ES2933048T3

ES2933048T3 - Uso de polipéptidos de autoensamblaje como adhesivos tisulares

Info

Publication number: ES2933048T3
Application number: ES13748339T
Authority: ES
Inventors: Axel Leimer; Lin Römer; Nathalie Maksimovikj
Original assignee: AMSilk GmbH
Current assignee: AMSilk GmbH
Priority date: 2012-08-17
Filing date: 2013-08-14
Publication date: 2023-01-31
Anticipated expiration: 2033-08-14
Also published as: EP2885015B1; EP3682912A1; US20220257825A1; WO2014027042A3; US20200078490A1; WO2014027042A2; US11273234B2; US10478520B2; EP2885015A2; WO2014027042A9; US12156955B2; EP3682912B1; US20150328363A1; DE202013011693U1

Abstract

La presente invención se refiere a un polipéptido de autoensamblaje para uso como adhesivo tisular. La presente invención también se refiere al uso de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular. Además, la invención se refiere al uso de un polipéptido autoensamblado para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, las mucosas y/o el cabello. Además, la invención se dirige a un polipéptido de autoensamblaje para uso en el pegado de uno o más compuestos farmacéuticos sobre tejido, piel, mucosa y/o cabello. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de polipéptidos de autoensamblaje como adhesivos tisulares

La presente invención se refiere al uso no terapéutico, ex-vivo, o in vitro de un polipéptido de seda como adhesivo tisular. Además, la invención se refiere al uso de un polipéptido de seda como adhesivo tisular para procesar alimentos. Además, la presente invención se refiere al uso cosmético de un polipéptido de seda para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, las mucosas y/o el cabello.

Antecedentes de la invención

Los adhesivos tisulares continúan evolucionando como una tecnología importante para el médico, en particular para el cirujano. Hace años había poco uso rutinario de estas sustancias; sin embargo, en los últimos años ha habido avances significativos. Cada vez es más importante para el médico, en particular para el cirujano, estar familiarizado con las indicaciones y las deficiencias de estos compuestos. Los adhesivos tisulares disponibles actualmente pueden clasificarse como adhesivos tisulares de fibrina o adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo cianoacrilatos. Aunque los adhesivos tisulares de fibrina y los adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo cianoacrilatos, se discuten a menudo bajo el tema general de los adhesivos tisulares, estas dos sustancias tienen diferentes indicaciones y mecanismos de acción. Los adhesivos tisulares de fibrina utilizan sustratos naturales que forman parte de los mecanismos de coagulación endógenos normales. Por el contrario, la adhesión lograda por los adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo cianoacrilatos, es el resultado de compuestos sintéticos que no se encuentran naturalmente en el cuerpo humano o animal. Estos dos tipos de adhesivos también tienen indicaciones clínicas diferentes. Los adhesivos tisulares de fibrina normalmente se aplican debajo de la dermis como hemostáticos biológicos o como selladores para usar con injertos y colgajos de piel. Los adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo, cianoacrilatos, se han utilizado con mayor éxito al nivel de la epidermis para el cierre superficial de la piel (véase Toriumi DM, Raslan WF, Friedman M, et al. "Histotoxicity of cyanoacrylate tissue adhesives.", Arch Otolaryngol Head Neck Surg 1990;116: 546-50).

El mecanismo de acción de los adhesivos tisulares de fibrina se comprende mejor si se revisa la fisiología básica de la coagulación sanguínea. Durante el proceso de coagulación normal, la trombina escinde la proteína fibrinógeno de gran peso molecular en subunidades de fibrina más pequeñas. Estas subunidades luego se someten a una polimerización de extremo a extremo y de lado a lado. El factor XIII (glutaminasa plasmática), en presencia de calcio, permite el reticulación de estas subunidades polimerizadas en un coágulo de fibrina estable. Normalmente, los adhesivos tisulares de fibrina se empacan como dos componentes separados que, cuando se mezclan en el campo lesionado o quirúrgico, simulan la interacción de estos compuestos endógenos y forman el coágulo de fibrina final. El primer componente está compuesto por fibrinógeno, factor XIII y cloruro de calcio, mientras que el segundo componente está compuesto por trombina y un agente antifibrinolítico. Los adhesivos tisulares de fibrina han encontrado varios usos prácticos en cirugía tales como cirugía cardiaca, cirugía vascular, cirugía plástica y cirugía reconstructiva como agentes hemostáticos así como adhesivos. También se pueden utilizar para el cierre tanto de injertos de piel como de colgajos cutáneos locales. Hay una variedad de aplicadores disponibles para administrar adhesivos tisulares de fibrina al campo quirúrgico. La más simple es la administración secuencial del primer componente y el segundo componente con dos jeringas separadas. También se puede utilizar un aplicador de doble jeringa. Los adhesivos tisulares de fibrina tienen la ventaja de que son biocompatibles y biodegradables. También muestran una reactividad tisular mínima. Sin embargo, los adhesivos tisulares de fibrina tienen la desventaja de que son muy caros. Además, los adhesivos tisulares de fibrina no son fáciles de manejar. Por ejemplo, los dos componentes del adhesivo tisular de fibrina deben transportarse y almacenarse ultracongelados (por ejemplo, a -20 °C). Por lo tanto, es muy importante que la cadena de frío (de distribución) no se interrumpa. Además, los adhesivos tisulares de fibrina deben empaquetarse como dos componentes separados para evitar la formación de coágulos de fibrina antes de la aplicación. Sin embargo, incluso después de mezclar, el tiempo de procesamiento es muy corto antes de que se complete la formación del coágulo de fibrina.

Los adhesivos tisulares a base de acrilato, tal como los cianoacrilatos, se utilizaron por primera vez en cirugía en 1959 cuando Coover (véase Coover HW, Joyner FB, et al. "Chemistry and performance of cyanoacrylate adhesives." J Soc Plast Eng 1959; 15: 413-7) encontraron sus propiedades adhesivas inherentes. Los cianoacrilatos incluyen, pero no se limitan a, metil-2-cianoacrilato, butil-2-cianoacrilato y octil-2-cianoacrilato. Estos compuestos tienen su mayor utilidad en cirugía tal como cirugía plástica facial y reconstructiva como alternativa al cierre tradicional con suturas. También se han utilizado para cerrar heridas superficiales. A diferencia de los adhesivos tisulares de fibrina, que se basan en la interacción de compuestos endógenos, los adhesivos tisulares de cianoacrilato son compuestos sintéticos que no se encuentran naturalmente en el cuerpo humano o animal. Un método para sintetizar un monómero de cianoacrilato de alquilo es hacer reaccionar cianoacetato de alquilo con paraformaldehído para formar un compuesto intermedio. El calor aplicado a este compuesto intermedio provoca la despolimerización, lo que da como resultado un destilado líquido de monómero de cianoacrilato de alquilo (Toriumi DM, Raslan WF, Friedman M, et al. "Histotoxicity of cyanoacrylate tissue adhesives." Arch Otolaryngol Head Neck Surg 1990; 116: 546-50). Adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo cianoacrilatos, son menos costosos que los adhesivos tisulares de fibroína. Sin embargo, se ha demostrado que los adhesivos tisulares a base de acrilato, por ejemplo, cianoacrilatos son histotóxicos cuando se aplican debajo de la dermis. Por ejemplo, cuando se aplican debajo de la piel, los cianoacrilatos pueden inducir histotoxicidad como resultado de la biodegradación del polímero en cianoacetato y formaldehído. Además, los adhesivos tisulares a base de acrilato tienen la desventaja de que sellan herméticamente el área tratada de manera que las células no pueden entrar en esta área para volver a conectar los tejidos separados.

Por tanto, existe la necesidad de adhesivos tisulares que superen los problemas antes mencionados.

Los inventores de la presente invención encomtraron sorprendentemente que los polipéptidod de autoensamblaje, particularmente los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, son adhesivos tisulares ideales ya que cumplen los siguientes criterios: fuerza de unión suficiente, aplicación sin complicaciones e independiente del tiempo, biocompatibilidad tisular, sin reactividad tisular tal como reacciones alérgicas o inflamatorias, y costes razonables. También es destacable que el efecto adhesivo se logra sin reacciones enzimáticas y/o químicas como se describe para los adhesivos tisulares a base de fibrina y acrilato. Además, cuando se usan como adhesivos tisulares, los polipéptidod de autoensamblaje, en particular los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, no forman una barrera infranqueable para que las células puedan entrar y pasar por los sitios pegados para generar nuevo tejido. Además, los polipéptidod de autoensamblaje, en particular los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, tienen la ventaja de que son flexibles, lo que reduce o incluso suprime la fuerza de tracción que actúa sobre el área afectada. Además, a diferencia de los adhesivos tisulares a base de acrilato y fibroína, los polipéptidod de autoensamblaje evitan o al menos retrasan el secado de los tejidos pegados.

Los sistemas para la producción recombinante de polipéptidos de autoensamblaje, en particular polipéptidos de seda, por ejemplo, polipéptidos de seda de araña, son conocidos en la técnica. En particular, los sistemas para la producción recombinante de polipéptidos de seda de araña en E. coli han sido desarrollados en WO 2006/008163 y WO 2006/002827. A modo de ejemplo, se hace referencia a WO 2006/008163 (reivindicando la prioridad de Solicitud provisional US No. 60/590,196). En este sistema de expresión, los bloques de construcción individuales (= módulos) se pueden variar libremente y, por lo tanto, se pueden adaptar a los requisitos del caso específico. Los módulos de este tipo se describen también en Hummerich et al., "Primary structure elements of dragline silks and their contribution to protein solubility and assembly", 2004, Biochemistry 43, 13604-13612. Se describen módulos adicionales en WO 2007/025719.

Sumario de la invención

En un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso no terapéutico, ex-vivo, o in vitro de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

i) GPGXX (SEQ ID NO: 3), en donde X es cualquier aminoácido, preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de A, S, G, Y, P y Q;

ii) GGX, en donde X es cualquier aminoácido, preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de Y, P, R, S, A, T, N y Q; y

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

En un segundo aspecto, la presente invención se relaciona con el uso de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular para procesar alimentos, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

En un tercer aspecto, la presente invención se relaciona con el uso cosmético de un polipéptido de autoensamblaje para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, mucosas y/o cabello, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

Descripción detallada de la invención

Antes de que la presente invención se describa en detalle a continuación, debe entenderse que esta invención no se limita a la metodología, los protocolos y los reactivos particulares descritos en este documento, ya que estos pueden variar. También debe entenderse que la terminología utilizada en este documento tiene el propósito de describir realizaciones particulares solamente, y no pretende limitar el alcance de la presente invención, que estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas. A menos que se defina lo contrario en el presente documento, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen los mismos significados que entiende comúnmente un experto en la técnica.

Preferiblemente, los términos utilizados en este documento se definen como se describe en "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, C^h-4010 Basilea, Suiza).

A continuación, se describirán los elementos de la presente invención. Estos elementos se enumeran con realizaciones específicas, sin embargo, debe entenderse que pueden combinarse de cualquier manera y en cualquier número para crear realizaciones adicionales. Ejemplos descritos de diversas formas y las realizaciones preferidas no deben interpretarse como una limitación de la presente invención únicamente a las realizaciones descritas explícitamente. Debe entenderse que esta descripción respalda y abarca realizaciones que combinan las realizaciones descritas explícitamente con cualquier número de los elementos descritos y/o preferidos. Además, cualquier permutación y combinación de todos los elementos descritos en esta solicitud debe considerarse divulgada por la descripción de la presente solicitud a menos que el contexto indique otra cosa.

A lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera lo contrario, la palabra "comprender", y variaciones tales como "comprende" y "que comprende", se entenderá que implica la inclusión de un número entero o paso o grupo de números enteros establecidos. o pasos, pero no la exclusión de cualquier otro número entero o paso o grupo de números enteros o pasos.

Tal como se utiliza en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno, una" y "el, la" incluyen referentes en plural, a menos que el contenido indique claramente lo contrario.

Se dice que los residuos en dos o más polipéptidos se "corresponden" entre sí si los residuos ocupan una posición análoga en las estructuras polipeptídicas. Es bien conocido en la técnica que pueden determinarse posiciones análogas en dos o más polipéptidos alineando las secuencias de polipéptidos basándose en la secuencia de aminoácidos o similitudes estructurales. Dichas herramientas de alineación son bien conocidas por el experto en la técnica y pueden obtenerse, por ejemplo, en la World Wide Web, por ejemplo, ClustalW (www.ebi.ac.uk/clustalw) o Align (http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html) utilizando la configuración estándar, preferiblemente para Align EMBOSS: aguja, Matriz: Blosum62, Gap Open 10.0, Gap Extend 0.5.

A menos que se indique lo contrario, los términos "polipéptido" y "proteína" se usan indistintamente en este documento y significan cualquier cadena de aminoácidos unida a péptido, independientemente de la longitud o la modificación postraduccional.

Como se mencionó anteriormente, los inventores de la presente invención encontraron sorprendentemente que los polipéptidos de autoensamblaje, particularmente los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, son adhesivos tisulares ideales ya que cumplen los siguientes criterios: fuerza de unión suficiente, aplicación independiente del tiempo y sin complicaciones, biocompatibilidad de tejido, ausencia de reactividad tisular como reacciones alérgicas o inflamatorias y costes razonables. También es destacable que el efecto adhesivo se consigue sin reacciones enzimáticas y/o químicas como las descritas para los adhesivos tisulares a base de fibrina y acrilato. Además, cuando se usan como adhesivos tisulares, los polipéptidod de autoensamblaje, en particular los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, no forman una barrera infranqueable para que las células puedan entrar y pasar por los sitios pegados para generar nuevo tejido. Además, los polipéptidod de autoensamblaje, particularmente los polipéptidos de seda como los polipéptidos de seda de araña, tienen la ventaja de que son flexibles, lo que reduce o incluso suprime la fuerza de tracción que actúa sobre el área afectada. Además, a diferencia de los adhesivos tisulares a base de acrilato y fibroína, los polipéptidod de autoensamblaje evitan o al menos retrasan el secado de los tejidos pegados.

Así, en un primer aspecto, la presente invención se refiere al uso no terapéutico, ex-vivo, o in vitro de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) Ax, en donde x es un número entero de 5 a 10.

El término "polipéptido de autoensamblaje", como se usa en el presente documento, se refiere a un polipéptido que puede realizar el autoensamblaje. "Autoensamblaje" es un término utilizado para describir un proceso en donde un sistema desordenado de polipéptidos preexistentes forma una estructura o patrón organizado como consecuencia de interacciones locales específicas (por ejemplo, fuerzas de van der Waals, interacciones hidrófobas, enlaces de hidrógeno, y/o puentes salinos, etc.) entre los propios polipéptidos, sin dirección o activación externa, aunque los factores externos podrían influir en la velocidad y la naturaleza del autoensamblaje. Esto significa particularmente que cuando dos o más polipéptidos desordenados y/o desplegados se ponen en contacto, interactúan entre sí y, en consecuencia, forman una estructura tridimensional. El cambio de un sistema desordenado a una estructura o patrón organizado durante el autoensamblaje se caracteriza por una transición de un estado fluido a un estado gelatinoso y/o sólido y un aumento correspondiente en la viscosidad. La transición de un estado fluido a un estado gelatinoso se puede controlar, por ejemplo, mediante la medición de la dispersión de la luz, la reología o el dicroísmo circular (CD). Estas técnicas son conocidas por el experto en la técnica. La transición de un estado fluido a un estado sólido se puede monitorizar, por ejemplo, utilizando métodos ópticos.

Preferiblemente, el polipéptido de autoensamblaje es biodegradable, biocompatible, no inmunogénico y/o no inflamatorio.

El "adhesivo tisular (también designado como sellador tisular o pegamento tisular)", como se usa aquí, permite conectar, particularmente reconectar, capas de tejido, por ejemplo, al menos dos capas de tejido, entre sí. En particular, el adhesivo tisular puede proporcionar una conexión estrecha, especialmente ajustada, entre capas de tejido o, en el caso de que las capas de tejido estén distantes entre sí, el adhesivo tisular puede llenar el espacio entre las capas de tejido, reemplazar el tejido faltante capas y/o unir las capas de tejido que faltan. Preferiblemente, el espacio tiene un tamaño de no más de 1 cm, más preferiblemente de no más de 0,75 cm, incluso más preferiblemente de no más de 0,5 cm, lo más preferiblemente de no más de 0,25 cm, por ejemplo de no más de 0.01, 0.015, 0.02, 0.025, 0.03, 0.035, 0.04, 0.045, 0.05, 0.055, 0.06, 0.065, 0.07, 0.075, 0.08, 0.085, 0.09, 0.095, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45, 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95, o 1 cm. Como alternativa o adicionalmente, el "adhesivo tisular" permite conectar capas de tejido a superficies artificiales, por ejemplo de dispositivos médicos como implantes, o permite conectar superficies artificiales, por ejemplo de dispositivos médicos como implantes, a capas de tejido. De ese modo, los dispositivos médicos tales como los implantes pueden embeberse o incorporarse en el tejido.

El tejido se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en tejido conjuntivo, tejido muscular, tejido nervioso, tejido epitelial y combinaciones de los mismos, por ejemplo, múltiples (diferentes) tejidos. Un órgano, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso, intestino, recto, esófago, pulmón, bazo, cerebro, corazón, riñón, hígado, piel, glándulas como la linfa y la tiroides, ojo o páncreas, está, por ejemplo, compuesto de múltiples (diferentes) tejidos.

Los inventores de la presente invención también encontraron sorprendentemente que el efecto adhesivo se puede mejorar cuando se usa un polipéptido de autoensamblaje, particularmente un polipéptido de seda como el polipéptido de seda de araña, que además comprende un péptido que tiene un reconocimiento de proteína mediadora de adhesión celular (CAMP). secuencia (por ejemplo, RGD). Esta secuencia de reconocimiento de la proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP) (por ejemplo, RGD) permite la unión del péptido a proteínas CAMP (por ejemplo, integrinas) que están presentes en la superficie de las células y que intervienen en la unión a otras células y/o al matriz extracelular (ECM) en un proceso llamado adhesión celular. El sorprendente efecto adhesivo de RGD, como se muestra aquí, es diferente al efecto conocido en la técnica que los polipéptidos de seda que contienen RGD favorecen el crecimiento celular. Una diferencia destacable entre esta realización de la invención y el estado de la técnica es que el efecto adhesivo se basa exclusivamente en una fuerte interacción molecular entre la secuencia de reconocimiento y CAMP y, por lo tanto, se produce en cuestión de minutos o incluso más rápido, mientras que el efecto de adhesión celular descrito anteriormente solo ocurre después de días

Por lo tanto, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido, por ejemplo, al menos dos péptidos, particularmente al menos dos péptidos idénticos, que son capaces de potenciar el efecto adhesivo. El término "péptido" significa un polímero corto formado a partir de la unión, en un orden definido, de aaminoácidos. La unión entre un residuo de aminoácido y el siguiente se denomina enlace amida o enlace peptídico. Preferiblemente, el al menos un péptido, por ejemplo al menos dos péptidos, particularmente al menos dos péptidos idénticos, que son capaces de mejorar el efecto adhesivo

(i) está (están) compuestos de entre 3 y 30 aminoácidos, más preferiblemente entre 3 y 20 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre 3 y 15 aminoácidos, por ejemplo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, o 30 aminoácidos, y/o

(ii) es (son) (a) péptido(s) lineal(es), péptido(s) cíclico(s) o análogo(s) de péptido.

Se prefiere particularmente que al menos un péptido, por ejemplo, al menos dos péptidos, particularmente al menos dos péptidos idénticos, son capaces de mejorar el efecto adhesivo en al menos un 10%, más preferiblemente en al menos un 20%, incluso más preferiblemente en al menos un 40 %, y lo más preferiblemente en al menos un 60 % u 80 %, por ejemplo, en al menos un 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80%. Las pruebas para medir el efecto adhesivo se describen en la sección experimental.

Es más preferido que al menos un péptido, por ejemplo, al menos dos péptidos, particularmente al menos dos péptidos idénticos, que son capaces de mejorar el efecto adhesivo están unidos al polipéptido de autoensamblaje, por ejemplo, al N- y/o C-terminal del polipéptido de autoensamblaje.

Dicha unión puede ocurrir a través de la fusión genética. Para la fusión genética, por ejemplo, el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo puede fusionarse mediante ingeniería genética con el polipéptido de autoensamblaje.

Como alternativa o adicionalmente, dicha unión puede ocurrir mediante acoplamiento químico, por ejemplo, mediante un enlace covalente tal como un enlace peptídico y/o un enlace no peptídico, por ejemplo, un enlace disulfuro. Dicha unión puede ser directa o indirectamente, por ejemplo a través de un enlazador. El término "enlazador", como se usa en el presente documento, se refiere a una fracción que conecta el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo con el polipéptido de autoensamblaje de forma covalente. Puede estar comprendido en el N-terminal y/o C del polipéptido de autoensamblaje. En este caso, el enlazador puede designarse como TAG. Los preferidos aquí son los enlazadores peptídicos. Esto significa que el conector peptídico es una secuencia de aminoácidos que conecta el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo con el polipéptido de autoensamblaje. El conector peptídico puede estar conectado al péptido mediante un enlace peptídico o no peptídico y al polipéptido de autoensamblaje mediante un enlace peptídico o no peptídico. Por ejemplo, el conector peptídico puede estar conectado (i) al péptido y al polipéptido de autoensamblaje a través de un enlace peptídico, (ii) al péptido y al polipéptido de autoensamblaje a través de un enlace no peptídico, (iii) al péptido a través de un enlace no peptídico y al polipéptido de autoensamblaje a través de un enlace peptídico, o (iv) al péptido a través de un enlace peptídico y al polipéptido de autoensamblaje a través de un enlace no peptídico. Cuando el enlazador peptídico se conecta al péptido a través de un enlace no peptídico, esto puede hacerse a través de un grupo tiol de una cisteína (C) del enlazador. Además, cuando el enlazador peptídico se conecta al péptido a través de un enlace peptídico, esto puede hacerse a través de un grupo £ de un residuo de lisina (K) del enlazador. Normalmente, un conector peptídico tiene una longitud de entre 1 y 20 aminoácidos, por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 aminoácidos. Se prefiere que dicho conector comprenda al menos un residuo de cisteína (C) o lisina (K). También se prefiere que la secuencia de aminoácidos del conector peptídico no sea inmunogénica para los seres humanos. Por ejemplo, un conector que tenga al menos la secuencia de aminoácidos GC, CG, GK o k G, o que tenga al menos la secuencia de aminoácidos GCG, GKG o cualquier otro conector peptídico, por ejemplo GGCG (SEQ ID NO: 23), GCGG (SEQ ID NO: 24), GGKG (SEQ ID NO: 27), o GKGG (SEQ ID NO: 28), se puede utilizar en la presente invención. También se conocen en la técnica y se pueden usar otros enlazadores para el acoplamiento químico de dos monómeros de proteínas.

