ES2953836T3

ES2953836T3 - Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas

Info

Publication number: ES2953836T3
Application number: ES14870819T
Authority: ES
Inventors: Brock Triplett; Micah Needham; Nasrin Tabayehnejad; Ginger Shank; Matthews, Sr; John Hogan; Mark Barker; Neil Francis Leininger
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2014-12-19
Publication date: 2023-11-16
Anticipated expiration: 2034-12-19
Also published as: NZ721415A; CA2934508A1; SG11201605043TA; KR102426987B1; MX2016008223A; IL246335B; JP2017500045A; TWI646188B; EP3083545A4; CN106029624A; BR112016014517A2; MX391467B; IL246335A0; JP6705581B2; AU2014369046A1; AU2014369046B2; US11124736B2; US20160319217A1; EP3083545B1; AR098895A1

Abstract

En el presente documento se describen procesos para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) de una o más células microbianas lisando las células para formar una composición celular lisada y luego recuperando el aceite de la composición celular lisada. En el presente documento se describe además un aceite microbiano que comprende uno o más PUFA que se recupera de células microbianas mediante al menos un proceso descrito en el presente documento. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas

Antecedentes de la invención

En la presente memoria se dan a conocer procedimientos para la obtención de un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA, por sus siglas en inglés) a partir de una o más células microbianas mediante el lisado de las células para formar una composición de células lisadas y, a continuación, recuperar el aceite a partir de la composición de células lisadas. En la presente memoria se da a conocer, además, un aceite microbiano que comprende uno o más PUFA que se recuperan a partir de células microbianas mediante por lo menos un procedimiento descrito en la presente memoria.

El aceite microbiano que contiene uno o más PUFA es producido por microorganismos, tales como, por ejemplo, algas y hongos.

Un procedimiento habitual para obtener PUFA que contienen aceite de células microbianas implica cultivar microorganismos que son capaces de producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor con el fin de producir una biomasa de células microbianas; separar la biomasa del medio de fermentación en el que se ha cultivado la biomasa; secar la biomasa de células microbianas; utilizar un solvente orgánico inmiscible en agua (p. ej., hexano) para extraer el aceite a partir de las células secas y eliminar el solvente orgánico (p. ej., hexano) del aceite. Dicho procedimiento puede implicar, además, diluir el medio de fermentación que contiene la biomasa celular con agua, seguido de la centrifugación para separar la biomasa del medio de fermentación diluido.

Otro procedimiento para obtener PUFA que contienen aceite a partir de células microbianas implica cultivar microorganismos que son capaces de producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor a fin de producir una biomasa de células microbianas; liberar los PUFA que contienen aceite al medio de fermentación en el que se han cultivado las células, mediante la utilización de fuerza mecánica (p. ej., homogeneización), tal como se indica en el documento n.° US 2012/130099, tratamiento enzimático o tratamiento químico para romper las paredes celulares, tal como se indica en el documento n.° US 2011/295028, y recuperar el aceite a partir de la composición resultante que comprende PUFA que contienen aceite, residuos celulares y líquido utilizando un solvente orgánico miscible en agua, p. ej., alcohol isopropílico. El aceite puede separar mecánicamente de la composición y el alcohol debe eliminarse tanto de la corriente de aceite como de la corriente de residuos acuosos de biomasa.

La utilización a escala industrial de cualquiera de los procedimientos descritos anteriormente para obtener PUFA que contienen aceites a partir de células microbianas requiere la utilización de una gran cantidad de solvente orgánico volátil e inflamable, lo que crea condiciones operativas peligrosas y requiere la utilización de caros equipos a prueba de explosiones. Además, la utilización de un solvente orgánico genera una corriente de residuos de solvente orgánico que requiere la implementación de un caro procedimiento de recuperación del solvente para cumplir con los estrictos límites medioambientales respecto a las emisiones de compuestos orgánicos volátiles (COV), lo que a su vez resulta en la necesidad de más mano de obra y costosos equipos.

Además, la utilización de calor en los procedimientos anteriores para secar las células y/o eliminar el solvente del aceite recuperado puede degradar los PUFA que contienen aceites e incrementar el uso de energía, lo que puede incrementar adicionalmente los costes de procesamiento. Se produce la degradación al exponer los PUFA que contienen aceites a oxígeno, tal como al romper la integridad de las paredes de las células microbianas o al exponer las células microbianas a calor.

Un procedimiento sin solventes para obtener PUFA que contienen aceite a partir de células microbianas implica cultivar microorganismos que son capaces de producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor a fin de producir una biomasa de células microbianas; liberar los PUFA que contienen aceite al medio de fermentación en el que se han cultivado las células, mediante la utilización de fuerza mecánica (p. ej., homogeneización), tratamiento enzimático o tratamiento químico para romper las paredes celulares, y recuperar el aceite en bruto a partir de la composición resultante que comprende PUFA que contienen aceite, residuos celulares y líquidos, mediante elevación del pH, adición de una sal, calentamiento y/o agitación de la composición resultante. Sin embargo, dicho procedimiento sin solventes para obtener PUFA que contienen aceite a partir de células, puede requerir tiempos de recuperación del aceite prolongados, grandes cantidades de sal, y/o muchas etapas, la totalidad de los cuales puede incrementar los costes del procesamiento.

En consecuencia, sigue existiendo una necesidad de un procedimiento para obtener PUFA de alta calidad que contengan aceites de células microbianas que no utilice un solvente orgánico volátil; pueda llevarse a cabo utilizando equipos fácilmente disponibles, requiera un número mínimo de etapas, presente tiempos de recuperación del aceite más cortos y pueda proporcionar un rendimiento elevado de PUFA de alta calidad que contiene aceite.

La invención proporciona un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla con una velocidad de la punta del impulsor de entre 5 y 250 cm/s, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de los mismos, para formar una composición de células lisadas desemulsionada, en la que dicha agitación es proporcionada por un agitador seleccionado de entre agitadores de paletas de fluidos, agitadores de con impulsor hidroala (hydrofoil), agitadores de palas de ángulo variable y combinaciones de las mismas, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de los mismos, para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de las mismas, para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de los mismos, para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite, en donde por lo menos uno de (a) o (b) comprende, además, calentar la composición hasta una temperatura de como mínimo 60 °C.,

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de las mismas, y elevar el pH de la composición de células lisadas desemulsionada hasta 8 o superior para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de las mismas, y añadir por lo menos un enzima para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas, que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial, o (iii) una combinación de las mismas, y reducir el pH de la composición de células lisadas desemulsionada hasta 6,5 o inferior para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas, que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano a fin de formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (d) recuperar el aceite, en el que (a) y (b) se combinan entre sí para formar una etapa única de lisado y desemulsionado que comprende: (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas.

En la presente memoria se da a conocer un procedimiento para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) a partir de una o más células microbianas que comprende: (a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano con (i) un enzima adecuado para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (ii) un pH adecuado para formar una composición de células lisadas desemulsionada, o (iii) una combinación de los mismos para formar una composición de células lisadas desemulsionada, (b) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y (c) recuperar el aceite, en el que la composición de células lisadas desemulsionada se obtiene durante dicho lisado bajo (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas.

En la presente memoria se da a conocer un aceite microbiano obtenido mediante cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria.

Las características y ventajas de la invención podrán ser más fácilmente entendidas por el experto ordinario en la materia tras la lectura de la descripción detallada siguiente. Debe apreciarse que determinadas características de la invención que, en aras de la claridad, se han descrito anteriormente y se describen posteriormente en el contexto de realizaciones separadas, también pueden agruparse de manera que formen subcombinaciones de los mismos.

Las realizaciones identificadas en la presente memoria como ejemplares pretenden ser ilustrativas y no limitativas.

El término "aproximadamente" pretende capturar variaciones dentro del error de las mediciones.

En el contexto de la invención, las unidades que no son unidades del SI pueden convertirse en unidades de SI como conocidas por el experto en la materia. La unidad "bar" puede convertirse en kPa del modo siguiente: 1 bar equivale a 100 kPa. La unidad "psi" puede convertirse en kPa del modo siguiente: 1 psi equivale a 6,8948 kPa. La unidad "rpm" puede convertirse en s-1 del modo siguiente: 1 rpm equivale a 0,01667 s-1. La unidad "hp" puede convertirse en kW del modo siguiente: 1 hp equivale a 0,7457 kW. La unidad "gal" puede convertirse en m3 del modo siguiente: 1 gal equivale a 0,00379 m3. La unidad "ft/min" puede convertirse en m/s del modo siguiente: 1 ft/min equivale a 0,00508 m/s.

Los ácidos grasos se clasifican basándose en la longitud y características de saturación de la cadena de carbonos. Los ácidos grasos presentes en un aceite microbiana pueden presentar entre 4 y 28 átomos de carbono y se denominan ácidos grasos de cadena corta, de cadena intermedia o de cadena larga basándose en el número de carbonos presente en la cadena. Los ácidos grasos se denominan ácidos grasos saturados en el caso de que no haya dobles enlaces presentes entre los átomos de carbono y se denominan ácidos grasos insaturados en el caso de que no haya dobles enlaces. Los ácidos grasos de cadena larga insaturados son monoinsaturados en el caso de que solo esté presente un doble enlace y son poliinsaturados en el caso de que haya más de un doble enlace.

El aceite microbiano descrito en la presente memoria se refiere a aceite que comprende uno o más PUFA y se obtiene a partir de células microbianas.

Los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) se clasifican basándose en la posición del primer doble enlace desde el extremo metilo del ácido graso; los ácidos grasos omega-3 (u>-3) contienen un doble enlace en el tercer carbono, mientras que los ácidos grasos omega-6 (w-6) contienen un primer doble enlace en el sexto carbono. Por ejemplo, el ácido docosahexaenoico (DHA) es un ácido graso poliinsaturado de cadena larga omega-3 (LC-PUFA, por sus siglas en inglés) con una longitud de cadena de 22 carbonos y 6 dobles enlaces, con frecuencia denominado "22:6n-3". En una realización, el PUFA se selecciona de entre un ácido graso omega-3, un ácido graso omega-6 y mezclas de los mismos. En otra realización, el PUFA se selecciona de entre los LC-PUFA. En una realización todavía adicional, el PUFA se selecciona de entre ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido araquidónico (ARA), ácido gamma-linolénico (GLA), ácido dihomo-gamma-linolénico (DGLA), ácido estearidónico (SDA) y mezclas de los mismos. En otra realización, el PUFA se selecciona de entre DHA, ARA y mezclas de los mismos. En una realización adicional, el PUFA es DHA. En una realización todavía adicional, el PUFA es ARA.

Los LC-PUFA son ácidos grasos que contienen por lo menos 3 dobles enlaces y presentan una longitud de cadena de 18 o más carbonos, o 20 o más carbonos. Entre los LC-PUFA de la serie omega-6 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ácido di-homo-gammalinoleico (C20:3n-6), ácido araquidónico (C20:4n-6) ("ARA"), ácido docosatetraenoico o ácido adrénico (C22:4n-6) y ácido docosapentaenoico (C22:5n-6) ("DPA n-6"). Entre los LC-PUFA de la serie omega-3 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ácido eicosatrienoico (C20:3n-3), ácido eicosatetraenoico (C20:4n-3), ácido eicosapentaenoico (C20:5n-3) ("EPA"), ácido docoxapentaenoico (C22:5n-3) y ácido docosahexaenoico (C22:6n-3). Entre los LC-PUFA se incluyen, además, ácidos grasos con más de 22 carbonos y 4 o más dobles enlaces, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, C24:6(n-3) y C28:8(n-3).

Los PUFA pueden encontrarse en la forma de un ácido graso libre, sal, éster de ácido graso (p. ej., metil o etil éster), monoacilglicerol (MAG), diacilglicerol (DAG), triacilglicerol (TAG) y/o fosfolípido (PL).

Los ácidos grasos altamente insaturados (HUFA, por sus siglas en inglés) son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/o omega-6 que contienen 4 o más enlaces carbono-carbono insaturados.

Tal como se utiliza en la presente memoria, una "célula" se refiere a un biomaterial que contiene aceite, tal como biomaterial derivado de microorganismos oleaginosos. El aceite producido por un microorganismo u obtenido a partir de una célula microbiana se denomina "aceite microbiano". El aceite producido por algas y/o hongos también se denomina aceite algal y/o fúngico, respectivamente.

Tal como se utiliza en la presente memoria, una "célula microbiana" o "microorganismo" se refiere a organismos tales como algas, bacterias, hongos, levaduras, protistas y combinaciones de los mismos, p. ej., organismos unicelulares. En algunas realizaciones, una célula microbiana es una célula eucariótica. Una célula microbiana incluye, aunque sin limitación, algas doradas (p. ej., microorganismos del reino Stramenopiles); algas verdes, diatomeas, dinoflagelados (p. ej., microorganismos del orden Dinophyceae, incluyendo miembros del género Crypthecodinium, tales como, por ejemplo, Crypthecodinium cohnii o C. cohnii); microalgas del orden Thraustochytriales; levaduras (Ascomycetes o Basidiomycetes) y hongos de los géneros Mucor, Mortierella, incluyendo, aunque sin limitación, Mortierella alpina y Mortierella sect. schmuckeri, y Pythium, incluyendo, aunque sin limitación, Pythium insidiosum.

