ES2736324T3 - Medicamento que comprende un anticuerpo anti-fosfolipasa D4 - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo que se une a la proteína fosfolipasa D4 (PLD4) para el uso como un medicamento de inhibición de células B activadas en la prevención o el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria provocada por células B activadas, o en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.

Description

DESCRIPCIÓN

Medicamento que comprende un anticuerpo anti-fosfolipasa D4

Campo Técnico

La presente invención se refiere al uso de un anticuerpo que se une a fosfolipasa D4. Más adelante en la presente memoria, "fosfolipasa D" se puede abreviar como PLD, y "fosfolipasa D4" y similares se pueden abreviar como PLD4 y similares.

Técnica Antecedente

PLD es una enzima que cataliza una reacción que produce ácido fosfatídico y colina hidrolizando fosfatidil colina, y provoca diversas señalizaciones intracelulares. Se ha creído que el ácido fosfatídico producido funciona como una molécula de señalización lipídica.

PLD1 y PLD2 se conocen como dos tipos de PLD de mamífero, que se conocían previamente, y contienen un dominio de homología Phox de unión a fosfatidil inosítido (dominio PX) y un dominio de homología de pleckstrina (dominio PH) de unión a fosfatidil inosítido en la región N-terminal de las mismas. Ambos dominios están implicados en la localización de PLD en las membranas.

PLD1 y PLD2 contienen además dos secuencias His-x-Lys-x-x-x-x-Asp (motivos HKD). Los motivos HKD son dominios esenciales para la actividad de PLD.

Se ha sugerido que el ácido fosfatídico producido por PLD1 y PLD2 está implicado en la reconstrucción del citoesqueleto, la exocitosis, fagocitosis, canceración, adhesión celular, quimiotaxia y similares, y actúa principalmente sobre el sistema nervioso, el sistema inmunitario y similares.

Hu-K4 humano y SAM9 de ratón, que ahora se denominan oficialmente PLD3, carecen de los dominios PX y PH, y no muestran actividad PLD a pesar de tener dos motivos HKD. Aunque hay otros tres miembros de la familia PLD, p LD4, PLD5 y PLD6, se sabe poco sobre estas PLDs distintas de las clásicas.

Como resultado de buscar un patrón de expresión génica en el desarrollo del cerebelo en ratones en la Base de Datos de Transcriptomas del Desarrollo del Cerebelo (CDT-DB), se identificó un producto de transcripción, PLD4, controlado durante el desarrollo (véase la bibliografía distinta de patentes 1). No se han informado las características básicas de PLD4. Es necesario determinar la actividad enzimática de PLD4 con o sin glicosilación.

PLD4 tiene una secuencia de 506 aminoácidos mostrada en SEQ ID N°: 1 y está codificada por una secuencia de bases de cADN de SEQ ID N°: 44 (bibliografía distinta de patentes 1 y 2). La proteína PLD4 tiene dos regiones PDE provisionales (motivos de fosfodiesterasa) constituidas por dos motivos HKD (secuencia de aminoácidos His-x-Lys-xx-x-x-Asp, x representa otros aminoácidos) conservadas en la región C-terminal, y un supuesto sitio de fosforilación (Thr 472). La estructura de la proteína PLD4 se estima como una proteína transmembrana de tipo II. Además, PLD4 no tiene dominios PX y PH, los cuales están presentes en PLD1 y PLD2 en una familia de PLD clásica, en la región N-terminal.

Por otra parte, PLD4 pertenece a la familia PLD debido a tener dos motivos HKD, pero carece del dominio PX y del dominio Ph , y tiene un supuesto dominio transmembrana en su lugar (bibliografía distinta de patentes 3).

Se ha hallado una expresión de mARN de PLD4 a niveles bajos a medios en pequeños agrupamientos celulares preferentemente localizados alrededor de regiones de materia blanca, que incluyen la materia blanca del cuerpo calloso y del cerebelo de ratones de 1 semana de edad. Estas células que expresan mARN de PLD4 se han identificado como microglía positiva para Iba1 (bibliografía distinta de patentes 3). Sin embargo, las células positivas para PLD4 en cerebelo de ratón están dispersas en ratones de 10 días de edad. Esto sugirió que la expresión de PLD4 se restringe temporalmente durante el desarrollo posnatal temprano en el cerebelo de ratón.

La formación de mielina en el ratón comienza en la materia blanca del cuerpo calloso y del cerebelo una semana después del nacimiento. En este momento, PLD4 se expresa a un nivel elevado en la microglía ameboide (un estado activado) que existe en la materia blanca, y por tanto también se ha creído que existe la posibilidad de que las células que expresan PLD4 en la materia blanca en este momento estén implicadas en la formación de mielina. En particular, también se ha revelado que PLD4 se acumula en las vacuolas digestivas, y se ha sugerido que existe la posibilidad de que PLD4 esté implicada en la fagocitosis. En la microglía ameboide que está en un estado activado, se secretan diversas citocinas y factores de crecimiento y se activa simultáneamente la fagocitosis. Se ha creído que en la materia blanca cerebral de ratón, en un periodo del desarrollo, los oligodendrocitos en exceso (células gliales del sistema nervioso central, que forman mielina enrollándose alrededor de los axones) experimentan apoptosis. Existe la posibilidad de que los oligodendrocitos se descompongan y se retiren en la microglía ameboide para secretar moléculas de señalización y ajustar de ese modo un medio de formación de mielina en la materia blanca. Se ha sugerido que PLD4 está implicada en estos procesos, que incluyen la formación de mielina.

La expresión del mARN de PLD4 de ratón también se observa en tejidos no neuronales, y principalmente se distribuye en el bazo. Se detecta una expresión intensa de la proteína PLD4 alrededor de la zona marginal de la pulpa roja esplénica, y la proteína PLD4 esplénica recogida de las fracciones de membranas subcelulares está muy N-glicosilada. Cuando se expresó PLD4 en un sistema de células heterólogas, PLD4 se localizó en el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi. La PLD4 expresada de manera heteróloga no mostró una actividad enzimática de PLD (bibliografía distinta de patentes 3).

A partir del patrón de expresión de PLD4, que está limitado de manera espaciotemporal, se ha sugerido que PLD4 puede desempeñar un papel en las funciones comunes de la microglía y las células de la zona marginal esplénica durante el desarrollo cerebral postnatal temprano.

Por otra parte, los presentes inventores han descubierto que PLD4 se expresa a nivel elevado específicamente en pDC (células dendríticas plasmacitoides) en un periodo de reposo (pDC en reposo) (bibliografía de patentes 1). Los presentes inventores han informado además que se puede utilizar un anticuerpo específico de PLD4 para la inhibición de la actividad de pDC.

Además, se ha informado que PLD4 es uno de los nuevos genes de susceptibilidad a esclerosis sistémica en japoneses (bibliografía distinta de patentes 4). Como resultado del mismo análisis en Europa, sin embargo, no se ha descubierto una correlación significativa con PLD4, y no se han obtenido resultados coherentes que muestren una relación entre PLD4 y las enfermedades autoinmunitarias, tales como la esclerosis sistémica.

Un mecanismo inmunitario se clasifica en líneas generales en dos grupos. Uno es la "inmunidad natural (inmunidad innata)" que detecta sustancias exógenas tales como patógenos y realiza un ataque inicial, y el otro es la "inmunidad adquirida" por medio del intercambio de información que es la presentación de péptidos antigénicos y similares derivados de sustancias exógenas. Los neutrófilos, macrófagos, células dendríticas (DC), células NK (citotóxicas naturales) y similares están implicadas principalmente en la "inmunidad natural", y las células T y las células B a las que se transmite la información de los péptidos antigénicos y similares presentados por las células dendríticas anteriores y similares están implicadas en la "inmunidad adquirida". Las células T activadas mediante la transmisión de información de los péptidos antigénicos son capaces de reconocer específicamente y atacar patógenos de manera directa como la inmunidad mediada por células, y las células B activadas de la misma manera que antes son capaces de reconocer específicamente y atacar a los patógenos de manera indirecta produciendo anticuerpos (inmunidad humoral).

En la "inmunidad natural", los patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs) que existen universalmente en los patógenos (LPS, ADN CpG, lipoproteínas, ARN, etc.) se reconocen por medio de receptores de tipo Toll (TLR), y se estimula la secreción de citocinas inflamatorias por medio de NF-kB, o se estimula la secreción de interferón (IFN) por medio de IRF (factor regulador de interferón). Los TLR se clasifican aproximadamente en dos grupos por los sitios de localización subcelular: un grupo expresado en las superficies de la célula y un grupo expresado en los endosomas y el retículo endoplásmico (RE). En pDC, IRF7 se activa por medio de TLR7 y TLR9 localizados en los endosomas y el retículo endoplásmico para inducir la producción de IFN-a. Se ha sugerido que la razón por la que estos TLRs no se expresan en las superficies de las células, sino dentro de las células, es disminuir el riesgo de inicio de enfermedades autoinmunitarias. TLR7 y TLR9 reconocen ARN monocatenario y ADN, respectivamente, como ligando. No solamente las bacterias patógenas exógenas, sino también los hospedadores, albergan estos ácidos nucleicos, y por tanto se ha sugerido que los receptores, que reconocen los ácidos nucleicos y activan las células inmunitarias, inducen siempre las enfermedades autoinmunitarias.

Por otra parte, las células B (linfocitos B) que muestran un papel importante en la "inmunidad adquirida" son linfocitos que expresan receptores de inmunoglobulina Ig en su superficie. Las células B se producen a partir de células madre hematopoyéticas de la médula ósea, y se diferencian en células pre-B y células B inmaduras, y después maduran hasta células B indiferenciadas (células B maduras, indiferenciadas). Las células B indiferenciadas se activan no solamente por la estimulación por medio de las células T anteriores, sino también con la estimulación directa con antígenos, y además se transforman en células productoras de anticuerpos mediante diferenciación y proliferación para producir y secretar anticuerpos tales como IgM, IgD, IgA, IgE, IgG (que incluyen subclases tales como IgG1, IgG2, IgG2b, IgG3 y similares). Se ha sabido que además de los receptores de células B (BCR) que reconocen antígenos exógenos específicos, los anteriores TLRs se expresan en las células B. Se ha sabido previamente, por ejemplo, que LPS, que se sabe que provoca la proliferación y producción de anticuerpos de las células B, es un ligando de t LR4 y los TLR7 y TLR9 anteriores también se expresan en las células B. Se ha sugerido que tales células B tienen la posibilidad de inducir no solamente las enfermedades autoinmunitarias anteriores, sino también enfermedades alérgicas debido a la reacción excesiva de la capacidad de producción de anticuerpos de las mismas.

IgG, la inmunoglobulina G, es un isotipo de anticuerpo que consiste en cuatro cadenas peptídicas, dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas. La IgG se produce en las células B y desempeña un papel crítico para la inmunidad adaptativa. Las células B indiferenciadas que no producen IgG se diferencian hasta plasmablastos, y finalmente hasta células plasmáticas. Los plasmablastos y las células plasmáticas pueden producir una gran cantidad de anticuerpos. De manera convencional, se ha demostrado que las células dendríticas mieloides (DCs) desencadenan el crecimiento y la diferenciación de las células B estimulándolas con IL-12 e IL-6 y/o moléculas de membrana, tales como BAFF/APRIL (bibliografía distinta de patentes 5, 6 y 7). Además, las DCs plasmacitoides (pDCs) inducen la maduración y diferenciación de las células B indiferenciadas hasta plasmablastos secretores de anticuerpos y células plasmáticas productoras de IFN-a e IL-6 (bibliografía distinta de patentes 8). La región variable de IgG captura diversos patógenos tales como virus, bacterias, y hongos, que dan como resultado la protección del cuerpo de tales infecciones.

LES se considera una enfermedad autoinmunitaria clásica mediada por complejos inmunitarios. Los complejos inmunitarios (CIs) se forman en la circulación o in situ como resultado de auto-anticuerpos producidos contra ácidos nucleicos y sus proteínas asociadas, tales como dsADN, ribonucleoproteína, e histona. Tales CIs provocan inflamación con los síntomas clínicos característicos de la enfermedad, tales como nefritis, artritis, erupciones cutáneas, y vasculitis. La sangre de un paciente de LES se caracteriza por una reducción de células B indiferenciadas y células B de memoria incrementadas, plasmablastos y células plasmáticas (bibliografía distinta de patentes 9, 10 y 11). Por lo tanto, la inhibición de la diferenciación hasta células plasmáticas y de la producción de anticuerpos por medio de la manipulación de plasmablastos secretores de anticuerpos auto-reactivos daría como resultado una estrategia prometedora para curar las enfermedades autoinmunitarias.

En las PBMCs hay diversos subgrupos de células B, tales como células B indiferenciadas, células B de memoria, y plasmablastos. La mayoría del subgrupo de células B de las PBMCs son células B indiferenciadas. Las células B indiferenciadas son las que no se han expuesto a un antígeno exógeno. Las células B de memoria son las que se forman por una infección primaria, y son críticas en la respuesta inmunitaria mediada por anticuerpos mediante la diferenciación hasta plasmablastos. Los plasmablastos son los que secretan una gran cantidad de anticuerpos, y están marcados mediante CD19+CD27+IgD-CD38+.

Una vez expuestas a un antígeno exógeno, las células B indiferenciadas se convierten en células B activadas. Las células B activadas se diferencian además hasta células B de memoria y/o también plasmablastos, que secretan anticuerpos. Este cambio se denomina "maduración".

La maduración de las células B se da en múltiples fases. La fase inicial, independiente de antígenos, induce células B maduras que se pueden unir a un único antígeno. Esta etapa de maduración ocurre en la médula ósea y el bazo en un organismo vivo. La fase dependiente del antígeno de la maduración de células B ocurre tras la activación de la célula B mediante la unión al antígeno y la co-estimulación. Estas señales estimulan la maduración de las células B hasta células B de memoria o plasmablastos secretores de anticuerpos. La fase dependiente de antígenos de la maduración de las células B implica la proliferación de células B activadas, la maduración por afinidad de los anticuerpos, y el cambio de clase de los anticuerpos. Esas maduraciones se dan en los centros germinales de los tejidos linfoides secundarios.

