TARIFNAME ANTI-FOSFOLIN D4 ANTIKORU IÇEREN ILAÇ Teknik Alan Mevcut bulus, fosfolipaz D4'e baglanan bir antikorun bir kullanimi ile ilgilidir. Bundan sonra "fosfolipaz D", PDL olarak ve "fosfolipaz D4" olarak kisaltilabilmektedir ve benzerleri PLD4 ve benzerleri olarak kisaltilabilmektedir. PLD, fosfotidil kolinin hidrolize edilmesi vasitasiyla fosfatidik asit ve kolin üretmek için bir reaksiyonu katalize etmektedir ve çesitli intraselüler sinyallemeye neden olmaktadir. Üretilen fosfatidik asidin bir lipit sinyal molekülü olarak islev gördügüne inanilmistir. PLDl ve PLDZ, önceden bilinen ve N-terminal alaninda bir fosfatidil inositid-baglayici Foks homoloji alani (PX alani) ve bir fosfatidil inositid-baglayici plekstrin homoloji alani (PH) içeren iki tip memeli PLD olarak bilinmektedir. Her iki alan da PLD'nin membran lokalizasyonuna dahil olmaktadir. PLDl ve PLDZ ayrica iki His-x-Lys-x-x-x-x-Asp sekansi (HKD motifleri) içermektedir. HKD motifleri, PLD aktivitesi için önemli alanlardir. PLDl ve PLD2 tarafindan üretilen osfatidik asidin, sitoskeleton yeniden yapilandirmasina, eksositoza, fagositoza, kanserlesmeye, hücre adezyonuna, kemotaksise ve benzerlerine dahil oldugu önerilmistir ve sadece sinir sistemi, immün sistem ve benzerleri üzerinde etkilidir. Simdi resmi olarak PLD3 olarak adlandirilan insan Hu-K4 ve fare SAM9'u, PX ve PH alanlarindan muaftir ve iki HKD motifine sahip olmasina ragmen PLD aktivitesi göstermemektedir. Her ne kadar üç PLD aile üyesi, PLD4, PLDS ve PLD6 olsa da bu klasik olmayan PLD'ler hakkinda çok az sey bilinmektedir. Serebellar Gelisini Transkriptoni Veri Tabaninda. (CDT-DB) fare serebellar gelisiminde bir gen ekspresyon paternini arastirma sonucu olarak gelisim sirasinda kontrol edilen bir transkripsiyon ürünü, PLD4 tanimlanmistir (bakiniz Patent Disi Literatür l). PLD4'ün temel özellikleri raporlanmamistir. PLD4'ün glikosilasyon ile ya da bu olmadan enzimatik aktivitesinin belirlenmesi gerekmektedir. PLD4, SEQ ID NO: 1'de gösterilen 506 amino asit sekansina sahiptir ve SEQ ID NO: 2'nin CDNA baz sekansi tarafindan kodlanmaktadir (Patent Disi Literatürler 1 ve 2). PLD4 proteini, C-terminal bölgesinde korunan iki HKD Emtifinden (His-X-Lys-x-X-x-x-Asp amino asit sekansi, x diger amino asitleri temsil etmektedir) ve bir putatif fosforilasyon alanindan (Thr 472) olusan iki geçici PDF alanina (fosfodiesteraz motifleri) sahiptir. PLD4 proteinin yapisi, bir tip II transmembran protein olarak tahmin edilmektedir. Ek olarak PLD4, N-terminal bölgesinde PX ve PH alanlarina sahip olmamakta olup, klasik PLD ailesinde PLD ailesinde PLDl ve PLDZ bunlara sahiptir. Diger taraftan PLD4, iki HKD motifine sahip oldugundan fakat PX alanindan ve PH alanindan muaf oldugundan ve bunun yerine bir putatif transmembran alanina sahip oldugundan dolayi PLD ailesine aittir (Patent Disi Literatür 3). PLD4 mRNA'nin ekspresyonu, 1 haftalik farelerin korpus kallosumunu ve serebellar beyaz maddesini içeren beyaz madde bölgeleri etrafina çevresel olarak lokalize küçük hücre kümelerinde düsük ila orta seviyelerde bulunmustur. Bu PLD4 mRNA eksprese eden hücreler, Ibal-pozitif mikroglia olarak tanimlanmistir (Patent Disi Literatür 3). Ayrica Pfare serebellumunda LD4-pozitif hücreler 10 günlük farelerde dagilmaktadir. PLD4 ekspresyonunun fare serebellumunda erken postnatal gelisim sirasinda geçici olarak kisitlandigi önerilmistir. Farelerde miyelin olusumu korpora kallosada ve serebellar beyaz maddede dogumdan sonraki ilk haftada baslamaktadir. Bu sirada PLD4, beyaz maddede mevcut amiboid (aktive edilmis bir durum) mikrogliada yüksek oranda eksprese edilmektedir ve dolayisiyla bu süre zarfinda beyaz maddede PLD4 eksprese eden hücrelerin miyelin olusumuna dahil olduguna dair bir olasilik olduguna inanilmaktadir. Özellikle PLD4'ün besin kofullarinda biriktigi ortaya çikartilmistir ve PLD4'ün fagositoza dahil olduguna dair bir olasilik oldugu önerilmistir. Aktive edilmis bir durum olan amiboid mikrogliada çesitli sitokinler` ve büyüme faktörleri sekrete edilmektedir ve es zamanli olarak fagositoz aktive edilmektedir. Bir gelisimsel periyotta beyin farelerin beyin beyaz maddesinde fazla oligodendrositler (aksonlarin etrafina sarilarak miyelin olusturan merkezi sinir sistemi glial hücreler) apoptozdan geçtigine inanilmistir. Oligodendrositlerin parçalandigina ve sinyal moleküllerini sekrete etmek ve böylelikle beyaz maddede bir miyelin olusturan ortami ayarlamak için amiboid mikrogliada uzaklastirildiginda iliskin bir olasilik vardir. PLD4'ün miyelin olusumunu içeren bu islemlere dahil oldugu önerilmistir. Fare mRNA'sinin ekspresyonu ayrica nöronal olmayan dokularda gözlemlenmektedir ve esasen dalakta dagitilmaktadir. PLD4 proteinin güçlü ekspresyonu kirmizi dalak pulpasinin marjinal bir alani etrafinda tespit edilmektedir ve subselüler membran fraksiyonlarindan toplanan dalak PLD4 proteini yüksek oranda N- glikosilatlanmaktadir. PLD4, bir heterolog hücre sisteminde eksprese edildigi zaman PLD4, endoplazmik retikulum ve Goldi aparatinda lokalize edilmistir. Heterolog olarak eksprese edilen PLD4, PLD enzim aktivitesi göstermemistir (Patent Disi Literatür Zaman ve mekansal olarak kisitli olan PLD4'ün ekspresyon paterninden PLD4, erken postnatal beyin gelisimi sirasinda mikrogliar ve dalak marjinal alan hücreleri arasindaki ortak fonksiyonlarda bir rol oynayabildigi önerilmistir. Diger taraftan mevcut bulus sahipleri, PLD4 spesifik olarak bir dinlenme periyodunda pDC'de (plazmasitoid Dendtirik Hücre) (dinlenen pDC) yüksek oranda eksprese edilmektedir (Patent Literatürü 1). Mevcut bulus sahipleri ayrica bir PLD4'e özgü antikorun, pDC aktivitesinin baskilanmasi için kullanilabildigini raporlamistir. Ayrica PLD4, Japonlarda Sistemik Sklerozun yeni yatkinlik genlerinin biri olarak raporlanmistir (Patent Disi Literatür 4). Bununla birlikte Avrupa'daki ayni analizin bir sonucu olarak PLD4 ile belirgin korelasyon bulunmustur ve PLD4 ve Sistemik Skleroz gibi otoimmün hastaliklar arasindaki bir iliskiyi gösteren güçlü sonuçlar elde edilmistir. Bir immün mekanizmasi kabaca iki grupta siniflandirilmaktadir. Birisi patojenler gibi yabanci Haddeleri tespit eden ve bir baslangiç atagi gerçeklestiren "fitri immünite (dogal immünite)" olmaktadir ve diger antijen peptitlerin ve yabanci maddelerden türeyen digerlerinin sunumu olan bilgi degisimi araciligiyla hücreler (DC), NK (Dogal Katil) hücreler ve benzerleri, esasen benzerlerinin bilgisinin iletildigi T hücreleri ve B hücreleri bilgisinin iletimi vasitasiyla aktive edilen T hücreler, özellikle patojenleri hücre aracili immünite gibi dogrudan bir sekilde ayirt edebilmekte ve bunlara saldilabilmektedir ve yukaridaki ile ayni sekilde aktive edilen B hücreleri patojenleri antikorlar üreterek dolayli bir sekilde ayirt edebilmekte ve bunlara saldirabilmektedir (hormonel immünite). lipoproteinler, RNA, vb.) bulunan patojen ile iliskili moleküler paternler (PAMP'lar) Toll-benzeri reseptörler (TLR) araciligiyla ayirt edilmektedir ve inflamatuar sitokinlerin sekresyonu NF-kB araciligiyla desteklenmektedir ya da interferonun (IFN) sekresyonu IRF (Interferon regülatör faktörü) araciligiyla deseklenmektedir. TLR, subselüler lokalizasyon alanlari araciligiyla kabaca iki grubta siniflandirilmaktadir: hücre yüzeyleri üzerinde eksprese edilen bir grup ve endozomlarda ve endoplasmik retikulada (ER) eksprese edilen bir grup. pDC'de indüklemek için lokalize olan TLR7 ve TLR9 araciligiyla aktive edilmektedir. Bu TLR'lerin hücre yüzeylerinde degilde hücrelerde eksprese edilmesinin nedeninin otoimmün hastaliklarin baslangicina iliskin riski azaltmak oldugu önerilmistir. TLR7 ve TLR9, sirasiyla tek sarmalli RNA'yi ve DNA'yi bir ligand olarak ayirt etmektedir. Sadece yabanci patojenik bakteriler degil ayni zamanda konaklar bu nükleik asitleri tutmaktadir ve dolayisiyla nükleik asitleri ayirt eden ve immün hücreleri aktive eden reseptörlerin daima otoimmün hastaliklari indükledigi önerilmistir. Diger taraftan "elde edilen immünitede" önemli bir rol gösteren B hücreleri (B lenfositleri) yüzeyindeki immünoglobulin Ig reseptörlerini eksprese eden lenfositlerdir. B hücreler, kemik iligindeki hematopoetik kök hücrelerden üretilmektedir ve pre-B hücreler` ve olgunlasmamis B hücrelerine farklilasmaktadirt ve daha sonra saf B hücrelerine olgunlasmaktadir (olgun, islemden geçirilmemis B hücreler). Saf B hücreleri, sadece yukaridaki T hücreler araciligiyla stimülasyon degil ayni zamanda dogrudan antijen stimülasyonu vasitasiyla aktive edilmektedir ve ayrica gibi alt siniflar dahil) gibi antikorlari üretmek ve sekrete etmek için farklilasma ve proliferasyon vasitasiyla antikor üreten hücreler haline gelmektedir. Spesifik yabanci antijenleri ayirt eden B hücre reseptörlerine (BCR) ek olarak yukaridaki TLR'lerin B hücrelerinde eksprese edildigi bilinmektedir. Önceden örnegini B hücrelerinin proliferasyonuna ve antikor üretimine neden oldugu bilinen LPS'nin bir TLR4 ligandi oldugu ve yukaridaki TLR7 ve TLR9'ün da ayrica B hücrelerinde eksprese edildigi bilinmektedir. Bu B hücrelerinin, yukaridaki otoimmün hastaliklari indükleme degil ayni zamanda antikor üretme kabiliyetlerinin fazla reaksiyonundan dolayi alerjik reaksiyonlari da indükleme olasiligina sahip oldugu önerilmistir. lgG, immünoglobulin G, dört peptit zincirinden - iki özdes agir zincir ve iki özdes hafif zincirden olusan bir antikor izotipidir. IgG, B hücreleri tarafindan üretilmektedir ve adaptif immünite için kritik bir rol oynamaktadir. IgG üretmeyen saf B hücreleri plazmablastlara ve sonuç olarak plazma hücrelerine farklilasmaktadir. Plazmablastlar ve plazma hücreleri, çok fazla bir miktarda antikor üretebilmektedir. Geleneksel olarak miyeloid dendritik hücrelerin (DC'ler) IL-lZ ve IL-6 ve/veya BAFF/APRIL ibi membran molekülleri ile stimüle olarak B hücresi büyümesini ve farklilasmayi tetikledigi gösterilmistir (Patent Disi Literatürler 5, 6 ve 7). Ek olarak plazmasitoid DC'ler (pDC'ler) saf B hücrelerinin olgunlasmasini ve antikor-sekrete eden plazma plazmablastlara ve IFN-d ve IL-6 üreten plazma hücrelerine farklilasmasini indüklemektedir (Patent Disi Literatür 8). IgG'nin degisken bölgesi Virüsler, bakteriler ve mantar gibi çesitli patojenleri yakalamakta olup, bu da bu tür enfeksiyonlardan vücudun korunmasi ile sonuçlanmaktadir. SLE, klasik bir immün kompleks aracili otoimmün hastalik olarak düsünülmektedir. Immün kompleksler (IC'ler) nükleik asitlere ve bunlarin dsDNA, ribonükleoprotein ve histon gibi iliskili proteinlerine karsi üretilen oto-antikorlarin bir sonucu olarak sirkülasyonda ya da in-situ olusmaktadir. Bu IC'ler nefrit, artrit, cilt kizarikliklari ve vaskülit gibi hastaliga özgü klinik semptomlar ile enflamasyona neden olmaktadir. SLE hastasindan alinan kan, saf B hücrelerinin azalmasi ve artan bellek B hücreleri, plazmablastlar ve plazma hücreleri ile karakterize edilmektedir (Patent Disi Literatürler 9, 10 ve 11). Dolayisiyla oto-reaktif antikor sekrete eden plazmablastlar araciligiyla plazma hücrelerine ve antikor üretimine farklilasmanin baskilanmasi, otoimmün hastaliklari iyilestirmek için umut vadeden bir strateji ile sonuçlanmaktadir. PBMC'lerde saf B hücreleri, bellek B hücreleri ve plazmablastlar gibi B hücrelerin çesitli alt dizileri vardir. PBMC'lerde B hücresi alt dizisinin birçogu saf B hücreleridir. Saf B hücreleri, yabanci antijenlere maruz olmayanlardir. Bellek B hücreleri, birincil enfeksiyon vasitasiyla olusan ve plazmablastlara farklilasma vasitasiyla hizli antikor-aracili immün tepkide kritik olanlardir. Plazmablastlar, büyük bir miktarda antikor sekrete eden ve CDl9+CD27+IgD-CD38+ ile isaretlenendir. Yabanci antikorlara maruz kaldiktan sonra saf B hücreleri aktive edilmis B hücreleri haline gelmektedir. Aktive edilmis B hücreleri ayrica bellek B hücrelerine ve/veya ayrica antikorlari sekrete eden plazmablastlara farklilasmaktadir. Bu degisim B hücre natürasyonu, birden çok asamada meydana gelmektedir. Ilk, antijenden bagimsiz asama, kendine özgü bir antijene baglanabilen olgun B hücreleri indüklemektedir. Matürasyonun bu asamasi, yasayan vücutta kemik iliginde ve dalakta meydana gelmektedir. B hücre natürasyonunun antijen bagimli asamasi, antijen baglama ve ko-stimülasyon vasitasiyla B hücre aktivasyonunu takiben meydana gelmektedir. Bu sinyaller gerek B hücrelere gerekse antikor sekrete eden plazmablastlara B hücresi matürasyonunu desteklemektedir. B hücre matürasyonunun antijene bagimli asamasi, aktive edilmis B hücresi proliferasyonunu, antikor afinite matürasyonunu ve antikor sinifi degisimi içermektedir. Bu matürasyonlar, ikincil lenfoid dokularin germinal merkezlerinde meydana gelmektedir. ln vitro deneysel kosullarda pDC'lerin aktive edilmis B hücrelerin IFN-d ve IL-6 salimi araciligiyla Ig sekrete eden plazmablastlara matürasyonunu indüklemektedir. CpG2216, matürasyonu baslatmak için IFN-d üretimini ve B hücreleri indüklemek için pDC'leri aktive etmektedir. pDC'lerden IFN-d ayrica aktive edilmis B hücrelerin IL-6 mevcudiyetinde plazmablastlara matürasyonunu desteklemektedir. Patent Literatürü 2, yeni proteinleri ve polinükleotitleri açiklamaktadir ve proteinlerin biyolojik aktiviteleri ve kullanimlari hakkinda tahminde bulunmaktadir. PLD4'ün amino asit sekansi açiklanmaktadir. olarak rüçhan tarifinden sonra yayinlanmistir ve Madde 54 (3) EPC altinda alinti yapilabilmektedir) 472-480 Mevcut bulus tarafindan çözülecek bir problem, PLD4'e baglanan bir antikor kullanarak aktive edilmis B hücreleri regüle etmek ve bunun neden oldugu hastaliklarin semptomlarini gelistirmektir. PLD4 ile ilgili arastirmalar araciligiyla mevcut bulus sahipleri, önceden raporlanmis olan bir dinlenme periyodundaki pDC hücrelere ek olarak PLD4 ekspresyonunun ayrica aktive edilmis B hücrelerde indüklenmis oldugunu onaylamistir. Dolayisiyla mevcut bulus sahipleri, aktive edilmis B hücreler üzerinde PLD4 antikorlarin etkisini arastirmistir. Anti-PLD4 üretimine ve saflastirmasina yönelik bir yöntem, Patent Literatürü l'deki bir yöntem vasitasiyla gerçeklestirilmektedir. Yani mevcut bulus asagida açiklanan anti-PLD4 antikorlarini kullanarak bir ikinci kullanim ile ilgilidir. (1) Aktive edilmis B hücrelerin neden oldugu bir otoimmün hastaligi engellemede