En una realización, las células microbianas son del género Mortierella, género Crypthecodinium u orden Thraustochytriales. En una realización todavía adicional, las células microbianas son de Crypthecodinium cohnii. En una realización aún todavía adicional, las células microbianas se seleccionan de entre Crypthecodinium cohnii, Mortierella alpina, género Thraustochytrium, género Schizochytrium, y mezclas de los mismos.

En una realización todavía adicional, entre las células microbianas se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, microorganismos pertenecientes al género Mortierella, género Conidiobolus, género Pythium, género Phytophthora, género Penicillium, género Cladosporium, género Mucor, género Fusarium, género Aspergillus, género Rhodotorula, género Entomophthora, género Echinosporangium y género Saprolegnia. En otra realización, se obtiene ARA a partir de células microbianas del género Mortierella, que incluye, aunque sin limitación, Mortierella elongata, Mortierella exigua, Mortierella hygrophila, Mortierella alpina, Mortierella schmuckeri, and Mortierella minutissima. En una realización adicional, se obtiene ARA a partir de células microbianas de Mortierella elongata IFO8570, Mortierella exigua IFO8571, Mortierella hygrophila IFO5941, Mortierella alpina IFO8568, ATCC16266, ATCC32221, ATCC42430, CBS219.35, CBS224.37, CBS250.53, CBS343.66, CBS527.72, CBS529.72, CBS608.70 y CBS754.68, y mutantes de los mismos. En una realización todavía adicional, las células microbianas son de Mortierella alpina.

En una realización todavía adicional, las células microbianas son microalgas del orden Thraustochytriales, que incluye, aunque sin limitación, los géneros Thraustochytrium (entre las especies se incluyen arudimentale, aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum, multirudimentale, pachydermum, proliferum, roseum, striatum); los géneros Schizochytrium (entre las especies se incluyen aggregatum, limnaceum, mangrove!, minutum y octosporum); los géneros Ulkenia (entre las especies se incluyen amoeboidea, kerguelensis, minuta, profunda, radiate, sailens, sarkariana, schizochytrops, visurgensis y yorkensis); el género Aurantiacochytrium; el género Oblongichytrium; el género Sicyoidochytium; el género Parientichytrium; el género Botryochytrium; y combinaciones de los mismos. Las especies indicadas dentro de Ulkenia se considerarán miembros del género Schizochytrium. En otra realización, las células microbianas son del orden Thraustochytriales. En todavía otra realización, las células microbianas son de Thraustochytrium. En una realización todavía adicional, las células microbianas son de Schizochytrium. En una realización todavía adicional, las células microbianas se seleccionan de los géneros Thraustochytrium, Schizochytrium o mezclas de los mismos.

En una realización, el procedimiento comprende lisar células microbianas que comprenden un aceite microbiano para formar una composición de células lisadas. Los términos "lisar" y "lisando" se refieren a un procedimiento en el que se rompe la pared y/o membrana de la célula microbiana. En una realización, la célula microbiana se lisa sometiéndola a por lo menos un tratamiento seleccionado de entre mecánico, químico, enzimático, físico y combinaciones de los mismos. En otra realización, el procedimiento comprende lisar las células microbianas que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas, en la que el lisado se selecciona de entre mecánico, químico, enzimático, físico y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, antes del lisado de las células, estas pueden lavarse y/o pasteurizarse. En algunas realizaciones, el lavado de las células incluye utilizar una solución acuosa, tal como agua, para eliminar cualquier compuesto soluble en agua o dispersable en agua extracelular. En algunas realizaciones, las células pueden lavarse una, dos, tres o más veces. En algunas realizaciones, la pasteurización de las células incluye calentarlas para inactivar cualesquiera enzimas no deseables, por ejemplo cualesquiera enzimas que puedan degradar el aceite o reducir el rendimiento de PUFA. En algunas realizaciones, las células se lavan y después se pasteurizan antes de lisarlas. En algunas realizaciones, las células que se lisan están contenidas en un caldo de fermentación.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende lisar células microbianas no lavadas que comprenden un aceite microbiano para formar una composición de células lisadas. En algunas realizaciones, un caldo de fermentación que comprende células microbianas que comprenden aceite microbiano en primer lugar se lava con, por ejemplo, agua, y después las células se lisan para formar una composición de células lisadas. En otras realizaciones, el procedimiento comprende lisar células no lavadas en un medio de fermentación para formar una composición de células lisadas.

El tratamiento mecánico incluye, aunque sin limitación, la homogeneización, los ultrasonidos, el prensado en frío, la molienda y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende lisar las células mediante homogeneización. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende lisar las células con un homogeneizador.

La homogeneización incluye, aunque sin limitación, procedimientos que utilizan una prensa celular francesa, sonicador, homogeneizador, microfluidificador, molino de bolas, molino de rodillos, molino de piedras, molino de perlas, rodillo de trituración a alta presión, impactador de eje vertical, licuador industrial, mezclador de alta cizalla, mezclador de paletas, homogeneizador Polytron, homogeneizador industrial (p. ej., el homogeneizador Niro Soavi VHP y los homogeneizadores APV Rannie y APV Gaulin), procesadores de fluidos de alta cizalla industriales (p. ej., procesador de fluidos de alta cizalla de microfluidos), homogeneizadores de lisado celular/molino de perlas (p. ej., Dyno-Mill y Buhler) y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, las células fluyen por un homogeneizador que está opcionalmente caliente. En algunas realizaciones, la homogeneización adecuada puede incluir 1 a 3 pases por un homogeneizador a presiones altas y/o bajas.

En algunas realizaciones, la presión durante la homogeneización es de entre 150 y 1.400 bar, entre 150 y 1.200 bar, entre 150 y 900 bar, entre 150 y 300 bar, entre 300 y 1.400 bar, entre 300 y 1.200 bar, entre 300 y 900 bar, entre 400 y 800 bar, entre 500 y 700 bar o de 600 bar. En algunas realizaciones, la presión durante la homogeneización es de entre 2.000 y 20.000 psi; de entre 2.000 psi y 18.000 psi; de entre 2.000 psi y 16.000 psi; de entre 2.000 psi y 14.000 psi; de entre 2.000 psi y 12.000 psi; de entre 2.000 psi y 10.000 psi; de entre 2.000 psi y 8.000 psi; de entre 2.000 psi y 6.000 psi; de entre 2.000 psi y 4.000 psi; de entre 4.000 psi y 20.000 psi; de entre 4.000 psi y 18.000 psi; de entre 4.000 psi y 16.000 psi; de entre 4.000 psi y 14.000 psi; de entre 4.000 psi y 12.000 psi; de entre 4.000 psi y 10.000 psi; de entre 4.000 psi y 8.000 psi; de entre 4.000 psi y 6.000 psi; de entre 6.000 psi y 20.000 psi; de entre 6.000 psi y 18.000 psi; de entre 6.000 psi y 16.000 psi; de entre 6.000 psi y 14.000 psi; de entre 6.000 psi y 12.000 psi; de entre 6.000 psi y 10.000 psi; de entre 6.000 psi y 8.000 psi; de entre 8.000 psi y 20.000 psi; de entre 8.000 psi y 18.000 psi; de entre 8.000 psi y 16.000 psi; de entre 8.000 psi y 14.000 psi; de entre 8.000 psi y 12.000 psi; de entre 8.000 psi y 10.000 psi; de entre 10.000 psi y 20.000 psi; de entre 10.000 psi y 18.000 psi; de entre 10.000 psi y 16.000 psi; de entre 10.000 psi y 14.000 psi; de entre 10.000 psi y 12.000 psi; de entre 12.000 psi y 20.000 psi; de entre 12.000 psi y 18.000 psi; de entre 12.000 psi y 16.000 psi; de entre 12.000 psi y 14.000 psi; de entre 14.000 psi y 20.000 psi; de entre 14.000 psi y 18.000 psi; de entre 14.000 psi y 16.000 psi; de entre 16.000 psi y 20.000 psi; de entre 16.000 psi y 18.000 psi; o de entre 18.000 psi y 20.000 psi.

En algunas realizaciones, las células microbianas se mezclan en un mezclador de alta cizalla antes de homogeneizarlas. En algunas realizaciones, el mezclador de alta cizalla se lleva a cabo en un intervalo de por lo menos 5.000 rpm; de por lo menos 7.500 rpm; de por lo menos 10.000 rpm; de por lo menos 12.500 rpm; de por lo menos 15.000 rpm; entre 5.000 rpm y 15.000 rpm; entre 5.000 rpm y 12.500 rpm; entre 5.000 rpm y 10.000 rpm; entre 5.000 rpm y 7.500 rpm; entre 7.500 rpm y 15.000 rpm; entre 7.500 rpm y 12.500 rpm; entre 7.500 rpm y 10.000 rpm; entre 10.000 rpm y 15.000 rpm; entre 10.000 rpm y 12.500 rpm; o entre 12.500 rpm y 15.000 rpm.

El tratamiento físico incluye, aunque sin limitación, el calentamiento, que incluye, aunque sin limitación, el calentamiento resistivo, convectivo, por vapor, en baño de fluido, solar y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, las células se calientan en un tanque con resistencias en o sobre sus paredes. En algunas realizaciones, las células se calientan en un baño con líquido tubos que pasan por el mismo.

El tratamiento químico incluye, aunque sin limitación, elevar el pH de las células, reducir el pH de las células, poner en contacto las células con un compuesto químico, y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, las células se lisan mediante elevación del pH de las células. En algunas realizaciones, el pH se eleva mediante la adición de una base. Entre las bases se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, hidróxidos (p. ej., LiOH, NaOH, KOH y Ca(OH)², y combinaciones de los mismos), carbonatos (p. ej., Na2CO3, K²CO³, MgCOs y combinaciones de los mismos), bicarbonatos (p. ej., LiHCOs, NaHCOs, KHCOs y combinaciones de los mismos) y combinaciones de los mismos. La base puede encontrarse en la forma de un sólido (p. ej., cristales, granulados y pellets); un líquido (p. ej., una solución acuosa) y combinaciones de las mismas.

En algunas realizaciones, la base presenta un pKb de entre 1 y 12, entre 1 y 10, entre 1 y 8, entre 1 y 6, entre 1 y 5, entre 2 y 12, entre 2 y 10, entre 2 y 8, entre 2 y 6, entre 2 y 5, entre 3 y 10, entre 3 y 6, entre 3 y 5, entre 4 y 10, entre 4 y 8, entre 4 y 6, entre 5 y 10, o entre 5 y 8. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "pKb" se refiere al logaritmo negativo de la constante de asociación de la base, Kb, de la base. Kb se refiere a la constante de equilibrio para la ionización de la base en agua, en la que: B H²O

HB+ OH-; y la Kb de la base, B, se define como:

En algunas realizaciones, el pH se selecciona de entre aproximadamente 8 y un valor superior, entre aproximadamente

9 y un valor superior, entre aproximadamente 10 y un valor superior, entre aproximadamente 11 y un valor superior, y entre aproximadamente 12 y un valor superior. En otras realizaciones, el pH se selecciona de entre 7 y 13; entre 7 y

12; entre 7 y 11; entre 7 y 10; entre 7 y 9; entre 8 y 13; entre 8 y 12; entre 8 y 11; entre 8 y 10; entre 8 y 9; entre 9 y 12; entre 9 y 11; entre 9 y 10; entre 10 y 12; y entre 10 y 11.

En algunas realizaciones, el pH de las células puede elevarse mediante un procedimiento con cloroálcali. En algunas realizaciones, el caldo de fermentación que contiene cloruro sódico y las células se someten a electrólisis, que resulta en la formación de hidróxido sódico, que eleva el pH de las células. En algunas realizaciones, el caldo de fermentación incluye cloruro cálcico o cloruro potásico en lugar de, o adicionalmente a cloruro sódico, y la electrólisis resulta en la formación de hidróxido cálcico o hidróxido potásico, respectivamente, elevando de esta manera el pH de las células.

