ES2887903T3 - Composiciones que comprenden cepas bacterianas - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en terapia.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones que comprenden cepas bacterianas

CAMPO TÉCNICO

Esta invención pertenece al campo de las composiciones que comprenden cepas bacterianas aisladas del tracto digestivo de mamíferos y al uso de tales composiciones en el tratamiento de enfermedades, como se define en las reivindicaciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se cree que el intestino humano es estéril en el útero, pero está expuesto a una gran variedad de microbios maternos y ambientales inmediatamente después del nacimiento. A partir de entonces, se produce un período dinámico de colonización y sucesión microbiana, que está influenciado por factores como el modo de administración, el medio ambiente, la dieta y el genotipo del huésped, todos los cuales afectan a la composición de la microbiota intestinal, particularmente durante los primeros años de vida. Posteriormente, la microbiota se estabiliza y se vuelve adulta [1]. La microbiota intestinal humana contiene más de 500-1000 filotipos diferentes que pertenecen esencialmente a dos divisiones bacterianas principales, Bacteroidetes y Firmicutes [2]. Las relaciones simbióticas exitosas que surgen de la colonización bacteriana del intestino humano han producido una amplia variedad de funciones metabólicas, estructurales, protectoras y otras funciones beneficiosas. Las actividades metabólicas mejoradas del intestino colonizado aseguran que los componentes de la dieta que de otro modo no serían digeribles se degraden con la liberación de subproductos que proporcionan una importante fuente de nutrientes para el huésped. De manera similar, la importancia inmunológica de la microbiota intestinal está bien reconocida y se ejemplifica en animales libres de gérmenes que tienen un sistema inmunológico deteriorado que se reconstituye funcionalmente después de la introducción de bacterias comensales [3-5].

Se han documentado cambios drásticos en la composición de la microbiota en trastornos gastrointestinales como la enfermedad inflamatoria intestinal (IBD). Por ejemplo, los niveles de la bacteria Clostridium grupo XIVa se reducen en pacientes con IBD mientras que el número de E. coli aumenta, lo que sugiere un desplazamiento en el equilibrio de simbiontes y patobiontes dentro del intestino [6-9]. Curiosamente, esta disbiosis microbiana también se asocia con desequilibrios en las poblaciones de células efectoras T.

En reconocimiento del posible efecto positivo que pueden tener ciertas cepas bacterianas en el intestino del animal, se han propuesto varias cepas para su uso en el tratamiento de diversas enfermedades (ver, por ejemplo, [10-13]). Además, se han propuesto ciertas cepas, incluidas principalmente cepas de Lactobacillus y Bifidobacterium, para su uso en el tratamiento de diversas enfermedades inflamatorias y autoinmunes que no están directamente relacionadas con los intestinos (ver [14] y [15] para consulta). Sin embargo, la relación entre diferentes enfermedades y diferentes cepas bacterianas, y los efectos precisos de cepas bacterianas particulares en el intestino y a nivel sistémico y en cualquier tipo particular de enfermedad, están pobremente caracterizados.

Existe un requisito en la técnica de nuevos métodos de tratamiento de enfermedades. También existe la necesidad de caracterizar los efectos potenciales de las bacterias intestinales para poder desarrollar nuevas terapias que utilicen bacterias intestinales.

El documento WO2017/160711 describe la modulación del microbioma intestinal para tratar trastornos mentales o enfermedades del sistema nervioso central.

Bessis et al. (2016, New Microbe and New Infect 12: 54-55) describe Bariatricus massiliensis como una nueva especie bacteriana de la microbiota intestinal humana.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

Los inventores han desarrollado nuevas composiciones que comprenden una cepa bacteriana del género Bariatricus que puede usarse en terapia. En particular, los inventores han desarrollado nuevas composiciones que comprenden una cepa del género Bariatricus para uso en el tratamiento y prevención de enfermedades o afecciones mediadas por una actividad elevada de histona desacetilasa (HDAC). Los inventores han identificado que las cepas bacterianas del género Bariatricus pueden ser eficaces para reducir la actividad de la histona desacetilasa. Se ha demostrado que la actividad de la histona desacetilasa media los síntomas patológicos en una variedad de enfermedades y afecciones que incluyen, entre otras, enfermedades y afecciones autoinmunes o inflamatorias que incluyen, entre otras, la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD), enfermedades inflamatorias del intestino, tales como la enfermedad de Crohn, enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Parkinson, lesiones cerebrales, como los accidentes cerebrovasculares, y una variedad de cánceres. Como tales, las composiciones de la invención pueden tener beneficios pleiotrópicos en el tratamiento o prevención de múltiples enfermedades mediadas al menos en parte por la actividad de HDAC. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la prevención de enfermedades mediadas por una actividad de HDAC aumentada.

Como se describe en los ejemplos, la administración oral de composiciones que comprenden Bariatricus puede reducir la actividad de la histona desacetilasa en modelos de enfermedad. Además, como se describe en los ejemplos, la administración oral de composiciones que comprenden Bariatricus puede reducir la hiperactividad en modelos de enfermedad en ratones. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden usarse en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección asociada con la hiperactividad. Las composiciones pueden usarse en el tratamiento o prevención de la hiperactividad. Las composiciones pueden usarse en el tratamiento o prevención de la hiperactividad asociada con trastornos del comportamiento, tal como el trastorno por déficit de atención e hiperactividad. Por tanto, los inventores han identificado composiciones efectivas en la prevención o tratamiento de enfermedades mediadas por la actividad de HDAC y composiciones efectivas en el tratamiento o prevención de trastornos del comportamiento. Los trastornos del comportamiento adecuados para el tratamiento con composiciones de la invención pueden o no estar mediados en parte por la actividad de HDAC.

En una primera realización, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en terapia.

En realizaciones particulares, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para su uso en el tratamiento y prevención de enfermedades mediadas por una actividad de HDAC elevada. Los inventores han identificado que el tratamiento con cepas bacterianas de este género puede reducir la actividad de HDAC, lo que puede proporcionar beneficios clínicos en el tratamiento de enfermedades mediadas por la actividad de HDAc . En algunas realizaciones, se ha encontrado que las composiciones de la invención son particularmente beneficiosas en la reducción de la actividad de HDAC de Clase I. Las HDAC de clase I se expresan de manera ubicua y con mayor frecuencia residen en el núcleo. Las HDAC de clase I desacetilan los residuos de lisina de histona para restaurar la carga positiva de la histona, lo que aumenta la unión electrostática entre las histonas y el ADN. Por tanto, la actividad de HDAC aumenta la compactación de la cromatina provocando una regulación a la baja de la expresión de genes en la secuencia de ADN subyacente. Las HDAC también tienen efectos reguladores adicionales al modificar los objetivos de proteínas que no son histonas. La inhibición de la acetilación de dianas proteicas que no son histonas puede ser beneficiosa en el tratamiento o prevención de otros aspectos de la enfermedad que no están directamente relacionados con el control de la expresión génica mediante la expansión de la cromatina. Por tanto, en determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden utilizar para regular la expresión del gen diana.

En realizaciones particulares, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada del grupo que consiste en: una enfermedad neurodegenerativa, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o Enfermedad de Parkinson; lesión cerebral, como accidente cerebrovascular; trastornos del comportamiento o psiquiátricos, tales como trastorno por déficit de atención e hiperactividad, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de ansiedad, trastorno bipolar o trastorno por estrés postraumático; una enfermedad inflamatoria o autoinmune, como asma, artritis, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes, rechazo de aloinjertos, enfermedad de injerto contra huésped o una enfermedad inflamatoria del intestino, como la enfermedad de Crohn; o cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico. El efecto mostrado para las cepas bacterianas del género Bariatricus sobre la actividad de HDAC puede proporcionar beneficios terapéuticos para enfermedades y afecciones mediadas por la actividad de HDAC aberrante, como las enumeradas anteriormente. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden proporcionar beneficios terapéuticos en el tratamiento de enfermedades o afecciones con una expresión de HDAC aumentada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden proporcionar beneficios terapéuticos en el tratamiento de enfermedades o afecciones con una actividad de HDAC aumentada. Además, los inventores han identificado que el tratamiento con una cepa bacteriana del género Bariatricus puede reducir la activación de moléculas proinflamatorias, tales como IL-6, por LPS. La inflamación crónica inducida por IL-6 puede conducir finalmente a la muerte celular. Por tanto, las cepas bacterianas de la invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o prevención de trastornos inflamatorios o autoinmunitarios. En algunas realizaciones, las cepas bacterianas son útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios o autoinmunitarios caracterizados por la activación mejorada de IL-6. Además, los inventores han identificado que el tratamiento con una cepa bacteriana del género Bariatricus puede aumentar la activación de MAP2 (proteína 2 asociada a microtúbulos). MAP2 es un gen asociado con la diferenciación neuronal de MAP2 y se cree que es esencial para la formación de microtúbulos en neuritogénesis, por lo que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar enfermedades neurodegenerativas o lesiones cerebrales. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas activando o aumentando los niveles de MAP2. Además, los inventores han identificado que el tratamiento con una cepa bacteriana del género Bariatricus puede alterar la expresión de IDO1 en el intestino. La expresión de IDO1 en el colon se asocia con la mejora de la enfermedad en un modelo de colitis en ratón. Por tanto, las cepas bacterianas de la invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias del intestino. Además, los inventores han identificado que el tratamiento con una cepa bacteriana del género Bariatricus puede alterar la expresión de varios genes en el cerebro, p. ej., aumentar la expresión de BDNF en el hipocampo y la corteza prefrontal. El BDNF es esencial para la plasticidad sináptica del adulto y la formación de recuerdos y se observa una disminución en los niveles de BDNF en pacientes con Alzheimer y Huntington. Por lo tanto, las cepas bacterianas de la invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades neurodegenerativas, p. ej., la enfermedad de Alzheimer y Huntington.

En algunas realizaciones, las cepas bacterianas del género Bariatricus pueden proporcionar beneficios terapéuticos en el tratamiento de trastornos del comportamiento seleccionados de la lista que consiste en: trastorno por déficit de atención e hiperactividad, trastorno negativista desafiante y trastorno de la conducta. Los inventores han identificado que el tratamiento con cepas de Bariatricus reduce la hiperactividad en ratones, que es un síntoma de trastornos del comportamiento como el ADHD. Por tanto, las cepas de la invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de trastornos del comportamiento, en particular en el tratamiento o prevención de trastornos del comportamiento asociados con hiperactividad, como el ADHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la hiperactividad en un sujeto. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de trastornos del comportamiento. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de ADHD.

En algunas realizaciones, las cepas bacterianas del género Bariatricus pueden proporcionar beneficios terapéuticos en el tratamiento o la prevención de la GVHD. Los inventores han identificado que el tratamiento con cepas de Bariatricus aumenta la supervivencia de GVHD en ratones. Por tanto, las cepas de la invención pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de la GVHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD mediada al menos en parte por la actividad de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de GVHD en un sujeto.

En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad neurodegenerativa mediada por una actividad HDAC elevada. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de síntomas de enfermedades neurodegenerativas mediadas por la actividad de HDAC. Los inventores han identificado que las cepas de la invención inhiben la actividad de HDAC. La acetilación y desacetilación de la histona es un regulador epigenético importante de la expresión génica. El desequilibrio de acetilación de histona se ha implicado en la patogénesis de enfermedades neurodegenerativas, tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington y enfermedad de Parkinson. En algunas realizaciones, las cepas de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades neurodegenerativas asociadas a la edad. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades neurodegenerativas de aparición con la edad, tales como la enfermedad de Parkinson de aparición con la edad o la enfermedad de Alzheimer de aparición con la edad. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades neurodegenerativas. En realizaciones preferidas, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para su uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o la enfermedad de Parkinson.

En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad inflamatoria del intestino mediada por una actividad de HDAC elevada. Se ha demostrado que la inhibición de la actividad de HDAC suprime la producción de ciOCDinas proinflamatorias en el tracto gastrointestinal. Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. En particular, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de afecciones asociadas con un aumento de la patogénesis de ciOCDinas proinflamatorias del colon. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad inflamatoria intestinal. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la colitis ulcerosa. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Crohn. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de colitis.

En determinadas realizaciones de la invención, las composiciones son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales. La actividad neuroprotectora de las composiciones de la invención y su capacidad para reducir los niveles de actividad de la histona desacetilasa (HDAC) puede hacerlas útiles para el tratamiento de lesiones cerebrales. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular, como el tratamiento de una lesión cerebral resultante de un accidente cerebrovascular. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de una lesión cerebral, en particular un accidente cerebrovascular.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de cáncer. La desregulación de las vías de acetilación en el cáncer se ha relacionado con la supervivencia de las células cancerosas y la evasión inmunitaria del tumor. Por ejemplo, la desacetilación de p53 mediada por HDAC reduce la estabilidad y la vida media de p53. La p53 acetilada se une y regula la expresión de genes reguladores del ciclo celular y proapoptóticos con mayor eficacia, reduciendo el crecimiento de células cancerosas y promoviendo la apoptosis. Por tanto, la desacetilación de p53 puede inhibir la apoptosis en las células cancerosas, aumentando la supervivencia de las células cancerosas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de cánceres. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de cánceres con p53 no mutado. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan en un método para aumentar la apoptosis en células cancerosas. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para disminuir la evasión inmunitaria tumoral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de cánceres con actividad HDAC aumentada. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso como medicamentos proapoptóticos, por ejemplo, para uso en el tratamiento o la prevención de cánceres. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento o prevención de cáncer.

En realizaciones preferidas adicionales, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para su uso en un método de tratamiento o prevención del cáncer, tal como cáncer de mama, pulmón o hígado. En determinadas realizaciones, la composición es para uso en un método para reducir el tamaño del tumor o prevenir el crecimiento del tumor en el tratamiento del cáncer. En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para uso en el tratamiento de cáncer.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para reducir la actividad histona desacetilasa en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad histona desacetilasa elevada.

En determinadas realizaciones, la composición es para uso en un paciente con una actividad de histona desacetilasa elevada. En determinadas realizaciones, la composición es para uso en un paciente con actividad HDAC de clase I elevada. El efecto sobre la actividad de la histona desacetilasa mostrado para las cepas de Bariatricus puede ser particularmente beneficioso para estos pacientes.

La cepa bacteriana en la composición es de Bariatricus. En determinadas realizaciones de la invención, la cepa bacteriana en la composición es de Bariatricus massiliensis. También se pueden usar cepas estrechamente relacionadas, como cepas bacterianas que tienen una secuencia del gen de ARNr 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2. Preferiblemente, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene la secuencia del gen de ARNr 16s representada por SEQ ID NO: 1. Preferiblemente, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene la secuencia del gen de ARNr 16s representada por SEQ ID NO: 2.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención es para administración oral. La administración oral de las cepas de la invención puede ser efectiva para tratar enfermedades y afecciones mediadas por la actividad de HDAC. En determinadas realizaciones, la administración oral de las cepas de la invención puede ser efectiva para tratar enfermedades y afecciones mediadas por una actividad de HDAC de clase I elevada. Además, la administración oral es conveniente para pacientes y médicos y permite el suministro a y/o colonización parcial o total del intestino.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención se formula utilizando uno o más excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención comprende una cepa bacteriana que ha sido liofilizada. La liofilización es una técnica efectiva y conveniente para preparar composiciones estables que permiten el suministro de bacterias.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona un producto alimenticio que comprende la composición descrita anteriormente.

Además, se describe un método para tratar o prevenir una enfermedad o afección mediada por la actividad de HDAC, que comprende administrar una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus.

Al desarrollar la invención anterior, los inventores han identificado y caracterizado cepas bacterianas que son particularmente útiles para terapia. Se ha demostrado que las cepas de Bariatricus massiliensis de la invención son efectivas para tratar las enfermedades descritas en el presente documento, tales como accidente cerebrovascular, ADHD y GVHD. Por tanto, en otro aspecto, la invención proporciona una célula de la cepa Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042. La invención también proporciona composiciones que comprenden tales células o cultivos biológicamente puros de tales células. La invención también proporciona una célula de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042 para su uso en terapia, en particular para las enfermedades descritas en este documento. Se describe una célula de la cepa Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43171. También se describen composiciones que comprenden tales células o cultivos biológicamente puros de dichas células. La invención también proporciona una célula de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43171 para uso en terapia, en particular para las enfermedades descritas en este documento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura 1 Actividad de histona desacetilasa de célula completa (Figura 1A), Actividad de histona desacetilasa de lisado celular (Figura 1B)

Figura 2 Niveles de producción de metabolitos en la cepa 43042 de Bariatricus massiliensis

Figura 3 Inhibición de HDAC de Clase I (Figura 3A); inhibición de HDAC1 (Figura 3B); inhibición de HDAC2 (Figura 3C); inhibición de HDAC3 (Figura 3D)

Figura 4 La cepa 43042 reduce la hiperactividad en ratones

Figura 5 Datos de peso corporal de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. Los animales se pesaron diariamente durante el estudio. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 6 Datos de peso corporal de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. Los animales se pesaron diariamente durante el estudio y se muestra el porcentaje de cambio de peso corporal con respecto al Día -14. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 7 Datos de peso corporal de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. Los animales se pesaron diariamente durante el estudio y se muestra el porcentaje de cambio de peso corporal con respecto al Día 0. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 8 Datos de peso corporal de GVHD en modelos de ratones a los que se les administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis, teniendo en cuenta para el grupo anfitrión, el peso corporal con el que murió un animal se llevó adelante durante el estudio para los animales encontrados muertos o sacrificados para todos los grupos excepto el Grupo 2. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 9 Datos de peso corporal de GVHD en modelos de ratones a los que se les administró tacrolimus (FK506) ***: p<0,005.

Figura 10 Supervivencia animal en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis

Figura 11 Supervivencia animal en modelos de ratones a los que se les administró tacrolimus (FK506)

Figura 12 Puntuaciones clínicas de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. A los animales se les asignó una puntuación clínica de GVHD diariamente desde los Días 0 a 30. El área bajo la curva (AUC) se calculó usando la regla de transformación trapezoidal y se muestra en el recuadro de la figura. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 13 Puntuaciones clínicas de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. A los animales se les asignó una puntuación clínica de GVHD diariamente desde los Días 0 a 30. Para tener en cuenta la deserción del grupo, la puntuación de GVHD con la que murió un animal se trasladó durante el estudio para los animales encontrados muertos o sacrificados para todos los grupos excepto el Grupo 2. El área bajo la curva (AUC) se calculó utilizando la regla de transformación trapezoidal y se muestra en la figura insertada. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± SEM. n=8-12 por grupo.

Figura 14 (A) postura, (B) actividad, (C) textura del pelaje, (D) integridad de la piel y (E) pérdida de peso utilizada en puntuaciones compuestas de GVHD en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis.

Figura 15 Puntuaciones clínicas de GVHD en modelos de ratones a los que se les administró tacrolimus (FK506)

Figura 16 Puntuaciones de gravedad de la colitis en modelos de ratones a los que se administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. Los animales se sometieron a una videoendoscopia el Día 29 para evaluar la inflamación del colon. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± Se M. n=8-12 por grupo.

Figura 17 Imágenes de endoscopia de colon representativas.

Figura 18 Niveles plasmáticos de citrulina en ratones a los que se les administró la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. Se recogió sangre antes de la eutanasia de todos los animales supervivientes y se procesó para obtener plasma; la citrulina plasmática se evaluó por duplicado mediante ELISA. El plasma se diluyó 1:10 para analizar. El asterisco indica importancia en comparación con el Grupo 1; la almohadilla indica importancia en comparación con el Grupo 2; y el punto indica importancia en comparación con el Grupo 3; a menos que se indique lo contrario. *p<0,05, **p<0,01, ***p<0,005, ****p<0,001. Los datos se presentan como media ± S^e M. n=8-12 por grupo.

Figura 19 Niveles de secreción de IL-6.

Figura 20 Activación de MAP2.

Figura 21 Expresión de IDOl en el íleon (A) y el colon (B) de ratones a los que se les administró Bariatricus. *p<0,05.

Figura 22 Expresión del receptor de glucocorticoides (A), receptor de mineralocorticoides (B), BDNF (C), Grin 2B (D), CRH (E), CFR1 (F), CD11b (G) y GABA A2 (H) en el hipocampo de ratones a los que se les administró Bariatricus. *p<0,05.

Figura 23 Expresión de receptor de oxicodina (A), receptor de glucocorticoide (B), receptor de mineralocorticoide (C), Grin 2A (D) y Grin 2B (E) en la amígdala de ratones a los que se les administró Bariatricus. *p<0,05.

Figura 24 Expresión de BDNF (A), CRFR1 (B) y receptor de mineralocorticoides (C) en la corteza prefrontal de ratones a los que se les administró Bariatricus. *p<0,05, **p<0,01.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Cepas bacterianas

Las composiciones de la invención comprenden una cepa bacteriana del género Bariatricus, como se define en las reivindicaciones. Los ejemplos demuestran que las bacterias de este género son útiles para tratar o prevenir enfermedades y afecciones mediadas por la actividad de HDAC. Las cepas bacterianas preferidas son de la especie Bariatricus massiliensis.

Un ejemplo de una cepa de Bariatricus para uso en la invención es una cepa de la especie Bariatricus massiliensis. Los Bariatricus son anaerobios obligados en forma de bastoncillo con reacción grampositiva (Bessis et al 2016 New Microbe y New Infect 12: 54-55). Bariatricus massiliensis puede aislarse del intestino humano. Las secuencias del gen de ARNr 16S de las cepas de Bariatricus massiliensis utilizadas en los ejemplos se describen en el presente documento como SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2. Una cepa de Bariatricus massiliensis ilustrativa adicional se describe en Bessis et al (2016 New Microbe y New Infect 12: 54-55).

La bacteria Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042 se ensayó en los Ejemplos y se denomina en el presente documento cepa 43042. Una secuencia del gen de ARNr 16s para la cepa 43042 que se ensayó se proporciona en la SEQ ID NO:1. La cepa 43042 fue depositada en la autoridad de depósito internacional NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Escocia) por 4D Pharma Research Limited (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB25 2ZS, Escocia) el 18/05/2018 como "Bariatricus massiliensis" y se le asignó el número de acceso NCIMB 43042. La bacteria Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43171 se ensayó en los Ejemplos y se denomina en el presente documento cepa 43171. Una secuencia del gen de ARNr 16S para la cepa 43171 que se ensayó se proporciona en la SEQ ID NO:2. La cepa 43171 se depositó en la autoridad de depósito internacional NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, AB21 9YA Scotland) por 4D Pharma Research Limited (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB25 2ZS, Escocia) el 20/08/2018 como "Bariatricus massiliensis" y se le asignó el número de acceso NCIMB 43171 También se espera que las cepas bacterianas estrechamente relacionadas con las cepas ensayadas en los Ejemplos sean eficaces para tratar o prevenir enfermedades y afecciones mediadas por la actividad de HDAC. En determinadas realizaciones, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene una secuencia del gen de ARNr 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:1. Preferiblemente, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene la secuencia del gen de ARNr 16s representada por SEQ ID NO:1. En determinadas realizaciones, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene una secuencia del gen de ARNr 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:2. Preferiblemente, la cepa bacteriana para uso en la invención tiene la secuencia del gen de ARNr 16s representada por SEQ ID NO:2.

También se espera que las cepas bacterianas que son biotipos de la bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 sean efectivas para tratar o prevenir enfermedades y afecciones mediadas por la actividad de HDAC. Un biotipo es una cepa estrechamente relacionada que tiene las mismas o muy similares características fisiológicas y bioquímicas.

Las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 y que son adecuadas para su en la invención pueden identificarse secuenciando otras secuencias de nucleótidos para una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171. Por ejemplo, se puede secuenciar sustancialmente todo el genoma y una cepa de biotipo para uso en la invención puede tener al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia en al menos 80% de todo su genoma (p. ej., en al menos 85%, 90%, 95% o 99%, o en todo su genoma). Otras secuencias adecuadas para uso en la identificación de cepas de biotipo pueden incluir hsp60 o secuencias repetitivas como BOX, ERIC, (GTG)s o REP [16]. Las cepas de biotipo pueden tener secuencias con al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% de identidad de secuencia con la secuencia correspondiente de una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171.

Alternativamente, las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 y que son adecuadas para uso en la invención pueden identificarse utilizando el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 y análisis de fragmentos de restricción y/o análisis de PCR, por ejemplo utilizando polimorfismo de longitud de fragmento amplificado fluorescente (FAFLP) y huella digital repetitiva de elementos de ADN (rep)-PCR, o perfilado de proteínas, o secuenciación parcial de ADNr 16S o 23S. En realizaciones preferidas, tales técnicas pueden usarse para identificar otras cepas de Bariatricus.

En determinadas realizaciones, las cepas que son biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 y que son adecuadas para uso en la invención son cepas que proporcionan el mismo patrón que una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171 cuando se analiza mediante análisis de restricción de ADN ribosómico amplificado (ARDRA), por ejemplo, cuando se utiliza la enzima de restricción Sau3AI (para métodos ilustrativos y guía, véase, por ejemplo, [17]. Alternativamente, las cepas de biotipo se identifican como cepas que tienen los mismos patrones de fermentación de carbohidratos que una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171.

Otras cepas de Bariatricus que son útiles en las composiciones y usos de la invención, tales como biotipos de una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 o NCIMB 43171, pueden identificarse usando cualquier método o estrategia apropiados, incluidos los ensayos descritos en los ejemplos. Por ejemplo, las cepas para uso en la invención pueden identificarse administrando las bacterias al ensayo de actividad de HDAC y evaluando la inhibición de la actividad de HDAC. Las cepas bacterianas con actividad inhibidora de HDAC comparable a NCIMB 43042 son adecuadas para uso en la invención. En particular, las cepas bacterianas que tienen patrones de crecimiento similares, tipo metabólico y/o antígenos de superficie a una bacteria depositada con el número de acceso NCIMB 43042 pueden ser útiles en la invención. Una cepa útil tendrá una actividad inhibidora de HDAC comparable y/o efectos comparables sobre la reducción de hiperactividad en los ensayos usados en los Ejemplos a la cepa NCIMB 43042, que puede identificarse usando los protocolos de cultivo y administración descritos en los Ejemplos. En otros casos, las cepas para uso en la invención pueden identificarse administrando las bacterias a los modelos de GVHD descritos en los Ejemplos y evaluando la eficacia en el tratamiento de GVHD. Las cepas bacterianas con actividad comparable a NCIMB 43171 con respecto al tratamiento de GVHD en las condiciones establecidas en los Ejemplos son adecuadas para uso en la invención.

