ES2932550T3 - Composiciones estimulantes de células madre y métodos para tratar el melasma - Google Patents

Abstract

Se presentan composiciones y métodos para el tratamiento tópico de las lesiones hiperpigmentadas del melasma. Tales composiciones incluyen defensinas en concentraciones que están por debajo de las que exhiben actividad antimicrobiana, y pueden estar en forma de gel, loción, lavado, champú, crema o mascarilla de aplicación tópica. Se proporcionan varias formulaciones para tales composiciones, que pueden incluir varios estabilizantes, emolientes y fragancias farmacéuticamente aceptables. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones estimulantes de células madre y métodos para tratar el melasma

Campo de la invención

El campo de la invención son las formulaciones cosméticas tópicas útiles en el tratamiento del melasma.

Antecedentes

El siguiente análisis de antecedentes incluye información que puede ser útil para comprender la presente invención. No es una admisión de que la información proporcionada en este documento sea técnica anterior o relevante para la invención ahora reivindicada, o que cualquier publicación a la que se haga referencia específica o implícitamente sea técnica anterior.

El melasma se caracteriza por el desarrollo de manchas de hiperpigmentación de color marrón o marrón grisáceo bien delimitadas, generalmente en la piel de la frente, las mejillas y el labio superior (aunque estas manchas hiperpigmentados pueden aparecer en otras partes del cuerpo). El desarrollo de estas manchas oscuras es más común en las mujeres y, a menudo, se asocia con el embarazo, el uso de anticonceptivos hormonales y la terapia hormonal sustitutiva. El desarrollo de melasma también parece estar asociado con la exposición al sol, siendo más común en mujeres con piel de color marrón claro que viven en climas soleados.

Aunque el melasma es inofensivo, la aparición de estas manchas oscuras se considera cosméticamente poco atractiva y puede ser una fuente de angustia. Si bien la apariencia del melasma se puede reducir con maquillaje de camuflaje, este enfoque requiere una habilidad y un esfuerzo considerables, y es posible que deba repetirse a lo largo del día. En muchos casos, el melasma se resolverá espontáneamente al suspender los tratamientos hormonales, evitar la exposición al sol y aplicar bloqueador solar. Actualmente, el melasma se trata generalmente con agentes despigmentantes aplicados tópicamente (como la hidroquinona), agentes químicos que alteran la actividad de los melanocitos, exfoliaciones químicas o mecánicas que eliminan la superficie de la piel afectada y tratamiento con láser. Lamentablemente, algunos de estos tratamientos no se pueden utilizar durante el embarazo. Además, la recurrencia es común, particularmente después de la exposición al sol.

Desde su descubrimiento inicial en la década de 1960, ha habido mucha investigación sobre el papel de las defensinas. Las defensinas son pequeñas proteínas ricas en cisteína, generalmente de solo 14 a 85 aminoácidos de longitud. Las defensinas se pueden encontrar en invertebrados, vertebrados y plantas, y se ha demostrado que son activas contra muchas bacterias, hongos y virus. De hecho, gran parte del conjunto de las investigaciones se ha centrado en las propiedades antimicrobianas de las defensinas. Sin embargo, en los últimos años, algunas investigaciones han explorado otras funciones que las defensinas pueden desempeñar en la piel humana, como la cicatrización de heridas o el crecimiento del cabello.

La Solicitud de Patente PCT WO 2014/004339 A2 del Solicitante ELC Management LLC enseña el uso de una composición cosmética que contiene resveratrol para estimular la producción endógena de beta-defensinas celulares en las células de la piel. Para ilustrar este efecto, los inventores probaron la composición en queratinocitos epidérmicos humanos normales ("NHEK") in vitro y midieron la presencia de beta-defensina en NHEK. Las cantidades de defensina estimuladas resultantes fueron muy pequeñas (aproximadamente 0,001 ng/ml). Los inventores teorizaron que la estimulación de las beta-defensinas en los queratinocitos mediante composiciones que contienen resveratrol sería eficaz para tratar el acné, inhibir el crecimiento microbiano en la piel y mejorar la reparación de la barrera cutánea. Debido a las bajas cantidades estimuladas de beta-defensina, y debido a que las composiciones no contienen realmente defensinas, es cuestionable que estas composiciones produzcan resultados cosméticamente significativos. Estos y todos los demás materiales extrínsecos analizados aquí se incorporan como referencia en su totalidad. Cuando una definición o el uso de un término en una referencia incorporada es incoherente o contrario a la definición de ese término proporcionada en este documento, se aplica la definición de ese término proporcionada en este documento y no se aplica la definición de ese término en la referencia.

Por otro lado, se ha demostrado que las defensinas representan un papel importante en la cicatrización de heridas. En el artículo de revista titulado "Stimulation of the folicular bulge LGR5+ and LGR6+ stem cells with the gut-derived human alpha defensin 5 results in decreased bacterial presence, enhanced wound healing, and hair growth from tissues devoid of adnexal structures” (Plast. Reconstr. Surg. 2013;132(5):1159-71), Lough et al. presentan una formulación que contiene alfa-defensina 5 humana que se demostró en condiciones experimentales que incorporaba células madre LGR5+ y LGR6+ a quemaduras de tercer grado en ratones, lo que aceleraba la cicatrización de la herida. Sin embargo, estos hallazgos dejan muchas preguntas. Por ejemplo, en las condiciones experimentales descritas por Lough et al., no está claro si LGR5+ y LGR6+ eran activadas por condiciones proinflamatorias y otros factores ya presentes en la herida o por la aplicación tópica de defensinas. Además, la formulación para la cicatrización de heridas utilizada por Lough et al. contenía concentraciones de defensinas en concentraciones antimicrobianamente activas (por ejemplo, aproximadamente 105 ng/ml). Sin embargo, esta alta concentración de defensina puede hacer que cualquier composición cosmética resultante sea más alergénica y más costosa.

Por lo tanto, aunque se conocen composiciones que contienen defensinas y que estimulan las defensinas, existe la necesidad de una formulación tópica cosmética que sea eficaz para reducir o eliminar la presencia y/o aparición de melasma.

El documento WO 2015/195677 divulga (Resumen): "El tema de la invención se dirige hacia formulaciones cosméticas tópicas listas para usar que incluyen al menos una defensina presente en concentraciones subantimicrobianamente eficaces. Sorprendentemente, incluso en concentraciones tan bajas, las defensinas incorporan células madre LGR6+ procedentes de los folículos pilosos al espacio interfolicular. La inclusión de defensinas en las formulaciones cosméticas tópicas de la invención puede reducir uno o más de la profundidad de las arrugas, la longitud de las arrugas, la anchura de las arrugas, el tamaño de los poros, la irregularidad en la textura de la superficie de la piel, la oleosidad, las manchas marrones y las manchas rojas en piel no lesionada, reduciendo así la edad aparente".

