ES2688977T3 - Formulación novedosa de mezclas de soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica/sangre para la reparación de tejidos - Google Patents
Formulación novedosa de mezclas de soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica/sangre para la reparación de tejidos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2688977T3 ES2688977T3 ES10831000.4T ES10831000T ES2688977T3 ES 2688977 T3 ES2688977 T3 ES 2688977T3 ES 10831000 T ES10831000 T ES 10831000T ES 2688977 T3 ES2688977 T3 ES 2688977T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- chitosan
- blood
- hcl
- clot
- nacl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 198
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 197
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 183
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 title description 13
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 title description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title description 8
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 146
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 118
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 99
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 60
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 52
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 22
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 19
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 claims description 8
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 claims description 8
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 8
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 claims description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 57
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 55
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 40
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 38
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 38
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 33
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 28
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 21
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 18
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 14
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol-phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(O)CO XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 5
- -1 polyol phosphate Chemical class 0.000 description 5
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 4
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 3
- 239000000306 component Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 208000013201 Stress fracture Diseases 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052925 anhydrite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- XJHCXCQVJFPJIK-UHFFFAOYSA-M caesium fluoride Inorganic materials [F-].[Cs+] XJHCXCQVJFPJIK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 2
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 2
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 210000005065 subchondral bone plate Anatomy 0.000 description 2
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- UGBLISDIHDMHJX-UHFFFAOYSA-N 1-(4-fluorophenyl)-4-[4-(2-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]butan-1-one;hydrochloride Chemical compound [Cl-].COC1=CC=CC=C1N1CC[NH+](CCCC(=O)C=2C=CC(F)=CC=2)CC1 UGBLISDIHDMHJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- KVEAILYLMGOETO-UHFFFAOYSA-H dicalcium magnesium diphosphate Chemical compound P(=O)([O-])([O-])[O-].[Mg+2].[Ca+2].[Ca+2].P(=O)([O-])([O-])[O-] KVEAILYLMGOETO-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000002149 energy-dispersive X-ray emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 238000000710 polymer precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001487 potassium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical group 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3616—Blood, e.g. platelet-rich plasma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/40—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material
- A61L27/44—Composite materials, i.e. containing one material dispersed in a matrix of the same or different material having a macromolecular matrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/10—Heparin; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Composite Materials (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Una composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl que comprende: a) sangre completa; y b) una solución de quitosano que comprende: quitosano que tiene un peso molecular promedio de Mn <232kDa, HCl, y NaCl a una concentración de 160 mm; en la que la composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl tiene un pH entre 6,0 y 7,8; y en la que la composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl coagula más rápidamente que una composición de sangre/quitosano-HCl-ß-glicerol fosfato.
Description
DESCRIPCIÓN
Formulación novedosa de mezclas de soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica/sangre para la reparación de tejidos 5
CAMPO TÉCNICO
[0001] La presente descripción se refiere a una composición novedosa que comprende mezclas de sangre/quitosano-sal inorgánica en la que las soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica mezcladas con 10 sangre se solidifican más rápidamente que las soluciones de quitosano-p-glicerol fosfato con quitosanos de pesos moleculares específicos.
ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA
15 [0002] El quitosano es un polisacárido lineal compuesto por D-glucosamina (unidad desacetilada) ligada a p-(1-4) y N-acetil-D-glucosamina (unidad acetilada), que se produce principalmente a partir de la desacetilación alcalina de quitina. El quitosano puede existir en muchas conformaciones estructurales, dependiendo de una diversidad de factores que incluyen el grado de hidratación, el entorno de electrolitos y la complejidad de la mezcla original de quitina. El quitosano y sus derivados amino sustituidos son polímeros catiónicos bioerosionables, biocompatibles y 20 biodegradables que han sido avanzados para una amplia diversidad de aplicaciones, incluyendo ingeniería tisular, administración de fármacos y genes, formulación farmacéutica, armazones para el crecimiento celular y encapsulación de células, cicatrización de heridas y hemostasia superficial.
[0003] Una propiedad bien conocida de quitosano es su solubilidad a pH ácido (<6) e insolubilidad a pH neutro, lo 25 que hace que su uso en solución con células vivas y tejidos sea problemático. Diversas publicaciones (Chenite,
publicación de solicitud de patente internacional n.° WO99/07416; Chenite y col., 2000, Biomater., 21:2155-2161 ; Chenite y col., 2001, Carbohyd. Polym., 46:39-47) describen que mezclar una sal dibásica de poliol-fosfato, es decir, glicerol fosfato (GP), con una solución acuosa de quitosano puede aumentar el pH de la solución mientras se evita la precipitación del polímero. En presencia de estas sales particulares, las soluciones de quitosano de concentración 30 sustancial (0,5-3 %) y alto peso molecular (> varios cientos de kDa) permanecen líquidas, a temperatura ambiente o baja, durante un largo período de tiempo con una región de pH neutro fisiológicamente aceptable entre 6,8 y 7,2. Estas soluciones de quitosano y glicerol fosfato que pueden gelificar con un calentamiento suave (por ejemplo, de 4 a 37 °C), son biocompatibles, biodegradables y adhesivos para los tejidos humanos, proporcionan nuevas oportunidades en la administración de productos terapéuticos sensibles.
35
[0004] Las composiciones que contienen sangre y quitosano se han descrito anteriormente (véase, por ejemplo, la Patente de los eE.UU n.° 7.148. 209 cuyo contenido se adjunta a este documento por referencia). El quitosano es conocido por ser un polímero trombogénico (por ejemplo, puede acelerar la coagulación de la sangre). Las soluciones de quitosano-GP se combinaron con sangre completa periférica de oveja para formar una mezcla trombogénica que
40 se solidificó y se adhirió a un defecto de cartílago de espesor completo mediante el uso de un modelo de reparación de ovejas. Los resultados obtenidos mostraron que la solidificación de un implante de quitosano-glicerol fosfato/sangre en defectos de microfractura mejoró la reparación del cartílago en comparación con la microfractura sola al aumentar la cantidad de tejido y mejorar su composición bioquímica y organización celular (Hoemann y col., 2005, J. Bone Joint Surg., 87A:2671-2686). Se desarrolló un modelo de reparación bilateral de cartílago de conejo para estudiar el efecto 45 de los implantes de quitosano-GP/sangre en la reparación del cartílago después de la estimulación medular. Los resultados mostraron que el quitosano-GP estabilizó estructuralmente los coágulos de sangre al inhibir la retracción del coágulo. El tratamiento del defecto perforado con coágulos de quitosano-GP/ sangre condujo a la formación de tejido de reparación hialino más integrado por encima de una placa ósea subcondral más porosa y vascularizada en comparación con la perforación sola (Hoemann y col., 2007, Osteoarthritis & Cartilage, 15:78-89).
50
[0005] Los implantes de quitosano-GP/sangre también aumentan el reclutamiento celular, la vascularización transitoria, la remodelación subcondral y modulan el fenotipo celular inflamatorio y reparador sugiriendo que estos eventos son en parte responsables de aumentar la cantidad y calidad de la zona tisular de reparación (Chevrier y col., 2007, Osteoarthritis & Cartilage, 15:316-327; Hoemann y col., 2010, Am. J. Sports Med., 38, 9:1845-56). La
55 ultraestructura y el detalle composicional de los coágulos de quitosano-GP/sangre, quitosano-GP solo y coágulos que contienen sangre completa solo se investigaron mediante microscopía electrónica de barrido ambiental (MEBA) junto con análisis de rayos X de energía dispersiva (EDS) (Iliescu y col., 2007, Microsc. Res. Tech., 71:236-247). Se mostró que el quitosano formaba una estructura de red tanto en el gel de quitosano-GP como en los coágulos de quitosano- GP/sangre. Sin embargo, esta estructura fue alterada por la fijación de aldehído para producir agregados artifactuales 60 de micropartículas de quitosano. El análisis EDS mostró que la mayoría del glicerol fosfato puede difundirse libremente desde el gel de quitosano-GP. También se investigaron los mecanismos de solidificación de los implantes de quitosano-glicerol fosfato/sangre. Los resultados mostraron que los implantes de quitosano-GP/sangre se solidifican
a través de los mecanismos de coagulación que implican la generación de trombina, la activación plaquetaria y la polimerización de fibrina. Los factores de coagulación se pueden usar para acortar el tiempo de solidificación in situ de los implantes de quitosano-GP/sangre en los defectos del cartílago microperforado (Marchand y col., 2009, Osteoarthritis & Cartilage, 17:953-960). Sin embargo, para facilitar su uso en la clínica, el tiempo de coagulación de la 5 composición de sangre/quitosano debe acortarse.
