ES2716417T3 - Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica - Google Patents

Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica Download PDF

Info

Publication number
ES2716417T3
ES2716417T3 ES15777624T ES15777624T ES2716417T3 ES 2716417 T3 ES2716417 T3 ES 2716417T3 ES 15777624 T ES15777624 T ES 15777624T ES 15777624 T ES15777624 T ES 15777624T ES 2716417 T3 ES2716417 T3 ES 2716417T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
methyl
represents hydrogen
substituted
methoxy
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15777624T
Other languages
English (en)
Inventor
Susanne Roehrig
Alexander Hillisch
Stefan Heitmeier
Martina Victoria Schmidt
Karl-Heinz Schlemmer
Adrian Tersteegen
Henrik Teller
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Pharma AG
Original Assignee
Bayer Pharma AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Pharma AG filed Critical Bayer Pharma AG
Application granted granted Critical
Publication of ES2716417T3 publication Critical patent/ES2716417T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/69—Two or more oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/2018—Sugars, or sugar alcohols, e.g. lactose, mannitol; Derivatives thereof, e.g. polysorbates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/2027—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2059—Starch, including chemically or physically modified derivatives; Amylose; Amylopectin; Dextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica
La invención se refiere a derivados de oxopiridina sustituidos y a procedimientos para su preparación así como a su uso para la preparación de fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de enfermedades cardiovasculares, preferentemente de enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas así como de edemas, como también de enfermedades oftalmológicas.
La coagulación sanguínea es un mecanismo protector del organismo con cuya ayuda pueden “sellarse” defectos en la pared de los vasos sanguíneos de forma rápida y fiable. Así, una pérdida de sangre puede evitarse o bien mantenerse a un mínimo. La hemostasia después de la lesión de los vasos sanguíneos se realiza esencialmente mediante el sistema de coagulación, en el cual se desencadena una cascada enzimática de las reacciones complejas de las proteínas plasmáticas. En este caso están involucrados numerosos factores de coagulación sanguínea, cada uno de los cuales convierte, mediante activación, respectivamente el próximo precursor inactivo en su forma activa. Al final de la cascada se encuentra la conversión del fibrinógeno soluble en la fibrina insoluble, de modo que se produce un coágulo de sangre. En la coagulación sanguínea, tradicionalmente se distingue entre el sistema intrínseco y el sistema extrínseco, que finalizan en una ruta de reacción conjunta final. Según esto, los factores Xa y IIa (trombina) cumplen funciones claves: El factor Xa agrupa las señales de las dos vías de coagulación dado que éste se produce tanto mediante el factor VIIa/tissue factor (ruta extrínseca) como mediante el complejo tenasa (ruta intrínseca) a través de la conversión del factor X. La serina proteasa Xa activada escinde la protrombina para dar trombina, la cual, mediante una serie de reacciones, transfiere los impulsos desde la cascada hasta el estado de coagulación de la sangre.
En el pasado reciente se ha modificado la teoría tradicional de las dos zonas separadas de la cascada de coagulación (ruta extrínseca o bien intrínseca) debido a nuevos conocimientos: en estos modelos se inicia la coagulación mediante unión del factor VIIa activado al factor tisular (TF). El complejo producido activa al factor X, lo que a su vez conduce a la generación de trombina con preparación posterior de fibrina y la activación de trombocitos (vía PAR-1) como productos finales de hemostasia que cierran la lesión. En comparación con la posterior fase de amplificación/propagación es baja la velocidad de la preparación de trombina en esta fase y está temporalmente limitada mediante la aparición de TFPI como inhibidor del complejo TF-FVIIa-FX.
Un componente central del paso desde la iniciación hacia la amplificación y propagación de la coagulación es el factor XIa: La trombina activa en bucles de reacoplamiento positivos además del factor V y el factor VIII también al factor XI para dar el factor XIa, el factor IX reacciona para dar el factor IXa y a través del complejo de factor IXa/factor VIIIa así generado estimula mucho la activación del factor X y con ello a su vez la formación de trombina, lo que conduce a un fuerte crecimiento del trombo y estabiliza el trombo.
Además se coloca en el foco de atención que además de la estimulación a través del factor tisular puede realizarse la activación del sistema de coagulación en superficies en particular cargadas negativamente, a las que pertenecen además de estructuras superficiales de células foráneas para el cuerpo (por ejemplo bacterias) también superficies artificiales tal como prótesis vasculares, endoprótesis y sistemas circulatorios extracorpóreos. Sobre la superficie tiene lugar en primer lugar la activación del factor XII (FXII) para dar el factor Xlla, que a continuación activa el factor XI unido a superficies celulares para dar el factor XIa. Esto conduce, tal como se ha descrito anteriormente, a la activación posterior de la cascada de coagulación. Además, el factor XIIa activa igualmente a la procalicreína plasmática unida para dar calicreína plasmática (PK), que por un lado conduce a la posterior activación del factor XII en el contexto de un bucle de potenciación, lo que tiene como consecuencia en total un refuerzo de la iniciación de la cascada de coagulación. Adicionalmente, PK representa una proteasa importante que libera bradicinina, que conduce por consiguiente entre otras cosas al aumento de la permeabilidad endotelial. Como otros sustratos se han descrito prorenina y prourocinasa, cuya activación puede influir en los procesos reguladores del sistema de reninaangiotensina y de la fibrinólisis. Con ello representa la activación de PK un importante eslabón entre procesos coaguladores e inflamatorios.
Una activación no controlada del sistema de coagulación o una inhibición defectuosa de los procesos de activación puede conducir a la formación de trombosis locales o embolias en los vasos (arterias, venas, vasos linfáticos) o cavidades cardíacas. Además, una hipercoagulación sistémica puede conducir a la amplia formación de trombos y finalmente a la coagulopatía de consumo en el contexto de una coagulación intravasal diseminada. Las complicaciones tromboembólicas además se encuentran en los sistemas circulatorios extracorpóreos, tal como por ejemplo durante una hemodiálisis, así como en las prótesis vasculares o bien valvulares y endoprótesis vasculares. En el curso de muchas enfermedades cardiovasculares y metabólicas, debido a los factores sistémicos tales como por ejemplo hiperlipidemia, diabetes o tabaquismo, debido a cambios en el flujo sanguíneo con estasis, tal como por ejemplo en la fibrilación auricular, o debido a cambios patológicos en las paredes de los vasos, por ejemplo, disfunciones endoteliales o aterosclerosis, hay una creciente tendencia a la activación de la coagulación y activación de trombocitos. Esta activación indeseada y sobreabundante de la coagulación puede conducir, mediante la formación de trombos ricos en fibrina y plaquetas, a enfermedades tromboembólicas y complicaciones trombóticas con estados potencialmente mortales. Según esto pueden estar involucrados también procesos inflamatorios. Las enfermedades tromboembólicas pertenecen por tanto ahora como antes a las causas más frecuentes de morbilidad y mortalidad en la mayoría de los países industrializados.
Los anticoagulantes conocidos por el estado de la técnica, es decir sustancias para inhibir o evitar la coagulación sanguínea, tienen varias desventajas. Un procedimiento de tratamiento eficaz o bien profilaxis de enfermedades trombóticas/tromboembólicas resulta en la práctica por tanto como muy difícil e insuficiente.
En el tratamiento y la profilaxis de enfermedades tromboembólicas, en primer lugar se hace uso de heparina la cual se administra de forma parenteral o subcutánea. Debido a las propiedades farmacocinéticas más favorables, se da creciente preferencia en estos días a la heparina de bajo peso molecular; sin embargo, las desventajas conocidas descritas a continuación, que existen en el tratamiento con heparina, no se pueden evitar de esta manera tampoco. Así, la heparina es ineficaz por vía oral y solo tiene un tiempo de vida media comparativamente bajo. Además, hay un alto riesgo de hemorragia, en particular pueden producirse hemorragias cerebrales y hemorragias en el tracto gastrointestinal, y puede haber trombopenia, alopecia por medicamentos u osteoporosis. Las heparinas de bajo peso molecular tienen una probabilidad más baja de conducir al desarrollo de trombocitopenia inducida por heparina, sin embargo, igualmente solo se pueden administrar por vía subcutánea. Esto además se aplica al fondaparinux, un inhibidor del factor Xa selectivo producido de forma sintética con un tiempo de vida media largo.
Una segunda clase de anticoagulantes son los antagonistas de la vitamina K. Estos incluyen, por ejemplo, 1,3-indanodionas y sobre todo sin embargo compuestos tales como warfarina, fenprocumona, dicumarol y otros derivados de cumarina que inhiben de forma no selectiva la síntesis de varios productos de ciertos factores de coagulación dependientes de la vitamina K en el hígado. Debido al mecanismo de acción, el inicio de la acción es muy lento (latencia al inicio de acción de 36 a 48 horas). Los compuestos se pueden administrar por vía oral, sin embargo, debido al alto riesgo de hemorragia y al estrecho índice terapéutico, se requiere un ajuste individual complicado y control del paciente. Además, se han descrito otros efectos secundarios tales como problemas gastrointestinales, pérdida de cabello y necrosis cutáneas.
Enfoques más recientes para anticoagulantes orales están en varias fases de evaluación clínica o en uso clínico y han demostrado su actividad en distintos estudios. Sin embargo, también con la toma de estos fármacos en particular en caso de pacientes predispuestos puede llegarse a complicaciones de hemorragia. Por tanto es de central importancia en el caso de fármacos antitrombóticos el espectro terapéutico: La distancia entre la dosis activa de forma terapéutica para la inhibición de la coagulación y la dosis con la que se pueden producir hemorragias debe ser tan grande como sea posible de modo que se consiga una actividad terapéutica máxima con un perfil de riesgo mínimo.
En distintos modelos in-vitro e in-vivo con por ejemplo anticuerpos como inhibidores del factor XIa, sin embargo también en modelos de desactivación del factor XIa, se documentó el efecto anti-trombótico en caso de baja/ninguna prolongación del tiempo de hemorragia o aumento del volumen sanguíneo. En estudios clínicos estaban asociados un elevado nivel de factor XIa con un aumento de tasa de acontecimiento. Por el contrario, la deficiencia del factor XI (hemofilia C) no conducía a hemorragias espontaneas y saltaba a la vista solo en el contexto de operaciones y traumatismos, sin embargo mostraba una protección frente a determinados acontecimientos tromboembólicos. Además está asociada la calicreína plasmática (PK) con otras enfermedades que van acompañadas de elevadas permeabilidades vasculares o enfermedades inflamatorias crónicas, tal como es esto el caso por ejemplo en la retinopatía diabética, el edema macular y el angioedema hereditario o bien enfermedades intestinales inflamatorias crónicas. La retinopatía diabética tiene como base en primer lugar una debilidad microvascular, en consecuencia de la cual se llega a un espesamiento de la membrana basal de los vasos sanguíneos y a la pérdida de pericitos que envuelven los vasos sanguíneos, posteriormente a la obliteración vascular con isquemia retiniana, que debido a la hipoxia retiniana producida puede conducir a permeabilidad vascular reforzada con posterior formación de un edema macular y debido a todos estos procesos en cuestión a la pérdida de visión del paciente. En el caso de angioedema hereditario (HAE), mediante la formación reducida del inhibidor fisiológico de la calicreína inhibidor de C1-esterasa se llega a la activación no controlada de calicreína plasmática y con ello a inflamaciones con formación de edema fulminante y dolores fuertes. A partir de planteamientos experimentales con animales existen indicios de que la inhibición de calicreína plasmática inhibe la elevada permeabilidad vascular y por consiguiente puede impedir la formación de un edema macular o bien de la retinopatía diabética o bien puede mejorar la sintomatología aguda del HAE. Los inhibidores de calicreína plasmática orales pudieron usarse igualmente para la profilaxis del HAE.
En el caso de la progresión de enfermedades intestinales inflamatorias crónicas (CED) tienen sobre todo las cininas generadas por medio de la calicreína plasmática un papel fundamental. Su acción pro-inflamatoria a través de la activación de receptores de bradicinina induce y potencia el desarrollo de la enfermedad. Los estudios en pacientes con enfermedad de Crohn muestran una correlación entre la concentración de calicreína en el epitelio intestinal y el grado de la inflamación intestinal. Una activación del sistema de calicreína-cinina se observó igualmente en estudios experimentales con animales. Una inhibición de la síntesis de bradicinina mediante inhibidores de calicreína podría usarse según esto también para la profilaxis y/o la terapia de enfermedades intestinales inflamatorias crónicas. Además puede ser especialmente atractiva también la combinación de principios antitrombóticos y antiinflamatorios para muchas enfermedades, para impedir el refuerzo recíproco de coagulación e inflamación.
Un objetivo de la presente invención es, por tanto, la facilitación de nuevos compuestos para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, en particular de enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas, y/o enfermedades edematosas, y/o enfermedades oftalmológicas, en particular de retinopatía diabética o bien del edema macular, en seres humanos y animales, que presenten un gran espectro terapéutico.
El documento WO 2006/030032 describe entre otras cosas piridinonas sustituidas como moduladores alostéricos del receptor mGluR2 y el documento WO 2008/079787 describe piridin-2-onas sustituidas y su uso como activadores de glucocinasa. Los documentos WO 2014/154794, WO 2014/160592, WO 2015/011087 y WO 2015/063093 describen piridin-2-onas sustituidas y su uso como inhibidores del factor XIa.
El objeto de la invención son compuestos de fórmula
Figure imgf000004_0001
en la que
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000004_0002
en la que * es el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa bromo, cloro, flúor, metilo, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, difluorometoxi o trifluorometoxi, R7 representa bromo, cloro, flúor, ciano, nitro, hidroxi, metilo, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, etinilo, 3,3,3-trifluoroprop-1-in-1 -ilo o ciclopropilo,
R8 representa hidrógeno, cloro o flúor,
R2 representa hidrógeno, bromo, cloro, flúor, ciano, alquilo Ci -C3 , difluorometilo, trifluorometilo, 1,1 -difluoroetilo, 2,2­ difluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo, alcoxi C1-C3 , difluorometoxi, trifluorometoxi, 1,1-difluoroetoxi, 2,2-difluoroetoxi, 2 ,2 ,2-trifluoroetoxi, metilcarbonilo o ciclopropilo,
R3 representa hidrógeno, alquilo C1-C5 , alcoxi C1-C4, difluorometilo, trifluorometilo, 1,1 -difluoroetilo, 1,1,2,2,2-pentadeuteroetilo, 3,3,3-trifluoro-2-hidroxiprop-1-ilo, 3,3,3-trifluoro-2-metoxiprop-1-ilo, 3,3,3-trifluoro-2-etoxiprop-1-ilo, prop-2-in-1-ilo, ciclopropiloxi o ciclobutiloxi,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por flúor, ciano, hidroxi, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, cicloalquilo C3-C6, oxoheterociclilo de 4 a 6 miembros, 1,4-dioxanilo, oxazolilo, fenilo y piridilo,
en el que cicloalquilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido por flúor, hidroxi, metilo, etilo, metoxi, etoxi, difluorometilo, trifluorometilo, difluorometoxi y trifluorometoxi,
y
en el que oxo-heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido poroxo, flúor, metilo, etilo, difluorometilo y trifluorometilo,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000004_0003
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, -N+(CH3)3, un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros o representa -NH(C=O)R14,
en el que heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido por alquilo C1 -C3,
y
en el que
R14 representa alquilo C1 -C4, un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros o ciclopropilo,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino, dimetilamino y un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros,
en el que el heterociclilo por su parte puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido por alquilo C1 -C3,
y
en el que heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido por alquilo C1 -C3,
y
en el que ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino y dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno o flúor,
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
Los compuestos de acuerdo con la invención son los compuestos de la fórmula (I) y las sales, solvatos y solvatos de las sales de los mismos, y además los compuestos comprendidos en la fórmula (I) y que se especifican de aquí en adelante como ejemplos de realización, y las sales, solvatos y solvatos de las sales de los mismos en la medida que los compuestos comprendidos en la fórmula (I) y que se especifican de aquí en adelante no sean ya sales, solvatos y solvatos de las sales.
Los compuestos de acuerdo con la invención pueden, dependiendo de su estructura, existir en diferentes formas estequiométricas, es decir, en la forma de isómeros configuracionales o además opcionalmente como isómeros conformacionales (enantiómeros y/o diastereómeros, incluyendo aquéllos en el caso de atropisómeros). La presente invención, por lo tanto, abarca los enantiómeros y diastereómeros, y las respectivas mezclas de los mismos. Los constituyentes estereoisoméricamente uniformes se pueden aislar de estas mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros de manera conocida; preferentemente se usan procedimientos de cromatografía para esto, en particular la cromatografía HPLC sobre una fase aquiral o quiral.
Si los compuestos de acuerdo con la invención pueden presentarse en formas tautoméricas, la presente invención abarca todas las formas tautoméricas.
La presente invención además abarca todas las variantes isotópicas adecuadas de los compuestos de acuerdo con la invención. Una variante isotópica de un compuesto de acuerdo con la invención se entiende en esta memoria descriptiva que significa un compuesto en el cual al menos un átomo dentro del compuesto de acuerdo con la invención ha sido intercambiado por otro átomo del mismo número atómico, pero con una masa atómica diferente que la masa atómica que usualmente o predominantemente se produce en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden ser incorporados en un compuesto de acuerdo con la invención son aquéllos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, cloro, bromo y yodo, tales como 2H (deuterio), 3H (tritio), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I y 131I. Las variantes isotópicas particulares de un compuesto de acuerdo con la invención, especialmente aquéllos en los cuales se han incorporado uno o más isótopos radioactivos, pueden ser beneficiosos, por ejemplo, para el análisis del mecanismo de acción o de la distribución del principio activo en el cuerpo; debido a la preparación y detección comparativamente fácil, especialmente los compuestos marcados con isótopos 3H o 14C son adecuados para este fin. Más aún, la incorporación de isótopos, por ejemplo de deuterio, puede conducir a ventajas terapéuticas particulares como consecuencia de mayor estabilidad metabólica del compuesto, tal como por ejemplo una extensión de la semivida en el cuerpo o una reducción en la dosis activa requerida; estas modificaciones de los compuestos de acuerdo con la invención pueden, por lo tanto, en algunos casos, constituir además una forma de realización preferente de la presente invención. Las variantes isotópicas de los compuestos de acuerdo con la invención se pueden preparar mediante los procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, así por ejemplo mediante los procedimientos que se describen a continuación y las instrucciones reproducidas en los ejemplos de realización, usando las correspondientes modificaciones isotópicas de los respectivos reactivos y/o compuestos de partida.
Como sales se prefieren en el contexto de la presente invención sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención. Sin embargo, además están comprendidas las sales que no son en sí mismas adecuadas para las aplicaciones farmacéuticas pero se pueden usar, por ejemplo, para el aislamiento o la purificación de los compuestos de acuerdo con la invención.
Las sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención incluyen sales de adición de ácido de ácidos minerales, ácidos carboxílicos y ácidos sulfónicos, por ejemplo sales de ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido maleico y ácido benzoico.
Las sales fisiológicamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención también incluyen sales de bases convencionales, como a modo de ejemplo y con preferencia las sales de metal alcalino (por ej., sales de sodio y potasio), sales de metal alcalinotérreo (por ej., sales de calcio y magnesio) y sales de amonio derivadas de amoníaco o aminas orgánicas con 1 a 16 átomos de carbono, como a modo de ejemplo y con preferencia etilamina, dietilamina, trietilamina, etildiisopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclohexilamina, dimetilaminoetanol, procaína, dibencilamina, W-metilmorfolina, arginina, lisina, etilendiamina, /V-metilpiperidina y colina.
Como solvatos se designan en el contexto de la invención aquellas formas de los compuestos de acuerdo con la invención que, en estado sólido o líquido, forman un complejo por coordinación con moléculas de disolvente. Los hidratos son una forma especial de los solvatos en la que la coordinación es con agua.
En el sentido de la presente invención, el término “tratamiento” o “que trata” incluye la inhibición, el retardo, la contención, el alivio, la atenuación, la restricción, la reducción, la supresión, el rechazo o la curación de una enfermedad, una afección, un trastorno, una lesión o un problema de salud, el desarrollo, el curso o el avance de estos estados y/o los síntomas de estos estados. El término “terapia” se entiende aquí como sinónimo del término “tratamiento”.
Los términos “prevención”, “profilaxis” o “exclusión” se usan como sinónimos en el contexto de la presente invención y se refieren a la evitación o reducción del riesgo de contraer, experimentar, padecer o tener una enfermedad, una afección, un trastorno, una lesión o problema de salud, un desarrollo o un avance de estos estados y/o los síntomas de estos estados.
El tratamiento o la prevención de una enfermedad, una afección, un trastorno, una lesión o un problema de salud puede ser parcial o completo.
En el contexto de la presente invención, los sustituyentes, a menos que se especifique lo contrario, tienen el siguiente significado:
Alquilo representa un resto alquilo lineal o ramificado con 1 a 5 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 4 átomos de carbono, de manera especialmente preferente de 1 a 3 átomos de carbono, a modo de ejemplo y preferentemente representa metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, 2-metil-prop-1-ilo, n-butilo, tere-butilo y 2,2-dimetilprop-1-ilo.
Alcoxi representa un resto alcoxi lineal o ramificado con 1 a 4 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 3 átomos de carbono, a modo de ejemplo y preferentemente representa metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi, 2-metil-prop-1-oxi, n-butoxi y tere-butoxi.
Cicloalquilo representa un grupo cicloalquilo monocíclico con 3 a 6 átomos de carbono, a modo de ejemplo y preferentemente para cicloalquilo se mencionan ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
Heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros en la definición del resto R12 representa un resto monocíclico saturado o parcialmente insaturado con 5 o 6 átomos de anillo, en el que un átomo de anillo es un átomo de nitrógeno, y el anillo puede contener otro heteroátomo de la serie O y N, a modo de ejemplo y preferentemente representa pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo, prefiriéndose pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo, prefiriéndose especialmente pirrolidinilo y piperazinilo.
Heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros en la definición del resto R14 representa un resto monocíclico saturado o parcialmente insaturado con 5 o 6 átomos de anillo, en el que un átomo de anillo es un átomo de nitrógeno, y el anillo puede contener otro heteroátomo de la serie O y N, a modo de ejemplo y preferentemente representa pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo, prefiriéndose pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo, prefiriéndose especialmente pirrolidinilo y piperazinilo.
Oxo-heterociclilo de 4 a 6 miembros en la definición del resto R3 representa un resto monocíclico saturado con 4 a 6 átomos de anillo, en el que un átomo de anillo es un átomo de oxígeno, a modo de ejemplo y preferentemente representa oxetanilo, tetrahidrofuranilo y tetrahidro-2H-piranilo.
En las fórmulas del grupo que puede representar R1, el punto de extremo de la línea, junto al que se encuentra en cada caso un *, no representa un átomo de carbono o bien un grupo CH2 sino que es parte constituyente del enlace al átomo al que está unido R1.
En las fórmulas del grupo que puede representar R5, l punto de extremo de la línea, junto al que se encuentra en cada caso una #, no representa un átomo de carbono o bien un grupo CH2 sino que es parte constituyente del enlace al átomo al que está unido R5.