Una cepa particularmente preferida de la invención es la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042. Esta es la cepa 43042 ilustrativa ensayada en los ejemplos y que se ha demostrado que es efectiva para reducir la actividad de HDAC y reducir la hiperactividad. Por tanto, la invención proporciona una célula, tal como una célula aislada, de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042. La invención también proporciona una composición que comprende una célula de la cepa Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIM^b 43042. La invención también proporciona un cultivo biológicamente puro de la cepa de Bariatricus massiliensis depositado con el número de acceso NCIMB 43042. La invención también proporciona una célula de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042 para uso en terapia, en particular para las enfermedades descritas en este documento.

Un derivado de la cepa depositada con el número de acceso NCIMB 43042 puede ser una cepa hija (progenie) o una cepa cultivada (subclonada) de la original. Un derivado de una cepa de la invención puede modificarse, por ejemplo, a nivel genético, sin eliminar la actividad biológica. En particular, una cepa derivada de la invención es terapéuticamente activa. Una cepa derivada tendrá una actividad inhibidora de HDAC comparable a la cepa NCIMB 43042 original. En particular, una cepa derivada provocará efectos comparables sobre la actividad inhibidora de HDAC o los modelos de hiperactividad mostrados en los Ejemplos, que pueden identificarse usando los protocolos de cultivo y administración descritos en los Ejemplos. Un derivado de la cepa NCIMB 43042 será generalmente un biotipo de la cepa NCIMB 43042.

Otra cepa particularmente preferida de la invención es la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43171. Se muestra que la cepa ilustrativa 43171 ensayada en los ejemplos es efectiva en el tratamiento de la GVHD. Se describe una célula, tal como una célula aislada, de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis, o un derivado de la misma. También se describe una composición que comprende una célula de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis, o un derivado de la misma. También se describe un cultivo biológicamente puro de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis. La invención también proporciona una célula de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis para uso en terapia, en particular para las enfermedades descritas en este documento. Un derivado de la cepa depositada con el número de acceso NCIMB 43171 puede ser una cepa hija (progenie) o una cepa cultivada (subclonada) de la original. Un derivado de una cepa de la invención puede modificarse, por ejemplo, a nivel genético, sin eliminar la actividad biológica. En particular, una cepa derivada de la invención es terapéuticamente activa. Una cepa derivada tendrá una actividad comparable a la cepa NCIMB 43171 original con respecto al tratamiento de GVHD en las condiciones establecidas en los Ejemplos. Un derivado de la cepa NCIMB 43171 será generalmente un biotipo de la cepa NCIMB 43171.

En realizaciones preferidas, las cepas bacterianas en las composiciones de la invención son viables y capaces de colonizar parcial o totalmente el intestino.

Usos terapéuticos

Como se demuestra en los ejemplos, las composiciones bacterianas de la invención son efectivas para reducir la actividad de HDAC. En particular, el tratamiento con composiciones de la invención logra una reducción en la actividad de HDAC de Clase 1. En particular, el tratamiento con composiciones de la invención logra una reducción en la actividad de HDAC2. Las composiciones de la invención también muestran mejoras clínicas en modelos animales de hiperactividad. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir enfermedades o afecciones mediadas por la actividad de HDAC. Una afección puede ser un síntoma de una enfermedad. En particular, las composiciones de la invención pueden ser útiles para reducir o prevenir enfermedades o afecciones mediadas por niveles elevados de actividad de HDAC. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir enfermedades o afecciones mediadas por niveles elevados de actividad de HDAC de Clase I. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir enfermedades o afecciones mediadas por niveles elevados de actividad de HDAC2.

Las histonas desacetilasas son una clase de enzimas que eliminan los grupos acetilo de las proteínas objetivo. La diana de HDAC más abundante son las histonas, pero se sabe que las HDAC desacetilan residuos de lisina de dianas proteicas que no son histonas para regular temporalmente la actividad de la proteína. Como tal, las HDAC a veces se denominan lisina desacetilasas. Actualmente hay 13 HDAC conocidas que se clasifican en cuatro clases principales: clase I (HDAC 1, 2, 3 y 8), clase IIa (HDAC 4, 5, 7 y 9) y clase IIb (HDAC 6 y 10), clase III (sirt1-sirt7) y clase IV (HDAC 11) [7]. Cada clase tiene generalmente un patrón de expresión tisular y una localización subcelular diferente.

La acetilación/desacetilación de proteínas se utiliza generalmente como un mecanismo de control postraduccional de la actividad de las proteínas. La acetilación/desacetilación de histona es un mecanismo bien establecido de regulación transcripcional. La regulación genética está causada por la escisión mediada por histona desacetilasa de un grupo acetilo de un s-N-acetilo de un aminoácido lisina en una cola de histona. La eliminación del grupo acetilo restaura la carga positiva a la cola de la histona, lo que conduce a una unión más favorable a la estructura principal del ADN del fosfodiéster con carga negativa. La unión mejorada conduce a una compactación cromosómica más estrecha y una reducción general de la expresión génica en el sitio de desacetilación de histonas.

La actividad de la histona desacetilasa se ha relacionado con una amplia gama de enfermedades y afecciones. La inhibición de la actividad de la histona desacetilasa se puede utilizar para aliviar o mejorar estas enfermedades o afecciones. Los paninhibidores de las histonas desacetilasas pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de enfermedades mediadas por HDAC. Los inhibidores de HDA^c específicos de isoformas pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades mediadas por la actividad de isoformas de HDAC específicas.

La inhibición de la actividad de HDAC es una modalidad de tratamiento establecida y varios inhibidores de HDAC son medicamentos aprobados, que incluyen: Vorinostat (CTCL), Romidepsin (CTCL), Chidamide (PTCL), Panobinostat (mieloma múltiple), Belinostat (linfoma de células T) y muchos están en ensayos clínicos, que incluyen: Panobinostat (CTCL), ácido valproico (cáncer de cuello uterino y cáncer de ovario, atrofia muscular espinal), Mocetinostat (linfoma folicular, linfoma de Hodgkin y leucemia mieloide aguda), Abexinostat (sarcoma), Entinostat (linfoma de Hodgkin, cáncer de pulmón y cáncer de mama), SB939 (cáncer de próstata recurrente o metastásico), Resminostat (linfoma de Hodgkin), Givinostat (leucemias y mielomas refractarios), HBI-800 (tumores sólidos avanzados que incluyen melanoma, carcinoma de células renales (RCC) y no Cáncer de pulmón de células pequeñas (NSCLC)), Kevetrina (cáncer de ovario), CUDC-101, AR-42 (mieloma múltiple en recaída o resistente al tratamiento, leucemia linfocítica crónica o linfoma), CHR-2845, CHR-3996, 4SC-202 (indicaciones hematológicas avanzadas), CG200745 (tumores sólidos), ACY-1215 (mieloma múltiple), ME-344 (tumores sólidos refractarios), sulforafano y Tricostatina (antiinflamatorio).

Ejemplos de enfermedades o afecciones mediadas por la actividad de HDAC incluyen enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o la enfermedad de Parkinson, lesión cerebral, como accidente cerebrovascular, trastornos del comportamiento, como el trastorno por déficit de atención e hiperactividad, enfermedades inflamatorias del intestino, como la enfermedad de Crohn, cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para tratar o prevenir una de estas enfermedades o afecciones. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se usan para tratar o prevenir una de estas enfermedades o afecciones mediadas por una actividad HDAC elevada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se usan para tratar o prevenir una de estas enfermedades o afecciones mediadas por una actividad elevada HDAC de clase I. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se usan para tratar o prevenir una de estas enfermedades o afecciones mediadas por una actividad HDAC2 elevada.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en terapia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad de HDAC elevada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para reducir la actividad de HDAC en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad HDAC elevada. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad HDAC de Clase I elevada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para inhibir la actividad de HDAC de Clase I. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para inhibir selectivamente la actividad de HDAC de Clase I en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad HDAC de Clase I elevada. Los inventores han identificado que determinadas composiciones de la invención inhiben selectivamente las HDAC de Clase I. Como se usa en el presente documento, "selectivo" se refiere a composiciones que tienen el mayor efecto inhibidor sobre las HDAC de Clase I, por ejemplo, en comparación con su efecto inhibidor de las HDAC de otras clases. La inhibición selectiva de las HDAC es ventajosa para el tratamiento de enfermedades que requieren la administración a largo plazo de un agente terapéutico, por ejemplo, cuando una enfermedad o afección necesita ser tratada a lo largo de la vida de un paciente. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención que son inhibidores selectivos de HDAC de Clase I son para uso en el tratamiento paliativo o la prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad de HDAC de Clase I elevada. Los inhibidores selectivos son ventajosos sobre los paninhibidores conocidos en la técnica al reducir los efectos secundarios asociados con la inhibición no deseada de otras clases de HDAC. En determinadas modalidades, los compuestos de la presente invención son inhibidores selectivos de HDAC2. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para reducir selectivamente la actividad de HDAC2. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por una actividad de HDAC2 elevada.

Lesión cerebral

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención son neuroprotectoras y tienen actividad inhibidora de HDAC. HDAC2 es una diana crucial para la recuperación funcional de un accidente cerebrovascular [18] y la inhibición de HDAC puede prevenir la lesión de la sustancia blanca [19], por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de lesiones cerebrales.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales. En algunas realizaciones, la lesión cerebral es una lesión cerebral traumática. En algunas realizaciones, la lesión cerebral es una lesión cerebral adquirida. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de traumatismos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de un tumor. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de una hemorragia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de encefalitis. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de hipoxia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales resultantes de anoxia cerebral.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de accidentes cerebrovasculares. Los efectos que se muestran en los ejemplos son particularmente relevantes para el tratamiento del accidente cerebrovascular. El accidente cerebrovascular ocurre cuando se interrumpe el flujo de sangre a al menos una parte del cerebro. Sin un suministro adecuado de sangre para proporcionar oxígeno y nutrientes al tejido cerebral y eliminar los productos de desecho del tejido cerebral, las células cerebrales comienzan a morir rápidamente. Los síntomas del accidente cerebrovascular dependen de la región del cerebro afectada por el flujo sanguíneo inadecuado. Los síntomas incluyen parálisis, entumecimiento o debilidad de los músculos, pérdida del equilibrio, mareos, dolores de cabeza repentinos intensos, dificultades en el habla, pérdida de la memoria, pérdida de la capacidad de razonamiento, confusión repentina, deterioro de la visión, coma o incluso la muerte. Un fallo cerebrovascular también se conoce como ataque cerebral o accidente cerebrovascular (CVA). Los síntomas del accidente cerebrovascular pueden ser breves si se restablece el flujo sanguíneo adecuado en un período corto de tiempo. Sin embargo, si el flujo sanguíneo inadecuado continúa durante un período de tiempo significativo, los síntomas pueden ser permanentes.

En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular es isquemia cerebral. La isquemia cerebral se produce cuando hay un flujo sanguíneo insuficiente a los tejidos del cerebro para satisfacer la demanda metabólica. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral es una isquemia cerebral focal, es decir, confinada a una región específica del cerebro. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral es una isquemia cerebral global, es decir, que abarca un área amplia del tejido cerebral. La isquemia cerebral focal ocurre comúnmente cuando un vaso cerebral se bloquea, ya sea parcial o completamente, reduciendo el flujo de sangre a una región específica del cerebro. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral focal es un accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es trombótico, es decir, causado por un trombo o coágulo de sangre, que se desarrolla en un vaso cerebral y restringe o bloquea el flujo sanguíneo. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es un accidente cerebrovascular trombótico. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es embólico, es decir, causado por un émbolo o una masa no adherida que viaja a través del torrente sanguíneo y restringe o bloquea el flujo sanguíneo en un sitio distante de su punto de origen. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular isquémico es un accidente cerebrovascular embólico. La isquemia cerebral global ocurre comúnmente cuando el flujo sanguíneo al cerebro en su conjunto se bloquea o se reduce. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral global está causada por hipoperfusión, es decir, debido a un choque. En algunas realizaciones, la isquemia cerebral global es el resultado de un paro cardíaco.

En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral focal. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular trombótico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular embólico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido isquemia cerebral global. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido hipoperfusión. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un paro cardíaco.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la isquemia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la isquemia cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del accidente cerebrovascular isquémico. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del accidente cerebrovascular trombótico. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la isquemia cerebral. En algunas realizaciones, se proporcionan las composiciones de la invención para uso en el tratamiento de la hipoperfusión.

En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular es un accidente cerebrovascular hemorrágico. El accidente cerebrovascular hemorrágico es causado por una hemorragia en o alrededor del cerebro, lo que provoca hinchazón, presión y daño a las células y tejidos del cerebro. El accidente cerebrovascular hemorrágico es comúnmente el resultado de un vaso sanguíneo debilitado que se rompe y sangra en el cerebro circundante. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es una hemorragia intracerebral, es decir, causada por hemorragia dentro del propio tejido cerebral. En algunas realizaciones, la hemorragia intracerebral es causada por una hemorragia intraparenquimatosa. En algunas realizaciones, la hemorragia intracerebral es causada por una hemorragia intraventricular. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es una hemorragia subaracnoidea, es decir, una hemorragia que se produce fuera del tejido cerebral pero todavía dentro del cráneo. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de una angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el accidente cerebrovascular hemorrágico es el resultado de una malformación arteriovenosa cerebral (AVM).

En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un accidente cerebrovascular hemorrágico. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intracerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intraparenquimal. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia intraventricular. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una hemorragia subaracnoide. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido AVM cerebral.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del accidente cerebrovascular hemorrágico. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intracerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intraparenquimal. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia intraventricular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una hemorragia subaracnoide. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una angiopatía amiloide cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de AVM cerebral.

La restauración del flujo sanguíneo adecuado al cerebro después de un período de interrupción, aunque es eficaz para aliviar los síntomas asociados con el accidente cerebrovascular, paradójicamente puede resultar en más daño al tejido cerebral. Durante el período de interrupción, el tejido afectado sufre de falta de oxígeno y nutrientes, y la restauración repentina del flujo sanguíneo puede resultar en inflamación y daño oxidativo a través de la inducción de estrés oxidativo. Esto se conoce como lesión por reperfusión y está bien documentado no solo después de un accidente cerebrovascular, sino también después de un ataque cardíaco u otro daño tisular cuando el suministro de sangre vuelve al tejido después de un período de isquemia o falta de oxígeno. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido una lesión por reperfusión como resultado de un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la lesión por reperfusión como resultado de un accidente cerebrovascular.

Un ataque isquémico transitorio (TIA), a menudo denominado mini accidente cerebrovascular, es una señal de advertencia reconocida de un accidente cerebrovascular más grave. Los sujetos que han sufrido uno o más TIA tienen, por tanto, un mayor riesgo de sufrir un accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto diagnosticado con lesión cerebral ha sufrido un TIA. En algunas realizaciones, se proporcionan las composiciones de la presente invención para uso en el tratamiento de un TIA. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una lesión cerebral en un sujeto que ha sufrido un TIA.

Presión arterial alta, colesterol alto en sangre, antecedentes familiares de accidente cerebrovascular, enfermedad cardíaca, diabetes, aneurismas cerebrales, malformaciones arteriovenosas, enfermedad de células falciformes, vasculitis, trastornos hemorrágicos, uso de antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), fumar tabaco, el consumo de grandes cantidades de alcohol, el consumo de drogas ilegales, la obesidad, la falta de actividad física y una dieta poco saludable se consideran factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En particular, se ha demostrado de manera concluyente que la disminución de la presión arterial previene los accidentes cerebrovasculares isquémicos y hemorrágicos [20, 21]. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una lesión cerebral en un sujeto que tiene al menos un factor de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene dos factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene tres factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene cuatro factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene más de cuatro factores de riesgo de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto tiene presión arterial alta. En algunas realizaciones, el sujeto tiene colesterol en sangre alto. En algunas realizaciones, el sujeto tiene antecedentes familiares de accidente cerebrovascular. En algunas realizaciones, el sujeto también presenta enfermedad cardíaca. En algunas realizaciones, el sujeto padece diabetes. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un aneurisma cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto tiene malformaciones arteriovenosas. En algunas realizaciones, el sujeto tiene vasculitis. En algunas realizaciones, el sujeto tiene anemia de células falciformes. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un trastorno hemorrágico. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un historial de uso de fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID). En algunas realizaciones, el sujeto fuma tabaco. En algunas realizaciones, el sujeto bebe grandes cantidades de alcohol. En algunas realizaciones, el sujeto usa drogas ilegales. En algunas realizaciones, el sujeto es obeso. En algunas realizaciones, el sujeto tiene sobrepeso. En algunas realizaciones, el sujeto carece de actividad física. En algunas realizaciones, el sujeto tiene una dieta poco saludable.

Los ejemplos indican que las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar lesiones cerebrales y ayudar a la recuperación cuando se administran antes de que ocurra la lesión. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar lesiones cerebrales cuando se administran a sujetos con riesgo de lesión cerebral, como accidente cerebrovascular.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del daño causado por una posible lesión cerebral, preferiblemente un accidente cerebrovascular. Las composiciones pueden reducir el daño causado cuando se administran antes de que se produzca la posible lesión cerebral, en particular cuando se administran a un paciente identificado como con riesgo de lesión cerebral.

Los ejemplos indican que las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar lesiones cerebrales y ayudar a la recuperación cuando se administran después de que ocurra la lesión. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar lesiones cerebrales cuando se administran a sujetos después de una lesión cerebral, como accidente cerebrovascular.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral reduciendo el daño motor. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la función motora. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la resistencia del músculo. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la memoria. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando el reconocimiento social. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la lesión cerebral mejorando la función neurológica.

El tratamiento de la lesión cerebral puede referirse, por ejemplo, al alivio de la gravedad de los síntomas. El tratamiento de la lesión cerebral también puede referirse a la reducción de las deficiencias neurológicas que siguen a un accidente cerebrovascular. Las composiciones de la invención para su uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar al sujeto antes del inicio del accidente cerebrovascular, por ejemplo, en un paciente identificado como con riesgo de accidente cerebrovascular. Las composiciones de la invención para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar después de que ha ocurrido un accidente cerebrovascular, por ejemplo, durante la recuperación. Las composiciones de la invención para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase aguda de recuperación (es decir, hasta una semana después del accidente cerebrovascular). Las composiciones de la invención para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase subaguda de recuperación (es decir, de una semana hasta tres meses después del accidente cerebrovascular). Las composiciones de la invención para uso en el tratamiento de un accidente cerebrovascular se pueden proporcionar durante la fase crónica de recuperación (desde tres meses después del accidente cerebrovascular).

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en combinación con un agente activo secundario. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en combinación con aspirina o activador de plasminógeno tisular (tPA). Otros agentes secundarios incluyen otros antiagregantes plaquetarios (como clopidogrel), anticoagulantes (como heparinas, warfarina, apixabán, dabigatrán, edoxabán o rivaroxabán), antihipertensivos (como diuréticos, inhibidores de la ACE, bloqueantes de los canales del calcio, betabloqueantes o alfabloqueantes) o estatinas. Las composiciones de la invención pueden mejorar la respuesta del paciente al agente activo secundario.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen el efecto de la isquemia en los tejidos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la cantidad de daño a los tejidos causado por la isquemia. En determinadas realizaciones, los tejidos dañados por isquemia son los tejidos cerebrales. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la necrosis o el número de células necróticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la apoptosis o el número de células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen el número de células necróticas y células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen la muerte celular por necrosis y/o apoptosis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen la muerte celular por necrosis y/o apoptosis causada por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la recuperación del tejido dañado por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la velocidad de aclaramiento de las células necróticas y/o células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la eficacia de aclaramiento de las células necróticas y/o células apoptóticas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la sustitución y/o regeneración de células dentro de los tejidos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la sustitución y/o regeneración de células dentro de los tejidos dañados por isquemia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la histología global del tejido (por ejemplo, tras una biopsia).

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención activan la activación de MAP2 (proteína 2 asociada a microtúbulos). MAP2 es un gen asociado con la diferenciación neuronal de MAP2 y se cree que es esencial para la formación de microtúbulos en neuritogénesis, por lo que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar lesiones cerebrales. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de lesiones cerebrales activando o aumentando los niveles de MAP2. Además, como MAP2 promueve el crecimiento de neuritas, que desempeñan un papel importante en la redistribución de neuronas dañadas y la sinaptogénesis, la expresión de MAP2 podría ir más allá de ser un marcador de diferenciación neuronal e indicar un "recableado neuronal" asociado con el resultado terapéutico de la enfermedad neuropatológica [22].

Trastornos inflamatorios y autoinmunitarios

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención tienen actividad inhibidora de HDAC. La actividad de HDAC es fundamental para la patología de muchos trastornos inflamatorios y autoinmunitarios, y los inhibidores de HDAC han demostrado eficacia en el tratamiento de muchos trastornos inflamatorios y autoinmunes, como se analiza a continuación en relación con afecciones específicas (ver también [23]). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar trastornos inflamatorios y autoinmunitarios, en particular trastornos inflamatorios y autoinmunitarios mediados por una actividad elevada de histona desacetilasa (HDAC).

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para tratar o prevenir un trastorno inflamatorio o autoinmunitario. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad inflamatoria o autoinmune, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con una enfermedad inflamatoria o autoinmune, en donde el paciente tiene niveles o actividad elevados de HDAC. En determinadas realizaciones, el paciente puede haber sido diagnosticado con una enfermedad o afección inflamatoria o autoinmune crónica, o la composición de la invención puede ser para uso en la prevención de una enfermedad o afección inflamatoria o autoinmune que se convierte en una enfermedad o afección inflamatoria o autoinmune crónica. En determinadas realizaciones, la enfermedad o afección puede no responder al tratamiento con inhibidores de TNF-a.

La HDAC puede estar asociada con enfermedades autoinmunes e inflamatorias crónicas, por lo que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar o prevenir enfermedades o afecciones crónicas enumeradas anteriormente. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en pacientes con enfermedades crónicas. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la prevención del desarrollo de enfermedades crónicas.

Las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar enfermedades y afecciones mediadas por HDAC y para abordar la activación de HDAC, por lo que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar o prevenir enfermedades crónicas, tratar o prevenir enfermedades en pacientes que no han respondido a otras terapias (como el tratamiento con inhibidores de TNF-a), y/o tratar o prevenir el daño tisular y los síntomas asociados con HDAC.

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención reducen la producción y secreción de IL-6, lo que puede ser particularmente útil para tratar trastornos inflamatorios y autoinmunitarios. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción la inflamación en el tratamiento de enfermedades. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la producción y secreción de IL-6. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención disminuyen la activación del promotor NF^kB. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden modular la activación de la producción de IL-6 por el potente lipopolisacárido de endotoxina proinflamatorio (LPS).

- Enfermedad intestinal inflamatoria

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención tienen actividad inhibidora de HDAC, por lo que pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal. La sobreexpresión de diferentes isoformas de HDAC se ha implicado en una variedad de patologías de enfermedades, incluida la colitis. Además, el ácido valproico se ha asociado con la inhibición de HDAC de clase I y la mejora de la colitis en un modelo murino de colitis por DSS [24]. Este estudio sugirió un papel para los inhibidores de HDAC clase I en la supresión de IFN-^y, IL-10, IL-1p y TNF-a, asignando funcionalidad a la inhibición de HDAC y eficacia en la colitis. Por tanto, los ejemplos indican que las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar enfermedades inflamatorias del intestino. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para tratar o prevenir la enfermedad inflamatoria intestinal. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad inflamatoria intestinal, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con una enfermedad inflamatoria intestinal, en donde el paciente tiene niveles o actividad elevada de HDAC.

La enfermedad inflamatoria intestinal (IBD) es una enfermedad compleja que puede ser causada por múltiples factores ambientales y genéticos. Los factores que contribuyen a la aparición de la IBD incluyen la dieta, la microbiota, la permeabilidad intestinal y la susceptibilidad genética a una respuesta inflamatoria aumentada a la infección intestinal. Los síntomas de la enfermedad inflamatoria intestinal incluyen dolor abdominal, vómitos, diarrea, sangrado rectal, calambres internos graves/espasmos musculares en la región pélvica, pérdida de peso y anemia. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de uno o más síntomas asociados con la IBD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la prevención de uno o más síntomas de IBD.

La IBD puede acompañar a otras enfermedades o afecciones, como artritis, pioderma gangrenoso, colangitis esclerosante primaria, síndrome de enfermedad no tiroidea, trombosis venosa profunda, bronquiolitis obliterante con neumonía organizada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de una o más enfermedades o afecciones que acompañan a la IBD.

La enfermedad inflamatoria intestinal generalmente se diagnostica mediante biopsia o colonoscopia. Las mediciones de calprotectina fecal son útiles para el diagnóstico preliminar de la IBD. Otras pruebas de laboratorio para el diagnóstico de IBD incluyen, hemograma completo, velocidad de sedimentación de eritrocitos, panel metabólico completo, prueba de sangre oculta en heces o prueba de proteína C reactiva. Normalmente se utilizará una combinación de pruebas de laboratorio y biopsia/colonoscopia para confirmar el diagnóstico de IBD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un sujeto diagnosticado con IBD. En determinadas realizaciones, la enfermedad inflamatoria intestinal es la enfermedad de Crohn. Los estudios han mostrado que varias HDAC se regulan positivamente en la muscosa inflamatoria de los pacientes con enfermedad de Crohn. Por tanto, la inhibición de la actividad de HDAC puede ser útil en el tratamiento de la enfermedad de Crohn. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Crohn.

