ES2908917T3

ES2908917T3 - Dispositivo de ensayo cardiaco de una etapa

Info

Publication number: ES2908917T3
Application number: ES17782044T
Authority: ES
Inventors: Emil Katz; Tzvi Tzubery
Original assignee: Novamed Ltd
Current assignee: Novamed Ltd
Priority date: 2016-04-13
Filing date: 2017-03-22
Publication date: 2022-05-04
Anticipated expiration: 2037-03-22
Also published as: US20190154705A1; CN109561887A; RU2018135637A; WO2017179036A1; EP3442428A4; EP3442428B1; EP3442428A1; RU2721726C2; JP2019514009A; RU2721726C9; RU2018135637A3; IL245091B; IL245091A0; JP7251982B2

Abstract

Un dispositivo para la detección de marcadores de. infarto agudo de miocardio (IAM) en una muestra de sangre humana, que comprende una mezcla de dos anticuerpos o conjugados de anticuerpo, cada uno de ellos específico para un marcador cardíaco, que se inmovilizan en una tira de inmunoensayo en una banda para reaccionar con la troponina cardíaca (TC) a una concentración umbral de 0,5 ng/ml y con la proteína de unión a ácidos grasos de tipo cardíaco (HFBP) a una concentración umbral de 5 ng/ml.

Description

DESCRIPCIÓN

Dispositivo de ensayo cardiaco de una etapa

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un inmunoensayo para detectar marcadores cardíacos durante las primeras etapas del infarto de miocardio. En particular, la invención proporciona un dispositivo para detectar una combinación relevante para el diagnóstico de dos marcadores sanguíneos tan pronto como media hora después de la aparición de los síntomas de un infarto agudo de miocardio.

Antecedentes de la invención

Alrededor de un millón de personas tienen un infarto agudo de miocardio (IAM) cada año solo en los Estados Unidos, de los cuales el 10 % puede morir dentro de un año, según la gravedad del acontecimiento y la calidad de la intervención. En cualquier caso, la asistencia médica, incluida la intervención coronaria percutánea primaria y/o la terapia trombolítica si es necesaria, debe proporcionarse lo antes posible. Se demostró que acortar la duración entre la aparición del dolor torácico y la reperfusión a menos de unas cuatro horas es fundamental para reducir la necrosis miocárdica y mejorar la función cardíaca y reducir la mortalidad a los 30 días. [Ho Y.C. et a l, Crit. Care Med., 42 (2014), 1788-1796]. El diagnóstico precoz del IAM es importante, pero la sensibilidad del ECG clásico para diagnosticar el IAM en los pacientes que presentan dolor torácico de tipo isquémico no supera el 50 % [The Merck Manual, 17a ed. (1999), p. 1673]. Los marcadores cardíacos en sangre son, por lo tanto, de inmensa importancia. Diversas proteínas que se escapan de las células miocárdicas lesionadas hacia el torrente sanguíneo han servido para evaluar la lesión cardíaca, incluida la mioglobina o enzimas, tales como la aspartato transaminasa, la lactato deshidrogenasa o la creatina fosfoquinasa. Hoy en día, son principalmente las troponinas las que se han reconocido como suficientemente específicas para detectar el daño miocárdico. Por desgracia, las troponinas cardíacas, aunque permanecen elevadas hasta 2 semanas después del acontecimiento de IAM, no aparecen de inmediato y solo pueden medirse bien varias horas después del acontecimiento de IAM, por lo que los primeros momentos, cuando el diagnóstico correcto es más crítico, no están bien cubiertos. Por lo tanto, un objeto de esta invención es proporcionar un método para diagnosticar el infarto de miocardio agudo mediante la detección de marcadores sanguíneos adecuados. Se ha descubierto que la proteína de unión a ácidos grasos de tipo cardíaco (HFBP, por sus siglas en inglés) es otro marcador de iAm y, convenientemente, la proteína aparece en la sangre dentro de aproximadamente una hora y alcanza su punto máximo dentro de aproximadamente cinco horas dentro del acontecimiento de IAM [Tanaka T. et a l, Clinical Biochemistry, 24 (1991), 195-201; Van Nieuwenhoven F.A. et a l, Circulation, 92 (1995), 2848-2854], pero se ha descubierto que la precisión diagnóstica de la HFBP como marcador único no era suficiente en el entorno clínico [Park S.Y. et a l. Clin. Neurol. Neurosurg., 115 (2013), 405-410]. Otro objeto de esta invención consiste en proporcionar un método para diagnosticar un infarto de miocardio agudo mediante la detección de más de un marcador sanguíneo.

