ES2949288T3 - Uso de un inhibidor de acetilcolinesterasa e idalopirdina para reducir las caídas en pacientes con enfermedad de Parkinson - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al uso de un inhibidor de la acetilcolinesterasa e idalopirdina para reducir las caídas en pacientes que padecen una enfermedad del SNC, en particular pacientes con enfermedad de Parkinson, en los que el equilibrio, la marcha o el movimiento están alterados. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de un inhibidor de acetilcolinesterasa e idalopirdina para reducir las caídas en pacientes con enfermedad de Parkinson

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de un inhibidor de acetilcolinesterasa según se define en las reivindicaciones adjuntas e idalopirdina para reducir las caídas en pacientes ancianos con enfermedad de Parkinson. La invención se refiere además a la combinación de un inhibidor de acetilcolinesterasa según se define en las reivindicaciones adjuntas e idalopirdina para reducir las caídas en pacientes que padecen enfermedad de Parkinson.

Antecedentes de la invención

Las caídas son una causa principal de muerte en los ancianos y, en una mayoría de pacientes con enfermedad de Parkinson (EP), la principal causa de hospitalización y cuidados a largo plazo, insensible a la levodopa. Se han atribuido las caídas en la EP a la degeneración de neuronas colinérgicas del cerebro anterior que, en interacción con pérdidas estriatales de dopamina, altera el control cognitivo del equilibrio, la marcha y el movimiento.

Además de los síntomas motores característicos de la enfermedad, que reflejan principalmente la pérdida estriatal de dopamina, los prominentes síntomas autonómicos, conductuales y cognitivos, incluida una propensión a las caídas, indican que la enfermedad de Parkinson (EP) se basa en procesos neurodegenerativos multisistémicos más generalizados1. Las caídas en pacientes con EP23 y también en los ancianos sanos4 son a menudo sucesos incapacitantes56. Tanto los programas basados en ejercicios7-9 como el tratamiento con inhibidores de acetilcolinesterasa10,11 reducen las tasas de caídas en los ancianos y los pacientes con EP, aunque sigue existiendo una necesidad insatisfecha de reducir aún más la propensión a las caídas.

Aunque las caídas de los pacientes están asociadas con numerosos factores de riesgo12-14, las deficiencias en la supervisión atencional del movimiento son un importante factor contribuyente, específicamente cuando superficies no familiares, así como obstáculos o tareas secundarias, suponen un desafío para la marcha, el equilibrio y el control del movimiento15-22. Los errores de marcha, equilibrio y movimiento inducen normalmente un control atencional compensatorio. Sin embargo, como el proceso de la enfermedad también afecta a los sistemas de atención del cerebro, tal despliegue compensatorio de recursos atencionales está cada vez menos disponible para acudir al rescate del movimiento y prevenir las caídas. De acuerdo con este punto de vista, tanto la degeneración de las proyecciones colinérgicas del prosencéfalo basal (PB) hacia las regiones telencefálica y talámica -un importante sistema de atención del cerebro2324- y de las proyecciones colinérgicas del tronco encefálico hacia el tálamo y los ganglios basales, están correlacionadas con baja velocidad de marcha, bloqueo de la marcha y caídas en pacientes con EP25-29.

También en otras enfermedades del SNC, tales como la demencia con cuerpos de Lewy (DCL), la parálisis parasupranuclear (PSP, por sus siglas en inglés) y la atrofia multisistémica (AMS), el equilibrio, la marcha y el movimiento resultan alterados a causa de la degeneración de neuronas colinérgicas30.

De lo que antecede queda claro que sigue existiendo una necesidad insatisfecha de tratamiento para uso en la reducción de las caídas en pacientes con enfermedad de Parkinson, así como en pacientes con otras enfermedades del SNC en donde la degeneración de neuronas colinérgicas conduce a un deterioro del equilibrio, la marcha y el movimiento. La N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina, con el nombre DCI de "idalopirdina" (representada a continuación) fue dada a conocer por primera vez en el documento WO 02/078693, y es un potente y selectivo antagonista del receptor 5-HT6 que ha estado en desarrollo clínico para tratar el deterioro cognitivo asociado con la esquizofrenia y como tratamiento para la EA.

En 2012 se informó de un estudio clínico con idalopirdina utilizada en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (EA). Los datos demostraron que idalopirdina más 10 mg/día de donepezilo mejoraron significativamente la función cognitiva en 278 pacientes con EA, en comparación con placebo más donepezilo, cuando se midió mediante la subescala cognitiva de la escala de evaluación de la EA (ADAS-cog). La idalopirdina mostró resultados positivos en criterios de valoración secundarios, entre ellos medidas de impresión global y actividades de la vida diaria, en comparación con pacientes tratados con donepezilo. Un posterior estudio de fase III no ha podido confirmar los resultados.

Los resultados incluidos en esta solicitud de patente han sido parcialmente dados a conocer en una publicación electrónica (doi: 10.111/ejn. 13354, publicada el 29 de julio de 2016)₃1. Además, la Michigan Complex Motor Control Task (MCMCT, Tarea de control motor complejo de Michigan) que se utiliza para evaluar el impacto del tratamiento en las caídas, la marcha y las paradas del movimiento ha sido descrita en un artículo de Kucinski et al.32.

Compendio de la invención

La presente invención se refiere a idalopirdina y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina, para uso en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, donde el tratamiento de la enfermedad de Parkinson consiste en reducir las caídas en un paciente con enfermedad de Parkinson. Los inventores de la presente invención han encontrado, sorprendentemente, que el cotratamiento con donepezilo e idalopirdina, o rivastigmina e idalopirdina, reduce las caídas en ratas con lesión doble (DL, por sus siglas en inglés) del sistema colinérgico cortical y el dopaminérgico estriatal. Estos resultados sugieren que el cotratamiento con un IACE y un antagonista del receptor 5HT6 puede reducir la propensión a las caídas en pacientes con EP, en particular en pacientes con EP que también muestren una propensión a paradas del movimiento relativamente breves inducidas por distractores o que ocurren espontáneamente.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1.

Caídas durante la travesía de una barra (N=70, n=14 por grupo y 7/sexo). En todas las condiciones de ensayo, las ratas DL cayeron con más frecuencia que las ratas SH/VEH. Además, en comparación con las ratas DL/VEH, el tratamiento con DON+IDL redujo significativamente las tasas de caída (A). La inspección de las condiciones de ensayo individuales (B-E) indicó que la reducción de caídas asociadas con recorrer la barra cuando giraba en el poco familiar sentido horario (cw, en su abreviatura inglesa), o cuando giraba de manera alterna en el sentido horario y en el sentido antihorario (cc, en su abreviatura inglesa), contribuyó principalmente al efecto global de DON+IDL en ratas DL. Esta y las siguientes figuras indican los resultados de comparaciones múltiples post hoc que se basaron en resultados significativos de análisis ANOVA que se describen en el apartado "Resultados" (*, **, ***, P<0,05, 0,01, 0,001; abreviaturas utilizadas en esta y otras figuras: SH, operación simulada; DL, lesión doble, prosencéfalo basalcolinérgica y estriatal-dopaminérgica; DON, donepezilo, IDL, idalopirdina, Riva, rivastigmina).

Figura 2.

Efectos del distractor del marco de puerta (N=70, n=14 por grupo y 7/sexo). Todas las ratas DL, excepto las ratas DL/DON+IDL, cayeron con mayor frecuencia que las ratas SH/VEH cuando fueron expuestas a este distractor pasivo (A, B). Para obtener información sobre los posibles mecanismos conductuales que intervienen en los efectos de DON+IDL, se analizó más a fondo el comportamiento de las ratas DL/VEH y DL/DON+IDL asociado con el marco de puerta. Las caídas asociadas con el marco de puerta estaban asociadas con la detención del movimiento o la congelación de la marcha, a medida que las ratas se acercaban o llegaban al marco. En general, las congelaciones más largas estaban asociadas con más caídas (C) tanto en las ratas DL/VEH como en las DL/DON+IDL. De hecho, las caídas asociadas con congelaciones más prolongadas no difirieron entre los grupos (D). Sin embargo, las ratas tratadas con DON+IDL caían con frecuencia significativamente menor cuando las congelaciones eran relativamente cortas (<2 s). La proporción de congelaciones cortas en sí no difirió entre los grupos. Según se ilustra en E, después de congelaciones breves, e incluso aunque no hubieran caído, las ratas DL/VEH reanudaban el movimiento hacia adelante con relativa lentitud, en general con la cola relativamente baja y con una postura encorvada (adviértase que estas ratas resbalan después de cruzar la puerta). Por el contrario, cuando las ratas DL/DON+IDL reanudaban el movimiento hacia adelante, a veces comenzando con un salto (como se muestra aquí), recuperaban rápidamente la velocidad de travesía regular y un movimiento hacia adelante fluido, con una posición de cola alzada y firme y una postura erguida.

Figura 3.

Desempeño en la tarea de distractor activo (N=70, n=14 por grupo y 7/sexo). Para modelizar el impacto de una tarea secundaria, se ofreció agua mientras las ratas recorrían la barra en rotación (véase la fotografía superior; las ratas habían sido privadas de agua debido a la prueba SAT diaria paralela). En general, las ratas DL eran menos propensas a participar en esta actividad competitiva, como lo indica el menor número de intentos de tomar el agua (A). Las ratas DL también tenían menos probabilidades de tomar agua sin sufrir una caída (B). Ninguno de los tratamientos farmacológicos (donepezilo (DON) o idalopirdina (IDL) solos o en combinación) mejoró significativamente el desempeño de las ratas DL en presencia de este distractor activo.

Figura 4

Número total de caídas combinado desde el día 2 hasta el día 5. Se muestra el número total de caídas registradas (eje y) en ratas con lesión doble (DL) o bien en ratas con operación simulada, después del tratamiento durante diez días con vehículo, con rivastigmina 1 mg/kg, con idalopirdina 10 mg/kg o con la combinación de tratamiento. Las barras representan la media ± e. e. m., *** P<0,001 cfr. DL Vehículo. Entre paréntesis se indican los números N.