ya da tedavi etmede ya da bir alerjik hastaligi engellemede ya da tedavi etmede aktive edilmis B hücresini baskilayan bir ilaç olarak kullanimi için fosfolipaz D4 (PLD4) proteinine baglanan bir monoklonal antikor baglama ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani. (2) Yukaridaki (1)'e göre kullanima yönelik monoklonal antikor ya da antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani olup, asagidakileri içermektedir: (a)Bir agir zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir SYWMH sekansi (SEQ ID NO: 2), CDR2 olarak bir DIYPGSDSTNYNEKFKS sekansi (SEQ ID No:3) ve bir CDR3 sekansi olarak GGWLDAMDY (SEQ ID `NO: 4) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir RASQDISNYLN sekansi (SEQ ID No:5), CDR2 olarak bir YTSRLHS sekansi (DEQ ID No:6) ve CDR3 olarak bir QQGNTLPW sekansi (SEQ ID NO:7); (b) Bir agir zincirin degisken bölgesinde CDRl olarak bir TYWMH sekansi (SEQ ID NO: 8), CDR2 olarak. bir AIYPGNSETSYNQKFKG sekansi (SEQ ID No:9) ve bir CDR3 sekansi olarak GYSDFDY (SEQ ID NO: 10) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir HASQGIRSNIG sekansi (SEQ ID NO:11), CDR2 olarak bir HGTNLED sekansi (DEQ ID NO:l2) ve CDR3 olarak bir VQYVQFP sekansi (SEQ ID NO:13); (c) Bir agir zincirin degisken bölgesinde CDRl olarak bir DYNLH sekansi (SEQ ID NO: 14), CDR2 olarak bir YIYPYNGNTGYNQKFKR sekansi (SEQ ID NO:l5) ve bir CDR3 sekansi olarak GGIYDDYYDYAIDY (SEQ ID NO: 16) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir RASENIYSHIA sekansi (SEQ ID NO:17), CDR2 olarak bir GATNLAH sekansi (DEQ ID NO:18) ve CDR3 olarak bir QHFWGTP sekansi (SEQ ID NO:19): (d) Bir agir zincirin degisken bölgesinde CDRl olarak bir SYYLY sekansi (SEQ ID NO: 20), CDR2 olarak bir LINPTNSDTIFNEKFKS sekansi (SEQ ID NO:21) ve bir CDR3 sekansi olarak EGGYGYGPFAY (SEQ ID NO: 22) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir TSSQTLVHSNGNTYLH sekansi (SEQ ID NO:23), CDR2 olarak bir KVSNRFS sekansi (DEQ ID NO:24) ve CDR3 olarak bir HSTHVP sekansi (SEQ ID NO:25); (e) Bir agir zincirin degisken bölgesinde CDRl olarak bir SYGMS sekansi (SEQ ID NO: 26), CDR2 olarak bir TISSGGSYIYYPESVKG sekansi (SEQ ID NO:27) ve bir CDR3 sekansi olarak LYGGRRGYGLDY (SEQ ID NO: 28) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir RSSKSLLHSDGITYLY sekansi (SEQ ID NO:29), CDR2 olarak bir QMSNLAS sekansi (SEQ ID NO:30) ve CDR3 olarak bir AQNLEL sekansi (SEQ ID NO:31); (f) Bir agir zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir SHYYWT sekansi (SEQ ID NO: 32), CDR2 olarak bir YISYDGSNNYNPSLKN sekansi (SEQ ID NO:33) ve bir CDR3 sekansi olarak EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 34) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir RASQDIDNYLN sekansi (SEQ ID NO:35), CDR2 olarak bir YTSRLHS sekansi (SEQ ID NO:36) ve CDR3 olarak bir QQFNTLP sekansi (SEQ ID NO:37); (9) Bir agir zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir SHYYWS sekansi (SEQ ID NO: 38), CDR2 olarak bir YISYDGSNNYNPSLKN sekansi (SEQ ID NO:39) ve bir CDR3 sekansi olarak EGPLYYGNPYWYFDV (SEQ ID NO: 40) ve bir hafif zincirin bir degisken bölgesinde CDRl olarak bir RASQDIDNYLN sekansi (SEQ ID NO:41), CDR2 olarak bir YTSRLHS sekansi (SEQ ID NO:42) ve CDR3 olarak bir QQFNTLP sekansi (SEQ ID NO:43). (3) Yukaridaki (1)'e göre kullanima yönelik monoklonal antikor ya da antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani olup, asagidakileri içermektedir: (a)SEQ ID NO:75'in amino asitlerinde 36 ila 153 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:95'in amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; (b) SEQ ID NO:77'in amino asitlerinde 20 ila 135 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:97'in amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; (c)SEQ ID NO:79'un amino asitleri 29 ila 142'de belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ zincir degisken bölgesi; (d)SEQ ID NO:82'in amino asitleri ila 142 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:101'in› amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; (e)SEQ ID NO:83'ün amino asitleri 29 ila 139'de belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ zincir degisken bölgesi; (f)SEQ ID NO:85'in amino asitleri ila 140 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:105'in amino asitlerinde 21 ila 131 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; (g)SEQ ID NO:85'in amino asitleri ila 140 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:107'nin amino asitlerinde 21 ila 131 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; ün SEQ ID NO:89'un amino asitleri 19 ila 142 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:109'un amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi; (i)SEQ ID NO:91'in amino asitleri 19 ila 142 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:111'nin amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi ya da (j) SEQ ID NO:93'ün amino asitleri 19 ila 142 belirtilen bir agir zincir degisken bölgesi ve SEQ ID NO:113'ün amino asitlerinde 21 ila 127 belirtilen bir hafif zincir degisken bölgesi. (4) Yukaridaki (1)'e göre kullanim için bir monoklonal antikor ya da bunun antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani, burada antikor bir aktif bilesen olarak NITE BP-1211, NITE BP- mp5B7, mp7B4, mpl3D4 and mpl3Hll'in herhangi biri ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren bir fragmani vasitasiyla üretilmektedir. (5) Yukaridaki (1)'e göre kullanima yönelik monoklonal antikor ya da antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani olup, kimerize ya da insanlastirilmistir. (6) Yukarida (l)'e göre kullanim için monoklonal antikor ya da bunun antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani olup, SEQ ID NO:121'de belirtilen bir agir zincir dizisini ve SEQ ID NO:123'te belirtilen bir hafif zincir dizisini içermektedir. (7) Aktive edilmis B hücreleri tespit etmek için bir in vitro yöntem olup, yöntem (a) PLD4'ün bir ekstraselüler alanina baglanan bir monoklonal antikorun ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren bir antikor fragmaninin test edilecek hücreler ile temas haline getirilmesine iliskin bir adim ve (b) hücrelere baglanan monoklonal antikorun ya da bunun antijen baglama bölesini içeren antikor fragmaninin tespit edilmesine iliskin bir adim içermektedir. (8) PLD4'ün bir ekstraselüler alanina baglanan bir monoklonal antikorun ya da bunun antikor baglama bölgesini içeren bir antikor fragmaninin, in vitro aktive edilmis B hücreleri tespit etmek için kullanimi. (9) Aktive edilmis B hücrelerin bir aktivitesini baskilamaya yönelik bir in vitro yöntem, yöntem asagidaki bilesenlerin herhangi birinin aktive edilmis B hücreleri ile temas haline getirilmesine iliskin bir adimi içermektedir: (a)PLD4'ü baglayan ve aktive edilmis B hücrelerin aktivitesini baskilayan ve aktive edilmis B hücrelere karsi sitotoksik aktiviteye sahip olan bir monoklonal antikor ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren bir antikor fragmani (b)(a)'daki monoklonal antikorun bir tamamalayicilik belirleme bölgesine asilandigi immünoglobulin ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren bir antikor fragmani, burada aktive edilmis B hücrelerin aktivitesi antikor üretimi ya da antikor sekrete eden hücrelere matürasyondur. (10) Aktive edilmis B hücrelerin neden oldugu bir otoimmün hastaligi engellemede ya da tedavi etmede ya da bir alerjik hastaligi engellemede ya da tedavi etmede aktive edilmis B hücresini baskilayan bir ilaç olarak kullanimi için bir monoklonal antikor ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani, burada: (a)PLD4'e baglanan ve aktive edilmis B hücrelerin aktivitesinir baskilayan ve aktive edilmis B hücrelere karsi sitotoksik aktiviteye sahip olan monoklonal antikor ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren antikor fragmani ve (b)Immünoglobulin (a)'daki monoklonal antikorun bir tamamlayicilik belirleme bölgesine asilandigi bir immünoglobulin ya da bunun bir antijen baglama bölgesini içeren bir antikor fragmanidir, burada aktive edilmis B hücrelerin aktivitesi antikor üretimi ya da antikor sekrete eden hücrelere matürasyondur. dogrudan stimülasyon ile degil ayni zamanda T hücreleri araciligiyla stimülasyon vasitasiyla da proliferasyon aktivitesini ve antikor üretimini ve sekresyonunu elde eden B hücreleri içerebilmektedir. fragmanlarini ve papain ya da pepsin ile kismi parçalanma vasitasiyla elde edilen benzerlerini içermektedir ancak bunlarla sinirli degildir. Ek olarak bir antijen baglama bölgesini içeren fragman, bir monoklonal antikorun CDR'sinin (tamamlayicilik belirleme bölgesi) asilandigi bir degisken bölgeyi içeren immünoglobulinin bir fragmanini içerebilmektedir. Bu antikor fragmanlarinin antijenlere baglanma afinitesine sahip olan antikor molekülleri olarak kullanilabildigi bilinmektedir. Alternatif olarak gerekli antijen baglama aktivitesi korundugu kadar gen rekombinasyonu araciligiyla yapilandirilan antikorlar da kullanilabilmektedir. Gen rekombinasyonu vasitasiyla yapilandirilan antikorlara iliskin örnekler kimerik antikorlari, CDR-asili antikorlari, tek Zincirli FV (scFV), diabody (diabodyler) ve antikor fragmanlarindan olusan polispesifik antikorlari ve benzerlerini içermektedir. Monoklonal antikorlara ya da monoklonal antikorlari üreten antikor üreten hücrelere dayanarak bu antikorlari elde etmeye iliskin bir yöntem bilinmektedir. maddeler olarak yanlis anlamasi vasitasiyla immün fonksiyonlarin saldirmasinin neden oldugu hastaliklardir. Organa özgü otoimmün hastaliklar Gullian-Barre sendromunu, miyestenia gravis, kronik gastrit (kronik atrofik gastrit), otoimmün hepatit, primer biliyer siroz, primer skleroz yapici kolanjit, otoimmün pankreatit, aortit sendromu, Goodpasture sendromu, hizli ilerleyen glomerulonefrit, megaloblastik anemi, otoimmün hemoltik. anemi, otoimmün nötrapi, idiyopatik› trombositopenik purpura, Basedow hastaligi, Hashimoto tiroidi, primer hipotroidizm, idiyopatik Addison hastaligi, tip 1 diyabet, ülseratif kolit, Crohn hastaligi, çölyak hastaligi ve benzerlerini içermektedir ve sistemin otoimmün hastaliklar artiküler romatizma, sistemik lupus eritematöz, anti-fosfolipit antikor sendromu, polimiyosit, skleroderma, Sjogren sendromu, vaskülit sendromu, otoimmün lenfoproliferatif sendrom (ALPS) ve benzerlerini içermektedir ancak bunlarla sinirli degildir. reaksiyonlarin neden oldugu hastaliklardir ve atopik dermatit, bronsiyal astim, pollinosiz, alerjik rinit, ürtiker, infantil astim, alerjik gastroenterit, temas dermatit, serum hastaligi, vasküler purpura ve benzerlerini içermektedir ancak bunlarla sinirli degildir. Mevcut bulus PDL4'ü spesifik olarak ayirt eden bir antikor ve bunun bir fragmanini kullanarak aktive edilmis B hücrelerinin baskilanmasina uygulanabilen bir terapötik yöntem ve bunun terapötik etkisine sahip olan bir ilaç saglamaktadir. Mevcut bulusun ayrica aktive edilmis B hücre baskilama aktivitesinin kullanilmasi vasitasiyla otoimmün hastaliklar ya da alerjikr hastaliklari olan hastalar üzerinde koruyucu ve terapötik etkilere sahip olmasi beklenebilmektedir. Sekil 1, anti-PLD4 antikorlari ile insan B hücrelerinin (CDl9+) boyanmasini gösteren bir FACS analiz diyagramidir. PLD4 proteini TLR9 ligandi, CpG2006 ile stimülasyon vasitasiyla CD19+ B hücreleri üzerinde indüklenmektedir. Aktive edilmis B hücrelerinde (CDl9+) PLD4'ün indüksiyonu bir TLR9 ligandi vasitasiyla tespit edilebilmektedir (CpGZOOö). Monoklonal antikorlar 11G9.6 ve 5B7, PLD4'ü tespit etmek için kullanilmistir. Fare IgGZb, K bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Sekil 2, bir anti-PLD4 antikoru ve anti-CDl9 antikoru ile insan PBMC'sinin boyanmasini gösteren bir FACS analiz diyagramidir. PLD4+ hücrelerin TLR9 ligandi ile stimülasyonu vasitasiyla aktive edilmis B hücrelerinde (CDl9+) artmistir. Fare IgGl, K bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Sekil 3, TLR9 ligand stimülasyonu mevcudiyetinde ya da yoklugunda anti-PLD4 antikorlari ve bir anti-CD19 antikoru ile insan PBMC'sinin boyanmasini gösteren bir FACS analiz diyagramidir. PLD4+TLR9 ligand stimüle edilmis B hücrelerinin (CDl9+) belirgin bir artisi, anti-PLD4 antikorlari (5B7, 13D4, 13H11 ve 11G9.6) ile tespit edilebilmektedir. Fare IgGZb, K bir negatif kontrol olarak kullanilmistir. Sekil 4, belirtilen her bir anti-PDL4 kimerik antikoru vasitasiyla PLD4+ aktive edilmis hücrelerinin azalmasini gösteren bir` FACS analiz diyagramidir. PBMC'lerin anti-PDL4+ kimerik antikorlar (chBB4, chl3D4, chl3Hll, ch5B7 ve chllG9.6) ile birlikte kültürü, TLR9 ligandinin yoklugunda PDL4+ aktive edilmis hücreleri azaltmistir. Bir antikorun eklenmedigi bir durumda (Ab yok) ve spesifik olmayan bir antikorun kullanildigi durumda (Kontrol Ig) ayrica B hücrelerin CpG2006 vasitasiyla aktivasyonu baskilanamamaktadir. Sekil 5, Sekil 4'teki baskilayici etkinin sayi halinde eksprese edildigi bir diyagramdir. PLD4'ü eksprese eden ve kontrol Ig ile isleme tabi tutulan bir aktive edilmis B hücre grubu, %100 olarak degerlendirilmektedir ve PDL4'ü eksprese eden ve anti-PDL4 kimerik antikoru ile isleme tabi tutulmus bir aktive edilmis B hücre grubundaki degisiklikler gösterilmektedir. Sekil 6, akis sitometrisinin bir sonucudur. PBMC'ler, TLR9 ligandi ve rekombinant insan IL-6'sinin mevcudiyetinde belirtilen kimerik PDL4 antikorlari ile kültürlenmistir. Plazmablast popülasyon (CD19+CD27 + IgD-CD38 +) kontrol lg tedavisi ile karsilastirilan ch3B4, ch5B7, chl3D4, chlBHll ya da chllG9.6 ile tedavi vasitasiyla düsürülmüstür. Sekil 7, Sekil 6'nin kültür süpernatantinin ELIZA analizinin bir sonucudur. Plazmablastlardan insan IgG üretimi kontrol lg tedavisi ile karsilastirildiginda ch3B4, ch5B7, chl3D4, chl3Hll ya da orchllG9.6 ile tedavi vasitasiyla düsürülmüstür. Mevcut bulus sahipleri PDL4'ün ekspresyonu B hücrelerinin aktivasyonu ile indüklenen bir molekül oldugunu yeni bulmustur. Mevcut bulus sahipleri önceden insan PLD4'ün ekspresyonunu, subselüler lokalizasyonu, yapisini ve fonksiyonunu önceden raporlamistir (Patent Literatürü 1). Mevcut bulusta ayrica PDL4'ün ekspresyonunun sadece pDC'de degil ayni zamanda aktive edilmis B hücrelerinde de indüklendigi ortaya çikmistir. Ayrica anti-PDL4 antikorlarinin aktive edilmis B hücrelerini baskiladigi yeni bulunmustur. Bu bulgular sadece anti-PDL4 antikorlarinin önceden raporlanmis olan pDC aktivitesinin degil ayni zamanda B hücre aktivitesinin baskilanmasi vasitasiyla da otoimmün hastaliklar üzerinde terapötik bir etkiye sahip olma olasiligini güçlendirmektedir. CDl9, CD20, CD22 ve BAFF-R gibi proteinler B hücrelerin yüzeyi üzerinde eksprese edilmektedir. CDl9, pro-B hücreler ila antikor sekrete eden plazma hücreleri gibi bir erken asamadan B hücreleri üzerinde eksprese edilmektedir ve olgun B hücreleri üzerinde bir yardimci reseptör kontrol eden aktivasyon olarak islev görmektedir. CDZO, pre B hücrelerinden aktive edilmis B hücrelerine kadar eksprese edilmektedir, CD22 olgun B hücrelerinin hücre yüzeyi üzerinde eksprese edilmektedir ve BAFF-R'nin ekspresyonu B hücrelerin kapsamli farklilasma asamasinda gözlemlenmektedir. Dolayisiyla bu proteinleri ayirt eden antikorlarin sadece aktive edilmis B hücrelerini degil ayni zamanda astarlanmamis saf B hücreleri de baskiladigina iliskin bir düsünce vardir. Mevcut bulusun anti-PDL4 antikorlari ayrica saf B hücreler üzerinde etki olmadan aktive edilmis B hücrelerin baskilanmasi vasitasiyla karakterize edilmektedir. Mevcut bulusta kullanilan anti-PLD4 antikorlari önceden raporlanmis olanlar ile aynidir (Patent Literatürü l). Kisaca PDL4'ün bir ekstraselüler alanini içeren bir amino asit sekansini kodlayan bir immünojen olarak bir rekombinant PLD4-Ig füzyon proteinin kullanilmasi (SEQ ID NO:1'de gösterilen amino asit sekansinda pozisyon 54 ila 506'ya karsilik gelen amino asit sekansi) PDL4'e karsi bir antikor asagidaki gibi elde edilmistir. l) Immünizasyon Bir immünojen olarak yukaridaki rekombinant PLD4-Ig füzyon proteini kullanilmistir. PDL4-Id füzyon proteini üç BALB/c farenin arka hipodermisine uygulanmistir. Adjuvanlar olarak Freund Adjuvanlari, Tam ve Tamamlanmis (SIGMA) kullanilmistir. Birinci uygulama hacmi 200 üp/Lnonso olmustur ve ikinci ila dördüncü uygulamanin hacmi 50 up/Lnonso olmustur. 