Otro objeto de esta invención es proporcionar un dispositivo para diagnosticar el IAM que emplea más de un marcador sanguíneo del infarto de miocardio.

Es un objeto adicional de esta invención proporcionar un dispositivo para ayudar a diagnosticar el IAM dentro del período de varias horas después del acontecimiento de IAM.

Otros objetos y ventajas de la presente invención surgirán a medida que avance la descripción.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona un dispositivo para detectar marcadores de infarto agudo de miocardio (IAM) en una muestra de sangre humana, y el dispositivo comprende una mezcla de al menos dos anticuerpos o conjugados de anticuerpo que reaccionan con al menos la troponina cardíaca (TC) y con la proteína de unión a ácidos grasos de tipo cardíaco (HFBP). Dichos marcadores comprenden TC y HFBP, en los que dichos conjugados de anticuerpo reaccionan simultáneamente con dichos marcadores presentes en dicha muestra de sangre, proporcionando así una señal visible si la concentración de cada uno de dichos marcadores es superior a un cierto umbral predeterminado. Los anticuerpos, o conjugados de anticuerpo, reaccionan con dichos marcadores sanguíneos solo después de separar el plasma sanguíneo de las células sanguíneas; las células sanguíneas no entran en contacto con dichos anticuerpos, tal como saben los expertos en la técnica, ya que las células sanguíneas se eliminan primero con un prefiltro; por lo general, el plasma migra hacia el anticuerpo o el conjugado de anticuerpo para formar un complejo de marcadoranticuerpo o un complejo de conjugado de anticuerpo-marcador, que proporciona una señal visible ya sea por sí mismo o después de reaccionar con reactivos adicionales. El umbral de cada marcador se deriva de la distribución de su concentración en sangre en la población sana. En una realización de la invención, dicho umbral es superior al 95° percentil en dicha distribución para cada uno de los marcadores. En otra realización de la invención, dicho umbral es superior al 99° percentil en dicha distribución para cada uno de los marcadores. En una realización preferida de la invención, dicho umbral para cada marcador es inferior a la concentración máxima del marcador en la sangre que no proporciona una señal visible durante la reacción con dichos anticuerpos o conjugados de anticuerpo, si dicho marcador está solo en la muestra. En una realización, dicho umbral para la TC es de 0,5 ng/ml y dicho umbral para la HFBP es de 5 ng/ml en el dispositivo según la invención. En un ejemplo, dicho umbral para la TC es de aproximadamente 1 ng/ml y dicho umbral para la HFBP es de aproximadamente 10 ng/ml. En una realización, el dispositivo de la invención proporciona una señal visible si la concentración de TC en dicha muestra de sangre es de al menos 0,5 ng/ml y simultáneamente la concentración de HFBP en dicha muestra de sangre es de al menos 5 ng/ml. En un ejemplo, el dispositivo de la invención proporciona una señal visible si las concentraciones de TC y HFBP en dicha muestra de sangre son de al menos 1 ng/ml y 5 ng/ml, respectivamente. En otro ejemplo más, el dispositivo de la invención proporciona una señal visible si las concentraciones de TC y HFBP en dicha muestra de sangre son de al menos 1 ng/ml y 10 ng/ml, respectivamente. Dicha troponina puede comprender proteínas seleccionadas de troponina-C, troponina-I, troponina-T, un complejo de dichas troponinas o una mezcla que comprende al menos dos de dichas troponinas. Preferiblemente, se emplea la troponina-I o la troponina-T como marcador cardiaco. Dicha mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo suele estar inmovilizada en una tira de inmunoensayo, en el dispositivo de la invención. Dicha tira puede ser parte de un dispositivo de inmunoensayo, por ejemplo, de un kit de inmunoensayo de flujo lateral. En una realización, dicho dispositivo de inmunoensayo comprende un ELISA. Dicha mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo se inmoviliza en una tira de inmunoensayo como una banda estrecha, que está configurada para cambiar de color en presencia de los antígenos, concretamente de dichos marcadores sanguíneos de IAM. Dicha señal visible es, por lo tanto, un cambio de color de dicha banda, provocado por una reacción de formación de color del marcador con un conjugado de anticuerpo. En otro aspecto de la invención, dicha mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo puede inmovilizarse en dicha tira como varias bandas estrechas que difieren en dicho umbral predeterminado y proporcionan señales visibles a diferentes concentraciones de dichos marcadores (diferentes en sensibilidad). El dispositivo de la invención puede comprender, de forma ventajosa, bandas de referencia, que presentan una intensidad de color comparativa antes o después del contacto con dicha muestra de sangre. Las bandas comparativas pueden comprender anticuerpos o conjugados de anticuerpo que reaccionan con proteínas típicas de la sangre (albúminas, inmunoglobulinas, etc.), y los anticuerpos o conjugados de anticuerpo se conjugan de tal manera y se inmovilizan en una cantidad tal que proporcionan una señal de color de la intensidad deseada en contacto con dicha muestra de sangre. Las bandas comparativas pueden comprender un color de la intensidad deseada presente en el dispositivo antes de ponerse en contacto con dicha muestra, y estable también después de ponerse en contacto con dicha muestra. Dicho color de la intensidad deseada puede corresponder a la señal de color esperada proporcionada por las concentraciones de marcadores relevantes en la muestra de sangre. Un conjunto de bandas comparativas permite evaluar la concentración de los marcadores cardíacos en la muestra de sangre, al comparar una señal visible proporcionada por un marcador cardíaco en sangre o una combinación de marcadores con el conjunto de bandas comparativas.