[0006] Todavía existe la necesidad de un implante mejorado de sangre/quitosano que se solidifique más rápido que las soluciones de implantes conocidas de quitosano-GP/sangre. Sería muy conveniente contar con implantes de sangre/quitosano de coagulación rápida para la reparación de tejidos.
10 El documento WO 02/00272 describe una composición y un procedimiento para la reparación y regeneración de cartílago y otros tejidos.
El documento WO 2006/015178 describe un sistema de encapsulación del factor de crecimiento para potenciar la formación ósea.
Chang y col., BioMedical Engineering, vol. 21 (2), abril de 2009, páginas 15-122, describe la evaluación de compuestos 15 de microesferas de plasma rico en plaquetas/quitosano/CaSO4 como material de osteogénesis de alveolo. Chevrier y col., Osteoarthritis and Cartilage, vol. 15 (3), 15 de febrero de 2007, páginas 316-327, informa que los implantes de quitosano-glicerol fosfato/sangre aumentan el reclutamiento celular, la vascularización transitoria y la remodelación del hueso subcondral en los defectos del cartílago perforado. Marchand y col., Osteoarthritis and Cartilage, vol. 17 (7), 1 de julio de 2009, páginas 953-960, describe los mecanismos 20 de solidificación de un implante de quitosano-glicerol fosfato/sangre para la reparación del cartílago articular.
[0007] Ahora se proporciona una composición polimérica que comprende un componente sanguíneo, un polímero y un ácido inorgánico. Dicha composición polimérica es útil en la reparación de un tejido en un sujeto.
25 [0008] Según un primer aspecto, la presente solicitud proporciona una composición polimérica que comprende un componente sanguíneo, un polímero y al menos una sal inorgánica, así como una composición polimérica que consiste esencialmente en un componente sanguíneo, un polímero y al menos una sal inorgánica. En una realización, la composición polimérica comprende además o contiene un ácido mineral o un ácido orgánico, tal como, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido bórico, ácido fluorhídrico y/o ácido bromhídrico. 30 En una realización, el polímero es quitosano, quitina, hialuronano, glicosaminoglicano, sulfato de condroitina, sulfato de queratina, sulfato de dermatano, heparina y/o sulfato de heparina. En otra realización, la sal inorgánica es sal de sodio, sal de cloruro, sal de potasio, sal de calcio, sal de magnesio, sal de fosfato, sal de sulfato y/o sal de carboxilato. En otra realización más, la al menos una sal inorgánica es NaCl, KCl, CsCl, CaCh, CsF, KClO4, NaNO3, y/o CaSO4. En aún otra realización, el componente sanguíneo es sangre completa, sangre procesada, sangre venosa, sangre 35 arterial, sangre de hueso, sangre de médula ósea, médula ósea, sangre de cordón umbilical y/o sangre de placenta. En aún otra realización, la composición es un gel. En otra realización, el componente sanguíneo se coagula. En otra realización, la composición polimérica tiene un pH entre 6,0 y 7,8, entre 6,2 y 6,7 o de 6,6. En otra realización más, la composición polimérica tiene una osmolalidad entre 200 mOsm/kg y 600 mOsm/kg, entre 326 mOsm/kg y 356 mOsm/kg, o de 354 mOsm/kg. En aún otra realización, el polímero es quitosano con un grado de desacetilación (DDA) 40 entre 20 % a 100 % o entre 76 % y 98 %. En otra realización, el polímero es quitosano con un peso molecular promedio en número (Mn) entre 1 kDa y 10 MDa o entre 2,7 kDa y 298 kDa. En aún otra realización, la relación componente sanguíneo: polímero es de 3:1 (v/v).
[0009] Según un segundo aspecto, la presente solicitud proporciona una composición polimérica que comprende 45 quitosano, ácido clorhídrico, NaCl y un componente sanguíneo y una composición polimérica que consiste
esencialmente en quitosano, ácido clorhídrico, NaCl y un componente sanguíneo. En una realización, la composición polimérica se prepara con una solución de quitosano que tiene una concentración de quitosano de aproximadamente 1,62 % p/p. En otra realización, la composición polimérica se prepara con una solución de ácido clorhídrico que tiene una concentración de ácido clorhídrico de aproximadamente 38 mM. En aún otra realización, la composición polimérica 50 se prepara con una solución de NaCl que tiene una concentración de NaCl de aproximadamente 160 mM. Se han presentado diversas realizaciones con respecto al pH y osmolalidad de la composición del polímero y se aplican en este documento. Se han presentado diversas realizaciones del grado de quitosano y el peso molecular y se aplican en este documento. Se han presentado diversas realizaciones del componente sanguíneo y se aplican en este documento.
55
[0010] Según un tercer aspecto, la presente solicitud proporciona un procedimiento para reparar un tejido en un sujeto que lo necesita, comprendiendo dicho procedimiento la etapa de introducir en dicho tejido una composición polimérica como se define en este documento de modo que la composición polimérica se adhiere al tejido y promueve la proliferación celular para reparar el tejido. En una realización, el tejido se selecciona de entre el grupo que consiste
60 en cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, tejidos maxilofaciales, tejidos temporomandibulares, abscesos, tumores resecados y úlceras.
[0011] Según un cuarto aspecto, la presente solicitud proporciona el uso de una composición polimérica como se define en este documento para reparar un tejido de un sujeto, en el que la composición polimérica se adhiere al tejido y promueve la proliferación celular para reparar el tejido, así como el uso de un composición polimérica como se define en este documento en la fabricación de un medicamento para reparar un tejido de un sujeto, en el que la composición
5 polimérica se adhiere al tejido y promueve la proliferación celular. En una realización, el tejido se selecciona de entre el grupo que consiste en cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, tejidos maxilofaciales, tejidos temporomandibulares, abscesos, tumores resecados y úlceras.
[0012] Según un quinto aspecto, la presente solicitud proporciona una composición polimérica como se define en 10 este documento para reparar un tejido en un sujeto, en el que la composición polimérica se adhiere al tejido y promueve
la proliferación celular. En una realización, el tejido se selecciona de entre el grupo que consiste en cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, tejidos maxilofaciales, tejidos temporomandibulares, abscesos, tumores resecados y úlceras.
15 [0013] Según un sexto aspecto, la presente solicitud proporciona un procedimiento para preparar una composición polimérica para reparar un tejido en un sujeto. En términos generales, el procedimiento comprende (o consiste esencialmente en) la etapa de: disolver el quitosano en HCl para proporcionar una mezcla de quitosano-HCl; añadir una solución de NaCl a la mezcla de quitosano-HCl para proporcionar una mezcla de quitosano-HCl-NaCl; y mezclar al menos un componente sanguíneo con la mezcla de quitosano-HCl-NaCl para proporcionar la composición 20 polimérica. En una realización, el quitosano se disuelve en HCl calentando a una temperatura de 60 °C. En una realización adicional, la concentración de quitosano en la mezcla de quitosano-HCl-NaCl es de aproximadamente 1,62 % p/p de quitosano, la concentración de ácido clorhídrico en la mezcla de quitosano-HCl-NaCl es de aproximadamente 38 mM de ácido clorhídrico y/o la concentración de NaCl en la mezcla de quitosano-HCl-NaCl es de aproximadamente 160 Mm. Diversas realizaciones del componente sanguíneo, el pH de la composición polimérica, 25 la osmolalidad de la composición polimérica, el polímero, el quitosano y la sal inorgánica se han descrito y se aplican en este documento.
[0014] En una realización particular, la composición polimérica comprende 1,62 % p/p de quitosano, 38 mM de ácido clorhídrico y 160 mM de NaCl mezclado con sangre.
