ES2833104T3 - Cepa que tiene una productividad aumentada de l-valina y método de producción de L-valina mediante el uso de la misma - Google Patents
Cepa que tiene una productividad aumentada de l-valina y método de producción de L-valina mediante el uso de la misma Download PDFInfo
- Publication number
- ES2833104T3 ES2833104T3 ES14764169T ES14764169T ES2833104T3 ES 2833104 T3 ES2833104 T3 ES 2833104T3 ES 14764169 T ES14764169 T ES 14764169T ES 14764169 T ES14764169 T ES 14764169T ES 2833104 T3 ES2833104 T3 ES 2833104T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- valine
- strain
- corynebacterium glutamicum
- leader peptide
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Una cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
Description
DESCRIPCIÓN
Cepa que tiene una productividad aumentada de l-valina y método de producción de L-valina mediante el uso de la misma
CAMPO TÉCNICO
La presente invención se refiere a una cepa que tiene una productividad aumentada de l-valina y a un método para producir l-valina mediante el uso de la cepa.
ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA
En un microorganismo, la L-valina, uno de los aminoácidos de cadena ramificada, se biosintetiza a partir de piruvato a través de ácido acetoláctico, ácido dihidroxi isovalérico, y ácido cetoisovalérico. Estos productos metabólicos intermedios se producen por una reacción catalizada por acetohidroxiácido sintasa, acetohidroxiácido isómero reductasa, dihidroxiácido deshidratasa, y transaminasa B. Sin embargo, estas enzimas también participan en la biosíntesis de L-isoleucina a partir de ácido cetobutírico y piruvato, y la L-leucina también se biosintetiza a partir del ácido cetoisovalérico, que es un producto metabólico intermedio, a través del ácido 2-isopropilmálico, el ácido 3-isopropilmálico, y el ácido cetoisocaproico. Por lo tanto, dado que los aminoácidos de cadena ramificada, es decir, L-valina, L-isoleucina, y L-leucina usan las mismas enzimas para sus procesos de biosíntesis, se conoce que la producción industrial de un tipo de aminoácido de cadena ramificada a través de la fermentación tiene una dificultad. Además, existe el problema de que la producción industrial en masa está limitada por la inhibición por retroalimentación provocada por la L-valina, que es un producto final, o un derivado de este.
Jin Hwan Park y otros, (PNAS, 2007, vol. 104, no. 19, págs. 7797-7802) describen la modificación de las vías de síntesis de aminoácidos de cadena ramificada en E. coli para la producción de L-valina mediante el uso de ingeniería metabólica. Morbach y otros, (J. Biosci. Bioeng., 2000, vol. 90, no. 5, págs. 501-507) describen la caracterización del péptido líder en el operón ilvBNC de Corynebacterium glutamicum y describen mutaciones en la secuencia del péptido líder que dan como resultado la pérdida de la expresión dependiente de valina.
Después de un gran esfuerzo para desarrollar una cepa que tenga una productividad aumentada de L-valina, los presentes inventores han completado la presente invención tras encontrar que una cepa transformada para tener una región reguladora inactivada del operón de L-valina tiene una productividad de L-valina superior a una cepa madre.
[Documentos de la técnica anterior]
[Bibliografías de patentes]
(Bibliografía de patentes 1) KR 10-1990-0007948 B1
(Bibliografía de patentes 2) KR 10-2008-0025355 A1
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN PROBLEMA TÉCNICO
Un objeto de la presente invención es proporcionar una cepa productora de L-valina novedosa transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar parcialmente o sustituir una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para producir L-valina mediante el uso de la cepa productora de L-valina novedosa.
Aún otro objeto de la presente invención es proporcionar una variante de región reguladora del operón ilvBN.
SOLUCIÓN TÉCNICA
Una modalidad de la presente invención proporciona una cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
Otra modalidad de la presente invención proporciona un método para producir L-valina, donde el método comprende cultivar la cepa productora de L-valina descrita en las reivindicaciones adjuntas en un medio de cultivo; y recuperar L-valina a partir del medio de cultivo de la cepa.
Además, otra modalidad de la presente invención proporciona una variante de la región reguladora del operón de L-valina, que tiene uno de los siguientes: (i) una deleción de una secuencia de nucleótidos completa que codifica un péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1; (ii) una deleción de un sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1; o (iii) una sustitución del último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1 con un codón de parada.
EFECTOS VENTAJOSOS
Como se indicó anteriormente, existe el efecto de que una cepa productora de L-valina novedosa de la presente invención aumenta la productividad de L-valina debido a una mayor expresión de la acetohidroxiácido sintasa, que es una enzima involucrada en la biosíntesis de L-valina, tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
Además, de acuerdo con un método de producción de L-valina mediante el uso de la cepa productora de L-valina novedosa de la presente invención, existe el efecto de producir L-valina con alta eficiencia y alto rendimiento.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La Figura 1 es un diagrama esquemático que muestra el operón ilvBN que incluye: una región reguladora del operón ilvBN de Corynebacterium glutamicum ATCC13032 de tipo salvaje; una variante de la región reguladora (DvalL) en la que se elimina una secuencia de nucleótidos completa que codifica un péptido líder; una variante de la región reguladora (DvalP) en la que se elimina un sitio de pausa en el péptido líder; una variante de región reguladora (DvalS) en la que el último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder se sustituye por un codón de parada; y una variante de la región reguladora (DvalA) en la que se eliminan tanto el péptido líder como un atenuador.
La Figura 2 es un diagrama detallado que muestra la región reguladora del operón ilvBN de Corynebacterium glutamicum ATCC13032 de tipo salvaje
La Figura 3 es un diagrama detallado de la variante de región reguladora (DvalL) de la Figura 1 en la que se elimina una secuencia de nucleótidos completa que codifica el péptido líder.
La Figura 4 es un diagrama detallado de la región reguladora de tipo variante (DvalP) de la Figura 1 en el que se elimina el sitio de pausa en el péptido líder.