En particular, el al menos un péptido, por ejemplo, al menos dos péptidos, en particular, al menos dos péptidos idénticos, se puede unir al polipéptido de autoensamblaje o enlazador a través de un grupo lateral de un aminoácido, por ejemplo, a través de un grupo tiol, grupo amino, o grupo carboxi, de dicho enlazador o polipéptido de autoensamblaje. La unión de al menos un péptido, por ejemplo, al menos dos péptidos, particularmente al menos dos péptidos idénticos, al polipéptido de autoensamblaje o conector también puede tener lugar a través de un grupo reactivo (por ejemplo, SMCC, succinimidil-4-(W-maleimidometilo)ciclohexano-1-carboxilato) que comprende opcionalmente una fracción espaciadora, tal como un ácido aminocarboxílico, en particular un ácido aminocarboxílico que comprende el grupo amino en el átomo u-C. El grupo reactivo que comprende opcionalmente una fracción espaciadora puede acoplarse al péptido, enlazador y/o polipéptido de autoensamblaje. Preferiblemente, el ácido aminocarboxílico comprende entre 2 y 10 átomos de C, y más preferiblemente entre 4, 6 y 8 átomos de C, por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 átomos de C. Más preferiblemente, el ácido aminocarboxílico es ácido 6-amino-hexanoico. El término "grupo reactivo", como se usa en este documento, significa cualquier grupo que sea capaz de formar un enlace covalente con un grupo lateral de un aminoácido. Más allá de eso, el experto en la técnica sabe cómo conectar el péptido con el polipéptido de autoensamblaje.

En una realización preferida, el polipéptido de autoensamblaje comprende además un TAG amino terminal y/o carboxi terminal seleccionado del grupo que consiste en

i) TAGCYS1 que consiste en la secuencia de aminoácidos GCGGGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 35),

ii) TAGCYS2 que consiste en la secuencia de aminoácidos GCGGGGGG (SEQ ID NO: 36),

iii) TAGCYS3 que consiste en la secuencia de aminoácidos GCGGSGGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 37),

iv) TAGLYS1 que consiste en la secuencia de aminoácidos GKGGGGGGSGGGG (SEQ ID NO: 38), y

v) TAGLYS2 que consiste en la secuencia de aminoácidos GKGGGGGG (SEQ ID NO: 39).

Dicho TAG está preferiblemente unido (por ejemplo, enlazado o acoplado covalentemente) al terminal N y/o C del polipéptido de autoensamblaje. El grupo tiol del residuo de cisteína comprendido en los TAG anteriores permite el acoplamiento del péptido a dichos TAG y, por lo tanto, también al polipéptido de autoensamblaje. En una realización más preferida, el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo se acopla covalentemente al grupo tiol de un residuo de cisteína de TAGCYS3

Preferiblemente, el efecto adhesivo está mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). Dicha unión es preferiblemente una unión no covalente, particularmente una unión no covalente y reversible. El término "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)", como se usa aquí, se refiere a una proteína ubicada en la superficie celular involucrada en la unión con otras células y/o con la matriz extracelular (ECM) en un proceso llamado adhesión celular. Esencialmente, los CAMP ayudan a las células a adherirse entre sí y a su entorno. Estas proteínas suelen ser receptores transmembrana y se componen de tres dominios: un dominio intracelular que interactúa con el citoesqueleto, un dominio transmembrana y un dominio extracelular que interactúa con otros CAM^pdel mismo tipo (unión homofílica) o con otros CAMP o la matriz extracelular (unión heterofílica). En particular, el dominio extracelular comprendido en los CAMP interactúa con las secuencias de reconocimiento de CAM^p.

El término "adhesión celular", como se usa aquí, se refiere a un mecanismo que permite el acoplamiento de células a células adyacentes (adhesión célula-célula) y/o el acoplamiento de células a la ECM circundante (adhesión célula-ECM). La adhesión celular es la base para el establecimiento y desarrollo de organismos multicelulares. Los procesos de adhesión celular son importantes para la morfogénesis celular y el desarrollo de los tejidos. Por lo tanto, la adhesión celular juega un papel importante durante la proliferación, migración y/o diferenciación. En particular, el mecanismo de adhesión celular es un proceso celular que incluye la cicatrización de heridas, la homeostasis, el crecimiento tumoral y la metástasis.

La mayoría de los CAMP pertenecen a tres familias de proteínas: las integrinas, las cadherinas y las selectinas. Por lo tanto, en realizaciones preferidas de la presente invención, el CAMP es una integrina, una selectina o una cadherina.

El término "integrinas", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una familia de receptores que median la unión entre una célula y el tejido que la rodea, como otras células y/o la matriz extracelular (ECM). Las integrinas son dependientes del calcio. Son una familia de CAMP heterofílicos. Las integrinas son heterodímeros que contienen dos cadenas distintas, denominadas subunidades a (alfa) y p (beta). Las diferentes combinaciones de subunidades a y p dan como resultado varias integrinas funcionales. Los heterodímeros de integrina a/p se pueden agrupar en tres subfamilias, a saber, integrina p1, integrina p2 e integrina av. Así, por ejemplo, la integrina se selecciona del grupo que consiste en integrina p1, integrina p2 e integrina av.

El término "selectinas (o grupo de proteínas de diferenciación 62/CD62)", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una familia de glicoproteínas transmembrana de cadena sencilla que comparten propiedades similares a las lectinas de tipo C debido a un terminal amino relacionado y una unión dependiente de calcio. Las selectinas se unen a fracciones de azúcar y, por lo tanto, se consideran un tipo de proteínas de adhesión celular de lectina que se unen a polímeros de azúcar. Son una familia de CAMP heterofílicas. Preferiblemente, la selectina se selecciona del grupo que consiste en L-selectina, P-selectina y E-selectina.

El término "cadherinas (o proteínas de adhesión dependientes de calcio)", como se usa en el presente documento, se refiere a una clase de proteínas transmembrana de tipo 1. Son una familia de CAMP homofílicas. Las cadherinas juegan un papel importante en la adhesión celular, asegurando que las células dentro de los tejidos se unan entre sí. Son dependientes de iones calcio (Ca2+) para funcionar, de ahí su nombre. Preferiblemente, las cadherinas se seleccionan del grupo que consiste en cadherinas clásicas, cadherinas desmosómicas, protocadherinas y cadherinas no convencionales/no agrupadas. Se prefiere particularmente que la cadherina (clásica) se seleccione del grupo que consiste en E-cadherina, N-cadherina y P-cadherina.

Más preferiblemente, el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP, por ejemplo, al menos una, dos, tres o cuatro secuencias de reconocimiento de CAMP. La al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP permite particularmente la unión del péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo a la CAMP. Por lo tanto, en realizaciones preferidas de la invención, el efecto adhesivo está mediado por la unión del péptido por su al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP a CAMP. Dicha unión es preferiblemente una unión no covalente, particularmente una unión no covalente y reversible.

Las secuencias de reconocimiento de CAMP ocurren naturalmente en proteínas de unión a CAMP, por ejemplo, en fibronectina, fibrinógeno o vitronectina. Ejemplos de proteínas de unión a CAMP, sus secuencias de reconocimiento de CAMP y las CAMP a las que se unen se enumeran en la Tabla 1.

Las secuencias de reconocimiento de CAMP que pueden usarse en la presente invención comprenden o consisten en un módulo que contiene RGD o un módulo que no contiene RGD.

La secuencia RGD es el sitio de unión celular de un gran número de proteínas de la matriz extracelular (EM), la sangre y la superficie celular. Particularmente, las integrinas reconocen esta secuencia (véase, por ejemplo, Ruoslahti, E. "RGD and other recognition sequences for integrins.", Annual Review of Cell and Developmental Biology, 1996, Vol.

12, páginas 697-715.). La secuencia RGD está, por ejemplo, comprendida naturalmente en la sialoproteína ósea, en el colágeno, la decorsina, la desintegrina, la fibronectina, el fibrinógeno, la fibrilina, la protrombina, la trombospondina, la tenascina, la vitronectina o en el factor de von Willebrand. Las proteínas con una secuencia de reconocimiento de CAMP que difiere de RGD son, por ejemplo, colágeno, citotactina/tenascina-C, epiligrina, factor X, cadena a de fibrinógeno, cadena ^yde fibrinógeno, invasina, laminina, matriz metaloproteinasa-2, factor inhibidor de neutrófilos, osteopontina, plasminógeno, espectrina, tenascina o VCAM-1.

Las secuencias GER, GEN y GEK son, por ejemplo, sitios de unión celular que están comprendidos naturalmente en los colágenos. Dichas secuencias son particularmente utilizadas por las integrinas de unión a colágeno (véase, por ejemplo, "Use of synthetic peptides to locate novel integrin a2p1-binding motifs in human collagen III.", Journal of biological chemistry, 2006, Vol. 281, páginas 3821-3831.). Además, la secuencia IDAPS es, por ejemplo, un sitio de unión celular que está naturalmente comprendido en fibronectina y las secuencias GPR y HHLGGAKQAGDV son, por ejemplo, sitios de unión celular que están naturalmente comprendidos en fibrinógeno. Particularmente, las integrinas reconocen estas secuencias. Además, la secuencia CDPGYIGSR es, por ejemplo, un sitio de unión celular que está naturalmente comprendido en laminina, la secuencia AEIDGIEL es, por ejemplo, un sitio de unión celular que está naturalmente comprendido en tenascina, la secuencia QIDS es, por ejemplo, un sitio de unión que está naturalmente comprendido en VCAM-1, y la secuencia LDT es, por ejemplo, un sitio de unión celular que está naturalmente comprendido en MAdCAM-1.

Tabla 1: Ejemplos de proteínas de unión a CAMP, sus secuencias de reconocimiento de CAMP y CAMPs a las que se unen.

En realizaciones preferidas, la secuencia de reconocimiento de CAMP comprende un módulo que contiene o consiste en RGD, GER, GEK, GEN, IDAPS (SEQ ID NO: 45) o variantes de los mismos, GPR, HHLGGAKQAGDV (SEQ ID NO: 46) o variantes de los mismos, CDPGYIGSR (SEQ ID NO: 47) o variantes del mismo, AEIDGIEL (SEQ ID NO: 48) o variantes del mismo, QIDS (SEQ ID NO: 49), o LTD. En realizaciones más preferidas, la secuencia de reconocimiento de CAMP comprende un módulo que contiene o consiste en RGD.

Como se mencionó anteriormente, se prefiere que el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP, por ejemplo, al menos una, dos, tres o cuatro secuencias de reconocimiento de CAMP. Preferiblemente, dicha secuencia de reconocimiento de CAMP comprende un módulo que ^{contiene o consiste en RGD, GER, GEK, GEN, IDAPS (SEQ ID NO: 45) o variantes de los mismos, g}P^r, ^{HHLGGAKQAGDV (SEQ ID NO: 46) o variantes de los mismos, CDPGYIGSR}(S^eQ ^{ID NO: 47) o variantes del mismo, AEIDGIEL (SEQ ID NO: 48) o variantes del mismo, QIDS (SEQ ID NO: 49), o}L^tD. ^{Así, por ejemplo, el péptido puede}comprender (i) uno, dos, tres o cuatro módulos que contienen RGD, (ii) uno, dos, tres o cuatro módulos que contienen GER, (iii) uno, dos, tres, o cuatro módulos que contienen GEK, (iv) uno, dos, tres o cuatro módulos que contienen GEN, (v) un módulo que contiene RGD y un módulo que contiene GER, (vi) un módulo que contiene RGD y un módulo que contiene GEK, (vii) un módulo que contiene RGD y un módulo que contiene GEN, (viii) un módulo que contiene GER y un módulo que contiene GEK, (ix) un módulo que contiene GER y un módulo que contiene GEN, (x) un módulo que contiene GEK y un módulo que contiene GEN, (xi) un módulo que contiene RGD, un módulo que contiene GER y un módulo que contiene GEK, (xii) un módulo que contiene RGD, un módulo que contiene GER y un módulo que ^{contiene GEN, (xiii) un módulo que contiene r}G^d, ^{un módulo que contiene GEK, y un módulo que contiene g}Eⁿ, ^{(xiv), un módulo que contiene g}E^r, ^{un módulo que contiene GEK y un módulo que contiene GEN, y (xv) un módulo}que contiene RGD, un módulo que contiene GER, un módulo que contiene GEK y un módulo que contiene GEN.

Las variantes mencionadas anteriormente, es decir, las variantes IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL, difieren de las referencias IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL (tipos salvajes) de las que se derivan en hasta 1, 2, 3 o 4 cambios de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos (es decir, sustituciones, adiciones, inserciones, eliminaciones, truncamientos N-terminales y/o truncamientos C-terminales). Dichas variantes pueden, alternativa o adicionalmente, caracterizarse por un cierto grado de identidad de secuencia con las referencias (tipos salvajes) de las que se derivan. Por lo tanto, las variantes IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL tienen una identidad de secuencia de al menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % a las respectivas referencias IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL (tipos salvajes). Se prefiere particularmente que la identidad de secuencia sea de al menos el 85 % en toda la longitud, al menos el 85 % en toda la longitud, al menos el 90 % en toda la longitud, al menos el 95 % en toda la longitud, sea al menos al menos el 98 % de la longitud total, o es al menos el 99 % de la longitud total de las respectivas referencias IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL (tipos salvajes).

Los fragmentos (o variantes de eliminación) de IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL tienen preferiblemente una eliminación de hasta 1 o 2 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Además, las variantes o fragmentos de IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL solo se consideran variantes o fragmentos de IDAPS, HHLGGAKQAGDV, CDPGYIGSR o AEIDGIEL en el contexto de la presente invención, si las modificaciones con respecto a la secuencia de aminoácidos en donde se encuentran las variantes o fragmentos en los que se basan no afectan negativamente a la capacidad del péptido para unirse a la CAMP. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el péptido que comprende una secuencia de reconocimiento de CAMP modificada todavía puede unirse a CAMP, por ejemplo mediante la realización de estudios de unión a proteínas. Por ejemplo, la calorimetría de titulación isotérmica (ITC) es una poderosa herramienta analítica que mide la afinidad de unión y la termodinámica entre dos biomoléculas cualesquiera. Además, la tecnología basada en resonancia de plasmones superficiales (SPR) se puede utilizar para estudiar interacciones biomoleculares en tiempo real.

En realizaciones aún más preferidas, la secuencia de reconocimiento de CAMP comprende un módulo que contiene un RGD lineal o cíclico. Se prefiere una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende un módulo que contiene un RGD lineal en los casos en los que el péptido se fusiona mediante ingeniería genética con el polipéptido de autoensamblaje. Por el contrario, se prefiere una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende un módulo que contiene un RGD cíclico en los casos en los que el péptido se fusiona mediante acoplamiento químico con el polipéptido de autoensamblaje. En las realizaciones más preferidas, el módulo que contiene un RGD lineal se selecciona del grupo que consiste en RGDS (SEQ ID NO: 50), GRGDS (SEQ ID NO: 51), GRGDY (SEQ ID NO: 52), GGSGGRGDSPG (SEQ ID NO: 53), RGDSPASSKP (SEQ ID NO: 54), y CGGNGEPRGDYRAY (SEQ ID NO: 55), y/o el módulo que contiene un RGD cíclico se selecciona del grupo que consiste en c(RGDfK), c(RGDfC) y c(RGDfE). Por lo tanto, RGD representa los aminoácidos arginina (Arg), glicina (Gly) y ácido aspártico (Asp); f representa D-fenilalanina (D-Phe); y K representa lisina (Lys), C representa cisteína (Cys) y E representa ácido glutámico (Glu), respectivamente.

Como alternativa o adicionalmente, la secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende

i) un módulo que contiene GER se selecciona del grupo que consiste en GFOGER (SEQ ID NO: 56), GLOGER (SEQ ID NO: 57), GASGER (SEQ ID NO: 58), GROGER (SEQ ID NO: 59), GMOGER (SEQ ID NO: 60), GLSGER (SEQ ID NO: 61), y GAOGER (SEQ ID NO: 62),

ii) un módulo que contiene GEK se selecciona del grupo que consiste en GFOGEK (SEQ ID NO: 63), GLOGEK (SEQ ID NO: 63). 64), GASGEK (SEQ ID NO: 65), GROGEK (SEQ ID NO: 66), GMOGEK (SEQ ID NO: 67), GLSGEK (SEQ ID NO: 68), y GAOGEK (SEQ ID NO: 69), o

iii) un módulo que contiene GEN se selecciona del grupo que consiste en GLOGEN (SEQ ID NO: 70) y GLKGEN (SEQ ID NO: 71).

La "O" en las secuencias anteriores se refiere a "hidroxiprolina".

En una realización preferida de la invención, el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende o consiste en un módulo que contiene RGD, preferiblemente un RGD lineal, más preferiblemente un RGD lineal que se selecciona del grupo que consiste en RGDS (SEQ ID NO: 50), GRGDS (SEQ ID NO: 51), GRGDY (SEQ ID NO: 52), GGSGGRGDSPG (SEQ ID NO: 53), RGDSPASSKP (SEQ ID NO: 54), y CGGNGEPRGDYRAY (SEQ ID NO: 55), o un RGD cíclico, más preferiblemente un RGD cíclico seleccionado del grupo que consiste en c(RGDfK), c(RGDfC) y c(RGDfE), en donde el efecto adhesivo está mediado por la unión de dicho péptido a una integrina como proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). Dicha unión es preferiblemente una unión no covalente, más preferiblemente una unión no covalente y reversible.

En otra realización preferida de la invención, el péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende o consiste en un módulo seleccionado del grupo que consiste en (i) GER, preferiblemente GFOGER (SEQ ID NO: 56), GLOGER (SEQ ID NO: 57), GASGER (SEQ ID NO: 58), GROGER (SEQ ID NO: 59), GMOGER (SEQ ID NO: 60), GLSGER (SEQ ID NO: 61), o GAOGER (SEQ ID NO: 62), (ii) GEK, preferiblemente GFOGEK (SEQ ID NO: 63), GLOGEK (SEQ ID NO: 63). 64), GASGEK (SEQ ID NO: 65), GROGEK (SEQ ID NO: 66), GMOGEK (SEQ ID NO: 67), GLSGEK (SEQ ID NO: 68), o GAOGEK (SEQ ID NO: 69), y (iii) GEN, preferiblemente GLOGEN (SEQ ID NO: 70) o GLKGEN (SEQ ID NO: 71), en donde el efecto adhesivo está mediado por la unión de dicho péptido a una integrina como proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). Dicha unión es preferiblemente una unión no covalente, más preferiblemente una unión no covalente y reversible. La "O" en las secuencias anteriores se refiere a "hidroxiprolina".

Preferiblemente, el polipéptido de autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en un polipéptido de seda, una elastina, un colágeno y una queratina. El polipéptido de seda puede expresarse en un sistema de expresión recombinante, por ejemplo microbiano, de insectos, plantas o de mamíferos, es decir, separado de su medio natural (polipéptido de seda recombinante), o se puede recolectar de fuentes naturales, por ejemplo larvas de araña, gusano de seda, abeja, mejillón o de mosca. El polipéptido de seda se puede aislar o purificar. En particular, un "polipéptido de seda purificado" o un "polipéptido de seda aislado" está libre o sustancialmente libre de material celular, restos de producción/fermentación y/u otras proteínas contaminantes de la fuente celular o tisular a partir de la cual se purifica o aísla la proteína. El lenguaje "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de un polipéptido de seda en las que el polipéptido de seda se separa de los componentes celulares de las células a partir de las cuales se produce de forma recombinante. Un polipéptido de seda que está "sustancialmente libre" de material celular, remanentes de producción/fermentación y/u otras proteínas contaminantes de la fuente celular o tisular a partir de la cual se purifica o aísla la proteína incluye preparaciones de polipéptidos de seda que tienen menos de aproximadamente 30%, 20 %, 10 %, 5 %, 1 % o 0,1 % (en peso seco) de proteína contaminante y/o menos de aproximadamente 30 %, 20 %, 10 %, 5 %, 1 % o 0,1 % (en peso seco) peso) de lípidos, ADN o sal contaminantes.

Se prefiere más que el polipéptido de seda sea un polipéptido de seda recombinante. También es más preferido que el polipéptido de seda sea un polipéptido de seda de araña, incluso más preferiblemente un polipéptido de seda de ampolla principal tal como un polipéptido de seda de dragalina, un polipéptido de seda de ampolla menor o un polipéptido de seda flageliforme de una araña red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), un polipéptido de seda de insecto, un polipéptido de seda de byssus de mejillón, o una mezcla de los mismos. La araña red orbe se puede seleccionar del grupo que consiste en Araneus diadematus, Nephila clavipes, y Latrodectus hesperus. El polipéptido de seda de insecto puede ser de lepidópteros, particularmente Bombycidae tal como Bombyx mori. El polipéptido de seda de insecto también puede ser de himenópteros, particularmente Apoidea tal como Anthophila.

Es aún más preferido que el polipéptido de seda sea un polipéptido de seda de araña recombinante, lo más preferiblemente un polipéptido de seda de ampolla principal recombinante tal como un polipéptido de seda de dragalina recombinante, un polipéptido de seda de ampolla menor recombinante o un polipéptido de seda flageliforme recombinante de una araña red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), un polipéptido de seda de insecto recombinante, un polipéptido de seda de byssus de mejillón recombinante, o una mezcla de los mismos. La araña red orbe se puede seleccionar del grupo que consiste en Araneus diadematus, Nephila clavipes, y Latrodectus hesperus. El polipéptido de seda de insecto recombinante puede ser de lepidópteros, particularmente Bombycidae tal como Bombyx mori. El polipéptido de seda de insecto también puede ser de himenópteros, particularmente Apoidea tal como Anthophila.

También se prefiere (alternativamente o adicionalmente) que el polipéptido de seda comprenda, consista esencialmente en, o consista en al menos dos unidades repetitivas idénticas. Dichas al menos dos unidades repetitivas idénticas comprenden o consisten en copias idénticas de secuencias de aminoácidos de polipéptidos de seda naturales o de variaciones de secuencias de aminoácidos de polipéptidos de seda naturales o combinaciones de ambos.

