ES2712201T3 - Biomarcadores para la evaluación de riesgos y la monitorización del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardíaca que han recibido terapia guiada por el péptido natriurético de tipo B - Google Patents

Biomarcadores para la evaluación de riesgos y la monitorización del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardíaca que han recibido terapia guiada por el péptido natriurético de tipo B Download PDF

Info

Publication number
ES2712201T3
ES2712201T3 ES14152777T ES14152777T ES2712201T3 ES 2712201 T3 ES2712201 T3 ES 2712201T3 ES 14152777 T ES14152777 T ES 14152777T ES 14152777 T ES14152777 T ES 14152777T ES 2712201 T3 ES2712201 T3 ES 2712201T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
level
marker
patient
pnc
therapy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14152777T
Other languages
English (en)
Inventor
Dirk Block
Hanspeter Brunner
Ursula-Henrike Wienhues-Thelen
Christian Zaugg
Thomas Dieterle
Cheryl Mitchell
Johan Ubby
Wijk Sandra Sanders-Van
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2712201T3 publication Critical patent/ES2712201T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/62—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving urea
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4737—C-reactive protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5412—IL-6
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/575—Hormones
    • G01N2333/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Brain natriuretic peptide [BNP, proBNP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • G01N2333/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Método para identificar un paciente que es elegible para una intensificación de la terapia de la insuficiencia cardíaca, comprendiendo dicho método las etapas de: (a) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematócrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardíaca y que recibe terapia para insuficiencia cardiaca guiada por péptido de tipo PNC, (b) comparar el nivel (o niveles) del marcador (o marcadores) medidos en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia) y (c) identificar un paciente que es elegible para una intensificación de la terapia de la insuficiencia cardíaca o no.

Description

DESCRIPCION
Biomarcadores para la evaluacion de riesgos y la monitorizacion del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardfaca que han recibido terapia guiada por el peptido natriuretico de tipo B
La insuficiencia cardfaca (IC) es de entre las causas principales de morbilidad y mortalidad en muchos pafses en todo el mundo. Aunque las opciones de tratamiento disponibles pueden reducir la morbilidad y mortalidad en pacientes con IC, el numero relativo de pacientes elegibles que reciben estos tratamientos sigue siendo insatisfactoriamente baja (O'Donoghue M. y Braunwald E., Nat. Rev. Cardiol. 2010; 7: 13-20). Ademas, en pacientes elegibles para el tratamiento, la terapia se ha guiado y ajustado segun los signos y smtomas de IC a la maxima tolerancia a los farmacos (p.ej., segun los estadios NY-HA, los estadios ACC/AHA, o puntuaciones de congestion).
La medicion de los marcadores de peptido natriuretico, tales como el peptido natriuretico de tipo B (PNC), o su fragmento aminoterminal proPNC N-terminal (NT-proPNC), se ha convertido en una importante herramienta para el diagnostico y la estratificacion de riesgos de los pacientes que presentan IC. Ademas, existe nueva evidencia de que NT-proPNC resulta util como grna de la terapia medica en la insuficiencia cardiaca (Januzzi J, Journal of Cardiac Failure, 2011; 17: 622-625).
Sin embargo, la terapia de la IC guiada por NT-proPNC no identifica todos los pacientes en riesgo de descompensacion de IC y de sucesos adversos. En consecuencia, algunos pacientes siguen en riesgo, aunque muestran una respuesta favorable a la terapia con respecto a sus niveles de NT-proPNC. Y de esta manera, no todos los pacientes se benefician de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
El documento n° WO 2009/141374 da a conocer un metodo para identificar un sujeto susceptible de terapia cardfaca, en el que dicho sujeto sufre de insuficiencia cardfaca y necesita una terapia cardfaca basada en la determinacion de la cantidad de protema de union a acidos grasos hepaticos.
El documento n° WO 2010/125165 da a conocer un metodo para diagnosticar el dano renal en un sujeto con insuficiencia cardfaca o que se sospecha que sufre de insuficiencia cardfaca, que comprende las etapas de: a) determinar las cantidades de protema de union a acidos grasos de tipo hepatico (L-FABP, por sus siglas en ingles) o una variante de la misma y molecula 1 de dano renal (KIM-I, por sus siglas en ingles).
Kistorp da a conocer que los niveles de NT-proPNC, CRP y albumina urinaria son predictivos de mortalidad (JAMA 6 de abril, 2005;293(13):1609-16).
Shah informa de un ensayo piloto multicentro aleatorizado. En el ensayo, se sometio a ensayo si la gestion ambulatoria diuretica guiada por el peptido natriuretico de tipo B (PNC) y la evaluacion clmica resulto en un mayor numero de dfas de supervivencia y no hospitalizacion durante 90 dfas en comparacion con la evaluacion clmica por sf sola (J. Card. Fail. agosto de 2011;17(8):613-2).
El documento n° WO2008/015254 da a conocer un metodo de prediccion del riesgo de mortalidad o de un suceso cardiovascular adicional en un paciente de insuficiencia cardfaca basada en la medicion de NT proPNC y GDF-15.
El documento n° WO 2010/0070411 da a conocer un metodo basado en la deteccion de GDF-15, NT-proPNA, NT-proPNC y troponina cardiaca, de monitorizacion de un sujeto aparentemente estable que sufre de insuficiencia cardfaca. Ademas, da a conocer un metodo de diagnostico y/o decision de que terapia/medicacion debe aplicarse en un paciente aparentemente estable que sufre de insuficiencia cardiaca y que experimenta un cambio en su estado fisiologico.
Bohm et al. 2011 (Clin. Res. Cardiol., 100:973-981) proporciona una revision de metodos basados en la deteccion de NTproPNC para la grna de terapia y monitorizacion de un paciente de insuficiencia cardiaca. Tambien menciona la posibilidad de combinar PNC y troponina para la grna de la terapia de la insuficiencia cardiaca.
Miyata et al. (J. of Cardiology 2012, 59, 352-358) examinaron el efecto de una terapia intensificada en un grupo de pacientes de CHF sobre diferentes marcadores y parametros clmicos a los 3 meses vs la lmea base. La mitad del grupo se paso al diuretico de accion prolongada azosemida, mientras que la otra mitad se mantuvo con diureticos de accion corta (furosemida). Los autores encontraron una reduccion significativa tras 3 meses de los niveles plasmaticos de PNC y PNA en el grupo de azosemida. No se observaron diferencias significativas entre ambos grupos en los cambios de creatinina, NUS (=nitrogeno de urea sangumea), sodio, potasio y hematocrito.
Ventajosamente, se ha encontrado en los estudios subyacentes a la presente invencion que la combinacion de NT-proPNC o PNC con otros marcadores y parametros clmicos pueden utilizarse con fines de monitorizacion y como grna para la terapia ademas del estandar de cuidado actual de ajuste y titulacion de la terapia en pacientes de IC (IC cronica o aguda despues de la estabilizacion). Estos marcadores y parametros son creatinina, NUS (urea), glucosa, HbA1c, sodio, hemoglobina y hematocrito. Espedficamente, la adicion de estas mediciones a NT-proPNC o PNC, junto con el estandar de cuidado actual pueden estratificar adicionalmente segun riesgos los pacientes de IC ya guiados por NTproPNC pero que pueden requerir una terapia mas intensificada y una observacion mas minuciosa. De esta manera, la presente invencion optimiza la gma a la terapia de la insuficiencia cardfaca mas alla de NT-proPNC mediante la consideracion de combinaciones de peptidos natriureticos con otros marcadores y/o parametros clmicos.
En particular, se ha encontrado en los estudios de la presente invencion que la determinacion adicional de los marcadores de parametros a los que se hace referencia anteriormente permite la identificacion de un subgrupo de pacientes que muestran un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca pero que, sin embargo, son elegibles para una intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardfaca. Gracias a la presente invencion, pueden identificarse pacientes que requieren una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca que basandose en la medicion del nivel de un tipo PNC por sf sola no habnan recibido una terapia intensificada de la insuficiencia cardfaca.
De acuerdo con lo anterior, la presente invencion se refiere a un metodo para identificar un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, comprendiendo dicho metodo las etapas de:
(a) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que recibe terapia de la insuficiencia cardfaca guiada por peptido de tipo PNC, en particular terapia de la insuficiencia cardfaca guiada por NT-proPNC o terapia de la insuficiencia cardfaca guiada por PNC.
(b) comparar el nivel (o niveles) del marcador (o marcadores) medidos en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia) y
(c) identificar un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
En una realizacion, el metodo comprende ademas la etapa (c) de identificacion o seleccion de un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, es decir, de terapia guiada por el peptido de tipo PNC.
Ademas, el metodo puede comprender la etapa (b) de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca o de recomendacion de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca (en el caso de que el paciente haya sido identificado como elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca). De acuerdo con lo anterior, la presente invencion contempla ademas un metodo de identificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, comprendiendo dicho metodo las etapas (a) a (d) tal como se ha indicado anteriormente.
El metodo de la presente invencion, preferentemente es un metodo ex vivo o in vitro. Ademas, puede comprender etapas ademas de las anteriormente indicadas explfcitamente. Por ejemplo, algunas etapas adicionales pueden estar relacionadas con pretratamientos de las muestras o la evaluacion de los resultados obtenidos mediante el metodo. El metodo puede llevarse a cabo manualmente o asistido por automatizacion. Preferentemente, la etapa (a) y/o (b) pueden estar asistidas completa o parcialmente por automatizacion, p.ej. por equipos roboticos y sensoriales adecuados para la medicion en la etapa (a) o en una identificacion implementada por ordenador en la etapa (c).
El “paciente” tal como se indica en la presente memoria es, preferentemente, un mairnfero. Entre los mairnferos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, animales domesticados (por ejemplo, vacas, ovejas, gatos, perros y caballos), primates (por ejemplo, seres humanos y primates no humanos tales como monos), conejos y roedores (por ejemplo, ratones y ratas). En determinadas realizaciones, el paciente es un paciente humano. Los terminos “sujeto” y “paciente” se utilizan intercambiablemente en la presente memoria.
La expresion “seleccion de un paciente” o “ identificacion de un paciente” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a utilizar la informacion o datos generados relacionados con el nivel de por lo menos un marcador tal como se utiliza en el contexto de la presente invencion en una muestra de un paciente con el fin de identificar o seleccionar el paciente como mas probablemente beneficiado o menos probablemente beneficiado de una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. Preferentemente, un sujeto que es elegible para dicha intensificacion requiere dicha intensificacion, mientras que un sujeto que no es elegible para dicha intensificacion no requiere dicha intensificacion.
Se entiende que un sujeto que es elegible para la intensificacion de la terapia de insuficiencia cardfaca se beneficiara de la intensificacion, mientras que un sujeto que no es elegible para dicha intensificacion puede no beneficiarse de dicha intensificacion, p.ej., puede experimentar efectos secundarios adversos o perjudiciales derivados de la intensificacion. En particular, un sujeto se beneficia de la intensificacion, en el caso de que la intensificacion reduzca el riesgo de mortalidad de dicho sujeto y/o reduzca el riesgo de hospitalizacion y/o de descompensacion cardfaca de dicho sujeto, en particular dentro de una ventana temporal de 18 meses o 3 anos despues de la obtencion de la muestra. Preferentemente, el riesgo (o riesgos) anteriormente mencionados se reducen en 5%, mas preferentemente en 10%, todavfa mas preferentemente en 15% y, lo mas preferentemente, en 20%. Preferentemente, la hospitalizacion y mortalidad a las que se hace referencia en la presente memoria se deberan a insuficiencia cardfaca.
En contraste, un sujeto que no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca no se beneficiara (en particular, no se beneficiara significativamente) de la intensificacion. En particular, un sujeto no se beneficia de la intensificacion, en el caso de que la intensificacion no reduzca (en particular, que no reduzca significativamente) el riesgo de mortalidad de dicho sujeto y/o que no reduzca (en particular, que no reduzca significativamente) el riesgo de hospitalizacion y/o de descompensacion cardfaca de dicho sujeto y/o que incrementa el riesgo de efectos secundarios no deseados, en particular dentro de una ventana temporal de 18 meses o 3 anos despues de la obtencion de la muestra. En este caso, pueden evitarse costes innecesarios de atencion sanitaria, en el caso de que no se intensifique la terapia. Ademas, pueden evitarse efectos secundarios adversos que resultan de la intensificacion.
De esta manera, mediante la identificacion de un sujeto que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, puede evaluarse si dicho sujeto se beneficiara de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, o no. De acuerdo con lo anterior, la presente invencion se refiere ademas a un metodo de identificacion de un sujeto que se beneficiara de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, basandose en las etapas explicadas en otros sitios de la presente memoria.
Tal como se indica posteriormente en la presente memoria en mayor detalle, un sujeto que es elegible para la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardfaca tambien sera monitorizado a intervalos cortos, mientras que un sujeto que no es elegible para la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardfaca (es decir, que no requiera la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardfaca) se monitorizara a intervalos largos. Por lo tanto, ademas de la decision de si el tratamiento de la insuficiencia cardfaca debe intensificarse o no, puede evaluarse si el sujeto debe monitorizarse a intervalos cortos o a intervalos largos.
Tal como entendera el experto en la materia, la evaluacion realizada mediante el metodo de la presente invencion habitualmente no esta destinada a ser correcta para el 100% de los sujetos que deben diagnosticarse. Sin embargo, el termino requiere que la evaluacion sea correcta para una porcion estadfsticamente significativa de los pacientes (p.ej. una cohorte en un estudio de cohorte). Si una parte es esiadfsticamente significativa o no puede ser determinado sin mas por el experto en la materia utilizando diversas herramientas de evaluacion estadfstica bien conocidos, por ejemplo la determinacion de intervalos de confianza, la determinacion del valor de p, la prueba t de Student, la prueba de Mann-Whitney, etc. Se encuentra mas informacion en Dowdy y Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York, 1983. Los intervalos de confianza preferentes son por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 97%, por lo menos 98% o por lo menos 99%. Los valores de p preferentemente son 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 o 0,0001.
Se encuentra contemplado en el contexto de la presente invencion que el sujeto sufre de insuficiencia cardfaca (IC), en particular de insuficiencia cardfaca cronica. Ademas, el sujeto puede sufrir de insuficiencia cardfaca aguda estabilizada.
La expresion “insuficiencia cardfaca” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a una disfuncion diastolica o, en particular, de una disfuncion sistolica del corazon que esta acompanada de signos manifiestos de insuficiencia cardfaca tal como conocera el experto en la materia. Preferentemente, la insuficiencia cardiaca a la que se hace referencia en la presente memoria es la insuficiencia cardiaca cronica (que preferentemente esta causada por disfuncion sistolica). La insuficiencia cardiaca segun la presente invencion incluye la insuficiencia cardiaca evidente y/o avanzada. En la insuficiencia cardiaca evidente, el paciente muestra smtomas de insuficiencia cardiaca tal como es conocida por el experto en la materia.