La Figura 5 es un diagrama detallado de la región reguladora de tipo variante (DvalS) de la Figura 1 en el que el último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder se sustituye por un codón de parada.
La Figura 6 es un diagrama detallado de la región reguladora de tipo variante (DvalA) de la Figura 1 en el que se eliminan tanto el péptido líder como el atenuador.
MODO DE LLEVAR A EFECTO LA INVENCIÓN
Una modalidad de la presente invención se refiere a una cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
En la presente invención, el término "operón de L-valina (operón ilvBN)" incluye un gen ilvBN que codifica a la acetohidroxiácido sintasa, que es una enzima involucrada en una primera etapa de la biosíntesis de L-valina en un microorganismo productor de L-valina y que sintetiza acetolactato a partir de 2 moléculas de piruvato.
Más particularmente, el operón ilvBN incluye una región reguladora y un gen estructural que codifica la acetohidroxiácido sintasa, en donde la región reguladora incluye un promotor, una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder, un sitio de pausa ubicado en el péptido líder, y un atenuador (véase, Figuras 1 y 2).
En la presente invención, la expresión del gen estructural que codifica la acetohidroxiácido sintasa se aumenta tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica el péptido líder en la región reguladora del operón ilvBN, para por consiguiente mejorar la productividad de L-valina. Específicamente, un sitio de deleción o sustitución parcial en una secuencia de nucleótidos que codifica el péptido líder puede estar en el sitio de pausa y, más específicamente, el final del sitio de pausa puede estar sustituido con un codón de parada.
En la presente invención, para proporcionar una cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos
que codifica el péptido líder en la región reguladora del operón ilvBN como se describió anteriormente, en primer lugar, puede construirse un vector recombinante que tenga la secuencia de nucleótidos que codifica el péptido líder se elimina completamente o se elimina o sustituye parcialmente en la región reguladora del operón ilvBN.
En un ejemplo específico de la presente invención, para construir el vector, las regiones reguladoras que tienen una secuencia de nucleótidos eliminada completamente o eliminada o sustituida parcialmente la cual codifica el péptido líder en la región reguladora del operón ilvBN (DvalL, DvalP, DvalS) se amplifican a través de la reacción en cadena de la polimerasa mediante el uso de un cromosoma de Corynebacterium sp. como molde. Después, la región reguladora amplificada se inserta en un vector para construir un vector recombinante. Después de eso, una cepa madre se transforma respectivamente con el vector recombinante.
Un vector usado para la construcción del vector recombinante puede ser un plásmido, un cósmido, un virus o un bacteriófago en estado nativo o estado recombinante. Como ejemplo, pWE15, M13, AEMBL3, AEMBL4, AFIXII, ADASHII, AZAPII, Agt10, Agt11, Charon4A, y Charon21A, etc. pueden usarse como vector de fago o vector de cósmido; y el vector pDZ, el vector basado en pBR, basado en pUC, basado en pBluescriptlI, basado en pGEM, basado en pTZ, basado en pCL y basado en pET, etc. puede usarse como vector plasmídico. Un vector disponible no está limitado particularmente, y también puede usarse un vector de expresión conocido.
En un ejemplo específico de la presente invención, se usó pDZ. El vector pDZ, que es un vector para insertar un cromosoma de un microorganismo de Corynebacterium sp., se prepara mediante el método descrito en la publicación de patente coreana núm. 2008-0025355.
Los vectores recombinantes pDZDvalL, pDZDvalP, y pDZDvalS se construyen tras insertar respectivamente las regiones reguladoras amplificadas (DvalL, DvalP, y DvalS) en los vectores pDZ.
En la presente invención, una cepa madre a transformar por el vector recombinante puede ser cualquier microorganismo capaz de producir L-valina sin estar específicamente limitado. Específicamente, puede usarse un microorganismo de Escherichia sp. o un microorganismo de Corynebacterium sp., más específicamente, puede usarse Corynebacterium glutamicum. Además más específicamente, Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 puede usarse como cepa madre. Además, puede usarse una cepa productora de L-valina resistente a L-valina o un derivado de esta, específicamente, puede usarse Corynebacterium glutamicum KCCM11201P.
La Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, que es la cepa descrita en la patente núm. 10-1117022 previamente registrada por el presente inventor, es una variante corresistente que tiene resistencia al ácido a-aminobutírico (ABA), a-hidroxivalina (AHV), tiazol alanina (TA), y norvalina (NV) en concentraciones de 20 mM, 20 mM, 40 mM y 50 mM, respectivamente, cuando se extienden en un medio mínimo en el que se añaden a-ABA, AHV TA, y NV, después de realizar mutagénesis aleatoria mediante el uso de Corynebacterium glutamicum KFCC 10661 (solicitud de patente coreana núm. 1988-0016543; publicación núm. 1990-0007948) como cepa madre, en donde ABA es un derivado de isoleucina y AHV, TA y NV son derivados de valina. La variante corresistente es una cepa sobresaliente que tiene una productividad de L-valina aumentada en 4 veces a la de la cepa madre Corynebacterium glutamicum KFCC 10661.
Se ha encontrado que KCCM11336P, KCCM11337P, y KCCM11338P, que son cepas transformadas de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P con el vector recombinante, tienen una productividad de L-valina superior a la cepa madre Corynebacterium glutamicum KCCM11201P.
La Corynebacterium glutamicum KCCM11336P que es una cepa producida por la transformación de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, con el vector recombinante pDZDvalL. pDZvalL se preparó tras insertar la variante de la región reguladora (DvalL) en el vector pDZ, en donde la variante de la región reguladora (DvalL) tiene una deleción de una secuencia de nucleótidos completa que codifica un péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1. La Corynebacterium glutamicum KCCM11336P se denominó KCJ-456 y se depositó en el Centro de cultivo de microorganismos de Corea el 19 de noviembre de 2012 con el número de acceso KCCM11336p.
