RS61972B1 - Kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve - Google Patents

Description

Opis pronalaska

OBLAST TEHNIKE

[0001] Ovaj pronalazak je u oblasti kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve izolovane iz digestivnog trakta sisara i upotrebe takvih kompozicija u lečenju bolesti, kao što je definisano patentnim zahtevima.

OBLAST PRONALASKA

[0002] Smatra se da je crevo kod ljudi sterilno in utero, ali je izloženo velikom broju mikroorganizama majke i mikroorganizama iz spoljašnje sredine odmah nakon rođenja. Nakon toga nastupa dinamičan period kolonizacije i sukcesije mikroorganizama, na koji utiču faktori kao što su način isporuke, spoljašnja sredina, ishrana i genotip domaćina, što sve utiče na sastav mikrobiota creva, posebno tokom ranog života. Posle toga, mikrobiota se stabilizuje i postaje kao kod odraslih subjekata [1]. Mikrobiota creva čoveka sadrži više od 500-1000 različitih filotipova koji u osnovi pripadaju dvema glavnim razdelima bakterija, Bacteroidetes i Firmicutes [2]. Uspešni simbiotski odnosi koji proističu od bakterijske kolonizacije ljudskog creva dali su širok spektar metaboličkih, strukturnih, zaštitnih i drugih korisnih funkcija. Pojačane metaboličke aktivnosti kolonizovanog creva osiguravaju da se inače nesvarljive komponente hrane razgrađuju oslobađanjem nusproizvoda koji obezbeđuju važan izvor hranljivih materija za domaćina. Slično tome, imunološki značaj mikrobiota u crevima dobro je prepoznat i opisan je kroz primere kod životinja bez mikroorganizama koji imaju oštećen imuni sistem koji je funkcionalno rekonstituisan nakon uvođenja komensalnih bakterija [3-5].

[0003] Dramatične promene u sastavu mikrobiota zabeležene su kod gastrointestinalnih poremećaja kao što je inflamatorna bolest creva (IBD). Na primer, nivoi bakterija Clostridium cluster XIVa smanjuju se kod pacijenata sa IBD, dok je broj E. coli povećan, što sugeriše promenu ravnoteže simbiota i patobionata u crevima [6-9]. Zanimljivo je da je ova disbioza mikroorganizama takođe povezana sa neravnotežom u populacijama T efektorskih ćelija.

[0004] Za prepoznavanje potencijalnog pozitivnog efekta koji određeni sojevi bakterija mogu imati na creva životinja, predloženi su različiti sojevi za upotrebu u lečenju različitih bolesti (videti, na primer, [10-13]). Takođe, određeni sojevi, uključujući uglavnom sojeve Lactobacillus i Bifidobacterium, predloženi su za upotrebu u lečenju različitih inflamatornih i autoimunih bolesti koje nisu direktno povezane sa crevima (videti [14] i [15] za pregled). Međutim, veza između različitih bolesti i različitih bakterijskih sojeva i precizni efekti određenih bakterijskih sojeva na creva i na sistemskom nivou i na bilo koje određene vrste bolesti slabo su okarakterisani.

[0005] U tehnici postoji potreba za novim postupcima lečenja bolesti. Takođe postoji potreba za karakterizacijom potencijalnih efekata bakterija creva tako da se nove terapije u kojima se koriste bakterije creva mogu razviti.

[0006] WO2017/160711 opisuje modulaciju mikrobioma creva za lečenje mentalnih bolesti i bolesti centralnog nervnog sistema.

[0007] Bessis et al. (2016, New Microbe and New Infect 12: 54-55) opisuje Bariatricus massiliensis kao novu bakterijsku vrstu iz mikrobiota creva ljudi.

SAŽETAK PRONALASKA

[0008] Istraživači su razvili nove kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve roda Bariatricus koji se mogu koristiti u terapiji. Posebno, istraživači su razvili nove kompozicije koje sadrže sojeve roda Bariatricus za upotrebu u lečenju i sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću histon deacetilaze (HDAC). Istraživači su identifikovali da bakterijski sojevi iz roda Bariatricus mogu biti efikasni za smanjenje aktivnosti histon deacetilaze. Pokazano je da aktivnost histon deacetilaze posreduje u patološkim simptomima u nizu bolesti i stanja koja uključuju, ali se ne ograničavaju na autoimume ili inflamatorne bolesti i stanja koja uključuju, ali se ne ograničavaju na, bolest graft protiv domaćina (GVHD), inflamatorne bolesti creva, kao što je Crohn-ova bolest, neurodegenerativne bolesti, kao što je Parkinson-ova bolest, povreda mozga, kao što je moždani udar, i različiti kanceri. Kao takve, kompozicije prema pronalasku mogu imati plejotropne prednosti u lečenju ili sprečavanju mnogih bolesti koje su najmanje delom posredovane aktivnošću HDAC. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju i sprečavanju bolesti posredovanih povećanom aktivnošću HDAC.

[0009] Kao što je opisano u primerima, oralna primena kompozicija koje sadrže Bariatricus može smanjiti aktivnost histon deacetilaze u modelima bolesti. Takođe, kako je opisano u primerima, oralna primena kompozicija koje sadrži Bariatricus može smanjiti hiperaktivnost u modelima bolesti kod miševa. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti korišćene u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja povezanih sa hiperaktivnošću. Kompozicije mogu biti korišćene u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti. Kompozicije mogu biti korišćene u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti povezane sa poremećajima ponašanja, kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj. Stoga, istraživači su identifikovali kompozicije efikasne u sprečavanju ili lečenju bolesti posredovanih aktivnošću HDAC i kompozicije efikasne u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja. Poremećaji ponašanja pogodni za lečenje sa kompozicijama prema pronalasku mogu ili ne moraju biti posredovani aktivnošću HDAC.

[0010] U prvom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u terapiji.

[0011] U posebnom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u lečenju i sprečavanju bolesti posredovanih povišenom aktivnošću HDAC. Istraživači su identifikovali da lečenje sa bakterijskim sojem iz ovog roda može smanjiti aktivnost HDAC, što može obezbediti kliničke pogodnosti u lečenju bolesti posredovanih aktivnošću HDAC. U nekim primerima izvođenja, utvrđeno je da su kompozicije prema pronalasku posebno korisne u smanjivanju aktivnosti HDAC Klase I. Klasa I HDACs su sveprisutno ekprimirane i najčešće se nalaze u jedru. HDACs Klasa I deacetiliraju ostatke lizina histona da bi vratili pozitivano naelektrisanje u histon, time povećavajući elektrostatičko vezivanje između histona i DNK. Aktivnost HDAC stoga povećava sabijanje hromatina što uzrokuje smanjenu regulaciju ekspresije gena koji se nalaze u DNK sekvenci. HDACs takođe imaju dodatne regulatorne efekte modifikovanjem ciljanog delovanja na nehistonske proteine. Inhibicija acetilacije koja ciljano deluje na nehistonske proteine može biti korisna u lečenju ili sprečavanju drugih aspekata bolesti ne direktno povezanih sa kontrolom ekspresije gena širenjem hromatina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu stoga biti korišćene da bi regulisalo ciljano delovanje na ekspresiju gena.

[0012] U posebnom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u postupku lečenja i sprečavanja bolesti ili stanja odabranih iz grupe koja se sastoji od: neurodegenerativne bolesti, kao što je Alzheimer-ova bolest, Huntington-ova bolest ili Parkinson-ova bolest; povreda mozga, kao što je moždani udar; ponašajni psihijatrijski poremećaji, kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj, opsesivno kompulzivni poremećaj, anksioznost, bipolarni poremećaj, ili post-traumatski stresni poremećaj, inflamatorna iili autoimmuna bolest, kao što je astma, artritis, psorijaza, multipla skleroza, dijabetes, odbacivanje alografta, bolest graft protiv domaćina, ili inflamatorna bolest crevam kao što je Crohn-ova bolest, ili karcinom, kao što je karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca. Efekat prikazan za bakterijske sojeve iz roda Bariatricus na HDAC aktivnost može obezbediti terapijske koristi za bolesti i stanja posredovana aberantnom aktivnošću HDAC, kao što je prethodno navedeno. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu obezbediti terapijske koristi u lečenju bolesti ili stanja sa povećanom ekspresijom HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu obezbediti terapijske koristi u lečenju bolesti ili stanja sa povećanom aktivnošću HDAC. Štaviše, istraživači su identifikovali da lečenje sa bakterijskim sojem roda Bariatricus može smanjiti aktivaciju proinflamatornih molekula, kao što je IL-6, pomoću LPS. Hronična inflamacija indukovana sa IL-6 može na kraju dovesti do smrti ćelije. Stoga, bakterijski sojevi prema pronalasku mogu biti delimično korisni u lečenju ili sprečavanju inflamatornih ili autoimunih poremećaja. U nekim primerima izvođenja, bakterijski sojevi su korisni u lečenju inflamatornih ili autoimunih poremećaja koje karakteriše pojačana aktivacija IL-6. Štaviše, istraživači su identifikovali da lečenje sa sojem bakterija iz roda Bariatricus može povećati aktivaciju MAP2 (protein 2 povezan sa mikrotubulama). MAP2 je gen povezan sa diferencijacijom neurona MAP2 i smatra se da je od suštinskog značaja za formiranje mikrotubula u neurogenezi, pa tako kompozicije prema pronalasku mogu biti delimično korisne za lečenje neurodegenerativnih bolesti ili povreda mozga. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste u lečenju neurodegenerativnih bolesti aktiviranjem ili povećavanjem nivoa MAP2. Štaviše, istraživači su identifikovali da lečenje sa bakterijskim sojem iz roda Bariatricus može zameniti ekspresiju IDO1 u crevima. Ekspresija IDOl u debelom crevu je povezana sa poboljšanjem bolesti u modelu kolitisa kod miševa. Stoga, sojevi bakterija prema pronalasku mogu biti delimično korisni u lečenju ili sprečavanju inflamatorne bolesti creva. Štaviše, istraživaći su identifikovali da lečenje sojem bakterija iz roda Bariatricus može zameniti ekspresiju određenog broja gena u mozgu, npr. povećana ekspresija BDNF u hipokampusu i prefrontalnom korteksu. BDNF je od suštinskog značaja za sinaptičku plastičnost kod odraslih i formiranje memorije i smanjenje u nivoima BDNF je posmatrano kod pacijenata sa Alzheimer-ovom i Huntington-ovom bolešću. Stoga, bakterijski sojevi prema pronalasku mogu biti delimično korisni u lečenju ili sprečavanju neurodegenerativnih bolesti, npr. Alzheimer-ove i Huntington-ove bolesti.

[0013] U nekim primerima izvođenja, bakterijski sojevi iz roda Bariatricus mogu obezbediti terapijske koristi u lečenju ponašajnih poremećaja odabranih iz liste koja se sastoji od: deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj protivljenja i odbijanja i poremećaja ponašanja. Istraživači su identifikovali da lečenje sa Bariatricus sojevima smanjuje hiperaktivnost kod miševa, što je simptom poremećaja ponašanja kao što je ADHD. Sojevi prema pronalasku mogu stoga biti korisni u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja, posebno u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja povezanih sa hiperaktivnošću, kao što je ADHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju i sprečavanju ADHD.

[0014] U nekim primerima izvođenja, bakterijski sojevi iz roda Bariatricus mogu obezbediti terapijske koristi u lečenju ili sprečavanju GVHD. Istraživači su identifikovali da lečenje sa sojevima Bariatricus povećava preživljavanje od GVHD kod miševa. Sojevi prema pronalasku mogu stoga biti korisni u lečenju ili sprečavanju GVHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste u lečenju ili sprečavanju GVHD posredovanog najmanje delimično aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste u lečenju ili sprečavanju GVHD kod subjekta.

[0015] U nekim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanju neurodegenerativne bolesti posredovane povišenom aktivnošću HDAC. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju ili sprečavanju simptoma neurodegenerativnih bolesti posredovanih aktivnošću HDAC. Istraživači su identifikovali da sojevi prema pronalasku inhibiraju aktivnost HDAC. Acetilacija i deacetilacija histona su važni epigenetski regulatori ekspresije gena. Neravnoteža acetilacije histona prisutna je u patogenezi neurodegenerativnih bolesti kao što su Alzheimer-ova bolest, Huntington-ova bolest i Parkinson-ova bolest. U nekim primerima izvođenja, sojevi prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neurodegenerativnih bolesti koje su povezane sa starošću. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju starosnih neurodegenerativnih bolesti, kao što su Parkinson-ova bolest ili Alchajmer-ova bolest, nastale u starosti. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neurodegenerativne bolesti. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Alzheimer-ove bolesti, Huntington-ove bolesti ili Parkinson-ove bolesti.

[0016] U nekim primerima izvođenja pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanju inflamatorne bolesti creva posredovane povišenom aktivnošću HDAC. Pokazalo se da inhibicija aktivnosti HDAC suzbija proizvodnju proinflamatornih citokina u gastrointestinalnom traktu. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju inflamatornih bolesti. Posebno, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju ili sprečavanju stanja povezanih sa patogenezom povećanja proinflamatornih citokina debelog creva. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju inflamatornih bolesti creva. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ulceroznog kolitisa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ove bolesti. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju inflamatornih bolesti. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju kolitisa.

[0017] U određenim promerima izvođenja prema pronalasku, kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga. Neuroprotektivna aktivnost kompozicija prema pronalasku i njihova sposobnost da smanje nivoe aktivnosti histon deacetilaze (HDAC) mogu ih učiniti korisnim za lečenje povrede mozga. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju moždanog udara, kao što je lečenje povrede mozga koja je posledica moždanog udara. U određenim promerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju povreda mozga, posebno moždanog udara.

[0018] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma. Disregulacija puteva acetilacije kod karcinoma uključena je u preživljavanje ćelija karcinoma i imunološku evaziju tumora. Na primer, HDAC posredovana deacetilacija p53 smanjuje stabilnost i poluživot p53. Acetilirani p53 veže i reguliše ekspresiju regulatornih i pro-apoptotičnih gena ćelijskog ciklusa sa većom efikasnošću, smanjujući rast ćelija karcinoma i pospešujući apoptozu. Deacetiliranje p53 stoga može inhibirati apoptozu u ćelijama karcinoma, povećavajući preživljavanje ćelija karcinoma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju karcinoma sa nemutiranim p53. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku povećanja apoptoze u ćelijama karcinoma. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku smanjenja imunološke evazije tumora. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma sa povećanom aktivnošću HDAC. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kao pro-apoptotični lekovi, na primer za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma.

[0019] U daljim poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanju karcinoma, kao što je karcinom dojke, pluća ili jetre. U određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu u postupku smanjenja veličine tumora ili sprečavanju rasta tumora u lečenju karcinoma.

U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis, za upotrebu u lečenju karcinoma.

[0020] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku smanjenja aktivnosti histon deacetilaze u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanog povišenom aktivnošću histon deacetilaze.

[0021] U određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu kod pacijenta sa povišenom aktivnošću histon deacetilaze. U određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu kod pacijenta sa povišenom aktivnošću HDAC klase I. Efekat na aktivnost histon deacetilaze prikazan za sojeve Bariatricus može biti posebno koristan za takve pacijente.

[0022] Bakterijski soj u kompoziciji je Bariatricus. U određenim primerima izvođenja prema pronalasku, bakterijski soj u kompoziciji je Bariatricus massiliensis. Takođe se mogu koristiti blisko povezani sojevi, kao što su bakterijski sojevi koji imaju sekvencu 16s rRNA gena koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična SEQ ID BR: 1 ili SEQ ID BR: 2. Poželjno, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena predstavljenu SEQ ID BR: 1. Poželjno, bakterijski soj za upotrebu prema pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena predstavljenu SEQ ID BR: 2.

[0023] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku je za oralnu primenu. Oralna primena sojeva prema pronalasku može biti efikasna za lečenje bolesti i stanja posredovanih aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, oralna primena sojeva prema pronalasku može biti efikasna za lečenje bolesti i stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC klase I. Takođe, oralna primena je pogodna za pacijente i lekare i omogućava isporuku i/ili delimičnu ili potpunu kolonizaciju creva.

[0024] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata ili nosača.

[0025] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku sadrži bakterijski soj koji je liofilizovan. Liofilizacija je efikasna i pogodna tehnika za pripremu stabilnih kompozicija koje omogućavaju isporuku bakterija.

[0026] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju kako je prethodno opisano.

[0027] Pored toga, otkriven je postupak lečenja ili sprečavanja bolesti ili stanja posredovanih aktivnošću HDAC, koji sadrži primenjivanje kompozicije koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus.

[0028] U razvoju prethodno pomenutog pronalaska pronalazači su identifikovali i okarakterisali bakterijske sojeve koji su posebno korisni za terapiju. Pokazalo se da su sojevi Bariatricus massiliensis prema pronalasku efikasni u lečenju ovde opisanih bolesti, kao što su moždani udar, ADHD i GVHD. Prema tome, u drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje ćeliju soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042. Pronalazak takođe obezbeđuje kompozicije koje sadrže takve ćelije ili biološki čiste kulture takvih ćelija. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042 za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti. Otkrivena je ćelija soja Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43171. Takođe su otkriveni kompozicije koji sadrže takve ćelije ili biološki čiste kulture takvih ćelija. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43171 za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0029]

Slika 1 Aktivnost histon deacetilaze celih ćelija (slika 1A), Aktivnost histon deacetilaze lizata ćelije (Slika 1B)

Slika 2 Nivoi proizvodnje metabolita kod soja Bariatricus massiliensis 43042

Slika 3 Inhibicija HDACs Klase I (Slika 3A); inhibicija HDAC1 (Slika 3B); inhibicija HDAC2 (Slika 3C); inhibicija HDAC3 (Slika 3D)

Slika 4 Soj 43042 smanjuje hiperaktinost kod miševa

Slika 5 Podaci o telesnoj težini GVHD kod modela miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis 43171. Životinje su merene dnevno tokom trajanja studije. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 6 Podaci o telesnoj težini GVHD kod modela miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis 43171. Životinje su merene dnevno tokom trajanja studije, i prikazan je procenat promene telesne težine u odnosu na 14 dan. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 7 Podaci o telesnoj težini GVHD kod modela miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis 43171. Životinje su merene dnevno tokom trajanja studije, i prikazan je procenat promene telesne težine u odnosu na dan 0. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 8 Podaci o telesnoj težini GVHD na modelima miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis soj 43171, uzimajući u obzir osipanje grupe, telesna težina uginulih životinja tokom trajanja studije se odnosila na životinje pronađene mrtve ili eutanazirane za sve grupe osim grupe 2. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi. Slika 9 Podaci o telesnoj težini GVHD na modelima miševa kojima je dat takrolimus (FK506) ***: p≤0.005.

Slika 10 Preživljavanje životinja na modelima miševa kojima je dat Bariatricus massiliensis soj 43171

Slika 11 Preživljavanje životinja na modelima miševa kojima je dat takrolimus (FK506) Slika 12 Kliničke ocene GVHD na modelima miševa kojima je dat Bariatricus massiliensis soj 43171. Životinjama je dodeljena klinička ocena GVHD svakodnevno od 0 do 30 dana. Površina ispod krive (AUC) izračunata je korišćenjem pravila trapezoidne transformacije i prikazana je na priloženoj slici. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 13 Kliničke ocene GVHD na modelima miševa kojima je dat Bariatricus massiliensis soj 43171. Životinjama je dodeljena klinička ocena GVHD svakodnevno od 0 do 30 dana. Da bi se uzelo u obzir osipanje grupe, ocena GVHD uginulih životinja za vreme trajanja studije odnosila se na životinje pronađene mrtve ili eutanazirane za sve grupe osim grupe 2.Površina ispod krive (AUC) izračunata je korišćenjem pravila trapezoidne transformacije i prikazana je na priloženoj slici. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

1

Slika 14 (A) držanje tela, (B) aktivnost, (C) tekstura krzna, (D) integritet kože i (E) gubitak telesne težine korišćen je u kompozitnim ocenama GVHD na modelima miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis 43171.

Slika 15 Kliničke ocene GVHD kod modela miševa kojima je dat takrolimus (FK506) Slika 16 Ocene jačine kolitisa na modelima miševa kojima je dat Bariatricus massiliensis soj 43171. Životinjama je urađena video endoskopija 29 dana da bi se procenila upala debelog creva. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 17 Reprezentativne slike endoskopije debelog creva.

Slika 18 Nivoi citrulina u plazmi kod miševa kojima je dat soj Bariatricus massiliensis 43171. Krv je prikupljena pre eutanazije od svih preživelih životinja i obrađena je za plazmu; citrulin u plazmi je procenjen u duplikatu pomoću ELISA. Plazma je razblažena 1:10 za analizu. Zvezdica ukazuje na značajnost u poređenju sa grupom 1; crta ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 2; a tačka ukazuje na značaj u poređenju sa grupom 3; osim ako nije drugačije naznačeno. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005, ****p<0.001. Podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± SEM. n=8-12 po grupi.

Slika 19 Nivoi sekrecije IL-6.

Slika 20 Aktivacija MAP2.

Slika 21 IDOl ekspresija u ileumu (A) i debelom crevu (B) miševa kojima je dat Bariatricus. *p<0.05.

Slika 22 Ekspresija glukokortikoidnog receptora (A), mineralokortikoidnog receptora (B), BDNF (C), Grin 2B (D), CRH (E), CFR1 (F), CD11b (G) i GABA A2 (H) u hipokampusu miševa kojima je dat Bariatricus. *p<0.05.

Slika 23 Ekspresija receptora oksitocina (A), glukokortikoidnog receptora (B), mineralokortikoidnog receptora (C), Grin 2A (D) i Grin 2B (E) u amigdali miševa kojima je dat Bariatricus. *p<0.05.

Slika 24 Ekspresija BDNF (A), CRFR1 (B) i mineralokortikoidnog receptora (C) u prefrontalnom korteksu kod miševa kojima je dat Bariatricus. *p<0.05, **p<0.01.

OTKRIVANJE PRONALASKA

Bakterijski sojevi

[0030] Kompozicije prema pronalasku sadrže bakterijski soj roda Bariatricus, kao što je definisano patentnim zahtevima. Primeri pokazuju da su bakterije ovog roda korisne za lečenje ili sprečavanje bolesti i stanja posredovanih aktivnošću HDAC. Poželjni bakterijski sojevi su od vrste Bariatricus massiliensis.

[0031] Primer soja Bariatricus za upotrebu prema pronalasku je soj vrste Bariatricus massiliensis. Bariatricus su Gram pozitivne bakterije, štapičasti obligativni anaerobi (Bessis et al 2016 New Microbe and New Infect 12: 54-55). Bariatricus massiliensis može biti izolovan iz creva ljudi. Sekvence 16S rRNA gena sojeva Bariatricus massiliensis korišćene u primerima su otkrivene ovde kao SEQ ID BR: 1 i SEQ ID BR: 2. Dalje ogledni soj Bariatricus massiliensis opisan je u Bessis et al (2016 New Microbe and New Infect 12: 54-55).

[0032] Bakterija Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43042 je testirana u Primerima i označena je ovde kao soj 43042. Sekvenca 16S rRNA gena za soj 43042 koji je ispitivan je obezbeđena u SEQ ID BR: 1. Soj 43042 je deponovan kod međunarodne depozitarne uprave NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Scotland) od strane 4D Pharma Research Limited (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB252ZS, Scotland) 18/05/2018 kao " Bariatricus massiliensis" i dodeljen joj je pristupni broj NCIMB 43042. Bakterija Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43171 testirana je u Primerima i označena je ovde kao soj 43171. Sekvenca 16S rRNA gena za soj 43171 koja je ispitivana je obezbeđena u SEQ ID BR: 2. Soj 43171 je deponovan kod međunarodne depozitarne uprave NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, AB21 9YA Scotland) od strane 4D Pharma Research Limited (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB252ZS, Scotland) 20/08/2018 kao „Bariatricus massiliensis“ i dodeljen mu je pristupni broj NCIMB 43171.

[0033] Očekuje se da će i sojevi bakterija blisko povezani sa sojevima testiranim u Primerima da budu efikasni u lečenju ili sprečavanju bolesti i stanja posredovanih aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, bakterijski soj za upotrebu prema pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična SEQ ID BR: 1. Poželjno, bakterijski soj za upotrebu prema pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena predstavljenu SEQ ID BR: 1. U određenim primerima izvođenja, bakterijski soj za upotrebu prema pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična SEQ ID BR: 2. Poželjno, bakterijski soj za upotrebu prema pronalasku ima sekvencu 16s rRNA gena predstavljenu SEQ ID BR: 2.

[0034] Takođe se očekuje da će i bakterijski sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171 biti efikasni u lečenju ili sprečavanju bolesti i stanja posredovanih HDAC aktivnošću. Biotip je blisko povezan soj koji ima iste ili veoma slične fiziološke i biohemijske karakteristike.

[0035] Sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171 i koji su pogodni za upotrebu prema pronalasku mogu se identifikovati sekvenciranjem drugih nukleotidnih sekvenci za bakteriju deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171. Na primer, u suštini čitav genom se može sekvencirati, a soj biotipa za upotrebu prema pronalasku može imati najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identiteta sekvence preko najmanje 80% celokupnog njegovog genoma (npr. preko najmanje 85%, 90%, 95% ili 99%, ili preko celokupnog njegovog genoma). Ostale pogodne sekvence za upotrebu u identifikovanju biotipskih sojeva mogu uključivati hsp60 ili ponovljene sekvence kao što su BOX, ERIC, (GTG)5ili REP [16]. Sojevi biotipa mogu imati sekvence sa najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identiteta sekvence u odgovarajućoj sekvenci bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171.

[0036] Alternativno, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovani pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171 i koji su pogodni za upotrebu prema pronalasku mogu se identifikovati korišćenjem pristupnog broja NCIMB 43042 ili NCIMB 43171, i analizom restrikcionih fragmenata i/ili PCR analizom, na primer korišćenjem polimorfizma dužine amplifikovanih fluorescentnih fragmenta (FAFLP) i repetitivnog DNK elementa (rep) -PCR fingerprinting tehnikom, ili profilisanjem proteina, ili delimičnim sekvenciranjem 16S ili 23S rDNA. U poželjnim primerima izvođenja, takve tehnike se mogu koristiti za identifikaciju drugih sojeva Bariatricus.

[0037] U određenim primerima izvođenja, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171 i koji su pogodni za upotrebu prema pronalasku su sojevi koji obezbeđuju isti obrazac kao i bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171 kada se analiziraju restrikcionom analizom amplifikovanih fragmenta ribosomalne DNK (ARDRA), na primer kada se koristi restriktivni enzim Sau3AI (za ogledne postupake i smernice videti, na primer, [17]. Alternativno, sojevi biotipa su identifikovani kao sojevi koji imaju iste obrasce fermentacije ugljenih hidrata kao i bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171.

[0038] Ostali sojevi Bariatricus koji su korisni u kompozicijama i upotrebama prema pronalasku, kao što su biotipovi bakterije deponovani pod pristupnim brojem NCIMB 43042 ili NCIMB 43171, mogu se identifikovati korišćenjem bilo kog odgovarajućeg postupka ili strategije, uključujući analize opisane u primerima. Na primer, sojevi za upotrebu prema pronalasku mogu se identifikovati primenom bakterija u analizi aktivnosti HDAC i procenom inhibicije aktivnosti HDAC. Sojevi bakterija sa uporedivom inhibitornom aktivnošću HDAC

1

NCIMB 43042 pogodni su za upotrebu prema pronalasku. Posebno, bakterijski sojevi koji imaju slične obrasce rasta, metabolički tip i/ili površinske antigene bakteriji deponovanoj pod pristupnim brojem NCIMB 43042 mogu biti korisni u pronalasku. Korisni soj imaće uporedivu HDAC inhibitornu aktivnost i/ili uporedive efekte na smanjenje hiperaktivnosti u analizama korišćenim u primerima sa sojem NCIMB 43042, koji se mogu identifikovati korišćenjem protokola kultivisanja i primene opisanih u primerima. U drugim slučajevima, sojevi za upotrebu prema pronalasku mogu se identifikovati primenom bakterija na GVHD modele opisane u primerima i procenom efikasnosti u lečenju GVHD. Sojevi bakterija sa uporedivom aktivnošću sa NCIMB 43171 u pogledu lečenja GVHD pod uslovima prikazanim u primerima su pogodni za upotrebu prema pronalasku.