En una realización preferida de la invención, se proporciona un dispositivo para detectar un acontecimiento de IAM que comprende una o más mezclas de anticuerpos simultáneamente específicos tanto para TC como para HFBP, inmovilizándose los anticuerpos o conjugados de anticuerpo en una tira de inmunoensayo como una o varias bandas estrechas y que reaccionan con los marcadores cardíacos TC y HFBP en al menos una muestra de sangre para proporcionar una o más señales visibles si la concentración de cada uno de dichos marcadores es superior a un cierto umbral predeterminado, comprendiendo dicha tira además bandas de referencia que exhiben unas intensidades de color comparativas ya sea antes o después del contacto con dicha muestra de sangre, en el que dichas varias bandas estrechas reaccionan opcionalmente con dichos marcadores en dicha muestra de sangre con diferentes sensibilidades y proporcionan dichas señales visibles a diferentes concentraciones de marcador. El dispositivo de la invención proporciona una evaluación de la concentración de TC y/o HFBP en dicha muestra, ya sea en base a la comparación de las intensidades de dichas una o más señales con dichas intensidades comparativas o en base a la comparación de dos señales correspondientes a dos concentraciones de marcador diferentes. En un aspecto de la invención, la evaluación de la concentración de TC y/o HFBP en dicha muestra proporciona una evaluación del tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el acontecimiento de IAM. En un ejemplo del dispositivo según la invención, dicho umbral predeterminado es de 0,5 ng/ml para TC y de 10 ng/ml para HFBP para una de dichas bandas estrechas, en el que una señal positiva indica que se ha producido un acontecimiento de IAM en el donante de dicha muestra al menos hace una hora. En otro ejemplo del dispositivo, dicho umbral predeterminado es de 1 ng/ml para TC y de 20 ng/ml para HFBP para una de dichas bandas estrechas, en el que una señal positiva indica que se ha producido un acontecimiento de IAM en el donante de dicha muestra al menos hace tres horas. En otro ejemplo del dispositivo, dicho umbral predeterminado es 4 ng/ml para TC y de 80 ng/ml para HFBP para una de dichas bandas estrechas, en el que una señal positiva indica que se ha producido un acontecimiento de IAM en el donante de dicha muestra al menos hace nueve horas. Las señales combinadas de varias bandas "bien ajustada" permiten evaluaciones más precisas. Por ejemplo, el dispositivo puede comprender una banda con un umbral de 0,5 ng/ml para TC y de 10 ng/ml para HFBP, y otra banda con un umbral de 1 ng/ml para TC y de 20 ng/ml para HFBP, en el que una señal positiva en la primera banda junto con una señal negativa en la última banda indican que se ha producido un acontecimiento de IAM en el donante de dicha muestra en un momento entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6 horas.