En algunas realizaciones, las células se lisan mediante reducción del pH de las células. En algunas realizaciones, el pH se reduce mediante la adición de un ácido. Entre los ácidos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los ácidos sulfúrico, fosfórico, clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, hipocloroso, cloroso, clórico, perclórico, fluorosulfúrico, nítrico, fluoroantimónico, fluorobórico, hexafluorofosfórico, crómico, bórico, acético, cítrico, fórmico y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el pH se selecciona de entre aproximadamente 7 y un valor inferior, entre aproximadamente 6,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 6 y un valor inferior, entre aproximadamente 5,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 5 y un valor inferior, entre aproximadamente 4,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 4 y un valor inferior, entre aproximadamente 3,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 3 y un valor inferior, entre aproximadamente 2,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 2 y un valor inferior, entre aproximadamente 1,5 y un valor inferior, entre aproximadamente 1 y un valor inferior, y entre aproximadamente 0,5 y un valor inferior, En otras realizaciones, el pH se selecciona de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 4 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 3 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 2,5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 2 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 1,5 de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 1 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 7 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2,5 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2 de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 7 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 6 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 4 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 3 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente 2,5 de entre aproximadamente 1.5 y aproximadamente de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 7 de entre aproximadamente 2 aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 6 de entre aproximadamente 2 aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 2 aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4 de entre aproximadamente 2 aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3 de entre aproximadamente 2 aproximadamente 2,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 2.5 y aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 6 de entre aproximadamente 2.5 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 2.5 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 4 de entre aproximadamente 2.5 y aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 3 de entre aproximadamente 3 aproximadamente 7 de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 3 aproximadamente 6 de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 3 aproximadamente 5 de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 3 aproximadamente 4 de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 3,5 de entre aproximadamente 3.5 y aproximadamente 7 de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 6,5 de entre aproximadamente 3.5 y aproximadamente 6 de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 5,5 de entre aproximadamente 3.5 y aproximadamente 5 de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 4,5 de entre aproximadamente 3.5 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 4.5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 4.5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 5.5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 6 y aproximadamente 6,5; y de entre aproximadamente 6,5 y aproximadamente 7,

En algunas realizaciones, se añade un ácido en una cantidad de entre aproximadamente 2 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 9 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 8 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 7 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 6 %, aproximadamente 3 % y aproximadamente 6 %, aproximadamente 4 % y aproximadamente 6 %, aproximadamente 5 % y aproximadamente 6 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 3 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 3 % y aproximadamente 4 %, o aproximadamente 4 % y aproximadamente 5 % en peso (o volumen) del caldo celular para reducir el pH.

El tratamiento enzimático se refiere a lisar las células mediante la puesta en contacto de las células con uno o más enzimas. Entre los enzimas se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, proteasas, celulasas, hemicelulasas, quitinasas, pectinasas y combinaciones de los mismos. Entre los ejemplos no limitativos de proteasas se incluyen serina proteasas, treonina proteasas, cisteína proteasas, aspartato proteasas, metaloproteasas, ácido glutámico proteasas, alacasa y combinaciones de las mismas. Entre los ejemplos no limitativos de celulasas se incluyen sucrasa, maltasa, lactasa, alfa-glucosidasa, beta-glucosidasa, amilasa, lisozima, neuraminidasa, galactosidasa, alfa-manosidasa, glucuronidasa, hialuronidasa, pululanasa, glucocerebrosidasa, galactosilceramidasa, acetilgalactosaminidasa, fucosidasa, hexosaminidasa, iduronidasa, maltasa-glucoamilasa y combinaciones de los mismos. Un ejemplo no limitativo de una quitinasa incluye la quitotriosidasa. Entre los ejemplos no limitativos de pectinasas se incluyen pectoliasa, pectozima, poligalacturonasa y combinaciones de las mismas. En algunas realizaciones, algunos enzimas se activan mediante calentamiento. En algunas realizaciones, la lisis no incluye la utilización de enzimas.

Tal como se utiliza en la presente memoria, una "composición de células lisadas" se refiere a una composición que comprende una o más células lisadas, incluyendo residuos celulares y otro contenido de las células, en combinación con aceite microbiano (de las células lisadas), y opcionalmente, un caldo de fermentación que contiene líquido (p. ej., agua), nutrientes y células microbianas. En algunas realizaciones, las células microbianas están contenidas en un caldo de fermentación o medio que comprende agua. En algunas realizaciones, composición de células lisadas se refiere a una composición que comprende una o más células lisadas, residuos celulares, aceite microbiano, el contenido natural de las células y componentes acuosos del caldo de fermentación. En una realización, la composición de células lisadas comprende líquido, residuos celulares y aceite microbiano. En algunas realizaciones, la composición de células lisadas se encuentra en forma de una emulsión de aceite en agua que comprende una mezcla de una fase acuosa continua y una fase de aceite dispersada. En algunas realizaciones,, se encuentra presente una fase de aceite dispersada en una concentración de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 60 %, entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 50 %; entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 40 %; entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 30 %; entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 20 %; entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 60 %; entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 50 %; entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 40 %; entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 30 %; entre aproximadamente 5 % y aproximadamente 20 %; entre aproximadamente 10 % y aproximadamente 60 %; entre aproximadamente 10 % y aproximadamente 50 %; entre aproximadamente 10 % y aproximadamente 40 %; entre aproximadamente 20 % y aproximadamente 60 %; entre 20 % y 50 %, entre 20 % y aproximadamente 40 %; entre aproximadamente 30 % y aproximadamente 60 %; entre aproximadamente 30 % y aproximadamente 50 %; o entre aproximadamente 40 % y aproximadamente 60 % en peso (o en volumen) de una composición de células lisadas emulsionadas.

En algunas realizaciones, el lisado de las células microbianas resulta en la formación de una emulsión de materiales endógenos en las células o biomasa celular, que incluye, aunque sin limitación, proteínas, fosfolípidos, carbohidratos y combinaciones de los mismos. Aunque sin restringirse a ninguna teoría en particular, se cree que los procedimientos de la presente invención rompen o desemulsionan la composición de células lisadas emulsionadas, permitiendo separar el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas. Los términos "emulsión" y "emulsionado" se refieren a una mezcla de dos o más fases o capas inmiscibles, en las que una fase o capa está dispersada en otra fase o capa. Los términos "romper", "desemulsionar", "desemulsionación", "desemulsionando" y "rompiendo" se refieren a un procedimiento de separación de fases o capas inmiscibles de una emulsión. Por ejemplo, desemulsionar o romper una composición de células lisadas emulsionadas se refiere a un procedimiento por el que una composición de células lisadas emulsionadas cambia de una emulsión que presenta una o más fases o capas a una composición que presenta dos o más fases o capas. Por ejemplo, en algunas realizaciones, un procedimiento de la presente invención rompe una composición de células lisadas emulsionadas de una sola fase a dos o más fases. En algunas realizaciones, entre las dos o más fases se incluyen una fase de aceite y una fase acuosa. En algunas realizaciones, el procedimiento de la presente invención rompe una composición de células lisadas emulsionadas de por lo menos tres fases. En algunas realizaciones, las tres fases se seleccionan de entre una fase de aceite, una fase acuosa y una fase sólida. En algunas realizaciones, las tres fases se seleccionan de entre una fase de aceite, una fase de emulsión, una fase acuosa y una fase sólida.

En algunas realizaciones, el tamaño medio de partícula de las gotas de aceite formadas durante la desemulsionación se selecciona de entre 5 micrómetros y 50 micrómetros; entre 5 micrómetros y 45 micrómetros; entre 5 micrómetros y 40 micrómetros; entre 5 micrómetros y 35 micrómetros; entre 5 micrómetros y 30 micrómetros; entre 5 micrómetros y 25 micrómetros; entre 5 micrómetros y 20 micrómetros; entre 5 micrómetros y 15 micrómetros; entre 10 micrómetros y 50 micrómetros; entre 10 micrómetros y 45 micrómetros; entre 10 micrómetros y 40 micrómetros; entre 10 micrómetros y 35 micrómetros; entre 10 micrómetros y 30 micrómetros; entre 10 micrómetros y 25 micrómetros; entre 10 micrómetros y 20 micrómetros; entre 10 micrómetros y 15 micrómetros; entre 15 micrómetros y 50 micrómetros; entre 15 micrómetros y 45 micrómetros; entre 15 micrómetros y 40 micrómetros; entre 15 micrómetros y 35 micrómetros; entre 15 micrómetros y 30 micrómetros; entre 15 micrómetros y 25 micrómetros; entre 15 micrómetros y 20 micrómetros; entre 20 micrómetros y 50 micrómetros; entre 20 micrómetros y 45 micrómetros; entre 20 micrómetros y 40 micrómetros; entre 20 micrómetros y 35 micrómetros; entre 20 micrómetros y 30 micrómetros; entre 20 micrómetros y 25 micrómetros; entre 25 micrómetros y 50 micrómetros; entre 25 micrómetros y 45 micrómetros; entre 25 micrómetros y 40 micrómetros; entre 25 micrómetros y 35 micrómetros; entre 25 micrómetros y 30 micrómetros; entre 30 micrómetros y 50 micrómetros; entre 30 micrómetros y 45 micrómetros; entre 30 micrómetros y 40 micrómetros; entre 30 micrómetros y 35 micrómetros; entre 35 micrómetros y 50 micrómetros; entre 35 micrómetros y 45 micrómetros; entre 35 micrómetros y 40 micrómetros; entre 40 micrómetros y 50 micrómetros; entre 40 micrómetros y 45 micrómetros; y entre 45 micrómetros y 50 micrómetros. En una realización adicional, el tamaño medio de partícula de las gotas de aceite formadas durante la emulsionación se selecciona de por lo menos 10 micrómetros, por lo menos 15 micrómetros, por lo menos 20 micrómetros, por lo menos 25 micrómetros, por lo menos 30 micrómetros, por lo menos 35 micrómetros, y por lo menos 40 micrómetros o más. En realizaciones adicionales, el tamaño medio de partícula de las gotas de aceite formadas durante la desemulsionación se selecciona de por lo menos 10 micrómetros, por lo menos 15 micrómetros, por lo menos 20 micrómetros y por lo menos 25 micrómetros. En algunas realizaciones, el tamaño medio de partícula puede medirse utilizando, p. ej., un analizador de tamaños de partícula Beckman Coulter LS 13 320 (Beckman Coulter, Brea, CA). En algunas realizaciones, el tamaño medio de partícula puede medirse utilizando, p. ej., un analizador de tamaños de partícula Malvern MS2000 (Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, Reino Unido).

En algunas realizaciones, se forma una composición de células lisadas desemulsionada bajo (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas. Los términos "agitando" y "agitación" se refieren a un procedimiento para afectar al movimiento de las células, la composición de células lisadas y/o la composición de células lisadas desemulsionada mediante la aplicación de fuerza. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende someter a agitación a las células, la composición de células lisadas y/o la composición de células lisadas desemulsionada mediante agitación, mezcla, combinación, sacudido, vibración o una combinación de las mismas. En algunas realizaciones, un agitador presenta una o más turbinas. Tal como se utiliza en la presente memoria, "agitador" se refiere a un dispositivo dispuesto para proporcionar movimiento a las células, composición de células lisadas o composición lisada desemulsionada al hacer que gire.

La agitación de baja cizalla y/o la agitación de flujo axial pueden proporcionarse mediante, por ejemplo, agitadores de flujo axial (también conocidos como agitadores de flujo axial) y agitadores de flujo mixto. Entre los agitadores de flujo axial se incluyen todos los agitadores en las que las paletas se encuentran en ángulo de menos de 90° respecto al plano de rotación. Entre los agitadores de flujo axial adecuados para formar una composición de células lisadas desemulsionada se incluyen, por ejemplo, agitadores de paletas de fluido (p. ej., A320 (agitadores de bajo número de Reynolds) y A315 (agitador de manipulación de gases)); agitadores de alta eficiencia, agitadores hidráulicos (p. ej., A310/A510 (agitador hidráulico de baja solidez) y A312 (agitador hidráulico de entrada lateral)); propulsores (p. ej., A100, y agitador de mezcla de tipo marino); A200(PBT); A100 (agitador de flujo axial plegable); A200 (aireador de superficie); A333 Borde limpio (flujo axial sin formación de fibras); A340 (bombeador ascendiente-manipulación de gases); A400 (de doble espiral, número de Reynolds bajo); A6000 (material compuesto); A620 (número de Reynolds bajo); MBI (por sus siglas en inglés, agitador magnético de entrada inferior), y combinaciones de los mismos. Entre las turbinas de flujo mixto se incluyen, por ejemplo, las turbinas de palas ajustables.

En algunas realizaciones, se forma una composición de células lisadas desemulsionada bajo (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas, que se proporciona mediante un agitador de flujo axial. En otras realizaciones, se forma una composición de células lisadas desemulsionada bajo (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas que es proporcionada por un agitador seleccionado de entre agitadores de paletas de fluido, agitadores de alta eficiencia, agitadores hidráulicos, propulsores, agitadores de paletas ajustables y combinaciones de los mismos. En una realización todavía adicional, se forma una composición de células lisadas desemulsionada bajo (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas, que se proporciona mediante una turbina de paletas de fluido.

