ES2683377T3 - Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso - Google Patents

Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso Download PDF

Info

Publication number
ES2683377T3
ES2683377T3 ES12820320.5T ES12820320T ES2683377T3 ES 2683377 T3 ES2683377 T3 ES 2683377T3 ES 12820320 T ES12820320 T ES 12820320T ES 2683377 T3 ES2683377 T3 ES 2683377T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
molecules
amino acid
sec
identification number
peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES12820320.5T
Other languages
English (en)
Inventor
Junjie Liu
Jesus Gonzalez
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Avelas Biosciences Inc
Original Assignee
Avelas Biosciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Avelas Biosciences Inc filed Critical Avelas Biosciences Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2683377T3 publication Critical patent/ES2683377T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
    • A61K49/0034—Indocyanine green, i.e. ICG, cardiogreen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0054—Macromolecular compounds, i.e. oligomers, polymers, dendrimers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Una molécula de suministro selectivo de Fórmula I, que tiene la estructura: [DA-cA]-A-[cM-M]-X-B-[cB-DB] Fórmula I en donde, X es un enlazador peptídico escindible por una metaloproteinasa de la matriz; A es un péptido con una secuencia que consiste de glutamatos consecutivos; B es un péptido con una secuencia que consiste de 8 argininas consecutivas; cA, cB y cM son cada uno independientemente de 0-1 aminoácido; M es un polímero de polietilenglicol (PEG) que tiene un peso molecular promedio de 500 Da, 2 kDa, 5 kDa o 10 kDa; cualquier M se une directamente (cM >= 0) o indirectamente (cM >= 1) a A, B o X, o a enlazadores entre X y A; DA y DB son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energía de resonancia fluorescente/Försters con el otro; [DA-cA] se une al N-terminal de A; [cB-DB] se une al C-terminal de B; y el C-terminal de X se une al N-terminal de B.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
DESCRIPCION
Moleculas de suministro selectivo y metodos de uso Referencias
La Patente de los EE.UU. num. 2006/041105 A1 de Jiang Tao y otros describe peptidos de estructura A-X-B-C, donde C es un resto de carga, la porcion B incluye aminoacidos basicos, X es una secuencia enlazadora escindible, y la porcion A incluye aminoacidos acidos. La estructura intacta no se capta significativamente por las celulas, pero la escision extracelular de X resulta en que la porcion B-C se capta para que la carga de un agente de contraste para diagnostico por imagen, un farmaco quimioterapeutico o un sensibilizador a la radiacion para la terapia se suministre a la celula.
Jiang y otros, (2004) PNAS 101: 17.867-17.872 describen peptidos que penetran en la celula activables (ACPP, por sus siglas en ingles) que comprenden un agente para la obtencion de imagenes fluorescente unido a una poliarginina, un polipeptido espaciador escindible por MMP, un acido poliglutamico y polietilenglicol (PEG).
Savariar E. N. y otros "Fluorescence resonance energy transfer accelerates and amplifies tumor:background contrast from activatable cell penetrating peptides", pagina 1, URL:
http://www.wmis.org/abstracts/2011/data/papers/T209.html es un resumen concerniente a ciertos peptidos que penetran en celulas activables por MMP marcados fluorescentemente.
El documento WO2011/008996 de la UNIV CALIFORNIA describe una molecula de transporte selectivo de formula (A-X- B-C)n-M, en donde C es un resto de carga; A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos consecutivos, en donde los aminoacidos se seleccionan de: aspartatos y glutamatos; B es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 20 aminoacidos basicos consecutivos; X es un enlazador; y M es un portador macromolecular.
El documento WO2005/107583 A1 de JIANG TAO y otros describe peptidos A-X-B-C, donde C es un resto de carga, la porcion B incluye aminoacidos basicos, X es una secuencia enlazadora escindible, y A incluye aminoacidos acidos. La estructura intacta no se capta significativamente por las celulas; sin embargo, tras la escision extracelular de X, se capta la porcion B-C, lo que suministra la carga a las celulas objetivo. La carga es, por ejemplo, un agente de contraste para diagnostico por imagen, un farmaco quimioterapeutico o un sensibilizador a la radiacion para la terapia.
Breve descripcion de la invencion
La presente invencion proporciona una molecula de suministro selectivo como se establece en las reivindicaciones 1 a la 7.
Se proporciona, ademas, una molecula de suministro selectivo como se establece en la reivindicacion 8 para su uso en un metodo in vivo para visualizar un tejido de interes en un individuo.
Se proporciona, ademas, una molecula de suministro selectivo como se establece en las reivindicaciones 9 a la 12 para su uso en un metodo in vivo para la eliminacion quirurgica de un tejido de interes de un individuo.
Se describe en la presente descripcion la molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es una macromolecula; y
Da y Db se seleccionan cada uno independientemente de un agente para la obtencion de imagenes y un terapeutico; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas modalidades, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En moleculas, M es un PEG. En algunas moleculas, M se selecciona de PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG (sec. con num. de ident.: 1) RPLAL WRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLAL WRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, M se selecciona de una protema, un polfmero natural, un polfmero sintetico o un dendnmero. En algunas moleculas, M se selecciona de dextrano, un polfmero de PEG, albumina o sus combinaciones. En algunas moleculas, M es un PEG. En algunas moleculas, M se selecciona de PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG 30 kDa y PEG 40 kDa. En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas modalidades, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas moleculas, la molecula de Formula I es:
SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas moleculas, moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas modalidades, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptidico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DpRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas modalidades, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas moleculas, la molecula de Formula I es:
SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion ciertas moleculas, que son moleculas de Formula II, quetienen la estructura:
A1-X1-B1; Formula II
en donde,
X1 es un enlazador escindible;
A1 es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos y que tiene un primer resto de aminoacido reactivo ca;
B1 es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos y que tiene un segundo resto de aminoacido reactivo cb; y
A1-X1-B1 tiene un tercer resto de aminoacido reactivo cm en A1 o X1; y en donde ca es capaz de reaccionar con un primer resto de carga que comprende Da, cb es capaz de reaccionar con un segundo resto de carga que comprende Db y cm es capaz de reaccionar con un portador macromolecular que comprende M para formar una molecula de Formula I.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm tienen grupos funcionales que son reactivos ortogonalmente. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p- aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas modalidades, cm es para-4-acetil L-fenilalanina.
Se describen en la presente descripcion ciertas muestras detejido que comprenden una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db]; Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido; que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas, ca, cb y cm son cada uno independientemente de 0-1 aminoacido. En algunas, la muestra de tejido es una lamina portaobjeto o seccion de patologfa. En algunas, la muestra de tejido es cancerosa. En algunas, el tejido canceroso es: tejido de cancer de mama, tejido de cancer de colon, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
melanoma o tejido de cancer de tiroides. En algunas, el tejido canceroso es tejido de cancer de mama. En algunas, el tejido canceroso es tejido de cancer de colon. En algunas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas, cb es D-cistema. En algunas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas, ca es D-glutamato. En algunas, ca es lisina. En algunas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas, X es escindible por una proteasa. En algunas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas modalidades, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG, PLG-C(me)-AG, RPLALWRS, ESPAYYTA, DPRSFL, PPRSFL, RLQLKL y RLQLK(Ac). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG. En algunos de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DpRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas, Da y Db son Cy5 e IRDye 800. En algunas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas modalidades, la molecula de Formula 1 es: SDM-23. SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de agentes para la obtencion de imagenes a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db]; Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunos metodos, el tejido de interes es canceroso. En algunos metodos, el tejido canceroso es: tejido de cancer de mama, tejido de cancer colorrectal, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de melanoma y tejido de cancer de tiroides. En algunos metodos, el tejido canceroso es tejido de cancer de mama. En algunos metodos, el tejido canceroso es tejido de cancer de colon. En algunos metodos, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunos metodos, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunos metodos, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunos metodos, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunos metodos, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunos metodos, cb es D-cistema. En algunos metodos, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunos metodos, ca es D- glutamato. En algunos metodos, ca es lisina. En algunos metodos, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunos metodos, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunos metodos, X es escindible por una proteasa. En algunos metodos, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunos metodos, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunos metodos, X comprende un enlace peptfdico. En algunos metodos, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG- C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunos metodos, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunos metodos, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunos, la molecula de Formula I es: SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprenden:
(a) administrar al individuo una molecula de Formula I que se localiza hacia el tejido de interes en el individuo, [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db]; Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B; y
(b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
En algunos metodos, el tejido es canceroso. En algunos metodos, el tejido canceroso es: tejido de cancer de mama, tejido de cancer colorrectal, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de melanoma o tejido de cancer detiroides. En algunos metodos, la celula o tejido canceroso es tejido de cancer de mama. En algunos metodos, la celula o tejido canceroso es tejido de cancer de colon. Algunos metodos comprenden, ademas, eliminar quirurgicamente el tejido de interes del individuo. En algunos metodos, se disminuye el margen quirurgico que rodea el tejido de interes. Algunos metodos comprenden, ademas, preparar una muestra de tejido a partir de la celula o tejido de interes eliminado. Algunos metodos comprenden, ademas, la estadificacion del tejido canceroso. En algunos metodos, Ay B notienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunos metodos, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas modalidades, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunos metodos, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunos metodos, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas modalidades, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o un aminoacido de origen no natural. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunos metodos, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
algunos metodos, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunos metodos, cb es D-cistema. En algunos metodos, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunos metodos, ca es D- glutamato. En algunos metodos, ca es lisina. En algunos metodos, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunos metodos, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunos metodos, X es escindible por una proteasa. En algunos metodos, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunos metodos, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunos metodos, X comprende un enlace peptfdico. En algunos metodos, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG- C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESpAyYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunos metodos, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunos metodos, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunos metodos, Da y Db son Cy5 e ICG. Algunos metodos comprenden, ademas, visualizar la transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters entre Da y Db. En algunos metodos, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas modalidades, la molecula se selecciona de: SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-14.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
25.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM- 27.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-35.
Se describen en la presente descripcion peptidos de acuerdo con el peptido P-3.
Figuras
La Figura 1 ejemplifica los efectos de una molecula de suministro selectivo (SDM, por sus siglas en ingles) al mostrar imagenes de fluorescencia de raton completo de 3 ratones diferentes inyectados con SDM-6. Las imagenes se tomaron 2 horas despues de la inyeccion. El tumor y el tejido contralateral usados para calcular el contraste se indican en el raton a mano derecha. El contraste promedio para lostres ratones es 1,1.
La Figura 2 ejemplifica los cambios de fluorescencia radiometrica de las moleculas de suministro selectivo. En esta figura, la SDM-9 se escindio con enzima MMP-2 1 nM. El aumento en la fluorescencia del donador (panel izquierdo) y la disminucion en la fluorescencia del aceptor (panel derecho) es indicativa de una FRET disminuida despues de la escision del peptido.
La Figura 3 ejemplifica la potenciacion de la fluorescencia de las moleculas de suministro selectivo despues de la escision por la proteasa. La SDM-10 se escindio con enzima MMP-9 1 nM en solucion salina tamponada. La fluorescencia de Cy5 aumenta > 100 veces despues de la escision del peptido debido a que los colorantes extintores ya no se unen intramolecularmente a Cy5 y ya no pueden extinguir a Cy5 eficientemente.
La Figura 4 ejemplifica la potenciacion de la fluorescencia de la molecula de suministro selectivo SDM-10 tras la escision por los homogenatos tumorales. La molecula de suministro selectivo 10 (SDM-10) se escindio con homogenatostumorales HT-1080. Se mezclaron MMP-9 1 nM o 10 ul de homogenatos de tejido tumoral (TH2 y TH3) con 1 pM del compuesto 13 en 100 pl de tampon durante 24 horas a 37 °C. El GM6001 es un inhibidor general de amplio espectro de MMP. El carril control contiene la SDM-6, que es altamente fluorescente en la forma intacta y sin escindir que corre en la parte superior del gel. La SDM-10 no escindida no es fluorescente debido a una extincion eficiente (segunda columna desde la izquierda). Despues de la escision por MMP-9, el fragmento que contiene el fluoroforo deja de estar extinguido (se vuelve altamente fluorescensete) y corre cerca de la parte inferior del gel. Como se demuestra en el gel, los homogenatos tumorales, ademas, escinden la SDM-10 para generar el producto altamente fluorescente. Esta reaccion se bloquea por el inhibidor de MMP lo que indica que la escision se debe a las MMP asociadas al tumor.
La Figura 5 ejemplifica la biodistribucion de 3 compuestos fluorescentes 6 horas despues de la administracion IV por la vena de la cola de 2,9 nmoles de cada compuesto. La SDM-6 tiene una distribucion tisular 5 veces mayor en el tumor en comparacion con la SDM-1 y la SDM-2. Las moleculas de suministro selectivo 1 y 2 tienen igual numero de glutamatos y de argininas, lo que les da un nucleo neutral neto, mientras que la SDM-6 tiene una carga neta 3+ debido a las argininas cargadas mas positivamente.
La Figura 6 ejemplifica la aplicacion de la obtencion de imagenes de la razon de emisiones de FRET para determinar la presencia de cancer en ganglios linfaticos de raton. Se genero una imagen de la razon de emisiones mediante el uso de la ecuacion 2 donde Exp1 = 0,7 segundos, Exp2 = 4,1 segundos y k = 20. El panel de la mano derecha muestra la imagen de la razon que muestra un contraste alto entre el ganglio linfatico metastasico (ganglio muy grande indicado con la flecha oscura inferior izquierda) y los ganglios no metastasicos (otras flechas). La razon mas alta se muestra como pfxeles mas claros (metastasicos) en comparacion con los pfxeles mas oscuros de la razon mas baja para los ganglios no metastasicos.
La figura 7 ejemplifica los resultados de un ensayo ex vivo de actividad de tejido de raton. La SDM-23 se incubo con homogenatos de tumor activado y de tejido muscular de muslo normal. La actividad enzimatica de los tejidos resulto en la escision de la SDM-23 y genero un gran aumento de la razon de emisiones de FRET (tumor primario marcado). El aumento de la razon resulto de la escision de la SDM. El tejido muscular normal no mostro actividad de escision de la SDM-23.
La Figura 8 ejemplifica los datos de la razon de emisiones de FRET en un ensayo ex vivo de tejido humano. La SDM-25 se incubo con homogenatos de tejido de mama humano normal y tejido de mama humano canceroso (WD2808, WD2821, WD2815, WD2817, WD2824). Se encontro que la actividad enzimatica y la escision de la SDM-25 fueron significativamente mayores en el tejido de mama humano canceroso en comparacion con el tejido de mama humano normal (barra de datos con errores).
La Figura 9 ejemplifica los datos de la razon de emisiones de FRET en un ensayo ex vivo de tejido humano. La SDM-25 y la SDM-32 se incubaron con tejido de mama humano normal saludable (WD2823) y tejido de mama humano canceroso (WD2808, WD2815). Se encontro que la actividad enzimatica y la escision de la SdM fueron mayores en el tejido de mama humano canceroso en comparacion con el tejido de mama humano normal.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La Figura 10 ejemplifica un diagrama de dispersion de los datos de la razon de emisiones de FRET de ganglios linfaticos positivos y negativos de un modelo de ganglio linfatico metastasico de raton que se ha tratado con SDM-24. Los ganglios se asignaron para ser positivos o negativos en base al analisis de la tincion de H y E realizada por un patologo.
La Figura 11 ejemplifica una curva ROC generada mediante el cambio del valor umbral usado para asignar una prediccion metastasica positiva o una negativa a partir de los datos de la razon de emisiones mediante el uso de la SDM-24 en el modelo de ganglio linfatico metastasico. Estos datos muestran una sensibilidad y especificidad alta para el diagnostico de ganglios linfaticos cancerosos y no cancerosos.
Descripcion detallada de la invencion
Las moleculas de suministro selectivo (SDM) permiten el suministro dirigido de agentes terapeuticos y/o agentes de obtencion de imagenes de celulas y/o tejidos espedficos. Algunas moleculas de suministro selectivo comprenden (a) una secuencia de retencion o transporte molecular (porcion B), (b) al menos un resto de carga (porcion D) unido a la porcion A, B o X, (c) X un enlazador y (d) un portador macromolecular y (e) una secuencia acida (porcion A) que es eficaz para inhibir o prevenir la captacion en las celulas o retencion tisular. En algunas, la escision del enlazador X, que permite la separacion de la porcion A de la porcion B, es efectiva para permitir la captacion o retencion de la porcion B y de la carga adjunta en las celulas y tejidos. Sin embargo, las moleculas de suministro selectivo pueden estar sujetas a un aclaramiento farmacocinetico rapido con una vida media plasmatica corta, una amplia distribucion y una depuracion lenta de multiples tejidos no objetivo con captacion no espedfica. Portanto, existe la necesidad de una molecula de suministro selectivo con aumento de la circulacion y acumulacion in vivo en el tejido objetivo con relacion al tejido no objetivo, selectividad de extravasacion modulada y biodistribucion modulada. Para los agentes para la obtencion de imagenes, existe una necesidad de contraste aumentado en el tejido objetivo con relacion al tejido de fondo.
Ciertas Definiciones
Como se usa en la presente, los terminos siguientes tienen los significados atribuidos a estos, a menos que se especifique de cualquier otra manera.
Como se usa en la presente, el termino "molecula objetivo" se refiere a cualquier agente (por ejemplo, peptido, protema, polfmero de acido nucleico, aptamero o molecula pequena) que se asocia con (por ejemplo, se une a) un objetivo de interes. El objetivo de interes puede ser un tejido, una celula, una estructura celular (por ejemplo, un organulo), una protema, un peptido, un polisacarido o un polfmero de acido nucleico. En algunas modalidades, la molecula de direccionamiento es cualquier agente que se asocia con (por ejemplo, se une a) una o mas celulas cancerosas de un sujeto.
Los terminos “polipeptido,” “peptido” y “protema” se usan indistintamente en la presente descripcion para referirse a un polfmero de residuos de aminoacidos. Los terminos se aplican a polfmeros de aminoacido de origen natural, asf como tambien a polfmeros de aminoacido en los que uno o mas residuos de aminoacido es un aminoacido de origen no natural (por ejemplo, un analogo de aminoacido). Los terminos abarcan cadenas de aminoacidos de cualquier longitud, lo que incluye protemas de longitud completa (es decir, antfgenos), en donde los residuos de aminoacidos se unen por enlaces peptfdicos covalentes. Como se usa en la presente, el termino "peptido" se refiere a un polfmero de residuos de aminoacido que vana tfpicamente en longitud de 2 a aproximadamente 50 residuos. En ciertas modalidades, el peptido vana en longitud de aproximadamente 2, 3, 4, 5, 7, 9, 10 u 11 residuos a aproximadamente 50, 45, 40, 45, 30, 25, 20 o 15 residuos. En ciertas modalidades, el peptido vana en longitud de aproximadamente 8, 9, 10, 11 o 12 residuos a aproximadamente 15, 20 o 25 residuos. En la presente descripcion, donde se proporciona una secuencia de aminoacidos, se contemplan, ademas, las versiones de la secuencia de aminoacidos L-, D- o beta, asf como tambien, las isoformas retro, inversa y retroinversa. Los peptidos incluyen, ademas, polfmeros de aminoacidos en los que uno o mas residuos de aminoacidos es un analogo qmmico artificial de un aminoacido de origen natural correspondiente, asf como tambien de polfmeros de aminoacidos de origen natural. Adicionalmente, el termino se aplica a los aminoacidos unidos por un enlace peptfdico o por otros enlaces modificados (por ejemplo, donde el enlace peptfdico se reemplaza por un a-ester, un pester, una tioamida, fosfonamida, carbamato, hidroxilato y similares (ver, por ejemplo, Spatola, (1983) Chem. Biochem. Amino Acids and Proteins 7: 267-357), donde la amida se reemplaza con una amina saturada (ver, por ejemplo, Skiles y otros, Patente de Estados Unidos Num. 4.496.542, y Kaltenbronn y otros, (1990) pp. 969-970 en Proc. 11th American Peptide Symposium, ESCOM Science Publishers, Pafses Bajos)).
El termino "aminoacido" se refiere a los aminoacidos de origen natural y sintetico, asf como tambien, a los analogos de aminoacidos y mimeticos de aminoacidos que funcionan de manera similar a los aminoacidos de origen natural. Los aminoacidos de origen natural son aquellos codificados por el codigo genetico, asf como tambien, aquellos aminoacidos que se modifican posteriormente, por ejemplo, hidroxiprolina, Y-carboxiglutamato y O-fosfoserina. Los analogos de aminoacidos se refieren a compuestos que tienen la misma estructura qmmica basica que un aminoacido de origen natural, es decir, un carbono a que se une a un hidrogeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R, por ejemplo, homoserina, norleucina, sulfoxido de metionina. Dichos analogos tienen grupos R modificados (por ejemplo, norleucina) o cadenas principales peptfdicas modificadas, pero conservan la misma estructura qmmica basica que un aminoacido de origen natural. Los mimeticos de aminoacidos se refieren a compuestos qmmicos que tienen una estructura que es
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
diferente de la estructura qmmica general de un aminoacido, pero que funcionan de manera similar a un aminoacido de origen natural. Los aminoacidos son D aminoacidos o L aminoacidos.
Los aminoacidos pueden referirse en la presente descripcion por sus sfmbolos de tres letras conocidos comunmente o por los sfmbolos de una letra recomendados por la Comision de Nomenclatura Bioqmmica IUPAC-IUB. Los nucleotidos, igualmente, pueden referirse por sus codigos de una sola letra aceptados comunmente.
Un experto reconocera que las sustituciones, deleciones o adiciones individuales a un peptido, polipeptido o secuencia proteica que altera, adiciona o elimina un unico aminoacido o un pequeno porcentaje de aminoacidos en la secuencia codificada es una "variante modificada conservadoramente" donde la alteracion resulta en la sustitucion de un aminoacido por un aminoacido similar qmmicamente. Las tablas de sustituciones conservadoras que proporcionan aminoacidos similares funcionalmente se conocen bien en la tecnica. Dichas variantes modificadas conservadoramente son adicionales, y no excluyen las variantes polimorficas, homologos interespecies, y alelos de la invencion.
Como se usa en la presente, el termino "marcador" se refiere a una molecula que facilita la visualizacion y/o deteccion de una molecula de direccionamiento descrita en la presente descripcion. En algunas modalidades, el marcador es un resto fluorescente.
La frase "se une espedficamente" cuando se refiere a la interaccion entre una molecula de direccionamiento descrita en la presente descripcion y un objetivo (por ejemplo, protema purificada, celulas cancerosas o tejido canceroso, tumor o lesion metastasica, metastasis o ganglio linfatico o ganglio linfatico metastasico), se refiere a la formacion de un enlace de afinidad alta entre la molecula de direccionamiento y el objetivo. Ademas, el termino significa que la molecula de direccionamiento tiene afinidad baja por los no objetivos.
"Union selectiva", "selectividad" y similares se refieren a la preferencia de un agente para interactuar con una molecula en comparacion con otra. Preferentemente, las interacciones entre una molecula de direccionamiento descrita en la presente descripcion y un objetivo son tanto espedficas como selectivas. Observese que en algunas modalidades, se disena un agente para "unirse espedficamente" y "unirse selectivamente" a dos objetivos distintos pero similares sin unirse a otros objetivos no deseados
Los terminos "individuo", "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente. Como se usa en la presente, ellos significan cualquier marnffero (es decir, especies de cualesquiera ordenes, familias y generos dentro de la clasificacion taxonomica animalia: chordata: vertebrata: mammalia). En algunas modalidades, el marnffero es un humano. Ninguno de los terminos requiere o se limita a una situacion caracterizada por la supervision (por ejemplo, constante o intermitente) de un trabajador de la salud (por ejemplo, un medico, una enfermera diplomada, una enfermera profesional, un asistente medico, un practicante o un trabajador de hospicio).
Los terminos "administrar", "que se administra", "administracion" y similares, como se usan en la presente descripcion, se refieren a los metodos que pueden usarse para permitir el suministro de agentes o composiciones al sitio deseado de accion biologica. Estos metodos incluyen, pero no se limitan a, inyeccion parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutanea, intraperitoneal, intramuscular, intravascular, intratecal, intravttrea, infusion o local). Las tecnicas de administracion que se emplean opcionalmente con los agentes y metodos descritos en la presente descripcion, incluyen, por ejemplo, como se discute enGoodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, ed. actual; Pergamon; y Remington's, Pharmaceutical Sciences (edicion actual), Mack Publishing Co., Easton, Pa.
El termino "aceptable farmaceuticamente", como se usa en la presente, se refiere a un material que no anula la actividad biologica o propiedades de los agentes descritos en la presente descripcion y es relativamente no toxico (es decir, la toxicidad del material excede significativamente el beneficio del material). En algunos casos, un material aceptable farmaceuticamente puede administrarse a un individuo sin causar efectos biologicos indeseables significativos o interactuar significativamente de manera perjudicial con cualquiera de los componentes de la composicion en la cual se contiene.
El termino "cirugfa" como se usa en la presente, se refiere a cualquier metodo que puede usarse para investigar, manipular, cambiar o causar un efecto en un tejido mediante una intervencion ffsica. Estos metodos incluyen, pero no se limitan a, cirugfa abierta, cirugfa endoscopica, cirugfa laparoscopica, cirugfa mmimamente invasiva, cirugfa robotica y cualquier procedimiento que pueda afectar a un tejido canceroso tal como reseccion de tumor, ablacion de tejido canceroso, estadificacion de cancer, diagnostico de cancer, estadificacion del ganglio linfatico, deteccion del ganglio linfatico centinela o tratamiento del cancer.
El termino "cirugfa guiada" como se usa en la presente, se refiere a cualquier procedimiento quirurgico donde el cirujano emplea un agente para la obtencion de imagenes para guiar la cirugfa.
El termino "cancer" como se usa en la presente, se refiere a cualquier enfermedad que implique el crecimiento o proliferacion no controlada de celulas en el cuerpo humano. Los canceres pueden caracterizarse, ademas, por la capacidad de las celulas para migrar desde el sitio original y diseminarse a sitios distantes (es decir, metastatizar). Los canceres pueden ser sarcomas, carcinomas, linfomas, leucemias, blastomas o tumores de celulas germinales. El cancer
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
puede ocurriren una variedad detejidos que incluyen, pero no se limitan a, pulmon, mama, ovarios, colon, esofago, recto, hueso, prostata, cerebro, pancreas, vejiga, rinon, hugado, celulas sangumeas, ganglios linfaticos y estomago.
Moleculas de suministro selectivo
Se describe en la presente descripcion la molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es una macromolecula; y
Da y Db se seleccionan cada uno independientemente de un agente para la obtencion de imagenes y un
terapeutico; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas. M se selecciona de una protema, un polfmero natural, un polfmero sintetico o un dendnmero. En algunas moleculas, M se selecciona de dextrano, un polfmero de PEG, albumina o sus combinaciones. En algunas moleculas, M es un PEG. En algunas moleculas, M se selecciona de PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG 30 kDa y PEG 40 kDa. En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas modalidades, la molecula de Formula I es:
SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se
une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos ((sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMp2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), EsPaYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11), y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas. X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas modalidades, la molecula de Formula I es:
SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3); B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, Xcomprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura:
[D3-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de Formula I, que tienen la estructura: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-14.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
25.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM- 27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-35.
