ES2940184T3 - Derivados de 4-pirazin-2-ilmetil-morfolina y uso de los mismos como medicamento - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con nuevas 4-pirazin-2-ilmetil-morfolinas de fórmula general A, procesos para su preparación, composiciones farmacéuticas que las contienen y su uso en terapia, particularmente en el tratamiento o prevención de condiciones que tienen una asociación con NR2B. propiedades moduladoras alostéricas negativas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de 4-pirazin-2-ilmetil-morfolina y uso de los mismos como medicamento

La presente invención se refiere a nuevos procedimientos de preparación de 4-pirazin-2-ilmetil-morfolinas de fórmula general A,

composiciones farmacéuticas que las contienen y su uso en terapia, particularmente en el tratamiento o prevención de condiciones que tienen una asociación con propiedades como moduladores alostéricos negativos de NR2B.

Los compuestos de la invención según la fórmula general A muestran propiedades como moduladores alostéricos negativos de NR2B.

Amplios estudios durante los últimos veinte años han indicado que los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA) desempeñan un papel relevante en la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la discinesia, el accidente cerebrovascular, la enfermedad de la neurona motora, la psicosis, la epilepsia, la ansiedad, la esquizofrenia. y el dolor.

El antagonista no selectivo del receptor NMDA ketamina, (tanto racémico como el enantiómero S), un medicamento usado principalmente para iniciar y mantener la anestesia, ha demostrado en los últimos años eficacia clínica en el tratamiento del trastorno depresivo mayor (MDD) a dosis subanestésicas (Murrough et al. 2013, Am J Psychiatry. 170: 1134; Singh et al. 2016, Biol Psychiatry. 80: 424). Más precisamente, la ketamina provoca un inicio rápido de la eficacia que dura varios días en pacientes con MDD que no responden lo suficiente a la terapía estándar con fármacos (Berman et al. 2000. Biol Psychiatry 47:351, Serafini et al. 2014. Curr. Neuro-pharmacol. 12:444). Sin embargo, los antagonistas de los receptores de NMDA no selectivos tienen una variedad de efectos indeseables que limitan su aplicación. En particular, los efectos secundarios disociativos y psicógenos son prominentes para los antagonistas del receptor NMDA no selectivos tales como la ketamina (Krystal et al. 1994. Arch. Gen. Psychiatry 51:199). A principios de la década de 1990, se descubrió que existen múltiples subtipos de receptores NMDA, que contienen diferentes subunidades NR2(A-D) (Paoletti et al., 2013 Nat Rev. Neurosci 14:383). Más recientemente, los moduladores alostéricos negativos del receptor NMDA selectivos del subtipo NR2B (NR2B NAM) han despertado interés y han mostrado potencial en una amplia gama de indicaciones clínicas, tales como atención, emoción, estado de ánimo y dolor, además de estar implicados en un número de diferentes trastornos humanos (Mony et. Al. 2009. Br. J. Pharmacol. 157:1301; Chaffey et al., Current Anaesthesia & Critical Care 19, 183). En particular, NR2B NAM también ha demostrado eficacia antidepresiva en la etapa inicial de ensayos clínicos (Preskorn et al.2008. J Clin Psychopharmacol 70:58). Los estudios preclínicos que usan NR2B NAM, así como la aplicación de diversas cepas de ratones transgénicos, han demostrado que los receptores NMDA que contienen NR2B están mediando el efecto positivo de la ketamina, por ejemplo, la prueba de natación forzada (Miller et al. 2014 eLife 3:e03581; Kiselycznyk et al. 2015, Behav Brain Res, 287:89). Adicionalmente, el NR2B NAM selectivo tiene ventajas sobre los antagonistas del receptor NMDA no selectivos, tales como la ketamina, debido a la gran disminución de los efectos secundarios psicotomiméticos y disociativos (Jimenez-Sanchez et al. 2014. Neuropsychopharmacology 39:2673). Los NR2B NAM descritos hasta la fecha han presentado inconvenientes con respecto a la farmacología de su receptor y/o a otras propiedades farmacológicas que tienen un uso potencial limitado en la terapia farmacológica humana (Taylor, et al., 2006, Clin Pharmacokinet.45: 989;Addy et al. 2009 J of Clinical Pharmacology 49:856)).

Los documentos WO2010/088408, WO03/010159 y Chaffey, 19(4), (2008), páginas 183-201 describen inhibidores de NMDA que, sin embargo, no muestran la presente combinación de morfolina y pirazina conectadas por un espaciador de metileno. El documento WO2015/130905 divulga los compuestos de fórmula (I)

que son inhibidores de Nav1.6 útiles en el tratamiento de esclerosis múltiple, polineuritis, neuritis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer o enfermedad de Parkinson. El documento WO2015/130905 divulga los ejemplos específicos 100, 105, 106 y 107 en los que el anillo B corresponde a un anillo de fenilo disustituido en meta.

El documento WO2015/130905 informa que los ejemplos específicos 100, 105, 106 y 107 son inhibidores débiles de Nav1.6 (bloqueo de Nav 1.6 de los ejemplos 100, 105 y 107 a 1-5 |iM, y bloqueo de Nav 1.6 del ejemplo 106 a >5 |iM).

Los compuestos de la presente invención están abarcados genéricamente por la fórmula (I) del documento WO2015/130905. Los compuestos de la presente invención difieren estructuralmente de los ejemplos 100, 105, 106 y 107 divulgados explícitamente en el documento WO2015/130905 en que contienen una subestructura de pirazinilo disustituido en para, en lugar del anillo de fenilo disustituido en meta.

Las diferencias estructurales dan como resultado inesperadamente potentes moduladores alostéricos negativos de NR2B (véase la tabla 1), mientras que los ejemplos específicos 100, 105, 106 y 107 del documento WO2015/130905 no muestran ninguna actividad en el canal iónico NR1-NR2B (véase la tabla 2). Adicionalmente, los compuestos de la presente invención no inhiben Nav 1.6 a concentraciones en las que los ejemplos específicos 100 y 105 del documento WO2015/130905 inhiben Nav 1.6 (5 |iM; véanse las tablas 3 y 4).

Además, los compuestos de la presente invención muestran una buena permeabilidad de la membrana y ausencia de eflujo in vitro (véase la tabla 5 para el ensayo MDCK MDR1 (P-gp)). Por lo tanto, se espera que los compuestos de la presente invención muestren una penetración cerebral favorable que se requiere para los medicamentos del CNS eficaces.

Los ensayos MDCK proporcionan información sobre el potencial de un compuesto para atravesar la barrera hematoencefálica. Las mediciones de permeabilidad en monocapas de células MDCK-MDR1 polarizadas y confluentes cultivadas en soportes de filtros permeables se usan como modelo de absorción in vitro: se miden los coeficientes de permeabilidad aparente (PE) de los compuestos en las monocapas de células MDCK-MDR1 (pH 7.4, 37 °C) en dirección de transporte de apical a basal (AB) y de basal a apical (BA). La permeabilidad AB (PEAB) representa la absorción del fármaco desde la sangre hacia el cerebro y el eflujo del fármaco de permeabilidad BA (PEBA) desde el cerebro de regreso a la sangre a través de la permeabilidad pasiva y los mecanismos de transporte activo mediados por transportadores de eflujo y captación que se expresan en las células MDCK-MDR1, predominantemente por el MDR1 humano sobreexpresado. Las permeabilidades idénticas o similares en ambas direcciones de transporte indican permeabilidad pasiva (PEBA/PEAB <1), la permeabilidad vectorial apunta a mecanismos de transporte activo adicionales. Una PEBA más alta que PEAB (PEBA/PEAB > 5) indica la participación del eflujo activo mediado por MDR1, lo que podría comprometer el objetivo de lograr una exposición cerebral suficiente.

