ES2833408T3 - Tratamiento de enfermedades neurológicas - Google Patents

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Abstract

Un péptido coagonista de GIP/GLP-1 representado por la Fórmula general I: **(Ver fórmula)** en donde Xaa24 es Asn; Y1 es Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys (SEQ. ID. No. 7). Y2 se selecciona de: Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No. 3); y Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 4); y R2 es -NH2, o un solvato o sal farmacéuticamente aceptable del péptido.

Description

DESCRIPCIÓN
Tratamiento de enfermedades neurológicas
Campo técnico de la invención
Los aspectos y realizaciones de la presente invención se refieren al tratamiento de trastornos neurológicos tales como, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson. En particular, determinadas realizaciones se refieren a péptidos coagonistas de GIP/GLP-1 para su uso en el tratamiento de estos dos trastornos neurológicos. También se incluyen en la presente invención, entre otras, composiciones farmacéuticas que comprenden los péptidos coagonistas de GIP/GLP-1, junto con métodos para tratar dichos trastornos, así como otros contenidos.
Antecedentes de la invención
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo crónico para el que actualmente no existe cura. Los medicamentos recetados actualmente solo alivian temporalmente algunos de los síntomas. Las principales características de la enfermedad son la desorientación, la pérdida de memoria, la pérdida de neuronas y sinapsis en el cerebro, la acumulación de proteína beta-amiloide en el cerebro (placas amiloides) y la agregación intracelular de proteína tau hiperfosforilada (ovillos) (LaFerla y Oddo, 2005; Blennow et al., 2006).
La enfermedad de Parkinson (EP) también es una enfermedad neurodegenerativa crónica para la que actualmente solo se dispone de medicación retardadora. Las principales características son el temblor, el rigor y la pérdida de la capacidad de movimiento, la degeneración de las neuronas del cerebro basal (sustancia negra) y la pérdida de liberación del neurotransmisor dopamina (Shen, 2010).
La diabetes tipo 2 (DMT2) se ha identificado como un factor de riesgo para la EA y la EP (Holscher, 2014), lo que indica que el deterioro de la señalización de la insulina puede ser un factor en el inicio o aceleración del desarrollo de la EA. Los estudios epidemiológicos encontraron una clara correlación entre la DMT2 y el riesgo de desarrollar EA u otros trastornos neurodegenerativos en una etapa posterior (Luchsinger et al., 2004; Ristow, 2004; Ohara et al., 2011). También se mostró que la señalización de la insulina en el cerebro está desensibilizada en pacientes con EA. Estudios recientes demostraron que los cerebros de pacientes con EA tenían niveles aumentados de receptores de insulina fosforilados inactivados y segundos mensajeros IRS-1, que son indicativos ambos de desensibilización a la insulina (Moloney et al., 2010; Bomfim et al., 2012; Talbot et al. 2012). En la EP, también se encontró que la señalización de la insulina estaba alterada y relacionada con la progresión de la enfermedad (Morris et al., 2011; Cereda et al., 2012).
El péptido similar al glucagón (GLP-1) es una hormona incretina peptídica endógena de 30 aminoácidos (Baggio y Drucker, 2007). La estimulación del receptor de GLP-1 mejora la proliferación de las células beta en el páncreas al activar la proliferación de células madre, facilitar la secreción de insulina dependiente de glucosa y reducir la glucosa en sangre en pacientes con DMT2 (Lovshin y Drucker, 2009). Actualmente, se encuentran en el mercado tres análogos de GLP-1 como tratamiento para la diabetes, exendina-4 (Byetta®, Bydureon®), lixisenatida (Lyxumia®) y liraglutida (Victoza®) (Campbell y Drucker, 2013; Elkinson y Keating, 2013).
El péptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP), también conocido como polipéptido inhibidor gástrico, es una hormona incretina de 42 aminoácidos que activa los islotes pancreáticos para mejorar la secreción de insulina y ayudar a reducir la hiperglucemia posprandial, de manera similar al GLP-1 (Gault et al., 2003). GIP es un miembro de la familia de polipéptidos neurorreguladores secretina/glucagón que también incluye el factor de liberación de la hormona del crecimiento. Se expresa en células alfa pancreáticas, células endocrinas y también en neuronas del cerebro (Nyberg et al., 2007; Campbell y Drucker, 2013). También se ha mostrado que GIP promueve el crecimiento, la diferenciación, la proliferación y la supervivencia celular de las células beta pancreáticas, documentando sus propiedades de hormona del crecimiento (Gault et al., 2003). Por lo tanto, se están realizando investigaciones para desarrollar GIP como una herramienta terapéutica para el tratamiento de la DMT2 (Irwin et al., 2006). Actualmente, no existen análogos de GIP autorizados para el tratamiento de la DMT2.
Los péptidos agonistas duales que se dirigen a más de un receptor se están considerando para el tratamiento de la DMT2. Actualmente, se están desarrollando varios péptidos coagonistas de GIP/GLP-1 para el tratamiento de la DMT2. Sin embargo, actualmente no existen agonistas duales del receptor de GIP/GLP-1 autorizados para su uso para tratar la DMT2.
Investigaciones recientes de las neuropropiedades de GLP-1 y GIP han indicado que estos péptidos pueden desempeñar un papel en la prevención de las características distintivas neurodegenerativas en varios modelos de ratón de la enfermedad de Alzheimer (EA) y también en modelos animales de la enfermedad de Parkinson (EP).
Tanto la insulina como las incretinas no solo tienen propiedades similares a factor de crecimiento en el cerebro, sino que también modulan la actividad sináptica (Holscher, 2014). Las sinapsis son los contactos entre las neuronas y son importantes para la formación de la memoria y el procesamiento de la información en el cerebro. La inyección directa de GLP-1 o análogos de GLP-1 de larga duración en el cerebro mejoró notablemente la potenciación a largo plazo de la transmisión sináptica (LTP) en el hipocampo, un área del cerebro que está implicada en la formación de la memoria. La LTP se considera un correlato celular de la formación de la memoria (Bliss y Collingridge, 1993). Se ha mostrado que el análogo de GLP-1, liraglutida, regula al alza la LTP en el cerebro de rata (McClean et al., 2010).
Además, los análogos de GLP-1 pudieron prevenir el deterioro de la LTP inducido por los fragmentos de beta-amiloide (Gault y Holscher, 2008a; McClean et al., 2011; Gengler et al., 2012; Han et al., 2013). Este deterioro de la LTP por la proteína amiloide puede ser el mecanismo por el cual el amiloide causa pérdida de memoria (Cleary et al., 2005). Un estudio que ensayó liraglutida en un modelo de ratón APP/PS1 de EA mostró que el fármaco puede prevenir el deterioro de la formación de la memoria y la plasticidad sináptica, la reducción del número total de sinapsis, normalizar la proliferación de células madre y la neurogénesis en la circunvolución dentada, reducir la respuesta a la inflamación y, además, reducir la carga de placa amiloide en la corteza y los niveles totales de amiloide en el cerebro (McClean et al., 2011). En otro estudio, la liraglutida también tuvo efectos protectores y regenerativos en ratones transgénicos muy viejos, lo que demuestra que incluso en un estadio avanzado de progresión de la enfermedad, se puede mejorar la memoria y reducir la carga de placa hasta cierto punto (McClean y Holscher, 2014).
En base a estos hallazgos en modelos animales, se ha llevado a cabo un ensayo clínico piloto en pacientes con Alzheimer. El hallazgo fue que el análogo de GLP-1 liraglutida protegía la degeneración de la actividad cerebral y la utilización de energía inducida por la enfermedad. Esto demuestra que el fármaco entra en el cerebro y protege a las neuronas de los efectos dañinos del Alzheimer mientras mantiene las neuronas activas y funcionales (Gejl et al., 2016). Se ha iniciado un ensayo clínico de fase II de liraglutida en pacientes con EA (NCT01843075).
Además, un estudio de la técnica anterior ha investigado los efectos del agonista del receptor de GLP-1 exendina-4 en el modelo de 6-hidroxidopamina de la EP. Después de que se indujo la lesión, las ratas se trataron con exendina-4 y se observó una protección de la actividad motora. El análisis histológico mostró que la exendina-4 aumentó significativamente el número de neuronas positivas para tirosina hidroxilasa y el transportador de monoamina vesicular 2 en la sustancia negra (Bertilsson et al., 2008). En un segundo estudio, se utilizaron dos modelos de roedores de EP, 6-hidroxidopamina (6-OHDA) y lipopolisacárido (LPS), para ensayar los efectos de la exendina-4. El control motor mejoró mucho en el grupo del fármaco, y las concentraciones de dopamina en el tejido estriado fueron notablemente más altas. Además, la exendina-4 revirtió la pérdida de DA extracelular en el cuerpo estriado (Harkavyi et al., 2008). Cuando se ensayaron los agonistas del receptor de GLP-1 liraglutida y lixisenatida en el modelo de ratón MPTP de la enfermedad de Parkinson, se encontró que ambos fármacos mostraban buenos efectos en la prevención del deterioro motor, la inflamación crónica en el cerebro y la pérdida de neuronas dopaminérgicas inducidas por la toxina MPTP (Liu et al., 2015).
En base a estos estudios, se inició un ensayo clínico de exendina-4 en pacientes con EP. Este estudio informó que en varias evaluaciones motoras y en un ensayo cognitivo, los pacientes habían mejorado y las mejoras se mantuvieron incluso después de que el fármaco se había suspendido durante 12 meses (Aviles-Olmos et al., 2013; Aviles-Olmos et al., 2014). Se ha iniciado un ensayo clínico de fase II en pacientes con Parkinson que ensaya el fármaco liraglutida (NCT02953665).
También se han llevado a cabo estudios para determinar si GIP o los análogos de GIP tienen un efecto en la EA. Se ha descubierto que los análogos de GIP pueden prevenir el deterioro de la LTP que inducen los fragmentos de beta-amiloide en la transmisión sináptica en el cerebro (Gault y Holscher, 2008b). En una cepa de ratón con deleción del receptor de GIP, la LTP también estaba alterada y la facilitación del pulso pareado se redujo, lo que indica que se reduce la liberación de vesículas sinápticas (Faivre et al., 2011). El análogo de GIP de larga duración D-Ala2-GIP también tenía efectos neuroprotectores en un modelo de ratón de APP/PS1 de la EA. En los ratones de 12 meses de edad, la plasticidad sináptica en el área CA1 del hipocampo y la formación de la memoria espacial estaban alteradas en ratones APP/PS1, pero estaban inalteradas en ratones APP/PS1 tratados con D-Ala2-GIP. Además, la carga de placa amiloide se redujo mucho, mostrando efectos impresionantes en la reducción de las principales características de la EA (Faivre y Holscher, 2013b).