Se describen en la presente descripcion peptidos de acuerdo con el peptido P-3.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM- 14.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
25.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM- 27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-35.
Porcion A
En algunas moleculas, A es un peptido con una secuencia que comprende de 2 a 20 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 8 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 7 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 5 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 6 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 7 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 8 aminoacidos acidos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 9 aminoacidos acidos.
En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
aproximadamente 20 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 8 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 7 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 5 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 6 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 7 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 8 aminoacidos acidos consecutivos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 9 aminoacidos acidos consecutivos.
En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 8 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 7 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 5 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 6 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 7 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 8 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 9 aminoacidos acidos seleccionados de, aspartatos y glutamatos.
En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 8 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 7 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 5 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 6 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 7 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 8 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos. En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende 9 aminoacidos acidos consecutivos seleccionados de, aspartatos y glutamatos.
En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 glutamatos. En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 9 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 8 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 7 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 5 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 6 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 7 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 8 glutamatos. En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 9 glutamatos.
En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 2 a aproximadamente 20 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 15). En algunas moleculas, la porcion A del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 16). En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 15). En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende de 5 a 8 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 17). En algunas moleculas, A tiene una secuencia que comprende de 5 a 7 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 18). En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5). En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 6 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 19). En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 7 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 20). En algunas moleculas. Atiene una secuencia que comprende 8 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 20). En algunas moleculas, Atiene una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13).
En algunas moleculas, la porcion A comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) (es decir, EEEEE o eeeee). En algunas moleculas, la porcion A comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13) (es decir, EEEEEEEEE o eeeeeeeee).
Una porcion acida A puede incluir aminoacidos que no son acidos. La porcion acida A puede comprender otros restos, tales como restos cargados negativamente. En modalidades de una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion, una porcion acida A puede ser una porcion cargada negativamente, que preferentemente tiene aproximadamente 2 a aproximadamente 20 cargas negativas a pH fisiologico que no incluye un aminoacido.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas moleculas, la cantidad de carga negativa en la porcion A es aproximadamente la misma que la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas modalidades, la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas moleculas, se observa captacion de tejido mejorada en una molecula de suministro selectivo en donde la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas moleculas, se observa una solubilidad mejorada en una molecula de suministro selectivo en donde la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas moleculas, se observa captacion de tejido mas rapida en una molecula de suministro selectivo en donde la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas moleculas, se observa captacion de tejido mayor en una molecula de suministro selectivo en donde la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B.
La porcion A es L-aminoacidos o D-aminoacidos. En modalidades de la invencion, se prefieren D-aminoacidos para minimizar la inmunogenicidad y la escision inespedfica mediante peptidasas de base o proteasas. Se conoce que la captacion celular de secuencias de oligo-D-arginina es tan buena o mejor que la de las oligo-L-argininas.
Debe entenderse que la porcion A puede incluir aminoacidos no estandar, tales como, por ejemplo, hidroxilisina, desmosina, isodesmosina u otros aminoacidos no estandar. La porcion A puede incluir aminoacidos modificados, lo que incluye aminoacidos modificados postransduccionalmente tales como, por ejemplo, aminoacidos metilados (por ejemplo, metil histidina, formas metiladas de lisina, etcetera), aminoacidos acetilados, aminoacidos amidados, aminoacidos formilados, aminoacidos hidroxilados, aminoacidos fosforilados u otros aminoacidos modificados. La porcion A puede incluir, ademas, restos mimeticos de peptidos, lo que incluye porciones unidas por enlaces no peptfdicos y aminoacidos unidos por o a porciones que no son de aminoacidos.
Las moleculas de suministro selectivo descritas en la presente son eficaces cuando A esta en el extremo amino o cuando A esta en el extremo carboxi, es decir, es permisible cualquier orientacion de los enlaces peptfdicos.
Porcion B
En algunas moleculas, B es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 15 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 aminoacidos basicos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 7 aminoacidos basicos.
En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 aminoacidos basicos consecutivos. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 7 aminoacidos basicos consecutivos.
En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 7 aminoacidos basicos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas.
En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 aminoacidos basicos consecutivos seleccionados de argininas, histidinas y lisinas. En algunas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 argininas. En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 7 argininas.
En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 20 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 22). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 5 a aproximadamente 12 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 23). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 24). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende entre aproximadamente 7 a aproximadamente 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 25). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, la porcion B del peptido comprende 7 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 26).
Una porcion B basica puede incluir aminoacidos que no son basicos. La porcion B basica puede comprender otros restos, tales como restos cargados positivamente. En modalidades, una porcion B basica puede ser una porcion cargada positivamente, que tiene preferentemente entre aproximadamente 5 y aproximadamente 20 cargas positivas a pH fisiologico, que no incluye un aminoacido. En algunas moleculas, la cantidad de carga negativa en la porcion A es aproximadamente igual que la cantidad de carga positiva en la porcion B. En algunas moleculas, la cantidad de carga negativa en la porcion A no es igual a la cantidad de carga positiva en la porcion B.
La porcion B es L-aminoacidos o D-aminoacidos. En modalidades de la invencion, se prefieren D-aminoacidos para minimizar la inmunogenicidad y la escision inespedfica mediante peptidasas de base o proteasas. Se conoce que la captacion celular de secuencias de oligo-D-arginina es tan buena o mejor que la de las oligo-L-argininas.
Debe entenderse que la parte B puede incluir aminoacidos no estandar, tales como, por ejemplo, hidroxilisina, desmosina, isodesmosina u otros aminoacidos no estandar. La porcion B puede incluir aminoacidos modificados, lo que incluye aminoacidos modificados postransduccionalmente tales como, por ejemplo, aminoacidos metilados (por ejemplo, metil histidina, formas metiladas de lisina, etcetera), aminoacidos acetilados, aminoacidos amidados, aminoacidos formilados , aminoacidos hidroxilados, aminoacidos fosforilados u otros aminoacidos modificados. La porcion B puede incluir, ademas, restos mimeticos de peptidos, lo que incluye porciones unidas por enlaces no peptfdicos y aminoacidos unidos por o a porciones que no son de aminoacidos.
Donde X es un peptido escindible por una proteasa que une el C-terminal de X al N-terminal de B, de modo que el nuevo amino terminal creado por la escision de X contribuye con una carga positiva adicional que se suma a las cargas positivas ya presentes en B.
Grupo de Conjugacion (c)
En algunas moleculas, la carga (por ejemplo, Da y Db) y los portadores de macromoleculas (M) se unen indirectamente a A-X-B.
En algunas moleculas, la carga (por ejemplo, Da y Db) y los portadores de macromoleculas (M) se unen indirectamente a A-X-B por un grupo de conjugacion (ca, cb y cm). En algunas moleculas, la carga (por ejemplo, Da y Db) y los portadores de macromoleculas (M) se unen indirectamente a A-X-B por un grupo de conjugacion reactivo (ca, cb y cm). En algunas moleculas, la carga (por ejemplo, Da y Db) y los portadores de macromoleculas (M) se unen indirectamente a A-X-B por un grupo de conjugacion reactivo ortogonalmente (ca, cb y cm). En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente un aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 0-10 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 1 aminoacido. En algunas moleculas, c a, cb y cm comprenden cada uno independientemente 2 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 3 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno
independientemente 4 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 5
aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 6 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 7 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm
comprenden cada uno independientemente 8 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno
independientemente 9 aminoacidos. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente 10 aminoacidos.
En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente un aminoacido derivatizado. En algunas moleculas, las cargas multiples (D) se unen a un grupo de conjugacion de aminoacidos derivatizados.
En algunas moleculas, el grupo de conjugacion comprende un ligando de receptor.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente un aminoacido de origen natural o un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que contiene un grupo amino libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm comprenden cada uno independientemente D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb comprende cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb comprende D-cistema. En algunas moleculas, ca comprende cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca comprende D-glutamato. En algunas moleculas, ca comprende lisina. En algunas moleculas, cm comprende cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm comprende para-4-acetil L-fenilalanina.
En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que contiene un grupo amino libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente entre: D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina.
Carga (D)
Agentes para la obtencion de imagenes
En algunas moleculas, un agente para la obtencion de imagenes es un colorante. En algunas moleculas, un agente para la obtencion de imagenes es un resto fluorescente. En algunas moleculas, un resto fluorescente se selecciona de: una protema fluorescente, un peptido fluorescente, un colorante fluorescente, un material fluorescente o sus combinaciones.
Todos los restos fluorescentes se abarcan dentro del termino "resto fluorescente." Los ejemplos espedficos de restos fluorescentes proporcionados en la presente descripcion son ilustrativos y no pretenden limitar los restos fluorescentes para su uso con las moleculas de direccionamiento descritas en la presente descripcion.
Los ejemplos de colorantes fluorescentes incluyen, pero no se limitan a, xantenos (por ejemplo, rodaminas, rodoles y fluorescemas, y sus derivados); bimanes; cumarinas y sus derivados (por ejemplo, umbeliferona y aminometil cumarinas); aminas aromaticas (por ejemplo, dansilo; colorantes de escuarato); benzofuranos; cianinas fluorescentes; indocarbocianinas; carbazoles; dicianometileno piranos; polimetino; oxabenzantrano; xanteno; pirilio; carbostilo; perileno; acridona; quinacridona; rubreno; antraceno; coroneno; fenantreceno; pireno; butadieno; estilbeno; porfirina; ftalocianina; complejos de quelato de metal lantanido; complejos de quelatos de metales de tierras raras; y derivados de dichos colorantes.
Los ejemplos de colorantes de fluorescema incluyen, pero no se limitan a, 5-carboxifluorescema, fluorescema-5- isotiocianato, fluorescema-6-isotiocianato y 6-carboxifluorescema.
Los ejemplos de colorantes de rodamina incluyen, pero no se limitan a, tetrametilrodamina-6-isotiocianato, 5- carboxitetrametilrodamina, derivados de 5-carboxirodol, tetrametil y tetraetil rodamina, difenildimetil y difenildietil rodamina, dinaftil rodamina, cloruro de sulfonilo de rodamina 101 (vendido con el nombre comercial de TEXAS RED®).
Ejemplos de colorantes de cianina incluyen, pero no se limitan a, Cy3, Cy3B, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, Cy7, IRDYE680, Alexa Fluor 750, IRDye800CW, ICG.
Los ejemplos de peptidos fluorescentes incluyen GFP (Protema verde fluorescente) o derivados de GFP (por ejemplo, EBFP, eBfP2, Azurite, mKalamal, ECFP, Cerulean, CyPet, YFP, Citrine, Venus, YPet).
Los marcadores fluorescentes se detectan por cualquier metodo adecuado. Por ejemplo, un marcador fluorescente puede detectarse mediante la excitacion del fluorocromo con la longitud de onda de luz apropiada y mediante la deteccion de la fluorescencia resultante, por ejemplo, por microscopfa, inspeccion visual, a traves de una pelmula fotografica, mediante el uso de detectores electronicos tales como dispositivos de carga acoplada (CCD, por sus siglas en ingles), fotomultiplicadores, etcetera.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes se marca con un isotopo emisor de positrones (por ejemplo, 18F) para la tomograffa de emision de positrones (PET, por sus siglas en ingles), isotopo de rayos gamma (por ejemplo, 99mTc) para la tomograffa computarizada por emision de foton unico (SPECT, por sus siglas en ingles), o una molecula o nanopartfcula paramagnetica (por ejemplo, nanopartfcula de magnetita quelada o recubierta de Gd3+) para la obtencion de imagenes por resonancia magnetica (MRI, por sus siglas en ingles).
En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes se marca con: un quelato de gadolinio, una partfcula de oxido de hierro, una partfcula super paramagnetica de oxido de hierro, una partfcula paramagnetica ultrapequena, un quelato de manganeso o un agente que contiene galio.
Los ejemplos de quelatos de gadolinio incluyen, pero no se limitan a, acido dietilentriaminopentaacetico (DTPA, por sus siglas en ingles), acido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacetico (DOTA, por sus siglas en ingles) y acido 1,4,7-triazaciclononano-N,N',N"-triacetico (NOTA, por sus siglas en ingles).
En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes es un fluoroforo cercano al infrarrojo para la obtencion de imagenes cercanas al infrarrojo (IR cercano), una luciferasa (luciernaga, bacteria o celenterado) u otra molecula luminiscente para la obtencion de imagenes por bioluminiscencia, o una vesfcula rellena de perfluorocarbono para ultrasonido.
En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes es una sonda nuclear. En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes es una sonda de radionuclidos SPECT o PET. En algunas moleculas, la sonda de radionuclidos se selecciona de: un quelato de tecnecio, un quelato de cobre, un fluor radioactivo, un yodo radiactivo, un quelato de indio.
Los ejemplos de quelatos de Tc incluyen, pero no se limitan a, HYNIC, DTPAy DOTA.
En algunas moleculas, el agente para la obtencion de imagenes contiene un resto radiactivo, por ejemplo, un isotopo radiactivo tal como 211At, 131I, 125I, 90Y, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 64Cu, isotopos radiactivos de Lu y otros.
En algunas moleculas, se emplea en cirugfa guiada una molecula de suministro selectivo de acuerdo con la Formula I que comprende un agente para la obtencion de imagenes. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se localiza preferentemente en tejidos cancerosos u otros tejidos no deseados (es decir, tejidos necroticos). En algunas moleculas, se emplea una molecula de suministro selectivo de acuerdo con la Formula I que comprende un agente para la obtencion de imagenes en una cirugfa guiada para eliminar el cancer colorrectal. En algunas moleculas, la cirugfa guiada que emplea la molecula de suministro selectivo permite a un cirujano extirpar tan poco tejido sano (es decir, no canceroso) como sea posible. En algunas moleculas, la cirugfa guiada que emplea la molecula de suministro selectivo permite a un cirujano visualizar y extirpar mas tejido canceroso de lo que el cirujano habna podido extirpar sin la presencia de la molecula de suministro selectivo. En algunas moleculas, la cirugfa es una cirugfa guiada porfluorescencia.
Agentes terapeuticos
Se describe en la presente descripcion el uso de una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion para suministrar un agente terapeutico a un tejido o a una pluralidad de celulas. En algunas, el agente terapeutico es un agente antiinflamatorio. En algunas, el agente terapeutico es un agente contra el cancer. En algunas, la molecula de suministro selectivo se usa para tratar el cancer colorrectal.
En algunas moleculas descritas en la presente descripcion, un resto D es independientemente un agente terapeutico. En algunas moleculas, el agente terapeutico se selecciona de: un agente quimioterapeutico, un esteroide, un agente inmunoterapeutico, una terapia dirigida, un agente antiinflamatorio o sus combinaciones.
En algunas moleculas, el agente terapeutico es un inhibidor de la via del receptor de celulas B. En algunas moleculas, el agente terapeutico es un inhibidor de CD79A, un inhibidor de CD79B, un inhibidor de CD19, un inhibidor de Lyn, un inhibidor de Syk, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de Blnk, un inhibidor de PLCy, un inhibidor de PKCp, o sus combinaciones. En algunas moleculas, el agente terapeutico es un anticuerpo, un inhibidor de la senalizacion del receptor de celulas B, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de IAP, un inhibidor de mTOR, un radioinmunoterapeutico, un agente que dana el ADN, un inhibidor de proteosoma, un inhibidor de histona deacetilasa, un inhibidor de protema quinasa, un inhibidor de hedgehog, un inhibidor de Hsp90, un inhibidor de telomerasa, un inhibidor de Jak1/2, un inhibidor de proteasa, un inhibidor de PKC, un inhibidor de PARP, o sus combinaciones. En algunas moleculas, el agente terapeutico se selecciona de: clorambucilo, ifosfamida, doxorrubicina, mesalazina, talidomida, lenalidomida, temsirolimus, everolimus, fludarabina, fostamatinib, paclitaxel, docetaxel, ofatumumab, rituximab, dexametasona, prednisona, CAL-101, ibritumomab, tositumomab, bortezomib, pentostatina, endostatina, bendamustina, clorambucilo, clormetina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan, prednimustina, trofosfamida, busulfan, mannosulfan, treosulfan, carboquona, tiotepa, triaziquona, carmustina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, semustina, estreptozocina, etoglucida, dacarbazina, mitobronitol, pipobroman, temozolomida, metotrexato, permetrexed, pralatrexato, raltitrexed, cladribina, clofarabina, fludarabina, mercaptopurina, nelarabina, tioguanina, azacitidina, capecitabina, carmofur, citarabina, decitabina, fluorouracilo, gemcitabina, tegafur, vinblastina, vincristina, vindesina , vinflunina, vinorelbina, etoposido,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
teniposido, demecolcina, docetaxel, paclitaxel, paclitaxel poliglumex, trabectedina, dactinomicina, aclarrubicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, pirarrubicina, valrubicina, zorubincina, bleomicina, ixabepilona, mitomicina, plicamicina, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, satraplatino, procarbazina, acido aminolevu^nico, efaproxiral, metil aminolevulinato, porffmero de sodio, temoporfina, dasatinib, erlotinib, everolimus, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, pazonanib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, alitretinoma, altretamina, amzacrina, anagrelida, trioxido de arsenico, asparaginasa, bexaroteno, bortezomib, celecoxib , denileukina diftitox, estramustina, hidroxicarbamida, irinotecan, lonidamina, masoprocol, miltefosema, mitoguazona, mitotano, oblimerseno, pegaspargasa, pentostatina, romidepsina, sitimagene ceradenovec, tiazofurina, topotecan, tretinoma, vorinostat, dietilestilbenol, etinilestradiol, fosfestrol, fosfato de poliestradiol, gestonorona, medroxiprogesterona, megestrol, buserelina, goserelina, leuprorelina, triptorelina, fulvestrant, tamoxifeno, toremifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, aminoglutetimida, anastrozol, exemestano, formestano, letrozol, vorozol, abarelix, degarelix, diclorhidrato de histamina, mifamurtida, pidotimod, plerixafor, roquinimex, timopentina, everolimus, gusperimus , leflunomida, acido micofenolico, sirolimus, ciclosporina, tacrolimus, azatioprina, lenalidomida, metotrexato, talidomida, iobenguane, ancestim, filgrastim, lenograstim, molgramostim, pegfilgrastim, sargramostim, interferon alfa natural, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon alfacon -1, interferon alfa-n1, interferon beta natural, interferon beta-la, interferon beta-lb, interferon gamma, peginterferon alfa- 2a, peginterferon alfa-2b, aldesleukina, oprelvekina, vacuna BCG, acetato de glatiramer, diclorhidrato de histamina, inmunocianina, lentinan, vacuna contra el melanoma, mifamurtida, pegademasa, pidotimod, plerixafor, poli I:C, poli-ICLC, roquinimex, tasonermina, timopentina, abatacept, abetimus, alefacept, inmunoglobulina antilinfodtica (caballo), inmunoglobulina antitimodtica (conejo), eculizumab, efalizumab, everolimus, gusperimus, leflunomida, muromab-CD3, acido micofenolico, natalizumab, sirolimus, adalimumab, afelimomab, certolizumab pegol, etanercept, golimumab, infliximab, anakinra, basiliximab, canakinumab, daclizumab, mepolizumab, rilonacept, tocilizumab, ustekinumab, ciclosporina, tacrolimus, azatioprina, lenalidomida, metotrexato, talidomida, adalimumab, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, certolizumab pegol, eculizumab, efalizumab, gemtuzumab, ibritumomab tiuxetan , muromonab-CD3, natalizumab, panitumumab, ranibizumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab, catumaxomab, edrecolomab, ofatumumab, muromab-CD3, afelimomab, golimumab, ibritumomab tiuxetan, abagovomab, adecatumumab, alemtuzumab, anticuerpo monoclonal anti-CD30 Xmab2513, anticuerpo monoclonal anti-MET MetMab, apolizumab, apomab, arcitumomab, anticuerpo biespedfico 2B1, blinatumomab, brentuximab vedotin, pendetida capromab, cixutumumab, claudiximab, conatumumab, dacetuzumab, denosumab, eculizumab, epratuzumab, epratuzumab, ertumaxomab, etaracizumab, figitumumab, fresolimumab, galiximab, ganitumab, gemtuzumab ozogamicina, glembatumumab, ibritumomab, inotuzumab ozogamicina, ipilimumab, lexatumumab, lintuzumab, lintuzumab, lucatumumab, mapatumumab, matuzumab, milatuzumab, anticuerpo monoclonal CC49, necitumumab, nimotuzumab, ofatumumab, oregovomab, pertuzumab, ramacurimab, ranibizumab, siplizumab, sonepcizumab, tanezumab, tositumomab, trastuzumab, tremelimumab, tucotuzumab, celmoleukin, veltuzumab, visilizumab, volociximab, zalutumumab, inhibidor de syk (por ejemplo, R788), enzastaurina, dasatinib, erlotinib, everolimus, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, pazonanib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, un inhibidor de la angiogenesis (por ejemplo, GT-111, JI- 101, R1530), inhibidores de la cinasa (por ejemplo, AC220, AC480, ACE-041, AMG 900, AP24534, Arry-614, AT7519, AT9283, AV-951, axitinib, AZD1152, AZD7762, AZD8055, AZD8931, bafetinib, BAY 73-4506, BGJ398, BGT226, BI 811283, BI6727, BIBF 1120, BIBW2992, BMS-690154, BMS-777607, BMS-863233, BSK-461364, CAL-101, CEP-11981, CYC116, DCC-2036, dinaciclib, dovitinib lactato, E7050, EMD 1214063, ENMD-2076, fostamatinib disodico, GSK2256098, GSK690693, INCB18424 , INNO-406, JNJ-26483327, JX-594, KX2-391, linifanib, LY2603618, MGCD265, MK-0457, MK1496, MLN8054, MLN8237, MP470, NMS-1116354, NMS-1286937, EN 01919.Na, OSI- 027, OSI-930, inhibidor de Btk, PF-00562271, PF-02341066, PF-03814735, PF-04217903, PF-04554878, PF-04691502, PF-3758309, PHA-739358, PLC3397, progenipoietina, R547, R763, ramucirumab , regorafenib, RO5185426, SAR103168, S3333333CH 727965, SGI-1176, SGX523, SNS -314, TAK-593, TAK-901, TKI258, TLN-232, TTP607, XL147, XL228, XL281RO5126766, XL418, XL765), un inhibidor de la senalizacion de protema quinasa activada por mitogeno (por ejemplo, U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, wortmannin o LY294002), adriamicina, dactinomicina, bleomicina, vinblastina, cisplatino, acivicina, aclarrubicina, clorhidrato de acodazol, acronina, adozelesina, aldesleucina, altretamina, ambomicina, acetato de ametantrona, aminoglutetimida , amsacrina, anastrozol, antramicina, asparaginasa, asperlina, azacitidina, azetepa, azotomicina, batimastat, benzodepa, bicalutamida, clorhidrato de bisantreno, dimesilato de bisnafida, bizelesina, sulfato de bleomicina, brequinar sodico, bropirimina, busulfan, cactinomicina, calusterona, caracemida, carbetimero, carboplatino , carmustina, clorhidrato de carubicina, carzelesina, cedefingol, clorambucil, cirolemicin, cladribina, mesilato de crisnatol, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, clorhidrato de daunorrubicina, decitabina, dexormaplatino, dezaguanina, mesilato de dezaguanina, diaziquona, doxorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina, droloxifeno, citrato de droloxifeno, propionato de dromostanolona, duazomicina, edatrexato, clorhidrato de eflornitina, elsamitrucina, enloplatino, enpromato, epipropidina, clorhidrato de epirrubicina, erbulozol, clorhidrato de esorrubicina, estramustina, fosfato sodico de estramustina , etanidazol, etoposido, etoposido fosfato, etoprina, clorhidrato de fadrozol, fazarabina, fenretinida, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracilo, flurocitabina, fosquidina, fostriecina sodica, gemcitabina, clorhidrato de gemcitabina, hidroxiurea, clorhidrato de idarrubicina, ifosfamida, iimofosina, interleucina II (lo que incluye la interleucina II recombinante o rlL2), interferon alfa-2a, interferon alfa- 2b, interferon alfa-nl, interferon alfa-n3, interferon beta-1a, interferon gamma-1b, iproplatino, clorhidrato de irinotecan, acetato de lanreotida, letrozol, acetato de leuprolida, clorhidrato de liarozol, lometrexol sodico, lomustina, clorhidrato de losoxantrona, masoprocol, maytansina, clorhidrato de mecloretamina, acetato de megestrol, acetato de melengestrol, melfalan, menogaril, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sodio, metoprina, meturedepa, mitinomida, mitocarcina, mitocromina, mitogilina, mitomalcina, mitomicina, mitosper, mitotano, clorhidrato de mitoxantrona, acido micofenolico, nocodazo, nogalamicina , ormaplatin, oxisuran, pegaspargase, peliomycin, pentamustina, sulfato de peplomicina, perfosfamida, pipobroman, piposulfan, piroxantrone hydrochloride, plicamycin, plomestane, porfimer sodio,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
