ES2969457T3

ES2969457T3 - Método para preparar un diastereómero de un derivado del ácido cítrico

Info

Publication number: ES2969457T3
Application number: ES18791471T
Authority: ES
Inventors: Katsuya Hiraishi; Hiroyuki Soma; Fumie Jimma; Taro Adachi; Ippei Yamaoka; Naoyuki Endo
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Factory Inc
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Factory Inc
Priority date: 2017-04-28
Filing date: 2018-04-23
Publication date: 2024-05-20
Anticipated expiration: 2038-04-23
Also published as: EP3617191A4; CA3058886C; AU2018259992A1; NZ757747A; US11155519B2; CN110546137B; JP6826267B2; TWI678360B; EP3617191B1; CN110546137A; US20200055821A1; KR102299521B1; KR20190129965A; SG11201909240SA; JPWO2018199040A1; PH12019550273A1; EP3617191A1; CA3058886A1; WO2018199040A1; EP3617191B9

Abstract

Realizando cromatografía en columna de intercambio iónico en una solución acuosa que contiene un compuesto A representado por la fórmula (A) y ácido cítrico o tratando la solución acuosa con carbonato de calcio, se elimina el ácido cítrico en la solución acuosa y se obtiene un compuesto A cristalino. sometiendo posteriormente la solución acuosa a varias etapas. Además, se obtiene un compuesto A no cristalino de alta pureza tratando la solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico con carbonato de calcio, ácido sulfúrico, un disolvente orgánico, etc. para eliminar el ácido cítrico y el compuesto cristalino. A en la solución. La estructura tridimensional del compuesto cristalino A es un estereoisómero SS según el sistema RS. La estructura tridimensional del compuesto no cristalino A es un estereoisómero SR según el sistema RS. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método para preparar un diastereómero de un derivado del ácido cítrico

Campo técnico

La presente invención se refiere a un cristal de un derivado del ácido cítrico que tiene un efecto inhibidor contra el trastorno hepático, a un diastereómero no cristalino altamente purificado (diastereómero amorfo) del mismo y a sus métodos de preparación.

Antecedentes de la técnica

El albaricoque japonés (ume) (nombre científico:Prunus muma)pertenece al subgéneroPrunusdel géneroPrunusde la subfamiliaAmígdaloideaede la familiaRosaceae,y se consume como productos procesados de ume, como ume encurtido, licores del ume y extractos de la pulpa del ume. Además, los extractos de la pulpa del ume tienen efectos de desinfección, recuperación de la fatiga, protección gástrica y similares, y se han ingerido para la salud. Además, se sabe que los extractos de la pulpa del ume tienen el efecto de mejorar el torrente sanguíneo (véanse los documentos no de Patente 1 y 2). Se sabe que el efecto de mejora del torrente sanguíneo es provocado por Mumefural y compuestos relacionados del mismo producidos calentando un ácido orgánico tal como ácido cítrico o ácido málico contenido en el extracto de la pulpa del ume junto con un azúcar (documento no de Patente 3).

Misatol (R) está disponible comercialmente como uno de los alimentos saludables que contienen extractos de la pulpa del ume y se sabe que tiene un efecto de inducción de autofagia y un efecto inhibidor contra el trastorno hepático en pacientes con hepatitis viral (documentos de Patente 1 y 2).

Se ha descubierto que un compuesto en el que dos grupos carboxilo se unen al carbono de la posición 1 (o al carbono de la posición 3) y al carbono de la posición 2 de la cadena de propano, que es una cadena de carbonos del ácido cítrico (nombre IUPAC: ácido 2-hidroxipropan-1,2,3-tricarboxílico), forman un enlace imida con un grupo amino de un aminoácido específico; y un compuesto de amida, obtenido por hidrólisis del compuesto de imida, del aminoácido y del grupo carboxilo unido al carbono de la posición 1 (o al carbono de la posición 3) de la cadena de propano procedente del ácido cítrico son sustancias activas que tienen un efecto inhibidor contra los trastornos hepáticos. El presente solicitante ha propuesto recientemente, basándose en el hallazgo anterior, un derivado de ácido cítrico que comprende un compuesto representado por la siguiente fórmula y un método de síntesis del mismo (documento de Patente PCT/JP2016/004789).

(En la fórmula, R1 representa un grupo alquilo de C1 a C3 que tiene opcionalmente un grupo carboxilo o un grupo hidroxilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno; o R1 y R2 opcionalmente juntos forman una estructura cíclica y representan una cadena de alquileno de C2 a C3).

Sin embargo, dado que el derivado del ácido cítrico representado por la fórmula química anterior tiene dos carbonos asimétricos, existen cuatro estereoisómeros. Sin embargo, para separar y obtener estos estereoisómeros que tienen estructuras análogas es necesario combinar varias columnas costosas que tienen una alta capacidad de separación y que la operación de separación se repita varias veces, y esto significa que sólo se pueden obtener pequeñas cantidades de separación dependiendo del tamaño de la columna y requiere costes elevados. No se ha establecido una tecnología para separar y purificar altamente estos estereoisómeros en grandes cantidades y de forma económica.

Documentos de la técnica anterior

Documentos de Patente

Documento de patente 1: Japanese Patent No. 4842624

Documento de patente 2: Japanese Patent No. 5577129

Documentos no de Patente

Documento no de patente 1: J. Agrie, FoodChem., 1999, 47, 828-31

Documento no de patente 2: Journal of Hemorheology Research 1,65-67, 1998

Documento no de patente 3: Journal of Hemorheology Research 3, 81-88, 2000

D1 - WO2017077707 (ADABIO CO LTD [JP], et al), que está incluido en el estado de la técnica bajo el artículo 54(3) EPC, describe derivados del ácido cítrico que tienen un efecto inhibidor del trastorno hepático y pueden usarse como inhibidores del trastorno hepático y aditivos alimentarios. Los compuestos comprenden un grupo alquilo de C1-C3 que puede tener un grupo carboxilo o un grupo hidroxilo, o alternativamente pueden comprender una estructura cíclica y representar una cadena de alquileno de C2-C3.

D2 - WO2015052342 (DSM IP ASSETS BV [NL]) describe una resina de poliéster obtenida por reacción en un proceso entre componentes que incluyen un Componente de Imida, que comprende una o más imidas cíclicas y un Componente de Poliol, comprende al menos un alcohol polihídrico saturado.

D3 - KONING, C. et al. (Journal of Coatings Technology and Research, (20170000), vol. 14, no. 4, pages 783 - 789) describe resinas alquídicas renovables basadas en estructuras de imida.

D4 - KONETSCHNY-RAPP, S. et al., (European Journal of Biochemistry, (19900000), vol. 191, no. 1, pages 65 - 74) describe la estafiloferrina A, un sideróforo estructuralmente nuevo de estafilococos.

D5 - MIYAKE, M. et al. (Biochimica et Biophysica Acta, General Subjects, (19780000), vol. 544, n. 3, pages 656 - 666) describe el aislamiento y la identificación del ácido beta-citril-L-glutámico del cerebro de rata recién nacida.

D6 - WO2016164437 (PENN STATE RES FOUND [US]) describe un método de detección que comprende disponer un fluoróforo en un entorno biológico, en donde el fluoróforo comprende un anillo de dioxopiridina (DPR) o un ácido de tiazolopiridina (TPA).

D7 - SCHMELZ, S. et al. (Nature Chemical Biology, (20090000), vol. 5, no. 3, pages 174 - 182) describe que AcsD cataliza la desimetrización enantioselectiva del citrato en la biosíntesis de sideróforos.

D8 - CHENEVERT, R. et al. (Tetrahedron Asymmetry, (19981224), vol. 9, núm. 24, pages 4325 - 4329) describe la regio y la enantioselectividad de la hidrólisis catalizada por enzimas de derivados del ácido cítrico.

D9 - DRECHSEL, H. et al. (BioMetals, (19920000), vol. 5, núm. 3, pages 141 - 148) describe la caracterización estereoquímica de la rizoferrina y la identificación de sus productos de deshidratación.

Compendio de la invención

Problema a resolver por la invención

Un problema de la presente invención es proporcionar un método para aislar un compuesto de diastereómero cristalino a partir de una mezcla de diastereómeros de un derivado del ácido cítrico, que es uno entre los derivados del ácido cítrico representados por la fórmula química anterior, representado por la siguiente fórmula obtenida por un reacción del ácido cítrico con ácido L-aspártico, en una gran cantidad del mismo usando medios económicos, y un método para purificar un compuesto de diastereómero no cristalino a partir de la mezcla de diastereómeros, con una alta pureza en una gran cantidad usando medios económicos.

Medios para resolver el problema

Como resultado de investigaciones y estudios exhaustivos para resolver el problema anterior, los presentes inventores han descubierto que se puede obtener un cristal de un compuesto representado por la fórmula anterior combinando etapas específicas. Los presentes inventores también han descubierto que se puede depositar una sal del diastereómero no cristalino del compuesto combinando etapas específicas. Los presentes inventores también han determinado la estructura de un diastereómero cristalino de un compuesto representado por la fórmula anterior mediante análisis estructural utilizando difractometría de rayos X de monocristal.

La presente invención se ha completado basándose en estos hallazgos.

Es decir, la presente invención es la siguiente.

[1] [3] Un cristal de un compuesto representado por la siguiente fórmula (A), en lo sucesivo denominado compuesto A:

teniendo el cristal picos de ángulos de difracción 20 a 11,74 ± 0,20°, 29,25 ± 0,20°, 18,36 ± 0,20°, 21,75 ± 0,20° y 15,95 ± 0,20° en un patrón difractométrico de rayos X en polvo usando una radiación de CuKa como una fuente de rayos X.

[2] El cristal según [1], que tiene una estructura estérica de un isómero SS en el sistema de notación RS.

[4] Un método para preparar el cristal del compuesto A, que comprende las siguientes etapas de (a) a (f):

(a) hacer pasar una solución acuosa que contiene el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo y que tiene un pH de 5,0 a 8,5 a través de una columna rellena con una resina de intercambio aniónico; (b) hacer pasar un eluyente a través de la columna para obtener de ese modo una solución acuosa que no contiene ácido cítrico pero que contiene el compuesto A;

(c) eliminar el eluyente de la solución acuosa obtenida en la etapa (b);

(d) concentrar la solución acuosa de la que se ha eliminado el eluyente;

(e) añadir agua al residuo concentrado para preparar una solución acuosa, y concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y

(f) obtener el cristal del compuesto A.

[5] El método de preparación según [4], en el que el cristal del compuesto A tiene una estructura estérica de un isómero SS en el sistema de notación RS.

[6] El método de preparación según [4] o [5], en el que el eluyente es un eluyente seleccionado del grupo que consiste en una solución acuosa de acetato de amonio, una solución acuosa de cloruro de sodio y una solución acuosa de formiato de amonio.

[7] El método de preparación según uno cualquiera de [4] a [6], en el que un método para eliminar el eluyente es un método que utiliza una columna rellena con una resina de intercambio catiónico.

[8] El método de preparación según uno cualquiera de [4] a [7], en el que un método de concentración es la liofilización.

[9] Un método para preparar el cristal del compuesto A, que comprende las siguientes etapas de (a) a (f):

(a) añadir carbonato de calcio a una solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para depositar de este modo citrato de calcio;

(b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa de metanol al 60%;

(c) añadir ácido sulfúrico a la solución acuosa para hacer que el pH sea 2,0 o inferior para depositar de este modo el sulfato de calcio;

(d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa;

(e) concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y

(f) obtener el cristal del compuesto A.

[10] El método de preparación según [9], en el que el cristal del compuesto A tiene una estructura estérica de un isómero SS en el sistema de notación RS.

[11] El método de preparación según [9] o [10], en el que la concentración es una concentración a vacío.

