ES2924775T3 - Métodos y composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer - Google Patents

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Abstract

La presente invención se relaciona con métodos y composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer. En particular, la presente invención se refiere a un método para mejorar la potencia de un inhibidor del punto de control inmunitario administrado a un sujeto como parte de un régimen de tratamiento para el cáncer, comprendiendo el método: administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un agente bloqueador del TNFα a un sujeto en combinación con el inhibidor del punto de control inmunitario. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos y composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer
Campo
La presente divulgación se encuentra en el campo de la medicina, en particular la oncología e inmunología. Antecedentes
Los puntos de control inmunitarios tales como el antígeno-4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) y muerte celular programada-1 (PD-1) son reguladores negativos clave de la respuesta inmunitaria anticancerígena, que limitan la activación de linfocitos y facilitan el escape inmunitario de las células tumorales y la progresión del cáncer. Anticuerpos monoclonales que inhiben CTLA-4 (ipilimumab, tremelimumab) o PD-1 (nivolumab, pembrolizumab) han demostrado una eficacia significativa en el tratamiento de melanoma metastásico, promoviendo una alta tasa de respuesta y un control tumoral duradero (Márquez-Rodas I, Ann Transl Med. 2015; 3(18):267). A pesar de los prometedores resultados, aproximadamente el 40% de los pacientes no presentan una respuesta terapéutica y una proporción significativa de los pacientes que responden experimentan recaída del tumor en los 2 años posteriores a la inducción del tratamiento. Recientemente, se demostró que la señalización de TNF dependiente de TNF-R1 del huésped altera la respuesta inmunitaria dependiente de células T CD8+ contra el melanoma (Bertrand et al., Cancer Research, 2015;75(13):2619-28). El bloqueo (usando etanercept) o la deficiencia de TNF (ratones con desactivación de TNF) facilita la acumulación de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) CD8+, limitando de ese modo el crecimiento de líneas celulares de melanoma de ratón (B16K1 y Yumm), que expresan moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I (CMH-I) a altos niveles. Se observaron hallazgos similares en ratones que carecen de TNF-R1, pero no de TNF-R2, lo que indica que TNF-R1 del huésped desempeña un papel crítico en la limitación del establecimiento de una respuesta inmunitaria dependiente de células T CD8+ de este tipo contra el melanoma en estas condiciones experimentales. En cuanto al mecanismo molecular, TNF-R1 se comporta probablemente como un punto de control inmunitario novedoso al desencadenar muerte celular de células T CD8+ activadas. Esta conclusión está respaldada por los siguientes hallazgos de que (i) células T CD8+ indiferenciadas, que expresan TNF-R2 pero no TNF-R1, resistieron la muerte celular inducida por TNF; (ii) células T CD8+ activadas, que expresaban significativamente TNF-R1, eran sensibles a TNF exógeno; y (iii) células T CD8+ deficientes en TNF-R1 eran completamente resistentes a la muerte celular inducida por TNF. El papel de TNF-R1 como punto de control inmunitario en melanoma obtiene mayor credibilidad tal como se ilustra mediante los presentes datos que muestran que la acumulación de células T CD8+ activadas en el melanoma se facilitó por la deficiencia en TNF-R1 en un experimento de transferencia adoptiva realizado en huéspedes deficientes en CD8 (Bertrand et al., Cancer Research, 2015;75(13):2619-28). Por tanto, el documento EP14305687 da a conocer que podrían usarse moléculas neutralizantes anti-TNF o anti-TNF-R1 en seres humanos para tratar el melanoma avanzado.
El documento WO2016023875 da a conocer la combinación de un anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente a CD40 humana; y un anticuerpo frente a PD-L1; y opcionalmente un componente que comprende como principio activo un inhibidor de citocina.
El documento WO2007056540 da a conocer métodos para tratar la enterocolitis inducida por un anticuerpo terapéutico inmunoestimulador (por ejemplo, un anticuerpo frente a CTLA-4) en un paciente a través de la administración de una cantidad eficaz de un bloqueante de TNF-[alfa] al paciente.
El documento WO2015187359 da a conocer la combinación de un inhibidor de punto de control inmunitario y un agente bloqueante de TNFa para el tratamiento de una manifestación autoinmunitaria secundaria (es decir, enterocolitis) que sigue al tratamiento con el inhibidor de punto de control inmunitario.
El documento WO2011159877 da a conocer el tratamiento del cáncer mediante el uso de una terapia de combinación que comprende al menos un anticuerpo anti-PD-1.
Donia M. et al. dan a conocer que el TNF se ha asociado con tanto la inhibición como la promoción del crecimiento tumoral (Donia, Marco, Julie Westerlin Kjeldsen, e Inge Marie Svane. “The controversial role of TNF in melanoma”. Oncoimmunology 5,4 (2016): e1107699).
Sumario de la invención
La presente invención se define mediante las reivindicaciones. En particular, la presente invención se refiere a un agente bloqueante de TNFa en combinación con un inhibidor de punto de control inmunitario para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, en el que administración de la combinación da como resultado una eficacia terapéutica potenciada en relación con la administración del inhibidor de punto de control inmunitario solo, y en el que:
- el agente bloqueante de TNFa es un anticuerpo que tiene especificidad por TNFa o por el receptor 1 de TNFa y,
- el inhibidor de punto de control inmunitario es un anticuerpo anti-PD-1.
La presente invención también se refiere a un agente bloqueante de TNFa en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 para su uso en el tratamiento del melanoma en un sujeto que lo necesita, en el que el agente bloqueante de TNFa es un receptor de TNFa soluble.
Descripción detallada
El factor de necrosis tumoral (TNF) a desempeña un papel doble en la oncoinmunología12 o bien actuando como factor anticancerígeno3,4, o bien comportándose como una citocina inmunosupresora 5'10 y limitando los linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) CD8+1211. Las inmunoterapias emergentes que seleccionan como diana puntos de control inmunitarios, como el anticuerpo anti-PD-1, han cambiado radicalmente la estrategia para combatir el melanoma12. Sin embargo, el 60-67% de los pacientes no responden a un anticuerpo anti-PD-11314, y los pacientes que responden bien desarrollan acontecimientos adversos graves relacionados con el sistema inmunitario con una frecuencia del 11,7-13,3%1114, que pueden curarse mediante un anticuerpo anti-TNF15. Las consecuencias del bloqueo de TNF sobre la respuesta inmunitaria anticancerígena desencadenada por un anticuerpo anti-PD-1 siguen siendo desconocidas. En el presente documento, los inventores muestran que el bloqueo o la deficiencia de TNF/TNFR1 produce sinergia con un anticuerpo anti-PD-1 en el tratamiento de melanoma experimental, conduciendo a una regresión tumoral total frecuente y mejorando enormemente la supervivencia global. La deficiencia de TNF o TNFR1 también sensibilizó el carcinoma de pulmón de Lewis al anticuerpo anti-PD-1. Mecanísticamente, el TNF que se produjo tras el anticuerpo anti-PD-1 indujo de manera potente la expresión de TIM-3 en TIL CD8+ y CD4+, un regulador clave del agotamiento de células T y un punto de control inmunitario implicado en la resistencia del melanoma o el escape al anticuerpo anti-PD-116. En consecuencia, el bloqueo de TNF impidió la regulación por incremento de TIM-3 y potenció drásticamente la producción de IFNy y el contenido de TIL CD8+. Este estudio preclínico demuestra que un anticuerpo anti-TNF y uno anti-PD-1 producen sinergia en la respuesta inmunitaria anticancerígena. En la presente divulgación, no se administra agente bloqueante de TNFa para tratar la enterocolitis, colitis o para mejorar la tolerabilidad o mantener la eficacia del anticuerpo frente a PD-L1 en combinación con el anticuerpo que activa CD40.
Por consiguiente, la presente divulgación se refiere a un método para potenciar la potencia de un inhibidor de punto de control inmunitario administrado a un sujeto como parte de un régimen de tratamiento para el cáncer, comprendiendo el método: administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un agente bloqueante de TNFa a un sujeto en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario.
Un objeto adicional de la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una combinación terapéuticamente eficaz de un inhibidor de punto de control inmunitario con un agente bloqueante de TNFa, en el que la administración de la combinación da como resultado una eficacia terapéutica potenciada en relación con la administración del inhibidor de punto de control inmunitario solo.
Un objeto adicional de la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita que comprende administrar al sujeto una combinación terapéuticamente eficaz de un inhibidor de punto de control inmunitario con un agente bloqueante de TNFa.
En particular, el método de la presente divulgación comprende administrar al sujeto una combinación terapéuticamente eficaz de un agente bloqueante de TNFa con un anticuerpo anti-CTLA-4 y un inhibidor de PD-1 tal como un anticuerpo anti-PD1 y un anticuerpo anti-PDL1.
En particular, el método de la presente divulgación no comprende administrar la combinación de un agente bloqueante de TNFa, un anticuerpo frente a PD-L1 y un anticuerpo que activa CD40 (TNFR).
El término “CD40” tiene su significado general en la técnica y se refiere a CD40, el miembro de la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFR), un regulador de la respuesta inmunitaria antitumoral por medio de su expresión sobre células presentadoras de antígenos (APC) que incluyen linfocitos B, células dendríticas (DC) y monocitos (Grewal IS et al, Ann Rev Immunol, 1998;16: 111-35; Van Kooten C et al, Leukoc. Biol, 2000;67:2-17; O'Sullivan B et al, Crit Rev Immunol. 2003;23(1 2):83-107). El término “anticuerpo que activa CD40” se refiere a anticuerpos que activan CD40 tal como se describe en el documento WO2016/023875.
En particular, el sujeto padece un cáncer. Tal como se usa en el presente documento, el término “cáncer” tiene su significado general en la técnica e incluye, pero no se limita a, tumores sólidos y tumores transmitidos por la sangre. El término cáncer incluye enfermedades de la piel, tejidos, órganos, huesos, cartílago, sangre y vasos. El término “cáncer” abarca además cánceres tanto primarios como metastásicos. Los ejemplos de cánceres que pueden tratarse mediante los métodos y las composiciones de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a, células cancerosas de la vejiga, sangre, hueso, médula ósea, cerebro, mama, colon, esófago, tracto gastrointestinal, encías, cabeza, riñón, hígado, pulmón, nasofaringe, cuello, ovario, próstata, piel, estómago, testículos, lengua o útero. En particular, el sujeto padece un cáncer seleccionado del grupo que consiste en acantoma, carcinoma de células acínicas, neuroma acústico, melanoma lentiginoso acral, acrospiroma, leucemia eosinofílica aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia monocítica aguda, leucemia mieloblástica aguda con maduración, leucemia mieloide aguda de células dendríticas, leucemia mieloide aguda, leucemia promielocítica aguda, adamantinoma, adenocarcinoma, carcinoma adenoide quístico, adenoma, tumor odontogénico adenomatoide, carcinoma corticosuprarrenal, leucemia de células T adultas, leucemia de células NK agresiva, cánceres relacionados con el SIDA, linfoma relacionado con el SIDA, sarcoma alveolar de partes blandas, fibroma ameloblástico, cáncer anal, linfoma anaplásico de células grandes, cáncer anaplásico de tiroides, linfoma angioinmunoblástico de células T, angiomiolipoma, angiosarcoma, cáncer del apéndice, astrocitoma, tumor rabdoide teratoide atípico, carcinoma basocelular, carcinoma de tipo basal, leucemia de células B, linfoma de células B, carcinoma ductal de Bellini, cáncer de las vías biliares, cáncer de vejiga, blastoma, cáncer óseo, tumor óseo, glioma del tronco encefálico, tumor cerebral, cáncer de mama, tumor de Brenner, tumor bronquial, carcinoma bronquioloalveolar, osteítis fibrosa quística, linfoma de Burkitt, cáncer de sitio primario desconocido, tumor carcinoide, carcinoma, carcinoma in situ, carcinoma del pene, carcinoma de sitio primario desconocido, carcinosarcoma, enfermedad de Castleman, tumor embrionario del sistema nervioso central, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma cerebral, cáncer de cuello uterino, colangiocarcinoma, condroma, condrosarcoma, cordoma, coriocarcinoma, papiloma del plexo coroideo, leucemia linfocítica crónica, leucemia monocítica crónica, leucemia mielógena crónica, trastorno mieloproliferativo crónico, leucemia neutrofílica crónica, tumor de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, craneofaringioma, linfoma cutáneo de células T, enfermedad de Degos, dermatofibrosarcoma protuberante, quiste dermoide, tumor desmoplásico de células redondas pequeñas, linfoma de células B grandes difuso, tumor neuroepitelial disembrioplásico, carcinoma embrionario, tumor del seno endodérmico, cáncer endometrial, cáncer uterino endometrial, tumor endometrioide, linfoma de células T asociado a enteropatía, ependimoblastoma, ependimoma, sarcoma epitelioide, eritroleucemia, cáncer de esófago, estesioneuroblastoma, familia de tumor de Ewing, familia de sarcoma de Ewing, sarcoma de Ewing, tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinativas, cáncer extrahepático del conducto biliar, enfermedad de Paget extramamaria, cáncer de las trompas de Falopio, feto dentro del feto, fibroma, fibrosarcoma, linfoma folicular, cáncer folicular de tiroides, cáncer de vesícula biliar, cáncer de vesícula biliar, ganglioglioma, ganglioneuroma, cáncer gástrico, 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síndrome de Sezary, carcinoma de células en anillo de sello, cáncer de piel, tumor de células redondas azules pequeñas, carcinoma de células pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, linfoma de células pequeñas, cáncer del intestino delgado, sarcoma de tejidos blandos, somatostatinoma, verruga de hollín, tumor de la médula espinal, tumor espinal, linfoma de la zona marginal esplénica, carcinoma de células escamosas, cáncer de estómago, melanoma de extensión superficial, tumor neuroectodérmico primitivo supratentorial, tumor del estroma epitelial superficial, sarcoma sinovial, leucemia linfoblástica aguda de células T, leucemia linfocítica granular grande de células T, leucemia de células T, linfoma de células T, leucemia prolinfocítica de células, teratoma, cáncer linfático terminal, cáncer testicular, tecoma, cáncer de garganta, carcinoma tímico, timoma, cáncer de tiroides, cáncer de células de transición de la pelvis renal y el uréter, carcinoma de células de transición, cáncer de uraco, cáncer de uretra, neoplasia urogenital, sarcoma uterino, melanoma uveal, cáncer de vagina, síndrome de Vemer Morrison, carcinoma verrugoso, glioma de la vía óptica, cáncer de vulva, macroglobulinemia de Waldenstrom, tumor de Warthin, tumor de Wilms, o cualquier combinación de los mismos.
En particular, el sujeto padece melanoma. Tal como se usa en el presente documento, “melanoma” se refiere a una afección caracterizada por el crecimiento de un tumor que surge del sistema melanocítico de la piel y otros órganos. La mayoría de los melanocitos están en la piel, pero también se encuentran en las meninges, el tubo digestivo, los ganglios linfáticos y los ojos. Cuando se produce el melanoma en la piel, se denomina melanoma cutáneo. El melanoma también puede producirse en los ojos y se denomina melanoma ocular o intraocular. El melanoma se produce raramente en las meninges, el tubo digestivo, los ganglios linfáticos u otras zonas donde se encuentran los melanocitos. En particular, el melanoma es un melanoma metastásico. El 40-60% de los melanomas portan una mutación activante en el gen que codifica para la serina-treonina proteína cinasa B-RAF (BRAF). Entre las mutaciones de BRAF observadas en el melanoma, más del 90% se encuentran en el codón 600 y, entre estas, más del 90% son mutaciones de un solo nucleótido que dan como resultado la sustitución del ácido glutámico por valina (BRAFV600E). En particular, el sujeto padece un melanoma resistente a inhibidores de BRAF. Tal como se usa en el presente documento, el término “resistente” se refiere a la aparición repetida de melanoma, o una progresión del melanoma independientemente de si la enfermedad se curó antes de dicha aparición o progresión. Tal como se usa en el presente documento, el término “inhibidor de BRAF” se refiere a un agente que puede inhibir la actividad de la cinasa BRAF o de la cinasa BRAF mutada (una o más formas mutadas de la serina-treonina proteína cinasa B-RAF (BRAF)) (por ejemplo, BRAFV600E). Por consiguiente, el término “inhibidores de BRAF” abarca dentro de su alcance un compuesto que puede inhibir BRAF o su forma mutada; o un compuesto que puede inhibir la forma mutada V600 de BRAF. Los ejemplos de inhibidores de BRAF incluyen, pero no se limitan a, BAY43-9006 (sorafenib, Bayer), vemurafenib (PLX4032, Plexxikon; RG7204, RO5185426, Hofmann-LaRoche), GDC-0879 (GlaxoSmithKline), dabrafenib (GSK21 18436, GlaxoSmithKline), PLX4720 (Hofmann-LaRoche), BMS-908662 (XL281, Bristol-Myers Squibb), LGX818 (Novartis), PLX3603 (RO5212054, Hofmann-LaRoche), ARQ-736 (ArQule), DP-4978 (Deciphera) o RAF265 (Novartis).
