ES2861306T3

ES2861306T3 - Composición dermatológica que contiene Escherichia coli y Enterococcus faecalis

Info

Publication number: ES2861306T3
Application number: ES17204458T
Authority: ES
Inventors: Hans-Jörg Müller; Thomas Michael Schmidts; Kurt Zimmermann; Volker Rusch
Original assignee: Symbiogruppe GmbH and Co KG
Current assignee: Symbiogruppe GmbH and Co KG
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2017-11-29
Publication date: 2021-10-06
Anticipated expiration: 2037-11-29
Also published as: CN109846907A; KR20190063422A; US20190160116A1; RU2018142254A3; PL3492089T3; EP3492089A1; DK3492089T3; CA3024590A1; US10933103B2; RU2018142254A; JP2019099560A; EP3492089B1

Abstract

Composición farmacéutica, que contiene una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas, así como excipientes y/o sustancias portadoras compatibles farmacéuticamente, para el uso en la terapia, en la terapia de soporte o en la profilaxis de enfermedades dermatológicas, presentándose la composición en una forma aplicable tópicamente y estando determinada para la aplicación exterior sobre la piel.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición dermatológica que contiene Escherichia coli y Enterococcus faecalis

Antecedentes

La función más importante de la piel es la función de barrera, es decir, la protección del organismo contra deshidratación y contra influencias exteriores. La capa de piel exterior (epidermis) tiene a este respecto, por su propia naturaleza, un papel particular. Es la superficie de contacto con el entorno y ha de ser siempre flexible y suave. A este respecto la humedad de la piel tiene una importancia muy esencial. Actúa en la epidermis como un plastificante en un sistema de estructuras de lípidos y proteínas, que se reproducen de manera continua en el proceso de la nueva formación de la piel.

Existen diferentes enfermedades de la piel, las cuales conducen a una piel seca, de modo que la piel ya no puede cumplir con su función de barrera.

Normalmente los principios farmacéuticos y cosméticos se basan en mejorar la humedad de la piel usando sustancias, las cuales suministran al tejido dañado de nuevo humedad a través de una composición que origina humedad y/o evitan el secado de humedad mediante una capa de protección.

Por ello la invención se basa en el objetivo de poner a disposición una nueva composición, la cual se use en la terapia, terapia de soporte o profilaxis de afecciones o enfermedades dermatológicas.

Resumen

Este objetivo se consigue a través del objeto de las reivindicaciones.

Se divulga por lo tanto una composición farmacéutica, conteniendo una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas, así como excipientes y/o sustancias portadoras compatibles farmacéuticamente para el uso en la terapia, en la terapia de soporte o en la profilaxis de afecciones y enfermedades dermatológicas, presentándose la composición en una forma aplicable tópicamente y estando determinada para la aplicación exterior sobre la piel.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse como lisado.

La mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis puede presentarse en una cantidad de 1-95 % en peso, de 20-80 % en peso, de 40-60 % en peso o de 45-55 % en peso en la composición total.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse en la mezcla en una proporción de entre 0,5:1,5 y 1,5:0,5, 0,75:1,25 y 1,25:0,75 o 1,15:0,85 y 0,85:1,15 o 1,05:0,95 y 0,95:1,05.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse respectivamente en un número de células de 0,5 x 107 a 10 x 107, 1,0 x 107 a 7 x 107 o 1,5 x 107 a 4,5 x 107 por 100 g de la masa total.

La enfermedad dermatológica o afección dermatológica pueden seleccionarse de enfermedades de la piel inflamatorias o neurodermatitis.

La composición puede presentarse como pomada, líquido, emulsión o solución.

Se divulga además de ello, un uso de una composición conteniendo una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas, para la aplicación cosmética exterior sobre la piel, presentándose la composición en una forma de aplicación tópica.

Enterococcus faecalis y Escherichia coli pueden presentarse en la composición como lisado.

La mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis puede presentarse en la composición en una cantidad de 1-95 % en peso, de 20-80 % en peso, de 40-60 % en peso o de 45-55 % en peso en la composición total.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse en la composición en una proporción de entre 0,5:1,5 y 1,5:0,5, 0,75:1,25 y 1,25:0,75 o 1,15:0,85 y 0,85:1,15 o 1,05:0,95 y 0,95:1,05.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse en la composición respectivamente en un número de células de 0,5 x 107 a 10 x 107, 1,0 x 107 a 7 x 107 o 1,5 x 107 a 4,5 x 107 por 100 g de la masa total.

El uso cosmético puede estar seleccionado de piel seca o de pérdida de agua transepidérmica.

La composición puede presentarse como pomada, líquido, emulsión o solución.

Breve descripción de los dibujos

Imagen 1: determinación de la liberación de IL-8 en células HaCaT tras tratamiento con 10 ng/mL de TNF-alfa (muestras de control sin TNF-alfa) e incubación con la sustancia de prueba (PSF) o hidrocortisona (HC) durante 72 h (cuando no se caracterice de otro modo), MW ± SEM, n = 3 (respectivamente por triplicado).

Imagen 2: liberación de IL-8 relativa para el control con TNF-alfa (72 h) en células HaCaT tras tratamiento con 10 ng/mL de TNF-alfa (muestras de control sin TNF-alfa) e incubación con la sustancia de prueba (PSF) o hidrocortisona (HC) durante 72 h (cuando no se caracterice de otro modo), MW ± SEM, n = 3 (respectivamente por triplicado).

Imagen 3: determinación de la liberación de IL-6 en células HaCaT tras tratamiento con 10 ng/mL de TNF-alfa (muestras de control sin TNF-alfa) e incubación con la sustancia de prueba (PSF) o hidrocortisona (HC) durante 72 h (cuando no se caracterice de otro modo), MW ± SEM, n = 3 (respectivamente por triplicado).