La IC puede clasificarse en diversos grados de severidad.
Segun la clasificacion de la NYHA (New York Heart Association), los pacientes de insuficiencia cardiaca se clasifican como pertenecientes a las clases I, II, III y IV de la NYHA. Un paciente que presenta insuficiencia cardiaca ya ha experimentado cambios estructurales y funcionales en su pericardio, miocardio, circulacion coronaria o valvulas cardiacas. No podra restaurar por completo su salud y requiere un tratamiento terapeutico. Los pacientes de NYHA clase I no presentan smtomas evidentes de enfermedad cardiovascular pero ya presentan evidencia objetiva de alteracion funcional. Los pacientes de NYHA de clase II presentan una ligera limitacion de la actividad ffsica. Los pacientes de NYHA de clase III presentan una marcada limitacion de la actividad ffsica. Los pacientes de NYHA de clase IV no puede llevar a cabo ninguna actividad ffsica sin molestias. Muestran smtomas de insuficiencia cardiaca en reposo.
Esta clasificacion funcional se complementa con la clasificacion mas reciente de la American College of Cardiology and the American Heart Association (ver J. Am. Coll. Cardiol. 38:2101-2113, 2001, actualizada en 2005, ver J. Am. Coll. Cardiol. 46:e1-e82, 2005). Se han definido 4 estadios: A, B, C y D. Los estadios A y B no son de IC, sino que se considera que ayudan a identificar los pacientes precozmente, antes de desarrollar “verdaderamente” IC. Los pacientes de estadios A y B se definen mejor como aquellos pacientes con factores de riesgo de desarrollo de IC. Por ejemplo, los pacientes con enfermedad arterial coronaria, hipertension o diabetes mellitus que no muestran funcion ventricular izquierda (VI) deteriorada, hipertrofia o una distorsion geometrica de la camara se consideraffan de estadio A, mientras que los pacientes que son asintomaticos pero muestran hipertrofia del VI y/o una funcion del VI deteriorada se denominanan de estadio B. El estadio C se refiere entonces a pacientes con smtomas actuales o pasados de IC asociados a enfermedad c a ^a ca estructural subyacente (la mayor parte de los pacientes con IC) y el estadio D se refiere a pacientes con IC verdaderamente refractaria.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion "insuficiencia cardiaca" preferentemente se refiere a los estadios B y C de la clasificacion ACC/AHA a la que se ha hecho referencia anteriormente. En estos estadios, el sujeto muestra smtomas tfpicos de insuficiencia cardiaca. De acuerdo con lo anterior, el paciente preferentemente presenta insuficiencia cardiaca clasificada como de estadio B o C segun la clasificacion de ACC/AHA. Tambien preferentemente, el paciente presenta insuficiencia cardiaca segun la clase II o III de la clasificacion de NYHA.
Preferentemente, la insuficiencia cardiaca se debe a una funcion sistolica deteriorada. De acuerdo con lo anterior, en particular se encuentra contemplado que el paciente sufre de insuficiencia cardiaca sistolica. Preferentemente, el paciente presenta una fraccion de eyeccion del ventnculo izquierdo (FEVI) inferior a 50%, mas preferentemente inferior a 45%, y lo mas preferentemente, inferior a 40%.
El paciente que debe someterse a ensayo segun el metodo de la presente invencion recibira terapia guiada por el peptido de tipo PNC, es decir, terapia de la insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC. Las expresiones “terapia guiada por peptido de tipo PNC” y “terapia de la insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC” son bien conocidos en la tecnica. De acuerdo con lo anterior, el paciente que debe someterse a ensayo recibira terapia para la insuficiencia cardiaca (para ser mas exactos, en el momento en que se obtiene la muestra) que es guiada por un peptido de tipo PNC. De esta manera, se encuentra contemplado que por lo menos se haya tomado una decision con respecto a la terapia de insuficiencia cardiaca para dicho paciente en el pasado (y de esta manera, antes de obtener la muestra que debe someterse a ensayo) basada en el nivel de un peptido de tipo PNC en dicho paciente, en particular basada en el nivel sangumeo, serico o plasmatico de un peptido de tipo PNC en dicho paciente. De acuerdo con lo anterior, el nivel en el paciente de un peptido de tipo PNC puede haberse considerado para decisiones anteriores sobre el tratamiento de la insuficiencia cardiaca. Ademas, se encuentra contemplado que la presente decision con respecto a la terapia de la insuficiencia cardiaca sea la primera decision que implique la consideracion del nivel de un peptido de tipo PNC. De acuerdo con lo anterior, el paciente que recibe terapia para insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC puede ser un paciente en el que se inicia la terapia de insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC (en particular, inmediatamente despues de obtener la muestra que debe someterse a ensayo). Sin embargo, dicho paciente puede haber recibido terapia para insuficiencia cardiaca anteriormente que no ha sido guiada por un peptido de tipo PNC.
Los peptidos de tipo PNC preferentes se dan a conocer en otros sitios de la presente memoria. La terapia guiada por peptido de tipo PNC preferentemente puede ser una terapia guiada por PNC (peptido natriuretico cerebral) o, en particular terapia guiada por NT-proPNC (peptido natriuretico procerebral N-terminal) (para una explicacion de estos marcadores, ver en otros sitios).
En la terapia guiada por el peptido de tipo PNC, se utiliza el nivel de un peptido de tipo PNC para el control del tratamiento de la insuficiencia cardiaca. Basandose en el nivel, se realizan decisiones sobre el tratamiento de la insuficiencia cardiaca. En principio, un paciente con un nivel incrementado de un peptido de tipo PNC recibe una terapia mas intensificada que un paciente con un nivel reducido de este marcador. La terapia guiada por el peptido de tipo PNC es bien conocida en la tecnica y se describe, p.ej., en Sanders-van Wijk et al. Eur. J. Heart Fail (2013) 15 (8): 910-918. Ademas, las terapias guiadas por peptido de tipo PNC se revisan en Januzzi, ver Archives of Cardiovascular Disease (2012), 105, 40 a 50.
En una realizacion preferente, el paciente muestra un nivel (en particular un nivel sangumeo, serico o plasmatico) de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC, siendo indicativa de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca. De acuerdo con lo anterior, el paciente es un paciente con un nivel de un peptido de tipo PNC que, administrado solo (es decir, no en combinacion con por lo menos un marcador adicional tal como se indica en la etapa (a) del metodo anteriormente mencionado), puede ser indicativo de un paciente que no es elegible de una intensificacion de la terapia de insuficiencia cardiaca. Los niveles de referencia preferentes de dicho peptido de tipo PNC son indicativos de la intensificacion de la terapia de insuficiencia cardiaca que debe aplicarse en el contexto de la presente invencion son los indicados en los Ejemplos. Los niveles de referencia preferentes se encuentran comprendidos en un intervalo de aproximadamente 80 a 400 pg/ml, o en particular, de aproximadamente 80 a 200 pg/ml para PNC, o dentro de un intervalo de aproximadamente 450 a 2.200 pg/ml, o en particular de aproximadamente 800 pg/ml a 1.200 pg/ml para NT-proPNC. Son niveles de referencia preferentes adicionales: aproximadamente 100 pg/ml o 400 pg/ml para PNC, y aproximadamente 1.000 pg/ml o 1.200 pg/ml para NT-proPNC. De esta manera, el paciente segun la presente invencion puede mostrar un nivel de NT-proPNC, en particular un nivel sangumeo, serico o plasmatico de NT-proPNC inferior a 1.000 pg/ml o 1.200 pg/ml.
Ademas, se encuentra contemplado que el paciente que muestra un nivel de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia de dicho peptido de tipo PNC que es indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca presente un nivel (en particular un nivel sangumeo, serico o plasmatico) de PNC comprendido dentro del intervalo de aproximadamente 80 a aproximadamente 400 pg/ml, en particular dentro del intervalo de aproximadamente 80 a aproximadamente 200 pg/ml. Ademas, el paciente que muestra un nivel de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC que es indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca puede presentar un nivel (en particular un nivel sangumeo, serico o plasmatico) de NT-proPNC comprendido dentro del intervalo de 450 a 2.200 pg/ml, en particular dentro del intervalo de 800 a 1.200 pg/ml.
Preferentemente, el termino “aproximadamente” tal como se utiliza en la presente memoria comprende un intervalo de y -20%, mas preferentemente un intervalo de y -10%, todavfa mas preferentemente un intervalo de y -5%, y lo mas preferentemente, un intervalo de y -2% respecto a la cantidad espedfica, p.ej. la indicacion de una cantidad de “aproximadamente 100” pretende comprender una cantidad en un intervalo de 80 a 120. Ademas, el termino “aproximadamente” se refiere a la cantidad exacta. Preferentemente, los niveles se miden tal como se indica en los Ejemplos.
La expresion “terapia de la insuficiencia cardfaca” (en la presente memoria tambien denominada “tratamiento de la insuficiencia cardfaca”) tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a cualquier tratamiento que permita el tratamiento de la insuficiencia cardfaca. Preferentemente, la expresion comprende cambios en el estilo de vida, regimen de alimentacion, intervenciones en el cuerpo, asf como la administracion de medicamentos apropiados, uso de dispositivos y/o trasplante de organos para el tratamiento de un paciente que sufre de insuficiencia cardfaca.
Entre los cambios del estilo de vida se incluyen el cese del tabaquismo, la moderacion del consumo de alcohol, el incremento de la actividad ffsica, la perdida de peso, la restriccion de sodio (sal), el control del peso y la alimentacion saludable (tal como aceite de pescado diario).
Son dispositivos preferentes para la aplicacion, marcapasos y dispositivos de resincronizacion, desfibrilador, bombas de balon intraaortico y dispositivos de asistencia ventricular izquierda.
En una realizacion preferente, la terapia de la insuficiencia cardfaca es terapia de la insuficiencia cardfaca medicinal. De acuerdo con lo anterior, la terapia de la insuficiencia cardfaca comprende la administracion de uno o mas medicamentos. El termino “administrar” tal como se utiliza en la presente memoria se utiliza en el sentido mas amplio y comprende, entre otras, la administracion oral, enterica, topica y la “administracion parenteral”. Las expresiones “administracion parenteral” y “administrado parenteralmente” tal como se utilizan en la presente memoria se refieren a modos de administracion diferentes de la administracion enterica y topica, habitualmente mediante inyeccion, e incluyen, sin limitarse a las mismas, las inyecciones e infusiones intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardfaca, intradermica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutanea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural, e intraesternal, y la infusion. En una realizacion, la medicacion se administra por via oral.
Los medicamentos adecuados para el tratamiento de la insuficiencia cardfaca son bien conocidos en la tecnica; ver, p.ej., Heart Disease, 8a edicion, eds. Braunwald, Elsevier Sounders, capftulo 24 o ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure (European Heart Journal (2008) 29, 2388-2442). Preferentemente, el tratamiento de la insuficiencia cardfaca incluye la administracion de por lo menos un medicamento seleccionado del grupo que consiste en inhibidores del enzima conversor de la angiotensina (inhibidores de la ACE), bloqueantes de receptores de la angiotensina II (frecuentemente tambien denominados antagonistas de receptores de la angiotensina II), bloqueantes beta-adrenergicos (en la presente memoria tambien denominados beta-bloqueantes), diureticos, antagonistas de aldosterona, agonistas adrenergicos, agentes inotropicos positivos, antagonistas del calcio, hidralazina, nitratos y aspirina. Resulta particularmente preferente que el medicamento sea un inhibidor del enzima conversor de angiotensina, un bloqueante de receptores de la angiotensina II, un beta-bloqueante y/o un agente bloqueante de aldosterona.
Entre los inhibidores de ACE preferentes se incluyen benazepril, captopril, cilazaprilenalapril, fosinopril, lisinopril, moexipril, perindopril, quinapril, ramipril, spirapril y trandolapril. Un inhibidor particularmente preferente es enalapril.
Entre los beta-bloqueantes preferentes se incluyen ebutolol, alprenolol, atenolol, betaxolol, bisoprolol, bupranolol, carazolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, metipranolol, metoprolol, nadolol, nebivolol, oxprenolol, penbutolol, pindolol, propanolol, sotalol, tanilolol y timolol. Un beta-bloqueante particularmente preferente es atenolol, bisoprolol, carvedilol o metoprol.
Son antagonistas de receptor de la angiotesina II preferentes, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, telmisartan y eprosartan. Un antagonista particularmente preferente es losartan o valsartan.
Los diureticos preferentes son diureticos del asa, tiazida y diureticos de tipo tiazida, diureticos ahorradores de K, antagonistas de receptor de mineralocorticoide y antagonistas de vasopresina.
Son antagonistas de aldosterona preferentes, eplerona, espironolactona, canrenona, mexrenona, prorenona y estatinas, en particular atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina. Un antagonista particularmente preferente es la espironolactona.
Los agentes inotropicos positivos preferentes son la digoxina y la digitoxina.
Los antagonistas del calcio preferentes son las dihidropiridinas, verapamilo y diltiazem.
Son agonistas adrenergicos preferentes, dobutamina, dopamina, epinefrina, isoprotenerol, norepinefrina y fenilefrina.
La terapia de la insuficiencia cardfaca que debe intensificarse, o no, puede ser cualquier tratamiento tal como se ha indicado anteriormente en la presente memoria. Sin embargo, en una realizacion preferente, la terapia de la insuficiencia cardfaca comprende la administracion de por lo menos un medicamento tal como se ha indicado anteriormente. En una realizacion todavfa mas preferente, la terapia de la insuficiencia cardfaca comprende la administracion de por lo menos un medicamento seleccionado del grupo que consiste en un inhibidor del enzima conversor de la angiotensina, un bloqueante de receptor de la angiotensina II, un beta-bloqueante, un diuretico y un antagonista de aldosterona. Mas preferentemente, el tratamiento de la insuficiencia cardfaca que debe intensificarse comprende la administracion combinada de un beta-bloqueante y un inhibidor de la ACE.
Segun el metodo de la presente invencion, debe evaluarse si el tratamiento de la insuficiencia cardfaca del paciente que debe someterse a ensayo debe intensificarse o no. Preferentemente, la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardfaca comprende por lo menos uno de los siguientes:
• incrementar la dosis de un medicamento administrado anteriormente o de medicamentos administrados anteriormente;
• la administracion de un medicamento adicional o de otro medicamento (o medicamentos), en particular la administracion de un medicamento (o medicamentos) adicional con un modo de accion diferente al del medicamento o medicamentos administrados anteriormente;
• terapia de dispositivo, en particular, utilizacion de dispositivos marcapasos, terapia de resincronizacion cardiaca (TRC), dispositivos desfibriladores implantables (DDI) o dispositivos de asistencia ventricular izquierda (DAVI) y • combinaciones de los mismos.
