco para su administracion a un sitio de tratamiento o se pueden acoplar un marcador detectable para facilitar la formacion de imagenes de un sitio que comprende celulas de interes, tales como celulas infectadas con el hCMV. Los metodos de acoplamiento de anticuerpos a farmacos y marcadores detectables son bien conocidos en la tecnica, como lo son los metodos para la formacion de imagenes usando marcadores detectables. Los anticuerpos marcados se pueden emplear en una amplia variedad de ensayos, que emplean una amplia variedad de marcadores. La deteccion de la formacion de un complejo anticuerpo-antfgeno entre un anticuerpo y un epftopo de interes (un epftopo de hCMV) puede facilitarse uniendo una sustancia detectable al anticuerpo. Los medios de deteccion adecuados incluyen el uso de marcadores tales como radionucleidos, enzimas, coenzimas, fluorescentes, quimioluminiscentes, cromogenos, sustratos o cofactores de enzimas, inhibidores de enzimas, complejos de grupos prosteticos, radicales libres, partfculas, colorantes y similares. Los ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rabano picante, fosfatasa alcalina, p-galactosidasa o acetilcolinesterasa; ejemplos de complejos de grupos prosteticos adecuados incluyen estreptavidina/biotina y avidina/biotina; ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluorescefna, isotiocianato de fluorescefna, rodamina, diclorotriazinilamina fluorescefna, cloruro de dansilo o ficoeritrina; un ejemplo de un material luminiscente es luminol; ejemplos de materiales bioluminiscentes incluyen luciferasa, luciferina y aequorina; y ejemplos de material radiactivo adecuado incluyen 125l, 131l, 35S, o 3H. Dichos reactivos marcados pueden usarse en una variedad de ensayos bien conocidos, tales como radioinmunoensayos, inmunoensayos enzimaticos, por ejemplo, ELISA, inmunoensayos fluorescentes y similares. Vease por ejemplo, referencias 15-18.

Un anticuerpo puede conjugarse con un resto terapeutico tal como una citotoxina, un agente terapeutico o un ion de metal radiactivo o radioisotopo. Los ejemplos de radioisotopos incluyen, pero no estan limitados a, 1-131, 1-123, 1125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 y similares. Dichos conjugados de

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anticuerpos pueden usarse para modificar una respuesta biologica dada; la fraccion de farmaco no debe interpretarse como limitada a agentes terapeuticos qufmicos clasicos. Por ejemplo, la fraccion de farmaco puede ser una protefna o polipeptido que posee una actividad biologica deseada. Dichas protefnas pueden incluir, por ejemplo, una toxina tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas o la toxina de la difteria.

Las tecnicas para conjugar dicha fraccion terapeutica a anticuerpos son bien conocidas. Vease, por ejemplo, Arnon et al. (1985) “Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), paginas 243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) “Antibodies for Drug Delivery”, en Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2a ed, Marcel Dekker, Inc.), paginas 623-653; Thorpe (1985) “Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review”, en Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. paginas. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italia, 1985)); “Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy”, en Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy ed. Baldwin et al. (Academic Press, Nueva York, 1985), paginas 303-316; y Thorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158.

En otra alternativa, un anticuerpo se puede conjugar con un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpo como se describe en la referencia 19. Ademas, se pueden usar enlazadores entre los marcadores y los anticuerpos de la invencion [20]. Los anticuerpos o fragmentos de union al antfgeno de los mismos se pueden marcar directamente con yodo, indio o itrio radiactivos u otra partfcula radiactiva conocida en la tecnica [21]. El tratamiento puede consistir en una combinacion de tratamiento con anticuerpos conjugados y no conjugados administrados simultaneamente o posteriormente [22, 23].

Los anticuerpos tambien pueden unirse a un soporte solido.

Adicionalmente, los anticuerpos, o fragmentos de anticuerpos funcionales de los mismos, pueden modificarse qufmicamente mediante conjugacion covalente con un polfmero para, por ejemplo, aumentar su semivida circulante, por ejemplo. Los ejemplos de polfmeros y los metodos para unirlos a los peptidos se muestran en las referencias 2427. En algunas realizaciones, los polfmeros se pueden seleccionar de polioles polioxietilados y polietilenglicol (PEG). El PEG es soluble en agua a temperatura ambiente y tiene la formula general: R(O--CH2 --CH2)n O--R donde R puede ser hidrogeno, o un grupo protector tal como un grupo alquilo o alcanol. En una realizacion, el grupo protector puede tener entre 1 y 8 atomos de carbono. En una realizacion adicional, el grupo protector es metilo. El sfmbolo n es un numero entero positivo. En una realizacion, n esta entre 1 y 1.000. En otra realizacion, n esta entre 2 y 500. En una realizacion, el PEG tiene un peso molecular promedio entre 1.000 y 40.000. En una realizacion adicional, el PEG tiene un peso molecular entre 2.000 y 20.000. En un realizacion adicional, el PEG tiene un peso molecular entre 3.000 y 12.000. En una realizacion, el PEG tiene por lo menos un grupo hidroxi. En otra realizacion, el PEG tiene un grupo hidroxi terminal. En otra realizacion mas, es el grupo hidroxi terminal el que se activa para que reaccione con un grupo amino libre sobre el inhibidor. Sin embargo, se entendera que el tipo y la cantidad de los grupos reactivos se pueden variar para conseguir un PEG/anticuerpo conjugado covalentemente.

Los polioles polioxietilados solubles en agua tambien son utiles. Incluyen sorbitol polioxietilado, glucosa polioxietilada, glicerol polioxietilado (POG) y similares. En una realizacion se usa POG. Sin estar ligados a ninguna teorfa y debido a que la cadena principal de glicerol del glicerol polioxietilado es la misma cadena principal que existe naturalmente en, por ejemplo, animales y seres humanos en mono-, di-, trigliceridos, esta ramificacion no necesariamente se considerarfa como un agente extrano por el cuerpo. En algunas realizaciones, el POG tiene un peso molecular en el mismo intervalo que PEG. La estructura de POG se muestra en la referencia 28, y en la referencia 24 se encuentra una descripcion de los conjugados POG/IL-2.

Otro sistema de administracion de farmacos que se puede usar para aumentar la semivida circulatoria es el liposoma. Los metodos para preparar sistemas de administracion de liposomas se describen en las referencias 29, 30 y 31. En la tecnica se conocen otros sistemas de administracion de farmacos y se describen en, por ejemplo, las referencias 32 y 33.

Los anticuerpos de la invencion se pueden proporcionar en forma purificada. Normalmente, el anticuerpo estara presente en una composicion que esta sustancialmente exenta de otros polipeptidos, por ejemplo, donde menos del 90 % (en peso), habitualmente menos del 60 % y mas habitualmente menos del 50 % de la composicion esta compuesta por otros polipeptidos.

Los anticuerpos pueden ser inmunogenos en hospedadores no humanos (o heterologos) por ejemplo en ratones. En particular, los anticuerpos pueden tener un idiotipo que es inmunogeno en hospedadores no humanos, pero no en un hospedador humano. Los anticuerpos para uso humano incluyen aquellos que no se pueden aislar facilmente de hospedadores tales como ratones, cabras, conejos, ratas, mamfferos que no son primates, etc. y que generalmente no se pueden obtener por humanizacion o a partir de ratones xeno.

Los anticuerpos pueden ser de cualquier isotipo (por ej. IgA, IgG, IgM es decir una cadena pesada a, y o p), pero generalmente sera IgG. Dentro del isotipo IgG, los anticuerpos pueden ser de la subclase IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4. Los anticuerpos pueden tener una cadena ligera k o A.

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Production de anticuerpos

Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar mediante cualquier metodo conocido en la tecnica. La metodologfa general para fabricar anticuerpos monoclonales utilizando tecnologfa de hibridoma es bien conocida [34, 35]. Preferiblemente, se usa el metodo alternativo de la inmortalizacion del EBV descrito en la referencia 36.

Usando el metodo descrito en la referencia 36, se pueden transformar los linfocitos B que producen el anticuerpo de la invencion con el EBV en presencia de un activador de linfocitos B policlonal. La transformacion con el EBV es una tecnica estandar y puede adaptarse facilmente para incluir activadores de linfocitos B policlonales.

Se pueden anadir estimulantes adicionales de crecimiento y diferenciacion celular durante la etapa de transformacion para mejorar aun mas la eficacia. Estos estimulantes pueden ser citocinas tales como IL-2 e IL-15. En un aspecto, durante la etapa de inmortalizacion se anade IL-2 para mejorar mas la eficacia de la inmortalizacion, aunque su uso no es esencial.

Los linfocitos B inmortalizadas producidos usando estos metodos pueden cultivarse posteriormente usando metodos conocidos en la tecnica y aislarse los anticuerpos a partir de los mismos.

Los anticuerpos tambien se pueden preparar cultivando celulas de plasma individuales en placas de cultivo de micropocillos usando el metodo descrito en la Solicitud de Patente del Reino Unido 0819376.5. Ademas, a partir de cultivos de celulas plasmaticas individuales, se puede extraer ARN y se puede realizar la PCR de las celulas individuales usando metodos conocidos en la tecnica. Las regiones VH y VL de los anticuerpos se pueden amplificar por RT-PCR, secuenciar y clonar en un vector de expresion que a continuacion se transfecta en celulas HEK293T u otras celulas del hospedador. La clonacion del acido nucleico en vectores de expresion, la transfeccion de las celulas hospedadoras, el cultivo de las celulas hospedadoras transfectadas y el aislamiento del anticuerpo producido se puede realizar usando cualquier metodo conocido por los expertos en la materia.

Los anticuerpos monoclonales se pueden purificar adicionalmente, si se desea, usando filtracion, centrifugacion y diversos metodos cromatograficos tales como HPLC o cromatograffa de afinidad. Las tecnicas para la purificacion de anticuerpos monoclonales, que incluyen tecnicas para producir anticuerpos de calidad farmaceutica, son bien conocidas en la tecnica.

Se pueden obtener fragmentos de anticuerpos monoclonales a partir de anticuerpos monoclonales mediante metodos que incluyen digestion con enzimas, tales como pepsina o papafna, y/o mediante escision de enlaces disulfuro por reduccion qufmica. En otra alternativa, se pueden obtener fragmentos de los anticuerpos monoclonales por clonacion y expresion de parte de las secuencias de las cadenas pesada o ligera. Los “fragmentos” de anticuerpos pueden incluir fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv. La invencion tambien abarca los fragmentos Fv monocatenarios (scFv) derivados de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo monoclonal de la invencion, por ej., la invencion incluye un scFv que comprende las CDR de un anticuerpo de la invencion. Tambien estan incluidos monomeros y dfmeros de cadena pesada o ligera, asf como anticuerpos monocatenarios, por ejemplo, el Fv monocatenario en el cual los dominios variables de la cadena pesada y ligera estan unidos por un enlazador peptfdico.

Se pueden usar tecnicas convencionales de biologfa molecular para preparar secuencias de ADN que codifican los anticuerpos o fragmentos de los anticuerpos de la presente invencion. Las secuencias de ADN deseadas se pueden sintetizar completamente o parcialmente usando tecnicas de sfntesis de oligonucleotidos. La mutagenesis dirigida al sitio y las tecnicas de reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) se pueden usar segun convenga.

Se puede usar cualquier sistema de celula hospedadora/vector adecuado para la expresion de las secuencias de ADN que codifican las moleculas de anticuerpo o fragmentos de las mismas. Se pueden usar sistemas bacterianos, por ejemplo, E. coli y otros sistemas microbianos, en parte, para la expresion de fragmentos de anticuerpos tales como fragmentos Fab y F(ab')2 y especialmente fragmentos Fv y fragmentos de anticuerpos monocatenarios, por ejemplo, Fvs monocatenarios. Se pueden usar sistemas de expresion en celulas hospedadoras eucariotas, por ejemplo, de mamffero para la produccion de moleculas de anticuerpo mas grandes, que incluyen moleculas de anticuerpo completas. Las celulas hospedadoras de mamffero adecuadas incluyen celulas CHO, HEK293T, PER.C6, NS0, mieloma o hibridoma.

La presente invencion tambien proporciona un metodo para la produccion de una molecula de anticuerpo de acuerdo con la presente invencion que comprende cultivar una celula hospedadora que comprende un vector de la presente invencion en condiciones adecuadas para conseguir la expresion de la protefna a partir del ADN que codifica la molecula de anticuerpo de la presente invencion y aislar la molecula de anticuerpo.

Una molecula de anticuerpo puede comprender solo un polipeptido de la cadena pesada o ligera, en cuyo caso solo se necesita usar una secuencia codificante de polipeptido de la cadena pesada o ligera para transfectar las celulas hospedadoras. Para la produccion de productos que comprenden tanto cadenas pesadas como ligeras, la lfnea celular puede transfectarse con dos vectores, un primer vector que codifica un polipeptido de la cadena ligera y un

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segundo vector que codifica un polipeptido de la cadena pesada. Como alternativa, se puede usar un unico vector, incluyendo el vector secuencias que codifican polipeptidos de la cadena ligera y de la cadena pesada.

Como alternativa, los anticuerpos pueden producirse i) expresando una secuencia de acido nucleico de acuerdo con la invencion en una celula, y ii) aislando el producto de anticuerpo expresado. Adicionalmente, el metodo puede incluir iii) purificar el anticuerpo.

Seleccion y aislamiento de linfocitos B

Los linfocitos B transformados pueden seleccionarse con el fin de obtener aquellos que producen anticuerpos de la especificidad de antfgeno deseada, y a continuacion pueden producirse clones de linfocitos B individuales a partir de las celulas positivas.

La etapa de seleccion puede llevarse a cabo mediante ELISA, tincion de tejidos o celulas (incluyendo celulas transfectadas), un ensayo de neutralizacion o uno de varios otros metodos conocidos en la tecnica para identificar la especificidad de antfgeno deseada. El ensayo se puede seleccionar basandose en el reconocimiento de antfgeno simple, o se puede seleccionar basandose adicionalmente en una funcion deseada, por ej., para seleccionar anticuerpos neutralizantes en lugar de solo anticuerpos que se unen a antfgenos, seleccionar anticuerpos que puedan cambiar las caracterfsticas de las celulas diana, como sus cascadas de senalizacion, su forma, su tasa de crecimiento, su capacidad de influir en otras celulas, su respuesta a la influencia por otras celulas o por otros reactivos o por un cambio en las condiciones, su estado de diferenciacion, etc.

La etapa de clonacion para separar clones individuales de la mezcla de celulas positivas se puede llevar a cabo usando dilucion limitante, micromanipulacion, deposicion de celulas individuales mediante clasificacion celular u otro metodo conocido en la tecnica.

Los clones de linfocitos B inmortalizados de la divulgacion se pueden usar de diferentes maneras por ej., como fuente de anticuerpos monoclonales, como fuente de acido nucleico (ADN o ARNm) que codifica un anticuerpo monoclonal de interes, para investigacion, etc.

La divulgacion proporciona una composicion que comprende linfocitos de memoria B inmortalizados, en la que las celulas producen anticuerpos con alta potencia neutralizante especffica del hCMV, y en la que los anticuerpos se producen a razon de >5 pg por celula por dfa. La divulgacion tambien proporciona una composicion que comprende clones de un linfocito de memoria B inmortalizado, en la que los clones producen un anticuerpo monoclonal con una alta afinidad especffica por el hCMV, y en la que el anticuerpo se produce a razon de > 5 pg por celula por dfa. Preferiblemente, dichos clones producen un anticuerpo monoclonal con una alta potencia para neutralizar la infeccion por hCMV.

Ejemplos de clones de linfocitos B inmortalizados de acuerdo con la divulgacion incluyen, pero no se limitan a, 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4122, 8L13, 2C12, 8C15, 916, 7B13, 8J16, 8I21, 7113, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 11B12, 13H11, 3G16, 2B11 y 6L3.

Epitopos

Como se ha mencionado anteriormente, los anticuerpos pueden usarse para cartografiar los epitopos a los que se unen. Los inventores han descubierto que los diversos anticuerpos que neutralizan la infeccion por hCMV de celulas endoteliales, celulas epiteliales, celulas retinianas y celulas dendrfticas, estan dirigidos hacia epitopos en la protefna del hCMV UL128, epitopos formados por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A, epitopos formados por las protefnas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, epitopos formados por las protefnas del hCMV gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, o epitopos formados por las protefnas del hCMV gM y gN. Los epitopos a los que se unen los anticuerpos de la divulgacion pueden ser lineales (continuos) o conformacionales (discontinuos) y pueden estar formados por una sola protefna del hCMV o por la combinacion de 2, 3 o mas protefnas del hCMV.

Los epitopos reconocidos por los anticuerpos de la presente divulgacion pueden tener varios usos. El epftopo y mimotopos de los mismos en forma purificada o sintetica se pueden usar para provocar respuestas inmunitarias (es decir como una vacuna, o para la produccion de anticuerpos para otros usos) o para seleccionar suero del paciente para obtener anticuerpos que inmunoreaccionan con el epftopo o mimotopos de los mismos. En una realizacion, dicho epftopo o mimotopo, o antfgeno que comprende dicho epftopo o mimotopo, se puede usar como una vacuna para provocar una respuesta inmunitaria. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos tambien se pueden usar en un metodo para controlar la calidad de las vacunas. En particular, los anticuerpos pueden usarse para comprobar que el antfgeno en una vacuna contiene el epftopo inmunogenico especffico en la conformacion correcta.

El epftopo tambien puede ser util para la seleccion de ligandos que se unen a dicho epftopo. Dichos ligandos incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos; incluidos los de camellos, tiburones y otras especies, fragmentos de anticuerpos, peptidos, productos de tecnologfa de presentacion en fagos, aptameros, adnectinas o fragmentos de otras protefnas vfricas o celulares, pueden bloquear el epftopo y asf prevenir la infeccion.

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Expresion recombinante

Los linfocitos de memoria B inmortalizados tambien se pueden usar como una fuente de acido nucleico para la clonacion de genes de anticuerpos para la expresion recombinante posterior. La expresion de fuentes recombinantes es mas comun para fines farmaceuticos que la expresion de linfocitos B o hibridomas por ej. por razones de estabilidad, reproducibilidad, facilidad de cultivo, etc.

Por lo tanto, la divulgacion proporciona un metodo para preparar una celula recombinante, que comprende las etapas de: (i) obtener uno o mas acidos nucleicos (por ej., genes de la cadena pesada y/o ligera) del clon de linfocitos B que codifica el anticuerpo de interes; y (ii) insertar el acido nucleico en un hospedador de expresion para permitir la expresion del anticuerpo de interes en ese hospedador de interes.