Tal como se usa en el presente documento, el término “tratamiento” o “tratar” se refiere tanto al tratamiento profiláctico o preventivo como al tratamiento curativo o modificador de la enfermedad, incluyendo el tratamiento de pacientes con riesgo de contraer la enfermedad o que se sospecha que han contraído la enfermedad, así como pacientes que están enfermos o que se les ha diagnosticado que padecen una enfermedad o afección médica, e incluye la supresión de la recaída clínica. El tratamiento puede administrarse a un sujeto que tiene un trastorno médico o que, en última instancia, pueda adquirir el trastorno, con el fin de prevenir, curar, retrasar la aparición, reducir la gravedad o mejorar uno o más síntomas de un trastorno o trastorno recurrente, o con el fin de prolongar la supervivencia de un sujeto más allá de lo esperado en ausencia de tal tratamiento. Por “régimen terapéutico” quiere decirse el patrón de tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, el patrón de dosificación usado durante la terapia. Un régimen terapéutico puede incluir un régimen de inducción y un régimen de mantenimiento. La expresión “régimen de inducción” o “periodo de inducción” se refiere a un régimen terapéutico (o la parte de un régimen terapéutico) que se usa para el tratamiento inicial de una enfermedad. El objetivo general de un régimen de inducción es proporcionar un alto nivel de fármaco a un paciente durante el periodo inicial de un régimen de tratamiento. Un régimen de inducción puede emplear (en parte o en su totalidad) un “régimen de carga”, que puede incluir la administración de una dosis mayor del fármaco que la que emplearía un médico durante un régimen de mantenimiento, la administración de un fármaco con más frecuencia de la que un médico administraría el fármaco durante un régimen de mantenimiento, o ambos. La expresión “régimen de mantenimiento” o “periodo de mantenimiento” se refiere a un régimen terapéutico (o la parte de un régimen terapéutico) que se usa para el mantenimiento de un paciente durante el tratamiento de una enfermedad, por ejemplo, para mantener al paciente en remisión durante largos periodos de tiempo (meses o años). Un régimen de mantenimiento puede emplear terapia continua (por ejemplo, administrar un fármaco a intervalos regulares, por ejemplo, semanal, mensual, anualmente, etc.) o terapia intermitente (por ejemplo, tratamiento interrumpido, tratamiento intermitente, tratamiento en caso de recaída o tratamiento tras el logro de un criterio determinado predeterminado [por ejemplo, dolor, manifestación de la enfermedad, etc.]).
Tal como se usa en el presente documento, el término “proteína de punto de control inmunitario” tiene su significado general en la técnica y se refiere a una molécula que se expresa por células T que, a su vez, activan una señal (moléculas de punto de control estimuladoras) o apagan una señal (moléculas de punto de control inhibidoras). Se reconoce en la técnica que las moléculas de punto de control inmunitario constituyen rutas de punto de control inmunitario similares a las rutas dependientes de CTLA-4 y PD-1 (véase, por ejemplo, Pardoll, 2012. Nature Rev Cancer 12:252-264; Mellman et al., 2011. Nature 480:480-489). Los ejemplos de moléculas de punto de control inhibitorio incluyen A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, CD277, IDO, KIR, PD-1, LAG-3, TIM-3 y VISTA. El receptor de adenosina A2A (A2AR) se considera un punto de control importante en la terapia del cáncer porque el microentorno tumoral tiene niveles relativamente altos de adenosina, lo que conduce a un bucle de retroalimentación inmunitaria negativo a través de la activación de A2AR. Originalmente, se entendió que B7-H3 o CD276 era una molécula coestimuladora, pero ahora se considera coinhibidora. B7-H4 o VTCN1, que se expresa por células tumorales y macrófagos asociados a tumores, desempeña un papel en el escape tumoral. BTLA (atenuador de linfocitos B y T) o CD272, es un ligando para el miembro 14 de la superfamilia de receptores de TNF o HVEM (mediador de entrada del virus del herpes). Mientras que la expresión de BTLA en la superficie celular se regula por disminución gradualmente durante la diferenciación de las células T CD8+ humanas del fenotipo de célula indiferenciada a efectora, las células T CD8+ humanas específicas de tumor expresan altos niveles de BTLA. CTLA-4 (proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos) o CD152, que se expresa en células Treg, regula la proliferación de células T. IDO (indoleamina 2,3-dioxigenasa) es una enzima catabólica de triptófano y una proteína inmunoinhibidora relacionada. Se sabe que IDO suprime las células T y NK, genera y activa Tregs y células supresoras derivadas de tejido mieloide, y promueve la angiogénesis tumoral. Otra molécula importante es también TDO (triptófano 2,3-dioxigenasa). KIR (receptor de tipo inmunoglobulina de células citolíticas) es un receptor para moléculas de CMH de clase I en células NK. LAG3 (gen 3 de activación de linfocitos) suprime la respuesta inmunitaria a través de su efecto sobre Tregs, así como sus efectos directos sobre células T CD8+. El receptor PD-1 (muerte programada 1), que tiene dos ligandos, PD-L1 y PD-L2, es la diana del fármaco para el melanoma Keytruda de Merck & Co. Obtuvo la aprobación de la FDA en septiembre de 2014. La selección como diana de PD-1 puede restaurar la función inmunitaria en el microentorno tumoral. TIM-3 (dominio de inmunoglobulina de células T y dominio de mucina 3) se expresa en células T CD4+ humanas activadas y regula citocinas Th1 y Th17. TIM-3 actúa como regulador negativo de la función de Th1/Tc1 al desencadenar muerte celular tras la interacción con su ligando, galectina-9. VISTA (supresor de Ig de dominio V de la activación de células T) se expresa principalmente en células hematopoyéticas, de modo que la expresión constante de VISTA en leucocitos dentro de tumores puede permitir que el bloqueo de VISTA sea eficaz en una amplia gama de tumores sólidos. Tal como se usa en el presente documento, el término “TIM-3” tiene su significado general en la técnica y se refiere a inmunoglobulina de células T y molécula que contiene dominio de mucina 3. El ligando natural de TIM-3 es galectina 9 (Gal9). Tal como se usa en el presente documento, el término “PD-1” tiene su significado general en la técnica y se refiere a la proteína 1 de muerte celular programada (también conocida como CD279). PD-1 actúa como punto de control inmunitario, que al unirse a uno de sus ligandos, PD-L1 o PD-L2, inhibe la activación de células T.
Tal como se usa en el presente documento, el término “inhibidor de punto de control inmunitario” tiene su significado general en la técnica y se refiere a cualquier compuesto que inhiba la función de una proteína de punto de control inhibidor inmunitario. La inhibición incluye la reducción de la función y el bloqueo completo. Los inhibidores de punto de control inmunitario preferidos son anticuerpos que reconocen específicamente proteínas de punto de control inmunitario. Se conocen varios inhibidores de punto de control inmunitarios y, en analogía con estos inhibidores de proteína de punto de control inmunitario conocidos, pueden desarrollarse inhibidores de punto de control inmunitario alternativos en un futuro (próximo). Los inhibidores de punto de control inmunitario incluyen péptidos, anticuerpos, moléculas de ácido nucleico y moléculas pequeñas. En particular, el inhibidor de punto de control inmunitario de la presente divulgación se administra para potenciar la proliferación, migración, persistencia y/o actividad citotóxica de las células T CD8+ en el sujeto y, en particular, la infiltración tumoral de células T CD8+ del sujeto. Tal como se usa en el presente documento, “células T CD8+” tiene su significado general en la técnica y se refiere a un subconjunto de células T, que expresan CD8 en su superficie. Están restringidas por el CMH de clase I y actúan como células T citotóxicas. Las “células T CD8+” también se denominan linfocitos T citotóxicos (cTl), células T citotóxicas, células T citolíticas o células T citotóxicas. Los antígenos CD8 son miembros de la superfamilia de inmunoglobulinas y son elementos de reconocimiento asociativos en interacciones restringidas por el complejo mayor de histocompatibilidad de clase I. La capacidad del inhibidor de punto de control inmunitario para mejorar la actividad de destrucción de células T CD8+ puede determinarse mediante cualquier ensayo bien conocido en la técnica. Normalmente, dicho ensayo es un ensayo in vitro en el que las células T CD8+ se ponen en contacto con células diana (por ejemplo, células diana que se reconocen y/o se lisan por células T CD8+). Por ejemplo, el inhibidor de punto de control inmunitario de la presente divulgación puede seleccionarse por la capacidad para aumentar la lisis específica por células T CD8+ en más de un 20%, preferiblemente con al menos un 30%, al menos un 40%, al menos un 50% o más de la lisis específica obtenida a la misma razón de células efectoras:diana con células T CD8+ o líneas de células T CD8 que se ponen en contacto con el inhibidor de punto de control inmunitario de la presente divulgación. Los ejemplos de protocolos para ensayos de citotoxicidad clásicos son convencionales. En particular, el inhibidor de punto de control inmunitario es un inhibidor de PD-1. Tal como se usa en el presente documento, el término “inhibidor de PD-1” tal como se usa en el presente documento se refiere a un compuesto, sustancia o composición que puede inhibir la función de PD-1. Por ejemplo, el inhibidor puede inhibir la expresión o actividad de PD-1, modular o bloquear la ruta de señalización de PD-1 y/o bloquear la unión de PD-1 a PD-L1 o PD-L2. En particular, el inhibidor de punto de control inmunitario es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en anticuerpos anti-CTLA4, anticuerpos anti-PD1, anticuerpos anti-PDL1, anticuerpos anti-PDL2, anticuerpos anti-TIM-3, anticuerpos anti-LAG3, anticuerpos anti-B7H3. anticuerpos, anticuerpos anti-B7H4, anticuerpos anti-BTLA y anticuerpos anti-B7H6.
Por tanto, la expresión “potenciar la potencia de un punto de control inmunitario” se refiere a la capacidad del agente bloqueante de TNFa para aumentar la capacidad del inhibidor de punto de control inmunitario para potenciar la proliferación, migración, persistencia y/o actividad citotóxica de células T CD8+. Tal como se usa en el presente documento, la expresión “eficacia terapéutica mejorada”, en relación con el cáncer, se refiere a una ralentización o disminución del crecimiento de células cancerosas o un tumor sólido, o una reducción en el número total de células cancerosas o la carga tumoral total. Por tanto, un “resultado terapéutico mejorado” o “eficacia terapéutica potenciada” significa que hay una mejora en la afección del paciente según cualquier criterio clínicamente aceptable, incluyendo, por ejemplo, una disminución del tamaño del tumor, un aumento en el tiempo hasta la progresión del tumor, una mayor supervivencia libre de progresión, un aumento del tiempo de supervivencia global, un aumento de la esperanza de vida, una disminución de los efectos adversos inmunitarios o una mejora de la calidad de vida. En particular, “mejorado” o “potenciado” se refiere a una mejora o potenciación del 1%, el 5%, el 10%, el 25%, el 50%, el 75%, el 100% o más del 100% de cualquier indicador clínicamente aceptable del resultado terapéutico o la eficacia. Tal como se usa en el presente documento, la expresión “en relación con” cuando se usa en el contexto de una comparación de la actividad y/o la eficacia de una composición de combinación que comprende el inhibidor de punto de control inmunitario con el agente bloqueante de TNFa con la actividad y/o eficacia del punto de control inmunitario solo, se refiere a una comparación usando cantidades que se sabe que son comparables según un experto en la técnica.
Tal como se usa en el presente documento, el término “anticuerpo” se usa, por tanto, para referirse a cualquier molécula similar a un anticuerpo que tiene una región de unión a antígeno, y este término incluye fragmentos de anticuerpos que comprenden un dominio de unión a antígeno tal como Fab', Fab, F(ab')2, anticuerpos de un solo dominio (DAB), dímero TandAbs, Fv, scFv (Fv de cadena sencilla), dsFv, ds-scFv, Fd, anticuerpos lineales, minicuerpos, diacuerpos, fragmentos de anticuerpos biespecíficos, bicuerpos, tricuerpos (fusiones scFv-Fab, biespecíficas o triespecíficas, respectivamente); sc-diacuerpo; cuerpos kappa(lamda) (fusiones scFv-CL); BiTE (acoplador de células T biespecífico (Bispecific T-cell Engager), tándems scFv-scFv para atraer células T); DVD-Ig (anticuerpo de dominio variable doble, formato biespecífico); SIP (inmunoproteína pequeña, una clase de minicuerpo); SMIP (dímero scFv-Fc “inmunofarmacéutico modular pequeño”; DART (diacuerpo estabilizado con ds de “redireccionamiento de afinidad doble (Dual Affinity ReTargeting")); miméticos de anticuerpos pequeños que comprenden una o más CDR y similares. Las técnicas para preparar y usar diversos constructos y fragmentos basados en anticuerpos se conocen bien en la técnica (véase Kabat et al., 1991). Los diacuerpos, en particular, se describen adicionalmente en los documentos EP404.097 y WO 93/11161; mientras que los anticuerpos lineales se describen adicionalmente en Zapata et al. (1995). Los anticuerpos pueden fragmentarse usando técnicas convencionales. Por ejemplo, pueden generarse fragmentos F(ab')2 tratando el anticuerpo con pepsina. El fragmento F(ab')2 resultante puede tratarse para reducir los puentes disulfuro para producir fragmentos Fab'. La digestión con papaína puede conducir a la formación de fragmentos Fab. Fab, Fab' y F(ab')2, scFv, Fv, dsFv, Fd, dAbs, TandAbs, ds-scFv, dímeros, minicuerpos, diacuerpos, fragmentos de anticuerpos biespecíficos y otros fragmentos también pueden sintetizarse mediante técnicas recombinantes o pueden sintetizarse químicamente. En la técnica se conocen bien técnicas para producir fragmentos de anticuerpos y se describen en la técnica. Por ejemplo, cada uno de Beckman et al., 2006; Holliger & Hudson, 2005; Le Gall et al., 2004; Reff & Heard, 2001; Reiter et al., 1996; y Young et al., 1995 describen y permiten además la producción de fragmentos de anticuerpos eficaces. En particular, el anticuerpo de la presente divulgación es un anticuerpo de cadena sencilla. Tal como se usa en el presente documento, el término “anticuerpo de un solo dominio” tiene su significado general en la técnica y se refiere al dominio variable de cadena pesada sencilla de anticuerpos del tipo que puede encontrarse en mamíferos camélidos que carecen de manera natural de cadenas ligeras. Tales anticuerpos de un solo dominio también son “nanobody®”. Para una descripción general de anticuerpos de (un solo) dominio, también se hace referencia a la técnica anterior citada anteriormente, así como al documento EP 0368 684, Ward et al. (Nature, 12 de octubre de 1989; 341 (6242): 544-6), Holt et al., Trends Biotechnol., 2003, 21(11):484-490; y los documentos WO 06/030220, WO 06/003388.