El término "unidad repetitiva", como se usa en el presente documento, se refiere a una región que corresponde en la secuencia de aminoácidos a una región que comprende o consiste en al menos un motivo peptídico (por ejemplo, AAAAAA (SEQ ID NO: 13) o GPGQQ (SEQ ID NO: 4)) que ocurre repetitivamente dentro de un polipéptido de seda natural (por ejemplo, MaSpI, ADF-3, ADF-4 o Flag) (es decir, secuencia de aminoácidos idéntica) o a una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la misma (es decir, secuencia de aminoácidos variacional). En este sentido, "sustancialmente similar" significa un grado de identidad de aminoácidos de al menos 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o incluso 99,9 %, preferiblemente en toda la longitud de la respectiva secuencia de aminoácidos de origen natural de referencia.

Una "unidad repetitiva" que tiene una secuencia de aminoácidos que es "sustancialmente similar" a una secuencia de aminoácidos correspondiente dentro de un polipéptido de seda natural (es decir, una unidad repetitiva de tipo salvaje) también es similar con respecto a sus propiedades funcionales, por ejemplo, un polipéptido de seda que comprende la "unidad repetitiva sustancialmente similar" todavía tiene la capacidad de actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el polipéptido de seda que comprende una "unidad repetitiva sustancialmente similar" sigue actuando como adhesivo, en particular sigue funcionando como adhesivo tisular, por ejemplo, realizando la prueba adhesiva o de tracción como se describe en la sección experimental.

Una "unidad repetitiva" que tiene una secuencia de aminoácidos que es "idéntica" a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de seda natural puede ser, por ejemplo, una porción de un polipéptido de seda correspondiente a uno o más motivos peptídicos de MaSp I (SEQ ID NO: 43) MaSp II (SEQ ID NO: 44), ADF-3 (SEQ ID NO: 1) y/o ADF-4 (SEQ ID NO: 2). Una "unidad repetitiva" que tiene una secuencia de aminoácidos que es "sustancialmente similar" a la secuencia de aminoácidos de un polipéptido de seda natural puede ser, por ejemplo, una porción de un polipéptido ^{de seda correspondiente a uno o más motivos peptídicos de MaSpI (SEQ ID n}O: ^{43) MaSpII (SEQ ID NO: 44),}A^dF-3 (SEQ ID NO: 1) y/o ADF-4 (SEQ ID NO: 2), pero que tiene una o más sustituciones de aminoácidos en (a) posiciones específicas de aminoácidos.

El término, una "unidad repetitiva", como se usa aquí, no incluye el dominio de aminoácido hidrofílico no repetitivo que generalmente se cree que está presente en el extremo amino y/o el extremo carboxilo de los polipéptidos de seda de origen natural.

El término "unidad repetitiva", como se usa aquí, se refiere además a una secuencia de aminoácidos con una longitud de 3 a 200 aminoácidos, o de 5 a 150 aminoácidos, preferiblemente con una longitud de 10 a 100 aminoácidos, o de 15 a 80 aminoácidos y más preferiblemente con una longitud de 18 a 60, o de 20 a 40 aminoácidos. Por ejemplo, la unidad repetitiva según la presente invención puede tener una longitud de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, o 200 aminoácidos. Lo más preferiblemente, la unidad repetitiva según la invención consiste en 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 18, 20, 24, 27, 28, 30, 34, 35 o 39 aminoácidos.

Cabe señalar que los términos "unidad repetitiva" y "unidad de repetición" pueden utilizarse de forma intercambiable en el contexto de la presente invención.

En realizaciones particularmente preferidas, el polipéptido de seda es un polipéptido con una secuencia de aminoácidos que comprende o consiste en al menos 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, preferiblemente al menos 95% y lo más preferiblemente 100% de copias múltiples de una unidad repetitiva idéntica (por ejemplo, A2, Q6, o C16, en donde los ítems 2, 6 o 16 representan el número de unidades repetitivas) o copias múltiples de dos o más unidades repetitivas diferentes (por ejemplo (AQ)24, o (AQ)12C16). Dicho polipéptido de seda se puede modificar adicionalmente agregando una etiqueta artificial para facilitar la detección o purificación de dicha proteína (por ejemplo, etiqueta T7).

La unidad repetitiva del polipéptido de seda puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquier región que comprenda o consista en al menos un motivo peptídico que se presente repetitivamente dentro de un polipéptido de seda natural conocido por los expertos en la técnica. Preferiblemente, la unidad repetitiva del polipéptido de seda comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una región que comprende o consiste en al menos un motivo peptídico que se produce de forma repetitiva dentro de un polipéptido de seda de artrópodo, más preferiblemente dentro de un polipéptido de seda de araña, o un polipéptido de seda de insecto. La unidad repetitiva del polipéptido de seda también puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de una región que comprende o consiste en al menos un motivo peptídico que aparece repetitivamente dentro de un polipéptido de seda de mejillón.

Se prefiere que la unidad repetitiva de seda de araña comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de una región que comprenda o consista en al menos un motivo peptídico que se presente repetitivamente dentro de un polipéptido de seda de ampolla principal (MaSp) de origen natural, tal como un polipéptido de seda de dragalina, un polipéptido de seda de ampolla menor (MiSp) o un polipéptido de seda flageliforme (FLAG). Lo más preferiblemente, la unidad repetitiva comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una región que comprende o consiste en al menos un motivo peptídico que aparece de forma repetitiva dentro de un polipéptido de seda de dragalina o un polipéptido de seda flageliforme de origen natural.

También se prefiere que la unidad repetitiva de seda de insecto comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de una región que comprenda o consista en al menos un motivo peptídico que se presente repetitivamente dentro de un polipéptido de seda de origen natural de lepidópteros. Más preferiblemente, la unidad repetitiva de seda de insecto comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de una región que comprende o consiste en al menos un motivo peptídico que ocurre repetitivamente dentro de un polipéptido de seda de insecto de origen natural de bombycidae, más preferiblemente de Bombyx mori.

El término "secuencia de consenso", como se usa en este documento, se refiere a una secuencia de aminoácidos que contiene aminoácidos que aparecen con frecuencia en una posición determinada (por ejemplo, "G") y en donde otros aminoácidos que además no se determinan se reemplazan por el marcador de posición "X".

Preferiblemente, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso, preferiblemente una, seleccionada del grupo que consiste en:

ii) GGX, en donde X es cualquier aminoácido, preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de Y, P, R, S, A, T, N y Q, más preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de Y, P y Q;

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10;

iv) GGRPSDTYG (SEQ ID NO: 18); y

v) GGRPSSSYG (SEQ ID NO: 19).

Más preferiblemente, el polipéptido de seda mencionado anteriormente tiene un peso molecular de al menos 5 kDa, por ejemplo, al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 kDa. Por tanto, en una realización más preferida, el polipéptido de autoensamblaje tiene un peso molecular de al menos 5 kDa, por ejemplo al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 kDa, y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10;

iv) GGRPSDTYG (SEQ ID NO: 18); y

v) GGRPSSSYG (SEQ ID NO: 19).

Los motivos (peptídicos) iterados GPGXX (SEQ ID NO: 3) y GGX, es decir, motivos ricos en glicina, proporcionan flexibilidad al polipéptido de seda y, por tanto, al hilo formado a partir de la proteína de seda que contiene dichos motivos. En detalle, el motivo GPGXX iterado (SEQ ID NO: 3) forma estructuras en espiral de giro p, lo que imparte elasticidad al polipéptido de seda. Las sedas ampolladas y flageliformes principales tienen un motivo GPGXX (SEQ ID NO: 3). El motivo GGX iterado está asociado con una estructura helicoidal que tiene tres aminoácidos por vuelta y se encuentra en la mayoría de las sedas de araña. El motivo GGX puede proporcionar propiedades elásticas adicionales a la seda. El motivo de polialanina A^xiterada (péptido) forma una estructura de lámina p cristalina que proporciona resistencia al polipéptido de seda. (WO 03/057727). Los motivos GGRPSDTYG (S^eQ ID NO: 18) y GGRPSSSYG (SEQ ID n O: 19) (peptídicos) han sido seleccionados de Resilin (WO 08/155304). Resilin es una proteína elastomérica que se encuentra en la mayoría de los artrópodos (arthropoda). Se encuentra en regiones especializadas de la cutícula, lo que proporciona baja rigidez y alta resistencia (Elvin et al., Nature (473): 999-1002, 2005).

Por lo tanto, en una realización preferida de la presente invención, el polipéptido de seda comprende o consiste en unidades repetitivas, cada una de las cuales comprende al menos uno (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9), preferiblemente uno, secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en GPGAS (SEQ ID NO: 5), GPGSG (SEQ ID NO: 6), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGP (SEQ ID NO: 8), GPGGA (SEQ ID NO: 9), GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGGG (SEQ ID NO: 10), GPGQG (SEQ ID NO: 40), y GPGGS (SEQ ID NO: 11). En otra realización preferida de la presente invención, el polipéptido de seda comprende o consiste en unidades repetitivas, cada una de las cuales comprende al menos una (por ejemplo, 1,2, 3, 4, 5, 8, 7 u 8), preferiblemente una secuencia de aminoácidos. seleccionados del grupo que consiste en GGY, GGP, GGA, GGR, Gg S, GGT, GGN y GGQ. En una realización adicionalmente preferida de la presente invención, el polipéptido de seda comprende o consiste en unidades repetitivas, cada una de las cuales comprende al menos una (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o 6), preferiblemente una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en AAAAA (SEQ ID NO: 12), AAAAAA (SEQ ID NO: 13), AAAAAAA (SEQ ID NO: 14), AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), AAAAAAAAA (SEQ ID NO: 16), y AAAAAAAAAA (SEQ ID NO: 17).

En otra realización preferida de la invención, el polipéptido de seda comprende o consiste en unidades repetitivas, cada una de las cuales comprende al menos una (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25), preferiblemente una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en GPGAS (SEQ ID NO: 5), GPGSG (SEQ ID NO: 6), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGP (SEQ ID NO: 8), GPGGA (SEQ ID NO: 9), GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGGG (SEQ ID NO: 10), GPGQG (SEQ ID NO: 40), GPGGS (SEQ ID NO: 11), GGY, GGP, GGA, GGR, GGS, GGT, GGN, GGQ, AAAAA (SEQ ID NO: 12), AAAAAA (SEQ ID NO: 13), AAAAAAA (SEQ ID NO: 14), AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), AAAAAAAAA (SEQ ID NO: 16), AAAAAAAAAA (SEQ ID NO: 17), GGRPSDTYG (SEQ ID NO: 18) y GGRPSSSYG (SEQ ID NO: 19).

Lo más preferiblemente, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en unidades repetitivas, que comprenden o consisten en

i) GPGAS (SEQ ID NO: 5), AAAAAA (SEQ ID NO: 13), GGY y GPGSG (SEQ ID NO: 6) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

ii) AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGY (SEQ ID NO: 7), y GPGGP (SEQ ID NO: 8) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

iii) GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGQQ (SEQ ID NO: 4) y GPGQQ (SEQ ID NO: 4) como secuencia de aminoácidos,

iv) GPGGA (SEQ ID NO: 9), GGP, GPGGA (SEQ ID NO: 9), GGP, GPGGA (SEQ ID NO: 9), y GGP como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

v) AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), GPGQG (SEQ ID NO: 40), y GGR como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

vi) AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), GPGGG (SEQ ID NO: 10), GGR, GGN y GGR como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

vii) GGA, GGA, GGA, GGS, GGA y GGS como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden, y/o

viii) GPGGA (SEQ ID NO: 9), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGS (SEQ ID NO: 11), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGS (SEQ ID NO: 11), y GPGGY (SEQ ID NO: 7) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden.

Cabe señalar que al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en los polipéptidos de seda mencionados anteriormente son unidades repetitivas idénticas.

Preferiblemente, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en entre 2 y 80 unidades repetitivas, entre 3 y 80 unidades repetitivas, o entre 4 y 60 unidades repetitivas, más preferiblemente entre 8 y 48 unidades repetitivas, o entre 10 y 40 unidades repetitivas y lo más preferiblemente entre 16 y 32 unidades repetitivas, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 unidades repetitivas, comprendiendo cada una al menos una secuencia consenso, preferiblemente una, seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

iv) GGRPSDTYG (SEQ ID NO: 18); y

v) GGRPSSSYG (SEQ ID NO: 19).

Más preferiblemente, el polipéptido de seda mencionado anteriormente tiene un peso molecular de al menos 5 kDa, por ejemplo, al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 kDa. Como se mencionó anteriormente, al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en el polipéptido de seda son unidades repetitivas idénticas.

Así, el polipéptido de seda preferiblemente comprende o consiste en entre 2 y 80 unidades repetitivas, entre 3 y 80 unidades repetitivas, o entre 4 y 60 unidades repetitivas, más preferiblemente entre 8 y 48 unidades repetitivas, o entre 10 y 40 unidades repetitivas y la mayoría preferiblemente entre 16 y 32 unidades repetitivas, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 unidades repetitivas, cada una de las cuales comprende al menos una (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25), preferiblemente una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en GPGAS (SEQ ID NO: 5), GPGSG (SEQ ID NO: 6), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGP (SEQ ID NO: 8), GPGGA (SEQ ID NO: 9), GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGQG (SEQ ID NO: 40), GPGGG (SEQ ID NO: 10), GPGGS (SEQ ID NO: 11), GGY, GGP, GGA, GGR, GGS, GGT, GGN, GGQ, AAAAA (SEQ ID NO: 12), AAAAAA (SEQ ID NO: 13), AAAAAAA (SEQ ID NO: 14), AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), AAAAAAAAA (SEQ ID NO: 16), AAAAAAAAAA (SEQ ID NO: 17), GGRPSDTYG (SEQ ID NO: 18) y GGRPSSSYG (SEQ ID NO: 19).

Lo más preferiblemente, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en

i) unidades repetitivas que comprenden o consisten en GPGAS (SEQ ID NO: 5), AAAAAA (SEQ ID NO: 13), GGY y GPGSG (SEQ ID NO: 6) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

ii) unidades repetitivas que comprenden o consisten en AAAAAAAA (SEQ ID NO: 100). 15), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGY (SEQ ID NO: 7), y Gp Gg P (SEQ ID NO: 8) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

iii) unidades repetitivas que comprenden o consisten en GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGQQ (SEQ ID NO: 4), GPGQQ (SEQ ID NO: 4) y GPGQQ (SEQ ID NO: 4) como secuencia de aminoácidos,

iv) unidades repetitivas que comprenden o consisten en GPGGA (SEQ ID NO: 9), GGP, GPGGA (SEQ ID NO: 9), GGP, GPGGA (SEQ ID NO: 9), y GGP como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

v) unidades repetitivas que comprenden o consisten en AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), GPGQG (SEQ ID NO: 40), y GGR como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

(vi) unidades repetitivas que comprenden o consisten en AAAAAAAA (SEQ ID NO: 15), GPGGG (SEQ ID NO: 10), GGR, GGN y GGR como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden,

vii) unidades repetitivas que comprenden o consisten en GGA, GGA, GGA, GGS, GGA y GGS como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden, y/o

viii) unidades repetitivas que comprenden o consisten en GPGGA (SEQ ID NO: 9), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGS (SEQ ID NO: 11), GPGGY (SEQ ID NO: 7), GPGGS (SEQ ID NO: 11), y GPGGY (SEQ ID NO: 7) como secuencia de aminoácidos, preferiblemente en este orden.

Preferiblemente, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en

i) (GPGXX)ⁿ(SEQ ID NO: 3) como una unidad repetitiva, en donde X es cualquier aminoácido, preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de A, S, G, Y, P y Q y n es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, o 9;

ii) (GGX)ⁿcomo una unidad repetitiva, en donde X es cualquier aminoácido, preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de Y, P, R, S, A, T, N y Q, más preferiblemente en cada caso seleccionado independientemente de Y, P y Q, y n es 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8; y/o

iii) (A^x)ⁿcomo una unidad repetitiva, en donde x es un número entero de 5 a 10 y n es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10.

Más preferiblemente, el polipéptido de seda mencionado anteriormente tiene un peso molecular de al menos 5 kDa, por ejemplo, al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 kDa. Como se mencionó anteriormente, al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en los polipéptidos de seda son unidades repetitivas idénticas.

Se prefiere además que las unidades repetitivas se seleccionen independientemente del módulo A (SEQ ID NO: 20), módulo C (SEQ ID NO: 21), módulo Q (SEQ ID NO: 22), módulo S (SEQ ID NO: 25), módulo R (SEQ ID NO: 26), o variantes de los mismos (es decir, variantes del módulo A, variantes del módulo C, variantes del módulo Q, variantes del módulo S o variantes del módulo R). Módulos A (SEQ ID NO: 20) y Q (SEQ ID NO: 22) se basan en la secuencia de aminoácidos de ADF-3 de la araña Araneus diadematus. Módulo C (SEQ ID NO: 21) se basa en la secuencia de aminoácidos de ADF-4 de la araña Araneus diadematus. Módulos S (^sE^qID NO: 25) y R (SEQ ID NO: 26) se basan en Resilin (Arthropoda) (WO 2008/155304).

Así, en una realización preferida, las unidades repetitivas del polipéptido de seda consisten en el módulo A: GPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQ (SEQ ID NO: 20), módulo C: GSSAAAAAAAASGPGGYGPENQGPSGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 21), módulo Q: GPGQQGPGQQGPGQQGPGQQ (SEQ ID NO: 22), módulo S: PGSSAAAAAAAASGPGQGQGQGQGQGGRPSDTYG (SEQ ID NO: 25), módulo R: SAAAAAAAAGPGGGNGGRPSDTYGAPGGGNGGRPSSSYG (SEQ ID NO: 26), o variantes de los mismos.

Es además particularmente preferido que el polipéptido de seda comprenda, consista esencialmente en, o consista en entre 2 y 80 unidades repetitivas, entre 3 y 80 unidades repetitivas, o entre 4 y 60 unidades repetitivas, más preferiblemente entre 8 y 48 unidades repetitivas, o entre 10 y 40 unidades repetitivas y lo más preferiblemente entre 16 y 32 unidades repetitivas, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 unidades repetitivas, que se seleccionan independientemente del módulo A (SEQ ID NO: 20), módulo C (SEQ ID NO: 21), módulo Q (SEQ ID NO: 22), módulo S (SEQ ID NO: 25), módulo R (Se Q ID NO: 26), o variantes de los mismos (es decir, variantes del módulo A, variantes del módulo C, variantes del módulo Q, variantes del módulo S o variantes del módulo R). Cabe señalar que al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en el polipéptido de seda son unidades repetitivas idénticas (módulos).

Por lo tanto, en una realización (particularmente) preferida, el polipéptido de seda comprende, consiste esencialmente en, o consiste en (i) unidades repetitivas que consisten en el módulo A y/o unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A, (ii)) unidades repetitivas que consisten en el módulo C y/o unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (iii) unidades repetitivas que consisten en el módulo Q y/o unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q, (iv) (a) unidades repetitivas que consisten en el módulo A y unidades repetitivas que consisten en el módulo Q, (b) unidades repetitivas que consisten en el módulo A y unidades repetitivas que consisten en las variantes del módulo Q, (c) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A y unidades repetitivas que consisten en el módulo Q, (d) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q, (v) (a) unidades repetitivas que consisten en el módulo A y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (b) unidades repetitivas que consisten en el módulo A y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (c) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (d) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A y unidad(es) repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (vi) (a) unidades repetitivas que consisten en el módulo C y unidades repetitivas que consisten en el módulo Q, (b) unidades repetitivas que consisten en el módulo C y unidad(es) que consisten en variantes del módulo Q, (c) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C y unidades repetitivas que consisten en el módulo Q, (d) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C y unidad repetitiva (s) consistentes en variantes del módulo Q, o (vii) (a) unidades repetitivas que consisten en el módulo A, unidades repetitivas que consisten en el módulo Q y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (b) unidades repetitivas unidad(es) que consisten en el módulo A, unidades repetitivas que consisten en el módulo Q y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (c) unidades repetitivas que consisten en el módulo A, unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (d) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A, unidades repetitivas que consisten en el módulo Q y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (e) unidades repetitivas que consisten en el módulo A, unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (f) unidades repetitivas que consiste en variantes del módulo A, unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q y unidades repetitivas que consisten en el módulo C, (g) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A, unidades repetitivas que consisten en el módulo Q y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C, (h) unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo A, unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo Q y unidades repetitivas que consisten en variantes del módulo C.

Los módulos A, C, Q, S, R o variantes de los mismos (es decir, variantes del módulo A, variantes del módulo C, variantes del módulo Q, variantes del módulo S o variantes del módulo R) también se pueden combinar o concatenar entre sí en cualquier combinación. y en cualquier número de cada uno, es decir, el módulo (unidad repetitiva) A se puede combinar con el módulo (unidad repetitiva) Q (es decir, la combinación AQ), el módulo (unidad repetitiva) C se puede combinar con el módulo (unidad repetitiva) Q (es decir, la combinación CQ)), módulo (unidad repetitiva) Q se puede combinar con módulo (unidad repetitiva) A y con módulo (unidad repetitiva) Q (es decir, combinación QAQ), módulo (unidad repetitiva) A se puede combinar con módulo (unidad repetitiva) A y con módulo (unidad repetitiva) Q (es decir, combinación AAQ), etc., con la condición de que el polipéptido de seda comprenda o consista en al menos dos unidades repetitivas que sean idénticas. Por ejemplo, el polipéptido de seda puede comprender o consistir en An, (AA)n, (AQ)n, (QA)n, Qn, (QQ)n, (QAQ)ⁿ, (AQA)ⁿ, Cn, (CC)n, (CCC)ⁿ, (CQ)ⁿ, (QC)ⁿ, (QCQ)ⁿ, (CQC)ⁿ, (AA)ⁿQⁿ, (QQ)ⁿAⁿ, (AAA)ⁿQⁿ, (QQQ)ⁿAⁿ, (AQQ)ⁿ, (QQA)ⁿ, Sⁿ, Rⁿ, (SS)ⁿ, (SR)ⁿ, (RS)ⁿ, or (RR)ⁿ, en donde n es al menos 2, preferiblemente 4, 8, 9, 10, 12, 16, 20, 24 o 32. En caso de que el polipéptido de seda consista en (AQ)¹², se observa que el módulo (unidad repetitiva) A está presente 12 veces y el módulo (unidad repetitiva) Q también está presente 12 veces en el polipéptido de seda y que, por tanto, el polipéptido de seda consiste en 24 módulos (unidades repetitivas). La disposición de los módulos (unidades repetidas) de un polipéptido de seda que consiste en (AQ)¹²es como sigue: AQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQ. Además, en caso de que el polipéptido de seda de los módulos (unidades repetidas) de un polipéptido de seda consista en (QAQ)^s, se observa que el módulo (unidad de repetición) A está presente 8 veces y el módulo (unidad repetitiva) Q está presente 16 veces en el polipéptido de seda y que, por tanto, el polipéptido de seda consiste en 24 módulos (unidades repetitivas). La disposición de los módulos (unidades repetidas) de un polipéptido de seda que consiste en (QAQ)^ses como sigue: QAQQAQQAQQAQQAQQAQQAQQAQ El polipéptido de seda también puede comprender o consistir en (A*Q)ⁿ, (AQ*)ⁿ, (A*Q*)ⁿ, (Q*A)ⁿ, (QA*)ⁿ, (Q*A*)ⁿ, (QAQ*)ⁿ, (QA*Q)ⁿ(Q*AQ)ⁿ, (QA*Q*)ⁿ, (Q*A*Q)ⁿ, (Q*AQ*)ⁿ, (Q*A*Q*)ⁿ, (AQA*)ⁿ, (AQ*A)ⁿ, (A*QA)ⁿ, (AQ*A*)ⁿ, (A*Q*A)ⁿ, (A*QA*)ⁿ, (A*Q*A*)ⁿ, en donde n es al menos 2, preferiblemente 4, 8, 9, 10, 12, 16, 20, 24 o 32 y en donde * indica una variante de módulo, es decir, variante de módulo A o Q.