Por lo tanto, este ensayo proporciona un apoyo valioso para la selección de compuestos aplicables para pruebas in vivo adicionales. La alta permeabilidad no limitada por el eflujo en la barrera hematoencefálica es una característica favorable para los compuestos que se van a usar para fármacos que actúan principalmente en el CNS.

Además, los compuestos de la presente invención son metabólicamente estables en los microsomas hepáticos humanos (véase la tabla 6, estabilidad metabólica). Por lo tanto, se espera que los compuestos de la presente invención tengan un aclaramiento in vivo favorable y, de este modo, la duración de acción deseada en humanos. La estabilidad en los microsomas hepáticos humanos se refiere a la susceptibilidad de los compuestos a la biotransformación en el contexto de la selección y/o diseño de fármacos con propiedades farmacocinéticas favorables. El sitio primario de metabolismo de muchos fármacos es el hígado. Los microsomas hepáticos humanos contienen el citocromo P450 (CYP) y, de este modo, representan un sistema modelo para estudiar el metabolismo de fármacos in vitro. La estabilidad mejorada en los microsomas hepáticos humanos se asocia con varias ventajas, incluida una mayor biodisponibilidad y una semivida adecuada, lo que puede permitir una dosificación más baja y menos frecuente de los pacientes. Por tanto, la estabilidad mejorada en los microsomas hepáticos humanos es una característica favorable para los compuestos que se van a usar para fármacos.

En consecuencia, los compuestos de la presente invención deben ser más viables para uso humano.

El problema técnico objetivo es, de este modo proporcionar moduladores alostéricos negativos de NR2B potentes y selectivos.

La presente invención proporciona nuevas 4-pirazin-2-ilmetil-morfolinas de fórmula A

en la cual

R¹ representa metilo, etilo, propilo, /so-propilo, ciclopropilo, H³C-CH²-CH²-CH²-, ciclobutilo;

R² representa fenilo que está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en flúor, cloro, metilo, etilo, ciclopropilo;

o una sal del mismo, particularmente una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, en la fórmula general A, R² tiene el mismo significado que se define en cualquiera de las realizaciones anteriores, y

R¹ representa metilo, etilo.

En otra realización, en la fórmula general A, R¹ tiene el mismo significado que se define en cualquiera de las realizaciones anteriores, y

R² representa

La presente invención proporciona nuevas 4-pirazin-2-ilmetil-morfolinas de fórmula general A que inesperadamente son moduladores alostéricos negativos de NR2B potentes y selectivos.

Otro aspecto de la invención se refiere a compuestos según la fórmula A como moduladores alostéricos negativos de NR2B potentes y selectivos que tienen una alta permeabilidad de la membrana y ausencia de eflujo in vitro.

Otro aspecto de la invención se refiere a compuestos según la fórmula A como moduladores alostéricos negativos de NR2B potentes y selectivos que tienen una alta estabilidad metabólica en microsomas hepáticos humanos.

Otro aspecto de la invención se refiere a los compuestos según la fórmula A como moduladores alostéricos negativos de NR2B potentes y selectivos que tienen una alta permeabilidad de la membrana, ausencia de eflujo in vitro y una alta estabilidad metabólica en los microsomas hepáticos humanos.

Otro aspecto de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto de fórmula A opcionalmente junto con uno o más portadores y/o diluyentes inertes.

Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a compuestos según la fórmula A, para el uso en la prevención y/o tratamiento de trastornos asociados con moduladores alostéricos negativos NR2B.

Otro aspecto de la invención se refiere a procedimientos de fabricación de los compuestos de la presente invención. Preparación

El siguiente esquema ilustrará en general cómo fabricar los compuestos según la fórmula general A y los compuestos intermedios correspondientes a modo de ejemplo. Los sustituyentes abreviados pueden ser como se definen anteriormente si no se definen de otra manera dentro del contexto del esquema.

El esquema 1 ilustra la síntesis de derivados de pirazina de fórmula general A. La primera etapa es una sustitución nucleofílica de un derivado de fenol sustituido R2-OH y éster metílico del ácido 5-doropirazina-2-carboxílico; el grupo éster se reduce al alcohol correspondiente con NaBH4; el grupo hidroxi luego se convierte en un grupo saliente (por ejemplo, mesilato).

La última etapa está representada por un desplazamiento nucleofílico empleando el mesilato y un ligero exceso de un derivado de amida del ácido (S)-morfolina-2-carboxílico obtenido haciendo reaccionar el éster metílico del ácido (S)-morfolina-2-carboxílico con la correspondiente amina R1 -NH2.

El enfoque sintético descrito también se puede usar para la síntesis a escala de gramos aplicando diferentes técnicas de purificación tales como cristalización o cromatografía en columna.

Definiciones generales

A los términos no definidos específicamente en este documento se les debe dar los significados que les daría un experto en la técnica a la luz de la divulgación y el contexto.

El canal iónico NR2B debe entenderse como el receptor NMDA que contiene la proteína NR2B.

En caso de que un compuesto de la presente invención se represente en forma de un nombre químico, así como una fórmula, la fórmula prevalecerá en caso de cualquier discrepancia.

Se puede usar un asterisco en las subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula central o al sustituyente al que está unido como se define.

El término “sustituido” como se usa en este documento significa que uno cualquiera o más hidrógenos en el átomo designado es reemplazado con una selección del grupo indicado, siempre que el número de valencia viable del átomo designado no sea excedido, y que la sustitución da como resultado un compuesto estable.

Estereoquímica:

A menos que se indique específicamente, a lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, una fórmula química o un nombre determinados abarcarán rotámeros, tautómeros y todos los isómeros estereoscópicos, ópticos y geométricos (por ejemplo, enantiómeros, diastereoisómeros, isómeros E/Z, etc.) y racematos de los mismos, así como mezclas en diferentes proporciones de los enantiómeros separados, mezclas de diastereoisómeros, o mezclas de cualquiera de las formas anteriores donde tales isómeros y enantiómeros existen.

Sales:

La frase “farmacéuticamente aceptable” se emplea en este documento para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del buen juicio médico, apropiados para su uso en contacto con los tejidos de los seres humanos sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, y acorde con una proporción riesgo/beneficio razonable.

Como se usa en este documento, “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a derivados de los compuestos divulgados en los que el compuesto original forma una sal o un complejo con un ácido o una base.

Los ejemplos de ácidos que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto original que contiene una unidad estructural básica incluyen ácidos minerales u orgánicos tales como ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido gentísico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malónico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido 4-metil-bencenosulfónico, ácido fosfórico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido sulfúrico o ácido tartárico.