Se ha informado que, en condiciones experimentales in vitro, las pDCs inducen la maduración de las células B activadas hasta plasmablastos secretores de Ig por medio de la liberación de IFN-a e IL-6. CpG2216 activa a las pDCs para que induzcan la producción de IFN-a y a las células B para que inicien la maduración. El IFN-a de las pDCs favorece además la maduración de las células B activadas hasta plasmablastos en presencia de IL-6.

La bibliografía de patentes 2 describe nuevas proteínas y polinucleótidos, y especula sobre las actividades biológicas y los usos de las proteínas. Se describe la secuencia de aminoácidos de PLD4.

Lista de Referencias

Bibliografía de patentes

[PTL 1] Documento PCT/JP2013/052781 (publicado después de la fecha de prioridad de la presente solicitud como documento WO2013/115410, y citable bajo el artículo 54(3) EPC)

[PTL 2] Documento WO 00/11015

Bibliografía distinta de patentes

[NPL 1] Tao et al., Nat. Methods 2(8), págs. 591-598 (2005)

[NPL 2] Clark et al., Genome Res. 13(10), págs. 2265-2270 (2003)

[NPL 3] Plos ONE www.plosone.org, noviembre de 2010, volumen 5, ejemplar 11, e13932

[NPL 4] ARTHRITIS & RHEUMATISM, vol. 65, n° 2, Febrero de 2013, págs. 472-480

[NPL 5] Balazs et al., 2002, Immunity, 17, 341-352

[NPL 6] Litinskiy et al., 2002, Nat Immunol, 3, 822-829

[NPL 7] MacLennan y Vinuesa, 2002, Immunity, 17, 235-238

[NPL 8] Jego et al, 2003, Immunity, 19, 225-234

[NPL 9] Odendahl et al., 2000, JI, 165, 5970-5979

[NPL 10] Arce et al., 2001, JI, 167, 2361-2369

[NPL 11] Wei et al., 2007, JI, 178, 6624-6633

Sumario

Problema Técnico

Un problema a resolver mediante la presente invención es regular las células B activadas mediante el uso de un anticuerpo que se une a PLD4 y mejorar los síntomas de las enfermedades provocadas por ellas.

Solución al Problema

Por medio de la investigación sobre PLD4, los presentes inventores verificaron que, además de en las células pDC en un periodo de reposo que se ha informado previamente, la expresión de PLD4 también se indujo en las células B activadas. Los presentes inventores, por lo tanto, examinaron la influencia de los anticuerpos hacia PLD4 sobre las células B activadas. Se lleva a cabo un método para producir y purificar anticuerpos anti-PLD4 mediante un método de la bibliografía de patentes 1.

Es decir, la presente invención se refiere a un segundo uso que utiliza los anticuerpos anti-PLD4 descritos a continuación.

(1) Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo que se une a la proteína fosfolipasa D4 (PLD4) para el uso como un medicamento de inhibición de células B activadas en la prevención o el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria provocada por células B activadas, o en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.

(2) El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según el punto (1) anterior, que comprende

(a) una secuencia SYWMH (SEQ ID N°: 2) como CDR1, una secuencia DIYPGSDSTNYNEKFKS (SEQ ID N°: 3) como CDR2 y GGWLDAMDY (SEQ ID N°: 4) como una secuencia CDR3 en una región variable de una cadena pesada, y una secuencia RASQDISNYLN (SEQ ID N°: 5) como CDR1, una secuencia YTSRLHS (SEQ ID N°: 6) como CDR2 y una secuencia QQGNTLpW (SEQ ID N°: 7) como CDR3 en una región variable de una cadena ligera;

(b) una secuencia TYWMH (SEQ ID N°: 8) como CDR1, una secuencia AIYPGNSETSYNQKFKG (SEQ ID N°: 9) como CDR2 y GYSDFDY (SEQ ID N°: 10) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia HASQGIRSNIG (Se Q ID N°: 11) como CDR1, una secuencia HGTNLED (SEQ ID N°: 12) como CDR2 y una secuencia Vq Yv QFP (SEQ iD N°: 13) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera;

(c) una secuencia DYNLH (SEQ ID N°: 14) como CDR1, una secuencia YIYPYNGNTGYNQKFKR (SEQ ID N°: 15) como CDR2 y GGIy Dd YYDYAIDY (SEQ ID N°: 16) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia RASENIYSHIA (SEQ ID N°: 17) como CDR1, una secuencia GATNLAH (SEQ ID N°: 18) como CDR2 y una secuencia QHFWGTP (SEQ ID N°: 19) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera;

(d) una secuencia SYYLY (SEQ ID N°: 20) como CDR1, una secuencia LINPTNSDTIFNEKFKS (SEQ ID N°: 21) como CDR2 y EGGYGYGPFAY (Se Q ID N°: 22) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia Ts Sq TLVHSNGNTYLH (SEQ ID N°: 23) como CDR1, una secuencia KVSNRFS (SEQ ID N°: 24) como CDR2 y una secuencia HSTHVP (SEQ ID N°: 25) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera;

(e) una secuencia SYGMS (SEQ ID N°: 26) como CDR1, una secuencia TISSGGSYIYYPESVKG (SEQ ID N°: 27) como CDR2 y LYGg Rr GYGLDY (SEQ ID N°: 28) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia RSSKSLLHSDGITYLY (SEQ ID N°: 29) como CDR1, una secuencia QMSNLAS (SEQ ID N°: 30) como CDR2 y una secuencia AQNLEL (SEQ ID N°: 31) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera;

(f) una secuencia SHYYWT (SEQ ID N°: 32) como CDR1, una secuencia YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID N°: 33) como CDR2 y EGPlYy GNPYWYFDV (SEQ ID N°: 34) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia RASQDIDNYLN (SEQ ID N°: 35) como CDR1, una secuencia YTSRLHS (SEQ ID N°: 36) como CDR2 y una secuencia QQFNTLP (SEQ ID N°: 37) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera;

(g) una secuencia SHYYWS (SEQ ID N°: 38) como CDR1, una secuencia YISYDGSNNYNPSLKN (SEQ ID N°: 39) como CDR2 y EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID N°: 40) como una secuencia CDR3 en la región variable de la cadena pesada, y una secuencia RASQDIDNYLN (SEQ ID N°: 41) como CDR1, una secuencia YTSRLHS (SEQ ID N°: 42) como CDR2 y una secuencia QQFNTLP (SEQ ID N°: 43) como CDR3 en la región variable de la cadena ligera.

(3) El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según el punto (1) anterior, que comprende

(a) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 36 a 153 de SEQ ID: 75 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 95;

(b) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 135 de SEQ ID: 77 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 97;

(c) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 142 de SEQ ID: 79 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 99;

(d) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 142 de SEQ ID: 81 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 101;

(e) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 139 de SEQ ID: 83 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 20 a 131 de SEQ ID: 103;

(f) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 140 de SEQ ID: 85 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 131 de SEQ ID: 105;

(g) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 140 de SEQ ID: 87 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 131 de SEQ ID: 107;

(h) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 89 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 109;

(i) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 91 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 111; o

(j) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 93 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 113.

(4) Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según el punto (1) anterior, en el que el anticuerpo se produce mediante cualquiera de los hibridomas mp5B7, mp7B4, mp13D4 ymp13H11 de los n°s de depósito NITE BP-1211, NITE BP-1212, NITE BP-1213 y NITE BP-1214, o un fragmento que contiene una región de unión al antígeno del mismo como ingrediente activo. (5) El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según el punto (1) anterior, que está quimerizado o humanizado.

(6) El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según el punto (1) anterior, que comprende una cadena pesada expuesta en SEQ ID: 121 y una cadena ligera expuesta en s Eq ID: 123.

(7) Un método in vitro para detectar células B activadas, y el método incluye (a) una etapa de puesta en contacto de un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular de PLD4 o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo con las células a ensayar; y (b) una etapa de detección del anticuerpo monoclonal o del fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo que se une a las células.

(8) El uso de un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular de PLD4 o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo para detectar células B activadas in vitro.

(9) Un método in vitro para inhibir una actividad de células B activadas, y el método incluye una etapa de puesta en contacto de cualquiera de los siguientes componentes con las células B activadas:

(a) un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo que se une a PLD4 e inhibe la actividad de las células B activadas o que tiene actividad citotóxica contra las células B activadas, y

(b) una inmunoglobulina en la que están injertadas las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo monoclonal de (a), o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo, en el que la actividad de las células B activadas es la producción de anticuerpos o la maduración hasta células secretoras de anticuerpos.

(10) Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo o una inmunoglobulina para el uso como un medicamento que inhibe células B activadas en la prevención o el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria provocada por las células B activadas, o en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en el que:

(a) el anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo se une a PLD4 e inhibe la actividad de las células B activadas o tiene actividad citotóxica contra las células B activadas, y

(b) la inmunoglobulina es una inmunoglobulina en la que están injertadas las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo monoclonal de (a), o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo, en el que la actividad de las células B activadas es la producción de anticuerpos o la maduración hasta células secretoras de anticuerpos.

Las "células B activadas" pueden incluir células B que poseen la actividad de proliferación y producción de anticuerpo y de secreción no solamente mediante la estimulación directa por medio de BCR y TLR, sino también mediante la estimulación por medio de las células T.

El "fragmento que contiene una región de unión al antígeno" puede incluir los fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y similares obtenidos mediante una digestión parcial con papaína o pepsina, pero no se limita a ellos. Además, el fragmento que contiene una región de unión al antígeno también puede incluir un fragmento de inmunoglobulina que contiene una región variable en la que se injerta una CDR (región determinante de la complementariedad) de un anticuerpo monoclonal. Es bien sabido que estos fragmentos de anticuerpos se pueden usar como moléculas de anticuerpo que tienen afinidad de unión hacia los antígenos. De manera alternativa, en la medida en que se mantenga la actividad necesaria de unión al antígeno, se pueden usar anticuerpos construidos mediante recombinación genética. Los ejemplos de anticuerpos construidos mediante recombinación genética pueden incluir anticuerpos quiméricos, anticuerpos injertados con CDRs, Fv de cadena simple (scFv), diacuerpo (diacuerpos), anticuerpos lineales, y anticuerpos poliespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos y similares. Se conoce un método para obtener estos anticuerpos basado en anticuerpos monoclonales o células productoras de anticuerpos que producen los anticuerpos monoclonales.

Las "enfermedades autoinmunitarias" son enfermedades que están provocadas por ataques de las funciones inmunitarias por la identificación incorrecta de los propios tejidos corporales como sustancias exógenas. Las enfermedades autoinmunitarias específicas de órgano incluyen el síndrome de Guillain-Barre, miastenia gravis, gastritis crónica (gastritis atrófica crónica), hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria, pancreatitis autoinmunitaria, síndrome aórtico, síndrome de Goodpasture, glomerulonefritis rápidamente progresiva, anemia megaloblástica, anemia hemolítica autoinmunitaria, neutropenia autoinmunitaria, púrpura trombocitopénica idiopática, enfermedad de Basedow, tiroiditis de Hashimoto, hipotiroidismo primario, enfermedad de Addison idiopática, diabetes tipo 1, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca y similares; y las enfermedades autoinmunitarias sistémicas incluyen reumatismo articular, lupus eritematoso sistémico, síndrome de anticuerpos anti-fosfolípido, polimiositis, esclerodermia, síndrome de Sjogren, síndrome de vasculitis, síndrome linfoproliferativo autoinmunitario (ALPS) y similares, pero sin limitaciones.

Las "enfermedades alérgicas" son enfermedades provocadas por reacciones inmunitarias anormales contra sustancias exógenas, e incluyen dermatitis atópica, asma bronquial, polinosis, rinitis alérgica, urticaria, asma infantil, gastroenteritis alérgica, dermatitis de contacto, enfermedad del suero, púrpura vascular y similares, pero sin limitación.

Efectos Ventajosos de la Invención

La presente invención proporciona un método terapéutico atribuible a la inhibición de las células B activadas mediante el uso de un anticuerpo que reconoce de manera específica PLD4 y un fragmento del mismo, y un medicamento que tiene su efecto terapéutico.

Además se puede esperar que la presente invención tenga efectos preventivos y terapéuticos sobre los pacientes con enfermedades autoinmunitarias o enfermedades alérgicas mediante el uso de la actividad inhibidora de células B activadas.

Breve Descripción de los Dibujos

La fig. 1 es un diagrama de análisis FACS que muestra la tinción de células B humanas (CD19+) con anticuerpos anti-PLD4. La proteína PLD4 se indujo en células B CD19+ mediante estimulación con el ligando de TLR9, CpG2006. La inducción de PLD4 en las células B activadas (CD19+) se pudo detectar mediante un ligando de TLR9 (CpG2006). Se usaron los anticuerpos monoclonales 11G9.6 y 5B7 para detectar PLD4. Se usó IgG2b, k de ratón como control negativo.

La Fig. 2 es un diagrama de análisis FACS que muestra la tinción de PBMC humanas con un anticuerpo anti-PLD4 y un anticuerpo anti-CD19. Las células PLD4+ se incrementaron en las células B activadas (CD19+) mediante la estimulación con un ligando de TLR9. Se usó IgG1, k de ratón como control negativo.

La Fig. 3 es un diagrama de análisis FACS que muestra la tinción de PBMC humanas con anticuerpos anti-PLD4 y un anticuerpo anti-CD19 en presencia o ausencia de estimulación con un ligando de TLR9. Se pudo detectar un incremento significativo de células B estimuladas con ligando de TLR9 PLD4+ (CD19+) con anticuerpos anti-PLD4 (5B7, 13D4, 13H11 y 11G9.6). Se usó IgG2b, k de ratón como control negativo.

La Fig. 4 es un diagrama de análisis FACS que muestra la reducción de células B activadas PLD4+ mediante cada anticuerpo quimérico anti-PLD4 indicado. El co-cultivo de PBMCs con los anticuerpos quiméricos anti-PLD4 (ch3B4, ch13D4, ch13H11, ch5B7 y ch11G9.6) redujo las células B activadas PLD4+ en presencia del ligando de TLR9. En un caso en el que no se añadió anticuerpo (NoAb) y un caso en el que se usó un anticuerpo inespecífico (Ig de Control), sin embargo, no se pudo inhibir la activación de células B añadiendo CpG2006.

