ES2841400T3 - Compuestos sustituidos de 6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3-diol como agentes diana de ASGPR - Google Patents

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Benjamin Thuma
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Abstract

Un compuesto de Fórmula (A) **(Ver fórmula)** en la que R1 es -Z-X-Y, -Z-Y o -X-Y en el que X es un engarce de cualquiera de las estructuras L1-L **(Ver fórmula)** en las que cada T está independientemente ausente o es alquileno, alquenileno o alquinileno, en el que uno o más grupos -CH2- del alquileno, alquenileno, o alquinileno se pueden reemplazar cada uno independientemente con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; cada Q está independientemente ausente o es C(O), C(O)-NR4, NR4-10 C(O),O-C(O)-NR4, NR4-C(O)-O, -CH2-, un heteroarilo o un grupo heteroátomo seleccionado entre O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4, en el que al menos dos átomos de carbono separan los grupos heteroátomos O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4 de cualquier otro grupo heteroátomo; cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C1-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y cada n es independientemente 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11,12,13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40, en el que si n es mayor de 1, cada T y cada Q de cada (T-Q-T-Q) se selecciona independientemente; Y es una secuencia de aminoácido o una secuencia de ácido nucleico, y Z es -C=C-, -CH=CH-, -CH2-, -CH2-O-, -C(O)-N(R4)-, -CH2-S-, -CH2-S(O)-, -CH2-S(O)2-, -CH2-S(O)2-N(R4)-, -C(O)- O-, -CH2-N(R4)-, -CH2-N(R4)-C(O)-, -CH2-N(R4)-S(O)2-, -CH2-N(R4)-C(O)-O-, -CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-, -CH2-OC( O)-, -CH2-O-C(O)-N(R4)-, -CH2-O-C(O)-O-, o arilo o heteroarilo, en el que el arilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido con R5; R2 es -OH, -N3, -N(R3)2, -N(R3)-C(O)-R3, -N(R3)-C(O)-N(R3)2, -N(R3)-C(O)-OR3, -N(R3)-S(O)2-R3, tetrazol o triazol, en el que el tetrazol y el triazol están opcionalmente sustituidos con R3; cada R3 es independientemente -H, -alquilo(C1-C5), (C1-C5) halo sustituido o cicloalquilo(C3-C6), en el que uno o más grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo pueden cada uno reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C1-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden cada uno reemplazarse con un heteroátomo independientemente seleccionado entre -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y cada R5 es independientemente -H, cicloalquilo(C3-C20) o alquilo(C1-C60) en el que de uno a seis grupos -CH2- del cicloalquilo o de uno a 20 grupos -CH2- del alquilo pueden cada uno reemplazarse con heteroátomos seleccionados independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los heteroátomos se separan por al menos dos átomos de carbono, y -CH3 del alquilo pueden reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y - S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos sustituidos de 6,8-dioxabicido[3.2.1]octano-2,3-diol como agentes diana de ASGPR
Campo de la invención
La presente invención se refiere a derivados sustituidos de 6,8-dioxabicido[3.2.1]octano-2,3-diol, estructuras cristalinas, composiciones farmacéuticas y los usos de los mismos como agentes dirigidos al receptor de asialoglucoproteína (ASGPR).
Antecedentes
La administración de fármacos es un problema grave para determinadas entidades moleculares y para determinados sitios de administración. Por ejemplo, la administración de moléculas grandes, tales como moléculas antisentido o ARNi, es difícil ya que dichos compuestos generalmente no pueden penetrar las membranas celulares. Por otra parte, las entidades moleculares que tienen carga muy negativa y son hidrófilas pueden tener una difusión restringida a través de las membranas celulares. Asimismo, la administración selectiva de fármacos a sitios de administración diana es con frecuencia difícil porque las moléculas para las que las células son permeables con frecuencia no son selectivas. Una solución para la difusión celular y la administración dirigida es la conjugación de fármacos con agentes de direccionamiento.
Los agentes de direccionamiento mejoran con frecuencia los atributos farmacéuticos, incluyendo la farmacocinética y la farmacodinámica. Los agentes de selección permiten que la carga útil del fármaco unida al agente de direccionamiento se distribuya eficazmente y sea captada por células específicas. Determinados azúcares, tales como galactosa, N-acetil galactosamina y otros derivados de galactosa, incluyendo los descritos por M.G. Finn y V. Mascitti y col. en el Journal of the American Chemical Society, 134, 1978 (2012) se han utilizado como agentes de direccionamiento para hepatocitos debido a la unión a receptores de asialoglucoproteína (ASGPR) que están presentes en la superficie de los hepatocitos. Sin embargo, dichos agentes de direccionamiento presentan en ocasiones algunos problemas farmacocinéticos o pueden presentar perfiles farmacocinéticos subóptimos.
Se realizan estudios de farmacocinética (PK) intravenosa/por vía oral (IV/PO) en modelos animales (en general, ratas, ratones, perros o primates no humanos) o en seres humanos durante ensayos clínicos para obtener información sobre cómo se absorbe, se reparte, se metaboliza y se elimina un fármaco en el cuerpo. En general, el fármaco se formula con metilcelulosa o polietilenglicol (PEG), azúcar y agua antes de la administración. Se toman muestras de sangre en diferentes momentos durante un máximo de 24 horas, habitualmente a través de la vena safena. Las muestras de sangre del brazo de dosificación se agrupan, se centrifugan y se recoge el plasma. El plasma se diluye de manera que las concentraciones estén dentro del intervalo dinámico de la curva patrón (1-5000 ng/ml). A continuación, las muestras de plasma se analizan para encontrar el analito de interés.
En consecuencia, todavía existe la necesidad de agentes de administración de fármacos que conduzcan a perfiles farmacocinéticos mejorados.
Sumario
La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (A)
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en la que
R1 es -Z-X-Y, -Z-Y o -X-Y en el que X es un engarce de cualquiera de las estructuras L1-L10
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en las que cada T está independientemente ausente o es alquileno, alquenileno o alquinileno, en el que uno o más grupos -CH2- del alquileno, alquenileno, o alquinileno se pueden reemplazar cada uno independientemente con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; cada Q está independientemente ausente o es C(O), C(O)-NR4, NR4-C(O),O-C(O)-NR4, NR4-C(O)-O, -CH2-, un heteroarilo o un grupo heteroátomo seleccionado entre O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4, en el que al menos dos átomos de carbono separan los grupos heteroátomos O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4 de cualquier otro grupo heteroátomo;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)-y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y cada n es independientemente 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11,12,13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40, en el que si n es mayor de 1, cada T y cada Q de cada (T-Q-T-Q) se selecciona independientemente;
Y es una secuencia de aminoácido o una secuencia de ácido nucleico, y
Z es -C=C-, -CH=CH-, -CH2-, -CH2-O-, -C(O)-N(R4)-, -CH2-S-, -CH2-S(O)-, -CH2-S(O)2-, -CH2-S(O)2-N(R4)-, -C(O)-O-, -CH2-N(R4)-, -CH2-N(R4)-C(O)-, -CH2-N(R4)-S(O)2-, -CH2-N(R4)-C(O)-O-, -CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-, -CH2-O-C(O)-, -CH2-O-C(O)-N(R4)-, -CH2-O-C(O)-O-, o arilo o heteroarilo, en el que el arilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido con R5;
R2 es -OH, -N3, -N(R3)2, -N(R3)-C(O)-R3, -N(R3)-C(O)-N(R3)2, -N(R3)-C(O)-OR3, - N(R3)-S(O)2-R3, tetrazol o triazol, en el que el tetrazol y el triazol están opcionalmente sustituidos con R3;
cada R3 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C5), (C1-C5) halo sustituido o cicloalquilo(C3-C6), en el que uno o más grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo pueden cada uno reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden cada uno reemplazarse con un heteroátomo independientemente seleccionado entre -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y
cada R5 es independientemente -H, cicloalquilo(C3-C2o) o alquilo(Ci-C6o) en el que de uno a seis grupos -CH2- del cicloalquilo o de uno a 20 grupos -CH2- del alquilo pueden cada uno reemplazarse con heteroátomos seleccionados independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los heteroátomos se separan por al menos dos átomos de carbono, y -CH3 del alquilo pueden reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la presente invención incluye un compuesto de Fórmula (A), como se ha definido anteriormente, en la que:
R1 es -Z-X-Y;
R2 es -OH, -N3, -N(R3)2, -N(R3)-C(O)-R3, -N(R3)-C(O)-N(R3)2, -N(R3)-C(O)-OR3, tetrazol o triazol, en el que el tetrazol y el triazol están opcionalmente sustituidos con R3;
cada R3 es independientemente -H, -alquilo(C1-C5), (C1-C5) halo sustituido o cicloalquilo(C3-C6), en el que un grupo -CH2- del alquilo o cicloalquilo pueden reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -O-, -S- y -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C1-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)-y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden sustituirse con uno a seis átomos halo; y
cada R5 es independientemente -H, cicloalquilo(C3-C2o) o alquilo(C1-C2o) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)-y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden sustituirse con uno a seis átomos halo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otro aspecto de la presente invención incluye composiciones farmacéuticas que comprenden (i) un compuesto de fórmula (A); y (ii) un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la presente invención incluye un compuesto según fórmula (A), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un procedimiento para tratar una enfermedad o afección hepática o una enfermedad o afección modulada por el hígado, incluyendo angioedema hereditario, tirosinemia familiar de tipo I, síndrome de Alagille, deficiencia de alfa-1-antitripsina, defectos en la síntesis y el metabolismo de los ácidos biliares, atresia biliar, hepatopatía por fibrosis quística, hepatitis neonatal idiopática, hepatopatías mitocondriales, colestasis intrahepática familiar progresiva, colangitis esclerosante primaria, amiloidosis por transtirretina, hemofilia, hipercolesterolemia familiar homocigota, hiperlipidemia, esteatohepatitis, esteatohepatitis no alcohólica (ENA), esteatosis hepática no alcohólica (EHNA), hiperglucemia como diabetes mellitus de tipo II y enfermedades que implican una producción de glucosa hepática anormalmente alta similar a la diabetes mellitus de tipo II.
Otro aspecto de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (B)
Figure imgf000005_0001
(B) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Otro aspecto de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (C)
Figure imgf000006_0001
(C) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Otro aspecto de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (D)
Figure imgf000006_0002
(D) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Un aspecto adicional de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (E)
Figure imgf000006_0003
(E) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Aún un aspecto adicional de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (F)
Figure imgf000007_0001
(F) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Aún un aspecto adicional de la presente divulgación incluye compuestos de Fórmula (G)
Figure imgf000007_0002
(G) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Aún un aspecto adicional de la presente divulgación es un compuesto de Fórmula (H)
Figure imgf000008_0001
(H) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 representa la estructura cristalina refinada para el compuesto del ejemplo 23 que se trazó utilizando el paquete de trazado SHELXTL con elipsoides dibujados a un nivel de confianza del 50 %.
Descripción detallada
La presente invención puede entenderse incluso más fácilmente con referencia a la siguiente descripción detallada de realizaciones ejemplares de la invención y los ejemplos incluidos en la misma.
Antes de que se desvelan y describan los presentes compuestos, composiciones y procedimientos, debe entenderse que esta invención no se limita a procedimientos sintéticos específicos de elaboración que, por supuesto, pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en el presente documento tiene el fin de describir únicamente realizaciones particulares y no pretende ser limitante. El plural y el singular deben tratarse como intercambiables, aparte de la indicación del número:
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo" se refiere a un radical hidrocarburo de fórmula general CnH2n+1. El radical alcano puede ser lineal o ramificado. Por ejemplo, la expresión "alquilo (C-i-Ca)" se refiere a un grupo alifático monovalente, lineal o ramificado que contiene de 1 a 6 átomos de carbono (por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, /-butilo, s-butilo, f-butilo, n-pentilo, 1 -metilbutilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, neopentilo, 3,3-dimetilpropilo, hexilo, 2-metilpentilo y similares). De forma similar, la porción alquilo (es decir, resto alquilo) de un grupo alcoxi, acilo (por ejemplo, alcanoilo), alquilamino, dialquilamino, alquilsulfonilo y alquiltio tienen la misma definición como anteriormente. Cuando se indica que está "opcionalmente sustituido", el radical alcano o el resto alquilo puede estar sin sustituir o sustituido con uno o más sustituyentes (generalmente, de uno a tres sustituyentes excepto en el caso de sustituyentes halógenos tales como percloro o perfluoroalquilos) seleccionados independientemente del grupo. de los sustituyentes enumerados a continuación en la definición de "sustituido". "Alquilo halo-sustituido" se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más átomos de halógeno (por ejemplo, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, perfluoroetilo, 1,1-difluoroetilo y similares).
De forma similar, "alquileno" se refiere a un radical hidrocarbonado divalente de fórmula general CnH2n que puede ser lineal o ramificado.
El término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado univalente que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono. El resto alquenilo puede ser lineal o ramificado. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen etilenilo. "Alquenileno", como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado divalente que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado.
El término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado univalente que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono. El resto alquinilo puede ser lineal o ramificado. "Alquinileno", como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo insaturado divalente que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono los cuales pueden ser lineales o ramificados.
El término "arilo" significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno, dos o tres anillos en el que tales anillos pueden estar condensados. Si los anillos están fusionados, uno de los anillos debe estar completamente insaturado y el anillo o anillos fusionados pueden estar completamente saturados, parcialmente insaturados o completamente insaturados. El término "fusionado" significa que un segundo anillo está presente (es decir, unido o formado) al tener dos átomos adyacentes en común (es decir, compartidos) con el primer anillo. El término "fusionado" es equivalente al término "condensado". El término "arilo" abarca radicales aromáticos, tales como bencilo, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, bifenilo, benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-onilo, 2,3-dihidro-1H indenilo y 1,2,3,4-tetrahidronaftalenilo.
El término "cicloalquilo" se refiere a anillos no aromáticos que están completamente hidrogenados y pueden existir como un solo anillo, anillo bicíclico o anillo espiro. A menos que se especifique lo contrario, el anillo carbocíclico es generalmente un anillo de 3 a 20 miembros. Por ejemplo, el cicloalquilo incluye grupos, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, norbornilo (biciclo[2,2.1]heptilo), biciclo[2,2.2]octilo y similares.
El término "heteroarilo" significa un sistema carbocíclico aromático que contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre y que tiene uno, dos o tres anillos en los que dichos anillos pueden estar fusionados, en los que condesado se define anteriormente. El término "heteroarilo" incluye pero sin limitación furilo, tienilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, piridiazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridin-2(1H)-onilo, piridazin-2(1H)-onilo, pirimidin-2(1H)-onilo, pirazin-2(1H)-onilo, imidazo[1,2-a]piridinilo, pirazolo[1,5-a]piridinilo, 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolinilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo, 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[6]piridinilo, 6,7-dihidro-5H-ciclopenta[c]piridinilo, 1,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazolilo, 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazolilo, 5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-d]pirazolilo, 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-6][1,2,4]triazolilo, 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidro-IH-indazolilo y 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazolilo.
La expresión "sistema de administración de fármacos" se refiere a un medio para administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un ligando e incluye, pero sin limitación polímeros, tales como PEG (Poli(etilenglicol) metil éter), PEG-PLA (Poli(etilenglicol) metil éter-poli(D,L lactida)), PEG-PLGA (Poli(etilenglicol) metil éter-poli(lactida-coglicolida)) y PEG-PCL (Poli(etilenglicol)-poli(£-caprolactona) metil éter), Puntos cuánticos (puntos Q), liposomas, inmunoliposomas, micelas, nanopartículas y nanogeles. Los sistemas de administración de fármacos ejemplares se describen en Tiwari, G., "Drug Delivery Systems: an Updated Review", Int J Pharm Investig 2 (1) pág. 2-11 (Jan 2012), que se incorpora en el presente documento como referencia para todos los fines.
La expresión "molécula pequeña" significa un compuesto orgánico que tiene un peso molecular entre 100 y 2000 daltons, incluyendo, pero sin limitación, compuestos sintéticos y productos naturales.
Un "anticuerpo" es una molécula de inmunoglobulina capaz de unirse de manera específica a una diana, tal como un hidrato de carbono, polinucleótido, lípido, polipéptido, etc., a través de al menos un sitio de reconocimiento de antígenos, ubicado en la región variable de la molécula de inmunoglobulina. Como se usa en el presente documento, el término abarca no solo anticuerpos policlonales o monoclonales intactos, sino también fragmentos de los mismos (tales como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), anticuerpos monocatenarios (ScFv) y de dominio) y proteínas de fusión que comprenden una parte de anticuerpo y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio de reconocimiento de antígenos. Un anticuerpo incluye un anticuerpo de cualquier clase, tal como IgG, IgA o IgM (o subclase de los mismos), y no es necesario que el anticuerpo sea de ninguna clase en particular. En función de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, se pueden asignar inmunoglobulinas a diferentes clases. Existen cinco clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varias de estas se pueden dividir adicionalmente en subclases (isotipos), p. ej., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que se corresponden con las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan alfa, delta, épsilon, gamma y mu, respectivamente. Las estructuras subunitarias y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas.
Como se usa en el presente documento, "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos a excepción de las posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en pequeñas cantidades. Los anticuerpos monoclonales son muy específicos, dirigiéndose contra un único sitio antigénico. Asimismo, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales, que incluyen normalmente diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante sobre el antígeno. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo como obtenido de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y no debe interpretarse que requiera la producción del anticuerpo mediante ningún procedimiento particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se utilizarán de acuerdo con la presente invención se pueden preparar mediante el procedimiento de hibridoma descrito por primera vez en Kohler y Milstein, 1975, Nature 256: 495, o se pueden preparar mediante procedimientos de ADN recombinante tales como los descritos en la patente de los Estados Unidos n.° 4.816.567. Los anticuerpos monoclonales también pueden aislarse de bibliotecas de fagos generadas utilizando las técnicas descritas en McCafferty y col., 1990, Nature 348: 552-554, por ejemplo.
Una "región variable" de un anticuerpo se refiere a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación. Como se conoce en la técnica, las regiones variables de la cadena pesada y ligera consisten cada una en cuatro regiones marco conservadas (FR) conectadas por tres regiones determinantes de complementariedad (CDR) que contienen regiones hipervariables. Las CDR en cada cadena se mantienen juntas en estrecha proximidad mediante las FR y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión a antígeno de los anticuerpos. Existen al menos dos técnicas para determinar las CDR: (1) un enfoque basado en la variabilidad de secuencia entre especies (es decir, Kabat y col. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)); y (2) un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos antígeno-anticuerpo (Al-lazikani y col., 1997, J. Molec. Biol.
273: 927-948). Como se usa en el presente documento, una CDR puede referirse a las CDR definidas por cualquiera de los enfoques o por una combinación de ambos enfoques.
Como se conoce en la técnica, una "región constante" de un anticuerpo se refiere a la región constante de la cadena ligera del anticuerpo o la región constante de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, alivia o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular o (iii) previene o retarda la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descritos en el presente documento.
El término "animal" se refiere a seres humanos (hombres o mujeres), animales de compañía (p. ej., perros, gatos y caballos), animales de origen alimentario, animales de zoológico, animales marinos, aves y otras especies animales similares. "Animales comestibles" se refiere a animales productores de alimento, tales como vacas, cerdos, ovejas y aves de corral.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición debe ser compatible química y/o toxicológicamente, con los otros ingredientes que comprenden una formulación, y/o con el mamífero que está siendo tratado con la misma.
Los términos "tratando", "tratar" o "tratamiento" abarcan tratamiento tanto preventivo, es decir, profiláctico, como paliativo.
Como se usa en el presente documento, "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye cualquier material que, cuando se combina con un principio activo, permite que el principio conserve actividad biológica y no reacciona con el sistema inmunológico del sujeto.
Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, cualquiera de los vehículos farmacéuticos convencionales, tales como una solución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones tales como emulsión de aceite/agua y diversos tipos de agentes humectantes. Los diluyentes preferidos para la administración en aerosol o parenteral son solución salina tamponada con fosfato (PBS) o solución salina normal (0,9 %). Las composiciones que comprenden dichos vehículos se formulan mediante procedimientos convencionales bien conocidos (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; y Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20a Ed., Mack Publishing, 2000).
La expresión "compuestos de la presente invención" (a menos que se identifique específicamente de otro modo) se refiere a compuestos de fórmula (A) y a todos los enantiómeros, tautómeros y compuestos marcados isotópicamente. Los hidratos y solvatos de los compuestos de la presente invención se consideran composiciones de la presente invención, en las que el compuesto está asociado con agua o disolvente, respectivamente. Los compuestos también pueden existir en uno o más estados cristalinos, es decir, como cocristales, polimorfos, o pueden existir como sólidos amorfos. Todas estas formas están abarcadas por las reivindicaciones.
El término "conector" es un grupo químico que conecta uno o más grupos químicos adicionales mediante al menos un enlace covalente. El conector puede incluir uno o más grupos espaciadores incluyendo, pero sin limitación, alquileno, alquenileno, alquinileno, alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo y similares. El conector puede ser de carga neutra, carga positiva o carga negativa. Además, el conector puede ser escindible de modo que el enlace covalente del conector que conecta el conector con otro grupo químico dentro del conector o que se une con el ligando se pueda romper o escindir en determinadas condiciones (véase, por ejemplo, H. Bruyere, y col., "Tuning the pH Sensitivities of Orthoester based compounds for Drug Delivery Applications by Simple Chemical Modification", Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 20, 2200 (2010) y A.A. Kislukhin y col., "Degradable Conjugates from Oxanorbornadiene Reagents", Journal of the American Chemical Society, 134, 6491 (2012). Estas condiciones incluyen el pH, la temperatura, la concentración de sal, un catalizador o una enzima. (G.M. Dubowchik y col., "Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin from Internalizing Immunoconjugates: Model Studies of Enzymatic Drug Release and Antigen-Specific In Vitro Anticancer Activity", Bioconjugate Chemistry, 13, 855 (2002), G. Leriche y col., "Cleavable Linkers in Chemical Biology", Bioorganic and Medicinal Chemistry, 20, 571 (2012), C.P.R. Hackenberger y col., "Chemoselective Ligation and Modification Strategies for Peptides and Proteins", Angewandte Chemie International Edition, 47, 10030 (2008); D.M. Patterson y col., "Finding the Right (Bioorthogonal) Chemistry", ACS Chemical Biology, 9, 592 (2014); C.A. Blencowe y col., "Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems", Polymer Chemistry, 2, 773 (2011).
En algunas realizaciones, el conector es escindible en condiciones intracelulares, de modo que la escisión del conector libera la unidad de ligando del compuesto de fórmula A en el entorno intracelular. En algunas realizaciones, el conector es escindible mediante un agente de escisión que está presente en el entorno intracelular (p. ej., dentro de un lisosoma o endosoma o caveola). Un ejemplo de un conector escindible es un conector escindido enzimáticamente, es decir, un conector de peptidilo que es escindido por una enzima peptidasa o proteasa intracelular, incluyendo, pero sin limitación, una proteasa lisosómica o endosómica. En algunas realizaciones, el conector de peptidilo tiene al menos dos aminoácidos de longitud o al menos tres aminoácidos de longitud. Los agentes de escisión enzimática incluyen catepsinas B y D y plasmina, todos los cuales se sabe que hidrolizan derivados de fármacos de dipéptidos lo que da lugar a la liberación del fármaco activo dentro de las células diana (véase Dubowchik, Gene M. y col., Cathepsin B-Labile Dipeptide Linkers for Lysosomal Release of Doxorubicin, Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869). Dichos conectores incluyen péptidos y dipéptidos, incluyendo los descritos en las publicaciones anteriores, que se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad para todos los fines.
Otros conectores escindibles se pueden escindir mediante reactivos nucleófilos/básicos, reactivos reductores, fotoirradiación y reactivos electrófilos/ácidos. (véase Leriche, Geoffray, y col., Cleavable Linkers in Chemical Biology, Bioorganic & Medicinal Chemistry 20 (2012) 571-582).
En otra realización más, la unidad conectora no se puede escindir y el compuesto de fórmula A libera el fármaco por degradación. Este procedimiento se denomina con frecuencia eliminación autoinmolativa, que actúa por ciclación o reacciones en cascada electrónicas impulsadas por entropía y termodinámica. Un ejemplo de un conector no escindible es una especie aromática polisustituida rica en electrones con un grupo amino o hidroxilo u otro grupo donador de electrones que se conjuga con un grupo saliente en una posición bencílica (véase Blencowe, Christopher A. y col., Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems, Polymer Chemistry, 2011,2, 773-790). Los conectores de eliminación inmolantes incluyen, pero sin limitación, conectores basados en anilina, Conectores basados en N-hidroxianilina, conectores basados en fenol, conectores basados en eliminación 1,8, enlazadores basados en ciclación (es decir, conectores basados en hidroxilo, conectores basados en amino y conectores basados en tiol), conjugados de polímero-dendrita y conjugados poliméricos (es decir, conjugados poliméricos de N-(2-hidroxipropil)-metacrilamida (HPMA), conjugados poliméricos de polietilenglicol (PEG)) (véase I. Tranoy-Opalinski, y col., Design of Self-Immolative Linkers for Tumour-Activated Prodrug Therapy, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, 2008, 8, 618-637; Blencowe, Christopher A. y col., Self-immolative Linkers in Polymeric Delivery Systems, Polymer Chemistry, 2011, 2, 773-790).
Normalmente, el conector no se escinde sustancialmente en el entorno extracelular. Como se usa en el presente documento, "no se escinde sustancialmente en el entorno extracelular" en el contexto de un conector significa que no más del 20 %, normalmente no más de aproximadamente el 15 %, más habitualmente no más de aproximadamente el 10 % e incluso más habitualmente no más de aproximadamente el 5 %, no más de aproximadamente el 3 % o no más de aproximadamente el 1 % de los conectores en una muestra de compuesto de fórmula A que incluye el grupo X-Y, se escinden cuando el compuesto está presente en un entorno extracelular (p. ej., plasma). Se puede determinar si un conector no se escinde sustancialmente en el entorno extracelular, por ejemplo, incubando el compuesto con plasma durante un periodo de tiempo predeterminado de hasta 24 horas (p. ej., 2, 4, 8, 16 o 24 horas) y cuantificando después la cantidad de ligando libre presente en el plasma.
El engarce puede ser un engarce ramificado monovalente, bivalente o trivalente. En una realización, el engarce es un puente disulfuro. En otra realización, el engarce es cualquiera de las estructuras L1-L10, que muestran el vínculo con Y y Z (en el que Y y Z representan grupos como se presenta en el resumen):
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En el que cada T está independientemente ausente o es alquileno, alquenileno o alquinileno, en el que uno o más grupos -CH2- del alquileno, alquenileno, o alquinileno se pueden reemplazar cada uno independientemente con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono;
cada Q está independientemente ausente o es C(O), C(O)-NR4, NR4-C(O),O-C(O)-NR4, NR4-C(O)-O, -CH2-, un heteroarilo o un grupo heteroátomo seleccionado entre O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4, en el que al menos dos átomos de carbono separan los grupos heteroátomos O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4 de cualquier otro grupo heteroátomo;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y
cada n es independientemente 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, o 40. En el que si n es mayor de 1, cada T y cada Q de cada (T-Q-T-Q) se selecciona independientemente.
En una realización, Q es un heteroarilo seleccionado entre 1H-1,2,3-triazolilo, piridinilo y 1,2,3,4-tetrazolilo.
La longitud del engarce podría ajustarse mediante el valor de n para optimizar la accesibilidad a la molécula diana. En algunos casos, la longitud óptima del engarce podría diseñarse analizando el sitio de interacción fármaco-objetivo o el espacio necesario para escindir adecuadamente el compuesto de Fórmula (A).
Por "material obtenido genéticamente" se entiende que se incluyen proteínas (incluyendo una proteína Cas9), plásmidos (incluyendo un plásmido que codifica la proteína Cas9 o una proteína cas9 y una secuencia guía), secuencias de ARN tales como ARNm, secuencias de ARNip y ribonucleoproteínas Cas9. La ribonucleoproteína Cas9 puede comprender dos elementos ligados o enlazados: (a) un primer elemento que comprende un elemento de reconocimiento que puede incluir una secuencia compañera de tracr y al menos una secuencia guía para la inserción cadena arriba de la secuencia compañera de tracr o una secuencia guía individual (ARNgi), en el que, cuando se expresa, la secuencia guía dirige la unión específica de secuencia de la ribonucleoproteína Cas9 a una secuencia diana en una célula eucariota, y (b) un segundo elemento que comprende una secuencia de proteína Cas9 y, opcionalmente, una o más secuencias de localización nuclear (SLN), tales como aproximadamente o más de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más SLN. En algunas realizaciones, el segundo elemento comprende aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 SLN en o cerca del extremo amino, el extremo carboxilo, o una combinación de estos (p. ej., una o más SLN en el extremo amino y una o más SLN en el extremo carboxilo). Cuando hay más de una SLN, cada una puede seleccionarse independientemente de las demás, de manera que una sola SLN puede estar presente en más de una copia y/o en combinación con una o más SLN adicionales presentes en una o más copias. Una "secuencia guía" es cualquier secuencia polinucleotídica que tenga suficiente complementariedad con una secuencia polinucleotídica diana para hibridar con la secuencia diana y la unión directa específica de secuencia de una ribonucleoproteína Cas9 a la secuencia diana. Se describen proteínas Cas9, plásmidos y ribonucleoproteínas ilustrativos en los documentos US20140068797, publicado el 6 de marzo de 2014; US2015031134, publicado el 29/01/2015; y US2015079681, publicado el 19/03/2015, todos los cuales se incorporan en el presente documento en su totalidad para todos los fines.
En algunas realizaciones, la secuencia guía comprende al menos 8 nucleótidos en los que el grado de complementariedad entre la secuencia guía y su secuencia diana correspondiente, cuando se alinean de manera óptima utilizando un algoritmo de alineación adecuado, es aproximadamente o más de aproximadamente 50 %, 60 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97,5 %, 99 % o más. La alineación óptima se puede determinar con el uso de cualquier algoritmo adecuado para alinear secuencias, ejemplos no limitantes de las cuales incluyen el algoritmo de Smith-Waterman, el algoritmo de Needleman-Wunsch, algoritmos basados en la Transformada de Burrows Wheeler (p. ej., el alineador de Burrows Wheeler), ClustalW, Clustal X, BLAT, Novoalign (Novocraft Technologies, ELAND (Illumina, San Diego, Calif.), SOAP (disponible en soap.genomics.org.cn) y Maq (disponible en maq.source-forge.net).
Las secuencias de la proteína Cas9 de diferentes especies incluyendo S. pneumoniae, S. pyogenes y S. thermophilus presentan una arquitectura conservada que tiene un dominio endonucleasa de orientación a HNH y un dominio endonucleasa RuvC/RNasaH dividido por lo que cada proteína Cas9 comparte 4 motivos primarios: motivos 1, 2 y 4, que son motivos tipo RuvC y motivo 3, que es un motivo HNH. Para Streptococcus pyogenes (SEQ ID No: 8), el motivo 1 es la SEQ ID NO: 260, el motivo 2 es la SEQ ID NO: 261, el motivo 3 es la SEQ iD NO: 262 y el motivo 4 es la SEQ ID NO: 263. Por lo tanto, por "secuencia de la proteína Cas9" se entiende un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 4 motivos dentro de la secuencia que tiene al menos aproximadamente 75 por ciento, al menos aproximadamente 80 por ciento, al menos aproximadamente 85 por ciento, al menos aproximadamente 90 por ciento, al menos aproximadamente 95 por ciento, al menos aproximadamente 99 por ciento o 100 por cien de identidad de secuencia de aminoácidos con los motivos 1, 2, 3 y 4 de la secuencia de aminoácidos de Cas9 de cualquiera de las SEQ ID NO: 260-263, o con las partes correspondientes en cualquiera de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEQ ID NO: 1-829. En otra realización, la secuencia de aminoácidos de Cas9 es al menos aproximadamente 75 por ciento, al menos aproximadamente 80 por ciento, al menos aproximadamente 85 por ciento, al menos aproximadamente 90 por ciento, al menos aproximadamente 95 por ciento, al menos aproximadamente 99 por ciento o 100 por cien de identidad de secuencia de aminoácidos con los aminoácidos en las posiciones 7 a 166 o 731 a 1003 de la SEQ ID NO: 8 o los aminoácidos correspondientes de los expuestos en las SEQ ID NO: 1-7, 9-829.
La secuencia de la proteína Cas9 puede modificarse de manera que se optimicen los codones para la expresión en una célula eucariota o para incluir modificaciones en la secuencia para influir en su función. En algunas realizaciones, la secuencia de la proteína Cas9 dirige la escisión de una o dos hebras de ADN en la ubicación de la secuencia diana, tal como con una nickasa Cas9 (es decir, Cas9-D10A) utilizada en combinación con secuencia o secuencias guía, p. ej., dos secuencias de guía, que se dirigen respectivamente a las hebras con sentido y antisentido de la diana de ADN, lo que permite cortar ambas hebras y que dan lugar a uniones terminales no homólogas. Cas9-D10A con una sola secuencia guía puede crear indeles. Sin embargo, en otras realizaciones, la secuencia de la proteína Cas9 carece de actividad de escisión de la hebra de ADN, tal como con el uso selectivo de dominios Cas catalíticamente inactivos (dCas). En otras realizaciones, la secuencia de la proteína Cas9 se modifica para permitir el enlace covalente con la proteína Cas9 o la ribonucleoproteína Cas9, incluyendo modificaciones de restos de lisina y cisteína. En otras realizaciones más, la ribonucleoproteína Cas9 es capaz de dirigir la escisión de las cadenas de a Rn como se describe en O/'Connell, Mitchell R., y col., Programmable RNA recognition and cleavage by CRISPR/Cas9, Nature, 2014, 516, p263-266.
Las modificaciones de la secuencia de la proteína Cas9 pueden incluir una mutación D1OA (de aspartato a alanina en la posición de aminoácido 10 de la SEQ ID NO: 8) (o la mutación correspondiente de cualquiera de las proteínas expuestas como las SEQ ID NO: 1-829) que puede escindir la hebra complementaria del ADN diana pero tiene una capacidad reducida para escindir la hebra no complementaria del ADN diana (dando lugar de este modo a una ruptura de una sola hebra en lugar de una ruptura de doble hebra). Otra modificación es una mutación H840A (de histidina a alanina en la posición de aminoácido 840 de la SEQ ID NO: 8) (o la mutación correspondiente de cualquiera de las proteínas expuestas como las SEQ ID NO: 1-829) que puede escindir la hebra no complementaria del ADN diana pero tiene una capacidad reducida para escindir la hebra complementaria del ADN diana (dando lugar de este modo a una ruptura de una sola hebra en lugar de una ruptura de doble hebra). El uso de la variante D1OA o H840A de Cas9 (o las mutaciones correspondientes en cualquiera de las proteínas expuestas como las SEQ ID NO: 1-829) puede alterar el resultado biológico esperado porque es mucho más probable que se produzca la unión de extremos no homólogos cuando están presentes rupturas de doble hebra en lugar de rupturas de una sola hebra.
