ES2788175T3 - Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo - Google Patents
Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo Download PDFInfo
- Publication number
- ES2788175T3 ES2788175T3 ES15779395T ES15779395T ES2788175T3 ES 2788175 T3 ES2788175 T3 ES 2788175T3 ES 15779395 T ES15779395 T ES 15779395T ES 15779395 T ES15779395 T ES 15779395T ES 2788175 T3 ES2788175 T3 ES 2788175T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- bacteriophage
- ocj25
- escherichia coli
- pathogenic escherichia
- avian
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 title claims abstract description 158
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 51
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims abstract description 85
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 65
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 62
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 claims description 32
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 claims description 32
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 27
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 25
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 23
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 18
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 11
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims description 8
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 7
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 description 23
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 21
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 20
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000701553 Myoviridae Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 208000007893 Salpingitis Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- -1 feed Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010071301 Perihepatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-pyrrolidin-1-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)CCN1CCCC1 MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 102000045442 glycosyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N lufenuron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(C(F)(F)F)F)=CC(Cl)=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 206010030306 omphalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/153—Nucleic acids; Hydrolysis products or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/00021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/00032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
- C12N2795/10111—Myoviridae
- C12N2795/10121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2795/00—Bacteriophages
- C12N2795/00011—Details
- C12N2795/10011—Details dsDNA Bacteriophages
- C12N2795/10111—Myoviridae
- C12N2795/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Birds (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Un bacteriófago ΦCJ25 (KCCM11463P) que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar.
Description
DESCRIPCIÓN
Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo
Campo técnico
La presente invención se refiere a un bacteriófago nuevo que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar (APEC; del inglés, Avian Pathogenic Escherichia coli) de los serotipos O-1, O-78 u O-125, a una composición que incluye el mismo y al bacteriófago para utilizar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Antecedentes de la técnica
Escherichia coli (en adelante, referida también como E. coli) es un bacilo corto Gram negativo del género Escherichia, familia Enterobacteriaceae y uno de los de la flora normal encontrada en los intestinos de varios animales, incluyendo mamíferos. La mayoría de las cepas de Escherichia coli no son patógenas y pueden causar una infección oportunista, pero algunas cepas altamente patógenas causan diversas enfermedades intestinales y sepsis en animales, incluyendo los seres humanos.
Entre estas cepas de Escherichia coli, E. coli patógena aviar causa infección a través del tracto respiratorio de aves tales como pollos, gansos, pavos y similares y se sabe que pasa al cuerpo del ave a través de la membrana mucosa respiratoria. Con respecto a las enfermedades respiratorias en avesE. coli patógena aviar causa enfermedades principalmente en aves de corral, lo que conlleva daños económicos enormes en la industria de aves de corral. Por otra parte, un bacteriófago se refiere a un virus específico de bacterias que evita e inhibe el crecimiento de una bacteria infectada con un bacteriófago específico. Como los bacteriófagos tienen una especificidad por el hospedador más fuerte que los antibióticos y son problemas crecientes la emergencia reciente de bacterias resistentes a antibióticos y los antibióticos residuales en animales, la aplicación de bacteriófagos ha atraído gran interés.
Se han realizado activamente en muchos países estudios sobre bacteriófagos y ha habido una tendencia creciente para obtener aprobación de la Food and Drug Administration (FDA) para composiciones que utilizan bacteriófagos, además de aplicaciones de patente para bacteriófagos. Por ejemplo, el documento KR101381793 divulga el bacteriófago OCJ23 activo contra E. coli patógena, serotipo O-78. El OCJ23 es resistente al ácido, resistente al calor y tiene una resistencia a la sequía excelente.
Sin embargo, las tecnologías relacionadas con bacteriófagos para la prevención y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, que son cuestiones importantes en la industria de la avicultura incluyendo la cría de aves de corral, debidas a Escherichia coli patógena aviar son insuficientes todavía y por tanto, hay necesidad de tales bacteriófagos y del desarrollo de tecnologías relevantes.
Problema técnico
Como resultado de una investigación seria encaminada a superar la emergencia de bacterias resistentes a antibióticos y los antibióticos residuales en animales y a prevenir eficazmente y tratar enfermedades infecciosas de aves, los presentes inventores aislaron de fuentes naturales un bacteriófago nuevo O CJ25 (KCCM11463P), que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 que causan enfermedades respiratorias de aves de corral.
Además, los presentes inventores identificaron propiedades morfológicas, bioquímicas y genéticas del bacteriófago nuevo, confirmaron que el bacteriófago tiene una resistencia al ácido excelente, resistencia al calor y resistencia al secado y desarrollaron antibióticos, desinfectantes, aditivos para piensos y otras composiciones utilizando el bacteriófago, una composición para prevenir enfermedades infecciosas en aves y proporcionan un bacteriófago nuevo para utilizar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar un bacteriófago nuevo O CJ25 (KCCM11463P) que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125. Otro objetivo de la presente invención consiste en proporcionar una composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125, incluyendo el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo.
Un objetivo adicional de la presente invención consiste en proporcionar antibióticos, aditivos para piensos, aditivos para agua de bebida, piensos, agua de bebida, desinfectantes o detergentes, incluyendo el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo.
Un objetivo todavía adicional de la presente invención consiste en proporcionar el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo para usar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Solución técnica
Un aspecto de la presente invención proporciona un bacteriófago nuevo OCJ25 (KCCM11463P) que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Otro aspecto de la presente invención proporciona una composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125, incluyendo el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo.
Un objetivo adicional de la presente invención proporciona antibióticos, aditivos para piensos, aditivos para agua de bebida, piensos, agua de bebida, desinfectantes o detergentes, incluyendo el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo.
Un objetivo todavía adicional de la presente invención consiste en proporcionar el bacteriófago O CJ25 (KCCM11463P) o la composición que incluye el bacteriófago O CJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo para usar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Efectos ventajosos
De acuerdo con la presente invención, el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) tiene un efecto de tener una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Adicionalmente, el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) según la presente invención tiene una resistencia al ácido excelente, resistencia al calor y resistencia al secado y por tanto puede utilizarse no solo como un agente para prevenir enfermedades infecciosas provocadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 a diferentes intervalos de temperatura, pH y condiciones de sequedad, sino también como antibióticos, aditivos para piensos, aditivos para agua de bebida, piensos, agua de bebida, desinfectantes, detergentes y similares, que incluyen el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) como un componente activo.