Figura 5

Número total de caídas desde la barra con rotación alterna (día 5). Se muestra el número total de caídas registradas (eje y) en ratas con lesión doble (DL) o en ratas con operación simulada, después del tratamiento durante diez días con vehículo, con rivastigmina 1 mg/kg, con idalopirdina 10 mg/kg o con la combinación de tratamiento. Las barras representan la media ± e. e. m., *** P<0,001, ** P<0,01 cfr. DL Vehículo. Entre paréntesis se indican los números N.

Figura 6

Número total de caídas desde la barra que giraba en sentido antihorario (día 4). Se muestra el número total de caídas registradas (eje y) en ratas con lesión doble (DL) o en ratas con operación simulada, después del tratamiento durante diez días con vehículo, con rivastigmina 1 mg/kg, con idalopirdina 10 mg/kg de o la combinación de tratamiento. Las barras representan la media ± e. e. m., *** P<0,001 cfr. DL Vehículo. Entre paréntesis se indican los números N.

Figura 7

Número total de caídas desde la barra estacionaria. Se muestra el número total de caídas registradas (eje y) en ratas con lesión doble (DL) o en ratas con operación simulada, después del tratamiento durante diez días con vehículo, con rivastigmina1 mg/kg, con idalopirdina 10 mg/kg o con la combinación de tratamiento. Las barras representan la media ± e. e. m., *** P<0,001 cfr. DL Vehículo. Entre paréntesis se indican los números N.

Definiciones

A lo largo de la memoria descriptiva, el término "idalopirdina" (a veces abreviado IDL) pretende incluir cualquier forma del compuesto, tal como la base libre y las sales farmacéuticamente aceptables. La base libre y las sales farmacéuticamente aceptables incluyen formas anhidras y formas solvatadas tales como los hidratos. Las formas anhidras incluyen formas amorfas y cristalinas, y los solvatos incluyen formas cristalinas. Análogamente, el término "donepezilo" (a veces abreviado DON) pretende incluir cualquier forma del compuesto, tal como la base libre y las sales farmacéuticamente aceptables, etc.

Un inhibidor de acetilcolinesterasa (abreviado "IACE" en el presente contexto) es una sustancia química o un fármaco que impide que la enzima acetilcolinesterasa descomponga la acetilcolina, aumentando así tanto el nivel como la duración de acción del neurotransmisor acetilcolina. En el presente contexto, los ejemplos de inhibidores de acetilcolinesterasa incluyen donepezilo, rivastigmina y galantamina. El inhibidor de acetilcolinesterasa de acuerdo con la invención se selecciona del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina.

A lo largo de la memoria descriptiva, la expresión "paciente anciano" se refiere a una persona que tiene una edad de al menos 60 años, tal como al menos 65 años, tal como al menos 70, 75, 80, 85 o 90 años.

En el presente contexto, cuando se emplea idalopirdina en combinación con un IACE, en una realización esto indica que se pueden administrar simultáneamente dichos dos compuestos, por ejemplo en una composición farmacéutica que comprende ambos compuestos. En otra realización, cuando se emplea idalopirdina en combinación con un IACE, esto indica que se administran por separado dichos dos compuestos en composiciones farmacéuticas individuales adecuadas. Estas composiciones individuales pueden ser administradas simultáneamente, por ejemplo a intervalos regulares una vez al día, ya sea por la mañana o por la noche, o pueden ser administradas de manera independiente, por ejemplo un compuesto a intervalos regulares una vez al día por la mañana y el otro compuesto a intervalos regulares una vez al día por la noche.

En el presente contexto, "composición farmacéutica" se refiere a una forma farmacéutica, por ejemplo una forma farmacéutica oral, tal como una forma farmacéutica oral sólida, típicamente comprimidos o cápsulas. "Composiciones farmacéuticas de la presente invención" se refiere a todas las composiciones farmacéuticas cubiertas por las reivindicaciones y la descripción.

En el presente contexto, "excipientes farmacéuticos" incluye, por ejemplo, diluyentes o cargas sólidas inertes, soluciones acuosas estériles y diversos disolventes orgánicos empleados en composiciones farmacéuticas de la presente invención.

En el presente contexto, una "forma farmacéutica unitaria" hace referencia a una unidad de formulación de una composición farmacéutica, por ejemplo un comprimido o una cápsula.

En el presente contexto, las "cantidades terapéuticamente eficaces" de un compuesto significan una cantidad suficiente para curar, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de una determinada enfermedad y sus complicaciones, en una intervención terapéutica que comprenda la administración de dicho compuesto. Una cantidad adecuada para lograr tal cosa se define como "cantidad terapéuticamente eficaz". Las cantidades eficaces para cada propósito dependerán de la gravedad de la enfermedad o lesión, así como del peso y el estado general del sujeto. Se entenderá que la determinación de la dosificación adecuada puede lograrse mediante experimentación rutinaria, construyendo una matriz de valores y ensayando distintos puntos de la matriz, todo lo cual está dentro de las habilidades ordinarias de un profesional médico capacitado.

La expresión "deterioro funcional en neuronas colinérgicas" es un estado de salud en el cual la función normal de las neuronas colinérgicas es inferior a su capacidad completa.

La expresión "degeneración de neuronas colinérgicas" es un estado de salud en el cual se produce un deterioro progresivo de las neuronas colinérgicas del cerebro.

En el presente contexto, "tratamiento" o "tratar" pretenden indicar la gestión y cuidado de un paciente con el propósito de aliviar, detener, detener parcialmente o retrasar el progreso de la manifestación clínica de la enfermedad, o bien curar la enfermedad. En un aspecto de la presente invención, "tratamiento" y "tratar" se refieren a un tratamiento profiláctico (preventivo). En otro aspecto, "tratamiento" y "tratar" se refieren al tratamiento (curativo). El paciente a tratar es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano.

"Ratas DL" son ratas que han sufrido una lesión doble del sistema estriatal-dopaminérgico y el cortical-colinérgico.

Descripción detallada de la invención

Los inventores de la presente invención han identificado, sorprendentemente, que la combinación de idalopirdina y donepezilo, o idalopirdina y rivastigmina, ha sido capaz de reducir las caídas en un modelo animal, lo que indica el potencial de la combinación de estas dos sustancias para el tratamiento terapéutico en la reducción de caídas en pacientes con EP y en pacientes ancianos. En resumen, se ensayaron los efectos de donepezilo (DON) e idalopirdina (IDL) en ratas con pérdidas cortical-colinérgicas y estriatal-dopaminérgicas (ratas DL) que cruzaban barras en rotación y realizaban la Tarea de atención sostenida (SAT, por sus siglas en inglés). Los principales hallazgos indican que el tratamiento con DON+IDL redujo las caídas desde la barra en rotación así como las provocadas por el distractor de marco de puerta. DON+IDL previnieron las caídas, principalmente al mejorar la eficacia y el vigor del reinicio de la travesía de la barra en rotación después de paradas de movimiento relativamente breves. Las ratas DL tratadas con DON+IDL presentaron menos caídas al recorrer la barra en rotación que otros grupos DL, y se cayeron menos frecuentemente en asociación con paradas relativamente cortas inducidas por marcos de puerta. Además, el tratamiento de ratas DL con Riva+IDL también mostró un número reducido de caídas en ratas DL, en comparación con las ratas DL tratadas solamente con vehículo. Véase la sección experimental para más detalles.

En las personas que se caen, al igual que en las ratas DL, una lenta velocidad de marcha y las detenciones del movimiento, inducidas por distractores o que se producen sin causas obvias, desestabilizan el movimiento hacia adelante y aumentan el riesgo de caídas. Las detenciones o congelaciones de la marcha implican inestabilidades en la postura y el control de la marcha, así como la interrupción de la elección y planificación del movimiento y, por lo tanto, tales detenciones pueden reflejar la ruptura de la comunicación corticoestriatal, frente a únicamente pérdidas de dopamina estriatal.

Así pues, la presente invención se refiere a idalopirdina y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina, para uso en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, donde el tratamiento de la enfermedad de Parkinson consiste en reducir las caídas en un paciente con enfermedad de Parkinson.

De acuerdo con la presente invención, se pueden administrados idalopirdina y un IACE, o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos dos compuestos, de cualquier forma adecuada, por ejemplo por vía oral, transmucosal o parenteral, y la idalopirdina y/o un IACE pueden presentarse en cualquier forma adecuada para tal administración. En una realización, y de acuerdo con el propósito de la presente invención, tanto la idalopirdina como un IACE son administrados en forma de entidades farmacéuticas sólidas, adecuadamente como comprimidos o cápsulas, o en forma de suspensiones, soluciones o dispersiones para inyección.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden estar formuladas con vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables, así como con cualquier otro adyuvante y excipiente conocido, siguiendo técnicas convencionales tales como las descritas en Remington: The Science and Practice of Pharmacy (La ciencia y la práctica de la Farmacia), 22.a edición, compilado por Hauber, Lippincott Williams & Wilkins, 2013. Así, se pueden preparar comprimidos mezclando los ingredientes activos con un vehículo ordinario, por ejemplo un adyuvante y/o diluyente, y comprimiendo posteriormente la mezcla en una máquina comprimidora.

Los vehículos y excipientes farmacéuticos adecuados incluyen diluyentes o cargas sólidas inertes, solución acuosa estéril y diversos disolventes orgánicos. Son ejemplos no limitativos de vehículos sólidos el almidón de maíz, lactosa, terra alba, sacarosa, ciclodextrina, talco, gelatina, agar, pectina, goma arábiga, estearato de magnesio, ácido esteárico y éteres alquílicos inferiores de celulosa. Son ejemplos no limitativos de vehículos líquidos el sirope, aceite de cacahuete, aceite de oliva, fosfolípidos, ácidos grasos, aminas de ácido graso, polioxietileno y agua.

También se puede utilizar cualquier otro adyuvante o aditivo, por ejemplo colorantes, aromas y conservantes, siempre que sean compatibles con los ingredientes activos. Por lo tanto, las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden típicamente una cantidad eficaz de idalopirdina y/o un IACE y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas formadas mediante la combinación de un compuesto empleado en la invención y los vehículos farmacéuticamente aceptables se administran después fácilmente en una variedad de formas farmacéuticas adecuadas para las vías de administración descritas.