2) Anti-serum titresinin onaylanmasi Kan, üçüncü ve dördüncü immünizasyondan sonra toplanmistir ve anti-serum titresi ELIZA vasitasiyla degerlendirilmistir. PDL4-Ig füzyon proteini, bir 96 kuyucuklu mikrotitre plaka üzerinde bir kati faza çevrilmistir. Bir antiserum seri olarak lOOO-kattan 3-kat artisa seyreltilmistir ve 729000 kata kadar bir seyreltme serisi hazirlanmistir. Antijen kapli plakaya her bir örnegin her bir 50 ül'si eklenmistir ve birinci reaksiyon gerçeklestirilmistir. Yikamadan sonra bir ikinci reaksiyon HPR- etiketli anti-fare IgG (K, A) antikoru ile gerçeklestirilmistir ve renk gelisimi OPD (ortofenilen diamin) ile tespit edilmistir (490 nm). 3) Hücre füzyonu Dalak hücreleri fareden ekstrakte edilmis olup, burada anti- serum titresinde bir artis gözlemlenmistir. Ekstrakte edilen dalak hücreleri ve fare miyelom hücreleri (P3Ul) PEG yöntemi vasitasiyla kaynastirilmistir ve kaynasik dalak hücreleri selektif olarak bir HAT ortaminda kültürlenmistir. HAT selektif kültürden elde edilen kaynasik dalak hücrelerinin her bir klonundan üretilen bir antikor FACS vasitasiyla degerlendirilmistir. Sonuç olarak hibridoma kültür l4Cl ve llG9.6 insan PDL4'ü ile iyi reaksiyona girmistir. Yukaridaki hibridomalardan üretilen her bir monoklonal antikorda bir degisken bölgede ve degisken bölgenin bir sekansindaki CDR bölgeleri (CDR'ler; CDRl, CDR2 ve CDR3) ve FW bölgeleri (Çerçeve bölgeleri) Rabat sayi sistemine iliskin bir analitik yönteme göre belirlenmistir (Rabat et al, 1991, Sequences of Proteins of Publication No. 91-3242, 5th ed., United States Department of Health and Human Services, Bethesda, MD). Elde edilen fare 11G9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 74'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 75'tir. Fare 11G9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 ve SEQ ID NO: 4'tür. Elde edilen fare 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 76'tür ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 ve SEQ ID NO: lO'dur. Elde edilen fare 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 78'dir ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 14, SEQ ID 15 ve SEQ ID NO: 16'dir. Elde edilen fare 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 80'dir ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 ve SEQ ID NO: l6'dir. 7B4 antikoru, 5B7 antikorundan baslayarak agir ve hafif zincirlerin degisken bölgelerindeki ayni CDR sekanslarina sahip olan bir antikordur. Elde edilen fare 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 82'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 83'dür. Fare 8C1l antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 ve SEQ ID NO: 22'dir. Elde edilen fare lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 84'dür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 85'tir. Fare 10C3 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 ve SEQ ID NO: 28'dir. Elde edilen fare llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 86'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 87'dir. Fare llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari Sirasiyla SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 ve SEQ ID NO: 28'dir. 11D10 antikoru, lOC3 antikorundan baslayarak agir ve hafif zincirlerin degisken bölgelerindeki ayni CDR sekanslarina sahip olan bir antikordur. Ayrica bunlarin agir zincir izotoplari farklidir (lOC3 fare IgG2a'nin sabit bölgesine sahiptir ve llDlO fare IgG2b'nin sabit bölgesine sahiptir). Elde edilen fare 13D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 88'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 89'dur. Fare 13D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 ve SEQ ID NO: 34'tür. Elde edilen fare 13Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 90'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 9l'dir. Fare l3Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 ve SEQ ID NO: 40'tir. Elde edilen fare 14Cl antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 92'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 93'tür. Fare 14Cl antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 ve SEQ ID NO: 40'tir. 14Cl antikoru, 13Hll antikorundan baslayarak agir ve hafif zincirlerin degisken bölgelerindeki ayni CDR sekanslarina sahip olan bir antikordur. Ayrica bunlarin agir zincir izotoplari farklidir (13H11 fare IgGZb'nin sabit bölgesine sahiptir ve 14C1 fare IgGl'in sabit bölgesine sahiptir). Fare 11G9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 94'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 95'tir. Fare 11G9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDR1, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ve SEQ ID NO: 7'dir. Fare 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 96'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 97'dir. Fare 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 ve SEQ ID NO: 13'tür. Fare 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 98'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 99'dur. Fare 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ve SEQ ID NO: 19'dur. Fare 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 100'dür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lOl'dir. Fare 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ve SEQ ID NO: 19'dur. Fare 8C11 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 102'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 103'tür. Fare 8C11 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 ve SEQ ID NO: 25'tir. Fare 10C3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ 1D NO: 104'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 105'dir. Fare 10C3 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 ve SEQ ID NO: 3l'dir. Fare llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 106'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lO7'dir. Fare llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 ve SEQ ID NO: 3l'dir. Fare 13D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: lO8'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lO9'dur. Fare l3D4 antikorunun. agir zincir degisken› bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDRB'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 ve SEQ ID NO: 37'dir. Fare l3Hll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: lOO'dür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lll'dir. Fare l3H11 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 ve SEQ ID NO: 43'tür. Fare l4Cl antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: llZ'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: l13'tür. Fare l4Cl antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 ve SEQ ID NO: 43'tür. Mevcut bulusta daha da tercih edilen antikorlara iliskin örnekler hibridomalar mp5B7, mp7B4, mp13D4 ve mpl3Hll tarafindan üretilen monoklonal antikorlari içermektedir. Hibridomalar mp5B7, mp7B4, mpl3D4 ve mpl3Hll National Institute of Technology and Evaluation, International Patent Organism Depositary tarafindan ABF-1213 and NITE ABF-1214 erisim numaralari altinda 27 Ocak 2012'den itibaren kabul edilmistir. Depolamayi belirten detaylar asagidaki gibi tanimlanacaktir. (l) Depo Yetkilisinin Adi ve Adresi Adi: National Institute of Technology and Evaluation, Advanced Organizma Deposu Adres: 2-5-8 Kazusa Kamatari Kisarazu-shi, Chiba Ibaraki, 292-0818, Japan (2) Depo Tarihi: 27 Ocak 2012 (3) Depo Numarasi NITE BP-lZll (hibridoma mp5B7) NITE BP-l2l3 (hibridoma mpl3D4) NITE BP-1214 (hibridoma mpl3Hll) Özellikle daha da tercih edilen antikorlar asagidakilerin bir kombinasyonuna sahip olan bir antikor agir zincir CDRl: DYNLH, CDRZ : YIYPYNGNTGYNQKFKR ve CDR3 GGIYDDYYDYAIDY ve hafif zincir CDRl: RASENIYSHIA, CDR2: GATNLAH ve CDR3: QHFWGTP kendi degisken bölgelerini olusturan CDR'lerin sekansi olarak; asagidakilerin kombinasyonuna sahip olan bir antikor agir zincir CDRl: SHYYWT, CDR2 : YISYDGSNNYNPSLKN ve CDR3 EGPLYYGNPYWYFDV ve hafif zincir CDRl: RASQDIDNYLN, CDRZ: YTSRLHS ve CDR3: QQFNTLP kendi degisken bölgelerini olusturan CDR'lerin sekanslari olarak ve asagidakilerin bir kombinasyonuna sahip olan bir antikordur agir zincir CDRl: SHYYWS, CDR2 : YISYDGSNNYNPSLKN ve CDR3 EGPLYYGNPYWYFDV ve hafif zincir CDRl: RASQDIDNYLN, CDRZ: YTSRLHS ve CDR3: QQFNTLP, kendi degisken bölgelerini olusturan CDR'lerin sekansi olarak. PDL4'ü ayirt eden bir kimerik antikor ya da bir insanlastirilmis antikor, bunu kodlayan bir polinükleotiti kullanilarak gentik mühendisligi vasitasiyla üretilebilmektedir. Patent Belgesi 1'de açiklandigi gibi örnegin her bir aktif kimerik antikor (ch3B4Ab, ch5B7Ab, ch7B4Ab, ch8CHAb, chlOC3Ab, chllDlOAb, chl3D4Ab, chl3HHAb, chl4ClAb, chllG9.6Ab, vb.) teknikte uzman kisiler tarafindan yukaridaki fare Hwnoklonal antikorlari (3B4, 5B7, kullanilarak kolaylikla üretilebilmektedir. Mevcut bulus sahipleri PDL4'e karsi monoklonal antikorlarin CDC (Tamliga Bagli Sitotoksisite) aktivitesine ve PDL4 eksprese eden hücrelere karsi ;ADCC (Antikorar Bagli Hücresel Sitotoksisite) aktivitesine sahip oldugunu onaylamistir. Dolayisiyla mevcut bulusa göre anti-PDL4 monoklonal antikorlar, PDL4 eksprese eden hücrelere karsi sitotoksisite etkisine sahiptir. Yani mevcut bulus aktive edilmis B hücrelerini baskilamak için bir ajan ile ilgili olup, burada ajan bir aktif bilesen olarak PDL4'ün bir ekstraselüler alanina baglanan bir antikoru içermektedir. Alternatif olarak mevcut bulus antikor üretimini baskilamak için bir yöntem saglamakta olup, yöntem PDL4'ün ekstraselüler alanina baglanan bir antikorun uygulanmasina iliskin bir adim içermektedir. Mevcut bulus ayrica aktive edilmis B hücrelerine yönelik bir farmasötik bilesimin üretiminde PDL4'ün bir ekstraselüler alanina baglanan bir antikorun kullanimi ile ilgilidir. Mevcut bulusta gerektigi gibi modifiye edilen bir antikor kullanilabilmektedir. Mevcut bulusa göre PDL4'ün ekstraselüler alanini ayirt eden bir antikor aktive edilmis B baskilama etkisine sahiptir. Yani bir antikorun kendisinin aktive edilmis B hücrelerine karsi sitotoksisite etkisine sahip olma olasiligi olduguna inanilmistir. Yogun efektör etki gösteren bir antikorun alt sinifi bilinmektedir. Alternatif olarak aktive edilmis B hücreleri üzerindeki baskilayici etki ayrica bir sitotoksik ajan ile bir antikorun modifiye edilmesi vasitasiyla arttirilabilmektedir. Sitotoksik ajanlar olarak asagidaki maddelerden bahsedilebilmektedir. Toksinler: Psödomona Endotoksin (PE), difteri toksini, lizin Radyoizotoplari: Tc99m, Sr89, 1131, Y9O Antikanser ajanlar: kaliseamisin, mitomisin, paklitaksel Toksinleri içeren proteinler, bir antikora ya da bunun bir fragmanina ya da benzerine bir iki fonksiyonlu ayiraç vasitasiyla baglanabilmektedir. Alternatif olarak bir antikoru kodlayan bir genin bir toksini kodlayan bir gen ile konjuge edilmesi vasitasiyla ikisinin bir füzyon proteini ayrica elde edilebilmektedir. Bir radyoizotopun bir antikora baglanmasina yönelik bir yöntem ayrica bilinmektedir. Bir antikorun bir radyoizotop ile örnegin bir selatlama ajani kullanilarak etiketlenmesine yönelik bir yöntembilinmektedir. Ayrica bir antikanser ajan bir glikan ya da bir iki fonksiyonlu ayiraç ve benzeri kullanilarak bir antikora baglanabilmektedir. Mevcut bulusta yapisi yapay olarak. modifiye edilebilen bir antikor bir aktif bilesen olarak kullanilabilmektedir. Örnegin sitotoksisite etkisini ve antikorlarin stabilitesini arttirmaya yönelik çesitli modifikasyon yöntemleri bilinmektedir. Kesin olarak kendi agir zincirinin glikaninin modifiye edildigi immünoglobulin bilinmektedir (Shinkawa, T. et al. J. Biol. Chem. immünoglobulinin ADCC (Antikora Bagli Hücre Aracili Sitotoksisite) aktivitesi arttirilmistir. Mevcut bulusta bir ya da daha fazla monoklonal antikor kullanilabilmektedir. Örnegin PDL4'ün ekstraselüler alanini ayirt eden monoklonal antikorlarin birkaç türü, kombine edilebilmekte ve mevcut bulusta kullanilabilmektedir. Asagida açiklandigi gibi anti-PDL4 antikorlarinin aktive edilmis B hücrelerin elde edilen immün antikor üreten aktivitesi üzerinde baskilayici etkiye sahip oldugu onaylanabilmektedir. B hücreleri, bir BCR ligandinin ya da bir TLR ligandinin stimülasyonu vasitasiyla büyük bir miktarda antikor üretmektedir (tercihen TLR4 ligandi, TLR7 ligandi ya da TLR9 ligandi). Bir anti-PDL4 antikoru, B hücreler üzerinde yukaridaki ligandin stimülasyonundan önce ya da sonra ya da es zamanli olarak ligandin stimülasyonu ile ve bir anti-PDL4 antikorunun bir kontrol olarak saglandigi B hücreleri kullanarak saglanmaktadir, B hücrelerinden türetilen elde edilen immün antikorlari üretme kabiliyeti karsilastirilmaktadir. Antikor üretme kabiliyeti, B hücrelerin bir hücre Süpernatantinda. bulunan salgi immünoglobulinin ölçülmesi vasitasiyla degerlendirilebilmektedir. Karsilastirmanin sonucu olarak süpernatanttaki B hücrelerinden türetilen elde edilen immün antikorun miktari bir anti-PDL4 antikoru eklenerek büyük oranda düsürüldügü zaman test edilen anti-PDL4 antikorunun B hücrelerin antikor üretme kabiliyeti üzerinde baskilayici etkiye sahip oldugu onaylanabilmektedir. Antikorlari ölçmeye iliskin bir yöntem bilinmektedir. B hücreleri, yasayan bir vücutta hormonel immüniteyi (salgi antikoru) üreten hücrelerdir. Dolayisiyla hormonel immünite B hücrelerin antikor üretme kabiliyetinin baskilanmasi vasitasiyla ayarlanabilmektedir. PDL4'ün ekstraselüler alanini ayirt eden bir antikor, antikorun türetildigi bir organizma türünden farkli bir konaga uygulandigi zaman bu tür bir konak tarafindan bir yabanci madde olarak ayirt edilmesinin zor oldugu bir forma islenmesi istenmektedir. Asagida açiklanan moleküllere isleme vasitasiyla immünoglobulinin bir yabanci madde olarak ayirt edilmesi zor olabilmektedir. Asagida açiklanan immünoglobulin moleküllerini islemeye iliskin teknikler bilinmektedir: - Bir sabit bölgeden muaf bir antijen baglama bölgesini içeren bir fragman (Monoklonal .Antikorlarz Principles and. Practice, third edition, Academic Press Limited. 