ES2876168T3

ES2876168T3 - Composición de tinción con una mejor intensidad de la tinción

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Publication number: ES2876168T3
Application number: ES18731220T
Authority: ES
Inventors: Gerrit Reinold Jacob Melles
Original assignee: Dutch Ophthalmic Research Center International BV
Current assignee: Dutch Ophthalmic Research Center International BV
Priority date: 2017-05-24
Filing date: 2018-05-24
Publication date: 2021-11-12
Anticipated expiration: 2038-05-24
Also published as: NL2018976B1; AU2018273448B2; PL3630202T3; US20200093941A1; WO2018217088A1; US12447214B2; EP3630202B1; EP3630202A1; AU2018273448A1; CA3064721A1; AU2018273448A8; PT3630202T; DK3630202T3

Abstract

Una composición de tinción que comprende un tinte vital y ácido hialurónico, en donde el tinte vital comprende Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición de tinción con una mejor intensidad de la tinción

La invención se dirige a una composición de tinción, un método para preparar la composición de tinción y al uso de la composición de tinción en la tinción del tejido ocular como parte de la cirugía ocular, en particular la cirugía de cataratas.

Una catarata se puede desarrollar debido al envejecimiento o a una amplia variedad de trastornos o enfermedades patológicas oculares o sistémicas. Cuando se desarrolla una catarata, la sustancia del lente se vuelve menos transparente.

Para restaurar la vía óptica, se puede realizar una cirugía de cataratas para eliminar la masa lenticular opaca. En la cirugía de cataratas, el lente opaco (catarata) del ojo se elimina y se reemplaza con un lente intraocular sintético (LIO),

En la cirugía de cataratas, la cámara anterior del ojo se abre a través de una incisión periférica en la córnea, el limbo o la esclerótica, la cápsula anterior del lente se abre y se elimina la sustancia del lente (por ejemplo mediante el uso de facoemulsificación), mientras que deja in situ el borde periférico de la cápsula anterior del lente, así como también las porciones capsulares ecuatorial y posterior. La cápsula vacía del lente forma una "bolsa" capsular que se puede usar para soportar el lente de implante intraocular sintético (LIO), de modo que la LIO se coloca "en la bolsa".

Durante la cirugía de cataratas, la técnica de capsulorrexis se usa para prevenir el desgarre involuntario del borde capsular anterior periférico durante las manipulaciones quirúrgicas que se requieren para abrir la cámara anterior. En la capsulorrexis, se hace un desgarre curvilíneo continuo para crear una abertura redonda en la cápsula anterior del lente. Se usa para eliminar la cápsula del lente durante la cirugía de cataratas mediante fuerzas de cizallamiento y estiramiento. El propósito de la capsulorrexis es abrir la cápsula sin un desgarre radial que podría en cualquier momento, ya sea durante o después de la operación, extenderse y permitir que el contenido de la bolsa cambie.

Con el fin de estabilizar la cámara anterior, se inyecta un material viscoelástico en la cámara anterior para ayudar a mantener su forma durante la cirugía. Este material viscoelástico se hace típicamente de sustancias de origen natural en el cuerpo. Debido a su alta viscosidad, el material no escapará de las incisiones durante la cirugía. El material viscoelástico mantiene una cámara con suficiente volumen durante la cirugía de cataratas y de esta manera permite una manipulación más eficiente con menos trauma en el endotelio corneal y otros tejidos oculares. La viscoelasticidad del material ayuda a que la superficie vítrea se empuje hacia atrás, lo que previene por tanto la formación de una cámara anterior plana postoperatoria.

Para facilitar la cirugía de cataratas, se pueden usar métodos de tinción para teñir selectivamente la superficie exterior de la cápsula anterior del lente, mientras que el material lenticular debajo de la cápsula anterior del lente (es decir las fibras del lente y en particular la corteza exterior del lente) no se tiñe notablemente. De esta forma, la cápsula del lente se puede distinguir visualmente de la corteza exterior del lente. Esta distinción reduce el riesgo de dañar inadvertidamente o incluso eliminar la cápsula del lente durante la cirugía de cataratas, especialmente durante la eliminación del lente. Una manipulación quirúrgica típica que se requiere para una tinción eficiente es que antes de inyectar la solución de tinción en la cápsula del lente, primero se inyecta una burbuja de aire en la cámara anterior. La burbuja de aire permite un contacto más directo de la solución de tinción y ayuda a prevenir, o al menos reducir, la dilución indeseable de la solución de tinción que resultaría en un contraste demasiado débil.

Tal método de tinción es conocido por el documento WO 99/58160, que describe un método para realizar capsulorrexis, en donde se tiñe una cápsula del lente de un ojo mediante el uso de al menos un tinte, tinte que es capaz de teñir el tejido sin difundirse a través de dicho tejido. El azul tripán se menciona como un ejemplo de tinte adecuado.

De acuerdo con el método del documento WO 99/58160, primero se puede aspirar el líquido ocular y rellenar con aire (es decir una burbuja de aire) la cámara anterior. Se aplican un par de gotas de la solución que comprende el tinte sobre la cápsula anterior del lente. La aplicación de la solución se puede llevar a cabo mediante la introducción de una cánula que se une a una jeringa que contiene el tinte en la cámara anterior, y la inyección de un par de gotas del tinte, generalmente menos de 1 mL (en la práctica menos de 0,5 mL), sobre la cápsula anterior del lente. La cámara anterior se rellena con aire, de modo que la concentración del tinte en la solución no se reduce por el líquido ocular. Como una alternativa, el documento WO 99/58160 describe que el tinte se puede administrar en una concentración más alta en el medio acuoso, o se puede usar una dispersión del tinte en una solución viscosa o viscoelastomérica. Preferentemente, el exceso de tinte se lava mediante la irrigación de la cámara anterior, lo que deja una tinción débil pero clara de la cápsula anterior del lente, después de lo que se puede continuar la cirugía mediante el uso de técnicas de rutina.

Los métodos de tinción que se aplican actualmente en la cirugía de cataratas, que incluye el método del documento WO 99/58160, tienen un número de desventajas.

En primer lugar, los métodos de tinción conocidos requieren que se aplique una burbuja de aire en la cámara anterior. Sin la burbuja de aire, la distinción entre la cápsula del lente que se tiñe y la corteza exterior del lente no es suficiente para tomar ventaja efectivamente del contraste que se proporciona por la tinción. Será evidente que la cirugía de cataratas sería menos compleja si tal etapa no se tendría que llevar a cabo.

En segundo lugar, una desventaja de los métodos de tinción conocidos en la técnica es que no consiguen teñir la cápsula del lente por una cantidad suficiente de tiempo. La tinción que se proporciona a la cápsula del lente tiende a desaparecer en el tiempo durante la cirugía. Como resultado, durante la última parte de la cirugía, ya no existe una clara distinción de color entre la cápsula del lente y la corteza del lente. En consecuencia, existe una necesidad de composiciones de tinción que proporcionen tinción con un aumento de la duración.

En tercer lugar, existe una necesidad de métodos de tinción con una mejora del contraste, tal como para reducir adicionalmente el riesgo de dañar inadvertidamente la cápsula del lente durante la cirugía de cataratas. En consecuencia, existe una necesidad de composiciones de tinción que proporcionen tinción con un aumento de la intensidad.

El documento EP 2620 144 describe una composición de tinción que comprende un tinte vital y un anestésico tanto para la tinción como para la anestesia del tejido ocular.