En particular, el anticuerpo es un anticuerpo humanizado. Tal como se usa en el presente documento, “humanizado” describe anticuerpos en los que algunos, la mayoría o todos los aminoácidos fuera de las regiones CDR se reemplazan por aminoácidos correspondientes derivados de moléculas de inmunoglobulina humana. Los métodos de humanización incluyen, pero no se limitan a, los descritos en las patentes estadounidenses n.os 4.816.567, 5.225.539, 5.585.089, 5.693.761, 5.693.762 y 5.859.205. En particular, el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano. También pueden prepararse anticuerpos monoclonales completamente humanos inmunizando ratones transgénicos para grandes porciones de locus de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina humana. Véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses n.os 5.591.669, 5.598.369, 5.545.806, 5.545.807, 6.150.584, y las referencias citadas en las mismas. Estos animales se han modificado genéticamente de manera que existe una deleción funcional en la producción de anticuerpos endógenos (por ejemplo, murinos). Los animales se modifican adicionalmente para que contengan todo o una parte del locus de gen de inmunoglobulina de línea germinal humana, de manera que la inmunización de estos animales dará como resultado la producción de anticuerpos completamente humanos contra el antígeno de interés. Después de la inmunización de estos ratones (por ejemplo, ratones XenoMouse (Abgenix), HuMAb (Medarex/GenPharm)), pueden prepararse anticuerpos monoclonales según la tecnología de hibridomas convencional. Estos anticuerpos monoclonales tendrán secuencias de aminoácidos de inmunoglobulina humana y, por tanto, no provocarán respuestas de anticuerpos humanos anti-ratón (KAMA) cuando se administren a seres humanos. También existen métodos in vitro para producir anticuerpos humanos. Estos incluyen la tecnología de presentación en fago (patentes estadounidenses n.os 5.565.332 y 5.573.905) y estimulación in vitro de células B humanas (patentes estadounidenses n.os 5.229.275 y 5.567.610). En particular, el anticuerpo comprende secuencias de regiones constantes de cadena pesada humana pero no agota las células T CD8+ a las que están unidas y preferiblemente no comprende una porción Fc que induce citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Tal como se usa en el presente documento, el término “agotamiento”, con respecto a células T CD8+, significa un proceso, método o compuesto que puede destruir, eliminar, lisar o inducir tal destrucción, eliminación o lisis, de modo que afecta negativamente al número de células T CD8+ presentes en una muestra o en un sujeto. Los términos “dominio Fc”, “porción Fc” y “región Fc” se refieren a un fragmento C-terminal de una cadena pesada de anticuerpo, por ejemplo, desde aproximadamente el aminoácido (aa) 230 hasta aproximadamente el aa 450 de una cadena pesada gamma humana o su secuencia homóloga en otros tipos de cadenas pesadas de anticuerpos (por ejemplo, a, 8, e y |i para anticuerpos humanos), o un alotipo que se produce de manera natural de la misma. A menos que se especifique lo contrario, en toda esta divulgación se usa la numeración de aminoácidos de Kabat comúnmente aceptada para las inmunoglobulinas (véase Kabat et al. (1991). Sequences of Protein of Immunological Interest, 5a ed., United States Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD). En particular, el anticuerpo de la presente descripción no conduce, directa o indirectamente, al agotamiento de las células T CD8+ (por ejemplo, no conduce a una eliminación o disminución del 10%, el 20%, el 50%, el 60% o mayor en el número de células T CD8+). En particular, el anticuerpo de la presente divulgación no comprende un dominio Fc capaz de unirse sustancialmente a un polipéptido FcgRIIIA (CD16). En particular, el anticuerpo de la presente divulgación carece de un dominio Fc (por ejemplo, carece de un dominio CH2 y/o CH3) o comprende un dominio Fc de isotipo IgG2 o IgG4. En particular, el anticuerpo de la presente divulgación consiste en o comprende un Fab, Fab', Fab'-SH, F (ab')2, Fv, un diacuerpo, un fragmento de anticuerpo de cadena sencilla o un anticuerpo multiespecífico que comprende múltiples fragmentos de anticuerpos diferentes. En particular, el anticuerpo de la presente divulgación no está unido a un resto tóxico. En particular, uno o más aminoácidos seleccionados de residuos de aminoácidos pueden reemplazarse por un residuo de aminoácido diferente de manera que el anticuerpo tenga una unión a C2q alterada y/o una citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) reducida o suprimida. Este enfoque se describe con más detalle en la patente estadounidense n.° 6.194.551 de ldusogie et al.
Se describen ejemplos de anticuerpos anti-CTLA-4 en las patentes estadounidenses n.os: 5.811.097; 5.811.097; 5.855.887; 6.051.227; 6.207.157; 6.682.736; 6.984.720; y 7.605.238. Un anticuerpo anti-CTLA-4 es tremelimumab (ticilimumab, CP-675.206). En particular, el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab (también conocido como 10D1, MDX-D010), un anticuerpo IgG monoclonal completamente humano que se une a CTLA-4. Se describen ejemplos de anticuerpos PD-1 y PD-L1 en las patentes estadounidenses n.os 7.488.802; 7.943.743; 8.008.449; 8.168.757; 8.217.149, y las solicitudes de patente publicada PCT n.os: WO03042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400 y WO2011161699. En particular, los bloqueantes de PD-1 incluyen anticuerpos anti-PD-L1. En particular, los bloqueantes de PD-1 incluyen anticuerpos anti-PD-1 y proteínas de unión similares tales como nivolumab (MDX 1106, BMS 936558, ONO 4538), un anticuerpo IgG4 completamente humano que se une y bloquea la activación de PD-1 por sus ligandos PD-L1 y PD-L2; pembrolizumab (anteriormente lambrolizumab) (MK-3475 o SCH 900475), un anticuerpo IgG4 monoclonal humanizado contra PD-1; CT-011, un anticuerpo humanizado que se une a PD-1; AMP-224 es una proteína de fusión de B7-DC; una porción Fc de anticuerpo; BMS-936559 (MDX-1105-01) para el bloqueo de PD-L1 (B7-H1). Otros inhibidores de punto de control inmunitario incluyen inhibidores del gen 3 de activación de linfocitos (LAG-3), tales como IMP321, una proteína de fusión de Ig soluble (Brignone et al., 2007, J. Immunol. 179:4202-4211). Otros inhibidores de punto de control inmunitario incluyen inhibidores de B7, tales como inhibidores de B7-H3 y B7-H4. En particular, el anticuerpo anti-B7-H3 MGA271 (Loo et al., 2012, Clin. Cancer Res. 15 de julio (18) 3834). También se incluyen inhibidores de TIM3 (dominio de inmunoglobulina de células T y dominio de mucina 3) (Fourcade et al., 2010, J. Exp. Med. 207:2175-86 y Sakuishi et al., 2010, J. Exp. Med. 207:2187-94). En la técnica se conocen bien anticuerpos que tienen especificidad por TIM-3 y se describen normalmente en los documentos WO2011155607, WO2013006490 y WO2010117057. En particular, el inhibidor de punto de control inmunitario es un inhibidor de IDO. Se describen ejemplos de inhibidores de IDO en el documento WO 2014150677. Los ejemplos de inhibidores de IDO incluyen, sin limitación, 1 -metil-triptófano (IMT), p-(3-benzofuranil)-alanina, p-(3-benzo(b)tienil)-alanina), 6-nitro-triptófano, 6-fluoro-triptófano, 4-metil-triptófano, 5-metil-triptófano, 6-metil-triptófano, 5-metoxi-triptófano, 5-hidroxi-triptófano, indol-3-carbinol, 3,3'-diindolilmetano, galato de epigalocatequina, 1,3-diacetato de 5-Br-4-Cl-indoxilo, 9-vinilcarbazol, acemetacina, 5-bromo-triptófano, diacetato de 5-bromoindoxilo, ácido 3-amino-naftoico, ditiocarbamato de pirrolidina, 4-fenilimidazol, un derivado de brasinina, un derivado de la tiohidantoína, un derivado de p-carbolina o un derivado de brasilexina. Preferiblemente, el inhibidor de IDO se selecciona de 1-metil-triptófano, p-(3-benzofuranil)-alanina, 6-nitro-L-triptófano, ácido 3-amino-naftoico y p-[3-benzo(b)tienil]-alanina o un derivado o profármaco de los mismos.
Tal como se usa en el presente documento, el término “TNFa” o “TNF-alfa” indica el factor de necrosis tumoralalfa. El TNF-alfa humano es una citocina humana codificada por el gen de TNF-alfa. Tal como se usa en el presente documento, el término “agente bloqueante de TNFa” o “TBA” significa en el presente documento un agente biológico que puede neutralizar los efectos del TNFa. Dicho agente es preferentemente una proteína tal como un receptor de TNFa soluble, por ejemplo, pegsunercept, o un anticuerpo. En particular, el TBA es un anticuerpo monoclonal que tiene especificidad por TNFa o por el receptor de TNFa. En particular, el TBA se selecciona en el grupo que consiste en etanercept (Enbrel®), infliximab (Remicade®), adalimumab (Humira®), certolizumab pegol (Cimzia®) y golimumab (Simponi®). También se han desarrollado proteínas basadas en receptores de TNF recombinantes (por ejemplo, etanercept, una proteína de fusión recombinante que consiste en dos partes extracelulares del receptor 2 de TNFa soluble (p75) unidas por el fragmento Fc de una molécula de IgG1 humana). También puede usarse un receptor de TNF de tipo 1 soluble pegilado como agente bloqueante de TNF. Además, se ha demostrado que la talidomida es un potente inhibidor de la producción de TNF. Los agentes bloqueantes de TNFa incluyen además, por tanto, análogos de talidomida inhibidores de fosfodiesterasa 4 (IV) y otros inhibidores de fosfodiesterasa IV. Tal como se usa en el presente documento, el término “etanercept” o “ETA” indica el antagonista del factor de necrosis tumoral-alfa (TNFa) usado para el tratamiento de la artritis reumatoide. El término “etanercept” (ETA, ETN, Enbrel) es una proteína de fusión de Fc de IgG y receptor de TNF recombinante compuesta por el receptor de TNF p75 fusionado genéticamente con el dominio Fc de IgG1. El etanercept neutraliza la citocina proinflamatoria factor de necrosis tumoral-a (TNFa) y la linfotoxina-a (Batycka-Baran et al., 2012).
Un objeto adicional se refiere a un método de prevención del escape tumoral en un sujeto tratado con un inhibidor de PD-1 que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente bloqueante de TNFa.
Tal como se usa en el presente documento, el término “escape tumoral” se refiere a cualquier mecanismo por el cual los tumores escapan del sistema inmunitario del huésped. En particular, el método es particularmente adecuado para prevenir el escape tumoral inducido por la expresión de TIM-3. En particular, el método es particularmente adecuado para prevenir el escape tumoral inducido por la expresión de TIM-3 y PD-1. En particular, el método es particularmente adecuado para prevenir el escape tumoral inducido por la expresión de TIM-3 y PD-L1. En particular, el método comprende i) determinar el nivel de expresión de TIM-3 en una muestra de tejido tumoral obtenida del sujeto, iii) comparar el nivel de expresión determinado en la etapa i) con un valor de referencia predeterminado y iv) coadministrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de PD-1 y un agente bloqueante de TNFa. Tal como se usa en el presente documento, el término “muestra de tejido tumoral” tiene su significado general en la técnica y abarca trozos o cortes de tejido que se han extraído, incluso después de una resección quirúrgica del tumor. La muestra de tejido tumoral puede someterse a una variedad de técnicas de almacenamiento y preparativas posteriores a la recogida bien conocidas (por ejemplo, fijación, almacenamiento, congelación, etc.) antes de determinar las densidades celulares. La muestra de tejido tumoral puede usarse en micromatrices, denominadas micromatrices de tejido (TMA). La expresión de TIM-3 se determina normalmente mediante inmunohistoquímica, inmunofluorescencia o cualquier método capaz de determinar el nivel de expresión del ARNm que codifica para TIM-3.
Tal como se usa en el presente documento, el término “coadministrar” tal como se usa en el presente documento significa un proceso mediante el cual se administra al mismo paciente la combinación del agente bloqueante de TNFa y el inhibidor de punto de control inmunitario. El agente bloqueante de TNFa y el inhibidor de punto de control inmunitario pueden administrarse simultáneamente, a esencialmente el mismo tiempo o secuencialmente. No es necesario administrar el agente bloqueante de TNFa y el inhibidor de punto de control inmunitario por medio del mismo vehículo. El agente bloqueante de TNFa y el inhibidor de punto de control inmunitario pueden administrarse una o más veces y el número de administraciones de cada componente de la combinación puede ser el mismo o diferente. Además, no es necesario administrar el agente bloqueante de TNFa y el inhibidor de punto de control inmunitario en el mismo sitio.
Tal como se usa en el presente documento, el término “combinación terapéuticamente eficaz” tal como se usa en el presente documento se refiere a una cantidad o dosis de un agente bloqueante de TNFa junto con la cantidad o dosis del inhibidor de punto de control inmunitario que es suficiente para tratar la enfermedad (es decir, el cáncer). La cantidad del agente bloqueante de TNFa en una combinación terapéuticamente eficaz dada puede ser diferente para diferentes individuos y diferentes tipos de tumores, y dependerá de uno o más agentes o tratamientos adicionales incluidos en la combinación. La “cantidad terapéuticamente eficaz” se determina usando procedimientos empleados de manera rutinaria por los expertos en la técnica de tal manera que resulte un “resultado terapéutico mejorado”. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de los compuestos y las composiciones de la presente descripción lo decidirá el médico encargado dentro del alcance del buen juicio médico. El nivel de dosis terapéuticamente eficaz específico para cualquier sujeto particular dependerá de una variedad de factores, incluyendo el trastorno que está tratándose y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto específico empleado; la composición específica empleada, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del sujeto; el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos usados en combinación o coincidentes con el polipéptido específico empleado; y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas. Por ejemplo, está bien dentro de la experiencia en la técnica comenzar las dosis del compuesto a niveles más bajos que los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta que se logre el efecto deseado. Sin embargo, la dosificación diaria de los productos puede variar a lo largo de un amplio intervalo de desde 0,01 hasta 1000 mg por adulto al día. Normalmente, las composiciones contienen 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 250 y 500 mg del principio activo para el ajuste sintomático de la dosificación al sujeto que va a tratarse. Un medicamento contiene normalmente de desde aproximadamente 0,01 mg hasta aproximadamente 500 mg del principio activo, preferiblemente desde 1 mg hasta aproximadamente 100 mg del principio activo. Una cantidad eficaz del fármaco se suministra normalmente a un nivel de dosificación de 0,0002 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal al día, especialmente desde aproximadamente 0,001 mg/kg hasta 7 mg/kg de peso corporal al día.
Un objeto adicional de la presente divulgación se refiere a un método de tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto una combinación terapéuticamente eficaz de un anticuerpo multiespecífico que comprende al menos un sitio de unión que se une específicamente a una proteína de punto de control inmunitario (por ejemplo, una molécula de PD-1), y al menos un sitio de unión que se une específicamente a TNFa o un receptor para TNFa (TNFR1 o TNFR2).