Se pueden mutar otros restos para inactivar también una nucleasa particular del motivo 1,2, 3 o 4. Como ejemplos no limitantes, se pueden modificar los restos D10, G12, G17, E762, H840, N854, N863, H982, H983, A984, D986 y/o A987 (o las mutaciones correspondientes de cualquiera de las proteínas expuestas como las SEQ ID NO: 1-829). Las mutaciones pueden incluir sustituciones, adiciones y supresiones, o cualquier combinación de las mismas. En algunos casos, la mutación convierte el aminoácido mutado en otro aminoácido, tal como alanina. Otras modificaciones incluyen una modificación de base, una modificación de cadena principal, y/o una modificación de enlace internucleosídico.
Por "secuencia de localización nuclear" (SLN) se entiende una secuencia de aminoácidos que ayuda a la ribonucleoproteína Cas9 a entrar en el núcleo de una célula eucariota. En consecuencia, una SLN comprende normalmente una o más secuencias cortas de lisinas o argininas con carga positiva expuestas en la superficie de la proteína. Los ejemplos de SLN incluyen, pero sin limitación, una secuencia SLN derivada de: la SLN del antígeno T grande del virus SV40, que tiene la secuencia de aminoácidos PKKKRKV (SEQ ID NO: 830); la SLN de nucleoplasmina (p. ej., el SLN bipartito de nucleoplasmina con la secuencia KRPAATKKAGQAKKKK (SEQ ID NO: 831); la s Ln c-myc que tiene la secuencia de aminoácidos PAAKRVKLD (SEQ ID NO: 832) o RQRRNELKRSP (SEQ ID NO: 833); la SLN hRNPA1 M9 que tiene la secuencia NQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFAKPRNQGGY (SEQ ID NO: 834); la secuencia RMRIZFKNKGKDTAELRRRRVEVSVELRKAKKDEQILKRRNV (SEQ ID NO: 835) del dominio IBB de importina-alfa; las secuencias VSRKRPRP (SEQ ID NO: 836) y PPKKARED (SEQ ID NO: 837) de la proteína T de mioma; la secuencia PQPKKKPL (SEQ ID NO: 838) de p53 humana; la secuencia SALIKKKKKMAP (SEQ ID NO: 839) de c-abl IV de ratón; las secuencias DRLRR (SEQ ID NO: 840) y PKQKKRK (SEQ ID NO: 841) de NS1 del virus de la gripe; la secuencia RKLKKKIKKL (SEQ ID NO: 842) del antígeno delta del virus de la hepatitis; la secuencia REKKKFLKRR (SEQ ID NO: 843) de la proteína Mx1 de ratón; la secuencia KRKGDEVDGVDEVAKKKSKK (SEQ ID NO: 844) de la poli(ADP-ribosa) polimerasa humana; la secuencia RKCLQAGMNLEARKTKK (SEQ ID NO: 845) de los glucocorticoides receptores de hormonas esteroides (humanos); la secuencia MAPKKKRKVGIHRGVP (SEQ ID NO: 846); y la secuencia PKKKRKVEDPKKKRKVD (SEQ ID NO: 847).
En una realización de un compuesto de fórmula (A), R1 es Z-X-Y y R2 es -NH-C(O)-CH3.
En otra realización de un compuesto de fórmula (A), Y es una secuencia de ARN.
En otra realización más de un compuesto de fórmula (A), Y es una secuencia de ARNip.
En otra realización, un compuesto de fórmula (A) es capaz de unirse a un receptor presente en un hepatocito.
En otra realización, el receptor presente en un hepatocito es un receptor de asialoglucoproteína.
En una realización de la composición farmacéutica, dicho compuesto o dicha sal terapéuticamente aceptable del mismo está presente en una cantidad terapéuticamente eficaz.
Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse mediante vías sintéticas que incluyen procedimientos análogos a los bien conocidos en las técnicas químicas, en particular a la luz de la descripción contenida en el presente documento. Los materiales de partida están disponibles en general de fuentes comerciales tales como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) o se preparan fácilmente utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica (p. ej., preparados mediante procedimientos descritos en general en Louis F. Fieser y Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, Nueva York (ed. 1967-1999) o Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlín, incluyendo suplementos (también disponibles a través de la base de datos en línea de Beilstein)).
Para fines ilustrativos, los esquemas de reacción representados a continuación proporcionan vías potenciales para sintetizar los compuestos de la presente invención así como intermedios sintéticos clave. Para obtener una descripción más detallada de las etapas de reacción individuales, véase la sección de ejemplos a continuación. Los expertos en la materia apreciarán que se pueden usar otras vías sintéticas para sintetizar los compuestos de la invención. Aunque los materiales de partida y reactivos específicos se representan en los esquemas y se analizan a continuación, otros materiales de partida y reactivos pueden sustituirse fácilmente para proporcionar diversos derivados y/o condiciones de reacción. Además, muchos de los compuestos preparados por los procedimientos descritos a continuación pueden modificarse adicionalmente a la luz de esta divulgación usando química convencional bien conocida por los expertos en la materia.
En la preparación de compuestos de la presente invención, puede ser necesaria la protección de la funcionalidad remota (p. ej., amina primaria o secundaria) de los intermedios. La necesidad de dicha protección variará según la naturaleza de la funcionalidad remota y las condiciones de los procedimientos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuados (NH-Pg o NPg) incluyen acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benciloxicarbonilo (CBz), 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc) y ftalimida (Pht). Un "grupo protector de hidroxi" se refiere a un sustituyente de un grupo hidroxi que bloquea o protege la funcionalidad hidroxi. Los grupos protectores de hidroxilo adecuados (O-Pg) incluyen, por ejemplo, alilo, acetilo (Ac), sililo (como trimetilsililo (TMS) o terc-butildimetilsililo (TBS)), bencilo (Bn), para-metoxibencilo (p Mb ), tritilo (Tr), para-bromobenzoílo, para-nitrobenzoílo y similares (bencilideno, cetales cíclicos, ortoésteres, ortoamidas para la protección de 1,2- o 1,3-dioles). Un experto en la materia determinará fácilmente la necesidad de dicha protección. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 1991.
El Esquema 1 describe los procedimientos generales que se podrían usar para proporcionar compuestos de la presente invención. En la etapa 1 del Esquema 1, el intermedio sintético (I-a), que puede prepararse mediante los procedimientos descritos por H. Paulsen y M. Paal en Carbohydrate Research, 135, 53 (1984), se persilila en condiciones clásicas [usando cloruro de trimetilsililo y piridina a temperatura ambiente (aproximadamente 23 °C)] seguido de la escisión selectiva del grupo trimetil sililo que protege el alcohol primario (mediante tratamiento en condiciones básicas como carbonato de potasio en un disolvente alcohólico como metanol a una temperatura que varía de aproximadamente -10 grados Celsius a temperatura ambiente) para revelar intermedio de alcohol primario (I­ b). En la etapa 2 del Esquema 1, el grupo hidroximetileno adicional que se encuentra en el intermedio (I-c) se puede introducir en el glucósido mediante una oxidación de Parikh-Doering descrita por JR Parikh y William v. E. Doering en Journal of the American Chemical Society, 89, 5505-5507 (1967) seguido de tratamiento con una fuente de formaldehído (p. Ej., Solución de formaldehído en agua, paraformaldehído sólido) en presencia de un hidróxido de metal alcalino (por ejemplo, hidróxido sódico, alcóxido sódico) en agua o en un alcohol. disolvente a una temperatura que varía desde aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 60 grados Clesius. Esto se conoce como reacción aldol-Cannizzaro. También pueden usarse modificaciones de este procedimiento conocidas por los expertos en la materia. Por ejemplo, otros oxidantes, como el ácido 2-yodoxibenzoico estabilizado descrito por Ozanne, A. y col. en Organic Letters, 5, 2903 (2003), también se puede usar la oxidación de Swern descrita en Kanji Omura and Daniel Swern en Tetrahedron, 34, 1651 (1978), así como otros oxidantes conocidos por los expertos en la técnica. La secuencia del aldol Cannizzaro ha sido descrita por Robert Schaffer en el Journal of The American Chemical Society, 81, 5452 (1959) y Amigues, E.J., y col., En Tetrahedron, 63, 10042 (2007). Las condiciones experimentales de la etapa 2 del esquema 1 también promueven la escisión de los grupos trimetilsililo que protegen los alcoholes secundarios. En la etapa 3 del Esquema 1, el intermedio (J-c) se trata con un ácido orgánico o inorgánico (por ejemplo, ácido sulfúrico) o una resina ácida en un disolvente como el agua a una temperatura que varía desde aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 100 grados Clesius para producir el compuesto (1) de la presente invención. En la etapa 4 del Esquema 1, el compuesto (1) se puede tratar con un agente reductor conocido por reducir los grupos azido a la amina correspondiente (por ejemplo, hidrogenación catalítica mediada por metales de transición, uso de trifenilfosfina en agua en condiciones experimentales clásicas bien conocidas por aquellos experto en la materia). El tratamiento posterior en presencia de un agente acilante (por ejemplo, anhídrido acético o cloruro de acetilo en presencia de piridina o trietilamina en un disolvente como diclorometano o tetrahidrofurano a una temperatura que varía de 0 a 80 grados Celsius) proporciona el compuesto (2) de la presente invención. En la etapa 5 del Esquema 1, el tratamiento del compuesto (2) en presencia de un alcóxido (por ejemplo, metóxido sódico) en un disolvente, o una mezcla de disolventes, tal como un disolvente alcohólico o tetrahidrofurano a una temperatura que varía de aproximadamente 0 °C a la temperatura ambiente proporciona el compuesto (3) de la presente invención. Además, los compuestos así obtenidos pueden luego funcionalizarse fácilmente en otros compuestos reivindicados de la presente invención usando secuencias de manipulación de grupos funcionales y protectores bien conocidas por los expertos en la materia. Por tanto, en las etapas 6 y 7 del Esquema 1, los grupos hidroxilo secundarios en los compuestos (1) y (3) respectivamente pueden protegerse adicionalmente mediante un grupo protector adecuado (por ejemplo, como un cetal cíclico tras el tratamiento con 2,2-dimetoxipropano en condiciones ácidas). condiciones en un disolvente tal como N, N-dimetilformamida a una temperatura que varía desde aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 90 grados Celsius) para acceder a intermedios tales como (I-d) y (I-e). A su vez, usando transformaciones sintéticas y manipulaciones de grupos funcionales y protectores bien conocidas por los expertos en la materia, (I-d) y (I-e) se ceban para una funcionalización y derivatización adicionales del grupo hidroxilo primario para unir el engarce X deseado y el ligando Y de interés en producir los compuestos que contienen XY reivindicados en la presente invención. La retirada de los grupos protectores (por ejemplo, Pg), usando reactivos y condiciones bien conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, en el caso en el que los dos Pg forman un cetal cíclico tal como un acetónido, se puede retirar en condiciones ácidas usando un ácido como el ácido acético en un disolvente o una mezcla de disolventes, tales como el ácido acético, un disolvente alcohólico, agua, tetrahidrofurano a una temperatura que varía de temperatura ambiente a aproximadamente 80 grados Celsius), para revelar los grupos hidroxilo secundarios conduce a compuestos que contienen XY reivindicados en la presente invención. Por ejemplo, la alquilación del grupo hidroxilo primario en (I-e) puede conducir, después de la manipulación y retirada del grupo protector, a los correspondientes compuestos que contienen XY unidos por éter reivindicados en esta invención. También se puede acceder convenientemente a los compuestos que contienen XY ligados a éster, ligados a carbonato y ligados a carbamato reivindicados en la presente invención desde (3) o intermedio (I-e) usando los reactivos apropiados y bien conocidos por los expertos en la materia. La conversión del grupo hidroxilo primario en (I-e) en el triflato correspondiente (III-e-l) seguido de un desplazamiento nucleófilo con el nucleófilo apropiado puede conducir a, después de la manipulación y eliminación del grupo protector, el correspondiente XY unido por éter y tioéter que contienen compuestos reivindicados en esta invención. La oxidación del intermedio tioéter también puede conducir a los correspondientes compuestos que contienen XY unidos a sulfóxido y sulfona reivindicados en esta invención. Además, el desplazamiento del triflato primario en (III-e-1) por tioacetato potásico seguido de hidrólisis de tioéster puede proporcionar el tiol correspondiente (III-e-2) que proporciona el compuesto (IV-e-1) de la presente invención después de la manipulación del grupo protector y retirada; la alquilación adicional del tiol (III-e-2) y la manipulación y retirada del grupo protector también pueden producir compuestos que contienen XY unidos a tioéter reivindicados en esta invención. (III-e-2) también puede convertirse en el correspondiente cloruro de sulfonilo y tratarse con la amina apropiada para producir, después de la manipulación y eliminación del grupo protector, los compuestos de la presente invención que contienen XY unidos a sulfonamida. El desplazamiento del triflato primario (III-e-1) con azida sódica también puede producir el correspondiente compuesto que contiene azida (III-e-3) que, después de la manipulación y retirada del grupo protector, proporciona el compuesto (IV-e-2) del presente invención. La reducción del compuesto (III-e-3) puede producir la amina primaria correspondiente (III-e-4) preparada para una funcionalización adicional (por ejemplo, formación de enlace amida, aminación reductora, formación de sulfonamida, formación de urea, formación de carbamato, etc.) para enlazar el sustituyente XY y producen los compuestos reivindicados en esta invención después de la manipulación y retirada del grupo protector. (III-e-4) también puede producir el compuesto (IV-e-3) de la presente invención después de la manipulación y retirada del grupo protector. El tratamiento del intermedio azida anterior (III-e-3) con un reactivo o intermedio sintético que contiene alquino o nitrilo seguido de la manipulación y retirada del grupo protector en condiciones bien conocidas por los expertos en la materia también puede producir un triazol o tetrazol ligado a los compuestos que contienen XY reivindicados en esta invención, respectivamente. Oxidación del grupo hidroxilo primario en (I-e) al aldehído correspondiente (III-e-5) seguido de aminación reductora, en condiciones clásicas conocidas por los expertos en la materia, con la amina apropiada, u olefinación (tal como Wittig-, Horner-Wadsworth-Emmons-, Petterson, tipo Julia y modificación de las mismas) seguido de reducción de la olefina formada (usando, por ejemplo, una hidrogenación catalítica mediada por metales o una reducción mediada por diimidas bien conocida por los expertos en la materia), puede conducir a los compuestos deseados que contienen XY con enlaces de nitrógeno o carbono reivindicados en esta invención después de la manipulación del grupo funcional y la manipulación y retirada del grupo protector, respectivamente. La conversión del aldehído (III-e-5) en el alquino correspondiente (III-e-6) (usando una reacción de tipo Corey-Fuchs o un reactivo de tipo Seyferth-Gilbert) seguida de la manipulación y eliminación del grupo protector puede conducir al compuesto (IV-e-4) reivindicado en la presente invención. A su vez, el tratamiento de alquino (III-e-6) o (IV-e-4) con un reactivo o intermedio sintético que contiene azida seguido de la manipulación y retirada del grupo protector en condiciones bien conocidas por los expertos en la materia también puede producir un compuestos que contienen XY unidos a triazol reivindicados en esta invención. El alquino (MI-e-6) también puede servir como un intermedio sintético útil para acceder a otros compuestos reivindicados en esta invención tras el tratamiento con los reactivos apropiados bajo acoplamientos cruzados mediados por metales conocidos por los expertos en la materia (tal como una reacción tipo Sonogashira). La oxidación del grupo hidroxilo primario en (I-e) al ácido correspondiente (111-e-7) proporciona, usando transformaciones sintéticas bien conocidas por los expertos en la materia, acceso al compuesto que contiene XY unido a éster y amida reivindicado en este invención, después de la eliminación del grupo protector. La manipulación y eliminación de grupos protectores en (MI-e-7) también proporciona un fácil acceso al compuesto (IV-e-5) de la presente invención. La conversión de (IV-e-5) o (MI-e-7) en la amida primaria correspondiente en condiciones bien conocidas por los expertos en la técnica proporciona directamente el compuesto (IV-e-6) reivindicado en la presente invención o el compuesto (NI-e-8) que después de la manipulación y retirada del grupo protector da (IV-e-6). Además, la deshidratación de la funcionalidad amida en (MI-e-8) puede proporcionar el correspondiente nitrilo (MI-e-9) el cual después de la manipulación y eliminación del grupo funcional proporciona el compuesto (IV-e-7) de la presente invención. El desplazamiento del triflato primario (IlI-e-l) con un anión cianuro también puede producir el correspondiente compuesto que contiene nitrilo (III-e-10) el cual después de la manipulación y retirada del grupo protector proporciona el compuesto (IV-e-8) de la presente invención. A su vez, la hidrólisis del nitrilo en (IV-e-8) o (III-e-10) puede proporcionar acceso directo al ácido (IV-e-9) o al (III-e-11) el cual después de la manipulación del grupo protector y la retirada proporciona (IV-e-9). Compuestos que contienen alquinos tales como (MI-e-6)/(IV-e-4), compuestos que contienen amidas primarias, tales como (IN-e-8)/(IV-e-6), compuestos que contienen nitrilo, tales como (MI-e-9)/(IV-e-7)/(NI-e-10)/(IV-e-8), compuesto que contiene ácido, tales como (IN-e-7)/(IV-e-5)/(MI-e-11)/(IV-e-9), compuestos que contienen aldehído, tales como (III-e-5) también se puede funcionalizar y hacer reaccionar con el reactivo apropiado y el intermedio sintético en condiciones bien conocidas por los expertos en la técnica (y resumidas en J. A. Joule y K. Mills, Heterocyclic Chemistry, 5a edición, Wiley Ed., (2010); J. J. Li, Name Reactions in heterocyclic chemistry, Wiley, (2005); M. R. Grimmett Advances in Heterocyclic Chemistry, 27, 241, (1981); I. G. Turchi y col., Chemical Reviews, 75, 389, (1975); K. T. Potts, Chemical Reviews, 61, 87, (1961); R. H. Wiley, Organic Reactions, 6, 367, (1951); L. B. Clapp, Advances in Heterocyclic Chemistry, 20, 65, (1976); A. Hetzheim y col., Advances in Heterocyclic Chemistry, 7, 183, (1967); j. Sandstrom, Advances in Heterocyclic Chemistry, 9, 165, (1968); S. J. Wittenberger, Organic Preparations and Procedures International, 26, 499, (1994); M. G. Finn y col., Angewandte Chemie International Edition, 48, 9879, (2009)) para producir anillo adicional de 5 y 6 miembros (tal como isoxazol, isotiazol, pirazol, oxazol, tiazol, imidazol, 1,2,4-oxadiazol, 1,2,4-tiadiazol, 1,2,4-triazol, 1,3,4-oxadiazol, 1,3,4-tiadiazol, tetrazol, 1,2,3-triazol) compuestos que contienen XY enlazados reivindicados en esta invención. También se puede acceder a los compuestos que contienen XY unidos en anillo de arilo reivindicados en esta invención a partir de alquinos tales como (MI-e-6) y (IV-e-4), o un análogo heterosustituido de estos alquinos (es decir, reemplazando el alquino hidrógeno en (MI-e-6)/(IV-e-4) por OR4, N(R4)2, SR4; se puede acceder a estos compuestos usando condiciones y reactivos conocidos por los expertos en la materia), mediante una reacción de benzanulación conocida por los expertos en la técnica (tal como una benzanulación de tipo Danheiser o de tipo Dotz).
También se puede aplicar una química similar descrita anteriormente para (3) y (l-e) a (1) y al intermedio (l-d) para proporcionar compuestos adicionales reivindicados en la presente invención. Véase la sección de ejemplos para obtener más detalles.
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El uso de anhídrido trifluoroacético en la etapa 4 del Esquema 1 también puede proporcionar acceso a N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabicido[3.2.1]octan-4-il)-2,2,2-trifluoroacetamida, compuesto (24) de la presente invención.
Como alternativa, los compuestos de la presente invención, tales como (3), podrían prepararse mediante la secuencia descrita en el Esquema 2. Por lo tanto, el 2-acetamido-2-desoxi-a-D-galactopiranósido de metilo (Il-a) podría someterse a un protocolo de oxidación/Aldo-Cannizzaro, similar al ya descrito por AW Mazur en EP0341062 (1989), para producir el intermedio (ll-b). El tratamiento de (ll-b) en las condiciones ya descritas anteriormente y conocidas por los expertos en la materia en las etapas 3 (formación de cetal en puente), 4 (acetilación) y 5 (hidrólisis del éster) del esquema 1 proporciona el compuesto (3). También se puede acceder al compuesto (1) desde (l-a) (o su epímero en la posición anomérica) usando el mismo enfoque descrito en el Esquema 2.
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Particularmente cuando R1 contiene una cadena alifática, derivada de PEG, oligo o polímero derivado de PEG, los compuestos de la presente invención se pueden funcionalizar, hacer reaccionar y formular en condiciones conocidas por los expertos en la materia para acceder a compuestos adicionales reivindicados en la presente invención que se pueden usar e incorporar en la formulación de sistemas de administración de fármacos hepatoselectivos, tales como nanopartículas poliméricas PLGA-b-PEG biodegradables (ver, Erica Locatelli y col., Journal of Nanoparticle Research, 14, 1316, (2012)) y plataformas basadas en lípidos como liposomas, nanopartículas lipídicas, nanopartículas de lípidos de ácidos nucleicos estables (véase, Sara Falsini y col., Journal of Medicinal Chemistry, 57, 1138 (2014)).
Las mezclas diastereoméricas se pueden separar en sus diastereómeros individuales en función de sus diferencias físico-químicas mediante procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia, tales como por cromatografía y/o cristalización fraccionada, destilación, sublimación. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diastereomérica por reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo, auxiliar quiral tal como un alcohol quiral o cloruro de ácido de Mosher), separando los diastereómeros y convirtiendo (por ejemplo, hidrolizando) los diastereómeros individuales en los enantiómeros puros correspondientes. Además, algunos de los compuestos de la presente invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de esta invención. Los enantiómeros también se pueden separar mediante el uso de una columna de HPLC quiral (cromatografía líquida de alta presión).
También es posible que los compuestos intermedios y compuestos de la presente invención puedan existir en diferentes formas tautoméricas, y todas estas formas están incluidas dentro del ámbito de la invención. El término "tautómero" o "forma tautomérica" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles mediante una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros de protones (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones a través de la migración de un protón, como las isomerizaciones de cetoenol e imin-enamina. Un ejemplo específico de un tautómero de protón es el resto imidazol en el que el protón puede migrar entre los dos nitrógenos del anillo. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de enlace. El equilibrio entre la forma cerrada y abierta de algunos intermedios (y/o mezclas de intermedios) recuerda el procedimiento de mutarrotación que involucra aldosas, conocido por los expertos en la materia.
La presente invención también incluye compuestos de la presente invención marcados isotópicamente que son idénticos a los enumerados en el presente documento, pero en los que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, yodo y cloro, tales como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 123I, 125I y 36Cl, respectivamente.
Determinados compuestos marcados isotópicamente de la presente invención (por ejemplo, los marcados con 3H y 14C) son útiles en ensayos de distribución de tejido de compuesto y/o sustrato. Los isótopos tritiados (es decir, 3H) y carbono-14 (es decir, 14C) son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados como el deuterio (es decir, 2H) puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica (por ejemplo, vida media in vivo aumentada o requisitos de dosificación reducidos) y, por lo tanto, puede ser preferible en algunas circunstancias. Los isótopos emisores de positrones como 15O, 13N, 11C y 18F son útiles para los estudios de tomografía por emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación del sustrato. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención generalmente se pueden preparar siguiendo procedimientos análogos a los desvelados en los Esquemas y/o en los Ejemplos en el presente documento a continuación, sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente por un reactivo no marcado isotópicamente.
Los compuestos de la presente invención son útiles para tratar enfermedades, afecciones y/o trastornos; por lo tanto, otra realización de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención y un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de la presente invención (incluidas las composiciones y procedimientos usados en los mismos) también se pueden usar en la fabricación de un medicamento para las aplicaciones terapéuticas descritas en el presente documento.
Las composiciones de esta invención pueden estar en soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles). La forma preferida depende del modo de administración y la aplicación terapéutica previstos. Las composiciones típicas están en forma de soluciones inyectables o infusibles, tales como composiciones similares a las utilizadas para la inmunización pasiva de seres humanos. Un modo de administración es parenteral (por ejemplo, intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular, intradérmico e intraesternal) o mediante técnicas de infusión, en forma de suspensiones líquidas inyectables estériles o suspensiones oleógenas. Como apreciará el experto en la materia, la vía y/o el modo de administración variarán dependiendo de los resultados deseados. En una realización preferida, el anticuerpo se administra por infusión o inyección intravenosa. En otra realización preferida, el anticuerpo se administra por inyección intramuscular o subcutánea.
Las composiciones terapéuticas típicamente son estériles y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento.
La composición se puede formular como solución, microemulsión, dispersión o liposoma. Pueden prepararse soluciones inyectables estériles incorporando el compuesto de la presente invención en la cantidad requerida en un diluyente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización (por ejemplo, esterilización por filtro). En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. Tales suspensiones se pueden formular de acuerdo con la técnica conocida usando los agentes dispersantes adecuados de humectantes y agentes de suspensión u otros agentes aceptables. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, la solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro sódico. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este fin, puede emplearse cualquier aceite fijo suave, incluidos mono o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos poliinsaturados n-3 pueden encontrar uso en la preparación de inyectables.
En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación preferidos son el secado al vacío y el secado por congelación que produce un polvo del principio activo más cualquier ingrediente adicional deseado de una solución filtrada previamente estéril del mismo. Se puede mantener la fluidez adecuada de una solución, por ejemplo, mediante la utilización de un recubrimiento, tal como la lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de una dispersión y mediante el uso de tensioactivos.
La absorción prolongada de composiciones inyectables se puede lograr incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina o formulando la composición en formas de absorción prolongada tales como depósitos, liposomas, microesferas poliméricas, geles poliméricos e implantes.
Otros procedimientos para la administración del compuesto de la presente invención descritos en el presente documento incluyen parches dérmicos que liberan los medicamentos directamente en la piel de un sujeto. Tales parches pueden contener el compuesto de la presente invención en una solución líquida opcionalmente tamponada, disuelto y/o disperso en un adhesivo o disperso en un polímero.
El compuesto se puede administrar una vez, pero también se puede administrar varias veces. Por ejemplo, el compuesto puede administrarse desde una vez al día hasta una vez cada seis meses o más. La administración puede realizarse en un horario como tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, una vez cada dos días, una vez cada tres días, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez cada mes, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses y una vez cada seis meses.
El compuesto también se puede administrar de forma continua mediante una minibomba. El compuesto se puede administrar en el sitio de la parte del cuerpo enferma o en un sitio distante del sitio de la parte del cuerpo enferma. El compuesto se puede administrar una vez, al menos dos veces o al menos durante el período de tiempo hasta que la enfermedad sea tratada, paliada o curada. En general, el compuesto puede administrarse mientras esté presente la enfermedad. El compuesto se administraría normalmente como parte de una composición farmacéutica como se describe anteriormente.
Las composiciones de la invención pueden incluir una cantidad terapéuticamente eficaz o una cantidad profilácticamente eficaz del compuesto de la invención. Al preparar la composición, la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto presente en la composición se puede determinar, por ejemplo, teniendo en cuenta los volúmenes de dosis deseados y el modo o modos de administración, la naturaleza y gravedad de la afección a tratar, y la edad y el tamaño del sujeto.
Los intervalos de dosis ejemplares, no limitantes para la administración de las composiciones farmacéuticas de la presente invención a un sujeto son de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg (expresados en términos de miligramos (mg) de compuesto de fórmula (A) administrados por kilogramo (kg) de peso del sujeto), de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 1,0 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, de aproximadamente 5,0 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg o aproximadamente 15 mg/kg. Para los fines de la presente invención, un sujeto humano promedio pesa alrededor de 70 kg. También se pretende que los rangos intermedios a cualquiera de las dosificaciones citadas en el presente documento, por ejemplo, aproximadamente 0,02 mg/kg - 199 mg/kg, formen parte de esta invención. Por ejemplo, se pretende que se incluyan los intervalos de valores que usan una combinación de cualquiera de los valores enumerados como límites superior y/o inferior.
Los regímenes de dosificación también pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica) administrando varias dosis divididas a un sujeto a lo largo del tiempo o la dosis puede reducirse o aumentarse proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación.
La forma de unidad de dosificación, como se usa en el presente documento, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas unitarias de dosificación de la invención está dictada y depende directamente de (a) las características únicas del compuesto o porción y el efecto terapéutico o profiláctico particular que se desea lograr, y (b) las limitaciones inherentes a la técnica de preparar tal anticuerpo para el tratamiento de la sensibilidad en individuos.
Las composiciones líquidas de la presente invención se pueden preparar como formas de dosificación unitarias. Por ejemplo, una dosis unitaria por vial puede contener de 1 a 1000 mililitros (ml) de diferentes concentraciones del compuesto de Fórmula (A). En otras realizaciones, una dosis unitaria por vial puede contener aproximadamente 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 7 ml, 8 ml, 9 ml, 10 ml, 15 ml, 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml o 100 ml de diferentes concentraciones del compuesto de fórmula (A). Si es necesario, estas preparaciones se pueden ajustar a la concentración deseada agregando un diluyente estéril a cada vial. Las composiciones líquidas de la presente invención también se pueden preparar como formas de dosificación unitarias en bolsas o recipientes estériles, que son adecuados para la conexión a una línea o catéter de administración intravenosa.
Otra formulación típica se prepara mezclando un compuesto de la presente invención y un vehículo, diluyente o excipiente. Los vehículos, diluyentes y excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales, tales como carbohidratos, ceras, polímeros solubles en agua y/o hinchables, materiales hidrofílicos o hidrofóbicos, gelatina, aceites, disolventes, agua y similares. El vehículo, diluyente o excipiente particular usado dependerá de los medios y el fin para el que se aplica el compuesto de la presente invención. Los disolventes se seleccionan generalmente basándose en disolventes reconocidos por los expertos en la técnica como seguros (GRAS) para su administración a un mamífero. En general, los disolventes seguros son disolventes acuosos no tóxicos como el agua y otros disolventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los disolventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles (por ejemplo, PEG400, PEG300), etc. y mezclas de los mismos. Las formulaciones también pueden incluir uno o más tampones, agentes estabilizantes, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes opacantes, agentes deslizantes, ayudas procesales, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes aromatizantes y otros aditivos conocidos para proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o composición farmacéutica del mismo) o ayudar en la fabricación del producto farmacéutico (es decir, un medicamento).
Las formulaciones se pueden preparar usando procedimientos convencionales de disolución y mezcla. Por ejemplo, la sustancia farmacológica a granel (es decir, el compuesto de la presente invención o la forma estabilizada del compuesto (por ejemplo, un complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente complejante conocido)) se disuelve en un disolvente adecuado en presencia de uno o más de los excipientes descritos anteriormente. El compuesto de la presente invención se formula típicamente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para proporcionar al paciente un producto elegante y fácilmente manejable.
Las composiciones farmacéuticas también incluyen solvatos e hidratos de los compuestos de fórmula (I). El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto representado por la Fórmula (I) (incluidas sus sales farmacéuticamente aceptables) con una o más moléculas de disolvente. Tales moléculas de disolvente son las que se usan comúnmente en la técnica farmacéutica, que se sabe que son inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, etilenglicol y similares, El término "hidrato" se refiere al complejo en el que la molécula de disolvente es agua. Los solvatos y/o hidratos existen preferentemente en forma cristalina. Se pueden usar otros disolventes como solvatos intermedios en la preparación de solvatos más deseables, tales como el metanol, metil t-butil éter, acetato de etilo, macetato de etilo, (S)-propilenglicol, (R)-propilenglicol, 1,4-butin-diol y similares. Las formas cristalinas también pueden existir como complejos con otras moléculas pequeñas inocuas, tales como L-fenilalanina, L-prolina, ácido L-piroglutámico y similares, como cocristales o solvatos o hidratos del material cocristalino. Los solvatos, hidratos y compuestos co-cristalinos se pueden preparar usando los procedimientos descritos en la Publicación PCT n.° WO 08/002824, incorporada en el presente documento como referencia, u otros procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.
La composición (o formulación) farmacéutica para la aplicación puede empaquetarse de diversas formas dependiendo del procedimiento utilizado para administrar el fármaco. En general, un artículo para distribución incluye un recipiente en el que se ha depositado la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen materiales tales como botellas (plástico y vidrio), bolsitas, ampollas, bolsas de plástico, cilindros metálicos y similares. El recipiente también puede incluir un conjunto a prueba de manipulaciones para evitar el acceso indiscreto al contenido del paquete. Además, el contenedor tiene depositada sobre él una etiqueta que describe el contenido del contenedor. La etiqueta también puede incluir advertencias apropiadas.
Las realizaciones de la presente invención se ilustran mediante los siguientes ejemplos. Debe entenderse, sin embargo, que las realizaciones de la invención no se limitan a los detalles específicos de estos Ejemplos, ya que otras variaciones de los mismos serán conocidas, o evidentes a la luz de la presente divulgación, para un experto en la materia.
Ejemplos
A menos que se especifique lo contrario, los materiales de partida están generalmente disponibles de fuentes comerciales tales como Aldrich Chemicals Co. (Milwaukee, WI), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH), Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, Inglaterra), Tyger Scientific (Princeton, NJ), AstraZeneca Pharmaceuticals (Londres, Inglaterra) y Accela ChemBio (San Diego, CA).
Procedimientos experimentales generales
Los espectros de RMN se registraron en un Varian Unity™ 400 (disponible de Varian Inc., Palo Alto, CA) a temperatura ambiente a 400 MHz para el protón. Los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (delta) en relación con el disolvente residual como referencia interna. Las formas de los picos se indican de la siguiente manera: s, singlete; d, doblete; dd, doblete de doblete; t, triplete; c, cuartete; m, multiplete; sa o s a, singlete amplio; 2s, dos singletes; d a, doblete amplio. En algunos casos, solo se dan picos representativos de RMN 1H. La cromatografía en columna se realizó con gel de sílice Baker™ (40 micrómetros; J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) o gel de sílice 50 (EM Sciences™, Gibbstown, NJ) en columnas de vidrio o en columnas Flash 40 Biotage™ (ISC, Inc., Shelton, CT). Se realizó MPLC (cromatografía líquida de presión media) usando un sistema de purificación Biotage™ SP o un Combiflash® Companion® de Teledyne™ Isco™; se usó utilizó el cartucho Biotage™ SNAP KPsil o la sílice Redisep
Rf (de Teledyne™ Isco™) a baja presión de nitrógeno. Salvo que se indique lo contrario, todas las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera inerte de gas nitrógeno usando disolventes anhidros. Además, salvo que se indique lo contrario, todas las reacciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente (~ 23 °C). Al hacer TLC (cromatografía en capa fina), Rf se define como la relación de la distancia recorrida por el compuesto dividida por la distancia recorrida por el eluyente. Tr (tiempo de retención). Reactor de hidrogenación de flujo continuo H-Cube®: Un reactor de hidrogenación autónomo de sobremesa, que combina microquímica de flujo continuo con generación de hidrógeno endógeno bajo demanda y un sistema de cartucho de catalizador desechable.