Los ingredientes farmacéuticos activos empleados en la presente invención, es decir, idalopirdina y un IACE, pueden ser administrados solos como compuestos puros, o en combinación con vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables, en dosis únicas o múltiples.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar formuladas específicamente para su administración por cualquier vía adecuada, por ejemplo la vía oral, rectal, nasal, pulmonar, tópica (incluidas la bucal y la sublingual), transdérmica y parenteral (incluidas la vía subcutánea, la intramuscular y la intravenosa), siendo preferida la vía oral. Se apreciará que la vía de administración puede depender del estado general y la edad del sujeto a tratar, de la naturaleza del estado a tratar y del ingrediente activo elegido.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral incluyen formas farmacéuticas orales sólidas tales como comprimidos, cápsulas, polvos y gránulos; y formas farmacéuticas orales líquidas tales como soluciones, emulsiones, suspensiones y jarabes, así como polvos y gránulos para disolver o suspender en un líquido apropiado.

Las formas farmacéuticas orales sólidas pueden presentarse como unidades discretas (por ejemplo, comprimidos o cápsulas duras o blandas), conteniendo cada una de ellas una cantidad predeterminada del ingrediente activo y, preferiblemente, uno o más excipientes adecuados. Cuando sea apropiado, las formas farmacéuticas sólidas pueden prepararse con revestimientos tales como revestimientos entéricos, o pueden formularse de manera que proporcionen una liberación modificada del ingrediente activo tal como una liberación retardada o prolongada, siguiendo métodos bien conocidos en la técnica. Cuando sea apropiado, la forma farmacéutica sólida puede ser una forma farmacéutica que se desintegre en la saliva, por ejemplo un comprimido bucodispersable. Los ejemplos de excipientes adecuados para la formulación oral sólida incluyen, pero sin limitación, celulosa microcristalina, almidón de maíz, lactosa, manitol, povidona, croscarmelosa sódica, sacarosa, ciclodextrina, talco, gelatina, pectina, estearato de magnesio, ácido esteárico y éteres alquílicos inferiores de celulosa. De manera similar, la formulación sólida puede incluir excipientes para formulaciones de liberación retardada o prolongada conocidas en la técnica, como monoestearato de glicerilo o hipromelosa. Si se utiliza material sólido para la administración oral, se puede preparar la formulación, por ejemplo, mezclando el ingrediente activo con excipientes sólidos y comprimiendo posteriormente la mezcla en una máquina comprimidora convencional; o bien, por ejemplo, se puede disponer la formulación en una cápsula dura, por ejemplo en forma de polvo, pastilla o minicomprimido. La cantidad de excipiente sólido variará ampliamente, pero normalmente se situará en el intervalo de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 1 g por unidad de dosificación.

Las formas farmacéuticas orales líquidas pueden presentarse como, por ejemplo, elixires, jarabes, gotas orales o una cápsula llena de líquido. Las formas farmacéuticas orales líquidas también pueden presentarse como polvos para disolver o suspender en un líquido acuoso o no acuoso. Los ejemplos de excipientes adecuados para la formulación oral líquida incluyen, pero sin limitación, etanol, propilenglicol, glicerol, polietilenglicoles, poloxámeros, sorbitol, polisorbato, mono y diglicéridos, ciclodextrinas, aceite de coco, aceite de palma y agua. Se pueden preparar las formas farmacéuticas orales líquidas, por ejemplo, disolviendo o suspendiendo el ingrediente activo en un líquido acuoso o no acuoso, o incorporando el ingrediente activo en una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite. En las formulaciones orales sólidas y líquidas se pueden emplear otros excipientes, tales como colorantes, saborizantes y conservantes, etc.

Las composiciones farmacéuticas para administración parenteral incluyen soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas y no acuosas estériles para inyección o infusión, concentrados para inyección o infusión, y polvos estériles para reconstituir antes de su uso, dando soluciones o dispersiones estériles para inyección o infusión. Los ejemplos de excipientes adecuados para la formulación parenteral incluyen, pero sin limitación, agua, aceite de coco, aceite de palma y soluciones de ciclodextrinas. En caso necesario, las formulaciones acuosas deben estar adecuadamente tamponadas e isotonizadas con suficiente solución salina o glucosa.

Otros tipos de composiciones farmacéuticas incluyen supositorios, inhalaciones, cremas, geles, parches dérmicos, implantes y formulaciones para administración bucal o sublingual.

Cuando se contempla la administración simultánea de idalopirdina y un IACE, puede ser particularmente conveniente una composición que contenga tanto idalopirdina como un IACE. Como alternativa, se pueden administrar por separado idalopirdina y un IACE en forma de composiciones adecuadas. Las composiciones se pueden preparar como se ha descrito más arriba. En una realización de la invención, se administran simultáneamente formas unitarias separadas de idalopirdina y un IACE, por ejemplo se administran ambos compuestos a intervalos regulares una vez al día, por la mañana o por la noche. En otra realización, se administran de manera independiente formas unitarias separadas de idalopirdina y un IACE, por ejemplo se administra idalopirdina a intervalos regulares una vez al día por la mañana y el IACE a intervalos regulares una vez al día por la noche, o a la inversa. La presente descripción comprende también un kit que comprende formas farmacéuticas unitarias discretas que contienen idalopirdina y formas farmacéuticas unitarias discretas que contienen un IACE, todas contenidas en el mismo recipiente o envase, por ejemplo un blíster.

Las composiciones farmacéuticas y los kits de acuerdo con la invención comprenden preferiblemente idalopirdina y un IACE en cantidades terapéuticamente eficaces. Una dosis diaria de idalopirdina es preferiblemente de 10 a 200 mg, por ejemplo de 10 mg a 120 mg, por ejemplo de 10 mg a 100 mg, por ejemplo de 30 mg a 90 mg, por ejemplo de 30 mg a 60 mg. Una dosis diaria de donepezilo es preferiblemente de 1 mg a 30 mg, por ejemplo de 5 mg a 23 mg, por ejemplo 10 mg. Una dosis diaria de rivastigmina es preferiblemente de 1 mg a 20 mg. Una dosis diaria de galantamina es preferiblemente de 4 mg a 24 mg, por ejemplo de 8 mg a 24 mg, por ejemplo 8 mg, 12 mg, 16 mg, 20 mg o 24 mg.

Realizaciones de acuerdo con la invención

En lo que sigue se describen realizaciones de la invención. A la primera realización se la denomina E1, a la segunda realización se la denomina E2, y así sucesivamente.

E1. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en

donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, donde el tratamiento de la enfermedad de Parkinson consiste en reducir las caídas en un paciente con enfermedad de Parkinson.

E2. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en

donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según la realización 1, donde la dosis diaria de idalopirdina es de 10 mg a 100 mg.

E3. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en

donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según la realización 1, donde la dosis diaria de idalopirdina es de 30 mg a 60 mg.

E4. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en

donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según cualquiera de las realizaciones 1-3, donde el inhibidor de acetilcolinesterasa es donepezilo.

E5. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en

donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según cualquiera de las realizaciones 1-3, donde el inhibidor de acetilcolinesterasa es rivastigmina.

E6. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y donepezilo para uso en el tratamiento según la realización 4, donde la dosis de donepezilo es de 1 a 30 mg.

E7. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y donepezilo para uso en el tratamiento según la realización 4, donde la dosis de donepezilo es de 5 a 23 mg.

E8. Idalopirdina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y rivastigmina para uso en el tratamiento según la realización 5, donde la dosis de rivastigmina es de 1 a 20 mg.

Se debe interpretar que el uso de los términos "un", "uno" y "una", y "el" y "la", y referencias similares en el contexto de la descripción de la invención, cubre tanto el singular como el plural, salvo que se indique otra cosa en la presente memoria o que el contexto lo contradiga claramente. Por ejemplo, debe entenderse que la expresión "el compuesto" se refiere a varios "compuestos" de la invención o del aspecto particular descrito, salvo que se indique otra cosa. La descripción en la presente memoria de cualquier aspecto o aspectos de la invención utilizando expresiones tales como "que comprende", "que tiene", "que incluye" o "que contiene", con referencia a un elemento o elementos, pretende proporcionar apoyo para un aspecto o aspecto similar de la invención que "consiste en", "consiste esencialmente en" o "comprende sustancialmente" ese elemento o elementos en particular, salvo que se indique otra cosa o el contexto lo contradiga claramente (por ejemplo, de una composición de la que describe en la presente memoria que comprende un elemento particular se debe entender que también describe una composición que consta de ese elemento, salvo que se indique otra cosa o el contexto lo contradiga claramente).

Referencias

1. Langston JW. The Parkinson's complex: Parkinsonism is just the tip of the iceberg. Ann Neurol 2006;59(4):591-596.

2. Balash Y, Peretz C, Leibovich G, Herman T, Hausdorff JM, Giladi N. Falls in outpatients with Parkinson's disease: frequency, impact and identifying factors. J Neurol 2005;252(11):1310-1315.

3. Wood BH. Incidence and prediction of falls in Parkinson's disease: a prospective multidisciplinary study. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry 2002;72(6):721-725.

4. Tinetti ME, Speechley M, Ginter SF. Risk factors for falls among elderly persons living in the community. N Engl J Med 1988;319(26) :1701-1707.

5. Baker SP, Harvey AH. Fall injuries in the elderly. Clin Geriatr Med 1985;1 (3) :501 -512.

6. Dellinger AM, Stevens JA. The injury problem among older adults: mortality, morbidity and costs. J Safety Res 2006;37(5):519-522.

7. Cameron ID, Gillespie LD, Robertson MC, etal. Interventions for preventing falls in older people in care facilities and hospitals. Cochrane Database Syst Rev 2012;12:CD005465.

8. Gillespie LD, Robertson MC, Gillespie WJ, et al. Interventions for preventing falls in older people living in the community. Cochrane Database Syst Rev 2012;9:CD007146.