En ratones con EA de 19 meses de edad, el fármaco aún podía revertir algunos de los síntomas de la EA, tales como la pérdida de sinapsis (Faivre y Holscher, 2013a). En un estudio longitudinal, el estrés oxidativo y la respuesta a la inflamación en el cerebro se redujeron mucho en ratones APP/PS1 (Duffy y Holscher, 2013). Esto sugiere que estos análogos tienen propiedades neuroprotectoras en la EA y protegen las sinapsis de los efectos perjudiciales del beta-amiloide.
En el modelo de ratón MPTP de la enfermedad de Parkinson, el análogo de GIP D-Ala2-GIP fue protector y evitó el deterioro de la actividad motora, la pérdida de neuronas dopaminérgicas, la pérdida de sinapsis y la respuesta a la inflamación crónica inducida por MPTP (Li et al., 2015). Cuando se ensayó un nuevo agonista dual de GLP-1/GIP en este modelo de ratón, se encontró que mostraba buenos efectos protectores (Ji et al., 2015). Sin embargo, esta molécula en particular no fue tan eficaz como los análogos de GLP-1.
Sigue existiendo la necesidad de identificar tratamientos para trastornos neurológicos tales como, por ejemplo, las enfermedades neurodegenerativas, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
Es un objetivo de determinadas realizaciones de la presente invención mitigar al menos parcialmente los problemas asociados con la técnica anterior.
Es un objetivo de determinadas realizaciones de la presente invención proporcionar un péptido terapéutico para su uso en el tratamiento y/o prevención de un trastorno neurodegenerativo tal como, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer y/o la enfermedad de Parkinson.
Es un objetivo de determinadas realizaciones de la presente invención proporcionar nuevos péptidos agonistas duales de GIP/GLP-1 que tengan una eficacia superior en comparación con el mejor mono agonista de GLP-1 liraglutida, para su uso en el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer o de Parkinson.
Es un objetivo de determinadas realizaciones de la presente invención proporcionar péptidos agonistas duales de GIP/GLP-1 que tengan propiedades superiores en comparación con un mono agonista de GIP. Los ejemplos de propiedades superiores incluyen, por ejemplo, una mayor disminución en la carga de placa de beta-amiloide y/o una reducción del deterioro de la habilidad motora.
Es un objetivo de determinadas realizaciones de la presente invención proporcionar nuevos péptidos agonistas duales de GIP/GLP-1 para su uso en el tratamiento y/o prevención de un trastorno neurodegenerativo tal como, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer y/o la enfermedad de Parkinson.
Resumen de la invención
La invención se define por las reivindicaciones.
En un aspecto de la presente descripción se proporciona un péptido coagonista de GIP/GLP-1 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico, en donde el péptido coagonista está representado por la fórmula general 1:
Tyr-Aib-G¡u-Gly-Thr-Pbe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-lle-Tyr-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Ala-Aib-G!u-Phe-Val-Xaa24-Trp-Leu-Leu-Ala-G!y-Y1-Y2-R2
(!) (SEQ, ID, No. 1)
en donde Xaa24 se selecciona de Asn y Cys;
Y1 se selecciona de ausente o una extensión que comprende al menos ocho moléculas de aminoácidos;
Y2 se selecciona de:
Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No 2);
Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No. 3)
Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 4); y
Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 5); y
R2 se selecciona de -NH2 o -OH,
o un derivado o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del péptido o del derivado.
En determinados aspectos de la descripción,
Y2 es Lys-Lys-Lys-Lys-Lys o Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys.
En determinados aspectos de la descripción
Y2 es Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr o Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr.
En determinadas realizaciones de la descripción
Xaa24 es Cys. En determinadas realizaciones, Xaa24 es Asn.
En determinadas realizaciones de la descripción
Y1 es una extensión que comprende al menos 10 aminoácidos, p. ej., al menos 11 aminoácidos.
En determinadas realizaciones de la descripción Y1 se selecciona de:
Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (SEQ. ID. No. 6);
Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys (SEQ. ID No. 7);
Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys (SEQ. ID. No. 8);
Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (SEQ. ID. No. 9);
Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser (SEQ. ID. No. 10); y
ausente.
Adecuadamente, Y1 es Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (SEQ. ID. No. 6). En la descripción, Y1 es Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Cys (SEQ. ID. No. 8). En una realización alternativa, Y 1 es Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys (SEQ. ID. No. 7).
En determinadas realizaciones, el péptido comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a un aminoácido. En determinadas realizaciones, el péptido comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a un aminoácido en la posición 24.
En determinadas realizaciones, el péptido comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a un aminoácido en la posición 39 o 40, cuando Y1 es una extensión que comprende al menos 10 aminoácidos o al menos 11 aminoácidos. En determinadas realizaciones, Xaa39 o Xaa40 es Cys y el péptido comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a Cys(39) o Cys(40).
En determinadas realizaciones, Xaa24 es Cys y el péptido comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a Cys(24). En determinadas realizaciones, el resto hidrófilo es un polímero soluble en agua.
En determinadas realizaciones, el polímero soluble en agua es un resto de polietilen glicol y opcionalmente en un resto de polietilen glicol que tiene un peso molecular de entre aproximadamente 20.000 Daltons y aproximadamente 60.000 Daltons. En determinadas realizaciones, el péptido se conjuga con un sustituyente lipófilo.
En determinadas realizaciones, el sustituyente lipófilo comprende una cadena de hidrocarburo que tiene de 8 a 24 átomos de carbono (C). En determinadas realizaciones, el sustituyente lipófilo comprende un grupo acilo.
En determinadas realizaciones, el sustituyente lipófilo es una molécula de ácido graso. Adecuadamente, la molécula de ácido graso se selecciona de un grupo octanoílo C-8, un grupo decanoílo C-10, un grupo lauroílo C-12, un grupo miristoílo C-14, un grupo palmitoílo C-16, un grupo estearoílo C-18 y un grupo acilo C-20.
En determinadas realizaciones, el sustituyente lipófilo se une a un aminoácido en el extremo carboxilo del péptido. En determinadas realizaciones, el sustituyente lipófilo se une a un aminoácido en la posición 40. Adecuadamente, el sustituyente lipófilo se une covalentemente a una cadena lateral de un aminoácido del péptido.
En determinadas realizaciones, el péptido comprende un espaciador que conjuga el sustituyente lipófilo con un residuo de aminoácido. Adecuadamente, el espaciador es un residuo de un aminoácido natural o no natural, en donde el espaciador comprende un residuo de Gly, Pro, Ala, Val, Leu, Ile, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg , Gln, Asn, a-Glu, Y-Glu, E-Lys, Asp, Ser, Thr, Gaba, Aib, p-aminohexonilo, 7-aminoheptanoílo, 8-aminooctanoílo, 9-aminononanoílo, 10-aminodecanoílo u 8-amino-3,6-dioxaoctanoílo.
En determinadas realizaciones, el espaciador es Y-Glu. En determinadas realizaciones, el espaciador es un dipéptido, en donde opcionalmente el espaciador comprende dos aminoácidos cargados negativamente y además opcionalmente en donde el espaciador es Y-Glu-Y-Glu.
En determinadas realizaciones, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ. ID. No. 11)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
En determinadas realizaciones, el péptido consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ. ID. No. 11)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
En determinadas realizaciones, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ. ID. No. 12)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
Adecuadamente, el péptido consiste esencialmente en la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ. ID. No. 12)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico que está causado por, o asociado, con el depósito de placas de proteína beta-amiloide en un área del paciente. En determinadas realizaciones, el depósito de placas de beta-amiloide se encuentra en el cerebro del paciente.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico causado por, o asociado con, la disfunción de la potenciación a largo plazo de la transmisión sináptica.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico causado por, o asociado con, inflamación.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico asociado con un deterioro motor.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico que afecta la función cognitiva, p. ej., demencia, accidente cerebrovascular, esquizofrenia y/o trastorno bipolar.
En determinadas realizaciones, el trastorno es la isquemia cerebral asociada con un accidente cerebrovascular.
En determinadas realizaciones, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno seleccionado de trastorno de estrés postraumático, epilepsia, síndrome de Tourette y alucinaciones; y procesos cognitivos disfuncionales, opcionalmente seleccionados de atención, cálculo, memoria, juicio, percepción, aprendizaje y razonamiento.
En determinadas realizaciones, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurodegenerativo, p. ej., enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, neuropatía periférica, enfermedad de Huntington y enfermedad de Creutzfeldt-Jacob. Adecuadamente, el trastorno neurológico es esclerosis múltiple.
En determinadas realizaciones, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico seleccionado de enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, enfermedad de Alzheimer prodrómica y angiopatía amiloide clínica o preclínica (CAA).
Adecuadamente, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de Alzheimer clínica. En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido como se describe en la presente memoria para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de Parkinson.
También se proporciona un método para tratar y/o prevenir un trastorno neurológico como se describe en la presente memoria, comprendiendo el método administrar una cantidad farmacéuticamente efectiva de un péptido coagonista de GIP/GLP-1 como se describe en la presente memoria a un sujeto que lo necesita.
En un aspecto adicional de la presente descripción, se proporciona un método para tratar y/o prevenir un trastorno neurológico que comprende administrar a un paciente que lo necesita una composición farmacéutica que comprende un péptido coagonista de GIP/GLP-1, o un derivado o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del péptido o del derivado,
en donde dicho péptido coagonista está representado por la Fórmula general I:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Pbe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-ne-Tyr-Leu-Asp-Lys-GIn-Ala-Ala-Aib-Glu-Phe-Val-Xaa24 -T rp-Leu-Leu-Ala-Gly-Y 1-Y2-R2
(I) (SEQ. ID. No. 1)
en donde Xaa24 se selecciona de Asn y Cys;
Y1 se selecciona de ausente o una extensión que comprende al menos ocho moléculas de aminoácidos;
Y2 se selecciona de:
Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No 2);
Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No. 3)
Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 4); y
Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 5); y
R2 se selecciona de -NH2 o -OH,
o un derivado o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del péptido o del derivado.
Adecuadamente, el péptido es como se describe en la presente memoria.
En determinadas realizaciones, el trastorno neurológico se selecciona de trastorno de estrés postraumático, epilepsia, síndrome de Tourette y alucinaciones; y procesos cognitivos disfuncionales, opcionalmente seleccionados de atención, cálculo, memoria, juicio, percepción, aprendizaje y razonamiento.
En determinadas realizaciones, el trastorno neurológico es un trastorno neurodegenerativo. Adecuadamente, el trastorno neurodegenerativo se selecciona de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, la esclerosis lateral amiotrófica, la neuropatía periférica y la enfermedad de Creutzfeldt-Jacob.