Los ejemplos de cationes y bases que forman una sal farmacéuticamente aceptable con un compuesto original que contiene una unidad estructural ácido incluyen Na⁺ , K⁺, Ca²⁺, Mg²⁺, NH⁴⁺, L-arginina, 2,2'-iminobisetanol, L-lisina, N-metil-D-glucamina o tris(hidroximetil)-aminometano.

Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir del compuesto original que contiene una unidad estructural básica o ácida mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad suficiente de la base o ácido apropiado en agua o en un diluyente orgánico como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos. Las sales de otros ácidos además de los mencionados anteriormente que, por ejemplo, son útiles para purificar o aislar los compuestos de la presente invención (por ejemplo, sales de trifluoroacetato) también forman parte de la invención.

Ensayos y datos biológicos

Lista de abreviaturas

DMEM Medio de Eagle modificado por Dulbecco

FBS Suero fetal bovino

FLIPR Lector de placas de imágenes fluorométricas

HEK293 Línea celular derivada de células de riñón embrionario humano

HEPES Solución reguladora de ácido hidroxietil-piperazinaetano-sulfónico

IC50 Concentración inhibitoria máxima media

MDCK Riñón canino Madin-Darby

MDR1 Proteína 1 de resistencia a múltiples fármacos

P-gp p-Glicoproteína

SEM Media del error estándar

EGTA (ácido etilenglicol-bis(p-aminoetil éter)-N,N,N',N'-tetraacético), también conocido como ácido egtazico Efecto in vitro:

Determinación de la actividad farmacológica in vitro

La actividad de los compuestos de la invención se puede demostrar usando los siguientes ensayos de células NMDA NR1/NR2B in vitro:

Método:

Se usó una línea celular humana HEK293 con expresión inducible por tetraciclina del receptor NMDA NR1/NR2B como sistema de prueba para la eficacia y potencia del compuesto. La línea celular se adquirió de ChanTest, Catálogo #CT6121. La actividad del compuesto se determinó midiendo el efecto de los compuestos sobre la concentración de calcio intracelular inducida por el agonismo de glicina/glutamato en un sistema FLIPRtetra (Molecular Devices). Cultivo de células:

Las células se obtuvieron como células congeladas en crioviales y se almacenaron hasta su uso a -150 °C.

Las células se cultivaron en medio de cultivo (DMEM/F12, FBS al 10 %, blasticidina 5 |ig/mL, zeozina 150 |ig/mL, geneticina 500 |ig/mL). Es importante que la densidad no supere el 80 % de confluencia. Para el subcultivo, las células se separaron de los matraces con Versene. Para el ensayo, las células se separaron, se lavaron dos veces con medio de inducción (DMEM/F12 sin glutamina, FBS al 10 %, 2 |ig/mL de tetraciclina, ketamina 2 mM) y se sembraron en placas de amina con recubrimiento puro de 384 pocillos (Becton Dickinson, 50000 células por pocillo en 50 |il) 48 h antes del ensayo en medio de inducción.

Preparación del compuesto

Los compuestos de prueba se disolvieron en DMSO al 100 % a una concentración de 10 mM y en una primera etapa se diluyeron en DMS^o a una concentración de 5 mM, seguido de etapas de dilución en serie en DMSO al 100 %. El factor de dilución y el número de etapas de dilución pueden variar según las necesidades. Por lo general, se prepararon por duplicado 8 concentraciones diferentes en diluciones 1:5, se llevaron a cabo diluciones intermedias adicionales (1:37.5) de las sustancias con solución reguladora de ensayo acuoso (NaCl 137 mM, KCl 4 mM, CaCb 1.8 mM, HEPES 10 mM, Glucosa 10 mM, pH 7.4), lo que da como resultado una concentración de compuesto 3 veces superior a la concentración final de la prueba y DMSO al 2.7 %, lo que da como resultado una concentración final de DMSO del 0.9 % en el ensayo.

Ensayo FLIPR:

El día del ensayo, las células se lavaron 3x con solución reguladora de ensayo (como se describe anteriormente), quedaron 10 |iL de solución reguladora en los pocillos después del lavado. 10 |iL de solución reguladora de carga del kit de Ca (AAT Bioquest; preparada a partir del kit que contiene los siguientes componentes: Componente A: Fluo-8 NW disuelto en 200 |iL de DMSO y 20 |iL de esta solución se mezclan con 10 ml de solución reguladora preparada a partir de los componentes B y C, Componente B: 10X Pluronic® F127 Plus diluido 1:10 en componente C, Componente C: HUBS (Hanks con Hepes 20 mM) se agregó a las células y las placas se incubaron con tapa durante 60 minutos a temperatura ambiente. 20 |iL de solución reguladora de ensayo que contenía glicina 60 |iM (20 |iM final) y glutamato 3 |iM (1 |iM final) se agregó a la columna 1-23, la columna 24 obtuvo solución reguladora de ensayo sin glicina/glutamato para servir como control negativo no estimulado. Se leyó la fluorescencia (que indica la entrada de calcio como resultado de la activación del canal iónico NR1/NR2B) en el dispositivo FLIPRtetra durante 60 segundos para controlar los efectos inducidos por el glutamato. Después de 2 minutos, se agregaron cuidadosamente a los pocillos 20 |iL de la dilución del compuesto preparada como se describe anteriormente o controles (filas 1-22) en solución reguladora de ensayo. Se leyó la fluorescencia en el dispositivo FLIPR tetra durante 6 minutos adicionales para monitorear los efectos inducidos por el compuesto después de la activación por los agonistas. Se calcula el promedio de 2 mediciones a los 5 minutos y 5 min 10 segundos después de la adición del compuesto y además se usa para los cálculos de IC50. Cada placa de dilución del compuesto de microtitulación del ensayo contenía pocillos (en la columna 23 o 24) con controles de DMSO en lugar del compuesto como controles para la fluorescencia inducida por glicina/glutamato (controles altos) y pocillos con 1 |iM de una NR2B NAM de referencia como controles bajos (Compuesto 22; referencia: Layton, Mark E et al, ACS Chemical Neuroscience 2011, 2(7), 352-362).

Evaluación y cálculo de datos:

El archivo de salida del lector contiene el número de pocillos y las unidades de fluorescencia promedio medidas. Para la evaluación y el cálculo de los datos, la medición del control bajo se estableció como control 0 % y la medición del control alto se estableció como control 100 %. Los valores de IC50 se calcularon usando la fórmula estándar de regresión logística de 4 parámetros. Cálculo: [y=(a-d)/(1+(x/c)Ab)+d], a = valor bajo, d = valor alto; x = conc M; c=CI50M; b = pendiente.

Se prefieren los moduladores alostéricos negativos NR2B cubiertos por la estructura general A y que exhiben un valor IC⁵⁰ bajo.

Tabla 1 Afinidad de NR2B in vitro de los compuestos de la presente invención obtenidos en el ensayo FLIPR

(continuación)

Tabla 2 Afinidad de NR2B in vitro de los compuestos de la técnica anterior más cercanos (ejemplos 100, 105, 106 y 107 en el documento WO2015/130905) obtenidos en el mismo ensayo FLIPR que los compuestos de la tabla 1

Determinación de la inhibición Nav 1.6.