Preferentemente, la intensificacion comprende incrementar la dosis de un medicamento administrado anteriormente o de medicamentos administrados anteriormente, en particular incrementar la dosis de un medicamento seleccionado del grupo que consiste en un diuretico, un inhibidor del enzima conversor de la angiotensina, un bloqueante de receptor de la angiotensina II, un antagonista de aldosterona y un beta-bloqueante. Como incrementar la dosis es bien conocido de la tecnica y, p. ej., puede derivarse a partir de las directrices. Preferentemente, las dosis de estos medicamentos pueden incrementarse hasta la dosis terapeutica maxima recomendada o hasta la dosis maxima tolerada, sea cual sea la que se alcance primero. Tambien preferentemente, la dosis puede incrementarse en por lo menos 20% o en por lo menos 50%.
Tambien preferentemente, la intensificacion comprende la administracion de un medicamento (o medicamentos) adicional, en particular la administracion de un medicamento (o medicamentos) adicional con un modo de accion diferente que los medicamentos administrados anteriormente, o la aplicacion de dispositivos adicionales (es decir, de medicamentos/dispositivos que no han sido administrados/utilizados antes de llevar a cabo el metodo de la presente invencion). Entre los medicamentos adicionales preferentes se incluyen hidralazina, nitratos, agentes inotropicos y agentes adrenergicos. Entre los dispositivos preferentes se incluyen dispositivos marcapasos, terapia de resincronizacion cardiaca (TRC) y dispositivos desfibriladores implantables (DDI).
Ademas, la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardiaca puede comprender ademas la monitorizacion del paciente a intervalos cortos. De acuerdo con lo anterior, llevando a cabo el metodo de la presente invencion puede identificarse un paciente que requiera una monitorizacion estrecha, en particular con respecto a la terapia de la insuficiencia cardiaca (y, de esta manera, una observacion mas estrecha). Por “monitorizacion mas estrecha” preferentemente se hace referencia a que los niveles de los marcadores a los que se hace referencia en la presente memoria en relacion al metodo de la presente invencion se miden en por lo menos una muestra adicional obtenida del paciente despues de transcurrir un intervalo corto desde la muestra a la que se hace referencia en la etapa a) del metodo de la presente invencion. Los intervalos cortos preferentes se mencionan posteriormente en la presente memoria.
Un paciente que no requiere la intensificacion del tratamiento de la insuficiencia cardiaca preferentemente puede continuar con el tratamiento de la insuficiencia cardiaca sin modificar el regimen de tratamiento. De esta manera, no resulta necesario adaptar la dosis del medicamento o medicamentos administrados y/o cambiar los medicamentos.
El termino "muestra" se refiere a una muestra de un lfquido corporal, a una muestra de celulas separadas o a una muestra de un tejido o de un organo. Las muestras de lfquidos corporales pueden obtenerse mediante tecnicas bien conocidas y entre ellas se incluyen muestras de sangre, plasma, suero, orina, lfquido linfatico, esputo, ascites, lavado bronquial o cualquier otra secrecion corporal o derivado de la misma. Las muestras de tejidos u organos pueden obtenerse de cualquier tejido u organo mediante, por ejemplo, biopsia. Las celulas separadas pueden obtenerse de lfquidos corporales o de los tejidos u organos mediante tecnicas de separacion tales como la centrifugacion o la separacion celular. P.ej., las muestras de celulas, tejidos u organos pueden obtenerse de aquellas celulas, tejidos u organos que expresan o producen el biomarcador. La muestra puede estar congelada, ser fresca, fijada (p.ej. fijada con formalina), centrifugada y/o incluida (p.ej. incluida en parafina), etc. La muestra celular puede, evidentemente, someterse a una diversidad de tecnicas post-recoleccion bien conocidas de preparacion y almacenamiento (p.ej. la extraccion de acidos nucleicos y/o protemas, la fijacion, el almacenamiento, la congelacion, la ultrafiltracion, la concentracion, la evaporacion, la centrifugacion, etc.) antes de evaluar el nivel del marcador en la muestra. De manera similar, tambien pueden someterse biopsias a tecnicas post-recoleccion de preparacion y almacenamiento, p.ej. la fijacion.
En una realizacion, la muestra es una muestra de sangre, suero o, en particular, una muestra de plasma.
La muestra puede obtenerse del paciente en orden creciente de preferencia por lo menos un mes, por lo menos seis meses o por lo menos 12 meses despues del inicio de la terapia de la insuficiencia cardfaca, en particular la terapia guiada por peptido de tipo PNC. Preferentemente, dicha terapia es terapia de la insuficiencia cardfaca medicinal.
El nivel de los biomarcadores a los que se hace referencia en la presente memoria puede determinarse en la misma muestra o en muestras diferentes (es decir, en dos o tres muestras diferentes) del paciente.
El termino “medir” el nivel de un marcador tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a la cuantificacion del biomarcador, p.ej. para determinar el nivel del biomarcador en la muestra, utilizando metodos apropiados de deteccion descritos en otros sitios en la presente memoria. En una realizacion, el nivel de por lo menos un biomarcador se mide mediante la puesta en contacto de la muestra con un agente de deteccion que se une espedficamente al marcador respectivo, formando de esta manera un complejo entre el agente y dicho marcador, la deteccion del nivel de complejo formado y, de esta manera, la medicion del nivel de dicho marcador. En el caso de que el marcador sea acido urico, el nivel de dicho biomarcador puede medirse poniendo en contacto la muestra con agente de deteccion, en particular un enzima o compuesto, que permita la conversion de dicho biomarcador, p.ej. que permite la oxidacion del acido urico. El enzima puede ser una uricasa (EC 1.7.3.3) que cataliza la oxidacion del acido urico en 5-hidroxiisourato. Ademas, el enzima puede ser una peroxidasa. El compuesto puede ser acido fosfotungstico. En el caso de que el marcador sea urea, el agente de deteccion puede ser ureasa. En el caso de que el marcador sea glucosas, el agente de deteccion puede ser hexoquinasa. En el caso de que el marcador sea creatinina, el agente de deteccion puede ser acido pfcrico (que forma un complejo con la creatinina). El nivel del complejo de acido pfcrico y creatinina puede medirse.
El marcador “creatinina” es bien conocido de la tecnica. En el metabolismo muscular, la creatinina se sintetiza endogenamente a partir de creatina y creatina fosfato. Bajo condiciones de funcion renal normal, la creatinina se excreta mediante filtracion glomerular. Las determinaciones de creatinina se llevan a cabo para el diagnostico y monitorizacion de la enfermedad renal aguda y cronica, asf como para la monitorizacion de la dialisis renal. Las concentraciones de creatinina en la orina pueden utilizarse como valores de referencia para la excrecion de determinados analitos (albumina, a-amilasa). La creatinina puede determinarse tal como indican Popper et al. (Popper H. et al. Biochem Z 1937;291:354), Seelig y Wust (Seelig HP, Wust H. Arztl Labor 1969; 15:34) o Bartels (Bartels H. et al., Clin. Chim. Acta 1972;37:193). Por ejemplo, se anade hidroxido sodico y acido pfcrico a la muestra para iniciar la formacion de complejo de creatinina-acido pfcrico. En solucion alcalina, la creatinina forma un complejo amarillonaranja con picrato. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentracion de creatinina y puede medirse fotometricamente.
El acido urico es el producto final del metabolismo de las purinas en un organismo sujeto. El nombre de IUPAC es 7,9-dihidro-3H-purm-2,6,8-triona. El compuesto frecuentemente tambien se denomina urato, acido lftico, 2,6,8-trioxipurina, 2,6,8-trihidroxipurina, 2,6,8-trioxopurina, 1H-purina-2,6,8-triol (compuesto de formula C5H4N4O3 , PubChem CID 1175, numero CAS 69-93-2).
Las mediciones del acido urico se utilizan en el diagnostico y tratamiento de numerosos trastornos renales y metabolico, incluyendo la insuficiencia renal, la gota, la leucemia, la soriasis, la inanicion u otras condiciones de caquexia, y de pacientes que reciben farmacos citotoxicos. La oxidacion del acido urico proporciona la base para dos enfoques a la determinacion cuantitativa de este metabolito purina. Un enfoque es la reduccion del acido fosfotungstico en una solucion alcalina en azul de tungsteno, que se mide fotometricamente. Un segundo enfoque, descrito por Praetorius y Poulson, utiliza el enzima uricasa para oxidar el acido urico; este metodo elimina las interferencias intrmsecas a la oxidacion qrnmica (Praetorius E., Poulsen H., Enzymatic Determination of Uric Acid with Detailed Directions, Scandinav. J. Clin. Lab. Investigation 3:273-280, 1953). La uricasa puede utilizarse en metodos que implican la medicion de UV del consumo de acido urico o, en combinacion con otros enzimas, para proporcionar un ensayo colorimetrico. Otro metodo es el metodo colorimetrico desarrollado por Town et al. (Town MH, Gehm S, Hammer B, Ziegenhorn J. J Clin Chem Clin Biochem 1985;23:591). La muestra se incuba inicialmente con una mezcla de reactivos que contiene ascorbato oxidasa y un sistema de aclarado. En dicho sistema de ensayo es importante que el acido ascorbico presente en la muestra resulte eliminado en la reaccion preliminar; lo anterior bloquear cualquier interferencia del acido ascorbico con la reaccion posterior del indicador POD. Tras la adicion del reactivo iniciador, se inicia la oxidacion del acido urico por la uricasa.
En el contexto de la presente invencion, el acido urico puede determinarse mediante cualquier metodo que se considere apropiado. Preferentemente, el biomarcador se determina mediante los metodos anteriormente indicados. Mas preferentemente, el acido urico se determina mediante la aplicacion de una ligera modificacion del metodo colorimetrico indicado anteriormente. En la presente reaccion, el peroxido reacciona en presencia de peroxidasa (POD), N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina (TOOS) y 4-aminofenazona para formar un pigmento quinonadiimina. La intensidad del color rojo formado es proporcional a la concentracion del acido urico y se determina fotometricamente.
La urea es el producto final principal del metabolismo del nitrogeno de las protemas. Presenta la formula qmmica CO(NH2)2 y se sintetiza mediante el ciclo de la urea en el Idgado a partir de amonio que se produce mediante desaminacion de aminoacidos. La urea es excretada principalmente por los rinones, aunque tambien se excretan cantidades mmimas en el sudor y es degradada en los intestinos por la accion bacteriana. La determinacion del nitrogeno de urea en sangre es el ensayo de cribado mas ampliamente utilizado para la funcion renal. La urea puede medirse mediante un ensayo in vitro para la determinacion cuantitativa de la urea/nitrogeno de la urea en suero, plasma y orina humanas en sistemas Roche/Hitachi cobas c. El ensayo puede llevarse a cabo automaticamente utilizando diferentes analizadores, incluyendo cobas c 311 y cobas c 501/502. El ensayo es un ensayo cinetico con ureasa y glutamato deshidrogenasa. La urea es hidrolizada por la ureasa para formar amonio y carbonato. En la segunda reaccion, el 2-oxoglutarato reacciona con el amonio en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) y el coenzima NADH para producir L-glutamato. En esta reaccion, se oxidan 2 moles de NADH en NAD+ por cada mol de urea hidrolizada. La tasa de reduccion de la concentracion de NADH es directamente proporcional a la concentracion de la urea en el especimen y se mide fotometricamente.
El marcador glucosa tambien es bien conocido de la tecnica. Tal como se utiliza en la presente memoria, el marcador preferentemente se refiere a D-glucosa. El nivel del marcador puede determinarse mediante metodos bien conocidos. Por ejemplo, el marcador puede fosforilarse a D-glucosa-6-fosfato en presencia del enzima hexoquinasa (HK) y adenosm-5’-trifosfato (ATP) con formacion simultanea de adenosm-5’-difosfato (ADP). En presencia del enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, la D-glucosa-6-fosfato es oxidada por NADP a D-gluconato fosfato con formacion de nicotinamida-adenina dinucleotido fosfato reducido (NADPH). La cantidad de NADPH formada en dicha reaccion es estequiometrica respecto a la cantidad de D-glucosa. NADPH puede medirse a partir de la absorbancia de la luz.
El marcador sodio es bien conocido de la tecnica. El sodio es el cation extracelular principal y funciona para mantener la distribucion de lfquidos y la presion osmotica. Algunas causas de los niveles reducidos de sodio incluyen el vomito o diarrea prolongado, una reabsorcion reducida en los rinones y una retencion excesiva de lfquidos. Entre las causas comunes de sodio incrementado se incluyen la perdida excesiva de lfquidos, una ingesta elevada de sales y una reabsorcion renal incrementada. El nivel del marcador puede determinarse mediante la aplicacion de un electrodo selectivo de iones (ESI) que utiliza las propiedades unicas de determinados materiales membranales para desarrollar un potencial electrico (fuerza electromotriz, FEM) para las mediciones de iones en solucion. El electrodo presenta una membrana selectiva en contacto con tanto la solucion de ensayo como una solucion de relleno interna. La solucion de relleno interna contiene el ion de ensayo a una concentracion fija. Debido a la naturaleza particular de la membrana, los iones de ensayo se asocian estrechamente con la membrana en cada cara. Se determina la FEM de la membrana como la diferencia de concentraciones de ion de ensayo en la solucion de ensayo y en la solucion de relleno interna. La FEM se desarrolla segun la ecuacion de Nernst para un ion espedfico en solucion.
El marcador hemoglobina (Hb) es bien conocido de la tecnica. La hemoglobina comprende cuatro subunidades proteicas, conteniendo cada una fraccion heme y es la protema de pigmentacion roja que se localiza en los eritrocitos. Su funcion principal es transportar oxfgeno y dioxido de carbono en la sangre. Cada molecula de Hb es capaz de unirse a cuatro moleculas de oxfgeno. La Hb consiste en una diversidad de subfracciones y derivados. El termino “hemoglobina” tal como se utiliza en la presente memoria preferentemente se refiere a hemoglobina total. El nivel de hemoglobina puede medirse mediante metodos bien conocidos, p.ej. mediante la oxidacion de la hemoglobina en metemoglobina por el hexacianoferrato de potasio (III) (Fe2+ ^ Fe3+). El nivel de hemoglobina es proporcional a la intensidad de color y, p.ej., puede medirse a una longitud de onda de 567 nm a 37°C. El nivel de hemoglobina tambien puede medirse mediante la puesta en contacto de la muestra con un anticuerpo que se une espedficamente a la hemoglobina.
