ES2904249T3

ES2904249T3 - Compuestos útiles para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas

Info

Publication number: ES2904249T3
Application number: ES18731530T
Authority: ES
Inventors: Gonzalez Raquel Delgado; Domènech Núria Alminana; Hernandez Consuelo Garcia; Santiago Mauricio Valerio; Montiel Antonio Ferrer; Den Nest Wim Van; Bielsa Catalina Rodriguez
Original assignee: Lubrizol Advanced Materials Inc
Current assignee: Lubrizol Advanced Materials Inc
Priority date: 2017-07-04
Filing date: 2018-06-05
Publication date: 2022-04-04
Anticipated expiration: 2038-06-05
Also published as: JP2020525529A; AU2018295515A1; BR112020000123A2; AU2018295515B2; EP3648784B1; US20200214960A1; CN110997694A; WO2019008452A1; EP3648784A1; KR20200024235A; JP7200211B2; KR102797328B1; US11896704B2

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-R2 (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde: AA1 es Phe; AA2 es Trp; AA3 se selecciona del grupo que consiste en Met, Leu e Ile; AA4 se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln; AA5 es Arg; AA6 es Lys; AA7 se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys e His; AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile, Leu y Met; y AA9 es Pro; W, X, Y y Z son cada uno independientemente un aminoácido; m, n, p y q son cada uno independientemente 0 o 1; m+n+p+q es menor o igual que 2; R1 se selecciona del grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, heterociclilo, heteroarilalquilo, arilo, aralquilo y R5-CO-, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en H, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, arilo, aralquilo, heterociclilo y heteroarilalquilo; R2 se selecciona del grupo que consiste en -NR3R4, -OR3, -SR3, en donde R3 y R4 se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, heterociclilo, heteroarilalquilo, arilo y aralquilo; y R1 y R2 no son aminoácidos.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos útiles para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas

Campo de la invención

La invención se refiere a compuestos útiles en el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. Los compuestos son útiles para mejorar la función de barrera de la piel, para energizar la piel y pueden actuar como agentes antienvejecimiento. Los compuestos pueden actuar para modular el ritmo circadiano de la piel y transmitir las propiedades diurnas de la piel a la piel a primera hora de la mañana.

Antecedentes de la invención

Los ritmos circadianos permiten que los eventos fisiológicos humanos sigan un patrón de acción específico debido a las oscilaciones ambientales durante el día. Un ritmo circadiano es cualquier función de nuestro sistema biológico, lo que incluye la secreción de melatonina, el control de la temperatura corporal central, el nivel plasmático de cortisol, etc., que muestra una oscilación endógena de aproximadamente 24 horas.

El control del ritmo circadiano tiene lugar en el núcleo supraquiasmático (SCN) del hipotálamo anterior y está estrechamente regulado por una maquinaria de ritmo circadiano orquestada, también conocida como "maquinaria de reloj" [1]. Esta maquinaria de reloj incluye un conjunto de genes reloj, cuyo patrón de expresión fluctúa a lo largo del día debido al complejo activador transcripcional formado por las proteínas Bmal1/Clock. Este complejo se une a las regiones promotoras de los genes reloj (PER, CRY), lo que desencadena su expresión durante el día. La acumulación progresiva de proteínas Cry y Per durante el día también actúa como un regulador negativo de su propia transcripción en la noche, lo que proporciona un circuito de retroalimentación para la ritmicidad circadiana [2]. Se ha informado de que la mayoría de los órganos y tejidos periféricos también pueden expresar oscilaciones circadianas para regular funciones tisulares específicas de forma aislada del SCN, lo que conduce a un control autónomo de la homeostasis del tejido/órgano durante el día [3]. La piel es la barrera más externa de nuestro cuerpo y muchas de sus propiedades esenciales también siguen una regulación circadiana. De hecho, la piel también tiene su propia maquinaria de ritmo circadiano interna para controlar la mayoría de sus funciones fisiológicas [4-5].

La función principal de la piel es formar una barrera entre el interior del huésped y el medio ambiente. La piel debe proteger al organismo de los productos químicos, la luz ultravioleta, los traumatismos mecánicos y los microorganismos patógenos. Lo más importante es que la piel debe proporcionar una barrera de permeabilidad eficiente que evite la pérdida de agua y electrolitos. La piel está compuesta por epidermis, dermis e hipodermis. La epidermis consiste en 4 capas: la capa basal indiferenciada, donde se produce la proliferación celular, el estrato espinoso, el estrato granuloso (SG) y las capas acelulares del estrato córneo. La barrera de permeabilidad se localiza principalmente en el estrato córneo, pero también en el estrato granuloso. [6]

En el estrato córneo (SC), tres parámetros fisiológicos contribuyen a la calidad de la función de barrera: el grosor del estrato córneo, el contenido y la organización de los lípidos intercelulares que forman una envoltura cornificada. Las ceramidas forman el componente lipídico principal dentro de la envoltura cornificada y son una familia de moléculas que están compuestas cada una de un residuo de ácido graso unido a una esfingosina. La cantidad de ceramidas en la piel está relacionada con las propiedades de impermeabilidad al agua de la piel y, por tanto, está relacionada con evitar la aparición de sequedad cutánea. La familia de ácidos grasos omega-3 también desempeña un papel clave en la funcionalidad de la piel. Entre ellos, el ácido docosahexaenoico (DHA) es un ácido graso poliinsaturado de cadena larga cuya incorporación a la membrana celular bicapa (también denominada la relación entre PC-DHA (fosfatidilcolina conjugada con DHA) y los niveles totales de fosfatidilcolina (PC), es decir, PC-DHA/PC) ayuda a mantener una fluidez adecuada de la membrana celular. Un aumento en la incorporación de DHA a las membranas celulares mejora la función de barrera de la piel [7].

La secreción de sebo por la piel tiene un punto máximo alrededor del mediodía y la capacitancia (la capacitancia es una medida de la hidratación de la piel) es menor al principio del día. Además, el flujo sanguíneo o la microcirculación cutánea y la función de barrera de la piel exhiben ritmos circadianos y ultradianos, con un flujo sanguíneo cutáneo bajo al principio del día que alcanza su punto máximo al final de la tarde y al final de la noche [8 9]. Un ritmo ultradiano es un período o ciclo recurrente que se repite a lo largo de un día circadiano de 24 horas. Recientemente, se ha demostrado que el control epigenético del ritmo circadiano es una característica clave del ritmo circadiano [10]. La proteína JARID1A es una histona desmetilasa 4 específica de lisina, codificada por el gen KDM5A, que forma un complejo con Bmal1-Clock en los promotores de los genes reloj (un promotor es la región del ADN que controla la expresión de los genes reloj). La proteína JARID1A potencia la transcripción de genes PER de una manera dependiente de Clock-Bmal1. En este sentido, se ha demostrado que un aumento de la proteína JARID1A conduce a una activación de la expresión del gen PER2 [11].

El rostro tiene un papel clave en la percepción social. La privación de sueño, el estrés, las enfermedades y el esfuerzo físico o mental determinan señales faciales y de fatiga, y el deseo de lucir menos fatigado es uno de los principales motivadores para someterse a tratamientos cosméticos.

La apariencia de fatiga en el rostro está fuertemente relacionada con señales que pertenecen a la apariencia de los ojos y de la piel. El sueño desempeña un papel importante en la apariencia y función de la piel. El papel del sueño en el mantenimiento de la integridad de la piel está respaldado por la observación de que las lesiones cutáneas se encuentran entre los primeros y más pronunciados déficits en ratas sometidas a privación prolongada del sueño. Además, se ha encontrado disfunción endotelial en pacientes con apnea obstructiva del sueño. La privación de sueño provoca piel pálida, arrugas y ojeras.

En comparación con después de una noche de sueño normal, los individuos privados de sueño se clasificaron como que lucían más fatigados, con más párpados caídos, ojos más rojos, ojos más hinchados, ojeras más pronunciadas, piel más pálida, más arrugas y líneas finas alrededor de los ojos, y comisuras de la boca más caídas y más tristes [12].

El envejecimiento es un proceso biológico complejo influenciado por una combinación de factores endógenos (genética, metabolismo celular, procesos metabólicos) y exógenos (exposición a la luz, radiación ionizante, contaminación ambiental, productos químicos). Está bien establecido que las mitocondrias desempeñan un papel importante durante el proceso de envejecimiento debido a la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) como consecuencia de la función de la cadena de transporte de electrones [13].

Las células de la piel humana, al estar directamente expuestas a factores ambientales tales como la luz solar, dependen en gran medida de grandes cantidades de energía para combatir la desregulación y/o el daño celular. Sin embargo, los niveles de energía celular disminuyen a medida que envejecemos. Las deficiencias en la capacidad energética cutánea están estrechamente relacionadas con alteraciones notables en la estructura de la piel humana, un mecanismo principal que conduce a la formación de arrugas.

La piel tiene un alto requerimiento de energía para satisfacer sus necesidades metabólicas, la regeneración y reparación constante de los tejidos que es necesaria para el mantenimiento normal de los tejidos. La piel también está expuesta a la radiación UV y otros factores externos que generan ROS y provocan cambios dañinos en el ADN (mitocondrial), las membranas celulares, las proteínas catalíticas y estructurales (por ejemplo, el colágeno). Si los mecanismos de reparación no pueden seguir el ritmo, pueden producirse cambios perjudiciales en la estructura de la piel, lo que conduce a signos visibles de envejecimiento. Aunque los mecanismos exactos de los cambios relacionados con la edad no se comprenden completamente. Las mitocondrias son las baterías de producción de energía en las células y la disminución de la función mitocondrial y la producción de energía puede considerarse tanto una causa como un efecto del envejecimiento.

Varios datos prueban que las células de la piel humana, energéticamente equilibradas, se reactivan metabólicamente y, por tanto, están marcadamente protegidas contra los cambios estructurales de la piel humana relacionados con la edad, para aumentar la densidad de las papilas dérmicas, que parece ser, entre otros, un factor principal para la disminución observada en la profundidad y apariencia de líneas finas y arrugas [14].

Recientemente, se ha demostrado que la actividad del complejo mitocondrial II disminuye con la edad en los fibroblastos dérmicos humanos, lo que conduce a una disfunción progresiva de las mitocondrias y, por tanto, a una menor producción de energía por parte de las células cutáneas más viejas [15]. Además, se ha demostrado que la inhibición parcial de la actividad del complejo mitocondrial I prolonga la esperanza de vida [16]. De hecho, el tratamiento con diferentes inhibidores de la actividad del complejo mitocondrial I (es decir, metformina, rotenona) puede ralentizar el proceso de envejecimiento [17-18].

La piel seca y escamosa se ve con frecuencia en los ancianos. La alteración o pérdida de la función de barrera de la piel con el aumento de la edad es en parte responsable de esta manifestación. Se ha demostrado que la recuperación de la función de barrera dañada es más lenta en pieles envejecidas, lo que da como resultado una mayor susceptibilidad a desarrollar sequedad. Este es un proceso multifactorial debido, en parte, a los niveles más bajos de lípidos en los cuerpos lamelares y a una disminución de la filagrina, una proteína estructural de las capas superiores de la epidermis. La piel envejecida también exhibe una mayor pérdida de agua transepidérmica (TEWL), lo que hace al estrato córneo más susceptible a secarse en ambientes de baja humedad [19].

Existe la necesidad de nuevos agentes activos que sean eficaces para su uso en el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. En particular, existe la necesidad de nuevos agentes activos que sean eficaces para su uso en el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, tales como para la mejora de la hidratación de la piel y/o el alivio, prevención y/o retardo del envejecimiento de la piel o los síntomas del envejecimiento de la piel. Además, existe la necesidad de un nuevo método para tratar la piel a primera hora de la mañana, o la piel que ha tenido sus ritmos circadianos alterados, para mejorar sus propiedades cosméticas tales como hidratación, microcirculación y función de barrera. La presente invención busca satisfacer una o más de estas necesidades.

Resumen de la invención

En un primer aspecto, la invención proporciona un compuesto representado por la fórmula (I):

Ri-Wm-Xn-AAi -AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-Yp-Zq-R2 (I),

sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde:

AA¹es Phe;

AA²es Trp;

AA³se selecciona del grupo que consiste en Met, Leu e Ile;

AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln;

AA⁵es Arg;

AA6 es Lys;

AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys e His;

AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile, Leu y Met; y

AAg es Pro;

W, X, Y y Z son cada uno independientemente un aminoácido;

m, n, p y q son cada uno independientemente 0 o 1;

m+n+p+q es menor o igual que 2;

R¹se selecciona del grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, heterociclilo, heteroarilalquilo, arilo, aralquilo y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en H, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, arilo, aralquilo, heterociclilo y heteroarilalquilo;

R²se selecciona del grupo que consiste en — NR³R⁴, -OR³, -SR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, heterociclilo, heteroarilalquilo, arilo y aralquilo; y

R¹y R²no son aminoácidos.

Se ha descubierto que los compuestos de la invención son eficaces para mejorar la función de barrera de la piel y como agentes antienvejecimiento. Además, pueden actuar para mejorar la hidratación de la piel y el flujo sanguíneo cutáneo. Como resultado, los compuestos de la invención son útiles en la protección, tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. En particular, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento y/o el cuidado no terapéutico de la piel que se encuentra en un punto de su ritmo circadiano donde la expresión de la proteína JARID1A es menor que el máximo diario; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 es menor que el máximo diario; y/o la cantidad de ceramidas presentes en la piel es menor que el máximo diario. Los compuestos de la invención pueden servir para hacer avanzar el ritmo circadiano de la piel, lo que transmite por tanto propiedades de la piel, tales como niveles de hidratación, funcionalidad de barrera y microcirculación, que están asociados con la piel más tarde en el ciclo del ritmo circadiano.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, junto con al menos un excipiente o adyuvante cosmética o farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, o una composición que comprende un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

En un aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, o una composición que comprende los mismos, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

En otro aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas de un sujeto que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, o una composición que comprende los mismos, al sujeto. Típicamente, el compuesto de la invención se administrará por vía tópica.

En un aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas de un sujeto que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, o una composición cosmética que comprende los mismos, al sujeto. Típicamente, el compuesto de la invención se administrará por vía tópica.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

En el contexto de esta invención, se entiende por "piel" las capas que la comprenden, desde la capa superior o estrato córneo hasta la capa inferior o hipodermis, ambas inclusive. Estas capas están compuestas por diferentes tipos de células, tales como queratinocitos, fibroblastos, melanocitos, mastocitos, neuronas y/o adipocitos, entre otros. El término "piel" también comprende el cuero cabelludo. El término "piel" incluye la piel de mamíferos e incluye la piel humana. Igualmente, los términos "cabello, uñas y membranas mucosas" incluyen el cabello, las uñas y las membranas mucosas de mamíferos, por ejemplo, humanos.

Cuando los términos "tratamiento" y "cuidado" van acompañados de las calificaciones "cosmético" y/o "no terapéutico", significa que el tratamiento o cuidado es tal y, por ejemplo, tiene el objetivo de mejorar o mantener la apariencia estética de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. En particular, el tratamiento puede tener como objetivo mejorar las propiedades cosméticas de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas tales como, por ejemplo, y no limitado a, el nivel de hidratación, elasticidad, firmeza, brillo, tono o textura, cuyas propiedades afectan la apariencia estética de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. El término "cuidado" en el contexto de esta memoria descriptiva se refiere al mantenimiento de las propiedades de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. Dichas propiedades están sujetas a ser mejoradas o mantenidas mediante tratamiento y/o cuidado cosmético de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas tanto en sujetos sanos, así como también en aquellos que tienen piel sensible y aquellos que presentan enfermedades y/o trastornos de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas tales como, por ejemplo, y no limitado a, úlceras y lesiones cutáneas, psoriasis, dermatitis, acné o rosácea, entre otras.

El término "prevención", como se usa en esta invención, se refiere a la capacidad de un compuesto de la invención para prevenir, retardar u obstaculizar el cambio en una propiedad cosmética de la piel, membranas mucosas y/o cabello. El término "prevención", como se usa en esta invención, es intercambiable con el término "inhibición", es decir, se refiere a la capacidad de un compuesto de la invención para inhibir el cambio en una propiedad cosmética de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

En el contexto de esta invención, el término "envejecimiento" se refiere a las cargas que experimenta la piel con la edad (cronoenvejecimiento) o por exposición al sol (fotoenvejecimiento) o a agentes ambientales tales como el humo del tabaco, condiciones climáticas extremas de frío o viento, contaminantes químicos, e incluye todos los cambios externos visibles y/o perceptibles a través del tacto, tales como, y no limitado a, el desarrollo de discontinuidades en la piel tales como arrugas, líneas finas, líneas de expresión, estrías, surcos, irregularidades o rugosidad, aumento del tamaño de los poros, pérdida de hidratación, pérdida de elasticidad, pérdida de firmeza, pérdida de tersura, pérdida de la capacidad de recuperación de deformaciones, pérdida de resiliencia, flacidez de la piel tal como mejillas caídas, la aparición de bolsas bajo los ojos o la aparición de papada, entre otros, cambios en el color de la piel tales como marcas, enrojecimiento, bolsas o la aparición de áreas hiperpigmentadas tales como manchas de la edad o pecas entre otros, diferenciación anómala, hiperqueratinización, elastosis, queratosis, caída del cabello, piel de naranja, pérdida de la estructura de colágeno y otros cambios histológicos del estrato córneo, de la dermis, epidermis, sistema vascular (por ejemplo, la apariencia de arañas vasculares o telangiectasias) o de aquellos tejidos cercanos a la piel, entre otros. El término "fotoenvejecimiento" agrupa el conjunto de procesos debidos a la exposición prolongada de la piel a radiaciones, lo que incluye las radiaciones ultravioleta, entre otras, que son resultado del envejecimiento prematuro de la piel, y presenta las mismas características físicas que el envejecimiento, tales como, y no limitado a, flacidez, cambios de color o irregularidades en la pigmentación, queratinización anormal y/o excesiva. La suma de diversos factores ambientales tales como la exposición al humo del tabaco, la exposición a la contaminación y condiciones climáticas tales como el frío y/o el viento también contribuyen al envejecimiento de la piel.

En esta descripción, las abreviaturas usadas para los aminoácidos siguen las reglas de la IUPAC-IUB Commission of Biochemical Nomenclature especificadas en Eur. J. Biochem., (1984), 138, 9-37. De esta forma, por ejemplo, Gly representa NH²-CH²-COOH, Gly- representa NH²-CH²-COOH, -Gly representa -NH-CH²-COOH y -Gly- representa -NH-CH²-CO-. Por lo tanto, el guion, que representa el enlace peptídico, elimina el OH en el grupo 1-carboxilo del aminoácido (representado aquí en la forma convencional no ionizada) cuando está situado a la derecha del símbolo, y elimina la H del grupo 2-amino del aminoácido cuando está situado a la izquierda del símbolo; ambas modificaciones pueden aplicarse al mismo símbolo (ver la Tabla 1).

Tabla 1

Como se usa en la presente, el término "grupo alifático no cíclico" incluye grupos hidrocarburo lineales (es decir, lineales y no ramificados) o ramificados, saturados o insaturados, tales como alquilo, alquenilo y alquinilo. El grupo alifático no cíclico puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido.

Como se usa en la presente, el término "alquilo" incluye grupos alquilo tanto lineales como ramificados saturados, que pueden estar (mono o poli) sustituidos o no sustituidos. El grupo alquilo está unido al resto de la molécula por un simple enlace. El grupo alquilo tiene de 1 a 24, preferentemente, de 1 a 16, con mayor preferencia, de 1 a 14, incluso con mayor preferencia, de 1 a 12, aún con mayor preferencia, 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono. El término "alquilo" incluye, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, ferc-butilo, 2-metilbutilo, heptilo, 5-metilhexilo, 2-etilhexilo, octilo, decilo, dodecilo, laurilo, hexadecilo, octadecilo y amilo.

Como se usa en la presente, el término "alquenilo" se refiere a un grupo que contiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado y (mono o poli) sustituido o no sustituido. Preferentemente, tiene 1, 2 o 3 dobles enlaces carbono-carbono. Si está presente más de un doble enlace carbono-carbono, los dobles enlaces pueden estar conjugados o no conjugados. Preferentemente, el grupo alquenilo tiene de 2 a 24, preferentemente, de 2 a 16, con mayor preferencia, de 2 a 14, incluso con mayor preferencia, de 2 a 12, aún con mayor preferencia, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono. El grupo alquenilo está unido al resto de la molécula por un simple enlace. El término "alquenilo" incluye, por ejemplo, grupos vinilo (-CH²=CH²), alilo (-CH²-CH=CH²), prenilo, oleilo, linoleilo y similares.

El término "alquinilo" se refiere a un grupo que contiene uno o más triples enlaces carbono-carbono y que puede ser lineal o ramificado y (mono o poli) sustituido o no sustituido. Preferentemente, el grupo alquinilo tiene 1, 2 o 3 triples enlaces carbono-carbono. Los triples enlaces pueden estar conjugados o no conjugados. El grupo alquinilo tiene de 2 a 24, preferentemente, de 2 a 16, con mayor preferencia, de 2 a 14, incluso con mayor preferencia, de 2 a 12, aún con mayor preferencia, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono. El grupo alquinilo está unido al resto de la molécula por un simple enlace. El término "alquinilo" incluye, por ejemplo, y no limitado a, etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo, 1 -butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo, pentinilo, tal como 1 -pentinilo y similares. El grupo alquinilo también puede contener uno o más dobles enlaces carbono-carbono, y los grupos alquinilo incluyen, por ejemplo, y no limitado a, grupos but-1-en-3-inilo y pent-4-en-1-inilo, y similares.

El término "aliciclilo" se usa en la presente descripción para cubrir, por ejemplo, y no limitado a, grupos cíclicos alifáticos (alicíclicos) tales como grupos cicloalquilo o cicloalquenilo o cicloalquinilo. El término "aliciclilo" se refiere a un monorradical que contiene uno o más anillos de átomos de carbono, los anillos pueden ser saturados (por ejemplo, ciclohexilo) o insaturados (por ejemplo, ciclohexenilo) siempre y cuando no sean aromáticos. Más específicamente, los grupos alicíclicos contienen tres o más, de 3 a 24, de 3 a 12, o de 6 a 12, átomos de carbono en el anillo. El grupo alicíclico puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico y los anillos pueden estar, por ejemplo, fusionados o enlazados por un simple enlace o un grupo de enlace tal como un metileno u otro grupo alquileno. El grupo alicíclico puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. En una modalidad, el grupo aliciclilo es un sistema de anillo de 6 a 12 miembros que consiste en átomos de carbono, y opcionalmente, contiene uno o dos dobles enlaces.

El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo alquilo mono o policíclico saturado que puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. El grupo cicloalquilo tiene de 3 a 24, preferentemente, de 3 a 16, con mayor preferencia, de 3 a 14, incluso con mayor preferencia, de 3 a 12, aún con mayor preferencia, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono. El grupo cicloalquilo está unido al resto de la molécula por un simple enlace. Los grupos cicloalquilo incluyen, por ejemplo, y no limitado a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, metil ciclohexilo, dimetil ciclohexilo, octahidroindeno, decahidronaftaleno, dodecahidronaftaleno y similares.

El término "cicloalquenilo" se refiere a un grupo alquenilo mono o policíclico no aromático que puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. El grupo cicloalquenilo tiene de 5 a 24, preferentemente, de 5 a 16, con mayor preferencia, de 5 a 14, incluso con mayor preferencia, de 5 a 12, aún con mayor preferencia, 5 o 6 átomos de carbono. El grupo cicloalquenilo está unido al resto de la molécula por un simple enlace. Preferentemente, el grupo cicloalquenilo contiene 1, 2 o 3 dobles enlaces carbono-carbono. Si está presente más de un doble enlace carbonocarbono, los dobles enlaces pueden estar conjugados o no conjugados. Los grupos cicloalquenilo incluyen, por ejemplo, y no limitado a, el grupo ciclopent-1-en-1-ilo y similares.

El término "cicloalquinilo" se refiere a un grupo alquinilo mono o policíclico no aromático que puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. El grupo cicloalquinilo tiene de 8 a 24, preferentemente, de 8 a 16, con mayor preferencia, de 8 a 14, incluso con mayor preferencia, de 8 a 12, aún con mayor preferencia, 8 o 9 átomos de carbono y está unido al resto de la molécula por un simple enlace. Preferentemente, el grupo cicloalquinilo contiene 1, 2 o 3 triples enlaces carbono-carbono, conjugados o no conjugados. Los grupos cicloalquinilo incluyen, por ejemplo, y no limitado a, el grupo ciclooct-2-in-1-ilo y similares. Los grupos cicloalquinilo también pueden contener uno o más dobles enlaces carbono-carbono, lo que incluye, por ejemplo, y no limitado a, el grupo ciclooct-4-en-2-inilo y similares.

Como se usa en la presente, el término "heterociclilo" o "heterocíclico" se refiere a un sistema de anillo hidrocarburo de 3 a 10 miembros, en donde uno o más de los átomos en el anillo o anillos es un heteroátomo (es decir, no un átomo de carbono). Por tanto, "heterociclilo" o "heterocíclico" se refiere a un grupo cíclico en el que los átomos del anillo consisten en carbono y uno o más heteroátomos. Para satisfacer la valencia, el heteroátomo puede estar unido a H o grupos sustituyentes. Preferentemente, de 1, 2 o 3 de los átomos de carbono del anillo son heteroátomos. Cada heteroátomo puede seleccionarse independientemente del grupo que consiste en O, N, S, P y B, o del grupo que consiste en O, N y S. El grupo heterociclilo puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido. El grupo heterociclilo puede ser un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico y los anillos pueden estar, por ejemplo, fusionados o enlazados por un simple enlace o un grupo de enlace tal como un grupo metileno u otro grupo alquileno. Los átomos de nitrógeno, carbono o azufre presentes en el radical heterociclilo pueden estar, opcionalmente, oxidados, y el átomo de nitrógeno puede estar, opcionalmente, cuaternizado. El radical heterociclilo puede estar no saturado o saturado parcial o totalmente. El radical heterociclilo puede ser alifático o aromático. En una modalidad, el heterociclilo es alifático (también conocido como heteroaliciclilo) y es un sistema de anillo de 3 a 10 miembros donde los átomos del anillo o anillos consisten en átomos de carbono y de 1 a 4, o 1, 2 o 3 heteroátomos. En una modalidad, el grupo heterociclilo es un sistema de anillo de 6 a 10 miembros donde los átomos del anillo o anillos consisten en átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos, y donde el sistema de anillo contiene, opcionalmente, uno o dos dobles enlaces. En una modalidad, el heterociclilo es aromático (también conocido como heteroarilo) y es un sistema de anillo de 6 a 10 miembros donde los átomos del anillo o anillos consisten en átomos de carbono y de 1 a 4, o 1, 2 o 3 heteroátomos. La mayor preferencia es que el término heterociclilo para referirse a un anillo de 5 o 6 miembros. Ejemplos de grupos heteroaliciclilo saturados son dioxano, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina y tiomorfolina. Ejemplos de grupos heterociclilo aromáticos son piridina, pirrol, furano, tiofeno, benzofurano, imidazolina, quinoleína, quinolina, piridazina y naftiridina.