Se prefieren compuestos de fórmula (I), en la que
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000007_0001
en la que * es el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa cloro,
R7 representa ciano, difluorometilo o difluorometoxi,
R8 representa hidrógeno o flúor,
R2 representa cloro, ciano, etoxi, metoxi o difluorometoxi,
R3 representa metilo, etilo, n-propilo, 2-metil-prop-1-ilo o n-butilo,
en el que metilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-2H-piranilo, oxazolilo y piridilo,
en el que ciclobutilo y ciclohexilo pueden estar sustituidos con 1 a 2 sustituyentes independientemente entre sí seleccionados del grupo que está constituido por hidroxi y metoxi,
y
en el que etilo, n-propilo y n-butilo pueden estar sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por metoxi y trifluorometoxi,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000007_0002
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, -N+(CH3)3, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14,
en el que pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo, y en el que
R14 representa alquilo C1-C4, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o ciclopropilo,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino, dimetilamino, pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo,
en el que pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo por su parte pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo, y
en el que pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en el que ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino y dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno,
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000008_0001
en la que * es el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa cloro,
R7 representa ciano,
R8 representa hidrógeno,
R2 representa metoxi,
R3 representa metilo o etilo,
en el que metilo puede estar sustituido con un sustituyente tetrahidro-2H-piranilo,
y
en el que etilo puede estar sustituido con un sustituyente metoxi,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000008_0002
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14, en el que piperazinilo puede estar sustituido con un sustituyente metilo,
y
en el que
R14 representa alquilo C1-C4, pirrolidinilo, piperidinilo o ciclopropilo,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, dimetilamino y pirrolidinilo,
y
en el que pirrolidinilo y piperidinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en el que ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno,
y sus sales, sus solvatos y los solvatos de sus sales.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000009_0001
en la que * es el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa cloro,
R7 representa ciano,
R8 representa hidrógeno.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que R2 representa.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R3 representa metilo o etilo,
en el que metilo puede estar sustituido con un sustituyente tetrahidro-2H-piranilo,
y
en el que etilo puede estar sustituido con un sustituyente metoxi.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000009_0002
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14, en el que piperazinilo puede estar sustituido con un sustituyente metilo, y en el que
R14 representa alquilo C1-C4, pirrolidinilo, piperidinilo o ciclopropilo,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, dimetilamino y pirrolidinilo,
y
en el que pirrolidinilo y piperidinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en el que ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000009_0003
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14, en el que piperazinilo puede estar sustituido con un sustituyente metilo,
y en el que
R14 representa alquilo Ci-C4, pirrolidinilo, piperidinilo o ciclopropilo,
en el que alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, dimetilamino y pirrolidinilo,
y
en el que pirrolidinilo y piperidinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en el que ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000010_0001
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que
R5 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000010_0002
en la que # es el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo.
Se prefieren también compuestos de fórmula (I), en la que R9 representa hidrógeno.
Se prefieren también compuestos que presentan la fórmula (Ia)
Figure imgf000010_0003
en la que R1, R2, R3, R4, R5 y R9 son tal como se ha definido anteriormente.
El objeto de la invención es además un procedimiento para la preparación de los compuestos de fórmula (I), o sus sales, sus solvatos o de los solvatos de sus sales, en el que los compuestos de fórmula
Figure imgf000010_0004
en la que
R1, R2, R3, R4 y R9 tienen el significado indicado anteriormente,
se hacen reaccionar en la primera etapa con compuestos de fórmula
HO-R5a (NI),
en la que
R5a tiene el significado indicado anteriormente de R5, pudiendo estar protegidos los grupos funcionales en R5 con grupos protectores,
en presencia de un reactivo de deshidratación,
y se hacen reaccionar en una segunda etapa mediante separación de los grupos protectores para dar compuestos de fórmula
Figure imgf000011_0001
en la que
R1, R2, R3, R4, R5y R9 tienen el significado indicado anteriormente.
La reacción de la primera etapa se lleva a cabo en general en disolventes inertes, si fuera apropiado en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura desde -20 °C hasta temperatura ambiente a presión atmosférica.
Como reactivos de deshidratación son adecuados según esto, por ejemplo, carbodiimidas tal como N,W-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N"-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilamino-isopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC) (opcionalmente en presencia de pentafluorofenol (PFP)), N-ciclohexilcarbodiimida-N‘-propiloximetil-poliestireno (Ps-carbodiimida) o compuestos de carbonilo tal como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tal como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio, o compuestos de acilamino tal como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina, o anhídrido propanofosfónico, o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitri(dimetilamino)fosfonio, o hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU), fluoroborato de (benzotriazol-1-iloxi)bisdimetilaminometilio (TBTU) o hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)-fosfonio (BOP), o ciano(hidroxiimino)acetato de etilo (oxima), o hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (COMU), o hexafluorofosfato de N-[(dimetilamino)(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metiliden]-N-metilmetanoaminio, o 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina (T3P), o mezclas de estos, con bases. La condensación se realiza preferentemente con clorhidrato de N-(3-dimetilamino-isopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC).
Las bases son, por ejemplo, carbonatos de metal alcalino tales como carbonato o hidrogenocarbonato de sodio o potasio, o bases orgánicas tales como trialquilaminas, por ejemplo trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina, o piridina, o mezclas de estas bases. Preferentemente se realiza la condensación con una mezcla de diisopropiletilamina y 4-dimetilaminopiridina.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tales como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos tales como benceno, u otros disolventes tales como nitrometano, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido o acetonitrilo. Igualmente es posible usar mezclas de los disolventes. Se prefiere especialmente diclorometano.
Los grupos protectores para grupos amino son, por ejemplo, ferc-butoxicarbonilo, bencilo o benciloxicarbonilo y son grupos protectores para grupos carboxilo, por ejemplo, benciloxi o ferc-butilo.
La reacción de la segunda etapa se realiza para grupos protectores bencilo, benciloxicarbonilo y benciloxi en general con un agente de reducción en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta el reflujo de los disolventes con de presión normal a 300 kPa.
Los agentes de reducción son, por ejemplo, paladio sobre carbón activo e hidrógeno, dicloruro de estaño, tricloruro de titanio o formiato de amonio y paladio sobre carbón activo en una mezcla de etanol y acetato de etilo, prefiriéndose paladio sobre carbón activo e hidrógeno.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, éteres tal como dietiléter, metil-ferc-butiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano, tetrahidrofurano, glicoldimetiléter o dietilenglicoldimetiléter, alcoholes tal como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol o ferc-butanol, hidrocarburos tales como benceno, xileno, tolueno, hexano, ciclohexano o fracciones de petróleo, u otros disolventes tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, prefiriéndose como disolventes metanol, etanol o iso-propanol.
La reacción de la segunda etapa para grupos protectores ferc-butoxicarbonilo y ferc-butilo se realiza tal como se describe para el procedimiento [A].
Los compuestos de fórmula (III) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Los compuestos de fórmula (II) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar
[A] los compuestos de fórmula
Figure imgf000012_0001
en la que
R1, R2, R3, R4 y R9 tienen el significado indicado anteriormente y
R30 representa terc-butilo,
con un ácido,
o
[B] los compuestos de fórmula
Figure imgf000012_0002
en la que
R1, R2, R3, R4 y R9 tienen el significado indicado anteriormente y
R30 representa metilo o etilo,
con una base.
Los compuestos de fórmulas (IVa) y (IVb) forman juntos la cantidad de compuestos de fórmula (IV).
La reacción según el procedimiento [A] se realiza en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente a 60 °C con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano o 1,2-dicloroetano, o éteres tal como tetrahidrofurano o dioxano, prefiriéndose diclorometano. Son ácidos, por ejemplo, ácido trifluoroacético o ácido clorhídrico en dioxano, prefiriéndose ácido trifluoroacético. La reacción según el procedimiento [B] se realiza en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta el reflujo de los disolventes con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano o 1,2-dicloroetano, alcoholes tal como metanol o etanol, éteres tal como dietiléter, metil-tercbutiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano o tetrahidrofurano, u otros disolventes tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, o mezclas de disolventes, o mezclas de disolventes con agua, prefiriéndose una mezcla de tetrahidrofurano y agua o una mezcla de metanol y agua.
Las bases son, por ejemplo, hidróxidos alcalinos tal como hidróxido de sodio, litio o potasio, o carbonatos alcalinos tal como carbonato de cesio, carbonato de sodio o potasio, o alcoholatos tal como terc-butilato de potasio o sodio, prefiriéndose hidróxido de litio o carbonato de cesio.
Los compuestos de fórmula (IV) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000013_0001
en la que
R1, R2 y R3 tienen el significado indicado anteriormente, con compuestos de fórmula
Figure imgf000013_0002
en la que
R4 y R9 tienen el significado indicado anteriormente y
R30 representa metilo, etilo o terc-butilo,
en presencia de un reactivo de deshidratación.
La reacción se realiza en general en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de 0°Ca temperatura ambiente con presión normal.
Como reactivos de deshidratación son adecuados según esto, por ejemplo, carbodiimidas tal como N,W-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diisopropil-, N,N"-diciclohexilcarbodiimida, clorhidrato de N-(3-dimetilamino-isopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC) (opcionalmente en presencia de pentafluorofenol (PFP)), N-ciclohexilcarbodiimida-N‘-propiloximetil-poliestireno (Ps-carbodiimida) o compuestos de carbonilo tal como carbonildiimidazol, o compuestos de 1,2-oxazolio tal como 3-sulfato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazolio o perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazolio, o compuestos de acilamino tal como 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina, o anhídrido propanofosfónico, o cloroformiato de isobutilo, o cloruro de bis-(2-oxo-3-oxazolidinil)fosforilo o hexafluorofosfato de benzotriazoliloxitri(dimetilamino)fosfonio, o hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TPTU), fluoroborato de (benzotriazol-1-iloxi)bisdimetilaminometilio (TBTU) o hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), o 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)-fosfonio (BOP), o ciano(hidroxiimino)acetato de etilo (oxima), o hexafluorofosfato de (1-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbenio (COMU), o hexafluorofosfato de N-[(dimetilamino)(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metiliden]-N-metilmetanoaminio, o 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina (T3P), o mezclas de estos, con bases. La condensación se realiza preferentemente con HATU o con T3P.
Las bases son, por ejemplo, carbonatos alcalinos, tal como por ejemplo carbonato o hidrogenocarbonato de sodio o potasio, o bases orgánicas tales como trialquilaminas, por ejemplo trietilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperidina, 4-dimetilaminopiridina o diisopropiletilamina, o piridina. Preferentemente se realiza la condensación con diisopropiletilamina o piridina.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano o triclorometano, hidrocarburos tales como benceno, u otros disolventes tal como nitrometano, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido o acetonitrilo. Igualmente es posible usar mezclas de los disolventes. Se prefiere especialmente dimetilformamida.
Los compuestos de fórmula (VI) se conocen, pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Los compuestos de fórmula (V) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar [C] compuestos de fórmula
Figure imgf000014_0001
en la que
R1, R2 y R3 tienen el significado indicado anteriormente y
R31 representa terc-butilo,
con un ácido,
o
[D] compuestos de fórmula
Figure imgf000014_0002
en la que
R1, R2 y R3 tienen el significado indicado anteriormente y
R31 representa metilo, etilo o bencilo,
con una base.
Los compuestos de fórmulas (VIIa) y (VIIb) forman juntos la cantidad de los compuestos de fórmula (VII). La reacción según el procedimiento [C] se realiza tal como se describe para el procedimiento [A].
La reacción según el procedimiento [D] se realiza tal como se describe para el procedimiento [B].
Los compuestos de fórmula (VII) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar
[E] compuestos de fórmula
Figure imgf000014_0003
en la que
R1 y R2 tienen el significado indicado anteriormente,
con compuestos de fórmula
Figure imgf000014_0004
en la que
R3 tiene el significado indicado anteriormente,
R31 representa metilo, etilo, bencilo o terc-butilo, y
X1 representa cloro, bromo, yodo, metanosulfoniloxi o trifluorometanosulfoniloxi,
o
[F] compuestos de fórmula
Figure imgf000015_0001
en la que
R2 y R3 tienen el significado indicado anteriormente,
R31 representa metilo, etilo, bencilo o terc-butilo y
X2 representa cloro, bromo o yodo,
con compuestos de fórmula
R1— Q (XI),
en la que
R1 tiene el significado indicado anteriormente y
Q representa -B(OH)2, un éster de ácido borónico, preferentemente boronato de pinacol, o -BF3"K+, en condiciones de acoplamiento de Suzuki.
La reacción según el procedimiento [E] se realiza en general en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente hasta el reflujo de los disolventes con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano o 1,2-dicloroetano, alcoholes tal como metanol o etanol, éteres tal como dietiléter, metil-tercbutiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano o tetrahidrofurano, u otros disolventes tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, o mezclas de disolventes, o mezclas de disolventes con agua, prefiriéndose dimetilformamida.
Las bases son, por ejemplo, hidróxidos alcalinos tal como hidróxido de sodio, litio o potasio, o carbonatos alcalinos tal como carbonato de cesio, carbonato de sodio o potasio, o terc-butilato de potasio o sodio, hidruro de sodio o una mezcla de estas bases o una mezcla de hidruro de sodio y bromuro de litio, prefiriéndose carbonato de potasio o hidruro de sodio.
Los compuestos de fórmula (IX) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
La reacción según el procedimiento [F] se realiza en general en disolventes inertes, en presencia de un catalizador, eventualmente en presencia de un reactivo de adición, eventualmente en un microondas, preferentemente en un intervalo de temperatura de temperatura ambiente a 150 °C con de presión normal a 300 kPa.
Los catalizadores son, por ejemplo, catalizadores de paladio habituales para condiciones de reacción de Suzuki, prefiriéndose catalizadores tal como por ejemplo diclorobis(trifenilfosfina)-paladio, tetraquistrifenilfosfinapaladio(O), acetato de paladio(II)/trisciclohexilfosfina, tris(dibencilidenacetona)dipaladio, cloruro de bis-(difenilfosfanferrocenil)-paladio-(II), dímero de 1,3-bis(2,6-diisopropilfenil)imidazol-2-iliden(1,4-naftoquinona)paladio, alil(cloro)-(1,3-dimesitil-1,3-dihidro-2H-imidazol-2-iliden)paladio, acetato de paladio(M)/diciclohexil-(2',4',6'-triisopropil-bifenil-2-il)-fosfina, aducto de cloruro de [1,1-bis-(difenilfosfino)-ferrocen]-paladio(II)-monodiclorometano o precatalizador XPhos [(2'-aminobifenil-2-il)(cloro)paladio-diciclohexil(2',4',6'-triisopropilbifenil-2-il)fosfano (1:1)], prefiriéndose tetraquistrifenilfosfina-paladio(O), aducto de cloruro de [1,1 -bis-(difenilfosfino)-ferrocen]-paladio(II)-monodiclorometano o precatalizador XPhos [(2'-aminobifenil-2-il)(cloro)paladio-diciclohexil(2',4',6'-triisopropilbifenil-2-il)fosfano (1:1)].
Los reactivos de adición son por ejemplo acetato de potasio, carbonato de cesio, potasio o de sodio, terc-butilato de potasio, fluoruro de cesio o fosfato de potasio, pudiéndose encontrar estos en solución acuosa, prefiriéndose reactivos de adición tal como carbonato de potasio o solución acuosa de fosfato de potasio.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, éteres tal como dioxano, tetrahidrofurano o 1,2-dimetoxietano, hidrocarburos tales como benceno, xileno o tolueno, o amidas de ácido carboxílico tal como dimetilformamida o dimetilacetamida, alquilsulfóxidos tal como dimetilsulfóxido, o N-metilpirrolidona o acetonitrilo, o mezclas de los disolventes con alcoholes tal como metanol o etanol y/o agua, prefiriéndose tetrahidrofurano, dioxano o acetonitrilo. Los compuestos de fórmula (XI) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Los compuestos de fórmula (VIII) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000016_0001
en la que
R1 y R2 tienen el significado indicado anteriormente,
con clorhidrato de piridinio o bromhidrato de piridinio.
La reacción se realiza en general en disolventes inertes, preferentemente en un intervalo de temperatura de 80 °C a 120 °C con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos tales como benceno, u otros disolventes tal como nitrometano, dioxano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido o acetonitrilo. Igualmente es posible usar mezclas de los disolventes. Se prefiere especialmente dimetilformamida.
Los compuestos de fórmula (XII) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000016_0002
en la que
R2 tiene el significado indicado anteriormente y
X3 representa cloro, bromo o yodo,
con compuestos de fórmula (XI) en condiciones de acoplamiento de Suzuki.
La reacción se realiza tal como se describe para el procedimiento [F].
Los compuestos de fórmula (XIII) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Los compuestos de fórmula (X) se conocen o pueden prepararse, haciendo reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000016_0003
en la que
R2 tiene el significado indicado anteriormente y
X2 representa cloro, bromo o yodo,
con compuestos de fórmula (IX).
La reacción se realiza tal como se describe para procedimiento [E].
Los compuestos de fórmula (XIV) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
En un procedimiento alternativo pueden prepararse los compuestos de fórmula (VII), haciéndose reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000017_0001
en la que
R1 y R2 tienen el significado indicado anteriormente y
R31 representa metilo, etilo, bencilo o terc-butilo,
con compuestos de fórmula
R — X 4 (XVI),
en la que
R3 tiene el significado indicado anteriormente y
X4 representa cloro, bromo, yodo, metanosulfoniloxi, trifluorometanosulfoniloxi o para-toluenosulfoniloxi. La reacción se realiza en general en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de -78 °C a temperatura ambiente con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano o 1,2-dicloroetano, alcoholes tal como metanol o etanol, éteres tal como dietiléter, metil-tercbutiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano o tetrahidrofurano, u otros disolventes tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, o mezclas de disolventes, o mezclas de disolventes con agua, prefiriéndose tetrahidrofurano.
Las bases son, por ejemplo, terc-butilato de potasio o de sodio, hidruro de sodio, N-butil-litio o bis-(trimetilsilil)-amida de litio, prefiriéndose bis-(trimetilsilil)-amida de litio.
Los compuestos de fórmula (XV) se conocen o pueden sintetizarse según los procedimientos descritos anteriormente, por ejemplo el procedimiento [E], a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Los compuestos de fórmula (XVI) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
En un procedimiento alternativo pueden prepararse los compuestos de fórmula (V), haciendo reaccionar compuestos de fórmula
Figure imgf000017_0002
en la que
R1 y R2 tienen el significado indicado anteriormente,
con compuestos de fórmula
Figure imgf000017_0003
en la que
R3 tiene el significado indicado anteriormente y
X5 representa cloro, bromo o yodo.
La reacción se realiza en general en disolventes inertes, eventualmente en presencia de una base, preferentemente en un intervalo de temperatura de -10 °C a 90 °C con presión normal.
Los disolventes inertes son, por ejemplo, hidrocarburos halogenados tal como diclorometano, triclorometano, tetraclorometano o 1,2-dicloroetano, alcoholes tal como metanol o etanol, éteres tal como dietiléter, metil-tercbutiléter, 1,2-dimetoxietano, dioxano o tetrahidrofurano, u otros disolventes tal como dimetilformamida, dimetilacetamida, acetonitrilo o piridina, o mezclas de disolventes, o mezclas de disolventes con agua, prefiriéndose tetrahidrofurano.
Las bases son, por ejemplo, terc-butilato de potasio o sodio, hidruro de sodio o bis-(trimetilsilil)-amida de litio o una mezcla de di-terc-butilato de magnesio y terc-butilato de potasio, prefiriéndose una mezcla de di-terc-butilato de magnesio y terc-butilato de potasio.
Los compuestos de fórmula (XVII) se conocen o pueden sintetizarse según procedimientos conocidos a partir de los correspondientes compuestos de partida.
Esquema 1
Figure imgf000018_0001
Los compuestos de acuerdo con la invención tienen un espectro útil impredecible de actividad farmacológica y un buen comportamiento farmacocinético. A este respecto se trata de compuestos que modulan la actividad proteolítica de la serina proteasa factor XIa (FXIa) y/o de la serina proteasa calicreína plasmática (PK). Los compuestos de acuerdo con la invención inhiben la escisión enzimática catalizada con FXIa y/o PK de sustratos que adoptan una función esencial en la activación de la coagulación sanguínea, en la agregación plaquetaria por medio de reducción de la trombina necesaria para la activación de PAR-1 de las plaquetas y en procesos inflamatorios que incluyen conjuntamente en particular un aumento de la permeabilidad vascular.
Por lo tanto son adecuados para su uso como fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en seres humanos y animales.
Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de enfermedades cardiovasculares, preferentemente de enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas y/o complicaciones trombóticas o bien tromboembólicas, y/o enfermedades oftalmológicas, en particular de retinopatía diabética o bien del edema macular y/o enfermedades inflamatorias, en particular aquéllas que están relacionadas con la actividad excesiva de calicreína plasmática, tal como por ejemplo el angioedema hereditario (HAE) o enfermedades inflamatorias crónicas, en particular del intestino, tal como por ejemplo enfermedad de Crohn.
El factor XIa (FXIa) es una enzima importante en el contexto de la coagulación que puede activarse tanto mediante trombina como también factor XIIa (FXIIa) y por consiguiente está implicado en dos procesos esenciales de la coagulación: es un componente central del paso desde la iniciación hacia la amplificación y propagación de la coagulación: La trombina activa en bucles de reacoplamiento positivos además del factor V y el factor VIII también al factor XI para dar el factor XIa, el factor IX reacciona para dar el factor IXa y a través del complejo de factor IXa/factor VIIIa así generado estimula mucho la activación del factor X y con ello a su vez la formación de trombina, lo que conduce a un fuerte crecimiento del trombo y estabiliza el trombo.
Además es el factor XIa un componente importante de la iniciación intrínseca de la coagulación: además de la estimulación a través del factor tisular (tissue factor, TF) puede realizarse la activación del sistema de coagulación en superficies en particular cargadas negativamente, a las que pertenecen además de estructuras superficiales de células foráneas para el cuerpo (por ejemplo bacterias) también superficies artificiales tal como prótesis vasculares, endoprótesis y sistemas circulatorios extracorpóreos. Sobre la superficie tiene lugar en primer lugar la activación del factor XII (FXII) para dar el factor Xlla, que a continuación activa el factor XI unido a superficies celulares para dar el factor XIa. Esto conduce, tal como se ha descrito anteriormente, a la activación posterior de la cascada de coagulación.
Por el contrario, la generación de trombina en la fase de iniciación a través de TF/factor VIIa y activación del factor X y finalmente la formación de trombina, permanece insensible a la reacción fisiológica en lesiones vasculares. Esto podría aclarar por qué no se encontraron prolongaciones de los tiempos de coagulación en ratones con FXIa desactivado, como también en conejos y otras especies con administración del inhibidor de FXIa. Esta baja tendencia a la hemorragia provocada por la sustancia es de gran importancia para su administración en seres humanos en particular en pacientes con elevado riesgo de hemorragia.
Además, el factor XIIa activa en el contexto de la activación intrínseca igualmente procalicreína plasmática para dar calicreína plasmática (PK), que conduce entre otras cosas a la activación posterior del factor XII en el contexto de un bucle de potenciación, lo que tiene como consecuencia en total un refuerzo de la iniciación de la cascada de coagulación en superficies. Una actividad inhibidora de PK de un compuesto de acuerdo con la invención reducirá por tanto la coagulación por medio de la activación de superficie y por consiguiente actuará de manera anticoagulante. Una ventaja podría encontrarse en la combinación de actividad inhibidora de factor XIa y de PK, que permite una acción antitrombótica equilibrada.
Por tanto, los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades o complicaciones que surgen o pueden surgir de la formación de coágulos.