Adicionalmente, la presente invención proporciona el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) o antibióticos que incluyen el mismo como un ingrediente activo y los antibióticos tienen efectos en los que los antibióticos tienen especificidad por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 en comparación con antibióticos anteriores y por tanto, matan selectivamente bacterias patógenas sin matar bacterias beneficiosas; y que los antibióticos no inducen resistencia a fármacos, dando lugar a una extensión de la vida de los productos en comparación con antibióticos previos.
Adicionalmente, la presente invención proporciona el bacteriófago O CJ25 (KCCM11463P) o la composición que incluye el bacteriófago O CJ25 (KCCM11463P) como un ingrediente activo para usar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Descripción de los dibujos
La Fig. 1 es una imagen de microscopía electrónica de un bacteriófago nuevo OCJ25 (KCCM11463P) (en adelante, referido como OCJ25).
La Fig. 2 muestra los resultados de electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) de un bacteriófago nuevo OCJ25.
La Fig. 3 muestra los resultados de electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato (SDS-PAGE) de un bacteriófago nuevo OCJ25.
La Fig. 4 es un gráfico que muestra los resultados de un experimento de resistencia al ácido de un bacteriófago nuevo OCJ25.
La Fig. 5 es un gráfico que muestra los resultados de un experimento de resistencia al calor de un bacteriófago nuevo OCJ25.
La Fig. 6 es un gráfico que muestra los resultados de un experimento de resistencia al secado de un bacteriófago nuevo OCJ25.
Mejor forma de realización
En adelante, se describirán en mayor detalle realizaciones de la presente invención. Se omitirá la descripción de detalles evidentes para una persona experta en la técnica en el presente documento.
Una realización de la presente invención proporciona un bacteriófago nuevo OCJ25 (KCCM11463P) (en adelante, referido como OCJ25) que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar (APEC) de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Escherichia coli patógena aviar se refiere a Escherichia coli que se transmite a través del tracto respiratorio de aves tales como pollos, gansos, pavos y similares y que puede causar enfermedades infecciosas de aves, específicamente colibacilosis aviar. Específicamente, Escherichia coli patógena aviar penetra en el cuerpo de aves a través de la membrana mucosa del tracto respiratorio y causa diversas enfermedades, tales como sepsis, granuloma, aerosaculitis, salpingitis, artritis y similares. Escherichia coli patógena aviar es un bacilo Gram negativo igual que la Escherichia coli general, tiene flagelos peritricosos para la motilidad y es una bacteria aeróbica o anaeróbica facultativa que descompone lactosa y fructosa para generar ácidos y gases.
Escherichia coli patógena aviar crece bien en medios comunes y es capaz de crecer a una temperatura de aproximadamente 7°C a aproximadamente 48 °C, con temperatura de crecimiento ideal que varía de aproximadamente 35 °C a aproximadamente 37 °C. Específicamente, a aproximadamente 42 °C, que está cerca de la temperatura corporal de las aves, se realiza eficazmente la expresión de factores patógenos. Adicionalmente, Escherichia coli patógena aviar puede crecer a pH que varía de 4,5 a 9,0.
Un bacteriófago es un virus específico de bacterias capaz de infectar una bacteria específica e inhibir el crecimiento de la bacteria y es un virus que incluye ácido desoxirribonucleico mono o bicatenario (ADN) o ácido ribonucleico (ARN) como un material genético.
Específicamente, el bacteriófago OCJ25 según la realización de la presente invención es un bacteriófago que tiene especificidad de especie, que infecta selectivamente Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 y que pertenece morfológicamente a Myoviridae, que tiene una cápside icosaédrica y una cola contráctil (véase la Fig. 1). Se compara la homología entre una secuencia de nucleótidos del bacteriófago OCJ25 y secuencias de nucleótidos descodificadas de otros bacteriófagos y los resultados se muestran en la Tabla 1. El bacteriófago OCJ25 muestra resistencia al ácido estable a pH 3,5 hasta pH 11,0 sin perder actividad (Fig. 4) y en términos de resistencia al calor, el bacteriófago OCJ25 no muestra disminución de actividad, incluso cuando se expone a 50 °C o más (por ejemplo, 53 °C) durante dos horas (Fig. 5). En términos de resistencia al secado, el bacteriófago OCJ25 muestra disminución de actividad de aproximadamente 2 log tras el secado (Fig. 6). La secuencia de nucleótidos del bacteriófago OCJ25 se expone en la SEQ ID NO: 1 de la lista de secuencias.
El bacteriófago OCJ25 es un bacteriófago nuevo aislado por el presente inventor y se depositó en el Korean Culture Center of Microorganisms (KCCM) (361-221, Hongje 1-dong, Seodaemun-gu, Seul, Corea) el 25 de octubre de 2013, con el número de entrada Kc CM 11462P.
Otra realización de la presente invención proporciona una composición para evitar enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125, incluyendo el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo.
Dado que el bacteriófago OCJ25 muestra actividad antibacteriana capaz de matar específicamente Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125, se puede utilizar el bacteriófago OCJ25 en la prevención de enfermedades causadas por infección con Escherichia coli patógena aviar. Entre los ejemplos de enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar se incluye la colibacilosis aviar, sin limitarse a la misma. En el presente documento, el término "colibacilosis aviar" se refiere a una enfermedad que se produce en el tracto respiratorio de aves debido a la infección con Escherichia coli y los síntomas de la misma incluyen aerosaculitis, perihepatitis, peritonitis, pericarditis, salpingitis, onfalitis, osteomielitis o septicemia, causando de este modo retraso en el crecimiento y mortalidad de aves infectadas.
En el presente documento, el término "que previene" o "prevención" se refiere a todas las acciones para inhibir o retrasar las correspondientes enfermedades o retrasar la existencia de las enfermedades correspondientes, mediante la administración a un animal del bacteriófago OCJ25 y/o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo.
La composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 según a esta realización puede incluir el bacteriófago OCJ25 en cantidades de 5x102 ufp/ml a 5x1012 ufp/ml, específicamente, 1x106 ufp/ml a 1x1010 ufp/ml.
La composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 según a esta realización puede incluir adicionalmente vehículos farmacéuticamente aceptables y se pueden formular con los vehículos para proporcionar piensos, medicinas, aditivos para piensos o aditivos para agua de bebida y similares.
En el presente documento, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a vehículos o diluyentes que no estimulan un organismo y que no inhiben la actividad biológica y las propiedades de los compuestos administrados.
Los tipos de vehículos aplicables a esta realización no se circunscriben particularmente y pueden utilizarse vehículos farmacéuticamente aceptables utilizados habitualmente en la técnica. Entre los ejemplos de vehículos pueden incluirse suero salino, agua destilada, solución de Ringer, solución salina tamponada, una solución de inyección de albúmina, una solución de dextrosa, una solución de maltodextrina, glicerol y etanol, sin limitarse a los mismos. Estos pueden utilizarse solos o en combinación de los mismos.
Es más, según sea necesario, se pueden añadir otros aditivos comunes tales como antioxidantes, soluciones tamponadas y/o citostáticas a la composición de acuerdo con la presente invención y se pueden añadir adicionalmente diluyentes, dispersantes, tensioactivos, aglutinantes y/o lubricantes a la composición de acuerdo con la presente invención para elaborar formulaciones inyectables tales como soluciones acuosas, suspensiones y emulsiones, píldoras, cápsulas, gránulos y comprimidos.
Los métodos para administrar la composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 no se circunscriben particularmente y pueden utilizarse métodos cualesquiera utilizados habitualmente en la técnica. Un ejemplo del método de administración puede incluir administración oral o administración parenteral.
Entre los ejemplos de formas de administración para administración oral se pueden incluir trociscos, pastillas para chupar, comprimidos, suspensiones solubles en agua, suspensiones de base oleosa, polvo de formulación, granulados, emulsiones, cápsulas duras, cápsulas blandas, jarabes y elixires.
Para formular la composición según esta realización en formas de administración tales como comprimidos o cápsulas, se pueden añadir adicionalmente aglutinantes, tales como lactosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, amilopectina, celulosa y gelatina; excipientes, tales como fosfato dicálcico; disgregadores, tales como almidón de maíz y almidón de batata; lubricantes, tales como estearato de magnesio, estearato de calcio, estearil fumarato sódico y cera de polietilenglicol y para la formulación de cápsulas, se pueden incluir adicionalmente vehículos líquidos, tales como aceites grasos, además de las sustancias mencionados anteriormente.
Entre los métodos para administrar parenteralmente la composición de esta realización se pueden incluir, por ejemplo, la inyección intravenosa, administración intraperitoneal, administración intramuscular, administración subcutánea y administración tópica y un método de aplicación o pulverización de la composición según la presente invención a una región afectada, sin limitarse a los mismos.
Con el fin de formular formas de administración parenteral, por ejemplo, la composición de esta realización puede formularse en formas de administración para inyección tales como inyección subcutánea, inyección intravenosa e inyección intramuscular; supositorios; o formas de administración para pulverización tales como aerosoles a fin de mantener la inhalación mediante inhaladores, sin limitarse a los mismos. Con el fin de formular formas de administración para inyección, la composición de esta realización se puede mezclar en agua con estabilizadores o agentes tamponadores para preparar soluciones o suspensiones, que se formulan en formas de administración por unidad de administración, tales como ampollas o viales. Cuando la composición se formula en formas de administración para pulverización tales como aerosoles, la composición se puede formular con propelentes y similares junto con aditivos, de manera que se dispersa en la misma un concentrado dispersado en agua o un polvo humedecido.
Las cantidades adecuadas de aplicación, pulverización o administración de la composición para prevenir enfermedades infecciosas causadas por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 según esta realización pueden diferir según factores tales como edad, peso corporal y sexo de los animales, grado de los síntomas de la enfermedad, piensos ingeridos, tasa de excreción y similares, además de un método para formular la composición, un método de administración, tiempo de administración y/o rutas de administración y un veterinario experto puede determinar y prescribir fácilmente cantidades de dosis eficaces para el tratamiento previsto.
Una realización adicional de la presente invención proporciona antibióticos que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo.
En el presente documento, el término "antibióticos" se refiere a una preparación que se administra a animales, incluyendo los seres humanos, en una forma medicinal y exhibe eficacia para esterilizar bacterias y se usa como un término general para antisépticos, germicidas y agentes antibacterianos.
Los antibióticos de esta realización que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo tienen efectos en los que los antibióticos tienen especificidad para Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 en comparación con antibióticos típicos y así matan bacterias patógenas específicas, pero no bacterias beneficiosas; y en los que los antibióticos no inducen resistencia a antibiótico, dando lugar a una extensión de la vida de los
productos en comparación con antibióticos típicos.
En todavía otra realización de la presente invención se proporciona un aditivo para piensos avícolas o agua de bebida avícola, que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo.
No se circunscriben aves en particular como sujetos para los que se aplican los aditivos para piensos avícolas o los aditivos para agua de bebida avícola, pero las aves en esta realización son aves de corral en particular.
En el presente documento, aves de corral es un nombre genérico para animales que pertenecen a aves dentro de la ganadería. No se circunscriben particularmente las aves de corral y pueden comprender al menos uno del grupo que consiste en pollos, gansos, pavos y similares.
Los aditivos para piensos avícolas o los aditivos para agua de bebida avícola pueden utilizarse para preparar separadamente aditivos para piensos o aditivos para agua de bebida avícola utilizando el bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el mismo y mezclado aditivos o agua de bebida con los aditivos o añadiendo directamente el bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el mismo en un proceso de preparación de piensos o agua de bebida.
El bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo utilizado en forma de aditivos para piensos o aditivos para agua de bebida según esta realización, puede ser una forma líquida o una forma seca, por ejemplo, una forma de polvo seco.
Por ejemplo, el bacteriófago OCJ25 según la presente invención se mezcla con una forma de polvo en cantidades de 0,05 % en peso (%p) a 10 %p, específicamente 0,1 %p a 2%p, según el peso de los aditivos para piensos.