1995; Antibody Engineering, A Practical Approach, IRL PRESS, 1996); - Bir monoklonal antikorun bir antijen baglama bölgesinden ve konak immünoglobulinin bir sabit bölgesinden olusan bir kimerik antikor (Experimental manual for gentic expression, Kodansha Ltd. 1994 (edited by Isao Ishida and Tamie Ando) ) ve - konak immünoglobulindeki bir tamamlayicilik belirleme bölgesinin (CDR) bir monoklonal antikorun CDR'si ile ornatildigi bir CDR-ornatilmis antikor (Experimental manual for gentic expression, Kodansha Ltd. 1994 (edited by Isao Ishida and Tamie Alternatif olarak insan immünoglobulinin bir degisken bölge geni, faj görüntüleme yöntemi vasitasiyla elde edilebilmetkedir görüntüleme yönteminde, insan immünoglobulinin bir degisken bölgesini kodlayan bir gen bir faj genine dahil edilmektedir. Kaynak olarak immünoglobulin genlerin Çesitli türlerinin kullanilmasi ile bir faj kütüphanesi ayrica olusturulabilmektedir. Bir faj, kendi fajini olusturan bir proteinin bir füzyon proteini olarak bu tür bir degisken bölgeyi eksprese etmektedir. Faj yüzeyi üzerindeki faj vasitasiyla eksprese edilen degisken böle, antijenlere baglanma aktivitesini korumaktadir. Dolayisiyla bir antijene ya da antijeni ya da benzerini eksprese eden hücrelere baglanan bir fajin seçilmesi vasitasiyla hedef baglanma aktivitesine sahip olan bir degisken bölge bir faj kütüphanesinden taranabilmektedir. Ayrica hedef baglama aktivitesine sahip olan bir degisken bölgeyi kodlayan gen, yukaridaki gibi seçilen faj parçaciginda korunmaktadir. Yani faj görüntüleme yönteminde bir indeks olarak bir degisken bölgenin baglama aktivitesinin kullanilmasi ile hedef baglama aktivitesine sahip olan bir degisken bölge elde edilebilmektedir. B hücre aktivitesini baskilamaya yönelik ajanda ya da mevcut bulusa göre B hücre aktivitesini baskilamaya yönelik yöntemde PDL4'ün ekstraselüler alanini ayirt eden bir antikor ya da bunun en azindan antijen baglama bölgesini içeren bir antikor fragmani bir protein ya da bunu kodlayan bir polinükleotit olarak uygulanabilmektedir. Bir polinükleotiti uygulamak iççin bir hedef proteini kodlayan bir polinükleotitin dogru bir baslayicinin kontrolü altinda düzenlendigi bir vektör istenmektedir böylece hedef protein eksprese edilebilmektedir. Bir vektörde bir arttirici ve bir sonlandirici ayrica düzenlenebilmektedir. Immünoglobulinin agir ve hafif zincirlerinin genlerini koruyan ve bir immünoglobulin molekülünün eksprese edildigi vektörler bilinmektedir. Immunoglobulinin eksprese edilebildigi bir vektör hücrelere dahil edilerek uygulanabilmektedir. Yasayan bir vücuda uygulama için yasayan vücuda uygulama vasitasiyla hücreleri enfekte edilebilen bir vektör dogrudan uygulanabilmektedir. Alternatif olrak bir vektör bir yasayan vücuttan ayrilan bir lenfosite dahil edilmektedir ve daha sonra vektör yasayan vücuda geri döndürülebilmektedir (ex vivo). B hücre aktivitesini baskilamaya yönelik ajanda ya da mevcut bulusa dayali B hücre aktivitesini baskilamaya yönelik yöntemde bir yasayan vücuda uygulanacak monoklonal antikor, vücut agirliginin kg'i basina immünoglobulin olarak normalde 0,5 mg ila 10 m, örnegin 1 mg ila 50 mg, tercihen 2 mg ila 10 m'dir. Bir antikorun yasayan bir vücuda uygulama araligi, tedavi periyodu sirasinda yasayan vücuttaki immünoglobulinin etkili bir miktarinin korunabilmesi için dogru sekilde ayarlanabilmektedir. Kesin olarak örnegin bir antikor 1 ila 2 haftalik araliklarda uygulanabilmektedir. Herhangi bir uygulama yolu kullanilabilmektedir. Teknikte uzman kisiler, tedavi için etkili bir uygulama yolunu dogru sekilde seçebilmektedir. Kesin olarak oral ya da parenteral uygulamadan bajsedilebilmektedir. Bir intravenöz enjeksiyon, bir intramüsküler enjeksiyon, bir intraperitoneal enjeksiyon ya da bir subkütan enjeksiyon ya da benzerleri örnegin vasitasiyla bir antikor sistemik ya da lokal olarak uygulanabilmektedir. Mevcut bulusta parenteral uygulama için uygun formülasyonlar enjeksiyonlari, fitilleri, spreyleri ve benzerini içermektedir. Ek olarak hücrelere uygulandigi zaman immünoglobulin normalde 1 ug/mL, tercihen lO ug/mL ya da daha fazla, daha tercihen 50 ug/mL ya da daha fazla ve ayrica tercihen 0,5 mg/mL ya da daha fazla bir miktarda bir kültür akiskaninda saglanmaktadir. B hücresi aktivitesini baskilamaya yönelik ajanda ya da mevcut bulusa bagli olarak B hücresi aktivitesini baskilamaya yönelik yöntemde bir monoklonal antikor herhangi bir yöntem vasitasiyla yasayan bir vücuda uygulanabilmektedir. Bir monoklonal antikor, normalde farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombine edilmektedir. Bir nmnoklonal antikor bir kivam arttirici, bir stabilize edici, bir antiseptik ve bir çözme ajani gibi katki maddeleri ile gerektigi sekilde kombine edilebilmektedir. Bu tasiyicilar ya da katki maddeleri laktoz, bir sitrik asit, bir stearik asit, magnezyum stearat, sükroz, nisasta, talk, jelatin, agar, bitki yagi, etilen glikol ve benzerini içermektedir. "Farmasötik. olarak. kabul edilebilir" terimi, çesitli ülkelerin idari yetkilileri tarafindan onaylanmis oldugu ya da hayvanlara, insanlara ve özellikle insana yönelik kullanimi çesitli ülkelerde ya da yaygin olarak kabul edilen farmakopelere listelendigi anlamina gelmektedir. Mevcut bulusta B hücresi aktivitesini baskilamaya yönelik ajan, bir ya da daha fazla dozda tabletler ya da dondurarak kurutulan tozlar formunda saglanabilmektedir. Ayrica çözünme için kullanilan enjeksiyona yönelik sterilize su, bir fizyolojik tuz solüsyonu ya da bir tampon solüsyonu bilesimin uygulamadan önce istenen konsantrasyonu elde etmesi için dondurarak kurutulmus tozlar ya da tabletler ile kombine edilebilmektedir. Ayrica immünoglobulin eksprese eden bir vektör olarak uygulama için bir agir zincir ve bir hafif zincir farkli plazmidler olarak birlikte transfekte edilmektedir ve her bir plazmid Vücut agirliginin kg'i basina 0,1 ila lO mg, örnegin 1 ila. 5 mg uygulanabilmektedir. Ek olarak 1 ila 5 ug vektör/106 hücre, in vitro hücrelere dahil edilmek üzere kullanilmaktadir. Bundan sonra, mevcut bulus örnek yoluyla daha detayli sekilde açiklanacaktir. Bundan sonra, mevcut bulus örnek yoluyla daha detayli sekilde açiklanacaktir. Ayrica mevcut bulusun sadece asagida belirtilen örneklerle sinirli olmadigina dikkat edilmelidir. Insan (1 x 107 hücre/ml) CpG2006, TLR9'un bir ligandi ile stimüle edilmis ve yaklasik olarak 20 saat boyunca bir COZ inkübatöründe 24 kuyucuklu bir plakada inkübe edilmistir. Paralel sekilde stimüle edilmemis olan insan PBMC U. X 107 hücre/ml) ayrica yaklasik 20 saat boyunca bir C02 inkübatöründe (37°C, %5 GOZ) kültürlenmistir. Insan PBMC'si 20 dakika boyunca 4°C'de FACS tamponu (%1 FBS/PBS) ile 5 kat seyreltilmis olan FcR Bloke Edici Ajan (Miltenyi) ile isleme tabi tutulmustur. Yikamadan sonra 5B7, 11G9.6 ya da fare boyunca gerçeklestirilmistir. Bir ikincil antikor ve sonraki antikorlar, FcR Bloke Edici Ayiracin 25 kat seyreltilmesi için FACS tamponu ile seyreltilmistir. PE etiketli anti-fare Ig (BD), bir ikincil antikor, 100 kat seyreltilmistir ve solüsyon buraya eklenmis ve karistirilmistir. Bunun yani sira FACS üzerindeki B hücreleri fraksiyonara ayirmak için APC etiketli anti-insan CD19 antikoru (Biolegend) FcR Bloke Edici Ayiraç içeren FACS tamponu ile 30 kat seyreltilmistir ve etiketleme 15 dakika boyunca 4°C'de gerçeklestirilmistir. FACS Calibur (BD) kullanilarak veri dahil edilmistir. Yasayan hücreler, X ekseninin bir nokta grafigi üzerinde kapatilmistir: FSC ve Y ekseni: SSC. Veriler, yasayan hücre kapisindaki hücrelerin sayisi 100.000'e erisene kadar dahil edilmistir. B hücreleri: anti-markör molekülü antikor-pozitif hücreler kapatilmistir. Kapali hücreler, X ekseni ile histogram üzerinde analiz edilmistir: PDL4 ve fare IgGZb, K ile boyamanin sonuçlari buranin üstüne serilmistir. Sonuç olarak anti-PDL4 antikorlari, stimüle edilmemis B hücrelree zor baglanmistir fakat TLR9 ligandi ile stimülasyon vasitasiyla aktive edilmis hücrelere selektif olarak baglanmistir (Sekil 1). Bu PDL4'ün aktive edilmis B hücreler üzerinde eksprese edildigini göstermektedir. Insan PBMC, yaklasik 20 saat boyunca 1 üm'lik bir nihai konsantrasyonda CpG2006 ile stimüle edilmistir. Hücreler toplanmis ve 20 dakika boyunca 4°C'de FcR Bloke Edici Ayiraç ile isleme tabi tutulmustur. Yikamadan sonra B4, 5B7, l3D4, l3Hll, llG9.6 fare IgGl, K ya da fare IgGZb, K, bir primer antikorun 10 ug/ml'si ile 4°C'de 15 dakika boyunca boyama gerçeklestirilmistir. Boyama, 15 dakika boyunca 4°C'de bir ikincil antikor olan PE etiketli anti-fare Ig ile gerçeklestirilmistir. Bir B hücresi grubunun kapatilmasi için 15 dakika boyunca 4°C'de bir APD etiketli anti insan CD19 antikoru ile çift boyama gerçeklestirilmistir. X ekseninin bir nokta grafigi üzerindeki bir yasayan hücre grubu: FSC ve Y ekseni: SSC anti-PLD4 antikorunun CD19+ B hücrelerine baglanmasi vasitasiyla analiz edilmistir (Sekil 2 ve Sekil 3). Sonuç olarak test edilmis anti-PDL4 monoklonal antikorlarin tamami, TLR9 vasitasiyla stimüle edilen B hücrelere baglanmistir. Yani bütün anti-PDL4 monoklonal antikorlar vasitasiyla PDL4 ekspresyonunun bir aktivasyona bagli sekilde B hücrelerinde indüklenmis oldugu onaylanmistir. sitotoksik aktivitesi TR9 ligandi (1 üM) ile stimülasyon vasitasiyla indüklenen PDL4+ aktive edilmis B hücrelerinin frekansi bir indeks olarak kullanilmistir. Insan PBMC, CpG2006 ve her bir anti-PDL4 kimerik antikoru ya da kontrol lg ile yaklasik 16 saat boyunca kültürlenmistir. Bir ortam olarak RPM (%10 PES dahil (Equitech-bio)), 5 ml , 5 ml Pen- Strep (GIBCO), 5 ml Sodyum Piruvat (GIBCO) ve 0,5 ml 50 mM 2-ME (SIGMA) kulanilmistir. Hücreler toplanmis ve 20 dakika boyunca 4°C'de FCRV Bloke Edici Ayiraç ile isleme tabi tutulmustur. Yikamadan sonra hücreler ayrica 15 dakika boyunca 4°C'de 5B7 or 13D4, 3B4 or mouse IgG2b, K, bir primer antikor ile boyanmistir (each 10 ug/mL). OPBMC'nin bir kimerik 3B4 antikor (cH3B4), bir kimerik 3D4 antikor (ch3D4) ya da bir kimerik 13Hll antikor (chl3H11) ile isleme tabi tutuldugu bir örnek, PBMC'nin bir kimerik 5B7 antikor (ch5B7) ya da bir kimerik 11G9.6 antikor (ch11G9.6) ile isleme tabi tutuldugu bir örnek 13D4 ile boyanmistir. ADCC için isleme tabi tutulmus bir anti-PDL4 antikorunun ve boyama için kullanilan bir anti-PDL4 antikor klonunun bir digeri ile rekabete girmedigi onaylanmistir. Anti- PDL4'ün baglanmasi 15 dakika boyunca 4°C'de bir ikincil antikor olan PE etiketli anti-fare Ig vasitasiyla bulunmustur. B hücreleri grubunun kapatilmasi için 15 dakika boyunca 4°C'de bir APD etiketli anti insan CD19 antikoru ile çift boyama gerçeklestirilmistir (Sekil 4). Her bir kimerik anti-PDL4 antikor ile isleme tabi tutulan PDL4+ aktive edilmis B hücrelerin popülasyonu, kontrol antikoru ile isleme tabi tutulan PDL4+ aktive edilmis B hücrelerininki ile karsilastirilmistir. Sonuç olarak kimerik PDL4 antikorlarin tamami, kontrol Ig ile islemle karsilastirildiginda aktive edilmis PDL4+ B hücrelerini azaltmistir (kontrol lg ile islem durumu %100 olarak inhibitör etkileri Anti-insan PLD4 antikorlarinin B hücreleri nmtürasyonu ve Ig üretimi üzerindeki etkisini B hücresi aktivasyonu vasitasiyla belirlemek için tüm insan PBMC'leri ch3B4, ch5B7, chl3D4, chl3Hll, chllG9.6 ya da kontrol Ig ile 24 saat boyunca ile isleme tabi tutulmustur. Daha sonra PBMC'ler ayrica CpG2216 (l pM) ve rekombinant insan IL-6 nevcudiyetinde B hücresi aktivayonunu indüklemek için kültürlenmis olup, bu da B hücresi matürasyonu ile sonuçlanmaktadr. 