[0039] Posebno poželjan soj prema pronalasku je soj Bariatricus massiliensis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43042. Ovo je ogledni soj 43042 testiran u primerima i pokazano je da je efikasan u smanjenju aktivnosti HDAC i smanjenju hiperaktivnosti. Prema tome, pronalazak obezbeđuje ćeliju, kao što je izolovana ćelija, soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042. Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži ćeliju soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042. Pronalazak takođe obezbeđuje biološki čistu kulturu soja Bariatricus massiliensis deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 43042. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Bariatricus massiliensis deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43042 za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti.

[0040] Derivat soja deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43042 može biti “kćerka” soj (potomstvo) ili kultivisan soj (subkloniran) iz originala. Derivat soja prema pronalasku može se modifikovati, na primer na genetičkom nivou, bez narušavanja biološke aktivnosti. Posebno, derivat soja prema pronalasku je terapijski aktivan. Derivat soja imaće uporedivu inhibitornu aktivnost HDAC sa originalnim sojem NCIMB 43042. Posebno, derivat soja će izazvati uporedive efekte na inhibitornu aktivnost HDAC ili modele hiperaktivnosti prikazane u primerima, koji se mogu identifikovati korišćenjem protokola kultivisanja i primene opisanih u primerima. Derivat soja NCIMB 43042 će generalno biti biotip soja NCIMB 43042.

[0041] Sledeći posebno poželjni soj prema pronalasku je soj Bariatricus massiliensis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43171. Ogledni soj 43171 testiran u primerima pokazao se efikasnim u lečenju GVHD. Otkrivena je ćelija, kao što je izolovana ćelija, soja Bariatricus massiliensis 43171, ili njegov derivat. Otkriven je takođe kompozicija koji sadrži ćeliju soja Bariatricus massiliensis 43171, ili njegov derivat. Otkrivena je takođe biološki čista kultura soja Bariatricus massiliensis 43171. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Bariatricus massiliensis 43171, za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti.

[0042] Derivat soja deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43171 može biti “kćerka” soj (potomstvo) ili kultivisan soj (subkloniran) iz originala. Derivat soja prema pronalasku može se modifikovati, na primer na genetičkom nivou, bez narušavanja biološke aktivnosti. Posebno, derivat soja prema pronalasku je terapijski aktivan. Derivat soja će imati uporedivu aktivnost sa originalnim sojem NCIMB 43171 u odnosu na lečenje GVHD pod uslovima prikazanim u primerima. Derivat soja NCIMB 43171 će generalno biti biotip NCIMB 43171 soja.

[0043] U poželjnim primerima izvođenja, bakterijski sojevi u kompozicijama prema pronalasku su vijabilni i sposobni za delimičnu ili potpunu kolonizaciju creva.

Upotreba u terapiji

[0044] Kao što je pokazano u primerima, bakterijske kompozicije prema pronalasku su efikasne za smanjenje aktivnosti HDAC. Posebno, lečenjem sa kompozicijama prema pronalasku postiže se smanjenje aktivnosti HDAC Klase 1. Posebno, lečenjem sa kompozicijama prema pronalasku postiže se smanjenje aktivnosti HDAC2. Kompozicije prema pronalasku takođe pokazuju klinička poboljšanja hiperaktivnosti na modelima životinja. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih aktivnošću HDAC. Stanje može biti simptom bolesti. Posebno, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za smanjenje ili sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih povišenim nivoima HDAC aktivnosti. Posebno, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za smanjenje ili sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih povišenim nivoima aktivnosti HDAC klase I. Posebno, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za smanjenje ili sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih povišenim nivoima aktivnosti HDAC2.

[0045] Histon deacetilaze su klasa enzima koji uklanjaju acetilne grupe sa proteina na koje ciljano deluju. Najrasprostranjeniji HDAC koji ciljano deluju su histoni, ali poznato je da HDACs deacetiliraju lizinske ostatke nehistonskim proteinima na koje ciljano deluju da bi privremeno regulisali aktivnost proteina. Kao takvi, HDAC se ponekad označavaju kao lizin deacetilaze. Trenutno je poznato 13 HDACs koji su svrstani u četiri glavne klase klasa I (HDACs 1, 2, 3 i 8), klasa IIa (HDACs 4,5,7 i 9) i klasa IIb (HDACs 6 i 10), klasa III (sirt1-sirt7) i klasa IV (HDAC 11) [7]. Svaka klasa obično ima drugačiji obrazac ekspresije tkiva i subćelijsku lokalizaciju.

[0046] Acetilacija/deacetilacija proteina se obično koristi kao mehanizam post-translacione kontrole aktivnosti proteina. Acetilacija/deacetilacija histona je dobro uspostavljen mehanizam regulacije transkripcije. Genetička regulacija je uzrokovana cepanjem acetilne grupe iz ε -N-acetil aminokiseline lizin u repu histona posredstvom histon deacetilaze. Uklanjanjem acetilne

1

grupe vraća se pozitivno naelektrisanje na rep histona, što dovodi do povoljnijeg vezivanja za negativno naelektrisanu fosfodiestarsku okosnicu DNK. Poboljšano vezivanje dovodi do čvršćeg zbijanja hromozoma i ukupnog smanjenja u ekspresiji gena na mestu deacetilacije histona.

[0047] Aktivnost histon deacetilaze je uključena u širok spektar bolesti i stanja. Inhibicija aktivnosti histon deacetilaze može se koristiti za ublažavanje ili poboljšanje ovih bolesti ili stanja. Pan-inhibitori histon deacetilaze mogu biti korisni u lečenju ili sprečavanju bolesti posredovanih HDAC. Specifične izoforme inhibitora HDAC mogu biti korisne u lečenju ili sprečavanju bolesti posredovanih specifičnom aktivnošću izoforme HDAC.

[0048] Inhibicija aktivnosti HDAC je utvrđeni modalitet lečenja, a brojni HDAC inhibitori su odobreni lekovi, uključujući: Vorinostat (CTCL), Romidepsin (CTCL), Hidamid (PTCL), Panobinostat (multipli mijelom), Belinostat (limfom T ćelija) i mnogi su u kliničkim ispitivanjima, uključujući: Panobinostat (CTCL), valproinsku kiselinu (rak grlića materice i rak jajnika, spinalna mišićna atrofija), Mocetinostat (folikularni limfom, Hodgkin-ov limfom i akutna mijeloidna leukemija), Abexinostat (sarkom), Entinostat (Hodgkin-ov limfom, rak pluća i rak dojke), SB939 (ponavljajući ili metastatski rak prostate), Resminostat (Hodgkin-ov limfom), Givinostat (refraktarne leukemije i mijelomi), HBI-800 (napredni čvrsti tumori uključujući melanom, karcinom bubrežnih ćelija (RCC) i nemikrocelularnog karcinoma pluća (NSCLC)), Kevetrin (karcinom jajnika), CUDC-101, AR-42 (recidivirani ili multipli mijelom rezistentan na lečenje, hronična limfocitna leukemija ili limfom), CHR-2845, CHR-3996, 4SC-202 ( napredne hematološke indikacije), CG200745 (čvrsti tumori), ACY-1215 (multipli mijelom), ME-344 (čvrsti refraktarni tumori), sulforafan i trihostatin (antiinflamatorno).

[0049] Primeri bolesti ili stanja posredovanih aktivnošću HDAC uključuju neurodegenerativne bolesti, kao što su Alzheimer-ova bolest, Huntington-ova bolest ili Parkinson-ova bolest, povreda mozga, kao što je moždani udar, poremećaji ponašanja, kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj, inflamatorne bolesti creva, kao što je Crohn-ova bolest, karcinom, kao što su karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste za lečenje ili sprečavanje jedne od ovih bolesti ili stanja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste za lečenje ili sprečavanje jedne od ovih bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste za lečenje ili sprečavanje jedne od ovih bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC klase I. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se koriste za lečenje ili sprečavanje jedne od ovih bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC2.

1

[0050] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u terapiji. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku smanjenja aktivnosti HDAC u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanog povišenom aktivnošću HDAC. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC klase I. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku inhibiranja aktivnosti HDAC klase I. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku selektivne inhibicije aktivnosti HDAC klase I u lečenju ili sprečavanju bolesti posredovane povišenom aktivnošću HDAC klase I. Istraživači su identifikovali da određene kompozicije prema pronalasku selektivno inhibiraju HDACs klase I. Kako je upotrebljen ovde, "selektivno" se odnosi na kompozicije koje imaju najveći inhibitorni efekat na HDACs klase I, na primer, u poređenju sa njihovim inhibitornim efektom HDACs iz drugih klasa. Selektivna inhibicija HDACs je korisna za lečenje bolesti koje zahtevaju dugotrajnu primenu terapijskog sredstva, na primer kada bolest ili stanje treba lečiti tokom čitavog života pacijenta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku koje su selektivni inhibitori HDAC klase I su za upotrebu u palijativnom lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC klase I. Selektivni inhibitori su korisniji od pan-inhibitora poznatih u tehnici zbog smanjivanja neželjenih efekata povezanih sa neželjenom inhibicijom drugih klasa HDACs. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su HDAC2 selektivni inhibitori. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku selektivnog smanjenja aktivnosti HDAC2. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti posredovane povišenom aktivnošću HDAC2.

Povreda mozga

[0051] Primeri pokazuju da su kompozicije prema pronalasku neuroprotektivne i da imaju inhibitornu aktivnost HDAC. HDAC2 je presudan za ciljano delovanje na funkcionalni oporavak od moždanog udara [18], a inhibicija HDAC može sprečiti povredu bele mase [19], pa kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju povrede mozga.

[0052] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga. U nekim primerima izvođenja, povreda mozga je traumatska povreda mozga. U nekim primerima izvođenja, povreda mozga je stečena povreda mozga. U nekim

1

primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica traume. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica tumora. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica krvarenja u mozgu. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica encefalitisa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne hipoksije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne anoksije.

[0053] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju moždanog udara. Efekti prikazani u primerima su posebno relevantni za lečenje moždanog udara. Moždani udar nastaje kada se prekine protok krvi najmanje u delu mozga. Bez adekvatnog snabdevanja krvlju koja obezbeđuje kiseonik i hranljive materije u moždanom tkivu i uklanjanja otpadnih materija iz moždanog tkiva, moždane ćelije brzo počinju da umiru. Simptomi moždanog udara zavise od regiona mozga koji nema neadekvatan protok krvi. Simptomi uključuju paralizu, ukočenost ili slabost mišića, gubitak ravnoteže, vrtoglavicu, iznenadne jake glavobolje, oštećenje govora, gubitak pamćenja, gubitak sposobnosti rasuđivanja, iznenadnu zbunjenost, oštećenje vida, komu ili čak smrt. Moždani udar se označava i kao moždani napad ili cerebrovaskularna nesreća (CVA). Simptomi moždanog udara mogu biti kratki ako se u kratkom vremenskom roku obnovi odgovarajući protok krvi. Međutim, ako se neadekvatan protok krvi nastavi tokom značajnog vremenskog perioda, simptomi mogu biti trajni.

[0054] U nekim primerima izvođenja, moždani udar je cerebralna ishemija. Cerebralna ishemija nastaje kada nema dovoljno protoka krvi u tkivima mozga da bi se zadovoljila metabolička potreba. U nekim primerima izvođenja, cerebralna ishemija je fokalna cerebralna ishemija, tj. ograničena na određeni region mozga. U nekim primerima izvođenja cerebralna ishemija je globalna cerebralna ishemija, tj. obuhvata široko područje moždanog tkiva. Fokalna cerebralna ishemija se često javlja kada se cerebralni krvni sud blokira, delimično ili u potpunosti, smanjujući protok krvi u određeni region mozga. U nekim primerima izvođenja fokalna cerebralna ishemija je ishemijski moždani udar. U nekim primerima izvođenja, ishemijski moždani udar je trombotičan, tj. uzrokovan trombom ili krvnim ugruškom, koji se razvija u cerebralnom krvnom sudu i ograničava ili blokira protok krvi. U nekim primerima izvođenja ishemijski moždani udar je trombotički moždani udar. U nekim primerima izvođenja ishemijski

1

moždani udar je emboličan, tj. uzrokovan embolusom ili slobodnom masom koja putuje kroz krvotok i ograničava ili blokira protok krvi na mestu udaljenom od njegovog porekla. U nekim primerima izvođenja ishemijski moždani udar je emboličan moždani udar. Globalna cerebralna ishemija se često javlja kada je protok krvi u mozak kao celina blokiran ili smanjen. U nekim primerima izvođenja globalna cerebralna ishemija je uzrokovana hipoperfuzijom, tj. usled šoka. U nekim primerima izvođenja globalna cerebralna ishemija je rezultat srčanog zastoja.

[0055] U nekim primarima izvođenja subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo cerebralnu ishemiju. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo fokalnu cerebralnu ishemiju. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo ishemijski moždani udar. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo trombotički moždani udar. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je embolični moždani udar. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je globalnu cerebralnu ishemiju. U nekim primarima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je hipoperfuziju. U nekim primarima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je srčani zastoj.

[0056] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju cerebralne ishemije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju fokalne cerebralne ishemije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ishemijskog moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju trombotičkog moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju emboličnog moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju globalne cerebralne ishemije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hipoperfuzije.

[0057] U nekim primerima izvođenja, moždani udar je hemoragijski moždani udar. Hemoragijski moždani udar uzrokovan je krvarenjem u mozak ili oko njega, što rezultuje otokom, pritiskom i oštećenjem ćelija i tkiva mozga. Hemoragijski moždani udar je obično rezultat oslabljenog krvnog suda koji pukne i iskrvari u okolini mozga. U nekim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je intracerebralno krvarenje, tj. uzrokovano krvarenjem unutar samog moždanog tkiva. U nekim primerima izvođenja intracerebralno krvarenje je uzrokovano intraparenhimskim krvarenjem. U nekim primerima izvođenja intracerebralno krvarenje je uzrokovano intraventrikularnim krvarenjem. U nekim primerima izvođenja hemoragijski moždani udar je subarahnoidno krvarenje, tj. krvarenje koje se javlja izvan moždanog tkiva, ali još uvek unutar lobanje. U nekim primerima izvođenja, hemoragijski

1

moždani udar je rezultat cerebralne amiloidne angiopatije. U nekim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar rezultat je aneurizme mozga. U nekim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je rezultat cerebralne arteriovenske malformacije (AVM).

[0058] U nekim primerima izvođenja subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je hemoragijski moždani udar. U nekim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je intracerebralno krvarenje. U nekim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je intraparenhimsko krvarenje. U nekim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je intraventrikularno krvarenje. U nekim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je subarahnoidno krvarenje. U nekim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga je pretrpeo cerebralnu amiloidnu angiopatiju. U nekim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je aneurizmu mozga. U nekim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je cerebralni AVM.

[0059] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hemoragijskog moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju intracerebralnog krvarenja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju intraparenhimskog krvarenja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju intraventrikularnog krvarenja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju subarahnoidnog krvarenja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju cerebralne amiloidne angiopatije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju aneurizme mozga. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju cerebralne AVM.

[0060] Vraćanje adekvatnog krvotoka u mozak nakon perioda prekida, iako efikasno u ublažavanju simptoma povezanih sa moždanim udarom, može paradoksalno rezultovati daljim oštećenjem moždanog tkiva. Tokom perioda prekida, zahvaćeno tkivo pati od nedostatka kiseonika i hranljivih sastojaka, a naglo obnavljanje krvotoka može rezultirati upalom i oksidativnim oštećenjem indukcijom oksidativnog stresa. Ovo je poznato kao reperfuzijska povreda i dobro je dokumentovano ne samo nakon moždanog udara, već i nakon srčanog udara ili drugog oštećenja tkiva kada se dotok krvi vraća u tkivo nakon perioda ishemije ili nedostatka kiseonika. U nekim primerima izvođenja subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpela je reperfuzijsku povredu kao rezultat moždanog udara. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju reperfuzijske povrede koja je posledica moždanog udara.

2

[0061] Privremeni ishemijski napad (TIA), koji se često naziva mini-moždani udar, je prepoznatljiv znak upozorenja za ozbiljniji moždani udar. Stoga, subjekti koji su pretrpeli jedan ili više TIAs imaju veći rizik od moždanog udara. U nekim primerima izvođenja subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je TIA. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju TIA. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekta koji je pretrpeo TIA.

[0062] Visok krvni pritisak, povišen holesterol u krvi, porodična istorija moždanog udara, bolesti srca, dijabetes, aneurizme mozga, arteriovenske malformacije, bolest srpastih ćelija, vaskulitis, poremećaji krvarenja, upotreba nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAIDs), pušenje duvana, konzumiranje velike količine alkohola, ilegalna upotreba droga, gojaznost, nedostatak fizičke aktivnosti i nezdrava ishrana smatraju se faktorima rizika za moždani udar. Posebno, definitivno je dokazano da snižavanje krvnog pritiska sprečava ishemijske i hemoragijske moždane udare [20, 21]. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekata koji imaju najmanje jedan faktor rizika za moždani udar. U nekim primerima izvođenja subjekat ima dva faktora rizika za moždani udar. U nekim primerima izvođenja subjekat ima tri faktora rizika za moždani udar. U nekim primerima izvođenja subjekat ima četiri faktora rizika za moždani udar. U nekim primerima izvođenja subjekat ima više od četiri faktora rizika za moždani udar. U nekim primerima izvođenja subjekat ima visok krvni pritisak. U nekim primerima izvođenja subjekat ima visok holesterol u krvi. U nekim primerima izvođenja subjekat ima porodičnu istoriju moždanog udara. U nekim primerima izvođenja subjekat ima srčanu bolest. U nekim primerima izvođenja subjekat ima dijabetes. U nekim realizacijama subjekat ima aneurizmu mozga. U nekim primerima izvođenja subjekat ima arteriovenske malformacije. U nekim primerima izvođenja subjekat ima vaskulitis. U nekim primerima izvođenja subjekat ima bolest srpastih ćelija. U nekim primerima izvođenja subjekat ima poremećaj krvarenja. U nekim primerima izvođenja subjekat ima istoriju upotrebe nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAIDs). U nekim primerima izvođenja subjekat puši duvan. U nekim primerima izvođenja subjekat konzumira velike količine alkohola. U nekim primerima izvođenja subjekat koristi ilegalne droge. U nekim primerima izvođenja subjekat je gojazan. U nekim primerima izvođenja subjekat ima prekomernu telesnu težinu. U nekim primerima izvođenja subjekat ima nedostatak fizičke aktivnosti. U nekim primerima izvođenja subjekat ima nezdravu ishranu.

[0063] Primeri ukazuju na to da kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje povrede mozga i pomažu oporavku kada se primenjuju pre nego što se dogodi povreda. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje povrede mozga kada se daju subjektima sa rizikom od povrede mozga, kao što je moždani udar.

[0064] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju oštećenja izazvanog potencijalnom povredom mozga, poželjno moždanim udarom. Kompozicije mogu smanjiti nastala oštećenja kada se daju pre nego što se dogodi potencijalna povreda mozga, posebno kada se daju pacijentu za koga je utvrđeno da postoji rizik od povrede mozga.

[0065] Primeri ukazuju na to da kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje povrede mozga i pomažu oporavku kada se daju nakon što se dogodi povreda. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje povrede mozga kada se daju subjektima nakon povrede mozga, kao što je moždani udar.

[0066] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga smanjenjem motoričkih oštećenja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga poboljšanjem motoričke funkcije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga poboljšanjem snage mišića. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga poboljšanjem memorije. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga poboljšanjem socijalnog prepoznavanja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče povredu mozga poboljšanjem neurološke funkcije.

[0067] Lečenje povrede mozga može se odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma. Lečenje povrede mozga takođe se može odnositi na smanjenje neuroloških oštećenja nakon moždanog udara. Kompozicije prema pronalasku za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu se obezbediti subjektu pre početka moždanog udara, na primer kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da postoji rizik od moždanog udara. Kompozicije prema pronalasku za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu se obezbediti nakon što se moždani udar desio, na primer, tokom oporavka. Kompozicije prema pronalasku za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu se obezbediti tokom akutne faze oporavka (tj. do jedne nedelje nakon moždanog udara). Kompozicije prema pronalasku za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu se obezbediti tokom subakutne faze oporavka (tj. od jedne nedelje do tri meseca nakon moždanog udara). Kompozicije prema pronalasku za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu se obezbediti tokom hronične faze oporavka (od tri meseca nakon moždanog udara).

[0068] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u kombinaciji sa sekundarnim aktivnim sredstvom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u kombinaciji sa aspirinom ili tkivnim aktivatorom plazminogena (tPA). Ostala sekundarna sredstva uključuju druge antitrombocitne lekove (kao što je klopidogrel), antikoagulanse (poput heparina, varfarina, apiksabana, dabigatrana, edoksabana ili rivaroksabana), antihipertenzive (kao što su diuretici, ACE inhibitori, blokatori kalcijumovih kanala, beta blokatori ili alfa-blokatori) ili statine. Kompozicije prema pronalasku mogu poboljšati odgovor pacijenta na sekundarno aktivno sredstvo.

[0069] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju efekat ishemije na tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju količinu oštećenja tkiva izazvanih ishemijom. U određenim primerima izvođenja, tkiva oštećena ishemijom su cerebralna tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju nekrozu ili broj nekrotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju apoptozu ili broj apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju broj nekrotičnih i apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom izazvanom ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju oporavak tkiva oštećenog ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju brzinu raščišćavanja nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju efikasnost raščišćavanja nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija u tkivima. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija u tkivima oštećenim ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju ukupnu histologiju tkiva (na primer nakon biopsije).

[0070] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku aktiviraju MAP2 (protein 2 povezan sa mikrotubulama) aktivaciju. MAP2 je gen povezan sa neuronskom diferencijacijom MAP2 i smatra se da je od suštinskog značaja za formiranje mikrotubula u neurogenezi, tako da kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje povreda mozga. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju povreda mozga aktiviranjem ili povećanjem nivoa MAP2. Štaviše, kako MAP2 pospešuje nastanak neurona, koji imaju glavnu ulogu u ponovnom umrežavanju oštećenih neurona i sinaptogenezi, ekspresija MAP2 može biti više od markera diferencijacije neurona i ukazati na „ponovno povezivanje neurona“ povezano sa terapijskim ishodom neuropatološke bolesti [22].

Inflamatorni i autoimuni poremećaji

[0071] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku imaju inhibitornu aktivnost HDAC. Aktivnost HDAC je glavna za patologiju mnogih inflamatornih i autoimunih poremećaja, a

2

inhibitori HDAC su pokazali efikasnost u lečenju mnogih inflamatornih i autoimunih poremećaja, kao što je u nastavku diskutovano u odnosu na specifične uslove (videti takođe [23]). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje inflamatornih i autoimunih poremećaja, posebno inflamatornih i autoimunih poremećaja posredovanih povišenom aktivnošću histon deacetilaze (HDAC).

[0072] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja inflamatornog ili autoimunog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju inflamatorne ili autoimune bolesti, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa inflamatornom ili autoimunom bolešću, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC. U određenim primerima izvođenja, pacijentu je možda dijagnostikovana hronična inflamatorna ili autoimuna bolest ili stanje, ili kompozicija prema pronalasku može biti za upotrebu u sprečavanju inflamatorne ili autoimune bolesti ili stanja koja se razvijaju u hroničnu inflamatornu ili autoimunu bolest ili stanje. U određenim primerima izvođenja, bolest ili stanje možda neće odgovoriti na lečenje inhibitorima TNF- α.

[0073] HDAC može biti povezan sa hroničnim inflamatornim i autoimunim bolestima, tako da kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje ili sprečavanje hroničnih bolesti ili stanja kao što je prethodno navedeno. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod pacijenata sa hroničnom bolešću. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u sprečavanju razvoja hronične bolesti.

[0074] Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisni za lečenje bolesti i stanja posredovanih sa HDAC i sa aktivacijom HDAC, tako da kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje ili sprečavanje hronične bolesti, lečenje ili sprečavanje bolesti kod pacijenata koji nisu reagovali na druge terapije (kao što je lečenje inhibitorima TNF- α) i/ili lečenje ili sprečavanje oštećenja tkiva i simptoma povezanih sa HDAC.

[0075] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku smanjuju proizvodnju i sekreciju IL-6, što može biti posebno korisno za lečenje inflamatornih i autoimunih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju upale u lečenju bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju proizvodnju i sekreciju IL-6. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju aktivaciju NFκB promotora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu da moduliraju aktivaciju proizvodnje IL-6 snažnim pro-inflamatornim endotoksinom lipopolisaharidom (LPS).

- Inflamatorna bolest creva

[0076] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku imaju inhibitornu aktivnost HDAC, pa tako mogu biti korisne u lečenju zapaljenskih bolesti creva. Prekomerna ekspresija različitih izoformi HDAC prisutna je u raznim patologijama bolesti, uključujući kolitis. Pored toga, valproinska kiselina je povezana sa inhibicijom HDAC klase I i poboljšanjem kolitisa u modelu DSS-kolitisa na mišima [24]. Ova studija ukazuje na ulogu inhibitora HDAC klase I u suzbijanju IFN- γ, IL-10, IL-1 β i TNF- α, dodeljujući funkcionalnost inhibiciji HDAC i efikasnosti u kolitisu. Prema tome, primeri ukazuju na to da kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje inflamatornih bolesti creva.

[0077] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju inflamatornih bolesti creva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju inflamatornih bolesti creva, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa inflamatornom bolešću creva, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

[0078] Inflamatorna bolest creva (IBD) je složena bolest koja može biti uzrokovana višestrukim faktorima iz spolajšnje sredine i genetičkim faktorima. Faktori koji doprinose nastanku IBD uključuju ishranu, mikrobiotu, permeabilnost creva i genetičku osetljivost na povećani inflamatorni odgovor na infekciju creva. Simptomi inflamatorne bolesti creva uključuju bol u stomaku, povraćanje, dijareju, rektalno krvarenje, jake unutrašnje grčeve/grčeve mišića u karličnom predelu, gubitak težine i anemiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju jednog ili više simptoma povezanih sa IBD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju jednog ili više simptoma IBD.

[0079] IBD može biti udružen sa drugim bolestima ili stanjima, kao što su artritis, pyoderma gangrenosum, primarni sklerozirajući kolangitis, sindrom netiroidne bolesti, duboka venska tromboza, bronhiolitis obliterans koji izaziva upalu pluća. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju jedne ili više bolesti ili stanja koja su udružena sa IBD.

[0080] Inflamatorna bolest creva obično se dijagnostikuje biopsijom ili kolonoskopijom. Merenje kalprotektina u fecesu korisno je za preliminarnu dijagnozu IBD. Ostali laboratorijski testovi za dijagnozu IBD uključuju kompletnu krvnu sliku, brzinu sedimentacije eritrocita,

2

sveobuhvatni metabolički prikaz, test za otkrivanje skrivene krvi u fecesu ili test C-reaktivnog proteina. Obično se koristi kombinacija laboratorijskog ispitivanja i biopsije/kolonoskopije za potvrđivanje dijagnoze IBD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod subjekta sa dijagnozom IBD.