En el presente documento se proporciona un método para diagnosticar un acontecimiento cardíaco, particularmente un IAM, que comprende tomar una muestra de sangre de un sujeto sospechoso de tal acontecimiento, por ejemplo, un sujeto que sufre de dolor torácico de tipo isquémico, y aplicar la muestra a un dispositivo de inmunoensayo que comprende una mezcla de al menos dos anticuerpos o conjugados de anticuerpo que reaccionan con al menos TC y HFBP. En otro aspecto de la invención, se toman al menos dos muestras en dos momentos diferentes, en el que las evaluaciones de concentración de TC y/o HFBP en dichas dos muestras mejoran la precisión en la evaluación del momento del acontecimiento IAM.

Descripción detallada de la invención

Los inventores descubrieron que la detección simultánea de dos marcadores sanguíneos cardíacos mediante el empleo de una mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo puede obviar los inconvenientes de los métodos anteriores dirigidos a la confirmación temprana de un acontecimiento cardíaco en caso, por ejemplo, de un dolor torácico de tipo isquémico u otros síntomas. La invención proporciona un dispositivo de ensayo cardíaco de una sola etapa que permite una evaluación diagnóstica rápida en un sujeto con sospecha de infarto agudo de miocardio (IAM), dentro del período más crítico de varias horas desde el acontecimiento. En un aspecto, la invención proporciona un ensayo inmunocromatográfico de flujo lateral cualitativo que comprende una mezcla de dos anticuerpos o conjugados de anticuerpo, cada uno de ellos específico para un marcador cardíaco, con el objetivo de la detección simultánea de ambos marcadores a bajas concentraciones características de las primeras etapas de la enfermedad. acontecimiento cardíaco, mientras que la señal del inmunoensayo combinado proporcionada por ambos marcadores, si supera cierto nivel umbral, indica el acontecimiento. Uno de los marcadores es la troponina cardíaca (TC) y el otro es la proteína de unión a ácidos grasos de tipo cardíaco (HFBP). En un ejemplo, la HFBP se detecta aproximadamente media hora después de la aparición de los síntomas, siendo los niveles en ese momento de aproximadamente 5 ng/ml (los niveles basales en el 95 % de la población sana están en el intervalo de 0,5-3,5), mientras que la troponina-I se vuelve detectable aproximadamente tres horas después de los síntomas, cuando sus niveles están por encima de 1 ng/ml. Por ejemplo, los resultados clínicos mostraron el efecto aditivo de dos marcadores, en los que cada uno por sí solo era indetectable por debajo de una concentración específica (generalmente 1 ng/ml para troponina y 5 ng/ml para HFBP), pero ambos juntos en las mismas concentraciones proporcionaron resultados positivos verdaderos; en un ejemplo, 0,14 ng/ml de troponina o 4,92 ng/ml de FABP fueron indetectables, pero una muestra que contenía 0,14 ng/ml de troponina con 4,92 ng/ml de HFBP se volvió detectable.

