RS63786B1 - Kompozicije za stimulisanje matičnih ćelija i postupci za lečenje melazme - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Oblast pronalaska lokalne kozmetičke formulacije za lokalnu uporebu koje su korisne u lečenju melazme.

Stanje tehnike

[0002] Sledeća diskusija stanja tehnike uključuje informaciju koja može biti korisna za razumevanje predmetnog pronalaska. Nije pristup da je bilo koja od informacija koje su ovde obezbeđene stanje tehnike ili relevantna za pronalazak za koji se trenutno traži zaštita, ili da bilo koja publikacija koja se posebno ili implicitno navodi referencom predstavlja prethodno stanje tehnike.

[0003] Melazmu karakteriše razvoj dobro razgraničenih smeđih ili sivo-braon fleka hiperpigmentacije, tipično na koži čela, obraza i gornje usne (iako se takve hiperpigmentisane fleke mogu pojaviti i na drugim mestima na telu). Razvoj ovih tamnih fleka je češći kod žena i često je povezan sa trudnoćom, upotrebom hormonskih kontraceptiva i terapijom hormonskom zamenom. Čini se da je razvoj melazme takođe povezan sa izlaganjem suncu, što je najčešće kod žena sa svetlo braon bojom kože koje žive u sunčanim klimatskim uslovima.

[0004] Pored toga što je melazma bezopasna, pojavljivanje ovih tamnih fleka se smatra kozmetički neprivlačnim i može biti izvor nelagodnosti. Iako se pojava melazme može smanjiti upotrebom maskirne šminke, takav pristup zahteva značajnu veštinu i trud, i može biti potrebno da se ponovi u toku dana. U mnogim slučajevima melazma će se povući spontano nakon prekida hormonskih tretmana, izbegavanja izlaganja suncu, i primene kreme za sunčanje. Trenutno, melazma se generalno leči upotrebom lokalno nanetih sredstava za depigmentaciju (kao što je hidrohinon), hemijskih sredstava koja menjaju aktivnost melanocita, hemijskih ili mehaničkih "pilinga" koji uklanjaju pogođenu površinu kože, i laserskim tretmanom. Nažalost neki od ovih tretmana ne mogu se upotrebiti tokom trudnoće. Pored toga, česta je ponovna pojava, posebno nakon izlaganja suncu.

[0005] Od njihovog prvobitnog otkrića u 1960-tim, bilo je mnogo istraživanja koja se odnose na uloge defenzina. Defenzini su mali proteini bogati cisteinom, obično samo 14-85 aminokiselina dužine. Defenzini se mogu naći kod beskičmenjaka, kičmenjaka, i biljaka, i pokazano je da su aktivni protiv mnogih bakterija, gljiva, i virusa. Ustvari, veliki deo istraživanja se fokusirao na antimikrobna svojstva defenzina. Međutim, poslednjih godina, neka istraživanja su ispitivala druge uloge koje defenzini mogu imati u humanoj koži, kao što je zarastanje rana ili rast dlaka.

[0006] PCT Patentna prijava WO 2014/004339 A2 podneta od strane prijavioca ELC Management LLC podučava upotrebu kozmetičke kompozicije koja sadrži resveratrol da stimuliše endogenu proizvodnju ćelijskih beta defenzina u ćelijama kože. Da bi ilustrovali ovaj efekat, pronalazači su ispitali kompoziciju na Normalnim Humanim Epidermalnim Keratinocitima ("NHEK") in vitro i mereno je prisustvo beta defenzina u NHEK. Dobijene stimulisane količine defenzina su bile jako male (približno 0.001 ng/ml). Pronalazači su predstavili teoriju da bi stimulacija beta defenzina u keratinocitima sa kompozicijama koje sadrže resveratrol bila efikasna za lečenje akni, inhibiciju mikrobnog rasta na koži, i poboljšanje reparacije kožne barijere. Zbog niskih stimulisanih količina beta defenzina, i zbog toga što kompozicije u stvari ne sadrže defenzine, upitno je da li bi ove kompozicije proizvele kozmetički značajne rezultate. Ovi i svi drugi spoljašnji materijali koji su ovde razmatrani obuhvaćeni su u njihovoj celosti referencom. Gde je definicija ili upotreba termina u uključenoj referenci nekonzistentna ili suprotna definiciji tog ovde obezbeđenog termina, definicija tog ovde obezbeđenog termina se primenjuje i definicija tog termina u referenci se ne primenjuje.

[0007] Sa druge strane, pokazano je da defenzini imaju značajnu ulogu u zarastanju rane. U članku časopisa pod naslovom "Stimulation of the follicular bulge LGR5+ and LGR6+ stem cells with the gutderived human alfa defenzin 5 results in decreased bacterial presence, enhanced wound healing, and hair growth from tissues devoid of adnexal structures" (Plast. Reconstr. Surg.2013;132(5):1159-71), Lough et al. prijavljuju formulaciju koja sadrži humani alfa defenzin 5 za koji je pokazano pod eksperimentalnim uslovima da regrutuje LGR5+ i LGR6+ matične ćelije u opekotine trećeg stepena kod miševa, što je ubrzalo zarastanje tj. reparaciju rane. Međutim, ovi nalazi ostavljaju mnoga pitanja. Na primer, u eksperimentalnim uslovima koji su opisani od strane Lough et al., nejasno je da li su LGR5+ i LGR6+ aktivisani sa pro-inflamatornim uslovima i drugim faktorima koji su već prisutni rani ili zbog lokalne primene defenzina. Osim toga, formulacija za zarastanje rana koja je upotrebljena od strane Lough et al. sadržala je koncentracije defenzina u antimikrobnim aktivnim koncentracijama (npr. oko 105 ng/ml). Međutim, ova visoka koncentracija defenzina može učiniti bilo koju rezultujuću kozmetičku kompoziciju više alergenom i skupljom.

[0008] Prema tome, iako su poznate kompozicije koje sadrže i stimulišu defenzin, postoji potreba za kozmetičkom formulacijom za lokalnu upotrebu koje su efikasne u smanjenju ili eliminisanju pojavljivanja i/ili pojave melazme.

[0009] WO 2015/195677 prikazuje (Apstrakt): "Inventivni predmet pronalaska je usmeren prema lokalnim kozmetičkim formulacijama spremnim za upotrebu koje uključuju bar jedan defenzin koji se nalazi u sub-antimikrobnim efikasnim koncentracijama. Iznenađujuće, čak i na tako niskim koncentracijama, defezini regrutuju LGR6+ matične ćelije iz folikula dlake u interfolikularni prostor. Uključivanje defenzina u inventivnim lokalnim kozmetičkim formulacijama može smanjiti jednu ili više od dubina bora, dužinu bora, širinu bora, veličinu pore, nepravilnost u teksturi površine kože, masnoću, braon (smeđe) slojeve, i crvene tačke u neoštećenoj koži, čime se smanjuje očigledna starost.”

[0010] WO 2011/109469 prikazuje (Apstrakt): "Predmetni pronalazak obezbeđuje kompozicije koje sadrže jedno ili više jedinjenja koja sekvestriraju antimikrobni peptid i postupke za lokalnu primenu takvih kompozicija na kožu za lečenje oboljenja i poremećaja kože kao što je rozacea kod ljudi."