Imagen 4: liberación de IL-6 relativa para el control con TNF-alfa (72 h) en células HaCaT tras tratamiento con 10 ng/mL de TNF-alfa (muestras de control sin TNF-alfa) e incubación con PSF o hidrocortisona (HC) durante 72 h (cuando no se caracterice de otro modo), MW ± SEM, n = 3 (respectivamente por triplicado).

Descripción detallada

Con una mezcla de bacterias inactivadas se entiende una mezcla de bacterias, en cuyo caso las bacterias no son viables, es decir, ya no llevan a cabo ningún metabolismo y/o no son capaces de multiplicarse. Las bacterias inactivadas pueden obtenerse mediante irradiación con radiación radioactiva o ultravioleta, calentamiento, enfriamiento, tratamiento con sustancias que perforan el revestimiento de bacteria, como agentes detergentes o sales, o lisis, por ejemplo, a través de exposición con respecto a una caída de presión, la cual destruye la membrana celular (por ejemplo, French Press).

Un lisado puede producirse mediante lisis, en cuanto que se homogeniza un cultivo líquido conteniendo bacterias con un número de células deseado durante 10-20, 12-18, 13-17, o 14 a 16 minutos, por ejemplo, mediante agitación a 50-150, 70-130 u 80-120 revoluciones por minuto. El cultivo líquido homogeneizado se somete entonces a un tratamiento en autoclave habitual, por ejemplo, se calienta durante al menos 20 minutos (por ejemplo, 20-40 minutos, 20-30 o 20-25 minutos) a al menos 121 °C (por ejemplo 121 °C - 130 °C, 121 °C - 125 °C o 121 °C - 123 °C), es decir, se esteriliza. Tras ello se enfría el lisado obtenido (por ejemplo, a 18 - 20 °C).

Una cantidad eficaz se considera una cantidad de una sustancia, la cual es suficiente para lograr un efecto deseado o terapéutico.

Cuando se antepone a una indicación numérica la expresión “aproximadamente”, entonces se hace referencia con ello a un intervalo de valores de /- 20 %, preferentemente /- 10 %, o de modo particularmente preferente /- 5 % alrededor de la indicación numérica.

Los títulos de capítulo sirven para facilitar la comprensión de la divulgación y no separan una divulgación de otra divulgación. En particular puede combinarse cada una de las divulgaciones que siguen a un título de capítulo con otra u otras varias divulgaciones que siguen a un título de capítulo.

Composiciones

Se divulga una composición, la cual comprende una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas. La composición puede ser una composición farmacéutica.

Preferentemente Escherichia coli es E. coli DSM 17252.

Preferentemente Enterococcus faecalis es Enterococcus faecalis DSM 16440.

Preferentemente la mezcla es una mezcla de E. coli DSM 17252 y Enterococcus faecalis DSM 16440.

La composición puede presentarse como lisado. El lisado contiene preferentemente todos los componentes solubles y no solubles de las bacterias y se presenta por lo tanto como solución acuosa. El lisado puede obtenerse por ejemplo, tal como se ha descrito arriba.

La mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis puede presentarse en una cantidad de 1-95 % en peso, de 10-90 % en peso, de 20-80 % en peso, de 30-70 % en peso, de 40-60 % en peso, de 45-55 % en peso, de 50-54 % en peso o de 52-53 % en peso en la composición total.

Escherichia coli y Enterococcus faecalis pueden presentarse respectivamente en un número de células de 0,5 x 107 a 10 x 107, 1,0 x 107 a 7 x 107 o 1,5 x 107 a 4,5 x 107 por 100 g de la masa total. La expresión número de células se refiere en caso de un lisado libre de células a la cantidad de las células, las cuales se usaron para preparar el lisado. La composición farmacéutica comprende excipientes y/o sustancias portadoras compatibles farmacéuticamente. La composición puede por lo tanto contener opcionalmente (denominación de acuerdo con "International Nomenclature of Cosmetic Ingredients" (nomenclatura internacional de ingredientes cosméticos), INCI, habiéndose indicado también, siempre y cuando sea habitual, las denominaciones de producto alemanas habituales):

Simmondsia Chinensis Seed Oil, en particular de 0,5 a 10 % en peso o aproximadamente 3,00 % en peso de Simmondsia Chinensis Seed Oil (natives Jojobawachs, cera de jojoba nativa),

Caprylic/Capric Triglyceride, en particular de 1-20 % en peso o aproximadamente 16,80 % en peso de Caprylic/Capric Triglyceride (mittelkettige Triglyceride, triglicéridos de cadena media),

Cera Alba, en particular de 0,1 a 3,0 % en peso o aproximadamente 0,50 % en peso de Cera Alba (Bienenwachs, cera de abejas),

Hydrogenated Castor Oil, en particular de 0,1 a 3,0 % en peso o aproximadamente 0,80 % en peso de Hydrogenated Castor Oil,

Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone, en particular de 1,0 a 4,0 % en peso o aproximadamente 2,0 % en peso de Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone (Abil EM 180),

Cetyl Palmitate, en particular de 0,1 a 3,0 % en peso o aproximadamente 0,3 % en peso de Cetyl Palmitate, una mezcla a partir de una mezcla de Glyceryl Dibehenate, Tribehenin, Glyceryl Behenate, Squalane, Ceramide 3, Ceramide 3B, Cermamide 6, Cholsterol, en particular de 0,1 a 10,0 % en peso o aproximadamente 0,5 % en peso de una mezcla a partir de Glyceryl Dibehenate, Tribehenin, Glyceryl Behenate, Squalane, Ceramide 3, Ceramide 3B, Cermamide 6, Cholsterol, Phytosphingosine (conteniendo esta mezcla aproximadamente 56,0-75,0 % en peso de Squalane, aproximadamente 5,0-15,0 % en peso de una mezcla de Glyceryl Dibehenate, Tribehenin, Glyceryl Behenate en proporción de peso de aproximadamente 1:1:1, conteniendo aproximadamente 1,0-5,0 % en peso de una mezcla de Ceramide 3 y Ceramide 3B en proporción en peso de aproximadamente 1:1, conteniendo aproximadamente 0,1-1,0 % en peso de Cermamide 6 y aproximadamente 5,0-15,0 % en peso de una mezcla de Cholsterol y Phytosphingosine en proporción en peso de aproximadamente 1:1, complementando todos proporción a 100 % en peso),