El documento WO 2011/109469 divulga (Resumen): "La presente invención proporciona composiciones que contienen uno o más compuestos secuestradores de péptidos antimicrobianos y métodos para la aplicación tópica de dichas composiciones a la piel para tratar enfermedades y trastornos de la piel tales como la rosácea en seres humanos".

Lough D et al., Plastic and Reconstructive Surgery, 132(5) :1159-1171, NOV 2013, DOI: 10.1097/PRS.Ob013e3182a48af6, PMID: 24165598 divulga (Resumen - Conclusiones): "La aplicación de alfadefensina 5 humana aumenta la migración de células madre LGR a los lechos de las heridas, lo que conduce a una mejor cicatrización, reducción de bacterias y producción de cabello a través del aumento de transcritos clave de Wnt y cicatrización de heridas. Estos hallazgos se pueden utilizar para derivar terapias basadas en proteínas intestinales en la cicatrización de heridas".

Compendio de la invención

La presente invención se expone en las reivindicaciones adjuntas. Cualquier realización, aspecto o ejemplo de la presente descripción/divulgación que no esté dentro del alcance de dichas reivindicaciones se proporciona únicamente con fines ilustrativos y no forma parte de la presente invención.

En un aspecto de la invención, una formulación cosmética tópica incluye una defensina en un vehículo cosméticamente aceptable. Las formulaciones cosméticas tópicas preferidas están listas para usar y contienen la defensina en una concentración subantimicrobianamente eficaz, en donde la concentración es ineficaz para inhibir el crecimiento de un patógeno microbiano de una manera terapéuticamente eficaz pero es eficaz para reducir o eliminar la aparición de melasma. Formulaciones tópicas aún más preferidas pueden comprender además una mezcla de dos o más defensinas diferentes, en donde la concentración combinada de defensinas en la formulación es una concentración subantimicrobianamente eficaz.

Los inventores contemplan además métodos de utilización de defensinas en concentraciones antimicrobianamente eficaces o subantimicrobianamente eficaces en formulaciones tópicas para incorporar células madre LGR6+ a un espacio interfolicular en piel no lesionada. Debe tenerse en cuenta que los métodos para incorporar células madre LGR6+ pueden incluir un paso de proporcionar una formulación tópica que contenga una concentración subantimicrobiana de al menos una defensina y un paso adicional de aplicar la formulación a piel no lesionada para reducir o eliminar la apariencia del melasma y/o una lesión melasmática tratada.

Se prefiere que las composiciones, los métodos y los usos de la invención empleen al menos una de alfa-defensina 1, alfa-defensina 5, alfa-defensina 6, defensina de neutrófilos 1, defensina de neutrófilos 2, defensina de neutrófilos 3, defensina de neutrófilos 4, teta-defensina, beta-defensina 1, beta-defensina 2, beta-defensina 3 y beta-defensina 4. En composiciones tópicas y métodos especialmente preferidos, se emplean alfa-defensina 5 y beta-defensina 3. Debe apreciarse que la defensina puede comprender una defensina sintética, una defensina humana, una defensina recombinante, una defensina de primate, una defensina murina, una defensina caprina, una defensina bovina, una defensina ovina, una defensina equina, una defensina lapina, una defensina porcina, una defensina canina y/o una defensina felina.

Con respecto a la concentración subantimicrobianamente eficaz de la primera defensina en la formulación cosmética tópica lista para usar, las concentraciones contempladas pueden estar entre 0,01 y 100 ng/ml, o entre 1 y 30 ng/ml, incluidos los puntos finales de cada intervalo. Además, realizaciones especialmente preferidas del objeto de la invención emplean concentraciones de defensina de aproximadamente 22 ng/ml y aproximadamente 4,4 ng/ml en formulaciones listas para usar.

Los inventores encontraron inesperadamente que, incluso a estas bajas concentraciones, las defensinas pueden ser eficaces para reducir sustancialmente la apariencia del melasma y/o una lesión melasmática tratada. Sin desear limitarse a ninguna teoría en particular, la eficacia de las defensinas en estas concentraciones subantimicrobianamente eficaces puede deberse a la activación y/o la incorporación de células madre LGR6+. Típicamente, las defensinas utilizadas en realizaciones preferidas del objeto de la invención tienen una pureza superior al 95%, como se muestra por HPLC, y la secuencia y la formación adecuada de enlaces disulfuro de las defensinas pueden confirmarse mediante MS/MS en tándem.

Dependiendo de la naturaleza de la formulación tópica, debe reconocerse que las defensinas pueden encapsularse en liposomas u otras nanopartículas. En las formulaciones preferidas, las defensinas también se pueden asociar con un vehículo, en particular, un vehículo proteínico como la albúmina (p. ej., albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, albúmina de huevo y albúmina recombinante producida por arroz, otras plantas, bacterias o levaduras), también encapsulado en liposomas cuando se desee.

Los inventores contemplan además que las formulaciones cosméticas tópicas también pueden incluir suplementos para proporcionar nutrición y soporte para las células madre LGR6+. Suplementos típicos incluyen albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, albúmina de huevo (es decir, ovoalbúmina), albúmina recombinante producida por arroz, otras plantas, bacterias o levaduras, un hidrolizado vegetal, beta-ciclodextrina, glutamina, fosfolípidos, fibronectina, hialuronato, ácido hialurónico, un hidrolizado vegetal, L-alanil-L-glutamina, gelatina, gelatina recombinante, factor de crecimiento epidérmico (EGF), vitamina E, nicotinato de tocoferilo, ubiquinona, coenzima Q10 y/o un antioxidante. Las formulaciones cosméticas adecuadas también pueden incorporar un agente bloqueador o protector de la luz ultravioleta y/o visible.

Los inventores han apreciado que las formulaciones cosméticas tópicas del objeto de la invención pueden incluirse en estuches con mascarillas exfoliantes. Estuches especialmente preferidos incluyen una mascarilla, una formulación de tratamiento en crema y una formulación de tratamiento en suero.

Otros aspectos del objeto de la invención proporcionan métodos para tratar cicatrices, quemaduras solares, hematomas y otros trastornos de la piel en los que las capas epidérmicas de la piel están prácticamente intactas. Métodos ejemplares incluyen los pasos de proporcionar una formulación tópica que tiene al menos una defensina en una concentración subantimicrobianamente eficaz y aplicar la formulación a piel no lesionada bajo un protocolo eficaz para reducir sustancialmente la apariencia del melasma y/o una lesión melasmática tratada.