9. Shen X, Wong-Yu IS, Mak MK. Effects of exercise on falls, balance, and gait ability in Parkinson's disease: A metaanalysis. Neurorehabil Neural Repair 2015.

10. Chung KA, Lobb BM, Nutt JG, Horak FB. Effects of a central cholinesterase inhibitor on reducing falls in Parkinson disease. Neurology 2010;75(14):1263-1269.

11. Henderson EJ, Lord SR, Brodie MA, et al. Rivastigmine for gait stability in patients with Parkinson's disease (ReSPonD): a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 2 trial. Lancet Neurol 2016 [Epub antes de la impresión].

12. van der Marck MA, Klok MP, Okun MS, et al. Consensus-based clinical practice recommendations for the examination and management of falls in patients with Parkinson's disease. Parkinsonism Relat Disord 2014;20(4):360-369.

13. Montero-Odasso M, Verghese J, Beauchet O, Hausdorff JM. (Gait and cognition: a complementary approach to understanding brain function and the risk of falling). J Am Geriatr Soc 2012;60(11):2127-2136.

14. Ensrud KE, Blackwell TL, Mangione CM, et al. Central nervous system-active medications and risk for falls in older women. J Am Geriatr Soc 2002;50(10):1629-1637.

15. Allcock LM, Rowan EN, Steen IN, Wesnes K, Kenny RA, Burn DJ. Impaired attention predicts falling in Parkinson's disease. Parkinsonism Relat Disord 2009;15(2) :110-115.

16. LaPointe LL, Stierwalt JAG, Maitland CG. Talking while walking: Cognitive loading and injurious falls in Parkinson's disease. International Journal of Speech-Language Pathology 2010;12(5):455-459.

17. Theill N, Martin M, Schumacher V, Bridenbaugh SA, Kressig RW. Simultaneously measuring gait and cognitive performance in cognitively healthy and cognitively impaired older adults: the Basel motor-cognition dual-task paradigm. J Am Geriatr Soc 2011 ;59(6):1012-1018.

18. Brown LA, Shumway-Cook A, Woollacott MH. Attentional demands and postural recovery: the effects of aging. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 1999;54(4):M165-171.

19. Woollacott M, Shumway-Cook A. Attention and the control of posture and gait: a review of an emerging area of research. Gait Posture 2002;16(1):1-14.

20. Hausdorff JM, Doniger GM, Springer S, Yogev G, Simon ES, Giladi N. A common cognitive profile in elderly fallers and in patients with Parkinson's disease: the prominence of impaired executive function and attention. Exp Aging Res 2006;32(4):411 -429.

21. Yogev-Seligmann G, Hausdorff JM, Giladi N. The role of executive function and attention in gait. Mov Disord 2008;23(3):329-342.

22. Amboni M, Barone P, Hausdorff JM. Cognitive contributions to gait and falls: evidence and implications. Mov Disord 2013 ;28(11 ):1520-1533.

23. Hasselmo ME, Sarter M. Modes and models of forebrain cholinergic neuromodulation of cognition. Neuropsychopharmacology 2011 ;36(1):52-73.

24. Gritton HJ, Howe WM, Mallory CS, Hetrick VL, Berke JD, Sarter M. Cortical cholinergic signaling controls the detection of cues. Proc Natl Acad Sci USA 2016;113(8):E1089-1097.

25. Bohnen Nl, Frey KA, Studenski S, et al. Gait speed in Parkinson disease correlates with cholinergic degeneration. Neurology 2013;81(18):1611-1616.

26. Bohnen Nl, Albin RL. Cholinergic denervation occurs early in Parkinson disease. Neurology 2009;73(4):256-257.

27. Bohnen Nl, Frey KA, Studenski S, et al. Extra-nigral pathological conditions are common in Parkinson's disease with freezing of gait: an in vivo positron emission tomography study. Mov Disord 2014;29(9):1118-1124.

28. Bohnen Nl, Müller MLTM, Koeppe RA, et al. History of falls in Parkinson disease is associated with reduced cholinergic activity. Neurology 2009;73(20):1670-1676.

29. Yarnall A, Rochester L, Burn DJ. The interplay of cholinergic function, attention, and falls in Parkinson's disease. Mov Disord 2011 ;26(14):2496-2503.

30. Bohnen Nl, Albin RL. The Cholinergic System and Parkinson Disease. Behav Brain Res. 2011 ;221 (2):564-573.

31. Kucinski A, de Jong I, Sarter M. Reducing falls in Parkinson's disease: Interactions between donepezil and the 5-HT6 receptor antagonist idalopirdine on falls in a rat model of impaired cognitive control of complex movements. doi:10.1111 /ejn.13354

32. Kucinski, A. et al. Modelling fall propensity in Parkinson's disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striatal-dopaminergic deafferentation. J. Neurosci, 2013; 33, 16522-16539 Ejemplos

Ejemplo 1 Reducción de caídas en ratas DL tratadas con donepezilo e idalopirdina

Materiales y métodos

Sujetos

Se alojaron individualmente ratas Sprague Dawley adultas, machos y hembras de entre 3 y 6 meses de edad (Harlan; N=70; 35 machos y 35 hembras), en jaulas individuales opacas estándar (27,70 cm x 20,30 cm) en un ambiente con temperatura y humedad controladas (23 °C, 45 %). A lo largo del experimento, las ratas macho pesaron más que las hembras (F(1,69)=460,29, P<0,001; machos: 359,86+4,27 g; hembras: 249,24+2,48 g), pero los pesos no difirieron entre los grupos experimentales (efecto principal del grupo y sexo x grupo: ambos F<0,29, ambos P>0,88). Se mantuvo a los animales bajo un horario de luz/oscuridad de 12:12 horas (se encendían las luces a las 8:00 a. m.). Estaba disponible comida (Rodent Chow; Harlan Teklad) adlibitum. Se restringió gradualmente durante un período de 7 días el acceso al agua (12, 8, 5, 3, 1, 0,5, 0,25 horas de acceso al agua por día) en la semana anterior a las pruebas de comportamiento previo y posterior a la intervención quirúrgica. Durante los experimentos se proporcionó agua como recompensa por las respuestas correctas durante la ejecución de la SAT y después de las travesías de la barra en la MCMCT (ver más abajo). A las ratas también se les proporcionaba cada día agua ad libitum durante 15 minutos después de realizar la SAT.

Cronología de los experimentos

Se entrenó inicialmente a los animales en la SAT (~2 meses de entrenamiento diario; ~9:00-11:00 a. m.). Una vez llegados a la etapa final de entrenamiento, los animales permanecieron en esta etapa durante 14 días consecutivos. Durante los últimos 6 días de entrenamiento, también se entrenó a las ratas en la MCMCT por las tardes (~2:00-4:00 p. m.). Experimentos anteriores habían mostrado que el desempeño en cualquiera de las tareas no se había visto afectado cuando se había entrenado a las ratas en ambas tareas el mismo día. Además, puesto que los presentes autores habían demostrado previamente que el ritmo circadiano de las ratas se adapta a la práctica diaria de SAT, generando un fenotipo diurno sólido, probablemente todas las pruebas de comportamiento tuvieron lugar durante la fase activa del día para los animales.

Tras el entrenamiento previo a la intervención quirúrgica, se sometió a los animales a intervenciones quirúrgicas de lesión estereotáxica, seguidas de 4 semanas de recuperación. Durante la última semana de recuperación, se restringió gradualmente el agua a los animales. Después se evaluaron los efectos de los fármacos con 12 días consecutivos de sesiones SAT y MCMCT (véase en la Tabla 1 la batería de condiciones de ensayo para MCMCT):

Las inyecciones de fármaco o vehículo se administraron 30 minutos antes de la realización de la SAT (inyecciones ~9:30, prueba SAT 10:00-10:45 a. m.) y por la tarde antes de la prueba MCMCT (~3:30-6:00 p. m.). Para las pruebas MCMCT, se inyectó individualmente a las ratas para que las pruebas comenzaran exactamente 30 minutos después de la inyección para cada animal.

Lesiones

De las 70 ratas, a 56 (28 hembras y 28 machos) se les practicaron lesiones dobles (DL) en los sistemas estriataldopaminérgico y cortical-colinérgico, y fueron asignadas aleatoriamente a 4 condiciones de tratamiento después de la intervención quirúrgica (n=14/grupo, 7/sexo). A 14 ratas (7/sexo) se les practicaron lesiones simuladas. Se administró bilateralmente 6-OHDA a terminales de dopamina en el cuerpo estriado dorsal (Sigma-Aldrich; 6,0 |ug/2 |uL/infusión, bolo; disuelto en NaCl al 0,9 % con ácido ascórbico al 0,1 %; dos sitios de infusión por hemisferio: AP 1,2 y 0,2 mm; ML ±2,5 y ±3,0 mm con respecto al bregma; DV -4,8 y -5,0 mm desde el cráneo). Se administró hidrocloruro de desipramina (10 mg/kg; vía IP; Sigma-Aldrich) a ratas que habían recibido infusiones de 6-OHDA 30 minutos antes de las intervenciones quirúrgicas, para proteger las neuronas noradrenérgicas4. Se dirigió inmunotoxina 192 IgG-saporina (Advanced Targeting Systems) en aCSF infundido bilateralmente (120 ng/|uL; 0,5 |uL/hemisferio; AP -0,8; ML ±2,9; DV -7,8) a las neuronas colinérgicas del prosencéfalo basal situadas en el núcleo basal y la sustancia innominada. Las ratas de la simulación recibieron volúmenes iguales de NaCl al 0,9 % con ácido ascórbico al 0,1 % (cuerpo estriado) y aCSF (prosencéfalo basal) sin neurotoxinas.