El marcador HbAlc (hemoglobina glicada, glicohemoglobina) tambien es bien conocida en la tecnica. HbAIc es una de las hemoglobinas glicadas, una subfraccion formada mediante la union de diversos azucares a la molecula de Hb. HbAIc se forma en dos etapas mediante la reaccion no enzimatica de la glucosa con el grupo amino N-terminal de la cadena p de la Hb adulta normal (HbA). La primera etapa es reversible y rinde HbAIc labil. Esta se reorganiza para formar HbAIc estable en una segunda etapa de reaccion. En los eritrocitos, la cantidad relativa de HbA convertida en HbAIc estable se incrementa con la concentracion media de glucosa en la sangre. La conversion en HbAIc estable esta limitada por el tiempo de vida de los eritrocitos, de aproximadamente 100 a 120 dfas. El nivel de la hemoglobina puede medirse mediante metodos bien conocidos. Preferentemente, la medicion del nivel de HbAIc comprende la medicion del nivel de todas las variantes de hemoglobina que estan glicadas en el extremo N-terminal de la cadena p de la HbA (hemoglobina adulta). En una realizacion, el nivel de dicho marcador se mide mediante la puesta en contacto de la muestra con un anticuerpo que se une espedficamente a este marcador. En este caso, la glicohemoglobina (HbA1c) en la muestra reacciona con el anticuerpo anti-HbAIc para formar complejos de antfgeno-anticuerpo solubles.
El hematocrito (Ht o HCT) tambien conocido como volumen concentrado celular (VCC) o fraccion de volumen eritrocitario (FVE), es el porcentaje en volumen (%) de globulos rojos en la sangre. Tal como se utiliza, el termino “hematocrito” preferentemente se refiere al porcentaje de globulos rojos concentrados en un volumen de sangre completa. El hematocrito puede determinarse mediante la centrifugacion de sangre heparinizada en un tubo capilar (tambien conocido como tubo microhematocrito) a 10.000 rpm durante cinco minutos. Esta operacion separa la sangre en capas. El volumen de globulos rojos concentrados dividido por el volumen total de muestra de sangre proporciona VCC. Debido a que se utiliza un tubo, puede calcularse mediante medicion de las longitudes de las capas. Con los equipos de laboratorio modernos, el hematocrito se calcula en un analizador automatizado y no se mide directamente. Se determina mediante multiplicacion del recuento de globulos rojos por el volumen celular medio. El hematocrito es ligeramente mas preciso, ya que el VCC incluye pequenas cantidades de plasma sangumeo atrapado entre los globulos rojos. Puede obtenerse un hematocrito estimado como porcentaje multiplicando por tres la concentracion de hemoglobina en g/dl y excluyendo las unidades.
Los biomarcadores a los que se hace referencia en la presente memoria pueden detectarse utilizando metodos generalmente conocidos de la tecnica. Los metodos de deteccion generalmente comprenden metodos para cuantificar el nivel de un biomarcador en la muestra (metodo cuantitativo). Es generalmente conocido por el experto en la materia cuales de los metodos siguientes resultan adecuados para la deteccion cualitativa y/o cuantitativa de un biomarcador. Las muestras pueden someterse a ensayo convenientemente para, p.ej., protemas utilizando transferencias western e inmunoensayos, tales como ELISA, RlA, inmunoensayos basados en fluorescencia, que se encuentran disponibles comercialmente. Entre los metodos adecuados adicionales para detectar el biomarcador se incluyen medir una propiedad ffsica o qmmica espedfica del peptido o polipeptido, tal como su masa molecular precisa o el espectro de RMN. Dichos metodos comprenden, p.ej., biosensores, dispositivos opticos acoplados a inmunoensayos, biochips, dispositivos anaffticos, tales como espectrometros de masas, analizadores de RMN o dispositivos cromatograficos. Ademas, entre los metodos se incluyen los metodos basados en ELISA de microplacas, inmunoensayos totalmente automatizados o robotizados (disponibles, por ejemplo, de analizadores Elecsys™), CBA (un ensayo enzimatico de union del cobalto, disponible en, por ejemplo, los analizadores Roche-Hitachi™) y ensayos de aglutinacion de latex (disponibles en, por ejemplo, los analizadores Roche-Hitachi™).
Para la deteccion de protemas biomarcadoras a las que se hace referencia en la presente memoria, se encuentra disponible un amplio abanico de tecnicas de inmunoensayo que utilizan dicho formato de ensayo; ver, p.ej., las patentes US n° 4.016.043, n° 4.424.279 y n° 4.018.653. Entre ellas se incluyen los ensayos de tipo 'sandwich' tanto de un solo sitio como de dos sitios de los tipos no competitivos, asf como en los ensayos de union competitiva tradicionales. Entre dichos ensayos se incluyen ademas la union directa de un anticuerpo marcado a un marcador diana.
Los ensayos de tipo sandwich son de entre los inmunoensayos mas utiles y mas comunmente utilizados.
Los metodos para medir los fenomenos de electroquimioluminiscencia son bien conocidos. Dichos metodos utilizan la capacidad de algunos complejos metalicos especiales de alcanzar, mediante oxidacion, un estado excitado del que se degradan al estado fundamental emitiendo electroquimioluminiscencia. Para una revision, ver Richter M.M., Chem. Rev. 104:3003-3036, 2004.
Los biomarcadores tambien pueden detectarse mediante metodos generalmente conocidos, entre ellos la espectroscopfa de resonancia magnetica (espectroscopfa de RMN), la cromatograffa de gases-espectrometna de masas (CG-EM), la cromatograffa ffquida-espectrometna de masas (CL-EM), la cromatograffa ffquida de alto y ultraalto rendimiento, HPLC tales como la HPLC de fase inversa, por ejemplo la HPLC de apareamiento de iones con deteccion dual de longitudes de onda de UV, la electroforesis capilar con deteccion de la fluorescencia inducida por laser, la cromatograffa de intercambio anionico y deteccion de fluorescencia y la cromatograffa de capa fina.
Preferentemente, medir el nivel de un biomarcador tal como se indica en la presente memoria comprende las etapas de: (a) poner en contacto una celula capaz de inducir una respuesta celular, la intensidad de la cual es indicativa del nivel del peptido o polipeptido con dicho peptido o polipeptido durante un periodo de tiempo adecuado, (b) medir la respuesta celular. Para medir respuestas celulares, la muestra o muestra procesada se anade, preferentemente, a un cultivo celular y se mide una respuesta celular interna o externa. La respuesta celular puede incluir la expresion medible de un gen informador o la secrecion de una sustancia, por ejemplo un peptido, polipeptido o una molecula pequena. La expresion o sustancia genera una senal de intensidad que se correlaciona con el nivel del peptido o polipeptido.
Tambien preferentemente, medir el nivel de un peptido o polipeptido comprende la etapa de medir una senal de intensidad espedfica obtenible del peptido o polipeptido en la muestra. Tal como se ha indicado anteriormente, dicha senal puede ser la intensidad de senal observada a una m/z variable espedfica para el peptido o polipeptido observada en los espectros de masas o un espectro de RMN espedfico para el peptido o polipeptido.
La medicion del nivel de un peptido o polipeptido puede, preferentemente, comprender las etapas de: (a) poner en contacto el peptido con un agente de union espedfico, (b) (opcionalmente) eliminar el agente de union no unido, (c) medir el nivel de agente de union unido, es decir, el complejo del agente de union formado en la etapa (a). Segun una realizacion preferente, dichas etapas de puesta en contacto, eliminacion y medicion pueden llevarse a cabo con una unidad analizadora del sistema dado a conocer en la presente memoria. Segun algunas realizaciones, dichas etapas pueden llevarse a cabo con una unica unidad analizadora de dicho sistema o con mas de una unidad analizadora en comunicacion operable entre su Por ejemplo, segun una realizacion espedfica, dicho sistema dado a conocer en la presente memoria puede incluir una primera unidad analizadora para llevar a cabo dichas etapas de puesta en contacto y eliminacion y una segunda unidad analizadora, operablemente conectada con dicha primera unidad analizadora mediante una unidad transportadora (por ejemplo, un brazo robotico), que lleva a cabo dicha etapa de medicion.
El agente de union unido, es decir, el agente de union o el complejo de agente de union/peptido, generara una senal con una intensidad. La union segun la presente invencion incluye la union tanto covalente como no covalente. Un agente de union segun la presente invencion puede ser cualquier compuesto, p.ej. un peptido, polipeptido, acido nucleico o molecula pequena que se une al peptido o polipeptido indicado en la presente memoria. Entre los agentes de union eferentes se incluyen anticuerpos, acidos nucleicos, peptidos o polipeptidos, tales como receptores o parejas de union para el peptido o polipeptido y fragmentos del mismo que comprenden los dominios de union para los peptidos, y aptameros, por ejemplo acidos nucleicos o aptameros peptfdicos. Los metodos para preparar dichos agentes de union son bien conocidos de la tecnica. Por ejemplo, la identificacion y produccion de anticuerpos o aptameros adecuados tambien es ofrecida por proveedores comerciales. Al experto en la materia le resultaran familiares los metodos para desarrollar derivados de dichos agentes de union de afinidad o especificidad mas elevada. Por ejemplo, pueden introducirse mutaciones aleatorias en los acidos nucleicos, peptidos o polipeptidos. A continuacion, dichos derivados pueden someterse a ensayo para la union segun los procedimientos de cribado conocidos de la tecnica, por ejemplo la expresion fagica. Entre los anticuerpos a los que se hace referencia en la presente memoria se incluyen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales, asf como fragmentos de los mismos, tales como los fragmentos Fv, Fab y F(ab)2 que son capaces de unirse a antfgenos o haptenos. La presente invencion tambien incluye anticuerpos de cadena sencilla y anticuerpos Idbridos humanizados, en los que las secuencias de aminoacidos de un anticuerpo donante no humano que muestre una especificidad de antfgeno deseada se combinan con secuencias de un anticuerpo aceptor humano. Las secuencias donantes habitualmente incluyen por lo menos los residuos aminoacidos de union a antfgeno del donante, aunque tambien pueden comprender otros residuos aminoacidos estructural y/o funcionalmente relevantes del anticuerpo donante. Dichos hfbridos pueden prepararse mediante varios metodos bien conocidos de la tecnica. Preferentemente, el ligando o agente se une espedficamente al peptido o polipeptido. La union espedfica segun la presente invencion se refiere a que el ligando o agente no debe unirse sustancialmente ("reaccionar cruzadamente") con otro peptido, polipeptido o sustancia presente en la muestra que debe analizarse. Preferentemente, el peptido o polipeptido unido espedficamente debe unirse con una afinidad por lo menos 3 veces mas alta, mas preferentemente por lo menos 10 veces mas alta y todavfa mas preferentemente por lo menos 50 veces mas alta, que cualquier otro peptido o polipeptido relevante. La union no espedfica puede ser tolerable, en caso de que todavfa pueda distinguirse y medirse inequvocamente, por ejemplo segun su tamano en una transferencia western, o por su abundancia relativamente mas alta en la muestra. La union del agente de union puede medirse mediante cualquier metodo conocido de la tecnica. Preferentemente, dicho metodo es semicuantitativo o cuantitativo. A continuacion, se describen tecnicas adecuadas adicionales para la determinacion de un polipeptido o peptido.
En una realizacion del metodo de la presente invencion, los niveles de los biomarcadores a los que se hace referencia en la presente memoria se miden mediante la utilizacion de los ensayos descritos en la seccion de Ejemplos.
En otra realizacion del metodo de la presente invencion, la medicion en la etapa a) puede llevarse a cabo mediante una unidad analizadora, en particular mediante una unidad analizadora tal como se define en otros sitios de la presente memoria.
La expresion “agente de union” o “agente de deteccion” se refiere a una molecula que comprende una fraccion de union que se une espedficamente al biomarcador respectivo correspondiente. Son ejemplos de “agente de union”, un aptamero, un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un acido peptido-nucleico (APN) o un compuesto qrnmico.
La expresion “union espedfica” o “de union espedfica” se refiere a una reaccion de union en la que moleculas de la pareja de union muestran union entre sf bajo condiciones en las que no se unen significativamente a otras moleculas. La expresion “union espedfica” o “se une espedficamente”, en referencia a una protema o peptido como biomarcador, se refiere a una reaccion de union en la que un agente de union se une a la molecula diana correspondiente con una afinidad de por lo menos 10-7 M. La expresion “union espedfica” o “se une espedficamente” preferentemente se refiere a una afinidad de por lo menos 10-8 M o incluso mas preferentemente de por lo menos 10-9 M para su molecula diana. El termino “espedfico” o “espedficamente” se utiliza para indicar que otras moleculas presentes en las muestras no se unen significativamente al agente de union espedfico para la molecula diana. Preferentemente, el nivel de union a una molecula diferente de la molecula diana resulta en una afinidad de union que es solo 10% o inferior, mas preferentemente solo 5% o inferior de la afinidad para la molecula diana.
Son ejemplos de “agentes de union”, una sonda de acidos nucleicos, un cebador de acidos nucleicos, una molecula de ADN, una molecula de ARN, un aptamero, un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un peptido, un acido peptidonucleico (APN) o un compuesto qrnmico. Un agente de union preferente es un anticuerpo que se une espedficamente al biomarcador que debe medirse. El termino “anticuerpo” en la presente memoria se utiliza en el sentido mas amplio y comprende diversas estructuras de anticuerpo, incluyendo, aunque sin limitacion, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespedficos (por ejemplo, anticuerpos biespedficos) y fragmentos de anticuerpo, con la condicion de que muestren la actividad de union a antfgeno deseada. Preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo policlonal. Mas preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
Otro agente de union que puede aplicarse, en un aspecto, puede ser un aptamero que se une espedficamente a por lo menos un marcador en la muestra. La expresion “union espedfica” o “se une espedficamente”, en referencia a un aptamero de acidos nucleicos como agente de union, se refiere a una reaccion de union en la que un aptamero de acidos nucleicos se une a la molecula diana correspondiente con una afinidad en el intervalo de pocos nM a pM.
En todavfa otro aspecto, la muestra se extrae del complejo formado entre el agente de union y por lo menos un marcador antes de la medicion del nivel de complejo formado. De acuerdo con lo anterior, en un aspecto, el agente de union puede inmovilizarse sobre un soporte solido. En todavfa otro aspecto, la muestra puede extraerse del complejo formado sobre el soporte solido mediante la aplicacion de una solucion de lavado. El complejo formado sera proporcional al nivel de por lo menos un marcador presente en la muestra. Se entendera que la especificidad y/o sensibilidad del agente de union que debe aplicarse define el grado de proporcion de por lo menos un marcador comprendido en la muestra que es capaz de unirse espedficamente. Tambien se encuentran en otros sitios de la presente invencion informacion adicional sobre como puede llevarse a cabo la determinacion. El nivel de complejo formado se transforma en un nivel de por lo menos un marcador que refleja el nivel presente efectivamente en la muestra. Dicha cantidad, en un aspecto, puede ser esencialmente la cantidad presente en la muestra o puede ser, en otro aspecto, una cantidad que es una determinada proporcion de la misma debido a la relacion entre el complejo formado y la cantidad presente en la muestra original.
