ES2972848T3

ES2972848T3 - Análogos de péptido GIP de acción prolongada

Info

Publication number: ES2972848T3
Application number: ES18728872T
Authority: ES
Inventors: Mette Rosenkilde; Jens Holst; Lærke Gasbjerg; Alexander Sparre-Ulrich; Maria Gabe
Original assignee: Københavns Universitet
Current assignee: Københavns Universitet
Priority date: 2017-05-31
Filing date: 2018-05-31
Publication date: 2024-06-17
Anticipated expiration: 2038-05-31
Also published as: AU2018276434A1; CN110691788B; EP3630806B1; BR112019025195A8; US11572399B2; EP4361173A3; KR102743887B1; BR112019025195A2; CA3064510A1; EP3630806A1; JP2020521784A; AU2018276434B2; US20200087373A1; EP4361173A2; WO2018220123A1; KR20200014287A; PL3630806T3; CN110691788A

Abstract

Se divulgan análogos peptídicos derivados del péptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP), GIP5-30 y GIP3-30, que son antagonistas del receptor GIP y comprenden al menos una molécula de ácido graso para aumentar la vida media manteniendo al mismo tiempo las propiedades antagonistas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Análogos de péptido GIP de acción prolongada

Campo técnico

La presente invención se refiere a análogos de péptido obtenidos del péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP, por sus siglas en inglés) que son antagonistas del receptor de GIP, que comprende un péptido GIP y al menos una molécula de ácido graso unida para aumentar la semivida mientras se mantienen las propiedades antagonistas.

Antecedentes

El péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) es una hormona secretada de las células K del intestino después de una comida 1. Al igual que su hormona hermana, el péptido similar al glucagón 1 (GLP-1, por sus siglas en inglés), el GIP es un potente secretagogo de insulina<2>En contraste con el efecto glucagonostático del GLP-1 3, 4, se ha demostrado que el GIP presenta propiedades de liberación de glucagón en ciertas condiciones (3, 5-13). El interés por comprender la biología del GIP se intensificó por la asociación entre el GIPR (receptor de GIP) de roedores y la adiposidad 14-21. En humanos, aunque menos clara, también hay evidencia de un papel del GIP en el metabolismo de las grasas con la demostración de la expresión de GIPR en tejido adiposo 22, una asociación entre un IMC alto y niveles de GIP aumentados 22, 23, flujo sanguíneo de tejido adiposo aumentado y depósito de TAG (triacilglicerol) después de la administración de GIP en un estado de insulina alta y glucosa alta 24, niveles basales y posprandiales de GIP disminuidos observados en niños obesos sometidos a una dieta 25, y niveles de GIP en ayunas aumentados observados en hombres jóvenes sanos sometidos a una dieta alta en grasas 26.

Por lo tanto, además de la demanda general de los investigadores que presenciaron los avances en la comprensión de GLP-1 después del descubrimiento del antagonista del receptor de GLP-1, exendina(9-39) 27, 28, el potencial como un agente antiobesidad ha atraído atención adicional para el desarrollo de antagonistas de GIPR potentes. Se han emprendido muchas estrategias diferentes con el fin de antagonizar la función de GIP, por ejemplo, un antagonista<29>del receptor de molécula pequeña, inmunización contra GIP 30'32, diversos truncamientos y mutaciones de la molécula de GIP con propiedades antagonistas 33'39, y recientemente un potente anticuerpo antagonista contra el GIPR<40>

En condiciones fisiológicas, la hormona de 42 aminoácidos, GIP, es degradada por la enzima dipeptidilpeptidasa 4 (DPP-4), que escinde en la tercera posición de la molécula de GIP para producir GIP3-42. El GIP3-42 porcino sintético no mostró propiedades antagonistas en cerdos o páncreas de rata perfundidos en concentraciones fisiológicas, mientras quein vitroantagonizó el GIPR humano 41. Muchas hormonas peptídicas se modifican postraduccionalmente dando como resultado diversas formas biológicas con diferentes longitudes y modificaciones de aminoácidos 42,<43>Así, se ha demostrado que el GIP1-30 se produce como resultado del procesamiento postraduccional<44>y que es un agonista en el GIPR 33,<45>Si GIP1-30 se secreta en la circulación en seres humanos, la escisión catalizada por DPP-4 daría como resultado GIP3-30.

El documento US 7,875,587 divulga antagonistas del receptor de GIP obtenidos de GIP(1-42) que tienen resistencia mejorada a la degradación por DPP-4, y su uso para el tratamiento de la resistencia a la insulina y la obesidad. En el documento WO2004/067548, se modifican metabolitos de DPP-4 por acoplamiento covalente de un farmacóforo para lograr la semivida más larga asociada con los metabolitos peptídicos y para retener la actividad biológica de los péptidos escindidos similar a los péptidos nativos, incluyendo GIP. El documento WO2012/055770 divulga G<i>P(3-42) como un metabolito endógeno que se elimina fácilmente y con efectos antagonistas de GIPR, y GIP(2-30) como un ejemplo de un análogo de GIP truncado con actividad agonista de GIPR. El documento WO1998/24464 divulga el antagonista GIP(7-30).

El documento WO 2016/034186 y Hansen et al. 2016 divulgan los antagonistas GIP(3-30) y GIP(5-30). Pathak et al., 2015, divulgan GIP(3-30) que está modificado en posición C-terminal con el Cex de 9 aminoácidos de exendina(1-39) y un residuo de lisina modificado con palmitoilo.