No se circunscriben métodos de secado en particular de los aditivos para piensos o de los aditivos para agua de bebida según esta realización para producir polvo seco y puede utilizarse cualquier método utilizado habitualmente en la técnica. Entre los ejemplos del método de secado se pueden incluir el secado por aire, secado natural, secado por pulverización y liofilización, sin limitarse a los mismos. Estos métodos pueden utilizarse solos o en combinación de los mismos.
Los aditivos para piensos o los aditivos para agua de bebida según esta realización pueden incluir adicionalmente otros microorganismos no patógenos. Los microorganismos pueden seleccionarse del grupo que consiste en Bacillus sp., tal como Bacillus subtilis capaz de producir proteasas, lipasas y/o glicosiltransferasas; bacterias de ácido láctico tales como Lactobacillus sp. que tienen actividad fisiológica y capacidad de descomponer materia orgánica en condiciones anaerobias como el estómago del ganado; bacterias filamentosas tales como Aspergillus oryzae que tiene efectos de ganancia de peso en animales, aumento de producción de leche e incremento de la tasa de digestión-absorción de los piensos; y levaduras tales como Saccharomyces cerevisiae y similares. Estos microorganismos pueden utilizarse solos o en combinación de los mismos.
Los aditivos para piensos o los aditivos para agua de bebida según esta realización que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo pueden comprender adicionalmente otros aditivos si es necesario. Entre los ejemplos de aditivos utilizables se pueden incluir los aglutinantes, emulsionantes y conservantes añadidos para la prevención del deterioro de la calidad de piensos o agua de bebida; agentes de aminoácidos, de vitaminas, de enzimas, probióticos, aromatizantes, compuestos nitrogenados no proteicos, agentes de silicatos, tamponadores, agentes colorantes, agentes que extraen u oligosacáridos que se añaden para incrementar la utilidad de piensos o agua de bebida; y otros suplementos para piensos y similares. Estos aditivos pueden utilizarse solos o en combinación de los mismos.
Los aditivos para piensos según la presente invención pueden estar presentes en cantidades de 0,05 partes en peso a 10 partes en peso, específicamente 0,1 partes en peso a 2 partes en peso, basados en 100 partes en peso de piensos. Los aditivos para agua de bebida según la presente invención pueden estar presentes en cantidades de 0,0001 en peso a 0,01 partes en peso, específicamente 0,001 partes en peso a 0,005 partes en peso, basados en 100 partes en peso de agua de bebida. Dentro de estos intervalos, los aditivos permiten la actividad del bacteriófago OCJ25 contra Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 y O-125 para que se despliegue suficientemente.
Todavía otra realización de la presente invención proporciona piensos o agua de bebida preparada añadiendo aditivos para piensos o los aditivos para agua de bebida que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo para piensos o agua de bebida o directamente añadiendo el bacteriófago OCJ25 a los mismos.
Los piensos utilizados en esta realización no se circunscriben en particular y puede utilizarse cualquiera de los piensos usados habitualmente en la técnica. Entre los ejemplos de piensos pueden utilizarse piensos vegetales tales como granos, tubérculos, subproductos de procesamiento de alimentos, algas, fibras, subproductos farmacéuticos, aceites y grasas, almidones, residuos o subproductos de granos y similares; y piensos animales tales como proteínas, sustancias inorgánicas, aceites y grasas, minerales, proteínas unicelulares y plancton animal o piensos
animales. Estos piensos se usan solos o en combinación de los mismos.
El agua de bebida utilizada en esta realización no se circunscribe en particular y puede utilizarse cualquier agua de bebida usada habitualmente en la técnica.
Todavía otra realización de la presente invención proporciona desinfectantes o detergentes que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo. Las formas de administración de los desinfectantes o detergentes no se circunscriben en particular y puede utilizarse cualquier forma de administración utilizada habitualmente en la técnica.
Para eliminar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125, se pueden pulverizar los desinfectantes a hábitats o aves, mataderos, zonas muertas, cocinas y equipamiento de cocina, sin limitarse a los mismos.
Los detergentes pueden usarse para limpiar una superficie de la dermis o partes del cuerpo de aves que están expuestas o que pueden exponerse a Escherichia coli patógena aviar, sin limitarse a las mismas.
Todavía otra realización de la presente invención proporciona el bacteriófago OCJ25 o la composición que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo para utilizar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
El bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 para utilizar según las reivindicaciones es para administración a aves que se exponen o que pueden exponerse a Escherichia coli patógena aviar. Las cantidades totales adecuadas del bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el mismo por día puede determinarse por un médico dentro del juicio médico apropiado, como es evidente para los expertos en la materia. Una cantidad eficaz concreta farmacéuticamente del bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo para ciertas aves puede determinarse teniendo en cuenta los tipos y grado de reacción a conseguir, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, sexo o dieta de los individuos correspondientes, tiempo de administración y rutas de administración del bacteriófago OCJ25 o una composición que incluye el mismo y tasa de secreción de la composición, periodo de tratamiento y similares y puede diferir dependiendo de varios factores y factores similares bien conocidos en el campo de la medicina que incluyen componentes de medicinas que se utilizan simultáneamente o en diferentes momentos.
El bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo es para administrar en forma de una preparación farmacéutica para aves, mediante pulverización intranasal o añadido directamente a piensos avícolas o a agua de bebida de modo que tiene que ser digerido y puede mezclarse en forma de aditivos para piensos o aditivos para agua de bebida con piensos o agua de bebida.
Las rutas y métodos de administración del bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo no se circunscriben en particular y la administración puede alcanzarse mediante rutas y métodos en tanto que la administración permita al bacteriófago OCJ25 o la composición que incluye el mismo alcanzar los tejidos deseados. En concreto, el bacteriófago OCJ25 o la composición que incluyen el bacteriófago OCJ25 como un ingrediente activo es para administrar mediante diferentes rutas orales o parenterales y entre los ejemplos de administración se pueden incluir la oral, rectal, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, transdérmica, intranasal, inhalación y similares, sin limitarse a los mismos.
En adelante, la presente invención se describirá con más detalle con referencia a un ejemplo preferido. Debe entenderse que estos ejemplos no deben interpretarse de un modo limitativo de la invención.