Los términos "combinados entre sí" o "concatenados entre sí", tal como se utilizan aquí, significan que los módulos (unidades repetitivas) se combinan o concatenan directamente entre sí, o significan que los módulos (unidades repetitivas) se combinan o concatenan entre sí a través de uno o más aminoácidos espaciadores. Así, en una realización, los módulos (unidades repetitivas) comprendidos en el polipéptido de seda se combinan o concatenan directamente entre sí. En otra realización, los módulos (unidades repetitivas) comprendidos en el polipéptido de seda se combinan o concatenan entre sí a través de uno o más aminoácidos espaciadores, preferiblemente a través de 1 a 25 o de 1 a 20 aminoácidos espaciadores, más preferiblemente a través de 1 a 15 o 1 a 10 aminoácidos espaciadores, y lo más preferiblemente, a través de 1 a 5 aminoácidos espaciadores, por ejemplo a través de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, o 25 aminoácidos espaciadores. Dicho aminoácido espaciador puede ser cualquier aminoácido presente de forma natural en las proteínas. Preferiblemente, dicho aminoácido espaciador no es prolina. Se prefiere que el aminoácido espaciador contenga uno o varios grupos cargados. Preferiblemente, el aminoácido espaciador que contiene uno o más grupos cargados se selecciona independientemente del grupo que consiste en aspartato, glutamato, histidina y lisina. Dicho aminoácido espaciador debería ser un aminoácido que no afecte negativamente a la capacidad de un polipéptido de seda para actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. Además, dicho aminoácido espaciador debe ser un aminoácido que no provoque impedimento estérico, por ejemplo un aminoácido que tiene un tamaño pequeño como la lisina y la cisteína. En realizaciones más preferidas, el polipéptido de seda comprende módulos que se combinan directamente entre sí y módulos que se combinan entre sí a través de 1 a 25 o de 1 a 20 aminoácidos espaciadores, más preferiblemente a través de 1 a 15 o de 1 a 10 aminoácidos espaciadores., y lo más preferiblemente, a través de 1 a 5 aminoácidos espaciadores, por ejemplo a través de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 aminoácidos espaciadores.

Una variante del módulo A, C, Q, S o R difiere del módulo de referencia (tipo salvaje) A, C, Q, S o R del que se deriva hasta en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 cambios de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos (es decir, sustituciones, adiciones, inserciones, eliminaciones, truncamientos N-terminal y/o truncamientos C-terminal). Dicha variante de módulo puede, alternativa o adicionalmente, caracterizarse por un cierto grado de identidad de secuencia con el módulo de referencia (de tipo salvaje) del que se deriva. Por lo tanto, una variante del módulo A, C, Q, S o R tiene una identidad de secuencia de al menos 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o incluso 99,9 % al respectivo módulo de referencia (tipo salvaje) A, C, Q, S o R. Preferiblemente, la secuencia la identidad es sobre un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 27, 28, 30, 34, 35 o más aminoácidos, preferiblemente sobre la longitud total del respectivo módulo A, C, Q, S o R de referencia (de tipo salvaje).

Se prefiere particularmente que la identidad de secuencia es al menos el 80 % en toda la longitud, al menos el 85 % en toda la longitud, al menos el 90 % en toda la longitud, al menos el 95 % en toda la longitud, es al menos el 98 % en toda la longitud, o es al menos el 99 % en toda la longitud del respectivo módulo de referencia (de tipo salvaje) A, C, Q, S o R. Se prefiere particularmente que la identidad de secuencia es al menos el 80% en un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28 o 30 aminoácidos, es al menos el 85% en un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28, o 30 aminoácidos, es al menos el 90 % en un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28 o 30 aminoácidos, es al menos el 95 % en un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28 o 30 aminoácidos, es al menos el 98 % sobre un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28 o 30 aminoácidos, o es al menos el 99 % sobre un tramo continuo de al menos 10, 15, 18, 20, 24, 28 o 30 aminoácidos del respectivo módulo de referencia (tipo salvaje) A, C, Q, S o R.

Un fragmento (o variante de eliminación) del módulo A, C, Q, S o R tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 aminoácidos en su terminal N y/o en su terminal C. La eliminación también puede ser interna.

Además, la variante o fragmento del módulo A, C, Q, S o R solo se considera una variante o fragmento de módulo A, C, Q, S o R en el contexto de la presente invención, si las modificaciones con respecto a la secuencia de aminoácidos en donde se basa la variante o el fragmento no afecta negativamente a la capacidad del polipéptido de seda para actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el polipéptido de seda que comprende una variante o fragmento del módulo A, C, Q, S o R sigue actuando como adhesivo, en particular para funcionar como adhesivo tisular, por ejemplo, realizando la prueba adhesiva o de tracción como descrito en la sección experimental.

Es más preferible que las unidades repetitivas se seleccionen independientemente del módulo A^C(SEQ ID NO: 29), módulo A^k(SEQ ID NO: 30), módulo C^C(SEQ ID NO: 31), módulo C^K1(SEQ ID NO: 32), módulo C^K2(SEQ ID NO: 33) o módulo C^KC(SEQ ID NO: 34). Los módulos A^C(SEQ ID NO: 29), A.^k(SEQ ID NO: 30), C.^C(SEQ ID NO: 31), C.^K1(SEQ ID NO: 32), C^K2(SEQ ID N^o: 33) y C^KC(SEQ ID NO: 34) son variantes del módulo A que se basa en la secuencia de aminoácidos de ADF-3 de la araña Araneus diadematus y del módulo C que se basa en la secuencia de aminoácidos de ADF-4 de la araña Araneus diadematus (WO 2007/025719). En el módulo AC (SEQ ID NO: 29) el aminoácido S (serina) en la posición 21 ha sido reemplazado por el aminoácido C (cisteína), en el módulo Ak (SEQ ID

NO: 30) el aminoácido S en la posición 21 ha sido reemplazado por el aminoácido K (lisina), en el módulo CC (SEQ ID

NO: 31) el aminoácido S en la posición 25 ha sido reemplazado por el aminoácido 25 por C, en el módulo CK1 (SEQ

ID NO: 32) el aminoácido S en la posición 25 ha sido reemplazado por el aminoácido K, en el módulo CK2 (SEQ ID

NO: 33) el aminoácido E (glutamato) en la posición 20 ha sido reemplazado por el aminoácido K, y en el módulo CKC

(SEQ ID NO: 34) el aminoácido E en la posición 20 ha sido reemplazado por el aminoácido K y el aminoácido S en la posición 25 ha sido reemplazado por el aminoácido C (WO 2007/025719). Por tanto, en una realización más preferida, las unidades repetitivas en el polipéptido de seda consisten en el módulo AC: GPYGPGASAAAAAAGGYGPGCGQQ

(SEQ ID NO: 29), módulo Ak: GPYGPGASAAAAAAGGYGPGKGQQ (SEQ ID NO: 30), módulo CC:

GSSAAAAAAAASGPGGYGPENQGPCGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 31), módulo CK1:

GSSAAAAAAAASGPGGYGPENQGPKGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 32), módulo CK2:

GSSAAAAAAAASGPGGYGPKNQGPSGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 33), o módulo CKC:

GSSAAAAAAAASGPGGYGPKNQGPCGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 34).

Es incluso más preferido que el polipéptido de seda comprenda, consista esencialmente en, o consista en entre 2 y

80 unidades repetitivas, entre 3 y 80 unidades repetitivas, o entre 4 y 60 unidades repetitivas, preferiblemente entre 8 y 48 unidades repetitivas, o entre 10 a 40 unidades repetitivas y lo más preferiblemente entre 16 a 32 unidades repetitivas, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,

29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59,

60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 unidades repetitivas, que se seleccionan independientemente del módulo AC (SEQ ID NO: 29), módulo Ak (SEQ ID NO: 30), módulo CC (SEQ ID NO: 31), módulo CK1 (SEQ ID NO: 32), módulo CK2 (SEQ ID NO: 33) o módulo CKC (SEQ ID NO: 34). Cabe señalar que al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en el polipéptido de seda son unidades repetitivas idénticas (módulos).

Lo más preferido es que el polipéptido de seda comprenda, consista esencialmente en o consista en entre 2 y 80 unidades repetitivas, entre 3 y 80 unidades repetitivas o entre 4 y 60 unidades repetitivas, preferiblemente entre 8 y

48 unidades repetitivas, o entre 10 y 40 unidades repetitivas y lo más preferiblemente entre 16 y 32 unidades repetitivas, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,

60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 u 80 unidades repetitivas, que se seleccionan independientemente del módulo A (SEQ ID NO: 20) o variantes del mismo, módulo C (SEQ ID NO: 21) o variantes del mismo, módulo Q (SEQ ID NO: 22) o variantes del mismo, módulo S (SEQ ID NO: 25) o variantes del mismo, módulo

R (SEQ ID NO: 26) o variantes del mismo, módulo AC (SEQ ID NO: 29), módulo Ak (SEQ ID NO: 30), módulo CC (SEQ

ID NO: 31), módulo CK1 (SEQ ID NO: 32), módulo CK2 (SEQ ID NO: 33), o módulo CKC (SEQ ID NO: 34). Nuevamente, debe señalarse que al menos dos de las unidades repetitivas comprendidas en el polipéptido de seda son unidades repetitivas idénticas (módulos).

Los módulos A^k, C^C, C^K1, C^K2y C^KCtambién se puede combinar con los módulos A, C, Q, S o R, es decir, módulo (unidad repetitiva) A^kse puede combinar con el módulo (unidad repetitiva) C (es decir, la combinación A^kC), o módulo (unidad repetitiva) C^Cse puede combinar con el módulo (unidad repetitiva) C (es decir, la combinación C^CC), etc., con la condición de que el polipéptido de seda comprenda o consista en al menos dos unidades repetitivas que sean idénticas. Por lo tanto, el polipéptido de seda también puede comprender o consistir en los módulos (AQA^K)ⁿ, (QA^K)ⁿ, (QA^KQ)ⁿ, (A^KQA)ⁿ, (A^KQA^K)ⁿ, (CC^C)ⁿ, (CC^CC)ⁿ, (C^CC^CC)ⁿ, (CC^CC^C)ⁿ, (C^CQ)ⁿ, (QC^C)ⁿ, (QC^CQ)ⁿ, (C^CQC)ⁿ, (CQC^C)ⁿ,

(C^CQC^C)ⁿ, (CC^K1)ⁿ, (C^K1C)ⁿ, (C^K1CC)ⁿ, (CC^K1C)ⁿ, (C^{K C}C^{K C}C)ⁿ, (CC^{K C}C^{K C})ⁿ, (C^{K C}Q)ⁿ, (QC^Kc)ⁿ, (QC (QC^K2A^K)ⁿ, o (C^K1C^K2C)ⁿ, en donde n es al menos 2, preferiblemente 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 16 o 20. En cuanto a los términos "combinados entre sí" o "concatenados entre sí", se hace referencia a las definiciones proporcionadas anteriormente. Por ejemplo, el polipéptido de seda comprende o consiste en los módulos C¹⁶C^C, C^CC-^{i 6}, C^bC^cC⁸, C^bC^C8, C^C8C⁸, C⁴C^{C s}C⁴, C^C4C⁸C^C4, C^C(AQ)²⁴, o (AQ)²⁴C^C

El polipéptido de seda puede comprender además al menos una unidad no repetitiva (NR), por ejemplo, al menos 1,

2, 3, 4, 5, 6 o más unidades NR, preferiblemente una unidad NR. En el contexto de la presente invención, el término "unidad no repetitiva (NR)" se refiere a una región de aminoácidos presentes en un polipéptido de seda natural que no muestra un patrón de repetición obvio (unidad no repetitiva o unidad NR). Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la unidad no repetitiva corresponde a una secuencia de aminoácidos no repetitiva de polipéptidos de dragalina de origen natural, preferiblemente de ADF-3 (SEQ ID NO: 1) o ADF-4 (SEQ ID NO: 2), o a una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la misma. La secuencia de aminoácidos de la unidad no repetitiva también puede corresponder a una secuencia de aminoácidos no repetitiva de la viuda negra. Más preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la unidad no repetitiva corresponde a una secuencia de aminoácidos carboxi terminal no repetitiva de polipéptidos de dragalina de origen natural, preferiblemente de ADF-3 (SEQ ID NO: 1) o ADF-4 (SEQ

ID NO: 2), oa una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la misma. Aún más preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la unidad no repetitiva corresponde a una secuencia de aminoácidos carboxi terminal no repetitiva de ADF-3 (SEQ ID NO: 1) que comprende los aminoácidos 513 a 636, o de ADF-4 (SEQ ID NO: 2) que comprende los aminoácidos 302 a 410, o una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la misma.

En este sentido, "sustancialmente similar" significa un grado de identidad de aminoácidos de al menos 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59 %, 60 %, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94 %, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o incluso 99,9%, preferiblemente sobre 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o más aminoácidos, más preferiblemente sobre la longitud total de las respectivas secuencia de aminoácidos no repetitivas (terminal carboxi) de referencia de polipéptidos de dragalina de origen natural, preferiblemente de ADF-3 (SEQ ID NO: 1) o ADF-4 (SEQ ID NO: 2). Una "unidad no repetitiva" que tiene una secuencia de aminoácidos que es "sustancialmente similar" a una secuencia de aminoácidos no repetitiva (terminal carboxi) correspondiente dentro de un polipéptido de dragalina natural (es decir, unidad no repetitiva (terminal carboxi) de tipo salvaje), preferiblemente dentro de ADF-3 (SEQ ID NO: 1) o ADF-4 (SEQ ID NO: 2), también es similar con respecto a sus propiedades funcionales, por ejemplo un polipéptido de seda que comprende la "unidad no repetitiva sustancialmente similar" todavía tiene la capacidad de actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el polipéptido de seda que comprende la "unidad no repetitiva sustancialmente similar" sigue actuando como adhesivo, en particular sigue funcionando como adhesivo tisular, por ejemplo, realizando la prueba adhesiva o de tracción como se describe en la sección experimental.

Más preferiblemente, la unidad no repetitiva (NR) es NR3 (SEQ ID NO: 41) o variantes de la misma, NR4 (SEQ ID ^{NO: 42) o variantes de la misma,}N^r5 ^{(SEQ ID NO: 76) o variantes de la misma, o NR6 (SEQ ID NO: 77) o variantes}de la misma. La unidad NR3 (SEQ ID NO: 41) se basa en la secuencia de aminoácidos de ADF-3 de la araña Araneus diadematus y la unidad NR4 (SEQ ID NO: 42) se basa en la secuencia de aminoácidos de ADF-4 de la araña Araneus diadematus (WO 2006/008163). Además, la unidad NR5 (SEQ ID NO: 76) y la unidad NR6 (SEQ ID NO: 77) se deriva de Latrodectus hesperus.

Una variante de unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 difiere de la unidad de referencia NR3 (SEQ ID NO: 41), NR4 (SEQ ID NO: 42), NR5 (SEQ ID NO: 76), o NR6 (SEQ ID NO: 77) de la que se deriva hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25 o 30 cambios de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos (es decir, intercambios, inserciones, eliminaciones, truncamientos N-terminales y/o truncamientos C-terminales). Dicha variante de unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 puede caracterizarse alternativa o adicionalmente por un cierto grado de identidad de secuencia con la unidad de referencia NR3, NR4, NR5 o NR6 de la que se deriva. Por lo tanto, una variante de unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 tiene una identidad de secuencia de al menos 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o incluso 99,9% con la respectiva unidad de referencia NR3, NR4, NR5 o NR6. Preferiblemente, la identidad de secuencia es sobre un tramo continuo de al menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o más aminoácidos, preferiblemente sobre la longitud total de la unidad NR3, NR4, NR5, o NR6 de referencia respectiva.

Se prefiere particularmente que la identidad de secuencia es al menos el 80 % en toda la longitud, al menos el 85 % en toda la longitud, al menos el 90 % en toda la longitud, al menos el 95 % en toda la longitud, es al menos el 98% en toda la longitud, o es al menos el 99% en toda la longitud de la respectiva unidad de referencia NR3, NR4, NR5 o NR6. Además, se prefiere particularmente que la identidad de secuencia es al menos el 80 % en un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 aminoácidos, es al menos el 85 % en un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 aminoácidos, es al menos el 90% en un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 aminoácidos, es al menos 95 % sobre un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 aminoácidos, es al menos 98% sobre un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 o 80 aminoácidos, o es al menos el 99 % en un tramo continuo de al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70 u 80 aminoácidos de la unidad de referencia respectiva NR3, NR4, NR5 o NR6.

Un fragmento (o variante de eliminación) de una unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 o 60 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Además, la variante o fragmento de la unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 solo se considera una variante o fragmento de la unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 en el contexto de la presente invención, si las modificaciones con respecto a la secuencia de aminoácidos en los que se basa la variante o el fragmento no afectan negativamente a la capacidad de un polipéptido de seda para actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el polipéptido de seda que comprende una variante o fragmento de la unidad NR3, NR4, NR5 o NR6 todavía actúa como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular, por ejemplo, realizando la prueba adhesiva o de tracción como se describe en la sección experimental.

Preferiblemente, el polipéptido de seda se selecciona del grupo que consiste en ADF-3 (SEQ ID NO: 1) o variantes ^{del mismo, ADF-4}(S^eQ ^{ID NO: 2) o variantes del mismo, MaSp I (SEQ ID NO: 43) o variantes del mismo, MaSp II}(SEQ ID NO: 44) o variantes del mismo, (C)^m, (C)^mNR^z, NR^z(C)^m, (AQ)^„, (AQ)ⁿNR^z, NR^z(AQ)ⁿ, (Q^AQ)^o, NR^z(Q^AQ)^o, (Q^AQ)^oNRz, en donde m es un número entero de 8 a 48 (es decir, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 o 48), n es un número entero de 6 a 24 (es decir, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23 o 24), o es un número entero de 8 a 16 (es decir, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16), z es un número entero de 1 a 3 (es decir, 1, 2 o 3), y NR representa una unidad no repetitiva. Las fórmulas mencionadas anteriormente se definen mediante una de las siguientes: en la fórmula

yo) (C)^m, un número "m" de módulos C, a saber de 8 a 48 módulos C, representados por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 21, se combinan entre sí,

ii) (C)^mNR^z, un número "m" de módulos C, a saber de 8 a 48 módulos C, representados por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 21, se combinan entre sí, en donde dichos módulos C se combinan además con un número "z" de unidades no repetitivas (NR), a saber de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, ⁿR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77,

iii) NR^z(C)^m, un número "z" de unidades no repetitivas (NR), es decir, de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo, las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, NR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77, está presente (z = 1) o se combinan entre sí (z = 2 o 3), en donde dichas unidades no repetitivas (NR) se combinan además con un número "m" de módulos C, a saber, módulos de 8 a 48 C, representados por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 21,

iv) (AQ)ⁿ, un número "n" de combinaciones de módulos A y Q, a saber, de 6 a 24 combinaciones de módulos A y Q, en donde el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20 y el módulo Q está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22, se combinan entre sí,

v) (AQ)ⁿNR^z, un número "n" de combinaciones de módulos A y Q, a saber, de 6 a 24 combinaciones de módulos A y Q, en donde el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20 y el módulo Q está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22, se combinan entre sí, y en donde dichas combinaciones de módulos A y Q se combinan además con un número "z" de unidades no repetitivas (NR), a saber de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, NR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77,

vi) NR^z(AQ)ⁿ, un número "z" de unidades no repetitivas (NR), es decir, de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo, las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, NR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77, está presente (z = 1) o se combinan entre sí (z = 2 o 3), en donde dichas unidades no repetitivas (NR) se combinan además con un número "n" de A y Combinaciones de módulos Q, concretamente de 6 a 24 combinaciones de módulos A y Q, en las que el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20 y el módulo Q está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22,

vii) (QAQ)^o, un número "o" de combinaciones de módulos Q, A y Q, a saber, de 8 a 16 combinaciones de módulos Q, A y Q, en donde el módulo Q está representado por una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22 y el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20, se combinan entre sí,

viii) (QAQ)^oNR^z, un número "o" de combinaciones de módulos Q, A y Q, a saber, de 8 a 16 combinaciones de módulos Q, A y Q, en donde el módulo Q está representado por una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22 y el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20, se combinan entre sí, y en donde dichas combinaciones de módulos Q, A y Q se combinan además con un número "z" de unidades no repetitivas (NR), concretamente de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, NR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77, y

ix) NR^z(QAQ)^o, un número "z" de unidades no repetitivas (NR), es decir, de 1 a 3 unidades no repetitivas (NR), por ejemplo, las unidades no repetitivas (NR) NR3 representadas por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 41, NR4 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 42, NR5 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 76, o NR6 representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 77, está presente (z = 1) o se combinan entre sí (z = 2 o 3), en donde dichas unidades no repetitivas (NR) se combinan además con un número "o" de Q, combinaciones de módulos A y Q, a saber de 8 a 16 combinaciones de módulos Q, A y Q, en las que el módulo Q está representado por una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 22 y el módulo A está representado por la secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO: 20

Más preferiblemente, el polipéptido de seda es C-^I6NR4, C³²NR4, (AQ)12NR3, (AQ)²⁴NR3, (AQ)¹², (AQ)²⁴, C¹⁶, C³², NR4C¹⁶NR4, NR4C³²NR4, NR3C-^I6NR3, NR3C³²NR3, NR4(AQ)-^,2NR4, NR4(AQ)²⁴NR4, NR3(AQ)-^,2NR3, NR3(AQ)²⁴NR3, (QAQ)b o (QAQ)¹⁶.