Equipo:

Plataforma electrofisiológica IonWorks Quattro

Preparación de placas del compuesto

Los compuestos se prepararon en DMSO a 300x las concentraciones finales del ensayo de 1 y 5 |iM.

Las soluciones madre de DMSO 300x se transfirieron a placas de ensayo en las que se colocaron 2 |iL por pocillo de cada solución madre 300x. Todas las placas de ensayo se almacenaron a -80 °C hasta el día del ensayo.

El día del ensayo, la placa de ensayo apropiada se descongeló a temperatura ambiente, se centrifugó y se agregaron 198 |il de solución de registro externo y se mezcló completamente. Esto proporcionó una dilución 1:100. Se produjo una dilución adicional de 1:3 al agregarlas a las células en la plataforma electrofisiológica IonWorks Quattro, dando una dilución de 1:300 en total. En cada placa de ensayo, se reservaron al menos 8 pocillos para el control del vehículo (DMSO al 0.3 %) y al menos 8 pocillos para cada control positivo específico de la línea celular analizada. Los controles positivos se probaron con un bloqueo máximo y una concentración IC50 aproximada. Como control positivo se usó lidocaína a concentraciones de 30 y 1000 |iM.

Soluciones de registro electrofisiológico

Las soluciones para registrar las corrientes Nav1.6 fueron las siguientes:

Solución de registro externo

NaCl 137 mM

KCl 4 mM

MgCl²1 mM

CaCl² 1.8 mM

HEPES 10 mM

Glucosa 10 mM

pH 7.3 (titulado con NaOH 10 M)

Solución de registro interno

CsF 90 mM

CsCl 45 mM

HEPES 10 mM

EGTA 10 mM

pH 7.3 (titulado con CsOH 1 M)

Se usó anfotericina B para obtener acceso eléctrico al interior de la célula a una concentración final de 200 |ig/ml en solución de registro interno.

Protocolos experimentales y análisis de datos

Protocolo experimental Nav1.6

Inhibición dependiente del estado: los canales de sodio cuando se mantienen en un potencial despolarizado o un pulso de prueba largo, los canales se abren y se inactivan y luego permanecen inactivados hasta que el potencial de membrana vuelve a los potenciales hiperpolarizados, cuando los canales inactivados se recuperan de la inactivación al estado cerrado. Un ejemplo es la inhibición de tetracaína, que es mucho más fuerte en potenciales despolarizados que en potenciales hiperpolarizados.

Las células se mantuvieron a -120 mV. Para inactivar por completo los canales de sodio (pulso 1), las células se pulsaron a 0 mV durante 2500 ms y retrocedieron a -120 mV durante 10 ms (para recuperarse completamente de la inactivación, sin embargo, los canales que tenían fármacos unidos a ellos no se recuperarán de la inactivación) antes de pasar a 0 mV durante 20 ms (pulso 2).

Filtros de datos de IonChannel Profiler

Resultados de control de ensayo

Los datos tanto del control positivo como del vehículo asociados con cada línea celular ensayada se muestran a continuación como un ejemplo. La media se muestra para cada control positivo y negativo como un símbolo sólido con el número total de réplicas de pocillos individuales al lado del símbolo sólido. Además, los datos individuales de cada pocillo se muestran en el gráfico como símbolos abiertos para que la variación sobre el valor medio se pueda evaluar fácilmente. Estos datos se proporcionan para ayudar a determinar si un compuesto tiene actividades en el canal iónico en relación con los datos de control y proporciona una indicación de la variabilidad del ensayo y, de acuerdo con lo anterior, se usa para juzgar el tamaño del efecto de un efecto específico del compuesto que se puede detectar. A continuación se muestran los controles de ensayo para el ensayo Nav1.6 lonWorks Quattro. La lidocaína, un compuesto de referencia de Nav1.6, inhibió las corrientes evocadas en una concentración y uso dependientes como se predijo.

P1 - pulso 1; P25 - pulso 25.

Un valor Pos/Pre de 1.0 corresponde al 0 % de inhibición, un valor Pos/Pre de 0.0 corresponde al 100 % de inhibición. Para ilustrar la variación del ensayo, tanto el ejemplo 106 del documento WO2015/130905 muestra una inhibición del 14 % de Nav 1.6 a 5 pM (normalizado, véase la tabla 3) como el ejemplo 7 de la presente invención que muestra una inhibición del -15 % de Nav 1.6 a 5 pM (normalizados, véase la tabla 4), respectivamente, están dentro de la variación del ensayo en comparación con los datos de control del ensayo y, por lo tanto, no muestran ninguna inhibición significativa del canal Nav 1.6 a 5 pM.

Las tablas 3 y 4 muestran el porcentaje normalizado de inhibición del canal Nav1.6. Los datos normalizados muestran los datos del compuesto normalizados para el control del vehículo (0 % de inhibición) y el control de inhibición máxima (100 % de inhibición); la inhibición máxima en P1 por lidocaína 1000 pM (no normalizada) varío desde 46.4 % a 47.2 % en todos los experimentos. (Véase también la figura resultados de control del ensayo anterior).

Tabla 3 Inhibición normalizada de Nav 1.6 in vitro de los compuestos de la técnica anterior más cercanos (ejemplos 100, 105, 106 y 107 en el documento WO2015/130905) obtenidos en el mismo ensayo electrofisiológico que los compuestos de la tabla 4 (concentraciones: 1 pM y 5 pM).

Tabla 4 Inhibición de Nav 1.6 normalizada in vitro de los compuestos de la presente invención obtenida en el mismo ensayo electrofisiológico como los compuestos de la técnica anterior en la tabla 3 (concentraciones: 1 pM y 5 pM).

Se prefieren los moduladores alostéricos negativos de NR2B cubiertos por la estructura general A que no muestran ninguna inhibición significativa de Nav1.6.

Los compuestos de la presente invención no muestran ninguna inhibición significativa del canal Nav 1.6 a 1 y 5 pM, respectivamente (véase la tabla 4 y resultados de control de ensayo), mientras que los ejemplos 100 y 105 del documento WO2015/130905 muestran 37.8 % y 68 % de inhibición de Nav 1.6 a 5 pM, respectivamente (véase la tabla 3). Los ejemplos 106 y 107 del documento WO2015/130905 no muestran ninguna inhibición significativa del canal Nav 1.6 a 1 y 5 pM, respectivamente (es decir, la inhibición está dentro de la variabilidad del ensayo, véase la tabla 3 y resultados de control del ensayo).