7 gün boyunca aktive edilmis B hücrelerin kültürünün sonucunda aktive edilmis B hücrelerindeki Plazmablastlar, CDl9+CD27+IgD-CD38+ bir PE etiketli anti-insan CDl9 antikorü ile akis sitometrisi vasitasiyla analiz edilmistir. Insan IgG üretimini ölçmek için kültürlenmis aktive edilmis B hücreleri, PBS ile 2 kere yikamadan sonra 50 ng/mL PMA (Forbol miristat asetat) ile yeniden stimüle edilmistir. Iki gün sonra insan IgG üretimi, ELIZA vasitasiyla kültür süpernatantlarinda ölçülmüstür. Aktive edilmis B hücrelerdeki plazmablastlar kontrol Ig tedavisi ile karsilastirildiginda ch3B4, ch5B7, chl3D4, chl3Hll ya da chllG9.6 ile islem vasitasiyla düsürülmüstür (Sekil 6). Ayrica insan IgG üretimi, kontrol lg tedavisi ile karsilastirildiginda ch3B4, ch5B7, chl3D4, chl3Hll ya da chllG9-6 ile islem vasitasiyla düsürülmüstür (Sekil 7). Bu sonuçlar kimerik anti-insan PD4 Abs ile islemin Ab-sekrete eden aktive edilmis insan B hücrelerini azalttigini belirtmektedir. Yukaridaki örneklerde gösterildigi gibi anti-PDL4 antikorlari aktive edilmis B hücrelerini ayirt etmekte ve baskilamaktadir. Dolayisiyla antikorlar immün fonksiyonuna dahil olan hastaliklarin (otoimmün hastaliklar ve alerjik hastaliklar) önlenmesi ve tedavisi için faydalidir. bilgisinin açiklamasi l;_Anti-PLD4 fare llG9.6 antikoru Elde edilen anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ llG9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDRZ ve CDR3'ün amino asit sekanslari NO: 2, SEQ ID NO: 3 ve SEQ ID NO: 4'tür. Anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunun (504) agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi [büyük Harfler: fare llG9.6 VH degisken bölgesi, küçük harfler: ATGAGATCACAGTTCTCTATACAGTTACTGAGCACACAGAACCTCACCTTGG GATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGTGTCCACTC CCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTC AGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATG CACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATT TATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCC ACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGC CTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTG GATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgCcaaa acaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc Fare llG9.6 antikorunun (168 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare llG9.6 degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CDZ ve CDR3) (SEQ ID NO: 75). MRSOFSIOLLSTQNLTLGWSCIILFLVATATGVHSOVOLQQPGAELVKPGTSVKMSCK ASGYTFTSYWMHWVKORPGOGLEWTGDIYPGSDSTOYNEKFKSKATLTVDTSSSTA YMOLSSLTSEDSAVYYCARGGWLDAMDYWGOGTSVTVSSakttDpsleaDkg llG9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl (SEQ ID NO: 2) llG9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRZ (SEQ ID NO: 3) llG9.6 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 (SEQ ID NO: 4) Anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunün hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ llG9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari NO: 5, SEQ ID NO: 6 ve SEQ ID NO: 7'dir. Anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (42l bp) harfler: fare llG9.6 VH degisken bölgesi, küçük harfler: ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcaagggcgaat Anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunun (140 a. a.) Hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekanslari [büyük harfler: fare llG9.6 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CD2 ve CDR3) (SEQ ID NO: 95). MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASODISNYLNWYO OKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQOGNTLP WTFGGGTKLEIKradaaptvsikge llG9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl (SEQ ID NO: 5) llG9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR2 (SEQ ID NO: 6) llG9.6 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 (SEQ ID NO: 7) Elde edilen fare 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 76'dir ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 ve SEQ ID NO: lO'dur. Anti-PLD4 fare 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (437 bp) [büyük harfler: fare 3B4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl agir zincir sabit bölgesi] ATGGAATGTAACTGGATACTTCCTTTTATTCTGTCGGTÃATTTCAGGGGTCT CCTCAGAGGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGACTGTGCTGTCAAGGCCTGGGG CTTCCGTGACGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCGACAGCTTTACCACCTACTG GATGCACTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTAGAATGGATTGGTGC TATCTATCCTGGAAATAGTGAAACTAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAA GGCCAAACTGACTGCAGTCACATCCGCCAGCACTGCCTATATGGAGTTCACT AGCCTGACAAATGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACGGGGGGTTATTCCG ACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAgccaaaacgaca Fare 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (145 a. a.) [büyük harfler: fare 3B4 VH degisken bölge, küçük harfler: fare lgGl agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MECNWILPFILSVISGVSS E VQLQQSGTVLS RPGAS VTMSC K AS GDS FTTYWMHWVK ORPGOGLEWlGAIYPGNSETSYNOKFKGKAKLTAVTSASTAYMEFTSLTNEDSAVYY CTGGYSDFDYWGOGTTLTVS Sakttppsvyp 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl TYWMH 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRZ AIYPGNSETSYNQKFKG 3B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 GYSDFDY Elde edilen fare 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 96'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 97'dir. Fare 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: ll, SEQ ID NO: 12 ve SEQ ID NO: Anti-PLD4 fare 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (459 bp) [büyük harfler: fare 3B4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGATGGTCCTTGCTCAGTTTCTTGCATTCTTGTTGCTTTGGTTTCCAGGTGC AGGATGTGACATCCTGATGACCCAATCTCCATCCTCCATGTCTGTATCTCTG GGAGACACAGTCAGCATCACTTGCCATGCAAGTCAGGGCATTAGAAGTAAT ATAGGGTGGTTGCAGCAGAAACCAGGGAAATCATTTAAGGGCCTGATCTTT CATGGAACCAACTTGGAAGATGGAGTTCCATCAAGGTTCAGTGGCAGAGGA TCTGGAGCAGATTATTCTCTCACCATCAACAGCCTGGAATCTGAAGATTTTG CAGACTATTACTGTGTACAGTATGTTCAGTTTCCTCCAACGTTCGGCTCGGG GACAAAGTTGGAAATAAGAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatcca Fare 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (153 a. a.) [büyük harfler: fare 3B4 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDRZ ve CDR3) göstermektedir. MMVLAQFLAFLLLWFPGAGCDILMTOSPSSMSVSLGDTVSITCHASOGIRSNIGWLO OKPGKSFKGLIFHGTNLEDGVPSRFSGRGSGÄDYSLTINSLESEDFADYYCVOYVOFP PTFGSGTKLEIRradaaptvsifppsseqltsggasw 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl HASQGIRSNIG 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRZ HGTNLED 3B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 VQYVQFP Elde edilen fare 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 78'dir ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 ve SEQ ID NO: l6'dir. Anti-PLD4 fare 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (475 bp) [büyük harfler: fare 587 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl agir zincir sabit bölgesi] ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCC ACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGG CCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAA CTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATA TATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGAGGAA GGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGC AGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATC TATGATGATTACTACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAÃCCTCAG TCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcgaa Anti-PDL4 fare 11G9.6 antikorunun (158 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekanslari [büyük harfler: fare 5B7 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgG2b agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CD2 ve CDR3). MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVOLOQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWV KOSHGKSLEWIGYIYPYNGNTGYNOKFKRKATLTVDNSSGTVYMELRSLTSEDSAV YYC ARGGIYDDYYDYAIDYWGOGTS VT V 5 Sakttpps vyplapkge 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR2 YIY PYNGNTGYNQKFKR 5B7 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 Elde edilen fare 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 98'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 99'dur. Fare 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ve SEQ ID NO: 19'dur. Anti-PLD4 fare 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (467 bp) [büyük harfler: fare 587 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATG CCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGT GGGAGAAÃCTGTCGCCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCA TATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTA TGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGG ATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTT GGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAG GCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatcc Fare 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (155 a. a.) [büyük harfler: fare 587 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIOMTOSPASLSVSVGETVAITCRASENIYSHIAWYQ QKEGKSPORLVYGATNLAHGVPSRFSGSGSGTOYSLKINSLOSEDFGSYYCOHFWGT PWTFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggaswcf 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl RASENIYSHIA 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRZ GATNLAH 5B7 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 QHFWGTP Elde edilen fare 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 80'dir ve amino asit sekansi SEQ içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 ve SEQ ID NO: l6'dir. Anti-PLD4 fare 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (470 bp) [büyük harfler: fare 7B4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl agir zincir sabit bölgesi] lgG2b agir zincir sabit bölgesi] ATGGGATGGAGCTGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGGAACTGCAGGCGTCC ACTCTGAGGTCCAGCTTCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTGAAACCTGGGG CCTCAGTGAAGATATCCTGCAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACTACAA CTTGCACTGGGTGAAGCAGAGCCATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGATA TATTTATCCTTACAATGGTAATACTGGCTACAACCAGAAGTTCAAGAGGAA GGCCACATTGACTGTAGACAATTCCTCCGGCACAGTCTACATGGAGCTCCGC AGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGATC TATGATGATTACTACGACTATGCTATCGACTATTGGGGTCAAGGAACCTCAG TCACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaaggg Fare 7B4 antikorunun (156 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare 7B4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgG2b agir zincir sabit bölgesi] Alti Çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CDZ ve CDR3). MGWSWIFLFLLSGTAGVHSEVOLOQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWV KOSHGKSLEWIGYIYPYNGNTGYNOKFKRKATLTVDNSSGTVYMELRSLTSEDSAV YYCARGGIYDDYYDYAIDYWGOGTSVTVSSakttDPsleaDk 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR2 YIY PYNGNTGYNQKFKR 7B4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 Elde edilen fare 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: lOO'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lOl'dir. Fare 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 ve SEQ ID NO: l9'dur. Anti-PLD4 fare 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (454 bp) [büyük harfler: fare 7B4 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGAGTGTGCCCACTCAGGTCCTGGGGTTGCTGCTGCTGTGGCTTACAGATG CCAGATGTGACATCCAGATGACTCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGTATCTGT GGGAGAAÃCTGTCGCCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTCA TATAGCATGGTATCAGCAGAAAGAGGGAAAATCTCCTCAGCGCCTGGTCTA TGGTGCAACAAACTTAGCACATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGG ATCAGGCACACAGTATTCCCTCAAGATCAACAGCCTTCAGTCTGAAGATTTT GGGAGTTATTACTGTCAACATTTTTGGGGTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAG GCACCAAGCTGGAAATCAAAcgggCtgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatcc Fare 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (l51 a. a.) [büyük harfler: fare 7B4 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDRZ ve CDR3) göstermektedir. MSVPTQVLGLLLLWLTDARCDIOMTOSPASLSVSVGETVAITCRASENIYSHIAWYO OKEGKSPORLVYGATNLAHGVPSRFSGSGSGTOYSLKINSLOSEDFGSYYCOHFWGT PWTFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggas 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki RASENIYSHIA 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki GATNLAH 7B4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki QHFWGTP g; Anti-PLD4 fare 8Cll antikoru Elde edilen fare 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 82'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 83'dür. Fare 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21 ve SEQ ID NO: 22'dir. Anti-PLD4 fare 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (462 bp) [büyük harfler: fare 8Cll VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgG2b agir zincir sabit bölgesi] ATGGGATGGAGCTATATCATCCTCTTTTTGGTAGCAACAGCAACAGGGGTCC ACTCCCAGGTCCAACTGCAGCAGTCGGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGG CTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTA TTTGTACTGGGTGAGGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACT GATTAATCCTACCAATAGTGATACTATCTTCAATGAGAAGTTCAAGAGCAA GGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCATACATGCAACTCAG CAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACACGAGAGGGGGG ATATGGTTACGGCCCGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTC TCTGCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc Fare 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (154 a. a.) [büyük harfler: fare 8Cll VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDRZ ve CDR3) göstermektedir. MGWSYIILFLVATATGVHSOVOLOQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYYLYWV RORPGOGLEWIGT^INPTNSDTIFNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMOLSSLTSEDSAVYY CTREGGYGYGPFAYWGQGTLVTVS Aakttppsvyp lapkg 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki SYYLY 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki LINPTNSDTIFNEKFKS 8Cll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki EGGYGYGPFAY Elde edilen fare 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: lOZ'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lO3'dür. Fare 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 ve SEQ ID NO: 'dir. Anti-PLD4 fare 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (457 bp) [büyük harfler: fare 5B7 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCA GCAGTGATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGG AGATCAAGCCTCCATCTCTTGCACATCTAGTCAGACCCTTGTACACAGTAAT GGAAACACCTATTTACATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCAAAG CTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCA GTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGG CTGAGGATCTGGGAGTTTATTTCTGCTCTCACAGTACACATGTTCCATTCAC GTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatct Fare 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (152 