A las “enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas” en el sentido de la presente invención pertenecen enfermedades que se producen tanto en la vasculatura arterial como en la venosa y que se pueden tratar con los compuestos de acuerdo con la invención, en particular enfermedades en las arterias coronarias del corazón, tales como síndrome coronario agudo (ACS), infarto de miocardio con elevación del segmento ST (STEMI) y sin elevación del segmento ST (no-STEMI), angina de pecho estable, angina de pecho inestable, reoclusiones y restenosis después de intervenciones coronarias tales como angioplastia, implantación de endoprótesis vascular o derivación aortocoronaria, pero además enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas en otros vasos que conducen a enfermedades oclusivas arteriales periféricas, embolias pulmonares, tromboembolias venosas, trombosis venosas, en particular en venas profundas de la pierna, y venas renales, ataques isquémicos transitorios y además accidente cerebrovascular trombótico y accidente cerebrovascular tromboembólico.
La estimulación del sistema de coagulación puede producirse por varias causas o bien enfermedades asociadas. En el contexto de las intervenciones quirúrgicas, inmovilidad, encamado, infecciones, inflamación o un cáncer o tratamiento de cáncer, entre otras cosas puede estar el sistema de coagulación extremadamente activado y puede haber complicaciones trombóticas, en particular trombosis venosas. Por lo tanto, los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados para la profilaxis de trombosis en el contexto de intervenciones quirúrgicas en pacientes que sufren de cáncer. Por lo tanto, los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados también para la profilaxis de trombosis en pacientes que tienen un sistema de coagulación activado, por ejemplo en las situaciones de estimulación descritas.
Por tanto, los compuestos de acuerdo con la invención también son adecuados para la prevención y el tratamiento de tromboembolias cardiógenas tales como, por ejemplo, isquemias cerebrales, accidentes cerebrovasculares y tromboembolias sistémicas e isquemias, en pacientes con arritmias cardíacas agudas, intermitentes o persistentes tales como, por ejemplo, fibrilación auricular, y en pacientes que experimentan cardioversión, además en pacientes con enfermedades en válvulas cardíacas o con prótesis valvulares.
Además son adecuados los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento y la prevención de una coagulación intravasal diseminada (DIC), que puede producirse entre otras cosas en el contexto de una septicemia, sin embargo también como consecuencia de intervenciones quirúrgicas, enfermedades tumorales, quemaduras u otras lesiones y mediante microtrombosis puede conducir a graves daños de órganos.
Las complicaciones tromboembólicas se producen además en caso de anemias hemolíticas microangiopáticas y mediante contacto de la sangre con superficies extrañas al cuerpo en el contexto de circulaciones sanguíneas extracorpóreas, tal como por ejemplo la hemodiálisis, ECMO (“extracorporal membrane oxygenation"), LVAD (“left ventricular assist device") y procedimientos similares, fístulas AV, endoprótesis vascular así como prótesis valvulares.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se tienen en consideración para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades que involucran la formación de microcoágulos o bien depósitos de fibrina en vasos sanguíneos cerebrales que pueden conducir a enfermedades de demencia tales como la demencia vascular o enfermedad de Alzheimer. Aquí, el coágulo puede contribuir a la enfermedad tanto mediante oclusiones como mediante la unión de otros factores relevantes de la enfermedad.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se tienen en consideración en particular para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades donde, además del componente pro-coagulante, también el componente pro­ inflamatorio cumple una función esencial. La potenciación mutua de la coagulación y la inflamación se puede prevenir en particular mediante los compuestos de acuerdo con la invención y por tanto se puede reducir de forma decisiva la probabilidad de una complicación trombótica. A este respecto pueden contribuir tanto el componente inhibidor del factor XIa (a través de la inhibición de la producción de trombina) como también el componente inhibidor de PK a la acción anticoagulante y antiinflamatoria (por ejemplo por medio de bradicinina). Por tanto se puede considerar entre otras cosas el tratamiento y/o la profilaxis, en el contexto de enfermedades vasculares ateroscleróticas, inflamaciones en el contexto de enfermedades reumáticas del sistema locomotor, enfermedades inflamatorias del pulmón, tales como por ejemplo fibrosis pulmonar, enfermedades inflamatorias del riñón, tales como por ejemplo glomerulonefritis, enfermedades inflamatorios del intestino, tales como por ejemplo enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa, o enfermedades que pueden estar presentes en el contexto de una enfermedad diabética subyacente, tales como por ejemplo retinopatía diabética o bien nefropatía.
En el caso de la progresión de enfermedades intestinales inflamatorias crónicas (CED) tienen entre otras cosas las cininas generadas por medio de la calicreína plasmática un papel fundamental. Su acción pro-inflamatoria a través de la activación de receptores de bradicinina induce y potencia el desarrollo de la enfermedad. Los estudios en pacientes con enfermedad de Crohn muestran una correlación entre la concentración de calicreína en el epitelio intestinal y el grado de la inflamación intestinal. Una activación del sistema de calicreína-cinina se observó igualmente en estudios experimentales con animales. Una inhibición de la síntesis de bradicinina mediante inhibidores de calicreína podría usarse según esto también para la profilaxis y/o la terapia de enfermedades intestinales inflamatorias crónicas.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se pueden usar para inhibir el desarrollo de tumores y la formación de metástasis, y además para la profilaxis y/o el tratamiento de complicaciones tromboembólicas, tales como, por ejemplo, tromboembolias venosas, en pacientes con tumor, en particular los que se someten a intervenciones quirúrgicas importantes o a quimioterapia o radioterapia.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se tienen en consideración también para la profilaxis y/o el tratamiento de hipertensión pulmonar.
En el contexto de la presente invención, el término "hipertensión pulmonar" incluye hipertensión arterial pulmonar, hipertensión pulmonar asociada con enfermedades del hemicardio izquierdo, hipertensión pulmonar asociada con enfermedades pulmonares y/o hipoxia e hipertensión pulmonar debida a tromboembolias crónicas (CTEPH).
La "hipertensión arterial pulmonar" comprende hipertensión arterial pulmonar idiopática (IPAH), inicialmente denominada también hipertensión pulmonar primaria), hipertensión arterial pulmonar familiar (FPAH) e hipertensión arterial pulmonar asociada (APAH), la cual está asociada con colagenosis, derivación pulmonar-sistémica congénita, hipertensión portal, infecciones por VIH, la ingestión de ciertas drogas y medicamentos, con otras enfermedades (enfermedades de la glándula tiroidea, enfermedades por depósito de glucógeno, enfermedad de Gaucher, teleangiectasia hereditaria, hemoglobinopatías, trastornos mieloproliferativos, esplenectomía), con enfermedades que tienen una contribución capilar/venosa significativa, tales como enfermedad pulmonar-venosa oclusiva y hemangiomatosis pulmonar-capilar, y además hipertensión pulmonar persistente de neonatos.
La hipertensión pulmonar asociada con enfermedades del hemicardio izquierdo comprende la enfermedad de la aurícula o el ventrículo izquierdo y defectos en la válvula mitral o aorta.
La hipertensión pulmonar asociada con enfermedades pulmonares y/o hipoxia comprende enfermedades pulmonares obstructivas crónicas, enfermedad pulmonar intersticial, síndrome de apnea del sueño, hipoventilación alveolar, mal de las alturas crónico y defectos inherentes.
La hipertensión pulmonar debida a tromboembolias crónicas (CTEPH) comprende la oclusión tromboembólica de las arterias pulmonares proximales, la oclusión tromboembólica de las arterias pulmonares distales y las embolias pulmonares no trombóticas (tumor, parásitos, cuerpos extraños).
Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para la preparación de fármacos para el tratamiento y/o la profilaxis de hipertensión pulmonar asociada con sarcoidosis, histiocitosis X y linfangiomatosis.
Además, las sustancias de acuerdo con la invención se tienen en consideración también para el tratamiento de fibrosis pulmonar y hepática.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se tienen en consideración también para el tratamiento y/o la profilaxis de la coagulación intravascular diseminada en el contexto de una enfermedad infecciosa, y/o del síndrome inflamatorio sistémico (SIRS), disfunción orgánica septicémica, insuficiencia orgánica septicémica e insuficiencia multiorgánica, síndrome disneico agudo (SDA), lesión aguda del pulmón (ALI), choque septicémico y/o insuficiencia orgánica septicémica.
En el curso de una infección, puede haber una activación generalizada del sistema de coagulación (“coagulación intravascular diseminada” o “coagulopatía de consumo”, denominada a continuación como "DIC") con microtrombosis en varios órganos y complicaciones hemorrágicas secundarias. Además, puede haber daño endotelial con aumento de permeabilidad de los vasos y filtración de fluidos y proteínas dentro del lumen extravasal. En el transcurso posterior puede haber insuficiencia de un órgano (por ejemplo insuficiencia renal, insuficiencia hepática, insuficiencia respiratoria, déficit del sistema nervioso central e insuficiencia cardiovascular) o insuficiencia multiorgánica.
En el caso de DIC, hay una activación masiva del sistema de coagulación en la superficie de las células endoteliales dañadas, las superficies de cuerpos extraños o del tejido extravascular lesionado. Como consecuencia, hay coagulación en pequeños vasos de varios órganos con hipoxia y posterior disfunción orgánica. Un efecto secundario es el consumo de factores de coagulación (por ejemplo factor X, protrombina y fibrinógeno) y plaquetas, que reduce la capacidad de coagulación de la sangre y pueden producirse hemorragias graves.
Los compuestos de acuerdo con la invención, que inhiben calicreína plasmática sola o en combinación con factor XIa, se tienen en consideración adicionalmente para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades en cuyo desarrollo está implicada la calicreína plasmática. Adicionalmente a la actividad anticoagulante, la calicreína plasmática representa una importante proteasa que libera bradicinina, que por consiguiente conduce entre otras cosas al aumento de la permeabilidad endotelial. Los compuestos pueden usarse, por consiguiente, para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, que van acompañadas de formaciones de edema, tal como por ejemplo enfermedades oftalmológicas, en particular la retinopatía diabética o el edema macular o el angioedema hereditario.
A las “enfermedades oftalmológicas” en el sentido de la presente invención pertenecen en particular enfermedades tal como retinopatía diabética, edema macular diabético (diabetic macular edema, DME), edema macular, edema macular asociado con oclusión venosa retiniana, degeneración macular asociada a la edad (AMD), neovascularización coroidea (CNV), membranas neovasculares coroideas (CNVM), edema macular cistoide (cystoid macula edema, CME), membranas epiretinales (ERM) y perforaciones de la mácula, neovascularización coroidea asociada a miopía, estrías angioides o bien vasculares (angioid streaks, vascular streaks), desprendimiento de retina, alteraciones atróficas de epitelio pigmentario de la retina, alteraciones hipertróficas del epitelio pigmentario de la retina, oclusión venosa retiniana, oclusión venosa retiniana coroidea, retinitis pigmentosa, enfermedad de Stargardt, retinopatía del prematuro, glaucoma, enfermedades inflamatorias del ojo tal como por ejemplo uveitis, escleritis o endoftalmitis, cataratas, anomalías de refracción tal como por ejemplo miopía, hipermetropía o astigmatismo y queratocono, enfermedades del ojo delantero tal como por ejemplo angiogénesis corneal como consecuencia de por ejemplo queratitis, trasplante de córnea o queratoplastia, angiogénesis corneal como consecuencia de hipoxia (por ejemplo al llevar mucho tiempo lentes de contacto), Pterygium conjunctivae, edema subcorneal y edema intracorneal.
Además se tienen en cuenta los compuestos de acuerdo con la invención para la profilaxis primaria de enfermedades trombóticas o tromboembólicas y/o enfermedades inflamatorias y/o enfermedades con elevada permeabilidad vascular en pacientes en los que las mutaciones génicas conducen a actividad reforzada de las enzimas o niveles elevados de los zimógenos y éstos se determinan mediante correspondientes ensayos/mediciones de la actividad enzimática o bien concentraciones de zimógenos.
Otro objeto de la presente invención es el uso de los compuestos de acuerdo con la invención para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de las enfermedades mencionadas anteriormente.
Otro objeto de la presente invención son los compuestos de acuerdo con la invención para su uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades, en particular de las enfermedades mencionadas anteriormente, usando una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con la invención.
Otro objeto de la presente invención son fármacos que contienen un compuesto de acuerdo con la invención y uno o varios principios activos adicionales.
Además, los compuestos de acuerdo con la invención se pueden usar para prevenir la coagulación ex vivo, por ejemplo para la protección de órganos a ser trasplantados contra el daño del órgano originado por la formación de coágulos y para proteger al receptor del órgano contra la tromboembolia del órgano trasplantado, para conservar los hemoderivados y derivados plasmáticos, para limpiar/pretratar catéteres y otros medios auxiliares e instrumentos médicos, para recubrir las superficies sintéticas de los medios auxiliares e instrumentos médicos que se usan in vivo o ex vivo o para muestras biológicas que podrían comprender el factor Xla o calicreína plasmática.
Otro objeto de la presente invención es un procedimiento para prevenir la coagulación de la sangre in vitro, en particular en muestras de sangre en bancos o muestras biológicas que pueden contener el factor XIa o calicreína plasmática o las dos enzimas, que se caracteriza porque se agrega una cantidad anticoagulante efectiva del compuesto de acuerdo con la invención.
Otro objeto de la presente invención son fármacos que contienen un compuesto de acuerdo con la invención y uno o varios principios activos adicionales, especialmente para el tratamiento y/o la profilaxis de las enfermedades mencionadas anteriormente. Como principios activos de combinación adecuados se mencionan a modo de ejemplo y preferentemente:
• hipolipemiantes, en particular inhibidores de HMG-CoA-(3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A) reductasa tales como, por ejemplo, lovastatina (Mevacor), simvastatina (Zocor), pravastatina (Pravachol), fluvastatina (Lescol) y atorvastatina (Lipitor);
• agentes terapéuticos coronarios/vasodilatadores, en particular inhibidores de ACE (enzima convertidora de la angiotensina) tales como, por ejemplo, captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril, quinapril y perindopril, o antagonistas del receptor AII (angiotensina II) tales como, por ejemplo, embusartan, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, eprosartan y temisartan, o antagonistas p-adrenoceptores tales como, por ejemplo, carvedilol, alprenolol, bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propanolol y timolol, o antagonistas del adrenoceptor alfa-1 tales como, por ejemplo, prazosina, bunazosina, doxazosina y terazosina, o diuréticos, tales como, por ejemplo, hidroclorotiazida, furosemida, bumetanida, piretanida, torasemida, amilorida y dihidralazina, o bloqueadores del canal de calcio, tales como, por ejemplo verapamilo y diltiazem, o derivados de dihidropiridinas tales como, por ejemplo, nifedipino (Adalat) y nitrendipino (Bayotensin), o preparaciones nitro tales como, por ejemplo, 5-mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida y trinitrato de glicerol, o sustancias que originan un incremento en el guanosina monofosfato cíclico (cGMP) tales como, por ejemplo, estimuladores de guanilato ciclasa soluble, por ejemplo riociguat;
• activadores del plasminógeno (trombolíticos/fibrinolíticos) y compuestos que promueven la trombólisis/fibrinólisis tales como inhibidores del inhibidor del activador del plasminógeno (inhibidores de PAI) o inhibidores del inhibidor de fibrinólisis activado por trombina (inhibidores de TAFI) tales como, por ejemplo, activador tisular del plasminógeno (tPA, por ejemplo Actilyse®), estreptocinasa, reteplasa y urocinasa o sustancias moduladoras de plasminógeno, que conducen a un refuerzo de la formación de plasmina;
• sustancias anticoagulantes (anticoagulantes), tales como, por ejemplo, heparina (UFH), heparinas de bajo peso molecular (NMH), tales como, por ejemplo, tinzaparina, certoparina, parnaparina, nadroparina, ardeparina, enoxaparina, reviparina, dalteparina, danaparoid, semuloparina (AVE 5026), adomiparina (M118) y EP-42675/ORG42675;
• inhibidores directos de la trombina (DTI) tales como, por ejemplo, pradaxa (Dabigatran), atecegatran (AZD-0837), DP-4088, SSR-182289A, argatroban, bivalirudina y tanogitran (BiBt -986 y el profármaco BIBT-1011), hirudina;
• inhibidores directos del factor Xa tales como, por ejemplo, rivaroxaban, apixaban, edoxaban (DU-176b), betrixaban (PRT-54021), R-1663, darexaban (YM-150), otamixaban (FXV-673/RPR-130673), letaxaban (TAK-442), razaxaban (DPC-906), DX-9065a, LY-517717, tanogitran (BIBT-986 y el profármaco BIBT-1011), idraparinux y fondaparinux,
• sustancias inhibidoras de la agregación plaquetaria (inhibidores de agregación plaquetaria, inhibidores de agregación trombocítica) tales como, por ejemplo, ácido acetilsalícilico (por ejemplo aspirina), antagonistas de P2Y12 tales como por ejemplo ticlopidina (Ticlid), clopidogrel (Plavix), prasugrel, ticagrelor, cangrelor, elinogrel, antagonistas de PAR-1 tal como por ejemplo vorapaxar, antagonistas de PAR-4, antagonistas de EP3 tales como por ejemplo DG041;
• inhibidores de la adhesión plaquetaria tales como antagonistas de GPVI y/o GPIb tales como por ejemplo revacept o caplacizumab;
• antagonistas del receptor del fibrinógeno (antagonistas de la glucoproteína IIb/IIIa) tales como, por ejemplo, abciximab, eptifibatida, tirofiban, lamifiban, lefradafiban y fradafiban;
• proteína C activada humana recombinante tal como, por ejemplo, Xigris o trombomodulina recombinante;
• así como agentes antiarrítmicos;
• inhibidores de la ruta de señalización VEGF y/o PDGF tal como por ejemplo aflibercept, ranibizumab, bevacizumab, KH-902, pegaptanib, ramucirumab, escualamina o bevasiranib, apatinib, axitinib, brivanib, cediranib, dovitinib, lenvatinib, linifanib, motesanib, pazopanib, regorafenib, sorafenib, sunitinib, tivozanib, vandetanib, vatalanib, vargatef y E-10030;
inhibidores de la ruta de señalización de angiopoyetina Tie tal como por ejemplo AMG386;
inhibidores del receptor de tirosina cinasa Tie2;
inhibidores de la ruta de señalización de integrina tal como por ejemplo volociximab, cilengitid y ALG1001; inhibidores de la ruta de señalización de PI3K-Akt-mTor tal como por ejemplo XL-147, perifosina, MK2206, sirolimus, temsirolimus y everolimus;
corticosteroide tal como por ejemplo anecortave, betametasona, dexametasona, triamcinolona, fluocinolona y fluocinolonacetonid;
inhibidores de la ruta de señalización de ALK1-Smad1/5 tal como por ejemplo ACE041;
inhibidores de ciclooxigenasa tal como por ejemplo bromfenaco y nepafenaco;
inhibidores del sistema de calicreína-cinina tal como por ejemplo safotibant y ecallantid;
inhibidores de la ruta de señalización de 1-fosfato de esfingosina tal como por ejemplo sonepcizumab; inhibidores del receptor complemento-C5a tal como por ejemplo eculizumab;
inhibidores del receptor 5HTla tal como por ejemplo tandospirona;
inhibidores de la ruta de señalización de Ras-Raf-Mek-Erk; inhibidores de la ruta de señalización de MAPK; inhibidores de la ruta de señalización de FGF; inhibidores de la proliferación de células endoteliales; principios activos que inducen a la apoptosis;
• terapia fotodinámica, que está constituida por un principio activo y la acción de la luz, siendo el principio activo por ejemplo verteporfina.
Por “combinaciones” en el sentido de la invención se entiende no solo formas farmacéuticas que contienen todos los componentes (las denominadas combinaciones fijas), y paquetes de combinaciones que contienen los componentes separados entre sí, sino además componentes que se administran de forma simultánea o secuencial, en la medida que se empleen para la profilaxis y/o el tratamiento de la misma enfermedad. De igual modo es posible combinar dos o más principios activos entre sí, es decir, se trata a este respecto en cada caso de combinaciones de dos componentes o multicomponentes.
Los compuestos de acuerdo con la invención pueden actuar de forma sistémica y/o local. A este fin, se pueden administrar de una manera adecuada, por ejemplo por vía oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, rectal, dérmica, transdérmica, conjuntival, ótica, o en forma de un implante o endoprótesis vascular.
Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden administrar en las formas de administración adecuadas para estas vías de administración.
Son formas de administración adecuadas para la administración oral aquéllas que funcionan de acuerdo con el estado de la técnica y proporcionan los compuestos de acuerdo con la invención de forma rápida y/o de una manera modificada, y que contienen los compuestos de acuerdo con la invención en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, tal como por ejemplo comprimidos (comprimidos no recubiertos o recubiertos, por ejemplo con recubrimientos entéricos o recubrimientos que son insolubles o se disuelven de una manera retardada, que controlan la liberación del compuesto de acuerdo con la invención), comprimidos que se disgregan rápidamente en la boca, o películas/obleas, películas/liofilizados, cápsulas (por ejemplo cápsulas de gelatina dura o blanda), comprimidos recubiertos con azúcar, gránulos, microgránulos, polvos, emulsiones, suspensiones, aerosoles o soluciones.
La administración parenteral puede realizarse con evitación de una etapa de absorción (por ejemplo, por vía intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intraespinal o intralumbar) o con inclusión de una absorción (por ejemplo, por vía intramuscular, subcutánea, intracutánea, percutánea o intraperitoneal). Las formas de administración adecuadas para la administración parenteral incluyen formulaciones para inyección e infusión en la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, liofilizados o polvos estériles.
Para la administración extraocular (tópica) son adecuadas formas de administración que funcionan según el estado de la técnica que proporcionan el principio activo de manera rápida y/o modificada o bien controlada, que contienen el principio activo en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, tal como por ejemplo gotas oculares, pulverizaciones y lociones (por ejemplo soluciones, suspensiones, sistemas vesiculares/coloidales, emulsiones, aerosoles), polvos para gotas oculares, pulverizaciones y lociones (por ejemplo principio activo molido, mezclas, liofilizados, principio activo precipitado), preparaciones oculares semisólidas (por ejemplo hidrogeles, hidrogeles in-situ, cremas y pomadas), insertos oculares (preparaciones sólidas y semisólidas, por ejemplo bioadhesivos, películas/obleas, comprimidos, lentes de contacto).
La administración intraocular comprende por ejemplo la administración intravítrea subretinal, subescleral, intracoroidea, subconjuntival, retrobulbar y subtenónica. Para la administración intraocular son adecuadas formas de administración que funcionan según el estado de la técnica que proporcionan el principio activo de manera rápida y/o modificada o bien controlada, que contienen el principio activo en forma cristalina y/o amorfa y/o disuelta, tal como por ejemplo inyecciones y concentrados para inyecciones (por ejemplo soluciones, suspensiones, sistemas vesiculares/coloidales, emulsiones, polvos para inyecciones (por ejemplo principio activo molido, mezclas, liofilizados, principio activo precipitado)), geles para inyecciones (preparaciones semisólidas, por ejemplo hidrogeles, hidrogeles in-situ) e implantes (preparaciones sólidas, por ejemplo implantes biodegradables y no biodegradables, bombas implantables).
Se prefiere la administración parenteral o bien en caso de enfermedades oftalmológicas la administración extraocular y la administración intraocular.