Una variante de ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II difiere de la referencia (tipo salvaje) ADF-3 (SEQ ID NO: 1), ADF-4 (SEQ ID NO: 2), MaSp I (SEQ ID NO: 43) o MaSp II (SEQ ID NO: 44) polipéptido del que deriva hasta 150 (hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, or 150) cambios de aminoácido en la secuencia de aminoácidos (es decir, sustituciones, inserciones, eliminaciones, truncamientos N-terminales y/o truncamientos C-terminales). Dicha variante puede caracterizarse alternativa o adicionalmente por un cierto grado de identidad de secuencia con el polipéptido de referencia (de tipo salvaje) del que se deriva. Por lo tanto, una variante de ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp Iⁱtiene una identidad de secuencia de al menos 50 %, 51 %, 52 %, 53 %, 54 %, 55 %, 56 %, 57 %, 58 %, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75 %, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o incluso 99,9 % al polipéptido de referencia (tipo salvaje) ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II respectivo. Preferiblemente, la identidad de secuencia es sobre un tramo continuo de al menos 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 150, 180, 200, 250, 300, 350, 400, o más aminoácidos, preferiblemente en toda la longitud del polipéptido de referencia (tipo salvaje) ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II respectivo.

Se prefiere particularmente que la identidad de secuencia es al menos el 80 % en toda la longitud, al menos el 85 % en toda la longitud, al menos el 90 % en toda la longitud, al menos el 95 % en toda la longitud, es al menos el 98 % en toda la longitud, o es al menos el 99 % en toda la longitud del polipéptido de referencia respectivo (de tipo salvaje) ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II. Es además particularmente preferido que la identidad de secuencia es al menos el 80 % en un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos, es al menos el 85 % en un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos, es al menos el 90% en un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos ácidos, es al menos el 95% en un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos, es al menos el 98% en un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos, o es al menos el 99% sobre un tramo continuo de al menos 20, 30, 50, 100, 150, 200, 250 o 300 aminoácidos del polipétido de referencia respectiva (tipo salvaje) ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II.

Un fragmento (o variante de eliminación) del polipétido ADF-3 (SEQ ID NO: 1) tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 120, 150, 170, 200, 220, 250, 270, 300, 320, 350, 370, 400, 420, 450, 470, 500, 520, 550, 570, 600 o 610 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Un fragmento (o variante de eliminación) del polipéptido ADF-4 (SEQ ID NO: 2) tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 120, 150, 170, 200, 220, 250, 270, 300, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, o 390 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Un fragmento (o variante de eliminación) del polipéptido MaSp I (SEQ ID NO: 43) tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 620, 640, 660, 670, 680, o 690 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Un fragmento (o variante de eliminación) del polipéptido MaSp II (SEQ ID NO: 44) tiene preferiblemente una eliminación de hasta 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 520, 540, 560 o 570 aminoácidos en su N-terminal y/o en su C-terminal. La eliminación también puede ser interna.

Además, la variante o fragmento de ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II solo se considera una variante o fragmento de ADF-3, ADF-4, MaSp I o MaSp II en el contexto de la presente invención, si las modificaciones con respecto a la secuencia de aminoácidos en donde se basa la variante o el fragmento no afectan negativamente a la capacidad del polipéptido de seda para actuar como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular. El experto en la técnica puede evaluar fácilmente si el polipéptido de seda que comprende una variante o fragmento de la unidad NR o NR4 todavía actúa como adhesivo, particularmente para funcionar como adhesivo tisular, por ejemplo, realizando la prueba adhesiva o de tracción como se describe en la sección experimental.

En una realización preferida de la invención, el polipéptido de seda, preferiblemente el polipéptido de seda de araña, más preferiblemente el polipéptido de seda de ampolla mayor tal como polipéptido de seda de dragalina, polipéptido de seda de ampolla menor o polipéptido de seda flageliforme de una araña de red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), el polipéptido de seda de insecto, o el polipéptido de seda de byssus de mejillón comprende, preferiblemente unido (por ejemplo, enlazado o acoplado covalentemente) al N-terminal y/o C-terminal, un péptido capaz de potenciar el efecto adhesivo que comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAM^pque comprende o que consiste en un módulo que contiene RGD, preferiblemente un RGD lineal, más preferiblemente un RGD lineal que se selecciona del grupo que consiste en RGDS (SEQ ID NO: 50), GRGDS (SEQ iD NO: 51), GRGDY (SEQ ID NO: 52), GGSGGRGDSPG (SEQ ID NO: 53), RGDSPASSKP (SEQ ID NO: 54), y CGGNGEPRGDYRAY (SEQ ID NO: 55), o un RGD cíclico, más preferiblemente un RGD cíclico seleccionado del grupo que consiste en c(RGDfK), c(RGDfC) y c(RGDfE).

En una realización más preferida de la invención, el polipéptido de seda, preferiblemente el polipéptido de seda de araña, más preferiblemente el polipéptido de seda de ampolla mayor tal como polipéptido de seda de dragalina, polipéptido de seda de ampolla menor o polipéptido de seda flageliforme de una araña de red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), el polipéptido de seda de insecto, o el polipéptido de seda de byssus de mejillón comprende, preferiblemente unido (por ejemplo, enlazado o acoplado covalentemente) al N-terminal y/o C-terminal, más preferiblemente unido (por ejemplo, enlazado o acoplado covalentemente) al C-terminal-terminal, un péptido capaz de potenciar el efecto adhesivo que comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende o consiste en un módulo que contiene GGSGGRGDSPG (SEQ ID NO: 53) (véase, por ejemplo, Figura 1B).

En otra realización más preferida de la invención, el polipéptido de seda, preferiblemente el polipéptido de seda de araña, más preferiblemente el polipéptido de seda de ampolla principal tal como polipéptido de seda de dragalina, polipéptido de seda de ampolla menor o polipéptido de seda flageliforme de una araña de red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), el polipéptido de seda de insecto, o el polipéptido de seda de byssus de mejillón comprende un TAG amino terminal y/o carboxi terminal, preferiblemente un TAG amino terminal, seleccionado del grupo que consiste en TAGCYS1 (SEQ ID NO: 35), TAGCYS2 (SEQ ID NO: 36), TAGCYS3 (SEQ ID NO: 37), TAGLYS1 (SEQ ID NO: 38) y TAGLYS2 (SEQ ID NO: 39), preferiblemente TAGCYS3 (SEQ ID NO: 37), y además comprende un péptido capaz de potenciar el efecto adhesivo que comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende o consiste en un módulo que contiene c(RGDfK), c(RGDfC) o c(RGDfE), preferiblemente c(RGDfK). Dicha(s) etiqueta(s) está(n) preferiblemente unida(s) (por ejemplo, unida o acoplada covalentemente) al N-terminal-terminal y/o al C-terminal-terminal de dicho polipéptido de seda, y/o dicho péptido está preferiblemente unido (por ejemplo, enlazado o acoplado covalentemente) a dichas TAGS. Se prefiere particularmente que dicho péptido se acople covalentemente al grupo tiol de un residuo de cisteína comprendido en el TAG amino terminal y/o carboxi terminal seleccionado del grupo que consiste en TAGCYS1 (SEQ ID NO: 35), TAGCYS2 (SEQ ID NO: 36) y TAGCYS3 (SEQ ID NO: 37) (véase, por ejemplo, la Figura 1A).

En otra realización preferida de la invención, el polipéptido de seda, preferiblemente el polipéptido de seda de araña, más preferiblemente el polipéptido de seda de ampolla principal tal como un polipéptido de seda de dragalina, polipéptido de seda de ampolla menor o polipéptido de seda flageliforme de una araña de red orbe (por ejemplo Araneidae o Araneoids), el polipéptido de seda de insecto, o el polipéptido de seda de byssus de mejillón comprende, preferiblemente unido al N-terminal y/o C-terminal, un péptido capaz de potenciar el efecto adhesivo que comprende al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP que comprende o consiste en un módulo seleccionado del grupo que consiste en (i) GER, preferiblemente GFOGER (SEQ ID NO: 56), GLOGER (SEQ ID NO: 57), GASGER (SEQ ID NO: 58), GROGER (SEQ ID NO: 59), GMOGER (SEQ ID NO: 60), GLSGER (SEQ ID NO: 61), o GAOGER (SEQ ID NO: 62), (ii) GEK, preferiblemente GFOGEK (SEQ ID NO: 63), GLOGEK (SEQ ID NO: 63). 64), GASGEK (SEQ ID NO: 65), GROGEK (SEQ ID NO: 66), GMOGEK (SEQ ID NO: 67), GLSGEK (SEQ ID NO: 68), o GAOGEK (SEQ ID NO: 69), y (iii) GEN, preferiblemente GLOGEN (SEQ ID NO: 69). 70) o GLKGEN (SEQ ID NO: 71). La "O" en las secuencias anteriores se refiere a "hidroxiprolina".

El efecto adhesivo mencionado anteriormente está mediado preferiblemente por la unión (por ejemplo, unión no covalente, particularmente unión no covalente y reversible) de dicho péptido a una integrina como proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). Adicional o alternativamente, los polipéptidos de seda mencionados anteriormente son polipéptidos de seda recombinantes.

El polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se puede proporcionar en varias composiciones preferenciales que incluyen, pero no se limitan a, composiciones sólidas como composiciones en polvo, composiciones líquidas como composiciones acuosas, por ejemplo, soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas, aerosoles como aerosoles secos o líquidos, rociadores de bomba y composiciones pastosas. Estas composiciones que comprenden el polipéptido de autoensamblaje pueden comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico.

El polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, puede proporcionarse además como película, gel, particularmente hidrogel, espuma, malla, andamio, parche, tela no tejida o capa, particularmente una capa de cobertura o recubrimiento. La película, el gel, particularmente el hidrogel, la espuma, la malla, el andamio, el p'arche, el material no tejido o la capa, particularmente la capa de cobertura o revestimiento, que comprende el polipéptido de autoensamblaje puede comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos.

El polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, también se puede aplicar a varios objetos preferenciales que incluyen, pero no se limitan a, mallas, andamios, parches, telas no tejidas e implantes, por ejemplo, implantes dentales, implantes de microchip, implantes de tejidos blandos tales como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo, implantes de cóclea). Debido a esta aplicación, los objetos que incluyen, pero no se limitan a, mallas, andamios, parches, telas no tejidas e implantes, por ejemplo, implantes dentales, implantes de microchip, implantes de tejidos blandos como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo implantes de cóclea) pueden estar cubiertos o revestidos, por ejemplo parcialmente o completamente cubierto o revestido, con el polipéptido de autoensamblaje.

Se puede aplicar a estos objetos mediante recubrimiento por inmersión, rociado o goteo. Para el recubrimiento por inmersión, los objetos preferenciales se sumergen en composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo soluciones acuosas, que comprenden el polipéptido de autoensamblaje. Además, para pulverizar, las composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo las soluciones acuosas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje se pulverizan sobre objetos preferentes. Además, para el goteo, las composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo las soluciones acuosas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje se dejan caer sobre objetos preferentes. Estas composiciones líquidas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje pueden comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico.

El término "compuesto farmacéutico", como se usa en el presente documento, se define a continuación. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, un compuesto antiviral, un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un factor de crecimiento, una enzima, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un compuesto sedante, una proteína, particularmente una glicoproteína o lipoproteína, un polisacárido y mezclas de los mismos.

Por lo tanto, en una realización preferida de la presente invención, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, es para uso como adhesivo tisular, en donde el polipéptido de autoensamblaje se proporciona (i) como película, gel, particularmente hidrogel, espuma, malla, andamio, parche, no tejido o capa, en particular una capa de cobertura o recubrimiento, o (ii) comprendido en y/o sobre un objeto, por ejemplo, una malla, andamio, parche, no tejido o implante, por ejemplo, implante dental, implante de microchip, implante blando implante de tejido como implante de silicona o implante con una superficie de silicona (por ejemplo, implante de cóclea). Dicho objeto (por ejemplo, malla, armazón, parche o material no tejido) puede insertarse en la herida (por ejemplo, insertarse en el corte o espacio de la herida) y puede dejarse en la herida.

En realizaciones preferidas de la invención, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se utiliza como adhesivo tisular.

i) en el tratamiento de una herida,

ii) en el tratamiento de una herida suturada,

iii) en la reducción o prevención de la fibrosis, en particular la fibrosis capsular, y/o en la reducción o prevención de la cicatrización,

iv) en la fijación de trasplantes, preferiblemente trasplantes de tejidos o trasplantes de órganos, más preferiblemente trasplantes de piel,

v) en la fijación de dispositivos médicos, preferiblemente implantes, más preferiblemente implantes de silicona o implantes con superficie de silicona, y/o

vi) en intervenciones quirúrgicas.

Como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se utiliza como adhesivo tisular en el tratamiento de una herida. Los inventores de la presente invención encontraron sorprendentemente que el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, puede usarse para volver a conectar capas de tejido de una herida entre sí. En particular, el adhesivo tisular puede proporcionar una conexión estrecha, especialmente ajustada, entre capas de tejido o, en el caso de que las capas de tejido estén distantes entre sí, el adhesivo tisular puede llenar el espacio entre las capas de tejido, reemplazar las capas de tejido faltante y/o unir las capas de tejido faltante. Preferiblemente, el espacio tiene un tamaño de no más de 1 cm, más preferiblemente de no más de 0,75 cm, incluso más preferiblemente de no más de 0,5 cm, lo más preferiblemente de no más de 0,25 cm, por ejemplo de no más de 0.01, 0.015, 0.02, 0.025, 0.0.3, 0.035, 0.04, 0.045, 0.05, 0.055, 0.06, 0.065, 0.07, 0.075, 0.08, 0.085, 0.09, 0.095, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45, 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95, o 1 cm.

El término "herida", como se usa aquí, incluye daños a cualquier tejido en un paciente. Como se usa en el presente documento, el término "paciente" significa cualquier mamífero o ave que pueda beneficiarse del adhesivo tisular como se describe en el presente documento. Preferiblemente, el paciente se selecciona del grupo que consiste en un animal de laboratorio (que incluye, por ejemplo, un ratón o una rata), un animal doméstico (que incluye, por ejemplo, una cobaya, conejo, pollo, pavo, cerdo, oveja, cabra, camello, vaca, caballo, burro, gato o perro) y primates (incluyendo, por ejemplo, un chimpancé y un ser humano). Se prefiere particularmente que el paciente sea un ser humano. Alternativamente, el paciente se selecciona del grupo que consiste en un ser humano y un animal.

La herida puede estar comprendida en la superficie del cuerpo de un paciente, por ejemplo, un ser humano (es decir, una herida superficial), o puede estar comprendida dentro del cuerpo de un paciente, por ejemplo, un ser humano (es decir, una herida interna). La herida puede haber sido causada por cualquier medio, incluidos, entre otros, infecciones, inflamaciones, intervenciones quirúrgicas, componentes externos como objetos punzantes, por ejemplo escalpelos, cuchillos o clavos, y circunstancias externas, tales como accidentes, por ejemplo accidentes de bicicleta, vehículo motorizado o automóvil.

Se prefiere particularmente que la herida se seleccione del grupo que consiste en herida tópica, herida profunda, herida abierta, herida de arma blanca, herida punzante, herida de penetración, incisión quirúrgica, laceración, corte y traumatismo (por ejemplo, traumatismo cerrado o agudo). El término "herida tópica", como se usa en el presente documento, se refiere a una herida en la superficie del tejido. El término "herida punzante", como se usa en el presente documento, se refiere a una herida causada por un objeto que perfora tejido(s), por ejemplo múltiples (diferentes) tejidos, en particular un órgano, por ejemplo piel, tal como un clavo o una aguja. El término "herida de penetración", como se usa aquí, se refiere a una herida causada por un objeto que entra y sale del tejido(s), por ejemplo múltiples múltiples (diferentes), en particular un órgano, por ejemplo piel, tal como un clavo o una aguja. El término "incisión quirúrgica", como se usa en este documento, se refiere a una herida causada por un objeto afilado, por ejemplo un bisturí o un cuchilla, durante la cirugía. El término "trauma", como se usa en este documento, se define como una lesión causada por una fuerza física, por ejemplo incluyen las consecuencias de los accidentes automovilísticos.

La herida puede estar situada en o sobre la superficie de un tejido. El tejido puede seleccionarse del grupo que consiste en tejido conjuntivo, tejido muscular, tejido nervioso, tejido epitelial y combinaciones de los mismos, por ejemplo múltiples (diferentes) tejidos. Un órgano, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso, intestino, recto, esófago, pulmón, bazo, cerebro, corazón, riñón, hígado, piel, glándulas tales como la linfa y la tiroides, ojo o páncreas, está, por ejemplo, compuesto de múltiples (diferentes) tejidos. Así, la herida también puede estar situada en un órgano, particularmente abarcando múltiples (diferentes) tejidos o capas de tejido. Particularmente, la herida es una lesión de la piel.

En realizaciones preferidas de la invención, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se usa como adhesivo tisular en (i) el tratamiento tópico de un sitio de herida y/o (ii) el tratamiento de un sitio de herida interna, por ejemplo, en caso de heridas más profundas o durante procedimientos quirúrgicos.

Como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se utiliza como adhesivo tisular en el tratamiento de una herida suturada. Los inventores de la presente invención encontraron sorprendentemente que el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se puede usar para sellar aún más una herida suturada. En este caso, el polipéptido de autoensamblaje que actúa como un adhesivo tisular puede fijar y/o pegar adicionalmente las capas de tejido suturadas entre sí. Esto puede fortalecer el efecto de la sutura de la herida, prevenir el sangrado posterior y/o evitar infecciones posteriores, por ejemplo infecciones bacterianas o virales. Las heridas suturadas que se tratan con el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, exhiben ventajosamente cicatrización reducida o nula y/o muestran una cicatrización acortada. Se prefiere particularmente que la herida suturada se seleccione del grupo que consiste en herida tópica, herida profunda, herida abierta, herida punzante, herida punzante, herida de penetración, incisión quirúrgica, laceración, corte y traumatismo (por ejemplo, traumatismo cerrado o traumatismo agudo).

Como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se utiliza como adhesivo tisular en la reducción o prevención de la fibrosis, en particular la fibrosis capsular, y/o en la reducción o prevención de la cicatrización. Preferiblemente, las heridas que se pegan con el polipéptido de autoensamblaje, particularmente el polipéptido de seda, como se describe en el presente documento, muestran una cicatrización reducida o nula y/o muestran una fibrosis reducida o nula, particularmente fibrosis capsular.

Además, como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, es para uso como adhesivo tisular en la fijación de trasplantes, preferiblemente trasplantes de tejidos o trasplantes de órganos, más preferiblemente trasplantes de piel. Los inventores encontraron sorprendentemente que el polipéptido de autoensamblaje se puede usar en la fijación de trasplantes, preferiblemente trasplantes de tejidos o trasplantes de órganos, más preferiblemente trasplantes de piel. En particular, los trasplantes de piel tienen la desventaja de que tienden a deslizarse después de la aplicación. Esto es causado especialmente por los movimientos del paciente que no pueden obviarse por completo. En estas circunstancias, el correcto proceso de curación se retrasa o incluso se impide. Los trasplantes de piel se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en trasplantes de piel autólogos (también denominados autoinjertos), trasplantes de piel isogénicos (también denominados isoinjertos o sininjertos), trasplantes de piel alogénicos (también denominados aloinjertos), trasplantes de piel xenogénicos (también denominados como xenoinjertos o heteroinjertos) y trasplantes de piel protésica (también denominados injertos protésicos). El significado de estos términos es claro para el experto en la técnica. Para arreglar los trasplantes, por ejemplo trasplantes de tejidos o trasplantes de órganos tales como trasplantes de piel, en tejidos o en la cavidad corporal, el área superficial de los trasplantes, por ejemplo los trasplantes de tejidos o trasplantes de órganos tales como trasplantes de piel, que estarán en contacto con el tejido o la cavidad corporal pueden cubrirse o recubrirse, por ejemplo parcialmente o completamente cubierto o revestido, con el polipéptido de autoensamblaje. Como alternativa o adicionalmente, el tejido o la cavidad corporal que estará en contacto con los trasplantes, por ejemplo los trasplantes de tejidos o los trasplantes de órganos, como los trasplantes de piel, pueden estar cubiertos o revestidos, por ejemplo parcialmente o completamente cubierto o revestido, con el polipéptido de autoensamblaje.

Además, como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, se utiliza como adhesivo tisular en la fijación de dispositivos médicos tales como implantes. Sorprendentemente, los inventores encontraron que el polipéptido de autoensamblaje, como se describe en el presente documento, puede usarse para conectar capas de tejido a superficies artificiales, por ejemplo de dispositivos médicos como implantes, o se puede utilizar para conectar superficies artificiales, por ejemplo de dispositivos médicos como implantes, a capas de tejido. Para ello, las capas de tejido o las superficies artificiales, por ejemplo de los dispositivos médicos, como los implantes, se pueden cubrir o revestir, por ejemplo parcialmente o completamente cubierto o revestido, con el polipéptido de autoensamblaje. De ese modo, los dispositivos médicos, tales como implantes, se fijan, particularmente se incrustan o se incorporan, en el tejido.

El término "dispositivo médico", como se usa en este documento, se refiere a un instrumento, aparato, implante u otro artículo similar o relacionado, que está destinado a ser utilizado en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones, o en la cura, mitigación, tratamiento o prevención de enfermedades, o que tiene la intención de afectar la estructura o cualquier función del cuerpo y que no logra ninguno de los propósitos primarios previstos a través de la acción química dentro o sobre el cuerpo. En particular, los dispositivos médicos logran su acción principal por medios físicos, fisicoquímicos o mecánicos. Se prefiere que los dispositivos médicos se seleccionen del grupo que consiste en implantes, preferiblemente implantes dentales, implantes de microchip, implantes de tejidos blandos como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo, implantes de cóclea), marcapasos cardíacos, bombas, preferiblemente bombas de insulina, cánula, preferiblemente cánula para el drenaje de licor, icor o sangre, depósitos, preferiblemente depósitos de fármacos, fijaciones, preferiblemente fijaciones internas o externas ("fixateur externe" en francés), prótesis, preferiblemente neuroprótesis, y sensores, preferiblemente sensores para medir la temperatura corporal, la presión arterial o la frecuencia del pulso. Los implantes de silicona o los implantes con una superficie de silicona también pueden ser implantes mamarios.