Oenothera Biennis Oil, en particular de 0,5 a 10 % en peso o aproximadamente 2,00 % en peso de Oenothera Biennis Oil (conteniendo opcionalmente tocoferol en una cantidad suficiente para evitar oxidación, aceite de onagra estabilizado con vitamina E),

Squalane, en particular de 1,0 a 20 % en peso o aproximadamente 6,0 % en peso de Squalane (escualeno, esta cantidad de Squalane está contenida adicionalmente a otras proporciones de Squalane, que están contenidas en la composición),

Prunus Amygdalus Dulcis Oil, en particular de 0,5 a 20 % en peso o aproximadamente 2,50 % en peso de Prunus Amygdalus Dulcis Oil (Mandelol, aceite de almendras),

Persea Gratissima Oil, en particular de 0,5 a 10 % en peso o aproximadamente 2,00 % en peso de Persea Gratissima Oil (raffiniertes Avocadool, aceite de aguacate refinado),

Tocopherolacetate, en particular de 0,1 a 5 % en peso o aproximadamente 0,5 % en peso de Tocopherolacetate (Vitamin-E-Acetat, acetato de vitamina E),

Butyrospermum Parkii Butter, en particular de 0,1 a 5 % en peso o aproximadamente 0,5 % en peso de Butyrospermum Parkii Butter (Sheabutter, manteca de karité),

Pentylene Glycol, en particular de 1,0 a 5,0 % en peso o aproximadamente 4,0 % en peso de Pentylene Glycol, Glycerin, en particular de 1,0 a 5,0 % en peso o aproximadamente 4,0 % en peso de Glycerin (Glycerin 99%, glicerina),

Sodium Hyaluronate, en particular de 0,01 a 0,5 % en peso o aproximadamente 0,10 % en peso de Sodium Hyaluronate (Na-Hyaluronat, hialuronato de sodio),

Panthenol, en particular de 0,1 a 5,0 % en peso o aproximadamente 1,0 % en peso de Panthenol (75 % Dexpanthenol, dexpantenol),

Betain, de 0,1 a 5,0 % en peso o aproximadamente 0,3 % en peso de Betain,

Magnesium Sulfate, en particular de 0,1 a 3,0 % en peso o aproximadamente 0,8 % en peso de Magnesium Sulfate (Magnesiumsulfat Heptahydrat, sulfato de magnesio heptahidratado),

Sodium Lactate, en particular de 0,05 a 1,00 % en peso o aproximadamente 0,10 % en peso de 50 % Sodium Lactate (Na-Lactat 50 %, lactato de sodio al 50 %),

Sodium Gluconate, en particular de 0,05 a 3,00 % en peso o aproximadamente 0,10 % en peso de Sodium Gluconate, y/o

Lactic Acid, en particular de 0,01 a 1,00 % en peso de Lactic Acid (90 %) (Milchsaure 90 %, ácido láctico).

La composición contiene preferentemente todos los excipientes mencionados arriba. Todas las combinaciones a partir de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 y 22 de los excipientes arriba mencionados quedan también divulgadas.

La composición contiene preferentemente menos de 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,1, 0,001 o 0,0001 % en peso de ácidos grasos insaturados o 0 % en peso de ácidos grasos insaturados en forma libre y/o esterificada. Los ácidos grasos insaturados son ácidos grasos, los cuales contienen al menos un enlace doble, no formando parte las ceramidas, en esta divulgación, de los ácidos grasos insaturados, y pudiendo estar contenidas por lo tanto en la composición.

El pH de la composición se encuentra entre 4 y 6 o 4,5 y 5. El valor de pH se ajusta preferentemente a través de adición de un ácido compatible farmacéuticamente, preferentemente un ácido orgánico. El ácido para el ajuste del pH es de manera particularmente preferente Lactic Acid (ácido láctico).

Afecciones y enfermedades dermatológicas

La composición farmacéutica se emplea para el uso en caso de la terapia, terapia de soporte o profilaxis de afecciones y enfermedades dermatológicas. Preferentemente la enfermedad dermatológica y la afección dermatológica están seleccionadas de piel seca, pérdida de agua transepidérmica, enfermedades de la piel inflamatorias, neurodermatitis.

La composición farmacéutica se adecúa en particular para el tratamiento de enfermedades de la piel o afecciones de la piel, que se caracterizan por una liberación (opcionalmente elevada) de interleucina-8. Una liberación elevada de interleucina-8 es una liberación de interleucina-8, la cual está en al menos un 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 % o 100 % por encima de la liberación de interleucina-8, la cual se produce en caso de un sujeto con piel sana. La composición de acuerdo con la invención puede reducir la liberación de interleucina-8 a razón de al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 % o 100 %. La interleucina-8 se libera en el tejido inflamado y es liberada por lo tanto en las enfermedades dermatológicas y afecciones dermatológicas que se han mencionado arriba. Una reducción de la liberación de interleucina-8 es caracterizadora por lo tanto de una reducción de la inflamación en el tejido afectado. La afección dermatológica “piel seca” puede estar caracterizada por un contenido de grasa y/o de humedad demasiado bajo y se manifiesta a través de una apariencia pálida, sin brillo, una reducida elasticidad, una sensación de tirantez y picor.