Ensayo P-gp de MDCK

Los coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de los compuestos a través de las monocapas de MDCK-MDR1 (células MDCKII transfectadas con plásmido de expresión de ADNc de MDR1 humano) se miden en dirección de apical a basal (AB) y de basal a apical ^{( B a ) .} Se siembran células MDCK-MDR1 (6 x 105 células/cm2) en insertos de filtro (Corning, Transwell, policarbonato, tamaño de poro de 0.4 |im) y se cultivan durante 9 a 10 días. Los compuestos disueltos en solución madre de DMSO (1-20 mM) se diluyen con solución reguladora acuosa HTP-4 (NaCl 128.13 mM, KCl 5.36 mM, MgSO4 1 mM, CaCh 1.8 mM, NaHCOa 4.17 mM, Na2HPO4 1.19 mM, NaH2PO40.41 mM, HEPES 15 mM, glucosa 20 mM, pH 7.4) complementado con BSA al 0.25 % para preparar las soluciones de transporte (concentración final: 1 o 10 pM, DMSO final <= 0.5 %). La solución de transporte se aplica al lado donante apical o basolateral para medir la permeabilidad A-B o B-A, respectivamente. El lado del receptor contiene solución reguladora HTP-4 complementada con 0.25 % de BSA. Las muestras se recolectaron al principio y al final del experimento del donante y en diversos intervalos de tiempo durante un máximo de 2 horas también del lado del receptor para la medición de la concentración mediante HPLC-MS/MS (Sistema MS Rapid-Fire de alto rendimiento (Agilent) acoplado a QT rap 6500 (AB Sciex) o TSQ Vantage (Thermo Scientific)). Los volúmenes de receptor muestreados se reemplazan con solución de receptor nueva. La proporción de eflujo se calcula dividiendo los valores de Papp (b-a) por los valores de Papp (a-b). Los resultados se muestran en la tabla 5.

Tabla 5

(continuación)

Los resultados experimentales anteriores muestran que los compuestos de la presente invención son NR2B NAM potentes que tienen una alta permeabilidad de la membrana y ausencia de eflujo in vitro que anticipa una excelente capacidad para atravesar la barrera hematoencefálica.

Estabilidad metabólica

La degradación metabólica del compuesto de prueba se ensayó a 37 °C con microsomas de hígado humano agrupados. El volumen de incubación final de 60 pl por punto de tiempo contiene solución reguladora TRIS pH 7.6 a temperatura ambiente (0.1 M), cloruro de magnesio (solución acuosa 5 mM), proteína microsomal (1 mg/mL para humanos) y el compuesto de prueba a una concentración final de 1 pM. Después de un breve período de preincubación a 37 °C, las reacciones se iniciaron mediante la adición de betanicotinamida adenina dinucleótido fosfato, en forma reducida (NADPH, 1 mM), y se terminaron transfiriendo una alícuota a acetonitrilo después de diferentes puntos de tiempo. Después de la centrifugación (10000 g, 5 min), se ensayó una alícuota del sobrenadante mediante HPLCMS/MS como se describe anteriormente para el ensayo P-gp de MDCK para la cantidad de compuesto original. La semivida se determinó mediante la pendiente de la gráfica semilogarítmica del perfil de concentración-tiempo. Los resultados se muestran en la tabla 6.

Tabla 6

Los resultados experimentales anteriores muestran que los compuestos de la presente invención son NR2B NAM potentes que tienen una alta estabilidad en los microsomas hepáticos humanos.

La presente invención proporciona compuestos según la fórmula A que inesperadamente dan como resultado una combinación favorable de los siguientes parámetros clave:

1) modulación alostérica negativa potente y selectiva de NR2B,

2) alta estabilidad en microsomas hepáticos humanos, y

3) alta permeabilidad y ausencia de eflujo in vitro en los transportadores de células MDCK-MDR1.

Composición farmacéutica

Las preparaciones apropiadas para administrar los compuestos de la presente invención serán evidentes para los expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios, comprimidos para deshacer en la boca, pastillas, soluciones, jarabes, elixires, sobres, inyectables, inhalantes, polvos, etc. El contenido del compuesto o compuestos farmacéuticamente activos puede variar en el intervalo desde 0.1 a 95 % en peso, preferiblemente de 5.0 a 90 % en peso de la composición como un todo.

Se pueden obtener comprimidos apropiados, por ejemplo, mezclando un compuesto de la presente invención con excipientes conocidos, por ejemplo, diluyentes inertes, portadores, desintegrantes, adyuvantes, surfactantes, aglutinantes y/o lubricantes y presionando la mezcla resultante para formar comprimidos.

Uso en tratamiento

Las aplicaciones terapéuticas humanas de NR2B NAM se han resumido en revisiones de Traynelis et al. (Traynelis et al., Pharmacology Reviews, 2010, 62:405), Beinat et al. (Beinat et al., Current Medicinal Chemistry, 2010, 17:4166) y Mony et al. (Mony et al., British J. Pharmacology, 2009, 157:1301).

La presente invención se refiere a compuestos que son útiles en el tratamiento de trastornos, enfermedades y afecciones psiquiátricos en los que la modulación alostérica negativa de NR2B tiene un beneficio terapéutico, incluidos: ( I) trastornos del estado de ánimo y trastornos afectivos del estado de ánimo; (2) trastornos del espectro de la esquizofrenia; (3) trastornos neuróticos, relacionados con el estrés y somatomorfos, incluidos los trastornos de ansiedad; (4) trastornos del desarrollo psicológico; (5) síndromes conductuales asociados con alteraciones fisiológicas y factores físicos; (6) trastornos adictivos y relacionados con sustancias; (7) enfermedad asociada con síntomas de valencia negativa y positiva; (8) dolor; (9) enfermedades cerebrovasculares; (10) trastornos episódicos y paroxísticos; ( I I ) enfermedades neurodegenerativas.

En vista de su efecto farmacológico, los compuestos de la presente invención son apropiados para su uso en el tratamiento de un trastorno, enfermedad o condición seleccionada de la lista que consiste en

(1) tratamiento de trastornos del estado de ánimo y trastornos afectivos del estado de ánimo, incluido el trastorno bipolar I en forma depresiva, hipomaníaca, maníaca y mixta; trastorno bipolar II; trastornos depresivos, tales como episodio depresivo único o trastorno depresivo mayor recurrente, trastorno depresivo menor, trastorno depresivo con inicio posparto, trastornos depresivos con síntomas psicóticos; trastorno depresivo mayor con o sin angustia ansiosa concomitante, características mixtas, características melancólicas, características atípicas, características psicóticas congruentes con el estado de ánimo, características psicóticas incongruentes con el estado de ánimo, catatonia.

(2) tratamiento de trastornos del estado de ánimo pertenecientes al espectro de la esquizofrenia y otros trastornos psicóticos que incluyen esquizofrenia y trastorno esquizoafectivo con síntomas negativos y cognitivos asociados.

(3) tratamiento de trastornos pertenecientes a los trastornos neuróticos, relacionados con el estrés y somatomorfos que incluyen trastornos de ansiedad, trastorno de ansiedad general, trastorno de pánico con o sin agorafobia, fobia específica, fobia social, trastornos de ansiedad crónica; trastorno obsesivo compulsivo; reacción al estrés severo y trastornos de adaptación, tales como el trastorno de estrés postraumático; otros trastornos neuróticos tales como el síndrome de despersonalización-desrealización.

(4) tratamiento de trastornos del desarrollo psicológico, incluidos los trastornos generalizados del desarrollo, incluidos el síndrome de Asperger y el síndrome de Rett, trastornos autistas, autismo infantil y trastorno hiperactivo asociado con retraso mental y movimientos estereotipados, trastorno específico del desarrollo de la función motora, trastornos específicos del desarrollo de las habilidades escolares, trastorno hiperactivo y déficit de atención.

(5) tratamiento de síndromes conductuales asociados con alteraciones fisiológicas y factores físicos que incluyen trastornos mentales y conductuales asociados con el puerperio, incluida la depresión posnatal y posparto; trastornos de la alimentación, incluidas la anorexia nerviosa y la bulimia nerviosa y otros trastornos del control de los impulsos.