De forma similar, la divulgacion proporciona un metodo para preparar una celula recombinante, que comprende las etapas de: (i) secuenciar el acido o acidos nucleicos del clon de linfocitos B que codifica el anticuerpo de interes; y (ii) usar la informacion de la secuencia de la etapa (i) para preparar el acido o acidos nucleicos para su insercion en un hospedador de expresion para permitir la expresion del anticuerpo de interes en ese hospedador. El acido nucleico se puede, aunque no es necesario, manipular entre las etapas (i) y (ii) para introducir sitios de restriccion, cambiar el uso de codones y/u optimizar las secuencias reguladoras de transcripcion y/o traduccion.

La divulgacion tambien proporciona un metodo para preparar una celula recombinante, que comprende la etapa de transformar una celula hospedadora con uno o mas acidos nucleicos que codifican un anticuerpo monoclonal de interes, en el que los acidos nucleicos son acidos nucleicos que se derivaron de un clon de linfocitos B inmortalizado. . Por lo tanto, los procedimientos para preparar primero el o los acidos nucleicos y luego usarlos para transformar una celula hospedadora pueden realizarse en diferentes momentos por diferentes personas en diferentes lugares (por ej. en diferentes pafses).

Estas celulas recombinantes pueden usarse luego para fines de expresion y cultivo. Son particularmente utiles para la expresion de anticuerpos para produccion farmaceutica a gran escala. Tambien se pueden usar como el principio activo de una composicion farmaceutica. Se puede utilizar cualquier tecnica de cultivo adecuada, que incluye, pero no se limita a, cultivo estatico, cultivo en botella giratoria, fluido de ascitis, cartucho de biorreactor de fibra hueca, minifermentador modular, tanque agitado, cultivo de microvehfculos, perfusion de nucleo ceramico, etc.

Los metodos para obtener y secuenciar genes de inmunoglobulina de linfocitos B son bien conocidos en la tecnica (por ej., ver referencia 37).

El hospedador de expresion es preferiblemente una celula eucariota, que incluye celulas de levadura y animales, particularmente celulas de mamffero (por ej., celulas CHO, celulas NS0, celulas humanas tales como celulas PER.C6 [Crucell; referencia 38] o HKB-11 [Bayer; referencias 39 y 40], celulas de mieloma [41 y 42], etc.), asf como celulas vegetales. Los hospedadores de expresion preferidos pueden glicosilar el anticuerpo, particularmente con estructuras de carbohidratos que no son inmunogenas en los seres humanos. En una realizacion, el hospedador de expresion es capaz de crecer en medios sin suero. En una realizacion adicional, el hospedador de expresion es capaz de crecer en cultivo sin la presencia de productos derivados de animales.

El hospedador de expresion se puede cultivar para dar una lfnea celular.

La divulgacion proporciona un metodo para preparar una o mas moleculas de acido nucleico (por ej., genes de la cadena pesada y ligera) que codifican un anticuerpo de interes, que comprende las etapas de: (i) preparar un clon de linfocitos B inmortalizado; (ii) obtener del clon de linfocitos B acido nucleico que codifica el anticuerpo de interes. La divulgacion tambien proporciona un metodo para obtener una secuencia de acido nucleico que codifica un anticuerpo de interes, que comprende las etapas de: (i) preparar un clon de linfocitos B inmortalizado de acuerdo con la invencion; (ii) secuenciar el acido nucleico del clon de linfocitos B que codifica el anticuerpo de interes.

La divulgacion tambien proporciona un metodo para preparar una molecula o moleculas de acido nucleico que codifica un anticuerpo de interes, que comprende la etapa de obtener el acido nucleico a partir de un clon de linfocitos B que se ha obtenido a partir de un linfocito B transformado de la invencion. Por lo tanto, los procedimientos para obtener primero el clon de linfocitos B y luego preparar el acido o acidos nucleicos a partir de este se pueden realizar en momentos muy diferentes por diferentes personas y en diferentes lugares (por ej., en diferentes pafses).

La divulgacion proporciona un metodo para preparar un anticuerpo (por ej., para uso farmaceutico), que comprende las etapas de: (i) obtener y/o secuenciar uno o mas acidos nucleicos (por ej., genes de la cadena pesada y ligera) del clon de linfocitos B seleccionado que expresa el anticuerpo de interes; (ii) insertar el o los acidos nucleicos en o usar el o los acidos nucleicos para preparar un hospedador de expresion que pueda expresar el anticuerpo de interes; (iii) cultivar o subcultivar el hospedador de expresion en condiciones en las que se exprese el anticuerpo de interes; y, opcionalmente, (iv) purificar el anticuerpo de interes.

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La divulgacion tambien proporciona un metodo para preparar un anticuerpo que comprende las etapas de: cultivar o subcultivar una poblacion de celulas hospedadoras de expresion en condiciones en las que se expresa el anticuerpo de interes y, opcionalmente, purificar el anticuerpo de interes, en el que dicha poblacion de celulas hospedadoras de expresion se ha preparado (i) proporcionando acido o acidos nucleicos del linfocito B seleccionado que codifica el anticuerpo de interes que es producido por una poblacion de linfocitos de memoria B preparados como se describio anteriormente, (ii) insertando el acido o acidos nucleicos en un hospedador de expresion que puede expresar el anticuerpo de interes, y (iii) cultivando o subcultivando hospedadores de expresion que comprenden dichos acidos nucleicos insertados para producir dicha poblacion de celulas hospedadoras de expresion. Por lo tanto, los procedimientos para preparar primero el hospedador de expresion recombinante y luego cultivarlo para expresar el anticuerpo pueden realizarse en momentos muy diferentes por diferentes personas y en diferentes lugares (por ej., en diferentes pafses).

Ademas, las lfneas celulares que expresan ejemplos de anticuerpos de la invencion, 4N10, 2C12, 8C15, 8121, 6B4, 10C6, 4H9, 11B12, 3G16 y 6L3 se depositaron en el Advanced Biotechnology Center (ABC), Largo Rossana Benzi 10, 16132 Genova ( Italia), conforme a los terminos del Tratado de Budapest, el 9 de julio de 2008, (con los numeros de deposito PD 08009, PD 08007, PD 08006, PD 08005, PD 08004, PD 08014, PD 08013, PD 08011, PD 08012, y PD 08010, respectivamente) y una lfnea de linfocitos B inmortalizada que expresa 7H3 se deposito el 16 de julio de 2008 con el numero de deposito PD 08017. Tambien se divulga un anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, expresado a partir de las lfneas celulares anteriores, asf como los anticuerpos, y fragmentos de union al antfgeno del mismo, con la misma secuencia de aminoacidos que la expresada a partir de las lfneas celulares anteriores.

Estos depositos se proporcionan para la comodidad de los expertos en la materia y no son una admision de que tales depositos se requieran para practicar la invencion ni que las realizaciones equivalentes no esten dentro del conocimiento de la tecnica a la vista de la presente divulgacion. La disponibilidad publica de estos depositos no es una concesion de una licencia para hacer, usar o vender los materiales depositados bajo esta u otras patentes.

Composiciones farmaceuticas

La invencion proporciona una composicion farmaceutica que contiene los anticuerpos y/o fragmentos de anticuerpos de la invencion y/o el acido nucleico que codifica dichos anticuerpos. Una composicion farmaceutica tambien puede contener un vehfculo farmaceuticamente aceptable para permitir la administracion. El vehfculo no debe inducir la produccion de anticuerpos perjudiciales para el individuo que recibe la composicion y no debe ser toxico. Los vehfculos adecuados pueden ser macromoleculas grandes, de metabolismo lento, tales como protefnas, polipeptidos, liposomas, polisacaridos, acidos polilacticos, acidos poliglicolicos, aminoacidos polimericos, copolfmeros de aminoacidos y partfculas vfricas inactivas.

Se pueden usar sales farmaceuticamente aceptables, por ejemplo sales de acidos minerales, tales como hidrocloruros, hidrobromuros, fosfatos y sulfatos, o sales de acidos organicos, tales como acetatos, propionatos, malonatos y benzoatos.

Los vehfculos farmaceuticamente aceptables en composiciones terapeuticas pueden contener adicionalmente lfquidos tales como agua, solucion salina, glicerol y etanol. Adicionalmente, sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes o sustancias tamponantes del pH, pueden estar presentes en tales composiciones. Tales vehfculos permiten que las composiciones farmaceuticas se formulen como comprimidos, pfldoras, grageas, capsulas, lfquidos, geles, jarabes, pastas y suspensiones, para su ingestion por el paciente.

Las formas de administracion pueden incluir aquellas formas adecuadas para administracion parenteral, por ej., por inyeccion o infusion, por ejemplo mediante inyeccion en bolo o infusion continua. Cuando el producto es para inyeccion o infusion, puede adoptar la forma de una suspension, solucion o emulsion en un vehfculo oleoso o acuoso y puede contener agentes de formulacion, tales como agentes de suspension, conservantes, estabilizantes y/o dispersantes. Como alternativa, la molecula de anticuerpo puede estar en forma seca, para su reconstitucion antes del uso con un lfquido esteril apropiado.

Una vez formuladas, las composiciones de la invencion se pueden administrar directamente al sujeto. En una realizacion, las composiciones estan adaptadas para administracion a sujetos humanos.

Las composiciones farmaceuticas de esta invencion pueden administrarse por cualquier via que incluyen, entre otras, la via oral, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, transdermica, transcutanea, topica, subcutanea, intranasal, enteral, sublingual, intravaginal o rectal. Los hiposprays tambien pueden usarse para administrar las composiciones farmaceuticas de la invencion. Generalmente, las composiciones terapeuticas se pueden preparar como inyectables, ya sea como soluciones lfquidas o como suspensiones. Asimismo se pueden preparar formas solidas adecuadas para solucion o suspension en vehfculos lfquidos antes de la inyeccion.

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La administracion directa de las composiciones generalmente se realizara por inyeccion subcutanea, intraperitoneal, intravenosa o intramuscular, o se administrara al espacio intersticial de un tejido. Las composiciones tambien se pueden administrar en una lesion. El tratamiento de dosificacion puede ser un esquema de dosis unica o un esquema de dosis multiple. Los productos farmaceuticos a base de anticuerpos conocidos pueden servir de orientacion en cuanto a la frecuencia de administracion por ej., si un medicamento debe ser administrado diariamente, semanalmente, mensualmente, etc. La frecuencia y la dosis tambien pueden depender de la gravedad de los sfntomas.

Las composiciones de la invencion se pueden preparar de diversas formas. Por ejemplo, las composiciones se pueden preparar como inyectables, como soluciones lfquidas o suspensiones. Tambien se pueden preparar formas solidas adecuadas para solucion o suspension en vehfculos lfquidos antes de la inyeccion (por ej., una composicion liofilizada, como Synagis™ y Herceptin™, para la reconstitucion con agua esteril que contiene un conservante). La composicion puede prepararse para administracion topica por ej., como una pomada, crema o polvo. La composicion puede prepararse para administracion oral por ej., como un comprimido o capsula, como un aerosol, o como un jarabe (opcionalmente con sabor). La composicion puede prepararse para administracion pulmonar por ej., como inhalador, usando un polvo fino o un aerosol. La composicion puede prepararse como un supositorio o pesario. La composicion puede prepararse para administracion nasal, aural u ocular por ej., como gotas. La composicion puede estar en forma de kit, disenada de modo que una composicion combinada se reconstituya justo antes de la administracion a un paciente. Por ejemplo, un anticuerpo liofilizado se puede proporcionar en forma de kit con agua esteril o un tampon esteril.

Se apreciara que el principio activo en la composicion sera una molecula de anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o variantes y derivados de los mismos. Como tal, sera susceptible a la degradacion en el tracto gastrointestinal. Por lo tanto, si la composicion se va a administrar mediante una ruta que usa el tracto gastrointestinal, la composicion necesitara contener agentes que protejan al anticuerpo contra la degradacion pero que liberen el anticuerpo una vez que se haya absorbido del tracto gastrointestinal.

Una descripcion completa de vehfculos farmaceuticamente aceptables se presenta en Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edicion, ISBN: 0683306472.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion generalmente tienen un pH entre 5,5 y 8,5, en algunas realizaciones esto puede estar entre 6 y 8, y en realizaciones adicionales aproximadamente 7. El pH puede mantenerse mediante el uso de un tampon. La composicion puede ser esteril y/o apirogena. La composicion puede ser isotonica con respecto a los seres humanos. En una realizacion, las composiciones farmaceuticas de la invencion se suministran en envases hermeticamente cerrados.

Las composiciones farmaceuticas incluiran una cantidad efectiva de uno o mas anticuerpos y/o uno o mas acidos nucleicos, es decir una cantidad que es suficiente para tratar, mejorar o prevenir una enfermedad o afeccion deseada, o para exhibir un efecto terapeutico detectable. Los efectos terapeuticos tambien incluyen la reduccion de los sfntomas ffsicos. La cantidad eficaz precisa para cualquier sujeto particular dependera de su tamano y estado de salud, la naturaleza y el alcance de la afeccion, y los farmacos o combinacion de farmacos seleccionados para la administracion. La cantidad efectiva para una situacion dada se determina mediante experimentacion de rutina y se determinara a juicio del medico. Para los fines de la presente invencion, una dosis eficaz generalmente sera de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, o de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg de las composiciones de la presente invencion en el individuo al que se administra. Los productos farmaceuticos a base de anticuerpos conocidos pueden servir de orientacion a este respecto, por ej., Herceptin™ se administra por infusion intravenosa de una solucion de 21 mg/ml, con una dosis de carga inicial de 4 mg/kg de peso corporal y una dosis de mantenimiento semanal de 2 mg/kg de peso corporal; Rituxan™ se administra semanalmente a 375 mg/m2; etc.

En una realizacion, las composiciones pueden incluir mas de uno (por ej., 2, 3, 4, 5, etc.) anticuerpos de la divulgacion para proporcionar un efecto terapeutico aditivo o sinergico. En otra realizacion, la composicion puede comprender uno o mas (por ej., 2, 3, 4, 5, etc.) anticuerpos de la divulgacion y uno o mas (por ej., 2, 3, 4, 5, etc.) anticuerpos adicionales que neutralizan la infeccion por hCMV.

Por ejemplo, un anticuerpo puede unirse a un epftopo formado por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A, mientras que otro se puede unir a un epftopo de la protefna del hCMV UL128, un epftopo diferente formado por UL130 y UL131A, un epftopo formado por UL128, UL130 y UL131A, un epftopo formado por gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, o un epftopo formado por gM y gN. Sin estar ligados a ninguna teorfa, un anticuerpo puede dirigirse al mecanismo que media la infeccion de fibroblastos, mientras que el otro anticuerpo puede estar dirigido al mecanismo que media la infeccion de celulas endoteliales. Para un efecto clfnico optimo, puede ser ventajoso abordar ambos mecanismos de infeccion por hCMV y su mantenimiento.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo UL128, y el segundo anticuerpo es especffico de un segundo epftopo UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, una combinacion de UL128, Ul130 y UL131A, una

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combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, o una combinacion de gM y gN.

En una realizacion, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo de una combinacion de UL130 y 131A, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, un segundo epftopo de una combinacion de UL130 y 131A, una combinacion de UL128, UL130 y UL131A, una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, o una combinacion de gM y gN.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, un segundo epftopo de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A, una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, o una combinacion de gM y gN.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo de una combinacion de gH, gL, UL128, UL130 y UL131A, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, una combinacion de UL128, UL130 y UL131A, un segundo epftopo de una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, o una combinacion de gM y gN.

La divulgacion proporcion una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo gB, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, una combinacion de UL128, Ul130 y UL131A, una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, un segundo epftopo gB, gH, gL, gM, gN, gO, o una combinacion de gM y gN.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo gH, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, una combinacion de uL128, UL130 y UL131A, una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, un segundo epftopo de gH, gL, gM, gN, gO, o una combinacion de gM y gN.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es especffico de un primer epftopo de una combinacion de gM y gN, y el segundo anticuerpo es especffico de UL128, una combinacion de UL130 y UL131A, una combinacion de UL128, UL130 y UL131A, una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130, gB, gH, gL, gM, gN, gO, o un segundo epftopo de una combinacion de gM

y gN.

Los ejemplos de anticuerpos para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo de la protefna UL128 del hCMV incluyen, pero no se limitan a, 15D8. Los ejemplos de anticuerpos para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo formado por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A incluyen, pero no se limitan a, 4N10, 10F7, 10P3, 4I22, 8L13, 1F11, 2F4 y 5A2 (vease la Solicitud de los Estados Unidos N.° 11/ 969.104, presentada el 3 de enero de 2008). Los ejemplos de anticuerpos para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo formado por las protefnas del hCMV UL128, UL130 y UL131A incluyen, pero no se limitan a, 2C12, 7B13, 7113, 8C15, 8J16, 916 y 6G4 (vease la solicitud de los Estados Unidos N.° 12/174.568, presentada el 16 de julio de 2008). Los ejemplos de anticuerpos para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo formado por las protefnas del hCMV gH, gL, UL128 y UL130 incluyen, pero no se limitan a, 8I21. Los ejemplos de anticuerpos de la invencion para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo de la protefna del hCMV gB incluyen, pero no se limitan a, 7H3, 10C6, 5F1, 6B4, 4H9 y 2B11. Los ejemplos de anticuerpos para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo de la protefna del hCMV gH incluyen, pero no se limitan a, 11B12, 13H11 y 3G16. Los ejemplos de anticuerpos de la invencion para su uso en una composicion farmaceutica que se unen a un epftopo formado por las protefnas del hCMV gM y gN incluyen, pero no se limitan a, 6L3. La invencion proporciona ademas una composicion farmaceutica que comprende dos o mas anticuerpos, en la que el primer anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de la invencion y el segundo anticuerpo es un anticuerpo conocido actualmente en la tecnica, o descubierto posteriormente, que neutraliza la infeccion por hCMV. Los ejemplos de tales anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, MSL-109, 8F9 o 3E3.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 15D8 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 15D8 variante 1 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 15D8 variante 2 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 8121 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 2C12 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una

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composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 8C15 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 916 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 7B13 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 8J16 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 7113 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 4N10 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 10F7 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 10P3 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. En una realizacion, la invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 4122 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 8L13 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 7H3 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 7H3 variante 1 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 10C6 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 5F1 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 6B4 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 4H9 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 4H9 variante 1 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 2B11 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 13H11 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 11B12 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 3G16 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable. La divulgacion proporciona una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo 6L3 o un fragmento de union al antfgeno del mismo, y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

En una realizacion, las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden comprender los anticuerpos anteriores de la invencion o fragmentos de union al antfgeno de los mismos, como el unico principio activo. La composicion farmaceutica puede comprender 2 o mas, por ej., 2,3, 4, 5, 6, 7, 8 o mas de los anticuerpos anteriores o fragmento de union al antfgeno del mismo. Como se describe en la presente memoria, las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden comprender tambien un segundo anticuerpo, o fragmento de union al antfgeno del mismo, que neutraliza la infeccion por hCMV.