30
[0015] También se proporciona en este documento un procedimiento para reparar un tejido de un paciente, comprendiendo el procedimiento la etapa de introducir en el tejido una composición de gel polimérico como se define en este documento tal que la composición se adhiere al tejido y promueve el reclutamiento celular y otros eventos para reparar el tejido. La composición se puede colocar o inyectar en un sitio del cuerpo en el que la mezcla ayuda a la
35 reparación, regeneración y reconstrucción del tejido.
[0016] En una realización, el tejido se selecciona de entre el grupo que consiste en cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, tejidos maxilofaciales, tejidos temporomandibulares, abscesos, tumores resecados y úlceras.
40
[0017] También se proporciona en este documento un procedimiento para preparar una composición polimérica para reparar tejidos en un sujeto, comprendiendo el procedimiento las etapas de disolver el quitosano en HCl; añadir una solución de NaCl a la mezcla de quitosano-HCl; y mezclar al menos un componente sanguíneo con el quitosano-HCl- NaCl.
45
[0018] En una realización adicional, el quitosano se disuelve en HCl calentando a 60 °C durante aproximadamente 2 horas.
[0019] También se proporciona en este documento el uso de la composición como se define en este documento 50 para reparar un tejido de un paciente y/o en la fabricación de un medicamento para reparar un tejido de un paciente,
en el que la composición se adhiere al tejido y promueve la proliferación celular para la reparación el tejido.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
55 [0020] Ahora se hará referencia a los dibujos adjuntos.
La Figura 1 es un histograma del tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano, preparado con el peso molecular promedio en número de quitosano (Mn) de 75 kDa; 79 % de DDA, que muestra que todas las mezclas de sangre/quitosano se coagularon en 15 minutos y que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl 60 se coagularon más rápido que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP (p glicerol fosfato) en 3 de 4 conejos.
La Figura 2 es un histograma de la resistencia mecánica de sangre/quitosano-HCl-NaCI y coágulos de sangre/quitosano-HCl-pGP preparados con quitosano Mn 75 kDa; 79 % de DDA con sangre de cuatro conejos diferentes.
La Figura 3 es un histograma del tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano, preparado con 5 quitosano Mn 2,7 kDa; 98 % de DDA, que muestra que todas las mezclas de sangre/quitosano se coagularon
en 18 minutos y que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl se coagularon más rápido que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP.
La Figura 4 es un histograma de la resistencia mecánica de sangre/quitosano-HCl-NaCl y coágulos de sangre/quitosano-HCl-pGP preparados con quitosano Mn 2,7 kDa; 98 % de DDA por triplicado.
10 La Figura 5 es un histograma del tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano, preparado con
quitosano Mn 75 kDa; 79 % de DDA, que muestra que todas las mezclas de sangre/quitosano se coagularon en 13 minutos y que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl se coagularon más rápido que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP.
La Figura 6 es un histograma de la resistencia mecánica de sangre/quitosano-HCl-NaCl y coágulos de 15 sangre/quitosano-HCl-pGP preparados con quitosano Mn 75 kDa; 79 % de DDA por triplicado.
La Figura 7 es un histograma del tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano, preparado con quitosano Mn 232 kDa; 81 % de DDA, que muestra que todas las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl y sangre/quitosano-HCl-pGP se coagularon en 7 minutos.
La Figura 8 es un histograma de la resistencia mecánica de sangre/quitosano-HCl-NaCl y coágulos de 20 sangre/quitosano-HCl-pGP de sangre preparado con quitosano Mn 232 kDa; 81 % de DDA por triplicado.
La Figura 9 es un histograma del tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano, preparado con quitosano Mn 298 kDa; 76 % de DDA, que muestra que todas las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl y sangre/quitosano-HCl-pGP se coagularon en 7 minutos.
La Figura 10 es un histograma de la resistencia mecánica de sangre/quitosano-HCl-NaCl y coágulos de 25 sangre/quitosano-HCl-pGP preparado con quitosano Mn 298 kDa; 76 % de DDA por triplicado.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0021] Se proporciona una composición polimérica novedosa que comprende un componente sanguíneo, un 30 polímero y al menos una sal inorgánica. También se proporcionan usos y procedimientos relacionados. En una realización, dicha composición puede usarse para reparar un tejido en un sujeto. En otra realización más, dicha composición se puede usar para limitar el tiempo asociado con la coagulación de la sangre en una composición de quitosano.
35 [0022] La composición polimérica comprende un polímero, tal como, por ejemplo, quitosano, quitina, hialuronano, glicosaminoglicano, sulfato de condroitina, sulfato de queratina, sulfato de dermatano, heparina y sulfato de heparina. El polímero debe ser capaz de formar un gel y usarse para el tratamiento de la reparación de tejidos.
[0023] La composición polimérica también comprende un componente sanguíneo. En este documento se contempla 40 cualquier componente sanguíneo, tal como sangre completa, sangre procesada, sangre venosa, sangre arterial,
sangre de hueso, sangre de médula ósea, médula ósea, sangre de cordón umbilical o sangre de placenta. En una realización, el componente sanguíneo se deriva de sangre completa para enriquecerse o agotarse para un componente sanguíneo específico. En una realización preferida, la relación de mezcla entre el componente sanguíneo y el polímero es de aproximadamente 3:1.
45
[0024] La composición polimérica también comprende al menos una sal inorgánica. En una realización preferida, se usa NaCl. Como alternativa, cualquier sal inorgánica, incluyendo sodio, cloruro, potasio, calcio, magnesio, fosfato, sulfato, sal de carboxilato, tales como KCl, CsCl, CaCl2, CsF, KClÜ4, NaNÜ3 y CaSÜ4 también se contemplan en este documento.
50
[0025] La composición polimérica puede comprender además un ácido, tal como un ácido mineral o un ácido orgánico. El ácido se usa para disminuir el pH de la composición para facilitar la disolución del quitosano. En una realización preferida, se usa HCl como el ácido. Como alternativa, también podrían usarse ácido acético, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido bórico, ácido fluorhídrico o ácido bromhídrico.
55
[0026] En otra realización, la composición polimérica consiste esencialmente en un componente sanguíneo, un polímero y al menos una sal inorgánica. Dicha composición polimérica no contiene componentes adicionales que participen en la formación del gel o la coagulación de la sangre (tales como productos de coagulación, por ejemplo) pero pueden contener otros componentes tales como un ácido (para facilitar la disolución del quitosano), conservantes,
60 etc.
[0027] Se describe específicamente en este documento la formulación de quitosano y un componente sanguíneo, en condiciones fisiológicas (pH, osmolalidad). En pocas palabras, las soluciones de quitosano-HCl-NaCl se mezclan con sangre, para crear sangre/quitosano-HCl-NaCl. Las composiciones de sangre/quitosano-HCl-NaCl son capaces de formar un gel. Además, el componente sanguíneo en la sangre/quitosano-HCl-NaCl es capaz de coagularse para
5 formar un implante para la reparación de los tejidos. Además, cuando se usa el quitosano que tiene un peso molecular promedio en número menor que Mn 232 kDa, las soluciones de quitosano-HCl-NaCl mezcladas con sangre descrita en este documento se coagula más rápido que las soluciones de quitosano-HCl-pGP.
[0028] Se muestra una realización preferida en el Ejemplo 1 en el que se preparó una formulación novedosa de
10 solución fisiológica de quitosano-HCl-NaCl con quitosano Mn 75 kDa; 79 % de DDA y se mezcló con sangre completa.
Las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl se coagularon más rápido que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP para crear implantes de sangre/quitosano de coagulación rápida para la reparación de los tejidos.
[0029] Una solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (38 mM)-NaCl (160 mM) a pH de 6,50 y osmolalidad de 15 354 mOsm/kg, y una solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (71 mM)-pGP (2,15 % p/p) a pH de 6,65 y osmolalidad
de 334 mOsm/kg (Tabla 1) se mezclaron con sangre completa de conejo fresca. Para preparar coágulos de quitosano/sangre, inmediatamente después de la recolección de sangre completa, se mezcló un volumen de 900 pl de sangre completa en un tubo criogénico que contenía 300 pl de solución de quitosano-HCl-NaCl al 1,62 % (o solución de quitosano-HCl-pGP al 1,62 %) y tres bolas de acero inoxidable de 0,39 g. La mezcla se agitó a mano 20 durante 10 segundos (la relación de mezcla de sangre a quitosano fue de 3 a 1).