El término "grupo arilo" se refiere a un grupo aromático que tiene de 6 a 30, preferentemente, de 6 a 18, con mayor preferencia, entre 6 y 10, aún con mayor preferencia, 6 o 10 átomos de carbono. El grupo arilo puede comprender 1, 2, 3 o 4 anillos aromáticos, que pueden estar enlazados por un enlace carbono-carbono o fusionados entre sí e incluyen, por ejemplo, y no limitado a, fenilo, naftilo, difenilo, indenilo, fenantrilo o antranilo, entre otros. El grupo arilo puede estar (mono o poli) sustituido o no sustituido.

El término "grupo aralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un grupo aromático, con de 7 a 24 átomos de carbono y que incluye, por ejemplo, y no limitado a, -(CH²)^1-6-fenilo, -(CH²)^1-6-(¹-naftilo), -(CH²)^1-6-(²-naftilo), -(CH²)¹-⁶-CH(fenilo)²y similares.

El término "heteroarilalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un grupo heteroarilo (también conocido como heterocíclico aromático) como se definió anteriormente, donde el grupo alquilo tiene de 1 a 6 átomos de carbono y el grupo heteroarilo tiene de 2 a 24 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos. Los grupos heteroarilalquilo incluyen, por ejemplo, y no limitado a, -(CH²)^1-6-imidazolilo, -(CH²)^1-6-triazolilo, -(CH²)^1-6-tienilo, -(CH²)^1-6-furilo, -(CH²)^1-6-pirrolidinilo y similares.

Como se entiende en este campo técnico, puede existir cierto grado de sustitución de los grupos antes mencionados. En particular, puede haber sustitución en cualquiera de los grupos identificados anteriormente donde se indique explícitamente. Los grupos sustituidos (radicales) mencionados anteriormente son grupos (o radicales) que están sustituidos en una o más posiciones disponibles por uno o más sustituyentes. Preferentemente, la sustitución es en las posiciones 1, 2 o 3, con mayor preferencia, en las posiciones 1 o 2, aún con mayor preferencia, en la posición 1. Los sustituyentes adecuados incluyen, por ejemplo y no limitado a: alquilo C¹-C⁴; hidroxilo; alcoxilo C¹-C⁴; amino; amino-alquilo C¹-C⁴; carboniloxilo C¹-C⁴; oxicarbonilo C¹-C⁴; halógeno tal como fluoruro, cloro, bromo y yodo; ciano; nitro; azida; alquilsulfonilo C¹-C⁴; tiol; alquiltio C¹-C⁴; ariloxi tal como fenoxilo; -NRb(C=NRb)NRbRc; en donde Rb y Rc se seleccionan independientemente del grupo formado por H, alquilo C¹-C⁴, alquenilo C²-C⁴, alquinilo, cicloalquilo C³-C¹⁰, arilo C⁶-C¹⁸, aralquilo C⁷-C¹⁷, heterociclilo de 3-10 miembros o grupo protector del grupo amino.

Como se usa en la presente, el término "que comprende", que es inclusivo o abierto y no excluye elementos o etapas de métodos no mencionados adicionales, pretende abarcar como modalidades alternativas, las frases "que consiste esencialmente en" y "que consiste en", donde "que consiste en" excluye cualquier elemento o etapa no especificado y "que consiste esencialmente en" permite la inclusión de elementos o etapas no mencionados adicionales que no afectan materialmente las características novedosas esenciales o básicas de la composición o método en consideración.

Compuestos de la invención

R1-Wm-Xn-AA1 -AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-Yp-Zq-R2 (I),

AA¹es Phe;

AA²es Trp;

AA³se selecciona del grupo que consiste en Met, Leu e Ile;

AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln;

AA⁵es Arg;

AA6 es Lys;

AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys e His;

AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile, Leu y Met; y

AAg es Pro;

W, X, Y y Z son cada uno independientemente un aminoácido;

m, n, p y q son cada uno independientemente 0 o 1;

m+n+p+q es menor o igual que 2;

R¹y R²no son aminoácidos.

El compuesto de fórmula (I) es un péptido que comprende 9, 10 u 11 aminoácidos enlazados en una cadena. R¹está unido al extremo amino terminal (N-terminal) del péptido y R²está unido al extremo carboxi-terminal (C-terminal) del péptido.

R¹puede seleccionarse del grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol con un peso molecular comprendido entre 200 y 35000 Daltons y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C²⁴, alquenilo C²-C²⁴, alquinilo C²-C²⁴, cicloalquilo C³-C²⁴, cicloalquenilo C⁵-C²⁴, cicloalquinilo C⁸-C²⁴, arilo C⁶-C³⁰, aralquilo C⁷-C²⁴, anillo heterociclilo de 3-10 miembros y un heteroarilalquilo que contiene de 2 a 24 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos, en donde el grupo alquilo tiene de 1 a 6 átomos de carbono.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en alquilo C¹-C¹⁸, alquenilo C²-C²⁴, cicloalquilo C³-C²⁴o el grupo que consiste en alquilo Ci-Cia, alquenilo C²-C¹⁸, cicloalquilo C³-C⁷. El grupo R⁵-CO- incluye grupos alcanoilo tales como acetilo (CH³-CO-, que se abrevia en la presente descripción como "Ac-"), lauroilo (CH³-(CH²)io-CO-, que se abrevia en la presente descripción como "Lau-"), miristoilo (CH³-(CH²)i²-CO-, que se abrevia en la presente descripción como "Mir-") y palmitoilo (CH³-(CH²)i⁴-CO-, que se abrevia en la presente descripción como "Palm-").

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y acetilo, ferc-butanoilo, prenilo, hexanoilo, 2-metilhexanoilo, ciclohexanocarboxilo, octanoilo, decanoilo, lauroilo, miristoilo, palmitoilo, estearoilo, oleoilo y linoleoilo.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-Cia o alquenilo C²-Ci⁸.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H, acetilo, lauroilo, miristoilo o palmitoilo o el grupo que consiste en H, acetilo y palmitoilo.

R²puede seleccionarse del grupo que consiste en -NR³R⁴, -OR³y -SR³, o del grupo que consiste en -NR³R⁴y -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo formado por H, un polímero derivado de polietilenglicol, alquilo Ci-C²⁴, alquenilo C²-C²⁴, alquinilo C²-C²⁴, cicloalquilo C³-C²⁴, cicloalquenilo C⁵-C²⁴, cicloalquinilo C⁸-C²⁴, arilo Ca-C³o, aralquilo C⁷-C²⁴, anillo heterociclilo de 3-i0 miembros y heteroarilalquilo que contiene de 2 a 24 átomos de carbono y de i a 3 heteroátomos, en donde el grupo alquilo tiene i a 6 átomos de carbono. Opcionalmente, R³y R⁴pueden unirse mediante un enlace carbono-carbono saturado o insaturado, lo que forma un anillo con el átomo de nitrógeno.

R²puede ser -NR³R⁴, -OR³y -SR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol con un peso molecular comprendido entre 200 y 35 000 Daltons, metilo, etilo, hexilo, dodecilo y hexadecilo. R³y R⁴pueden seleccionarse independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R²es -NR³R⁴o -OR³, donde R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia, lo que incluye metilo, etilo, hexilo, dodecilo y hexadecilo. Por ejemplo, R²puede ser — OH o -NHR⁴, donde R⁴es H o alquilo Ci-Cia, tal como alquilo Ca (-CaHi³) o alquilo Cia (-CiaH³³).

R²puede seleccionarse de -NR³R⁴y -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R²se selecciona del grupo que consiste en — OH, -NH²y -NHR⁴, donde R⁴es alquilo Ci-Cia. R²puede ser -NR³R⁴, donde R³y R⁴se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo Ci-Cia. R⁴puede ser alquilo Ca, es decir, -CaHi³, o alquilo Cia, es decir, -CiaH³³. R⁴puede ser alquilo Ci-a.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-Ci8, alquenilo C²-C²⁴, cicloalquilo C³-C²⁴; y R²puede ser -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia; por ejemplo, R²se selecciona del grupo que consiste en — OH, -NH²y — NHR⁴, donde R⁴es alquilo Ci-Cia. R⁴puede ser alquilo Ca, es decir, -CaHi³, o alquilo Cia, es decir, -CiaH³³. R⁴puede ser alquilo Ci-a.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y acetilo, ferc-butanoilo, prenilo, hexanoilo, 2-metilhexanoilo, ciclohexanocarboxilo, octanoilo, decanoilo, lauroilo, miristoilo, palmitoilo, estearoilo, oleoilo y linoleoilo; y R²puede ser -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia; por ejemplo, R²se selecciona del grupo que consiste en — OH, -NH²y — NHR⁴, donde R⁴es alquilo Ci-Cia. R⁴puede ser alquilo Ca, es decir, -CaHi3, o alquilo Cia, es decir, -CiaH³³. R⁴puede ser alquilo Ci-a.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H y R⁵-CO-, en donde R⁵se selecciona del grupo que consiste en alquilo Ci-Cia o alquenilo C²-Ci⁸; y R²puede ser -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia; por ejemplo, R²se selecciona del grupo que consiste en — OH, -NH²y — NHR⁴, donde R⁴es alquilo Ci-Cia. R⁴puede ser alquilo Ca, es decir, -CaHi³, o alquilo Cia, es decir, -CiaH³³. R⁴puede ser alquilo Ci-a.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H, acetilo, lauroilo, miristoilo o palmitoilo; y R²puede ser -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia; por ejemplo, R²se selecciona del grupo que consiste en -OH, -NH²y — NHR⁴, donde R⁴es alquilo Ci-Cia. R⁴puede ser alquilo Ca, es decir, -CaHi³, o alquilo Cia, es decir -CiaH³³. R⁴puede ser alquilo Ci-a.

Ri puede seleccionarse del grupo que consiste en H, acetilo o palmitoilo; y R²puede ser -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo Ci-Cia. En una modalidad, R³es H y R⁴se selecciona del grupo formado por H y alquilo Ci-Cia; por ejemplo, R²se selecciona del grupo que consiste en — OH, -NH2 y — NHR4, donde R4 es alquilo Ci-Ci6. R4 puede ser alquilo C6, es decir -C6Hi3, o alquilo Ci6, es decir -Ci6H33. R4 puede ser alquilo C1-6.

Las estructuras más preferidas del polímero derivado de polietilenglicol son el grupo (-CH2-CH2-O)r H en el que r es un número comprendido entre 4 y 795 y el grupo

donde s es un número comprendido entre 1 y 125.

La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde al menos uno de R¹no es H; y R²no es OH. En otras palabras, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde R¹no es H y/o R²no es OH.

La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde AA3 es Met. AA4 puede seleccionarse del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln o del grupo que consiste en Lys y Arg, AA⁴puede ser Lys o AA4 puede ser Arg. En una modalidad, aA3 es Met; AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln; AA7 se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile y Leu. En una modalidad, AA3 es Met; AA4 se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; AA7 se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile y Leu. En una modalidad, AA3 es Met; AA4 es Lys; aA7 se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile y Leu. En una modalidad, AA3 es Met; AA4 es Arg; AA7 se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile y Leu. En una modalidad, AA3 es Met; AA4 es Arg; AA7 es Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val e Ile.

La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde AA3 es Leu. AA4 puede seleccionarse del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln, o del grupo que consiste en Lys y Arg, AA4 puede ser Lys o AA4 puede ser Arg. En una modalidad, AA³es Leu; AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val e Ile. En una modalidad, AA³es Leu; AA⁴es Lys; AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val e Ile. En una modalidad, AA³es Leu; AA⁴es Arg; AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg; y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val e Ile. En una modalidad, AA³es Leu; AA⁴es Arg; AA⁷es Lys; y AA8 es Ile. La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde AA³es Ile. AA⁴puede seleccionarse del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln o AA⁴puede ser Gln. En una modalidad, AA³es Ile; AA⁴es Gln; AA⁷es His; y AA8 es Met. La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), en donde R1 es H, R2 es OH, y m, n, p y q son cada uno 0, es decir, la invención proporciona un compuesto de fórmula: H-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-OH (también escrito como AA1-^aA2-AA3-AA4-AA5-A^a6-AA7-AA8-AA9), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde: AA1 es Phe; aA2 es Trp; AA3 se selecciona del grupo que consiste en Met, Leu e Ile; AA4 se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln; AA5 es Arg; AA6 es Lys; ^aA7 se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys e His; A^a8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile, Leu y Met; y AA9 es Pro [SEQ ID NO.1]. Las variaciones en AA3, AA4, AA7 y AA8 contempladas anteriormente también se aplican a esta modalidad.

Los compuestos de la invención incluyen uno o más compuestos seleccionados de los compuestos enumerados en la Tabla 2, en los que se detalla el identificador de secuencia de cada secuencia de aminoácidos, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables.

Tabla 2

En particular, los compuestos de la invención incluyen uno o más compuestos seleccionados de los compuestos enumerados en la Tabla 3, en los que se detalla el identificador de secuencia de cada secuencia de aminoácidos, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables.

Tabla 3

En las secuencias de aminoácidos de las Tablas 2 y 3, cada secuencia de acuerdo con la fórmula (I), Ri y R²son H y OH, respectivamente. Los compuestos de la invención incluyen cada una de las secuencias de las Tablas 2 y 3 con sus N y C terminales modificados por los otros grupos R¹y R², respectivamente, como se define en la presente descripción para la fórmula (I). Por ejemplo, los compuestos de la invención incluyen cada una de las secuencias de la Tabla 2 y 3 en las que el residuo de aminoácido C-terminal termina opcionalmente (se modifica) con R¹como se definió anteriormente para la fórmula (I), donde R¹no es H. Además, los compuestos de la invención incluyen cada una de las secuencias de la Tabla 2 y 3 en las que el residuo de aminoácido N-terminal termina opcionalmente (se modifica) con R²como se definió anteriormente para la fórmula (I), donde R²no es OH.

Por tanto, la invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), en donde el compuesto es una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO. 1 a 9, y sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde, opcionalmente, dicha secuencia tiene su N-terminal modificado por R¹, donde R¹no es H y/o su C-terminal modificado por R², donde R²no es OH. La secuencia de aminoácidos puede ser SEQ ID NO. 2, S^eQ ID NO. 6 o SEQ ID NO. 8. La secuencia de aminoácidos puede ser SEQ ID NO. 2.

Los compuestos de esta invención pueden existir como estereoisómeros o mezclas de estereoisómeros; por ejemplo, los aminoácidos que los comprenden pueden tener la configuración L-, D- o ser racémicos independientemente entre sí. Por lo tanto, es posible obtener mezclas de isómeros, así como también mezclas racémicas o mezclas diastereoisoméricas, o diastereoisómeros o enantiómeros puros, en dependencia del número de carbonos asimétricos y de que isómeros o mezclas isoméricas están presentes. Las estructuras preferidas de los compuestos de la invención son isómeros puros, es decir, enantiómeros o diastereoisómeros.

Por ejemplo, cuando se establece que uno de los aminoácidos en la fórmula (I) es Met, se entiende que se selecciona de L-Met, D-Met o mezclas de ambos, racémicas o no racémicas. Los procedimientos de preparación descritos en este documento permiten al experto en la técnica obtener cada uno de los estereoisómeros del compuesto de la invención al elegir el aminoácido con la configuración correcta. Los aminoácidos en la fórmula (I) pueden ser L-aminoácidos, es decir, cada uno de los aminoácidos AA¹a AAg y W, X, Y y Z, cuando cualquiera de W, X, Y y Z está presente, es un L-aminoácido.

En el contexto de esta invención, el término "aminoácidos" incluye los aminoácidos codificados por el código genético así como también los aminoácidos no codificados, sean naturales o no. Ejemplos de aminoácidos no codificados son, sin limitación, citrulina, ornitina, sarcosina, desmosina, norvalina, ácido 4-aminobutírico, ácido 2-aminobutírico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido 6-aminohexanoico, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, ácido 2-aminobenzoico, ácido 4-aminobenzoico, 4-clorofenilalanina, ácido 2,3-diaminopropiónico, ácido 2,4-diaminobutírico, cicloserina, carnitina, cistina, penicilamina, ácido piroglutámico, tienilalanina, hidroxiprolina, alo-isoleucina, alotreonina, ácido isotretinoína, isoserina, fenilglicina, estatina, p-alanina, norleucina, W-metil aminoácidos, aaminoácidos y p-aminoácidos, entre otros, así como también sus derivados. Puede encontrarse una lista de aminoácidos no naturales en el artículo "Unusual amino acids in peptide synthesis" por D.C. Roberts y F. Vellaccio, en The Peptides, Vol. 5 (1983), Capítulo VI, Gross E. y Meienhofer J., Eds., Academic Press, Nueva York, EE. UU. o en los catálogos comerciales de las empresas especializadas en el campo.

En el contexto de esta invención, cuando al menos uno de W, X, Y y/o Z está presente, es decir, cuando al menos uno de n, m, p o q no es 0, se entiende que la naturaleza de W, X, Y y/o Z no obstaculiza la actividad del compuesto de la invención y, en cambio, contribuye a ella o no tiene ningún efecto sobre ella. En una modalidad, W, X, Y y Z se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en Ala, Val, Ile y Gly.

En una modalidad de la invención, cada uno de m, n, p y q es 0, es decir, el compuesto de fórmula (I) es un péptido que comprende 9 aminoácidos enlazados en una cadena. En una modalidad, la suma de m, n, p y q es 1, es decir, el compuesto de fórmula (I) es un péptido que comprende 10 aminoácidos enlazados en una cadena. En una modalidad, la suma de m, n, p y q es 2, es decir, el compuesto de fórmula (I) es un péptido que comprende 11 aminoácidos enlazados en una cadena.

Los compuestos de la invención incluyen uno o más compuestos seleccionados del grupo de compuestos enumerados en la Tabla 4, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables.

Tabla 4

La invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), en donde el compuesto es un compuesto seleccionado de los enumerados en la Tabla 4 y, en particular, puede seleccionarse de PEP-1, PEP-12 y PEP-14. Las sales cosmética o farmacéuticamente aceptables de los compuestos proporcionados por la presente invención también se encuentran dentro del campo de esta invención. El término "sales cosmética o farmacéuticamente aceptables" significa una sal reconocida para su uso en animales, por ejemplo, en mamíferos, y más específicamente en seres humanos, e incluye sales usadas para formar sales de adición de base, ya sean inorgánicas, por ejemplo, y no limitadas a, litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, manganeso, cobre, zinc o aluminio entre otros, o son orgánicos, por ejemplo, y no limitadas a, etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, arginina, lisina, histidina o piperazina entre otras, o sales de adición de ácido, ya sean orgánicas, por ejemplo, y no limitadas a, acetato, citrato, lactato, malonato, maleato, tartrato, fumarato, benzoato, aspartato, glutamato, succinato, oleato, trifluoroacetato, oxalato, pamoato o gluconato entre otros, o inorgánicos, por ejemplo, y no imitadas a, cloruro, sulfato, borato o carbonato, entre otras. La naturaleza de la sal no es fundamental, siempre que sea cosmética o farmacéuticamente aceptable. Las sales cosmética o farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la invención pueden obtenerse mediante los métodos convencionales, bien conocidos en la técnica anterior /Berge S.M. y otros, "Pharmaceutical Salts", (1977), J. Pharm. Sci., 66, 1-19].

Procedimientos de preparación de los compuestos de la invención

La síntesis de los compuestos de la invención, sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables puede llevarse a cabo de acuerdo con métodos convencionales, conocidos en la técnica anterior, tales como métodos de síntesis de péptidos en fase sólida /Stewart J.M. y Young J.D., "Solid Phase Peptide Synthesis, 2da edición", (1984), Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M. y Bodanzsky A., "The practice of Peptide Synthesis", (1994), Springer Verlag, Berlín; Lloyd-Williams P. y otros, "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins", (1997), CRC, Boca Raton, FL, EE. UU. ], síntesis en solución, síntesis enzimática /Kullmann W. "Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides", (1980), J. Biol. Chem., 255(17), 8234-8238] o cualquier combinación de los mismos. Los compuestos pueden ser sintéticos, por ejemplo, sintetizados mediante síntesis de péptidos en fase sólida. Los compuestos también pueden obtenerse por fermentación de una cepa bacteriana, modificada o no modificada por ingeniería genética con el objetivo de producir las secuencias deseadas, o por hidrólisis controlada de proteínas de origen animal o vegetal, por ejemplo, microorganismos o algas, preferentemente, plantas, lo que da como resultado fragmentos de péptidos libres que contienen la secuencia deseada.

Por ejemplo, un método para obtener los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros y mezclas de los mismos comprende las etapas de:

- acoplamiento de un aminoácido, con el extremo W-terminal protegido y el extremo C-terminal libre, con un aminoácido con el extremo W-terminal libre y el extremo C-terminal protegido o unido a un soporte sólido;

- eliminación del grupo protector del extremo W-terminal;

- repetición de la secuencia de acoplamiento y eliminación del grupo protector del extremo N-terminal hasta obtener la secuencia de péptidos deseada;

- eliminación del grupo protector del extremo C-terminal o escisión del soporte sólido.

Preferentemente, el extremo C -terminal está unido a un soporte sólido y el proceso se lleva a cabo en fase sólida y, por lo tanto, comprende el acoplamiento de un aminoácido con el extremo W-terminal protegido y el extremo C-terminal libre, con un aminoácido con el extremo W-terminal libre y el extremo C-terminal unido a un soporte polimérico; eliminación del grupo protector del extremo W-terminal; y repetición de esta secuencia tantas veces como sea necesario para obtener por tanto el compuesto de la longitud deseada, seguido finalmente por la escisión del compuesto sintetizado del soporte polimérico original.

Los grupos funcionales de las cadenas laterales de los aminoácidos se mantienen convenientemente protegidos con grupos protectores temporales o permanentes durante toda la síntesis, y pueden desprotegerse simultánea u ortogonalmente al proceso de escisión del péptido del soporte polimérico.

De manera alternativa, la síntesis en fase sólida puede llevarse a cabo mediante una estrategia convergente al acoplar un péptido con el soporte polimérico o con un péptido o un aminoácido unido previamente al soporte polimérico. Las estrategias de síntesis convergente se conocen ampliamente por los expertos en la técnica y se describen en Lloyd-Williams P. y otros, "Convergent Solid-Phase Peptide Synthesis", (1993), Tetrahedron, 49(48), 11065-11133.

El proceso puede comprender las etapas adicionales de desprotección de los extremos W-terminal y C-terminal y/o escisión del péptido del soporte polimérico en un orden indiscriminado, mediante el uso de procedimientos y condiciones estándar conocidos en la técnica anterior, después de lo cual los grupos funcionales de estos extremos pueden modificarse. La modificación opcional de los extremos W-terminal y C-terminal puede llevarse a cabo con el péptido de fórmula (I) anclado al soporte polimérico o una vez que el péptido se ha separado del soporte polimérico. Opcionalmente, puede introducirse R¹mediante la reacción del extremo W-terminal del compuesto de la invención con un compuesto R¹-X mediante una reacción de sustitución nucleofílica, en presencia de una base y un solvente adecuados, en donde los fragmentos que tienen los grupos funcionales que no participan en la formación de enlaces N-C están adecuadamente protegidos con grupos protectores temporales o permanentes. R¹es como se definió anteriormente y X es un grupo saliente, por ejemplo, y no limitado a, el grupo tosilo, el grupo mesilo y grupos halógeno, entre otros.

Opcional y/o adicionalmente, los radicales R²pueden introducirse mediante la reacción de un compuesto HR²con un fragmento complementario que corresponde al péptido de fórmula (I) en el que R²es -OH en presencia de un solvente adecuado y una base tal como W,W-diisopropiletilamina (DIEA) o trimetilamina, o un aditivo tal como 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) o 1-hidroxiazabenzotriazol (HOAt), y un agente deshidratante tal como una carbodiimida, una sal de uronio, una sal de fosfonio o sal de amidinio, entre otros, o mediante la formación previa de un haluro de acilo con, por ejemplo, cloruro de tionilo, y se obtiene de esta manera un péptido de acuerdo con la invención de fórmula (I), en donde los fragmentos que tienen los grupos funcionales no implicados en la formación de enlaces N-C están adecuadamente protegidos con grupos protectores temporales o permanentes. De manera alternativa, pueden introducirse otros radicales R²por incorporación simultánea con el proceso de escisión del péptido del portador polimérico. R²es -OR³, -NR³R⁴o -SR³, donde R³y R⁴son como se definió anteriormente.

Un experto en la técnica comprenderá fácilmente que las etapas de desprotección/escisión de los extremos C-terminal y W-terminal y su posterior derivatización pueden realizarse en un orden diferente, de acuerdo con los procesos conocidos en la técnica anterior.

El término "grupo protector" se refiere a un grupo que bloquea un grupo funcional orgánico y que puede eliminarse en condiciones controladas. Los grupos protectores, sus reactividades relativas y las condiciones en las que permanecen inertes se conocen por el experto en la técnica.

Ejemplos de grupos protectores representativos para el grupo amino son amidas, tales como acetato de amida, benzoato de amida, pivalato de amida; carbamatos tales como benciloxicarbonilo (Cbz o Z), 2-clorobencilo (CIZ), para-nitrobenciloxicarbonilo (pNZ), terc-butiloxicarbonilo (Boc), 2,2,2-tricloroetiloxicarbonilo (Troc), 2-(trimetilsilil)etiloxicarbonilo (Teoc), 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) o aliloxicarbonilo (Alloc), tritilo (Trt), metoxitritilo (Mtt), 2,4-dinitrofenilo (Dnp), W-[1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohex-1-iliden)etilo (Dde), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutilo (ivDde), 1-(1-adamantil)-1-metiletoxicarbonilo (Adpoc), entre otros, preferentemente, Boc o Fmoc.

Ejemplos de grupos protectores representativos para el grupo carboxilo son ésteres, tales como el éster terc-butílico (tBu), éster alílico (All), éster trifenilmetílico (éster Trt), éster ciclohexílico (cHx), éster bencílico (Bzl), éster ortonitrobencílico, éster para-nitrobencílico, éster para-metoxibencílico, éster trimetilsililetílico, éster 2-fenilisopropílico, éster fluorenilmetílico (Fm), éster 4-('W-[1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutil]amino)bencílico (Dmab), entre otros; los grupos protectores preferidos de la invención son los ésteres All, tBu, cHex, Bzl y Trt.

Las cadenas laterales de los aminoácidos trifuncionales pueden protegerse durante el proceso de síntesis con grupos protectores temporales o permanentes ortogonales a los grupos protectores de los extremos W-terminal y C-terminal.

En la literatura pueden encontrarse ejemplos de estos y otros grupos protectores, su introducción y eliminación /Atherton B. y Sheppard R.C., "Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach", (1989), IRL Oxford University Press/ El término "grupos protectores" también incluye los soportes poliméricos usados en la síntesis en fase sólida.