En algunas realizaciones, el agitador presenta una placa de calentamiento. En algunas realizaciones, el agitador presenta un recubrimiento para la agitación. En algunas realizaciones, el agitador es un agitador de estilo dispersión que dispersa una base y/o sal antes o durante el lisado de las células y/o después de desemulsionar la composición de células lisadas.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, la agitación (i) antes o durante el lisado de las células, (ii) después de desemulsionar la composición de células lisadas, o (iii) una combinación de los mismos. Entre las turbinas adecuadas para agitar antes o durante el lisado de las células y/o después de desemulsionar la composición de células lisadas se incluyen agitadores de palas rectas, agitadores de paletas Rushton, agitadores de flujo axial, agitadores de flujo radial, agitadores de disco de palas cóncavas, agitadores de alta eficiencia, hélices, paletas, turbinas y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende agitar las células y/o una composición de células lisadas desemulsionada a razón de entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 10 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 5 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 4 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 3 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2,5 hp/1.000gal y aproximadamente 10 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2.5 hp/1.000 gal y aproximadamente 5 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 2,5 hp/1.000 gal y aproximadamente 4 hp/1.000 gal, o entre aproximadamente 2,5 hp/1.000 gal y aproximadamente 3 hp/1.000 gal de composición. En otra realización, el procedimiento comprende someter a agitación las células y/o la composición de células lisadas desemulsionada a razón de aproximadamente 2 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 2,1 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 2,2 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 2,3 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 2,4 hp/1.000 gal o más, o a aproximadamente 2.5 hp/1.000 gal o más de composición. En realizaciones adicionales, el procedimiento comprende agitar las células y/o la composición de células lisadas desemulsionada a razón de entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 3 hp/1.000 gal de composición. En realizaciones todavía adicionales, el procedimiento comprende someter a agitación las células y/o la composición de células lisadas desemulsionada a razón de entre aproximadamente 2 hp/1.000 gal y aproximadamente 10 hp/1.000 gal de composición.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende someter a agitación la composición de células lisadas desemulsionada a razón de entre aproximadamente 0,01 hp/1.000 gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 0,1 hp/1.000 gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 0,5 hp/1.000 gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal, entre aproximadamente 1 hp/1.000 gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal, o entre aproximadamente 1,5 hp/1.000gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal de composición. En realizaciones adicionales, el procedimiento comprende someter a agitación la composición de células lisadas desemulsionada a razón de aproximadamente 0,01 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 0,1 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 0,2 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 0,3 hp/1.000 gal o más, a aproximadamente 0,4 hp/1.000 gal o más, o a aproximadamente 0.5 hp/1.000 gal o más de composición. En realizaciones todavía adicionales, el procedimiento comprende someter a agitación la composición de células lisadas desemulsionada a razón de entre aproximadamente 0,01 hp/1.000 gal y aproximadamente 2 hp/1.000 gal de composición. En realizaciones todavía adicionales, el procedimiento comprende someter a agitación la composición de células lisadas desemulsionada a razón de aproximadamente 0,5 hp/1.000 gal o más.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la agitación a 10 rpm o menos, 20 rpm o menos, 50 rpm o menos, 100 rpm o menos, 150 rpm o menos, 200 rpm o menos, 250 rpm o menos, 300 rpm o menos, 350 rpm o menos, 400 rpm o menos, 10 rpm a 400 rpm, 10 rpm a 350 rpm, 10 rpm a 300 rpm, 10 rpm a 250 rpm, 10 rpm a 200 rpm, 10 rpm a 150 rpm, 10 rpm a 100 rpm, 10 rpm a 50 rpm, 10 rpm a 20 rpm, 20 rpm a 400 rpm, 20 rpm a 350 rpm, 20 rpm a 300 rpm, 20 rpm a 250 rpm, 20 rpm a 200 rpm, 20 rpm a 150 rpm, 20 rpm a 100 rpm, 20 rpm a 50 rpm, 50 rpm a 400 rpm, 50 rpm a 350 rpm, 50 rpm a 300 rpm, 50 rpm a 250 rpm, 50 rpm a 200 rpm, 50 rpm a 150 rpm, 50 rpm a 100 rpm, 100 rpm a 400 rpm, 100 rpm a 350 rpm, 100 rpm a 300 rpm, 100 rpm a 250 rpm, 100 rpm a 200 rpm, 100 rpm a 150 rpm, 150 rpm a 400 rpm, 150 rpm a 350 rpm, 150 rpm a 300 rpm, 150 rpm a 250 rpm, 150 rpm a 200 rpm, 200 rpm a 400 rpm, 200 rpm a 350 rpm, 200 rpm a 300 rpm, 200 rpm a 250 rpm, 250 rpm a 400 rpm, 250 rpm a 350 rpm, 250 rpm a 300 rpm, 300 rpm a 400 rpm, 300 rpm a 350 rpm, o 350 rpm a 400 rpm. En algunas realizaciones, la agitación ocurre a una velocidad de 350 rpm o menos.

El procedimiento incluye someter a agitación las células, la composición de células lisadas y/o la composición de células lisadas desemulsionada utilizando un agitador que presenta una velocidad de la punta del agitador de entre 5 cm/s y 250 cm/s. La expresión "velocidad de punta de agitador" se refiere a la velocidad de la parte más externa del agitador a medida que gira en torno a su eje central.

En algunas realizaciones, la agitación (y etapas adicionales opcionales tal como se indica en la presente memoria) se lleva a cabo en un recipiente que comprende un agitador, en el que la proporción entre el diámetro del agitador y el volumen del recipiente es de entre 0,1 y 0,5, entre 0,1 y 0,4, entre 0,2 y 0,5, entre 0,2 y 0,4, entre 0,3 y 0,5 o entre 0,3 y 0,4.

En algunas realizaciones, la agitación (y etapas adicionales opcionales tal como se indica en la presente memoria) se lleva a cabo en un recipiente que comprende un agitador, en el que la proporción entre el diámetro del agitador y el diámetro interno del recipiente es de por lo menos 0,25, de por lo menos 0,34, de por lo menos 0,65, de entre 0,25 y 0,65, de entre 0,25 y 0,33, de entre 0,3 y 0,6, de entre 0,3 y 0,5, de entre 0,3 y 0,4, de entre 0,34 y 0,65, de entre 0,34 y 0,6, de entre 0,34 y 0,55, de entre 0,37 y 0,55, de entre 0,4 y 0,65, de entre 0,4 y 0,6, de entre 0,4 y 0,6 o de entre 0,42 y 0,55.

En algunas realizaciones, la agitación comprende mezclar las células, la composición de células lisadas y/o la composición de células lisadas desemulsionada, de manera que las células, la composición de células lisadas y/o la composición de células lisadas desemulsionada se somete a condiciones de flujo descritas con un número de Reynolds de entre 10 y 10.000, de entre 1.000 y 10.000, de entre 1.500 y 10.000 o de entre 2.000 y 10.000. En algunas realizaciones, la emulsión de células lisadas durante la agitación presenta un número de Reynolds de 2.000 o superior, de 3.000 o superior, o de 5.000 o superior, o de entre 2.000 y 10.000, de entre 3.000 y 10.000 o de entre 5.000 y 10.000.

En algunas realizaciones, los recipientes de agitación pueden presentar dos agitadores. En algunas realizaciones, los agitadores utilizados para la agitación antes o durante el lisado de las células y/o después de desemulsionar la composición de células lisadas (es decir, la composición de células lisadas desemulsionaa) son agitadores de flujo radial. En algunas realizaciones, los agitadores utilizados para la agitación antes o durante el lisado de las células y/o después de desemulsionar la composición de células lisadas son agitadores de pala Rushton. En algunas realizaciones, los agitadores se separan unos de otros por una distancia por lo menos igual al diámetro del agitador más pequeño. En otras realizaciones, en donde un volumen de líquido en un recipiente con un diámetro (x) y una pala de agitador de diámetro (y) (en donde y=0,3x a 0,5x), puede someterse a agitación una altura de líquido de (x) en el c aso de que el agitador inferior se sitúe en una localización respecto al fondo de y/0,33 y el agitador o agitadores superiores se sitúan a una distancia de entre 'y' y '2y' sobre el agitador inferior para el bombeo axial o a una distancia de entre 2y y 3y sobre el agitador inferior para el bombeo radial. En algunas realizaciones, los recipientes de agitación presentan un volumen de por lo menos 10.000 litros, por lo menos 20.000 litros, por lo menos 30.000 litros, por lo menos 40.000 litros, por lo menos 50.000 litros, por lo menos 60.000 litros, por lo menos 70.000 litros, por lo menos 80.000 litros, por lo menos 90.000, por lo menos 100.000, por lo menos 150.000 o por lo menos 200.000 litros. En algunas realizaciones, una composición de células lisadas se sometió a agitación a por lo menos 50 rpm, por lo menos 100 rpm o por lo menos 200 rpm.

En algunas realizaciones, el procedimiento de formar una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir por lo menos un enzima. En algunas realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir por lo menos un cóctel de enzimas. Entre los enzimas adecuados para formar una composición de células lisadas desemulsionada se incluye, por ejemplo, beta-glucanasa (p. ej., Vinoflow Max (Novozymes Corp.) y Brewzyme LP (Dyadic Int.)); xilanasa (p. ej., Xylanase Plus (Dyadic Int.) y Pentopan(Novozymes Corp.)); celulasa (p. ej., Cellustar CL (Dyadic Int.), Fibrezyme G2000 (Dyadic Int.), Celluclast (Novozymes Corp.), Fungamyl (Novozymes Corp.) y (Viscozyme L (Novozymes Corp.)); pectinasa (p. ej., Pectinex(Novozymes Corp.)); mananasa; amilasa (p. ej., Alphastar Plus(Dyadic Int.) y Termamyl(Novozymes Corp.)); y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir por lo menos un enzima seleccionado de entre betaglucanasa, xilanasa, celulasa, pectinasa, mananasa, amilasa y combinaciones de los mismos. En otras realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir por lo menos un enzima beta-glucanasa.

En algunas realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir un enzima (p. ej., en forma de polvos o en solución) en una cantidad de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 10 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 9 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 8 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 7 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 6 % , de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 5 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 4 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 3 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 2 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 1 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 0,5 %, de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 0,1 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 10 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 9 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 8 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 7 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 6 % , de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 5 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 4 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 3 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 2 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 1 %, de entre aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 0,5 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 10 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 9 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 8 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 7 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 6 % , de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 5 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 4 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 3 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 2 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 1 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 10 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 9 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 8 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 7 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 6 % , de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 5 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 4 %, de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 3 %, y de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 2 % en peso (o en volumen) de la composición. En realizaciones adicionales, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir un enzima en una cantidad inferior a aproximadamente 10 %, aproximadamente 9 %, aproximadamente 8 %, aproximadamente 7 %, aproximadamente 6 %, aproximadamente 5 %, aproximadamente 4 %, aproximadamente 3 %, aproximadamente 2 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 0,5 % en peso (o en volumen) de la composición.

En algunas realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, añadir un emulsionante. En algunas realizaciones, el emulsionante sustituye la emulsión formada por los materiales endógenos debido a que los PUFA presentan una afinidad más fuerte para el emulsionante que para los materiales endógenos (p. ej., proteínas, fosfolípidos y carbohidratos). En algunas realizaciones, la emulsión formada por el emulsionante es más estable que la emulsión formada por los materiales endógenos. En algunas realizaciones, una emulsión formada por el emulsionante es más fácilmente desemulsionable utilizando los procedimientos descritos en la presente memoria que una emulsión formada por los materiales endógenos.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende desemulsionar la composición de células lisadas mediante la reducción del pH de la composición de células lisadas. En algunas realizaciones, el pH se reduce mediante la adición de un ácido. Entre los ácidos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los ácidos sulfúrico, fosfórico, clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, hipocloroso, cloroso, clórico, perclórico, fluorosulfúrico, nítrico, fluoroantimónico, fluorobórico, hexafluorofosfórico, crómico, bórico, acético, cítrico, fórmico y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el pH se selecciona de 7 o un valor inferior, de entre aproximadamente 6,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 6 y un valor inferior, de entre aproximadamente 5,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 4,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 4 y un valor inferior, de entre aproximadamente 3,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 3 y un valor inferior, de entre aproximadamente 2,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 2 y un valor inferior, de entre aproximadamente 1,5 y un valor inferior, de entre aproximadamente 1 y un valor inferior, y de entre aproximadamente 0,5 y un valor inferior, En algunas realizaciones, el procedimiento comprende reducir el pH de la composición de células lisadas hasta aproximadamente 6 o menos. En otras realizaciones, el pH se selecciona de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 3; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 2,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 2; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 1,5; de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 1; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2,5; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 2; de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 1,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 3; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 2,5; de entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 2; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 4, de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 3; de entre aproximadamente 2 y aproximadamente 2,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 3; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 3 y aproximadamente 3,5; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 3,5 y aproximadamente 4; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 4,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 5; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 5 y aproximadamente 5,5; de entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 6,5; de entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 6; de entre aproximadamente 6 y aproximadamente 7; de entre aproximadamente 6 y aproximadamente 6,5; y de entre aproximadamente 6,5 y aproximadamente 7, En algunas realizaciones, el procedimiento comprende reducir el pH de la composición de células lisadas hasta un valor entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 6.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende desemulsionar la composición de células lisadas mediante la adición de un ácido en una cantidad de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 20 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 15 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 10 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 9 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 8 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 7 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 6 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 5 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 4 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 3 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 2 %, de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 1 % en peso (o volumen) del caldo celular o de la composición de células lisadas. En una realización, el procedimiento comprende desemulsionar la composición de células lisadas mediante la adición e un ácido en una cantidad comprendida entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 20 % en peso de composición de células lisadas.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, agrupar las etapas de lisado y desemulsionado para formar una etapa conjunta de lisado y desemulsionado.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, agrupar las etapas de lisado y desemulsionado para formar una etapa conjunta de lisado y desemulsionado que comprende añadir por lo menos un enzima ya indicado anteriormente en la presente memoria para obtener una composición de células lisadas desemulsionada. En otras realizaciones, se lisan las células con por lo menos un enzima adecuado para formar una composición de células lisadas desemulsionada. En algunas realizaciones, el enzima adecuado es un enzima ya indicado anteriormente en la presente memoria para obtener una composición de células lisadas desemulsionada.