porfiromicina, prednimustina, procarbazine, puromicina, clorhidrato de puromicina, pirazofurina, riboprina, rogletimida, safingol, clorhidrato de safingol, semustina, simtrazeno, sparfosato sodio, esparsomicina, clorhidrato de espirogermanium, espiromustina, espiroplatino, estreptonigrina, estreptozocina, sulofenur, talisomicina, tecogalan sodio, tegafur, teloxantrone hydrochloride, temoporfin, teniposide, teroxirone, testolactone, thiamiprine, thioguanine, thiotepa, tiazofurina, tirapazamina, citrato de toremifeno, acetato de trestolona, fosfato de triciribina, trimetrexato, glucuronato de trimetrexato, triptorelina, clorhidrato de tubulozol, mostaza de uracilo, uredepa, vapreotida, verteporfina, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, vindesina, sulfato de vindesina, sulfato de vinidina, sulfato de vinindinosina, sulfato de vinleurosina, tartrato de vinorelbina, sulfato de vinrosidina, sulfato de vinzolidina, vorozol, zeniplatino, zinostatino, clorhidrato de zorubicina. En algunas moleculas, el agente terapeutico se selecciona de: 20-epi-1, 25 dihidroxivitamina D3, 5-etiniluracilo, abiraterona, aclarrubicina, acilfulvene, adecipenol, adozelesin, aldesleucina, antagonistas de ALL-TK, altretamina, ambamustina, amidox, amifostina, acido aminolevulmico, amrubicina, amsacrina, anagrelida, anastrozol, andrografolida, inhibidores de la angiogenesis, antagonista D, antagonista G, antarelix, protema-1 morfogenetica anti-dorsalizante, antiandrogeno, carcinoma prostatico, antiestrogeno, antineoplaston, oligonucleotidos antisentido, glicinato de afidicolina, moduladores del gen de la apoptosis, reguladores de la apoptosis, acido apurmico, ara-CDP-DL-PTBA, arginina desaminasa, asulacrina, atamestano, atrimustina, axinastatina 1, axinastatina 2, axinastatina 3, azasetron, azatoxina, azatirosina, derivados de baccatin III, balanol, batimastat, antagonistas de BCR/ABL, benzoclorinas, benzoilestaurosporina, derivados de beta lactama, beta -aletina, betaclamicina B, acido betulmico, inhibidor de bFGF, bicalutamida, bisantreno, bisaziridinilspermina, bisnafida, bistrateno A, bizelesina, breflate, bropirimina, budotitane, sulfoximinade butionine, calcipotriol, calfostin C, derivados de la camptotecina, canaripox IL-2, capecitabina, carboxamida-amino-triazol, carboxiamidotriazol, CaRest M3, CARN 700, inhibidor derivado del cartflago, carzelesina, inhibidores de la casema quinasa (ICOS) , castanospermine, cecropin B, cetrorelix, clorlns, cloroquinoxalina sulfonamida, cicaprost, cis-porfirina, cladribino, analogos de clomifeno, clotrimazol, colismicina A, colismicina B, combretastatina A4, analogos de combretastatina, conagenina, crambescidina 816, crisnatol, criptoficina 8, derivadosde criptoficinaA, curacina A, ciclopentantraquinones, cicloplatam, cypemycin, citarabine ocfosfate, factor citolitico, citostatin, dacliximab, decitabine, dehydrodidemnin B, deslorelina, dexametasona, dexifosfamide, dexrazoxane, dexverapamil, diaziquone, didemnin B, didox, diethilnorspermina, dihidro-5-azacitidina, 9-dioxamicina, difenil spiromustina, docosanol, dolasetron, doxifluridina, droloxifeno, dronabinol, duocarmicina SA, ebselen, ecomustina, edelfosina, edrecolomab, eflornitine, elemene, emitefur, epirrubicina, epristeride, de analogo deestramustina, agonistas de estrogenos, antagonistas de estrogenos, etanidazol, fosfato de etoposido, exemestano, fadrozol, fazarabine, fenretinide, filgrastim, finasteride, flavopiridol, flezelastine , flutardona, fludarabina, clorhidrato de fluorodaunorrunicina, forfenimex, formestano, fostriecina, fotemustina, texafirina de gadolinio, nitrato de galio, galocitabina, ganirelix, inhibidores de gelatinasa, gemcitabina, inhibidores de glutation, hepsulfam, heregulina, hexametilen bisacetamida, hipericina, acido ibandronico, idarrubicina, idoxifeno, idramantona, ilmofosina, ilomastat, imidazoacridonas, imiquimod, peptidos inmunoestimulantes, insulinatal como porejemplo, inhibidor del receptor del factor de crecimiento 1, agonistas del interferon, interferones, interleucinas, iododoxorrubicina, ipomeanol, 4-, iroplact, irsogladine, isobengazole, isohomohalicondrin B , itasetron, jasplakinolide, kahalalide F, triacetato de lamellarin-N, lanreotida, leinamicina, lenograstim, lentinan sulfato, leptolstatina, letrozol, factor inhibidor de la leucemia, interferon alfa leucocitario, leuprolida + estrogeno + progesterona, leuprorelina, levamisol, liarozol, analogo de poliamina lineal, peptido disacarido lipofilo, compuestos de platino lipofilos, lissoclinamida 7, lobaplatino, lombricine, lometrexol, lonidamine, losoxantrona, lovastatina, loxoribine, lurtotecan, lutetium texafirin, lisofillina, peptidos ltticos, maitansina, mannostatina A, marimastat, masoprocol, maspin, inhibidores de matrilisina, inhibidores de metaloproteinasas de la matriz, menogaril, merbarone, meterelin , metioninasa, metoclopramida, inhibidor de MIF, mifepristona, miltefosina, mirimostim, ARN bicatenario no compatible, mitoguazona, mitolactol, analogos de mitomicina, mitonafida, factor de crecimiento de fibroblastos de mitotoxina-saporina, mitoxantrona, mofaroteno, molgramostim, anticuerpo monoclonal, gonadotropina corionica humana, monofosforil lfpido A + pared celular de myobacterium sk, mopidamol, inhibidor del gen de resistencia a multiples farmacos, terapia supresora de tumores multiples 1, agentemostaza contra el cancer, micaperoxido B, extracto de la pared celular micobacteriana, miriaporone, N-acetildinalina, benzamidas N-substituidas, nafarelina, nagrestip, naloxona + pentazocine, napavin, nafterpin, nartograstim, nedaplatino, nemorrubicina, acido neridronico, endopeptidasa neutral, nilutamida, nisamicina, moduladores de oxido mtrico, antioxidantenitroxido, nitrulina, O6-bencilguanina, octreotido, okicenona, oligonucleotidos, onapristona, ondansetron, ondansetron, oracina, inductor oral de citocina, ormaplatino, osaterona, oxaliplatino, oxaunomicina, palauamina, palmitoilrizoxina, acido pamidronico, panaxitiol, panomifeno, parabactina, pazeliptina, pegaspargasa, peldesine, pentosan polisulfatosodico, pentostatina, pentrozol, perflubron, perfosfamida, perilil-alcohol, fenazinomicina, fenilacetato, inhibidores de la fosfatasa, picibanil, clorhidrato de pilocarpina, pirarrubicina, piritrexim, placetin A, placetin B, inhibidor del activadorde plasminogeno, complejo de platino, compuestos de platino, complejo platino-triamina, porfimer sodico, porfiromicina , prednisona, propil bis- acridona, prostaglandina J2, inhibidores del proteosoma, modulador inmune basado en protema A, inhibidor de la protema quinasa C, inhibidores de la protema quinasa C, microalgas, inhibidores de la protema tirosina fosfatasa, inhibidores de la purina nucleosido fosforilasa, purpurinas, pirazoloacridina, hemoglobina piridoxilada, polioxietileno conjugado, antagonistas de raf, raltitrexed, ramosetron, inhibidores de ras farnesil protema transferasa, inhibidores de ras, inhibidor de ras GAP, reteliptina desmetilada, etidronato renio Re 186, rizoxina, ribozimas, retinamida RII, rogletimida, rohituquina, romurtide, roquinimex, rubiginona B1, ruboxil, safingol, saintopina, SarCNU, sarcofitol A, sargramostim, mimeticos de Sdi 1, semustino, inhibidor 1 derivado de la senescencia, oligonucleotidos sentido, inhibidores de transduccion de senales, moduladores de transduccion de senales, protema de union a antfgeno de cadena simple, sizofiran, sobuzoxano, borocaptato de sodio, fenilacetato de sodio, solverol, protema de union a somatomedina, sonermina, acidosparfosico, espicamicina D, espiromustina, esplenopentina, espongistatina 1, escualamina, inhibidor de celulas madre, inhibidores de la division de celulas madre, stipiamida, inhibidores de estromelisina, sulfinosina, antagonista del peptido intestinal vasoactivo superactivo, suradista, suramina, swainsonina, glicosaminoglicanos sinteticos, talimustina, tamoxifeno
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
metiodido, tauromustina, tazaroteno, tecogalan sodico, tegafur, telurapirilium, inhibidores de la telomerasa, temoporfina, temozolomida, teniposido, tetraclorodecaoxido, tetrazomina, taliblastina, tiocoralina, trombopoyetina, mimetico de trombopoyetina, timalfasina, agonista del receptor de timopoietina, timotrinan, hormona estimulante de la tiroides, etiopurpurina de etil estano, tirapazamina, bicloruro de titanoceno, topsentina, toremifeno, factor de celulas madre totipotentes, inhibidores de la traduccion, tretinoma, triacetiluridina, triciribina, trimetrexato, triptorelina, tropisetron, turosterida, inhibidores de la tirosina quinasa, tirfostins, inhibidores de UBC, ubenimex, factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital, antagonistas del receptor de la uroquinasa, vapreotida, variolina B, sistema de vector, terapia genica de los eritrocitos, velaresol, veramina, verdinas, verteporfina, vinorelbina, vinxaltina, vitaxina, vorozol, zanoterona, zeniplatino, zilascorb, zinostatina stimalamer, mecloroetamina, ciclofosfamida, clorambucilo, busulfan, carmustina , lomusitna, decarbazina, metotrexato, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina, mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucilo, meifalan, etilenimina, metilmelamina, hexametilmelamina, tiotepa, busulfan, carmustina, lomusitna, semustina, estreptozocina, descarbazina, fluorouracilo, floxouridina, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina, erbulozol (conocido tambien como R-55104), Dolastatin 10 (conocido tambien como DLS-10 y NSC-376128), Isetionato de mivobulina (conocido tambien como CI-980), vincristina, NSC-639829, Discodermolida (conocida tambien como NVP- XX-A-296), aBt-751 (Abbott, conocido tambien como E-7010), Altorirtinos (tales como Altorirtin A y Altorirtin C), Spongistatinos (tales como Spongistatin 1, Spongistatin 2, Spongistatin 3, Spongistatin 4, Spongistatin 5, Spongistatin 6, Spongistatin 7, Spongistatin 8 y Spongistatin 9), clorhidrato de Cemadotin (conocido tambien como LU-103793 y NSC-D- 669356), Epotilones (tales como Epotilone A, Epotilone B, Epotilone C (conocido tambien como desoxiepotilone A o dEpoA), Epotilone D (conocido tambien como kOs-862, dEpoB y desoxiepotilone B), Epotilone E, Epotilone F, N-oxido Epotilone B, N-oxido Epotilone A, 16-aza-epotilone B, 21-aminoepotilone B (conocido tambien como BMS-310705), 21- hidroxiepotilone D (conocido tambien como Desoxiepotilone F y dEpoF ), 26-fluoroepotilone), Auristatin PE (conocido tambien como NSC-654663), Soblidotin (conocido tambien como TZT-1027), LS-4559-P (Pharmacia, conocido tambien como LS-4577), LS-4578 (Pharmacia, conocido tambien como LS-477-P), LS-4477 (Pharmacia), LS-4559 (Pharmacia), RPR-112378 (Aventis), sulfato de Vincristina, DZ-3358 (Daiichi), FR-182877 (Fujisawa, conocido tambien como WS- 9885B), GS-164 (Takeda), GS-198 (Takeda), KAR-2 (Hungarian Academy of Sciences), BSF-223651 (BASF, conocido tambien como ILX-651 y LU-223651), SAH-49960 (Lilly/Novartis), SDZ-268970 (Lilly/Novartis), AM-97 (Armad/Kyowa Hakko), AM-132 (Armad), AM-138 (Armad/Kyowa Hakko), IDN-5O05 (Indena), Criptoficina 52 (conocido tambien como LY-355703), AC-7739 (Ajinomoto, conocido tambien como AVE-8063a y CS-39.HCI), AC-77O0 (Ajinomoto, conocido tambien como AVE-8062, AVE-8062A, CS-39 -L-Ser.HCI, y RPR-258062A), Vitilevuamida, Tubulisina A, Canadensol, Centaureidina (conocido tambien como NSC-106969), T-138067 (Tularik, conocido tambien como T-67, TL-138067 y TI- 138067), COBRA-1 (Parker Hughes Institute, conocido tambien como DDE-261 y WHI-261), H10 (Kansas State University), H16 (Kansas State University), Oncocidin A1 (conocido tambien como BTO-956 y DIME), DDE-313 (Parker Hughes Institute), Fijianolida B, Laulimalida, SPA-2 (Parker Hughes Institute), SPA-1 (Instituto Parker Hughes, conocido tambien como SpIKET-P), 3-IAABU (Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine, conocido tambien como MF-569), Narcosine (conocido tambien como NSC-5366), Nascapine, D-24851 (Asta Medica), A-105972 (Abbott), Hemiasterlin, 3- BAABU (Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine, conocido tambien como MF-191), TMPN (Arizona State University), acetilacetonato de Vanadocene, T-138026 (Tularik), Monsatrol, Inanocine (conocido tambien como NSC-698666), 3- 1AABE (Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine), A-204197 (Abbott), T-607 (Tuiarik, conocido tambien como T- 900607), RPR-115781 (Aventis), Eleuterobinas (tales como Desmetileleuterobin, Desaetileleuterobin, Isoeleuterobin Ay Z-Eleuterobin), Caribaeoside, Caribaeolin, Halicondrin B, D-64131 (Asta Medica), D-68144 (Asta Medica), Diazonamida A, A-293620 (Abbott), NPI-2350 (Nereus), Taccalonolida A, TUB-245 (Aventis) , A-259754 (Abbott), Diozostatina, (-) - Fenilahistin (conocido tambien como NsCl-96F037), D-68838 (Asta Medica), D-68836 (Asta Medica), Mioseverin B, D- 43411 (Zentaris, conocido tambien como D-81862), A-289099 (Abbott), A-318315 (Abbott), H TI-286 (conocido tambien como SPA-110, sal de trifluoroacetato) (Wyeth), D-82317 (Zentaris), D-82318 (Zentaris), SC-12983 (NCI), Resverastatin fosfato sodico, BPR-OY-007 (National Health Research Institutes) y SSR-250411 (Sanofi).
En algunas moleculas, el agente terapeutico es un agente antiinflamatorio. En algunas moleculas, el agente terapeutico es un agente anti-TNF, un antagonista del receptor de IL-1, un antagonista del receptor de IL-2, un agente citotoxico, un agente inmunomodulador, un antibiotico, un bloqueador coestimulador de celulas T, un agente depletor de celulas B, un agente inmunosupresor, un agente alquilante, un antimetabolito, un alcaloide vegetal, un terpenoide, un inhibidor de la topoisomerasa, un antibiotico antitumoral, un anticuerpo, una terapia hormonal, un agente antidiabetes, un inhibidor de leucotrienos, o sus combinaciones. En algunas moleculas, el agente terapeutico se selecciona de: alefacept, efalizumab, metotrexato, acitretina, isotretinoma, hidroxiurea, micofenolato mofetil, sulfasalazina, 6-tioguanina, Dovonex, Taclonex, betametasona, tazaroteno, hidroxicloroquina, etanercept, adalimumab, infliximab, abatacept, rituximab, tratuzumab, anticuerpo monoclonal anti-CD45 AHN-12 (NCI), Anticuerpo anti-Blyodo-131 (Corixa Corp.), anticuerpo monoclonal anti- CD66 BW 250/183 (NCI, Southampton General Hospital), anticuerpo monoclonal anti-CD45 (NCI, Baylor College of Medicine), integrina de anticuerpo anti-anb3 (NCI), BIW-8962 (BioWa Inc.), Anticuerpo BC8 (NCI), anticuerpo muJ591 (NCI), anticuerpo monoclonal Mn-14 indio In 111 (NCI ), anticuerpo monoclonal MN-14 itrio Y 90 (NCI), anticuerpo monoclonal F105 (NIAID), anticuerpo monoclonal RAV12 (Raven Biotechnologies), CAT-192 (anticuerpo monoclonal anti- TGF-Beta1 humano, Genzyme), anticuerpo 3F8 (NCI), 177Lu-J591 (Weill Medical College of Cornell University), TB-403 (BioInvent International AB), anakinra, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina A, leflunomida, d-penicilamina, amitriptilina o nortriptilina, clorambucilo, mostaza nitrogenada, prasterona, LJP 394 (abetimus sodico), LJP 1082 (La Jolla Pharmaceutical), eculizumab, belibumab, rhuCD40L (NIAID), epratuzumab, sirolimus, tacrolimus, pimecrolimus, talidomida, globulina equinaantitimocito (Atgam, Pharmacia Upjohn), globulina de conejoantitimocito (Timoglobulina, Genzyme), Muromonab-CD3 (FDA Office of Orphan Products Development), basiliximab, daclizumab, riluzol, cladribina, natalizumab, interferon beta-lb, interferon beta-la, tizanidina, baclofeno, mesalazina, asacol, pentasa, mesalamina,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
balsalazida, olsalazina, 6-mercaptopurina, AIN457 (Anticuerpo monoclonal anti-IL-17, Novartis), teofilina, D2E7 (un AcM anti-TNF humano de Knoll Pharmaceuticals), Mepolizumab (Anticuerpo anti-IL-5, SB 240563), Canakinumab (Anticuerpo anti-IL-1Beta, NIAMS), anticuerpo receptor anti-IL-2 ( Daclizumab, NHLBI), CNTO 328 (Anti IL-6 Anticuerpo monoclonal, Centocor), ACZ885 (anticuerpo monoclonal anti-interleucina-1 beta humano completo, Novartis), CNTO 1275 (Anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humano completo, Centocor), (3S)-N-hidroxi-4-({4-[(4-hidroxi-2-butinil)oxi]fenil} sulfonil)-2,2-dimetil- 3-tiomorfolina carboxamida (apratastat), golimumab (CNTO 148), Onercept, BG9924 (Biogen Idec), Certolizumab Pegol (CDP870, UCB Pharma), AZD9056 (AstraZeneca), AZD5069 (AstraZeneca), AZD9668 (AstraZeneca), AZD7928 (AstraZeneca), AZD2914 (AstraZeneca), AZD6067 (AstraZeneca), AZD3342 (AstraZeneca), AZD8309 (AstraZeneca), acido [(1R)-3-metil-1-({(2S)-3-fenil-2-[(pirazin-2-ilcarbonil)amino]propanoil}amino)butil] boronico (Bortezomib), AMG-714, (Anticuerpo monoclonal humano anti-IL 15, Amgen), ABT-874 (anticuerpo monoclonal anti-IL-12, Abbott Labs), MRA (Tocilizumab, un anticuerpo monoclonal anti receptor de IL-6, Chugai Pharmaceutical), CAT-354 (un anticuerpo monoclonal anti-interleucina-13 humano, Cambridge Antibody Technology, MedImmune), aspirina, acidosalidlico, acido gentisico, salicilato de magnesio colina, salicilato de colina, salicilato de magnesio colina, salicilato de colina, salicilato de magnesio, salicilato de sodio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofeno calcico, flurbiprofeno, ibuprofeno, ketoprofeno, nabutona, ketolorac, ketorolac trometamina, naproxeno, oxaprozino, diclofenaco, etodolaco, indometacina, sulindaco, tolmetina, meclofenamato, meclofenamato sodico, acido mefenamico, piroxicam, meloxicam, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-502 (Sankyo), JTE-522 (Japan Tobacco Inc.), L-745,337 (Almirall), NS398 (Sigma), betametasona (Celestone), prednisona (Deltasone), alclometasona, aldosterona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisona, cortivazol, deflazacort, desoxicorticosterona, desonida, desoximetasona, desoxicortona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, fluclorolona, fludrocortisona, fludroxicortida, flumetasona, flunisolida, acetonido de fluocinolona, fluocinonida , fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluticasona, formocortal, formoterol, halcinonida, halometasona, hidrocortisona, hidrocortisona aceponato, hidrocortisona buteprato, hidrocortisona butirato, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, metilprednisolona aceponato, mometasona furoato, parametasona, prednicarbato, prednisona, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, ulobetasol, Pioglitazona, Rosiglitazona, Glimepirida, Glyburida, Clorpropamida, Glipizida, Tolbutamida, Tolazamida, Glucofago, Metformina, (gliburida + metformina), Rosiglitazona + metformina, (Rosiglitazona + glimepirida), Exenatida, Insulina, Sitagliptina, (glipizida y metformina), Repaglinida, Acarbosa, Nateglinida, Orlistat, cisplatino; carboplatino; oxaliplatino; mecloretamina; ciclofosfamida; clorambucilo; vincristina; vinblastina; vinorelbina; vindesina; mercaptopurina; fludarabina; pentostatina; cladribina; 5-fluorouracilo (5FU); floxuridina (FUDR); arabinosido de citosina; trimetoprima; pirimetamina; pemetrexed; paclitaxel; docetaxel; etoposido; teniposido; irinotecan; topotecan; amsacrina; etoposido; etoposido fosfato; teniposido; dactinomicina; doxorrubicina; daunorrubicina; valrubicina; idarubicina; epirrubicina; bleomicina; plicamicina; mitomicina; finasterida; goserelina; aminoglutetimida; anastrozol; letrozol; vorozole; exemestano; 4-androsten-3,6,17-triona ("6-OXO"; 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD); formestano; testolactona; fadrozol; A-81834acido (3-(3-(1,1 -dimetiletiltio-5- (quinolin-2-ilmetoxi)-1-(4-clorometilfenil)indol-2-il)-2,2-dimetilpropionaldel'ndo oxima-O-2-acetico; AME103 (Amira); AME803 (Amira); atreleuton; BAY-x-1005 acido((R)-(+)-alfa-ciclopentil-4-(2-quinolinilmetoxi)-benzenoacetico); cJ-13610 (4-(3-(4-(amida de acido 2-metil-imidazol-1-il)-fenilsulfanil) -fenil) -tetrahidro-piran-4-carboxflico); DG-031 (DeCode); DG- 051 (DeCode); MK886 sal sodica del acido (1-[(4-clorofenil)metil]3-[(1,1-dimetiletil) tio]-a,a-dimetil-5- (1-metiletil)-1H-indol- 2-propanoico); MK591acido (3-(1)4[(4-clorofenil)metil]-3-[(t-butiltio)-5-((2-quinol)metoxi)-1H-indol-2]-dimetilpropanoico); RP64966acido ([4-[5-(3-fenil-propil)tiofen-2-il]butoxi]acetico); SA6541 ((R)-S-[[4-(dimetilamino)fenil]metil]-N-(3-mercapto- 2metil-1)-oxopropil-L-cistema); SC-56938 (etil-1-[2-[4-(fenilmetil) fenoxi]etil]-4-piperidina-carboxilato); ViA-2291 (via Pharmaceuticals); WY-47,288 (2-[(1-naftaleniloxi)metil]quinolina); zileuton; zD-2138 (6-((3-fluoro-5-(tetrahidro-4-metoxi- 2H-piran-4il) fenoxi) metil)-1-metil-2(1H)-quinilolinona); doxiciclina; o sus combinaciones.
Portadores macromoleculares
El termino "portador" significa una molecula inerte que modula la vida media en plasma, la solubilidad o la biodistribucion. En algunas moleculas, un portador modula la vida media en plasma de una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion. En algunas moleculas, un portador modula la solubilidad de una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion. En algunas moleculas, un portador modula la biodistribucion de una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion.
En algunas moleculas, un portador disminuye la captacion de una molecula de suministro selectivo por celulas o tejidos no objetivo. En algunas moleculas, un portador disminuye la captacion de una molecula de suministro selectivo en el cartflago. En algunas moleculas, un portador disminuye la captacion de una molecula de suministro selectivo en las articulaciones con relacion al tejido objetivo.
En algunas moleculas, un portador aumenta la captacion de una molecula de suministro selectivo por celulas o tejidos objetivo. En algunas moleculas, un portador disminuye la captacion de una molecula de suministro selectivo en el hfgado con relacion al tejido objetivo. En algunas moleculas, un portador disminuye la captacion de una molecula de suministro selectivo en los rinones. En algunas moleculas, un portador aumenta la captacion en el tejido canceroso. En algunas moleculas, un portador aumenta la captacion en los canales linfaticos y/o ganglios linfaticos.
En algunas moleculas, un portador aumenta la vida media plasmatica mediante la reduccion de la filtracion glomerular. En algunas moleculas, un portador modula la vida media del plasma mediante el aumento o disminucion del metabolismo o la degradacion de la proteasa. En algunas moleculas, un portador aumenta la captacion tumoral debido a la
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
permeabilidad y retencion mejoradas (EPR, por sus siglas en ingles) de la vasculatura tumoral. En algunas moleculas, un portador aumenta la solubilidad acuosa de la molecula de suministro selectivo.
Cualquier M se une directa o indirectamente independientemente (por ejemplo, a traves de cm) a A, B o X. En algunas moleculas, cualquier M se une independientemente a A en el poliglutamato n-terminal. En algunas moleculas, cualquier M se une independientemente a A (o, al poliglutamato n-terminal) mediante un enlace covalente. En algunas moleculas, cualquier M se une independientemente a B en la poliarginina c-terminal. En algunas moleculas, cualquier M se une independientemente a B (o, a la poliarginina c-terminal) mediante un enlace covalente. En algunas modalidades, cualquier M se une directa o indirectamente independientemente a los enlazadores entre X o A; o en algunas moleculas X y B, By C/N terminal y A y C/N terminal. En algunas modalidades, el enlace covalente comprende un enlace eter, enlace tioeter, enlace amina, enlace amida, enlace oxima, enlace carbono-carbono, enlace carbono-nitrogeno, enlace carbono-oxfgeno o enlace carbono-azufre.
En algunas moleculas, M se selecciona de una protema, un polfmero sintetico o natural, o un dendnmero. En algunas moleculas, M se selecciona de dextrano, un polfmero de PEG (por ejemplo, PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG 30 kDa y PEG40 kDa), albumina o sus combinaciones. En algunas modalidades, M es un polfmero de PEG.
En algunas moleculas, el tamano de M esta entre 50 y 70 kD.
En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con albumina. En ciertos casos, la albumina se excluye del filtrado glomerular en condiciones fisiologicas normales. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo comprende un grupo reactivotal como maleimida que puede formar un conjugado covalente con albumina. Una molecula de suministro selectivo que comprende albumina resulta en una acumulacion mejorada de moleculas de suministro selectivo escindidas en tumores de una manera dependiente de la escision. En algunas moleculas, los conjugados de albumina tienen buenas propiedades farmacocineticas.
En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un polfmero de PEG. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un polfmero de PEG de 5 kDa. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un polfmero de PEG de 12 kDa. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un polfmero de PEG de 20 kDa. En algunas moleculas, los conjugados de PEG de 30 kD teman una vida media mas larga en comparacion con los peptidos libres. En algunas moleculas, las moleculas de suministro selectivo se conjugan con un polfmero de PEG de 20-40 kD que tiene aclaramiento hepatico y renal.
En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un dextrano. En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un dextrano de 70 kDa. En algunas moleculas, los conjugados de dextrano, al ser una mezcla de pesos moleculares, son diffciles de sintetizary purificar reproduciblemente.
En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con estreptavidina.
En algunas moleculas, la molecula de suministro selectivo se conjuga con un dendnmero PAMAM de quinta generacion.
En algunas moleculas, un portador tiene un casquete. En algunas modalidades, la adicion de un casquete al portador mejora la farmacocinetica y reduce la citotoxicidad de un portador mediante la adicion de hidrofilicidad. En algunas modalidades, el casquete se selecciona de: Acetilo, succinilo, 3-hidroxipropionilo, 2-sulfobenzoilo, glicidilo, PEG-2, PEG- 4, PEG-8 y PEG-12.
Porcion X (enlazadores)
En las moleculas descritas en la presente descripcion, se usa un enlazador que consiste de uno o mas aminoacidos para unir la secuencia peptfdica A (es decir, la secuencia disenada para inhibir la accion de suministro del peptido B) y la secuencia peptfdica B. Generalmente, el peptido enlazador no tendra otra actividad biologica espedfica mas que unir las moleculas o preservar una distancia minima u otra relacion espacial entre ellas. Sin embargo, los aminoacidos constituyentes del enlazador pueden seleccionarse para influir en algunas propiedades de la molecula, tales como el plegamiento, la carga neta o la hidrofobicidad.
En celulas vivas, una molecula de suministro selectivo intacta descrita en la presente descripcion puede no ser capaz de entrar en la celula debido a la presencia de la porcion A. Portanto, un proceso estrictamente intracelular para escindirX sena ineficaz para escindir X en celulas sanas ya que la porcion A, al evitar su captacion en las celulas, no sena escindida eficazmente por las enzimas intracelulares en las celulas sanas ya que no se captana y no obtendna acceso a dichas enzimas intracelulares. Sin embargo, cuando una celula se dana o se enferma (por ejemplo, celulas cancerosas, celulas hipoxicas, celulas isquemicas, celulas apoptoticas, celulas necroticas) dichas enzimas intracelulares se escapan de la celula y ocurrina la escision de A, lo que permitina la entrada de la porcion B y/o la carga en la celula, lo que producina el suministro dirigido de la porcion B y/o la carga D a las celulas vecinas. En algunas moleculas, X se escinde en el espacio extracelular.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
El hecho de que los capilares a menudo tienen fugas alrededor de los tumores y otros sitios traumaticos aumenta la capacidad de las moleculas de peso molecular alto (por ejemplo, peso molecular de aproximadamente 30 kDa o mas) para alcanzar el compartimiento intersticial. En algunas moleculas, las celulas enlazadoras X que no expresan la proteasa relevante pero que estan adyacentes inmediatamente a las celulas que las expresan toman la carga de una molecula de suministro selectivo debido a que el enlace de un enlazadorX es extracelular tipicamente. En algunas moleculas, dicho direccionamiento hacia la vecindad es beneficioso en el tratamiento de tumores debido a la heterogeneidad de los fenotipos celulares y al deseo de eliminar un porcentaje tan alto de celulas sospechosas como sea posible.
En algunas moleculas, X es un enlazador escindible.
En algunas moleculas, el enlazador es flexible. En algunas modalidades, el enlazador es ngido.
En algunas modalidades, el enlazador comprende una estructura lineal. En algunas modalidades, el enlazador comprende una estructura no lineal. En algunas modalidades, el enlazador comprende una estructura ramificada. En algunas modalidades, el enlazador comprende una estructura dclica.
En algunas modalidades, X es de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 6 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 8 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 10 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 12 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 14 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 16 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 18 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 20 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 25 atomos de longitud. En algunas modalidades, X es de aproximadamente 30 atomos de longitud.
En algunas moleculas, el enlazador une la porcion A del peptido (es decir, la secuencia peptfdica que evita la captacion celular) a la porcion B del peptido (es decir, la secuencia de suministro) mediante un enlace covalente. En algunas moleculas, el enlace covalente comprende un enlace eter, enlace tioeter, enlace amina, enlace amida, enlace oxima, enlace hidrazona, enlace carbono-carbono, enlace carbono-nitrogeno, enlace carbono-oxfgeno o enlace carbono-azufre.
En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. El enlace peptfdico comprende L-aminoacidos y/o D- aminoacidos. En modalidades de la invencion, se prefieren D-aminoacidos para minimizar la inmunogenicidad y la escision inespedfica mediante peptidasas de base o proteasas. Se conoce que la captacion celular de secuencias de oligo-D- arginina es tan buena o mejor que la de las oligo-L-argininas.
En algunas modalidades, un enlazador X se disena para la escision en presencia de condiciones particulares o en un entorno particular. En modalidades preferidas, un enlazadorX es escindible en condiciones fisiologicas. La escision de dicho enlazadorX puede, por ejemplo, aumentarse o puede afectarse por senales patologicas particulares o un entorno particular relacionado con las celulas en las que se desea el suministro de la carga. El diseno de un enlazador X para la escision por condiciones espedficas, tal como mediante una enzima espedfica, permite dirigir la captacion celular a un lugar espedfico donde se obtienen dichas condiciones. Por tanto, una forma importante de que las moleculas de suministro selectivo proporcionen un direccionamiento espedfico de la captacion celular hacia las celulas, tejidos o regiones deseadas es mediante el diseno de la porcion del enlazador X para escindirse por las condiciones proximas a dichas celulas, tejidos o regiones objetivo.
En algunas modalidades, X es un enlazador sensible al pH. En algunas modalidades, X se escinde en condiciones de pH basico. En algunas modalidades, X se escinde en condiciones de pH acido. En algunas moleculas, X se escinde por una proteasa, una metaloproteinasa de la matriz.
En algunas modalidades, X se escinde mediante un agente reductor.
De acuerdo con la invencion, X se escinde por una MMP. La actividad hidrolttica de las metaloproteinasas de la matriz (MMP, por sus siglas en ingles) se ha implicado en la migracion invasiva de celulas tumorales metastasicas. En ciertos casos, las MMP se encuentran cerca de los sitios de inflamacion. En ciertos casos, las MMP se encuentran cerca de los sitios de accidente cerebrovascular (es decir, un trastorno caracterizado por dano cerebral despues de una disminucion en el flujo sangumeo). Por lo tanto, la captacion de moleculas que tienen elementos de la invencion puede dirigir la captacion celular de la carga (al menos un resto D) a celulas, tejidos o regiones espedficos que tienen MMP activas en el entorno extracelular. En algunas modalidades, un enlazadorX incluye las secuencias de aminoacidos PLG-C(Me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2) que se escinden por las enzimas metaloproteinasas MMP-2, MMP-9 o MMP-7 (MmP involucradas en cancer e inflamacion).
En algunas modalidades, X se escinde mediante enzimas proteolfticas o entorno reductor, como puede encontrarse cerca de celulas cancerosas. Dicho entorno, o dichas enzimas, no se encuentran, tfpicamente, cerca de las celulas normales.
En algunas modalidades, X se escinde por serina proteasas que incluyen, pero no se limitan a, trombina.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas modalidades, X se escinde en o cerca de tejidos que sufren hipoxia. En algunas modalidades, la escision en o cerca de tejidos hipoxicos permite el direccionamiento a celulas cancerosas y tejidos cancerosos, regiones de infarto y otras regiones hipoxicas. En algunas modalidades, X comprende un enlace disulfuro. En algunas modalidades, un enlazador que comprende un enlace disulfuro se escinde preferentemente en regiones hipoxicas y, por lo tanto, dirige el suministro de la carga a las celulas en dicha region. Se piensa que la hipoxia hace que las celulas cancerosas se vuelvan mas resistentes a la radiacion y la quimioterapia y, ademas, inicien la angiogenesis. En un entorno hipoxico en presencia de, por ejemplo, celulas permeables o necroticas, los tioles libres y otros agentes reductores se vuelven disponibles extracelularmente, mientras que el O2 que normalmente mantiene el entorno extracelular oxidante, por definicion, se agota. En algunas modalidades, este cambio en el equilibrio redox promueve la reduccion y escision de un enlace disulfuro dentro de un enlazador X. Ademas de los enlaces disulfuro que toman ventaja del equilibrio tiol-disulfuro, se usan enlaces que incluyen quinonas que se deshacen cuando se reducen a hidroquinonas en un enlazador X disenado para escindirse en un entorno hipoxico.
En algunas modalidades, X se escinde en un entorno necrotico. La necrosis conduce a menudo a la liberacion de enzimas u otros contenidos celulares que pueden usarse para desencadenar la escision de un enlazador X. En algunas modalidades, la escision de X por enzimas necroticas (por ejemplo, por calpamas) permite que la carga sea captada por celulas enfermas y por celulas vecinas que aun no se han vuelto permeables totalmente.
En algunas moleculas descritas en la presente descripcion, X es un enlazador labil a los acidos. En algunas moleculas, X comprende un enlace acetal o vinil eter. La acidosis se observa en sitios de tejido danado o hipoxico, debido al cambio de Warburg de la fosforilacion oxidativa a la glucolisis anaerobica y la produccion de acido lactico. En algunas moleculas, la acidosis se usa como desencadenante de la captacion de la carga mediante la sustitucion de algunas de las argininas en B por histidinas, que solo se vuelven cationicas mas abajo de pH 7.
Debe entenderse que un enlazador descrito en la presente descripcion puede incluir aminoacidos no estandar, tales como, por ejemplo, hidroxilisina, desmosina, isodesmosina u otros aminoacidos no estandar. Un enlazador descrito en la presente descripcion puede incluir aminoacidos modificados, que incluyen aminoacidos modificados postransduccionalmente tales como, por ejemplo, aminoacidos metilados (por ejemplo, metil histidina, formas metiladas de lisina, etcetera), aminoacidos acetilados, aminoacidos amidados, aminoacidos formilados, aminoacidos hidroxilados, aminoacidos fosforilados u otros aminoacidos modificados. Un enlazador descrito en la presente descripcion puede incluir, ademas, restos de peptidomimeticos, lo que incluye porciones unidas por enlaces no peptfdicos y aminoacidos unidos por o a porciones que no son de aminoacidos.
En algunas modalidades, el enlazador X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAyYtA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos PLGxAG (secuencia de aminoacidos: 27), en donde x es cualquier aminoacido (de origen natural o de origen no natural). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos ESPAYYTA(sec. con num. de ident.: 8). En algunas modalidades, el enlazadorXcomprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas modalidades, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12).