El documento WO2016/066744 divulga análogos de GIP útiles como agonistas de GIPR y lipidados en una cualquiera de las posiciones 16, 17, 30, 32, 40. El documento WO2012/088379 divulga que la lipidación/acilación de péptidos en general puede ser útil para mejorar su semivida.

Se han utilizado una serie de diferentes enfoques para modificar la estructura de compuestos de GLP-1 con el fin de proporcionar una mayor duración de acciónin vivo.Éstos incluyen la introducción de un sustituyente lipófilo en un residuo de aminoácido (WO 96/29342 y WO 98/08871) y análogos de GLP-1 acilados (WO 00/34331). El documento WO 02/46227 divulga análogos de GLP-1 y de exendina-4 fusionados con albúmina sérica humana con el fin de prolongar la semividain vivo.

Compendio

Los presentes inventores han identificado análogos de péptido GIP de GIP(3-30) que están modificados por acilación grasa para aumentar la semivida (Ty2) del péptido, mientras que retienen sus propiedades antagonistas de GlPR altamente potentes. Sorprendentemente, la acilación no puede aparecer en la posición C-terminal 30 de GIP(3-30) mientras se retienen las propiedades antagonistas de GlPR.

En un aspecto, la invención se refiere a un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 2: EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2),

o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En otro aspecto, la invención se refiere al uso de tales análogos de péptido GIP como un medicamento. En otro aspecto más, la invención se refiere al uso de tales análogos de péptido GIP en un método para antagonizar un receptor de GIP; o tratar trastornos metabólicos (o síndrome metabólico), tales como obesidad, sobrepeso, diabetes mellitus, resistencia a la insulina y trastorno del metabolismo de los ácidos grasos. En otros aspectos, la invención se refiere a métodos para tratar el cáncer. En otros aspectos, la invención se refiere a métodos para tratar un trastorno de volumen/densidad óseos.

La invención está definida por las reivindicaciones. Cualquier materia que se encuentre fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona sólo con fines informativos.

Descripción de los dibujos

Figura 1. El examen con lisina (Lys) en acoplamiento con diácido C16 de GIP(5-30)NH<2>de la posición 5 a la posición 30 muestra sitios de lipidación altamente prometedores para el desarrollo de antagonistas del receptor de GIP de acción prolongada, de alta potencia.

La acumulación de AMPc en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano se evaluó después de una incubación con GIP(5-30)NH<2>examinado con lys en acoplamiento con diácido C16 en la lisina.

Figura 2. El examen con lisina (Lys) en acoplamiento con diácido C16 de GIP(3-30)NH<2>de la posición 5 a la posición 30 muestra sitios de lipidación altamente prometedores para el desarrollo de antagonistas del receptor de GIP de acción prolongada, de alta potencia.

La acumulación de AMPc en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano se evaluó después de una incubación con GIP(3-30)NH<2>examinado con lys en acoplamiento con diácido C16 en la lisina.

Figura 3. La adición de enlazadores (moléculas que enlazan los ácidos grasos a los péptidos) mejora el perfil antagonista.

La acumulación de AMPc en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano se evaluó después de una incubación con los diferentes análogos lipidados con enlazadores. Las curvas dosis-respuesta del antagonista se realizaron inhibiendo una cantidad constante de GIP(1-42) nativo correspondiente a un 50-80% de la activación máxima del receptor con concentraciones crecientes de los análogos lipidados. Las curvas se muestran como media ± ETM, n=2.

Figura 4. La lipidación aumenta la semivida de eliminación (T<1/2>) de los análogos de GIP. Administración subcutánea en un cerdo del análogo AT117 de GIP(3-30)Nh<2>lipidado y de GIP(3-30)NH<2>no lipidado. Posteriormente se recogieron muestras de sangre en los puntos de tiempo indicados de un catéter venoso central. Las cantidades de GIP(3-30)NH<2>y AT117 se midieron usando un radioinmunoensayo interno.

Definiciones

El término "afinidad" se refiere a la fuerza de unión entre un receptor y su o sus ligandos. En el presente contexto, la afinidad de un antagonista peptídico por su sitio de unión (Ki) determinará la duración de la inhibición de la actividad agonista. La afinidad de un antagonista puede determinarse experimentalmente usando regresión de Schild en estudios funcionales o mediante estudios de unión de radioligando como 1) experimentos de unión competitiva usando la ecuación de Cheng-Prusoff,<2>) experimentos de unión de saturación usando la ecuación de Scatchard o 3) estudios cinéticos con determinación de tasas de activación y desactivación (Kactivado y Kdesactivado, respectivamente).

El término "CI50" representa la concentración inhibitoria media máxima (CI50), que es una medida de la eficacia de una sustancia en la inhibición de una función biológica o bioquímica específica. Esta medida cuantitativa indica cuánto se necesita de un fármaco concreto u otra sustancia (por ejemplo, antagonista) para inhibir un determinado proceso biológico (o componente de un proceso, es decir, una enzima, célula, receptor celular o microorganismo) en la mitad. Se usa comúnmente como una medida de la potencia del fármaco antagonista en la investigación farmacológica. La CI50 representa la concentración de un fármaco que se requiere para una inhibición del 50%in vitro.En el presente contexto, el valor CI50 también puede referirse a la concentración de un fármaco en la que el 50% de un ligando radiomarcado se desplaza del receptor, que es una caracterización de la afinidad del fármaco realizada en experimentos de unión competitiva.