[0081] U određenim primerima izvođenja, inflamatorna bolest creva je Crohn-ova bolest. Studije su pokazale povišenu regulaciju nekoliko HDACs u inflamatornoj muskozi pacijenata sa Crohnovom bolešću. Stoga, inhibicija aktivnosti HDAC može biti korisna u lečenju Crohn-ove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ove bolesti.

[0082] Crohn-ova bolest je složena bolest sa nizom verovatnih uzroka, uključujući genetičke faktore rizika, ishranu, druge faktore životnog stila, kao što su pušenje i konzumacija alkohola, i sastav mikrobioma. Crohn-ova bolest se može manifestovati bilo gde duž gastrointestinalnog trakta.

[0083] Gastrointestinalni simptomi Crohn-ove bolesti se kreću od blagih do jakih i uključuju bolove u stomaku, proliv, fekalnu krv, ileitis, pojačano pražnjenje creva, povećanu nadutost, stenozu creva, povraćanje i nelagodu u perianalnoj regiji. Kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju jednog ili više gastrointestinalnih simptoma Crohn-ove bolesti.

[0084] Sistemski simptomi Crohn-ove bolesti uključuju nedostatke u rastu, kao što je nemogućnost održavanja rasta tokom puberteta, smanjen apetit, groznice i gubitak težine. Karakteristike van creva Crohn-ove bolesti uključuju uveitis, strah od svetlosti, episkleritis, kamenje u žuči, seronegativnu spondiloartropatiju, artritis, entezitis, erythema nodosum, pyodermu gangrenosum, duboku vensku trombozu, plućnu emboliju, autoimunu hemolitičnu anemiju, promena oblika noktiju i osteoporozu. Karakteristike van creva su dodatna stanja povezana sa Crohn-ovom bolešću koji se manifestuju van GI trakta. Subjekti sa Crohn-ovom bolešću takođe pokazuju povećanu podložnost neurološkim komplikacijama kao što su napadi, moždani udar, miopatija, periferna neuropatija, glavobolja i depresija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju jednog ili više sistemskih simptoma Crohn-ove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju jedne ili više karakteristika van creva Crohnove bolesti.

[0085] Dijagnoza Crohn-ove bolesti obično uključuje sprovođenje više testova i hirurških postupaka, poput gastroskopije i/ili kolonoskopije i biopsije, obično ileuma, radioloških testova, kompletne krvne slike, testova C-reaktivnog proteina i brzine sedimentacije eritrocita. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod subjekata

2

kojima je dijagnostikovana Crohn-ova bolest. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju subjekata kojima je dijagnostikovana Crohn-ova bolest.

[0086] Crohn-ova bolest je klasifikovana u zavisnosti od obima pogođenog regiona GI trakta [25]. Bolest ileuma i debelog creva klasifikovana je kao ileokolična Crohn-ova bolest. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ileokolične Crohnove bolesti. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod subjekta sa dijagnozom ileokolične Crohn-ove bolesti/Crohn-ov ileitis je klasifikovan ako je pogođen samo ileum. Crohn-ov kolitis je klasifikovan ako je pogođeno samo debelo crevo. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ovog ileitisa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod subjekata sa dijagnozom Crohnovog ileitisa. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ovog kolitisa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod subjekata sa dijagnozom Crohn-ovog kolitisa.

[0087] Crohn-ova bolest se može lečiti brojnim terapijskim sredstvima, kao što su kortikosteroidi, kao što je prednizon, imunosupresivnim sredstvima, kao što je azatioprin, ili biološkim sredstvima, kao što je infliksimab, adalimumab i golimumab, vedolizumab i etrolizumab. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ove bolesti u kombinaciji sa dodatnim terapijskim sredstvom. U određenim primerima izvođenja, dodatno terapijsko sredstvo je za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Crohn-ove bolesti.

[0088] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku smanjuju moduliranu ekspresiju IDO1 u crevima, što može biti posebno korisno za lečenje inflamatornih bolesti creva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku povećavaju ekspresiju IDOl.

- Multipla skleroza

[0089] Multipla skleroza (MS) je autoimuni inflamatorni poremećaj centralnog nervnog sistema. MS se može modelovati na životinjama indukcijom eksperimentalnog autoimunog encefalomijelitisa (EAE). Pokazano je da inhibitori HDAC smanjuju kliničke simptome i inhibiraju napredovanje bolesti kod miševa sa usvojenim EAE (Dasgupta et al., 2003, J Immunol, 170 (7), 3874-3882). Takođe je pokazano da ubrizgavanje inhibitora HDAC značajno smanjuje neurološka oštećenja i invaliditet kod miševa sa eksperimentalnim modelom hronične MS (Camelo et al., 2005, J Neuroimmunol, 164 (1-2), 10-21). Inhibicija aktivnosti HDAC je predložena kao terapija za MS koja obećava (Gray et al., 2006, Epigenetics, 1: 2, 67-75). Prema

2

tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje multiple skleroze kod subjekata.

[0090] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju multiple skleroze, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa multiplom sklerozom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

[0091] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju multiple skleroze. Kompozicije prema pronalasku mogu postići inhibiciju HDAC, i zbog toga mogu biti korisne u lečenju ili sprečavanju multiple skleroze. Multipla skleroza je inflamatorni poremećaj povezan sa oštećenjem mijelinskih ovojnica neurona, posebno u mozgu i kičmenom stubu. Multipla skleroza je hronična bolest koja predstavlja progresivno onesposobljavanje i koja se razvija u epizodama.

[0092] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama prema pronalasku rezultuje smanjenjem učestalosti ili ozbiljnosti bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju učestalosti bolesti ili ozbiljnosti bolesti. U određenim primerima izvođenja, lečenje sa kompozicijama prema pronalasku sprečava pad motoričke funkcije ili rezultuje poboljšanom motoričkom funkcijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju opadanja motoričke funkcije ili za upotrebu u poboljšanju motoričke funkcije. U određenim primerima izvođenja, lečenje sa kompozicijama prema pronalasku sprečava razvoj paralize. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju paralize u lečenju multiple skleroze.

[0093] Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za moduliranje imunološkog sistema pacijenta, zbog čega su u određenim primerima izvođenja kompozicije prema pronalasku za upotrebu u sprečavanju multiple skleroze kod pacijenta kod kojeg je utvrđeno da postoji rizik od multiple skleroze ili kod kojeg je dijagnostikovana multipla skleroza u ranom stadijumu ili „relapsno-remitentna“ multipla skleroza. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za sprečavanje razvoja skleroze.

[0094] Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za upravljanje ili ublažavanje multiple skleroze. Kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa multiplom sklerozom. Lečenje ili sprečavanje multiple skleroze može se odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili opsega okidača koji predstavljaju problem za pacijenta.

2

- Artritis

[0095] Artritis je bolest koju karakteriše hronična upala zglobova. Reumatoidni artritis je hronični autoimuni poremećaj koji obično rezultuje otečenim i bolnim zglobovima. Inhibicija HDAC je predložena za lečenje reumatoidnog artritisa različitim mehanizmima, uključujući uticaj na proizvodnju citokina, inhibiciju diferencijacije T-ćelija, suzbijanje proliferacije sinovijalnih fibroblasta i smanjenje gubitka kosti uticajem na osteoklaste i osteoblaste (Vojinov et al., 2011, Mol Med , 17 (5-6) 397-403). Pokazalo se, na nekoliko životinjskih modela, da inhibicija HDAC ima snažno antiinflamatorno dejstvo kod artritisa (Joosten et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 391-396). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavannje artritisa kod subjekata.

[0096] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju reumatoidnog artritisa (RA). U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju reumatoidnog artritisa, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa reumatoidnim artritisom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

[0097] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama prema pronalasku rezultuje smanjenjem otoka zglobova. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod pacijenata sa otečenim zglobovima ili pacijenata za koje je utvrđeno da imaju rizik od otečenih zglobova. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku smanjenja otoka zglobova kod RA.

[0098] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama prema pronalasku rezultuje smanjenjem oštećenja hrskavice ili oštećenja kostiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ili sprečavanju oštećenja hrskavice ili kostiju u lečenju RA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju pacijenata sa teškim RA koji imaju rizik od oštećenja hrskavice ili kostiju.

[0099] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju erozije kostiju ili oštećenja hrskavice u lečenju RA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju pacijenata koji pokazuju eroziju kostiju ili oštećenje hrskavice ili pacijenata za koje je utvrđeno da imaju rizik od erozije kostiju ili oštećenja hrskavice.

[0100] Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za moduliranje imunološkog sistema pacijenta, zbog čega su u određenim primerima izvođenja kompozicije prema pronalasku za

2

upotrebu u sprečavanju RA kod pacijenta kod kojeg je utvrđeno da postoji rizik od RA ili kod kojeg je dijagnostikovan RA u ranoj fazi. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za sprečavanje razvoja RA.

[0101] Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za upravljanje ili ublažavanje RA. Kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa oticanjem zglobova ili uništavanjem kostiju. Lečenje ili sprečavanje RA može se odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili opsega okidača koji predstavljaju problem za pacijenta.

- Astma

[0102] Astma je hronična inflamatorna respiratorna bolest. Pokazalo se da inhibitori HDAC imaju antiinflamatorne efekte koji ublažavaju upalu disajnih puteva, preuređivanje disajnih puteva i preosetljivost disajnih puteva na miševima kao modelu prilikom proučavanja hronične astme (Ren et al., 2016, Inflamm Res, 65, 995-1008). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje astme kod subjekata.

[0103] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju astme. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju astme, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa astmom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

[0104] U određenim primerima izvođenja, astma je eozinofilna ili alergijska astma. Eozinofilnu i alergijsku astmu karakteriše povećani broj eozinofila u perifernoj krvi i u sekretu disajnih puteva i patološki je povezan sa zadebljanjem zone bazalne membrane i farmaceutskim odgovaranjem kortikosteroida [26]. Kompozicije koje smanjuju ili inhibiraju regrutovanje ili aktiviranje eozinofila mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje eozinofilne i alergijske astme. Eozinofilnu i alergijsku astmu takođe karakteriše kaskada inflamatornih događaja posredovanih postupcima pomoćnih T limfocita tip 2 (Th2). Kompozicije koje smanjuju ili inhibiraju postupke pomoćnih T limfocita tip 2 (Th2) mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje eozinofilne i alergijske astme.

[0105] U dodatnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neutrofilne astme (ili ne-eozinofilne astme). Veliki broj neutrofila povezan je sa ozbiljnom astmom koja može biti neosetljiva na lečenje kortikosteroidima. Kompozicije koje smanjuju ili inhibiraju regrutovanje ili aktiviranje neutrofila mogu biti korisni za lečenje ili sprečavanje neutrofilne astme.

[0106] Eozinofilna astma (takođe označena kao astma sa jakim obeležijima Th2-upale) i neutrofilna astma (takođe se naziva astma sa niskim obeležijima Th2-upale ili astma bez obeležja Th2-upale) imaju u osnovi različite patofiziološke mehanizme i predstavljaju različite kliničke karakteristike. Na primer, astma sa jakim obeležijima Th2-upale obično se pojavljuje rano i pokazuje sezonske varijacije simptoma, dok astma sa niskim obeležijima Th2-upale se znatno kasniji pojavljuje, obično oko 40 godine ili kasnije. Astma sa jakim obeležijima Th2-upale se takođe karakteriše povećanim nivoom imunoglobulina E (IgE) u krvi, dok ova osobina odsustvuje kod astma sa niskim obeležijima Th2-upale. Astma sa jakim obeležijima Th2-upale takođe se karakteriše visokim nivoom eozinofila u sputumu. Suprotno tome, astma sa niskim obeležijima Th2-upale se može okarakterisati povišenim nivoima neutrofila u sputumu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju astma sa niskim obeležijima Th2-upale ili astma bez obeležja Th2-upale. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju astma sa jakim obeležijima Th2-upale.

[0107] Eozinofilna i neutrofilna astma se međusobno ne isključuju i lečenja koja pomažu u uspostavljanju odgovora eozinofila i neutrofila mogu biti korisni za lečenje astme uopšte.

[0108] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupcima smanjenja eozinofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili sprečavanju astme, ili za upotrebu u postupcima smanjenja neutrofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili sprečavanju astme. Kao što je prethodno pomenuto, visoki nivoi eozinofila kod astme su patološki povezani sa zadebljanjem zone bazalne membrane, tako da smanjenje eozinofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili sprečavanju astme možda će moći da se specifično usmeri na ovu karakteristiku bolesti. Takođe, povišeni neutrofili, bilo u kombinaciji sa povišenim eozinofilima ili u njihovom odsustvu, povezani su sa ozbiljnom astmom i hroničnim suženjem disajnih puteva. Stoga, smanjenje neutrofilnog inflamatornog odgovora može biti posebno korisno za usmerivanje na tešku astmu.

[0109] U određenim primerima izvođenja, kompozicije smanjuju peribronhiolarnu infiltraciju kod alergijske astme ili su za upotrebu u smanjenju peribronhiolarne infiltracije u lečenju alergijske astme. U određenim primerima izvođenja, kompozicije smanjuju peribronhiolarnu i/ili perivaskularnu infiltraciju u neutrofilnoj astmi ili su za upotrebu u smanjenju peribronhiolarne i/ili perivaskularne infiltracije u lečenju alergijske neutrofilne astme.

[0110] U određenim primerima izvođenja, lečenje sa kompozicijama prema pronalasku obezbeđuju smanjenje ili sprečavanje povećavanja nivoa TNFα.

[0111] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku lečenja astme koji rezultuje smanjenjem eozinofilnog i/ili neutrofilnog inflamatornog

1

odgovora. U određenim primerima izvođenja, pacijent koji se leči ima, ili je prethodno utvrđeno da ima, povišen nivo neutrofila ili eozinofila, na primer kao što je utvrđeno uzimanjem uzoraka krvi ili analizom sputuma. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za sprečavanje razvoja astme kod novorođenčeta kada se daju novorođenčetu ili trudnici. Kompozicije mogu biti korisne za sprečavanje razvoja astme kod dece. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisni za lečenje ili sprečavanje astme kod odraslih. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za upravljanje ili ublažavanje astme. Kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa astmom koju pogoršavaju alergeni, poput grinja iz kućne prašine.

[0112] Lečenje ili sprečavanje astme može se odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili opsega okidača koji predstavljaju problem za pacijente.

- Psorijaza

[0113] Psorijaza je hronična inflamatorna bolest kože. Saopštena je prekomerna ekspresija HDAC1 u biopsijama kože kod pacijenata sa psorijazom (Tovar-Castillo et al., 2007, Int J Dermatol, 46, 239-46) i pokazalo se da inhibitor HDAC blokira konverziju Foxp3 Tregs u Foxp3- RORγt IL-17/Tregs (pomak povezan sa napredovanjem bolesti psorijaze) (Bovenschen et al., 2011, J Invest Dermatol, 131, 1853-60). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje psorijaze kod subjekata.

[0114] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju psorijaze. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju psorijaze, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa psorijazom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

- Sistemski eritemski lupus

[0115] Sistemski eritemski lupus (SLE) je autoimuna bolest. Veruje se da je inhibicija HDAC obećavajući terapijski pristup za lečenje SLE na osnovu studija na ćelijskim kulturama i modelima miševa za ispitivanje SLE (Reilly et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 417-425). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje sistemskog eritemskog lupusa kod subjekata.

2

[0116] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju SLE. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju SLE, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa SLE, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

- Odbacivanje alografta

[0117] Do odbacivanja alografta dolazi kada transplantirana tkiva odbaci imuni sistem primaoca. Studije na transplantacijama srčanim mišića pokazale su da inhibicija HDAC povećava acetilaciju histona 3 unutar alografta i povezana je sa povećanim nivoima Foxp3 proteina unutar alografta (član “forkhead” familije transkripcije uključen u kontrolu imunoloških odgovora), održavanjem izgleda tkiva i nedostatkom znaka hroničnog odbacivanja u odnosu na kontrole (Wang et al., Immunol Cell Biol, 1-8). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje odbacivanja alografta kod subjekata.

[0118] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju odbacivanja alografta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju odbacivanja alografta, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa odbačenim alograftom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

- Dijabetes

[0119] Dijabetes melitus je grupa bolesti kod kojih nizak nivo insulina i/ili periferna rezistencija na insulin dovodi do hiperglicermije. Inhibicija HDAC je predložena za lečenje dijabetesa pomoću različitih mehanizama, uključujući derepresiju Pdx1 (Park et al., 2008, J Clin Invest, 118, 2316-24), pojačavanjem ekspresije transkripcionog faktora Ngn3 da bi se povećao pul endokrinih progenitornih ćelija (Haumaitre et al., 2008, Mol Cell Biol, 28, 6373-83) i povećanjem ekspresije insulina (Molsey et al., 2003, J Biol Chem, 278, 19660-6), između ostalih. Inhibicija HDAC je takođe obećavajuće lečenje za kasne komplikacije kod dijabetesa kao što su nefropatija kod dijabetisa i ishemija mrežnjače (Christensen et al., 2011, Mol Med, 17 (5-6), 370-390). Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili sprečavanje dijabetesa kod subjekata.

[0120] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju dijabetesa. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju dijabetesa tipa I. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju dijabetesa tipa II. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju dijabetesa, pri čemu se navedeno lečenje ili sprečavanje postiže smanjenjem ili sprečavanjem aktivacije HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju pacijenta sa dijabetesom, pri čemu pacijent ima povišene nivoe ili aktivnost HDAC.

- Bolest graft protiv domaćina (GVHD)

[0121] Kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti graft protiv domaćina (GVHD). GVHD je medicinska komplikacija nakon transplantacije alogeničnih tkiva u subjekat. GVHD se obično javlja nakon transplantacije matičnih ćelija ili koštane srži ili transplantacije čvrstih organa, posebno tamo gde se razlikuje genetička osnova grafta (tj. donora) i domaćina (tj. primaoca).

[0122] Patofiziologija GVHD sadrži tri različite faze. Prvo, antigen-prezetujuće ćelije domaćina (APCs), poput dendritičnih ćelija (DCs), aktiviraju se nakon prepoznavanja transplantiranog tkiva kao strane supstance. Aktivacija APC prethodi regrutaciji i aktivaciji efektorskih imunih ćelija, kao što su konvencionalne citotoksične T ćelije, što dovodi do uništavanja ili odbacivanja stranog tkiva.

[0123] Pokazalo se da inhibicija HDAC posreduje u snažnim plejotropnim antiinflamatornim efektima korisnim u lečenju ili sprečavanju GVHD. Inhibicija HDAC može inhibirati na više tačaka patofiziološke kaskade GVHD. Na primer, inhibicija HDAC sprečava aktivaciju antigenprezentujućih ćelija i dendritičnih ćelija protiv alogeničnih tkiva in vivo pojačavajući ekspresiju indoleamin 2,3-dioksigenaze u zavisnosti od STAT-3 [27]. Inhibicija aktivnosti HDAC STAT-1 takođe se pokazala korisnom u lečenju ili sprečavanju GVHD [28]. U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku može biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD inhibiranjem aktivacije APC.

[0124] Takođe je pokazano da inhibicija HDAC povećava populacije Treg ćelija i aktivnost in vivo [29]. Pokazalo se da inhibicija HDAC posredovana povišenom regulacijom aktivnosti Treg ćelija suzbija konvencionalnu aktivnost citotoksičnih T ćelija, što može biti korisno u lečenju ili sprečavanju GVHD suzbijanjem 2 faze patofiziološke kaskade GVHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD

4

smanjenjem konvencionalne aktivnosti citotoksičnih T ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u smanjenju konvencionalne aktivnosti citotoksičnih T ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD povećavanjem regulacije aktivnosti Treg ćelija.

[0125] Dokazano je da NK ćelije donora smanjuju GVHD uklanjanjem APCs domaćina. Pokazalo se da inhibicija HDAC povećava aktivnost NK ćelija. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu da bi se povećale aktivnosti NK ćelija, što može biti korisno u lečenju ili sprečvanju GVHD povećanjem eliminacije APCs. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD pojačavanjem eliminacije APCs domaćina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD pojačavanjem aktivnosti NK ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD pojačavanjem aktivnosti NK ćelija posredovanih eliminacijom APCs domaćina.

[0126] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se primenjivati kod domaćina nakon izvršene transplantacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se primeniti kod domaćina pre nego je kod subjekta izvršena transplantacija. Primena kompozicija prema pronalasku pre nego što je izvršena transplantacija može biti korisna u pripremi imunološkog sistema subjekata da ne izazove inflamatorni ili autoimuni odgovor protiv transplantiranog tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se koristiti za sprečavanje ili sprečavanje pojave GVHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku može biti za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD profilaktički. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se koristiti u profilaksi GVHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u postupku sprečavanja odbacivanja transplantiranog tkiva kod subjekta.

[0127] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje, odlaganje, sprečavanje ili sprečavanje početka akutnog GVHD. Simptomi akutnog GVHD obično se manifestuju u prvih 100 dana od transplantacije. Odlaganje, lečenje ili sprečavanje akutnog GVHD mogu biti posebno korisni za pomoć u oporavku subjekata neposredno nakon operacije transplantacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije mogu lečiti, odlagati početak, sprečavati ili sprečavati nastanak akutnog GVHD inhibiranjem aktivnosti HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak akutnog GVHD povećavanjem regulacije aktivnosti Treg ćelija. Kompozicije mogu lečiti, odlagati početak, sprečavati ili sprečavati nastanak akutnog GVHD inhibiranjem konvencionalne aktivnosti citotoksičnih T ćelija. Kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak akutnog GVHD povećavanjem aktivnosti NK ćelija. Kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odlagati početak, sprečavati ili sprečavati nastanak akutnog GVHD inhibiranjem aktivacije APC.

[0128] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak akutnog GVHD kada se daju subjektu u roku od 100 dana nakon transplantacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak akutnog GVHD kada se daju subjektu profilaktički, na primer, kada se kompozicija daje subjektu pre transplantacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak upornog, kasnog ili ponavljajućeg akutnog GVHD, kao što je akutni GVHD koji se javlja ili se ponavlja nakon više od 100 dana posle transplantacije.

[0129] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku može da leči, odlaže početak, sprečava ili sprečava nastanak jednog ili više simptoma akutnog GVHD odabranog sa liste koja se sastoji od makulo-papularnog osipa na koži, mučnine, anoreksije, dijareje, jakog bola u trbuhu, ileusa i holestatske hiperbilirubinemije.

[0130] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje, odlaganje početka, sprečavanje ili sprečavanje početka hroničnog GVHD. Hronični GVHD je složen, multisistemski poremećaj koji može da zahvati bilo koji organ i koji se obično karakteriše fibrozom. Hronični GVHD se može razviti iz akutnog GVHD, ili se može pojaviti nakon perioda mirovanja nakon akutnog GVHD, ili se može pojaviti de novo. Simptomi hroničnog GVHD mogu se pojaviti u bilo kom trenutku nakon transplantacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije mogu biti korisne za lečenje, sprečavanje, sprečavanje početka ili odlaganje početka hroničnog GVHD inhibiranjem aktivnosti HDAC. Kompozicije mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak hroničnog GVHD povećavanom regulacijom aktivnosti Treg ćelija. Kompozicije mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak hroničnog GVHD inhibiranjem konvencionalne aktivnosti citotoksičnih T ćelija. Kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak hroničnog GVHD pojačanom aktivnošću NK ćelija. Kompozicije prema pronalasku mogu lečiti, odložiti početak, sprečiti ili sprečiti nastanak hroničnog GVHD inhibiranjem aktivacije APC DC.

[0131] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za primenu kod pacijenta koji je nedavno podvrgnut transplantaciji matičnih ćelija, koštane srži ili čvrstog organa. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za primenu kod pacijenta kojem je potrebna transplantacija matičnih ćelija, koštane srži ili čvrstog organa.

[0132] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku može da leči, odlaže početak, sprečava ili sprečava nastanak jednog ili više simptoma hronične GVHD odabranih sa liste koja se sastoji od: promena pigmentacije, novonastale alopecije, poikiloderma, erupcija lichen planus-a ili sklerotične karakteristike, distrofija ili gubitak noktiju, kserostomija, čir na ustima (kao što je aftozni stomatitis), lišajevi u ustima (poput skleroze lišajeva), suvo oko, Sjögrenov sindrom, cicatricialni konjunktivitis, fascitis, miozitis, ukočenost zglobova, vaginalna skleroza, ulceracije, anoreksija, gubitak težine, ezofagealna mreža, žutica, transaminitis, pleuralni izlivi, bronhiolitis obliterans, nefrotski sindrom, perikarditis, trombocitopenija, anemija i neutropenija.

[0133] Istraživači su takođe pokazali da kompozicije prema pronalasku mogu smanjiti kolitis povezan sa GVHD. Kolitis je inflamatorni neželjeni efekat primećen kod pacijenata sa GVHD. Kompozicije prema pronalasku mogu takođe biti korisne za lečenje upale debelog creva kod subjekata sa GVHD. Prema tome, u nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju kolitisa kod subjekata sa GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ozbiljnosti kolitisa kod subjekata sa GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ozbiljnosti kolitisa u lečenju GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju upale debelog creva kod subjekata sa GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ozbiljnosti upale debelog creva kod subjekata sa GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju upale debelog creva u lečenju GVHD.

[0134] Istraživači su takođe otkrili da su kompozicije prema pronalasku korisne za održavanje funkcije crevne barijere kod subjekata sa GVHD. Održavanje funkcije crevne barijere smanjuje translokaciju inflamatornih citokina kroz crevnu barijeru, koji pogoršavaju toksičnost kod GVHD [30]. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u održavanju funkcije crevne barijere u lečenju GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju translokacije inflamatornih citokina preko crevne barijere u lečenju GVHD.

[0135] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutkih sredstava za lečenje ili sprečavanje GVHD. U određenim primerima izvođenja, jedno ili više farmaceutkih sredstava su za farmaceutsko sprečavanje ili lečenje GVHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju GVHD kod subjekta koji prima, je primao ili će uskoro primiti jedno ili više pomenutih farmaceutskih sredstava. U određenim primerima izvođenja, jedno ili više farmaceutskih sredstava odabrano je sa liste koja se sastoji od: suberoilanilid, vorisnostat, ITF2357 ciklosporin, ciklosporin, sirolimus, pentostatin, rituksimab, imatinib, mikofenolat mofetil, takrolimus, prednizon, metotreksat, remestemcel-L i Prochymal, pri čemu se farmaceutsko sredstvo daje u terapijski efikasnoj količini za lečenje ili sprečavanje GVHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju GVHD kod subjekta koji je primio, prima ili će tek primiti vantelesne fotofereze.

Ponašajni i psihijatrijski poremećaji

[0136] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku smanjuju hiperaktivnost kod modela miševa sa neurološkim bolestima. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u smanjenju hiperaktivnosti kod subjekata. Hiperaktivnost je simptom ponašanog i psihijatrijskog poremećaja, kao što su deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj (ADHD), posttraumatski stresni poremećaj, anksiozni poremećaji, bipolarni afektivni poremećaj i opsesivno-kompulzivni poremećaj. Hiperaktivnost može biti simptom hormonalnih poremećaja, poput hipertireoze, hiperkinetike i rezistencije na tiroidni hormon. Hiperaktivnost takođe može biti simptom neuronskih poremećaja, poput adrenoleukodistrofije. Hiperaktivnost takođe može biti simptom hiperkinetičkog poremećaja, katanične šizofrenije, anoreksije nervoze, sindroma fragilnog X (FXS), fenilketonurije (PKU), fetalnog alkoholnog sindroma (FAS), anksioznosti, depresije i Tourette-ovog sindroma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju psihijatrijskih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju emocionalnih poremećaja i poremećaja ponašanja.