[12] El método de preparación según uno cualquiera de [9] a [11], que comprende además, después de obtener el cristal del compuesto A, las siguientes etapas de (g) a (j):

(g) añadir un disolvente orgánico a la solución acuosa para depositar de este modo el citrato de calcio;

(h) separar el citrato de calcio del líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico;

(i) deshidratar el líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y

(j) obtener el cristal del compuesto A.

[13] El método de preparación según [12], en el que el disolvente orgánico es acetona.

[14] Un método para preparar una sal del diastereómero no cristalino del compuesto A, que comprende las siguientes etapas de (a) a (l):

(b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa;

(d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa;

(e) concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A;

(f) separar los cristales del compuesto A de la solución acuosa;

(g) añadir un disolvente orgánico a la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A y citrato de calcio;

(h) separar los cristales del compuesto A y el citrato de calcio del líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico;

(i) deshidratar el líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico para depositar de este modo un cristal del compuesto A;

(j) separar el cristal del compuesto A de la solución acuosa

(k) añadir una sal metálica o una sal de aminoácido y un alcohol a la solución acuosa para depositar de este modo una sal del diastereómero no cristalino del compuesto A; y

(l) obtener la sal del diastereómero no cristalino del compuesto A.

[15] El método de preparación según [14], en el que la sal del diastereómero no cristalino del compuesto A tiene una estructura estérica de un isómero SR en el sistema de notación RS.

[16] El método de preparación según [14], en donde el disolvente orgánico es acetona.

[17] El método de preparación según uno cualquiera de [14] a [16], en donde la sal metálica es una sal metálica seleccionada del grupo que consiste en una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y una sal de calcio.

[18] El método de preparación según uno cualquiera de [14] a [16], en donde la sal de aminoácido es una sal de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en una sal de arginina, una sal de citrulina, una sal de ornitina y una sal de histidina.

[19] El método de preparación según uno cualquiera de [14] a [18], en donde el alcohol es etanol o metanol.

[20] Un diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo.

[21] El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según [20], que tiene una estructura estérica de un isómero SR en el sistema de notación RS.

[22] El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según [20] o [21], en donde la sal es una sal metálica o una sal de aminoácido del diastereómero no cristalino del compuesto A.

[23] El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según [22], en donde la sal metálica es una sal metálica seleccionada del grupo que consiste en una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y una sal de calcio.

[24] El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según [22], en donde la sal de aminoácido es una sal de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en una sal de arginina, una sal de citrulina, una sal de ornitina y una sal de histidina.

Efecto de la invención

Las adquisiciones del cristal del compuesto A y del diastereómero no cristalino altamente purificado del compuesto A sirven para dilucidar la actividad fisiológica de cada sustancia y el mecanismo de acción de las mismas sobre las enfermedades. Además, el cristal del compuesto A y el diastereómero no cristalino altamente purificado del compuesto A, dado que se manipulan más fácilmente que una mezcla de diastereómeros que los contiene, son extraordinariamente útiles en la fabricación o similares de medicamentos que utilizan el compuesto A como ingrediente activo, o productos alimenticios y bebidas que utilizan el compuesto A. Además, según el método descrito en la presente solicitud, el cristal del compuesto A y el diastereómero no cristalino se pueden separar y obtener de forma más económica en cantidades mayores y en un tiempo más corto que en los métodos de purificación que utilizan columnas de alta separación utilizadas como medios de purificación comunes. En los métodos de purificación que utilizan columnas y similares que utilizan un vehículo de alta separación utilizado como métodos habituales de separación de diastereómeros, la cantidad que se puede purificar en un proceso de purificación de una sola vez depende del tamaño de la columna que se va a utilizar, y un método de purificación de grandes cantidades que utiliza grandes columnas que requieren un costoso vehículo de alta separación no es fácil en términos de costes y eficiencia. Según el método descrito en la presente solicitud, se pueden separar fácilmente 20 g o más de un diastereómero de alta pureza a partir de 500 mL de un líquido de reacción mediante un proceso de purificación de una sola vez, y la escala de purificación se puede ampliar fácilmente.

Breve descripción de los dibujos

[Figura 1] La Figura 1 muestra un cromatograma de HPLC (dilución de 160 veces) de un líquido de reacción de síntesis del compuesto A.

[Figura 2] La Figura 2 muestra un cromatograma de HPLC de un cristal de un compuesto A cristalizado en una solución acuosa.

[Figura 3] La Figura 3 muestra un cromatograma de HPLC de una solución madre después de que se haya recogido fraccionadamente un cristal del compuesto A.

[Figura 4] La Figura 4 muestra un cromatograma de HPLC (después de la recristalización) del compuesto A cristalizado en acetona.

[Figura 5] La Figura 5 muestra un cromatograma de HPLC de un precipitado depositado a un pH de 3,6 (sal de Ca del compuesto A no cristalino (1)).

[Figura 6] La Figura 6 muestra un cromatograma de HPLC de un precipitado depositado a un pH de 6,0 (sal de Ca del compuesto A no cristalino (2)). En el pico 2 en la Figura 6, un pico de un compuesto de amida obtenido por hidrólisis del compuesto A está superpuesto en una parte del hombro izquierdo de un pico del compuesto A (el hombro izquierdo del pico parece abultado). Además, el pico 3 es un pico que se supone es ácido cítrico.

[Figura 7] La Figura 7 muestra un cromatograma de HPLC de una solución de síntesis de un compuesto A apenas purificado.

[Figura 8] La Figura 8 muestra un cromatograma de HPLC de un cristal del compuesto A cristalizado en una solución acuosa (resultado del análisis para la misma muestra que en la Figura 2).

[Figura 9] La Figura 9 muestra un cromatograma de HPLC del compuesto A cristalizado en acetona (resultado del análisis para la misma muestra que en la Figura 4).

[Figura 10] La Figura 10 muestra un cromatograma de HPLC de la sal de Ca del compuesto A no cristalino depositado a un pH de 3,6 (resultado del análisis para la misma muestra que en la Figura 5).

[Figura 11] La Figura 11 es un diagrama de flujo de un método para preparar un cristal del compuesto A mediante cromatografía de intercambio iónico en el Ejemplo 7.

[Figura 12] La Figura 12 muestra un cromatograma de HPLC de un cristal del compuesto A.

[Figura 13] La Figura 13 muestra una espectro de 1H-NMR de un cristal del compuesto A.

[Figura 14] La Figura 14 muestra un cromatograma de HPLC de un líquido madre después de que se haya recogido fraccionadamente un cristal del compuesto A.

[Figura 15] La Figura 15 muestra una espectro de 1H-NMR de un líquido madre después de que se haya recogido fraccionadamente un cristal del compuesto A.

[Figura 16] La Figura 16 muestra una comparación mediante trazado múltiple entre patrones de difracción de rayos X en polvo de las respectivas sustancias de una muestra de prueba 1 (un cristal obtenido de una solución acuosa mediante purificación en columna), una muestra de prueba 2 (un cristal obtenido de una solución de acetona) y una muestra de prueba 3 (una sal de Ca de un diastereómero no cristalino) en orden de arriba hacia abajo.

Modo de llevar a cabo la invención

También se describe un cristal del compuesto A que tiene picos de ángulos de difracción (20) a 11,74 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 29,25 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 18,36 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 21,75 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, y 15,95 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10° en un patrón de difracción de rayos X en polvo usando una radiación CuKa como fuente de rayos X.

También se describe un cristal del compuesto A que tiene picos de ángulos de difracción (20) a 24,09 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 19,32 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 19,04 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 26,95 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10° y 16,19 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10° en un patrón de difracción de rayos X en polvo usando una radiación CuKa como fuente de rayos X, además de lo anterior.

También se describe un cristal del compuesto A que tiene además, además de lo anterior, picos de ángulos de difracción (20) a 26,42 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 16,68 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 17,85 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10°, 21,19 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10° y 18,14 ± 0,20°, preferiblemente ± 0,10° en un patrón de difracción de rayos X en polvo usando una radiación CuKa como fuente de rayos X.

Los patrones de difracción de rayos X en polvo que utilizan CuKa como fuente de rayos X se pueden adquirir mediante un método descrito en el Ejemplo 8 en la presente descripción.

El compuesto A tiene diastereómeros que tienen un carbono asimétrico como el carbono de la posición 2 de la cadena de propano procedente del ácido cítrico. En este caso, aunque el compuesto A también tiene un carbono asimétrico en una estructura procedente del ácido aspártico, la configuración del carbono asimétrico se deriva del ácido aspártico o de la asparagina que se va a utilizar como materia prima. El cristal del compuesto A se deriva de un isómero L del ácido aspártico.

Aunque el cristal del compuesto A es un cristal de uno cualquiera de los diastereómeros del compuesto A, el espectro de NMR no puede decir a cuál de los diastereómeros corresponde cada uno.

Un método para determinar qué diastereómero es un cristal del compuesto A incluye un análisis estructural utilizando difracción de rayos X de monocristal. Específicamente, el método incluye un método descrito en el Ejemplo 9 como un ejemplo. Como resultado del análisis en el Ejemplo 9, se aclaró que un compuesto A cristalino (un cristal del compuesto A) era enantiómeros de un isómero s S y un isómero RR. Después, dado que el ácido aspártico utilizado en la síntesis era completamente ácido L-aspártico (isómero S), se encontró que la configuración del compuesto A cristalino era un isómero SS en el sistema de notación RS.

Como resultado del análisis, se aclaró que el compuesto A cristalino era enantiómeros de un isómero SS y un isómero RR. Después, dado que el ácido aspártico utilizado en la síntesis era completamente ácido L-aspártico (isómero S), se encontró que el compuesto cristalino A era un isómero SS. En respuesta a esto, también se encontró que el compuesto A que tiene la propiedad de no cristalizarse es un isómero SR.

El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo puede ser un diastereómero que no esté cristalizado mediante un método de cristalización del compuesto A descrito a continuación (en lo sucesivo, también denominado diastereómero no cristalino) entre los diastereómeros del compuesto A, o una sal de los mismos.

El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo puede confirmarse mediante análisis cualitativo usando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) descrita en el Ejemplo 5, y puede distinguirse del diastereómero cristalino.

Como se describió anteriormente, dado que la configuración del cristal del compuesto A es un isómero SS en el sistema de notación RS, también se encontró que la configuración del amorfo (el diastereómero no cristalino) del compuesto A es un isómero SR en el sistema de notación RS como se muestra a continuación.

El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo, incluye aquellos que tienen una proporción de mezcla del diastereómero cristalino del 5% o menos, preferiblemente del 4% o menos, más preferiblemente del 3% o menos, aún más preferiblemente del 2% o menos y lo más preferiblemente del 1% o menos.

La sal del diastereómero no cristalino del compuesto A incluye una sal metálica y una sal de aminoácido.

La sal metálica incluye una sal metálica seleccionada del grupo que consiste en una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y una sal de calcio, y lo más preferiblemente incluye una sal de calcio.

La sal de aminoácido incluye una sal de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en una sal de arginina, una sal de citrulina, una sal de ornitina y una sal de histidina. La sal de aminoácido es preferiblemente un isómero L de la sal de aminoácido.

El cristal del compuesto A se puede obtener mediante cristalización usando cromatografía en columna de intercambio iónico o usando un compuesto tal como el carbonato de calcio.

(Método que utiliza cromatografía en columna de intercambio iónico)

El cristal del compuesto A se prepara mediante las siguientes etapas de (a) a (f):

(a) hacer pasar una solución acuosa que contiene el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo y que tiene un pH de 5,0 a 8,5 a través de una columna rellena con una resina de intercambio aniónico; (b) hacer pasar un eluyente a través de la columna para obtener de este modo una solución acuosa que no contiene ácido cítrico pero que contiene el compuesto A;

(c) eliminar el eluyente de la solución acuosa obtenida en la etapa (b);

(d) concentrar la solución acuosa de la que se ha eliminado el eluyente;

(e) añadir agua al residuo concentrado para preparar una solución acuosa y concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y

(f) obtener el cristal del compuesto A.