El término "agonista" en el presente contexto se refiere a un péptido capaz de unirse a y activar un receptor.

El término "antagonista" en el presente contexto se refiere a un análogo de péptido GIP como se define en la presente memoria, capaz de unirse a y bloquear o reducir respuestas mediadas por agonista de un receptor. Los antagonistas normalmente no provocan una respuesta biológica por sí mismos tras la unión a un receptor. Los antagonistas tienen afinidad, pero no eficacia, por sus receptores semejantes, y la unión entorpecerá la interacción e inhibirá la función de un agonista o agonista inverso en los receptores. Los antagonistas median sus efectos mediante la unión al sitio activo (ortostérico) o a sitios alostéricos en receptores, o pueden interactuar en sitios de unión únicos normalmente no involucrados en la regulación biológica de la actividad del receptor. La actividad antagonista puede ser reversible o irreversible dependiendo de la longevidad del complejo antagonista-receptor, que, a su vez, depende de la naturaleza de la unión antagonista-receptor. La mayoría de los antagonistas de fármacos logran típicamente su potencia compitiendo con sustratos o ligandos endógenos en sitios de unión estructuralmente definidos en receptores. Los antagonistas pueden ser competitivos, no competitivos, acompetitivos, antagonistas silenciosos, agonistas parciales o agonistas inversos.

Un antagonista competitivo (también conocido como antagonista superable) se une de forma reversible a receptores en el mismo sitio de unión (es decir, en el sitio activo) que el agonista o ligando endógeno, pero sin activar el receptor. Los agonistas y antagonistas por lo tanto "compiten" por el mismo sitio de unión en el receptor. Una vez unido, un antagonista bloquea la unión del agonista. El nivel de actividad del receptor se determina por la afinidad relativa de cada molécula por el sitio y sus concentraciones relativas. Las concentraciones altas de un antagonista competitivo aumentarán la proporción de receptores que ocupa el antagonista; se requerirán mayores concentraciones del agonista para obtener el mismo grado de ocupación del sitio de unión.

La expresión "antagonismo no competitivo" (también llamada antagonismo no superable o insuperable) describe dos fenómenos distintos con resultados funcionalmente similares: uno en el que el antagonista se une al sitio activo del receptor, y uno en el que el antagonista se une a un sitio alostérico del receptor. A diferencia de los antagonistas competitivos, que afectan a la cantidad de agonista necesaria para lograr una respuesta máxima, pero no afectan a la magnitud de esa respuesta máxima, los antagonistas no competitivos reducen la magnitud de la respuesta máxima que se puede alcanzar mediante cualquier cantidad de agonista.

La expresión "antagonista silencioso" se refiere a un antagonista del receptor competitivo que no tiene absolutamente ninguna actividad intrínseca para activar un receptor.

La expresión "agonista parcial" se refiere a un agonista que, en un receptor dado, podría diferir en la amplitud de la respuesta funcional que produce después de la ocupación máxima del receptor. Los agonistas parciales pueden hacer de antagonista competitivo en presencia de un agonista completo (o un agonista más eficaz), dado que compiten con el agonista completo por la ocupación del receptor, produciendo así una reducción neta en la activación del receptor en comparación con la observada con el agonista completo solo.

La expresión "agonista inverso" se refiere a agonistas que tienen efectos similares a los de los antagonistas, pero que causan un conjunto distinto de respuestas biológicas aguas abajo. Los receptores constitutivamente activos que presentan actividad intrínseca o basal pueden tener agonistas inversos, que no sólo bloquean los efectos de los agonistas de unión como un antagonista clásico, sino que también inhiben la actividad basal del receptor.

El término "individuo" se refiere a vertebrados, miembros concretos de las especies de mamíferos, preferiblemente primates, incluidos los humanos. Tal como se usan en la presente memoria, 'sujeto' e 'individuo' pueden usarse indistintamente.

Un "péptido aislado" es un péptido separado y/o recuperado de un componente de su entorno natural, típicamente celular, que está esencialmente libre de componentes celulares contaminantes, tales como carbohidratos, lípidos u otras impurezas proteicas asociadas con el polipéptido en la naturaleza. Típicamente, una preparación de péptido aislado contiene el péptido en una forma altamente purificada, es decir, al menos aproximadamente un 80% puro, al menos aproximadamente un 90% puro, al menos aproximadamente un 95% puro, más de un 95% puro o más de un 99% puro. El término "aislado" no excluye la presencia del mismo péptido en formas físicas alternativas, tales como dímeros, tetrámeros o alternativamente formas glucosiladas o derivadas.