Varios objetivos, características, aspectos y ventajas del objeto de la invención se harán más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de las realizaciones preferidas, junto con las figuras de dibujos adjuntas en las que los mismos números representan los mismos componentes.

Breve descripción de los dibujos

Las Figs. 1A y 1B muestran fotografías una al lado de la otra que muestran una reducción de las arrugas. La Fig. 1A muestra la apariencia de la piel antes del tratamiento. La Fig. 1B muestra la apariencia de la piel después del tratamiento.

Las Figs. 2A y 2B muestran fotografías una al lado de la otra que muestran una reducción en la apariencia de manchas marrones. La Fig. 2A muestra la apariencia de la piel antes del tratamiento. La Fig. 2B muestra la apariencia de la piel después del tratamiento.

Descripción detallada

Los inventores descubrieron inesperadamente que las concentraciones antimicrobianas y subantimicrobianas de defensinas pueden lograr numerosos efectos deseables en la piel no lesionada cuando se aplican en formulaciones tópicas listas para usar. Entre otras cosas, dichas formulaciones tópicas proporcionan una reducción o eliminación significativa de la aparición y/o apariencia de las lesiones hiperpigmentadas características del melasma, por ejemplo, el melasma epidérmico.

En una realización preferida, una formulación cosmética tópica lista para usar comprende al menos una defensina presente en una formulación cosmética tópica en una concentración subantimicrobianamente eficaz. Por supuesto, debe apreciarse que las formulaciones tópicas pueden contener una defensina, una combinación de dos defensinas o una combinación de tres o más defensinas. Las defensinas utilizadas pueden ser del mismo tipo o de diferentes tipos y subtipos. Por ejemplo, defensinas adecuadas pueden incluir una o más de alfa-defensina 1, alfa-defensina 5, alfa-defensina 6, defensina de neutrófilos 1, defensina de neutrófilos 2, defensina de neutrófilos 3, defensina de neutrófilos 4, teta-defensina, beta-defensina 1, beta-defensina 2, beta-defensina 3 y beta-defensina 4. Las formulaciones tópicas especialmente preferidas contienen alfa-defensina 5 y beta-defensina 3. Cuando se usan dos defensinas más en combinación, cada defensina puede estar presente en cantidades iguales en masa o en proporciones de masa especificadas para lograr un resultado deseado, como 1:1,5, 1:2, 1:4, 1:5, etc. Notablemente, se debe apreciar que las concentraciones totales de defensinas utilizadas en las formulaciones listas para usar contempladas son ineficaces para inhibir la proliferación sustancial de microbios en infecciones cutáneas establecidas de una manera terapéuticamente eficaz. Alternativamente, en otras realizaciones del concepto de la invención, la concentración de defensina o defensinas que comprende la formulación puede ser suficiente para tener un efecto antimicrobiano.

Según se usa en este documento, el término "lista para usar" indica que la formulación tópica que contiene defensina está en una forma que se presenta para la venta y aplicación. Se contempla que las formulaciones listas para usar pueden comprender una solución, crema, gel, suero, loción, etc. completamente combinados. Alternativamente, la defensina se puede envasar en un recipiente separado (p. ej., en un vial que bombea una solución de defensina con una crema que el usuario mezcla antes de aplicar en la piel intacta) y se combina con otra formulación tópica en el momento del uso/la aplicación.

Según se usa también en este documento, la expresión "concentración subantimicrobianamente eficaz" significa concentración(es) de defensinas que se caracterizan por una incapacidad para inhibir la proliferación de microbios en una infección establecida. Por lo general, las formulaciones tópicas listas para usar no incluyen concentraciones superiores a 1 gg/ml. En realizaciones preferidas, la concentración de defensinas se encuentra entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 ng/ml, e incluso más típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 30 ng/ml, en donde las concentraciones contempladas incluyen los puntos finales de cada intervalo. En realizaciones aún más preferidas, las formulaciones cosméticas tópicas tienen concentraciones de defensina de aproximadamente 22 ng/ml y aproximadamente 4,4 ng/ml. Según se usa en este documento, cuando el término "aproximadamente" se usa junto con un número, "aproximadamente" significa un intervalo de más o menos el diez por ciento del valor numérico dado, incluidos los puntos finales. La mención de intervalos de valores en este documento pretende simplemente servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentra dentro del intervalo. A menos que se indique lo contrario en este documento, cada valor individual se incorpora a la memoria descriptiva como si se mencionara individualmente en este documento.

Las formulaciones tópicas generales pueden incluir todas y cada una de las formulaciones adecuadas para uso tópico cosmético, especialmente en piel no lesionada. Según se usa en este documento, el término piel "no lesionada" se refiere a piel en la que la dermis y la hipodermis están sustancialmente intactas. Por lo tanto, visto desde una perspectiva diferente, la piel no lesionada aparecerá intacta a simple vista, sin brechas lo suficientemente grandes o profundas como para provocar sangrado. Así, piel no lesionada (o “sana”) incluye piel envejecida y piel con quemaduras solares de primer grado, exposición ambiental, magulladuras o estrato córneo parcialmente retirado. La piel no lesionada (o sana) también excluye piel que muestre una infección persistente con patógenos que den como resultado síntomas y signos visibles de infección.

Con respecto a la fuente de defensinas, los inventores contemplan que las defensinas procedentes tanto de fuentes naturales como sintéticas pueden ser adecuadas para incorporarlas en formulaciones tópicas. Por ejemplo, las defensinas pueden obtenerse de plantas (p. ej., Arabidopsis, guisante, tabaco, abeto y/o plantas recombinantes), mamíferos u otros animales, organismos (como levaduras o bacterias) recombinantes y/o productos de síntesis peptídica de laboratorio (por ejemplo, mediante el uso de una resina de Merrifield u otra síntesis en fase sólida). Ejemplos de defensinas derivadas de fuentes naturales pueden incluir defensinas humanas, defensinas símicas, defensinas murinas, defensinas bovinas, defensinas ovinas, defensinas caprinas, defensinas equinas, defensinas lapinas, defensinas porcinas, defensinas caninas y/o defensinas felinas.