[0011] Lough D et al., Plastic and Reconstructive Surgery, 132(5):1159-1171, NOV 2013, DOI: 10.1097/PRS.Ob013e3182a48af6, PMID: 24165598 prikazuje (Apstrakt - Zaključci): "Primena humanog alfa defenzina 5 povećava migriranje LGR matičnih ćelija u osnovu rane, dovodeći do unapređenog lečenja, smanjenja bakterija, i proizvodnje dlake kroz povećanje ključnih Wnt i transkripata za zarastanje rane. Ovi nalazi se mogu koristiti da za izvođenje terapeutici zasnovanih na proteinima creva u zarastanju rana.

Suština pronalaska

[0012] Predmetni pronalazak je predstavljen u priloženim zahtevima. Bilo koja izvođenja, aspekti ili primeri iz predmetnog opisa/prikaza koji nisu obuhvaćeni obimom pomenutih zahteva su obezbeđeni samo za ilustrativne svrhe i ne čine deo predmetnog pronalaska.

[0013] U jednom aspektu pronalaska, kozmetička formulacija za loklanu upotrebu uključuje defenzin u kozmetički prihvatljivom nosaču. Poželjne lokalne kozmetičke formulacije su spremne za upotrebu i sadrže defenzin u sub-antimikrobnoj efikasnoj koncentraciji, pri čemu koncentracija nije efikasna za inhibiciju rasta mikrobnog patogena na terapeutski efikasan način ali je efikasna u smanjenju ili eliminaciji pojave melazme. Dalje, još poželjnije lokalne formulacije mogu sadržati mešavinu dva ili više različitih defenzina, pri čemu kombinovana koncentracija defenzina u formulaciji je subantimikrobna efikasna koncentracija.

[0014] Pronalazači dalje razmatraju postupke za upotrebu defenzina na antimikrobno efikasnim ili sub-antimikrobno efikasnim koncentracijama u formulacijama za lokalnu upotrebu za regrutovanje LGR6+ matičnih ćelija u interfolikularni prostor u nepovređenoj koži. Treba razumeti da postupci regrutovanja LGR6+ matičnih ćelija mogu uključiti korak obezbeđivanja formulacije za lokalnu upotrebu koja sadrži sub-antimikrobnu koncentraciju bar jednog defenzina i dalji korak primene formulacije na nepovređenu kožu da se smanji ili eliminiše pojava melazme i/ili lečenih lezija melazme.

[0015] Poželjno je da inventivne kompozicije, postupci, i upotrebe koriste bar jedan od alfa-defenzin 1, alfa-defenzin 5, alfa-defenzin 6, neutrofilni defenzin 1, neutrofilni defenzin 2, neutrofilni defenzin 3, neutrofilni defenzin 4, teta-defenzin, beta-defenzin 1, beta-defenzin 2, beta-defenzin 3, i betadefenzin 4. U posebno poželjnim kompozicijama za lokalnu upotrebu i postupcima, korišćeni su alfadefenzin 5 i beta-defenzin 3. Treba razumeti da defenzin može sadržati sintetički defenzin, humani defenzin, rekombinantni defenzin, defenzin primata, mišji defenzin, kozji defenzin, goveđi defenzin, defenzin ovaca, defenzin konja, zečji defenzin, defenzin svinje, defenzin pasa, i/ili defenzin mačaka.

[0016] U odnosu na sub-antimikrobnu efikasnu koncentraciju prvog defenzina u kozmetičkoj formulaciji za lokalnu upotrebu koja je spremna za upotrebu, koncentracije koje se razmatraju mogu biti između 0.01 i 100 ng/ml, ili između 1 i 30 ng/ml, uključujući krajnje tačke svakog opsega. Dodatno, posebno poželjna izvođenja iz inventivnog predmeta pronalaska koriste koncentracije defenzina od oko 22 ng/ml i oko 4.4 ng/ml u formulacijama koje su spremne za upotrebu.

[0017] Pronalazači su neočekivano pronašli da, čak i u ovim niskim koncentacijama, defenzini mogu biti efikasni da u suštini smanje pojavu melazme i/ili lečene lezije melazme. Bez želje za vezivanjem za bilo koju određenu teoriju, efikasnost defenzina u ovim sub-antimikrobnim efikasnim koncentracijama može biti zbog aktivacije i/ili regrutovanja LGR6+ matičnih ćelija. Uobičajeno, defenzini koji su korišćeni u poželjnim izvođenjima inventivnog predmeta imaju čistoću veću od 95% kao što je prikazano sa HPLC, i sekvencu i odgovarajuće formiranje disulfidne veze defenzina može se potvrditi tandemskom MS/MS.

[0018] U zavisnosti od prirode lokalne formulacije, treba prepoznati da defenzini mogu biti inkapsulirani u lipozomima ili drugim nanočesticama. U poželjnim formulacijama, defenzini takođe mogu biti povezani sa nosačem, naročito proteinskim nosačem kao što je albumin (npr., humani serumski albumin, goveđi serumski albumin, albumin iz jajeta, i rekombinantni albumin koji je proizveden od pirinča, drugih biljaka, bakterija ili kvasaca), takođe inkapsuliran u lipozomima gde je poželjno.

[0019] Pronalazači dalje razmatraju da kozmetičke formulacije za lokalnu upotrebu mogu takođe uključiti suplemente da bi se obezbedila ishrana i podrška za LGR6+ matične ćelije. Uobičajeni suplementi uključuju humani serumski albumin, goveđi serumski albumin, albumin jajeta (tj. ovalbumin), rekombinantni albumin proizveden od pirinčna, drugih biljaka, bakterija ili kvasca, biljnog hidrolizata, beta-ciklodekstrin, glutamin, fosfolipidi, fibronektin, hijaluronat, hijaluronska kiselina, biljni hidrolizat, L-alanil-L-glutamin, želatin, rekombinantni želatin, epidermalni faktor rasta (EGF), vitamin E, Tokoferil Nikotinat, ubihinon, koenzim Q10, i/ili antioksidans. Pogodne kozmetičke formulacije mogu takođe uključiti blokiranje ultraljubičastom i/ili vidljivom svetlošću ili sredstvom za skrining.

[0020] Pronalazači razumeju da kozmetičke formulacije za lokalnu upotrebu inventivnog predmeta pronalaska mogu biti uključene u kompletima sa maskama za piling. Naročito poželjni kompleti uključuju masku, formulaciju kreme za tretman, i formulaciju seruma za tretman.

[0021] Dalji aspekti inventivnog predmeta pronalaska obezbeđuju postupke za lečenje ožiljaka, opektina od sunca, modrica, i drugih kožnih poremećaja u kojima epidermalni slojevi kože su u velikom delu intakni. Primeri postupaka uključuju korake obezbeđivanja lokalne formulacije koja ima bar jedan defenzin u sub-antimikrobnoj efikasnoj koncentraciji i primenom formulacije na nepovređenu kožu pod protokolom koji je efikasan da suštinski smanji pojavu melazme i/ili lečenih lezija melazme.

[0022] Različiti ciljevi, karakteristike, aspekti i prednosti inventivnog predmeta će postati očigledniji iz sledećeg detaljnog opisa poželjnih izvođenja, zajedno sa pratećim nacrtima slika na kojima slični brojevi predstavljaju slične komponente.