Los formatos a modo de ejemplo para las moléculas de anticuerpos multiespecíficos de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a (i) dos anticuerpos reticulados por heteroconjugación química, uno con una especificidad por la proteína de punto de control inmunitario (por ejemplo, PD-1) y otro con una especificidad por TNFa o un receptor para TNFa (TNFR1 o TNFR2); (ii) un solo anticuerpo que comprende dos regiones de unión a antígeno diferentes; (iii) un anticuerpo de cadena sencilla que comprende dos regiones de unión a antígeno diferentes, por ejemplo, dos scFv unidos en tándem por un ligador peptídico adicional; (iv) un anticuerpo de dominio variable doble (DVD-Ig), donde cada cadena ligera y cadena pesada contiene dos dominios variables en tándem a través de una unión peptídica corta (Wu et al., Generation and Characterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin (DVD-Ig™) Molecule, en: Antibody Engineering, Springer Berlín Heidelberg (2010)); (v) un fragmento (Fab')2 biespecífico unido químicamente; (vi) un Tandab, que es una fusión de dos diacuerpos de cadena sencilla que da como resultado un anticuerpo biespecífico tetravalente que tiene dos sitios de unión para cada uno de los antígenos diana; (vii) un flexicuerpo, que es una combinación de scFv con un diacuerpo que da como resultado una molécula multivalente; (viii) una denominada molécula de “acoplamiento y bloqueo”, basada en el “dominio de dimerización y acoplamiento” en la proteína cinasa A, que, cuando se aplica a Fabs, puede producir una proteína de unión biespecífica trivalente que consiste en dos fragmentos Fab idénticos unidos a un fragmento Fab diferente; (ix) una denominada molécula Scorpion, que comprende, por ejemplo, dos scFv fusionados a ambos extremos terminales de un brazo Fab humano; y (x) un diacuerpo. Otro formato a modo de ejemplo para anticuerpos biespecíficos son moléculas similares a IgG con dominios CH3 complementarios para forzar la heterodimerización. Tales moléculas pueden prepararse usando tecnologías conocidas, tales como, por ejemplo, las conocidas como Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), Knob-into-Hole (Genentech), CrossMAb (Roche) y de emparejamiento electrostático (Amgen), LUZ-Y (Genentech), Strand Exchange Engineered Domain body (SEEDbody)(EMD Serono), Biclonic (Merus) y DuoBody (Genmab A/S). En particular, el anticuerpo biespecífico se obtiene o puede obtenerse por medio de un intercambio de brazos Fab controlado, normalmente usando la tecnología DuoBody. Se han descrito métodos in vitro para producir anticuerpos biespecíficos mediante el intercambio controlado de brazos Fab en los documentos WO2008119353 y WO 2011131746 (ambos de Genmab A/S). En un método a modo de ejemplo, descrito en el documento WO 2008119353, se forma un anticuerpo biespecífico mediante el intercambio de “brazos Fab” o “medias moléculas” (intercambio de una cadena pesada y una cadena ligera unida) entre dos anticuerpos monoespecíficos, que comprenden ambas regiones CH3 similares a IgG4, tras la incubación en condiciones reductoras. El producto resultante es un anticuerpo biespecífico que tiene dos brazos Fab que pueden comprender secuencias diferentes. En otro método a modo de ejemplo, descrito en el documento WO 2011131746, se preparan anticuerpos biespecíficos de la presente divulgación mediante un método que comprende las siguientes etapas, en el que al menos uno de los anticuerpos primero y segundo es un anticuerpo de la presente divulgación: a) proporcionar un primer anticuerpo que comprende una región Fc de una inmunoglobulina, comprendiendo dicha región Fc una primera región CH3; b) proporcionar un segundo anticuerpo que comprende una región Fc de una inmunoglobulina, comprendiendo dicha región Fc una segunda región CH3; en el que las secuencias de dichas regiones CH3 primera y segunda son diferentes y son tales que la interacción heterodimérica entre dichas regiones CH3 primera y segunda es más fuerte que cada una de las interacciones homodiméricas de dichas regiones CH3 primera y segunda; c) incubar dicho primer anticuerpo junto con dicho segundo anticuerpo en condiciones reductoras; y d) obtener dicho anticuerpo biespecífico, en el que el primer anticuerpo es un anticuerpo de la presente divulgación y el segundo anticuerpo tiene una especificidad de unión diferente, o viceversa. Las condiciones reductoras pueden proporcionarse, por ejemplo, añadiendo un agente reductor, por ejemplo seleccionado de 2-mercaptoetilamina, ditiotreitol y tris(2-carboxietil)fosfina. La etapa d) puede comprender además restaurar las condiciones para que se vuelvan no reductoras o menos reductoras, por ejemplo mediante la eliminación de un agente reductor, por ejemplo, por desalación. Preferiblemente, las secuencias de las regiones CH3 primera y segunda son diferentes, comprendiendo solo unas pocas mutaciones asimétricas, bastante conservadoras, de manera que la interacción heterodimérica entre dichas regiones CH3 primera y segunda es más fuerte que cada una de las interacciones homodiméricas de dichas regiones CH3 primera y segunda. Se proporcionan más detalles sobre estas interacciones y cómo se pueden lograr en el documento WO 2011131746.
Según la presente divulgación, el agente activo (por ejemplo, el agente bloqueante de TNFa, el inhibidor de punto de control inmunitario o el anticuerpo multiespecífico) se administra al sujeto en forma de una composición farmacéutica. Normalmente, el agente activo se combina con excipientes farmacéuticamente aceptables y, opcionalmente, matrices de liberación sostenida, tales como polímeros biodegradables, para formar composiciones terapéuticas. “Farmacéuticamente” o “farmacéuticamente aceptable” se refiere a entidades y composiciones moleculares que no producen una reacción adversa, alérgica u otra no deseada cuando se administran a un mamífero, especialmente a un ser humano, según sea apropiado. Un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable se refiere a una carga, diluyente, material de encapsulación o auxiliar de formulación de cualquier tipo sólido, semisólido o líquido no tóxico. En las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación para administración oral, sublingual, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, local o rectal, el principio activo, solo o en combinación con otro principio activo, puede administrarse en forma de administración unitaria, como mezcla con soportes farmacéuticos convencionales, a animales y seres humanos. Las formas de administración unitaria adecuadas comprenden formas de vía oral tales como comprimidos, cápsulas de gel, polvos, gránulos y suspensiones o disoluciones orales, formas de administración sublingual y bucal, aerosoles, implantes, formas de administración subcutánea, transdérmica, tópica, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, subdérmica, transdérmica intratecal e intranasal y formas de administración rectal. Normalmente, las composiciones farmacéuticas contienen vehículos que son farmacéuticamente aceptables para una formulación que puede inyectarse. Pueden ser, en particular, soluciones salinas, estériles e isotónicas (fosfato de monosodio o disodio, cloruro de sodio, potasio, calcio o magnésico o mezclas de tales sales), o composiciones secas, especialmente secadas por congelación que, tras la adición, dependiendo del caso, de agua esterilizada o solución salina fisiológica, permiten la constitución de disoluciones inyectables. Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen disoluciones o dispersiones acuosas estériles; formulaciones que incluyen aceite de sésamo, aceite de cacahuete o propilenglicol acuoso; y polvos estériles para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida en la medida en que exista una fácil jeringabilidad. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y debe conservarse contra la acción contaminante de microorganismos, tales como bacterias y hongos. Pueden prepararse disoluciones que comprenden compuestos de la presente divulgación como base libre o sales farmacológicamente aceptables en agua mezclada adecuadamente con un tensioactivo, tal como hidroxipropilcelulosa. También pueden prepararse dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones habituales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para impedir el crecimiento de microorganismos. El agente activo puede formularse en una composición en forma neutra o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adición de ácido (formadas con los grupos amino libres de la proteína) y que se forman con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácidos clorhídrico o fosfórico, o ácidos orgánicos tales como acético, oxálico, tartárico, mandélico. También pueden derivarse sales formadas con los grupos carboxilo libres de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o férrico, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, histidina, procaína. El portador también puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos puede llevarse a cabo mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede lograrse mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Se preparan disoluciones inyectables estériles incorporando los compuestos activos en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los otros componentes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por esterilización por filtración. Generalmente, se preparan dispersiones incorporando los diversos principios activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene el medio de dispersión básico y los otros componentes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de disoluciones inyectables estériles, los métodos típicos de preparación son técnicas de secado al vacío y secado por congelación que producen un polvo del principio activo más cualquier componente adicional deseado a partir de una disolución previamente esterilizada por filtración de los mismos. También se contempla la preparación de disoluciones más concentradas o altamente concentradas para inyección directa, donde se contempla el uso de DMSO como disolvente para dar como resultado una penetración extremadamente rápida, suministrando altas concentraciones de los principios activos a un área tumoral pequeña. Tras la formulación, las disoluciones se administrarán de manera compatible con la formulación de dosificación y en una cantidad tal que sea terapéuticamente eficaz. Las formulaciones se administran fácilmente en una variedad de formas de dosificación, tales como el tipo de disoluciones inyectables descritas anteriormente, pero también pueden emplearse cápsulas de liberación de fármacos. Para la administración parenteral en una disolución acuosa, por ejemplo, la disolución debe tamponarse adecuadamente si es necesario y el diluyente líquido debe volverse isotónico en primer lugar con suficiente solución salina o glucosa. Estas disoluciones acuosas particulares son especialmente adecuadas para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. En este sentido, los expertos en la técnica conocerán los medios acuosos estériles que pueden emplearse a la luz de la presente divulgación. Necesariamente se producirá algo de variación en la dosificación dependiendo de la afección del sujeto que está tratándose. La persona responsable de la administración determinará, en cualquier caso, la dosis apropiada para el sujeto individual.
La presente descripción se ilustrará adicionalmente mediante las siguientes figuras y ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos y figuras no deben interpretarse de ninguna manera como limitativos del alcance de la presente divulgación.
Figuras
Figura 1: Tumorigénesis en ratones deficientes en TNF y de tipo natural con melanoma establecido en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1. A ratones KO para TNF y de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 3*105 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o un control de isotipo relevante en los días indicados (n=11 ratones por grupo). a, esquema que representa el protocolo experimental. b y c, se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Se representan curvas individuales para cada tumor (b). Los números indican la regresión tumoral de los tumores totales (b, inserto). Se representan los valores determinados en el día 27 para tumores individuales. Las barras representan valores medios ± eem (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001) (c). d, curvas de supervivencia acumulada (**p<0,01; ***p<0,001).
Figura 2: Tumorigénesis en ratones deficientes en TNF-R1 y de tipo natural con melanoma establecido en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1. A ratones KO para TNF-R1 y de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 3*105 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o un control de isotipo relevante en los días indicados (n=6 ratones por grupo). A, esquema que representa el protocolo experimental. B y C, se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Se representan curvas individuales para cada tumor (B). Los números indican la regresión tumoral de los tumores totales (B, inserto). Se representan los valores determinados en el día 27 para tumores individuales. Las barras representan valores medios ± eem (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001) (C). D, curvas de supervivencia acumulada (**p<0,01; ***p<0,001).
Figura 3: Inyección de anticuerpo anti-PD-1 y anti-TNF en ratones WT con melanoma establecido. A ratones de tipo natural C57BL/6 se les injerto por vía intradérmica y de manera bilateral 3*105 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 y/o anti-TNF o un control de isotipo relevante (10 mg/kg para cada anticuerpo) en los días indicados (n=12 ratones por grupo). A, esquema que representa el protocolo experimental. B y C, se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Se representan curvas individuales para cada tumor (B). Los números indican la regresión tumoral de los tumores totales (B, inserto). Se representan los valores determinados en el día 27 para tumores individuales. Las barras representan valores medios ± eem (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001) (C). D, curvas de supervivencia acumulada (**p<0,01; ***p<0,001; ns p>0,5).
Figura 4: Infiltración de células inmunitarias en tumores a partir de ratones deficientes en TNF y de tipo natural con melanoma establecido en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1. A ratones KO para TNF y de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o vehículo (PBS) en el día 7. A, esquema que representa el protocolo experimental. B, en el día 10, se sacrificaron los ratones y se pesaron los tumores. Los datos son medias ± eem de al menos 22 tumores por grupo. (ns: p>0,5, *: p<0,05; ***p<0,001). C, se disociaron los tumores y se realizó el análisis del contenido de TiL mediante el uso de citometría de flujo. Se determinó la proporción de TIL CD45+, Thy1+, CD4+ y CD8+ totales. Los datos son medias ± eem de al menos 11 tumores por grupo. (ns: p>0,05, *: p<0,05; ***p<0,001). D, se determinó la media de la intensidad de fluorescencia de la tinción de TiM-3 en TIL CD8+ y TIL CD4+ mediante citometría de flujo. Los datos son medias ± eem de al menos 11 tumores por grupo. E, se purificaron células T CD8 a partir de bazo de tipo natural y se activaron antes de la incubación con TNF 6 ng/ml durante 3 días. A continuación se analizó la expresión de TIM-3 mediante citometría de flujo. Los valores indican el % de células positivas para TIM-3 y la media de la intensidad de fluorescencia de la tinción de TIM-3 (ns: p>0,05, *: p<0,05; **: p<0,01).
Figura 5: Inyección de etanercept en combinación con anticuerpos anti-CTLA-4 y anti-PD-1 en ratones de tipo natural con melanoma establecido. A ratones de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 3*105 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de vehículo (PBS) o etanercept (Eta, 3 mg/kg) con o sin la combinación de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 5 mg/kg) y anti-CTLA-4 (aCTLA-4, 5 mg/kg para la primera inyección y luego 2,5 mg/kg) en los días indicados (n=5 ratones por grupo). A, esquema que representa el protocolo experimental. B y C, se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Se representan curvas individuales para cada tumor (B). Las barras representan valores medios determinados en el día 24. Se calculan los valores de p usando la prueba de la t de Student para cada condición en comparación con los ratones en los que se inyectó vehículo (PBS) (C).
Figura 6: Infiltración de células inmunitarias de tumores a partir de ratones deficientes en TNF y de tipo natural con melanoma establecido tratados con anticuerpo anti-PD-1. a-e, a ratones de tipo natural (WT) y deficientes en TNF (TNF-/-) C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o vehículo (PBS; Ctrl) en el día 7. a, en el día 10, se sacrificaron los ratones y se pesaron los tumores. Los datos son medias ± eem de al menos 22 tumores por grupo. b y c, se cuantificaron los niveles de transcrito de TNF e IFN mediante RT-qPCR usando ARNm total purificado a partir de los tumores. Los datos son medias ± eem de al menos 4 tumores por grupo. d y e, se disociaron los tumores y se analizó el análisis del contenido de TIL mediante el uso de citometría de flujo. Se determinó la proporción de TIL CD45+, Thy1+, CD4+ y CD8+ totales entre las células totales. Los datos son medias ± eem de al menos 11 tumores por grupo. f, a ratones de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpo anti-TNF (aTNF, 10 mg/kg) o vehículo (Ctrl) en los días 5 y 7 con anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o vehículo (PBS) en el día 7. En el día 10, se analizaron los TIL mediante citometría de flujo. Los datos son medias ± eem de al menos 5 tumores por grupo. (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Figura 7: La expresión de TNF se correlaciona positivamente con la expresión de TIM-3 en muestras de melanoma humano. Análisis de correlación entre la expresión de HAVCR2 (que codifica para TIM-3) y TNFA (que codifica para TNF) en muestras de melanoma de pacientes con melanoma metastásico de la cohorte TCGA (n=342). (p<0,0001).
Figura 8: La deficiencia de TNF potencia el contenido de TIL PD-1+. A ratones de tipo natural (WT) y deficientes en TNF C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1. En el día 10, se recogieron los tumores y se disociaron y se realizó el análisis del contenido tumoral mediante el uso de citometría de flujo. Se determinó la proporción de TIL CD8+ y CD4+ que expresan PD-1 entre las células totales. Los datos son medias ± eem de al menos 21 tumores por grupo (*p<0,05; ***p<0,001).