Sin embargo, debido a sus cantidades relativamente bajas en un organismo vivo y su bajo peso molecular, generalmente se prefiere que las defensinas sean defensinas sintéticas. Las defensinas sintéticas incluyen defensinas producidas por síntesis química (por ejemplo, síntesis en fase sólida) o por tecnologías recombinantes (por ejemplo, producidas por bacterias, levaduras, cultivos de tejidos, plantas o animales recombinantes). Los inventores contemplan además que se pueden usar análogos de defensina tales como hapivirinas y diprovirinas en algunas realizaciones del objeto de la invención. Aún más, los inventores contemplan además que las defensinas también pueden modificarse para aumentar su actividad y especificidad para mejoras cosméticas en la apariencia de la piel. Por ejemplo, las defensinas pueden desplegarse y replegarse en condiciones controladas para determinar la formación adecuada de enlaces disulfuro (que puede controlarse mediante análisis por MS y/o espectroscopia de CD). Alternativamente, se contemplan modificaciones químicas (por ejemplo, usando aminoácidos no naturales y/o PEGilación para aumentar el tiempo de semivida, o aminoácidos proteinogénicos derivados para aumentar la lipofilia) para adaptar las defensinas a una necesidad particular.

Independientemente de la fuente de las defensinas, debe apreciarse que la actividad específica de las defensinas depende de diversos factores, incluida la forma isómera y la estructura terciaria de la proteína final. Así, y especialmente cuando la defensina es sintética, se pueden usar grupos protectores ortogonales para proteger residuos de cisteína seleccionados, que luego se pueden desproteger individualmente y unir con el residuo de cisteína buscado coincidente, lo que conduce a la formación coordinada de enlaces disulfuro no aleatorios. El uso de dichos grupos protectores en la estrategia sintética puede dar lugar a defensinas con una actividad específica comparable a la actividad específica de la defensina natural. Puede emplearse cualquier medida adecuada de caracterización y control de calidad. Normalmente, la actividad específica de las defensinas incorporadas en las formulaciones tópicas de la invención se mide por la pureza determinada por HPLC. En realizaciones ejemplares, la defensina tiene una pureza de entre aproximadamente el 80% y aproximadamente el 100%, más típicamente la defensina tiene una pureza de al menos aproximadamente el 90%, o una pureza de al menos aproximadamente el 95%, o una pureza de al menos aproximadamente el 99%, o una pureza de al menos aproximadamente el 99,9%. Además, la secuencia de aminoácidos y la formación de enlaces disulfuro adecuadas pueden confirmarse mediante MS/MS en tándem, por ejemplo.

Con respecto a la concentración adecuada de defensinas en las formulaciones cosméticas presentadas en este documento, se contempla que todas las concentraciones se consideren apropiadas siempre que dichas concentraciones sean cosméticamente eficaces para reducir la apariencia y/o aparición de regiones hiperpigmentadas características del melasma en piel sana. En consecuencia, la concentración total de defensinas (de un solo tipo o combinación de distintas defensinas) en la formulación cosmética final aplicada a la piel puede estar entre aproximadamente 0,01 ng/ml y aproximadamente 100 ng/ml, o entre aproximadamente 0,1 ng/ml y aproximadamente 100 ng/ml, o entre aproximadamente 1 ng/ml y aproximadamente 100 ng/ml, o entre aproximadamente 2 ng/ml y aproximadamente 80 ng/ml, o entre aproximadamente 4 ng/ml y aproximadamente 60 ng/ml, o entre aproximadamente 1 ng/ml y aproximadamente 30 ng/ml. Así, las composiciones preferidas incluyen defensinas en una concentración de al menos aproximadamente 0,01 ng/ml, al menos aproximadamente 0,1 ng/ml, al menos aproximadamente 1 ng/ml, o al menos aproximadamente 4 ng/ml, pero no más de aproximadamente 200 ng/ml, no más de aproximadamente 100 ng/ml, no más de aproximadamente 75 ng/ml, o no más de aproximadamente 50 ng/ml.

En algunas realizaciones, la defensina se puede asociar con una proteína cosméticamente aceptable para aumentar la estabilidad y/o las características de administración. En este contexto, debe apreciarse que tal asociación es preferiblemente no covalente (p. ej., electrostática, iónica, hidrófoba, etc.), sin embargo, no se excluye la unión covalente a un grupo lateral de la proteína. Ejemplos de proteínas cosméticamente aceptables incluyen lactoferrina, transferrina y albúmina (por ejemplo, albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, ovoalbúmina y/o albúmina recombinante). Las defensinas y los vehículos proteínicos pueden estar en varias proporciones, incluidas proporciones equimolares, submolares y supramolares. Además, se pueden usar combinaciones de dos o más vehículos proteínicos. Por ejemplo, en una formulación en la que se usan dos defensinas, una defensina puede estar asociada con un vehículo y la otra defensina puede estar asociada con un vehículo diferente. Por lo tanto, se contempla cualquier combinación de defensinas y vehículos.

En otros aspectos contemplados adicionales, las defensinas (y las proteínas portadoras) pueden encapsularse en formulaciones cosméticamente aceptables, y especialmente en formulaciones que usan una membrana lipídica. Por ejemplo, se contemplan especialmente liposomas, microcápsulas, nanocápsulas, micropartículas, nanopartículas, sistemas de administración de micropartículas. Puede encontrar una descripción de algunos sistemas cosméticamente aceptables de administración de cosméticos en Maherani et al., "Liposomes: A Review of Manufacturing Techniques and Targeting Strategy", Current Nanoscience; 7:436-452 (2011). Un método preferido de fabricación de liposomas es un método de cizalladura. Los sistemas de administración de cosméticos preferidos se parecen a las membranas naturales, son flexibles y pueden penetrar en los espacios intersticiales entre las células. Se contempla además que los sistemas de administración de cosméticos pueden tener estructuras de monocapa, bicapa (p. ej. vesícula unilamelar o ULV) o multicapa (por ejemplo, vesícula multilamelar o MLV). Además, los liposomas de multicapa, las microcápsulas, los microsomas y las nanocápsulas pueden tener estructuras encajadas (por ejemplo, vesícula multivesicular o MVV). Los sistemas de administración de cosméticos utilizados en las formulaciones tópicas pueden variar en tamaño de aproximadamente de 500 nm a aproximadamente 10 pm. En la preparación de sistemas de administración de cosméticos, se contemplan todas las composiciones lipídicas cosméticamente aceptables, especialmente los lípidos farmacéuticamente aceptables. En la mayoría de los casos, los sistemas de administración de cosméticos preferidos comprenden moléculas anfipáticas o anfifílicas tales como fosfolípidos o combinaciones de fosfolípidos (por ejemplo, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, ácido fosfatídico, fosfatidilserina y fosfoinosítidos). Además, en algunos casos, los sistemas de administración de cosméticos contemplados pueden contener aditivo(s) tales como esteroles, polietilenglicol, colesterol, fosfato de dimetilo, estearilamina, etc. Con respecto a la cantidad de sistemas de administración incorporados en cada formulación lista para usar, el contenido del sistema de administración de cosméticos normalmente se ajustará para lograr una concentración subantimicrobiana de defensinas dentro de un intervalo preferido. Se pueden producir vesículas/liposomas unilamelares usando técnicas de alta cizalladura. Estas vesículas tienen un potencial zeta mayor que el liposoma típico, lo que permite un tamaño de partícula más pequeño y uniforme con mayor estabilidad. El potencial zeta es un indicador de la carga electrónica en la superficie de cualquier material macroscópico que esté en contacto con un líquido. Esto se puede utilizar para predecir y controlar la estabilidad de las suspensiones; cuanto mayor sea el potencial zeta, mayor será la estabilidad de la molécula porque las partículas cargadas pueden repeler y superar su afinidad innata para ensamblarse.