[0137] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju hipertiroidizma ili rezistencije na tiroidni hormon. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom hipertiroidizma ili rezistencije na tiroidni hormon.

[0138] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju adrenoleukodistrofije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom adrenoleukodistrofije.

[0139] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju katatonične šizofrenije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom katatonične šizofrenije.

[0140] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju anoreksije nervoze. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom anoreksija nervosa.

[0141] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju fragilnog X sindroma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom fragilnog X sindroma (FXS).

[0142] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju fenilketonurije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom fenilketonurije.

[0143] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju fetalnog alkoholnog sindroma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom fetalnog alkoholnog sindroma.

[0144] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju anksioznosti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom anksioznosti.

[0145] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju depresije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom depresije.

[0146] U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju Tourette-ovog sindroma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom Tourette-ovog sindroma.

- ADHD

[0147] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ADHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti kod subjekata sa poremećajima ponašanja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti kod subjekata sa ADHD. ADHD se može manifestovati i kod dece i kod odraslih. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ADHD kod odraslih. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ADHD kod dece.

[0148] U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod subjekata kojima je dijagnostikovan ADHD. Dijagnoza ADHD je složen postupak koji često uključuje psihološku procenu subjekta koji pokazuje simptome ADHD, zajedno sa fizičkim pregledom i verovatno otkrivanjem bioloških markera povezanih sa ADHD, kao što je nivo ekspresije trombocitne mono-amino-oksidaze, nivo norepinefrin u urinu, nivo MHPG u urinu i nivo fenetilamina u urinu.

[0149] Formalnu dijagnozu obično postavlja psihijatar. Različite zemlje koriste različite metrike za dijagnozu i klasifikaciju ADHD-a. U nekim zemljama dijagnoza i klasifikacija se vrši prema kriterijumima koje je definisalo Američko psihijatrijsko udruženje u Dijagnostičkom i statističkom priručniku za mentalne poremećaje (DSM). DSM klasifikuje ADHD u različite podtipove u zavisnosti od niza simptoma koje subjekti pokazuju. ADHD se može dijagnostikovati kao ADDH predominantno nepažljivi tip (ADHD-pi). U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ADHD-pi. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod subjekata sa dijagnozom ADHD-pi. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku lečenja subjekata sa dijagnozom ADHD-pi. ADHD se takođe može dijagnostikovati kao ADHD predominantno hiperaktivno-impulsivni tip. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ADHD predominantno hiperaktivno-impulsivnog tipa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod subjekata sa dijagnozom ADHD predominantno hiperaktivno-impulsivnog tipa. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku lečenja subjekata sa dijagnozom ADHD predominantno hiperaktivno-impulsivnog tipa.

[0150] Simptomi ADHD uključuju lako ometanje, zaborav, sanjarenje, neorganizovanost, lošu koncentraciju i poteškoće u izvršavanju zadataka, sa prekomernim vrpoljenjem i nemirom, hiperaktivnošću, poteškoćama u čekanju i ostajanju u sedećem položaju, nezrelim ponašanjem. Destruktivno ponašanje takođe može biti prisutno. Da bi simptomi bili povezani sa ADHD, oni moraju biti prisutni duže od šest meseci i moraju se pojaviti u više okruženja (kao što su kod kuće, u školi ili na poslu). U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju jednog ili više simptoma ADHD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju subjekta koji pokazuje jedan ili više simptoma ADHD. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju hiperaktivnosti. U nekim primerima izvođenja, kompozicije su za

4

upotrebu u postupku smanjenja hiperaktivnosti kod subjekta. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kao lekovi protiv hiperaktivnosti.

[0151] Ostali postupci lečenja ADHD uključuju psihološku terapiju, bihejvioralnu terapiju, kognitivno-bihejvioralnu terapiju, interpersonalnu psihoterapiju, stimulativne lekove, kao što je metilfenidat, nestimulativne lekove, kao što su atomoksetin, bupropion, gvanfacin i klonidin. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u kombinaciji sa dodatnim postupkom lečenja ADHD.

- Opsesivno-kompulzivni poremećaj (OCD)

[0152] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju OCD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju OCD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom OCD.

[0153] OCD je heterogeni, hronični i onesposobljavajući poremećaj koji pripada anksioznim poremećajima. Prema definiciji DSM-IV, suštinske karakteristike OCD-a su ponavljajuće opsesije i/ili prisiljavanja (kriterijum A) koje su ozbiljne i dugotrajne (više od jednog sata dnevno) ili uzrokuju izraženu bol ili značajno ometaju normalnu rutinu subjekta, profesionalno funkcionisanje, uobičajene društvene aktivnosti ili odnose (kriterijum C). Kao neki trenutak tokom poremećaja, subjekat je prepoznao da su opsesije ili prisiljavanja prekomerne ili nerazumne (kriterijum B).

[0154] Opsesije se definišu kao ponavljajuće i uporne misli, nagoni ili slike koje se doživljavaju kao nametljive i neprikladne i uzrokuju izraženu anksioznost ili uznemirenost. Misli, impulsi ili slike nisu samo preterana briga zbog stvarnih problema, već ih pacijent prepoznaje kao proizvod sopstvenog uma (npr. strah od kontaminacije, opsednutost simetrijom). Subjekat pokušava da ignoriše, potisne ili neutrališe opsesiju nekim drugim mislima ili postupcima.

[0155] Prisiljavanja su definisana kao ponavljajuća ponašanja (npr. pranje ruku, naređivanje, nagomilavanje, proveravanje) ili mentalni postupci (npr. molitva, brojanje, ponavljanje reči u tišini) da subjekat oseća da je podstaknuta da ih radi kao odgovor na opsesiju ili prema pravilima koja se moraju strogo primeniti.

[0156] OCD je često povezan sa stopom komorbiditeta drugih psihijatrijskih bolesti, uključujući veliki depresivni poremećaj, druge anksiozne poremećaje (generalizovani anksiozni poremećaj, socijalni anksiozni poremećaj, panični poremećaj), zloupotrebu supstanci i poremećaje ishrane (anoreksija i bulimija).

[0157] OCD je psihijatrijski poremećaj koji se može razviti ili trajati usled disfunkcije na osi mikrobiota-creva-mozak. Shodno tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju OCD kod subjekata.

[0158] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju suštinske simptomatske karakteristike OCD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju ponavljajuće opsesije i/ili prisiljavanja kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, opsesije su ponavljajuće ili uporne misli, impulsi ili slike koje su nametljive i neprimerene i uzrokuju izraženu anksioznost ili uznemirenost. U određenim primerima izvođenja, prisiljavanja su ponavljajuća ponašanja da se subjekat oseća podstaknutim da ih izvodi kao odgovor na opsesiju ili prema pravilima koja se moraju strogo primenjivati.

[0159] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome OCD kod subjekata u skladu sa Y-BOCS i/ili NIMH-OC dijagnostičkom i/ili simptomatskom skalom. U nekim primerima izvođenja, Y-BOCS skala se koristi za praćenje poboljšanja primarnih krajnjih tačaka. U nekim primerima izvođenja, NIMH-OC skala se koristi za praćenje poboljšanja sekundarnih parametara.

[0160] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju skalu poboljšanja opšteg kliničkog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku pokazuju pozitivan efekat na opšte socijalno funkcionisanje (odnosi, rad, itd.) subjekata sa ASDs. U nekim primerima izvođenja, globalna skala je Sheehan-ova skala nesposobnosti.

[0161] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju najmanje jedan komorbiditet OCD. Komorbiditeti OCD uključuju veliki depresivni poremećaj, druge anksiozne poremećaje (generalizovani anksiozni poremećaj, socijalni anksiozni poremećaj, panični poremećaj), zloupotrebu supstanci i poremećaje ishrane (anoreksija i bulimija), Gilles de la Tourette-ov sindrom, ADHD (deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj) i razvojne poremećaje.

[0162] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju OCD kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje OCD. Takve terapije uključuju inhibitore ponovnog preuzimanja serotonina i dopamina; klomipramin i antipsihotike.

- Anksiozni poremećaj

[0163] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju anksioznih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju anksioznog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom anksioznog poremećaja.

[0164] Anksiozni poremećaji su grupa mentalnih poremećaja koje karakterišu osećanja anksioznosti i straha. Postoji niz anksioznih poremećaja, uključujući generalizovani anksiozni poremećaj (GAD); specifična fobija; socijalni anksiozni poremećaj; separacijski anksiozni poremećaj; agorafobija; panični poremećaj i selektivni mutizam.

[0165] GAD se dijagnostikuje prema DMS-5 u šest kriterijuma. Prvi kriterijum je prevelika anksioznost ili zabrinutost tokom više od šest meseci, pri čemu su anksioznost ili zabrinutost prisutni većinu vremena u pogledu mnogih aktivnosti. Drugi kriterijum je da subjekat nije u stanju da upravlja simptomima prvog kriterijuma. Treći kriterijum je da se najmanje tri (jedno kod dece) od sledećeg dešava: uznemirenost; lako se umara; problemi sa koncentracijom; razdražljivost; napetost mišića i problemi sa spavanjem. Poslednja tri kriterijuma su da simptomi rezultuju značajnim socijalnim, profesionalnim i funkcionalnim oštećenjima; simptomi nisu posledica lekova, droga ili drugih problema sa fizičkim zdravljem; a simptomi se ne uklapaju bolje sa drugim psihijatrijskim problemom kao što je panični poremećaj. Svi ostali anksiozni poremećaji mogu se smatrati drugačijom dijagnozom GAD.

[0166] GAD je često povezan sa širokim spektrom drugih mentalnih poremećaja kao komorbiditeti, uključujući depresiju; poremećaji upotrebe supstanci; stres; IBS; nesanica; glavobolja; bol; srčani događaji; međuljudski problemi i ADHD.

[0167] Poremećaj anksioznost je psihijatrijski poremećaj koji se može razviti ili trajati usled disfunkcije na osi mikrobiota-creva-mozak. Shodno tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju poremećaja anksioznosti kod subjekata. U određenim primerima izvođenja, poremećaj anksioznosti je generalizovani anksiozni poremećaj (GAD); specifična fobija; socijalni anksiozni poremećaj; separacijski anksiozni poremećaj; agorafobija; panični poremećaj i selektivni mutizam.

[0168] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma GAD kod subjekta klasifikovane prema ovde navedenim kriterijumima DMS-5. Prema DMS-5, isti simptomi su povezani sa drugim anksioznim poremećajima. Stoga, u određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma anksioznih poremećaja kod subjekata. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju anksioznost ili zabrinutost subjekta. U određenim primerima izvođenja,

4

kompozicije prema pronalasku smanjuju pojavu simptoma u roku od šest meseci. U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku sprečava, smanjuje ili ublažava nemir; umor; gubitak koncentracije; razdražljivost; napetost mišića; i/ili probleme sa spavanjem. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju socijalna, profesionalna i funkcionalna oštećenja povezana sa anksioznim poremećajima.

[0169] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome anksioznih poremećaja prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim primerima izvođenja, skala za procenu simptomatskog poboljšanja uključuje Hamilton-ovu skalu za ocenjivanje anksioznosti (HAM-A). U nekim primerima izvođenja, ukupna skala HAM-A se koristi za procenu primarne krajnje tačke. U drugim primerima izvođenja, faktor psihičke anksioznosti HAM-A može biti koristan kao sekundarna krajnja tačka.

[0170] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju skalu poboljšanja opšteg kliničkog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku pokazuju pozitivan efekat na opšte socijalno, profesionalno i funkcionalno oštećenje subjekata sa anksioznim poremećajem. U nekim primerima izvođenja, globalna skala je Sheehan-ova skala nesposobnosti.

[0171] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju najmanje jedan komorbiditet GAD i anksioznih poremećaja. Komorbiditeti GAD uključuju depresiju; poremećaje upotrebe supstanci; stres; IBS; nesanicu; glavobolju; bol; srčane događaje; međuljudske probleme i ADHD.

[0172] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju anksioznih poremećaja kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje anksioznih poremećaja. Takve terapije uključuju selektivno inhibitore ponovnog preuzimanja serotonina (venlafaksin, duloksetin, escitalopram i paroksetin); benzodiazepini (alprazolam, lorazepam i klonazepam); pregabalin (Lyrica®) i gabapentin (Neurontin ®); delimični agonisti receptora serotonina (buspiron i tandospiron); atipični serotonergični antidepresivi (kao što su imipramin i klomipramin); inhibitori mono-aminooksidaze (MAOIs) (kao što su moklobemid i fenelzin); hidroksizin; propranolol; klonidin; gvanfacin i prazosin.

- Post-traumatski stresni poremećaj (PTSD)

[0173] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju PTSD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju PTSD. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom PTSD.

[0174] PTSP je težak i onesposobljavajući poremećaj, čija je osnovna karakteristika uključivanje traumatskog događaja kao precipitirajućeg faktora ovog poremećaja.

[0175] Simptomi PTSD grupisani su u četiri glavna klastera prema DMS-V kriterijumima: (i) intruzija: primeri uključuju noćne more, neželjene misli o traumatskim događajima, flešbekove i reagovanje na traumatsko podsećanje emocionalnim stresom ili fiziološke reaktivnosti; (ii) izbegavanje: primeri uključuju izbegavanje okidača za traumatska sećanja, uključujući mesta, razgovore ili druga podsećanja; (iii) negativne promene u kogniciji i raspoloženju: primeri uključuju iskrivljenu krivicu sebe ili drugih za traumatski događaj, negativna verovanja o sebi ili svetu, uporne negativne emocije (npr. strah, krivica, sram), osećaj otuđenosti i stegnuti afekt (npr. nemogućnost doživljavanja pozitivnih emocija); (iv) promene u uzbuđenju i reaktivnosti: primeri uključuju besno, nesmotreno ili samodestruktivno ponašanje, probleme sa spavanjem, probleme sa koncentracijom, pojačan preplašen odgovor i hipervigilitet.

[0176] Simptomi koji se povuku u roku od 4 nedelje od traumatskog događaja ispunjavaju kriterijume za akutni stresni poremećaj. DSM razlikuje akutni (trajanje simptoma kraće od tri meseca) i hronični PTSD (trajanje simptoma duže od 3 meseca). Ako simptomi počnu da se pojavljuju nakon više od 6 meseci nakon stresa, poremećaj se definiše kao PTSD sa odloženim početkom.

[0177] PTSD nosi visoke komorbiditete sa velikim depresivnim poremećajem i poremećajima upotrebe supstanci.

[0178] PTSD je psihijatrijski poremećaj koji se može razviti ili trajati usled disfunkcije ose mikrobiota-creva-mozak. Shodno tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju PTSD kod subjekta. Prema sličnoj patogenezi, u određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju stresnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče akutni stresni poremećaj. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče akutni i/ili hronični PTSP. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče PTSD sa odloženim početkom.

[0179] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma PTSD (ili stresnog poremećaja) kod subjekata koji je klasifikovan prema ovde navedenim kriterijumima DMS-5. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju nametljive misli kod subjekata sa PTSD. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju ponašanje izbegavanja kod subjekata sa PTSD. U poželjnim

4

primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju negativne promene u kognicijama i raspoloženju kod subjekata sa PTSD. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju promene u uzbuđenju i reaktivnosti kod subjekata sa PTSD.

[0180] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome PTSD i stresnih poremećaja prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim primerima izvođenja, skala za procenu simptomatskog poboljšanja je skala za kliničku procenu PTSP (CAPS).

[0181] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju skalu poboljšanja opšteg kliničkog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku pokazuju pozitivan efekat na opšte socijalno, profesionalno i funkcionalno oštećenje subjekata sa PTSD i stresnim poremećajima. U nekim primerima izvođenja, globalna skala je Sheehan-ova skala nesposobnosti.

[0182] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju najmanje jedan komorbiditet PTSD i poremećaja stresa. Komorbiditeti PTSD i poremećaja stresa uključuju MDD, poremećaje upotrebe supstanci; stres i anksioznost.

[0183] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju PTSD i poremećaja stresa kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje PTSD i stresnih poremećaja. Takve terapije uključuju serotonergična sredstva, triciklične antidepresive, stabilizatore raspoloženja, sredstva koji inhibiraju adrenergike, antipsihotike, benzodiazepine, sertralin (Zoloft®), fluoksetin (Prozac®) i/ili paroksetin (Paxil®).

- Bipolarni poremećaj

[0184] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bipolarnog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u smanjenju hiperaktivnosti u lečenju bipolarnog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju hiperaktivnosti kod pacijenta sa dijagnozom bipolarnog poremećaja.

[0185] Bipolarni poremećaj je uopšte hronična bolest. Manija je glavni simptom bipolarnog poremećaja. Postoji nekoliko vrsta bipolarnog poremećaja zasnovanih na određenom trajanju i obrascu maničnih i depresivnih epizoda. U DMS-5 razlikuje se bipolarni I poremećaj, bipolarni

4

II poremećaj, ciklotimični poremećaj, bipolarni poremećaj sa brzom promenom faza i bipolarni poremećaj NOS.

[0186] Prema DSM-u, manija je poseban period abnormalno i uporno povišenog, ekspanzivnog ili razdražljivog raspoloženja. Epizoda mora trajati nedelju dana, a raspoloženje mora imati najmanje tri od sledećih simptoma: visoko samopoštovanje; smanjena potreba za snom; povećati stopu govora; brzo nadolazenje ideja; lako ometanje; povećano interesovanje za ciljeve ili aktivnosti; psihomotorna agitacija; povećana potraga za aktivnostima sa visokim rizikom od opasnosti.

[0187] Bipolarni I poremećaj uključuje jednu ili više maničnih ili mešovitih (manija i depresija) epizoda i najmanje jednu veliku depresivnu epizodu (videti prethodno pomenute simptome epizoda MDD). Bipolarni poremećaj II ima jednu ili više glavnih depresivnih epizoda praćenih najmanje jednom hipomaničnom epizodom. Ne postoje manične ili mešovite epizode. Hipomanija je manji oblik manije. Simptomi su odgovorni za značajna socijalna, profesionalna i funkcionalna oštećenja. Ciklotimiju karakteriše promena depresije na niskom nivou uporedo sa periodima hipomanije. Simptomi moraju biti prisutni najmanje dve godine kod odraslih ili godinu dana kod dece pre postavljanja dijagnoze. Periodi bez simptoma kod odraslih i dece traju ne duže od dva meseca ili mesec dana, respektivno. Bipolarni poremećaj sa brzom promenom faza je težak oblik bipolarnog poremećaja. Pojavljuje se kada subjekat ima najmanje četiri epizode velike depresije, manije, hipomanije ili mešovitih stanja u roku od godinu dana. Bipolarni poremećaj koji nije drugačije definisan (NOS) klasifikuje bipolarne simptome koji se jasno ne uklapaju u druge tipove. NOS se dijagnostikuje kada je prisutno više bipolarnih simptoma, ali nedovoljno da dobije oznaku bilo kog drugog podtipa.

[0188] Bipolarni poremećaj povezan je sa sledećim komorbiditetima: ADHD; anksiozni poremećaji; poremećaji upotrebe supstanci; gojaznost i metabolički sindrom.

[0189] Bipolarni poremećaj je psihijatrijski poremećaj koji se može razviti ili trajati usled disfunkcije ose mikrobiota-creva-mozak. Prema tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bipolarnog poremećaja kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, bipolarni poremećaj je bipolarni I poremećaj. U određenim primerima izvođenja, bipolarni poremećaj je bipolarni II poremećaj. U određenim primerima izvođenja, bipolarni poremećaj je ciklotimični poremećaj. U određenim primerima izvođenja, bipolarni poremećaj je bipolarni poremećaj sa brzom promenom faza. U određenim primerima izvođenja, bipolarni poremećaj je bipolarni poremećaj NOS.

[0190] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma bipolarnog poremećaja kod subjekata. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu

4

maničnih epizoda kod subjekata. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu abnormalnog i upornog povišenog, ekspanzivnog ili razdražljivog raspoloženja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više sledećih simptoma: visoko samopoštovanje; smanjena potreba za snom; povećati stopu govora; brzo nadolazenje ideja; lako ometanje; povećano interesovanje za ciljeve ili aktivnosti; psihomotorna agitacija; povećana potraga za aktivnostima sa visokim rizikom od opasnosti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu jedne ili više maničnih ili mešovitih epizoda kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku smanjuju pojavu najmanje jedne velike depresivne epizode kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu najmanje jedne velike depresivne epizode praćene najmanje jednom hipomaničnom epizodom.

[0191] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče akutnu fazu bipolarnog poremećaja i/ili sprečavaju pojavu daljih epizoda. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku leče akutnu fazu manično/depresivnih epizoda kod subjekta sa bipolarnim poremećajem i sprečavaju pojavu daljih manično/depresivnih epizoda.

[0192] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome bipolarnog poremećaja prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim primerima izvođenja, skala za procenu simptomatskog poboljšanja maničnih epizoda je skala procenjivanja maničnog stanja i Young-ova skala procenjivanja manije. U određenim primerima izvođenja, skala je Bech-Rafaelsen-ova skala procenjivanja manije (BRMAS). U određenim primerima izvođenja, skale za procenu simptomatskog poboljšanja prelaska sa manične na depresivnu epizodu uključuju Hamilton-ovu skalu procene depresije, Montgomery-Asberg-ovu skalu procene i Bech-Rafaelsen-ovu skalu procene depresije.

[0193] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju skalu poboljšanja opšteg kliničnog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku pokazuju pozitivan efekat na opšta socijalna, profesionalna i funkcionalna oštećenja subjekata sa bipolarnim poremećajem.

[0194] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju najmanje jedan komorbiditet bipolarnog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, komorbiditet je odabran od ADHD, anksioznih poremećaja, poremećaja upotrebe supstanci, gojaznosti i metaboličkog sindroma.

4

[0195] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju manično-depresivne bolesti i bipolarnog poremećaja koji ne reaguju na litijum i divalproex.

[0196] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju bipolarnog poremećaja kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje bipolarnog poremećaja. U određenim primerima izvođenja, takve terapije uključuju litijum karbonat, antikonvulzivne lekove (uključujući valproat, divalproex, karbamazepin i lamotrigin) i antipsihotične lekove (uključujući aripiprazol, olanzapin, kvetiapin i risperidon).

Karcinom

[0197] Funkcija i ekspresija HDAC poremećeni su kod raznih vrsta karcinoma i često dovode do loše prognoze. Funkcija HDAC kod karcinoma povezana je sa poremećenom ekspresijom ili funkcijom gena koji pospešuju ćelijsku proliferaciju i tumorogene fenotipove. Kod određenih karcinoma HDACs primarno regulišu pojavu karcinoma i opisuju se kao onkogeni. Kod drugih karcinoma, onkofuzijski proteini regrutuju HDAC klase I da bi potisni ekspresiju gena koji regulišu ćelijsku diferencijaciju ili kontrolu ćelijskog ciklusa, što dovodi do ćelijske transformacije. Pokazalo se da snižavanje ili inhibicija ekspresije HDAC imaju višestruke antikancerogene efekte, kao što je zaustavljanja ćelijskog ciklusa i inhibicije proliferacije, apoptoze, diferencijacije i senescencije i poremećaja angiogeneze. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju karcinoma posredovanih aktivnošću HDAC, inhibiranjem aktivnosti HDAC.

[0198] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma posredovanih povišenom aktivnošću HDAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma debelog creva.

[0199] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama prema ovom pronalasku rezultuje smanjenjem veličine tumora ili smanjenjem rasta tumora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora ili smanjenju rasta tumora. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne za smanjenje veličine ili rasta tumora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod pacijenata sa čvrstim tumorima. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ili sprečavanju angiogeneze u lečenju karcinoma.

4

Geni regulisani HDACs imaju centralnu ulogu u angiogenezi. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju metastaza.

[0200] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma želuca. Pokazalo se da HDAC2 ima funkcionalnu ulogu u razvoju karcinoma želuca i kolorektalne tumorigeneze [31,32]. Kod modela miševa sa kolorektalnim karcinomom, inhibicija HDAC2 je rezultovala smanjenim stopama razvoja tumora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku koje selektivno inhibiraju HDAC2 su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma debelog creva, posebno karcinoma debelog creva posredovanog povišenom aktivnošću HDAC2.

[0201] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma dojke. Kompozicije prema ovom pronalasku mogu biti efikasne za lečenje karcinoma dojke, a pokazalo se da HDACs imaju povećanu regulaciju kod karcinoma dojke [33]. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora ili smanjenju angiogeneze u lečenju karcinoma dojke.

[0202] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma prostate. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne za lečenje karcinoma prostate, jer aktivnost HDAC ima glavnu ulogu u razvoju karcinoma prostate [34]. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora ili smanjenju angiogeneze u lečenju karcinoma prostate. U određenim primerima izvođenja, karcinom je hormonski otporan karcinom prostate.

[0203] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma pluća. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne za lečenje karcinoma pluća, a pokazalo se da su HDACs više regulisani kod karcinoma pluća [35]. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora ili smanjenju angiogeneze u lečenju karcinoma pluća. U poželjnim primerima izvođenja karcinom je karcinom pluća. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju karcinoma pluća sa visokim nivoima ekspresije HDAC2. Pokazalo se da određena tkiva kod karcinoma pluća imaju obilnu ekspresiju HDAC2. Inaktivacija HDAC2 potiskuje rast ćelija kod karcinoma pluća. Pokazano je da visoki nivoi aktivnosti HDAC2 potiskuju aktivnost p53 [36]. Aktivni p53 zaustavlja deljenje ćelija i na kraju dovodi do početka apoptoze. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku koje inhibiraju HDAC2 su za upotrebu u lečenju karcinoma pluća sa visokim nivoom aktivnosti HDAC2.

[0204] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma jetre. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne za lečenje karcinoma jetre, a pokazalo se da su HDACs više regulisani kod karcinoma jetre [37]. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora ili smanjenju angiogeneze u lečenju karcinoma jetre. U poželjnim primerima izvođenja karcinom je hepatom (hepatocelularni karcinom). U određenim primerima izvođenja, karcinom je tumor niskog stepena ili u ranom stadijumu.

[0205] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju karcinoma. Kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno efikasne za lečenje karcinoma. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju ne-imunogenog karcinoma. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne za lečenje ne-imunogenih karcinoma.

[0206] U daljim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju akutne limfoblastične leukemije (ALL), akutne mijeloidne leukemije, adrenokortikalnog karcinoma, karcinoma bazalnih ćelija, karcinoma žučnog kanala, karcinoma bešike, tumora kostiju, osteosarkoma/malignog fibroznog histiocitoma, glioma moždanog stabla, tumora mozga, cerebelarnog astrocitoma, cerebralnog astrocitoma/malignog glioma, ependimoma, meduloblastoma, supratentorijalnih primitivnih neuroektodermalnih tumora, karcinoma dojke, bronhijalnih adenoma/karcinoida, Burkitt-ov limfoma, karcinoidnog tumora, karcinoma grlića materice, hronične limfocitne leukemije, hronične mijeloidne leukemije, hroničnih mijeloproliferativnih poremećaja, karcinoma debelog creva, kožnog limfoma T-ćelija, karcinoma endometrijuma, ependimoma, karcinoma jednjaka, Ewing-ov sarkoma, intraokularnog melanoma, retinoblastoma, karcinoma žučne kese, karcinoma želuca, gastrointestinalnog karcinoidnog tumora, gastrointestinalnog stromalnog tumora (GIST), tumora germinativnih ćelija, glioma vizuelnog puta i hipotalamusa u detinjstvu, Hodgkin-ov limfoma, melanoma, karcinoma ostrvskih ćelija, Kaposi-jev sarkoma, karcinoma bubrežnih ćelija, karcinoma grkljana, leukemije, limfoma, mezotelioma, neuroblastoma, ne-Hodgkin-ov limfoma, orofaringealni karcinoma, osteosarkoma, karcinoma jajnika, karcinoma pankreasa, karcinoma paratiroidnih žlezda, faringealnog karcinoma, adenoma hipofize, neoplazija plazma ćelija, karcinoma prostate, karcinoma bubrežnih ćelija, retinoblastoma, sarkoma, karcinoma testisa, karcinoma štitne žlezde ili karcinoma materice.