En determinadas realizaciones, el trastorno neurológico es un trastorno neurológico seleccionado de enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, enfermedad de Alzheimer prodrómica y angiopatía amiloide clínica o preclínica (CAA). Adecuadamente, el trastorno neurológico es la enfermedad de Alzheimer clínica.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de Alzheimer clínica, consistiendo el péptido en la siguiente secuencia:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ. ID. No. 11)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un péptido para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de Alzheimer clínica, consistiendo el péptido en la siguiente secuencia:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ. ID. No. 12)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
En una realización, el péptido comprende o consiste en la siguiente secuencia de aminoácidos:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ. ID. No. 11)
X = ácido aminoisobutírico
Este péptido se denomina en la presente memoria "DA4" y tiene una secuencia de aminoácidos como se indica en la SEQ. ID. No. 11.
En una realización, el péptido comprende o consiste en la siguiente secuencia de aminoácidos:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ. ID. No. 12)
X = ácido aminoisobutírico
Este péptido se denomina en la presente memoria "DA5" y tiene una secuencia de aminoácidos como se indica en la SEQ. ID. No. 12.
La capacidad de cruzar la barrera hematoencefálica puede tener utilidad en el tratamiento de trastornos neurodegenerativos. Sin pretender la vinculación a ninguna teoría, se considera que los péptidos de determinadas realizaciones de la presente invención pueden atravesar la barrera hematoencefálica. Además, los péptidos de determinadas realizaciones cruzan la barrera hematoencefálica a una velocidad mejorada en comparación con los péptidos coagonistas de GIP/GLP-1 conocidos.
Se indica que puede haber muchas dificultades en la transmisión de un péptido a través de la barrera hematoencefálica. Se han considerado varios mecanismos diferentes para mejorar el acceso a través de la barrera hematoencefálica, uno de los cuales es la modificación de las secuencias de los péptidos. Sin embargo, aunque se sabe que varias modificaciones en los péptidos ayudan potencialmente a cruzar la barrera hematoencefálica, su comportamiento in vivo es difícil de predecir. Su adición a una molécula de péptido o de proteína puede ser ineficaz o conducir a la inactivación del péptido o proteína, p. ej., por procesos de degradación de proteínas, patrones incorrectos de plegamiento de péptidos y/o un cambio en las propiedades de unión al receptor del péptido.
Adecuadamente, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer o la enfermedad de Parkinson.
También se proporciona en la presente memoria una composición farmacéutica que comprende péptidos coagonistas del receptor de GIP/GLP-1 como se describe en la presente memoria y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico como se describe en la presente memoria. Además, en la presente descripción se proporciona un kit que incluye dicha composición farmacéutica.
Breve descripción de los dibujos
A continuación, se proporcionan más detalles de las realizaciones de la invención, con referencia a los dibujos adjuntos a modo de ejemplo únicamente:
Tal y como se usa en la presente memoria, la abreviatura "DA4" se refiere a un coagonista de GIP/GLP-1 que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID. No. 11.
Tal y como se usa en la presente memoria, la abreviatura "DA5" se refiere a un coagonista de GIP/GLP-1 que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID. No. 12.
La Figura 1 ilustra una medición inmunohistoquímica de la carga de placa de beta-amiloide en la corteza de ratones transgénicos (modelo de la enfermedad de Alzheimer). Todos los péptidos redujeron la carga de placa. Ambos péptidos coagonistas (DA4 y DA5) de las realizaciones de la presente invención fueron superiores a los análogos de GIP o GLP-1 individuales y la administración de DA4 y DA5 reduce la carga de placa de beta-amiloide cuantificada por inmunohistoquímica de beta-amiloide y determinación del % de área positiva para beta amiloide en secciones transversales de la corteza cerebral. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N=6 por grupo.
La Figura 2 es un gráfico que ilustra que los péptidos DA4 y DA5 protegen de la pérdida de sinapsis en la corteza de los ratones transgénicos (modelo de la enfermedad de Alzheimer) cuantificada por la medición inmunohistoquímica de las densidades sinápticas en la corteza de los ratones transgénicos. Todos los péptidos protegieron frente a la pérdida de sinapsis. Ambos péptidos coagonistas de las realizaciones de la presente invención fueron superiores a los análogos de GIP o GLP-1 individuales. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N=6 por grupo.
La Figura 3 es un gráfico que ilustra que los péptidos DA4 y DA5 protegen a los ratones de un deterioro de las habilidades motoras inducido por MPTP para reducir los niveles de dopamina. Se llevó a cabo un ensayo de habilidad motora en rotarod como se describe a continuación. Se registró el tiempo de resistencia de cada animal y se calculó el promedio. Los datos fueron analizados usando ANOVA de una vía con ensayos poshoc de Bonferroni. Ambos péptidos coagonistas de las realizaciones de la presente invención fueron superiores a los análogos de GIP o GLP-1 individuales. Control = ratón de tipo salvaje sin MPTP. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N=6 por grupo.
La Figura 4 ilustra la reducción inducida por MPTP de la enzima TH que sintetiza dopamina en la sustancia negra, pars compacta. Tanto DA4 como DA5 protegieron a las neuronas dopaminérgicas a una tasa mayor que los análogos de GIP y GLP-1 individuales. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N=6 por grupo.
La Figura 5 ilustra que el péptido DA5 no afecta el rendimiento locomotor y exploratorio de los ratones APP/PS1 y de tipo salvaje. Se llevó a cabo un ensayo de campo abierto para medir el comportamiento espontáneo de los ratones tratados con disolución salina/DA5. El análisis estadístico (p => 0,05) no mostró ninguna diferencia entre los grupos de disolución salina/DA5 (a,b).
La Figura 6 ilustra la memoria de trabajo espacial mejorada de ratones APP/PS1 en un ensayo de laberinto en Y tras el tratamiento con el péptido DA5. El porcentaje de alternancia correcta en los ratones APP/PS1 se redujo significativamente. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001 N = 8-14 por grupo.
La Figura 7 ilustra que el trastorno en la memoria espacial observado en ratones APP/PS1 se puede mejorar con el tratamiento con el péptido DA5. Se llevó a cabo un laberinto de agua de Morris clásico y se evaluó la memoria espacial de los ratones mediante un ensayo de prueba, como se describe a continuación. (Figura 7a, 7b) Se registró la latencia de escape de cada animal durante un período de entrenamiento y se calculó el promedio. (Figura 7c, 7d). El ensayo de prueba indicó que los ratones APP/PS1 tratados con DA5 recordaron la ruta de escape en mayor medida que los ratones APP/PS1 con disolución salina. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N = 8-14 por grupo.
La Figura 8 ilustra que el péptido DA5 protege a los ratones APP/PS1 frente a la disminución de la flexibilidad cognitiva y restaura su capacidad para volver a aprender. Se llevó a cabo un ensayo de laberinto de agua de Morris inverso como se describe a continuación. (Figura 8a, Figura 8b). Se registró la latencia de escape de cada animal durante un período de entrenamiento prolongado y se calculó el promedio (Figura 8c, 8d). El ensayo de prueba indicó que los ratones APP/PS1 tratados con DA5 recordaron un cambio en la ruta de escape en mayor medida que los ratones APP/PS1 con disolución salina. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N = 8-14 por grupo.
La Figura 9 ilustra que el péptido DA5 mantiene la fuerza sináptica en ratones APP/PS1 (Figura 9a) El pretratamiento de ratones con DA5 pudo revertir la depresión de L-LTP observada en ratones transgénicos APP/PS1 (Figura 9b) Además, los ratones APP/PS1 tratados con DA5 mantuvieron niveles elevados de L-LTP tras los estímulos neuronales. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N=6 por grupo.
La Figura 10 es un gráfico que ilustra que DA5 reduce los ovillos neurofibrilares en ratones APP/PS1. La cuantificación de la tinción por inmunofluorescencia de la proteína p-tau indicó ovillos neurofibrilares reducidos en ratones APP/PS1 tratados con DA5 en comparación con APP/PS1-disolución salina. * = p <0,05, ** = p <0,01; *** = p <0,001. N = 4 por grupo.
La Figura 11 muestra una transferencia western y gráficos que ilustran que DA5 puede proteger los comportamientos cognitivos y mejorar los cambios patológicos en ratones con EA. El tratamiento de ratones APP/PS1 con DA5 previene la activación excesiva de GSKp regulando al alza la señalización de P13/AKT (a-g). * = p <0,05, N = 6 por grupo.
La Figura 12 detalla secuencias de aminoácidos de péptidos como se describe en la presente memoria.
Descripción detallada de realizaciones de la invención
La práctica de las realizaciones de la presente invención empleará, a no ser que se indique otra cosa, técnicas convencionales de biología celular, microbiología, tecnología de ADN recombinante e inmunología, que están dentro de los conocimientos de los expertos en la técnica.
La mayor parte de la tecnología general de biología molecular, microbiología, ADN recombinante e inmunológica se pueden encontrar en Sambrook et al, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2001) Cold Harbor-Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. o Ausubel et al., Current protocols in molecular biology (1990) John Wiley and Sons, N.Y. A no ser que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece esta descripción. Por ejemplo, el Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2a ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3 a ed., Academic Press; y la Oxford University Press, proporcionan a un experto en la técnica un diccionario general de muchos de los términos usados en esta descripción.
La presente descripción se refiere al uso de péptidos coagonistas de GIP/GLP-1. El péptido GLP-1 humano nativo y las secuencias del péptido GIP son conocidas en la técnica. El término "GLP-1" o "hGLP-1", tal y como se usa en la presente memoria, se refiere al péptido similar al glucagón 1 humano (GLP-1 (7-37)), cuya secuencia se incluye en la presente memoria como SEQ ID. No. 13.
El péptido que tiene la secuencia de SEQ ID. No. 13 también puede designarse como GLP-1 "nativo".
La secuencia de GLP-1 (7-37) de Homo sapiens es:
HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR G-OH (SEQ ID No. 13).
El término "GIP", o "hGIP" tal y como se usa en la presente memoria se refiere al péptido inhibidor gástrico humano (también conocido como péptido insulinotrópico dependiente de glucosa) cuya secuencia se incluye en la presente memoria como SEQ. ID. No. 14. El péptido que tiene la secuencia de SEQ. ID. No. 14 también puede designarse como GIP "nativo":
YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ-OH (SEQ ID. No. 14.
Tal y como se usa en la presente memoria, una referencia general a "GIP" o "GLP-1" en ausencia de cualquier designación adicional pretende significar GIP nativo o GLP-1 nativo, respectivamente.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "péptido" engloba una secuencia de 3 o más aminoácidos y típicamente menos de 50 aminoácidos, en donde los aminoácidos son aminoácidos naturales o no naturales. Los aminoácidos no naturales se refieren a aminoácidos que no ocurren naturalmente in vivo pero que, no obstante, pueden incorporarse en las estructuras peptídicas descritas en la presente memoria.