Cabe señalar que las defensinas, los vehículos proteínicos, los liposomas u otras estructuras membranosas tienen un peso molecular que excede la administración transmembranaria e incluso la administración a través del estrato córneo. No obstante, como se analiza con más detalle, las defensinas tienen un profundo efecto sobre la actividad de las células madre en las capas dérmica e hipodérmica. Sin desear estar vinculados por ninguna teoría o hipótesis, los inventores contemplan que las formulaciones liposómicas tienen la capacidad de transportar las defensinas a través de una ruta intersticial y/o invadir el folículo piloso a una profundidad y concentración suficientes para activar las células LGR6+. Visto desde otra perspectiva, se cree que el uso de sistemas de administración de cosméticos ayuda en la administración de defensinas, ya que no se esperaría que las defensinas de por sí penetraran en el estrato córneo de la piel (que actúa como una barrera para moléculas con pesos moleculares superiores a 500 Da). Además, cuando se asocia con albúmina (65-70 kDa) y/o liposomas, se hace, al menos conceptualmente, incluso más difícil que la composición de defensina penetre en la piel intacta. Así, los inventores plantean la hipótesis de que el mecanismo para administrar defensinas sea diferente en la piel sana en comparación con la piel rasgada o lesionada.

En algunas realizaciones del concepto de la invención, una formulación que incluye una o más defensinas puede administrarse mediante un mecanismo activo. Mecanismos activos adecuados pueden incluir la aplicación de energía láser, ondas de presión acústica, ultrasonidos, microagujas y/o inyecciones en la zona de la piel que se somete a tratamiento, para facilitar el transporte de las defensinas a la región deseada de la piel y/o la zona o zonas de piel asociadas (es decir, epidermis, dermis, capa basal y/o folículo piloso).

En otro aspecto, los inventores proporcionan ventajosamente ingredientes adicionales que alimentan y mantienen las células madre incorporadas en una piel sana. Por ejemplo, albúmina (p. ej., albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino), albúmina de huevo (ovoalbúmina), albúmina recombinante, un hidrolizado vegetal y p-ciclodextrina, glutamina, fosfolípidos (liposomas), fibronectina, hialuronato, un hidrolizado vegetal, L-alanil-L-glutamina, gelatina, vitamina E (nicotinato de tocoferilo), ubiquinona (coenzima Q10), gelatina, gelatina recombinante, ácido hialurónico, factor de crecimiento epidérmico pueden proporcionar nutrición y mantenimiento a las células madre.

En otros aspectos contemplados adicionales, el tratamiento cosmético del melasma en piel sana puede ser asistido adicionalmente por procedimientos complementarios. Procedimientos especialmente contemplados incluyen la exfoliación química y/o mecánica. Por ejemplo, la exfoliación química se puede realizar utilizando una o más proteasas (por ejemplo, papaína, Lactobacillus/extracto de fermento de calabaza, Lactobacillus/extracto de fermento de fruto de Punica Granatum), alfa-hidroxiácidos, etc., mientras que la exfoliación mecánica se puede realizar utilizando cristales de azúcar, materia vegetal celulósica, pelado con cinta, CO² congelado, perlas poliméricas y/o gránulos de sílice.

Aunque sin desear limitarse a una teoría, los inventores contemplan que el objeto de la invención (es decir, los métodos y el uso de concentraciones de defensinas antimicrobianamente eficaces o subantimicrobianamente activas en formulaciones cosméticas tópicas) puede actuar para incorporar células madre LGR6+ en el espacio interfolicular en piel no lesionada. Por lo general, se indicará al usuario que aplique la formulación tópica en regiones de piel no lesionada que incluyan o puedan incluir zonas hiperpigmentadas características del melasma bajo un protocolo eficaz para reducir o eliminar la apariencia de zonas hiperpigmentadas de la piel, y/ o eficaz para reducir o eliminar la aparición de tales zonas hiperpigmentadas. Por ejemplo, las defensinas se pueden aplicar al menos una vez al día (o dos veces al día) durante un período de al menos una semana, o dos semanas, tres semanas, seis semanas o incluso más. De manera beneficiosa, la cantidad total de formulaciones aplicadas es tal que la formulación se absorba en la piel. Por ejemplo, las formulaciones tópicas se aplican normalmente en de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 mg por cm2, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 mg por cm2, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 300 mg por cm2, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg por cm2, o de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 mg por cm2.

Usando composiciones tópicas como las que se presentan en los ejemplos a continuación, los inventores descubrieron que las formulaciones cosméticas que incluían las defensinas tienen efecto en la reducción de la apariencia y/o la prevención de la aparición o reaparición de lesiones hiperpigmentadas asociadas con el melasma.

En algunas realizaciones del concepto de la invención, la aplicación tópica de dichas formulaciones de defensina en un programa adecuado es suficiente para reducir la zona de una lesión melasmática tratada hasta menos del 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% o menos del 5% de la lesión melasmática antes del tratamiento con la formulación tópica de defensina. En otras realizaciones del concepto de la invención, la aplicación tópica de dicha formulación de defensina en un programa adecuado puede reducir la pigmentación excesiva asociada con una lesión melasmática tratada hasta menos del 300%, 200%, 100%, 50%, 25% o 10% de pigmentación más allá de la asociada con la piel normal no afectada adyacente a la lesión melasmática tratada.