[0207] Kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno efikasne kada se koriste u kombinaciji sa drugim terapijskim sredstvima. Efekti inhibicije HDAC kompozicijama prema pronalasku mogu biti efikasni kada se kombinuju sa direktnijim sredstvima protiv karcinoma. Prema tome, u određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj

1

roda Bariatricus i sredstvo protiv karcinoma. U poželjnim primerima izvođenja sredstvo protiv karcinoma je inhibitor imunološke kontrolne tačke, ciljana imunoterapija antitelima, terapija CAR-T ćelijama, onkolitički virus ili citostatski lek. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicija sadrži sredstvo protiv karcinoma odabrano iz grupe koja se sastoji od: Yervoy (ipilimumab, BMS); Keytruda (pembrolizumab, Merck); Opdivo (nivolumab, BMS); MEDI4736 (AZ/MedImmune); MPDL3280A (Roche/Genentech); Tremelimumab (AZ/MedImmune); CT-011 (pidilizumab, CureTech); BMS-986015 (lirilumab, BMS); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MSB-0010718C (Merck); PF-05082566 (Pfizer); MEDI6469 (AZ/MedImmune); BMS-986016 (BMS); BMS-663513 (urelumab, BMS); IMP321 (Prima Biomed); LAG525 (Novartis); ARGX-110 (arGEN-X); PF-05082466 (Pfizer); CDX-1127 (varlilumab; CellDex Therapeutics); TRX-518 (GITR Inc.); MK-4166 (Merck); JTX-2011 (Jounce Therapeutics); ARGX-115 (arGEN-X); NLG-9189 (indoximod, NewLink Genetics); INCB024360 (Incyte); IPH2201 (Innate Immotherapeutics/AZ); NLG-919 (NewLink Genetics); anti-VISTA (JnJ); Epacadostat (INCB24360, Incyte); F001287 (Flexus/BMS); CP 870893 (University of Pennsylvania); MGA271 (Macrogenix); Emactuzumab (Roche/Genentech); Galunisertib (Eli Lilly); Ulocuplumab (BMS); BKT140/BL8040 (Biokine Therapeutics); Bavituximab (Peregrine Pharmaceuticals); CC 90002 (Celgene); 852A (Pfizer); VTX-2337 (VentiRx Pharmaceuticals); IMO-2055 (Hybridon, Idera Pharmaceuticals); LY2157299 (Eli Lilly); EW-7197 (Ewha Women's University, Korea); Vemurafenib (Plexxikon); Dabrafenib (Genentech/GSK); BMS-777607 (BMS); BLZ945 (Memorial Sloan-Kettering Cancer Centre); Unituxin (dinutuximab, United Therapeutics Corporation); Blincyto (blinatumomab, Amgen); Cyramza (ramucirumab, Eli Lilly); Gazyva (obinutuzumab, Roche/Biogen); Kadcyla (adotrastuzumab emtansine, Roche/Genentech); Perjeta (pertuzumab, Roche/Genentech); Adcetris (brentuximab vedotin, TakedalMillennium); Arzerra (ofatumumab, GSK); Vectibix (panitumumab, Amgen); Avastin (bevacizumab, Roche/Genentech); Erbitux (cetuximab, BMS/Merck); Bexxar (tositumomab-I131, GSK); Zevalin (ibritumomab tiuxetan, Biogen); Campath (alemtuzumab, Bayer); Mylotarg (gemtuzumab ozogamicin, Pfizer); Herceptin (trastuzumab, Roche/Genentech); Rituxan (rituximab, Genentech/Biogen); volociximab (Abbvie); Enavatuzumab (Abbvie); ABT-414 (Abbvie); Elotuzumab (Abbvie/BMS); ALX-0141 (Ablynx); Ozaralizumab (Ablynx); Actimab-C (Actinium); Actimab-P (Actinium); Milatuzumab-dox (Actinium); Emab-SN-38 (Actinium); Naptumonmab estafenatox (Active Biotech); AFM13 (Affimed); AFM11 (Affimed); AGS-16C3F (Agensys); AGS-16M8F (Agensys); AGS-22ME (Agensys); AGS-15ME (Agensys); GS-67E (Agensys); ALXN6000 (samalizumab, Alexion); ALT-836 (Altor Bioscience); ALT-801 (Altor Bioscience); ALT-803 (Altor Bioscience); AMG780 (Amgen); AMG 228 (Amgen); AMG820 (Amgen); AMG172 (Amgen); AMG595 (Amgen); AMG110 (Amgen); AMG232

2

(adecatumumab, Amgen); AMG211 (Amgen/MedImmune); BAY20-10112 (Amgen/Bayer); Rilotumumab (Amgen); Denosumab (Amgen); AMP-514 (Amgen); MEDI575 (AZ/MedImmune); MEDI3617 (AZ/MedImmune); MEDI6383 (AZ/MedImmune); MEDI551 (AZ/MedImmune); Moxetumomab pasudotox (AZ/MedImmune); MEDI565 (AZ/MedImmune); MEDI0639 (AZ/MedImmune); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MEDI562 (AZ/MedImmune); AV-380 (AVEO); AV203 (AVEO); AV299 (AVEO); BAY79-4620 (Bayer); Anetumab ravtansine (Bayer); vantictumab (Bayer); BAY94-9343 (Bayer); Sibrotuzumab (Boehringer Ingleheim); BI-836845 (Boehringer Ingleheim); B-701 (BioClin); BIIB015 (Biogen); Obinutuzumab (Biogen/Genentech); BI-505 (Bioinvent); BI-1206 (Bioinvent); TB-403 (Bioinvent); BT-062 (Biotest) BIL-010t (Biosceptre); MDX-1203 (BMS); MDX-1204 (BMS); Necitumumab (BMS); CAN-4 (Cantargia AB); CDX-011 (Celldex); CDX1401 (Celldex); CDX301 (Celldex); U3-1565 (Daiichi Sankyo); patritumab (Daiichi Sankyo); tigatuzumab (Daiichi Sankyo); nimotuzumab (Daiichi Sankyo); DS-8895 (Daiichi Sankyo); DS-8873 (Daiichi Sankyo); DS-5573 (Daiichi Sankyo); MORab-004 (Eisai); MORab-009 (Eisai); MORab-003 (Eisai); MORab-066 (Eisai); LY3012207 (Eli Lilly); LY2875358 (Eli Lilly); LY2812176 (Eli Lilly); LY3012217(Eli Lilly); LY2495655 (Eli Lilly); LY3012212 (Eli Lilly); LY3012211 (Eli Lilly); LY3009806 (Eli Lilly); cixutumumab (Eli Lilly); Flanvotumab (Eli Lilly); IMC-TR1 (Eli Lilly); Ramucirumab (Eli Lilly); Tabalumab (Eli Lilly); Zanolimumab (Emergent Biosolution); FG-3019 (FibroGen); FPA008 (Five Prime Therapeutics); FP-1039 (Five Prime Therapeutics); FPA144 (Five Prime Therapeutics); catumaxomab (Fresenius Biotech); IMAB362 (Ganymed); IMAB027 (Ganymed); HuMax-CD74 (Genmab); HuMax-TFADC (Genmab); GS-5745 (Gilead); GS-6624 (Gilead); OMP-21M18 (demcizumab, GSK); mapatumumab (GSK); IMGN289 (ImmunoGen); IMGN901 (ImmunoGen); IMGN853 (ImmunoGen); IMGN529 (ImmunoGen); IMMU-130 (Immunomedics); milatuzumab-dox (Immunomedics); IMMU-115 (Immunomedics); IMMU-132 (Immunomedics); IMMU-106 (Immunomedics); IMMU-102 (Immunomedics); Epratuzumab (Immunomedics); Clivatuzumab (Immunomedics); IPH41 (Innate Immunotherapeutics); Daratumumab (Janssen/Genmab); CNTO-95 (Intetumumab, Janssen); CNTO-328 (siltuximab, Janssen); KB004 (KaloBios); mogamulizumab (Kyowa Hakko Kirrin); KW-2871 (ecromeximab, Life Science); Sonepcizumab (Lpath); Margetuximab (Macrogenics); Enoblituzumab (Macrogenics); MGD006 (Macrogenics); MGF007 (Macrogenics); MK-0646 (dalotuzumab, Merck); MK-3475 (Merck); Sym004 (Symphogen/Merck Serono); DI17E6 (Merck Serono); MOR208 (Morphosys); MOR202 (Morphosys); Xmab5574 (Morphosys); BPC-1C (ensituximab, Precision Biologics); TAS266 (Novartis); LFA102 (Novartis); BHQ880 (Novartis/Morphosys); QGE031 (Novartis); HCD122 (lucatumumab, Novartis); LJM716 (Novartis); AT355 (Novartis); OMP-21M18 (Demcizumab, OncoMed); OMP52M51 (Oncomed/GSK); OMP-59R5 (Oncomed/GSK); vantictumab (Oncomed/Bayer); CMC-544 (inotuzumab ozogamicin, Pfizer); PF-03446962 (Pfizer); PF-04856884 (Pfizer); PSMA-ADC (Progenics); REGN1400 (Regeneron); REGN910 (nesvacumab, Regeneron/Sanofi); REGN421 (enoticumab, Regeneron/Sanofi); RG7221, RG7356, RG7155, RG7444, RG7116, RG7458, RG7598, RG7599, RG7600, RG7636, RG7450, RG7593, RG7596, DCDS3410A, RG7414 (parsatuzumab), RG7160 (imgatuzumab), RG7159 (obintuzumab), RG7686, RG3638 (onartuzumab), RG7597 (Roche/Genentech); SAR307746 (Sanofi); SAR566658 (Sanofi); SAR650984 (Sanofi); SAR153192 (Sanofi); SAR3419 (Sanofi); SAR256212 (Sanofi), SGN-LIV1A (lintuzumab, Seattle Genetics); SGN-CD33A (Seattle Genetics); SGN-75 (vorsetuzumab mafodotin, Seattle Genetics); SGN-19A (Seattle Genetics) SGN-CD70A (Seattle Genetics); SEA-CD40 (Seattle Genetics); ibritumomab tiuxetan (Spectrum); MLN0264 (Takeda); ganitumab (Takeda/Amgen); CEP-37250 (Teva); TB-403 (Thrombogenic); VB4-845 (Viventia); Xmab2512 (Xencor); Xmab5574 (Xencor); nimotuzumab (YM Biosciences); Carlumab (Janssen); NY-ESO TCR (Adaptimmune); MAGE-A-10 TCR (Adaptimmune); CTL019 (Novartis); JCAR015 (Juno Therapeutics); KTE-C19 CAR (Kite Pharma); UCART19 (Cellectis); BPX-401 (Bellicum Pharmaceuticals); BPX-601 (Bellicum Pharmaceuticals); ATTCK20 (Unum Therapeutics); CAR-NKG2D (Celyad); Onyx-015 (Onyx Pharmaceuticals); H101 (Shanghai Sunwaybio); DNX-2401 (DNAtrix); VCN-01 (VCN Biosciences); Colo-Adl (PsiOxus Therapeutics); ProstAtak (Advantagene); Oncos-102 (Oncos Therapeutics); CG0070 (Cold Genesys); Pexa-vac (JX-594, Jennerex Biotherapeutics); GL-ONC1 (Genelux); T-VEC (Amgen); G207 (Medigene); HF10 (Takara Bio); SEPREHVIR (HSV1716, Virttu Biologics); OrienX010 (OrienGene Biotechnology); Reolysin (Oncolytics Biotech); SW-001 (Neotropix); Cacatak (CVA21, Viralytics); Alimta (Eli Lilly), cisplatin, oxaliplatin, irinotecan, folinic acid, methotrexate, cyclophosphamide, 5-fluorouracil, Zykadia (Novartis), Tafinlar (GSK), Xalkori (Pfizer), Iressa (AZ), Gilotrif (Boehringer Ingelheim), Tarceva (Astellas Pharma), Halaven (Eisai Pharma), Veliparib (Abbvie), AZD9291 (AZ), Alectinib (Chugai), LDK378 (Novartis), Genetespib (Synta Pharma), Tergenpumatucel-L (NewLink Genetics), GV1001 (Kael-GemVax), Tivantinib (ArQule); Cytoxan (BMS); Oncovin (Eli Lilly); Adriamycin (Pfizer); Gemzar (Eli Lilly); Xeloda (Roche); Ixempra (BMS); Abraxane (Celgene); Trelstar (Debiopharm); Taxotere (Sanofi); Nexavar (Bayer); IMMU-132 (Immunomedics); E7449 (Eisai); Thermodox (Celsion); Cometriq (Exellxis); Lonsurf (Taiho Pharmaceuticals); Camptosar (Pfizer); UFT (Taiho Pharmaceuticals); and TS-1 (Taiho Pharmaceuticals).

Neurodegenerativne bolesti

4

Alzheimer-ova bolest i demencija

[0208] Aberantna akumulacija hiperfosforiliranog tau je obeležje neurodegenerativnih tauopatija kao što je Alzheimer-ove bolest. Smanjenje aktivnosti HDAC može smanjiti nivoe hiperfosforiliranog tau i ublažiti simptome neuroloških poremećaja posredovanih tauom [38]. Prema tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neurodegenerativnih tauopatija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju Alzheimer-ove bolesti.

[0209] U DSM-5, termin demencija zamenjen je terminima glavni neurokognitivni poremećaj i blagi neurokognitivni poremećaj. Neurokognitivni poremećaj je heterogena klasa psihijatrijskih bolesti. Najčešći neurokognitivni poremećaj je Alzheimer-ova bolest, praćena vaskularnim demencijama ili mešovitim oblicima. Drugi oblici neurodegenerativnih poremećaja (npr. bolest Lewy-jeva telašca, frontotemporalna demencija, Parkinson-ova demencija, Creutzfeldt-Jakobova bolest, Huntington-ova bolest i Wernicke-Korsakoff sindrom) praćeni su demencijom.

[0210] Alzheimer-ovu bolest i demenciju takođe karakterišu gubitak neurona, zbog čega neuroprotektivni i neuroproliferativni efekti prikazani u primerima za kompozicije prema pronalasku ukazuju na to da oni mogu biti korisni za lečenje ili sprečavanje ovih stanja.

[0211] Simptomatski kriterijumi za demenciju pod DSM-5 dokaz su značajnog kognitivnog pada u odnosu na prethodni nivo performansi u jednom ili više kognitivnih domena odabranih iz: učenja i pamćenja; jezik; izvršna funkcija; složena pažnja; perceptivno-motorička i socijalna kognicija. Kognitivni deficiti moraju ometati nezavisnost u svakodnevnim aktivnostima. Pored toga, kognitivni deficiti se ne javljaju isključivo u kontekstu delirija i ne mogu se bolje objasniti drugim mentalnim poremećajem (na primer MDD ili šizofrenija).

[0212] Pored primarnog simptoma, subjekti sa neurodegenerativnim poremećajima pokazuju i bihejvioralne i psihijatrijske simptome, uključujući agitaciju, agresiju, depresiju, anksioznost, apatiju, psihozu i poremećaje ciklusa spavanja i budnosti.

[0213] Neurodegenerativni poremećaji mogu se razviti ili trajati usled disfunkcije ose mikrobiota-creva-mozak. Prema tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neurodegenerativnih poremećaja kod subjekata. U poželjnim primerima izvođenja, neurodegenerativni poremećaj je Alzheimer-ova bolest. U drugim primerima izvođenja, neurodegenerativni poremećaj je odabran iz: vaskularnih demencija; mešanog oblika Alzheimer-ove bolesti i vaskularne demencije; bolest Lewy-jevih telašaca; frontotemporalna demencija; Parkinson-ova demencija; Creutzfeldt-Jakob-ova bolest; Hantington-ova bolest; i Wernicke-Korsakoff sindrom.

[0214] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma neurodegenerativnih poremećaja kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu kognitivnog opadanja kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju nivo performansi subjekta sa neurodegenerativnim poremećajima u jednom ili više kognitivnih domena odabranih iz: učenja i pamćenja; jezik; izvršna funkcija; složena pažnja; perceptivno-motorička i socijalna kognicija. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu jednog ili više ponašajnih i psihijatrijskih simptoma povezanih sa neurodegenerativnim poremećajima odabranim od agitacije, agresije, depresije, anksioznosti, apatije, psihoze i poremećaja ciklusa spavanja i budnosti.

[0215] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju simptomatsku bolest intervencijom sumnjivih mehanizama patogena u pretkliničkoj fazi. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju modifikaciju bolesti, usporavanjem ili zaustavljanjem napredovanja simptoma. U nekim primerima izvođenja, usporavanje ili zaustavljanje napredovanja simptoma korelira sa dokazima o odlaganju osnovnog neuropatološkog postupka. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome neurodegenerativnih poremećaja koji sadrže pojačano kognitivno i funkcionalno poboljšanje. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju ponašajne i psihijatrijske simptome demencije (BPSD). U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju sposobnost subjekta sa neurodegenerativnim poremećajem da preduzima svakodnevne aktivnosti.

[0216] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju kogniciju i funkcionisanje kod subjekta sa Alzheimer-ovom bolešću. U nekim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku poboljšava kognitivne krajnje tačke kod subjekta sa Alzheimerovom bolešću. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju funkcionalnu krajnju tačku kod subjekta sa Alzheimer-ovom bolešću. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju kognitivne i funkcionalne krajnje tačke kod subjekta sa Alzheimer-ovom bolešću. U još daljim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju ukupni klinički odgovor (opšta krajnja tačka) kod subjekata sa Alzheimer-ovom bolešću.

[0217] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome neurodegenerativnih poremećaja prema simptomatskom ili dijagnostičkom testu. U određenim primerima izvođenja, testovi za procenu simptomatskog poboljšanja Alzheimer-ove bolesti (i drugih neurodegenerativnih poremećaja) su odabrani iz objektivnih kognitivnih, svakodnevnih aktivnosti, opšte procene promena, testova kvaliteta zdravstvenog stanja i testova koji procenjuju bihejvioralne i psihijatrijske simptome neurodegenerativnih poremećaja.

[0218] U određenim primerima izvođenja, objektivni kognitivni testovi za procenu simptomatskog poboljšanja koriste skalu- kognitivnu subskalu za procenu Alzheimer-ove bolesti (ADAS-cog) i klasičnu ADAS skalu. U određenim primerima izvođenja, simptomatsko poboljšanje kognicije se procenjuje pomoću neurofiziološkog testa baterije za upotrebu kod Alzheimer-ove bolesti (NTB).

[0219] U nekim primerima izvođenja, test opšte procene promena koristi skalu poboljšanja opšteg kliničkog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, opšta skala je zasnovana na globalnoj proceni od strane nezavisnog lekara na osnovu kliničkog intervjua sa pacijentom i osobom koja brine o pacijentu (CIBIC-plus). U nekim primerima izvođenja, opšta skala je sveobuhvatna globalna procena pacijenta od strane lekara uključujući i mišljenje osobe koja vodi brigu o pacijentu (ADCS-CGIC).

[0220] U određenim primerima izvođenja, mere kvaliteta zdravstvenog stanja su QOL povezan sa Alzheimer-ovom bolešću (ADRQL) i QOL-Alzheimer-ova bolest (QOL-AD).

[0221] U određenim primerima izvođenja, testovi koji procenjuju bihevioralne i psihijatrijske simptome neurodegenerativnih poremećaja su odabrani iz bihevioralne patologije na skali za procenu Alzheimerove bolesti (BEHAVE-AD); ponašajna skala za procenjivanje demencije (BRSD); neuropsihijatrijski inventar (NPI); i Cohen-Mansfield-ov inventor agitacija (CMAI).

[0222] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju neurodegenerativnih poremećaja kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje neurodegenerativnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, takve terapije uključuju inhibitore acetilholinesteraze, uključujući donepezil (Aricept®), galantamin (Razadyne®) i rivastigmin (Exelon®), i memantin.

- Parkinson-ova bolest

[0223] Parkinson-ova bolest je česta neurodegenerativna bolest koju neuropatološki karakteriše degeneracija heterogenih populacija nervnih ćelija (ćelije koje proizvode dopamin). Klinička dijagnoza Parkinson-ove bolesti zahteva bradikineziju i najmanje jedan od sledećih osnovnih simptoma: drhtanje u mirovanju; rigidnost mišića i oštećenje posturalnog refleksa. Ostali znaci i simptomi koji mogu biti prisutni ili se mogu razviti tokom napredovanja bolesti su autonomne smetnje (sialoreja, seboreja, zatvor, poremećaji mokrenja, seksualno funkcionisanje, ortostatska hipotenzija, hiperhidroza), poremećaji spavanja i poremećaji osećaja mirisa ili osećaja temperatura. Parkinson-ova bolest je neurodegenerativna bolest koja se može razviti ili trajati usled aktivnosti HDAC. Na primer, pokazalo se da aktivnost HDAC reguliše agregaciju i taloženje toksičnih unutarćelijskih proteinskih filamenata koji su obeležje neurodegenerativnih bolesti kao što je Parkinson-ova bolest [39]. Pokazalo se da inhibicija aktivnosti HDAC smanjuje događaje pogrešnog sklapanja toksičnih proteina u modelima Parkinson-ove bolesti. Prema tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju Parkinsonove bolesti kod subjekta.

[0224] U daljim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja Parkinson-ove bolesti. Kompozicije prema pronalasku mogu poboljšati motoričke i kognitivne funkcije kod modela Parkinson-ove bolesti. Lečenje kompozicijama može modulirati signalizaciju u centralnom, autonomnom i enteričnom nervnom sistemu; mogu modulirati aktivnost putanje HPA ose; mogu modulirati neuroendokrine i/ili neuroimune puteve; i mogu da moduliraju nivoe komensalnih metabolita, markera upale i/ili gastrointestinalnu permeabilnost subjekta, koji su svi umešani u neuropatologiju Parkinson-ove bolesti. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Bariatricus massiliensis za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanju Parkinson-ove bolesti. Kompozicije koji koriste Bariatricus mogu biti posebno efikasne za lečenje Parkinsonove bolesti. Kompozicija može dalje sadržati organsku kiselinu.

[0225] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma Parkinson-ove bolesti kod subjekta. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više osnovnih simptoma Parkinson-ove bolesti kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju bradikineziju kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju drhtanje u mirovanju; krutost mišića i/ili oštećenje posturalnog refleksa kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma povezanih sa progresijom Parkinson-ove bolesti odabranih iz autonomnih poremećaja (sialoreja, seboreja, zatvor, poremećaji mokrenja, seksualno funkcionisanje, ortostatska hipotenzija, hiperhidroza), poremećaja spavanja i poremećaja u smislu mirisa ili osećaja temperature.

[0226] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju komorbidne simptome depresije sa Parkinsonovom bolešću. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju verbalno pamćenje i/ili izvršne funkcije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju pažnju, radnu memoriju, verbalnu tečnost i/ili anksioznost.

[0227] U drugim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju komorbidne kognitivne disfunkcije sa Parkinsonovom bolešću.

[0228] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju komorbidnu hiperaktivnost ili ponašanje nalik anksioznosti sa Parkinson-ovom bolešću. Pokazalo se da modeli miševa sa Parkinson-ovom bolesti pokazuju hiperaktivnost. Određeni modeli su ukazali da hiperaktivnost može biti posledica neuravnoteženih nivoa neurotransmitera u mozgu ili funkcionalnih promena u drugim strukturama u mozgu koje prethode degeneraciji dopaminergičnih neurona. Prema tome, poremećaji u ponašanju, kao što je hiperaktivnost, mogu biti simptomi Parkinson-ove bolesti koji prethode nastanku motoričkih poremećaja. Pokazano je da kompozicije prema pronalasku smanjuju hiperaktivnost kod modela miševa sa Parkinson-ovom bolesti. Prema tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu biti za upotrebu u sprečavanju motoričkih poremećaja kod Parkinsonove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju poremećaja ponašanja povezanih sa Parkinson-ovom bolešću.

[0229] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju progresiju Parkinson-ove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasnije motoričke komplikacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasnije motoričke fluktuacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju gubitak neurona. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome demencije Parkinson-ove bolesti (PDD). U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenje izvršne funkcije, pažnje i/ili radne memorije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju dopaminergičku neurotransmisiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenu dopaminergičku neurotransmisiju.

[0230] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome Parkinsonove bolesti prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim primerima izvođenja, testovi za procenu simptomatskog poboljšanja motoričke funkcije kod Parkinsonove bolesti je unifikovana skala za procenu Parkinson-ove bolesti. Posebno, UPDRS II uzima u obzir svakodnevne aktivnosti, a UPDRS III uzima u obzir motoričko ispitivanje.

[0231] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju simptome povezane sa PDD prema simptomatskom ili dijagnostičkom testu i/ili skali. U određenim primerima izvođenja, test ili skala su odabrani iz Hopkins-ovog verbalnog testa učenja -revidirani (HVLT-R); Delis-Kaplanov sistem egzekutivnih funkcija (D-KEFS) testa smetnji boja-reč; Hamilton-ova skala procene depresije (HAM-D 17; depresija); Hamilton-ova skala za procenu anksioznosti (HAM-A; anksioznost) i unifikovana skala za procenu Parkinson-ove bolesti (UPDRS; ozbiljnost simptoma PD).

[0232] U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku poboljšavaju skalu poboljšanja opšteg kliničkog utiska (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku pokazuju pozitivan efekat na opšte socijalno i profesionalno oštećenje subjekta sa Parkinson-ovom bolešću.

[0233] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekata pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje gubitka dopaminergičnih ćelija u substantia nigra. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekata pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje degeneracije dopaminergičnih neurona u pars compacta supstancie nigra. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekata pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje degeneracije dopaminergičnih neurona u pars compacta substantie nigra i posledično gubitak njihovih projektovanih nervnih vlakana u strijatumu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekata pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje gubitka nigrostriatalnih dopaminergičnih neurona.

[0234] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekta pri čemu navedena upotreba uključuje povećanje nivoa dopamina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekta pri čemu navedena upotreba uključuje povećanje nivoa DOPAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili sprečavanju neuroloških poremećaja kao što je Parkinson-ova bolest kod subjekta pri čemu navedena upotreba uključuje povećanje nivoa dopamina i DOPAC. U određenim primerima izvođenja, nivoi dopamina i/ili DOPAC su povećani u strijatumu.

[0235] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku aktiviraju MAP2 (protein 2 povezan sa mikrotubulama) aktivaciju. MAP2 je gen povezan sa neuronskom diferencijacijom MAP2 i smatra se da je od suštinskog značaja za formiranje mikrotubula u neurogenezi, tako da kompozicije prema pronalasku mogu biti posebno korisne za lečenje neurodegenerativnih bolesti. U nekim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju neurodegenerativne bolesti, kao što je Alzheimer-ova bolest ili Parkinson-ova bolest, aktiviranjem ili povećanjem nivoa MAP2. Štaviše, pošto MAP2 pospešuje formiranje neurita, koji imaju glavnu ulogu u ponovnom umrežavanju oštećenih neurona i sinaptogenezi, ekspresija MAP2 nije samo marker neuronske diferencijacije već ukazuje i na „ponovno povezivanje neurona“ povezano sa terapijskim ishodom neuropatološke bolesti [22].