La Corynebacterium glutamicum KCCM11337P es una cepa producida por la transformación de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, con el vector recombinante pDZDvalP. El pDZvalP se preparó tras insertar la variante de la región reguladora (DvalP) en el vector pDZ, en donde la variante de la región reguladora (DvalP) tiene una deleción de un sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1. La Corynebacterium glutamicum KCCM11337P se denominó KCJ-457 y se depositó en el Centro de cultivo de microorganismos de Corea el 19 de noviembre de 2012 con el número de acceso KCCM11337P.
La Corynebacterium glutamicum KCCM11338P que es una cepa producida por la transformación de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, con el vector recombinante pDZDvalS. pDZvalS se preparó tras insertar la variante de la región reguladora (DvalS) en el vector pDZ, en donde la variante de la región reguladora (DvalS) tiene una sustitución del último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1 con un codón de parada. La Corynebacterium glutamicum KCCM11338P se denominó KCJ-458 y se depositó en el Centro de cultivo de microorganismos de Corea el 19 de noviembre de 2012 con el número de acceso KCCM11338P.
Además, en la presente invención, los vectores de expresión que tienen la región reguladora modificada se construyen para aumentar la capacidad de expresión de la biosíntesis de valina. Por lo tanto, se proporciona una cepa productora de L-valina mediante la transformación de Corynebacterium glutamicum ATCC13032, que es una cepa conocida de tipo salvaje, mediante el uso de los vectores de expresión anteriores.
Para construir los vectores de expresión que tienen una región reguladora modificada del operón de L-valina y el complejo de genes biosintéticos de valina, se amplifican secuencias de nucleótidos para la inserción del vector a través de un método de PCR mediante el uso de cromosomas de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, Corynebacterium glutamicum KCCM11336P, Corynebacterium glutamicum KCCM11337P, Corynebacterium glutamicum KCCM11338P y Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA como moldes. Después, cada una de las secuencias de nucleótidos amplificadas se inserta en el vector pECCG117 para construir pECCG117-DvalW, pECCG117-DvalL, pECCG117-DvalP, pECCG117-DvalS y pECCG117-DvalA.
Posteriormente, Corynebacterium glutamicum ATCC13032 se transformó con los vectores mencionados anteriormente, pECCG117-DvalW, pECCG117-DvalL, pECCG117-DvalP, pECCG117-DvalS y pECCG117-DvalA, respectivamente. Se construyeron las cepas productoras de L-valina, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalW, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalL, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalP, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalS y Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalA.
Entre esas cepas, se ha encontrado que las cepas de Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalL, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalP, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalS tienen una productividad de L-valina superior a la de Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalW la cual se transforma para tener una región reguladora de un operon de L-valine de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P.
Como se indicó anteriormente, existe el efecto de que la cepa productora de L-valina de la presente invención tiene una productividad de L-valina sobresaliente debido a la expresión aumentada de la acetohidroxiácido sintasa, que es una enzima involucrada en la biosíntesis de L-valina, tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
Además, otra modalidad de la presente invención se refiere a un método de producción de L-valina mediante el uso de la cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón de L-valina, en donde el péptido líder está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
Para producir L-valina en la presente invención, la cepa productora de L-valina de la presente invención puede cultivarse mediante un método ampliamente conocido de cultivo de un microorganismo de Corynebacterium sp. Específicamente, los ejemplos del método de cultivo incluyen, pero no se limitan a, cultivo discontinuo, cultivo continuo, y cultivo semicontinuo. Dichos diversos métodos, por ejemplo, se describen en "Biochemical Engineering" (James M. Lee, Prentice-Hall International Editions, págs. 138-176, 1991), etc.
Un medio usado en cultivo debe cumplir los requisitos de una cepa en particular de manera apropiada. Se conoce un medio de cultivo para un microorganismo de Corynebacterium sp. (véase, por ejemplo, Manual of Methods for General Bacteriology. American Society for Bacteriology. Washington d C, EE. UU., 1981). Como fuente de glucosa disponible, se incluyen azúcares y carbohidratos tales como glucosa, sacarosa, lactosa, fructosa, maltosa, almidón, y celulosa; aceites y grasas tales como aceite de soja, aceite de girasol, aceite de ricino, y aceite de coco; ácidos grasos tales como ácido palmítico, ácido esteárico, y ácido linolénico; alcoholes tales como glicerol y etanol; y un ácido orgánico como el ácido acético. Estos materiales pueden usarse por separado o como una mezcla, pero no se limitan a ellos. Como fuente de nitrógeno disponible, pueden incluirse peptona, extracto de levadura, salsa, extracto de malta, líquido de remojo de maíz, harina de soja y urea, o un compuesto inorgánico como sulfato de amonio, cloruro de amonio, fosfato de amonio, carbonato de amonio y nitrato de amonio. La fuente de nitrógeno también puede usarse por separado o como una mezcla, pero no se limita a ello. Como fuente de fósforo disponible, pueden incluirse dihidrogenofosfato de potasio, o fosfato dibásico de potasio, o la sal que contiene sodio correspondiente, pero no se limita a ellos. Además, un medio de cultivo debe contener la sal metálica necesaria para el crecimiento, tal como sulfato de magnesio o sulfato de hierro. Por otra parte, además de estos materiales, puede incluirse un producto de crecimiento esencial como un aminoácido y una vitamina.
Además, puede usarse un precursor apropiado en un medio de cultivo. Las materias primas anteriores pueden añadirse al cultivo durante un proceso de cultivo de tipo discontinuo o de tipo continuo según sea apropiado.
El pH del medio de cultivo puede ajustarse mediante el uso de compuestos básicos tales como el hidróxido de sodio, el hidróxido de potasio, y el amoniaco, o compuestos ácidos tales como el ácido fosfórico, y el ácido sulfúrico, de manera apropiada. Además, la formación de espuma puede suprimirse mediante el uso de un agente antiespumante tal como un éster de poliglicol de ácido graso. Puede inyectarse oxígeno o un gas que contenga oxígeno (por ejemplo,
aire) en el medio de cultivo para mantener una condición aeróbica. La temperatura de cultivo puede estar normalmente entre 20 °C y 45 °C. El proceso de cultivo puede continuar hasta que se obtenga la cantidad máxima producida de L-valina deseada. Normalmente, dicho objetivo puede alcanzarse en 10 a 160 horas. La L-valina puede secretarse al medio de cultivo o incluirse en las células.