La Fig. 5 es un diagrama en el que se expresa el efecto supresor de la Fig. 4 en números. Un grupo de células B activadas que expresaban PLD4 y que se trataron con Ig de control se considera el 100%, y se muestran los cambios en un grupo de células B activadas que expresaban PLD4 y se trataron con cada anticuerpo quimérico anti-PLD4.

La Fig. 6 es un resultado de la citometría de flujo. Se cultivaron PBMCs con los anticuerpos hacia PLD4 quiméricos indicados en presencia de ligando de TLR9 e IL-6 humana recombinante. La población de plasmablastos (CD19+CD27+IgD-CD38+) se redujo mediante el tratamiento con ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, o ch11G9.6 en comparación con el tratamiento con Ig de control.

La Fig. 7 es un resultado de un ensayo ELISA del sobrenadante de cultivo de la Fig. 6. Se redujo la producción de IgG humana de los plasmablastos mediante el tratamiento con ch3B4, ch5B7, ch13D4, chl3H11, o ch11G9.6 en comparación con el tratamiento con Ig de control.

Descripción de las Realizaciones

Los presentes inventores descubrieron recientemente que PLD4 fue una molécula cuya expresión se induce con la activación de las células B.

Los presentes inventores han informado previamente la expresión, la localización subcelular, la estructura y la función de PLD4 humana (bibliografía de patentes 1). En la presente invención, además resultó que la expresión de PLD4 se induce no solamente en pDC, sino también en las células B activadas. Además se descubrió recientemente que los anticuerpos anti-PLD4 inhibieron las células B activadas. Tales hallazgos no solamente refuerzan la posibilidad de que los anticuerpos anti-PLD4 tengan un efecto terapéutico sobre las enfermedades autoinmunitarias por la inhibición de la actividad de pDC, que se ha informado previamente, sino también por la inhibición de la actividad de las células B.

En la superficie de las células B se expresan proteínas tales como CD19, CD20, CD22 y BAFF-R. CD19 se expresa en las células B de una etapa temprana, tales como pro-células B a células plasmáticas secretoras de anticuerpos, y funciona como receptor auxiliar que controla la activación hasta las células B maduras. CD20 se expresa en células pre-B a células B activadas, CD22 se expresa en la superficie celular de las células B maduras, y la expresión de BAFF-R se observa en la etapa de diferenciación amplia de las células B. Por lo tanto, existe la preocupación de que los anticuerpos que reconocen estas proteínas inhiban no solamente las células B activadas, sino también las células B indiferenciadas sin exposición al antígeno. Los anticuerpos anti-PLD4 de la presente invención se caracterizan, sin embargo, por inhibir las células B activadas sin influir en las células B indiferenciadas.

Los anticuerpos anti-PLD4 usados en la presente invención son los mismos que los informados previamente (bibliografía de patentes 1). Brevemente, mediante el uso como inmunógeno de una proteína de fusión PLD4-Ig recombinante que codifica una secuencia de aminoácidos que contiene un dominio extracelular de PLD4 (la secuencia de aminoácidos que corresponde a las posiciones 54 a 506 de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID N°: 1), se obtuvo un anticuerpo contra PLD4 como sigue.

Creación de anticuerpos monoclonales anti-PLD4 humana

1) Inmunización

Como inmunógeno, se usó la proteína de fusión PLD4-Ig recombinante anterior. La proteína de fusión PLD4-Ig se administró en la hipodermis dorsal de tres ratones BALB/c. Como adyuvantes, se usaron adyuvantes de Freund completos e incompletos (SIGMA). El volumen de la primera administración fue 200 pg/ratón, y el volumen de la segunda a la cuarta administración fue 50 pg/ratón.

2) Confirmación del título de anti-suero

Se recogió sangre después de la tercera y cuarta inmunización, y se determinó el título de anti-suero mediante ELISA.

La proteína de fusión PLD4-Ig se transformó en una fase sólida en una placa de microtitulación de 96 pocillos. Un antisuero se diluyó en serie en incrementos de 3 veces desde 1000 veces, y se preparó una serie de diluciones de hasta 729000 veces. A la placa revestida de antígeno se le añadieron 50 pl de cada muestra y se llevó a cabo una reacción de primer orden. Después de lavar, se llevó a cabo una reacción de segundo orden con el anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con HRp (k, A), y el desarrollo de color se detectó con OPD (ortofenilen diamina) (490 nm).

3) Fusión celular

Se extrajeron células esplénicas de ratones en los que se observó un incremento del título de anti-suero. Se fusionaron las células esplénicas extraídas y células de mieloma de ratón (P3U1) mediante el método de PEG, y las células esplénicas fusionadas se cultivaron selectivamente en un medio HAT.

Cribado mediante FACS de hibridomas mediante el uso de células CAL-1

Se analizó un anticuerpo producido a partir de cada clon de células esplénicas fusionadas obtenido mediante cultivo selectivo en medio HAT mediante FACS. Por lo tanto, 3B4, 5B7, 7B4, 8C11, 10C3, 11D10, 13D4, 13H11, 14C1 y 11G9.6 de los pocillos de sobrenadantes de los cultivos de hibridomas reaccionaron con PLD4 humana.

En cada anticuerpo monoclonal producido a partir de los hibridomas anteriores, se determinaron las regiones CDR (CDRs; CDR1, CDR2 y CDR3) y las regiones FW (regiones estructurales) de una región variable y una secuencia de la región variable según un método analítico del sistema de numeración de Kabat (Kabat et al, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, publicación n° 91-3242, 5a ed., United States Department of Health and Human Services, Bethesda, MD).

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 74, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 75. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón son SEQ ID N°: 2, SEQ ID N°: 3 y SEQ ID N°: 4, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 76, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 77. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón son SEQ ID N°: 8, SEQ ID N°: 9 y SEQ ID N°: 10, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 78, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 79. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón son SEQ ID N°: 14, SEQ ID N°: 15 y SEQ ID N°: 16, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 80, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 81. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón son SEQ ID N°: 14, SEQ ID N°: 15 y SEQ ID N°: 16, respectivamente. El anticuerpo 7B4 es un anticuerpo que tiene las mismas secuencias de CDR en las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras que el anticuerpo 5B7.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 82, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 83. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón son SEQ ID N°: 20, SEQ ID N°: 21 y SEQ ID N°: 22, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 84, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 85. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón son SEQ ID N°: 26, SEQ ID N°: 27 y SEQ ID N°: 28, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 86, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 87. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón son SEQ ID N°: 26, SEQ ID N°: 27 y SEQ ID N°: 28, respectivamente. El anticuerpo 11D10 es un anticuerpo que tiene las mismas secuencias de CDR en las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras que el anticuerpo 10C3. Sus isotipos de la cadena pesada, sin embargo, son diferentes (10C3 tiene la región constante de IgG2a de ratón y 11D10 tiene la región constante de IgG2b de ratón).

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 88, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 89. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón son SEQ ID N°: 32, SEQ ID N°: 33 y SEQ ID N°: 34, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 90, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 91. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón son SEQ ID N°: 38, SEQ ID N°: 39 y SEQ ID N°: 40, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón obtenido es SEQ ID N°: 92, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 93. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón son SEQ ID N°: 38, SEQ ID N°: 39 y SEQ ID N°: 40, respectivamente. El anticuerpo 14C1 es un anticuerpo que tiene las mismas secuencias de CDR en las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras que el anticuerpo 13H11. Sus isotipos de la cadena pesada, sin embargo, son diferentes (13H11 tiene la región constante de IgG2b de ratón y 14C1 tiene la región constante de IgG1 de ratón).

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón es SEQ ID N°: 94, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 95. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón son SEQ ID N°: 5, SEQ ID N°: 6 y SEQ ID N°: 7, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón es SEQ ID N°: 96, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 97. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón son SEQ ID N°: 11, SEQ ID N°: l2 y SEQ ID N°: 13, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón es SEQ ID N°: 98, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 99. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón son SEQ ID N°: 17, SEQ ID N°: l8 y SEQ ID N°: 19, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón es SEQ ID N°: 100, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 101. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón son SEQ ID N°: 17, SEQ ID N°: 18 y SEQ ID N°: 19, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón es SEQ ID N°: 102, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 103. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón son SEQ ID N°: 23, SEQ ID N°: 24 y SEQ ID N°: 25, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón es SEQ ID N°: 104, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 105. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón son SEQ ID N°: 29, SEQ ID N°: 30 y SEQ ID N°: 31, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón es SEQ ID N°: 106, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 107. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón son SEQ ID N°: 29, SEQ ID N°: 30 y SEQ ID N°: 31, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón es SEQ ID N°: 108, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 109. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón son SEQ ID N°: 35, SEQ ID N°: 36 y SEQ ID N°: 37, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón es SEQ ID N°: 100, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 111. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón son SEQ ID N°: 41, SEQ ID N°: 42 y SEQ ID N°: 43, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón es SEQ ID N°: 112, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 113. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón son SEQ ID N°: 41, SEQ ID N°: 42 y SEQ ID N°: 43, respectivamente.

Los ejemplos de anticuerpos monoclonales más preferidos en la presente invención pueden incluir los anticuerpos monoclonales producidos por los hibridomas mp5B7, mp7B4, mp13D4 y mp13H11.

Los hibridomas mp5B7, mp7B4, mp13D4 y mp13H11 fueron aceptados por el Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación, Depositario de Organismos de Patentes Internacionales, con los n°s de acceso NITE ABP-1211, NITE ABP-1212, NITE ABP-1213 y NITE ABP-1214 desde el 27 de enero de 2012.

Los detalles que especifican el depósito se describirán a continuación.

(1) Nombre y Dirección de la Autoridad Depositaria

Nombre: Instituto Nacional de Tecnología y Evaluación, Ciencia y Tecnología Industrial Avanzada, Depositario de Organismos de Patentes Internacionales

Dirección: 2-5-8 Kazusa Kamatari Kisarazu-shi, Chiba Ibaraki, 292-0818, Japón

(2) Fecha de Depósito: 27 de enero de 2012

(3) Número de depósito NITE BP-1211 (hibridoma mp5B7)

NITE BP-1212 (hibridoma mp7B4)

NITE BP-1213 (hibridoma mp13D4)

NITE BP-1214 (hibridoma mp13H11)

En particular, los anticuerpos más preferidos son un anticuerpo que tiene una combinación de

la CDR1 de la cadena pesada: DYNLH, CDR2: YIYPYNGNTGYNQKFKR, y CDR3: GGIYDDYYDYAIDY, y la CDR1 de la cadena ligera: RASENIYSHIA, CDR2: GATNLAH, y CDR3: QHFWGTP

como las secuencias de las CDRs que constituyen sus regiones variables; un anticuerpo que tiene una combinación de

la CDR1 de la cadena pesada: SHYYWT, CDR2: YISYDGSNNYNPSLKN, y CDR3: EGPLYYGNPYWYFDV, y la CDR1 de la cadena ligera: RASQDIDNYLN, CDR2: YTSRLHS, y CDR3: QQFNTLP

como las secuencias de las CDRs que constituyen sus regiones variables; y un anticuerpo que tiene una combinación de

la CDR1 de la cadena pesada: SHYYWS, CDR2: YISYDGSNNYNPSLKN, y CDR3: EGPLYYGNPYWYFDV, y la CDR1 de la cadena ligera: RASQDIDNYLN, CDR2: YTSRLHS, y CDR3: QQFNTLP,

como las secuencias de las CDRs que constituyen sus regiones variables.

Se puede producir un anticuerpo quimérico o un anticuerpo humanizado que reconozca PLD4 mediante ingeniería genética mediante el uso de un polinucleótido que lo codifique. Como se describe en el Documento de Patente 1, por ejemplo, los expertos en la técnica pueden producir fácilmente cada anticuerpo quimérico activo (ch3B4Ab, ch5B7Ab, ch7B4Ab, ch8C11Ab, ch10C3Ab, ch11D10Ab, ch13D4Ab, ch13H11Ab, ch14C1Ab, ch11G9.6Ab, etc.) mediante el uso de cada región CDR de los anticuerpos monoclonales de ratón anteriores (3B4, 5B7, 7B4, 8C11, 10C3, 11D10, 13D4, 13H11, 14C1, 11G9.6, etc.).

Los presentes inventores han verificado que los anticuerpos monoclonales contra PLD4 tienen actividad de CDC (citotoxicidad dependiente del complemento) y actividad de ADCC (citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos) contra las células que expresan PLD4. Por lo tanto, los anticuerpos monoclonales anti-PLD4 según la presente invención tienen una acción citotóxica contra las células que expresan PLD4.

Es decir, la presente invención se refiere a un agente para la inhibición de células B activadas, en el que el agente comprende una unión del anticuerpo a un dominio extracelular de PLD4 como componente activo. De manera alternativa, la presente invención proporciona un método para la inhibición de la producción de anticuerpos, y el método incluye una etapa de administración de un anticuerpo que se une a un dominio extracelular de PLD4. La presente invención se refiere además al uso de un anticuerpo que se une a un dominio extracelular de PLD4 en la producción de una composición farmacéutica para la inhibición de células B activadas.

En la presente invención, se puede usar un anticuerpo modificado según sea necesario. Según la presente invención, un anticuerpo que reconoce el dominio extracelular de PLD4 tiene la acción de inhibición de las células B activadas. Es decir, se ha creído que existe la posibilidad de que un anticuerpo por sí mismo tenga una acción citotóxica contra las células B activadas. Se conoce la subclase de un anticuerpo que muestra una acción efectora intensa. De manera alternativa, el efecto supresor en las células B activadas se puede incrementar adicionalmente modificando un anticuerpo con un agente citotóxico. Como agentes citotóxicos, se pueden mencionar las siguientes sustancias. Toxinas: Endotoxina de Pseudomonas (EP), toxina de la difteria, lisina

Radioisótopos: Tc99m, Sr89, I131, Y90

Agentes antineoplásicos: caliqueamicina, mitomicina, paclitaxel

Las toxinas que contienen proteínas se pueden unir a un anticuerpo o un fragmento del mismo, o similares, mediante un reactivo bifuncional. De manera alternativa, conjugando un gen que codifica un anticuerpo con un gen que codifica una toxina, también se puede obtener una proteína de fusión de los dos. También se conoce un método para unir un radioisótopo a un anticuerpo. Se conoce un método para marcar un anticuerpo con un radioisótopo, por ejemplo, mediante el uso de un agente quelante. Además, se puede unir un agente antineoplásico a un anticuerpo, mediante el uso de un glicano o un reactivo bifuncional o similares.