La enfermedad de Crohn es una enfermedad compleja con una variedad de causas probables, incluidos los factores de riesgo genéticos, la dieta, otros factores del estilo de vida, como el tabaquismo y el consumo de alcohol, y la composición del microbioma. La enfermedad de Crohn puede manifestarse en cualquier parte del tracto gastrointestinal.

Los síntomas gastrointestinales de la enfermedad de Crohn varían de leves a graves e incluyen dolor abdominal, diarrea, sangre fecal, ileítis, aumento de los movimientos intestinales, aumento de la flatulencia, estenosis intestinal, vómitos y malestar perianal. Las composiciones de la invención pueden ser para uso en el tratamiento de la prevención de uno o más síntomas gastrointestinales de la enfermedad de Crohn.

Los síntomas sistémicos de la enfermedad de Crohn incluyen defectos de crecimiento, como la incapacidad de mantener el crecimiento durante la pubertad, disminución del apetito, fiebre y pérdida de peso. Las características extra-intestinales de la enfermedad de Crohn incluyen uveítis, fotofobia, epiescleritis, cálculos biliares, espondiloartropatía seronegativa, artritis, entesitis, eritema nudoso, pioderma gangrenoso, trombosis venosa profunda, embolia pulmonar, anemia hemolítica autoinmune, dedos hipocráticos y osteoporosis. Las características extra-intestinales son afecciones adicionales asociadas con la enfermedad de Crohn que se manifiestan fuera del tracto GI. Los sujetos con enfermedad de Crohn también exhiben una mayor susceptibilidad a complicaciones neurológicas como convulsiones, accidentes cerebrovasculares, miopatía, neuropatía periférica, dolor de cabeza y depresión. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de uno o más síntomas sistémicos de la enfermedad de Crohn. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de una o más características extra­ intestinales de la enfermedad de Crohn.

El diagnóstico de la enfermedad de Crohn suele implicar la realización de múltiples pruebas y procedimientos quirúrgicos, como la gastroscopia y/o colonoscopia y biopsia, típicamente del íleon, pruebas radiológicas, hemogramas completos, pruebas de proteína C reactiva y velocidades de sedimentación de eritrocitos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en sujetos diagnosticados con la enfermedad de Crohn. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un sujeto que ha sido diagnosticado con enfermedad de Crohn.

La enfermedad de Crohn se clasifica según la extensión de la región del tracto GI afectada [25]. Una enfermedad tanto del íleon como del colon se clasifica como enfermedad de Crohn ileocólica. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o prevención de la enfermedad de Crohn ileocólica. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en un sujeto diagnosticado con enfermedad de Crohn ileocólica/ileítis de Crohn se clasifica si sólo está afectado el íleon. La colitis de Crohn se clasifica si solo se ve afectado el colon. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o la prevención de la ileítis de Crohn. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en un sujeto diagnosticado con ileítis de Crohn. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o la prevención de la colitis de Crohn. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en un sujeto diagnosticado con colitis de Crohn.

La enfermedad de Crohn se puede tratar con varios agentes terapéuticos, como corticosteroides, como prednisona, agentes inmunosupresores, como azatioprina, o biológicos, como infliximab, adalimumab y golimumab, vedolizumab y etrolizumab. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Crohn en combinación con un agente terapéutico adicional. En determinadas realizaciones, el agente terapéutico adicional es para uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Crohn.

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención reducen la expresión modular de IDO1 en el intestino, lo que puede ser particularmente útil para tratar enfermedades inflamatorias del intestino. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención aumentan la expresión de IDO1.

- Esclerosis múltiple

La esclerosis múltiple (MS) es un trastorno inflamatorio autoinmune del sistema nervioso central. La MS puede modelarse en animales mediante la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Se ha demostrado que los inhibidores de HDAC reducen los síntomas clínicos e inhiben el progreso de la enfermedad en ratones con EAE adoptiva (Dasgupta et al., 2003, J Immunol, 170 (7), 3874-3882). También se ha demostrado que la inyección de un inhibidor de HDAc reduce significativamente el deterioro neurológico y la discapacidad en ratones con un modelo experimental de MS crónica (Camelo et al., 2005, J Neuroimmunol, 164 (1-2), 10-21). Se ha sugerido que la inhibición de la actividad de HDAC es una terapia prometedora para la MS (Gray et al., 2006, Epigenetics, 1:2, 67-75). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir la esclerosis múltiple en un sujeto.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con esclerosis múltiple, en donde el paciente tiene niveles o actividad elevada de HDAC.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la esclerosis múltiple. Las composiciones de la invención pueden lograr la inhibición de HDAC y, por tanto, pueden ser útiles en el tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple. La esclerosis múltiple es un trastorno inflamatorio asociado con daño a las vainas de mielina de las neuronas, particularmente en el cerebro y la columna vertebral. La esclerosis múltiple es una enfermedad crónica, progresivamente incapacitante y que evoluciona en episodios.

En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención da como resultado una reducción en la incidencia de la enfermedad o en la gravedad de la enfermedad. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción de la incidencia o la gravedad de la enfermedad. En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención evita una disminución de la función motora o da como resultado una función motora mejorada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la prevención de una disminución de la función motora o para uso en la mejora de la función motora. En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención previene el desarrollo de parálisis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la prevención de la parálisis en el tratamiento de la esclerosis múltiple.

Las composiciones de la invención pueden ser útiles para modular el sistema inmunológico de un paciente, por lo que en ciertas realizaciones las composiciones de la invención son para uso en la prevención de la esclerosis múltiple en un paciente que ha sido identificado como en riesgo de esclerosis múltiple o que ha sido diagnosticado con esclerosis múltiple en etapa temprana o esclerosis múltiple "remitente-recidivante". Las composiciones de la invención pueden ser útiles para prevenir el desarrollo de esclerosis.

Las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o aliviar la esclerosis múltiple. Las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para reducir los síntomas asociados con la esclerosis múltiple. El tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple puede referirse, por ejemplo, a un alivio de la gravedad de los síntomas o una reducción de la frecuencia de las exacerbaciones o del rango de desencadenantes que son un problema para el paciente.

- Artritis

La artritis es una enfermedad caracterizada por una inflamación crónica de las articulaciones. La artritis reumatoide es un trastorno autoinmune crónico que generalmente produce articulaciones inflamadas y dolorosas. Se ha propuesto la inhibición de HDAC para tratar la artritis reumatoide mediante una variedad de mecanismos, que incluyen influir en la producción de ciOCDinas, inhibir la diferenciación de células T, suprimir la proliferación de fibroblastos sinoviales y reducir la pérdida ósea al influir en los osteoclastos y osteoblastos (Vojinov et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6) 397-403). Se ha demostrado que la inhibición de HDAC tiene un fuerte efecto antiinflamatorio en varios modelos animales de artritis (Joosten et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 391-396). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir la artritis en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención se utilizan para tratar o prevenir la artritis reumatoide (RA). En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la artritis reumatoide, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con artritis reumatoide, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención da como resultado una reducción de la inflamación de las articulaciones. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en pacientes con articulaciones inflamadas o pacientes identificados con riesgo de tener articulaciones inflamadas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método para reducir la inflamación de las articulaciones en la RA.

En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención da como resultado una reducción del daño del cartílago o del hueso. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción o prevención del daño del cartílago o del hueso en el tratamiento de la RA. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento de pacientes con RA grave que tienen riesgo de daño en el cartílago o los huesos.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la prevención de la parálisis en la erosión ósea o daño del cartílago en el tratamiento de RA. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento de pacientes que presentan erosión ósea o daño del cartílago o pacientes identificados con riesgo de erosión ósea o daño del cartílago.

Las composiciones de la invención pueden ser útiles para modular el sistema inmunológico de un paciente, por lo que en ciertas realizaciones las composiciones de la invención son para uso en la prevención de la RA en un paciente que ha sido identificado como en riesgo de padecer RA, o que ha sido diagnosticado con RA en etapa temprana. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para prevenir el desarrollo de RA.

Las composiciones de la invención pueden ser útiles para manejar o aliviar la RA. Las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para reducir los síntomas asociados con la inflamación de las articulaciones o la destrucción de los huesos. El tratamiento o la prevención de la RA puede referirse, por ejemplo, a un alivio de la gravedad de los síntomas o una reducción de la frecuencia de las exacerbaciones o del rango de desencadenantes que son un problema para el paciente.

- Asma

El asma es una enfermedad respiratoria inflamatoria crónica. Se ha demostrado que los inhibidores de HDAC tienen efectos antiinflamatorios que alivian la inflamación de las vías respiratorias, la remodelación de las vías respiratorias y la hipersensibilidad de las vías respiratorias en un modelo de ratón con asma crónica (Ren et al., 2016, Inflamm Res, 65, 995-1008). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir el asma en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso para tratar o prevenir el asma. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del asma, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con asma reumatoide, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

En determinadas realizaciones, el asma es asma eosinofílica o alérgica. El asma eosinofílica y alérgica se caracteriza por un mayor número de eosinófilos en la sangre periférica y en las secreciones de las vías respiratorias y se asocia patológicamente con el engrosamiento de la zona de la membrana basal y farmacológicamente por la respuesta a los corticosteroides [26]. Las composiciones que reducen o inhiben el reclutamiento o activación de eosinófilos pueden ser útiles para tratar o prevenir el asma eosinofílica y alérgica. El asma eosinofílica y alérgica también se caracteriza por una cascada de eventos inflamatorios mediados por procesos de linfocitos T helper tipo 2 (Th2). Las composiciones que reducen o inhiben los procesos de los linfocitos T helper tipo 2 (Th2) pueden ser útiles para tratar o prevenir el asma eosinofílica y alérgica.

En realizaciones adicionales, las composiciones de la invención se utilizan para uso en el tratamiento o prevención del asma neutrofílica (o asma no eosinofílica). Un número elevado de neutrófilos se asocia con un asma grave que puede ser insensible al tratamiento con corticosteroides. Las composiciones que reducen o inhiben el reclutamiento o activación de neutrófilos pueden ser útiles para tratar o prevenir el asma neutrofílica.

El asma eosinofílica (también denominada asma Th2-alta) y el asma neutrofílica (también denominada asma Th2-baja o no Th2) tienen diferentes mecanismos fisiopatológicos subyacentes y presentan diferentes características clínicas. Por ejemplo, el asma con niveles altos de Th2 generalmente presenta un inicio temprano y presenta variaciones estacionales de los síntomas, mientras que el asma con niveles bajos de Th2 tiene un inicio mucho más tardío, generalmente alrededor de los 40 años o más tarde. El asma con niveles elevados de Th2 también se caracteriza por un aumento de los niveles sanguíneos de inmunoglobulina E (IgE), mientras que esta característica está ausente en el asma con niveles bajos de Th2. El asma alta Th2 también se caracteriza por niveles elevados de eosinófilos en el esputo. Por el contrario, el asma con niveles bajos de Th2 puede caracterizarse por niveles elevados de neutrófilos en el esputo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del asma con niveles bajos de Th2 o sin Th2. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento del asma con niveles altos de Th2.

El asma eosinofílica y neutrofílica no son afecciones mutuamente excluyentes y los tratamientos que ayudan a abordar las respuestas de eosinófilos y neutrófilos pueden ser útiles para tratar el asma en general.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en métodos que reducen una respuesta inflamatoria eosinofílica en el tratamiento o prevención del asma, o para uso en métodos de reducción de una respuesta inflamatoria neutrofílica en el tratamiento o prevención del asma. Como se señaló anteriormente, los niveles altos de eosinófilos en el asma se asocian patológicamente con el engrosamiento de la zona de la membrana basal, por lo que la reducción de la respuesta inflamatoria eosinofílica en el tratamiento o la prevención del asma puede abordar específicamente esta característica de la enfermedad. Además, los neutrófilos elevados, ya sea en combinación con eosinófilos elevados o en su ausencia, se asocian con asma grave y estrechamiento crónico de las vías respiratorias. Por lo tanto, la reducción de la respuesta inflamatoria neutrofílica puede ser particularmente útil para tratar el asma grave.

En determinadas realizaciones, las composiciones reducen la infiltración peribronquiolar en el asma alérgica o son para uso para reducir la infiltración peribronquiolar en el tratamiento del asma alérgica. En determinadas realizaciones, las composiciones reducen la infiltración peribronquiolar y/o perivascular en el asma neutrofílica, o se usan para reducir la infiltración peribronquiolar y/o perivascular en el tratamiento del asma alérgica neutrofílica. En determinadas realizaciones, el tratamiento con composiciones de la invención proporciona una reducción o previene una elevación de los niveles de TNFa.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método de tratamiento del asma que da como resultado una reducción de la respuesta inflamatoria eosinofílica y/o neutrofílica. En determinadas realizaciones, el paciente que se va a tratar tiene, o se ha identificado previamente que tiene, niveles elevados de neutrófilos o eosinófilos, por ejemplo, según se identifica mediante muestreo de sangre o análisis de esputo. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para prevenir el desarrollo de asma en un recién nacido cuando se administran a un recién nacido o a una mujer embarazada. Las composiciones pueden ser útiles para prevenir el desarrollo de asma en niños. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir el asma de inicio en la edad adulta. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para manejar o aliviar el asma. Las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para reducir los síntomas asociados con el asma agravada por alérgenos, tales como los ácaros del polvo doméstico.

El tratamiento o la prevención del asma puede referirse, por ejemplo, a un alivio de la gravedad de los síntomas o una reducción de la frecuencia de las exacerbaciones o del rango de desencadenantes que son un problema para el paciente.

- Psoriasis

La psoriasis es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel. Se ha informado de sobreexpresión de HDAC1 en biopsias de piel de pacientes psoriásicos (Tovar-Castillo et al., 2007, Int J Dermatol, 46, 239-46) y se ha mostrado que un inhibidor de HDAC bloquea la conversión de Foxp3 Tregs en Foxp3-RORYt IL-17/Tregs (un cambio asociado con la progresión de la psoriasis) (Bovenschen et al., 2011, J Invest Dermatol, 131, 1853-60). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir la psoriasis en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la psoriasis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la psoriasis, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con psoriasis, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

- Lupus eritematoso sistémico

El lupus eritematoso sistémico (SLE) es una enfermedad autoinmune. Se cree que la inhibición de HDAC es un enfoque terapéutico prometedor para tratar el SLE basado en estudios en cultivos celulares y modelos de ratón de SLE (Reilly et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 417-425) . Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir el lupus eritematoso sistémico en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del SLE. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del SLE, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con SLE, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

- Rechazo de aloinjertos

El rechazo del aloinjerto ocurre cuando los tejidos trasplantados son rechazados por el sistema inmunológico del receptor. Los estudios sobre trasplantes cardíacos murinos han demostrado que la inhibición de HDAC aumenta la acetilación de la histona 3 intra-injerto y está asociada con un aumento de los niveles intra-injerto de la proteína Foxp3 (un miembro de la familia de la transcripción en forkhead involucrado en el control de las respuestas inmunes), el mantenimiento de la arquitectura del tejido y la falta de los estigmas del rechazo crónico en relación con los controles (Wang et al., Immunol Cell Biol, 1-8). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir el rechazo al aloinjerto en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del rechazo del aloinjerto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del rechazo del aloinjerto, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con rechazo del aloinjerto, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

- Diabetes

La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades en las que los niveles bajos de resistencia a la insulina y/o resistencia a la insulina periférica produce hiperglicermia. Se ha propuesto la inhibición de HDAC para tratar la diabetes mediante una variedad de mecanismos, incluida la des-represión de Pdx1 (Park et al., 2008, J Clin Invest, 118, 2316-24), mejorando la expresión del factor de transcripción Ngn3 para aumentar el conjunto de células progenitoras endocrinas (Haumaitre et al., 2008, Mol Cell Biol, 28, 6373-83) y mejorar la expresión de insulina (Molsey et al., 2003, J Biol Chem, 278, 19660-6) entre otros. La inhibición de H^dA^c también es un tratamiento prometedor para las complicaciones diabéticas tardías, como la nefropatía diabética y la isquemia retiniana (Christensen et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 370-390). Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar o prevenir la diabetes en un sujeto.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la diabetes. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la diabetes de tipo I En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la diabetes de tipo II. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la diabetes, en donde dicho tratamiento o prevención se logra reduciendo o previniendo la activación de HDAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de un paciente con diabetes, en donde el paciente tiene niveles o actividad de HDAC elevada.

- Enfermedad de injerto contra huésped (GVHD)

Las composiciones de la invención pueden usarse en el tratamiento o prevención de la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD). La GVHD es una complicación médica posterior al trasplante de tejido alogénico en un sujeto. La GVHD ocurre comúnmente después de un trasplante de células madre o de médula ósea o de un órgano sólido, particularmente cuando el trasfondo genético del injerto (es decir, el donante) y el huésped (es decir, el receptor) son distintos.

La fisiopatología de la GVHD comprende tres fases distintas. En primer lugar, las células presentadoras de antígenos (APC) del huésped, como las células dendríticas (DC), se activan tras el reconocimiento del tejido trasplantado como una sustancia extraña. La activación de APC precede al reclutamiento y activación de células inmunes efectoras, como las células T citotóxicas convencionales, lo que conduce a la destrucción o rechazo del tejido extraño.

Se ha demostrado que la inhibición de HDAC media en potentes efectos antiinflamatorios pleiotrópicos útiles en el tratamiento o prevención de la GVHD. La inhibición de HDAC puede inhibir en múltiples puntos de la cascada fisiopatológica de la GVHD. Por ejemplo, la inhibición de HDAC previene la activación de células presentadoras de antígenos y de células dendríticas contra tejidos alogénicos in vivo al mejorar la expresión de indoleamina 2,3-dioxigenasa de una manera dependiente de STAT-3 [27]. También se ha demostrado que la inhibición de la actividad de STAT-1 por HDAC es beneficiosa en el tratamiento o la prevención de la GVHD [28]. En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede usarse en el tratamiento o prevención de la GVHD inhibiendo la activación de APC.

También se ha mostrado que la inhibición de HDAC expande las poblaciones de células Treg y la actividad in vivo [29]. Se ha mostrado que la regulación positiva de la actividad de las células Treg mediada por la inhibición de HDAC suprime la actividad de las células T citotóxicas convencionales, que puede ser útil en el tratamiento o la prevención de la GVHD suprimiendo la 2a fase de la cascada patofisiológica de la GVHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD reduciendo la actividad de las células T citotóxicas convencionales. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden usarse para reducir la actividad de las células T citotóxicas convencionales. En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede ser para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD mediante la regulación positiva de la actividad de las células Treg.

Se ha demostrado que las células NK de los donantes reducen la GVHD al eliminar las APC del huésped. Se ha mostrado que la inhibición de HDAC aumenta la actividad de las células NK. Por lo tanto, las composiciones de la invención pueden ser para uso para aumentar la actividad de las células NK, lo que puede ser útil en el tratamiento o prevención de GVHD al aumentar la eliminación de APC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD mejorando la eliminación de las APC del huésped. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD mediante la potenciación de la actividad de las células NK. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD mejorando la eliminación mediada por la actividad de células NK de APC del huésped.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar después de que el huésped haya recibido el trasplante. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar al huésped antes de que el sujeto haya recibido el trasplante. La administración de las composiciones de la invención antes de que se haya recibido el trasplante puede ser útil para estimular el sistema inmunológico del sujeto para que no provoque una respuesta inflamatoria o autoinmunitaria contra el tejido trasplantado. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden usarse para prevenir o prevenir la aparición de GVHD. En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede ser para uso en el tratamiento o prevención de la GVHD de forma profiláctica. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden usarse en la profilaxis de la GVHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en un método para prevenir el rechazo de tejido trasplantado en un sujeto.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar, retrasar, prevenir o prevenir la aparición de la GVHD aguda. Los síntomas de la GVHD aguda se manifiestan típicamente dentro de los primeros 100 días después del trasplante. El retraso, el tratamiento o la prevención de la GVHD aguda pueden ser particularmente beneficiosos para ayudar a la recuperación de los sujetos inmediatamente después de la cirugía de trasplante. En determinadas realizaciones, las composiciones pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda mediante la inhibición de la actividad de HDAC. En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de la GVHD mediante la regulación positiva de la actividad de las células Treg. Las composiciones pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda inhibiendo la actividad de las células T citotóxicas convencionales. Las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda mejorando la actividad de las células NK. Las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda inhibiendo la activación de APC.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda cuando se administran a un sujeto dentro de los 100 días posteriores al trasplante. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda cuando se administran a un sujeto de forma profiláctica, por ejemplo, cuando la composición se administra al sujeto antes del trasplante. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD aguda persistente, de aparición tardía o recurrente, como la GVHd aguda que se produce o reaparece más de 100 días después del trasplante.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede tratar, retrasar la aparición de, o prevenir, o prevenir la aparición de uno o más síntomas de GVHD aguda seleccionados de la lista que consiste en sarpullido en la piel macropaular, náuseas, anorexia, diarrea, dolor abdominal grave, hiperbilirubinemia colestática e ilea.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar, retrasar, prevenir o prevenir la aparición de la GVHD aguda. La GVHD crónica es un trastorno multisistémico complejo que puede afectar a cualquier órgano y se caracteriza típicamente por fibrosis. La GVHD crónica puede evolucionar de GVHD aguda o puede surgir después de un período de inactividad después de la GVHD aguda, o puede surgir de novo. Los síntomas de la GVHD crónica pueden surgir en cualquier momento después del trasplante. En determinadas realizaciones, las composiciones pueden ser útiles para tratar, prevenir, prevenir la aparición o retrasar la aparición de la GVHD crónica al inhibir la actividad de HDAC. Las composiciones pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD crónica regulando positivamente la actividad de las células Treg. Las composiciones pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD crónica inhibiendo la actividad de las células T citotóxicas convencionales. Las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD crónica mejorando la actividad de las células NK. Las composiciones de la invención pueden tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de GVHD crónica inhibiendo la activación de APC DC.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para la administración a un paciente que se ha sometido recientemente a un trasplante de células madre, médula ósea u órgano sólido. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para la administración a un paciente que necesita un trasplante de células madre, médula ósea o órgano sólido.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención puede tratar, retrasar la aparición, prevenir o prevenir la aparición de uno o más síntomas de GVHD crónica seleccionados de la lista que consiste en: despigmentación, alopecia de nueva aparición, poiquilodermia, erupciones similares al liquen plano o características escleróticas, distrofia o pérdida de uñas, xerostomía, úlceras bucales (como estomatitis aftosa), características de tipo liquen en la boca (como liquen esclerosis), queratoconjuntivitis seca, síndrome de sicca, conjuntivitis cicatricial, fascititis, miositis, rigidez de las articulaciones, esclerosis vaginal, ulceraciones, anorexia, pérdida de peso, tejido esofágico, ictericia, transaminitis, derrames pleurales, bronquiolitis obliterante, síndrome nefrótico, pericarditis, trombocitopenia, anemia y neutropenia.

Los inventores también han mostrado que las composiciones de la invención pueden reducir la colitis asociada con la GVHD. La colitis es un efecto secundario inflamatorio observado en pacientes con GVHD. Las composiciones de la invención también pueden ser útiles para tratar la inflamación del colon en un sujeto con GVHD. Por tanto, en algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la colitis en un sujeto con GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción de la gravedad de la colitis en un sujeto con GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción de la severidad de la colitis en el tratamiento de la GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la inflamación del colon en un sujeto con GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción de la gravedad de la inflamación del colon en un sujeto con GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción de la inflamación del colon en el tratamiento de la GVHD.

Los inventores también han encontrado que las composiciones de la invención son útiles para mantener la función de barrera intestinal en sujetos con GVHD. Mantener la función de la barrera intestinal reduce la translocación de ciOCDinas inflamatorias a través de la barrera intestinal, lo que agrava la toxicidad en la GVHD [30]. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para mantener la función de barrera intestinal en el tratamiento de la GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para reducir la translocación de ciOCDinas inflamatorias a través de la barrera intestinal en el tratamiento de la GVHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en combinación con uno o más agentes farmacológicos para el tratamiento o la prevención de la GVHD. En determinadas realizaciones, el uno o más agentes farmacológicos son para la prevención o el tratamiento farmacológico de la GVHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la GVHD en un sujeto que está recibiendo, ha recibido o está a punto de recibir uno o más de dichos agentes farmacológicos. En determinadas realizaciones, el uno o más agentes farmacológicos se seleccionan de la lista que consiste en: suberoilanilida, vorisnostat, ciclosporina ITF2357, ciclosporina, sirolimus, pentostatina, rituximab, imatinib, micofenolato de mofetilo, tacrolimús, prednisona, metotrexato, remestencel-L y proquimal, en donde el agente farmacológico se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz para el tratamiento o la prevención de la GVHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la GVHD en un sujeto que ha recibido, está recibiendo o está a punto de recibir fotoforesis extracorpóreas.

Trastornos psiquiátricos y del comportamiento

Los Ejemplos muestran que las composiciones de la invención reducen la hiperactividad en modelos de ratones de enfermedad neurológica. Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles para reducir la hiperactividad en un sujeto. La hiperactividad es un síntoma de trastornos del comportamiento y psiquiátricos, como el trastorno por déficit de atención e hiperactividad (ADHD), el trastorno de estrés postraumático, los trastornos de ansiedad, el trastorno afectivo bipolar y el trastorno obsesivo compulsivo. La hiperactividad puede ser síntoma de trastornos hormonales, como hipertiroidismo, hipercinética y resistencia a la hormona tiroidea. La hiperactividad también puede ser un síntoma de trastornos neuronales, como la adrenoleucodistrofia. La hiperactividad también puede ser un síntoma de trastorno hipercinético, esquizofrenia catatónica, anorexia nerviosa, síndrome de X frágil (FXS), fenilcetonuria (PKU), síndrome de alcoholismo fetal (FAS), ansiedad, depresión y síndrome de Tourette. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos del comportamiento. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos psiquiátricos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de trastornos emocionales y del comportamiento.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del hipertiroidismo o la resistencia a la hormona tiroidea. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con hipertiroidismo o resistencia a la hormona tiroidea.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la adrenoleucodistrofia. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con adrenoleucodistrofia.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la esquizofrenia catatónica. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con esquizofrenia catatónica.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la anorexia nerviosa. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con anorexia nerviosa.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del síndrome del X frágil. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con síndrome del X frágil (FXS).