Tarea de control motor complejo de Michigan (MCMCT)

Se evaluaron medidas de ejecución de movimientos complejos, incluida la propensión a las caídas, utilizando la MCMCT (para detalles y una ilustración, véase Kucinski, A. et al. (2013) Modelling fall propensity in Parkinson's disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striataldopaminergic deafferentation (Modelización de la propensión a las caídas en la enfermedad de Parkinson: Déficits en el control atencional de movimientos complejos en ratas con desaferenciación cortical-colinérgica y estriataldopaminérgica. J. Neurosci, 33, 16522-16539). Este aparato de travesía de viga fue diseñado para poner a prueba la capacidad de las ratas para realizar movimientos que exigen atención y corregir los errores de pisada mientras cruzan una superficie de barra cuadrada estrecha (2,54 cm2). Los extremos de la viga (de 2,0 m de longitud) estaban sujetos en receptáculos que permitían hacer girar la barra por medio de un motorreductor (10 r. p. m.) acoplado a un extremo del elemento de viga. El recorrer la barra, particularmente cuando estaba en rotación, generó de manera fiable caídas y otras alteraciones del movimiento en ratas con lesión doble de entradas estriatal-dopaminérgicas y corticalcolinérgicas. También se utilizó una superficie de tablón plano (13,3 cm de ancho) para evaluar la capacidad motora básica y para que se habituaran al aparato. Dos plataformas idénticas (área de 23,0 x 31,5 cm) situadas en los extremos opuestos de la viga estaban rodeadas de paredes retráctiles (27,0 cm de altura) para formar estructuras de caja terminal. Las paredes se suben y bajan manualmente y se aseguran en su posición mediante una abrazadera de fricción que se desliza por una ranura vertical en la estructura de soporte bajo la plataforma. Las paredes enfrentadas a la viga tenían aberturas (9,0 cm de ancho) para permitir que las ratas entraran y salieran de las cajas terminales. En el suelo de cada caja terminal se había incorporado un vaso de cobre para agua (2,7 cm de diámetro, 3 cm de profundidad), y después de cada travesía se proporcionó a las ratas ~ 150 μL de agua. Estas recompensas estaban concebidas como un incentivo para travesías autoiniciadas y, por lo tanto, limitaban la manipulación del experimentador durante la prueba.

Al comienzo de una sesión de prueba, se colocaron las ratas en la barra o en el tablón a ~10 cm de una caja final y se les permitió entrar en la caja y beber la recompensa de agua. Una vez dentro de la caja en la primera prueba, y en pruebas posteriores, se dio a las ratas ~45 s para beber el agua y explorar. Las ratas podían salir en cualquier momento de las cajas finales para cruzar al lado opuesto de la viga. Si las ratas no había iniciado el recorrido transcurridos 45 s, se bajaban las paredes como señal para comenzar la travesía. La mayoría de las ratas iniciaban la travesía por sí mismas cuando se bajaban las paredes, pero de no ser así el experimentador movía las ratas hacia la tabla o barra. Cuando se producían las caídas, los animales caían en una porción de red de seguridad (0,7 x 0,2 m) de una red de bádminton (genérica) colocada 20 cm por debajo del elemento de viga. El bastidor de la red también servía como punto de montaje para las diversas cámaras, espejos y elementos de distracción.

Las caídas, los resbalones y el tiempo de travesía fueron evaluados como se describe en Kucinski, A. et al. (2013) Modelling fall propensity in Parkinson's disease: Deficits in the attentional control of complex movements in rats with cortical-cholinergic and striatal-dopaminergic deafferentation (Modelización de la propensión a las caídas en la enfermedad de Parkinson: Déficits en el control atencional de movimientos complejos en ratas con desaferenciación cortical-colinérgica y estriatal-dopaminérgica. J. Neurosci, 33, 16522-16539). Se marcó una caída en los siguientes casos: cuando un resbalón o paso en falso hizo que una rata detuviera su movimiento hacia adelante y perdiera la postura de caminar erguida, dando como resultado que la parte inferior del animal golpease la superficie de la barra, cuando la rata cayó por completo de la barra hacia la red bajo la barra o quedó colgando de la barra por sus patas, cuando una rata dejaba de moverse hacia delante y se aferraba a la barra mientras giraba (girando así con ella y quedando boca abajo), o cuando una rata dejaba de moverse hacia delante y se sentaba perpendicularmente sobre la barra durante un tiempo mayor de 2 s, mientras intentaba reanudar el movimiento hacia adelante, pero sin lograrlo. Se marcó un resbalón cuando cualquiera de las patas de la rata perdió el contacto con la superficie de la barra y se extendía por debajo del borde horizontal inferior de la barra. El tiempo de travesía se definió como la latencia para recorrer toda la distancia de la viga. Durante las pruebas en las que se produjo una caída, los resbalones y el tiempo de travesía se prorratearon multiplicando el cociente entre la distancia de una travesía completa y la distancia a la cual las patas traseras perdieron el contacto con la barra durante la caída.

Se presentaron dos distractores durante las travesías. En primer lugar, se incorporó a la secuencia de prueba MCMCT un distractor de marco de puerta pasivo, constituido por una superficie de 46,0 x 39,4 cm hecha de núcleo de espuma, con un recorte en forma de marco de puerta de 20 cm x 10 cm. Se colocó el distractor en el punto medio de la viga (marca de 100 cm) con jambas laterales a 3,5 cm de la superficie de la barra por ambos lados y el borde superior del recorte de marco de puerta 11 cm por encima de la superficie plana de la barra. Los presentes autores habían descubierto con anterioridad que este distractor provocaba interrupciones en el movimiento, tales como congelación de la marcha y caídas, modelizando así los efectos de dicho distractor en pacientes con EP. En segundo lugar, se confrontó a los animales con una tarea de distracción activa en la que se presentaba una recompensa de agua (3 gotas de agua; ~-150 μL) en una plataforma (4,9 cm de diámetro) durante las travesías. También se colocó la plataforma en la marca de 100 cm, con 2-3 cm de separación entre la barra y la plataforma.

Primeramente, se aclimataron las ratas a la tarea en 4 pruebas de moldeamiento (días de prueba 8 y 9). En estos ensayos, se colocó directamente a las ratas en la barra estacionaria (sin rotar) al lado de la plataforma (aproximadamente en la mitad del ancho de la viga) y se les permitió beber el agua de la plataforma. Después de las pruebas de moldeamiento, se sometió a las ratas a 4 ensayos de prueba en los cuales las ratas realizaron sin ayuda travesías de la barra mientras giraba (en direcciones alternas) con presentaciones de recompensas de agua. En otros dos días de prueba (10 y 12), las ratas realizaron 10 recorridos de prueba por día. Además de las caídas, se contó el número de recompensas de agua ganadas, definidas como lamer/beber agua de la plataforma durante >1 segundo. Todos los ensayos fueron grabados utilizando un sistema de 4 cámaras de tipo bala (KT&C; modelo KPCS190SH Black/White Bullet Camera con CCD SONY Super HAD de 7,62 mm (1/3")) con bases giratorias que estaban fijadas al bastidor de soporte externo del lado externo del aparato mediante abrazaderas de mano. Las medidas de desempeño fueron analizadas mediante la reproducción de video por experimentadores que desconocían el estado de lesión y el régimen de tratamiento de las ratas.

Tarea de atención sostenida (SAT)

Aparato

El entrenamiento y las pruebas se realizaron utilizando 12 compartimentos operativos (MED Associates Inc.) alojadas dentro de cubículos individuales con atenuación de sonido. Cada cámara estaba equipada con dos palancas retráctiles, un panel central de luz blanca (2,8 W) y un dispensador de agua ubicado en la misma pared que las luces del panel. El dispensador de agua era capaz de administrar 45 μL de agua por entrega. La presentación de la señal, el funcionamiento de la palanca, la entrega del refuerzo y la recopilación de datos se controlaban mediante un PC Pentium y el software Med-PC para Windows (versión 4.1.3; MED Associates).

Adquisición

Inicialmente se entrenó a las ratas privadas de agua para que presionaran una palanca con el fin de obtener una recompensa de agua de acuerdo con un programa modificado de relación fija 1 (FR1, por sus siglas en inglés) para el refuerzo por agua. Durante esta fase de entrenamiento, cualquier presión de la palanca daba como resultado la entrega de agua. Típicamente, los animales no exhiben ningún sesgo lateral con respecto a qué palanca se presiona; sin embargo, si se presionaba una palanca 5 veces seguidas, se modificaba el programa FR1 para requerir que el animal presionara la palanca opuesta antes de poder conseguir la siguiente recompensa. Después de 3 días consecutivos con 120 presiones de palanca reforzadas cada una, se comenzó a entrenar a las ratas para discriminar entre una señal (1 s de iluminación de la luz del panel central) y un evento sin señal (sin iluminación). Dos segundos (s) después de un evento de señal o sin señal, se extendían ambas palancas hacia el interior del compartimento operativo y permanecían extendidas durante 4 s o hasta que se presionaba una palanca. Si no se producía ninguna presión transcurridos 4 s, se retraían las palancas y se anotaba una omisión. Inmediatamente después de las respuestas (correctas o incorrectas), se retraían las dos palancas y se reiniciaba el intervalo variable entre ensayos (ITI, por sus siglas en inglés; 12±3 s). En las pruebas con señal se reforzó presionar la palanca izquierda, a lo que se denominaba "acierto", mientras que no se reforzó presionar la palanca derecha, a lo que se denominaba "fallo". En las pruebas sin señal se reforzó presionar la palanca derecha, a lo que se denominaba "rechazo correcto", mientras que no se reforzó presionar la palanca izquierda, a lo que se denominaba "falsa alarma".

Los animales recibían recompensas de agua solo por las respuestas correctas (45 μL por cada acierto y rechazo correctos), mientras que las respuestas incorrectas (errores y falsas alarmas) no eran recompensadas. Para eliminar la posibilidad de un sesgo de selección, a la mitad de los animales se los entrenó con el patrón opuesto. Se presentaron eventos con señal y sin señal en orden pseudoaleatorio en un número de 81 ensayos de cada tipo (162 ensayos en total) por sesión. Durante esta fase de entrenamiento, las respuestas incorrectas fueron seguidas por pruebas de corrección en las que se repetía la prueba anterior. Después de tres respuestas incorrectas consecutivas en las pruebas de corrección, se sometió al animal a una prueba forzada en la que se extendía la palanca durante 90 s o hasta que el animal respondiera. Si la prueba de elección forzada era una prueba con señal, la luz de señal permanecía iluminada mientras la palanca estaba extendida. Durante esta etapa de entrenamiento la luz ambiental no estaba encendida. Los animales avanzaron al siguiente paso de moldeamiento si respondían correctamente a >70 % de ensayos tanto con señal como sin señal durante 3 días consecutivos.