CL/EM TOF (IEN): Todos los datos se recopilaron en un LC Agilent 1100 con detectores de espectrometría de masas
MSD TOF (modelo Agilent G1969A) que funcionan con una fuente de ionización por pulverización por electropulverización. El instrumento LC incluye una bomba binaria (modelo Agilent G1312A) con un límite de presión superior de 40 MPa conectado al inyector automático (modelo Agilent G1313A) que usa un ensayo externo para el envío de muestras. El compartimento de la columna (modelo Agilent G1316A) que está conectado a la matriz de diodos (modelo Agilent G1315A). La adquisición del instrumento y el manejo de datos se realizaron con Agilent MassHunter
TOF / Q-TOF B.02 (B11285) Patches 1.2.3. Condiciones de elución: Columna: No se usó columna. Inyección de flujo:
Volumen de inyección: 1,0 microlitos; Caudal: 0,5 ml/min. Tiempo de ejecución: 1,0 min; Disolvente: Metanol (ácido fórmico al 0,1 % y formiato amónico al 0,05%). Condiciones TOF: Fuente de ionización: Fuente de ionización por pulverización de electropulverización en modo positivo; Temp. gas: 325 C; Secado de gas: 6 l/min; Nebulizador: 50 psg; VCap: 3500V; Intervalo de masa 110-100 m/z; Tasa de adquisición: 0,99 espectros/s: Tiempo de adquisición;
1012,8 ms/espectro. Todos los disolventes eran de grado HPLC Chromasolv, de Sigma Aldrich (St. Louis, Missouri).
La mayoría de los productos químicos y tampones se adquirieron de Sigma Aldrich, todos con una pureza del 97 % o superior.
Procedimiento C ejecución de 1,5 minutos LRMS (espectroscopía de masas de baja resolución): Waters Acqity HSS
T3, 2,1 mmx50 mm, C18, 1,7 pm; Fase móvil: A: ácido fórmico al 0,1 % en agua (v/v); Fase móvil B: ácido fórmico al
0,1 % en acetonitrilo (v/v); Flujo-1,25 ml/minuto; Condiciones iniciales: A-95%:B-5%; mantener al inicio a 0,0-0,1 minuto; Rampa lineal a A-5 %: B-95 % durante 0,1 -1,0 minutos; mantener a A-5 %:B-95 % de 1,0-1,1 minutos; volv a las condiciones iniciales 1,1-1,5 minutos.
Procedimiento C ejecución de 3,0 minutos LRMS (espectroscopía de masas de baja resolución): Waters Acqity HSS
T3, 2,1 mmx50 mm, C18, 1,7 pm; Fase móvil: A: ácido fórmico al 0,1 % en agua (v/v); Fase móvil B: ácido fórmico al
0,1 % en acetonitrilo (v/v); Flujo-1,25 ml/minuto; Condiciones iniciales: A-95%:B-5%; mantener al inicio a 0,0-0,1 minuto; Rampa lineal a A-5 %: B-95 % durante 0,1-2,6 minutos; mantener a A-5 %:B-95 % de 2,6-2,95 minutos; volver a las condiciones iniciales 2,95-3,0 minutos.
Procedimientos
((2R,3S,4R,5R,6R)-5-azido-6-metoxi-3,4-bis((trimetilsilil)oxi)tetrahidro-2H-piran-2-il)metanol (I-b)
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Se disolvió (2R,3R,4R,5R,6R)-5-azido-2-(hidroximetil)-6-metoxitetrahidro-2H-piran-3,4-diol (I-a) (5 g, 23 mmol) en piridina anhidra (100 ml) y se añadió cloruro de trimetilsililo (17,5 ml, 139 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente y después se evaporó piridina. El residuo se recogió en acetato de etilo/agua.
La fase acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para dar 9,9 g (rendimiento del 98 %) del correspondiente compuesto persililado en forma de un aceite de color amarillo. El material se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. A una solución del compuesto persililado anterior
(9,71 g, 22,3 mmol) en metanol anhidro (45 ml) enfriado a 0 grados Celsius, se le añadieron 9,06 ml de una solución de carbonato potásico en metanol (0,032 M). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora y después se neutralizó mediante la adición de 17 microlitros de ácido acético. El disolvente se evaporó y el residuo se disolvió en acetato de etilo. Se añadió agua y la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo al 30 %/hexanos) sobre gel de sílice para proporcionar 6,77 g (84 %) de (I-b) en forma de un aceite. [a]D7 (c 1, cloroformo); RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) delta ppm 0,14 (s, 9H), 0,20 (s, 9H), 1,80 (s a, 1H), 3,36-3,42 (m, 1H), 3,45 (dd, J = 7,3, 4,6 Hz, 1H), 3,54 (dd, J = 10,0, 8,0 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,65 (dd, J = 11,3, 4,7 Hz, 1H), 3,77 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 11,2, 7,3 Hz, 1H), 4,14 (d, J=8,0 Hz, 1H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d) delta ppm 0,27 (3C), 0,6 (3C), 57,3, 62,6, 64,0, 71,1,73,7, 75,2, 103,4; HRMS (IEN) calc. para C13H29NsO5SÍ2 (m/z) [M Na]+ 386,1538, encontrado 386,1539.
(3R,4R,5R,6R)-5-azido-2,2-bis(hidroximetil)-6-metoxitetrahidro-2H-piran-3,4-diol (I-c)
Figure imgf000024_0001
Se disolvió (I-b) (7,73 g, 21,3 mmol) en diclorometano (70 ml). Se añadieron sulfóxido de dimetilo (10,6 ml, 150 mmol) y trietilamina (9 ml, 60 mmol) y la mezcla de reacción se enfrió a 0 grados Celsius. Se añadió un complejo de trióxido de azufre piridina (10,2 g, 64 mmol) y la mezcla se agitó a 0 grados Celsius durante 1 hora, y después se calentó hasta una temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se interrumpió con una solución saturada de cloruro sódico y se diluyó con diclorometano. La fase acuosa se extrajo 3 veces con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada acuosa de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron para proporcionar el aldehído correspondiente. El aldehído se disolvió en etanol anhidro (106 ml) y se añadieron polvo de paraformaldehído (40,3 g, 425 mmol) seguido de una solución al 21 % en peso de etóxido sódico en etanol (16 ml, 42,5 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas y después se evaporó etanol. A la mezcla en bruto se le añadió metanol y el sólido se filtró y se aclaró a fondo con metanol. Al filtrado que contenía el producto deseado se le añadió gel de sílice y se evaporó metanol. La carga seca resultante se secó a alto vacío y se cargó en una columna. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 10 %/diclorometano) sobre gel de sílice para dar 3,03 g de (I-c) en forma de un aceite incoloro (57 % en 2 etapas). [a]D -20 (c 1,25, metanol); RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 3,46 (dd, J=10,2, 8,1 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,64-3,80 (m, 5H), 3,80-3,83 (m, 1H), 4,54 (d, J=8,0 Hz, 1 H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-d4) delta ppm 57,2, 61,2, 63,6, 65,9, 69,9, 71,2, 80,9, 101,2; HRMS (IEN) calc. para C8H15N3O6 (m/z) [M Na]+ 272,0853, encontrado 272,0856.
N-((3aR,4S,7S,8R,8aR)-4-(hidroximetil)-2,2-dimetilhexahidro-4,7-epoxi[1,3]dioxolo[4,5-d]oxepin-8-il)acetamida (I-e-1)
Figure imgf000024_0002
A una solución del compuesto (3) (230 mg, 0,986 mmol) en 6,6 ml de dimetilformamida, se le añadió 2,2-dimetoxipropano (0,8 ml, 6 mmol) seguido de ácido (+/-)-alcanfor-10-sulfónico (101 mg, 0,435 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 70 grados Celsius durante 24 horas, se enfrió hasta a temperatura ambiente y después, se añadió metanol (1,2 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y después, se neutralizó con trietilamina (56 microlitros). El disolvente se evaporó y el residuo se coevaporó 3 veces con tolueno. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (15/1 acetato de etilo/metanol) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto (I-e-1) en forma de un sólido de color blanco (246 mg, rendimiento del 91 %). p.f.: 164,7-166,0 °C; [a]D 147 (c 1, metanol); RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 1,34 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 3,77 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,83 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,91-3,94 (m, 1H), 4,14-4,19 (m, 1H), 4,29 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,23 (d, J=2,0 Hz, 1H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-d4) delta ppm 22,7, 26,9, 28,5, 56,8, 61,9, 70,2, 76,1, 76,6, 83,0, 102,6, 112,5, 173,6; HRMS (IEN) calc. para C12H19NO6 (m/z) [M H]+274,1285, encontrado 274,1274.
(1S,2R,3R,4R,5S)-4-azido-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3-diol (1)
Figure imgf000025_0001
El tetra-ol (I-c) (3 g, 12 mmol) se disolvió en agua (40 ml) y se añadió ácido sulfúrico concentrado (6,7 ml). La mezcla de reacción se agitó a 100 grados Celsius durante 40 horas, se enfrió a temperatura ambiente, y después se neutralizó mediante la adición de hidróxido de amonio concentrado. Se evaporó agua y se añadió metanol a la mezcla resultante. El sólido se filtró y se aclaró a fondo con metanol. Al filtrado que contenía el producto deseado se le añadió gel de sílice y se evaporó metanol. La carga seca resultante se secó a alto vacío y se cargó en una columna. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 10 %/diclorometano) sobre gel de sílice para dar 2,2 g (84 %) de (1) en forma de un aceite incoloro. [a]D 160 (c 1,1, metanol); RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 3,35 (dd, J=9,2, 1,6 Hz, 1H), 3,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,83-3,89 (m, 2H), 3,90 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J=1,4 Hz, 1H); RMN 13C (100 MHz, M ETANO L^) delta ppm 61,9, 66,1, 69,5, 69,6, 71,0, 85,3, 102,7; HRMS (IEN) calc. para C7H11N3O5 (m/z) [M Na]+ 240,0591, encontrado 240,0596.
diacetato de (1R,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-1-(acetoximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3-diilo (2)
Figure imgf000025_0002
En un matraz de fondo redondo, se disolvió el compuesto (1) (1,93 g, 8,9 mmol) en etanol (45 ml) y el sistema se lavó abundantemente con nitrógeno. Se añadió catalizador de Lindlar (1,89 g, 0,9 mmol) y el sistema se lavó abundantemente con nitrógeno y después con hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de hidrógeno (usando un globo) durante 24 horas. El paladio se filtró usando una membrana de nailón y se aclaró a fondo con metanol y después agua. El disolvente se evaporó y el residuo se disolvió en agua y se liofilizó. Después, el material en bruto resultante se disolvió en piridina (40 ml) y se añadió anhídrido acético (9 ml, 100 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas y la piridina se evaporó. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con una solución saturada de bicarbonato sódico. La fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo y después las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada acuosa de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 3 %/diclorometano) sobre gel de sílice para dar (2) (3,19 g, cuant.). [a]o 75 (c 1, cloroformo); RMN 1H (400 MHz, M ETANO L^) delta ppm 1,95 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 3,75 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,06 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,20 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 5,13 (dd, J = 10,4, 4,4 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 5,38 (d, J=4,3 Hz, 1H); RMN 13C (100 MHz, M ETANO L^) delta ppm 20,6, 20,7 (2C), 22,6, 53,3, 63,0, 68,9, 69,1, 70,3, 82,6, 103,0, 171,8, 171,9, 172,1, 173,8; HRMS (IEN) calc. para C15H21NO9 (m/z) [M H]+ 360,1289, encontrado 360,1290.
N-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-il)acetamida (3)
Figure imgf000025_0003
Se disolvió el compuesto (2) (3,19 g, 8,88 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) y se añadió metóxido sódico 0,5 M en metanol (100 ml, 50 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas y después se neutralizó mediante la adición de resina H+ Amberlyte™ IR-120. La resina se filtró y el disolvente se evaporó para dar 1,71 g de (3) en forma de un sólido de color blanco (83%). p.f.: 175,7-176,1 °C; [a]o 164 (c 1, metanol); RMN 1H (400 MHz, METANOLd) delta ppm 1,99 (s, 3H), 3,68 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,70-3,73 (m, 1H), 3,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 9,9, 1,1 Hz, 1H), 5,22 (d, J=1,3 Hz, 1 H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-d4) delta ppm 22,7, 56,4, 62,1,69,2, 69,3, 70,6, 85,1, 102,8, 174,1; HRMS (IEN) calc. para CgH-,5NO6 (m/z) [M H]+ 234,0972, encontrado 234,0974.
(4-((2-((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridecan 13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)etil)amino)-4-oxobutil)carbamato (4), bencilo (4-((1,3-bis((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabicido[3.2.1]octan-1-N)-2,5,8,11 - tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)propan-2-il)amino)-4-oxobutil)carbamato de bencilo (5), (4-((1,3- bis((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-2.3- dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-lH-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)-2-(((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-lH-1.2.3- triazol-4-il)metoxi)metil)propan-2-il)amino)-4-oxobutil)carbamato de bencilo (6)
Figure imgf000026_0001
En un vial de microondas se disolvió el compuesto (I-e-1) (50 mg, 0,18 mmol) en 1 ml de diclorometano. se añadió hidróxido sódico acuoso 12,5 M (0,5 ml) seguido de 15-corona-5-éter (5 microlitros, 0,02 mmol) y 1-azido-2-(2-(2-(2-yodoetoxi)etoxi)etoxi)etano (descrito en J. Am. Chem. Soc. 132, 1523 (2010)) (301 mg, 0,915 mmol). La mezcla de reacción se agitó vigorosamente a 55 °C durante 24 horas. La fase orgánica se retiró y se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 5 %/acetato de etilo) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto (I-e-2) en forma de un aceite (52 mg, rendimiento del 60 %). [a]D 74 (c 1, cloroformo); RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 1,34 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 3,37 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 3,62-3,71 (m, 14H), 3,75-3,80 (m, 2H), 3,86 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 3,90 - 3,97 (m, 2H), 4,12-4,19 (m, 1H), 4,31 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 5,23 (d, J=2,0 Hz, 1H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-d4) delta ppm 22,7, 26,9, 28,5, 51,9, 56,7, 70,9, 71,1, 71,3, 71,6, 71,7, 71,8, 71,81, 71,82, 72,7, 76,1,76,5, 82,1, 102,4, 112,4, 173,6; HRMS (IEN) calc. para C20H34N4O9 (m/z) [M H]+ 475,2399, encontrado 475,2386.
Figure imgf000026_0002
(l-f-1) n = 1
(l-f-2) n = 2
(l-f-3) n =3
Se conoce el Intermedio (I-f-1) y se describe en WO06120545.
El Intermedio (I-f-2) puede sintetizarse como sigue a continuación: A una solución de Boc-serinol (1000 mg, 5,1 mmol) en tetrahidrofurano (21 ml) se le añadió a temperatura ambiente yoduro de tetrabutilamonio (287 mg, 0,76 mmol), yoduro sódico (153 mg, 1,02 mmol) y bromuro de propargilo (1,8 ml, 16 mmol, 80% en tolueno). Se añadió en porciones hidróxido potásico (569 mg, 10,1 mmol) durante 30 minutos y después, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo al 30 %/hexanos) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto (I-f-2) en forma de un aceite (530 mg, rendimiento del 39 %). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 1,44 (s, 9H), 2,44 (t, J = 2,4 Hz, 2H), 3,53-3,67 (m, 4H), 3,92 (s a, 1H), 4,16 (d, J = 2,5 Hz, 4H), 4,90 (s a, 1H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 28,4 (3C), 49,5, 58,5 (2C), 68,6 (2C), 74,6 (2C), 77,2, 79,5 (2C), 155,4; HRMS (IEN) calc. para C14H21NO4 (m/z) [M H]+ 268,1543, encontrado 268,1536. Se conoce el Intermedio (I-f-3) y se describe en R. Roy y col. J. Org. Chem. 73, 5602 (2008).
Figure imgf000027_0001
Se disolvió el compuesto (I-f-1), (I-f-2) o (I-f-3) (1 equiv.) en diclorometano (0,2 M) y se añadió cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano (5 a 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2-3 horas y después, se evaporó el disolvente. El residuo se secó a alto vacío durante 1 hora. El intermedio resultante se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. El intermedio resultante anterior (1 equiv.) y ácido 4-(((benciloxi)carbonil)amino)butanoico (1 equiv.) se disolvieron en una mezcla de dioxano y dimetilformamida (0,09 M, 3:1). Se añadió hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfonio (1,2 equiv.) seguido de N,N-diisopropiletilamina (5 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añadieron diclorometano y agua y la fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se disolvió en una cantidad mínima de tolueno, se cargó en una columna y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice.
Intermedio (I-g-1): Condiciones de purificación: acetato de etilo al 100%, cuantitativo, aceite. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 1,80 - 1,91 (m, 2H), 2,24 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,46 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 3,22-3,31 (m, 2H), 3,43-3,51 (m, 2H), 3,56-3,64 (m, 2H), 4,16 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 5,07 (s a, 1H), 5,10 (s, 2H), 6,09 (s a, 1H), 7,28 -7,42 (m, 5H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 25,9, 33,7, 39,1, 40,5, 58,3, 66,7, 68,7, 74,8, 79,4, 128,1, 128,5 (4C), 136,6, 156,7, 172,5; HRMS (IEN) calc. para C17H22N2O4 (m/z) [M H]+ 319,1652, encontrado 319,1646.
Intermedio (I-g-2): Condiciones de purificación: acetato de etilo al 70 %/hexanos, 65 mg, aceite (rendimiento del 76 %), aceite. RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 1,79 -1,91 (m, 2H), 2,24 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 2.4 Hz, 2H), 3,20-3,29 (m, 2H), 3,54-3,69 (m, 4H), 4,16 (d, J = 1,5 Hz, 4H), 4,22-4,33 (m, 1H), 5,10 (s a, 3H), 6,04 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,28 - 7,42 (m, 5H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 25,8, 33,7, 40,4, 48,2, 58.4 (2C), 66,6, 68,3 (2C), 74,7 (2C), 79,4 (2C), 128,1, 128,5 (4C), 136,6, 156,6, 172,2; HRMS (IEN) calc. para C21H26N2O5 (m/z) [M H]+ 387,1914, encontrado 387,1904.
Intermedio (I-g-3): Condiciones de purificación: acetato de etilo al 70 %/hexanos, 42 mg, aceite (rendimiento del 60 %). RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d) delta ppm 1,76 - 1,88 (m, 2H), 2,21 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 2,3 Hz, 3H), 3,18-3,30 (m, 2H), 3,84 (s, 6H), 4,14 (d, J = 2,3 Hz, 6H), 5,10 (s, 2H), 5,12 (s a, 1H), 5,89 (s a, 1H), 7,28 - 7,40 (m, 5H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 25,7, 34,3, 40,3, 58,6 (3C), 59,2, 66,6, 68,5 (3C), 74,6 (3C), 79,5 (3C), 128,1, 128,5 (4C), 136,6, 156,6, 172,6; HRMS (IEN) calc. para C25H30N2O6 (m/z) [M H]+ 455,2177, encontrado 455,2167.
Figure imgf000027_0002
Intermedio (I-h-1):
Se disolvieron tris(3-hidroxipropiltriazolilmetil)amina (THPTA; véase M. G. Finn y col. en Angewandte Chemie International Edición 48, 9879 (2009)) (2 mg, 0,005 mmol) y sulfato de cobre (1 mg, 0.004 mmol) en agua (50 microlitros) y después, se añadieron a una solución de (I-e-2) (42 mg, 0,089 mmol) y alquino (I-g-1) (40 mg, 0,125 mmol) en metanol (0,9 ml). Después se añadió ascorbato sódico (1,8 mg, 0,009 mmol), disuelto en agua (30 microlitros) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 5 %-10 % en diclorometano) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto deseado (I-h-1) en forma de un aceite (54 mg, rendimiento del 76 %); [a]D 48,2 (c 0,54, metanol); RMN 1H (400 MHz, M ETANO L^) delta ppm 1,33 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,70-1,83 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 2,21 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,13 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 3,37 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,51-3,70 (m, 14H), 3,71-3,95 (m, 7H), 4,15 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,56 (t, J=5,0 Hz, 2H), 4,60 (s, 2H), 5,06 (s, 2H), 5,22 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,25-7,38 (m, 5H), 8,01 (s, 1 H); RMN 13C (100 MHz, M ETANO L^) delta ppm 22,7, 27,0, 27,4, 28,5, 34,4, 40,5, 41,4, 51,6, 56,7, 62,4, 64,9, 67,5, 70,0, 70,5, 70,8, 71,1, 71,5, 71,6, 71,65, 71,7, 71,73, 72,6, 73,8, 76,2, 76,5, 82,1, 102,4, 112,4, 126,1, 129,0, 129,1, 129,6, 138,6, 146,1, 159,0, 173,6, 175,7; HRMS (IEN) calc. para C37H56N6O13 (m/z) [M H]+ 793,3978, encontrado 793,3959.
Intermedio (I-h-2)
Se disolvieron THPTA (22 mg, 0,051 mmol) y sulfato de cobre (2,5 mg, 0,01 mmol) en agua (70 microlitros) y después se añadieron a una solución de (I-e-2) (48 mg, 0,1 mmol) y alquino (I-g-2) (20 mg, 0,051 mmol) en metanol (1 ml). Después se añadió ascorbato sódico (4 mg, 0,02 mmol), disuelto en agua (30 microlitros) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en diclorometano y una solución saturada acuosa de cloruro de amonio. La fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Intermedio (I-h-3)
Se disolvieron THPTA (34 mg, 0,079 mmol) y sulfato de cobre (4 mg, 0,016 mmol) en agua (200 microlitros) y después se añadieron a una solución de (I-e-2) (50 mg, 0,1 mmol) y alquino (I-g-3) (24 mg, 0,053 mmol) en metanol (1 ml). Después se añadió ascorbato sódico (6,5 mg, 0,032 mmol), disuelto en agua (30 microlitros) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en diclorometano y una solución saturada acuosa de cloruro de amonio. La fase acuosa se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron. El material en bruto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Procedimiento general para la retirada de la acetonida:
El compuesto (I-h-1), (I-h-2) o (I-h-3) (0,030-0,068 mmol) se disolvió en una mezcla de ácido acético, metanol y agua (1,6-1,8 ml, 0,5 ml, 0,5 ml respectivamente) y se agitó a 70 °C durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se coevaporó dos veces con tolueno. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice.
Ejemplo (4):
Condiciones de purificación: metanol al 10 % en diclorometano, 43,3 mg, aceite (rendimiento del 85 %). [a]D 45 (c 1, metanol); RMN 1H (400 MHz, M ETANO L^) delta ppm 1,72 - 1,83 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,22 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,13 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,37 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,52-3,79 (m, 20H), 3,85-4,00 (m, 3H), 4,57 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 4,61 (s, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,21 (s, 1H), 7,24-7,41 (m, 5H), 8,02 (s, 1H); RMN 13C (100 MHz, M ETANO L^) delta ppm 22,8, 27,4, 34,4, 40,4, 41,4, 51,6, 56,4, 64,9, 67,5, 69,0, 70,0, 70,1, 70,4, 70,5, 71,4, 71,5 (2C), 71,6, 71,65, 71,7, 72,5, 84,3, 102,6, 126,0, 129,0 (2C), 129,1, 129,6 (2C), 138,6, 145,8, 159,0, 174,0, 175,8; HRMS (IEN) calc. para C34H52N6O13 (m/z) [M H]+ 753,3665, encontrado 753,3679.
Ejemplo (5):
Condiciones de purificación: metanol al 20 % en diclorometano, 25 mg, aceite (rendimiento del 20 % en 2 etapas). [a]D 56 (c 1,25, metanol); RMN 1H (400 MHz, M ETANO L^) delta ppm 1,72 -1,81 (m, 2H), 1,99 (s, 6H), 2,23 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 3,13 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 3,50-3,80 (m, 36H), 3,85-3,91 (m, 6H), 3,92-4,00 (m, 4H), 4,13-4,25 (m, 1H), 4,52-4,63 (m, 8H), 5,07 (s, 2H), 5,21 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 7,23-7,40 (m, 5H), 8,01 (s, 2H); RMN 13C (100 MHz, M ETANO L^) delta ppm 22,6 (2C), 27,2, 34,2, 41,2, 50,2, 51,4 (2C), 56,2 (2C), 65,0 (2C), 67,3, 68,8 (2C), 69,9 (2C), 70,0 (2C), 70,2 (2C), 70,3 (2C), 71,2 (2C), 71,3 (4C), 71,4 (2C), 71,5 (2C), 71,52 (2C), 72,3 (2C), 84,1 (2C), 102,4 (2C), 125,8 (2C), 128,8 (2C), 128,9, 129,4 (2C), 138,4, 145,6 (2C), 158,8, 173,8 (2C), 175,3; HRMS (IEN) calc. para C55H86N10O23 (m/z) [M H]+ 1255,5940, encontrado 1255,5925.
Ejemplo (6):
Condiciones de purificación: metanol al 20 % en diclorometano, 31 mg, aceite (rendimiento del 18 % en 2 etapas). [a]o 53 (c 1, metanol); RMN 1H (400 MHz, M ETANO L^) delta ppm 1,65 - 1,78 (m, 2H), 1,98 (s, 9H), 2,19 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,11 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,51-3,80 (m, 54H), 3,86-3,91 (m, 9H), 3,91-3,99 (m, 6H), 4,51-4,63 (m, 12H), 5,06 (s, 2H), 5,21 (d, J = 1,3 Hz, 3H), 7,24-7,40 (m, 5H), 7,98 (s, 3H); HRMS (IEN) calc. para C76H120N14O33 (m/z) [M 2H]+/2 879,4144, encontrado 879,4148.
N-(2-((1-(1-((1S,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridecan13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi)etil)-4-aminobutanamida (7), 4-amino-N-{1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabicido[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]propan-2-il}butanamida (8), 4-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabicido[3.2.1]od-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(H1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabicido[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)butanamida (9)
Figure imgf000029_0001
En un matraz de fondo redondo, se disolvió el compuesto (4), (5) o (6) (1 equiv.) en metanol (0,01M) y el matraz se lavó abundantemente con nitrógeno. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 0,7 equiv.) y el matraz se lavó abundantemente con nitrógeno y después con hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12-24 horas en una atmósfera de hidrógeno (se usó un globo lleno con hidrógeno). El paladio se filtró usando un PTFE Acrodisc Cr de 0,45 micrómetros y se aclaró una vez con metanol. El disolvente se evaporó.
Ejemplo (7):
25.5 mg, aceite, rendimiento del 76 %; [a]D 57,6 (c 1,25, metanol); RMN 1H (400 MHz, METANOL-cfe) delta ppm 1,70 - 1,81 (m, 2H), 1,99 (s, 3H), 2,24 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,67 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,36-3,41 (m, 2H), 3,51-3,80 (m, 19H), 3,84-4,01 (m, 4H), 4,59 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 4,61 (s, 2H), 5,21 (s, 1H), 8,03 (s, 1H); RMN 13C (100 MHz, METANOLC) delta ppm 22,8, 29,6, 34,5, 40,4, 42,0, 51,6, 56,4, 64,9, 69,0, 70,0, 70,1,70,5, 70,6, 71,4, 71,5 (2C), 71,6, 71,66, 71,7, 72,5, 84,3, 102,6, 126,0, 145,8, 174,1, 175,9; HRMS (IEN) calc. para OsH^NeOn (m/z) [M H]+619,3297, encontrado 619,3278.
Ejemplo (8):
El material en bruto se disolvió en 0,5 ml de metanol/agua (50:50) y se inyectó en una columna HPLC. La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 Á, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) a (22:58:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las fracciones a 25,7-27,3 minutos que se consideró que tenían la pureza adecuada se reunieron y evaporaron para producir 10,7 mg de (8) como un aceite, rendimiento del 49 %; [a]D 56 (c 1, metanol); RMN 1H (500 MHz, METANOLC) delta ppm 1,86 - 1,95 (m, 2H), 1,99 (s, 6H), 2,37 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,96 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,50-3,80 (m, 36H), 3,84-4,00 (m, 10H), 4,17-4,26 (m, 1H), 4,57-4,62 (m, 8H), 5,21 (s, 2H), 8,03 (s, 2 H); RMN 13C (100 MHz, METANOLC) delta ppm 22,8 (2C), 29,2, 34,5, 41,8, 50,4, 51,6 (2C), 56,4 (2C), 65,1 (2C), 69,0 (2C), 70,1 (2C), 70,3 (2C), 70,5 (2C), 70,6 (2C), 71,4 (2C), 71,5 (4C), 71.6 (2C), 7,67, (2C), 71,7 (2C), 72,5 (2C), 84,3 (2C), 102,6 (2C), 126,1 (2C), 145,8 (2C), 174,1 (2C), 175,6; HRMS (IEN) calc. para C47H80N10O2i (m/z) [M H]+ 1121,5572, encontrado 1121,5558. Ejemplo (9):
El material en bruto se disolvió en 0,5 ml de metanol/agua (50:50) y se inyectó en una columna HPLC. La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 Á, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) a (22:58:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las fracciones a 30,3-32,0 minutos que se consideró que tenían la pureza adecuada se reunieron y evaporaron para producir 15 mg de (9) como un aceite, rendimiento del 63 %; [a]D 59,1 (c 1,1, metanol); RMN 1H (500 MHz, METANOLC) delta ppm 1,84 - 1,92 (m, 2H), 2,00 (s, 9H), 2,31-2,38 (m, 2H), 2,97 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,54-3,80 (m, 54H), 3,86-3,93 (m, 9H), 3,93-4,00 (m, 6H), 4,57 (s, 6H), 4,60 (t, J = 4,9 Hz, 6H), 5,22 (s, 3H), 8,02 (s, 3H); HRMS (IEN) calc. para C68H114N14O31 (m/z) [M H]+ 1623,7847, encontrado 1623,7803.
Ejemplos (10), (11) y (12); conjugados Alexa fluor® 647
Figure imgf000030_0001
El éster succinimidílico del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 era de Invitrogen (número de catálogo A-20106). Invitrogen informó que el peso molecular era -1250. El peso molecular del compuesto marcado con Alexa647 se estimó basándose en el [M H]+ encontrado de 955,07 del éster succinimidílico del ácido carboxílico Alexa Fluor 647 de CLEM. El coeficiente de extinción para Amax 650 es -270000 ± 20000, que varía de un lote a otro.
Procedimiento general para purificación HPLC:
La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 A, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) to (22:78:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon y evaporaron.
Ejemplo (10):
A una solución del compuesto (7) (3,0 mg, 4,8 micromol) en sulfóxido de dimetilo (200 microlitros), se le añadieron succinimidil éster del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 (5,0 mg, 4 micromol) y N,N-diisopropiletilamina (10 microlitros, 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después, se purificó directamente por HPLC preparativa. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica,y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon (Tr = 22,7-24 minutos). Se obtuvieron 3,2 mg de (10) (rendimiento del 55 %). La solución se dividió en alícuotas y se evaporó en una centrífuga de vacío y el producto se almacenó a 4 °C. EM (IEN) calc. (m/z) para [M H]+ ~ 1456, encontrado 1456,82.
Ejemplo (11):
A una solución del compuesto (8) (6,0 mg, 5 micromol) en sulfóxido de dimetilo (200 microlitros), se le añadieron succinimidil éster del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 (5,0 mg, 4 micromol) y N,N-diisopropiletilamina (10 microlitros, 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después, se purificó directamente por HPLC preparativa. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica,y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon (Tr = 25,3-26,7 minutos). Se obtuvieron 4,8 mg de (11) (rendimiento del 62 %). La solución se dividió en alícuotas y se evaporó en una centrífuga de vacío y el producto se almacenó a 4 °C. EM (IEN) calc. (m/z) para [M H]+ ~ 1958, encontrado 1958,74
Ejemplo (12):
A una solución del compuesto (9) (9,8 mg, 6 micromol) en sulfóxido de dimetilo (200 microlitros), se le añadieron succinimidil éster del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 (5,0 mg, 4,8 micromol) y N,N-diisopropiletilamina (10 microlitros, 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después, se purificó directamente por HPLc preparativa. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica,y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon (Tr = 27,7 minutos). Se obtuvieron 5,2 mg de (12) (rendimiento del 52 %). La solución se dividió en alícuotas y se evaporó en una centrífuga de vacío y el producto se almacenó a 4 °C. e M (IEN) calc. (m/z) para [M H]+ ~ 2460, encontrado 2461,18.
4-amino-N-[1,31-bis(1-{[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]metil}-1H-1,2,3-triazol-4-il)-2,6,10,14,18,22,26,30-octaoxahentriacontan-16-il]butanamida (13) y 4-amino-N-{1,31-bis(1-{[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]metil}-1H-1,2,3-triazol-4-il)- 16-[15-(1-{[(1S,2R,3R,4R,5s)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]metil}-1H-1,2,3-triazol-4-il)-2,6,10,14-tetraoxapentadec-1-il]-2,6,10,14,18,22,26,30-octaoxahentriacontan-16-il}butanamida (14)
Figure imgf000030_0002
Se disolvió el compuesto (I-e-1) (247 mg, 0,904 mmol) en diclorometano (15 ml) y se añadió piridina (1,46 ml, 18,1 mmol). La mezcla de reacción se enfrió a -20 °C y se añadió gota a gota trifluorometanosulfónico anhídrido (0,23 ml, 1,4 mmol) en diclorometano (0,6 ml) y la mezcla se agitó mientras se dejaba calentar a 0 grados C durante 50 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con una solución acuosa 1 M de cloruro de hidrógeno, una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y una solución saturada acuosa de cloruro sódico. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró. El material en bruto se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. Se añadió azida sódica (270 mg, 4,1 mmol) a una solución del triflato anterior en dimetilformamida (4,1 ml). La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 16 horas. El disolvente se evaporó y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (15/1 acetato de etilo/metanol) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto deseado (I-e-3) en forma de un aceite de color amarillo (227 mg, rendimiento del 92 %).