Un "residuo de aminoácido" puede ser un residuo de aminoácido natural o no natural enlazado mediante enlaces peptídicos o enlaces diferentes de los enlaces peptídicos. Los residuos de aminoácido pueden estar en configuración D o en configuración L. Un residuo de aminoácido comprende una parte amino-terminal (NH<2>) y una parte carboxi-terminal (COOH) separadas por una parte central que comprende un átomo de carbono, o una cadena de átomos de carbono, al menos uno de los cuales comprende al menos una cadena lateral o grupo funcional. NH<2>se refiere al grupo amino presente en el extremo amino-terminal de un aminoácido o péptido, y COOH se refiere al grupo carboxi presente en el extremo carboxi-terminal de un aminoácido o péptido. El término genérico aminoácido comprende aminoácidos tanto naturales como no naturales. Los aminoácidos naturales de la nomenclatura estándar tal como se enumeran en J. Biol. Chem., 243:3552-59 (1969) y adoptados en 37 C.F.R., sección 1.822(b)(2) pertenecen al grupo de aminoácidos enumerados a continuación: Y,G,F,M,A,S,I,L,T,V,P,K,H,Q,E,W,R,D,N y C. Los aminoácidos no naturales son los que no se han enumerado inmediatamente antes. Además, los residuos de aminoácido no naturales incluyen, pero no se limitan a, residuos de aminoácido modificados, residuos de L-aminoácido y estereoisómeros de residuos de D-aminoácido.

Un "residuo de aminoácido equivalente" se refiere a un residuo de aminoácido capaz de reemplazar otro residuo de aminoácido en un polipéptido sin alterar sustancialmente la estructura ni/o la funcionalidad del polipéptido. Los aminoácidos equivalentes tienen por lo tanto propiedades similares, tales como la voluminosidad de la cadena lateral, la polaridad de la cadena lateral (polar o no polar), la hidrofobicidad (hidrófoba o hidrófila), el pH (ácido, neutro o básico) y la organización de cadena lateral de las moléculas de carbono (aromática/alifática). Como tales, los "residuos de aminoácido equivalentes" se pueden considerar como "sustituciones conservativas de aminoácidos".

Dentro del significado de la expresión "sustitución de aminoácidos equivalente" como se aplica en la presente memoria, un aminoácido puede sustituirse por otro, en una realización, dentro de los grupos de aminoácidos indicados en la presente memoria a continuación:

i) Aminoácidos que tienen cadenas laterales polares (Asp, Glu, Lys, Arg, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr y Cys)

ii) Aminoácidos que tienen cadenas laterales no polares (Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Pro y Met)

iii) Aminoácidos que tienen cadenas laterales alifáticas (Gly, Ala Val, Leu, Ile)

iv) Aminoácidos que tienen cadenas laterales cíclicas (Phe, Tyr, Trp, His, Pro)

v) Aminoácidos que tienen cadenas laterales aromáticas (Phe, Tyr, Trp)

vi) Aminoácidos que tienen cadenas laterales ácidas (Asp, Glu)

vii) Aminoácidos que tienen cadenas laterales básicas (Lys, Arg, His)

viii) Aminoácidos que tienen cadenas laterales amida (Asn, Gln)

ix) Aminoácidos que tienen cadenas laterales hidroxi (Ser, Thr)

x) Aminoácidos que tienen cadenas laterales que contienen azufre (Cys, Met)

xi) Aminoácidos neutros, débilmente hidrófobos (Pro, Ala, Gly, Ser, Thr)

xii) Aminoácidos ácidos hidrófilos (Gln, Asn, Glu, Asp) y

xiii) Aminoácidos hidrófobos (Leu, Ile, Val)

Si no se ha especificado la forma L o D (isómeros ópticos), se debe entender que el aminoácido en cuestión tiene la forma L natural, véase Pure & Appl. Chem. Vol. (56(5) págs. 595-624 (1984) o la forma D, de modo que los péptidos formados pueden estar constituidos por aminoácidos de forma L, forma D o una secuencia de formas L y formas D mezcladas.

Una "variante funcional" de un péptido es un péptido capaz de realizar esencialmente las mismas funciones que el péptido del que es una variante funcional. En particular, una variante funcional puede unirse esencialmente a las mismas moléculas que el péptido del que es una variante funcional.

Un "agente bioactivo" (es decir, una sustancia/agente biológicamente activo) es cualquier agente, fármaco, compuesto, composición de materia o mezcla que proporcione algún efecto farmacológico, a menudo beneficioso, que se pueda demostrarin vivooin vitro.Se refiere a los análogos de péptido GIP como se definen en la presente memoria y a compuestos o composiciones que comprenden éstos. Tal como se usa en la presente memoria, esta expresión incluye además cualquier sustancia fisiológica o farmacológicamente activa que produzca un efecto localizado o sistémico en un individuo.

Los términos "fármaco" y "medicamento" tal como se usan en la presente memoria incluyen sustancias biológicamente, fisiológicamente o farmacológicamente activas que actúan local o sistémicamente en el cuerpo humano o animal.

Los términos "tratamiento" y "tratar", tal como se usan en la presente memoria, se refieren a la gestión y el cuidado un paciente con el fin de combatir un estado, enfermedad o trastorno. El término está destinado a incluir el espectro completo de tratamientos para un estado dado del cual esté padeciendo el paciente, y se refiere igualmente a la terapia curativa, a la terapia profiláctica o preventiva y a la terapia de mejora o paliativa, tal como la administración del péptido o composición para los efectos de: mitigar o aliviar los síntomas o complicaciones; retrasar la evolución del estado, detener parcialmente las manifestaciones clínicas, la enfermedad o el trastorno; curar o eliminar el estado, enfermedad o trastorno; mejorar o paliar el estado o los síntomas, y hacer que remitan (ya sea parcial o totalmente), ya sea de forma detectable o no detectable; y/o prevenir o reducir el riesgo de contraer el estado, enfermedad o trastorno, debiendo entenderse que "prevenir" o "prevención" se refieren a la gestión y el cuidado de un paciente con el fin de impedir el desarrollo del estado, enfermedad o trastorno e incluyen la administración de los compuestos activos para prevenir o reducir el riesgo del comienzo de síntomas o complicaciones. El término "paliación" y las variaciones del mismo, tal como se usan en la presente memoria, significan que el grado y/o las manifestaciones no deseables de un estado o síntoma fisiológicos se reducen y/o el curso temporal de la evolución se ralentiza o se alarga, en comparación con la no administración de composiciones de la presente invención.