[Ejemplo 1] - Aislamiento del bacteriófago que infecta Escherichia coli patógena aviar de serotipos O-1, O-78 u O-125
<Ejemplo 1-1>
Cribado de bacteriófagos y aislamiento de bacteriófagos individuales
Se centrifugaron 50 ml de una muestra obtenida a partir de heces de pollo recogidas en torno a la granja SamwhawonJong en Gwangcheon, Hongsung-gun, Chungcheong, a 4.000 rpm durante 10 minutos y el sobrenadante resultante se filtró mediante un filtro de 0,45 pm para preparar un líquido de muestra, que a su vez se utilizó para realizar un método de superposición de agar blando. El método de superposición de agar blando se refiere a un método de observación de lisis por bacteriófagos que utiliza una célula hospedadora que crece sobre agar (unido a un medio sólido que utiliza agar al 0,7 %).
Específicamente, se mezclaron 150 pl de una solución de cultivo agitado (OD600 = 2) de Escherichia coli patógena aviar (E09-19) obtenida del Department of Veterinary Medicine de Konkuk University y 2 ml de medio 10xLb (10 g/l
de triptófano; 5 g/l de extracto de levadura; 10 g/l de NaCI) con 18 ml del líquido de muestra filtrado, seguido del cultivo a 30 °C durante 18 horas y la solución de cultivo resultante se centrifugó a 4.000 rpm durante 10 minutos y el sobrenadante resultante se filtró mediante un filtro de 0,45 |jm. Posteriormente, una solución mixta que consiste en 3 ml de agar 0,7 % (p/v) y 150 j l de una solución de cultivo agitado (OD600 = 2) de Escherichia coli patógena aviar (E09-19) se vertió y solidificó sobre una placa de medio LB, sobre la que se añadieron 10 j l del líquido de muestra gota a gota, seguido de cultivo a 30 °C durante 18 horas, identificando de este modo la formación de placas.
Dado que se sabe que está presente un tipo de bacteriófago por placa, los inventores trataron de aislar bacteriófagos individuales de las placas formadas. Específicamente, se añadieron 400 j l de solución SM (5,8 g/l de NaCI; 2 g/l de MgSO47H2O; 50 ml de Tris-HCI 1M (pH 7,5)) a las placas y se dejaron a temperatura ambiente durante 4 horas, obteniendo de ese modo una solución de bacteriófagos.
Posteriormente, se mezclaron 100 j l de la solución de bacteriófagos con 12 ml de agar 0,7 % (p/v) y 500 j l de una solución de cultivo agitado (OD600 = 2) de Escherichia coli patógena aviar (E09-19), que se utilizó para realizar un método de superposición de agar blando utilizando una placa de medio LB que tiene un diámetro de 150 mm donde se realizó el cultivo hasta que el bacteriófago se lisó completamente. Después de completarse el cultivo, se añadieron 15 ml de solución SM a la placa de medio LB y se dejó a temperatura ambiente durante 4 horas, obteniendo de ese modo una solución de bacteriófagos.
A la solución obtenida, se añadió cloroformo 1 % (v/v) y se mezcló durante 10 minutos, seguido de centrifugación a 4.000 rpm durante 10 minutos, obteniéndose de este modo un sobrenadante, que a su vez se filtró mediante un filtro de 0,45 jm, obteniendo de este modo una muestra final.
<Ejemplo 1-2>
Cultivo a gran escala y purificación del bacteriófago
Se cultivó el bacteriófago obtenido en el Ejemplo 1-1 a gran escala utilizando Escherichia coli patógena aviar (E09-19) y de ahí se purificó el bacteriófago a continuación.
Específicamente, Escherichia coli patógena aviar (E09-19) se produjo en cultivo agitado y se inoculó a 1,5x1010 ufc, seguido de centrifugación a 4.000 rpm durante 10 minutos y resuspensión en 4 ml de solución SM. A esto, se añadió el bacteriófago a 1,5x106ufp con multiplicidad de infección (MOI; del inglés, Multiplicity of Infection) de 0,0001 y a continuación se dejó a temperatura ambiente durante 20 minutos.
A continuación, con ello se inocularon 150 ml de medio LB y se cultivó a 30 °C durante 6 horas. Después de completarse el cultivo, se añadió cloroformo a un volumen de 1 % (v/v) del volumen final, seguido de agitación durante 20 minutos, a lo que se añadieron ADNasa y ARNasa como enzimas de restricción en una concentración final de 1 jg/ml, respectivamente y se dejó a 30 °C durante 30 minutos. Posteriormente, se añadieron cloruro de sodio y polietilenglicol a una concentración final de 1M y 10 % (p/v), respectivamente y se dejó a 4 °C durante 3 horas, seguido de centrifugación a 4 °C y 12.000 rpm durante 20 minutos, obteniéndose de este modo un precipitado.
El precipitado obtenido se suspendió en 5 ml de solución SM y a continuación se dejó a temperatura ambiente durante 20 minutos, se añadieron 4 ml de cloroformo al mismo con agitación, seguido de centrifugación a 4 °C con 4.000 rpm durante 20 minutos, obteniendo de este modo un sobrenadante. El sobrenadante se filtró a través de un filtro de 0,45 jm, seguido de ultracentrifugación (35.000 rpm, 1 hora, 4 °C) utilizando un método de gradiente de densidad de glicerol (densidad: glicerol 40 %, 5 %), purificando de este modo un bacteriófago.
Los presentes inventores aislaron un bacteriófago que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125 a partir de muestras recogidas de heces de pollos en granjas, que se designó como "Bacteriófago OCJ25" y se depositó en el Korean Culture Center of Microorganisms (KCCM) (361-221 Hongje 1-dong, Seodaemun-gu, Seul, Corea) el 25 de octubre de 2013, con el número de entrada KCCM 11463P.
<Ejemplo 2>
Observación morfológica de QCJ25
El bacteriófago OCJ25 purificado en el Ejemplo 1 se diluyó en solución de gelatina 0,01 % y se fijó con una solución de glutaraldehído 2,5 %. El bacteriófago resultante se añadió gota a gota a una placa de mica recubierta de carbono (aprox. 2,5 mmx2,5 mm), se aclimató durante 10 minutos y a continuación se lavó con agua destilada.