Figura 9: La deficiencia de TNF o TNFR1 potencia la terapia con anticuerpo anti-PD-1 en carcinoma de pulmón de Lewis (LLC) establecido. A ratones de tipo natural (WT), deficientes en TNF y deficientes en TNFR1 C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 4*105 células LLC antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) o un control de isotipo relevante (Ctrl, 10 mg/kg) en los días 6, 9 y 13. a, se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Los datos son la media ± eem de al menos 4 ratones por grupo. b, se representan los valores determinados en el día 20 para tumores individuales. Las barras representan valores medios ± eem (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Figura 10: El anticuerpo anti-TNFR1 produce sinergia con el anticuerpo anti-PD-1 en melanoma experimental. A ratones de tipo natural C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 3*105 células de melanoma B16K1. Los ratones recibieron dos inyecciones de anticuerpo anti-TNF-R1 y anticuerpo anti-PD-1 en el día 6 y 9 (10 mg/kg) solos o en combinación. Alternativamente, a los ratones se les inyectó control de isotipo (Ctrl). Se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador en los días indicados. Los datos son la media ± eem de al menos 4 ratones por grupo. Las barras representan valores medios ± eem. (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Figura 11: Análisis de la expresión de TIM-3 y PD-1 en TIL. A ratones de tipo natural (WT) y deficientes en TNF C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1. En el día 10, se recogieron los tumores y se disociaron y se realizó el análisis del contenido tumoral mediante el uso de citometría de flujo. Se determinó la proporción de células T CD8+ y CD4+ que coexpresan PD-1 y TIM-3 entre las células T CD8+ y CD4+, respectivamente. Los datos son medias ± eem de al menos 10 tumores por grupo (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Figura 12: El TNF desencadena muerte celular en TIL CD4+ y CD8+ tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1. A ratones de tipo natural (WT) y deficientes en TNF (TNF-/-) C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1 antes de la inyección intraperitoneal de anticuerpos anti-PD-1 (aPD-1, 10 mg/kg) en el día 7. En el día 10, se analizó la proporción de TIL CD8+ y CD4+ muertos mediante citometría de flujo. Se representan los valores medidos en 12 tumores por grupo a partir de dos experimentos independientes como cajas de Tukey (prueba de la t de Student: *p<0,05; ***p<0,001).
Figura 13: El TNF induce expresión de PD-L1 y/o PD-L2 en TIL y DC. Ratones WT y deficientes en TNF (TNF-/-) recibieron inyecciones tal como se describe en la leyenda de la figura 13. Se analizaron los TIL mediante citometría de flujo en tumores desarrollados en el día 10. a, media de la intensidad de fluorescencia (MFI) para la tinción de PD-L1 en TIL CD8+ (panel izquierdo) y TIL CD4+ (panel derecho). b, porcentaje de DC tumorales entre las células totales. c-d, media de la intensidad de fluorescencia (MFI) de la tinción de PD-L1 (c) o PD-L2 (d) en DC. a-d, se representan los valores medidos en al menos 6 tumores por grupo a partir de un experimento representativo (de dos) como cajas de Tukey (prueba de la U de Mann-Whitney: *p<0,05; **p<0,01).
Figura 14: Los anticuerpos anti-TNF y anti-TNFR1 superan la resistencia a la terapia con anticuerpo anti-PD-1 en carcinoma de mama experimental. Se inyectaron por vía ortotópica 1*105 células de carcinoma de mama 4T1 en la almohadilla de grasa mamaria de ratones Balb/c WT. A continuación, los ratones recibieron inyecciones con control de isotipo, anticuerpo anti-TNF, anticuerpo anti-TNFR1, anticuerpo anti-PD-1 (10 mg/kg de cada anticuerpo) o la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF o la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNFR1. Se usó una prueba de la U de Mann-Whitney y las diferencias fueron estadísticamente significativas (*p<0,05) en comparación con el grupo de control de isotipo. Los datos son valores medios ± eem de 6 ratones por grupo de un experimento.
Figura 15: El bloqueo de TNF previene la regulación por incremento de TIM-3 en TIL en respuesta al anticuerpo anti-PD-1. a y b, se determinó el nivel de expresión de TIM-3 en TIL CD8+ (a) y TIL CD4+ (b) mediante citometría de flujo en tumores de ratones WT en el día 10 después del injerto de B16K1 tras la inyección de vehículo (PBS), anticuerpo anti-PD-1 (aPD-1), anticuerpo anti-TNF (aTNF) o una combinación de ambos. La media de la intensidad de fluorescencia (MFI) en TIL CD8+ (b) y CD4+ (c) medida en al menos 5 tumores por grupo de un experimento se representa como cajas de Tukey. c y d, a ratones WT C57BL/6 se les injertó por vía intradérmica y de manera bilateral 1*106 células de melanoma B16K1 antes de la inyección con control de isotipo o anticuerpo anti-PD-1 combinado con anticuerpo anti-TNF y/o anticuerpo anti-TIM-3 (10 mg/kg de cada anticuerpo) en los días 13, 17 y 20 (n=5-6 ratones por grupo). Los datos son de un experimento. Se determinaron los volúmenes tumorales con un compás calibrador. Los datos son medias ± e.e.m. (c). Se representan los volúmenes tumorales determinados en el día 24 para tumores individuales. Las barras representan valores medios ± eem (d). (a-d: prueba de la U de Mann-Whitney U: ns: no significativo; *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001).
Ejemplos
EJEMPLO 1:
Material y métodos:
Reactivos y anticuerpos: Se adquirieron los anticuerpos anti-PD-1 (clon: RMP1-14), anti-CTLA-4 (clon: 9H10), anti-TNF (clon: XT3.11), de control de isotipo de BioXcell y el anticuerpo anti-TNFR1 (clon: 55R-170) de Ozyme. Los anticuerpos adicionales usados en este estudio fueron los anticuerpos anti-CD45 de ratón (BD Biosciences, BUV395), anti-Thy1 de ratón (Biolegend, APC-Cy7), anti-CD8 de ratón (BD Biosciences, BV605), anti-CD4 de ratón (eBioscience, FITC), anti-TIM3 (Biolegend, PE-Cy7), anti-CD11c (eBioscience, PE-Cy7), anti-CD3 (Biolegend, FITC), anti-CD19 (Biolegend, FITC), anti-NK1.1 (BD Biosciences, FiTC), anti-PD-L1 (b D Biosciences, PE) y anti-PD-L2 (BD Biosciences, APC). El etanercept lo proporcionó el Dr. Astudillo (CHU, Toulouse, Francia).
Líneas celulares:, B16K1 es una línea celular de melanoma de ratón C57BL/6 modificada genéticamente obtenida de células B16F10 y que expresa de manera estable la molécula de CMH-I H-2Kb, que estimula respuestas inmunitarias dependientes de células T CD812. Se cultivaron las células en medio DMEM que contenía suero fetal de ternero (FCS) inactivado con calor al 10%. El medio se cambió cada 2-3 días. Las células de carcinoma de pulmón de Lewis (LLC) y las células de cáncer de mama 4T1 procedían de la ATCC. Las células se cultivaron durante un número limitado de pases en medio DMEM que contenía FCS al 10% y se sometió a prueba para determinar la ausencia de contaminación por micoplasmas mediante PCR.
Ratones. Se adquirieron ratones C57BL/6 deficientes en TNF (n.° 5540) y deficientes en TNFR1 (n.° 2818) de Jackson Laboratories. Los ratones C57BL/6 WT eran de Janvier. Los ratones se alojaron en habitaciones con temperatura controlada en la instalación específica para animales libre de patógenos (plataforma Anexplo, Toulouse, Francia), se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas y tuvieron acceso ilimitado a alimento y agua. Todos los estudios con animales se realizaron según las políticas nacionales e internacionales y fueron aprobados por el comité local de experimentación con animales.
Tumorigénesis in vivo: Se inyectaron 3*105 células B16K1 o 4x105 células LLC por vía intradérmica y de manera bilateral en ratones de tipo natural, deficientes en TNF y deficientes en TNFR1. A continuación, se inyectó por vía intraperitoneal anticuerpo anti-PD-1 (10 mg/kg) o control de isotipo (10 mg/kg) en los días 6, 10 y 13 después del injerto de B16K1. Se inoculó anticuerpo anti-TNF3 (10 mg/kg) en los días 6, 10, 13 y 16 y anticuerpo anti-TNFR13 (10 mg/kg) en los días 6 y 10. Alternativamente, a los ratones se les inyectó anticuerpos de control de isotipo relevantes (10 mg/kg). Alternativamente, se estableció un protocolo que combinaba un anticuerpo anti-TNF (etanercept) con los anticuerpos bloqueantes de aPD-1 y aCTLA-4 en ratones de tipo natural. Se inyectaron 3*105 células B16K1 por vía intradérmica y de manera bilateral en ratones de tipo natural (n = 5 ratones por condición). Los grupos de control y tratado con etanercept se realizaron inyectando por vía intraperitoneal 7 días después del injerto de B16K1 y dos veces por semana durante todo el experimento, vehículo (PBS) y etanercept (3 mg/kg), respectivamente. Se trataron los ratones con aPD-1 y aCTLA-4 por vía intraperitoneal en los días 7, 13 y 17 con aPD-1 (5 mg/kg) y en los días 20, 24 y 27 con aCTLA-4 (5 mg/kg para la primera inyección y luego 2,5 mg/kg). Se calculó el volumen tumoral usando un compás calibrador en los días indicados. Se calculó el volumen tumoral con un compás calibrador en los días indicados con la fórmula: Volumen tumoral = 0,52 * longitud * ancho2.
Supervivencia global:. Se estimó la supervivencia global teniendo en cuenta el momento de la muerte natural de los animales o, alternativamente, el momento del sacrificio cuando los tumores alcanzaron el 10% del peso corporal (es decir, un volumen tumoral total de 2.000 mm3), según las políticas nacionales e internacionales. Análisis del contenido de linfocitos de los tumores. Se inyectaron 106 células B16K1 por vía intradérmica en ratones WT y deficientes en TNF. A continuación se inyectó por vía intraperitoneal el anticuerpo anti-PD-1 (10 mg/kg), el anticuerpo anti-TNF (10 mg/kg) o vehículo (PBS) en el día 7. En el día 10, se sacrificaron los ratones y se recogieron los tumores, se pesaron y se digirieron con el kit de disociación de tumores, de ratón (Miltenyi). Las células se tiñeron con los anticuerpos y el reactivo LIVE/DEAD (Invitrogen) antes del análisis de citometría de flujo.
Análisis de transcritos tumorales: Se inyectaron 106 células B16K1 por vía intradérmica en ratones WT, deficientes en TNF y deficientes en CD8. Se inyectó por vía intraperitoneal el anticuerpo anti-PD-1 (10 mg/kg) o vehículo (PBS) en el día 7. El día 10, se sacrificaron los ratones y se recogieron los tumores y se disociaron usando el homogeneizador de tejidos Evolution (Precellys, Bertin technologies) a 8.000 rpm durante 2 ciclos de 30 s en viales que contienen bolas de cerámica. El a Rn se purificó usando el kit RNeasy Midi (Qiagen). Se preparó ADNc a partir del ARN total con transcriptasa inversa SuperScript II (Thermofischer) usando 1 |ig de ARN de cada muestra. Se realizó qPCR usando mezcla maestra SYBR Green (Takara) y cebadores para transcritos que codifican para p-actina murina, HPRT, TNFa e IFNy (Qiagen).
Análisis de la inducción de TIM-3 en linfocitos purificados: Se purificaron células T CD8+ indiferenciadas murinas del bazo de ratones WT indiferenciados o deficientes en TNFR1 usando un kit de purificación de células T CD8+ indiferenciadas de ratón (Miltenyi Biotec). Se aislaron células T CD8+ indiferenciadas humanas a partir de sangre completa de donantes sanos usando un kit de purificación de células T CD8+ indiferenciadas humanas (Miltenyi Biotec). Las células T murinas y humanas se activaron con perlas recubiertas con anticuerpo anti-CD3 y anticuerpo anti-CD28 (Life Technologies) y perlas recubiertas con anticuerpo anti-CD3, anticuerpo anti-CD28 y anticuerpo anti-CD2 (Miltenyi), respectivamente, en presencia de IL-2 ( Invitrogen; 200 U/ml). Las células T CD8+ activadas se incubaron durante 48 horas en presencia de TNF recombinante o bien murino o bien humano (Peprotech) y luego se evaluó la expresión de TIM-3 mediante citometría de flujo.
Crecimiento de células de cáncer de mama 4T1 en ratones. Se inyectaron por vía ortotópica 1*105 células 4T1 en la almohadilla de grasa mamaria de ratones Balb/c. A continuación, a los ratones se les inyectó control de isotipo, anticuerpo anti-PD-1, anticuerpo anti-TNF o la combinación de anticuerpo anti-PD-1 y anticuerpo anti-TNF (10 mg/kg de cada anticuerpo) en los días 6, 9 y 13. Se calculó el volumen tumoral usando un compás calibrador en los días indicados con la fórmula: Volumen tumoral = 0,52 * longitud * ancho2.
Análisis de la expresión de TNF, TIM3, PDL1/2 en melanoma humano. Se analizó la expresión de TNF usando la cohorte de melanoma TCGA. Los datos genómicos y clínicos de TCGA se descargaron del proyecto de navegador del genoma del cáncer de la UCSC (https://genomecancer.ucsc.edu). La población de análisis consistió en 342 pacientes con metástasis distante para quienes se solapan los datos clínicos y de RNAseq. No se realizó ningún cálculo formal del tamaño de muestra en relación con el análisis de TCGA. Todos los pacientes que cumplieron con los criterios de inclusión y no inclusión se incluyeron en este análisis. Se midió la expresión génica experimentalmente usando la plataforma de secuenciación de ARN HiSeq 2000 de Illumina y se transformó con log2(x+1). Alternativamente, se analizó la expresión de TNF en biopsias de melanoma de pacientes tratados con anticuerpo anti-PD-1 (el presente análisis de datos publicado por Chen et al., Cancer Discov 6, 827-837 (2016)). La fuerza de la relación entre los genes que codifican para TNF y TIM-3 se evaluó usando el coeficiente de correlación de rangos de Spearman.
Análisis estadístico: Se evaluó la significación estadística de la diferencia entre los grupos usando el software Graph-Pad Prism. Brevemente, se sometió a prueba si los valores proceden de una distribución gaussiana con una prueba de normalidad ómnibus de D'agostino-Pearson. Cuando pasan la prueba de normalidad, se usó una prueba de la t de Student. De lo contrario, se usó la prueba de la U de Mann-Whitney. Se consideró que las diferencias eran estadísticamente significativas cuando p<0,05 (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001). Para la significación estadística de la supervivencia, se usó una prueba de Gehan-Breslow-Wilcoxon.
EJEMPLO 2:
La inhibición de TNF o TNF-R1 mejora la terapia con anticuerpo anti-PD-1 contra el melanoma.
Recientemente, se ha demostrado que la señalización de TNF dependiente de TNF-R1 del huésped altera el contenido tumoral de células T CD8+ en melanoma de ratón al desencadenar la muerte de células T CD8+ activadas y limitar la densidad intratumoral de las vénulas endoteliales altas, que son vasos sanguíneos implicados en la infiltración tisular de linfocitos. En consecuencia, la inyección de etanercept, que neutraliza eficazmente el TNF de ratón, reduce significativamente el crecimiento de melanoma de CMH-Ialto (B16K1) en ratones inmunocompetentes pero no inmunodeficientes (es decir, desnudos, IFNy y KO para CD8). La inmunoterapia emergente, que incluye anticuerpos bloqueantes de aPD-1, ha demostrado su eficacia clínica para el tratamiento de pacientes afectados por melanoma metastásico. En el presente documento, se ha evaluado el efecto de la estrategia de bloqueo de TNF o TNF-R1 sobre el desarrollo del melanoma en combinación con inmunoterapia con aPD-1. Se han seleccionado líneas celulares de melanoma de ratón B16K1, que expresan CMH-I a altos niveles y, por tanto, representan un modelo apropiado para estudiar la respuesta inmunitaria dependiente de células T CD8+. Se inyectaron por vía ortotópica B16K1 en ratones tanto de tipo natural como deficientes en TNF y, a continuación, a los ratones se les inyectó por vía intraperitoneal aPD-1 o un control de isotipo apropiado tal como se indica en la figura 1a. Según las presentes observaciones anteriores, el crecimiento tumoral de B16K1 se redujo significativamente en ratones KO para TNF en comparación con sus homólogos de tipo natural (figuras 1b y c). Además, hubo un retraso significativo en la muerte de ratones KO para TNF en comparación con los ratones de control. En ratones de tipo natural, la inyección de anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 retrasó significativamente el crecimiento tumoral de B16K1 y este fenómeno se potenció enormemente en animales deficientes en TNF (figuras 1b y 1c). Mientras que la inyección de anticuerpo anti-PD1 condujo a la regresión total de 8 tumores de 22 en ratones WT, desencadenó 20 rechazos de tumores de 22 en ratones KO para TNF. Además, tras la inyección de anticuerpo anti-PD-1, la tasa de supervivencia mejoró drásticamente en los ratones deficientes en TNF (9 de 11 ratones) en comparación con los ratones de tipo natural (0 de 11 ratones) (figura 1d). Dos meses después de la primera inyección de células B16K1, se reinyectaron células B16K1 en los ratones KO para TNF supervivientes. Ninguno de los ratones desarrolló tumores en contraste con los ratones de control de tipo natural, que no se han expuesto a células B16K1 anteriormente (figura 1d). Esta última observación indica que todos los ratones KO para TNF supervivientes estaban totalmente vacunados contra células B16K1. Por tanto, es poco probable que se requiera la señalización de TNF para el establecimiento de una respuesta de células T CD8+ de memoria eficaz contra el melanoma.