[0030] Se transfirieron 250 pl en 3 tubos de vidrio a 37 °C con una jeringa de 1 ml para preparar 3 coágulos
(implantes). Se usó un coágulo para probar el tiempo de coagulación y se fijó inmediatamente después de coagularse, el segundo coágulo se usó para probar el tiempo de coagulación y se fijó a los 60 minutos después del mezclado, y el
25 tercer coágulo se usó para probar el tiempo de coagulación y la resistencia mecánica después de 60 minutos.
[0031] Los resultados del tiempo de coagulación (Tablas 2-5 y Figura 1) mostraron que todas las mezclas de sangre/quitosano preparadas con quitosano Mn 75 kDa; 79 % de DDA coagularon en 15 minutos (de 6 minutos a 15 minutos). En 3 de 4 conejos, el tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl fue menor que
30 el tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP (p <0,05). En el mejor de los casos, el tiempo de coagulación se acortó en un factor de 2. Los resultados de resistencia mecánica (Tabla 6 y Figura 2) demostraron que todos los coágulos de la mezcla de sangre fresca/quitosano eran gel firme y elástico, la resistencia mecánica de todos los coágulos se puntuó como "++++".
35 [0032] Después de 60 minutos, algo de suero emanaba de los coágulos (Tabla 6). Los resultados de la evaluación de la homogeneidad se muestran en la Tabla 7.
[0033] Otra realización se muestra en el Ejemplo 2, en el que se usaron quitosanos de diferentes pesos moleculares Mn para preparar una formulación novedosa de mezclas fisiológicas de quitosano-HCl-NaCl (Tabla 8). Mezclas de
40 sangre/quitosano-HCl-NaCl coagularon más rápido que las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP cuando el quitosano tiene un peso molecular promedio en número Mn <232 kDa para crear implantes de sangre/quitosano-HCl- NaCl de coagulación rápida con buena resistencia mecánica para la reparación de tejidos (Tablas 9-12 y Figuras 3-6) Los quitosanos con pesos moleculares promedios en número Mn > 232 kDa también se usaron para preparar una formulación novedosa de mezclas fisiológicas de quitosano-HCl-NaCl que coagularon en 7 minutos para crear 45 implantes de sangre/quitosano de rápida coagulación con buena resistencia mecánica (Tablas 13-16 y Figuras 7-10).
[0034] Después de 60 minutos, algo de suero emanaba de los coágulos y los resultados de la evaluación de la homogeneidad se muestran en la Tabla 17.
50 [0035] Por lo tanto, se demuestra en este documento que mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl coagulaban más rápido que las mezclas de sangre/quitosana-pGP cuando el quitosano tenía un peso molecular Mn <232 kDa para crear coágulos de sangre/quitosano (implantes) con buenas propiedades mecánicas. Los quitosanos con un peso molecular promedio en número Mn > 232 kDa también se usaron para preparar mezclas de sangre/quitosano-HCl- NaCl que se coagularon para crear coágulos de sangre/quitosano (implantes) con buenas propiedades mecánicas. 55 Por lo tanto, estas soluciones pueden ser alternativas a la solución actual de quitosano-HCl-pGP conocida en la técnica con la ventaja de solidificarse más rápidamente.
[0036] Las composiciones descritas en este documento se pueden usar para mejorar la reparación y para regenerar tejidos cartilaginosos y otros tejidos que incluyen, sin limitación, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, 60 tejidos periodontales, abscesos, tumores resecados y úlceras.
[0037] También se contempla en este documento el uso de las composiciones poliméricas descritas en este documento que pueden colocarse o inyectarse en un sitio corporal en el que la mezcla ayuda a la reparación, regeneración, reconstrucción o acumulación de tejidos. Los tejidos reparados incluyen, por ejemplo, sin limitación, cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, abscesos, tumores resecados y
5 úlceras. El tejido que puede repararse o regenerarse es, por ejemplo, sin limitación cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejido periodontal, abscesos, tumores resecados o úlceras. En algunos casos, el sitio de introducción en el cuerpo puede prepararse quirúrgicamente para eliminar los tejidos anormales. Dicho procedimiento se puede hacer agujereando, erosionando o perforando en regiones de tejidos adyacentes o regiones vascularizadas para crear canales para que la composición polimérica migre al sitio que requiere la reparación.
10
[0038] La presente descripción se entenderá más fácilmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos que se proporcionan para ilustrar realizaciones en lugar de limitar su alcance.
EJEMPLO 1
15
Formulación y caracterización de mezclas de sangre fresca/solución fisiológica de quitosano (sangre de conejo)
1- Preparación de solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (38 mM)-NaCl (160 mM); sin NaOH, pH: 6,6; volumen total: 20 10,0 ml
[0039] Se pesaron 0,180 g de quitosano (grado de desacetilación o DDA = 79 % y peso promedio en número o Mn =75 kDa) en un vaso de precipitados de 20 ml. Se añadió HhOdd al vaso de precipitados hasta que el peso de quitosano + H2O = 9,34 g. Se añadió una barra de agitación magnética al vaso de precipitados y la solución se agitó
25 durante aproximadamente 10 minutos con el fin de hidratar el polvo de quitosano tanto como fuera posible. Se añadieron 0,38 ml de HCl 1 N (Sigma, Producto n.° 318949) a la solución con agitación moderada. El vaso de precipitados se cubrió con parafilm™, y la solución se calentó a aproximadamente 60 °C durante 2 horas, se agitó durante una noche hasta que se disolvió por completo. Se añadieron 0,32 ml de solución de NaCl 5N (Sigma, producto n.° S-9888) al vaso de precipitados y se mezclaron. El pH obtenido de la solución de quitosano fue fisiológico a 6,5 y 30 la osmolalidad también fue fisiológica a 354 mOsm/kg (Tabla 1).
2- Preparación de solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (71 mM)-fiGP (2,15 %), pH: 6,6, volumen total: 9,0 ml
[0040] Se pesaron 0,162 g de quitosano (grado de desacetilación o DDA = 79 % y peso promedio en número o Mn 35 = 75 kDa) en un vaso de precipitados de 20 ml. Se añadió H2Odd al vaso de precipitados hasta que el peso de
quitosano + H 2O = 6,65 g. Se añadió una barra de agitación magnética al vaso de precipitados para agitar la solución durante aproximadamente 10 minutos con el fin de hidratar el polvo de quitosano tanto como fuera posible. Se añadieron 0,55 ml de HCl 1 N (Sigma, producto n.° 318949) a la solución con agitación moderada. El vaso de precipitados se cubrió con parafilm™ y se agitó durante una noche hasta que se disolvió por completo. Se añadieron 40 1,8 ml de (3GP al 10,75 % (Sigma, producto n.° G9891) en solución de HCl 50 mM al vaso de precipitados y se mezclaron (la relación de mezcla de solución de quitosano/solución de pGP es de 4:1). El pH obtenido de la solución de quitosano fue fisiológico a 6,7 y la osmolalidad también fue fisiológica a 334 mOsm/kg (Tabla 1).
Tabla 1 45
- Composición y propiedades de soluciones de quitosano
- Solución n.° y tipo
- Cquitosano (% P/P) Chci (mM) CNaCI (mM) C PGP (% P/P) Precipitación PH (medido) Osmolalidad (mOsm/kg)
- Quitosano- HCl-NaCl pH 6,6
- 1,62 38 160 no 6,50 354
- Quitosano- HCl-pGP pH 6,6
- 1,62 71 2,15 no 6,65 334
3-Extracción de sangre
[0041] La sangre se extrajo de los conejos usando una técnica estéril, que comienza inyectando 0,3 cc/kg de 50 Hypnorm® IM a los conejos (por ejemplo, 0,9 cc para un conejo de 3 kg). Primero, para cada conejo, se recogieron ~2 ml de sangre en un tubo Vacutainer® que contenía EDTA (Fisher, BD, producto n.° 02-683-99A) para obtener CBC (hemograma completo) y recuento de plaquetas. En segundo lugar, para cada conejo, se recogieron ~5 ml de sangre
usando una jeringa estéril de 5 cc (Fisher, BD, producto n.° 309604). Cuatro conejos fueron usados en este experimento.