Para las otras vías de administración son adecuadas por ejemplo formas farmacéuticas para inhalación (incluyendo inhaladores de polvo, nebulizadores), gotas, soluciones o pulverizaciones nasales; comprimidos para administración lingual, sublingual o bucal, películas/obleas o cápsulas, supositorios, preparaciones oftalmológicas u oculares, cápsulas vaginales, suspensiones acuosas (lociones, mezclas para agitar), suspensiones lipófilas, pomadas, cremas, sistemas terapéuticos transdérmicos (por ej., parches), leche, pastas, espumas, polvos para espolvoreo, implantes o endoprótesis vascular.
Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden convertir en las formas de administración mencionadas. Esto se puede hacer de una manera conocida per se, mezclándolos con coadyuvantes inertes, no tóxicos, farmacéuticamente adecuados. Estos coadyuvantes incluyen entre otros vehículos (por ejemplo celulosa microcristalina, lactosa, manitol), disolventes (por ejemplo polietilenglicoles líquidos), emulsionantes y agentes dispersantes o humectantes (por ejemplo dodecilsulfato sódico, oleato de polioxisorbitano), aglutinantes (por ejemplo polivinilpirrolidona), polímeros sintéticos y naturales (por ejemplo albúmina), estabilizantes (por ejemplo, antioxidantes, tales como por ejemplo ácido ascórbico), colorantes (por ejemplo, pigmentos inorgánicos, tales como por ejemplo óxidos de hierro) y correctores del sabor y/o el olor.
Otro objeto de la presente invención son fármacos que contienen al menos un compuesto de acuerdo con la invención, preferentemente junto con uno o más coadyuvantes inertes no tóxicos, farmacéuticamente adecuados, y el uso de los mismos para los fines mencionados anteriormente.
En el caso de administración parenteral, en general se ha hallado que es ventajoso administrar cantidades de aproximadamente 5 a 250 mg cada 24 horas para obtener resultados efectivos. En el caso de administración oral, la cantidad es aproximadamente de 5 a 500 mg cada 24 horas.
Sin embargo, puede ser necesario donde sea apropiado desviarse de las cantidades establecidas, específicamente en función del peso corporal, la vía de administración, la respuesta individual al principio activo, la naturaleza de la preparación y el momento o el intervalo en el que tiene lugar la administración.
Los porcentajes en las pruebas y en los ejemplos que siguen son, a menos que se indique lo contrario, porcentajes en peso; las partes son partes en peso. Las relaciones de disolvente, las relaciones de dilución y las cifras de concentración para las soluciones líquido/líquido se refieren en cada caso al volumen. La indicación "p/v" significa "peso/volumen". Así, por ejemplo "10% p/v" significa: 100 ml de solución o suspensión contienen 10 g de sustancia.
A) Ejemplos
Abreviaturas:
Boc terc-butiloxicarbonilo
aprox. circa
d día(s), doblete (en RMN)
CCF cromatografía de capa fina
DCM diclorometano
DCI ionización química directa (en EM)
dd doblete de dobletes (en RMN)
DIC W,W-diisopropilcarbodiimida
DIEA W,W-diisopropiletilamina
DMAP 4-dimetilaminopiridina
DMF W,W-dimetilformamida
DMSO dimetilsulfóxido
d. t. de la teoría (en rendimiento)
eq. equivalente(s)
ESI ionización por electropulverización (en EM)
h hora(s)
HATU hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HPLC cromatografía líquida de alta resolución, alta presión
HV alto vacío
CL-EM cromatografía líquida acoplada a espectroscopía de masa
LDA diisopropilamida de litio
m multiplete (en RMN)
min minuto(s)
EM espectroscopía de masas
RMN espectroscopía de resonancia nuclear
oxima hidroxiiminocianoacetato de etilo
q cuarteto o cuadrupleto (en RMN)
cuant. cuantitativo
quin quinteto (en RMN)
RP fase inversa (en HPLC)
TA temperatura ambiente
Rt tiempo de retención (en HPLC)
s singulete (en RMN)
sxt sexteto (en RMN)
SFC cromatografía de líquidos supercríticos (con dióxido de carbono supercrítico como fase móvil)
t triplete (en RMN)
THF tetrahidrofurano
TFA ácido trifluoroacético
T3P 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina
Procedimientos de HPLC, CL/EM y CG:
Procedimiento 1: instrumento: sistema Waters ACQUITY SQD UPLC; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 |i 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua 0,25 ml de ácido fórmico al 99 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo 0,25 de ácido fórmico al 99 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A ^-1,2 min 5 % de A ^ 2,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; flujo: 0,40 ml/min; detección UV: 208-400 nm.
Procedimiento 2: instrumento: sistema Waters ACQUITY SQD UPLC; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 |i 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua 0,25 ml de ácido fórmico al 99 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo 0,25 de ácido fórmico al 99 %; gradiente: 0,0 min 95 % de A ^ 6,0 min 5 % de A ^ 7,5 min 5 % de A; horno: 50 °C; flujo: 0,35 ml/min; detección UV: 210-400 nm.
Procedimiento 3: instrumento: Micromass Quattro Premier con Waters UPLC Acquity; columna: Thermo Hypersil GOLD 1,9 |i 50 mm x 1 mm; eluyente A: 1 l de agua 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo 0,5 ml de ácido fórmico al 50 %; gradiente: 0,0 min 97 % de A ^ 0,5 min 97 % de A ^ 3,2 min 5 % de A ^ 4,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; flujo: 0,3 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 4: instrumento de EM: Waters (Micromass) Quattro Micro; instrumento de HPLC: Agilent 1100 Serie; columna: YMC-Triart C183 |i 50 mm x 3 mm; eluyente A: 1 l de agua 0,01 mol de carbonato de amonio, eluyente B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 100 % de A ^ 2,75 min 5 % de A ^ 4,5 min 5 % de A; horno: 40 °C; flujo: 1,25 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 5: instrumento de EM: Waters (Micromass) QM; instrumento de HPLC: Agilent 1100 Serie; columna: Agient ZORBAX Extend-C183,0 mm x 50 mm 3,5 micrómetros; eluyente A: 1 l de agua 0,01 mol de carbonato de amonio, eluyente B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 98 % de A ^ 0,2 min 98 % de A ^ 3,0 min 5 % de A ^ 4,5 min 5 % de A; horno: 40 °C; flujo: 1,75 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 6: instrumento de EM: Waters (Micromass) ZQ; instrumento de HPLC: Agilent 1100 Serie; columna: Agient ZORBAX Extend-C183,0 mm x 50 mm 3,5 micrómetros; eluyente A: 1 l de agua 0,01 mol de carbonato de amonio, eluyente B: 1 l de acetonitrilo; gradiente: 0,0 min 98 % de A ^ 0,2 min 98 % de A ^ 3,0 min 5 % de A ^ 4,5 min 5 % de A; horno: 40 °C; flujo: 1,75 ml/min; detección UV: 210 nm.
Procedimiento 7: instrumento: Thermo DFS, Trace GC Ultra; columna: Restek RTX-35, 15 m x 200 |im x 0,33 |im; flujo constante con helio: 1,20 ml/min; horno: 60 °C; entrada: 220 °C; gradiente: 60 °C, 30 °C/min ^ 300 °C (mantener durante 3,33 min).
Procedimiento 8: instrumento: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent 1290; columna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 |i 50 mm x 2,1 mm; eluyente A: 1 l de agua 0,25 ml de ácido fórmico al 99 %, eluyente B: 1 l de acetonitrilo 0,25 ml de ácido fórmico al 99 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A ^ 0,3 min 90 % de A ^ 1,7 min 5 % de A ^ 3,0 min 5 % de A; horno: 50 °C; flujo: 1,20 ml/min; detección UV: 205-305 nm.
Procedimiento 9: instrumento: Thermo Scientific DSQII, Thermo Scientific Trace GC Ultra; columna: Restek RTX 35MS, 15 m x 200 |im x 0,33 |im; flujo constante con helio: 1,20 ml/min; horno: 60 °C; entrada: 220 °C; gradiente: 60 °C, 30 °C/min ^ 300 °C (mantener durante 3,33 min).
Microondas: Como reactor de microondas se usó un aparato de “modo único” del tipo Emrys™ Optimizer.
Cuando los compuestos de acuerdo con la invención se purifican por HPLC preparativa usando los procedimientos descritos anteriormente en los cuales las fases móviles contienen aditivos, tales como, por ejemplo, ácido trifluoroacético, ácido fórmico o amoníaco, los compuestos de acuerdo con la invención se pueden obtener en forma de sal, por ejemplo, como trifluoroacetato, formiato o sal de amonio, siempre que los compuestos de acuerdo con la invención contengan una funcionalidad lo suficientemente ácida o básica. Este tipo de sal se puede convertir en la correspondiente base libre o ácido libre mediante varios procedimientos conocidos por el experto en la técnica. Si, en los intermedios de síntesis y los ejemplos de realización de la invención descritos más adelante se da un compuesto en la forma de una sal de la correspondiente base o ácido, en general no se conoce la composición estequiométrica exacta de esta sal como se ha obtenido mediante el respectivo procedimiento de preparación y/o purificación. A menos que se especifique en más detalle, las adiciones a los nombres y fórmulas estructurales, tales como "clorhidrato", "trifluoroacetato", "sal de sodio" o "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+" no se deben entender de forma estequiométrica en el caso de estas sales, sino que solo tienen carácter descriptivo con respecto a los componentes formadores de sales contenidos en las mismas.
Esto se aplica de igual manera si los intermedios de síntesis y los ejemplos de realización o las sales de los mismos se obtuvieron mediante los procedimientos de preparación y/o purificación descritos en la forma de solvatos, por ejemplo hidratos, cuya composición estequiométrica (si es de un tipo definido) no se conoce.
Compuestos de partida
Procedimiento general 1A: preparación de un ácido borónico
Una solución del correspondiente derivado de piridina en tetrahidrofurano (aprox. 3 ml/mmol) se mezcló a -78 °C con diisopropilamida de litio (2 M en tetrahidrofurano/heptano/etilbenceno), se agitó durante de 2 a 4 h y a continuación se mezcló rápidamente con borato de triisopropilo. La mezcla de reacción se mantuvo durante otras de 2 a 3 h a -78 °C y a continuación se descongeló lentamente durante la noche hasta TA. Tras la adición de agua se separó el tetrahidrofurano a vacío y la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. La fase acuosa se acidificó con ácido clorhídrico acuoso (2 M), precipitándose por regla general un precipitado que se filtró, se lavó con agua y se secó. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio o de magnesio), se filtraron y se concentraron a vacío.
Procedimiento general 2A: acoplamiento de Suzuki
En un matraz calentado, lavado con argón se dispusieron 1,0 eq. de los correspondientes ácidos borónicos, 1,0 eq. del bromuro de arilo o yoduro de arilo, 3,0 eq. de carbonato de potasio y 0,1 eq. de aducto de cloruro de [1,1-bis-(difenilfosfino)-ferrocen]-paladio(II)-monodiclorometano o tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0). El matraz se evacuó a continuación tres veces y se aireó siempre de nuevo con argón. La mezcla de reacción se mezcló con dioxano (aprox. 6 ml/mmol) y se agitó durante varias horas hasta completar en gran parte la reacción a 110 °C. La mezcla de reacción se filtró a continuación a través de Celite, el filtrado se concentró a vacío. El residuo se mezcló con agua. Tras la adición de acetato de etilo y separación de fases se lavó la fase orgánica una vez con agua y una vez con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secó (sulfato de sodio o de magnesio), se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometano-metanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de aguaacetonitrilo o gradiente de agua-metanol).
Procedimiento general 3A: separación de metoxipiridina
Una solución de la correspondiente metoxipiridina en dimetilformamida (10-12,5 ml/mmol) se mezcló con 20 eq. de clorhidrato de piridinio o bromhidrato de piridinio y se agitó a 100 °C durante de varias horas a días, eventualmente se mezcló con clorhidrato de piridinio o bromhidrato de piridinio adicional, hasta completar en gran parte la reacción. A continuación se concentró a vacío la solución de reacción y se mezcló mediante agitación el residuo con agua. El precipitado producido se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío.
Procedimiento general 4A: W-alquilación de derivados de 2-piridinona con los correspondientes derivados de éster de ácido 2-bromo- o 2-cloropropanoico en presencia de carbonato de calcio
Una solución de 1,0 eq. del correspondiente derivado de 2-piridinona en dimetilformamida (5-10 ml/mmol) se mezcló bajo argón a TA con 1,2 eq. del correspondiente derivado de éster de ácido 2-bromo- o 2-cloropropanoico y 1,5 eq. de carbonato de potasio y se agitó a 100 °C. Tras la separación de la dimetilformamida y adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se lavó la fase orgánica con agua y con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secó (sulfato de sodio o de magnesio), se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometano-metanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de agua-acetonitrilo o gradiente de agua-metanol).
Procedimiento general 5A: acoplamiento de amida con HATU/DIEA
Una solución del correspondiente ácido carboxílico (1,0 eq.) en dimetilformamida (7-15 ml/mmol) se mezcló bajo argón a TA con la amina (1,1 eq.), con N,N-diisopropiletilamina (2,2 eq.) y una solución de HATU (1,2 eq.) en por ejemplo dimetilformamida. La mezcla de reacción se agitó a TA. Tras la adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se lavó la fase orgánica con agua y con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secó (sulfato de sodio o sulfato de magnesio), se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se purificó a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometano-metanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de agua-acetonitrilo o gradiente de agua-metanol). Procedimiento general 6A: saponificación de un éster ferc-butílico o de una amina protegida con Boc por medio de TFA
Una solución de 1,0 eq. del correspondiente derivado de éster ferc-butílico en diclorometano (aprox. 5-10 ml/mmol) se mezcló a TA con 20 eq. de TFA y se agitó a TA durante de 1 a 8 h. A continuación se concentró a vacío la mezcla de reacción, se evaporó conjuntamente el residuo varias veces con diclorometano y tolueno y se secó a vacío. El producto bruto se purificó eventualmente a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometano-metanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de aguaacetonitrilo o gradiente de agua-metanol).
Procedimiento general 6B: saponificación de un éster metílico/etílico o bencílico con hidróxido de litio Una solución de 1,0 eq. del correspondiente éster metílico o etílico en tetrahidrofurano/agua (3:1, aprox. 7-15 ml/mmol) se mezcló a TA con hidróxido de litio (2-4 eq.). La mezcla de reacción se agitó a de TA hasta 60 °C y a continuación se ajustó con ácido clorhídrico acuoso (1 N) hasta obtener un pH 1. Tras la adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se extrajo la fase acuosa tres veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio o sulfato de magnesio), se filtraron y se concentraron a vacío. El producto bruto se purificó a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometano-metanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de agua-acetonitrilo o gradiente de agua-metanol).
Procedimiento general 7A: preparación de triflatos
Una solución del correspondiente alcohol (1 eq.) se dispuso en diclorometano (0,1 M) y se mezcló a -20 °C sucesivamente con lutidina (1,1-1,5 eq.) o trietilamina (1,1-1,5 eq.) y con anhídrido de ácido trifluorometanosulfónico (1,05-1,5 eq.). La mezcla de reacción se agitó posteriormente durante 1 h a -20 °C y se diluyó a continuación con el triple de cantidad (con respecto al volumen de reacción) de metil-terc-butiléter. La fase orgánica se lavó tres veces con una mezcla 3:1 de solución acuosa, saturada de cloruro de sodio/ácido clorhídrico 1 N y finalmente con solución acuosa, saturada de hidrogenocarbonato de sodio, se secó (sulfato de sodio o de magnesio), se filtró y se separó el disolvente con presión reducida. El producto bruto se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.
Procedimiento general 8A: alquilación de ésteres de ácido acético con triflatos
Una solución del correspondiente éster de ácido acético (1 eq.) en tetrahidrofurano (0,1-0,2 M) se mezcló bajo argón a -78 °C gota a gota con bis-(trimetilsilil)-amida de litio (1,0 M en THF, 1,1-1,3 eq.) y se agitó durante 15 min. A continuación se añadió el correspondiente triflato de alquilo (1,5-2,0 eq.) como sustancia pura o solución en THF. La mezcla de reacción resultante se agitó posteriormente durante 15 min a -78 °C y durante 1 h a TA. La mezcla de reacción se mezcló con solución acuosa, saturada de cloruro de amonio. Tras la separación de fases se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio o sulfato de magnesio), se filtraron y se concentraron con presión reducida. El producto bruto se purificó a continuación o bien por medio de cromatografía de fase normal (mezclas de ciclohexano-acetato de etilo o mezclas de diclorometanometanol) o de RP-HPLC preparativa (gradiente de agua-acetonitrilo o gradiente de agua-metanol).
Ejemplo 1.1A
Ácido 2,5-dimetoxipiridin-4-ilborónico
Figure imgf000027_0001
Según el procedimiento general 1A se hicieron reaccionar 11,53 g (82,9 mmol) de 2,5-dimetoxipiridina. Tras acidificar la fase orgánica precipitó el producto deseado como precipitado. Rendimiento: 9,53 g (61 % d. t.) CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,47 min; EM (ESlpos): m/z = 184 (M+H)+.
Ejemplo 1.1B
4-Cloro-2-(2,5-dimetoxipiridin-4-il)benzonitrilo
Figure imgf000028_0001
Según el procedimiento general 2A se hacen reaccionar 7,87 g (95 % de pureza, 40,86 mmol) de ácido 2,5­ dimetoxipiridin-4-ilborónico con 8,85 g (40,86 mmol) de 2-bromo-4-clorobenzonitrilo en presencia de monoaducto de cloruro de [1,1-bis-(difenNfosfino)-ferrocen]-paladio(N)-didorometano. Rendimiento: 6,23 g (92 % de pureza, 51 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,08 min; EM (ESIpos): m/z = 275 (M+H)+.
Ejemplo 1.1C
4-Cloro-2-(5-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridin-4-il)benzonitrilo
Figure imgf000028_0002
Según el procedimiento general 3A se hicieron reaccionar 7,23 g (92 % de pureza, 24,21 mmol) de 4-cloro-2-(2,5-dimetoxipiridin-4-il)benzonitrilo con clorhidrato de piridinio. Rendimiento: 6,66 g (91 % de pureza, 96 % d. t.) CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,76 min; EM (ESIpos): m/z = 261 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 11,45 (s a, 1H), 7,98 (d, 1H), 7,75-7,67 (m, 2H), 7,29 (s a, 1H), 6,43 (s, 1H), 3,64 (s, 3H).
Ejemplo 1.1D
[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]acetato de tere-butilo
Figure imgf000028_0003
Según el procedimiento general 4B se hicieron reaccionar 516 mg (91 % de pureza, 1,8 mmol) de 4-cloro-2-(5-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridin-4-il)benzonitrilo con 1,2 eq. de bromoacetato de tere-butilo a 100 °C. Rendimiento: 464 mg (68 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,00 min; EM (ESIpos): m/z = 375 (M+H)+.
Ejemplo 1.1E
2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoato de tere-butilo (racemato)
Figure imgf000029_0001
Una solución de 5,0 g (13,3 mmol) de [4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]acetato de tere-butilo en 100 ml de tetrahidrofurano se mezcló bajo argón a -78 °C gota a gota con 14,0 ml (1,0 M en THF, 14,0 mmol, 1,05 eq.) de bis-(trimetilsilil)-amida de litio y se agitó durante 15 min a -78 °C. A continuación se añadieron gota a gota 2,6 g (14,7 mmol, 1,1 eq.) de trifluorometanosulfonato de etilo como sustancia pura. El baño frío se separó y la mezcla de reacción se agitó posteriormente durante 1 h a TA. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C y se mezcló con solución acuosa, saturada de cloruro de amonio. Tras la separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con metil-terc-butiléter. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El producto bruto se purificó a continuación por medio de cromatografía ultrarrápida (340 g de gel de sílice, eluyente: mezclas de ciclohexano-acetato de etilo 8:1,4:1). Las fracciones que contienen producto se combinaron y se concentraron a vacío. El residuo se disolvió en el calor en metil-terc-butiléter, la solución se dejó abierta, cristalizándose tras 10 min la mezcla casi completamente. El cristalizado se filtró y se lavó dos veces con metil-tercbutiléter. Los filtrados combinados se concentraron a vacío y el residuo se recristalizó otra vez tal como se ha descrito. Los dos cristalizados se combinaron y se secó a vacío. Rendimiento: 4,2 g (78 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,05 min; EM (ESlpos): m/z = 403 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 5 [ppm] = 7,99 (d, 1H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,36 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,03 (dd, 1H), 3,64 (s, 3H), 2,19-2,06 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 0,85 (t, 3H).
Ejemplo 1.1 F
Ácido 2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoico (racemato)
Figure imgf000029_0002
Una solución de 4,1 g (10,2 mmol) de 2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoato de terebutilo (racemato) en 40 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a TA con 7,8 ml (101,8 mmol, 10 eq.) de ácido trifluoroacético, se agitó durante 1 h a TA, se mezcló con otros 7,8 ml (101,8 mmol, 10 eq.) de ácido trifluoroacético, se agitó durante 1 h a TA, se mezcló con otros 7,8 ml (101,8 mmol, 10 eq.) de ácido trifluoroacético y se agitó durante 1 h a TA. Tras completar la reacción se concentró a vacío la mezcla de reacción, se evaporó conjuntamente el residuo en cada caso tres veces con diclorometano y una vez con tolueno y se secó a vacío. El residuo se suspendió en 100 ml de acetato de etilo y se lavó varias veces con una solución acuosa, fuertemente diluida de hidrogenocarbonato de sodio (no debiendo sobrepasar el valor de pH del agua de lavado pH 3-4, dado que el producto por lo demás se disuelve bien en agua). La fase orgánica se secó a continuación (sulfato de sodio), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se mezcló mediante agitación en metil-terc-butiléter, se filtró, se lavó dos veces con metil-terc-butiléter y se secó a vacío. Rendimiento: 2,9 g (83 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,81 min; EM (ESlpos): m/z = 347 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,97 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 6,49 (s, 1H), 5,09 (dd, 1H), 3,64 (s, 3H), 2,21-2,09 (m, 2H), 0,84 (t, 3H).