No están especialmente limitadas la sal del compuesto A y la sal del ácido cítrico en la solución acuosa que contiene el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo y que tiene un pH de 5,0 a 8,5. Ejemplos de la sal del compuesto A y la sal de ácido cítrico incluyen una sal de aminoácido y una sal metálica (una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio, una sal de calcio). Los más preferibles como compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo son el compuesto A y ácido cítrico.

La solución acuosa que contiene el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo y que tiene un pH de 5,0 a 8,5, para su uso en la etapa (a) anterior se prepara, por ejemplo, como sigue. El monohidrato del ácido cítrico y el ácido L-aspártico se hacen reaccionar bajo calentamiento para formar de este modo un compuesto A. El compuesto A puede ser un compuesto A preparado mediante un método distinto del método de síntesis, tal como un método de reacción enzimática o un método de fermentación. Una vez completada la reacción, se deja enfriar el líquido de reacción y se añade metanol en condiciones ácidas. La concentración de la solución de metanol puede ser cualquier concentración siempre que sea una concentración a la cual se deposite el ácido L-aspártico, pero sea, por ejemplo, 60% v/v. Dado que a partir del ácido cítrico sin reaccionar y del ácido L-aspártico contenidos en el líquido de reacción, el ácido L-aspártico se deposita y precipita, el depósito y el precipitado se separan sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración. La solución acuosa después de la separación sólido-líquido contiene el compuesto A y el ácido cítrico. En el caso en que la solución acuosa después de la separación sólido-líquido sea ácida, es preferible añadir una solución acuosa alcalina, por ejemplo, amoníaco acuoso, para ajustar el pH. El pH de la solución acuosa es de 5,0 a 8,5, preferiblemente de 6,0 a 8,0 y lo más preferiblemente de 6,5 a 7,2. La solución acuosa se pasa a través de una columna rellena con una resina de intercambio aniónico.

La resina de intercambio aniónico puede ser cualquier resina de intercambio aniónico capaz de separar el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo, pero ejemplos de la misma incluyen un TOYOPEARL SuperQ-650M (150 mm x 500 mm, fabricado por Tosoh Corp.).

Un eluyente a usar en la etapa (b) anterior no está especialmente limitado, pero se selecciona, por ejemplo, del grupo que consiste en una solución acuosa de acetato de amonio, una solución acuosa de cloruro sódico y una solución acuosa de formiato de amonio.

La concentración del eluyente es de 50 mM a 5 M, preferiblemente de 100 mM a 3 M, más preferiblemente de 150 mM a 2 M y lo más preferiblemente de 200 mM a 1,5 M. La elución se puede llevar a cabo aumentando gradualmente la concentración del eluyente.

El caudal de la etapa de elución está en el intervalo de 10 a 500 mL/min, preferiblemente de 50 a 300 mL/min y lo más preferiblemente de 100 a 200 mL/min.

Es deseable que "que no contiene ácido cítrico" en la etapa (b) anterior es que no contiene ácido cítrico, pero puede contener una pequeña cantidad de ácido cítrico hasta el punto de no convertirse en un obstáculo en la cristalización del compuesto A.

En la etapa (c) anterior, los ejemplos de un método para eliminar el eluyente incluyen un método que utiliza una columna rellena con una resina de intercambio catiónico y electrodiálisis, y preferiblemente incluye el método que utiliza una columna rellena con una resina de intercambio catiónico. En este caso, "eliminar el eluyente" significa eliminar componentes (solutos) en el eluyente.

La resina de intercambio catiónico puede ser cualquier resina de intercambio catiónico siempre que sea capaz de separar el compuesto A y el eluyente, pero incluye una DOWEX 50Wx8 (fabricada por Wako Chemical Corp.). Mediante la alimentación de una solución acuosa, por ejemplo, agua purificada, a una columna rellena con la resina de intercambio catiónico, se obtiene una solución acuosa que contiene el compuesto A pero no contiene eluyente. Es deseable que "que no contiene eluyente" es que no contiene ningún eluyente, pero puede contenerse una pequeña cantidad del eluyente hasta el punto de no convertirse en un obstáculo en la cristalización del compuesto A.

En las etapas anteriores (d) y (e), los métodos de concentración de las soluciones acuosas incluyen concentración por calentamiento, concentración al vacío y liofilización, y lo más preferiblemente incluyen liofilización.

En las etapas anteriores (d) y (e), concentrando las soluciones acuosas, se puede obtener un no-cristal y/o un cristal del compuesto A, o una mezcla de los mismos, o un residuo concentrado que los contiene. En el caso en que el compuesto A sea un no-cristal, en el caso que sea una mezcla que contenga los no cristales, o en el caso que sea un residuo concentrado que los contenga, es preferible que se añada nuevamente agua para hacer una mezcla acuosa y se lleve a cabo una etapa de concentración. Realizando esta etapa se puede depositar un cristal del compuesto A.

En la etapa anterior (f), un método para obtener el cristal incluye filtración a presión, filtración por succión y separación centrífuga. Además, para reducir la adhesión de un líquido madre y mejorar la calidad del cristal, el cristal se puede lavar adecuadamente. El cristal lavado se seca mediante secado al vacío, secado en lecho fluidizado, secado con aire forzado o similares para obtener de este modo el producto final.

En el método anterior, la cristalización del compuesto A también se puede lograr llevando a cabo la etapa (d) y la etapa (e) repetidamente varias veces.

(Método por cristalización utilizando un compuesto tal como el carbonato de calcio)

Se prepara un cristal del compuesto A en una solución acuosa mediante las siguientes etapas de (a) a (f): (a) añadir carbonato de calcio a una solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para depositar de este modo el citrato de calcio;

(b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa;

(d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa;

(f) obtener el cristal del compuesto A.

La solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior, para su uso en la etapa (a) anterior se prepara, por ejemplo, como sigue. El monohidrato del ácido cítrico y el ácido L-aspártico se hacen reaccionar bajo calentamiento para formar de este modo un compuesto A. El compuesto A puede ser un compuesto A preparado mediante un método distinto del método de síntesis, tal como un método de reacción enzimática o un método de fermentación. Una vez completada la reacción, se deja enfriar el líquido de reacción y se añade metanol en condiciones ácidas. La concentración de la solución de metanol puede ser cualquier concentración siempre que sea una concentración en la cual se deposite el ácido L-aspártico, pero sea, por ejemplo, 60 % v/v. Dado que a partir del ácido cítrico sin reaccionar y del ácido L-aspártico contenidos en el líquido de reacción, el ácido L-aspártico se deposita y precipita, el depósito y el precipitado se separan sólido-líquido mediante separación centrífuga. En este caso, en esta etapa, es importante la adición de metanol. No se permite etanol. Para las etapas posteriores, se utiliza la solución acuosa después de la separación sólido-líquido que contiene el compuesto A y el ácido cítrico.

El punto difícil cuando se obtiene el cristal del compuesto A mediante el presente método es separar el ácido cítrico de la solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico en condiciones ácidas. Dado que el compuesto A es inestable en una solución acuosa de neutra a alcalina (pH de 5 o superior), para suprimir la descomposición del compuesto A, es importante mantener una condición ácida. Por lo tanto, la solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para su uso en la etapa (a) puede ser una solución acuosa cuyo pH es preferiblemente de 0,6 a 1,8 y lo más preferiblemente de 1,0 a 1,6. Los presentes inventores han pensado en separar el ácido cítrico convirtiéndolo en una forma de sal y, como resultado de repetidas pruebas y errores usando sales que consisten en varios iones metálicos, han descubierto que el uso de ion calcio (Ca<2+>) puede separar bien el ácido cítrico. Los presentes inventores también han descubierto que incluso si la sal es una sal de calcio, en el caso de usar cloruro de calcio (CaCb), el ácido cítrico no se puede separar bien en condiciones ácidas y, en el caso de utilizar carbonato de calcio (CaCO<3>), el ácido cítrico se puede separar con éxito incluso en condiciones ácidas. Posiblemente esto se deba a que dado que los iones carbonato (CO<32'>) del carbonato de calcio se convierten en CO<2>y los aniones a medida que desaparecen los contraiones de los iones de calcio, resulta fácil unir los iones cítricos y los iones de calcio. Por lo tanto, el uso de carbonato cálcico en la etapa (a) es una condición esencial.

La separación del citrato de calcio en la etapa (b) anterior y la separación del sulfato de calcio en la etapa (d) anterior se pueden llevar a cabo, por ejemplo, mediante separación centrífuga o filtración.

La razón para usar ácido sulfúrico en la etapa (c) anterior incluye que debido a la fragilidad del compuesto A frente a los álcalis y la baja solubilidad del sulfato de calcio, la separación de los iones de calcio es fácil (es decir, la desalinización es fácil). Al hacer que el pH sea 2,0 o inferior, los iones de calcio presentes como una sal de calcio del compuesto A se disocian del compuesto A y se convierten en sulfato de calcio. El pH en este momento es preferiblemente de 1,0 a 2,0 y más preferiblemente de 1,3 a 1,8. En el caso de utilizar una sal de sodio (sulfato de sodio) o una sal de potasio (sulfato de potasio), la desalación resulta difícil.

Los ejemplos específicos de un método de concentración de la solución acuosa en la etapa (e) anterior incluyen concentración por calentamiento y concentración al vacío, pero para evitar el deterioro o la descomposición de los componentes mixtos por el calor, es preferible el uso de la concentración al vacío.

En la solución acuosa (líquido madre cristalino) después de depositar el cristal del compuesto A en la etapa (e) anterior, todavía está contenido un diastereómero del compuesto A cristalino. Por lo tanto, el cristal del compuesto A se puede obtener además llevando a cabo las siguientes etapas de (g) a (j):

(j) obtener el cristal del compuesto A.

El disolvente orgánico que se va a añadir en la etapa (g) anterior es preferiblemente un disolvente orgánico que es miscible con agua y puede disolver una determinada cantidad del compuesto A, y ejemplos específicos del mismo incluyen acetona.

La separación del citrato de calcio en la etapa (h) anterior se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante separación centrífuga o filtración.

Un método para depositar el cristal del compuesto A en la etapa (i) anterior puede ser cualquier método para depositar el compuesto, pero preferiblemente incluye un método en el que la solución acuosa se concentra mediante destilación del disolvente y se añade de nuevo un disolvente.

En la etapa anterior (j), un método para obtener el cristal incluye filtración a presión, filtración por succión y separación centrífuga. Además, para reducir la adhesión de un líquido madre y mejorar la calidad del cristal, el cristal se puede lavar adecuadamente. El cristal lavado se seca mediante secado al vacío, secado en lecho fluidizado, secado con aire forzado o similares para obtener de este modo el producto final.

La sal del diastereómero no cristalino del compuesto A se puede obtener mediante un método que comprende las siguientes etapas de (a) a (l):

(a) añadir carbonato de calcio a una solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para depositar de este modo el citrato de calcio;

(b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa;

(d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa;

(f) separar el cristal del compuesto A;

(g) añadir un disolvente orgánico a la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A y el citrato de calcio;

(h) separar el cristal del compuesto A y el citrato de calcio del líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico;

(j) separar los cristales del compuesto A de la solución acuosa;

(l) obtener la sal del diastereómero no cristalino del compuesto A.

La solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior, para su uso en la etapa (a) anterior se prepara, por ejemplo, como sigue. El monohidrato del ácido cítrico y el ácido L-aspártico se hacen reaccionar bajo calentamiento para formar de este modo un compuesto A. El compuesto A puede ser un compuesto A preparado mediante un método distinto del método de síntesis, tal como un método de reacción enzimática o un método de fermentación. Una vez completada la reacción, se deja enfriar el líquido de reacción y se añade metanol en condiciones ácidas. La concentración de la solución de metanol puede ser cualquier concentración siempre que sea una concentración en la cual se deposite el ácido L-aspártico, pero sea, por ejemplo, 60 % v/v. Dado que a partir del ácido cítrico sin reaccionar y del ácido L-aspártico contenidos en el líquido de reacción, el ácido L-aspártico se deposita y precipita, el depósito y el precipitado se separan sólido-líquido mediante separación centrífuga. En este caso, en esta etapa, es importante la adición de metanol. No se permite el etanol. Para las etapas posteriores, se utiliza la solución acuosa después de la separación sólido-líquido que contiene el compuesto A y el ácido cítrico. La solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior puede ser una solución acuosa cuyo pH es preferiblemente de 0,6 a 1,8 y lo más preferiblemente de 1,0 a 1,6.