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la fenilcetonuria. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con fenilcetonuria.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del síndrome de alcoholismo fetal. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con síndrome de alcoholismo fetal. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la ansiedad. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con ansiedad.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de la depresión. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con depresión.

En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del síndrome de Tourette. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con síndrome de Tourette.

- ADHD

En determinadas realizaciones, la composición de la invención es para uso en el tratamiento o prevención del ADHD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la hiperactividad en sujetos con trastornos del comportamiento. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de la hiperactividad en sujetos con ADHD. El ADHD puede manifestarse tanto en niños como en adultos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del ADHD en adultos. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o la prevención del ADHD en niños.

En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en sujetos diagnosticados con ADHD. El diagnóstico de ADHD es un procedimiento complejo que a menudo implica la evaluación psicológica de un sujeto que muestra síntomas de ADHD, junto con un examen físico y posiblemente la detección de marcadores biológicos asociados con el ADHD, como la expresión de monoamino oxidasa plaquetaria, norepinefrina urinaria, MHPG urinario y niveles de fenetilamina urinaria.

El diagnóstico formal generalmente lo realiza un profesional de la salud psiquiátrica. Los diferentes países utilizan diferentes métricas para el diagnóstico y la clasificación del ADHD. En algunos países, el diagnóstico y la clasificación se realizan de acuerdo con los criterios definidos por la Asociación Americana de Psiquiatría en el Manual de Diagnóstico y Estadístico de los Trastornos Mentales (DSM). El DSM clasifica el ADHD en diferentes subtipos según la variedad de síntomas que presenta el sujeto. El ADHD puede diagnosticarse como ADHD de tipo predominantemente desatento (ADHD-pi). En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del ADHD-pi. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un sujeto diagnosticado con ADHD-pi. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método de tratamiento de un sujeto diagnosticado con ADHD-pi. El ADHD también se puede diagnosticar como ADHD de tipo predominantemente hiperactivo-impulsivo. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o la prevención del tipo predominantemente hiperactivo-impulsivo de ADHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un sujeto diagnosticado con ADHD de tipo predominantemente hiperactivo-impulsivo. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en un método de tratamiento de un sujeto diagnosticado con ADHD de tipo predominantemente hiperactivo-impulsivo.

Los síntomas del ADHD incluyen distracción fácil, olvido, soñar despierto, desorganización, falta de concentración y dificultad para completar tareas, con excesiva intranquilidad y desasosiego, hiperactividad, dificultad para esperar y permanecer sentado, comportamiento inmaduro. También pueden presentarse comportamientos destructivos. Para que los síntomas se asocien con el ADHD, deben estar presentes durante más de seis meses y deben aparecer en más de un entorno (como en el hogar, la escuela o el trabajo). En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o prevención de uno o más síntomas del ADHD. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en el tratamiento o la prevención de un sujeto que presenta uno o más síntomas de ADHD. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de la hiperactividad. En algunas realizaciones, las composiciones son para uso en un método para reducir la hiperactividad en un sujeto. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso como medicamentos antihiperactividad.

Otros métodos de tratamiento del ADHD incluyen terapia psicológica, terapia conductual, terapia cognitivoconductual, psicoterapia interpersonal, medicamentos estimulantes, como metilfenidato, medicamentos no estimulantes, como atomoxetina, bupropión, guanfacina y clonidina. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan en combinación con un método adicional de tratamiento del ADHD.

Trastorno obsesivo compulsivo (OCD)

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del OCD. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de OCD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con OCD.

El OCD es un trastorno heterogéneo, crónico e incapacitante que pertenece a los trastornos de ansiedad. Según la definición del DSM-IV, las características esenciales del OCD son las obsesiones y/o compulsiones recurrentes (criterio A) que son graves y consumen tiempo (más de una hora al día) o causan angustia marcada o interfieren significativamente con la rutina normal del sujeto, el funcionamiento ocupacional, las actividades sociales habituales o las relaciones (criterio C). Como en algún momento durante el curso del trastorno, la persona ha reconocido que las obsesiones o compulsiones son excesivas o irrazonables (criterio B).

Las obsesiones se definen como pensamientos, impulsos o imágenes recurrentes y persistentes que se experimentan como intrusivos e inapropiados y causan ansiedad o angustia marcada. Los pensamientos, impulsos o imágenes no son simplemente preocupaciones excesivas sobre problemas de la vida real, son reconocidos por el paciente como producto de su propia mente (p. ej., miedo a la contaminación, obsesión por la simetría). La persona intenta ignorar, reprimir o neutralizar las obsesiones con otros pensamientos o acciones.

Las compulsiones se definen como comportamientos repetitivos (p. ej., lavarse las manos, ordenar, acumular, controlar) o actos mentales (p. ej., rezar, contar, repetir palabras en silencio) que la persona se siente impulsada a realizar en respuesta a una obsesión o de acuerdo con reglas que deben aplicarse rígidamente.

El OCD a menudo se asocia con tasas de comorbilidad de otras enfermedades psiquiátricas, incluido el trastorno depresivo mayor, otros trastornos de ansiedad (trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de ansiedad social, trastorno de pánico), abuso de sustancias y trastornos de la alimentación (anorexia y bulimia).

El OCD es un trastorno psiquiátrico que puede desarrollarse o persistir debido a una disfunción del eje microbiotaintestino-cerebro. Por consiguiente, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del OCD en un sujeto.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las características sintomáticas esenciales del OCD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las obsesiones y/o compulsiones recurrentes en un tema. En determinadas realizaciones, las obsesiones son pensamientos, impulsos o imágenes recurrentes o persistentes que son experiencias tan intrusivas e inapropiadas y que provocan una ansiedad o angustia marcada. En ciertas realizaciones, las compulsiones son comportamientos repetitivos que el sujeto se siente impulsado a realizar en respuesta a una obsesión o de acuerdo con reglas que deben aplicarse rígidamente.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas del OCD en un sujeto de acuerdo con el diagnóstico de Y-BOCS y/o NIMH-OC y/o escalas sintomáticas. En algunas realizaciones, la escala Y-BOCS se usa para controlar la mejora de los puntos finales primarios. En algunas realizaciones, la escala NIMH-OC se usa para controlar la mejora de los parámetros secundarios.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la escala de Impresión Clínica Global - Mejora Global (CGI-I) para evaluar trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención muestran un efecto positivo sobre el funcionamiento social global (relaciones, trabajo, etc.) del sujeto con ASD. En algunas realizaciones, la escala global es la escala de discapacidad de Sheehan.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian al menos una comorbilidad del OCD. Las comorbilidades del OCD incluyen trastorno depresivo mayor, otros trastornos de ansiedad (trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de ansiedad social, trastorno de pánico), abuso de sustancias y trastornos de la alimentación (anorexia y bulimia), síndrome de Gilles de la Tourette, ADHD (trastorno de déficit de atención/hiperactividad) y trastornos del desarrollo.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son particularmente efectivas para prevenir, reducir o aliviar el OCD cuando se usan en combinación con otra terapia para tratar el OCD. Tales terapias incluyen inhibidores de la recaptación de serotonina y dopamina; clomipramina y antipsicóticos.

- Trastornos de ansiedad

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos de la ansiedad. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del trastorno de la ansiedad. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado un trastorno de la ansiedad.

Los trastornos de ansiedad son un grupo de trastornos mentales caracterizados por sentimientos de ansiedad y miedo. Hay una serie de trastornos de ansiedad que incluyen el trastorno de ansiedad generalizada (GAD); fobia específica; trastorno de ansiedad social; trastorno de ansiedad por separación; agrorafobia; trastorno de pánico y mutismo selectivo.

El GAD se diagnostica de acuerdo con DMS-5 en seis criterios. El primer criterio es demasiada ansiedad o preocupación durante más de seis meses en los que la ansiedad o preocupación está presente la mayor parte del tiempo con respecto a muchas actividades. El segundo criterio es que el sujeto es incapaz de manejar los síntomas del primer criterio. El tercer criterio es que ocurren al menos tres (uno en niños) de los siguientes: inquietud; se cansa fácilmente; problemas para concentrarse; irritabilidad; tensión muscular y problemas para dormir. Los tres últimos criterios son que los síntomas provoquen un deterioro social, ocupacional y funcional significativo; los síntomas no se deben a medicamentos, drogas u otros problemas de salud física; y los síntomas no encajan mejor con otro problema psiquiátrico como el trastorno de pánico. Todos los demás trastornos de ansiedad pueden considerarse diagnósticos diferenciales de GAD.

El GAD se asocia con frecuencia con un amplio espectro de otros trastornos mentales como comorbilidades, incluida la depresión; trastornos por uso de sustancias; estrés; IBS; insomnio; dolores de cabeza dolor; eventos cardíacos; problemas interpersonales y ADHD.

Los trastornos de ansiedad son trastornos psiquiátricos que pueden desarrollarse o persistir debido a una disfunción del eje microbiota-intestino-cerebro. Por consiguiente, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos de ansiedad en un sujeto. En determinadas realizaciones, el trastorno de ansiedad es un trastorno de ansiedad generalizada (GAD); fobia específica; trastorno de ansiedad social; trastorno de ansiedad por separación; agorafobia; trastorno de pánico y mutismo selectivo.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas del GAD en un sujeto según la clasificación de los criterios de DMS-5 enumerados en el presente documento. Según DMS-5, los mismos síntomas se asocian con otros trastornos de ansiedad. Por tanto, en determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas de los trastornos de ansiedad en un sujeto. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la ansiedad o preocupación del sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la aparición de síntomas en un período de seis meses. En determinadas realizaciones, la composición de la invención previene, reduce o alivia la inquietud; fatiga; pérdida de concentración; irritabilidad; tensión muscular; y/o problemas con el sueño. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian el deterioro social, ocupacional y funcional asociado con los trastornos de ansiedad.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas de los trastornos de ansiedad según una escala sintomática o diagnóstica. En ciertas realizaciones, la escala para evaluar la mejoría sintomática incluye la Escala de Calificación de Ansiedad de Hamilton (HAM-A). En algunas realizaciones, la escala tota1HAM-A se usa para evaluar el punto final primario. En otras realizaciones, el factor de ansiedad psíquica HAM-A puede ser útil como punto final secundario.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la escala de Impresión Clínica Global - Mejora Global (CGI-I) para evaluar trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención muestran un efecto positivo sobre el deterioro social, ocupacional y funcional global del sujeto con trastorno de ansiedad. En algunas realizaciones, la escala global es la escala de discapacidad de Sheehan.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian al menos una comorbilidad del GAD y trastornos de ansiedad. Las comorbilidades del GAD incluyen depresión; trastornos por uso de sustancias; estrés; IBS; insomnio; dolores de cabeza; dolor; eventos cardíacos; problemas interpersonales y ADHD.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son particularmente efectivas para prevenir, reducir o aliviar los trastornos de ansiedad cuando se usan en combinación con otra terapia para tratar los trastornos de ansiedad. Tales terapias incluyen inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (venlafaxina, duloxetina, escitalopram y paroxetina); benzodiazepinas (alprazolam, lorazepam y clonazepam); pregabalina (Lyrica®) y gabapentina (Neurontin®); agonistas parciales del receptor de serotonina (buspirona y tandospirona); antidepresivos serotoninérgicos atípicos (como imipramina y clomipramina); inhibidores de la monoaminooxidasa (MAOI) (como moclobemida y fenelzina); hidroxizina; propranolol; clonidina; guanfacina y prazosina.

- Trastorno de estrés postraumático (PTSD)

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del PTSD. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento de PTSD. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con PTSD.

El PTSD es un trastorno grave e incapacitante, una característica esencial del cual es la inclusión de un evento traumático como factor desencadenante de este trastorno.

Los síntomas de PTSD se agrupan en cuatro grupos principales de acuerdo con los criterios de DMS-V: (i) intrusión: los ejemplos incluyen pesadillas, pensamientos no deseados de los eventos traumáticos, flashbacks y reaccionar a recordatorios traumáticos con angustia emocional o reactividad fisiológica; (ii) evitación: los ejemplos incluyen evitar los desencadenantes de recuerdos traumáticos, incluidos lugares, conversaciones u otros recordatorios; (iii) alteraciones negativas en las cogniciones y el estado de ánimo: los ejemplos incluyen culpa distorsionada de sí mismo o de otros por el evento traumático, creencias negativas sobre uno mismo o el mundo, emociones negativas persistentes (por ejemplo, miedo, culpa, vergüenza), sentirse alienado y afecto restringido (p. ej., incapacidad para experimentar emociones positivas); (iv) alteraciones en la excitación y la reactividad: los ejemplos incluyen comportamiento enojado, imprudente o autodestructivo, problemas de sueño, problemas de concentración, mayor respuesta de sobresalto e hipervigilancia.

Los síntomas que se resuelven dentro de las 4 semanas posteriores al evento traumático cumplen los criterios de un trastorno de estrés agudo. El DSM distingue entre agudo (duración de los síntomas de menos de tres meses) y PTSD crónico (duración de los síntomas de más de 3 meses). Si los síntomas comienzan más de 6 meses después del factor estresante, el trastorno se define como PTSD de aparición tardía.

El trastorno de estrés postraumático conlleva altas comorbilidades con trastorno depresivo mayor y trastornos por uso de sustancias.

El PTSD es un trastorno psiquiátrico que puede desarrollarse o persistir debido a una disfunción del eje microbiotaintestino-cerebro. Por consiguiente, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de PTSD en un sujeto. Según una patogénesis similar, en determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos por estrés. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención tratan el trastorno de estrés agudo. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan PTSD agudo y/o crónico. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención tratan el PTSD de aparición retardada.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas del PTSD (o trastorno por estrés) en un sujeto según la clasificación de los criterios de DMS-5 enumerados en el presente documento. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian los pensamientos intrusivos en un sujeto con PTSD. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian el comportamiento de evitación en un sujeto con PTSD. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las alteraciones negativas en las cogniciones y el estado de ánimo en un sujeto con PTSD. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen alteraciones en la excitación y reactividad en un sujeto con PTSD.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas del PTSD y trastornos por estrés según una escala sintomática o diagnóstica. En determinadas realizaciones, la escala para evaluar la mejoría sintomática es la escala de PTSD administrado clínicamente (CAPS).

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la escala de Impresión Clínica Global - Mejora Global (CGI-I) para evaluar trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención muestran un efecto positivo sobre el deterioro social, ocupacional y funcional global del sujeto con PTSD y trastornos por estrés. En algunas realizaciones, la escala global es la escala de discapacidad de Sheehan. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian al menos una comorbilidad del PTSD y trastornos de ansiedad. Las comorbilidades del PTSD y los trastornos por estrés incluyen MDD, trastornos por uso de sustancias; estrés y ansiedad.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son particularmente efectivas para prevenir, reducir o aliviar el PTSD y trastornos por estrés cuando se usan en combinación con otra terapia para tratar el PTSD y los trastornos por estrés. Tales terapias incluyen agentes serotoninérgicos, antidepresivos tricíclicos, estabilizadores del estado de ánimo, agentes inhibidores adrenérgicos, antipsicóticos, benzodiazepinas, sertralina (Zoloft®), fluoxetina (Prozac®) y/o paroxetina (Paxil®).

- Trastorno bipolar

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del trastorno bipolar. En determinadas realizaciones, las composiciones son para uso en la reducción de la hiperactividad en el tratamiento del trastorno bipolar. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la hiperactividad en un paciente diagnosticado con un trastorno bipolar. El trastorno bipolar en general es una enfermedad crónica. La manía es el síntoma cardinal del trastorno bipolar. Hay varios tipos de trastorno bipolar según la duración y el patrón específicos de los episodios maníacos y depresivos. En DMS-5, se hace una distinción entre trastorno bipolar I, trastorno bipolar II, trastorno ciclotímico, trastorno bipolar de ciclo rápido y trastorno bipolar NOS.

Según el DSM, la manía es un período distinto de estado de ánimo anormal y persistentemente elevado, expansivo o irritable. El episodio debe durar una semana y el estado de ánimo debe tener al menos tres de los siguientes síntomas: alta autoestima; reducción de la necesidad de dormir; aumentar la velocidad del habla; salto rápido de ideas; distraído fácilmente; un mayor interés en metas o actividades; agitación psicomotora; mayor seguimiento de actividades con alto riesgo de peligro.

El trastorno bipolar I implica uno o más episodios maníacos o mixtos (manía y depresión) y al menos un episodio depresivo mayor (consulte los síntomas de los episodios de MDD más arriba). El trastorno bipolar II tiene uno o más episodios depresivos mayores acompañados de al menos un episodio hipomaníaco. No hay episodios maníacos o mixtos. La hipomanía es una forma menor de manía. Los síntomas son responsables de importantes deterioros sociales, ocupacionales y funcionales. La ciclotimia se caracteriza por cambios en la depresión de bajo nivel junto con períodos de hipomanía. Los síntomas deben estar presentes durante al menos dos años en adultos o un año en niños antes de que se pueda hacer un diagnóstico. Los períodos libres de síntomas en adultos y niños no duran más de dos meses o un mes, respectivamente. El trastorno bipolar de ciclo rápido es una forma grave de trastorno bipolar. Ocurre cuando una persona tiene al menos cuatro episodios de depresión mayor, manía, hipomanía o estados mixtos en un año. El trastorno bipolar no especificado (NOS) clasifica los síntomas bipolares que no encajan claramente en otros tipos. La NOS se diagnostica cuando hay múltiples síntomas bipolares, pero no lo suficiente para cumplir con la etiqueta de cualquiera de los otros subtipos.

El trastorno bipolar se asocia con las siguientes comorbilidades: ADHD; trastornos de ansiedad; trastornos de sustancias; obesidad y síndrome metabólico.

El trastorno bipolar es un trastorno psiquiátrico que puede desarrollarse o persistir debido a una disfunción del eje microbiota-intestino-cerebro. Por tanto, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso para tratar o prevenir el trastorno bipolar en un sujeto. En determinadas realizaciones, el trastorno bipolar es el trastorno bipolar I. En determinadas realizaciones, el trastorno bipolar es el trastorno bipolar II. En determinadas realizaciones, el trastorno bipolar es un trastorno ciclotímico. En determinadas realizaciones, el trastorno bipolar es el trastorno bipolar de ciclo rápido. En determinadas realizaciones, el trastorno bipolar es el trastorno bipolar NOS. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas del trastorno bipolar en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición de episodios maníacos en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición de un estado de ánimo anormal y persistentemente elevado, expansivo o irritable. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los siguientes síntomas: alta autoestima; reducción de la necesidad de dormir; aumentar la velocidad del habla; salto rápido de ideas; distraído fácilmente; un mayor interés en metas o actividades; agitación psicomotora; mayor seguimiento de actividades con alto riesgo de peligro. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición de uno o más episodios maníacos o mixtos en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención reducen la aparición de al menos un episodio depresivo mayor en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición de al menos un episodio depresivo mayor acompañado de al menos un episodio hipomaníaco.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención tratan la fase aguda del trastorno bipolar y/o previenen la aparición de nuevos episodios. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención tratan la fase aguda de episodios maníacos/depresivos en un sujeto con trastorno bipolar y prevenir la aparición de más episodios maníacos/depresivos.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas del trastorno bipolar según una escala sintomática o diagnóstica. En determinadas realizaciones, la escala para evaluar la mejoría sintomática de los episodios maníacos es la Escala de calificación del estado maníaco y la Escala de calificación de la manía joven. En determinadas realizaciones, la escala es la escala de manía de Bech-Rafaelsen (BRMAS). En determinadas realizaciones, las escalas para evaluar la mejora sintomática del cambio de episodios maníacos a depresivos incluyen la Escala de valoración de depresión de Hamilton, la Escala de valoración de Montgomery-Asberg y la Escala de depresión de Bech-Rafaelsen.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la escala de Impresión Clínica Global - Mejora Global (CGI-I) para evaluar trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención muestran un efecto positivo sobre el deterioro social, ocupacional y funcional global del sujeto con trastorno de ansiedad.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian al menos una comorbilidad del trastorno bipolar. En determinadas realizaciones, la comorbilidad se selecciona entre ADHD, trastornos de ansiedad, trastornos por sustancias, obesidad y síndrome metabólico.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades maniacodepresivas y trastorno bipolar que no responden al litio y al divalproex.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son particularmente efectivas para prevenir, reducir o aliviar el trastorno bipolar cuando se usan en combinación con otra terapia para tratar el trastorno bipolar. En determinadas realizaciones, tales terapias incluyen carbonato de litio, fármacos anticonvulsivos (que incluyen valproato, divalproex, carbamazepina y lamotrigina) y fármacos antipsicóticos (que incluyen aripiprazol, olanzapina, quetiapina y risperidona).

Cáncer

La función y expresión de HDAC se altera en una variedad de cánceres y, a menudo, conduce a un mal pronóstico. La función de HDAC en el cáncer está asociada con la expresión o función aberrante de genes que promueven la proliferación celular y fenotipos tumorigénicos. En determinados cánceres, las HDAC regulan principalmente la aparición del cáncer y se describen como oncogenes. En otros cánceres, las proteínas de onco-fusión reclutan HDAC de clase I para reprimir la expresión de genes que regulan la diferenciación celular o el control del ciclo celular, lo que lleva a la transformación celular. Se ha mostrado que la desactivación o inhibición de la expresión de HDAC tiene múltiples efectos anticancerígenos, como la detención del ciclo celular y la inhibición de la proliferación, apoptosis, diferenciación y senescencia y alteración de la angiogénesis. Por tanto, las composiciones de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de cánceres mediados por la actividad de HDAC, inhibiendo la actividad de HDAC.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer. En determinadas realizaciones, la composición de la invención es para uso en el tratamiento o prevención de cánceres mediados por una actividad HDAC elevada. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer colorrectal.

En determinadas realizaciones, el tratamiento con las composiciones de la invención da como resultado una reducción del tamaño del tumor o una reducción del crecimiento del tumor. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del tamaño del tumor o la reducción del crecimiento del tumor. Las composiciones de la invención pueden ser eficaces para reducir el tamaño o el crecimiento del tumor. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en pacientes con tumores sólidos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción o prevención de la angiogénesis en el tratamiento del cáncer. Los genes regulados por HDAC tienen funciones centrales en la angiogénesis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la prevención de la metástasis.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer gástrico. Se ha demostrado que HDAC2 desempeña un papel funcional en el desarrollo de cánceres gástricos y tumorigénesis colorrectal [31,32]. En modelos de ratones de cáncer colorrectal, la inhibición de HDAC2 resultó en una reducción de las velocidades de desarrollo de tumores. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención que inhiben selectivamente HDAC2 son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer colorrectal, en particular el cáncer colorrectal mediado por una actividad elevada de HDAC2.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer de mama. Las composiciones de la invención pueden ser efectivas para tratar el cáncer de mama, y se ha demostrado que las HDAC están reguladas positivamente en el cáncer de mama [33]. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del tamaño del tumor, la reducción del crecimiento del tumor o la reducción de la angiogénesis en el tratamiento del cáncer de mama.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer de próstata. Las composiciones de la invención pueden ser efectivas para tratar el cáncer de próstata, ya que la actividad de HDAC juega un papel importante en el desarrollo del cáncer de próstata [34]. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del tamaño del tumor, la reducción del crecimiento del tumor o la reducción de la angiogénesis en el tratamiento del cáncer de próstata. En determinadas realizaciones, el cáncer es cáncer de próstata refractario a las hormonas.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer de pulmón. Las composiciones de la invención pueden ser efectivas para tratar el cáncer de pulmón, y se ha demostrado que las HDAC están reguladas positivamente en el cáncer de pulmón [35]. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del tamaño del tumor, la reducción del crecimiento del tumor o la reducción de la angiogénesis en el tratamiento del cáncer de pulmón. En realizaciones preferidas, el cáncer es carcinoma de pulmón. En realizaciones preferidas, las composiciones son para uso en el tratamiento del cáncer de pulmón con altos niveles de expresión de HDAC2. Se ha demostrado que ciertos tejidos de cáncer de pulmón expresan abundantemente HDAC2. La inactivación de HDAC2 reprime el crecimiento de células de cáncer de pulmón. Se ha demostrado que los altos niveles de actividad de HDAC2 reprimen la actividad de p53 [36]. El p53 activo detiene la división celular y finalmente conduce al inicio de la apoptosis. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención que inhiben HDAC2 son para uso en el tratamiento de cánceres de pulmón con niveles elevados de actividad de HDAC2.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer de hígado. Las composiciones de la invención pueden ser efectivas para tratar el cáncer de hígado, y se ha demostrado que las HDAC están reguladas positivamente en el cáncer de hígado [37]. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en la reducción del tamaño del tumor, la reducción del crecimiento del tumor o la reducción de la angiogénesis en el tratamiento del cáncer de hígado. En realizaciones preferidas, el cáncer es hepatoma (carcinoma hepatocelular). En determinadas formas de realización, el cáncer es un tumor de grado bajo o en estadio temprano.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del carcinoma. Las composiciones de la invención pueden ser particularmente efectivas para tratar el carcinoma. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención del cáncer no-inmunogénico. Las composiciones de la invención pueden ser efectivas para tratar cánceres no inmunogénicos.