4- Preparación de mezclas de sangre/solución fisiológica de quitosano midiendo el tiempo de coagulación y la 5 resistencia mecánica de los coágulos
[0042] Para preparar coágulos de sangre/quitosano-HCl-NaCl (pH 6,6)-1, inmediatamente después de la recogida de sangre completa, se añadió una pipeta de 900 gl de sangre completa en un tubo criogénico que contenía tres bolas de acero inoxidable de 0,39 g y 300 gl de solución de quitosano y se mezcló agitando a mano durante 10 segundos.
10 Luego se transfirieron 250 gl en 3 tubos de vidrio a 37 °C con una jeringa de 1 ml para preparar 3 coágulos: el primer coágulo se usó para probar el tiempo de coagulación y se fijó inmediatamente después de que se coaguló; el segundo coágulo se usó para probar el tiempo de coagulación y se fijó a los 60 minutos después de la mezcla; el tercer coágulo se usó para probar el tiempo de coagulación y la resistencia mecánica después de 60 minutos. Este experimento se realizó por triplicado para cada conejo. Para preparar coágulos sanguíneos/quitosano-HCl-pGP (pH 6,6)-2, se repitió 15 el mismo procedimiento como se describió anteriormente, pero una solución de quitosano-HCl-pGP (pH 6,6) se mezcló con sangre.
[0043] La coagulación se determinó por visualización del coágulo a 37 °C. Todos los tres tubos de vidrio se usaron para probar el tiempo de coagulación. Los tubos de vidrio se tomaron suavemente de la placa caliente verticalmente
20 cada minuto, se inclinó lentamente y la mezcla de sangre se visualizó en el fondo del tubo. Si la mezcla era inmóvil y se formaba coágulo, se coagulaba; si la mezcla todavía era móvil en el fondo del tubo, aún no estaba coagulada. La resistencia mecánica se probó colocando el coágulo en el centro de la palma de la mano y presionando el coágulo con un dedo hasta que se aplastó. La resistencia a la compresión, expresión líquida y aspecto aplastado también se observaron. La resistencia mecánica se puntuó con un sistema de 4 "+": "+" representa que el coágulo se rompió 25 fácilmente y el aspecto aplastado era de fragmentos múltiples (más de 5 fragmentos); "++" representa que el coágulo era relativamente firme y el aspecto aplastado era de fragmentos múltiples (3-5 fragmentos); "+++" representa que el coágulo era firme y elástico, el aspecto aplastado era de 2-3 fragmentos; "++++" representa que el coágulo era firme y elástico, el aspecto aplastado era de 2 fragmentos (a veces todavía conectados) o simplemente había un orificio en el centro del coágulo.
30
[0044] Para el conejo 259F (R1F), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 10 minutos (de 7 minutos a 10 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 2). El tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (8 minutos) fue significativamente menor que el tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (9,7 minutos) (Figura 1).
35
Tabla 2
- Tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano del conejo R259F (R1F)
- Mezcla
- Número de muestra Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min)
- Sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1)
- Mezcla 1 1 8 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Mezcla 2
- 1 9
- 2
- 9
- 3
- 9
- Mezcla 3
- 1 7
- 2
- 7
- 3
- 7
- Sangre fresca/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- Mezcla 1 1 10 9,7
- 2
- 10
- 3
- 10
- Mezcla 2
- 1 9
- 2
- 9
- 3
- 9
- Mezcla 3
- 1 10
- 2
- 10
- 3
- 10
[0045] Para el conejo 260F (R2F), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 9 minutos y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 3 y la Figura 1).
Tabla 3 5
- Tiempo de coagulación de coágulos de sangre/quitosano del conejo R260F (R2F)
- Mezcla
- Número de muestra Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min)
- Sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1)
- Mezcla 1 1 9 8,3
- 2
- 9
- 3
- 9
- Mezcla 2
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Mezcla 3
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Sangre fresca/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- Mezcla 1 1 9 8,7
- 2
- 9
- 3
- 9
- Mezcla 2
- 1 9
- 2
- 9
- 3
- 9
- Mezcla 3
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
[0046] Para el conejo 261M (R3M), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 15 minutos (de 6 minutos a 15 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 4). El tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (7,3 minutos) fue significativamente menor que el tiempo de coagulación de las 10 mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (14,3 minutos) (Figura 1).
Tabla 4
- Tiempo de coagulación del conejo R261M (R3M)
- Mezcla
- Número de muestra Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min)
- Sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1)
- Mezcla 1 1 6 7,3
- 2
- 6
- 3
- 6
- Mezcla 2
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Mezcla 3
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Sangre fresca/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- Mezcla 1 1 14 14,3
- 2
- 14
- 3
- 14
- Mezcla 2
- 1 15
- 2
- 15
- 3
- 15
- Mezcla 3
- 1 14
- 2
- 14
- 3
- 14
15 [0047] Para el conejo 262M (R3MR4M), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 14 minutos (de 7 minutos a 14 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 5). El tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (8,3 minutos) fue significativamente menor que el tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (12,7 minutos) (Figura 1).
Tabla 5
- Tiempo de coagulación del conejo R262M (R4M)
- Mezcla
- Número de muestra Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min)
- Sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1)
- Mezcla 1 1 7 8,3
- 2
- 7
- 3
- 7
- Mezcla 2
- 1 8
- 2
- 8
- 3
- 8
- Mezcla 3
- 1 10
- 2
- 10
- 3
- 10
- Sangre fresca/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- Mezcla 1 1 12 12,7
- 2
- 12
- 3
- 12
- Mezcla 2
- 1 12
- 2
- 12
- 3
- 12
- Mezcla 3
- 1 14
- 2
- 14
- 3
- 14
5 [0048] Los resultados de resistencia mecánica (Tabla 6 y Figura 2) demostraron que todos los coágulos de sangre fresca/quitosano eran firmes y elásticos, las resistencias mecánicas de todos los coágulos se puntuaron como "++++". Después de 60 minutos, había algo de suero emanado de los coágulos (puntuado como ++ en la mayoría de los casos). Aunque los puntajes de resistencia mecánica fueron idénticos para todos los coágulos, 9 de 12 coágulos pGP (coágulo 2) solo tenían un orificio en el centro, mientras que solo 3 de 12 coágulos NaCl (coágulo 1) tenían solo un 10 orificio en el centro, lo que sugiere una mejora en la resistencia mecánica.
Tabla 6
- Prueba de resistencia mecánica de coágulos de sangre/quitosano
- Conejo n.°
- Componente de mezcla Muestra n.° Resistencia a la compresión Líquido expresado Aspecto aplastado
- R259F
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1) Coágulo 1-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- coágulo 1-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- coágulo 1-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- coágulo 2-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-3 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- R260F
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCI pH 6,6 (coágulo 1) coágulo 1-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- coágulo 1-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- coágulo 1-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- coágulo 2-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- R261M
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1) coágulo 1-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 1-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 1-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- coágulo 2-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- R262M
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl pH 6,6 (coágulo 1) coágulo 1-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- coágulo 1-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 1-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP pH 6,6 (coágulo 2)
- coágulo 2-1 Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-2
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ No se rompe pero hay un orificio en el centro del coágulo
- coágulo 2-3
- Firme y elástico ++++ Algo de líquido emanado ++ Rompe en 2 fragmentos pero todavía conectados
5-Tratamiento histológico y evaluación de la homogeneidad de coágulos de sangre/quitosano
[0049] Los coágulos fijos fueron seccionados en dos partes. Una parte se crioprotegió con sacarosa, se infiltró con 5 OCT, se sometió a criosección, se tiñó con Safranin O/Fast Green y se observó mediante microscopía óptica. Una
parte se almacenó a 4 °C hasta su uso posterior. Todas las fotos fueron tomadas de las muestras de coágulos de sangre/quitosano fijadas 60 minutos después de que se prepararon los coágulos; dos fotos tomadas con objetivos 5x y 40x de diferentes regiones de cada muestra se usaron para la evaluación de la homogeneidad. Cada muestra se observó bajo microscopio con especial énfasis en: presencia de burbujas o grietas; presencia y distribución de 10 precipitados de quitosano descritos como: agregados grandes o agregados pequeños; distribución de quitosano y si están distribuidos homogéneamente o no en toda la sección; morfología eritrocítica en términos de discoide, encogido, hinchado o encadenado.