El método de preparación de L-valina de la presente invención incluye recuperar L-valina a partir del medio de cultivo. Como método para recuperar L-valina a partir del medio de cultivo, puede usarse un método conocido en la técnica, por ejemplo, centrifugación, filtración, cromatografía de intercambio aniónico, cristalización y HPLC, pero no se limita a ellos.
De acuerdo con un ejemplo de la presente invención, el cultivo se centrifugó a baja velocidad para eliminar la biomasa, y después, se separó el sobrenadante obtenido a través de cromatografía de intercambio iónico.
En lo adelante, la presente invención se describirá en más detalle a través de ejemplos. Sin embargo, los ejemplos siguientes están destinados a explicar ilustrativamente la presente invención, y el alcance del derecho de patente de la invención no se limita a los ejemplos.
EJEMPLO 1: CONSTRUCCIÓN DE VECTOR QUE TIENE DELECIÓN TOTAL O DELECIÓN O SUSTITUCIÓN PARCIAL EN LA SECUENCIA DE NUCLEÓTIDOS QUE CODIFICA EL PÉPTIDO LÍDER PARA INACTIVAR LA REGIÓN REGULADORA DEL OPERÓN DE L-VALINE
Las Figuras 1 y 2 muestran el operón de L-valina (operón ilvBN) para sintetizar la acetohidroxiácido sintasa que comprende un gen estructural que codifica la acetohidroxiácido sintasa y una región reguladora que incluye un promotor (Pro), una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder, un sitio de pausa ubicado en el péptido líder, y un atenuador. De la región reguladora, como se muestra en la Figura 1, para amplificar la variante de las regiones reguladoras, la amplificación se realizó a través de la reacción en cadena de la polimerasa (en adelante, "método de PCR") mediante el uso de ADN cromosómico de la cepa Corynebacterium glutamicum ATCC13032, que se adquiere de American Type Culture collection (ATCC), como molde, en donde las variantes de la región reguladora a amplificar son las siguientes: una región reguladora en la que se elimina una secuencia de nucleótidos completa que codifica el péptido líder (en adelante, denominada "DvalL"); una variante de región reguladora en la que se elimina el sitio de pausa en el péptido líder (en lo adelante, denominado "DvalP"); una variante de la región reguladora en la que el último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder está sustituido con un codón de parada (en lo adelante, denominado "DvalS"); y una variante de la región reguladora en la que se eliminan tanto el péptido líder como el atenuador (en lo adelante, denominado "DvalA").
Específicamente, para preparar DvalL, en primer lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía el sitio de la enzima de restricción BamHI en una región 5' a través del método de PCR mediante el uso de ADN cromosómico de la cepa Corynebacterium glutamicum ATCC13032 como molde y cebadores de las SEQ ID No: 5 y 6, en donde una condición del PCR era repetir 30 ciclos de: desnaturalización durante un minuto a 94 °C; hibridación durante 30 segundos a 58 °C; y polimerización durante 30 segundos a 72 °C con polimerasa Pfu.
En segundo lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía el sitio de la enzima de restricción XbaI en una región 3' a través del método de PCR descrito anteriormente mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 7 y 8. Los fragmentos de ADN obtenidos se aislaron mediante el kit GeneAllR Expin™ GEL SV (Seúl, Corea) y después se usaron como moldes para el PCR cruzado.
A continuación, se realizó un PCR cruzado mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 5 y 8 y dos fragmentos de ADN obtenidos anteriormente como moldes. Específicamente, se amplificó un fragmento de aproximadamente 2000 pares de bases a través del método de PCR descrito anteriormente. Los fragmentos amplificados se trataron con las enzimas de restricción BamHI, y XbaI, y después se ligaron al pDZ tratado con las mismas enzimas para construir pDZvalL.
Para preparar DvalP, en primer lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía un sitio de la enzima de restricción BamHI en una región 5' mediante el uso de un cromosoma de la cepa Corynebacterium glutamicum ATCC13032 como molde y cebadores de las SEQ ID No: 5 y 9.
En segundo lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía un sitio de la enzima de restricción XbaI en una región 3' a través del método de PCR descrito anteriormente mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 10 y 8.
Después, se amplificó un fragmento de aproximadamente 2000 pares de bases a través del método de PCR cruzado descrito anteriormente mediante el uso de dos fragmentos de ADN amplificados como moldes. Los fragmentos amplificados se trataron con las enzimas de restricción BamHI, y XbaI, y después se ligaron al pDZ tratado con las mismas enzimas para construir pDZvalP.
Para preparar DvalS, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía un sitio de la enzima de restricción BamHI en una región 5'mediante el uso de un cromosoma de la cepa Corynebacterium glutamicum ATCC13032 como molde y cebadores de las SEQ ID No: 5 y 11.
En segundo lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía el sitio de la enzima de restricción XbaI en una región 3' a través del método de PCR descrito anteriormente mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 12 y 8.
Después, se amplificó un fragmento de aproximadamente 2000 pares de bases a través del método de PCR cruzado descrito anteriormente mediante el uso de dos fragmentos de ADN amplificados como moldes. Los fragmentos amplificados se trataron con las enzimas de restricción BamHI, y XbaI, y después se ligaron al pDZ tratado con las mismas enzimas para construir pDZvalS.
Para preparar DvalA, en primer lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía un sitio de la enzima de restricción BamHI en una región 5' mediante el uso de un cromosoma de la cepa Corynebacterium glutamicum ATCC13032 como molde y cebadores de las SEQ ID No: 5 y 13.
En segundo lugar, se amplificó un fragmento de aproximadamente 700 pares de bases que tenía el sitio de la enzima de restricción XbaI en una región 3' a través del método de PCR descrito anteriormente mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 14 y 8.