En realizaciones adicionales, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda, carcinoma adrenocortical, carcinoma de células basales, cáncer de vías biliares, cáncer de vejiga, tumor óseo, osteosarcoma/histiocitoma fibroso maligno, glioma del tronco encefálico, tumor cerebral, astrocitoma cerebeloso, glioma maligno/astrocitoma cerebral, ependimoma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriales, cáncer de mama, bronquios adenomas/carcinoides, Linfoma de Burkitt, tumor carcinoide, cáncer de cuello uterino, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, trastornos mieloproliferativos crónicos, cáncer de colon, linfoma cutáneo de células T, cáncer de endometrio, ependimoma, cáncer de esófago, sarcoma de Ewing, melanoma intraocular, retinoblastoma, cáncer de vesícula biliar cáncer, tumor carcinoide gastrointestinal, tumor del estroma gastrointestinal (GIST), tumor de células germinales, glioma, vías visuales e hipotalámicas infantiles, linfoma de Hodgkin, melanoma, carcinoma de células de los islotes, sarcoma de Kaposi, cáncer de células renales, cáncer de laringe, leucemias, linfomas, mesotelioma, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de orofaringe, osteosarcoma, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de paratiroides, cáncer de faringe, adenoma pituitario, neoplasia de células plasmáticas, cáncer de próstata, carcinoma de células renales, retinoblastoma, sarcoma, cáncer de testículo, cáncer de tiroides o uterino cáncer.

Las composiciones de la invención pueden ser particularmente efectivas cuando se usan en combinación con otros agentes terapéuticos. Los efectos inhibidores de HDAC de las composiciones de la invención pueden ser eficaces cuando se combinan con agentes anticancerosos más directos. Por tanto, en determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus y un agente anticanceroso. En realizaciones preferidas, el agente anticanceroso es un inhibidor de puntos de control inmunológico, una inmunoterapia con anticuerpos dirigidos, una terapia con células CAR-T, un virus oncolítico o un fármaco citostático. En realizaciones preferidas, la composición comprende un agente anticancerígeno seleccionado del grupo que consiste en: Yervoy (ipilimumab, BMS); Keytruda (pembrolizumab, Merck); Opdivo (nivolumab, BMS); MEDI4736 (AZ/MedImmune); MPDL3280A (Roche/Genentech); Tremelimumab (AZ/MedImmune); CT-011 (pidilizumab, CureTech); BMS-986015 (lirilumab, BMS); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MSB-0010718C (Merck); PF-05082566 (Pfizer); MEDI6469 (AZ/MedImmune); BMS-986016 (BMS); BMS-663513 (urelumab, BMS); IMP321 (Prima Biomed); LAG525 (Novartis); ARGX-110 (arGEN-X); PF-05082466 (Pfizer); CDX-1127 (varlilumab; CellDex Therapeutics); TRX-518 (GITR Inc.); MK-4166 (Merck); JTX-2011 (Jounce Therapeutics); ARGX-115 (arGEN-X); NLG-9189 (indoximod, NewLink Genetics); INCB024360 (Incyte); IPH2201 (Innate Immotherapeutics/AZ); NLG-919 (NewLink Genetics); anti-VISTA (JnJ); Epacadostat (INCB24360, Incyte); F001287 (Flexus/BMS); CP 870893 (Universidad de Pensilvania); MGA271 (Macrogenix); Emactuzumab (Roche/Genentech); Galunisertib (Eli Lilly); Ulocuplumab (BMS); BKT140/BL8040 (Biokine Therapeutics); Bavituximab (Peregrine Pharmaceuticals); C^c 90002 (Celgene); 852A (Pfizer); VTX-2337 (VentiRx Pharmaceuticals); IMO-2055 (Hybridon, Idera Pharmaceuticals); LY2157299 (Eli Lilly); EW-7197 (Universidad Ewha Women, Korea); Vemurafenib (Plexxikon); Dabrafenib (Genentech/GSK); Bm S-777607 (BmS); BLZ945 (Centro del Cáncer Memorial Sloan-Kettering); Unituxin (dinutuximab, United Therapeutics Corporation); Blincyto (blinatumomab, Amgen); Cyramza (ramucirumab, Eli Lilly); Gazyva (obinutuzumab, Roche/Biogen); Kadcyla (adotrastuzumab emtansine, Roche/Genentech); Perjeta (pertuzumab, Roche/Genentech); Adcetris (brentuximab vedotin, TakedalMillennium); Arzerra (ofatumumab, ^g S^k ); Vectibix (panitumumab, Amgen); Avastin (bevacizumab, Roche/Genentech); Erbitux (cetuximab, BMS/Merck); Bexxar (tositumomab-I131, GSK); Zevalin (ibritumomab tiuxetan, Biogen); Campath (alemtuzumab, Bayer); Mylotarg (gemtuzumab ozogamicin, Pfizer); Herceptin (trastuzumab, Roche/Genentech); Rituxan (rituximab, Genentech/Biogen); volociximab (Abbvie); Enavatuzumab (Abbvie); ABT-414 (Abbvie); Elotuzumab (Abbvie/BMS); ALX-0141 (Ablynx); Ozaralizumab (Ablynx); Actimab-C (Actinium); Actimab-P (Actinium); Milatuzumab-dox (Actinium); Emab-SN-38 (Actinium); Naptumonmab estafenatox (Active Biotech); AFM13 (Affimed); AFM11 (Affimed); AGS-16C3F (Agensys); AGS-16M8F (Agensys); AGS-22ME (Agensys); AGS-15ME (Agensys); GS-67E (Agensys); ALXN6000 (samalizumab, Alexion); ALT-836 (Altor Bioscience); ALT-801 (Altor Bioscience); ALT-803 (Altor Bioscience); AMG780 (Amgen); a Mg 228 (Amgen); AMG820 (Amgen); Am G172 (Amgen); AMG595 (Amgen); AMG110 (Amgen); AMG232 (adecatumumab, Amgen); AMG211 (Amgen/MedImmune); BAY20-10112 (Amgen/Bayer); Rilotumumab (Amgen); Denosumab (Amgen); AMP-514 (Amgen); MEDI575 (AZ/MedImmune); MEDI3617 (AZ/MedImmune); MEDI6383 (AZ/MedImmune); MEDI551 (AZ/MedImmune); Moxetumomab pasudotox (AZ/MedImmune); MEDI565 (AZ/MedImmune); MEDI0639 (AZ/MedImmune); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MEDI562 (AZ/MedImmune); AV-380 (AVEO); AV203 (AVEO); AV299 (AVEO); BAY79-4620 (Bayer); Anetumab ravtansine (Bayer); vantictumab (Bayer); BAY94-9343 (Bayer); Sibrotuzumab (Boehringer Ingleheim); BI-836845 (Boehringer Ingleheim); B-701 (BioClin); BIIB015 (Biogen); Obinutuzumab (Biogen/Genentech); BI-505 (Bioinvent); BI-1206 (Bioinvent); TB-403 (Bioinvent); BT-062 (Biotest) BIL-010t (Biosceptre); MDX-1203 (BMS); MDX-1204 (BMS); Necitumumab (BMS); CAN-4 (Cantargia AB); CDX-011 (Celldex); CDX1401 (Celldex); CDX301 (Celldex); U3-1565 (Daiichi Sankyo); patritumab (Daiichi Sankyo); tigatuzumab (Daiichi Sankyo); nimotuzumab (Daiichi Sankyo); DS-8895 (Daiichi Sankyo); DS-8873 (Daiichi Sankyo); DS-5573 (Daiichi Sankyo); MORab-004 (Eisai); MORab-009 (Eisai); MORab-003 (Eisai); MORab-066 (Eisai); LY3012207 (Eli Lilly); LY2875358 (Eli Lilly); LY2812176 (Eli Lilly); LY3012217(Eli Lilly); LY2495655 (Eli Lilly); LY3012212 (Eli Lilly); LY3012211 (Eli Lilly); LY3009806 (Eli Lilly); cixutumumab (Eli Lilly); Flanvotumab (Eli Lilly); IMC-TR1 (Eli Lilly); Ramucirumab (Eli Lilly); Tabalumab (Eli Lilly); Zanolimumab (Emergent Biosolution); Fg -3019 (FibroGen); FPA008 (Five Prime Therapeutics); FP-1039 (Five Prime Therapeutics); FPA144 (Five Prime Therapeutics); catumaxomab (Fresenius Biotech); IMAB362 (Ganymed); IMAB027 (Ganymed); HuMax-CD74 (Genmab); HuMax-TFADC (Genmab); GS-5745 (Gilead); GS-6624 (Gilead); OMP-21M18 (demcizumab, GSK); mapatumumab (GSK); Im Gn289 (ImmunoGen); IMGN901 (ImmunoGen); IMGN853 (ImmunoGen); IMGN529 (ImmunoGen); I^m M^u -130 (Immunomedics); milatuzumab-dox (Immunomedics); IMMU-115 (Immunomedics); IMMU-132 (Immunomedics); IMMU-106 (Immunomedics); IMMU-102 (Immunomedics); Epratuzumab (Immunomedics); Clivatuzumab (Immunomedics); IPH41 (Innate Immunotherapeutics); Daratumumab (Janssen/Genmab); CNTO-95 (Intetumumab, Janssen); CNTO-328 (siltuximab, Janssen); KB004 (KaloBios); mogamulizumab (Kyowa Hakko Kirrin); KW-2871 (ecromeximab, Life Science); Sonepcizumab (Lpath); Margetuximab (Macrogenics); Enoblituzumab (Macrogenics); MGD006 (Macrogenics); MGF007 (Macrogenics); MK-0646 (dalotuzumab, Merck); MK-3475 (Merck); Sym004 (Symphogen/Merck Serono); DI17E6 (Merck Serono); MOR208 (Morphosys); Mo R202 (Morphosys); Xmab5574 (Morphosys); BPC-1C (ensituximab, Precision Biologics); TAS266 (Novartis); ^lF^a 102 (Novartis); BHQ880 (Novartis/Morphosys); QGE031 (Novartis); HCD122 (lucatumumab, Novartis); LJM716 (Novartis); ^a T355 (Novartis); OMP-21 M18 (Demcizumab, OncoMed); OMP52M51 (Oncomed/GSK); OMP-59R5 (Oncomed/GSK); vantictumab (Oncomed/Bayer); CMC-544 (inotuzumab ozogamicin, Pfizer); PF-03446962 (Pfizer); PF-04856884 (Pfizer); PSMA-ADC (Progenics); REGN1400 (Regeneron); REGN910 (nesvacumab, Regeneron/Sanofi); REGN421 (enoticumab, Regeneron/Sanofi); RG7221, RG7356, RG7155, RG7444, RG7116, RG7458, RG7598, RG7599, RG7600, RG7636, RG7450, RG7593, RG7596, DCDS3410A, RG7414 (parsatuzumab), RG7160 (imgatuzumab), RG7159 (obintuzumab), RG7686, RG3638 (onartuzumab), RG7597 (Roche/Genentech); SAR307746 (Sanofi); SAR566658 (Sanofi); SAR650984 (Sanofi); SAR153192 (Sanofi); SAR3419 (Sanofi); SAR256212 (Sanofi), SGN-LIV1A (lintuzumab, Seattle Genetics); SGN-CD33A (Seattle Genetics); Sg N-75 (vorsetuzumab mafodotin, Seattle Genetics); SGN-19A (Seattle Genetics) SGN-CD70A (Seattle Genetics); SEA-CD40 (Seattle Genetics); ibritumomab tiuxetan (Spectrum); MLN0264 (Takeda); ganitumab (Takeda/Amgen); CEP-37250 (Teva); TB-403 (Thrombogenic); VB4-845 (Viventia); Xmab2512 (Xencor); Xmab5574 (Xencor); nimotuzumab (YM Biosciences); Carlumab (Janssen); NY-ESO TCR (Adaptimmune); MAGE-A-10 TCR (Adaptimmune); CTL019 (Novartis); JcAr015 (Juno Therapeutics); KTE-C19 CAR (Kite Pharma); UCART19 (Cellectis); ^b P^x -401 (Bellicum Pharmaceuticals); BPX-601 (Bellicum Pharmaceuticals); ATTCK20 (Unum Therapeutics); CAR-NKG2D (Celyad); Onyx-015 (Onyx Pharmaceuticals); H101 (Shanghai Sunwaybio); DnX-2401 (DNAtrix); v Cn-01 (VCN Biosciences); Colo-Adl (PsiOxus Therapeutics); ProstAtak (Advantagene); Oncos-102 (Oncos Therapeutics); CG0070 (Cold Genesys); Pexa-vac (JX-594, Jennerex Biotherapeutics); GL-ONC1 (Genelux); T-VEC (Amgen); G207 (Medigene); HF10 (Takara Bio); SEPREHVIR (HSV1716, Virttu Biologics); OrienX010 (OrienGene Biotechnology); Reolysin (Oncolytics Biotech); SW-001 (Neotropix); Cacatak (CVA21, Viralytics); Alimta (Eli Lilly), cisplatin, oxaliplatin, irinotecan, ácido folínico, methotrexate, cyclophosphamide, 5-fluorouracil, Zykadia (Novartis), Tafinlar (GSK), Xalkori (Pfizer), Iressa (AZ), Gilotrif (Boehringer Ingelheim), Tarceva (Astellas Pharma), Halaven (Eisai Pharma), Veliparib (Abbvie), AZD9291 (AZ), Alectinib (Chugai), LDK378 (Novartis), Genetespib (Synta Pharma), Tergenpumatucel-L (NewLink Genetics), GV1001 (Kael-GemVax), Tivantinib (ArQule); Cytoxan (BMS); Oncovin (Eli Lilly); Adriamycin (Pfizer); Gemzar (Eli Lilly); Xeloda (Roche); Ixempra (BMS); Abraxane (Celgene); Trelstar (Debiopharm); Taxotere (Sanofi); Nexavar (Bayer); IMMU-132 (Immunomedics); E7449 (Eisai); Thermodox (Celsion); Cometriq (Exellxis); Lonsurf (Taiho Pharmaceuticals); Camptosar (Pfizer); UFT (Taiho Pharmaceuticals); y TS-1 (Taiho Pharmaceuticals).

Enfermedades neurodegenerativas

- Enfermedad de Alzheimer y demencia.

La acumulación aberrante de tau hiperfosforilada es una característica de las tauopatías neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer. La reducción de la actividad de HDAC puede reducir los niveles de tau hiperfosforilada y aliviar los síntomas de los trastornos neurológicos provocados por la tau [38]. Por tanto, en determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de tauopatías neurodegenerativas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

En el DSM-5, el término demencia fue reemplazado por los términos trastorno neurocognitivo mayor y trastorno neurocognitivo leve. El trastorno neurocognitivo es una clase heterogénea de enfermedades psiquiátricas. El trastorno neurocognitivo más común es la enfermedad de Alzheimer, seguida de demencias vasculares o formas mixtas de las dos. Otras formas de trastornos neurodegenerativos (p. ej., enfermedad de cuerpos de Lewy, demencia frontotemporal, demencia de Parkinson, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Huntington y síndrome de Wernicke-Korsakoff) se acompañan de demencia.

La enfermedad de Alzheimer y la demencia también se caracterizan por la pérdida neuronal, por lo que los efectos neuroprotectores y neuroproliferativos mostrados en los ejemplos de las composiciones de la invención indican que pueden ser útiles para tratar o prevenir estas afecciones.

Los criterios sintomáticos para la demencia según el DSM-5 son evidencia de un deterioro cognitivo significativo de un nivel previo de desempeño en uno o más dominios cognitivos seleccionados de: aprendizaje y memoria; idioma; función ejecutiva; atención compleja; cognición perceptivo-motora y social. Los déficits cognitivos deben interferir con la independencia en las actividades cotidianas. Además, los déficits cognitivos no ocurren exclusivamente en el contexto de un delirio y no se explican mejor por otro trastorno mental (por ejemplo, MDD o esquizofrenia).

Además del síntoma principal, los sujetos con trastornos neurodegenerativos muestran síntomas conductuales y psiquiátricos que incluyen agitación, agresión, depresión, ansiedad, apatía, psicosis y alteraciones del ciclo de sueño-vigilia.

Los trastornos neurodegenerativos pueden desarrollarse o persistir debido a la disfunción del eje microbiotaintestino-cerebro. Por tanto, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o prevención de trastornos neurodegenerativos en un sujeto. En realizaciones preferidas, el trastorno neurodegenerativo es enfermedad de Alzheimer. En otras realizaciones, el trastorno neurodegenerativo se selecciona de demencias vasculares; enfermedad de Alzheimer de forma mixta y demencia vascular; enfermedad con cuerpos de Lewy; demencia frontotemporal; demencia de Parkinson; enfermedad de Creutzfeldt-Jakob; enfermedad de Huntington; y síndrome de Wernicke-Korsakoff.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas de trastornos neurodegenerativos en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición del deterioro cognitivo en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran el nivel de rendimiento de un sujeto con trastornos neurodegenerativos en uno o más dominios cognitivos seleccionados entre: aprendizaje y memoria; idioma; función ejecutiva; atención compleja; cognición perceptivo-motora y social. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la aparición de uno o más síntomas conductuales y psiquiátricos asociados con trastornos neurodegenerativos seleccionados entre agitación, agresión, depresión, ansiedad, apatía, psicosis y alteraciones del ciclo sueño-vigilia.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la enfermedad sintomática mediante la intervención en mecanismos patogénicos sospechosos en una etapa preclínica. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la modificación de la enfermedad, con ralentización o detención de la progresión de los síntomas. En algunas realizaciones, la ralentización o la detención de la progresión de los síntomas se correlaciona con la evidencia del retraso del proceso neuropatológico subyacente. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran los síntomas de los trastornos neurodegenerativos que comprenden una mejora cognitiva y funcional mejorada. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran los síntomas conductuales y psiquiátricos de la demencia (BPSD). En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran la capacidad de un sujeto con trastorno neurodegenerativo para realizar actividades cotidianas.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran tanto la cognición como el funcionamiento en un sujeto con enfermedad de Alzheimer. En algunas realizaciones, la composición de la invención mejora el criterio de valoración cognitivo en un sujeto con enfermedad de Alzheimer. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran el criterio de valoración funcional en un sujeto con enfermedad de Alzheimer. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran el criterio de valoración cognitivo y funcional en un sujeto con enfermedad de Alzheimer. En aún otras realizaciones preferidas, las composiciones de la invención mejoran la respuesta clínica global (el criterio de valoración global) en un sujeto con enfermedad de Alzheimer.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas de los trastornos neurodegenerativos según una prueba sintomática o de diagnóstico. En ciertas realizaciones, las pruebas para evaluar la mejoría sintomática de la enfermedad de Alzheimer (y otros trastornos neurodegenerativos) se seleccionan de cognitivas objetivas, actividades de la vida diaria, evaluación global del cambio, pruebas de calidad de vida relacionadas con la salud y pruebas que evalúan síntomas conductuales y psiquiátricos de trastornos neurodegenerativos.

En determinadas realizaciones, las pruebas cognitivas objetivas para la evaluación de la mejoría sintomática utilizan la subescala cognitiva de la Escala de evaluación de la enfermedad de Alzheimer (ADAS-cog) y la escala ADAS clásica. En determinadas realizaciones, la mejora sintomática de la cognición se evalúa utilizando la batería de pruebas neurofisiológicas para su uso en la enfermedad de Alzheimer (NTB).

En algunas realizaciones, la prueba de evaluación global del cambio utiliza la escala de Impresión Clínica Global -Mejora Global (CGI-I) para evaluar los trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, la escala global es la Impresión de cambio más basada en entrevistas del médico (CIBIC-plus). En algunas realizaciones, la escala global es la Impresión Global del Cambio del Médico de la Unidad de Estudio Cooperativo de la Enfermedad de Alzheimer (ADCS-Cg IC).

En determinadas realizaciones, las medidas de calidad de vida relacionadas con la salud son la QOL relacionada con la enfermedad de Alzheimer (ADRQL) y la QOL-enfermedad de Alzheimer (QOL-AD).

En determinadas realizaciones, las pruebas que evalúan síntomas conductuales y psiquiátricos de trastornos neurodegenerativos se seleccionan de la Escala de Valoración de Patología Conductual en la enfermedad de Alzheimer (BEHAVE-AD); la Escala de Calificación Conductual para la Demencia (BRSD); el Inventario Neuropsiquiátrico (NPI); y el Inventario de Agitación de Cohen-Mansfield (CMAI).

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son particularmente efectivas para prevenir, reducir o aliviar los trastornos de ansiedad cuando se usan en combinación con otra terapia para tratar los trastornos neurodegenerativos. En determinadas realizaciones, tales terapias incluyen inhibidores de acetilcolinesterasa que incluyen donepezil (Aricept®), galantamina (Razadyne®) y rivastigmina (Exelon®) y memantina.

- Enfermedad de Parkinson

La enfermedad de Parkinson es una enfermedad neurodegenerativa común caracterizada neuropatológicamente por la degeneración de poblaciones heterogéneas de células neurales (células productoras de dopamina). El diagnóstico clínico de la enfermedad de Parkinson requiere bradicinesia y al menos uno de los siguientes síntomas centrales: temblor en reposo; rigidez muscular y deterioro de los reflejos posturales. Otros signos y síntomas que pueden estar presentes o desarrollarse durante la progresión de la enfermedad son alteraciones autonómicas (sialorrea, seborrea, estreñimiento, alteraciones de la micción, funcionamiento sexual, hipotensión ortostática, hiperhidrosis), alteraciones del sueño y alteraciones en el sentido del olfato o del sentido de la temperatura. La enfermedad de Parkinson es una enfermedad neurodegenerativa que puede desarrollarse o persistir debido a la actividad de HDAC. Por ejemplo, se ha demostrado que la actividad de HDAC regula la agregación y el depósito de filamentos proteicos intracelulares tóxicos que son un sello distintivo de enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson [39]. Se ha mostrado que la inhibición de la actividad de HDAC reduce los eventos de plegamiento de proteínas tóxicas en modelos de enfermedad de Parkinson. Por tanto, en realizaciones preferidas, las composiciones de la invención son para uso para tratar o prevenir la enfermedad de Parkinson en un sujeto.

En realizaciones preferidas adicionales, las composiciones de la invención son para uso en método para tratar o prevenir la enfermedad de Parkinson. Las composiciones de la invención pueden mejorar las funciones motoras y cognitivas en modelos de la enfermedad de Parkinson. El tratamiento con las composiciones puede modular la señalización en los sistemas nerviosos central, autónomo y entérico; puede modular la actividad de la vía del eje HPA; puede modular neuroendocrino y/o vías neuroinmunes; y puede modular los niveles de metabolitos comensales, marcadores inflamatorios y/o permeabilidad gastrointestinal de un sujeto, todos los cuales están implicados en la neuropatología de la enfermedad de Parkinson. En realizaciones preferidas, la invención proporciona una composición que comprende una cepa bacteriana de la especie Bariatricus massiliensis para su uso en un método de tratamiento o prevención de la enfermedad de Parkinson. Las composiciones que usan Bariatricus pueden ser particularmente efectivas para tratar la enfermedad de Parkinson. La composición puede comprender además un ácido orgánico.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas de la enfermedad de Parkinson. En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más de los síntomas de la enfermedad de Parkinson en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la bradicinesia en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian el temblor en reposo; rigidez muscular y/o deterioro del reflejo postural en un sujeto. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian uno o más síntomas asociados con la progresión de la enfermedad de Parkinson seleccionados entre alteraciones autonómicas (sialorrea, seborrea, estreñimiento, alteraciones de la micción, funcionamiento sexual, hipotensión ortostática, hiperhidrosis), alteraciones del sueño y alteraciones en el sentido del olfato o el sentido de la temperatura.

En realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian los síntomas depresivos comórbidos con la enfermedad de Parkinson. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la memoria verbal y/o funciones ejecutivas. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la atención, la memoria de trabajo, la fluidez verbal y/o la ansiedad.

En otras realizaciones preferidas, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las disfunciones cognitivas comórbidas con la enfermedad de Parkinson.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la hiperactividad o el comportamiento similar a la ansiedad comórbido con la enfermedad de Parkinson. Se ha mostrado que los modelos de ratones de la enfermedad de Parkinson exhiben hiperactividad. Ciertos modelos han indicado que la hiperactividad puede ser consecuencia de niveles desequilibrados de neurotransmisores en el cerebro o cambios funcionales en otras estructuras dentro del cerebro que preceden a la degeneración de las neuronas dopaminérgicas. Por tanto, las alteraciones del comportamiento, como la hiperactividad, pueden ser síntomas de la enfermedad de Parkinson que preceden a la aparición de las alteraciones motoras. Se ha mostrado que las composiciones de la invención reducen la hiperactividad en modelos de ratones de la enfermedad de Parkinson. Por tanto, en determinadas realizaciones, las composiciones de la invención pueden ser para uso en la prevención de alteraciones motoras en la enfermedad de Parkinson. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento o la prevención de alteraciones del comportamiento asociadas con la enfermedad de Parkinson.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la progresión de la enfermedad de Parkinson. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las complicaciones motoras posteriores. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian las fluctuaciones motoras tardías. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la pérdida neuronal. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas de la demencia de la enfermedad de Parkinson (PDD). En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian el deterioro de la función ejecutiva, atención y/o memoria de trabajo. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la neurotransmisión dopaminérgica. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención previenen, reducen o alivian la neurotransmisión dopaminérgica alterada.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas de la enfermedad de Parkinson según una escala sintomática o diagnóstica. En determinadas realizaciones, las pruebas para evaluar la mejora sintomática de la función motora en la enfermedad de Parkinson es la Escala Unificada de Valoración de la Enfermedad de Parkinson. En particular, UPDRS II considera la actividad de la vida diaria y UPDRS III considera el examen motor.

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran los síntomas asociados con el PDD según una prueba y/o escala sintomática o de diagnóstico. En determinadas realizaciones, la prueba o escala se selecciona de la Prueba de aprendizaje verbal de Hopkins - Revisada (HVLT-R); la prueba de interferencia de palabras y colores del sistema de funciones ejecutivas Delis-Kaplan (D-KEFS); la Escala de Calificación de Depresión de Hamilton (HAM-D 17; depresión); la Escala de Calificación de Ansiedad de Hamilton (HAM-A; ansiedad) y la Escala de Calificación de la Enfermedad de Parkinson Unificada (UPDRS; severidad de los síntomas de la PD).