Tal y como se usan en la presente memoria, los términos "polipéptido" y "proteína" son términos que se usan indistintamente para referirse a un polímero de aminoácidos, independientemente de la longitud del polímero. Típicamente, los polipéptidos y las proteínas tienen una longitud de polímero que es mayor que la de los "péptidos".
Tal y como se usa en la presente memoria, una "modificación" de aminoácidos se refiere a una sustitución, adición o deleción de un aminoácido, e incluye la sustitución con o la adición de cualquiera de los 20 aminoácidos que se encuentran comúnmente en proteínas humanas, así como aminoácidos atípicos o no naturales. A lo largo de la solicitud, todas las referencias a una posición de aminoácido particular por número (p. ej., la posición 28) se refieren al aminoácido en esa posición en el agonista dual de GIP/GLP-1 de las realizaciones de la presente invención.
A lo largo de esta memoria descriptiva, se usan los códigos convencionales de una letra y de tres letras para los aminoácidos naturales, así como los códigos de tres letras generalmente aceptados para otros aminoácidos, tales como por ejemplo Aib (ácido a-aminoisobutírico).
Por tanto, en un aspecto de la presente invención, se proporciona un péptido coagonista de GIP/GLP-1, o un derivado o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del péptido o del derivado, para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico. Adecuadamente, el péptido coagonista tiene un porcentaje de potencia de GLP-1 dentro de aproximadamente 10 veces el porcentaje de potencia de GIP.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "agonista" se refiere a una sustancia (ligando) que activa el tipo de receptor en cuestión. Los términos "agonista dual" y "coagonista" que se usan en la presente memoria son intercambiables y se refieren a una sustancia (ligando) que activa dos tipos de receptores. Adecuadamente, los péptidos coagonistas de GIP/GLP-1 descritos en la presente memoria tienen una actividad equilibrada tanto en el GLP-1R como en el GIPR. En una realización, el péptido coagonista tiene una CE50 en el receptor de GLP-1 humano dentro de aproximadamente 10 veces de la CE50 en el receptor de GIP humano. La actividad en ensayos in vitro puede usarse como una medida de la actividad de los péptidos.
Adecuadamente, los péptidos descritos en la presente memoria se sintetizan mediante síntesis de péptidos en fase sólida o en fase líquida, como se describe, por ejemplo, en WO98/11125. Adecuadamente, los péptidos pueden sintetizarse como se describe en Finan et al. (Sci. Transí. Med. 5209ra151 (2013) p 1 a 16).
Los péptidos de la presente descripción se pueden formular como composiciones farmacéuticas preparadas para almacenamiento o administración para su uso en el tratamiento y/o prevención de un trastorno neurológico como se describe en la presente memoria. Una composición de este tipo comprende típicamente una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido coagonista de GIP/GLP-1, en la forma apropiada, en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido coagonista de GIP/GLP-1 como se describe en la presente memoria dependerá de la ruta de administración, el tipo de mamífero que se esté tratando y de las características físicas del mamífero específico en consideración. Estos factores y su relación con la determinación de esta cantidad son bien conocidos por los expertos en la técnica médica. Esta cantidad y el método de administración pueden adaptarse para lograr una eficacia óptima y pueden depender de factores tales como el peso, la dieta, la medicación concurrente y otros factores, bien conocidos por los expertos en la técnica médica. Los péptidos de la presente descripción pueden ser particularmente útiles para el tratamiento de seres humanos.
Un protocolo de dosificación y tratamiento efectivo puede determinarse por medios convencionales, comenzando con una dosis baja en animales de laboratorio y luego aumentando la dosificación mientras se monitorizan los efectos, y variando sistemáticamente también el régimen de dosificación. Un médico puede tener en cuenta numerosos factores cuando determine una dosificación óptima para un sujeto dado. El experto en la técnica conoce dichas consideraciones.
El término "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar. Los vehículos farmacéuticamente aceptables para su uso terapéutico son conocidos en la técnica farmacéutica y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985). Por ejemplo, se puede usar disolución salina estéril y disolución salina tamponada con fosfato a pH ligeramente ácido o fisiológico. Los agentes tamponadores del pH pueden ser fosfato, citrato, acetato, tris/hidroximetil)aminometano (TRIS), ácido N-Tris(hidroximetil)metil-3-aminopropanosulfónico (TAPS), bicarbonato de amonio, dietanolamina, histidina, arginina, lisina o acetato o mezclas de los mismos. El término engloba además cualquier agente enumerado en la Farmacopea de EE. UU. para uso en animales, incluyendo los seres humanos.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal de uno cualquiera de los péptidos coagonistas de GIP/GLP-1 de las realizaciones de la invención. Las sales incluyen sales farmacéuticamente aceptables tales como sales de adición de ácido y sales básicas. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales hidrocloruro, sales citrato y sales acetato. Los ejemplos de sales básicas incluyen sales en las que el catión se selecciona de metales alcalinos, tales como sodio y potasio, metales alcalinotérreos, tales como calcio, y iones de amonio N(R3)3(R4), donde R3 y R4 designan independientemente alquilo-C1-6 opcionalmente sustituido, alquenilo-C2-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17a edición. Ed. Alfonoso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, EE.UU., 1985 y ediciones más recientes, y en la Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology.
El término "solvato" en el contexto de la presente descripción se refiere a un complejo de estequiometría definida formado entre un soluto (p. ej., un péptido o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la presente descripción) y un disolvente. El disolvente a este respecto puede ser, por ejemplo, agua, etanol o típicamente otra especie orgánica de pequeño peso molecular, aceptable farmacéuticamente, tal como, pero no limitado a, ácido acético o ácido láctico. Cuando el disolvente en cuestión es agua, dicho solvato normalmente se denomina hidrato.
"Tratamiento" es un enfoque para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Para los propósitos de la presente descripción, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero no están limitados a, alivio de los síntomas, disminución del grado de la enfermedad, estabilización (es decir, no empeoramiento) del estado de la enfermedad, demora o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o mitigación del estado de enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento. “Tratamiento” es una intervención realizada con la intención de prevenir el desarrollo o alterar la patología de un trastorno. Por consiguiente, "tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a las medidas profilácticas o preventivas en determinadas realizaciones. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen aquellos que ya tienen el trastorno, así como aquellos en los cuales se debe prevenir el trastorno. Por tratamiento se entiende inhibir o reducir un aumento de la patología o síntomas en comparación con la ausencia de tratamiento, y no implica necesariamente el cese completo de la afección relevante.
Las composiciones farmacéuticas para su uso en el tratamiento de un trastorno neurológico pueden estar en forma de dosificación unitaria. En dicha forma, la composición se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de las preparaciones, por ejemplo, comprimidos envasados, cápsulas y polvos en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una cápsula, sello, o comprimido en sí mismo, o puede ser la cantidad adecuada de cualquiera de estas formas envasadas. Puede proporcionarse en forma inyectable de dosis única, por ejemplo, en forma de pluma. En determinadas realizaciones, las formas envasadas incluyen una etiqueta o un inserto con instrucciones para su uso. Las composiciones se pueden formular para cualquier ruta y medio de administración adecuados. Los vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen aquellos usados en formulaciones adecuadas para administración oral, rectal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, y transdérmica). Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos conocidos en la técnica farmacéutica.
Tal y como se usa en la presente memoria, una cantidad "efectiva" o una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un péptido se refiere a una cantidad no tóxica pero suficiente del péptido para proporcionar el efecto deseado. La cantidad que es "efectiva" variará de un sujeto a otro, dependiendo de la edad y el estado general del individuo, el modo de administración y similares. Una cantidad "efectiva" apropiada en cualquier caso individual puede ser determinada por un experto en la técnica usando experimentación rutinaria.
Los términos "paciente", "sujeto" e "individuo" pueden usarse indistintamente y se refieren a un mamífero humano o no humano. Adecuadamente, el sujeto es un ser humano.
Los péptidos descritos en la presente memoria se pueden usar para tratar y/o prevenir un trastorno neurológico, p. ej., un trastorno neurodegenerativo. En una realización, el péptido es para su uso en el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Alzheimer. La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno neurodegenerativo que da lugar a la pérdida de neuronas corticales, especialmente en la neocorteza asociativa y el hipocampo, lo que a su vez conduce a una pérdida lenta y progresiva de las funciones cognitivas, que finalmente conduce a la demencia y la muerte. Las principales características distintivas de la enfermedad son la agregación y el depósito de proteínas mal plegadas, tales como el péptido beta-amiloide agregado como "placas" seniles o neuríticas extracelulares, y la proteína tau hiperfosforilada como "ovillos" neurofibrilares intracelulares (NFT).
Genéticamente, la EA se divide en dos formas: (1) EA familiar de aparición temprana (<60 años) y (2) EA esporádica de aparición tardía (>60 años). Se sabe que las mutaciones raras que causan enfermedades en los genes de la proteína precursora amiloide (APP), presenilina 1 (PSEN1) y presenilina 2 (PSEN2) dan como resultado EA familiar de aparición temprana, mientras que APOE (alelo 4) es el factor de riesgo individual más importante para la EA de aparición tardía.
Aunque la enfermedad de Alzheimer se desarrolla de manera diferente para cada individuo, hay muchos síntomas comunes. A menudo se piensa erróneamente que los primeros síntomas son las preocupaciones "relacionadas con la edad" o manifestaciones de estrés. En los primeros estadios, el síntoma más común es la dificultad para recordar eventos recientes. Cuando se sospecha de EA, el diagnóstico se confirma habitualmente con ensayos que evalúan el comportamiento y las habilidades de pensamiento, a menudo seguidas de un escáner cerebral si está disponible; sin embargo, se requiere un examen del tejido cerebral para un diagnóstico definitivo.
A medida que avanza la enfermedad, los síntomas pueden incluir confusión, irritabilidad, agresión, cambios de humor, problemas con el lenguaje y pérdida de la memoria a largo plazo. A medida que el enfermo decae, a menudo se aleja de la familia y la sociedad. Gradualmente, las funciones corporales se pierden, conduciendo finalmente a la muerte. Dado que la enfermedad es diferente para cada individuo, es difícil predecir cómo afectará a la persona. La EA se desarrolla durante un período de tiempo variable y desconocido antes de volverse completamente aparente, y puede progresar sin ser diagnosticada durante años. De promedio, la esperanza de vida después del diagnóstico es de aproximadamente siete años. Menos del tres por ciento de los individuos viven más de catorce años después del diagnóstico.
En una realización, el péptido coagonista es para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. El péptido puede usarse para ralentizar y/o detener la progresión de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto. El péptido puede ser usarse para ralentizar y/o prevenir la progresión a la enfermedad de Alzheimer clínica de un sujeto que padece la enfermedad de Alzheimer preclínica.