Cuando se relaciona con “anticuerpo” en la descripción de la invención, la relación puede ser con un anticuerpo, así como con un derivado de anticuerpo o un conjugado de anticuerpo, siendo el aspecto relevante la capacidad del agente de reaccionar con el antígeno, es decir, con el marcador cardíaco. La mezcla de anticuerpos en un dispositivo 0 método según la invención puede comprender más de un anticuerpo contra un marcador; la mezcla puede comprender anticuerpos contra varias formas del marcador, tal como contra varias formas de troponina, o contra varios epítopos en el mismo marcador. Por supuesto, puesto que el dispositivo y el método según la invención emplean reacciones conocidas en la técnica, tales como reacciones del complejo de anticuerpo-antígeno con otro anticuerpo o conjugado de anticuerpo, el objetivo es conseguir una señal visible tan fuerte como sea necesario. En una realización de la invención, por ejemplo, el dispositivo comprende dos anticuerpos para la reacción con TC y un anticuerpo para la reacción con HFBP, y otros dos conjugados de anticuerpo para reaccionar con los complejos de TC y un conjugado de anticuerpo para reaccionar con los complejos de HFBP.

En un aspecto, el ensayo tiene como objetivo la determinación cualitativa de HFBP y troponina I en una muestra de sangre completa de un sujeto diagnosticado, y dichos marcadores son generalmente detectables en sangre dentro de 1 hora y dentro de 4 horas, respectivamente, después del daño miocárdico, cuando se verifican por separado, en el que debe señalarse que la práctica actual no se basa únicamente en la detección de HFBP.

Se han descrito medios para detectar por separado HFBP y troponina I; sin embargo, la invención combina dos reacciones separadas en un efecto que da como resultado una señal indicativa. En un aspecto importante de la invención, un dispositivo que comprende una mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo específicos para dos marcadores cardíacos detecta simultáneamente niveles mínimos combinados de troponina cardíaca I y/o HFBP; en una realización de la invención, dichos niveles mínimos pueden ser apenas detectables cuando se miden por separado. De forma ventajosa, el dispositivo de la invención proporciona resultados en pocos minutos, por ejemplo, de 10 a 15 minutos; lo que es muy importante, los resultados pueden obtenerse dentro de las primeras horas más críticas de un acontecimiento cardíaco, tal como dentro de cuatro horas, por ejemplo, dentro de tres horas o dentro de dos horas. El hecho es que un resultado positivo en la detección de niveles elevados de cualquiera de HFBP y TC después de un acontecimiento cardíaco sospechado en un sujeto indica una situación de emergencia y dirige al sujeto al hospital; la actitud novedosa de combinar ambos marcadores en una sola línea simplifica la interpretación de los resultados procesables. Además, la línea de ensayo común para dos marcadores cardíacos mejora la sensibilidad del ensayo, en el que los complejos de más anticuerpos o conjugados de anticuerpo, tales como anti-HFBP y antitroponina I, contribuyen a la intensidad de la misma banda. Gracias a este efecto de acumulación, se detectan cantidades más bajas de marcadores en una banda que comprende una mezcla de anticuerpos que en dos bandas separadas que comprenden anticuerpos o conjugados de anticuerpo por separado. Sin embargo, la principal ventaja del nuevo dispositivo y método es un efecto promediado de la combinación de señales en el período crítico de entre 1 y 4 horas desde un acontecimiento de IAM, lo que proporciona resultados rápidos y fiables casi en línea.

La invención se describirá e ilustrará adicionalmente en los siguientes ejemplos.