En algunas realizaciones, las composiciones de la invención mejoran la escala de Impresión Clínica Global - Mejora Global (CGI-I) para evaluar trastornos psiquiátricos y neurológicos. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención muestran un efecto positivo sobre el deterioro social y ocupacional global del sujeto con la enfermedad de Parkinson.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de los trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica reducir o prevenir la pérdida de células dopaminérgicas en la sustancia nigra. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de los trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica reducir o prevenir la degeneración de neuronas dopaminérgicas en la sustancia nigra pars compacta. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de los trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica reducir o prevenir la degeneración de neuronas dopaminérgicas en la sustancia nigra pars compacta y la pérdida consecuente de sus fibras nerviosas de proyección en el cuerpo estriado. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica reducir o prevenir la pérdida de neuronas dopaminérgicas nigroestriatales.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se utilizan para tratar o prevenir trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica aumentar los niveles de dopamina. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica aumentar los niveles de DOPAC. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de prevención de trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson en un sujeto en el que dicho uso implica aumentar los niveles de dopamina y DOPAC. En determinadas formas de realización, la dopamina y/o los niveles de DOPAC aumentan en el cuerpo estriado.

Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención activan la activación de MAP2 (proteína 2 asociada a microtúbulos). MAP2 es un gen asociado con la diferenciación neuronal de MAP2 y se cree que es esencial para la formación de microtúbulos en neuritogénesis, por lo que las composiciones de la invención pueden ser particularmente útiles para tratar enfermedades neurodegenerativas. En algunas realizaciones, las composiciones de la invención son para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa, como la enfermedad de Alzheimer o la enfermedad de Parkinson, activando o aumentando los niveles de MAP2. Además, como MAP2 promueve el crecimiento de neuritas, que desempeñan un papel importante en la redistribución de neuronas dañadas y la sinaptogénesis, la expresión de MAP2 podría ir más allá de ser un marcador de diferenciación neuronal e indicar un "recableado neuronal" asociado con el resultado terapéutico de la enfermedad neuropatológica [22]. Los ejemplos demuestran que las composiciones de la invención modulan la expresión de varias proteínas en el cerebro. En particular, las composiciones de la invención aumentan la expresión de BDNF en el hipocampo y la corteza prefrontal. El BDNF es esencial para la plasticidad sináptica del adulto y la formación de recuerdos y se observa una disminución en los niveles de BDNF en pacientes con Alzheimer y Huntington. Por tanto, las composiciones de la invención son particularmente útiles para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y Huntington. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención aumentan la expresión de BDNF en el cerebro.

Modos de administración

Preferiblemente, las composiciones de la invención deben administrarse al tracto gastrointestinal para permitir el suministro a y/o colonización parcial o total del intestino con la cepa bacteriana de la invención. Generalmente, las composiciones de la invención se administran por vía oral, pero pueden administrarse por vía rectal, intranasal o por vía bucal o sublingual.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar como espuma, spray o gel. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención se pueden administrar como un supositorio, como un supositorio rectal, por ejemplo, en forma de aceite de teobroma (manteca de cacao), grasa dura sintética (p. ej., suppocire, witepsol), glicerogelatina, polietilenglicol o composición de glicerina de jabón.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención se administra al tracto gastrointestinal a través de un tubo, tal como un tubo nasogástrico, tubo orogástrico, tubo gástrico, tubo de yeyunostomía (tubo en J), gastrostomía endoscópica percutánea (PEG), o un puerto, tal como un puerto de la pared torácica que proporciona acceso al estómago, yeyuno y otros puertos de acceso adecuados.

Las composiciones de la invención pueden administrarse una vez o pueden administrarse secuencialmente como parte de un régimen de tratamiento. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención deben administrarse diariamente.

En determinadas realizaciones de la invención, el tratamiento según la invención se acompaña de la evaluación de la microbiota intestinal del paciente. El tratamiento puede repetirse si se administra y/o la colonización parcial o total con la cepa de la invención no se logra de manera que no se observe eficacia, o el tratamiento puede interrumpirse si el suministro y/o la colonización parcial o total tiene éxito y se observa eficacia.

En determinadas realizaciones, la composición de la invención se puede administrar a un animal preñado, por ejemplo, un mamífero como un ser humano para prevenir el desarrollo de una enfermedad inflamatoria o autoinmune en su hijo en el útero y/o después de que nazca.

Las composiciones de la invención pueden administrarse a un paciente que ha sido diagnosticado con una enfermedad o afección mediada por una actividad histona desacetilasa elevada, o que se ha identificado como en riesgo de una enfermedad o afección mediada por una actividad histona desacetilasa elevada. Las composiciones también se pueden administrar como medida profiláctica para prevenir el desarrollo de enfermedades o afecciones mediadas por una actividad elevada de histona desacetilasa en un paciente sano.

Las composiciones de la invención se pueden administrar a un paciente que se ha identificado que tiene una microbiota intestinal anormal. Por ejemplo, el paciente puede tener una colonización reducida o ausente por Bariatricus, y en particular por Bariatricus massiliensis.

Las composiciones de la invención se pueden administrar como un producto alimenticio, tal como un suplemento nutricional.

Generalmente, las composiciones de la invención son para el tratamiento de seres humanos, aunque pueden usarse para tratar animales, incluidos mamíferos monogástricos como aves de corral, cerdos, gatos, perros, caballos o conejos. Las composiciones de la invención pueden ser útiles para mejorar el crecimiento y el rendimiento de los animales. Si se administra a animales, se puede usar sonda oral.

Composiciones

La composición de la invención comprende bacterias. En realizaciones preferidas de la invención, la composición se formula en forma liofilizada. Por ejemplo, la composición de la invención puede comprender gránulos o cápsulas de gelatina, por ejemplo cápsulas de gelatina dura, que comprenden una cepa bacteriana de la invención.

Preferiblemente, la composición de la invención comprende bacterias liofilizadas. La liofilización de bacterias es un procedimiento bien establecido y la orientación pertinente está disponible, por ejemplo, en las referencias [40,,42]. Alternativamente, la composición de la invención puede comprender un cultivo bacteriano activo vivo.

En realizaciones preferidas, la composición de la invención se encapsula para permitir el suministro de la cepa bacteriana al intestino. La encapsulación protege la composición de la degradación hasta el suministro en la ubicación objetivo mediante, por ejemplo, la ruptura con estímulos químicos o físicos como presión, actividad enzimática o desintegración física, que pueden desencadenarse por cambios en el pH. Puede usarse cualquier método de encapsulación apropiado. Las técnicas de encapsulación ejemplares incluyen atrapamiento dentro de una matriz porosa, unión o adsorción sobre superficies sólidas del portador, autoagregación por floculación o con agentes reticulantes y contención mecánica detrás de una membrana microporosa o microcápsula. Orientación sobre encapsulación que puede ser útil para preparar composiciones de la invención está disponible en, por ejemplo, referencias [43] y [44].

La composición se puede administrar por vía oral y puede estar en forma de comprimido, cápsula o polvo. Se prefieren los productos encapsulados porque los Bariatricus son anaerobios. Se pueden incluir otros ingredientes (como la vitamina C, por ejemplo) como captadores de oxígeno y sustratos prebióticos para mejorar la administración y/o colonización y supervivencia parcial o total in vivo. Alternativamente, la composición probiótica de la invención puede administrarse por vía oral como alimento o producto nutricional, tal como leche o producto lácteo fermentado a base de suero, o como producto farmacéutico.

La composición se puede formular como probiótico.

Una composición de la invención incluye una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana de la invención. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana es suficiente para ejercer un efecto beneficioso sobre un paciente. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una cepa bacteriana puede ser suficiente para dar como resultado el suministro a y/o colonización parcial o total del intestino del paciente.

Una dosis diaria adecuada de la bacteria, por ejemplo para un ser humano adulto, puede ser de aproximadamente 1 x 103 a aproximadamente 1 x 1011 unidades formadoras de colonias (UFC); por ejemplo, de aproximadamente 1 x 107 a aproximadamente 1 x 1010 UFC; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 106 a aproximadamente 1 x 1010 UFC; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 107 a aproximadamente 1 x 1011 UFC; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1010 UFC; en otro ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1011 UFC.

En determinadas realizaciones, la dosis de bacterias es de al menos 109 células por día, tal como al menos 1010, al menos 1011 o al menos 1012 células por día.

En determinadas realizaciones, la composición contiene la cepa bacteriana en una cantidad de aproximadamente 1 x 106 a aproximadamente 1 x 1011 UFC/g, con respecto al peso de la composición; por ejemplo, de aproximadamente 1 x 108 a aproximadamente 1 x 1010 UFC/g. La dosis puede ser, por ejemplo, 1 g, 3 g, 5 g y 10 g. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la cantidad de cepa bacteriana es de aproximadamente 1 x 103 a aproximadamente 1 x 1011 unidades formadoras de colonias por gramo con respecto al peso de la composición.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la composición se administra a una dosis de entre 500 mg y 1000 mg, entre 600 mg y 900 mg, entre 700 mg y 800 mg, entre 500 mg y 750 mg o entre 750 mg y 1000 mg. En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la bacteria liofilizada en la composición farmacéutica se administra a una dosis de entre 500 mg y 1000 mg, entre 600 mg y 900 mg, entre 700 mg y 800 mg, entre 500 mg y 750 mg o entre 750 mg y 1000 mg.

Normalmente, un probiótico, como la composición de la invención, se combina opcionalmente con al menos un compuesto prebiótico adecuado. Un compuesto prebiótico suele ser un carbohidrato no digerible, como un oligo o polisacárido, o un alcohol de azúcar, que no se degrada ni se absorbe en el tracto digestivo superior. Los prebióticos conocidos incluyen productos comerciales tales como inulina y transgalactooligosacáridos.

En determinadas realizaciones, la composición probiótica de la presente invención incluye un compuesto prebiótico en una cantidad de aproximadamente 1 a aproximadamente 30% en peso, con respecto al peso total de la composición (p. ej., de 5 a 20% en peso). Los carbohidratos se pueden seleccionar del grupo que consiste en: fructo-oligosacáridos (o FOS), fructo-oligosacáridos de cadena corta, inulina, isomalt-oligosacáridos, pectinas, xilooligosacáridos (o XOS), quitosano-oligosacáridos (o COS), beta -glucanos, almidones resistentes y modificados con goma de cultivo, polidextrosa, D-tagatosa, fibras de acacia, algarroba, avena y fibras de cítricos. En un aspecto, los prebióticos son los fructooligosacáridos de cadena corta (por simplicidad mostrados a continuación en el presente documento como FOSs-cc); dichos FOSs-cc no son carbohidratos digeribles, generalmente obtenidos por conversión del azúcar de remolacha y que incluyen una molécula de sacarosa a la que se unen tres moléculas de glucosa.

Las composiciones de la invención pueden comprender excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Se pueden encontrar ejemplos de tales excipientes adecuados en la referencia [45]. Se conocen en la técnica farmacéutica portadores o diluyentes aceptables para uso terapéutico y se describen, por ejemplo, en la referencia [46]. Ejemplos de portadores adecuados incluyen lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol, sorbitol y similares. Ejemplos de diluyentes adecuados incluyen etanol, glicerol y agua. El diluyente, excipiente o portador farmacéutico se puede seleccionar conforme a la vía de administración deseada y la práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender como, o además de, el vehículo, excipiente o diluyente cualquier aglutinante(s), lubricante(s), agente(s) de suspensión, agente(s) de revestimiento, agente(s) solubilizantes adecuados. Ejemplos de aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa, lactosa anhidra, lactosa en flujo libre, beta-lactosa, endulzantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa y polietilenglicol. Ejemplos de lubricantes adecuados incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. En la composición farmacéutica se pueden proporcionar conservantes, estabilizadores, colorantes e incluso agentes aromatizantes. Ejemplos de conservantes incluyen benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido p-hidroxibenzoico. También se pueden usar antioxidantes y agentes de suspensión.

Las composiciones de la invención se pueden formular como un producto alimenticio. Por ejemplo, un producto alimenticio puede proporcionar un beneficio nutricional además del efecto terapéutico de la invención, como en un suplemento nutricional. De manera similar, se puede formular un producto alimenticio para mejorar el sabor de la composición de la invención o para hacer que la composición sea más atractiva para consumir al ser más similar a un artículo alimenticio común, en lugar de a una composición farmacéutica. En determinadas realizaciones, la composición de la invención se formula como un producto a base de leche. El término "producto a base de leche" significa cualquier producto a base de leche o suero líquido o semisólido que tenga un contenido de grasa variable. El producto a base de leche puede ser, p. ej., leche de vaca, leche de cabra, leche de oveja, leche desnatada, leche entera, leche recombinada de leche en polvo y suero sin ningún procesamiento, o un producto procesado, como yogur, leche cuajada, cuajada, leche agria, leche entera agria, leche de mantequilla y otros productos lácteos agrios. Otro grupo importante incluye las bebidas lácteas, como las bebidas de suero, leches fermentadas, leches condensadas, leches para lactantes o bebés; leches aromatizadas, helados; alimentos que contienen leche, como dulces.

En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención contienen una única cepa o especie bacteriana y no contienen ninguna otra cepa o especie bacteriana. Tales composiciones pueden comprender sólo cantidades mínimas o biológicamente irrelevantes de otras cepas o especies bacterianas. Tales composiciones pueden ser un cultivo sustancialmente exento de otras especies de organismos. En determinadas realizaciones, las composiciones de la invención consisten en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 cepas o especies bacterianas. En determinadas realizaciones, las composiciones consisten en 1 a 10, preferiblemente de 1 a 5 cepas o especies bacterianas.

Las composiciones para su uso de acuerdo con la invención pueden requerir o no aprobación de comercialización.

En algunos casos, la cepa bacteriana liofilizada se reconstituye antes de la administración. En algunos casos, la reconstitución se realiza mediante el uso de un diluyente descrito en el presente documento.

Las composiciones de la invención pueden comprender excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: una cepa bacteriana de la invención; y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; en el que la cepa bacteriana está en una cantidad suficiente para tratar un trastorno cuando se administra a un sujeto que lo necesita; y en el que el trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o la enfermedad de Parkinson, lesión cerebral, como accidente cerebrovascular, trastornos del comportamiento, como el trastorno por déficit de atención con hiperactividad, enfermedades inflamatorias del intestino, como la enfermedad de Crohn, cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende: una cepa bacteriana de la invención; y un excipiente, vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; en el que la cepa bacteriana está en una cantidad suficiente para tratar o prevenir una enfermedad o afección mediada por una actividad HDAC elevada. En realizaciones preferidas, dicha enfermedad o afección se selecciona del grupo que consiste en enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o la enfermedad de Parkinson, lesión cerebral, como accidente cerebrovascular, trastornos del comportamiento, como el trastorno por déficit de atención e hiperactividad, enfermedades inflamatorias del intestino, como la enfermedad de Crohn, cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la cantidad de cepa bacteriana es de aproximadamente 1 x 103 a aproximadamente 1 x 1011 unidades formadoras de colonias por gramo con respecto al peso de la composición.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la composición se administra en una dosis de 1 g, 3 g, 5 g o 10 g.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que la composición se administra mediante un método seleccionado del grupo que consiste en oral, rectal, subcutáneo, nasal, bucal y sublingual.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un vehículo seleccionado del grupo que consiste en lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, manitol y sorbitol.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un diluyente seleccionado del grupo que consiste en etanol, glicerol y agua.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en almidón, gelatina, glucosa, lactosa anhidra, lactosa de flujo libre, beta-lactosa, edulcorante de maíz, goma arábiga, tragacanto, alginato de sodio, carboximetil celulosa, polietilenglicol, oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio y cloruro de sodio.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende además al menos uno de entre un conservante, un antioxidante y un estabilizador.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, que comprende un conservante seleccionado del grupo que consiste en benzoato de sodio, ácido sórbico y ésteres de ácido phidroxibenzoico.

En determinadas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que dicha cepa bacteriana está liofilizada.

En ciertas realizaciones, la invención proporciona la composición farmacéutica anterior, en la que cuando la composición se almacena en un recipiente sellado a aproximadamente 4 °C o aproximadamente 25 °C y el recipiente se coloca en una atmósfera que tiene 50% de humedad relativa, al menos 80% de la cepa bacteriana medida en unidades formadoras de colonias, permanece después de un período de al menos aproximadamente: 1 mes, 3 meses, 6 meses, 1 año, 1,5 años, 2 años, 2,5 años o 3 años.

Métodos de cultivo

Las cepas bacterianas para su uso en la presente invención se pueden cultivar usando técnicas de microbiología estándar como se detalla, por ejemplo, en las referencias [47,,49].

El medio sólido o líquido usado para el cultivo puede ser agar YCFA o medio YCFA. El medio YCFA puede incluir (por 100 ml, valores aproximados): Casitone (1,0 g), extracto de levadura (0,25 g), NaHCO3 (0,4 g), cisteína (0,1 g), K2HPO4 (0,045 g), KH2PO4 (0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4 (0,09 g), MgSO4 • 7H2O (0,009 g), CaCl2 (0,009 g), resazurina (0,1 mg), hemina (1 mg), biotina (1 pg), cobalamina (1 pg), ácido p-aminobenzoico (3 pg), ácido fólico (5 pg) y piridoxamina (15 pg).

Cepas bacterianas para su uso en composiciones de vacunas

Los inventores han identificado que las cepas bacterianas de la invención son útiles para tratar o prevenir enfermedades o afecciones mediadas por HDAC. Es probable que esto sea el resultado del efecto que las cepas bacterianas de la invención tienen sobre el sistema inmunológico del huésped. Por lo tanto, las composiciones de la invención también pueden ser útiles para prevenir enfermedades o afecciones mediadas por HDAC, cuando se administran como composiciones de vacuna. En ciertas de tales realizaciones, las cepas bacterianas de la invención se pueden matar, inactivar o atenuar. En ciertas de tales realizaciones, las composiciones pueden comprender un adyuvante de vacuna. En determinadas realizaciones, las composiciones son para administración mediante inyección, tal como mediante inyección subcutánea.

General

La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, métodos convencionales de química, bioquímica, biología molecular, inmunología y farmacología, dentro de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la bibliografía. Ver, p. ej., referencias [50] y [51,57], etc.

El término "que comprende" abarca "que incluye" así como "que consiste", p. ej., una composición "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional, p. ej,. X + Y.

El término "aproximadamente" en relación con un valor numérico x es opcional y significa, por ejemplo, x+10%. La palabra "sustancialmente" no excluye "completamente", p. ej., una composición que está "sustancialmente libre" de Y puede estar completamente libre de Y. Cuando sea necesario, la palabra "sustancialmente" puede omitirse de la definición de la invención.

Las referencias a un porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias de nucleótidos significan que, cuando se alinean, ese porcentaje de nucleótidos es el mismo al comparar las dos secuencias. Este alineamiento y el porcentaje de homología o identidad de secuencia se pueden determinar usando programas de software conocidos en la técnica, por ejemplo los descritos en la sección 7.7.18 de la ref. [58]. Una alineación preferida se determina mediante el algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman usando una búsqueda de huecos afines con una penalización por apertura de huecos de 12 y una penalización por extensión de huecos de 2, matriz BLOSUM de 62. El algoritmo de búsqueda de homología de Smith-Waterman se describe en la ref. [59].

A menos que se indique específicamente, un proceso o método que comprende numerosos pasos puede comprender pasos adicionales al principio o al final del método, o puede comprender etapas intermedias adicionales. Además, las etapas se pueden combinar, omitir o realizar en un orden alternativo, si es apropiado.

Se describen en el presente las realizaciones preferidas de la invención. Se apreciará que las características especificadas en cada realización pueden combinarse con otras características especificadas, para proporcionar realizaciones adicionales. En particular, las realizaciones destacadas en el presente documento como adecuadas, típicas o preferidas pueden combinarse entre sí (excepto cuando son mutuamente excluyentes).

MODO(S) DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN

Ejemplo 1 - Eficacia de las bacterias sobre la actividad de la histona desacetilasa

Introducción

Los inventores buscaron investigar la eficacia de la cepa 43042 de Bariatricus massiliensis y sus metabolitos sobre la inhibición de HDAC.

Materiales y métodos

Recolección de sobrenadante libre de células y cultivo bacteriano

Se cultivaron anaeróbicamente cultivos puros de bacterias 43042 en caldo YCFA hasta que alcanzaron su fase de crecimiento estacionario. Los cultivos se centrifugaron a 5.000 x g durante 5 minutos y el sobrenadante libre de células (CFS) se filtró usando un filtro de 0,2 pM (Millipore, UK). Alícuotas de 1 mL del CFS se almacenaron a -80 °C hasta uso. Se obtuvieron butirato de sodio, ácido hexanoico y valérico de Sigma Aldrich (Reino Unido) y se prepararon suspensiones en caldo YCFA.

Cuantificación de SCFA y MCFA de sobrenadantes bacterianos

Los ácidos grasos de cadena corta (SCFA) y los ácidos grasos de cadena media (MCFA) de los sobrenadantes bacterianos se analizaron y cuantificaron mediante MS Omics APS de la siguiente manera. Las muestras se acidificaron usando ácido clorhídrico y se añadieron patrones internos marcados con deuterio. Todas las muestras se analizaron en orden aleatorio. El análisis se realizó usando una columna de alta polaridad (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. Columna de 30 mx 0,25 mm x 0,25 pm) instalada en un GC (7890B, Agilent) acoplado con un detector de cuatro polos (59977B, Agilent). El sistema fue controlado por ChemStation (Agilent). Los datos sin procesar se convirtieron al formato netCDF usando Chemstation (Agilent), antes de que los datos fueran importados y procesados en Matlab R2014b (Mathworks, Inc.) usando el software PARADlSe descrito por Johnsen, 2017, J Chromatogr A, 1503, 57-64.

Análisis de actividad global de HDAC

Se aislaron células enteras y sobrenadantes libres de células de cultivos de fase estacionaria 43042 mediante centrifugación y filtración en un filtro de 0,22 uM. Las células HT-29 se utilizaron 3 días después de la confluencia y se redujeron en 1 ml de DTS 24 horas antes del comienzo del experimento. Las células HT-29 se desafiaron con 10 % sobrenadante libre de células se diluyó en DTS y se dejó incubar durante 48 horas. A continuación, se extrajeron las proteínas nucleasa utilizando el kit de extracción Sigma Aldrich Nuclease y las muestras se congelaron rápidamente antes de la medición de la actividad HDAC. El kit de actividad HDAC se evaluó fluorométricamente utilizando el kit Sigma Aldrich (Reino Unido).

A nális is de activ idad específica de H D A C

Se analizó la actividad de inhibición de HDAC específica para HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 utilizando kits de ensayo fluorogénicos para cada tipo de HDAC (BPS Bioscience, CA). Los ensayos se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante y cada muestra se realizó en réplicas. Los sobrenadantes libres de células se diluyeron 1 en 10 y se expusieron a proteínas HDAC específicas proporcionadas en el kit para mantener la coherencia entre los métodos.

R esultados

Células enteras 43042 y sobrenadantes libres de células reducen la actividad global de HDAC

Los resultados mostrados en la Figura 1 muestran que células completas 43042 y CFS reducen la actividad global de HDAC en una cantidad estadísticamente significativa.

43042 produce el butirato del metabolito inhibidor de HDAC

El sobrenadante 43042 mostró una fuerte inhibición de HDAC y se encontró que producía cantidades significativas de butirato (Figura 2A).

Para investigar qué metabolitos eran responsables de la inhibición de HDAC inducida por la cepa, se midieron diferentes concentraciones de ácido hexanoico, ácido valérico y butirato de sodio para determinar su inhibición de HDAC en células HT-29 completas y en lisado de células HT-29. Los resultados en la Fig. 2B muestran significante (P < 0,05) inhibición de la actividad de HDAC por butirato de sodio en células completas así como en el lisado celular, mientras que el ácido hexanoico mostró una actividad inhibidora significativa. El ácido valérico inhibió la actividad total de HDAC (* (p < 0,05), ** (p < 0,005), *** (P < 0,001), ****(p < 0,0001)).

Los inhibidores de HDAC totales potentes investigaron las IHDAC de clase diana.

Se investigó el perfil de inhibición de HDAC específico de la cepa de bacterias de prueba. Se llevaron a cabo ensayos de inhibición de HDAC específicos (BPS Bioscience, CA) para las HDAC de Clase I. Se analizó la capacidad de la cepa bacteriana para inhibir las enzimas HDAC. Los resultados (Figura 3) demuestran que 43042 es un potente inhibidor de las enzimas HDAC de clase 1 (HDAC1, 2 y 3), en particular HDAC2.

Discusión

Curiosamente, los resultados de la actividad específica de HDAC muestran que la cepa probada es un potente inhibidor de las HDAC de clase I, y en particular de las HDAC2 (Figura 3). Las HDAC de clase I (HDAC1, 2, 3 y 8) residen en el núcleo y se expresan de forma ubicua en varios tipos de células humanas. Las HDAC 1-3 comparten más del 50% de homología, pero tienen estructuras y funciones celulares distintas [60]. Están involucrados principalmente en la supervivencia, proliferación y diferenciación celular y, por lo tanto, la inhibición puede ser útil en una amplia gama de enfermedades. [61,62,63,64,65]. Estos datos muestran que las composiciones de la invención pueden ser útiles para tratar enfermedades mediadas por HDAC.

E jem plo 2: eficacia de las bacterias sobre la h iperactiv idad

Introducción

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de las bacterias anaeróbicas utilizando ratones lesionados por MPTP. Un número de 72 ratones fueron lesionados con MPTP (6 grupos con n=12 animales cada uno) se trataron diariamente durante 18 días mediante sonda oral con 43042, vehículo o compuesto de referencia, comenzando 14 días antes de la inducción de la enfermedad. Un grupo de n=12 los animales sirvieron como control de lesión simulada y se trataron con vehículo.