Cuando la síntesis tiene lugar total o parcialmente en fase sólida, los posibles soportes sólidos usados en el proceso de la invención implican soporte de poliestireno, polietilenglicol injertado a poliestireno y similares, por ejemplo, y no limitados a, resinas de p-metilbenzhidrilamina (MBHA) [Matsueda G.R. y otros, "A p-methylbenzhydrylamine resin for improved solid-phase synthesis of peptide amides", (1981), Peptides, 2, 45-50], resinas de 2-clorotritilo [Barlos K. y otros, "Darstellung geschützter Peptid-Fragmente unter Einsatz substituierter Triphenylmethyl-Harze", (1989), Tetrahedron Lett., 30, 3943-3946; Barlos K. y otros, "Veresterung von partiell geschützten Peptid-Fragmenten mit Harzen. Einsatz von 2-Chlorotritylchlorid zur Synthese von Leu1-Gastrin I", (1989), Tetrahedron Lett., 30, 3947 3951], resinas TentaGel (Rapp Polymere GmbH), resinas ChemMatrix (Matrix Innovation, Inc) y similares, que pueden incluir o no un enlazador lábil, tal como el ácido 5-(4-aminometil-3,5-dimetoxifenoxi)valérico (PAL) [Albericio F. y otros, "Preparation and application of the 5-(4-(9-fluorenylmethyloxycarbonyl) aminomethyl-3,5-dimethoxyphenoxy)valeric acid (PAL) handle for the solid-phase synthesis of C-terminal peptide amides under mild conditions", (1990), J. Org. Chem., 55, 3730-3743], ácido 2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)]fenoxiacético (AM) [Rink H., "Solidphase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resin", (1987), Tetrahedron Lett., 28, 3787-3790], [Wang S.S., "p-Alkoxybenzyl Alcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin for Solid Phase Synthesis of Protected Peptide Fragments", (1973), J.Am.Chem.Soc., 95, 1328-1333] y similares, que permiten la desprotección y escisión simultáneas del compuesto del soporte polimérico.

Aplicaciones

La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que un compuesto de fórmula (I) es eficaz para modular el ritmo circadiano de la piel y que esta capacidad puede emplearse para mejorar las propiedades cosméticas de la piel. En particular, la invención se refiere al ritmo circadiano de la piel que se manifiesta en variaciones en: la expresión de la proteína JARID1A en la piel; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel; la cantidad de ceramidas presentes en la piel; y/o la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células cutáneas. Las propiedades cosméticas de la piel asociadas con el ritmo circadiano incluyen la función de barrera y la hidratación de la piel. Se cree que el compuesto de la invención modula el ritmo circadiano de la piel al provocar un aumento en la expresión de la proteína JARID1A; un aumento en la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3; un aumento en la cantidad de ceramidas; y/o un aumento en la cantidad de ácido docosahexaenoico (DHA) incorporado en las membranas de las células cutáneas. Por tanto, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento de la piel que se encuentra en un punto de su ritmo circadiano en el que: la expresión de la proteína JARID1A en la piel es menor que el máximo diario; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel es menor que el máximo diario; la cantidad de ceramidas presentes en la piel; y/o la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel es menor que el máximo diario. La expresión de la proteína JARID1A en la piel puede representarse mediante la expresión de la proteína JARID1A en los queratinocitos. La expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel puede representarse mediante la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en queratinocitos epidérmicos. La cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel puede representarse mediante la proporción de PC-DHA/PC en la piel.

La expresión de la proteína JARID1A en la piel, la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y PER3 en la piel, la cantidad de ceramidas en la piel y la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel es menor en la piel a primera hora de la mañana que, por ejemplo, en la piel a "última hora de la mañana". La piel a primera hora de la mañana es la piel en la primera hora de la mañana, es decir, a las horas normales de despertar, por ejemplo, entre 5.00 a 8.00 a.m., por ejemplo, a las 7.30 a.m. La última hora de la mañana es entre las 11.00 a.m. y el mediodía, por ejemplo, a las 11.30 a.m. Por tanto, los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento y/o el cuidado de la piel a primera hora de la mañana. Por tanto, en un aspecto, el compuesto de la invención es eficaz para hacer avanzar el ritmo circadiano de la piel y la invención se refiere al uso del compuesto de la invención para modular o hacer avanzar el ritmo circadiano de la piel. Los compuestos de la invención también son útiles en el tratamiento de la piel en sujetos que han tenido alterado el ritmo circadiano de su piel, por ejemplo, debido al desfase horario o al trabajo por turnos. La piel puede haber tenido su ritmo circadiano alterado de modo que la expresión de la proteína jAr ID1A en la piel es menor que el máximo diario; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel es menor que el máximo diario; la cantidad de ceramidas presentes en la piel; y/o la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel es menor que el máximo diario. Se ha descubierto que los compuestos de la invención son particularmente eficaces en aumentar los niveles de expresión de los genes reloj PER2 y PER3 en sujetos mayores de edad. Por tanto, los compuestos de la invención son particularmente útiles en el tratamiento de la piel de un sujeto que tiene más de 26 años de edad, por ejemplo, un sujeto que tiene treinta años de edad o más, cuarenta años de edad o más. El sujeto puede tener cincuenta años o más, o sesenta años o más.

Además, se ha descubierto que el compuesto de la invención es eficaz para aumentar el metabolismo energético (producción de energía) de las células de la piel y, por tanto, encuentra uso para energizar la piel y, por ejemplo, para aliviar y/o prevenir los síntomas de fatiga cutánea. Además, se ha descubierto que el compuesto de la invención es eficaz como agente antienvejecimiento de la piel. Por tanto, el compuesto de la invención puede, por ejemplo, hacer avanzar el ritmo circadiano de la piel lo que proporciona por tanto a la piel propiedades cutáneas diurnas a primera hora de la mañana en combinación con un efecto energizante y un efecto antienvejecimiento sobre la piel. Las propiedades diurnas de la piel son propiedades asociadas con la piel durante el día y estas incluyen propiedades tales como la función de barrera de la piel, la hidratación de la piel, la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel, que están asociados con la piel más tarde en el día, por ejemplo, en las últimas horas de la mañana.

Por tanto, los compuestos de la invención son particularmente útiles en la protección y/o el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas. En particular, la protección, tratamiento y/o cuidado es el de la piel. En el contexto de esta invención, piel incluye la piel de todo el cuerpo, lo que incluye la piel de la cara (lo que incluye la piel alrededor de los ojos), cuero cabelludo, escote, cuello, escote bajo, brazos, manos, piernas, pies, muslos, caderas, nalgas, estómago, torso y área genital.

En un aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

El uso puede ser cosmético, es decir, no terapéutico. La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, o una composición cosmética que comprende un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para la tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para mantener y/o mejorar la función de barrera de la piel. La función de barrera cutánea de la piel también se denomina en la presente descripción la barrera física de la piel, la barrera de permeabilidad de la piel o simplemente la barrera cutánea. Esta barrera es proporcionada por el estrato córneo y las uniones estrechas en la epidermis. La función de barrera deteriorada puede deberse a moduladores circadianos intrínsecos o internos, por ejemplo, la privación del sueño, el estrés psicológico o la edad. La función de barrera deteriorada puede dar como resultado, por ejemplo, la pérdida de agua y electrolitos de la piel. La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para mantener y/o mejorar la hidratación de la piel. La hidratación cutánea de la piel muestra un patrón diario dependiente del tiempo, donde los niveles de hidratación cutánea mejoran, es decir, aumentan, a medida que avanza el día, desde un nivel bajo a primera hora de la mañana. La hidratación de la piel también se denomina en la presente descripción niveles de hidratación de la piel o humectación de la piel. Por tanto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado de la piel es el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para mantener y/o mejorar la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel. La microcirculación cutánea también se denomina en la presente descripción flujo sanguíneo cutáneo y es el flujo sanguíneo en los pequeños vasos sanguíneos de la piel, tales como los capilares y arteriolas de la piel. La microcirculación cutánea muestra un patrón diario dependiente del tiempo, donde los niveles de microcirculación de la piel mejoran, es decir, aumentan, a medida que avanza el día, desde un nivel bajo a primera hora de la mañana. El tono de la piel está estrechamente relacionado con la microcirculación de la piel, con un tono cutáneo mejorado asociado con un aumento de la microcirculación cutánea. Por tanto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado de la piel es el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para energizar la piel. Energizar la piel significa aumentar el metabolismo energético de las células de la piel. Esto puede tener los beneficios cosméticos de: mantener y/o mejorar el tono de la piel; y/o prevenir y/o reducir arrugas en la piel. Ventajosamente, este efecto energizante evita la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Por tanto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento cosmético, no terapéutico, y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado de la piel energiza la piel.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para aliviar o prevenir los síntomas de la fatiga cutánea. Los síntomas de la fatiga cutánea incluyen la aparición de ojeras, tez opaca, pérdida del tono de la piel y sequedad cutánea. Por tanto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado de la piel es el alivio o prevención de los síntomas de fatiga cutánea.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento y/o prevención del envejecimiento de la piel o los síntomas del envejecimiento cutáneo. Los síntomas del envejecimiento cutáneo incluyen el tratamiento y/o prevención de arrugas cutáneas, sequedad cutánea, aspereza cutánea, pérdida del tono de la piel y alteraciones de la barrera cutánea. Los síntomas del envejecimiento cutáneo pueden ser arrugas cutáneas, sequedad cutánea, pérdida del tono de la piel y alteraciones de la barrera cutánea. Los síntomas del envejecimiento cutáneo pueden incluir síntomas de envejecimiento debido a la presencia de ROS generadas por la actividad del complejo mitocondrial I en la piel y/o una disminución de la actividad del complejo mitocondrial II en la piel debido al envejecimiento. Ventajosamente, se ha encontrado que los compuestos de la invención disminuyen la actividad del complejo mitocondrial I, aumentan la actividad del complejo mitocondrial II y generan especies reactivas de oxígeno (ROS) insignificantes en fibroblastos dérmicos humanos. La actividad del complejo mitocondrial II disminuye en la piel debido al envejecimiento. Adicionalmente, el complejo mitocondrial I es una fuente importante de rOs en la célula que desencadena el estrés oxidativo y el envejecimiento. Relacionado con esto, un aumento de la actividad del complejo II y/o una inhibición parcial del complejo I conduce a un efecto antienvejecimiento. Por tanto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado de la piel es el alivio y/o prevención de los síntomas del envejecimiento cutáneo.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento y/o prevención de las bolsas en los ojos. Las bolsas en los ojos, como se denominan en la presente descripción, también pueden denominarse hinchazón periorbital, "ojos hinchados" o flacidez debajo de los ojos y se caracterizan comúnmente por hinchazón en los tejidos alrededor de los ojos, más particularmente, debajo de los ojos. Las bolsas en los ojos se exacerban por la alteración de los patrones de sueño, tales como la privación de sueño, y comúnmente se presentan junto con las ojeras. El tratamiento de las bolsas en los ojos incluye reducir el volumen de las bolsas en los ojos. La prevención de las bolsas en los ojos significa prevenir la aparición de las bolsas en los ojos.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, para mantener y/o mejorar la luminosidad de la piel. El término luminosidad de la piel se conoce bien por los expertos y se usa en su sentido más amplio. Los nombres alternativos que también se usan comúnmente en la bibliografía son "claridad de la piel" o "brillo de la piel". La luminosidad de la piel se asocia generalmente con una apariencia saludable de la piel.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es: el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel; el alivio o la prevención de los síntomas de la fatiga cutánea; energizar la piel; el tratamiento o la prevención de las bolsas en los ojos; el mantenimiento o mejora de la luminosidad de la piel; y/o el alivio y/o prevención de los síntomas del envejecimiento cutáneo.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es: el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel; el alivio o la prevención de los síntomas de la fatiga cutánea; energizar la piel; y/o el alivio y/o prevención de los síntomas del envejecimiento cutáneo.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es: el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel; energizar la piel; y/o el alivio y/o prevención de los síntomas del envejecimiento cutáneo.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es: el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; energizar la piel; y/o el alivio y/o prevención de los síntomas del envejecimiento cutáneo.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es como se describió anteriormente y en donde dicho tratamiento y/o cuidado es para la piel a primera hora de la mañana. En particular, el tratamiento terapéutico y/o cuidado de la piel puede ser el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; y/o el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel. La piel a primera hora de la mañana puede ser piel en un punto de su ritmo circadiano donde la expresión de la proteína JARID1A en la piel es menor que el máximo diario; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel es menor que el máximo diario; la cantidad de ceramidas presentes en la piel es menor que el máximo diario; y/o la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel es menor que el máximo diario.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es como se describió anteriormente y en donde dicho tratamiento y/o cuidado es de la piel que ha tenido alterado su ritmo circadiano. En particular, el tratamiento terapéutico y/o cuidado de la piel puede ser el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; y/o el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel. El ritmo circadiano de la piel puede estar alterado de modo que la expresión de la proteína JARID1A en la piel es menor que el máximo diario; la expresión de los genes reloj CRY2, PER2 y/o PER3 en la piel es menor que el máximo diario; la cantidad de ceramidas presentes en la piel es menor que el máximo diario; y/o la cantidad de DHA incorporado en las membranas de las células de la piel es menor que el máximo diario. La piel puede ser la piel de un sujeto cuyo ritmo circadiano se ha alterado, por ejemplo, debido al desfase horario o al trabajo por turnos.

La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas, en donde dicho tratamiento y/o cuidado es como se describió anteriormente y en donde dicho tratamiento y/o cuidado es de la piel si un sujeto es mayor de 26 años de edad, por ejemplo, un sujeto que tiene treinta años de edad o más, cuarenta años de edad o más. El sujeto puede tener cincuenta años de edad o más, o sesenta años de edad o más. En particular, el tratamiento terapéutico y/o cuidado de la piel puede ser el mantenimiento o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; y/o el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel.

En otro aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas de un sujeto, que comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables o una composición que comprende una cantidad cosmética o farmacéuticamente eficaz del compuesto de la invención, sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, al sujeto. El método puede ser para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas como se describió anteriormente con relación a las aplicaciones (usos) de los compuestos de la invención. En particular, el método de tratamiento y/o cuidado es un método de tratamiento y/o cuidado de la piel. La administración del compuesto de la invención o composición que comprende el mismo puede ser tópica o, por ejemplo, transdérmica. El método puede ser un método cosmético, no terapéutico, o un método terapéutico.

En una modalidad, la invención proporciona un método cosmético, no terapéutico, de tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas en un sujeto, que comprende administrar una cantidad cosméticamente eficaz de un compuesto de la invención, sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables o una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz del compuesto de la invención, sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, al sujeto. El compuesto de la invención puede estar presente en una composición cosmética, por ejemplo, una composición cosmética como se describe en la presente descripción. El método cosmético, no terapéutico, puede ser para el tratamiento y/o cuidado de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas como se describió anteriormente con relación a aplicaciones (usos) de métodos cosméticos, no terapéuticos, de los compuestos de la invención.

Para los métodos de la invención descritos anteriormente, la aplicación tópica o transdérmica puede llevarse a cabo mediante iontoforesis, sonoforesis, electroporación, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, cura oclusiva, microinyecciones, microagujas (o una matriz de microagujas), mediante inyecciones sin aguja por medio de presión, mediante parches microeléctricos, mascarillas faciales o cualquier combinación de los mismos.

Para los métodos de la invención descritos anteriormente, la frecuencia de aplicación o administración puede variar mucho, en dependencia de las necesidades de cada sujeto, con una recomendación de una aplicación de una vez al mes a diez veces al día, preferentemente, de una vez a la semana a cuatro veces al día, con mayor preferencia, de tres veces a la semana a dos veces al día, incluso con mayor preferencia, una vez al día. La aplicación o administración del compuesto de la invención o una composición que comprende el compuesto de la invención puede tener lugar a primera hora de la mañana.

En un aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, o una composición farmacéutica que comprende el mismo, para su uso como medicamento. La invención también proporciona el uso del compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad o trastorno. En un aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad o trastorno que comprende administrar un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales farmacéuticamente aceptables, o una composición farmacéutica que comprende el mismo, al sujeto.

Composiciones de la invención

Los compuestos de la invención pueden administrarse para su aplicación por cualquier medio que provoque el contacto entre los compuestos y el sitio de acción en el cuerpo de un sujeto, preferentemente, el de un mamífero, preferentemente, un humano, y en forma de una composición que los contenga.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición cosmética o farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables. En particular, la invención proporciona una composición cosmética que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables.

Las composiciones de la invención incluyen típicamente al menos un excipiente o adyuvante cosmética o farmacéuticamente aceptable. En particular, la invención proporciona una composición cosmética que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, junto con al menos un excipiente o adyuvante cosméticamente aceptable. Estas composiciones pueden prepararse por medios convencionales conocidos por los expertos en la técnica ["Harry's Cosmeticology", Séptima edición, (1982), Wilkinson J.B., Moore R.J., ed. Longman House, Essex, GB].

Los compuestos de esta invención tienen una solubilidad variable en agua, de acuerdo con la naturaleza de su secuencia de aminoácidos o cualquier posible modificación en los extremos W-terminal y/o C-terminal. Por lo tanto, los compuestos de esta invención pueden incorporarse a las composiciones mediante solución acuosa, y aquellos que no son solubles en agua pueden solubilizarse en solventes convencionales cosmética o farmacéuticamente aceptables tales como, y no limitados a, etanol, propanol, isopropanol, propilenglicol, glicerina, butilenglicol o polietilenglicol o cualquier combinación de los mismos.

Las composiciones de la invención contienen una cantidad cosmética o farmacéuticamente (terapéuticamente) eficaz del compuesto de la invención. La cantidad cosmética o farmacéuticamente (terapéuticamente) eficaz de los compuestos de la invención que debe administrarse, así como también su dosis, dependerá de numerosos factores, lo que incluye la edad, el estado del paciente, la naturaleza o gravedad de la afección, trastorno o enfermedad a tratar y/o cuidar, la vía y frecuencia de administración y la naturaleza particular de los compuestos a usar.

Se entiende que los términos "cantidad cosméticamente eficaz" y "cantidad farmacéuticamente eficaz" significan una cantidad no tóxica pero suficiente del compuesto o compuestos de la invención para proporcionar el efecto deseado. Los términos "farmacéuticamente eficaz" y "terapéuticamente eficaz" se usan indistintamente en la presente descripción. Los compuestos de la invención se usan en las composiciones cosméticas o farmacéuticas de esta invención en concentraciones cosmética o farmacéuticamente eficaces para lograr el efecto deseado; por ejemplo, en cantidades con respecto al peso total de la composición de: 0,00000001 % en peso a 20 % en peso; de 0,000001 % en peso a 15 % en peso; de 0,00001 % en peso a 10 % en peso; de 0,00005 % en peso a 5 % en peso; de 0,00005 % en peso a 1 % en peso; de 0,00005 % en peso a 0,1 % en peso; de 0,00005 % en peso a 0,05 % en peso; de 0,00005 % en peso a 0,01 % en peso; de 0,00005 % en peso a 0,005 % en peso; de 0,0005 % en peso a 0,01 % en peso o de 0,0005 % en peso a 0,005 % en peso. Los compuestos de la invención pueden ser al menos 0,00000001, 0,000001, 0,00001, 0,00005 o 0,0005 % en peso del peso total de la composición.

Los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosméticas o farmacéuticamente aceptables, también pueden incorporarse en sistemas de suministro cosméticos o farmacéuticos y/o sistemas de liberación sostenida.

El término "sistema de suministro" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador con el que se administra el compuesto de la invención. Estos portadores cosméticos o farmacéuticos pueden ser líquidos, tales como agua, aceites o tensioactivos, lo que incluye los de petróleo, origen animal, vegetal o sintético, por ejemplo y no limitados a, aceite de maní, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, aceite de ricino, polisorbatos, ésteres de sorbitán, sulfatos de éter, sulfatos, betaínas, glucósidos, maltósidos, alcoholes grasos, nonoxinoles, poloxámeros, polioxietilenos, polietilenglicoles, dextrosa, glicerol, digitonina y similares. Un experto en la técnica conoce los diluyentes, adyuvantes o excipientes que pueden usarse en los diferentes sistemas de suministro en los que puede administrarse el compuesto de la invención.

El término "liberación sostenida" se usa en un sentido convencional relacionado con un sistema de suministro de un compuesto que proporciona la liberación gradual de este compuesto durante un período de tiempo, y preferentemente, aunque no necesariamente, con niveles de liberación del compuesto relativamente constantes durante un período de tiempo.

Los ejemplos de sistemas de suministro o liberación sostenida incluyen, sin limitación, liposomas, liposomas mixtos, oleosomas, niosomas, etosomas, milipartículas, micropartículas, nanopartículas y nanopartículas lipídicas sólidas, portadores lipídicos nanoestructurados, esponjas, ciclodextrinas, vesículas, micelas, micelas mixtas de tensioactivos, micelas mixtas de tensioactivos-fosfolípidos, milisferas, microesferas y nanoesferas, lipoesferas, milicápsulas, microcápsulas y nanocápsulas, así como también microemulsiones y nanoemulsiones, que pueden añadirse para lograr una mayor penetración del principio activo y/o mejorar sus propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas. Los sistemas de suministro o liberación sostenida preferidos son liposomas, micelas mixtas de tensioactivosfosfolípidos, microemulsiones, con mayor preferencia, microemulsiones agua en aceite con una estructura interna de micela inversa y nanocápsulas que contienen microemulsiones.

En una modalidad, la invención proporciona una composición cosmética o farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y un portador cosmética o farmacéuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste en cremas, emulsiones, geles, liposomas, nanopartículas y ungüentos.

Los sistemas de liberación sostenida pueden prepararse mediante métodos conocidos en la técnica anterior, y las composiciones que los contienen pueden administrarse, por ejemplo, por administración tópica o transdérmica, lo que incluye parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos y parches microeléctricos, o por administración sistémica, por ejemplo, y no limitado a, vía oral o parenteral, lo que incluye implantación o inyección nasal, rectal o subcutánea, o implantación o inyección directa en una parte específica del cuerpo, y preferentemente, deben liberar una cantidad relativamente constante de los compuestos de la invención. La cantidad de compuesto contenido en el sistema de liberación sostenida dependerá, por ejemplo, de dónde se administrará la composición, la cinética y la duración de la liberación del compuesto de la invención, así como también de la naturaleza de la afección, trastorno y/o enfermedad a tratar y/o a atender.

Los compuestos de esta invención también pueden adsorberse en polímeros orgánicos sólidos o soportes minerales sólidos, tales como, y no limitado a, talco, bentonita, sílice, almidón o maltodextrina, entre otros.

Las composiciones que contienen los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables también pueden incorporarse en tejidos, telas no tejidas y dispositivos médicos que están en contacto directo con la piel, lo que libera por tanto los compuestos de la invención ya sea por biodegradación del sistema de unión a la tela, tela no tejida o dispositivo médico, o por fricción entre ellos y el cuerpo, debido a la humedad corporal, el pH de la piel o la temperatura corporal. Además, los compuestos de la invención pueden incorporarse a los tejidos y telas no tejidas que se usan para confeccionar prendas de vestir que están en contacto directo con el cuerpo.

Ejemplos de telas, telas no tejidas, prendas de vestir, dispositivos médicos y medios para inmovilizar los compuestos a ellos, entre los que se encuentran los sistemas de suministro y/o los sistemas de liberación sostenida descritos anteriormente, pueden encontrarse en la literatura y se conocen en la técnica anterior YSchaab C.K. (1986) HAPPI mayo de 1986; Nelson G., "Application of microencapsulation in textiles", (2002), Int. J. Pharm., 242(1-2), 55-62; "Biofunctional Textiles and the Skin" (2006) Curr. Probl. Dermatol v.33, Hipler ^uC y Elsner P., eds. S. Karger AG, Basel, Switzerly; Malcolm R.K. y otros, "Controlled release of a model antibacterial drug from a novel self-lubricating silicone biomaterial", (2004), J. Cont. Release, 97(2), 313-320]. Las telas, telas no tejidas, prendas de vestir y dispositivos médicos preferidos son vendajes, gasas, camisetas, calcetines, medias, ropa interior, fajas, guantes, pañales, toallas sanitarias, apósitos, colchas, toallitas, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos, parches microeléctricos y/o máscaras faciales.

Las composiciones cosméticas o farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención, sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, pueden usarse en diferentes tipos de composiciones para aplicación tópica o transdérmica que incluyen, opcionalmente, los excipientes cosmética o farmacéuticamente aceptables necesarios para formular la forma de administración deseada.

Las composiciones para la aplicación tópica o transdérmica puede producirse en cualquier formulación sólida, líquida o semisólida, tal como, y no limitada a, cremas, emulsiones múltiples tales como, y no limitadas a, emulsiones de aceite y/o silicona en agua, emulsiones agua en aceite y/o silicona, emulsiones de tipo agua/aceite/agua o agua/silicona/agua y emulsiones de tipo aceite/agua/aceite o silicona/agua/silicona, composiciones anhidras, dispersiones acuosas, aceites, leches, bálsamos, espumas, lociones, geles, geles en crema, soluciones hidroalcohólicas, soluciones hidroglicólicas, hidrogeles, linimentos, sueros, jabones, champús, acondicionadores, sueros, películas de polisacáridos, ungüentos, mousses, pomadas, polvos, barras, lápices y pulverizadores o aerosoles (nebulizadores), lo que incluye las formulaciones para dejar y enjuagar. Estas formulaciones de aplicación tópica o transdérmica pueden incorporarse mediante el uso de técnicas conocidas por el experto en la técnica en diferentes tipos de accesorios, por ejemplo, y no limitados a, vendajes, gasas, camisetas, calcetines, medias, ropa interior, fajas, guantes, pañales, toallas sanitarias, apósitos, colchas, toallitas, parches adhesivos, parches no adhesivos, parches oclusivos, parches microeléctricos o máscaras faciales, o se pueden incorporar a diferentes productos de maquillaje, tales como bases de maquillaje, tales como bases fluidas y bases compactas, lociones desmaquillantes, leches desmaquillantes, correctores de ojeras, sombras de ojos, lápices labiales, protectores labiales, brillo labial y polvos, entre otros.

Las composiciones cosméticas o farmacéuticas de la invención pueden incluir agentes que aumentan la absorción percutánea de los compuestos de la invención, por ejemplo, y no limitados a, dimetilsulfóxido, dimetilacetamida, dimetilformamida, tensioactivos, azona (1-dodecilazacicloheptan-2-ona), alcohol, urea, etoxidiglicol, acetona, propilenglicol o polietilenglicol, entre otros. Además, las composiciones cosméticas o farmacéuticas de esta invención pueden aplicarse en áreas locales a tratar por medio de iontoforesis, sonoforesis, electroporación, parches microeléctricos, presión mecánica, gradiente de presión osmótica, cura oclusiva, microinyecciones o inyecciones sin aguja por medio de presión, tales como inyecciones por presión de oxígeno, o cualquier combinación de las mismas, para lograr una mayor penetración del péptido de la invención. El área de aplicación se determinará por la naturaleza de la afección, trastorno y/o enfermedad a tratar y/o atender.

En una modalidad, la composición cosmética o farmacéutica de la invención contiene un irritante químico contenido típicamente en cosméticos (lo que incluye maquillaje e hidratantes) y productos de higiene (lo que incluye productos de limpieza). Por irritante químico se entiende un producto químico que provoca irritación en la piel. Por tanto, la composición cosmética o farmacéutica de la invención puede contener uno o más productos químicos seleccionados de tensioactivos; oxidantes; solventes; conservantes; ácidos grasos o alcoholes; protectores solares químicos; compuestos etoxilados y otros liberadores de formaldehído; fragancias y/o exfoliantes químicos. En una modalidad, la composición cosmética o farmacéutica de la invención contiene uno o más tensioactivos.