En una realización, el péptido coagonista es para su uso en el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Parkinson. La enfermedad de Parkinson es un trastorno neurodegenerativo que se caracteriza por una pérdida neuronal progresiva, en particular de neuronas dopaminérgicas de la sustancia negra, que conduce a alteraciones motoras tales como temblores, rigidez, lentitud de movimientos e inestabilidad postural. En una realización, el péptido es para su uso para reducir y/o prevenir alteraciones motoras asociadas con la enfermedad de Parkinson.
Además, existe un número creciente de síndromes de Parkinson atípicos y subclases de la enfermedad de Parkinson, que están asociados con déficits de aprendizaje y memoria. Los ejemplos típicos son la demencia por enfermedad de Parkinson (PDD), la demencia con cuerpos de Lewy (LBD) y la atrofia multisistémica (MSA). El péptido puede usarse en la recuperación o mejora de procesos de aprendizaje o déficits de aprendizaje y/o la prevención, recuperación o mejora de la pérdida de memoria o deterioro de memoria en un sujeto que padece la enfermedad de Parkinson.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta memoria descriptiva, las palabras "comprenden" y "contienen" y las variaciones de las mismas significan "que incluyen, pero no están limitadas a" y no están destinadas para (y no) excluyen otros restos, aditivos, componentes, números enteros o etapas. A lo largo de la descripción y las reivindicaciones de esta memoria descriptiva, el singular engloba el plural a no ser que el contexto requiera otra cosa. En particular, cuando se usa el artículo indefinido, debe entenderse que la memoria descriptiva contempla tanto la pluralidad como la singularidad, a no ser que el contexto requiera otra cosa.
La atención del lector se dirige a todos los artículos y documentos que se presentan simultáneamente con o antes de esta memoria descriptiva en conexión con esta solicitud y que están abiertos a la inspección pública con esta memoria descriptiva.
Las unidades, los prefijos y los símbolos se indican en su forma aceptada de unidades por el Sistema Internacional (SI). Los rangos numéricos incluyen los números que definen el rango. A no ser que se indique otra cosa, las secuencias de aminoácidos se escriben de izquierda a derecha en orientación de amino a carboxi. Todos los residuos de aminoácidos en los péptidos de las realizaciones de la invención están preferiblemente en la configuración L. Sin embargo, también pueden estar presentes aminoácidos en la configuración D.
Ejemplos
Estructuras moleculares
Síntesis de péptidos
Los péptidos fueron sintetizados por GL Biochem Ltd. (Shanghai). La pureza del péptido se analizó mediante HPLC de fase inversa y se caracterizó usando espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización/desorción láser asistida por matriz (MALDI-TOF), con una pureza > 99 %. Los péptidos se reconstituyeron en agua ultrapure® hasta una concentración de 1 mg/ml en tubos de polipropileno y se congelaron en partes alícuotas para permitir la preparación fresca de las dosis necesarias para inyección.
Los péptidos ensayados fueron:
1. Liraglutida (análogo de GLP-1) - la liraglutida es un fármaco peptídico que se administra típicamente por la ruta parenteral. La liraglutida está autorizada para el tratamiento de la diabetes tipo 2. La liraglutida se describe en WO98/08871 A1, Ejemplo 37. La secuencia de aminoácidos de liraglutida se muestra en la SEQ ID. No. 15. El ácido graso está unido al aminoácido Lys en la posición 26. El aminoácido Lys en la posición 34 ha sido reemplazado por el aminoácido Arg. 2. DAla2GIP-Lys37-Y-Glu-PAL (análogo de GIP) La secuencia de DAla2GIP-Lys37-Y-Glu-PAL es:
Yd-AEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKK(Y-E-C16)NDWKHNITQ
La liraglutida es es un mono agonista del receptor de GLP-1, mientras DAla2GIP--LyS37-Y-Glu-PAL es un mono agonista del receptor de GIP.
3. Un péptido denominado en la presente memoria DA4 que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2
X = ácido amino-isobutírico
El péptido DA4 es un agonista dual de GLP-1/GIP.
4. Un péptido denominado en la presente memoria DA5 que tiene la siguiente secuencia de aminoácidos:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2
X = ácido amino-isobutírico
El péptido DA5 es un agonista dual de GLP-1/GIP.
Ejemplo 1
Modelo de ratón transgénico de la enfermedad de Alzheimer
Se han desarrollado modelos animales para ensayar nuevos fármacos. Un modelo estándar para la enfermedad de Alzheimer son los ratones transgénicos que expresan genes humanos mutados para la producción de amiloide que se sabe que inducen la enfermedad de Alzheimer en los seres humanos. Estos ratones transgénicos APP/PS1 recapitulan algunos de los síntomas de la enfermedad de Alzheimer tales como la agregación de amiloide en el cerebro, la pérdida de memoria y la pérdida de sinapsis (Radde et al., 2006).
Los ratones APP/PS1 expresan APP con mutación Sueca humana y presenilina-1 mutada humana que inducen la enfermedad de Alzheimer en los seres humanos.
La dosis de péptido ensayada fue de 10 nmoles/kg de peso corporal. Los péptidos se administraron mediante una inyección intraperitoneal una vez al día durante 8 semanas. Se administraron inyecciones de disolución salina como control. Se inyectó a seis animales por grupo un péptido o un control de disolución salina.
Análisis de tejido cerebral para determinar placas amiloides y números de sinapsis en ratones con EA
Los animales (6 por grupo) se perfundieron transcardialmente con 30 ml de PBS enfriado en hielo y 30 ml de paraformaldehído al 4 % enfriado en hielo para la posfijación del cerebro. Se extrajeron los cerebros y se colocaron en una disolución de sacarosa fresca al 30 % en PBS para crioproteger el tejido y se cortaron a un grosor de 40 |jm en un criostato. Las secciones se eligieron de acuerdo con reglas estereológicas, con la primera sección tomada al azar y cada 5a sección posterior. Se analizaron entre 7 y 13 secciones por cerebro.
Se usaron técnicas de inmunotinción para evaluar la carga de placa neuronal (anticuerpo policlonal de conejo anti betaamiloide (1: 200, policlonal de conejo-Invitrogen 71-5800) y de sinaptofisina (anticuerpo primario policlonal de conejo antisinaptofisina, 1: 2.000, Abcam, Cambridge, Reino Unido) para medir la cantidad de sinapsis en la corteza. Las muestras de cerebro se expusieron primero a ácido fórmico al 99 % durante 7 minutos y luego se lavaron 3 veces durante 10 minutos en TBS. Se sabe que el pretratamiento con ácido fórmico al 99 % aumenta drásticamente la detección de beta-amiloide en muestras de cerebro fijadas con formalina. Después, las muestras se incubaron en H2O2 al 0,3 % (Sigma Aldrich; No. de Cat.: 516813) en TBS durante 30 minutos en el agitador para eliminar la actividad peroxidasa endógena, y se lavaron 3 veces en TBS durante 10 minutos posteriormente.
Para aumentar la permeabilidad de las membranas en el tejido cerebral, las muestras se expusieron a Triton X-100 al 0,3 % (Sigma Aldrich; No. de Cat.: 516813) en TBS durante 10 minutos en el agitador. La unión proteinofílica inespecífica en el tejido se saturó incubando las muestras con suero de cabra al 5 % (Gibco; No. de Cat.: 16210-064) en TBS durante 30 minutos en el agitador.
Se añadió un anticuerpo primario frente a beta-amiloide o sinaptofisina y se incubó toda la noche en el agitador a 4 °C. El anticuerpo era policlonal y se generó frente a un péptido beta-amiloide 1-43 sintético en conejo. El anticuerpo primario se usó en una dilución final de 1 a 250 en TBS que contenía suero de cabra al 2 % y Triton X-100 al 10 %. Posteriormente, las muestras se lavaron con TBS 3 veces durante 10 minutos y se añadió un anticuerpo secundario durante 90 minutos en el agitador a 4 °C. El anticuerpo secundario fue una IgG anti-conejo biotinilada generada en cabra (Kit Vectastaína, IgG de Conejo; Vector Laboratories; No. de Cat.: PK-6101), y se usó en una dilución final de 1 a 60 en TBS que contenía suero de cabra al 1 % y Triton-X-100 al 10 %.
Después de lavar 3 veces durante 10 minutos en TBS, las muestras se incubaron en TBS que contenía una disolución de avidina al 3 % (Kit de Vectastaína ABC, IgG de Conejo; Vector Laboratories; No. de Cat.: PK-6101) y disolución de peroxidasa de rábano picante biotinilada al 3 % (Kit de Vectastaína ABC, IgG de Conejo; Vector Laboratories; No. de Cat.: PK-6101) durante 90 minutos a 4 °C en el agitador. Las muestras se lavaron entonces 3 veces en TBS durante 10 minutos y luego se tiñeron añadiendo disolución salina tamponada con fosfato que contenía disolución azul SG al 3 % (Kit de Peroxidasa Azul SG; Vector Laboratories; No. de Cat: SK-4700) y disolución de H2O2 al 3 % durante 5 minutos y luego se lavó de nuevo 3 veces durante 10 minutos con disolución salina tamponada con fosfato.
Para aumentar la tinción, las muestras se incubaron con ddH2O que contenía CuSO4 al 0,5 % (p/p) durante 5 minutos. Después de lavar 3 veces durante 10 minutos en ddH2O, las secciones de cerebro se colocaron en portaobjetos de vidrio recubiertos con silano con un cepillo fino donde pudieron secarse toda la noche. Finalmente, los portaobjetos se cubrieron con un cubreobjetos con medio de montaje acuático (Medio de Montaje VectaMountAQ; Vector Laboratories, No. de Cat.: H-5501). Como control sirvió un conjunto de muestras de un compañero de camada no transgénico de 17 meses de edad procesadas junto con las muestras experimentales.
Las secciones se fotografiaron bajo un microscopio (Zeiss, Alemania), se superpusieron disectores no sesgados aleatorizados en las imágenes de las secciones del cerebro y se analizaron usando un complemento de umbral múltiple con el software Image J (NIH, EE. UU.). Los datos fueron analizados usando ANOVA de una vía con ensayos poshoc de Bonferroni.
Modelo de ratón de Parkinson
Un modelo estándar para inducir síntomas similares al Parkinson en ratones es la inyección de la sustancia química (MPTP) (Li et al., 2009). Esta sustancia química daña o mata a las neuronas del cerebro que producen dopamina. Los ratones desarrollan alteraciones motoras y las neuronas dopaminérgicas del cerebro se reducen en número y función. La enzima tirosina hidroxilasa (TH) es necesaria para sintetizar la dopamina. Una pérdida de TH significa una pérdida de producción de dopamina (Harkavyi et al., 2008).