Después, se amplificó un fragmento de aproximadamente 2000 pares de bases mediante el uso de dos fragmentos de ADN amplificados como moldes a través del método de PCR cruzado descrito anteriormente. Los fragmentos amplificados se trataron con las enzimas de restricción BamHI, y XbaI, y después se ligaron al pDZ tratado con las mismas enzimas para construir pDZvalA.
En un nivel de aminoácidos, las secuencias del péptido líder y el sitio de pausa se establecen en las SEQ ID No: 1 y 2, respectivamente, y las secuencias de aminoácidos de DvalP y DvalS se establecen en las SEQ ID No: 3 y 4, respectivamente.
Además, una secuencia de nucleótidos de una región reguladora completa del operón de L-valina, ilvBN, una secuencia de nucleótidos del péptido líder y una secuencia de nucleótidos del sitio de pausa se exponen en las SEQ ID No: 21, 22 y 23, respectivamente. Las secuencias de nucleótidos de DvalL, DvalP, DvalS y DvalA se exponen en las SEQ ID No: 24 a 27, respectivamente.
EJEMPLO 2: CONSTRUCCIÓN DE UNA CEPA QUE TIENE INACTIVADA LA REGIÓN REGULADORA DEL OPERÓN DE L-VALINE DERIVADA DE UNA CEPA PRODUCTORA DE L-VALINA, CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM KCCM11201P
Para construir una cepa que tiene una región reguladora modificada del operón de L-valina, se usó la cepa Corynebacterium glutamicum KCCM11201P productora de L-valina como cepa madre.
Se transformó Corynebacterium glutamicum KCCM11201P respectivamente con los vectores pDZDvalL, pDZDvalP, pDZD-valS y pDZDvalA que se construyeron en el ejemplo 1 a través de electroporación.
A través de un segundo proceso de cruzamiento, se obtuvieron cepas productoras de L-valina que tenían respectivamente una región reguladora modificada del operón de L-valina en un cromosoma de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P.
La sustitución de bases en el promotor se confirmó finalmente tras analizar una secuencia de nucleótidos para un sitio objetivo; y analizar si un gen se amplificó o no a través de PCR cuando se usa la combinación del cebador de SEQ ID No: 8 y: DvalL y el cebador de Se Q ID No: 15; DvalP y el cebador de SEQ ID No: 16; DvalS y el cebador de SEQ ID No: 17; y DvalA y el cebador de SEQ ID No: 18.
Las cepas transformadas con los vectores pDZDvalL, pDZDvalP, y pDZDvalS se denominaron Corynebacterium glutamicum KCJ-456, Corynebacterium glutamicum KCJ-457, y Corynebacterium glutamicum KCJ-458, respectivamente, y se depositaron en el Centro de cultivo de microorganismos de Corea el 19 de noviembre de 2012 con el número de acceso KCCM11336P, KCCM11337P, y KCCM11338P, respectivamente.
Además, una cepa transformada con el vector pDZDvalA se denominó Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA.
EJEMPLO 3: CONSTRUCCIÓN DEL VECTOR DE SOBREEXPRESIÓN PARA LA BIOSÍNTESIS DE L-VALINA QUE TIENE INACTIVADA LA REGIÓN REGULADORA DEL OPERÓN DE L-VALINA
Se construyó un vector de sobreexpresión para la biosíntesis de L-valina a partir de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, que es una cepa productora de L-valina.
Además, se construyeron vectores de expresión que tenían una región reguladora modificada del operón de L-valina a partir de Corynebacterium glutamicum KCCM11336P, Corynebacterium glutamicum KCCM11337P, Corynebacterium glutamicum KCCM11338P y Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA preparados en el ejemplo 2.
Para la construcción de los vectores, mediante el uso de cebadores de las SEQ ID No: 19 y 20, los genes se amplificaron a través de un método de PCR mediante el uso de ADN cromosómico de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, Corynebacterium glutamicum KCCM11336P, Corynebacterium glutamicum KCCM11337P, Corynebacterium glutamicum KCCM11338P y Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA como moldes. Después, los genes amplificados se trataron con las enzimas de restricción BamHI y XbaI, y se insertaron en el vector pECCG117 tratado con las mismas enzimas para construir el respectivo vector de sobreexpresión para la biosíntesis de L-valina que son pECCG117-DvalW, pECCG117-DvalL, pECCG117-DvalP, pECCG117-DvalS y pECCG117-DvalA.
EJEMPLO 4: CONSTRUCCIÓN DE LA CEPA DE SOBREEXPRESIÓN PARA LA BIOSÍNTESIS DE L-VALINA QUE TIENE INACTIVADA LA REGIÓN REGULADORA DEL OPERÓN DE L-VALINA
Cada uno de los vectores de expresión, que son pECCG117-DvalW, pECCG117-DvalL, pECCG117-DvalP, pECCG117-DvalS y pECCG117-DvalA, como se preparó en el ejemplo 3, se introdujo en Corynebacterium glutamicum ATCC13032 a través de electroporación para construir Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalW, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalL, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalP, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalS, y Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalA, respectivamente. Cuando se transforma el vector, se logra la resistencia a la kanamicina. Por lo tanto, la transformación se confirmó tras investigar si el crecimiento ocurre o no en un medio que incluye kanamicina a una concentración de 25 ng/ml.
EJEMPLO 5: PRODUCCIÓN DE L-VALINA EN CEPA QUE TIENE INACTIVADA LA REGIÓN REGULADORA DEL OPERÓN DE L-VALINA
Para producir L-valina a partir de cada una de las cepas productoras de L-valina Corynebacterium glutamicum KCCM11336P, Corynebacterium glutamicum KCCM11337p , Corynebacterium glutamicum KCCM11338P y Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA, preparadas en el ejemplo 2, se cultivaron como sigue. Como control se cultivó Corynebacterium glutamicum KCCM11201P, que es una cepa madre.