(6) tratamiento de trastornos relacionados con sustancias y trastornos adictivos, que son trastornos por uso de sustancias inducidos por alcohol, cannabis, alucinógenos, estimulantes, hipnóticos, tabaco.

(7) tratamiento de enfermedades asociadas con síntomas de valencia negativa y positiva que incluyen anhedonia, amenaza y pérdida sostenida, ideación suicida.

(8) tratamiento del dolor agudo y crónico que es relacionado con la neuropatía, por ejemplo, neuropatía o polineuropatía diabética, procedimientos fisiológicos y trastornos físicos que incluyen, por ejemplo, lumbalgia, dolor en las articulaciones, enfermedad del sistema musculoesquelético y del tejido conjuntivo, por ejemplo, reumatismo, mialgia, trastornos nerviosos, de la raíz nerviosa y del plexo, por ejemplo, síndrome del miembro fantasma con dolor, síndrome del túnel carpiano.

(9) tratamiento de enfermedades cerebrovasculares, por ejemplo, hemorragia intracerebral o subaracnoidea, infarto cerebral, accidente cerebrovascular, oclusión y estenosis, aterosclerosis cerebral, angiopatía amiloide cerebral.

(10) tratamiento de trastornos episódicos y paroxísticos, por ejemplo, epilepsia.

(11) tratamiento de enfermedades que incluyen formas de neurodegeneración, por ejemplo, accidente cerebrovascular, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Huntington.

Como se usa en este documento, a menos que se indique lo contrario, los términos “tratar”, “tratamiento” incluirán el manejo y cuidado de un sujeto humano o paciente humano con el fin de combatir una enfermedad, afección o trastorno e incluye la administración de un compuesto de la presente invención para prevenir la aparición de síntomas o complicaciones, aliviar los síntomas o complicaciones, o eliminar la enfermedad, afección o trastorno.

Como se usa en este documento, a menos que se indique lo contrario, el término “prevención” incluirá (a) reducción en la frecuencia de uno o más síntomas; (b) reducción en la severidad de uno o más síntomas; (c) el retraso o la evitación del desarrollo de síntomas adicionales; y/o (d) retraso o evitación del desarrollo del trastorno o afección. Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento y/o prevención de las afecciones mencionadas anteriormente.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque el compuesto de fórmula A se usa además de la terapia conductual, TMS (estimulación magnética transcraneal), ECT (terapia electroconvulsiva) y otras terapias.

Terapia de combinación

Los compuestos según la presente invención se pueden combinar con otras opciones de tratamiento que se sabe que se usan en la técnica en relación con un tratamiento de cualquiera de las indicaciones cuyo tratamiento está en el foco de la presente invención.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque el compuesto de fórmula A se administra además del tratamiento con uno o más antidepresivos seleccionados de la lista que consiste en duloxetina, escitalopram, bupropión, venlafaxina, desvenlafaxina, sertralina, paroxetina, fluoxetina, vortioxetina, mirtazapina, citalopram, vilazodona, trazodona, amitriptilina, clomipramina, agomelatina, levomilnacipran, litio, doxepina, nortriptilina. El término “antidepresivo” significará cualquier agente farmacéutico o fármaco que pueda usarse para tratar la depresión o enfermedades asociadas con síntomas depresivos.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque el compuesto de fórmula A se administra además del tratamiento con uno o más antipsicóticos seleccionados de la lista que consiste en aripiprazol, palmitato de paliperidona, lurasidona, quetiapina, risperidona, olanzapina, paliperidona, brexpiprazol, clozapina, asenapina, clorpromazina, haloperidol, cariprazina, ziprasidona, amisulprida, iloperidona, flufenazina, blonanserina, aripiprazol lauroxil. El término “antipsicótico” significará cualquier agente farmacéutico o fármaco que pueda usarse para tratar enfermedades asociadas con síntomas psicóticos o depresivos.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque el compuesto de fórmula A se administra además del tratamiento con uno o más psicoestimulantes seleccionados de la lista que consiste en lisdexanfetamina, metilfenidato, anfetamina, dexanfetamina, dexmetilfenidato, armodafinilo, modafinilo. El término “psicoestimulante” significará cualquier agente farmacéutico o fármaco que pueda usarse para tratar enfermedades como trastornos del estado de ánimo o trastornos del control de los impulsos.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque el compuesto de fórmula A se administra además del tratamiento con nootrópicos seleccionados de la lista que consiste en oxiracetam, piracetam o el producto natural Hierba de San Juan.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula A que se administra además del tratamiento con uno o más antidepresivos, antipsicóticos, psicoestimulantes, nootrópicos o producto natural según uno cualquiera de los aspectos anteriores caracterizado porque la combinación del compuesto de fórmula A y uno o más antidepresivos, antipsicóticos, psicoestimulantes, nootrópicos o productos naturales se usa además de la terapia conductual, TMS (estimulación magnética transcraneal), ECT (terapia electroconvulsiva) y otras terapias.

Sección experimental

Abreviaturas:

ACN acetonitrilo

APCI Ionización química a presión atmosférica

Boc tert-butiloxicarbonilo

CDI 1,1'-carbonildiimidazol

CO2 Dióxido de carbono

D día

DA Matriz de diodos

DCM diclorometano

DIPE diisopropiléter

DIPEA diisopropiletilamina

DMF dimetilformamida

e.e. exceso enantiomérico

ESI ionización por electroaspersión (en MS)

EtOAc acetato de etilo

EtOH etanol

Ej. Ejemplo

h hora (s)

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio-hexafluorofosfato

HPLC cromatografía líquida de alta resolución

HPLC-MS cromatografía líquida de alta resolución acoplada-espectrometría de masas

M molar (mol/L)

MeOH metanol

min Minuto (s)

MS espectrometría de masas

MW peso molecular

NH3 amoníaco

PSI Libra por pulgada cuadrada

rt temperatura ambiente

_Rt tiempo de retención

scCO2 CO2 supercrítico

disol disolvente

TBTU Tetrafluoroborato 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio

TEA trietilamina

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

TLC cromatografía de capa fina

SFC cromatografía de fluidos supercríticos

Abreviaturas dentro de los datos espectrales:

1H- RMN Resonancia magnética nuclear de protones

br ancho

6 desplazamiento químico

d d doblete

dd doblete de dobletes

dt doblete de tripletes

DMSO-d6 hexa-deutero-dimetilsulfóxido

H protón

Hz Hercio (=1/segundo)

J constante de acoplamiento

m multiplete

ppm partes por millón

_q cuarteto

s singlete

t triplete

td triplete de dobletes

Analítica General.

Todas las reacciones se llevaron a cabo usando reactivos y disolventes de calidad comercial. Los espectros de RMN se registraron en un instrumento Bruker AVANCE III HD 400 MHz usando el software Top-Spin 3.2 pl6. Los desplazamientos químicos se dan en partes por millón (ppm) campo abajo del trimetilsilano de referencia interna en unidades 8. Los datos seleccionados se informan de la siguiente manera: desplazamiento químico, multiplicidad, constantes de acoplamiento (J), integración. La cromatografía en capa fina (TLC) analítica se llevó a cabo usando placas de gel de sílice 60 F254 de Merck. Todos los compuestos se visualizaron como puntos únicos usando luz ultravioleta de onda corta. Los espectros de masas de baja resolución se obtuvieron usando un espectrómetro de masas de cromatografía líquida (LCMS) que constaba de un LC Agilent serie 1100 acoplado a un espectrómetro de masas cuadripolar Agilent 6130 (ionización positiva por electroaspersión).