[0236] Primeri pokazuju da kompozicije prema pronalasku moduliraju ekspresiju određenog broja proteina u mozgu. Posebno, kompozicije prema pronalasku povećavaju ekspresiju BDNF u hipokampusu i prefrontalnom korteksu. BDNF je od suštinske važnosti za sinaptičku plastičnost kod odraslih i formiranje memorije, a smanjenje nivoa BDNF se primećuje kod pacijenata sa Alzheimer-ovom i Huntington-ovom bolešću. Kompozicije prema pronalasku su stoga posebno korisne za lečenje Alchajmer-ove i Huntington-ove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku povećavaju ekspresiju BDNF u mozgu.

Načini primene

[0237] Posebno, kompozicije prema pronalasku se primenjuju u gastrointestinalnom traktu da bi se omogućilo isporučivanje i/ili delimična ili potpuna kolonizacija creva sa bakterijskim sojem prema pronalasku. Uopšteno, kompozicije prema pronalasku se primenjuju oralno, ali se mogu primenjivati rektalno, intranazalno ili bukalnim ili sublingvalnim putem.

[0238] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se primeniti kao pena, sprej ili gel.

[0239] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku mogu se primeniti kao supozitorije, kao što je rektalna supozitorija, na primer pena ulja kakaovca (kakao puter), sintetička tvrda mast (npr. suppocire, witepsol), glicerol-želatin, polietilen glikol ili kompozicija sapuna od glicerina.

[0240] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se primenjuju u gastrointestinalni trakt kroz sondu, kao što su nazogastrična sonda, orogastrična sonda, želučana sonda, jejunostomska sonda (J sonda), perkutana endoskopska gastrostoma (PEG) ili otvor, kao što je otvor na zidu grudnog koša koji omogućava pristup stomak, jejunum i druge pogodne pristupne otvore.

[0241] Kompozicije prema pronalasku mogu se primeniti jednom ili se mogu primenjivati sekvencijalno kao deo režima lečenja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku treba da se primenjuju svakodnevno.

[0242] U određenim primerima izvođenja prema pronalasku, lečenje prema pronalasku prati procena mikrobiota creva pacijenta. Lečenje se može ponoviti ako se ne postigne isporuka i/ili

1

delimična ili potpuna kolonizacija sa sojem prema pronalasku tako da se ne primećuje efikasnost ili se tretman može prekinuti ako je isporuka i/ili delimična ili potpuna kolonizacija uspešna i ako se primeti efikasnost.

[0243] U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku može se primeniti kod gravidne životinje, na primer sisara, kao što je čovek, da bi se sprečilo da se kod deteta in utero i/ili nakon što se rodi razvije inflamatorna ili autoimuna bolest.

[0244] Kompozicije prema pronalasku mogu se primenjivati kod pacijenta kome je dijagnostikovana bolest ili stanje posredovano povišenom aktivnošću histon deacetilaze ili za koje je utvrđeno da rizikuju od bolesti ili stanja posredovanog povišenom aktivnošću histon deacetilaze. Kompozicije se takođe mogu primenjivati kao profilaktička mera za sprečavanje razvoja bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću histon deacetilaze kod zdravog pacijenta.

[0245] Kompozicije prema pronalasku mogu se primenjivati kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da ima abnormalnu mikrobiotu creva. Na primer, pacijent može imati smanjenu ili odsutnu kolonizaciju sa Bariatricus, a posebno sa Bariatricus massiliensis.

[0246] Kompozicije prema pronalasku mogu se primenjivati kao prehrambeni proizvod, kao što je dodatak ishrani.

[0247] Uopšteno, kompozicije su za lečenje ljudi, mada one mogu biti korišćene za lečenje životinja uključujući monogastrične sisare kao što su živina, svinje, mačke, pasi, konji ili zečevi. Kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za pospešivanje rasta i performansi životinja. Ako se primenjuje na životinjama, može se koristiti oralna gavaža.

Kompozicije

[0248] Kompozicija prema pronalasku sadrži bakterije. U poželjnim primerima izvođenja prema pronalasku, kompozicija je formulisana u liofilizovanom obliku. Na primer, kompozicija prema pronalasku može da sadrži granule ili želatinske kapsule, na primer tvrde želatinske kapsule, koje sadrže bakterijski soj prema pronalasku.

[0249] Poželjno, kompozicija prema pronalasku sadrži liofilizovane bakterije. Liofilizacija bakterija je dobro uspostavljena procedura i relevantne smernice su dostupne u, na primer, referencama [40,, 42].

[0250] Alternativno, kompozicija prema pronalasku može da sadrži žive, aktivne bakterijske kulture.

[0251] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku je inkapsulirana da bi omogućila isporuku bakterijskog soja u crevo. Kapsulacija štiti kompoziciju od razgradnje do

2

isporuke na ciljnom mestu kroz, na primer, pucanje hemijskim ili fizičkim stimulusima kao što su pritisak, enzimska aktivnost ili fizički raspad, što može biti izazvano promenama pH. Može se koristiti bilo koji odgovarajući postupak inkapsulacije. Ogledne tehnike inkapsulacije uključuju zarobljavanje unutar porozne matrice, vezivanje ili adsorpciju na čvrstim površinama nosača, samoagregaciju flokulacijom ili sredstvima za umrežavanje i mehaničko zadržavanje iza mikroporozne membrane ili mikrokapsule. Smernice za inkapsulaciju koje mogu biti korisne za pripremu kompozicija prema pronalasku dostupne su u, na primer, referencama [43] i [44].

[0252] Kompozicija se može primenjivati oralno i može biti u obliku tablete, kapsule ili praha. Kapsulirani proizvodi su poželjniji jer su Bariatricus anaerobi. Ostali sastojci (kao što je vitamin C, na primer) mogu biti uključeni kao sredstva za uklanjanje kiseonika i prebiotički supstrati da bi se poboljšale isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije i preživljavanja in vivo. Alternativno, probiotička kompozicija prema pronalasku može se primenjivati oralno kao prehrambeni ili hranljivi proizvod, kao što je fermentisani mlečni proizvod na bazi mleka ili surutke, ili kao farmaceutski proizvod.

[0253] Kompozicija se može formuulisati kao probiotik.

[0254] Kompozicija prema pronalasku uključuje terapijski efikasnu količinu bakterijskog soja prema pronalasku. Terapijski efikasna količina bakterijskog soja dovoljna je da bi imala korisno dejstvo na pacijenta. Terapijski efikasna količina bakterijskog soja može biti dovoljna da dovede do isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije creva pacijenta.

[0255] Pogodna dnevna doza bakterija, na primer za odraslog čoveka, može biti od oko 1 x 10<3>do oko 1 x 10<11>jedinica za formiranje kolonija (CFU); na primer, od oko 1 x 10<7>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<7>do oko 1 x 10<11>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<11>CFU.

[0256] U određenim primerima izvođenja, doza bakterija je najmanje 10<9>ćelija po danu, kao što je najmanje 10<10>, najmanje 10<11>, ili najmanje 101<2>ćelija po danu.

[0257] U određenim primerima izvođenja, kompozicije sadrže bakterijski soj u količini od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<11>CFU/g, u odnosu na težinu kompozicije; na primer, od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<10>CFU/g. Doza može biti, na primer, 1 g, 3g, 5g, i 10g.

[0258] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je količina bakterijskog soja od oko 1 × 10<3>do oko 1 × 10<11>jedinica za formiranje kolonija po gramu u odnosu na težinu kompozicije.

[0259] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje u dozi između 500mg i 1000mg, između 600mg i 900mg, između 700mg i 800mg, između 500mg i 750mg ili između 750mg i 1000mg. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se liofilizovana bakterija u farmaceutskoj kompoziciji primenjuje u dozi između 500mg i 1000mg, između 600mg i 900mg, između 700mg i 800mg, između 500mg i 750mg ili između 750mg i 1000mg.

[0260] Tipično, probiotik, kao što je kompozicija prema pronalasku, se opciono kombinuje sa najmanje jednim pogodnim prebiotičkim jedinjenjem. Prebiotičko jedinjenje je obično neprobavljivi ugljeni hidrat kao što je oligo- ili polisaharid ili šećerni alkohol, koji se ne razgrađuje ili apsorbuje u gornjem delu digestivnog trakta. Poznati prebiotici uključuju komercijalne proizvode kao što su inulin i transgalakto-oligosaharidi.

[0261] U određenim primerima izvođenja, probiotička kompozicija prema ovom pronalasku uključuje prebiotičko jedinjenje u količini od oko 1 do oko 30% težine, u odnosu na ukupnu težinu kompozicije (npr. od 5 do 20% težine). Ugljeni hidrati se mogu odabrati iz grupe koja se sastoji od: frukto-oligosaharida (ili FOS), frukto-oligosaharida kratkog lanca, inulina, izomaltoligosaharida, pektina, ksilo-oligosaharida (ili XOS), hitozan-oligosaharida (ili COS), betaglukana, skrobova modifikovanih i otpornih na obradive smole, polidekstroza, D-tagatoza, bagremovih vlakana, rogača, ovasa i citrusnih vlakana. U jednom aspektu, prebiotici su fruktooligosaharidi kratkog lanca (radi jednostavnosti prikazane ovde u nastavku kao FOSs-c.c); pomenuti FOSs-c.c. nisu svarljivi ugljeni hidrati, koji se uglavnom dobijaju pretvaranjem šećera od repe, uključujući molekul saharoze za koji su vezana tri molekula glukoze.

[0262] Kompozicije prema pronalasku mogu sadržati farmaceutski prihvatljive ekscipijente ili nosače. Primeri takvih pogodnih ekscipijenata mogu se naći u referenci [45]. Prihvatljivi nosači ili razblaživači za terapijsku upotrebu dobro su poznati u farmaceutskoj tehnici i opisani su, na primer, u referenci [46]. Primeri pogodnih nosača uključuju laktozu, skrob, glukozu, metil celulozu, magnezijum stearat, manitol, sorbitol i slično. Primeri pogodnih razblaživača uključuju etanol, glicerol i vodu. Izbor farmaceutskog nosača, ekscipijenta ili razblaživača može se odabrati s obzirom na predviđeni način primene i standardnu farmaceutsku praksu. Farmaceutske kompozicije mogu sadržati kao, ili dodatno, nosač, ekscipijent ili razblaživač bilo koje odgovarajuće vezivno sredstvo/sredstva, mazivo/maziva, suspenzijsko sredstvo/sredstva, sredstvo/sredstva za premazivanje, sredstvo/sredstva za rastvaranje. Primeri pogodnih veziva uključuju skrob, želatinu, prirodne šećere kao što su glukoza, anhidrovana laktoza, laktoza bez protoka, beta-laktoza, zaslađivače od kukuruza, prirodne i sintetičke smole, kao što su bagrem, tragakant ili natrijum alginat, karboksimetil celuloza i polietilen glikol. Primeri pogodnih maziva uključuju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. U farmaceutskoj kompoziciji mogu se obezbediti konzervansi, stabilizatori, boje i čak sredstva za aromatizaciju. Primeri konzervansa uključuju natrijum

4

benzoat, sorbinsku kiselinu i estre p-hidroksibenzoeve kiseline. Takođe se mogu koristiti antioksidanti i sredstva za suspendovanje.

[0263] Kompozicije prema pronalasku mogu se formulisati kao prehrambeni proizvod. Na primer, prehrambeni proizvod može obezbediti hranjivu korist pored terapijskog efekta prema pronalasku, kao što je dodatak ishrani. Slično tome, prehrambeni proizvod može biti formulisan da poboljša ukus kompozicije prema pronalasku ili da kompoziciju učini privlačnijom za konzumiranje, da bude sličnija uobičajenom prehrambenom proizvodu, nego farmaceutskoj kompoziciji. U određenim primerima izvođenja, kompozicija prema pronalasku je formulisana kao proizvod na bazi mleka. Izraz „proizvod na bazi mleka“ označava bilo koji tečni ili polučvrsti proizvod na bazi mleka ili surutke koji ima različit sadržaj masti. Proizvod na bazi mleka može biti, na primer, kravlje mleko, kozje mleko, ovčje mleko, obrano mleko, punomasno mleko, mleko rekombinovano iz mleka u prahu i surutke bez ikakve prerade, ili prerađeni proizvod, kao što je jogurt, usireno mleko, kiselo mleko, kiselo punomasno mleko, puter mleko i drugi proizvodi od kiselog mleka. Druga važna grupa uključuje pića od mleka, kao što su napitci od surutke, fermentisano mleko, kondenzovano mleko, mleko za novorođenčad ili bebe; aromatizovana mleka, sladoled; hranu koja sadrži mleko, kao što su slatkiši.

[0264] U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku sadrže jedan bakterijski soj ili vrstu i ne sadrže nijedan drugi bakterijski soj ili vrstu. Takve kompozicije mogu sadržati samo de minimis ili biološki nebitne količine drugih bakterijskih sojeva ili vrsta. Takve kompozicije mogu biti kulture koje u osnovi nemaju druge vrste organizama. U određenim primerima izvođenja, kompozicije prema pronalasku se sastoje od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16 bakterijskih sojeva ili vrsta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije se sastoje od 1 do 10, poželjno od 1 do 5 bakterijskih sojeva ili vrsta.

[0265] Kompozicije za upotrebu u skladu sa pronalaskom mogu ili ne moraju da zahtevaju odobrenje za stavljanje u prodaju.

[0266] U nekim slučajevima, liofilizovani bakterijski soj se rekonstituiše pre primene. U nekim slučajevima, rekonstitucija se vrši upotrebom ovde opisanog razblaživača.

[0267] Kompozicije prema pronalasku mogu sadržati farmaceutki prihvatljive ekscipijente, razblaživače ili nosače.

[0268] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj prema pronalasku; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini dovoljnoj za lečenje poremećaja kada se daje subjektu kome je to potrebno; i pri čemu je poremećaj odabran iz grupe koja se sastoji od neurodegenerativnih bolesti, poput Alzheimer-ove bolesti, Huntington-ove bolesti ili Parkinsonove bolesti, povrede mozga, kao što je moždani udar, poremećaja ponašanja, kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj, inflamatornih bolesti creva, kao što je Crohn-ova bolest, karcinom, kao što su karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca.

[0269] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj prema pronalasku; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini dovoljnoj za lečenje ili sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC. U poželjnim primerima izvođenja, pomenuta bolest ili stanje je odabrano iz grupe koja se sastoji od neurodegenerativnih bolesti, poput Alzheimer-ove bolesti, Huntington-ove bolesti ili Parkinson-ove bolesti, povrede mozga, kao što je moždani udar, poremećaja ponašanja, kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj, inflamatornih bolesti creva, kao što je Crohn-ova bolest, karcinom, kao što su karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca.

[0270] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je količina bakterijskog soja od oko 1 × 10<3>do oko 1 × 10<11>jedinica koje formiraju koloniju po gramu u odnosu na težinu kompozicije.

[0271] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je kompozicija primenjena u dozi od 1 g, 3 g, 5 g ili 10 g.

[0272] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje postupkom odabranim iz grupe koja se sastoji od oralni, rektalni, potkožni, nazalni, bukalni i sublingvalni.

[0273] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži nosač odabran iz grupe koja se sastoji od laktoze, skroba, glukoze, metil celuloze, magnezijum stearate, manitola i sorbitola.

[0274] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži razređivač odabran iz grupe koja se sastoji od etanola, glicerola i vode.

[0275] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno pomenutu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži ekscipijent odabran iz grupe koja se sastoji od skroba, želatina, glukoze, anhidrovane laktoze, laktoze bez protoka, beta laktoze, zaslađivača od kukuruza, bagrema, tragakanta, natrijum alginata, karboksimetil celuloze, polietilen glikola, natrijum oleata, natrijum stearata, magnezijum stearata, natrijum benzoata, natrijum acetate i natrijum hlorida.

[0276] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodnu pomenutu farmaceutsku kompoziciju, koja dalje sadrži najmanje jedan od konzervansa, antioksidanasa i stabilizatora.

[0277] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodnu pomenutu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži konzervans odabran iz grupe koja se sastoji od natrijum benzoata, sorbinske kiseline i estara p-hidroksibenzoeve kiseline.

[0278] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodnu pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je pomenuti bakterijski soj liofilizovan.

[0279] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodnu pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu kada se kompozicija skladišti u zapečaćenoj posudi na oko 4°C ili oko 25°C i posuda se smešta na vazduhu koji ima 50% relativne vlažnosti, najmanje 80% bakterijskog soja mereno u jedinicama za formiranje kolonija, ostaje posle perioda od najmanje oko: 1 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1.5 godine, 2 godine, 2.5 godine ili 3 godine.

Postupci kultivisanja

[0280] Bakterijski sojevi za upotrebu u ovom pronalasku mogu se kultivisati korišćenjem standardnih mikrobioloških tehnika kako je detaljno opisano u, na primer, referencama [47,, 49].

[0281] Čvrst ili tečni medijum koji se koristi za kulture može biti YCFA agar ili YCFA medijum. YCFA medijum može uključivati (na 100ml, približne vrednosti): kasiton (1.0 g), ekstrakt kvasca (0.25 g), NaHCO3(0.4 g), cistein (0.1 g), K2HPO4(0.045 g), KH2PO4(0.045 g), NaCl (0.09 g), (NH4)2SO4(0.09 g), MgSO47H2O (0.009 g), CaCl2(0.009 g), resazurin (0.1 mg), hemin (1 mg), biotin (1 µg), kobalamin (1 µg), p-aminobenzoeve kiseline (3 µg), folne kiseline (5 µg), i piridoksamin (15 µg).

Bakterijski sojevi za upotrebu u kompozicijama vakcina

[0282] Istraživači su identifikovali da su bakterijski sojevi prema pronalasku korisni za lečenje ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih HDAC. Ovo je verovatno rezultat efekta koji sojevi bakterija prema pronalasku imaju na imuni sistem domaćina. Prema tome, kompozicije prema pronalasku mogu takođe biti korisne za sprečavanje bolesti ili stanja posredovanih HDAC, kada se primenjuju kao kompozicije vakcine. U određenim takvim primerima izvođenja, sojevi bakterija prema pronalasku mogu biti ubijeni, inaktivirani ili oslabljeni. U određenim takvim primerima izvođenja, kompozicije mogu sadržati pomoćno sredstvo u vakcini. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za primenu ubrizgavanjem, kao što je potkožno ubrizgavanje.

Uopšteno

[0283] U praksi će se prema ovom pronalasku koristiti, ukoliko nije drugačije naznačeno, uobičajeni postupci hemije, biohemije, molekularne biologije, imunologije i farmakologije, u okviru veštine tehnike. Takve tehnike su u potpunosti objašnjene u literaturi. Pogledati, npr. reference [50] i [51,57] itd.

[0284] Termin "sadrži" obuhvata "uključuje" kao i " sastoji se" npr. kompozicija "sadrži" X može da se sastoji isključivo od X ili može uključivati nešto dodatno npr. X Y.

[0285] Termin "oko" u odnosu na numeričku vrednost x je opciona i znači, na primer, x+10%.

[0286] Reč „suštinski“ ne isključuje „u potpunosti“ npr. kompozicija koja je „u suštini slobodna“ od Y može biti potpuno slobodna od Y. Gde je potrebno, reč „suštinski“ može biti izostavljena iz definicije prema pronalasku.

[0287] Upućivanje na procentualni identitet sekvence između dve nukleotidne sekvence znači da je, kada se poravnaju, taj procenat nukleotida isti u poređenju dve sekvence. Ovo poravnanje i procenat homologije ili identiteta sekvence može se odrediti pomoću softverskih programa poznatih u tehnici, na primer onih opisanih u odeljku 7.7.18 ref. [58]. Poželjno poravnanje se određuje Smith-Waterman-ovim algoritmom za pretraživanje homologije koristeći afin pretragu praznine sa vrednosti otvorenosti praznine od 12 i vrednosti produženja praznine od 2, BLOSUM matricom od 62. Smith-Waterman-ov algoritam za pretraživanje homologije otkriven je u ref. [59].

[0288] Osim ako nije izričito navedeno, postupak koji sadrži brojne korake može sadržati dodatne korake na početku ili na kraju postupka, ili može sadržati dodatne intervenišuće korake. Takođe, koraci se mogu kombinovati, izostavljati ili izvoditi po alternativnom redosledu, ako je to potrebno.

[0289] Ovde su opisani različiti primeri izvođenja prema pronalasku. Podrazumeva se da se karakteristike navedene u svakom primeru izvođenja mogu kombinovati sa drugim specificiranim karakteristikama, da bi se obezbedili dalji primeri izvođenja. Posebno, primeri izvođenja koji su ovde istaknuti kao pogodni, tipični ili poželjni mogu se kombinovati međusobno (osim kada se međusobno isključuju).

NAČINI IZVOĐENJA PRONALASKA

Primer 1 – Efikasnost bakterija na aktivnost histon deacetilaze

Uvod

[0290] Istraživači su pokušali da istraže efikasnost soja Bariatricus massiliensis 43042 i njegovih metabolita na inhibiciju HDAC.

Materijal i postupci

Kultura bakterija i sakupljanje supernatanta bez ćelija

[0291] Čiste kulture od 43042 bakterije uzgajane su anaerobno u YCFA tečnom medijumu dok nisu dostigle stacionarnu fazu rasta. Kulture su centrifugirane na 5,000 x g tokom 5 minuta i supernatant bez ćelija (CFS) je filtriran upotrebom 0.2 µM filtera (Millipore, UK). Alikvoti CFS od 1 mL čuvani su na -80 °C do upotrebe. Natrijum-butirat, heksanska i valerijanska kiselina su dobijeni od Sigme Aldrich (Velika Britanija), a suspenzije su pripremljene u YCFA tečnom medijumu.

SCFA i MCFA kvantifikacija supernatanata bakterija

[0292] Masne kiseline kratkog lanca (SCFAs) i masne kiseline srednjeg lanca (MCFAs) iz supernatanta bakterija su analizirane i kvantifikovane pomoću MS Omics APS na sledeći način. Uzorci su zakiseljeni upotrebom hidrohloridne kiseline i dodani su interni standardi obeleženi deuterijumom. Svi uzorci su analizirani po slučajnom redosledu. Analiza je izvedena korišćenjem visoko polarne kolone (Zebron ™ ZB-FFAP, GC Cap. Kolona 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm) instalirane u GC (7890B, Agilent) zajedno sa kvadrupol detektorom (59977B, Agilent). Sistemom je upravljao ChemStation (Agilent). Sirovi podaci su konvertovani u format netCDF pomoću Chemstation (Agilent), pre nego što su podaci ubačeni i obrađeni u Matlab R2014b (Mathworks, Inc.) pomoću softvera PARADISe koji je opisao Johnsen, 2017, J Chromatogr A, 1503, 57-64.

Analiza opšte aktivnosti HDAC

[0293] Cele ćelije i supernatanti bez ćelija stacionarne faze 43042 kulture izolovani su centrifugiranjem i filtriranjem u 0.22 uM filteru. HT-29 ćelije su korišćene 3 dana nakon sastavljanja i spuštene u 1 mL DTS 24 sata pre početka eksperimenta. HT-29 ćelije su izazvane sa 10% supernatantom bez ćelija razblaženim u DTS i ostavljene da bi se inkubirale 48 sati. Proteini nukleaze su zatim ekstrahovani pomoću kompleta Sigma Aldrich za ekstrakciju nukleaza, a uzorci su brzo zamrznuti pre merenja aktivnosti HDAC. Komplet za aktivnost HDAC procenjen je fluorometrijski pomoću kompleta Sigma Aldrich (UK).

Analiza specifične aktivnosti HDAC

[0294] Specifična aktivnost inhibicije HDAC analizirana je za HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 pomoću fluorogenih kompleta za analizu za svaki tip HDAC (BPS Bioscience, CA). Analize su izvedene prema uputstvima proizvođača i svaki uzorak je izvršen u replikama. Supernatanti bez ćelija su razblaženi 1: 10 i izloženi specifičnim HDAC proteinima obezbeđenim u kompletu da bi se održala doslednost između postupaka.

Rezultati

43042 cele ćelije i supernatanti bez ćelije smanjuju opštu aktivnost HDAC

[0295] Rezultat prikazani na Slici 1 pokazuju da 43042 cele ćelije i CFS smanjuju opštu aktivnost HDAC za statistički značajnu količinu.

43042 proizvodi HDAC inhibitrni metabolit butirat

[0296] 43042 supernatant je pokazao snažnu inhibiciju HDAC i utvrđeno je da proizvodi značajne količine butirata (Slika 2A).

[0297] Da bi se istražilo koji su metaboliti odgovorni za inhibiciju HDAC izazvanu sojem, izmerene su različite koncentracije heksanske kiseline, valerijanske kiseline i natrijum-butirata za njihovu inhibiciju HDAC na celim HT-29 ćelijama i na lizatu HT-29 ćelija. Rezultati na slici 2B pokazuju značajnu (P <0.05) inhibiciju aktivnosti HDAC natrijum-butiratom na celim ćelijama, kao i na ćelijskom lizatu, dok je heksanska kiselina pokazala značajnu inhibitornu aktivnost. Valerijanska kiselina inhibirala je ukupnu aktivnost HDAC (* (p <0.05), ** (p <0.005), *** (P <0.001), **** (p <0.0001)).

Istraživani moćni potpuni inhibitori HDAC ciljne klase IHDACs

[0298] Istražen je specifični profil inhibicije HDAC testiranjem soja bakterija. Sprovedene su specifične analize inhibicije HDAC (BPS Bioscience, CA) za klasu I HDACs. Analizirana je sposobnost bakterijskog soja da inhibira HDAC enzime. Rezultati (Slika 3) pokazuju da je 43042 moćan inhibitor HDAC enzima klase 1 (HDAC1, 2 i 3), posebno HDAC2.

Diskusija

[0299] Zanimljivo je da rezultati za određenu aktivnost HDAC pokazuju da je testirani soj moćan inhibitor HDACs klase I, a posebno HDAC2 (Slika 3). Klasa I HDACs (HDAC1, 2, 3 i 8) su smešteni u jedru i sveprisutno se eksprimiraju u nekoliko tipova ćelija kod ljudi. HDACs 1-3 dele više od 50% homologije, ali imaju različite strukture i ćelijske funkcije [60]. Oni su prvenstveno uključeni u preživljavanje ćelija, proliferaciju i diferencijaciju, pa stoga inhibicija može biti korisna za širok spektar bolesti [61,62,63,64,65]. Ovi podaci pokazuju da kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne za lečenje bolesti posredovanih HDAC.

Primer 2 – Efikasnost bakterija na hiperaktivnost

Uvod

[0300] Cilj ove studije bio je da se procene efekti anaerobnih bakterija pomoću miševa ozleđenih MPTP-om. Određeni broj 72 miševa ozleđenih MPTP-om (6 grupa sa n = 12 životinja) lečeni su svakodnevno tokom 18 dana oralnom gavažom 43042, sredstva ili referentnog jedinjenja, počev od 14 dana pre indukcije bolesti. Grupa od n = 12 životinja poslužila je kao lažna kontrola i lečena je sa sredstvom.

Materijal i postupci

Životinje

[0301] Sve životinje bile su smeštene u pojedinačne kaveze sa ventilacijom (IVCs) i bile su bez patogena, ali nisu držane pod SPF. Pored toga, kavezi su otvoreni pod laminarnim protokom vazduha.