El individuo que ha de ser tratado es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano. Sin embargo, la presente memoria también abarca el tratamiento de animales, tales como ratones, ratas, perros, gatos, vacas, caballos, ovejas y cerdos.

Un "individuo que lo necesite" se refiere a un individuo que pueda beneficiarse de la presente divulgación. En una realización, dicho 'individuo que lo necesite' es un individuo enfermo, pudiendo ser dicha enfermedad una enfermedad o trastorno metabólicos tales como obesidad o diabetes, un trastorno de densidad ósea o un cáncer.

Un tratamiento según la invención puede ser profiláctico, de mejora o curativo.

Una "cantidad farmacológicamente eficaz", "cantidad farmacéuticamente eficaz" o "cantidad fisiológicamente eficaz" de un agente bioactivo es la cantidad de un agente bioactivo presente en una composición farmacéutica como se describe en la presente memoria que es necesaria para proporcionar un nivel deseado de agente activo en el torrente sanguíneo o en el sitio de acción en un individuo (por ejemplo, los pulmones, el sistema gástrico, el sistema colorrectal, la próstata, etc.) que ha de ser tratado para provocar una respuesta fisiológica anticipada cuando se administra tal composición. Un agente bioactivo en el presente contexto se refiere a un análogo de péptido GIP como se divulga en la presente memoria.

"Coadministrar" o "coadministración" tal como se usan en la presente memoria se refieren a la administración de uno o más análogos de péptido GIP de la presente invención y una composición farmacéutica del estado de la técnica. Los al menos dos componentes pueden administrarse por separado, secuencialmente o simultáneamente.

Descripción detallada

GIP se refiere a polipéptido insulinotrópico dependiente de la glucosa, también conocido como péptido (o polipéptido) inhibidor gástrico. Tal como se usa en la presente memoria, la abreviatura GIP o hGIP es GIP humano (número de entrada de Uniprot P09681). El GIP se obtiene de una proproteína de 153 aminoácidos y circula como un péptido de 42 aminoácidos biológicamente activo. Es sintetizado por células K de la mucosa del duodeno y el yeyuno del tracto gastrointestinal.

GIPR (o receptor de GIP) se refiere a receptores de polipéptidos inhibidores gástricos. Estas proteínas transmembrana de siete dominios se encuentran al menos en células beta en el páncreas. Tal como se usa en la presente memoria, la abreviatura GIPR o hGIPR es GIPR humano (número de entrada de Uniprot P48546). Los presentes inventores han identificado péptidos GIP que son antagonistas del GIPR, y que se acilan con la presente memoria para aumentar la semivida y la estabilidadin vivomientras retienen las sorprendentes propiedades antagonistas. Esto los hace potencialmente útiles en diversas aplicaciones terapéuticas.

Péptidos GIP

La presente invención está dirigida a análogos de péptido GIP que comprenden un fragmento peptídico de GIP (nativo o variantes) que tiene propiedades antagonistas de GIPR, y uno o más ácidos grasos unidos al mismo para aumentar la semivida de dicho péptido mientras se retienen las propiedades antagonistas de GIPR. Un aspecto es proporcionar un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

H - Q - Q - D - F - V - N - W - L - L - A - Q - K

en donde dicho péptido comprende además el dipéptido E - G en el extremo N (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

Un aspecto es también proporcionar un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 2 (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2):

En una realización, dicho péptido, o análogo de péptido GIP, está amidado en el extremo C-terminal (-NH2). En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso no se une al residuo Lys (K) en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso no se une al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, habiendo sido sustituido dicho residuo de aminoácido en la posición 30 por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E.

En una realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) que comprende

- un péptido EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, opcionalmente amidado (-NH<2>) en el extremo C, y

- al menos una molécula de ácido graso unida a uno o más residuos de aminoácido de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

- un péptido que consiste en EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, y - al menos una molécula de ácido graso unida a uno o más residuos de aminoácido de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

Variante funcional - funcionalidad

Un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) como se define en toda la memoria comprende una secuencia peptídica (SEQ ID NO: 2, y variantes de la misma) y al menos una molécula de ácido graso.

El término "péptido" y la expresión "péptido aislado" se pueden utilizar indistintamente en la presente memoria. El término "variante" y la expresión "variante funcional" se pueden utilizar indistintamente en la presente memoria. Un péptido, tal como se define en la presente memoria, incluye secuencias peptídicas nativas y también variantes funcionales de las secuencias de aminoácidos definidas de dicho péptido.

En una realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) TFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1),

en donde dicho péptido comprende además el dipéptido EG en el extremo N (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, y

en donde dicho péptido es capaz de unirse a y/o antagonizar un GIPR.