A continuación, se evaluaron las consecuencias de la deficiencia de TNF-R1 sobre la actividad terapéutica de los anticuerpos bloqueantes anti-PD-1. Se inyectaron por vía ortotópica células B16K1 en ratones WT y deficientes en TNF-R1 y, a continuación, a los ratones se les inyectó por vía intraperitoneal aPD-1 o control de isotipo tal como se indica en la figura 2a. Según las presentes observaciones anteriores, el crecimiento tumoral de B16K1 se redujo significativamente en ratones KO para TNF-R1 en comparación con sus homólogos de tipo natural (figuras 2b y c). Además, hubo un retraso significativo en la muerte de los ratones KO para TNF-R1 en comparación con los ratones de control. Mientras que el anticuerpo anti-PD-1 retrasó significativamente el crecimiento tumoral (figuras 2b y c) y la muerte (figura 2d) en ratones de tipo natural, la mayoría de los tumores experimentaron recaída y todos los ratones murieron en el plazo de 60 días tras la inyección de células tumorales. En marcado contraste, todos los tumores experimentaron regresión completa en ratones deficientes en TNF-R1 en los que se inyectaron anticuerpos anti-PD-1 (figura 2b, panel derecho). Desde el día 26, no pudieron detectarse tumores en ninguno de los animales KO para TNF-R1 tratados con anticuerpos anti-PD-1 (figura 2c). Además, todos los ratones sobrevivieron en marcado contraste con el grupo en el que se inyectó isotipo en el que todos los ratones murieron en el plazo de los 40 días posteriores a la inyección de células B16K1 (figura 2d). Dos meses después de la primera inyección de células B16K1, se reinyectaron células B16K1 en los ratones KO para TNF-R1 supervivientes y ninguno de los ratones desarrolló tumores (figura 2). Esta última observación indica que, al igual que los ratones KO para TNF en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1, todos los ratones KO para TNF-R1 supervivientes estaban totalmente vacunados contra células B16K1.
En conjunto, los presentes datos indican que la señalización de TNF dependiente de TNF-R1 no se requiere para la respuesta inmunitaria antimelanoma desencadenada por anticuerpos anti-PD-1, sino que más bien inhibe el beneficio terapéutico del bloqueo de PD-1 en el melanoma. Por tanto, la inhibición de TNF o TNF-R1 puede facilitar la eficacia del anticuerpo anti-PD-1 para combatir el melanoma.
EJEMPLO 3:
Inyección de anticuerpo anti-TNF en combinación con anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 en ratones de tipo natural con melanoma establecido.
Los resultados de los ensayos clínicos indican que la terapia con anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 es una estrategia prometedora en melanoma metastásico. Sin embargo, algunos pacientes no se benefician del tratamiento y una proporción de ellos presenta efectos adversos graves relacionados con el sistema inmunitario, incluyendo reacciones autoinmunitarias e inflamatorias. Teniendo en cuenta (i) las presentes observaciones anteriores que indican que la inhibición de TNF/TNF-R1 mejora la eficacia terapéutica del anticuerpo anti-PD-1 en el melanoma de ratón, (ii) los presentes hallazgos recientes que ilustran que la inyección de anticuerpo anti-TNF mejora la respuesta inmunitaria dependiente de células T CD8+ contra el melanoma y (iii) la eficacia de algunas moléculas bloqueantes anti-TNF para inhibir síndromes autoinmunitarios e inflamatorios en la práctica clínica, los presentes inventores han diseñado un protocolo para evaluar la combinación de anticuerpo anti-TNF con anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 en melanoma de ratón (figura 3A). En comparación con los ratones de control en los que se inyectó el isotipo, el anticuerpo anti-TNF solo inhibía ligeramente el crecimiento del melanoma B16K1 (figuras 3B y C). La inyección de anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 solos estuvo acompañada de un mayor retraso en el crecimiento tumoral con una regresión total de 7 tumores de 24 en ratones de control. Curiosamente, la combinación de anticuerpo anti-PD-1 con anticuerpo anti-TNF aumentó este fenómeno con una regresión total de 18 tumores de 24 (figuras 3B y C). Además, la inyección de anticuerpo anti-PD-1 combinado con anticuerpo anti-TNF condujo a la supervivencia de 9 ratones de 12 en comparación con 2 ratones de 12 en el grupo en el que se inyectó anticuerpo anti-PD-1 solo.
En conjunto, los presentes datos indican que el anticuerpo anti-TNF no compromete, sino que mejora, al menos hasta cierto punto, el efecto terapéutico del anticuerpo anti-PD-1 en el melanoma.
EJEMPLO 4:
Infiltración tumoral de células inmunitarias en melanoma desarrollado en ratones WT y deficientes en TNF en los que se inyectó anticuerpo bloqueante anti-PD-1
Debido a que anteriormente se mostró que la señalización de TNF dependiente de TNF-R1 del huésped altera el contenido tumoral de células T CD8 en melanoma de ratón, a continuación se investigó el efecto del anticuerpo anti-PD-1 sobre TIL en ratones WT y deficientes en TNF. Para este fin, a los ratones se les inyectó por vía ortotópica 1 millón de células B16K1. En el día 7, a los ratones se les inyectó vehículo o anticuerpo anti-PD-1 y se sacrificaron en el día 10 (figura 4A). En esas condiciones, los pesos de los tumores B16K1 se redujeron significativamente en los ratones deficientes en TNF en comparación con los ratones WT y este fenómeno se amplificó con la inyección de anticuerpo anti-PD-1 (figura 4B). El análisis del contenido tumoral de leucocitos mediante citometría de flujo indicó que la inyección de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT indujo un aumento pequeño, aunque significativo, de células CD45+, así como de linfocitos T CD8+ y CD4+ en comparación con ratones WT de control (figura 4C). En buena concordancia con los datos publicados de los presentes inventores, las células CD45+, así como los TIL CD8+ y CD4+, aumentaron drásticamente en ratones deficientes en TNF, y este fenómeno no mejoró adicionalmente con la inyección de anticuerpo anti-PD-1 (figura 4C). Teniendo en cuenta el papel principal de TIM-3 en los mecanismos de escape inmunitario asociados con la resistencia a anticuerpo anti-PD-1 tanto en ratones como en pacientes, se evaluó entonces la expresión de TIM-3 en TIL. Cabe destacar que aproximadamente el 70% de los TIL CD8+ y CD4+ coexpresaban PD-1 y TIM-3, independientemente del estado de TNF (figura 11). La intensidad de fluorescencia media de la tinción de TIM-3 en células T CD8+ y CD4+ aumentó después de la inyección de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT (figura 4D). En marcado contraste, este fenómeno se suprimió totalmente en ratones KO para TNF (figura 4D), lo que sugiere que se produjo expresión de TIM-3 desencadenada por anticuerpo anti-PD1 de una manera dependiente de TNF. Para evaluar si el TNF es un potente inductor de la expresión de TIM-3, se incubaron células T CD8+ murinas purificadas y activadas con una dosis exógena y subtóxica de TNF murino. El TNF indujo un aumento del porcentaje de células TIM-3+ y de la intensidad de fluorescencia media de la tinción de TIM-3 (figura 4E). En conjunto, los presentes datos muestran que la deficiencia de TNF no sólo aumenta el contenido de TIL CD4+ y CD8+, sino que también previene la regulación por incremento de TIM-3 desencadenada por anticuerpo anti-PD-1 en el melanoma.
EJEMPLO 5:
Inyección de etanercept en combinación con anticuerpos bloqueantes anti-CTLA-4 y anti-PD-1 en ratones de tipo natural con melanoma establecido.
Ensayos clínicos recientes indican que la terapia de combinación que asocia anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 y anti-CTLA-4 es una estrategia prometedora en melanoma metastásico. Sin embargo, una gran proporción de pacientes presenta efectos adversos graves relacionados con el sistema inmunitario, incluyendo reacciones autoinmunitarias e inflamatorias, que pueden curarse con anticuerpo anti-TNF. Los presentes inventores han diseñado un protocolo para evaluar la combinación de etanercept con anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 y anti-CTLA-4 en melanoma de ratón (figura 5A). En comparación con los ratones de control en los que se inyectó vehículo (PBS), el etanercept solo inhibió significativamente el crecimiento del melanoma B16K1 (figuras 5B y C). La inyección de anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 y anti-CTLA-4 estuvo acompañada por un mayor retraso en el crecimiento tumoral, siendo más pronunciado este fenómeno con la inyección de etanercept (figuras 5B y C). En conjunto, los presentes datos indican que el etanercept no compromete, sino que mejora, al menos hasta cierto punto, el efecto terapéutico de la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-CTLA-4 en el melanoma. EJEMPLO 6:
Dado que los TIL CD8+ preexistentes que están regulados negativamente por la ruta de PD-1 son predictivos de la respuesta al anticuerpo anti-PD-1 en pacientes con melanoma29, se evaluó inicialmente la expresión de PD-1 y sus ligandos (PD-L1 y PD-L2) en tumores B16K1 de ratones de tipo natural (WT) y deficientes en TNF. La proporción de TIL CD8+PD-1+ (figura 8a) y TIL CD4+PD-1+ (figura 8b) aumentó en tumores de melanoma de ratones deficientes en TNF. Por tanto, la deficiencia de TNF aumenta el contenido tumoral de linfocitos efectores clave que expresan PD-1.
A continuación, se investigó el efecto de la deficiencia o el bloqueo de TNF en combinación con aPD-1 sobre el desarrollo de melanoma. Con este fin, a ratones WT y deficientes en TNF se les inyectó células de melanoma y, cuando los tumores se volvieron detectables en el día 6, los ratones recibieron la primera de tres inyecciones de anticuerpo bloqueante anti-PD-1 o control de isotipo. Según informes anteriores de los presentes inventores11, el crecimiento tumoral de B16K1 (figuras 1a y 1b) y la muerte de los animales (figura 1c) se retrasaron significativamente en ratones deficientes en TNF en comparación con sus homólogos WT. En ratones WT, la inyección de anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 retrasó significativamente el crecimiento tumoral de B16K1. Sin embargo, la mayoría de los tumores experimentaron recaída y todos los ratones murieron en el plazo de 60 días tras la inyección de células tumorales (figuras 1a, 1b y 1c). Curiosamente, en ratones deficientes en TNF, la terapia con anticuerpo anti-PD-1 indujo el rechazo tumoral del 90% de los tumores (figuras 1a y 1b). Además, más del 80% de los ratones deficientes en TNF sobrevivieron hasta 120 días (figura 1c). Se obtuvieron datos similares en ratones deficientes en TNFR1, que rechazaron potentemente las células de melanoma B16K1 con la terapia con anticuerpo anti-PD-1 (figuras 2a y 2b). Dos meses después de la primera inoculación de células de melanoma B16K1, la reinyección de células de melanoma B16K1 en los ratones supervivientes deficientes en TNF y TNFR1 no comprometió la supervivencia global, lo que demuestra que estaban totalmente vacunados contra células de melanoma B16K1 (figura 1c y figura 2c).
Para extender las presentes observaciones a otro modelo de células cancerosas, se sometió a prueba entonces el efecto del anticuerpo bloqueante anti-PD1 en ratones WT, deficientes en TNF y deficientes en TNFR1 en los que se inyectaron células de carcinoma de pulmón de Lewis (LLC) (figura 9). Ni la deficiencia de TNF ni la de TNFR1 alteró el crecimiento de LLC (figura 9a). Además, en ratones WT, el anticuerpo anti-PD-1 no tuvo ningún efecto sobre el crecimiento tumoral, lo que indica que LLC era completamente resistente a esta terapia en las presentes condiciones experimentales (figuras 9a y 9b). De interés, la deficiencia de TNF o TNFR1 superó parcialmente la resistencia de LLC a anticuerpo anti-PD-1 (figuras 9a y 9b). Por tanto, es poco probable que la sinergia de la deficiencia de TNF/TNFR1 y el anticuerpo anti-PD-1 esté restringida al melanoma, sino que puede extenderse a otros tipos de cáncer, tales como carcinoma de pulmón, que puede beneficiarse del anticuerpo anti-PD-1 según ensayos clínicos en fase 2 y fase 33031. Según los presentes datos preclínicos, la respuesta clínica al anticuerpo anti-PD-1 es más débil en pacientes con carcinoma de pulmón que en pacientes con melanoma.
Para evaluar la relevancia terapéutica de las observaciones anteriores, se investigó entonces la combinación de anticuerpos bloqueantes anti-TNF y anti-PD-1 en melanoma de ratón (figura 3). En comparación con los ratones de control, el anticuerpo anti-TNF solo inhibía ligera, pero significativamente, el crecimiento del melanoma B16K1 (figura 3). La inyección de anticuerpos bloqueantes anti-PD-1 solos estaba acompañada de un retraso en el crecimiento tumoral con una regresión total de menos del 30% de los tumores en los ratones de control (figura 3). Curiosamente, la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF condujo a una regresión total del 75% de los tumores (figura 3) y a la supervivencia del 75% de los ratones en comparación con menos del 20% en el grupo de ratones en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1 solo. Los ratones supervivientes estaban totalmente vacunados contra B16K1 (datos no mostrados). Se obtuvieron datos similares con la combinación de anticuerpos anti-TNFR1 y anti-PD-1 (figura 10). En conjunto, los presentes datos indican que la señalización de TNF dependiente de TNFR1 afecta al beneficio terapéutico del bloqueo de PD-1.
Para obtener información sobre los mecanismos moleculares y celulares implicados en el efecto terapéutico beneficioso del bloqueo de TNF sobre la terapia con anticuerpo anti-PD-1, se configuró un protocolo basado en una única inyección de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT y deficientes en TNF siete días después de la inyección de B16K1. En el día 10, se sacrificaron los ratones. Se observó que los pesos tumorales se redujeron significativamente en ratones deficientes en TNF en comparación con ratones WT y que este fenómeno se amplificó adicionalmente con la inyección de anticuerpo anti-PD-1 (figura 6a). Curiosamente, mientras que una sola inyección de anticuerpo anti-PD-1 no logró fomentar el rechazo tumoral en ratones WT, desencadenó más del 30% de rechazo tumoral en ratones deficientes en TNF (figura 6a). A continuación se monitorizó el contenido intratumoral de transcritos que codifican para TNF e IFNy. En ratones WT, la inyección de anticuerpo anti-PD-1 indujo un aumento en la expresión de ambos transcritos de TNF e IFNy (figuras 6b y c). Curiosamente, en tumores de ratones deficientes en TNF, los transcritos de IFNy aumentaron en la condición de control y se potenciaron adicionalmente con la inyección de anticuerpo anti-PD-1 (figura 6c). En ratones deficientes en CD8, el nivel tumoral de ARNm de TNF e IFNy fue bajo tanto en condiciones de control como de anticuerpo anti-PD-1, lo que demuestra que se requieren células T CD8+ para la producción potente de TNF e IFNy en este modelo de melanoma (figuras 6b y c).