Pérdida de agua transepidérmica (TEWL, del inglés Trans Epidermal Water Loss) denomina la evaporación de agua de la piel sin incluir la pérdida de agua debida al sudor, dado que a través de la piel puede ser entregada agua por dos vías, a través del sudor y a través de difusión pasiva. El proceso de la difusión pasiva a través de la piel se denomina pérdida de agua transepidérmica. La TEWL es fuertemente dependiente de la integridad de la capa córnea. De este modo la TEWL es un valor con el cual puede evaluarse de modo caracterizado el estado de la piel. La composición de acuerdo con la invención se adecúa para la reducción de la TEWL, en particular para la reducción de la TEWL a razón de al menos 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 % o 50 %.

Para la determinación de la TEWL puede usarse cualquier procedimiento conocido para ello, por ejemplo usarse cámaras sin ventilación, cámaras ventiladas, el gradiente de presión de vapor (por ejemplo con un Tewameter) o un Corneometer.

En el caso del principio de análisis cutáneo del Corneometer se determina a través de una medición de capacidad la humedad de la piel de la “capa exterior” de la epidermis (capa córnea). Este principio se basa en el hecho de las diferentes constantes dieléctricas de agua y otras sustancias. Un condensador de medición correspondientemente formado reacciona a las muestras introducidas en su volumen de medición con diferentes modificaciones de capacidad, que son detectadas y evaluadas por completo automáticamente por el aparato. La sonda activa revestida de vidrio especial se presiona sobre el punto de piel a medir y tras un segundo aparece en la pantalla el valor de medición del analizador cutáneo, es decir, el grado de la humedad sobre la superficie de la piel. Debido a una construcción especial se asegura que la superficie frontal activa de la sonda se presiona respectivamente con fuerza constante también sobre todos los puntos de piel no accesibles.

El Corneometer consiste en una carcasa de atril y el sensor de medición correspondiente. Éste está unido con la carcasa de atril a través de un cable enrollado con enchufe especial. Sobre el campo de indicación que se encuentra en la carcasa de atril se representa el valor de medición como número de cómo máximo tres cifras. El campo de indicación cumple además de ello también adicionalmente funciones de información.

El sensor de medición tiene una configuración cuadrada. Su superficie frontal activa revestida de vidrio especial es móvil axialmente y tiene un recorrido de al menos 3 mm. El principio de medición requiere un contacto plano de la superficie frontal con presión constante. Para poder garantizar esto de modo lo más reproducible posible, se configuró el lado frontal del cabezal de medición muy pequeño (7 x 7 mm). La parte móvil interior, la superficie frontal activa, se presiona a través de un resorte con respectivamente 3,5 N sobre la piel.

El Corneometer puede funcionar de modo completamente automático. Para llevar a cabo una medición se presiona el cabezal de medición sobre el punto a medir de la piel. Tras un segundo se indica el valor de medición.

El valor de medición del Corneometer indica el grado de la humedad sobre la superficie de la piel, por ejemplo antes y tras tratamientos de la piel con productos cosméticos o farmacéuticos, es decir, el aparato indica el estado o el cambio de la humedad de la superficie de la piel.

Las mediciones pueden llevarse a cabo en una ventana temporal constante tras la aplicación de la composición. Las enfermedades de la piel inflamatorias son enfermedades de la piel provocadas por alérgenos, urticaria, mastocitosis, eccemas, dermatitis, exantema medicamentoso, liquen, eritema nodoso, xantogranuloma juvenil, granuloma anular, pioderma gangrenoso y/o necrobiosis lipoídica. Los eccemas comprenden en particular eccemas atópicos, denominado también como neurodermatitis, dermatitis atópica y eccema endógeno.

Forma de aplicación

La composición puede presentarse como pomada, líquido, emulsión o solución.

La composición puede aplicarse tópicamente, en particular a través de aplicación exterior de la composición sobre la piel, no comprendiendo la piel las mucosas, en particular de la nariz.

La aplicación puede producirse a lo largo de un periodo de tiempo de 1, 2, 3, 4, 5 o 7 días. La aplicación puede producirse a lo largo de un periodo de tiempo de 1, 2, 3, 4, 5 o 7 semanas, preferentemente a lo largo de un periodo de tiempo de 4 semanas. La aplicación puede producirse 1,2, 3, 4 o 5 veces al día, preferentemente 2 veces al día. En caso de varias aplicaciones al día, las aplicaciones se producen preferentemente a intervalos aproximadamente iguales temporalmente.

La aplicación de la composición se produce de manera particularmente preferente durante un periodo de tiempo de 4 semanas, con aplicación doble diaria (preferentemente con separación de 12 h).

Procedimiento de preparación

Se describe un procedimiento para la preparación de un compuesto farmacéutico o compuesto cosmético, mezclándose una cantidad eficaz de Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas con excipientes y/o sustancias portadoras compatibles farmacéutica o cosméticamente, para obtener la composición farmacéutica o cosmética eficaz dermatológicamente mencionada.

La composición obtenida es preferentemente una emulsión.

La emulsión puede prepararse mediante procedimientos conocidos. La emulsión puede prepararse por ejemplo, a través del siguiente procedimiento, correspondiéndose las cantidades usadas con las cantidades usadas arriba para la mezcla conteniendo Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas y para los excipientes:

Se dispersa Sodium Hyaluronate en Pentylene Glycol y Glycerin, debido a lo cual resulta una fase C;

La mezcla conteniendo Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas se mezcla como solución acuosa con Panthenol, Betain, Magnesium Sulfate, Sodium Lactate, Sodium Gluconate y Lactic Acid, dando como resultado una fase D; a continuación, se añade la fase D a la fase C, de lo cual resulta una fase E;

La fase E se agita hasta que el Sodium Hyaluronate queda disuelto (claro);

La fase E se ajusta con un ácido orgánico, por ejemplo, Lactic Acid, a un pH de 4,0 a 5,5 o 4,5 a 5,0.