Ejemplo 1.1G
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1 (2H)-il]butanoil}am¡no)-benzoato de etilo (racemato)
Figure imgf000030_0001
Una solución de 1,0 g (2,9 mmol) de ácido 2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡co (racemato) en 10 ml de dimetilformamida se mezcló bajo argón a TA con 476 mg (2,9 mmol, 1,0 eq.) de 4-aminobenzoato de etilo, con 41 mg (0,29 mmol, 0,1 eq.) de oxima y a continuación gota a gota con 452 |al (2,9 mmol, 1,0 eq.) de N,W-d¡¡sopropilcarbod¡¡m¡da (DIC). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a 40-45 °C, se enfrió hasta tA, se mezcló con metil-terc-butiléter y agua y se agitó durante 10 min de manera vigorosa, precipitando un precipitado. El precipitado se filtró, se lavó dos veces con agua y metil-terc-butiléter y se secó a vacío (precipitado 1). Tras la separación de fases de los filtrados combinados se extrajo la fase acuosa una vez con metil-terc-butiléter. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron una vez con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se mezcló mediante agitación en metil-tercbutiléter, se filtró, se lavó dos veces con metil-terc-butiléter y se secó a vacío. Este precipitado se mezcló mediante agitación durante 10 min en ácido clorhídrico acuoso (1 n), se filtró, se lavó dos veces con agua y una vez con acetonitrilo y se secó a vacío (precipitado 2). Rendimiento: precipitado 1: 1,12 g (79 % d. t.), precipitado 2: 127 mg (contiene de acuerdo con RMN-1H aún 1,3-diisopropilurea)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,11 min; EM (ESlneg): m/z = 492 (M-H)-,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 10,82 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,29 (q, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,11 (m, 2H), 1,31 (t, 3H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 1.1 H
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡co (racemato)
Figure imgf000030_0002
Una suspensión de 200 mg (0,41 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butanoil}amino)benzoato de etilo (racemato) en 2,0 ml de etanol se mezcló a TA con 0,2 ml de agua y 97 mg (1,22 mmol, 3,0 eq.) de hidróxido de sodio. La mezcla de reacción se agitó durante 1 h a TA y durante 6 h a 60 °C de temperatura de baño de aceite, se dejó durante la noche a TA y a continuación se añadió en ácido clorhídrico acuoso (1 N). Tras la dilución con agua se precipitó un precipitado que se filtró, se lavó dos veces con agua y se secó a vacío. El precipitado se purificó a continuación por medio de cromatografía ultrarrápida (25 g de gel de sílice, eluyente: diclorometano ^ diclorometano/metanol 50:1). Rendimiento: 144 mg (38 % d. t. con respecto a 0,82 mmol, dado que se purificaron juntos dos productos brutos del tamaño indicado)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,92 min; EM (ESlneg): m/z = 464 (M-H)-,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,74 (s, 1H), 10,80 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,79-7,70 (m, 4H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,65 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,11 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 1.11
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡co (enantiómero 1)
Figure imgf000031_0001
La separación de enantiómeros de 433 mg del racemato del ejemplo 1.1H dio como resultado 196 mg del compuesto del título del ejemplo 1.1I (enantiómero 1): HPLC quiral: Rt = 5,22 min; 99 % de ee.
Procedimiento de separación: columna: Daicel Chiralpak IF 5 |am 250 mm x 20 mm; eluyente: 50 % de isohexano, 50 % de etanol 0,2 % de ácido acético; temperatura: 40 °C; flujo: 15 ml/min; detección UV: 220 nm. Análisis químico: columna: Daicel Chiralpak AZ-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 50 % de iso-hexano, 50 % de etanol 0,2 % de TFA 1 % de agua; temperatura: 40 °C; flujo: 1 ml/min; detección UV: 220 nm.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 12,77 (s, 1H), 10,81 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,91 (d, 2H), 7,79-7,71 (m, 4H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,11 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 1.21
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡co (enantiómero 2)
Figure imgf000031_0002
La separación de enantiómeros de 433 mg del racemato del ejemplo 1.1H dio como resultado 201 mg del compuesto del título del ejemplo 1.2I (enantiómero 2): HPLC quiral: Rt = 8,19 min; 99% de ee. procedimiento de separación: columna: Daicel Chiralpak IF 5 |am 250 mm x 20 mm; eluyente: 50 % de isohexano, 50 % de etanol 0,2 % de ácido acético; temperatura: 40 °C; flujo: 15 ml/min; detección UV: 220 nm. análisis químico: columna: Daicel Chiralpak AZ-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 50 % de iso-hexano, 50 % de etanol 0,2 % de TFA 1 % de agua; temperatura: 40 °C; flujo: 1 ml/min; detección UV: 220 nm.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,77 (s, 1H), 10,81 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,91 (d, 2H), 7,79-7,71 (m, 4H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,11 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 2.1A
2-[(Benciloxi)met¡l]tetrah¡dro-2H-p¡rano (racemato)
Figure imgf000031_0003
A una suspensión de 9,47 g (237 mmol, 60 % en aceite mineral) de hidruro de sodio en 500 ml de THF se añadió gota a gota lentamente a 0 °C una solución de 25,0 g (215 mmol) de tetrahidro-2H-piran-2-ilmetanol (racemato) en 500 ml de THF y tras completar la adición se agitó posteriormente durante 30 min a 0 °C. A continuación se añadieron 25,7 ml (215 mmol) de bromuro de bencilo y se agitaron durante 30 min a 0 °C y durante 1 h a temperatura ambiente. La reacción se finalizó mediante adición de 200 ml de solución acuosa, saturada de cloruro de amonio y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo dos veces con 200 ml de metil-terc-butiléter. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se separó el disolvente con presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente de acetato de etilociclohexano, cartucho de 340 g de sílice, flujo: 100 ml/min) y se obtuvo el compuesto del título. Rendimiento: 41,9 g (94 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 3]: Rt = 2,18 min; EM (ESIpos): m/z = 207 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 [ppm] = 7,37-7,25 (m, 5H), 4,47 (s, 2H), 3,87-3,81 (m, 1H), 3,47-3,28 (m, 4H), 1,80-1,72 (m, 1H), 1,58-1,37 (m, 4H), 1,25-1,13 (m, 1H).
Ejemplo 2.1B
(R)-2-[(Benciloxi)metil]tetrahidro-2H-pirano
Figure imgf000032_0001
La separación de enantiómeros de 41,9 g del racemato del ejemplo 2.1A dio como resultado 16,7 g del compuesto del título del ejemplo 2.1B (enantiómero 1): HPLC quiral: Rt = 5,28 min; 99 % de ee, 93 % de pureza.
Ángulo de rotación: [a]5892°,° = 14,9 ° (c 0,43 g/100 cm3, cloroformo)
Procedimiento de separación: columna: OD-H 5 |am 250 mm x 20 mm; eluyente: 95 % de iso-hexano, 5 % de 2-propanol; temperatura: 25 °C; flujo: 25 ml/min; detección UV: 210 nm.
Análisis químico: columna: OD-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 95 % de iso-hexano, 5 % de 2-propanol; flujo: 1 ml/min; detección UV: 220 nm.
Ejemplo 2.2B
(S)-2-[(Benciloxi)metil]tetrahidro-2H-pirano
Figure imgf000032_0002
La separación de enantiómeros de 41,9 g del racemato del ejemplo 2.1A dio como resultado 17,0 g del compuesto del título del ejemplo 2.2B (enantiómero 2): HPLC quiral: Rt = 7,36 min; 96 % de ee, 96 % de pureza.
Ángulo de rotación: [a ^ s ^ 0 = -13,9 ° (c 0,61 g/100 cm3, cloroformo)
Procedimiento de separación: columna: OD-H 5 |am 250 mm x 20 mm; eluyente: 95 % de iso-hexano, 5 % de 2-propanol; temperatura: 25 °C; flujo: 25 ml/min; detección UV: 210 nm.
Análisis químico: columna: OD-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 95 % de iso-hexano, 5 % de 2-propanol; flujo: 1 ml/min; detección UV: 220 nm.
Ejemplo 2.1C
(2S)-Tetrahidro-2H-piran-2-ilmetanol
Figure imgf000032_0003
A una solución de 17,0 g (82,4 mmol) de (S)-2-[(benciloxi)metil]tetrahidro-2H-pirano (96 % de ee, 96 % de pureza) en 120 ml de etanol se añadieron 3,51 g (3,30 mmol) de paladio sobre carbón (al 10 %) y se hidrógeno durante la noche a temperatura ambiente y presión normal. A continuación se añadieron otra vez 1,75 g (1,65 mmol) de paladio sobre carbón (al 10 %) y se hidrogenó durante otras 72 h a temperatura ambiente. A continuación se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se concentró el filtrado. El residuo se purificó mediante cromatografía (sílice, gradiente de diclorometano/metanol) y se liberaron las fracciones de producto a < 25 °C y > 5 kPa del disolvente. Rendimiento: 8,23 g (86 % d. t.)
Ángulo de rotación: [a]58920’° = 9,1 ° (c 0,36 g/100 cm3, cloroformo), véase A. Aponick, B. Biannic, Org. Lett.
2011, 13, 1330-1333.
GC/EM [procedimiento 7]: Rt = 1,82 min; EM: m/z = 116 (M)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 4,51 (t, 1H), 3,87-3,81 (m, 1H), 3,37-3,18 (m, 4H), 1,80-1,71 (m, 1H), 1,59-1,50 (m, 1H), 1,49-1,36 (m, 3H), 1,19-1,05 (m, 1H).
Ejemplo 2.1D
Trifluorometanosulfonato de (2S)-tetrahidro-2H-piran-2-ilmetilo
Figure imgf000033_0001
Según el procedimiento general 7A se hicieron reaccionar 330 mg (2,84 mmol) de (2S)-tetrahidro-2H-piran-2-ilmetanol con 0,57 ml (3,41 mmol, 1,2 eq.) de anhídrido de ácido trifluorometanosulfónico en presencia de 0,48 ml (3,41 mmol, 1,2 eq.) de trietilamina. El producto bruto se hizo reaccionar sin purificación adicional en la siguiente etapa.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 4,32 (dd, 1H), 4,18 (dd, 1H), 4,00-3,92 (m, 1H), 3,60-3,52 (m, 1H), 3,48­ 3,39 (m, 1H), 1,85-1,74 (m, 1H), 1,56-1,41 (m, 4H), 1,28-1,14 (m, 1H).
Ejemplo 2.1E
2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoato de tere-butilo (mezcla de diastereómeros enantioméricamente puros)
Figure imgf000033_0002
De acuerdo con el procedimiento general 8A se llevaron a reacción 4,10 g (10,9 mmol) de [4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]acetato de tere-butilo, 4,07 g (16,4 mmol) de trifluorometanosulfonato de (2S)-tetrahidro-2H-piran-2-ilmetilo y 12,0 ml (12,0 mmol) de bis-(trimetilsilil)-amida de litio (1 M en THF) en 90 ml de THF. Tras el procesamiento acuoso se purificó el producto bruto por medio de cromatografía ultrarrápida (cartucho de 340 g de sílice, flujo: 100 ml/min, mezcla de ciclohexano-acetato de etilo). Rendimiento: 4,2 g (81 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,15 min; EM (ESlpos): m/z = 473 (M+H)+.
Ejemplo 2.1F
Ácido 2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]-3-[(2S)-tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l]propano¡co (mezcla de diastereómeros enant¡omér¡camente puros)
Figure imgf000034_0001
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 6A se h¡c¡eron reacc¡onar 9,8 g (20,7 mmol) de 2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]-3-[(2S)-tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l]propanoato de ferc-but¡lo (mezcla de d¡astereómeros enant¡omér¡camente puros) en 245 ml de d¡clorometano con 59,9 ml (777 mmol) de TfA. Rend¡m¡ento: 8,7 g (73 % de pureza, 74 % de la teoría)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,92 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 417 (M+H)+.
Ejemplo 2.1G
4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]-3-[(2S)-tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l]propano¡l}am¡no)benzoato de et¡lo (mezcla de d¡astereómeros enant¡omér¡camente puros)
Figure imgf000034_0002
Una soluc¡ón de 10 g (24 mmol) de ác¡do 2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]-3-[(2S)-tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l]propano¡co (mezcla de d¡astereómeros enant¡omér¡camente puros) y 4,4 g (26 mmol, 1,1 eq.) de 4-am¡nobenzoato de et¡lo en 100 ml de d¡met¡lformam¡da se mezcló a TA con 10,4 ml (60 mmol, 2,5 eq.) de N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na y gota a gota con 23 g (36 mmol, 1,5 eq.) de anhídr¡do de ác¡do prop¡lfosfón¡co (T3P, al 50 % en acetato de et¡lo) y se ag¡tó durante 3 h a 80 °C. Tras enfr¡ar hasta TA se añad¡ó la mezcla de reacc¡ón a una mezcla de 500 ml de soluc¡ón acuosa al 10 % de cloruro de sod¡o y 150 ml de acetato de et¡lo. Tras la separac¡ón de fases se extrajo la fase acuosa con 150 ml de acetato de et¡lo. Las fases orgán¡cas, comb¡nadas se lavaron dos veces con en cada caso 100 ml de soluc¡ón acuosa, al 10 % de cloruro de sod¡o, se secaron y se concentraron a vacío. El producto bruto se pur¡f¡có por med¡o de cromatografía ultrarráp¡da (gel de síl¡ce 40-63 |am, éter de petróleo-acetato de et¡lo 1:1). Rend¡m¡ento: 7,7 g (57 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 2]: Rt = 3,75 m¡n/3,81 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 564 (M+H)+.
Ejemplo 2.1H
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoico (mezcla de diastereómeros enantioméricamente puros)
Figure imgf000035_0001
Una suspensión de 7,6 g (13,5 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoato de etilo (mezcla de diastereómeros enantioméricamente puros) en 152 ml de metanol y 38 ml de agua se mezcló con 8,8 g (26,9 mmol, 2 eq.) de carbonato de cesio y se agitó durante 4 h a 60 °C. Se separó metanol a vacío. La mezcla de reacción restante se diluyó con 100 ml de agua y se lavó con 100 ml de acetato de etilo. La fase acuosa se revistió con 100 ml de acetato de etilo y se ajustó con agitación con ácido clorhídrico semiconcentrado hasta pH 2. Tras la separación de la fase orgánica se extrajo de nuevo la fase acuosa con 100 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron y se concentraron a vacío. El producto bruto se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice 40-63 |am, diclorometano-metanol 9:1). Rendimiento: 6,3 g (87 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,99 min; EM (ESlpos): m/z = 536 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,7 (s a, 1H), 10,74/10,66 (2x s, 1H), 8,02-7,97 (m, 1H), 7,94-7,86 (m, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,53/7,49 (2x s, 1H), 6,52/6,51 (2x s, 1H), 5,83/5,75 (t/dd, 1H), 3,90-3,78 (m, 1H), 3,69/3,68 (2x s, 3H), 3,29-3,15 (m, 1H), 3,14-3,05 (m, 1H), 2,43-2,10 (m, 2H), 1,80-1,70 (m, 1H), 1,68-1,55 (m, 1H), 1,48-1,34 (m, 3H), 1,31-1,21 (m, 1H).
Ejemplo 2.11
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoico (diastereómero 1 enantioméricamente puro)
Figure imgf000035_0002
La separación de diastereómeros de una mezcla del ejemplo 2.1H dio como resultado el compuesto del título del ejemplo 2.1I (diastereómero 1 enantioméricamente puro): HPLC quiral: Rt = 3,5 min; 99 % de ee.
Procedimiento de separación (SFC): columna: AD-H 20 ^m 360 mm x 50 mm; eluyente: 75 % dióxido de carbono/25 % de 2-propanol ^ 60 % de dióxido de carbono/40 % de 2-propanol; temperatura: 20 °C; flujo: 400 ml/min; presión: 8.000 kPa; detección UV: 220 nm.
Análisis químico (SFC): columna: AD-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 70 % de dióxido de carbono, 30 % de 2-propanol; temperatura: 40 °C; flujo: 3 ml/min; detección UV: 220 nm.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,7 (s, 1H), 10,7 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,77-7,72 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,78-5,71 (m, 1H), 3,84-3,79 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,23-3,15 (m, 1H), 3,13-3,05 (m, 1H), 2,42-2,32 (m, 1H), 2,26-2,18 (m, 1H), 1,78-1,71 (m, 1H), 1,62-1,56 (m, 1H), 1,46-1,37 (m, 3H), 1,30-1,20 (m, 1H).
Ejemplo 2.21
Ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoico (diastereómero 2 enantioméricamente puro)
Figure imgf000036_0001
La separación de diastereómeros de una mezcla del ejemplo 2.1H dio como resultado el compuesto del título del ejemplo 2.2I (diastereómero 2 enantioméricamente puro): HPLC quiral: Rt = 6,2 min; 99 % de ee.
Procedimiento de separación (SFC): columna: AD-H 20 |am 360 mm x 50 mm; eluyente: 75 % de dióxido de carbono/25 % de 2-propanol ^ 60 % de dióxido de carbono/40 % de 2-propanol; temperatura: 20 °C; flujo: 400 ml/min; presión: 8.000 kPa; detección UV: 220 nm.
Análisis químico (SFC): columna: AD-H 5 |am 250 mm x 4,6 mm; eluyente: 70% de dióxido de carbono, 30 % de 2-propanol; temperatura: 40 °C; flujo: 3 ml/min; detección UV: 220 nm.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 12,8 (s, 1H), 10,7 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,77 (d, 2H), 7,74­ 7,71 (m, 2H), 7,52 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 5,82 (t, 1H), 3,90-3,84 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,28-3,22 (m, 2H), 2,34-2,27 (m, 1H), 2,19-2,10 (m, 1H), 1,78-1,73 (m, 1H), 1,67-1,60 (m, 1H), 1,47-1,36 (m, 3H), 1,33-1,23 (m, 1H).
Ejemplo 3.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}-amino)benzoato de (2R,3S)-4-(benciloxi)-3-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-oxobutan-2-ilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000036_0002
Una solución de 250 mg (0,46 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoico (diastereómero 2 enantioméricamente puro) y 174 mg (0,51 mmol, 1,1 eq.) de N-[(benciloxi)carbonil]-L-treoninato de bencilo en 5 ml de tetrahidrofurano se mezcló bajo argón a 0 °C con 11 mg (92 ^mol, 0,2 eq.) de 4-dimetilaminopiridina y lentamente con 105 mg (0,51 mmol, 1,1 eq.) de 1,3-diciclohexilcarbodiimida. La mezcla de reacción se dejo llegar hasta TA, se agitó durante la noche a TA y a continuación se concentró a vacío. Tras la adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se separó por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice-50, mezcla de ciclohexano-acetato de etilo) y la fracción de mezcla obtenida se purificó otra vez por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 191 mg (48 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,34 min; EM (ESlpos): m/z = 861 (M+H)+.
Ejemplo 4.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2R,3S)-4-(benc¡lox¡)-3-[(fe/'c-butox¡carbon¡l)am¡no]-4-oxobutan-2-¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000037_0001
Una soluc¡ón de 1018 mg (2,16 mmol) de ác¡do 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡co (enant¡ómero 2) y 736 mg (2,38 mmol, 1,1 eq.) de N-(fe/'c-butox¡carbon¡l)-L-treon¡nato de benc¡lo en 22 ml de tetrah¡drofurano se mezcló bajo argón a 0 °C con 536 mg (2,60 mmol, 1,2 eq.) de 1,3-d¡c¡dohex¡lcarbod¡¡m¡da y 53 mg (0,43 mmol, 0,2 eq.) de 4-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na. La mezcla de reacc¡ón se dejo llegar hasta TA, se ag¡tó posteriormente durante 6 h, se dejó durante la noche a TA y a cont¡nuac¡ón se concentró a vacío. Tras la ad¡c¡ón de agua/acetato de et¡lo y separac¡ón de fases se extrajo la fase acuosa con acetato de et¡lo. Las fases orgán¡cas, comb¡nadas se lavaron con soluc¡ón acuosa, saturada de cloruro de sod¡o, se secaron (sulfato de sod¡o), se f¡ltraron y se concentraron a vacío. El res¡duo se suspend¡ó en d¡clorometano y se purificó por med¡o de cromatografía ultrarráp¡da (gel de síl¡ce-50, mezcla de c¡clohexano-acetato de et¡lo). Rend¡m¡ento: 887 mg (54 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 1,33 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 757 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,81 (s, 1H), 8,07-7,97 (m, 3H), 7,78-7,68 (m, 5H), 7,50 (s, 1H), 7,29­ 7,16 (m, 5H), 6,50 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 5,51-5,43 (m, 1H), 5,12 (d, 1H), 5,04 (d, 1H), 4,54 (dd, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,27-2,13 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,28 (d, 3H), 0,92 (t, 3H).
Ejemplo 4.1B
N-(fe/'c-Butox¡carbon¡l)-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-treon¡na (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000037_0002
Una soluc¡ón de 777 mg (1,03 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}-am¡no)benzoato de (2^,3S)-4-(benc¡lox¡)-3-[(ferc-butox¡carbon¡l)am¡no]-4-oxobutan-2-¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 78 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 45 m¡n a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se filtró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te, se lavó el res¡duo con etanol y agua y se separó etanol a vacío. El res¡duo prec¡p¡tado se filtró y se secó a vacío. Rend¡m¡ento: 594 mg (94 % de pureza, 86 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 1,07 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 667 (M+H)+.
Ejemplo 5.1A
N-(ferc-Butoxicarbonil)-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoil]-2-metil-L-serina (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000038_0001
Una solución de 50 mg (0,11 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) en 1 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 29 mg (0,13 mmol, 1,25 eq.) de N-(ferc-butoxicarbonil)-2-metil-L-serina, 3 mg (27 |amol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 23 |al (0,13 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 25 mg (0,13 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 16 mg (22 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,05 min; EM (ESlpos): m/z = 667 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 12,7 (s a, 1H), 10,84 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,96 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 7,77-7,70 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,27 (s a, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 4,67-4,58 (m, 1H), 4,40-4,30 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,12 (m, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,35 (s, 9H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 6.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de (2S)-3-(benciloxi)-2-[(fercbutoxicarbonil)amino]-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000038_0002
Una solución de 500 mg (1,07 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) y 396 mg (1,34 mmol, 1,25 eq.) de N-(ferc-butoxicarbonil)-L-serinato de bencilo en 20 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 33 mg (0,27 mmol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 0,23 ml (1,34 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 257 mg (1,34 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó posteriormente durante 4,5 h a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice-50, mezcla de ciclohexano-acetato de etilo). Rendimiento: 515 mg (61 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,22 min; EM (ESlpos): m/z = 743 (M+H)+.
Ejemplo 6.1B
4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-2-am¡no-3-(benc¡lox¡)-3-oxopropilo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000039_0001
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 6A se h¡c¡eron reacc¡onar 829 mg (1,08 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(benc¡lox¡)-2-[(fercbutox¡carbon¡l)am¡no]-3-oxoprop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en presenc¡a de 1,67 ml (21,6 mmol, 20 eq.) de ác¡do tr¡fluoroacét¡co. El producto bruto se pur¡f¡có por med¡o de cromatografía ultrarráp¡da (gel de síl¡ce-50, mezcla de d¡clorometano-metanol). Rend¡m¡ento: 570 mg (82 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,84 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 643 (M+H)+.
Ejemplo 7.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(benc¡lox¡)-3-oxo-2-[(p¡rrol¡d¡n-1-¡lacet¡l)am¡no]prop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000039_0002
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 5A se h¡c¡eron reacc¡onar 109 mg (0,17 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}-am¡no)benzoato de (2S)-2-am¡no-3-(benc¡lox¡)-3-oxoprop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) con 21 mg (0,16 mmol, 0,95 eq.) de ác¡do p¡rrol¡d¡n-1-¡lacét¡co. La mezcla de reacc¡ón se concentró a vacío. El res¡duo se recr¡stal¡zó con agua, el sól¡do prec¡p¡tado se f¡ltró, se lavó con agua y se secó a vacío. Rend¡m¡ento: 132 mg (94 % de pureza, 97% d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,89 m¡n; Em (ESlpos): m/z = 754 (M+H)+.
Ejemplo 8.1A
1-Benc¡lprol¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-ser¡nato de benc¡lo (mezcla de d¡astereómeros)
Figure imgf000039_0003
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 5A se h¡c¡eron reacc¡onar 103 mg (0,16 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2 cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}-amino)benzoato de (2S)-2-amino-3-(benciloxi)-3-oxopropNo (diastereómero enantioméricamente puro) con 31 mg (0,15 mmol, 0,95 eq.) de 1-bencilprolina (racemato). La mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se recristalizó con agua, el sólido precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío. Rendimiento: 136 mg (cuant.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,98 min; Em (ESIpos): m/z = 830 (M+H)+.