Los anticuerpos de la invencion se pueden administrar (combinados o por separado) con otros compuestos terapeuticos por ej., con compuestos quimioterapeuticos, con radioterapia, etc. Los compuestos terapeuticos preferidos incluyen compuestos antivfricos tales como ganciclovir, foscarnet y ciclofovir. Dicha terapia de combinacion proporciona una mejora aditiva o sinergica a la eficacia terapeutica con respecto a los agentes terapeuticos individuales cuando se administran solos. El termino “sinergia” se usa para describir un efecto combinado de dos o mas agentes activos que es mayor que la suma de los efectos individuales de cada agente activo respectivo. Por lo tanto, cuando el efecto combinado de dos o mas agentes da como resultado la “inhibicion sinergica” de una actividad o proceso, se pretende que la inhibicion de la actividad o proceso sea mayor que la suma de los efectos inhibidores de cada agente activo respectivo. La expresion “efecto terapeutico sinergico” se refiere a un efecto terapeutico observado con una combinacion de dos o mas terapias en las que el efecto terapeutico (medido por cualquiera de varios parametros) es mayor que la suma de los efectos terapeuticos individuales observados con las respectivas terapias individuales.

Los anticuerpos se pueden administrar a aquellos pacientes que previamente no han mostrado respuesta al tratamiento de la infeccion por hCMV, es decir que han demostrado ser resistentes al tratamiento anti-hCMV. Tal tratamiento puede incluir tratamiento previo con un agente antivfrico. Esto puede ser debido, por ejemplo, a la infeccion con una cepa del hCMV resistente a los antivfricos.

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En las composiciones de la invencion que incluyen anticuerpos de la invencion, los anticuerpos pueden representar al menos el 50 % en peso (por ej., 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o mas) de la protefna total en la composicion. Los anticuerpos estan por lo tanto en forma purificada.

La divulgacion proporciona un metodo para preparar un producto farmaceutico, que comprende las etapas de: (i) preparar un anticuerpo de la invencion; y (ii) mezclar el anticuerpo purificado con uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables.

La divulgacion tambien proporciona un metodo para preparar un producto farmaceutico, que comprende la etapa de mezclar un anticuerpo con uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables, en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal que se ha obtenido a partir de un linfocito B transformado de la divulgacion. Por lo tanto, los procedimientos para obtener primero el anticuerpo monoclonal y luego preparar el producto farmaceutico pueden realizarse en momentos muy diferentes por diferentes personas y en diferentes lugares (por ej., en diferentes pafses).

Como una alternativa a la administracion de anticuerpos o linfocitos B con fines terapeuticos, es posible administrar acido nucleico (generalmente ADN) que codifica el anticuerpo monoclonal (o fragmento activo del mismo) de interes a un sujeto, de tal modo que el acido nucleico se puede expresar en el sujeto in situ para proporcionar un efecto terapeutico deseado. La terapia genica y los vectores de administracion de acidos nucleicos adecuados son conocidos en la tecnica.

Las composiciones de la divulgacion pueden ser composiciones inmunogenas, y en algunas realizaciones pueden ser composiciones de vacuna que comprenden un antfgeno que comprende un epftopo de la protefna del hCMV UL128, formadas por las protefnas del hCMV UL130 y UL131A, formadas por las protefnas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, formadas por las protefnas del hCMV gH, gL, UL128 y UL130, por la protefna del hCMV gB, por la protefna del hCMV gH, o formada por las protefnas del hCMV gM y gN. Las composiciones alternativas pueden comprender (i) un antfgeno que comprende un epftopo formado por una combinacion de protefnas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, y (ii) un antfgeno que comprende un epftopo que se encuentra en gB, gH, gL, gM, gN, gO, UL128, UL130 o UL131A, o una combinacion de los mismos. Las vacunas de acuerdo con la invencion pueden ser profilacticas (es decir para prevenir la infeccion) o terapeuticas (es decir para tratar la infeccion).

Las composiciones pueden incluir un agente antimicrobiano, particularmente si esta empaquetado en un formato de dosis multiple. Pueden comprender un detergente por ej., un Tween (polisorbato), tal como Tween 80. Los detergentes generalmente estan presentes en niveles bajos por ej., <0.01 %. Las composiciones tambien pueden incluir sales de sodio (por ej., cloruro de sodio) para dar tonicidad. Una concentracion de 10 ± 2 mg/ml de NaCl es tfpica.

Las composiciones pueden comprender un alcohol de azucar (por ej., manitol) o un disacarido (por ej., sacarosa o trehalosa) por ej., en una concentracion de aproximadamente 15-30 mg/ml (por ej., 25 mg/ml), especialmente si van a ser liofilizadas o si incluyen material que ha sido reconstituido a partir de material liofilizado. El pH de una composicion para liofilizacion puede ajustarse a aproximadamente 6,1 antes de la liofilizacion.

Las composiciones tambien pueden comprender uno o mas agentes inmunorreguladores. En una realizacion, uno o mas de los agentes inmunorreguladores incluyen un adyuvante.

Las composiciones de epftopo pueden provocar tanto una respuesta inmunitaria celular como una respuesta inmunitaria humoral con el fin de atacar eficazmente una infeccion por hCMV. Esta respuesta inmunitaria puede inducir anticuerpos de larga duracion (por ej., neutralizantes) y una inmunidad celular que puede aparecer rapidamente tras la exposicion al hCMV.

Tratamientos y usos medicos

Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos de la invencion o derivados y variantes de los mismos se pueden usar para el tratamiento de la infeccion por hCMV, para la prevencion de la infeccion por hCMV o para el diagnostico de la infeccion por hCMV.

Los metodos de diagnostico pueden incluir poner en contacto un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo con una muestra. Tales muestras pueden ser muestras de tejido tomadas de, por ejemplo, glandulas salivales, pulmon, hfgado, pancreas, rinon, ofdo, ojo, placenta, sistema digestivo, corazon, ovarios, hipofisis, glandulas suprarrenales, tiroides, cerebro o piel. Los metodos de diagnostico tambien pueden incluir la deteccion de un complejo antfgeno/anticuerpo.

Por lo tanto, la divulgacion proporciona (i) un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o variantes y derivados del mismo de acuerdo con la invencion, (ii) un clon de linfocitos B inmortalizado de acuerdo con la invencion, (iii) un epftopo capaz de unirse a un anticuerpo de la invencion o (iv) un ligando, preferiblemente un anticuerpo, capaz de unirse a un epftopo que se une a un anticuerpo de la invencion para su uso en terapia.

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Tambien se divulga un metodo para tratar a un paciente que comprende administrar a ese paciente (i) un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, o variantes y derivados del mismo de acuerdo con la invencion, o un ligando, preferiblemente un anticuerpo, capaz de unirse a un epftopo que se une un anticuerpo de la invencion.

La invencion tambien proporciona el uso de (i) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo de acuerdo con la invencion en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la infeccion por hCMV.

La invencion proporciona un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo o una composicion de la invencion para su uso como un medicamento para la prevencion o tratamiento de la infeccion por hCMV. La divulgacion proporciona el uso de un anticuerpo y/o una protefna que comprende un epftopo al que se une dicho anticuerpo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de un paciente y/o diagnostico en un paciente. Tambien proporciona un metodo para tratar un sujeto que necesita tratamiento, que comprende la etapa de administrar una composicion de la divulgacion al sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto puede ser un ser humano. Una forma de comprobar la eficacia del tratamiento terapeutico implica seguir los sfntomas de la enfermedad despues de la administracion de la composicion de la divulgacion. El tratamiento puede ser un esquema de dosis unica o un esquema de dosis multiples.

Un anticuerpo, un fragmento de union al antfgeno del mismo, un epftopo o una composicion se puede administrar a un sujeto que necesita dicho tratamiento profilactico o terapeutico. Tal sujeto incluye, pero no se limita a, alguien que esta particularmente en riesgo o es susceptible de una infeccion por hCMV. Los ejemplos de sujetos incluyen, pero no se limitan a, sujetos inmunodeprimidos o mujeres embarazadas hCMV-seronegativas o infectadas recientemente con el hCMV. Los ejemplos de sujetos inmunodeprimidos incluyen, pero no se limitan a, aquellos afectados por el VIH o aquellos sometidos a terapia inmunosupresora.

Los anticuerpos y fragmentos de union al antfgeno de los mismos tambien se pueden usar en la inmunizacion pasiva. Ademas, tambien se pueden usar en un kit para el diagnostico de la infeccion por hCMV.

Los epftopos capaces de unirse a un anticuerpo de la divulgacion, por ejemplo, los anticuerpos monoclonales 15D8, 4N10, 10F7, 10P3, 4122, 8L13, 2C12, 8C15, 916, 7B13, 8J16, 8121, 7113, 7H3, 6B4, 5F1, 10C6, 4H9, 2B11, 11B12, 13H11, 3G16, y 6L3 se pueden usar en un kit para controlar la eficacia de los procedimientos de vacunacion detectando la presencia de anticuerpos anti-hCMV protectores.

Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, o variantes y derivados de los mismos, como se describe en la presente memoria, tambien pueden usarse en un kit para controlar la fabricacion de vacunas con la inmunogenicidad deseada.

La divulgacion tambien proporciona un metodo para preparar un producto farmaceutico, que comprende la etapa de mezclar un anticuerpo monoclonal con uno o mas vehfculos farmaceuticamente aceptables, en la que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo monoclonal que se ha obtenido a partir de un hospedador de expresion de la invencion. Por lo tanto, los procedimientos para obtener primero el anticuerpo monoclonal (por ej., expresarlo y/o purificarlo) y luego mezclarlo con el vehfculo o los vehfculos farmaceuticos se puede realizar en momentos muy diferentes por diferentes personas y en diferentes lugares (por ej., en diferentes pafses).

Comenzando con un linfocito B transformado de la divulgacion, se pueden realizar varias etapas de cultivo, subcultivo, clonacion, subclonacion, secuenciacion, preparacion de acido nucleico etc. con el fin de perpetuar el anticuerpo expresado por el linfocito B transformado, con optimizacion opcional en cada etapa. En una realizacion preferida, los metodos anteriores comprenden ademas tecnicas de optimizacion (por ej., afinidad de maduracion u optimizacion) aplicadas a los acidos nucleicos que codifican el anticuerpo. La divulgacion abarca todas las celulas, acidos nucleicos, vectores, secuencias, anticuerpos etc. usados y preparados durante tales etapas.

En todos estos metodos, el acido nucleico usado en el hospedador de expresion puede manipularse para insertar, eliminar o modificar ciertas secuencias de acido nucleico. Los cambios de dicha manipulacion incluyen, pero no se limitan a, cambios para introducir sitios de restriccion, para modificar el uso de codones, para anadir u optimizar secuencias reguladoras de la transcripcion y/o traduccion, etc. Tambien es posible cambiar el acido nucleico para alterar los aminoacidos codificados. Por ejemplo, puede ser util introducir uno o mas (por ej., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, etc.) sustituciones, deleciones y/o inserciones de aminoacidos en la secuencia de aminoacidos del anticuerpo. Tales mutaciones puntuales pueden modificar las funciones efectoras, la afinidad de union al antfgeno, las modificaciones postraduccionales, la inmunogenicidad, etc., pueden introducir aminoacidos para la union de grupos covalentes (por ej., marcadores) o pueden introducir etiquetas (por ej., para fines de purificacion). Las mutaciones se pueden introducir en sitios especfficos o se pueden introducir aleatoriamente, seguido de la seleccion (por ej., evolucion molecular). Por ejemplo, pueden mutarse aleatoriamente o direccionalmente uno o mas acidos nucleicos que codifican cualquiera de las regiones CDR, regiones variables de la cadena pesada o regiones variables de la cadena ligera de anticuerpos de la divulgacion para introducir diferentes propiedades en los aminoacidos codificados. Dichos cambios pueden ser el resultado de un proceso iterativo en el que se conservan los cambios iniciales y se introducen nuevos cambios en otras posiciones de nucleotidos. Ademas, pueden combinarse los cambios obtenidos en etapas independientes. Las diferentes propiedades introducidas en los aminoacidos

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codificados pueden incluir, pero no se limitan a, afinidad mejorada.

Generalidades

El termino “que comprende” abarca “que incluye” asf como “que consiste”, por ej., una composicion “que comprende” X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional por ej., X + Y.

La palabra “sustancialmente” no excluye “completamente”, por ej., una composicion que esta “sustancialmente exenta” de Y puede estar completamente exenta de Y. Cuando sea necesario, la palabra “sustancialmente” puede omitirse de la definicion de la invencion.

El termino “aproximadamente” en relacion con un valor numerico x significa, por ejemplo, x ± 10 %.

El termino “enfermedad” como se usa en la presente memoria pretende generalmente ser sinonimo, y se usa indistintamente con los terminos “trastorno” y “afeccion” (como en afeccion medica), ya que todos reflejan una condicion anormal del cuerpo humano o animal o de una de sus partes que altera el funcionamiento normal, se manifiesta generalmente por signos y sfntomas distintivos, y hace que el ser humano o animal tenga una duracion o calidad de vida reducida.

Como se usa en la presente memoria, la referencia al “tratamiento” de un paciente pretende incluir la prevencion y la profilaxis. El termino “paciente” significa todos los mamfferos, incluidos los seres humanos. Los ejemplos de pacientes incluyen seres humanos, vacas, perros, gatos, caballos, cabras, ovejas, cerdos y conejos. En general, el paciente es un ser humano.

Ejemplos

Las realizaciones de ejemplo de la presente invencion se proporcionan en los siguientes ejemplos. Los siguientes ejemplos se presentan solo a modo de ilustracion y para ayudar a un experto de conocimientos comunes en la materia en el uso de la invencion. Los ejemplos no estan destinados de ninguna manera a limitar de otro modo el alcance de la invencion.

Ejemplo 1: Clonacion de linfocitos B y seleccion de actividad neutralizante del hCMV

Se identificaron donantes con altos tftulos de anticuerpos neutralizantes de hCMV en el suero. Los linfocitos B de memoria se aislaron e inmortalizaron usando EBV y CpG como se describe en la referencia 36. Brevemente, los linfocitos B de memoria se aislaron mediante seleccion negativa usando perlas CD22, seguido de la eliminacion de linfocitos B IgM+, IgD+ IgA+ usando anticuerpos especfficos y clasificacion de celulas. Las celulas clasificadas (IgG+) se inmortalizaron con EBV en presencia de CpG 2006 y se irradiaron las celulas mononucleares alogenicas. Los cultivos replicados que contenfan cada uno 50 linfocitos B de memoria se establecieron en veinte placas de fondo U de 96 pocillos. Despues de dos semanas, los sobrenadantes de cultivo se recogieron y se analizaron en cuanto a su capacidad para neutralizar la infeccion por hCMV de fibroblastos o celulas epiteliales en ensayos separados. Los clones de linfocitos B se aislaron a partir de cultivos policlonales positivos como se describe en la referencia 36. Las concentraciones de IgG en el sobrenadante de los clones seleccionados se determinaron usando un ELISA especffico de IgG.

Para el ensayo de neutralizacion vfrica, se mezclo una cantidad titulada de un aislado de hCMV clfnico con un volumen igual de sobrenadante de cultivo o con diluciones de sueros humanos que contenfan anticuerpos neutralizantes. Despues de 1 hora de incubacion a temperatura ambiente, la mezcla se anadio a monocapas confluyentes de celulas endoteliales (por ej., celulas HUVEC o celulas HMEC-1), celulas epiteliales (por ej., celulas retinianas ARPE), fibroblastos (por ej., MRC-9 o celulas estromales mesenquimales) o celulas mieloides (por ej., celulas dendrfticas derivadas de monocitos) en placas de 96 pocillos de fondo plano y se incubaron a 37 °C durante dos dfas. El sobrenadante se descarto, las celulas se fijaron con metanol frfo y se tineron con una mezcla de anticuerpos monoclonales de raton contra antfgenos tempranos del hCMV, seguido de una Ig anti-raton de cabra marcada con fluorescefna. Las placas se analizaron usando un microscopio de fluorescencia. En ausencia de anticuerpos neutralizantes, las celulas infectadas fueron de 100-1.000/campo, mientras que en presencia de concentraciones saturantes de anticuerpos neutralizantes, la infeccion se inhibio por completo. El tftulo neutralizante se indica como la concentracion de anticuerpo (pg/ml) que proporciona una reduccion del 50 % o del 90 % de la infeccion por hCMV.

La Tabla 5A muestra la neutralizacion de un aislado clfnico del hCMV (VR1814) tanto en una lfnea celular fibroblastica (MRC-9) como en una lfnea celular epitelial retiniana humana (ARPE). Algunos anticuerpos neutralizaron la infeccion por hCMV de las celulas epiteliales (ARPE) pero no neutralizaron la infeccion de los fibroblastos (MRC-9). Esto concuerda con los datos previos de que las diferentes protefnas son responsables del tropismo hacia un tipo de celula particular [7]. La mayorfa de estos anticuerpos, que son especfficos de una o mas protefnas del complejo proteico gH/gL/UL128/UL130/UL131A, neutralizaron la infeccion por hCMV de las celulas epiteliales a concentraciones muy bajas (50 % de reduccion de la infeccion por hCMV en concentraciones que

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varfan de 0,01 pg/ml y 0,001 pg/ml). Otros anticuerpos, que son especfficos de la protefna del hCMV gB, gH o una combinacion de gM y gN, neutralizaron la infeccion por hCMV de fibroblastos y celulas epiteliales con potencia comparable. Estos resultados muestran que algunos de los anticuerpos neutralizantes del hCMV son igualmente potentes tanto en fibroblastos como en celulas epiteliales, mientras que otros muestran actividad diferencial en los dos tipos de celulas.

Basandose en el analisis mostrado en la Tabla 5A, los anticuerpos se agruparon en el Grupo 1 (infeccion por hCMV neutralizante de fibroblastos y celulas epiteliales) y el Grupo 2 (infeccion por hCMV neutralizante de celulas epiteliales). La Tabla 5B muestra un experimento independiente realizado usando anticuerpos purificados. Los resultados muestran que los anticuerpos del Grupo 2 neutralizaron la infeccion de celulas epiteliales con valores de CI90 (es decir, la concentracion de anticuerpo necesaria para lograr una reduccion del 90 % de la infeccion vfrica) que varfan de 0,007 pg/ml a 0,003 pg/ml mientras que los anticuerpos del Grupo 1 neutralizaron la infeccion tanto de fibroblastos como de celulas epiteliales con valores de CI90 que varfan de 0,1 pg/ml a 30 pg/ml. Los anticuerpos del Grupo 2 tambien neutralizaron la infeccion de celulas endoteliales (HUVEC) y celulas mieloides (celulas dendrfticas derivadas de monocitos) (datos no mostrados). Los anticuerpos del Grupo 1 tambien neutralizaron la infeccion de celulas endoteliales (HUVEC), celulas mieloides (celulas dendrfticas derivadas de monocitos) y celulas del estroma mesenquimal de medula osea, como se muestra para algunos anticuerpos representativos en la Tabla 5C. Los anticuerpos de la invencion tambien neutralizaron la infeccion de celulas endoteliales (HUVEC) por diferentes aislados clfnicos del hCMV: VR6952 (de orina), VR3480B1 (de sangre, resistente a ganciclovir) y VR4760 (de sangre, resistente a ganciclovir y foscarnet) (datos no mostrados).