Durante la tercera fase de moldeamiento, se introdujeron múltiples duraciones de señal (500, 50 y 25 ms) y se redujo a 9±3 s el ITI. También se eliminaron los ensayos con corrección y de elección forzada. El tipo de ensayo y la duración de la señal se determinaron de forma seudoaleatoria para cada ensayo. La duración de la sesión se fijó en 40 min. Después de al menos 3 días de desempeño estable, definido por al menos 70 % de aciertos a señales de 500 ms, 70 % de rechazos correctos y <30 % de omisiones, se inició el entrenamiento de los animales en la versión final de la tarea. La versión final era idéntica a la fase de entrenamiento anterior salvo en que durante toda la sesión la luz ambiente estuvo encendida. La adición de la luz ambiente encendida representa un elemento crucial a la hora de probar la atención sostenida, ya que requiere que el animal restrinja su comportamiento y se concentre en la luz del panel central durante la ejecución de la tarea. Al llegar a la etapa final de entrenamiento antes de las intervenciones quirúrgicas lesivas, los animales permanecieron en esta etapa durante 14 días consecutivos y se promediaron las puntuaciones de los últimos 5 días de desempeño para determinar las puntuaciones de cada animal previas a la intervención quirúrgica. Durante las pruebas de los efectos del fármaco, posteriores a la intervención quirúrgica, durante 12 días consecutivos se sometieron las ratas a las pruebas, únicamente en la fase final, y una vez más se promediaron las puntuaciones de los últimos 5 días para obtener los análisis finales.

Medidas de desempeño en la SAT

Durante cada sesión SAT se registraron las siguientes medidas de comportamiento: aciertos, errores, falsas alarmas, rechazos correctos y omisiones. Los errores y las falsas alarmas son, respectivamente, lo contrario de los aciertos y los rechazos correctos. Se calculó el número relativo de aciertos (aciertos/aciertos+fallos) para cada longitud de señal, así como el número relativo de rechazos correctos (rechazos correctos/rechazos correctos+falsas alarmas). Además, también se determinó una medida global de aptitud atencional, la puntuación SAT, que integra tanto el número relativo de aciertos (h) como el número relativo de falsas alarmas (f), para cada duración de la señal. La puntuación SAT se calculó utilizando la siguiente fórmula: (h-f)/[2(h+f)-(h+f)₂]. Así, en las puntuaciones de la SAT no intervienen errores de omisión. Las puntaciones SAT variaban de 1,0 a -1,0, donde 1,0 indica que todas las respuestas fueron aciertos y rechazos correctos, 0 indica una incapacidad para discriminar entre eventos de señal y sin señal, y -1,0 indica que todas las respuestas fueron fallos y falsas alarmas. Los errores de omisión se registraron por separado.

Histología y valoraciones de las lesiones

Después de completar el ensayo con fármacos posterior a la intervención quirúrgica, se anestesió profundamente a las ratas y se las perfundió transcardiacamente, a razón de 50 mL/min, con solución tampón de fosfato (STF) 0,1 M durante 2 minutos, seguida de perfusión con paraformaldehído al 4 % en disolución de fosfato de sodio 0,4 M y ácido pícrico al 15 % (pH 7,4) durante 9 minutos. Se extirparon rápidamente los cerebros y se posfijaron durante 2 a 6 horas a 4 °C, y después se enjuagaron en STF 0,1 M y se conservaron en una solución de sacarosa al 30 %, dejando que se hundieran. Se cortaron secciones coronales (40 μm de espesor) utilizando un micrótomo de congelación ^{( C m} 2000R; Leica) y se conservaron en solución anticongelante. Las inmunotinciones con tirosina hidroxilasa (TH) y ChAT se realizaron tal como se describe en la literatura.

Utilizando un microscopio digital Leica DM400B se tomaron, con un aumento de 4x, imágenes de las secciones inmunoteñidas con TH. Para capturar las imágenes se utilizó el software SPOT 5.1 (Spot Imaging Solutions). Se utilizaron dos cortes (AP 1,2 y 0,2 mm) para generar una única puntuación que representaba el tamaño y el grado de las lesiones bilaterales. Se dirigieron infusiones de 6-OHDA al estriado dorsal de manera centrada entre los límites medio y lateral. Se puntuó el tamaño de la lesión basándose en el tamaño del área de pérdida de TH observada en el cuerpo estriado dorsal, correspondiendo una puntuación de 10 a que 100 % del cuerpo estriado dorsal presentase pérdida de TH, una puntuación de 5 a 50 %, y una puntuación de 1 a 10 %. También se determinó el grado de eliminación de TH (grado de pérdida de TH) dentro del área del tamaño de la lesión basándose en una escala de 1 a 10, correspondiendo una calificación de 10 a la depleción completa de TH dentro del espacio de la lesión, y valores más bajos correspondientes al porcentaje de TH remanente (por ejemplo: 5 es 50 % de pérdida de TH, 2 es 20 % de pérdida de TH). Se promediaron las puntuaciones en cuanto a tamaño y extensión de la lesión de ambas secciones y hemisferios, a fin de proporcionar una única puntuación de lesión para cada rata.

Para evaluar el alcance de las pérdidas de células colinérgicas, se generaron estimaciones semicuantitativas del número de neuronas colinérgicas como se ha hecho anteriormente. Utilizando un microscopio digital Leica DM400B se tomaron fotografías del prosencéfalo basal teñido con ChAT de los dos hemisferios, con un aumento de 5x. Se realizaron estimaciones de conteo de células del área del núcleo basal de Meynert (nbM) y la sustancia innominada (SI) dentro de una región de 680 μm x 680 μm, y del núcleo horizontal de la banda diagonal/área preóptica dentro de una zona de 1000 μm x 1300 μm. Se utilizó la función "recuento" de Photoshop CS6 para cuantificar el número de células ACh. Esta característica también etiqueta cada neurona ya contada para evitar el doble conteo y permite la revisión por parte de un segundo contador. Se promediaron estas estimaciones semicuantitativas de los dos hemisferios, para proporcionar una sola estimación por rata. Para determinar las relaciones entre el grado de las lesiones y las medidas de desempeño y para verificar lesiones similares entre grupos con lesiones de DL, se generó para cada rata un único núcleo compuesto que reflejaba la gravedad de las lesiones de los dos sistemas. Para ello se calificó de 5 a 1 la pérdida de células colinérgicas de dos áreas del prosencéfalo basal por hemisferio (5: >90 % de pérdida de células en relación con el testigo; 4: >80 %; 3: >70 %; 2: >60 %; 1: >30-50 % de pérdida). Se promedió esta puntuación, multiplicada por 2, con la puntuación de lesión TH descrita más arriba, para generar una única puntuación compuesta (sobre 10) por rata DL.

Administración de fármacos y dosis

Se disolvieron donepezilo e idalopirdina en solución de vehículo de 2-hidroxipropil-beta-ciclodextrina al 5 %. Se dividieron las ratas en los siguientes grupos de administración de fármacos (14 por grupo, 7 por sexo): con lesión simulada y administración de vehículo (SH/VEH), DL y vehículo (DL/VEH), ^{D l} y donepezilo (DL/DON), DL e idalopirdina (DL/IDL) y DL e idalopirdina más donepezilo (DL/DON+IDL). Las soluciones se prepararon la noche anterior a la administración y se repusieron cada 6 días. Para el tratamiento combinado se disolvieron DON e IDL en la misma solución. A las ratas se les inyectó por vía SC (2,0 mL/kg) en cuatro sitios de inyección alternos (cuello izquierdo, ijar derecho, cuello derecho, ijar izquierdo; secuencia repetida). Se inyectó a las ratas 30 minutos antes de realizar la SAT por la mañana y 30 minutos antes de realizar la MCMCT por la tarde.

Las dosis de fármaco fueron seleccionadas en base a los datos de un experimento piloto que evaluó, en cada caso en 4 ratas DL, los efectos de DON solo, a 0,1, 0,3 y 1,0 mg/kg, o administrado en combinación con IDL (5,0 mg/kg). Los resultados sugirieron que el desempeño en la MCMCT de ratas DL puede beneficiarse más claramente de la combinación de tratamiento que implica a la dosis media de DON.

Análisis estadísticos

Se compararon las medidas de desempeño en la SAT y la MCMCT entre los cinco grupos, y se utilizaron principalmente análisis ANOVA de medidas repetidas intrasujeto, así como ANOVA de una o dos vías cuando correspondía. El sexo fue un factor en todos los análisis. El análisis de las puntuaciones y aciertos en la SAT también incluyó la duración de la señal (500, 50 y 25 ms) como factor intrasujeto. Para las ejecuciones de MCMCT en la barra (días de prueba 2 a 5), se evaluaron el tiempo de recorrido, los resbalones y las caídas en función de la situación (estacionaria, girando en sentido antihorario (cc) o en sentido horario (cw), o girando en direcciones alternas) como un factor intrasujeto. Para cada situación (o día), se promediaron las medidas de desempeño durante los 6 ejercicios de cada rata en ese día, y para los análisis estadísticos se utilizaron estos valores promediados. En los días de prueba con marco de puerta (6, 7 y 11) se compararon las caídas inducidas por el distractor de marco de puerta entre grupos y sexos. Se compararon mediante análisis ANOVA de dos vías las caídas y las recompensas obtenidas durante la situación de distractor activo. Las comparaciones del comportamiento de congelación inducido por el marco de puerta y otras medidas de desempeño entre ratas DL/N H y DL/DON+IDL se llevaron a cabo utilizando análisis ANOVA de dos vías. También se utilizó ANOVA de dos vías para comparar puntuaciones para la lesión compuesta TH/ChAT entre los grupos de fármaco y entre los sexos. Después de los efectos principales significativos, se realizaron comparaciones múltiples post hoc utilizando la prueba de diferencia mínima significativa (DMS). Se realizó el seguimiento de las interacciones significativas entre los efectos del grupo y otros factores, mediante análisis ANOVA de una vía sobre los efectos del grupo y pruebas DMS de comparación múltiple. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando SPSS for Windows (versión 17.0: SPSS). En los casos de violación de la suposición de esfericidad, se dan los valores F corregidos por Huyhn-Feldt, junto con los grados de libertad no corregidos. Se fijó alfa en 0,05. Se indican los valores exactos de P como ha sido recomendado anteriormente. Se indican y se ilustran las varianzas como error estándar de la media (e. e. m.). Los tamaños de efecto para los efectos seleccionados se expresan utilizando la d de Cohen.