Ejemplo 9.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de (2S)-3-(benciloxi)-2-({[(2R)-1-metilpiperidin-2-il]carbonil}amino)-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000040_0001
De acuerdo con el procedimiento general 5A se hicieron reaccionar 109 mg (0,17 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}-amino)benzoato de (2S)-2-amino-3-(benciloxi)-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro) con 24 mg (0,17 mmol, 1,0 eq.) de ácido (2R)-1-metilpiperidin-2-carboxílico. La mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se recristalizó con agua, el sólido precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío. Rendimiento: 141 mg (93 % de pureza, cuant.)
CL/Em [procedimiento 1]: Rt = 0,86 min; EM (ESIpos): m/z = 768 (M+H)+.
Ejemplo 10.1A
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de (2S)-3-(benciloxi)-2-({[1 -(dimetilamino)ciclopropil]carbonil}amino)-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000040_0002
De acuerdo con el procedimiento general 5A se hicieron reaccionar 109 mg (0,17 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)-benzoato de (2S)-2-amino-3-(benciloxi)-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro) con 21 mg (0,17 mmol, 1,0 eq.) de ácido 1-(dimetilamino)ciclopropancarboxílico. La mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se recristalizó con agua, el sólido precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío. Rendimiento: 127 mg (85 % de pureza, 87 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,00 min; EM (ESIpos): m/z = 754 (M+H)+.
Ejemplo 11.1A
N,N-D¡met¡l-L-val¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-ser¡nato de benc¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000041_0001
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 5A se h¡c¡eron reacc¡onar 138 mg (0,21 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡din-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzoato de (2S)-2-amino-3-(bencilox¡)-3-oxoprop¡lo (diastereómero enant¡omér¡camente puro) con 3o mg (0,21 mmol, 1,0 eq.) de N,N-dimetil-¿-val¡na. La mezcla de reacc¡ón se concentró a vacío. El residuo se recristalizó con agua, el sólido precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío. Rendimiento: 158 mg (90 % de pureza, 89 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,87 min; EM (ESlpos): m/z = 770 (M+H)+.
Ejemplo 12.1A
(2S,3S)-3-Hidrox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-dicarbox¡lato de 2-bencil-1-ferc-but¡lo
Figure imgf000041_0002
Una solución de 200 mg (0,87 mmol) de (3S)-1-(fe/'c-butoxicarbon¡l)-3-hidrox¡-L-prol¡na en 6,5 ml de metanol y 1,3 ml de agua se mezcló con 141 mg (0,43 mmol, 0,5 eq.) de carbonato de cesio, se agitó durante 1 h a TAy se concentró a vacío. El residuo se destiló conjuntamente dos veces con en cada caso 10 ml de tolueno, se secó durante 2 h a alto vacío, se suspendió en 8 ml de dimetilformamida, se mezcló a 0 °C con 98 |al (0,825 mmol, 0,95 eq.) de bromuro de bencilo y se agitó durante 1 h a TA. Tras la adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. Rendimiento: 286 mg (cuant.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,92 min; EM (ESlpos): m/z = 322 (M+H)+.
Ejemplo 12.1B
(2S,3S)-3-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡rid¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]ox¡}p¡rrol¡d¡n-1,2-dicarboxilato de 2-benc¡l-1-ferc-but¡lo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000041_0003
Una solución de 248 mg (75 % de pureza, 0,40 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-il]butanoil}am¡no)benzo¡co (enantiómero 2) en 4 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 160 mg (0,50 mmol, 1,25 eq.) de 2-bencil-1-fe/'c-but¡l-(2S,3S)-3-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato, 12 mg (0,1 mmol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 0,87 | l (0,50 mmol, 1,25 eq.) de tyN-diisopropiletilamina y finalmente 96 mg (0,50 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-et¡l-3-(3-d¡met¡lam¡noprop¡l)carbod¡¡m¡da. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. La nueva adición de 0,5 eq. de dimetilaminopiridina, 0,5 eq. de tyN-diisopropiletilamina y finalmente 0,5 eq. de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropiOcarbodiimida a -20 °C y agitación a TA durante 2 días apenas dio como resultado un rendimiento adicional. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 57 mg (18% d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,27 min; EM (ESlpos): m/z = 769 (M+H)+.
Ejemplo 12.1C
(3S)-3-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}-am¡no)benzo¡l]ox¡}-L-prol¡nato de bencilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000042_0001
De acuerdo con el procedimiento general 6A se hicieron reaccionar 57 mg (73 |mol) de (2S,3S)-3-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-ox¡}p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 2-bencil-1-fercbutilo (diastereómero enantioméricamente puro) en presencia de 113 | l (1,47 mmol, 20 eq.) de ácido trifluoroacético. El producto bruto se hizo reaccionar sin purificación adicional. Rendimiento: 74 mg (31 % de pureza, 46 % d. t.) CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,87 min; EM (ESlpos): m/z = 669 (M+H)+.
Ejemplo 13.1 A
(2R,4R)-4-H¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 2-bencil-1-ferc-butilo
Figure imgf000042_0002
Una solución de 500 mg (2,15 mmol) de (4R)-1-(ferc-butox¡carbon¡l)-4-h¡drox¡-D-prol¡na en 18 ml de metanol y 3,5 ml de agua se mezcló con 352 mg (1,08 mmol, 0,5 eq.) de carbonato de cesio, se agitó durante 1 h a TA y se concentró a vacío. El residuo se destiló conjuntamente dos veces con en cada caso 10 ml de tolueno, se secó durante 2 h a alto vacío, se suspendió en 10 ml de dimetilformamida, se mezcló a 0 °C con 244 | l (2,05 mmol, 0,95 eq.) de bromuro de bencilo y se agitó durante 1 h a TA. Tras la adición de agua/acetato de etilo y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. Rendimiento: 721 mg (cuant.)
CL/e M [procedimiento 1]: Rt = 0,90 min; EM (ESlpos): m/z = 322 (M+H)+.
Ejemplo 13.1B
(2R,4R)-4-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]ox¡}p¡rrol¡d¡n-1,2-dicarboxilato de 2-benc¡l-1-ferc-but¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000043_0001
Una soluc¡ón de 188 mg (0,40 mmol) de ác¡do 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡co (enant¡ómero 2) en 4 ml de d¡clorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 167 mg (0,50 mmol, 1,25 eq.) de (2R,4R)-4-h¡drox¡p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato de 2-benc¡l-1-ferc-but¡lo, 12 mg (0,1 mmol, 0,25 eq.) de 4-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na, 0,87 | l (0,50 mmol, 1,25 eq.) de N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na y finalmente 96 mg (0,50 mmol, 1,25 eq.) de clorh¡drato de 1-et¡l-3-(3-d¡met¡lam¡noprop¡l)carbod¡¡m¡da. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 20 m¡n a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se ag¡tó durante la noche a TA. Tras la ad¡c¡ón de agua/d¡clorometano y separac¡ón de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con d¡clorometano. Las fases orgán¡cas, comb¡nadas se secaron (sulfato de sod¡o), se filtraron y se concentraron a vacío. El res¡duo se purificó por med¡o de cromatografía ultrarráp¡da (gel de síl¡ce-50, mezcla de c¡clohexano-acetato de et¡lo). Rend¡m¡ento: 198 mg (82 % de pureza, 53 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 1,26 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 769 (M+H)+.
Ejemplo 13.1C
(4R)-4-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]ox¡}-D-prol¡nato de benc¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000043_0002
De acuerdo con el proced¡m¡ento general 6A se h¡c¡eron reacc¡onar 198 mg (82 % de pureza, 0,21 mmol) de (2R,4R)-4-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}-am¡no)benzo¡l]ox¡}p¡rrol¡d¡n-1,2-d¡carbox¡lato 2-benc¡l-1-ferc-but¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en presenc¡a de 325 | l (4,22 mmol, 20 eq.) de ác¡do tr¡fluoroacét¡co. El producto bruto se purificó por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 71 mg (94 % de pureza, 47 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,87 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 669 (M+H)+.
Ejemplo 14.1A
(2S)-3-Hidroxi-2-(pirrolidin-1-il)propanoato de bencilo
Figure imgf000044_0001
Una solución de 500 mg (2,16 mmol) de clorhidrato de éster L-serinabencílico y 869 mg (2,81 mmol, 1,3 eq.) de 1,4-diyodobutano en 25 ml de 2-propanol se mezcló bajo argón a TA con 595 mg (5,61 mmol, 2,6 eq.) de carbonato de sodio y se agitó durante la noche a 90 °C. Tras enfriar hasta TA y separar el 2-propanol a vacío se mezcló el residuo con acetato de etilo. Las sales insolubles se filtraron. El filtrado se lavó con agua y la fase orgánica se secó (sulfato de sodio), se filtró y se concentró a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice-50, diclorometano, entonces diclorometano/metanol 5:1). Rendimiento: 268 mg (48 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 5]: Rt = 2,03 min; EM (ESlpos): m/z = 250 (M+H)+.
Ejemplo 14.1B
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de (2S)-3-(benciloxi)-3-oxo-2-(pirrolidin-1-il)propilo (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000044_0002
Una solución de 233 mg (0,50 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) en 8 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 162 mg (0,63 mmol, 1,25 eq.) de (2S)-3-hidroxi-2-(pirrolidin-1-il)propanoato de bencilo, 15 mg (0,13 mmol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 109 | l (0,63 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 120 mg (0,63 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice-50, mezcla de ciclohexano-acetato de etilo) y posteriormente por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 73 mg (21 % d. t.)
Cl/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,90 min; EM (ESlpos): m/z = 697 (M+H)+.
Ejemplo 15.1A
4-(2-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)-benzoil]oxi}etil)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (enantiómero 2)
Figure imgf000044_0003
Una solución de 93 mg (0,20 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) en 2 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 57 mg (0,25 mmol, 1,25 eq.) de 4-(2-hidroxietil)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo, 6 mg (50 |amol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 44 |al (0,25 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 48 mg (0,50 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 66 mg (49 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 1,28 min; EM (ESlpos): m/z = 677 (M+H)+.
Ejemplos de realización
Ejemplo 1
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoil]-L-treonina (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000045_0001
Una solución de 191 mg (0,22 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3-[(2S)-tetrahidro-2H-piran-2-il]propanoil}amino)benzoato de (2R,3S)-4-(benciloxi)-3-{[(benciloxi)carbonil]amino}-4-oxobutan-2-ilo (diastereómero enantioméricamente puro) en 5 ml de etanol se hidrogenó en presencia de 19 mg de paladio (al 10 % sobre carbón activo) durante 2,5 h a TA y presión normal. A continuación se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se lavó el residuo con etanol. Los filtrados combinados se concentraron a vacío. El residuo precipitado se filtró y se secó a vacío. El producto bruto se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 40 mg (28 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,85 min; EM (ESlpos): m/z = 637 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,75 (s, 1H), 8,05-7,96 (m, 3H), 7,78 (d, 2H), 7,75-7,70 (m, 2H), 7,53 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 5,81 (t, 1H), 5,43-5,34 (m, 1H), 3,90-3,82 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,35-2,26 (m, 1H), 2,22-2,13 (m, 1H), 1,79-1,71 (m, 1H), 1,67-1,59 (m, 1H), 1,47-1,39 (m, 3H), 1,38 (d, 3H), 1,34-1,22 (m, 1H).
Ejemplo 2
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)-benzoil]-L-treonina (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000045_0002
Una solución de 492 mg (94 % de pureza, 0,69 mmol) de N-(tere-butoxicarbonil)-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoil]-Mreonina (diastereómero enantioméricamente puro) en 5 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a 0 °C gota a gota con 0,8 ml (10,4 mmol, 15 eq.) de TfA. La mezcla de reacción se dejó llegar hasta TA, se agitó posteriormente durante 6 h a TA y a continuación se concentró a vacío. El residuo se evaporó conjuntamente dos veces con en cada caso 10 ml de tolueno y se secó a vacío. El producto bruto se purificó previamente por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua) (rendimiento: 405 mg, 69 % de pureza) y se purificó posteriormente por medio de una segunda RP-HPLC (producto bruto disuelto en 8 ml de acetonitrilo/4 ml de agua; fase: Shield RP185 |am, 19 mm x 100 mm; eluyente: 40 % de acetonitrilo/48 % de agua/12 % de ácido fórmico en agua, flujo: 25 ml/min; temperatura: 40 °C). Rendimiento: 9 mg (95 % de pureza, 2 % d. t.) y 39 mg (91 % de pureza, 9 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,80 min; EM (ESlpos): m/z = 567 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 10,82 (s, 1H), 8,06-7,97 (m, 3H), 7,82-7,55 (s a, 2H), 7,79-7,70 (m, 4H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 5,43-5,34 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,41-3,36 (m, 1H), 2,26-2,13 (m, 2H), 1,38 (d, 3H), 0,90 (t, 3H).
Ejemplo 3
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)-benzoil]-2-metil-L-serina (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000046_0001
Una solución de 16 mg (20 |mol) de N-(fe/'c-butox¡carboml)-0-[4-({2-[4-(5-doro-2-c¡anofeml)-5-metox¡-2-oxop¡ridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoil]-2-metil-L-serina (diastereómero enantioméricamente puro) en 2 ml de diclorometano se mezcló a 0 °C con 37 | l (0,48 mmol, 20 eq.) de ácido trifluoroacético y se agitó durante la noche a TA. La mezcla de reacción se concentró a vacío y el residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 5 mg (33 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,74 min; EM (ESlpos): m/z = 567 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,85 (s a, 1H), 8,09 (d, 2H), 8,00 (d, 1H), 7,92-7,64 (s a, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,75-7,70 (m, 2H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,39-4,28 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,27-2,12 (m, 2H), 1,33 (s, 3H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 4
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)-benzoil]-L-serina (diastereómero enantioméricamente puro)
Figure imgf000046_0002
Una solución de 193 mg (0,30 mmol) de (4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de 2S)-2-amino-3-(benciloxi)-3-oxopropilo (diastereómero enantioméricamente puro) en 5 ml de etanol se hidrogenó en presencia de 19 mg de paladio (al 10 % sobre carbón activo) durante 30 min a TA y presión normal. A continuación se filtró la mezcla de reacción a través de Celite y se lavó el residuo con etanol. Los filtrados combinados se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 101 mg (61 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,77 min; EM (ESlpos): m/z = 553 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,83 (s, 1H), 8,04 (d, 2H), 8,00 (d, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,76-7,71 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,63-4,56 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,59 (dd, 1H), 2,27­ 2,12 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 5
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]-N-(p¡rrol¡d¡n-1-¡lacet¡l)-L-serina (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000047_0001
Una soluc¡ón de 132 mg (94 % de pureza, 0,18 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]-butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(benc¡lox¡)-3-oxo-2-[(p¡rrol¡d¡n-1-¡lacet¡l)am¡no]prop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 15 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 1 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 47 mg (43 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,71 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 664 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 10,85 (s, 1H), 8,23 (d, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,65 (s a, 1H), 4,57 (dd, 1H), 4,49 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,65 (s a, 4H), 2,26-2,10 (m, 2H), 1,71 (s a, 4H), 0,90 (t, 3H).
Ejemplo 6
Prol¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]-L-ser¡na (mezcla de d¡astereómeros)
Figure imgf000047_0002
Una soluc¡ón de 132 mg (0,16 mmol) de 1-benc¡lprol¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-ser¡nato de benc¡lo (mezcla de d¡astereómeros) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 15 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 4 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 5 mg (90 % de pureza; 5 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,75 m¡n/0,77 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 650 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,85 (s, 1H), 8,5 (s a, 1H), 8,00/7,95 (2x d, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49/7,48 (2x s, 1H), 6,54/6,47 (2x s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,62-4,53 (m, 1H), 4,50-4,37 (m, 2H), 3,93-3,83 (m, 1H), 3,69/3,68 (2x s, 3H), 3,02-2,86 (m, 3H), 2,27-2,12 (m, 2H), 2,12-2,02 (m, 1H), 1,80-1,58 (m, 3H), 0,90 (t, 3H).
Ejemplo 7
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]-N-{[(2R)-1-met¡lp¡per¡d¡n-2-¡l]carbon¡l}-L-ser¡na (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000048_0001
Una soluc¡ón de 141 mg (93 % de pureza, 0,17 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(benc¡lox¡)-2-({[(2R)-1-met¡lp¡per¡d¡n-2-¡l]carbon¡l}am¡no)-3-oxoprop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 20 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 1 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se purificó por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 8 mg (7 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,73 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 678 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,84 (s, 1H), 8,1 (s a, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,64-4,52 (m, 2H), 4,50-4,41 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,97-2,87 (m, 1H), 2,27-1,99 (m, 6H), 1,76-1,62 (m, 2H), 1,62-1,54 (m, 1H), 1,54-1,46 (m, 2H), 1,27-1,11 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 8
0-[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]-N-{[1-(d¡met¡lam¡no)c¡cloprop¡l]carbon¡l}-L-ser¡na (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000048_0002
Una soluc¡ón de 127 mg (85 % de pureza, 0,14 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(bendlox¡)-2-({[1-(d¡met¡lam¡no)-ddoprop¡l]-carbon¡l}am¡no)-3-oxoprop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 20 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 1 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se filtró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los filtrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se purificó por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 47 mg (49 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,75 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 664 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 13,1 (s a, 1H), 10,83 (s, 1H), 8,33 (d, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,89 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,72-4,65 (m, 1H), 4,62 (dd, 1H), 4,50 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,26-2,16 (m, 2H), 2,15 (s, 6H), 1,00-0,85 (m, 7H).
Ejemplo 9
N,N-D¡met¡l-L-val¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-ser¡na (diastereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000049_0001
Una soluc¡ón de 158 mg (90 % de pureza, 0,19 mmol) de N,N-d¡met¡l-L-val¡l-0-[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]-L-ser¡nato de benc¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 20 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 1,5 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se purificó por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 32 mg (25 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,76 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 680 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 12,9 (s a, 1H), 10,83 (s, 1H), 8,3 (s a, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,81-7,70 (m, 4H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,80-4,71 (m, 1H), 4,53 (dd, 1H), 4,46 (dd, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,27-2,09 (m, 8H), 2,01-1,88 (m, 1H), 0,91 (t, 3H), 0,88 (d, 3H), 0,81 (d, 3H).
Ejemplo 10
(3S)-3-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]ox¡}-L-prol¡na (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000049_0002
Una soluc¡ón de 74 mg (31 % de pureza, 34 |amol) de (3S)-3-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]ox¡}-L-prol¡nato de benc¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 2 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 7 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 1,0 h a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se filtró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los filtrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se purificó por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 4 mg (91 % de pureza, 18 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,80 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 579 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,84 (s, 1H), 8,03-7,98 (m, 3H), 7,79 (d, 2H), 7,76-7,71 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,66-5,60 (m, 2H), 3,94 (s, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,53-3,45 (m, 1H), 2,26-2,12 (m, 2H), 2,11-1,91 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 11
(4R)-4-{[4-({2-[4-(5-Cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]ox¡}-D-prol¡na (diastereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000050_0001
Una soluc¡ón de 71 mg (94 % de pureza, 0,10 mmol) de (4R)-4-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzo¡l]ox¡}-D-prol¡nato de benc¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 2 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 7 mg de palad¡o (al 1o % sobre carbón act¡vo) durante 2 h a TA y pres¡ón normal, se mezcló otra vez con 7 mg de palad¡o (al l0 % sobre carbón act¡vo) y 1 ml de tetrah¡drofurano y se h¡drogenó ad¡c¡onalmente durante 1 h a TAy pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 37 mg (92 % de pureza, 59 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 2]: Rt = 2,23 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 579 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,90 (s, 1H), 10,2 (s a, 1H), 9,0 (s a, 1H), 8,04 (d, 2H), 8,0 (d, 1H), 7,80 (d, 2H), 7,76-7,71 (m, 2H), 7,48 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 5,54 (t, 1H), 4,6 (s a, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,61-2,55 (m, 1H), 2,48-2,35 (m, 2H), 2,28-2,11 (m, 2H), 0,91 (t, 1H).
Ejemplo 12
Ác¡do (2S)-3-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)-benzo¡l]ox¡}-2-(p¡rrol¡d¡n-1-¡l)propano¡co (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro)
Figure imgf000050_0002
Una soluc¡ón de 73 mg (0,11 mmol) de 4-({2-[4-(5-cloro-2-c¡anofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de (2S)-3-(benc¡lox¡)-3-oxo-2-(p¡rrol¡d¡n-1-¡l)prop¡lo (d¡astereómero enant¡omér¡camente puro) en 10 ml de etanol se h¡drogenó en presenc¡a de 10 mg de palad¡o (al 10 % sobre carbón act¡vo) durante 45 m¡n a TA y pres¡ón normal. A cont¡nuac¡ón se f¡ltró la mezcla de reacc¡ón a través de Cel¡te y se lavó el res¡duo con etanol. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron a vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por med¡o de RP-HPLC (Repros¡l C18, grad¡ente de aceton¡tr¡lo-agua). Rend¡m¡ento: 22 mg (35 % d. t.)
CL/EM [proced¡m¡ento 1]: Rt = 0,78 m¡n; EM (ESlpos): m/z = 607 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,85 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,97 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 7,50 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,58 (d, 2H), 3,72-3,66 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,25-3,15 (m, 2H), 3,10-3,01 (m, 2H), 2,26-2,12 (m, 2H), 1,89-1,80 (m, 4H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 13
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de 1 -metilpiperidin-4-ilo (enantiómero)
Figure imgf000051_0001
Una solución de 70 mg (0,15 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) en 1 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 22 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de 1 -metilpiperidin-4-ol, 5 mg (37 |mol, 0,25 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 33 | l (0,19 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 36 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. La mezcla de reacción se mezcló a TA con otros 9 mg (75 mmol, 0,5 eq.) y se agitó durante otra noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 16 mg (19 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,74 min; EM (ESlpos): m/z = 563 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-da): 8 [ppm] = 10,83 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 4,95-4,85 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,65-2,55 (m, 2H), 2,28-2,11 (m, 4H), 2,19 (s, 3H), 1,96-1,86 (m, 2H), 1,77-1,65 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 14
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoato de 2-(4-metilpiperazin-1-il)etilo (enantiómero 2)
Figure imgf000051_0002
Una solución de 70 mg (0,15 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofenil)-5-metoxi-2-oxopiridin-1(2H)-il]butanoil}amino)benzoico (enantiómero 2) en 2 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 27 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanol, 18 mg (0,15 mmol, 1,0 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 33 | l (0,19 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisopropiletilamina y finalmente 36 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitriloagua). Rendimiento: 54 mg (61 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,76 min; EM (ESlpos): m/z = 592 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,83 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,93 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 4,34 (t, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,66 (t, 2H), 2,48-2,40 (m, 4H), 2,35-2,24 (m, 4H), 2,24-2,15 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 15
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡din-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de 2-(piperidin-4-il)etilo (enantiómero)
Figure imgf000052_0001
Una solución de 66 mg (98 |amol) de 4-(2-{[4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butanoil}am¡no)benzo¡l]ox¡}et¡l)p¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (enantiómero) en 2 ml de diclorometano se mezcló a 0°C con 151 |al (1,96 mmol, 20 eq.) de ácido trifluoroacético y se agitó durante 1,5 h a TA. La mezcla de reacción se concentró a vacío y se purificó el residuo por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 32 mg (56 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 2]: Rt = 2,27 min; EM (ESlpos): m/z = 577 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,84 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,79 (d, 2H), 7,76-7,71 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,63 (dd, 1H), 4,30 (t, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,26 (d, 2H), 2,87 (t, 2H), 2,26-2,10 (m, 2H), 1,87 (d, 2H), 1,81-1,63 (m, 3H), 1,40-1,26 (m, 2H), 0,91 (t, 3H).