En protocolos de tratamiento adecuados, la formulación de defensina se puede aplicar cuatro veces al día (p. ej., cada 6 horas), tres veces al día (p. ej., cada 8 horas), dos veces al día (p. ej., cada 12 horas), una vez al día (p. ej., por la mañana, o antes de la exposición ultravioleta), cada dos días, cada tres días, una vez a la semana o con una frecuencia determinada por el uso práctico. En algunas realizaciones, la formulación tópica de defensina se puede aplicar con mayor frecuencia al comienzo del tratamiento. En otras realizaciones, la formulación tópica de defensina se puede aplicar con mayor frecuencia a medida que avanza el tratamiento. En otras realizaciones más, el tratamiento puede continuar en un primer programa de tratamiento hasta que la apariencia de la lesión de melasma se resuelva por completo, sea aceptable y/o se estabilice y mejore, y luego cambiar a un segundo programa de tratamiento que mantenga la apariencia tratada.

El tratamiento con las formulaciones tópicas de defensina enseñadas se puede llevar a cabo durante cualquier período de tiempo adecuado para eliminar o reducir la apariencia de una lesión melasmática. Períodos de tratamiento adecuados pueden ser de al menos una semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 6 semanas, 8 semanas, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses o más. En algunas realizaciones, una formulación tópica de defensina se puede aplicar a largo plazo (es decir, más de un año) o durante un período de tiempo indefinido en un programa de mantenimiento adecuado para proporcionar y mantener la reducción o eliminación deseada en la apariencia de una lesión melasmática tratada.

Ejemplos

Formulaciones adecuadas se describen en la Solicitud de Patente Internacional N° PCT/US15/36049. Si bien se pueden preparar formulaciones cosméticas adecuadas usando cualquier número de ingredientes y formulaciones conocidos en la técnica, las formulaciones tópicas preferidas incluyen aquellas que están listas para usar y pueden ser aplicadas por un usuario. Por tanto, con respecto a los vehículos cosméticamente aceptables, se contemplan todos los vehículos cosméticamente aceptables e incluyen cremas, emulsiones de aceite en agua, emulsiones de agua en aceite, espumas, mousses, ungüentos, lociones, suspensiones, sueros y geles. En algunas realizaciones, la formulación cosmética puede incluir un filtro solar, como un ingrediente bloqueador de la luz ultravioleta y/o visible (por ejemplo, óxido de zinc), que reduce ventajosamente el impacto de un factor causante sospechado en el desarrollo del melasma.

Ejemplos de formulaciones cosméticas tópicas en crema adecuadas pueden incluir uno o más de los siguientes ingredientes: agua, oleosomas de Carthamus tinctorius (cártamo), manteca de Butyrospermum parkii (karité), aceite de semillas de Macadamia integrifolia, niacinamida, extracto de levadura, copolímero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP, aceite de semillas de Helianthus annuus (girasol), fosfolípidos, alfa-defensina 5, beta-defensina 3, ácido hialurónico, extracto de raíz de Ophiopogon japonicus, extracto de Candida saitoana hidrolizado, extracto de látigo de mar, extracto de fruto de Lycium chinense, extracto de fruto de Vaccinium angustifolium, extraubiquinona de fruto de Vaccinium macrocarpon (arándano), L-alanil-L-glutamina, filtrado de fermento de Leuconostoc/raíz de rábano, gelatina, oligopéptido-1 SH, goma xantana, ácido fítico, polisorbato 20, triglicérido caprílico/cáprico, fenoxietanol, caprililglicol, etilhexilglicerina, hexilenglicol, sorbato de potasio, cloruro de sodio y fragancia natural y/o artificial.

Ejemplos de una formulación cosmética tópica en suero adecuada pueden incluir uno o más de los siguientes: agua, ciclopentasiloxano, glicerina, niacinamida, filtrado de fermento de Sinorhizobium meliloti, dimeticona, polisorbato 20, polímero cruzado de dimeticona/vinildimeticona, lauril-PEG-9-polidimetilsiloxietildimeticona, copolímero de acriloildimetiltaurato de amonio/VP, fosfolípidos, alfa-defensina 5, beta-defensina 3, palmitoiltripéptido-38, hialuronato de sodio, extracto de Arabidopsis thaliana, extracto de látigo de mar, ergotioneína, aceite de semillas de Helianthus annuus (girasol), extracto de hojas de Rosmarinus offinalis (romero), oligopéptido-1 SH, acetato de tocoferilo, ubiquinona, filtrado de fermento de Leuconostoc/raíz de rábano, albúmina, gelatina, L-alanil-L-glutamina, triglicérido caprílico/cáprico, cetilhidroxietilcelulosa, lecitina, hidroxipropilciclodextrina, ácido fítico, fenoxietanol, caprililglicol, etilhexilglicerina, hexilenglicol y/o cloruro de sodio.

Ejemplos de una formulación en forma de mascarilla adecuada pueden incluir uno o más de los siguientes: butilenglicol, PEG-8, almidón de tapioca, sacarosa, dióxido de titanio, copolímero de acrilato de hidroxietilo/acriloildimetiltaurato de sodio, escualano, polisorbato 60, fruto de Carica papaya (papaya), papaína, jugo de hojas de Aloe barbadensis, extracto de fermento de Lactobacillus/calabaza, extracto de fermento de Lactobacillus/fruto de Punica granatum, extracto de látigo de mar, aceite de flores de Cananga odorata, aceite de cáscara de Citrus aurantium dulcis (naranja), triglicérido caprílico/cáprico, ácido láctico, fenoxietanol, caprililglicol, etilhexilglicerina y/o hexilenglicol.

Formulaciones liposómicas

La Tabla 1 a continuación muestra un ejemplo de formulación liposómica de administración cosmética que incluye dos tipos de defensinas. Estos liposomas se incorporan típicamente en una formulación cosmética en una fracción de aproximadamente 1,0% en peso a 10,0% en peso para la mayoría de las aplicaciones para el cuidado de la piel. En algunas realizaciones, la concentración de defensina puede ser de hasta 10 mg/ml o superior.

Tabla 1. Ejemplo de formulación de liposomas

En otro aspecto más del objeto de la invención, las formulaciones cosméticas tópicas se pueden ofrecer juntas como un estuche. Estuches preferidos incluyen una formulación en forma de máscara y una formulación de tratamiento en suero o crema que contiene defensina. Estuches incluso más preferidos incluyen una formulación en forma de máscara y las formulaciones de tratamiento tanto en crema como en suero que contienen defensina.