Ejemplos

Se obtuvieron conjugados de anticuerpo que proporcionaban una reacción de color con TC, HFBP o albúmina de suero humana, en particular anti-troponina I, anti-HFBP y anti-HSA. Los conjugados de anticuerpo se emplearon para la inmovilización, en bandas estrechas, en tiras de lechos capilares configurados para inmovilizar conjugados de anticuerpo. Las tiras se emplearon en la preparación de dispositivos de inmunoensayo de flujo lateral (“lateral flow immunoassay devices”, LFID). Mediante la inmovilización de una serie de cantidades/concentraciones de conjugado (volúmenes de ciertas concentraciones que se aplicarán a la tira para la inmovilización del conjugado correspondientes a diferentes cantidades totales de reactivos formadores de color en la banda), y haciendo reaccionar las bandas con una serie de muestras que contienen diferentes concentraciones de antígeno, se determinaron las cantidades de reactivo necesarias para las intensidades de señal deseadas para todos los antígenos. Se determinaron las siguientes cantidades/concentraciones umbral: la cantidad de anti-troponina I para detectar 1 ng/ml de troponina I en la muestra, y la cantidad de anti-FABP-3 para detectar 5 ng/ml de HFBP en la muestra, correspondiendo las cantidades umbral a la cantidad máxima que proporciona una señal de color imperceptible. Las muestras que comprendían 3 ng/ml de troponina-I o 15 mg/ml de HFBP proporcionaron, en las mismas condiciones, bandas de color bastante claras. Se empleó anti-HAS en tal cantidad para proporcionar una señal fuerte (aproximadamente 10 veces más fuerte que 3 ng/ml de troponina-I con la banda de troponina) y actuar como el control con el que trabaja principalmente el LFID. Se preparó una mezcla de conjugados de anticuerpo mezclando dicha cantidad umbral de anti-troponina I y dicha cantidad umbral de FABP-3.

Se prepararon nueve LFID, que comprendían todos una banda de HAS de control; tres comprendían la cantidad umbral para detectar 1 ng/ml de troponina-I, tres comprendían la cantidad umbral para detectar 5 ng/ml de HFBP y tres comprendían la banda con conjugados de anticuerpo mixtos que comprendían dichas cantidades umbral tanto de antitroponina-I como de anti-HFBP. Una muestra de sangre humana de un donante sano (niveles muy bajos de los marcadores cardíacos) se dividió en tres porciones: se agregó troponina-I a la primera porción hasta una concentración de 1 ng/ml, se agregó HFBP a la segunda porción hasta una concentración de 5 ng/ml, y ambos marcadores se añadieron en concentraciones de 1 y 5 ng/ml, respectivamente, en la tercera porción. Cada porción se aplicó a los LFID que comprendían el anticuerpo pertinente. Aparecieron señales perceptibles (+) o no aparecieron (-) en los dispositivos como se muestra en la tabla 1.

Tabla 1: La presencia (+) o ausencia (-) de una señal visible en nueve dispositivos. Tres dispositivos comprendían anti-TC, tres dispositivos anti-HFBP y tres la mezcla de anticuerpos; se aplicó una muestra de sangre que contenía 1 ng/ml de troponina-I añadida a los dispositivos anti-TC; se aplicó una muestra de sangre que contenía 5 ng/ml de HFBP a los dispositivos anti-HFBP; se aplicó una muestra de sangre que comprendía 1 ng/ml de troponina-I añadida y 5 ng/ml de HFBP añadida a los dispositivos de mezcla. C significa control, M significa marcador cardíaco.

La tabla muestra resultados consistentes proporcionados por los dispositivos (por triplicado). Las concentraciones de 1 y 5 ng/ml de los dos marcadores, respectivamente, corresponden a una etapa muy temprana del acontecimiento cardíaco. La tabla muestra que un dispositivo según la invención puede proporcionar información relevante que contribuya al diagnóstico precoz de un IAM.

Si bien esta invención se ha descrito en términos de algunos ejemplos específicos, son posibles muchas modificaciones y variaciones. Por lo tanto, se entiende que, dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la invención se puede realizar de forma diferente a como se describe específicamente.