Ejemplo 16
4-({2-[4-(5-Cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡din-1(2H)-¡l]butano¡l}am¡no)benzoato de 2-(pirrolidin-1 -il)etilo (enantiómero 2)
Figure imgf000052_0002
Una solución de 70 mg (0,15 mmol) de ácido 4-({2-[4-(5-cloro-2-cianofen¡l)-5-metox¡-2-oxop¡r¡d¡n-1(2H)-¡l]butanoil}amino)benzo¡co (enantiómero 2) en 2 ml de diclorometano se mezcló bajo argón a -20 °C con 22 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de 2-(pirrolid¡n-1-¡l)etanol, 18 mg (0,15 mmol, 1,0 eq.) de 4-dimetilaminopiridina, 33 |al (0,19 mmol, 1,25 eq.) de N,N-diisoprop¡let¡lam¡na y finalmente 36 mg (0,19 mmol, 1,25 eq.) de clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimet¡lam¡noprop¡l)carbod¡im¡da. La mezcla de reacción se agitó durante 20 min a -20 °C, se dejó llegar hasta TA y se agitó durante la noche a TA. Tras la adición de agua/diclorometano y separación de fases se extrajo la fase acuosa dos veces con diclorometano. Las fases orgánicas, combinadas se lavaron con solución acuosa, saturada de cloruro de sodio, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo se purificó por medio de RP-HPLC (Reprosil C18, gradiente de acetonitrilo-agua). Rendimiento: 30 mg (36 % d. t.)
CL/EM [procedimiento 1]: Rt = 0,74 min; EM (ESlpos): m/z = 563 (M+H)+,
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 8 [ppm] = 10,83 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,78 (d, 2H), 7,76-7,70 (m, 2H), 7,49 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,64 (dd, 1H), 4,34 (t, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,76 (t, 2H), 2,26-2,11 (m, 2H), 1,72-1,62 (m, 4H), 0,91 (t, 3H).
B) Evaluación de la actividad fisiológica
La idoneidad de los compuestos de acuerdo con la invención para el tratamiento de enfermedades tromboembólicas se puede demostrar en los siguientes sistemas de ensayo:
a) Descripciones del ensayo íin vitro)
a.1) Medición de la inhibición de FXIa
Para la determinación de la inhibición del factor XIa de las sustancias de acuerdo con la invención se usa un sistema de ensayo bioquímico, en el que se usa la reacción de un sustrato del factor XIa peptídico para la determinación de la actividad enzimática de factor XIa humano. A este respecto, el factor XIa escinde del sustrato del factor XIa peptídico la aminometilcoumarina (AMC) C-terminal, cuya fluorescencia se mide. Las determinaciones se realizan en placas de microtitulación.
Las sustancias de prueba se disuelven en dimetilsulfóxido y se diluyen en serie en dimetilsulfóxido (de 3000 |iM a 0,0078 |iM; concentraciones finales resultantes en el ensayo: de 50 |iM a 0,00013 |iM). En cada caso se dispone 1 |il de las soluciones de sustancia diluidas en las cavidades de placas de microtitulación blancas de la empresa Greiner (384 cavidades). A continuación se añaden sucesivamente 20 |il de tampón de ensayo (Tris/HCl 50 mM pH 7,4; cloruro de sodio 100 mM; cloruro de calcio 5 mM; albúmina de suero bovino al 0,1 %) y 20 |il de factor XIa de la empresa Kordia (0,45 nM en tampón de ensayo). Tras 15 min de incubación se inicia la reacción enzimática mediante adición de 20 |il del sustrato del factor XIa disuelto en tampón de ensayo Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC (10 |iM en tampón de ensayo) de la empresa Bachem, se incuba durante 30 min a temperatura ambiente (22 °C) y a continuación se realiza una medición de fluorescencia (excitación: 360 nM, emisión: 460 nM). Las emisiones medidas de los conjuntos de ensayo con sustancia de prueba se comparan con las de conjuntos control sin sustancia de prueba (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar de sustancia de prueba en dimetilsulfóxido) y a partir de las relaciones de concentración-acción se calculan valores CI50. Los datos de acción de este ensayo están mencionados en la siguiente tabla A:
Tabla A
Figure imgf000053_0001
a.2) Determinación de la selectividad
Para demostrar la selectividad de las sustancias con respecto a la inhibición de FXIa se examinan las sustancias de prueba con respecto a su inhibición de otras serina proteasas humanas, tal como factor Xa, tripsina y plasmina. Para determinar la actividad enzimática del factor Xa (1,3 nmol/l de Kordia), tripsina (83 mU/ml de Sigma) y plasmina (0,1 |ig/ml de Kordia), estas enzimas se disuelven (50 mmol/l de tampón Tris [C,C,C-tris(hidroximetil)aminometano], 100 mmol/l de cloruro de sodio, 0,1 % de BSA [albúmina de suero bovino], 5 mmol/l de cloruro de calcio, pH 7,4) y se incuban durante 15 min con sustancia de prueba en varias concentraciones en dimetilsulfóxido y con dimetilsulfóxido sin sustancia de prueba. La reacción enzimática luego se inicia adicionando los correspondientes sustratos (5 |imol/l de Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC de Bachem para FXa y tripsina, 50 |imol/l de MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC de Bachem para plasmina). Después de un tiempo de incubación de 30 min a 22 °C se mide la fluorescencia (excitación: 360 nm, emisión: 460 nm). Las emisiones medidas de los conjuntos de ensayo con sustancia de prueba se comparan con los conjuntos control sin sustancia de prueba (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar de sustancia de prueba en dimetilsulfóxido) y a partir de las relaciones de concentración-actividad se calculan los valores de CI50.
a.3) Ensayo de generación de trombina (trombograma)
La acción de las sustancias de prueba en el trombograma (ensayo de generación de trombina de acuerdo con Hemker) se determina in vitro en plasma humano (Octaplas® de la empresa Octapharma).
En el ensayo de generación de trombina de acuerdo con Hemker, la actividad de trombina en el plasma de coagulación se determina midiendo los productos de escisión fluorescentes del sustrato I-1140 (Z-Gly-Gly-Arg-AMC, Bachem). Las reacciones se realizan en presencia de concentraciones variables de sustancia de prueba o del correspondiente disolvente. Para iniciar la reacción se usan los reactivos de la empresa Thrombinoscope (30 pM o 0,1 pM de factor tisular recombinante, 24 |iM de fosfolípidos en HEPES). Además, se usa un calibrador de trombina de la empresa Thrombinoscope cuya actividad amidolítica es necesaria para calcular la actividad de trombina en una muestra con cantidad desconocida de trombina. La realización del ensayo se lleva a cabo según las indicaciones del fabricante (Thrombionsocpe BV): se incuban 4 |il de sustancia de ensayo o del disolvente, 76 |il de plasma y 20 |il de reactivo PPP o calibrador de trombina a 37 °C durante 5 min. Después de la adición de 20 |il de 2,5 mM de sustrato de trombina en 20 mM de HEPES, 60 mg/ml de BSA, 102 mM de cloruro de calcio, se mide la generación de trombina cada 20 s durante un período de 120 min. La medición se lleva a cabo mediante el uso de un fluorómetro (Fluoroskan Ascent) de la empresa Thermo Electron, que está equipado con un par de filtros 390/460 NM y un distribuidor.
Mediante el uso del “software Thrombinoscope”, se calcula el trombograma y se representa mediante un gráfico. Se calculan los siguientes parámetros: tiempo muerto, tiempo al pico, pico, ETP (potencial de trombina endógena) y la cola de inicio.
a.4) Determinación de la acción anticoagulante
La acción anticoagulante de las sustancias de prueba se determina in vitro en plasma humano y de rata. A este fin, se extrae sangre en una relación de mezclado de citrato de sodio/sangre de 1:9 usando una solución de citrato de sodio de 0,11 molar como patrón. Inmediatamente después de haberse extraído la sangre, se mezcla bien y se centrifuga a aprox. 4000 g durante 15 minutos. El sobrenadante se pipetea.
Se determina el tiempo de protrombina (PT, sinónimos: tiempo de tromboplastina, ensayo rápido) en presencia de concentraciones variables de sustancia de prueba o el correspondiente disolvente mediante el uso del kit de ensayo comercial (Neoplastin® de la empresa Boehringer Mannheim o Hemoliance® RecombiPlastin de la empresa Instrumentation Laboratory). Los compuestos de prueba se incuban con el plasma a 37 °C durante 3 minutos. Luego se inicia la coagulación por adición de tromboplastina y se determina el momento del comienzo de la coagulación. Se determina la concentración de la sustancia de prueba que efectúa una duplicación del tiempo de protrombina. Se determina el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) en presencia de concentraciones variables de la sustancia de prueba o el correspondiente disolvente mediante el uso de un kit de ensayo comercial (reactivo PTT de la empresa Roche). Los compuestos de prueba se incuban con el plasma y el reactivo PTT (cefalina, caolín) a 37 °C durante 3 minutos. Luego se inicia la coagulación adicionando 25 mM de cloruro de calcio y se determina el momento del comienzo de la coagulación. Se determina la concentración de la sustancia de prueba que efectúa una prolongación al 50 % o bien una duplicación del APTT.
a.5) Determinación de la actividad de calicreína plasmática
Para la determinación de la inhibición de calicreína plasmática de las sustancias de acuerdo con la invención se usa un sistema de ensayo bioquímico, en el que se usa la reacción de un sustrato de calicreína plasmática peptídica para la determinación de la actividad enzimática de calicreína plasmática humana. A este respecto, la calicreína plasmática escinde del sustrato de calicreína plasmática peptídica la aminometilcoumarina (AMC) C-terminal, cuya fluorescencia se mide. Las determinaciones se realizan en placas de microtitulación.
Las sustancias de prueba se disuelven en dimetilsulfóxido y se diluyen en serie en dimetilsulfóxido (de 3000 |iM a 0,0078 |iM; concentraciones finales resultantes en el ensayo: de 50 |iM a 0,00013 |iM). En cada caso se dispone 1 |il de las soluciones de sustancia diluidas en las cavidades de placas de microtitulación blancas de la empresa Greiner (384 cavidades). A continuación se añaden sucesivamente 20 |il de tampón de ensayo (Tris/HCl 50 mM pH 7,4; solución de cloruro de sodio 100 mM; solución de cloruro de calcio 5 mM; albúmina de suero bovino al 0,1 %) y 20 |il de calicreína plasmática de la empresa Kordia (0,6 nM en tampón de ensayo). Tras 15 min de incubación se inicia la reacción enzimática mediante adición de 20 |il del sustrato disuelto en tampón de ensayo H-Pro-Phe-Arg-AMC (10 |iM en tampón de ensayo) de la empresa Bachem, se incuba durante 30 min a temperatura ambiente (22 °C) y a continuación se realiza una medición de fluorescencia (excitación: 360 nM, emisión: 460 nM). Las emisiones medidas de los conjuntos de ensayo con sustancia de prueba se comparan con las de conjuntos control sin sustancia de prueba (exclusivamente dimetilsulfóxido en lugar de sustancia de prueba en dimetilsulfóxido) y a partir de las relaciones de concentración-acción se calculan valores CI50.
Tabla B
Figure imgf000055_0001
a.6) Determinación de la integridad endotelial
La actividad de los compuestos de acuerdo con la invención se caracteriza por medio de un ensayo de permeabilidad in-vitro en células de la vena del cordón umbilical humano “human umbilical venous cells" (HUVEC). Por medio del aparato EOS (EC IS: Electric Cell-substrate Impedance Sensing; Applied Biophysics Inc; Troy, NY) pueden medirse continuamente diferencias de la resistencia eléctrica transendotelial (TEER) a través de una monocapa de células endoteliales que se colocó en placa a través de electrodos de oro. Las HUVEC se siembran en una placa de electrodos con detector de 96 pocillos (96W1 E, Ibidi GmbH, Martinsried). Se induce una hiperpermeabilidad de la monocapa de células confluente producida por medio de estimulación con cininógeno, precalicreína y factor XII (en cada caso 100 nM). Los compuestos de acuerdo con la invención se añaden antes de la adición de las sustancias indicadas anteriormente. Las concentraciones habituales de los compuestos son 1 x 10' 10 a 1 x 10-6 M.
a. 7) Determinación de la permeabilidad in-vitro de células endoteliales
En otro modelo de hiperpermeabilidad se determina la actividad de las sustancias sobre la modulación de la permeabilidad macromolecular. Las HUVEC se siembran en una membrana de filtro trans-pocillo revestida con fibronectina (placas de 24 pocillos, inserto de 6,5 mm con membrana de policarbonato 0,4 pM; Costar #3413). La membrana de filtro separa el espacio de cultivo celular superior del inferior con la capa de células endoteliales confluente sobre la base del espacio de cultivo celular superior. Al medio del espacio superior se añaden 250 g/ml de FITC-dextrano 40 kDa (Invitrogen, D1844). Se induce una hiperpermeabilidad de la monocapa por medio de estimulación con cininógeno, precalicreína y factor XII (en cada caso 100 nM). Se extraen muestras de medio cada 30 min desde la cámara inferior y se determina la fluorescencia relativa, como parámetro de las modificaciones de la permeabilidad macromolecular dependiendo del tiempo, con un fluorímetro. Los compuestos de acuerdo con la invención se añaden antes de la adición de las sustancias indicadas anteriormente. Las concentraciones habituales de los compuestos son 1 x 10'10 a 1 x 10'6 M.
b) Determinación de la acción antitrombótica (in vivo)
b. 1) Modelo de trombosis arterial (trombosis inducida por cloruro de hierro(II)) en combinación con tiempo de hemorragia en la oreja en el conejo
La actividad antitrombótica de los inhibidores de FXIa se somete a ensayo en un modelo de trombosis arterial. A este respecto se desencadena la formación de trombos mediante daño químico de una zona de la arteria carótida en el conejo. De manera simultánea se determina el tiempo de hemorragia en la oreja.
Se anestesian conejos macho (Crl:KBL (NZW)BR, Charles River) con dieta normal con un peso de 2,2 - 2,5 kg de peso corporal mediante administración intramuscular de xilacina y ketamina (Rompun, Bayer, 5 mg/kg y Ketavet, Pharmacia & Upjohn GmbH, 40 mg/kg de peso corporal). La anestesia se respalda además mediante administración intravenosa de los mismos preparados (bolo: infusión continua) a través de la vena de la oreja derecha.
Tras la exposición de la arteria carótida derecha se genera el daño vascular de manera que un trozo de papel de filtro (10 mm x 10 mm) sobre una tira de Parafilm® (25 mm x 12 mm) se enrolla alrededor de la arteria carótida, sin alterar debido a ello el flujo sanguíneo. El papel de filtro contiene 100 |il de una solución al 13 % de cloruro de hierro(II) (Sigma) en agua. Tras 5 min se separa el papel de filtro y se lava el vaso dos veces con solución acuosa al 0,9 % de cloruro de sodio. 30 min tras la lesión se disecciona la arteria carótida en la zona del daño y se extrae y se pesa el material trombótico eventualmente existente.
Las sustancias de prueba se administran por vía intravenosa a través de la vena femoral a los animales anestesiados en cada caso 5 min antes del daño.
El tiempo de hemorragia en la oreja se determina 2 min tras el daño de la arteria carótida. Para ello se rasura la oreja izquierda y se coloca un corte definido de 3 mm de longitud (número de artículo de Klinge 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Alemania) de manera paralela al eje longitudinal de la oreja. A este respecto se presta atención a no lesionar ningún vaso visible. La sangre que sale eventualmente se absorbe en intervalos de 15 segundos con trozos de papel de filtro pesados de manera precisa, sin tocar directamente la herida. El tiempo de hemorragia se calcula como el intervalo de tiempo desde la colocación del corte hasta el momento en el que ya no es detectable sangre en el papel de filtro. El volumen de sangre que ha salido se calcula tras pesada de los trozos de papel de filtro.
c) Determinación de la acción sobre la extravasación/formación de edema y/o neovascularización en el ojo (in vivo)
c.1) Ensayo de la actividad de sustancias en el modelo de neovascularización coroidea inducida por láser Este estudio sirve para someter a estudio la actividad de una sustancia de prueba sobre la reducción de la extravasación/formación de edema y/o la neovascularización coroidea en el modelo de rata de la neovascularización coroidea inducida por láser.
Para ello se seleccionan ratas pigmentadas de la especie Brown-Norway, que no presentan síntomas de enfermedades oftalmológicas, y se asignan a grupos de tratamiento según el principio aleatorio. En el día 0 se narcotizan los animales por medio de inyección intraperitoneal (15 mg/kg de xilacina y 80 mg/kg de ketamina). Tras la instilación de una gota de una solución al 0,5 % de tropicamida para la dilatación de las pupilas se desencadena la neovascularización coroidea por medio de un fotocoagulador de láser de argón de 532 nm en seis sitios definidos alrededor del nervio óptico (50-75 |im de diámetro, 150 mW de intensidad, 100 ms de duración). La sustancia de prueba y el vehículo correspondiente (por ejemplo PBS, solución isotónica de cloruro de sodio) se administran o bien sistémicamente por vía oral o bien por vía intraperitoneal o localmente en el ojo mediante múltiple administración como gotas oculares o bien inyección intravítrea. El peso corporal de todos los animales se determina antes del inicio del estudio y a continuación diariamente durante el estudio.
En el día 21 se realiza una angiografía por medio de un retinógrafo de fluorescencia (por ejemplo Kowe, HRA). En narcosis y tras una nueva dilatación de la pupila se inyecta un colorante de fluoresceína sódica al 10 % por vía subcutánea (s.c.). 2-10 min más tarde se registran imágenes del fondo de ojo. La intensidad de la extravasación/del edema, representada mediante la fuga de fluoresceína, se evalúa por de dos a tres observadores ciegos y se clasifica en grados de gravedad de 0 (ninguna extravasación) a 3 (fuerte coloración a través de la propia lesión). Tras la muerte de los animales en el día 23 se extraen los ojos y se fijan en solución al 4 % de paraformaldehído durante una hora a temperatura ambiente. Tras un paso de lavado se cristaliza cuidadosamente la retina y se colorea el complejo coroideoescleral con un anticuerpo anti FITC-isolectina B4 ya continuación se coloca de manera plana sobre un portaobjetos. Los preparados así obtenidos se evalúan por medio de un microscopio de fluorescencia (Apotom, Zeiss) con una longitud de onda de excitación de 488 nm. La superficie o bien el volumen de la neovascularización coroidea (en |im2 o bien |im3) se calcula mediante análisis morfométrico por medio del software Axiovision 4,6.
c.2) Ensayo de la actividad de sustancias en el modelo de retinopatía inducida por oxígeno
Se mostró que una retinopatía inducida por oxígeno representa un modelo animal valioso para el estudio de la angiogénesis retiniana patológica. Este modelo se basa en la observación de que una hiperoxia durante el desarrollo postnatal temprano en la retina conduce a la detención o a la ralentización del crecimiento de vasos sanguíneos retinianos normales. Tan pronto como los animales volvieron tras una fase de hiperoxia de 7 días al aire ambiente normóxico, es esto sinónimo de una relativa hipoxia, dado que en la retina faltan los vasos normales que son necesarios para garantizar un suministro suficiente del tejido neural en condiciones normóxicas. La situación isquémica generada debido a ello conduce a la neovascularización anómala que muestra algunas similitudes con la neovascularización fisiopatológica en enfermedades oculares tal como AMD húmeda. Además, la neovascularización producida es muy reproducible, cuantificable y un importante parámetro para el estudio de los mecanismos patológicos y posibles tratamientos de las más diversas formas de enfermedades de la retina.
El objetivo de este estudio es estudiar la actividad de dosis administradas diariamente de manera sistémica del compuesto de prueba sobre el crecimiento de los vasos retinianos en el modelo de retinopatía inducida por oxígeno. Neonatos de ratones C57B1 / 6 y sus madres se exponen en el día 7 postnatal (PD7) a una hiperoxia (70 % de oxígeno) durante 5 días. A partir de PD12, se mantienen los ratones en condiciones normóxicas (aire ambiente, 21 % de oxígeno) hasta el PD17. Desde el día 12 hasta el día 17 se tratan los ratones diariamente con la sustancia de prueba o el correspondiente vehículo. En el día 17 se narcotizan todos los ratones con isofluran y a continuación se sacrifican mediante desnucamiento. Los ojos se extraen y se fijan en un 4 % de formalina. Tras el lavado en solución de cloruro de sodio tamponada con fosfato se prepara la retina, se genera un preparado plano de ello y se colorea éste con anticuerpo anti-isolectina B4. La cuantificación de los vasos que crecen de nuevo se realiza usando un Zeiss ApoTome.
C) Determinación de la estabilidad, solubilidad y comportamiento de liberación
a) Medición de la estabilidad en tampón con distintos valores de pH (detección por HPLC)
Descripción del ensayo: se disuelven 0,3 mg del compuesto de prueba en 0,1 ml de dimetilsulfóxido y se mezclan con 0,4 ml de acetonitrilo. Para conseguir una disolución completa se trata la mezcla de muestra durante aprox. 20 segundos en un baño de ultrasonido. A continuación se añade 1,0 ml del correspondiente tampón y se trata de nuevo la mezcla de muestra en un baño de ultrasonido.
Soluciones de tampón usadas
pH 4,0: Fluka, número de pedido 33643 (11,76 g de ácido cítrico, 2,57 g de cloruro de sodio y 2,72 g de hidróxido de sodio)
pH 7,4: se completan 90 g de cloruro de sodio, 13,61 g de dihidrogenofosfato de potasio y 83,35 g de una solución acuosa 1 M de hidróxido de sodio hasta obtener 1 litro con agua Millipore y entonces se diluyen en la relación 1:10.
Se analizan porciones de 10 |il de las soluciones de muestra por medio de HPLC en distintos momentos (0 h, 1 h, 2 h, 4 h y 24 h) a 37 °C. Se cuantifica a través de las superficies pico en porcentaje.
Procedimiento de HPLC: Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (G1312A), automuestreador (G1329A), horno de columna (G1316A), termostato (G1330B); columna: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 |im; temperatura de columna: 37 °C; velocidad de flujo: 1,5 ml/min; detección UV: 210 nm; volumen de inyección: 10 |il; eluyente A: 5 ml de ácido perclórico/litro de agua; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 min: 98 % de A, 2 % B ^ 3,0 min: 85 % de A, 15 % B ^ 8,0 min: 50 % de A, 50 % B ^ 16,0 min: 50 % de A, 50 % B ^ 20,0 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 21,0 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 24,0 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 25,0 min: 98 % de A, 2 % de B.
Se determina la relación de las superficies pico (F) en distintos momentos en relación con la superficie pico en el punto inicial.
b) Medición de la estabilidad in vitro en plasma de rata y humano (detección por HPLC)
Descripción del ensayo: se disuelve 1 mg del compuesto de prueba en una mezcla de 0,5 ml de acetonitrilo/dimetilsufóxido (9:1). 20 |il de esta solución de muestra se añaden a 1,0 ml de plasma heparinizado, caliente a 37 °C (plasma de ratas Wistar o plasma humano). En distintos momentos (0, 30, 60, 90, 120 y 240 min) se mezcla una alícuota de 100 |il de la solución de muestra con 300 |il de acetonitrilo. Esta etapa finaliza la reacción enzimática con las enzimas plasmáticas. La solución de muestra de acetonitrilo se centrifuga a continuación durante 10 min con 5000 revoluciones por minuto. La cantidad de compuesto de prueba en el sobrenadante se determina mediante cuantificación por medio de HPLC.