En una realización, los análogos de péptido GIP son capaces de unirse a un GIPR. En una realización, los análogos de péptido GIP son capaces de antagonizar un GIPR. En una realización, los análogos de péptido GIP son capaces de unirse a y antagonizar un GIPR. En algunas realizaciones, el GIPR es el GIPR humano (número de entrada de Uniprot P48546), el GIPR de ratón (número de entrada de Uniprot Q0P543), el GIPR de rata (número de entrada de Uniprot P43219), el GIPR de perro (número de entrada de Uniprot E2RIK5), el GIPR de cerdo (número de entrada de Uniprot I3LND8), y/o el GIPR de Macaca mulatta (número de entrada de Uniprot A0A1D5QDM0) (primate).

En una realización, los análogos de péptido GIP divulgados en la presente memoria son antagonistas del receptor de hGIP.

En una realización, los análogos de péptido GIP divulgados en la presente memoria son antagonistas competitivos del receptor de hGIP.

Cuando se haga referencia a un "péptido" o "análogo de péptido GIP" en la presente memoria, este término o esta expresión abarcarán referencias tanto a un análogo de péptidoper secomo a un análogo de péptido para su uso en métodos terapéuticos como se define en la presente memoria.

Una variante funcional de los péptidos de los presentes análogos de péptido GIP son los equivalentes funcionales de dichas secuencias peptídicas, es decir, retienen al menos algún efecto asociado con la secuencia peptídica nativa.

En una realización, una variante funcional de un péptido de la SEQ ID NO: 2 retiene las mismas actividades o capacidades biológicas que el péptido nativo o el péptido del que se obtiene. En una realización, un péptido y una variante funcional del mismo como se define en la presente memoria son capaces de uno o más de los siguientes: unirse a uno o más GIPR; antagonizar uno o más GIPR; desplazar GIP1-42 y/o GIP1-30 de uno o más GIPR; tener una afinidad mayor, igual o menor por un GIPR dado que GIP1-42 y/o GIP1-30; antagonizar la secreción de somatostatina inducida por GIP nativo, GIP1-42 y/o GIP1-30; antagonizar la secreción de insulina inducida por GIP nativo, GIP1-42 y/o GIP1-30; y antagonizar la secreción de glucagón inducida por GIP nativo, GIP1-42 y/o GIP1-30.

En una realización, un péptido y una variante funcional del mismo son capaces de unirse (o se unen) a uno o más de los siguientes: hGIPR (número de entrada de Uniprot P48546), rGIPR (número de entrada de Uniprot P43219), mGIPR (número de entrada de Uniprot Q0P543), el GIPR de perro (número de entrada de Uniprot E2RIK5), el GIPR de cerdo (número de entrada de Uniprot I3LND8), y el GIPR de Macaca mulatta (número de entrada de Uniprot A0A1D5QDM0) (primate).

En una realización, un péptido y una variante funcional del mismo son capaces de inhibir (reducir, antagonizar) una o más de las siguientes: i) secreción de glucagón inducida por GIP, ii) secreción de insulina inducida por GIP, iii) secreción de somatostatina inducida por GIP, iv) absorción de glucosa inducida por GIP, v) síntesis de ácido graso y/o incorporación de ácido graso inducidas por GIP, vi) expresión o actividad altas o aumentadas de un GIPR y vii) liberación de GIP después de una comida (liberación de GIP posprandial).

Variante funcional - mutantes

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 como se define en la presente memoria tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2. "Identidad" e "identidad de secuencia" pueden utilizarse indistintamente en la presente memoria.

En otra realización, dicha variante funcional tiene al menos un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En otra realización más, dicha variante funcional tiene al menos un 85% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha variante funcional tiene al menos un 90% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En otra realización, dicha variante funcional tiene al menos un 95% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha variante funcional tiene de un 75% a un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, tal como de un 80% a un 85%, tal como de un 85% a un 90%, tal como de un 90% a un 95% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

en donde dicho péptido comprende además el dipéptido EG en el extremo N (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), 0 una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

1 sustitución de aminoácido individual tal como se usa en la presente memoria se entiende como una sustitución de aminoácido en cualquier posición específica de la SEQ ID NO: 2, que se sustituye independientemente de cualesquiera otras características de la SEQ ID NO: 2, por ejemplo, otras sustituciones de aminoácidos o modificaciones con ácidos grasos.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales, tal como de 1 a 2, de 2 a 3, de 3 a 4, de 4 a 5 o de 5 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la parte o posición correspondientes de la SEQ ID NO: 2 (o, entre la variante y el péptido GIP nativo correspondiente).

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 1 sustitución de aminoácido individual. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 1 sustitución de aminoácido individual.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 2 sustituciones de aminoácidos individuales. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 2 sustituciones de aminoácidos individuales.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 3 sustituciones de aminoácidos individuales. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 3 sustituciones de aminoácidos individuales.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 4 sustituciones de aminoácidos individuales. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 4 sustituciones de aminoácidos individuales.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 5 sustituciones de aminoácidos individuales. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 5 sustituciones de aminoácidos individuales.

En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene 6 sustituciones de aminoácidos individuales. En una realización, dicha variante funcional de la SEQ ID NO: 2 tiene no más de 6 sustituciones de aminoácidos individuales.