Kratak opis nacrta

[0023]

Slike 1A i 1B pokazuju uporedne fotografije koje pokazuju smanjenje u borama. Slika 1A pokazuje izgled kože pre tretmana. Slika 1B pokazuje izgled kože nakon tretmana.

Slike 2A i 2B pokazuju uporedne fotografije koje pokazuju smanjenje u pojavi braon tačaka. Slika 2A pokazuje izgled kože pre tretmana. Slika 2B pokazuje izgled kože nakon tretmana.

Detaljan opis

[0024] Pronalazači su neočekivano otkrili da antimikrobne i sub-antimikrobne koncentracije defenzina mogu postići brojne poželjne efekte na nepovređenoj koži kada se primenjuju u formulacijama koje su spremne za upotrebu. Između ostalog, takve formulacije za lokalnu upotrebu obezbeđuju značajno smanjenje ili eliminaciju pojave i/ili pojave hiperpigmentisanih lezija karakterističnih za melazmu, na primer epidermalnu melazmu.

[0025] U jednom poželjnom izvođenju, konzmetička formulacija za lokalnu upotrebu koja je spremna za upotrebu sadrži bar jedan defenzin koji se nalazi u lokalnoj kozmetičkog formulaciji u subantimikrobnoj efikasnoj koncentraciji. Naravno, treba razumeti da lokalne fromulacije mogu sadržati jedan defenzin, kombinaciju dva defenzina, ili kombinaciju tri ili više defenzina. Defenzini mogu biti istog ili različitih tipova i podtipova. Na primer pogodni defenzini mogu uključiti jedan ili više od alfadefenzina 1, alfa-defenzina 5, alfa-defenzina 6, neutrofilnog defenzina 1, neutrofilnog defenzina 2, neutrofilnog defenzina 3, neutrofilnog defenzina 4, teta-defenzina, beta-defenzina 1, beta-defenzina 2, beta-defenzina 3, i beta-defenzina 4. Posebno poželjne formulacije za lokalnu upotrebu sadrže alfadefenzin 5 i beta-defenzin 3. Kada su dva ili više defenzina korišćeni u kombinaciji, svaki defenzin se može nalaziti u jednakim količinama u odnosu na masu ili masene odnose specifične da bi se postigao željeni rezultat, kao što je 1:1.5, 1:2, 1:4, 1:5, itd. Primetno, treba razumeti da ukupne koncentracije defenzina koje su upotrebljene u razmotrenim formulacijama koje su spremne za upotrebu nisu efikasne u inhibiciji suštinske proliferacije mikroba u uspostavljenim kožnim infekcijama na terapeutski efikasan način. Alternativno, u drugim izvođenjima inventivnog koncepta koncentracija defenzina ili defenzina koji čine formulaciju može biti dovoljna za postizanje anti-mikrobnog efekta.

[0026] Kao što se ovde koristi, termin "spremno za upotrebu" označava da formulacija za lokalnu upotrebu koja sadrži defenzin je u obliku koji je predstavljen za prodaju i primenu. Smatra se da formulacije koje su spremne za upotrebu mogu sadržati potpuno kombinovani rastvor, kremu, gel, serum, losion, itd. Alternativno, defenzin može biti spakovan u odvojenom kontejneru (npr., u bočici koja pumpa rastvor defenzina sa kremom koje korisnik meša pre nanošenja na neoštećenu kožu) i kombinovana sa drugom formulacijom za lokalnu upotrebu u vremenu upotrebe/nanošenja.

[0027] Kao što je ovde takođe korišćeno, fraza "sub-antimikrobna efikasna koncentracija" označava koncentraciju(e) defenzina koje su karakterisane sa nesposobnošću da inhibiraju proliferaciju mikroba u uspostavljenoj infekciji. Obično, formulacije za lokalnu upotrebu koje su spremne za upotrebu ne obuhvataju koncentracije koje su veće od 1 µg/ml. U poželjnim izvođenjima, koncentracija defenzina nalazi se između oko 0.01 i oko 100 ng/ml, još više uobičajeno između oko 1 i oko 30 ng/ml, pri čemu razmatrane koncentracije uključuju krajnje tačke svakog opsega. U još poželjnijim izvođenjima, kozmetičke formulacije za lokalnu upotrebu imaju koncentracije defenzina od oko 22 ng/ml i oko 4.4 ng/ml. Kao što je ovde korišćeno, kada se termin "oko" koristi zajedno sa brojačnom vrednosti, "oko" označava opseg od plus ili minus deset procenta date numeričke vrednosti, uključujući krajnje tačke. Navođenje opsega vrednosti ovde je uglavno namenjeno da služi kao postupak skaćenog pisanja individualnog navođenja za svaku odvojenu vrednost koja se nalazi u okviru datog opsega. Osim ukoliko nije drugačije naznačeno, svaka pojedinačna vrednost je uključena u specifikaciju kao da je ovde zasebno naznačena.

[0028] Opšte formulacije za lokalnu upotrebu mogu uključiti bilo koje i sve formulacije koje su pogodne za kozmetičku lokalnu upotrebu, posebno na neoštećenoj koži. Kao što se ovde koristi, termin "neoštećena" koža odnosi se na kožu u kojoj su dermis i hipodermis u suštini intaktni. Prema tome, posmatrano iz drugačije perspektive, neoštećena koža će izgledati intaktno golim okom, bez dovoljno velikih ili dubokih pukotina koje će dovesti do krvarenja. Prema tome, neoštećena (ili "zdrava") koža uključuje stariju kožu i kožu sa prvim stepenom opekotina od sunca, izlaganjem uslova u spoljašnjoj sredini, modricama, ili delimičnom ablacijom rožnatog soja (stratum corneum). Neoštećena (ili zdrava) koža takođe isključuje kožu koja ispoljava upornu infekciju sa patogenima koja će rezultovati u vidljivim simptomima i znacima infekcije.

[0029] U odnosu na izvor defenzina, pronalazači razmatraju da defenzini koji potiču i iz prirodnih i sintetičkih izvora mogu biti pogodni za uključivanje u formulacije koje se primenjuju lokalno. Na primer, defenzini se mogu dobiti iz biljaka (npr., Arabidopsis, grašak, duvan, smrča, i/ili rekombinantnih biljaka), sisara ili drugih sisara, rekombinantnih organizama (kao što su kvasci ili bakterije), i/ili proizvoda laboratorijske sinteze peptida (na primer, upotrebom Merrifield-ove smole ili druge sinteze na čvrstoj fazi). Primeri defenzina koji su dobijeni iz prirodnih izvoda mogu obuhvatiti humane defenzine, defenzine majmuna, mišje defenzine, goveđe defenzine, ovčije defenzine, kozje defenzine, defenzine konja, zečje defenzine, svinjske defenzine, pseće defenzine, i/ili mačje defenzine.