Schumann y otros (Retina, the journal of retinal and vitreous diseases 2009, vol. 29, número 5, páginas 669-676) describen la tinción de una membrana limitante interna que se elimina mediante el uso de un tinte vital tal como azul tripán, azul brillante G, azul de bromofenol, azul de Chicago y verde de indocianina en la cirugía del agujero macular.

Los tintes viscoelásticos que comprenden un compuesto de tinte y ácido hialurónico se describen en el documento EP 1 132065. Dichos tintes viscoelásticos se inyectan en la cámara anterior del ojo y no pretenden teñir el tejido ocular.

OZCAN KAYIKICIOGLU y otros (JOURNAL CATARACT AND REFRACTIVE SURGERY, vol. 27, número 7, 2001, página 970) usan una composición de azul tripán e hialuronato de sodio para la capsulorrexis.

Un objetivo de la invención es proporcionar una composición de tinción que resuelva uno o más de los problemas que se mencionan anteriormente.

Este objetivo se alcanza al proporcionar una composición de tinción que comprende un tinte vital y ácido hialurónico, en donde el tinte vital comprende Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán, y en donde se encuentra presente ácido hialurónico adicional.

Cuando se usa la composición de tinción de acuerdo con la invención para teñir la cápsula del lente en la cirugía de cataratas, los inventores encontraron que la composición era capaz de teñir la cápsula del lente con un aumento de la intensidad y un aumento de la duración. Aún al final de la cirugía, continuó existiendo una buena visibilidad del borde de la bolsa capsular, lo que facilitó una correcta colocación del LIO. Los inventores encontraron adicionalmente que la composición de tinción de acuerdo con la invención aún proporcionaba suficiente contraste cuando no se inyectaba ninguna burbuja de aire en la cámara anterior. Por tanto, la invención hace posible eliminar una etapa quirúrgica de la cirugía de cataratas. Los resultados clínicos se describen con más detalle en el Ejemplo 6.

Con respecto al aumento de la intensidad de la tinción, los inventores encontraron un efecto sinérgico de la combinación de tintes de Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán. Esta combinación de tintes en particular proporciona una tinción superior en comparación con otras combinaciones de tintes, como es mostrado en los Ejemplos 1 y 3. Se llevaron a cabo mediciones de absorbancia que mostraron que la absorbancia a una longitud de onda de 500-610 nm era más alta para la combinación de estos dos tintes en comparación con la suma de la absorbancia que se mide para los dos tintes individuales. Adicionalmente, se observó un cambio en el máximo de absorbancia a una longitud de onda inferior. Los resultados experimentales se describen con más detalle en los Ejemplos 2, 3 y 5. Se plantea la hipótesis de que el cambio en la absorbancia y el máximo de absorbancia se provoca por la interacción de las dos moléculas de tinte en la solución. Dado que una longitud de onda de 500-610 nm corresponde al intervalo de longitud de onda para el que el ojo humano es más sensible, la absorbancia más alta y el cambio en el máximo de absorbancia se perciben como un aumento de la intensidad de los dos tintes. Los inventores encontraron adicionalmente que la presencia de ácido hialurónico fortalece este efecto en la absorbancia. En las pruebas de tinción que se realizaron con ojos bovinos y humanos, el ácido hialurónico no tuvo ningún efecto negativo notable en la intensidad de la tinción. Esto contrasta con otros polímeros que se probaron, que incluyeron polietilenglicol (PEG), (hidroxipropil)metilcelulosa (HPMC), alcohol polivinílico (PVA) y polivinilpirrolidona (PVP). Todos estos polímeros provocaron una reducción significativa en la intensidad de la tinción, aún a tal punto que la intensidad de la tinción fue demasiado baja para proporcionar un contraste que se usa clínicamente, como es mostrado en el Ejemplo 4.

Las Figuras 1-6 muestran un espectro de absorbancia que se mide para diferentes composiciones de tinción, como se analiza en los Ejemplos 2-4.

La Figura 7 muestra la estructura molecular de la forma de sal de sodio del Azul Cielo de Chicago.

La Figura 8 muestra la estructura molecular de la forma de sal de sodio del Azul Tripán.

Los detalles específicos de la composición de tinción de acuerdo con la invención se describen más abajo.

La composición de tinción de acuerdo con la invención es preferentemente un líquido, que es una forma apropiada cuando se usa la composición en cirugía. La composición de tinción es típicamente un líquido acuoso, preferentemente una solución acuosa. Tanto los tintes como el ácido hialurónico son solubles en agua.

La composición de tinción comprende ácido hialurónico. El ácido hialurónico es un glicosaminoglicano de alta viscosidad de origen natural que tiene enlaces glucosaminídicos 1-4 alternos. El peso molecular de este material se encuentra generalmente dentro del intervalo de 50000 a 8000000 g/mol, aunque existen reportes de pesos moleculares tan altos como 13000 000 g/mol en dependencia de la fuente, el método de aislamiento y el método de determinación. Después de aislar el ácido hialurónico de su fuente, son conocidos tratamientos que reducen el peso molecular del ácido hialurónico. En consecuencia, también se puede usar ácido hialurónico de inferior peso molecular en la composición de tinción de la invención, por ejemplo de 10000 a 50000 g/mol. La viscosidad de cizallamiento cero del ácido hialurónico generalmente varía de 50000 a 10000000 centipoise. Se han obtenido buenos resultados mediante el uso de ácido hialurónico con un peso molecular de entre 100000 y 5000000 Da, en particular con un peso molecular de entre 500000 y 3000000 g/mol.

El ácido hialurónico se puede encontrar presente en la composición en una cantidad de menos del 3,0 % en peso, preferentemente menos del 2 % en peso, aún con mayor preferencia menos del 1,0 % en peso, en base al peso de la composición de tinción. Pueden no ser deseables concentraciones más altas en vista de la alta viscosidad que se obtiene con tales cantidades.

Cuando se usa ácido hialurónico que tienen un peso molecular entre 50 000 y 8 000 000 g/mol (por ejemplo, ácido hialurónico sin tratar), el ácido hialurónico se encuentra presente preferentemente en concentraciones relativamente bajas, es decir en una concentración de menos del 0,8 % en peso, en base al peso total de la composición. Los inventores encontraron que concentraciones más altas de ácido hialurónico resultaron en una composición que era difícil de manipular debido, entre otras cosas, a una viscosidad muy alta. Preferentemente, la composición de tinción comprende 0,2 - 0,75 % en peso, en base al peso de la composición de tinción. Se han obtenido buenos resultados con una concentración de ácido hialurónico de 0,3 - 0,7 % en peso.

Preferentemente, se usa una concentración de ácido hialurónico de al menos 0,4 % en peso, con mayor preferencia al menos 0,5 % en peso, aún con mayor preferencia al menos 0,6 % en peso, en base al peso total de la composición de tinción. Atan altas concentraciones, se alcanza una duración de tinción particularmente buena.

El ácido hialurónico formará una sal cuando se disuelva en un ambiente acuoso. En consecuencia, el ácido hialurónico se puede encontrar presente en la composición de tinción en su forma iónica, llamada hialuronato. Por ejemplo, la composición de tinción puede comprender ácido hialurónico como una sal de sodio, potasio o amonio. El ácido hialurónico también se puede encontrar presente en estado neutro o sin disolver.

La composición de tinción comprende adicionalmente dos compuestos de tintes, es decir, Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago. El Azul Cielo de Chicago es también conocido como Azul Cielo de Chicago 6B, Azul Directo 1 o Azul Cielo Pontamina.