En la presente invención, se puede usar un anticuerpo cuya estructura se modifica de manera artificial como componente activo. Por ejemplo, se conocen diversos métodos de modificación para mejorar la acción citotóxica y la estabilidad de los anticuerpos. Concretamente, se conoce una inmunoglobulina en la que el glicano de su cadena pesada está modificado (Shinkawa, T. et al. J. Biol. Chem. 278:3466-3473. 2003). Mediante la modificación del glicano, se incrementó la actividad de ADCC (citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos) de la inmunoglobulina.

En la presente invención, se pueden usar uno o más anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, se pueden combinar varios tipos de anticuerpos monoclonales que reconocen el dominio extracelular de PLD4, y usarlos para la presente invención.

Como se describe más adelante, se puede verificar que los anticuerpos anti-PLD4 tienen una acción inhibidora sobre la actividad inmunitaria adquirida de producción de anticuerpos de las células B activadas. Las células B producen una gran cantidad de anticuerpos mediante la estimulación de un ligando de BCR o un ligando de TLR (preferiblemente ligando de TLR4, ligando de TLR7 o ligando de TLR9). Se proporciona un anticuerpo anti-PLD4 antes y después de la estimulación del ligando anterior en las células B o de manera simultánea con la estimulación del ligando, y mediante el uso de células B para las que no se proporciona un anticuerpo anti-PLD4 como control, se compara la capacidad de producir anticuerpos inmunitarios adquiridos derivados de células B. La capacidad de producción de anticuerpos se puede determinar midiendo la inmunoglobulina secretora contenida en un sobrenadante de cultivo de células B. Como resultado de la comparación, cuando la cantidad del anticuerpo inmunitario adquirido obtenido de células B en el sobrenadante disminuye significativamente añadiendo un anticuerpo anti-PLD4, se puede verificar que el anticuerpo anti-PLD4 ensayado tiene una acción supresora sobre la capacidad de producción de anticuerpos de las células B. Se conoce un método para medir los anticuerpos. Las células B son células que producen inmunidad humoral (anticuerpo secretor) en un organismo vivo. Por lo tanto, se puede ajustar la inmunidad humoral inhibiendo la capacidad de producción de anticuerpos de las células B.

Cuando un anticuerpo que reconoce el dominio extracelular de PLD4 se administra a un hospedador diferente de una especie de organismo del que deriva el anticuerpo, se desea procesarlo de forma que sea difícil que tal hospedador lo reconozca como una sustancia exógena. Procesándolo hasta las moléculas descritas más adelante, por ejemplo, puede ser difícil que la inmunoglobulina sea reconocida como una sustancia exógena. Se conocen las técnicas para procesar moléculas de inmunoglobulina como se describe a continuación:

- un fragmento que contiene una región de unión al antígeno que carece de una región constante (Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, tercera edición, Academic Press Limited. 1995; Antibody Engineering, A Practical Approach, IRL PRESS, 1996);

- un anticuerpo quimérico constituido por una región de unión al antígeno de un anticuerpo monoclonal y una región constante de una inmunoglobulina del hospedador (Experimental manual for genetic expression, Kodansha Ltd. 1994 (editado por Isao Ishida y Tamie Ando)); y

- un anticuerpo con sustitución de CDR en el que una región determinante de la complementariedad (CDR) de la inmunoglobulina del hospedador se sustituye por la CDR de un anticuerpo monoclonal (Experimental manual for genetic expression, Kodansha Ltd. 1994 (editado por Isao Ishida y Tamie Ando)).

De manera alternativa, también se puede obtener un gen de la región variable de una inmunoglobulina humana mediante el método de expresión en fago (McCafferty J. et al., Nature 348:552-554, 1990; Kretzschmar T et. al., Curr Opin Biotechnol, dic. de 2002; 13(6):598-602.). En el método de expresión en fago, se incorpora un gen que codifica una región variable de una inmunoglobulina humana en un gen de fago. Mediante el uso de diversos tipos de genes de inmunoglobulinas como fuentes, también se puede crear una biblioteca de fagos. Un fago expresa tal región variable como una proteína de fusión de una proteína que construye el propio fago. La región variable expresada por el fago en la superficie del fago mantiene la actividad de unión a los antígenos. Por lo tanto, seleccionando un fago que se une a un antígeno o a las células que expresan el antígeno o similares, se puede cribar un fago que expresa una región variable que tiene la actividad de unión de interés a partir de una biblioteca de fagos. Además, un gen que codifica una región variable que tiene la actividad de unión de interés se mantiene en la partícula de fago seleccionada como antes. Es decir, en el método de expresión en fago, mediante el uso de la actividad de unión de una región variable como índice, se puede obtener un gen que codifica una región variable que tiene la actividad de unión de interés.

En el agente de inhibición de la actividad de células B o el método de inhibición de la actividad de células B según la presente invención, se puede administrar un anticuerpo que reconoce el dominio extracelular de PLD4 o un fragmento de anticuerpo que contiene al menos la región de unión al antígeno del mismo como una proteína o un polinucleótido que lo codifica. Para administrar un polinucleótido, se desea que un vector en el que un polinucleótido que codifica una proteína de interés esté colocado para ser usado bajo control de un promotor adecuado, de forma que se pueda expresar la proteína de interés. En un vector, también se puede colocar un potenciador y un terminador. Se conocen los vectores que mantienen los genes de las cadenas pesadas y ligeras que constituyen la inmunoglobulina, y en los que se puede expresar una molécula de inmunoglobulina. Se puede administrar un vector en el que se puede expresar una inmunoglobulina mediante la introducción en células. Para la administración a un organismo vivo, se puede administrar directamente un vector que puede infectar las células mediante la administración al organismo vivo. De manera alternativa, se introduce un vector en un linfocito separado de un organismo vivo, y después el vector se puede devolver al organismo vivo (ex vivo).

En el agente para la inhibición de la actividad de las células B o el método para la inhibición de la actividad de las células B basados en la presente invención, la cantidad de anticuerpo monoclonal a administrar a un organismo vivo es normalmente de 0,5 mg a 10 mg, por ejemplo 1 mg a 50 mg, preferiblemente 2 mg a 10 mg como inmunoglobulina por kg de peso corporal. Un intervalo de administración de un anticuerpo a un organismo vivo se puede ajustar de manera adecuada para que se pueda mantener una concentración eficaz de la inmunoglobulina en el organismo vivo durante el periodo de tratamiento. Concretamente, por ejemplo, se puede administrar un anticuerpo a intervalos de 1 a 2 semanas. Se puede usar cualquier vía de administración. Los expertos en la técnica pueden seleccionar de manera adecuada una vía de administración eficaz para el tratamiento. Concretamente, se puede mencionar la administración oral o parenteral. Un anticuerpo se puede administrar de manera sistémica o local, por ejemplo mediante una inyección intravenosa, una inyección intramuscular, una inyección intraperitoneal o una inyección subcutánea, o similares. Las formulaciones adecuadas para administración parenteral en la presente invención incluyen inyecciones, supositorios, esprays y similares. Además, cuando se proporciona a células, la inmunoglobulina se proporciona normalmente en un fluido de cultivo en una cantidad de 1 pg/ml, preferiblemente 10 pg/mL o más, más preferiblemente 50 pg/mL o más, y más preferiblemente 0,5 mg/mL o más.

En el agente para la inhibición de la actividad de las células B o el método para la inhibición de la actividad de las células B basado en la presente invención, un anticuerpo monoclonal se puede administrar a un organismo vivo mediante cualquier método. Un anticuerpo monoclonal normalmente se combina con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un anticuerpo monoclonal se puede combinar con aditivos según sean necesarios, tales como un espesante, un estabilizante, un antiséptico y un agente solubilizante. Tales vehículos o aditivos incluyen lactosa, un ácido cítrico, un ácido esteárico, estearato de magnesio, sacarosa, almidón, talco, gelatina, agar, aceite vegetal, etilen glicol y similares. La expresión "farmacéuticamente aceptable" significa que está aprobado por las autoridades gubernamentales de diversos países, o que su uso para animales, mamíferos y, en particular, seres humanos se enumera en las farmacopeas de diversos países, o farmacopeas habitualmente reconocidas. El agente para la inhibición de la actividad de las células B en la presente invención se puede suministrar también en forma de polvos liofilizados o comprimidos a una o más dosis. Además, el agua esterilizada para inyecciones, una disolución salina fisiológica o una disolución tampón, que se usan para disoluciones, se pueden combinar con polvos liofilizados o comprimidos para que la composición obtenga una concentración deseada antes de la administración.

Además, para la administración en forma de un vector que expresa una inmunoglobulina, se cotransfectan una cadena pesada y una cadena ligera en forma de plásmidos diferentes, y cada plásmido se puede administrar a 0,1 a 10 mg, por ejemplo 1a 5 mg por kg de peso corporal. Además, se usan 1 a 5 pg vectores/106 células para la introducción en células in vitro. La presente invención se describirá a continuación con más detalle por medio de ejemplos.

La presente invención se describirá a continuación con más detalle por medio de ejemplos. Se debería indicar, sin embargo, que la presente invención no se limita a los ejemplos.

Ejemplos

Ejemplo 1

Se estimularon PBMC humanas (1 * 107 células/ml) mediante CpG2006, un ligando de TLR9, (una concentración final de 1 pM) y se incubaron en una placa de 24 pocillos en un incubador de CO2 (37 °C, 5% de CO2) durante alrededor de 20 horas. En paralelo, también se cultivaron PBMC humanas (1 * 107 células/ml) que no se estimularon en un incubador de CO2 (37 °C, 5% de CO2) durante alrededor de 20 horas.

Las PBMC humanas se trataron con reactivo de bloqueo FcR (Miltenyi), que se diluyó 5 veces con tampón de FACS (1% de FBS/PBS), a 4 °C durante 20 minutos. Después de lavar, se llevó a cabo la tinción con 5B7, 11 G9.6 o IgG2b, k de ratón, un anticuerpo primario, (cada uno 10 pg/ml) a 4 °C durante 15 minutos. Se diluyó un anticuerpo secundario y anticuerpos posteriores con tampón de FACS de forma que el reactivo de bloqueo FcR se diluyese 25 veces. Anti-Ig de ratón marcado con PE (BD), un anticuerpo secundario, se diluyó 100 veces y la disolución se le añadió y se mezcló. Además, para fraccionar las células B en FACS, se diluyó 30 veces un anticuerpo anti-CD 19 humano marcado con APC (Biolegend) con tampón de FACS que contenía reactivo de bloqueo FcR, y se llevó a cabo la tinción a 4 °C durante 15 minutos. Se incorporaron los datos mediante el uso de FACS Calibur (BD). Las células vivas se delimitaron en un diagrama de puntos del eje X: FSC y el eje Y: SSC. Los datos se incorporaron hasta que el número de células en la delimitación de las células vivas llegó a 100.000 cuentas. Células B: Se delimitaron las células positivas para el anticuerpo anti-molécula marcadora. Las células delimitadas se analizaron en el histograma con el eje X: PLD4, y los resultados de la tinción con IgG2b, k de ratón se superpusieron sobre ellas. Por lo tanto, los anticuerpos anti-PLD4 apenas se unieron a las células sin estimular, pero se unieron selectivamente a las células B activadas mediante la estimulación con el ligando de TLR9 (Fig. 1). Esto demuestra que PLD4 se expresa en las células B activadas.

Ejemplo 2

Ensayo de unión a células B mediante cada anticuerpo monoclonal

Se estimularon PBMC humanas con CpG2006 con una concentración final de 1 pM durante alrededor de 20 horas. Las células se recogieron y se trataron con reactivo de bloqueo FcR a 4 °C durante 20 minutos. Después de lavar, se llevó a cabo una tinción con 10 pg/ml de 3B4, 5B7, 13D4, 13H11, 11G9.6, IgG1, k de ratón o IgG2b, k de ratón, un anticuerpo primario, a 4 °C durante 15 minutos. La tinción se llevó a cabo con anti-Ig de ratón marcado con PE, un anticuerpo secundario, a 4 °C durante 15 minutos. Para delimitar un grupo de células B, se llevó a cabo una tinción doble con un anticuerpo anti-CD19 humano marcado con APC a 4 °C durante 15 minutos. Se analizó un grupo de células vivas en el diagrama de puntos del eje X: FSC y el eje Y: SSC mediante la unión de un anticuerpo anti-PLD4 a células B CD19+ (Fig. 2 y Fig. 3). Por lo tanto, todos los anticuerpos monoclonales anti-PLD4 ensayados se unieron a células B estimuladas mediante TLR9. Es decir, se verificó que mediante todos los anticuerpos monoclonales anti-PLD4, se indujo la expresión de PLD4 en las células B de una manera dependiente de la activación.