El punto difícil cuando se obtiene el cristal del compuesto A mediante el presente método es separar el ácido cítrico de la solución acuosa que contiene el compuesto A y el ácido cítrico. Los presentes inventores han pensado en separar el ácido cítrico convirtiéndolo en una forma de sal y, como resultado de repetidas pruebas y errores usando sales que consisten en varios iones metálicos, han descubierto que el uso del ion calcio (Ca<2+>) puede separar bien el ácido cítrico. Los presentes inventores también han descubierto que incluso si la sal es una sal de calcio, en el caso de usar cloruro de calcio (CaCb), el ácido cítrico no se puede separar bien en condiciones ácidas y, en el caso de utilizar carbonato de calcio (CaCO<3>), el ácido cítrico se puede separar con éxito incluso en condiciones ácidas. Posiblemente esto se deba a que dado que los iones carbonato (CO<32->) del carbonato de calcio se convierten en CO<2>y los aniones a medida que desaparecen los contraiones de los iones de calcio, resulta fácil unir los iones cítricos y los iones de calcio. Por lo tanto, el uso de carbonato calcio en la etapa (a) es una condición esencial.

La razón para usar ácido sulfúrico en la etapa (c) anterior incluye que debido a la fragilidad del compuesto A frente a los álcalis y la baja solubilidad del sulfato de calcio, la separación de los iones de calcio es fácil (es decir, la desalación es fácil). Al hacer que el pH sea 2,0 o inferior, los iones de calcio presentes como una sal de calcio del compuesto A se disocian a partir del compuesto A y se convierten en sulfato de calcio. El pH en este momento es preferiblemente de 1,0 a 2,0 y más preferiblemente de 1,3 a 1,8. En el caso de utilizar una sal de sodio (sulfato de sodio) o una sal de potasio (sulfato de potasio), la desalación resulta difícil.

Los ejemplos específicos de un método de concentración de la solución acuosa en la etapa (e) anterior incluyen la concentración por calentamiento y la concentración al vacío, pero para evitar el deterioro o la descomposición de los componentes mixtos por el calor, es preferible el uso de la concentración al vacío.

En la etapa anterior (f), un método para separar el cristal incluye filtración a presión, filtración por succión y separación centrífuga.

La etapa (g) y la etapa (h) anteriores son etapas esenciales para una alta purificación de la sal del diastereómero del compuesto A. La razón de esto es que en la solución acuosa después de que se haya separado el cristal del compuesto A en la etapa (f), permanece el compuesto A que aún debe cristalizar.

En la etapa anterior (j), un método para separar el cristal incluye separación centrífuga, filtración a presión y filtración por succión. En la etapa de la etapa (j) anterior, el compuesto cristalino A prácticamente se separa.

La sal metálica que se va a añadir en la etapa (k) anterior incluye una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y una sal de calcio, y lo más preferiblemente, se puede utilizar una sal de calcio (como por ejemplo, cloruro de calcio o acetato de calcio). Entonces el pH de la solución acuosa es preferiblemente ácido y lo más preferiblemente 3,6 o inferior.

La sal de aminoácido que se va a añadir en la etapa (k) anterior incluye un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en una sal de arginina, una sal de citrulina, una sal de ornitina y una sal de histidina, y ejemplos de las mismas incluyen un clorhidrato de L-arginina, un clorhidrato de L-citrulina, un clorhidrato de L-ornitina y un clorhidrato de L-histidina.

El alcohol que se va a añadir en la etapa (k) anterior incluye metanol, etanol, n-propanol e isopropanol, y se puede utilizar, por ejemplo, etanol o metanol. La eficacia para depositar la sal del diastereómero del compuesto A es mejor en el caso del etanol que en el caso del metanol.

El compuesto A se puede sintetizar utilizando, como sustancias de partida, ácido cítrico y ácido L-aspártico y/o L-asparagina (lo más preferiblemente ácido L-aspártico). En este caso, el compuesto A sintetizado consiste en una mezcla de dos diastereómeros. Según el siguiente procedimiento, la cristalización del compuesto A y la deposición de la sal del diastereómero no cristalino del compuesto A se pueden llevar a cabo de forma continua. En este caso, en las siguientes etapas, se pueden usar las condiciones de las etapas correspondientes descritas anteriormente.

(1) El monohidrato del ácido cítrico y el ácido L-aspártico y/o L-asparagina (lo más preferiblemente ácido L-aspártico) se hacen reaccionar bajo calentamiento para formar de este modo el compuesto A. La temperatura de calentamiento y el tiempo de reacción se pueden determinar teniendo en cuenta diversas condiciones (por ejemplo, ejemplo, 121°C, 8 horas).

(2) Una vez completada la reacción, se deja enfriar el líquido de reacción y se añade metanol (por ejemplo, solución de metanol al 60%) en condiciones ácidas. Dado que a partir del ácido cítrico sin reaccionar y del ácido L-aspártico contenidos en el líquido de reacción, el ácido L-aspártico se deposita y precipita, el depósito y la precipitación se separan sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración. El ácido L-aspártico separado se puede reutilizar. En este caso, en esta etapa, aunque incluso si se añade etanol o isopropanol, distinto del metanol, se puede separar el ácido L-aspártico, el metanol es el más adecuado desde el punto de vista de la solubilidad del carbonato de calcio que se añadirá más tarde.

(3) Se añade agua purificada a la solución de metanol que contiene el compuesto A obtenido y el ácido cítrico para dilución (por ejemplo, doble dilución), y después se añade carbonato de calcio en polvo (por ejemplo, 228 mg por 1 mL del líquido de reacción). De este modo, el líquido de reacción se espuma y precipita el citrato de calcio. El citrato de calcio precipitado se separa sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración. El líquido de reacción del que se ha separado el citrato de calcio es una solución en metanol del compuesto A que contiene iones de calcio.

(4) El líquido de reacción obtenido en (3) se concentra para destilar el metanol y se añade agua purificada para hacer que el volumen del líquido de reacción sea igual al del líquido de reacción inicial. Por ejemplo, se añade al mismo ácido sulfúrico 1 M para hacer que el pH sea 2,0 o inferior y 1,3 o superior, de modo que los iones de calcio se conviertan en sulfato de calcio, que después precipite. El sulfato de calcio precipitado se separa sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración. El líquido de reacción después de la separación sólido-líquido es una solución ácida de ácido sulfúrico que contiene el compuesto A.

(5) Por concentración de la solución ácida de ácido sulfúrico, por ejemplo, a aproximadamente 2/5, dado que un cristal del compuesto A (denominado "compuesto A cristalizado") está cristalizado, el cristal se separa y el resto se trata como un líquido madre cristalino.

(6) Por concentración del líquido madre cristalino acido de ácido sulfúrico y la adición de acetona para preparar una solución de acetona (ácida) (por ejemplo, solución de acetona al 80%) del compuesto A, se deposita un precipitado viscoso y después se cristaliza (citrato de calcio). El citrato de calcio se separa sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración.

(7) El líquido madre cristalino después de la separación sólido-líquido se concentra y se deshidrata (deshidratación en acetona). Por adición de acetona al líquido madre cristalino después de la deshidratación de modo que la acetona en el disolvente llegue a ser, por ejemplo, 90% o más, el compuesto A se cristaliza y precipita. El compuesto A cristalizado (denominado "compuesto A cristalizado") se separa sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración.

(8) Se añade agua purificada a la solución de acetona del compuesto A y se destila la acetona. Se añaden cloruro de calcio e hidróxido de calcio a la solución acuosa del compuesto A después de destilar la acetona de modo que el pH llegue a ser, por ejemplo, 3,6; y después por adición de etanol (por ejemplo, solución acuosa de etanol al 70%), se precipita una sal de calcio de un diastereómero no cristalino del compuesto A. El precipitado (denominado compuesto A no cristalino (sal de Ca)) se separa sólido-líquido mediante separación centrífuga o filtración.

El compuesto A cristalizado (cristal en la solución acuosa) obtenido en la etapa (5) anterior y el compuesto A cristalizado (cristal en acetona) obtenido en la etapa (7) anterior se almacenan sometiéndolos a la siguiente operación.

Redisolución en agua ^ recristalización ^ evaluación de pureza mediante análisis cualitativo utilizando HPLC ^ secado ^ almacenamiento

El compuesto A no cristalino (sal de Ca) obtenido en la etapa (8) anterior se almacena sometiéndolo a la siguiente operación.

Redisolución en agua ^ concentración (separación del citrato de calcio precipitado) ^ adición de etanol (por ejemplo, solución acuosa de etanol al 90 % v/v) a la solución acuosa del compuesto A ^ reprecipitación ^ evaluación de la pureza mediante análisis cualitativo utilizando HPLC ^ secado ^ almacenamiento

Con respecto al compuesto A no cristalino (sal de Ca) obtenido, en el uso del mismo, haciéndolo que sea ácido con ácido sulfúrico, se puede separar el calcio del mismo y se puede evaluar la concentración del compuesto A mediante análisis cualitativo y cuantitativo usando HPLC.

Ejemplos

En lo sucesivo, la presente invención se describirá específicamente mediante ejemplos, pero la presente invención no se limita de ningún modo a los mismos.

[Ejemplo 1]

(Síntesis del compuesto A)

Se añadió agua a 240 g (1,142 mol) de ácido cítrico (monohidrato, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) para preparar 400 mL de una solución espesa de ácido cítrico; a la solución se le añadieron 72 g (0,541 moles) de ácido L-aspártico (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.); y la solución resultante se diluyó hasta un volumen de solución de 600 mL (concentración final de ácido cítrico: 1,903 mol/L, concentración final de ácido L-aspártico: 0,902 mol/L). El líquido de reacción se puso en un recipiente de vidrio resistente a la presión y se selló el mismo, y se calentó en un baño de agua a 90°C para disolver de este modo la mayor cantidad posible de ácido L-aspártico añadido. Después, el líquido de reacción en el recipiente resistente a la presión se puso en un autoclave calentado a aproximadamente 80°C y se trató térmicamente a 121°C durante 120 min. La temperatura en el autoclave se redujo a aproximadamente 80°C, y el líquido de reacción en el recipiente resistente a la presión se sacó y se agitó para disolver de este modo la mayor cantidad posible de ácido L-aspártico que quedaba sin disolver. El líquido de reacción se trató térmicamente adicionalmente en el autoclave a 121°C durante 120 min. Se repitieron la agitación y el tratamiento térmico para llevar a cabo el tratamiento térmico a 121°C durante un total de 420 minutos mientras se disolvía el ácido L-aspártico. (El ácido L-aspártico se disolvió completamente en el momento en que terminó el calentamiento durante un total de 360 minutos). Se confirmó mediante análisis cualitativo usando la cromatografía de HPLC descrita en el siguiente Ejemplo 2 que el compuesto A se sintetizó en el líquido de reacción (Figura 1). La Figura 1 muestra un cromatograma de HPLC (dilución de 160 veces) del líquido de reacción de síntesis del compuesto A. Como queda claro en la Figura 1, con respecto al líquido de reacción de síntesis después de la reacción térmica, surgió un pico (RT 26,0) del compuesto A y se redujo la altura de un pico (RT 27,7) del ácido cítrico. En este caso, mediante análisis posteriores se confirmó que el pico a RT 26,0 era el compuesto A. En este caso, el ácido aspártico como materia prima de síntesis, dado que casi no presenta absorción de luz a 210 nm, no fue detectado en este caso por un sistema de detección.