Se preve que los anticuerpos que neutralizan la infeccion de diferentes tipos de celulas pueden combinarse para producir un efecto de neutralizacion aditivo o sinergico cuando los diferentes tipos de celulas estan presentes durante la infeccion. Como ejemplo, un anticuerpo neutralizante, tal como 15D8 que es potente para neutralizar la infeccion de celulas epiteliales pero que no neutraliza la infeccion de fibroblastos podrfa combinarse con 3G16 que tiene actividad neutralizante de virus en fibroblastos. Como otro ejemplo, un anticuerpo neutralizante, tal como 9I6 que es potente para neutralizar la infeccion de celulas epiteliales pero no neutraliza la infeccion de fibroblastos, podrfa combinarse con 6B4 que tiene actividad neutralizante de virus en fibroblastos.

Tabla 5A



: Neutralizacion 50 %(1) Neutralizacion 50 %(1)

mAb: Donante Especificidad(2) MRC-9 ARPE

15D8: GRA UL128 - + + + +

4N10: GIO UL130/UL131A + + + + +

10F7: PAP UL130/UL131A + + + +

10P3: PEL UL130/UL131A - + + + +

4122: PEL UL130/UL131A - + + +

8L13: PEL UL130/UL131A - + + +

2C12: PAP UL128/UL130/UL131A + + + +

7B13: PAP UL128/UL130/UL131A - + + + +

7113: PAP UL128/UL130/UL131A - + + +

8C15: PAP UL128/UL130/UL131A - + + + +

8J16: PAP UL128/UL130/UL131A - + + + +

916: PEL UL128/UL130/UL131A - + + + +

8l21: PEL gH/gL/UL128/UL130 - + + +

11B12: PAP gH + +

13H11: GRA gH + + + +

3G16: PEL gH + +

7H3: PEL gB + -

10C6: PEL gB + +

5F1: PEL gB + +

6B4: PEL gB + +

4H9: PEL gB + +

6L3: PEL gM/gN No realizado +

1) Valores que indican la concentracion de anticuerpo necesaria para proporcionar una reduccion del 50 % de la infeccion por hCMV de los fibroblastos (por ej., MRC-9) o celulas epiteliales (p.ej., celulas retinianas ARPE). La concentracion es como se indica a continuacion:

++++ <0,001 pg/ml; +++ <0,01 pg/ml; ++ <0,1 pg/ml; + < 2 pg/ml;

- No neutralizante a la concentracion mas alta probada (2 pg/ml).

2) Especificidad como se define en la Tabla 6.

Tabla 5B




: Neutralizacion 90 %(1) Neutralizacion 90 %(1)

Grupo: mAb Donante Especificidad(2) MRC-9 ARPE

2: 15D8 GRA UL128 nn(3) 0,008

2: 4N10 GIO UL130/UL131A nn 0,02

2: 10F7 PAP UL130/UL131A nn 0,002

2: 10P3 PEL UL130/UL131A nn 0,0025

2: 4l22 PEL UL130/UL131A nn 0,0015

2: 8L13 PEL UL130/UL131A nn 0,001

2: 2C12 PAP UL128/UL130/UL131A nn 0,006

2: 7B13 PAP UL128/UL130/UL131A nn 0,003

2: 7l13 PAP UL128/UL130/UL131A nn 0,008

2: 8C15 PAP UL128/UL130/UL131A nn 0,0025

2: 8J16 PAP UL128/UL130/UL131A nn 0,0008

2: 9l6 PEL UL128/UL130/UL131A nn 0,0007

2: 8l21 PEL gH/gL/UL128/UL130 nn 0,03

1: 11B12 PAP gH 3,5 1,2

1: 13H11 GRA gH 1,12 0,4

1: 3G16 PEL gH 1,0 0,3

1: 7H3 PEL gB 3 0,6

1: 10C6 PEL gB 0,75 0,2

1: 5F1 PEL gB 0,5 0,1

1: 6B4 PEL gB 1,0 0,15

1: 4H9 PEL gB 10 0,4

1: 2B11 PEL gB 0,75 0,2

1: 6L3 PEL gM/gN 30 10

1) Los valores que indican la concentracion de anticuerpo en pg/ml requerida para proporcionar una reduccion del 90 % de la infeccion por hCMV (VR1814) de los fibroblastos (p.ej, MrC-9) o celulas epiteliales (p.ej, celulas retinianas ARPE),

2) Especificidad como se define en la Tabla 6,

3) nn, no neutralizante a la concentracion mas alta probada (10 pg/ml),

Tabla 5C



: Neutralizacion 50 %(1)

Grupo: mAb Especificidad HUVEC Mo-DC BM-MSC

1: 7H3 gB nd 0.06 2

1: 10C6 gB 0,19 0,02 0,3

1: 5F1 gB 0,21 0,05 0,3

1: 6B4 _______gB_______ nd 0,11 2

1) Los valores que indican la concentracion de anticuerpo en pg/ml requerida para proporcionar una reduccion del 50 % de la infeccion por hCMV (VR1814) de las celulas primarias. HUVEC, celulas endoteliales de vena umbilical humana, Mo-DC, celulas dendrfticas derivadas de monocitos, BM-MSC, celulas estromales de medula osea mesenquimales.

5 Ejemplo 2: Identificacion de los antfgenos diana reconocidos por los anticuerpos monoclonales

Para cartografiar la especificidad de los anticuerpos neutralizantes del hCMV, se transfectaron celulas HEK293T con uno o mas vectores que codifican las protefnas del hCMV de longitud completa UL128, UL130, UL131A, gH, gL, gB, gM y gN. Despues de 36 h, las celulas se fijaron, se permeabilizaron y se tineron con los anticuerpos monoclonales 10 humanos seguido de IgG anti-humana de cabra. La Figura 1 muestra la union de anticuerpos representativos a celulas HEK293T que expresan una o mas protefnas del hCMV. La Tabla 6 muestra el patron de tincion de todos los diferentes anticuerpos contra celulas HEK293T transfectadas con el gen del hCMV. Con la excepcion del anticuerpo 15D8, que tenia las celulas transfectadas con UL128, todos los otros anticuerpos del Grupo 2 no tineron transfectantes de un solo gen, lo que sugiere que pueden reconocer epftopos que requieren la coexpresion de mas 15 de un producto genico. De hecho, cinco anticuerpos (4N10, 10F7, 10P3, 4122 y 8L13) tenfan celulas que coexpresaban UL130 y UL131A, seis anticuerpos (2C12, 7B13, 7113, 8C15, 8J16 y 916) tenfan celulas que coexpresaban UL128, UL130 y UL131A, y un anticuerpo (8I21) tenia celulas transfectadas con UL128 y UL130 asf como con gH y gL. Todos estos anticuerpos tambien tineron las celulas HEK293T transfectadas con todos los genes que forman el complejo gH/gL/UL128-130. Entre los anticuerpos del Grupo 1, tres (11B12, 13H11 y 3G16) tenfan 20 celulas que expresan la protefna del hCMV gH, seis (7H3, 10C6, 5F1, 6B4, 4H9 y 2B11) tenfan celulas que expresaban la protefna del hCMV gB y uno (6L3) tenia celulas que coexpresaban las protefnas del hCMV gM y gN.

Tabla 6.



: Anticuerpo monoclonal

: Gru po 2 Grupo 1

Celulas HEK293T transfectadas con:: 15D8 4N10 10F7 2C12 7B13 8l21 11B12 13H11 7H3 10C6 6L3


: 10P3 7l13 3G16 5F1


: 4l22 8C15 6B4


: 8L13 8J16 4H9



: 9l6 2B11

UL128: + - - - - - ndO)

UL130: - - - - - - nd

UL131A: - - - - - - nd

UL128+UL130: + - - - - - nd

UL128+UL131A: + - - - - - nd

UL130+UL131A: - + - - - - nd

UL128+UL130+UL131A: + + + - - - -

gH: - - - - + - -

gH+gL: - - - - + - -

gH+UL128+UL130+UL131A: + + + - + nd nd

gL+UL128+UL130+UL131 A: + + + - - nd nd

gH+gL+UL128: + - - - + nd nd

gH+gL+UL130: - - - - + nd nd

gH+gL+UL131A: - - - - + nd nd

gH+gL+UL128+UL130: + - - + + nd nd

gH+gL+UL128+UL130+UL131 A: + + + + + - -

gB: - - - nd - + -

gM: nd - - nd nd nd -

gN: nd - - nd nd nd -

gM+gN: - - - - nd nd +

1) nd, no realizado

Para explorar adicionalmente la identidad de los sitios de antfgeno a los que se unen los anticuerpos, se realizaron experimentos de competicion cruzada. Aquf, las celulas HEK293T se transfectaron con vectores que codifican las 5 protefnas del hCMV de longitud completa gH, gL, UL128, UL130 y UL131A. Las celulas se incubaron a continuacion con un exceso de 20 veces de un anticuerpo neutralizante del hCMV competidor antes de la adicion de un anticuerpo biotinilado. Este procedimiento se repitio varias veces con diferentes anticuerpos competidores y anticuerpos biotinilados. En estos experimentos se incluyeron cuatro anticuerpos descritos en la Solicitud de patente N.° 11/ 969.104 (IF11, 2F4 y 5A2) y en la Solicitud de patente N.° 12/174.568 (6G4). Los datos se muestran en la 10 Tabla 7A, B.

Tabla 7A.



: Inhibicion de la union %)

Competidor (exceso 20 veces): Especificidad(1) 15D8- biotina 4N10- biotina 10F7- biotina 4I22- biotina 1F11- biotina 2F4- biotina 5A2- biotina

15D8: UL128 100 0 0 0 0 0 0

4N10: UL130/UL131A 0 100 0 0 0 0 100

10F7: UL130/UL131A 0 0 100 100 100 100 0

10P3: UL130/UL131A 0 nd nd 0 0 0 nd

4122: UL130/UL131A nd 0 100 100 100 100 0

8L13: UL130/UL131A nd nd 100 nd 100 nd nd

1F11: UL130/UL131A 0 0 100 100 100 100 0

2F4: UL130/UL131A nd 0 100 100 100 100 0

5A2: UL130/UL131A nd 100 0 0 0 50(2) 100

2C12: UL128/UL130/UL131A 0 0 0 0 0 0 0

7B13: UL128/UL130/UL131A nd nd nd nd nd nd nd

7I13: UL128/UL130/UL131A nd nd nd nd 0 nd nd

8C15: UL128/UL130/UL131A nd nd nd 0 nd nd nd

8J16: UL128/UL130/UL131A nd nd nd 0 0 0 nd

916: UL128/UL130/UL131A nd nd Nd 0 0 0 nd

6G4: UL128/UL130/UL131A 0 0 0 0 0 0 0

8121: gH/gL/UL128/UL130 0 90 nd 0 0 0 95

1) Especificidad tal como se define en la Tabla 6.

5

10

15

20

25

2) La competencia por debajo del 100 % puede deberse al solapamiento parcial de los epftopos o a impedimento esterico o a una menor afinidad.

Tabla 7B.


: Inhibicion de la union (%)

Competidor (exceso 20 veces): Especificidad'1 2C12- biotina 8C15- biotina 8J16- biotina 916- biotina 6G4- biotina 8121- biotina

15D8: UL128 0 nd Nd nd 0 0

4N10: UL130/UL131A 0 nd Nd nd 0 90(2)

10F7: UL130/UL131A 0 nd Nd nd 0 0

10P3: UL130/UL131A 0 nd Nd nd 0 0

4l22: UL130/UL131A 0 nd 0 nd nd 0

8L13: UL130/UL131A nd nd Nd nd nd nd

1F11: UL130/UL131A 0 nd Nd nd 0 0

2F4: UL130/UL131A 0 nd Nd 0 0 0

5A2: UL130/UL131A 0 nd Nd 0 0 92

2C12: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 100 100 0

7B13: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 100 100 0

7l13: UL128/UL130/UL131A 0 0 0 0 0 0

8C15: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 100 100 0

8J16: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 70 100 0

916: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 100 100 0

6G4: UL128/UL130/UL131A 100 100 100 100 100 0

8l21: gH/gL/UL128/UL130 0 nd Nd nd 0 100

3G16: ____________________ 0 nd Nd nd 0 0

1) Especificidad tal como se define en la Tabla 6.

Basandose en los datos de la Tabla 7A, B, se pueden distinguir al menos siete sitios antigenicos distintos en el complejo del hCMV formado por gH, gL, UL128 y UL130 (Tabla 8). El sitio 1 esta presente en UL128 y esta definido por el anticuerpo 15D8. Los sitios 2 a 4 estan formados por la combinacion de UL130 y UL131A y estan definidos por los anticuerpos 10F7, 4I22, 8L13, 1F11 y 2F4 (sitio 2), por 4N10 y 5A2 (sitio 3), y por 10P3 (sitio 4), respectivamente. Los sitios 5 y 6 estan formados por la combinacion de UL128, UL130 y UL131A y estan definidos por los anticuerpos 2C12, 7B13, 8C15, 8J16, 916 y 6G4 (sitio 5) y por 7113 (sitio 6), respectivamente. Finalmente, el sitio 7 esta formado por la combinacion de gH, gL, UL128 y UL130 y esta definido por el anticuerpo 8121. Los anticuerpos que definen el sitio 7 y el sitio 3 compitieron parcialmente entre si, lo que sugiere que estos sitios pueden estar proximos en la estructura del complejo gH/gL/UL128-131A.

Se anticipa que los anticuerpos neutralizantes dirigidos a diferentes epftopos en la misma diana se pueden usar en combinacion para lograr una neutralizacion robusta de la infeccion del virus, como se ejemplifica por 10F7 y 4N10 o por 8J16 y 7I13. Ademas, se preve que los anticuerpos neutralizantes dirigidos a diferentes moleculas diana o combinaciones de moleculas diana se puedan usar juntos para lograr una neutralizacion robusta del virus. Como un ejemplo, la Tabla 8 sugiere que 15D8 y 10F7, 15D8 y 2C12, u 8J16 y 8I21 podrfan combinarse para producir efectos de neutralizacion del hCMV aditivos o sinergicos.

Tabla 8.

Antfgeno diana: Sitio antigenico Anticuerpos que definen el sitio antigenico

UL128: 1 15D8

UL130/UL131A: 2 10F7, 4I22, 8L13, 1F11, 2F4

UL130/UL131A: 3 4N10, 5A2

UL130/UL131A: 4 10P3

UL128/UL130/UL131A: 5 2C12, 7B13, 8C15, 8J16, 916, 6G4

UL128/UL130/UL131A: 6 7I13

g H/g L/UL128/UL130: 7 8I21

De una manera similar a la descrita en la Tabla 7, las celulas HEK293T se transfectaron con un vector que codifica gH de longitud completa para examinar la union de competicion cruzada de los anticuerpos anti-gH. Como puede verse en la Figura 2a y en la Tabla 9, se identificaron al menos dos sitios de union diferentes en la protefna del hCMV gH. El anticuerpo 3G16 define un sitio y los anticuerpos 11B12 y 13H11 definen un segundo sitio. Finalmente, las celulas HEK293T se transfectaron con un vector que codificaba gB de longitud completa para examinar la union de competicion cruzada de los anticuerpos anti-gB. Como se puede ver en la Figura 2B y la Tabla 10, se identificaron al menos tres sitios antigenicos diferentes en la protefna del hCMV gB. El anticuerpo 6B4 define un

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sitio, 7H3 define un segundo sitio y el conjunto de 10C6, 5F1, 4H9 y 2B11 define un tercer sitio. El anticuerpo 6B4 (que reconoce el sitio 1 de la gB) reacciono mediante ELISA con el peptido gB 69-78 (CE50 de 0,044 pg/ml). Se preve que los anticuerpos que se dirigen a sitios diferentes incluso en la misma molecula diana se puedan usar en combinacion para lograr una neutralizacion robusta del virus.

Tabla 9.


: Inhibicion de la union (%) de:

Competidor (exceso 20 veces): Especificidad(1) 3G16-biotina 11B12-biotina 13H11-biotina Sitio antigenico en gH

3G16: gH 100 0 0 1

11B12: gH 0 100 100 2

13H11: ______gH______ 0 100 100 2

1) Como se define en la Tabla 6

Tabla 10.


: Inhibicion de la union (%) de:

Competidor (exceso 20 veces): Especificidad(1) 7H3- biotina 10C6- biotina 5F1- biotina 6B4- biotina 4H9- biotina 2B11- biotina Sitio antigenico en gH

6B4: gB 0 0 0 100 0 0 1

7H3: gB 100 0 0 0 0 0 2

10C6: gB 0 100 100 0 100 100 3

5F1: gB 0 100 100 0 100 100 3

4H9: gB 0 100 100 0 100 100 3

2B11: _gB____________ 0 100 100 0 100 100 3

1) Como se define en la Tabla 6.

2) La competencia por debajo del 100 % puede deberse a una superposicion parcial de epftopos, a impedimento esterico o a una menor afinidad.

Como resumen, 15D8 se une a un epftopo de UL128 que es distinto del epftopo reconocido por 2C12, 7B13, 6G4 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A) y del epftopo reconocido por 8121 (especffico de una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130). Ademas, la union de 15D8 a su epftopo no es inhibida por 4N10, 10F7, 10P3 y 1F11 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A).

4N10 se une a un epftopo que requiere la expresion de UL130 y UL131A y que es igual o se solapa en gran medida a los epftopos reconocidos por 5A2 (especffico de una combinacion de UL130 y UL131A) y 8121 (especffico de una combinacion de gH, gL, uL128 y UL130 ) pero distinto de los epftopos reconocidos por 10F7, 4122, 1F11, 2F4 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A), 2C12 y 6G4 (ambos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A). Ademas, la union de 4N10 a su epftopo no es inhibida por 15D8 (especffico de UL128).

10F7 se une a un epftopo que requiere la expresion de UL130 y UL131A que es igual o se solapa en gran medida con el epftopo o los epftopos reconocidos por 4122, 8L13, 1F11 y 2F4 pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 4N10 y 5A2 (ambos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A), asf como distinto de los epftopos reconocidos por 2C12 y 6G4 (ambos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A). Ademas, la union de 10F7 a su epftopo no es inhibida por 15D8 (especffico de UL128) o por 13H11 (especffico de gH).