Métodos:

Métodos HPLC-MS:

Método 1

Método 2

Método 3

Métodos analíticos SFC quirales:

Método 4: I SA 20 IPA NH3 001

Método 5: I IC 30 IPA NHa 001

Condiciones de HPLC preparativa para la purificación:

Instrumento: (Agilent 1100). Eluyentes: Agua - solución al 5 % de NH⁴OH en Agua - CH³CN;

Caudal: 50 ml/min; Temperatura 60 °C; Columna: Xbridge C18.

Preparación de Intermedios:

Ejemplo 1a

Se mezcló clorhidrato de éster metílico del ácido (S)-morfolina-2-carboxílico (35 g; 192.7 mmol) junto con 400 ml de una solución 8 M de metilamina en EtOH. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente, durante 60 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida, se agregaron THF (500 ml) y TEA (50 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente, durante 12 horas. Se formó un precipitado; la suspensión se filtró a través de un filtro de vidrio y la solución filtrada se evaporó a presión reducida. Se obtuvieron 23.5 g del producto deseado en forma sólida.

Ejemplo 1b

Se mezcló clorhidrato de éster metílico del ácido (S)-morfolina-2-carboxílico (5 g; 27.5 mmol) junto con 138 ml de una solución 2 M de etilamina en THF. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente, durante 60 horas. El disolvente se eliminó a presión reducida, se agregaron THF (500 ml) y TEA (50 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente, durante 12 horas. Se formó un precipitado; la suspensión se filtró a través de un filtro de vidrio y la solución filtrada se evaporó a presión reducida. Se obtuvieron 4.3 g del producto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2a

Se disolvieron éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol) y 4-fluoro-fenol (0.78 g; 6.95 mmol) en DMSO (10 ml); se agregó K²CO³ (1.2 g; 8.69 mmol) y la mezcla de reacción se agitó, durante 45 min a 60 °C. La mezcla de reacción se vertió en agua (50 ml) y se agitó, durante 15 minutos. El precipitado obtenido se lavó con agua, una solución acuosa al 10 % de K²CO³ y se secó. Se obtuvieron 1.4 g de sólido.

Ejemplo 2b

El ejemplo 2b se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-doro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 2-fluoro-4-metilfenol (0.75 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.5 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2c

El ejemplo 2c se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 4-metilfenol (0.73 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.35 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2d

El ejemplo 2d se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-doro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 2,4-dimetilfenol (0.83 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.45 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2e

El ejemplo 2e se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 4-cloro-2-fluoro-fenol (0.74 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.55 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2f

El ejemplo 2f se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 2,4-difluorofenol (0.67 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.50 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2g

El ejemplo 2g se sintetizó de manera análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 4-clorofenol (0.89 g; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.5 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2h

El ejemplo 2h se sintetizó de manera análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 4-fluoro-2-metilfenol (0.88 g; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.5 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2i

El ejemplo 2i se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 2-fluorofenol (0.62 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.22 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2k

El ejemplo 2k se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1 g; 5.79 mmol), 2-clorofenol (0.71 ml; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.51 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2j

El ejemplo 2j se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (1.00 g; 5.80 mmol), fenol (0.65 g; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.30 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 21

El ejemplo 21 se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-doro-pirazina-2-carboxílico (1.00 g; 5.80 mmol), 2,6-difluorofenol (0.90 g; 6.95 mmol). Se obtuvieron 1.52 g del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 2m

El ejemplo 2m se sintetizó de forma análoga al ejemplo 2a.

Materiales de partida: éster metílico del ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (320 mg; 1.85 mmol), 2-fluoro-6-metilfenol (257 mg; 2.04 mmol). Se obtuvieron 480 mg del compuesto deseado en forma sólida.

Ejemplo 3a

Se disolvió el ejemplo 2a (1.4 g; 5.64 mmol) en MeOH (15 ml); se agregó NaBH⁴ (0.64 g; 16.9 mmol) y la mezcla de reacción se agitó, durante 3 horas a temperatura ambiente. Se agregó agua para inactivar la reacción; la mezcla de reacción luego se evaporó a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc (100 ml) y una solución acuosa al 10 % de K²CO³ (30 ml). La fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴ y el residuo obtenido después de la evaporación de los disolventes se purificó por cromatografía instantánea (Eluyente: gradiente comenzando con éter de petróleo/EtOAc 3/1 a éter de petróleo/EtOAc 2/1). Se obtuvieron 0.8 g del compuesto deseado (aceite).

Ejemplo 3b

El ejemplo 3b se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2b (1.5 g; 5.72 mmol). Se obtuvo 1g del compuesto deseado.

Ejemplo 3c

El ejemplo 3c se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2c (1.35 g; 5.53 mmol). Se obtuvieron 0.95 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3d

El ejemplo 3d se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2d (1.45 g; 5.61 mmol). Se obtuvieron 0.83 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3e

El ejemplo 3e se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2e (1.55 g; 5.48 mmol). Se obtuvieron 1.02 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3f

El ejemplo 3f se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2f (1.50 g; 5.64 mmol). Se obtuvieron 1.04 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3g

El ejemplo 3g se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2g (1.5 g; 5.67 mmol). Se obtuvieron 0.83 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3h

El ejemplo 3h se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2h (1.5 g; 5.72 mmol). Se obtuvieron 0.86 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3i

El ejemplo 3i se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2i (1.22 g; 4.92 mmol). Se obtuvieron 0.75 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3k

El ejemplo 3k se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2k (1.51 g; 5.71 mmol). Se obtuvieron 0.85 g del compuesto deseado.

Ejemplo 3j

El ejemplo 3j se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2k (1.30 g; 5.65 mmol). El producto en bruto obtenido tras la evaporación de los disolventes orgánicos se usó tal cual en las siguientes etapas. Se obtuvieron 0.98 g del compuesto deseado (contenido 70 %).

Ejemplo 31

El ejemplo 31 se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 21 (1.52 g; 5.71 mmol). El producto en bruto obtenido tras la evaporación de los disolventes orgánicos se usó tal cual en las siguientes etapas. Se obtuvieron 1.30 g del compuesto deseado (contenido 85 %).

Ejemplo 3m

El ejemplo 3m se preparó de forma análoga al ejemplo 3a. Materiales de partida: Ejemplo 2m (480 mg; 1.83 mmol). El producto en bruto después de la evaporación de los disolventes orgánicos se usó como tal en las siguientes etapas. Se obtuvieron 420 mg del compuesto deseado (contenido 85 %).