El termino “nivel” tal como se utiliza en la presente memoria comprende la cantidad absoluta de un biomarcador al que se hace referencia en la presente memoria, la cantidad o concentracion relativa de dicho biomarcador, asf como cualquier valor o parametro que se correlaciona con los mismos o que puede derivarse de los mismos. Dichos valores o parametros comprenden valores de intensidad de senal de todas las propiedades ffsicas o qmmicas espedficas obtenidas a partir de dichos peptidos mediante mediciones directas, p.ej. valores de intensidad en los espectros de masas o espectros de RMN. Ademas, se encuentran comprendidos todos los valores o parametros que se obtienen mediante mediciones indirectas especificadas en otros sitios de la presente descripcion, por ejemplo niveles de respuesta determinados en sistemas biologicos de lectura en respuesta a los peptidos o senales de intensidad obtenidos de ligandos unidos espedficamente. Debe entenderse que los valores correlacionados con las cantidades o parametros anteriormente indicados tambien pueden obtenerse mediante todas las operaciones matematicas estandares.
El termino “comparar” tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a comparar el nivel de los biomarcadores en la muestra del individuo o paciente con el nivel de referencia de los biomarcadores especificados en otros sitios en la presente descripcion. Debe entenderse que comparar tal como se utiliza en la presente memoria habitualmente se refiere a una comparacion de los parametros o valores correspondientes, p.ej., con una cantidad absoluta con una cantidad de referencia absoluta, mientras que una concentracion se compara con una concentracion de referencia o se compara una senal de intensidad obtenida del biomarcador en una muestra con el mismo tipo de senal de una intensidad obtenida de una muestra de referencia. La comparacion puede llevarse a cabo manualmente o asistida por ordenador. De esta manera, la comparacion puede llevarse a cabo con un dispositivo informatico (p.ej. de un sistema dado a conocer en la presente memoria). El valor del nivel medido o detectado del biomarcador en la muestra del individuo o paciente y el nivel de referencia pueden, p.ej., compararse entre sf y dicha comparacion puede llevarse a cabo automaticamente con un programa informatico que ejecuta un algoritmo para la comparacion. El programa informatico que lleva a cabo dicha evaluacion proporcionara la evaluacion deseada en un formato de salida adecuado. Para una comparacion asistida por ordenador, el valor de la cantidad determinada puede compararse con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos utilizando un programa informatico. El programa informatico puede evaluar adicionalmente el resultado de la comparacion, es decir, proporcionar automaticamente la evaluacion deseada en un formato de salida adecuado. Para una comparacion asistida por ordenador, el valor de la cantidad determinada puede compararse con valores correspondientes a referencias adecuadas que se almacenan en una base de datos utilizando un programa informatico. El programa informatico puede evaluar adicionalmente el resultado de la comparacion, es decir, proporcionar automaticamente la evaluacion deseada en un formato de salida adecuado.
En determinadas realizaciones, la expresion “nivel de referencia” se refiere en la presente memoria a un valor predeterminado para el biomarcador respectivo. En este contexto, “nivel” comprende la cantidad absoluta, la cantidad relativa o concentracion, asf como cualquier valor o parametro que se correlaciona con la misma o puede derivarse a partir de la misma. Preferentemente, el nivel de referencia es un nivel que permite asignar el paciente a un grupo de pacientes elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, o a un grupo de pacientes no elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. De esta manera, el nivel de referencia permite diferenciar entre un paciente que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca y un paciente que no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
Tal como apreciara el experto en la materia, el nivel de referencia esta predeterminado y se ha fijado para satisfacer requisitos rutinarios en terminos de, p.ej. especificidad y/o sensibilidad. Estos requisitos pueden variar, p.ej. segun el organismo regulador. Puede ocurrir, por ejemplo, que la sensibilidad o la especificidad del ensayo, respectivamente, deban fijarse en determinados Kmites, p.ej. 80%, 90%, 95% o 98%, respectivamente. Dichos requisitos tambien pueden definirse en terminos de valores predictivos positivos o negativos. Sin embargo, basandose en las ensenanzas proporcionadas en la presente invencion, en todo caso sera posible para el experto en la materia alcanzar un nivel de referencia que satisfaga dichos requisitos. En una realizacion, el nivel de referencia se determina en una muestra o muestras de referencia de un paciente (o grupo de pacientes) que presenta insuficiencia cardfaca y que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca o en una muestra o muestras de referencia de un paciente (o grupo de pacientes) que presenta insuficiencia cardfaca y que no es elegible para intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. El nivel de referencia en una realizacion ha sido predeterminado en muestras de referencia procedentes de la entidad de enfermedad a la que pertenece el paciente. En determinadas realizaciones, el nivel de referencia puede, p.ej., fijarse en cualquier porcentaje entre 25% y 75% de la distribucion global de los valores en una entidad de enfermedad investigada. En otras realizaciones, el nivel de referencia puede, p.ej., fijarse en la mediana, terciles o cuartiles determinados de la distribucion global de los valores en muestras de referencia procedentes de una entidad de enfermedad investigada. En una realizacion, el nivel de referencia se fija en el valor de la mediana segun se determina a partir de la distribucion global de los valores en una entidad de enfermedad investigada. El nivel de referencia puede variar dependiendo de diversos parametros fisiologicos, tales como la edad, el genero o la subpoblacion, asf como de los medios utilizados para la determinacion de los biomarcadores a los que se hace referencia en la presente memoria. En una realizacion, la muestra de referencia es de esencialmente el mismo tipo de fuente de celulas, tejidos, organos o lfquido corporal que la muestra del individuo o paciente sometido al metodo de la invencion, p.ej. en el caso de que segun la invencion se utilice sangre como muestra para determinar el nivel de biomarcadores en el individuo, tambien se determina el nivel de referencia en sangre o una parte de la misma.
En determinadas realizaciones, la expresion “mayor que el nivel de referencia” o “superior al nivel de referencia” se refiere a un nivel del biomarcador en la muestra del individuo o paciente superior al nivel de referencia o a un incremento global de 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100% o superior, determinado mediante los metodos descritos en la presente memoria, en comparacion con el nivel de referencia. En determinadas realizaciones, el termino incremento se refiere al incremento del nivel de biomarcador en la muestra del individuo o paciente, en el que el incremento es por lo menos aproximadamente 1,5, 1,75, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90 o 100 veces superior al nivel de referencia, p.ej. predeterminado a partir de una muestra de referencia.
En determinadas realizaciones, la expresion “inferior al nivel de referencia” o “ inferior” en la presente memoria se refiere a un nivel del biomarcador en la muestra del individuo o paciente inferior al nivel de referencia o a una reduccion global de 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o superior, determinado mediante los metodos descritos en la presente memoria, en comparacion con el nivel de referencia. En determinadas realizaciones, el termino reduccion del nivel de biomarcador en la muestra del individuo o paciente, en el que el nivel reducido es como maximo aproximadamente 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1, 0,05 o 0,01 veces el nivel de referencia, p.ej. predeterminado a partir de una muestra de referencia, o inferior.
Lo siguiente se aplica a un algoritmo diagnostico en el caso de que el marcador o marcadores se seleccionan del grupo que consiste en creatinina, urea, glucosa y HbAIc (hemoglobina glicada).
preferentemente, un nivel (niveles) de por lo menos un marcador en la muestra procedente del paciente que es superior al nivel de referencia (niveles de referencia) de dicho marcador (marcadores) indica que el paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca y/o un nivel (niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
Lo siguiente se aplica como algoritmo diagnostico en el caso de que por lo menos un marcador se seleccione del grupo que consiste en sodio, hemoglobina y hematocrito:
preferentemente, un nivel (niveles) de por lo menos un marcador en la muestra procedente del paciente que es inferior al nivel de referencia (niveles de referencia) de dicho marcador (marcadores) indica que el paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca y/o un nivel (niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
La Tabla A, a continuacion, proporciona intervalos preferentes para niveles de referencia (tercera columna) para los diversos marcadores, asf como niveles de referencia espedficos preferentes (cuarta columna). El experto en la materia puede determinar niveles de referencia adicionales sin operaciones adicionales.
Tabla A
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
Con respecto a la duracion de QRS, la referencia puede encontrarse en el intervalo de aproximadamente 140 a aproximadamente 180 ms. En una realizacion, la referencia es aproximadamente 160 ms.
En el contexto de la presente invencion, se encuentra contemplado medir el nivel de un unico marcador o de una combinacion de marcadores. De esta manera, se encuentra contemplado medir el nivel de dos, tres, cuatro o incluso mas marcadores. Las combinaciones preferentes son las siguientes:
por ejemplo, se encuentran contempladas las combinaciones de marcadores siguientes:
• creatinina y sodio;
• urea y HbAIc;
• hematocrito y creatinina.
Segun la presente invencion, puede medirse el nivel de un determinado marcador con el fin de identificar un paciente que es elegible para la intensificacion de una determinada terapia de la insuficiencia cardfaca, en particular el tratamiento intensificado con un determinado medicamento. Por ejemplo, puede utilizarse un marcador con el fin de evaluar si el tratamiento con el medicamento debe intensificarse o no (p.ej., si la dosis del medicamento administrado debe incrementarse o no). Por ejemplo, en el caso de que el marcador que debe medirse es la creatinina, la terapia de la insuficiencia cardfaca que debe intensificarse preferentemente es el tratamiento con un beta-bloqueante.
Las definiciones proporcionadas anteriormente en la presente memoria se aplican por analogfa a lo siguiente. Ademas, las etapas llevadas a cabo en relacion al metodo descrito anteriormente en la presente memoria, pueden llevarse a cabo segun el metodo siguiente.
La presente invencion se refiere ademas a un metodo, en particular a un metodo in vitro, para identificar un paciente que es elegible para una intensificacion de terapia de la insuficiencia cardfaca, comprendiendo dicho metodo las etapas de:
(a) medir el nivel de un peptido de tipo PNC en una muestra procedente de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que rece terapia para la insuficiencia cardfaca guiada por peptido de tipo PNC;
(b) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra del paciente;
(c) comparar el nivel del peptido de tipo PNC medido en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia), y (d) comparar el nivel (o niveles) de por lo menos un marcador medido en (b) con un nivel de referencia (o niveles de referencia).
Llevando a cabo la etapa (c) o (d), se identifica un paciente que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. En una realizacion, el metodo comprende ademas la etapa (e) de identificacion o seleccion de un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. Ademas, el metodo puede comprender la etapa (f) de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca o de recomendacion de la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca (en el caso de que el paciente haya sido identificado como elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca). De acuerdo con lo anterior, la presente invencion contempla ademas un metodo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, comprendiendo dicho metodo las etapas (a) a (f) tal como se ha explicado anteriormente.
Ademas, el marcador al que se hace referencia en la etapa a), o alternativamente, la duracion de QRS, puede medirse o proporcionarse y compararse con una referencia (tal como se indica de manera general en otros sitios de la presente memoria).
Ademas, del metodo descrito anteriormente, el metodo comprende ademas la etapa de medir el nivel de un peptido de tipo PNC.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresion “peptidos de tipo PNC” comprende pre-proPNC, proPNC, NT-proPNC y PNC. El pre-propeptido (134 aminoacidos en el caso de preproPNC) comprende un peptido de senal corto que es escindido enzimaticamente para liberar el propeptido (108 aminoacidos en el caso de proPNC). El propeptido se corta adicionalmente en un propeptido N-terminal (NT-propeptido, 76 aminoacidos en el caso de NT-proPNC) y la hormona activa (32 aminoacidos en el caso de PNC). Preferentemente, los peptidos de tipo PNC segun la presente invencion son NT-proPNC, PNC (peptido natriuretico cerebral) y variantes de los mismos. PNC es la hormona activa y presenta una semivida mas corta que la contrapartida inactiva respectiva, NT-proPNC. PNC es metabolizado en la sangre, mientras que NT-proPNC circula en la sangre en forma de una molecula intacta y sin modificacion es eliminada renalmente. La semivida in vivo de NT-proPNC es 120 min. mas larga que la de la PNC, que es de 20 min. (Smith, J.