a. a.) [büyük harfler: fare 8Cll VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir` ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MKLPVRLLVLMFWIPASSSDVVMTOTPLSLPVSLGDQASISCTSSOTLVHSNGNTYLH WYLOKPGOSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSHST gZEFTFGSGTKLElKradaaptvsifppsseqltsg 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl TSSQTLVHSNGNTYLH 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRZ KVSNRFS 8Cll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 g; Anti-PLD4 fare lOC3 antikoru Elde edilen fare lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 84'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 85'tir. Fare 10C3 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDRZ ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 ve SEQ ID NO: 28'dir. Anti-PLD4 fare lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (450 bp) [büyük harfler: fare 10C3 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZa agir zincir sabit bölgesi] ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCC AGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAG GGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGG CATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAAC CATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAAGTGTGAAGGGGCG ATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAG CAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGT GGTAGGAGAGGCTATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACC GTCTCCTCAgccaaaacaacagccccatcggtctatcca Fare lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (150 a. a.) [büyük harfler: fare lOC3 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGZa agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDRZ ve CDR3) göstermektedir. MNFGLSLIFLALILKGVQCEVQLVESGGDLVRPGGSLKLSCAASGFSFSâXgMêWFRO TPDKRLEWVATISSGGSYIYYPESVKGRFTISRDNARNILYLOMSSLKSEDTAMYYCV RLYGGRRGYGLDYWGOGTS VTVSSakttapsvyp lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRZ TISSGGSYIYYPESVKG lOC3 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 Elde edilen fare lOC3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: lO4'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lOS'tir. Fare lOC3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 ve SEQ ID NO: 3l'dir. Anti-PLD4 fare lOC3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (423 bp) [büyük harfler: fare lOC3 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGAT CCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCT TGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGT GATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTC AGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTT CAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGA GGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatc Fare 1003 antikorunun (141 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare lOC3 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CD2 ve CDR3). MRFSAQLLGLLVLWIPGSTAEIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSDGITYLY WYEQKPGQSPQLEIYOMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCQQE LELYTFGGGTKLEIKradaaptVSi lOC3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki RSSKSLLHSDGITYLY 10C3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRZ QMSNLAS lOC3 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 Z; Anti-PLD4 fare 11D10 antikoru Elde edilen fare 11D10 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 86'tür ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 87'tir. Fare 11D10 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 ve SEQ ID NO: 28'dir. Anti-PLD4 fare 11D10 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (450 bp) [büyük harfler: fare 11D10 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCC AGTGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAGGCCTGGAG GGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGCTATGG CATGTCTTGGTTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAAC CATTAGTAGTGGTGGTAGTTACATCTACTATCCAGAAÃGTGTGAAGGGGCG ATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAGGAACATCCTGTACCTGCAAATGAG CAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTATTGTGTAAGACTCTACGGT GGTAGGAGAGGCTATGGTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACC GTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatcca Fare llDlO antikorunun (150 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare llDlO VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CDR2 ve CDRB). MNFGLSLIFLALILKGVQCEVOLVESGGDLVRPGGSLKLSCAASGFSFSSYGMSWFRO TPDKRLEWVATISSGGSYIYYPESVKGRFTISRDNARNILYLOMSSLKSEDTAMYYCV RLYGGRRGYGLDYWGOGTSVTVSS akttppsvyp llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR2 TISSGGSYIYYPESVKG llDlO antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 Elde edilen fare llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 106'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lO7'dir. Fare llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 ve SEQ ID NO: 3l'dir. Anti-PLD4 fare llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (423 bp) [büyük harfler: fare llDlO VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGAGGTTCTCTGCTCAGCTTCTGGGGCTGCTTGTGCTCTGGATCCCTGGAT CCACTGCGGAAATTGTGATGACGCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCT TGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGT GATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTC AGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTT CAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGA GGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTTACACG TTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAcgggCtgatgctgcaccaactgtatccatc Fare llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (141 a. a.) [büyük harfler: fare llDlO VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR.bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MRFSAQIXGLLVLWIPGSTAEIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSDGIIYLY WYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQN LELYTFGGGTKLEIKradaaptVSi llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki RSSKSLLHSDGITYLY llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki QMSNLAS llDlO antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki AQNLEL g;_Anti-PLD4 fare 13D4 antikoru Elde edilen fare 13D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 88'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 89'dur. Fare 13D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 ve SEQ ID NO: 34'tür. Anti-PLD4 fare l3D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (472 bp) [büyük harfler: fare 13D4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAATC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCACCAGTCATTATTACT GGACCTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAAACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAÂTTCTGT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC ACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggcg Fare l3D4 antikorunun (157 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare 13D4 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CDZ ve CDR3). MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIOMTOTTSSLSASLGDRVTISCRASODIDNYLNWYO OKPDGTVKTJ.TYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSTTTSNT.EOEDVATYFCOOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaapt l3D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl l3D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRZ YISYDGSNNYNPSLKN l3D4 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 EGPLYYGNPYWYFDV Elde edilen fare 13D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 108'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lO9'dur. Fare 13D4 antikorünün hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 ve SEQ ID NO: 37'dir. Anti-PLD4 fare 13D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (404 bp) [büyük harfler: fare 13D4 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATGTTG Fare l3D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (134 a. a.) [büyük harfler: fare 13D4 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASODIDNYLNWYO OKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEOEDVATYFCOOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaapt l3D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl RASQDIDNYLN l3D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR2 YTSRLHS l3D4 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 QQFNTLP g; Anti-PLD4 fare 13Hll antikoru Elde edilen fare 13Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 90'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 91'dir. Fare l3Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 ve SEQ ID NO: 40'tir. Anti-PLD4 fare 13H11 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (471 bp) [büyük harfler: fare 13H11 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACT GGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAÃCCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC ACCGTCTCCTCAgccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctaagggc Fare 13Hll antikorunun (157 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare l3Hll VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgG2b agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CDZ ve CDR3). MKVLSLLYLLTAIPGILSDVOLOESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSISSHYYWSWIROF PGNRT.EWMGYISYDGSNNYNPSLKNRISITRDTSKNOFFTXLNSVTTEDTATYNCARE GPLYYGNPYWYFDVWGAGTTVTVSSakttppsvyplankg l3Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRl lBHll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDRZ YISYDGSNNYNPSLKN l3Hll antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki CDR3 EGPLYYGNPYWYFDV Elde edilen fare lBHll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: llO'dur ve amino asit sekansi SEQ ID NO: lll'dir. Fare l3Hll antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 ve SEQ ID NO: 43'tür. Anti-PLD4 fare l3Hll antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (414 hp) [büyük harfler: fare l3Hll VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGGCAGCGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTG Fare 13Hll antikorunun (138 a. a.) agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi [büyük harfler: fare l3H11 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGZb agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini göstermektedir (CDRl, CD2 ve CDR3). MM SS AQFLGLLLLCFQGTRCDIOMTQTTS S LSASLGGSVTISCRASQDIDNYLNWYQ QKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCOOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaaptvsif lBHll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDRl RASQDIDNYLN l3Hll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR2 YTSRLHS lBHll antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki CDR3 QQFNTLP lO. Anti-PLD4 fare l4Cl antikoru Anti-PDL4 fare llG9.6 antikorunun (504) agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 92'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 93'tür. Fare 14C1 antikorunun agir zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39 ve SEQ ID NO: 40'tir. Anti-PLD4 fare 14Cl antikorunun agir zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (470 bp) [büyük harfler: fare 14C1 VH degisken bölgesi, küçük harfler: fare lgGl agir zincir sabit bölgesi] ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTGATGTACAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGGCCTCGTGAAACCTTCTCAGTC TCTGTCTCTCACCTGCTCTGTCACTGGCTACTCCATCTCCAGTCATTATTACT GGAGTTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAATGGATGGGCTACA TAAGCTACGACGGTAGCAATAACTACAACCCATCTCTCAAAAATCGAATCT CCATCACTCGTGACACATCTAAGAACCAGTTTTTCCTGAAGTTGAATTCTGT GACTACTGAGGACACAGCTACATATAACTGTGCAAGAGAGGGCCCGCTCTA CTATGGTAACCCCTACTGGTATTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTC ACCGTCTCCTCAgccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctaaggg Fare 14C1 antikorunun agir zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (156 a. a.) [büyük harfler: fare 14C1 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl agir zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDR1, CDRZ ve CDR3) göstermektedir. MKVLSLLYLLTAIPGILSDVOLOESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSISSHYYWSWIROF PGNRLEWMGYISYDGSNNYNPSLKNRISlTRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYNCARE GPLYYGNPYWYFDVWGAGTTVTVS s akttppsvyplapk l4C1 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki SHYYWS 14Cl antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki YISYDGSNNYNPSLKN 14C1 antikorunun agir zincir degisken bölgesindeki EGPLYYGNPYWYFDV Elde edilen fare 14C1 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi SEQ ID NO: 112'dir ve amino asit sekansi SEQ ID NO: 113'tür. Fare 1401 antikorunun hafif zincir degisken bölgesi içindeki CDRl, CDR2 ve CDR3'ün amino asit sekanslari sirasiyla SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 ve SEQ ID NO: 43'tür. Anti-PLD4 fare 1401 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin nükleik asit sekansi (465 bp) [büyük harfler: fare 5B7 VL degisken bölgesi, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGGGGCAGCGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTGACAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAAAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGTTTAATACGCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatcca Fare 14C1 antikorunun hafif zincir degisken bölgesinin amino asit sekansi (155 a. a.) [büyük harfler: fare 14C1 VH degisken bölge, küçük harfler: fare IgGl hafif zincir sabit bölgesi] Alti çizili sekans kendi sinyal sekansini göstermektedir ve çift çizgi kendi CDR bölgelerini (CDRl, CDR2 ve CDR3) göstermektedir. MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIOMTQTTSSLSASLGGSVTISCRASODIDNYLNWYQ OKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEOEDIATYFCOOFNTLPR TFGGGTKLEIKradaaptvsifppsseqltsggaswcf 14C1 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki RASQDIDNYLN 14C1 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki YTSRLHS 14C1 antikorunun hafif zincir degisken bölgesindeki QQFNTLP Olusturulan kimerik llG9.6 antikorunun