La fase E se calienta a aproximadamente 75 °C;

Se prepara una fase A mediante mezcla de los componentes Simmondsia Chinensis Seed Oil, Caprylic/Capric Triglyceride, Cera Alba, Hydrogenated Castor Oil, Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone, Cetyl Palmitate, Glyceryl Dibehenate, Tribehenin, Glyceryl Behenate, Squalane, Ceramide 3, Ceramide 3B, Cermamide 6, Cholsterol, Phytosphingosine; la fase A se calienta a aproximadamente 75 °C;

Se prepara la fase B mediante mezcla de los componentes Oenothera Biennis Oil, Squalane, Prunus Amygdalus Dulcis Oil, Persea Gratissima Oil, Tocopherolacetate, Butyrospermum Parkii Butter; la fase B se calienta a aproximadamente 50 °C;

La fase E calentada se añade a la fase A y se mezcla dando como resultado una fase AE; la fase B calentada se añade a AE y se homogeneíza, debido a lo cual resulta una emulsión de agua en aceite.

La emulsión obtenida se enfría mediante agitación a aproximadamente 30 °C (máximo 30 °C) y se mantiene a esta temperatura;

La emulsión se homogeneíza a aproximadamente 30 °C (máximo 30 °C) durante aproximadamente 5 minutos, debido a lo cual se obtiene la composición de acuerdo con la invención como emulsión.

Los pasos de mezcla pueden llevarse a cabo en una unidad agitadora a aproximadamente 75 rpm. Los pasos de homogeneización se llevan a cabo en un homogeneizador a aproximadamente 19000 rpm.

Procedimientos cosméticos

Se describe un procedimiento cosmético para el aumento de la elasticidad y/o humedad de la piel con la composición de acuerdo con la invención que se ha descrito arriba. Se adecúa en caso de personas, cuya piel no está modificada patológicamente de ningún modo.

Se describe además de ello, que en el caso del procedimiento cosmético la composición de acuerdo con la invención puede aplicarse tópicamente, en particular a través de aplicación exterior de la composición sobre la piel, no comprendiendo la piel las mucosas, en particular de la nariz.

Ejemplos

Ejemplo 1: efecto de una mezcla conteniendo Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas en la liberación de interleucinas en células HaCaT

Para comprobar el uso de la composición de acuerdo con la invención para el cuidado en caso de enfermedades de la piel inflamatorias se llevaron a cabo pruebas para la reducción de la liberación de citoquina.

A modo de ejemplo de determinó en este caso la liberación de interleucina-6 (IL-6) y de interleucina-8 (IL-8). A través de la estimulación con TNF-alfa (10 ng/mL) pueden formarse interleucinas en diferentes tipos de células. Mediante aplicación de sustancias activas antiinflamatorias o inmunomoduladores puede influirse en la producción de interleucina. Las propiedades inmunomoduladoras se prueban en células HaCaT (Human adult low Calcium high temperature keratinocytes, queratinocitos humanos adultos con bajo calcio alta temperatura). La línea celular HaCaT obtenida a partir de queratinocitos humanos, no malignos (= piel normal) (inmortalizado espontáneamente) procede de piel sana de un paciente hombre y presenta esencialmente las propiedades de queratinocitos epidérmicos basales.

La propiedad antiinflamatoria (antiflogística) o inmunomoduladora de una sustancia puede examinarse por ejemplo in vitro en líneas celulares. En esta estructura de pruebas se induce una inflamación (regulación hacia arriba de la producción de interleucina) en la línea celular a través de estímulos externos.

La sustancia de prueba 1 tenía la siguiente composición:

Bacterias intestinales naturales Enterococcus faecalis y Escherichia coli en forma inactivada. 1 ml de suspensión contiene: lisado de bacterias preparado a partir de 1,5 - 4,5 x 107 células de Escherichia coli (DSM 17252) y 1,5 - 4,5 x 107 células de Enterococcus faecalis (^dS^m16440).

La sustancia de prueba 1 se aplica en dos diluciones sobre las células estimuladas y se examina la regulación hacia abajo o modulación de la producción de interleucina (IL-6 e IL-8). La evaluación se produce mediante ELISA (del inglés Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas). La sustancia antiinflamatoria hidrocortisona se evalúa también como sustancia comparativa. Las células HaCaT se cultivan con una densidad celular de 20.000 células por pocillo en una placa de cultivo de tejido de 24 pocillos; tras 24 h se estimulan las células HaCaT con TNF-a (10 ng/mL) (inducción de la producción de interleucina, por ejemplo, IL-8) y se produce la adición de las sustancias a examinar. Tras 72 h de incubación se evaluaron los dos marcadores de inflamación (IL-8 e IL-6) cuantitativamente mediante ELISA.

Para la comprobación de la actividad antiinflamatoria se llevan a cabo tres pruebas independientes por triplicado. La estimulación de las células HaCaT con TNF-alfa condujo a una liberación 2,5 veces más alta de interleucina-8 en comparación con la muestra de control tras 72 h (imágenes 1 2). La liberación de IL-8 de las células HaCaT incubada únicamente con la sustancia de prueba (1:10, muestra de control sin TNF-alfa) fue por término medio a razón de aproximadamente un 10 % menor en comparación con la muestra de control en caso de 72 h. En caso de entrega simultánea de TNF-alfa y la sustancia de prueba (1:10) pudo reducirse la liberación de IL-8 a razón de aproximadamente 27 % (1:10) en comparación con la muestra de control con TNF-alfa tras 72 h.