[0030] Zbog njihovih relativno niskih količina u živom organizmu i niskoj molekulskoj težini, generalno je poželjno, međutim, da su defenzini sintetički defenzini. Sintetički defenzini uključuju defenzine koji su proizvedeni hemijskom sintezom (npr., sintezom na čvrstoj fazi) ili sa rekombinantnim tehnologijama (npr., proizvedeni od strane rekombinantnih bakterija, kvasca, kultura tkiva, biljaka ili životinja). Pronalazači dalje razmatraju da analozi defenzina kao što su hapivirini i diprovirin mogu da se koriste u nekim izvođenjima inventivnog predmeta pronalaska. Dalje, pronalazači dodatno razmatraju da defenzini mogu takođe biti modifikovani da bi se povećala njihova aktivnost i specifičnost za kozmetička poboljšanja u odnosu na izgled kože. Na primer, defenzini mogu biti odvijeni ili savijeni pod kontrolisanim uslovima da bi se utvrdilo pravilno obrazovanje disulfidne veze (koje se može pratiti by MS analizom i/ili CD spektroskopijom). Alternativno, hemijske modifikacije (npr., upotreba neprirodnih amiokiselina i/ili PEGilacija da bi se povećalo vreme polu-života, ili derivatizovane proteinogene aminokiseline da bi se povećala lipofilnost) su razmotrene da bi se defenzini prilagodili u odnosu na specifičnu potrebu.

[0031] Bez obzira na izvor defenzina, treba razumeti da specifična aktivnost defenzina zavisi od različitih faktora, uključujći izomerni oblik i tercijernu strukturu konačnog proteina. Prema tome, i posebno gde je defenzin sintetički, ortogonalne zaštitne grupe mogu se koristiti za zaštitu odabranih cisteinskih ostataka, kojima zatim pojedinačno može biti uklonjena zaštita i mogu se povezati sa odgovarajućim ciljnim cisteinskim ostatkom, koji dovodi do obrazovanja koordinisane nenasumične disulfidne veze. Upotreba takvih zaštitnih grupa u sintetičkoj strategiji mogu dovesti do defenzina sa specifičnom aktivnosti koja je uporediva sa specifičnom aktivnosti nativnog defenzina. Bilo koja pogodna karakterizacija i mere kvaliteta kontrole se mogu koristiti. Obično, specifična aktivnost defenzina uključena je u inventivne formulacije za lokalnu primenu merena je za čistoću kao što je određeno sa HPLC. U primerima izvođenja, defenzin je između oko 80% i oko 100% čistoće, najčešće defenzin je oko 90% čistoće, ili bar oko 95% čistoće, ili najmanje oko 99% čistoće, ili bar oko 99.9% čistoće. Dodatno, odgovarajuća aminokiselinska sekvenca i obrazovanje disulfidne veze može se potvrditi na primer, tandemskom MS/MS.

[0032] U odnosu na pogodnu koncentraciju defenzina u kozmetičkim formulacijama koje su ovde predstavljene, razmatra se da su sve koncentracije smatrane odgovarajućim sve dok su takve koncentracije kozmetički efikasne u smanjenju pojave i/ili pojave hiperpigmentisanih karakteristika melazme na zdravoj koži. Stoga, ukupna koncentracija defenzia (jednog tipa ili kombinacija različitih defenzina) u finalnoj kozmetičkoj formulaciji kao što je primenjena na kožu može biti zmeđu oko 0.01 ng/ml i oko 100 ng/ml, ili između oko 0.1 ng/ml i oko 100 ng/ml, ili između oko 1 ng/ml i oko 100 ng/ml, ili između oko 2 ng/ml i oko 80 ng/ml, ili između oko 4 ng/ml i oko 60 ng/ml, ili između oko 1 ng/ml i oko 30 ng/ml. Prema tome, poželjne kompozicije uključuju defenzine u koncentraciji od bar oko 0.01 ng/ml, bar oko 0.1 ng/ml, bar oko 1 ng/ml, ili bar oko 4 ng/ml, ali ne više od oko 200 ng/ml, ne više od oko 100 ng/ml, ne više od oko 75 ng/ml, ili ne više od oko 50 ng/ml.

[0033] U nekim izvođenjima defenzin može biti povezan sa kozmetički prihvatljivim proteinom da bi se povećala stabilinost i/ili karakteristike isporuke. U ovom kontekstu, treba razumeti da je takvo povezivanje poželjno nekovalentno (npr., elektrostatičko, jonsko, hidrofobno, itd.), međutim, kovalentno vezivanje za bočnu grupu proteina nije isključeno. Primeri kozmetički prihvatljivih proteina uključuju laktoferin, transferin, i albumin (npr., humani serumski albumin, goveđi serumski albumin, ovalbumin, i/ili rekombinantni albumin). Defenzini i proteinski nosači mogu biti u različitim razmerama, uključujući ekvimolarne, sub-, i supramolarne razmere. Dodatno, kombinacije dva ili više proteinskih nosača mogu biti korisne. Na primer, u fomulaciji u kojoj su korišćena dva defenzina, jedan defenzin može biti povezan sa jednim nosačem, i drugi defenzin može biti povezan sa različitim nosačem. Prema tome, razmatrana je bilo koja kombinacija defenzina i nosača.

[0034] U još drugim razmatranim aspektima, defenzini (i proteini nosači) mogu biti inkapsulirani u kozmatički prihvatljivim formulacijama, i naroičito formulacijama upotrebom lipidne membrane. Na primer, lipozomi, mikrokapsule, nanokapsule, mikročestice, nanočestice, sistemi za isporuku mikročestica, su posebno razmatrani. Opis nekih kozmetičkih prihvatljivih sistema za isporuku može se pronaći u Maherani et al, "Liposomes: A Review of Manufacturing Techniques and Targeting Strategy," Current Nanoscience; 7:436-452 (2011). Poželjan postupak dobijanja lipozoma je postupak smicanja. Poželjni kozmetički sistemi za isporuku liči membranama koje se nalaze u prirodi, su fleksibilni, i mogu penetrirati u intersticijernim prostorima između ćelija. Dalje je razmatrano da kozmetički sistemi mogu imati monoslojne, bislojne (npr. unilameralnu vezikulu ULV), ili višeslojne strukture (npr. multilameralnu vezikuju ili MLV). Dodatno, višeslojni lipozomi, mikrokapsule, mikrozomi, i nanokapsule mogu imati ugrađene strukture (npr. multivezikularnu vezikulu ili MVV). Kozmetički sistemi za isporuku koji su korišćeni u formulacijama koje se primenjuju lokalno mogu imati opseg u veličini od od oko 500 nm do oko 10 µm. U pripremi kozmetičkih sistema za isporuku, sve kozmetički prihvatljive lipidne kompozicjie su razmatrane, naročito farmaceutski prihvatljivi lipidi. U većini slučajeva poželjni kozmetički sistemi za isporuku sadrže amfipatične ili amfifilične molekule kao što su fosfolipidi ili kombinacije fosfolipida (npr., fosfatidilholin, fosfatidiletanolamin, fosfatidinska kiselina, fosfatidilserin, i fosfoinozitidi). Dodatno, u nekim slučajvima razmotreni kozmetički sistemi za isporuku mogu sadržati aditiv(e) kao što su steroli, polietilen glikol, holesterol, dicetilfosfat, stearil amin, itd. U odnosu na količinu sistema za isporuku koji su uključeni u formulaciju koja je spremna za upotrebu, sadržaj kozmetičkog sistema za isporuku će obično biti prilagođen da se postigne subantimikrobna koncentracija defenzina sa poželjnim opsegom. Unilamelarne vezikule/lipozomi mogu se proizvesti upotrebom tehnika većeg smicanja. Ove vezikule imaju veći Zeta Potencijal od uobičajenog lipozoma, koji dozvoljava manju, uniformniju veličinu čestice sa povećanom stabilnosti. Zeta Potencijal je indikator elektronske šarže na površini na površini bilo kog makroskopskog materijala koji se nalazi u kontaktu sa tečnosti. Ovo se može koristiti za predviđanje i kontrolu stabilnosti suspenzija; što je veći Zeta Potencijal, veća je stabilnost molekula zbog toga što su naelektrisane čestice sposobne da odbijaju i prevaziđu njihovu urođenu sklonost ka spajanju.