En algunas modalidades, el enlazadorX comprende un peptido seleccionado de: PR(S/T)(L/I)(S/T), donde las letras entre parentesis indican que cualquiera de los aminoacidos indicados puede estar en esa posicion en la secuencia); GGAANLVRGG (sec. con num. de ident.: 28); SGRIGFLRTA (sec. con num. de ident.: 29); SGRSA (sec. con num. de ident.: 30); GFLG (sec. con num. de ident.: 31); ALAL (sec. con num. de ident.: 32); FK; PIC(Et)F-F (sec. con num. de ident.: 33), donde C9Et) indica S-etilcistema (cistema con un grupo etilo unido al tiol) y el "-" indica el sitio de escision tfpico en esta secuencia y en las siguientes); GGPRGLPG (sec. con num. de ident.: 34); HSSKLQ (sec. con num. de ident.: 35); LVLA-SSSFGY (sec. con num. de ident.: 36); GVSQNY-PIVG (sec. con num. de ident.: 38); GVVQA-SCRLA (sec. con num. de ident.: 39); f(Pip)R-S, donde "f" indica D-fenilalanina y "Pip" indica acido piperidinoa-2-carboxflico (acido pipecolmico, un analogo de prolina que tiene un anillo de seis miembros); DEVD (sec. con num. de ident.: 39); GWEHDG (sec. con num. de ident.: 40); RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7) o sus combinaciones.
En algunas modalidades, X se escinde en condiciones hipoxicas. En algunas modalidades, X comprende un enlace disulfuro. En algunas modalidades, X comprende una quinina.
En algunas modalidades, X se escinde en condiciones necroticas. En algunas modalidades, X comprende una molecula escindible por una calpama.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas modalidades, X comprende 6-aminohexanoilo, 5-(amino)-3-oxapentanoilo, o sus combinaciones. En algunas modalidades, X comprende un enlace disulfuro.
En algunas moleculas descritas en la presente descripcion, el enlazador es un alquilo. En algunas moleculas, el enlazador es heteroalquilo.
En algunas moleculas, el enlazador es un alquileno. En algunas moleculas, el enlazador es un alquenileno. En algunas moleculas, el enlazador es un alquinileno. En algunas moleculas, el enlazador es un heteroalquileno.
Un grupo "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifatico. El resto alquilo puede ser un alquilo saturado o un alquilo insaturado. En dependencia de la estructura, un grupo alquilo puede ser un monoradical o un diradical (es decir, un grupo alquileno).
El resto "alquilo" puede tener del a 10 atomos de carbono (cuando aparece en la presente descripcion, un rango numerico tal como "1 a 10" se refiere a cada numero entero en el rango dado; por ejemplo, "1 a 10 atomos de carbono" significa que el grupo alquilo puede consistir en 1 atomo de carbono, 2 atomos de carbono, 3 atomos de carbono, etcetera, hasta e incluido 10 atomos de carbono, aunque la presente definicion, ademas, cubre la ocurrencia del termino "alquilo" donde no se designa un rango numerico). El grupo alquilo podna, ademas, ser un "alquilo inferior" que tiene de 1 a 6 atomos de carbono. El grupo alquilo de los compuestos descritos en la presente descripcion puede designarse como "alquilo de C1- C4" o designaciones similares. Amanera de ejemplo solamente, "alquilo de C1-C4" indica que hay de uno a cuatro atomos de carbono en la cadena alquilo, es decir, la cadena alquilo se selecciona de: metilo, etilo, propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo yt-butilo. Los grupos alquilo tfpicos incluyen, pero de ningun modo se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo terciario, pentilo, hexilo, etenilo, propenilo, butenilo y similares.
En algunas moleculas, el enlazador comprende una estructura de anillo (por ejemplo, un arilo). Como se usa en la presente descripcion, el termino "anillo" se refiere a cualquier estructura cerrada covalentemente. Los anillos incluyen, por ejemplo, carbociclos (por ejemplo, arilos y cicloalquilos), heterociclos (por ejemplo, heteroarilos y heterociclos no aromaticos), aromaticos (por ejemplo, arilos y heteroarilos) y no aromaticos (por ejemplo, cicloalquilos y heterociclos no aromaticos). Los anillos pueden sustituirse opcionalmente. Los anillos pueden ser monodclicos o polidclicos.
Como se usa en la presente, el termino "arilo" se refiere a un anillo aromatico, en donde cada uno de los atomos que forman el anillo es un atomo de carbono. Los anillos de arilo pueden formarse por cinco, seis, siete, ocho, nueve o mas de nueve atomos de carbono. Los grupos arilo pueden sustituirse opcionalmente. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftalenilo, fenantrenilo, antracenilo, fluorenilo e indenilo. En dependencia de la estructura, un grupo arilo puede ser un monoradical o un diradical (es decir, un grupo arileno).
El termino "cicloalquilo" se refiere a un radical no aromatico monodclico o polidclico, en donde cada uno de los atomos que forman el anillo (es decir, atomos esqueleticos) es un atomo de carbono. Los cicloalquilos pueden ser saturados o insaturados parcialmente. Los grupos cicloalquilo incluyen grupos que tienen de 3 a 10 atomos en el anillo. Los cicloalquilos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo.
En algunas moleculas, el anillo es un cicloalcano. En algunas moleculas, el anillo es un cicloalqueno.
En algunas moleculas, el anillo es un anillo aromatico. El termino "aromatico" se refiere a un anillo plano que tiene un sistema de n-electrones deslocalizado que contiene 4n + 2 n electrones, donde n es un numero entero. Los anillos aromaticos pueden formarse a partir de cinco, seis, siete, ocho, nueve o mas de nueve atomos. Los aromaticos pueden sustituirse opcionalmente. El termino "aromatico" incluye grupos arilo carbodclico (por ejemplo, fenilo) y arilo heterodclico (o "heteroarilo" o "heteroaromatico") (por ejemplo, piridina). El termino incluye grupos monodclico o polidclicos de anillo fusionado (es decir, anillos que comparten pares adyacentes de atomos de carbono).
En algunas moleculas, el anillo es un heterociclo. El termino "heterociclo" se refiere a grupos heteroaromaticos y heteroalidclicos que contienen de uno a cuatro heteroatomos, cada uno seleccionado de O, S y N, en donde cada grupo heterodclico tiene de 4 a 10 atomos en su sistema de anillo, y con la condicion de que el anillo de dicho grupo no contiene dos atomos de O o S adyacentes. Los grupos heterodclicos no aromaticos incluyen grupos que tienen solo 3 atomos en su sistema de anillo, pero los grupos heterodclicos aromaticos deben tener al menos 5 atomos en su sistema de anillo. Los grupos heterodclicos incluyen sistemas de anillos benzofusionados. Un ejemplo de un grupo heterodclico de 3 miembros es aziridinilo. Un ejemplo de un grupo heterodclico de 4 miembros es azetidinilo (derivado de azetidina). Un ejemplo de un grupo heterodclico de 5 miembros es tiazolilo. Un ejemplo de un grupo heterodclico de 6 miembros es piridilo, y un ejemplo de un grupo heterodclico de 10 miembros es quinolinilo. Ejemplos de grupos heterodclicos no aromaticos son pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, piperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, 2-pirrolinilo, 3- pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3- azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3H-indolilo y quinolizinilo. Ejemplos de grupos heterodclicos aromaticos son piridinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cinnolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo. Los grupos anteriores pueden unirse a C o unirse a N donde esto es posible. Por ejemplo, un grupo derivado de pirrolo puede ser pirrol-1-ilo (unido a N) o pirrol-3-ilo (unido a C). Ademas, un grupo derivado de imidazol puede ser imidazol-1-ilo o imidazol-3-ilo (ambos unidos a N) o imidazol-2-ilo, imidazol-4-ilo o imidazol-5-ilo (todos unidos a C). Los grupos heterodclicos incluyen sistemas de anillos benzofusionados y sistemas de anillos sustituidos con uno o dos restos oxo (=O) tales como pirrolidin-2-ona. En dependencia de la estructura, un grupo heterociclo puede ser un monoradical o un diradical (es decir, un grupo heterocicleno).
En algunas moleculas, el anillo se fusiona. El termino "se fusiona" se refiere a estructuras en las que dos o mas anillos comparten uno o mas enlaces. En algunas moleculas, el anillo es un dfmero. En algunas moleculas, el anillo es un tnmero. En algunas moleculas, el anillo es uno sustituido.
El termino "carbodclico" o "carbociclo" se refiere a un anillo, en donde cada uno de los atomos que forman el anillo es un atomo de carbono. Carbociclo incluye arilo y cicloalquilo. El termino, por tanto, distingue carbociclo de heterociclo ("heterodclico") en el que la cadena principal del anillo contiene al menos un atomo que es diferente del carbono (es decir, un heteroatomo). Heterociclo incluye heteroarilo y heterocicloalquilo. Los carbociclos y heterociclos pueden sustituirse opcionalmente.
En algunas modalidades, el enlazador se sustituye. El termino "sustituido opcionalmente" o "sustituido" significa que el grupo referenciado puede sustituirse con uno o mas grupo(s) adicionales seleccionados individualmente e independientemente de alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C8, arilo, heteroarilo, heteroalidclico de C2-C6, hidroxi, alcoxi de C1-C6, ariloxi, alquiltio de C1-C6, ariltio, alquilsulfoxido de C1-C6, arilsulfoxido, alquilsulfona de C1-C6, arilsulfona, ciano, halo, acilo de C2-C8, aciloxi de C2-C8, nitro, haloalquilo de C1-C6, fluoroalquilo de C1-C6 y amino, lo que incluye alquilamino de C1- 6 y los derivados protegidos de estos. A manera de ejemplo, un sustituyente opcional puede ser LsRs, en donde cada Ls se selecciona independientemente de un enlace, -O-, -C(=O)-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NH-, -NHC(=O)-, - C(=O)NH-, S(=O)2NH-, -NHS(=O)2-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -(C1-C6alquilo)-, o -(C2-C6alquenilo)-; y cada Rs se selecciona independientemente de H, (alquilo de C1-C4), (cicloalquilo de C3-C8), heteroarilo, arilo, y heteroalquilo de C1- C6. Los grupos no aromaticos sustituidos opcionalmente pueden sustituirse con uno o mas oxo (=O). Los grupos protectores que pueden formar los derivados protectores de los sustituyentes anteriores se conocen por los expertos en la tecnica.
En algunas modalidades, una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion comprende una sola molecula de enlazador. El uso de un mecanismo unico para mediar la captacion tanto de cargas para la obtencion de imagenes como de cargas terapeuticas es valioso particularmente, porque la obtencion de imagenes con cantidades de trazas no perjudiciales pueden usarse para evaluar si una dosis terapeutica posterior es probable que se concentre correctamente en el tejido objetivo.
En algunas modalidades, las moleculas de suministro selectivo descritas en la presente descripcion comprenden una pluralidad de enlazadores. Cuando una molecula de suministro selectivo descrita en la presente descripcion incluye multiples enlaces X, la separacion de la porcion A de las otras porciones de la molecula requiere la escision de todos los enlaces X. La escision de multiples enlazadores X puede ser simultanea o secuencial. Multiples enlaces X pueden incluir enlaces X que tienen especificidades diferentes, de modo que la separacion de la parte A de las otras porciones de la molecula requiere que la molecula encuentre mas de una condicion o entorno ("senales extracelulares"). La escision de multiples enlazadores X, por lo tanto, sirve como un detector de combinaciones de dichas senales extracelulares. Por ejemplo, una molecula de suministro selectivo puede incluir dos porciones enlazadoras Xa y Xb que conectan la porcion basica B con la porcion acida A. Ambos enlazadores Xa y Xb deben escindirse antes de que se separe la porcion acida A de la porcion basica B, lo que permite la entrada de la porcion B y el resto de carga C (si existe) para entrar a una celula. Debe entenderse que una region enlazadora puede unirse a una porcion basica B o a un resto de carga C independientemente de otro enlazador que pueda estar presente, y que, donde se desee, pueden incluirse mas de dos regiones de enlazador X.
Las combinaciones de dos o mas enlazadores X pueden usarse para modular adicionalmente el direccionamiento y el suministro de moleculas a las celulas, tejidos o regiones deseadas. Las combinaciones de senales extracelulares se usan para ampliar o reducir la especificidad de la escision de los enlazadores X si se desea. Donde se unen multiples enlazadores X en paralelo, la especificidad de la escision se reduce, ya que cada enlazador X debe escindirse antes de que la porcion A pueda separarse del resto de la molecula. Donde se unen multiples enlazadores X en serie, la especificidad de la escision se amplfa, ya que la escision de cualquier enlazador X permite la separacion de la porcion A del resto de la molecula. Por ejemplo, para detectar una proteasa o hipoxia (es decir, para escindir X en presencia de proteasa o hipoxia), un enlazador X se disena para colocar los sitios sensibles a la proteasa y sensibles a la reduccion en tandem, de modo que la escision de cualquiera sena suficiente para permitir la separacion de la porcion acida A. Alternativamente, para detectar la presencia tanto de una proteasa como de hipoxia (es decir, para escindir X en presencia de ambas, proteasa e hipoxia, pero no en presencia de solo una sola), se disena un enlazador X para colocar el sitio sensible a la proteasa entre al menos un par de cistemas que se une entre sf por disulfuro. En ese caso, se requieren tanto la escision de la proteasa como la reduccion de disulfuro para permitir la separacion de la porcion A.
5
10
15
20
25
30
Moleculas de suministro selectivo ilustrativas
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-14.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-
25.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM- 27.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo de acuerdo con SDM-35.
Se describen en la presente descripcion peptidos de acuerdo con el peptido P-3.
Se describen en la presente descripcion moleculas de suministro selectivo quetienen una estructura de: SDM-1, SDM-2, SDM-3, SDM-4, SDM-5, SDM-6, SDM-7, SDM-8, SDM-9, SDM-10, SDM-11, SDM-12, SDM-13, SDM-14, SDM-15, SDM- 16, SDM-17, SDM-18, SDM-19, SDM-20, SDM-21, SDM-22, SDM-26, SDM-28, SDM-30, SDM-32, SDM-33, SDM-34, SDM-35, SDM-36, SDM-37, SDM-38, SDM-39, y SDM-40.
imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
imagen7
imagen8
imagen9
imagen10
imagen11
imagen12
■<V-
imagen13
imagen14
imagen15
imagen16
imagen17
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Modificaciones adicionales
Las moleculas de direccionamiento de la presente invencion descritas en la presente descripcion se conjugan opcionalmente con moleculas de peso molecular alto que aumentan la multivalencia y avidez del marcaje. En algunas modalidades, las moleculas de peso molecular alto son polfmeros solubles en agua. Los ejemplos de polfmeros solubles en agua adecuados incluyen, pero no se limitan a, peptidos, sacaridos, poli(vinilos), poli(eteres), poli(aminas), poli(acidos carbox^licos) y similares. En algunas modalidades, el polfmero soluble en agua es dextrano, polietilenglicol (PEG), polioxialquileno, acido polisialico, almidon o hidroxietil almidon. Se usa cualquier metodo adecuado para conjugar peptidos a poUmeros solubles en agua (ver Hermanson G., Bioconjugate Techniques 2da Edicion, Academic Press, Inc. 2008).
Composiciones farmaceuticas
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es una macromolecula; y
Da y Db se seleccionan cada uno independientemente de un agente para la obtencion de imagenes y un
terapeutico; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 aminoacidos glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) en A. En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 moleculas consecutivas de glutamato (sec. con num. de ident.: 3), A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un T-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMp2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, el enlazador X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me) (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, M se selecciona de una protema, un polfmero natural, un polfmero sintetico o un dendrimero. En algunas moleculas, M se selecciona de dextrano, un polfmero de PEG, albumina o sus combinaciones. En algunas modalidades, M es un PEG. En algunas moleculas, M se selecciona de PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG 30 kDa y PEG 40 kDa. En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas modalidades, la molecula de Formula I es:
SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM-27.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y
en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se
une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de glutamatos acidos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, B es un peptido que
comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que
comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 3). En algunas modalidades, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGlAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. La molecula de Formula I puede ser: SDM-23, SDM-24, SDM-25 o SDM- 27.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3);
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un poKmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[Cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-DB] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-14.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-25.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-27.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion composiciones farmaceuticas que comprenden una molecula de suministro selectivo de acuerdo con SDM-35.
Las composiciones farmaceuticas en la presente descripcion se formulan mediante el uso de uno o mas portadores aceptables fisiologicamente, lo que incluye excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los agentes activos en preparaciones que se usan farmaceuticamente. La formulacion apropiada depende de la ruta de administracion seleccionada. Se encuentra un resumen de las composiciones farmaceuticas, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Decimonovena Edicion (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. y Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; y Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Septima Edicion. (Lippincott Williams & Wilkins, 1999).
Una composicion farmaceutica descrita en la presente descripcion puede comprender, ademas, un(os) diluyente(s), excipiente(s) o portador(es) aceptable(s) farmaceuticamente. En algunas, las composiciones farmaceuticas incluyen otros agentes medicinales o farmaceuticos, portadores, adyuvantes, tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o agentes emulsionantes, promotores de solucion, sales para regular la presion osmotica y/o tampones. Ademas, las composiciones farmaceuticas tambien contienen otras sustancias valiosas terapeuticamente.
Una composicion farmaceutica descrita en la presente descripcion puede administrarse a un sujeto mediante cualquier via de administracion adecuada, lo que incluye, pero no se limita a, la administracion parenteral (intravenosa, subcutanea, intraperitoneal, intramuscular, intravascular, intratecal, intravttrea, infusion o local).
Las formulaciones adecuadas para la inyeccion intramuscular, subcutanea, peritumoral o intravenosa incluyen soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas esteriles aceptables farmaceuticamente, y polvos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
esteriles para la reconstitucion en soluciones o dispersiones inyectables esteriles. Ejemplos de portadores, diluyentes, solventes o vehuculos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol, cremofor y similares), mezclas adecuadas de estos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva) y esteres organicos inyectables tales como etil oleato. La fluidez apropiada se mantiene, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos. Las formulaciones adecuadas para la inyeccion subcutanea contienen, ademas, aditivos opcionales tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y dispensadores.
Para las inyecciones intravenosas, un agente activo se formula opcionalmente en soluciones acuosas, preferentemente en tampones compatibles fisiologicamente tales como solucion de Hank, solucion de Ringer o tampon salino fisiologico.
Las inyecciones parenterales implican opcionalmente inyeccion en bolo o infusion continua. Las formulaciones para inyeccion se presentan opcionalmente en forma de dosificacion unitaria, por ejemplo, en ampulas o en contenedores de multiples dosis, con un conservante anadido. En algunas modalidades, la composicion farmaceutica descrita en la presente descripcion esta en una forma adecuada para inyeccion parenteral como suspensiones, soluciones o emulsiones esteriles en vehfculos oleosos o acuosos, y contiene agentes de formulacion tales como agentes de suspension, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones farmaceuticas para administracion parenteral incluyen soluciones acuosas de un agente activo en forma soluble en agua. Adicionalmente, las suspensiones se preparan opcionalmente como suspensiones de inyeccion oleosas apropiadas.
La composicion farmaceutica descrita en la presente descripcion puede estar en formas de dosificacion unitarias adecuadas para la administracion unica de dosificaciones precisas. En forma de dosificacion unitaria, la formulacion se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas de un agente activo descrito en la presente descripcion. La dosificacion unitaria puede presentarse en forma de un empaque que contiene cantidades discretas de la formulacion. Los ejemplos no limitantes son tabletas o capsulas empacadas, y polvos en viales o ampollas. Las composiciones de suspension acuosa pueden empacarse en contenedores de dosis unica no resellables. Alternativamente, pueden usarse contenedores resellables de dosis multiple, en cuyo caso es tfpico incluir un conservante en la composicion. Solamente a manera de ejemplo, las formulaciones para inyeccion parenteral se presentan en forma de dosificacion unitaria, que incluye, pero no se limitan a ampulas, o en contenedores de dosis multiples, con la adicion de un conservante. Metodos de uso
Las moleculas de suministro selectivo de Formula I permiten el suministro dirigido de agentes terapeuticos y/o agentes para la obtencion de imagenes a celulas y/o tejidos espedficos. Las moleculas comprenden una secuencia peptfdica basica (B) que se disena para transportarse a traves de una membrana celular, una secuencia peptfdica acida (A) que inhibe la captacion del peptido B en celulas, un enlazadorX que puede escindirse en condiciones espedficas, restos de carga (al menos Da y Db) unidos a los peptidos A y B, o X y un portador macromolecular. La escision del enlazador X libera el peptido B del peptido A y permite el transporte del peptido B (y cualquier carga unida a este) a traves de una membrana celular. Las moleculas de suministro selectivo de Formula I permiten el suministro dirigido de una o mas cargas (por ejemplo, agentes terapeuticos o agentes para la obtencion de imagenes) a un tejido celular.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar carga a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es una macromolecula; y
Da y Db se seleccionan cada uno independientemente de un agente para la obtencion de imagenes y un
terapeutico; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas modalidades, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 10. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, M se selecciona de una protema, un polfmero natural, un polfmero sintetico o un dendnmero. En algunas moleculas, M se selecciona de dextrano, un polfmero de PEG, albumina o sus combinaciones. En algunas moleculas, M es un PEG. En algunas moleculas, M se selecciona de PEG 5 kDa, PEG 12 kDa, PEG 20 kDa, PEG 30 kDa y PEG 40 kDa. En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. En algunas moleculas, la molecula de Formula I es: SDM-14, SDM-15, SDM-23, SDM-24, SDM-25, SDM-26, SDM-27, SDM-32 o SDM-35.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar carga a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos; ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db se seleccionan cada uno independientemente de agentes para la obtencion de imagenes y agentes terapeuticos; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas modalidades, A y B no tienen un numero igual de aminoacidos acidos y basicos. En algunas modalidades, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas modalidades, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas modalidades, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas modalidades, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas modalidades, ca, cb y cm son cada uno independientemente de 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4- acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptidico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DpRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12).
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para suministrar carga a un tejido de interes, que comprenden poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3); B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db se seleccionan independientemente de agentes para la obtencion de imagenes y agentes terapeuticos; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1).
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar carga a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db se seleccionan independientemente de agentes para la obtencion de imagenes y agentes terapeuticos; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7).
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar carga a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptidico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db se seleccionan independientemente de agentes para la obtencion de imagenes y agentes terapeuticos;
y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7).
Tejido de interes
El tejido de interes puede ser tejido canceroso (o cancer). El tejido canceroso puede ser: tejido de cancer de mama, tejido de cancer de colon, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de melanoma o tejido de cancer de tiroides. El tejido canceroso puede ser tejido de cancer de mama. El tejido canceroso puede ser tejido de cancer de colon.
El cancer puede ser canceres relacionados con el SIDA (por ejemplo, linfoma relacionado con el SIDA), cancer anal, carcinoma de celula basal, cancer de los conductos biliares (por ejemplo, extrahepatico), cancer de vejiga, cancer de hueso (osteosarcoma e histiocitoma fibroso maligno), cancer de mama, cancer cervical, cancer de colon, cancer colorrectal, cancer endometrial (por ejemplo, cancer uterino), ependimoma, cancer esofagico, cancer ocular (por ejemplo, melanoma y retinoblastoma intraocular), cancer gastrico (estomago), tumor de celulas germinales, (por ejemplo, extracraneal, extragonadal, ovarico), cancer de cabeza y cuello, leucemia, cancer de labio y cavidad oral, cancer de Imgado, cancer de pulmon (por ejemplo, cancer de pulmon de celulas pequenas, cancer de pulmon de celulas no pequenas, adenocarcinoma de pulmon y carcinoma escamoso de pulmon), cancer de ovario, cancer de pancreas, tumor de pituitaria, cancer de prostata, cancer renal, cancer de piel, cancer de intestino delgado, cancer de celulas escamosas, cancer testicular, cancer de garganta, cancer de tiroides, cancer uretral y trastorno linfoproliferativo postrasplante (PTLD, por sus siglas en ingles).
El cancer puede ser un cancer linfoide (por ejemplo, linfoma).
El cancer puede ser un cancer de celulas B. El cancer puede ser canceres de celulas B precursoras (por ejemplo, leucemia/linfoma B linfoblastico precursor) y canceres de celulas B perifericas (por ejemplo, leucemia linfocftica cronica/leucemia prolinfocftica/linfoma linfocftico pequeno (iinfocftico pequeno (SL) NHL) de celulas B), linfoma linfoplasmacitoide/inmunocitoma, linfoma de celulas mantel, linfoma de folmulo central, linfoma folicular (por ejemplo, grados citologicos: I (celulas pequenas), II (celulas mixtas pequenas y grandes), III (celulas grandes) y/o subtipo: difuso y predominantemente del tipo de celula pequena), linfoma de grado bajo/linfoma folicular no Hodgkin (NHL), NHL de grado intermedio/folicular, linfoma de celulas B zona marginal (por ejemplo, extranodal (por ejemplo, celulas B de tipo MALT +/- monocitoides) y/o nodal (por ejemplo, celulas B +/- monocitoides)), linfoma de la zona marginal esplenica (por ejemplo, linfocitos vellosos), leucemia de celulas pilosas, plasmacitoma/mieloma de celulas plasmaticas (por ejemplo, mieloma y mieloma multiple), linfoma difuso de celulas B grandes (por ejemplo, linfoma primario mediastmico (timico) de celulas B),
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
NHL difuso de grado intermedio, linfoma de Burkitt, linfoma de celulas B de grado alto, NHL inmunoblastico de grado alto similar a Burkitt, NHL linfoblastico de grado alto, NHL de celulas pequenas no divididas de grado alto, NHL de enfermedad voluminosa, linfoma relacionado con el SIDAy macroglobulinemia de Waldenstrom).
El cancer puede ser un cancer de celulas T y/o un cancer de celulas NK putativo. El cancer puede ser un cancer precursor de celulas T (linfoma/leucemia linfoblastica T precursora) y canceres de celulas T y NK perifericas (por ejemplo, leucemia linfocftica cronica/leucemia prolinfodtica de celulas T y leucemia linfodtica granular grande (LGL) (por ejemplo, similar de celulas T y/o similar de celulas NK), linfoma cutaneo de celulas T (por ejemplo, micosis fungoide/smdrome de Sezary), linfomas primarios inespedficos de celulas T (por ejemplo, categonas citologicas (por ejemplo, celulas de tamano medio, mixta de celulas medianas y grandes), celulas grandes, celulas linfoepiteloideas, linfoma de celulas T subtipo hepatoesplenico y§ y linfoma de celulas T subcutaneo paniculftico), linfoma de celulas T angioinmunoblastico (AILD, por sus siglas en ingles), linfoma angiocentrico, linfoma de celulas T intestinal (por ejemplo, enteropatfa asociada +/-), linfoma/leucemia de celulas T en adultos (ATL, por sus silas en ingles ), linfoma anaplasico de celulas grandes (ALCL, por sus siglas en ingles) (por ejemplo, similares de celulas CD30 +, T y nulas), linfoma anaplasico de celulas grandes y similares a Hodgkin).
El cancer puede ser la enfermedad de Hodgkin.
El cancer puede ser leucemia. El cancer puede ser leucemia mielocftica I cronica (granulocftica), leucemia mielogena cronica y leucemia linfocftica cronica (LLC), leucemia linfoblastica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda, leucemia linfocftica aguda y leucemia mielocftica aguda (por ejemplo, mieloblastica, promielocftica, mielomonodtica, monodtica y eritroleucemia).
El cancer puede ser un tumor ftquido o plasmacitoma. El cancer puede ser plasmacitoma extramedular, mieloma solitario y mieloma multiple. El plasmacitoma puede ser mieloma multiple.
El cancer puede ser cancer de pulmon.
El cancer puede ser cancer de prostata. El cancer de prostata puede ser un adenocarcinoma. El cancer de prostata puede ser un sarcoma, tumor neuroendocrino, cancer de celulas pequenas, cancer ductal o un linfoma. En algunas modalidades, el cancer de prostata es cancer de prostata en estadio A (el cancer no puede sentirse durante un examen rectal). El cancer de prostata puede ser cancer de prostata en estadio B (es decir, el tumor involucra mas tejido dentro de la prostata, puede sentirse durante un examen rectal, o puede encontrarse con una biopsia que se realiza debido a un nivel alto de pSa). El cancer de prostata puede ser cancer de prostata en estadio C (es decir, el cancer se disemino fuera de la prostata a los tejidos cercanos). El cancer de prostata puede ser cancer de prostata en estadio D. El cancer de prostata puede ser cancer de prostata independiente de androgenos (AIPC por sus siglas en ingles). El cancer de prostata puede ser un cancer de prostata dependiente de androgenos. El cancer de prostata puede ser refractario a la terapia hormonal. El cancer de prostata puede ser refractario sustancialmente a la terapia hormonal. El cancer de prostata puede ser refractario a la quimioterapia. El cancer de prostata es cancer de prostata metastasico. El individuo puede ser un ser humano que tiene un gen, una mutacion genetica o un polimorfismo asociado con el cancer de prostata (por ejemplo, RNASEL/HPCl, ELAC2/HPC2, SR-A/MSR1, CHEK2, BRCA2, PON1, OGG1, MIC-1, TLR4 y PTEN) o tiene una o mas copias extra de un gen asociado con cancer de prostata. El cancer de prostata puede ser HER2 positivo. El cancer de prostata puede ser HER2 negativo.
El cancer puede tener metastasis y se caracteriza por celulas tumorales circulantes.
Usos en imagenologfa