[Ejemplo 2]

(Condición de separación en el análisis cualitativo utilizando HPLC del compuesto A)

Con respecto al compuesto A presente en el líquido de reacción de síntesis y una muestra purificada del mismo, la presencia del compuesto A se confirmó mediante análisis cualitativo utilizando la siguiente cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Se diluyeron soluciones que tenían diversas concentraciones del compuesto A con una solución acuosa de ácido perclórico 10 mM (fase móvil para análisis cualitativo usando HPLC) para tener una concentración adecuada; las sustancias no disueltas se separaron mediante un filtro de membrana; y la solución diluida se analizó mediante cromatografía líquida de alta resolución. La condición de separación en el análisis cualitativo usando HPLC fue la siguiente. El componente del título que se supone que es el compuesto A en el cromatograma tenía un pico en un tiempo de retención (RT) de 25,4 a 26,0 min.

[Condición de separación en análisis cualitativo utilizando HPLC]

Aparato: Shimadzu Corp., cromatógrafo líquido de alta resolución Prominence

Columnas: dos columnas acopladas, Shodex RSpak KC-811 (300 mm * 8,0 mm)

Fase móvil: solución acuosa de ácido perclórico 10 mM

Caudal: 0,5 mL/min

Temperatura de la columna: 30°C

Volumen de inyección: 20 pL

Longitud de onda de detección: 210 nm

[Ejemplo 3]

(Purificación del compuesto A y cristalización del compuesto A)

Cuando se añadieron 900 mL de metanol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) a 600 mL del líquido de reacción después de la reacción térmica para preparar una solución de metanol al 60%, el ácido L-aspártico sin reaccionar en el líquido de reacción se depositó y precipitó gradualmente como un precipitado blanco. Aquí, en el caso de usar una solución de etanol en esta etapa, incluso si se adoptaron etapas similares en etapas posteriores, el compuesto A no cristalizó. La solución se dejó reposar durante todo un día y una noche a temperatura ambiente para precipitar la mayor cantidad posible de ácido L-aspártico y después se filtró con un papel de filtro (Whatman plc, No. 114) para separar de este modo el precipitado y el líquido de reacción (metanol al 60%) que contiene el compuesto A. El ácido L-aspártico obtenido como precipitado, vaporizando y separando el metanol y secando el precipitado, podría reutilizarse como materia prima de síntesis para la síntesis del compuesto A. El líquido de reacción (metanol al 60%) que contenía el compuesto A obtenido como un filtrado se diluyó dos veces con agua purificada (agua purificada de la Farmacopea Japonesa) para preparar una solución de metanol al 30 %. Se añadieron gradualmente a la solución con agitación 136 g (228 mg por 1 mL del líquido de reacción inicial) de un polvo de carbonato de calcio (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), después de lo cual se depositó un precipitado blanco de citrato de calcio que tenía baja solubilidad. Aunque al principio el carbonato de calcio se disolvió acompañado de formación de espuma (gas de dióxido de carbono), más tarde, gradualmente, el citrato de calcio que tenía baja solubilidad se depositó de la solución. Cuando se dejó reposar la solución durante todo el día y la noche, el ácido cítrico sin reaccionar precipitó en su mayor parte como citrato de calcio para formar una solución espesa, blanca y turbia. La solución turbia blanca se separó centrífugamente (temperatura ambiente, 1500 xg, 30 min) para separarla de este modo en un precipitado y una solución sobrenadante, y se recogió la solución sobrenadante (que contenía metanol al 30%) que contenía el compuesto A. Se destiló el metanol de la solución sobrenadante recogida mientras se concentraba mediante un evaporador (Tokyo Rikakikai Co., Ltd.) para obtener de este modo una solución viscosa espesa. Se añadió agua purificada a la solución viscosa que contenía el compuesto A concentrado para tener el mismo volumen de solución de 600 mL que el del líquido de reacción inicial. Se añadió gradualmente un mol/L (2 N) de ácido sulfúrico a la solución y el pH de la solución llegó a ser de 1,3 a 1,6, después de lo cual los iones Ca en la solución se depositaron y precipitaron como una sal de sulfato de calcio. El precipitado se separó mediante filtración y el filtrado se recogió. El filtrado contenía el compuesto A y se acidificó con ácido sulfúrico. La solución (aproximadamente 600 mL) se concentró mediante un evaporador calentando en un baño de agua a 40°C para tener un volumen de aproximadamente 250 mL (a 200 mL). La solución como líquido madre para la cristalización del compuesto A se enfrió a temperatura ambiente y después se frotó la superficie de la pared de vidrio con una espátula o similar, tras lo cual apareció un depósito cristalino del compuesto A; y se dejó reposar la solución como estaba durante todo un día y una noche, se obtuvo un precipitado blanco. El precipitado se separó de la solución madre mediante filtración y se recogió después de lavar con una pequeña cantidad de agua purificada para obtener un cristal del compuesto A.

La operación anterior desde el líquido de reacción de síntesis hasta la serie de purificación y cristalización del compuesto A cristalino se llevó a cabo repetidamente para obtener de este modo aproximadamente 130 g (peso húmedo) de un cristal del compuesto A a partir de 3 L del líquido de reacción de síntesis. Se dejó a un lado una pequeña cantidad del cristal (cristal de siembra), y el resto del cristal se disolvió (en un baño tibio a 40°C) en agua purificada en la menor cantidad posible, y después la solución resultante se concentró mucho mediante un evaporador y después se enfrió; y el cristal se obtuvo nuevamente añadiendo el cristal de siembra a la solución. El cristal se recogió mediante filtración por succión y se secó para obtener así 113 g de un compuesto A cristalizado. Para confirmar la precisión del cristal del compuesto A obtenido, se llevó a cabo la evaluación (Figura 2) utilizando de manera similar el análisis cualitativo de HPLC en la confirmación del compuesto A en la solución de síntesis (Figura 1). La Figura 2 muestra un cromatograma de HPLC del cristal del compuesto A que está cristalizado en la solución acuosa. Específicamente, el compuesto A purificado a partir del líquido de la reacción de síntesis después de la reacción térmica se cristalizó en la solución acuosa, y el cristal resultante se purificó mediante recristalización y posteriormente se evaluó mediante HPLC. Se pesaron 70 mg del compuesto A cristalizado y se disolvieron en 1 mL de agua purificada. La solución resultante se diluyó 160 veces con un disolvente de fase móvil (solución de ácido perclórico 10 mM) del sistema de análisis de HPLC y se analizó. Se observó un pico claro del compuesto A, y otros picos correspondientes a impurezas tenían intensidades casi de trazas y no eran claros, por lo que se confirmó que el compuesto A estaba altamente purificado.

Además, un no cristal del compuesto A tenía higroscopicidad y, cuando se concentraba y solidificaba, se convertía en una forma higroscópica y altamente viscosa (glutinosa), que era difícil de manipular. Por otra parte, el cristal del compuesto A era un polvo no higroscópico, que se manipulaba fácilmente.

[Ejemplo 4]

(Purificación del compuesto A no cristalino)

La solución de la que se había recogido el cristal del compuesto A mediante el método mencionado anteriormente y que se convirtió en un líquido madre cristalino obtenido como un filtrado se usó como material para la purificación del compuesto A que no estaba cristalizado. Se confirmó mediante análisis cualitativo utilizando HPLC que el compuesto A permanecía en la solución (Figura 3). La Figura 3 muestra un cromatograma de HPLC del filtrado del cual, después de cristalizar el compuesto A, se recogieron los cristales. El filtrado se diluyó 400 veces con un disolvente de fase móvil (solución de ácido perclórico 10 mM) de análisis cualitativo usando HPLC y se analizó. El pico del compuesto A se observó como el pico principal y también se observaron picos de otros componentes que eran impurezas.

Aproximadamente 1 L de la solución madre cristalina obtenida a partir de 3 L del líquido de reacción de síntesis se concentró usando un evaporador en un baño de agua a 40°C para obtener de este modo aproximadamente 200 mL de un líquido concentrado que tiene una alta viscosidad. Se añadieron aproximadamente 800 mL de acetona (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) y se mezclaron con el líquido concentrado, después de lo cual el líquido se volvió blanco turbio y luego, después de aproximadamente 1 hora, precipitaron los componentes turbios blancos y precipitó un depósito de líquido glutinoso. Se separaron el sobrenadante y el depósito viscoso. A partir del depósito viscoso se obtuvo un depósito cristalino que contenía citrato de calcio. El sobrenadante se concentró otra vez usando un evaporador para preparar de este modo una solución concentrada que tenía una alta viscosidad. La concentración mediante destilación del disolvente y la disolución en acetona se repitieron tres veces para sustituir así la humedad del agua en la solución por acetona (deshidratación de la solución por acetona). En el proceso de deshidratación de la acetona, junto con la reducción de la humedad del agua, aumentó gradualmente un depósito cristalino blanco. El resultante finalmente se convirtió en 500 mL de una solución de acetona, y cuando la solución se dejó reposar durante todo un día y una noche, precipitó un depósito cristalino blanco. El precipitado y la solución de acetona sobrenadante se separaron por filtración. Un análisis posterior descubrió que el depósito blanco era el compuesto A cristalino (Figura 4). La Figura 4 muestra un cromatograma de HPLC del compuesto A como un cristal purificado mediante recristalización, que ha sido cristalizado en acetona. Específicamente, el cristal filtrado se purificó recristalizándolo con agua purificada; el cristal recristalizado (aproximadamente 20 mg) se disolvió en agua purificada (aproximadamente 0,5 mL); y la solución resultante se diluyó 40 veces con un disolvente de fase móvil (solución de ácido perclórico 10 mM) de análisis cualitativo usando HPL<c>, y se analizó. Se observó un pico claro del compuesto A, y los picos de impurezas tenían intensidades casi de trazas y no eran claros. Mediante los procesos hasta ahora, casi todo el diastereómero del compuesto A cristalino en la solución madre cristalina cristalizó, y casi todo el compuesto A disuelto en la solución de acetona era el diastereómero del compuesto A que era mayoritariamente no cristalino.

Después, se repitió tres veces la operación en donde se añadieron 500 mL de agua purificada a la solución de acetona que contenía el diastereómero del compuesto A que no era cristalino y se destiló la acetona mediante un evaporador para convertir así el disolvente de la solución en agua. Se añadieron 100 g de cloruro de calcio a la solución acuosa resultante (volumen de la solución: aproximadamente 200 mL) y se añadió adicionalmente hidróxido de calcio para hacer que el pH de la solución fuera 3,6. Mediante este tratamiento, el compuesto A, una sustancia ácida, se derivó a una sal de calcio. La solución se diluyó con agua purificada hasta obtener un volumen de 300 mL y se añadieron 700 mL de etanol para preparar una solución de etanol al 70%, después de lo cual se depositó una sal de calcio del compuesto A como un precipitado blanco. El precipitado se separó de la solución sobrenadante mediante separación centrífuga y se purificó adicionalmente lavándolo con etanol al 70% para obtener de este modo un precipitado purificado (sal de Ca del compuesto A no cristalino (1)). Por otro lado, al examinar mediante análisis cualitativo utilizando HPLC, la solución sobrenadante preparada para ser una solución de etanol al 70% incluía el compuesto A restante, y se ajustó el pH de la solución a 6,0 como una condición para inducir más fuertemente la sal de Ca del compuesto A, y después haciendo que la solución fuera una solución de etanol al 80%, se obtuvo un precipitado. El precipitado se lavó con etanol para preparar un precipitado purificado (sal de Ca del compuesto A no cristalino (2)).