Se proporcionó a ratones C57BL/6 machos adultos la toxina dopaminérgica MPTP (20 mg/kg en 0,1 mL de PBS i.p. en intervalos de 2-h de 4 dosis de MPTP; Sigma) o vehículo (PBS) durante un día. Este tratamiento afecta selectivamente a las neuronas dopaminérgicas e induce síntomas similares al Parkinson en ratones. Un grupo no recibió MPTP como control no lesionado.
La dosis de péptido ensayada fue de 10 nmoles/kg de peso corporal. Los péptidos se administraron mediante una inyección intraperitoneal una vez al día durante 2 semanas. Se administraron inyecciones de disolución salina como control. Se inyectó a seis animales por grupo un péptido o un control de disolución salina.
Ensayo de control motor con rotarod
El rotarod consiste en una varilla giratoria que se acelera con el tiempo. Los ratones se colocan sobre la varilla y se evalúan las habilidades motoras acelerando la rotación. A medida que aumenta la rotación, los animales pierden el agarre y caen sobre un cojín ubicado debajo de la varilla. A los ratones se les administraron tres ensayos con intervalos de 45 minutos entre ensayos cada uno de 2 días consecutivos durante 3 semanas. Se registró el tiempo de resistencia de cada animal y se calculó el promedio. Los datos fueron analizados usando ANOVA de una vía con ensayos poshoc de Bonferroni.
Inmunohistoquímica para TH en la sustancia negra pars compacta y el cuerpo estriado
Se analizaron seis animales por grupo para determinar la expresión de tirosina hidroxilasa (TH), un marcador para la producción de dopamina. Se analizaron secciones coronarias del cerebro (20|jm) del cuerpo estriado (bregma 11 a 10,2) y SNpc (bregma 24,80 a 26,04) por inmunohistoquímica usando anticuerpos que reconocen TH.
Las secciones se cortaron en un criostato y se posfijaron en paraformaldehído al 4 %, se lavaron en PBS, se trataron con H2O2 al 0,3 % en metanol durante 20 min, y se lavaron de nuevo. La incubación con el anticuerpo frente a TH (1:800) fue a 48 °C toda la noche en PBS con Tween al 0,1 % y suero de cabra al 10 %. Las secciones se incubaron durante 1 hr a temperatura ambiente con anticuerpo secundario biotinilado diluido en PBS-Tween al 0,1 %. La tinción con DAB se realizó de acuerdo con las instrucciones del kit de Vectastaína ABC (Vector Laboratories). Para cada animal, se tiñeron tres secciones de tejido de un nivel del cuerpo estriado y se analizaron para determinar la inervación de fibras positiva para TH. Para conseguir un recuento de células TH representativo del SN completo, cada animal se analizó a cuatro y tres niveles rostrocaudales (bregma - 4,80 a - 6,04). Se cuantificaron dos secciones de tejido de cada nivel mediante inmunohistoquímica.
Los datos se analizaron usando ANOVA de una vía con ensayos poshoc de Bonferroni. Los resultados se ilustran en las Figuras 1 a 4.
Conclusión
Los resultados demuestran que los péptidos agonistas duales de GLP-1/GIP (DA4 y DA5) mostraron una neuroprotección superior sobre los análogos de GLP-1 y GIP individuales en modelos animales de enfermedad de Alzheimer y de Parkinson. Por tanto, los datos de los presentes ejemplos demuestran que ambos péptidos DA4 y DA5 pueden considerarse adecuados para su uso en el tratamiento y/o prevención de trastornos neurodegenerativos tales como, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer y/o la enfermedad de Parkinson.
Ejemplo 2
Los materiales y métodos del Ejemplo 2 son los mismos que los del Ejemplo 1, excepto cuando se indique. Los reactivos usados en el Ejemplo 2 solo incluyen anticuerpos frente a p-PI3Kp85, PI3Kp85, p-Akt (ser473), Akt, p-GSK3p (Y216), y GSK3p de Abcam, Inc. Cambridge, Reino Unido. El anticuerpo frente a p-tau (AT8) de Thermo Scientific USA, Anti-pactina de ratón, IgG anti-conejo, IgG anti-ratón, IgG anti-ratón-CY3, lisado de RIPA, kit de ensayo de proteínas BCA, disolución de tinción DAPI y agente anti-desintegración de la fluorescencia de Boster (Wuhan, China).
Ensayo de campo abierto para investigar la actividad locomotora y el comportamiento exploratorio.
Antes del experimento, los animales tuvieron 30 min de adaptación en el laboratorio. El campo abierto se dividió en 16 cuadrados de igual tamaño, definiendo 4 cuadrados en el medio como área central y el resto como área periférica. Cada ratón se colocó individualmente en el aparato (40cm * 40cm * 40cm) desde el centro durante 5 min y se registraron la distancia total, así como el porcentaje de tiempo en el centro por el sistema de software Smart 3.0 (Panlab, España) al mismo tiempo. El aparato se limpió con etanol al 70 % antes de cada ensayo.
Ensayo en el laberinto en Y para medir la memoria de trabajo en ratones con EA
La memoria de trabajo espacial se evaluó registrando el comportamiento de alternancia espontánea en un laberinto en Y. El laberinto estaba formado por tres brazos de 30 cm de largo, 7 cm de alto, 15 cm de ancho y los brazos convergían en un área central triangular equilátera. Cada ratón se colocó en el área triangular central y se le permitió moverse libremente por el laberinto durante una sesión de 8 minutos. Las entradas en el brazo total y el orden del brazo se registraron por el sistema de software Smart 3.0. La alternancia se definió como entradas sucesivas en los tres brazos, en conjuntos de tripletes superpuestos. El porcentaje de alternancia se calculó como la relación entre las alternancias reales y las posibles (definida como el número total de entradas de brazos menos 2) multiplicado por 100.
Ensayos en el laberinto de agua de Morris clásico y laberinto de agua de Morris inverso para medir el aprendizaje y la memoria espaciales.
El ensayo en el laberinto de agua de Morris clásico (MWM) se usó para investigar la memoria de referencia espacial del ratón. El laberinto de agua incluía principalmente una piscina de acero inoxidable y una plataforma en la piscina para escapar. Había varios puntos de referencia fijados a las paredes del laberinto de agua. La piscina se llenó con agua del grifo a 22 ± 2 °C. La primera fase fue la fase de ensayo de adquisición que consistió en cinco días de entrenamiento (días 1-5) y cuatro ensayos cada día. La piscina (diámetro, 120 cm; alto, 50 cm) se dividió en cuatro cuadrantes y la plataforma de escape (diámetro, 12 cm), escondida 1 cm debajo de la superficie del agua, se colocó en el centro del primer cuadrante. Cuatro puntos igualmente espaciados a lo largo de la circunferencia de la piscina sirvieron como la posición de partida, que se eligieron al azar en los cuatro ensayos por día. Cuando el ratón se subió a la plataforma o el tiempo llegó a 1 minuto, los registros se detuvieron. Las latencias de escape se registraron por el sistema de software Ethovision 3.0 (Noldus Information Technology, Países Bajos). La segunda fase fue la fase de ensayo de prueba. El día después de terminar la tarea de adquisición (día 6), se realizó un ensayo de prueba para evaluar la memoria espacial. Se retiró la plataforma de la piscina y se permitió que los animales nadasen libremente durante 1 min. Se registró el porcentaje de tiempo de nado en el cuadrante diana (el primer cuadrante) y se registró la frecuencia de cruce de la plataforma. El ensayo de MWM de inversión se usó para observar la capacidad de los ratones para reaprender y la flexibilidad cognitiva. Después del ensayo de MWM clásico, la plataforma se movió al cuadrante inverso (el tercer cuadrante) y los ratones se colocaron en el agua para un ensayo de adquisición de cuatro días similar y un ensayo de prueba de un día como se ha mencionado anteriormente. La tercera fase fue el ensayo de la plataforma visible. Eleva la plataforma 1 cm por encima del nivel del agua y los ratones se colocaron en dos cuadrantes seleccionados aleatoriamente. Se registró el tiempo de nado hasta la diana.
Mediciones en hipocampo in vivo de L-LTP en ratones con EA
Los ratones se anestesiaron con uretano (Sigma, Reino Unido, 1,5 g/kg, i.p.) y se colocaron en un aparato estereotáxico (RWD Life Science, China) para el registro de L-LTP. Eliminar por corte el cuero cabelludo y exponer el cráneo, se perforaron pequeños agujeros en un lado del cráneo (2,0 mm posterior a bregma y 1,5 mm lateral a la línea media).
Se insertó un par de electrodos paralelos de estimulación/registro (Sequim, WA, EE. UU.) en el colateral de Schaffer y el stratum radiatum en la región CA1 del hipocampo. Los fEPSP de línea base se obtuvieron mediante estímulos de ensayo en un intervalo de 30 segundos y se registraron las fEPSP de 30 minutos para observar si la transmisión sináptica subyacente se veía afectada. Después, se administraron dos estímulos de ensayo emparejados con un intervalo de 50 ms antes de HFS para inducir la facilitación de pulso emparejado (PPF). Se considera que el cambio en la relación de PPF, calculado dividiendo la pendiente del segundo fEPSP por la pendiente del primer fEPSP, está relacionado con los cambios en la liberación de neurotransmisores desde las terminales presinápticas. La L-LTP se indujo mediante tres conjuntos de estimulación de alta frecuencia (HFS) con un intervalo de 5 minutos. Cada conjunto de HFS incluye tres trenes de 20 pulsos con 5 ms de intervalo entre estímulos (200 Hz). Los fEPSP se registraron durante 180 minutos después de las HFS. Todos los eventos fueron registrados por un sistema de procesamiento de señales biológicas (Chengdu Instruments Ltd, China). Se comparó el porcentaje de cambio de fEPSP en cada grupo después de HFS.
Inmunotinción para la proteína tau fosforilada en el hipocampo
Después del registro in vivo de la L-LTP del hipocampo, los ratones se anestesiaron con hidrato de cloral (0,007ml/g) por inyección intraperitoneal y después el tejido cerebral se fijó con paraformaldehído durante 24 horas, después de lo cual el tejido se transfirió a una disolución de sacarosa al 30 % para su deshidratación. El tejido cerebral se recogió, se congeló a -80 °C y después se cortó en secciones con un grosor de 30 |jm, se colocó la sección congelada en PBS, se bloqueó con suero de cabra normal (Solarbio, Pekín, China), seguido de la adición del anticuerpo primario, anticuerpo secundario y DAPI. La proteína tau fosforilada se observó mediante microscopía de barrido láser confocal.