El dispositivo médico puede ser un dispositivo médico subdérmico o transdérmico, por ejemplo, un implante transdérmico o subdérmico. Un dispositivo médico subdérmico es un dispositivo que está completamente enterrado en la piel, mientras que un dispositivo médico transdérmico se coloca debajo de la piel, pero también sobresale de ella.

Además, como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje como se describe en el presente documento es para uso en intervenciones quirúrgicas. También se prefiere particularmente que las intervenciones quirúrgicas se seleccionen del grupo que consiste en intervenciones quirúrgicas cardiovasculares, intervenciones quirúrgicas cardiotorácicas, intervenciones quirúrgicas gastrointestinales, intervenciones quirúrgicas neumotóracas, intervenciones neuroquirúrgicas, intervenciones quirúrgicas urológicas, intervenciones quirúrgicas dentales, intervenciones quirúrgicas reconstructivas, intervenciones quirúrgicas en el oído, intervenciones quirúrgicas en la nariz, intervenciones quirúrgicas en el área de la garganta, fístulas linfáticas, biliares y cerebroespinales, fugas de aire durante intervenciones quirúrgicas torácicas y pulmonares, intervenciones quirúrgicas ortopédicas, intervenciones quirúrgicas ginecológicas, intervenciones quirúrgicas cosméticas e intervenciones quirúrgicas vasculares. Se prefiere particularmente que las intervenciones quirúrgicas cosméticas o reconstructivas incluyan la inserción de implantes, preferiblemente implantes dentales, implantes de tejidos blandos tales como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo, implantes de cóclea). Los implantes de silicona o los implantes con una superficie de silicona también pueden ser implantes mamarios.

El polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular puede usarse como parte de una composición tal como una solución acuosa que tenga una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5.9, o de entre 5,4 y 5,9. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar aumentando la temperatura de la composición, tal como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 20°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar disminuyendo el pH de la composición, como una solución acuosa, de 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH del tejido a pegar. El tejido que se va a pegar puede tener un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como de entre 4,5 y 6,5, de entre 4,8 y 5.9, o de entre 5,4 y 5,9.

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

Preferiblemente, el alimento es carne. Más preferiblemente, la carne es cerdo, ternera, pollo o pavo.

En un tercer aspecto, la presente invención se relaciona con el uso cosmético de un polipéptido de autoensamblaje para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, mucosas y/o cabello, particularmente sobre superficies cutáneas, superficies mucosas y/o superficies capilares, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención.

El término "compuesto cosmético (también designado como sustancia cosmética)", como se usa en el presente documento, se refiere a una sustancia destinada principalmente para uso externo en la superficie del cuerpo, por ejemplo, la superficie del cuerpo humano, o en la cavidad bucal, por ejemplo, de un ser humano, para la limpieza. e higiene personal para alterar la apariencia o el olor corporal o para transmitir olor. En particular, se entiende que una sustancia cosmética es una molécula que muestra un cierto efecto predecible. Tal molécula de efecto puede ser, por ejemplo, una molécula proteinácea (por ejemplo, una enzima) o una molécula no proteinácea (por ejemplo, un tinte, pigmento, agente fotoprotector, vitamina, provitamina, un antioxidante, acondicionador o un compuesto que comprende iones metálicos).

Entre las moléculas proteináceas, se prefieren las enzimas. Ejemplos de enzimas útiles incluyen, pero no se limitan a, oxidasas, peroxidasas, proteasas, glucanasas, mutanasas, tirosinasas, enzimas que se unen a metales, lactoperoxidasas, lisozimas, aminoglucosidasas, glucosa oxidasas, superóxido dismutasas, fotoliasas, proteínas que se unen a metales pesados, T4 endonucleasas, catalasas y reductasas tales como tiorredoxina-reductasas. También se prefieren las sustancias proteínicas que no poseen una función enzimática. Ejemplos de moléculas proteináceas no enzimáticas incluyen, pero no se limitan a, péptidos antimicrobianos, hidrofobinas, colágenos, queratinas, proteínas que se unen a metales pesados, proteínas que se unen a olores, proteínas que se unen a celulosa, proteínas que se unen a almidón y proteínas que se unen a queratina. Otras moléculas proteináceas preferidas son, por ejemplo, hidrolizados de proteínas, por ejemplo hidrolizados de proteínas de origen vegetal o animal. Dichos hidrolizados de proteínas pueden ser de origen marino.

Entre las moléculas no proteináceas, se prefieren los agentes protectores contra los rayos UV, los antioxidantes, las vitaminas, las provitaminas y sus precursores y sus derivados, los colorantes, los polisacáridos o las fragancias. El término "agente protector de UV", como se usa en este documento, se refiere a una sustancia orgánica que puede absorber longitudes de onda específicas en el rango de longitudes de onda UV. La energía absorbida puede luego emitirse en forma de radiación de onda más larga, por ejemplo calor. El término "antioxidante", como se usa en este documento, se refiere a un compuesto que interrumpe la cadena de reacciones fotoquímicas desencadenadas por la radiación UV al penetrar en la piel. Ejemplos típicos de antioxidantes incluyen, pero no se limitna a, superóxido dismutasa, catalasa, tocoferol (vitamina E), ácido ascórbico (vitamina C), coenzima Q10 (ubiquinano) y quiniona. Ejemplos de vitaminas, provitaminas y sus precursores incluyen, pero no se limitan a, p-caroteno (provitamina de la vitamina A), ácido ascórbico (vitamina C), tocoferol (vitamina E), las vitaminas, provitaminas y sus precursores de la vitamina B. grupo que abarca la vitamina Bi (tiamina), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B3 (ácido nicotínico o nicotinamida), vitamina B5 (ácido pantoténico y pantenol), vitamina B6 (5-hidroximetil-2-metilpiridin-3-ol, también conocido como piridoxina, piridoasamina o piridoxal) y vitamina B7 (biotina). Ejemplos de tintes incluyen, pero no se limitan a, tintes alimentarios, tintes semipermanentes, tintes permanentes, tintes reactivos y tintes de oxidación. Los colorantes útiles se describen, por ejemplo, en Rowe Colour Index, 3rd edition, Society of Dyers and Colourists, Bradford, Inglaterra, 1971. El uso de la proteína de autoensamblaje permite particularmente el pegado de tatuajes tales como tatuajes temporales en superficies de la piel.

Además, los compuestos cosméticos pueden ser proteínas, en particular glicoproteínas o lipoproteínas, fragancias, células madre, compuestos reflectantes de infrarrojos, compuestos absorbentes de infrarrojos, mezclas de compuestos reflectantes de infrarrojos y compuestos absorbentes de infrarrojos, aceites de argán, ácidos hialurónicos, extractos de limo marino, gelee royale, extractos de oro, medimiel, aceites de sacha inchi o alatoninas.

Más preferiblemente, los compuestos cosméticos son tintes, fragancias, células madre, enzimas, vitaminas, agentes protectores de UV o antioxidantes.

Como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje se usa para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, las mucosas y/o el cabello. La piel se puede seleccionar del grupo que consiste en piel facial, la piel de los brazos (por ejemplo, la parte superior o inferior de los brazos), la piel de los pies y la piel de las piernas, la mucosa se puede seleccionar del grupo que consiste en, mucosa oral, mucosa nasal, mucosa lingual, mucosa labial y mucosa palatina, y/o el pelo puede seleccionarse del grupo que consiste en pelo del cuero cabelludo, pestañas, pelo de los brazos, pelo de los pies, pelo de las piernas, vello facial y vello púbico.

El polipéptido de autoensamblaje se puede utilizar como parte de una composición tal como una solución acuosa que tiene una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o entre 5,4 y 5.9 para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre piel, mucosas y/o cabello. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar aumentando la temperatura de la composición, como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 20°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar disminuyendo el pH de la composición, como una solución acuosa, de 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH de la piel, mucosas y/o cabello a tratar. La piel, mucosas y/o cabello a tratar puede tener un pH entre 4,5 y 7,0, como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o entre 5,4 y 5,9.

También se describe en el presente documento, pero no está abarcado por la presente invención, un polipéptido de autoensamblaje para uso en el pegado de uno o más compuestos farmacéuticos sobre tejido, piel, mucosa y/o cabello.

En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención.

El término "compuesto farmacéutico", como se usa aquí, se refiere a cualquier sustancia biológica o química, particularmente sustancia farmacológica, metabólica o inmunológica, que puede usarse en el tratamiento, cura, profilaxis, prevención o diagnóstico de una condición patológica, por ejemplo una enfermedad o trastorno, o que pueda utilizarse para mejorar el bienestar físico, psíquico o mental. Por consiguiente, el término "compuesto farmacéutico" incluye cualquier compuesto con efectos terapéuticos, diagnósticos o profilácticos. Por ejemplo, el compuesto farmacéutico puede ser un compuesto que afecte o participe en el crecimiento tisular, el crecimiento celular, la diferenciación celular, un compuesto que pueda invocar una acción biológica como una respuesta inmunitaria, o un compuesto que pueda desempeñar cualquier otro papel en uno o más procesos biológicos. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, como un compuesto antibacteriano (por ejemplo, un antibiótico), un compuesto antiviral o un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un anticoagulante, un compuesto antirreumático, un compuesto antipsoriático, un compuesto sedante, un relajante muscular, un compuesto contra la migraña, un antidepresivo, un repelente de insectos, un factor de crecimiento, una hormona, un antagonista hormonal, un antioxidante, una proteína, como una glicoproteína, una lipoproteína o una enzima (por ejemplo, hialuronidasas), un polisacárido, un eliminador de radicales libres, un compuesto radioterapéutico, un compuesto de terapia fotodinámica, un colorante como un tinte fluorescente y un agente de contraste.

Como se mencionó anteriormente, el polipéptido de autoensamblaje se usa para pegar uno o más compuestos farmacéuticos sobre tejido, piel, mucosa y/o cabello. El tejido puede seleccionarse del grupo que consiste en tejido conjuntivo, tejido muscular, tejido nervioso, tejido epitelial y combinaciones de los mismos (por ejemplo, múltiples (diferentes) tejidos tales como de un órgano, por ejemplo, estómago, intestino delgado, intestino grueso, intestino, recto, esófago, pulmón, bazo, cerebro, corazón, riñón, hígado, piel, glándulas suprarrenales, glándulas linfáticas y tiroideas, ojos o páncreas), la piel puede seleccionarse del grupo consistente en piel facial, la piel del brazos (por ejemplo, la parte superior o inferior de los brazos), la piel de los pies y la piel de las piernas, la mucosa puede seleccionarse del grupo que consiste en mucosa oral, mucosa nasal, mucosa lingual, mucosa labial, mucosa palatina, mucosa alveolar, mucosa intestinal, mucosa bronquial, mucosa gástrica, mucosa intestinal, mucosa ruminal y mucosa estomacal, y/o el cabello puede seleccionarse del grupo que consiste en cabello del cuero cabelludo, pestañas, cabello de los brazos, cabello de los pies, cabello de las piernas, vello facial y vello púbico. En particular, el tejido puede ser un tejido perioperatorio o posoperatorio.

El polipéptido de autoensamblaje se puede utilizar como parte de una composición tal como una solución acuosa que tiene una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o entre 5,4 y 5.9 para pegar uno o más compuestos farmacéuticos sobre tejidos, piel, mucosas y/o cabello. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar aumentando la temperatura de la composición, como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 20°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar disminuyendo el pH de la composición, como una solución acuosa, de 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH del tejido, piel, mucosas y/o cabello a tratar. El tejido, piel, mucosa y/o cabello a tratar puede tener un pH de entre 4,5 y 7,0 como de entre 4,5 y 6,5, de entre 4,8 y 5,9, o de entre 5,4 y 5,9.

El aspecto anterior puede redactarse alternativamente de la siguiente manera: En el presente documento se describe un método para usar un polipéptido de autoensamblaje para pegar uno o más compuestos farmacéuticos en tejido, piel, mucosa y/o cabello.

También se describe aquí, pero no está abarcada por la presente invención, una combinación de aplicación (o simplemente a una combinación) que comprende

i) un polipéptido de autoensamblaje, y

ii) un factor que potencia el autoensamblaje

para su uso como adhesivo tisular.

El término "combinación de aplicación", como se usa en el presente documento, se refiere a una combinación de al menos dos componentes, un polipéptido de autoensamblaje y un factor que potencia el autoensamblaje, que se puede aplicar a las superficies a pegar. La combinación de aplicación se puede aplicar a tejido para que funcione como adhesivo de tejido, particularmente para (re)conectar capas de tejido entre sí. También se puede aplicar a la piel, mucosa y/o cabello para pegar uno o más compuestos cosméticos a estas superficies o al tejido, piel, mucosa y/o cabello para pegar uno o más compuestos farmacéuticos a estas superficies.

En cuanto a la definición de los términos "polipéptido de autoensamblaje", "autoensamblado" y "adhesivo tisular", se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. El tejido se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en tejido conjuntivo, tejido muscular, tejido nervioso, tejido epitelial y combinaciones de los mismos, por ejemplo múltiples (diferentes) tejidos. Un órgano, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso, intestino, recto, esófago, pulmón, bazo, cerebro, corazón, riñón, hígado, piel, glándulas suprarrenales, linfa y glándulas tiroideas, ojo o páncreas, está, por ejemplo, compuesto de múltiples (diferentes) tejidos. En cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, también se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención.

El término "un factor que potencia el autoensamblaje", tal como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula que mejora el proceso en donde un sistema desordenado de polipéptidos preexistentes forma una estructura o patrón organizado como consecuencia de interacciones locales específicas (por ejemplo, fuerzas de van der Waals, interacciones hidrófobas, enlaces de hidrógeno y/o puentes salinos, etc.) entre los propios polipéptidos. Mejora particularmente este proceso al acelerar el autoensamblaje. El cambio de un sistema desordenado a una estructura o patrón organizado durante el autoensamblaje se caracteriza por una transición de un estado fluido a un estado gelatinoso y/o sólido y un aumento correspondiente en la viscosidad. La transición de un estado fluido a un estado gelatinoso se puede controlar, por ejemplo, mediante la medición de la dispersión de la luz, la reología o el dicroísmo circular (CD). La transición de un estado fluido a un estado sólido se puede controlar, por ejemplo, mediante métodos ópticos. Estas técnicas son conocidas por el experto en la técnica. Preferiblemente, el factor que potencia el autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en alcoholes, sulfatos, fosfatos y un agente de reticulación.

El término agente de "reticulación" se refiere a un compuesto que puede formar enlaces químicos entre cadenas moleculares, tales como cadenas de proteínas, para construir una red tridimensional de moléculas conectadas, como proteínas. Preferiblemente, el agente de reticulación tiene la siguiente fórmula (I):

, en donde

R1 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo Cⁱa C^e, preferiblemente alquilo Cⁱa C⁴, hidroxialquilo C¹a C^a, preferiblemente hidroxialquilo Cⁱa C⁴y CH²-C(O)O-R4, en donde R4 es alquilo C ⁱa C⁴,

R2 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo Cⁱa C^a, preferiblemente alquilo Cⁱa C⁴, hidroxialquilo Cⁱa C^a, preferiblemente hidroxialquilo Cⁱa C⁴y CH²-C(O)O-R4, en donde R4 es alquilo C ⁱa C⁴, y

R3 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C ⁱa C^a, preferiblemente alquilo Cⁱa C⁴, más preferiblemente CH³, e hidroxialquilo Cⁱa C^a, preferiblemente hidroxialquilo Cⁱa C⁴.

Se prefiere particularmente que R i y R2 sean idénticos, por ejemplo, que R i y R2 sean H, y/o que R3 sea H o CH³. Más preferiblemente, el agente de reticulación es genipina que tiene la siguiente fórmula (II):

Genipina es un compuesto químico que se encuentra en el extracto de fruta de gardenia. Es un aglicona derivado de un glucósido iridoide llamado genipósido presente en frutos de Gardenia jasminoides. Genipina es un excelente reticulante natural para proteínas. Mejora o facilita el autoensamblaje de polipéptidos tal como los polipéptidos de seda.

Se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje se apliquen consecutiva o simultáneamente. Para aplicaciones consecutivas, el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse primero y el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse después, o el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse primero y el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse después. Por ejemplo, el primer componente (por ejemplo, el polipéptido de autoensamblaje o el factor que potencia el autoensamblaje) se esparce sobre el área del tejido, por ejemplo herida, y luego el segundo componente (por ejemplo, el factor que potencia el autoensamblaje o el polipéptido de autoensamblaje) se extiende sobre la misma área de tejido, por ejemplo herida. Para aplicaciones simultáneas, el polipéptido de autoensamblaje y el factor potenciador de autoensamblaje pueden aplicarse al mismo tiempo, preferiblemente comprendidos en un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes o en forma de una combinación de aplicación de dos componentes. Por ejemplo, los dos componentes (es decir, el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje) del dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes se extienden simultáneamente sobre el área del tejido, por ejemplo herida. El dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes puede incluir dos jeringas separadas, una puede llenarse con el polipéptido de autoensamblaje y la otra puede llenarse con el factor que potencia el autoensamblaje. También se puede usar un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes de jeringa doble.

Se prefiere además que

i) el polipéptido de autoensamblaje está incluido en una composición, y/o

ii) el factor que potencia el autoensamblaje está comprendido en una composición.

La composición puede ser una composición sólida como una composición en polvo, una composición líquida tal como una composición acuosa, por ejemplo, una solución acuosa, una emulsión o una suspensión, un aerosol como un aerosol seco o líquido, un rociador con bomba o una composición pastosa. Preferiblemente, la composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje son del mismo tipo. Más preferiblemente, el polipéptido de autoensamblaje está comprendido en una composición líquida, particularmente en una composición acuosa, por ejemplo una solución acuosa, y/o el factor que potencia el autoensamblaje está comprendido en una composición líquida, particularmente una composición acuosa, por ejemplo solución acuosa.

Se prefiere particularmente que la composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y/o la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje comprenda además uno o más compuestos farmacéuticos. El término "compuesto farmacéutico" se define anteriormente. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, un compuesto antiviral, un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un factor de crecimiento, una enzima, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un compuesto sedante, una proteína, particularmente una glicoproteína o lipoproteína, un polisacárido y mezclas de los mismos.

En realizaciones preferidas, la composición de aplicación que comprende el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje, como se describe en el presente documento, es para uso como adhesivo tisular.

i) en el tratamiento de una herida,

ii) en el tratamiento de una herida suturada,

vi) en intervenciones quirúrgicas.

En cuanto a la definición de los términos "herida" y "dispositivos médicos" y a las realizaciones preferidas de las "heridas", "heridas suturadas", "trasplantes", "dispositivos médicos", "implantes" e "intervenciones quirúrgicas", se refiere al primer aspecto de la presente invención.

El aspecto anterior puede redactarse alternativamente de la siguiente manera: En el presente documento se describe un método de uso de una combinación de aplicación que comprende un polipéptido de autoensamblaje y un factor que potencia el autoensamblaje como adhesivo tisular.

También se describe aquí, pero no está incluido en la presente invención, el uso de una combinación de aplicaciones (o simplemente de una combinación) que comprende

i) un polipéptido de autoensamblaje, y

ii) un factor que potencia el autoensamblaje

como adhesivo tisular.

El uso puede ser un uso in vivo, in vitro, o ex-vivo, preferiblemente, un uso in vitro o ex-vivo. En cuanto a la definición de los términos "polipéptido de autoensamblaje", "autoensamblado" y "adhesivo tisular", se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. El tejido se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en tejido conjuntivo, tejido muscular, tejido nervioso, tejido epitelial y combinaciones de los mismos, por ejemplo múltiples (diferentes) tejidos. Un órgano, por ejemplo estómago, intestino delgado, intestino grueso, intestino, recto, esófago, pulmón, bazo, cerebro, corazón, riñón, hígado, piel, glándulas suprarrenales, linfa y glándulas tiroideas, ojo o páncreas, está, por ejemplo, compuesto de múltiples (diferentes) tejidos. En cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", en particular del "polipéptido de seda", también se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención. Además, en cuanto a la definición de los términos "combinación de aplicaciones" y "un factor que potencia el autoensamblaje", se hace referencia a la descripción anterior. Preferiblemente, el factor que potencia el autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en alcoholes, sulfatos, fosfatos y un agente de reticulación. En cuanto a la definición del término "agente de reticulación" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "agente de reticulación", se hace referencia a la descripción anterior. Se prefiere particularmente que el agente de reticulación sea genipina.

Se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje se apliquen consecutiva o simultáneamente. Para aplicaciones consecutivas, el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse primero y el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse después, o el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse primero y el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse después. Para aplicaciones simultáneas, el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje pueden aplicarse al mismo tiempo, preferiblemente comprendidos en un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes o en forma de una combinación de aplicación de dos componentes. Por ejemplo, los dos componentes (es decir, el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje) del dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes se extienden simultáneamente sobre el área del tejido, por ejemplo herida. El dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes puede incluir dos jeringas separadas, una puede llenarse con el polipéptido de autoensamblaje y la otra puede llenarse con el factor que potencia el autoensamblaje. También se puede usar un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes de jeringa doble.

Se prefiere además que

i) el polipéptido de autoensamblaje está incluido en una composición, y/o

La combinación de aplicaciones se puede utilizar para procesar alimentos. En una realización, la combinación de aplicación se usa para pegar tejidos, preferiblemente de carne, más preferiblemente de cerdo, res, pollo o pavo.

i) un polipéptido de autoensamblaje, y

ii) un factor que potencia el autoensamblaje

para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, las mucosas y/o el cabello.

En cuanto a la definición de los términos "polipéptido de autoensamblaje" y "autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención. Además, en cuanto a la definición de los términos "combinación de aplicaciones" y "un factor que potencia el autoensamblaje", se hace referencia a la descripción anterior. Preferiblemente, el factor que potencia el autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en alcoholes, sulfatos, fosfatos y un agente de reticulación. En cuanto a la definición del término "agente de reticulación" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "agente de reticulación", se hace referencia a la descripción anterior. Se prefiere particularmente que el agente de reticulación sea genipina.