agir zincirinin ve hafif zincirini baz sekanslari ve amino asit sekanslari asagida verilen sekans sayilari gibidir. Agir zincir SEQ ID NO: 120 (baz sekans) SEQ ID NO: 121 (amino asit sekansi) Hafif zincir SEQ ID NO: 122 (baz sekans) SEQ ID NO: 123 (amino asit sekansi) agir zincir nükleik asit sekansi [büyük harfler: kimerik 11G9 VH degisken bölgesi, küçük harfler: insan IgG agir zincir sabit bölgesi] (SEQ ID NO: 120) ATGAAAGTGTTGAGTCTGTTGTACCTGTTGACAGCCATTCCTGGTATCCTGT CTcagGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGTGAAGCCTGGGACTTC AGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATG CACTGGGTGAAGCAGAGGCCGGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGAGATATT TATCCTGGTAGTGATAGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCC ACACTGACTGTAGACACATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGC CTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGAGGGTGGTTG GATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAgctagc accaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagc aaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgt tacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggc gtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaa gcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggac cctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactg gtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcag caggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccc aaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagct gcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat acaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcacc gcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcaga zincirinin nükleik asit sekansi [büyük harfler: kimerik llG9 VH degisken bölgesi, küçük harfler: insan IgG agir zincir sabit bölgesi] (SEQ ID NO: 121) MKVLSLLYLLTAIPGILSQVQLQQPGAELVKPGTSVKMSCKASGYTFTSYWMH WVKQRPGQGLEWIGDlYPGSDSTNYNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSE DSAVYYCARGGWLDAMDYWGQGTSVTVSSastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyf pvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkv epkscdkthtcppcpape llggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpekanwyvdgvevhnaktkpreeqy nstyrwsvltvlhqd wlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqultclvkgfyp sdiavewesngqpenny kttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk 13. Anti-PDL4 kimerik llG9.6 antikorunun (466 bp) hafif zincirinin nükleik asit sekansi [büyük harfler: kimerik llG9 VH degisken bölgesi, küçük harfler: insan Ig K hafif zincir sabit bölgesi] (SEQ ID NO: 122) ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTAC CAGATGTGATATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTG GGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGCAATTAT TTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACT ACACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGT CTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTG CCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGAGG CACCAAGCTGGAAATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctg aaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagt ctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacag gctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcc 14. Anti-PDL4 kimerik llG9.6 antikorunun (466 hp) agir zincirinin nükleik asit sekansi [büyük harfler: kimerik llG9 VH degisken bölgesi, küçük harfler: insan lg K hafif zincir sabit bölgesi] (SEQ ID NO: 123) MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTlSCRASQDISNYLN WYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTlSNLEQEDIATYFCQ QGNTLPWTFGGGTKLEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdn alqsgnsq esvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec QGNTL PWTFGGG IKLE 1 Kilvcmpm F1î'ppsdcqlksgtzisa-vclInnfypreakvqwkx iinalqsgmq csvîcii Li Kkd :tvs | 5 stlilsk :idyck hk \- vzitcnhiiglwpvtk @fm gm: Insan PLD4 CDNA ( ATGCCGCCCCGCCGCCCGTGÜGAC.-\(`i`A(`i.~`\GG(`[l"G(iCACGI `l›('_`i(`.-\L'i(îi1'('(_î I'G GGAG( `GCT(JGCTGIU(ITGTGCK."IUGGCTCCGTGGCVYC'ITATCÄTGCCTCCTGT GGC .-\.›\(.ill"('i(.`(IC(`(JTCC'TCCC;XCLWIiGGGCC.-\ GGTGCAGC( '( AAGG v-\(I.`('_i'[`('i(_` ("('I(".-\(`i('iA(_`('I`I`(Ii(_'("i'\ I`(_Ill`('i( î.-\(_i(_'(.`(_`i(j(_' .-\(.`›(.`(_`(_'(_"l (_"I'(_i(_`(_`(_`AOCC'I'(_"l`(_î(_`i(_}(.`(_`r\ GGCC ITiCiL' l (i('I;\(_i("'l`(_i('î'l ('.i(_i.i\(".~\(.î l`(_.i(_î(_`(.î i\(j(j.«\(_i.-\(_i("('i I`(.`L`.-\(_`(j 1'(.}Gf_"l"1'(` A-'\ I'AC I AC l`(`i(`i›l'(_î(It-TTC .~\(`..i\(:i(_i(_i('('.` I (îJ\(_`AT(:`(j(j(_i(Ii/I"(_I:\,i\('_`(3.'\(_` [`C(_i`l`(_"l"I`CC j-\'l"I'TC(.`(."I'CrCiCT(iTGGCC.-\(.'('AOC -\(.i(.`(`(`(_i.-\(`.-\(_"I'GGCCAGGACATCCACC GGFACA l'A l ACA l (1( &UCAG I`(`i("(".›\A("a\ l`(}(.i±\(^î'['(`i(i("(jG [`(_"I`(A"I`(jACGCAGG (`I`I"I`(_`(`z\(_`(_i( i("(` l'(4I l"|"l'(_i;\`[ (_`i(_i('it'i`l`(.'i("(l`(..`,-\(`('.`.-\(_' I4('i("(.î l`:\("`l` [(4 I'(_'A(j(j(j TCG (`(`..\(I`(`.i\(i(" :\(."l'(" I (i l`("(`.(` C.v-\(_r(-i(_i(_'(-7(-i(_î.~\(`(`CÜGGACCI (_i(_ir\(i("i(j(j('î'l (.'i(_`.`l`(_i GCAGG(`.(`r(."1'(`,.-\(-i(`..›\.›\(`,(I`C('I(iCGGCCAACGTCTC'l'GTGG.›\(.`(_iTG.~\ AAG I`(;` I"I' G'l`L`GGAGG ›\'I"l`;-\(,"I' l`(_`.-\ GC.-\G(,`:\(,'(J'G(I(j (jGGG'1`GGGC` I` I'GG'I'ÜGTCACCCA »\(j(_"I'(_` I' [TUAUCU(j(_j.~\(_"l`(j(jA(_i'l"|`(_I(j(_`(_$(_î llACÜCC(j`l'(_`(_}(j(_î(" I`(.j(j.-\(_`(j(j.~'\(_` Insan PDL4 proteini ( .\11.i DLPSAAGSPSAQPL (jQAWL 01..] .iyiiwixsw 1 v Asw wsi .'imivi(_'i\-i^i\'n$ssr\ii,( J' E›-\l..Lf.!KLQ(_)Ll.GRXISI..›\\".-\'I`S`lî"l LAR'rsi'ni ,(`›\-'i..«\/i\i<(ja,\i I\*'RQ\-'P:'\I(iRl..`I`R GVLHSKFWVVDG RHIY.\1C}SAI\TI\ID\\'RSI.TQVKELGAV'IYNCSHIAQDLE mm UR I'RI)I .l . '\I ,I ..~\\"M(,`i5\`›\(`)I-.I-`IY.v'\S`\"MI'.\` I` I"l 4] R1*S}'{PPRY\VI'\`LDN AI .R,-\-v\.-\I"(j Km I(\›"Rl.l.\'(`i("(`il..\'T DPTMFI'YLRSL(`).›\LS.\`P.-\±\N\-'S\-'D\-'1\'\<'FlVPVGNHSNI PFSRVNI ism .\-1\-'TEKAA\-'i(+ i sx \\ sir i wus I`A(_i\-'GLV\i"l'QSPG.-\QP.-\(ji.=\T\`Q EQLRQL i-'ERDWSSRYAVGI-D(1(`)...\i›(;ij_u)("xxx-'(30 .v\TG(`T(`iÂ-\.»'\("i(`(` TC TTCGGAGAGC-;JGCÇA GTGACCCFC ›\'l`(_`i AI'(_5(}(_`(,I (j I'GC TC CA GAÜ TGCTGGCT.›\TG(`T(`1T(`i(j(_` I (_i("i(_i(` I'L'C .-\'I`(_i(,i(_"I'CTTACC'IACC I`(`C TGTG UCAAGTGÜGCCGTCCTCC'CIMSC | ('_iGÜLE(L`:\(J`GTG(_`:\(1`FF(`A .-\(j(_i.-'X("G`I (_i(_`(.` CAGGTCCTGGGGGCATGGI"I'(_I('_`:\Ci(î'(:`(.îA(Ii(_"l`(_I`I'(jG.›\GCCCCTG(Ii.i'\.-\G(II(]G.-\ GUI (_` MJGAAGCAU,<\G(î(j.-'\C l CCTGCCAGC'I TGTCFTTGT("iCi.-\:\..r\(_i(:`.-\ I›(_`(_`C (ECCTGG (TGCAGCTGCTGGAFAC 1 GFCF :\(i(_i.=\(ýi «\G(.`GTC CACGTGGÜ I I( I A T.-\C`J`.-\C'I`GG.I'(IC' CTC AC ;XGGt-iCC'C (MC /\ I`l`('i('i(Ii(`iTC.«\.-\CGACTCATCT1CCC AOL' l`(`i('i( ;AG :\(:i'(_}(_`(.'("I"[CTGCAGAAGC l'GC.~\(`iC.›'\ GCTGC'I'GGGCÄ GGAAC .-\ TT TCCTTGGITGTGGC (`.:\(_`(`..-\(.i(_` ›\(J"I'C(.`..i'\.-\(.'.-\(_`.T("i(`i(7(" ÂGÜÂA ("i I ("(I ,›\(.`(`(_`i AC( TGCAGG I CCTG GCT(`i'(_`(_`(_'(J`.«'\(j(jTÜ(_`(.IC.-\ GGTACGACGGG [GC C('.`,›\'l GG (j(_`.~\CA'I`.-\T.i\(` ATGGGCAÜ | (7(`c.›\.-\(" ›\`l`('ri(i`.-\(' I`(iGCGGTCCCTG-MIGCAGGT ('i AAGQ AGC TTG GCGCTGTÜ .›\ 1`i.` TA 'l`i\_-\(`I t GF .-\ G(".CACC'I`GG(ICC .-\.-\G.~\(" (` I` TTCC AGGGCCTCT TTGATG(_i'(-'i(`iJ'(_i(".(`(j.v\(`(.`,i\(.î14(_î(_`CT1-\(."[`TCT(`.AGCATÜG(T 0011)." I`('i('î(_5('î A( E( '(j(.`("(_` AGGAGTTC.›*\'I'L`T.-'\`I`GCC'I`CCG'I`GA'I`GGAGTATTTC CC I` AC (I.i\("g("(-i('I I' 1 (".›\ GÜL` ACCCCCGCAGGTACT(}('i("("('i("iT('i`("` l`(`i` G M" AAFG CGCTGCGGG CGGCAGCCT'I'( IAGC »\ ›~'\(_i('i('}'l`(_i'l'(_i(_'î(_`iC GTGCGCC TGC TCG] C .-\ GÜL'GC`&I`(_`.›'\(i(_`;\ i\(`(..('(.`(_îf_`('iGC(.`.~\A(`CiT("l`(`T("i [GG A (_'(Ii`l`(j.^'\.»\ ,~\(_E'I`(,` TTC :XT CG l'(j(IC`(i(j I`('i(Ii(j(j =\ A I`(` AT TCCAAC ATCCCGT TC AOC A (QGG l'(_i .i\ .i\ C L` ACAG C .-'\.-\GTTC NI'GGTC .›\ C GG :XGAAGGC AGC C T AC ATA GG( At" ("T (_I (I A .-\ (LI TGGTC GGAGGATTACTTCAGC.'-\('i'(";\( `(`i.-\("('_i(_i('i('i(_}'l`(_i(_â('i(_`L"[ÄGÜTGGTCJWTCAGAG (_"(_`(_`(IGGCGCGCEKECCC(ECC('i('i('i(_i("(:î .i\(_'(_i("i I` .-\(_I.»\('}(_`i,»\(i(`.›\(.`v(.`TC'i(_`(i(}CAGP l` Cinomolgus maymun PDL4 proteini (506 amino asit) MLKPLRR.~\A\"TP?\'I`.\T'CSMl I'KRLWDRE:\(ý`i"l`LO\«"LG\"I .~\\1L\\'LGSMAL'I'YLI. DLPF.-\.~\GSI.S,~\QPI.GQ:\\\"I.QI.LDTAQESVll\".›\S`i'\'\\'SI.14('il'l)l(.i\-'NDSSSQLÜ EA! I OKI VQQLI (jRNlSI AVATSSPTI_;\RKSTDLQ\-'l...~\x\RÜAQVRRVPMGRLTR (NI.lISKI-"'VVDGRIHYMGSAKMDWRSL'I'QVKEI,GAVIYNFSIII.AOI)1J-IK'I'FQ TYWVI.('iVPKAYI PKTWPQNFSS}IINRFQPFQGLFDGVI'I I`.--\\`I"S.*\SPP»\I (ÇPQCI RTPI)LE:\LL.›\\'.\IGSAQI'IFIYASVMIEYFPTTRFSHPRKYWPVLI)NALRAAXI'SK DVR VR LLVSCGL N JDI'VI'MI 'I'YLRSI .QAI SN PA A N\'S\«"!)\"K \'!°`[\-"P\'(j.`\'HS.\'IPF SR\~'\'i isx I`.\1\"I'EKAA YI( i I`SNWSEDYFSSTTGVGI.\'\"1 QSPG.-\Qr';\(`i.~\ i VQH) Resus maymun PDL4 cDNA'si ( ATO('IL(jA.^\GCCT(."I"I'(`(i(j.-\('i.-\(}(I('i(}('AG I`G.-\(`(`(I(`(V`,\`I Ci l'GG(`(_i(,i'l (jCTCC ATO(`TGCCCC(i(`(.`(i(`(`T(iT(}(`i('r:'\('r\(}.-\GA(}( K` l'( i("i(',\("(` i`l` l`('i( '._\(_i('i` I`(_`(_4 l`(} GGAGTGCTGGCYATGCTGTGGCTGGG("I`("(`.=\1GG( l'(ITT:\("(" I e\(_`(' I`(.'(I`l UI` (I`(_` A GG'I (_`(_` I'(J`(j(_i(J(_j(_`.A`I'(_i(j'l`T(_`(_4 .i\(_i(,`(_"[`.›\ (_i(_"[`(_"['GG.~\(.$C(IC(`TG("1'A .-\(`i(`(`i(3 .~\(J(J` I (_I ,:\(.i(_i -\ AOC a\(j AG(iGACT(ICIUCC .~\(.i`(_"l"l`(i I`(`(I`l`T(îTGG.-\ .'\:\(i(".›\'l (A`(_I .«\ll`.~\l_I I MI` l'(`i('i'l`(;`(.`.(" I'(_I.i\(` .i\(_i(j(_`i(_`(_`(_`.('j.-\(_`.*-\'I"l`(_j(j(_`i(jTf_`.AACGAC TCATCTTCC ("_,\(j,'(_' I`('i'('i( ;;'\(-i.'\(_j('i( I(.'(_"l I'(_"I (:i( I .i\(j.-\ i\(_i(."l`(_`i(_î -\(_î(_î:\(_;`(_` I'(_5(__"I'(_iG(j(I AGÜAACI (i I'('i -\,›\(-i`('i.-\(_i("`l"l`(_i('i(_î(_i(_` ]`(_i I`('I.›\`l (_` l`.›\'I'A.~\(`I l (_ECAGCC A(ý`(._`.'l`(_5(j(_`CCAAGAC CTGGAGAAGACCTTCC AGACCTACTGGGTGC'I'CiGGGCiTGC(IT.-\ Mj( 5( TO I (_7 (ÄI(."["[`(I`(.',a\(_i(`i(_iCC'I (_"I'TTG -ÄTGGG(i'l`(.i(_`(_î(_`A(ICAC ›[`G(_`(_'TACTTCTCAGCATC ('i("(_` .-\(`I("(I(j('î .-\(,`'l`('î'['(j'l'(j(II(j(,` .~\(_i(îi(j(j("(j(_î :XC CCC I (j AC( I'GGAGGC GCTGTTG GC (701 G.›\`I`("i(`i`(`i(_i.i'\(ii(_î(:i("("(".i\(`i(`i.-\(:i'1"1`(î.`,-\ I'('I`f`.~\`l'('i(_î('_` Il(T(,`(_'i`[`(_`iATGGAGTAT TC` A (j (:1 I (j L`(Ii(_i ;\ (,`.`I`(_T .-\ AC .›\ (_` (5(_i A (S (_` (_` (_`. ;\ (_`(` ATGT 11`. C C (_I`l` ATCTGC GGTC C C T CATCGT(iCCGGI`G('i(`i("i.›\:\'I'CATT("CAACA T("("("(i I"l'(".i\("i(`,~\ OGG' 1`(`i'.-\ ,~\(_`(.`.=\ C A GC AAGTT C AT GGTC ;\ C G G .i\ G A A G G Ü .-'\ GC (_I I AC .-\ I AG` (_i(` A (` C` ' I ›(_`('I A .-\(.f 'I` (j .i\(_i(_"l`("l I`ll (Iii\(J(7(j(j(j.›\(Ç IÄ(j(_}.4\G›I"I`(`ý(.j(I(j(_"l`ACG(`CGI'CUGC(›"I.G(}.~\(.`(î(}AC 1\(,i(j(_r"l'(,`(QUGGULÄUGACI (jCG I I` I4G(j('.-\(j(j(j(j.'I`(j.~\ Resus maymun PDL4 proteini ( MLKPLRRAAVTPMW'PCSNH.PRRLWDREAGTI.Q\'l.G\-'I.AMI..Wl.GSMAISIYLI. DLPFAA (jSl.S.»\QPL(j(_)I~\\\"LQLI I) I`.~\QI:S\*I l VASY YWSL'I GPDIGVNDSSSQLG (j\v`L[I$KI-'WVVDÜRIII\'I\'1(iS.~\N\1l)WI(SI IIQVKIÄI (_i.›*\\-"I`YN(_'SIILAQDLFKTFQ RTPINJ: AI I..i\VXR-ERAQl-IH\',i\S\-".'\.Hi`r'}'I' I` I RFS!llr'RRYWPVl I)\'.-\| .RAAAFSK GVI( \"R1.L\-'SCGLNTDP'I MFI'YLRSLQALSNPAANVSVDVK\'FI\7P\"(ýiNl ISMPF SRVMISKF.\1\"TEK.-\.~\YlGTSN\\"SIEDYFSS`l `I`Ci\.'(iI,\."\"TOSI'(`i.-\.QP.-\('i.i\ I'\i'()l~`_() LRQI ,r Ekim-`SSK \' ,-\\'{`il_.l)(`iQAPGQDCVWVQG Fare PDL4 CDNA'si ( .~\G`l`(_j(,jr\(jG I Ç IC ['(_i'.i\'l'1(_i('_i("C(_I'i`(j(_`."[`(_`(.`.-\(_I.i\ I`C'I"(_'._›\'| GA IC( i-\(_`v-\`l`.i\(_`i(_.`(j('i,›\ CTTGG(_`.-\`1`(_j(j']` -\(_I`l`(](_i(_i(:i.-\ 1'(j(_`I i\(_i(`"l`(_i I'.\(I"l`(j(`i(j.-\(_' I (_I.›\(_i("`l`(_' H] I (i.-\(_I`I'C (,`(_`(_"1'(_i AQUA AG I`(_i(`(I(] I (TI I`(_î(_rT(ICTC'ifHî.-\(7.-\(`("'(_I`l'("i.›\i\J-\Ci(iAGACGC I`("i` ;\ (_`i(_lv\(i(`«\Ci.~\:\ I AA( TCCTGTFAGCTCATCCTTGTGG.~\A.-\GC.›\II`(`FCCGAGG.-\ (j I` I'(',i(,`(" v\I I"l'(:`i(".i\(}(I'l'(`i(`i(`A(i(`(`(`(".*\(`TGC(`(`:10(`('I(`CT(`i("i("(`('I c\(`i('i(` l` I'(i`(`i (`AI`GC.-\GCTTCT FG.-\C.^\(ITG(I TC`GGG.«-\(.`n\(iCCvT(`(`Â-\C.v'\'l"l'(`i(`("1`(`(}TJ-\(`T:\(."l' GTC'I'TGOL"I`(j(`(.`(_`,-\'I'(j(i`I`(j(`(`(_`.›\(3 ›'\'I'AC GAP AA (i IGÜCCATG;\A.›\(I AGFT I` .-\C`I(J`G(j(j(j'l'(j'l`l`(j'l`.›\(,`.»\(j I (`(" AA :\ T I`Cll ('iCiG i"I'GT(`iG.~\`l`OGG( GA( Al` (I: TC] ALIUI'GUUCA(j("(j(_î(`IJ-\A(`.`.-\ l ("i('i:\('I [GGCI(i(`iT(`(ICT(i.-\(I`IC.»\("i(i1('r:\.›\("i('i;\i\(` (ITGGCCTCGGAACTTC I CA l'(_`(_`(_`s\(_`.-\'l`("A A'k( I(_`(J("`1"l`("( `,-\ l`(_`("('I›I' l`(j(_`('i(_}(j('i4|` ('iGG l`('i(_.`4TCGCC`AÜTTCATCTATG'I'CTCGGTGATGGA(jTATTTCCCTACCALT.? Ct'i("[` I'C.^.(T(I-XCC:\TGCCAGGTACTGGCCCGTGCTGGACA .i\T(iCGCT.-\CGG GCAGCGGCCCTCAATA.-\(j(,_i('j'l`(î`i I`(_;("A'l`('i l'(_i(_'G(_.` l"]`.-\(_"1`(`i(i I f`AG(-"IIIEC'IIIKG'I' GTC .-\CAGAC:\AGAC AG CCTATUI'ALIGL` -\(I (_"I'(_` '1' *x `i\(:"l`(j('j l'(_.` .-\(J'r\.~\(_,`i.-'\(_I'I'e\(_` (_'(_}AG.›\(-"I`(`i(îi.›\(`i l"l CCC'A( l`ATGCTATGGAFCT:\(}.›\C.-\G;\C.›\AGTCC CGAGC Fare PDL4 proetini ( MDKKKEHPEÄ-IRJPI Q YAW." VS! HW'CS TSHTH'HSCiLGNIV I (i Mi 7 AVM" .SSVTLI LFLWQGATSFT&IRß-IFPLIEVPSWSWF l I.I\'(_5I)AEQQNTNS(IQI .[l .\'lî"\`lPi:Il)I PFA AGSPTAQPLAQAW'LQLLDTARI-ISVHI.\SYY\\"SLTGLDIG\'NI)SSSRQGEALLQ K I-'QQI .I .I.R,\'IS\-'\'\".-\'I HS!' I'l..AKTSTDLQVLAiU!UAQ[RQVPMKQLTGGVUIS KI'\i\'\"\"1)(_`iRHVYVGSANMI)\\7RSL'I'QVKELGAIIYNCSNLAQDLEKTFQTYWV DAVI.GVMFGARQFIY\*'S`\"fv[lî\'I-`P'I'TRI-` I`IHI:\RY\\"P\"I .DN \l..R.~\.-\.~"\I,NKG\"H VRLLVSF WFNFDI' FMFAYLRSLQAFSNPSAGISVDVK\'I;I\«"P\i'(jNl[SNIPFSRV'N I1SKFNIVTDKTAYVGTSNWSEDY['SI IÄI`A(_G\›"('il AIVSQK I I'R.r\f)l'('i.~^\ I` I`\i'Q[-i()l .R Insan PDL3 CDNA sekansi (SEQ ID NO:55) -\ I (`i.-\.›\(i(`("14.\-\.\(`[(`i.-\ TG l .\(_`(_`;\(j(_'i.-\(_;CTG.i\.-\G(_`iTG(IFTGÜ.v\(i`.-\(}(`i.i\(_i("("(` GCCA ~\ I~(i.-\G(`TGCCCNIG.-\.\T(`i.-\(L\T'I`G.v\(`iû(`(il'(`i(j.-\ NGGCTGC(i(j.~\A.i\;\ (`i_-\4-\:\G(`(`(`(`1(I'I (iGCiTfC'I'GCI GGT( `C T( :\ IT( Hi( i( `( i(i l` !(i l (1( i(7é(,` I' I ( '( i( i.\ GCCCTGATGA(T(`.-\(3("1`(3'IT`I (_ TATLEGG.-\:\Tx\(`G(_i("('i .-\(" I I (11` '\ I (' I ( ' I'! I (`i GÖCC(H~\.\(C -\(_i(.`(}C`(`f`.-\(`i(_ (_ ("(`(_T(i(`T,\ IGA( CC l I(_i(`('i.\.\("i(`.«\(_i I`(:i(_4 I (56 TGUA ›\.^.(j(` '\TT(`CTUAU(SCICCTGCL-VÄT'I CCCCÄ.-\›I'(i("(I I'("( `.-\(`(_i'(`›Ci(i.\.~\C(' (K:.-\Ü(`(`(ý"]`(`TÜ(`.C(I.i\(`i(`.-\G(SGr('i.=\(1`(}s\(iG TF( IT( UGFA( i(VT(i(ý`.-\(›;\(I(j( I› (i( :( XX( `t ` «\ -\ M i( i( }( `( i'î ( i -\ `\( '(,}`l`(_`(ý`(j(ý` NI'( `(j(' I`(j I`(iv\(.i(_`.\ \(i(.'(_`(_`AGCÜGGC(' (K) K1(&TOG:\(`('.\G:\C(I('AVI-[C I`.-\(`("I'GU'CECI'KE'I'GC(`A:WINX (i(`r.\CTGG(`(i (ICTGGC'I`('(}:\(i.