Resultados

Desempeño SATy MCMCTantes de la intervención quirúrgica

Antes de la intervención quirúrgica, se sometió a las ratas a entrenamiento SAT hasta que alcanzaron un desempeño de criterio estable y también estaban familiarizadas con la MCMCT.

Tasa reducida de caídas DON+IDL en ratas DL

En el primer día de las pruebas MCMCT después de la intervención quirúrgica (Tabla 1), las ratas cruzaban por la superficie de tablón. Esta superficie rara vez causa resbalones o caídas y, por lo tanto, solamente se evaluó el tiempo de recorrido. El tiempo de travesía no difirió entre grupos y sexos (efectos principales e interacción: todos F<1,46, todos P>0,23; 4,02±0,16 s por travesía).

Los días 2, 3, 4 y 5, las ratas realizaron travesías por la superficie de la barra, y se evaluaron el tiempo de travesía, los resbalones y las caídas (6 travesías por día, 24 travesías en total). El día 2, la barra permaneció estacionaria (sin girar), seguida de una rotación de la barra (a 10 r. p. m.) en el familiar sentido antihorario (cc), el día 3. El día 4 se invirtió el sentido de giro de la barra al menos familar sentido antihorario (cw), y el día 5 se alternaba el sentido de rotación en ensayos sucesivos (cc-cw-cc-cw-cc-cw). Se analizaron las medidas de desempeño en cuanto a los efectos de grupo, sexo y condiciones del ensayo (barra estacionaria, cc, cw, rotación alterna) como factor intrasujeto.

Caídas

El recorrer la barra mientras estaba en rotación aumentó en general el número de caídas en todos los animales (efecto principal de la condición de prueba: F(3,180)=6,48, P<0,001; caídas desde la barra estacionaria: 21,67±1,90 %, girando en sentido antihorario (cc): 32,62±1,90 %, en sentido horario (cw): 30,00±2,34 %, alternos: 30,00±2,00 %; menos caídas en la barra estacionaria que en todas las demás situaciones; todo P<0,001). En estos ensayos, un efecto principal de grupo sobre la frecuencia de caídas (F(4,60)=2,62, P=0,04) reflejó que en comparación con la frecuencia de caídas en ratas DL/VEH, las ratas SH/VEH y DL/DON+IDL cayeron con frecuencia significativamente menor (d de Cohen = 0,96; para comparaciones múltiples véase la figura 1A). Además, y a diferencia de las ratas DL/DON+IDL, con una frecuencia de caídas estadísticamente similar a la observada en las ratas SH-VEH, las ratas tratadas únicamente con IDL cayeron con la misma frecuencia que las ratas DL no tratadas (DL/VEH). La frecuencia de caídas en ratas DL/DON tendió a ser menor que en ratas DL/VEH pero el efecto no alcanzaba significación (P=0,17). Los efectos de grupo y de las condiciones de ensayo no interactuaban (F(12,180)=1,00, P=0,45), lo que indica que el desempeño en todas las situaciones de la barra contribuía al efecto de DON+IDL (figuras 1B-D). No hubo efecto del sexo ni interacciones en las que estuviera implicado el sexo (todo F<1,69, todo P>0,17).

Velocidad de travesía

De manera similar a los efectos sobre las caídas, la velocidad de travesía difirió entre los grupos (F(4,60)=3,31, P=0,02), mostrando el grupo de tratamiento DL/IDL, que cayó tan a menudo como las ratas DL tratadas con vehículo, los recorridos más lentos (SH/VEH: 3,96±0,19 s; DL/ VEH: 4,62±0,25 s; DL/DON: 4,48±0,36 s; DL/IDL: 5,48±0,45 s, DL/DON+IDL: 4,58±0,32 s; siendo el DL/IDL significativamente más lento que todos los demás grupos). Además, los machos fueron generalmente más lentos que las hembras F(1,60)=13,54, P=0,001; machos: 5,12±0,23 s, hembras: 4,13±0,17 s. En ambos sexos, los pesos corporales no estaban correlacionados con las velocidades de travesía (ambos R2<0,06). La velocidad de travesía no se vio afectada por las condiciones de ensayo, y no se encontraron interacciones de 2 o 3 vías entre los 3 factores (todo F<0,91, p>0,33).

Resbalones

El recorrer la barra en rotación causó generalmente más resbalones en comparación con la barra estacionaria (F(3,180)=37,53, P<0,001; estacionaria: 1,02±0,67 resbalones; cc: 2,31 ±0,16; cw: 2,39±0,15; rotación alterna: 2,35±0,13). El número de resbalones no difirió entre grupos (F(4,60)=2,37, P=0,06), reflejando la tendencia que las ratas DL/IDL parecían tener resbalones con más frecuencia que todas las demás ratas DL (SH/VEH: 1,60+0,11; DL/VEH: 2,04+0,16; DL/DON: 2,04+0,14; DL/IDL: 2,51+0,38, DL/DON+IDL: 1,92+0,16). Los machos resbalaba más frecuentemente que las hembras (F(1,60)=5,64, P=0,02; machos: 2,24±0,17; hembras: 1,79±0,10) pero una vez más no existía interacción entre los tres factores (todos F<1,01, p >0,44). Los resbalones en los machos, pero no en las hembras, estaban correlacionados positivamente con sus pesos corporales (machos: R2=0,14, P=0,03; hembras: R2=0,08, P=0,10).

Reducción de las caídas asociadas al marco de puerta en ratas DL tratadas con DON+IDL

En los pacientes con EP que ya tienen una propensión a la congelación de la marcha, los umbrales estrechos son muy eficaces para provocar la congelación y, por lo tanto, aumentar el riesgo de caídas. Se supone que este efecto refleja un cambio de recursos atencionales limitados, desde el apoyo al movimiento hacia adelante al procesamiento de este distractor pasivo. Se dispuso a lo largo de la barra el distractor de marco de puerta (figura 2A) los días de prueba 6, 7 y 11.

Globalmente, el distractor de puerta triplicó con creces el porcentaje de ensayos en los que se produjeron caídas (F(1,60)=117,10, P<0,001; caídas con puerta: 38,34±2,89 %, caídas sin puerta: 11,30±1,34 %). El efecto principal de grupo (F(4,60)=3,24, P=0,018) y una interacción significativa de puerta x grupo (F(4,60)=3,15, P=0,02) reflejaban que las caídas inducidas por el marco de puerta eran responsables de las diferencias de grupo (figura 2B). Las ratas DL tratadas con VEH, DON o IDL experimentaron más caídas asociadas a marco de puerta que las ratas SH/VEH. Por el contrario, en presencia de marco de puerta, las tasas de caída en ratas DL/DON+IDL no difirieron de las de ratas SH/VEH, y fueron significativamente más bajas que las tasas de caída en ratas DL/IDL (d de Cohen = 0,74; figura 2B). En todas las ratas, la tasa de caídas asociadas al marco de puerta disminuyó en el transcurso de los tres días de prueba (efecto principal del día: F(1120)=48,31, P<0,001; día 1: 64,76±4,42 % de caídas, 2: 38,10±4,14 %, 3: 12,14±2,14; todas las interacciones con otros factores: F<1,34, P>0,23).

El marco de puerta causó casi el doble de caídas en machos que en hembras, sin embargo, los machos no caían más que las hembras en ausencia del marco de puerta (sexo x situación: F(1,60)=34,24, P<0,001; porcentaje de caídas con puerta respecto a ensayos; hembras: 25,69±3,76 %, machos: 50,99±3,22 %, t(69)=26,09, P<0,001; caídas sin puerta en hembras: 13,27±1,81 %, machos: 9,32±1,95 %, t(69)=2,20, P=0,14). Las caídas asociadas con marco de puerta en machos no estaban correlacionadas con sus pesos corporales ni las velocidades de travesía (en ambos casos R2 <0,03). Sin embargo, las hembras más lentas tuvieron más caídas en esta situación (R2=0,21, P=0,005). No existían interacciones significativas entre los 3 factores (todos F<1,31, todos P>0,25).

Correlatos microconductuales

Para determinar posibles correlatos de comportamiento del efecto del tratamiento con DON+IDL en las caídas asociadas a marco de puerta, se realizó un análisis basado en vídeo del microcomportamiento de los animales durante la travesía con marco de puerta. Se seleccionaron recorridos con marco de puerta de ratas DL/VEH y DL/DON+IDL macho y hembra, de días en los que sus tasas de caída reflejaban las medias de su grupo (días 6 y 7 para las hembras y 11 para los machos). En general, se observó que las ratas de ambos grupos detenían su movimiento de avance cuando se acercaban al marco de puerta (efectos de los grupos sobre la duración de la congelación: F(1,27)=1,22, P=0,28; DL/VEH: 1,25±0,22 s/congelación DL/DON+IDL: 0,93±0,21 s). Además, la duración de los períodos de congelación de las ratas individuales estaba correlacionado con sus tasas de caída (figura 2C). Puesto que los congelamientos más prolongados estaban asociados casi consistentemente con caídas en todas las ratas, se agruparon las congelaciones provocadas por el marco de puerta en congelaciones prolongadas (>2 s) frente a cortas (<2 s). El porcentaje de ensayos en los que se produjo una congelación prolongada no difirió entre los dos grupos (6 ensayos por animal; F(1,27)=2,59, P=0,12; 26,79±4,95 % de los ensayos implicaron congelaciones prolongadas). Además, las tasas de caída asociadas con congelaciones prolongadas -en animales que mostraron al menos una de estas congelaciones- (10 DL/VEH y 9 DL/DON+IDL), no diferían entre estos dos grupos (F(1,18)=0,004, P=0,95; DL/VEH: 62,67±12,62 % de caídas en recorridos con congelaciones prolongadas asociadas a marco de puerta; DL/DON+IDL: 63,89±13,89 %). Sin embargo, las tasas de caída asociadas con congelaciones cortas fueron más altas en ratas DL/VEH que en ratas DL/DON+IDL (14 ratas por grupo; F(1,27)=5,27, P=0,03, figura 2D). Por lo tanto, estas observaciones indicaban que el tratamiento de ratas DL con DON+IDL no aumentó la proporción de recorridos con marco de puerta que estuviesen asociados con congelaciones relativamente cortas, pero las ratas tratadas con DON+IDL fueron más capaces de reanudar y continuar la travesía después de congelaciones cortas.