Transferencia Western para evaluar los niveles en hipocampo de PI3K/AKT/GSK3|3
Se diseccionaron los hipocampos de ratones y se homogeneizaron en reactivo de extracción de proteínas tisulares, y se midió la concentración de proteínas usando el kit de ensayo de proteínas BCA. Se usó un total de 50 jg de proteína de cada muestra. Las proteínas de la muestra se separaron en geles de poliacrilamida-SDS al 12 %. Después de esto, las proteínas se transfirieron a membranas de PVDF y se bloqueó la unión no específica con BSA al 5 %. Se usó un anticuerpo primario para incubar las membranas toda la noche a 4 °C, seguido de un anticuerpo secundario durante 2 h. La densidad óptica de la tira diana (p-PI3K, t-PI3K, p-AKT, t-AKT, p-GSK3|3 y t-GSK3|3) se analizó usando un sistema de procesamiento de imágenes en gel.
Los datos se analizaron usando ANOVA de una vía con ensayos poshoc de Bonferroni. Los resultados se ilustran en las Figuras 5 a 11.
Conclusión
Los resultados presentes en este estudio confirmaron los efectos protectores del péptido DA5 agonista dual de GLP-1/GIP sobre la función cognitiva y las características patológicas en ratones transgénicos APP/PS1 con EA. La neuroprotección del péptido DA5 puede estar asociada con la mejora de la plasticidad sináptica del hipocampo y la ruta de señalización de PI3K/AKT/GSK3|3. Los resultados anteriores sugieren que el péptido DA5 puede ser útil en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas y, en particular, puede ser beneficioso para los pacientes con EA, especialmente aquellos con DMT2 o hiperglucemia.
REFERENCIAS
Aviles-Olmos I, Dickson J, Kefalopoulou Z, Djamshidian A, Ell P, Soderlund T, Whitton P, Wyse R, Isaacs T, Lees A, Limousin P, Foltynie T (2013) Exenatide and the treatment of patients with Parkinson's disease. The Journal of clinical investigation 123:2730-6.
Aviles-Olmos I, Dickson J, Kefalopoulou Z, Djamshidian A, Kahan J, Fmedsci PE, Whitton P, Wyse R, Isaacs T, Lees A, Limousin P, Foltynie T (2014) Motor and Cognitive Advantages Persist 12 Months After Exenatide Exposure in Parkinson's Disease. Journal of Parkinson's disease 4:337-344.
Baggio LL, Drucker DJ (2007) Biology of incretins: GLP-1 and GIP. Gastroenterology 132:2131-2157.
Bertilsson G, Patrone C, Zachrisson O, Andersson A, Dannaeus K, Heidrich J, Kortesmaa J, Mercer A, Nielsen E, Ronnholm H, Wikstrom L (2008) Peptide hormone exendin-4 stimulates subventricular zone neurogenesis in the adult rodent brain and induces recovery in an animal model of Parkinson's disease. Journal of neuroscience research 86:326-338.
Blennow K, de Leon MJ, Zetterberg H (2006) Alzheimer's disease. Lancet 368:387-403.
Bliss TVP, Collingridge GL (1993) A synaptic model of memory: long-term potentiation in the hippocampus. Nature 361:31-39.
Bomfim TR, Forny-Germano L, Sathler LB, Brito-Moreira J, Houzel JC, Decker H, Silverman MA, Kazi H, Melo HM, McClean PL, Holscher C, Arnold SE, Talbot K, Klein WL, Munoz DP, Ferreira ST, De Felice FG (2012) An anti-diabetes agent protects the mouse brain from defective insulin signaling caused by Alzheimer's disease-associated Abeta oligomers. The Journal of clinical investigation 122:1339-53.
Campbell JE, Drucker DJ (2013) Pharmacology, physiology, and mechanisms of incretin hormone action. Cell metabolism 17:819-837.
Cereda E, Barichella M, Cassani E, Caccialanza R, Pezzoli G (2012) Clinical features of Parkinson disease when onset of diabetes came first: A case-control study. Neurology 78:1507-1511.
Christensen M, Knop FK, Holst JJ, Vilsboll T (2009) Lixisenatide, a novel GLP-1 receptor agonist for the treatment of type 2 diabetes mellitus. IDrugs: the investigational drugs journal 12:503-513.
Cleary JP, Walsh DM, Hofmeister JJ, Shankar GM, Kuskowski MA, Selkoe DJ, Ashe KH (2005) Natural oligomers of the amyloid-beta protein specifically disrupt cognitive function. Nature neuroscience 8:79-84.
Duffy AM, Holscher C (2013) The incretin analogue D-Ala(2)GIP reduces plaque load, astrogliosis and oxidative stress in an APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Neuroscience 228:294-300.
Elkinson S, Keating GM (2013) Lixisenatide: first global approval. Drugs 73:383-391.
Faivre E, Holscher C (2013a) D-Ala2GIP facilitated synaptic plasticity and reduces plaque load in aged wild type mice and in an Alzheimer's disease mouse model. Journal of Alzheimer's disease: JAD 35:267-283.
Faivre E, Holscher C (2013b) Neuroprotective effects of D-Ala2GIP on Alzheimer's disease biomarkers in an APP/PS1 mouse model. Alzheimer's research & therapy 5:20-28.
Faivre E, Gault VA, Thorens B, Holscher C (2011) Glucose-dependent insulinotropic polypeptide receptor knockout mice are impaired in learning, synaptic plasticity, and neurogenesis. J Neurophysiol 105:1574-1580.
Gault V, Holscher C (2008a) GLP-1 agonists facilitate hippocampal LTP and reverse the impairment of LTP induced by beta-amyloid. European journal of pharmacology 587:112-117.
Gault VA, Holscher C (2008b) Protease-resistant glucose-dependent insulinotropic polypeptide agonists facilitate hippocampal LTP and reverse the impairment of LTP induced by beta-amyloid. J Neurophysiol 99:1590-1595.
Gault VA, Flatt PR, O'Harte FP (2003) Glucose-dependent insulinotropic polypeptide analogues and their therapeutic potential for the treatment of obesity-diabetes. Biochemical and biophysical research communications 308:207-213. Gejl M, Gjedde A, Egefjord L, M0 ller A, Hansen SB, Vang K, Rodell AB, Braendgaard H, Gottrup H, Schacht A, M0 ller N, Brock B, Rungby J (2016) In Alzheimer's Disease, Six-Month Treatment with GLP-1 Analogue Prevents Decline of Brain Glucose Metabolism: Randomized, Placebo-Controlled, Double-Blind Clinical Trial. Frontiers in aging neuroscience 8:1-10.
Gengler S, McCIean P, McCurtin R, Gault V, Holscher C (2012) Val(8)GLP-1 rescues synaptic plasticity and reduces dense core plaques in APP/PS1 mice. Neurobiology of aging 33:265-276.
Han B, Hu J, Shen J, Gao Y, Lu Y, Wang T (2013) Neuroprotective effect of hydroxysafflor yellow A on 6-hydroxydopamineinduced Parkinson's disease in rats. European journal of pharmacology 714:83-88.
Harkavyi A, Abuirmeileh A, Lever R, Kingsbury AE, Biggs CS, Whitton PS (2008) Glucagon-like peptide 1 receptor stimulation reverses key deficits in distinct rodent models of Parkinson's disease. Journal of neuroinflammation 5:19(11-19).
Holscher C (2014) Insulin, incretins and other growth factors as potential novel treatments for Alzheimer's and Parkinson's diseases. Biochemical Society transactions 42:593-599.
Hunter K, Holscher C (2012) Drugs developed to treat diabetes, liraglutide and lixisenatide, cross the blood brain barrier and enhance neurogenesis. BMC neuroscience 13:33-38.
Irwin N, O'Harte F P, Gault VA, Green BD, Greer B, Harriott P, Bailey CJ, Flatt PR (2006) GIP(Lys(16)PAL) and GIP(Lys(37)PAL): Novel Long-Acting Acylated Analogues of Glucose-Dependent Insulinotropic Polypeptide with Improved Antidiabetic Potential. Journal of medicinal chemistry 49:1047-1054.
Ji C, Xue GF, Lijun C, Feng P, Li D, Li L, Li G, Holscher C (2015) A novel dual GLP-1 and GIP receptor agonist is neuroprotective in the MPTP mouse model of Parkinson's disease by increasing expression of BNDF. Brain research 1634:1-11.
LaFerla FM, Oddo S (2005) Alzheimer's disease: Abeta, tau and synaptic dysfunction. Trends Mol Med 11:170-176. Li Y, Liu W, Li L, Holscher C (2015) Neuroprotective effects of a GIP analogue in the MPTP Parkinson's disease mouse model. Neuropharmacology 101:255-263.
Li Y, Perry T, Kindy MS, Harvey BK, Tweedie D, Holloway HW, Powers K, Shen H, Egan JM, Sambamurti K, Brossi A, Lahiri DK, Mattson MP, Hoffer BJ, Wang Y, Greig NH (2009) GLP-1 receptor stimulation preserves primary cortical and dopaminergic neurons in cellular and rodent models of stroke and Parkinsonism. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106:1285-1290.
Liu L, Venkatraman SS, Yang YY, Guo K, Lu J, He B, Moochhala S, Kan L (2008) Polymeric micelles anchored with TAT for delivery of antibiotics across the blood-brain barrier. Biopolymers 90:617-623.
Liu W, Jalewa J, Sharma M, Li G, Li L, Holscher C (2015) Neuroprotective effects of lixisenatide and liraglutide in the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Neuroscience 303:42-50.
Lovshin JA, Drucker DJ (2009) Incretin-based therapies for type 2 diabetes mellitus. Nature reviews Endocrinology 5:262-269.
Luchsinger JA, Tang MX, Shea S, Mayeux R (2004) Hyperinsulinemia and risk of Alzheimer disease. Neurology 63:1187-1192.
McClean P, Holscher C (2014) Liraglutide can reverse memory impairment, synaptic loss and reduce plaque load in aged APP/PS1 mice, a model of Alzheimer's disease. Neuropharmacol 76:57-67.
McClean P, Parthsarathy V, Faivre E, Holscher C (2011) The diabetes drug Liraglutide prevents degenerative processes in a mouse model of Alzheimer's disease. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience 31:6587-6594.
McClean PL, Gault VA, Harriott P, Holscher C (2010) Glucagon-like peptide-1 analogues enhance synaptic plasticity in the brain: A link between diabetes and Alzheimer's disease. European journal of pharmacology 630:158-162.
Moloney AM, Griffin RJ, Timmons S, O'Connor R, Ravid R, O'Neill C (2010) Defects in IGF-1 receptor, insulin receptor and IRS-1/2 in Alzheimer's disease indicate possible resistance to IGF-1 and insulin signalling. Neurobiology of aging 31:224-243.