Al usarse la sustancia de prueba (1:1000) no pudo determinarse por término medio ninguna modificación en la liberación de IL-8 en comparación con la muestra de control con TNF-alfa tras 72 h.

La liberación de interleucina-6 tras estimulación con TNF-alfa fue claramente menor en comparación con interleucina-8 en células HaCaT (imágenes 3 4). Tras 24 h sin adición de TNF-alfa (muestra de control) la liberación de IL-6 se encuentra por debajo del límite de detección. En caso de entrega simultánea de TNF-alfa y la sustancia de prueba (1:10) pudo verse por término medio una ligeramente elevada liberación de IL-6 a razón de 24 % en comparación con la muestra de control con TNF-alfa tras 72 h.

La liberación de IL-6 en caso de la dilución 1:100 de la sustancia de muestra fue comparable con la muestra de control tratada tras 72 h. A diferencia de en el caso de la liberación de IL-8, la hidrocortisona (10‘7 M) condujo a una reducción más clara (40 %) de la liberación de IL-6 en comparación con la muestra de control tratada tras 72 h. Las pruebas para influir en el desarrollo de la inflamación a través de la sustancia de prueba mostraron tanto en el caso de IL-8, como también en el caso de IL-6, una modulación dependiente de la concentración, de la liberación. En el caso de una dilución 1:10 de la sustancia de prueba, se redujo la liberación de IL-8 a razón de 27 %, pero se elevó la liberación de IL-6 a razón de 24 % en comparación con la muestra de control con TNF-alfa tras 72 h. En el caso de una dilución de 1:100 de la sustancia de prueba, tanto la liberación de IL-8, como también la liberación de IL-6, estuvo en el intervalo de la muestra de control con TNF-alfa tras 72 h.

Una inflamación puede provocarse mediante entrega de TNF-alfa. TNF-alfa es una citoquina multifuncional, la cual transmite además de inflamación, también respuesta inmune y apoptosis. TNF-alfa activa la respuesta inmune a través del inicio de la producción de citoquinas adicionales, las cuales se consideran marcadores de inflamación. IL-6 se forma en el cuerpo (en vivo) tras estimulación a través de TNF-alfa e influye en diferentes reacciones de inflamación. A través de IL-6 se estimula, por ejemplo, la formación de la proteína C reactiva, que se aprovecha a menudo como parámetro de inflamación agudo. IL-8 es una citoquina quimiotáctica, la cual es exprimida por diferentes tejidos y células sanguíneas. Como mediador de inflamación, IL-8 moviliza y activa granulocitos neutrófilos y favorece su desgranulación. La interacción entre linfocitos T, granulocitos neutrófilos y células epidérmicas presumiblemente tiene una importancia decisiva en la patofisiología de enfermedades de la piel inflamatorias, como por ejemplo, psoriasis.

Las pruebas llevadas a cabo en células HaCaT tras estimulación con TNF-alfa mostraron que la sustancia de prueba 1 influye en dependencia de la concentración en la liberación de interleucina en vivo.

Ejemplo 2: efecto de una mezcla conteniendo Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas en la pérdida de agua transepidérmica (TEWL) de la piel humana

La pérdida de agua transepidérmica de la piel es uno de los parámetros más importantes para la evaluación de la función de protección de la piel. A este respecto se trata de la evaporación de agua del interior del cuerpo sin incluirse la pérdida de agua al sudar. Un preparado, el cual mantiene o mejora la función de barrera de la piel, da lugar a una reducción de la pérdida de agua transepidérmica. Una evaporación de agua reducida en la piel corresponde a un efecto de mantenimiento de la humedad bueno de la piel.

La determinación cuantitativa de la pérdida de agua transepidérmica (TEWL) de la piel se llevó a cabo con el evaporímetro. La sonda de medición del evaporímetro consiste en un tubo abierto hacia arriba con dos sensores de temperatura y de humedad, los cuales están fijados uno sobre el otro con una pequeña separación. Los dos sensores de humedad determinan el gradiente de presión de vapor directamente en la zona de difusión sobre la piel. Mediante la ayuda de procesamiento electrónico de datos se mide la entrega de agua en g/hm2 de acuerdo con las leyes de Fick sobre la difusión:

dm de

- dt = - D - A d —x

donde

dm/dt = flujo de difusión

D = coeficiente de difusión

A = superficie

dc/dx = gradiente de densidad.

Las pruebas para la pérdida de agua transepidérmica de la piel se llevaron a cabo con el dispositivo Tewameter® (Courage Khazaka electronic GmbH).

La sonda de medición se dispone sin aplicación de presión sobre el área de piel a examinar, de modo que los bordes del tubo de teflón terminan a la altura de la piel. En total se llevan a cabo 20 ciclos de medición de una serie de medición por cada campo de prueba, que se registran y promedian mediante el aparato. Como área de prueba sirvió la cara con campos de medición con una magnitud de aproximadamente 3 cm de diámetro. En estas áreas se midió en 3 puntos diferentes y los valores de medición se promediaron. Los valores de medición obtenidos se representan a modo de tabla.

20 personas de experimentación hombres/mujeres de entre 23 y 66 años representan el colectivo de personas de experimentación. Las personas de experimentación fueron instruidas para aplicar la sustancia de prueba 2 durante cuatro semanas de forma regular por las mañanas y por las noches.

Las personas presentaban en el área de prueba una piel muy seca o con tendencia hacia neurodermatitis (médicamente no requerido tratamiento).