[a]D 127 (c 1, metanol); RMN 1H (500 MHz, CLOROFORMO-d) delta ppm 1,34 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 3,67 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,02-4,10 (m, 2H), 4,11 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,95 (d, J=8,8 Hz, 1H); RMN 13C (125 MHz, CLOROFORMO-d) delta ppm 23,2, 26,2, 27,7, 51,0, 54,2, 69,3, 74,8, 76,1,80,6, 101,2, 111,6, 170,1; HRMS (IEN) calc. para C12H18N4O5 (m/z) [M H]+ 299,1350, encontrado 299,1344.
Figure imgf000031_0001
Los compuestos (I-j-2) y (I-j-3) pueden prepararse partiendo de bromuro de propargilo, (I-i-2)
(disponible en el mercado de Dalton Pharma; DC-001760) y (I-i-3) (B. Ernst y col. en Bioorganic& Medicinal Chemistry, 16, 5216 (2008)) respectivamente, siguiendo el mismo procedimiento descrito para la formación del compuesto (I-f-2).
Compuesto (I-j-2): Condiciones de purificación: acetato de etilo al 20 %/hexanos, 85 mg, aceite (rendimiento del 8 %);
RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 1,77 - 1,90 (m, 14 H), 2,23 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 2,3 Hz, 2H), 3,20-3,29 (m, 2H), 3,39-3,55 (m, 24H), 3,60 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 4,13 (d, J = 2,5 Hz, 4H), 4,15-4,24 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,16 (s a, 1H), 6,05 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,28 - 7,41 (m, 5H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 25,8, 29,8 (2C), 29,9 (2C), 30,0 (2C), 33,7, 40,4, 48,5, 58,1 (2C), 66,6, 67,2 (2C), 67,6 (2C), 67,7 (2C), 67,8 (2C), 67,9 (2C), 68,3 (2C), 69,0 (2C), 74,2 (2C), 79,9 (2C), 128,1, 128,5 (4C), 136,6, 156,6, 172,1; HRMS (IEN) calc. para C39H62N2O11 (m/z) [M h ]+ 735,4426, encontrado 735,4424. Compuesto (I-j-3) Condiciones de purificación: acetato de etilo al 85 %/hexanos, 32,6 mg, aceite, (rendimiento del 71 %); RMN 1H (400 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 1,75 - 1,90 (m, 20H), 2,18 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 2,4 Hz, 3H), 3,23 (c, J=6,3 Hz, 2H), 3,40-3,53 (m, 30H), 3,59 (t, J = 6,3 Hz, 6H), 3,67 (s, 6H), 4,13 (d, J = 2,3 Hz, 6H), 5,08 (s, 2H), 5,27 (s a, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,27 -7,40 (m, 5H); RMN 13C (100 MHz, CLOROFORMO-d/TMS) delta ppm 25,7, 29,7 (3C), 29,9 (3C), 30,0 (3C), 34,4, 40,4, 58,1 (3C), 59,8, 66,5, 67,1 (3C), 67,6 (3C), 67,7 (3C), 67,8 (3C), 67,82 (3C), 68,4 (3C), 69,1 (3C), 74,2 (3C), 79,9 (3C), 128,0, 128,4 (4C), 136,6, 156,6, 172,3; HRMS (IEN) calc. para C52H84N2O15 (m/z) [M H]+ 977,5944, encontrado 977,5943.
Figure imgf000031_0002
Compuesto (I-k-2) :
Se disolvieron THPTA (22,6 mg, 0,052 mmol) y sulfato de cobre (2,5 mg, 0,01 mmol) en agua (200 microlitros) y después se añadieron a una solución de (I-e-3) (45 mg, 0,152 mmol) y (I-j-2) (51 mg, 0,069 mmol) en metanol (1,1 ml).
Después, se añadió ascorbato sódico (4,2 mg, 0,021 mmol), disuelto en agua (100 microlitros), y la mezcla de reacción se agitó a 50 grados Celsius durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 5 % en diclorometano) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto deseado (I-k-2) en forma de un aceite (72 mg, rendimiento del 78 %). RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 1,34 (s, 6H), 1,52 (s, 6H), 1,73-1,86 (m, 12H), 1,97 (s, 6H), 2,24 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,15 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,43-3,54 (m, 22H), 3,58 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 3,86 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,97 (dd, J = 6,2, 1,9 Hz, 2H), 4,11-4,23 (m, 5H), 4,58 (s, 4H), 4,78 (s, 6H), 4,91 (d, J = 14,1 Hz, 2H), 4,98 (d, J = 14,4 Hz, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,24 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 7,25-7,40 (m, 5H), 7,99 (s, 2H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-d4) delta ppm 22,7 (2C), 26,8 (2C), 27,5, 28,4 (2C), 31,1 (4C), 31,2 (2C), 34,5, 41,4, 50,6, 51,0 (2C), 56,3 (2C), 64,8 (2C), 67,5 (2C), 68,7 (2C), 68,8 (2C), 68,9 (3C), 69,0 (2C), 69,4 (2C), 69,7 (2C), 70,9 (2C), 76,3 (2C), 76,6 (2C), 81,5 (2C), 102,5 (2C), 112,8 (2C), 127,2 (2C), 129,0 (2C), 129,1, 129,6 (2C), 138,6, 146,3 (2C), 159,0, 173,5 (2C), 175,5; HRMS (IEN) calc. para C63H98N10O21 (m/z) [M H]+ 1331,6981, encontrado 1331,6971.
Compuesto (I-k-3):
Se disolvieron THPTA (16 mg, 0,037 mmol) y sulfato de cobre (1,7 mg, 0,007 mmol) en agua (100 microlitros) y después se añadieron a una solución de (I-e-3) (32,5 mg, 0,109 mmol) y (I-j-3) (32 mg, 0,033 mmol) en metanol (1,1 ml). Después, se añadió ascorbato sódico (3 mg, 0,015 mmol), disuelto en agua (100 microlitros), y la mezcla de reacción se agitó a 50 grados Celsius durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida (metanol al 10 % en diclorometano) sobre gel de sílice para proporcionar el compuesto deseado (I-k-3) en forma de un aceite (43,5 mg, rendimiento del 70 %). RMN 1H (400 MHz, METANOL-C4) delta ppm 1,33 (s, 9H), 1,52 (s, 9H), 1,71-1,87 (m, 18H), 1,97 (s, 9H), 2,20 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,15 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,43-3,52 (m, 28H), 3,58 (t, J = 6,3 Hz, 6H), 3,67 (s, 6H), 3,86 (d, J = 8,3 Hz, 3H), 3,97 (dd, J = 6,0, 1,8 Hz, 3H), 4,14-4,22 (m, 5H), 4,58 (s, 6H), 4,78 (s, 8H), 4,91 (d, J = 14,6 Hz, 3H), 4,97 (d, J = 14,6 Hz, 3H), 5,07 (s, 2H), 5,24 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 7,26-7,38 (m, 5H), 7,98 (s, 3H); RMN 13C (100 MHz, METANOL-C4) delta ppm 22,7 (3C), 26,9 (3C), 27,7, 28,4 (3C), 31,1 (3C), 31,2 (3C), 31,3 (3C), 35,2, 41,3, 51,0 (3C), 56,3 (3C), 61,8, 64,9 (3C), 67,5 (3C), 68,7 (3C), 68,8 (3C), 68,9 (3C), 69,0 (4C), 69,6 (3C), 69,7 (3C), 70,0 (3C), 76,3 (3C), 76,6 (3C), 81,5 (3C), 102,5 (3C), 112,8 (3C), 127,2 (3C), 129,0 (2C), 129,1, 129,7 (2C), 138,6, 146,4 (3C), 159,0, 173,5 (3C), 175,6; HRMS (IEN) calc. para C88H138N14O30 (m/z) [M H]+ 1871,9776, encontrado 1871,9713.
Figure imgf000032_0001
Se disolvió el compuesto (I-k-2) o (I-k-3) (0,068 mmol) en una mezcla de ácido acético, metanol y agua (2,5-3 ml, 0,6­ 0,9 ml, 0,6-0,9 ml respectivamente) y se agitó a 70 grados Celsius durante 24 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se coevaporó dos veces con tolueno. El material en bruto obtenido se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Figure imgf000032_0002
En un matraz de fondo redondo, se disolvió el compuesto (I-I-2) o (I-I-3) (1 equiv.) en metanol (0,01 M) y el matraz se lavó abundantemente con nitrógeno. Se añadió paladio sobre carbono (10%, 0,7 equiv.) y el matraz se lavó abundantemente con nitrógeno y después con hidrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno (se usó un globo lleno con hidrógeno). El paladio se filtró usando un PTFE Acrodisc Cr de 0,45 micrómetros y se aclaró una vez con metanol. El disolvente se evaporó.
Ejemplo (13):
El material en bruto se disolvió en 0,5 ml de metanol/agua (50:50) y se inyectó en una columna HPLC. La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 Á, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) a (22:58:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las fracciones a 34,7-35,6 minutos que se consideró que tenían la pureza adecuada se reunieron y evaporaron para producir 12,8 mg de (13) como un aceite, (rendimiento del 17 % en 2 etapas); RMN 1H (500 MHz, METANOL-C4) delta ppm 1,73 - 1,87 (m, 12 H), 1 ,88­ 1,96 (m, 2H), 1,98 (s, 6H), 2,39 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,42 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,45-3,55 (m, 24H), 3,59 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 3,71-3,75 (m, 4H), 3,77 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 3,96-4,02 (m, 2H), 4,13-4,20 (m, 1H), 4,58 (s, 4H), 4,91-4,95 (m, 4H), 5,20 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 7,98 (s, 2H); HRMS (IEN) calc. para C49H84N10O19 (m/z) [M H]+ 1117,5987, encontrado 1117,5977.
Ejemplo (14):
El material en bruto se disolvió en 0,5 ml de metanol/agua (50:50) y se inyectó en una columna HPLC. La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 Á, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) a (42:58:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las fracciones a 24,7-25,6 minutos que se consideró que tenían la pureza adecuada se reunieron y evaporaron para producir 5,5 mg de (14) como un aceite (rendimiento del 10 % durante 2 etapas); RMN 1H (500 MHz, METANOL-C4) delta ppm 1,75 - 1,86 (m, 18H), 1,87-1,94 (m, 2H), 1,98 (s, 9H), 2,37 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,43 (d, J = 8,5 Hz, 3H), 3,46-3,53 (m, 31H), 3,59 (t, J = 6,3 Hz, 6H), 3,68 (s, 6H), 3,72-3,76 (m, 5H), 3,77 (d, J = 8,3 Hz, 3H), 3,97-4,02 (m, 3H), 4,59 (s, 6H), 4,90-4,96 (m, 6H), 5,20 (d, J=1,2 Hz, 3H) 7,98 (s, 3H); HRMS (IEN) calc. para C71H120N14O28 (m/z) [M H]+ 1617,8469, encontrado 1617,8415.
Ejemplos (15) y (16); Conjugados de Alexa fluor® 647 (AF647)
Figure imgf000033_0001
El éster succinimidílico del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 era de Invitrogen (número de catálogo A-20106). Invitrogen informó que el peso molecular era -1250. El peso molecular del compuesto marcado con Alexa647 se estimó basándose en el [M H]+ encontrado de 955,07 del éster succinimidílico del ácido carboxílico Alexa Fluor 647 de CLEM. El coeficiente de extinción para Amax 650 es -270000 ± 20000, que varía de un lote a otro.
Procedimiento general para purificación HPLC:
La cromatografía preparativa líquida de alta resolución (HPLC) se realizó usando una columna Waters XBridge BEH C18 OBD Prep, 130 A, 5 micrómetros, 19 mm X 100 mm (Waters, número de pieza 186002978), eluyendo con un gradiente de pendiente lineal a un caudal 17 ml/min. Gradiente del disolvente: acetonitrilo/agua/ácido trifluoroacético (2:98:0,1) to (22:78:0,1) en 40 min. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica, y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon y evaporaron.
Ejemplo (15):
A una solución del compuesto (13) (4,5 mg, 4 micromol) en sulfóxido de dimetilo (200 microlitros), se le añadieron succinimidil éster del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 (5,0 mg, 4 micromol) y N,N-diisopropiletilamina (10 microlitros, 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después, se purificó directamente por HPLC preparativa. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica,y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon (Tr = 37,3-39 minutos). Se obtuvieron 4,0 mg de (15) (rendimiento del 50 %). La solución se dividió en alícuotas y se evaporó en una centrífuga al vacío y el producto se almacenó a 4 grados Celsius. EM (IEN) calc. (m/z) para [M H]+ ~ 1955, encontrado 1955,32.
Ejemplo (16):
A una solución del compuesto (14) (5,2 mg, 3,2 micromol) en sulfóxido de dimetilo (200 microlitros), se le añadieron succinimidil éster del ácido carboxílico Alexa Fluor® 647 (5,0 mg, 4 micromol) y N,N-diisopropiletilamina (10 microlitros, 10 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después, se purificó directamente por HPLC preparativa. Las fracciones recogidas se analizaron por CLEM analítica,y las que se consideró que tenían la pureza adecuada se agruparon (Tr = 24,3-25,3 minutos). Se obtuvieron 4,0 mg de (16) (rendimiento del 51 %). La solución se dividió en alícuotas y se evaporó en una centrífuga de vacío y el producto se almacenó a 4 °C. EM (IEN) calc. (m/z) para [M H]+ ~ 2455, encontrado 2456,90.
Condiciones generales de alquilación/desprotección para acceder a los ejemplos (17) -(21):
A una solución de (I-e-1) en diclorometano se le añadieron el yodoalquilo deseado, hidrogenosulfato de tetrabutilamonio y una solución acuosa 12,5 M de hidróxido sódico. La mezcla de reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente, se diluyó con agua y diclorometano y la fase acuosa se extrajo dos veces adicionales con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico, agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material resultante puede llevarse en bruto a la siguiente reacción o purificarse usando cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice. El material resultante se disolvió en una mezcla de ácido acético/metanol/agua (3:1:1 v/v) y la solución se calentó a 60 - 70 grados Celsius durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, se coevaporó dos veces con tolueno y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice o cromatografía de fase inversa.
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(etoximetil)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (17)
Figure imgf000033_0002
Se sintetizó (17) como se describe en el procedimiento general anterior usando yodoetano (20 equiv.). El producto en bruto se disolvió en metanol y se le añadió carbón vegetal activado. La mezcla se agitó durante 15 minutos, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:1). Las fracciones que contenían el producto deseado se recogieron y se concentraron a presión reducida. Al material en bruto se le añadió acetato de etilo/metanol (15:1) que dio como resultado un precipitado que se filtró produciendo 9,1 mg (rendimiento del 32 %) del producto deseado en forma de un sólido. RMN 1H (400 MHz, METANOL-c/4) delta ppm 5,23 (d, J=1,5 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J=9,7, 1,4 Hz, 1 H), 3,94 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,73 (dd, J=9,8, 4,3 Hz, 1 H), 3,66 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,60 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,59 (dc, J=9,6, 7,1 Hz, 1 H), 3,55 (dc, J=9,6, 7,1 Hz, 1 H), 2,00 (s, 3 H), 1,19 (t, J=6,9 Hz, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 262,1 [M+H] (100 %).
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(propoximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (18)
Figure imgf000034_0001
Se sintetizó (18) como se describe en el procedimiento general anterior usando yodopropano (20 equiv.). El producto en bruto se purificó usando cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:2) produciendo 13,9 mg (rendimiento del 80%) del producto deseado en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, METANOL-c/4) delta ppm 5,23 (d, J=1,5 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J=9,7, 1,4 Hz, 1 H), 3,95 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,89 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,73 (dd, J=9,8, 4,3 Hz, 1 H), 3,66 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,59 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 3,49 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 3,46 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 2,01 (s, 3 H), 1,60 (ct, J=7,4, 6,5 Hz, 2 H), 0,94 (t, J=7,4 Hz, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 276,2 [M+H] (100 %).
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(butoximetil)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (19)
Figure imgf000034_0002
(19) se sintetizó como se describe en el procedimiento general anterior usando yodobutano (20 equiv.). El producto en bruto deseado se purificó usando cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:1) produciendo 18 mg (rendimiento del 100 %) del producto deseado en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, METANOLC,) delta ppm 5,23 (d, J=1,3 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J=9,6, 1,3 Hz, 1 H), 3,94 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,73 (dd, J=9,8, 4,3 Hz, 1 H), 3,66 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,59 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 3,54 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 3,50 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 2,00 (s, 3 H), 1,52 - 1,61 (m, 2 H), 1,34 - 1,45 (m, 2 H), 0,95 (t, J=7,3 Hz, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 290,2 [M+H] (100 %).
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-[(pentiloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}acetamida (20)
Figure imgf000034_0003
(20) se sintetizó como se describe en el procedimiento general anterior usando yodopentano (20 equiv.). El producto en bruto deseado se purificó usando cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:1) produciendo 17 mg (rendimiento del 68 %) del producto deseado en forma de un aceite. RMN 1H (400 MHz, METANOLC,) delta ppm 5,23 (d, J=1,5 Hz, 1 H), 3,97 (dd, J=9,8, 1,3 Hz, 1 H), 3,94 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,73 (dd, J=9,8, 4,3 Hz, 1 H), 3,66 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,59 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,53 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 3,49 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 2,01 (s, 3 H), 1,53 - 1,63 (m, 2 H), 1,29 - 1,41 (m, 4 H), 0,89-0,97 (m, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 304,1 [M+H] (100 %).
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-1-[(hexiloxi)metil]-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}acetamida (21)
Figure imgf000035_0001
Se sintetizó (21) como se describe en el procedimiento general anterior usando yodohexano (20 equiv.). El producto en bruto deseado se purificó usando cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:1) produciendo 56 mg del producto en forma de un aceite. Este material se purificó usando cromatografía de fase inversa produciendo 7,1 mg (rendimiento del 15 %) del producto deseado en forma de un sólido. RMN 1H (400 MHz, METANOL-d4) delta ppm 5,23 (d, J=1,5Hz, 1 H), 3,96 (dd, J=10,1, 1,3 Hz, 1 H), 3,94 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,79 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,73 (dd, J=9,8, 4,3 Hz, 1 H), 3,66 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,59 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,53 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 3,49 (dt, J=9,3, 6,5 Hz, 1 H), 2,00 (s, 3 H), 1,53 - 1,62 (m, 2 H), 1,27 - 1,50 (m, 6 H), 0,89 - 0,97 (m, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 318,1 [M+H] (100 %).
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-il)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (22)
Figure imgf000035_0002
A una solución de (I-e-1) en diclorometano (3 ml) se le añadió piridina (0,3 ml, 4 mmol), la mezcla se enfrió a -20 grados Celsius, y se añadió trifluorometanosulfónico anhídrido (0,047 ml, 0,28 mmol) en diclorometano (0,6 ml). La mezcla de reacción se dejó calentar a -10 grados Celsius durante 1 hora, se diluyó con diclorometano y se lavó sucesivamente con una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico, solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida para proporcionar el material en bruto deseado, el cual se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. A una solución de 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-ol (207 mg, 0,994 mmol) en W,A/-dimetilformamida enfriada a 0 grados Celsius, se le añadió hidruro sódico (39,9 mg, 1,0 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos. El trifluorometanosulfonato de ((3aR,4R,7S,8R,8aR)-8-acetamido-2,2-dimetiltetrahidro-4,7-epoxi[1,3]dioxolo[4,5-d]oxepin-4(5H)-il)metilo en bruto anterior se añadió gota a gota en W,W-dimetilformamida (0,5 ml) y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 25 minutos a 0 grados Celsius. La reacción se interrumpió con metanol y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 5 minutos. Después, la mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo obtenido se disolvió en diclorometano y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo dos veces adicionales con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/metanol (15:2) produciendo 85 mg (100 %) del producto deseado. Una solución de N-((3aR,4S,7S,8R,8aR)-2,2-dimetil-4-(2,5,8,11,14-pentaoxapentadecil)hexahidro-4,7-epoxi[1,3]dioxolo[4,5-d]oxepin-8-il)acetamida (85 mg, 0,18 mmol) en una mezcla de ácido acético/metanol/agua (3,9:1,3:1,3 v/v) se calentó a 70 grados Celsius durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el material en bruto resultante se coevaporó dos veces con tolueno y se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice eluyendo con metanol al 10 %/diclorometano produciendo 15 mg del producto deseado (22) en forma de un aceite. Rm N 1H (400 MHz, METANOLd) delta ppm 5,22 (d, J=1,3 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,95 (dd, J=9,9, 1,3 Hz, 1 H), 3,89 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,78 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 3,59 - 3,74 (m, 17 H), 3,53 - 3,56 (m, 2 H), 3,36 (s, 3 H), 1,99 (s, 3 H). CLEM (APCI) m/z: 424,2 [M+H] (13 %), 441,3 [M+NH4] (100%).
bis(4-bromobenzoato) de (1R,2R,3R,4R,5S)-4-acetamido-1-(((4-bromobenzoil)oxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3-diilo (23)
Figure imgf000036_0001
A una solución de (3) (9 mg) en W,A/-dimetilformamida anhidra (500 microlitros) enfriada a temperatura ambiente se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (34 microlitros) y 4-(dimetilamino)piridina (4,3 mg) seguido de cloruro de pbromobenzoílo (44 mg) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h. Se añadió agua, la mezcla resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo, y la fase orgánica combinada se lavó sucesivamente con una solución acuosa 0,5 M de ácido clorhídrico y salmuera. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró y el material en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 % en heptano, para proporcionar 23 mg del producto (23) (rendimiento del 80 %). RMN 1H (400 MHz, CDCl3): delta (ppm) 7,89 - 7,95 (m, 2 H), 7,78 - 7,84 (m, 2 H), 7,54 - 7,66 (m, 6 H), 7,41 -7,46 (m, 2 H), 5,87 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 5,80 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 5,60 (d, J = 1,1 Hz, 1 H), 5,44 (dd, J=10,2, 4,5 Hz, 1 H), 4,54 -4,64 (m, 3 H), 4,15 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 3,93 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 1,95 (s, 3 H). RMN 13C (101 MHz, CDCl3) delta ppm 170,6, 165,6, 165,0, 164,9, 132,1, 131,9, 131,8, 131,4, 131,2, 131,2, 129,3, 129,0, 128,9, 127,7, 127,5, 127,4, 101,8, 81,6, 69,5, 68,8, 68,4, 62,5, 52,7, 23,2. Los monocristales se obtuvieron mediante la técnica de difusión de vapor utilizando metanol y heptano como disolventes. Análisis de rayos X monocristalino: La recolección de datos se realizó en un difractómetro Bruker APEX a temperatura ambiente. La recolección de datos consistió en 3 exploraciones omega y de ángulo bajo y tres en ángulo alto; cada uno con 0,5 etapas. Además, se recogieron 2 exploraciones phi para mejorar la calidad de la corrección de absorción. La estructura es un gemelo no meroedrial; refinado ignorando el segundo dominio. La estructura se resolvió mediante procedimientos directos usando el paquete de software SHELX (véase SHELXTL, Versión 5.1, Bruker AXS, 1997) en el grupo espacial P2(1). Posteriormente, la estructura se refinó mediante el procedimiento de mínimos cuadrados de matriz completa. Todos los átomos distintos de hidrógeno se encontraron y refinaron usando parámetros de desplazamiento anisotrópicos. El átomo de hidrógeno ubicado en el nitrógeno se colocó en esta posición y se constriñó en una posición razonable. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió viajar sobre sus átomos portadores. El refinamiento final incluyó parámetros de desplazamiento isotrópico para todos los átomos de hidrógeno. Análisis de la estructura absoluta mediante procedimientos de verosimilitud (R.W.W. Hooft y col. J. Appl. Cryst., 41, 96-103 (2008)) se realizó usando PLATON (A.L. Spek, J. Appl. Cryst., 36, 7-13 (2003)). Los resultados indican que la estructura absoluta se ha asignado correctamente. El procedimiento calcula que la probabilidad de que la estructura sea correcta es 100,0. El parámetro Hooft se informa como 0,036 con una esd de 0,013. De manera adicional, el parámetro Flack es 0.03 con un esd de 0,04. El índice final R fue 5,6 %. Una diferencia final de Fourier no reveló ninguna densidad electrónica perdida o fuera de lugar. El cristal pertinente, la recopilación de datos y el refinamiento se resumen en la tabla 1 y la Figura 1.
Tabla 1. Refinamiento de estructura y datos de cristal para (23).
Fórmula empírica C15 H12 Br1,50 N0,5004,50
Peso de la fórmula 391,12
Temperatura 296(2) K
Longitud de onda 1,54178 A
Sistema cristalino Monocíclico
Grupo espacial P2(1)
Dimensiones de la celda unitaria a = 12,5748(9) A a = 90°.
b = 5,6465(4) A p= 97,453(4)° c = 21,2806(16) A y = 90°.
Volumen 1498,23(19) A3
Z 4
Densidad (calculada) 1,734 Mg/m3
Coeficiente de absorción 5,476 mm-1
F(000) 776
Tamaño del cristal 0,37 x 0,22 x 0,15 mm3
Intervalo theta para la recopilación de datos 2,09 a 68,30°.
Intervalos de índice -13<=h<=15, -5<=k<=6, -24<=I<=24
(continuación)
Reflexiones recogidas 8050
Reflexiones independientes 4408 [R(int) = 0,0247]
Completitud a theta = 68,30° 93,9 %
Corrección de absorción Empírico
Procedimiento de refinamiento Mínimos cuadrados de matriz completa en F2 Datos / restricciones / parámetros 4408 / 32 / 389
Bondad de ajuste en F2 1,031
Índices R finales [I>2sigma(I)] R1 = 0,0563, wR2 = 0,1658
Índices R (todos los datos) R1 = 0,0589, wR2 = 0,1701
Parámetro de estructura absoluta 0,04 (3)
Mayor diferencia pico y agujero 0,949 y -0,685 e.A-3
(1S,2R,3R,4R,5S)-4-azido-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano (I-m-1)
Figure imgf000037_0001
A una solución de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-azido-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano-2,3-diol (1) (445 mg, 2,05 mmol) en W,A/-dimetilformamida (5 ml), se le añadió hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 410 mg, 10,2 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se volvió muy espesa y no se agitó bien. Se añadió un adicional de 5 ml de W,W-dimetilformamida y la reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de la adición gota a gota de bromuro de bencilo (1,23 ml, 10,2 mmol). La reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente. A la siguiente mañana la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces. La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 40 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-30 %/heptano produciendo el compuesto del título (890,0 mg, 89,1 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 510]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,07­ 7,52 (m, 15H), 5,31 (s, 1H), 4,81 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,68-4,74 (m, 1H), 4,47-4,51 (m, 1H), 4,46 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,35-4,42 (m, 1H), 4,12 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,87-3,91 (m, 2H), 3,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,62 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,58 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,46 (d, J = 8,6 Hz, 1H)
(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-amina (1-n-1)
Figure imgf000037_0002
Una mezcla de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-azido-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano (I-m-1) (310 mg, 0,64 mmol), trifenilfosfina (334 mg, 1,27 mmol), agua (92 mg, 5,1 mmol) y tetrahidrofurano (10 ml) se agitó a 65 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se cargó sobre una columna de gel de sílice. La cromatografía eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 20 % al 80 % en heptano dio el producto del título en forma de una goma incolora (210 mg, 72 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 7,20-7,37 (m, 15H), 5,29 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,90 (d, 11,5 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 12,1Hz, 1H), 4,39 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,42 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 9,4, 3,5 Hz, 1H), 3,07 (dd, J=9,4, 1,2 Hz, 1H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8: 131,8, 131,6, 131,5, 128,2, 128,2, 128,1, 128,1, 128,0, 127,7, 127,6, 127,6, 127,4, 103,5, 82,6, 80,3, 74,5, 73,3, 73,1,72,2, 69,9, 69,3, 55,1; CLEM (ES+): 1,18 min, 484,2 (M+Na)+.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}acetam¡da (I-n-2)
Figure imgf000038_0001
A una mezcla ag¡tada de (1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-am¡na (1-n-1) (25 mg, 0,054 mmol), p¡r¡d¡na (43 mg, 0,54 mmol) y 2-met¡l-tetrah¡drofurano (1 ml) se le añad¡ó anhídr¡do acét¡co (46 mg, 0,43 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 horas y se repart¡ó entre acetato de et¡lo y agua. El extracto orgán¡co se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có sobre una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo del 20 % al 60 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sól¡do de color blanco (20 mg, 73 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 7,24-7,43 (m, 15H), 5,35 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,74 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,30-4,36 (m, 1H), 4,04 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,67-3,70 (m, 1H), 3,58-3,61 (m, 1H), 3,41-3,47 (m, 2H), 1,87 (s, 3H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8: 170,0, 138,2, 137,8, 137,4, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 101,6, 82,8, 75,7, 75,0, 73,8, 73,2, 71,5, 70,1, 69,5, 53,5, 23,3; CLEM (ES+): 1,87 m¡n, 526,3 (M+Na)+.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}-2,2,2-tr¡fluoroacetam¡da (1-n-3)
Figure imgf000038_0002
A una mezcla ag¡tada de (1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-am¡na (1-n-1) (75 mg, 0,16 mmol), p¡r¡d¡na (129 mg, 1,62 mmol) y 2-met¡l-tetrah¡drofurano (1 ml) se le añad¡ó anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (102 mg, 0,49 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente. La mezcla de reacc¡ón se agitó a temperatura amb¡ente durante 16 horas y se repart¡ó entre acetato de et¡lo y agua. El extracto orgán¡co se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có sobre una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo del 10 % al 40 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sól¡do de color blanco (60 mg, 66 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 87,25-7,42 (m, 15H), 5,91 (d, J=8,6 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,72 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,36 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,68-3,72 (m, 1H), 3,60-3,63 (m, 1H), 3,50 (dd, J = 10,0, 3,7 Hz, 1H), 3,45 (d, J=8,6 Hz, 1H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8137,9, 137,1, 136,1, 128,9, 128,5, 128,5, 128,4, 128,4, 128,1, 128,1, 128,1, 127,9, 100,6, 83,0, 75,0, 74,9, 73,8, 72,7, 71,4, 70,3, 69,2, 54,1; RMN 19F (CLOROFORMO-d) 8: -75,7 (s); CLEM (ES-): 2,11 m¡n, 556,2 (M-H)-.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}metanosulfonam¡da
(1-n-4)
Figure imgf000038_0003
A una mezcla ag¡tada de (1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-am¡na (1-n-1) (50 mg, 0,11 mmol), trietilamina (0,100 ml, 0,72 mmol) y 2-metil-tetrahidrofurano (1 ml) se le añadió gota a gota cloruro de metansulfonilo (0,025 ml, 0,33 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se repartió entre acetato de etilo y bicarbonato sódico acuoso saturado. El extracto orgánico se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 10 % al 50 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sólido de color blanco (58 mg, 65%). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 87,22-7,41 (m, 15H), 5,43 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,62 (s a, 1H), 4,56 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,68-3,72 (m, 1H), 3,62 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,54 (dd, J = 10,0, 3,7 Hz, 1H), 3,44 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,90 (s, 3H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8: 138,0, 137,3, 137,2, 128,7(2), 128,5(2), 128,4(2), 128,3, 128,1(2), 128,1, 127,9(2), 127,8(2), 102,7, 82,9, 77,2, 77,1, 75,0, 73,7, 73,5, 72,8, 70,2, 69,3, 57,7, 41,2; CLEM (ES-): 1,97 min, 538,3 (M-H)-.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}propanamida (1-n-5)
Figure imgf000039_0001
A una mezcla agitada de ácido propiónico (23 mg, 0,31 mmol) en tetrahidrofurano (1 ml) se le añadió 1,1'-carbonildiimidazol (33 mg, 0,20 mmol) en una porción a temperatura ambiente y la solución transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron trietilamina (0,028 ml, 0,20 mmol) y (1S,2r ,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-((benciloxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-amina (1-n-1) (47 mg, 0,10 mmol) en una porción a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se repartió entre acetato de etilo (3 ml) y salmuera (2 ml) y agua (2 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 10 % al 50 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sólido de color blanco (43 mg, 82 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 7,03-7,58 (m, 15H), 5,35 (s, 1H), 5,09 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,72 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,39 (s, 2H), 4,31-4,38 (m, 1H), 4,04 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,44-3,49 (m, 1H), 3,44 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,08 (c, J=7,4 Hz, 2H), 1,11 (t, J=7,6 Hz, 3H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8173,5, 138,1, 137,8, 137,4, 128,6, 128,5, 128,3, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 128,0, 127,7, 101,6, 82,7, 75,7, 74,9, 73,7, 73,2, 71,5, 70,1, 69,4, 53,3, 29,6, 9,5; CLEM (ES-): 1,94 min, 516,4 (M-H)-; CLEM (AP+):
1,94 min, 518,5 (M+H)+.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}-3,3,3-trifluoropropanamida
(1-n-6)
Figure imgf000039_0002
A una mezcla agitada de ácido 3,3,3-trifluoropropiónico (39 mg, 0,31 mmol) en tetrahidrofurano (1 ml) se le añadió 1,1'-carbonildiimidazol (33 mg, 0,20 mmol) en una porción a temperatura ambiente y la solución transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron trietilamina (0,028 ml, 0,20 mmol) y (1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-((benciloxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-amina (1-n-1) (47 mg, 0,10 mmol) en una porción a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se repartió entre acetato de etilo (3 ml) y salmuera (2 ml) y agua (2 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 10 % al 50 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sólido de color blanco (40 mg, 69 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 7,24-7,42 (m, 15H), 5,37 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,35-4,40 (m, 1H), 4,05 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,50 (dd, J = 10,0, 3,7 Hz, 1H), 3,45 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,92 (c, J = 10,5 Hz, 2H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 5: 162,3, 138,0, 137,6, 137,3, 128,7, 128,5, 128,4, 128,3, 128,3, 128,2, 128,0, 128,0, 127,8, 101,1, 82,8, 75,8, 75,0, 73,7, 73,2, 71,9, 70,2, 69,3, 54,0, 41,7; RMN 19F (CLOROFORMO-d) 5: -62,8 (s); CLEM (ES-): 2,05 min, 570,3 (M-H)-.