Además, las composiciones cosméticas que contienen los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables pueden usarse en diferentes tipos de formulaciones para administración oral, preferentemente, en forma de cosméticos o fármacos orales, tales como, y no limitados a, cápsulas, lo que incluye cápsulas de gelatina, cápsulas blandas, cápsulas duras, comprimidos, lo que incluye comprimidos recubiertos de azúcar, tabletas, píldoras, polvos, gránulos, goma de mascar, soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elíxires, películas de polisacáridos, jaleas o gelatinas, y cualquier otra forma conocida por el experto en la técnica. En una modalidad particular, los compuestos de la invención pueden incorporarse en cualquier forma de alimento funcional o alimento fortificado, tal como, y no limitado a, barras dietéticas o polvos compactos o no compactos. Estos polvos pueden disolverse en agua, refrescos, productos lácteos, derivados de la soja o pueden incorporarse en barritas dietéticas. Los compuestos de esta invención pueden formularse con excipientes y adyuvantes comunes para composiciones orales o complementos alimenticios, por ejemplo, y no limitados a, componentes grasos, componentes acuosos, humectantes, conservantes, agentes texturizantes, sabores, aromas, antioxidantes y colorantes comunes en la industria de alimentos.

También pueden administrarse composiciones cosméticas o farmacéuticas que contienen los compuestos de fórmula (I), sus estereoisómeros, mezclas de los mismos y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, así como también por vía tópica o transdérmica, por cualquier otra vía apropiada, tal como la vía oral o parenteral, para lo cual incluirán los excipientes farmacéuticamente aceptables necesarios para la formulación de la forma de administración deseada. En el contexto de esta invención, el término "parenteral" incluye por vía nasal, auricular, oftálmica, rectal, uretral, vaginal, subcutánea, intradérmica, inyecciones intravasculares, tales como intravenosas, intramusculares, intraoculares, intravítreas, intracorneales, intraespinales, intramedulares, intracraneales, intracervical, intracerebral, intrameníngea, intraarticular, intrahepática, intratorácica, intratraqueal, intratecal e intraperitoneal, y cualquier otra técnica de inyección o infusión similar. Un experto en la técnica conoce los diferentes medios por los que pueden administrarse las composiciones cosméticas o farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención.

Entre los adyuvantes cosmética o farmacéuticamente aceptables contenidos en las composiciones cosméticas o dermofarmacéuticas descritas en esta invención, se encuentran ingredientes adicionales comúnmente usados en las composiciones cosméticas o farmacéuticas, por ejemplo, y no limitados a, otros agentes que mejoran o restauran la función de barrera de la piel, agentes que protegen el microbioma natural de la piel, agentes que mejoran el metabolismo energético de la célula, agentes que mejoran o protegen la función mitocondrial, agentes contra la fatiga, agentes que modulan la nocturnina, agentes que refuerzan el metabolismo mitocondrial, agentes que potencian la liberación de adiponectina, agentes que refuerzan la comunicación intercelular, agentes que aumentan las conexinas en las células de la piel, agentes que promueven la autorrenovación de la piel, agentes que previenen la fibrosis hipertrópica de la piel, agentes protectores del ADN, agentes reparadores del ADN, agentes protectores de células madre, agentes reactivadores del conjunto de células madre de la piel, agentes que inhiben la exocitosis neuronal, agentes anticolinérgicos, agentes que inhiben la contracción muscular, agentes antienvejecimiento, agentes antiarrugas, agentes antitranspirantes, agentes antiinflamatorios y/o analgésicos, agentes antiprurito, agentes calmantes, agentes anestésicos, inhibidores de la agregación de receptores de acetilcolina, inhibidores de la acetilcolinesterasa, agentes relajantes de la piel, agentes estimulantes o inhibidores de la síntesis de melanina, agentes aclarantes o despigmentantes, agentes propigmentantes, agentes autobronceadores, agentes inhibidores de la NO-sintasa, agentes inhibidores de la 5a-reductasa, agentes inhibidores de la lisil y/o prolil hidroxilasa, antioxidantes, depuradores de radicales libres y/o agentes contra la contaminación atmosférica, depuradores de especies reactivas de carbonilo, agentes antiglicación, agentes detoxificantes, agentes antihistamínicos, agentes antivirales, agentes antiparasitarios, emulsificantes, emolientes, solventes orgánicos, propelentes líquidos, acondicionadores de la piel, humectantes, sustancias que retienen la humedad, alfa hidroxiácidos, beta hidroxiácidos, hidratantes, enzimas hidrolíticas epidérmicas, vitaminas, aminoácidos, proteínas, pigmentos o colorantes, tintes, biopolímeros, polímeros gelificantes, espesantes, tensioactivos, agentes suavizantes, emulsificantes, agentes aglutinantes, conservantes, agentes capaces de reducir o tratar las bolsas debajo de los ojos, agentes exfoliantes, agentes queratolíticos, agentes descamadores, agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos, agentes fungistáticos, agentes bactericidas, agentes bacteriostáticos, agentes que estimulan la síntesis de macromoléculas dérmicas o epidérmicas y/o capaces de inhibir o prevenir su degradación, agentes estimulantes de la síntesis de colágeno, agentes estimulantes de la síntesis de elastina, agentes estimulantes de la síntesis de decorina, agentes estimulantes de la síntesis de laminina, agentes estimulantes de la síntesis de defensina, agentes estimulantes de la síntesis de chaperonas, agentes estimulantes de la síntesis de cAMP, agentes moduladores de AQP-3, agentes estimulantes de la síntesis de acuaporina, proteínas de la familia de la acuaporina, agentes estimulantes de la síntesis de ácido hialurónico, agentes estimulantes de la síntesis de glicosaminoglicanos, agentes estimulantes de la síntesis de fibronectina, agentes estimulantes de la síntesis de sirtuina, agentes activadores de sirtuina, proteínas de choque térmico, agentes estimulantes de la síntesis de proteínas de choque térmico, agentes estimulantes de la síntesis de lípidos y componentes del estrato córneo, ceramidas, ácidos grasos, agentes que inhiben la degradación del colágeno, agentes que previenen o reducen la carbamilación, agentes moduladores de la lisil hidroxilasa, agentes que mejoran la reticulación de las fibras de colágeno, agentes que inhiben metaloproteinasa de la matriz, agentes que inhiben la degradación de la elastina, agentes que inhiben las serina proteasas tales como calicreínas, elastasa o catepsina, agentes estimulantes de la proliferación de fibroblastos, agentes estimulantes de la proliferación de queratinocitos, agentes estimulantes de la proliferación de adipocitos, agentes estimulantes de la proliferación de melanocitos, agentes estimulantes de la diferenciación de queratinocitos, agentes estimulantes o retardadores de la diferenciación de adipocitos, agentes antihiperqueratosis, agentes comedolíticos, agentes antipsoriasis, estabilizadores, agentes para el tratamiento y/o cuidado de la piel sensible, agentes reafirmantes, agentes antiestrías, agentes aglutinantes, agentes que regulan la producción de sebo, agentes lipolíticos o agentes que estimulan la lipólisis, agentes adipogénicos, agentes moduladores de la expresión de PGC-1a, agentes moduladores de la actividad de PPAR^y, agentes que aumentan o reducen el contenido de triglicéridos de los adipocitos, agentes anticelulíticos, agentes que inhiben la actividad de PAR-2, agentes que estimulan la cicatrización, agentes coadyuvantes de la cicatrización, agentes que estimulan la reepitelización, agentes coadyuvantes de la reepitelización, factores de crecimiento de citocinas, agentes que actúan sobre la circulación capilar y/o microcirculación, agentes que estimulan la angiogénesis, agentes que inhiben la permeabilidad vascular, agentes venotónicos, agentes que actúan sobre el metabolismo celular, agentes para mejorar la unión dérmicaepidérmica, agentes que inducen el crecimiento del cabello, agentes inhibidores o retardadores del crecimiento del cabello, agentes retardadores de la pérdida del cabello, conservantes, perfumes, desodorantes cosméticos y/o absorbentes y/o para enmascarar olores corporales, agentes quelantes, extractos vegetales, aceites esenciales, extractos marinos, agentes obtenidos a partir de un proceso biotecnológico, sales minerales, extractos celulares, protectores solares y agentes fotoprotectores orgánicos o minerales activos contra los rayos ultravioleta A y/o B y/o rayos infrarrojos A, o mezclas de los mismos, siempre que sean física y químicamente compatibles con el resto de componentes de la composición y en particular con los compuestos de la invención.

Además, la naturaleza de estos ingredientes adicionales no debería alterar inaceptablemente los beneficios de los compuestos de esta invención. La naturaleza de estos ingredientes adicionales puede ser sintética o natural, tal como extractos vegetales, o proceder de un proceso biotecnológico, o de una combinación de un procedimiento de síntesis y un proceso biotecnológico. Pueden encontrarse ejemplos adicionales en CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary & Handbook, 12ma Edición (2008,). En el contexto de esta invención, se entiende por proceso biotecnológico cualquier proceso que produce el ingrediente activo, o parte de él, en un organismo o en parte de él.

En una modalidad, la invención proporciona una composición cosmética o farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y una cantidad farmacéutica o cosméticamente eficaz de uno o más adyuvantes seleccionados del grupo que consiste en: (i) compuestos, aceites o ceras seleccionados del grupo de los adyuvantes cosméticos o farmacéuticos formados por humectantes, sustancias que retienen la humedad, hidratantes y emolientes; (ii) compuestos con propiedades anti-edema que mejoran la permeabilidad/microcirculación vascular; (iii) compuestos que mejoran el metabolismo energético celular, revitalizan, vigorizan, aumentan el estado energizante de las células o aumentan el nivel de energía o la producción de ATP en las células; (iv) compuestos con propiedades antifatiga para mejorar las condiciones de la piel, o un agente para mejorar la apariencia y la vitalidad de la piel al mejorar la apariencia de ojeras, rasgos cansados, cutis apagado, pérdida de tono y sequedad; (v) depuradores de especies reactivas de carbonilo, depuradores de radicales libres y/o agentes antiglicación, agentes detoxificantes, agentes antioxidantes y/o anticontaminantes; (vi) compuestos para mejorar la función de barrera de la piel, o agentes que contrarrestan la sequedad de la piel mediante una reducción de la pérdida de agua transepidérmica (TEWL), o agentes que protegen la integridad de las capas de células de la piel, o agentes que mejoran la barrera lipídica o de defensa de la piel; y (vii) compuestos que pueden producir un efecto antienvejecimiento mediante la modulación de la actividad de los complejos mitocondriales, mejoran la funcionalidad de las mitocondrias con la edad, o protegen contra el envejecimiento de la piel debido a una potenciación de la actividad del complejo mitocondrial II, o reducen la actividad del complejo mitocondrial I.

La composición cosmética o farmacéutica de esta invención puede comprender una cantidad cosmética o farmacéuticamente eficaz de al menos un compuesto, aceite o cera seleccionado del grupo de adyuvantes cosméticos o farmacéuticos formados por humectantes, sustancias que retienen la humedad, hidratantes y emolientes, tales como y no limitados a, polioles y poliéteres tales como glicerina, etilhexilglicerina, caprililglicol, pentilenglicol, butilenglicol, propilenglicol y sus derivados, trietilenglicol, polietilenglicol, gliceret-26, sorbet-30; pantenol; ácido piroglutámico y sus sales o derivados; aminoácidos, tales como serina, prolina, alanina, glutamato o arginina; ectoína y sus derivados; W-(2-hidroxietil)acetamida; ácido pirrolidona carboxílico (PCA); ácido /V-lauroilpirrolidona carboxílico; V-lauroil-L-lisina; V-alfa-benzoil-L-arginina; urea; creatina; alfa y beta-hidroxiácidos tales como ácido láctico, ácido glicólico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico o ácido salicílico y sus sales; acrilato de poliglicerilo; azúcares y polisacáridos, tales como glucosa, sacárido isomerado, sorbitol, pentaeritritol, inositol, xilitol, sorbitol, trehalosa y sus derivados, glucuronato de sodio, carragenanos (Chondrus crispus) o quitosano; glicosaminoglicanos tales como ácido hialurónico y sus derivados; aloe vera en cualquiera de sus formas; miel; colágeno soluble; lecitina y fosfatidilcolina; ceramidas; colesterol y sus ésteres; tocoferol y sus ésteres, tales como acetato de tocoferilo o linoleato de tocoferilo; alcoholes de cadena larga tales como alcohol cetearílico, alcohol esteárico, alcohol cetílico, alcohol oleílico, alcohol isocetílico u octadecan-2-ol; ésteres de alcohol de cadena larga tales como lactato de laurilo, acetato de miristilo o benzoatos de alquilo C¹²-C¹⁵; ácidos grasos tales como ácido esteárico, ácido isoesteárico o ácido palmítico; ácidos grasos poliinsaturados (PUFA); sorbitanos tales como diestearato de sorbitán; glicéridos tales como monoricinoleato de glicerilo, monoestearato de glicerilo, citrato de estearato de glicerilo o triglicérido de ácido caprílico y cáprico; ésteres de sacarosa tales como palmitato de sacarosa u oleato de sacarosa; ésteres de butilenglicol, tales como dicaprilato y dicaprato; ésteres de ácidos grasos tales como isoestearato de isopropilo, palmitato de isobutilo, estearato de isocetilo, laurato de isopropilo, laurato de hexilo, oleato de decilo, palmitato de cetilo, sebacato de di-n-butilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, estearato de isopropilo, estearato de butilo, miristato de butilo, linoleato de isopropilo, palmitato de 2-etilhexilo, cocoato de 2-etilhexilo, oleato de decilo, miristato de miristilo; escualeno; aceite de visón; lanolina y sus derivados; alcoholes de lanolina acetilados; derivados de silicona tales como ciclometicona, dimeticona o dimetilpolisiloxano; ingrediente marino Antarcticine® [INCI: Agua (Aqua), extracto de fermento de Pseudoalteromonas, caprililglicol], película molecular Xpertmoist® [INCI: glicerina, extracto de fermento de Pseudoalteromonas, goma xantana, prolina, alanina, serina, etilhexilglicerina, caprililglicol], péptido Bodyfensine® [INCI: aminohexanoato de acetil dipéptido-3], ingrediente marino Hyadisine® [INCI: extracto de fermento de Pseudoalteromonas] o péptido Diffuporine® [INCI: acetil hexapéptido-37] comercializados por Lipotec/Lubrizol; Amiporine® ER [INCI: glicerina, extracto de fruta de Punica granatum], HPS3® [INCI: extracto de tallo de Padina pavonica] o Biocomplejo de fitoaminas [INCI: extracto de Symphytum Officinale, extracto de semilla de Plantago ovata, proteína de trigo hidrolizada, glutamina, prolina, leucina, serina] comercializados por Alban Muller; Dermaclarine™ [INCI: proteína de huevo hidrolizada, proteasa] comercializada por Aqua Bio Technology; Bio-Plex NMF [INCI: PCA de sodio, ácido láctico, lactato de sodio, urea, aminoácidos de colágeno], DermaFlux® [INCI: urea, aminoácidos de levadura, trehalosa, inositol, taurina, betaína] o arroz rojo ReGeniStem™ [INCI: extracto de cultivo de callos de Oryza sativa (arroz) ozonizado] comercializados por Arch/Lonza; Hydralphatine™ Asia [INCI: hidrolizado de almidón hidrogenado, pantenol, extracto de brote Bambusa vulgaris, extracto de flor de Nelumbo nucifera, extracto de raíz de Nymphaea alba], Hydriame® [INCI: glicosaminoglicanos, goma de esclerotio], Hydraporine™ [INCI: betaína, lecitina hidrogenada, miel, pectina] o Exo-H™ [INCI: extracto de fermento de alteromonas] comercializados por Lucas Meyer Cosmetics/Unipex; PatcH²O™ [INCI: trehalosa, urea, serina, poliacrilato de glicerilo, algina, hialuronato de sodio, pululano] comercializado por BASF; Cellike [INCI: triglicérido caprílico/cáprico, fospatidilcolina hidrogenada, manteca de Butyrospermum parkii (karité), fitoesteroles, caprilato de glicerilo, ceramida NP] comercializado por BioSpectrum; Aquasense® [INCI: extracto de cáscara de Piptadenia colubrina Peel] comercializado por Chemyunion; DayMoist™ CLR [INCI: almidón de maíz hidrolizado, extracto de raíz de Beta vulgaris (remolacha)] comercializado por CLR; Hydranov [INCI: carragenina sódica, sal de mar] o Hidrasalinol [INCI: extracto de Salicornia herbacea, triglicérido caprílico/cáprico] comercializado por Codif; Marine Filling Spheres™ [INCI: tetraisoestearato de pentaeritritilo, dimetilsililato de sílice, condroitina sulfato de sodio, atelocolágeno] comercializado por Coletica/Engelhard/BASF; HyaCare® [INCI: hialuronato de sodio] o Skinmimics® [INCI: Cetearet-25, alcohol cetílico, ácido behénico, colesterol, ceramida N^p, ceramida NS, ceramida EOS, ceramida EOP, ceramida AP, caprooil fitoesfingosina, caprooil esfingosina] comercializados por Evonik; DS-Sphyngomielin M [INCI: esfingolípidos] comercializado por Doosan; Syn-Up™ [INCI: acetato de amidinobenzamida de bencilsulfonil D-seril homofenilalanina] comercializado por DSM; Aqualicia® [INCI: extracto de semillas de Acacia macrostachya hidrolizado] o Soline® [INCI: insaponificables de aceite de semilla de Helianthus annuus (girasol)] comercializados por Laboratoires Expanscience; Arct'Alg® [INCI: extracto de Chondrus crispus] o Glistin® [INCI: Glutamilamidoetil indol] comercializados por Exsymol; Bonicel™ [INCI: fermento de Bacillus] comercializado por Ganeden Biotech; Gatuline® Renew [INCI: extracto de yema de Cryptomeria Japonica] comercializado por Gattefosse; Biotilys® [INCI: lisado de fermento de Lactobacillus] comercializado por Greentech; Aqua Shuttle [INCI: sorbitol, extracto de Laminaria Digitata, tierra de diatomeas] comercializado por Infinitec; Aquarize™ IS [INCI: extracto de arroz hidrolizado] o Aqua-Osmoline™ [INCI: extracto de semilla de Ceratonia Siliqua (algarrobo)] comercializados por Vincience/ISP/Ashland; Aqu'activ™ [INCI: alcohol behenílico, oleato de glicerilo, cocamida MIpA], Hibiscin® HP [INCI: extracto de semilla de Hibiscus esculentus], Hyalurosmooth® [INCI: polisacárido de semilla de Cassia Angustifolia], Indinyl® CA [INCI: polisacárido de semilla de Cassia angustifolia], Irwinol® [INCI: octildodecanol, manteca de grano de Irvingia gabonensis, cocoglicéridos hidrogenados], Lipodermol® [INCI: octildodecanol, propionato de araquidilo, acetato de tocoferilo, palmitato de retinilo, linoleato de etilo, linolenato de etilo] o Seanamin® SU [INCI: sorbitol, extracto de algas, Chrondrus Crispus (carragenina), extracto de Fucus Vesiculosus, algina] comercializados por L. Serobiologiques/Cognis/BASF; Lipocare HA/EC [INCI: hialuronato de sodio, equinacina] comercializado por Lipochemicals; Hydro-Gain™ [INCI: aceite de canola, lecitina hidrogenada, aceite de semilla de Opuntia ficus-indica, extracto de corteza de Betula Alba] comercializado por Lipoid Kosmetik; RonaCare® RenouMer [INCI: extracto de algas] comercializado por Merck; AquaCacteen [INCI: extracto de tallo de Opuntia ficusindica], polvo de algas de las nieves [INCI: extracto de Coenochloris signiensis] o Trimoist KMF [INCI: estearoil lactilato de sodio, alcohol cetílico, aceite vegetal/aceite de Olus, acetato de tocoferilo, esteroles de Glycine soja (soja), carboximetilbetaglucano de sodio, lactato de sodio, carnosina, ácido láctico] comercializados por Mibelle; Alpaflor® Nectapure [INCI: extracto de flor/hoja de Thymus vulgaris (Tomillo), extracto de Buddleja davidii], Hyasol bT [INCI: hialuronato de sodio], Pentavitin® [INCI: isomerato de sacárido] o Phytaluronate® [INCI: goma de Ceratonia siliqua (Carob)] comercializados por Pentapharm/DSM; Hidromanil [INCI: goma de Caesalpinia spinosa hidrolizada, goma de Caesalpinia spinosa] comercializado por Provital; Aquarich® [INCI: extracto de semilla de Avena strigosa], CellActive®-Hydro [INCI: extracto de fruta de Pyrus Malus (manzana), pectina, fermento de proteína de Chlorella vulgaris/Lupinus albus], CellActive®-Men [INCI: taurina, fermento de proteína de Chlorella vulgaris/Lupinus albus, extracto de raíz de Acanthopanax Senticosus (eleutero)], Hydractin®-LMF [INCI: extracto de rizoma de Polypodium vulgare, extracto de tallo de Cetraria islandica (musgo de Islandia),extracto de Sphagnum magellanicum], Myramaze® [INCI: extracto de Myrothamnus flabellifolia, ácido ascórbico] o Reforcyl® [INCI: glutamina, decil glucósido, alcohol fenetílico, extracto de flor/hoja/tallo de Cistus incanus, extracto de tallo/hoja de Gynostemma pentaphyllum] comercializados por Rahn; Aqualance™ [INCI: eritritol, homarina HCI], Hydraprotectol™ [INCI: polimetacrilato de glicerilo, ácido aleurítico, extracto de levadura (Faex), glicoproteína], Moist 24™ [INCI: extracto de raíz de Imperata cylindrica], Optim Hyal™ [INCI: extracto de levadura hidrolizado, cetil hidroxietilcelulosa, ácido poliglucurónico], OSMOCIDE® 4 [INCI: glicerina, crospolímero de acrilatos/acrilato de alquilo C10-30], Renovage™ [INCI: triglicérido caprílico/cáprico, teprenona], Revidrate™ [INCI: etilhexil palmitato, oleato de sorbitán, laureato de sorbitán, ácido fosfónico miristil malato], Subliskin™ [INCI: filtrado de fermento de Sinorhizobium meliloti, cetilhidroxietilcelulosa] comercializados por Sederma/Croda; Aquaxyl™ [INCI: xilitilglucósido anhidroxilitol, xilitol] o Sepicalm™ S [INCI: cocoil aminoácidos de sodio, sarcosina, aspartato de potasio, aspartato de magnesio] comercializados por Seppic; Cohesium® [INCI: extracto de raíz de Ophiopogon japonicus] comercializado por Silab; Hydreís [INCI: betaglucano hidrolizado], Hydrintense [INCI: extracto de Porphyridium Cruentum] o RenovHyal [INCI: hialuronato de sodio] comercializado por Soliance; SymLift™ [INCI: trehalosa, betaglucano, extracto de semilla de Hordeum vulgare, hialuronato de sodio] comercializados por Symrise; vaselina; aceite mineral; ceras minerales y sintéticas; cera de abejas (cera alba); parafina; o ceras y aceites de origen vegetal tal como cera de candelilla (Euphorbia cerífera), cera de carnauba (Copernicia cerífera), manteca de karité (Butirospermum parkii), manteca de cacao (Theobroma cacao), aceite de ricino (Ricinus communis), aceite de girasol (Helianthus annuus ), aceite de oliva (Olea europaea), aceite de coco (Cocos nucifera), aceite de palma (Elaeis guineensis), aceite de germen de trigo (Triticum vulgare), aceite de almendras dulces (Prunus amygdalus dulces), aceite de semilla de rosa almizclera (Rosa moschata), aceite de soja silvestre (Glycine soja), aceite de semilla de uva (Vitis vinifera), aceite de caléndula (Calendula officinalis), aceite de jojoba (Simmonsis chinensis), aceite de mango (Mangifera indica), aceite de aguacate (Persea gratissima), entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición de la invención puede comprender al menos un compuesto adicional con propiedades antiedema y que mejoran la permeabilidad/microcirculación vascular, por ejemplo, y no limitado a, elegido de ingrediente marino Eyedeline™ [INCI: butilenglicol, agua (aqua), extracto de plancton], péptido Eyeseryl® [INCI: Agua (Aqua), butilenglicol, acetil tetrapéptido-5] comercializado por Lipotec/Lubrizol; Legactif [INCI: extracto de raíz de Ruscus aculeatus, extracto de cáscara de Citrus limon (limón), extracto de Solidago virgaurea (vara de oro)] comercializado por Provital; Legance™ [INCI: extracto de Zingiber zerumbet] y Eyeliss [INCI: hesperidin metil calcona, dipéptido-2, palmitoil tetrapéptido-7] comercializados por Sederma/Croda; Silidine® [INCI: exudado de Prophyridium cruentum] comercializado por Greentech; Biophytex [INCI: escina, extracto de raíz de Ruscus aculeatus, glicirrizato de amonio, extracto de Centella asiatica, proteína de levadura hidrolizada, extracto de flor de Calendula officinalis] comercializado por L. Sérobiologiques/Cognis/BASF; Cytobiol Lumin-Eye [INCI: niacinamida, extracto de corteza de Franxius excelsior, citrato de potasio de silanetriol] comercializado por Gattefosse; Regu®-Age [INCI: proteína de arroz hidrolizada, óxido reductasas, proteína de Glycine soja (soja)] comercializado por DSM; AC Dermapeptide Warming PF [INCI: Lactobacillus/ extracto de fermento de fruta de Capsicum frutescens, Leuconostoc/filtrado de fermento de raíz de rábano] comercializado por Active Concepts; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición cosmética o farmacéutica de esta invención puede comprender una cantidad cosmética o farmacéuticamente eficaz de al menos un compuesto que mejora el metabolismo energético celular, revitaliza, vigoriza, aumenta el estado energizante de las células o aumenta el nivel de energía o la producción de ATP en las células, por ejemplo y no limitado a, elegido entre Chondricare™ IS biofuncional [INCI: agua, propanodiol, hexapéptido-42] comercializado por Ashland; Pepha®-ctive [INCI: agua, extracto de algas] o Revitalin® P^f[INCI: glicoproteínas, ácido glutámico, valina, treonina] comercializado por DSM; Chronodyn™ [INCI: extracto de Euglena gracilis, glicerina] comercializado por Sederma; Sepitonic™ M3 [INCI: aspartato de magnesio, gluconato de zinc, gluconato de cobre] comercializado por Seppic; OvernightEnhance [ MJ+C] [INCI: extracto de callo de Mirabilis jalapa] comercializado por Naolys; Signaline™ S [INCI: aceite de fruta de Olea europea (oliva), extracto de semilla de Simmondsia chinensis (jojoba)] comercializado por Ashland; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición de la invención puede comprender al menos un compuesto adicional con propiedades antifatiga para mejorar las condiciones de la piel, o un agente para mejorar el aspecto y la vitalidad de la piel al mejorar la apariencia de ojeras, rasgos cansados, cutis apagado, pérdida de tono y sequedad, por ejemplo, y no limitado a, elegido de ingrediente funcional Vilastene™ [INCI: agua (aqua), lisina HCl, lecitina, caprililglicol, fenoxietanol, tripéptido-10, citrulina, carbomer, hidróxido de sodio] o ingrediente funcional dGlyage® [INCI: agua (agua), propanodiol, lisina HCl, lecitina, fenoxietanol, tripéptido-9 citrulina] comercializados por Lipotec/Lubrizol; StimulHyal [INCI: cetogluconato de calcio] comercializado por Soliance; CELLACTIVE® VIP [INCI: agua, fermento de proteína de Chlorella vulgaris/Lupinus albus, jugo de Ananas sativus, extracto de Rosmarinus officinalis] comercializado por Rahn; Chronodyn™ [INCI: extracto de Euglena gracilis, glicerina] comercializado por Sederma; Circagenyl® [INCI: extracto de raíz de Lindera strychnifolia] comercializado por Silab; Life Oléobooster® [INCI: aceite de semilla de Brassica Campestris (y) poligliceril-3-diisoestearato (y) extracto de Stevia rebaudiana (y) extracto de Cistus monspeliensis] comercializado por Hallstar; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición puede comprender además un depurador de especies de carbonilo reactivo, depuradores de radicales libres y/o agente antiglicación, agente desintoxicante, agente antioxidante y/o anticontaminación, por ejemplo, y no limitado a, del grupo formado por carnosina y sus derivados, GHK [INCI: tripéptido-1], Quintescine IS [INCI: dipéptido-4] o Blumilight™ Biofunctional [INCI: Agua/Aqua (y) butilenglicol (y) extracto de semillas de Theobroma cacao (Cocoa)] comercializado por Vincience/ISP/Ashland; Melitane [INCI: dextrano, acetil hexapéptido-1], Homeoxi [INCI: extracto de Enteromorpha compressa, Palmaria palmata] o Lanatellis [INCI: extracto de Chrysantellum indicum, extracto de hojas de Camellia sinensis] o Exo-P™ [INCI: agua (y) butilenglicol (y) filtrado de fermento de alteromonas] comercializados por Atrium Innovations/Lucas Meyer Cosmetics; Protectan [INCI: lisado de fermento de Lactococcus] comercializado por CLR; Phycosaccharide [INCI: algina hidrolizada, sulfato de magnesio, sulfato de manganeso] o Algowhite [INCI: extracto de Ascophyllum nodosum] comercializados por Codif; Preregen [INCI: proteína de Glycine soja (soja), óxido reductasas], Edelweiss GC [INCI: extracto de Leontopodium alpinum], Lipogard [INCI: Escualano, ubiquinona], Nectapure [INCI: extracto de Buddleja davidii, extracto de Thymus vulgaris], Alpaflor Nectapure [INCI: extracto de Buddleja davidii, extracto de Thymus vulgaris] o Dismutin-BT [INCI: superóxido dismutasa] comercializados por Pentapharm/DSM; TEGO Turmerone [INCI: Extracto de Curcuma longa] comercializado por Evonik Goldschmidt; Hierogaline [INCI: insaponificables de aceite de germen de Triticum vulgare (trigo), insaponificables de aceite de Sesamum indicum (sésamo)] comercializado por Expanscience Laboratoires; Glistin [INCI: glutamilamidoetil indol], Glutrapeptide [INCI: piroglutamidoetil indol], Algisium C [INCI: manuronato de metilsilanol], Silysin C [INCI: lisinato de silanotriol], Exsy-Arl [INCI: prolinamidoetil] o OTZ-10 [INCI: oxotiazolidina] comercializados por Exsymol; Gatuline Skin-Repair Bio [INCI: extracto de flor/hoja/tallo de Onopordum acanthium] comercializado por Gattefosse; péptido Preventhelia® [INCI: diaminopropionoil tripéptido-33], ingrediente funcional Aldenine® [INCI: proteína de trigo hidrolizada, proteína de soja hidrolizada, tripéptido-1], molécula sintética Lipochroman® [INCI: dimetilmetoxi cromanol], péptido Thermostressine® [INCI: acetil tetrapéptido-22], péptido Bodyfensine® [INCI: aminohexanoato de acetil dipéptido-3] o ingrediente funcional Pollushield™ [INCI: diisopropil adipato, lecitina, copolímero de ácido acrílico/ácido acrilamidometil propano sulfónico, dimetilmetoxicromanol/goma xantana] comercializados por Lipotec/Lubrizol]; Setiline [INCI: extracto de semilla de Trigonella foenum-graecum hidrolizado] o PhytoBioactive Soliberine [INCI: agua, propanodiol, extracto de flor de Buddleja officinalis] comercializado por Greentech; Sunactyl [INCI: manitol, extracto de Pisum sativum, histidina HCI, arginina, ciclodextrina, dextrina, extracto de levadura, acetil trisoína, piridoxina HCI, extracto de corteza de Khaya senegalensis, nicotinamida, dinucleótido adenina, succinato disódico, ácido aspártico] Imidinyl [INCI: polisacárido de semilla de Tamarindus indica], Phystrogene [INCI: extracto de Malva sylvestris (Malva), goma xantana] o Purisoft [INCI: extracto de semilla de Moringa pterogysperma] comercializados por BASF; AquaCacteen [INCI: extracto de tallo de Opuntia ficus indica], Trimoist (KMF) [INCI: estearoil lactilato de sodio, alcohol letílico, aceite vegetal, acetato de tocoferilo, esterol de Glycine Soja, lactato de sodio, barboximetil betaglucano de sodio, carnosina], MelanoBronze [INCI: extracto de Agnus castus Vitex (extracto de bayas de pimienta de monje (fitoendorfinas)), acetiltirosina], CM-Glucano [INCI: carboximetilbetaglucano de sodio], SunActin [INCI: extracto de brotes de Helianthus annuus (girasol), tocoferoles, lecitina], piel GSP-T [INCI: aceite de ricino hidrogenado PEG-40, extracto de semilla de Vitis vinifera (uva)] o detoxofano [INCI: extracto de brote de Lepidium sativum, lecitina] comercializados por Mibelle Biochemistry; Bacocalmina [INCI: PEG-8, extracto de Bacopa monniera, hidroxietilcelulosa], Kombuchka [INCI: fermento de té negro Saccharomyces/Xylinum, hidroxietilcelulosa], Citystem [INCI: glicerina, extracto de Marrubium vulgare] o Prodizia [INCI:: extracto de Albizia Julibrissin] comercializados por Sederma/Croda; Extramel C [INCI: crospolímero de hidroxipropiltrimonio maltodextrina, extracto de fruta de Cucumis melo (melón)] comercializado por Seppic; Defensine [INCI: extracto de germen de Triticum vulgare], Antiglyskin [INCI: extracto de semilla de Helianthus annuus], Apolluskin® [INCI: extracto de Taraxacum officinale (diente de león)] o Detoxyl® [INCI: agua, butilenglicol, extracto de residuo seco de Butyrospermum parkii (manteca de karité)] comercializados por Silab; ATP 23 [INCI: azeloil tetrapéptido-23] comercializado por Sinergia; Glycofilm [INCI: goma de biosacáridos-4] comercializado por Solabia; AC Cinnamon Liposome [INCI: agua, extracto de corteza de Cinnamomum cassia, fosfolípidos, fermento de Lactobacillus], AC Moisturezyme Protect [INCI: extracto de fruta Citrus sinensis (naranja), extracto de hoja de Aloe barbadensis], ACB Mushroom Extract SM PF [INCI: Lactobacillus/extracto de Ganoderma lucidum (hongo Reishi)/filtrado de fermento de extracto Lentinus edodes (hongo Shiitake) y fermento de actobacillus], ACB Olive Leaf Extract PF [INCI: Lactobacillus/Extracto de fermento de hoja de olivo], ACB Purslane Bioferment PF [INCI: Lactobacillus/extracto de fermento de Portulaca oleracea, Leuconostoc/Filtrado de fermento de raíz de rábano], ACB Tomato Bioferment PF [INCI: Lactobacillus/extracto de fermento de fruta de tomate, Leuconostoc/filtrado de fermento de raíz de rábano] o A^cRoyal Jelly Extract [INCI: butilenglicol, ácido 10-hidroxidocanoico, ácido sebácico, 1,10-decanodiol] comercializados por Active Concepts; Citruskin [INCI: extracto de fruta de Citrus reticulata, propanodiol] o Paradisyl [INCI: extracto de fruta de Citrus paradisi, propanodiol] comercializados por Biolie.; Sens'flower [INCI: propanodiol, agua, extracto de flor de Crocus sativus, benzoato de sodio, sorbato de potasio] comercializado por ID Bio; Crodarom Elfe Flower [INCI: glicerina, agua, Epimedium grandiflorum] o Phytessence Peach Flower [INCI: glicerina, agua, extracto de flor de Prunus persica] comercializado por Crodarom; Lingostem [INCI: agua, glicerina, extracto de fruta de Vaccinium vitis-idaea, goma xantana, benzoato de sodio, ácido cítrico, gluconolactona, gluconato de calcio] comercializado por Provital; Peppermint LG [INCI: glicerina, agua, extracto de hojas de Mentha piperita] comercializado por Naturex; Radicare [INCI: agua, extracto de hojas de Melissa officinalis] comercializado por RAHN; Refine Ginger [INCI: extracto de células de hojas de Zingiber officinale] comercializado por Naolys; Spechwhite 02 [INCI: glucósido de ascorbilo] o Spechwhite 04 [INCI: feniletil resorcinol] comercializado por Spechchem; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición de la invención puede comprender además un compuesto para mejorar la función de barrera de la piel, o un agente que contrarresta la sequedad de la piel mediante una reducción de la pérdida transepidérmica de agua (TEWL), o un agente que protege la integridad de las capas de células de la piel, o un agente que mejora la barrera lipídica o de defensa de la piel, por ejemplo, y no limitado a, elegido de péptido Fensebiome™ [INCI: acetil heptapéptido-4], ingrediente marino Antarcticine® [INCI: agua (aqua), extracto de fermento de Pseudoalteromonas, caprililglicol] o péptido Delisens™ [INCI: butilenglicol, agua (aqua), ácido cítrico, acetil hexapéptido-49] comercializados por Lipotec/Lubrizol; Indufence® [INCI: extracto de Alisma plantago-aquatica], Vederine® [INCI: extracto de raíz de Cichorium intybus (achicoria)], Pro-Lipiskin® [INCI: extracto de Pichia anomala] o Nerenyl® [INCI: hidrolizado de sacáridos] comercializado por Silab; ProRenew Complex [INCI: lisado de fermento de Lactococcus] o PhytoDefense CLR™ [INCI: aceite de Glycine soja (soja), éter de dicaprililo, extracto de corteza de Magnolia grandiflora, alcohol laurílico] comercializados por CLR; ProSynergen™ DF [INCI: Lactobacillus/filtrado de extracto de fermento de Ulkenia amoeboidea] o NAB® Rhodiola Extract [INCI: extracto de raíz de Rhodiola rosea] comercializados por Lonza; Skinmimmics® [INCI: cetearet-25, glicerina, alcohol cetílico, ácido behénico, colesterol, ceramida NP, ceramida NS, ceramida EOS, ceramida EOP, ceramida AP, caprooil fitosfingosina, caprooil esfingosina] comercializado por Evonik; PytoCellTec™ Alp Rose [INCI: extracto de cultivo celular de hojas de Rhododendron ferrugineum, isomalt, lecitina, benzoato de sodio, ácido láctico, agua/agua] o MAXnolia [INCI: extracto de corteza de Magnolia officinalis, Vitis vinifera/extracto de semilla de Vitis vinifera (uva), tocoferol] comercializado por Mibelle; Stratixyl™ [INCI propuesto: aqua/agua, glicerina, proteína de maíz hidrolizada] comercializado por Ashland; Rubixyl® [INCI sugerido: glicerina, agua, hexapéptido] comercializado por Induchem; The Skin Maker® [INCI: palmitoil heptapéptido-27, palmitoil oligopéptido-78, copolímero de ácido láctico/ácido glicólico, alcohol polivinílico, palmitoil octapéptido-24] comercializado por Infinitec; Venuceane™ [INCI: fermento de Thermus thermophillus] o Calmosensine™ [INCI: éster cetílico de acetil dipéptido-1] o Pacifeel™ [INCI: extracto de Mirabilis jalapa] comercializados por Sederma/Croda; Aquaxtrem™ [INCI: extracto de raíz de Rheum rhaponticum] o Polyplant® Epithelizing (Provital) [INCI: Calendula officinalis, Hypericum perforatum, Chamomilla recutita, Rosmarinus officinalis] comercializados por Provital; Cytokinol® LS 9028 [INCI: caseína hidrolizada, proteína de levadura hidrolizada, lisina HCl] o Skinasensyl™ [INCI: acetil tetrapéptido 15] comercializado por L. Sérobiologiques/Cognis/BASF; Symbiocell™ [INCI: extracto de Cestrum Latifolium] o Deliner® [INCI: extracto de grano de Zea mays (maíz)] comercializado por BASF; Alpaflor® Imperatoria a O [INCI: extracto de hojas de Peucedanum ostruthium] o OXY 229-BT [INCI: lisado de Saccharomyces] comercializados por Pentapharm/DSM; Drieline™ [INCI: hidrolizado de almidón hidrogenado, extracto de levadura] comercializado por Lucas Meyer; Gatuline® Derma-Sensitive [INCI: miristato de octildodecilo, extracto de fruta de Capparis spinosa] o Neoskin™ [INCI: extracto de corteza de Mimosa Tenuiflora] comercializado por Gattefosse; SymPeptide™ 222 [INCI: miristoil pentapéptido-8], SymSitive® 1609 [INCI: 4 t butilciclohexanol], SymPeptide™ 225 [INCI: miristoil pentapéptido-11] o SymPeptide™ 230 [INCI: miristoil pentapéptido-4] comercializados por Symrise; Neutrazen™ [INCI: dextrano, palmitoil tripéptido 8] comercializado por Atrium; Meliprene® [INCI: dextrano, acetil heptapéptido 1] comercializado por Institut Européen de Biologie Cellulaire; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