En algunas realizaciones, el emulsionante es un detergente. En algunas realizaciones, el emulsionante es un surfactante. En algunas realizaciones, el emulsionante se añade antes, durante o después de la lisis. En una realización, el emulsionante se añade después de la lisis. En algunas realizaciones, el emulsionante se añade a la composición de células lisadas. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "emulsionante" se refiere a una sustancia que estabiliza una emulsión. Los emulsionantes se seleccionan de entre emulsionantes iónicos, emulsionantes n iónicos y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el emulsionante es un emulsionante iónico.

En algunas realizaciones, el emulsionante iónico se selecciona de entre emulsionantes aniónicos, emulsionantes catiónicos y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, los emulsionantes aniónicos pueden ser emulsionantes sulfato aniónicos, tales como, por ejemplo, sulfatos de alquilo (p. ej., laurilsulfato amónico, laurilsulfato sódico (SL)/dodecilsulfato sódico (SDS) y combinaciones de los mismos), sulfatos de alquil éter (p. ej., laurethsulfato sódico/lauril éter sulfato sódico, miridosulfato sódico y combinaciones de los mismos), y combinaciones de los mismos; emulsionantes sulfonato aniónicos, tales como, por ejemplo, docusatos (p. ej., sulfosuccinato sódico de dioctilo, fluorosurfactantes sulfonato (p. ej., perfluorooctanosulfonato y perfluorobutanosulfonato), alquilbecenosulfonatos y combinaciones de los mismos); emulsionantes fosfato aniónicos (p. ej., alquilaril éter fosfato, alquil éter fosfato y combinaciones de los mismos); emulsionantes carboxilato aniónicos (p.ej., carboxilatos de alquilo (p.ej., estearato sódico, lauroílsarcosinato sódico); fluorosurfactantes carboxilato (p. ej., perfluorononanoato, perfluorooctanoato y combinaciones de los mismos) y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el emulsionante es un emulsionante aniónico. En una realización, el emulsionante aniónico se selecciona de entre emulsionante sulfato aniónico, emulsionante sulfonato aniónico, emulsionante fosfato aniónico, emulsionante carboxilato aniónico y combinaciones de los mismos. En otra realización, el emulsionante aniónico es un emulsionante sulfato aniónico. En una realización todavía adicional, el emulsionante sulfato aniónico se selecciona de entre laurilsulfato amónico, dodecilsulfato sódico, laurethsulfato sódico, lauril éter sulfato sódico, miridosulfato sódico y combinaciones de los mismos. En todavía una realización todavía adicional, un emulsionante sulfato aniónico es dodecilsulfato sódico.

En algunas realizaciones, el emulsionante catiónico puede ser una amina primaria dependiente del pH, una amina secundaria dependiente del pH, una amina terciaria dependiente del pH, dihidrocloruro de octenidina, un catión de amonio cuaternario permanentemente cargado (p. ej., sales de alquiltrimetilamonio (p. ej., bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB)/bromuro de hexadeciltrimetilamonio, cloruro de cetiltrimetilamonio (CTAC) y combinaciones de los mismos), cloruro de cetilpiridinio (CPC), cloruro de benzalconio (BAC), cloruro de bencetonio (BZT), 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxano, cloruro de dimetildioctadecilamonio, bromuro de dioctadecildimetilamonio (DODAB) y combinaciones de los mismos), y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, el peso molecular del emulsionante se selecciona de 500 g/mol o menos, 450 g/mol o menos, 400 g/mol o menos, 350 g/mol o menos y 300 g/mol o menos. En una realización adicional, el peso molecular del emulsionante se selecciona de entre 250 y 500 g/mol, de entre 250 y 450 g/mol, de entre 250 y 400 g/mol, de entre 250 y 350 g/mol, de entre 250 y 300 g/mol, de entre 300 y 500 g/mol, de entre 300 y 450 g/mol, de entre 300 y 400 g/mol, de entre 300 y 350 g/mol, de entre 350 y 500 g/mol, de entre 350 y 450 g/mol, de entre 350 y 400 g/mol, de entre 400 y 500 g/mol, de entre 400 y 450 g/mol y de entre 450 y 500 g/mol. Por ejemplo, el peso molecular de SDS es 288 g/mol y el peso molecular de CTAB es de 364 g/mol. En una realización todavía adicional, el peso molecular del emulsionante se selecciona de entre 250 y 450 g/mol, de entre 250 y 400 g/mol, de entre 250 y 350 g/mol y de entre 250 y 300 g/mol.

En algunas realizaciones, el emulsionante se añade en forma de unos polvos. En algunas realizaciones, se añade un emulsionante en una solución que presenta una concentración de emulsionante en una cantidad de entre 5 % y 50 %, 5 % y 45 %, 5 % y 40 %, 5 % y 35 %, 5 % y 30 %, 10 % y 50 %, 10 % y 45 %, 10 % y 40 %, 10 % y 35 %, 10 % y 30 %, 15 % y 50 %, 15 % y 45 %, 15 % y 40 %, 15 % y 35 %, 15 % y 30 %, 20 % y 50 %, 20 % y 45 %, 20 % y 40 %, 20 % y 35 %, 20 % y 30 %, 25 % y 50 %, 25 % y 45 %, 25 % y 40 %, 25 % y 35 %, 25 % y 30 %, 30 % y 50 %, 30 % y 45 %, 30 % y 40 %, y 30 % y 35 %.

En algunas realizaciones,, se añade un emulsionante (p. ej., en forma de polvos o en solución) en una cantidad selecciona de entre 0,2 % y 10 %, 0,2 % y 9,5 %, 0,2 % y 9 %, 0,2 % y 8,5 %, 0,2 % y 8 %, 0,2 % y 7,5 %, 0,2 % y 7 %, 0,2 % y 6,5 %, 0,2 % y 6 %, 0,2 % y 5,5 %, 0,2 % y 5 %, 0,2 % y 4,5 %, 0,2 % y 4 %, 0,2 % y 3,5 %, 0,2 % y 3 %, 0,2 % y 2,5 %, 0,2 % y 2 %, 0,2 % y 1,5 %, 0,2 % y 1 %, 0,2 % y 0,5 %, 0,5 % y 10 %, 0,5 % y 9,5 %, 0,5 % y 9 %, 0,5 % y 8,5 %, 0,5 % y 8 %, 0,5 % y 7,5 %, 0,5 % y 7 %, 0,5 % y 6,5 %, 0,5 % y 6 %, 0,5 % y 5,5 %, 0,5 % y 5 %, 0,5 % y 4.5 %, 0,5 % y 4 %, 0,5 % y 3,5 %, 0,5 % y 3 %, 0,5 % y 2,5 %, 0,5 % y 2 %, 0,5 % y 1,5 %, 0,5 % y 1 %, 1 % y 10 %, 1 % y 9,5 %, 1 % y 9 %, 1 % y 8,5 %, 1 % y 8 %, 1 % y 7,5 %, 1 % y 7 %, 1 % y 6,5 %, 1 % y 6 %, 1 % y 5,5 %, 1 % y 5 %, 1 % y 4,5 %, 1 % y 4 %, 1 % y 3,5 %, 1 % y 3 %, 1 % y 2,5 %, 1 % y 2 %, 1 % y 1,5 %, 1,5 % y 10 %, 1,5 % y 9,5 %, 1,5 % y 9 %, 1,5 % y 8,5 %, 1,5 % y 8 %, 1,5 % y 7,5 %, 1,5 % y 7 %, 1,5 % y 6,5 %, 1,5 % y 6 %, 1,5 % y 5,5 %, 1.5 % y 5 %, 1,5 % y 4,5 %, 1,5 % y 4 %, 1,5 % y 3,5 %, 1,5 % y 3 %, 1,5 % y 2,5 %, 1,5 % y 2 %, 2 % y 10 %, 2 % y 9.5 %, 2 % y 9 %, 2 % y 8,5 %, 2 % y 8 %, 2 % y 7,5 %, 2 % y 7 %, 2 % y 6,5 %, 2 % y 6 %, 2 % y 5,5 %, 2 % y 5 %, 2 % y 4,5 %, 2 % y 4 %, 2 % y 3,5 %, 2 % y 3 %, 2 % y 2,5 %, 2,5 % y 10 %, 2,5 % y 9,5 %, 2,5 % y 9 %, 2,5 % y 8,5 %, 2,5 % y 8 %, 2,5 % y 7,5 %, 2,5 % y 7 %, 2,5 % y 6,5 %, 2,5 % y 6 %, 2,5 % y 5,5 %, 2,5 % y 5 %, 2,5 % y 4,5 %, 2.5 % y 4 %, 2,5 % y 3,5 %, 2,5 % y 3 %, 3 % y 10 %, 3 % y 9,5 %, 3 % y 9 %, 3 % y 8,5 %, 3 % y 8 %, 3 % y 7,5 %, 3 % y 7 %, 3 % y 6,5 %, 3 % y 6 %, 3 % y 5,5 %, 3 % y 5 %, 3 % y 4,5 %, 3 % y 4 %, y de entre 3 % y 3,5 % en peso (o en volumen) del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas, En otra realización, se añade un emulsionante (p. ej., en forma de polvos o en solución) en una cantidad seleccionada de entre 0,2 % y 5 %, 0,5 % y 5 %, 1 % y 5 %, 1,5 % y 5 %, 2 % y 5 %, 2,5 % y 5 % y 3 % y 5 % en peso (o en volumen) del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas. En todavía una realización adicional, se añade un emulsionante en una cantidad de entre 0,2 % y 10 % en peso de la composición de células lisadas.

En algunas realizaciones, el emulsionante reduce la tensión interfacial (es decir, la tensión superficial) del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "tensión interfacial" o "tensión superficial" se refiere a la fuerza que actúa sobre una línea imaginaria de un metro de longitud en la interfaz entre dos fases. En algunas realizaciones, la tensión interfacial de la emulsión formada por el emulsionante es inferior a la de una emulsión formada por los materiales endógenos. En algunas realizaciones, la tensión interfacial puede medirse en dinas/cm.

En algunas realizaciones, el emulsionante incrementa el valor absoluto del potencial zeta del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas (es decir, incrementa un potencial zeta positivo o reduce un potencial zeta negativo). En algunas realizaciones, la adición de un emulsionante aniónico puede resultar en un desplazamiento hacia abajo del potencial zeta del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas (p. ej., reduce un potencial zeta positivo o incrementa un potencial zeta negativo). En algunas realizaciones, la adición de un emulsionante catiónico puede resultar en un desplazamiento hacia arriba del potencial zeta del caldo de fermentación o de la composición de células lisadas (p. ej., incrementa un potencial zeta positivo o incrementa un potencial zeta negativo). Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "potencial zeta" se refiere al potencial electrocinético entre partículas en la emulsión. En algunas realizaciones, el potencial zeta puede medirse en mV. En algunas realizaciones, el valor absoluto del potencial zeta de la emulsión formada por el emulsionante es superior al de una emulsión formada por los materiales endógenos.

En algunas realizaciones, la adición de un emulsionante iónico crea una emulsión de aceite en agua. En algunas realizaciones, la emulsión de aceite en agua incluye, aunque sin limitación, aceite, agua y un emulsionante iónico.

En algunas realizaciones, el procedimiento de formación de una composición de células lisadas desemulsionada comprende, además, elevar el pH de la composición de células lisadas. En algunas realizaciones, se eleva el pH mediante la adición de una base a la composición de células lisadas. Las bases que pueden utilizarse para desemulsionar la composición de células lisadas son iguales a las indicadas anteriormente en la presente memoria. En algunas realizaciones, el pH se selecciona de entre aproximadamente 7,5 y un valor superior, de entre aproximadamente 8 y un valor superior, de entre aproximadamente 9 y un valor superior, de entre aproximadamente 10 y un valor superior, de entre aproximadamente 11 y un valor superior, y de entre aproximadamente 12 y un valor superior. En otras realizaciones, el pH se selecciona de entre 7 y 13; entre 7 y 12; entre 7 y 11; entre 7 y 10; entre 7 y 9; entre 7 y 8; entre 8 y 13; entre 8 y 12; entre 8 y 11; entre 8 y 10; entre 8 y 9; entre 9 y 13; entre 9 y 12; entre 9 y 11; entre 9 y 10; entre 10 y 13; entre 10 y 12, y entre 10 y 11. En algunas realizaciones, el pH se selecciona de entre 9 y 11.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, la adición de una sal a la composición de células lisadas. El término "sal" se refiere a un compuesto iónico formado mediante la sustitución de un ion hidrógeno de un ácido por un metal (p. ej., un metal alcalino, un metal alcalinotérreo y un metal de transición) o un compuesto cargado positivamente (p. ej., NH4+). En algunas realizaciones, la sal puede ser una sal de metal alcalino, sales de metal alcalinotérreo, sales sulfato o combinaciones de las mismas. Entre las especies iónicas cargadas negativamente presentes en una sal se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, haluros, sulfatos, bisulfatos, sulfitos, fosfatos, hidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, carbonatos, bicarbonatos y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la sal se selecciona de entre cloruro sódico, sulfato sódico, carbonato sódico, cloruro cálcico, sulfato potásico, sulfato de magnesio, glutamato monosódico, sulfato amónico, cloruro potásico, cloruro de hierro, sulfato de hierro, sulfato de aluminio, acetato amónico y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la sal no incluye NaOH. Puede añadirse una sal en forma de un sólido (p. ej., en forma cristalina, amorfa, peletizada y/o granular) y/o en forma de una solución (p. ej., una solución diluida, una solución saturada o una solución supersaturada) que contiene, por ejemplo, agua.