[0302] Miševi su bili smešteni u pojedinačne kaveze sa ventilacijom od dva različita dobavljača i u tri različite veličine: kavezi od polikarbonata kompanije Ehret, ili tipa 1 dužine: 426 cm<2>, ili tipa 2 dužine: 530 cm<2>, ili kaveza od polisulfona iz kompanije Tecniplast "greenline": 500 cm<2>. Oba ventilaciona sistema uključuju sistem HEPA filtera (klasa HEPA 14), koji ispunjavaju trenutni standard.

1

[0303] Za procenu zdravstvenog stanja životinja koriste se kontrolne životinje.

[0304] Odrasle jedinke (najmanje 8 nedelja), ženke (da bi se izbegla agresija između mužjaka) CD1 miševa su korišćeni kao kontrole. Kontrolne životinje su bile smeštene u parovima po kavezu.

[0305] Sledeći parametri su održavani na mestima gde su smeštene životinje:

- 12 časovni ciklus svetlo –tama (letnje vreme: svetlo upaljeno od 6 do 18 časova., svetlo ugašeno od 18 časova do 6 časova.; zimsko vreme: svetlo upaljeno od 5 do 17 časova, svetlo ugašeno od 17 časova do 5 časova)

- Intenzitet svetlosti: kritična vrednost: Miš [<400 Luksa]

- Jačina zvuka: kritična vrednost: [<60 dB]

- Neprekidni pozadinski šum pri maloj jačini zvuka (npr. uključen radio tokom faze svetlosti)

- Sobna temperatura: 20-24°C

- Vlažnost: 30-70%

- Vlažnost i sobna temperature su centralno nadgledani alarmnim sistemom.

- Kao materijal za podlogu korišćen je drveni granulat koji poseduje visoko usisavajuće svojstvo i pokazuje mali udeo finog materijala (npr. Lignocel)

- Kao materijal za obogaćivanje koji je umetnut korišćen je "Nestlets"

- Korišćena je standardna hrana za održavanje miševa i pacova ili hrana za uzgoj rasplodnih životinja (npr. Altromin)

- Normalna voda iz slavine je korišćena za dovod vode

[0306] Najmanji broj životinja je korišćen u skladu sa važećim propisima i naučnim integritetom. Dobrobit životinja uzeta je u obzir u pogledu broja i obima postupaka koje treba izvršiti.

[0307] Mere predostrožnosti koje su funkcionisale u okviru objekta gde su vršene analize bile su primenjene na studiju.

Detalji korišćenih životinja

[0308]

Linija miševa: C57BL/6J (JAX™ Mice Strain) JAX™ Mice Stock Number 000664

Nabavljač: Charles River Laboratories

Starost na početku: ∼10 nedelja

2

Smeštaj životinja

[0309] Čim su životinje stigle u QPS Austrija, dovedene su u dodeljenu prostoriju za životinje, raspakovane su i proverene u pogledu zdravstvenog stanja. Podaci o transportnom sistemu i podaci koje je prethodno pružila Charles River Laboratories (CRL) bili su povezani. Sastavljen je spisak životinja, uključujući IRN, starost prilikom isporuke i pol. Životinje su bile navikavane na uslove najmanje nedelju dana pre početka studije.

Smeštanje

[0310] Životinje su bile smeštene u grupe od po dvoje. Sobna temperatura se održavala na približno 20-24 °C, a relativna vlažnost između 30 i 70%. Životinje su bile smeštene pod stalnim svetlosnim ciklusom (12 sati svetlo/mrak; (letnje vreme: svetlo upaljeno od 6 do 18 časova, svetlo ugašeno od 18 do 6 časova; zimsko vreme: svetlo upaljeno od 5 do 17 časova, svetlo ugašeno od 17 časova do 5 časova. Životinjama je po želji bila dostupna sušena, peletirana, standardna hrana za glodare (Altromin), kao i normalna voda iz slavine.

Identifikacija

[0311] Životinje su uzastopno numerisane klasičnim izdvajanjem, ako već to nije prisutno pri dolasku.

[0312] Svaki kavez je identifikovan obojenom karticom koja je označavala broj studije, pol, individualne registracione brojeve (IRN) životinja, starost prilikom isporuke i dodeljenu grupu za lečenje.

Dodeljivanje grupe

[0313] U istraživanje su bile uključene samo životinje u očigledno dobrom zdravstvenom stanju. Životinje su izdvojene u grupe za lečenje u odnosu na telesnu težinu, rezultate osnovnog IRWIN testa, i u odnosu na kompoziciju u kavezima.

[0314] Detalji postupaka koji nisu navedeni u narednim odeljcima ovog plana studije sadržani su u odgovarajućim standardnim operativnim procedurama.

Specifično rukovanje životinjama i randomozacija

[0315] Rukavice su se morale menjati između svake grupe za lečenje i prskati 70% rastvorom etanola između svakog kaveza iste grupe da bi se minimizirao rizik od kontaminacije kad god se rukovalo životinjama (npr. lečenje, ispitivanje ponašanja, čišćenje i uzimanje uzoraka tkiva).

[0316] Lečenje je moralo biti svakodnevno nasumično i naizmenično da bi se sprečilo da se iste grupe leče svakog dana u isto vreme. Takođe ispitivanja ponašanja bi se morala vršiti po pseudonasumičnom redosledu, naizmenično svakog dana, da bi se sprečilo rukovanje istim životinjama u isto vreme. Životinje su takođe bile nasumično odabrane po kavezu za uzorkovanje tkiva.

Dodeljivanje grupe za lečenje, lečenje

[0317] 72 mužjaka miša su izdvojena u 5 različitih grupa za lečenje. Grupe su lečene svakodnevno tokom 18 dana oralnom gavažom 43042 (grupa C), ili sredstvom (PBS) (grupe A, B i E) ili sredstvom (anaerobni PBS - grupa D). Oralno lečenje započeto je 14 dana pre ozlede MPTP. Životinje grupe E dobijale su dnevno sredstvo (PBS) za lečenje oralnim putem i ubrizgane su i.p. (intraperitonealno) sa referentnim lekom 30 minuta pre i 90 minuta nakon prvog MPTP-a na dan 0. Obim primene lečenja sa sredstvom oralnim putem je iznosio 200 µl po mišu. 43042 je iz zaliha glicerola (gly). Za oralno lečenje, gavaže za primene su čuvane u bočici koja sadrži 70% etanola i ispirane su pre i posle svake upotrebe destilovanom vodom. Svaka grupa za lečenje imala je svoju bočicu za gavažu i etanol i bočicu sa destilovanom vodom. Neposredno pre lečenja, svaki špric je ispran sa N2.

[0318] Na dan 0 ubrizgan je MPTP (20 mg/kg telesne mase 4 puta, u intervalu od 2 sata između lečenja) i.p. kod životinja iz grupa B, C, D i E. Jedna grupa životinja (A) lažno je ozleđena i.p. primenom MPTP sredstva (0.9% fiziološki rastvor). Zapremina primene bila je 10 µl po g telesne težine. Merenje težine životinja je izvršeno pre lečenja sa MPTP da bi se doziralo životinjama prema njihovoj stvarnoj telesnoj težini. Nakon toga životinje su svakodnevno lečene oralnim putem.

Test otvorenog prostora

[0319] Test otvorenog prostora je izvršen na 2 dan.

[0320] Spontana aktivnost i anksioznost procenjivani su na otvorenom prostoru procenom sledećih parametara: hiperaktivnost (i), aktivnost (i). U tu svrhu korišćen je otvoreni prostor od pleksiglasa (48 x 48 cm; TSE-System®). Infracrveni zraci su postavljeni na rastojanju od 1.4 cm oko kutije. Da bi se otkrio zadnji (stojeći na zadnjim šapama), postavljen je još jedan red zraka 4 cm iznad prvog. Svaka sesija ispitivanja trajala je 5 minuta da bi se proverilo ponašanje miševa u

4

novom okruženju, jer su prvi minuta testa na otvorenom prostoru bili najpogodniji da se prikaže istraživanje ponašanja životinja. Nakon toga prebrojan je broj fekalnih bolusa, kao merilo emocionalnosti. Otvoren prostor je očišćen sa 70% etanolom nakon svakog miša da bi se oslobodili tragova mirisa. Ispitivanje je izvršeno pod standardnim uslovima osvetljenja prostorije tokom svetlosne faze cirkadijalnog ciklusa.

Statistika

[0321] Izvršena je osnovna statistička analiza, pa su sirovi podaci testirani na normalnost pomoću Kolmogorow-Smirnow-og testa. Ako je potvrđena normalna raspodela, razlike između dve grupe su testirane T-testom ili između više od dve grupe sa jednofaktorskom analizom varijanse. Ako podaci nisu normalno distribuirani, razlike između dve grupe su testirane Mann-Whitney testom ili između više od dve grupe sa Kruskal-Wallis testom. Bonferroni nakon testa je korišćen kao post hoc test za jednofaktorsku analizu varijanse, a Dunn-ov test je korišćen kao post hoc test za Kruskal-Wallis test. Grupne razlike tokom vremena testirane su korišćenjem dvofaktorske analize varijanse praćene Bonferroni-jem nakon testa. Ako je prikladno, podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ± ili standardna greška srednje vrednosti (SEM).

[0322] Statističke analize su izvršene upoređivanjem svih grupa nasuprot A (pozitivna kontrola), B (negativna kontrola), E (referentna stavka) i C nasuprot D (sredstvo za grupu C).

Rezultati

Opšta zapažanja i zdravstveni status

[0323] Životinje su dobro podnosile primenu sojeva bakterija. Na dan MPTP ozlede, a ako je potrebno i dan kasnije, crveno svetlo je grejalo životinje. Ako su životinje bile u neoptimalnim uslovima (osećale su se hladno, dehidrirano, abnormalno ponašanje), snabdevane su mokrom hranom i potkožnim fiziološkim rastvorom ako je potrebno. Tokom praćenja studije 6 životinja je uginulo iz nepoznatih razloga.

Ispitivanje na otvorenom prostoru

[0324] Drugog dana toka studije (2 dana nakon MPTP ozlede) životinje su testirane u testu na otvorenom prostoru. Testiranje je pokazalo da su hiperaktivnost i aktivnost značajno smanjene kod životinja grupe C (43042) i grupe D (sredstvo (anaerobni PBS)) u poređenju sa lažno ozleđenim i životinjama tretiranim sa sredstvom grupe A (Slika 84). Takođe u poređenju sa referentnom stavkom grupe E (7-nitroindazol) životinje grupe G pokazale su značajno smanjenu hiperaktivnost u testu na otvorenom prostoru.

Diskusija

[0325] Izrazito smanjenje hiperaktivnosti kod miševa na kojima se primenjuje 43042 7 u poređenju sa kontrolama koje imaju samo sredstva naglašava da 43042 može biti korisno u lečenju ili sprečavanju stanja ili bolesti povezanih sa hiperaktivnošću, kao što su poremećaji u ponašanju, uključujući ADHD, i Parkinson-ovu bolest. Hiperaktivnost je povezana sa povećanom anksioznošću kod subjekata sa Parkinson-ovom bolešću.

Primer 3 – Efikasnost soja Bariatricus massiliensis 43171 u poboljšavanju preživljavanja od GVHD

Cilj

[0326] Istraživači su nastojali da utvrde efekat soja Bariatricus massiliensis 43171 na bolest graft protiv domaćina (GVHD) izazvanu kod Balb/C miševa.

Materijal i postupci

- Životinje

[0327] Mužjaci miševa Balb/C (BALB/cAnNCrl; starosti 6-8 nedelja; n = 125) sa prosečnom početnom telesnom težinom (± SEM) od 20.67 ± 0.11 g dobijeni su iz Charles River Laboratories (Wilmington, MA). Dodatnih n = 75 mužjaka C57B1/6 (C57B1/6NCrl; starosti 6-8 nedelja) je dobijeno od istog prodavca. Životinje su se aklimatizovale pre početka studije. Tokom ovog perioda, životinje su svakodnevno posmatrane da bi se odbacile one koje su se pojavile u lošem stanju.

- Smeštanje

[0328] Studija je izvršena u prostorijama za životinje obezbeđenim HEPA filtriranim vazduhom na temperaturi od 70 ± 5<o>F i 50% ± 20% relativne vlažnosti. Životinje su bile smeštene u grupe od 4-6 po kavezu. Konkretno, grupe sa 8 životinja/grupa bile su smeštene u n = 4/kavez; grupe sa 10 životinja/grupa bile su smeštene u n = 5/kavez; a grupe sa 12 životinja po grupi bile su smeštene u n = 6/kavez. Životinje su bile smeštene u HEPA-filtrirane, individualno ventilirane kaveze. Kavezi su bili geografski odvojeni na stalcima da bi se umanjila unakrsna kontaminacija između grupa. Sobe za životinje su postavljene da održavaju minimum 12 do 15 promena vazduha po satu. Soba je bila na automatskom tajmeru za ciklus svetlo/mrak od 12 sati svetlo i 12 sati mrak bez sumraka. Korišćena je Alpha-dri® podloga (ozračena). Pored podloge, svaki kavez je obezbeđen sa enviro-dri i shepherd shack (obogaćivanje). Podovi su se svakodnevno čistili i brisali minimum dva puta nedeljno komercijalnim deterdžentom. Zidovi i stalci kaveza su brisani sunđerom minimum jednom mesečno sa rastvorenim rastvorom belila. Kartica ili etiketa u kavezu sa odgovarajućim informacijama neophodnim za identifikaciju studije, doze, broja životinje i grupe za lečenje korišćena je za obeležavanje svih kaveza. Tokom studije zabeležene su temperatura i relativna vlažnost, i beleške su sačuvane. Svi tehničari su obukli PPE (laboratorijski ogrtač, rukavice, zaštitne naočare) pre ulaska u laboratoriju/vivarijum i rada sa životinjama.

- Ishrana

[0329] Životinje su hranjene LabDiet 5053 sterilnom (ozračenom) hranom za glodare i voda (reverzna osmoza) je obezbeđena po želji. Nije obezbeđeno obogaćivanje bazirano na hrani.

- Nasumičnost i izdvajanje životinja

[0330] Životinje su na početku studije nasumično raspoređene u 5 grupa. Svaka grupa uključuje između 8 do 12 miševa. Svaka grupa je dalje podeljena na kohorte A i B (n = 4-6 miševa po grupi po kohorti); kohorte su imale raspoređene vremenske linije bolesti.

- Analiza kinetike rasta NCIMB 43171

[0331] Pre primene NCIMB 43171 utvrđena je kriva rasta/maksimalan OD i određen je broj virtuelnih kolonija (VCC) na maksimalnom OD600 i posle pranja. Analiza krive rasta/maksimalnog OD se odvijala na sledeći način. U 6 časova ujutro, po jedna epruveta smrznutih zaliha bakterija ubačena je u Coy komoru. Epruvete su ostavljene da se odmrznu, pažljivo su pomešane pipetiranjem gore-dole, a dve epruvete (duplikati) koje su sadržavale 9.5 mL prethodno redukovanog, prethodno zagrejanog (37 °C) YCFA tečnog medijuma inokulirane su sa 500 µL bakterijskih zaliha. To su bile pretkulture. Pretkulture su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 24 sata. U 6 časova ujutru sledećeg dana (tj. posle 24 sata inkubacije), mali alikvot svake kulture uklonjen je iz Coy komore, a OD600 je određen nanodropom. Epruvete su mešane inverzijom pre uklanjanja alikvota za merenje OD600. Ostatak 24 časovnih kultura (koristeći epruvetu sa većim OD600 kako je prethodno određeno) uzgajane su u duplikatu na sledeći način: 250 µL NCIMB 43171 24 časovne kulture upotrebljeno je za inokulaciju dve epruvete koje sadrže 24.75 mL prethodno zagrejanog YCFA tečnog medijuma. Ove kulture su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 24 sata, a mali alikvot je uklonjen iz Coy komore za merenje OD600 svaka dva sata tokom 16 sati (tj. u 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20 i 22) i u 24 sata (sledećeg dana u 6 časova ujutru). Epruvete su mešane inverzijom pre uklanjanja alikvota za merenje OD600.

[0332] VCC pri analizi maksimalnog OD izvršeno je na sledeći način: jedna epruveta sa zalihom NCIMB 43171 unesena je u Coy komoru. Epruvete su ostavljene da se odmrznu, pažljivo su pomešane pipetiranjem gore-dole, a dve epruvete (duplikati) koje su sadržavale 9.5 mL prethodno redukovanog, prethodno zagrejanog YCFA tečnog medijuma inokulirane su sa 500 µL bakterijskih zaliha. To su bile pretkulture. Pretkulture su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 24 sata. Sledećeg dana (posle 24 časovne inkubacije), mali alikvot pretkulture je uklonjen iz Coy komore, a OD600 je određen nanodropom. Epruvete su mešane inverzijom pre uklanjanja alikvota za merenje OD600. Preostali deo od 24 časa, kulture (koristeći epruvete sa većim OD) uzgajane su u duplikatu na sledeći način: 250 µL je upotrebljeno za inokulaciju dve epruvete koje sadrže 24.75 mL prethodno zagrejanog YCFA tečnog medijuma. To su bile glavne kulture. Mali alikvot glavne kulture uklonjen je iz Coy komore u naznačeno vreme, a OD600 je određen nanodropom. Epruvete su mešane inverzijom pre uklanjanja alikvota za merenje OD600. VCC preostale zalihe je određen na sledeći način: pojedinačna serija razblaživanja (nerazređena, 1: 103, 1: 104, 1: 105 i 1: 106) pripremljena je u PBS. Ostatak svake kulture je zatim prebačen u konusnu epruvetu od 50 mL, a epruvete su uklonjene iz Coy komore i centrifugirane (3500xg; 15 minuta). Po završetku centrifugiranja, epruvete su vraćene u Coy komoru, a supernatanti su uklonjeni (vodeći računa da se ne zakače peleti) i izmereni. Peleti su resuspendovani u zapreminama PBS ekvivalentnim zapreminama uklonjenih supernatanta i pažljivo su pomešane pipetom (bez vorteksa). Pojedinačne serije razblaživanja (nerazređene, 1: 103, 1: 104, 1: 105 i 1: 106) su pripremljene u PBS. Obe serije razblaživanja (tečni medijum i suspendovani PBS) su tačno nanete (20 µL) u triplikatu u jednom kvadrantu prethodno redukovane YCFA agar ploče. Ploče su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 48 sati i prebrojano je VCC bilo kog razblaženja koje je dalo tačke sa 5-20 CFU/tačka. Vrednosti VCC/tačka za tri tačke su uprosečene da bi se odredio VCC/mL preko noći kultura u tečnom medijumu i centrifugiralo/resuspendovalo u PBS.

- Priprema doziranja NCIMB 43171

[0333] Dva dana pre svakog vremenskog termina za doziranje, jedna epruveta (1 mL/epruveta) po soju smrznutih zaliha NCIMB 43171 smeštena je u Coy komoru. Epruvete su ostavljene da se odmrznu, a dve epruvete od 15 mL, od kojih svaka sadrži 9.5 mL prethodno redukovanog i prethodno zagrejanog YCFA tečnog medijuma, inokulirane su sa 0.5 mL svake zalihe bakterija. To su bile pretkulture (epruvete 1 i 2). Pretkulture su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 24 časa.

[0334] Posle inkubacije tokom 24 časa, jedan dan pre svakog vremenskog termina za doziranje, kulture su pomešane inverzijom, a mali alikvot (20 µL) kultura uklonjen je iz Coy komore za određivanje OD600 pomoću nanodropa. Bilo koja epruveta (1 ili 2) po soju koja je imala veću vrednost OD600, korišćena je za glavnu kulturu, u duplikatu, na sledeći način: 250 µL pretkulture sa višim OD600 upotrebljeno je da bi se inokuliralo 24.75 mL prethodno zagrejanog YCFA tečnog medijuma u konusnoj epruveti od 50 mL (u duplikatu; epruvete A i B). Ove glavne kulture su inkubirane u Coy komori (na 37 °C) tokom 14 sati.

[0335] Na svaki dan doziranja (nakon prethodno navedenih inkubacija glavnih kultura), kulture su pomešane inverzijom, a mali alikvot (20 µL) kultura uklonjen je iz Coy komore za određivanje OD600 pomoću nanodropa. Epruvete su onda uklonjene iz Coy komore i centrifugirane (3500xg; 15 minuta). Po završetku centrifugiranja, epruvete su vraćene u Coy komoru, a supernatant je odstranjen pipetom (vodeći računa da se ne zakače peleti). Peleti su resuspendovani u 2.04 ml PBS. Peleti su pažljivo pomešani pipetiranjem (bez vorteksa). Alikvot (0.5 mL) svakog soja pipetiran je u Eppendorf-ovim epruvetana i zadržan u Coy komori. Ostatak svakog soja uklonjen je iz Coy komore i korišćen za doziranje (0.1 mL po životinji), vodeći računa da se životinje doziraju što je brže moguće nakon resuspenzije.

[0336] Alikvot od 0.5 mL svakog soja zadržanog u Coy komori korišćen je za pripremu pojedinačne serije razblaživanja u prethodno redukovanog MRD; razblaženja 1: 107, 1: 108, 1: 109 i 1: 110 su naneta tačno (20 µL) u triplikatu u jedan kvadrant prethodno redukovane YCFA agar ploče. Ploče su inkubirane na 37 °C u Coy komori tokom 48 sati i prebrojane su VCC od bilo kog razblaženja koja su dala tačke sa 5-20 CFU/tačka. Vrednosti VCC/tačke tri tačke su uprosečene da bi se odredio VCC/mL eksperimentalnog materijala za doziranje.

- Faza pre lečenja

[0337] Sve životinje su izmerene i nasumično po težini stavljane u grupe za lečenje pre početka studije. Pre indukcije GVHD 1 i 0 dana, sve životinje su prethodno lečene (PO) sa PBS (grupe 1-4), NCIMB 43171 (grupa 5) ili solima butirata kontrola (grupa 6) svakodnevno počev od 14 dana. Butirat je korišćen kao pozitivna kontrola, jer je deficit butirata identifikovan u crevima pacijenata sa GVHD. Lečenja su primenjena na grupama nasumično, a grupna lečenja su se svakodnevno smenjivala da bi se sprečilo lečenje istih grupa svakog dana u isto vreme. Jednom kada je započeto doziranje ispitivanog člana, vodilo se računa da se svede na minimum unakrsna kontaminacija grupe: tehničar je menjao rukavice između grupa za lečenje i prskao ih 70% izopropil alkoholom između svakog kaveza iste grupe.

- GVHD modeliranje

[0338] GVHD je indukovan kod miševa upotrebom jedne akutne doze od 8 Gy ukupnog ozračenja tela (TBI) prvog dana. Dana 0, ovim miševima primaocima je data intravenozna injekcija kombinacije ćelija koštane srži osiromašenih T ćelijama i ćelija slezine od miševa donora C57B1/6 u PBS. Ćelije koštane srži su izolovane korišćenjem standardnih postupaka ispiranja, a bile su osiromašene T ćelijama korišćenjem antigena CD3 na površini T ćelije, sa CD3-biotin kompletom (Miltenyi Biotec katalog 130-094-973). Splenociti su izolovani korišćenjem Miltenyi GentleMACS disocijatora. Životinje iz grupe 1 služile su kao naivne kontrole i nisu dobile ni TBI ni prenos ćelija. Životinje iz grupe 2 služile su kao kontrole zračenja i primile su 8 Gy TBI prvog dana, ali nisu primile prenos ćelija na dan 0. Životinje u grupi 3 služile su kao singenične usvojne prenosne kontrole; ove životinje su dobile 8 Gy TBI prvog dana i intravensku injekciju kombinacije ćelija koštane srži osiromašenih T ćelijama i ćelija slezine od donora Balb/C miševa u sterilnom PBS.

[0339] Predmet dnevnog ispitivanja doziranja nastavljen je tokom trajanja studije (od 14 do 30 dana). Preživljavanje životinja beleženo je svakodnevno, kao pokazatelj ozbiljnosti GVHD. Životinjama je izmerena telesna težina, posmatrana je i određena svakodnevno ocena kliničkog GVHD tokom trajanja studije nakon indukcije GVHD. Ocena GVHD procenjena je standardnim sistemom bodovanja na osnovu pet kriterijuma (Tabela 21): procenat promene težine, držanje tela (pogrbljenost), aktivnost, tekstura krzna i integritet kože (maksimalna ocena = 10).

Tabela 1: Procena GVHD kod transplantiranih miševa (svakodnevno ocenjivane)

[0340] Životinjama koje su izgubile 20% telesne težine davane su potkožne tečnosti (SID; fiziološki rastvor) i obezbeđena je omekšana hrana. Ako je bilo kojoj pojedinačnoj ispitivanoj životinji bila potrebna omekšana hrana, svim ispitivanim životinjama je obezbeđivana omekšana hrana dok se ne spreči gubitak telesne težine životinje. Lečenje se nastavilo sve do predviđene eutanazije ili gubitka telesne težine veće od 30%. Životinje koje nisu mogle da se poprave, bile su hladne na dodir ili su bile uspavane, eutanazirane.

[0341] 29-og dana, svim preživelim životinjama izvršena je endoskopija za nadgledanje upale debelog creva. Snimljene su slike i ocenjena je ozbiljnost kolitisa i konzistencija izmeta pomoću skale za ocenjivanje prikazane u Tabeli 2.

Tabela 2: Skala za ocenjivanje kolitisa posmatranog endoskopijom

[0342] 30-og dana krv je sakupljena putem RO krvarenja; krv (približno 150 - 300 µL) sakupljena je u dve epruvete - približno dve trećine krvi je sakupljeno u epruvete K2EDTA, a preostala trećina je sakupljena u litijum-heparinske epruvete. Oba uzorka su centrifugirana i obrađena za plazmu, a epruvete za plazmu su jasno označene da ukazuju na korišćeni antikoagulant. Za uzorak K2EDTA, plazma je alikvotirana na sledeći način: 25 µL (za upotrebu u analizi nizvodnog citrulina) i ostatak. Sva plazma je zamrznuta na -80 ° C. Svi uzorci K2EDTA su procenjeni na citrulin pomoću ELISA po završetku studije.

1

Eutanazija je izvedena udisanjem CO2 i dislokacijom grlića materice, bez sakupljanja organa za životinje koje su eutanazirane van rasporeda tokom TBI faze studije. Eutanazija je izvedena samo dislokacijom grlića materice, sa kolekcijama organa, za životinje koje su eutanazirane van rasporeda tokom GVHD faze studije. Krajnje prikupljanje izvršeno je na stolu. Sto je očišćen sa 70% izopropil alkoholom i komercijalnim sredstvom za dezinfekciju pre početka. Instrumenti su očišćeni sa 70% izopropil alkohola između životinja i sa komercijalnim sredstvom za dezinfekciju između grupa.

- Statističke analize

[0343] Parametarski podaci su analizirani jednofaktorskom ANOVA-om sa Tukey-evim testom višestrukog poređenja da bi se sve grupe međusobno uporedile. Neparametarski podaci su analizirani Kruskal-Wallis-ovim testom sa Dunn-ovim testom višestrukog poređenja da bi se sve grupe međusobno uporedile. Sve statističke analize izvršene su pomoću GraphPad Prism 7 (La Jolla, CA).

Rezultati i diskusija

- Težina tela

[0344] Životinjama je svakodnevno merena telesna težina tokom trajanja studije, a srednja telesna težina za sve grupe tokom studije prikazana je na Slici 5. Izračunata je promena telesne težine u odnosu na 14-ti dan (Slika 6) ili dan 0 (Slika 7). Da bi se utvrdile statistički značajne razlike između grupa u prosečnoj telesnoj težini ili srednjoj vrednosti promene telesne težine u odnosu na 14-ti dan ili 0 dan, površina ispod krive (AUC) je izračunata korišćenjem pravila trapezoidne transformacije i prikazana je u delovima Slika 5, 6 i 7. Da bi se uzelo u obzir istrošenost grupe, promena telesne težine u odnosu na dan 0 prikazana sa telesnom težinom sa kojom je životinja uginula premeštenom tokom trajanja studije na životinje pronađene mrtve ili eutanazirane (za sve grupe sa izuzetkom grupe 2) prikazana je na Slici 8, sa AUC delom.