Además, las cepas Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalW, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalL, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalP, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalS, y Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalA se cultivaron por el mismo método anterior para producir L-valina.
Se inoculó un asa de platino de una cepa en un matraz Corner-Baffle de 250 ml que contenía 25 ml de un medio de producción, y la producción se realizó durante 72 horas a 30 °C con 200 rpm. La composición del medio de producción se muestra en la tabla 1 a continuación.
Después de completado el cultivo, se midió la cantidad de L-valina producida mediante HPLC. La concentración de L-valina en un medio de cultivo para cada cepa se muestra en las tablas 2 y 3 a continuación.
Tabla 1
Tabla 2
Tabla 3
Como se muestra en la tabla 2, se ha encontrado que una cepa transformada para inactivar una región reguladora del operón de L-valina, excepto Corynebacterium glutamicum KCCM11201P_DvalA, tuvo una productividad de L-valina mejorada a la de una cepa productora de L-valina Corynebacterium glutamicum KCCM11201 que es una cepa madre. En particular, Corynebacterium glutamicum KCCM11338P mostró una productividad de L-valina mejorada en un 25 % a la de una cepa madre.
Además, como se muestra en la tabla 3 anterior, se ha encontrado que las cepas productoras de L-valina, que son las cepas Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalL, Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalP y Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalS que tienen una región reguladora modificada del operón de L-valina, tienen una productividad de 9 a 13 veces mayor que la de Corynebacterium glutamicum ATCC13032_DvalW que está transformada para tener una región reguladora del operón de L-valina de Corynebacterium glutamicum KCCM11201P.
[Explicación del símbolo]
Pro: un promotor,
Péptido líder: una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder
Sitio de pausar: un sitio de pausa
Atenuador: un atenuador
Gen: un gen estructural
[Número de acceso]
Nombre de la organización de depósito: Centro de cultivo de microorganismos de Corea (internacional)
Número de acceso: KCCM11336P
Fecha de adhesión: 20121119
Nombre de la organización de depósito: Centro de cultivo de microorganismos de Corea (internacional) Número de acceso: KCCM11337P
Fecha de adhesión: 20121119
Nombre de la organización de depósito: Centro de cultivo de microorganismos de Corea (internacional) Número de acceso: KCCM11338P
Fecha de adhesión: 20121119
TRATADO DE BUDAPEST SOBRE EL RECONOCIMIENTO
INTERNACIONAL DEL DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS A
LOS FINES DEL PROCEDIMIENTO DE PATENTE
FORMULARIO INTERNACIONAL
A. CJ ChelJedang Corporation
330 DONGHO-RO, RECIBO EN EL CASO DE UN ORIGINAL emitido CHUNG-KU, SEÚL de conformidad con la Regla 7.1 por la
REPÚBLICA DE COREA AUTORIDAD DEPOSITARIA INTERNACIONAL
identificada al pie de esta página
t,
Donde se aplique la Regla 6.4(d), dicha fecha es la fecha en la que se adquirió la condición de autoridad depositaria internacional; donde un depósito realizado fuera del Tratado de Budapest después de la adquisición de la condición de autoridad depositaria internacional se convierte en depósito en virtud del Tratado de Budapest, dicha fecha es la fecha en que la autoridad depositaria internacional recibió el microorganismo.
Formulario BP/4 Página única
TRATADO DE BUDAPEST SOBRE EL RECONOCIMIENTO
INTERNACIONAL DEL DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS A
LOS FINES DEL PROCEDIMIENTO DE PATENTE
FORMULARIO INTERNACIONAL
A. CJ ChelJedang Corporation
330 DONGHO-RO, RECIBO EN EL CASO DE UN ORIGINAL emitido de CHUNG-KU, SEÚL conformidad con la Regla 7.1 por la AUTORIDAD REPÚBLICA DE COREA DEPOSITARIA INTERNACIONAL identificada al pie de esta página
I ,4
Donde se aplique la Regla 6.4(d), dicha fecha es la fecha en la que se adquirió la condición de autoridad depositaria internacional; donde un depósito realizado fuera del Tratado de Budapest después de la adquisición de la condición de autoridad depositaria internacional se convierte en depósito en virtud del Tratado de Budapest, dicha fecha es la fecha en que la autoridad depositaria internacional recibió el microorganismo.
Formulario BP/4 Página única
TRATADO DE BUDAPEST SOBRE EL RECONOCIMIENTO
INTERNACIONAL DEL DEPÓSITO DE MICROORGANISMOS A
LOS FINES DEL PROCEDIMIENTO DE PATENTE
FORMULARIO INTERNACIONAL
A CJ ChelJedang Corporation
330 DONGHO-RO, RECIBO EN EL CASO DE UN ORIGINAL emitido CHUNG-KU, SEÚL de conformidad con la Regla 7.1 por la AUTORIDAD REPÚBLICA DE COREA DEPOSITARIA INTERNACIONAL identificada al pie de esta página
Donde se aplique la Regla 6.4(d), dicha fecha es la fecha en la que se adquirió la condición de autoridad depositaria internacional; donde un depósito realizado fuera del Tratado de Budapest después de la adquisición de la condición de autoridad depositaria internacional se convierte en depósito en virtud del Tratado de Budapest, dicha fecha es la fecha en que la autoridad depositaria internacional recibió el microorganismo.
Formulario BP/4 Página única
Claims (9)
1. Una cepa productora de L-valina transformada para aumentar la expresión del operón de L-valina tras eliminar completamente o eliminar o sustituir parcialmente una secuencia de nucleótidos que codifica un péptido líder en una región reguladora del operón ilvBN, en donde el péptido líder está representado por una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1.
2. La cepa de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido líder comprende un sitio de pausa de una secuencia de aminoácidos representada por la SEQ ID No: 2.
3. La cepa de acuerdo con la reivindicación 2, en donde se elimina toda o parte de la secuencia de nucleótidos que codifica el sitio de pausa o se sustituye una parte de la secuencia de nucleótidos que codifica el sitio de pausa.