Claims

REIVINDICACIONES

1 Un dispositivo para la detección de marcadores de. infarto agudo de miocardio (IAM) en una muestra de sangre humana, que comprende una mezcla de dos anticuerpos o conjugados de anticuerpo, cada uno de ellos específico para un marcador cardíaco, que se inmovilizan en una tira de inmunoensayo en una banda para reaccionar con la troponina cardíaca (TC) a una concentración umbral de 0,5 ng/ml y con la proteína de unión a ácidos grasos de tipo cardíaco (HFBP) a una concentración umbral de 5 ng/ml.
2. - El dispositivo de la reivindicación 1, en el que dicho umbral para cada marcador se deriva de la distribución de su concentración en sangre en la población sana.
3. - El dispositivo de la reivindicación 2, en el que dicho umbral es superior al 95° percentil, tal como el 99° percentil, en dicha distribución para cada uno de los marcadores.
4. - El dispositivo de la reivindicación 2, en el que dicho umbral para cada marcador es inferior a la concentración máxima del marcador que no proporciona una señal visible si dicho marcador está solo en la muestra.
5. - El dispositivo de la reivindicación 1, en el que dicha troponina comprende proteínas seleccionadas del grupo que consiste en troponina-C, troponina-I, troponina-T, un complejo de dichas troponinas y una mezcla que comprende al menos dos de dichas troponinas.
6. - El dispositivo de la reivindicación 1, en el que dicha tira de inmunoensayo es parte de un kit de inmunoensayo de flujo lateral.
7. - El dispositivo de la reivindicación 6, en el que dicha mezcla de anticuerpos o conjugados de anticuerpo se inmoviliza en dicha tira en bandas estrechas que difieren en dicho umbral y proporcionan dicha señal visible a diferentes concentraciones de dichos marcadores.
8. - El dispositivo de la reivindicación 1, que comprende un ELISA.
9. - El dispositivo de la reivindicación 1, que comprende una o más mezclas de anticuerpos o conjugados de anticuerpo, y dichas mezclas son simultáneamente específicas tanto para TC como para HFBP, estando inmovilizados los anticuerpos o conjugados de anticuerpo en una tira de inmunoensayo como una o varias bandas estrechas y que reaccionan con dichos marcadores en al menos una muestra de sangre para proporcionar una o más señales visibles si la concentración de cada uno de dichos marcadores es mayor que un cierto umbral predeterminado, comprendiendo dicha tira además bandas de referencia que exhiben unas intensidades de color comparativas antes o después del contacto con dicha muestra de sangre, en el que dichas varias bandas estrechas reaccionan opcionalmente con dichos marcadores en dicha muestra de sangre con diferentes sensibilidades y proporcionan dichas señales visibles a diferentes concentraciones de marcador.
10. - El dispositivo de la reivindicación 9, que proporciona una evaluación de la concentración de TC y/o HFBP en dicha muestra, basada en la comparación de las intensidades de dichas una o más señales con dichas intensidades comparativas o en la comparación de dos señales correspondientes a dos concentraciones de marcador diferentes, en el que dicha evaluación proporciona opcionalmente una estimación del tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el acontecimiento de IAM.
11. - El dispositivo de la reivindicación 9, en el que dicho umbral predeterminado es de 0,5 ng/ml para TC y de 10 ng/ml para HFBP para una de dichas bandas estrechas, y en el que una señal positiva indica que se produjo un acontecimiento de IAM en el donante de dicha muestra al menos hace una hora.
12. - El dispositivo de la reivindicación 9, en el que dicha al menos una muestra de sangre comprende al menos dos muestras tomadas en dos momentos diferentes, y en el que las evaluaciones de concentración de las concentraciones de TC y/o HFBP en dichas dos muestras mejoran la precisión en la evaluación del momento del acontecimiento de IAM.