Las moleculas de suministro selectivo de formula I permiten el suministro dirigido de agentes para la obtencion de imagenes a celulas y/o tejidos espedficos (por ejemplo, tejidos cancerosos). Las moleculas comprenden una secuencia peptfdica basica (B) que se disena para ser transportada a traves de una membrana celular o retenida por el tejido, una secuencia peptfdica acida (A) que inhibe la captacion y retencion del peptido B en celulas, un enlazador X que puede escindirse en condiciones espedficas, restos de agentes para la obtencion de imagenes unidos a los peptidos A y B, o X y un portador macromolecular. La escision del enlazador X libera el peptido B del peptido A y permite el transporte del peptido B (y cualquier resto de agente para la obtencion de imagenes unido a este) a traves de una membrana celular o la retencion de B en el tejido. Las moleculas de suministro selectivo de Formula I permiten el suministro dirigido de uno o mas agentes para la obtencion de imagenes a una celula o tejido. En algunas modalidades, el suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite al profesional medico visualizar/representar un tejido espedfico.
Se describen en la presente descripcion, metodos para suministrar agentes para la obtencion de imagenes a un tejido de interes, que comprenden poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se
une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMp2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, DA y DB son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia.
Se describen en la presente descripcion, metodos para suministrar agentes para la obtencion de imagenes a un tejido de interes, que comprenden poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia.
Se describen en la presente descripcion, metodos para suministrar agentes para la obtencion de imagenes a un tejido de interes, que comprenden poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, DA y DB son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia.
Se describen en la presente descripcion, metodos para suministrar agentes para la obtencion de imagenes a un tejido de interes, que comprenden poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, DA y DB son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia.
Se describe en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa Forsters/de resonancia fluorescente con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos. En algunas moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas. En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas. En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un y- aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4- acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa Forsters/de resonancia fluorescente con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptidico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas modalidades, DA y DB son Cy5 y Cy7.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa Forsters/de resonancia fluorescente con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia
de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye 750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptidico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende el aminoacido DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-14.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-15.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-23.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-24.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-25.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-26.
Se describen en la presente descripcion, en determinadas modalidades, metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM- 27.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-32.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con SDM-35.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprenden:
(a) administrar al individuo una molecula de Formula I que se localiza hacia el tejido de interes en el individuo, [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db]; Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son cada uno independientemente un agente para la obtencion de imagenes; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B; y
(b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
El tejido puede ser canceroso. El tejido canceroso puede ser tejido de cancer de mama, tejido de cancer colorrectal, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de melanoma o tejido de cancer de tiroides. La celula o tejido canceroso puede ser tejido de cancer de mama. La celula o tejido canceroso puede ser tejido de cancer de colon. El metodo puede comprender, ademas, eliminar quirurgicamente el tejido de interes del individuo. El margen quirurgico que rodea el tejido de interes puede disminuirse. El metodo puede comprender, ademas, preparar una muestra de tejido a partir de la celula o tejido de interes eliminado. El metodo puede comprender, ademas, la estadificacion del tejido canceroso. En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas
moleculas, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas
moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son independientemente de 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-aminoacido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas
moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato.
En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMP2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas modalidades, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas modalidades, Da y Db son Cy5
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
e ICG. El metodo puede comprender, ademas, visualizar la transferencia de ene^a de resonancia fluorescente/Forsters entre Da y Db. En algunas moleculas, Da y Db son un resto fluorescente y un resto extintor de fluorescencia. La molecula puede seleccionarse de: SDM-14, SDM-15, SDM-23, SDM-24, SDM-25, SDM-26, SDM-27, SDM-32, y SDM-35.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprenden:
(a) administrar al individuo una molecula de Formula I que se localiza hacia el tejido de interes en el individuo, [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptidico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3);
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B; y
(b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALAWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas modalidades, Da y Db son Cy5 y Cy7.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprenden:
(a) administrar al individuo una molecula de Formula I que se localiza en el tejido de interes en el individuo,: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.:
5) ;
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.:
6) ;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B; y
(b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprenden:
(a) administrar al individuo una molecula de Formula I que se localiza en el tejido de interes en el individuo,: [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.:
13) ;
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.:
14) ;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro; y en donde [cm -M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-c a] se une a cualquier aminoacido en A, y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B; y
(b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 y Cy7. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye750. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e IRDye800. En algunas moleculas, Da y Db son Cy5 e ICG.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-14 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-15 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-23 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-24 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-25 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion, metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-26 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion, en ciertas modalidades, metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-27 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-32 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
Se describen en la presente descripcion metodos para visualizar un tejido de interes en un individuo que lo necesita, que comprende, (a) administrar SDM-35 al individuo, y (b) visualizar al menos uno de los agentes para la obtencion de imagenes.
El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico visualizar/representar un tejido espedfico (por ejemplo, tejido canceroso). El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico eliminar (o, extirpar quirurgicamente) el tejido de interes (por ejemplo, tejido canceroso). El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico eliminar (o, extirpar quirurgicamente) el tejido de interes (por ejemplo, tejido canceroso) con una disminucion en los margenes quirurgicos. El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico eliminar (o extirpar quirurgicamente) un tumor/tejido canceroso y disminuye la posibilidad de que parte del tumor/tejido canceroso no se elimine. El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico citorreducir al maximo un tumor/tejido canceroso. El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes al tejido mamario canceroso disminuye las posibilidades de operaciones innecesarias y reoperaciones.
El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico obtener muestras mas precisas (por ejemplo, biopsia (por ejemplo, biopsia por escision, biopsia por incision, biopsia por aspiracion o biopsia por aguja)) del tejido de interes (por ejemplo, tejido canceroso). El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico visualizar/representar un tejido espedfico (por ejemplo, tejido canceroso) dentro de un tejido extirpado que contiene tejido sano. Habilitar la identificacion del tejido objetivo (por ejemplo, tejido canceroso) puede guiar al patologo en cuanto a la seccion de la evaluacion patologica y disminuye las posibilidades de que un patologo pase por alto tejido no sano (por ejemplo, tejido canceroso) y muestree tejido sano que puede producir un falso negativo. El tejido (por ejemplo, tejido canceroso) eliminado despues del uso de un compuesto de Formula I puede usarse para preparar una seccion o lamina portaobjeto de patologfa. El tejido canceroso eliminado despues del uso de un compuesto de Formula I puede usarse para preparar una seccion o lamina portaobjeto de patologfa que se usa para diagnosticar un tejido como maligno o benigno.
El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes al tejido mamario canceroso permite a un profesional medico estadificar con precision el cancer, lo que permite tomar decisiones sobre el tratamiento medico. El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes al tejido canceroso permite a un profesional medico observar el tamano de un tumor (tejido canceroso) o la diseminacion (por ejemplo, lesiones metastasicas) de tejido canceroso. El suministro dirigido de un agente para la obtencion de imagenes a una celula o tejido permite a un profesional medico disenar un regimen de tratamiento eficaz.
Una molecula de suministro selectivo de acuerdo con la Formula I que comprende un agente para la obtencion de imagenes puede emplearse en cirugfa guiada. Las moleculas de suministro selectivo descritas en la presente descripcion se localizan preferentemente en tejidos cancerosos, u otros tejidos patologicos con actividad de proteasa regulada positivamente (por ejemplo, tejidos que experimentan respuesta inflamatoria). Puede emplearse una molecula de suministro selectivo de acuerdo con la Formula I que comprende un agente para la obtencion de imagenes en una cirugfa guiada para eliminar el cancer colorrectal. La cirugfa guiada que emplea la molecula de suministro selectivo permite a un cirujano extirpartan poco tejido sano (es decir, no canceroso) como sea posible. La cirugfa guiada que emplea la molecula de suministro selectivo permite a un cirujano visualizar y extirpar mas tejido canceroso de lo que el cirujano habna podido extirpar sin la presencia de la molecula de suministro selectivo. La cirugfa puede ser cirugfa guiada por fluorescencia.
Agentes para la obtencion de imagenes
Un agente para la obtencion de imagenes puede ser un colorante. Un agente para la obtencion de imagenes puede ser un resto fluorescente. Un resto fluorescente puede seleccionarse de: una protema fluorescente, un peptido fluorescente, un colorante fluorescente, un material fluorescente o sus combinaciones.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Todos los restos fluorescentes se abarcan dentro del termino "resto fluorescente." Los ejemplos espedficos de restos fluorescentes proporcionados en la presente descripcion son ilustrativos y no pretenden limitar los restos fluorescentes para su uso con las moleculas de direccionamiento descritas en la presente descripcion.
Los ejemplos de colorantes fluorescentes incluyen, pero no se limitan a, xantenos (por ejemplo, rodaminas, rodoles y fluorescemas, y sus derivados); bimanes; cumarinas y sus derivados (por ejemplo, umbeliferona y aminometil cumarinas); aminas aromaticas (por ejemplo, dansilo; colorantes de escuarato); benzofuranos; cianinas fluorescentes; indocarbocianinas; carbazoles; dicianometileno piranos; polimetino; oxabenzantrano; xanteno; pirilio; carbostilo; perileno; acridona; quinacridona; rubreno; antraceno; coroneno; fenantreceno; pireno; butadieno; estilbeno; porfirina; ftalocianina; complejos de quelato de metal lantanido; complejos de quelatos de metales de tierras raras; y derivados de dichos colorantes.
Los ejemplos de colorantes de fluorescema incluyen, pero no se limitan a, 5-carboxifluorescema, fluorescema-5- isotiocianato, fluorescema-6-isotiocianato y 6-carboxifluorescema.
Los ejemplos de colorantes de rodamina incluyen, pero no se limitan a, tetrametilrodamina-6-isotiocianato, 5- carboxitetrametilrodamina, derivados de 5-carboxirodol, tetrametil y tetraetil rodamina, difenildimetil y difenildietil rodamina, dinaftil rodamina, cloruro de sulfonilo de rodamina 101 (vendido con el nombre comercial de TEXAS RED®).
Ejemplos de colorantes de cianina incluyen, pero no se limitan a, Cy3, Cy3B, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, Cy7, IRDYE680, Alexa Fluor 750, IRDye800CW, ICG.
Los ejemplos de peptidos fluorescentes incluyen GFP (Protema Fluorescente Verde) o derivados de GFP (por ejemplo, EBFP, eBfP2, Azurite, mKalamal, ECFP, Cerulean, CyPet, YFP, Citrine, Venus, YPet).
Los marcadores fluorescentes se detectan por cualquier metodo adecuado. Por ejemplo, un marcador fluorescente puede detectarse mediante la excitacion del fluorocromo con la longitud de onda de luz apropiada y mediante la deteccion de la fluorescencia resultante, por ejemplo, por microscopfa, inspeccion visual, a traves de una pelfcula fotografica, mediante el uso de detectores electronicos tales como dispositivos de carga acoplada (CCD), fotomultiplicadores, etcetera.
El agente para la obtencion de imagenes puede marcarse con un isotopo emisor de positrones (por ejemplo, 18F) para la tomograffa de emision de positrones (PET, por sus siglas en ingles), isotopo de rayos gamma (por ejemplo, 99mTc) para la tomograffa computarizada por emision de foton unico (SPECT, por sus siglas en ingles), o una molecula o nanopartfcula paramagnetica (por ejemplo, quelato de Gd3+ o nanopartfcula de magnetita recubierta) para la obtencion de imagenes por resonancia magnetica (RMI, por sus siglas en ingles).
El agente para la obtencion de imagenes puede marcarse con: un quelato de gadolinio, una partfcula de oxido de hierro, una partfcula superparamagnetica de oxido de hierro, una partfcula paramagnetica ultrapequena, un quelato de manganeso o un agente que contenga galio.
Los ejemplos de quelatos de gadolinio incluyen, pero no se limitan a, acido dietilentriaminopentaacetico (DTPA, por sus siglas en ingles), acido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacetico (DOTA, por sus siglas en ingles) y acido 1,4,7-triazaciclononano-N,N',N"-triacetico (NOTA, por sus siglas en ingles).
El agente para la obtencion de imagenes puede ser un fluoroforo infrarrojo cercano para imagenes cercanas al infrarrojo (IR cercano), una luciferasa (luciernaga, bacteria o celenterado) u otra molecula luminiscente para la obtencion de imagenes por bioluminiscencia, o una vesfcula rellena de perfluorocarbono para ultrasonido.
El agente para la obtencion de imagenes puede ser una sonda nuclear. El agente para la obtencion de imagenes puede ser una sonda de radionuclido SPECT o PET. La sonda de radionuclidos puede seleccionarse de: un quelato de tecnecio, un quelato de cobre, un fluor radiactivo, un yodo radiactivo, un quelato de indio.
Los ejemplos de quelatos de Tc incluyen, pero no se limitan a, HYNIC, DTPAy DOTA.
El agente para la obtencion de imagenes puede contener un resto radiactivo, por ejemplo, un isotopo radiactivo tal como isotopos radiactivos de Lu, 211At, 131I, 1251,90Y, 186Re, 188 Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 64Cu, y otros.
Usos terapeuticos
Las moleculas de suministro selectivo de Formula I permiten el suministro dirigido de agentes terapeuticos a celulas y/o tejidos espedficos (por ejemplo, tejidos cancerosos). Las moleculas comprenden una secuencia peptfdica basica (B) que se disena para transportarse a traves de una membrana celular, una secuencia peptfdica acida (A) que inhibe la captacion del peptido B en las celulas, un enlazadorXque puede escindirse en condiciones espedficas, agentes terapeuticos unidos a los peptidos A y B, o X y un portador macromolecular. La escision del enlazador X libera el peptido B del peptido A y permite el transporte del peptido B (y cualquier agente terapeutico unido a este) a traves de una membrana celular. Las
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
moleculas de suministro selectivo de formula I permiten el suministro dirigido de uno o mas agentes terapeuticos a una celula o tejido. El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido permite a un profesional medico tratar un tejido espedfico.
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un agente terapeutico a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador escindible;
A es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos;
B es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
al menos uno de Da y Db es independientemente un agente terapeutico; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, el numero
de aminoacidos basicos en B es mayor que el numero de aminoacidos acidos en A. En algunas moleculas, A es un peptido
que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3). En algunas modalidades, B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3) y B es un peptido que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4). En algunas moleculas, A es un peptido que comprende 5 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 5) y B es un peptido que comprende 8 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 6). En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas modalidades, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-amino acido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X es escindible por una proteasa. En algunas moleculas, X es escindible por una metaloproteinasa de la matriz. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos que es escindible por MMp2, MMP7, MMP9 o MMP14. En algunas moleculas, X comprende un enlace peptfdico. En algunas moleculas, X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7), ESPAYYTA (sec. con num. de ident.: 8), DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9), PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10), RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11) y RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos DPRSFL (sec. con num. de ident.: 9). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PPRSFL (sec. con num. de ident.: 10). En algunas modalidades, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLKL (sec. con num. de ident.: 11). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RLQLK(Ac) (sec. con num. de ident.: 12).
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un agente terapeutico a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 o 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 3); B es un peptido con una secuencia que comprende 8 o 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 4); ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y al menos uno de Da y Db es independientemente un agente terapeutico; y
en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
En algunas moleculas, A y B no tienen igual numero de aminoacidos acidos y basicos. En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cBy cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1).
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un agente terapeutico a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 5 glutamatos consecutivos;
B es un peptido con una secuencia que comprende 8 argininas consecutivas;
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
al menos uno de Da y Db es independientemente un agente terapeutico; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7).
Se describen en la presente descripcion metodos para suministrar un agente terapeutico a un tejido de interes, lo que comprende poner en contacto el tejido de interes con una molecula de Formula I:
[Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
en donde,
X es un enlazador peptfdico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
A es un peptido con una secuencia que comprende 9 glutamatos consecutivos (sec. con num. de ident.: 13);
B es un peptido con una secuencia que comprende 9 argininas consecutivas (sec. con num. de ident.: 14);
ca, cb y cm comprende cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
M es un polfmero de polietilenglicol (PEG); y
al menos uno de Da y Db es independientemente un agente terapeutico; y en donde [cm-M] se une a cualquier posicion en A o X, [Da-ca] se une a cualquier aminoacido en A y [cb-Db] se une a cualquier aminoacido en B.
En algunas moleculas, ca, cb y cm son cada uno independientemente 0-1 aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas moleculas, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1). En algunas moleculas, X comprende la secuencia de aminoacidos RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7).
El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido permite que un profesional medico trate un tejido espedfico (por ejemplo, tejido canceroso). El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido disminuye la dosificacion del agente terapeutico. El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido disminuye el contacto del agente terapeutico con el tejido sano. El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido disminuye los efectos secundarios no deseados que surgen del uso de concentraciones altas de un agente terapeutico o contacto. El suministro dirigido de un agente terapeutico a una celula o tejido disminuye los efectos secundarios no deseados que surgen del contacto entre el agente terapeutico y el tejido sano.
Agentes terapeuticos
Un agente terapeutico puede seleccionarse de: un agente quimioterapeutico, un esteroide, un agente inmunoterapeutico, una terapia dirigida, un agente antiinflamatorio o sus combinaciones.
Un agente terapeutico puede ser un inhibidor de la via del receptor de celulas B. Un agente terapeutico puede ser un inhibidor de CD79A, un inhibidor de CD79B, un inhibidor de CD19, un inhibidor de Lyn, un inhibidor de Syk, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de Blnk, un inhibidor de PLCy, un inhibidor de PKCp o sus combinaciones. En algunas modalidades, un agente terapeutico es un anticuerpo, un inhibidor de senalizacion del receptor de celulas B, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de IAP, un inhibidor de mTOR, un radio inmunoterapeutico, un agente que dana el ADN, un inhibidor de proteosoma, un inhibidor de histona deacetilasa, un inhibidor de protema quinasa, un inhibidor de hedgehog, un inhibidor de Hsp90, un inhibidor de telomerasa, un inhibidor de Jak1/2, un inhibidor de proteasa, un inhibidor de PKC, un inhibidor de PARP o sus combinaciones. Un agente terapeutico puede seleccionarse entre: clorambucilo, ifosfamida, doxorrubicina, mesalazina, talidomida, lenalidomida, temsirolimus, everolimus, fludarabina, fostamatinib, paclitaxel, docetaxel, ofatumumab, rituximab, dexametasona, prednisona, CAL-101, ibritumomab, tositumomab, bortezomib, pentostatina, endostatina, bendamustina, clorambucilo, clormetina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan, prednimustina, trofosfamida, busulfan, mannosulfan, treosulfan, carbocuona, tiotepa, triaziquona, carmustina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina, semustina, estreptozocina, etoglucida, dacarbazina, mitobronitol, pipobroman, temozolomida, metotrexato, permetrexed, pralatrexato, raltitrexed, cladribina, clofarabina, fludarabina, mercaptopurina, nelarabina, tioguanina, azacitidina, capecitabina, carmofur, citarabina, decitabina, fluorouracilo, gemcitabina, tegafur, vinblastina, vincristina, vindesina, vinflunina, vinorelbina, etoposido, teniposido, demecolcina, docetaxel, paclitaxel, paclitaxel poliglumex, trabectedina, dactinomicina, aclarrubicina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitoxantrona, pirarrubicina, valrubicina, zorubincina, bleomicina, ixabepilona, mitomicina, plicamicina, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, satraplatino, procarbazina, acido aminolevulmico, efaproxiral, aminolevulinato de metilo , porffmero de sodio, temoporfina, dasatinib, erlotinib, everolimus, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, pazonanib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, alitretinoma, altretamina, amzacrina, anagrelida, trioxido de arsenico, asparaginasa, bexaroteno, bortezomib, celecoxib, denileukin diftitox, estramustina, hidroxicarbamida, irinotecan, lonidamina, masoprocol, miltefosema, mitoguazona, mitotano, oblimersen, pegaspargasa, pentostatina, romidepsina, sitimagene ceradenovec, tiazofurina, topotecan, tretinoma, vorinostat, dietilestilbenol, etinilestradiol, fosfestrol, fosfato de poliestradiol, gestonorona, medroxiprogesterona, megestrol, buserelina, goserelina, leuprorelen, triptorelina, fulvestrant, tamoxifeno, toremifeno, bicalutamida, flutamida, nilutamida, aminoglutetimida, anastrozol, exemestano, formestano, letrozol, vorozol, abarelix, degarelix, diclorhidrato de histamina, mifamurtida, pidotimod, plerixafor, roquinimex, timmopentina, everolimus, gusperimus, leflunomida , acido micofenolico, sirolimus, ciclosporina, tacrolimus, azatioprina, lenalidomida, metotrexato, talidomida, iobenguane, ancestim, filgrastim, lenograstim, molgramostim, pegfilgrastim, sargramostim, interferon alfa natural, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon alfacon-1 , interferon alfa-n1, interferon beta natural, interferon beta-la, interferon beta-lb, interferon gamma, peginterferon alfa-2a, peginterferon alfa-2b, aldesleucina, oprelvequina, vacuna BCG, acetato de glatiramer, diclorhidrato de histamina, inmunocitosina, lentinan, vacuna contra el melanoma, mifamurtida, pegademasa, pidotimod, plerixafor, poli I:C, poli-ICLC, roquinimex, tasonermina, timopentina, abatacept, abetimus, alefacept, inmunoglobulina antilinfodtica (caballo), inmunoglobulina antitimodtica (conejo), eculizumab, efalizumab, everolimus, gusperimus, leflunomida, muromab-CD3, acido micofenolico, natalizumab, sirolimus, adalimumab, afelimomab, certolizumab pegol, etanercept, golimumab, infliximab, anakinra, basiliximab, canakinumab, daclizumab, mepolizumab, rilonacept, tocilizumab, ustekinumab, ciclosporina, tacrolimus, azatioprina, lenalidomida, metotrexato, talidomida, adalimumab, alemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, certolizumab pegol, eculizumab, efalizumab, gemtuzumab, ibritumomab tiuxetan, muromonab-CD3, natalizumab, panitumumab, ranibizumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab, catumaxomab, edrecolomab, ofatumumab, muromab-CD3, afelimomab, golimumab, ibritumomab tiuxetan, abagovomab, adecatumumab, alemtuzumab, anticuerpo monoclonal anti-CD30 Xmab2513, anticuerpo monoclonal anti-MET MetMab, apolizumab, apomab, arcitumomab, anticuerpo biespedfico 2B1, blinatumomab, brentuximab vedotin, pendetida capromab, cixutumumab, claudiximab, conatumumab, dacetuzumab, denosumab, eculizumab, epratuzumab, epratuzumab, ertumaxomab, etaracizumab, figitumumab, fresolimumab, galiximab, ganitumab, gemtuzumab ozogamicina, glembatumumab, ibritumomab, inotuzumab ozogamicina, ipilimumab, lexatumumab, lintuzumab, lintuzumab, lucatumumab , mapatumumab, matuzumab, milatuzumab, anticuerpo monoclonal CC49, necitumumab, nimotuzumab, ofatumumab, oregovomab, pertuzumab, ramacurimab, ranibizumab, siplizumab, sonepcizumab, tanezumab, tositumomab, trastuzumab, tremelimumab, tucotuzumab, celmoleukin, veltuzumab, visilizumab, volociximab, zalutumumab, un inhibidor syk (por ejemplo, R788), enzastaurina, dasatinib, erlotinib, everol