En algunas realizaciones, la sal se añade en una cantidad de entre 5 y 25 g/l, entre 5 y 10 g/l, entre 10 y 15 g/l, entre 15 y 20 g/l, entre 20 y 25 g/l o entre 10 y 20 g/l.

En otras realizaciones, se añade una sal a la composición de células lisadas en una cantidad de 20 % o inferior, 15 % o inferior, 10 % o inferior, 7,5 % o inferior, 5 % o inferior, o 2 % o inferior en peso (o en volumen) de la composición de células lisadas. En algunas realizaciones, se añade una sal a la composición de células lisadas en una cantidad de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 15 %, aproximadamente 0,1 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 15 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 2,5 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 2 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 1,5 %, aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 1 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 15 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 4 %, 1 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 2,5 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 2 %, aproximadamente 1 % y aproximadamente 1,5 %, aproximadamente 1,5 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 1,5 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 1,5 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 1,5 % y aproximadamente 2,5 %, aproximadamente 1,5 % y aproximadamente 2 %, aproximadamente 2 % to 20 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 15 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 2 % y aproximadamente 2,5 %, aproximadamente 2,5 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 2,5 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 2,5 % y aproximadamente 3 %, aproximadamente 3 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 3 % y aproximadamente 4 %, aproximadamente 4 % y aproximadamente 5 %, aproximadamente 5 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 5 % y aproximadamente 15 %, aproximadamente 5 % y aproximadamente 10 %, aproximadamente 10 % y aproximadamente 20 %, aproximadamente 10 % y aproximadamente 15 %, o aproximadamente 15 % y aproximadamente 20 %, en peso (o en volumen) de la composición de células lisadas (p. ej., peso (o volumen) total de caldo). Por ejemplo, en el caso de una composición de células lisadas que pesa 1.000 kg, la adición de una sal en una cantidad de entre 0,5 % y 20 %- en peso (o en volumen) requiere la adición de 5 a 200 kg de sal a la composición de células lisadas. En algunas realizaciones, se añade una sal a la composición de células lisadas en una cantidad de entre aproximadamente 0,05% y aproximadamente 20 %, entre aproximadamente 0,1% y aproximadamente 20 % en peso (o en volumen), entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 15% en peso (o en volumen) o entre aproximadamente 2 % y aproximadamente 10 % en peso (o en volumen) de la composición de células lisadas.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, el calentamiento antes, durante o después de lisar las células. En algunas realizaciones, el calentamiento se lleva a cabo antes de añadir un emulsionante, durante la adición de un emulsionante, después de añadir un emulsionante, antes de añadir una sal, durante la adición de una sal, después de añadir una sal o combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende el calentamiento de la composición de células lisadas y/o de las células hasta por lo menos 10 °C, por lo menos 20 °C, por lo menos 25 °C, por lo menos 30 °C, por lo menos 35 °C, por lo menos 40 °C, por lo menos 45 °C, por lo menos 50 °C, por lo menos 55 °C, por lo menos 60 °C, por lo menos 65 °C, por lo menos 70 °C, por lo menos 75 °C, por lo menos 80 °C, por lo menos 85 °C, por lo menos 90 °C, por lo menos 95 °C, o por lo menos 100 °C. En otras realizaciones, el procedimiento comprende el calentamiento de la composición de células lisadas y/o de las células entre aproximadamente 10 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 10 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 10 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 10 °C y aproximadamente 70 °C, aproximadamente 20 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 20 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 20 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 20 °C y aproximadamente 70 °C, aproximadamente 30 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 30 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 30 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 30 °C y aproximadamente 70 °C, aproximadamente 40 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 40 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 40 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 50 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 50 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 50 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 50 °C y aproximadamente 70 °C, aproximadamente 60 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 60 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 60 °C y aproximadamente 80 °C, aproximadamente 70 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 70 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 80 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 80 °C y aproximadamente 90 °C, o aproximadamente 90 °C y aproximadamente 100 °C. En realizaciones adicionales, el procedimiento comprende el calentamiento de la composición de células lisadas entre aproximadamente 60 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 70 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 70 °C y aproximadamente 90 °C, aproximadamente 80 °C y aproximadamente 100 °C, aproximadamente 80 °C y aproximadamente 90 °C, o aproximadamente 90 °C y aproximadamente 100 °C. En realizaciones todavía adicionales, el procedimiento comprende el calentamiento de la composición de células lisadas hasta por lo menos 60 °C, por lo menos 70 °C, por lo menos 75 °C, por lo menos 80 °C, por lo menos 85 °C, por lo menos 90 °C, por lo menos 95 °C, o por lo menos 100 °C.

En algunas realizaciones, la composición de células lisadas se calienta durante un periodo de tiempo suficiente para desemulsionar la composición de células lisadas.

En algunas realizaciones, las células y/o la composición de células lisadas puede calentarse en un sistema cerrado o en un sistema con un evaporador. En algunas realizaciones, las células y/o la composición de células lisadas puede calentarse en un sistema con un evaporador de manera que una parte del agua presente en las células y/o en la composición de células lisadas se elimina mediante evaporación. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende el calentamiento de las células y/o de la composición de células lisadas en un sistema con un evaporador a fin de eliminar hasta 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % o 50 % en peso (o en volumen) de agua presente en las células y/o en la composición de células lisadas. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende el calentamiento de las células y/o de la composición de células lisadas en un sistema con un evaporador para eliminar entre 1 % y 50 %, entre 1 % y 45 %, entre 1 % y 40 %, entre 1 % y 35 %, entre 1 % y 30 %, entre 1 % y 25 %, entre 1 % y 20 %, entre 1 % y 15 %, entre 1 % y 10 %, entre 1 % y 5 %, entre 5 % y 50 %, entre 5 % y 45 %, entre 5 % y 40 %, entre 5 % y 35 %, entre 5 % y 30 %, entre 5 % y 25 %, entre 5 % y 20 %, entre 5 % y 15 %, entre 5 % y 10 %, entre 10 % y 50 %, entre 10 % y 45 %, entre 10 % y 40 %, entre 10 % y 35 %, entre 10 % y 30 %, entre 10 % y 25 %, entre 10 % y 20 %, entre 10 % y 15 %, entre 15 % y 50 %, entre 15 % y 45 %, entre 15 % y 40 %, entre 15 % y 35 %, entre 15 % y 30 %, entre 15 % y 25 %, entre 15 % y 20 %, entre 20 % y 50 %, entre 20 % y 45 %, entre 20 % y 40 %, entre 20 % y 35 %, entre 20 % y 30 %, entre 20 % y 25 %, entre 25 % y 50 %, entre 25 % y 45 %, entre 25 % y 40 %, entre 25 % y 35 %, entre 25 % y 30 %, entre 30 % y 50 %, entre 30 % y 45 %, entre 30 % y 40 %, entre 30 % y 35 %, entre 35 % y 50 %, entre 35 % y 45 %, entre 35 % y 40 %, entre 40% y 50%, entre 40% y 45%, o entre 45 %y 50 % en peso (o en volumen) de agua.

En algunas realizaciones, la composición de células lisadas se somete a uno o más de entre un emulsionante, una base, una sal, calor y agitación a fin de formar una composición de células lisadas desemulsionada.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la desemulsionación de células lisadas no lavadas que comprenden aceite microbiano para obtener una composición de células lisadas desemulsionada no lavada y después separar el aceite a partir de la composición de células lisadas desemulsionada no lavada. Una composición de células lisadas desemulsionada no lavada se refiere a un procedimiento en el que la composición de células lisadas no se lava, p. ej., con agua o tampón que a continuación se elimina mediante, p. ej., centrifugación. El lavado de la composición de células lisadas puede reducir el rendimiento global de aceite obtenido a partir de la célula.

En una realización alternativa, el número de veces en que se lava la composición de células lisadas puede reducirse en 1 vez, 2 veces, 3 veces o más. En algunas realizaciones, el lavado se realiza no más de 1 vez, 2 veces o 3 veces.

En algunas realizaciones, las diversas combinaciones de formación de una composición de células lisadas, adición de un emulsionante a la composición de células lisadas, puesta en contacto de una composición de células lisadas con una base o la elevación del pH de una composición de células lisadas, la puesta en contacto de la composición de células lisadas con una sal, el calentamiento de la composición de células lisadas y la agitación de la composición de células lisadas pueden producirse en un único recipiente. En algunas realizaciones, las diversas combinaciones de formación de células, puesta en contacto de las células con una base o elevación del pH de las células, adición de un emulsionante a la composición de células lisadas, puesta en contacto de las células con una sal, calentamiento de las células y agitación de las células pueden producirse en un único recipiente. En algunas realizaciones, el recipiente único incluye un recipiente de fermentación. En algunas realizaciones, el recipiente de agitación presenta un volumen de por lo menos 20.000 litros, por lo menos 50.000 litros, por lo menos 100.000 litros, por lo menos 120.000 litros, por lo menos 150.000 litros, por lo menos 200.000 litros, o por lo menos 220.000 litros. En algunas realizaciones, el recipiente de fermentación puede presentar un volumen de entre 20,000 litros y 220,000 litros, entre 20,000 litros y 100.000 litros, entre 20.000 litros y 50.000 litros, entre 50.000 litros y 220.000 litros, entre 50.000 litros y 150.000 litros, entre 50.000 litros y 100.000 litros, entre 100.000 litros y 220.000 litros, entre 100.000 litros y 150.000 litros, entre 100.000 litros y 120.000 litros, entre 150.000 litros y 220.000 litros, entre 150.000 litros y 200.000 litros o de entre 200.000 litros y 220.000 litros.

En algunas realizaciones, una cantidad de células o de composición de células lisadas formada en un recipiente puede transferirse a uno o más recipientes de agitación. En algunas realizaciones, los recipientes de agitación pueden presentar un volumen de por lo menos 20.000 litros, por lo menos 30.000 litros, por lo menos 40.000 litros, o por lo menos 50.000 litros. En algunas realizaciones, los recipientes de agitación pueden presentar un volumen de entre 20.000 litros y 50.000 litros, entre 20.000 litros y 40.000 litros, entre 20.000 litros y 30.000 litros, entre 30.000 litros y 50.000 litros, entre 30.000 litros y 40.000 litros o entre 40.000 litros y 50.000 litros.

En general, los procedimientos descritos en la presente memoria no utilizan un solvente orgánico para obtener, separar o de otro modo recuperar un aceite microbiano a partir de las células microbianas. En algunas realizaciones, no se utiliza ningún solvente orgánico para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas. En otra realización, no se añade un solvente orgánico a las células, no se añade a la composición de células lisadas y/o no se añade al aceite durante los procedimientos dados a conocer en la presente memoria, en una cantidad o concentración suficiente para obtener un aceite microbiano. Entre los solventes orgánicos se incluyen solventes polares, solventes no polares, solventes miscibles en agua, solventes inmiscibles en agua y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende, además, la separación de un aceite a partir de una composición de células lisadas desemulsionada. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende separar un aceite a partir de una composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación de la composición de células lisadas desemulsionada. En algunas realizaciones, se separa un aceite a partir de la composición de células lisadas desemulsionada dejando que la composición de células lisadas desemulsionada repose, en la que el aceite se separa (p. ej., en forma de una capa separada) de la composición de células lisadas desemulsionada por gravedad. En algunas realizaciones, la separación se consigue mediante una membrana lipofílica. En algunas realizaciones, la separación comprende centrifugar a una temperatura de entre 10 °C y 100 °C. En algunas realizaciones, el aceite se separa de la composición de células lisadas desemulsionada elevando en primer lugar el pH hasta la neutralidad (p. ej., mediante la adición de una base que se ha indicado anteriormente en la presente memoria) y después centrifugando la composición de células lisadas desemulsionada a fin de obtener el aceite.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la separación de un aceite a partir de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación de la composición de células lisadas desemulsionada a una temperatura de por lo menos 10 °C, por lo menos 20°C, por lo menos 25°C, por lo menos 30°C, por lo menos 35°C, por lo menos 40°C, por lo menos 45°C, por lo menos 50°C, por lo menos 55°C, por lo menos 60°C, por lo menos 65°C, por lo menos 70°C, por lo menos 75°C, por lo menos 80°C, por lo menos 85°C, por lo menos 90°C, por lo menos 95°C, o por lo menos 100°C. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la separación de la composición de células lisadas desemulsionada mediante centrifugación de la composición de células lisadas desemulsionada a una temperatura de entre 10°C y 100°C, 10°C y 90°C, entre 10°C y 80°C, entre 20°C y 100°C, entre 20°C y 90°C, entre 20°C y 80°C, entre 25°C y 100°C, entre 25°C y 90°C, entre 25°C y 80°C, entre 25°C y 75°C, entre 30°C y 100°C, entre 30°C y 90°C, entre 30°C y 80°C, entre 40°C y 100°C, entre 40°C y 90°C, entre 40°C y 80°C, entre 50°C y 100°C, entre 50°C y 90°C, entre 50°C y 80°C, entre 50°C y 70°C, entre 60°C y 100°C, entre 60°C y 90°C, entre 60°C y 80°C, entre 60°C y 70°C, entre 70°C y 100°C, entre 70°C y 90°C, entre 70°C y 80°C, entre 80°C y 100°C, entre 80°C y 90°C, o entre 90°C y 100°C.