La composición de la invención puede comprender además al menos un compuesto que puede producir un efecto antienvejecimiento debido a la modulación de la actividad de los complejos mitocondriales, mejorar la funcionalidad de las mitocondrias con la edad o proteger contra el envejecimiento de la piel debido a una mejora de la actividad del complejo mitocondrial II, o reducir la actividad del complejo mitocondrial I, por ejemplo y no limitado a, elegido de Peptide Q10™ Biofuncional [INCI: trifluoroacetato de pentapéptido-34] o Dynachondrine™ ISR [INCI: glicerina, proteína de soja hidrolizada, agua, benzoato de sodio, sorbato de potasio] comercializado por Ashland; Neodermyl® [INCI: glicerina, agua, metilglucósido fosfato, lisinato/prolinato de cobre] comercializado por Induchem; Riboxyl™ [INCI: ribosa] comercializado por Lucas Meyer; Juvinity™ [INCI: triglicérido caprílico/cáprico, geranilgeranilpropanol] comercializado por Sederma; SEAVIE® [INCI: agua, extracto de Fucus serratus] comercializado por Gelyma; EARLY BOOST PA [INCI: glicerina, agua, extracto de Jania rubens, carragenina de sodio, alcohol fenetílico] comercializado por CODIF; SlRTALlCE™ [INCI: fermento de Bacillus] comercializado por Lipotrue; entre otros, y/o mezclas de los mismos.

Las composiciones de la invención pueden usarse en cualquiera de las aplicaciones o usos analizados anteriormente bajo el título "Aplicaciones".

La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplos

Metodología general

Todos los reactivos y solventes son de calidad de síntesis y se usan sin tratamiento adicional.

Abreviaturas

Las abreviaturas usadas para los aminoácidos siguen las recomendaciones de la IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclatura de 1983 descritas en Eur. J. Biochem. (1984) 138:9-37.

(R), resina; 2-CITrt-(R), resina de 2-clorotritilo; Ac, acetilo; AcOH, ácido acético; Ala, alanina; AM, ácido 2-[4-aminometil-(2,4-dimetoxifenil)] fenoxiacético; Arg, arginina; Asn, asparagina; Asp, ácido aspártico; Boc, tercbutiloxicarbonilo; DCM, diclorometano; DIEA, N,N '-diisopropiletilamina; DIPCDI, NN'-diisopropilcarbodiimida; DMF, N,N-dimetilformamida; ESI-MS, espectrometría de masas de ionización por electropulverización; Fmoc, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo; Gln, glutamina; Glu, ácido glutámico; Gly, glicina; His, histidina; HOBt, 1-hidroxibenzotriazol; HPLC, cromatografía líquida de alta resolución; Ile, isoleucina; KOH, hidróxido de potasio; Leu, leucina; Lys, lisina; MBHA, p-metilbenzhidrilamina; MeCN, acetonitrilo; MeOH, metanol; Met, metionina; Myr, miristoilo; Palm, palmitoilo; Pbf, 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo; Pro, prolina; Ser, serina; tBu, tercbutilo; TFA, ácido trifluoroacético; Thr, treonina; Trt, tritilo; Val, valina.

Síntesis química

Todos los procesos de síntesis se llevan a cabo en jeringas de polipropileno provistas de discos de polietileno poroso. Todos los reactivos y solventes son de calidad de síntesis y se usan sin ningún tratamiento adicional. Los solventes y reactivos solubles se eliminan por succión. El grupo Fmoc se elimina con piperidina-DMF (2:8, v/v) (1 x 1 min, 1 x 5 min, 5 ml/g de resina) /Lloyd-Williams P. y otros (1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton (FL, EE. UU.)]. Los lavados entre las etapas de desprotección, acoplamiento y, nuevamente, desprotección, se llevan a cabo con DMF (3 x 1 min) cada vez mediante el uso de 10 ml de solvente/g de resina. Las reacciones de acoplamiento se realizan con 3 ml de solvente/g de resina. El control de los acoplamientos se realiza al llevar a cabo la prueba de ninhidrina /Kaiser E. y otros, Anal. Biochem. (1970), 34: 595-598] o la prueba de cloranilo /Christensen T., Acta Chem. Scand., (1979), 33B, 763-766]. Todas las reacciones de síntesis y los lavados se llevan a cabo a 25 °C.

Algunos aminoácidos se usan con sus grupos funcionales en las cadenas laterales protegidos. Los grupos protectores usados son:

• Boc, terc-butiloxicarbonilo para los aminoácidos Lys y Trp;

• Pbf, 2,2,4,6,7-pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonilo para el aminoácido Arg; y

• Trt, tritilo para los aminoácidos Gln e His.

El análisis cromatográfico por HPLC se lleva a cabo con un equipo Shimadzu (Kyoto, Japón) mediante el uso de una columna de fase inversa termostatizada a 30 °C (50 x 4,6 mm, Kromasil C18, 3,5 pm, Akzo Nobel, Suecia). La elución se lleva a cabo mediante el uso de un gradiente de acetonitrilo (+TFA al 0,07 %) en agua (+TFA al 0,1 %) a un régimen de flujo de 1,6 ml/min y la detección se lleva a cabo a 220 nm. La espectrometría de masas de ionización por electropulverización se lleva a cabo en un detector WATERS Alliance ZQ 2000 mediante el uso de una mezcla de MeCN:H²O 4:1 (+TFA al 0,1 %) como fase móvil y un régimen de flujo de 0,3 ml/min.

Ejemplo 1

Obtención de H-AAg-O-2-C/Trt-(R), en donde AAg es L-Pro.

Los pesos se han normalizado. 3,2 mmol (1 equiv) de Fmoc-L-Pro-OH, disuelto en 20 ml de DCM, al que se le añaden 0,83 equiv de DIEA, se acopla sobre resina de 2-clorotritilo seca (3,2 mmol) con una funcionalización de 1,6 mmol/g. La mezcla se agita durante 5 min, después de lo cual se añaden 1,63 equiv de DIEA. Se deja reaccionar la mezcla durante 40 min. Los grupos cloruro restantes se bloquean mediante tratamiento con 2 ml de MeOH.

Ejemplo 2

Obtención de Fmoc-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-O-2-C/Trt-(R), en donde AA¹es L-Phe; AA²es L-Trp; AA³es L-Met; AA⁴es L-Lys; AA⁵es L-Arg; AAe es L-Lys; AA⁷es Arg; AA8 es L-Val; AA⁹es L-Pro.

Los pesos se han normalizado. Se lavan 76 mg de resina H-L-Pro-O-2-Cl-Trt con una funcionalización de 1,19 mmol/g (0,09 mmol) como se describe en los métodos generales. De acuerdo con los protocolos descritos, se acoplan 5 equiv de Fmoc-Val-OH (Fmoc-AAs-OH) sobre las resinas de peptidilo en presencia de 5,5 equiv de DIPCDI y 5 equiv de HOBt mediante el uso de DMF como solvente durante ^{6 0}minutos.

A continuación, se lava la resina como se describe en los métodos generales y se repite el tratamiento de desprotección del grupo Fmoc para acoplar el siguiente aminoácido. De acuerdo con los protocolos descritos anteriormente, se acoplan 5 equiv de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AAz-OH) sobre las resinas de peptidilo en presencia de 5,5 equiv de DIPCDI y 5 equiv de HOBt mediante el uso de DMF como solvente durante 60 minutos. A continuación, se lava la resina como se describe en los métodos generales y se repite el tratamiento de desprotección del grupo Fmoc para acoplar el siguiente aminoácido. De acuerdo con los protocolos descritos anteriormente, las etapas de acoplamiento, lavado y desprotección se repiten para acoplar secuencialmente 5 equiv de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA6-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA⁵-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA⁴-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Met-OH (Fmoc-AA³-OH); y 5 equiv de Fmoc-L-Trp(Boc)-OH (Fmoc-AA²-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Phe-OH (Fmoc-AAi-OH); cada uno de ellos en presencia de 5 equiv de HOBt y 5,5 equiv de DIPCDI durante la etapa de acoplamiento.

Después de la síntesis, la resina de peptidilo se lava con DCM (3 x 1 min).

Todos los péptidos que se muestran en la Tabla 5 podrían sintetizarse de acuerdo con el protocolo descrito en este ejemplo.

Tabla 5

Ejemplo 3

Obtención de Fmoc-Wm-Xn-AAi-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-AM-MBHA-(R), en donde AAi es L-Phe; AA²es L-Trp; AA³es L-Met; AA⁴es L-Lys; AA⁵es L-Arg; AAe es L-Lys; AA⁷es Arg; AA8 es L-Val; AA⁹es L-Pro; y m, n, p y q son cada uno 0

Los pesos se han normalizado. Se tratan 240 mg (0,12 mmol) de resina Fmoc-AM-pMBHA con una funcionalización de 0,51 mmol/g con piperidina:DMF de acuerdo con el protocolo general descrito para eliminar el grupo Fmoc. Se incorporan 5 equiv de Fmoc-L-Pro-OH (Fmoc-AAg-OH) sobre la resina desprotegida en presencia de 5,5 equiv de DIPCDI y 5 equiv de HOBt mediante el uso de DMF como solvente durante 1 hora.

A continuación, se lava la resina como se describe en los métodos generales y se repite el tratamiento de desprotección del grupo Fmoc para acoplar el siguiente aminoácido. De acuerdo con los protocolos descritos anteriormente, se acoplan secuencialmente 5 equiv de Fmoc-Val-OH (Fmoc-AA8-OH); y subsecuentemente 5 equiv de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA⁷-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA6-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH (Fmoc-AA⁵-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Lys(Boc)-OH (Fmoc-AA⁴-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Met-OH (Fmoc-AA³-OH); 5 equiv de Fmoc-L-Trp(Boc)-OH (Fmoc-AA²-OH); y finalmente 5 equiv de Fmoc-L-Phe-OH (Fmoc-AA-i-OH) en presencia de 5 equiv de HOBt y 5,5 equiv de DIPCDI en cada etapa de acoplamiento.

Después de la síntesis, la resina de peptidilo se lava con DCM (3 x 1 min).

Todos los péptidos mostrados en la Tabla 6 podrían sintetizarse de acuerdo con el protocolo descrito en este ejemplo.

Tabla 6

Ejemplo 4

Proceso general para la eliminación del grupo protector Fmoc N-terminal.

El grupo Fmoc N-terminal de las resinas de peptidilo obtenidas en los ejemplos 1, 2 y 3 se desprotege como se describe en los métodos generales (20 % de piperidina en DMF, 1 x 1 min 1 x 5 min). Las resinas de peptidilo se lavan con DMF (5 x 1 min), DCM (3 x 1 min), éter dietílico (3 x 1 min) y se secan al vacío.

Ejemplo 5

Proceso para introducir el grupo palmitoilo R¹en las resinas de peptidilo obtenidas en el Ejemplo 4.

Se añaden 180 mg (0,7 mmol; 5 equiv) o 154 mg (0,6 mmol, 5 equiv) de ácido palmítico disuelto previamente en DMF (1 ml) sobre 0,14 mmol o 0,12 mmol respectivamente de cada una de las resinas de peptidilo obtenidas en el Ejemplo 4, en presencia de 107 mg (0,7 mmol; 5 equiv) o 92 mg (0,6 mmol, 5 equiv) de HOBt y 127 pl de DIPCDI (0,77 mmol; 5,5 equiv) o 102 |jl (0,66 mmol, 5,5 equiv) de DIPCDI. Se deja reaccionar la mezcla durante 3 horas, después de lo cual la resina se lava con DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), éter dietílico (3 x 1 min) y se seca al vacío.

Ejemplo 6

Proceso de introducción del grupo acetilo Ri en las resinas de peptidilo obtenidas en el Ejemplo 4.

Se tratan 0,12 mmol o 0,14 mmol de las resinas de peptidilo obtenidas en el Ejemplo 4 con 25 equiv de anhídrido acético en presencia de 25 equiv de DIEA mediante el uso de 2 ml de DMF como solvente. Se deja reaccionar la mezcla durante 30 min, después de lo cual la resina se lava con DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), éter dietílico (3 x 1 min) y se seca al vacío.

Ejemplo 7

Proceso de escisión del soporte polimérico de las resinas de peptidilo obtenidas en los Ejemplos 4, 5 y 6.

Cada una de las resinas de peptidilo secas obtenidas en los Ejemplos 4, 5 y 6 se tratan con 3 ml de TFA:H²O (95:5, v/v) durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación. A continuación, se filtran a través de una jeringa de polipropileno equipada con discos de polietileno poroso. El filtrado se recolecta sobre 20 ml de éter dietílico frío y se lava 5 veces con 10 ml de éter dietílico. El precipitado final se seca al vacío.

Se obtienen, de acuerdo con este método, péptidos de fórmula general RrWm-Xn-AA-i-AA²-AA³-AA⁴-AA⁵-AA⁶-AA⁷-AA8-AAg-Yp-Zq-OH o R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AA9-Yp-Zq-NH2, en donde R¹es H, acetilo o palmitoilo, y m, n, p y q son cada uno 0.

Los análisis por HPLC de los péptidos obtenidos en gradientes de MeCN (+TFA al 0,07 %) en H²O (+TFA al 0,1 %) muestran una pureza superior al 80 % en todos los casos. La identidad de los péptidos obtenidos se confirma mediante ESI-Ms .