Ejemplo 3

Actividad citotóxica de anticuerpos quiméricos anti-PLD4 contra las células B activadas

Se usó como índice la frecuencia de células B activadas PLD4+ inducidas mediante la estimulación con el ligando de TLR9 (1 pM). Se cultivaron PBMC humanas con CpG2006, y cada anticuerpo quimérico anti-PLD4 o Ig de control durante alrededor de 16 horas. Como medio se usó RPM11640 (SIGMA) (que incluyó un 10% de FBS (Equitech-bio), 5 ml de L-Glutamina 200 mM (GIBCO), 5 ml de Pen-Strep (GIb Co ), 5 ml de Piruvato de Sodio (GIBc O), y 0,5 ml de 2-ME 50 mM (SIGMA)). Las células se recogieron y se trataron con reactivo de bloqueo FcR a 4 °C durante 20 minutos. Después de lavar, las células se tiñeron además con 5B7 o 13D4, 3B4 o IgG2b, k de ratón, un anticuerpo primario, a 4 °C durante 15 minutos (cada uno 10 pg/ml). Una muestra en la que las PBMC se trataron con un anticuerpo 3B4 quimérico (ch3B4), un anticuerpo 3D4 quimérico (ch3D4), o un anticuerpo 13H11 quimérico (ch13H11) se tiñó con 5B7, y una muestra en la que las PBMC se trataron con un anticuerpo 5B7 quimérico (ch5B7) o un anticuerpo 11G9.6 quimérico (ch11G9.6) se tiñó con 13D4. Se ha verificado que un clon de anticuerpo anti-PLD4 tratado para ADCC y un clon de anticuerpo anti-PLD4 usado para la tinción no compiten entre sí. Se halló la unión del anti-PLD4 mediante anti-Ig de ratón marcado con PE, un anticuerpo secundario, a 4 °C durante 15 minutos. Para delimitar las células B, se llevó a cabo una tinción doble con un anticuerpo anti-CD19 humano marcado con APC a 4 °C durante 15 minutos (Fig. 4). La población de células B activadas PLD4 tratadas con cada anticuerpo anti-PLD4 quimérico se comparó con la de células B activadas PLD4 tratadas con el anticuerpo de control (Fig. 5). Por lo tanto, todos los anticuerpos anti-PLD4 quiméricos redujeron las células B activadas PLD4 en comparación con el tratamiento con la Ig de control (cuando se consideró el caso de tratar con la Ig de control como el 100%, ch3B4: 70,2%, ch13D4: 56,0%, ch13H11: 55,3%, ch5B7: 25,8%, ch11G9.6: 66,4%).

Ejemplo 4

Efectos inhibitorios de los anticuerpos anti-PLD4 quiméricos contra las células B activadas

Para determinar el efecto del anticuerpo anti-PLD4 humana en la maduración de las células B y la producción de Ig por medio de la activación de las células B, se trataron PBMCs humanas completas con ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, ch11G9.6, o Ig de control durante 24 h. Después, las PBMCs se cultivaron adicionalmente en presencia de CpG2216 (1 pM) e IL-6 humana recombinante para inducir la activación de las células B, lo que dio como resultado la maduración de las células B. En el resultado del cultivo de células B activadas durante 7 días, se analizaron los plasmablastos, CD19+CD27+IgD-CD38+, en las células B activadas mediante citometría de flujo con un anticuerpo anti-CD19 humana marcado con PE. Para medir la producción de IgG humana, las células B activadas cultivadas se re-estimularon con 50 ng/ml de PMA (miristato-acetato de forbol) después de lavarlas con PBS 2 veces. Dos días más tarde, se midió la producción de IgG humana en los sobrenadantes de cultivo mediante ELISA. Se redujeron los plasmablastos en las células B activadas mediante el tratamiento con ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, o ch11G9.6 comparado con el tratamiento con Ig de control (Figura 6). Además, se redujo la producción de IgG humana mediante el tratamiento con ch3B4, ch5B7, ch13D4, ch13H11, o ch11G9.6 en comparación con el tratamiento con Ig de control (Figura 7). Estos resultados indicaron que el tratamiento con los Abs quiméricos anti-PLD4 humana redujeron las células B humanas activadas secretoras de Abs.

Aplicabilidad Industrial

Como se muestra en los ejemplos anteriores, los anticuerpos anti-PLD4 reconocen e inhiben las células B activadas. Por lo tanto, los anticuerpos son útiles para la prevención y el tratamiento de enfermedades implicadas en la función inmunitaria (enfermedades autoinmunitarias y enfermedades alérgicas).

Explicación de la información de secuencias de los anticuerpos monoclonales anti-PLD4 según la presente invención 1. Anticuerpo 11G9.6 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 74, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 75. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón son SEQ ID N°: 2, SEQ ID N°: 3 y SEQ ID N°: 4, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón anti-PLD4 (504 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 11G9.6 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón] (SEQ ID N°: 74)

ATGAGATCACAGTTCTCTATACAGTTACTGAGCACACAGAACCTCACCTTGG GATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTC CCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTC AGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATG CACTGG GTGAAGC AGAGGC CGGG ACAAGGCCTTGAGTGG ATTGG AGATATT TATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCC ACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGC CTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTG GATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgccaaa

acaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 de ratón (168 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 11G9.6 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3) (SEQ ID N°: 75).

MRSQFS1QLLSTQNLTLGWSCI1LFLVATATGVHSQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCK

ASGYTFTSYWMHWVKORPGOGLEWIGDIYPGSDSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTA

YMOLSSLTSEDSAVYYCARGGWLDAMDYWGOGTSVTVSSakttnnswnlankg

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 2)

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 3)

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 4)

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 94, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 95. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón son SEQ ID N°: 5, SEQ ID N°: 6 y SEQ ID N°: 7, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón anti-PLD4 (421 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 11G9.6 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón] (SEQ ID N°: 94)

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CT GG AAC AG ATTATTCT CT C AC C ATT AGC AACC TGGAGC AAGAAG AT ATT G CCACTT ACTTTTGCCAACAGGGT AATACGCTTCCGTGGACGTT CGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcaagggcgaat

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 de ratón (140 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 11G9.6 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3) (SEQ ID N°: 95).

MMSSAOFLGLLLLCFQGTRCDIOVTTOTTSSLSAS LGDRVTrSCRASODÍSNYLNWYO

QKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLP WTFGGGTKLEIKradaaptvsikge

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 5)

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 6)

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 (SEQ ID N°: 7)

2. Anticuerpo 3B4 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 76, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 77. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón son SEQ ID N°: 8, SEQ ID N°: 9 y SEQ ID N°: 10, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón anti-PLD4 (437 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 3B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 de ratón].

ATGGAATGTAACTGGATACTTCCTTTTATTCTGTCGGTAATTTCAGGGGTCT CCTCAGAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGACTGTGCTGTCAAGGCCTGGGG CTTCCGTGACGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCGACAGCTTTACCACCTACTG GATGCACTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTAGAATGGATTGGTGC T AT CT ATCCT GGAAAT AGTG AAACT AGCTACAACCAGAAGTTC AAGGGCAA GGCCAAACTGACTGCAGTCACATCCGCCAGCACTGCCTATATGGAGTTCACT AGCCTGACAAATGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACGGGGGGTTATTCCG ACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAgccaaaacgaca cccccatctgtctatccact

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 de ratón (145 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 3B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MECN WILPFILS VISG VS S E V OLOOS GTVLSRPGAS VTMSCKAS GDS FTTY WMHW VK ORPGOGLEWIGAIYPGNSETSYNOKFKGKAKETAVTSASTAYMEFTSLTNEPSAVYY CTOGYSnFPYWGOOTTLTVSSakllnpswn

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 TYWMH

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 AIYPGNSETSYNQKFKG

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 3B4 GYSDFDY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 96, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 97. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón son SEQ ID N°: 11, SEQ ID N°: 12 y SEQ ID N°: 13, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón anti-PLD4 (459 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 3B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGATGGTCCTTGCTCAGTTTCTTGCATTCTTGTTGCTTTGGTTTCCAGGTGC AGGATGTGACATCCTGATGACCCAATCTCCATCCTCCATGTCTGTATCTCTG GGAGACACAGTCAGCATCACTTGCCATGCAAGTCAGGGCATTAGAAGTAAT ATAGGGTGGTTGCAGCAGAAACCAGGGAAATCATTTAAGGGCCTGATCTTT

CAT GG AACC AACTTGG AAGATGGAGTTC C AT C AAGGTT C AGT GGC AGAGGA TCTGGAGCAGATTATTCTCTCACCATCAACAGCCTGGAATCTGAAGATTTTG CAGACTATTACTGT GTACAGTATGTT CAGTTT CCTCCAACGTT CGGCT CGGG GACAAAGTTGGAAATAAGAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagtt aacatctggaggtgcctcagtcgtg

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 de ratón (153 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 3B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MMVLAOFLAFLLLWFPGAGCDILMTOSPSBMSVSLGDTVSITCHASOGIRSNIGWLO OKPGKSFKGLIFHGTXLEDGVPSRFSGRGSGADYSLTINSLESEDFADYYCVOYVOFP PTFGSGTKLEIRradaaptvsifppsseqltsggasw

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 HASQGIRSNIG

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 HGTNLED

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 3B4 VQYVQFP

3. Anticuerpo 5B7 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 78, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 79. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón son SEQ ID N°: 14, SEQ ID N°: 15 y SEQ ID N°: 16, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón anti-PLD4 (475 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 5B7 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCC ACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGG CCTC AGT G AAGAT AT CCTGC AAGGCTTCTGGAT AC AC ATTC ACTGAC T ACAA CTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATA TATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGAGGAA GGCC ACATT GACTGTAGAC AATTC CT CCGGC AC AGTCTAC AT GGAGCTCC GC AGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATC TATGATGATTACTACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAG TCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcgaat

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 de ratón (158 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 5B7 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVOLOOSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNEfíWV

KQSHGKS LEWIGYIYPYNGNTGYNOKFKRKATLTVDNS SGTVYM ELRS LTSEDSA V YYCARGGIYUDYYDYAII3Y WGUGTSV J'VSSakttppsvyplapkge

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 DYNLH

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 YIYPYNGNTGYNQKFKR

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 5B7 GGIYDDYYDYAIDY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 98, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 99. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón son SEQ ID N°: 17, SEQ ID N°: 18 y SEQ ID N°: 19, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón anti-PLD4 (467 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 5B7 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATG CCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGT GGGAG AAACTGTCGCC AT CAC AT GTC G AGC A AGTGAGAATATTT AC AGT C A TATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTA TGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGG ATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTT GGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAG GCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcag ttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttctt

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 de ratón (155 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 5B7 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIQMTQSPASLSVSVGETVAITCRASMIÍSHIAWYQ OKEGKSPORLVYGATNLAHGVPSRFSGSGSGTOYSLKINSLOSEDFGSYYOOHFWGT PWTFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggaswcf

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 RASENIYSHIA

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 GATNLAH

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 5B7 QHFWGTP

4. Anticuerpo 7B4 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 80, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 81. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón son SEQ ID N°: 14, SEQ ID N°: 15 y SEQ ID N°: 16, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón anti-PLD4 (470 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 7B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCC ACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGG CCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAA CTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATA T ATTT ATC C TTAC AATGGT AAT ACTGGCTAC AACC AGA AGTTC AAGAGG AA GGCC ACATT G ACT GT AG AC AATT C CTCC GGC AC AGTCTAC AT GG AGCTCC GC AGCCT GACATCTGAGGACTCTGCAGT CT ATTACT GTGC AAGAGGAGGGAT C TATGATGATTACT ACGACTATGCT AT CGACT ATTGGGGTC AAGGAACCT CAG TCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaaggg

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 de ratón (156 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 7B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVOLOOSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWV KQSHGKSLEWIGYIYPYNGNTGYNQKFKRKATLTVDNSSGTVYMELRSLTSEDSAV YYCARGGIYDPYYDYAIDYWGQGTSVTVSSakttppswplapk

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 DYNLH

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 YIYPYNGNTGYNQKFKR

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 7B4 GGIYDDYYDYAIDY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 100, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 101. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón son SEQ ID N°: 17, SEQ ID N°: 18 y SEQ ID N°: 19, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón anti-PLD4 (454 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 7B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón] ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATG CCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGT GGGAGAAACTGTCGCCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCA TATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTA TGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGG ATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTT GGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAG GCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcag ttaacatctggaggtgcctcag

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 de ratón (151 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 7B4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MSVPTOVLGLLLLWLTDARCDIOMTOSPASLSVSVGETVAITCRASEYTYSHTAWYO OKEGKSPORLVYGATNLAHGVPSRFSGSGSGTOYSLKINSLOSEPFGSYYCOHFWGT PWTFGGGTKLFJKradaaptvsifppsseqltsggas

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 RASENIYSHIA

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 GATNLAH

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 7B4 QHFWGTP

5. Anticuerpo 8C11 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 82, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 83. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón son SEQ ID N°: 20, SEQ ID N°: 21 y SEQ ID N°: 22, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón anti-PLD4 (462 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 8C11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

ATGGGATGGAGCTATATCATCCTCTTTTTGGTAGCAACAGCAACAGGGGTCC ACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGTCGGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGG CTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTA TTTGTACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACT GATTAATCCTACCAATAGTGATACTATCTTCAATGAGAAGTTCAAGAGCAA GGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCATACATGCAACTCAG CAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACACGAGAGGGGGG ATATGGTTACGGCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTC TCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 de ratón (154 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 8C11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MGWSYIILFLVATATGVHSQVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSZYLYWV RORPGOGLEWIGLINPTNSDTIFNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMOLSSLTSEDSAVYY CTREGGYGYGPFAYWGOGTLVTVSAflkttPDSWDlapkg

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 SYYLY

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 LINPTNSDTIFNEKFKS

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 8C11 EGGYGYGPFAY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 102, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 103. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón son SEQ ID N°: 23, SEQ ID N°: 24 y SEQ ID N°: 25, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón anti-PLD4 (457 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 8C11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón] ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCA GCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGG AGATCAAGCCTCCATCTCTTGCACATCTAGTCAGACCCTTGTACACAGTAAT GGA AAC ACCTATTT ACATTGGT ACCT GC AGAAGCCAGGCC AGTCTCCA AAG CTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCA GTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGG CTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCACAGTACACATGTTCCATTCAC GTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttc ccaccatccagtgagcagttaacatctggag

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 de ratón (152 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 8C11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTOTPLSLPVSLGDQASISCTSSOTLVHSNGNTYLH WYLOKPGOS PKLLIYKV SNRFSG VPDRFSGS GSGTDFTLKIS RVE AEDLG V YFCSH S T HVPFTFGSGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsg

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 TSSQTLVHSNGNTYLH

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 KVSNRFS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 8C11 HSTHVP

6. Anticuerpo 10C3 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 84, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 85. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón son SEQ ID N°: 26, SEQ ID N°: 27 y SEQ ID N°: 28, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón anti-PLD4 (450 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 10C3 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2a de ratón].

ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCC AGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAG GGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGG CATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAAC CATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTGTGAAGGGGCG ATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAG CAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGT GGTAGGAGAGGCTATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACC GTCTCCTCAgccaaaacaacagccccatcggtctatcca

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 de ratón (150 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 10C3 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2a de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MTMFGESLIFLAUEKGVOCEVOTYESGGnLVRPGGSEXESCAASGFSFSSYGMSWFRO TPDKRLEWVATISSGGSYIYYPESVKGRFTrSRDNARNILYLOMSSLKSEDTAVlYYCV

RLY GGRRGY GLD Y WGOGTS VT V SSakttapsvyp

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 SYGMS

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 TISSGGSYIYYPESVKG

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 10C3 LYGGRRGYGLDY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 104, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 105. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón son SEQ ID N°: 29, SEQ ID N°: 30 y SEQ ID N°: 31, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón anti-PLD4 (423 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 10C3 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGAT CCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCT TGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGT GATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTC AGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTT C AGT AGC AGT GGGT CAGG AACT G ATTT C AC ACTGAG A AT C AG C AG AGT GG A GGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 de ratón (141 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 10C3 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MRFSAOLLGELVLWTPGSTAEIVMTOAAFSXPVTEGTSASISCRSSKSLEFrsnGlTYTY" WYLOKPGOSPOLLIYOMSXLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAON

r -ET YTFGGGTKT ETKradaanlvsi

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 RSSKSLLHSDGITYLY

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 QMSNLAS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 10C3 AQNLEL

7. Anticuerpo 11D10 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 86, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 87. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón son SEQ ID N°: 26, SEQ ID N°: 27 y SEQ ID N°: 28, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón anti-PLD4 (450 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 11D10 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

AT G AACTTCGGGCT C AGCTT GATTTT CCTTGCCCT C ATTTTA AA AGGT GTCC AGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAG GGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGG CATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAAC CATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTGTGAAGGGGCG ATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAG CAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGT GGT AGG AGAGGCT ATGGTTT GGACT ACTGGGGT CAAGG AACCTCAGTC ACC GTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatcca

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 de ratón (150 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 11D10 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MNFGLSLIFLALILKGVOCEVOLVESGGDLVRPGGSLKLSCAASGFSFSSYGMSWFRO TPDKRLEWVATTSSGGSYIYYPESVKGRFTISRDNARNILYLQMSSLKSEDTAMYYCV RLYGGRRGYGLDYWGOGTS VTV SS akttppsvyp

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 SYGMS

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 TISSGGSYIYYPESVKG

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 11D10 LYGGRRGYGLDY

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 106, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 107. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón son SEQ ID N°: 29, SEQ ID N°: 30 y SEQ ID N°: 31, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón anti-PLD4 (423 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 11D10 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGAT CCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCT T GGAACATC AGCTT CC ATCTCCTGC AGGTCTAGT AAGAGT CTCCT AC AT AGT GATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTC AGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTT CAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGA GGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 de ratón (141 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 11D10 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MRFSAQLLGLLVLWIPGSTAEIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSK.SLLHSDGITYLY

WYLQKPGQSPQLLTYQMSNLMGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQN

LELYTFGGGTKLEIKradaaptvsi

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 RSSKSLLHSDGITYLY

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 QMSNLAS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 11D10 AQNLEL

8. Anticuerpo 13D4 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 88, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 89. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón son SEQ ID N°: 32, SEQ ID N°: 33 y SEQ ID N°: 34, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón anti-PLD4 (472 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 13D4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAATC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTCATTATTACT GGACCTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATC ACTCGT GACAC AT CTAAGAACC AGTTTTT CCT GAAGTTGAATT CT GT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC AC C GTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatc cact ggccc ctaagggcg

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 de ratón (157 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 13D4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MMS S AOFLGLLLLCFOGTRC DIOMTOTTS SLS ASLGDRVTIS CR A S ODTDNYr ,NWY O OKPDGTVKTJJYYTSRT/HSGVPSRFSGSGSGTDYSrTTSNT.F.OFDVATYFCOOFNTTPR

TFGGGTKLElKradaapt

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 SHYYWT

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 YISYDGSNNYNPSLKN

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13D4 EGPLYYGNPYWYFDV

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 108, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 109. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón son SEQ ID N°: 35, SEQ ID N°: 36 y SEQ ID N°: 37, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón anti-PLD4 (404 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 13D4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATGTTG CCACTTACTTTTGCCAGCAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAACTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgt

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 de ratón (134 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 13D4 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MMSSAOFLGLLLLCFOGTRCDIOMTOTTSSLSASLODRVTISCRASODID'NYLNWYO OKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEOEDVATYFCOOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaapt

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 RASQDIDNYLN

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 YTSRLHS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13D4 QQFNTLP

9. Anticuerpo 13H11 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 90, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 91. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón son SEQ ID N°: 38, SEQ ID N°: 39 y SEQ ID N°: 40, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón anti-PLD4 (471 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 13H11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón].

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACT GGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC ACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 de ratón (157 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 13H11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG2b de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MKVLSI .EYLLTAIPGILSDVQLQESGPGI A'KPSQSLSLTCSVTGYSISSHYYWSWIRQF PGNRLEWMGYISYDGSNKYNPSLKNRISITRDTSKNOFFLKLNSVTTEDTATYNCARE GPLYYGNPYWYFDVWGAGTTVTVSSakttppswplaDkg

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 SHYYWS

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 YISYDGSNNYNPSLKN

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 13H11 EGPLYYGNPYWYFDV

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 110, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 111. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón son SEQ ID N°: 41, SEQ ID N°: 42 y SEQ ID N°: 43, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón anti-PLD4 (414 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 13H11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]

ATGATGT CCTCTGCTCAGTTCCTT GGTCTCCTGTT GCTCT GTTTTCAAGGTAC

CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGG C AGC GT C ACC AT CAGTT GC AGGGC AAGT C AGGACATT GAC AATTAT TT AAACTGGT ATC AGC AAAAACCAGATGG AACT GTT AAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 de ratón (138 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 13H11 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGGSVTISCRASQDIDNYLNWYQ OKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLKOKDlAlYrCQOrNTLPR

TFGGGTKLElKradaaptvsif

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 RASQDIDNYLN

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 YTSRLHS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 13H11 QQFNTLP

10. Anticuerpo 14C1 de ratón anti-PLD4

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 92, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 93. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón son SEQ ID N°: 38, SEQ ID N°: 39 y SEQ ID N°: 40, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón anti-PLD4 (470 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 14C1 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 de ratón].

ATGAAAGTGTTGAGTCT GTTGT ACCTGTT GAC AGCC ATTCCT GGT ATCCT GT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACT GGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATC ACTCGT GACAC AT CTAAGAACC AGTTTTTCCT G AAGTT GAATT CT GT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC ACCGTCTCCTCAgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctaaggg

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 de ratón (156 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 14C1 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MKVLSLLYLLTAIPGILSDVOLOESGPGLVKPSOSLSLTCSVTGYSISSHYYWSWIRQF PGNRLRWMGYISYDGSNXYNPSLKXRISITRDTSKNOFFr.KI.NSVTTEDTATYNCARE

GPLYYGNPYWYFDV WGAOTTVTVSS akttppsvyplapk

CDR1 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 SHYYWS

CDR2 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 YISYDGSNNYNPSLKN

CDR3 de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 14C1 EGPLYYGNPYWYFDV

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón anti-PLD4 obtenido es SEQ ID N°: 112, y la secuencia de aminoácidos es SEQ ID N°: 113. Las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 dentro de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón son SEQ ID N°: 41, SEQ ID N°: 42 y SEQ ID N°: 43, respectivamente.

La secuencia de ácido nucleico de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón anti-PLD4 (465 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 14C1 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón] ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGGCAGCGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagtt aacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttc

La secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 de ratón (155 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 14C1 de ratón, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k de ratón]. La secuencia subrayada muestra su secuencia señal y el doble subrayado muestra sus regiones CDR (CDR1, CDR2 y CDR3).

MMSSAOFLGLLLLCFOGTRCDIOMTOTTSSLSASLGGSVTISCRASODIDNYLNWYO QKPDGTVKLLIYYTSRLIISGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLFOFDÍATYFCQOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggaswcf

CDR1 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 RASQDIDNYLN

CDR2 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 YTSRLHS

CDR3 de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo 14C1 QQFNTLP

Las secuencias de bases y las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada y de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 quimérico creado son los números de secuencias proporcionados a continuación.

Cadena pesada

SEQ ID N°: 120 (secuencia de bases)

SEQ ID N°: 121 (secuencia de aminoácidos)

Cadena Ligera

SEQ ID N°: 122 (secuencia de bases)

SEQ ID N°: 123 (secuencia de aminoácidos)

11. La secuencia de ácido nucleico de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 quimérico anti-PLD4 (1401 pb) [letras mayúsculas: región variable VH de 11G9 quimérico, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 humano] (SEQ ID N°: 120)

ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTcagGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTC

AGT GAAAAT GTCCT GC AAGGCTTCTGGCT AC ACCTT CACC AGCT ACTGG ATG CACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATT TATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCC ACACT GACT GTAGACACATCCT CCAGCACAGCCTACAT GCAACTCAGCAGC CTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTG GATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgctagc accaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtc aaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcc tacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaac gtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgt gcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacc cctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggag gtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcac caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctcc aaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtca gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaact acaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggca gcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgg gtaaatga

12. La secuencia de aminoácidos de la cadena pesada del anticuerpo 11G9.6 quimérico anti-PLD4 (466 aa.) [letras mayúsculas: región variable VH de 11G9 quimérico, letras minúsculas: región constante de la cadena pesada de IgG1 humano] (SEQ ID N°: 121)

MKVLSLLYLLTAIPGILSQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCKASGYTFTSYWMH WVKQRPGQGLEWTGDTYPGSDSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSE DSAVYYCARGGWLDAMDYWGQGTSVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpc pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpape llggpsvflfppkpkdtimisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrwsvitvihqd wlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltcLvkgfypsdiavewesngqpetiny

13. La secuencia de ácido nucleico de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 quimérico anti-PLD4 (705 pb) [letras mayúsculas: región variable VL de 11G9 quimérico, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k humana] (SEQ ID N°: 122)

ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttg

gctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgctag

14. La secuencia de aminoácidos de la cadena ligera del anticuerpo 11G9.6 quimérico anti-PLD4 (234 aa.) [letras mayúsculas: región variable VL de 11G9 quimérico, letras minúsculas: región constante de la cadena ligera de Ig k humana] (SEQ ID N°: 123)

MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLN WYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTTSNLEQEDTATYFCQ QGNTLPWTFGGGTKLEIKrtvaapsvfífppsdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsq esvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec

secuencias de cADN y de proteína de las moléculas relacionadas con PLD4

> cADN de PLD4 humana (1521 pb) (SEQ ID N°: 44)

ATGCTGAAGCCTCTTTGGAAAGCAGCAGTGGCCCCCACATGGCCATGCTCC ATGCCGCCCCGCCGCCCGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTG GGAGCGCTGGCTGTGCTGTGGCTGGGCTCCGTGGCTCTTATCTGCCTCCTGT GGCAAGTGCCCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGC CCAGGTCCTGGGAGCATGGCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCCCCTGGAAGCAG AGGCCAGGCAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCC CCCAGGACCTGCCATCTGCAGCCGGCAGCCCCTCTGCCCAGCCTCTGGGCCA GGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTC

ATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCTGACATCGGGGTCAACGACTCGTCTTCC CAGCTGGGAGAGGCTCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAAC ATTTCCCTGGCTGTGGCCACCAGCAGCCCGACACTGGCCAGGACATCCACC GACCTGCAGGTTCTGGCTGCCCGAGGTGCCCATGTACGACAGGTGCCCATG GGGCGGCTCACCAGGGGTGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGAC GGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCTCTGACGCAGG TGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACC TGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCC TCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACTTCAACCGTTTCCAGCC CTTCCACGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCGTCG CCACCAGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCGGGACCTGGAGGCGCTGCTG GCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTAT TTCCCCACCACGCGCTTCAGCCACCCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTGGACA ACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCGGCAAGGGCGTGCGCGTGCGCCTGCTGG TCGGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCT GCAGGCGCT CAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCT GTGGACGT GAAAGT CTT CATCGTGCCGGTGGGGAACCATTCCAACATCCCATTCAGCAGGGTGAACCA CAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTG GTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGGCGGGGGTGGGCTTGGTGGTCACCCA GAGCCCTGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTGCAGGAGCAGCTGCGGC AGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGAC AGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> Proteína PLD4 humana (506 aminoácidos) (SEQ ID N°: 1)

MLKPLWKAAVAPTWPCSMPPRRPWDREAGTLQVLGALAVLWLGSVALICLL WQVPRPPTWGQYQPKDVPRSWEHGSSPAWEPLEAEARQQRDSCQLVLVESIPQ DLPSAAGSPSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLG EALLQKLQQLLGRNTSLAVATSSPTLARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTR GVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQ TYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQ GRTRDLEALLAVMGSAQEFTYASVMEYFPTTRFSHPPRYWPVLDNALRAAAFG KGVRVRLLVGCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFTVPVGNHSNT PFSRVNHSKFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTAGVGLVVTQSPGAQPAGATVQ EQLRQLFERD W S SR Y A V GLDGQ APG QDCV W QG

> cADN de PLD4 de mono Cynomolgus (1521 pb) (SEQ ID N°: 63)

ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCgGCAGTGACCCCCATGTGGCCGTGCTCCA TGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTGG GAGTGCTGGCTATGCTGTGGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGTG GCAAGTGCGCCGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCC CAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCCAGCTCTGGAGCCCCTGGAAGCGGA GGTCAGGAAGCAGAGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCC CCAGGACCTGCCATTTGCAGCCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCAG GCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCA TACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGACTCATCTTCCC

AGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACA TTTCCTTGGCTGTGGCCACCAGCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACCG ACCTGCAGGTCCTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATGG GGCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACg GCACATATACATGGGCAGTGCcAACATGGACTGGCGGTCCCTGACGCAGGT GAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCT GGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCT CCCCAAAACCT GGCCTC AG AACTTCT CATCTCAC AT CAACCGTTT CC AGCCC TTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCATCGC CACCcGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTGGC GGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTC CCTACCACgCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACG CGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCA GCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCTGCA GGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCAT CGTGCCGGTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAACCACAG CAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTC GGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGGGGGTGGGCCTGGTGGTCACCCAGAG CCCCGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGCAGCT CTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGC TCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> Proteína PLD4 de mono Cynomolgus (506 aminoácidos) (SEQ ID N°: 129)

MLKPLRRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTLQVLGVLAMLWLGSMALTYLL WQVRRPPTWGQVQPKDVPRSWGHGSSPALEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQ DLPFAAGSLSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDTGVNDSSSQLG EALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLTR GVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDLEKTFQ TYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQG RTPDLEALLAVMGSAQEFTYASVMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSK GVRVRLLVSCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNTPF SRVNHSRFMVTEKAAYIGTSNWSEDYFSSTTGVGLVVTQSPGAQPAGATVQEQ LRQLFERD WSSRY AVGLDGQAPGQDC VW QG

> cADN de PLD4 de mono Rhesus (1521 pb) (SEQ ID N°: 124)

ATGCTGAAGCCTCTTCGGAGAGCGGCAGTGACCCCCATGTGGCCGTGCTCC ATGCTGCCCCGCCGCCTGTGGGACAGAGAGGCTGGCACGTTGCAGGTCCTG GGAGTGCTGGCTATGCTGTGGCTGGGCTCCATGGCTCTTACCTACCTCCTGT GGCAAGTGCGCTGTCCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAGGGACGTGC CCAGGTCCTGGGGGCATGGTTCCAGCCTAGCTCTGGAGCCCCTGGAAGCGG AGGTC AGGAAGCAGAGGGACTCCT GCC AGCTTGT CCTTGT GGAAAGC AT CC CCCAGGACCTGCCATTTGCAGCCGGCAGCCTCTCCGCCCAGCCTCTGGGCCA GGCCTGGCTGCAGCTGCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTC ATACTACTGGTCCCTCACAGGGCCCGACATTGGGGTCAACGACTCATCTTCC

CAGCTGGGAGAGGCCCTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAAC ATTTCCTTGGCTGTGGCCACCAGCAGTCCAACACTGGCCAGGAAGTCCACC GACCTGCAGGTCCTGGCTGCCCGAGGTGCCCAGGTACGACGGGTGCCCATG GGGCGGCTCACCAGGGGCGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGA CGGCACATATACATGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCCCTGACGCAG GTGAAGGAGCTTGGCGCTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGAC CTGGAGAAGACCTTCCAGACCTACTGGGTGCTGGGGGTGCCCAAGGCTGTC CTCCCCAAAACCTGGCCTCAGAACTTCTCATCTCACATCAACCGTTTCCAGC CCTTCCAGGGCCTCTTTGATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCATC GCCACCCGCACTCTGTCCCCAGGGCCGCACCCCTGACCTGGAGGCGCTGTTG GCGGTGATGGGGAGCGCCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTAT TTCCCTACCACGCGCTTCAGCCACCCCCGCAGGTACTGGCCGGTGCTGGACA ACGCGCTGCGGGCGGCAGCCTTCAGCAAGGGTGTGCGCGTGCGCCTGCTGG TCAGCTGCGGACTCAACACGGACCCCACCATGTTCCCCTATCTGCGGTCCCT GCAGGCGCTCAGCAACCCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTT CATCGTGCCGGTGGGGAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCAGGGTGAACCA CAGCAAGTTCATGGTCACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTG GTCGGAGGATTACTTCAGCAGCACGACGGGGGTGGGCCTGGTGGTCACCCA GAGCCCCGGCGCGCAGCCCGCGGGGGCCACGGTACAGGAGCAGCTGCGGC AGCTCTTTGAGCGGGACTGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGAC AGGCTCCGGGCCAGGACTGCGTTTGGCAGGGCTGA

> Proteína PLD4 de mono Rhesus (506 aminoácidos) (SEQ ID N°: 130)

MLKPERRAAVTPMWPCSMLPRRLWDREAGTEQVLGVLAMLWLGSMALTYLL WQVRCPPTWGQVQPRDVPRSWGHGSSLALEPLEAEVRKQRDSCQLVLVESIPQ DLPFAAGSLSAQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLG EALLQKLQQLLGRNISLAVATSSPTLARKSTDLQVLAARGAQVRRVPMGRLTR GVLHSKFWVVDGRHIYMGSANMDWRSLTQVKELGAVIYNCSHLAQDEEKTFQ TYWVLGVPKAVLPKTWPQNFSSHINRFQPFQGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQG RTPDLEALLAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPRRYWPVLDNALRAAAFSK GVRVRLLVSC GLNTD PTMFP YLRS LQ ALSNPA AN VS VD VKVFIVP VGNH SNIPF SRVNHSKFMVTEKAAYTCTSNWSEDYFSSTTGVOLVVTQSPGAQPAGATVQEQ LRQLFERDWSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG

> cADN de PLD4 de ratón (1512 pb) (SEQ ID N°: 131)

ATGGACAAGAAGAAAGAGCACCCAGAGATGCGGATACCACTCCAGACAGC AGTGGAGGTCTCTGATTGGCCCTGCTCCACATCTCATGATCCACATAGCGGA CTTGGCATGGTACTGGGGATGCTAGCTGTACTGGGACTCAGCTCTGTGACTC TCATCTTGTTCCTGTGGCAAGGGGCCACTTCTTTCACCAGTCATCGGATGTT CCCTGAGGAAGTGCCCTCCTGGTCCTGGGAGACCCTGAAAGGAGACGCTGA GCAGCAGAATAACTCCTGTCAGCTCATCCTTGTGGAAAGCATCCCCGAGGA CTTGCCATTT GCAGCT GGCAGCCCCACT GCCCAGCCCCTGGCCCAGGCTT GG CTGCAGCTTCTTGACACTGCTCGGGAGAGCGTCCACATTGCCTCGTACTACT GGTCCCT CACT GGACT GGAC ATTGGAGTC AAT GACTCGTCTT CTCGGCAGGG AGAGGCCCTTCTACAGAAGTTCCAACAGCTTCTTCTCAGGAACATCTCTGTG

GTGGTGGCCACCCACAGCCCAACATTGGCCAAGACATCCACTGACCTCCAG GTCTTGGCTGCCCATGGTGCCCAGATACGACAAGTGCCCATGAAACAGCTT ACTGGGGGTGTTCTACACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGGCGACACGTCT ACGTGGGCAGCGCCAACATGGACTGGCGGTCCCTGACTCAGGTGAAGGAAC TTGGTGCAATCATCTACAACTGCAGCAACCTGGCTCAAGACCTTGAGAAAA CATTCCAGACCTACTGGGTGCTAGGGACTCCCCAAGCTGTTCTCCCTAAAAC CTGGCCTCGGAACTTCTCATCCCACATCAACCGCTTCCATCCCTTGCGGGGT CCCTTTGATGGGGTTCCCACCACGGCCTATTTCTCGGCCTCCCCTCCCTCCCT CTGCCCGCATGGCCGGACCCGGGATCTGGACGCAGTGTTGGGAGTGATGGA GGGTGCTCGCCAGTTCATCTATGTCTCGGTGATGGAGTATTTCCCTACCACG CGCTTCACCCACCATGCCAGGTACTGGCCCGTGCTGGACAATGCGCTACGG GCAGCGGCCCTCAATAAGGGTGTGCATGTGCGCTTACTGGTCAGCTGCTGGT TCAACACAGACCCCACCATGTTCGCTTATCTGAGGTCCCTGCAGGCTTTCAG T AACCCCTCGGCT GGCATCTCAGT GGATGT GAAAGT CTTC AT CGTGCCTGT G GGAAATCATTCCAACATCCCGTTCAGCCGCGTGAACCACAGCAAGTTCATG GT C AC AGAC A AGACAGCCT AT GT AGGCAC CTCT AACTGGT CAGA AG ACT AC TTCAGCCACACCGCTGGTGTGGGCCTGATTGTCAGCCAGAAGACCCCCAGA GCCCAGCCAGGCGCAACCACCGTGCAGGAGCAGCTGAGGCAACTCTTTGAA CGAGACTGGAGTTCCCACTATGCTATGGACCTAGACAGACAAGTCCCGAGC CAGGACTGTGTCTGGTAG

> Proteína PLD4 de ratón (503 aminoácidos) (SEQ ID N°: 132)

MDKKKEHPEMRIPLQTAVEVSDWPCSTSHDPHSGLGMVLGMLAVLGLSSVTL1 LFLWQGATSFTSHRMFPEEVPSWSWETLKGDAEQQNNSCQLILVESIPEDLPFA AGSPT AQPLAQ AWLQLLDT ARE S VHIAS Y Y WS LT GLDIGVND S S SRQ GEALLQ KFQQLLLRNISVVVATHSPTLAKTSTDLQVLAAHGAQIRQVPMKQLTGGVLHS KFWVVDGRHVYVGSANMDWRSLTQVKELGATTYNCSNLAQDLEKTFQTYWV LGTPQAVLPKTWPREJFSSHINRFHPLRGPFDGVPTTAYFSASPPSLCPHGRTRDL DAVLGVMEGARQFIYVSVMEYFPTTRFTHHARYWPVLDNALRAAALNKGVH VRLLVSC WFNTDPTMF AYLRSLQ AFSNPS AGI S VD VKVFIVP VGNHSNIPF SRVN HSKFMVTDKTAYVGTSNWSEDYFSHTAGVGLIVSQKTPRAQPGATTVQEQLR QLFERDWSSHYAMDLDRQVPSQDCVW

> Secuencia de cADN de PLD3 humana (SEQ ID N°: 55)

ATGAAGCCTAAACTGATGTACCAGGAGCTGAAGGTGCCTGCAGAGGAGCCC GCC AAT G AGCT GC C C AT G AAT G AG ATT G AGGC GT G GAAGGCT GCGG AAAA GAAAGCCCGCTGGGTCCTGCTGGTCCTCATTCTGGCGGTTGTGGGCTTCGGA GCCCTGATGACTCAGCTGTTTCTATGGGAATACGGCGACTTGCATCTCTTTG GGCCCAACCAGCGCCCAGCCCCCTGCTATGACCCTTGCGAAGCAGTGCTGG TGGAAAGCATTCCTGAGGGCCTGGACTTCCCCAATGCCTCCACGGGGAACC CTTCCACCAGCCAGGCCTGGCTGGGCCTGCTCGCCGGTGCGCACAGCAGCC TGGACATCGCCTCCTTCTACTGGACCCTCACCAACAATGACACCCACACGCA GGAGCCCTCTGCCCAGCAGGGTGAGGAGGTCCTCCGGCAGCTGCAGACCCT GGCACCAAAGGGCGTGAACGTCCGCATCGCTGTGAGCAAGCCCAGCGGGCC CCAGCCACAGGCGGACCTGCAGGCTCTGCTGCAGAGCGGTGCCCAGGTCCG

CATGGTGGACATGCAGAAGCTGACCCATGGCGTCCTGCATACCAAGTTCTG GGTGGTGGACCAGACCCACTTCTACCTGGGCAGTGCCAACATGGACTGGCG TTCACTGACCCAGGTCAAGGAGCTGGGCGTGGTCATGTACAACTGCAGCTG CCTGGCTCGAGACCTGACCAAGATCTTTGAGGCCTACTGGTTCCTGGGCCAG GCAGGCAGCTCCATCCCATCAACTTGGCCCCGGTTCTATGACACCCGCTACA ACCAAGAGACACCAATGGAGATCTGCCTCAATGGAACCCCTGCTCTGGCCT ACCTGGCGAGTGCGCCCCCACCCCTGTGTCCAAGTGGCCGCACTCCAGACCT GAAGGCTCTACTCAACGTGGTGGACAATGCCCGGAGTTTCATCTACGTCGCT GTCATGAACTACCTGCCCACTCTGGAGTTCTCCCACCCTCACAGGTTCTGGC CTGCCATTGACGATGGGCTGCGGCGGGCCACCTACGAGCGTGGCGTCAAGG TGCGCCTGCTCATCAGCTGCTGGGGACACTCGGAGCCATCCATGCGGGCCTT CCTGCTCTCTCTGGCTGCCCTGCGTGACAACCATACCCACTCTGACATCCAG GTGAAACTCTTTGTGGTCCCCGCGGATGAGGCCCAGGCTCGAATCCCATATG CCCGTGTCAACCACAACAAGTACATGGTGACTGAACGCGCCACCTACATCG GAACCTCCAACTGGTCTGGCAACTACTTCACGGAGACGGCGGGCACCTCGC TGCTGGTGACGCAGAATGGGAGGGGCGGCCTGCGGAGCCAGCTGGAGGCC ATTTTCCTGAGGGACTGGGACTCCCCTTACAGCCATGACCTTGACACCTCAG CTGACAGCGTGGGC AACGCCT GCCGCCTGCTCT GA

> Proteína PLD3 humana (490 aminoácidos) (SEQ ID N°: 127)

MKPKLMYQELKVPAEEPANELPMNETEAWKAAEKKARWVLLVLTLAVVGFGA LMTQLFLWEYGDLHLFGPNQRPAPCYDPCEAVLVESIPEGLDFPNASTGNPSTS QAWLGLLAGAHSSLDIASFYWTLTNNDTHTQEPSAQQGEEVLRQLQTLAPKGV NVRIAVSKPS GPQPQ ADLQ ALLQSG AQVRM VDM QKLT HGVLHTKFW V YD QT HFYLGSANMDWRSLTQVKELGVVMYNCSCLARDLTKTFEAYWFLGQAGSSIPS T W PRF Y DTRYNQETPMEICLN GTPALAY LAS APPPLCPS GRT PD LKALLN V VDN ARSFIYVAVMNYLPTLEFSHPHRFWPAIDDGLRRATYERGVKVRLLISCWGHSE PSMRAFLLSLAALRDNHTHSDIQVKLFVVPADEAQARIPYARVNHNKYMVTER ATYIGTSNWSGNYFTETAGTSLLVTQNGRGGLRSQLEAIFLRDWDSPYSHDLDT SADSVGNACRLL