La relación en peso de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago en la composición se puede encontrar entre 1:3 y 3:1. Se han obtenido buenos resultados mediante el uso de más Azul Tripán que Azul Cielo de Chicago, es decir, una relación en peso de más de 1:1. Sin embargo, cuando se encuentra presente más Azul Cielo de Chicago que Azul Tripán (es decir, una relación en peso de menos de 1:1), el aumento en la intensidad de la tinción continúa siendo significativo en comparación con tintes o combinaciones de tintes conocidos.

En una modalidad, la relación en peso de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago puede ser 1:2 o más. En otra modalidad, la relación en peso de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago es 2:1 o menos.

La cantidad de Azul Tripán presente en la composición de tinte se puede encontrar en el intervalo de 0,001 - 0,5 % en peso, preferentemente en el intervalo de 0,01 - 0,2 % en peso, aún con mayor preferencia en el intervalo de 0,02 - 0,1 % en peso, aún con mayor preferencia en el intervalo de 0,03 - 0,08 % en peso, en base al peso total de la composición. Los tintes pueden ser tóxicos a concentraciones demasiado altas. Las cantidades demasiado pequeñas de tinte pueden no resultar en una tinción lo suficientemente intensa.

La cantidad de Azul Cielo de Chicago presente en la composición de tinte se puede encontrar en el intervalo de 0,001 -0,5 % en peso, preferentemente en el intervalo de 0,01 - 0,2 % en peso, aún con mayor preferencia en el intervalo de 0,02 - 0,1 % en peso, aún con mayor preferencia en el intervalo de 0,03 - 0,08 % en peso, en base al peso total de la composición. Los tintes pueden ser tóxicos a concentraciones demasiado altas. Las cantidades demasiado pequeñas de tinte pueden no resultar en una tinción lo suficientemente intensa.

La concentración combinada de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago en la composición de tinción puede residir en el intervalo de 0,002 - 1 % en peso, preferentemente en el intervalo de 0,01 - 0,5 % en peso, con mayor preferencia en el intervalo de 0,02 - 0,2 % en peso, aún con mayor preferencia en el intervalo de 0,04 - 0,1 % en peso. La concentración combinada se refiere a la suma de la concentración de Azul Tripán y la concentración de Azul Chicago. Los tintes pueden ser tóxicos a concentraciones demasiado altas.

Preferentemente, Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán son los únicos tintes presentes en la composición. Sin embargo, es posible incluir uno o más compuestos de tintes adicionales en la composición de tinción, además de Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán. Tal compuesto de tinte se encuentra presente preferentemente en una cantidad igual a menos de la mitad de la cantidad total de tinte presente en la composición. Por ejemplo, la composición de tinción puede comprender un compuesto de tinte adicional seleccionado del grupo que consiste en azul de metileno (MB), azul brillante G (BBG), azul brillante R (BBR), azul patente V, rojo tripán, azul brillante de cresilo, indocianina verde, verde claro SF amarillento (LG), rojo fenol, rojo clorofenol-beta-D-galactopiranósido (CPRG), rosa de bengala (4,5,6,7-tetracloro-2',4',5',7'-tetrayodofluoresceína), floxina B y safranina.

La concentración total de tinte en la composición de tinción se puede encontrar en el intervalo de 0,001 a 2 % en peso, preferentemente en el intervalo de 0,01 a 0,5 % en peso, con mayor preferencia en el intervalo de 0,04 a 0,2 % en peso. Dentro de este intervalo, la concentración se puede adaptar a las características de toxicidad y coloración del tinte adicional que se usa. Se prefiere que dicha cantidad se elija de manera que se alcance un efecto de tinción e intensidad óptimos, mientras que al mismo tiempo se minimiza el riesgo de posible daño al ojo o cualquier parte del mismo debido a que se minimiza la toxicidad del tinte.

Además del ácido hialurónico, la composición de tinción no comprende preferentemente cantidades significativas de compuestos que aumentan la viscosidad. Tales compuestos pueden afectar negativamente al aumento de la intensidad de la tinción, especialmente en el caso de polímeros tales como polietilenglicol (PEG). En consecuencia, la composición de tinción se encuentra preferentemente de forma esencial libre de tales compuestos. En caso de que la composición de tinción comprenda un compuesto que aumenta la viscosidad distinto del ácido hialurónico, dicho compuesto que aumenta la viscosidad se encuentra presente preferentemente en una cantidad de menos del 0,5 % en peso, con mayor preferencia menos del 0,1% en peso, aún con mayor preferencia menos del 0,05 % en peso, en base al peso total de la composición de tinción. Además, los compuestos que aumentan la viscosidad se seleccionan de polímeros, tales como polisacáridos, polinucleótidos, proteínas y polímeros sintéticos (tales como polímeros de ácido acrílico, polímeros de ácido metacrílico). Ejemplos más específicos de compuestos que aumentan la viscosidad adecuados son polietilenglicol (PEG), (hidroxipropil)metilcelulosa (HPMC), alcohol polivinílico (PVA) y polivinilpirrolidona (PVP), sulfato de condroitina, ácido algínico, celulosa y derivados de celulosa, se puede encontrar presente cada uno individual e independientemente entre sí en una cantidad de menos del 0,5 % en peso, preferentemente menos del 0,1 % en peso, con mayor preferencia menos del 0,05 % en peso.

La viscosidad de la composición de tinción es preferentemente de al menos 2,0 mPa.s, con mayor preferencia de al menos 5,0 mPa.s, aún con mayor preferencia de al menos 8,0 mPa.s. Además, la viscosidad de la composición de tinción es preferentemente menos de 150 mPa.s, con mayor preferencia menos de 50 mPa.s, aún con mayor preferencia menos de 20 mPa.s. La viscosidad, como se usa en la presente descripción, se refiere en particular a la viscosidad dinámica. Como resultado de la presencia del ácido hialurónico, la composición de tinción es típicamente un líquido diluyente por cizallamiento. Esto significa que la viscosidad de la composición líquida de acuerdo con la invención aumenta cuando aumenta la velocidad de cizallamiento. Los valores de viscosidad se determinaron mediante el uso de un reómetro a una temperatura de 298 K y a una velocidad de cizallamiento en el intervalo de 1000-2000 s-1, por ejemplo a 1500 s-1.

La composición de tinción puede comprender adicionalmente una sal. La composición de tinción líquida es preferentemente isotónica con el fluido ocular. Para este propósito, la composición de tinción líquida puede comprender una sal para ajustar su osmolaridad a un valor adecuado. La composición de tinción de la invención tiene preferentemente una osmolaridad entre 250 y 400 mOsm/L, preferentemente 300-330 mOsm/L, por ejemplo 315 mOsm/L. El experto será capaz de calcular la cantidad de sal necesaria para alcanzar esto.

La sal se puede elegir del grupo que consiste en cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, cloruro de magnesio, o una combinación de los mismos. Para proporcionar una sal a la composición de tinción, la composición de tinción puede comprender una solución salina. Ejemplos adecuados son la solución salina equilibrada o la solución de Ringer con lactato de Hartmann (ver también Nuijts RMMA, Edelhauser HF, Holley GP, "Intraocular irrigating solutions: a comparison of Hartmann's lactated Ringer's solution, BSS and BSS plus", Clin. Exp. Ophtamol., Vol. 233 (1995), páginas 655-661).