Morris JK, Bomhoff GL, Gorres BK, Davis VA, Kim J, Lee PP, Brooks WM, Gerhardt GA, Geiger PC, Stanford JA (2011) Insulin resistance impairs nigrostriatal dopamine function. Experimental neurology 231:171-180.
Nyberg J, Jacobsson C, Anderson MF, Eriksson PS (2007) Immunohistochemical distribution of glucose-dependent insulinotropic polypeptide in the adult rat brain. Journal of neuroscience research 85:2099-2119.
Ohara T, Doi Y, Ninomiya T, Hirakawa Y, Hata J, Iwaki T, Kanba S, Kiyohara Y (2011) Glucose tolerance status and risk of dementia in the community: The Hisayama Study. Neurology 77:1126-1134.
Radde R, Bolmont T, Kaeser SA, Coomaraswamy J, Lindau D, Stoltze L, Calhoun ME, Jaggi F, Wolburg H, Gengler S, Haass C, Ghetti B, Czech C, Holscher C, Mathews PM, Jucker M (2006) Abeta42-driven cerebral amyloidosis in transgenic mice reveals early and robust pathology. EMBO Rep 7:940-647.
Ristow M (2004) Neurodegenerative disorders associated with diabetes mellitus. J Mol Med 82: 510-529.
Scherrmann JM (2002) Drug delivery to brain via the blood-brain barrier. Vascul Pharmacol 38:349-354.
Shen J (2010) Impaired neurotransmitter release in Alzheimer's and Parkinson's diseases. Neuro-degenerative diseases 7:80-83.
Talbot K, Wang HY, Kazi H, Han LY, Bakshi KP, Stucky A, Fuino RL, Kawaguchi KR, Samoyedny AJ, Wilson RS, Arvanitakis Z, Schneider JA, Wolf BA, Bennett DA, Trojanowski JQ, Arnold SE (2012) Demonstrated brain insulin resistance in Alzheimer's disease patients is associated with IGF-1 resistance, IRS-1 dysregulation, and cognitive decline. The Journal of clinical investigation 122:1316-38.
Windisch M, Gschanes A, Hutter-Paier B (1998) Neurotrophic activities and therapeutic experience with a brain derived peptide preparation. Journal of neural transmission Supplementum 53:289-298.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un péptido coagonista de GIP/GLP-1 representado por la Fórmula general I:
Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-lle-Tyr-Leu-Asp-Lys-GIn-Ala-Ala-Aib-Glu-Phe-Val-Xaa24 -Trp-Leu-Leu-Ala-Gly-Y1 -Y2-R2
(I) (SEQ. ID. No. 1)
en donde Xaa24 es Asn;
Y1 es Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys (SEQ. ID. No. 7).
Y2 se selecciona de:
Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ. ID. No. 3); y
Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-Tyr (SEQ. ID. No 4); y
R2 es -NH2,
o un solvato o sal farmacéuticamente aceptable del péptido.
2. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ. ID. No. 11)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
3. El péptido según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de aminoácidos de:
YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ. ID. No. 12)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
4. El péptido según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a un aminoácido.
5. El péptido según la reivindicación 4, que comprende un resto hidrófilo unido covalentemente a (i) un aminoácido en la posición 24 o (ii) un aminoácido en la posición 39 o 40.
6. El péptido según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 5, en donde el resto hidrófilo es un polímero soluble en agua, en donde opcionalmente el polímero soluble en agua es un resto de polietilen glicol y opcionalmente es un resto de polietilen glicol que tiene un peso molecular de entre aproximadamente 20.000 Daltons y aproximadamente 60.000 Daltons.
7. El péptido según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el péptido está conjugado con un sustituyente lipófilo.
8. El péptido según la reivindicación 7, en donde el sustituyente lipófilo comprende un grupo acilo y es opcionalmente una molécula de ácido graso y además en donde opcionalmente la molécula de ácido graso se selecciona de un grupo octanoílo C-8, un grupo decanoílo C-10, un grupo lauroílo C-12, un grupo miristoílo C-14, un grupo palmitoílo C-16, un grupo estearoílo C-18 y un grupo acilo C-20.
9. El péptido según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en donde el sustituyente lipófilo está unido a un aminoácido en el extremo carboxilo del péptido.
10. El péptido según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, que comprende un espaciador que conjuga el sustituyente lipófilo con un residuo de aminoácido.
11. El péptido según la reivindicación 10, en donde el espaciador es un residuo de un aminoácido natural o no natural, en donde el espaciador comprende un residuo de Gly, Pro, Ala, Val, Leu, Ile, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Gln, Asn, a-Glu, Y-Glu, E-Lys, Asp, Ser, Thr, Gaba, Aib, p-aminohexonilo, 7-aminoheptanoílo, 8-aminooctanoílo, 9-aminononanoílo, 10-aminodecanoílo u 8-amino-3,6-dioxaoctanoílo.
12. El péptido según la reivindicación 11, en donde el espaciador es Y-Glu o en donde el espaciador es un dipéptido, en donde opcionalmente el espaciador comprende dos aminoácidos cargados negativamente y además opcionalmente en donde el espaciador es Y-Glu-Y-Glu.
13. El péptido según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico,
tal como un trastorno neurológico que está causado por, o asociado con, la deposición de placa de proteína beta-amiloide en un área del paciente,
o un trastorno neurológico causado por, o asociado con:
a) disfunción de la potenciación a largo plazo de la transmisión sináptica; o
b) inflamación.
14. El péptido según la reivindicación 13, que es para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico que afecta la función cognitiva, p. ej., demencia, accidente cerebrovascular, esquizofrenia y/o trastorno bipolar, en donde opcionalmente el trastorno es isquemia cerebral asociada con accidente cerebrovascular,
o para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno seleccionado de trastorno por estrés postraumático, epilepsia, síndrome de Tourette y alucinaciones; y procesos cognitivos disfuncionales, seleccionados opcionalmente de atención, cálculo, memoria, juicio, percepción, aprendizaje y razonamiento,
o para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurodegenerativo, p. ej., enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, neuropatía periférica, enfermedad de Huntington y enfermedad de Creutzfeldt-Jacob,
o para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de un trastorno neurológico seleccionado de enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, enfermedad de Alzheimer prodrómica y angiopatía amiloide clínica o preclínica (CAA).
15. Un péptido para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de Alzheimer clínica, el péptido que consiste en la siguiente secuencia:
(a) YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKKKKKK-NH2 (SEQ ID No. 11)
en donde X = ácido aminoisobutírico; o
(b) YXEGTFTSDYSIYLDKQAAXEFVNWLLAGGPSSGAPPPSKRRQRRKKRGY-NH2 (SEQ ID No. 12)
en donde X = ácido aminoisobutírico.
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201620611D0 (en) * 2016-12-05 2017-01-18 Univ Of Lancaster Treatment of neurological diseases
IL291876A (en) 2019-11-06 2022-06-01 Novo Nordisk As Receptor agonists in glp-1 type dementia
TW202140058A (zh) * 2020-01-30 2021-11-01 美商美國禮來大藥廠 提派肽（ｔｉｒｚｅｐａｔｉｄｅ）之治療用途
EP4185607A1 (en) 2020-07-22 2023-05-31 Novo Nordisk A/S Co-agonists at glp-1 and gip receptors suitable for oral delivery
JP2023543036A (ja) * 2020-09-25 2023-10-12 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド グルカゴン、ｇｌｐ－１及びｇｉｐ受容体の全てに対して活性を有する三重活性体またはその結合体の神経退行性疾患の治療用途
CN114617956B (zh) * 2020-12-10 2023-10-03 江苏中新医药有限公司 一种高效降糖的蛋白质药物
US12281149B2 (en) 2021-05-13 2025-04-22 Carmot Therapeutics, Inc. Modulators of G-protein coupled receptors
CN114042149B (zh) * 2021-12-03 2023-06-16 中国人民解放军空军军医大学 D-Ala2-GIP用于制备治疗焦虑症药物的应用
TW202330584A (zh) 2022-01-20 2023-08-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 前藥及其用途
WO2023151594A1 (en) * 2022-02-11 2023-08-17 Hangzhou Sciwind Biosciences Co., Ltd. A composition comprising gip receptor agonists and glp-1 receptor agonists and use thereof
EP4687947A1 (en) 2023-04-05 2026-02-11 Antag Therapeutics ApS Gip activity modulators and orthostatic intolerance
WO2025168003A1 (zh) * 2024-02-06 2025-08-14 上海市第四人民医院 一种治疗神经退行性疾病的药物

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2913056A1 (en) * 2006-01-05 2015-09-02 The University of Utah Research Foundation Methods and compositions related to improving properties of pharmacological agents targeting nervous system
CN102105159B (zh) 2008-06-17 2015-07-08 印第安纳大学研究及科技有限公司 基于gip的混合激动剂用于治疗代谢紊乱和肥胖症
CA2740316A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Angiochem Inc. Conjugates of glp-1 agonists and uses thereof
KR20120123443A (ko) 2010-01-27 2012-11-08 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 대사 장애 및 비만 치료용 글루카곤 길항제-ｇｉｐ 항진제 콘쥬게이트
RU2607033C2 (ru) 2010-09-28 2017-01-10 Ноно Инк. Пептиды nd2 и способы лечения неврологического заболевания
TWI559929B (en) * 2011-09-01 2016-12-01 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease
WO2013054110A2 (en) 2011-10-10 2013-04-18 University Of Lancaster Compositions for binding to amyloid proteins
IN2014MN02304A (es) 2012-05-03 2015-08-07 Zealand Pharma As
CN104583232B (zh) * 2012-06-21 2018-04-13 印第安纳大学研究及科技有限公司 展现gip受体活性的胰高血糖素类似物
CN106661126B (zh) 2014-05-28 2021-12-10 诺诺公司 TAT-NR2B9c的氯盐
GB2528436A (en) * 2014-07-15 2016-01-27 Lancaster Univ Business Entpr Ltd Treatment of neurological diseases
US20160143920A1 (en) * 2014-10-22 2016-05-26 Morris Notelovitz Composition, formulations and methods of making and using botanicals and natural compounds for the promotion of healthy brain aging
US20170112897A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Cedars-Sinai Medical Center Methods for treating brain insulin resistance
EP3368556B1 (en) 2015-10-28 2024-04-10 Tufts University Novel polypeptides with improved proteolytic stability, and methods of preparing and using same
WO2017210168A1 (en) 2016-06-02 2017-12-07 Indiana University Research And Technology Corporation Aqueously soluble and chemically stable depsi glucagon agonists
GB201620611D0 (en) * 2016-12-05 2017-01-18 Univ Of Lancaster Treatment of neurological diseases

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190101367A (ko) 2019-08-30
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