M ateriales y m étodos

A nim ales

Todos los animales fueron alojados en jaulas ventiladas individuales (IVC) y estaban libres de patógenos pero no se mantuvieron bajo SPF. Además, las jaulas se abrieron bajo un flujo de aire laminar.

Los ratones se alojaron en jaulas ventiladas individuales de dos proveedores diferentes y en tres tamaños diferentes: jaulas de policarbonato de la empresa Ehret de tipo 1 largo: 426 cm 2 o tipo 2 largo: 530 cm 2 o jaulas de polisulfona de Tecniplast "greenline": 500 cm2. Ambos sistemas de ventilación de aire incluían sistemas de filtro HEPA (clase HEPA 14), que cumplen con la norma actual.

Para evaluar el estado de salud de los animales se utilizan animales centinela.

Se utilizaron ratones CD1 adultos (al menos 8 semanas), hembras (para evitar agresiones entre machos) como centinelas. Los centinelas se alojaron en parejas por jaula.

Se mantuvieron los siguientes parámetros para el alojamiento de los animales:

- Ciclo de 12 horas luz-oscuridad (horario de verano: luces encendidas de 6 a.m. a 6 p.m., luces apagadas de 6 p.m. a 6 a.m.; horario de invierno: luces encendidas de 5 a.m. a 5 p.m., luces apagadas de 5 p.m. a 5 a.m.)

- Intensidad de luz: valor crítico: ratón [<400 Lux]

- Volumen: valor crítico: [<60 dB]

- Ruido de fondo continuo a bajo volumen (p. ej., Radio encendida durante la fase de luz)

- Temperatura ambiente: 20-24°C

- Humedad: 30-70%

- La humedad y la temperatura ambiente se controlaron de forma centralizada mediante un sistema de alarma.

- Como material de lecho se utilizó material granulado de madera que posee una alta propiedad de succión y mostró una porción de material fino bajo (p. ej., Lignocel)

- Como material de anidación de enriquecimiento se utilizaron "Nestlets"

- Se utilizaron alimentos de mantenimiento estándar para ratones y ratas o alimentos de cría para animales reproductores (p. ej., Altromin)

- Se utilizó agua del grifo normal como suministro de agua.

Se utilizó el menor número de animales cumpliendo con la normativa vigente y la integridad científica. El bienestar de los animales se tuvo en cuenta en términos de número y extensión de los procedimientos a realizar.

Se aplicaron al estudio las precauciones de seguridad que operan dentro de la instalación de prueba.

Detalles de los animales utilizados

Línea de ratón: C57BL/6J (Cepa de ratones JAX™) Número de almacenamiento de ratones JAX™ 000664

Proveedor: Laboratorios Charles River

Edad al inicio: ~10 semanas

Alojamiento de animales

Tan pronto como los animales llegaron a QPS Austria, fueron llevados a la sala de animales asignada, se desempacaron y se verificó su estado de salud. Se cotejó la información sobre el sistema de transporte y los datos proporcionados por Charles River Laboratories (CRL) de antemano. Se generó una lista de animales que incluía el IRN, la edad al momento del parto y el sexo. Los animales se habituaron durante al menos una semana antes del inicio del estudio.

Alojamiento

Los animales se alojaron en grupos de dos. La temperatura ambiente se mantuvo aproximadamente a 20-24 ° C y la humedad relativa entre 30 y 70%. Los animales se alojaron bajo un ciclo de luz constante (12 horas luz/oscuridad; (horario de verano: luces encendidas de 6 a.m. a 6 p.m., luces apagadas de 6 p.m. a 6 a.m.; horario de invierno: luces encendidas de 5 a.m. a 5 p.m., luces apagadas de 5 p.m. a 5 a.m.). Los animales disponían ad libitum de pienso estándar para roedores seco y granulado (Altromin), así como agua corriente normal.

Identificación

Los animales se numeraron consecutivamente mediante la asignación clásica, si no estaban ya presentes a la llegada.

Cada jaula se identificó mediante una tarjeta de color que indicaba el número de estudio, el sexo, los números de registro individual (IRN) de los animales, la edad en el momento del parto y la asignación del grupo de tratamiento.

Asignación de grupo

Sólo se incluyeron en el estudio animales que aparentemente se encontraban en buenas condiciones de salud. Los animales se asignaron a los grupos de tratamiento con respecto al peso corporal, los resultados de la prueba IRWIN de referencia y, respectivamente, la composición en las jaulas.

Los detalles de los métodos que no se especificaron en las secciones posteriores de este plan de estudio se encuentran en los procedimientos operativos estándar apropiados.

Manejo específico de animales y aleatorización

Los guantes debían cambiarse entre cada grupo de tratamiento y rociarse con una disolución de etanol al 70% entre cada jaula del mismo grupo para minimizar el riesgo de contaminación cuando se manipulaban animales (p. ej.,: tratamiento, pruebas de comportamiento, limpieza y muestreo de tejidos).

El tratamiento tenía que ser aleatorio y alternado diariamente para evitar que los mismos grupos fueran tratados a la misma hora cada día. Además, las pruebas de comportamiento debían realizarse en un orden pseudoaleatorio, alternando cada día, para evitar que se manipularan los mismos animales en los mismos momentos. Los animales también se asignaron al azar por jaula en el muestreo de tejido.

Asignación del grupo de tratamiento, tratamiento

Se asignaron 72 ratones macho a 5 grupos de tratamiento diferentes. Los grupos se trataron diariamente durante 18 días mediante sonda oral con 43042 (Grupo C), o vehículo (PBS) (Grupos A, B y E) o vehículo (PBS anaeróbico -Grupo D). El tratamiento oral se inició 14 días antes de la lesión por MPTP. Los animales del Grupo E recibieron un tratamiento con vehículo diario (PBS) p.o. y se inyectaron i.p. (intraperitoneal) con el fármaco de referencia 30 minutos antes y 90 minutos después del primer MPTP el Día 0. El volumen de aplicación para el tratamiento p.o. con vehículo fue de 200 pl por ratón. 43042 eran de reservas de glicerol (gly). Para el tratamiento oral, las sondas nasogástricas para aplicaciones se almacenaron en viales que contenían etanol al 70% y se lavaron antes y después de cada uso con agua destilada. Cada grupo de tratamiento tenía su propio vial de etanol y sonda nasogástrica y un vial de agua destilada. Inmediatamente antes del tratamiento, se lavó cada jeringa con N2.

El día 0 MPTP (20 mg/kg b.w. 4 veces, intervalo entre tratamientos de 2 h) se inyectó i.p. en animales de los Grupos B, C, D y E. Un grupo de animales (A) se lesionó de forma simulada mediante la administración i.p. del vehículo de MPTP (disolución salina al 0,9%). El volumen de aplicación fue de 10 pl por g de peso corporal. El pesaje de los animales se realizó antes del tratamiento con MPTP para dosificar a los animales de acuerdo con su peso corporal real. Posteriormente, los animales recibieron el tratamiento diario p.o..

Prueba de Campo Abierto

La prueba de campo abierto se realizó el Día 2.

La actividad espontánea y la ansiedad se evaluaron en Campo Abierto mediante la evaluación de los siguientes parámetros: hiperactividad[es], actividad[es]. Para ello se utilizó un Campo Abierto Plexiglas (48x48 cm; TSE-System®). Los rayos foto infrarrojos se colocaron a una distancia de 1,4 cm alrededor de la caja. Para detectar la cría (de pie sobre las patas traseras), se montó otra fila de haces foto 4 cm por encima de la primera. Cada sesión de prueba tuvo una duración de 5 minutos para verificar el comportamiento de los ratones en el nuevo entorno, ya que los primeros minutos de la prueba de campo abierto fueron los más adecuados para mostrar el comportamiento de exploración de los animales. A partir de entonces se contó el número de bolos fecales, como medida de emocionalidad. El Campo Abierto se limpió con etanol al 70% después de cada ratón para eliminar los rastros de olor. Las pruebas se realizaron en condiciones de iluminación ambiental estándar durante la fase de luz del ciclo circadiano.

Estadísticas

Se realizó un análisis estadístico básico, por lo que se probó la normalidad de los datos brutos mediante la prueba de Kolmogorow-Smirnow. Si se confirmó la distribución normal, las diferencias entre dos grupos se probaron con la prueba T o entre más de dos grupos con el análisis de varianza unidireccional. Si los datos no estaban distribuidos normalmente, las diferencias entre dos grupos se probaron con la prueba de Mann-Whitney o entre más de dos grupos con la prueba de Kruskal-Wallis. La prueba posterior de Bonferroni se utilizó como prueba post hoc para el análisis de varianza unidireccional y la prueba de Dunn se utilizó como prueba post hoc para la prueba de Kruskal-Wallis. Las diferencias de grupo a lo largo del tiempo se probaron mediante el análisis de varianza bidireccional seguido de la prueba posterior de Bonferroni. Si era apropiado, los datos se presentaron como media ± o error estándar de la media (SEM).

Los análisis estadísticos se realizaron comparando todos los grupos con A (control positivo), B (control negativo), E (elemento de referencia) y C con D (vehículo para el Grupo C).

Resultados

Observaciones generales y estado de salud

Los animales toleraron bien la administración de cepas de bacterias. El día de la lesión de MPTP y, si era necesario, al día siguiente, se utilizó una luz roja para calentar a los animales. Si los animales se encontraban en condiciones subóptimas (se sentían fríos, deshidratados, comportamiento anormal), se les suministraba alimento húmedo y tratamiento con disolución salina subcutánea si era necesario. Durante el estudio, los siguientes 6 animales murieron por razones desconocidas.

Pruebas de Campo Abierto

El Día 2 del curso de estudio (2 días después de la lesión de MPTP) los animales fueron probados en la Prueba de Campo Abierto. La prueba mostró que la hiperactividad y la actividad se reducen significativamente en los animales del Grupo C (43042) y del grupo D (Vehículo (PBS anaeróbico)) en comparación con los animales tratados con lesión simulada y con vehículo del Grupo A (Figura 84). También en comparación con el elemento de referencia del Grupo E (7-nitroindazol), los animales del Grupo G mostraron una hiperactividad significativamente reducida en las Pruebas de Campo Abierto.

Discusión

La marcada reducción de la hiperactividad en ratones a los que se les administró 43042 7 en comparación con controles de solo vehículo destaca que 43042 puede ser útil en el tratamiento o prevención de afecciones o enfermedades asociadas con la hiperactividad, como trastornos del comportamiento, incluido el ADHD y la enfermedad de Parkinson. La hiperactividad se ha asociado con un aumento de la ansiedad en sujetos con enfermedad de Parkinson.

Ejemplo 3 - Eficacia de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis para mejorar la supervivencia de la GVHD

Objetivo

Los inventores buscaron determinar el efecto de la cepa 43171 de Bariatricus massiliensis sobre la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) inducida en ratones Balb/C.

Material y métodos

- Animales

Ratones macho Balb/C (BALB/cAnNCrl; 6-8 semanas de edad; n=125) con un peso corporal inicial promedio (± SEM) de 20,67 ± 0,11 g se obtuvieron de Charles River Laboratories (Wilmington, MA). n=75 macho C57B1/6 (C57B1/6NCrl; 6-8 semanas de edad) adicional se obtuvieron del mismo proveedor. Los animales se aclimataron antes del comienzo del estudio. Durante este período, los animales fueron observados diariamente con el fin de rechazar cualquiera que se presentara en mal estado.

- Alojamiento

El estudio se realizó en salas para animales provistas de aire filtrado HEPA a una temperatura de 70 ± 5 °F y 50% ± 20% de humedad relativa. Los animales se alojaron en grupos de 4-6 por jaula. Específicamente, grupos con 8 animales/grupo estaban alojados en n=4/jaula; grupos con 10 animales/grupo estaban alojados en n=5/jaula; y grupos con 12 animales por grupo se alojaron en n=6/jaula. Los animales se alojaron en jaulas ventiladas individualmente y filtradas con HEPA. Las jaulas se separaron geográficamente en las rejillas para minimizar la contaminación cruzada entre los grupos. Los cuartos de los animales se establecieron para mantener un mínimo de 12 a 15 cambios de aire por hora. La habitación estaba en un temporizador automático durante un ciclo luz/oscuridad de 12 horas encendido y 12 horas apagado sin crepúsculo. Se utilizó ropa de cama Alpha-dri® (irradiada). Además de la ropa de cama, cada jaula se proporcionó con enviro-dri y una cabaña de pastor (enriquecimiento). El suelo se barrió a diario y se pasó la mopa un mínimo de dos veces por semana con un detergente comercial. Las paredes y las rejillas de las jaulas se limpiaron con una esponja como mínimo una vez al mes con una disolución diluida de lejía. Se utilizó una tarjeta o etiqueta de la jaula con la información apropiada necesaria para identificar el estudio, la dosis, el número de animal y el grupo de tratamiento para marcar todas las jaulas. La temperatura y la humedad relativa se registraron durante el estudio y se conservaron los registros. Todos los técnicos se pusieron el EPP (bata de laboratorio, guantes, gafas de seguridad) antes de ingresar al lab/vivarium y trabajar con animales.

- Dieta

Los animales fueron alimentados con alimento para roedores estéril (irradiado) LabDiet 5053 y se les proporcionó agua (ósmosis inversa) ad libitum. No se proporcionó ningún enriquecimiento a base de alimentos.

- Asignaciones y aleatorización de animales

Los animales se asignaron al azar en 5 grupos al comienzo del estudio. Cada grupo comprendía entre 8 y 12 ratones. Cada grupo se subdividió en las cohortes A y B (n=4-6 ratones por grupo por cohorte); las cohortes habían escalonado las líneas de tiempo de la enfermedad.

- Análisis de la cinética de crecimiento de NCIMB 43171

Antes de la administración de la curva/máximo de crecimiento de NCIMB 43171 se determinaron las OD y se determinó el recuento de colonias virtuales (VCC) a una OD600 máxima y después del lavado. El análisis de la curva/máximo de crecimiento se llevó a cabo el análisis de OD. A las 6 ^a M, se llevó un tubo de cada una de las reservas bacterianas congeladas a la cámara Coy. Los tubos se dejaron descongelar, se mezclaron cuidadosamente pipeteando hacia arriba y hacia abajo, y dos tubos (duplicados) que contenían 9,5 ml de caldo YCFA prerreducido y precalentado (37 °C) se inocularon con 500 pl de reserva de bacterias. Estos fueron los precultivos. Los precultivos se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 24 horas. A las 6 AM del día siguiente (es decir, después de 24 horas de incubación), se extrajo una pequeña alícuota de cada cultivo de la cámara Coy y se determinó la OD600 mediante nanogota. Los tubos se mezclaron por inversión antes de retirar la alícuota para la medición de la OD600. El resto de los cultivos de 24 horas (usando el tubo con la OD600 más alta como se determinó anteriormente) se cultivaron por duplicado como sigue: se usaron 250 pL de cultivo de 24 horas NCIMB 43171 para inocular dos tubos que contenían 24,75 ml de caldo YCFA precalentado. Estos cultivos se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 24 horas y se extrajo una pequeña alícuota de la cámara Coy para medir la OD600 cada dos horas durante 16 horas (es decir, a las 8 AM., 10 AM, 12 PM., 2 PM, 4 PM, 6 PM, 8 PM y 10 PM) y a las 24 horas (6 AM del día siguiente). Los tubos se mezclaron por inversión antes de retirar la alícuota para la medición de la OD600.

El análisis de VCC en la OD máxima se produjo de la siguiente manera: se llevó un tubo de reserva NCIMB 43171 a la cámara Coy. Se dejó que los tubos se descongelaran, después se mezclaron cuidadosamente pipeteándolos arriba y abajo y dos tubos (duplicados) que contenían 9,5 mL de caldo YCFA prerreducido, precalentado se inocularon con 500 pL de reserva de bacterias. Estos fueron los precultivos. Los precultivos se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 24 horas. El día siguiente (es decir, después de 24 horas de incubación), se extrajo una pequeña alícuota de cada cultivo de la cámara Coy y se determinó la OD600 mediante nanogota. Los tubos se mezclaron por inversión antes de retirar la alícuota para la medición de la OD600. El resto de los cultivos de 24 horas (usando los tubos con la OD más alta) se cultivaron por duplicado como sigue: se usaron 250 pl para inocular dos tubos que contenían 24,75 ml de caldo YCFA precalentado. Estos fueron los principales cultivos. Se extrajo una pequeña alícuota del cultivo principal de la cámara Coy en el momento indicado y se determinó la OD600 mediante nanogota. Los tubos se mezclaron por inversión antes de retirar la alícuota para la medición de la OD600. El VCC de la reserva restante se determinó de la siguiente manera: una serie de diluciones individuales (sin diluir, 1:103, 1:104, 1:105, y 1:106) se preparó en PBS. El resto de cada cultivo se transfirió luego a un tubo cónico de 50 mL, y los tubos se sacaron de la cámara Coy y se centrifugaron (3500xg; 15 minutos). Una vez que se completó la centrifugación, los tubos se devolvieron a la cámara Coy, y se retiraron los sobrenadantes (con cuidado de no alterar los pélets) y se midieron. Los sedimentos se resuspendieron en volúmenes de PBS equivalentes a los de los sobrenadantes eliminados y se mezclaron cuidadosamente con una pipeta (sin agitación con vórtex). Una serie de diluciones individuales (sin diluir, 1:103, 1:104, 1:105, y 1:106) se preparó en PBS. Ambas series de diluciones (caldo y PBS suspendidas) se sembraron en placas puntuales (20 pl) por triplicado en un cuadrante de una placa de agar YCFA prerreducida. Las placas se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 48 horas, y el VCC de cualquier dilución produjo manchas con 5-20 UFC/spot fue contado. Los valores de VCC de las tres manchas/mancha fueron promediados para determinar el VCC/mL de cultivos nocturnos en caldo y se centrifugaron/resuspendieron en PBS.

- Preparación de dosificación NCIMB 43171

Dos días antes de cada momento de dosificación, un tubo (1 mL/tubo) por cepa de reservas congeladas de NCIMB 43171 se introdujeron en la cámara Coy. Se dejó descongelar los tubos y se inocularon dos tubos de 15 ml, cada uno con 9,5 ml de caldo YCFA pre-reducido y precalentado, con 0,5 ml de cada reserva de bacterias. Estos fueron los precultivos (tubos 1 y 2). Los precultivos se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 24 horas.

Después de la incubación durante 24 horas, un día antes de cada momento de dosificación, los cultivos se mezclaron por inversión y se extrajo una pequeña alícuota (20 pL) de los cultivos de la cámara Coy para la determinación de la OD600 mediante nanogota. Cualquier tubo (1 o 2) por cepa que tuviera el valor de OD600 más alto se utilizó para el cultivo principal, por duplicado, de la siguiente manera: se usaron 250 pL del precultivo con la OD600 más alta para inocular 24,75 mL de caldo YCFA precalentado en una cónica de 50 mL (por duplicado; tubos A y B). Estos cultivos principales se incubaron en la cámara Coy (a 37 °) durante 14 horas.

En cada día de dosificación (después de las incubaciones de cultivos principales anteriores), los cultivos se mezclaron por inversión y se extrajo una pequeña alícuota (20 pL) de los cultivos de la cámara Coy para la determinación de la OD600 mediante nanogota. A continuación, se retiraron los tubos de la cámara Coy y se centrifugaron (3500 xg; 15 minutos). Una vez que se completó la centrifugación, los tubos se devolvieron a la cámara Coy, y se retiraron los sobrenadantes (con cuidado de no alterar los pélets) con pipeta. Los sedimentos se resuspendieron en 2,04 ml de PBS. Los gránulos se mezclaron cuidadosamente pipeteando (sin agitar con vórtex). Se pipeteó una alícuota (0,5 ml) de cada cepa en tubos Eppendorf y se retuvo en la cámara Coy. El resto de cada cepa se retiró de la cámara Coy y se usó para la dosificación (0,1 ml por animal), con cuidado de dosificar a los animales lo más rápido posible después de la resuspensión.

La alícuota de 0,5 ml de cada cepa retenida en la cámara Coy se utilizó para la preparación de una serie de diluciones individuales en MRD prerreducida; la 1:107, 1:108, 1:109, y 1:1010 las diluciones se sembraron en placas puntuales (20 pl) por triplicado en un cuadrante de una placa de agar YCFA prerreducida. Las placas se incubaron a 37 °C en la cámara Coy durante 48 horas, y el VCC de cualquier dilución produjo manchas con un recuento de 5-20 UFC/mancha. Los valores VCC de tres manchas/mancha fueron promediados para determinar el VCC/mL del material de dosificación experimental.

- Fase de Pretratamiento

Todos los animales fueron pesados y asignados al azar por peso en grupos de tratamiento antes del inicio del estudio. Antes de la inducción de la GVHD en los días -1 y 0, todos los animales se pretrataron (PO) con PBS (Grupos 1-4), NCIMB 43171 (Grupo 5) o control de sal de butirato (Grupo 6) diariamente a partir del Día-14. El butirato se utilizó como control positivo ya que se ha identificado un déficit de butirato en el intestino de pacientes con GVHD. Los tratamientos se administraron a grupos al azar, y los tratamientos grupales se alternaron diariamente para evitar que los mismos grupos fueran tratados a la misma hora cada día. Una vez que comenzó la dosificación del artículo de prueba, se tuvo cuidado de minimizar la contaminación cruzada del grupo: el técnico cambió los guantes entre los grupos de tratamiento y se roció con alcohol isopropílico al 70% entre cada jaula del mismo grupo.

- Modelado de GVHD

La GVHD se indujo en ratones usando una sola dosis aguda de 8 Gy de irradiación corporal total (TBI) el Día -1. El Día 0, a estos ratones receptores se les administró una inyección intravenosa de una combinación de células de la médula ósea empobrecidas en células T y células esplénicas del donante de ratones C57B1/6 en PBS. Las células de la médula ósea se aislaron usando prácticas de lavado estándar, y se agotaron las células T usando el antígeno de células T de la superficie celular c D3, con un kit de CD3-biotina (catálogo de Miltenyi Biotec 130-094-973). Los esplenocitos se aislaron usando disociadores Miltenyi GentleMACS. Los animales del Grupo 1 sirvieron como controles ingenuos y no recibieron TBI ni transferencia celular. Los animales del Grupo 2 sirvieron como controles de irradiación y recibieron los 8 Gy de TBI el Día -1, pero no recibieron una transferencia celular el Día 0. Los animales del Grupo 3 sirvieron como controles de transferencia adoptiva singénica; estos animales recibieron 8 Gy de TBI el Día -1 y una inyección intravenosa de una combinación de células de la médula ósea agotadas de células T y células esplénicas de ratones donantes Balb/C en PBS estéril.

La dosificación diaria del artículo de prueba continuó durante la duración del estudio (días -14 a 30). La supervivencia de los animales se registró diariamente, como una indicación de la gravedad de la GVHD. Los animales también se pesaron, observaron y se les dio una puntuación clínica de GVHD diariamente durante la duración del estudio después de la inducción de GVHD. La puntuación de la GVHD se evaluó mediante un sistema de puntuación estándar basado en cinco criterios (Tabla 21): porcentaje de cambio de peso, postura (encorvado), actividad, textura del pelaje e integridad de la piel (puntuación máxima = 10).

Tabla 1: Evaluación de la GVHD en ratones trasplantados (puntuación diaria)

A los animales que perdieron el 20% de su peso corporal se les administraron líquidos subcutáneos (SID; disolución salina) y se les proporcionó alimento ablandado. Si algún animal individual del estudio requería alimento ablandado, todos los animales del estudio recibían alimento ablandado hasta que la pérdida de peso del animal individual hubiera sido rescatada. El tratamiento continuó hasta la eutanasia programada o la pérdida de peso corporal superior a 30%. Los animales que no podían enderezarse, estaban fríos al tacto o moribundos fueron sacrificados. El Día 29, todos los animales supervivientes se sometieron a una endoscopia para controlar la inflamación del colon. Se tomaron imágenes y se puntuó la gravedad de la colitis y la consistencia de las heces utilizando la escala de puntuación que se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2: Escala de puntuación de colitis por endoscopia

El Día 30, se recogió sangre mediante sangrado por RO; Se recogió sangre (aproximadamente 150 - 300 pL) en dos tubos; aproximadamente dos tercios de la sangre se recogió en tubos K2EDTA y el tercio restante se recogió en tubos de heparina-litio. Ambas muestras se centrifugaron y procesaron para plasma, y los tubos de plasma se etiquetaron claramente para indicar el anticoagulante utilizado. Para la muestra de K2EDTA, el plasma se dividió en alícuotas de la siguiente manera: 25 pL (para usar en el ensayo de citrulina posterior) y el resto. Todo el plasma se congeló a -80 °C. Todas las muestras de K2EDTA fueron evaluadas para citrulina mediante ELISA al finalizar el estudio.

La eutanasia se realizó mediante inhalación de CO2 y dislocación cervical, sin recolección de órganos para animales sacrificados fuera de horario durante la fase de TBI del estudio. La eutanasia se realizó mediante dislocación cervical únicamente, con recolección de órganos, para los animales sacrificados fuera de horario durante la fase de GVHD del estudio. Las recolecciones de terminales ocurrieron en la mesa. La mesa se limpió con alcohol isopropílico al 70% y un desinfectante comercial antes de comenzar. Los instrumentos se limpiaron con alcohol isopropílico al 70% entre animales y con un desinfectante comercial entre grupos.

- Análisis estadísticos

Los datos paramétricos se analizaron mediante ANOVA de una vía con la prueba de comparaciones múltiples de Tukey para comparar todos los grupos entre sí. Los datos no paramétricos se analizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis con la prueba de comparaciones múltiples de Dunn para comparar todos los grupos entre sí. Se llevó a cabo análisis estadísticos usando el software GraphPad Prism 7 (La Jolla, CA).