En la fabricación de formulaciones cosméticas de defensina, se contempla que las preparaciones concentradas de defensina puedan añadirse a formulaciones de base cosmética de modo que la concentración de la defensina en el producto listo para usar esté en una concentración subantimicrobianamente eficaz buscada. Dependiendo de la formulación deseada, las defensinas se pueden incorporar en preparaciones concentradas como soluciones, asociadas con proteínas portadoras y, más típicamente, como formulaciones liposómicas. Estos preparados concentrados de defensina pueden añadirse a las formulaciones de base cosmética en las proporciones que se indican a continuación:

Ejemplo de formulación de loción corporal (aceite en agua):

Mezcla a) PEG-7-aceite de ricino hidrogenado 2,00% PEG-20-laurato de glicerilo 1,00% cocoglicéridos 3,00% alcohol cetearílico 1,00% isononanoato de cetearilo 4,00% estearato de octilo 4,00% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0,30% Mezcla b) agua, destilada 73,40% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno, 0,30% glicerina 3,00% Mezcla c) preparación concentrada de defensina 5,00% Mezcla d) copolímero de acrilamidas, aceite mineral isoparafina C13-C14, polisorbato 85 3,00%

Para preparar la formulación de loción corporal, la mezcla a) se funde a aproximadamente 70°C. La mezcla b) se calienta hasta aproximadamente 70°C y luego se añade a la mezcla a) mientras se agita. Se continúa agitando hasta que la loción se haya enfriado hasta aproximadamente 30°C. Se añaden las mezclas c) y d) a la mezcla enfriada mientras se agita, y la loción se homogeneiza. En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Ejemplo de formulación de loción en gel:

Mezcla a) copolímero de acrilamidas, aceite mineral, isoparafina C13-14, polisorbato 85 5,00% miristato miret-3 4,00% Mezcla b) agua, destilada 85,00% fenoxietanol (y) metilparabeno (y) etilparabeno (y) butilparabeno (y) propilparabeno (e) 0,50% isobutilparabeno

goma xantana 0,50% Mezcla c) preparación concentrada de defensina 5,00%

Para preparar la formulación de loción en gel, la mezcla a) se disuelve a aproximadamente 50°C. La mezcla b) se dispersa a temperatura ambiente y se añade a la mezcla a) mientras se agita. Luego, se añade la mezcla c) mientras se agita.

Ejemplo de formulación de aceite en agua en crema:

Mezcla a) alcohol cetearílico (y) cetearet-20 8,00% cocoglicéridos 2,00% alcohol cetearílico 2,00% éter de dicaprililo 8,00% erucato de oleílo 7,00% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0,30% Mezcla b) agua, destilada 62,40% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0,30% glicerina 5,00% Mezcla c) preparación concentrada de defensina 5,00%

Para preparar la formulación, la mezcla a) se funde a aproximadamente 70°C. La mezcla b) se calienta hasta aproximadamente 70°C y se añade a la mezcla a) mientras se agita. Se continúa agitando hasta que la crema se haya enfriado hasta aproximadamente 30°C. A continuación, se añade la composición c) mientras se agita y la crema se homogeneiza. En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Ejemplo de formulación de agua en aceite en crema:

Mezcla a) dilinoleato de dímero de diisostearoil-poliglicerilo-3 3,00% cera de abejas 0,60% aceite de ricino, hidratado 0,40% parafina viscosa 5,00% isohexadecano 10,00% Éter estearílico de PPG-15 2,00% dimeticona 0,50% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutiparabeno 0,30% Mezcla b) agua, destilada 68,40% fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutilparabeno 0,30% glicerina 3,00% MgSO4 *7H2O 1,00% Mezcla c) preparación concentrada de defensina 5,00% Mezcla d) dimetilsililato de sílice 0,50%

Para preparar la formulación de aceite en agua en crema, la mezcla a) se calienta hasta aproximadamente 80°C. La mezcla b) se lleva hasta 80°C y luego se añade a la mezcla a) mientras se agita. Se prosigue la agitación hasta que la crema se haya enfriado hasta aproximadamente 30°C, luego se añaden las mezclas c) y d) y la crema se homogeneiza. En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Ejemplo de formulación de champú:

Polioxietilen-lauril-etersulfato de sodio 15,0% Alquilpoliglucósido 4,0%

Amida del ácido N-etanol-N-metildodecanoico 3,0%

EDTA-Na² 0,3%

Ácido málico para ajustar el pH hasta 6,0 c. s.

Conservante 0,5% Preparación concentrada de defensina 10,0%

Agua purificada resto

Total 100,0%

Para preparar la formulación de champú, se mezclan entre sí todos los ingredientes y se lleva el volumen hasta aproximadamente 90 ml. Luego se ajusta el pH y finalmente se ajusta el volumen hasta 100 ml (todos los porcentajes son % en peso). En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Ejemplo de formulación de gel de baño:

Polioxietilen-lauril-etersulfato de sodio 16,0% Polioxietileno de sodio 5,0%

N-etanol-N-metilamida de ácido graso de aceite de nuez de palma 2,5% Glicerina 3,0% Celulosa cationizada 0,1% Diestearato de etilenglicol 3,0% EDTA-Na2 0,3% Ácido cítrico para ajustar el pH hasta 5,7 c. s.

Conservante 0,5% Preparación concentrada de defensina 7,5% Agua purificada resto Total 100,0

Para preparar la formulación de gel de baño, todos los ingredientes se mezclan entre sí y el volumen se lleva hasta aproximadamente 90 ml. Luego se ajusta el pH y finalmente se ajusta el volumen hasta 100 ml (todos los porcentajes son % en peso). En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Ejemplo de formulación de lavado facial:

Polioxietilen-lauril-etersulfato de sodio 20,0% Amida del ácido N-etanol-N-metildodecanoico 4,8% Glicerina 3,0% Hidroxietilcelulosa 0,3% Diestearato de etilenglicol 1,5%

EDTA-Na2 0,3%

Ácido cítrico para ajustar el pH hasta 6,0 c. s.

Conservante 0,5% Preparación concentrada de defensina 10,0%

Agua purificada resto

Total 100,0

Para preparar la formulación de lavado facial, todos los ingredientes se mezclan entre sí y el volumen se lleva hasta aproximadamente 90 ml. Luego se ajusta el pH y finalmente se ajusta el volumen hasta 100 ml (todos los porcentajes son % en peso). En algunas realizaciones, la concentración final de defensina puede oscilar entre 1 ng/ml y 10 mg/ml o más.

Los inventores probaron una formulación preferida del objeto de la invención en dos estudios clínicos, el Estudio Clínico 1 y el Estudio Clínico 2 (estudio doblemente enmascarado). Ambos estudios se realizaron bajo la supervisión del Dr. Gregory Keller, M.D., F.A.C.S en the Plastic Surgery Clinic en Santa Barbara, California. El diseño de ambos estudios fue sustancialmente similar. Ambos estudios clínicos examinaron a 10 sujetos a lo largo de 6 semanas. Cada sujeto recibió una crema, un suero y una mascarilla. La mitad de los sujetos (Estudio 2) recibieron formulaciones de la crema, el suero y las mascarillas que contenían defensinas. La otra mitad de los sujetos recibió formulaciones de placebo de la crema, el suero y la mascarilla que tenían una composición idéntica a la del grupo de prueba, excepto que las formulaciones no contenían defensinas.