[0050] La histología mostró que la homogeneidad de los coágulos preparados con pGP fue mejor (8 de 12 muestras 15 se puntuaron como "+" y ninguna se puntuó como "-") que la homogeneidad de los coágulos preparados con NaCl (3
de 11 muestras se puntuaron como "+" y 3 de 11 muestras se puntuaron como "-") (Tabla 7).
Tabla 7
- Homogeneidad de coágulos de sangre/quitosano
- Muestra del coágulo 1 (con NaCl)
- Homogeneidad del coágulo 1 Muestra del coágulo 2 (con PGP) Homogeneidad del coágulo 2
- FB 1-1-R259F
- + FB 2-1-R259F +
- FB 1-2-R259F
- + FB 2-2-R259F +
- FB 1-3-R259F
- - FB 2-3-R259F ±
- FB 1-1-R260F
- + FB 2-1-R260F +
- FB 1-2-R260F
- ± FB 2-2-R260F +
- FB 1-3-R260F
- - FB 2-3-R260F +
- FB 1-1-R261M
- ± FB 2-1-R261M ±
- FB 1-2- R261M
- - FB 2-2-R261M +
- FB 1-3-R261M
- * FB 2-3-R261M +
- FB 1-1-R262M
- ± FB 2-1-R262M +
- FB 1-2-R262M
- ± FB 2-2-R262M ±
- FB 1-3-R262M
- + FB 2-3-R262M ±
| * Información no disponible EJEMPLO 2
Formulación y caracterización de coágulos de sangre fresca/quitosano mediante el uso de soluciones de 5 quitosano con diferentes pesos moleculares (sangre de conejo)
1-Preparación de solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (38 mM)-NaCl (160 mM); sin NaOH, pH: 6,6; volumen total: 10,0 ml
10 [0051] Las soluciones de quitosano-HCl-NaCl se prepararon como se describió anteriormente con quitosanos de diferentes Mn y DDA (lote n.° AS-144-02-A:Mn 2,7 kDa y DDA 98 %; lote n.° CH10075:Mn 75 kDa y DDA 79 %; lote n.° CH0100702B:Mn 232 kDa, y DDA 81 %; lote n.° CH0050602A: Mn 298 kDa y DDA 76 %). El pH de las soluciones de quitosano era fisiológico (6,2 a 6,7) y la osmolalidad también era fisiológica (326 a 356 mOsm/kg) (véase la Tabla 8).
15 2-Preparación de solución de quitosano (1,62 % p/p)-HCl (71 mM)- fiGP (2,15 %), pH: 6,6; volumen total: 9,0 ml
[0052] Las soluciones de quitosano-HCl-NaCl se prepararon como se describió anteriormente con quitosanos de diferentes Mn y DDA (lote n.° AS-144-02-A: Mn 2,7 kDa y DDA 98 %; lote n.° CH10075:Mn 75 kDa y DDA 79 %; lote n.° CH0100702B:Mn 232 kDa, y DDA 81 %; lote n.° CH0050602A:Mn 298 kDa y DDA 76 %). El pH de las soluciones de 20 quitosano era fisiológico a 6,7 y la osmolalidad también era fisiológica (340 a 345 mOsm/kg) (Tabla 8).
Tabla 8
- Composición y propiedades de soluciones de quitosano
- Solución n.° y tipo
- Cquitosano (%P/P) Chci (mM) CNaCI (mM) CpGP (%P/P) Precipitación pH (medido) Osmolalidad (mOsm)
- Quitosano-HCl- NaCl pH6,6 (AS- 144-02-A)
- 1,62 55 160 no no 6,19 356
- Quitosano-HCl- pGP pH6,6 (AS- 144-02-A)
- 1,62 77 No 2,15 no 6,69 345
- Quitosano -HCl- NaCl pH6,6 (CH10075)
- 1,62 38 160 no no 6,62 326
- Quitosano-HCl- pGP pH6,6 (CH10075)
- 1,62 71 No 2,15 no 6,67 344
- Quitosano-HCl- NaCl pH6,6 (CH0100702B)
- 1,62 38 160 no no 6,65 339
- Quitosano-HCl- pGP pH6,6 (CH01007028)
- 1,62 71 No 2,15 no 6,71 337
- Quitosano-HCl- NaCl pH6,6 (CH0050602A)
- 1,62 38 160 no no 6,58 332
- Quitosano-HCl- pGP pH6,6 (CH0050602A)
- 1,62 71 No 2,15 no 6,68 340
25 3- Extracción de sangre
[0053] La sangre se extrajo de conejos usando una técnica estéril, como se describió anteriormente. Cuatro conejos fueron usados en este experimento.
30 4-Preparación de mezclas de sangre/solución fisiológica de quitosano, midiendo el tiempo de coagulación y la resistencia mecánica de los coágulos
[0054] Se prepararon mezclas de sangre completa de conejo/quitosano-HCl-NaCI y mezclas de sangre de conejo/quitosano-HCl-pGP en una relación de mezcla de 3:1 v/v como se describió anteriormente. Este experimento se realizó por triplicado para cada conejo. La coagulación del coágulo se determinó mediante la visualización del coágulo a 37 °C como se describió anteriormente. La resistencia mecánica se probó como se describió anteriormente
5
[0055] Para el lote de quitosano n.° AS-144-02-A (Mn de 2,7 kDa y 98 % de DDA), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 18 minutos (de 10 minutos a 18 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 9). El tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 fue significativamente menor que el tiempo de coagulación de las mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (Figura 3). Los resultados
10 de la prueba de resistencia mecánica mostraron que todos los coágulos eran firmes y elásticos, las resistencias mecánicas de todos los coágulos se puntuaron como "++++" y los coágulos no se retrajeron significativamente (véase la Tabla 10 y la Figura 4).
Tabla 9 15
- Tiempo de coagulación de mezclas de sangre fresca/quitosano (lote n.° AS-144-02-A)
- Mezcla
- Concentración de solución de quitosano y relación de mezcla Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min) Comentarios
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 1-11) 1 12 11,3 Todas las muestras de mezcla coagularon en 12 minutos (de 10 minutos a 12 minutos).
- 2
- 11
- 3
- 11
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 11-2)
- 1 11 11
- 2
- 11
- 3
- 11
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 11-3)
- 1 11 10,7
- 2
- 10
- 3
- 11
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 12-1) 1 18 17,3 Todas las muestras de mezcla coagularon en 18 minutos (de 15 minutos a 18 minutos).
- 2
- 17
- 3
- 17
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 12-2)
- 1 17 16,7
- 2
- 16
- 3
- 17
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 12-3)
- 1 15 15,3
- 2
- 15
- 3
- 16
Tabla 10
- Prueba de resistencia mecánica de coágulos de sangre fresca/quitosano (lote n.° AS-144-02-A)
- Muestra
- Resistencia a la compresión Líquido expresado Aspecto aplastado
- Coágulo 1-1-1 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 1-1-2 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 1-1-3 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Algún líquido expresado ++ 2 fragmentos
- Coágulo 1-2-1 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 1-2-2 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 1-2-3 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
[0056] Para el lote de quitosano n.° CH10075 (Mn de 75 kDa y 79 % de DDA), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 13 minutos (de 6 minutos a 13 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (Tabla 11). El tiempo de coagulación de mezclas de sangre/quitosano-HCl-NaCl pH 6,6 fue significativamente menor que el tiempo de 5 coagulación de mezclas de sangre/quitosano-HCl-pGP pH 6,6 (Figura 5). Los resultados de la prueba de resistencia mecánica mostraron que todos los coágulos eran firmes y elásticos, las resistencias mecánicas de todos los coágulos se puntuaron como "++++" y los coágulos no se retrajeron significativamente (véase la Tabla 12 y la Figura 6).
Tabla 11
10
- Tiempo de coagulación de mezclas de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH10075)
- Mezcla
- Concentración de solución de quitosano y relación de mezcla Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min) Comentarios
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 2-11) 1 7 7 Todas las muestras de mezcla coagularon en 7 minutos (de 6 minutos a 7 minutos).