A continuación, se investigó el efecto del anticuerpo anti-PD-1 sobre la acumulación de TIL en ratones WT y deficientes en TNF en los que se inyectó o no el anticuerpo anti-PD-1. El análisis del contenido tumoral de leucocitos mediante citometría de flujo indicó que la inyección de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT indujo un aumento pequeño, pero significativo, de células T y CD45+ (figura 6d), incluyendo tanto TIL CD8+ como, aunque en menor medida, CD4+ (figura 6e). Según los hallazgos previos de los presentes inventores11, las células CD45+ así como los TIL CD8+ y CD4+ aumentaron drásticamente en ratones deficientes en TNF (figuras 6d y e) y en ratones WT en los que se inyectó anticuerpo anti-TNF (figura 6f), sin elevación adicional tras el tratamiento con anticuerpo anti-PD-1 (figuras 6d-f). Por tanto, el bloqueo de TNF potencia fuertemente los TIL CD8+ y CD4+ en melanoma de ratón, un fenómeno predictivo de la respuesta al anticuerpo anti-PD-1 en pacientes con melanoma29. TIM-3, que inhibe la respuesta Th1 y desencadena tolerancia periférica32, ha surgido recientemente como un punto de control inmunitario clave que altera la respuesta de células T CD8+ específicas de antígeno en melanoma33 y que desempeña un papel importante en los mecanismos de escape inmunitario asociados con la resistencia del melanoma al anticuerpo anti-PD-1 tanto en ratones como en pacientes16. Se evaluó la expresión de TIM-3 en TIL y se encontró que más del 50% de los TIL CD8+ y CD4+ coexpresaban PD-1 y TIM-3, independientemente del estado de TNF (figura 11). La intensidad de fluorescencia media (MFI) de la tinción de TIM-3, que refleja su expresión en los TIL, aumentó significativamente en TIL CD8+ tras la administración de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT (figura 4D). En marcado contraste, este fenómeno se suprimió totalmente en ratones deficientes en TNF (figura 4D), lo que sugiere que se produjo expresión de TIM-3 desencadenada por anticuerpo anti-PD1 de una manera dependiente de TNF. De manera importante, el anticuerpo anti-TNF alteró la expresión de TIM-3 en TIL CD4+ y c D8+ en ratones WT (datos no mostrados). Para evaluar si el TNF puede inducir la expresión de TIM-3, se purificaron y activaron células T CD8+ murinas indiferenciadas antes de la incubación con dosis exógenas y subtóxicas de TNF murino. El TNF provocó un aumento tanto del porcentaje de células T CD8+ TIM-3+ como de la intensidad de fluorescencia media de la tinción de TIM-3 (figura 4E). Esto se suprimió en células T CD8+ deficientes en TNFR1, lo que indica que el TNF indujo la expresión de TIM-3 de una manera dependiente de TNFR1 (datos no mostrados). De interés, el TNF también estimuló la expresión de TIM-3 en células T CD8+ humanas indiferenciadas purificadas (datos no mostrados). Además, en muestras de melanoma de pacientes con melanoma metastásico de la cohorte TCGA, la expresión de TNFA (que codifica para TNF) se correlacionó positiva y significativamente (r=0,723, p<0,0001) con la de HAVCR2 (que codifica para TIM-3) (figura 7), reforzando adicionalmente el estrecho vínculo molecular entre la señalización de TNF y la expresión de TIM-3 en el melanoma.
En conjunto, los presentes datos destacan por primera vez que la señalización de TNF dependiente de TNFR1 constituye un potente mecanismo de escape inmunitario que confiere resistencia al anticuerpo anti-PD-1, muy probablemente al limitar el contenido de TIL CD8+ e inducir la expresión de TIM-3. El presente estudio proporciona la prueba de concepto de la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF para combatir el melanoma y supuestamente otros tipos de cáncer tales como carcinoma de pulmón en pacientes.
EJEMPLO 7:
La deficiencia de TNF reduce la muerte celular de los TIL tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1.
Para obtener información sobre los mecanismos moleculares y celulares implicados en el efecto beneficioso del bloqueo de TNF en la terapia con anticuerpo anti-PD-1, se injertó de manera bilateral un millón de células B16K1 en ratones WT y deficientes en TNF seguido de una sola inyección de anticuerpo anti-PD-1 siete días después. Para evaluar si la deficiencia de TNF tiene un impacto sobre la proliferación de TIL, se monitorizó la expresión de Ki67, un marcador de proliferación. Las proporciones de TIL Ki67+ CD8+ y TIL Ki67+ CD4+ fueron similares en ratones WT y deficientes en TNF tratados con anticuerpo anti-PD-1 (datos no mostrados). Por tanto, el TNF no parece ser un regulador importante de la proliferación de TIL tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1. A continuación, se monitorizó la muerte celular de TIL evaluando el aumento en la permeabilidad de la membrana plasmática (células positivas para LIVE/DEAD). De manera importante, en los animales tratados con anticuerpo anti-PD-1, la deficiencia de TNF redujo significativamente la muerte celular de TIL tanto CD8+ como CD4+ (figura 12). Cabe destacar que la deficiencia de TNF no alteró los niveles de ARNm de quimiocinas en tumores tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1 (datos no mostrados). En conjunto, los presentes datos indican que la acumulación de TIL en ratones deficientes en TNF dio como resultado un aumento de la supervivencia de TIL en lugar de un aumento en la proliferación de células T o quimiotaxis tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1.
EJEMPLO 8:
La deficiencia de TNF potencia la respuesta de IFN-y y reduce la expresión de PD-L1.
En ratones WT, la inyección de anticuerpo anti-PD-1 provocó un aumento de la expresión de transcritos tanto de TNF como de IFN-y en tumores (figuras 6b y c). Curiosamente, en tumores de ratones deficientes en TNF, los transcritos de IFN-y aumentaron en condiciones basales y aumentaron adicionalmente tras el tratamiento con anticuerpo anti-PD-1 (figura 6c). En tumores de ratones deficientes en CD8, los niveles de ARNm de TNF e IFN-y permanecieron bajos tanto en condiciones de control como con anticuerpo anti-PD-1, lo que demuestra que se requieren células T CD8+ para la producción potente de TNF e IFN-y en este modelo de melanoma (figuras 6b y c).
Mientras que la proporción de TIL IFN-y+CD8+ no se vio afectada por la pérdida de TNF, los TIL IFN-y+CD4+ aumentaron significativamente, lo que argumenta que el TNF limita la respuesta Th1 tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1 (datos no mostrados). Por tanto, el aumento de la expresión de IFN-y en tumores de ratones deficientes en TNF estaba asociado con una polarización Th1 potenciada y la acumulación de TIL CD8+, que son potentes productores de IFN-y. La proporción de TIL granzima B+ CD8+ también aumentó significativamente en ratones deficientes en TNF (datos no mostrados), lo que indica que el TNF altera la acumulación de TIL CD8+ citotóxicos.
Se sabe que el TNF fomenta la expresión de PD-L1 en cánceres sólidos17, incluyendo melanoma15 A continuación se analizaron los niveles de PD-L1 y PD-L2 en las presentes condiciones experimentales. En ratones WT, el tratamiento con anticuerpo anti-PD-1 potenció selectivamente la expresión de PD-L1, pero no la de PD-L2, en TIL tanto CD4+ como c D8+ (figura 13a y datos no mostrados). La deficiencia de TNF suprimió totalmente la regulación por incremento de PD-L1 en los TIL tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1 (figura 13a). También se monitorizó el contenido tumoral de células dendríticas (DC), que desempeñan un papel clave en la sensibilización de las células T. Las DC infiltrantes de tumores aumentaron ligera, aunque significativamente, en ratones WT tratados con anticuerpo anti-PD-1, así como en ratones deficientes en TNF con o sin inyección de anticuerpo anti-PD-1 (figura 13b). Además, la expresión de PD-L1 y, aunque en menor medida, de PD-L2 se redujo en DC en ratones deficientes en TNF en condiciones de control y con anticuerpo anti-PD-1 (figuras 13c y 13d). Por tanto, la deficiencia de TNF favorece la acumulación de DC en los tumores, al tiempo que reduce, pero no suprime, su expresión de los ligandos de PD-1.
EJEMPLO 9:
El TNF potencia la expresión de TIM-3 en leucocitos infiltrantes de tumores.
TIM-3 inhibe las respuestas Th1 y desencadena tolerancia periférica28. Esta molécula de punto de control inmunitario clave recientemente reconocida altera la respuesta de las células T CD8+ específicas de antígeno en melanoma29 y desempeña un papel importante en los mecanismos de escape inmunitario. Esto estaba asociado con la resistencia del melanoma al anticuerpo anti-PD-1 tanto en ratones como en pacientes22.
Se evaluó la expresión de TIM-3 en TIL y se encontró que más del 70% de los TIL CD8+ y el 50% de los TIL CD4+ coexpresaban PD-1 y TIM-3, independientemente del estado de TNF (figura 11). La intensidad de fluorescencia media (MFI) de la tinción de TIM-3, que refleja su expresión en TIL, aumentó significativamente en TIL CD8+ y CD4+ después de la administración de anticuerpo anti-PD-1 en ratones WT (figura 4D). En marcado contraste, la regulación por incremento de TIM-3 se suprimió totalmente en ratones deficientes en TNF (figura 4D), lo que sugiere que la expresión de TIM-3 desencadenada por anticuerpo anti-PD-1 se produjo de una manera dependiente de TNF. Cabe destacar que la deficiencia de TNF no alteró la expresión de TIGIT, LAG3 y CTLA-4 en TIL CD8+ (datos no mostrados), lo que indica que es poco probable que el TNF sea un inductor potente de esos puntos de control inmunitarios en las presentes condiciones experimentales.
Para evaluar si el TNF puede inducir la expresión de TIM-3, se purificaron y activaron células T CD8+ murinas indiferenciadas antes de la incubación con dosis exógenas y subtóxicas de TNF murino. El TNF provocó un aumento tanto del porcentaje de células T CD8+ TIM-3+ como de la MFI de la tinción de TIM-3 (figura 4E). Esto se suprimió en células T c D8+ deficientes en TNFR1, lo que indica que el TNF indujo la expresión de TIM-3 de una manera dependiente de TNFR1 (datos no mostrados). En consecuencia, el TNF no logró desencadenar la expresión de TIM-3 en células T CD8+ no activadas, que no expresan TNFR114 (datos no mostrados). Mientras que el TNF reguló por incremento la expresión de TIM-3 en células T CD8+ activadas, tuvo un efecto mínimo o nulo sobre la expresión de TIGIT y LAG3 (datos no mostrados). De interés, el TNF también estimuló la expresión de TIM-3 en células T CD8+ humanas activadas e indiferenciadas purificadas (datos no mostrados).
A continuación, se investigaron los mecanismos moleculares implicados en la expresión de TIM-3 inducida por TNF en células T CD8+ activadas. El análisis se centró en las rutas de señalización, es decir, MEK, p38 MAPK y PI3K, que se activan por TNF30, y conducen a la expresión de TIM-33132. La inhibición farmacológica de PI3K y MEK, pero no de p38 MAPK, redujo significativamente la expresión basal de TIM-3. Curiosamente, sólo el inhibidor de p38 MAPK impidió totalmente la expresión de TIM-3 inducida por TNF en células T CD8+ activadas (datos no mostrados). Por tanto, es probable que p38 MAPK desempeñe un papel fundamental en la regulación por incremento de TIM-3 en células T CD8+ en respuesta al TNF.
EJEMPLO 10:
Los anticuerpos anti-TNF producen sinergia con la terapia con anticuerpo anti-PD-1.
Para evaluar la relevancia terapéutica de las observaciones anteriores, se sometió a prueba la combinación de anticuerpos bloqueantes anti-TNF y anti-PD-1 en melanoma de ratón (figura 3a). En comparación con los ratones no tratados, el anticuerpo anti-TNF solo inhibió ligeramente el crecimiento del melanoma B16K1 (figuras 3B y C). Curiosamente, la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF condujo a una regresión total del 75% de los tumores (figuras 3B y C) y condujo a la supervivencia del 75% de los ratones en comparación con menos del 20% en el grupo de ratones en los que se inyectó anticuerpo anti-PD-1 solo (figura 3D). Los ratones supervivientes estaban totalmente vacunados contra B16K1 (datos no mostrados). Cabe destacar que los anticuerpos anti-TNF y anti-TNFR1 también producen sinergia con el anticuerpo anti-PD-1 en un modelo de cáncer de mama basado en un injerto ortotópico de células 4T1 en la almohadilla de grasa mamaria de ratones Balb/c. Mientras que los anticuerpos anti-PD-1, anti-TNF o anti-TNFR1 solos no lograron alterar el crecimiento tumoral, la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF o la combinación de anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNFR1 lo redujeron significativamente (figura 14).
Para investigar adicionalmente los mecanismos moleculares y celulares implicados en el beneficio terapéutico de combinar anticuerpos anti-PD-1 y anti-TNF, se analizaron los TIL CD8+ en tumores B16K1. El anticuerpo anti-TNF aumentó la proporción de TIL CD8+ (figura 6f) y previno no sólo su muerte (datos no mostrados), sino también su regulación por incremento de TIM-3 (figuras 15a y 15b) en respuesta al tratamiento con anticuerpo anti-PD-1. Estos hallazgos muestran que el TNF producido tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1 desencadena tanto AICD de TIL CD8+ como regulación por incremento de TIM-3 en los TIL. A continuación, se comparó la eficacia de una terapia que incluye anticuerpo anti-PD-1 como base en tumores establecidos y se sometieron a prueba diversas combinaciones retrasando la primera inyección de anticuerpos hasta el día 13. Las coadministraciones de anticuerpos anti-TIM-3 y anti-TNF fueron igualmente eficaces en la reducción del crecimiento tumoral (figuras 15c y 15d). Finalmente, la coinyección de anticuerpo anti-TIM-3 junto con anticuerpos anti-TNF y anti-PD-1 no mejoró adicionalmente el efecto terapéutico (figuras 15c y 15d). Se observaron hallazgos similares en ratones deficientes en TNF, en los que la inyección de anticuerpo anti-TIM-3 no mejoró los efectos terapéuticos del anticuerpo anti-PD-1 (datos no mostrados). En conjunto, los datos indican que el beneficio terapéutico de combinar anticuerpos anti-TNF y anti-PD-1 se debe, al menos en parte, a la inhibición de la ruta dependiente de TIM-3.
EJEMPLO 11:
Una alta expresión de TNF está asociada con la firma del gen de escape inmunitario en melanoma humano. Para evaluar cómo los presentes hallazgos se traducen en melanoma metastásico en pacientes, a continuación se analizó el banco de datos de melanoma TCGA33 para determinar la expresión de un conjunto de genes que codifican para proteínas implicadas en el escape inmunitario y, en última instancia, en la resistencia a la terapia con anticuerpo anti-PD-1. Sorprendentemente, una firma de gen de escape inmunitario está enriquecida en muestras de melanoma que presentan una alta expresión de TNF, lo que sugiere que el TNF es parte de una red de genes que conduce a supresión inmunitaria en melanoma humano (datos no mostrados). Además, la expresión de TNFA (que codifica para TNF) se correlacionó positiva y significativamente con la de HAVCR2 (que codifica para TIM-3), PDCD1LG1 (que codifica para PD-L1) y PDcDlLG2 (que codifica para PD-L2) (figura 7 y datos no mostrados). El análisis por parte de los presentes inventores de otro conjunto de datos publicado23 también reveló una fuerte correlación positiva y significativa entre la expresión de TNFA, HAVCR2, p DcD1LG1 y PDCD1LG2 en muestras de melanoma de pacientes tratados con anticuerpo anti-PD-1 (datos no mostrados). Por tanto, junto con los presentes datos preclínicos, esas observaciones sobre el melanoma humano sugieren que el TNF induce de manera potente la expresión de PD-L1, PD-L2 y TIM-3 en melanoma tras la terapia con anticuerpo anti-PD-1.