Endocrinol. 167: 239-46). La preanalttica es mas robusta con NT-proPNC, permitiendo un facil transporte de la muestra a un laboratorio central (Mueller, Clin. Chem. Lab. Med. 42: 942-4, 2004). Pueden almacenarse las muestras de sangre a temperatura ambiente durante varios dfas o pueden enviarse por correo o embarcarse sin perdidas. En contraste, el almacenamiento de PNC durante 48 horas a temperatura ambiente o a 4°C conduce a una perdida de concentracion de por lo menos 20% (Mueller loc. cit.; Wu, Clin. Chem. 50: 867-73, 2004). Por lo tanto, dependiendo del curso temporal o propiedades de interes, la medicion de las formas activas o inactivas del peptido natriuretico puede resultar ventajosa. Los peptidos de tipo PNC mas preferentes segun la presente invencion son NT-proPNC y variantes del mismo. Tal como se ha comentado brevemente anteriormente, el NT-proPNC humano, al que se hace referencia segun la presente invencion, es un polipeptido que comprende, preferentemente, 76 aminoacidos de longitud correspondiente a la parte N-terminal de la molecula de NT-proPNC humana. La estructura de PNC y NT-proPNC humanas ya ha sido descrita en detalle en la tecnica anterior, p.ej. en los documentos n° WO 02/089657 y n° WO 02/083913, o Bonow, loc. cit. Preferentemente, NT-proPNC humano tal como se utiliza en la presente memoria es NT-proPNC humano tal como se da a conocer en la patente n° EP 0648228 B1. El NT-proPNC al que se hace referencia segun la presente invencion comprende ademas variantes alelicas y otras variantes de dicha secuencia espedfica para el NT-proPNC humano comentado anteriormente. Espedficamente, se encuentran contemplados polipeptidos variantes que al nivel de los aminoacidos preferentemente son 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% o 99% identicos a NT-proPNC humano, preferentemente a lo largo de la longitud completa de NT-proPNC humano. El grado de identidad entre dos secuencias de aminoacidos puede determinarse mediante algoritmos bien conocidos de la tecnica. Preferentemente, el grado de identidad debe determinarse mediante comparacion de dos secuencias alineadas optimamente en una ventana de comparacion, en la que el fragmento de secuencia de aminoacidos en la ventana de comparacion puede comprender adiciones o deleciones (p.ej., huecos o extremos protuberantes) en comparacion con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para la alineacion optima. El porcentaje se calcula determinando el numero de posiciones en las que se observa el residuo aminoacido identico en ambas secuencias, rindiendo el numero de posiciones correspondientes, dividiendo el numero de posiciones correspondientes por el numero total de posiciones en la ventana de comparacion y multiplicando el numero por 100 para obtener el porcentaje de identidad de secuencias. La alineacion optima de secuencias para la comparacion puede llevarse a cabo mediante el algoritmo de homologfas locales de Smith y Waterman, Add. Appl. Math. 2:482, 1981); mediante el algoritmo de alineacion de homologfas de Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970), mediante el metodo de busqueda de similitudes de Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 2444, 1988, mediante implementaciones informatizadas de dichos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI) o mediante inspeccion visual. Dado que se han identificado dos secuencias para la comparacion, preferentemente se utilizan GAP y BESTFIT para determinar la alineacion optima y, de esta manera, el grado de identidad. Preferentemente se utilizan los valores por defecto de 5,00 para el peso de hueco y de 0,30 para el peso de longitud de hueco. Las variantes a las que se ha hecho referencia anteriormente pueden ser variantes alelicas o cualesquiera otros homologos, paralogos u ortologos espedficos de especie. Son sustancialmente similares y tambien se encuentran contemplados los productos de degradacion proteolttica que todavfa se identifican por medios diagnosticos o mediante ligandos dirigidos contra el peptido de longitud completa respectivo. Tambien se encuentran comprendidos polipeptidos variantes que presentan deleciones, sustituciones y/o adiciones de aminoacidos en comparacion con la secuencia de aminoacidos de NT-proPNC humano con la condicion de que dichos polipeptidos presenten propiedades de NT-proPNC. Las propiedades de NT-proPNC a las que se hace referencia en la presente memoria son propiedades inmunologicas y/o biologicas. Preferentemente, las variantes de NT-proPNC presentan propiedades inmunologicas (es decir, composicion de epttopos) comparables a las de la NT-proPNC humana. De esta manera, las variantes pueden reconocerse mediante los medios o ligandos anteriormente mencionados utilizados para la determinacion de la cantidad de peptidos natriureticos. Las propiedades biologicas y/o inmunologicas de NT-proPNC pueden detectarse mediante el ensayo descrito en Karl et al. (Karl, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 230:177-181, 1999), Yeo et al. (Yeo, Clinica Chimica Acta 338:107-115, 2003). Ademas, se describe un ensayo para la determinacion de NT-proPNC en Mueller T. et al., Clinica Chimica Acta 341 (2004) 41-48. En una realizacion, NT-proPNC se lleva a cabo tal como se indica en cualquiera de las referencias anteriormente mencionadas. Las variantes incluyen ademas peptidos modificados posttraduccionalmente, tales como peptidos glucosilados. Ademas, una variante segun la presente invencion tambien es un peptido o polipeptido que ha sido modificado tras la recoleccion de la muestra, por ejemplo mediante la union covalente o no covalente de un marcaje, particularmente un marcaje radioactivo o fluorescente, al peptido.
La expresion “nivel de referencia” ha sido definida anteriormente. El nivel de referencia para el peptido de tipo PNC, preferentemente, debe ser un nivel que, considerado por sf solo (es decir, no en combinacion con marcadores adicionales, tales como a los que se hace referencia en el contexto de la presente invencion) es indicativo de un paciente que no es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca. Los niveles de referencia preferentes de dicho peptido de tipo PNC son indicativos de la intensificacion de la terapia de insuficiencia cardfaca que debe aplicarse en el contexto de la presente invencion son los indicados en los Ejemplos. Los niveles de referencia preferentes se encuentran comprendidos en un intervalo de aproximadamente 80 a 400 pg/ml, o en particular, de aproximadamente 80 a 200 pg/ml para PNC, o dentro de un intervalo de aproximadamente 450 a 2.200 pg/ml, o en particular de aproximadamente 800 pg/ml a 1.200 pg/ml para NT-proPNC. Son niveles de referencia preferentes adicionales: aproximadamente 100 pg/ml o 400 pg/ml para PNC, y aproximadamente 1.000 pg/ml o 1.200 pg/ml para NT-proPNC.
Los niveles o intervalos de referencia preferente para los niveles de referencia de los marcadores creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito se muestran en la Tabla A, anteriormente.
Lo siguiente se aplica a un algoritmo diagnostico en el caso de que por lo menos un marcador medido en la etapa (b) se selecciona del grupo que consiste en creatinina, urea, glucosa y HbAIc (hemoglobina glicada):
(a) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(b) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; (c) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; y/o
(d) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
Alternativamente o adicionalmente, se aplica lo siguiente como algoritmo diagnostico en el caso de que por lo menos un marcador medido en la etapa (b) se selecciona del grupo que consiste en sodio, hemoglobina y hematocrito:
(a) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(b) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; (c) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; y/o
(d) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
El paciente que debe someterse a ensayo de acuerdo con el metodo anteriormente mencionado puede mostrar cualquier nivel (en particular cualquier nivel en sangre, suero o plasma) de un peptido de tipo PNC.
Ademas, la presente invencion se refiere a un metodo para optimizar la terapia de la insuficiencia cardfaca guiada por peptido de tipo PNC, comprendiendo dicho metodo las etapas de:
(a) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que recibe terapia guiada por peptido de tipo PNC, y
(b) comparar el nivel (o niveles) del marcador (o marcadores) medidos en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia) y
(c) optimizar la terapia guiada por peptido de tipo PNC.
El paciente segun el metodo anteriormente mencionado preferentemente muestra un nivel (en particular un nivel en sangre, suero o plasma) de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC, siendo indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
La presente invencion se refiere ademas a la utilizacion de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito y/o a la utilizacion de por lo menos un agente de deteccion de un marcador seleccionado del grupo de marcadores que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que esta recibiendo terapia para insuficiencia cardfaca guiada por peptido de tipo PNC, para la identificacion de un paciente que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca o para la optimizacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca guiada por peptido de tipo PNC.
En el caso de que el marcador sea un polipeptido o peptido, en particular en el caso de que el marcador sea HbAIc (hemoglobina glicada), el agente de deteccion preferentemente se une espedficamente a dicho marcador. En este caso, el agente de deteccion preferentemente es un anticuerpo monoclonal o policlonal (para una definicion del termino “anticuerpo”, ver en otros sitios en la presente memoria). Para los marcadores restantes, el agente de deteccion puede ser un agente que forma un complejo con el marcador, permitiendo de esta manera la medicion del nivel del marcador, o un enzima que permite la conversion del marcador tal como se indica en otros sitios en la presente memoria.
En el caso de que el marcador sea creatinina, el agente de deteccion puede ser acido pfcrico, que forma un complejo con la creatinina.
En el caso de que el marcador sea acido urico, el agente de deteccion puede ser uricasa o peroxidasa.
En el caso de que el marcador sea urea, el agente de deteccion puede ser ureasa.
En el caso de que el marcador sea glucosa, el agente de deteccion puede ser una hexoquinasa.
Ejemplos
A continuacion, se ilustra la invencion mediante los Ejemplos siguientes, que no pretenden restringir o limitar el alcance de la presente invencion.
Ejemplo 1: Pacientes
499 pacientes que sufnan de IC (IC sistolica de clase II-IV de NYHA (FEVI<45%) fueron controlados segun la diana NT-proPNC o se sometieron a los cuidados habituales (Pfisterer M. et al. JAMA. 2009; 301:383-92). Globalmente, los pacientes con niveles de NT-proPNC <1.000 pg/ml, un valor de corte previamente identificado para un buen resultado clmico, presentaron un resultado significativamente mejor que aquellos con niveles de NT-proPNC que no pudieron reducirse a estos niveles. Sin embargo, algunos de los pacientes con niveles bajos de NT-proPNC, <1.000 pg/ml siguieron en riesgo. Ademas, algunos pacientes con niveles de NT-proPNC ligeramente superiores a 1.000 pg/ml presentaron un riesgo inesperadamente elevado. Este riesgo pudo identificarse con buena precision mediante la medicion adicional de los niveles de marcador y de parametros clmicos, por ejemplo despues de 6 meses de terapia. Ademas, estos marcadores y parametros adicionales proporcionaron ademas importante informacion adicional para la potencial grna terapeutica en el grupo con riesgo mas alto (es decir, niveles de NT-proPNC despues de 6 meses >1.000 pg/ml).
Los niveles de PNC y/o de NT-proPNC junto con uno o varios marcadores y/o parametros clmicos se midieron a intervalos regulares de entre pocas semanas y cada seis meses. En el caso de que la intensificacion de la terapia medica fuese clmicamente necesaria y/o indicada para PNC/NT-proPNC y/o uno de estos marcadores y/o parametros adicionales, estos sujetos realizaron visitas de seguimiento a la clmica cada pocas semanas hasta alcanzar una terapia medica optima/maxima, hasta alcanzar el objetivo de diana PNC/NT-proPNC de <100-200 pg/ml y <1.000 pg/ml, respectivamente y los siguientes objetivos de diana o el sujeto requiriese hospitalizacion.
La Tabla 1 muestra los valores de corte para marcadores y parametros clmicos adicionales (basados en valores de corte optimizados mediante ROC y puntos de inflexion de deciles de riesgo; ambos metodos proporcionan valores de corte similares para la identificacion del riesgo residual; en el caso de que ambos se encuentren disponibles, debe aplicarse el valor de corte mas bajo):
Tabla 1:
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0001
La Tabla 2 muestra las puntuaciones de Wald, valores de p y cocientes de riesgo (CR, con intervalos de confianza al 95%) de biomarcadores y parametros clmicos en pacientes guiados segun NT-proPNC. Las puntuaciones de Wald y los cocientes de riesgo indican el riesgo remanente de descompensacion, hospitalizacion o muerte en pacientes guiados con peptidos de tipo PNC.
Figure imgf000018_0002
Todos los sujetos con una concentracion de PNC/NT-proPNC >100-200 pg/ml y >1.000 pg/ml y niveles de marcador/parametro superiores a los valores de corte en la tabla, anteriormente (o inferiores en el caso de hemoglobina, hematocrito, IGFBP-7 y sodio), respectivamente, se consideraron para la terapia farmacologica y/o la intensificacion de la terapia con dispositivo, con independencia del estado de los smtomas, estabilidad percibida y con una reevaluacion cuidadosa de la presencia de un programa medico “optimo”. Ademas, los sujetos con concentracion de PNC/NT-proPNC <100-200 pg/ml y <1.000 pg/ml, respectivamente y niveles de marcador/parametro superiores a los valores de corte, tal como se muestran anteriormente, se consideraron para la terapia farmacologica y/o la intensificacion de la terapia con dispositivo. El control de los pacientes de IC segun tal terapia de IC guiada por marcadores combinados es el mismo que con el estandar de cuidado y comprende todos los farmacos, dispositivos y opciones de tratamiento recomendados por las directrices de practica. La intensificacion de la terapia consiste en incrementar la dosis de farmacos anteriormente prescritos o la adicion de farmacos con un modo de accion o terapia de dispositivo diferente, ejercicio, dieta o una combinacion de los mismos en cumplimiento con las directrices de practica y consistentemente con las mejores practicas clmicas. No se utiliza ningun algoritmo particular de titulacion de farmaco o de seleccion de farmaco. Aunque los diureticos del asa pueden reducir las concentraciones de NT-proPNC, tipicamente no se consideran terapia de “primera lmea” para un paciente no congestionado con un nivel elevado de NT-proPNC, dada la falta de beneficio de mortalidad de tales agentes en el contexto de la IC cronica.
Una vez los ajustes de la medicacion resultan en la consecucion de un valor diana o el sujeto esta sintomaticamente estable, el sujeto se considera que se encuentra en un “regimen medico optimo dirigido con marcador combinado” y por lo tanto se retira del bucle de seguimiento de pocas semanas y se visita en la siguiente consulta clmica programada (intervalos de monitorizacion periodicos). Los niveles de marcador combinado durante las visitas posteriores o durante las mediciones de marcador combinado en la cabecera del paciente (utilizando ensayos de punto de cuidado) puede utilizarse para guiar adicionalmente la terapia de la IC, es decir, para incrementar o reducir adicionalmente la intensidad de la terapia en visitas y bucles de medicion de PNC/NT-proPNC similares, tal como se ha indicado anteriormente.
En el caso de que el sujeto no alcance los objetivos de marcador/parametro combinado diana pero sf alcance un lfmite terapeutico claro, el sujeto sera retirado del bucle de seguimiento cada pocas semanas y se visitara en la siguiente consulta clmica programada. Este sujeto es reevaluado en esa consulta clmica programada con respecto a los niveles de marcador combinado y a las oportunidades de titulacion adicional de la medicion y el ajuste de las opciones de tratamiento. La invencion de estratificacion adicional segun marcadores y parametros adicionales tambien proporciona un beneficio a los pacientes con dianas de NT-proPNC mas elevada, p.ej. 3.000 pg/ml. Espedficamente, debido a que no todos los pacientes pueden alcanzar dianas de NT-proPNC <1.000 pg/ml, pueden utilizarse valores de corte de la diana mas altos y a estos niveles, marcadores y parametros clmicos adicionales todavfa pueden proporcionar una estratificacion de riesgos, monitorizacion y beneficios de la grna terapeutica adicionales.
En comparacion con la tecnica anterior y los enfoques guiados por biomarcador de la IC anteriores, la invencion proporciona niveles de marcador y parametro diana adicionales mas alla de los intervalos de la diana de PNC/NT-proPNC. La invencion ademas mejora la identificacion de los pacientes que no se benefician optimamente de la terapia de la IC guiada por PNC/NT-proPNC.
Ademas, las asociaciones de niveles de marcador, modificaciones de la terapia y resultados, indican que el riesgo residual reflejado por los diferentes parametros, anteriormente, pueden modificarse utilizando las terapias disponibles. Esta asociacion indica que las diversas combinaciones de marcadores pueden aplicarse a la terapia guiada de la insuficiencia cardiaca mas alla de NT-proPNC. Un ejemplo de estas asociaciones terapeuticas se muestra posteriormente:
combinacion de NT-proPNC y creatinina para guiar los beta-bloqueantes: Los pacientes guiados con NT-proPNC y concentraciones elevadas de creatinina a los 6 meses presentan un buen resultado clmico con una dosis elevada de beta-bloqueante o dosis crecientes de beta-bloqueantes.
Ejemplo 2: Ensayos
Se determino NT-proPNC utilizando el ensayo ELISA de electroquimioluminiscencia de Roche llamado Elecsys proBNP II STAT (por sus siglas en ingles, tiempo de ejecucion corto). El ensayo utiliza dos anticuerpos monoclonales que reconocen epftopos situados en la parte N-terminal (1-76) de proPNO (1-108).