Posteriormente, la película de carbono se montó sobre una rejilla de cobre y se tiñó con acetato de uranilo 4 % durante 60 segundos, se secó y se examinó en un microscopio electrónico de transmisión (Jem-1011, 80 kV, de x200.000 aumentos) (Fig. 1).
La Fig. 1 es una imagen de microscopía electrónica de transmisión del bacteriófago OCJ25, en la que el bacteriófago OCJ25 tiene características morfológicas de una cápside icosaédrica que tiene un tamaño de aproximadamente 83 nm con una cola contráctil, que indica que el bacteriófago pertenece al morfotipo A1 de Myoviridae.
<Ejemplo 3>
Análisis de tamaño de ADN genómico total de QCJ25
El ADN genómico se extrajo del bacteriófago OCJ25 purificado en el Ejemplo 1.
Específicamente, se añadieron ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 20 mM, 50 pg/ml de proteasa K y dodecilsulfato sódico (SDS) 0,5 % (p/v) a una solución cultivada del bacteriófago OCJ25 y se dejó a 50 °C durante una hora, a la que se añadió una cantidad igual de fenol (pH 8,0) con agitación, seguido de centrifugación a temperatura ambiente y 12.000 rpm durante 10 minutos, obteniendo de este modo un sobrenadante.
El sobrenadante se mezcló con una cantidad igual de FC (fenol: cloroformo = 1:1), seguido de centrifugación a temperatura ambiente y 12.000 rpm durante 10 minutos, obteniendo de este modo un sobrenadante. El sobrenadante se mezcló con una cantidad igual de cloroformo, seguido de centrifugación a temperatura ambiente y 12.000 rpm durante 10 minutos, obteniendo de este modo un sobrenadante. El sobrenadante se mezcló con 10 % (v/v) de acetato de sodio 3M basado en el volumen total, seguido de la adición de 2 volúmenes de etanol frío 95 %, mezclado y permaneciendo a -20 °C durante 1 hora.
Posteriormente, la sustancia resultante se centrifugó a 0°C y 12.000 rpm durante 10 minutos, de la que se retiró un sobrenadante para obtener un precipitado, que se disolvió en 50 pl de solución tamponada de TE (Tris-EDTA, pH 8,0). El ADN extraído se diluyó 10 veces y se determinó la concentración de ADN mediante la medición de la absorbancia a OD260.
A continuación, se cargó 1 pg de ADN sobre un gel de agarosa PFGE (electroforesis en gel de campo pulsado) 1 % y se desarrolló utilizando el BIORAD PFGE SYSTEM NO.7 PROGRAM (tamaño que varía de 25 kb a 100 kb; tiempo de cambio de carril de 0,4 a 2,0 segundos, forma lineal; tensión directa, 180 V; tensión inversa, 120 V) a temperatura ambiente durante 20 horas (Fig. 2).
La Fig. 2 es una fotografía de gel de electroforesis de ADN genómico del bacteriófago OCJ25 y puede observarse que el tamaño de ADN genómico del bacteriófago OCJ25 fue de aproximadamente 39 kpb.
<Ejemplo 4>
Análisis del patrón de proteínas de QCJ25
Se mezclaron 15 pl de la solución de bacteriófago OCJ25 purificado (valoración 1011 ufp/ml) con 3 pl de 5xsolución de muestra de SDS y a continuación se hirvieron durante 5 minutos para realizar SDS-PAGE 12 % (Fig. 3).
La Fig. 3 es una fotografía de electroforesis de resultados de SDS-PAGE realizada sobre el bacteriófago OCJ25 y puede observarse que las proteínas principales tienen un tamaño de aproximadamente 43 kDa, aproximadamente 49,3 kDa, aproximadamente 60,4 kDa y aproximadamente 94,9 kDa.
<Ejemplo 5>
Análisis de las propiedades genéticas de QCJ25
Para determinar las propiedades genéticas del bacteriófago OCJ25 purificado en el Ejemplo 1, el ADN del bacteriófago OCJ25 se analizó utilizando como un analizador génico un FLX Titanium Sequencer (Roche). Los genes se recombinaron utilizando GS y un software ensamblador de novo (Roche) de Macogen Inc. El marco abierto de lectura se identificó utilizando los software Gene-Mark. hmm, Glimmer v3.02 y FGENESB. El marco abierto de lectura se anotó utilizando BLASTP y el programa InterProScan.
La secuencia de nucleótidos del bacteriófago OCJ25 mostró similaridad a la secuencia de nucleótidos de bacteriófagos notificados anteriormente (fago EcoDSI de Enterobacteria), pero pudo observarse que no hubo bacteriófagos en los que todos los fragmentos coincidieran al 100%. Por consiguiente, pudo observarse que el bacteriófago era un bacteriófago aislado nuevo.
La siguiente Tabla 1 muestra los resultados de la comparación entre la secuencia de nucleótidos del bacteriófago OCJ25 y la secuencia de nucleótidos descodificada del bacteriófago previo notificado en la técnica.
TABLA 1
El ADN del bacteriófago preparado OCJ25 se analizó utilizando un secuenciador de ADN y la secuencia de nucleótidos total analizada se expone en la SEQ ID NO: 1.
<Ejemplo 6>
Estabilidad de pH de QCJ25
Para identificar si el bacteriófago OCJ25 puede mantener estabilidad a pH bajo como las condiciones estomacales, la estabilidad del bacteriófago OCJ25 se examinó a diferentes pH (pH 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 5,5, 6,5, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0 y 11,0).
Para el experimento, se prepararon diferentes soluciones de pH (soluciones tamponadoras de acetato de sodio (pH 4,0, pH 4,5, pH 5,0, pH 5,5), soluciones tamponadoras de citrato de sodio (pH 2,5, pH 3,0 y pH 3,5), soluciones tamponadoras de fosfato de sodio (pH 6,5 y pH 7,0) y soluciones de Tris-HCl (pH 8,0, pH 9,0, pH 10,0 y pH 11,0)) a una concentración de 0,2M.