Bibliografía
A lo largo de toda esta solicitud, diversas referencias describen el estado de la técnica al que pertenece la presente divulgación.
1. Bertrand, F., Colacios, C. y Segui, B. TNF-R1, an immune checkpoint in melanoma? Genes Cancer 6, 369-370 (2015).
2. Bertrand, F., et al. Targeting TNF alpha as a novel strategy to enhance CD8+ T cell-dependent immune response in melanoma? Oncoimmunology 5, e1068495 (2016).
3. Balkwill, F. Tumour necrosis factor and cancer. Nat Rev Cancer 9, 361-371 (2009).
4. Carswell, E.A., et al. An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors. Proc Natl Acad Sci U S A 72, 3666-3670 (1975).
5. Ratner, A. y Clark, W.R. Role of TNF-alpha in CD8+ cytotoxic T lymphocyte-mediated lysis. J Immunol 150, 4303-4314 (1993).
6. Chopra, M., et al. Tumor necrosis factor receptor 2-dependent homeostasis of regulatory T cells as a player in TNF-induced experimental metastasis. Carcinogenesis 34, 1296-1303 (2013).
7. Okubo, Y., Mera, T., Wang, L. y Faustman, D.L. Homogeneous expansion of human T-regulatory cells via tumor necrosis factor receptor 2. Sci Rep 3, 3153 (2013).
8. Schioppa, T., et al. B regulatory cells and the tumor-promoting actions of TNF-alpha during squamous carcinogenesis. Proc Natl Acad Sci USA 108, 10662-10667 (2011).
9. Zhao, X., et al. TNF signaling drives myeloid-derived suppressor cell accumulation. J Clin Invest 122, 4094­ 4104 (2012).
10. Sade-Feldman, M., et al. Tumor necrosis factor-alpha blocks differentiation and enhances suppressive activity of immature myeloid cells during chronic inflammation. Immunity 38, 541-554 (2013).
11. Beyer, M., et al. Tumor-necrosis factor impairs CD4(+) T cell-mediated immunological control in chronic viral infection. Nat Immunol 17, 593-603 (2016).
12. Chen, X., Baumel, M., Mannel, D.N., Howard, O.M. y Oppenheim, J.J. Interaction of TNF with TNF receptor type 2 promotes expansion and function of mouse CD4+CD25+ T regulatory cells. J Immunol 179, 154-161 (2007).
13. Zheng, L., et al. Induction of apoptosis in mature T cells by tumour necrosis factor. Nature 377, 348-351 (1995).
14. Bertrand, F., et al. Blocking Tumor Necrosis Factor alpha Enhances CD8 T-cell-Dependent Immunity in Experimental Melanoma. Cancer Res 75, 2619-2628 (2015).
15. Donia, M., et al. Aberrant Expression of MHC Class II in Melanoma Attracts Inflammatory Tumor-Specific CD4+ T-Cells, Which Dampen CD8+ T-cell Antitumor Reactivity. Cancer Res 75, 3747-3759 (2015).
16. Landsberg, J., et al. Melanomas resist T-cell therapy through inflammation-induced reversible dedifferentiation. Nature 490, 412-416 (2012).
17. Lim, S.O., et al. Deubiquitination and Stabilization of PD-L1 by CSN5. Cancer Cell 30, 925-939 (2016).
18. Larkin, J., et al. Combined Nivolumab and Ipilimumab or Monotherapy in Untreated Melanoma. N Engl J Med 373, 23-34 (2015).
19. Robert, C., et al. Nivolumab in previously untreated melanoma without BRAF mutation. N Engl J Med 372, 320-330 (2015).
20. Robert, C., et al. Pembrolizumab versus Ipilimumab in Advanced Melanoma. N Engl J Med 372, 2521-2532 (2015).
21. Postow, M.A., Callahan, M.K. y Wolchok, J.D. Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy. J Clin Oncol 33, 1974-1982 (2015).
22. Koyama, S., et al. Adaptive resistance to therapeutic PD-1 blockade is associated with upregulation of alternative immune checkpoints. Nat Commun 7, 10501 (2016).
23. Chen, P.L., et al. Analysis of Immune Signatures in Longitudinal Tumor Samples Yields Insight into Biomarkers of Response and Mechanisms of Resistance to Immune Checkpoint Blockade. Cancer Discov 6, 827­ 837 (2016).
24. Spain, L., Diem, S. y Larkin, J. Management of toxicities of immune checkpoint inhibitors. Cancer Treat Rev 44, 51-60 (2016).
25. Tumeh, P.C., et al. PD-1 blockade induces responses by inhibiting adaptive immune resistance. Nature 515, 568-571 (2014).
26. Rizvi, N.A., et al. Activity and safety of nivolumab, an anti-PD-1 immune checkpoint inhibitor, for patients with advanced, refractory squamous non-small-cell lung cancer (CheckMate 063): a phase 2, single-arm trial. Lancet Oncol 16, 257-265 (2015).
27. Borghaei, H., et al. Nivolumab versus Docetaxel in Advanced Nonsquamous Non-Small-Cell Lung Cancer. N Engl J Med 373, 1627-1639 (2015).
28. Sabatos, C.A., et al. Interaction of Tim-3 and Tim-3 ligand regulates T helper type 1 responses and induction of peripheral tolerance. Nat Immunol 4, 1102-1110 (2003).
29. Fourcade, J., et al. Upregulation of Tim-3 and PD-1 expression is associated with tumor antigen-specific CD8+ T cell dysfunction in melanoma patients. J Exp Med 207, 2175-2186 (2010).
30. Borghi, A., Verstrepen, L. y Beyaert, R. TRAF2 multitasking in TNF receptor-induced signaling to NF-kappaB, MAP kinases and cell death. Biochem Pharmacol 116, 1-10 (2016).
31. Yoon, S.J., et al. Activation of mitogen activated protein kinase-Erk kinase (MEK) increases T cell immunoglobulin mucin domain-3 (TIM-3) transcription in human T lymphocytes and a human mast cell line. Mol Immunol 48, 1778-1783 (2011).
32. Mujib, S., et al. Antigen-independent induction of Tim-3 expression on human T cells by the common gammachain cytokines IL-2, IL-7, IL-15, and IL-21 is associated with proliferation and is dependent on the phosphoinositide 3-kinase pathway. J Immunol 188, 3745-3756 (2012).
33. Cancer Genome Atlas, N. Genomic Classification of Cutaneous Melanoma. Cell 161, 1681-1696 (2015). 34. Daud, A.I., et al. Tumor immune profiling predicts response to anti-PD-1 therapy in human melanoma. J Clin Invest 126, 3447-3452 (2016).
35. Sakuishi, K., et al. Targeting Tim-3 and PD-1 pathways to reverse T cell exhaustion and restore anti-tumor immunity. J Exp Med 207, 2187-2194 (2010).
36. Ngiow, S.F., et al. Anti-TIM3 antibody promotes T cell IFN-gamma-mediated antitumor immunity and suppresses established tumors. Cancer Res 71, 3540-3551 (2011).
37. Zhu, C., et al. An IL-27/NFIL3 signalling axis drives Tim-3 and IL-10 expression and T-cell dysfunction. Nat Commun 6, 6072 (2015).
38. Galluzzi, L., et al. Essential versus accessory aspects of cell death: recommendations of the NCCD 2015. Cell Death Differ 22, 58-73 (2015).
39. Porgador, A., Feldman, M. y Eisenbach, L. H-2Kb transfection of B16 melanoma cells results in reduced tumourigenicity and metastatic competence. J Immunogenet 16, 291-303 (1989).
40. Pequeux, C., et al. Stromal estrogen receptor-alpha promotes tumor growth by normalizing an increased angiogenesis. Cancer Res 72, 3010-3019 (2012).
41. Sheehan, K.C., et al. Monoclonal antibodies specific for murine p55 and p75 tumor necrosis factor receptors: identification of a novel in vivo role for p75. J Exp Med 181, 607-617 (1995).

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Agente bloqueante de TNFa en combinación con un inhibidor de punto de control inmunitario para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesita, en el que la administración de la combinación da como resultado una eficacia terapéutica potenciada en relación con la administración del inhibidor de punto de control inmunitario solo, y en el que:
- el agente bloqueante de TNFa es un anticuerpo que tiene especificidad por TNFa o por el receptor 1 de TNFa y, - el inhibidor de punto de control inmunitario es un anticuerpo anti-PD-1.
2. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el sujeto padece melanoma, cáncer de pulmón o cáncer de mama.
3. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el sujeto padece un melanoma.
4. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el sujeto padece un melanoma resistente a inhibidores de BRAF.
5. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el agente bloqueante de TNFa es un fragmento de anticuerpo Fab', Fab o F(ab')2 que tiene especificidad por TNFa o por el receptor 1 de TNFa.
6. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el agente bloqueante de TNFa es un anticuerpo completamente humano o humanizado que tiene especificidad por TNFa o por el receptor 1 de TNFa.
7. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el agente bloqueante de TNFa se selecciona del grupo que consiste en infliximab, adalimumab, certolizumab pegol y golimumab.
8. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab o pembrolizumab.
9. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, que comprende además un anticuerpo anti-CTLA-4.
10. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según 9, en el que anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab o tremelimumab.
11. Agente bloqueante de TNFa en combinación con el inhibidor de punto de control inmunitario para su uso según la reivindicación 1, que comprende i) determinar el nivel de expresión de TIM-3 en una muestra de tejido tumoral obtenida del sujeto, iii) comparar el nivel de expresión determinado en la etapa i) con un valor de referencia predeterminado y iv) administrar conjuntamente al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo anti-PD-1 y el agente bloqueante de TNFa.
12. Agente bloqueante de TNFa en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 para su uso en el tratamiento de melanoma en un sujeto que lo necesita, en el que el agente bloqueante de TNFa es un receptor de TNFa soluble.
13. Agente bloqueante de TNFa en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 para su uso según la reivindicación 12, en el que el receptor de TNFa soluble es etanercept.
14. Agente bloqueante de TNFa en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 para su uso según la reivindicación 12, en el que el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab o pembrolizumab.
15. Agente bloqueante de TNFa en combinación con un anticuerpo anti-PD-1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 para su uso según la reivindicación 12, en el que el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab o tremelimumab.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA53355A (fr) 2015-05-29 2022-03-16 Agenus Inc Anticorps anti-ctla-4 et leurs procédés d'utilisation
AU2016317915B2 (en) 2015-09-01 2021-02-18 Agenus Inc. Anti-PD-1 antibodies and methods of use thereof
ES2924775T3 (es) * 2016-01-28 2022-10-10 Inst Nat Sante Rech Med Métodos y composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer
JP7066696B2 (ja) 2016-10-11 2022-05-13 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｌａｇ－３抗体及びその使用方法
DK3551660T5 (da) 2016-12-07 2024-09-02 Agenus Inc Anti-ctla-4-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
CN110300599B (zh) 2016-12-07 2024-07-02 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
US11306144B2 (en) 2017-08-25 2022-04-19 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-H4 antibodies and methods of use thereof
JP7381083B2 (ja) * 2017-09-08 2023-11-15 フォスプラティン テラピューティクス インコーポレイテッド 免疫調節剤としてのホスファプラチン化合物およびその治療的使用
BR112020016986A2 (pt) 2018-02-21 2021-03-02 Five Prime Therapeutics, Inc. formulações de anticorpo contra b7-h4
KR20200144094A (ko) 2018-03-02 2020-12-28 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. B7-h4 항체 및 이의 사용 방법
CN113795515A (zh) * 2019-04-30 2021-12-14 芝诺锡拉公司 用于治疗癌症的多克隆抗体和抗pd1或抗pdl1抗体的联合
JP2022536598A (ja) * 2019-05-07 2022-08-18 イミューニコム， インコーポレイテッド 体外アフェレーシスによるチェックポイント阻害剤に対する応答の上昇
CN113244386A (zh) * 2020-02-13 2021-08-13 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd-1抗体在治疗肿瘤中的用途
US20230416830A1 (en) * 2020-11-16 2023-12-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating uveal melanoma
CN116421720A (zh) * 2023-04-26 2023-07-14 乔国梁 抗肿瘤联用细胞产品和抗肿瘤细胞产品
WO2025128263A1 (en) * 2023-12-15 2025-06-19 Pharmaessentia Corporation Anti-pd-1 monoclonal antibody and methods of preparation thereof

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ATE207080T1 (de) 1991-11-25 2001-11-15 Enzon Inc Multivalente antigen-bindende proteine
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
EP0690452A3 (en) 1994-06-28 1999-01-07 Advanced Micro Devices, Inc. Electrically erasable memory and method of erasure
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6207157B1 (en) 1996-04-23 2001-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6682736B1 (en) 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1212422B1 (en) 1999-08-24 2007-02-21 Medarex, Inc. Human ctla-4 antibodies and their uses
US20060073141A1 (en) 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
CN101899114A (zh) 2002-12-23 2010-12-01 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
DK2439273T3 (da) 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
PT1907424E (pt) 2005-07-01 2015-10-09 Squibb & Sons Llc Anticorpos monoclonais humanos para o ligando 1 de morte programada (pd-l1)
AU2006311475A1 (en) * 2005-11-08 2007-05-18 Medarex, Inc. TNF-alpha blocker treatment for enterocolitis associated with immunostimulatory therapeutic antibody therapy
ES2593484T3 (es) 2007-03-29 2016-12-09 Genmab A/S Anticuerpos biespecíficos y métodos de producción de los mismos
BR122017025062B8 (pt) 2007-06-18 2021-07-27 Merck Sharp & Dohme anticorpo monoclonal ou fragmento de anticorpo para o receptor de morte programada humano pd-1, polinucleotídeo e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
US8552154B2 (en) 2008-09-26 2013-10-08 Emory University Anti-PD-L1 antibodies and uses therefor
EP3255060A1 (en) 2008-12-09 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
JP5844159B2 (ja) 2009-02-09 2016-01-13 ユニヴェルシテ デクス−マルセイユＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅ Ｄ’Ａｉｘ−Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ Ｐｄ−１抗体およびｐｄ−ｌ１抗体ならびにその使用
JP5748653B2 (ja) 2009-04-10 2015-07-15 協和発酵キリン株式会社 抗ｔｉｍ−３抗体を用いた血液腫瘍治療法
WO2011066342A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Amplimmune, Inc. Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
WO2011082400A2 (en) 2010-01-04 2011-07-07 President And Fellows Of Harvard College Modulators of immunoinhibitory receptor pd-1, and methods of use thereof
HRP20241208T1 (hr) 2010-04-20 2024-11-22 Genmab A/S Heterodimerni proteini koji sadrže fc fragment protutijela i postupci za njihovu proizvodnju
AU2011262758B8 (en) 2010-06-11 2014-09-04 Kyowa Kirin Co., Ltd. Anti-tim-3 antibody
WO2011159877A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
EA031470B1 (ru) 2013-03-15 2019-01-31 Бристол-Майерс Сквибб Компани Ингибиторы ido
US10519251B2 (en) * 2013-12-30 2019-12-31 Epimab Biotherapeutics, Inc. Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof
WO2015187359A1 (en) 2014-06-04 2015-12-10 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for targeting a pathway
WO2016023875A1 (en) 2014-08-14 2016-02-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of antibodies activating human cd40 and antibodies against human pd-l1
JP6902040B2 (ja) * 2016-01-28 2021-07-14 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 免疫チェックポイント阻害剤の効力を増強する方法
ES2924775T3 (es) * 2016-01-28 2022-10-10 Inst Nat Sante Rech Med Métodos y composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer
EP3411063B1 (en) * 2016-02-02 2020-11-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for enhancing cd8+ t cell-dependent immune responses in subjects suffering from cancer
US20190353657A1 (en) * 2018-05-15 2019-11-21 New York University Method of improving efficacy of melanoma treatment

Also Published As

Publication number Publication date
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EP3407911A1 (en) 2018-12-05
JP2019503384A (ja) 2019-02-07
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