[0345] Nisu primećene veće razlike u srednjoj vrednosti telesne težine (Slika 5) ni za jednu grupu tokom perioda pre lečenja. Sve grupe izložene TBI pokazale su gubitak telesne težine od 0 do 3 dana. Srednja vrednost telesne težine za životinje iz grupe 3 (PBS - TBI singenični prenos) oporaviljena od ove tačke unapred i na kraju vraćena na početnu liniju. Srednja vrednost telesne težine životinja u grupi 2 (samo PBS - TBI) nije uspela da se oporavi pre smrti svih životinja u grupi. Za sve ostale ispitivane grupe, srednja vrednost telesne težine je nastavila da se

2

smanjuje do 7 dana, povećavala se do 14 dana, a zatim se smanjivala tokom trajanja studije. Srednja vrednost telesne težine u grupama 2, 5 i 6 značajno je smanjena tokom studije u poređenju sa grupom 1 (PBS - naivna). Nasuprot tome, srednja vrednost telesne težine u grupama 3-6 značajno je povećana tokom studije u poređenju sa grupom 2. Konačno, srednja vrednost telesne težine u grupama 5 i 6 je značajno smanjena tokom trajanja studije u poređenju sa grupom 3. Nisu primećene značajne razlike u srednjoj vrednosti telesne težine tokom studije kada su se upoređivale grupe za lečenje (grupe 5 i 6) sa grupom 4 (PBS - TBI alogenični prenos). Ovaj isti trend primećen je kada je miševima dat imunosupresiv takrolimus, poznata terapija GVHD (Slika 9).

[0346] Srednja vrednost promene telesne težine u odnosu na 14-ti dan (Slika 6) povećala se za sve grupe tokom perioda pre lečenja, a kinetika promene telesne težine u odnosu na 14-ti dan od 0 dana nadalje je slična onoj primećenoj za srednju vrednost telesne težine. Životinje iz grupa 2 i 4-6 pokazale su značajno povećan gubitak telesne težine tokom studije u poređenju sa grupom 1 i grupom 3.

[0347] Srednja vrednost promene telesne težine u odnosu na 0 dan (Slike 7 i 8) smanjila se za sve grupe izložene TBI od 0 do 3 dana, kada je povećanje telesne težine počelo za životinje u grupi 3; gubitak telesne težine nastavljen je za sve ostale grupe tokom 4-og dana. Promena telesne težine u odnosu na dan 0 povećavala se od 7 do 14 dana, a srednja vrednost gubitka telesne težine primećena je za grupe 4-6 od 14 dana do kraja studije na 30-om danu. Iako je ukupan obrazac promene telesne težine u odnosu na 0 dan bio sličan bez obzira na to da li se telesna težina prenosila za uginule životinje, statistički značajne razlike između grupa su se razlikovale. Značajno povećan gubitak telesne težine u poređenju sa grupama 1, 2 i 3 primećen je za grupe 4-6 i sa i bez telesne težine prenete za uginule životinje, što je ponovo slično trendu primećenom kod miševa kojima je data poznata GVHD terapija takrolimusom (Slika 9).

- Preživljavanje

[0348] Životinjama je svakodnevno procenjivano preživljavanje ili umiranje, a na slici 10. prikazana je Kaplan-Meier-ova kriva koja pokazuje preživljavanje tokom trajanja studije. Preživljavanje je bilo 100% u grupama 1 i 3, 0% u grupi 2 i 75% u grupi 5. Preživljavanje zabeleženo u grupi 5 je naročito poboljšano u poređenju sa obe grupe 4 i 6. Ovo je značajno, jer je butirat predložen za lečenje GVHD [66]. Stope preživljavanja bile su uporedive sa kontrolama miševa kojima je dat poznati takrolimus za lečenje GVHD (FK506 - Slika 11).

- Ocene GVHD

[0349] Ocene GVHD su procenjene (prema višeparametarskom ocenjivanju prikazanom u Tabeli 2) kod svih životinja od 0 dana do kraja studije 30-og dana. Srednje vrednost ocena GVHD za sve grupe prikazane su na slici 12, a ovi isti podaci su predstavljeni sa ocenom GVHD prenesenom za uginule životinje na slici 13. AUC je izračunata koristeći pravilo trapezoidne transformacije da bi se utvrdile statistički značajne razlike u ukupnim ocenama GVHD između grupa, a to je prikazano na delovima slika 12 i 13. Klinička ocena GVHD dodeljena svakoj životinji je kombinacija koji se sastoji od držanja tela (Slika 14A), aktivnosti (Slika 14B), teksture krzna (Slika 14C), integriteta kože (Slika 14D) i gubitka težine (Slika 14E).

[0350] Intravensko ubrizgavanje alogeničnih splenocita i ćelija koštane srži indukovalo je GVHD u svim grupama, sa početkom oko 19 dana i progresivno se povećala ozbiljnost bolesti do završetka studije. Postojala je početna povećana ocena GVHD između 0-7 dana, verovatno zbog TBI i prihvatanja; preživljavanje životinja nakon ove tačke potvrđuje uspešno prihvatanje transplantiranih ćelija. Iako su kinetike ocena GVHD bile slične, bez obzira na to da li se ocena GVHD prenosila za uginule životinje, statistički značajne razlike među grupama su se razlikovale. Životinje u grupama 3-6 pokazale su značajno povećane srednje vrednosti ocena GVHD u poređenju sa obe grupe 1 i 2 sa i bez ocena GVHD prenesenih za uginule životinje; na isti način, životinje u grupama 4-6 pokazale su značajno povećane srednje vrednosti ocena GVHD u poređenju sa grupom 3 u oba slučaja. Ovaj trend je takođe primećen i na modelima miševa sa GVHD koji su primali imunosupresiv takrolimus, što je poznata terapija GVHD (Slika 15).

- Endoskopija

[0351] Životinje su bile podvrgnute endoskopiji 29 dana da bi se procenilo zapaljenje debelog creva. Kolitis je vizuelno ocenjen na skali od pet tačaka koja se kreće od 0 za normalno, do 4 za ozbiljne ulceracije (Tabela 3). Srednja vrednost ozbiljnosti kolitisa prikazana je na slici 16.

[0352] Srednje vrednosti ocena ozbiljnosti kolitisa povećane su za životinje lečene sojem 43171 i butiratom u poređenju sa naivnim miševima (grupa 1). Međutim, kolitis je bio značajno manji kod miševa lečenih sojem 43171 u poređenju sa miševima lečenim butiratom. Ovo je značajno, jer je korekcija deficita butirata predložena kao lečenje kolitisa [67]. Reprezentativne slike endoskopije prikazane su na slici 17.

- Citrulin plazma

4

[0353] Krv je prikupljena pre eutanazije od svih preživelih životinja i obrađena je za plazmu. Citrulin u plazmi je u duplikatu ispitivan kao marker permeabilnosti creva pomoću ELISA. Smanjenje nivoa citrulina u plazmi odgovara gubitku mase epitelne ćelije što ukazuje na povećanje permeabilnosti crevne barijere. Održavanje funkcije crevne barijere (tj. održavanje crevne nepropusnosti) je važno za lečenje GVHD [68]. Rezultati su prikazani na slici 18. Miševi kojima je dat soj 43171 održavali su veće nivoe citrulina u plazmi u poređenju sa miševi kojima su dati soli butirata (grupa 6), što je značajno s obzirom na ulogu butirata u održavanju ispravne funkcije barijere.

Primer 3 – Ispitivanje stabilnosti

[0354] Ovde opisana kompozicija koja sadrži najmanje jedan ovde opisani bakterijski soj čuva se u zatvorenoj posudi na 25 °C ili 4 °C, a posuda se stavlja na vazduh koja ima 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% ili 95% relativne vlažnosti. Posle 1 meseca, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1.5 godine, 2 godine, 2.5 godine ili 3 godine ostaće najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% soja bakterija mereno jedinicama za formiranje kolonija utvrđenim standardnim protokolima.

Primer 4 –Efikasnost bakterijskog inokuluma za smanjenje sekrecije IL-6

Uvod

[0355] Aktivacija proinflamatornih citokina povezana je sa oštećenjem kod inflamatornih bolesti. Lipopolisaharid (LPS) je poznati stimulator proinflamatornog citokina IL-6. U373 ćelije su lečene kompozicijama koje sadrže soj 43042 prema pronalasku u kombinaciji sa LPS da bi se posmatrala njegova sposobnost modulacije nivoa IL-6.

Postupci

[0356] U373 je ćelijska linija humanog astrocitoma glioblastoma. Ćelije (korišćene između 20 i 37 prolaza) održavane su u 25 ml MEME 4.5 g/L D-glukoze, dopunjene sa 10% FBS inaktiviranog toplotom, 4mM L-glutaminom, 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicina i 5 µg/ml plazmocina, 1% ne-esencijalnih aminokiselina, 1% natrijum piruvata (označen kroz tekst kao medijum za potpuni rast).

[0357] Ćelije su postavljene u ploče sa 24 udubljenja sa gustinom od 100,000 ćelija/udubljenju u 1 ml medija za potpuni rast i ostavljene da miruju na 37 °C/5% CO2 tokom 72 sata. Na dan lečenja, medijum je uklonjen iz svakog udubljenja, ćelije su isprane sa 0.5 ml medijuma za pranje (MEME bez seruma), dodato je 0.9 ml medijuma za stimulaciju (MEME medijum koji sadrži 2% FBS) koji sadrži 1 µg/ml LPS u odgovarajuća udubljenja i inkubirano na 37 °C i 5% CO2. Posle 1 sata prethodne inkubacije, ćelije su uklonjene iz CO2 inkubatora i tretirane sa 100 µl bakterijskog supernatanta koji potiče iz soja 43042. Kao kontrola je korišćena kontrola medijuma. Ćelije su zatim inkubirane još 24 sata na 37 °C/5% CO2, nakon čega su sakupljeni supernatanti bez ćelija i usporeno okretani na 10,000 g na 4 °C tokom 3 minuta. Uzorci su alikvotirani u mikropipetama od 1.5 ml i čuvani na -80 °C za hIL-6 i hIL-8 ELISA.

Rezultati

[0358] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na slici 19. Lečenje ćelijama sa LPS i bakterijskim sojem dovodi do smanjenja nivoa sekrecije IL-6.

Primer 5 - aktivacija MAP2

[0359] Istražen je efekat soja 43042 na ekspresiju gena povezanog sa diferencijacijom neurona -protein 2 povezan sa mikrotubulama (MAP2). qPCR analizom je otkriveno da je MAP2 transkript više regulisan sa 43042 prethodno pomenutih kontrolnih uzoraka medijuma u ćelijama neuroblastoma SH-SY5Y (vidi sliku 20).

[0360] SH-SY5Y ćelije su ćelijska linija neuroblastoma. Ćelije su uzgajane u 50% MEM i 50% Nutrient Mixture F-12 Ham medijuma sa dodatim sa 2 mM L-glutaminom, 10% FBS inaktiviranim toplotom, 100 U/ml penicilina i 100 µg/ml streptomicina. SH-SY5Y ćelije su postavljene u ploče sa 6 udubljenja sa gustinom od 0.5 x 106 ćelija. Posle 24 sata, ćelije su tretirane u medijumu za diferencijaciju (medijum za rast koji sadrži 1% FBS bez RA) sa 10% bakterijskih supernatanta ili YCFA ili 10 uM RA tokom 24 sata. Sakupljene su ćelije i izolovana je ukupna RNK u skladu sa protokolom RNeasy mini kit (Qiagen). cDNA je napravljena korišćenjem kompleta velikog kapaciteta cDNA za reverznu transkripciju (Applied Biosystems). Ekspresija gena izmerena je pomoću qPCR. GAPDH je korišćen kao unutrašnja kontrola. Put promene je izračunat prema postupku 2 ^ (-ΔΔCt).

Lista prajmera korišćenih za in vitro analizu ekspresije gena pomoću qPCR.

ID gena Sekvenca unapred Reverzna sekvenca

ACTB GATCAAGATCATTGCTCCTC TTGTCAAGAAAGGGTGTAAC

GAPDH GGTATCGTGGAAGGACTCATG ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTC

MAP2 CTCAGCACCGCTAACAGAGG CATTGGCGCTTCTCTCCTC

Primer 6 – Efekat na ekspresiju funkcionalnih markera u crevu

Sažetak

[0361] U ovoj studiji istražen je efekat soja 43042 Bariatricus massiliensis na ekspresiju proteina uskog spoja i funkcionalnih markera u crevima. Indoleamin 2,3 dioksigenaza-1 (IDO1) je enzim koji pokreće katabolizam triptofana na putu koji generiše nekoliko bioaktivnih metabolita zasnovanih na kinureninu. Triptofan hidroksilaza-1 (TPH-1) katalizuje stvaranje 5-hidroksi-L-triptofana (5-HTP) iz L-triptofana, što je prvi korak koji ograničava brzinu u biosintezi 5-HT.

Postupak

[0362] Mužjaci BALB/c miševa su primali oralne gavaže (200 µL zapremine) 1 X 10<9>CFU bakterijskog soja tokom 6 uzastopnih dana. Sedmog dana životinje su eutanazirane. Tkivo creva je izrezano (segmenti ileuma i debelog creva od 1 cm). Ukupna RNK je ekstrahovana pomoću mirVana™ miRNA izolacionog kompleta (Ambion/Llife technologies, Paisley, UK) i tretirana DNazom (Turbo DNA-free, Ambion/life technologies), u skladu sa preporukama proizvođača. RNK je kvantifikovana pomoću NanoDrop™ spektrofotometra (Thermo Fisher Scientific Inc., Wilmington, Delaware, USA) prema uputstvima proizvođača. Kvalitet RNK je procenjen korišćenjem Agilent Bioanalyzer-a (Agilent, Stockport, UK) prema proceduri proizvođača i izračunat je broj RNA integriteta (RIN). RNK sa RIN vrednošću> 7 je korišćena za naredne eksperimente. RNK je reverzno transkribovana u cDNA pomoću kompleta Applied Biosystems High Capacity cDNA (Applied Biosystems, Warrington, UK) prema uputstvima proizvođača. Ukratko, Multiscribe reverzna transkriptaza (50 U/µL) je dodata kao deo RT master mešavine, inkubirana na 25 °C 10 minuta, 37 °C 2 sata, 85 °C 5 minuta i čuvana na 4 °C. Kvantitativna PCR izvedena je upotrebom sondi (6 karboksi fluorescein - FAM) koje je dizajnirao Applied Biosystems za specifično ciljano delovanje na gene miševa, dok je β -aktin korišćen kao endogena kontrola. Reakcije amplifikacije sadržale su 1 µl cDNA, 5 µl 2X PCR master mešavine (Roche) i 900 nM svakog prajmera i dovedene su do ukupno 10 µl dodavanjem vode bez RNaze. Sve reakcije su izvedene u triplikatu koristeći ploče sa 96 udubljenja na LightCycler®480 sistemu. Uslovi toplotnog ciklusa bili su preporučeni od strane proizvođača (Roche) za 55 ciklusa. Da bi se proverila kontaminacija amplikonima, svaka proba nije sadržavala šablonske kontrole u triplikatu za svaku korišćenu sondu. Zabeležene su vrednosti praga ciklusa (Ct). Podaci su normalizovani korišćenjem β -aktina i transformisani postupkom 2- ΔΔCT i predstavljeni kao put promene nasuprot kontrolne grupe.

Rezultati

[0363] Od testiranih gena, ekspresija IDOl bila je različita kod miševa koji su primili bakterijski soj u poređenju sa životinjama koje su dobile sredstvo. Došlo je do značajnog povećanja u ileumu (Slika 21A) i značajnog smanjenja u debelom crevu (Slika 21B). Ekspresija IDO1 u debelom crevu u modelu kolitisa kod miševa povezana je sa ublažavanjem bolesti [69]. Stoga, bakterijski sojevi roda Bariatricus mogu biti korisni u lečenju ili sprečavanju inflamatornih bolesti creva.

Primer 7 – Efekat na ekspresiju gena u mozgu

Sažetak

[0364] Ovom studijom je proučavan efekat soja Bariatricus massiliensis 43042 na ekspresiju određenih gena od interesa u mozgu. Nivoi mRNK za markere za oksitocinergički sistem (receptor za oksitocin i receptor za vazopresin), endokrini sistem (mineralokortikoid (Nr3cl); glukokortikoidni receptor (Nr3c2); faktor oslobađanja kortikosterona (CRF) i receptore; neurotrofički faktor poreklom iz mozga (BDNF)), imuni sistem (11-6, TNF- α, TLR-4); i sisteme neurotransmitera (NMDA receptor 2A (Grin2A); NMDA receptor 2B (Grin2B); subjedinica A2 GABAA receptora; subjedinica B1 GABAB receptora; serotonin 2C) procenjeni su u amigdali, hipokampusu i prefrontalnom korteksu (PFC), koji su ključni regioni mozga limbičkog sistema uključenog u emocionalni odgovor.

Materijali i postupci

Postupak

[0365] Mužjaci BALB/c miševa su primali oralnu gavažu (200 µL zapremine) 1 X 10<9>CFU bakterijskog soja tokom 7 uzastopnih dana. Sedmog dana životinje su eutanazirane. Mozak je brzo izrezan, seciran i svaki region mozga je brzo zamrznut na suvom ledu i čuvan na -80 °C za dalju analizu. Ekspresija mRNK je kvantifikovana kako je opisano u Primeru 6.

Rezultati

[0366] Kao što je prikazano na slici 22, od testiranih gena, primećeno je značajno povećanje ekspresije glukokortikoidnog receptora (A), mineralokortikoidnog receptora (B), BDNF (C), Grin 2B (D), CRH (E), CFR1 (F), CD11b (G) i GABA A2 (H) u hipokampusu. Kao što je prikazano na Slici 23, receptor oksitocina (A), glukokortikoidni receptor (B), mineralokortikoidni receptor (C), Grin 2A (D) i Grin 2B (E) pokazali su značajno veću ekspresiju u amigdali. U prefrontalnom korteksu, BDNF (A), CRFR1 (B) i mineralokortikoidni receptor (C) bili su značajno povišeno regulisani kao rezultat lečenja bakterijom (Slika 24).

[0367] To ukazuje da Bariatricus može biti koristan u lečenju ili sprečavanju poremećaja ili stanja koja mogu imati koristi od modulacije nivoa ekspresije ovih proteina u mozgu, npr. bolesti i poremećaja CNS-a. Posebno, BDNF i njegovi receptori su od suštinske važnosti za sinaptičku plastičnost kod odraslih i stvaranje sećanja [70]. Smanjenje mRNK BDNF primećeno je u hipokampusu subjekata obolelih od Alzheimer-ove bolesti [71]. Studije meta-analize takođe pokazuju da pacijenti sa Alzheimer-ovom bolešću imaju smanjeni nivo BDNF u serumu [72]. Smanjenje proteina BDNF takođe je primećeno u delovima mozga označenim kao repato jedro i putamen kod pacijenata koji pate od Huntington-ove bolesti [73]. Prema tome, bakterijski sojevi prema pronalasku mogu biti korisni za lečenje neurodegenerativnih bolesti, na primer Alzheimer-ove i Huntington-ove bolesti.

Sekvence

[0368]

SEQ ID Br: 1 – 43042 sekvenca 16S rRNK gena (konsenzus 2 čitanja sastavljen upotrebom Geneious)

SEQ ID Br: 2 – soj 43171 sekvenca 16S rRNK gena (konsenzus 2 čitanja sastavljen upotrebom Geneious)

REFERENCE

[0369]

[1] Spor et al. (2011) Nat Rev Microbiol.9(4):279-90.

[2] Eckburg et al. (2005) Science.10;308(5728):1635-8.

[3] Macpherson et al. (2001) Microbes Infect.3(12):1021-35

[4] Macpherson et al. (2002) Cell Mol Life Sci.59(12):2088-96.

[5] Mazmanian et al. (2005) Cell 15;122(1):107-18.

[6] Frank et al. (2007) PNAS 104(34):13780-5.

[7] Scanlan et al. (2006) J Clin Microbiol.44(11):3980-8.

[8] Kang et al. (2010) Inflamm Bowel Dis.16(12):2034-42.

[9] Machiels et al. (2013) Gut.63(8):1275-83.

[10] WO 2013/050792

[11] WO 03/046580

[12] WO 2013/008039

1

[13] WO 2014/167338

[14] Goldin and Gorbach (2008) Clin Infect Dis.46 Suppl 2:S96-100.

[15] Azad et al. (2013) BMJ.347:f6471.

[16] Masco et al. (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.

[17] Srutková et al. (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1):10-6.

[18] Tang, et al. (2017) J Am Heart Assoc, 6(10).

[19] Wang et al. (2015) PNAS 112(9):2583-2858

[20] Psaty et al. (2003) JAMA, 289(19):2534-44

[21] Lancet. (1995) 346(8991-8992):1647-53

[22] Abdanipour, Schluesener, Tiraihi, & Noori-Zadeh, 2015 Neurol Res, 37(3), 223-228. doi:10.1179/1743132814Y.0000000438

[23] Leoni et al. (2005) Mol. Med., 11(1-12):1-15.

[24] Glauben, et al. (2006) Journal of Immunology, 176(8): 5015-5022

[25] Gasche et al 200 Inflammatory Bowel Diseases 6: 8-15

[26] Fahy (2009) ProcAm Thorac Soc 6.256-259

[27] Reddy et al (2008) J Clin. Invest.118:2562-73

[28] Leng et al (2006) Exp. Hematol. 34:776-787

[29] Tao et al (2007) Nat. Med.13:1299-1307

[30] Johansson and Ekman (2004) Blood 104:5075

[31] Song et al (2005) APMIS 113: 264-268

[32] Zimmerman et al (2007) Cancer Res 67: 9074-54

[33] Zhang et al (2005) Breast Cancer Res Treat 94: 11-16

[34] Abbas and Gupta (2008) Epigenetics 3: 300-309

[35] Minamiya et al (2011) Lung Cancer 74: 300-4

[36] Jung et al (2012) J Cell Biochem 113: 2167-2177

[37] Quint et al 2011 Virchows Arch 459: 129-139

[38] Cook et al (2014) Hum Mol Genet 23:104-106

[39] Simoes-Pires et al (2013) Mol Neurodegen 8: 7

[40] Miyamoto-Shinohara et al. (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.

[41] Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols, ed. by Day and McLellan, Humana Press.

[42] Leslie et al. (1995) Appl. Environ. Microbiol.61, 3592-3597.

[43] Mitropoulou et al. (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.

[44] Kailasapathy et al. (2002) Curr Issues Intest Microbiol.3(2):39-48.

[45] Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Weller

2

[46] Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit.1985) [47] Handbook of Microbiological Media, Fourth Edition (2010) Ronald Atlas, CRC Press.

[48] Maintaining Cultures for Biotechnology and Industry (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press

[49] Strobel (2009) Methods Mol Biol.581:247-61.

[50] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th edition, ISBN: 0683306472.

[51] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream et al., eds., 1998, Academic Press).

[52] Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.)

[53] Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds, 1986, Blackwell Scientific Publications)

[54] Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition (Cold Spring Harbor Laboratory Press).

[55] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S. ed., CRC Press, 1997)

[56] Ausubel et al. (eds) (2002) Short protocols in molecular biology, 5th edition (Current Protocols).

[57] PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2nd ed. (Newton & Graham eds., 1997, Springer Verlag)

[58] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987) Supplement 30 [59] Smith & Waterman (1981) Adv. Appl. Math.2: 482-489

[60]West and Johnstone, (2014) J Clin Invest, 124, 30-39

[61] Glauben et al (2006) J Immunol. 176, 5015-5022

[62] Angiolilli et al. (2017) Ann Rheum Dis.76, 277-285

[63] Gonneaud et al (2014). J Inflamm. 11: 43

[64] Alenghat et al. (2013). Nature.504: 153-157

[65] Felice et al (2015). Ailment Pharmacol Ther.41: 26-38

[66] Matthewson et al (2016) Nature Immunology 15: 505-513

[67] Baas, T (2013) SciBX 6: doi:10.1038/scibx.2013.1310

[68] Johansson and Ekman (2004) Blood 104:5075

[69] Coquerelle et al. (2009) Gut.58: 1363-1373.

[70] Andero et al. (2014) Prog Mol Biol Transl Sci.122:169-92.

[71] Philips et al. (1991) Neuron.7:695-702.

[72] Ng et al. (2019) Int J Mol Sci.20: pii: E257.

[73] Ferrer et al. (2000) Brain Res.866:257-61.

4

Claims (16)

Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u terapiji.

2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povećanom aktivnošću histon deacetilaze (HDAC).

3. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja posredovanih povećanom aktivnošću HDAC Klase I.

4. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu u postupku selektivnog inhibiranja aktivnosti HDAC Klase I u lečenju stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC Klase I.

5. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time da je kompozicija za upotrebu u selektivnom inhibiranju HDAC1, HDAC2 ili HDAC3 kod bolesti ili stanja posredovanih povišenom aktivnošću HDAC1, HDAC2 ili HDAC3.

6. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu kod pacijenta sa povišenom aktivnošću HDAC.

7. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja odabranih sa liste koja se sastoji od: neurodegenerativne bolesti, kao što je Alzheimer-ova bolest, Huntington-ova bolest ili Parkinson-ova bolest; povrede mozga, kao što je moždani udar; ponašajni ili psihijatrijski poremećaj; kao što je deficit pažnje/hiperaktivni poremećaj, opsesivno kompulzivni poremećaj, anksioznost, bipolarni poremećaj, ili post-traumatski stresni poremećaj; inflamatorna ili autoimuna bolest, kao što je astma, artritis, psorijaza, multipla skleroza, dijabetes, odbacivanje alografta, bolest graft protiv domaćina, ili inflamatorna bolest creva, kao što je Crohn-ova bolest; ili karcinom, kao što je karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca.

8. Kompozicija koja sadrži bakterijski soj roda Bariatricus, za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja odabranih sa liste koja se sastoji od: neurodegenerativne bolesti, kao što je Alzheimer-ova bolest, Huntington-ova bolest ili Parkinson-ova bolest, povrede mozga, kao što je moždani udar, inflamatorna ili autoimuna bolest, kao što je astma, artritis, psorijaza, multipla skleroza, dijabetes, odbacivanje alografta, bolest graft protiv domaćina, ili inflamatorna bolest creva, kao što je Crohn-ova bolest ili ulcerozni kolitis; ili karcinom, kao što je karcinom prostate, kolorektalni karcinom, karcinom dojke, karcinom pluća, karcinom jetre ili karcinom želuca.

9. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time da je bakterijski soj vrsta Bariatricus massiliensis.

10. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time da bakterijski soj ima sekvencu 16s rRNA gena koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična sa SEQ ID BR:1 ili SEQ ID BR:2, ili pri čemu bakterijski soj ima sekvencu 16s rRNA gena predstavljenu sa SEQ ID BR:1 ili SEQ ID BR:2.

11. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time da je kompozicija za oralnu upotrebu.

12. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time da je bakterijski soj liofilizovan.

13. Prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu bilo kog od prethodnih patentnih zahteva.

14. Ćelija soja Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43042.

15. Ćelija soja Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43042 za upotrebu u terapiji, poželjno za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja kao što je definisano u jednom od patentnih zahteva 2-8.

16. Ćelija soja Bariatricus massiliensis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43171 za upotrebu u terapiji, poželjno za upotrebu u lečenju ili sprečavanju bolesti ili stanja kao što je definisano u jednom od patentnih zahteva 2-8.