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imus, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, pazonanib, sorafenib, sunitinib, temsirolimus, un inhibidor de la angiogenesis (por ejemplo, GT-111, JI-101, R1530), un inhibidor de la quinasa (por ejemplo, AC220, AC480, ACE-041, AMG 900, AP24534, Arry-614, AT7519, AT9283, AV-951, axitinib, AZD1152, AZD7762, AZD8055, AZD8931, bafetinib, BAY 734506, BGJ398, BGT226, BI 811283, BI6727, BIBF 1120, BIBW 2992, BMS- 690154, BMS-777607, BMS-863233, BSK- 461364, CAL-101, CEP-11981, CYC116, DCC-2036, dinaciclib, dovitinib lactato, E7050, EMD 1214063, ENMD-2076, fostamatinib disodico, GSK2256098, GSK690693, INCB18424 , INNO-406, JNJ-26483327, JX-594, KX2-391, linifanib, LY2603618, MGCD265, MK-0457, MK1496, MLN8054, MLN8237, MP470, NMS-1116354, NMS-1286937, EN 01919.Na, OSI- 027, OSI-930, inhibidor de Btk, PF-00562271, PF-02341066, PF-03814735, PF-04217903, PF-04554878, PF- 04691502, PF-3758309, PHA-739358, PLC3397, progenipoietin, R547, R763, ramucirumab , regorafenib, RO5185426, SAR103168, S3333333CH 727965, SGI-1176, SGX523, SNS -314, TAK-593, TAK-901, TKI258, TLN-232, TTP607, XL147, XL228, XL281RO5126766, XL418, XL765), un inhibidor de la senalizacion de protema quinasa activada por mitogeno (por ejemplo, U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, wortmannin o LY294002), adriamicina, dactinomicina, bleomicina, vinblastina, cisplatino, acivicina, aclarrubicina, acodazol, clorhidrato, acronina, adozelesina, aldesleucina, altretamina, ambomicina, acetato de ametantrona, aminoglutetimida , amsacrina, anastrozol, antramicina, asparaginasa, asperlina, azacitidina, azetepa, azotomicina, batimastat, benzodepa, bicalutamida, clorhidrato de bisantreno, dimesilato de bisnafida, bizelesina, sulfato de bleomicina, brequinar sodico, bropirimina, busulfan, cactinomicina, calusterona, caracemida, carbetimero, carboplatino , carmustina, clorhidrato de carubicina, carzelesina, cedefingol, clorambucilo, cirlemicina, cladribina, mesilato de crisnatol, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, clorhidrato de daunorrubicina, decitabina, dexor maplatin, dezaguanine, mesilato dezaguanina, diaziquona, doxorrubicina, clorhidrato de doxorrubicina, droloxifeno, citrato de droloxifeno, propionato de dromostanolona, duazomicina, edatrexato, clorhidrato de eflornitina, elsamitrucina, enloplatino, enpromato, epipropidina, clorhidrato de epirrubicina, erbulozol, clorhidrato de esorrubicina, estramustina, estramustina fosfato sodica , etanidazol, etoposido, etoposido fosfato, etoprina, clorhidrato de fadrozol, fazarabina, fenretinida, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracilo, flurocitabina, fosquidona, fostriecina sodica, gemcitabina, clorhidrato de gemcitabina, hidroxiurea, clorhidrato de idarrubicina, ifosfamida, iimofosina, interleucina II (incluida la interleucina II recombinante o rIL2), interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon alfa-nl, interferon alfa-n3, interferon beta-1a, interferon gamma-1b, iproplatino, clorhidrato de irinotecan, acetato de lanreotida, letrozol, acetato de leuprolida, clorhidrato de liarozol, lometrexol sodico, lomustina, clorhidrato de losoxantrona, masoprocol, maitansina, clorhidrato de mecloretamina, acetato de megestrol, acetato de melengestrol, melfalan, menogaril, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sodico, metoprina, meturedepa, mitindomida, mitocarcina, mitocromina, mitogilina, mitomalcina, mitomicina, mitosper, mitotano, clorhidrato de mitoxantrona, acido micofenolico, nocodazoilo, nogalamicina, ormaplatino, oxisurano, pegaspargasa, peliomicina, pentamustina, sulfato de peplomicina, perfosfamida, pipobroman, piposulfan, clorhidrato de piroxantrona, plicamicina, plomestano, porfimer sodico, porfiromicina, prednimustina, clorhidrato de procarbazina, puromicina, clorhidrato de puromicina, pirazofurina, riboprina, rogletimida, safingol, clorhidrato de safingol, semustina, simtrazeno, sparfosato sodico, sparsomicina, clorhidrato de espirogermanio, espiromustina, espiroplatino, estreptonigrina, estreptozocina, sulofenur, talisomicina, tecogalan sodico, tegafur, clorhidrato de teloxantrona, temoporfina, teniposido, teroxirona, testolactona, tiamiprina, tioguanina, tiotepa, tiazofurina, tirapazamina, citrato de toremifeno, acetato de trestolona, fosfato de triciribina, trimetrexato, glucuronato de trimetrexato, triptorelina, clorhidrato de tubulozol, mostaza de uracilo, uredepa, vapreotida, verteporfina , sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, vindesina, sulfato de vindesina, sulfato de vinapidina, sulfato de vinglicinato, sulfato de vinleurosina, tartrato de vinorelbina, sulfato de vinrosidina, sulfato de vinzolidina, vorozol, zeniplatino, zinostatina, clorhidrato de zorrubicina. En algunas modalidades, un agente terapeutico se selecciona de: 20- epi-1, 25 dihidroxivitamina D3, 5-etiniluracilo, abiraterona, aclarrubicina, acilfulvene, adecypenol, adozelesina, aldesleucina, antagonistas de ALL-TK, altretamina, ambamustina, amidox, amifostina, acido aminolevulmico, amrubicina, amsacrina, anagrelida, anastrozol, andrografolida, inhibidores de la angiogenesis, antagonista D, antagonista G, antarelix, protema morfogenetica anti-dorsalizante-1, antiandrogeno, carcinoma prostatico, antiestrogeno, antineoplaston, oligonucleotidos antisentido, glicinato de afidicolina, moduladores del gen de la apoptosis, reguladores de la apoptosis, acido apurmico, ara-CDP- DL-PTBA, arginina desaminasa, asulacrina, atamestano, atrimustina, axinastatina 1, axinastatina 2, axinastatina 3, azasetron, azatoxina, azatirosina, derivados de baccatin III, balanol, batimastat, antagonistas de BCR/ABL, benzoclorinas, benzoilestaurosporina, derivados de beta lactama, beta -aletina, betaclamicina B, acido betulmico, inhibidor de bFGF, bicalutamida, bisantreno, bisaziridinilspermina, bisnafida, bistrateno A, bizelesina, breflate, bropirimina, budotitano, butionina sulfoximina, calcipotriol, calfostin C, derivados de la camptotecina, canaripox IL-2, capecitabina, carboxamida-amino-triazol, carboxiamidotriazol, CaRest M3, CARN 700, inhibidor derivado del cartflago, carzelesina, inhibidores de la casema quinasa (ICOS), castanospermina, cecropin B, cetrorelix, clorlns, cloroquinoxalina sulfonamida, cicaprost, cis-porfirin, cladribina, analogos de clomifeno, clotrimazol, colismicina A, colismicina B, combretastatina A4, analogo de combretastatina, conagenina, crambescidina 816, crisnatol, criptoficina 8, derivados de criptoficina A, curacina A, ciclopentantraquinonas, cicloplatam, cipemicina, citarabina ocfosfato, factor citolftico, citostatin, dacliximab, decitabine, dehidrodidemnin B, deslorelina, dexametasona, dexifosfamida, dexrazoxano, dexverapamilo, diaziquona, didemnin B, didox, dietilnorspermina, dihidro-5-azacitidina, 9-dioxamicina, difenil spiromustina, docosanol, dolasetron, doxifluridina, droloxifeno, dronabinol, duocarmicin SA, ebselen, ecomustina, edelfosina, edrecolomab, eflornitina, elemeno, emitefur, epirrubicin, epristerida, analogo de estramustina, agonistas de estrogenos, antagonistas de estrogenos, etanidazol, etoposido fosfato, exemestano, fadrozole, fazarabina, fenretinide, filgrastim, finasteride, flavopiridol, flezelastina , flutardona, fludarabina, clorhidrato de fluorodaunorrunicina, forfenimex, formestano, fostriecina, fotemustina, texafirina de gadolinio, nitrato de galio, galocitabina, ganirelix, inhibidores de gelatinasa, gemcitabina, inhibidores de glutation, hepsulfam, heregulina, hexametileno bisacetamida, hipericina, acido ibandronico, idarrubicina, idoxifeno, idramantona, ilmofosina, ilomastat, imidazoacridonas, imiquimod, peptidos inmunoestimulantes, insulina, como por ejemplo inhibidor del receptor del factor de crecimiento 1, agonistas del interferon,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
interferones, interleucinas, iododoxorrubicina, ipomeanol, 4-iroplact, irsogladina, isobengazole, isohomohalicondrin B , itasetron, jasplakinolide, kahalalide F, triacetato de lamellarin-N, lanreotida, leinamicina, lenograstim, sulfato de lentinan, leptolstatina, letrozol, factor inhibidor de la leucemia, interferon alfa leucocitario, leuprolida + estrogeno + progesterona, leuprorelina, levamisol, liarozol, analogo de poliamina lineal, peptido disacarido lipofilo, compuestos de platino lipofilos, lissoclinamida 7, lobaplatino, lombricina, lometrexol, lonidamina, losoxantrona, lovastatina, loxoribina, lurtotecan, lutetium texafirina, lisofilina, peptidos ltticos, maitansina, mannostatina A, marimastat, masoprocol, maspin, inhibidores de matrilisina, inhibidores de metaloproteinasas de la matriz, menogaril, merbarona, meterelina, metioninasa, metoclopramida, inhibidor de MIF, mifepristona, miltefosina, mirimostim, ARN bicatenario no compatible, mitoguazona, mitolactol, analogos de mitomicina, mitonafida, factor de crecimiento de fibroblastos de mitotoxina-saporina, mitoxantrona, mofaroteno, molgramostim, anticuerpo monoclonal, gonadotropina corionica humana, monofosforil lfpido A+ pared celular de myobacterium, mopidamol, inhibidor genico de resistencia a multiples farmacos, terapia supresora de tumores multiples 1, agente mostaza contra el cancer, micaperoxido B, extracto de pared celular micobacteriana, miriaporone, N- acetildinalina, benzamidas N-substituidas, nafarelina, nagrestip, naloxone + pentazocina, napavina, naphterpina, nartograstim, nedaplatino, nemorrubicina, acido neridronico, endopeptidasa neutral, nilutamida, nisamicina, moduladores de oxido mtrico, antioxidante nitroxido, nitrulina, O6-bencilguanina, octreotido, okicenona, oligonucleotidos, onapristona, ondansetron, ondansetron, oracina, inductor de citocina oral, ormaplatino, osaterona, oxaliplatino, oxaunomicina, palauamina, palmitoilrizoxina, acido pamidronico, panaxitiol, panomifeno, parabactina, pazeliptina, pegaspargase, peldesina, pentosan polisulfato sodico, pentostatina, pentrozol, perflubron, perfosfamida, alcohol perillyl, fenazinomicina, fenilacetato, inhibidores de la fosfatasa, picibanil, clorhidrato de pilocarpina, pirarrubicina, piritrexim, placetin A, placetin B, inhibidor del activador del plasminogeno, complejo de platino, compuestos de platino, complejo platino-triamina, porffmero sodico, porfiromicina , prednisona, propil bis-acridona, prostaglandina J2, inhibidores del proteosoma, modulador inmune basado en protema A, inhibidor de la protema quinasa C, inhibidores de la protema quinasa C, microalgas, inhibidores de la protema tirosina fosfatasa, inhibidores de la purina nucleosido fosforilasa, purpurinas, pirazoloacridina, hemoglobina piridoxilada, polioxietileno conjugado, antagonistas de raf, raltitrexed, ramosetron, inhibidores de ras farnesil protema transferasa, inhibidores ras, inhibidor de ras GAP, reteliptina desmetilada, etidronato renio Re 186, rizoxina, ribozimas, retinamida RII, rogletimida, rohituquina, romurtida, roquinimex, rubiginona B1, ruboxil, safingol, saintopina, SarCNU, sarcofitol A, sargramostim, mimeticos de Sdi 1, semustino, inhibidor 1 derivado de la senescencia, oligonucleotidos sentido, inhibidores de transduccion de senales, moduladores de transduccion de senales, protema de union a antfgeno de cadena simple, sizofiran, sobuzoxano, borocaptato de sodio, fenilacetato de sodio, solverol, protema de union a somatomedina, sonermina, acido, sparfosico, espicamicina D, espiromustina, esplenopentina, espongistatina 1, escualamina, inhibidor de celulas madre, inhibidores de la division de celulas madre, stipiamida, inhibidores de estromelisina, sulfinosina, antagonista del peptido intestinal vasoactivo superactivo, suradista, suramina, swainsonina, glicosaminoglicanos sinteticos, talimustina, tamiodifenotioduro tauromustina, tazaroteno, tecogalan sodico, tegafur, telurapirilio, inhibidores de la telomerasa, temoporfina, temozolomida, teniposido, tetraclorodecaoxido, tetrazomina, taliblastina, tiocoralina, trombopoietina, mimetico de trombopoietina, timalfasina, agonista del receptor de la timpopoietina, timotrinan, hormona estimulante de la tiroides, etiopurpurina de etil estano, tirapazamina, bicloruro de titanoceno, topsentina, toremifeno, factor de celulas madre totipotentes, inhibidores de la traduccion, tretinoma, triacetiluridina, triciribina, trimerexato, triptorelina, tropisetron, turosterida, inhibidores de la tirosina quinasa, tirfostins, inhibidores UBC, ubenimex, factor inhibidor del crecimiento derivado del seno urogenital, antagonistas del receptor de la uroquinasa, vapreotida, variolina B, sistema de vector, terapia genica de los eritrocitos, velaresol, veramina, verdinas, verteporfina, vinorelbina, vinxalina, vitaxina, vorozol, zanoterona, zeniplatino, zilascorb, zimostatin stimalamer, mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucilo, busulfan, carmustina , lomusitne, decarbazina, metotrexato, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina, mecloretamina, ciclofosfamida, clorambucilo, meifalan, etilenimina, metilmelamina, hexametilmelamina, tiotepa, busulfan, carmustina, lomusitne, semustina, estreptozocina, descarbrazina, fluorouracilo, floxouridina, citarabina, mercaptopurina, tioguanina, pentostatina, erbulozol (conocido tambien como R- 55104), Dolastatin 10 (conocido tambien como DLS-10 y NSC-376128), isetionato de mivobulina (conocido tambien como CI-980), vincristina, NSC-639829, Discodermolida (conocido tambien como NVP-XX-A-296), ABT-751 (Abbott, conocido tambien como E-7010), Altorirtinos (tales como Altorirtin A y Altorirtin C), Spongistatinos (como Spongistatin 1, Spongistatin 2, Spongistatin 3, Spongistatin 4, Spongistatin 5, Spongistatin 6, Spongistatin 7, Spongistatin 8, y Spongistatin 9), Clorhidrato de Cemadotin (conocido tambien como LU-103793 y NSC-D-669356), Epotilones (tales como Epotilone A, Epotilone B, Epotilone C (conocido tambien como desoxiepotilone A o dEpoA), Epotilone D (conocido tambien como KOS- 862, dEpoB y desoxiepotilone B), Epotilone E, Epotilone F, Epotilone B N-oxido, Epotilone A N- oxido, 16-aza-epotilone B, 21-aminoepotilone B (conocido tambien como BMS-310705), 21-hidroxiepotilone D (conocido tambien como Desoxiepotilone F y dEpoF ), 26-fluoroepotilona), Auristatina PE (conocido tambien como NSC-654663), Soblidotin (conocido tambien como TZT-1027), LS-4559-P (Pharmacia, conocido tambien como LS-4577), LS-4578 (Pharmacia, conocido tambien como LS-477-P), LS-4477 (Pharmacia), LS-4559 (Pharmacia), RPR-112378 (Aventis), sulfato de vincristina, DZ-3358 (Daiichi), FR-182877 (Fujisawa, conocido tambien como WS-9885B), GS-164 (Takeda), GS-198 (Takeda), KAR-2 (Hungarian Academy of Sciences), BSF-223651 (BASF, conocido tambien como ILX-651 y LU-223651), SAH-49960 (Lilly/Novartis), SDZ-268970 (Lilly/Novartis), AM-97 (Armad/Kyowa Hakko), AM-132 (Armad), AM-138 (Armad/Kyowa Hakko), IDN-5005 (Indena), Criptoficina 52 (conocido tambien como LY-355703), AC-7739 (Ajinomoto, conocido tambien como AVE-8063A y CS-39.hC|), AC-7700 (Ajinomoto, conocido tambien como AvE-8062, AVE-8062A, CS-39 -L-Ser.HCI, y RPR-258062A), Vitilevuamida, Tubulisina A, Canadensol, Centaureidina (conocido tambien como NSC-106969), T-138067 (Tularik, conocido tambien como T-67, TL-138067 y TI-138067), COBRA-1 (Parker) Hughes Institute, conocido tambien como DDE-261 y WHI-261), H10 (Kansas State University), H16 (Kansas State University), Oncocidina A1 (conocido tambien como BTO-956 y DIME), DDE-313 (Parker Hughes Institute), Fijianolida B, Laulimalida, SPA-2 (Parker Hughes Institute), SPA-1 (Parker Hughes Institute, conocido tambien como SPIKET-P), 3-IAABU
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
(Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine, conocida tambien como MF-569), Narcosina (conocida tambien como NSC- 5366), Nascapina, D-24851 (Asta Medica), A-105972 (Abbott), Hemiasterlina, 3-BAABU (Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine, conocida tambien como MF-191), TMPN (Arizona State University), acetilacetonato de Vanadoceno, T-138026 (Tularik), Monsatrol, Inanocino (conocido tambien como NSC-698666), 3-IAABE (Cytoskeleton/Mt. Sinai School of Medicine), A-204197 (Abbott), T-607 (Tuiarik, conocido tambien como T-900607), RPR-115781 (Aventis), Eleuterobinas (tales como Desmetileleuterobina, Desaetileleuterobina, Isoeleuterobina A, y Z-Eleuterobina) , Caribaeosida, Caribaeolina, Halicondrina B, D-64131 (Asta Medica), D-68144 (Asta Medica), Diazonamida A, A-293620 (Abbott), NPI- 2350 (Nereus), Taccalonolida A, TUB-245 (Aventis), A-259754 (Abbott), Diozostatina, (-)- Fenilahistina (conocido tambien como NSCL-96F037), D-68838 (Asta Medica), D-68836 (Asta Medica), Myoseverin B, D-43411 (Zentaris, conocido tambien como D-8l862), A-289099 (Abbott), A-318315 (Abbott), H TI-286 (conocido tambien como SPA-110, sal trifluoroacetato) (Wyeth), D-82317 (Zentaris), D-82318 (Zentaris), SC-12983 (NCl), Resverastatina fosfato sodico, BPR- OY-007 (National Health Research Institutes) y SSR-250411 (Sanofi).
Un agente terapeutico puede ser un agente antiinflamatorio. En algunas, un agente terapeutico puede ser un agente anti- TNF, un antagonista del receptor de IL-1, un antagonista del receptor de IL-2, un agente citotoxico, un agente inmunomodulador, un antibiotico, un bloqueador coestimulador de celulas T, un agente depletador de celulas B, un agente inmunosupresor, un agente alquilante, un antimetabolito, un alcaloide vegetal, un terpenoide, un inhibidor de topoisomerasa, un antibiotico antitumoral, un anticuerpo, una terapia hormonal, un agente antidiabetes, un inhibidor de leucotrieno o sus combinaciones. En algunas modalidades, un agente terapeutico se selecciona de: alefacept, efalizumab, metotrexato, acitretina, isotretinoma, hidroxiurea, micofenolato mofetilo, sulfasalazina, 6-tioguanina, Dovonex, Taclonex, betametasona, tazaroteno, hidroxicloroquina, etanercept, adalimumab, infliximab, abatacept, rituximab, tratuzumab, anticuerpo monoclonal anti-CD45 AHN-12 (NCI), Anticuerpo anti-B1, yodo-131 (Corixa Corp.), anticuerpo monoclonal anti- CD66 BW 250/183 (NCI, Southampton General Hospital), anticuerpomonoclonal anti-CD45 (NCI, Baylor College of Medicine), anticuerpo anti-integrina anb3 (NCI), BIW-8962 (BioWa Inc.), anticuerpo BC8 (NCI), anticuerpo muJ591 (NCI), anticuerpo monoclonal MN-14(NCI ), indio In-111, anticuerpo monoclonal MN-14 itrio Y 90 (NCI), anticuerpo monoclonal F105 (NIAID), anticuerpo monoclonal RAV12 (Raven Biotechnologies), CAT-192 (anticuerpo monoclonal anti-TGF-Betal humano, Genzyme), anticuerpo 3F8 (NCI), 177Lu-J591 (Weill Medical College of Cornell University), TB-403 (BioInvent International AB), anakinra, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina A, leflunomida, d-penicilamina, amitriptilina o nortriptilina, clorambucilo, mostaza nitrogenada, prasterona, LJP 394 (abetimus sodico), LJP 1082 (La Jolla Pharmaceutical), eculizumab, belibumab, rhuCD40L (NIAID), epratuzumab, sirolimus, tacrolimus, pimecrolimus, talidomida, globulina equinaantitimocito (Atgam, Pharmacia Upjohn), globulina de conejo antitimocito (timoglobulina, Genzyme), Muromonab-CD3 (FDA Office of Orphan Products Development), basiliximab, daclizumab, riluzol, cladribina, natalizumab, interferon beta-lb, interferon beta-la, tizanidina, baclofeno, mesalazina, asacol, pentasa, mesalamina, balsalazida, olsalazina, 6-mercaptopurina, AIN457 (Anticuerpo monoclonal anti-IL-17, Novartis), teofilina, D2E7 (un AcM anti-TNF humano de Knoll Pharmaceuticals), Mepolizumab (anticuerpo anti-IL-5, SB 240563), Canakinumab (anticuerpo beta anti-IL-1, NIAMS), anticuerpo receptor anti-IL-2 (Daclizumab , NHLBI), CNTO 328 (Anticuerpo monoclonal anti IL-6, Centocor), ACZ885 (anticuerpo monoclonal anti-interleucina-1 beta humano completo, Novartis), CNTO 1275 (Anticuerpo monoclonal anti-IL-12 humano completo, Centocor), (3S)-N-hidroxi-4 -(4-[(4-hidroxi-2-butinil)oxi]fenil} sulfonil)-2,2-dime- hil-3-tiomorfolina carboxamida (apratastat), golimumab (CNTO 148), Onercept, BG9924 (Biogen Idec), Certolizumab Pegol (CDP870, UCB Pharma), AZD9056 (AstraZeneca), AZD5069 (AstraZeneca), AZD9668 (AstraZeneca), AZD7928 (AstraZeneca), AZD2914 (AstraZeneca), AZD6067 (AstraZeneca), AZD3342 (AstraZeneca), AZD8309 (AstraZeneca),acido [(1R)-3-metil-1-({(2S)-3-fenil-2-[(pirazin-2-ilcarbonil) amino] propanoil} amino) butil] boronico (Bortezomib), AMG-714, (Anticuerpo monoclonal humano anti-IL 15, Amgen), ABT-874 (anticuerpo monoclonal anti-IL-12, Abbott Labs), MRA (Tocilizumab, un anticuerpo monoclonal anti receptor de IL-6, Chugai Pharmaceutical), CAT-354 (un anticuerpo monoclonal anti-interleucina-13 humano, Cambridge Antibody Technology, MedImmune), aspirina, acidosalidlicico, acido gentfsico, salicilato de magnesiocolina, salicilato de colina, salicilato de magnesio colina, salicilato de colina, salicilato de magnesio, salicilato de sodio, diflunisal, carprofeno, fenoprofeno, fenoprofeno calcico, flurobiprofeno, ibuprofeno, ketoprofeno, nabutona, ketolorac, ketorolac trometamina, naproxeno, oxaprozina, diclofenaco, etodolaco, indometacina, sulindaco, tolmetina, meclofenamato, meclofenamato sodico, acido mefenamico, piroxicam, meloxicam, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, parecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, CS-502 (Sankyo), JTE-522 (Japan Tobacco Inc .), L-745,337 (Almirall), NS398 (Sigma), betametasona (Celestone), prednisona (Deltasone), alclometasona, aldosterona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, ciclesonida, clobetasol, clobetasona, clocortolona, cloprednol, cortisona, cortivazol, deflazacort, desoxicorticosterona, desonida, desoximetasona, desoxicortona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difluprednato, fluclorolona, fludrocortisona, fludroxicortida, flumetasona, flunisolida, acetonido de fluocinolona, fluocinonida , fluocortina, fluocortolona, fluorometolona, fluperolona, fluprednideno, fluticasona, formocortal, formoterol, halcinonida, halometasona, hidrocortisona, hidrocortisona aceponato, hidrocortisona buteprato, hidrocortisona butirato, loteprednol, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, metilprednisolona aceponato, mometasona furoato, parametasona, prednicarbato, prednisona, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, ulobetasol, Pioglitazona, Rosiglitazona, Glimepirida, Glyburida, Clorpropamida, Glipizida, Tolbutamida, Tolazamida, Glucofago, Metformina, (gliburida + metformina), Rosiglitazona + metformina, (Rosiglitazona + glimepirida), Exenatida, Insulina Sitagliptina, (glipizida y metformina), Repaglinida, Acarbosa, Nateglinida, Orlistat, cisplatino; carboplatino; oxaliplatino; mecloretamina; ciclofosfamida; clorambucilo; vincristina; vinblastina; vinorelbina; vindesina; mercaptopurina; fludarabina; pentostatina; cladribina; 5-fluorouracilo (5FU); floxuridina (FUDR); arabinosido de citosina; trimetoprima; pirimetamina; pemetrexed; paclitaxel; docetaxel; etoposido; teniposido; irinotecan; topotecan; amsacrina; etoposido; etoposido fosfato; teniposido; dactinomicina; doxorrubicina; daunorrubicina; valrubicina; idarubicina; epirrubicina; bleomicina; plicamicina; mitomicina; finasterida; goserelina; aminoglutetimida; anastrozol; letrozol; vorozole; exemestano;
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
4-androsten-3,6,17-triona ("6-OXO"; 1,4,6-androstatrien-3,17-diona (ATD); formestano; testolactona; fadrozol; A- 81834acido (3-(3- (i,i-dimetiletiltio-5-(quinolin-2-ilmetoxi)-i-(4-dorometilfenil)indol-2-il)-2,2-dimetilpropionaldeh^do
oxima-O-2-acetico: AME103 (Amira); AME803 (Amira); atreleuton; BAY-x-1o05acido ((R)-(+)-alfa-ciclopentil-4-(2- quinolinilmetoxi)-benzenoacetico); CJ-13610 (4-(3-(4-(amida de acido 2-metil-imidazol-1-il)-fenilsulfanil)-fenil)-tetrahidro- piran-4-carbox^lico); DG-031 (DeCode); DG-051 (DeCode); MK886sal sodica del acido (1-[(4-clorofenil)metil]3-[(1,1- dimetiletil)tio]-a,a-dimetil-5- (1-metiletil)-1H-indol-2-propanoico); MK591 acido (3-(1)4[(4-clorofenil)metil] -3-[(t-butiltio)-5- ((2-quinol)metoxi)-1H-indol-2]- dimetilpropanoico); RP64966 addo([4-[5-(3-fenil-propil)tiofen-2-il]butoxi]acetico); SA6541 ((r)-S-[[4- (dimetilamino)fenil]metil]-N-(3-mercapto-2metil-1)-oxopropil-L-cistema); SC-56938 (etil-1 -[2-[4-
(fenilmetil)fenoxi]etil]-4-piperidina-carboxilato); VIA-2291 (Via Pharmaceuticals); WY-47,288 (2-[(1-
naftaleniloxi)metil]quinolina); zileuton; ZD-2138 (6-((3-fluoro-5-(tetrahidro-4-metoxi-2H-piran-4il)fenoxi) metil)-1-metil- 2(1H)-quinilolinona); doxiciclina; o sus combinaciones.
Materiales de partida
Se describen en la presente descripcion moleculas de Formula II quetienen la estructura:
A1-X1-B1; Formula II
en donde,
X1 es un enlazador escindible;
Ai es un peptido con una secuencia que comprende de 5 a 9 aminoacidos acidos y que tiene un primer resto de aminoacido reactivo ca;
B1 es un peptido con una secuencia que comprende de 7 a 9 aminoacidos basicos y que tiene un segundo resto de aminoacido reactivo cb; y
A1-X1-B1 tiene un tercer resto de aminoacido reactivo cm en Ai o Xi; y en donde ca es capaz de reaccionar con un primer resto de carga que comprende Da, cb es capaz de reaccionar con un segundo resto de carga que comprende Db y cm es capaz de reaccionar con un portador macromolecular que comprende M para formar una molecula de Formula I.
En algunas moleculas, ca, cb y cm tienen grupos funcionales que son reactivos ortogonalmente. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un aminoacido de origen natural o de un aminoacido de origen no natural. En algunas modalidades, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de un D aminoacido, un L aminoacido, un a-amino acido, un p-aminoacido o un Y-aminoacido. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre, cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal y cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina. En algunas moleculas, cb es cualquier aminoacido que tiene un grupo tiol libre. En algunas moleculas, cb es D-cistema. En algunas moleculas, ca es cualquier aminoacido que tiene un grupo amino N-terminal. En algunas modalidades, ca es D-glutamato. En algunas moleculas, ca es lisina. En algunas moleculas, cm es cualquier aminoacido con una cadena lateral capaz de formar un enlace oxima o hidrazona tras la reaccion con un grupo hidroxilamina o hidrazina. En algunas moleculas, cm es para-4-acetil L-fenilalanina.
Como se usa en la presente, "reactivo ortogonalmente" significa que una pluralidad de grupos puede unirse a una molecula a traves de una secuencia de reacciones que no reaccionan de forma cruzada lo que permite la union espedfica de cada grupo en presencia de los otros. En algunas modalidades, los tres grupos (Da, Db y Dm) pueden unirse a ArX1-B1a traves de ca, cb y cm mediante el uso de una secuencia de 3 reacciones independientes que no reaccionan de forma cruzada, de modo que cada grupo se une a un solo sitio en A1-X1-B1.
Se describe en la presente descripcion una molecula que tiene la secuencia de aminoacidos:
(D-Glu)5-F(4-Ac)-o-Pro-Leu-Gly-Cys(Me)-Ala-Gly-(D-Arg)s-(D-Cys) en donde o representa 5-(amino-3-oxapentanoilo); F(4- Ac) representa para-acetil-(L)-fenilalanina; y C(Me) representa S-metil-(L)-cistema.
La molecula puede comprender ademas un polfmero de polietilenglicol (PEG). En algunas moleculas, el polfmero de PEG se une covalentemente a la molecula en la subunidad F(4-Ac). En algunas moleculas, la molecula comprende grupos que pueden reaccionar ortogonalmente. En algunas moleculas, los grupos que pueden reaccionar ortogonalmente se seleccionan de: un amino, un tiol y una acetil fenilalanina. En algunas moleculas, la molecula comprende un amino, un tiol y una acetil fenilalanina.
En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 500 daltons. En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 2.000 daltons. En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 5.000 daltons. En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 10.000 daltons. En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 20.000 daltons. En algunas moleculas, el polfmero de PEG tiene un peso molecular promedio de 40.000 daltons. Se describe en la presente descripcion el uso de la molecula en la smtesis de una molecula de acuerdo con la Formula I.
Se describe en la presente descripcion una molecula que tiene la secuencia de aminoacidos:
(D-Glu)5-o-Pro-Leu-Glys-Cys(me)-Ala-Gly-(D-Arg)8-(D-Cys)-[PEG(3K)] en donde todos los glutamates y argininas son D- aminoacidos; o representa 5-(amino-3-oxapentanoilo); C(me) representa S-metil-(L)-cistema; y PEG(3k) representa a- amino-u>-amida poli(etilenglicol) con un peso molecular promedio de tres mil Dalton. En algunas moleculas, la molecula comprende, ademas, un resto fluorescente. Se describe en la presente descripcion el uso de la molecula en la smtesis de 5 una molecula de acuerdo con la Formula I.
imagen18
imagen19
imagen20
imagen21
imagen22
‘JH,
imagen23
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Materiales y metodos
Se adquirio acetonitrilo de calidad HPLC de Fisher Scientific (PhiMipsburg, PA). El agua purificada se colecto a traves del sistema de purificacion de agua Milli-Q (Millipore, Bedford, MA). El ester acido 3-maleimidopropionico-Pfp se adquirio de Molecular Biosciences (Boulder, CO). Se adquirio tampon PBS-EDTA de Teknova (Hollister, CA). El acido trifluoroacetico (TFA), dimetilformamida (DMF) y A/-metilmorfolina (NMM) se suministraron por Sigma-Aldrich (Milwaukee, WI). El a- mercaptoetil-w-metoxi, polioxietileno (peso molecular 2.0O0, 5.000, 20.000 y 40.000) [mPEG(2K)-SH, mPEG(5K)-SH, mPEG(20K)-SH, mPEG(40K)-SH] y a-aminoxyl-w-metoxi, polioxietileno (Pm 2.000, 5.000, 20.000 y 40.000) [mPEG(2K)- ONH2, mPEG(5K)-ONH2, mPEG(20K)-ONH2, mPEG(40K)-ONH2] se adquirieron de NOF America Corporation (Irvine, CA). El mPEG(lK)-NHNH2 se compro de Nanocs (Nueva York). La maleimida IRDye 800CW (Mal-IRDye) y el ester succinimidflico IRDye 750 se suministraron por Li-Cor Biosciences (Lincoln, NE). Los peptidos liofilizados P1-P17 se prepararon mediante el uso de metodos de acoplamiento de peptidos basados en resina estandar.
El analisis LC-MS se llevo a cabo en una serie Agilent 1200 SL en combinacion con AB SCIEX API 3200, equipado con un automuestreador CTC PAL que funciona a 4 °C, un desgasificador de vado, una bomba binaria, un detector UV-VIS, software analttico asociado Analyst 1.5 y una columna Phenomenex (Kinetex 2,6|j C18 100A, 100 *2,1 mm) o un modulo de separacion Waters 2695 equipado con un detector de absorbancia dual A Waters 2487 en combinacion con un espectrometro de masas Finnigan LCQ Deca XP. El equipo se asocia con el software analttico Xcalibur y una columna Peeke Scientific (Titan 200 5jm, C18-MC, 50 * 2,1 mm).
El HPLC de preparacion se llevo a cabo en un sistema Agilent (serie Agilent 1.200) y una columna Thermo Scientific (Hypersil Gold C18, 5j, 250 * 10 mm) o un sistema de HPLC preparativa Waters Delta Prep y una columna Varian (F75L, C18, 15j, 1.200g), o un sistema Waters PrepLC equipado con un detector de absorbancia dual lambda Waters 2487, Fraction Collector III, software Masslynx y una columna Thermo Scientific (Hypersil Gold C18, 5j, 250 * 10 mm) o una columna Phenomenex (luna, C18(2), 5j, 100A AX 150 * 30 mm). La fase movil consistio en un gradiente de agua (TFA al 0,05 %)(solvente A)/acetonitrilo (TfA al 0,05 %)(solvente B).
La centrifugacion se llevo a cabo a 4 °C con una centnfuga Eppendorf 5810R o una Beckman Microfuge® 18.
Los materiales ilustrativos para la smtesis de las moleculas de suministro selectivo descritas en la presente descripcion incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de los peptidos P-1, P-2, P-3, P-4, P-5, P-6, P-7, P-8, P-9, P-10, P-11, P12, P13, P-14, P-15, P-16 y P-17.
Los materiales de partida anteriores se resumen mas abajo:
Secuencias del peptido
Peptido P-1
eeeeeeeeeoPLGC(Me)AGrrrrrrrrrc
Peptido P-2
eeeeeoPLGC(Me)AGrrrrrrrrc
Peptido P-3
eeeeeF(4-Ac)oPLGC(Me)AGrrrrrrrrc
Peptido P-4
eeeeeeeeeF(4-Ac)oPLGC(Me)AGrrrrrrrrrc
Peptido P-5
(Ac)eeeeeoPLGC(Me)AGrrrrrrrrck
Peptido P-6
eeeeeoPLGC(Me)AGoF(4-Ac)rrrrrrrrc
Peptido P-7
eeeeeeeeeoPLGC(Me)AGrrrrrrrrrcoF(4-Ac)
Peptido P-8
[mPEG(2K)]crrrrrrrrPLGC(Me)AGoeeeeek
Peptido P-9
[mPEG(5K)]crrrrrrrrPLGC(Me)A Goeeeeek
Peptido P-10
eeeeeoPLGC(Me)AGrrrrrrrrc[PEG(3K)]
Abreviaturas Se usaron abreviaturas de aminoacidos de 1 letra estandar en todas las secuencias. Los caracteres en minusculas indicaron D-aminoacidos. Todos los peptidos se amidaron en el extremo C-terminal. o: 5-(amino-3-oxapentanoilo); F(4-ac): para-acetil-(L)-fenilalanina; C(Me): S-metil-(L)-cistema. PEG(3K): a-amino-w-amida polietilenglicol con un peso molecular promedio detres mil Daltons; mPEG(2k): a-carboxi-w-metoxi polietilenglicol con un peso molecular promedio de dos mil Daltons; mPEG(5k): a-carboxi-w-metoxi polietilen glicol con un peso molecular promedio de cinco mil Daltons. Ac: acetilo.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen24
)i(jOH 5,
M
HjN.^NM H/l
'■UH 'NH HJi -|JH LNII
P_1 HN' NH, HN"1 NH, hw w, HN "NH, NHj
IHDve-aOO DW-JJal MMM, DMF, 1 ti
O-OH O.OH O-OH a, OH
OjOH O^OH OjOH
tw.ll) ttW-NH HzN,!*) I'1 (
i A "i ^ ^.fjo
O Ul O kH O O I. H 6 qXhh 9 1 H 9 a 9 I H f'i B <? l H ? >0 iJ/*' t
o'xh x w «h x aV^W o1^ 'n aTfrjnrqrr™™
' m ^nh NH W KN^NHj HN^NHz HTl** HN NH
9?
OPlp
OjOH O.
PIMM, DMF, 20 h
HWIj.fH -V HiM-.t-tl Hll'W*1 t
- - -t, , p
° ^5i* M4 S5x,4
i£4 Y* L>«
KH'CNH2 JfTN^ ** A HN
'JW w < NH2 HhS*I2
mPEG(40K>^H
OjOM Osj. OH OjOH O^OH OjO 1 H 0 I N 9 f H 9 -H H O f H
pH 7.4, PBS. 20 h
•'•**4^V<WVteWH£
9°*
HjNjpNH HjNy'H
O
Pm = 40.000
V X i
C OH (/ CM O'
k a
OH
!f
HN Ntfc HN NH,
V
IP I- lfc*_l
NH* HN lM-fc
SDM-2
Smtesis del Intermediario 5
A una solucion del peptido P-1 (8 mg, 2,1 pmol) en DMF (0,8 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida IRDye 800CW (2 mg, 1,7 pmol) y A/-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC- MS y se completo por lo general en 1 hora. La mezcla se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
A la mezcla de reaccion anterior se anadio ester del acido 3-maleimidopropionico-Pfp (2 mg, 6,0 pmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 5 (2,1 mg, 22 % para dos etapas). Calculada: [M+3H]3+(CwH290N59O64S6) m/z = 1.526; ESI encontrada: [M+3H]3+(CwH290N59O64S6) m/z = 1.526.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-2
La mezcla del intermediario 5 (1,5 mg, 0,27 pmol) y mPEG(40K)-SH (10 mg, 0,25 pmol) en tampon PBS-EDTA (0,5 ml, NaCl 137 mM, Na2HPO4 7 mM, KCl 3 mM, K3PO4 1,4 mM, EDTA 4 mM, pH 7,4) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-2 (7,0 mg, 61 %).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen25
Ejemplo 2: Smtesis de SDM-6 a partir del peptido P-2
Y
HjjN'
0|0H O-j^H 0*^08
I_ . 'k Ik .
HjN.. NH hfeN.yNH H^-yNH HtfklyNH Htik, HN.^ HKL HH1
mM [W 'NH 'NH r-Z HN^NH, HKI-'NHi HM NH, m flHj
Cy5-Ma1 MMM, DMF, 1 h
OyOH <XjCH 0.|X3H
KbN.WH H^rNH H^_NH 0|C^kXlJ
HN, HN. HNk HM ' _
SO^M
f W 9 « H 9 f H r \ HN mn n.M. ™
*rorj i:»; “?/,. . ,i, „ t „ ? l hqSj,,\h»\ .? >
‘fWrrtrs 51 ,inr<Ti-rcirt£1p (
\+H 'MH 7*1 NH
UN'S** HNTNH, HM'NH,
f Y ■ ■ o
OyOH 0|0H CijOH
NMM, DMF. 5n
H^l ,NH HaN-yNH PfeNyNH ■' •’'V ■■*
(U^WV^-vv ] H\ “Y ' >
0 • o'-oh ;^V
mPEG(40K^SH
Uyun OyOH OyO
r h g r h ? ‘ ‘
>IH NH ‘NH
hn"nhz HNT'NHj hi/Sih,
pH 7,4, PBS, 20 h
,• 0 r H O f H 0 1 H e"\ HM HN. HN, HM,
'°K'Vv *0 r&in'fy m
O'OH O^OH (To 1 Jj i T B d) 1. H O T H o Lh O f N
lNH 'NH >H NH
HN' NH2 HM NH, NH, Il'TNlfe
Pm = 40.000
r~n
o
SDM-6
Smtesis del Intermediario 7
A una solucion del peptido P-2 (378,5 mg, 0,1 mmol) en DMF (25 ml) atemperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (87 mg, 0,09 mmol) y A/-metilmorfolina (350 pl, 3,2 mmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC- MS y se completo en 1 hora. La mezcla se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
A la mezcla de reaccion anterior se anadio ester del acido 3-maleimidopropionico-Pip (50 mg, 0,15 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 5 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 7 (108 mg, 27 % para dos etapas). Calculada: [M+2H]2+(C-i48H235N51O44S4) m/z = 1.780; eSi encontrada: [M+2H]2+(C148H235N51O44S4) m/z = 1.780.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-6
La mezcla del intermediario 7 (95 mg, 21,2 pmol) y mPEG(40K)-SH (0,9 g, 22,5 pmol) en tampon PBS-EDTA (40 ml, NaCl 137 mM, Na2HPO4 7 mM, KCl 3 mM, K3PO41,4 mM, EDTA4 mM, pH 7,4) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-6 (0,85 g, 90 %).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-7 y SDM-8 se prepararon analogamente a SDM-6 a partir del peptido P-2.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen26
O
£k,OH tyjH ff*"
MjM NH HjN NH HjN^NH
HNr HN^ HW.^
P-3
NH NH NH
HlT'NHa UN” NHj
cy&=Ma[ NMM, DMFt 1 h
O^DH O^OH h* .NH H.N. NH 1 ^
^ii^.W.W^V0 1 hA' ^
Xr£° X?
''HH NH 'N'l "HH a
H'/nH, HmSjN, Hn'nH, HN' NH,
!■■■__:■ - __KlljH
/ tt^OH Qk^OH