Se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje se apliquen consecutiva o simultáneamente. Para aplicaciones consecutivas, el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse primero y el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse después, o el factor que potencia el autoensamblaje puede aplicarse primero y el polipéptido de autoensamblaje puede aplicarse después. Por ejemplo, el primer componente (por ejemplo, el polipéptido de autoensamblaje o el factor que potencia el autoensamblaje) se esparce sobre el área del tejido, por ejemplo herida, y luego el segundo componente (por ejemplo, el factor que potencia el autoensamblaje o el polipéptido de autoensamblaje) se extiende sobre la misma área de tejido, por ejemplo herida. Para aplicaciones simultáneas, el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje pueden aplicarse al mismo tiempo, preferiblemente comprendidos en un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes o en forma de una combinación de aplicación de dos componentes. Por ejemplo, los dos componentes (es decir, el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje) del dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes se extienden simultáneamente sobre el área del tejido, por ejemplo herida. El dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes puede incluir dos jeringas separadas, una puede llenarse con el polipéptido de autoensamblaje y la otra puede llenarse con el factor que potencia el autoensamblaje. También se puede usar un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes de jeringa doble.

Se prefiere además que

i) el polipéptido de autoensamblaje está incluido en una composición, y/o

En cuanto a la definición del término "compuesto cosmético" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "compuesto cosmético", "piel", "mucosa" y "pelo", se hace referencia a la descripción anterior.

El aspecto anterior puede redactarse alternativamente de la siguiente manera: En el presente documento se describe un método para usar una combinación de aplicación que comprende un polipéptido de autoensamblaje y un factor que potencia el autoensamblaje para pegar uno o más compuestos cosméticos sobre la piel, la mucosa y/o el cabello.

También se describe aquí, pero no abarcada por la presente invención, una combinación de aplicación (o simplemente una combinación) que comprende

i) un polipéptido de autoensamblaje, y

ii) un factor que potencia el autoensamblaje

para uso en el pegado de uno o más compuestos farmacéuticos sobre tejido, piel, mucosa y/o cabello.

En cuanto a la definición de los términos "polipéptido de autoensamblaje" y "autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención. Además, en cuanto a la definición de los términos "combinación de aplicaciones" y "un factor que potencia el autoensamblaje", se hace referencia a la descripción anterior. Preferiblemente, el factor que potencia el autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en alcoholes, sulfatos, fosfatos y un agente de reticulación. En cuanto a la definición del término "agente de reticulación" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "agente de reticulación", se hace referencia a la descripción anterior. Se prefiere particularmente que el agente de reticulación sea genipina.

Se prefiere además que

i) el polipéptido de autoensamblaje está incluido en una composición, y/o

La composición puede ser una composición sólida tal como una composición en polvo, una composición líquida tal como una composición acuosa, por ejemplo, una solución acuosa, una emulsión o una suspensión, un aerosol como un aerosol seco o líquido, un rociador con bomba o una composición pastosa. Preferiblemente, la composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje son del mismo tipo. Más preferiblemente, el polipéptido de autoensamblaje está comprendido en una composición líquida, particularmente en una composición acuosa, por ejemplo una solución acuosa, y/o el factor que potencia el autoensamblaje está comprendido en una composición líquida, particularmente una composición acuosa, por ejemplo solución acuosa.

En cuanto a la definición del término "compuesto farmacéutico" ya las realizaciones preferidas del "compuesto farmacéutico", "tejido", "piel", "mucosa" y "pelo", se hace referencia a la descripción anterior.

El aspecto anterior puede redactarse alternativamente de la siguiente manera: En el presente documento se describe un método para usar una combinación de aplicación que comprende un polipéptido de autoensamblaje y un factor que potencia el autoensamblaje para pegar uno o más compuestos farmacéuticos en tejido, piel, mucosa y/o cabello.

El polipéptido de autoensamblaje que forma parte de las combinaciones de aplicación descritas anteriormente puede estar incluido en una composición tal como una solución acuosa, y/o el factor que potencia el autoensamblaje que forma parte de las combinaciones de aplicación descritas anteriormente puede estar incluido en una composición tal como una solución acuosa que tiene una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o entre 5,4 y 5,9. Las combinaciones de aplicación que comprenden el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje pueden aplicarse a tejido, piel, mucosa y/o cabello. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje y/o el factor que potencia el autoensamblaje puede mejorarse aumentando la temperatura de la composición, como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 20°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje y/o el factor que potencia el autoensamblaje puede mejorarse disminuyendo el pH de la composición tal como solución acuosa en 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH del tejido, piel, mucosas y/o cabello a tratar. El tejido, piel, mucosa y/o cabello a tratar puede tener un pH de entre 4,5 y 7,0 como de entre 4,5 y 6,5, de entre 4,8 y 5,9, o de entre 5,4 y 5,9.

También se describe aquí, pero no está abarcado por la presente invención, un polipéptido de autoensamblaje para usar como material de protección de órganos y/o aislamiento de órganos. En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención.

Preferiblemente, el órgano es un órgano de los sentidos, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en piel, ojo, oído, nariz y boca.

Los inventores de la presente invención encontraron sorprendentemente que el polipéptido de autoensamblaje es adecuado para proteger y/o aislar un órgano, preferiblemente un órgano de los sentidos (por ejemplo, piel u ojos), particularmente de su entorno, ya que los factores ambientales, por ejemplo, podrían influir y/o irritar un órgano (por ejemplo, la piel o los ojos) o el área que lo rodea. Ejemplos de factores ambientales incluyen, pero no se limitan a, microorganismos como bacterias, virus y hongos (pueden causar infecciones o inflamaciones), polvo fino y partículas finas (que se encuentran en el aire) y materias extrañas. Su idoneidad, por ejemplo, se ha demostrado en las pruebas de seguridad (por ejemplo, estudio de irritación ocular aguda, prueba de inmunogenicidad, prueba de toxicidad sistémica aguda y prueba de irritabilidad cutánea aguda) descritas en la sección experimental.

El órgano puede comprender un área afectada, particularmente un área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo, una herida. Preferiblemente, la herida se selecciona del grupo que consiste en una abrasión, una quemadura, una quemadura solar, un rasguño, una raspadura, una úlcera, una herida tópica, una herida abierta y una herida causada por calor, corriente eléctrica, productos químicos (por ejemplo, ácidos y /o bases), un agente biológico, una inflamación o una infección.

Se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje selle el área afectada, particularmente el área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo, la herida, comprendida en el órgano. El área afectada puede ser una región de la piel, en donde la piel está dañada o falta. Por lo tanto, es ventajoso que el polipéptido de autoensamblaje, particularmente el polipéptido de seda como el polipéptido de seda de araña, no forme una barrera infranqueable para que las células, así como el oxígeno y el agua, puedan ingresar y atravesar los sitios protegidos y/o aislados. Por ejemplo, las células comprendidas en el área afectada pueden migrar, el tejido afectado puede reconstruirse y/o el tejido afectado puede reconectarse. Además, el polipéptido de autoensamblaje, particularmente el polipéptido de seda como el polipéptido de seda de araña, tiene la ventaja de que es flexible, lo que reduce o incluso anula la fuerza de tracción que actúa sobre el área afectada, por ejemplo herida. Además, el polipéptido de autoensamblaje evita la desecación del órgano aislado y/o protegido.

En realizaciones preferidas, el polipéptido de autoensamblaje cubre o reviste el órgano que se va a aislar y/o proteger, por ejemplo, el área afectada, particularmente el área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo, la herida, comprendida en el órgano.

El polipéptido de autoensamblaje se puede proporcionar en varias composiciones preferidas que incluyen, pero no se limitan a, composiciones sólidas como composiciones en polvo, composiciones líquidas como composiciones acuosas, por ejemplo, soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas, aerosoles como aerosoles secos o líquidos, pulverizadores de bomba y composiciones pastosas. Estas composiciones que comprenden el polipéptido de autoensamblaje pueden comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico. Así, por ejemplo, se aplica una composición líquida (por ejemplo, una composición acuosa) que comprende el polipéptido de autoensamblaje y que opcionalmente comprende además uno o más compuestos farmacéuticos al órgano a proteger y/o aislar, por ejemplo, el área afectada, particularmente infectada, zona inflamada o lesionada, por ejemplo la herida, comprendida en el órgano.

El polipéptido de autoensamblaje puede proporcionarse además como película, gel, particularmente hidrogel, espuma, malla, armazón, parche, tela no tejida o capa, particularmente una capa de cobertura o revestimiento. La película, el gel, particularmente el hidrogel, la espuma, la malla, el andamio, el parche, el material no tejido o la capa, particularmente la capa de cobertura o revestimiento, que comprende el polipéptido de autoensamblaje puede comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos. Así, por ejemplo, se aplica a el órgano a proteger y/o aislar, por ejemplo el área afectada, particularmente el área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo la herida, comprendida en el órgano.

El polipéptido de autoensamblaje también se puede aplicar a varios objetos preferenciales que incluyen, pero no se limitan a, mallas, andamios, parches, telas no tejidas e implantes, por ejemplo, implantes dentales, implantes de microchip, implantes de tejidos blandos como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo, implantes de cóclea). Debido a esta aplicación, los objetos que incluyen, pero no se limitan a, mallas, andamios, parches, implantes, por ejemplo, implantes dentales, implantes de microchip, implantes de tejidos blandos como implantes de silicona o implantes con una superficie de silicona (por ejemplo, implantes de cóclea), y los no tejidos pueden estar cubiertos o revestidos, por ejemplo parcialmente o completamente cubierto o revestido, con el polipéptido de autoensamblaje. Se puede aplicar a estos objetos mediante recubrimiento por inmersión, rociado o goteo. Para el recubrimiento por inmersión, los objetos preferenciales se sumergen en composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo soluciones acuosas, que comprenden el polipéptido de autoensamblaje. Además, para pulverizar, las composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo las soluciones acuosas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje se pulverizan sobre objetos preferentes. Además, para el goteo, las composiciones líquidas tales como composiciones acuosas, por ejemplo las soluciones acuosas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje se dejan caer sobre objetos preferentes. Estas composiciones líquidas que comprenden el polipéptido de autoensamblaje pueden comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico. Así, por ejemplo, se aplica al órgano que se va a proteger o aislar, una malla, armazón, parche, material no tejido o implante recubierto y/o sumergido con el polipéptido de autoensamblaje y opcionalmente recubierto y/o sumergido adicionalmente con uno o más compuestos farmacéuticos, por ejemplo el área afectada, particularmente el área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo la herida, comprendida en el órgano.

El término "compuesto farmacéutico", como se usa en el presente documento, se define anteriormente. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, un compuesto antiviral, un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un factor de crecimiento, una enzima, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un compuesto sedante, una proteína, particularmente una glicoproteína o lipoproteína, un polisacárido y mezclas de los mismos.

El aspecto anterior puede redactarse alternativamente de la siguiente manera: En el presente documento se describe un método de uso de un polipéptido de autoensamblaje como material de protección y/o aislamiento de órganos.

También se describe aquí, pero no está abarcado por la presente invención, el uso de un polipéptido de autoensamblaje como material de protección y/o aislamiento de órganos. En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", particularmente polipéptido de seda, elastina, colágeno o queratina, se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. Por ejemplo, se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje comprenda además al menos un péptido que sea capaz de potenciar el efecto adhesivo. Se prefiere además que el efecto adhesivo esté mediado por la unión del péptido a una proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP). También se prefiere, adicional o alternativamente, que el péptido comprenda al menos una secuencia de reconocimiento de CAMP. En cuanto a la definición de los términos "péptido", "péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo", "proteína mediadora de la adhesión celular (CAMP)" y "adhesión celular" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "péptido", “péptido que es capaz de potenciar el efecto adhesivo”, “proteína mediadora de la adhesión celular”, “secuencia de reconocimiento de CAMP”, se refiere al primer aspecto de la presente invención.

Preferiblemente, el órgano es un órgano de los sentidos, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en piel, ojo, oído, nariz y boca. El órgano puede comprender un área afectada, en particular un área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo una herida. Preferiblemente, la herida se selecciona del grupo que consiste en una abrasión, una quemadura, una quemadura solar, un rasguño, una raspadura, una úlcera, una herida tópica, una herida abierta y una herida causada por calor, corriente eléctrica, productos químicos (por ejemplo, ácidos y /o bases), un agente biológico, una inflamación o una infección.

Se prefiere que el polipéptido de autoensamblaje selle el área afectada, particularmente el área infectada, inflamada o lesionada, por ejemplo, la herida, comprendida en el órgano. El área afectada puede ser una región de la piel, en donde la piel está dañada o falta. Además, el polipéptido de autoensamblaje evita la desecación del órgano aislado y/o protegido. En cuanto a otras realizaciones preferidas, se hace referencia a la descripción anterior.

También se describe aquí, pero no está incluido en la presente invención, un método para conectar dos tejidos mediante un adhesivo que comprende los pasos de:

i) aplicar un polipéptido de autoensamblaje a un primer tejido, y

ii) poner en contacto el primer tejido con un segundo tejido, conectando así dichos dos tejidos.

Dichos tejidos pueden ser particularmente capas de tejido. El polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular puede aplicarse como parte de una composición tal como una solución acuosa que tenga una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o de entre 5,4 y 5,9 al primer tejido. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar aumentando la temperatura de la composición, como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 2o°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar disminuyendo el pH de la composición, como una solución acuosa, de 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH del tejido que se va a conectar. El tejido que se va a conectar puede tener un pH de entre 4,5 y 7,0 como de entre 4,5 y 6,5, de entre 4,8 y 5,9, o de entre 5,4 y 5,9.

Se prefiere que el método comprenda además el paso de aplicar un factor que potencia el autoensamblaje al primer tejido. Este paso se lleva a cabo preferiblemente después del paso i). El polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje también pueden aplicarse al mismo tiempo, por ejemplo comprendido en un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes o en forma de una combinación de aplicación de dos componentes (véase arriba), en el paso i). El polipéptido de autoensamblaje puede estar incluido en una composición y/o el factor que potencia el autoensamblaje puede estar incluido en una composición. La composición puede ser una composición sólida como una composición en polvo, una composición líquida tal como una composición acuosa, por ejemplo una solución acuosa, una emulsión o una suspensión, un aerosol tal como un aerosol seco o líquido, un rociador con bomba y una composición pastosa. Preferiblemente, la composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje son del mismo tipo. La composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y/o la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje puede comprender uno o más compuestos farmacéuticos. El término "compuesto farmacéutico", como se usa en el presente documento, se define anteriormente. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, un compuesto antiviral, un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un factor de crecimiento, una enzima, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un compuesto sedante, una proteína, particularmente una glicoproteína o lipoproteína, un polisacárido y mezclas de los mismos. El polipéptido de autoensamblaje puede secarse antes o después del contacto con el tejido.

También se describe aquí, pero no está incluido en la presente invención, un método para llenar un espacio en un tejido mediante un adhesivo que comprende los pasos de:

i) proporcionar un tejido con un espacio, y

ii) aplicar un polipéptido de autoensamblaje al espacio en el tejido, llenando así el espacio en el tejido.

El polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular puede aplicarse como parte de una composición tal como una solución acuosa que tenga una temperatura de 20°C y un pH de entre 4,5 y 7,0 tal como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o de entre 5,4 y 5,9 al espacio del tejido. El efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar aumentando la temperatura de la composición, como una solución acuosa, por encima de 20 °C, por ejemplo desde una temperatura de 20°C a 25°C, 30°C, 35°C, 37°C, 38°C, 39°C o 40°C. Como alternativa o adicionalmente, el efecto adhesivo del polipéptido de autoensamblaje se puede mejorar disminuyendo el pH de la composición, como una solución acuosa, de 0,1 a 2,5 unidades de pH, por ejemplo de 0,1 a 0,5 unidades de pH, por debajo del pH del tejido que se va a tratar. El tejido que se va a tratar puede tener un pH entre 4,5 y 7,0 como entre 4,5 y 6,5, entre 4,8 y 5,9, o entre 5,4 y 5,9.

Se prefiere que el método comprenda además el paso de aplicar un factor que potencia el autoensamblaje al espacio en el tejido. Este paso se lleva a cabo preferiblemente después del paso ii). El polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje también pueden aplicarse al mismo tiempo, por ejemplo comprendido en un dispositivo de combinación de aplicación de dos componentes o en forma de una combinación de aplicación de dos componentes (véase arriba), en el paso ii). El polipéptido de autoensamblaje puede estar incluido en una composición y/o el factor que potencia el autoensamblaje puede estar incluido en una composición. La composición puede ser una composición sólida como una composición en polvo, una composición líquida tal como una composición acuosa, por ejemplo una solución acuosa, una emulsión o una suspensión, un aerosol tal como un aerosol seco o líquido, un rociador con bomba y una composición pastosa. Preferiblemente, la composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje son del mismo tipo. La composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y/o la composición que comprende el factor que potencia el autoensamblaje puede comprender uno o más compuestos farmacéuticos. El término "compuesto farmacéutico", como se usa en el presente documento, se define anteriormente. Preferiblemente, el compuesto farmacéutico se selecciona del grupo que consiste en un compuesto antimicrobiano, un compuesto antiviral, un compuesto antifúngico, un compuesto inmunosupresor, un factor de crecimiento, una enzima, un compuesto antiinflamatorio, un compuesto antialérgico, un compuesto sedante, una proteína, particularmente una glicoproteína o lipoproteína, un polisacárido y mezclas de los mismos. El polipéptido de autoensamblaje puede secarse antes o después del contacto con el espacio del tejido.

También se describe aquí, pero no se abarca por la presente invención, un polipéptido de seda de araña caracterizado por un tamaño de no más de 100 kDa, preferiblemente de no más de 95 o 90 kDa, más preferiblemente de no más de 85 u 80 kDa, incluso más preferiblemente de no más de 75 o 70, lo más preferiblemente de no más de 65 kDa, que comprende al menos una, preferiblemente una o dos secuencias no repetitivas según SEQ ID NO: 76 (NR5) o SEQ ID NO: 77 (NR6). Preferiblemente, el polipéptido de seda de araña es un polipéptido de seda de araña recombinante. También se prefiere que el polipéptido de seda de araña sea Ci6NR5 o C16NR6.

También se describe aquí, pero no está abarcado por la presente invención, un polipéptido de seda de araña que consiste en no más de 1000 aminoácidos, preferiblemente de no más de 950 aminoácidos, más preferiblemente de no más de 900 aminoácidos, incluso más preferiblemente de no más de 850 aminoácidos, lo más preferiblemente de no más de 800 o 750 aminoácidos, que comprenden al menos una, preferiblemente una o dos secuencias no repetitivas según SEQ ID NO: 76 (NR5) o SEQ ID NO: 77 (NR6). Preferiblemente, el polipéptido de seda de araña es un polipéptido de seda de araña recombinante. También se prefiere que el polipéptido de seda de araña sea C16NR5 o C16NR6.

También se describe aquí, pero no está abarcado por la presente invención, un implante recubierto con un polipéptido de autoensamblaje. En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. En particular, el polipéptido de autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en un polipéptido de seda tal como un polipéptido de seda recombinante. Preferiblemente, el implante es un implante dental, un implante de microchip o un implante de tejido blando, como un implante de silicona, o un implante con una superficie de silicona (por ejemplo, un implante de cóclea). El implante de silicona o el implante con una superficie de silicona también puede ser un implante mamario. El término "revestimiento" a este respecto, se refiere a un revestimiento que está comprendido sobre el implante. El implante puede cubrirse o revestirse parcial o completamente con el polipéptido de autoensamblaje. Preferiblemente, dicho "recubrimiento" cubre o rodea completamente el implante. Se prefiere que el "recubrimiento" tenga un espesor de entre 1 nm y 50 pm, preferiblemente entre 40 nm y 50 pm, más preferiblemente entre 0,5 pm y 10 pm y lo más preferiblemente entre 0,5 pm y 5 pm.

También se describe aquí, pero no está abarcado por la presente invención, un polipéptido de autoensamblaje para uso como material de recubrimiento o para el uso de un polipéptido de autoensamblaje como material de recubrimiento. En cuanto a la definición del término "polipéptido de autoensamblaje" y en cuanto a las realizaciones preferidas del "polipéptido de autoensamblaje", se hace referencia al primer aspecto de la presente invención. En particular, el polipéptido de autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en un polipéptido de seda tal como un polipéptido de seda recombinante.

También se describe aquí, pero no abarcada por la presente invención, una composición que comprende un polipéptido de autoensamblaje y un factor que potencia el autoensamblaje para uso como material de recubrimiento o para el uso de una composición que comprende un polipéptido de autoensamblaje y un factor mejorar el autoensamblaje como material de revestimiento. Preferiblemente, el factor que potencia el autoensamblaje se selecciona del grupo que consiste en alcoholes, sulfatos, fosfatos y un agente de reticulación.

El término agente de "reticulación" se refiere a un compuesto que puede formar enlaces químicos entre cadenas moleculares, como cadenas de proteínas, para construir una red tridimensional de moléculas conectadas, como proteínas. En cuanto a las realizaciones preferidas del "agente de reticulación", se hace referencia a la definición anterior. Se prefiere particularmente que el agente de reticulación sea genipina.

Dicha composición incluye, pero no se limita a, una composición sólida como una composición en polvo, una composición líquida tal como una composición acuosa, por ejemplo, una solución, emulsión o suspensión acuosa, un aerosol como un aerosol seco o líquido, un rociador con bomba, y una composición pastosa. La composición que comprende el polipéptido de autoensamblaje y el factor que potencia el autoensamblaje puede comprender adicionalmente uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico. Así, por ejemplo, puede usarse como material de recubrimiento una composición líquida (por ejemplo, una composición acuosa) que comprende el polipéptido de autoensamblaje, el factor que potencia el autoensamblaje y uno o más compuestos farmacéuticos tales como compuestos terapéuticos o de diagnóstico.

Las siguientes figuras y ejemplos son meramente ilustrativos de la presente invención y no deben interpretarse como limitantes del alcance de la invención como se indica en las reivindicaciones adjuntas de ninguna manera.

LEYENDA DE LA FIGURA

Figura 1: Producción de C-^spRGD y ntagCysCi6-c(RGDfK). (A) Estructura química del péptido RGD cíclico sintético c(RGDfK)-fracción espaciadora-parte de SMCC empleada para la modificación química de ntagCysCi6. (B) eADF4 (Cié), la variante que contiene RGD ntagCysCi6-c(RGDfK) (modificado químicamente) y CiéspRGD (modificado genéticamente). para ntagCysCi6-c(RGDfK), c(RGDfK)-fracción espaciadora-parte de SMCC se acopló covalentemente al grupo tiol de un residuo de cisteína de ntagCysCi6. CiéspRGD fue modificado por ingeniería genética hibridando un espaciador y un dominio RGD con eADF4 (Cié).