En una realización, una o más, o la totalidad, de dichas sustituciones de aminoácidos son sustituciones conservativas de aminoácidos (o sustituciones sinónimas). Una sustitución conservativa es la sustitución de aminoácidos cuyas cadenas laterales tienen propiedades bioquímicas similares y, por lo tanto, no afectan a la función del péptido.

Entre los aminoácidos comunes, por ejemplo, una "sustitución conservativa de aminoácidos" también se puede ilustrar mediante una sustitución entre aminoácidos dentro de cada uno de los siguientes grupos: (1) glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina, (2) fenilalanina, tirosina y triptófano, (3) serina y treonina, (4) aspartato y glutamato, (5) glutamina y asparagina, y (6) lisina, arginina e histidina.

En una realización, un residuo de serina de un péptido de la invención se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Gin, Asn y Thr (todos ellos aminoácidos con cadenas laterales polares no cargadas); e independientemente de esto, un residuo de glicina (Gly) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Ala, Val, Leu e Ile; e independientemente de esto, un residuo de arginina (Arg) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Lys e His (todos tienen cadenas laterales cargadas positivamente); e independientemente de esto, un residuo de lisina (Lys) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Arg e His; e independientemente de esto, un residuo de metionina (Met) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Leu, Pro, Ile, Val, Phe, Tyr y Trp (todos tienen cadenas laterales hidrófobas); e independientemente de esto, un residuo de glutamina (Gln) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Asp, Glu y Asn; e independientemente de esto, un residuo de alanina (Ala) se sustituye por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Gly, Val, Leu e Ile.

Las sustituciones de aminoácidos concretas divulgadas en la presente memoria son K a R, E a D, L a M, Q a E, I a V, I a L, A a S, Y a W, K a Q, S a T, N a S, M a L y Q a R.

La identidad entre secuencias de aminoácidos se puede calcular utilizando algoritmos bien conocidos, tales como BLOSUM 30, BLOSUM 40, BLOSUM 45, BLOSUM 50, BLOSUM 55, BLOSUM 60, BLOSUM 62, BLOSUM 65, BLOSUM 70, BLOSUM 75, BLOSUM 80, BLOSUM 85 o BLOSUM 90 o por comparación simple de los aminoácidos específicos presentes en las posiciones correspondientes en dos secuencias peptídicas que se hayan de comparar.

Se puede utilizar la homología como un sinónimo de identidad/identidad de secuencia.

En otra realización, una variante funcional como se define en la presente memoria incluye secuencias donde un aminoácido de alquilo se sustituye por un aminoácido de alquilo, donde un aminoácido aromático se sustituye por un aminoácido aromático, donde un aminoácido que contiene azufre se sustituye por un aminoácido que contiene azufre, donde un aminoácido que contiene hidroxi se sustituye por un aminoácido que contiene hidroxi, donde un aminoácido ácido se sustituye por un aminoácido ácido, donde un aminoácido básico se sustituye por un aminoácido básico y/o donde un aminoácido monocarboxílico dibásico se sustituye por un aminoácido monocarboxílico dibásico.

Pueden introducirse sustituciones conservativas en una cualquiera o más posiciones de un péptido seleccionado de una cualquiera de la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 2, siempre que la variante resultante permanezca funcional. Sin embargo, también puede ser deseable introducir sustituciones no conservativas en una o más posiciones (sustituciones no sinónimas).

Una sustitución no conservativa que conduce a la formación de una variante de un péptido de la SEQ ID NO: 2 en una realización comprende la sustitución de residuos de aminoácidos que i) difieren sustancialmente en polaridad, por ejemplo, un residuo con una cadena lateral no polar (Ala, Leu, Pro, Trp, Val, Ile, Leu, Phe o Met) que sustituye a un residuo con una cadena lateral polar tal como Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn, o Gln o un aminoácido cargado tal como Asp, Glu, Arg o Lys, o la sustitución de un residuo no polar por uno cargado o polar; y/o ii) difieren sustancialmente en su efecto sobre la orientación de la cadena principal peptídica, tal como la sustitución de Pro o Gly por otro residuo; y/o iii) difieren sustancialmente en carga eléctrica, por ejemplo, sustitución de un residuo cargado positivamente tal como Lys, His o Arg por un residuo cargado negativamente tal como Glu o Asp (y viceversa); y/o iv) difieren sustancialmente en volumen estérico, por ejemplo, sustitución de un residuo que tenga una cadena lateral menor, por ejemplo, Ala, Gly o Ser por uno voluminoso tal como His, Trp, Phe o Tyr (y viceversa).

La sustitución de aminoácidos puede realizarse en una realización basándose en sus valores de hidrofobicidad e hidrofilicidad y la similitud relativa de los sustituyentes de cadena lateral de aminoácido, incluyendo la carga, el tamaño y similares.

Los péptidos o sus duplicados de variante funcional como se definen en la presente memoria comprenden aminoácidos proteinogénicos o naturales, es decir, los 22 aminoácidos incorporados de forma natural en polipéptidos. De éstos, 20 están codificados por el código genético universal y los 2 restantes; selenocisteína (Sec, U) y pirrolisina (Pyl, O), se incorporan a proteínas mediante mecanismos sintéticos únicos.