Ejemplo 8

Proceso de escisión del soporte polimérico y funcionalización con amina sustituida R²: Obtención de H-Wm-Xn-AA¹-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-Yp-Zq-NH-(CH2)5-CH3, en donde AA¹es L-Phe; AA²es L-Trp; AA³es L-Met; AA⁴es L-Lys; AA⁵es L-Arg; AAe es L-Lys; AA⁷es L-Arg; AA8 es L-Val; AA⁹es un enlace o L-Pro; y m, n, p y q son cada uno 0.

Los péptidos H-Wm-Xn-AA¹-AA²-AA³-AA⁴-AA⁵-AA⁶-AA⁷-AA⁸-AAg-Yp-Zq-OH con cadenas laterales totalmente protegidas se obtienen al tratar 299 mg de la resina de peptidilo H-Wm-Xn-AA-i-AA²-AA³-AA⁴-AA⁵-AA⁶-AA⁷-AA⁸-AAg-Yp-Zq-O-2-ClTrt-(R) obtenida en el Ejemplo 4, que se desecan previamente al vacío en presencia de KOH. Se tratan con 2,03 ml de AcOH durante 2 horas, la fase líquida se separa mediante filtración. Se recolecta el filtrado y después se lava la resina con 1 ml de AcOH (1 x 1 min). Todas las fases líquidas se combinan y se liofilizan.

Se pesan 0,03 mmol del péptido crudo obtenido en un matraz y se añaden 3 equiv de hexilamina. HOBt y 2 ml de DMF anhidra. Se añaden 4 equiv de DIPCDI y se deja reaccionar con agitación magnética a 47 °C. La reacción se monitorea por HPLC hasta la desaparición de los productos iniciales y se completa después de 2-4 horas. Los solventes se evaporan hasta la sequedad y se evaporan conjuntamente dos veces con DCM. El residuo obtenido se disuelve en 4 ml de una mezcla de TFA:H²O (95:5, v/v) y se deja reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente. Se añaden 30 ml de éter dietílico frío, el precipitado se lava 2 veces con éter dietílico. El residuo se disuelve en una mezcla de MeCN en H²O (v/v) y se liofiliza.

Los análisis por HPLC de los péptidos obtenidos en gradientes de MeCN (+TFA al 0,07 %) en H²O (+TFA al 0,1 %) muestran una pureza superior al 80 % en todos los casos. La identidad de los péptidos obtenidos se confirma mediante ESI-M^s.

Ejemplo 9

Proceso de escisión del soporte polimérico y funcionalización con amina sustituida R²: Obtención de H-Wm-Xn-AA1AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-Yp-Zq-NH-(CH2)15-CH3, en donde AA¹es L-Phe; AA²es L-Trp; AA³es L-Met; AA⁴es L-Lys; AA⁵es L-Arg; AAe es L-Lys; AA⁷es L-Arg; AA8 es L-Val; AA⁹es un enlace o L-Pro; y m, n, p y q son cada uno 0.

El péptido H-Wm-Xn-AA¹-AA²-AA³-AA⁴-AA⁵-AA⁶-AA⁷-AA⁸-AA⁹-Yp-Zq-OH con cadenas laterales totalmente protegidas se obtiene al tratar 299 mg de cada una de las resinas H-Wm-Xn-AA¹-AA²-AA³-AA⁴-AA⁵-AA⁶-AA⁷-AA⁸-AA⁹-Yp-Zq-O-²-ClTrt-(R) del Ejemplo 4, que se desecan previamente al vacío en presencia de KOH. Se tratan con 2,03 ml de AcOH durante 2 horas, la fase líquida se separa mediante filtración. Se recolecta el filtrado y después se lava la resina con 1 ml de AcOH (1 x 1 min). Todas las fases líquidas se combinan y se liofilizan.

Se pesan 0,03 mmol del péptido crudo obtenido en un matraz y se añaden 3 equiv de hexilamina.HOBt y 2 ml de DMF anhidra. Se añaden 2 equiv de DIPCDI y se deja reaccionar con agitación magnética a 47 °C. La reacción se monitorea por HPLC hasta la desaparición de los productos iniciales y se completa después de 2-4 horas. Los solventes se evaporan hasta la sequedad y se evaporan conjuntamente dos veces con DCM. El residuo obtenido se disuelve en 54 ml de una mezcla de TFA:H²O (95:5, v/v) y se deja reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente. Se añaden 30 ml de éter dietílico frío, el precipitado se lava 2 veces con éter dietílico. El residuo se disuelve en una mezcla de MeCN en H²O (v/v) y se liofiliza.

Ejemplo 10:

Estudio in vitro de la expresión del gen JARID1A en queratinocitos epidérmicos humanos sincronizados de adultos (HEKa) mediante el uso de matrices de PCR en tiempo real.

Una proteína involucrada en los relojes circadianos es la proteína histona desmetilasa de lisina, llamada JARID1A. La proteína JARID1A forma un complejo con CLOCK-BMAL1 para activar la transcripción de los genes PER. La expresión reducida de Jarid1A condujo a una expresión disminuida de los genes PER y ritmos circadianos alterados. Entonces, la activación de Jarid1A y la expresión de los genes reloj a primera hora de la mañana podría conducir a un avance en el ciclo circadiano para conferir la funcionalidad diurna de la piel. Por lo tanto, el principal objetivo de este estudio es evaluar la capacidad de algunos péptidos para incrementar la expresión de Jarid1A a primera hora de la mañana en queratinocitos humanos sincronizados.

Se siembran células HEKA (Life Technologies) a 3,0 x 105 células/pocillo en placas de 12 pocillos (2 pocillos por condición) y se incuban en medio de cultivo, medio de crecimiento de queratinocitos suplementado con solución Mix C39016-CaCl2 (Promocell). Para la sincronización, las células se sometieron a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno). 12 horas después de comenzar la sincronización, las células se incuban con los péptidos a 0,5 mg/ml o (5 pg/ml) en medio de cultivo, en dependencia de los efectos de toxicidad de cada péptido (se seleccionan las condiciones no tóxicas). Las células tratadas solo con medio se usan como condición basal.

Al final de la sincronización, los lisados celulares se recolectan en dos momentos diferentes: 7:30 horas (punto a primera hora de la mañana) y 11:30 horas (punto del mediodía). Brevemente, las células se lisan directamente en los pocillos y el ARN se purifica de acuerdo con el protocolo descrito en el minikit RNeasy (Qiagen) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Después de la elución del ARN, se realizan la cuantificación y el análisis de la pureza de las muestras de ARN con un Nanodrop (Thermo). Para cada muestra, se retrotranscriben 3 pg de ARN de alta calidad con iScript Advanced (BioRad) en un volumen final de 20 pl. La mezcla de reacción completa se incuba en un termociclador (Eppendorf) a 42 °C durante 30 minutos y la reacción se detiene a 85 °C durante 5 minutos. El ADN complementario se amplifica mediante qPCR en un termociclador de PCR en tiempo real (BioRad) mediante el uso de SYBR Green Supermix (BioRad) en la placa de 96 pocillos para su uso con SYBR® Green (BioRad). SYBR Green se une a moléculas de ADN bicatenarias y emite fluorescencia que se cuantifica, y la intensidad de fluorescencia es proporcional a la cantidad de producto en la reacción de PCR. Las condiciones de ciclaje en el instrumento BioRad CFX96 son: 95 °C durante 3 minutos, seguido de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 5 segundos, hibridación y alargamiento a 60 °C durante 30 segundos. Se usan GAPDH (gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa), TBP (proteína de unión a caja TATA) y HRPT1 (hipoxantina fosforribosiltransferasa 1) como controles endógenos. El cambio en veces con respecto a la expresión de los genes de muestra y los genes de referencia se calcula mediante el uso del método de expresión normalizada (AA(Ct)) mediante el uso del software CFX Manager (BioRad).

La inducción en veces del gen JARID1A a las 7:30 horas con respecto a las condiciones basales a las 7:30 horas para las muestras sometidas a prueba se muestra en la Tabla 7. Los datos para la inducción en veces representan el valor de un experimento.

Tabla 7

Tratamiento Concentración Inducción en veces con respecto a la sometida a prueba condición basal a las 7:30 h (%) Condición basal 7:30 h 100,0

Condición basal 11:30 h 181,36

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 212,39

NH²(PEP-1)

Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val- 0,005 mg/ml 122,22

Pro-NH²(PEP-2)

Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val- 0,5 mg/ml 126,63

Pro-NH²(PEP-3)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 158,92

OH (PEP-4)

Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val- 0,005 mg/ml 121,55

Pro-OH (PEP-5)

Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val- 0,5 mg/ml 109,08

Pro-OH (PEP-6)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 159,64

NHCaRH-ia (PEP-7)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 113,64

NHC1aH33 (PEP-8)

H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro- 0,5 mg/ml 141,90

NH²(PEP-9)

H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro- 0,5 mg/ml 138,09

NH²(PEP-10)

H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 127,91

NH²(PEP-11)

H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 203,75

NH²(PEP-12)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro- 0,5 mg/ml 147,62

NH²(PEP-13)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro- 0,5 mg/ml 187,65

NH²(PEP-14)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu- 0,5 mg/ml 123,90

Pro-NH2 (PEP-15)

Los resultados de la tabla 7 muestran que los péptidos de la invención son capaces de aumentar la expresión de JARID1A a primera hora de la mañana en queratinocitos humanos sincronizados.

Ejemplo 11

Estudio in vitro del aumento del nivel de la proteína JARID1A por el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en queratinocitos humanos sincronizados mediante el uso de un ensayo ELISA basado en detección colorimétrica.

Muchas funciones de la piel siguen un ritmo circadiano: la secreción de sebo tiene un punto máximo alrededor del mediodía y la capacitancia (una medida de la hidratación de la piel) es menor al comienzo del día. El flujo sanguíneo cutáneo y la función de barrera de la piel también exhiben un ritmo circadiano y ultradiano (con un período de recurrencia más corto que un día) con un flujo sanguíneo cutáneo bajo al principio del día y con puntos máximos al final de la tarde y al final de la noche.

En los mamíferos, los relojes circadianos se encuentran en la mayoría de los tejidos y se basan en circuitos de retroalimentación de regulación, en los que el complejo CLOCK-BMAL1 impulsa la transcripción de los genes reloj circadianos (tales como PER y CRY) durante el día. Una proteína involucrada en los relojes circadianos es la proteína histona desmetilasa de lisina, llamada proteína JARID1A. La proteína JARID1A forma un complejo con CLOCK-BMAL1 para activar la transcripción de los genes PER. Se cree que la activación de la expresión de Jarid1A en la piel a primera hora de la mañana podría conducir a un avance en el ciclo circadiano para conferir la funcionalidad diurna de la piel a la piel a primera hora de la mañana. Por lo tanto, el objetivo principal de este estudio es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) para aumentar la expresión de la proteína Jarid1A a primera hora de la mañana en un modelo experimental en el que pueden sincronizarse queratinocitos humanos (entran al mismo tiempo en la misma fase del ciclo del ritmo circadiano) de acuerdo con un ciclo día-noche.

Las células HaCaT (línea celular de queratinocitos humanos, Deutsches Krebsforschungszentrum) se siembran a una densidad de 200000 células/pocillo (2 pocillos por condición) en placas de 12 pocillos. Las células se siembran en medio de cultivo medio Eagle modificado de Dulbecco alto en Glutamax (Fisher Scientific) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (volumen/volumen) (Cultek). Para la sincronización de la temperatura de las células, las células se someten a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno). 12 horas después de comenzar la sincronización, las células se tratan con una solución de 0,5 mg/ml del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en medio de cultivo. Al mismo tiempo, se usa como condición basal el tratamiento con solo medio de cultivo.

Al final de la sincronización, los lisados celulares se recolectan en dos momentos diferentes: 7:30 horas (punto a primera hora de la mañana) y 11:30 horas (punto al mediodía). Brevemente, los lisados celulares se someten a dos ciclos de congelación y descongelación para romper la membrana nuclear y liberar la proteína Jarid1A. Los extractos nucleares se analizan para cuantificar el nivel de proteína JARID1A y la concentración de proteína total.

Medición del nivel de proteína JARID1A (KDM5A) con la prueba ELISA (Ensayo inmunoabsorbente

ligado a enzimas)

La proteína JARID1A se cuantifica mediante el uso de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Desmetilasa 5A específica de lisina humana (KDM5A) (CUSABIO) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, la proteína JARID1A se detecta con los anticuerpos proporcionados en el kit y se cuantifica mediante una reacción colorimétrica. La cuantificación de la absorbancia se lleva a cabo mediante el uso de un lector de microplacas (ClarioStar®, BMG) ajustado a 450 nm y 570 nm. Para la corrección de la longitud de onda, las lecturas a 570 nm se restaron de las lecturas a 450 nm.

Determinación de proteína total mediante el ensayo BCA (ácido bicinconínico)

La concentración de proteína total del lisado celular se determina mediante el uso del kit de ensayo de proteínas Pierce BCA (Thermo Scientific). Brevemente, se dispensan los estándares y las muestras y se añade el reactivo de trabajo a las muestras. Después de 30 minutos de incubación a 60 °C, el cambio de color se mide con el lector de absorbancia de microplacas (Clariostar®, BMG) a 562 nm. La cantidad total de proteína se usa para normalizar el nivel de concentración de proteína JARID1A obtenido mediante la prueba ELISA en las muestras.

Los porcentajes de proteína JARID1A con respecto a la condición basal se muestran en la Tabla 8. Los resultados representan la media del porcentaje para el nivel de proteína JARID1A a las 7:30 horas después del tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) con respecto al nivel de proteína JARID1A a las 7:30 horas en condiciones basales para al menos seis ensayos diferentes.

Tabla 8

Tratamiento Porcentaje de proteína JARID1A con respecto a la condición basal (%)

Condición basal 7:30 horas 100,00

Condición basal 11:30 horas 143,93

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1)

7:30 horas ^126,84

Los resultados de la Tabla 8 muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar los niveles de proteína JARID1A a las 7:30 horas en cultivo celular de queratinocitos humanos sincronizados con respecto al mismo tiempo en condiciones basales.

Ejemplo 12

Inhibición de la actividad del complejo mitocondrial I mediante el uso de un ensayo basado en detección colorimétrica.

Las mitocondrias son los orgánulos centrales responsables de la producción de energía dentro de las células, al generar alrededor del 90 % de la energía celular en forma de ATP (trifosfato de adenosina). Este proceso tiene lugar dentro de la membrana interna de las mitocondrias, una estructura compleja que acopla la cadena de transporte de electrones (ETC) a la síntesis de ATP debido al flujo de protones a través de esta estructura. La ETC es responsable del transporte de electrones desde NADH y FADH²(producidos durante la glucólisis y el ciclo del ácido cítrico) a una molécula de oxígeno, lo que conduce a su reducción a H²O al final de este proceso. La ETC está compuesta por cuatro complejos de proteínas diferentes. En el complejo I (NADH deshidrogenasa), los electrones pasan del NADH a la cadena de transporte de electrones, donde fluyen a través de los complejos restantes. Como consecuencia, la actividad del complejo mitocondrial I desencadena la oxidación de NADH a NAD.

Las mitocondrias desempeñan un papel importante durante el proceso de envejecimiento debido a la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS) como consecuencia de la función de la cadena de transporte de electrones. En los últimos años, se ha demostrado que la inhibición parcial de la actividad del complejo mitocondrial I prolonga la esperanza de vida, un proceso bien conservado desde los gusanos hasta los mamíferos. De hecho, el tratamiento con diferentes inhibidores de la actividad del complejo mitocondrial I (es decir, metformina, rotenona) ralentiza el proceso de envejecimiento. Por tanto, la reducción parcial de la actividad del complejo mitocondrial I podría usarse como un nuevo objetivo para los ingredientes antienvejecimiento en el campo cosmético. El objetivo principal de este experimento es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) para disminuir parcialmente la actividad del complejo mitocondrial I en fibroblastos dérmicos humanos.

Se siembran fibroblastos dérmicos humanos de adultos (HDFa, Life Technologies) a una densidad de 750 000 células/matraz de 75 cm2 (un matraz por condición) en medio de cultivo M106 con suplemento de crecimiento bajo en suero (Life Technologies). Las células se cultivan durante 8 días a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². A continuación, se retira el medio y las células se tratan con diluciones escalares del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 1, 0,5 y 0,1 mg/ml en medio de cultivo durante 48 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². Las células no tratadas incubadas en solo medio de cultivo se usan como condiciones basales. Como control positivo, las células se tratan con metformina 10 mM (Sigma) preparada en medio de cultivo, ya que se conoce que este compuesto inhibe parcialmente la actividad del complejo mitocondrial I. Después de 48 horas de tratamiento, las células se desprenden mediante el uso de tripsina y se resuspenden en 60 ul de solución salina tamponada con fosfato (Sigma). La concentración de proteína total se mide con un kit de ensayo de proteína Pierce BCA (ensayo BCA, Thermo Scientific) de acuerdo con el protocolo del fabricante para ajustar la concentración final de proteína entre 700-1000 ug/ml. Brevemente, se dispensan los estándares y las muestras y se añade el reactivo de trabajo a las muestras. Después de 30 minutos de incubación a 37 °C, se mide la absorbancia con un lector de microplacas (Clariostar®, BMG) a 562 nm.

La actividad del complejo mitocondrial I se mide con el kit de ensayo en microplaca de actividad enzimática del Complejo I (Abcam) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Este ensayo sigue la oxidación de NADH a NAD acoplada a la reducción de un colorante colorimétrico específico, lo que conduce a un aumento en la absorbancia a 450 nm. Brevemente, se incuban 200 ul de cada muestra (ajustada a 700-1000 ug/ml de cantidad de proteína total) durante 3 horas. Después de eso, los pocillos se lavan varias veces y se incuban con la solución de ensayo proporcionada con el kit (compuesta por NADH y el colorante específico). Para la determinación de la actividad del complejo mitocondrial I, se mide el aumento colorimétrico de la densidad óptica (OD) a 450 nm en una reacción cinética a lo largo de 1 hora con un lector de microplacas (Clariostar®, BMG). Los resultados se calculan como la tasa de aumento en OD a 450 nm entre dos puntos de la zona lineal a lo largo del tiempo.

El porcentaje de actividad del complejo mitocondrial I con respecto a las condiciones basales después del tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) se representa en la Tabla 9. Estos valores representan la media de al menos tres ensayos independientes.

Tabla 9

Tratamiento Dosis sometida Porcentaje de actividad del complejo a prueba mitocondrial I con respecto a la condición basal (%)

Condición basal - 100,00

Metformina 10 mM 63,61

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,1 mg/ml 83,23

NH²(PEP-1)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 71,68

NH²(PEP-1)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 1 mg/ml 55,35

NH²(PEP-1)

Los resultados muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de disminuir la actividad del complejo mitocondrial I en el cultivo celular de fibroblastos dérmicos humanos a las concentraciones sometidas a prueba. La inhibición de la actividad del complejo mitocondrial I muestra un efecto dosis-respuesta y confiere un efecto beneficioso sobre el retardo del proceso de envejecimiento en la piel.

Ejemplo 13

Medición del aumento de la actividad del complejo mitocondrial II mediante el uso de un ensayo basado en detección colorimétrica.

La producción de ATP tiene lugar dentro de la membrana interna de las mitocondrias, un orgánulo especializado que produce alrededor del 90 % de la energía en la célula. Este proceso tiene lugar dentro de la membrana interna de las mitocondrias, al acoplar la cadena de transporte de electrones (ETC) a la síntesis de ATP. La ETC es responsable del transporte de electrones desde NADH y FADH²(producidos durante la glucólisis y el ciclo del ácido cítrico) a una molécula de oxígeno, lo que conduce a su reducción a H²O al final de este proceso. La ETC está compuesta por cuatro complejos de proteínas diferentes. El complejo mitocondrial II, también conocido como succinato-coenzima Q reductasa (SDH), cataliza la transferencia de electrones del succinato a la ubiquinona (Q), lo que conduce a la producción de ubiquinol (QH²).

La función de las mitocondrias está ligada al proceso de envejecimiento debido a la pérdida progresiva de la eficiencia de la cadena de transporte de electrones. De hecho, se ha demostrado que la actividad del complejo mitocondrial II disminuye con la edad en fibroblastos dérmicos humanos, lo que conduce a una disfunción mitocondrial progresiva. Entonces, el aumento de la actividad del complejo mitocondrial II podría usarse como una nueva estrategia para desarrollar nuevos tratamientos antienvejecimiento de la piel. El principal objetivo de este ensayo es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH (PEP-1) para aumentar la actividad del complejo mitocondrial II en fibroblastos dérmicos humanos.

Se siembran fibroblastos dérmicos humanos de adultos (HDFa, Life Technologies) a una densidad de 750 000 células/matraz de 75 cm2 (un matraz por condición) en medio de cultivo M106 con suplemento de crecimiento bajo en suero (Life Technologies). Las células se cultivan durante 7 días a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². A continuación, se retira el medio y las células se tratan con diluciones escalares del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 1, 0,5 y 0,1 mg/ml en medio de cultivo durante 24 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². Las células no tratadas incubadas en solo medio de cultivo se usan como condiciones basales. Después de 24 horas de tratamiento, las células se desprenden mediante el uso de tripsina y se resuspenden en 40 ul de solución salina tamponada con fosfato (Sigma). La concentración de proteína total se mide con un kit de ensayo de proteína Pierce BCA (ensayo BCA, Thermo Scientific) de acuerdo con el protocolo del fabricante para ajustar la concentración final de proteína entre 2500-3000 ug/ml. Brevemente, se dispensan los estándares y las muestras y se añade el reactivo de trabajo a las muestras. Después de 30 minutos de incubación a 37 °C, se mide la absorbancia con un lector de microplacas (Clariostar®, BMG) a 562 nm.

La actividad del complejo mitocondrial II se mide con el kit de ensayo de microplacas de actividad enzimática del Complejo II (Abcam) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Este ensayo sigue la producción de ubiquinol (QH²; producido por el complejo mitocondrial II) acoplada a la reducción de un colorante colorimétrico (DCPIP, 2,6-diclorofenolindofenol). Brevemente, se incuban 50 ul de cada muestra (ajustada a 2500-3000 ug/ml de cantidad de proteína total) durante 2 horas. Después de eso, los pocillos se lavan varias veces y se incuban con la solución de actividad proporcionada con el kit (compuesta por ubiquinona, succinato y DCPIP). Para la determinación de la actividad del complejo mitocondrial II, se mide la reducción colorimétrica de DCPIP a la densidad óptica (OD) a 600 nm en una reacción cinética a lo largo de 30 minutos con un lector de microplacas (Clariostar®, BMG). Los resultados se calculan como la tasa de disminución de la absorbancia a una OD a 600 nm entre dos puntos de la zona lineal a lo largo del tiempo.

El porcentaje de actividad del complejo mitocondrial II con respecto a las condiciones basales después del tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) se representa en la Tabla 10. Estos valores representan la media de al menos tres ensayos independientes.

Tabla 10

Tratamiento Dosis Porcentaje de actividad del complejo sometida a mitocondrial II con respecto a la condición prueba basal (%)

Condición basal - 100,00

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,1 mg/ml 166,00

NH²(PEP-1)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 0,5 mg/ml 142,12

NH²(PEP-1)

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro- 1 mg/ml 133,00

NH²(PEP-1)

Los resultados muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar la actividad del complejo mitocondrial II en el cultivo celular de fibroblastos dérmicos humanos a las concentraciones sometidas a prueba, lo que conduce a un efecto antienvejecimiento beneficioso sobre la piel.

Ejemplo 14

Estudio in vitro del aumento del potencial de membrana mitocondrial en fibroblastos dérmicos humanos (HDFa) mediante un ensayo de inmunofluorescencia.

Las mitocondrias son orgánulos intracelulares que desempeñan un papel vital en el metabolismo celular. El potencial de membrana mitocondrial (MMP) es una medida del potencial eléctrico a través de la membrana mitocondrial interna creado por la función normal de la cadena de transporte de electrones en esta estructura. El MMP está altamente relacionado con muchos procesos mitocondriales. Concretamente, el MMP es un biomarcador directo de la síntesis de trifosfato de adenosina (ATP), la principal fuente de energía de la célula. Por esta razón, los productos con la capacidad de aumentar el MMP son capaces de energizar las células y mejorar las funciones de la piel. El principal objetivo de este experimento es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) de aumentar el potencial de membrana mitocondrial en fibroblastos dérmicos humanos.

Los fibroblastos dérmicos humanos de adultos (HDFa, Life Technologies) se siembran a una densidad de 6000 células/pocillo (3 pocillos por condición) en placas de 96 pocillos. Las células se siembran en medio de cultivo M106 con suplemento de crecimiento bajo en suero (Life Technologies) durante 24 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². A continuación, se retira el medio de cultivo y las células se tratan con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 0,5 mg/ml disuelto en medio de cultivo Eagle modificado de Dulbecco (Life Technologies) suplementado con 10 % (volumen/volumen) de suero fetal bovino (FBS, Cultek) durante 16 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². Las células no tratadas incubadas solo con medio se usan como condiciones basales.

Después de 16 horas de tratamiento, las células se usan para cuantificar el potencial de membrana mitocondrial mediante el uso del kit de ensayo de potencial de membrana mitocondrial JC-1 (Abcam) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, las células se incuban con una solución de trabajo JC-1 preparada con tampón de dilución suplementado en presencia del tratamiento con el péptido a 0,5 mg/ml a 37 °C con 5 % de CO²durante 30 minutos. Posteriormente, las células se lavan varias veces y se incuban con el tratamiento correspondiente disueltas en tampón de dilución suplementado a 37 °C con 5 % de CO²durante 2,5 horas (cada tratamiento está siempre presente durante el ensayo). El colorante JC-1 desarrolla una fluorescencia roja o verde, respectivamente, cuando se añade en mitocondrias sanas con potenciales de membrana altos (hiperpolarización; células energizadas) o existe como monómero en mitocondrias con el potencial de membrana disminuido (despolarización; células no energizadas).

Se obtienen imágenes de las células y se mide el potencial de membrana mitocondrial mediante el uso del sistema de obtención de imágenes Operetta® High Content (PerkinElmer, Inc.). En las células energizadas, aparecen agregados rojos y el colorante emite a 560-630 nm cuando se excita a 520-550 nm. En células despolarizadas, el colorante emite a 500-550 nm cuando se excita a 460-490 nm. El número de células se cuantifica mediante el uso de la tinción Hoechst 33342 (ThermoFisher Scientific), una contratinción nuclear permeable a las células y que emite fluorescencia azul a 460 nm cuando se une a ADNbc y se excita a 350 nm. Para cada imagen, se cuantifica la intensidad de fluorescencia de células energizadas y despolarizadas y se normaliza contra el número de núcleos. La media del porcentaje del potencial de membrana mitocondrial después del tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) con respecto a las condiciones basales se representa en la tabla 1. Estos valores representan los valores de al menos cuatro ensayos independientes.