Se prefiere adicionalmente que la composición de tinción líquida tenga un pH neutro o ligeramente básico, es decir un pH de 6,5 - 8. Preferentemente, la composición tiene un pH de 7,2-7,7. Para mantener un pH estable, la composición de tinción puede comprender un tampón, preferentemente un tampón salino, que tiene las propiedades para ser de uso en aplicaciones oftálmicas. Un ejemplo de tampón adecuado es NaCl tamponado con fosfato.

Cada componente de la composición de tinción tiene preferentemente una concentración en la composición de tinción que es fisiológica y toxicológicamente aceptable. En otras palabras, la cantidad mínima de cada componente en la composición de tinción debe ser lo suficientemente baja de manera que no ocurran, o apenas no ocurran efectos adversos tóxicos. Preferentemente, cada componente de la composición de tinción no es, o es al menos apenas, tóxico para las estructuras oculares. Se prefiere adicionalmente, que el contenido de cada componente en la composición de tinción presente en el ojo, poco después de la cirugía ocular, apenas presente riesgo de que el paciente experimente cualquier efecto secundario por el uso de la composición de tinción.

Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán se encuentran típicamente presentes en la composición en su forma aniónica. Típicamente, uno y preferentemente ambos de Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán se proporcionan como una sal de sodio en la composición. La estructura molecular de la forma de sal de sodio del Azul Cielo de Chicago se proporciona en la Figura 7. La estructura molecular de la forma de sal de sodio del Azul Tripán se proporciona en la Figura 8. También se pueden usar otras sales, tales como, por ejemplo, sales de potasio o amonio.

La composición de tinción de acuerdo con la invención se puede preparar por un método que comprende disolver Azul Tripán, Azul Cielo de Chicago y ácido hialurónico en un líquido, en particular un líquido acuoso. El tinte vital y el compuesto que aumenta la densidad que se usan en el método de la invención son como se describen anteriormente. El líquido que se usa en el método de la invención se elige preferentemente del grupo que consiste en agua, una solución salina o un tampón, tal como un tampón salino. Los ejemplos de soluciones salinas o tampones adecuados se describen anteriormente. El método puede comprender adicionalmente disolver y/o dispersar componentes adicionales en el líquido, tales como aquellos componentes que se describen para la composición de tinción. El método puede comprender adicionalmente la etapa de disolver una sal en el líquido para ajustar la osmolaridad del líquido a un valor entre 250 y 400 mosmol/L, preferentemente 315 mosmol/L.

La composición de tinción de acuerdo con la invención se puede usar en el tratamiento de tinción de un tejido ocular o parte de un tejido ocular, en particular la cápsula del lente. El tratamiento de tinción puede ser parte de una cirugía ocular. La tinción de al menos parte de un tejido ocular se puede usar en muchos tipos de cirugía ocular para facilitar el trabajo del cirujano haciéndole más fácil distinguir visualmente un tejido ocular del otro. La composición de tinción se aplica típicamente a la superficie del tejido ocular que se va a teñir. Se puede permitir después que la composición de tinción se extienda a través de este tejido al permitir que la composición de tinción se hunda o penetre en el tejido, por ejemplo, bajo la fuerza de la gravedad.

La invención se dirige adicionalmente a la composición de tinción de acuerdo con la invención para su uso en un método de cirugía ocular que comprende teñir un tejido ocular o parte del mismo, en particular la cápsula del lente, y realizar cirugía en el tejido ocular que se tiñe o su tejido circundante. En particular, la composición de tinción de la invención se puede usar para teñir un primer tejido ocular con el fin de distinguirlo de un segundo tejido ocular. El primer tejido ocular puede ser el tejido circundante o subyacente del segundo tejido. Alternativamente, el segundo tejido ocular puede ser el tejido circundante o subyacente del primer tejido.

La invención se dirige en particular al uso de la composición de tinción de la invención para teñir la cápsula del lente en la cirugía de cataratas. Tal cirugía de cataratas comprende las etapas de teñir la superficie de la cápsula del lente y eliminar el lente. En particular, se elimina el lente, mientras que deja la cápsula del lente suficientemente intacto. La composición de tinción tiñe selectivamente la superficie de la cápsula del lente, mientras que el material lenticular debajo de la cápsula del lente (es decir las fibras del lente y, en particular, la corteza exterior del lente) no se tiñe notablemente.

Con mayor particularidad, la cirugía de cataratas puede comprender las etapas de

- abrir la cámara anterior del ojo; y

- opcionalmente inyectar una burbuja de aire en la cámara anterior; e

- inyectar un líquido viscoelástico en la cámara anterior; y

- teñir la cápsula del lente; y

- crear una abertura en la cápsula del lente; y

- retirar el lente de la cápsula del lente, mientras que deja la cápsula del lente lo suficientemente intacto; y

- colocar un lente sintético en la cápsula del lente.

La etapa de tinción se puede llevar a cabo mediante la aplicación de la composición de tinción de la invención a la superficie exterior de la cápsula anterior del lente. Esto se puede hacer mediante el uso de una cánula o jeringa, preferentemente una cánula roma. La cánula o jeringa se puede colocar sobre la superficie exterior de la cápsula del lente para aplicar la composición de tinción. Se alcanza una tinción suficiente casi inmediatamente tras el contacto de la composición de tinción con la cápsula anterior del lente. Después de la aplicación, se puede permitir que la composición de tinción se hunda o penetre en la cápsula del lente, por ejemplo, por 1-30 segundos, preferentemente 5-15 segundos. Después de la tinción, la cámara anterior se puede enjuagar (por ejemplo, con una solución salina) para eliminar cualquier exceso de tinte. Aunque la composición de tinción es capaz de penetrar el tejido de la cápsula del lente, no es capaz de teñir el tejido debajo de la cápsula del lente. Por tanto, la corteza exterior del lente no se tiñe mediante este método.

La cantidad de solución de tinción que se usa para teñir la cápsula del lente se puede encontrar en el intervalo de 0,01 a 0,5 mL, preferentemente en el intervalo de 0,1 a 0,3 mL.

La etapa de teñir la cápsula del lente se lleva a cabo típicamente antes de abrir la cápsula del lente, tal como para evitar que la composición de tinción entre y tiña el tejido en el interior de la bolsa capsular.

La etapa de abrir la cámara anterior del ojo se lleva a cabo al hacer una o más incisiones periféricas en la córnea, el limbo o la esclerótica.

Preferentemente, la cirugía de cataratas se realiza sin llevar a cabo la etapa de inyectar una burbuja de aire en la cámara anterior. Con las composiciones de tinción de la técnica anterior, se necesitaba la burbuja de aire para asegurar un contacto directo del tinte con el tejido, de manera que se obtuviera una tinción suficiente. Sin embargo, la intensidad y la duración de la composición de tinción de acuerdo con la invención son de manera que esta etapa ya no se requiere.

La etapa de inyectar un líquido viscoelástico en la cámara anterior se puede llevar a cabo para mantener un espacio suficientemente grande en la cámara anterior durante la cirugía de cataratas. También, el líquido viscoelástico realiza una función protectora para reducir o evitar el daño del tejido ocular. Al final de la cirugía, el líquido viscoelástico se puede eliminar mediante el enjuague, por ejemplo, con solución salina. El líquido viscoelástico puede proteger los tejidos oculares y crear espacio durante toda la duración de la cirugía.

La etapa de abrir la cápsula del lente se puede llevar a cabo al hacer una abertura (típicamente de forma circular) a través de la cual se puede extraer el lente. Obtener acceso al lente natural a través de la cápsula anterior se puede hacer mediante capsulorrexis.