En algunas realizaciones, la centrifugación se lleva a cabo a una tasa de alimentación (de una composición de células lisadas desemulsionada a una centrífuga) de entre 1 kilogramo por minuto (kg/min) y 500 kg/min, entre 1 kg/min y 400 kg/min, entre 1 kg/min y 300 kg/min, entre 1 kg/min y 200 kg/min, entre 1 kg/min y 100 kg/min, entre 1 kg/min y 75 kg/min, entre 1 kg/min y 50 kg/min, entre 1 kg/min y 40 kg/min, entre 1 kg/min y 30 kg/min, entre 1 kg/min y 25 kg/min, entre 1 kg/min y 10 kg/min, entre 10 kg/min y 500 kg/min, entre 10 kg/min y 400 kg/min, entre 10 kg/min y 300 kg/min, entre 10 kg/min y 200 kg/min, entre 10 kg/min y 100 kg/min, entre 10 kg/min y 75 kg/min, entre 10 kg/min y 50 kg/min, entre 10 kg/min y 40 kg/min, entre 10 kg/min y 30 kg/min, entre 20 kg/min y 500 kg/min, entre 20 kg/min y 400 kg/min, entre 20 kg/min y 300 kg/min, entre 20 kg/min y 200 kg/min, entre 20 kg/min y 100 kg/min, entre 20 kg/min y 75 kg/min, entre 20 kg/min y 50 kg/min, entre 20 kg/min y 40 kg/min, entre 25 kg/min y 500 kg/min, entre 25 kg/min y 400 kg/min, entre 25 kg/min y 300 kg/min, entre 25 kg/min y 200 kg/min, entre 25 kg/min y 100 kg/min, entre 25 kg/min y 75 kg/min, entre 25 kg/min y 50 kg/min, entre 30 kg/min y 60 kg/min, entre 30 kg/min y 50 kg/min, entre 30 kg/min y 40 kg/min, entre 50 kg/min y 500 kg/min, entre 100 kg/min y 500 kg/min, o entre 200 kg/min y 500 kg/min.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la centrifugación de una composición de células lisadas desemulsionada, a una fuerza centrífuga de entre 1.000 g y 25.000 g, entre 1.000 g y 20.000 g, entre 1.000 g y 10.000 g, entre 2.000 g y 25.000 g, entre 2.000 g y 20.000 g, entre 2.000 g y 15.000 g, entre 3.000 g y 25.000 g, entre 3.000 g y 20.000 g, entre 5.000 g y 25.000 g, entre 5.000 g y 20.000 g, entre 5.000 g y 15.000 g, entre 5.000 g y 10.000 g, entre 5.000 g y 8.000 g, entre 10.000 g y 25.000 g, entre 15.000 g y 25.000 g, o por lo menos 1.000 g, por lo menos 2.000 g, por lo menos 4.000 g, por lo menos 5.000 g, por lo menos 7.000 g, por lo menos 8.000 g, por lo menos 10.000 g, por lo menos 15.000 g, por lo menos 20.000 g, o por lo menos 25.000 g. Tal como se utiliza en la presente memoria, "g" se refiere a la gravedad estándar, o aproximadamente 9,8 m/s2. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende la centrifugación de una composición de células lisadas desemulsionada entre 4.000 rpm y 14.000 rpm, entre 4.000 rpm y 10.000 rpm, entre 6.000 rpm y 14.000 rpm, entre 6.000 rpm y 12.000 rpm, entre 8.000 y 14.000 rpm, entre 8.000 rpm y 12.000 rpm, o entre 8.000 rpm y 10.000 rpm.

En algunas realizaciones, el aceite puede recuperarse, por ejemplo, mediante decantación, espumado, vacío, bombeo, succión, extracción, sifonado o recuperación de otro modo del aceite microbiano de la superficie de la composición separada.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende el secado del aceite que se ha recuperado para eliminar el agua en el aceite. En algunas realizaciones, el secado del aceite puede incluir, aunque sin limitación, el calentamiento del aceite para evaporar el agua. En algunas realizaciones, tras el secado, el aceite presenta un contenido de agua en porcentaje en peso (o en volumen) de aceite que es inferior a 3 %, inferior a 2,5 %, inferior a 2 %, inferior a 1,5 %, inferior a 1 %, inferior a 0,5 %, inferior a 0,1 % o de 0 %. En algunas realizaciones,, tras el secado, el aceite presenta un contenido de agua en porcentaje en peso (o en volumen de aceite de entre 0 % y 3 %, entre 0 % y 2,5 %, entre 0 % y 2 %, entre 0 % y 1,5 %, entre 0 % y 1 %, entre 0 % y 0,5 %, entre 0,1 % y 3 %, entre 0,1 % y 2,5 %, entre 0,1 % y 2 %, entre 0,1 % y 1,5 %, entre 0,1 % y 1 %, entre 0,1 % y 0,5 %, entre 0,5 % y 3 %, entre 0,5 % y 2,5 %, entre 0,5 % y 2 %, entre 0,5 % y 1,5 %, entre 0,5 % y 1 %, entre 1 % y 3 %, entre 1 % y 2,5 %, entre 1 % y 2 %, entre 1 % y 1,5 %, entre 1,5 % y 3 %, entre 1,5 % y 2,5 %, entre 1,5 % y 2 %, entre 2 % y 3 %, entre 2 % y 2,5 %, o entre 2,5 % y 3 %,

En la presente memoria se da a conocer un aceite microbiano que puede obtenerse a partir de células microbianas mediante cualquiera de los procedimientos dados a conocer en la presente memoria. En algunas realizaciones, el aceite comprende por lo menos 30 % en peso (o en volumen) de ácido araquidónico. En algunas realizaciones, el aceite comprende por lo menos 30 % en peso (o en volumen) de ácido docosahexaenoico.

El valor de anisidina (AV) se determina de acuerdo con el método oficial AOCS Cd 18-90. En una realización, el aceite indicado en la presente memoria presenta un AV inferior a aproximadamente 50, inferior a aproximadamente 40, inferior a aproximadamente 30, inferior a aproximadamente 20, inferior a aproximadamente 15, o inferior a aproximadamente 10. En algunas realizaciones, el aceite presenta un AV inferior a aproximadamente 50. La expresión valor de anisidina se refiere a la medición de los productos de reacción secundarios, tales como aldehídos y cetonas que aparecen durante la oxidación del aceite.

El valor de peróxido (PV) se determina de acuerdo con el método oficial AOCS Cd 8-53. En una realización, el aceite indicado en la presente memoria presenta un PV inferior a aproximadamente 20 meq/kg, inferior a aproximadamente 10 meq/kg o inferior a aproximadamente 5 meq/kg. En algunas realizaciones, el aceite presenta un PV inferior a aproximadamente 5 meq/kg. La expresión valor de peróxido se refiere a la medición de los productos de reacción primarios, tales como peróxidos e hidroperóxidos, que aparecen durante la oxidación del aceite. Tal como se utiliza en la presente memoria, el valor de peróxido se mide en meq/kg.

En algunas realizaciones,, el aceite presenta un contenido de fósforo de 100 ppm o inferior, 95 ppm o inferior, 90 ppm o inferior, 85 ppm o inferior, 80 ppm o inferior, 75 ppm o inferior, 70 ppm o inferior, 65 ppm o inferior, 60 ppm o inferior, 55 ppm o inferior, 50 ppm o inferior, 45 ppm o inferior, 40 ppm o inferior, 35 ppm o inferior, 30 ppm o inferior, 25 ppm o inferior, 20 ppm o inferior, 15 ppm o inferior, 10 ppm o inferior, 9 ppm o inferior, 8 ppm o inferior, 7 ppm o inferior, 6 ppm o inferior, 5 ppm o inferior, 4 ppm o inferior, 3 ppm o inferior, 2 ppm o inferior, o 1 ppm o inferior. En algunas realizaciones, el aceite presenta un contenido de fósforo de aproximadamente 8 ppm o inferior.

En algunas realizaciones, el aceite comprende uno o más PUFA. En algunas realizaciones, el aceite comprende por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, por lo menos 20 %, por lo menos 25 %, por lo menos 30 %, por lo menos 35 %, por lo menos 40 %, por lo menos 45 %, por lo menos 50 %, por lo menos 60 %, por lo menos 70 % o por lo menos 80 % de PUFA (en peso de PUFA). En algunas realizaciones, el aceite comprende por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, por lo menos 20 %, por lo menos 25 %, por lo menos 30 %, por lo menos 35 %, por lo menos 40 %, por lo menos 45 %, por lo menos 50 %, por lo menos 60 %, por lo menos 70 % o por lo menos 80 % DHA (en peso de DHA), and/or por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, o por lo menos 20 % DPA n-6 (en peso de DPA n-6), y/o por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, o por lo menos 20 % EPA (en peso de EPA), y/o por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, por lo menos 20 %, por lo menos 25 %, por lo menos 30 %, por lo menos 35 %, por lo menos 40 %, por lo menos 45 %, por lo menos 50 %, por lo menos 55 %, por lo menos 60 %, por lo menos 65 %, por lo menos 70 %, por lo menos 75 %, o por lo menos 80 % ARA (en peso de ARA). En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de 50 %, menos de 40 %, menos de 30 %, menos de 20 %, menos de 15 %, menos de 10 % o menos de 5 % de EP (en peso de EPA). En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de 50 %, menos de 40 %, menos de 30 %, menos de 20 %, menos de 15 %, menos de 10 % o menos de 5 % de DHA (en peso de DHA). En algunas realizaciones, el aceite comprende menos de 10 %, menos de 5 %, menos de 2 %, menos de 1 % o menos de 0,5 % en peso (o en volumen) de esteroles.

En algunas realizaciones, el aceite comprende por lo menos 50 %, por lo menos 60 %, por lo menos 70 %, por lo menos 80 %, por lo menos 90 %, por lo menos 95 %, o entre 50 % y 95 %, entre 50 % y 90 %, entre 50 % y 85 %, entre 50 % y 80 %, entre 50 % y 75 %, entre 60 % y 95 %, entre 60 % y 90 %, entre 60 % y 85 %, entre 70 % y 95 %, entre 70 % y 90 %, entre 70 % y 85 %, entre 75 % y 95 %, entre 75 % y 90 %, o entre 75 % y 85 % en peso (o en volumen) de triglicéridos.

En algunas realizaciones, los triglicéridos comprenden por lo menos 10 %, por lo menos 20%, por lo menos 30%, por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 50%, por lo menos 60%, por lo menos 70% o por lo menos 80 % en peso (o en volumen) de DHA. En algunas realizaciones, los triglicéridos comprenden por lo menos 10 %, por lo menos 20%, por lo menos 30%, por lo menos 35%, por lo menos 40%, por lo menos 45%, por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70 %, por lo menos 75 % o por lo menos 80 % en peso (o en volumen) de ARA. En algunas realizaciones, los triglicéridos comprenden por lo menos 50%, por lo menos 40%, por lo menos 30%, por lo menos 20%, por lo menos 15%, por lo menos 10%, por lo menos 5 % en peso (o en volumen) de EPA.

En una realización, el aceite microbiano obtenido y/o recuperado mediante cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria es un aceite en bruto. En otra realización, el aceite descrito en la presente memoria es un aceite refinado. Un "aceite en bruto" es un aceite obtenido a partir de células microbianas sin procesamiento adicional. Un "aceite refinado" es un aceite obtenido mediante tratamiento de un aceite en bruto mediante procesamiento estándar de refinado, decoloración y/o desodorización. Ver, p. ej., la patente US n.° 5.130.242. En algunas realizaciones, el refinado incluye, aunque sin limitación, el refinado cáustico, el desgomado, el tratamiento ácido, el tratamiento con álcali, el enfriamiento, el calentamiento, la decoloración, la desodorización, la desacidificación y combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende concentrar un caldo de fermentación que comprende células microbianas. En algunas realizaciones, el procedimiento comprende concentrar la composición de células lisadas. Tal como se utiliza en la presente memoria, "concentrar" se refiere a eliminar el agua de una composición. Concentrar puede incluir, aunque sin limitación, la evaporación, el secado químico, la centrifugación y similar, y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la composición celular o la composición de células lisadas se concentra para proporcionar una concentración de aceite de por lo menos 4 %, por lo menos 5 %, por lo menos 10 %, por lo menos 15 %, por lo menos 2 %, por lo menos 25 %, o por lo menos 30 % en peso (o en volumen) de la composición. En algunas realizaciones, la composición celular o la composición de células lisadas se concentra para proporcionar una concentración de aceite de entre 4 % y 40 %, entre 4 % y 30 %, entre 4 % y 20 %, entre 4 % y 15 %, entre 5 % y 40 %, entre 5 % y 30 %, entre 5 % y 20 %, entre 10 % y 40 %, entre 10 % y 30 %, entre 10 % y 20 %, entre 15 % y 40 %, entre 15 % y 30 %, entre 20 % y 40 %, entre 20 % y 30 %, entre 25 % y 40 %, o entre 30 % y 40 % en peso (o en volumen) de la composición.