[0035] Treba primetiti da defenzini, proteinski nosači, lipozomi, ili druge membranozne strukture imaju molekularnu težinu koja prelazi transmembransku isporuku, i čak isporuku kroz rožnati soj (stratum corneum). Osim toga, kao što je detaljnije razmotreno, defenzini imaju duboki efekat na aktivnost matične ćelije u dermalnim i hipodermalnim slojevima. Bez želje za vezivanjem za bilo koju teoriju ili hipotezu, pronalazači razmatraju da lipozomalne formulacije mogu imati sposobnost transporta defenzina preko intersticijernog puta i/ili da napadnu folikul dlake po dubini i koncentraciji dovoljnoj da aktivira LGR6+ ćelije. Gledano iz druge perspektive, smatra se da upotreba kozmetičkih sistema za isporuku pomaže u isporuci defenzina kao što se ne bi očekivalo da defenzini penetriraju po sebi kroz rožnati sloj kože (koji deluje kao barijera za molekule sa molekularnim težinama većim od 500 Da). Osim toga, kada su povezani sa albuminom (65-70kDa) i/ili lipozomoma, postaje bar konceptualno još teže da kompozicija defenzina penetrira kroz neoštećenu kožu. Prema tome, pronalazači pretpostavljaju da se mehanizam za isporuku defenzina razlikuje u neoštećenoj koži u poređenju sa povređenom ili oštećenom kožom.

[0036] U nekim izvođenjima inventivnog koncepta formulacija koja uključuje jedan ili više defenzina može biti isporučena aktivnim mehanizmom. Pogodni aktivni mehanizmi mogu uključiti primenu laserske energije, akustičnog pritiska talasa, ultrazvuka, mikroigala, i/ili injekcija na oblast kože koja je izložena tretmanu, da bi se olakšao transport defenzina u željeni region oblast(i) u koži i/ili koji je u vezi sa kožom (tj. epidermis, dermis, bazalni sloj, i/ili folikul dlake).

[0037] U drugom aspektu, pronalazači su kao prednost obezbedili dodatne sastojke koji hrane i podržavaju regrutovane matične ćelije u zdravu kožu. Na primer, albumin (npr., humani serumski albumin, goveđi serumski albumin), albumin iz jajeta (ovalbumin), rekombinantni albumin, biljni hidrolozat, i β-ciklodekstrin, glutamin, fosfolipidi (lipozomi), fibronektin, hijaluronat, biljni hidrolizat, L-alanil-L-glutamin, želatin, Vitamin E (tokoferil nikotinat), ubihinon (koenzime Q10), želatin, rekombinantni želatin, hijaluronska kiselina, epidermalni faktor rasta može obezbediti ishranu i podržavati matične ćelije.

[0038] Dalje, u drugim razmatranim aspektima kozmetičkog tretmana melazme na zdravoj koži može dalje biti potpomognuto dodatnim procedurama. Posebno razmatrane procedure uključuju hemijski i/ili mehanički piling. Na primer, hemijski piling se može izvesti upotrebom jedne ili više proteaza (na primer papain, Lactobacillus/ekstrakt fermenta bundeve, Lactobacillus/Punica Granatum voćni ekstrakt fermenta nara), alfa-hidroksi kiselinama, itd. dok se mehanički piling može sprovesti upotrebom kristala šećera, celuloznom biljnom materijom, skidanje trakom, zamrznuti CO2, polimerne čestice, i/ili granule silicijum dioksida.

[0039] Iako bez želje za vezivanjem za teoriju, pronalazači razmatraju da inventivni predmet (tj., postupci i upotreba antimikrobnih efikasnih ili sub-antimikrobnih aktivnih koncentracija defenzina u kozmetičkim formulacijama koje se primenjuju lokalno) može imati dejstvo tako da regrutuje LGR6+ matične ćelije u interfolikularni prostor u neoštećenoj koži. Najčešće, korisnik će dobiti instrukcije da primeni formulaciju za lokalnu upotrebu u regionima neoštećene kože koji uključuju ili će verovatno uključiti hiperpigmentisane oblasti karakteristične za melazmu pod protokolom koji je efikasan sa smanji ili eliminiše pojavu hiperpigmentisanih oblasti na koži, i/ili efikasan da smanji ili eliminiše pojavu takvih hiperpigmentisanih oblasti. Na primer, defenzini se mogu primeniti najmanje bar jednom dnevno (ili dva puta dnevno) u periodu od bar jedne nedelje, ili dve nedelje, tri nedelja, šest nedelja, ili čak duže. Od koristi, ukupna količina primenjenih formulacija je takva da je formulacija apsorbovana na koži. Na primer, formulacije za lokalnu upotrebu su obično primenjene u oko 0.1 do oko 500 mg po cm<2>, oko 0.1 do oko 500 mg po cm<2>, oko 0.5 do oko 300 mg po cm<2>, oko 5 do oko 500 mg po cm<2>, ili oko 100 do oko 500 mg po cm<2>.

[0040] Upotrebom kompozicija za lokalnu upotrebu kao što su one koje se nalaze u primerima ispod, pronalazači su otkrili da kozmetičke formulacije koje su uključivale defenzine su efikasne u smanjenju izgleda i/ili prevenciji pojavljivanja ili ponovnog pojavljivanja hiperpigmentisanih lezija koje su povezane sa melazmom.

[0041] U nekim izvođenjima inventivnog koncepta, lokalna primena takvih formulacija defenzina u pogodnom rasporedu je dovoljna da smanji oblast tretirane lezije melazme do manje od 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, ili manje od 5% lezije melazme pre tretmana sa lokalnom formulacijom defenzina. U drugim izvođenjima inventivnog koncepta, lokalna primena takve formulacije defenzina u pogodnom rasporedu može smanjiti višak pigmentacije koja je povezana sa tretiranom lezijom melazme do manje od 300%, 200%, 100%, 50%, 25%, ili 10% pigmentacije izvan one koja se smatra normalnom, nepogođenu kožu u blizini tretirane lezije melazme.

[0042] U pogodnim protokolima lečenja, formulacija defenzina se može primeniti četiri puta dnevno (npr. svakih 6 sati), tri puta dnevno (npr. svakih 8 sati), dva puta dnevno (npr. svakih 12 sati), jednom dnevno (npr. ujutro ili pre izlaganja ultraljubičastom zračenju), svaki drugi dan, svaka tri dana, jednom nedeljno, ili učestalošću utvrđenom kroz praktičnu upotrebu. U nekim izvođenjima, formulacija defenzina za lokalnu upotrebu može se češće primenjivati na početku lečenja. U drugim izvođenjima, formulacija defenzina za lokalnu upotrebu može se primenjivati češće kako tretman napreduje. U još nekim izvođenjima tretman se može nastaviti po prvom rasporedu tretmana sve dok se pojava lezije melazme potpuno ne razreši, postane prihvatljiva i/ili se stabilizuje i poboljša, a zatim se pređe na drugi raspored tretmana koji održava tretirani izgled.