4. La cepa de acuerdo con la reivindicación 3, en donde los ácidos nucleicos 13 a 15 de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID No: 23 que codifica el sitio de pausa están sustituidos con un codón de parada.
5. La cepa de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la cepa es un microorganismo de Corynebacterium sp.
6. La cepa de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la cepa es Corynebacterium glutamicum.
7. Un método para producir L-valina, el método que comprende:
cultivar la cepa de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en un medio de cultivo; recuperar L-valina a partir del medio de cultivo de la cepa.
8. Una variante de la región reguladora del operón de L-valina, que tiene una de las siguientes:
(i) una deleción de una secuencia de nucleótidos completa que codifica un péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1;
(ii) una deleción de un sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1; o
(iii) una sustitución del último aminoácido del sitio de pausa en el péptido líder que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 1 con un codón de parada.
9. La variante de región reguladora de la reivindicación 8, que comprende una secuencia de nucleótidos representada por las SEQ ID No: 24, 25 o 26.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130025528A KR101721722B1 (ko) | 2013-03-11 | 2013-03-11 | L-발린 생산능이 향상된 균주 및 이를 이용한 l-발린 생산방법 |
| PCT/KR2014/001793 WO2014142463A1 (ko) | 2013-03-11 | 2014-03-05 | L-발린 생산능이 향상된 균주 및 이를 이용한 l-발린 생산방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2833104T3 true ES2833104T3 (es) | 2021-06-14 |
Family
ID=51537057
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES14764169T Active ES2833104T3 (es) | 2013-03-11 | 2014-03-05 | Cepa que tiene una productividad aumentada de l-valina y método de producción de L-valina mediante el uso de la misma |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10072278B2 (es) |
| EP (1) | EP2975114B1 (es) |
| JP (1) | JP6359037B2 (es) |
| KR (1) | KR101721722B1 (es) |
| CN (1) | CN105026550B (es) |
| BR (1) | BR112015020274B1 (es) |
| ES (1) | ES2833104T3 (es) |
| HU (1) | HUE051725T2 (es) |
| MY (1) | MY175182A (es) |
| PH (1) | PH12015501906A1 (es) |
| WO (1) | WO2014142463A1 (es) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101776375B1 (ko) | 2015-03-18 | 2017-09-08 | 씨제이제일제당 (주) | 피루브산 디하이드로게나아제 변이체, 이를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 |
| CN106190921B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-07-26 | 天津科技大学 | 一种谷氨酸棒状杆菌与应用 |
| CN107287196B (zh) * | 2017-05-27 | 2020-05-26 | 中国科学院微生物研究所 | ilv衰减子的突变体、相关工程菌及其在生产缬氨酸中的应用 |
| US11021697B2 (en) | 2017-07-11 | 2021-06-01 | Cj Cheiljedang Corporation | Acetohydroxy acid synthase variant, microorganism comprising the same, and method of producing L-branched-chain amino acid using the same |
| KR101996129B1 (ko) | 2017-07-11 | 2019-07-04 | 씨제이제일제당 (주) | 아세토하이드록시산 신타아제 변이체, 이를 포함하는 미생물 또는 이를 이용하는 l-분지쇄 아미노산 생산 방법 |
| KR102134418B1 (ko) * | 2019-06-17 | 2020-07-16 | 씨제이제일제당 주식회사 | L-타이로신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-타이로신 생산 방법 |
| KR102311391B1 (ko) | 2020-05-21 | 2021-10-12 | 씨제이제일제당 주식회사 | L- 분지쇄 아미노산 생산능이 강화된 미생물 및 이를 이용하여 l-분지쇄 아미노산을 생산하는 방법 |
| RU2753996C1 (ru) * | 2020-10-05 | 2021-08-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Бактерия Corynebacterium glutamicum с повышенной способностью продуцировать L-валин и способ получения L-валина с использованием этой бактерии |
| KR102281366B1 (ko) * | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 테트라하이드로디피콜리네이트 n-숙시닐트랜스퍼라제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281364B1 (ko) * | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 우레아제 부속 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281359B1 (ko) * | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281365B1 (ko) * | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 프롤린 탈수소효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281363B1 (ko) | 2021-01-26 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 시스테인 설피네이트 디설피나제 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281371B1 (ko) * | 2021-04-07 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 글리세르알데히드-3-인산탈수소효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102306010B1 (ko) * | 2021-04-07 | 2021-09-27 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 분지쇄아미노산 투과효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR102281370B1 (ko) * | 2021-04-07 | 2021-07-22 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 2-이소프로필말레이트합성효소 변이체 및 이를 이용한 l-발린 생산 방법 |
| KR20240147321A (ko) | 2023-03-31 | 2024-10-08 | 씨제이제일제당 (주) | 미생물 발효를 활용한 l-발린 제조 공정 |
| KR20250001187A (ko) | 2023-06-28 | 2025-01-06 | 씨제이제일제당 (주) | pH 조절 및 PVA 첨가를 이용한 L-발린 결정 및/또는 과립의 제조방법 |