Se mezclaron 180 pl de cada solución de pH con 20 pl de una solución de bacteriófago con valoración 1,0x1010 UFP/ml para permitir que cada solución de pH tuviera una concentración de 1M y a continuación la solución resultante se dejó a temperatura ambiente durante 2 horas. Para un grupo de control, se mezclaron 20 pl de una solución de bacteriófago con valoración 1,0x1010 UFP/ml con 180 pl de solución SM mediante el mismo método y la solución resultante se dejó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, las soluciones se diluyeron en serie y se cultivaron 10 pl de cada una de las soluciones en cada etapa de dilución mediante el método de superposición de agar blando a 30 °C durante 18 horas para determinar la valoración de bacteriófago basándose en si el bacteriófago se lisó (Fig. 4).
La Fig. 4 muestra resultados experimentales de resistencia al ácido del bacteriófago OCJ25. En la Fig. 4, se pudo observar que el bacteriófago OCJ25 no perdió su actividad y mantuvo la estabilidad desde pH 3,5 a pH 11,0, en comparación con el grupo de control.
<Ejemplo 7>
Estabilidad térmica del bacteriófago QCJ25
Si los bacteriófagos de formulan en aditivos para piensos entre las formas de administración de bacteriófagos, se puede generar calor durante los procesos de formulación y por tanto, se realizó el siguiente experimento para determinar la estabilidad térmica de los bacteriófagos.
Específicamente, se dejaron 100 pl de solución de bacteriófago OCJ25 con 1,25x1010 UFP/ml a 37 °C, 45 °C, 53 °C y 60 °C durante 10 minutos, 30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, respectivamente. Después, la solución de cultivo experimental resultante se diluyó en serie, se cultivaron 10 pl de cada una de las soluciones en cada etapa de dilución mediante el método de superposición de agar blando a 30 °C durante 18 horas para determinar la valoración de bacteriófago basándose en si el bacteriófago se lisó (Fig. 5).
La Fig. 5 muestra resultados experimentales de resistencia al calor del bacteriófago OCJ25. Como se muestra en la Fig. 5, se pudo observar que el bacteriófago OCJ25 no mostró pérdida de actividad a 53 °C durante un máximo de 120 minutos y mostró reducción de actividad de aproximadamente 1 log o menos a 60 °C durante un máximo de 120 minutos.
<Ejemplo 8>
Estabilidad de secado del bacteriófago QCJ25
Si los bacteriófagos de formulan en aditivos para piensos entre las formas de administración de bacteriófagos, los bacteriófagos se pueden secar durante los procedimientos de formulación y por tanto, se realizó el siguiente experimento para determinar la estabilidad de los bacteriófagos ante las condiciones de secado.
Basándose en los resultados del experimento de resistencia al calor, el experimento de secado se realizó utilizando un concentrador SpeedVac. Se secaron 200 pl de solución de bacteriófago OCJ25 con 1,2x1010 UFP/ml a 60 °C al
vacío durante 2 horas y los sedimentos resultantes se introdujeron en 200 |jl de solución SM, seguido de resuspensión completa a 4 °C durante un día, midiendo valoraciones de este modo (Fig. 6).
La Fig. 6 muestra resultados experimentales de resistencia al secado del bacteriófago OCJ25. Como se muestra en la Fig. 6, se pudo observar que después del secado, en comparación con valoraciones iniciales y estabilidad relativa, el bacteriófago OCJ25 mostró pérdida de actividad de aproximadamente 1 log o menos cuando se secó a 60 °C durante 2 horas.
<Ejemplo 9>
Examen del intervalo de infecciones del bacteriófago OCJ25 sobre una cepa aislada de tipo silvestre, Escherichia coli patógena aviar
Se analizó la actividad lítica del bacteriófago OCJ25 para 46 cepas del tipo silvestre de Escherichia coli patógena aviar por el College of Veterinary Medicine, Konkuk University (KU), 10 cepas de Escherichia coli patógena aviar aisladas por la Korea Animal and Plant Quarantine Agency (KAPQA), 7 cepas de Escherichia coli patógena aviar aisladas por el College of Veterinary Medicine, Chonbuk National University (CNU) y 26 cepas de Escherichia coli patógena aviar de diagnóstico de enfermedad aisladas por Komipharm farm (KF) junto con Escherichia coli patógena aviar (E09-19) utilizada en el presente experimento.
Específicamente, se mezclaron 150 j l de una solución de cultivo agitado de cada cepa (OD600 = 2) y se vertieron a la misma 10 j l de la solución de bacteriófago OCJ25 con valoración 109 ufp/ml y se cultivaron mediante el método de superposición de agar blando a 30 °C durante 18 horas y a continuación se examinó la formación de placas (Table 2).
Los resultados se muestran en la Tabla 2.
TABLA 2
continuación
Tal como se muestra en la Tabla 2, el bacteriófago OCJ25 muestra capacidad de infección hacia Escherichia coli patógena aviar (específicamente de los serotipos O-1, O-78 u O-125), que es una bacteria causante de colibacilosis aviar principal en granjas de aves de corral comunes.
Por otra parte, se sabe que el serotipo O-78 es habitualmente la cepa más dominante entre la Escherichia coli patógena aviar aislada en granjas de aves de corral.
INDICACIONES RELATIVAS AL MICROORGANISMO
DEPOSITADO Y OTRO MATERIAL BIOLÓGICO
PCT Re la 136/s
Formulario PCT/RO/134 (Julio1998; reimpresa enero 2004)
Claims (10)
1. Un bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) que tiene una capacidad específica para matar Escherichia coli patógena aviar.
2. Una composición que comprende el bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) según la reivindicación 1 como un ingrediente activo.