Tabla 11

Tratamiento Dosis sometida Porcentaje de MMP con respecto a prueba a las condiciones basales (%) Condición basal - 100,00

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 0,5 mg/ml 130,98

Los resultados muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de energizar los fibroblastos dérmicos humanos al aumentar el potencial de membrana mitocondrial a la concentración sometida a prueba.

Ejemplo 15

Evaluación de los niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) en fibroblastos dérmicos humanos (HDFA) mediante un enfoque de fluorescencia.

El metabolismo celular comprende una amplia gama de reacciones químicas que permiten que las células crezcan y se reproduzcan, mantengan sus estructuras y respondan a los cambios ambientales. Como consecuencia del metabolismo del oxígeno, las células producen varios subproductos naturales llamados especies reactivas de oxígeno (ROS). Las ROS son moléculas de oxígeno altamente reactivas que incluyen radical hidroxilo, anión superóxido, peróxido de hidrógeno y peroxinitrito. Los niveles de ROS celulares pueden incrementarse por diferentes fuentes externas, lo que incluye la exposición a productos químicos, radiación ionizante e infecciones bacterianas o virales.

Durante el metabolismo celular normal, los niveles de ROS están controlados por un subconjunto de varias enzimas antioxidantes endógenas (es decir, superóxido dismutasa, catalasa y glutatión peroxidasa). Sin embargo, durante los estados relacionados con el estrés oxidativo, las ROS se acumulan dentro de las células y los mecanismos de reparación de detoxificación no son suficientes para mantener la viabilidad celular. Las mitocondrias son la principal fuente de ROS dentro de las células debido a su propia función. Además, los productos químicos que inducen estrés mitocondrial o potencian su funcionalidad podrían aumentar los niveles de ROS. Por estas razones, la medición de los niveles de ROS es un buen predictor del estado de estrés oxidativo provocado por diferentes exposiciones a productos químicos. El objetivo principal de este experimento es confirmar que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1.) no aumenta los niveles de ROS en líneas celulares de fibroblastos dérmicos humanos.

Los fibroblastos dérmicos humanos de adultos (HDFa, Life Technologies) se siembran a una densidad de 10 000 células/pocillo (3 pocillos por condición) en placas de 96 pocillos en medio de cultivo M106 con suplemento de crecimiento bajo en suero (LSGS, Life Technologies). Las células se cultivan durante 24 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². A continuación, se retira el medio y las células se tratan con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) durante 16 horas a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO². Las células no tratadas incubadas en solo medio de tratamiento se usan como condiciones basales. Como control positivo, las células se tratan con 10 pl de peróxido de hidrógeno (H²O²; Sigma) 0,5 mM preparado en solución salina tamponada con fosfato (PBS, Sigma), ya que se conoce bien que este compuesto aumenta los niveles de ROS. Después de 30 min a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO², las células se usan para cuantificar los niveles de ROS.

Los niveles de ROS se cuantifican mediante el uso de un kit de ensayo de detección de especies reactivas de oxígeno celular (Abcam) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Brevemente, las células se tratan con 100 pl de solución de trabajo ROS Orange durante ^{6 0}minutos en el medio de cultivo. Después del período de tiempo, se determina la señal de fluorescencia mediante el uso del microscopio confocal Operetta® (PerkinElmer, Inc.). Las intensidades de fluorescencia se miden mediante el uso del canal Mitotracker Orange (filtro de excitación: 520 550 nm/filtro de emisión: 560-630 nm) y se corrigen mediante la determinación del número de núcleos por pocillo. Para esta cuantificación, las células se tiñen con 10 pl de una solución de Hoechst 33342 (ThermoFisher Scientific), una contratinción nuclear permeable a las células que emite fluorescencia azul a 460 nm cuando se une a ADNbc y se excita a 350 nm.

El porcentaje del nivel de ROS en fibroblastos dérmicos humanos con respecto a las condiciones basales después del tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) se representa en la tabla 12. Estos valores representan la media de al menos tres ensayos independientes.

Tabla 12

Tratamiento Dosis sometida a Porcentaje del nivel de ROS con prueba respecto a las condiciones de control basales (%) Condición basal - ^{1 0 0 , 0 0}Peróxido de hidrógeno 0,05 mM 1309,23

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²0,5 mg/ml 102,69

(PEP-1)

Los resultados muestran que, aunque el tratamiento con H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) potencia la energía de los fibroblastos dérmicos humanos, como lo demuestra un aumento en el potencial de membrana mitocondrial, el tratamiento no provoca un aumento en los niveles de ROS en las células a la concentración sometida a prueba.

Ejemplo 16

Medición del nivel de hidratación en modelos sincronizados de piel humana de grosor total.

Muchas funciones esenciales de la piel siguen un ritmo circadiano: la secreción de sebo alcanza un punto máximo alrededor del mediodía, el flujo sanguíneo cutáneo y la barrera cutánea son bajos a primera hora de la mañana y alcanzan su punto máximo a última hora de la tarde. La temperatura y la hidratación también muestran un patrón dependiente del tiempo en la piel a lo largo del día. Los niveles bajos de hidratación de la piel a primera hora de la mañana aumentan alrededor del mediodía. La hidratación de la piel es uno de los factores más importantes para mantener la homeostasis del tejido cutáneo. Un contenido apropiado de agua en la piel regula muchas funciones vitales dentro de las capas de queratinocitos, tales como la integridad de la capa de lípidos, el refuerzo de la función de barrera de la piel y la composición funcional y estructural del estrato córneo. La exposición al sol, la dieta y hábitos de cuidado de la piel deficientes conducen a una piel deshidratada, aceleración del envejecimiento, la destrucción del colágeno y la formación de líneas de expresión y arrugas. En consecuencia, la piel seca adquiere una apariencia desvitalizada y sombría.

La hidratación de la piel epidérmica puede evaluarse al medir la capacitancia de la piel, una propiedad eléctrica de la piel, que depende del contenido de agua con respecto a otros componentes de la piel. El principal objetivo de este experimento es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) de mejorar los niveles de hidratación en modelos sincronizados de piel humana.

Inmediatamente después de la llegada, los modelos de piel de grosor completo Phenion® (Henkel) se colocan en placas Petri (5 modelos de piel por condición) de acuerdo con las instrucciones del proveedor en medio ALI (HENKEL). Después de 72 horas de incubación a 37 °C, 5 % de CO², se inicia un protocolo de sincronización. Para este propósito, los modelos de piel se someten a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno). Al comienzo de la sincronización, se somete a prueba la medición de hidratación previa al tratamiento a las 7:30 horas en modelos de piel. Las mediciones de hidratación de la epidermis se realizan con DPM 9003 BT™ (NOVA® Technology Corporation) y con MoistureMeter SC (Delphin). Para las mediciones previas al tratamiento, la superficie del modelo de piel se lava con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS, Sigma). A continuación, se colocan en una superficie seca y estéril donde se realizan las mediciones al presionar el sensor contra la superficie superior del modelo de piel. Después de las mediciones previas al tratamiento, los modelos de piel se tratan con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 0,5 mg/ml tanto en la superficie superior (50 pl de tratamiento) de los modelos como dentro del medio que contiene la placa Petri. Los modelos de piel tratados solo con medio se usan como condición de control basal. Este tratamiento se reemplaza después de 24 horas en las mismas condiciones. Después de 48 horas de tratamiento, la medición de la hidratación se realiza a las 7:30 horas y a las 11:30 horas de la mañana de acuerdo con el mismo protocolo descrito para la medición previa al tratamiento. Los resultados de la Tabla 13 muestran la media del porcentaje de los niveles de hidratación a las 7:30 horas después de 48 horas de tratamiento con respecto a los niveles de hidratación en condiciones basales. Para cada condición, se realiza una normalización previa de los datos primarios de los niveles de hidratación con respecto a los valores previos al tratamiento. Estos valores se calculan para un ensayo. La medición de la hidratación se realiza con DPM9003 BT™ (NOVA® Technology Corporation).

Tabla 13

Tratamiento Nivel de hidratación a

las 7:30 horas (%) Condiciones basales 100,0

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 131,6

Los resultados de la Tabla 14 representan la media del porcentaje de los niveles de hidratación a las 7:30 horas después de 48 horas de tratamiento con respecto a los niveles de hidratación en condiciones basales al mismo tiempo. Para cada condición, se realiza una normalización previa de los niveles de hidratación de los datos primarios con relación a los valores previos al tratamiento. Estos valores se calculan para un ensayo. La medición de la hidratación se realiza con MoistureMeter SC (Delphin).

Tabla 14 ________________________Tratamiento__________________________ Nivel de hidratación (%)

Condiciones basales 7:30 h 100,0 Condiciones basales 11:30 h 124,6

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1) 7:30 h_______________ 110,1_________ Los resultados de la tabla 13 y la tabla 14 muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar los niveles de hidratación a las 7:30 horas en modelos sincronizados de piel humana. El nivel de hidratación a las 7:30 horas después del tratamiento muestra un valor intermedio comparado con los resultados de hidratación a las 11:30 horas en condiciones basales.

Ejemplo 17

Estudio in vitro de la expresión de los genes reloj en queratinocitos epidérmicos humanos sincronizados de adultos (HEKa) mediante el uso de matrices de PCR en tiempo real.

Muchas funciones de la piel siguen un ritmo circadiano: la secreción de sebo tiene un punto máximo alrededor del mediodía y la capacitancia (una medida de hidratación de la piel) es menor al comienzo del día. El flujo sanguíneo cutáneo y la función de barrera de la piel también exhiben un ritmo circadiano y ultradiano con flujo sanguíneo cutáneo bajo al principio del día y con puntos máximos al final de la tarde y al final de la noche.

En los mamíferos, los relojes circadianos se encuentran en la mayoría de los tejidos y se basan en circuitos de retroalimentación de regulación, en los que el complejo CLOCK-BMAL1 impulsa la transcripción de los genes reloj circadianos (tales como PER y CRY) durante el día. Una proteína involucrada en los relojes circadianos es la proteína histona desmetilasa de lisina, llamada Jarid1A. Jarid1A forma un complejo con CLOCK-BMAL1 para activar la transcripción de los genes PER. La expresión reducida de Jarid1A condujo a la expresión reducida de los genes PER y ritmos circadianos alterados. Entonces, la activación de Jarid1A y la expresión de los genes reloj a primera hora de la mañana podría conducir a un avance en el ciclo circadiano para conferir la funcionalidad diurna de la piel.

Por lo tanto, el principal objetivo de este estudio es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) de incrementar la expresión de los genes reloj a primera hora de la mañana en queratinocitos humanos sincronizados.

Se sembraron células HEKA (Life Technologies) a 3,0 x 105 células/pocillo en placas de 12 pocillos y se incubaron en medio de cultivo, medio de crecimiento de queratinocitos suplementado con solución Mix C39016-CaCh (Promocell). Para la sincronización, las células se sometieron a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno).

12 horas después de comenzar la sincronización, las células se incuban con el péptido sintético H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 0,5 mg/ml en medio de cultivo. Las células tratadas con solo medio se usan como condición basal.

Al final de la sincronización, los lisados celulares se recolectan en dos momentos diferentes: 7:30 horas (punto a primera hora de la mañana) y 11:30 horas (punto al mediodía). Brevemente, las células se lisan directamente en los pocillos y el ARN se purifica de acuerdo con el protocolo descrito en el kit RNeasy Mini (Qiagen) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Después de la elución del ARN, la cuantificación y el análisis de la pureza de las muestras de ARN se realizan con un Nanodrop (Thermo). Para cada muestra, se retrotranscriben 3 |jg de ARN de alta calidad con iScript Advanced (BioRad) en un volumen final de 20 jl. La mezcla de reacción completa se incuba en un termociclador (Eppendorf) a 42 °C durante 30 minutos y la reacción se detiene a 85 °C durante 5 minutos. El ADN complementario se amplifica mediante qPCR en un termociclador de PCR en tiempo real (BioRad) mediante el uso de SYBR Green Supermix (BioRad) en una placa personalizada de 96 pocillos para su uso con SYBR® Green (BioRad). SYBR Green se une a moléculas de a Dn bicatenario y emite fluorescencia que se cuantifica, y la intensidad de la fluorescencia es proporcional a la cantidad de producto en la reacción de PCR. Las condiciones de ciclaje en el instrumento BioRad CFX96 son: 95 °C durante 3 minutos, seguido de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 5 segundos, hibridación y alargamiento a 60 °C durante 30 segundos. Se usan GAPDH (gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa), TBP (proteína de unión a caja TATA) y HRPT1 (hipoxantina fosforribosiltransferasa 1) como controles endógenos. El cambio en veces con respecto a la expresión de los genes de muestra y los genes de referencia se calcula mediante el uso del método de expresión normalizada (AA(Ct)) mediante el uso del software CFX Manager (BioRad)

La inducción en veces de los genes reloj circadianos CRY2 (reloj circadiano criptocromo 2) y PER3 (reloj circadiano período 3) con respecto a las condiciones basales se muestra en la Tabla 15 y la Tabla 16. Los valores representan la media de al menos 3 experimentos independientes.

Tabla 15

Nombre del Tratamiento Inducción en veces con respecto gen a la condición basal a las 7:30 h (%)

CRY2 Condición basal 7:30 h 100,0

CRY2 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 132,5

7:30 h

CRY2 Condición basal 11:30 h 130,2

Tabla 16

Nombre del Tratamiento Inducción en veces con respecto a gen la condición basal a las 7:30 h (%) PER3 Condición basal 7:30 h 100,0

PER3 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 182,5

7:30 h

PER3 Condición basal 11:30 h 182,8

Los resultados de las Tablas 15 y 16 muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar el nivel de expresión de CRY2 y PER3 a las 7:30 horas en cultivo celular de queratinocitos humanos sincronizados con respecto al mismo tiempo en condiciones basales. La cantidad de expresión de los genes CRY2 y PER3 a las 7:30 horas después del tratamiento con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) alcanza un nivel similar de la expresión de los genes CRY2 y PER3 obtenida en condiciones basales a las 11:30 horas.

Ejemplo 18

Estudio in vitro de la expresión de genes PER en queratinocitos epidérmicos humanos (HEKa) jóvenes y viejos mediante el uso de matrices de PCR en tiempo real.

En los mamíferos, los relojes circadianos se encuentran en la mayoría de los tejidos y se basan en circuitos de retroalimentación de regulación, en los que el complejo CLOCK-BMAL1 impulsa la transcripción de los genes reloj circadianos (tales como PER y CRY) durante el día. La alteración del reloj circadiano de los mamíferos da como resultado un envejecimiento acelerado y, además, los ritmos circadianos se deterioran con la edad. La alteración genética de los ritmos circadianos por la inactivación de los genes PER conduce a diversas patologías relacionadas con la edad y signos visibles de envejecimiento prematuro. Los niveles de expresión de los genes PER se reducen considerablemente en las células de la piel humana con la edad. Por lo tanto, el objetivo principal de este estudio es evaluar la capacidad del péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) de incrementar la expresión de los genes PER2 y PER3 en queratinocitos humanos de un donante de 26 años de edad y un donante de 54 años de edad mediante el uso de matrices de PCR en tiempo real.

Se siembran queratinocitos epidérmicos humanos, células (HEKa) (Life Technologies) de un donante de 26 años de edad y un donante de 54 años de edad a 3,0 x 105 células/pocillo en placas de 12 pocillos y se incuban en medio de cultivo, medio de crecimiento de queratinocitos suplementado con la solución Mix C39016-CaCh (Promocell). Para la sincronización, las células se sometieron a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno). 12 horas después de comenzar la sincronización, las células se incuban con el péptido sintético H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) (PEP-1) a 0,5 mg/ml en medio de cultivo. Las células tratadas solo con medio se usan como condición basal.

Al final de la sincronización, los lisados celulares se recolectan a las 7:30 horas (punto a primera hora de la mañana). Brevemente, las células se lisan directamente en los pocillos y el ARN se purifica de acuerdo con el protocolo descrito en el kit RNeasy Mini (Qiagen) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Después de la elución del ARN, la cuantificación y el análisis de la pureza de las muestras de ARN se realizan con un Nanodrop (Thermo). Para cada muestra, se retrotranscriben 3 |jg de ARN de alta calidad con iScript Advanced (BioRad) en un volumen final de 20 jl. La mezcla de reacción completa se incuba en un termociclador (Eppendorf) a 42 °C durante 30 minutos y la reacción se detiene a 85 °C durante 5 minutos. El ADN complementario se amplifica mediante qPCR en un termociclador de PCR en tiempo real (BioRad) mediante el uso de SYBR Green Supermix (BioRad) en la placa de 96 pocillos para su uso con SYBR® Green (BioRad). SYBR Green se une a moléculas de ADN bicatenario y emite fluorescencia que se cuantifica, y la intensidad de fluorescencia es proporcional a la cantidad de producto en la reacción de PCR. Las condiciones de ciclaje en el instrumento BioRad CFX96 son: 95 °C durante 3 minutos, seguido de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 5 segundos, hibridación y alargamiento a 60 °C durante 30 segundos. Se usan GAPDH (gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa), TBP (proteína de unión a caja TATA) y HRPT1 (hipoxantina fosforribosiltransferasa 1) como controles endógenos. El cambio en veces con respecto a la expresión de los genes de muestra y los genes de referencia se calcula mediante el uso del método de expresión normalizada (AA(Ct)) mediante el uso del software CFX Manager (BioRad).

En la Tabla 17 se muestra la inducción en veces de los genes PER, PER2 (reloj circadiano período 2) y PER3 (reloj circadiano período 3) con respecto a las condiciones basales. Los valores representan la media de al menos 3 experimentos independientes.

Tabla 17

Nombre del Edad (años) Inducción en veces a las 7:30 h con respecto a gen la condición basal (%)

PER2 26 172,0

PER2 54 292,0

PER3 26 182,5

PER3 54 249,0

Los resultados de la Tabla 17 muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar el nivel de expresión de los genes PER2 y PER3 en diferentes edades. Este aumento es mayor en los queratinocitos viejos (de un donante de 54 años de edad) lo que contrarresta la disminución de la expresión de los genes PER durante el envejecimiento.

Ejemplo 19

Análisis del perfil lipidómico en modelos sincronizados de piel humana de grosor completo.

Los lípidos desempeñan un papel fundamental en la piel. El estrato córneo (la capa externa de la piel) contiene una estructura especializada llamada envoltura cornificada, el punto final de la diferenciación de las células epidérmicas. Esta estructura está compuesta por una malla de queratinas altamente reticulada rodeada por una envoltura lipídica. La envoltura cornificada funciona como barrera física para partículas exógenas, patógenos y pérdida de agua epidérmica, lo que regula la homeostasis de la piel. Las ceramidas (el principal componente lipídico dentro de la envoltura cornificada) son una familia de moléculas compuestas por una esfingosina y un ácido graso. La cantidad de ceramidas en la piel proporciona las propiedades de impermeabilidad al agua de la piel lo que evita la aparición de sequedad cutánea. La familia de ácidos grasos omega-3 también desempeña un papel clave en la funcionalidad de la piel. Entre ellos, el ácido docosahexaenoico (DHA) es un ácido graso poliinsaturado de cadena larga cuya incorporación a la membrana celular de dos capas (también conocida como la relación entre los niveles de fosfatidilcolina conjugada con DHA y de fosfatidilcolina total, es decir, PC-DHA/PC) ayuda a mantener una fluidez apropiada de la membrana celular. La suplementación dietética con DHA aumenta su incorporación en la piel, lo que mejora la función de barrera de la piel medida por una disminución de la pérdida transepidérmica de agua y, por tanto, un aumento de la hidratación cutánea.

El perfil lipidómico de los modelos de piel humana puede evaluarse al medirlo mediante el uso de una cromatografía líquida de ultra alto rendimiento-espectrometría de masas (UHPLC-MS). El principal objetivo de este experimento es evaluar el perfil lipidómico de modelos de piel humana sincronizados después del tratamiento con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) para determinar el contenido de ceramida en la piel y la relación PC-DHA/PC.

Después de la llegada, los modelos de piel de grosor total Phenion® (HENKEL) se colocan en placas Petri (5 modelos de piel por condición) de acuerdo con las instrucciones del proveedor en medio ALI (HENKEL). Después de 72 horas de incubación a 37 °C, 5 % de CO², se inicia un protocolo de sincronización. Para este propósito, los modelos de piel se someten a dos ciclos alternativos de 12 horas cada uno a 37 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo diurno) y a 33 °C en aire humidificado con 5 % de CO²(modo nocturno). Los modelos de piel se tratan con el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) a 0,5 mg/ml tanto en la superficie superior (50 |jl de tratamiento) de los modelos como dentro del medio que contiene la placa Petri. Los modelos de piel tratados con medio se usan como condición de control basal. Este tratamiento se reemplaza después de 24 horas en las mismas condiciones. Después de 48 horas de tratamiento, los modelos de piel se recolectan a las 7:30 horas y a las 11:30 horas y se congelan a -80 °C para el análisis UHPLC-MS. Brevemente, las muestras se descongelan y mezclan con cloruro de sodio (50 mM) y cloroformo/metanol (2:1) (volumen:volumen) y se homogenizan. Después de homogeneizar las muestras, los extractos se incuban durante 1 hora a -20 °C y se centrifugan a 18 000 x g durante 15 minutos. A continuación, la fase orgánica se recolecta y se seca al vacío. Los extractos secos se reconstituyen finalmente en acetonitrilo/isopropanol (1:1) (volumen:volumen), se centrifugan a 18000 * g durante 5 minutos y se transfieren a viales para el análisis UPLC®-MS. Todos los datos se procesan mediante el uso del administrador de aplicaciones TargetLynx para el software MassLynx 4.1 (Waters Corp., Milford, EE. UU.).

Los resultados de la Tabla 14 muestran la media del porcentaje de cantidad de ceramidas (lo que incluye los grupos mayoritarios de ceramidas en la piel, compuestos por el 68,9 % de las ceramidas cutáneas totales) a las 7:30 horas después de 48 horas de tratamiento con respecto a las condiciones basales al mismo tiempo. Estos valores se calculan para un ensayo.

Tabla 18

______________ Tratamiento_________________Cantidad de ceramidas (%)

Condición basal 7:30 h 100,0

Condición basal 11:30 h 148,6

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²147,6

(PEP-1) 7:30 h

Los resultados de la tabla 18 muestran que el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar los niveles de ceramidas a las 7:30 horas en modelos de piel humana sincronizados. La cantidad de ceramidas a las 7:30 horas después del tratamiento muestra un valor similar en comparación con los resultados de los niveles de ceramidas a las 11:30 horas en condiciones basales.

Los resultados de la Tabla 19 representan la media del porcentaje de relación PC-DHA/PC a las 7:30 horas después de 48 horas de tratamiento con respecto a las condiciones basales. Estos valores se calculan para un ensayo.

Tabla 19

Tratamiento Porcentaje de relación PC

DHA/PC (%)________ Condiciones basales 7:30 h 100,0

Condiciones basales 11:30 h 118,7

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1) 7:30 h_____________ 120,2___________

Los resultados de la Tabla 19 muestran que el H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) es capaz de aumentar la relación PC-DHA/PC a las 7:30 horas en modelos sincronizados de piel humana. La relación PC-DHA/PC a las 7:30 horas después del tratamiento muestra un valor similar en comparación con el valor a las 11:30 horas en condiciones basales.

Ejemplo 20

Preparación de una microemulsión que comprende el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) En un recipiente apropiado se disuelve el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en agua [INCI: AGUA (AQUA)] (fase A1), y después se introduce una mezcla de los ingredientes de la fase A2 (2-fenoxietanol [INCI: FENOXIETANOL], Structure® XL [INCI: FOSFATO DE HIDROXIPROPIL ALMIDÓN], Zemea™ [INCI: PROPANODIOL], Amigel® [INCI: GOMA DE ESCLEROTIO] e hialuronato de sodio [INCI: HIALURONATO DE SODIO]; ver tabla 16), que se había mezclado previamente en un recipiente separado. La mezcla resultante se calienta a 70 °C mientras se agita suavemente y después se añade Cola®Fax CPE-K: [INCI: FOSFATO DE CETIL POTASIO] (fase A3).

En otro recipiente, se introducen los componentes de la fase B: éster DIS Schercemol™ [INCI: SEBACATO DE DIISOPROPILO] y Montanov™ 68 [INCI: ALCOHOL CETEARÍLICO; GLUCÓSIDO DE CETEARILO], se calientan a 80 °C y se agita la mezcla. La fase B se introduce lentamente sobre la fase A mientras se agita intensamente.

Mientras se mantiene la temperatura a 70-80 °C, la muestra se homogeniza con una sonda de titanio durante 30 segundos.

Tabla 20

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso A1 AGUA (AQUA) q.s.100

A1 H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 0,0010

A2 FENOXIETANOL 2,7382

A2 FOSFATO DE HIDROXIPROPIL ALMIDÓN 0,6570

A2 PROPANODIOL 5,4764

A2 GOMA DE ESCLEROTIO 0,3285

A2 HIALURONATO DE SODIO 0,0109

A3 FOSFATO DE CETIL POTASIO 0,5476

B SEBACATO DE DIISOPROPILO 10,9500

B [ALCOHOL CETEARÍLICO; GLUCÓSIDO DE CETEARILO] 4,3811

Ejemplo 21

Preparación de una composición de nanopartículas lipídicas que comprende la microemulsión del Ejemplo 20 La microemulsión preparada en el ejemplo 20 se introduce en un recipiente apropiado (fase A).

Por separado, la fase B (ver la Tabla 17) se prepara mediante la disolución de N-Hance® CG-17 guar catiónica [INCI: CLORURO DE GUAR HIDROXIPROPILTRIMONIO; AGUA (AQUA)] en agua [INCI: AGUA (AQUA)]. La fase B se añade a la fase A con agitación intensa.

Los componentes de la fase C (Structure® XL [FOSFATO DE HIDROXIPROPIL ALMIDÓN] y Amigel® [INCI: GOMA DE ESCLEROTIO]) y fase D (Heliogel™ [INCI: COPOLÍMERO DE ACRILATOS DE SODIO; POLIISOBUTENO HIDROGENADO; LECITINA; ESTEARATO DE POLIGLICERIL-10; ACEITE DE SEMILLA DE GIRASOL (HELIANTHUS ANNUUS); TOCOFEROL]) se añaden lentamente y uno por uno con agitación intensa.

Tabla 21

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso A Microemulsión del ejemplo 20 q.s. 100 %

B [CLORURO DE GUAR HIDROXIPROPILTRIMONIO; AGUA (AQUA)] 0,20

B AGUA (AQUA) 6,00

C FOSFATO DE HIDROXIPROPIL ALMIDÓN 1,50

C GOMA DE ESCLEROTIO 0,75

D [COPOLÍMERO DE ACRILATOS DE SODIO;

POLIISOBUTENO HIDROGENADO; LECITINA; ESTEARATO DE POLIGLICERIL- 0,25 10; ACEITE DE SEMILLA DE GIRASOL (HELIANTHUS ANNUUS)

; TOCOFEROL]

Ejemplo 22

Preparación de liposomas que comprenden el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) En un recipiente apropiado, se prepara la fase A al disolver el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en agua [INCI: AGUA (AQUA)], se añaden Zemea™ [INCI: PROPANODIOL] y 2-fenoxietanol [INCI: FENOXIETANOL] (fase B) a la fase A.