La etapa de eliminar el lente de la cápsula del lente se puede hacer mediante la eliminación del lente en su totalidad o en fragmentos. El lente se puede fragmentar mediante facoemulsificación. En caso de que se use la facoemulsificación, el lente se emulsiona con ondas de ultrasonido, por ejemplo, mediante el uso de un dispositivo ultrasónico (típicamente una pieza de mano). El material lenticular que se emulsiona se puede aspirar subsecuentemente del ojo. Alternativamente, el lente también se puede eliminar y/o fragmentar mediante el uso de técnicas láser, tal como la tecnología láser de femtosegundos.

Es esencial que la cápsula del lente se encuentre intacta después de eliminar el lente natural. Esto significa que debe quedar suficiente tejido de la cápsula del lente de manera que se pueda colocar una LIO en la cápsula del lente. La cápsula del lente que queda después de eliminar del lente también se puede denominar como "bolsa capsular".

Un lente intraocular (LIO) se usa comúnmente como lente sintética. Los ejemplos son los lentes de silicona y acrílicos.

El tipo específico de cirugía de cataratas que se realiza no es particularmente relevante, ya que es deseable teñir la cápsula del lente independientemente del tipo específico que se usa. La cirugía de cataratas que se usa puede ser, por ejemplo, facoemulsificación (faco), extracción extracapsular de cataratas (ECCE) o cirugía de cataratas de pequeña incisión manual (MSICS).

Cuando se aplica la composición de tinción en la cirugía, el tinte no se usa para tener un efecto diagnóstico o terapéutico. El contraste que se produce por la tinción del tejido solo es visible y/o útil en combinación con la manipulación quirúrgica actual, por ejemplo, eliminación del tejido. En otras palabras, el tinte no se aplica sobre el tejido para hacer o confirmar un diagnóstico, ya que la transparencia del medio ocular permite a los profesionales médicos establecer el tipo de patología (es decir, llegar a un diagnóstico) antes de la cirugía. También, el tinte no tiene ningún efecto terapéutico y no actúa como adyuvante. El propósito de teñir el tejido es simplemente producir un contraste entre diferentes estructuras de tejidos durante un procedimiento quirúrgico.

La invención se dirige adicionalmente a un método para teñir un tejido ocular o parte del mismo, que comprende las etapas de

- aplicar la composición de tinción de la invención a la superficie del tejido ocular o parte del tejido ocular, preferentemente a la superficie exterior de la cápsula del lente; y

- permitir que la composición de tinción se hunda o penetre en el tejido ocular o parte del tejido ocular.

Los detalles para aplicar la composición de tinción pueden ser similares como se describen anteriormente con respecto al uso de la composición de tinción en la cirugía de cataratas.

La presente invención se ilustrará adicionalmente por el siguiente ejemplo.

Ejemplo 1: Efecto de las combinaciones de tintes en la tinción

Se prepararon ocho soluciones de tinción con diferentes combinaciones de tintes de Azul Tripán (TB), Azul Cielo de Chicago (CSB), Azul Brillante G (BBG) y Azul de Metileno (MB). Las combinaciones de tintes específicas y las concentraciones que se usan se enumeran en la Tabla 1. Las cantidades que se enumeran en la Tabla 1 representan la cantidad en peso del tinte en gramos que se encuentra presente en 100 mL de solución de tinción (% p/v). Aunque la concentración total de tinte varía para las diferentes soluciones, la absorbancia en la longitud de onda máxima (Amáx) fue comparable para cada solución de tinción.

Tabla 1: composición de soluciones de tinción Ejemplo 1

5

10

Se obtuvieron cuarenta pares de ojos cadavéricos porcinos en menos de seis horas post mortem. La edad de los animales fue de aproximadamente seis meses, y las cápsulas del lente se aislaron dentro de las 8 horas después de la muerte. En 15 primer lugar, se eliminaron del globo restos como músculos, grasa y otros tejidos. A continuación, se escindió un borde corneoescleral de 17,0 mm de cada globo, e inmediatamente después de la escisión del borde corneoescleral, se cosechó la cápsula del lente al agarrar la raíz del iris con un fórceps, lo que separó el vítreo del iris y el lente con un bisturí quirúrgico, y pelar el lente, que incluye el iris, del vítreo. El lente (que incluye el iris) se almacenó en NaCl a temperatura ambiente hasta su uso.

20

Por solución de tinción, se tiñeron cuatro cápsulas de lente porcina al sumergir la cápsula del lente (que incluye el iris) en 2-5 mL de solución de tinte por 10 segundos y lavarla subsecuentemente con PBS. Para las imágenes digitales (Casio Exilim EX-Z40, China), las lentes que se tiñen, que incluyen el iris, se colocaron en un recipiente de vidrio y se hicieron las fotografías.

25

La intensidad de la tinción se puntuó en una escala de 1 a 5. La tinción que se obtiene con la solución A se usa como estándar y se fija en una puntuación de 3. Se usa una puntuación de 1 para indicar una tinción mucho peor que la solución A, se usa una puntuación de 2 para indicar una tinción peor que la solución A, se usa una puntuación de 3 para indicar una tinción comparable a la solución A, se usa una puntuación de 4 para indicar una tinción mejor que la solución A y se 30 usa una puntuación de 5 para indicar una tinción mucho mejor que la solución A.

Tabla 2: puntuaciones de la prueba de tinción para la tinción de la cápsula del lente porcino (n=4)

35

40

45

La tinción de la cápsula del lente con las soluciones D, E y F (combinación de tintes TB+CSB) resulta en la tinción más intensa. Estas soluciones puntuaron mejor en la tinción que las soluciones A y B, que contienen un solo tinte, es decir, TB.

50 La tinción de las cápsulas del lente con las soluciones H y J (combinaciones de tintes TB+MB y CSB+MB) resultaron en una tinción mucho menos intensa en comparación con las otras soluciones.

La tinción de las cápsulas del lente con la solución G (combinación de tintes TB+BBG) resulta en una intensidad de la tinción comparable a las soluciones de un único tinte con TB (soluciones A y B).

5555

A partir de este ejemplo, se puede concluir que la combinación de TB y CSB resulta en una intensidad de la tinción superior en comparación con las otras combinaciones de tintes que se prueban.

Ejemplo 2: Efecto sinérgico de TB+CSB en ausencia de HA

60

En vista de los resultados del aumento de la tinción para la combinación de tintes TB+CSB, se llevó a cabo una prueba de absorbancia para cuantificar este efecto. Se plantea la hipótesis de que el TB y el CSB interactúan entre sí a nivel molecular en solución, lo que influye de esta manera en el máximo y la intensidad de absorbancia.

65 Se prepararon soluciones de TB, CSB y TB+CSB (muestras 1-3). Las muestras se prepararon como sigue.

Para la muestra 1, se disolvió una cantidad de 25,33 pM de TB en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato.

Para la muestra 2, se disolvió una cantidad de 32,87 pM de CSB en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato.

Para la muestra 3, se disolvió una cantidad de 12,67 pM de TB y 16,44 pM de CSB en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato. Por tanto, la cantidad de TB y CSB que se usa en la muestra 3 fue la mitad de aquellas que se usaron en las muestras 1 y 2.

Cada solución se colocó en una cubeta y se midió la absorbancia mediante el uso de un espectrofotómetro. Adicionalmente, se determinó una absorbancia combinada teórica mediante el cálculo de la suma de las absorbancias de 12,67 pM de TB y 16,44 pM de CSB mediante el uso de la relación entre la absorbancia y la concentración que se mide en la muestra 1 y la muestra 2.