Se midio la IL-6 (interleuquina 6) mediante un inmunoensayo de electroquimioluminiscencia (ECLIA, Roche Diagnostics). El ensayo se llevo a cabo utilizando un analizador Cobas E601 de Roche Diagnostics. El ensayo se basa en una primera incubacion con un anticuerpo monoclonal biotinilado espedfico d eIL-6 y una segunda incubacion con un anticuerpo monoclonal espedfico de iL-6 marcado con un complejo de rutenio y micropartmulas recubiertas de estreptavidina.
Se determino CRP altamente sensible (hs, por sus siglas en ingles) utilizando un ensayo inmunoturbidimetrico con refuerzo de partmulas de Roche Diagnostics (protema C-reactiva cardiaca Tina-quant (latex) altamente sensible). En este ensayo, los anticuerpos anti-CRP acoplado con micropartmulas de latex reaccionan con el antfgeno en la muestra formando un complejo de antfgeno/anticuerpo. Tras la aglutinacion, se mide el complejo turbidimetricamente.
Con el fin de determinar la concentracion de GDF-15 en muestras de suero y plasma, se utiliza un ensayo prototipo Elecsys, utilizando un anticuerpo IgG policlonal de cabra anti-GDF-15 humano purificado mediante cromatograffa de afinidad a GDF-15 de R&D Systems (AF957). En cada experimento, se genera una curva estandar con GDF-15 humano recombinante de R&D Systems (957-GD/CF). Los resultados con nuevos lotes o protema GDF-15 recombinante se sometieron a ensayo en muestras de plasma estandares y cualquier desviacion superior a 10% se corrigio mediante la introduccion de un factor de ajuste para este ensayo. Las mediciones de GDF-15 en muestras de suero y plasma del mismo paciente rindieron resultados virtualmente identicos tras la correccion para eventuales factores de dilucion. El lfmite de deteccion del ensayo era 200 pg/ml.
Para la deteccion de IGFBP7 en muestras de suero o plasma humano, se utilizo un ELISA de tipo sandwich. Para la captura y deteccion del antfgeno, se conjugaron almuotas de un anticuerpo policlonal anti-IGFBP7 de R&D Systems (numero de catalogo AF 1334) con biotina y digoxigenina, respectivamente.
Las placas de microtitulacion de 96 pocillos recubiertas con estreptavidina se incubaron con 100 pl de anticuerpo policlonal anti-IGFBP7 biotinilado durante 60 min a razon de 1 pg/ml en solucion 1x de PBS. Tras la incubacion, las placas se lavaron tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%, se bloquearon con PBS BSA al 1% (albumina de suero bovino) y despues se lavaron nuevamente tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%. A continuacion, los pocillos se incubaron durante 1,5 h con una dilucion en serie de IGFBP7 recombinante como antfgeno estandar, o con muestras de suero o plasma diluidas (1:50) procedentes de pacientes o individuos de control, respectivamente. Tras la union del IGFBP7, las placas se lavaron tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%. Para la deteccion espedfica del IGFBP7 unido, los pocillos se incubaron con 100 pl de anticuerpo policlonal anti-IGFBP7 digoxigenilado durante 60 min a una concentracion de 1 pg/ml en 1x PBS BSA al 1%. Despues, las placas se lavaron tres veces para eliminar el anticuerpo no unido. En una etapa siguiente, los pocillos se incubaron con 75 mU/ml de conjugados de antidigoxigenina-POD (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n° de catalogo 1633716) durante 60 min en 1x PBS BSA al 1%. Las placas se lavaron posteriormente seis veces con el mismo tampon. Para la deteccion de los complejos de antfgeno-anticuerpo, los pocillos se incubaron con 100 pl de solucion de ABTS (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n° de catalogo 11685767) y se midio la densidad optica (DO) tras 15 minutos a 405 nm y 492 nm con un lector de ELISA.
Se determino Gal-3 mediante la utilizacion de BGM galectina-3 (BG medicine, Waltham, MA, USA). Cuantitativamente mide la galectina-3 en suero o EDTA-plasma mediante ensayo de inmunosorcion ligada a enzima (ELISA) en una plataforma de placa de microtitulacion. El ensayo utiliza dos anticuerpos monoclonales contra la galectina-3. Una superficie de los pocillos en una placa de microtitulacion se recubre con un anticuerpo monoclonal de rata antigalectina-3 de raton y sirve como anticuerpo de captura para unir las moleculas de galectina-3 en la muestra, mientras que el otro anticuerpo monoclonal de raton anti-galectina-3 humana se proporciona en solucion y funciona como anticuerpo trazador para detectar las moleculas de galectina-3 unidas al anticuerpo de captura.
Para la deteccion de mimecan en suero o plasma humano, se utilizo un ELISA de tipo sandwich. Para la captura y deteccion del antigeno, se conjugaron alfcuotas de un anticuerpo policlonal anti-mimecan de R&D Systems (numero de catalogo AF 2660) con biotina y digoxigenina, respectivamente. Las placas de microtitulacion de 96 pocillos recubiertas con estreptavidina se incubaron con 100 pl de anticuerpo policlonal anti-mimecan biotinilado durante 60 min a razon de 0,2 pg/ml en solucion 1x de PBS. Tras la incubacion, las placas se lavaron tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%, se bloquearon con PBS BSA al 2% (albumina de suero bovino) durante 45 min y despues se lavaron nuevamente tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%. A continuacion, los pocillos se incubaron durante 1 h con 100 pl de una dilucion en serie de mimecan recombinante como antfgeno estandar o con muestras de suero o plasma diluido (1:5 en 1x PBS BSA al 1%) procedentes de pacientes o individuos de control, respectivamente. Tras la union del mimecan, las placas se lavaron tres veces con 1x PBS Tween-20 al 0,02%. Para la deteccion espedfica del mimecan unido, los pocillos se incubaron con 100 pl de anticuerpo policlonal anti-mimecan digoxigenilado durante 45 min a una concentracion de 0,2 pg/ml en 1x PBS BSA al 1%. Despues, las placas se lavaron tres veces para eliminar el anticuerpo no unido. En una etapa siguiente, los pocillos se incubaron con 100 pl de 75 mU/ml de conjugados de anti-digoxigenina-POD (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n° de catalogo 1633716) durante 30 min en 1x PBS BSA al 1%. Las placas seguidamente se lavaron seis veces con el mismo tampon de lavado que anteriormente. Para la deteccion de los complejos de antfgeno-anticuerpo, los pocillos se incubaron con 100 pl de solucion de ABTS (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, n° de catalogo 11685767) y se midio la densidad optica (DO) tras 15 minutos a 405 nm y 492 nm con un lector de ELISA.
Para la medicion de la endostatina en suero o plasma humano, se utilizo un ELISA de tipo sandwich disponible comercialmente (inmunoensayo de endostatina humana Quantikine, numero de catalogo DNSTO, R&D Systems). Las mediciones se realizaron siguiendo las instrucciones proporcionadas por el fabricante.
Se determino sST2 mediante la utilizacion del ensayo de ST2 Presage™ de Critical Diagnostics (San Diego, CA, USA). El ensayo es un ELISA monoclonal de tipo sandwich cuantitativo en un formato de placa de 96 pocillos para la medicion de ST2 en suero o plasma. Se cargo plasma diluido en pocillos apropiados en la placa recubierta con anticuerpo anti-ST2 y se incubo durante el tiempo prescrito. Tras una serie de etapas en que se lavaron los reactivos de la placa y se anadieron reactivos adicionales y posteriormente se eliminaron mediante lavado, el analito se detecto finalmente mediante la adicion de un reactivo colorimetrico y se midio la senal resultante espectroscopicamente a 450 nm.
Se determino el biomarcador mimecan tal como se indica en el documento n° WO2011/12268.
Se sometio a ensayo sFlt1 utilizando un inmunoensayo ELECSYS que utiliza dos anticuerpos que son espedficos para sFlt1. El ensayo puede llevarse a cabo automaticamente utilizando diferentes analizadores Roche, incluyendo ELECSYS 2010 y cobra e411 y cobra e601.
Se determino el acido urico mediante la aplicacion de un metodo colorimetrico enzimatico. En la presente reaccion, el peroxido reacciona en presencia de peroxidasa (POD), N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-metilanilina (TOOS) y 4-aminofenazona para formar un pigmento quinona-diimina. La intensidad del color rojo formado es proporcional a la concentracion del acido urico y se determina fotometricamente.
Se midio la urea mediante un ensayo in vitro para la determinacion cuantitativa de la urea/nitrogeno de la urea en suero, plasma y orina humanas en sistemas Roche/Hitachi cobas c. El ensayo puede llevarse a cabo automaticamente utilizando diferentes analizadores, incluyendo cobas c 311 y cobas c 501/502. El ensayo es un ensayo cinetico con ureasa y glutamato deshidrogenasa. La urea es hidrolizada por la ureasa para formar amonio y carbonato. En la segunda reaccion, el 2-oxoglutarato reacciona con el amonio en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) y el coenzima NADH para producir L-glutamato. En esta reaccion, se oxidan 2 moles de NADH en NAD+ por cada mol de urea hidrolizada. La tasa de reduccion de la concentracion de NADH es directamente proporcional a la concentracion de la urea en el especimen y se mide fotometricamente.
Se midio la creatinina en muestras de plasma mediante un metodo de Jaffe con modificacion cinetica y compensado, adaptado para los autoanalizadores de Roche/Hitachi (ver tambien Foster-Swanson et al., Reference Interval Studies of the Rate-Blanked Creatinine/Jaffe Method on BM/Hitachi Systems in Six U. S. Laboratories, Clin Chem 1994; resumen n° 361). El ensayo se basa en un ensayo in vitro cinetico utilizando una modificacion cinetica y compensacion para la determinacion cuantitativa de la creatinina en suero, plasma y orina humanas. Se anadio hidroxido sodico y acido pmrico a la muestra para iniciar la formacion de complejo de creatinina-acido pmrico. En solucion alcalina, la creatinina forma un complejo amarillo-naranja con picrato. La intensidad del color, que es directamente proporcional a la concentracion de creatinina, se midio fotometricamente.
Se midio la D-glucosa en muestras de plasma utilizando un ensayo enzimatico de Roche/R-Biopharm (ver tambien Schmidt, Die enzymatische Bestimmung von Glucose and Fructose nebeneinander, Klinische Wochenzeitschrift, 1961, 39, 1244-1247. El marcador se fosforilo a D-glucosa-6-fosfato en presencia del enzima hexoquinasa (HK) y adenosm-5'-trifosfato (ATP) con la formacion simultanea de adenosm-5'-difosfato (ADP). En presencia del enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, la D-glucosa-6-fosfato es oxidada por NADP a D-gluconato fosfato con formacion de nicotinamida-adenina dinucleotido fosfato reducido (NADPH). La cantidad de NADPH formada en dicha reaccion es estequiometrica respecto a la cantidad de D-glucosa. Se midio el NADPH a partir de la absorbancia de la luz.
Se midio el sodio plasmatico mediante electrodos selectivos para iones utilizando espedmenes de plasma mediante la aplicacion de un electrodo selectivo de iones (ESI) que utiliza las propiedades unicas de determinados materiales de membrana para desarrollar un potencial electrico (fuerza electromotriz, FEM) para las mediciones de iones en solucion (COBAs Integra 400; Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania, ensayo: "ISE indirect Na-K-Cl for Gen.2").
Se midio la hemoglobina (Hb) utilizando el ensayo de hemoglobina Reflotron®. El ensayo se basa en la oxidacion de la hemoglobina a metemoglobina por hexacianoferrato (III) de potasio (Fe2+ a Fe3+). El nivel de hemoglobina es proporcional a la intensidad del color y se midio a una longitud de onda de 567 nm a 37°C,
Se midio la HbAIc (hemoglobina glicada, glicohemoglobina) mediante la utilizacion de un ensayo in vitro Roche que permite la determinacion cuantitativa de HbAIc en los sistemas Roche/Hitachi cobas c (ensayo: "Tina-quant Hemoglobin A1c Gen.3", Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania).
Se midio la prealbumina mediante la utilizacion de un ensayo in vitro de Roche que permite la determinacion cuantitativa de la prealbumina en muestras humanas en sistemas Roche/Hitachi cobas c (ACN 710, ACN 8710). El ensayo es un ensayo inmunoturbidimetrico. La prealbumina humana forma un precipitado con un antisuero espedfico que se determina turbidimetricamente.
Se midio la cistatina C mediante la utilizacion de un ensayo inmunoturbidimetrico para la determinacion in vitro cuantitativa de la cistatina C en suero y plasma humanos en analizadores de qmmica clmica automatizados de Roche (Ensayo: Tina-quant Cystatin C, Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania). En este ensayo, la cistatina C humana se aglutina con pardculas de latex recubiertas con anticuerpos anti-cistatina C. El agregado se determina turbidimetricamente a 546 nm.
Conclusiones:
La combinacion de NT-proPNC o PNC con otros marcadores y parametros clmicos puede utilizarse con fines de monitorizacion y como grna para la terapia ademas del estandar de cuidado actual para ajustar y titular la terapia en pacientes de IC (IC cronica o aguda despues de la estabilizacion), preferentemente en aquellos pacientes en los que la IC se debe a una funcion sistolica deteriorada. Estos marcadores y parametros preferentemente son creatinina, eGFR (calculada a partir de los niveles de creatinina), NUS, glucosa, HbA1c, hsCRP, cistatina C, IL-6, prealbumina, sFLt-1, acido urico, GFD-15, sS2, galectina-3, endostatina, mimecan, IGFBP-7, osteopontina, sodio, hemoglobina y hematocrito, asf como la tasa cardfaca y la duracion de QRS. Espedficamente, la adicion de estas mediciones a NT-proPNC o PNC, junto con el estandar de cuidado actual pueden estratificar adicionalmente segun riesgos los pacientes de IC ya guiados por NT-proPNC pero que pueden requerir una terapia mas intensificada y una observacion mas minuciosa. De esta manera, la presente invencion optimiza la grna a la terapia de la insuficiencia cardfaca mas alla de NT-proPNC mediante la consideracion de combinaciones de peptidos natriureticos con otros marcadores y/o parametros clmicos.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Metodo para identificar un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, comprendiendo dicho metodo las etapas de:
(a) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que recibe terapia para insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC,
(b) comparar el nivel (o niveles) del marcador (o marcadores) medidos en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia) y
(c) identificar un paciente que es elegible para una intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca o no.