Procedimiento de HPLC: Agilent 1100 con DAD (G1315B), bomba binaria (G1312A), automuestreador (G1329A), horno de columna (G1316A), termostato (G1330B); columna: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 |im; temperatura de columna: 45 °C; velocidad de flujo: 1,5 ml/min; detección UV: 230 nm; volumen de inyección: 20 |il; eluyente A: 5 ml de ácido perclórico/litro de agua; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 3,0 min: 85 % de A, 15 % de B ^ 8,0 min: 50 % de A, 50 % de B ^ 16,0 min: 50 % de A, 50 % de B ^ 20,0 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 21,0 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 24,0 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 25,0 min: 98 % de A, 2 % de B. Se determina la relación de las superficies pico (F) en distintos momentos en relación con la superficie pico en el punto inicial.
c) Medición de la solubilidad de compuestos de prueba en tampón PBS con pH 6,5
Descripción del ensayo: se disolvieron 2 mg de la forma sólida de un compuesto de prueba en 40 |il de dimetilsulfóxido (c = 50 g/l). 10 |il de esta solución de muestra se añadieron a 990 |il de tampón PBS pH 6,5 (c = 500 |ig/ml) en una placa de microtitulación. Para conseguir condiciones de equilibrio se agita esta placa de microtitulación con 96 soluciones de muestra distintas durante 24 h a 25 °C. A continuación se transfieren las soluciones o suspensiones de muestra a tubos de centrifugadora. El material no disuelto se separa mediante ultracentrifugación durante 30 min con 114000 revoluciones por minuto. El compuesto de prueba disuelto en el sobrenadante se diluye con una mezcla de acetonitrilo/agua (8:2) y se determina su contenido por medio de detección por CL-EMEM.
Para la creación de una curva de calibración se añaden 10 |il de la solución madre de dimetilsulfóxido a 823 |il de dimetilsulfóxido (c = 600 |ig/ml). El contenido en compuesto de prueba se determina durante 5 etapas de concentración distintas.
Aparato de CL-EMEM: AB Sciex TRIPLE QUAD 4500, bomba Agilent 1260 (G1312B Infinity), desgasificador (G4225a Infinity), termostato (G1316C Infinity), sistema de inyección CTC Analytics PAL THC-xt.
Procedimiento de HPLC: columna: Waters OASIS HLB, 2,1 mm x 20 mm, 25 |im; temperatura columna: 30 °C; velocidad de flujo: 2,5 ml/min; volumen de inyección: 5 |il; separación de flujo: 1:20; eluyente A: 0,5 ml de ácido fórmico (al 50 % en agua)/litro de agua; eluyente B: 0,5 ml de ácido fórmico (al 50 % en agua)/litro de acetonitrilo; gradiente: 0 min: 90 % de A, 10 % de B ^ 0,5 min: 5 % de A, 95 % de B ^ 0,84 min: 5 % de A, 95 % de B ^ 0,85 min: 90 % de A, 10 % de B ^ 1,50 min: 90 % de A, 10 % de B.
Procedimiento de EM: análisis de inyección de flujo (FIA) para la optimización, monitorización de reacción múltiple (MRM) para la cuantificación; columna: tubo capilar de acero inoxidable; temperatura del capilar: 22 °C; flujo: 0,25 ml/min; volumen de inyección: 5 |il; eluyente A: 0,5 ml de ácido fórmico (al 50 % en agua)/litro de agua; eluyente B: 0,5 ml de ácido fórmico (al 50 % en agua)/litro de acetonitrilo
d) Selección de solubilidad de sustancias en medios adecuados para la administración i.v.
Realización del ensayo: por compuesto de prueba y medio se pesan en cada caso de 0,5 a 0,6 mg de manera exacta (8 pesadas). Se añade en cada caso a la muestra tanto medio que se obtenga una concentración de 500 |ig/ml. Esta solución de muestra se agita durante 24 h a TA y 1400 revoluciones por minuto.
Una pesada adicional de 0,5 a 0,6 mg se requiere para la solución de calibración de dimetilsulfóxido (pesada 9). Esta muestra se complementa con DMSO hasta obtener una concentración de 600 |ig/ml. A partir de esta solución madre se preparan 2 soluciones de calibración. En un recipiente de HPLC de 2 ml se disponen 1000 |il de dimetilsulfóxido y se añaden mediante pipeteado 34,4 |il de la solución madre (c = 20 |ig/ml). De esta solución (c = 20 |ig/ml) se añaden 714 |il a otro recipiente de HPLC de 2 ml, en el que se encuentran 500 |il de dimetilsulfóxido (c = 2,5 |ig/ml).
Tras la agitación de las soluciones de muestra se transfieren en cada caso 220 |il del sobrenadante a un tubo de centrifugadora y se centrifugan con 42000 revoluciones por minuto durante 30 min.
Entonces se retiran 160 |il del sobrenadante, se diluyen con dimetilsulfóxido en la relación 1:5 y 1:100 y se transfieren a vasos de HPLC de 2 ml. Las dos soluciones de calibración y las soluciones de muestra diluidas se analizan por HPLC. Se cuantifica por medio de las correspondientes superficies pico.
Disolvente: agua destilada, ácido perclórico (Fluka; 77227), acetonitrilo (Leitungsware), DMSO (Merck; 8,02912,2500)
Medios
Cloruro de sodio al 0,9 % en agua
PEG400/etanol/agua 30/10/60
Solutol/etanol/agua 20/10/70
Tampón citrato pH 4
Tampón PBS pH 7
Tampón Tris pH 8,5
HP-p-ciclodextrina al 10 % en agua
D-Manitol al 5 % en agua
Aparatos: Agilent 1100 o aparato comparable con detección UV, longitud de onda variable (por ejemplo matriz de diodos), baño de ultrasonido, Vibromix de Janke & Kunkel, Thermomixer de Eppendorf
Procedimiento de HPLC: columna: Nucleodur 100 C18 ec, 50 mm x 2 mm, 3 |im; temperatura de columna: 30 °C; velocidad de flujo: 0,75 ml/min; detección UV: 210 nm; volumen de inyección: 60 |il; eluyente A: 5 ml de ácido perclórico/litro de agua; eluyente B: acetonitrilo; gradiente: 0,0 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 0,5 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 4,55 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 6,55 min: 10 % de A, 90 % de B ^ 6,75 min: 98 % de A, 2 % de B ^ 7,55 min: 98 % de A, 2 % de B.
e) Ensayo de hepatocitos para la determinación de la estabilidad metabólica
Las estabilidades metabólicas de nuevos compuestos de ensayo frente a hepatocitos se determinan incubándose los compuestos con bajas concentraciones (preferentemente por debajo de luM) y con bajos recuentos celulares (preferentemente con 1*10A6 células/ml), para garantizar condiciones cinéticas a ser posible lineales en el ensayo. Se extraen siete muestras de la solución de incubación en un intervalo temporal determinado para el análisis por CL-EM, para determinar el tiempo de vida media (la degradación) del compuesto. A partir de este tiempo de semivida se calculan distintos “parámetros de aclaramiento (CL)” (véase a continuación) y valores “Fmáx” (véase a continuación). Los valores de CL y Fmáx representan una medida de la “fase 1” y “fase 2” del metabolismo del compuesto en los hepatocitos. Para mantener baja en lo posible la influencia del disolvente orgánico sobre las enzimas en las mezclas de incubación, se limitan sus concentraciones en general hasta el 1 % (acetonitrilo) o bien hasta el 0,1 % (DMSO). Para todas las especies y razas se cuenta con un recuento de hepatocitos en el hígado de 1,1*10A8 células/ g de hígado. Los parámetros de CL cuyo calculo se basa en tiempos de vida media, que superan el tiempo de incubación (habitualmente 90 minutos), pueden considerarse solo como valor indicativo aproximado.
Los parámetros calculados y su significado son:
(QH = flujo sanguíneo de hígado específico de la especie)
Fmáx-bien agitado [%]: Biodisponibilidad posible máxima tras administración oral
Cálculo: (1 -CLsangre bien agitado/QH)*100
CLsangre bien agitado aclaramiento de sangre calculado (modelo bien agitado)
[l/(h*kg)]:
Cálculo: (QH* CL intrínseco ) / (QH+ CL' intrínseco)
CL' intrínseco capacidad máxima del hígado (de los hepatocitos) de metabolizar un compuesto, con la [ml/(min*kg)]: suposición de que el flujo sanguíneo del hígado no es limitativo de la velocidad Cálculo: CL'intrínseco,aparente * número de hepatocitos específico de la especie [1,1*10A8/g de hígado]* peso del hígado específico de la especie [g/kg]
CL' intrínseco , aparente “normaliza” la constante de eliminación, dividiéndose ésta entre el número de [ml/(min*mg)]: hepatocitos usado x (x*10A6/ml)
Cálculo: kel[1/min] / (número de células [x*10A6] / volumen de incubación [ml])
f) Farmacocinética i.v. en ratas Wistar
En el día antes de la administración de sustancia se implantan a los animales de experimentación (ratas Wistar macho, peso corporal de 200-250 g), con narcosis con Isofluran®, un catéter para la obtención de sangre en la vena yugular.
En el día del ensayo se administra una dosis definida de la sustancia de prueba como solución con una jeringuilla de vidrio Hamilton® en la vena de la cola (administración en bolo, duración de administración <10 s). En el intervalo de 24 h tras la administración de sustancia se extraen muestras de sangre secuencialmente (8-12 momentos) a través del catéter. Para la obtención del plasma se centrifugan las muestras en tubos heparinizados. Por momento se mezcla un volumen de plasma definido para la precipitación de proteínas con acetonitrilo. Tras la centrifugación se determinan cuantitativamente la sustancia de prueba y productos de escisión de la sustancia de prueba eventualmente conocidos en el sobrenadante con un procedimiento de CL/EM-EM adecuado.
El cálculo de parámetros farmacocinéticos de la sustancia de prueba o bien del compuesto de principio activo (A) liberado de ésta tal como AUC, Cmáx, T1/2 (tiempo de vida media) y CL (aclaramiento) se realiza a partir de las concentraciones de plasma medidas.
D) Ejemplos de realización de composiciones farmacéuticas
Las sustancias de acuerdo con la invención se pueden convertir en preparaciones farmacéuticas de la siguiente forma:
Comprimido:
Composición:
100 mg del compuesto del ejemplo 1, 50 mg de lactosa (monohidrato), 50 mg de almidón de maíz, 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (empresa BASF, Alemania) y 2 mg de estearato de magnesio.
Peso del comprimido 212 mg. Diámetro 8 mm, radio de curvatura 12 mm.
Preparación:
La mezcla del compuesto del ejemplo 1, lactosa y almidón se granula con una solución al 5 % (m/m) de la PVP en agua. Después del secado, el granulado se mezcla con el estearato de magnesio durante 5 min. Esta mezcla se comprime con una prensa de preparación de comprimidos convencional (véase anteriormente el formato del comprimido).
Suspensión oral:
Composición:
1000 mg del compuesto del ejemplo 1, 1000 mg de etanol (96 %), 400 mg de Rhodigel (goma xantana) (empresa FMC, EE.UU.) y 99 g de agua.
Una monodosis de 100 mg del compuesto de acuerdo con la invención corresponde a 10 ml de suspensión oral. Preparación:
El Rhodigel se suspende en etanol, se añade el compuesto del ejemplo 1 a la suspensión. El agua se adiciona mientras se agita. La mezcla se agita durante aprox. 6 horas hasta que se completa el hinchamiento del Rhodigel.
Solución i.v.:
El compuesto de acuerdo con la invención se disuelve en una concentración por debajo de la solubilidad de saturación en un disolvente fisiológicamente compatible (por ejemplo solución de cloruro de sodio isotónica, solución de glucosa al 5 % y/o polietilenglicol 400 / agua al 30 % m/m). La solución se esteriliza por filtración y se envasa en recipientes para inyección estériles y libres de pirógenos.
Solución o suspensión para la administración tópica en el ojo (gotas oculares):
Una preparación farmacéutica estéril para la administración tópica en el ojo puede prepararse mediante reconstitución de un liofilizado del compuesto de acuerdo con la invención en solución estéril de cloruro de sodio. Como conservante para una solución o suspensión de este tipo es adecuado, por ejemplo, cloruro de benzalconio, tiomersal o nitrato de fenilmercurio en un intervalo de concentración del 0,001 al 1 por ciento en peso.
Solución o suspensión para la administración tópica en el ojo (gotas oculares):
Una preparación farmacéutica estéril para la administración tópica en el ojo puede prepararse mediante reconstitución de un liofilizado del compuesto de acuerdo con la invención en solución estéril de cloruro de sodio. Como conservante para una solución o suspensión de este tipo es adecuado, por ejemplo, cloruro de benzalconio, tiomersal o nitrato de fenilmercurio en un intervalo de concentración del 0,001 al 1 por ciento en peso.

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula
Figure imgf000061_0001
en la que
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000061_0002
siendo * el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa bromo, cloro, flúor, metilo, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, difluorometoxi o trifluorometoxi, R7 representa bromo, cloro, flúor, ciano, nitro, hidroxi, metilo, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, etinilo, 3,3,3-trifluoroprop-1-in-1-ilo o ciclopropilo,
R8 representa hidrógeno, cloro o flúor,
R2 representa hidrógeno, bromo, cloro, flúor, ciano, alquilo Ci-C3, difluorometilo, trifluorometilo, 1,1 -difluoroetilo, 2.2- difluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo, alcoxi C1-C3, difluorometoxi, trifluorometoxi, 1,1-difluoroetoxi, 2,2-difluoroetoxi, 2.2.2- trifluoroetoxi, metilcarbonilo o ciclopropilo,
R3 representa hidrógeno, alquilo C1-C5, alcoxi C1-C4, difluorometilo, trifluorometilo, 1,1-difluoroetilo, 1,1,2,2,2-pentadeuteroetilo, 3,3,3-trifluoro-2-hidroxiprop-1-ilo, 3,3,3-trifluoro-2-metoxiprop-1-ilo, 3,3,3-trifluoro-2-etoxiprop-1-ilo, prop-2-in-1-ilo, ciclopropiloxi o ciclobutiloxi,
pudiendo estar el alquilo sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por flúor, ciano, hidroxi, difluorometilo, trifluorometilo, metoxi, etoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, cicloalquilo C3-C6, oxoheterociclilo de 4 a 6 miembros, 1,4-dioxanilo, oxazolilo, fenilo y piridilo,
en donde el cicloalquilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por flúor, hidroxi, metilo, etilo, metoxi, etoxi, difluorometilo, trifluorometilo, difluorometoxi y trifluorometoxi,
y
en donde el oxo-heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por oxo, flúor, metilo, etilo, difluorometilo y trifluorometilo,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmulas
Figure imgf000061_0003
siendo # el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, -N+(CH3)3, un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros o -NH(C=O)R14, en donde el heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por alquilo C1-C3,
y
en donde
R14 representa alquilo C1-C4, un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros o ciclopropilo, en donde el alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino, dimetilamino y un heterociclilo que contiene nitrógeno de 5 o 6 miembros,
en donde el heterociclilo por su parte puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por alquilo Ci-C3,
y
en donde el heterociclilo puede estar sustituido con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por alquilo C1-C3,
y
en donde el ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino y dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno o flúor,
o una de sus sales, de sus solvatos o de los solvatos de sus sales.
2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000062_0001
siendo * el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa cloro,
R7 representa ciano, difluorometilo o difluorometoxi,
R8 representa hidrógeno o flúor,
R2 representa cloro, ciano, etoxi, metoxi o difluorometoxi,
R3 representa metilo, etilo, n-propilo, 2-metil-prop-1-ilo o n-butilo,
pudiendo estar el metilo sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-2H-piranilo, oxazolilo y piridilo,
en donde el ciclobutilo y el ciclohexilo pueden estar sustituidos con 1 a 2 sustituyentes seleccionados independientemente entre sí del grupo que está constituido por hidroxi y metoxi,
y
pudiendo estar el etilo, el n-propilo y el n-butilo sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por metoxi y trifluorometoxi,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmulas
Figure imgf000062_0002
siendo # el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, -N+(CH3)3, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14, en donde pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo, y
en donde
R14 representa alquilo C1-C4, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o ciclopropilo,
en donde el alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino, dimetilamino, pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo, en donde pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo por su parte pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en donde pirrolidinilo, piperidinilo y piperazinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo, y
en donde ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, metilamino y dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno,
o una de sus sales, de sus solvatos o de los solvatos de sus sales.
3. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque
R1 representa un grupo de fórmula
Figure imgf000063_0001
en siendo * el sitio de enlace al anillo de oxopiridina,
R6 representa cloro,
R7 representa ciano,
R8 representa hidrógeno,
R2 representa metoxi,
R3 representa metilo o etilo,
pudiendo estar el metilo sustituido con un sustituyente tetrahidro-2H-piranilo,
y
pudiendo estar el etilo sustituido con un sustituyente metoxi,
R4 representa hidrógeno,
R5 representa un grupo de fórmulas
Figure imgf000063_0002
siendo # el sitio de enlace al átomo de oxígeno,
R10 representa hidrógeno o metilo,
R11 representa hidrógeno o metilo,
R12 representa amino, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo o representa -NH(C=O)R14,
en donde piperazinilo puede estar sustituido con un sustituyente metilo,
y
en donde
R14 representa alquilo C1-C4, pirrolidinilo, piperidinilo o ciclopropilo,
en donde alquilo puede estar sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo que está constituido por amino, dimetilamino y pirrolidinilo,
y
en donde pirrolidinilo y piperidinilo pueden estar sustituidos con un sustituyente metilo,
y
en donde ciclopropilo puede estar sustituido con un sustituyente dimetilamino,
R13 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R15 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R16 representa hidrógeno o metilo,
R17 representa hidrógeno o hidroxicarbonilo,
R18 representa hidrógeno o metilo,
R9 representa hidrógeno,
o una de sus sales, de sus solvatos o de los solvatos de sus sales.
4. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) o una de sus sales, de sus solvatos o de los solvatos de sus sales según la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto de fórmula
Figure imgf000064_0001
en la que
R1, R2, R3, R4 y R9 tienen el significado indicado en la reivindicación 1,
se hace reaccionar en la primera etapa con un compuesto de fórmula
HO-R5a (III),
en la que
R5a tiene el significado de R5 indicado en la reivindicación 1, pudiendo estar protegidos los grupos funcionales en R5 con grupos protectores,
en presencia de un reactivo de deshidratación,
y se hace reaccionar en una segunda etapa mediante separación de los grupos protectores para dar un compuesto de fórmula
Figure imgf000064_0002
en la que
R1, R2, R3, R4, R5y R9 tienen el significado indicado en la reivindicación 1.
5. Compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
6. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades.
7. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas.
8. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades oftalmológicas.
9. Uso de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un fármaco para el tratamiento y/o la profilaxis de angioedema hereditario o enfermedades inflamatorias del intestino, tal como enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.
10. Fármaco que contiene un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3 en combinación con un coadyuvante inerte, no tóxico y farmacéuticamente adecuado.123
11. Fármaco según la reivindicación 10 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades trombóticas o bien tromboembólicas.
12. Fármaco según la reivindicación 10 para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades oftalmológicas.
13. Fármaco según la reivindicación 10 para el tratamiento y/o la profilaxis de angioedema hereditario o enfermedades inflamatorias del intestino, tal como enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.
ES15777624T 2014-09-24 2015-09-22 Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica Active ES2716417T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14186081 2014-09-24
PCT/EP2015/071650 WO2016046159A1 (de) 2014-09-24 2015-09-22 Substituierte oxopyridin-derivate

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2716417T3 true ES2716417T3 (es) 2019-06-12

Family

ID=51589180

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15777624T Active ES2716417T3 (es) 2014-09-24 2015-09-22 Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10414731B2 (es)
EP (1) EP3197880B1 (es)
ES (1) ES2716417T3 (es)
WO (1) WO2016046159A1 (es)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10077265B2 (en) * 2014-09-24 2018-09-18 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted oxopyridine derivatives
CA2979937A1 (en) * 2015-03-19 2016-09-22 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Oxo-pyridine-derivatives as factor xia inhibitors for the treatment of thrombosis
JO3703B1 (ar) 2015-07-09 2021-01-31 Bayer Pharma AG مشتقات أوكسوبيريدين مستبدلة
HUE057289T2 (hu) 2016-08-31 2022-05-28 Jiangsu Hengrui Medicine Co Oxopikolinamid-származék, annak elõállítási módszere és gyógyszerészeti felhasználása
PE20210165A1 (es) 2018-04-10 2021-01-26 Bayer Pharma AG Un derivado de oxopiridina sustituido
CR20210342A (es) 2018-12-21 2021-08-09 Bayer Ag Derivados de oxopiridina sustituidos
US20220144848A1 (en) 2018-12-21 2022-05-12 Bayer Aktiengesellschaft Substituted oxopyridine derivatives

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1526131A1 (en) 2003-10-22 2005-04-27 Graffinity Pharmaceuticals Aktiengesellschaft Aminoalkyl-pyrazinones and -pyridones as thrombin inhibitors
GB0420722D0 (en) 2004-09-17 2004-10-20 Addex Pharmaceuticals Sa Novel allosteric modulators
US8163779B2 (en) 2006-12-20 2012-04-24 Takeda San Diego, Inc. Glucokinase activators
ES2579832T3 (es) * 2011-10-14 2016-08-17 Bristol-Myers Squibb Company Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituida como inhibidores del factor XIa
WO2014160592A2 (en) 2013-03-27 2014-10-02 Merck Sharp & Dohme Corp. FACTOR XIa INHIBITORS
TWI633089B (zh) 2013-03-28 2018-08-21 拜耳製藥股份有限公司 經取代的酮基吡啶衍生物
CA2918814C (en) 2013-07-23 2021-10-12 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted oxopyridine derivatives and use thereof as factor xia/plasma
CA2928867A1 (en) 2013-10-30 2015-05-07 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted oxopyridine derivatives
CN105829298B (zh) 2014-02-14 2019-02-01 四川海思科制药有限公司 一种吡啶酮或嘧啶酮衍生物、及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3197880B1 (de) 2018-10-24
US10414731B2 (en) 2019-09-17
EP3197880A1 (de) 2017-08-02
US20180346424A1 (en) 2018-12-06
WO2016046159A1 (de) 2016-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2659045T3 (es) Derivados de oxopiridina sustituidos
ES2633248T3 (es) Derivados de oxopiridina sustituidos y su uso como factor XIa e inhibidores de calicreína plasmática
ES2716417T3 (es) Derivados de oxopiridina sustituidos con acción antiinflamatoria y antitrombótica
ES2712886T3 (es) Derivados de piridobenzazepina y piridobenzazocina que inhiben el factor XIa
ES2713624T3 (es) Derivados de oxopiridina sustituidos
ES2694189T3 (es) Derivados de oxopiridina sustituidos
US10167280B2 (en) Substituted oxopyridine derivatives
US10077265B2 (en) Substituted oxopyridine derivatives
US20180250280A1 (en) Substituted oxopyridine derivatives
JP2018509426A (ja) 血栓症の治療のための因子ＸＩａ阻害剤としてのオキソピリジン誘導体
HK1237777A1 (en) Substituted oxopyridine derivatives
HK1227852A1 (en) Substituted oxopyridine derivatives