[0043] Tretman sa naučenim lokalnim formulacijama defenzina može se sprovoditi u bilo kom vremenskom periodu koji je pogodan za eliminisanje ili smanjenje pojave lezije melazme. Pogodni periodi lečenja mogu biti najmanje tj. bar nedelju dana, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 6 nedelja, 8 nedelja, 3 meseca, 4 meseca, 5 meseci, 6 meseci ili duže. U nekim izvođenjima, formulacija defenzina za lokalnu upotrebu može biti primenjena na dugi rok (tj. duže od jedne godine) ili na vremenski period otvorenog tipa prema rasporedu održavanja koji je pogodan da obezbedi i održi željeno smanjenje ili eliminaciju u pojavi lečenih lezija melazme.

Primeri

[0044] Pogodne formulacije su opisane u Međunarodnoj patentnoj prijavi br. PCT/US15/36049. Dok se pogodne kozmetičke formulacije mogu pripremiti korišćenjem bilo kog broja sastojaka i formulacija poznatih u oblasti tehnike, poželjne lokalne formulacije uključuju one koje su spremne za upotrebu i koje korisnik može primeniti. Prema tome, u pogledu kozmetički prihvatljivih nosača, svi kozmetički prihvatljivi nosači su razmatrani i obuhvataju kreme, emulzije ulje u vodi, emulzije voda u ulju, pene, museve, masti, losione, suspenzije, serum i gelove. U nekim izvođenjima, kozmetička formulacija može uključiti kremu za sunčanje, kao što je sastojak koji blokira ultraljubičasto i/ili vidljivo svetlo (na primer, cinkov oksid), koji povoljno smanjuje uticaj sumnjivog uzročnog faktora u razvoju melazme.

[0045] Primeri pogodnih kozmetičkih formulacija kreme za lokalnu upotrebu kreme mogu uključiti jedan ili više od sledećih sastojaka: vodu, Carthamus tinctorius (šafran) oleozome, Butyrospermum parkii (Ši) Buter, Macadamia integrifolia ulje semena, niacinamid, ekstrakt kvasca, amonijum akriloildimetiltaurat/ VP kopolimer, Helianthus annuus (suncokretovo) ulje semena, fosfolipidi, alfadefenzin 5, beta-defenzin 3, hijaluronsku kiselinu, ekstrakt korena Ophiopogon japonicus, hidrolizovani ekstrakt Candida saitoana, ekstrakt “sea whip” korala, voćni ekstrakt Lycium chinense, voćni ekstrakt, Vaccinium marcrocarpon (brusnica) voćni ekstraubihinon, L-alanil-L-glutamin, filtrat fermenta korena Leuconostod Radish, želatin, SH oligopeptid-1, ksantan guma, fitinska kiselina, polisorbat 20, kaprilni/kaprinski-triglicerid, fenoskietanol, kaprilil glikol, etilheksilglicerin, heksilen glikol, kalijum sorbat, natrijum hlorid i prirodni i/ili veštački miris.

[0046] Primeri pogodnih kozmetičkih formulacija seruma za lokalnu upotrebu mogu uključiti jednu ili više od sledećih: vodu, ciklopentasiloksan, glicerin, niacinamid, Sinorhizobium meliloti filtrat fermenta, dimetikon, polisorbat 20, dimetikon/vinil dimetikon krospolimer, lauril PEG-9 polidimetilsiloksietil dimetikon, amonijum akriloildimetiltaurat/ VP kopolimer, fosfolipidi, alfa-defenzin 5, beta-defenzin 3, palmitoil tripeptid-38, natrijum hijaluronat, Arabidopsis thaliana ekstrakt, ekstrakt “sea whip” korala ergotionein, Helianthus annuus (suncokret) ulje semena, Rosmarinus offinalis (ruzmarin) ekstrakt lista, SH oligopeptid-1, tokoferil acetat, ubihinon, Leuconostoc/koren rena filtrat fermenta, albumin, želatin, L-alanil-L-glutamin, kaprilni/kaprinski triglicerid, cetil hidroksietilceluloza, lecitin, hidroksipropil ciklodekstrin, fitinska kiselina, fenoksietanol, kaprilil glikol, etilheksilglicerin, heksilen glikol i/ili natrijum hlorid.

[0047] Primeri pogodne formulacije maske mogu uključiti jedan ili više od sledećih: butilen glikol, PEG-8, tapioka skrob, saharoza, titanijum dioksid, hidroksietil akrilat/natrijum akriloildimetil taurat kopolimer, sknalan, polisorbat 60, Carica papaya (papaja) voće, papain, sok lista Aloe barbadensis, Lactobacillus/ ekstrakt fermenta bundeve, Lactobacillus/Punica granatum voćni ektrakt nara, ekstrakt “sea whip” korala, ulje cveta Cananga odorata, Citrus aurantium dulcis (narandža) ulje kore, kaprilni/kaprinski triglicerid, mlečna kiselina, fenoksietanol, kaprilil glikol, etilheksilglicerin i/ili heksilen glikol.

1

Formulacije lipozoma

[0048] Tabela 1 ispod pokazuje primer kozmetičke formulacije lipozoma za isporuku uključujući dva tipa defenzina. Ovi lipozomi su obično uključeni u kozmetičku formulaciju u delu od oko 1.0 mas% do 10.0 mas% za većinu primena za negu kože. U nekim izvođenjima koncentracija defenzina može biti do 10 mg/ml ili veća.

Tabela 1. Primeri formulacije lipozoma

[0049] U još daljem aspektu inventivnog predmeta, lokalne kozmetičke formulacije mogu biti ponuđene zajedno kao komplet. Poželjni kompleti uključuju formulaciju maske i formulaciju tretmana kreme ili seruma koja sadrži defenzin. Još poželjniji kompleti uključuju formulaciju maske i obe, formulacije tretmana kreme i seruma koje sadrže defenzin.

[0050] U dobijanju kozmetičkih formulacija defenzina, razmatra se da preparati koncentrovanog defenzina mogu biti dodati u kozmetičke osnovne formulacije tako da koncentracija defenzina u proizvodu koji je spreman za upotrebu bude u ciljanoj sub-antimikrobnoj efikasnoj koncentraciji. U zavisnosti od željene formulacije, defenzini mogu biti uključeni u koncentrovane preparate kao što su rastvori, koji su povezani sa nosačima proteina, i uobičajenije kao lipozomalne formulacije. Takvi koncentrovani preparati defenzina mogu se dodati u kozmetičke osnovne formulacije u delovima kao što je predstavljeno ispod:

[0051] Primer formulacije losiona za telo (ulje u vodi):

Smeša a) PEG-7 hidrogenizovano ricinusovo ulje 2.00%

PEG-20 gliceril laurat 1.00%

kokogliceridi 3.00%

cetearil alkohol 1.00%

cetearil izononanoat 4.00% oktil stearat 4.00%

fenoksietanol, metilparaben, etilparaben, butilparaben, propilparaben, 0.30%

izobutilparaben

Smeša b) voda, destilovana 73.40%

fenoksietanol, metilparaben, etilparaben, butilparaben, propilparaben, 0.30%

izobutilparaben,

glicerin 3.00%

Smeša c) koncentrovani preparat defenzina 5.00%

Smeša d) kopolimer akrilamida, mineralno ulje C13-C14 izoparafin, polisorbat 85 3.00%

[0052] Da bi se pripremila formulacija losiona za telo smeša a) je otopljena na približni 70 °C Smeša b) je zagrejana do približno 70 °C i nakon toga je dodata u smešu a) uz mešanje. Mešanje je nastavljeno sve dok losion nije ohlađen do približno 30 C°. Smeše c) i d) su dodate u ohlađenu smešu uz mešanje, i losion je homogenizovan. U nekim izvođenjima konačna koncentracija defenzina može imati opseg od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili veći.