Figura 2: Preparación de la piel de cerdo y aplicación de la solución de Cié o de CiespRGD a la piel de cerdo para la prueba adhesiva. (A) Se utilizó piel de cerdo para la prueba adhesiva. La piel de cerdo se cortó en trozos que tenían un tamaño de aproximadamente 9,5 x i i , 0 cm (un tamaño que cabe en una placa de Petri que tiene un diámetro de i4,5 cm) utilizando un bisturí. (B) Las piezas se fijaban en sus bordes con clavos a una tabla para tensar la piel. (C) y (D) Se realizaron tres incisiones por pieza de piel según una muestra de ejemplo de i cm x i cm utilizando un bisturí. (MI) El injerto de piel resultante se levantó posteriormente con pinzas y se cortó para producir un bolsillo de piel. (F) La solución de Cié o de CiespRGD se dejó caer en el área de corte utilizando una pipeta (a bajas concentraciones de proteína de < 40 mg/ml) o se extendió sobre el área de corte utilizando una espátula (a altas concentraciones de proteína de > 40 mg/ml) para cubrir la superficie de la "herida". (G) El colgajo de piel separado se reposicionó posteriormente en el área de corte.

Figura 3: Prueba adhesiva. El efecto adhesivo de Cié o CiespRGD se probó doblando (por ejemplo, enrollando) la pieza de piel de cerdo como se preparó anteriormente (véase Figura 2). El doblado (por ejemplo, rodando) se llevó a cabo para aplicar tensión a la "herida". (A) Fotografía de una pieza de piel de cerdo doblada que comprende un área de corte tratada con una solución de Cié. El colgajo de piel permaneció conectado al área de corte tratada. (B) Imagen esquemática de la pieza de piel de cerdo doblada como se muestra en (A). (C) Muestra un colgajo de piel antes de la aplicación de una solución de CiéspRGD y (D) Muestra un colgajo de piel después de la aplicación de una solución de CiéspRGD (concentración: 40 mg/ml y tiempo de incubación: i hora). La línea de puntos representa los bordes cortantes del colgajo de piel.

Figura 4: Preparación de la piel de cerdo y aplicación de la solución de Cié o CiéspRGD a la piel de cerdo para la prueba de tracción. (A) Se utilizó piel de cerdo para la prueba de tracción. Se generaron tiras de piel de cerdo que

3é

tenían un tamaño de 1,5 cm x 6 cm. Se realizó una incisión vertical de 1,5 cm de longitud a una distancia de 2,5 cm del extremo corto de la tira usando un bisturí (véase línea continua dentro de la tira de piel de cerdo). (B) La incisión se terminó a la mitad del grosor (el grosor está marcado con una "d") de la pieza de piel de cerdo (véase la incisión marcada con una "a"). La incisión se continuó horizontalmente durante 1 cm (véase incisión marcada con "b") antes de girar en dirección vertical para cortar el tejido (véase incisión marcada con "c"). La incisión para cortar el tejido también se indica como una línea punteada dentro de la tira de piel de cerdo en (A). (C) Las áreas/superficies de corte de las dos mitades de tiras de piel de cerdo producidas se recubrieron con una solución de C16 o de C^spRGD.

Figura 5: (A) se aplicó un superpegamento (por ejemplo, "UHU Kunststoff Spezialsekundenkleber") al lado de la piel de la tira. El superpegamento se extendió utilizando una espátula o un raspador de células. No se aplicó pegamento cerca del sitio de corte. Los portaobjetos de plástico (por ejemplo, "microportaobjetos de plástico Rinzle") con una longitud de 2,5 y 3,5 cm se conectaron posteriormente con el sitio pegado de la tira de piel (el portaobjetos con una longitud de 2,5 cm se colocó en el sitio corto del portaobjetos de piel y el portaobjetos que tenía una longitud de 3,5 cm se colocó en el sitio más largo del portaobjetos de piel). (B) Se hizo lo mismo para el lado opuesto al lado de piel de la tira. (C) La fuerza de adhesión bajo tensión tangencial se probó utilizando un probador de tracción. Por lo tanto, la tira de piel de cerdo pegada se fijó en el probador de tracción utilizando portamuestras. Las flechas indican la dirección del movimiento.

Figura 6: Análisis visual de implantes recubiertos o no recubiertos de proteína de seda después de la implantación submuscular en la espalda de ratas. (A) y (B) Los implantes sin recubrimiento mostraron fibrosis capsular. (C) La fibrosis capsular en los implantes recubiertos con proteína de seda se redujo fuertemente (la cápsula era más delgada). Además, no se observaron cicatrices.

Figura 7: Comparación del grosor de la cápsula: implantes recubiertos con el adhesivo de seda e implantes no recubiertos (control).

Figura 8: Prueba de inmunogenicidad. Títulos de IgG de punto final 2, 5 y 8 semanas después de la administración de eADF4 (C16). El grupo completo de cinco ratones no mostró ningún aumento significativo de IgG y, por lo tanto, ninguna formación de anticuerpos específicos significativos.

Ejemplos

1. Producción de eADF4 (C16), C^spRGD y ntagCysC16-c(RGDfK)

1.1 Producción de eADF4 (C16)

La proteína de seda de araña recombinante eADF4 (también designada como C16 en el presente documento) se basa en la secuencia de consenso de una de las tres espidroínas de la seda de dragalina de la araña de jardín europea (Araneus diadematus). El motivo de consenso (módulo C) de a DF4 (GSSAAAAAAAASGPGGYGPENQGPSGPGGYGPGGP (SEQ ID NO: 21)) se repite 16 veces en la proteína recombinante (Figura 1B). Para la detección, se puede unir a la molécula una etiqueta T7 N-terminal. La producción en E. coli y la purificación se realizó como se describe en WO 2011/120690 A2 ("Separation of insoluble target proteins").

1.2 Modificación genética de eADF4 (C16)

Se crearon casetes de ADN que codifican RGD y una secuencia espaciadora mediante la hibridación de dos oligonucleótidos sintéticos. Para la etiqueta RGD: GATCCATGGGCGGTCGTGGTG ACTCTCCGGGTTAATGAA (SEQ ID NO: 72) y AGCTTTCATTAACCCGGAGAGTCACCACGACCGCCCATG (SEQ ID NO: 73) y para la secuencia espaciadora: se utilizaron GATCCATGGGCGGTGGCTCTGGTTAATGAA (SEQ ID NO: 74) y AGCTTT CATTAACCAGAGCCACCGCCCATG (SEQ ID NO: 75). La secuencia de aminoácidos resultante para la etiqueta específica spRGD fue GGSGGRGDSPG (SEQ ID NO: 53) (Figura 1B). La inserción de las secuencias de ADN en el vector de clonación y la ligadura con el gen que codifica eADF4 (C16) se lograron mediante una estrategia de clonación perfecta como se describió anteriormente por Huemmerich et al. ("Primary structure elements of spider dragline silks and their contribution to protein solubility", Biochemistry, 2004, 43: 13604-12). La secuencia de ADN del C^spRGD manipulado genéticamente se confirmó mediante secuenciación. Los procedimientos de producción y purificación de proteínas fueron idénticos a los de eADF4 (C16) (véase más arriba). Una secuencia del C^spRGD manipulado genéticamente que incluye una etiqueta T7 se muestra en SEQ ID NO: 78.

1.3 Acoplamiento químico de RGD a una variante modificada con cisteína de eADF4 (C16)

Para una alta especificidad de acoplamiento, el acoplamiento químico de los péptidos RGD se realizó con la cisteína que contenía eADF4 (C16) variante ntagCysC16 que ha sido establecido previamente por Spiess et al. ("Structural characterization and functionalization of engineered spider silk films", Soft Matter, 2010, 6: 4168-74) (Figura 1B) (ntagCys, también designado como TAGCYS3 en este documento, tiene una secuencia de acuerdo con SEQ ID NO: 37 y C16 comprende 16 veces el módulo C que tiene una secuencia de acuerdo con SEQ ID NO: 21). Para el RGD cíclico c(RGDfK) -fracción espaciadora-parte de SMCC (SMCC = Succinimidil-4-(W-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato) (véase Peptides International, Louisville, Kentucky, EE. UU.) (véase también Pierschbacher and Ruoslahti, "Influence of stereochemistry of the sequence Arg-Gly-Asp-Xaa on binding specificity in cell adhesión", J Biol Chem, 1987, 262: 17294-8; Haubner et al. "Stereoisomeric peptide libraries and peptidomimetics for designing selective inhibitors of the alpha(V)beta(3) integrin for a new cancer therapy", Angew. Chem. Int. Edit., 1997, 36: 1375-89; and Aumailley et al. "Arg-Gly-Asp constrained within cyclic pentapeptides, Strong and selective inhibitors of cell adhesion to vitronectin and laminin fragment P1", FEBS Lett, 1991, 291: 50-4) (Figura 1A), ntagCysC-i6 liofilizado se disolvió en tiocianato de guanidinio 6 M (GdmSCN), se dializó frente a HEPES 20 mM, pH 7, y se diluyó hasta una concentración final de 2 mg/ml. Para la reducción de los enlaces disulfuro, las proteínas se incubaron en un exceso de diez veces de tris (2-carboxietil)fosfina (TCEP) durante 2 ha temperatura ambiente. Después de la adición de un exceso de veinte veces de c(RGDfK)-fracción espaciadora-parte de SMCC, la reacción de maleimida y grupos tiol libres se llevó a cabo durante 2 ha TA. La proteína se purificó por precipitación con fosfato de potasio (pH 8) a una concentración final de 1 M, seguido de un lavado del sedimento tres veces con agua desionizada.

2. Preparación de la solución de proteína de seda.

C16 y C-^spRGD se han producido como se describe anteriormente. Cantidades respectivas de C16 y C-^spRGD se disolvieron en tiocianato de guanidinio 6 M y se dializaron durante al menos 3 días a 4 °C frente a Tris 5 mM, pH 9. Después de la diálisis, las muestras se centrifugaron durante 15 min a 14.000 rpm a 4°C. Luego se estimó la concentración de proteína por espectrómetro UV-Vis. Las soluciones de proteína se diluyeron con solución de Tris 5 mM, pH 9 a las concentraciones solicitadas.

3. Prueba adhesiva

3.1 Preparación de la piel

Se utilizó piel de cerdo para la prueba adhesiva. La piel de cerdo se cortó en trozos que tenían un tamaño de aproximadamente 9,5 x 11,0 cm (un tamaño que cabe en una placa de Petri con un diámetro de 14,5 cm) utilizando un bisturí. Las piezas fueron fijadas en sus bordes con clavos sobre una tabla para tensar la piel (véase Figura 2A y B). Se realizaron tres incisiones por trozo de piel según una muestra de ejemplo de 1 cm x 1 cm utilizando un bisturí (véase Figura 2C y D). El injerto de piel resultante se levantó posteriormente con pinzas y se cortó para producir un bolsillo de piel como se muestra en Figura 2E.

3.2 Aplicación de la solución de proteína de seda a la piel

La solución de C16 o c-^spRGD producida anteriormente se dejó caer sobre el área de corte con una pipeta (a bajas concentraciones de proteínas de < 40 mg/ml), o se esparció sobre el área de corte con una espátula o un raspador de células (a altas concentraciones de proteínas de > 40 mg/ml) para cubrir la superficie de la "herida" (véase Figura 2F). El colgajo de piel separado se reposicionó posteriormente en el área de corte (véase Figura 2G). El área de corte también puede designarse como superficie de corte. Las muestras se incubaron a 37°C.

El efecto adhesivo se probó doblando (por ejemplo, enrollando) la pieza de piel de cerdo como se preparó anteriormente (véase Figura 3A y 3B). El doblado (por ejemplo, enrollando) se llevó a cabo para aplicar tensión a la "herida". Si el colgajo de piel permaneció conectado al área de corte tratada con la solución de C16 o c-^spRGD durante el doblado (por ejemplo, enrollando), la muestra se clasificó como una muestra que mostraba propiedades adhesivas. Si el colgajo de piel se desprendió del área de corte tratada con la solución de C16 o c-^spRGD durante el doblado (por ejemplo, enrollando), la muestra se clasificó como una muestra que no mostraba propiedades adhesivas.

A continuación, se muestran los resultados de la prueba adhesiva utilizando piezas de piel de cerdo tratadas con soluciones de C-^spRGD que tienen una concentración de 30, 40, 50 y 70 mg/ml (véase Tablas 2 y 3), o soluciones de C16 que tienen una concentración de 40, 50 y 70 mg/ml (véase Tabla 3).

Tabla 2: Resultados de una primera prueba adhesiva de C^spRGD con diferentes concentraciones de proteína de seda en un tiempo de incubación de 15 min y 1 h

Tabla 3: Resultados de una segunda prueba adhesiva de C16 y C-^spRGD con diferentes concentraciones y volúmenes de proteína de seda en un tiempo de incubación de 1 h

Un efecto adhesivo de C16 y C^spRGD se ha demostrado para todas las muestras tratadas con soluciones de C16 y Ci6spRGD (concentración de 40 a 70 mg/ml, volumen de 50 jl/cm 2 y concentración de 40 a 70 mg/ml, volumen de 25 |jl/cm2) después de un tiempo de incubación de 1 hora. En cada caso, el colgajo de piel permaneció conectado al área de corte durante el doblado (véase, por ejemplo, Figura 3A y B para c16). No se ha demostrado ningún efecto adhesivo para ambas muestras de referencia (Ref-Tris: área de corte tratada con regulador Tris y Ref: área de corte tratada con H2O) utilizados como controles negativos. En estas muestras, el colgajo de piel se desprendió del área de corte durante el doblado.

La Figura 3C muestra además un colgajo de piel antes de la aplicación de la solución de C^spRGD y la Figura 3D muestra un colgajo de piel después de la aplicación de la solución de C^spRGD (concentración: 40 mg/ml y tiempo de incubación: 1 hora). La línea de puntos representa los bordes cortantes del colgajo de piel.

Se consiguieron resultados similares con piezas de piel de cerdo a las que se les había quitado completamente el colgajo de piel. El área de corte se cubrió con las soluciones de C16 y C^spRGD como se describe anteriormente. Posteriormente, se reposicionó el colgajo de piel en la zona de corte. La prueba de adherencia se llevó a cabo como se ha descrito anteriormente.

4. Prueba de tracción

4.1 Preparación de la piel

Se utilizó piel de cerdo para la prueba de tracción. La piel de cerdo se cortó en trozos que tenían un tamaño de aproximadamente 6,0 x 11,0 cm utilizando un bisturí. Las piezas se fijaban en sus bordes con clavos a una tabla para tensar la piel. En un paso siguiente, se cortaron tiras de piel de cerdo con un tamaño de 1,5 cm x 6 cm de las piezas de piel de cerdo (véase Figura 4A). Las tiras de piel de cerdo individuales se procesaron adicionalmente de la siguiente manera: Se realizó una incisión vertical de 1,5 cm de longitud a una distancia de 2,5 cm del extremo corto de una tira usando un bisturí (véase línea continua dentro de la tira de piel de cerdo en la Figura 4A). La incisión se terminó a la mitad del espesor (el espesor está marcado con una "d" en la Figura 4B) de la tira de piel de cerdo (véase incisión marcada con "a" en la Figura 4B). La incisión se continuó horizontalmente durante 1 cm (véase incisión marcada con "b" en la Figura 4B) antes de girar en dirección vertical para cortar el tejido (vea la incisión marcada con "c" en la Figura 4B y línea punteada dentro de la franja de piel de cerdo en la Figura 4a ).

4.2 Aplicación de la solución de proteína de seda sobre la piel

El procedimiento de incisión/corte descrito anteriormente separó la franja de piel de cerdo en dos mitades. Las mitades de las tiras de piel de cerdo se separaron entre sí para tratar las áreas de corte con la solución de C16 o c^spRGD como se produjo anteriormente. Por lo tanto, la solución de C16 o c^spRGD se dejó caer en las áreas de corte con una pipeta (a bajas concentraciones de proteína de < 40 mg/ml) o se extendió sobre las áreas de corte con una espátula o un raspador de células (a altas concentraciones de proteína de > 40 mg/ml) para cubrir la superficie de la "herida". Las dos mitades de la tira de piel de cerdo se reposicionaron posteriormente de modo que las áreas de corte tratadas entraran en contacto entre sí (véase Figura 4C). Las muestras se incubaron a 37°C durante 30 min.

4.3 Preparación de la muestra para la prueba de tracción

Una vez transcurrido el tiempo de incubación de 30 min, se aplicó un superpegamento (por ejemplo, "UHU Kunststoff Spezialsekundenkleber") al lado de la piel de la tira. El superpegamento se extendió utilizando una espátula o un raspador de células. No se aplicó pegamento al sitio de corte. A continuación, se conectaron portaobjetos de plástico (por ejemplo, "microportaobjetos de plástico Rinzle") con una longitud de 2,5 y 3,5 cm con el sitio pegado de la tira de piel (el portaobjetos con una longitud de 2,5 cm se colocó en el sitio corto del portaobjetos de piel y el portaobjetos con una longitud de 3,5 cm se colocó en el sitio más largo del portaobjetos de piel) (véase Figura 5A). Lo mismo se hizo para el lado opuesto al lado de la piel de la tira (véase Figura 5B).

La fuerza de adhesión bajo tensión tangencial se probó utilizando un probador de tracción (por ejemplo, Zwicki Z 0.5; Zwick Roell, celda de carga de 50 N). Por lo tanto, la tira de piel de cerdo pegada se fijó en el probador de tracción utilizando portamuestras como se muestra en Figura 5C.

Los parámetros de la prueba de tracción fueron los siguientes:

Precarga: 0.01MPa

Velocidad de prueba: 10 mm/min

Longitud de sujeción en la posición inicial: 15,00 mm

Módulo de tracción de velocidad: 10 mm/min

A continuación, se muestran los resultados de la prueba de tracción utilizando tiras de piel de cerdo tratadas con soluciones de C^spRGD o C16 que tienen una concentración de 35 mg/ml.

Tabla 4: Resultados de la prueba de tracción de C16 y C16 spRGD

La fuerza de adhesión máxima promedio se indica en Tabla 4. La fuerza de adhesión máxima se puede definir como la carga máxima por unidad de ancho de la línea de unión requerida para producir una separación progresiva de dos adherentes unidos, particularmente adherentes flexibles. La fuerza de adhesión máxima promedio para C^spRGD se incrementó en aproximadamente un 80% en comparación con la fuerza de adhesión máxima promedio para C16.

Los datos experimentales anteriores demuestran claramente que las proteínas de seda (por ejemplo, C16) o proteínas de seda modificadas (por ejemplo, C^spRGD) funcionan como adhesivos tisulares. Así, las proteínas de seda se pueden utilizar, por ejemplo, como adhesivos tisulares para tratar heridas o heridas suturadas.

5. Recubrimiento de implantes con proteínas de seda

Se cubrieron implantes de silicona texturizada (Polytech Health & Aesthetics / Alemania) con un diámetro de 2,6 cm y un volumen de 3 ml con una capa de proteína de seda de un espesor de 10 pm según el siguiente protocolo: C16 la proteína se produjo como se ha descrito anteriormente. 1,35 g de C16 la proteína se disolvió en 135 ml de tiocianato de guanidinio 6 M con agitación suave. Se añadieron lentamente 135 ml de regulador Tris 50 mM (pH 9 (Roth) 4°C) para obtener una solución homogénea. La solución de proteína resultante se dializó durante la noche frente a regulador Tris 50 mM pH 9 a 4°C. Los restos de guanidinio-SCN se eliminaron mediante filtración de flujo cruzado a 4 °C mientras se añadía constantemente regulador Tris (50 mM, pH 9). Posteriormente la solución de proteína C16 se concentró a 60 ml. La concentración final fue de 10,8 mg/ml (determinada mediante espectroscopia uV/Vis, Beckman Coulter, DU 800).

El recubrimiento se realizó en una cámara estéril (esterilizada a 140°C durante 1 hora). Los implantes de silicona se lavaron con etanol y se secaron a temperatura ambiente antes del proceso de recubrimiento. Los implantes de silicona se recubrieron 3 veces con la solución de proteína C16 (30 ml a 10,8 mg/ml) sumergiendo los implantes de silicona en la solución durante 120 s y secándolos al aire durante 300 s, respectivamente. Para el postratamiento, los trasplantes se sumergieron en solución de KH2PO4 (pH4 1M (Roth, 99%), NaCl 0,91% p/v (Roth, 99,5%)) durante 120 s y secado durante 120 s antes de lavar los trasplantes en una solución salina (9 g/l). Después de la esterilización por radiación gamma con una dosis de 5 kGray (en Isotron, Allershausen), los implantes recubiertos con proteína de seda se implantaron submuscularmente en la espalda de ratas Sprague-Dawley que tenían un peso de 250 a 300 mg. Como control, se usaron implantes sin recubrimiento.

Después de 3 meses, se sacrificaron las ratas Sprague-Dawley. Los implantes fueron expuestos y posteriormente analizados. Los resultados se ilustran en Figura 6. Mientras que los implantes sin recubrimiento mostraron fibrosis capsular (véase Figuras 6A y B), la fibrosis capsular en los implantes recubiertos con proteína de seda se redujo fuertemente (véase Figura 6C). Esto da como resultado que se forme menos tejido cicatricial en la interfaz del implante y el tejido huésped, como lo demuestra una reducción del 30 % del tejido cicatricial que forma la cápsula del implante en comparación con el grupo de control (véase Figura 7). Además, las cápsulas de los implantes recubiertos con proteína de seda eran más delgadas (véase Figura 6C) en contraste con las cápsulas de los implantes sin recubrimiento (véase Figura 6A).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso no terapéutico, ex-vivo, o in vitro de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) Ax, en donde x es un número entero de 5 a 10.

2. El uso no terapéutico, ex-vivo, o in vitro de la reivindicación 1, en donde las unidades repetitivas se seleccionan independientemente del módulo A (SEQ ID NO: 20), módulo C (SEQ ID NO: 21), módulo Q (S^eQ ID NO: 22), módulo S (SEQ ID NO: 25), o módulo R (SEQ ID NO: 26).

3. Uso de un polipéptido de autoensamblaje como adhesivo tisular para procesar alimentos, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) A^x, en donde x es un número entero de 5 a 10.

4. El uso de la reivindicación 3, en donde el alimento es carne.

5. Uso cosmético de un polipéptido de autoensamblaje para adherir uno o más compuestos cosméticos a la piel, mucosa y/o cabello, en donde dicho polipéptido es un polipéptido de seda, y en donde el polipéptido de seda tiene un peso molecular de al menos 5 kDa y comprende al menos dos unidades repetitivas idénticas, cada una de las cuales comprende al menos una secuencia consenso seleccionada del grupo que consiste en:

iii) Ax, en donde x es un número entero de 5 a 10.