< H 0 i H O f M O I R r\
Cy7-MHS NMM. DMF. 36 h

H^JtH HjN^NH HaNrNH HjK^.NH y ••
hn H*L HN HN, *

n • u a '. ij n **1 u n ^
"MHI 'NH ""' "
9 HN NM, Mt/ni
'NM
*NH* HM^WM*
mPEG(2K>-ONHa
OjS
i
SOjH
pH 3,0, Glicina 0,1 M anilina 20 mM. 24 h
Q...DH Ck-J2)H HO fHO - “
«w
*w -,
C> OH O OH 0“ OH
. r9
sVriiT^
x
H/J VNH H0.JH H^tSH HjN.fNH l ' N^ ^ Jp*
HN HN-j HH^ HN. * \
h eS h «■> H O ti 9'(a ? „ >
a? WtWV/AV cjr iK' Vr
SDMh25
'"HIM NN *NM NH
HN‘'NH, WJ-SjH, HH'SjHj WOOl,
Smtesis del Intermediario 8
A una solucion del peptido P-3 (200 mg, 49,6 pmol) en DMF (5 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (60 mg, 65,6 pmol) y A/-metilmorfolina (80 pl, 0,73 mmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC- MS y se completo en 1 hora. Se anadio eter (40 ml) a la mezcla. El precipitado se colecto despues de la centrifugacion, se lavo con eter (40 ml x 2) y se purifico por HPLC para proporcionar el intermediario 8 (l4l mg, 61 %). Calculada: [M+3H]3+(Ci52H242N5iO43S4) m/z = 1.200; ESI encontrada: [M+3H]3+(C152H242N51O43S4) m/z = 1.200.
Smtesis del Intermediario 9
A una solucion del intermediario 8 (101 mg, 21,8 pmol) en DMF (10 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy7, ester succinimidflico (40 mg, 41,1 pmol) y W-metilmorfolina (0,2 ml, 1,8 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 36 horas. A la mezcla se anadio eter (35 ml). El precipitado se colecto despues de la centrifugacion y se lavo con eter (40 ml x 2). La purificacion de la mezcla por RP-HPLC proporciono el intermediario 9 (28,1 mg, 25 %) y el intermediario 8 (63 mg). Calculada: [M+3H]3+ (C187H282N53O50S6) m/z = 1.421; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C187H282N53O50S6) m/z = 1.421.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-25
La mezcla del intermediario 9 (28,1 mg, 5,4 pmol) y mPEG(2K)-ONH2 (17 mg, 7,6 pmol) en tampon de glicina (4 ml, 0,1 M, anilina 20 mM, pH 3,0) y acetonitrilo (0,8 ml) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 24 horas. Despues que la reaccion se completo, se anadio acetofenona (10 pl, 86 pmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-25 (25 mg, 63 %).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-9, SDM-10, SDM-22, SDM-23, SDM-24, SDM-26, SDM-27, SDM-29 y SDM- 31 se prepararon analogamente a SDM-25 a partir del peptido P-3 .
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen27
A una solucion del peptido P-4 (30 mg, 6,2 pmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (7,5 mg, 8,2 pmol) y A/-metilmorfolina (15 pl, 0,14 mmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC- MS y se completo en 1 hora. La mezcla se purifico por HPLC para proporcionar el intermediario 11 (19,7 mg, 59 %). Calculada: [M+3H]3+ (C178H282N59O56S4) m/z = 1.424; ESI encontrada: [M+3HHC178H282N59O56S4) m/z = 1.424.
Smtesis del Intermediario 12
A una solucion del intermediario 11 (15 mg, 2,8 pmol) en DMF (1,5 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy7, succinimidil ester (4 mg, 4,3 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 48 horas. La purificacion por RP-HPLC dio el intermediario 12 (5,0 mg, 30 %). Calculada: [M+3H]3+ (C213H322N61O63S6) m/z = 1.645; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C213H322N61O63S6) m/z = 1.645.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-15
La mezcla del intermediario 12 (1,1 mg, 0,18 pmol) y mPEG(2K)-ONH2 (1 mg, 0,5 pmol) en tampon de glicina (1 ml, 0,1 M, anilina 20 mM, pH 3,0) y acetonitrilo (0,2 ml) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 1 dfa. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-15 (0,6 mg, 42 %).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen28
A una solucion de peptido P-5 (20 mg, 5,2 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (6 mg, 6,6 pmol) y A/-metilmorfolina (12 pl, 109 pmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC-MS y se completo por lo general en 1 hora. La mezcla se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
A una solucion de la mezcla anterior en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadio ester del acido 3- maleimidopropionico-Pip (2,5 mg, 7,5 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 20 (7,3 mg, 30 % para dos etapas). Calculada: [M+3H]3+ (C156H250N53O46S4) m/z = 1.244; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C156H250N53O46S4) m/z = 1.244.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-16
La mezcla del intermediario 20 (1,4 mg, 0,3 pmol) y mPEG(40K)-SH (14 mg, 0,35 pmol) en tampon PBS-EDTA (2 ml, NaCl 137 mM, Na2HPO4 7 mM, KCl 3 mM, K3PO4 1,4 mM, EdtA 4 mM, pH 7,4) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-16 (6,5 mg, 49 %).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen29
Smtesis del Intermediario 21
A una solucion del peptido P-7 (20 mg, 4,1 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (6 mg, 6,6 pmol) y A/-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC-MS y se completo en 1 hora. La mezcla se purifico por RP-HPLC para proporcionar el intermediario 21 (9 mg, 40 %). Calculada: [M+3H]3+ (C182H289N60O58S4) m/z = 1.458; ESI encontrada: [M+3H]3+(C-,82H289N60O58S4) m/z = 1.458.
Smtesis del Intermediario 22
A una solucion del intermediario 21 (9 mg, 1,6 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy7, ester succinimidflico (3 mg, 3,1 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 24 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 22 (4,9 mg, 50 %). Calculada: [M+3H]3+ (C217H329N62O65S6) m/z = 1.679; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C217H329N62O65S6) m/z = 1.679.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-33
La mezcla del intermediario 22 (0,9 mg, 0,15 pmol) y mPEG(10K)-ONH2 (3 mg, 0,3 pmol) en tampon de glicina (1 ml, 0,1 M, anilina 20 mM, pH 3,0) y acetonitrilo (0,2 ml) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 3 dfas. Despues que la reaccion se completo, se anadio acetofenona (10 pl, 86 pmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-33 (0,8 mg, 38 %).
La molecula de suministro selectivo SDM-34 se preparo analogamente a SDM-33 a partir del intermediario 22.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen30
Smtesis del Intermediario 23
A una solucion del peptido P-8 (10 mg, 1,7 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (4 mg, 4,4 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol) con agitacion. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 23 (5,4 mg, 48 %).
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-36
A una solucion del producto intermediario 23 (5,4 mg, 0,82 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy7, ester succinimidflico (3 mg, 3,1 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 36 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono SDM-36 (0,7 mg, 13%).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-37 se prepararon analogamente a SDM-36 a partir del peptido P-8.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen31
Smtesis del Intermediario 24
A una solucion del peptido P-10 (10 mg, 1,4 pmol) en tampon PBS (1 ml, pH 7,4) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadio maleimida de Cy5 (4 mg, 4,4 pmol) con agitacion. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 24 (7,9 mg, 79 %).
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-38
A una solucion del intermediario 24 (7,9 mg, 1,1 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy7, ester succinimid^lico (2 mg, 2,0 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 36 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono moleculas de suministro selectivo SDM-38 (1,7 mg, 19 %).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-39 se prepararon analogamente a SDM-38 a partir del peptido P-10.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen32
A una solucion del peptido P-8 (10 mg, 1,7 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy7 (4 mg, 4,2 pmol) y W-metilmorfolina (10 pl, 91 pmol) con agitacion. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 23 (3,1 mg, 28 %).
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-40
A una solucion del intermediario 23 (3,1 mg, 0,47 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carboxflico Cy5, ester succinimidflico (2 mg, 2,1 pmol) y W-metilmorfolina (5 pl, 46 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 24 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono SDM-40 (1,4 mg, 41 %).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
imagen33
Sintesis del Intermediario 26
La mezcla del intermediario 8 (3 mg, 0,64 pmol) y Cy7-ONH2 (3 mg, 2,9 pmol) en tampon de glicina (4 ml, 0,1 M, anilina 20 mM, pH 3,0) y acetonitrilo (0,1 ml) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 36 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 26 (1,1 mg, 31 %). Calculada: [M+3H]3+ (C189H288N55O50S6) m/z = 1.441; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C189H288N55O50S6) m/z = 1.441. Se preparo Cy7-ONH2 a partir de Cy7-COoH y 2-[N-ftalimido- (aminooxi)]etanamina en condiciones estandar de acoplamiento de amida seguido por la eliminacion del grupo protector ftalimida con hidrazina. Se preparo 2-[N-ftalimido-(aminooxi)]etanamina a partir de N-Boc-etanolamina y N-hidroxiftalimida, disponibles comercialmente, mediante una reaccion de Mitsunobu seguida por la escision del grupo Boc con TFA.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
A una solucion del intermediary 26 (1,1 mg, 0,2 pmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente se anadieron ester del acido 3-maleimidopropionico-Pfp (0,5 mg, 1,5 pmol) y W-metilmorfolina (5 pl, 45 pmol). La mezcla resultante anterior se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 36 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono el intermediario 27 (0,8 mg, 75 %). Calculada: [M+3H]3+ (C196H291N56O53S6) m/z = 1.491; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C196H291N56O53S6) m/z = 1.491.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-30
La mezcla del intermediario 27 (0,7 mg, 0,15 pmol) y mPEG(10K)-SH (3 mg, 0,3 pmol) en tampon PBS-EDTA (0,5 ml, NaCl 137 mM, Na2HPO4 7 mM, KCl 3 mM, K3pO}41,4 mM, EDTA 4 mM, pH 7,4) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 40 horas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-30 (1,2 mg, 23 %).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-32 y SDM-35 se prepararon analogamente a SDM-30 a partir de los peptidos P-3 y P-4.
Ejemplo 11: Smtesis de SDM-21 a partir del peptido P-6
imagen34
A una solucion del peptido P-6 (30 mg, 7,6 pmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente en la oscuridad se anadieron maleimida de Cy5 (9 mg, 9,4 pmol) y W-metilmorfolina (15 pl, 137 pmol) con agitacion. La reaccion se siguio por LC-MS y se completo en 1 hora. La purificacion por RP-HPLC proporciono el compuesto intermediario 28 (24,9 mg, 68 %). Calculada: [M+3H]3+ (C156H249N52O45S4) m/z = 1.233; ESI encontrada: [M+3H]3+(C-i56H249N52O45S4) m/z = 1.233.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
A una solucion del intermediario 28 (17,7 mg, 3,7 pmol) en DMF (1,5 ml) a temperatura ambiente se anadieron acido carbox^lico Cy7, ester succinimid^lico (5 mg, 5,5 pmol) y A/-metilmorfolina (20 pl, 0,18 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 30 horas. La purificacion de la mezcla por RP-HPLC proporciono el intermediario 29 (7,1 mg, 35 %). Calculada: [M+3H]3+ (C191H289N54O52S6) m/z = 1.455; ESI encontrada: [M+3H]3+ (C191H289N54O52S6) m/z = 1.455.
Smtesis de la molecula de suministro selectivo SDM-21
La mezcla del intermediario 29 (1,8 mg, 0,33 pmol) y mPEG(10K)-ONH2 (4 mg, 0,4 pmol) en tampon de glicina (1 ml, 0,1 M, anilina 20 mM, pH 3,0) y acetonitrilo (0,1 ml) se agito a temperatura ambiente en la oscuridad durante 3 dfas. La purificacion por RP-HPLC proporciono la molecula de suministro selectivo SDM-21 (1,0 mg, 20 %).
Las moleculas de suministro selectivo SDM-19 y SDM-20 se prepararon analogamente a SDM-21 a partir del intermediario 29.
Ejemplo 12: Aumento de la fluorescencia y cambios en el color dependientes de enzima
La molecula de suministro selectivo 9 se disolvio en tampon TCNB (Tris 50 mM, pH 7,5, con cloruro de calcio 10 mM, cloruro de sodio 150 mM, y BRIJ 35 al 0,05 %) a temperatura ambiente a 1 pM. Los espectros de fluorescencia se registraron en el espectrometro de fluorescencia F-2500. El donador de fluorescencia Cy5 se excito mediante el uso de luz de 625 nm y la emision se escaneo de 660 a 800 nm. La emision del donador Cy5 alcanzo su maximo a -670 nm y el pico de emision del aceptor FRET Cy7 fue -780 nm como se muestra en la Figura 2. La escision del peptido se inicio con la adicion de metaloproteinasa-2 de la matriz (MMP-2) a una concentracion final de 1 nM. La reaccion de escision se completo dentro de 2 horas y los espectros de fluorescencia indicaron interrupcion de FRET y un gran aumento de 8 veces en la emision del donador Cy5 y una disminucion de 2 veces en la emision de Cy7. La disminucion real de la fluorescencia intrmseca de Cy7 es mas grande, sin embargo, se enmascara por el pico de longitud de onda largo de Cy5. Este resultado demuestra que SDM-9 tiene una transferencia de energfa eficiente de Cy5 a Cy7 en el peptido intacto.
Ejemplo 13: Aumento de la fluorescencia y cambios en el color dependientes de enzima
La molecula de suministro selectivo 10 se disolvio en tampon TCNB (pH 7,5) a temperatura ambiente a 1 pM. Los espectros de fluorescencia se registraron en el espectrometro de fluorescencia F-2500. La excitacion del donador de fluorescencia Cy5 se excito a 625 nm y la emision se midio a 669 nm. La escision del peptido se inicio con la adicion de MMP-9 a una concentracion final de 1 nM. La reaccion de escision se completo dentro de 2 horas y la fluorescencia se mejoro >100 veces tras la escision de la proteasa, Figura 3. La gran respuesta de fluorescencia demuestra que el extintor de colorante extingue eficientemente el fluoroforo Cy5 en la SDM-10 sin escindir.
Ejemplo 14: Respuesta fluorogenica de homogenatos tumorales
Las celulas HT1080 (Cat. # CCL-121, American Type Culture Collection, VA, EE.UU.) se cultivaron en condiciones de crecimiento exponencial en atmosfera humidificada de CO2 al 5 % en aire a 37 °C hasta alcanzar 80-100 % de confluencia antes de la cosecha para la implantacion en el raton. Cada raton desnudo se inmovilizo con la mano y se inyecto con 2 * 106 celulas HT-1080 en la almohadilla de grasa mamaria mediante el uso de una aguja 25 G. Los tumores HT-1080 se cosecharon cuando alcanzaron un tamano de 100-200 mm3 (tfpicamente de 1-2 semanas despues de la implantacion de las celulas tumorales).
Los tumores HT-1080 se homogenizaron mediante el uso de disrupcion ultrasonica. Se mezclaron MMP-9 1 nM o 10 pl de homogenatos de tejido tumoral (TH2 y TH3) con SDM-10 1 pM en 100 pl de tampon durante 24 horas a 37 °C. La molecula de suministro selectivo 6 se uso como un control de fluorescencia de tamano similar a la SDM-10 intacta. Las muestras se cargaron en un gel de poliacrilamida y se separaron mediante el uso de electroforesis. Los datos se muestran en la Figura 4 y demuestran que SDM-10 es esencialmente no fluorescente antes de la escision. Despues de la incubacion con homogenatos tumorales HT-1080, SDM-10 se escinde y se vuelve altamente fluorescente. El GM6001 es un inhibidor general de amplio espectro de MMP. El hecho de que GM6001 inhibe la escision demuestra que la escision del homogenato se debe a las MMP asociadas al tumor.
Ejemplo 15: Ensayo de obtencion de imagenes in vivo para el contraste del tumor
El modelo de xenoinjerto HT-1080 se genero como se describio en el Ejemplo 14 y se uso para evaluar la capacidad de las moleculas para proporcionar contraste de fluorescencia tumoral in vivo en comparacion con el tejido circundante. Los conjugados fluorescentes se probaron en ratones portadores de tumores HT-1080 una vez que los tumores habfan alcanzado un tamano de 100-200 mm3 (tfpicamente de 1-2 semanas despues de la implantacion de las celulas tumorales). Los ratones con tumor HT-1080 conscientes se restringieron mediante el uso de un inyector de cola giratorio (Cat. # RTI; Braintree Scientific, MA, EE.UU.) y se dosificaron por via intravenosa (vena de la cola) con el compuesto de prueba a entre 0,1 y 5 nanomoles por raton en 100 pl de solucion salina. En la preparacion para la obtencion de imagenes, los
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
ratones se anestesiaron ligeramente con una mezcla de ketamina/xilazina (Cat. # K-113; Sigma, Aldrich, MO, EE.UU.) administrada por v^a intraperitoneal (1 pl/gramo de peso corporal) para minimizar el movimiento.
Se realizaron imagenes seriadas del cuerpo completo (incluido el tumor) mediante el uso de un sistema de visualizacion de imagenes fluorescentes de animales completos o un estereomicroscopio fluorescente Olympus. Los ratones se colocaron sobre sus espaldas y las imagenes se realizaron desde la parte superior para obtener una imagen del lado ventral del animal. Las longitudes de onda de excitacion y emision se seleccionaron en base al colorante fluorescente usado. El contraste se calculo mediante el uso de la siguiente ecuacion:
Contraste = (Intensidad de la fluorescencia del tumor - Intensidad de la fluorescencia del tejido colateral del
torax)/(Intensidad del tejido colateral del torax).
El contraste mayor que 0,4 en el animal completo se detecta facilmente a simple vista en la imagen del animal completo y es un buen contraste. El contraste > 0,7 es un contraste alto.
Los ratones se fotografiaron varias veces entre 1-24 horas despues de la inyeccion.
Los datos representativos de imagenes dos horas despues de la dosificacion para la molecula de suministro selectivo 6 en 3 ratones diferentes se muestran en la Figura 1. En esta imagen particular, el contraste promedio es 1,1. Se probaron otros compuestos de manera similar y los resultados de contraste se dan en latabla 1.
Tabla 1: Resumen de los datos de contraste in vivo de conjugado peptfdico del modelo de xenoinjerto HT-1080.
Molecula de suministro selectivo
Contraste maximo (> 0,4 = bueno; > 0,9 = alto) Tiempo hasta el contraste maximo (horas) (muy rapido < 4; 4 < rapido < 12; > 12 lento)
1
Bueno Rapido
2
Alto Rapido
3
Alto Lento
4
5
6
Alto Muy rapido
7
Alto Lento
8
Bueno Muy rapido
9
Alto Rapido
Ejemplo 16: Distribucion in vivo y compuestos con acumulacion tisular mejorada
Para determinar la acumulacion total de colorante en diversos organos, se sacrificaron ratones con xenoinjerto HT-1080 y se colectaron muestras de tejido de sangre, tugado, rinon y tumor 6 horas despues de que los compuestos se administraron por via iv a traves de la vena de la cola. Se usaron 3-4 ratones para cada punto de datos. Las muestras de sangre se almacenaron a 4 °C durante toda la noche y despues se centrifugaron a 15.000 rpm para separar el suero. Los organos se mezclaron en un tampon ProK (Prok 0,25 mg/ml, ADNasa 0,1 mg/ml, NaCl 150 mM, Tris 10 mM pH 8,0, SDS al 0,2 %) a 10 pl/mg de tejido y se cortaron en piezas pequenas mediante el uso de tijeras. El tejido/solucion de digestion se sonico despues durante 1 minuto a un ciclo de trabajo del 67 % y se digirio durante toda la noche a 37 °C. Despues de la digestion, la muestra se centrifugo a 15.000 rpm y el homogenato de tejido se retiro por aspiracion y se almaceno a 4 °C.
La concentracion en tejido de compuestos fluorescentes se determino a partir de curvas patron de fluorescencia generadas por la adicion en concentraciones conocidas de compuestos administrados en homogenatos de suero y tejido (a varias diluciones) de animales controles que no se inyectaron con el compuesto. El rango lineal para cada compuesto se determino para cada tejido. Las mediciones de fluorescencia se realizaron en un lector de placas fluorescentes o en un espectrometro de fluorescencia. Los resultados de la biodistribucion tisular de las moleculas de suministro selectivo 1, 2 y 6 se muestran en la Figura 5. Un resultado sorprendente fue que la molecula de suministro selectivo 6 tiene una distribucion tisular 5 veces mayor en el tumor en comparacion con las moleculas de suministro selectivo 1 y 2. Este resultado inesperado se debe al nucleo asimetrico compuesto de numeros desiguales de peptidos cargados positiva y negativamente de la cadena principal. Las moleculas de suministro selectivo 1 y 2 tienen numeros iguales que dan un nucleo neutral neto, mientras que la molecula de suministro selectivo 6 tiene una carga neta 3+ debido a mas argininas cargadas positivamente. Esto demuestra que los compuestos con numero diferente de aminoacidos acidos y basicos tienen propiedades de biodistribucion in vivo utiles y mejoradas sobre las moleculas simetricas.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Marcaje de fluorescencia de ganglios linfaticos cervicales metastasicos despues de la administracion intravenosa y peritumoral de SDM fluorescentes en ratones portadores de tumores.
El modelo y los ensayos siguientes se usaron para determinar la capacidad de las SDM fluorescentes para detectar metastasis de cancer a ganglios linfaticos en ratones BALB/c inmunocompetentes (Charles River, Wilmington, MA 01887) portadores de tumores de oreja singenicos.
Modelo de raton. Los ratones se alojaron en grupos de 4 en jaulas desechables de IVC ventiladas individualmente (Innovive, Inc., San Diego, CA 92121) y tuvieron libre acceso al alimento de laboratorio estandar (Cat. # 2018, Harlan Laboratories, Inc. Indianapolis, IN 46250) y agua potable. Los animales se mantuvieron en condiciones ambientales controladas (ciclo de luz/oscuridad de 12 horas/12 horas) durante al menos 5 dfas antes de la implantacion de la celula tumoral. Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo por el protocolo IACUC aprobado # EB11-002-009A. El tumor murino 4T1 (Numero ATCC®: CRL-2539™) y el carcinoma mamario (Polyoma Middle T 8119 subclone "PyMT 8119") de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA 20108) y la Universidad de San Diego, California (UCSD, La Jolla, CA 92093), respectivamente, se cultivaron por separado mediante el uso de tecnicas de cultivo celular estandar. Las celulas tumorales (4x105 celulas tumorales/50 pl/raton) se suspendieron en DPBS/Matrigel™ (vol 1:1) y se inyectaron por via subcutanea en el pabellon de la oreja de raton por encima del cartflago auricular para la induccion del tumor primario. La obtencion de las imagenes in vivo de los ganglios linfaticos cervicales metastasicos en los ratones portadores de tumor en la oreja usados como modelo murino sustituto de cancer de mama metastasico tuvieron lugar de diecisiete a veinte dfas despues de la implantacion de la celula tumoral.
Administracion del compuesto SDM de prueba. Para la administracion intravenosa (inyeccion en la vena de la cola) de las SDM, los ratones se restringieron en un inyector de cola giratorio (Cat. # RTI, Braintree Scientific, Inc., Braintree, MA 02185) y el compuesto de prueba (5-120 pM; 100 pl/raton) se inyecto en el raton mediante el uso de unajeringa de insulina 28 G1/2 (Cat. # 14-826-79, Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ 07417). Para realizar la inyeccion peritumoral de SDM, se sedaron los ratones implicados mediante el uso de una mezcla de ketamina/xilazina (Ketaject® y Xyla-ject®, Phoenix Pharmaceuticals, St. Joseph, MO 64506) administrada por via intraperitoneal y el compuesto de prueba (5-120 pM; 30-60 pl/oreja) se inyecto por via subcutanea alrededor del tumor primario y el pabellon de la oreja contralateral mediante el uso de una aguja PrecisionGlide™ 30 G (Cat. # 305106, Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ 07417). Despues de la dosificacion, cada raton se devolvio a la jaula asignada y se mantuvo en condiciones ambientales controladas antes de la obtencion de imagenes. Imagen de fluorescencia de los ganglios linfaticos cervicales 1-24 horas despues de la administracion del compuesto como se describe mas abajo.
Imagenes de fluorescencia. Para obtener imagenes de los ganglios linfaticos cervicales, cada raton se anestesio profundamente con una mezcla de ketamina/xilazina administrada intraperitonealmente. El raton anestesiado profundamente se transfirio a una pieza de corcho negro (4x4 pulgadas, Quartet®, ACCO Brands, Lincolnshire, IL 60069, EE.UU.) para la diseccion directa y toma de las imagenes de los ganglios linfaticos cervicales mediante el uso de un estereomicroscopio fluorescente computarizado (SZX10, Olympus Optical, CO, LTD, Japon) equipado con filtros de fluorescencia apropiados tanto para la deteccion de la fluorescencia de intensidad unica como para la deteccion de la razon de fluorescencia de dos fluoroforos. Por ejemplo, los filtros para Cy5 y Cy7 se usaron para SDM basadas en FRET con el par FRET Cy5 y Cy7. Despues de la obtencion de imagenes de fluorescencia in vivo (ver mas abajo el metodo para la obtencion de imagenes por razon), los ganglios linfaticos cervicales se extirparon quirurgicamente, se fijaron en formalina tamponada al 10 % y se procesaron para histologfa (tincion con hematoxilina y eosina) para evaluar la correlacion fluorescencia/cancer y determinar el rendimiento diagnostico de las SDM.
Metodo de obtencion de imagenes por razon de emisiones. Las imagenes de fluorescencia se adquirieron mediante el uso de un estereomicroscopio de investigacion Olympus SZX10 (Olympus America, Center Valley, PA). Para las SDM basadas en FRET Cy5 y Cy7 se usaron un filtro de excitacion centrado a 620 nm (Chroma ET620/60x, Chroma Technology Corp. Bellows Falls, VT) y filtros de emision centrados a 700 nm y 810 nm (filtros Chroma ET700/75m y ET810/90m) para producir dos imagenes a diferentes longitudes de onda de emision. Las imagenes se adquirieron con una camara Orca- R2 (Hamamatsu, Bridgewater, NJ) conectada a una computadora con Windows. Se usaron dos metodos para determinar las razones de emisiones para los ganglios linfaticos. Para un metodo, la intensidad se promedio sobre una region de interes (ROI, por sus siglas en ingles) trazada para incluir parte o la totalidad del ganglio linfatico de interes. La razon de emisiones se calculo despues a partir de los datos de intensidad para cada region de interes.
Razon de emisiones de Roi = (roiInt1/Exp1)/(Int2/Exp2) (ecuacion 1)
donde:
roiInt1 = intensidad promedio para ROI a la longitud de onda de emision 1 con filtro ET700/75 m Exp1 = tiempo de exposicion usado para Int1
roiInt 2 = intensidad promedio para ROI a la longitud de onda de emision 2 con filtro ET810/90 m Exp 2 = tiempo de exposicion usado para Int2
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Un segundo metodo usado para determinar las razones de emisiones se baso en el promedio de la razon de emisiones de una region de interes (ROI) trazada para incluir parte o la totalidad del ganglio linfatico de interes tornado de una imagen de razon de emisiones. Las imagenes de razon de emisiones se produjeron mediante el uso de una forma modificada de la ecuacion I que incluye un factor de escala de modo que los valores de los pfxeles cayeran entre 0 y 255 para una imagen de 8 bits.
Razon de emisiones Px = k* (pxInt1/Exp1)/(pxInt2/Exp2) (ecuacion 2)
donde:
k = factor de escala
pxIntl = intensidad de pixel en la longitud de onda de emisiones 1 con filtro ET700/75 m Exp1 = tiempo de exposicion usado para Inti
pxInt 2 = intensidad de pixel en la longitud de onda de emisiones 2 con filtro ET810/90 m Exp 2 = tiempo de exposicion usado para Int2
Las razones de emisiones para los ganglios linfaticos dieron resultados similares cuantitativamente mediante el uso de cualquiera de los metodos.
Los ganglios linfaticos se identificaron como metastasicos o no metastasicos por un patologo basado en la tincion de H y E. El contraste de razon de emisiones para cada SDM (molecula de suministro selectivo) se cuantifico despues mediante la division de la razon de emisiones promedio de los ganglios metastasicos por las emisiones promedio de los ganglios no metastasicos y la resta de uno como se muestra en la ecuacion 3:
ERC = MetAV/ConAV - 1 (ecuacion 3)
donde:
ERC = contraste de razon de emisiones
MetAV = razon de emisiones promedio de ganglio linfatico metastasico
ConAV = razon de emisiones promedio de ganglio linfatico contralateral no metastasico
Se muestra en la Figura 6 un ejemplo de una imagen de razon de emisiones. El panel de la mano derecha muestra la imagen de la razon que muestra un contraste alto entre el ganglio linfatico metastasico (ganglio muy grande indicado con la flecha oscura inferior izquierda) y los ganglios no metastasicos (otras flechas). La razon mas alta se muestra como pfxeles mas claros (metastasicos) en comparacion con los pfxeles mas oscuros de la razon mas baja para los ganglios no metastasicos.
Util para detectar ganglios linfaticos cancerosos, un contraste de 20 a 50 % se considero bueno, un aumento de 50 a 100 % se considero alto, mientras que un aumento mayor que 100 % se considero un contraste muy alto.
Tabla 2: Resumen de los datos de contraste de razon in vivo de SDM del modelo tumoral murino 4T1.
Molecula de suministro selectivo
IV contraste maximo (Bajo < 20 %, Bueno 20 % a 50 %, Alto > 50 % a 100 % Muy alto > 100 %) Contraste maximo peritumoral (Bajo < 20 %, Bueno 20 % a 50 %, Alto > 50 % a 100 %, Muy alto > 100%)
SDM-9
nd Bajo
SDM-11
nd Bajo
SDM-12
nd Bueno
SDM-13
Bueno Bueno
SDM-14
Bueno Muy alto
SDM-19
Bueno
SDM-20
Bajo
SDM-21
nd Bueno
SDM-22
Bajo
SDM-23
Alto Muy alto
SDM-24
Muy alto Muy alto
SDM-25
Muy alto Muy alto
SDM-27
Muy alto nd
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Molecula de suministro selectivo
IV contraste maximo (Bajo < 20 %, Bueno 20 % a 50 %, Alto > 50 % a 100 % Muy alto > 100 %) Contraste maximo peritumoral (Bajo < 20 %, Bueno 20 % a 50 %, Alto > 50 % a 100 %, Muy alto > 100%)
SDM-28
Bueno Alto
SDM-29
nd Alto
SDM-30
nd Muy alto
SDM-31
Bajo nd
SDM-32
Muy alto Muy alto
SDM-33
Bajo Alto
SDM-35
Muy alto Bueno
SDM-36
Alto Bueno
SDM-37
Bajo nd
SDM-38
Bueno nd
SDM-39
Bueno Alto
SDM-40
nd Alto
Ejemplo 18: Ensayo de actividad tumoral PvMT 8119 de raton ex vivo: Escision de SDM y respuesta de la razon de emisiones FRET en tejido de cancer de raton en comparacion con tejido no canceroso
Se colectaron muestras de tejido tumoral y muscular de ratones portadores del tumor PyMT8119 y se congelaron a -80 °C. Los tejidos se descongelaron y se homogenizaron en tampon TCNB fno (pH 7,5, Tris-HCl 50 mM, CaCl210 mM, NaCl 150 mM y Brij35 al 0,05 %) a 100 mg/200 jl mediante el uso de disrupcion ultrasonica (VCX500, Sonics & Materials Inc, Newtown, CT). Despues que los homogenatos se centrifugaron a 15.000 g a 4 °C durante 20 min, se colectaron los sobrenadantes. Se anadio a los sobrenadantes (90 jl) APMA (p-aminofenilmercurico acetato, 90 jl, 2 mM en tampon TCNB). Las mezclas resultantes se incubaron a 37 °C durante 1 hora antes del uso. Se usaron 500 nM de SDM-23 para la escision de 45 jl de sobrenadantes de tejido activado (volumen final: 50 jl). El ensayo se llevo a cabo mediante el uso de un espectrometro SpectraMax M2 con software SoftMax Pro v4.5. Las senales de fluorescencia de (Aex, 620 nm, Aem, 670 nm), (Aex, 620 nm, Aem, 773 nm) y (Aex, 720 nm; Aem, 773 nm), donde Aex y Aem representan las longitudes de onda de excitacion y emision, respectivamente, se midieron como una funcion del tiempo a temperatura ambiente. Las muestras se midieron portriplicado y la escision de la SDM FRET resulto en un aumento de la razon de emisiones de fluorescencia de Cy5/Cy7 donde se uso la senal Cy5 (Aex, 620 nm, Aem, 670 nm) y Cy7 (Aex, 620 nm, Aem, 773 nm) en condiciones experimentales.
La actividad enzimatica de los tejidos resulto en la escision de SDM-23 y genero un gran aumento de la razon de emisiones de FRET (tumor primario marcado), como se muestra en la Figura 7. El aumento de la razon es el resultado de la escision de la SDM. Estos datos muestran que la SDM-23 es muy activa en los tejidos de cancer de mama de raton y la escision es significativamente mayor en el tejido canceroso en comparacion con el musculo normal, que no muestra actividad en este ensayo.
Ejemplo 19: Ensayo de tejido humano ex vivo: Escision de SDM y respuesta de la razon de emisiones FRET en tejido de cancer humano en comparacion con tejido no canceroso
Muestras de tejido de cancer de mama humano y tejido de mama humano normal (proporcionado por Cancer Human Tissue Network) se homogenizaron en tampon TCNB fno (pH 7,5, Tris-HCl 50 mM, CaCl210 mM, NaCl 150 mM y Brij35 al 0,05 %) a 100 mg/200 jl mediante el uso de disrupcion ultrasonica (VCX500, Sonics & Materials Inc, Newtown, CT). Despues que los homogenatos se centrifugaron a 15.000 g a 4 °C durante 20 min, se colectaron los sobrenadantes. Se usaron 500 nM de SDM para la escision de 45 jl de sobrenadante tisular (volumen final: 50 jl) en el ensayo a menos que se indique de cualquier otra manera. El ensayo se llevo a cabo mediante el uso de un espectrometro SpectraMax M2 con software SoftMax Pro v4.5. Las senales de fluorescencia de (Aex, 620 nm, Aem, 670 nm), (Aex, 620 nm, Aem, 773 nm) y (Aex, 720 nm; Aem, 773 nm), donde Aex y Aem representan las longitudes de onda de excitacion y emision, respectivamente, se midieron como una funcion del tiempo a temperatura ambiente. Las muestras se midieron por triplicado y la escision de la SDM FRET resulto en un aumento de la razon de emisiones de fluorescencia de Cy5/Cy7 donde se uso la senal Cy5 (Aex, 620 nm, Aem, 670 nm) y Cy7 (Aex, 620 nm, Aem, 773 nm) en condiciones experimentales. Un ejemplo mediante el uso de SDM-25 se muestra en la Figura 8. Otras SDM se evaluaron mediante el uso del mismo procedimiento. La respuesta de fluorescencia dependiente de la escision, ademas, puede cuantificarse como la velocidad de escision (delta razon por tiempo), como se muestra en la Figura 9 para SDM-25 y SDM-32. Las velocidades se calcularon a partir de la pendiente de los datos de tiempo 0 a 300 minutos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Las principales medidas de rendimiento de un agente de diagnostico son la sensibilidad y la especificidad. La sensibilidad se relaciona con la capacidad de diagnosticar correctamente las pruebas positivas. Mientras que la especificidad se relaciona con la capacidad de diagnosticar correctamente las pruebas negativas.
Como un ejemplo de rendimiento alto de diagnostico de una SDM FRET, usamos los datos generados a partir de SDM- 24 en el modelo de ganglio linfatico metastasico de raton 4T1. La SDM-24 se administro mediante inyeccion IV a traves de la vena de la cola. Despues de 3 a 6 horas, se tomaron imagenes de los ganglios linfaticos de los ratones mediante el uso de obtencion de imagenes por la razon de fluorescencia como se describio anteriormente para determinar si el ganglio linfatico tema o no una razon alta (cancer diagnosticado positivo) o una razon baja (cancer diagnosticado negativo). La sensibilidad y la especificidad se determinaron mediante el uso de la caractenstica operativa del receptor (ROC, por sus siglas en ingles) o curvas ROC (
http://en.wikipedia.org/wiki/Receiver_operating_characteristic). Para el analisis de la curva ROC, los datos se dividen en una clasificacion binaria de positivos y negativos basada en un valor umbral para la razon de emisiones. La curva ROC grafica la fraccion verdadera positiva de positivos (tasa de verdaderos positivos) frente a la fraccion falsa positiva de negativos (tasa de falsos positivos).
Los verdaderos positivos, falsos positivos, negativos verdaderos y falsos negativos se determinaron mediante la comparacion de la prediccion basada en los datos de la razon de emisiones de fluorescencia y el valor umbral con la asignacion positiva o negativa realizada por un patologo mediante el uso de tincion con H y E. Los valores de la razon de emisiones para el cancer positivo y negativo (segun lo determinado por histopatologfa de H y E) se muestran en la Figura 10. El valor umbral se ajusto gradualmente de menor a mayor para obtener una curva ROC completa desde (1, 1) o todos los positivos hasta (0, 0) o todos los negativos. Una curva ROC se muestra en la Figura 11. Se usaron datos de 48 ganglios linfaticos para generar esta curva. Tenga en cuenta que la sensibilidad y la especificidad pueden determinarse para cada punto en la curva ROC. La sensibilidad es la tasa de verdaderos positivos, mientras que la especificidad es uno menos la tasa de falsos positivos. Las ecuaciones usadas para generar la curva ROC se muestran mas abajo.
TPR = TP/(TP+FN)
FPR = FP/(FP+TN)
Donde:
TPR = tasa de verdaderos positivos FPR = tasa de falsos positivos TP = # de verdaderos positivos TN = # de verdaderos negativos FP = # de falsos positivos FN = # de falsos negativos
En este ejemplo, tanto la sensibilidad como la especificidad son del 100 % para todos los valores umbral entre 5,65 y 7,15. Esto significa que todos los ganglios linfaticos se identificaron correctamente con el metodo de razon de emisiones FRET en comparacion con el estandar de oro, la histopatologfa. En general, los valores de sensibilidad y especificidad > 90 % se consideran muy altos.
Ejemplo 21: Uso de una SDM para visualizar el cancer en pacientes con cancer de mama
La SDM-25 se administra por via intravenosa a una paciente con cancer de mama. Los restos fluorescentes en SDM-25 se captan por celulas y/o tejidos cancerosos despues de la escision del enlazador. Se irradia una fuente de luz sobre el tejido objetivo. Los restos fluorescentes emiten luz la cual se detecta por una camara o un detector. Los datos obtenidos por la camara o el detector se procesan para generar una imagen que permite al cirujano visualizar celulas o tejidos cancerosos. El cirujano extirpa dicho tejido para la biopsia.
Ejemplo 22: Uso de una SDM para visualizar el cancer en pacientes con cancer de prostata
La SDM-26 se suministra por via intravenosa a un paciente con cancer de prostata. Los restos fluorescentes en SDM-26 se captan por celulas y/o tejidos cancerosos despues de la escision del enlazador. Se irradia una fuente de luz sobre el tejido objetivo. Los restos fluorescentes emiten luz la cual se detecta por una camara o un detector. Los datos obtenidos por la camara o el detector se procesan para generar una imagen que permite al cirujano visualizar celulas o tejidos cancerosos. El cirujano extirpa dicho tejido para la biopsia.
Ejemplo 23: Uso de una SDM para visualizar el cancer en pacientes con cancer (escamoso) de cabeza y cuello
La SDM-27 se suministra por via intravenosa a un paciente con cancer de cabeza y cuello. Los restos fluorescentes en SDM-27 se captan por celulas y/o tejidos cancerosos despues de la escision del enlazador. Se irradia una fuente de luz sobre el tejido objetivo. Los restos fluorescentes emiten luz la cual se detecta por una camara o un detector. Los datos
obtenidos por la camara o el detector se procesan para generar una imagen que permite al cirujano visualizar celulas o tejidos cancerosos. El cirujano extirpa dicho tejido para la biopsia.
Ejemplo 24: Uso de una SDM para visualizar el cancer en pacientes con melanoma 5
La SDM-24 se suministra por via intravenosa a un paciente con melanoma. Los restos fluorescentes en SDM-24 se captan por celulas y/o tejidos cancerosos despues de la escision del enlazador. Se irradia una fuente de luz sobre el tejido objetivo. Los restos fluorescentes emiten luz la cual se detecta por una camara o un detector. Los datos obtenidos por la camara o el detector se procesan para generar una imagen que permite al cirujano visualizar celulas o tejidos cancerosos. 10 El cirujano extirpa dicho tejido para la biopsia.
Ejemplo 25: Uso de una SDM para visualizar el cancer en pacientes con cancer de tiroides
La SDM-32 se administra por via intravenosa a un paciente con cancer de tiroides. Los restos fluorescentes en SDM-32 15 se captan por celulas y/o tejidos cancerosos despues de la escision del enlazador. Se irradia una fuente de luz sobre el tejido objetivo. Los restos fluorescentes emiten luz la cual se detecta por una camara o un detector. Los datos obtenidos por la camara o el detector se procesan para generar una imagen que permite al cirujano visualizar celulas o tejidos cancerosos. El cirujano extirpa dicho tejido para la biopsia.