La sustancia de prueba 2 tenía la siguiente composición:

3.00 % en peso de Simmondsia Chinensis Seed Oil,

16,80 % en peso de Caprylic/Capric Triglyceride,

0,50 % en peso de Cera Alba,

0,80 % en peso de Hydrogenated Castor Oil,

Cetyl PEG/PPG-10/1 Dimethicone,

0,3 % en peso de Cetyl Palmitate,

0,5 en peso de una mezcla a partir de Glyceryl Dibehenate, Tribehenin, Glyceryl Behenate, Squalane, Ceramide 3, Ceramide 3B, Cermamide 6, Cholsterol, Phytosphingosine (presentándose las correspondientes sustancias en respectivamente las mismas proporciones),

2.00 % en peso de Oenothera Biennis Oil (estabilizado con tocoferol),

6.0 % en peso de Squalane,

2,50 % en peso de Prunus Amygdalus Dulcís Oil,

2.00 % en peso de Persea Gratissima Oil,

0,5 % en peso de Tocopherolacetate,

0,5 % en peso de Butyrospermum Parkii Butter,

4.0 % en peso de Pentylene Glycol,

4.0 % en peso de Glycerin (99 %),

0,10 % en peso de Sodium Hyaluronate,

52,19 % en peso de la sustancia de prueba 1 (véase ejemplo 1)

1.0 % en peso de Panthenol,

0,3 % en peso de Betain,

0,8 % en peso de Magnesium Sulfate,

0,10 % en peso de Sodium Lactate,

0,10 % en peso de Sodium Gluconate, o

Lactic Acid para el ajuste del pH a un intervalo de 4,5 a 5.

Las siguientes tablas reproducen valores promedio (en g/hm2) para las mediciones de TEWL en el área de prueba respectivamente antes y tras 4 semanas de aplicación regular.

Resultan valores negativos cuando la pérdida de agua transepidérmica de la piel se había reducido desde la primera medición a la segunda medición.

Tabla 1: representación de los resultados de medición (valores TEWL) de las 20 personas de experimentación antes y tras 4 semanas de aplicación del preparado y cálculo de las diferencias antes / después. Mitad del cuerpo derecha.

La modificación de valor TEWL (%) promedio por el uso del preparado se promedia a través de los resultados individuales de las 20 personas de experimentación. La diferencia de los valores TEWL determinados por término medio es de - 4,7. Este valor reproduce la reducción promedio de la entrega de agua tras uso del preparado. En el caso de un valor de partida TEWL de por término medio 17,6, esto se corresponde con una reducción de la pérdida de agua transepidérmica de la piel de aproximadamente - 26,70 %.

Tabla 2: representación de los resultados de medición (valores TEWL) de las 20 personas de experimentación antes y tras 4 semanas de aplicación del preparado y cálculo de las diferencias antes / después. Mitad del cuerpo izquierda.

La modificación de valor TEWL (%) promedio por el uso del preparado se promedia a través de los resultados individuales de las 20 personas de experimentación. La diferencia de los valores TEWL determinados por término medio es de - 3,0. Este valor reproduce la reducción promedio de la entrega de agua tras uso del preparado. En el caso de un valor de partida TEW^lde por término medio 16,9, esto se corresponde con una reducción de la pérdida de agua transepidérmica de la piel de aproximadamente - 17,75 %.

Tabla 3: representación de los resultados de medición (valores TEWL) de las 20 personas de experimentación antes y tras 4 semanas de aplicación en el área de control (es decir, sin aplicación de la sustancia de prueba 2) y cálculo de las diferencias antes / después.

La modificación de valor TEWL (%) promedio en la zona de control no tratada se promedia a través de los resultados individuales de las 20 personas de experimentación. La diferencia de los valores TEWL determinados por término medio es de - 0,5. Este valor reproduce la reducción promedio de la entrega de agua sin uso del preparado. En el caso de un valor de partida TEWL de por término medio 10,3, esto se corresponde con una reducción de la pérdida de agua transepidérmica de la piel de aproximadamente - 4,85 %.

Tabla 4: resumen de las modificaciones promedio durante el periodo de tiempo de observación:

De este modo puede probarse que la sustancia de prueba 2 da lugar a una notable reducción de la pérdida de agua transepidérmica en el caso de personas con piel muy seca.

Ejemplo 3: efecto de una mezcla conteniendo Escherichia coli y Enterococcus faecalis inactivadas, en la humedad de la piel

En el caso del principio del Corneometer se determina a través de una medición de capacidad, la humedad de la piel de la “capa exterior” de la epidermis (capa córnea). Este principio se basa en el hecho de las diferentes constantes dieléctricas de agua y otras sustancias. Un condensador de medición correspondientemente formado reacciona a las muestras introducidas en su volumen de medición, con diferentes modificaciones de capacidad, que son detectadas y evaluadas por completo automáticamente por el aparato. La sonda activa revestida de vidrio especial se presiona sobre el punto de piel a medir y tras 1 segundo aparece en la pantalla el valor de medición del analizador cutáneo, es decir, el grado de la humedad sobre la superficie de la piel. Debido a una construcción especial se asegura que la superficie frontal activa de la sonda se presiona respectivamente con fuerza constante también sobre todos los puntos de piel no accesibles.

El Corneometer funciona de modo completamente automático. Para llevar a cabo una medición se presiona el cabezal de medición sobre el punto a medir de la piel. Tras un segundo se indica el valor de medición.

El valor de indicación del Corneometer indica el grado de la humedad sobre la superficie de la piel, por ejemplo antes y tras tratamientos de la piel con productos cosméticos o farmacéuticos, es decir, el aparato indica el estado o el cambio de la humedad de la superficie de la piel.

Las mediciones se llevan a cabo en una ventana temporal constante tras la aplicación de producto.

Se indicó a las personas de experimentación que usasen el producto de prueba solo en el intervalo de prueba definido durante la duración de la prueba.

Las mediciones se llevaron a cabo del siguiente modo:

1. Las personas de experimentación se aclimatan durante 45 minutos a una temperatura de 22 grados Celsius y 60 % de humedad relativa.