| EP4711468A1 (en) | 2023-06-28 | 2026-03-18 | CJ Cheiljedang Corporation | Method for preparing l-valine crystals and/or granules by using ph control |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR900007948B1 (ko) | 1988-12-12 | 1990-10-23 | 제일제당 주식회사 | 글루타민산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법 |
| JP3709564B2 (ja) | 1994-08-30 | 2005-10-26 | 味の素株式会社 | Ｌ−バリン及びｌ−ロイシンの製造法 |
| RU2355763C2 (ru) * | 2006-09-13 | 2009-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная ацетолактатсинтаза и способ продукции разветвленных l-аминокислот |
| US9109242B2 (en) | 2006-09-15 | 2015-08-18 | Cj Cheiljedang Corporation | Corynebacteria having enhanced L-lysine productivity and a method of producing L-lysine using the same |
| KR100832740B1 (ko) * | 2007-01-17 | 2008-05-27 | 한국과학기술원 | 분지쇄 아미노산 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를이용한 분지쇄 아미노산의 제조방법 |
| KR101117022B1 (ko) | 2011-08-16 | 2012-03-16 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-발린 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-발린 제조방법 |
-
2013
- 2013-03-11 KR KR1020130025528A patent/KR101721722B1/ko active Active
-
2014
- 2014-03-05 EP EP14764169.0A patent/EP2975114B1/en active Active
- 2014-03-05 US US14/771,969 patent/US10072278B2/en active Active
- 2014-03-05 ES ES14764169T patent/ES2833104T3/es active Active
- 2014-03-05 BR BR112015020274-8A patent/BR112015020274B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-05 MY MYPI2015002297A patent/MY175182A/en unknown
- 2014-03-05 JP JP2015557955A patent/JP6359037B2/ja active Active
- 2014-03-05 HU HUE14764169A patent/HUE051725T2/hu unknown
- 2014-03-05 WO PCT/KR2014/001793 patent/WO2014142463A1/ko not_active Ceased
- 2014-03-05 CN CN201480013323.2A patent/CN105026550B/zh active Active
-
2015
- 2015-08-28 PH PH12015501906A patent/PH12015501906A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MY175182A (en) | 2020-06-12 |
| EP2975114B1 (en) | 2020-09-30 |
| KR20140111421A (ko) | 2014-09-19 |
| BR112015020274A2 (pt) | 2017-10-10 |
| EP2975114A4 (en) | 2016-11-09 |
| EP2975114A1 (en) | 2016-01-20 |
| US10072278B2 (en) | 2018-09-11 |
| US20160108444A1 (en) | 2016-04-21 |
| JP2016506756A (ja) | 2016-03-07 |
| HUE051725T2 (hu) | 2021-03-29 |
| WO2014142463A1 (ko) | 2014-09-18 |
| KR101721722B1 (ko) | 2017-04-10 |
| CN105026550A (zh) | 2015-11-04 |
| PH12015501906B1 (en) | 2016-01-04 |
| BR112015020274B1 (pt) | 2022-11-29 |
| PH12015501906A1 (en) | 2016-01-04 |
| CN105026550B (zh) | 2019-09-20 |
| JP6359037B2 (ja) | 2018-07-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2975114B1 (en) | Strain having enhanced l-valine productivity and l-valine production method using the same | |
| ES2907694T3 (es) | Nuevo promotor y uso del mismo | |
| KR102269637B1 (ko) | L-시트룰린 또는 l-아르기닌 생산능이 향상된 변이 균주 및 이를 이용한 l-시트룰린 또는 l-아르기닌의 제조 방법 | |
| EP3564366A2 (en) | Novel isopropylmalate synthase mutant and production method of l-leucine using same | |
| JP2018531033A (ja) | Ｌ−イソロイシン生産能を有するコリネバクテリウム属微生物及びこれを用いてｌ−イソロイシンを生産する方法 | |
| JP2018531033A6 (ja) | Ｌ−イソロイシン生産能を有するコリネバクテリウム属微生物及びこれを用いてｌ−イソロイシンを生産する方法 | |
| JP6806895B2 (ja) | Ｌ−アルギニンを生産するコリネバクテリウム属微生物及びこれを用いたｌ−アルギニン生産方法 | |
| KR102614733B1 (ko) | 포스포에놀피루베이트 카르복실라아제 신규 변이체 및 이를 이용한 5’-이노신산 생산 방법 | |
| JP2018528771A (ja) | Ｌ−リジン生産能を有するコリネバクテリウム属微生物及びそれを用いたｌ−リジン生産方法 | |
| JP2018529354A (ja) | Ｌ−トレオニンを生産する組み換え微生物及びそれを用いてｌ−トレオニンを生産する方法 | |
| ES2795437T3 (es) | Microorganismo del género corynebacterium para producir l-aminoácido y método para producir l-aminoácido usando el mismo | |
| KR20240153302A (ko) | L-히스티딘 생산능이 향상된 에스케리치아 속 변이주 및 이를 이용한 l-히스티딘의 생산 방법 | |
| KR20230165734A (ko) | L-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 및 이를 이용한 l-라이신의 생산 방법 | |
| JP7475409B2 (ja) | Ｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリン生産能が向上したコリネバクテリウム属微生物およびこれを用いたｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリンの生産方法 | |
| JP7475408B2 (ja) | Ｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリン生産能が向上したコリネバクテリウム属微生物およびこれを用いたｌ－アルギニンまたはｌ－シトルリンの生産方法 | |
| KR102703218B1 (ko) | L-히스티딘 생산능이 향상된 에스케리치아 속 변이주 및 이를 이용한 l-히스티딘의 생산 방법 | |
| ES2860698T3 (es) | Nuevo promotor y uso del mismo | |
| ES3009768T3 (en) | Recombinant vector for transformation improving glutamine productivity, and strain employing same | |
| JP7683040B2 (ja) | Ｌ－リシン生産能が向上したコリネバクテリウム・グルタミカム変異株及びそれを用いたｌ－リシンの生産方法 | |
| KR102684451B1 (ko) | Pts 수송체 서브유닛 eiic 신규 변이체 및 이를 이용한 5’-이노신산 생산 방법 | |
| KR102614734B1 (ko) | 5-데하이드로-2-데옥시글루코노키나아제 신규 변이체 및 이를 이용한 5’-이노신산 생산 방법 | |
| WO2008072891A1 (en) | Microorganism whose enzyme activity for nrfe is inactivated and process for producing l-tryptophan using the same | |
| KR20240017394A (ko) | L-시트룰린 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 및 이를 이용한 l-시트룰린의 생산 방법 | |
| KR20250166386A (ko) | L-시트룰린 또는 l-아르기닌 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-시트룰린 또는 l-아르기닌의 생산 방법 | |
| KR20250117262A (ko) | L-시트룰린 또는 l-아르기닌 생산능이 향상된 변이 미생물 및 이를 이용한 l-시트룰린 또는 l-아르기닌의 생산 방법 |