4122 se une a un epftopo que requiere la expresion de UL130 y UL131A y que es igual o que se solapa parcialmente al epftopo o epftopos reconocidos por 2F4, 1F11 y 10F7 pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 4N10, 10P3 y 5A2 (todos ellos especfficos de un combinacion de UL130 y UL131A) y distinto de los epftopos reconocidos por 2C12, 8C15, 8J16, 916, 6G4 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A) y 8121 (especffico de una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130. Ademas, la union de 4122 a su epftopo no es inhibida por los anticuerpos 15D8 (especffico de UL128) o por 13H11 (especffico de gH).

2C12 se une a un epftopo que requiere la expresion de los productos de los genes del hCMV UL128, UL130 y UL131A y que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 7B13, 8C15, 8J16, 916 y 6G4 pero distinto del epftopo reconocido por 7113 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A) y distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 15D8 (especffico de UL128), 4N10, 10F7, 10P3, 4122, 8L13, 1F11, 2F4, 5A2 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A) y 8121 (especffico de una combinacion de gH, gL, UL128 y UL130). Ademas, la union de 2C12 a su epftopo no es inhibida por 3G16 (especffico de gH).

8C15 se une a un epftopo que requiere la expresion de los productos de los genes del hCMV UL128, UL130 y

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UL131A y que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 2C12, 7B13, 8J16, 916 y 6G4 pero distinto del epftopo reconocido por 7I13 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A).

8J16 se une a un epftopo que requiere la expresion de los productos de los genes del hCMV UL128, UL130 y UL131A y que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 2C12, 7B13, 8C15, 916 y 6G4, pero distinto del epftopo reconocido por 7I13 (todos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A) y del epftopo reconocido por 4122 (especffico de una combinacion de UL130 y UL131A).

9I6 se une a un epftopo que requiere la expresion de los productos de los genes del hCMV UL128, UL130 y UL131A y que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 2C12, 7B13, 8C15, 8J16 y 6G4 pero distinto del epftopo reconocido por 7113 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A) y de los epftopos reconocidos por 2F4 y 5A2 (especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A).

8I21 se une a un epftopo que requiere la expresion de los productos de los genes del hCMV gH, gL, UL128 y UL130 y que puede solaparse parcialmente con el epftopo o epftopos reconocidos por 4N10 y 5A2 (ambos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A) pero distinto de los epftopos reconocidos por 15D8 (especffico de UL128), 10F7, 10P3, 4I22, 1F11, 2F4 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL130 y UL131A), 2C12, 7B13, 7113, 8C15, 8J16, 916 y 6G4 (todos ellos especfficos de una combinacion de UL128, UL130 y UL131A). Ademas, la union de 8I21 a su epftopo no es inhibida por 3G16 (especffico de gH).

3G16 se une a un epftopo de gH que es distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 11B12 y 13H11 (ambos especfficos de gH).

11B12 se une a un epftopo de gH que es igual o se solapa en gran parte con el epftopo reconocido por 13H11 y distinto de los epftopos reconocidos por 3G16 (ambos especfficos de gH).

13H11 se une a un epftopo de gH que es igual o se solapa en gran parte con el epftopo reconocido por 11B12 y distinto de los epftopos reconocidos por 3G16 (ambos especfficos de gH).

6B4 reconoce un epftopo de gB que es distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 7H3, 4H9, 5F1, 10C6 y 2B11 (todos ellos especfficos de gB).

7H3 se une a un epftopo de gB que es distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 6B4, 7H3, 4H9, 5F1, 10C6 y 2B11 (todos ellos especfficos de gB).

10C6 se une a un epftopo de gB que es igual o parcialmente solapado con el epftopo o epftopos reconocidos por 5F1, 4H9 y 2B11, pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 7H3 y 6B4 (todos ellos especfficos de gB).

5F1 se une a un epftopo de gB que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 10C6, 4H9 y 2B11 pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 6B4 y 7H3 (todos ellos especfficos de gH).

4H9 se une a un epftopo de gB que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 5F1, 10C6 y 2B11, pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 6B4 y 7H3 (todos ellos especfficos de gH).

2B11 se une a un epftopo de gB que es el mismo o se solapa en gran parte con el epftopo o epftopos reconocidos por 5F1, 10C6 y 4H9 pero distinto del epftopo o epftopos reconocidos por 6B4 y 7H3 (todos ellos especfficos de gH).

Ejemplo 3: Amplitud de la actividad neutralizante del anticuerpo 15D8

UL128 es el gen mas conservado del locus UL132-128. Sin embargo, las secuencias derivadas de varios aislados clfnicos revelaron la existencia de 10 variantes con una o mas mutaciones en comparacion con la secuencia VR1814. Por lo tanto, investigamos si la union del anticuerpo 15D8 especffico de UL128 se verfa afectada por cualquiera de estas mutaciones. Con este objetivo, se alinearon secuencias publicadas de aminoacidos de variantes de UL128 de aislados clfnicos (VR4603-M, VR4836-M, VR5001-M, VR4254-M, VR4969-M, VR4313-M, VR4116-M, VR5235-T, VR5055-T, VR4168-A, VR1814-PCR) y cepas de laboratorio (Towne, TB40/E, AD169, Merlin y Toledo) y se sintetizo un gen que codifica una protefna que incluye todas las sustituciones de aminoacidos descritas, asf como una mutacion adicional que se vio que se generaba a una frecuencia muy alta in vitro tras la amplificacion por PCR (F33V). La secuencia de nucleotidos del gen sintetico fue:

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atgaacagcaaagacctgacgccgttcttgacgaccttgtggctgctattggaccacagccgcgtgccgcgggtacgcgcagaagaatgtt

gcgaattcataaacgtcaaccacccgccggaacgctgttacgatttcaaaatgtgcaatctgttcaccgtcgcgctgcggtgtccggacggc

gaagtctgctacagtcccgagaaaacggctgagattcgcgggatcgtcaccaccatgacccattcattgacacgccaggtcatccacaaca

aactgacgagctgcaactacaatccgttatacctcgaagctgacgggcgaatacgctgcggcaaagtgagcgacaaggcgcagtacctg

ctgggcgccgctggcagcgttccctatcgatggatcaacctggaatacgacaagataacccggatcgtgggcctggatcagtacctggag

agcgttaagaaacacaaacggctggatgtgtgccgcgctaaaatgggctatatgctgcagtag.

Las celulas HEK293T se transfectaron con el UL128 original de VR1814 o con el gen pan-mutado y se tineron con diluciones en serie del anticuerpo 15D8. Como se muestra en la Figura 3, la protema de UL128 original y del pan- mutado fueron reconocidas por 15D8 con una eficacia comparable (tincion saturada a ~ 0,2 pg/ml). Estos hallazgos indican que 15D8 reconoce un epftopo altamente conservado en la protema codificada por UL128.

REFERENCIAS

[1] Plachter et al. (1996) Adv Virus Res 46:195-261.

[2] Gerna et al. (2002) J Med Virol 66:335-339.

[3] Adler, B., L. Scrivano, Z. Ruzcics, B. Rupp, C. Sinzger, and U. Koszinowski. 2006. Role of human cytomegalovirus UL131A in cell type-specific virus entry and release. J Gen Virol 87:2451-2460.

[4] Gerna, G., E. Percivalle, D. Lilleri, L. Lozza, C. Fornara, G. Hahn, F. Baldanti, and M.G. Revello. 2005. Dendritic-cell infection by human cytomegalovirus is restricted to strains carrying functional UL131-128 genes and mediates efficient viral antigen presentation to CD8+ T cells. J Gen Virol 86:275-284.

[5] Hahn, G., M.G. Revello, M. Patrone, E. Percivalle, G. Campanini, A. Sarasini, M. Wagner, A. Gallina, G. Milanesi, U. Koszinowski, F. Baldanti, and G. Gerna. 2004. Human cytomegalovirus UL131-128 genes are indispensable for virus growth in endothelial cells and virus transfer to leukocytes. J Virol 78:10023-10033.

[6] Patrone, M., M. Secchi, L. Fiorina, M. lerardi, G. Milanesi, and A. Gallina. 2005. Human cytomegalovirus UL130 protein promotes endothelial cell infection through a producer cell modification of the virion. J Virol 79:8361-8373.

[7] Wang, D., and T. Shenk. 2005. Human cytomegalovirus virion protein complex required for epithelial and endothelial cell tropism. Proc Natl Acad Sci USA 102:18153-18158.

[8] Wang, D., and T. Shenk. 2005. Human cytomegalovirus UL131 open reading frame is required for epithelial cell tropism. J Virol 79:10330-10338.

[9] Nigro et al. 2005. Passive immunization during pregnancy for congenital cytomegalovirus infection. N Engl J Med 353:1350-1362.

[10] Borucki et al. 2004, A phase II, double-masked, randomized, placebo-controlled evaluation of a human monoclonal anti-Cytomegalovirus antibody (MSL-109) in combination with standard therapy versus standard therapy alone in the treatment of AIDS patients with Cytomegalovirus retinitis. Antiviral Res 64:103-111.

[11] McLean et al. 2005. Recognition of human cytomegalovirus by human primary immunoglobulins identifies an innate foundation to an adaptive immune response. J Immunol, 174:4768-4778.

[12] Lefranc et al. 2003. IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains. Dev Comp Immunol. 27(1):55-77.

[13] Lefranc et al. 1997. Unique database numbering system for immunogenetic analysis. Immunology Today, 18:509.

[14] Lefranc (1999) The Immunologist, 7:132-136.

[15] US 3.766.162

[16] US 3.791.932

[17] US 3.817.837

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40

45

50

[18] US 4.233.402

[19] US 4.676.980

[20] US 4.831.175

[21] US 5.595.721

[22] WO00/52031

[23] WO00/52473

[24] US 4.766.106

[25] US 4.179.337

[26] US 4.495.285

[27] US 4.609.546

[28] Knauf et al. (1988) J. Bio. Chem. 263:15064-15070

[29] Gabizon et al. (1982) Cancer Research 42:4734

[30] Cafiso (1981) Biochem Biophys Acta 649:129

[31] Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Eng. 9:467

[32] Poznansky et al. (1980) Drug Delivery Systems (R.L. Juliano, ed., Oxford, N.Y.) pp. 253-315

[33] Poznansky (1984) Pharm Revs 36:277

[34] Kohler, G. and Milstein, C,. 1975, Nature 256:495-497.

[35] Kozbar et al. 1983, Immunology Today 4:72.

[36] WO2004/076677

[37] Chapter 4 of Kuby Immunology (4th edition, 2000; ASIN: 0716733315

[38] Jones et al. Biotechnol Prog 2003,19(1): 163-8

[39] Cho et al. Cytotechnology 2001,37:23-30

[40] Cho et al. Biotechnol Prog 2003,19:229-32

[41] US 5.807.715

[42] US 6.300.104

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Humab, LLC

<120> ANTICUERPOS NEUTRALIZANTES DEL CITOMEGALOVIRUS HUMANO Y USO DE LOS MISMOS

<130> HMB0007-401-PC <150> 61/081.334 <151> <160> 370

<170> Patentin version 3.5

<210> 1 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 1

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Val 1 5

<210>2 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 2

Val lie Pro lie Phe Asp Thr Val 1 5

<210>3 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 3

Ala Arg Gly lie Leu Ala Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Asn Thr Pro 15 10 15

Tyr Gly Met Asp Val 20

<210>4 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 4

Gin Ser lie Ser Ser Trp 1 5

<210>5 <211>3 <212> PRT

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

<213> Homo sapiens <400>5

Lys Ala Ser 1

<210>6 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400>6

Gin Gin Tyr Asn Ser Ser Trp Thr 1 5

<210>7 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400>7

ggaggcacct tcagcagcta tgtt

<210>8 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400>8

gtcatcccta tctttgatac agta

<210>9 <211> 63 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400>9

gcgagaggaa ttctagcata ttgtggtggt gattgctata atacccotta cggtatggac gtc

24

60

63

<210> 10 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 10

cagagtatta gtagctgg 18

<210> 11 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 11

aaggcgtct 9

<210> 12 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 12

caacagtata atagttcgtg gacg 24

<210> 13

5 <211>128

<212> PRT <213> Homo sapiens

10

<400> 13

imagen1

<210> 14 <211> 106 15 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 14

20

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser He Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

5

10

15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 20

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu lie 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 65 70

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 85

Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu 100

<210> 15 <211>385 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 15

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag

tcctgcaagg cttctggagg caccttoagc

cctggacaag gtcttgagtg gatggggggg

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt

atggagctga gcagcctgaa atctgaggac

ctagcatatt gtggtggtga ttgctataat

gggaccacgg tcaccgtctc ctcag

<210> 16 <211> 319 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 16

gacatccaga tgacccagtc tccttccatc atcacttgcc gggccagtca gagtattagt gggaaagccc caaaactcct aatctataag aggatcagcg gcagtggatc tgggacagaa

gatgattttg caacttatta ctgccaacag acgaaggtgg aaatcaaac

Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Trp 25 30

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 45

Gly Val Pro Ser Arg lie Ser Gly 60

l>eu Thr lie Ser Ser lieu Gin Pro 75 80

Gin Gin Tyr Asn Ser Ser Trp Thr 90 95

lie Lys 105

gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagggtc agctatgtta tcatctgggt gcgacaggcc gtcatcccta tctttgatac agtaaattac accgcggacg aatccacgag tactgcctac acggccgtat attactgtgc gagaggaatt accccttacg gtatggacgt ctggggccaa

ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc agctggttgg cctggtatca gcagaaacca gcgtctagtt tagaaattgg ggtcccatca ttcactctca ccatoagcag cotgcagoct tataatagtt cgtggacgtt cggccaaggg

60

120

180

240

300

360

385

60

120

180

240

300

319

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<210> 17 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 17

Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Ala 1 5

<210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 18

lie Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr 15 10

<210> 19 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19

Thr Arg Ala Ser Ser lieu lieu Trp Leu Leu Asn Pro Gin Pro Asn Phe 15 10 15

Asp Tyr

<210> 20 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 20

Asn lie Gly Ser Asn Asn 1 5

<210> 21 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 21

Asp Asp Ser 1

<210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 22

Gin Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Pro Val 15 10

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

<210> 23 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 23

ggattcacct ttggtgatta tgct

24

<210> 24 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 24

attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 30

<210> 25 <211> 54 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 25

actagagcat cttcattact atggttacta aaccctcaac ccaactttga ctac

54

<210> 26 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 26

aacattggaa gtaacaat 18

<210> 27 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 27

gatgatagc 9

<210> 28 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 28

caggtgtggg atagtagtag tgatcatccg gta 33

<210> 29 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 29

5

Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser l>eu Arg lieu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly lieu Glu Trp Val 35 40 45

Gly Phe lie Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala 50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser lie 65 70 75 80

Ala Tyr lieu Gin Met Asn Ser lieu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95

Tyr Cys Thr Arg Ala Ser Ser Leu Leu Trp Leu Leu Asn Pro Gin Pro 100 105 110

Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr lieu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 30 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 30

Ser Tyr Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Gly Gly Asn Asn lie Gly Ser Asn Asn Val 20 25 30

His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

5

10

15

20

25

30

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 85 90 95

Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105

<210> 31 <211> 382 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 31

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60

tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ocgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180

gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240

gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300

gcatcttcat tactatggtt actaaaccct caacccaact ttgactactg gggccaggga 360

accctggtca ccgtctcctc ag 382

<210> 32 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 32

tcctatgtgc: tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60

acctgtgggg: gaaacaacat tggaagtaac aatgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120

caggcccctg: tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180

ttctctggct: ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240

gatgaggcog: actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatcc ggtattcggc 300

ggagggacca: agctgaccgt cctag 325

<210> 33 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 33

Gly Phe Thr Phe His Asn Tyr Arg 1 5

<210> 34 <211>8

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 34

He Lys Gin Asp Gly Ser Glu Lys 1 5

<210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 35

imagen2

<210> 36 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 36

Val Leu Pro Asn Gin Tyr 1 5

<210> 37 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 37

Lys Asp Thr 1

<210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 38

Gin Ser Ala Asp Ser Ser Gly Ala Asp Tyr Val 15 10

<210> 39 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 39

ggattcacct ttcataacta tcgc

<210> 40 <211> 24 <212> ADN

5

10

15

20

25

30

35

40

45

<213> Homo sapiens <400> 40

ataaagcaag atggaagtga gaaa 24

<210> 41 <211> 57 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 41

gcgaggggtg aagggtacac ctatggtgtc gtctactcct attccgctat ggacgtc 57

<210> 42 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 42

gtattgccaa accaatat 18

<210> 43 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 43

aaagacact 9

<210> 44 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 44

caatcagcag acagcagtgg tgccgattat gtc

33

<210> 45 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 45

Glu Val Gin I*eu Val Glu Ser Gly Gly Gly lieu Val Arg Pro Gly Gly 15 10 15

Ser lieu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe His Asn Tyr 20 25 30

Arg Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly lieu Glu Trp val 35 40 45

Ala Asn lie Lys Gin Asp Gly Ser Glu Lys Ser Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

lieu Gin lie Asn Ser lieu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Glu Gly Tyr Thr Tyr Gly Val Val Tyr Ser Tyr Ser Ala 100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val lie Val Ser Ser 115 120 125

<210> 46 <211> 108 5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 46

Ser Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Arg lie Thr Cys Ser Gly Asn Val lieu Pro Asn Gin Tyr Ala 20 25 30

Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val lieu Val lie Tyr 35 40 45

Lys Asp Thr Glu Arg Pro Ser Gly lie Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr lieu Thr lie Ser Gly Val Gin Ala Glu 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Ala Asp Ser Ser Gly Ala Asp 85 90 95

10

Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105

<210> 47 <211>379 <212> ADN

15 <213> Homo sapiens

5

10

15

20

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30

35

<400> 47

gaggtgcagc

tcatgtgcag

ccagggaagg

gtggactctg

ctgcaaatta

gggtacacct

acagtcatcg

tggtagagtc tgggggaggc ttggtccggc ctggggggto octgagactc cctctggatt cacctttcat aactatcgca tgaactgggt ccgccaggct ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaaatcctat tgaggggccg attcaccacc tccagagaca actccaagaa ttcactctat acagcctgcg agccgaggac acggctgtct attactgtgc gaggggtgaa atggtgtcgt ctactcctat tccgctatgg acgtctgggg ccaagggacc tctcctcag