Los resultados se muestran en la Figura 1. La Figura 1 muestra los tres espectros de absorbancia que se miden para las muestras 1-3 (TB=línea continua; CSB=línea de puntos; mezcla física TB/CSB=línea de puntos en negrita), así como también la absorbancia que se calcula al tomar la suma de la mitad de la absorbancia que se mide para la muestra 1 y la mitad de la absorbancia que se mide para la muestra 2 (que se representa por la línea continua en negrita en la Figura 1).

A partir de la Figura 1, se pueden observar dos efectos sobre la absorbancia. En primer lugar, la Figura 1 muestra que la absorbancia que se mide en la región de 500-610 nm para la muestra 3 (mezcla TB/CSB) fue más alta que la absorbancia en la región de 500-610 nm que se calcula a partir de las mediciones de absorbancia de las muestras 1 y 2 (suma de TB y CSB individualmente). En segundo lugar, se observa un cambio en la longitud de onda para el máximo de absorbancia, de manera que el máximo ocurre a una longitud de onda inferior. La región de longitud de onda específica en donde ocurren estos cambios corresponde a la región de longitud de onda sensible en el ojo. El ojo humano es más sensible a una longitud de onda de 555 nm. En consecuencia, se espera que tanto el aumento de la absorbancia en la región 500 600, así como también el cambio en la longitud de onda hacia un valor inferior, contribuyan a mejorar la sensibilidad del ojo hacia la combinación de tintes. En consecuencia, se deduce que la combinación de TB+CSB muestra mejores propiedades de absorbancia de las que se podrían haber esperado en base a las absorbancias individuales que se miden para CSB y HA. Se plantea la hipótesis de que este efecto sinérgico es la razón por la que se percibe que la combinación de tintes TB+CSB tiene un aumento de la intensidad en comparación con TB o CSB solo.

Subsecuentemente, se midió el efecto de la gelatina. Se preparó una cuarta muestra similar a la muestra 3, excepto que se añadieron 5 mg/mL de gelatina como compuesto adicional a la muestra (muestra 4). La gelatina es un colágeno hidrolizado y se usó para simular la presencia de moléculas de colágeno en el tejido ocular. Como el tinte se unirá a la gelatina, este experimento simula la unión del tinte al tejido ocular.

Se obtuvo un espectro de absorbancia para la muestra 4 que tuvo una forma similar a la mezcla TB/CSB (muestra 3) en la Figura 1.

La Figura 2 muestra el efecto de la gelatina sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. Los dos gráficos en la Figura 2 representan espectros de diferencia que se calcularon a partir del espectro de absorbancia de la muestra 4. La línea continua en la Figura 2 se obtuvo mediante la substracción del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 3 (mezcla física, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 4 (mezcla física, gelatina). La línea de puntos en la Figura 2 se obtuvo mediante la substracción del espectro de absorbancia combinado teórico que se calcula a partir de las muestras 1 y 2 (suma que se calcula, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 4 (mezcla física, gelatina).

Se puede concluir a partir de la Figura 2 que la presencia de gelatina tiene un efecto positivo sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. Por tanto, la intensidad de la tinción de la combinación de tintes TB+CSB es aún más fuerte cuando se aplica al tejido ocular que en una solución líquida de TB+CSB.

Ejemplo 3: Efecto sinérgico de TB+CSB en presencia de HA

Se repitió el Ejemplo 2 con muestras que comprenden ácido hialurónico (HA), con el fin de mostrar que el efecto sinérgico que se observa para la combinación de tintes TB y CSB también ocurre en presencia de HA.

Se prepararon soluciones de TB, CSB y TB+CSB (muestras 5-7). Las muestras se prepararon como sigue.

Para la muestra 5, se disolvió una cantidad de 32,85 pM de TB y 5 mg de gelatina en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato.

Para la muestra 6, se disolvió una cantidad de 36,53 pM de CSB y 5 mg de gelatina en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato.

Para la muestra 7, se disolvió una cantidad de 15,31 pM de TB y 18,05 pM de CSB en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato. Por tanto, la cantidad de TB y CSB que se usa en la muestra 7 fue aproximadamente la mitad de aquellas que se usaron en las muestras 5 y 6.

Adicionalmente, se disolvió una cantidad de ácido hialurónico en cada muestra de manera que contenían una solución de HA al 0,34 % en peso. Cada muestra también contenía 5 mg/mL de gelatina.

Cada solución se colocó en una cubeta y se midió la absorbancia mediante el uso de un espectrofotómetro. Adicionalmente, se determinó una absorbancia combinada teórica mediante el cálculo de la suma de las absorbancias de 15,31 pM de TB y 18,05 pM de CSB mediante el uso de la relación entre la absorbancia y la concentración que se mide en la muestra 5 y la muestra 6.

Los resultados se muestran en la Figura 3. La Figura 3 muestra los tres espectros de absorbancia que se miden para las muestras 5-7 (TB+HA=línea continua; CSB+HA=línea de puntos; mezcla física TB+CSB+HA=línea de puntos en negrita), así como también la absorbancia combinada teórica ("suma que se calcula", que se representa por la línea continua en negrita en la Figura 3). La absorbancia combinada teórica se calculó al tomar la suma de la absorbancia de 15,31 pM de TB mediante el uso del coeficiente de absorbancia molar de TB (que se determina a partir de la absorbancia que se mide y la concentración conocida en la muestra 5) y la absorbancia de 18,05 pM de CSB mediante el uso del coeficiente de absorbancia molar de CSB (que se determina a partir de la absorbancia que se mide y la concentración conocida de CSB en la muestra 6).

En primer lugar, la Figura 3 muestra que la absorbancia en la región de 500-610 nm fue más alta para la muestra 7 (mezcla TB/CSB) que la absorbancia en la región de 550-610 nm que se calcula a partir de las mediciones de absorbancia de las muestras 5 y 6 (suma de TB y CSB individualmente). La región de longitud de onda específica para la que aumenta la absorbancia corresponde a la región de longitud de onda sensible en el ojo. Por lo tanto, se espera que el aumento de la intensidad en esta región resulte en un aumento de la intensidad que se percibe.

En segundo lugar, se observa un cambio en la longitud de onda para el máximo de absorbancia, de manera que el máximo ocurre a una longitud de onda inferior. El ojo humano es más sensible a una longitud de onda de 555 nm. En consecuencia, se espera que el cambio en el máximo hacia un valor más cercano a una longitud de onda de 555 nm resulte en un aumento en la intensidad que se percibe.

En consecuencia, se deduce que la combinación de TB+CSB muestra mejores propiedades de absorbancia de las que se podrían haber esperado en base a las absorbancias individuales que se miden para CSB y HA. Se plantea la hipótesis de que este efecto sinérgico es la razón por la que se percibe que la combinación de tintes TB+CSB tiene un aumento de la intensidad en comparación con TB o CSB solo.

Ejemplo 4: Efecto de los polímeros en la intensidad de la tinción

El efecto del tipo de polímero en la tinción se determinó mediante la tinción de cápsulas de lentes humanas con varias soluciones de tinción que comprenden diferentes tipos y cantidades de polímero.