›\II(`T('i;\(`(I'\.«\(i.~\ IT'I'TTGMKK(~ TA(THG!'17(`(`T("i(i(i("(".›\(`i GC ,\(:(`i('.-\("i("1'("(".~\T(`(`('i\T(`.i\.v\(`T] (_'i()t`('(`(`(i(`i ['T('T.-\T('rAt' .-\(`(`( (i(' I :\(`.\ A(`(`›\.›\(i`-\(SA(`i\(4(`.›\.›\'l^(i'(ji\(ii\l("I(i(`("1(`.-\.›\I'(i($ \-\(`('('('!(i`(`l`(`IGGCC] .i\('(` I`(i(`i(`(i;\(`yT(`i(`(i( '('('(`l '..v\(`( `(`( ` l G H i`I (`l"z\.\(i` [( i(}(`(`(i(`:\(` I`('(`»\(i.\\( '("I' (il(`:\'| ( `i.-\.-\( "II-VX` l'( i('(`(`.-\(,`T( ` l`(_i(_i.›\(i›l› I`(` I'(_'(_`(`.›\(_`L`("I'(`.-\(_` '\G(_i'I'I`CTG(_i(_` (' î(i(`( ' i\'l"î(i.i\(`(iz\ H i( i(i(` I ( i('( i( i( `(i( i( i(`('i\(`( IM '( uk( i( U 1 ( i(i(^(i` I`(`.›\.›\(}(i (il(i.-\.›\:\("ll(` I`I`I`G'I`GU'I'( `(`(`('( i(`('î(i \ TUM 9( i('(`(`›\(`i(}(' I (`(i':\:\ T(`('(`:\ I'.-\ H& (H `( i I (5 H `.›\.-\(`(`:\(`.~\:\(`..i\:\( i i'.\( ':1 i ( i( i I (i.-\(` I`(i,\ \( 4( 'it `( i( `(`:\(`('TA(`:\ l (Ih (TÜAC AG( GTGGGC AACGC( f(`i(`IC("i(`.C HHCI ( I GA Insan PDL3 proteini ( NIKI'KIÄH (:IF.I.K\ I' »\F.F.I'i\\'lîl.I'\1.\'ltIF..-\\\ KA.-\F.}\'K5\R\\-'\."l.l.\'1.ll..v\\"\"(l`il'(i.-\ LMTOLFLWEYGDLHLIGPNQRPAPCYDPFEAVLVESIPIEGLDFP.\':\STGXPSTS (`)A\\'l.(':l.l.x\(`i.r\liSSLDlASFYWTI.TNXD'HITQEPSAQQGFEVLRULQ'l LAPKGV NVR1AVRKî'SGI'QPQ_~\DI.Q;\l.L QSUAOVRMVDMQKL'l'H(i\-'i.}l'l KFWVN DQ'I I[FYI,GSv\i\.\îI)\\`RSLTQ\'KFI .(`i\'\-'.\1Y.\J(`S(LAR!" TKIFF.:\\'\\'I"l.(i():\(&SMPS .-\RSFI\'\'.~\\ MNYIVPAI'IVIJFSIlPHRI-WI'›\IDI`)GIVRRA'IYI R(Ii\'K\`RJ LISCWÜHSI- PSNIRAH L\1_.\.-\LRI):\`H'I`HSDI()\'KLI'\'\'P;\DI`AQ.\R[PYARVNI INKYMVIIIR ATYIGTSNWSÜNYFTI'ZTAGTSLIÃ'TQNÜRGGLRSQIEAH LRDWDSPYSHDLDT SÃDS\'(;~N.~\(_`RI l.. Insan PDL5 cDNA'si ( .v\'l'(i(_i(i.~*\(_i`;\(_iGi\ TGAGGA [GG.»\C`I`CTC`.~'\(`i.-\.›\AAAAA'I I`('}(`(`.›\.›\.›\.~'\'I .-\,~\.›'\4['(j AI`(I(Ii.-\.I\TTGCCCTGGTGGAA:KAT ATTCC f(j.›\.~\GGCCTTAACTATTC:\GA.~\A:\T TCR-VII`AGCATGTCAGGGTCA.\CGTCT TT T'I GAA.-\:\(_'i'l"l`('_i(_` f(-`C`;\('_'i('î J`(_'i4-\(_`T GT.-\'I"I`.-\(_i.-\A(i(_`C'I"I'(_`i ^\.-\.i\'l"l'.›\.»\ ~\(_S(j(_iAGCL'GAGG'I'GACGTA(I.i\T(}.-\.›\(`.«=\TG C AOC ACGTGTATATCGGC AGTGC (ftjG'IWTGGAC TGGC AATÜ C( TGGGAC AG ATO-X.~\A(`i.-X!\(.`T(IGGTGTCA TC"1"I'(.`T.-\C *KACTGCAGC I'CîCCTG( i`l'(.`(".T .~\(_r:'\ I'I (i(_' A.-\(_"'I` l`(_2«\(_il Il( i)\.=\ I'( i .«\.i'\.i\("(_`.,`\ .-\.»\`l`(f I (_'. :MM-_ECA ["I"I`(j`l' 3x I`(_`(jA XI'I`LI`1`(_I(_.` Â AATA.'\Gr\(`r.*\.-\GC:\IIVTAG-In"TTÂCGAAGCGTÂI'AGÂGII-TCGACTCCTT I'TAAGC TTC 100.& ACIUAAALI'I GA I`(II(_"(I(I'I"1`A("(J"[` I"1`.i\,~\(`1 I'I`A`l"l `l (:'A`l`(_`T(_`.`I"I`.-\.-\.›\(j(_` (li«\`I"l"[`(i(".-\(` l`(`i.\.i\:'\`I"›'\(j(I(".-\A("'I GC'AG l"I` l'(`i.-\.v\.›\(il l'.-\.-\.i\'l"l' l"["I`I`(i›\`I (_`T(_i T IÄ-\'I'(_` ,~\AC(_IA(.}(}(_` AG AÂI'G'I'G wXUUAA (TA A C AQAAUCA'I'CA'I'T AA( iC-XACTTA Insan PDL5 proteini ( MGEDEDGI_ SEKNCQNKCRIAL \'ENIPEGL.\'YSE1\`.~\PFHLSLFQG\\"MNLLN.\I:\ KKSVDIVSSIIWDLNHTHPSACQGQRLFEKLLQLTSQNIEIKLVSDVI'ADSKYLR ALKIKGAEV I`YT\1?\IM I .-\YKKf'iRIQSSl'WI\-'1)KQI!VYI('iS.i\('i`l.D\\'QSI.('iQMKlz l.(_i'VII<`\'N("S(`.I.\'I .DLQRII".v\1.YSSLKFKSRVI'Q'I`WSKR!.YG\"'YI)NI:KKI.QJ _QIN It` I KSQAH SNSI'Kl.FCI'KNRS`FDIDAIYSVH)D.-\|\'OY\"\'1.J\\'I\'IDYI.PISSTS YKRT YWPDLDAKIRE.-\L\«'LRSVR\~'RL1,LSFWKETDPLTFNFISSLKAICTEIANCSLKV KI:l"[`)I,ERENA(`ATKEOK NI i'l FPRLNRNKYMVI'D(MA YICîNFD\\i'\i"(`iI\'l)F'l ONA (TI CiLV[NQ.-\D\'RNNI{SIIKQI KDVFIERDWYSPYAKTLQPTKQPNCSSI 'F KLKPL SNKT.~\TDDTGGKDPR1\'V Insan PDL4-Ig füzyon proteini cDNA'si (2142 bp) (SEQ ID .v\ I`(j(j.~\(`i'l"l"l'(_'.v\(j :\(I(j(.`.«\( ;(7) H` I I'T('iT.-\ TT(4('i›I ('iTTGC'I`("I`(_i'('iT l (Ii'l (" I'GG 1'('i l` TGAT'GG.i'\gattacaziggaigacgacguiaaaGGATCCCCcagagggc:cacaaicaagcçctgccctccatgça aatgcçuagcsicstaa:ctcligggîggucatcugtctlcat([lccctccaaagattuaggatglactcatgalclccctgagc güclggatgagtggcaasgagntaaaîgcaaggzcaacaauaaigacçiccuagcgcuçulcgagagaacçahicaaai a(lsza;aciasilarigrigiuzîcr;.;alggltrtl.u'ucatgmcaguaagctgm 1` "açaagaagauclggulggaaagaaat nurluistizclglti'autgggtcmiçgdsçggw::ca:aatcaccacacgsic .:::gunclccitggiactusgglaaaCGT (_`CT(_` CCACÇ TGGGG L`(_IA(_}(J"['(}C .~\ GC( (I AA GG' .›\("G I4(_'r{_.'(_`(_îj\('i'(_i` [T .T 1' (I'iGGAG CATGGCTCCAGCCCAGCITGGGAGCCCCTGGAAGCAGAGGCCAGGCAUCAU AOGGAUJFC1U(CAhVIIGICCT1UTUQAAAUCAFCCCCCAGUACCTGCCAT ("l fit` .-\(`i("("(Ii'(,i('` M'i(I`("("("I`(_"I`( i(`(`(.`.~\( i(`(j'l'(:` I`(}(j(.i(_`(_`.-\(}G(.'(."I`(}(i("l`(i(" ›\('i(' l' (1( 'I GG .4\(_` i\(_" [`(IiC("(I AGU .-\(j:\(j{:`(j`l`C(_I ;\(_`(_i 1`(.j(_`iL"]"[`C_-\T.r'\CT.-\(I TGGT("('I(` I (I ACAGGGCCTGACAICGGGGTCAACGACTCGTCTTCCCAGCTGGGAGAGGCT (`TI4(`1(i("A(`iA.-\('i("l`($('IA(`i'(.`.-\(_i(" I'(i('î'I'(iCi( iC'AGL& AM.' A'I"I`T(.`CCTG(}(`"I`GTG GCCAC (IAGCAGCCC G.›\(`..~\(".T(`iG(`t`:\(`iG.›\C.~\ I`C(` :\(_I(."(I`i AU.` [GC -XG(j'l"ll(_"l`(_} GC TGCC C GAGGTGCC C AT ( i T;\C(i;-\C Mîü [ GC( C A. I`(_i(i(:i(i(j(.3(j(_` I`ll.` A ('CAUU GLX-"(51602 .-\.-\C ATGGA("I'GGCGGT(ITCT(?›\(IG(I.~\GGTG.~\ AGGAGC F'l'(i('i(`î(`r AGACCTACTGGGTACTGGGGGTGCCCAAGGCTGICCTCCCCAAAACCTGGC GATGGGG TGCCC .~\(`(`..v›\(`.`TGC(`. FACTTCTF AGPGTCOCCM"( `.i\(_i(.` ›\(` I`(.."I`(.j'l`C (`,~\L`i(_`(_`:'\ (CCC(_`.C(j..\(_i(j I`A L` [UGCCUG l`(i`(_` I'(j(_`i ACAA CGCGCTGCGGGC'GGC AGCC'I TCGGCAAG(`iG(`.(`i"l`(i(`.(i(`.G I›(`i(`.`GC(`,TGC"I`(`i`(`i`l`(`.(_i`(i(î'l`(i(_î(_`i(J;\(_`,T(_`±\,-\ CACGGACCCCACCATGTTCCCCTACCTGCGGTCCCTGCAGGCGCTCAGCAAC CCCGCGGCCAACGTCTCTGTGGACGTGAAAGTCTTCATCGTGCCGGTGGGG ACGGAGAAGGCAGCCTACATAGGCACCTCCAACTGGTCGGAGGATTACTTC TGGAGTTCGCGCTACGCCGTCGGCCTGGACGGACAGGCTCCGGGCCAGGAC Insan PDL4-Ig füzyon proteini (713 amino asit) (SEQ ID $\'1"I FPPK [KDV LM]SLSPI\"`l`(`\"\*\-rl)\'.$l -` l )1)Pl) VQ I S W I-`\':\i .\` VEVl l`l`J-\QTQTHR EDYNS'I'LR\I'\~`SAI.PIQI1()I)\\"T\=ISGKIEFKCK\rN.\'KDI.P.-\PIERTISKPK GSVR APO VYVLHWTFEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDHWHÄVTNNGKTELNYKNPFPVLDS DGSYPWYSKLRVhKKÖÜVVFRNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGKRPPf" GO VOPKI )\*'1'R9 WH !ÜS SPA""EPLEAIEA RQQRDSCQLVLVE SI PQI JH'SA .MISIN AQPLGOAuLQLLDTAQESVHVASYY"SLTGPDKRWIWSSQLGEALLOKLQQ LI.(iRNISLAVATSSPTI..ARTSTDLQVI .AARG .-\I IVRQVPMGRI .TRCIVLHSKFWV VDGRIHYMGSANNHMYRSLTQVKELGAV1YNCSHLAQDLEKTFQTY"WLGVP KAVLPKTßTQNFSSHFNRFQPPHGLFDG\?TTAYFSASPRÄLCPQGRTRDLEAL lÃVNHNAQhHYASVMEYHHIRFQHWRYWTVIDNALRAAÄFGKUVRVNJN' ERISIM NUMARALARI NITE ABF-1211 NITE ABF-1212 NITE ABF-1213 NITE ABF-1214 SEKANS LISTESI SERBEST METIN Ileri primer Ters primer Ileri primer Ters primer Ileri primer Ters primer Ileri primer Ters primer Ileri primer Ters primer Ankraj primer n deoksinosindir AUAP primer SEQUENCEUSNNG SBIHOTECHCOWLTD ANHFOSFOUND4ANHKORUIÇERENHAÇ <130 W7064-OO <160 132 <170 Patentin versiyon 3.4 <210 1 <211 506 <212 PRT <213 Homo sapiens <220 <221 PEPTIT <222 (1) .. (506) <400 1 Met Leu Lys Pro geu Trp Lys Ala Ala Ygl Ala Pro Thr Trp ?go Cys Ser Met Pro Pro Arg Arg Pro Trp Asp Arg Glu Ala Gly Thr Leu Gin 25 30 Val Leu Gly Ata Leu Ala Val Leu Trp Leu Gly Ser Val Ala Leu I|e 40 45 Cys Leu Leu Trp Gln Val Pro Arg Pro Pro Thr Trp Gly Gln Val Gln 50 55 60 Pro Lys Asp Val Pro Arg Ser Trp Glu His Gly Ser Ser Pro Ala Trp 65 70 75 80 Glu Pro Leu Glu A1a Glu Ala Arg Gin Gln Arg Asp Ser Cys Gln Leu 85 90 95 Val Leu Var Glu Ser Ile Pro Gln Asp Leu Pro Ser Ala Ala Gly Ser 100 105 110 Pro Ser Ala Gln Pro Leu Gly Gln Ala Trp Leu Gln Leu Leu Asp Thr 115 120 125 Ala Gln Glu Ser Val His Val Ala 130 135 Pro Asp I|e Gly Va| Asn Asp Ser 145 150 Leu Ala Ala Arg Gly Ala His Va1 195 200 210 215 Arg Tyr Trp Pro Val Leu Asp Asn 155 160 170 175 235 240 250 255 315 320 330 335 355 360 365 Lys Gly Val Arg Val Arg Leu Leu Val Gly Cys Gly Leu Asn Ihr Asp 370 375 380 Pro Thr Met Phe Pro Tyr Leu Arg Ser Leu Gln Ala Leu Ser Asn Pro Ala Ala Asn Val Ser Val Asp Val Lys Val Phe Ile Val Pro Val Gly 405 410 415 Asn His Ser Asn lle Pro Phe Ser Arg Val Asn His Ser Lys Phe Met 420 425 430 Val Thr Glu Lys Ala Ala Tyr Ile Gly Thr Ser Asn Trp Ser Glu Asp 435 440 445 Tyr Phe Ser Ser Thr Ala Gly Val Gly Leu Val Val îhr Gln Ser Pro 450 455 460 Gly Ala Gln Pro Ala Gly Ala Thr Val Gln Glu Gln Leu Arg Gln Leu Phe Glu Arg Asp Trp Ser Ser Arg Tyr Ala Val Gly Leu Asp Gly Gln 485 490 495 Ala Pro Gly Gln Asp Cys Val Irp Gln Gly 500 505 <210) 2 <211) 5 (212) PRT <213 Homo sapiens <400 2 (210) 3 (211) 17 (212) PRT (213) Homo sapiens <400 3 Asp [le Tyr Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys (210) 4 (211) 9 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 4 (210) 5 (211) 11 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 5 (210) 6 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 6 (210) 7 (211) 8 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 7 (210) 8 (211) 5 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 8 (210) 9 (211) 17 <212 PRT <213 Homo sapiens (400) 9 <210 10 <211 7 <212 PRT <213 Homo sapiens (400) 10 <210 11 <211 II <212 PRT <213 Homo sapiens <400 11 His Ala Ser Gln Gly [le Arg Ser Asn lâe Gly <210 12 (211) 7 <212 PRI <213 Homo sapiens <400 12 (210) 13 (211) 7 <212 PRT <213 Homo sapiens (400) 13 (210) 14 (211) 5 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 14 (210) 15 (211) 17 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 15 (210) 16 (211) 14 (212) PR1 (213) Homo sapiens (400) 16 (210) 17 (211) 11 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 17 Arg Ala Ser Glu Asn [le Tyr Ser His Ile Ala (210) 18 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 18 (210) 19 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 19 (210) 20 (211) 5 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 20 (210) 21 (211) 17 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 21 Leu lle Asn Pro ghr Asn Ser Asp Thr Ile Phe Asn Glu Lys Pge Lys (210) 22 (211) 11 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 22 Glu Gly Gly Tyr gly Tyr Gly Pro Phe ?aa îyr (210) 23 (211) 16 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) Thr Ser Ser Gln Thr Leu Val His Ser Asn G! (210) (211) (212) (213) (400) (210) (211) (212) (213) (400) (210) (211) (212) (213) Homo-sapiensLys Val Ser Asn grg Phe Ser6 Homo sapiensHis Ser Thr His Val Pro Homo sapiens (400) (210) (211) (212) (213) (400) Homo sapiens (210) (211) (212) (213) Homo sapiens (400) 28 Leu Tyr Gly Gly êrg Arg Gly Tyr Gly Leu Asp Tyr (210) 29 (211) 15 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 29 Arg Ser Ser Lys ger Leu Leu His Ser ?gp Gly Ile îhr îyr &su Tyr (210) 30 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 30 (210) 31 (211) 6 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 31 (210) 32 (211) 6 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 32 (210) 33 (211) 16 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 33 îyr Ile Ser Tyr gsp Gly Ser Asn Asn :ör Asn Pro Ser Leu Lgs Asn (210) 34 (211) 15 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 34 (210) 35 (211) 11 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 35 (210) 36 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 36 (210) 37 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 37 (210) 38 (211) 6 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 38 (210) 39 (211) 16 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 39 (210) 40 (211) 15 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 40 (210) 41 (211) 11 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 41 Arg Ala Ser Gln gsp Ile Asp Asn îyr Lgu Asn (210) 42 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 42 (210) 43 (211) 7 (212) PRT (213) Homo sapiens (400) 43 (210) 44 <211 (212) <213 (400) 44 Homo sapiens <210 45 <211 18 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 45 <210 46 <211 20 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <400 46 <210 47 <211 19 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 47 <210 48 <211 19 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <400 48 <210 49 <211 18 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 49 <210 50 <211 20 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <400 50 <210 51 <211 19 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 51 <210 52 <211 19 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <400 52 <210 53 <21130 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 53 <210 54 <21134 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer (400) 54 <210 55 <211 1473 <212 DNA <213 Homo sapiens <220 <221› gen <222 <40055 (1)..(1473) <210 56 <211 1338 <212 DNA <213 Homo sapiens <220 <221 gene <222 <40056 (1)..(1338) gatccccgga acgtatga <210 57 <211 39 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <40057 <21058 <211 57 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <400 58 <210 59 <211 39 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 59 <210 60 <211 57 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ters primer <4006O 40 (210) ßi <211 26 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 ileri primer <400 61 <210 62 <211 25 <212 DNA <2"l 3 Yapay <220 <223 ters primer (400) 62 <210 63 <211 1521 <212 DNA <213 Macaca fascicular is <220 <221 gen <222 (1y.(1521) (400) 63 <210 64 <211 36 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer (400) 64 <210 65 <211 32 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer (400) 65 <210 66 <211 24 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer <40066 <210 67 <211 24 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer (400) 67 <210 68 <21124 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer <400 68 tccagagttc caagtcacag tcac <210 69 <211 24 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer (400) 69 <210 70 <211 36 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 anchor primer <220 <221 misc_feature <222 (24).. (25) <223 ri deoksiizozin. <220 <221 miso_feature <222 (29).. (30) <223 n deoksi izozin. <220 <221 mi sc_feature <222 (34).. (35) <223 n deoksi izozin. <40070 <210 71 <211 20 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 AUAP primer <400 71 <210 72 <211 31 <212 DNA <213 <220 <223 primer <40072 <210 73 <211 23 <212 DNA <213 Yapay <220 <223 primer <400 73 <210 74 <211 504 <212 DNA <213 Mus musculus (400) 74 <210 75 <211 168 <212 PRT <213 Mus musculus <400 75 Val Tyr Pro Leu Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser <210 76 <211 437 <212 DNA <213 Mus musculus <40076 ggacagggtc <210 77 <211 145 <212 PRT <213 Mus musculus <400 77 TR TR TR TR TR TR TR