Ejemplo 4a

Se disolvió el ejemplo 3a (0.8 g; 3.63 mmol) en 2-metil-THF (Aldrich) (40 ml); se agregó gota a gota TEA (0.76 ml; 5.45 mmol), seguido de cloruro de metanosulfonilo (0.3 ml; 4 mmol). La mezcla se agitó, durante 1.5 horas a rt antes de procesarla. Se agregó una solución al 5 % de NaHCO3 en agua a la mezcla de reacción, las fases se separaron y se secaron sobre Na2SO4. El producto en bruto obtenido tras la evaporación de los disolventes orgánicos se usó tal cual en las siguientes etapas. Se obtuvieron 1.05 g del producto deseado.

Ejemplo 4b

El ejemplo 4b se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3b (1 g; 4.27 mmol). Se obtuvieron 1.3 g. El producto se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4c

El ejemplo 4c se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3c (0.95 g; 4.39 mmol). Se obtuvieron 1.25 g. El producto obtenido después del procesamiento se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4d

El ejemplo 4d se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3d (0.83 g; 3.61 mmol). Se obtuvieron 1.1g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4e

El ejemplo 4e se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3e (1.02 g; 4.0 mmol). Se obtuvieron 1.32 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4f

El ejemplo 4f se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3f (1.04 g; 4.37 mmol). Se obtuvieron 1.35 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4g

El ejemplo 4g se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3g (0.83 g; 3.51 mmol). Se obtuvieron 1.1 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4h

El ejemplo 4h se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3h (0.86 g; 3.67 mmol). Se obtuvieron 1.12 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4i

El ejemplo 4i se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3i (0.75 g; 3.41 mmol). Se obtuvo 1.0 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4k

El ejemplo 4k se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3k (0.85 g; 3.59 mmol). Se obtuvieron 1.1 g. El producto obtenido después del trabajo se usó como tal en la siguiente etapa.

Ejemplo 4j

El ejemplo 4j se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3k (0.98 g; contenido 70 %; 3.39 mmol). El producto obtenido después del procesamiento se usó como tal en la siguiente etapa. Se obtuvieron 1.35 g del producto deseado (contenido 70 %).

Ejemplo 41

El ejemplo 41 se preparo de forma analoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 31 (1.30 g; contenido 85 %; 4.64 mmol). El producto obtenido después del procesamiento se usó como tal en la siguiente etapa. Se obtuvieron 1.70 g (contenido 85 %).

Ejemplo 4m

El ejemplo 4m se preparó de forma análoga al ejemplo 4a. Material de partida: Ejemplo 3m (0.42 g; contenido 85 %; 1.52 mmol). Se obtuvieron 0.55 g. El producto obtenido después del procesamiento se usó como tal en la siguiente etapa.

Realizaciones ejemplares

Ejemplo 1

Se disolvieron el ejemplo 4a (100 mg; 0.34 mmol) y el ejemplo 1a (53.17 mg; 0.37 mmol) en THF (5 ml); se agregó piridina (0.08 ml; 1 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50 °C, durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a rt, se diluyó con MeOH (3 ml) y se filtró mediante un filtro de jeringa. La solución obtenida se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 53 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 2

El ejemplo 2 se sintetizó de forma análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4b (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (50.78 mg; 0.35 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 105 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 3

El ejemplo 3 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4c (100 mg; 0.34 mmol) ejemplo 1a (53.9 mg; 0.37 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 80 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 4

El ejemplo 4 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4d (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (51.4 mg; 0.36 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 55 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 5

El ejemplo 5 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4e (100 mg; 0.30 mmol) ejemplo 1a (47.66 mg; 0.33 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 70 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 6

El ejemplo 6 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4f (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (50.14 mg; 0.35 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 81 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 7

El ejemplo 7 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4g (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (50.39 mg; 0.35 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 97 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 8

El ejemplo 8 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4h (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (50.78 mg; 0.35 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 60 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 9

El ejemplo 9 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4i (100 mg; 0.34 mmol) ejemplo 1a (53.17 mg; 0.37 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 49 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 18

El ejemplo 18 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4k (100 mg; 0.32 mmol) ejemplo 1a (50.78 mg; 0.35 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 64 mg del compuesto deseado.

Ejemplo 30

El ejemplo 30 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4f (100 mg; 0.32 mmol) y ejemplo 1b (60 mg; 0.38 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 58 mg.

Ejemplo 31

El ejemplo 31 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4b (100 mg; 0.32 mmol) y ejemplo 1b (60 mg; 0.38 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 57 mg.

Ejemplo 33

El ejemplo 33 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4k (100 mg; 0.32 mmol) y ejemplo 1b (60 mg; 0.38 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 37 mg.

Ejemplo 34

El ejemplo 34 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4j (100 mg; contenido 70 %; 0.25 mmol) y ejemplo 1a (39.6 mg; 0.28 mmol). El producto en bruto se purificó por HPL^c preparativa. Se obtuvieron 71.0 mg del producto deseado.

continuación

Ejemplo 35

El ejemplo 35 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 41 (130 mg; 0.35 mmol) y ejemplo 1a (55.4 mg; 0.38 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 71.0 mg del producto deseado.

Ejemplo 36

El ejemplo 36 se sintetizó de manera análoga al ejemplo 1.

Materiales de partida: Ejemplo 4m (130 mg; 0.42 mmol) y ejemplo 1a (66.0 mg; 0.46 mmol). El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa. Se obtuvieron 87.0 mg del producto deseado.

Claims (22)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula A

en la cual

R1 representa metilo, etilo, propilo, /so-propilo, ciclopropilo, H3C-CH2-CH2-CH2-, ciclobutilo;

R2 representa fenilo que está opcionalmente sustituido con 1,2 o 3 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en flúor, cloro, metilo, etilo, ciclopropilo.

2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que

R1 representa metilo, etilo;

R2 representa

3. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, a saber, un compuesto seleccionado del grupo que consiste en





4. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

5. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

6. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

7. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

8. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

9. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

10. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

13. El enantiómero (S) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene la estructura:

14. Una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.

15. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso como medicamento.

16. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en el tratamiento y/o prevención del trastorno bipolar I en forma depresiva, hipomaníaca, maníaca y mixta; trastorno bipolar II; trastornos depresivos; trastorno depresivo mayor con o sin angustia ansiosa concomitante, características mixtas, características melancólicas, características atípicas, características psicóticas congruentes con el estado de ánimo, características psicóticas incongruentes con el estado de ánimo, catatonia.

17. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en el tratamiento y/o prevención de episodio depresivo único o trastorno depresivo mayor recurrente, trastorno depresivo menor, trastorno depresivo con inicio posparto, trastornos depresivos con síntomas psicóticos.

18. El compuesto para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17 caracterizado porque el compuesto se administra además del tratamiento con otro fármaco antidepresivo.

19. El compuesto para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17 caracterizado porque el compuesto se administra además de la terapia conductual.

20. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en el tratamiento del dolor agudo y crónico que está relacionado con neuropatía, procedimientos fisiológicos y trastornos físicos, enfermedad del sistema musculoesquelético y tejido conectivo, trastornos nerviosos, de la raíz nerviosa y del plexo.

21. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para su uso en el tratamiento de neuropatía diabética, polineuropatía, lumbalgia, dolor en las articulaciones, reumatismo, mialgia, síndrome del miembro fantasma con dolor, síndrome del túnel carpiano.

22. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 mezclado con un adyuvante, diluyente y/o portador farmacéuticamente aceptable.