Cuando se disuelven todos los componentes anteriores, se añade lecitina [INCI: LECITINA] (fase C) poco a poco y con agitación intensa, hasta completar la dispersión. La composición finalmente obtenida se muestra en la Tabla 22.

Tabla 22

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso A AGUA (AQUA) q.s. 100 % A H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) 0,0010

B PROPANODIOL 8,5000

B FENOXIETANOL 0,9050

C LECITINA 0,5000

La muestra se homogeniza con una sonda de titanio durante 30 segundos.

Ejemplo 23:

Preparación de liposomas del ejemplo 22 unidos a polímeros catiónicos

Los liposomas obtenidos en el Ejemplo 22 se añaden a SENSOMER® CT-50 [INCI: AGUA (AQUA), CLORURO DE HIDROXIPROPIL ALMIDÓN; UREA; LACTATO DE SODIO; CLORURO DE SODIO; BENZOATO DE SODIO] a una relación liposomas:polímero catiónico de 95:5 (p/p) con agitación lenta.

Ejemplo 24

Preparación de una composición cosmética (emulsión fluida) que contiene el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1)

En un recipiente adecuado, se disuelven los ingredientes de la fase A1: agua [INCI: AGUA (AQUA)], Zemea™ [INCI: PROPANODIOL], glicerina [INCI: GLICERINA], Genencare™ OSMS BA [INCI: BETAINA], Dissolvine® NA2 [INCI: EDTA DISÓDICO], sorbato de potasio [INCI: SORBATO DE POTASIO].

Fase A2: Se añade polímero Carbopol® Ultrez 10 [INCI: CARBOMER] a la mezcla anterior. Una vez disperso, fase A3: se añade Cola®Fax CPE-K [INCI: FOSFATO DE CETIL POTASIO]. La mezcla resultante se calienta a 70-75 °C. En otro recipiente, los componentes de la fase B: Massocare® HD [INCI: ISOHEXADECANO], Lincol BAS [INCI: BENZOATO DE ALQUILO C12-C15], Gandak C [INCI: ALCOHOL CETÍLICO], Sorbitol T 20 P [INCI: POLISORBATO 20], 2-fenoxietanol [INCI: FENOXIETANOL], ácido esteárico vegetal 50/50 [INCI: ÁCIDO ESTEÁRICO; ÁCIDO PALMÍTICO] se mezclan y se calientan a 70-75 °C. La fase B se introduce lentamente sobre la fase A mientras se agita intensamente con una turbina.

La mezcla se enfría a 40 °C, y se añade la fase C: BRB CM 56-S [INCI: CICLOMETICONA], una premezcla de péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en agua y octano-1,2-diol [INCI: a GuA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1], Fragancia [INCI: FRAGANCIA (PERFUME)]. El pH se ajusta a 6,0-6,5 con el ingrediente de la fase D: hidróxido de sodio al 20 % p/p [INCI: AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO].

Tabla 23

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso A1 AGUA 71,2 A1 PROPANODIOL 10 A1 GLICERINA 3 A1 BETAINA 3 A1 EDTA DISÓDICO 0,2 A1 SORBATO DE POTASIO 0,1 A2 CARBOMER 0,4 A3 FOSFATO DE CETIL POTASIO 0,4

B ISOHEXADECANO 2

B BENZOATO DE ALQUILO C12-C15 2

B ALCOHOL CETÍLICO 1,8

B POLISORBATO 20 0,8

B FENOXIETANOL 0,5

B [ÁCIDO ESTEÁRICO; ÁCIDO PALMÍTICO] 0,5

C CICLOMETICONA 2 C [AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; 2

NONAPÉPTIDO-1]

C FRAGRANCIA (PERFUME) 0,1 D [AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO] ____ q,s_____

Ejemplo 25

Preparación de una composición cosmética (crema) que contiene el péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH2 (PEP-1)

En un recipiente adecuado, se disuelven los ingredientes de la fase A1: agua [INCI: AGUA (AQUA)], Zemea™ [INCI: PROPANODIOL], Hydrolite® 5 [INCI: PENTILENGLICOL] y Dissolvine® NA2 [INCI: EDTA DISÓDICO].

Ingrediente de la fase A2: Se añade el polímero Carbopol® Ultrez 10 [INCI: CARBOMER] en la mezcla anterior. Una vez disperso, fase A3: se introduce Cola®Fax CPE-K [INCI: FOSFATO DE CETIL POTASIO]. A continuación, la mezcla se calienta a 70-75 °C.

En un recipiente separado, se mezclan los ingredientes de la fase B: éster DIA Schercemol™ [INCI: ADIPATO DE DIISOPROPILO], Phytocream® 2000 [INCI: ESTEARATO DE GLICERILO; ALCOHOL CETEARÍLICO, PROTEÍNA DE TRIGO HIDROLIZADA PALMITOIL POTASIO], Massocare® EC [INCI: COCOATO DE ETILHEXILO], Astro-sil 2C 350 [INCI: DIMETICONA], acetato de tocoferilo [INCI: ACETATO DE TOCOFERILO] y Phenoxetol™ [INCI: FENOXIETANOL] y la mezcla resultante se calienta a 70-75 °C.

La emulsión se prepara al añadir lentamente la fase B sobre la fase A con agitación rápida con una turbina.

Una vez que la mezcla se enfría hasta 40 °C, fase C: se añade polímero Novemer™ EC-1 [INCI: ACEITE MINERAL (PARAFINA LIQUIDA); AGUA (AQUA); CROSPOLÍMERO DE ACRILATOS/ACRILAMIDA; POLISORBATO 85], fragancia [INCI: FRAGANCIA (PERFUME)] y una premezcla de péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en agua y octano-1,2-diol [INCI: AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1]) a la mezcla anterior.

El pH se ajusta a 6,0 - 6,5 con el ingrediente de la fase D hidróxido de sodio al 20 % p/p [INCI: AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO]).

Tabla 24

Fase INGREDIENTE (nombre INCI)

% en peso

A1 AGUA 69,10

A1 PROPANODIOL 10,00

A1 PENTILENGLICOL 2,00

A1 EDTA DISÓDICO 0,20

A2 CARBOMER 0,50

A3 FOSFATO DE CETIL POTASIO 0,50

B ADIPATO DE DIISOPROPILO 5,00

B [ ESTEARATO DE GLICERILO; ALCOHOL CETEARÍLICO, PROTEÍNA DE TRIGO 5,00

HIDROLIZADA PALMITOIL POTASIO]

B COCOATO DE ETILHEXILO 2,50

B DIMETICONA 1,00

B ACETATO DE TOCOFERILO 0,50

B FENOXIETANOL [ACEITE MINERAL (PARAFINA LIQUIDA); AGUA 0,50

C (AQUA); CROSPOLÍMERO DE ACRILATOS/ACRILAMIDA; POLISORBATO 85] 1,00

C FRAGANCIA (PERFUME) [AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; 0,20

C FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1] 2,00

D [AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO] _q,s_______ Ejemplo 26

Preparación de una composición cosmética (loción) que contiene H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1)

En un recipiente adecuado, se disuelven los ingredientes de la fase A1: agua [INCI: AGUA (AQUA)], Zemea™ [INCI: PROPANODIOL], glicerina [INCI: GLICERINA], sorbato de potasio [INCI: SORBATO DE POTASIO] y Dissolvine® NA2 [INCI: EDTA DISODICO].

Ingrediente de la fase A2: Se añade el polímero Carbopol® Ultrez 30 [INCI: CARBOMER] en la mezcla anterior. Una vez dispersada, fase A3: se introduce goma xantana [INCI: GOMA XANTANA]. A continuación, la mezcla se calienta a 70-75 °C.

En un recipiente separado, se mezclan los ingredientes de la fase B: aceite de semilla de Meadowfoam Fancor® [INCI: ACEITE DE SEMILLA DE LIMNANTHES ALBA (MEADOWFOAM)], Gel Kodasil 600 IDD [INCI: ISODODECANO; CROSPOLIMERO DE VINIL DIMETICONA/LAURIL DIMETICONA; DIMETICONA; LAURIL DIMETICONA], Astro-sil 2C 350 [INCI: DIMETICONA], éster CATC Schercemol™ [INCI: COPOLIMERO DE ÁCIDO COCOIL ADIPICO/TRIMETILOLPROPANO; TRIMETILOLPROPANO], éster DIS Schercemol™ [INCI: SEBACATO DE DIISOPROPILO], acetato de tocoferilo [INCI: ACETATO DE TOCOFERILO] y Phenoxetol™ [INCI: FENOXIETANOL] y la mezcla resultante se calienta a 70-75 °C.

Una vez que la mezcla se enfría hasta 40 °C, fase C: se añade polímero Novemer™ EC-2 [INCI: AGUA (AQUA); CROSPOLIMERO DE ACRILATOS DE SODIO/METACRILATO DE BEHENET-25; POLIDECENO HIDROGENADO, GLUCÓSIDO DE LAURILO], SA-SB-300 (7 %) [INCI: SILICE; DIMETICONA], Fragancia [INCI: FRAGANCIA (PERFUME)] y una premezcla de péptido H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) en agua y octano-1,2-diol [INCI: AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1]) a la mezcla anterior.

El pH se ajusta a 6,0 - 6,5 con el ingrediente de la fase D hidróxido de sodio al 20 % p/p [INCI: AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO])

Tabla 25

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso

A1 AGUA 63,60

A1 PROPANODIOL 10,00

A1 GLICERINA 5,00

A1 SORBATO DE POTASIO 0,10

A1 EDTA DISODICO 0,20

A2 CARBOMER 0,30

A3 GOMA XANTANA 0,20

B ACEITE DE SEMILLA DE LIMNANTHES ALBA (MEADOWFOAM) [ISODODECANO; 5,00

CROSPOLIMERO DE VINIL DIMETICONA/LAURIL DIMETICONA

B ; DIMETICONA; LAURIL DIMETICONA] 3,00

B DIMETICONA [COPOLIMERO DE ÁCIDO COCOIL ADIPICO/TRIMETILOLPROPANO 3,00

B ; TRIMETILOLPROPANO] 2,00

B SEBACATO DE DIISOPROPILO 2,00

B ACETATO DE TOCOFERILO 0,50

B FENOXIETANOL [AGUA (AQUA); 0,50

C CROSPOLIMERO DE ACRILATOS DE SODIO/METACRILATO DE BEHENET-25; 1,50

POLIDECENO HIDROGENADO, GLUCÓSIDO DE LAURILO]

C [SILICE; DIMETICONA] 1,00

C FRAGANCIA (PERFUME) [AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; 0,10

C FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1] 2,00

Ejemplo 27

Preparación de una composición de gel-crema (placebo)

En un recipiente adecuado, se dispersan los ingredientes de la fase A: agua [INCI: AGUA (AQUA)], Zemea™ [INCI: PROPANODIOL], Phenoxetol® [INCI: FENOXIETANOL], Dissolvine® NA2 [INCI: EDTA DISODICO] y sorbato de potasio granular [SORBATO DE POTASIO].

Ingrediente de la fase A1: Se añade polímero Carbopol® Ultrez 21 [INCI: CROSPOLIMERO DE ACRILATOS/ ACRILATO DE ALQUILO C10/30] en la mezcla anterior con agitación. Una vez dispersada, fase A2: se añade goma xantana [INCI: GOMA XANTANA] a la mezcla anterior y se agita hasta su completa dispersión.

En un recipiente separado, se pesan los ingredientes de la fase B: éster Schercemol™ 1818 [INCI: ISOESTEARATO DE ISOSTEARILO].

El pH se ajusta a 6,0 - 6,5 con el ingrediente de la fase D: hidróxido de sodio al 20 % p/p [INCI: AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO])

Tabla 26

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % en peso

A AGUA 85,50

A PROPANODIOL 10,00

A FENOXIETANOL 0,35

A EDTA DISÓDICO 0,20

A SORBATO DE POTASIO 0,10

A1 CROSPOLIMERO DE ACRILATOS/ ACRILATO DE ALQUILO 0,65

C10/30

A2 GOMA XANTANA 0,20

B ISOESTEARATO DE ISOSTEARILO 2,00

D [AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO] 1,00

Ejemplo 28

Preparación de una composición de gel-crema que comprende H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1) al 5 % (p/p)

Ingrediente de la fase A1: se añade el polímero Carbopol® Ultrez 21 [INCI: CROSPOLIMERO DE ACRILATOS/ ACRILATO DE ALQUILO C10/30] en la mezcla anterior con agitación. Una vez dispersada, fase A2: se añade goma xantana [INCI: GOMA XANTANA] a la mezcla anterior y se agita hasta su completa dispersión.

Fase C: Se añade solución PEP-1 [INCI: AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; CAPRILILGLICOL; NONAPÉPTIDO-1] a la mezcla anterior.

Tabla 27

Fase INGREDIENTE (nombre INCI) % de peso

A AGUA 80,50

A PROPANODIOL 10,00

A FENOXIETANOL 0,35

A EDTA DISÓDICO 0,20

A SORBATO DE POTASIO 0,10

A1 CROSPOLIMERO DE ACRILATOS/ ACRILATO DE ALQUILO C10/30 0,65

A2 GOMA XANTANA 0,20

B ISOESTEARATO DE ISOSTEARILO 2,00

C [AGUA (AQUA); FOSFATO DE SODIO; FOSFATO DE DISODIO; 5,00

CAPRILILGLICOL;

NONAPÉPTIDO-1]

D [AGUA (AQUA); HIDRÓXIDO DE SODIO] 1,00

Ejemplo 29

Estudio in vivo para la evaluación del efecto energizante de la aplicación a corto plazo en voluntarias de piel caucásica del ingrediente activo de acuerdo con la invención.

La piel tiene un reloj interno. Sus propiedades esenciales siguen una regulación circadiana y es alrededor del mediodía cuando la apariencia del rostro se ve mejor. Pero condiciones como el trabajo por turnos o la privación de sueño pueden provocar una desincronización de las funciones biológicas de la piel. El ejemplo en la presente descripción se realizó para demostrar que la composición que comprende el péptido de la invención tiene un efecto energizante y es capaz de hacer avanzar el reloj biológico de nuestra piel según se evalúa al medir la microcirculación de la piel, el volumen de las bolsas en los ojos y la funcionalidad de barrera de la piel.

El estudio se lleva a cabo durante 7 días. Dieciocho voluntarias caucásicas, con edades comprendidas entre los 36 y los 46 años, se dividen en dos grupos. Uno de los grupos aplica la composición descrita en el Ejemplo 28 en todo el rostro por la mañana y una crema placebo descrita en el Ejemplo 27 por la noche. El segundo grupo de voluntarias aplica una crema placebo descrita en el Ejemplo 27 en todo el rostro dos veces al día, por la mañana y por la noche. Los sujetos sirven como su propia referencia y los resultados obtenidos a los 7 días se comparan con los obtenidos en el momento inicial. Las mediciones a los 7 días se realizan después de la privación del sueño: las voluntarias solo duermen 4 horas y las mediciones se toman temprano en la mañana después de 1 hora de aplicación del producto. Los resultados obtenidos con la composición del Ejemplo 28 se comparan con los obtenidos con la crema placebo. Microcirculación cutánea

Las mediciones de la microcirculación cutánea se toman con Tissue Viability Imager (TiVi) (WheelsBridge™) en cada mejilla después de 7 días de la aplicación del producto. Los resultados se muestran en la Tabla 28.

Tabla 28. Cambio de la microcirculación de la piel después de 7 días de aplicación del producto.

______________________________ % de cambio frente a los valores iniciales

Crema activa (%) 7

______ Crema placebo (%)_______________________ -11_________________ Los resultados demuestran que, después de 7 días de aplicación de la composición de la invención, existe un aumento de la microcirculación en comparación con el placebo y frente al momento inicial.

Volumen de la bolsa en los ojos (volumen de la bolsa en los ojos)

El volumen de la bolsa en los ojos se mide con el sistema Primos lite 3D (Canfield) después de 7 días de aplicación del producto en un ojo seleccionado al azar. Los resultados se muestran en la Tabla 29.

Tabla 29. Cambio del volumen de la bolsa en los ojos después de 7 días de la aplicación del producto en el ojo seleccionado al azar.

_______________________ % de cambio frente a los valores iniciales

Crema activa (%) -17

Crema placebo (%)____________________-4___________________

Los resultados demuestran que, después de 7 días de aplicación del ingrediente activo, existe una disminución en el volumen de las bolsas en los ojos en comparación con el placebo y en comparación con el momento inicial.

Coeficiente de función de barrera de la piel

Se miden tres parámetros diferentes asociados con la función de barrera de la piel después de 7 días de aplicación del ingrediente activo. La hidratación se mide con un Corneometer® CM825 (Courage Khazaka), la pérdida de agua transepidérmica (TEWL) con un Vapometer (Delfin Technologies) y el contenido de sebo con un Sebumeter® SM810 (Courage Khazaka). El coeficiente de función de barrera de la piel se calcula al sumar los valores obtenidos al medir la hidratación y el sebo y restar el valor TEWL. Los resultados se muestran en la Tabla 30.

Tabla 30. Aumento del coeficiente de barrera de la piel después de 7 días de aplicación del producto.

% de cambio frente a los valores _________________________________________ iniciales______________

Crema activa (%) 15

Crema placebo (%) -1

Los resultados muestran que, después de 7 días de aplicación del ingrediente activo, existe un aumento del coeficiente de función de barrera de la piel en comparación con el placebo y frente al momento inicial.

Por lo tanto, la composición que comprende el péptido de la invención es capaz de hacer avanzar el reloj biológico como lo demuestra un aumento de la microcirculación de la piel, una reducción del volumen de las bolsas en los ojos y una mejora de la función de barrera de la piel temprano en la mañana, incluso después de la privación de sueño. Ejemplo 30

Estudio in vivo para la evaluación del efecto energizante y antienvejecimiento después de la aplicación a largo plazo en voluntarias de piel caucásica.

El envejecimiento y el "desfase horario" disminuyen la capacidad de la piel para configurar el reloj del ritmo circadiano interno, lo que conduce a una desincronización de las funciones biológicas de la piel a lo largo del día. El estudio tuvo como objetivo demostrar que el ingrediente activo de acuerdo con la invención es capaz de hacer avanzar el reloj biológico de nuestra piel lo que conduce a propiedades antienvejecimiento.

El estudio se lleva a cabo durante 28 días. Cuarenta y una voluntarias caucásicas, con edades comprendidas entre 31 y 46 años, se dividen en dos grupos. Uno de los grupos aplica la composición descrita en el Ejemplo 28 en todo el rostro por la mañana y una crema placebo descrita en el Ejemplo 27 por la noche. El segundo grupo de voluntarias aplica una crema placebo descrita en el Ejemplo 27 en todo el rostro dos veces al día, por la mañana y por la noche. Los sujetos sirven como su propia referencia y los resultados obtenidos a los 28 días se comparan con los obtenidos en el momento inicial. Las mediciones se realizan temprano en la mañana. Los resultados obtenidos con la composición del Ejemplo 28 se comparan con los obtenidos con la crema placebo.

El efecto energizante y antienvejecimiento del principio activo de acuerdo con la invención en la cara se evalúa al medir la luminosidad de la piel, la visibilidad de las arrugas y el volumen de las bolsas en los ojos.

Luminosidad de la piel

Las imágenes del rostro de las voluntarias se toman con Camerascan (Orion Concept) y las mediciones de luminosidad se toman después de 28 días de aplicación del producto. Los resultados se muestran en la Tabla 31. Tabla 31. Aumento de la luminosidad de la piel a los 28 días de aplicación del producto. Significación estadística con respecto a la crema placebo: *** p<0,001 calculado mediante el uso de una prueba t de Student pareada. ________________________________________________ % de incremento frente a los valores iniciales________

Crema activa (%) 3,5 (***)

____________ Crema placebo (%)_____________________________________ 1,4_________________________ Los resultados demuestran que, después de 28 días de aplicación del ingrediente activo, existe un aumento estadísticamente significativo de la luminosidad de la piel en comparación con el tiempo inicial. El aumento de la luminosidad de la piel también es mayor con el ingrediente activo que con la crema placebo.

Visibilidad de las arrugas

Se toman imágenes del rostro de las voluntarias con Camerascan (Orion Concept) y se mide la visibilidad de las arrugas después de 28 días de aplicación del producto. Los resultados se muestran en la Tabla 32.

Tabla 32. Cambio de visibilidad de las arrugas después de 28 días de aplicación del producto. Significación estadística con respecto a la crema placebo: * p<0,05 calculado mediante el uso de una prueba t de Student pareada. __________________________________________________ % de cambio frente a los valores iniciales_________

Crema activa (%) -15 (*)

____________ Crema placebo (%)______________________________________-6_________________________ Se demuestra que, después de 28 días de aplicación del ingrediente activo, existe una disminución estadísticamente significativa de la visibilidad de las arrugas en la piel en comparación con el momento inicial. Además, la reducción de la visibilidad de las arrugas es mayor con el ingrediente activo que con la crema placebo.

Volumen de las bolsas en los ojos (volumen de las bolsas en los ojos)

El volumen de las bolsas en los ojos se mide con el sistema Primos lite 3D (Canfield) después de 28 días de aplicación del producto en un ojo seleccionado al azar. Los resultados se muestran en la Tabla 33.

Tabla 33. Cambio del volumen de las bolsas en los ojos después de 28 días de la aplicación del producto en el ojo seleccionado al azar. _______________________________________% de cambio frente a los valores iniciales

Crema activa (%) -11

__________ Crema placebo (%)_____________________________-8__________________

Estos resultados que se muestran en la Tabla 33 demuestran que, después de 28 días de aplicación del ingrediente activo, existe una disminución del volumen de las bolsas en los ojos en comparación con el placebo y frente al momento inicial.

Por lo tanto, el principio activo de acuerdo con la invención es capaz de hacer avanzar el reloj biológico de nuestra piel lo que conduce a propiedades antienvejecimiento como lo demuestra la reducción de la visibilidad de las arrugas, la reducción del volumen de las bolsas en los ojos y un aumento de la luminosidad de la piel.

Referencias

[1] Hastings M, O'Neill JS, Maywood ES. (2007). Circadian clocks: regulators of endocrine and metabolic rhythms. J Endocrinol. 195:187-198.

[2 ] Ko CH, Takahashi JS. (2006) Molecular components of the mammalian circadian clock. Hum Mot Genet 15. Núm. 2:R271— R277.

[3] Mohawk, J. A., Green, C. B., y Takahashi, J. S. (2012). Central and peripheral circadian clocks in mammals. Annual Review of Neuroscience. 35, 445-462.

[4] Geyfman MI, Andersen B. (2009). How the skin can tell time. J Invest Dermatol. 129(5):1063-6.

[⁵] Matsui MS, Pelle E, Dong K, Pernodet N. (2016). Biological rhythms in the skin. hat J Mol Sci. 17,801.

[6] Feingold K, Elias P. Role of lipids in the formation and maintenance of the cutaneous permeability barrier. Biochimica et Biophysica Acta. Marzo de 2014; 1841(3):280-294

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I):

R1-Wm-Xn-AA1-AA2-AA3-AA4-AA5-AA6-AA7-AA8-AAg-Yp-Zq-R2 (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde:

AA¹es Phe;

AA²es Trp;

AA³se selecciona del grupo que consiste en Met, Leu e Ile;

AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys, Arg y Gln;

AA⁵es Arg;

AA6 es Lys;

AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Arg, Lys e His;

AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile, Leu y Met; y

AAg es Pro;

W, X, Y y Z son cada uno independientemente un aminoácido;

m, n, p y q son cada uno independientemente 0 o 1;

m+n+p+q es menor o igual que 2;

R²se selecciona del grupo que consiste en -NR³R⁴, -OR³, -SR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en H, un polímero derivado de polietilenglicol, un grupo alifático no cíclico, aliciclilo, heterociclilo, heteroarilalquilo, arilo y aralquilo; y

R¹y R²no son aminoácidos.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde AA³es Met y, opcionalmente, AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg o AA⁴es Lys o AA⁴es Arg.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg, y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val, Ile y Leu.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde AA³es Leu y, opcionalmente, AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg o AA⁴es Lys o AA⁴es Arg.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde AA⁴se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg, AA⁷se selecciona del grupo que consiste en Lys y Arg y AA8 se selecciona del grupo que consiste en Val e Ile.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde AA³es Ile y, opcionalmente, AA⁴es Gln.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, en donde dicho compuesto es de una fórmula seleccionada del grupo que consiste en:

R-i-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R²(ii)

;

R¹-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-Yp-Zq-R²(iii)

R¹-Wm-Xn-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-Yp-Zq-R²(iv)

R-i-Wm-Xn-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R²(v)

R-i-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-Yp-Zq-R²(vi)

Ri-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-Yp-Zq-R²(vii)

Ri-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-Yp-Zq-R²(viii) ; y

Ri-Wm-Xn-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-Yp-Zq-R²(ix) y en donde Ri R², W, X, Y Z y m, n, p y q son como se definió para la fórmula (I) en la reivindicación 1.

8. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde R¹se selecciona del grupo que consiste en H, acetilo, palmitoilo, lauroilo o miristoilo; y R²es -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo C¹-C¹⁶.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, en donde R¹se selecciona del grupo que consiste en H, acetilo o palmitoilo; y R²es -NR³R⁴o -OR³, en donde R³y R⁴se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo C¹-C¹⁶.

10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona de:

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-1);

Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-2);

Ac-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-3);

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-4);

Palm-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-OH (PEP-5);

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC6H13 (PEP-7);

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NHC16H33 (PEP-8);

H-Phe-Trp-Leu-Arg-Arg-Lys-Lys-Ile-Pro-NH²(PEP-9);

H-Phe-Trp-Ile-Gln-Arg-Lys-His-Met-Pro-NH²(PEP-10);

H-Phe-Trp-Leu-Lys-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-11);

H-Phe-Trp-Met-Arg-Arg-Lys-Arg-Val-Pro-NH²(PEP-12);

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Lys-Val-Pro-NH²(PEP-13);

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Ile-Pro-NH²(PEP-14);

y

H-Phe-Trp-Met-Lys-Arg-Lys-Arg-Leu-Pro-NH²(PEP-15).

11. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para el tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas.

12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde dicho tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico, es el tratamiento y/o prevención de los síntomas del envejecimiento de la piel; energizar la piel; el mantenimiento y/o mejora de la función de barrera de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la hidratación de la piel; el mantenimiento y/o mejora de la microcirculación de la piel y/o el tono de la piel; el tratamiento y/o prevención de los síntomas de fatiga cutánea; el tratamiento y/o prevención de las bolsas de los ojos; o el mantenimiento y/o mejora de la luminosidad de la piel.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 11 o la reivindicación 12, en donde la piel es la piel a primera hora de la mañana o la piel es la de un sujeto cuyo ritmo circadiano se ha alterado.

14. Una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), sus estereoisómeros y/o sus sales cosmética o farmacéuticamente aceptables, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, y al menos un excipiente o adyuvante cosméticamente aceptable.

15. Un método de tratamiento y/o cuidado cosmético, no terapéutico de la piel, cabello, uñas y/o membranas mucosas de un sujeto que comprende administrar una cantidad cosméticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables o una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de dicho compuesto, sus estereoisómeros y/o sus sales cosméticamente aceptables, al sujeto.