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}-2,2-d¡fluoroacetam¡da (1-n-7)
Figure imgf000040_0001
A una mezcla ag¡tada de ác¡do d¡fluoroacét¡co (29 mg, 0,31 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (1 ml) se le añad¡ó 1,1'-carbon¡ld¡¡m¡dazol (33 mg, 0,20 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente y la soluc¡ón transparente se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 3 horas. Se añad¡eron tr¡et¡lam¡na (0,028 ml, 0,20 mmol) y (1S,2r ,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(bendlox¡)-1-((bendlox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]octan-4-am¡na (1-n-1) (47 mg, 0,10 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 h y se repart¡ó entre acetato de et¡lo (3 ml) y salmuera (2 ml) y agua (2 ml). El extracto orgán¡co se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró. El res¡duo se somet¡ó a cromatografía sobre una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo del 10 % al 50 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sól¡do de color blanco (32 mg, 58 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 57,14-7,47 (m, 15H), 6,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,83 (t, J = 54,2 Hz, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,96 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 4,34-4,40 (m, 1H), 4,08 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,67-3,75 (m, 1H), 3,59-3,65 (m, 1H), 3,53 (dd, J = 9,8, 3,9 Hz, 1H), 3,46 (d, J=8,6 Hz, 1H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 5: 162,6, 138,0, 137,3, 128,8, 128,5, 128,4, 128,3, 128,1, 128,0, 127,8, 108,3 (t, J = 253,1 Hz), 100,9, 82,9, 75,3, 75,0, 73,8, 72,9, 71,6, 70,2, 69,3, 53,5; RMN 19F (CLOROFORMO-d) 5 -126,1 (d, J = 53,1 Hz); CLEM (ES-): 2,05 m¡n, 538,2 (M-H)-.
{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}carbamato de terc-but¡lo (I-n-8)
Figure imgf000040_0002
A una mezcla ag¡tada de (1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-am¡na (1-n-1) (120 mg, 0,26 mmol) y W,W-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na (DMAP) (6,4 mg, 0,052 mmol) y tetrah¡drofurano (2 ml) se le añad¡ó d¡carbonato de d¡-terc-but¡lo (113 mg, 0,52 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 horas y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có sobre una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo del 10 % al 40 % en heptano para obtener el producto del título en forma de un sól¡do de color blanco (104 mg, 71 %). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 5: 7,17-7,45 (m, 15H), 5,35 (s, 1H), 4,97 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,74 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 4,47 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,39 (s, 2H), 4,09 (s a, 1H), 4,01 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,63-3,71 (m, 1H), 3,54-3,62 (m, 1H), 3,38-3,48 (m, 2H), 1,47 (s, 9H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 5: 155,2, 138,2, 137,8, 137,4, 128,5, 128,4, 128,3, 128,3, 128,0, 127,9, 127,8, 127,7, 102,2, 82,8, 79,4, 74,8, 73,7, 73,4, 72,0, 70,0, 69,4, 54,6, 31,9, 28,4; CLEM (AP+): 2,25 m¡n, 462,2 (M-Boc+H)+.
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]propanam¡da (25)
Figure imgf000040_0003
Una mezcla de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4il)propionamida (1-n-5) (42 mg, 0,081 mmol), 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,093 ml, 0,81 mmol), Pd al 10% sobre carbono activado (20 mg) y 2-propanol (2,5 ml) se agitó a 80 °C durante 3 horas. Se añadió agua (0,2 ml) y toda la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se secó en un rotavapor. El material se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de metanol del 4 % al 15 % en diclorometano dio el compuesto del título en forma de una goma incolora (12 mg, 60%). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,21 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 10,1, 1,2 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,71-3,76 (m, 2H), 3,68 (d, J=8,2 Hz, 1H),, 3,35 (s, 1H), 2,26 (c, J=7,4 Hz, 2H), 1,13 (t, J=7,4 Hz, 3H); RMN 13C (METANOL-d4) 8 177,7, 102,6, 84,9, 70,4, 69,1, 69,0, 61,9, 56,0, 30,0, 10,3; CLEM (AP+): 0,25 min, 248,2 (M+H)+.
W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]-2,2,2-trifluoroacetamida (24)
Figure imgf000041_0001
Una mezcla de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-((benciloxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-il)-2,2,2-trifluoroacetamida (1-n-3) (20 mg, 0,036 mmol), 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,093 ml, 0,81 mmol), Pd al 10% sobre carbono activado (20 mg) y 2-propanol (2,5 ml) se agitó a 80 °C durante 3 horas. Se añadió agua (0,2 ml) y toda la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se secó en un rotavapor. El material se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de metanol del 4 % al 15 % en diclorometano dio el compuesto del título en forma de una goma incolora (7,2 mg, 69 %). RMN 1H (METANOL-d4) 85,25 (d, J=1,2 Hz, 1H), 4,02 (d, J =8,6 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,88-3,95 (m, 2H), 3,82 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,71 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,35 (s, 1H); RMN 13C (METANOL-d4) 8: 159,8, 102,3, 85,5, 70,8, 69,7, 68,4, 62,2, 57,4; RMN 19F (CLOROFORMO-d) 8: -77,0 (s); CLEM (AP+): 0,42 min, 288,2 (M+H)+.
W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]metanosulfonamida (26)
Figure imgf000041_0002
Una mezcla de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-((benciloxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-il)metanosulfonamida (1-n-4) (19 mg, 0,035 mmol), 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,093 ml, 0,81 mmol), Pd al 10% sobre carbono activado (20 mg) y 2-propanol (2,5 ml) se agitó a 80 °C durante 3 horas. Se añadió agua (0,2 ml) y toda la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se secó en un rotavapor. El material se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de metanol del 4 % al 15 % en diclorometano dio el compuesto del título en forma de una goma incolora (6,4 mg, 68 %). RMN 1H (METANOL-d4) 85,26 (d, J=1,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,73 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,66-3,71 (m, 1H), 3,37 (dd, J = 9,8, 1,6 Hz, 1H), 3,35 (s, 1H), 3,04 (s, 3H); RMN 13C (METANOL-d4) 8: 104,6, 85,1, 70,9, 69,8, 69,3, 62,0, 60,2, 41,7; CLEM (ES-): 0,15 min, 268,0 (M-H)-.
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]-2,2-difluoroacetamida (27)
Figure imgf000041_0003
A una solución de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}-2,2-difluoroacetamida (1-n-7) (32,0 mg, 0,059 mmol) en 2-propanol (1,0 ml) y tetrahidrofurano (0,5 ml) en un vial de microondas de 5 ml se le añadió 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,2 ml, 2 mmol) seguido de la adición de paladio al 10 % sobre carbono (50 % húmedo p/p, 20,0 mg, 0 mmol). El vial se cerró herméticamente y se calentó a 80 °C durante 4 horas. Después de 4 horas, la TLC (metanol al 10 %/diclorometano) mostró que la reacción no se completó pero hubo formación del producto deseado. Se añadió un adicional de 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,2 ml mg, 2 mmol) y la reacción se volvió a cerrar herméticamente y se calentó a 80 °C durante una noche (18 horas). Después de 22 horas en total, la reacción se diluyó con metanol y se filtró a través de un filtro de jeringa Life Sciences Acrodisc de 25 mm. El filtrado se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de un sólido (5,0 mg, SÓLIDO, 31 %). -Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 292]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 6,06 (t, J = 54,2 Hz, 1H), 5,25 (s, 1H), 4,02 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,84-3,90 (m, 2H), 3,81 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H) W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]-3,3,3-tr¡fluoropropanam¡da (28)
Figure imgf000042_0001
A una soluc¡ón de N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}-3,3,3-tr¡fluoropropanam¡da (1-n-6) (40,0 mg, 0,070 mmol) en 2-propanol (1,0 ml) y tetrah¡drofurano (0,5 ml) en un v¡al de m¡croondas de 5 ml se le añad¡ó 1-met¡l-1,4-c¡clohexad¡eno (0,2 ml, 1,75 mmol) segu¡do de la ad¡c¡ón de palad¡o al 10 % sobre carbono (50 % húmedo p/p., 20,0 mg, 0 mmol). El v¡al se cerró hermét¡camente y se calentó a 80 °C durante 4 horas. Después de 4 horas, la reacc¡ón se d¡luyó con metanol y se f¡ltró a través de un f¡ltro de jer¡nga L¡fe Sc¡ences Acrod¡sc de 25 mm. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 4 g de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0­ 20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título en forma de un sól¡do (15,3 mg, 73 %). LRMS [M+1 = 302]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,23 (s, 1H), 3,99 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,87 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,71-3,74 (m, 1H), 3,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,22 (cd, J = 10,7, 2,5 Hz, 2H)
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}-A/-met¡lacetam¡da (I-o-1)
Figure imgf000042_0002
A una mezcla ag¡tada de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-¡l)acetam¡da (I-n-2) (19 mg, 0,038 mmol) y W,W-d¡met¡lformam¡da (1,5 ml) se le añad¡ó h¡druro sód¡co (suspens¡ón al 60 % en ace¡te m¡neral) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente y la mezcla se ag¡tó durante 30 m¡nutos. Se añad¡ó yodometano (16 mg, 0,11 mmol) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 16 horas y se repart¡ó entre acetato de et¡lo (3 ml) y salmuera (2 ml) y agua (2 ml). El extracto orgán¡co se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có sobre una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo del 10 % al 50 % en heptano para obtener el producto del título en forma de una goma ¡ncolora (19 mg, 97 %). Mezcla de rotámeros (3:1). Rotámero 1: RMN 1H (CLOROFORMO-d) d: 7,21-7,43 (m, 15H), 5,37 (s, 1H), 4,93 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,37-4,45 (m, 2H), 4,15 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,85 (dd, J = 10,1, 3,5 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,45 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,19 (s, 3H); rotámero 2: RMN 1H (CLOROFORMO-d) d: 7,21-7,43 (m, 15H), 5,27 (s, 1H), 5,12 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,94-4,98 (m, 1H), 4,74 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,37-4,46 (m, 2H), 4,14-4,17 (m, 1H), 3,97 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,82-3,89 (m, 2H), 3,79 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,60-3,63 (m, 1H), 2,71 (s, 3H), 2,08 (s, 3H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) d: 172,2, 138,0, 137,3, 137,2, 128,6, 128,5, 128,5, 128,4, 128,1, 128,0, 127,9, 127,9, 127,9, 127,8, 103,2, 83,2, 75,2, 74,1, 73,8, 73,7, 73,0, 72,4, 70,1,69,2, 61,2, 28,0, 22,2; CLEM (AP+): 1,99 m¡n, 518,0 (M+H)+.
W-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}-A/-met¡lmetanosulfonam¡da (I-o-2)
Figure imgf000042_0003
A una mezcla ag¡tada de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-¡l)metanosulfonam¡da (1-n-4) (19 mg, 0,035 mmol) y W,W-d¡met¡lformam¡da (1,5 ml) se le añad¡ó h¡druro sód¡co (suspens¡ón al 60 % en ace¡te m¡neral) en una porc¡ón a temperatura amb¡ente y la mezcla se ag¡tó durante 30 m¡n.
Se añadió yodometano (16 mg, 0,11 mmol) en una porción a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se repartió entre acetato de etilo (3 ml) y salmuera (2 ml) y agua (2 ml). El extracto orgánico se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 10 % al 50% en heptano para obtener el producto del título en forma de una goma incolora (11 mg, 56%). RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 7,25-7,39 (m, 15H), 5,39 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 4,93 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,87 (dd, J = 10,5, 3,9 Hz, 1H), 3,82 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,62 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,45 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 2,83 (s, 3H), 2,68 (s, 3H); RMN 13C (CLOROFORMO-d) 8: 138,1, 137,3, 136,8, 128,7, 128,5, 128,4, 128,4, 128,1, 128,1, 128,0, 127,8, 104,6, 82,9, 74,9, 73,8, 73,5, 73,3, 71,6, 70,3, 69,4, 59,7, 37,5, 29,5; CLEM (AP+): 2,08 min, 575,8 (M+Na)+.
{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}metilcarbamato de tere-butilo (I-o-3)
Figure imgf000043_0001
A una solución en agitación de {(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-[(benciloxi)metil 6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}carbamato de tere-butilo (I-n-8) (100 mg, 0,178 mmol) en W,W-dimetilformamida (1,5 ml) se le añadió hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 8,55 mg, 0,214 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 1 hora antes de la adición de yodometano (0,055 ml, 0,89 mmol). La reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente. Después de 24 horas, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo tres veces acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 0-100 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (78 mg, 76%). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 598]. RMN 1H (el compuesto es una mezcla de dos rotámeros -1:1) Rotámero 1: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,08-7,48 (m, 15H), 5,26 (s, 1H), 4,83-4,90 (m, 1H), 4,73 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,47-4,58 (m, 3H), 4,36-4,47 (m, 2H), 4,21 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 10,7, 3,3 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,61 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,47 (dd, J = 8,6, 3,9 Hz, 1H), 2,75 (s, 3H), 1,42 (s, 9H)
Rotámero 2: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,08-7,48 (m, 15H), 5,21 (s, 1H), 4,83-4,90 (m, 1H), 4,73 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,47-4,58 (m, 3H), 4,36-4,47 (m, 2H), 4,21 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 3,98 (dd, J = 10,7, 3,3 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,61 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,47 (dd, J = 8,6, 3,9 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H), 1,44-1,52 (m, 9H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(hidroximetil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]-W-metilacetamida (29)
Figure imgf000043_0002
Una mezcla de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-bis(benciloxi)-1-((benciloxi)metil)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octan-4-il)-A/-metilacetamida (I-o-1) (19 mg, 0,037 mmol), 1-metil-1,4-ciclohexadieno (0,093 ml, 0,81 mmol), Pd al 10% sobre carbono activado (20 mg) y 2-propanol (2,5 ml) se agitó a 80 °C durante 3 horas. Se añadió agua (0,2 ml) y toda la mezcla se cargó sobre gel de sílice y se secó en un rotavapor. El material se purificó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con un gradiente de metanol del 4 % al 15 % en diclorometano dio el compuesto del título en forma de una goma incolora (4,3 mg, 47 %). RMN 1H (mezcla de rotámeros -1:1) Rotámero 1: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,20 (s, 1H), 4,65 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,02-4,09 (m, 1H), 3,89-3,98 (m, 2H), 3,84 (s, 1H), 3,78-3,82 (m, 1H), 3,68 (s, 1H), 3,11 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) Rotámero 2: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,37 (s, 1H), 4,02-4,09 (m, 1H), 3,89-3,98 (m, 3H), 3,84-3,87 (m, 1H), 3,79-3,83 (m, 1H), 3,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,98 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) RMN 13C (METANOL-d4) 8: 175,4, 104,6, 85,8, 71,3, 69,7, 66,2, 62,3, 59,1, 28,8, 22,7; CLEM (ES-): 0,41 min, 246,2 (M-H)W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]-W-met¡lmetanosulfonam¡da (30)
Figure imgf000044_0001
Una mezcla de W-((1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-((benc¡lox¡)met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octan-4-¡l)-A/-met¡lmetanosulfonam¡da (I-o-2) (11 mg, 0,020 mmol), 1-met¡l-1,4-c¡clohexad¡eno (0,093 ml, 0,81 mmol), Pd al 10% sobre carbono act¡vado (20 mg) y 2-propanol (2,5 ml) se ag¡tó a 80 °C durante 3 horas. Se añad¡ó agua (0,2 ml) y toda la mezcla se cargó sobre gel de síl¡ce y se secó en un rotavapor. La cromatografía sobre una columna de gel de síl¡ce, que eluyó con un grad¡ente de metanol del 4 % al 15 % en d¡clorometano d¡o el compuesto del título en forma de una goma ¡ncolora (2,9 mg, 51 %). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,26 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 4,00-4,05 (m, 1H), 3,92-3,96 (m, 1H), 3,89-3,91 (m, 1H), 3,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,77-3,83 (m, 2H), 3,68 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,93 (s, 3H); RMN 13C (METANOL-d4) 8: 106,1, 85,5, 71,5, 69,7, 65,9, 62,6, 62,2, 37,8, 30,4; CLEM (ES-): 0,42 m¡n, 282,0 (M-H)-.
[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]met¡lcarbamato de ferc-but¡lo (31)
Figure imgf000044_0002
A una soluc¡ón de {(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-b¡s(benc¡lox¡)-1-[(benc¡lox¡)met¡l]-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l}met¡lcarbamato de terc-but¡lo (I-o-3)(75 mg, 0,13 mmol) en 2-propanol (1,0 ml) y tetrah¡drofurano (0,5 ml) en aun v¡al de m¡croondas de 5 ml, se le añad¡ó 1-met¡l-1,4-c¡clohexad¡eno (0,18 ml, 1,56 mmol) segu¡do de la ad¡c¡ón de palad¡o al 10 % sobre carbono (50 % húmedo p/p., 20,0 mg). El v¡al se cerró hermét¡camente y se calentó a 80 °C durante 4 horas. Después de 4 horas, la TLC (metanol al 10 %/d¡clorometano) mostró que la reacc¡ón no se completó pero hubo formac¡ón del producto deseado. Se añad¡ó un ad¡c¡onal de 1-met¡l-1,4-c¡clohexad¡eno (0,18 ml, 1,6 mmol) y la reacc¡ón se volv¡ó a cerrar hermét¡camente y se calentó a 80 °C durante una noche (18 horas). Después de 22 horas en total, la reacc¡ón se d¡luyó con metanol y se f¡ltró a través de un f¡ltro de jer¡nga L¡fe Sc¡ences Acrod¡sc de 25 mm. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 4 g de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título (29,0 mg, 73 %) en forma de un sól¡do. Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+Na = 328]. El compuesto es una mezcla de dos rotámeros ~1:1:
Rotámero 1: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,22 (s a, 1H), 4,19 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,90­ 3,95 (m, 2H), 3,77-3,82 (m, 2H), 3,67 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 2,94 (s, 3H), 1,47 (s, 9H)
Rotámero 2: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,21 (s a, 1H), 4,05-4,10 (m, 1H), 4,00 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,90-3,95 (m, 2H), 3,77-3,82 (m, 2H), 3,67 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 2,94 (s, 3H), 1,47 (s, 9H)
clorh¡drato de (1S,2R,3R,4R,5S)-1-(h¡drox¡met¡l)-4-(met¡lam¡no)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octano-2,3-d¡ol (32)
Figure imgf000044_0003
A una soluc¡ón de [(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]met¡lcarbamato de ferc-but¡lo (31) (25,3 mg, 0,0829 mmol) en d¡clorometano (5,0 ml), se le añad¡ó cloruro de h¡drógeno 4,0 M en d¡oxano (0,518 ml, 2,07 mmol) y la reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón durante 48 horas a temperatura amb¡ente. Después de 48 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se lavó con acetato de et¡lo (5 ml) el cual creó un sól¡do y se d¡luyó con heptano (10 ml) y se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de un sól¡do (30,0 mg, 130%). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+1 = 206]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,63 (s, 1H), 3,90-3,97 (m, 3H), 3,84 (s, 2H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,10-3,20 (m, 1H), 2,84 (s, 3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-d¡met¡l-1-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-3)
Figure imgf000045_0001
A una solución de A/-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(h¡drox¡met¡l)-4,4-d¡metil-3,5,9,11-tetraoxatriddo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-1) (1200 mg, 4,39 mmol) y 13-yodo-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecano
Figure imgf000045_0002
(véase Synthetic Metals, 162(23), 2163-2170; 2012; 7000 mg, 17,76 mmol) en diclorometano (30,0 ml), se le añadió hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (2290 mg, 6,60 mmol) seguido de la adición de hidróxido sódico acuoso 12,5 M (30,0 ml, 380 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 64 horas. Después de 64 horas, la reacción se diluyó con agua y diclorometano. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces adicionales con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico 1 N, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto resultante se añadió acetato de etilo (50 ml) y se agitó durante 30 minutos. El precipitado resultante se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna ISCO RediSep Gold de 80 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo del 0-100 %/heptano seguido inmediatamente de elución con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produjo el compuesto del título (1267 mg, 53,5%). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 562]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,13-7,45 (m, 5H), 5,22 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,30 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,73-3,79 (m, 2H), 3,58-3,71 (m, 16H), 1,98 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,33 (s, 3H)
W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (33)
Figure imgf000045_0003
Una solución de A/-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-d¡met¡l-1-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-3) (60,0 mg, 0,11 mmol) en ácido acético (4,0 ml), metanol (1,0 ml) y agua (1,0 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (42,5 mg, 77 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 500]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,14-7,45 (m, 5H), 5,21 (s, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,92-4,01 (m, 2H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,77 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,70 (dd, J = 9,8, 3,9 Hz, 1H), 3,58-3,68 (m, 18H), 1,98 (s, 3H)
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-az¡do-2,5,8,11-tetraoxat^dec-1-¡l)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-2)
Figure imgf000045_0004
A una solución agitada de N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(h¡drox¡met¡l)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-1) (10,0 g, 36,59 mmol, 1,0 equiv.) en W,W-dimetilformamida (200 ml) se le añadió hidróxido potásico (8,21 g, 146,37 mmol, 4equiv.) a 5 °C (hielo/agua). Después de la adición, la mezcla de reacción se agitó a 5 °C durante 30 min. Después, se añadió 1-az¡do-2-{2-[2-(2-yodoetox¡)etox¡]etox¡}etano (36,13 g, 109,78 mmol, 3,0 equiv.) a la mezcla de reacción a 5 °C (hielo/agua). La mezcla de reacción se agitó a 5 °C (hielo/agua) durante 30 minutos y la mezcla de reacción se calentó a 27 °C y se agitó a 27 °C durante 18 horas.
Después de 18 horas, la mezcla de reacción se vertió en hielo/agua y se extrajo tres veces con diclorometano (400 ml).
Las capas orgánicas combinadas se lavaron tres veces con agua (400 ml) y salmuera (500 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró para dar producto en bruto. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con diclorometano: metanol = 100:1-40:1 hasta el compuesto del título (10,0 g, 57,6 %) en forma de un aceite incoloro. Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+45 (ácido fórmico) = 519]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,93-3,97 (m, 1H), 3,90­ 3,93 (m, J = 2,0 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 3,61-3,71 (m, 14H), 3,37 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatndec-1-il)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida
(34)
Figure imgf000046_0001
Una solución de N-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatndec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-2) (82,0 mg, 0,17 mmol) en ácido acético (6,0 ml), metanol (1,45 ml) y agua (1,45 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de un aceite (43,3 mg, 58 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M-1 = 433]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,21 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,72 (dd, J = 10,1,4,3 Hz, 1H), 3,61-3,69 (m, 16H), 3,38 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 1,99 (s, 3H)
N-[(1S,2R,6R-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-en-1-il)-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-4)
Figure imgf000046_0002
A una solución de N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(hidroximetil)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-1) (50,0 mg, 0,18 mmol) y 3-{2-[2-(2-yodoetoxi)etoxi]etoxi}prop-1-eno
Figure imgf000046_0003
(véase Organic Letters, 5(11), 1887-1890; 2003, 139,0 mg, 0,463 mmol) en diclorometano (1,5 ml) se le añadió hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (95,3 mg, 0,275 mmol) seguido de la adición de hidróxido sódico 12,5 M acuoso (0,75 ml, 9,4 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se diluyó con agua y diclorometano. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces adicionales con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico 1 N, agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto resultante se diluyó con acetato de etilo (5 ml) y el precipitado resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El precipitado se filtró y la torta de filtro se lavó con acetato de etilo (2 x 5 ml). El filtrado se concentró a presión reducida.
El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna ISCO RediSep Gold de 4 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano. Después, la columna eluyó con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (13,6 mg, 17 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 468]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,92 (ddt, J = 16,8, 10,9, 5,7 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17,4, 1,4 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 10,3, 1,0 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,73-3,80 (m, 2H), 3,56-3,72 (m, 12H), 1,98 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,34 (s, 3H).
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-en-1-il)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida
(35)
Figure imgf000047_0001
Una solución de N-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-4,4-dimet¡M-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-en-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-4) (13,0 mg, 0,029 mmol) en ácido acético (1,0 ml), metanol (0,25 ml) y agua (0,25 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (6,5 mg, 55 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 406]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,80-6,09 (m, 1H), 5,28 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 10,5, 1,2 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,5 Hz, 1H), 3,57-3,68 (m, 14H), 1,99 (s, 3H).
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-d¡met¡l-1-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-¡n-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-5)
Figure imgf000047_0002
A una solución de N-[(1S,2R,6R,-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0-2,6-]undec-7-il]acetamida (I-e-1) (100,0 mg, 0,366 mmol) y 3-{2-[2-(2-yodoetox¡)etox¡]etox¡}prop-1-¡na
Figure imgf000047_0003
(véase Synthesis, (10), 1639-1644; 2010, 425,0 mg, 1,43 mmol) en diclorometano (3 ml) se le añadió hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (191 mg, 0,550 mmol) seguido de la adición de hidróxido sódico 12,5 M acuoso (1,5 ml, 19 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se diluyó con agua y diclorometano. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces adicionales con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico 1 N, agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto resultante se diluyó con acetato de etilo (20 ml) y el precipitado resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El precipitado se filtró y la torta de filtro se lavó con acetato de etilo (2 x 15 ml). El filtrado se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna ISCO RediSep Gold de 12 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano. Después, la columna eluyó con un gradiente de metanol al 0­ 20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (70,0 mg, 43 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 466]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,19 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,90-3,97 (m, 2H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,74-3,79 (m, 2H), 3,60-3,72 (m, 12H), 2,85 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 1,98 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-d¡h¡drox¡-1-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-¡n-1-¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-¡l]acetam¡da (36)
Figure imgf000047_0004
Una solución de N-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-4,4-d¡met¡l-1-(2,5,8,11-tetraoxatetradec-13-¡n-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-5) (70,0 mg, 0,16 mmol) en ácido acético (4,0 ml), metanol (1,0 ml), y agua (1,0 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (57,6 mg, 90 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 404]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,22 (s, 1H), 4,19 (d, J = 1,8 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 1H), 3,60-3,69 (m, 14H), 2,86 (s, 1H), 1,99 (s, 3H)
W-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-amino-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (37)
Figure imgf000048_0001
Una solución de N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (34) (40,0 mg, 0,092 mmol) en etanol (2 ml) se pasó a través de1 H-cube (condiciones: catalizador (paladio al 10 % sobre carbono (30x4 mm), caudal: 1 ml/min, temperatura: temperatura ambiente, presión = H2 total). Después de pasar a través del H-cube, la solución se recogió y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (17,2 mg, 46 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 409]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,21 (s, 1H), 3,92-4,00 (m, 2H), 3,89 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,69-3,74 (m, 1H), 3,61-3,69 (m, 14H), 3,56 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 2,85 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 1,99 (s, 3H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(13-hidroxi-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (38)
Figure imgf000048_0002
Se disolvió A/-[(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-(15-fenil-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-il)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida (33) (43 mg, 0,086 mmol) en metanol (2 ml) se pasó a través de1 H-cube (condiciones: catalizador (hidróxido de paladio al 20 % sobre carbono (30x4 mm), caudal: 1 ml/min, temperatura: 60C, presión = H2 total). Después de pasar a través del H-cube, la solución se recogió y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título (32,2 mg, 91 %). RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,21 (s, 1H), 3,98 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 1H), 3,61-3,69 (m, 16H), 3,54-3,59 (m, 2H), 1,99 (s, 3H). RMN 13C (METANOL-d4) 5: 174,1, 102,6, 84,3, 73,8, 72,5, 71,7, 71,7(2), 71,6, 71,5, 71,4, 70,5, 70,2, 69,0, 62,4, 56,4, 22,7
N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-hidroxi-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-6)
Figure imgf000048_0003
Se disolvió N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-dimetil-1-(15-fenil-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-il)-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-3) (2,897 g, 5,37 mmol) en metanol (150 ml), se pasó a través del H-cube (condiciones: catalizador (paladio al 10 % sobre carbono (30x4 mm), caudal: 1 ml/min, temperatura: 60 °C, presión = H2 total). Después de pasar a través del H-cube, la solución se recogió y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (2,5 g, 100 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+1 = 450]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,74-3,80 (m, 2H), 3,60-3,71 (m, 14H), 3,53-3,59 (m, 2H), 1,98 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)
W-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-dimetil-1-(13-oxo-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-6a)
Figure imgf000049_0001
A una solución de W-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-h¡drox¡-2,5,8,11-tetraoxatndec-1-il)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-6) (175 mg, 0,389 mmol) en diclorometano (5,0 ml), se le añadió reactivo de Dess-Martin (354 mg, 0,584 mmol) que dio como resultado una mezcla. Después de ~30 minutos, la reacción se volvió casi homogénea. Después de 3 horas, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con diclorometano. El filtrado se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 24 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano. Los tubos que contenían el producto deseado se concentraron a presión reducida. El material resultante se diluyó con diclorometano (4 ml) y se diluyó con etil éter (10 ml) el cual dio como resultado un precipitado de color blanco. La solución se decantó y el sólido se diluyó con diclorometano (2 ml) y éter etílico (8 ml) y se decantó una segunda vez. La solución decantada se pasó a través de un filtro de jeringa Life Science Acrodisc de 25 mm con una membrana de nailón de 0,45 um. La solución recogida se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (65,0 mg, 37 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 448]. RMN 1H (CLOROFORMO-d) 8: 9,74 (s, 1H), 5,63 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,17 (s, 2H), 4,09-4,15 (m, 1H), 4,01 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,77-3,85 (m, 3H), 3,68-3,76 (m, 5H), 3,61-3,68 (m, 7H), 2,03 (s, 3H), 1,56 (s, 3H), 1,36 (s, 3H).
ácido 1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxat^decan-13-oico (38A)
Figure imgf000049_0002
A una solución de W-[(1S,2R,6R,7R,8S)-4,4-d¡met¡l-1-(13-oxo-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-¡l]acetam¡da (I-e-6a) (60,0 mg, 0,13 mmol) en tetrahidrofurano/t-butanol (1,5 ml/1,5 ml) se la trató con 2-metil-2-buteno (1,0 ml) seguido de una solución de clorito sódico (169,4 mg, 2,01 mmol) y fosfato sódico (250,0 mg, 2,58 mmol) (monobásico y monohidrato, 250 mg, 2,58 mmol) en agua (1,5 ml) a través de una pipeta de vidrio. La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (tres veces). La capa orgánica se descartó. Las capas acuosas se concentraron a presión reducida y el producto en bruto resultante se disolvió en metanol (10 ml) y diclorometano (100 ml) y la mezcla resultante se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida. El material resultante se disolvió en metanol (5 ml) y diclorometano (50 ml) y la mezcla resultante se filtró. El filtrado se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-100 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma como una sal sódica (40 mg, ninguno, 67 %). LRMS [M+1 = 424]; RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,24 (s, 1H), 4,14 (s, 2H), 3,97 (d, J = 10,1 Hz, 2H), 3,90 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,63-3,77 (m, 15H), 2,01 (s, 3H)
metanosulfonato de 1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-ilo (I-e-7)
Figure imgf000049_0003
A una solución de metanosulfonato de 1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡lo (I-e-6) (1117 mg, 2,49 mmol) en diclorometano (12,4 ml), se le añadió trietilamina (1,05 ml, 7,45 mmol) y se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo seguido de la adición de cloruro de metanosulfonilo (0,232 ml, 2,98 mmol). La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después de 1,5 horas, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo una vez adicional con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida produciendo el compuesto del título, que se llevó a cabo en bruto (1300,0 mg, 99,2 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 550]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,34-4,40 (m, 2H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,72-3,81 (m, 4H), 3,59-3,71 (m, 12H), 3,11 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)
S-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}etanotioato (I-e-8)
Figure imgf000050_0001
A una solución de metanosulfonato de 1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-ilo (I-e-7) (125,0 mg, 0,237 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 ml), se le añadió tioacetato potásico (135 mg, 1,18 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 64 horas. Después de 64 horas, la reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (95,2 mg, 79,2%). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 530]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,90-3,97 (m, 2H), 3,86 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,74-3,79 (m, 2H), 3,55-3,72 (m, 14H), 3,08 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,34 (s, 3H)
S-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}etanotioato (39)
Figure imgf000050_0002
Una solución de S-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}etanotioato (I-e-8) (81,0 mg, 0,16 mmol) en ácido acético (6,0 ml), metanol (1,45 ml) y agua (1,45 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (53,7 mg, 72 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 468]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 5,23 (s, 1H), 4,00 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 10,1,4,3 Hz, 1H), 3,63-3,70 (m, 14H), 3,60 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,01 (s, 3H)
N-{(1S,2R,3R,4R,5S)-2,3-dihidroxi-1-[13-(piridin-2-ildisulfanil)-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il]-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il}acetamida (40)
Figure imgf000050_0003
A una solución de S-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]- 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}etanotioato (39) (50 mg, 0,11 mmol) en metanol (3 ml) seguido de la adición de una solución 0,5 M de metóxido sódico en metanol (1,28 ml, 0,642 mmol) y la reacción se dejó en agitación durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de 45 minutos, se añadió ácido acético (42 mg, 0,70 mmol, 0,040 ml) y se agitó durante 10 minutos. Después, la solución de metanol se añadió gota a gota a una solución en agitación de 2,2'-disulfanediildipiridina (35,3 mg, 0,160 mmol) en una mezcla de metanol (2 ml) y ácido acético (1 ml). La reacción se dejó en agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep Gold de 4 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (31,4 mg, 55 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 557]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 8,39 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,83 (td, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 6,8, 5,3 Hz, 1H), 5,21 (s, 1H), 3,92-4,00 (m, 2H), 3,88 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 3,77 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,71 (t, J = 6,0 Hz, 3H), 3,59-3,67 (m, 12H), 3,52-3,58 (m, 2H), 3,02 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,99 (s, 3H)
{1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}carbamato de ferc-butilo (I-f-3)
Figure imgf000051_0001
Véase Journal of Organic Chemistry, 73(14), 5602-5605; 2008 para la síntesis de (I-f-3). ácido 1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)- 2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-aminaclorhídrico (I-p-1)
Figure imgf000051_0002
A una solución de {1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}carbamato de ferc-butilo (I-f-3) (3000 mg, 8,945 mmol) en diclorometano (45 ml), se le añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (20 ml, 89,4 mmol) y la reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la reacción se concentró a presión reducida produciendo de un aceite. Se añadió acetato de etilo (20 ml) a la mezcla en bruto y la mezcla resultante se agitó. Se añadió heptano (20 ml) y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente.
El material se filtró y la torta de filtro se lavó con acetato de etilo y se secó extrayendo al vacío durante 2 horas produciendo el compuesto del título (2140 mg, 88 %). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 4,25 (s, 6H), 3,72 (s, 6H), 2,97 (s, 3H).