Se prepararon diez soluciones de tinción diferentes que comprenden TB en una cantidad de 0,033 g/100 mL y CSB en una cantidad de 0,066 g/100 mL. Adicionalmente, nueve de estas soluciones de tinción comprenden uno de los siguientes polímeros:

- polietilenglicol (PEG) con un promedio de Mw de 3350 Da

- polietilenglicol (PEG) con un promedio de Mw de 35000 Da

- ácido hialurónico (HA) con una Mw de 1200-2000 kDa

- hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) con una Mw de 86000

- polivinilpirrolidona (PVP) con una Mw de 10000

La composición específica de las soluciones de tinción se enumera en la Tabla 3.

Tabla 3: composiciones de la solución de tinción

Para este experimento se usaron veinte ojos de cadáveres humanos de veinte donantes (edad media del donante 74+10 años; intervalo, 48-85 años). Los globos de los donantes se descontaminaron y se siguieron con la preparación del injerto de córnea con escisión de los bordes corneoesclerales. Los ojos se almacenaron en solución salina (NaCl al 0,9 %) a 4 6 °C por 4-20 días. La cápsula del lente se cosechó al cortar la esclerótica radialmente en cuatro lugares (a 90 ° de separación) con el fin de abrir el globo. Se realizó un corte circunferencial al cuerpo ciliar superior a 360 °. El tejido que contiene el iris, el cuerpo ciliar y el lente se extrajo con unas pinzas y se separaron del vítreo (si era necesario, se usaron las tijeras para cortar el vítreo que se une a la cápsula posterior del lente). Después se obtuvo el lente intacto (que contiene su cápsula) y se retiraron suavemente los tejidos circundantes (iris y cuerpo ciliar) con dos pinzas.

Por solución de tinción, se tiñeron dos cápsulas de lente humana al sumergir el lente en 2-5 mL de solución de tinte por 10-15 segundos seguido de enjuague con H²O. Se usaron tiempos de tinción más largos (20-30 segundos) en caso de que la solución de tinción fuera especialmente viscosa (HA al 0,65 %, HA al 0,8 %, PEG 3350 al 20 % y PEG 35000 al 20%). Para evaluar la eficiencia de la tinción, los lentes se colocaron en una placa Petri, se fotografiaron, se inspeccionaron visual y biomicroscópicamente y se puntuaron.

La intensidad de la tinción se puntuó en una escala de 1 a 5 y se basó en la inspección visual de las cápsulas del lente y representó diferentes intensidades de tinción:

1. incoloro; comparable al color nativo del lente;

2. algo de tinción

3. buena tinción

4. muy buena tinción

5. excelente tinción

Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4: puntuaciones de la prueba de tinción para la tinción de la cápsula del lente humano (n=2)

Durante la tinción en una solución de HA al 0,65 % (Solución 6), una de las cápsulas del lente se rompió y durante la etapa de lavado se desprendió completamente del lente. Sin embargo, no se observó una tinción posterior del lente por sí mismo. Este evento no intencionado confirma que la solución de tinción tiñe selectivamente la cápsula del lente y no el lente subyacente.

La tinción más intensa se obtuvo mediante el uso de la Solución 5 (HA al 0,4 %) y la Solución 6 (HA al 0,65 %). La concentración más alta de HA (0,8 %) en la Solución 7 hizo que la solución fuera extremadamente viscosa y difícil de manipular; el lente no se sumergió en la solución de tinción por sí mismo y se necesitó más manipulación para cubrir uniformemente el tinte. La tinción final que se obtuvo fue pobre.

Las cuatro soluciones de tinción con PEG (Soluciones 1-4) resultaron en una tinción considerablemente menos intensa que las soluciones de tinción con HA. La tinción con la Solución 8 (HPMC al 1 %) y la Solución 9 (PVP al 4 %) mostró resultados muy pobres. Se plantea la hipótesis de que estos polímeros inhiben la tinción hasta cierto grado, probablemente mediante la competencia ya sea por la unión a los tintes o a los sitios de unión de las proteínas.

Se puede concluir que las soluciones de tinción que comprenden TB, CSB y HA son capaces de proporcionar un aumento de la intensidad de la tinción a la cápsula del lente humano en comparación con las soluciones de tinción que comprenden TB, CSB y un polímero diferente, tal como PEG, HPMC o PVP.

Ejemplo 5: Pruebas de absorbancia sobre el efecto del polímero en la intensidad de la tinción de TB+CSB

En vista de los resultados del comportamiento de tinción para las combinaciones de tinte-polímero que se prueban en el Ejemplo 4, se llevó a cabo una prueba de absorbancia para cuantificar el efecto del polímero. Este ejemplo muestra el efecto de diferentes polímeros sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB, así como también el efecto de la gelatina (que se asemeja al colágeno presente en el tejido ocular).

Se midieron los espectros de absorbancia de soluciones de TB+CSB con uno de HA, PEG y HPMC (muestras B, C y D) y se compararon con el espectro de absorbancia de una solución de TB+CSB sin polímero (muestra A) y el espectro de absorbancia que se calcula al tomar el promedio de la suma de la absorbancia que se mide para TB y CSB individualmente (que se describe en los Ejemplos 2 y 3 anteriormente).

Se prepararon cuatro muestras. Todas las muestras contienen una solución de TB y CSB que se disuelve en un tampón de fosfato (PBS), mediante el uso de una concentración similar a la que se usa en los Ejemplos 2 y 3. Adicionalmente, cada muestra contiene 5 mg de gelatina por mL de solución de muestra. Las muestras fueron diferentes entre sí en la cantidad y tipo del polímero presente:

- muestra A (referencia): sin polímero

- muestra B: ácido hialurónico (0,34 % en peso)

- muestra C: HPMC (0,36 % en peso)

- muestra D: PEG 3350 (1,84 % en peso)

Se midió la absorbancia de estas cuatro muestras. Los espectros de absorbancia de estas muestras no se muestran, pero son similares en forma a aquellos que se representan en la Figura 1. Los resultados de las mediciones de absorbancia se representan en las Figuras 4-6.

La Figura 4 muestra el efecto del polímero sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB en presencia de gelatina. Para cada una de las muestras A-D, se calculó un espectro de diferencia mediante la substracción del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 3 (mezcla física, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se mide para las muestras A-D. Estos cuatro espectros de diferencia se representan en la Figura 5.

A partir de la Figura 4 se puede concluir que el ácido hialurónico tiene un efecto positivo sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB, mientras que tanto el HPMC como el PEG3350 tienen un efecto negativo. Esto explica la reducción de la intensidad de la tinción que se observa en el Ejemplo 4.

La Figura 5 muestra el efecto de la gelatina sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. La línea continua en la Figura 5 se obtuvo mediante la substracción del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 3 (mezcla física, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra A (referencia, gelatina). La línea de puntos en la Figura 5 se obtuvo mediante la substracción el espectro de absorbancia combinado teórico que se calcula a partir de las muestras 1 y 2 (HA, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra A (referencia, gelatina).

Se puede concluir a partir de la Figura 5 que la presencia de gelatina tiene un efecto positivo sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. Por tanto, la intensidad de la tinción de la combinación de tintes TB+CSB es aún más fuerte cuando se aplica al tejido ocular que en una solución líquida de TB+CSB.

La Figura 6 muestra el efecto del HA sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. La línea continua en la Figura 6 se obtuvo mediante la substracción del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra 3 (mezcla física, sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra B (HA, gelatina). La línea de puntos en la Figura 5 se obtuvo mediante la substracción del espectro de absorbancia combinado teórico que se calcula a partir de las muestras 1 y 2 (sin gelatina) del espectro de absorbancia que se obtuvo para la muestra B (HA, gelatina).