2. Se miden valores de medición de la piel en el respectivo campo de prueba en tres puntos diferentes. Los valores registrados de promedian.

3. Como área de medición de control sirve en el caso de esta prueba un área de piel no tratada.

4. Las mediciones se produjeron antes de iniciarse la aplicación y tras 4 semanas de aplicación de la composición de prueba 2 del ejemplo 2. Las mediciones se producen respectivamente 10-12 horas tras la última aplicación del producto usado hasta el momento o de los productos de prueba.

Los valores de humedad de la piel por campo de prueba y momento respectivamente se promedian. Los correspondientes valores se encuentran en las tablas que acompañan.

A través de las personas de experimentación, que están especificadas a través de un número en uso, edad y sexo, se promedia y se determina el desvío estándar.

(Bibliografía: L. Sachs, "Statistische Methoden", sexta edición, editorial Springer Verlag Berlin Heidelberg 1988).

delta = diferencias de los valores de humedad de la piel

delta (%) = modificación de humedad porcentual media debida al uso, referido al valor de partida

Las correspondientes tablas contienen los valores respectivamente determinados.

Las personas presentan en el área de prueba una piel muy seca o con tendencia hacia neurodermatitis (médicamente no requerido tratamiento).

Tabla 5: medición de humedad de la piel en el área tratada, mitad del cuerpo derecha.

Tabla 6: medición de humedad de la piel en el área tratada, mitad del cuerpo izquierda.

Tabla 7: medición de la humedad de la piel en la zona de control no tratada.

Tabla 8: evaluación a modo de resumen de las mediciones de humedad de la piel

En total 20 sujetos de prueba toleraron sin problemas durante la prueba de aplicación de cuatro semanas de acuerdo con criterios dermatológicos-clínicos, la sustancia de prueba 2. No se produjeron en ningún caso modificaciones de la piel no deseadas o incluso patológicas en la zona de las áreas de prueba.

La medición de corneometría para la comprobación del efecto de la sustancia de prueba 2 en la humedad de la piel se llevó a cabo con la sonda de corneómetro CM 825 (empresa Courage+Khazaka) en 20 personas de experimentación.

La modificación de los valores de humedad de la piel se determinó en el área de prueba antes y tras 4 semanas de aplicación regular de los preparados, así como en un área de control no tratada. En el área tratada pudo verse una mejora de la humedad de la piel de 51,37 % (mitad del cuerpo derecha) y de 53,67 % (mitad del cuerpo izquierda). La modificación de humedad de la piel promedio en el área de piel no tratada fue de 5,23 %.

Por lo tanto se muestra una clara mejora de la humedad de la piel a través de la sustancia de prueba 2.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Composición farmacéutica, que contiene una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas, así como excipientes y/o sustancias portadoras compatibles farmacéuticamente, para el uso en la terapia, en la terapia de soporte o en la profilaxis de enfermedades dermatológicas, presentándose la composición en una forma aplicable tópicamente y estando determinada para la aplicación exterior sobre la piel.

2. Composición farmacéutica para el uso según la reivindicación 1, estando presentes Escherichia coli y Enterococcus faecalis como lisado.

3. Composición farmacéutica para el uso según una o varias de las reivindicaciones anteriores, estando presente la mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis en una cantidad del 1-95 % en peso, del 20-80 % en peso, del 40-60 % en peso o del 45-55 % en peso en la composición total.

4. Composición farmacéutica para el uso según una o varias de las reivindicaciones anteriores, estando presentes Escherichia coli y Enterococcus faecalis en la mezcla en una proporción de entre 0,5:1,5 y 1,5:0,5, 0,75:1,25 y 1,25:0,75 o 1,15:0,85 y 0,85:1,15 o 1,05:0,95 y 0,95:1,05, estando presentes opcionalmente Escherichia coli y Enterococcus faecalis cada una de ellas en un número de células de 0,5 x 107 a 10 x 107, de 1,0 x 107 a 7 x 107 o de 1,5 x 107 a 4,5 x 107 por 100 g de la masa total.

5. Composición farmacéutica para el uso según una o varias de las reivindicaciones anteriores, seleccionándose la enfermedad dermatológica de enfermedades de la piel inflamatorias y de neurodermatitis.

6. Composición farmacéutica para el uso según una o varias de las reivindicaciones anteriores, presentándose la composición como pomada, líquido, emulsión o solución.

7. Uso de una composición, que contiene una cantidad eficaz de una mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis inactivadas, para el uso cosmético exterior sobre la piel, presentándose la composición en una forma aplicable tópicamente.

8. Uso según la reivindicación 7, estando presentes Escherichia coli y Enterococcus faecalis como lisado.

9. Uso según las reivindicaciones 7 u 8, estando presente la mezcla de Escherichia coli y de Enterococcus faecalis en una cantidad del 1-95 % en peso, del 20-80 % en peso, del 40-60 % en peso o del 45-55 % en peso en la composición total.

10. Uso según una o varias de las reivindicaciones 7 - 9, estando presentes Escherichia coli y Enterococcus faecalis en la mezcla en una proporción de entre 0,5:1,5 y 1,5:0,5, 0,75:1,25 y 1,25:0,75 o 1,15:0,85 y 0,85:1,15 o 1,05:0,95 y 0,95:1,05, estando presentes opcionalmente Escherichia coli y Enterococcus faecalis cada una de ellas en un número de células de 0,5 x 107 a 10 x 107, de 1,0 x 107 a 7 x 107 o de 1,5 x 107 a 4,5 x 107 por 100 g de la masa total.

11. Uso según una o varias de las reivindicaciones 7 - 10 , seleccionándose el uso cosmético de piel seca o de pérdida de agua transepidérmica.

12. Uso según una o varias de las reivindicaciones 7 - 11, presentándose la composición como pomada, líquido, emulsión o solución.