[6-({1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}amino)-6-oxohexil]carbamato de bencilo (I-q-1)
Figure imgf000051_0003
A una solución de ácido 6-{[(benciloxi)carbonil]amino}hexanoico
Figure imgf000051_0004
(2910 mg, 11,0 mmol) en N,N-dimetilformamida (4 ml) y tetrahidrofurano (20,0 ml), se le añadieron clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodimiimida (I-p-1) (2150 mg, 11,0 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (1480 mg, 11,0 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 1 hora, tiempo durante el cual la reacción se volvió homogénea. Se añadió ácido 1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-aminaclorhídrico (2130 mg, 7,84 mmol) puro en una porción a la mezcla de reacción en agitación seguido de la adición de N,N-diisopropiletilamina (5,46 ml, 31,4 mmol) y la reacción se calentó a 60 °C durante 24 horas. La reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. La reacción se interrumpió con agua (150 ml) y se extrajo con acetato de etilo. La capa acuosa se lavó un tiempo adicional con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 80 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de un aceite, el cual solidificó después de un periodo de reposo (3250 mg, 86 %). Procedimiento C: Mass-Lynx\Acid_3,0Min.olp - LRMS [M+1 = 483]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,10-7,46 (m, 5H), 5,06 (s, 2H), 4,14 (d, J = 2,0 Hz, 6H), 3,79 (s, 6H), 3,03-3,20 (m, 2H), 2,83 (t, J = 2,1 Hz, 3H), 2,18 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,59 (quint., J = 7,3 Hz, 2H), 1,44-1,54 (m, 2H), 1,28-1,40 (m, 2H) ácido 6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanoico (I-r-1)
Figure imgf000052_0001
A una solución de 2,2'-disulfanediildipiridina
Figure imgf000052_0002
(1490 mg, 6,75 mmol) en una mezcla de etanol (12,0 ml) y ácido acético (0,291 ml) se la agitó en nitrógeno seguido de la adición gota a gota de ácido 6-sulfanilhexanoico
Figure imgf000052_0003
(1000,0 mg, 6,75 mmol) en acetato de etilo (6,0 ml). La reacción se dejó en agitación durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep Gold de 40 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0­ 100 % (modificador de ácido acético al 2 %)/heptano produciendo compuesto del título en bruto (1170 mg). El material en bruto se purificó de nuevo usando el CombiFlash Rf (columna RediSep Gold de 40 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100% (modificador de ácido acético al 2 %)/heptano produciendo el compuesto del título en forma de un aceite (544 mg, 31 %).
1-{[6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-s-1)
Figure imgf000052_0004
A una solución de ácido 6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanoico (I-r-1) (705 mg, 2,2 mmol) en W,W-dimetilformamida (4 ml), se le añadió A/-hidroxisuccinimida (306 mg, 2,66 mmol) seguido de clorhidrato de A/-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodimiimida (520 mg, 2,66 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La mañana siguiente, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado, salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 40 g gold) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título (364 mg, 47 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+1 = 355]. Rm N 1H (METANoL-d4) 8: 8,39 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,85-7,90 (m, 1H), 7,77-7,84 (m, 1H), 7,21 (dd, J = 6,6, 5,5 Hz, 1H), 2,77-2,90 (m, 6H), 2,61 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,63-1,83 (m, 4H), 1,46-1,59 (m, 2H)
W-{1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}-6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanamida (I-t-1)
Figure imgf000052_0005
A una solución de 1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-amina ácido clorhídrico (Ip-1) (100,0 mg, 0,324 mmol) en W,W-dimetilformamida (2,0 ml), se le añadió W,W-diisopropiletilamina (0,339 ml, 1,95 mmol) y se dejó en agitación durante 10 minutos antes de añadirse 1-{[6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-s-1) (138 mg, 0,389 mmol) en una porción y después, la reacción se calentó a 60 °C durante 16 horas. Después de 16 horas, la reacción se diluyó con agua y se extrajo con tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato del etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (66,7 mg, 43 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 497]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,39 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,85-7,90 (m, 1H), 7,78-7,84 (m, 1H), 7,19-7,25 (m, 1H), 4,06-4,23 (m, 6H), 3,72-3,84 (m, 6H), 2,78-2,87 (m, 5H), 2,12-2,20 (m, 2H), 1,71 (quint., J = 7,3 Hz, 2H), 1,57 (quint., J = 7,3 Hz, 2H), 1,36-1,50 (m, 2H)
1-{[4-(benciloxi)butanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-u-1)
Figure imgf000053_0001
A una solución de ácido 4-(benciloxi)butanoico (1000 mg, 3,77 mmol) en W,A/-dimetilformamida (7,54 ml), se le añadió W-Hidroxisuccinimida (521 mg, 4,52 mmol) seguido de clorhidrato de W-(3-dimetilaminopropil)-W'-etilcarbodimiimida (885 mg, 4,52 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La mañana siguiente, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado, salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 40 g gold) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título (1098 mg, 100 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 314]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,11­ 7,50 (m, 5H), 4,51 (s, 2H), 3,56 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,81 (s, 4H), 2,73 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,99 (quint., J = 6,6 Hz, 2H)
4-(benciloxi)-A/-{1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}butanamida (I-v-1)
Figure imgf000053_0002
A una solución de ácido 1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-aminatrifluoroacético (Ip-1) (750,0 mg, 1,62 mmol) en W,A/-dimetilformamida (5 ml), se le añadió W,W-diisopropiletilamina (1,69 ml, 9,71 mmol) y se dejó en agitación durante 10 minutos antes de la adición de 1-{[4-(benciloxi)butanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-u-1) (566 mg, 1,94 mmol) en W,W-dimetilformamida (1 ml) y después, se calentó a 60 °C durante 72 horas. Después de 72 horas, la reacción se diluyó con agua y se extrajo con tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 24 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (495 mg, ninguno, 74 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+1 = 412]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,21-7,41 (m, 5H), 4,51 (s, 2H), 4,12 (d, J = 2,3 Hz, 6H), 3,78 (s, 6H), 3,51 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 2,3 Hz, 3H), 2,28 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,79-1,94 (m, 2H)
(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)carbamato de ferc-butilo (I-w-1)
Figure imgf000054_0001
A un matraz de fondo redondo de 50 ml equipado con una barra de agitación, se le cargó con {1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)- 2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}carbamato de ferc-butilo (I-f-3) (305,0 mg, 0,909 mmol), se le añadió N-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (Ie-2) (1433,0 mg, 3,020 mmol) en t-butanol (12 ml) seguido de la adición de agua (5 ml) seguido de la adición de ascorbato sódico (1840 mg, 9,09 mmol) puro y la reacción se purgó con nitrógeno durante 10 minutos. Se añadió sulfato de cobre (II) (147 mg, 0,909 mmol) en 1 ml de agua (desionizada) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se interrumpió añadiendo la mezcla de reacción a un cloruro de amonio saturado (30 ml) e hidróxido de amonio conc. (3 ml) y se extrajo tres veces con diclorometano (20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 80 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una espuma de color blanco (789,0 mg, ninguno, 49,3 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+45-1 = 1804]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,00 (s, 3H), 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 4,51-4,63 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,87-3,96 (m, 12H), 3,84 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,73-3,80 (m, 6H), 3,64-3,72 (m, 12H), 3,54-3,63 (m, 30H), 1,98 (s, 9H), 1,48 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 1,33 (s, 9H)
N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2.5.8.11- tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3.5.9.11- tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)-6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanamida (I-x-1)
Figure imgf000055_0001
A una solución de N-{1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}-6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanamida (I-t-1) (66,0 mg, 0,l4m m ol) y A/-[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-2) (219 mg, 0,459 mmol) en t-butanol (2 ml), se le añadió agua (0,5 ml, agua desionizada). Se añadió ascorbato sódico (84,3 mg, 0,417 mmol) en forma de un sólido y la mezcla de reacción se purgó con nitrógeno durante 5 minutos antes de la adición de sulfato de cobre (II) (6,73 mg, 0,0417 mmol) en agua (0,5 ml, agua desionizada) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción se interrumpió añadiendo la mezcla de reacción a un cloruro de amonio saturado (20 ml) e hidróxido de amonio conc. (2 ml) y se extrajo tres veces con diclorometano (15 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título impuro (105,0 mg, ninguno, 40%). El producto en bruto (105,0 mg) se purificó de nuevo usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 4 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (94,5 mg, 36%). Procedimiento C: MassLynx\Acid_3,0Min.olp - LRMS [M+Na = 1921]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,38 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,97 (s, 3H), 7,82-7,88 (m, 1H), 7,78-7,81 (m, 1H), 7,20 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,23 (s, 3H), 4,52-4,62 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,86-3,96 (m, 12H), 3,81-3,85 (m, 3H), 3,72-3,80 (m, 12H), 3,54-3,71 (m, 36H), 2,79 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,16 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,98 (s, 9H), 1,64-1,73 (m, 2H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,42 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,32 (s, 9H)
{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2.5.8.11- tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)- 4,4-dimetil-3.5.9.11- tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de bencilo (I-y-1)
Figure imgf000056_0001
A un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con una barra de agitación, se le cargó con [6-({1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}amino)-6-oxohexil]carbamato de bencilo (I-q-1) (880 , 0 mg, 1 , 8 2 mmol), se le añadió N-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]acetamida (I-e-2) (3075,0 mg, 6,8 mmol) en t-butanol (26 ml) seguido de la adición de agua (12 ml) seguido de la adición de ascorbato sódico (3690 mg, 18,2 mmol) puro y la reacción se purgó con nitrógeno durante 10 minutos. Se añadió sulfato de cobre (II) (294 mg, 1,82 mmol) en 1 ml de agua y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se interrumpió añadiendo la mezcla de reacción a un cloruro de amonio saturado (50 ml) e hidróxido de amonio conc. (5 ml) y se extrajo tres veces con diclorometano (45 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 80 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de un sólido (1890,0 mg, 54,4 %) y el compuesto del título impuro. El producto en bruto (1270,0 mg, 36,5 %) se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 80 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol del 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (607,0 mg, 17,5 %). Rendimiento total del compuesto del título 2,497 g (72 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 1907]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 7,21-7,47 (m, 5H), 5,25 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 5,07 (s, 2H), 4,53-4,62 (m, 12H), 4,31 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,18 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,88-3,98 (m, 12H), 3,85 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,74-3,81 (m, 12H), 3,53-3,71 (m, 36H), 3,10 (c, J = 6,2 Hz, 2H), 2,18 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,00 (s, 9H), 1,53-1,65 (m, 2H), 1,50 (s, 11H), 1,34 (s, 11H)
N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)-6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanamida (41)
Figure imgf000057_0001
Una solución de N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-[[(1-[1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)-6-(p¡r¡d¡n-2-ild¡sulfan¡l)hexanam¡da (I-x-1) (94,5 mg, 0,0498 mmol) en ácido acético (4 ml), metanol (1 ml) y agua (1,0 ml) se calentó a 70 °C durante 64 horas. Después de 64 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título impuro en forma de una goma (85,3 mg). El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (47,6 mg, 53,8 %).
Condiciones de purificación:
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por HPLC de fase inversa. Columna: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 65 %/acetonitrilo al 35% en 8,5 min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 9,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 9,0 a 10,0 min. Flujo: 25 ml/min. produciendo 47,6 mg del compuesto del título en forma de una goma (tiempo de retención 2,87, masa observada = 890,4376).
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 50 %/acetonitrilo al 50 % en 3,75 min, a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % a 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min. Tiempo de retención = 2,87; Masa observada = 890,4376. Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M = 889]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,41 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,99 (s, 3H), 7,84-7,91 (m, 2H), 7,26 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,58 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,95 (t, J = 8,8 Hz, 6H), 3,89 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 3,86-3,88 (m, 3H), 3,74­ 3,78 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,4, 4,1 Hz, 3H), 3,54-3,67 (m, 42H), 2,80 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,16 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,68 (quint., J = 7,3 Hz, 2H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,35-1,44 (m, 2H)
N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxabic¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-il}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]metil}-2-am¡nopropox¡)met¡l]-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l}-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-2,3-d¡h¡droxi-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-4-il]acetamida - sal del ácido clorhídrico (42)
Figure imgf000058_0001
Una solución de (1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-[[(1-[1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]metil}propan-2-¡l)carbamato de ferc-butilo (I-w-1) (210 mg, 0,119 mmol) en ácido acético (8,0 ml), metanol (2,0 ml) y agua (2,0 ml) se calentó a 70 °C durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y metanol y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con diclorometano (10 ml) y metanol (4 ml) al cual se añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (2,0 ml, 8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con acetato de etilo (1 ml) y se le añadió heptano (10 ml) y se concentró a presión reducida. Después, el material se colocó a alto vacío durante 18 horas produciendo el compuesto del título en forma de un sólido (198,8 mg, 106 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 1561]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,13-8,21 (m, 3H), 5,22 (s, 3H), 4,71 (s, 9H), 4,65 (d, J = 4,7 Hz, 6H), 3,92-4,00 (m, 12H), 3,90 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 3,58-3,80 (m, 51H), 2,02 (s, 9H)
6-az¡do-N-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ciclo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lamino)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (43)
Figure imgf000059_0001
A una solución de N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-am¡nopropox¡)met¡l]-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l}-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡do[3.2.1]oct-4-¡l]acetam¡da - sal del ác¡do clorhídr¡co (42) (25 mg, 0,016 mmol) en N,N-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml), se le añad¡ó N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,0111 ml, 0,0635 mmol) y se dejó en ag¡tac¡ón durante 10 m¡nutos antes de añad¡rse a 1-[(6-az¡dohexano¡l)ox¡]p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona pura
Figure imgf000059_0002
(véase PCT Int. Appl., 2011034951, 24 de marzo de 2011, 6,05 mg, 0,0238 mmol) y la reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 18 horas. Después, la reacc¡ón se calentó a 60 °C durante 32 horas. Después de 32 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se d¡luyó con sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pasó a través de un f¡ltro de jer¡nga y el mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando cromatografía de fase ¡nversa usando que se ven a cont¡nuac¡ón, produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (6,2 mg, 23 %).
Condiciones de purificación
El res¡duo se d¡solv¡ó en sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pur¡f¡có por HPLC de fase ¡nversa (Columna: Waters Sunf¡re C18 19x100, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 90,0 %/aceton¡tr¡lo al 10,0 % l¡neal a H2O al 70 %/aceton¡tr¡lo al 30 % en 10,5 m¡n, H2O al 70 %/aceton¡tr¡lo al 30 % l¡neal a H2O al 0 %/MeCN al 100 % en 0,5 m¡n, Mantener a H2O al 0 % / aceton¡tr¡lo al 100 % de 11,0 a 12,0 m¡n. Flujo: 25 ml/m¡n.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlant¡s dC184,6x50, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); MobCe fase B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 5 %/aceton¡tr¡lo al 95 % en 4,0 m¡n, Mantener a H2O al 5 % / aceton¡tr¡lo al 95 % de 4,0 a 5,0 m¡n. Flujo: 2 ml/m¡n.; T¡empo de retenc¡ón = 1,77 m¡nutos; Masa observada = 839,7097. Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+1 = 1678]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,00 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,58 (t, J = 4,7 Hz, 6H), 4,57 (s, 6H), 3,95 (t, J = 10,0 Hz, 6H), 3,85-3,92 (m, 9H), 3,74-3,80 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,55-3,68 (m, 42H), 3,25 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,19 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,52-1,62 (m, 4H), 1,33-1,41 (m, 2H) N-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hept-6-enam¡da
(44)
Figure imgf000060_0001
A una solución de N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡hidrox¡-6,8-d¡oxab¡c¡do[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-l3-¡l}-lH-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-am¡nopropox¡)met¡l]-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l}-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡do[3.2.1]oct-4-¡l]acetam¡da - sal del ác¡do clorhídr¡co (42) (25 mg, 0,016 mmol) en W,A/-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml), se le añad¡ó W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,0111 ml, 0,0635 mmol) y se dejó en ag¡tac¡ón durante 10 m¡nutos antes de añad¡rse a 1-(hept-6-eno¡lox¡)p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona pura
Figure imgf000060_0002
(véase Angewandte Chem¡e, Internat¡onal Ed¡t¡on, 51(25), 6144-6148, S6144/1-S6144/53; 2012, 5,36 mg, 0,0238 mmol) y la reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 18 horas. Después, la reacc¡ón se calentó a 60 °C durante 32 horas. Después de 32 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se d¡luyó con sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pasó a través de un f¡ltro de jer¡nga y el mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando cromatografía de fase ¡nversa usando que se ven a cont¡nuac¡ón, produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (4,9 mg, 19 %).
Condiciones de purificación:
El res¡duo se d¡solv¡ó en sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pur¡f¡có por HPLC de fase ¡nversa (Columna: Waters Sunf¡re C18 19x100, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 55 %/aceton¡tr¡lo al 45 % en 10,5 m¡n, H2O al 55 %/aceton¡tr¡lo al 45 % l¡neal a H2O al 0 %/MeCN al 100 % en 0,5 m¡n, Mantener a H2O al 0 % / aceton¡tr¡lo al 100 % de 11,0 a 12,0 m¡n. Flujo: 25 ml/m¡n.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlant¡s dC184,6x50, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 5 %/aceton¡tr¡lo al 95 % en 4,0 m¡n, Mantener a H2O al 5 % / aceton¡tr¡lo al 95 % de 4,0 a 5,0 m¡n. Flujo: 2 ml/m¡n.; T¡empo de retenc¡ón = 1,81; masa observada = 825,2381). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M-1 = 1647]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,69-5,88 (m, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,95 (m, 2H), 4,51-4,63 (m, 12H), 3,95 (t, J = 9,7 Hz, 6H), 3,85-3,91 (m, 9H), 3,74-3,81 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,4, 4,1 Hz, 3H), 3,54-3,68 (m, 42H), 2,17 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,01-2,09 (m, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,52-1,61 (m, 2H), 1,39 (qu¡nt., J = 7,5 Hz, 2H)
N-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8 d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hept-6-¡nam¡da (45)
Figure imgf000061_0001
A una soluc¡ón de N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-l3-¡l}-lH-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-am¡nopropox¡)met¡l]-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l}-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]od-4-¡l]acetam¡da - sal del ác¡do clorhídrico (42) (25 mg, 0,016 mmol) en N,N-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml), se le añad¡ó N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,0111 ml, 0,0635 mmol) y se dejó en ag¡tac¡ón durante 10 m¡nutos, antes de añad¡rse a 1-(hept-6-¡no¡lox¡)p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona pura
Figure imgf000061_0002
(véase PCT Int. Appl., 2007056389, 18 de mayo de 2007, 5,31 mg, 0,0238 mmol) y la reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 18 horas. Después, la reacc¡ón se calentó a 60 °C durante 32 horas. Después de 32 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se d¡luyó con sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pasó a través de un f¡ltro de jer¡nga y el mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando cromatografía de fase ¡nversa usando que se ven a cont¡nuac¡ón, produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (5 mg, 19 %).
Condiciones de purificación:
El res¡duo se d¡solv¡ó en sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pur¡f¡có por HPLC de fase ¡nversa (Columna: Waters Sunf¡re C18 19x100, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 55 %/aceton¡tr¡lo al 45 % en 10,5 m¡n, H2O al 55 %/aceton¡tr¡lo al 45 % l¡neal a H2O al 0 %/MeCN al 100 % en 0,5 m¡n, Mantener a H2O al 0 % / aceton¡tr¡lo al 100 % de 11,0 a 12,0 m¡n. Flujo: 25 ml/m¡n.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlant¡s dC184,6x50, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 5 %/aceton¡tr¡lo al 95 % en 4,0 m¡n, Mantener a H2O al 5 % / aceton¡tr¡lo al 95 % de 4,0 a 5,0 m¡n. Flujo: 2 ml/m¡n.; T¡empo de retenc¡ón = 1,68; Masa observada = 824,2237. Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [1/2M= 823]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,59 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,95 (t, J = 10,0 Hz, 6H), 3,85-3,92 (m, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,54-3,67 (m, 41H), 2,13-2,24 (m, 6H), 1,99 (s, 9H), 1,66 (qu¡nt., J = 7,5 Hz, 2H), 1,50 (qu¡nt., J = 7,3 Hz, 2H)
7-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-7-oxoheptanoato de etilo (I-z-1)
Figure imgf000062_0001
A una solución de ácido 7-etoxi-7-oxoheptanoico
Figure imgf000062_0002
(448 mg, 2,38 mmol) en N,N-dimetilformamida (6,0 ml), se le añadió N-Hidroxisuccinimida (329 mg, 2,86 mmol) seguido de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodimiimida (559 mg, 2,86 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 72 horas. Después de 72 horas, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado, salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 40 g gold) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (426 mg, 63%). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 308]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 4,12 (c, J = 7,0 Hz, 2H), 2,83 (s, 4H), 2,64 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,33 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,74 (quint., J = 7,4 Hz, 2H), 1,58-1,68 (m, 2H), 1,40-1,53 (m, 2H), 1,24 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
ácido 7-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-7-oxoheptanoico (sal sódica) (46)
Figure imgf000062_0003
A una solución de N-[(1S,2R,3R,4R,5S)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]- 2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}-2-aminopropoxi)metil]-1H-1,2,3-triazol-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-4-il]acetamida - sal del ácido clorhídrico (42) (30,0 mg, 0,019 mmol) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml), se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,0133 ml, 0,0762 mmol) y se dejó en agitación durante 10 minutos, antes de añadirse a 7-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-7-oxoheptanoato de etilo (I-z-1) (7,4 mg, 0,026 mmol) puro y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 18 horas. Después, la reacción se calentó a 60 °C durante 32 horas. Después de 32 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con etanol (1 ml) y agua (0,03 ml) seguido de la adición de una solución acuosa 12,5 M de hidróxido sódico (0,015 ml, 0,190 mmol). La reacción se dejó en agitación durante 3 horas a temperatura ambiente. Después de 3 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se filtró a través de un filtro de jeringa. La solución se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (3,7 mg, 11 %).
Condiciones de purificación
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por HPLC de fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 90,0 %/acetonitrilo al 10,0 % lineal a H2O al 70 %/acetonitrilo al 30 % en 10,5 min, H2O al 70 %/acetonitrilo al 30 % lineal a H2O al 0 %/MeCN al 100 % en 0,5 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 11,0 a 12,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; tiempo de retención = 1,58 minutos; Masa observada = 839,7097). Procedimiento C: MassLynx\Acid_3,0Min.olp - LRMS [M+1 = 1681]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,58 (t, J = 4,7 Hz, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,95 (t, J = 9,7 Hz, 6H), 3,89 (dt, J = 9,8, 4,8 Hz, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,53-3,67 (m, 42H), 2,25 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,17 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,58 (dquint., J = 14,3, 7,3 Hz, 4H), 1,31-1,39 (m, 2H) {6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de bencilo (47)
Figure imgf000063_0001
Una solución de {6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-[1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de bencilo (I-y-1) (308 mg, 0,162 mmol) en ácido acético (6 ml), metanol (1,5 ml) y agua (1,5 ml) se calentó a 70 °C durante 64 horas. Después de 64 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título (286 mg, ninguno, 99 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+1 = 1787]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 7,19-7,43 (m, 5H), 5,21 (s, 3H), 5,06 (s, 2H), 4,50-4,66 (m, 12H), 3,95 (dd, J = 9,6, 5,7 Hz, 6H), 3,86-3,91 (m, 9H), 3,74-3,78 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,54-3,67 (m, 42H), 3,03-3,12 (m, 2H), 2,11-2,24 (m, 2H), 1,98 (s, 9H), 1,51-1,63 (m, 2H), 1,43-1,51 (m, 2H), 1,33 (d, J = 6,6 Hz, 2H). sal acetato 6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-123-triazol-4-il)metoxi]-2-1[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (48)
Figure imgf000064_0001
Se disolvió {6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]- 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de bencilo (47) (640 mg, 0,358 mmol) en metanol (20,0 ml) y ácido acético (0,041 ml, 0,717 mmol). Después, la solución se pasó a través del H-cube usando un paladio al 10 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los siguientes parámetros (temperatura = 50 °C, caudal = 1,0 ml/min, presión = H2 total (0,1 MPa)). La solución se recogió y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una espuma de color blanco (572 mg, 93 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 1652]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 8,00 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,59 (t, J = 4,9 Hz, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,95 (d, J = 9,8 Hz, 6H), 3,85-3,92 (m, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,69-3,74 (m, 3H), 3,55-3,69 (m, 42H), 2,91 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,20 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,90 (s, 3H), 1,52­ 1,68 (m, 4H), 1,34-1,43 (m, 2H)
W-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida
A una solución de 6-am¡no-W-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (48) (60 mg, 0,036 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml) y tetrah¡drofurano (0,5 ml), se le añad¡eron W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,0253 ml, 0,145 mmol) y 1-{6-[(2,5-d¡oxop¡rrol¡d¡n-1-¡l)ox¡]-6-oxohex¡l}-1H-p¡rrol-2,5-d¡ona
Figure imgf000065_0001
(12,3 mg, 0,040 mmol) temperatura amb¡ente 16 horas. Después de 16 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando cromatografía de fase ¡nversa usando las s¡gu¡entes cond¡c¡ones, produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (15,4 mg, 23 %).
Condiciones de purificación
El res¡duo se d¡solv¡ó en sulfóx¡do de d¡met¡lo (1 ml) y se pur¡f¡có por columna HPLC de fase ¡nversa: Waters Sunf¡re C18 19x100, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05% en aceton¡tr¡lo (v/v); Grad¡ente: H2O al 80,0 %/aceton¡tr¡lo al 20,0% l¡neal a H2O al 75 %/aceton¡tr¡lo al 25% en 10,5m¡n a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 11,0 m¡n, Mantener a H2O al 0 % / aceton¡tr¡lo al 100 % de 11,0 a 12,0 m¡n. Flujo: 25 ml/m¡n.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlant¡s dC184,6x50, 5u; Fase móv¡l A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móv¡l B: TFA al 0,05 % en aceton¡tr¡lo (v/v); Grad¡ente: H2O al 95,0 %/aceton¡tr¡lo al 5,0 % l¡neal a H2O al 5 %/aceton¡tr¡lo al 95 % en 4,0 m¡n, Mantener a H2O al 5 % / aceton¡tr¡lo al 95 % de 4,0 a 5,0 m¡n. Flujo: 2 ml/m¡n.; T¡empo de retenc¡ón = 1,69 m¡nutos; masa observada = 923,4907. Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M-1 = 1843]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,00 (s, 3H), 6,80 (s, 2H), 5,21 (s, 3H), 4,59 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,95 (t, J = 9,7 Hz, 6H), 3,90 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 3,88 (d, J = 4,1 Hz, 3H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,55-3,68 (m, 42H), 3,48 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,12 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,11-2,23 (m, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,53-1,66 (m, 6H), 1,48 (qu¡nt., J = 7,2 Hz, 2H), 1,24-1,36 (m, 4H)
N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-12,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-[(bromoacet¡l)am¡no]hexanam¡da (50)
Figure imgf000065_0002
A una soluc¡ón de 6-am¡no-W-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (48) (60 mg, 0,036 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml) y tetrah¡drofurano (0,5 ml), se le añad¡eron WW-diisopropiletilamina (0,0253 ml, 0,145 mmol) y 6-[(bromoacetil)amino]hexanoato de pentafluorofenilo
Figure imgf000066_0001
(véase Chemistry -A European Journal, 14(16), 4939-4947; 2008, 16,7 mg, 0,0400 mmol) temperatura ambiente 16 horas. Después de 16 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las condiciones siguientes, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (4,4 mg, 6,4 %). Masa observada: 944,1543
Condiciones de purificación
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 75 %/acetonitrilo al 25% en 10,5min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 11,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 11,0 a 12,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 1,64 minutos; masa observada = 944,1543. Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 1886]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,57-4,62 (m, 6H), 4,56 (s, 6H), 3,92-3,98 (m, 6H), 3,83-3,91 (m, 10H), 3,80 (s, 2H), 3,69­ 3,79 (m, 12H), 3,54-3,68 (m, 43H), 3,13 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,18 (d, J = 6,5 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,59-1,67 (m, 2H), 1,51-1,59 (m, 4H), 1,48 (s a, 2H), 1,27-1,41 (m, 4H)
{(1 S)-1-c¡clopent¡l-2-[(2,5-d¡oxop¡rrol¡d¡n-1-¡l)ox¡]-2-oxoet¡l}carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (I-aa-1)
Figure imgf000066_0002
Se añadió WW-diciclohexilcarbodiimida (247 mg, 1,2 mmol) en porciones a una solución de ácido (2S)-ciclopentil{[(9H-fluoren^-ilmetoxOcarboni^amino^tanoico
Figure imgf000066_0003
(380 mg, 1,04 mmol) y W-hidroxisuccinimida (137,6 mg, 1,2 mmol) en tetrahidrofurano seco (40 ml) a 5-10 °C. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se enfrió a -20 °C, después se filtró para retirar el subproducto. La torta de filtro se lavó mediante tetrahidrofurano frío, el filtrado se concentró a sequedad, se purificó por columna ultrarrápida (eluyendo con éter de petróleo: acetato de etilo del 100:10 al 100:50) para proporcionar el compuesto del título (380 mg, 79 %).
N~5~-carbamo¡l-W~2~-[(2S)-2-c¡clopent¡l-2-{[(9H-fluoren-9-¡lmetox¡)carbon¡l]am¡no}acet¡l]-L-orn¡t¡na (I-ab-1)
Figure imgf000067_0001
A la solución de ácido (2S)-2-amino-5-(carbamoilamino)pentanoico (151 mg, 0,86 mmol) y bicarbonato sódico (72,5 mg, 0,86 mmol) en agua (15 ml), se le añadió tetrahidrofurano (10 ml) a 0 °C. A la mezcla resultante, se le añadió gota a gota una solución de {(1S)-1-ciclopentil-2-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-2-oxoetil}carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (I-aa-1) (380 mg, 0,82 mmol) en 1,2-dimetoxi-etano (15 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se lavó 4 veces con metil-tercbutil éter (50 ml). La fase orgánica se descartó y la capa acuosa se acidificó a pH=3-4 por ácido clorhídrico acuoso (1 M). La solución se extrajo usando cloroformo/alcohol isopropílico (4:1) (50 ml) 6 veces. La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato sódico, se concentró a sequedad para proporcionar el compuesto del título (403 mg, 93,7 %) en forma de un sólido de color blanco.
9H-fluoren-9-ilmetil[(1S)-2-{[(2S)-5-(carbamoilamino)-1-{[4-(hidroximetil)fenil]amino}-1-oxopentan-2-il]amino}-1-ciclopentil-2-oxoetil]carbamato (I-ac-1)
Figure imgf000067_0002
A la solución de N~5~-carbamoil-W~2~-[(2S)-2-ciclopentil-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}acetil]-L-ornitina (I-ab-1) (500 mg, 0,95 mmol) y alcohol 4-aminobencílico (470 mg, 3,82 mmol) en diclorometano/metanol (30 ml/15 ml), se le añadió W-etoxicarbonil-2-etoxi-1,2-dihidroquinolina (708 mg, 2,86 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche en la oscuridad. La mañana siguiente, la reacción se concentró a presión reducida y el residuo se lavó con metil ferc-butil éter (100 mlx3). Después, la torta de filtro se purificó por HPLC prep. (véase condiciones a continuación) para dar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo (31 mg, 5,1 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO): 89,95 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 7,90-7,88 (d, 2H), 7,73-7,71 (t, 2H), 7,55-7,53 (t, 2H), 7,41 (t, 2H), 7,34-7,30 (t, 2H), 7,24-7,22 (d, 2H), 5,96 (t, 1H), 5,39 (s, 2H), 5,11-5,08 (t, 1H), 4,44-4,42 (d, 3H), 4,32­ 4,23 (m, 3H), 3,96-3,92 (t, 1H), 3,01-3,00 (m, 3H), 2,15-2,13 (m, 1H), 1,66-1,24 (m, 12H), m/z para C35H41N5O6: 628,4 (M+H)+, Tiempo de retención: 4,213 min
Condiciones de purificación:
Columna: DIKMA Diamonsil (2) C18 200*20 mm*5um; fase móvil: de acetonitrilo al 30 % en agua (TFA al 0,1 %) a acetonitrilo al 50 % en agua (TFA al 0,1 %); longitud de onda = 220 nm; tratamiento: concentrado y liofilizado.
Condiciones QC:
Columna: Ultimate XB-C18,3*50 mm, 3 um; Tiempo de retención: 4,33 min; Fase móvil: A, agua (2,7 ml de TFA en 4 l agua) B, acetonitrilo (2,5 ml TFA en 4 l acetonitrilo) gradiente de elución 1 %-100 %; Longitud de onda: 220 nm; valor ee: 100 %. Columna: Chiralcel OD-3 50*4,6 mm I.D., 3 um; tiempo de retención: 1,923 minutos; Fase móvil: etanol (DEA al 0,05%) en CO2 del 5% al 40%; caudal: 2,5 ml/minutos; Longitud de onda: 254 nm; valor ee = 100%. Columna: AD-3 50*4,6 mm I.D., 3 um; tiempo de retención: 1,981 min.; Fase móvil: etanol (DEA al 0,05 %) en CO2 del 5 % al 40 %; Caudal: 2,5 ml/min.; longitud de onda: 220 nm
W~2~-[(2S)-2-amino-2-ciclopentilacetil]-W~5~-carbamoil-W-[4-(hidroximetil)fenil]-L-ornitinamida (I-ad-1)
Figure imgf000068_0001
A una solución agitada de [(1S)-2-{[(2S)-5-(carbamoilamino)-1-{[4-(hidroximetil)fenil]amino}-1-oxopentan-2-il]amino}-1 -ciclopentil-2-oxoetil]carbamato de 9H-fluoren-9-ilmetilo (I-ac-1) (500 mg, 0,797 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml), se le añadió gota a gota piperidina (4 ml) a 5°C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. La reacción se concentró a sequedad. El producto en bruto se lavó con diclorometano (20 ml), se filtró y la torta de filtro se secó al vacío para dar el compuesto del título (300 mg, 93,1 %) en forma de un sólido, el cual se usó durante la siguiente etapa sin purificación.
N-[(1S)-2-{[(2S)-5-(carbamoilamino)-1-{[4-(hidroximetil)fenil]amino}-1-oxopentan-2-il]amino}-1-ciclopentil-2-oxoetil]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (I-ae-1)
Figure imgf000068_0002
A una solución agitada de N~2~-[(2S)-2-amino-2-ciclopentilacetil]-N~5~-carbamoil-N-[4-(hidroximetil)fenil]-L-ornitinamida (I-ad-1) (300 mg, 0,74 mmol) en N,N-dimetilformamida (12 ml), se le añadió 1-{6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-6-oxohexil}-1H-pirrol-2,5-diona (272 mg, 0,889 mmol) a 3 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se añadió gota a gota en metil ferc-butil éter (250 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, se filtró y la torta de filtro se concentró a sequedad para dar el compuesto del título (300 mg, 67,8 %) en forma de un sólido, el cual se usó para la siguiente etapa sin purificación.