Se puede concluir a partir de la Figura 6 que la presencia de HA y gelatina juntas tiene un efecto positivo sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB. Por tanto, la intensidad de la tinción de la composición de acuerdo con la invención es aún más fuerte cuando se aplica al tejido ocular que en la composición líquida por sí misma.

Cuando se comparan las Figuras 5 y 6, se puede observar que el aumento de absorbancia (en comparación con la absorbancia combinada de TB+CSB que se calcula) es más alta en la Figura 6 que en la Figura 5, especialmente en el máximo. El máximo de absorbancia de la línea continua para la muestra B en la Figura 6 (668 nm, absorbancia 0,08639) es significativamente más alta que el máximo de absorbancia de la línea continua para la muestra A en la Figura 5 (665 nm, absorbancia 0,0725). En consecuencia, se puede concluir que la presencia de HA tiene un efecto positivo sobre la absorbancia de la combinación de tintes TB+CSB.

En resumen, este ejemplo muestra que la intensidad de la tinción de la combinación de tintes TB+CSB aumenta por la presencia de ácido hialurónico. Esto es sorprendente, ya que otros polímeros tales como PEG y HPMC tienen un efecto negativo. Adicionalmente, se puede concluir que la combinación de tintes tiene una mejor intensidad de la tinción cuando se pone en contacto con tejido ocular (como se simula con gelatina).

Ejemplo 6: Estudio clínico en la cirugía de cataratas

Se llevó a cabo una prueba clínica para evaluar la capacidad de tinción de las soluciones de tinción que comprenden una combinación de tintes de Azul Tripán (TB), Azul Cielo de Chicago (CSB) y ácido hialurónico (HA) en cápsulas de lentes humanos. Se usaron diferentes concentraciones de TB, CSB y HA y se evaluó la intensidad y duración de la tinción de la solución de tinte.

Todas las muestras se basaron en una solución tamponada con fosfato isotónico neutro que comprende agua (1 L), NaCl (8,2 g), Na2HPO4.2H2O (1,9 g) y NaH2PO4.2H2O (0,3 g) y que tiene un pH entre 7,3 y 7,45 y una osmolalidad en el intervalo de 257-314 mOsm/kg. La concentración de TB, CSB y HA de las diferentes muestras es mostrada en la Tabla 5. El peso molecular de HA se encontraba en el intervalo de 1200-2000 kDa. Las cantidades se dan en porcentaje en peso y se basan en el peso total de la solución de tinción.

Tabla 5: composiciones de tinción que se usan en las pruebas clínicas

Las diferentes muestras se probaron clínicamente por tres cirujanos diferentes. Los cirujanos aplicaron las muestras como una composición de tinción para teñir la cápsula del lente humano durante la cirugía de cataratas. La muestra H corresponde a la solución de tinción que usó en ese momento por los cirujanos en la cirugía de cataratas.

La cirugía de cataratas hizo uso ya sea de la extracción extracapsular de cataratas o de la facoemulsificación. La solución de tinción se aplicó suavemente a la cápsula del lente frontal mediante el uso de una cánula roma. No se inyectó ninguna burbuja de aire en la cámara anterior durante la cirugía. Subsecuentemente se irrigó la cámara anterior con el fin de eliminar el exceso de tinte.

Los parámetros que se evaluaron por los cirujanos fueron la intensidad de la tinción (pobre/promedio/buena/excelente), la duración del efecto de la tinción (pobre/promedio/buena/excelente), y la inyectabilidad, es decir facilidad de la inyección (pobre/promedio/buena/excelente). Los resultados se muestran en la Tabla 6.

Tabla 6: descripción general de los resultados clínicos

Se puede concluir a partir de la evaluación clínica que las composiciones de tinción de acuerdo con la invención tienen una mejor intensidad de la tinción y una mejor duración de la tinción en comparación con la composición de tinción que se usa actualmente en la técnica (muestra H).

Se obtuvo una duración especialmente buena mediante el uso de una concentración de HA de 0,65-0,8 % en peso. Esto fue notable mediante un contraste intenso que duró hasta el mismo final de la cirugía, que es típicamente de 10 minutos. La intensidad de la tinción fue buena cuando se usó una concentración de TB más alta que 0,02 % en peso.

Las composiciones de tinción de acuerdo con la invención proporcionaron un contraste intenso aún si no se inyectó ninguna burbuja de aire. Ser capaces de omitir el uso de la burbuja de aire significa menos manipulación para el cirujano y, por lo tanto, consume menos tiempo. La inyección y la subsecuente eliminación de una burbuja de aire típicamente añaden de 30 segundos a 1 minuto a una duración total de una cirugía de cataratas de 10-15 minutos. También, como ocurre con cualquier manipulación quirúrgica, siempre existe un riesgo de que surjan complicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

i. Una composición de tinción que comprende un tinte vital y ácido hialurónico, en donde el tinte vital comprende Azul Cielo de Chicago y Azul Tripán.
2. Una composición de tinción de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el ácido hialurónico se encuentra presente en una cantidad de menos de 0,8 % en peso, en base al peso total de la composición de tinción.
3. Una composición de tinción de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde la relación en peso de Azul Tripán a Azul Cielo de Chicago se encuentra entre 1:3 y 3:1.
4. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la relación en peso de Azul Tripán a Azul Cielo de Chicago es 2:1 o menos.
5. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la relación en peso de Azul Tripán a Azul Cielo de Chicago es 1:1 o más.
6. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración combinada de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago en la composición de tinción es de 0,02 - 0,2 % en peso.
7. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración combinada de Azul Tripán y Azul Cielo de Chicago en la composición de tinción es de 0,04 - 0,1 % en peso.
8. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición comprende 0,2 - 0,75 % en peso de ácido hialurónico.
9. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el ácido hialurónico tiene un peso molecular de entre 100000 y 5000000 Da.
10. Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el tinte comprende adicionalmente un compuesto seleccionado del grupo que consiste en azul de metileno (MB), azul brillante G (BBG), azul brillante R (BBR), azul patente V, rojo tripán, azul brillante de cresilo, verde indocianina, verde claro SF amarillento (LG), rojo fenol, rojo clorofenol-beta-D-galactopiranósido (CPRG), rosa de bengala (4,5,6,7-tetracloro-2',4',5',7'-tetrayodofluoresceína), floxina B y safranina.
i i . Una composición de tinción de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en un método de cirugía ocular, cuyo método comprende teñir un tejido ocular o parte del mismo con la composición de tinción y realizar una cirugía en el tejido ocular teñido o su tejido circundante.
12. Una composición de tinción para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde la cirugía ocular es una cirugía de cataratas y en donde el método comprende teñir la cápsula del lente con la composición de tinción y eliminar subsecuentemente el lente.
13. Una composición de tinción para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la cápsula del lente se debe teñir mediante la aplicación de la composición de tinción a la superficie exterior de la cápsula del lente.
14. Una composición de tinción para su uso de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, en donde la cirugía de cataratas comprende las etapas de

- abrir la cámara anterior del ojo; y

- opcionalmente inyectar una burbuja de aire en la cámara anterior; e

- inyectar opcionalmente un líquido viscoelástico en la cámara anterior; y

- teñir la cápsula del lente; y

- crear una abertura en la cápsula del lente; y

- eliminar el lente de la cápsula del lente, mientras que deja la cápsula del lente lo suficientemente intacta; y - colocar un lente sintético en la cápsula del lente.
15. Una composición de tinción para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12-14, en donde no se inyecta ninguna burbuja de aire en la cámara anterior durante la cirugía.