- 2
- 7
- 3
- 7
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 21-2)
- 1 6 6,3
- 2
- 7
- 3
- 6
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 21-3)
- 1 6 6
- 2
- 6
- 3
- 6
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 22-1) 1 12 12,3 Todas las muestras de mezcla coagularon en 13 minutos (de 12 minutos a 13 minutos).
- 2
- 12
- 3
- 13
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 22-2)
- 1 13 12,7
- 2
- 13
- 3
- 12
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 22-3)
- 1 13 12,7
- 2
- 12
- 3
- 13
Tabla 12
- Prueba mecánica de coágulos de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH10075)
- Muestra
- Resistencia a la compresión Líquido expresado Aspecto aplastado
- Coágulo 2-1-1 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 2-1-2 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 2-1-3 de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 2-2-1 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 2-2-2 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 2-2-3 de sangre fresca/quitosano-HCl-pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
[0057] Para el lote de quitosano n.° CH0100702B (Mn de 232 kDa y 81 % de DDA), todas las mezclas de sangre/quitosano coagularon en 7 minutos (de 3 minutos a 7 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 13 y la Figura 7). Los resultados de la prueba de resistencia mecánica mostraron que todos los coágulos eran 5 firmes y elásticos, las resistencias mecánicas de todos los coágulos se puntuaron como "++++" y los coágulos no se retrajeron significativamente (véase la Tabla 14 y la Figura 8).
Tabla 13
- Tiempo de coagulación de mezcla de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH0100702B)
- Mezcla
- Concentración de solución de quitosano y relación de mezcla Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min) Comentarios
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 3-11) 1 7 6,7 Todas las muestras de mezcla coagularon en 7 minutos (de 6 minutos a 7minutos).
- 2
- 7
- 3
- 6
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 31-2)
- 1 7 6,7
- 2
- 7
- 3
- 6
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 31-3)
- 1 7 6,3
- 2
- 6
- 3
- 6
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 32-1) 1 3 3,7 Todas las muestras de mezcla coagularon en 4 minutos (de 3 minutos a 4 minutos).
- 2
- 4
- 3
- 4
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 32-2)
- 1 4 3,3
- 2
- 3
- 3
- 3
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 32-3)
- 1 3 3,3
- 2
- 3
- 3
- 4
10
Tabla 14
- Prueba mecánica de coágulos de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH0100702B)
- Muestra
- Resistencia a la compresión Líquido expresado Aspecto aplastado
- Coágulo 3-1-1-de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 3-1-2-de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado ++ 2 fragmentos
- Coágulo 3-1-3-de sangre fresca/quitosano-HCl-NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 3-2-1-de sangre fresca/quitosano-HCl- pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado ++ 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 3-2-2-de sangre fresca/quitosano-HCl- pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 3-2-3-de sangre fresca/quitosano-HCl- pGP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
[0058] Para el lote de quitosano n.° CH0050602A (Mn de 298 kDa, 76 % de DDA), todos las mezclas de 15 sangre/quitosano coagularon en 7 minutos (de 5 minutos a 7 minutos) y formaron coágulos elásticos firmes (véase la Tabla 15 y la Figura 9). Los resultados de la prueba de resistencia mecánica mostraron que todos los coágulos eran
firmes y elásticos, las resistencias mecánicas de todos los coágulos se puntuaron como "++++" y los coágulos no se retrajeron significativamente (véase la Tabla 16 y la Figura 10).
Tabla 15 5
- Tiempo de coagulación de mezcla de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH0050602A)
- Mezcla
- Concentración de solución de quitosano y relación de mezcla Tiempo de coagulación (min) Valor medio (min) Comentarios
- Sangre fresca/quitosano- HCl-NaCl
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 4-11) 1 7 7 Todas las muestras de mezcla coagularon en 7 minutos (de 6 minutos a 7 minutos).
- 2
- 7
- 3
- 7
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 41-2)
- 1 7 6,7
- 2
- 7
- 3
- 6
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 41-3)
- 1 7 6,3
- 2
- 6
- 3
- 6
- Sangre fresca/quitosano- HCl-pGP
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 42-1) 1 7 6,7 Todas las muestras de mezcla coagularon en 7 minutos (de 5 minutos a 7 minutos).
- 2
- 6
- 3
- 7
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 42-2)
- 1 7 6,7
- 2
- 7
- 3
- 6
- 1,62 % y 3:1 (coágulo 42-3)
- 1 6 5,7
- 2
- 6
- 3
- 5
Tabla 16
- Prueba mecánica de coágulos de sangre fresca/quitosano (lote n.° CH0050602A)
- Muestra
- Resistencia a la compresión Líquido expresado Aspecto aplastado
- Coágulo 4-1-1 de sangre fresca/quitosano-HCl- NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos
- Coágulo 4-1-2 de sangre fresca/quitosano-HCl- NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 4-1-3 de sangre fresca/quitosano-HCl- NaCl (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 4-2-1 de sangre fresca/quitosano-HCl- 3GP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + Orificio en el centro
- Coágulo 4-2-2 de sangre fresca/quitosano-HCl- 3GP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
- Coágulo 4-2-3 de sangre fresca/quitosano-HCl- 3GP (1,62 %, 3:1)
- Firme y elástico ++++ Casi ningún líquido expresado + 2 fragmentos pero todavía conectados
10 5- Tratamiento histológico y evaluación de homogeneidad de coágulos de sangre/quitosano
[0059] El tratamiento histológico y la evaluación de homogeneidad se realizaron como se describió anteriormente.
[0060] La histología mostró que la homogeneidad de los coágulos preparados con pGP fue mejor (9 de 12 muestras 5 se puntuaron como "+" y ninguna se puntuó como "-") que la homogeneidad de los coágulos preparados con NaCl (2
de 12 muestras se puntuaron como "+" y 7 de 12 muestras se puntuaron como "-") (véase la Tabla 17).
Tabla 17
- Homogeneidad de coágulos de sangre/quitosano
- Muestras de coágulo (con NaCl)
- Homogeneidad de coágulos (con NaCl) Muestras de coágulo (con PGP) Homogeneidad de coágulos (con PGP)
- sangre 1-1-1 (AS- 144-02-A)
- + (entre ± y +) sangre 1-2-1 (AS-144- 02-A) ±
- sangre 1-1-2 (AS- 144-02-A)
- ± (entre ± y +) sangre 1-2-2 (AS-144- 02-A) + (entre ± y +)
- sangre 1-1-3 (AS- 144-02-A)
- ± (entre ± y +) sangre 1-2-3 (AS-144- 02-A) + (entre ± y +)
- sangre 2-1-1 (CH10075)
- - sangre 2-2-1 (CH10075) +
- sangre 2-1-2 (CH10075)
- - sangre 2-2-2 (CH10075) + (entre ± y +)
- sangre 2-1-3 (CH10075)
- - sangre 2-2-3 (CH10075) +
- sangre 3-1-1 (CH0100702B)
- + sangre 3-2-1 (CH0100702B) +
- sangre 3-1-2 (CH0100702B)
- + sangre 3-2-2 (CH0100702B) +
- sangre 3-1-3 (CH0100702B)
- - sangre 3-2-3 (CH0100702B) +
- sangre 4-1-1 (CH0050602A)
- - sangre 4-2-1 (CH0050602A) +
- sangre 4-1-2 (CH0050602A)
- - sangre 4-2-2 (CH0050602A) +
- sangre 4-1-3 (CH0050602A)
- - sangre 4-2-3 (CH0050602A) +
10
[0061] La invención es como se define en las reivindicaciones adjuntas. Aunque la invención se ha descrito en relación con realizaciones específicas de la misma, se entenderá que es capaz de modificaciones adicionales y esta solicitud está destinada a cubrir cualquier variación, usos o adaptaciones de la invención siguiendo, en general, los principios de la invención e incluyendo dichas desviaciones de la presente descripción como parte de la práctica 15 conocida o habitual en la técnica a la que se refiere la invención y que puede aplicarse a las características esenciales expuestas anteriormente en este documento, y como sigue en el alcance de las reivindicaciones adjuntas.