Para detallar más los efectos potenciales del tratamiento combinado con DON+IDL, se seleccionaron recorridos representativos (primeras dos pruebas en el día 2 con marco de puerta en hembras y en el día 3 para machos; 2 ensayos por rata) y se contó la tasa de los siguientes comportamientos durante un período de 1 s que comenzaba poco después de congelaciones breves (0,5-1,5 s de períodos de congelación) y durante las mismas: (1) aumentos repentinos de la velocidad de travesía después de una congelación; (2) posición de la cola alta y firme al pasar por debajo del marco de puerta, asociada con una postura erguida controlada y enfocada hacia delante, en contraste con una cola baja y arrastrada, y una postura encorvada y enfocada hacia abajo, típica de las ratas DL; 31 (3) balanceo de la cola para mantener el equilibrio después de resbalones asociados con el marco de puerta; (4) el uso de las extremidades anteriores para "empujar" la parte superior del tronco del cuerpo hacia la barra después de los resbalones; (5) movimientos activos de las extremidades traseras ("andar en el sitio") durante los congelamientos, para mantener el equilibrio en la barra; y (6) pequeños "saltos" después de las congelaciones para restablecer el impulso de avance a través del marco de puerta. Los resultados indican, en primer lugar, que una puntuación compuesta que condensaba los recuentos de los 6 comportamientos estaba correlacionada negativamente con las tasas de caída en ambos grupos (ambos R2>0,42, ambos P<0,02), lo que indica que los movimientos de recuperación activos después de congelaciones breves son un fuerte predictor de pasos con éxito por el marco de puerta. En segundo lugar, las ratas DL/DON+IDL presentaron más casos de comportamiento de categoría #2 (véase más arriba) que las ratas DL/VEH (X2=7,22, P=0,03, DL/VEH: 0,18±0,10 recuentos/ensayo, DL/DON+IDL: 0,54±0,11; todas las demás categorías de comportamiento: P>0,30; figuras 2E).

Falta de efectos del tratamiento sobre las caídas asociadas a distractor activo

Las caídas en personas de edad avanzada y pacientes con EP están correlacionadas con un desempeño deficiente en dobles tareas. Para modelizar el impacto que tiene sobre el control de movimiento complejo la reasignación de recursos atencionales a una tarea secundaria, se ofreció agua a ratas privadas de agua para que la tomasen mientras cruzaban la barra en rotación.

En conjunto, 54 de los 70 animales (77,14 %) tomaron agua (definido como lamer el agua durante al menos 1 s, con independencia de las caídas) en al menos un ensayo (13 SH/VEH, 9 DL/VEH, 10 DL/DON, 11 DL/IDL, y 11 DL/DON+IDL; 26 machos y 28 hembras). Un efecto principal del grupo indicó que todas las ratas DL tomaban agua con menor frecuencia que las ratas SH/VEH (F(4,60)=3,32, P=0,016), aunque las comparaciones múltiples indicaron que el recuento de tomas de las ratas DL/DON no era significativamente menor que el de las de DL/VEH (figura 3A). Las hembras tomaron agua con más frecuencia que los machos (F(1,60)=10,56, P=0,002; hembras: 49,78±6,32 %, machos: 26,69±4,36 %], sin embargo, los efectos del sexo no interactuaban con los de grupo (F(4,60)=1,50, P=0,22). En esta prueba, las tomas de agua y las caídas son medidas combinadas, ya que detener el movimiento hacia adelante para tomar agua supone un alto riesgo de caídas. Las ratas SD/VEH lograron tomar agua sin caerse con mayor frecuencia que las ratas DL (F(4,60)=5,84, P<0,001; figura 3B). Además, las hembras lograron tomar agua sin caerse con más frecuencia que los machos (F(1,60)=10,81, P=0,002; hembras 33,98+5,02 % de ensayos; machos: 16,73+3,36 %) pero este efecto no interactuaba con el de grupo (F(1,69)=1,56, P=0,19). En ninguno de los sexos estaba correlacionada esta medida con el peso corporal, con la velocidad de travesía ni con las caídas asociadas a marco de puerta, todo R2<0,1). Así pues, las lesiones DL redujeron el compromiso con el distractor activo y aumentaron las tasas de caída asociadas, pero los tratamientos farmacológicos no mejoraron el desempeño de travesía de la barra en presencia de este distractor activo.

Falta de efectos del tratamiento sobre el desempeño en la SAT

Después de completar el período de recuperación posquirúrgico de cuatro semanas, los animales volvieron a las pruebas SAT por la mañana y MCMCT por la tarde, y se administraron tratamientos farmacológicos 30 minutos antes de la sesión de prueba de la mañana y también de la tarde. Las lesiones DL afectaron al desempeño en la SAT. Sin embargo, ninguno de los tratamientos mejoró el desempeño.

Ejemplo 2: Reducción de caídas en ratas DL tratadas con rivastigmina e idalopirdina

Esquema del estudio:

Durante los 10 días siguientes se trató subcutáneamente (SC), con un volumen de 5 mL/kg, a ratas con lesión doble (DL) o con operación simulada, tanto con vehículo (2-hidroxipropil-p-ciclodextrano, 2-HPBCD, al 10 % en solución salina) como con rivastigmina 1 mg/kg, idalopirdina 10 mg/kg o una combinación de los dos tratamientos. Las comparaciones estadísticas se efectuaron mediante un análisis ANOVA unidireccional y una prueba de comparación múltiple de Dunnetts post hoc, con animales DL tratados con vehículo como testigo.

MCMCT: Desviaciones del aparato con respecto al ejemplo 1:

El aparato era similar al utilizado anteriormente (Kucinski et al., 2013). Consistía en una barra cuadrada recta de 3 metros de largo (2,54 cm2) o una barra en zigzag con dos superficies dobladas a lo largo de la barra, sostenida entre dos torres de un metro de largo sobre las que se sostenían las plataformas de inicio y final. Estas plataformas idénticas medían 30 cm x 25 cm, y cada una tenía una taza de agua de cobre, de 3 cm de diámetro, incrustada en el piso. Las plataformas estaban rodeadas por estructuras de paredes retráctiles que tenían 23 cm de alto cuando estaban en las posiciones totalmente elevadas. Estas paredes se podían subir y bajar mecánicamente mediante un motor eléctrico de c. c. a 12 V, controlado de forma remota mediante un conmutador basculante y, por lo tanto, permitían la conversión desde una plataforma abierta, al principio, hasta una estructura de caja, al final. En la pared enfrentada a la viga había una abertura de 9 cm de ancho para permitir el acceso de las ratas hacia y desde la viga. La barra estaba hecha de tubo de aluminio, cubierto por entero de cinta adhesiva gris, utilizada para la tracción. Para las situaciones de tablón se colocó un tablón de 13,3 cm de ancho directamente encima de la barra y se ajustó dentro de los bordes de las torres de soporte. Se utilizó un motor eléctrico de c.c. a 12 V para hacer girar la barra, controlado por un modulador de ancho de pulso. Se suspendió una red de seguridad 20 cm por debajo de la barra, para recoger a las ratas en las caídas. Las grabaciones de la MCMCT se efectuaron utilizando 4 cámaras tipo bala Marshall 1080-HD-DI, modelo CV500 (velocidad de cuadro B-30/25P, 59,94i), montadas sobre un bastidor paralelo a un lado de la barra. Se convirtieron los vídeos a una sola fuente usando un multivisor cuádruple SDI a HDMI (Matrox MicroQuad) y se vieron directamente en un PC utilizando el software Elgato Game Capture HD.

Tabla 2: Secuencia MCMCT (cc: en sentido antihorario, cw: en sentido horario, alt.: cc/cw alternadamente)

Resultados:

En las figuras 4-7 se muestran los resultados, y se puede observar que el tratamiento combinado de ratas DL con idalopirdina y rivastigmina (DL/Riva+IDL) redujo el número de caídas en comparación con las ratas DL no tratadas (DL/Veh).

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, donde el tratamiento de la enfermedad de Parkinson consiste en reducir las caídas en un paciente con enfermedad de Parkinson.

2. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según la reivindicación 1, donde la dosis diaria de idalopirdina es de 10 mg a 100 mg.

3. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según la reivindicación 1, donde la dosis diaria de idalopirdina es de 30 mg a 60 mg.

4. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el inhibidor de acetilcolinesterasa es donepezilo.

5. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un inhibidor de acetilcolinesterasa seleccionado del grupo consistente en donepezilo y rivastigmina para uso en el tratamiento según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el inhibidor de acetilcolinesterasa es rivastigmina.

6. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y donepezilo para uso en el tratamiento según la reivindicación 4, donde la dosis de donepezilo es de 1 a 30 mg.

7. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y donepezilo para uso en el tratamiento según la reivindicación 4, donde la dosis de donepezilo es de 5 a 23 mg.

8. N-(2-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etil)-3-(2,2,3,3-tetrafluoropropoxi)bencilamina (idalopirdina) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y rivastigmina para uso en la tratamiento según la reivindicación 5, donde la dosis de rivastigmina es de 1 a 20 mg.