N~5~-carbamoil-N~2~-[(2S)-2-ciclopentil-2-{[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil]amino}acetil]-N-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida (I-af-1)
Figure imgf000068_0003
A una solución agitada de A/-[(1S)-2-{[(2S)-5-(carbamo¡lam¡no)-1-{[4-(hidrox¡met¡l)fen¡l]am¡no}-1-oxopentan-2-il]amino}-1-ciclopentil-2-oxoetil]-6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamida (I-ae-1) (300 mg, 0,740 mmol) en N,N-dimetilformamida (12 ml), se le añadieron bis(4-nitrofenil)carbonato (900 mg, 2,96 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (390 mg, 2,96 mmol) a 3 °C en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se añadió gota a gota en metil ferc-butil éter (60 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 20 min, se filtró y la torta de filtro se lavó con metil ferc-butil éter (100 ml). El producto en bruto se secó al vacío a sequedad. El producto en bruto se purificó por columna ultrarrápida eluyendo con diclorometano: metanol de 100:1 a 94:6 para proporcionar el compuesto del título (50 mg, 17,7 %) en forma de un sólido. RMN 1H (400 MHz, DMSO): 810,09 (a, 1H), 8,33 (d, 2H), 8,13 (d, 1H), 7,93 (d, 1H), 7,67-7,41 (m, 6H), 7,01 (s, 2H), 5,98 (a, 1H), 5,43 (s, 2H), 5,25 (s, 2H), 4,39 (m, 1H), 4,23-4,19 (m, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,03-2,96 (m, 2H), 2,14-2,11 (m, 3H), 1,70-1,19 (m, 19H). CL-EM: m/z para C37H45N7O11: 764,3 (M+H)+; Tiempo de retención: 0,823 min.
{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1 R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1 -{1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de 4-{[(2R)-5-(carbamoilamino)-2-{[(2R)-2-ciclopentil-2-{[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1R-pirrol-1-il)hexanoil]amino}acetil]amino}pentanoil]amino}bencilo
Figure imgf000069_0001
A una solución de 6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1 -il]-2,5,8,11 -tetraoxatridecan-13-il}-1 R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1 -{1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (48) (45 mg, 0,027 mmol) en N,N-dimetilformamida (0,5 ml) y tetrahidrofurano (0,3 ml), se le añadieron N,N-diisopropiletil amina (0,019 ml, 0,109 mmol) y N~5~-carbamoil-N~2~-[(2S)-2-ciclopentil-2-{[6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1 R-pirrol-1-il)hexanoil]amino}acetil]-N-[4-({[(4-nitrofenoxi)carbonil]oxi}metil)fenil]-L-ornitinamida (I-af-1) (20,8 mg, 0,0272 mmol) a temperatura ambiente 18 horas. Después de 18 horas, se extrajo una muestra y la UPLC mostró la formación del producto deseado. La mezcla de reacción en bruto se concentró a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (21,7 mg, 35 %).
Condiciones de purificación:
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 75,0 %/acetonitrilo al 25,0% lineal a H2O al 65 %/acetonitrilo al 35% en 10,5min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 11,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 11,0 a 12,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; tiempo de retención = 1,99 minutos; Tiempo de retención = 1,99 minutos; Masa observada = 1139,1254. Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [1/2M= 1138]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 7,99 (s, 3H), 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 6,79 (s, 2H), 5,21 (s, 3H), 5,01 (s, 2H), 4,55-4,64 (m, 12H), 4,51 (dd, J = 9,0, 5,1 Hz, 1H), 4,43 (c, J = 7,2 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 9,8 Hz, 6H), 3,85-3,91 (m, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,54-3,67 (m, 41H), 3,47 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,16-3,26 (m, 1H), 3,10-3,16 (m, 1H), 3,07 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,24 (c, J = 7,7 Hz, 3H), 2,16 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,85-1,95 (m, 1H), 1,42-1,84 (m, 16H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,23-1,34 (m, 5H)
N-(1,3-bis[(1 -{1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1 -il]-2,5,8,11 -tetraoxatridecan-13-il}-1 R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1 -{1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)-3,19-dioxo-1-(piridin-2-ildisulfanil)-7,10,13,16-tetraoxa-4,20-diazahexacosan-26-amida
Figure imgf000070_0001
A una solución de sal acetato 6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (48) (70,0 mg, 0,041 mmol) y N-{15-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-15-oxo-3,6,9,12-tetraoxapentadec-1-il}-3-(piridin-2-ildisulfanil)propanamida
Figure imgf000070_0002
(27,5 mg, 0,0491 mmol) en N,N-dimetilformamida (0,6 ml) y tetrahidrofurano (0,6 ml), se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,0285 ml, 0,164 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente 18 horas. Después de 18 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (47,7 mg, 56 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/3M+1= 699]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 8,47 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 8,01 (s, 3H), 7,93 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 7,30-7,38 (m, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,57-4,62 (m, 6H), 4,57 (s, 6H), 3,92-3,99 (m, 6H), 3,89 (dd, J = 10,7, 4,9 Hz, 9H), 3,74-3,80 (m, 9H), 3,72 (dd, J = 9,8, 4,7 Hz, 6H), 3,51-3,68 (m, 55H), 3,35-3,41 (m, 2H), 3,14 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,64 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,17 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,52-1,61 (m, 2H), 1,43-1,51 (m, 2H), 1,27-1,38 (m, 2H) Condiciones de purificación
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0 % lineal a H2O al 70 %/acetonitrilo al 30 % en 8,5 min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 9,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 9,0 a 10,0 min. Flujo: 25 ml/min. Condiciones QC
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 1,78 minutos; masa observada = 699,6404
N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1 H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1 -{1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)-3,31-dioxo-1-(piridin-2-ildisulfanil)-7,10,13,16,19,22,25,28-octaoxa-4,32-diazaoctatriacontan-38-amida (53)
Figure imgf000071_0001
A una solución de sal acetato de 6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (48) (70,0 mg, 0,041 mmol) y N-{27-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-27-oxo-3,6,9,12,15,l8,21,24-octaoxaheptacos-1-il}-3-(piridin-2-ildisulfanil)propanamida
Figure imgf000071_0002
(30,1 mg, 0,041 mmol) en N,N-dimetilformamida (0,6 ml) y tetrahidrofurano (0,6 ml), se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,0285 ml, 0,164 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente 18 horas. Después de 18 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (59,2 mg, 64 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/3M= 757]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 8,47 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,01 (s, 3H), 7,92 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 7,30-7,39 (m, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,57-4,62 (m, 6H), 4,57 (s, 6H), 3,92-3,99 (m, 6H), 3,86-3,92 (m, 9H), 3,77 (s, 9H), 3,69-3,74 (m, 6H), 3,50-3,68 (m, 73H), 3,14 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,64 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,17 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,53-1,63 (m, 2H), 1,42-1,52 (m, 2H), 1,32 (dt, J = 15,1, 7,5 Hz, 2H)
Condiciones de purificación
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 70 %/acetonitrilo al 30% en 8,5 min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 9,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 9,0 a 10,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; tiempo de retención = 1,85 minutos; masa observada = 758,405
6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)- 4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0-2,6-]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (I-ag-1)
Figure imgf000072_0001
Se disolvió {6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-[[(1-[1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}carbamato de benc¡lo (I-y-1) (1200 mg, 0,63 mmol) en metanol (30 ml). Después, la soluc¡ón se pasó a través de1H-cube usando un palad¡o al 10 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los s¡gu¡entes parámetros (temperatura = 50 °C, caudal = 1,0 ml/m¡n, pres¡ón = H2 total (0,1 MPa)). La soluc¡ón se recog¡ó. Se extrajo una muestra y la UPLC mostró que quedaba mater¡al de part¡da. La reacc¡ón se pasó a través del H-cube por segunda vez usando los parámetros anter¡ores. La soluc¡ón recog¡da se concentró a pres¡ón reduc¡da dando el compuesto del título como una espuma de color blanco (1039 mg, 93 %). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 1,5 m¡nutos LRMS [1/2M = 886]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 4,45-4,62 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,87-3,98 (m, 12H), 3,73-3,85 (m, 15H), 3,54-3,70 (m, 36H), 2,87 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,20 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,98 (s, 9H), 1,53-1,69 (m, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,34-1,41 (m, 2H), 1,33 (s, 9H)
W-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2.5.8.11- tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-y!)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3.5.9.11- tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)hexanam¡da (I-ag-2)
Figure imgf000073_0001
A una solución de 6-am¡no-W-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]- 2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-7,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (I-ag-1) (105,0 mg, 0,0593 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (0,5 ml) y tetrahidrofurano (0,5 ml), se le añadió N,N-di¡sopropilet¡lam¡na (0,031 ml, 0,178 mmol) y se dejó en ag¡tac¡ón durante 10 m¡nutos antes de añad¡rse a 1-{[6-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)hexano¡l]ox¡}p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona (I-s-1) (25,2 mg, 0,0711 mmol) y después, la reacc¡ón se calentó a temperatura amb¡ente durante 16 horas. Después de 16 horas, la reacc¡ón se d¡luyó con agua (15 ml) y salmuera (5 ml) y se extrajo tres veces con d¡clorometano (20 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato de magnes¡o, se f¡ltraron y se concentraron a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 12 g de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0­ 20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título (59,6 mg, 50 %). Proced¡m¡ento C: MassLynx\Ac¡d_3,0M¡n.olp - LRMS [1/2M+1 = 1006]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,39 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,98 (s, 3H), 7,83-7,87 (m, 1H), 7,77-7,83 (m, 1H), 7,21 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 4,50-4,64 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,87-3,96 (m, 12H), 3,84 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,71-3,79 (m, 15H), 3,54-3,70 (m, 31H), 3,18-3,28 (m, 2H), 3,13 (c, J = 6,5 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,12-2,23 (m, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,71 (qu¡nt., J = 7,3 Hz, 2H), 1,51-1,64 (m, 6H), 1,44-1,51 (m, 11H), 1,28-1,34 (m, 11H)
N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)hexanam¡da (54)
Figure imgf000074_0001
Una solución de N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-il)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)hexanam¡da (I-ag-2) (59 mg, 0,029 mmol) en ácido acético (4 ml), metanol (1 ml) y agua (1 ml) se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en bruto (50,5 mg, 91 %). El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando la siguientes condiciones y produciendo el compuesto del título en forma de una goma (25,2 mg, 45 %)
Condiciones de purificación:
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 70 %/acetonitrilo al 30% en 10,5min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 11,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 11,0 a 12,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 1,96 minutos; masa observada = 946,5137. Procedimiento C: Massl_ynx\Acid_3,0Min.olp - LRMS [1/2M+1 = 946]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,45 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,01 (s, 3H), 7,94 (d, J = 3,1 Hz, 2H), 7,29-7,36 (m, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,57-4,62 (m, 6H), 4,57 (s, 6H), 3,92-4,00 (m, 6H), 3,89 (dd, J = 10,7, 4,9 Hz, 9H), 3,74-3,80 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,1, 4,3 Hz, 3H), 3,53­ 3,68 (m, 42H), 3,13 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,85 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,17 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,71 (quint., J = 7,4 Hz, 2H), 1,52-1,64 (m, 4H), 1,45 (td, J = 15,0, 7,8 Hz, 4H), 1,26-1,37 (m, 2H)
{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxathciclo[6.2.1.0-2,6-]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-?,2,3-triazol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4 3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato de 2-(pir¡d¡n-2-¡ld¡sulfanil)et¡lo (I-ag-3)
Figure imgf000075_0001
A una solución de 6-am¡no-W-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]- 2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡do[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (I-ag-1) (61,4 mg, 0,0347 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (0,3 ml) y tetrah¡drofurano (0,3 ml)se le añad¡eron N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,0241 ml, 0,139 mmol) y 2-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)et¡l carbonato de 4-n¡trofen¡lo
Figure imgf000075_0002
(véase European Journal of Med¡c¡nal Chem¡stry, 82, 355-362; 2014, 18,0 mg, 0,051 mmol) temperatura amb¡ente 16 horas. Después de 16 horas, la mezcla de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 4 g Gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (57,4 mg, n¡nguno, 83 %). Proced¡m¡ento C: MassLynx\Ac¡d_3,0M¡n.olp - LRMS [1/2M+1 = 993]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,40 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,98 (s, 3H), 7,83-7,89 (m, 1H), 7,75-7,83 (m, 1H), 7,15-7,25 (m, 1H), 5,22 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 4,51-4,64 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,23 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,86-3,97 (m, 12H), 3,83 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,72-3,79 (m, 12H), 3,53-3,69 (m, 36H), 3,05 (t, J = 5,7 Hz, 4H), 2,17 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,98 (s, 9H), 1,51-1,61 (m, 2H), 1,48 (s, 11H), 1,33 (s, 11H)
{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)- 4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}carbamato de 2-(p¡r¡d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)et¡lo
Figure imgf000076_0001
Una solución de 2-(piridin-2-ildisulfanil)etil {6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0-2,6-]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1 H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}carbamato (I-ag-3) (57,4 mg, 0,0289 mmol) en ácido acético (4,0 ml), metanol (1,0 ml) y agua (1,0 ml) se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (29,8 mg, 55 %)
Condiciones de purificación:
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 70 %/acetonitrilo al 30% en 10,5min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 11,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 11,0 a 12,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 1,91 minutos; masa observada = 933,4313. Procedimiento C: MassLynx\Acid_3,0Min.olp - LRMS [1/2M+1 = 933]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 8,46 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 8,01 (s, 3H), 7,86-7,97 (m, 2H), 7,32 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 5,21 (s, 3H), 4,55-4,62 (m, 12H), 4,24 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,92-3,99 (m, 6H), 3,85-3,92 (m, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,52­ 3,68 (m, 42H), 2,99-3,15 (m, 4H), 2,17 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,56 (quint., J = 7,4 Hz, 2H), 1,42-1,50 (m, 2H), 1,24-1,38 (m, 2H) 1-{[6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-ah-1)
Figure imgf000076_0002
Una solución de clorotris(trifenilfosfina)rodio (I), catalizador Wilkinson (39,7 mg, 0,0429 mmol) en diclorometano (5,0 ml) se purgó con nitrógeno durante 10 minutos antes de la adición gota a gota de 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (299 mg, 2,34 mmol, 0,340 ml). La reacción se dejó en agitación durante 10 minutos a temperatura ambiente. hex-5-enoato de 2,5-dioxopirrolidin-1-ilo
Figure imgf000077_0001
(véase Journal of the American Chemical Society, 132(35), 12197-12199; 2010, 412 mg, 1,95 mmol) se disolvió en diclorometano (1,0 ml) y se añadió gota a gota. La reacción se dejó en agitación durante 18 horas a temperatura ambiente. La mañana siguiente, la reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 24 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0­ 100 %/heptano produciendo compuesto del título en bruto (366 mg). El compuesto del título en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 24 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de un aceite (271,0 mg, ninguno, 41,0 %). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 2,83 (s, 4H), 2,61 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,71 (quint., J = 7,1 Hz, 2H), 1,38-1,50 (m, 4H), 1,24 (s, 12H), 0,75 (t, J = 6,8 Hz, 2H).
W-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2.5.8.11- tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3.5.9.11- tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (I-ag-4)
Figure imgf000077_0002
A una solución de 6-amino-W-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]- 2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (I-ag-1) (200 mg, 0,113 mmol) en W,W-dimetilformamida (0,6 ml) y tetrahidrofurano (0,6 ml), se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,0786 ml, 0,451 mmol) seguido de la adición de 1-{[6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-ah-1) (57,4 mg, 0,169 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (209,0 mg, ninguno, 93 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M = 998]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 5,23 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 4,52-4,62 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,87-3,97 (m, 12H), 3,84 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 3,72-3,79 (m, 12H), 3,54­ 3,69 (m, 36H), 3,13 (c, J = 6,6 Hz, 2H), 2,16 (c, J = 7,3 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,52-1,66 (m, 4H), 1,44-1,51 (m, 11H), 1,35-1,43 (m, 2H), 1,27-1,35 (m, 13H), 1,18-1,25 (m, 12H), 0,73 (t, J = 7,6 Hz, 2H)
N-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6 oxohexil}-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (56)
Figure imgf000078_0001
Una solución de N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatricido[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-il}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)hexanam¡da (I-ag-4) (104,0 mg, 0,052l mmol) en ácido acético (4 ml), metanol (1 ml) y agua (1 ml) se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en bruto (112,0 mg, 115 %). Se purificó una porción del compuesto del título en bruto (52,7 mg) usando cromatografía de fase inversa produciendo el compuesto del título en forma de una goma (18,2 mg, 19 %)
Condiciones de purificación
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 80,0 %/acetonitrilo al 20,0% lineal a H2O al 65 %/acetonitrilo al 35% en 8,5 min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 9,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 9,0 a 10,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 2 minutos; Masa observada = 938,9628). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,01 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,51-4,66 (m, 12H), 3,95 (dd, J = 9,4, 5,9 Hz, 6H), 3,89 (dd, J = 11,7, 4,7 Hz, 9H), 3,74-3,81 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,52-3,68 (m, 42H), 3,13 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,17 (c, J = 7,0 Hz, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,53-1,66 (m, 4H), 1,45-1,52 (m, 2H), 1,36-1,44 (m, 2H), 1,27­ 1,35 (m, 4H), 1,23 (s, 12H), 0,73 (t, J = 7,6 Hz, 2H)
7-[(1,3-dihidrox¡propan-2-¡l)am¡no]-7-oxoheptanoato de etilo (I-ai-1)
Figure imgf000078_0002
A una solución de 7-[(2,5-dioxop¡rrol¡din-1-¡l)ox¡]-7-oxoheptanoato de etilo (I-z-1) (228,0 mg, 0,799 mmol) en N,N-dimetilformamida (1,0 ml), se le añadió N,N-diisoprop¡let¡lam¡na (0,557 ml, 3,20 mmol) y se dejó en agitación durante 10 minutos antes de la adición de 2-aminopropano-1,3-diol (72,8 mg, 0,799 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. Después de 72 horas, la reacción se diluyó con agua y se extrajo 3 veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida produciendo compuesto del título en bruto (89,0 mg, ninguno, 43 %). La capa acuosa se concentró a presión reducida. La capa acuosa concentrada en bruto se diluyó con metanol (5 ml) y diclorometano (10 ml). La mezcla se decantó y se combinó con compuesto del título en bruto de la primera extracción. La solución se concentró a presión reducida. El material en bruto combinado se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (183,0 mg, 88 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+1 = 262]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 4,11 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 3,83-3,99 (m, 1H), 3,60 (d, J = 5,5 Hz, 4H), 2,31 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,63 (quint., J = 7,5 Hz, 4H), 1,30-1,45 (m, 2H), 1,24 (t, J = 7,0 Hz, 3H)
7-[(2,2-dimetil-1,3-dioxan-5-il)amino]-7-oxoheptanoato de etilo (I-aj-1)
Figure imgf000079_0001
A una solución de 7-[(1,3-dihidroxipropan-2-il)amino]-7-oxoheptanoato de etilo (I-ai-1) (180,0 mg, 0,689 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 ml), se le añadió 2,2-dimetoxipropano (0,53 ml, 4,13 mmol) seguido de ácido (1S)-(+)-10-alcanforsulfónico (64,0 mg, 0,276 mmol). La reacción se calentó a 70 °C durante 72 horas. Después de 72 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se repartió entre agua (20 ml) y acetato de etilo (10 ml). Las capas se extrajeron y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó dos veces adicionales con acetato de etilo (10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en bruto (94,0 mg, ninguno, 45 %).
ácido 7-[(2,2-dimetil-1,3-dioxan-5-il)amino]-7-oxoheptanoico (I-ak-1)
Figure imgf000079_0002
A una solución de 7-[(2,2-dimetil-1,3-dioxan-5-il)amino]-7-oxoheptanoato de etilo (I-aj-1) (94,0 mg, 0,31 mmol) en etanol (5 ml), se le añadió hidróxido sódico acuoso 1,0 M (1,5 ml, 1,5 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La mañana siguiente, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto resultante se diluyó con ácido clorhídrico 1 N (3,0 ml) y acetato de etilo. Las capas se separaron y la capa orgánica se extrajo dos veces adicionales con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida produciendo el compuesto del título en bruto (29,4 mg, ninguno, 34 %).
N-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}-N'-(1,3-dihidroxipropan-2-il)heptanodiamida (57)
A una solución de ácido 7-[(2,2-dimetil-1,3-dioxan-5-il)amino]-7-oxoheptanoico (I-ak-1) (18,8 mg, 0,0688 mmol) en WA-dimetilformamida (0,3 ml) y tetrahidrofurano (0,3 ml), se le añadieron 1-Hidroxibenzotriazol (10,3 mg, 0,0762 mmol) y clorhidrato de W-^-dimetilammopropi^-W-etilcarbodimMmida (14,9 mg, 0,0762 mmol) y la reacción se dejó en agitación durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se añadió a 6-amino-W-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatric¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxat^decan-13-¡l}-1H-1,2,3-t^azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11 -tetraoxatridecan-13-il}-1 H-1,2,3-t^azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-il)hexanamida (I-ag-1) (75,0 mg, 0,042 mmol) seguido de la adición de WA-diisopropiletilamina (0,0295 ml, 0,169 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. Después de 16 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se disolvió en ácido acético (4,0 ml), metanol (1 ml) y agua (1,0 ml), se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida produciendo compuesto del título en bruto (175,0 mg, 220%). El compuesto del título en bruto se purificó por cromatografía de fase inversa usando las siguientes condiciones, produciendo el compuesto del título en forma de una goma (10,9 mg, 14 %)
Condiciones de purificación:
El residuo se disolvió en sulfóxido de dimetilo (1 ml) y se purificó por columna HPLC de fase inversa: Waters Sunfire C18 19x100, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05% en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05% en acetonitrilo (v/v); Gradiente: H2O al 85,0 %/acetonitrilo al 15,0% lineal a H2O al 75 %/acetonitrilo al 25% en 8,5 min a H2O al 0 %/MeCN al 100 % a 9,0 min, Mantener a H2O al 0 % / acetonitrilo al 100 % de 9,0 a 10,0 min. Flujo: 25 ml/min.
Condiciones QC:
Columna: Waters Atlantis dC184,6x50, 5u; Fase móvil A: TFA al 0,05 % en agua (v/v); Fase móvil B: TFA al 0,05 % en acetonitrilo (v/v); H2O al 95,0 %/acetonitrilo al 5,0 % lineal a H2O al 5 %/acetonitrilo al 95 % en 4,0 min, Mantener a H2O al 5 % / acetonitrilo al 95 % de 4,0 a 5,0 min. Flujo: 2 ml/min.; Tiempo de retención = 1,53 minutos; masa observada = 934,548. Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 1889]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,00 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,52-4,62 (m, 12H), 3,95 (t, J = 9,4 Hz, 6H), 3,85-3,91 (m, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,55-3,67 (m, 47H), 3,12 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,22 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,17 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,58-1,69 (m, 4H), 1,51-1,57 (m, 2H), 1,48 (quint., J = 7,2 Hz, 2H), 1,26-1,40 (m, 4H)
6-az¡do-W-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxat^c¡clo[6.2.1.0-2,6-]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)- 4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-t^azol-4-iOmetox^meti^propan^-i^amino^-oxohexi^hexanamida (I-ag-5)
Figure imgf000080_0001
A una solución de 6-am¡no-W-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-t^azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1 [(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)hexanam¡da (I-ag-1) (300 mg, 0,169 mmol) en N, N-d¡met¡lformam¡da (0,6 ml) y tetrah¡drofurano (0,6 ml), se le añad¡eron N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,118 ml, O, 677 mmol) y 1-[(6-az¡dohexano¡l)ox¡]p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona (56,0 mg, 0,220 mmol). La reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. La mezcla de reacc¡ón en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 24 g gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (269 mg, 83 %). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [1/2M+1 = 956]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 5,22 (s, 3H), 4,50-4,65 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,5 Hz, 3H), 3,87-3,95 (m, 12H), 3,83 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 3,73-3,79 (m, 12H), 3,55-3,71 (m, 36H), 3,26-3,30 (m, 2H), 3,14 (c, J = 6,5 Hz, 2H), 2,18 (c, J = 7,6 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,53-1,68 (m, 6H), 1,45-1,51 (m, 11H), 1,36-1,43 (m, 2H), 1,29-1,36 (m, 11H)
6-az¡do-N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}hexanam¡da (58)
Figure imgf000081_0001
Una soluc¡ón de 6-az¡do-N-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-7,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}hexanam¡da (I-ag-5) (25,0 mg, 0,013 mmol) en ác¡do acét¡co (3 ml), metanol (0,75 ml) y agua (0,75 ml) se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se d¡luyó con tolueno y se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (22,7 mg, 97%). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+1 = 1791]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,51-4,66 (m, 12H), 3,92-4,01 (m, 6H), 3,89 (dd, J = 10,1,4,7 Hz, 9H), 3,74-3,81 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,52-3,68 (m, 42H), 3,25-3,30 (m, 2H), 3,08-3,19 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,54­ 1,69 (m, 6H), 1,49 (dt, J = 14,4, 7,2 Hz, 2H), 1,36-1,44 (m, 2H), 1,32 (dd, J = 14,8, 6,2 Hz, 2H)
1-{[6-(benc¡lox¡)hexano¡l]ox¡}p¡rrol¡d¡n-2,5-d¡ona (I-al-1)
Figure imgf000081_0002
A una soluc¡ón de ác¡do 6-(benc¡lox¡)hexano¡co
(véase Synlett, (4), 693-697; 2004, 1400,0 mg, 6,298 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 ml), se le añadió N-hidroxisuccinimida (870 mg, 7,56 mmol) seguido de clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodimiimida (1480 mg, 7,56 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. La mañana siguiente, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado, salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 40 g gold) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (715 mg, 36 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 342]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,22-7,42 (m, 5H), 4,51 (s, 2H), 3,53 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,85 (s, 4H), 2,65 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,76 (quint., J = 7,5 Hz, 2H), 1,61-1,71 (m, 2H), 1,47-1,59 (m, 2H)
6-(benciloxi)-N-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-ietraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-7,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-il)am¡no]-6-oxohex¡l}hexanam¡da (I-ag-6)
Figure imgf000082_0001
A una solución de 6-amino-N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-[1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (I-ag-1) (200 mg, 0,113 mmol) en N, N-dimetilformamida (0,6 ml) y tetrahidrofurano (0,6 ml), se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,0786 ml, O, 451 mmol) y 1-{[6-(benciloxi)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona(I-al-1)(46,9 mg, 0,147 mmol) y la reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (203 mg, 91 %). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 7,19-7,38 (m, 5H), 5,23 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 4,52-4,64 (m, 12H), 4,48 (s, 2H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,15 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,86-3,96 (m, 12H), 3,83 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,72­ 3,80 (m, 12H), 3,54-3,70 (m, 36H), 3,49 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,08-3,15 (m, 2H), 2,12-2,26 (m, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,51­ 1,68 (m, 6H), 1,48 (s, 11H), 1,37-1,44 (m, 2H), 1,33 (s, 11H)
6-(benciloxi)-N-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}hexanamida (59)
Figure imgf000083_0001
Una solución de 6-(benciloxi)-A/-16-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxa'tridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1 H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}hexanamida (I-ag-6) (180,0 mg, 0,0911 mmol) en ácido acético (6,0 ml), metanol (1,5 ml) y agua (1,5 ml) se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (164,0 mg, 97,0 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M = 928]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 7,99 (s, 3H), 7,25-7,39 (m, 5H), 5,21 (s, 3H), 4,52-4,66 (m, 12H), 4,48 (s, 2H), 3,92-3,99 (m, 6H), 3,84-3,91 (m, 9H), 3,74-3,81 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,54-3,67 (m, 42H), 3,49 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,08-3,17 (m, 2H), 2,13-2,22 (m, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,51-1,68 (m, 6H), 1,48 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,39 (dt, J = 15,3, 7,8 Hz, 2H), 1,26-1,35 (m, 2H)
acetato de (1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2-(acetiloxi)-1-{13-[4-(4,4-bis{[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-bis(acetiloxi)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}-6,13-dioxo-20-fenil-2,19-dioxa-5,12-diazaicos-1-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il}-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-3-ilo (I-am-1)
Figure imgf000083_0002
Se
2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}hexanam¡da (59) (130 mg, 0,07 mmol) en (3 ml, 40 mmol) y se añad¡ó anhídr¡do acét¡co (0,198 ml, 2,10 mmol) a temperatura amb¡ente. Después, la reacc¡ón se calentó a 50 °C durante una noche. La mañana s¡gu¡ente, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 12 g gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (130,0 mg, 88 %). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [1/2M = 1054]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 7,16-7,39 (m, 5H), 5,44 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 5,32 (s, 3H), 5,10 (dd, J = 10,5, 4,3 Hz, 3H), 4,52-4,60 (m, 12H), 4,48 (s, 2H), 4,18 (d, J = 10,5 Hz, 3H), 3,99 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 3,89 (t, J = 5,1 Hz, 6H), 3,70-3,81 (m, 12H), 3,52-3,67 (m, 39H), 3,49 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,13 (c, J = 6,6 Hz, 2H), 2,13-2,21 (m, 13H), 1,94 (d, J = 1,6 Hz, 18H), 1,51-1,68 (m, 6H), 1,45-1,50 (m, 2H), 1,37-1,43 (m, 2H), 1,28-1,35 (m, 2H)
W-{6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}-6-h¡drox¡hexanam¡da (I-an-1)
Figure imgf000084_0001
Se d¡solv¡ó (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2-(acet¡lox¡)-1-{13-[4-(4,4-b¡s{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-6,13-d¡oxo-20-fen¡l-2,19-d¡oxa-5,12-d¡aza¡cos-1-¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l}-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-3-¡l acetato (I-am-1) (110 mg, 0,0522 mmol) en metanol (10,0 ml) y después, la soluc¡ón se pasó a través del H-cube usando un palad¡o al 10 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los s¡gu¡entes parámetros (Temperatura - 60 °C, Caudal - 1,0ml/m¡n, pres¡ón - H2 total (0,1 Mpa)). La soluc¡ón se recog¡ó y se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (91,6 mg, 87%). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [1/2M = 1009]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 5,44 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 5,32 (s, 3H), 5,10 (dd, J = 10,5, 4,3 Hz, 3H), 4,50-4,64 (m, 12H), 4,18 (d, J = 10,5 Hz, 3H), 3,99 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 3,90 (t, J = 4,9 Hz, 6H), 3,71-3,82 (m, 9H), 3,44-3,66 (m, 44H), 3,08-3,19 (m, 2H), 2,16-2,22 (m, 4H), 2,15 (s, 9H), 1,94 (d, J = 1,2 Hz, 18H), 1,44-1,68 (m, 8H), 1,27-1,42 (m, 4H)
acetato de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5s )- 4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-({6[(6h¡drox¡hexano¡l)am¡no]hexano¡l}am¡no)propox¡}met¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l}-3-(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-2-¡lo (60)
Figure imgf000085_0001
Se disolvió 6-(bendlox¡)-A/-{6-[(1,3-b¡s[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2.5.8.11- tetraoxatndecan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡ddo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatndecan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}hexanam¡da (I-an-1) (31,0 mg, 0,017 mmol) en metanol (5 ml) y después, la soluc¡ón se pasó a través de1H-cube usando un palad¡o al l0 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los s¡gu¡entes parámetros (Temperatura -60 °C, Caudal - 1,0 ml/m¡n, pres¡ón - H2 total (0,1 MPa)). La soluc¡ón se recog¡ó y se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (7,9 mg, 27 %). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+1 = 1766]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,99 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,49-4,63 (m, 12H), 3,92-4,00 (m, 6H), 3,89 (dd, J = 10,3, 4,5 Hz, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,53-3,67 (m, 44H), 3,02-3,16 (m, 2H), 2,18 (td, J = 7,3, 3,3 Hz, 4H), 1,99 (s, 9H), 1,44-1,72 (m, 8H), 1,25-1,42 (m, 4H)
[6-({6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2.5.8.11- tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{ 1-[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-(acet¡lam¡no)-4,4-d¡met¡l-3.5.9.11- tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatndecan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l} am¡no)-6-oxohex¡l]carbamato de benc¡lo (I-ag-7) tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]- 2-{[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)hexanamida (I-ag-1) (222 mg, 0,125 mmol) en W,W-dimetilformamida (1,5 ml) y tetrahidrofurano (1,0 ml), se le añadieron W,A/-diisopropiletilamina (0,0873 ml, 0,501 mmol) y {6-[(2,5-dioxopirrolidin-1-il)oxi]-6-oxohexil}carbamato de bencilo
Figure imgf000086_0001
(véase Journal of Heterocyclic Chemistry, 23(3), 901-3; 1986, 68,1 mg, 0,188 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacción se concentró a presión reducida. La mezcla de reacción en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (250 mg, 99 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M+1 = 1010]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 7,98 (s, 3H), 7,22-7,40 (m, 5H), 5,22 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 5,06 (s, 2H), 4,51-4,61 (m, 12H), 4,29 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,16 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 3,86-3,96 (m, 12H), 3,83 (d, J = 7,8 Hz, 3H), 3,73-3,79 (m, 12H), 3,53-3,70 (m, 36H), 3,04-3,19 (m, 4H), 2,17 (t, J = 7,4 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,58 (td, J = 14,5, 7,6 Hz, 4H), 1,48 (s, 13H), 1,33 (s, 13H)