Claims (6)
- REIVINDICACIONES1. Una composición de sangre/quitosano-HCl-NaCI que comprende:5 a) sangre completa; yb) una solución de quitosano que comprende: quitosano que tiene un peso molecular promedio de Mn <232kDa, HCl, y NaCl a una concentración de 160 mm;en la que la composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl tiene un pH entre 6,0 y 7,8; y 10 en la que la composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl coagula más rápidamente que una composición de sangre/quitosano-HCl-p-glicerol fosfato.
- 2. La composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl de la reivindicación 1, en la que la composición polimérica tiene un pH entre 6,2 y 6,7, y más preferentemente un pH de 6,6.15
- 3. La composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl de la reivindicación 1 o 2, en la que el grado de desacetilación de quitosano (dDa) está entre 20 % y 100 %, y más preferentemente entre 76 % y 98 %.
- 4. La composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la 20 relación de sangre completa: quitosano es de 3:1 v/v.
- 5. La composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl de la reivindicación 1, en la que el HCl está en una concentración de 38 mM.25 6. Una composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su uso en la reparación de un tejido en un sujeto, en la que la composición polimérica se adhiere al tejido y promueve la proliferación celular.
- 7. La composición de sangre/quitosano-HCl-NaCl para su uso según la reivindicación 6, en la que dicho tejido 30 se selecciona de entre el grupo que consiste en cartílago, menisco, ligamento, tendón, hueso, piel, córnea, tejidos periodontales, tejidos maxilofaciales, tejidos temporomandibulares, abscesos, tumores resecados y úlceras.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26278609P | 2009-11-19 | 2009-11-19 | |
| US262786P | 2009-11-19 | ||
| PCT/CA2010/001842 WO2011060544A1 (en) | 2009-11-19 | 2010-11-18 | Novel formulation of physiological chitosan-inorganic salt solution/blood mixtures for tissue repair |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2688977T3 true ES2688977T3 (es) | 2018-11-07 |
Family
ID=44059158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10831000.4T Active ES2688977T3 (es) | 2009-11-19 | 2010-11-18 | Formulación novedosa de mezclas de soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica/sangre para la reparación de tejidos |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20120321721A1 (es) |
| EP (1) | EP2501754B1 (es) |
| CA (1) | CA2814783A1 (es) |
| DK (1) | DK2501754T3 (es) |
| ES (1) | ES2688977T3 (es) |
| WO (1) | WO2011060544A1 (es) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2008219065B2 (en) | 2007-02-19 | 2014-01-30 | Marine Polymer Technologies, Inc. | Hemostatic compositions and therapeutic regimens |
| CN103239762B (zh) * | 2013-05-23 | 2014-09-17 | 中国海洋大学 | 一种甲壳素膜及其在眼科治疗中的应用 |
| CA2940012C (en) * | 2014-02-20 | 2023-08-01 | Ortho Regenerative Technologies Inc. | Lyophilized polymer scaffold compositions, processes for preparation and use in anabolic wound repair |
| FR3038838B1 (fr) | 2015-07-13 | 2017-08-18 | Synolyne Pharma | Chitosane pour melange avec un fluide coagulable |
| CN109481726A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-03-19 | 广州新诚生物科技有限公司 | 一种可生物降解的止血骨蜡及其制备方法 |
| EP4686486A1 (en) * | 2024-07-30 | 2026-02-04 | Paul Hartmann AG | Gel composition comprising whole blood |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3623414B2 (ja) * | 1999-11-05 | 2005-02-23 | ニッピコラーゲン工業株式会社 | ソーセージ用ケーシングおよびその製造方法 |
| US6716970B2 (en) * | 2000-04-21 | 2004-04-06 | Adjuvant Pharmaceuticals, Llc | Water soluble, randomly substituted partial N-partial O-acetylated chitosan, preserving compositions containing chitosan, and processes for making thereof |
| IL153490A0 (en) | 2000-06-29 | 2003-07-06 | Biosyntech Canada Inc | Composition and method for the repair and regeneration of cartilage and other tissues |
| US20060159663A1 (en) | 2004-07-30 | 2006-07-20 | Lu Helen H | Growth factor encapsulation system for enhancing bone formation |
| US20060251628A1 (en) * | 2005-05-06 | 2006-11-09 | Mohamed Attawia | Defatted, dewatered bone marrow |
-
2010
- 2010-11-18 EP EP10831000.4A patent/EP2501754B1/en active Active
- 2010-11-18 ES ES10831000.4T patent/ES2688977T3/es active Active
- 2010-11-18 WO PCT/CA2010/001842 patent/WO2011060544A1/en not_active Ceased
- 2010-11-18 US US13/510,661 patent/US20120321721A1/en not_active Abandoned
- 2010-11-18 CA CA2814783A patent/CA2814783A1/en not_active Abandoned
- 2010-11-18 DK DK10831000.4T patent/DK2501754T3/en active
-
2017
- 2017-06-22 US US15/629,795 patent/US20170333477A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2501754A1 (en) | 2012-09-26 |
| WO2011060544A1 (en) | 2011-05-26 |
| CA2814783A1 (en) | 2011-05-26 |
| EP2501754A4 (en) | 2013-08-07 |
| DK2501754T3 (en) | 2018-09-03 |
| US20170333477A1 (en) | 2017-11-23 |
| US20120321721A1 (en) | 2012-12-20 |
| EP2501754B1 (en) | 2018-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2691723T3 (es) | Formulaciones de quitosán fisiológicas solubles combinadas con plasma rico en plaquetas (PRP) para reparación de tejidos | |
| ES2688977T3 (es) | Formulación novedosa de mezclas de soluciones fisiológicas de quitosano-sal inorgánica/sangre para la reparación de tejidos | |
| KR101114773B1 (ko) | 연골조직 수복용 조성물의 제조방법 | |
| TR201911079T4 (tr) | Kolajen ve fibrinin karıştırıldığı doku yapıştırıcısı ve bunun hazırlanmasına yönelik yöntem. | |
| KR20190007826A (ko) | 주입형 온도감응성 목재 기반 산화 나노 셀룰로오스를 포함한 유착 방지제 | |
| US9370608B2 (en) | Continuous matrix with osteoconductive particles dispersed therein, method of forming thereof, and method of regenerating bone therewith | |
| WO2023065474A1 (zh) | 基于磷酸钙的有机-无机复合生物活性材料及其制备方法 | |
| JP6877360B2 (ja) | 止血組成物 | |
| WO2022048126A1 (zh) | 一种骨科用无创植入高黏度胶材料及其制备方法及应用 | |
| ES2325313T3 (es) | Composicion gelificable, biocompatible e implantable. | |
| CN118718114A (zh) | 促骨再生骨蜡及其制备方法与应用 | |
| JP7078733B2 (ja) | 核酸、骨移植材及び陽イオン性高分子を含む骨移植用組成物とその製造方法、及びこれを製造するための骨移植用キット | |
| Xu et al. | Application of new bone cement biomaterials in osteoporotic compression fractures | |
| CN106310357A (zh) | 一种骨填充黏合剂及其制备方法及应用 | |
| CN103736149A (zh) | 一种可注射型生物活性人工骨材料及制备方法和应用 | |
| KR102008999B1 (ko) | 생체물질의 유실방지를 위한 생체막 | |
| CN118286522A (zh) | 一种骨折修复可吸收内固定材料及其制备方法和应用 | |
| CN116712604A (zh) | 一种阴离子改性骨修复水凝胶及其制备方法和应用 | |
| Lü et al. | Preparation and evaluation of self-hardening bone-rehabilitative composite with natural hydroxyapatite/chitosan | |
| TWI435728B (zh) | 注射式之骨修復複合材料 | |
| PT104674A (pt) | Estruturas compósitas à base de goma gelana para utilização em medicina regenerativa e seus métodos de preparação | |
| Adel Moh'd Fawzi | A novel glass polyalkenoate cement for fixation purposes in the skeleton/Adel Moh'd Fawzi AR Alhalawani | |
| Adel Moh’d Fawzi | A Novel Glass Polyalkenoate Cement for Fixation Purposes in the Skeleton | |
| Shavga et al. | The composite material litar in the treatment of osteal pathology in children | |
| TWM471881U (zh) | 創傷保護止血材 |