[0053] Primer formulacije Gel-Losion:

Smeša a) kopolimer akrilamida, mineralno ulje, C13-14 izoparafin, polisorbat 85 5.00%

miret-3 miristat 4.00%

Smeša b) voda, destilovana 85.00%

fenoksietanol (i) metilparaben (i) etilparaben (i) butilparaben (i)

propilparaben (i) izobutilparaben 0.50%

ksantan guma 0.50%

Smeša c) koncentrovani preparat defenzina 5.00%

[0054] Da bi se dobila formulacija gel losiona smeša a) je razblažena na približno 50 °C. Smeša b) je raspršena na sobnoj temperaturi i dodata je u smešu a) uz mešanje. Zatim, smeša c) je dodata uz mešanje.

[0055] Primer formulacija kreme ulje u vodi:

Smeša a) cetearil alkohol (i) cetearet-20 8.00%

kokogliceridi 2.00%

cetearil alkohol 2.00%

dikaprilil etar 8.00%

oleil erukat 7.00%

fenoksietanol, metilparaben, etilparaben, butilparaben, propilparaben, 0.30%

izobutilparaben

Smeša b) voda, destilovana 62.40% fenoksietanol, metilparaben, etilparaben, butilparaben, 0.30% propilparaben, izobutilparaben

glicerin 5.00% Smeša c) Koncentrovani preparat defenzina 5.00%

[0056] Da bi se dobila formualcija smeša a) je otopljena na približno 70 °C. Smeša b) je zagrejana do približno 70 °C i dodata je u smešu a) uz mešanje. Mešanje je nastavljeno dok se krema nije ohladila do približno 30 °C. Zatim, kompozicija c) je dodata uz mešanje i krema je homogenizovana. U nekim izvođenjima finalna koncentracija defenzina može biti u opsegu od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili većem.

[0057] Primer formulacije kreme voda u ulju:

Smeša a) diizostearoil poligliceril-3 dimer dilinoleat 3.00%

Pčelinji vosak 0.60% ricinusovo ulje, hidrirano 0.40% paraffinum subliquidum 5.00% izoheksadekan 10.00% PPG-15 stearil etar 2.00% dimetikon 0.50% fenoksietanol, metilparaben, etilparaben, butilparaben, propilparaben, 0.30% izobutiparaben

Smeša b) voda, destilovana 68.40%

fenoksietanol, metilparaben, 0.30% etilparaben, butilparaben, propilparaben, izobutilparaben

glicerin 3.00% MgSO4 *7H2O 1.00% Smeša c) Koncentrovani preparate defenzina 5.00% Smeša d) silicijum dimetil sililat 0.50%

[0058] Da bi se pripremila formulacija ulja u vodi kreme smeša a) je zagrejana do približno 80 °C. Smeša b) je dovedena do 80 °C i nakon toga je dodata u smešu a) uz mešanja. Mešanje je nastavljeno dok krema nije ohlađena do približno 30 °C, nakon čega su smeše c) i d) dodate i krema je homogenizovana. U nekim izvođenjima finalna koncentracija može biti u opsegu od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili većem.

[0059] Primeri formulacije šampona:

1

Natrijum polioksietilen lauril etar 15.0%

sulfat

Alkil poliglukozid 4.0%

N-etanol-N-metil amid 3.0%

dodekanoinske kiseline

EDTA-Na20.3%

Jabučna kiselina za podešavanje pH q.s.

do 6.0

Konzervans 0.5%

Koncentrovani preparat defenzina 10.0%

prečišćene vode Balans

Ukupno 100.0%

[0060] Da bi se pripremila formulacija šampona svi sastojci su pomešani zajedno i zapremina je dovedena do približno 90 ml. Zatim se podesi pH i zapremina se konačno podesi do 100 ml (svi procenti su težinski %). U nekim izvođenjima finalna koncentracija defenzina može imati opseg od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili veći.

[0061] Primeri formulacija za pranje tela:

Natrijum polioksietilen lauril etar sulfat 16.0%

Natrijum polioksietilen 5.0%

Amid N-etanol-N-metil amid masne kiseline ulja 2.5%

palminog jezgra

Glicerin 3.0%

Katjonizovana celuloza 0.1%

Etilen glikol distearat 3.0%

EDTA-Na20.3%

Limunska kiselina da se podesi pH do 5.7 q.s.

Konzervans 0.5%

Koncentrovani preparat defenzina 7.5%

Prečišćena voda balans

Ukupno 100.0

[0062] Da bi se pripremila formulacija za pranje tela svi sastojci su pomešani zajedno i zapremina je dovedena do približno 90 ml. Zatim se podesi pH i zapremina se konačno podesi do 100 ml (svi procenti su težinski %). U nekim izvođenima finalna koncentracija defenzina može imati opseg od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili veći.

[0063] Primeri fomulacija za pranje lica:

Natrijum polioksietilen lauril etar sulfat 20.0%

N-etanol-N-metil amid dodekanoinske kiseline 4.8%

Glicerin 3.0%

Hidroksietil celuloza 0.3%

Etilen glikol distearat 1.5%

Limunska kiselina da se podesi pH do 5.7 q.s.

Konzervans 0.5%

Koncentrovani preparat defenzina 10.0%

Prečišćena voda balans

Ukupno 100.0

[0064] Da bi se pripremila formulacija za pranje lica svi sastojci su pomešani zajedno i zaprema je dovedena do približno 90 ml. Zatim se podesi pH i zapremina se konačno podesi do 100 ml (svi procenti su težinski %). U nekim izvođenima finalna koncentracija defenzina može imati opseg od 1 ng/ml do 10 mg/ml ili veći.

[0065] Pronalazači su ispitali poželjnu formulaciju inventivnog predmeta u dve kliničke studije, Klinička studija 1 i Klinička studija 2 (dvostruko slepa studija). Obe studije su sprovedena pod supervizijom Dr. Gregory Keller, M.D, F.A.C.S u Klinici za plastičnu hirurgiju u Santa Barbari, Kalifornija. Dizajn za obe studije je bio suštinski sličan. Obe kliničke studije su ispitale 10 ispitanika tokom trajanja od 6 nedelja. Svakom ispitaniku je davana krema, serum, i maska. Polovina ispitanika (Studija 2) je primila formulaciju kreme, seruma, i maske koje sadrže defenzine. Druga polovina ispitanika je primila lažne (placebo) formulacije kreme, seruma, i maske koje su bile identične u kompoziciji sa ispitivanom grupom, izuzev formulacija koje nisu sadržale defenzine.