3. El bacteriófago OCJ25 (KCCM11463P) según la reivindicación 1 para utilizar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
4. Un aditivo para piensos avícolas que comprende la composición según la reivindicación 2.
5. Piensos avícolas que comprenden el aditivo para piensos avícolas según la reivindicación 4.
6. Un aditivo para agua de bebida avícola que comprende la composición según la reivindicación 2.
7. Agua de bebida avícola que comprende el aditivo para agua de bebida avícola según la reivindicación 6.
8. Un desinfectante que comprende la composición según la reivindicación 2.
9. Un detergente que comprende la composición según la reivindicación 2.
10. La composición según la reivindicación 2 para usar en la prevención de colibacilosis aviar causada por Escherichia coli patógena aviar de los serotipos O-1, O-78 u O-125.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140044997A KR101591795B1 (ko) | 2014-04-15 | 2014-04-15 | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물 |
| PCT/KR2015/003705 WO2015160165A1 (ko) | 2014-04-15 | 2015-04-14 | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2788175T3 true ES2788175T3 (es) | 2020-10-20 |
Family
ID=54324297
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES15779395T Active ES2788175T3 (es) | 2014-04-15 | 2015-04-14 | Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10240129B2 (es) |
| EP (1) | EP3133151B1 (es) |
| JP (1) | JP6314250B2 (es) |
| KR (1) | KR101591795B1 (es) |
| CN (1) | CN106574251B (es) |
| DK (1) | DK3133151T3 (es) |
| ES (1) | ES2788175T3 (es) |
| PH (1) | PH12016502001B1 (es) |
| PL (1) | PL3133151T3 (es) |
| WO (1) | WO2015160165A1 (es) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101381793B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101761573B1 (ko) * | 2014-12-29 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장출혈성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-1 및 이의 장출혈성 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101649851B1 (ko) | 2014-12-30 | 2016-08-30 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 시가독소생산 F18형 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-1 및 이의 시가독소생산 F18형 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101761581B1 (ko) * | 2014-12-30 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장침입성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＯＰ-4 및 이의 장침입성 대장균 증식 억제 용도 |
| KR101761578B1 (ko) * | 2014-12-30 | 2017-07-26 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 신규한 장병원성 대장균 박테리오파지 Ｅｓｃ-ＣＨＰ-2 및 이의 장병원성 대장균 증식 억제 용도 |
| US11058131B2 (en) | 2015-04-16 | 2021-07-13 | Kennesaw State University Research And Service Foundation, Inc. | Escherichia coli O157:H7 bacteriophage Φ241 |
| US11872256B2 (en) | 2017-09-15 | 2024-01-16 | Syntbiolab Inc. | Bacteriophage composition and method of preventing bacterial infections in livestock |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8309077B2 (en) * | 2004-11-02 | 2012-11-13 | Chr. Hansen A/S | Stabilized bacteriophage formulations |
| KR101070938B1 (ko) | 2008-12-02 | 2011-10-06 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101275263B1 (ko) | 2011-04-01 | 2013-06-14 | 서울대학교산학협력단 | 조류 병원성 대장균 특이 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101355158B1 (ko) * | 2011-12-20 | 2014-02-03 | 주식회사 바이오포아 | 조류 병원성 대장균의 분자적 동정을 위한 프라이머 및 이를 이용한 조류 병원성 대장균의 동정 방법 |
| KR101299179B1 (ko) | 2012-04-18 | 2013-08-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
| KR101381793B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2014-04-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 박테리오파지 및 이를 포함하는 항균 조성물 |
-
2014
- 2014-04-15 KR KR1020140044997A patent/KR101591795B1/ko active Active
-
2015
- 2015-04-14 DK DK15779395.1T patent/DK3133151T3/da active
- 2015-04-14 CN CN201580032048.3A patent/CN106574251B/zh active Active
- 2015-04-14 US US15/304,402 patent/US10240129B2/en active Active
- 2015-04-14 PL PL15779395T patent/PL3133151T3/pl unknown
- 2015-04-14 ES ES15779395T patent/ES2788175T3/es active Active
- 2015-04-14 JP JP2016563041A patent/JP6314250B2/ja active Active
- 2015-04-14 WO PCT/KR2015/003705 patent/WO2015160165A1/ko not_active Ceased
- 2015-04-14 EP EP15779395.1A patent/EP3133151B1/en active Active
-
2016
- 2016-10-10 PH PH12016502001A patent/PH12016502001B1/en unknown
-
2019
- 2019-01-17 US US16/250,713 patent/US10822590B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106574251B (zh) | 2019-11-05 |
| CN106574251A (zh) | 2017-04-19 |
| EP3133151A4 (en) | 2017-09-06 |
| US20170037382A1 (en) | 2017-02-09 |
| PL3133151T3 (pl) | 2020-08-24 |
| JP2017518735A (ja) | 2017-07-13 |
| BR112016023960A2 (pt) | 2017-10-17 |
| US10822590B2 (en) | 2020-11-03 |
| WO2015160165A1 (ko) | 2015-10-22 |
| EP3133151B1 (en) | 2020-03-25 |
| PH12016502001B1 (en) | 2021-01-06 |
| KR20150118837A (ko) | 2015-10-23 |
| US20190153399A1 (en) | 2019-05-23 |
| EP3133151A1 (en) | 2017-02-22 |
| JP6314250B2 (ja) | 2018-04-18 |
| US10240129B2 (en) | 2019-03-26 |
| PH12016502001A1 (en) | 2017-01-09 |
| KR101591795B1 (ko) | 2016-02-04 |
| DK3133151T3 (da) | 2020-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2788686T3 (es) | Nuevo bacteriófago y composición que comprende el mismo | |
| US11785948B2 (en) | Bacteriophage and composition comprising same | |
| CN105008525B (zh) | 噬菌体、包括其的组合物及其用途、抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂及清洁剂 | |
| EP3133152B1 (en) | Novel bacteriophage, and composition containing same | |
| CN105008526B (zh) | 噬菌体、包括其的组成物及其应用 | |
| CN105209610B (zh) | 噬菌体、包括其的组成物及其应用 | |
| US10704027B2 (en) | Bacteriophage and antibacterial composition comprising the same | |
| US10822590B2 (en) | Bacteriophage and composition comprising same | |
| BR112015020706B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar ou aditivo para água potável, e desinfetante ou produto de limpeza | |
| US10925909B2 (en) | Bacteriophage and composition comprising same | |
| BR112016023960B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar para aves, alimentos para aves, aditivo para água potável para aves, água potável para aves, desinfetante e detergente | |
| BR112016023904B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar para aves, alimentos para aves, aditivo para água potável para aves, água potável para aves, desinfetante e detergente | |
| BR112016023456B1 (pt) | Composição, aditivo alimentar, alimentos, aditivo para água potável, água potável, desinfetante e detergente |