2. Metodo segun la reivindicacion 1, en el que el paciente muestra un nivel de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC, siendo indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
3. Metodo segun la reivindicacion 1 o 2, en el que:
i) el marcador o marcadores se seleccionan del grupo que consiste en creatinina, urea, glucosa y HbAIc (hemoglobina glicada), y en el que un nivel (o niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, y/o en el que un nivel (o niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, y/o
ii) el marcador o marcadores se seleccionan del grupo que consiste en sodio, hemoglobina y hematocrito, y en el que un nivel (o niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, y/o en el que un nivel (niveles) de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia (niveles de referencia) para dicho marcador (marcadores) indica que el paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
4. Metodo segun la reivindicacion 1, que comprende ademas la etapa de medir el nivel de un peptido de tipo PNC en una muestra del paciente y comparar el nivel del peptido de tipo PNC con un nivel de referencia (o niveles de referencia).
5. Metodo segun la reivindicacion 4, en el que:
i) el marcador o marcadores se seleccionan del grupo que consiste en creatinina, urea, glucosa y HbAIc (hemoglobina glicada), y en el que:
(a) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(b) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(c) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; y/o
(d) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca, y/o
ii) el marcador o marcadores se seleccionan de entre el grupo que consiste en sodio, hemoglobina y hematocrito, y en el que
(a) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(b) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es inferior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca;
(c) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es superior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca; y/o
(d) un nivel de por lo menos un marcador en la muestra del paciente que es superior al nivel de referencia para dicho marcador, y un nivel de peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC es indicativo de que un paciente no es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardfaca.
6. Metodo para optimizar la terapia de la insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC, comprendiendo dicho metodo las etapas de:
(a) medir el nivel de por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardfaca y que recibe terapia para insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC,
(b) comparar el nivel (o niveles) del marcador (o marcadores) medidos en (a) con un nivel de referencia (o niveles de referencia) y
(c) optimizar la terapia de la insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC.
7. Metodo segun la reivindicacion 6, en el que el paciente muestra un nivel de un peptido de tipo PNC que es inferior al nivel de referencia para dicho peptido de tipo PNC, siendo indicativo de intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca.
8. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el paciente presenta insuficiencia cardiaca clasificada como en estadio B o C segun la clasificacion de ACC/AHA, y/o en el que el paciente presenta insuficiencia cardiaca de clase II o II segun la clasificacion de NYHA.
9. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la muestra es una muestra de sangre, suero o plasma y/o en el que el paciente es un ser humano.
10. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la terapia de la insuficiencia cardiaca es terapia de la insuficiencia cardiaca medicinal, en particular en el que la terapia de la insuficiencia cardiaca comprende la administracion de por lo menos un medicamento seleccionado del grupo que consiste en diureticos, inhibidores del enzima conversor de la angiotensina, bloqueantes de receptor de la angiotensina II, beta-bloqueantes y antagonistas de aldosterona.
11. Metodo segun la reivindicacion 10, en el que la terapia de la insuficiencia cardiaca comprende la administracion combinada de un beta-bloqueante y un inhibidor de la ACE.
12. Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca comprende incrementar la dosis de medicamentos anteriormente administrados, la administracion de un medicamento (o medicamentos) adicional, en particular la administracion de un medicamento (o medicamentos) adicional con un modo de accion diferente de los medicamentos administrados anteriormente, terapia con dispositivos, cambios en el estilo de vida y combinaciones de los mismos.
13. Utilizacion de i) por lo menos un marcador seleccionado del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito y/o ii) utilizacion de por lo menos un agente de deteccion de un marcador seleccionado del grupo de marcadores que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito en una muestra de un paciente que presenta insuficiencia cardiaca y que esta recibiendo terapia para insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC, para la identificacion de un paciente que es elegible para la intensificacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca o para la optimizacion de la terapia de la insuficiencia cardiaca guiada por peptido de tipo PNC.
14. Utilizacion segun la reivindicacion 13, en la que i) el marcador o marcadores seleccionados del grupo que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito se utiliza en combinacion con un peptido de tipo PNC y/o ii) el agente o agentes de deteccion para un marcador seleccionado del grupo de marcadores que consiste en creatinina, urea, sodio, glucosa, HbAIc (hemoglobina glicada), hemoglobina y hematocrito, se utiliza en combinacion con un agente de deteccion que se une espedficamente a un peptido de tipo PNC.
ES14152777T 2014-01-28 2014-01-28 Biomarcadores para la evaluación de riesgos y la monitorización del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardíaca que han recibido terapia guiada por el péptido natriurético de tipo B Active ES2712201T3 (es)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14152777.0A EP2899544B1 (en) 2014-01-28 2014-01-28 Biomarkers for risk assessment and treatment monitoring in heart failure patients who receive B-type natriuretic peptide guided therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2712201T3 true ES2712201T3 (es) 2019-05-09

Family

ID=49999827

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14152777T Active ES2712201T3 (es) 2014-01-28 2014-01-28 Biomarcadores para la evaluación de riesgos y la monitorización del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardíaca que han recibido terapia guiada por el péptido natriurético de tipo B

Country Status (7)

Country Link
US (2) US10684291B2 (es)
EP (2) EP3470848A3 (es)
JP (2) JP6672154B2 (es)
CN (3) CN115128279A (es)
CA (1) CA2945680C (es)
ES (1) ES2712201T3 (es)
WO (1) WO2015113889A1 (es)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3470848A3 (en) * 2014-01-28 2019-05-22 Roche Diagnostics GmbH Biomarkers for risk assessment and treatment monitoring in heart failure patients guided by natriuretic peptides
WO2016123163A2 (en) 2015-01-27 2016-08-04 Kardiatonos, Inc. Biomarkers of vascular disease
EP3194981B1 (en) * 2015-06-05 2018-08-22 Beckman Coulter, Inc. Obstructive sleep apnea (osa) biomarker panel
KR102621034B1 (ko) 2015-10-02 2024-01-03 율리우스-막시밀리안스 우니버지태트 뷔르츠부르크 면역 체크포인트 차단제를 이용한 치료의 임상적인 경과를 예측하기 위한 진단 마커로서의 gdf-15
CN106872447A (zh) * 2017-01-14 2017-06-20 北京工业大学 增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法
US10969384B2 (en) 2017-05-04 2021-04-06 Vector Laboratories, Inc. Immunofluorescence assays
US11942219B1 (en) * 2017-09-25 2024-03-26 Cerner Innovation, Inc. Determining a cardiovascular ischemic event and decision support tool
KR20210044216A (ko) * 2018-08-10 2021-04-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 심방세동-관련 뇌졸중 평가를 위한 ces-2 (카르복실에스테라제-2)
CN110092824B (zh) * 2019-05-14 2021-03-19 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 氨基末端脑钠肽前体多肽、抗体及其制备方法、检测试剂盒及检测方法
US12461113B2 (en) 2019-05-23 2025-11-04 Roche Diagnostics Operations, Inc. IGFBP7 ratio for HFpEF
EP4035171A1 (en) * 2019-09-27 2022-08-03 CardioRenal Overall loop system
KR20230107309A (ko) 2020-11-10 2023-07-14 카탈임 게엠베하 항-gdf15 항체 및 암 치료용 투여 용법
EP4060347A1 (en) * 2021-03-15 2022-09-21 F. Hoffmann-La Roche AG Method for screening a subject for the risk of chronic kidney disease and computer-implemented method
CN117269512A (zh) * 2023-10-31 2023-12-22 中南大学湘雅医院 用于影响患有二型糖尿病的帕金森病患者死亡风险的生物标志物及其应用

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4424279A (en) 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
US5744101A (en) 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
GB9211686D0 (en) 1992-06-03 1992-07-15 Medisinsk Innovation A S Chemical compounds
US5695761A (en) 1993-12-23 1997-12-09 Rutgers University Suppression of nitric oxide production by osteopontin
US5804452A (en) * 1995-04-27 1998-09-08 Quidel Corporation One step urine creatinine assays
AU8591198A (en) 1997-07-31 1999-02-22 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Growth differentiation factor-15
US6414219B1 (en) 1998-06-30 2002-07-02 Rutgers, The State University Of New Jersey Osteopontin knock-out mouse and methods of use thereof
US6709855B1 (en) 1998-12-18 2004-03-23 Scios, Inc. Methods for detection and use of differentially expressed genes in disease states
ES2275513T3 (es) 1999-05-17 2007-06-16 Biopharm Gesellschaft Zur Biotechnologischen Entwicklung Und Zum Vertrieb Von Pharmaka Mbh Propiedades neuroprotectoras de gdf-15, un miembro de la superfamilia de tgf-beta.
US7632647B2 (en) 2001-04-13 2009-12-15 Biosite Incorporated Use of B-type natriuretic peptide as a prognostic indicator in acute coronary syndromes
ATE458199T1 (de) 2001-05-04 2010-03-15 Biosite Inc Diagnostische marker der akuten koronaren syndrome und ihre verwendungen
US20050032879A1 (en) * 2003-08-07 2005-02-10 Temple Okarter Formulations and use of a beta-blocker and an ACE-inhibitor for the treatment of cardiovascular diseases
EP2452619B1 (en) * 2003-12-18 2013-10-02 Alere Switzerland GmbH Monitoring method and apparatus
WO2005113585A2 (en) 2004-05-20 2005-12-01 Acceleron Pharma Inc. Modified tgf-beta superfamily polypeptides
US20060003338A1 (en) 2004-06-30 2006-01-05 Deng David X System and methods for the management and treatment of vascular graft disease
ATE511656T1 (de) * 2006-08-04 2011-06-15 Hannover Med Hochschule Verfahren zur risikobewertung von herzeingriffen auf gdf-15-basis
WO2008061978A2 (en) * 2006-11-21 2008-05-29 Roche Diagnostics Gmbh Means and methods for optimization of diagnostic and therapeutic approaches in chronic artery disease based on the detection of troponin t and nt-probnp
JP2010517023A (ja) * 2007-01-25 2010-05-20 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 心不全の評価におけるｉｇｆｂｐ−７の使用
US20090197900A1 (en) * 2007-03-29 2009-08-06 Howard Dittrich Methods of treating heart failure and renal dysfunction in individuals with an adenosine a1 receptor antagonist
EP2294423A1 (en) * 2008-05-15 2011-03-16 F. Hoffmann-La Roche AG Multimarker panel for the differentiation of dilated cardiomyopathy and as basis for a differential therapy and its result
JP5419968B2 (ja) * 2008-05-21 2014-02-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 心臓治療を必要とする個体におけるｌ−ｆａｂｐ、ナトリウム利尿ペプチド及び心筋トロポニン
JP2011528115A (ja) 2008-07-14 2011-11-10 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 心不全を有する患者の診断、モニター及び治療の選択のためのマルチマーカーパネル
US8625572B2 (en) 2008-12-19 2014-01-07 Nokia Corporation Synchronization indication in networks
EP2425245B1 (en) 2009-04-27 2016-10-05 Roche Diagnostics GmbH Use of endostatin as a marker of heart failure
JP2012525571A (ja) * 2009-04-30 2012-10-22 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 適切な治療を必要とする個体において心不全関連腎臓損傷を診断するための手段及び方法
WO2011012268A1 (en) 2009-07-27 2011-02-03 Roche Diagnostics Gmbh Use of mimecan in the assessment of heart failure
ES2549460T3 (es) * 2009-11-03 2015-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag NT-pro ANP y sFlt-1 para la diferenciación entre los eventos isquémicos y circulatorios
EP2588111A1 (en) * 2010-07-02 2013-05-08 BG Medicine, Inc. Statin therapy monitored by galectin- 3 measurement
EP2383579A1 (en) * 2010-12-17 2011-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG sFlt-1, cardiac troponins and natriuretic peptides in the recognition of therapy with HER-2 inhibitors
WO2012106152A1 (en) * 2011-02-03 2012-08-09 Abbott Laboratories Methods of prognosis and diagnosis in chronic heart failure
WO2014009418A1 (en) * 2012-07-10 2014-01-16 Roche Diagnostics Gmbh TnT, NTproBNP, sFlt-1 for CURB65 IN PNEUMONIA
ES2672255T3 (es) * 2012-12-04 2018-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarcadores en la selección de tratamiento para la insuficiencia cardíaca
EP3470848A3 (en) * 2014-01-28 2019-05-22 Roche Diagnostics GmbH Biomarkers for risk assessment and treatment monitoring in heart failure patients guided by natriuretic peptides

Also Published As

Publication number Publication date
JP6977081B2 (ja) 2021-12-08
EP3470848A3 (en) 2019-05-22
CN105934674A (zh) 2016-09-07
CN115128279A (zh) 2022-09-30
JP2017505906A (ja) 2017-02-23
CN110068683A (zh) 2019-07-30
JP2020109412A (ja) 2020-07-16
WO2015113889A1 (en) 2015-08-06
US12117454B2 (en) 2024-10-15
CA2945680A1 (en) 2015-08-06
JP6672154B2 (ja) 2020-03-25
US20160334419A1 (en) 2016-11-17
CA2945680C (en) 2022-07-19
US20200271670A1 (en) 2020-08-27
EP2899544B1 (en) 2018-12-26
US10684291B2 (en) 2020-06-16
CN110068683B (zh) 2022-07-12
EP3470848A2 (en) 2019-04-17
EP2899544A1 (en) 2015-07-29
CN105934674B (zh) 2019-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2712201T3 (es) Biomarcadores para la evaluación de riesgos y la monitorización del tratamiento en pacientes de insuficiencia cardíaca que han recibido terapia guiada por el péptido natriurético de tipo B
ES2944613T3 (es) proADM y/o histonas como marcadores indicadores de un acontecimiento adverso
ES2676553T3 (es) IGFBP7 para el diagnóstico de la disfunción diastólica
EP2671083A1 (en) Methods of prognosis and diagnosis in chronic heart failure
CN104769435B (zh) 心力衰竭中的基于NTproBNP和cTnT的疗法指导
ES2899923T3 (es) NT-proANP y NT-proBNP para el diagnóstico de apoplejía
WO2013006629A1 (en) Methods and compositions for assigning likelihood of acute kidney injury progression
JP2020046432A (ja) 心不全におけるスタチン治療階層化のためのマーカー
US8097424B2 (en) Method for predicting the outcome of a critically ill patient
US20190279770A1 (en) Soluble st2 for the identification of progressors to lvh in the general population
JP2011523072A (ja) １型糖尿病を有する患者の合併症の評価
JP2024516680A (ja) 敗血症の早期検出用のｉｌ６マーカーパネル
HK40012159A (en) Biomarkers for risk assessment and treatment monitoring in heart failure patients guided by natriuretic peptides
HK1228997A1 (en) Biomarkers for risk assessment and treatment monitoring in heart failure patients guided by natriuretic peptides
JP2024516001A (ja) 敗血症の早期検出のためのｅｓｍ１マーカーパネル
HK1228997B (zh) 用於在由利钠肽指导的心力衰竭患者中风险评估和治疗监测的生物标记物
HK1212037B (en) Ntprobnp and ctnt based therapy guidance in heart failure