<210> 48 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

60

120

180

240

300

360

379

<400> 48

toctatgagc: tgacacagcc accotoggtg tcagtgtccc caggacagac ggccaggatc 60

acctgctctg: gaaatgtatt gccaaaccaa tatgcttctt ggtaccagca gaagccaggc 120

caggcocctg: tattggtgat atataaagac actgagaggc cctcagggat ocotgggcga 180

ttctctggct: ccagctcagg gacgacagtc acgttgacca tcagtggagt coaggcagag 240

gacgaggctg: actattactg tcaatcagca gacagcagtg gtgccgatta tgtcttcgga 300

actgggacca: aggtcaccgt cctag 325

<210> 49 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 49

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5

<210> 50 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 50

lie Ser Tyr Asp Gly Asp Asn Lys 1 5

<210> 51 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 51

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ala Arg Glu Glu Leu Val Gly Leu Met Pro Pro Tyr Tyr Asn Tyr Gly 15 10 15

Leu Asp Val

<210> 52 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 52

Asn Ser Asn lie Gly Asn Asn Tyr 1 5

<210> 53 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 53

Asp Asn Asp 1

<210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 54

Glu Thr Trp Asp Thr Ser Leu Ser Ala Ala Val Val 15 10

<210> 55 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 55

ggattcacct tcagttccta tgct

24

<210> 56 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 56

atttcatatg atggcgacaa caaa 24

<210> 57 <211> 57 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 57

gcgagagaag agttagtcgg gttgatgcct ccctattaca actacggatt ggacgtc 57

<210> 58 <211> 24

5

10

15

20

25

30

35

<212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 58

aactccaaca tcgggaataa ttat 24

<210> 59 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 59

gacaatgat 9

<210> 60 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 60

gaaacatggg ataccagcct gagtgctgct gttgtc 36

<210> 61 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 61

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg lieu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Asp Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Arg lie Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Ala Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Glu Leu Val Gly Leu Met Pro Pro Tyr Tyr Asn Tyr Gly 100 105 110

l*eu Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 62 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

<400> 62

imagen3

<210> 63 <211>379 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 63

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggg gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt tcctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atttcatatg atggcgacaa caaattctac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaggatc tccagagaca catccaagaa tacactgtat 240 ctggaaatga acagcctgag agctgcggac acggctatat attactgtgc gagagaagag 300 ttagtcgggt tgatgcctcc ctattacaac tacggattgg acgtctgggg ccaaggaacc 360 acggtcaccg tctcgtcag 379

<210> 64 <211> 334 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 64

5

10

15

20

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30

35

40

45

cagtctgtgt tgactcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60

tcctgctotg gaagcaactc caacatcggg aataattatg tatcgtggta ccagcagctc 120

ccaggaagag cccccaaact cctcatttat gacaatgatc accgaccctc agggattcct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggtcatcac cggactccag 240

actggggacg aggccgatta ttactgcgaa acatgggata ccagcctgag tgctgctgtt 300

gtcttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctac 334

<210> 65 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 65

Gly Phe Ser Leu Asn Thr Asn Gly Val Gly 15 10

<210> 66 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 66

lie Tyr Trp Asn Gly Asn Glu 1 5

<210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 67

Val His Trp Pro Gin Gly Leu Thr Thr Val Thr Arg Leu Ala Phe Asp 15 10 15

lie

<210> 68 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 68

Thr Ser Asp Val Gly Arg Tyr Asn Phe 1 5

<210> 69 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 69

5

10

15

20

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40

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50

55

60

Asp Val Ser 1

<210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 70

Cys Ser Tyr Ala Gly Gly Asn Phe Phe Ser Tyr Val 15 10

<210> 71 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 71

ggcttctcac tcaacactaa tggagtgggt

<210> 72 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 72

atttactgga atggtaatga g

<210> 73 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 73

gtacactggc cccaagggtt gactacggtg acaagacttg cttttgatat c

<210> 74 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 74

accagtgatg ttggtcgtta taacttt

<210> 75 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 75 gatgtcagt

<210> 76 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 76

tgctcatatg caggcggcaa ttttttctct tatgtc

<210> 77

30

21

51

27

9

<211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens

5 <400> 77

Gin He Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Asn 20 25 30

Gly Val Gly Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala Leu lie Tyr Trp Asn Gly Asn Glu Gly Tyr Ser Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr He Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Val His Trp Pro Gin Gly Leu Thr Thr Val Thr Arg Leu Ala Phe 100 105 110

Asp He Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 78

10 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 78 15

5

10

imagen4

<210> 79 <211> 376 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 79

cagatcacct tgagggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg

€0

acctgcacct tctctggctt ctcactcaac actaatggag tgggtgtggg ctggatccgt

120

cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt actggaatgg taatgagggc

180

tacagcccct ctctgaaaag cagactcacc atcaccaagg acacctccaa aaaccaggtg

240

gtcctgacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgtacactgg

300

ccccaagggt tgactacggt gacaagactt gcttttgata tctggggcca agggactatg

360

gtcaccgtct ottcag

376

<210> 80 <211>337 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 80

cagtctgccc tgactcagcc tcgctcagtg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc

60

tcctgcactg gaaccaccag tgatgttggt cgttataact ttgtctcctg gtaccaacaa

120

5

10

15

20

25

30

35

40

45

cacccaggca aagococoaa actcctgatg tatgatgtca gtcagcggcc ctcaggggtc 180

octagtogot tctotggoto caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240

caggctgagg atgaggctgt tttttactgc tgctcatatg caggcggcaa ttttttctct 300

tatgtcttcg gaactgggac caaggtcaoc gtcctag 337

<210> 81 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 81

Gly Gly Ser lie Arg Ser Tyr Tyr 1 5

<210> 82 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 82

lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr 1 5

<210> 83 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 83

Ala Arg His Asp Val lie Val Val Arg Gly Val Phe Asp Val 15 10

<210> 84 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 84

Ser Ser Asp lie Gly Thr Tyr Asn Leu 1 5

<210> 85 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 85

Asp Gly Ser 1

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

<210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 86

Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Ser Asp Phe Phe Val Val 15 10

<210> 87 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 87

ggtggctcca tccggagtta ctac 24

<210> 88 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 88

atctattaca gtgggaacac c 21

<210> 89 <211> 42 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 89

gcgagacatg atgtgatagt agtccgcggt gtctttgatg tc 42

<210> 90 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 90

agcagtgata ttggaactta taacctt 27

<210> 91 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 91

gatggcagt 9

<210> 92 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 92

tgctcatatg ctggtactag cgatttcttt gtggtt

<210> 93 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

<400> 93

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Arg Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly His lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Gin 50 55 60

Ser Arg Val Thr lie Ser lieu Asp Thr Pro Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg His Asp Val lie Val Val Arg Gly Val Phe Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Val Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 94 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 94

Gin Ser Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp lie Gly Thr Tyr 20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val 35 40 45

Leu lie Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe

5

10

15

20

25

50

55

60

Ser Ala Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Thr Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Thr 85 90 95

Ser Asp Phe Phe Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110

<210> 95 <211> 361 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 95

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggt ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatccgg agttactact ggagctggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggagtg gattgggcac atctattaca gtgggaacac caactacagc 180

ccctccctcc agagtcgagt caccatatca ttagacacgc ccaagaacca attctccctg 240

cggctgagct ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtctatt actgtgcgag acatgatgtg 300

atagtagtcc gcggtgtctt tgatgtctgg ggccaaggga cagtggtcac cgtctcttca 360

g 361

<210> 96 <211>337 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 96

cagtctgccc: tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtcac ctggacagtc gatcaccatc 60

tcctgcactg: gaaccagcag tgatattgga acttataacc ttgtctcctg gtaccaacaa 120

cacccaggca: aagcccccaa agtcctaatt tatgatggca gtaagcggcc ctcaggggtt 180

tctagtcgct: tctctgcctc caagtctggc aacacggcct ccctgacaat ctctgggctc 240

caggctgagg: acgagactga ttattactgc tgctcatatg ctggtactag cgatttcttt 300

gtggttttcg: gcggagggac caagctgacc gtcctgg 337

<210> 97 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 97

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

Gly Asp Thr Phe Pro Ala Tyr Trp

1 5

<210> 98 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 98

lie Tyr Pro lie Asp Ser Glu Thr 1 5

<210> 99 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 99

Ala Arg Gly Thr Ser Thr Gly Leu Arg Glu Ala Phe His lie 15 10

<210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 100

Gin Ser Leu Gly Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 15 10

<210> 101 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 101

Glu Val Ser 1

<210> 102 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 102

Met Gin Gly Thr His Trp Pro Pro Met Cys Ser 15 10

<210> 103 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 103

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

ggagacactt ttcccgccta ctgg

24

<210> 104 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 104

atctatccta ttgactctga gacc 24

<210> 105 <211> 42 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 105

gcccggggga caagtactgg cctcagagag getttteata tc 42

<210> 106 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 106

caaagcctcg gatacagtga tggaaacacc tat 33

<210> 107 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 107

gaggtttct 9

<210> 108 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 108

atgcaaggta cacactggcc tcccatgtgc agt 33

<210> 109 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 109

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Ser Leu Lys He Ser Cys Arg Glu Ser Gly Asp Thr Phe Pro Ala Tyr 20 25 30

Trp lie Ala Trp val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Tyr Pro lie Asp Ser Glu Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60

Gin Gly Gin Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Ser Ala lie Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Gly Thr Ser Thr Gly Leu Arg Glu Ala Phe His lie Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 110 <211> 114 5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 110

Asp Val Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Thr Leu Gly 15 10 15

Gin Pro Ala Tyr lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Gly Tyr Ser 20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Arg Arg Leu lie Tyr Glu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Thr Tyr Tyr Cys Met Gin Gly 85 90 95

Thr His Trp Pro Pro Met Cys Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110

lie Lys

5

10

15

20

25

30

35

<210> 111 <211>364 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 111 gaggtgcagc tcctgtaggg cccgggaaag agcocgtoct ctgcagtgga agtactggcc tcag

tggtgcagtc

aatctggaga

gcctggagtg

tccaaggcca

gcagcctgaa

tcagagaggc

tggagcagag

cacttttccc

gatgggaatt

ggtcaccatt

ggcctcggac

ttttcatatc

gtgaaaaagc

gcctactgga

atctatccta

tcagccgaca

tcogocattt

tggggccaag

ccggggagtc

tcgcctgggt

ttgactctga

agtccatcaa

attactgtgc

ggacaatggt

tctgaagatc

gcgccagatg

gaccacatat

caccgcctac

ccgggggaca

oaocgtotot

<210> 112 <211> 343 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 112

gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc otggccgtca cccttggaca atctcctgca ggtcaagtca aagcctcgga tacagtgatg gaaacaccta tttcagcaga gaccaggcca atctcccagg cgcctaattt atgaggtttc tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcgggca ctgatttcac agcagggtgg aggctgagga tgttgggact tattactgca tgcaaggtac cccatgtgca gttttggcca ggggaccaag ttggagatca aac

gcoggcctac

tttgaattgg

taaccgggac

actgaaaatc

acactggcct

<210> 113 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 113

60

120

180

240

300

360

364

60

120

180

240

300

343

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly 1 5

<210> 114 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 114

lie Trp Asn Asp Gly Ser Lys Lys

<210> 115 <211> 19 <212> PRT

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

<213> Homo sapiens <400> 115

Ala Arg Asp Glu Gly Val Gin Met Val Phe Ala Met Pro Asp Tyr Gly 15 10 15

Met Asp Val

<210> 116 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 116

Lys Leu Gly Asp Lys Phe 1 5

<210> 117 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 117

Gin Asp Ser 1

<210> 118 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 118

Gin Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala His Tyr Val 15 10

<210> 119 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 119

ggattcacct tcagtaatta tggc 24

<210> 120 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 120

atatggaatg atggaagtaa gaaa

<210> 121 <211> 57 <212> ADN <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

<400> 121

gcgagagatg aaggtgtaca aatggtgttc gccatgcctg actacggtat ggacgtc

57

<210> 122 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 122

aaattggggg ataaattc

18

<210> 123 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 123

caagattcc 8

<210> 124 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 124

caggcgtggg acagcagcac tgcccattat gtc

33

<210> 125 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 125

imagen5

5

10

65

70

75

80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Glu Gly Val Gin Met Val Phe Ala Met Pro Asp Tyr Gly 100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 126 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 126

Ser Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Ser lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys lieu Gly Asp Lys Phe Ala 20 25 30

Cys Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Gin Ser Pro lie Leu Val lie Tyr 35 40 45

Gin Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr lieu Thr lie Arg Gly Thr Gin Ala Met 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala His 85 90 95

Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105

<210> 127 <211>379 <212> ADN <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

caggtgcagt tgctggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aattatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggaatg atggaagtaa gaaatattat 180

gcagagtccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacagtatat 240

ctacaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatgaa 300

ggtgtacaaa tggtgttcgc catgcotgac tacggtatgg acgtctgggg ccaggggacc 360

acggtcaccg tctcctcag 379

<210> 128 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 128

tcctatgaac

aottgototg

cagtctccta

ttctctggct

gatgaggctg

actgggacca

tgactcagcc accctcagtg gagataaatt gggggataaa tactggtcat ctatcaagat ccaactctgg gaacacagcc aotattactg tcaggcgtgg aggtoaocgt cottg

tccgtgtccc caggacagac ttcgcttgct ggtatcagca tccaagcggc cctcagggat actctgacca tccgcgggac gacagcagca ctgcccatta

agccagcatc: 60

gaggccaggc: 120

ccctgagcga: 180

ocaggctatg: 240

tgtcttcgga: 300

: 325

<210> 129 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 129

Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr Gly 1 5

<210> 130 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 130

lie Pro Ser Asp Gly Asn Tyr Gin 1 5

<210> 131 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ala His lieu Gly Gly Gly lieu Phe Asp Phe 15 10

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<400> 132

Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Glu Phe 1 5

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<400> 133

Asp Val Asp 1

<210> 134 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 134

Tyr Ser Ser Ala Asp Thr Trp val 1 5

<210> 135 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 135

ggattctcct tcagtaatta tggc 24

<210> 136 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 136

ataccgtctg atggaaatta tcaa

24

<210> 137 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 137

gcccacctcg gggggggttt atttgacttc

<210> 138 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

agcagtgatg ttggtggtta tgagttt

27

<210> 139 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 139

gatgtcgat 9

<210> 140 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 140

tactcatctg cagacacctg ggtc 24

<210> 141 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 141

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Leu lie Pro Ser Asp Gly Asn Tyr Gin Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

I>eu Gin Met Lys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Arg Tyr His Cys 85 90 95

Ala His lieu Gly Gly Gly Leu Phe Asp Phe Trp Gly Gin Gly Thr lieu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 142 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

Gin Ser Ala lieu Asn Gin Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Ser Val Ser lie Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30

Glu Phe Val Ser Trp Tyr Gin His His Pro Gly Lys Ala Pro Lys lieu 35 40 45

lie He Tyr Asp Val Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60

Ser Gly Ser Arg Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Ser Ala Asp Thr 85 90 95

Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys lieu Thr Val lieu 100 105

<210> 143 <211> 352 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 143

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctggggggtc cctgagattg 60

toctgtgcag cgtctggatt ctccttcagt aattatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcactt ataccgtctg atggaaatta tcaatactat 180

acagactccg tgaagggccg attcaccgtc tccagagaca attccaggaa cacgttgtat 240

ctgcaaatga agagcctgag agotgaggac acggctagat atcattgtgc ccacctcggg 300

gggggtttat ttgacttctg gggccagggc accctggtca ccgtctcctc ag 352

<210> 144 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 144

cagtctgccc tgaatcagcc tcgctcagtg tccgggtctc ctggacagtc agtctccatc 60

tcctgcactg gctccagcag tgatgttggt ggttatgagt ttgtctcctg gtaccaacac 120

cacccaggca aagcccccaa actcataatt tatgatgtcg ataagcggcc ctcaggggtc 180

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

cctgatcgct tctctggctc caggctgagg atgaggctga ggagggacca agctcactgt

caggtctggc

ttattactgc

cctag

gacacggcct ccctgacoat ototgggctc tactcatctg cagacacctg ggtcttcggc

<210> 145 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 145

Gly Gly Phe Thr Ser Ser Tyr Tyr 1 5

<210> 146 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 146

Val Tyr Tyr Gly Glu Ser Thr 1 5

<210> 147 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 147

Ala Arg Glu Val Asp Lys Arg Gly Phe Asp Tyr 15 10

240

300

325

<210> 148 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 148

Gin Ser Val Ser Gly Gly Tyr 1 5

<210> 149 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 149

Gly Ala Ser 1

<210> 150 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Gin Gin Tyr Gly Arg Thr Pro Leu Thr 1 5

<210> 151 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 151

ggtggcttca ccagtagtta ttat 24

<210> 152 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 152

gtgtattacg gtgaaagtac c 21

<210> 153 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 153

gcgagagaag tggataaacg gggctttgac tac

33

<210> 154 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 154

cagagtgtta gcggcggtta c 21

<210> 155 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 155

ggtgcatcc 9

<210> 156 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 156

cagcagtatg gtaggacacc gctcact 27

<210> 157 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Gly Phe Thr Ser Ser Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp He Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Tyr Val Tyr Tyr Gly Glu Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Ala Thr lie Ser lie Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Glu Val Asp Lys Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Ala Leu 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser 115

5

<210> 158 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 158

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Gly Gly 20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Glu Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Val 35 40 45

lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly He Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

5

10

15

20

25

30

Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85

lieu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105

Leu: Thr lie Thr Arg Leu Glu

: 75 80

Gin
Gin: Tyr Gly Arg Thr Pro

90: 95

Glu: He Lys

<210> 159 <211> 352 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 159

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcagtg tctctggtgg cttcaccagt agttattatt ggagttggat ccggcaggcc 120

cccgggaagg gactggagtg gattggctat gtgtattacg gtgaaagtac cgattacaac 180

ccctccctca agagtcgagc caccatatca atagacacgt ccaagaacca attctccctg 240

aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtctatt attgtgcgag agaagtggat 300

aaacggggct ttgactactg gggccaggga gccctggtca ccgtctcctc ag 352

<210> 160 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 160

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctatctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggcggttact tagcctggta ccagcaggaa 120

cctggccagg ctcocaggct cgtcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatcoca 180

gacaggttca gtgccagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcac cagactggag 240

ccagaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggacaccgct cactttcggc 300

ggagggacca aggtggagat caaac 325

<210> 161 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 161

lie Ser Tyr Asp Ala Ser Ser Lys 1 5

<210> 162 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ala Lys Ala lieu Arg Tyr lieu Asp Trp Phe lieu Ser Asp Pro Phe Asp 15 10 15