Resultados y discusión

- Peso corporal

Los animales se pesaron diariamente durante la duración del estudio, y el peso corporal medio de todos los grupos durante el transcurso del estudio se muestra en la Figura 5. Se calculó el cambio de peso corporal en relación con el Día - 14 (Figura 6) o el Día 0 (Figura 7). Con el fin de determinar diferencias estadísticamente significativas entre los grupos en el peso corporal medio o en el cambio de peso corporal medio en relación con el Día -14 o el Día 0, se calculó el área bajo la curva (AUC) utilizando la regla de transformación trapezoidal y se muestra en los recuadros de las Figuras 5, 6 y 7. Para tener en cuenta la deserción del grupo, el cambio de peso corporal en relación con el Día 0 mostrado con el peso corporal con el que murió un animal se trasladó durante la duración del estudio para los animales encontrados muertos o sacrificados (para todos los grupos con la excepción del Grupo 2) se muestra en la Figura 8, con el recuadro AUC.

No se observaron diferencias importantes en el peso corporal medio (Figura 5) para ningún grupo durante el período de pretratamiento. Todos los grupos expuestos a TBI demostraron una pérdida de peso corporal de los días 0 a 3. El peso corporal medio de los animales del Grupo 3 (PBS - TBI transferencia singénica) se recuperó desde este punto en adelante y finalmente regresó a la línea de base. El peso corporal medio de los animales del Grupo 2 (solo PBS - TBI) no se recuperó antes de la muerte de todos los animales del grupo. Para todos los demás grupos de estudio, el peso corporal medio continuó disminuyendo hasta el Día 7, aumentó hasta el Día 14 y, posteriormente, disminuyó durante la duración del estudio. El peso corporal medio en los Grupos 2, 5 y 6 se redujo significativamente durante el transcurso del estudio en comparación con el Grupo 1 (PBS - sin tratamiento previo). Por el contrario, el peso corporal medio en los Grupos 3-6 aumentó significativamente durante el transcurso del estudio en comparación con el Grupo 2. Finalmente, el peso corporal medio en los Grupos 5 y 6 se redujo significativamente durante el transcurso del estudio en comparación con el Grupo 3. No se observaron diferencias significativas en el peso corporal medio durante el transcurso del estudio al comparar los grupos de tratamiento (Grupos 5 y 6) con el Grupo 4 (PBS - TBI+transferencia alogeneica). Esta misma tendencia se observó cuando a los ratones se les administró el inmunosupresor tacrolimus, una terapia conocida de la GVHD (Figura 9).

El cambio de peso corporal medio en relación con el Día -14 (Figura 6) aumentó para todos los grupos durante el período de pretratamiento, y la cinética del cambio de peso corporal en relación con el Día -14 desde el Día 0 en adelante fue similar a la observada para la media peso corporal. Los animales de los Grupos 2 y 4-6 demostraron una pérdida de peso corporal significativamente mayor durante el transcurso del estudio en comparación con el Grupo 1 y el Grupo 3.

El cambio de peso corporal medio en relación con el Día 0 (Figuras 7 y 8) disminuyó para todos los grupos expuestos a TBI de los días 0 a 3, momento en el que comenzó el aumento de peso corporal para los animales del Grupo 3; la pérdida de peso corporal continuó para todos los demás grupos hasta el Día 4. El cambio de peso corporal en relación con el Día 0 aumentó del Día 7 al Día 14, y se observó una pérdida de peso corporal media para los Grupos 4-6 desde el Día 14 hasta el final del estudio el Día 30. Si bien el patrón general en el cambio de peso corporal en relación con el Día 0 fue similar independientemente de si el peso corporal se llevó adelante para los animales fallecidos, las diferencias estadísticamente significativas entre los grupos difirieron. Se observó una pérdida de peso corporal significativamente mayor en comparación con los Grupos 1, 2 y 3 para los Grupos 4-6 con y sin peso corporal para los animales muertos trasladados, nuevamente, lo cual es similar a la tendencia observada en ratones a los que se les administró la terapia conocida de GVHD tacrolimus (Figura 9).

- Supervivencia

Los animales se evaluaron diariamente para determinar su supervivencia o moribundidad, y en la Figura 10 se muestra una curva de Kaplan-Meier que muestra la supervivencia durante la duración del estudio. La supervivencia fue del 100% en los Grupos 1 y 3, 0% en el Grupo 2 y el 75% en el Grupo 5. La supervivencia observada en el Grupo 5 mejoró notablemente en comparación con los Grupos 4 y 6. Esto es significativo, ya que se ha propuesto el butirato como tratamiento para la GVHD [66]. Las tasas de supervivencia fueron comparables a las de los ratones controles a los que se les administró el conocido tratamiento de GVHD tacrolimus (FK506 - Figura 11)

- Puntuaciones de GVHD

Se evaluaron las puntuaciones de la GVHD (según la puntuación de múltiples parámetros que se muestra en la Tabla 2) en todos los animales desde el Día 0 hasta el final del estudio el Día 30. Las puntuaciones medias de GVHD para todos los grupos se muestran en la Figura 12, y estos mismos datos presentados con la puntuación de GVHD con la que un animal murió se muestran en la Figura 13. El AUC se calculó utilizando la regla de transformación trapezoidal para determinar diferencias estadísticamente significativas en las puntuaciones generales de GVHD entre los grupos, y esto se muestra en los recuadros de las Figuras 12 y 13. La puntuación clínica de la GVHD asignada a cada animal es una combinación que consta de postura (figura 14A), actividad (figura 14B), textura del pelaje (figura 14C), integridad de la piel (figura 14D) y pérdida de peso (figura 14E).

La inyección intravenosa de esplenocitos alogénicos y células de la médula ósea indujo GVHD en todos los grupos que comenzó alrededor del Día 19 y aumentó progresivamente en gravedad hasta la conclusión del estudio. Hubo una puntuación inicial de GVHD aumentada entre los Días 0-7, presumiblemente debido a un TBI y al injerto; La supervivencia de los animales más allá de este punto verifica el injerto exitoso de las células trasplantadas. Si bien la cinética de la puntuación de la GVHD fue similar independientemente de si la puntuación de la GVHD se llevó adelante para los animales fallecidos, las diferencias estadísticamente significativas entre los grupos difirieron. Los animales de los Grupos 3-6 demostraron puntuaciones medias de GVHD significativamente aumentadas en comparación con los Grupos 1 y 2 con y sin puntuaciones de GVHD para los animales muertos transferidos; asimismo, los animales de los Grupos 4-6 demostraron un aumento significativo de las puntuaciones medias de GVHD en comparación con el Grupo 3 en ambos casos. Esta tendencia también se observó en modelos de ratones de GVHD a los que se les administró el inmunosupresor tacrolimus, que es una terapia conocida de GVHD (Figura 15).

- Endoscopia

Los animales se sometieron a una endoscopia el Día 29 para evaluar la inflamación del colon. La colitis se puntuó visualmente en una escala de cinco puntos que va de 0 para normal a 4 para ulceración grave (Tabla 3). La gravedad media de la colitis se muestra en la Figura 16.

Las puntuaciones medias de gravedad de la colitis aumentaron para los animales tratados con la cepa 43171 y los tratados con butirato en comparación con los ratones sin tratamiento previo (Grupo 1). Sin embargo, la colitis fue significativamente menor en los ratones tratados con la cepa 43171 en comparación con los ratones tratados con butirato. Esto es significativo, ya que se ha sugerido la corrección del déficit de butirato como tratamiento para la colitis [67]. Las imágenes de endoscopia representativas se muestran en la Figura 17.

- Citrulina plasmática

Se extrajo sangre antes de la eutanasia de todos los animales supervivientes y se procesó para obtener plasma. La citrulina plasmática se evaluó como marcador de permeabilidad intestinal por duplicado mediante ELISA. Una reducción de los niveles plasmáticos de citrulina corresponde a una pérdida de masa de células epiteliales que indica un aumento de la permeabilidad de la barrera intestinal. El mantenimiento de la función de barrera intestinal (es decir, el mantenimiento de la impermeabilidad intestinal) es importante para el tratamiento de la GVHD [68]. Los resultados se muestran en la Figura 18. Los ratones a los que se les administró la cepa 43171 mantuvieron mayores niveles de citrulina en plasma en comparación con los ratones a los que se les administró sales de butirato (Grupo 6), lo cual es significativo considerando el papel del butirato en el mantenimiento de la función de barrera correcta.

E jem plo 3: Prueba de estabilidad

Una composición descrita en este documento que contiene al menos una cepa bacteriana descrita en este documento se almacena en un recipiente sellado a 25 °C o 4 °C y el recipiente se coloca en una atmósfera que tenga 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% o 95% de humedad relativa. Después de 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 1 año, 1,5 años, 2 años, 2,5 años o 3 años, al menos 50%, 60%, 70%, el 80% o el 90% de la cepa bacteriana permanecerá medido en unidades formadoras de colonias determinadas por protocolos estándar.

E jem plo 4: E ficacia de los inóculos bacterianos p ara red u cir la secreción de IL -6

Introducción

La activación de ciOCDinas proinflamatorias se ha asociado con daño en la enfermedad inflamatoria. El lipopolisacárido (LPS) es un estimulador conocido de la citoquina proinflamatoria IL-6. Las células U373 se trataron con composiciones que comprenden la cepa 43042 de la invención en combinación con LPS para observar su capacidad para modular los niveles de IL-6.

M étodos

U373 es una línea celular de astrocitoma de glioblastoma humano. Las células (utilizadas entre el pase 20 y el pase 37) se mantuvieron en 25 ml de MEME 4,5 g/L D-glucosa suplementada con FBS inactivado por calor al 10%, L-glutamina 4 mM, 100 U/ml penicilina, 100 pg/ml estreptomicina y 5 pg/ml plasmocina, 1% aminoácidos no esenciales, 1% piruvato de sodio (denominado en todo momento medio de crecimiento completo).

Las células se colocaron en placas en placas de 24 pocillos a una densidad de 100.000 células/pocillo en 1ml de medio de crecimiento completo y se dejó permanecer a 37°C/5% CO2 durante 72h. El día del tratamiento, se retiró el medio de cada pocillo, las células se enjuagaron con 0,5 ml de medio de lavado (MEME sin suero), 0,9 ml de medio de estimulación (medio MEME que contiene 2% FBS) que contiene 1 pg/ml Se añadió LPS a los pocillos apropiados y se incubó a 37 °C y 5% CO2. Después de 1 hora de preincubación, las células se retiraron de la incubadora de CO2 y se trataron con 100 pl de sobrenadante bacteriano derivado de la cepa 43042. El control de medios se utilizó como control. Las células después se incubaron durante otras 24h a 37 °C/5% CO2, después de los cual los sobrenadantes libres de células se recogieron y se desespumaron a 10.000g a 4°C durante 3 min. Se extrajeron alícuotas de las muestras en microtubos de 1,5 ml y se almacenaron a -80°C para ELISA hIL-6 y hIL-8.

R esultados

Los resultados de los experimentos se muestran en la Figura 19. El tratamiento de las células con LPS y la cepa de bacterias condujo a una disminución del nivel de IL-6 secretado.

E jem plo 5: A ctivación de M AP2

Se investigó el efecto de la cepa 43042 sobre la expresión de un gen asociado con la diferenciación neuronal: la proteína 2 asociada a microtúbulos (MAP2). El análisis de qPCR reveló que la transcripción de MAP2 estaba regulada al alza por 43042 por encima de las muestras de control de medios en células de neuroblastoma SH-SY5Y (ver Figura 20).

Las células SH-SY5Y son una línea celular de neuroblastoma. Las células se cultivaron en medio Ham F-12 de mezcla de nutrientes al 50% y MEM al 50% suplementado con L-glutamina 2 mM, FBS inactivado por calor al 10%, 100 U/ml penicilina y 100 pg/ml estreptomicina. Las células SH-SY5Y se sembraron en placas de 6 pocillos a una densidad de 0,5 x 106 células. Después de 24 h, las células se trataron en medio de diferenciación (medio de crecimiento que contenía 1% FBS sin RA) con sobrenadantes bacterianos al 10% o YCFA o RA 10uM durante 24 h. Se recogieron las células y se aisló el ARN total de acuerdo con el proOCDolo del mini kit RNeasy (Qiagen). El ADNc se preparó utilizando el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystems). La expresión génica se midió mediante qPCR. Se utilizó GAPDH como control interno. Se calcularon los cambios múltiplos utilizando el método 2A(-AACt).

Lista de cebadores utilizados para el análisis de expresión génica in vitro mediante qPCR.

E jem plo 6: Efecto sobre la expresión de m arcadores funcionales en e l intestino

Resum en

Este estudio investigó el efecto de la cepa 43042 de Bariatricus massiliensis sobre la expresión de proteínas de unión estrecha y marcadores funcionales en el intestino. La indolamina 2,3 dioxigenasa-1 (IDO1) es una enzima que inicia el catabolismo del triptófano a lo largo de una vía que genera varios metabolitos bioactivos basados en quinurenina. La triptófano hidroxilasa-1 (TPH-1) cataliza la formación de 5-hidroxi-L-triptófano (5-HTP) a partir de L-triptófano, el primer paso limitante en la biosíntesis de 5-HT.

M étodo

Ratones BALB/c machos recibieron alimentación por sonda oral (volumen de 200 pl) de 1 x 109 UFC de la cepa bacteriana durante 6 días consecutivos. En el Día 7, los animales se sometieron a eutanasia. Se extirpó tejido intestinal (segmentos de 1 cm de íleon y colon). El ARN total se extrajo con el kit de aislamiento de miARN mirVana™ (tecnologías Ambion/Llife, Paisley, Reino Unido) y tratados con DNasa (tecnologías Turbo DNA-free, Ambion/life) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. El ARN se cuantificó usando un espectrofotómetro NanoDrop™ (Thermo Fisher Scientific Inc., Wilmington, Delaware, EE. UU.) De acuerdo con las instrucciones del fabricante. La calidad del ARN se evaluó utilizando el Agilent Bioanalyzer (Agilent, Stockport, Reino Unido) de acuerdo con el procedimiento del fabricante y se calculó un número de integridad del ARN (RIN). ARN con valor de RIN >7 se utilizó para experimentos posteriores. El ARN se transcribió de forma inversa a ADNc usando el kit de ADNc de alta capacidad de Applied Biosystems (Applied Biosystems, Warrington, Reino Unido) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, la transcriptasa inversa multiscribe (50 U/pL) se añadió como parte de la mezcla maestra de RT, se incubó a 25 °C durante 10 min, 37 °C durante 2 h, 85 °C durante 5 min y se almacenó a 4 °C. La PCR cuantitativa se llevó a cabo usando sondas (6 carboxifluoresceína - FAM) diseñadas por Applied Biosystems para genes diana específicos de ratón, mientras se usaba p-actina como control endógeno. Las reacciones de amplificación contenían 1 pl de ADNc, 5 pl de la mezcla maestra de PCR 2X (Roche) y 900 nM de cada cebador y se llevaron a un total de 10 pl mediante la adición de agua libre de RNasa. Todas las reacciones se realizaron por triplicado utilizando placas de 96 pocillos en el sistema LightCycler®480. Las condiciones de ciclo térmico fueron las recomendadas por el fabricante (Roche) durante 55 ciclos. Para comprobar la contaminación por amplicones, cada experimento no contenía controles de plantilla por triplicado para cada sonda utilizada. Se registraron los valores de umbral de ciclo (Ct). Los datos se normalizaron usando p-actina y se transformaron usando el método 2-AACT y se presentaron como un cambio de veces frente al grupo de control.

R esultados

De los genes probados, la expresión de IDO1 fue diferente en los ratones que habían recibido la cepa bacteriana en comparación con los animales que recibieron el vehículo. Hubo un aumento significativo en el íleon (Fig. 21A) y una disminución significativa en el colon (Fig. 21B). La expresión de IDO1 en el colon se asocia con la mejora de la enfermedad en un modelo de colitis en ratón [69]. Por tanto, las cepas bacterianas del género Bariatricus pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias del intestino.

E jem plo 7: E fecto sobre la expresión génica en el cerebro

Resum en

Este estudio investigó el efecto de la cepa 43042 de Bariatricus massiliensis sobre la expresión de ciertos genes de interés en el cerebro. Niveles de ARNm para marcadores del sistema oxiOCDinérgico (receptor de oxiOCDina y receptor de vasopresina), sistema endocrino (mineralocorticoide (Nr3cl); receptor de glucocorticoide (Nr3c2); factor de liberación de corticosterona (CRF) y receptores; factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF)), sistema inmunológico (11-6, TNF-a, TLR-4); y sistemas de neurotransmisores (receptor NMDA 2A (Grin2A); receptor NMDA 2B (Grin2B); subunidad A2 del receptor GABAA; subunidad B1 del receptor GABAB; serotonina 2C) se evaluaron en la amígdala, el hipocampo y la corteza prefrontal (PFC), que son regiones cerebrales clave del sistema límbico involucrado en la respuesta emocional.

Materiales y Métodos

Método

Ratones BALB/c machos recibieron alimentación por sonda oral (volumen de 200 pl) de 1 x 109 UFC de la cepa bacteriana durante 6 días consecutivos. En el Día 7, los animales se sometieron a eutanasia. El cerebro se extirpó rápidamente, se diseccionó y cada región del cerebro se congeló instantáneamente en hielo seco y se almacenó a -80 °C para análisis adicionales. La expresión de ARNm se cuantificó como se describe en el Ejemplo 6.

Resultados

Como se muestra en la Figura 22, a partir de los genes probados, un aumento significativo en la expresión del receptor de glucocorticoides (A), receptor de mineralocorticoides (B), BDNF (C), Grin 2B (D), CRH (E), CFR1 (F), se observó CD11b (G) y GABA A2 (H) en el hipocampo. Como se muestra en la Figura 23, el receptor de oxiOCDina (A), el receptor de glucocorticoides (B), el receptor de mineralocorticoides (C), Grin 2A (D) y Grin 2B (E) exhibieron una expresión significativamente mayor en la amígdala. En la corteza prefrontal, el BDNF (A), CRFR1 (B) y el receptor de mineralocorticoides (C) se regularon significativamente como resultado del tratamiento con la bacteria (Fig. 24).

Esto indica que Bariatricus puede ser útil en el tratamiento o prevención de trastornos o afecciones que pueden beneficiarse de la modulación de los niveles de expresión de estas proteínas en el cerebro, p. ej., enfermedades y trastornos del SNC. En particular, el BDNF y su receptor son esenciales para la plasticidad sináptica del adulto y la formación de recuerdos. [70]. Se observó una disminución en el ARNm de BDNF en el hipocampo de individuos con enfermedad de Alzheimer [71]. Los estudios de metanálisis también muestran que los pacientes con enfermedad de Alzheimer tienen un nivel reducido de BDNF sérico [72]. También se observó una disminución de la proteína BDNF en las regiones del cerebro caudado y putamen de pacientes que padecían la enfermedad de Huntington [73]. Por lo tanto, las cepas bacterianas de la invención pueden ser particularmente útiles en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, p. ej., la enfermedad de Alzheimer y Huntington.

Secuencias

SEQ ID NO: 1- secuencia del gen de ARNr 16S 43042 (conseso 2 lecturas acopladas usando Geneious)

AGCTCCCTCCTTTCGGTTGGGTCACTGACTTCGGGCGTTACTGACTCCCATGGTGTGACG GGCGGTGTGTACAAGACCCGGGAACGTATTCACCGCGACATTCTGATTCGCGATTACTA GCGATTCCAGCTTCATGTAGTCGAGTTGCAGACTACAATCCGAACTGAGACGTTATTTTT GGGATTTGCTCCGCCTCGCGGCCTCGCTTCCCTTTGTTTACGCCATTGTAGCACGTGTGT

AGCCCTGATCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAGGTTATCC CT GGC AGT CTCTCT AGAGTGCCC ACCTT AA AT GCT GGCT ACT A AAGAT A AGGGTTGCGC TCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACC TGTCTCCAGTGCCCCGAAGGGAAAGTACATTACATACTCTGTCACCGGGATGTCAAGAC CAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGTC CCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCATTCTTGCGAACGTACTCCCCAGGTGGAATACTTACTG CGTTTGCTGCGGCACCGAATGGCTTTGCCACCCGACACCTAGTATTCATCGTTTACGGCG TGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGAGCATCAACGTCAGTC ATCGTCCAGTAAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCCAATATCTACGCATTTCACCGC TACACTGGGAATTCCACTTACCTCTCCGACACTCTAGCTGCATAGTTTCCAAAGCAGTCC CGGGGTTGAGCCCCGGGCTTTCACTCCAGACTTACACAGCCGTCTACGCTCCCTTTACAC CCAGTAAATCCGGATAACGCTTGCACCATACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTATTT AGCCGGTGCTTCTTAGTCAGGTACCGTCATTTTCTTCCCTGCTGATAGAGCTTTACATAC CGAAATACTTCTTCGCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGGTTTCCCCCATTGTGCAATAT TCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGGTCA CCCTCTCAGGTCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACCAGCTAA TCAGACGCGGGTCCATCTCATACCACCGGAGTTTTTACCACCGCACCATGCGGTGCTGTG GTCTTATACGGTATTAGCAGCCATTTCTAACTGTTATCCCCTTGTATGAGGCAGGTTACC CACGCGTTACTCACCCGTCCGCCACTCAGTCACGAAAACCTTCCTTCCGAAGAAATCGA GTTCTAAGTGCTTCGTCGACTGCA SEQ ID NO: 2- secuencia del gen de ARNr 16S cepa 43171 (conseso 2 lecturas acopladas usando Geneious)

ACCCGGGAACGTATTCACCGCGACATTCTGATTCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCAT GTAGTCGAGTTGCAGACTACAATCCGAACTGAGACGTTATTTTTGGGATTTGCTCCGCCT CGCGGCCTCGCTTCCCTTTGTTTACGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTGATCATAAGG GGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAGGTTATCCCTGGCAGTCTCTCTAG AGTGCCCACCTTAAATGCTGGCTACTAAAGATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAA CCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCTCCAGTGCCCCG AAGGGAAAGTACATTACATACTCTGTCACCGGGATGTCAAGACCAGGTAAGGTTCTTCG CGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGTCCCCGTCAATTCCTTTG AGTTTCATTCTTGCGAACGTACTCCCCAGGTGGAATACTTACTGCGTTTGCTGCGGCACC GAATGGCTTTGCCACCCGACACCTAGTATTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTAT CTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGAGCATCAACGTCAGTCATCGTCCAGTAAGCCG CCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCCAATATCTACGCATTTCACCGCTACACTGGGAATTCCA CTTACCTCTCCGACACTCTAGCTGCATAGTTTCCAAAGCAGTCCCGGGGTTGAGCCCCGG GCTTTCACTCCAGACTTACACAGCCGTCTACGCTCCCTTTACACCCAGTAAATCCGGATA ACGCTTGCACCATACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTATTTAGCCGGTGCTTCTTAGT CAGGTACCGTCATTTTCTTCCCTGCTGATAGAGCTTTACATACCGAAATACTTCTTCGCT CACGCGGCGTCGCTGCATCAGGGTTTCCCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCC CGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGGTCACCCTCTCAGGTCGGCTA CTGATCGTCGCCTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACCAGCTAATCAGACGCGGGTCCAT

CTCATACCACCGGAGTTTTTACCACCGCACCATGCGGTGCTGTGGTCTTATACGGTATTA GCAGCCATTTCTAACTGTTATCCCCTTGTATGAGGCA

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Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para uso en terapia.

2. La composición para su uso según la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad elevada de histona desacetilasa (HDAC).

3. La composición para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección mediada por una actividad elevada de HDAC de Clase I.

4. La composición para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, para su uso en un método de inhibición selectiva de la actividad de HDAC de Clase I en el tratamiento de una afección mediada por una actividad de HDAC de Clase I elevada.

5. La composición para su uso según cualquier reivindicación anterior, en la que la composición se utiliza para inhibir selectivamente HDAC1, HDAC2 o HDAC3 en una enfermedad o afección mediada por una actividad elevada de HDAC1, HDAC2 o HDAC3.

6. La composición para su uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, para su uso en un paciente con actividad HDAC elevada.

7. La composición para uso según cualquier reivindicación anterior, para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada del grupo que consiste en: una enfermedad neurodegenerativa, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o enfermedad de Parkinson; lesión cerebral, como accidente cerebrovascular; trastornos del comportamiento o psiquiátricos, tales como trastorno por déficit de atención e hiperactividad, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de ansiedad, trastorno bipolar o trastorno por estrés postraumático; una enfermedad inflamatoria o autoinmune, como asma, artritis, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes, rechazo de aloinjertos, enfermedad de injerto contra huésped o una enfermedad inflamatoria del intestino, como la enfermedad de Crohn; o cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico.

8. Una composición que comprende una cepa bacteriana del género Bariatricus, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada de la lista que consiste en: una enfermedad neurodegenerativa, como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington o la enfermedad de Parkinson, lesión cerebral, tales como apoplejía, una enfermedad inflamatoria o autoinmune, tal como asma, artritis, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes, rechazo de aloinjertos, enfermedad de injerto contra huésped o una enfermedad inflamatoria del intestino, tal como enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa; o cáncer, como cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado o cáncer gástrico.

9. La composición para su uso de cualquier reivindicación anterior, en la que la cepa bacteriana es de la especie Bariatricus massiliensis.

10. La composición para su uso de cualquier reivindicación anterior, en la que la cepa bacteriana tiene una secuencia del gen de ARNr 16s que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% o 99,9% idéntico a SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2, o en el que la cepa bacteriana tiene la secuencia del gen ARNr 16s representada por SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2.

11. La composición para uso de cualquier reivindicación anterior, en la que la composición es para administración oral.

12. La composición para su uso de cualquier reivindicación precedente, en la que la cepa bacteriana está liofilizada.

13. Un producto alimenticio que comprende la composición de cualquier reivindicación anterior, para el uso de cualquier reivindicación anterior.

14. Una célula de la cepa Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042.

15. Una célula de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43042 para uso en terapia, preferiblemente para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección como se define en una de las reivindicaciones 2-8.

16. Una célula de la cepa de Bariatricus massiliensis depositada con el número de acceso NCIMB 43171 para uso en terapia, preferiblemente para uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección como se define en una de las reivindicaciones 2-8.