El precipitado purificado obtenido a un pH de 3,6 mediante la operación anterior y el precipitado purificado obtenido a un pH de 6,0 se evaluaron cada uno mediante análisis cualitativo usando HPLC (Figura 5, Figura 6). Cada precipitado (aproximadamente 10 mg) se disolvió en agua purificada (aproximadamente 1 mL), se diluyó 40 veces con una solución de ácido perclórico 10 mM que era una fase móvil del análisis cualitativo usando HPLC, y se analizó (diluyéndolo con solución de ácido perclórico 10 mM, que era un disolvente ácido, las sales de Ca del compuesto A se convirtieron en el compuesto A, por lo que la detección se realizó como el compuesto A). La Figura 5 es un cromatograma de HPLC del precipitado depositado a un pH de 3,6; y La Figura 6 es un cromatograma de HPLC del precipitado depositado a un pH de 6,0. En el cromatograma de HPLC del precipitado purificado (sal de Ca del compuesto A no cristalino (1)) obtenido a un pH de 3,6, aunque se observan picos de impurezas, el pico principal del compuesto A se observa fuertemente, lo que revela que el precipitado se purificó. Por otro lado, en el cromatograma de HPLC del precipitado purificado (sal de Ca del compuesto A no cristalino (2)) obtenido a un pH de 6,0, junto con el pico del compuesto A (pico 2), se observa una mezcla de un compuesto (un pico que se superpone en el hombro izquierdo del pico del compuesto A) amidado por hidrólisis de una parte de la estructura de imida del compuesto A, y un pico (pico 3) que se supone que es ácido cítrico aumentado. Por lo tanto, era concebible que la hidrólisis del compuesto A progresara por la cantidad de álcali, que se añadió para que el pH fuera 6,0, y que la condición de depósito de la sal de Ca del compuesto A fuera demasiado severa. Dado que la sal de Ca del compuesto A depositada a un pH de 3,6 tenía sólo una pequeña cantidad mezclada del hidrolizado del compuesto A, era concebible que el pH de 3,6 fuera el límite de la condición alcalina.

Disolviendo el precipitado de la sal de Ca del compuesto A depositado en la solución de etanol, en agua, y haciendo que la solución resultante fuera ácida con ácido sulfúrico (por ejemplo, un pH de 1,3) para depositar de este modo el sulfato de calcio, el contenido de calcio podría separarse y podría prepararse el compuesto A como una solución ácida de ácido sulfúrico. Mediante este proceso de purificación, se obtuvieron 192,7 g de un sólido seco de la sal de Ca del compuesto A no cristalino (1) que era un precipitado purificado obtenido a un pH de 3,6 a partir de 3 L del líquido de reacción de síntesis.

[Ejemplo 5]

(Análisis cualitativo utilizando HPLC de los diastereómeros del compuesto A)

La proporción de la presencia de los diastereómeros del compuesto A como las sustancias purificadas obtenidas en el proceso de purificación a partir de la solución de síntesis del compuesto A anterior se confirmó mediante análisis cualitativo usando HPLC usando la siguiente columna. Se diluyeron soluciones que tenían diversas concentraciones del compuesto A con un líquido mixto (fase móvil para análisis cualitativo usando HPLC) de una solución acuosa de TFA al 0,1% (98 en volumen) y metanol (2 en volumen); y las sustancias no disueltas se separaron mediante un filtro de membrana; y la solución se analizó mediante cromatografía líquida de alta resolución. Las condiciones del análisis cualitativo utilizando HPLC fueron las siguientes. El componente objetivo que se supone que es el compuesto A en el cromatograma se detectó como dos picos adyacentes en el intervalo de un tiempo de retención (RT) de 3,3 a 3,7 min (sin embargo, el RT cambió ligeramente en algunos casos, debido a influencias tales como el deterioro del material de relleno de la columna). El diastereómero del compuesto A cristalino se detectó como un pico en el lado derecho del tiempo de retención más largo en la columna; y el diastereómero del compuesto A no cristalino se detectó como un pico en el lado izquierdo del tiempo de retención más corto.

(Condición de separación en el análisis cualitativo utilizando HPLC)

Aparato: Shimadzu Corp., cromatógrafo líquido de alta resolución Prominence

Columna: Phenomenex Kinetex F5 (100 mm * 4,6 mm)

Fase móvil: un líquido mixto de una solución acuosa de TFA al 0,1% (98 en volumen) y metanol (2 en volumen)

Caudal: 0,8 mL/min

Temperatura de la columna: 30°C

Volumen de inyección: 5 pL

Longitud de onda de detección: 200 nm

[Ejemplo 6]

(Resultados del análisis de diastereómeros en muestras que contienen el compuesto A)

Mediante el análisis cualitativo de HPLC utilizando la columna mencionada anteriormente, se confirmó el estado de presencia de diastereómeros en muestras purificadas a partir de la solución de síntesis del compuesto A.

(1) Solución de síntesis del compuesto A.

Se confirmó el estado de presencia de los diastereómeros del compuesto A en una solución de síntesis del compuesto A apenas purificada, preparada separando la mayor parte del ácido aspártico y ácido cítrico sin reaccionar de la solución de síntesis del compuesto A (Figura 7). La Figura 7 muestra un cromatograma de HPLC de la solución de síntesis del compuesto A apenas purificada. Se detectaron dos diastereómeros del compuesto A como dos picos adyacentes, y su proporción de presencia fue casi igual.

(2) Cristal del compuesto A

El cristal del compuesto A obtenido al purificarlo a partir de la solución de síntesis del compuesto A y cristalizarlo en la solución acuosa se disolvió en agua purificada y el estado de presencia de los diastereómeros del compuesto A se evaluó mediante análisis cualitativo usando HPLC (Figura 8). La Figura 8 muestra un cromatograma de HPLC (resultado del análisis para la misma muestra como en la Figura 2) del compuesto A cristalizado en la solución acuosa. El compuesto A cristalino se detectó como un pico en el lado derecho de un tiempo de retención más largo en el intervalo de detección de los dos diastereómeros del compuesto A, y su proporción de presencia fue del 99 % o superior en la proporción de área del pico. La proporción de mezcla del otro diastereómero fue 0,36% (calculada a partir de la proporción de área del pico).

(3) Cristal del compuesto A cristalizado en acetona.

El cristal del compuesto A obtenido al purificarlo a partir de la solución de síntesis del compuesto A y cristalizarlo en acetona se disolvió en agua purificada y se evaluó el estado de presencia de los diastereómeros del compuesto A mediante análisis cualitativo usando HPLC (Figura 9). La Figura 9 muestra un cromatograma de HPLC (resultado del análisis para la misma muestra como en la Figura 4) del compuesto A cristalizado en acetona. El compuesto A cristalino cristalizado en acetona, de manera similar al compuesto A cristalino cristalizado en la solución acuosa, se detectó como un pico en el lado derecho de un tiempo de retención más largo en el intervalo de detección de los dos diastereómeros del compuesto A, y su proporción de presencia fue 98% o más en la proporción de área del pico. La proporción de mezcla del otro diastereómero fue 1,36% (calculada a partir de la proporción de área del pico).

(4) Sal de Ca del compuesto A no cristalino (1) precipitada a un pH de 3,6 en etanol al 70% (sal de Ca del compuesto A no cristalino (1))

Después de cristalizar el compuesto A que se iba a cristalizar en la solución de síntesis del compuesto A, el compuesto A no cristalino que quedaba en la solución se convirtió en una sal de Ca mediante la condición de un pH de 3,6 y se depositó como un precipitado en etanol al 70%; y el estado de presencia de los diastereómeros del compuesto A del precipitado se evaluó mediante análisis cualitativo usando HPLC (Figura 10) (la misma muestra de depósito como la muestra de la Figura 5). La Figura 10 muestra un cromatograma de HPLC (resultado del análisis para la misma muestra en la Figura 5) de la sal de Ca del compuesto A no cristalino (1) depositada a un pH de 3,6 (sal de Ca del compuesto A no cristalino (1)). El precipitado depositado en etanol al 70% se disolvió en agua purificada, se sometió a análisis cualitativo utilizando HPLC y se detectó como un pico en el lado izquierdo del tiempo de retención más corto en el intervalo de detección de los dos diastereómeros del compuesto A. El pico se detectó como un pico a un RT claramente diferente del pico del compuesto A cristalino. Su proporción de presencia fue del 99 % o superior en la relación de área del pico. La proporción de mezcla del otro diastereómero (compuesto A cristalino) fue del 0,45% (calculada a partir de la proporción de área del pico).

(Interpretación: dado que los picos en cada cromatograma se extienden hacia atrás (un fenómeno en donde los pies de los picos se extienden), las proporciones de área de los picos son más pequeñas que las alturas visuales de los picos que se mezclan).

[Ejemplo 7]

(Preparación del cristal del compuesto A mediante cromatografía de intercambio iónico)

1. Purificación de la sustancia de partida.

1-1. Preparación de la sustancia de partida.

Se añadió agua a 75 g (0,59 mol) de ácido cítrico (monohidrato) para preparar de este modo 83,3 mL de una solución espesa de ácido cítrico; a la solución se añadieron 10 g (0,111 mol) de L-asparagina y 1,5 g (0,019 mol) de ácido L-aspártico; y la solución resultante se diluyó hasta un volumen de solución de 100 mL. El líquido de reacción se puso en un recipiente de vidrio resistente a la presión y se selló allí, y se calentó en un baño de agua a 90°C para disolver así completamente la L-asparagina y el ácido L-aspártico añadidos. Después, el líquido de reacción en el recipiente resistente a la presión se puso en un autoclave calentado a aproximadamente 80°C y se trató térmicamente a 121°C durante 180 min. Después de la reacción, el líquido de reacción se enfrió espontáneamente a 25°C y después se llevó a un vaso de precipitados de 1 L y se enfrió con hielo.

Se disolvieron aproximadamente 20 g de hidróxido de sodio en 83 mL de agua purificada; esta solución acuosa de hidróxido de sodio se enfrió con hielo y se añadió gradualmente al líquido de reacción anterior para neutralizar el líquido de reacción a un pH de 5,8 (dado que la generación de calor se produjo debido al calor de neutralización, la neutralización se llevó a cabo mientras se verificaba que la temperatura es de 25°C). Después de la neutralización, el volumen del líquido de reacción se llevó a 200 mL con agua purificada. Después, se disolvieron 33,3 g de cloruro de calcio (dihidrato) en 0,33 L de agua purificada para preparar una solución de cloruro de calcio; se añadió aproximadamente la mitad del volumen de la misma al líquido de reacción anterior, se agitó bien y se dejó reposar durante aproximadamente 16 horas. En la solución se depositó un precipitado blanco (citrato de calcio). Dado que cuando se añadió más solución de cloruro de calcio, precipitó nuevamente un precipitado blanco, la solución de cloruro de calcio se añadió gradualmente y, como resultado, se añadieron aproximadamente 333 mL (0,23 moles como cantidad de cloruro de calcio) a 200 mL del líquido de reacción neutralizado. Se añadió agua purificada a la solución mixta resultante de modo que el volumen total llegó a ser de 600 mL y, posteriormente, se separó mediante separación centrífuga un precipitado blanco que era citrato de calcio y se recuperó el sobrenadante. Después, se concentraron 430 mL del sobrenadante hasta 133 mL mediante un evaporador (dado que no se pretendía aplicar calor, la temperatura del baño se hizo a 25°C). Se añadieron 310 mL de etanol a la solución acuosa concentrada y se agitó. Cuando se dejó reposar el líquido mixto resultante durante un tiempo, el líquido mixto se separó en dos capas, que eran una capa superior relativamente transparente (capa de etanol) y 50 mL de una solución de capa inferior que tenía coloración y viscosidad. La capa inferior se separó y recuperó y se diluyó con agua purificada hasta aproximadamente 130 mL; y después de eso, el etanol restante en la solución se destiló mediante un evaporador (dado que no se pretendía aplicar calor, la temperatura del baño se hizo a 25°C) para preparar así 55 mL de la solución. La solución se separó centrífugamente para obtener de este modo 45 mL de sobrenadante. El sobrenadante se liofilizó para obtener de este modo 32,67 g del resultante. El resultante se utilizó como sustancia de partida.