Claims (10)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    Reivindicaciones
    1. Una molecula de suministro selectivo de Formula I, que tiene la estructura:
    [Da-ca]-A-[cm-M]-X-B-[cb-Db] Formula I
    en donde,
    X es un enlazador peptidico escindible por una metaloproteinasa de la matriz;
    A es un peptido con una secuencia que consiste de 5 glutamates consecutivos;
    B es un peptido con una secuencia que consiste de 8 argininas consecutivas; ca, cb y cm son cada uno independientemente de 0-1 aminoacido;
    M es un polfmero de polietilenglicol (PEG) que tiene un peso molecular promedio de 500 Da, 2 kDa, 5 kDa o 10 kDa;
    cualquier M se une directamente (cm = 0) o indirectamente (cm = 1) a A, B o X, o a enlazadores entre X y A;
    Da y Db son un par de restos fluorescentes aceptor y donador que son capaces de experimentar transferencia de energfa de resonancia fluorescente/Forsters con el otro;
    [Da-ca] se une al N-terminal de A;
    [cb-Db] se une al C-terminal de B; y el C-terminal de X se une al N-terminal de B.
  2. 2. Una molecula como se reivindico en la reivindicacion 1, en donde ca, cb y cm se seleccionan cada uno independientemente de D-cistema, D-glutamato, lisina y para-4-acetil L-fenilalanina.
  3. 3. Una molecula como se reivindico en la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, en donde X comprende una secuencia de aminoacidos seleccionada de: PLGLAG (sec. con num. de ident.: 2), PLG-C(me)-AG (sec. con num. de ident.: 1), y RPLALWRS (sec. con num. de ident.: 7).
  4. 4. Una molecula como se reivindico en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde Da y Db se seleccionan de Cy5 y Cy7, Cy5 e IRDye750, Cy5 e IRDye800, o Cy5 e ICG.
  5. 5. Una molecula como se reivindico en la reivindicacion 4, en donde Da y Db son Cy5 y Cy7.
  6. 6. Una molecula como se reivindico en cualquier reivindicacion anterior, en donde M es un polfmero de PEG que tiene un peso molecular promedio de 2 kDa.
  7. 7. Una molecula como se reivindico en la reivindicacion 1, en donde la molecula de Formula I tiene la estructura:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    55
    60
    65
    imagen1
    Una molecula de suministro selectivo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en un metodo in vivo para visualizar un tejido de interes en un individuo.
    Una molecula de suministro selectivo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en un metodo in vivo en la eliminacion quirurgica de un tejido de interes de un individuo.
  8. 10.
    Una molecula de suministro selectivo para su uso en el metodo in vivo como se reivindico en la reivindicacion 9, en donde el margen quirurgico que rodea el tejido de interes disminuye.
  9. 11. 5
    Una molecula de suministro selectivo para usar en el metodo in vivo como se reivindico en la reivindicacion 9 o la reivindicacion 10, en donde el tejido es tejido canceroso.
  10. 12.
    Una molecula de suministro selectivo para usar en el metodo in vivo como se reivindico en la reivindicacion 11, en donde el tejido canceroso es: tejido de cancer de mama, tejido de cancer colorrectal, tejido de carcinoma de celulas escamosas, tejido de cancer de prostata, tejido de melanoma o tejido de cancer de tiroides.
    10
ES12820320.5T 2011-07-29 2012-07-27 Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso Active ES2683377T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161513287P 2011-07-29 2011-07-29
US201161513287P 2011-07-29
PCT/US2012/048732 WO2013019681A2 (en) 2011-07-29 2012-07-27 Selective delivery molecules and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2683377T3 true ES2683377T3 (es) 2018-09-26

Family

ID=47629864

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES12820320.5T Active ES2683377T3 (es) 2011-07-29 2012-07-27 Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso

Country Status (12)

Country Link
US (6) US9278144B2 (es)
EP (2) EP3473273A1 (es)
JP (1) JP6124150B2 (es)
KR (1) KR102004558B1 (es)
CN (1) CN103874512B (es)
AU (1) AU2012290318B2 (es)
CA (1) CA2841249C (es)
DK (1) DK2736533T3 (es)
EA (1) EA030795B1 (es)
ES (1) ES2683377T3 (es)
MX (1) MX350082B (es)
WO (1) WO2013019681A2 (es)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7985401B2 (en) 2003-10-31 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake by cells is controllable
US9695251B2 (en) 2003-10-31 2017-07-04 The Regents Of The University Of California Activatable cell penetrating peptides with quenched fluorophores
EP4032538A3 (en) 2009-03-02 2022-10-26 Massachusetts Institute of Technology Methods and products for in vivo enzyme profiling
AU2010273321A1 (en) 2009-07-15 2012-03-08 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake in cells is controllable
ES2683377T3 (es) 2011-07-29 2018-09-26 Avelas Biosciences, Inc. Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso
US10029017B2 (en) 2013-01-29 2018-07-24 The Regents Of The University Of California Pretargeted activatable cell penetrating peptide with intracellularly releasable prodrug
JP6508781B2 (ja) * 2013-01-30 2019-05-08 アベラス バイオサイエンシーズ，インク． 選択的な送達分子及びその使用方法
EP2988786A4 (en) * 2013-04-22 2016-12-21 Avelas Biosciences Inc COMPOSITIONS FOR SELECTIVE DRUG ADMINISTRATION AND METHOD OF USE
PL405046A1 (pl) * 2013-08-12 2015-02-16 Instytut Biologii Doświadczalnej Im. Marcelego Nenckiego Pan Genetycznie kodowany oparty na FRET biosensor aktywności MMP-9 i jego zastosowanie
US10385380B2 (en) 2014-10-02 2019-08-20 The Regents Of The University Of California Personalized protease assay to measure protease activity in neoplasms
US10596259B2 (en) 2015-05-20 2020-03-24 The Regents Of The University Of California Tumor radiosensitization with monomethyl auristatin E (MMAE) and derivatives thereof
WO2017211278A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Asclepiumm Taiwan Co., Ltd Antibody fusion proteins for drug delivery
US11293868B2 (en) * 2017-04-07 2022-04-05 Avelas Biosciences, Inc. Ratiometric fluorescence imaging methods
WO2018237212A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 The Procter & Gamble Company FILMS COMPRISING A WATER-SOLUBLE LAYER AND AN ORGANIC COATING DEPOSITED IN STEAM PHASE
WO2018237213A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 The Procter & Gamble Company FILMS COMPRISING A WATER-SOLUBLE LAYER AND AN INORGANIC COATING PRESENTED IN STEAM PHASE
CN108096255B (zh) * 2017-12-28 2019-11-12 北京大学 地夫可特用于抑制或治疗胰腺癌的用途
US11054428B2 (en) 2018-03-05 2021-07-06 Massachusetts Institute Of Technology Inhalable nanosensors with volatile reporters and uses thereof
US20220347306A1 (en) * 2018-04-16 2022-11-03 Avelas Biosciences, Inc. Selective delivery of therapeutic and imaging agents
EP3856921A2 (en) 2018-09-25 2021-08-04 Massachusetts Institute Of Technology Lung protease nanosensors and uses thereof
WO2020150560A1 (en) 2019-01-17 2020-07-23 Massachusetts Institute Of Technology Sensors for detecting and imaging of cancer metastasis
CN110075322B (zh) * 2019-05-20 2021-07-06 复旦大学附属妇产科医院 一种靶向GnRH受体的近红外荧光成像探针及其制备方法与应用
EP4034567A4 (en) * 2019-09-23 2023-07-05 Neonc Technologies, Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS WITH POH DERIVATIVES
WO2024233344A1 (en) * 2023-05-05 2024-11-14 The United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs Compositions and methods for treating tendon and bone injuries

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4466919A (en) 1982-12-16 1984-08-21 Monsanto Company Peptide substrates for mammalian collagenase
US4507389A (en) 1982-12-16 1985-03-26 Monsanto Company Determination of collagenase by reacting with peptide substrates
GB8927722D0 (en) 1989-12-07 1990-02-07 British Bio Technology Proteins and nucleic acids
US5747641A (en) 1989-12-21 1998-05-05 Biogen Inc Tat-derived transport polypeptide conjugates
DE69434810T2 (de) * 1993-11-16 2007-08-02 Bracco International B.V. Immobilisiertes markierungsverfahren
US6592847B1 (en) 1998-05-14 2003-07-15 The General Hospital Corporation Intramolecularly-quenched near infrared flourescent probes
US6083486A (en) 1998-05-14 2000-07-04 The General Hospital Corporation Intramolecularly-quenched near infrared fluorescent probes
AU755564B2 (en) 1998-06-20 2002-12-12 Washington University Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
US20020009786A1 (en) 2000-04-18 2002-01-24 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003006043A1 (en) 2001-07-10 2003-01-23 Massachusetts Institute Of Technology Surfactant peptide nanostructures, and uses thereof
WO2005019247A2 (en) 2003-08-15 2005-03-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Cyclic peptide and imaging compound compositions and uses for targeted imaging and therapy
US7985401B2 (en) 2003-10-31 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake by cells is controllable
US9695251B2 (en) 2003-10-31 2017-07-04 The Regents Of The University Of California Activatable cell penetrating peptides with quenched fluorophores
US7431915B2 (en) 2003-10-31 2008-10-07 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake by cells is controllable
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
NZ548256A (en) 2004-02-02 2010-02-26 Ambrx Inc Modified human four helical bundle polypeptides and their uses
EP2322920B1 (en) * 2005-06-07 2014-12-10 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) MALDI tissue imaging using conjugates cleavable by fast fragmentation
NZ602170A (en) 2008-02-08 2014-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
TW201004647A (en) 2008-05-20 2010-02-01 Sigma Tau Ind Farmaceuti Novel dual targeting antitumoural conjugates
WO2010014236A2 (en) * 2008-07-30 2010-02-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Acylhydrazone-based cleavable linkers
WO2010039496A2 (en) 2008-09-23 2010-04-08 The Regents Of The University Of California Nanocarriers for drug delivery
DK2342223T3 (en) 2008-09-26 2017-07-24 Ambrx Inc Modified animal erythropoietin polypeptides and their uses
KR101095841B1 (ko) 2009-02-19 2011-12-21 주식회사 나이벡 표적 선택적 세포／조직 투과기능 활성을 가지는 펩타이드 및 그 용도
RU2011138096A (ru) 2009-03-19 2013-04-27 Дженерал Электрик Компани Агенты для оптической визуализации
WO2010121023A2 (en) 2009-04-15 2010-10-21 The Regents Of The University Of California Peptides and aptamers for targeting of neuron or nerves
AU2010273321A1 (en) 2009-07-15 2012-03-08 The Regents Of The University Of California Peptides whose uptake in cells is controllable
US20130142734A1 (en) * 2010-01-12 2013-06-06 Ayelet David Targeted delivery systems for diagnostic applications
JP5580625B2 (ja) 2010-03-03 2014-08-27 住友化学株式会社 メタンスルホン酸アルキルエステル溶液の製造方法
US20120055055A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Illumin8 Outdoor Media, LLC Systems and Method for Outdoor Media Signage
ES2708662T3 (es) 2011-02-10 2019-04-10 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Oeffentlichen Rechts Péptidos hidrofóbicos modificados para el diagnóstico hepático específico
ES2683377T3 (es) 2011-07-29 2018-09-26 Avelas Biosciences, Inc. Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso
US10029017B2 (en) 2013-01-29 2018-07-24 The Regents Of The University Of California Pretargeted activatable cell penetrating peptide with intracellularly releasable prodrug
JP6508781B2 (ja) 2013-01-30 2019-05-08 アベラス バイオサイエンシーズ，インク． 選択的な送達分子及びその使用方法
EP2988786A4 (en) 2013-04-22 2016-12-21 Avelas Biosciences Inc COMPOSITIONS FOR SELECTIVE DRUG ADMINISTRATION AND METHOD OF USE

Also Published As

Publication number Publication date
US9371367B1 (en) 2016-06-21
CN103874512A (zh) 2014-06-18
EP2736533B1 (en) 2018-07-04
AU2012290318B2 (en) 2016-09-01
KR20140063587A (ko) 2014-05-27
EP3473273A1 (en) 2019-04-24
EP2736533A4 (en) 2015-03-04
JP2014521661A (ja) 2014-08-28
US9278144B2 (en) 2016-03-08
WO2013019681A2 (en) 2013-02-07
CA2841249A1 (en) 2013-02-07
EA201490385A1 (ru) 2014-07-30
EP2736533A2 (en) 2014-06-04
US20180057536A1 (en) 2018-03-01
WO2013019681A3 (en) 2013-07-11
DK2736533T3 (en) 2018-08-06
US9840537B2 (en) 2017-12-12
AU2012290318A1 (en) 2014-01-23
HK1197184A1 (en) 2015-01-09
EA030795B1 (ru) 2018-09-28
MX350082B (es) 2017-08-24
US20150031852A1 (en) 2015-01-29
US20190119327A1 (en) 2019-04-25
KR102004558B1 (ko) 2019-07-26
US10570178B2 (en) 2020-02-25
US20160220707A1 (en) 2016-08-04
US20170044214A1 (en) 2017-02-16
MX2014001138A (es) 2014-07-22
US10239919B2 (en) 2019-03-26
US9504763B2 (en) 2016-11-29
US20160152670A1 (en) 2016-06-02
JP6124150B2 (ja) 2017-05-10
CN103874512B (zh) 2016-11-16
CA2841249C (en) 2023-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2683377T3 (es) Moléculas de suministro selectivo y métodos de uso
US20200376013A1 (en) Selective drug delivery compositions and methods of use
US10363313B2 (en) PSMA ligands and uses thereof
US20220347306A1 (en) Selective delivery of therapeutic and imaging agents
US20210079039A1 (en) Compositions and methods for the selective delivery of therapeutic and imaging agents
HK1197184B (en) Selective delivery molecules and methods of use
JP2025503540A (ja) ホスファチジルセリン複合体