Entre las condiciones de cultivo eficaces para una célula microbiana para la utilización con la invención se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, medios eficaces, biorreactor, condiciones de temperatura, pH y oxígeno que permitan la producción de aceite. Un medio eficaz se refiere a cualquier medio en el que habitualmente se cultive una célula microbiana, p. ej., una célula microbiana de Thraustochytriales. Dichos medios normalmente comprenden un medio acuoso que presenta fuentes asimilables de carbono, nitrógeno y fosfato, así como sales apropiadas, minerales, metales y otros nutrientes, tales como vitaminas. Las células microbianas para la utilización con la presente invención pueden cultivarse en biorreactores de fermentación convencionales, matraces de agitación, probetas, placas de microtitulación y placas Petri.

En algunas realizaciones, una célula microbiana comprende por lo menos 30 % en peso (o en volumen) de aceite, por lo menos 35 % en peso (o en volumen) de aceite, por lo menos 40 % en peso (o en volumen) de aceite, por lo menos 50 % en peso (o en volumen) de aceite, por lo menos 60 % en peso (o en volumen) de aceite, por lo menos 70 % en peso (o en volumen) de aceite o por lo menos 80 % en peso (o en volumen) de aceite. En algunas realizaciones, una célula microbiana para la utilización con la presente invención es capaz de producir por lo menos 0,1 gramos por litro por hora (g/l/h) de DHA, por lo menos 0,2 g/l/h de DHA, por lo menos 0,3 g/l/h de DHA o por lo menos 0,4 g/l/h de DHA. En algunas realizaciones, una célula microbiana para la utilización con la presente invención es capaz de producir por lo menos 0,01 gramos por litro por hora (g/l/h) de ARA, por lo menos 0,05 g/l/h de ARA, por lo menos 0,1 ^{g/l/h de}A^ra, ^{por lo menos 0,2 g/l/h de AR, por lo menos 0,3 g/l/h de ARA o por lo menos 0,4 g/l/h de ARA.}

En algunas realizaciones, un aceite obtenido según cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria, la biomasa o combinaciones de los mismos pueden utilizarse como alimentos o ingredientes alimentarios, tales como un ingrediente en alimentos infantiles, fórmulas infantiles, bebidas, salsas, alimentos de tipo lácteo (tales como leche, yogur, queso y helado), aceites (p. ej., aceites de cocción o aliños de ensalada) y productos horneados, complementos nutricionales (p. ej., en forma de cápsula o tableta), piensos o complementos de pienso para cualquier animal no humano (p. ej., aquellos cuyos productos (p. ej., carne, leche o huevos) son consumidos por seres humanos), complementos alimentarios y farmacéuticos (de aplicación directa o de aplicación como tratamiento complementario). El término "animal" se refiere a cualquier organismo perteneciente al reino Animalia e incluye cualquier animal humano y animal no humano a partir del que se deriven productos (p. ej., leche, huevos, carne de ave, vaca, cerdo o cordero). En algunas realizaciones, el aceite y/o biomasa puede utilizarse en alimentos de origen marino. Los alimentos de origen marino se derivan, aunque sin limitación, de pescado, gambas y marisco. El término "productos" incluye cualquier producto derivado de dichos animales, incluyendo, aunque sin limitación, carne, huevos, leche u otros productos. En el caso de que se alimente a dichos animales con el aceite y/o biomasa, pueden incorporarse aceites poliinsaturados en la carne, leche, huevos u otros productos de dichos animales para incrementar su contenido en dichos aceites.

Ejemplos

Ejemplo 1

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH del caldo a 7,2-77,5 y caldo Alcalase® 2.4 FG al 0,5 en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y se sometieron a agitación durante 2 horas a 55-60 °C. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante la continuación de la agitación a 190-221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha, la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a 4; la adición de NaCl al 2 % en peso de composición, y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 76,47 % de DHA (DHA en peso).

Ejemplo 2

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Se formó una composición de células lisadas desemulsionada mediante: la adición de caldo al 1,5 % en peso, solución de ácido sulfúrico al 98 % para ajustar el pH a 1,6-2,1 y calentamiento a 90 °C bajo agitación a 190 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y agua para el calentamiento. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 84,57 % de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 3

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Se formó una composición de células lisadas desemulsionada mediante: la adición de caldo al 1,5 % en peso, solución de ácido sulfúrico al 98 % para ajustar el pH a 1,6-2,1 y calentamiento a 90 °C bajo agitación a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y vapor para el calentamiento. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 87,08% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 4

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Se formó una composición de células lisadas desemulsionada mediante: la adición de caldo al 4% en peso, solución de ácido sulfúrico al 98 % para ajustar el pH a <1,0 y calentamiento a 90 °C bajo agitación a 151-190 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y agua o vapor para el calentamiento. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 93,61% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 5

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 2 horas a 55-60 °C. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y agua o vapor para el calentamiento; la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a 10,5; la adición de NaCl al 2 % en peso de composición, y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 72,77% de DHA (DHA en peso).

Ejemplo 6

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 8 horas a 55-60 °C y el control del pH a 7,2-7,5. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y agua o vapor para el calentamiento; la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a 10,5; la adición de NaCl al 2 % en peso de composición, y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 85,28% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 7

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 2 horas a 55-60 °C y control del pH. El caldo se trató con una segunda dosis de 0,5 % en peso de caldo Alcalase® y se mantuvo bajo agitación durante 2 horas adicionales con control del pH. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y agua o vapor para el calentamiento; la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a 10,5; la adición de NaCl al 2 % en peso de composición, y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 81,12% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 8

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 2 horas a 55-60 °C. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha y la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a 10,5; la adición de NaCl al 2 % en peso de composición, y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se añadió NaOH al 50 % en peso a la composición para reajustar el pH a 9-10,5 y se mantuvo la composición a 90 °C durante unas cuantas horas bajo agitación. El aceite microbiano se separó de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) 86,57% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 9

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 2 horas a 55-60 °C. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha; adición de 2,5 %, en peso de caldo, de solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 11,8; la adición de 2 %, en peso de composición, de NaCl y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se añadió NaOH al 50 % en peso a la composición para reajustar el pH a 10.5 y se mantuvo la composición a 90 °C bajo agitación. Tras unas cuantas horas más, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante la adición de NaOH al 50 % en peso para ajustar el pH a la neutralidad (6,5 a 8,5) y centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto, que rindió (de promedio) >96% de DHA (en peso de DHA).

Ejemplo 10

Un caldo celular sin lavar (500 a 700 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mediante la adición de una solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 7,2 a 7,5 y caldo Alcalase ® 2.4 FG al 0,5 % en peso (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) y la agitación durante 2 horas a 55-60 °C. La composición de células lisadas se desemulsionó mediante: continuación de la agitación de la composición a 221 rpm con agitadores hidráulicos de paleta estrecha; adición de 2,5 %, en peso de caldo, de solución de NaOH al 50 % para ajustar el pH a 11; la adición de 2 %, en peso de composición, de NaCl y el calentamiento a 90 °C. Tras unas cuantas horas a 90 °C, se añadió NaOH al 50 % en peso a la composición a fin de reajustar el pH a 10.5 y se mantuvo la composición a 90 °C bajo agitación. T ras unas cuantas horas más, se separó el aceite microbiano respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, mediante centrifugación (Seital SR 1010 (Seital srl, Italia)) de la composición a 1750 rpm, proporcionando un aceite en bruto.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para la obtención de un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados a partir de una o más células microbianas, en el que el procedimiento comprende:

(a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas, (b) desemulsionar la composición de células lisadas para formar una composición de células lisadas desemulsionada,

(c) separar el aceite respecto de la composición de células lisadas desemulsionada, y

(d) recuperar el aceite,

en el que (b) comprende (i) agitación de baja cizalla con una velocidad de punta del agitador de entre 5 cm/s y 250 cm/s, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas, y en el que dicho (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) combinación de las mismas es proporcionada por un agitador seleccionado de entre agitadores con impulsor hidroala, turbinas de palas de ángulo variable y combinaciones de los mismos.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicha (i) agitación de baja cizalla, (ii) agitación de flujo axial o (iii) una combinación de las mismas, se proporciona mediante un agitador con impulsor hidroala (hydrofoil).

3. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, que (a) comprende adicionalmente la agitación de las células con un agitador de flujo radial.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el que el agitador de flujo radial es un agitador Rushton.

5. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, en el que por lo menos uno de (a) o (b) comprende, además, el calentamiento de las células o la composición a por lo menos 60 °C, preferentemente hasta una temperatura de entre aproximadamente 60 °C y aproximadamente 100 °C.

6. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, que (b) comprende adicionalmente la adición de una base a la composición de células lisadas y/o la elevación del pH de la composición de células lisadas hasta aproximadamente 8 o un valor superior.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que (b) comprende adicionalmente la reducción del pH a aproximadamente 6 o un valor inferior, preferentemente hasta un valor entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 6, y/o que (b) comprende adicionalmente la adición de un ácido en una cantidad de entre aproximadamente 0,5 % y aproximadamente 20 % en peso de la composición de células lisadas.

8. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, que (b) comprende adicionalmente la adición de una sal en una cantidad de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 20 % en peso de la composición de células lisadas, preferentemente en el que la sal se selecciona del grupo que consiste en sales de metal alcalino, sales de metal alcalinotérreo, sales sulfato y combinaciones de las mismas.

9. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, que (b) comprende adicionalmente la adición de por lo menos un enzima, en el que preferentemente el enzima se selecciona de entre beta-glucanasa, xilanasa, celulasa, pectinasa, mananasa, amilasa y combinaciones de los mismos, en el que preferentemente el enzima es una beta-glucanasa, preferentemente en el que el enzima se añade en una cantidad de entre aproximadamente 0,05 % y aproximadamente 10 % en peso de la composición de células lisadas.

10. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, que:

(i) (a) comprende adicionalmente la agitación de las células,

(ii) las células de (a) no están lavadas,

(iii) las células de (a) están contenidas en un caldo de fermentación,

(iv) (c) comprende la centrifugación de la composición de células lisadas desemulsionada, (v) la composición de células lisadas comprende líquido, residuos celulares y aceite microbiano, (vi) no se obtiene un solvente orgánico para obtener el aceite a partir de las células,

(vii) el tamaño medio de partícula de la composición de células lisadas desemulsionada es de por lo menos 10 micrómetros,

(viii) (c) comprende adicionalmente la elevación del pH de la composición de células lisadas desemulsionada, y/o

(ix) (b) comprende adicionalmente la adición de un emulsionante a la composición de células lisadas, preferentemente en el que el emulsionante es un emulsionante iónico.

11. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, en el que el ácido graso poliinsaturado se selecciona de entre un ácido graso omega-3, un ácido graso omega-6 y mezclas de los mismos, preferentemente en el que el ácido graso poliinsaturado se selecciona de entre ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido araquidónico (ARA), ácido gammalinolénico (GLA), ácido dihomo-gamma-linolénico (DGLA), ácido estearidónico (SDA) y mezclas de los mismos, más preferentemente en el que el ácido graso poliinsaturado se selecciona de entre ácido docosahexaenoico (DHA) o ácido araquidónico (ARA).

12. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, en el que las células microbianas son algas, levaduras, hongos, protistas o células bacterianas, preferentemente en el que las células microbianas son de los géneros Mortierella, Crypthecodinium, o del orden Thraustochytriales, más preferentemente en el que las células microbianas son del género Thraustochytrium, Schizochytrium, o mezclas de los mismos o de Mortierella alpina.

13. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, en el que el aceite:

(x) comprende por lo menos 30 % en peso de ácido araquidónico,

(xi) comprende por lo menos 30 % en peso de ácido docosahexaenoico,

(xii) presenta un valor de anisidina inferior a aproximadamente 50,

(xiii) presenta un contenido de fósforo de aproximadamente 8 ppm o inferior, y/o

(xiv) presenta un valor de peróxido inferior a aproximadamente 5 meq/kg.

14. Procedimiento según cualquier reivindicación anterior, en el que el aceite de (d) es un aceite en bruto, preferentemente en el que (d) comprende, además, el refinado del aceite en bruto con el fin de obtener un aceite refinado.