1-2. Cromatografía en columna de intercambio iónico (SuperQ)

Se disolvieron 280 mL (solución acuosa, contenido de sólidos: 235 g) de la sustancia de partida preparada mediante el método anterior en 1 L de agua purificada; se añadieron aproximadamente 13 mL de amoníaco acuoso al 25 % y 19 L de agua purificada para ajustar el pH y la electroconductividad para de este modo preparar una muestra para introducirla (pH: 7,1, electroconductividad: 8,4 mS/cm). Esto se alimentó a una cromatografía en columna de intercambio iónico (TOYOPEARL SuperQ-650M, $150 mm x 500 mm). Los detalles de la fase móvil y cada fracción separada se muestran en la Figura 11. Cada una de las dos fracciones de la sustancia objetivo se liofilizó para obtener de este modo las sustancias indicadas en la Tabla 1 en la Figura 11. El contenido estimado de la sustancia objetivo en dos fracciones de la sustancia objetivo (Fr (fracción) 8 a 12 y Fr13 se calculó como 55,4 g, y la tasa de recuperación a 64,1 g del contenido estimado de la sustancia objetivo en la materia prima fue del 86,4 %. En este caso, los números de lote en la Tabla 1 son los números adjuntos a las dos fracciones de sustancia objetivo por conveniencia.

1-3. Separación de acetato de amonio mediante cromatografía en columna de intercambio iónico (DOWEX 50W*8) y liofilización.

Se disolvieron 740,2 g de Fr8 a 12 (Lote No. 198-012-74-1) en aproximadamente 600 mL de agua purificada y se sometieron al tratamiento por lotes con una resina de intercambio iónico (DOWEX 50W*8, tipo H+, 100 -200 mesh), y posteriormente se liofilizó. El producto liofilizado se disolvió nuevamente en 800 mL de agua purificada, y se dividió en dos partes y se introdujo en la cromatografía en columna de intercambio iónico (DOWEX 50W x 8, tipo H+, 150 mm x 200 mm). Después de la introducción, se alimentó con agua purificada y se recogieron y liofilizaron las fracciones que contenían la sustancia objetivo. La operación en la que se añadió agua purificada al residuo seco y el resultante se liofilizó se repitió varias veces para reducir de este modo el ácido acético. En este momento, dado que la cristalización se produjo en agua purificada, se separaron un cristal y un líquido madre mediante filtración por succión. Cada uno de los resultantes se liofilizó para obtener de este modo lo siguiente.

El cristal del compuesto A: 16,5 g (Lote No. 198-012-078-1, cristal blanco, véase un cromatograma de HPLC de la Figura 12, véase un espectro de 1H NMR de la Figura 13)

El líquido madre (que contiene el compuesto A) después de que se haya recogido fraccionadamente el cristal del compuesto A: 36,1 g (Lote No. 198-012-078-2, estado amorfo blanco lechoso, véase un cromatograma de HPLC de la Figura 14, véase un espectro de 1H NMR de la Figura 15).

2. Compendio

Se pudo obtener lo siguiente a partir de 280 mL (solución acuosa, contenido de sólidos: 235 g) de la sustancia de partida mediante cromatografía en columna de intercambio iónico. En la Tabla 1 se muestra el contenido estimado de la sustancia objetivo (compuesto A) calculado a partir del contenido de ácido acético calculado por 1H NMR y el valor del área de HPLC. El contenido total de sustancia objetivo de los tres lotes obtenidos en el proceso de purificación de esta vez se calculó como 54,2 g y la tasa de recuperación de la sustancia de partida (contenido estimado de la sustancia objetivo: 64,1 g) fue del 84,5 %.

Como se describió anteriormente, se demostró que mediante la purificación mediante cromatografía en columna de intercambio iónico, el cristal podía cristalizarse a partir de la solución acuosa del compuesto A.

[Tabla 1]

*1: El rendimiento se calculó siempre que el contenido de sólidos de la sustancia de partida fuera de 235 g. *2: El contenido de ácido acético se calculó a partir de 1H NMR.

*3: El contenido estimado de la sustancia objetivo se calculó a partir de una curva de calibración de un punto de un valor de área de HPLC utilizando como referencia el pico del cristal del compuesto A obtenido esta vez. *4: La "pureza por HPLC" representaba una pureza como la del compuesto A.

[Ejemplo 8]

(Difractometría de rayos X en polvo)

La medición de la difracción de rayos X en polvo se llevó a cabo utilizando el cristal del compuesto A y el diastereómero no cristalino del compuesto A según la presente invención mediante el siguiente método.

1. Objetivo

Se confirma si el cristal del compuesto A y el diastereómero no cristalino del compuesto A según la presente invención obtenidos en los Ejemplos anteriores eran cristalinos o no cristalinos (amorfos).

2. Muestras

Se usaron como muestras el cristal del compuesto A obtenido de la solución acuosa mediante purificación en columna en el Ejemplo 7 (muestra de prueba 1), el cristal del compuesto A obtenido de la solución de acetona en el Ejemplo 4 (cristal almacenado como cristal de siembra y sin recristalizar) (muestra de prueba 2), y la sal de Ca (1) del compuesto A no cristalino (el diastereómero no cristalino del compuesto A) obtenido en el método de preparación en el Ejemplo 4 (muestra de prueba 3).

3. Método de análisis

3.1. Aparato

Difractómetro de rayos X de tipo gran angular RINT-TTRNII, fabricado por Rigaku Corp.

Fuente de rayos X: radiación CuKa

Tensión tubo-corriente tubo: 50 kV-300 mA

Ancho de paso: 0,02 grados.

Velocidad de medición: 5 grados/min

Sistema de hendidura: divergencia-recepción-dispersión

0,5 grados-0,15 mm-0,5 grados.

Línea de difracción monocromática de cristal curvo.

3.2. Método

Los polvos de la muestra de prueba 1 a la muestra de prueba 3 se midieron tal como estaban.

4. Resultados

La Figura 16 muestra una comparación mediante trazado múltiple de patrones difractométricos de rayos X en polvo de las respectivas sustancias de la muestra de prueba 1 (el cristal obtenido de una solución acuosa mediante purificación en columna), la muestra de prueba 2 (el cristal obtenido de una solución de acetona) y la muestra de prueba 3 (la sal de Ca del diastereómero no cristalino). Además, la lista de picos de la difracción de rayos X en polvo de la muestra de prueba 1 se muestra en la Tabla 2; y el de la muestra de prueba 2, en la Tabla 3.

Como queda claro en la Figura 16 (en el patrón superior y en el patrón medio) y en la Tabla 2 y la Tabla 3, en la muestra de prueba 1 y en la muestra de prueba 2 cada una, se observaron picos claros en el patrón de difracción mediante difractometría de rayos X en polvo, y se confirmó que eran sólidos cristalinos. Además, dado que los patrones de difracción por difractometría de rayos X en polvo de la muestra de prueba 1 y la muestra de prueba 2 coincidieron entre sí, también se confirmó que ambos eran cristales que tenían la misma forma.

Por otro lado, como queda claro en la Figura 16 (en el patrón inferior), al ser la muestra de prueba 3 un sólido obtenido añadiendo etanol para solidificar el diastereómero no cristalino como la sal de Ca, no se observó ningún pico claro en el patrón de difracción de rayos X en polvo, y se confirmó que era un sólido amorfo (no cristalino).

[Tabla 2]

[Tabla 3]

[Ejemplo 9]

(Determinación de la configuración del compuesto A cristalino)

Se produjo un monocristal del compuesto A para el análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal mediante el siguiente método y se sometió a análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal.

1. Objetivo

Cuando el compuesto A se sintetizó mediante el método descrito en el párrafo [0056] del Ejemplo 3, se unió ácido cítrico a una estructura derivada del ácido L-aspártico (isómero S) mediante una reacción de imidización y se sintetizó dos diastereómeros (isómero SS e isómero SR) que se muestran a continuación. Uno de ellos tenía la propiedad de cristalizarse y el otro tenía la propiedad de no cristalizarse. Aunque los dos diastereómeros pueden separarse y purificarse debido a esta diferencia, hasta el momento no se puede especificar cuál es un isómero SS o un isómero SR. Para resolver este problema, se produjo un monocristal que tenía un tamaño de 0,2 mm cúbicos o mayor del compuesto A cristalino, y se sometió al análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal.

(* las marcas en las fórmulas indican las posiciones de los carbonos asimétricos)

Incluso si el compuesto A se cristalizó en un disolvente tal como agua o acetona mediante el método descrito en el párrafo [0056] del Ejemplo 3, no se pudo obtener un único cristal de un tamaño tal que sea capaz de realizar el análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal. Por lo tanto, se estudiaron el sistema de disolvente y el método de cristalización para obtener un monocristal del compuesto A, y se estableció el método para producir un monocristal en un nivel de tamaño utilizable para el análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal, después se realizó el análisis.

2. Estudio de la condición de la producción del monocristal del compuesto A

Utilizando, como materia prima, el compuesto A obtenido mediante purificación adicional del cristal del compuesto A sintetizado, purificado y cristalizado en la solución acuosa mediante el método descrito en el párrafo [0048] del Ejemplo 3, mediante la recristalización descrita en el párrafo [0049] del Ejemplo 3, se investigó la producción del monocristal para el análisis estructural mediante difracción de rayos X del monocristal.

Se obtuvo un polvo cristalino altamente purificado del compuesto A repitiendo tres veces la misma operación que en la recristalización descrita en el párrafo [0049] del Ejemplo 3. Se añadieron 100 mL de agua purificada (agua purificada de la Farmacopea Japonesa) a 10 g del polvo cristalino, que después se disolvió mediante calentamiento del resultante en un baño de agua a 50°C. La solución resultante se filtró usando un filtro de membrana (Merck Millipore) de 0,22 |jm de tamaño de poro y se recogió el filtrado resultante. El filtrado se concentró usando un evaporador en un baño de agua a 40°C para recoger de este modo el resultante como aproximadamente 50 mL de una solución. Esta solución se concentró y se enfrió a temperatura ambiente para convertirse así en una solución en estado sobresaturado. La solución tal como estaba en estado calentado (40°C) se distribuyó en tubos de ensayo con tapa para tener las proporciones de disolvente indicadas en la siguiente Tabla (Tabla 4) para producir de este modo soluciones que tenían disolventes mixtos. Específicamente, añadiendo 100 jL de disolventes orgánicos de metanol, etanol, acetona y similares a 400 jL de la solución sobresaturada, se preparó una solución que tenía una proporción de agua en el disolvente mixto del 80%. De manera similar, añadiendo 200 jL , 300 jL y 400 jL de disolventes orgánicos de metanol, etanol, acetona y similares a 300 jL (agua: 60%), 200 jL (agua: 40%) y 100 jL (agua: 20 %) de la solución sobresaturada, respectivamente, se produjeron soluciones que tenían disolventes mixtos con proporciones de agua en los disolventes mixtos del 60 %, 40 % y 20 %, respectivamente. Con respecto a la solución que tenía 100% de agua, 500 jL de la solución sobresaturada como tal fue dispensada. Con respecto a la solución que tenía 100% de disolventes orgánicos de metanol, etanol, acetona y similares, se pusieron en un tubo de ensayo 50 mg del cristal altamente purificado del compuesto A; se añadieron 500 jL del disolvente; y se disolvió la mayor cantidad posible de cristal calentándolo a 40°C. En sistemas de disolventes mixtos de isopropanol y agua, cuando la proporción de isopropanol era del 40% o superior, dado que la solubilidad del compuesto A disminuía y gran parte del precipitado se depositaba rápidamente, no se llevó a cabo ningún estudio sobre el 40% o más de isopropanol en los sistemas de disolventes mixtos. Los resultados se muestran en la Tabla 4.