[6-({6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1 R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1 - { 1 -[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}amino)-6-oxohexil]carbamato de bencilo (61)
Figure imgf000086_0002
Una solución de [6-({6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1 S,2R,6R,7R,8S)-7-(acetilamino)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}amino)-6-oxohexil]carbamato de bencilo (I-ag-7) (250,0 mg, 0,124 mmol) en ácido acético (8 ml), metanol (2 ml) y agua (2 ml) se calentó a 70 °C durante 36 horas. Después de 36 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con tolueno una segunda vez y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (225 mg, 96 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M+1 = 950]. RMN 1H (METANOL-d4) 5: 7,98 (s, 3H), 7,22-7,41 (m, 5H), 5,21 (s, 3H), 5,05 (s, 2H), 4,57 (t, J = 5,0 Hz, 6H), 4,55 (s, 6H), 3,92-4,00 (m, 6H), 3,83­ 3,91 (m, 9H), 3,73-3,78 (m, 9H), 3,68-3,72 (m, J = 10,0, 4,1 Hz, 3H), 3,52-3,68 (m, 42H), 3,05-3,17 (m, 4H), 2,16 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 1,98 (s, 9H), 1,57-1,65 (m, 2H), 1,53-1,57 (m, 2H), 1,43-1,52 (m, 4H), 1,24-1,39 (m, 4H)
acetato de 6-amino-W-{6-[(1,3-bis[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il]-1R-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1 S,2R,3R,4R,5S )-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)amino]-6-oxohexil}hexanamida (62)
Figure imgf000087_0001
Se disolvió [6-({6-[(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-d¡-h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)am¡no]-6-oxohex¡l}am¡no)-6-oxohex¡l]carbamato de benc¡lo (61) (200 mg, 0,105 mmol) en metanol (20 ml) y ác¡do acét¡co (0,024 ml, 0,421 mmol) y después, la soluc¡ón se pasó a través de1H-cube usando un palad¡o al 10 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los s¡gu¡entes parámetros (Temperatura - 50 °C, Caudal - 1,0 ml/m¡n, pres¡ón -H2 total (0,1 Mpa)). La soluc¡ón se recog¡ó y se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (148 mg, 77 %). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+ 45 (ác¡do fórm¡co) = 1809]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,02 (s, 3H), 5,23 (s, 3H), 4,59-4,63 (m, 6H), 4,58 (s, 6H), 3,97 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 6H), 3,91 (dd, J = 11,3, 4,7 Hz, 9H), 3,76-3,82 (m, 9H), 3,73 (dd, J = 10,1,4,3 Hz, 3H), 3,56-3,70 (m, 42H), 3,16 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,93 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,16-2,29 (m, 4H), 2,01 (s, 9H), 1,92 (s, 3H), 1,62-1,74 (m, 4H), 1,54-1,61 (m, 2H), 1,46-1,53 (m, 2H), 1,39-1,45 (m, 2H), 1,29-1,38 (m, 2H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-7-az¡do-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxathc¡clo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l]metanol (I-d-1)
Figure imgf000087_0002
A una soluc¡ón de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-az¡do-1-(h¡drox¡met¡l)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]octano-2,3-d¡ol (1) (2,52 g, 11,61 mmol) en W,W-d¡met¡lformam¡da (21 ml), se le añad¡ó 22-d¡metox¡propano (9,0 ml, 69,6 mmol) segu¡do de ác¡do (1S)-(+)-10-alcanforsulfón¡co (1,08 g, 4,65 mmol). La reacc¡ón se calentó a 70 °C durante 24 horas. Después de 24 horas, la reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente antes de la ad¡c¡ón de metanol (5 ml), se añad¡ó segu¡do de la ad¡c¡ón de tr¡et¡lam¡na (0,22 ml, 1,55 mmol) y la soluc¡ón se ag¡tó durante 10 m¡nutos antes de concentrarse a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 80 g Gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título ¡mpuro. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 40 g Gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de acetato de et¡lo al 0-100 %/heptano produc¡endo el compuesto del título (2419 mg, 81 %). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,42 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,34-4,43 (m, 2H), 3,88-3,98 (m, 3H), 3,81-3,87 (m, 1H), 3,37 (dd, J = 6,2, 1,6 Hz, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,42 (s, 3H)
(1S,2R,6R,7R,8S)-7-az¡do-4,4-d¡met¡l-1-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatr¡c¡clo[6.2.1.0~2,6~]undecano (I-d-2)
Figure imgf000088_0001
A una solución de [(1S,2R,6R,7R,8S)-7-az¡do-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatriddo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il]metanol (I-d-1) (490 mg, 1,90 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml), se le añadió hidruro sódico en dispersión al 6o % en aceite mineral (127 mg, 3,2 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se dejó en agitación en una atmósfera de nitrógeno durante 30 minutos antes de la adición de 13-yodo-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecano (1130 mg, 2,86 mmol) en tetrahidrofurano (2 ml). La reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente. A la siguiente mañana (18 horas), la reacción se interrumpió con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo dos veces adicionales. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna ISCO RediSep Gold de 40 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0-100 %/heptano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (336,0 mg, 34%). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+Na = 546]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,17-7,47 (m, 5H), 5,35 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,55 (s, 2H), 4,32-4,37 (m, 1H), 4,25-4,32 (m, 1H), 3,92 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,73-3,80 (m, 2H), 3,55-3,71 (m, 17H), 1,49 (s, 3H), 1,36 (s, 3H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-h¡drox¡-2,5,8,11-tetraoxat^dec-1-¡l)-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]carbamato de tere-butilo (I-ao-1)
Figure imgf000088_0002
El material de partida, (1S,2R,6R,7R,8S)-7-az¡do-4,4-d¡met¡l-1-(15-fen¡l-2,5,8,11,14-pentaoxapentadec-1-¡l)-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undecano (I-d-2) (310,0 mg, 0,592 mmol) se disolvió en metanol (6 ml) seguido de la adición de di-tere-butildicarbonato (162 mg, 0,74 mmol) y paladio al 10 % sobre carbono (50 % húmedo p/p., 100,0 mg, 0,940 mmol) en un reactor de 50 ml. El reactor se cerró herméticamente y la reacción se purgó tres veces con nitrógeno (0,34 MPa) y después se purgó dos veces con hidrógeno (0,34 MPa) y se rellenó a 0,34 MPa con hidrógeno y se agitó durante una noche. A la siguiente mañana (24 horas), la reacción se filtró a través de un lecho de celite y se lavó con metanol. El filtrado se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (304 mg, 100 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 530]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,22 (s, 1H), 4,28 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,11 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,80-3,85 (m, 1H), 3,76 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,60-3,71 (m, 15H), 3,53-3,59 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,34 (s, 3H)
metanosulfonato de 1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(tere-butox¡carbon¡l)am¡no]-4,4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatr¡ddo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-¡l}-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡lo (I-ap-1)
Figure imgf000088_0003
A una solución de [(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-h¡drox¡-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l)-4-d¡met¡l-3,5,9,11-tetraoxatridclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]carbamato de tere-butilo (I-ao-1) (300,0 mg, 0,591 mmol) en diclorometano (2 ml), se le añadió trietil amina (0,332 ml, 2,36 mmol) y se enfrió a 0 °C usando un baño de hielo seguido de la adición de cloruro de metanosulfonilo (0,055 ml, 0,71 mmol). La reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después de 20 horas, la reacción se interrumpió con agua y se extrajo. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo una vez adicional con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de un aceite (339 mg, 98 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 608]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,22 (s, 1H), 4,33-4,43 (m, 2H), 4,28 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,11 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,80-3,86 (m, 1H), 3,72-3,79 (m, 4H), 3,61-3,70 (m, 12H), 3,58 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 3,11 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,34 (s, 3H)
[(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]carbamato de terc-butilo (I-aq-1)
Figure imgf000089_0001
A una solución de metanosulfonato de 1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0-2,6-]undec-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-ilo (I-ap-1) (339 mg, 0,579 mmol) en N,N-dimetilformamida (1,5 ml), se le añadió azida sódica (67,7 mg, 1,04 mmol) y la reacción se calentó a 100 °C durante una noche en un tubo de microondas de 5 ml cerrado herméticamente. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y la reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida, produciendo el material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (246 mg, 80%). RMN 1H (METANOL-d4) 8: 5,24 (s, 1H), 4,30 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,13 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,95 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 3,82-3,88 (m, 1H), 3,75-3,80 (m, 2H), 3,53-3,74 (m, 15H), 3,39 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 1,52 (s, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,36 (s, 3H)
{(1S,2R,6R,7R,8S)-1-[13-(4-{[2-{[4-(benciloxi)butanoil]amino}-3-{[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il]metoxil-2-({[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il]metoxilmetil)propoxi]metil}-1H-1,2,3-triazol-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il}carbamato de terc-butilo (I-ar-1)
Figure imgf000089_0002
Un vial de 20 ml equipado con una barra de agitación se cargó con 4-(benciloxi)-W-{1,3-bis(prop-2-in-1-iloxi)-2-[(prop-2-in-1-iloxi)metil]propan-2-il}butanamida (I-v-1) (45,0 mg, 0,11 mmol) y se le añadió [(1S,2R,6R,7R,8S)-1-(13-azido-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-4,4-dimetil-3,5,9,l1-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il]carbamato de ferc-butilo (I-aq-1) (192 mg, 0,361 mmol) en t-butanol (3 ml) y agua (1,5 ml, agua desionizada). La reacción se purgó con nitrógeno durante 5 minutos antes de la adición de ascorbato sódico (66,3 mg, 0,328 mmol) y la adición gota a gota de una solución de sulfato de cobre (II) (5,24 mg, 0,0328 mmol) en agua (500 ul, agua desionizada). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Después de 20 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y la reacción se interrumpió añadiendo la mezcla de reacción a un cloruro de amonio saturado (30 ml) e hidróxido de amonio conc. (2 ml) y se extrajo tres veces con diclorometano (15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 12 g Gold de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0­ 20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título en forma de una goma (165 mg, ninguno, 75%). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M+1 = 1005]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,97 (s, 3H), 7,17-7,43 (m, 5H), 5,21 (s, 3H), 4,52-4,60 (m, 12H), 4,45 (s, 2H), 4,25 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 4,10 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 3,85-3,93 (m, 9H), 3,71-3,82 (m, 15H), 3,63-3,69 (m, 6H), 3,53-3,62 (m, 33H), 3,48 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,27 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,74­ 1,96 (m, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,45 (s, 27H), 1,32 (s, 9H)
4-(benciloxi)-A/-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-amino-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-f[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-amino-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)butanamida (63)
Figure imgf000090_0001
Una solución de {(1S,2R,6R,7R,8S)-1-[13-(4-{[2-{[4-(benciloxi)butanoil]amino}-3-{[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(fercbutoxicarbonil)amino]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il]metoxil-2-({[1-(1-{(1S,2R,6R,7R,8S)-7-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il]metoxilmetil)propoxi]metil}-1H-1,2,3-triazol-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il]-4,4-dimetil-3,5,9,11-tetraoxatriciclo[6.2.1.0~2,6~]undec-7-il}carbamato de ferc-butilo (I-ar-1) (150,0 mg, 0,0747 mmol) en ácido acético (5 ml), metanol (1,5 ml) y agua (1,5 ml) se calentó a 70 °C durante 18 horas. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con diclorometano (10 ml) y metanol (4 ml) al cual se añadió cloruro de hidrógeno 4,0 M en dioxano (2,0 ml, 8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de 18 horas, la reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se diluyó con acetato de etilo (1 ml) y se le añadió heptano (10 ml) y se concentró a presión reducida. Después, el material se colocó a alto vacío durante 18 horas produciendo el compuesto del título (139,0 mg, 103 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [1/2M+1 = 795]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,09 (s, 3H), 7,27-7,39 (m, 5H), 5,48 (s, 3H), 4,57-4,66 (m, 12H), 4,47 (s, 2H), 3,98 (d, J = 9,8 Hz, 3H), 3,90-3,95 (m, 9H), 3,82-3,89 (m, 6H), 3,79 (s, 6H), 3,76 (d, J = 8,2 Hz, 3H), 3,71 (d, J = 9,8 Hz, 3H), 3,57-3,69 (m, 36H), 3,50 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,21 (d, J = 9,4 Hz, 3H), 2,29 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,85 (quint., J = 6,8 Hz, 2H)
acetato de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-bis(acetiloxi)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-bis(acetiloxi)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il} 1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}-2-[[4-(benciloxi)butanoil]amino}propoxi)metil]-1H-1,2,3-triazol-1-il)-2,5,8,11-tetraoxatndec-1-¡l)-3-(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-2-¡lo (I-as-1)
Figure imgf000091_0001
Se disolvió 4-(benc¡lox¡)-N-(1,3-b¡s[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-am¡no-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-,5,8,11-tetraoxatndecan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-am¡no-2,3-d¡h¡drox¡-6,8-d¡oxab¡c¡do[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}propan-2-¡l)butanam¡da (63) (80 mg, 0,044 mmol) en p¡r¡d¡na (anh¡dro) (1,5 ml, 19 mmol) y se añad¡ó anhídr¡do acét¡co (0,125 ml, 1,33 mmol) a temperatura amb¡ente. Después, la reacc¡ón se calentó a 50 °C durante una noche. La mañana s¡gu¡ente, la reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da. El mater¡al en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 12 g gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo compuesto del título en bruto. El compuesto del título en bruto se pur¡f¡có usando el Comb¡Flash Rf (columna Red¡Sep de 4 g gold de gel de síl¡ce) y eluyendo con un grad¡ente de metanol al 0-20 %/d¡clorometano produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (54,0 mg, 62%). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 1,5 m¡nutos LRMS [1/2M+1 = 984]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,97 (s, 3H), 7,19-7,42 (m, 5H), 5,44 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 5,31 (s, 3H), 5,10 (dd, J = 10,3, 4,1 Hz, 3H), 4,51-4,64 (m, 12H), 4,45 (s, 2H), 4,18 (d, J = 10,1 Hz, 3H), 3,99 (d, J = 8,6 Hz, 3H), 3,88 (t, J = 4,9 Hz, 6H), 3,68-3,82 (m, 12H), 3,52-3,64 (m, 39H), 3,48 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,26 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,15 (s, 9H), 1,94 (d, J = 1,2 Hz, 18H), 1,84 (t, J = 6,8 Hz, 2H).
acetato de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5s )- 4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tnazol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-[(4-h¡drox¡butano¡l)am¡no]propox¡}met¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l}- 3-(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-2-¡lo (I-at-1)
Figure imgf000092_0001
Se disolvió acetato de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-1-(13-{4-[(3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-bis(acetiloxi)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-bis(acetiloxi)-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}-2-{[4-(benciloxi)butanoil]amino}propoxi)metil]-1H-1,2,3-triazol-1-il}-2,5,8,11-tetraoxatridec-1-il)-3-(acetiloxi)-6,8-dioxabicido[3.2.1]oct-2-ilo (I-as-1) (54,0 mg, 0,027 mmol) en metanol (10,0 ml) y después, la solución se pasó a través del H-cube usando un paladio al 10 % sobre carbono (cartucho pequeño) usando los siguientes parámetros (Temperatura - 60 °C, Caudal - 1,0 ml/min, presión - H2 total (0,1 MPa)). La solución se recogió y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en forma de una goma (51,0 mg, 99 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos LRMS [M+Na = 1899]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 7,98 (s, 3H), 5,44 (d, J = 4,3 Hz, 3H), 5,32 (s, 3H), 5,10 (dd, J = 10,5, 3,9 Hz, 3H), 4,41-4,66 (m, 12H), 4,18 (d, J = 10,5 Hz, 3H), 3,99 (d, J = 8,6 Hz, 3H), 3,90 (t, J = 5,1 Hz, 6H), 3,68-3,83 (m, 12H), 3,51-3,67 (m, 41H), 2,24 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,15 (s, 9H), 1,94 (s, 18H), 1,69-1,83 (m, 2H)
N-(1,3-bis[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acetilamino)-2,3-dihidroxi-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]oct-1-il]-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il}-1H-1,2,3-triazol-4-il)metoxi]metil}propan-2-il)-4-hidroxibutanamida (64)
Figure imgf000093_0001
A una solución de acetato de (1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-1-{13-[4-({3-[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]-2-{[(1-{1-[(1S,2R,3R,4R,5S)-4-(acet¡lam¡no)-2,3-b¡s(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡decan-13-¡l}-1H-1,2,3-tr¡azol-4-¡l)metox¡]met¡l}-2-[(4-h¡drox¡butano¡l)am¡no]propox¡}met¡l)-1H-1,2,3-tr¡azol-1-¡l]-2,5,8,11-tetraoxatr¡dec-1-¡l}-3-(acet¡lox¡)-6,8-d¡oxab¡c¡clo[3.2.1]oct-2-¡lo (I-at-1) (8,5 mg, 0,0045 mmol) en metanol (1 ml), se le añad¡ó metóx¡do sód¡co 0,5 M en metanol (0,154 ml mg, 0,0770 mmol) y la reacc¡ón se dejó en ag¡tac¡ón a temperatura amb¡ente durante 3 horas. Después de 3 horas, la reacc¡ón se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de res¡na de ¡ntercamb¡o ¡ón¡co Amberlyst 15 aclarada con metanol tr¡ple (n.° CAS = 39389-20-3, RS-106008) a un pH = 5. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró y la res¡na se aclaró dos veces con metanol. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da produc¡endo el compuesto del título en forma de una goma (1,5 mg, 20%). Proced¡m¡ento C: ejecuc¡ón de 3 m¡nutos LRMS [M+45(ác¡do fórm¡co) = 1668]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,00 (s, 3H), 5,21 (s, 3H), 4,53-4,65 (m, 12H), 3,92-4,00 (m, 6H), 3,89 (dd, J = 11,1, 4,9 Hz, 9H), 3,74-3,79 (m, 9H), 3,71 (dd, J = 9,8, 4,3 Hz, 3H), 3,52-3,69 (m, 44H), 2,24 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,99 (s, 9H), 1,76 (qu¡nt., J = 6,9 Hz, 2H)
El engarce ortoéster ejempl¡f¡cado por el compuesto (66) en el Esquema 4 y descr¡to genér¡camente en el Esquema 3 podría ser s¡ntet¡zado por un experto en la mater¡a ut¡l¡zando (I-aw-1) (véase H. Bruyere y col., B¡oorg. Med. Chem. Lett., 20, 2200-2203, (2010)) y un alcohol aprop¡ado, tal como (I-an-1), el ác¡do aprop¡ado, tal como p-tolueno sulfonato de p¡r¡d¡n¡o en un d¡solvente aprop¡ado, tal como tolueno en cond¡c¡ones de reflujo para produc¡r (I-ax-1). La desprotecc¡ón de (I-ax-1) podría lograrse en cond¡c¡ones bás¡cas conoc¡das por un experto en la mater¡a (tales como carbonato potás¡co catalít¡co en metanol) que daría como resultado el compuesto (65) de la presente ¡nvenc¡ón. Se podría lograr una func¡onal¡zac¡ón ad¡c¡onal de (65) para produc¡r compuestos ad¡c¡onales re¡v¡nd¡cados en la presente ¡nvenc¡ón. Por lo tanto, el tratam¡ento de (65) con un ác¡do aprop¡ado y un agente de acoplam¡ento (conoc¡do por los expertos en la mater¡a) o un éster act¡vado (tal como h¡drox¡succ¡nam¡da) tal como (Is-1) en un d¡solvente aprop¡ado, tal como W,W-d¡met¡lformam¡da usando un una base aprop¡ada, tal como W,W-d¡¡soprop¡let¡lam¡na podría produc¡r el compuesto (66).
Figure imgf000094_0001
Figure imgf000095_0001
De una manera similar, como se muestra en el Esquema 5, el compuesto (66) también podría sintetizarse por un experto en la materia utilizando (I-av-1) y un alcohol apropiado, tal como (I-an-1) usando las condiciones de reacción descritas previamente para el Esquema 4.
Figure imgf000096_0001
N-(1,3-dihidroxipropan-2-il)-6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanamida (I-au-1)
Figure imgf000096_0002
A una solución de 1-{[6-(piridin-2-ildisulfanil)hexanoil]oxi}pirrolidin-2,5-diona (I-s-1) (518 mg, 2,01 mmol) en N,N-dimetilformamida (7 ml), se le añadieron clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodimiimida (463 mg, 2,42 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (326 mg, 2,42 mmol) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se añadió 2-aminopropano-1,3-diol (183 mg, 2,01 mmol) seguido de W,A/-dMsoprop¡letilam¡na (1,05 ml, 6,04 mmol). La reacción se dejó en agitación durante una noche a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la reacción se diluyó con agua y se extrajo con tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando el CombiFlash Rf (columna RediSep de 24 g de gel de sílice) y eluyendo con un gradiente de metanol al 0-20 %/diclorometano produciendo el compuesto del título (368 mg, 55 %). Procedimiento C: ejecución de 1,5 minutos LRMS [M+45(ácido fórmico) = 375]. RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,38 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,84­ 7,89 (m, 1H), 7,77-7,83 (m, 1H), 7,21 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,92 (quint., J = 5,5 Hz, 1H), 3,51-3,70 (m, 4H), 2,82 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,21 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,71 (quint., J = 7,3 Hz, 2H), 1,60 (quint., J = 7,5 Hz, 2H), 1,37-1,51 (m, 2H)
W -^-m etoxM ^-dioxan^-ip^pindin^-ild isulfamphexanam ida (I-av-1)
Figure imgf000097_0001
A una mezcla de W-(1,3-d¡h¡drox¡propan-2-¡l)-6-(p¡^d¡n-2-¡ld¡sulfan¡l)hexanam¡da (I-au-1) (280 mg, 0,847 mmol) en diclorometano (0,605 ml) y trimetilortoformiato (0,5 ml, 5 mmol), se le añadió monohidrato de ácido p-toluenosulfónico (1,78 mg, 0,00847 mmol). La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de 3 horas, la TLC mostró el casi consumo completo del material de partida. La reacción se diluyó con diclorometano y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (3 x 1 ml) y salmuera (1 ml), se secó sobre carbonato potásico anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida produciendo el compuesto del título en bruto (263,0 mg,=83,3 %). Procedimiento C: ejecución de 3 minutos (modo básico: Columna: Base: Waters Acquity UPLC BEH, 2,1 mmx50 mm, C18, 1,8 |jm; Fase móvil: A: amoniaco al 0,1 % en agua (v/v); B: amoniaco al 0,1 % en acetonitrilo (v/v)) LRMS [M+45 = 417]. 1:1 mezcla de isómeros cis/trans:
Isómero 1: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,41 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,86-7,92 (m, 1H), 7,80-7,86 (m, 1H), 7,20-7,27 (m, 1H), 5,31 (s, 1H), 4,29 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,92-3,96 (m, 1H), 3,83 (s a, 1H), 3,63 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,59 (dd, J = 11,5, 3,7 Hz, 1H), 3,42 (s, 3H), 2,85 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,21-2,30 (m, 2H), 1,68-1,80 (m, 2H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,39­ 1,53 (m, 2H)
Isómero 2: RMN 1H (METANOL-d4) 8: 8,41 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,86-7,92 (m, 1H), 7,80-7,86 (m, 1H), 7,20-7,27 (m, 1H), 5,27 (s, 1H), 4,26 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 3,92-3,96 (m, 2H), 3,86-3,91 (m, 1H), 3,59 (dd, J = 11,5, 3,7 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 2,85 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,21-2,30 (m, 2H), 1,68-1,80 (m, 2H), 1,56-1,67 (m, 2H), 1,39-1,53 (m, 2H)
DATOS FARMACOLÓGICOS
La práctica de la invención para el tratamiento de enfermedades moduladas dirigiéndose al receptor de asialoglucoproteína (ASGPR) usando compuestos de la invención puede demostrarse por la actividad en uno o más de los ensayos funcionales descritos a continuación en el presente documento. La fuente de suministro se proporciona entre paréntesis.
Medidas de resonancia de plasmón superficial
Preparación de ASGPR biotinilado:
El tipo silvestre de ASGPr H1 se expresó como un cuerpo de inclusión (IB) insoluble en E. coli. El sedimento celular se resuspendió en tampón de TBS pH 8,0 con 0,1 mg/ml de lisozima 25 microg/ml de DNasa 10 microg/ml de RNasa MgCl2 10 mM y se agitó en hielo hasta que se mezcló bien. La mezcla se pasó dos veces por un microfluidizador y se centrifugó durante 30 minutos a 30.000 x g. El sedimento de IB resultante se lavó con tampón de TBS a pH 8,0 urea 3 M y se centrifugó y este procedimiento se repitió tres veces más con agua. El sedimento de IB se solubilizó en Tris 10 mM urea 8 M p-mercaptoetanol 100 mM (pH 8,5), se agitó durante aproximadamente 20 minutos, después se centrifugó para descartar cualquier precipitado. Para las siguientes manipulaciones, "tampón T" se refiere a Tris 20 mM NaCl 0,5 M CaCh 25 mM. El sobrenadante se diluyó hasta aproximadamente 0,5 mg/ml en tampón T p-mercaptoetanol 2 mM urea 8 M (pH 8,0), después se dializó frente a un volumen en exceso 8-10x de tampón T p-mercaptoetanol 2 mM urea 2 M (pH 8,0) durante una noche a 4 °C. La diálisis se repitió en tampón T p-mercaptoetanol 1 mM urea 1 M (pH 8,0) durante aproximadamente 24 h a 4 °C con varios cambios de volumen con una diálisis final frente a tampón T GSH 5 mM GSSG 1 mM (pH 7,5) con 3 cambios de volumen. La muestra resultante se centrifugó y el sobrenadante se cargó en una columna Pharmacia XK 26 empaquetada con N-acetil-D-galactosamina agarosa, equilibrada en tampón T TCEP 2 mM (pH 8,0). La columna se lavó con este tampón hasta que se restableció la medida inicial. La proteína unida se eluyó con Tris 20 mM NaCl 0,5 M TCEP 2 mM EDTA 2 mM (pH 8,0). El rendimiento final fue de aproximadamente 50 mg a partir de 5 l (70 wgm.) Sedimento de células de E. coli.
Aunque BSA tiene una cisterna (Cys34) que no participa en el enlace disulfuro, este grupo tiol se bloquea con frecuencia como un disulfuro mixto con tioles pequeños tales como cisterna o como el ácido sulfénico mediante oxidación aeróbica. Se descubrió que la reducción con disulfuro y el marcaje eran el procedimiento más limpio para derivatización del dominio de unión de ASGPR entre los que los inventores probaron. Se eligieron condiciones de reducción de disulfuro suaves para no romper los entrecruzamientos intracatenarios internados (inaccesibles al disolvente). Por tanto, inmediatamente antes de la biotinilación, la muestra de ASGPR se incubó en primer lugar con TCEP 1 mM para garantizar que la muestra contuviera un solo tiol libre. La proteína se hizo reaccionar con un exceso molar de 19 veces de reactivo de maleimida-PEG2-biotina de Pierce en PBS durante una noche a 4 °C.
El exceso de biotina se eliminó de la muestra utilizando columnas PD-10 (GE Healthcare) o columnas de desalación Zeba Spin (Thermo/Pierce) utilizando los protocolos del fabricante. El análisis de LC-MS del producto verificó la presencia de una sola masa con la adición de 525 uma coherente con el peso molecular del aducto de maleimida. Ya que TCEP estuvo presente durante toda la reacción de maleimida, si la proteína se había reducido completamente (haciendo disponibles otros tioles de cisteína), el resultado habría sido un producto heterogéneo que contenía múltiples aductos y probablemente un plegamiento incorrecto o precipitación tras la eliminación de enlaces disulfuro estructurales clave. No se observaron dichos resultados. Asimismo, la observación de la especificidad de unión convencional (GalNAc frente a metil galactósido frente a lactosa) sugiere fuertemente que se plegó y presentó correctamente suficiente proteína en el chip de RPS.
Medidas de unión de RPS:
Todas las medidas de RPS con compuestos se realizaron utilizando un Biacore 3000 (GE Healthcare) a 25 °C. El ASGPR biotinilado se inmovilizó normalmente a 2000-3000 unidades de resonancia (uR) utilizando chips sensores SA (GE Healthcare) o chips sensores personalizados con Neutravidin (Pierce Biochemical) inmovilizados mediante acoplamiento de amina convencional a chips sensores CM5 (GE Healthcare). El tampón de ejecución fue HBS (HEPES 10 mM, NaCl 150 mM), CaCh 20 mM, p20 al 0,01 %, DMSO al 3 % o tris 50 mM, NaCl 150 mM, CaCl250 mM, p20 al 0,01 %, DMSO al 3 % pH 7,5. Los compuestos se diluyeron en tampón de ejecución a una concentración de 900 uM y se diluyeron en serie 3 veces hasta 3,7 uM. Se inyectaron soluciones de compuestos a 50 ul/min durante 1 min seguido de una disociación de 1 min por duplicado para cada concentración. Para los conjugados multiméricos (dímeros, trímeros), los conjugados se diluyeron en tampón de ejecución a concentraciones de 100 nM o 10 nM y se diluyeron en serie. Los conjugados se inyectaron durante 2 min y se detectaron velocidades de disociación durante 300 o 600 segundos. Después de completar los datos de la fase inactiva, los compuestos se desplazaron utilizando una inyección de GalNAc 900 uM que devolvió la superficie del receptor al estado libre. Todos los datos se procesaron utilizando Scrubber2 (Biologic Software, Inc.) a cero, alinear, referenciar y corregir con respecto a efectos de volumen excluidos. Se determinaron Kd ajustando las respuestas de unión en estado estacionario para los compuestos y moléculas conjugadas individuales en Scrubber2. Se procesaron Kd para conjugados multiméricos que muestran respuestas cinéticas en Scrubber2 y se ajustaron en BiaEval (GE Healthcare) para extraer los parámetros de velocidad de asociación y disociación para calcular la Kd. Los valores reflejan desviaciones típicas de múltiples experimentos.
Se obtuvieron los siguientes resultados para el ensayo de unión de RPS en el que cada ejecución se informa por separado o se observa el número de ejecuciones (n) y la desviación típica:
Figure imgf000098_0001
continuación
Figure imgf000099_0001

Claims (11)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula (A)
Figure imgf000100_0001
en la que
R1 es -Z-X-Y, -Z-Y o -X-Y en el que X es un engarce de cualquiera de las estructuras L1-L10
Figure imgf000100_0002
L5
Figure imgf000101_0001
en las que cada T está independientemente ausente o es alquileno, alquenileno o alquinileno, en el que uno o más grupos -CH2- del alquileno, alquenileno, o alquinileno se pueden reemplazar cada uno independientemente con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono;
cada Q está independientemente ausente o es C(O), C(O)-NR4, NR4-C(O),O-C(O)-NR4, NR4-C(O)-O, -CH2-, un heteroarilo o un grupo heteroátomo seleccionado entre O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4, en el que al menos dos átomos de carbono separan los grupos heteroátomos O, S, S-S, S(O), S(O)2 y NR4 de cualquier otro grupo heteroátomo;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C2o) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)-y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2, -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y
cada n es independientemente 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11,12,13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 o 40, en el que si n es mayor de 1, cada T y cada Q de cada (T-Q-T-Q) se selecciona independientemente;
Y es una secuencia de aminoácido o una secuencia de ácido nucleico, y
Z es -C=C-, -CH=CH-, -CH2-, -CH2-O-, -C(O)-N(R4)-, -CH2-S-, -CH2-S(O)-, -CH2-S(O)2-, -CH2-S(O)2-N(R4)-, -C(O)-O-, -CH2-N(R4)-, -CH2-N(R4)-C(O)-, -CH2-N(R4)-S(O)2-, -CH2-N(R4)-C(O)-O-, -CH2-N(R4)-C(O)-N(R4)-, -CH2-O-C(O)-, -CH2-O-C(O)-N(R4)-, -CH2-O-C(O)-O-, o arilo o heteroarilo, en el que el arilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido con R5;
R2 es -OH, -N3, -N(R3)2 , -N(R3)-C(O)-R3, -N(R3)-C(O)-N(R3)2 , -N(R3)-C(O)-OR3, -N(R3)-S(O)2-R3, tetrazol o triazol, en el que el tetrazol y el triazol están opcionalmente sustituidos con R3;
cada R3 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C5 ), (C1-C5 ) halo sustituido o cicloalquilo(C3-C6), en el que uno o más grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo pueden cada uno reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden cada uno reemplazarse con un heteroátomo independientemente seleccionado entre -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo; y
cada R5 es independientemente -H, cicloalquilo(C3-C20) o alquilo(C-i-C60) en el que de uno a seis grupos -CH2- del cicloalquilo o de uno a 20 grupos -CH2- del alquilo pueden cada uno reemplazarse con heteroátomos seleccionados independientemente entre -O-, -S- y -N(R4)- en el que los heteroátomos se separan por al menos dos átomos de carbono, y -CH3 del alquilo pueden reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden estar sustituidos con átomos halo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto de la reivindicación 1 en la que
R1 es -Z-X-Y;
R2 es -OH, -N3 , -N(R3)2 , -N(R3)-C(O)-R3, -N(R3)-C(O)-N(R3)2 , -N(R3)-C(O)-OR3, tetrazol o triazol, en el que el tetrazol y el triazol están opcionalmente sustituidos con R3;
cada R3 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C5), (C1 -C5) halo sustituido o cicloalquilo(C3-C6), en el que un grupo -CH2- del alquilo o cicloalquilo pueden reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -O-, -S- y -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono;
cada R4 es independientemente -H, -alquilo(C-i-C20) o cicloalquilo(C3-C6) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden sustituirse con uno a seis átomos halo; y
cada R5 es independientemente -H, cicloalquilo(C3-C20) o alquilo(C-i-C20) en el que de uno a seis grupos -CH2- del alquilo o cicloalquilo separados por al menos dos átomos de carbono pueden reemplazarse con -O-, -S- o -N(R4)- y -CH3 del alquilo puede reemplazarse con un grupo heteroátomo seleccionado entre -N(R4)2 , -OR4 y -S(R4) en el que los grupos heteroátomos se separan por al menos 2 átomos de carbono; y en el que el alquilo y el cicloalquilo pueden sustituirse con uno a seis átomos halo;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es -X-Y y R2 es -NH-C(O)-CH3.
4. El compuesto de la reivindicación 1 o 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que Y es una secuencia de ARNip.
5. El compuesto de la reivindicación 1 o 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que el compuesto de fórmula (A) es capaz de unirse a un receptor presente en un hepatocito y el receptor es un receptor de asialoglucoproteína.
6. Una composición farmacéutica que comprende (i) un compuesto de la reivindicación 5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y (ii) un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. La composición de la reivindicación 6, en la que dicho compuesto o dicha sal terapéuticamente aceptable del mismo está presente en una cantidad terapéuticamente eficaz.
8. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en un procedimiento para tratar una enfermedad o afección hepática o una enfermedad o afección modulada por el hígado.
9. Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la enfermedad o afección hepática o enfermedad o afección modulada por el hígado se selecciona del grupo que consiste en: angioedema hereditario, tirosinemia familiar de tipo I, síndrome de Alagille, deficiencia de alfa-1-antitripsina, defectos en la síntesis y el metabolismo de los ácidos biliares, atresia biliar, hepatopatía por fibrosis quística, hepatitis neonatal idiopática, hepatopatías mitocondriales, colestasis intrahepática familiar progresiva, colangitis esclerosante primaria, amiloidosis por transtirretina, hemofilia, hipercolesterolemia familiar homocigota, hiperlipidemia, esteatohepatitis, esteatohepatitis no alcohólica (ENA), esteatosis hepática no alcohólica (EHNA), hiperglucemia y enfermedades que implican la producción de glucosa hepática anormalmente alta similar a la diabetes mellitus de tipo II.
10. Una composición según la reivindicación 6 para su uso en un procedimiento para tratar una enfermedad o afección hepática o una enfermedad o afección modulada por el hígado.
11. Una composición para su uso en un procedimiento de tratamiento de acuerdo con la reivindicación 10, en la que la enfermedad o afección hepática o enfermedad o afección modulada por el hígado se selecciona del grupo que consiste en: angioedema hereditario, tirosinemia familiar de tipo I, síndrome de Alagille, deficiencia de alfa-1-antitripsina, defectos en la síntesis y el metabolismo de los ácidos biliares, atresia biliar, hepatopatía por fibrosis quística, hepatitis neonatal idiopática, hepatopatías mitocondriales, colestasis intrahepática familiar progresiva, colangitis esclerosante primaria, amiloidosis por transtirretina, hemofilia, hipercolesterolemia familiar homocigota, hiperlipidemia, esteatohepatitis, esteatohepatitis no alcohólica (ENA), esteatosis hepática no alcohólica (EHNA), hiperglucemia y enfermedades que implican la producción de glucosa hepática anormalmente alta similar a la diabetes mellitus de tipo II.
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