[0066] Pronalazači su izmerili izmereni individualne rezultate zdravlja kože za svakog učesnika pre i posle tretmana upotrebom QuantifiCare™ 3D LifeViz™ Imaging Clinical System and protocol developed by QuantifiCare Inc. (www.quantificare. com). Lica svakog učesnika su skenirana upotrebom 3D LifeViz™ sistema i data im je vrednost za svaku od sledećih kategorija: dubina bora, dužina i širina; dubina pora; ujednačenost kože; masnoća kože; smeđe (braon) fleke na koži; i crvene tačke na koži. Dobijene vrednosti za svakog učesnika su zatim upoređene sa populacijom istog pola, starosti i tipa kože, upotrebom QuantifiCare referentne baze podataka populacije. Dobijeni rezultat za zdravlje kože za svakog učesnika bio je procenat rangiranja zdravlja kože u poređenju sa populacijom ljudi istog uzrasta, pola i tipa kože.

[0067] Na primer, Tabela 2 (ispod) prikazuje prosečan uzrast svake studijske grupe u poređenju sa populacijom odgovarajućeg uzrasta, pola i tipa kože. Uzrast je izračunata pomoću parametra bora, koji predstavlja kombinaciju dubine, dužine i širine bora na čelu i obrazima.

1

Tabela 2. Rangiranje prosečnog uzrasta za kliničko ispitivanje 2 pre i nakon tretmana Rangiranje prosečnog uzrasta

Grupa Pre tretmana Nakon 6 nedelja

Placebo 77 % 74 %

Ispitivana grupa 61 % 81 %

[0068] Slike 1A i 1B prikazuju slike pre (Slika 1A) i posle (Slika 1B) dobijene 3D LifeViz™ sistemom za učesnika 3-PC (žena od 63 godine) u kliničkoj studiji 1. Učesniku 3-PC je data ispitivana formulacija. Merenja pomoću 3D LifeViz™ sistema su pokazala da je učesnik 3-PC primetio smanjenje vidljive procene starosti kože (na osnovu vrednosti ravnosti kože izračunate pomoću 3D LifeViz™ sistema) sa 64 godine na 37 godina. Fotografije nisu retuširane.

[0069] Slike 2A i 2B prikazuju slike pre (Slika 2A) i posle (Slika 2B) dobijene 3D LifeViz™ sistemom sa filterom braon mrlja za učesnika 8-IK (žene) Kliničke studije 1. Učesniku 3-PC je data ispitivana formulacija. Slike pokazuju smanjenje smeđih fleka (tačaka) na licu kao rezultat tretmana. Fotografije nisu retuširane.

[0070] Termine "sadrži" i "sastoji se od" treba razumeti tako da se odnose na elemente, komponente, ili korake na neisključiv način, što ukazuje na to da navedeni elementi, komponente, ili koraci mogu biti prisutni, ili upotrebljeni, ili kombinovani sa drugim elementima, komponentama, ili koracima koji nisu izričito navedeni. Kada se zahtevi u specifikaciji odnose na bar jedan od nečega izabranog iz grupe koja se sastoji iz A, B, C .... i N, tekst treba tumačiti kao da zahteva samo jedan element iz grupe, ne A plus N, ili B plus N, itd. Osim toga kao što je ovde korišćeno u opisu i kroz zahteve koji slede, značenje u jednini uključuje pozivanje na množinu osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje drugačije. Takođe, kao što je ovde korišćeno u opisu, značenje "u" obuhvata "u" i "na" osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje drugačije.

1

Claims (13)

Patentni zahtevi

1. Kozmetički postupak za smanjenje lezije koja je povezana sa melazmom u nepovređenoj koži koji obuhvata:

obezbeđivanje formulacije za lokalnu upotrebu koja sadrži prvi defenzin u koncentraciji efikansnoj da regrutuje LGR6+ matične ćelije u inferfolikularni prostor u nepovređenoj koži; i

primenu formulacije za lokalnu upotrebu na nepovređenoj koži pod protokolom koji je efikasan da smanji leziju koja je povezana sa melazmom,

pri čemu prvi defenzin obuhvata bar jedan iz grupe koja obuhvata alfa-defenzin 1, alfa-defenzin 5, alfadefenzin 6, neutrofilni defenzin 1, neutrofilni defenzin 2, neutrofilni defenzin 3, neutrofilni defenzin 4, teta-defenzin, beta-defenzin 1, beta-defenzin 2, beta-defenzin 3, i beta-defenzin 4.

2. Postupak prema zahtevu 1, pri čemu prvi defenzin obuhvata bar jedan od sintetičkog defenzina, humanog defenzina, rekombinantnog defenzina, defenzina majmuna, defenzina miša, defenzina koze, defenzina goveda, defenzina ovaca, defenzina konja, defenzina zeca, defenzina svinja, defenzina pasa i defenzina mačaka.

3. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-2, gde koncentracija prvog defenzina u formulaciji za lokalnu upotrebu je između, uključujući 0.01 i 100 ng/ml.

4. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-2, gde koncentracija prvog defenzina u formulaciji za lokalnu upotrebu je između, uključujući 1 i 30 ng/ml.

5. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-2, gde koncentracija prvog defenzina u formulaciji za lokalnu upotrebu je između, uključujući 100 ng/mL i 10 mg/ml.

6. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-5, gde prvi defenzin ima čistoću veću od 80%.

7. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-6, gde je prvi defenzin inkapsuliran u lipozomu.

8. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-7, gde je prvi defenzin u vezi sa proteinskim nosačem.

9. Postupak prema zahtevu 8, gde proteinski nosač sadrži bar jedan iz grupe koja se sastoji iz humanog serumskog albumina, rekombinantnog albumina, goveđeg serumskog albumina, i ovalbumina.

10. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-9, gde formulacija za lokalno davanje dalje sadrži drugi defenzin, pri čemu se drugi defenzin razlikuje od prvog defenzina, i gde je drugi defenzin prisutan u formulaciji u antimikrobnoj efikasnoj ili sub-antimikrobnoj efikasnoj koncentraciji.

11. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-10, gde formulacija za lokalno davanje dalje sadrži dodatak za LGR6+ matične ćelije, pri čemu dodatak sadrži najmanje jednu iz grupe koju čine humani serumski albumin, goveđi serumski albumin, ovalbumin, biljni hidrolizat, beta-ciklodekstrin, glutamin, fosfolipidi, fibronektin, hijaluronat, biljni hidrolizat, L-alanil-L-glutamin, želatin, vitamin E, rekombinantni albumin, hijaluronska kiselina, epidermalni faktor rasta, faktor rasta fibroblasta, rekombinantni želatin, tokoferil nikotinat, koenzim Q10 i ubihinon.

12. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-11, pri čemu je melazma epidermalna melazma.

13. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-12, gde protokol obuhvata isporuku prvog defenzina na kožu i/ili tkiva koja su povezana sa kožom upotrebom uređaja koji je odabran iz grupe koja se sastoji iz lasera, uređaja sa talasom akustičnog pritiska, ultrazvučnog uređaja, mikroigle i hipodermične igle.

1