[Tabla 4]

El tubo de ensayo de cada solución del compuesto A así producido se cerró herméticamente con la tapa del tubo de ensayo y se dejó reposar a temperatura ambiente durante todo un día y una noche o más para hacer de ese modo que el compuesto A se depositara desde el estado sobresaturado. Cada uno de los tubos de ensayo se sometió a separación centrífuga (temperatura ambiente, 3000 rpm, 10 min) para hacer de este modo depósitos que precipitaran; y se transfirió con cuidado un sobrenadante de cada solución a otro tubo de ensayo limpio con tapa de plástico para preparar así una solución saturada de cada solución. En el estado en que la tapa del tubo de ensayo de cada solución saturada estaba cerrada, se abrió un orificio en la tapa de plástico mediante una aguja de inyección y se dejó reposar el tubo de ensayo a temperatura ambiente mientras el disolvente se evaporaba lentamente a través del orificio y así se depositó el cristal del compuesto A. Observando la forma y el tamaño del cristal depositado y la situación del crecimiento del cristal con el tiempo, se ha descubierto que era adecuado un método de cristalización del cristal utilizando el sistema de solución mixta de agua y acetona. Con respecto a la proporción de disolvente, una proporción de acetona del 40 % al 80 % (una proporción de agua del 60 % al 20 %) era buena, y lo mejor era el cristal obtenido evaporando una solución saturada que tenía particularmente una proporción de acetona del 60 % (proporción de agua del 40%). En sistemas disolventes basados en alcohol distintos del sistema de acetona, era probable que se produjera policristalización o el crecimiento de los cristales fuera deficiente, por lo que no se obtuvo ningún mono cristal utilizable para la difractometría de rayos X de monocristal.

3. Producción del monocristal del compuesto A.

Para el análisis estructural del compuesto A mediante difractometría de rayos X de monocristal, se utilizaron cristales obtenidos evaporando lentamente el disolvente mixto agua-acetona (40%-60%) a temperatura ambiente a través del orificio en la tapa del tubo de ensayo en el que se puso la solución saturada del disolvente mixto. Se hizo que los cristales crecieran durante varios días hasta que los monocristales cristalizados crecieran lo suficiente y se recogieron antes de que los monocristales se fusionaran y policristalizaran. El procedimiento de recolección de los cristales implicó voltear el tubo de ensayo junto con la solución que contiene los cristales para dejar caer la solución en un papel de filtro para que la solución sea absorbida en el papel de filtro y recolectar los cristales que quedan en el papel de filtro mediante una aguja metálica. Los monocristales recolectados se observaron bajo un mesoscopio, y se seleccionaron monocristales que tenían tamaños y formas utilizables para el análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal, y se usaron para el análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal.

4. Análisis estructural del compuesto A mediante difractometría de rayos X de monocristal.

Se llevó a cabo un análisis estructural mediante difractometría de rayos X de monocristal para examinar cuál de los isómeros SS y SR era el compuesto A cristalizado. Se tomó una muestra de un cristal prismático (0,2 mm x 0,2 mm x 0,6 mm) que tenía buena cristalinidad a partir de los monocristales producidos según el método anterior para producir monocristales, después se montó sobre una fibra de vidrio y se sometió a difractometría de rayos X usando un tipo de difractómetro tetraaxial RASA-7R, fabricado por Rigaku Corp., utilizando una radiación CuKa (A = 1,54178 A) monocromatizada mediante un monocromómetro de grafito.

La constante de red se determinó mediante el método de mínimos cuadrados a partir de 25 reflexiones en el intervalo de 50,0° < 20 < 58,8°. La medición se llevó a cabo en reflexiones de ángulos de difracción 20 de 136,1° o inferiores mediante el método de escaneo w-20. Después de la medición de todos los datos de reflexión, se encontró mediante la regla de extinción (extinción sistemática de la intensidad de reflexión) que el grupo espacial era P21/c (#14). Los datos de medición se muestran en la Tabla 5 y los datos del cristal se muestran en la Tabla 6.

[Tabla 5] <Datos de medición>

[Tabla 6] <Datos del cristal>

5. Determinación de la estructura cristalina del compuesto A.

La determinación estructural se realizó utilizando el método directo SIR92 utilizando 280 reflexiones cuyos valores absolutos de los factores estructurales estandarizados E fueron superiores a 1,527. Todas las coordenadas atómicas podrían determinarse a partir de Emap calculado a partir de un conjunto de fases que dan la Figura de mérito más alta (FOM = 1,416) y la extensión estructural de Fourier. El refinamiento se llevó a cabo utilizando 1899 reflexiones cuyas intensidades de reflexión I eran superiores a 3a(I) y el método de mínimos cuadrados de matriz completa. El factor R calculado igualando las tasas de peso de todas las reflexiones convergió a 0,053. El valor máximo y el valor mínimo de la densidad electrónica en un diagrama D de Fourier final fueron 0,28 y -0,25e-/Á3. El factor de dispersión de átomos utilizado fue un valor descrito en "International Tables for X-ray Crystallography", y todos los cálculos se llevaron a cabo utilizando CrystalStructure, que es un paquete de software cristalográfico de Rigaku Corporation y Rigaku/MSC. Los datos del análisis se muestran en la Tabla 7.

[Tabla 7] <Datos de análisis>

Como resultado del análisis, se aclaró que el compuesto cristalino A (el cristal del compuesto A) eran enantiómeros de un isómero SS y un isómero RR en el sistema de notación RS. Después, dado que el ácido aspártico utilizado en la síntesis era todo ácido L-aspártico (un isómero S), se descubrió que el compuesto cristalino A era un isómero SS. Después, en respuesta a esto, también se ha descubierto que el compuesto A que tiene la propiedad de no cristalizarse era un isómero SR.

Aplicabilidad industrial

Aunque se sabe que la mezcla de diastereómeros del compuesto A es una sustancia activa que tiene un efecto inhibidor contra los trastornos hepáticos, hasta ahora se desconoce la acción fisiológica del compuesto A cristalino y del compuesto A no cristalino en los organismos. Para separar compuestos orgánicos que tienen estructuras análogas, tales como diastereómeros, sin limitarse al compuesto A, se requieren procesos que requieren una tecnología altamente purificadora que generalmente utiliza columnas que tienen una capacidad de alta resolución. Además, en los medios de purificación habituales que utilizan estas columnas, la ampliación de la escala de purificación es difícil y el suministro de la misma en una gran cantidad requiere costes elevados en muchos casos. En la presente solicitud, se ha confirmado el hecho de que sólo se puede cristalizar un diastereómero del compuesto A y se ha establecido el método para purificar el diastereómero de forma económica y en grandes cantidades según la tecnología de cristalización. También se han establecido medios para purificar el diastereómero no cristalino de forma económica y en grandes cantidades cristalizando casi por completo el diastereómero cristalino usando un disolvente orgánico. De este modo, se espera que la escala de suministro de los diastereómeros purificados del compuesto A pueda ampliarse desde el nivel de análisis al nivel industrial. Debido a que, según la presente invención, se proporcionan de forma económica y en grandes cantidades el cristal del compuesto A y el diastereómero no cristalino de pureza notablemente alta del compuesto A, se espera que el compuesto A se aplique eficazmente al campo de fabricación de medicamentos, los campos de fabricación de alimentos, incluyendo alimentos funcionales y alimentos saludables, y similares.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un cristal de un compuesto representado por la siguiente fórmula (A), en lo sucesivo denominado compuesto A:

teniendo el cristal picos de ángulos de difracción 20 a 11,74 ± 0,20°, 29,25 ± 0,20°, 18,36 ± 0,20°, 21,75 ± 0,20° y 15,95 ± 0,20° en un patrón difractométrico de rayos X en polvo usando una radiación CuKa como una fuente de rayos X.
2. El cristal según la reivindicación 1, que tiene una estructura estérica de un isómero SS en el sistema de notación RS.
3. Un método para preparar el cristal del compuesto A según la reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas de (a) a (f): (a) hacer pasar una solución acuosa que contiene el compuesto A y/o una sal del mismo y ácido cítrico y/o una sal del mismo y que tiene un pH de 5,0 a 8,5 a través de una columna rellena con una resina de intercambio aniónico; (b) hacer pasar un eluyente a través de la columna para obtener de este modo una solución acuosa que no contiene ácido cítrico pero que contiene el compuesto A; (c) eliminar el eluyente de la solución acuosa obtenida en la etapa (b); (d) concentrar la solución acuosa de la que se ha eliminado el eluyente; (e) añadir agua al residuo concentrado para preparar una solución acuosa y concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y (f) obtener el cristal del compuesto A.
4. El método de preparación según la reivindicación 3, en donde el eluyente es un eluyente seleccionado del grupo que consiste en una solución acuosa de acetato de amonio, una solución acuosa de cloruro de sodio y una solución acuosa de formiato de amonio.
5. El método de preparación según la reivindicación 3 o 4, en donde un método para eliminar el eluyente es un método que utiliza una columna rellena con una resina de intercambio catiónico.
6. El método de preparación según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, en donde un método de concentración es la liofilización.
7. Un método para preparar el cristal del compuesto A según la reivindicación 1, que comprende las siguientes etapas de (a) a (f): (a) añadir carbonato de calcio a una solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para depositar de este modo citrato de calcio; (b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa; (c) añadir ácido sulfúrico a la solución acuosa para hacer que el pH sea 2,0 o inferior para depositar de este modo el sulfato de calcio; (d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa; (e) concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y (f) obtener el cristal del compuesto A.
8. El método de preparación según la reivindicación 7, en donde la concentración es concentración al vacío.
9. El método de preparación según la reivindicación 7 u 8, que comprende además, después de obtener el cristal del compuesto A, las siguientes etapas de (g) a (j): (g) añadir un disolvente orgánico a la solución acuosa para depositar de este modo el citrato de calcio; (h) separar el citrato de calcio del líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico; (i) deshidratar el líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico para depositar de este modo un cristal del compuesto A; y (j) obtener el cristal del compuesto A.
10. El método de preparación según la reivindicación 9, en donde el disolvente orgánico es acetona.
11. Un método para preparar una sal del diastereómero no cristalino del compuesto A representado por la siguiente fórmula (A), que comprende las siguientes etapas de (a) a (l):

(a) añadir carbonato de calcio a una solución acuosa que contiene el compuesto A y ácido cítrico y que tiene un pH de 2,0 o inferior para depositar de este modo el citrato de calcio; (b) separar el citrato de calcio de la solución acuosa; (c) añadir ácido sulfúrico a la solución acuosa para hacer que el pH sea 2,0 o inferior para depositar de este modo el sulfato de calcio; (d) separar el sulfato de calcio de la solución acuosa; (e) concentrar la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A; (f) separar los cristales del compuesto A de la solución acuosa; (g) añadir un disolvente orgánico a la solución acuosa para depositar de este modo un cristal del compuesto A y el citrato de calcio; (h) separar los cristales del compuesto A y el citrato de calcio del líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico; (i) deshidratar el líquido mixto de la solución acuosa y el disolvente orgánico para depositar de este modo un cristal del compuesto A; (j) separar los cristales del compuesto A de la solución acuosa; (k) añadir una sal metálica o una sal de aminoácido y un alcohol a la solución acuosa para depositar de este modo una sal del diastereómero no cristalino del compuesto A; y (l) obtener la sal diastereómera no cristalina del compuesto A.
12. El método de preparación según la reivindicación 11, en donde el disolvente orgánico es acetona.
13. Un diastereómero no cristalino del compuesto A representado por la siguiente fórmula (A) o una sal del mismo:
14. El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según la reivindicación 13, que tiene una estructura estérica de un isómero SR en el sistema de notación RS.
15. El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según la reivindicación 13 o 14, en donde la sal es una sal metálica del diastereómero no cristalino del compuesto A.
16. El diastereómero no cristalino del compuesto A o una sal del mismo según la reivindicación 15, en donde la sal metálica es una sal metálica seleccionada del grupo que consiste en una sal de sodio, una sal de potasio, una sal de magnesio y una sal de calcio.