> cADN de PLD5 humana (1338 pb) (SEQ ID N°: 56)

ATGGGAGAGGATGAGGATGGACTCTCAGAAAAAAATTGCCAAAATAAATG T CG AATT GCC CT GGTGGAAAAT ATTCCTGAAGGCCTT AACT ATT C AGAAAAT GCACCATTTCACTTATCACTTTTCCAAGGCTGGATGAATTTACTCAACATGG CCAAAAAGTCTGTTGACATAGTGTCTTCCCATTGGGATCTCAACCACACTCA TCCATCAGCATGTCAGGGTCAACGTCTTTTTGAAAAGTTGCTCCAGCTGACT TCGCAAAATATTGAAATCAAGCTAGTGAGTGATGTAACAGCTGATTCAAAG GTATTAGAAGCCTTGAAATTAAAGGGAGCCGAGGTGACGTACATGAACATG ACCGCTTACAACAAGGGCCGGCTGCAGTCCTCCTTCTGGATCGTGGACAAA CAGCACGTGTATATCGGCAGTGCCGGTTTGGACTGGCAATCCCTGGGACAG ATGAAAG AACT CGGT GT C ATCTTCT AC AACT GC AGCTGCCT GGT CCTAGATT T AC AAAGG AT ATTT GCTCT AT AT AGTTC ATT AAAATT C A AAAG C AGAGTGC C TCAAACCTGGTCCAAAAGACTCTATGGAGTCTATGACAATGAAAAGAAATT GCAACTTCAGTTGAATGAAACCAAATCTCAAGCATTTGTATCGAATTCTCCA

AAACTCTTTTGC CCTAAAAAC AGAAGTTTT GAC ATAGAT GCCATCT AC AGT G TGATAGATGATGCCAAGCAGTATGTGTACATCGCTGTCATGGACTACCTGCC TATCTCCAGCACAAGCACCAAAAGGACTTACTGGCCAGACTTGGATGCAAA AATAAGAGAAGCATTAGTTTTACGAAGCGTTAGAGTTCGACTCCTTTTAAGC TTCTGGAAGGAAACTGATCCCCTTACGTTTAACTTTATTTCATCTCTTAAAGC GATTTGCACTGAAATAGCCAACTGCAGTTTGAAAGTTAAATTTTTTGATCTG GAAAGAGAGAATGCTTGTGCTACAAAAGAACAAAAGAATCACACCTTTCCT AGGTTAAATCGCAACAAGTACATGGTGACAGATGGAGCAGCTTATATTGGA AATTTTGATTGGGTAGGGAATGATTTCACTCAGAATGCTGGCACGGGCCTTG TT ATC AACC AGGC AGATGTG AGGAAC AAC AGAAGC AT CATT AAGC A ACTT A AAGATGTGTTTGAAAGGGACTGGTATTCACCGTATGCCAAAACCTTACAGC CAACCAAACAGCCGAACTGCTCAAGCCTGTTCAAACTCAAACCCCTCTCCA ACAAAACTGCCACAGACGACACAGGCGGAAAGGATCCCCGGAACGTATGA

> Proteína PLD5 humana (445 aminoácidos) (SEQ ID N°: 128)

MGEDEDGLSEKNCQNKCRIALVENIPEGLNYSENAPFHLSLFQGWMNLLNMA KKSVDIVSSHWDLNHTHPSACQGQRLFEKLLQLTSQNIEIKLVSDVTADSKVLE ALKLKGAEVTYMNMTAYNKGRLQSSFWIVDKQHYYIGSAGLDWQSLGQMKE LGVIFYNCSCLVLDLQRIFALYSSLKFKSRVPQTWSKRLYGVYDNEKKLQLQLN ETKSQAFVSNSPKLFCPKNRSFDIDAIYSVIDDAKQYVYIAVMDYLPISSTSTKRT YWPDLDAKTREALVLRSVRVRLLLSFWKETDPLTFNFTSSLKATCTEIANCSLKV KFFDLERENACATKEQKNHTFPRLNRNKYMVTDGAAYIGNFDWVGNDFTQNA GTGLVINQADVRNNRSI1KQLKDVFERDWYSPYAKTLQPTKQPNCSSLFKLKPL SNKT ATDDTGGKDPRNV

> cADN de proteína de fusión PLD4 humana-Ig (2142 pb) (SEQ ID N°: 125)

ATGGAGTTT C AGACCCAGGT CTTTGTATT CGT GTT GCTCT GGTT GTCT GGT GT TGATGGAgattacaaggatgacgacgataaaGGATCCcccagagggcccacaatcaagccctgtcctccatgca aatgcccagcacctaacctcttgggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaagatcaaggatgtactcatgatctccctgagc cccatagtcacatgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagatgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagt

cccaaagggtcagtaagagctccacaggtatatgtcttgcctccaccagaagaagagatgactaagaaacaggtcactctgac ctgcatggtcacagacttcatgcctgaagacatttacgtggagtggaccaacaacgggaaaacagagctaaactacaagaac actgaaccagtcctggactctgatggttcttacttcatgtacagcaagctgagagtggaaaagaagaactgggtggaaagaaat agctactcctgttcagtggtccacgagggtctgcacaatcaccacacgactaagagcttctcccggactccgggtaaaCGT CCTCCCACCTGGGGCCAGGTGCAGCCCAAGGACGTGCCCAGGTCCTGGGAG CATGGCTCCAGCCCAGCTTGGGAGCCCCTGGAAGCAGAGGCCAGGCAGCAG AGGGACTCCTGCCAGCTTGTCCTTGTGGAAAGCATCCCCCAGGACCTGCCAT CTGCAGCCGGCAGCCCCTCTGCCCAGCCTCTGGGCCAGGCCTGGCTGCAGCT GCTGGACACTGCCCAGGAGAGCGTCCACGTGGCTTCATACTACTGGTCCCTC ACAGGGCCTGACATCGGGGTCAACGACTCGTCTTCCCAGCTGGGAGAGGCT CTTCTGCAGAAGCTGCAGCAGCTGCTGGGCAGGAACATTTCCCTGGCTGTG GCCACCAGCAGCCCGACACTGGCCAGGACATCCACCGACCTGCAGGTTCTG GCTGCCCGAGGTGCCCATGTACGACAGGTGCCCATGGGGCGGCTCACCAGG

GGTGTTTTGCACTCCAAATTCTGGGTTGTGGATGGACGGCACATATACATGG GCAGTGCCAACATGGACTGGCGGTCTCTGACGCAGGTGAAGGAGCTTGGCG CTGTCATCTATAACTGCAGCCACCTGGCCCAAGACCTGGAGAAGACCTTCC AGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGTCCTCCCCAAAACCTGGC CTCAGAACTTCTCATCTCACTTCAACCGTTTCCAGCCCTTCCACGGCCTCTTT GATGGGGTGCCCACCACTGCCTACTTCTCAGCGTCGCCACCAGCACTCTGTC CCCAGGGCCGCACCCGGGACCTGGAGGCGCTGCTGGCGGTGATGGGGAGCG CCCAGGAGTTCATCTATGCCTCCGTGATGGAGTATTTCCCCACCACGCGCTT CAGCCACCCCCCGAGGTACTGGCCGGTGCTGGACAACGCGCTGCGGGCGGC AGCCTTCGGCAAGGGCGTGCGCGTGCGCCTGCTGGTCGGCTGCGGACTCAA CACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAAC CCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGG AACCATTCCAACATCCCATTCAGCAGGGTGAACCACAGCAAGTTCATGGTC ACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTC AGCAGCACGGCGGGGGTGGGCTTGGTGGTCACCCAGAGCCCTGGCGCGCAG CCCGCGGGGGCCACGGT GCAGGAGCAGCT GCGGCAGCTCTTT GAGCGGGAC TGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGAC TGCGTTTGGCAGGGCTGA

> Proteína de fusión PLD4 humana-Ig (713 aminoácidos) (SEQ ID N°: 126) MEFQTQVFVFVLLWLSGVDGDYKDDDDKGSPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGP SVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHR EDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQ VYVLPPPEEEMTKKQVTFTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDS DGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKRPPTW GQVQPKDVPRSWEHGSSPAWEPLEAEARQQRDSCQLVLVESIPQDFPSAAGSPS AQPLGQAWLQLLDTAQESVHVASYYWSLTGPDIGVNDSSSQLGEALLQKLQQ LLGRNISLAVATSSPTLARTSTDLQVLAARGAHVRQVPMGRLTRGVLHSKFWV VDGRHTYMGSANMDWRSLTQVKELGAVTYNCSHLAQDLEKTFQTYWVLGVP KAVLPKTWPQNFSSHFNRFQPFHGLFDGVPTTAYFSASPPALCPQGRTRDLEAL LAVMGSAQEFIYASVMEYFPTTRFSHPPRYWPVLDNALRAAAFGKGVRVRLLV GCGLNTDPTMFPYLRSLQALSNPAANVSVDVKVFIVPVGNHSNIPFSRVNHSKF MYTEKAAYIGTSN W SEDYFS STAG VGLVVT Q SPG AQPAG ATVQEQLRQLFERD WSSRYAVGLDGQAPGQDCVWQG NÚMEROS DE ACCESO NITE ABP-1211

NITE ABP-1212

NITE ABP-1213

NITE ABP-1214

TEXTO LIBRE DEL LISTADO DE SECUENCIAS SEQ ID N°: 45: Cebador directo

SEQ ID N°: 46: Cebador inverso

SEQ ID N°: 47: Cebador directo

SEQ ID N°: 48: Cebador inverso

SEQ ID N°: 49: Cebador directo

SEQ ID N°: 50: Cebador inverso

SEQ ID N°: 51: Cebador directo

SEQ ID N°: 52: Cebador inverso

SEQ ID N°: 53: Cebador directo

SEQ ID N°: 54: Cebador inverso

SEQ ID N°: 70: Cebador de anclaje

SEQ ID N°: 70: n es desoxiinosina

SEQ ID N°: 71: cebador AUAP

SEQ ID N°: 72: Cebador

SEQ ID N°: 73: Cebador

SEQ ID N°: 114: Cebador

SEQ ID N°: 115: Cebador

SEQ ID N°: 116: Cebador

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo que se une a la proteína fosfolipasa D4 (PLD4) para el uso como un medicamento de inhibición de células B activadas en la prevención o el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria provocada por células B activadas, o en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica.

2. El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 1, que comprende

(a) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 2, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 3, una CDR3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 4, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 5, una CDR2 de la cadena ligera como se expone en SEQ ID N°: 6, y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 7;

(b) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 8, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 9, una CDR3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 10, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 11, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 12 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 13;

(c) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 14, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 15, una CDr 3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 16, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 17, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 18 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 19;

(d) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 20, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 21, una CDr 3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 22, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 23, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 24 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 25;

(e) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 26, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 27, una CDr 3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 28, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 29, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 30 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 31;

(f) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 32, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 33, una CDr 3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 34, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 35, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 36 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 37; o

(g) una CDR1 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 38, una CDR2 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 39, una CDr 3 de la cadena pesada expuesta en SEQ ID N°: 40, una CDR1 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 41, una CDR2 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 42 y una CDR3 de la cadena ligera expuesta en SEQ ID N°: 43.

3. El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 1, que comprende

(a) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 36 a 153 de SEQ ID: 75 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 95;

(b) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 135 de SEQ ID: 77 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 97;

(c) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 142 de SEQ ID: 79 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 99;

(d) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 142 de SEQ ID: 81 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 101;

(e) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 139 de SEQ ID: 83 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 20 a 131 de SEQ ID: 103;

(f) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 140 de SEQ ID: 85 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 131 de SEQ ID: 105;

(g) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 20 a 140 de SEQ ID: 87 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 131 de SEQ ID: 107;

(h) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 89 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 109;

(i) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 91 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 111; o

(j) una región variable de la cadena pesada expuesta en los aminoácidos 19 a 142 de SEQ ID: 93 y una región variable de la cadena ligera expuesta en los aminoácidos 21 a 127 de SEQ ID: 113.

4. Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo se produce mediante cualquiera de los hibridomas mp5B7, mp7B4, mp13D4 y mp13H11 de los n°s de depósito NITE BP-1211, NITE BP-1212, NITE BP-1213 y NITE b P-1214, o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo para el uso como un medicamento de inhibición de células B activadas.

5. El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 1, que está quimerizado o humanizado.

6. El anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo para el uso según la reivindicación 1, que comprende una cadena pesada expuesta en SEQ ID: 121 y una cadena ligera expuesta en SEQ ID: 123.

7. Un método in vitro para detectar células B activadas, y el método incluye

a) una etapa de puesta en contacto de un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular de PLD4 o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo con las células a ensayar; y

b) una etapa de detección del anticuerpo monoclonal o del fragmento de anticuerpo que contiene la región de unión al antígeno del mismo que se une a las células.

8. El uso de un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular de PLD4 humana o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo para detectar células B activadas in vitro.

9. Un método in vitro para inhibir una actividad de células B activadas, y el método incluye una etapa de puesta en contacto de cualquiera de los siguientes componentes con las células B activadas:

(a) un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo que se une a PLD4 e inhibe la actividad de las células B activadas o que tiene actividad citotóxica contra las células B activadas, y

(b) una inmunoglobulina en la que están injertadas las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo monoclonal de (a), o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo, en el que la actividad de las células B activadas es la producción de anticuerpos o la maduración hasta células secretoras de anticuerpos.

10. Un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo o una inmunoglobulina para el uso como un medicamento que inhibe células B activadas en la prevención o el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria provocada por las células B activadas, o en la prevención o el tratamiento de una enfermedad alérgica, en el que:

(a) el anticuerpo monoclonal o el fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo se une a PLD4 e inhibe la actividad de las células B activadas o tiene actividad citotóxica contra las células B activadas, o

(b) la inmunoglobulina es una inmunoglobulina en la que están injertadas las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo monoclonal de (a), o un fragmento de anticuerpo que contiene una región de unión al antígeno del mismo, en el que la actividad de las células B activadas es la producción de anticuerpos o la maduración hasta células secretoras de anticuerpos.