Tyr

<210> 163 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 163

Gin Ser Val Ser Ser Asp Phe 1 5

<210> 164 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 164

Gin Gin Tyr Ala Ala Ser Pro Pro 1 5

<210> 165 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 165

ggattcacct tcagtaacta tggc 24

<210> 166 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 166

atatcttatg atgcaagtag taaa

24

<210> 167 <211> 51 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 167

gcgaaagccc tacgatatct tgactggttc ctctcggacc ccttcgacta c 51

<210> 168 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 168

cagagtgtta gtagcgactt c 21

<210> 169

10

15

20

<211> 24

<212> ADN

<213> Homo sapiens

<400> 169

cagcagtatg ctgcctcacc gccc 24

<210> 170 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 170

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Ala Ser Ser Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val 50 55 60

Gin Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ala Leu Arg Tyr Leu Asp Trp Phe Leu Ser Asp Pro Phe Asp 100 105 110

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 171 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 171

5

10

15

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asp 20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45

lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Ala Ala Ser Pro 85 90 95

Pro Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105

<210> 172 <211>373 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 172

caggtgcaac: tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctcagactc 60

tcctgtgcag: cctctggatt cacottcagt aactatggca tgcactgggt ccgccagggt 120

ccaggcaagg: ggctggagtg ggtggcagtt atatcttatg atgcaagtag taaatactat 180

acagactccg: tgcagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacactgttt 240

ctgcaaatga: acagcctgag aggtgaagac acggctgtgt attactgtgc gaaagcccta 300

cgatatcttg: actggttcct ctcggacccc ttcgactact ggggccaggg aaccctggtc 360

accgtctcct: cag 373

<210> 173 <211> 322 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 173

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcgacttct tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag ccgactggag 240

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

cctgaagatt ttgcagtcta ttactgtcag cagtatgctg cctcaccgcc cttcggccaa 300

gggacacgac tggagattaa ac 322

<210> 174 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 174

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp Gly 1 5

<210> 175 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 175

lie Ser Ser Asp Gly Ser Thr Pro 1 5

<210> 176 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 176

Ala Lys Asp Trp Ala Leu Phe Arg Trp Leu Arg Thr Phe Asp His 15 10 15

<210> 177 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 177

Gin Ser Val Gly lie Asn 1 5

<210> 178 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 178

Gin Gin Tyr Asn Asp Trp Pro Pro Trp Thr 15 10

<210> 179 <211> 24 <212> AND <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

<400> 179

ggattcacct tcagtagcga cggc

<210> 180 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 180

atatcatctg acggaagtac tcca

24

<210> 181 <211> 45 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 181

gccaaagatt gggcattatt tcggtggcta cgaacctttg atcat

45

<210> 182 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 182

cagagtgttg gcatcaat

18

<210> 183 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 183

caacaatata atgactggcc tccgtggacg

30

<210> 184 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 184

imagen6

5

10

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Trp Ala Leu Phe Arg Trp Leu Arg Thr Phe Asp His Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 185 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 185

imagen7

<210> 186 <211> 367 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 186

ctggtggaac tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agcgacggca tgcactgggt ccgccagagt 120

5

10

15

20

25

30

35

40

ccaggcaggg ggctggaatg ggtggccttt atatcatctg acggaagtac tccatactat 180 gctgactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacactgtat 240 ctgcaaatga acagcctcag agctgaggac acggctatgt acttctgtgc caaagattgg 300 gcattatttc ggtggctacg aacctttgat cattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctcag 367

<210> 187 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 187

gaaacggtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctcctggggg aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc atcaatttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggcctctgg tttcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcaccag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtctatta ctgtcaacaa tataatgact ggcctccgtg gacgttcggc 300

caagggacca aggtggagat caaac 325

<210> 188 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 188

Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp 1 5

<210> 189 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 189

lie Tyr Pro Gly Asp Ser Asp lie 1 5

<210> 190 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 190

Ala Arg His Ala lie Arg Gly Asp Gly Phe Asp Tyr 15 10

<210> 191 <211>6

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

<212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 191

Lys Leu Gly Glu Lys Tyr 1 5

<210> 192 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 192

Gin Asp Thr 1

<210> 193 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 193

Gin Ala Trp Asp Thr Asn Thr Val lie 1 5

<210> 194 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 194

ggatacagct ttaccaacta ctgg

24

<210> 195 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 195

atctatcctg gtgactctga tatc

24

<210> 196 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 196

gcgagacatg caatacgagg agatgggttt gactac

36

<210> 197 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 197

aaattggggg aaaaatac

<210> 198

5

10

15

20

25

30

<211>9

<212> ADN

<213> Homo sapiens

<400> 198

caagatacg 9

<210> 199 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 199

caggcgtggg acaccaacac tgtgata 27

<210> 200 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 200

imagen8

<210> 201 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 201

5

10

15

Ser Tyr Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gin 15 10 15

Thr Ala Thr lie Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Glu Lys Tyr Ala 20 25 30

Cys Trp

Gin Asp 50

Tyr: Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Val i>eu Val

35: 40 45

Thr: Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe Ser

Met Tyr

Gly Ser

55

60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Arg Ala Met 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Thr Asn Thr Val lie 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105

<210> 202 <211>358 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 202

gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagaa gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc tcctgtcagg cttctggata cagctttacc aactactgga tcgcctgggt gcgccagatg cccgggaaag gcctggagtg gatgggcatc atctatcctg gtgactctga tatcaaatac agcccgtcct tccgaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag taatgccttc ctccagtggc gaagcctgag ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacatgca atacgaggag atgggtttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag

60

120

180

240

300

358

<210> 203 <211> 319 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 203

tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccaccatc acctgctctg gagataaatt gggggaaaaa tacgcttgct ggtatcagca gaagccaggc

60

5

10

15

20

25

30

35

40

cagtcccctg ttttggtcat gtatcaagat acgaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180

ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccgggctatg 240

gatgaagctg actattactg tcaggcgtgg gacaccaaca ctgtgatatt cggcggaggg 300

accaagctga ccgtcctag 319

<210> 204 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 204

lie Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr 1 5

<210> 205 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 205

Gly Arg His Ala lie Arg Gly Asp Gly Phe Asp Tyr 15 10

<210> 206 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 206

atctatcctg gtgactctga tacc

24

<210> 207 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 207

gggagacatg caatacgagg agatgggttt gactac

36

<210> 208 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 208

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Ser Leu Lys lie Ser Cys Gin Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

5

10

15

20

25

Trp: lie Ala Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met


: 35 40 45

Gly: He lie Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe

: 50 55 60

Arg: Gly Gin Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Phe

65: 70 75 80

Leu: Gin Trp Arg Ser Leu Arg Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys




: 85 90 95

Gly: Arg His Ala lie Arg Gly Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin
Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

<210> 209 <211>358 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 209

gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagaa gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60

tcctgtcagg cttctggata cagctttacc aactactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120

cccgggaaag gcctggagtg gatgggcatc atctatcctg gtgactctga taccaaatac 180

agcccgtcct tccgaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag tactgccttc 240

ctccagtggc gaagcctgag ggcctcggac accgccatgt attactgtgg gagacatgca 300

atacgaggag atgggtttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 358

<210> 210 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 210

Glu Arg His Ala lie Arg Gly Asp Gly Phe Asp Tyr 15 10

<210> 211 <211> 36 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 211

gagagacatg caatacgagg agatgggttt gactac

36

<210> 212 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 212

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Ser Leu Lys lie Ser Cys Gin Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp lie Ala Trp Val Arg Gin Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly lie lie Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60

Arg Gly Gin Val Thr lie Ser Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80

lieu Gin Trp Arg Ser lieu Arg Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95

Glu Arg His Ala lie Arg Gly Asp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr lieu Val Thr Val Ser Ser 115

10 <210> 213

<211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens

15

<400> 213

imagen9

5

10

15

20

25

30

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr Arg Ala Met 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ala Trp Asp Thr Asn Thr Val lie 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105

<210> 214 <211>358 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 214

gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagaa gtgaaaaagc coggggagtc tctgaagatc 60

tcctgtcagg cttctggata cagctttacc aactactgga tcgcctgggt gcgccagatg 120

cccgggaaag gcctggagtg gatgggcatc atctatcctg gtgactctga taccaaatac 180

agcccgtcct tccgaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag tactgccttc 240

ctccagtggc gaagcctgag ggcctcggac accgccatgt attactgtga gagacatgca 300

atacgaggag atgggtttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 358

<210> 215 <211> 319 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 215

tcctatgtcc

acctgctctg

cagtcccctg

ttctctggct

gatgaagctg

accaagctga

tgactcagcc: accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccaccatc 60

gagataaatt: gggggaaaaa tacgcttgct ggtatcagca gaagccaggc 120

ttttggtcat: gtatcaagat acgaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180

ccaactctgg: gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ocgggctatg 240

actattactg: tcaggcgtgg gacaccaaca ctgtgatatt cggcggaggg 300

ccgtcctag: 319

<210> 216 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 216

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr 1 5

<210> 217 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

lie His Pro Ser Ser Gly Gly Thr 1 5

<210> 218 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 218

Gly Arg Ala Phe Arg lie Leu Gly Leu Ser Asp Val Phe Val Asn Asp 15 10 15

<210> 219 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 219

Gin Gly lie Asn Asn Tyr 1 5

<210> 220 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 220

Ala Ala 1

Ser

<210> 221 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 221

Gin Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Phe Thr 1 5

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<400> 222

ggatacacct tcaccaacta ctat

<210> 223 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 223

atccacccta gtagtgg

5

10

15

20

25

30

35

40

<210> 224 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 224

gggagagcct ttcggatctt gggactttcg gatgtctttg ttaatgac

<210> 225 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 225

cagggcatta acaattat

<210> 226 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 226

gctgcatcc 9

<210> 227 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 227

caaaagtata acagtgcccc cttcact 27

<210> 228 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 228

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30

Tyr lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

5

10

Gly He lie His Pro Ser Ser Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Ser 65 70 75 80

Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Gly Arg Ala Phe Arg lie Leu Gly Leu Ser Asp Val Phe Val Asn Asp 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Val Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 229 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 229

imagen10

<210> 230 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 230

caggtgcagt tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

5

10

15

20

25

30

35

tcctgcaagg catctggata caccttcacc aactactata tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggaata atccacccta gtagtggtgg cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtttcc 240 atggacctga gcagcctgag atctgaagac acggccgtat attactgtgg gagagccttt 300 cggatcttgg gactttcgga tgtctttgtt aatgactggg gccagggaac tgtggtcacc 360 gtctcctcag 370

<210> 231 <211> 322 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 231

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggcgagtca gggcattaac aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagttc ctaagctcct gatctatgct gcatccacat tgcaatcagg ggtcccatct 180

cggttcagtg gcagtggatc tgggacagct ttcaccctca ccatcctcag cctgcagcct 240

gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg cccccttcac tttcggccct 300

gggaccaaag tggacatcaa ac 322

<210> 232 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 232

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser Ala 1 5

<210> 233 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 233

lie Val Leu Gly Ser Gly Asn Thr 1 5

<210> 234 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

imagen11

<210> 235 <211>7 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 235

Gin Thr lie Ser Asn Thr Tyr 1 5

<210> 236 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 236

Gin Gin Asn Gly Gin Ser Pro Trp Thr 1 5

<210> 237 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 237

ggattcacct ttactagctc tgct

<210> 238 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 238

24

<210> 239 <211> 42 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 239

gcggcagata ggggtagagg tggatacaat gtatacactt ac

42

<210> 240 <211> 21 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 240

cagactatta gtaacaccta c

<210> 241 <211> 27

21

imagen12

10

15

20

<212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 241

cagcagaatg gtcagtcacc ttggacg 27

<210> 242 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 242

Gin Met Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Gin Val Lys Lys Pro Gly Thr 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30

Ala Met Gin Trp Val Arg Gin Ala Arg Gly Gin Arg Pro Glu Trp lie 35 40 45

Gly Trp lie Val Leu Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Glu Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Met Ser Thr Ala Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Ala Asp Arg Gly Arg Gly Gly Tyr Asn Val Tyr Thr Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Leu Val Ala Val Ser Ser 115 120

<210> 243 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 243

5

10

15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Thr lie Ser Asn Thr 20 25 30

Tyr Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45

lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Arg Arg Leu Glu 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Asn Gly Gin Ser Pro 85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Asn Val Glu lie Lys 100 105

<210> 244 <211> 364 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 244

caaatgcagc tggtgcagtc tgggcctcaa gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatt cacctttact agctctgcta tgoagtgggt gcggcaggct 120

cgtggacagc gccctgagtg gataggatgg atcgtccttg gcagcggtaa cacaaactac 180

gcacagaagt tccaggaaag agtcaccctt accagggaca tgtccactgc tacagcctac 240

atggaactga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcagatagg 300

ggtagaggtg gatacaatgt atacacttac tggggccagg ggaccctggt cgccgtctcc 360

tcag 364

<210> 245 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

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5

10

15

20

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60 120 180 240 300 325

<210> 246 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 246

gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc ctctcctgca gggccagtca gactattagt aacacctacg tggcctggta ccagcagaaa cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatccg cagactggag cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagaatggtc agtcaccttg gacgttcggc

caagggacca acgtggaaat caaac

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr 1 5

<210> 247 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 247

He Asn Pro Met Thr Gly Ala Thr 1 5

<210> 248 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 248

Ala Arg Gly Gly Pro Thr Ser Thr Arg lie Thr Gly Lys Arg His Phe 15 10 15

Asp Leu

<210> 249 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 249

lie Ser Asp Val Gly Ala Tyr Asn Ser 1 5

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5

10

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20

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35

40

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55

Asp Val Thr 1

<210> 251 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 251

Ser Ser Tyr Thr Thr Ser Asp Thr Tyr Val 15 10

<210> 252 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 252

ggatacacct tcaccggcta ctat

<210> 253 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 253

atcaacccta tgactggagc caca

<210> 254 <211> 54 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 254

gcgagaggag gtcctaccag tacccgaata acagggaaac ggcacttcga tctc

<210> 255 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 255

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<210> 256 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 256 gacgtcact

<210> 257 <211> 30 <212> ADN <213> Homo sapiens

24

54

27

agctcatata caaccagtga cacttatgtc 30

<210> 258 <211> 125 5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 258

10

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<210> 259 <211> 110 <212> PRT

15 <213> Homo sapiens

<400> 259

5

10

15

Ser lie Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr lie Ser Asp Val Gly Ala Tyr 20 25 30

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lie lie Tyr Asp Val Thr Asn Arg Pro Ala Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60

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Gin Ser Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Thr Ser 85 90 95

Asp Thr Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Gin Val Thr Val Leu 100 105 110

<210> 260 <211> 376 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 260

cgggcgcagt

toctgcgagg

cccggacaag

ccacagaagt

atagaactga

cctaccagta

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<400> 261

tggtgcagtc tgcggctgag atgaagaacc ctggggcctc agtgaaggtc 60 cttctggata caccttcacc ggctactatg tacactggat gcgacaggcc 120 gactagagtg gatgggatgg atcaacccta tgactggagc cacaaagtct 180 ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cttccaccac cgcaacccac 240 ctaggctgag atctgacgac agtgccgtct ttttctgtgc gagaggaggt 300 cccgaataac agggaaacgg cacttcgatc tctggggccg cggcaccctg 360 cctcag 376

5

10

15

20

25

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40

45

cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggagagtc gatcaccatc 60

tcctgoactg gaaccatcag tgaogttggt gcttataact ctgtctcctg gtaccaacaa 120

cactcaggca cagcccccga actoatcatt tatgacgtca ctaatcggcc cgcaggggtt 180

tcgagtogct totctggoto caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctcttggcto 240

cagtctgagg acgaggctga atattattgc agctcatata caaccagtga cacttatgtc 300

ttcggaagtg ggacccaagt caccgtccta a 331

<210> 262 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 262

Gly Phe Thr Val Ser Thr Thr Tyr 1 5

<210> 263 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 263

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<210> 264 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 264

Ala Arg Glu His Arg Gly Thr lie Asp Ala Phe Asp Ala 15 10

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<400> 265

Gin Asn lie Arg Asn Tyr 1 5

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<400> 266

Thr Thr Ser 1

5

10

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50

55

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<400> 267

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<400> 268

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<400> 269

attcataccg gtggcatttt tggcgttggc ggtaca

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<400> 270

gcgagggaac atcggggaac tatcgatgct tttgatgcc

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<400> 271

cagaacattc gaaattat

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<400> 273

caacagagtt acgatgggtg gacg

<210> 274 <211> 124 <212> PRT <213> Homo sapiens

24

36

39

18

9

5

10

Glu Val Arg Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

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20 25 30

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Asn Thr Val Ser Leu Gin Met Ser Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala 85 90 95

lie Tyr Phe Cys Ala Arg Glu His Arg Gly Thr lie Asp Ala Phe Asp 100 105 110

Ala Trp Gly Gin Gly Thr Val Val lie Val Ser Ser 115 120

<210> 275 <211> 106 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 275

5

10

Asp lie His Met Thr Gin Ser Pro 1 5

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 20

Leu Asn Trp Tyr Gin His Lys Pro 35 40

Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Gin Ser 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70

Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys 85

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<400> 276

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Ser
Ser: Leu Ser Ala Ser Val Gly

: 10 15

Ala: Ser Gin Asn lie Arg Asn Tyr

25: 30

Gly: Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie




: 45

Gly: Val Pro Ser Arg Phe Ser
Gly



: 60

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: 75 80

Gin
Gin: Ser Tyr Asp Gly Trp Thr

: 90 95

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ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc accacctaca tggcctgggt ccgccaggct attcataccg gtggcatttt tggcgttggc agattcacca tctccagaga cacttccaag agagtcgagg acacggccat ctatttctgt tttgatgcct ggggccaagg gacagtggtc

€0

120

180

240

300

360

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5

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20

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180

240

300

319

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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Glu 1 5

<210> 279 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 279

lie Asp Phe Thr Gly Ser Thr lie 1 5

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<400> 280

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gaagactttg

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ggtcccatca

cctgcaacca

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<210> 281 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

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Ser Ser Asn lie Gly Ala Gly Tyr Asp 1 5

<210> 282 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

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55

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<400> 283

Gin Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Asn Gly Trp Val 15 10

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24

<210> 285 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 285

attgatttta ctggctcaac catc

24

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<400> 286

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<210> 287 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

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27

<210> 288 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 288

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<400> 289

cagtcgtatg acagcagcct gaatggttgg gtg 33

10

15

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Ser lieu Arg lieu Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

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lieu Gin Met Asn Lys lieu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Arg Asp Ala Gly Arg Trp Gly Thr Ser Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr lieu Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 291 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 291

5

10

15

Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15

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Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Val Ser Leu Ala lie Thr Gly Leu 65 70 75 80

Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95

Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110

<210> 292 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 292

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cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc tcctgcactg ggctcagctc caacatcggg gcaggttatg atatacactg gtatcagcag attccaggaa aagcccccaa actcctcatc tatggtaaca acaatcggcc ctcaggggtc

tgggggcggc: ttggcacagc ctggacggtc cctgaggctc 60

cactttcagt: agctatgaga tgaactgggt ccgccaggct 120

gattgcatac: attgatttta ctggctcaac catctactac 180

attcaccatt: tccagagaca ccgccaggaa ctcactctat 240

agtcgaggac: acggctgttt attactgtgt gagagatgcg 300

gtactacttt: gactattggg gccagggaac cctggtcacc 360




: 370

60

120

10

15

cctgaccgat tctctggctc taagtctggc caggctgagg atgaggctga ttattactgc gtgttcggcg gagggaccag gttgaccgtc

acctcagtct ccctggccat cactgggctc cagtcgtatg acagcagcct gaatggttgg ctaa

240

300

334

<210> 294 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 294

imagen15

<210> 295 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 295

gcggtgcagc tggtggagtc tgggggcgac ttggcacagc ctggacggtc cctgaggctc 60

tcgtgtaaag tgtctggatt cactttcagt agctatgaga tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg gattgcatac attgatttta ctggctcaac catctactac 180

gcagactctg tgaagggacg attcaccatt tccagagaca ccgccaggaa ctcactctat 240

ctgcagatga acaaattgag agtcgaggac acggctgttt attactgtgt gagagatgcg 300

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

imagen16

<210> 296 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 296

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Glu 1 5

<210> 297 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 297

lie Asp Phe Thr Gly Ser lie lie 1 5

<210> 298 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 298

Ala Arg Asp Gly Gly Arg Trp Gly Thr Ser Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr 15 10 15

<210> 299 <211>9 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 299

Ser Ser Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Asp 1 5

<210> 300 <211>2 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 300

Gly Ser 1

<210> 301 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Gin Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Ala Trp Val 15 10

<210> 302 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 302

ggattcacct tcagttctca tgag

<210> 303 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 303

attgatttta ctggcagtat tata

<210> 304 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 304

gcgagagatg ggggtcgttg gggcaccagt tggtactact ttgactac

<210> 305 <211> 27 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 305

agttccaact tcggggcagg ttatgat

<210> 306 <211>6 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 306

ggtagc

<210> 307 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 307

cagtcctatg acagcagcct gagcgcttgg gtg

<210> 308 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

24

48

27

6

33

5

10

Ala Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro 15 10

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30

Glu Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Ser Tyr lie Asp Phe Thr Gly Ser lie lie Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Ser 65 70 75

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Leu Tyr 85 90

Ala Arg Asp Gly Gly Arg Trp Gly Thr Ser Trp Tyr Tyr Phe 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

<210> 309 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 309

Gin Ser Val lieu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro 15 10

Arg Val Thr lie Thr Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Phe Gly 20 25 30

Tyr Asp Gly His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro 35 40 45

lieu He Tyr Gly Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Val Ser Leu Ala lie Thr Gly 65 70 75

Gly Gly 15

Ser His Trp Leu Ser Val

Leu Phe

80

Tyr Cys 95

Asp Tyr

Gly Gin 15

Ala Gly

Lys Leu

Phe Ser

Leu Gin 80

5

10

15

20

25

30

imagen17

tgggggaggc

caccttcagt

gctttcatac

gttcaccatc

agacgaggat

gtactacttt

ttggtacggc

tctcatgaga

attgatttta

tccagagaca

acggctcttt

gactactggg

ctggagggtc

tgcactgggt

ctggcagtat

acaccaaaaa

attactgtgc

gccagggagt

cctgagactc

ccgccaggct

tatatactac

gtcactgttt

gagagatggg

cctggtcacc

<210> 310 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 310

gcggtgcagc tggtggagtc tcctgtgcag cctctggatt ccagggaagg ggctggaatg gcagactctg tgaggggtcg ctgcaaatga acagcctgag ggtcgttggg gcaccagttg gtctcctcag

<210> 311 <211> 331 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 311

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccata acctgcactg ggagcagttc caacttcggg gcaggttatg atggacactg gtaccagcaa cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtagca atcggccctc aggggtccct gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagtctccc tggccatcac tgggctccag gctgacgatg aggctgatta ttactgccag tcctatgaca gcagcctgag cgcttgggtg

60

120

180

240

300

360

370

60

120

180

240

300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta c

331

<210> 312 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 312

lie Asp Phe Thr Gly Ser Ser lie 1 5

<210> 313 <211> 24 <212> ADN

<213> Homo sapiens

10

<400> 313

attgatttta ctggcagtag tata

24

<210> 314 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 314

imagen18

15 <210> 315

<211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

20 <400> 315

gcggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacggc ctggagggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tctcatgaga tgcactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg gctttcatac attgatttta ctggcagtag tatatactac 180

gcagactctg tgaggggtcg gttcaccatc tccagagaca ataccaaaaa gtcactgttt 240

ctgcaaatga acagcctgag agacgaggat acggctcttt attactgtgc gagagatggg 300

ggtcgttggg gcaccagttg gtactacttt gactactggg gccagggagt cctggtcacc 360

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

imagen19

<210> 316 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 316

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr 1 5

<210> 317 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 317

Phe Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr 1 5

<210> 318 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 318

Ala Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ala Ser Ala Tyr Tyr Gly Leu Asn Phe 15 10 15

Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 20

<210> 319 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 319

Ser Ser Asn lie Gly Lys Asn Tyr 1 5

<210> 320 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 320

Lys Asn Asn 1

<210> 321 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Ser Ala Trp Asp Gly Ser Leu Ser Arg Pro Leu 15 10

<210> 322 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 322

ggatacacct tcaccgacta ctat

<210> 323 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 323

ttcaacccta acagtggtgg caca 24

<210> 324 <211> 69 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 324

gcgaaagatt ccgcgaaaac tgcgagtgct tattatggac tgaacttctt ctactacggt 60

atggacgtc 6 9

<210> 325 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 325

agttccaaca tcggaaagaa ttat 24

<210> 326 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 326

aagaataat 9

<210> 327 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 327

tcagcgtggg atggcagcct gagtcgtcca eta

33

<210> 328 <211> 130 <212> PRT <213> Homo sapiens

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly 1 5

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20

Tyr lie His Trp Val Arg Gin Ala 35 40

Gly Trp Phe Asn Pro Asn Ser Gly 50 55

Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg 65 70

Met Glu lieu Ser Arg lieu Arg Ser 85

Ala Lys Asp Ser Ala Lys Thr Ala 100

Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp 115 120

Ser Ser 130

Ala: Glu val Lys Asn Pro Gly Ala

: 10 15

Ser: Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

25: 30

Pro: Gly Gin Gly i>eu Glu Trp Met




: 45

Gly: Thr Asn Phe val Gin Asn Phe



: 60

Asp: Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr


: 75 80

Asp
Asp: Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

: 90 95

Ser: Ala Tyr Tyr Gly lieu Asn Phe

105: 110

Gly: Gin Gly Thr Thr Val Thr Val




: 125

<210> 329 <211> 110 5 <212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 329

Gin Ser Val Leu Ser Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin 15 10 15

Arg Val Thr lie Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Lys Asn 20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gin Gin Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

10

35

40

45

Met Phe Lys Asn Asn Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Gly Ser Leu 85 90 95

Ser Arg Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110

10

15

<210> 330 <211> 391 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 330

caggtgcagc: tggtgcagtc tggggctgaa gtgaagaacc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg: cttctggata caccttcacc gactactata tacactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag: gacttgagtg gatgggctgg ttcaacccta acagtggtgg cacaaacttt 180

gtacagaact: ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctca: gcaggctgag atctgacgac acggccatgt attactgtgc gaaagattcc 300

gcgaaaactg: ogagtgotta ttatggaotg aacttcttot actacggtat ggacgtotgg 360

ggccaaggga: ccacggtcac cgtctcctca g 391

<210> 331 <211> 331 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 331

cagtctgtac tgagtcagcc tcttgttctg gaagcagttc ccaggaacgg cccccaaact gaccgattct ctggctccaa tccgaggatg aggctgatta ttcggcggag ggaccaaggt

<210> 332 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens

accctcagca: tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

caacatcgga: aagaattatg tatattggta ccagcaggtc 120

octcatgttt: aagaataatc agcgaccctc aggggtcoct 180

gtotggoaoc: tctgcctccc tggccatcag tgggctccgg 240

ttattgttca: gcgtgggatg gcagcctgag tcgtccacta 300

gaccgtccta: <3 331

5

Ala Arg Asp Ser Ala Lys Thr Ala Ser Ala Tyr Tyr Gly Leu Asn Phe 15 10 15

Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 20

5 <210> 333

<211> 69 <212> ADN <213> Homo sapiens

10 <400> 333

gcgagagatt ccgcgaaaac tgcgagtgct tattatggac tgaacttctt ctactacggt 60

atggacgtc 6 9

15

20

<210> 334 <211> 130 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 334

imagen20

5

10

15

20

25

30

35

40

<210> 335 <211> 391 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 335

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgaa gtgaagaacc ctggggcctc agtgaaggtc

60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc gactactata tacactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggctgg ttcaacccta acagtggtgg cacaaacttt 180 gtacagaact ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcaggctgag atctgacgac acggccatgt attactgtgc gagagattcc 300 gcgaaaactg cgagtgctta ttatggactg aacttcttct actacggtat ggacgtctgg 360

ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca g

391

<210> 336 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 336

Gly Phe Arg Phe Asn Glu Phe Asn 1 5

<210> 337 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 337

He Ser lie Asp Gly Arg His Lys 1 5

<210> 338 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 338

Val Thr Asp Gly Lys Ala Val Asp Gly Pbe Ser Gly lie Leu Glu Phe 15 10 15

<210> 339 <211>6 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 339

Gin Ser Val Gly Gly Tyr 1 5

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

<210> 340 <211>3 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 340

Asp Ala Ser 1

<210> 341 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 341

Gin Gin Arg Asn Asn Trp Pro Pro Leu Thr 15 10

<210> 342 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 342

ggattcaggt tcaatgaatt taat

<210> 343 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 343

atctcaattg atgggagaca caaa

<210> 344 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 344

gtgacagatg ggaaagcagt ggatgggttt tccggaattt tagagttc

<210> 345 <211> 18 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 345

cagagtgttg gcggctac

<210> 346 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 346 gatgcatoc

<210> 347

24

48

18

10

15

20

<211> 30

<212> ADN

<213> Homo sapiens

<400> 347

cagcagcgta acaactggcc accactcact 30

<210> 348 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 348

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Asn Glu Phe 20 25 30

Asn Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser lie Asp Gly Arg His Lys Tyr Asn Ala Asp Ser Val 50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Thr Asp Gly Lys Ala Val Asp Gly Phe Ser Gly lie Leu Glu Phe 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Thr 115 120

<210> 349 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 349

5

10

15

Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Trp Ala Ser Gin Ser Val Gly Gly Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser lie Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr lie Asn Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Asn Asn Trp Pro Pro 85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105

<210> 350 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 350 caggtgcaac tcctgtgcag ccaggcaagg gcagactccg ctgcaaatga aaagcagtgg gtctccacag

tggtggagtc: tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

octetggatt: caggttcaat gaatttaata tgcactgggt ccgccaggct 120

gcctggagtg: ggtggcagtt atctcaattg atgggagaca caaatacaac 180

tggagggccg: attoaccatc tccagagaca attccagaaa caotctttat 240

acagcctgag: agttgaggac aeggetettt attactgtgt gacagatggg 300

atgggttttc: cggaatttta gagttctggg gccagggaac ccoagtcacc 360





: 370

<210> 351 <211> 325 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 351

gaaattgtgt: tgacacagtc tccggccacc ctgtctttgt ctccagggga gagagccacc 60

ctctcctgct: gggccagtca gagtgttggc ggetaettag cctggtacca acaaaaacct 120

ggccaggctc: ccaggctcct catctatgat gcatccatca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg: gcagtgggtc tgggacacac ttoaototoa ccatcaatag cctcgagcct 240

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

gaagattttg ccgtttatta ctgtcagcag cgtaacaact ggccaccact cactttcggc 300

ggagggacca aggtggagat caaac 325

<210> 352 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 352

Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Glu 1 5

<210> 353 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 353

ggattcagtt tcagtaactt tgag 24

<210> 354 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 354

attgatttta ctggctctac catc 24

<210> 355 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 355

gtgagagatg cgggccgttg gggcaccagt tggtactatt ttgactat 48

<210> 356 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 356

cagtcatatg acagcagcct gaatggttgg gtg 33

<210> 357 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 357

Ala Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Gin Pro Gly Arg 15 10 15

5

10

15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe 20 25 30

Glu Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie

35 40 45

Ala Tyr lie Asp Phe Thr Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60

Lys 65: Gly Arg Phe Thr lie 70 Ser Arg Asp Thr Ala Arg 75 Asn Ser Leu Tyr 80

Leu: Gin Met Asn Lys 85 Leu Arg Val Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys

Val: Arg Asp Ala 100 Gly Arg Trp Gly Thr 105 Ser Trp Tyr Tyr Phe 110 Asp Tyr

Trp Gly: Gin Gly 115 Thr Leu Val Thr 120 Val Ser Ser

<210> 358 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 358

gcggtgcagc tggtggaatc cgggggcggc ttggcacagc tcgtgtaaag tgtccggatt cagtttcagt aactttgaga ccagggaagg ggctggagtg gattgcatat attgatttta tcagactctg tgaagggacg gtttaccatt tccagagaca ctgcagatga acaaattgag agtcgaggac acggctgttt ggccgttggg gcaccagttg gtactatttt gactattggg gtctcctcag

ctggacggtc: cctgaggoto 60

tgaactgggt: ccgccaggct 120

ctggctctac: catctactac 180

ccgccaggaa: ctcactctat 240

attactgtgt: gagagatgcg 300

gccagggcac: cctggtcacc 360


: 370

<210> 359 <211> 334 <212> ADN <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc tcctgcactg ggctcagctc caacatcggg gcaggttatg atatacactg gtatcagcag attccaggaa aagcccccaa actcctcatc tatggtaaca acaatcggcc ctcaggggtc cctgaccgat tctctggctc taagtctggc acctcagtct ccctggccat cactgggctc

caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcatatg acagcagcct gaatggttgg gtgttcggcg gagggaccag gttgaccgtc ctaa

120

180

240

300

334

<210> 360 <211>8 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 360

Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr Glu 1 5

<210> 361 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 361

Gin Ser Tyr Asp Asn Ser Leu Asn Gly Trp Val 15 10

<210> 362 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 362

ggattcacct tcggaagcta tgaa

24

<210> 363 <211> 24 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 363

attgacttta ctggttcaac catc

24

<210> 364 <211> 48 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 364

gtgagagatg cgggccgctg gggcaccagt tggtattact ttgactat

<210> 365 <211>9 <212> ADN <213> Homo sapiens

5

10

15

20

25

<400> 365 ggcaacaac

<210> 366 <211> 33 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 366

cagtcctatg acaacagcct gaatggttgg gtg

33

<210> 367 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens

<400> 367

Ala Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ala Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser lieu Arg lieu Ser Cys Gin Val Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr 20 25 30

Glu Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly lieu Glu Trp lie 35 40 45

Ala Tyr lie Asp Phe Thr Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asn Thr Ala Arg Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Arg Asp Ala Gly Arg Trp Gly Thr Ser Trp Tyr Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Pro 115 120

<210> 368 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens

5

10

15

Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15

Arg Val Thr lie Ser Cys Thr Gly lie Ser Ser Asn lie Gly Ala Gly 20 25 30

Tyr Asp lie His Trp Tyr Gin Gin lie Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45

Leu Val Tyr Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Val Ser lieu Ala lie Thr Gly lieu 65 70 75 80

Gin Val Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Asn Ser 85 90 95

Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110

<210> 369 <211>370 <212> ADN <213> Homo sapiens

<400> 369

gcggtgcggc tggtggagtc tgggggaggc ttggcacagc ctggacggtc cctgagactc 60

tcgtgtcaag tgtctggatt caccttcgga agctatgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120

cccggcaagg gactggagtg gattgcctac attgacttta ctggttcaac catctactac 180

gcagactotg tgaagggccg attcaccata tccagaaaca ccgccaggaa ctoaotctat 240

ctgcagatga acagcctgag agtcgaggac acggctgttt attactgtgt gagagatgcg 300

ggocgctggg gcaccagttg gtattacttt gactattggg gccaaggaac ccgggtcacc 360

gtotocccag 370

<210> 370 <211> 334 <212> ADN <213> Homo sapiens

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

1. Un anticuerpo aislado, o un fragmento de union al antfgeno del mismo que se une a un epftopo formado por las protefnas del citomegalovirus humano (hCMV) UL130 y UL131A, en el que el anticuerpo o fragmento neutraliza la infeccion de celulas epiteliales humanas por el hCMV y comprende regiones variables de la cadena pesada y ligera que tienen secuencias de aminoacidos al menos un 85 % identicas a las SEQ ID NOs: 61 y 62, respectivamente.
2. El anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la reivindicacion 1, en el que el anticuerpo comprende secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada como se expone en las SEQ ID NOs: 49, 50 y 51, respectivamente, y secuencias CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera como se expone en las SEQ ID NOs: 52, 53 y 54, respectivamente.
3. El anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en el que el anticuerpo comprende las secuencias de la region variable de la cadena pesada y ligera expuestas en las sEq ID NOs: 61 y 62, respectivamente.
4. El anticuerpo o fragmento de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monoclonal humano, un anticuerpo monocatenario, Fab, Fab', F(ab')2, Fv o scFv.
5. Una molecula de acido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica el anticuerpo o fragmento de anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
6. Un vector de expresion que comprende un acido nucleico de acuerdo con la reivindicacion 5.
7. Una celula transformada con un vector de expresion de acuerdo con la reivindicacion 6.
8. Una composicion farmaceutica que comprende el anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un diluyente o vehfculo farmaceuticamente aceptable.
9. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 8, que ademas comprende un segundo anticuerpo, o un fragmento de union al antfgeno del mismo, que neutraliza la infeccion por hCMV.
10. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 9 en la que dicho segundo anticuerpo o fragmento de union al antfgeno del mismo se une a una protefna del hCMV gH, una protefna del hCMV gB, una protefna del hCMV UL128, un segundo epftopo formado por ambas protefnas del hCMV UL130 y UL131A, un epftopo formado por las protefnas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, un epftopo formado por las protefnas del hCMV gH, gL, UL128 y Ul130, o un epftopo formado por las protefnas del hCMV gM y gN.
11. Un anticuerpo o fragmento de union al antfgeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una composicion farmaceutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 para su uso en un metodo de tratamiento o prevencion de la infeccion por hCMV.
12. Uso del anticuerpo o porcion de union al antfgeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o prevencion de la infeccion por hCMV.
13. Un metodo para producir anticuerpos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende (i) cultivar una celula de acuerdo con la reivindicacion 7 y (ii) aislar anticuerpos.

imagen1

imagen2

anti-UL128

imagen3