Los inventores midieron las puntuaciones individuales de salud cutánea de cada participante antes y después del tratamiento utilizando el sistema clínico de obtención de imágenes QuantifiCare™ 3D LifeViz™ y el protocolo desarrollado por QuantifiCare Inc. (www.quantificare.com). Los rostros de cada participante fueron escaneados usando el sistema 3D LifeViz™ y se dio valor para cada una de las siguientes categorías: profundidad, longitud y anchura de las arrugas; profundidad de los poros; uniformidad de la piel; oleosidad de la piel; manchas cutáneas marrones; y manchas cutáneas rojas. Los valores resultantes para cada participante se compararon luego con una población del mismo sexo, edad y tipo de piel, utilizando la base de datos de población de referencia de QuantifiCare. La puntuación resultante de la salud cutánea para cada participante fue una clasificación por percentiles de la salud cutánea en comparación con una población de personas de la misma edad, sexo y tipo de piel.

Por ejemplo, la Tabla 2 (a continuación) muestra la edad promedio de cada grupo de estudio en comparación con una población con la edad, el sexo y el tipo de piel correspondientes. La edad se calculó utilizando el parámetro de arrugas, que es una combinación de la profundidad, la longitud y la anchura de las arrugas de la frente y las mejillas.

Tabla 2. Clasificación por edad promedio para el Estudio clínico 2 antes y después del tratamiento

Clasificación por edad promedio

Grupo Antes del tratamiento Después de 6 semanas Placebo 77% 74%

Grupo de prueba 61% 81 %

Las Figuras 1A y 1B muestran las imágenes de antes (Figura 1 A) y después (Figura 1B) adquiridas por un sistema 3D LifeViz™ para el participante 3-PC (mujer de 63 años) del Estudio clínico 1. El participante 3-PC recibió la formulación de prueba. Las mediciones mediante el sistema 3D LifeViz™ mostraron que el participante 3-PC vio una reducción en la estimación de la edad cutánea visible (basándose en el valor de uniformidad cutánea calculado por el sistema 3D LifeViz™) de 64 años a 37 años. Las fotos no han sido retocadas.

Las Figuras 2A y 2B muestran imágenes de antes (Figura 2A) y después (Figura 2B) adquiridas por un sistema 3D LifeViz™ con el filtro de manchas marrones para el participante 8-IK (mujer) del Estudio clínico 1. El participante 3-PC recibió la formulación de prueba. Las imágenes muestran una reducción de las manchas marrones en la cara como resultado del tratamiento. Las fotos no han sido retocadas.

Los términos "comprende" y "que comprende" deben interpretarse como una referencia a elementos, componentes o pasos de manera no exclusiva, lo que indica que los elementos, componentes o pasos a los que se hace referencia pueden estar presentes, utilizarse o combinarse con otros elementos, componentes o pasos que a los que no se hace referencia expresamente. Cuando las reivindicaciones de la memoria descriptiva se refieran a al menos uno de algo seleccionado del grupo que consta de A, B, C... y N, el texto debe interpretarse como que requiere solo un elemento del grupo, no A más N o B más N, etc. Además, según se utiliza en la descripción de este documento y en las reivindicaciones que siguen, el significado de "un", "uno/una" y "el/la" incluye una referencia en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Además, según se utiliza en la descripción de este documento, el significado de "en" incluye "en" y "sobre" a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Un método cosmético para reducir una lesión asociada con melasma en piel no lesionada que comprende:

proporcionar una formulación tópica que comprende una primera defensina a una concentración eficaz para incorporar células madre LGR6+ en un espacio interfolicular en piel no lesionada; y

aplicar la formulación tópica a la piel no lesionada bajo un protocolo eficaz para reducir una lesión asociada con melasma,

en donde la primera defensina comprende al menos una del grupo que consiste en alfa-defensina 1, alfa-defensina 5, alfa-defensina 6, defensina de neutrófilos 1, defensina de neutrófilos 2, defensina de neutrófilos 3, defensina de neutrófilos 4, teta-defensina, beta-defensina 1, beta-defensina 2, beta-defensina 3 y beta-defensina 4.

2. El método según la reivindicación 1, en donde la primera defensina comprende al menos una de una defensina sintética, una defensina humana, una defensina recombinante, una defensina símica, una defensina murina, una defensina caprina, una defensina bovina, una defensina ovina, una defensina equina, una defensina lapina, una defensina porcina, una defensina canina y una defensina felina.

3. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde la concentración de la primera defensina en la formulación tópica está entre 0,01 y 100 ng/ml, inclusive.

4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde la concentración de la primera defensina en la formulación tópica está entre 1 y 30 ng/ml, inclusive.

5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde la concentración de la primera defensina en la formulación tópica está entre 100 ng/ml y 10 mg/ml, inclusive.

6. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, en donde la primera defensina tiene una pureza superior al 80%.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la primera defensina está encapsulada en un liposoma.

8. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde la primera defensina está asociada con un vehículo proteínico.

9. El método según la reivindicación 8, en donde el vehículo proteínico comprende al menos uno del grupo que consiste en albúmina de suero humano, albúmina recombinante, albúmina de suero bovino y ovoalbúmina.

10. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -9, en donde la formulación tópica comprende además una segunda defensina, en donde la segunda defensina es diferente de la primera defensina, y en donde la segunda defensina está presente en la formulación a una concentración antimicrobianamente eficaz o subantimicrobianamente eficaz.

11. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, en donde la formulación tópica comprende además un suplemento para células madre LGR6+, en donde el suplemento comprende al menos uno del grupo que consiste en albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, ovoalbúmina, un hidrolizado vegetal, beta-ciclodextrina, glutamina, fosfolípidos, fibronectina, hialuronato, un hidrolizado vegetal, L-alanil-L-glutamina, gelatina, vitamina E, albúmina recombinante, ácido hialurónico, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento de fibroblastos, gelatina recombinante, nicotinato de tocoferilo, coenzima Q10 y ubiquinona.

12. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el melasma es melasma epidérmico.

13. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -12, en donde el protocolo comprende la administración de la primera defensina a la piel y/o tejidos asociados a la piel usando un dispositivo seleccionado del grupo que consiste en un láser, un dispositivo de ondas de presión acústica, un dispositivo ultrasónico, una microaguja y una aguja hipodérmica.