Un péptido como se define en la presente memoria, en una realización, comprende uno o más residuos de aminoácido de origen no natural (aminoácidos no naturales, no proteinogénicos o no estándar). Los aminoácidos de origen no natural incluyen, por ejemplo, sin limitación, beta-2-naftil-alanina, trans-3-metilprolina, 2,4-metanoprolina, cis-4-hidroxiprolina, ornitina (Orn), trans-4-hidroxiprolina, N-metilglicina, alotreonina, metiltreonina, hidroxietilcisteína, hidroxietilhomocisteína, nitroglutamnina, homoglutamina, ácido pipecólico, ácido tiazolidina carboxílico, deshidroprolina, 3- y 4-metilprolina, 3,3-dimetilprolina, terc-leucina, norleucina (Nle), metoxinina (Mox), norvalina, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina y 4-fluorofenilalanina.

En una realización, el aminoácido Met se sustituye por un análogo de aminoácido resistente a la oxidación, por ejemplo, norleucina (Nle), que conserva la longitud de la cadena lateral de aminoácido importante para interacciones hidrófobas, pero no sus propiedades de unión de hidrógeno; o metoxinina (Mox), un aminoácido no canónico que se asemeja más estrechamente a las propiedades electrónicas de Met en comparación con Nle.

Cualesquiera aminoácidos como se definen en la presente memoria pueden estar en la configuración L o D. Si no se especifica nada, se entiende preferiblemente la referencia a la forma isomérica L.

Los aminoácidos estándar y/o no estándar pueden estar enlazados por enlaces peptídicos (para formar una cadena peptídica lineal) o por enlaces no peptídicos (por ejemplo, a través de las cadenas laterales variables de los aminoácidos). Preferiblemente, los aminoácidos de los péptidos definidos en la presente memoria están enlazados por enlaces peptídicos.

El término péptido también abarca modificaciones postraduccionales introducidas por reacciones químicas o catalizadas por enzimas, como son conocidas en la técnica. Éstas incluyen la acetilación, la fosforilación, la metilación, la glucosilación, la glicación, la amidación, la hidroxilación, la desiminación, la desamidación, la carbamilación y la sulfatación de uno o más residuos de aminoácidos, y también la modificación proteolítica por proteinasas conocidas, incluidas las catepsinas lisosomales, y también las calpaínas, las secretasas y las metaloproteinasas de matriz.

En una realización preferida un péptido de la SEQ ID NO: 2 o una variante funcional del mismo están amidados, tal como amidados en el extremo C-terminal (-NH<2>). En una realización ejemplar de la misma, el péptido es hGIP(5-30)-NH<2>o hGIP(3-30)-NH<2>, o variantes del mismo, que comprende también una molécula de ácido graso.

En una realización, un péptido de la SEQ ID NO: 2 o una variante funcional del mismo están acetilados, tal como acetilados en el extremo N-terminal.

Asimismo, los equivalentes funcionales de los péptidos pueden comprender modificaciones químicas tales como ubiquitinación, marcado (por ejemplo, con radionúclidos, diversas enzimas, etc.), pegilación (derivatización con polietilenglicol) o por inserción (o sustitución por síntesis química) de aminoácidos, tales como la ornitina, que normalmente no aparecen en proteínas humanas (no proteinogénicos).

Se pueden formular compuestos estéricamente similares para imitar las porciones clave de la estructura peptídica. Esto se puede lograr mediante técnicas de modelado y diseño químico conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, pueden emplearse la esterificación y otras alquilaciones para modificar el extremo amino de, por ejemplo, una cadena principal peptídica de diarginina, para imitar una estructura tetrapeptídica. Se entenderá que todos los constructos estéricamente similares de este tipo entran dentro del alcance de la presente invención. En la presente invención también se incluyen péptidos con esterificaciones y alquilaciones N-terminales y C-terminales.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en N, Q y T está sustituido por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en D, E y S. En una realización, tales sustituciones de aminoácidos aumentan la solubilidad del péptido resultante.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 30 está sustituida por cualquier aminoácido.

Cualquier aminoácido tal como se usa en la presente memoria se refiere a aminoácidos tanto de origen natural como de origen no natural como se definen en la presente memoria.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 30 está sustituida por una sustitución conservativa de aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que un aminoácido hidrófobo está sustituido por un aminoácido hidrófilo.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 30 está sustituida por un aminoácido hidrófilo.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 30 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en D, E, S, R y A, tal como un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 30 está sustituida por cualquier aminoácido cuando la K en la posición 30 no se modifica uniendo una molécula de ácido graso.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 16 está sustituida por cualquier aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 16 está sustituida por una sustitución conservativa de aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 16 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en D, E, S, R y A, tal como un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 16 está sustituida por cualquier aminoácido cuando la K en la posición 16 no se modifica uniendo una molécula de ácido graso.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la K en la posición 16 y la K en la posición 30 están ambas sustituidas por cualquier aminoácido, tal como sustituciones conservativas de aminoácidos, tal como sustituidas por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en D, E, S, R y A, tal como sustituidas por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la M en la posición 14 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como sustituida por L, S, K o norleucina (Nle) o metoxinina (Mox). En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la D en la posición 15 está sustituida por cualquier aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la D en la posición 15 está sustituida por una sustitución conservativa de aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la D en la posición 15 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en E, A, Orn y K.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la H en la posición 18 está sustituida por cualquier aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la H en la posición 18 está sustituida por una sustitución conservativa de aminoácido.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la H en la posición 18 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en A, R, Orn y K.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la S en la posición 11 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Orn y K.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la I en la posición 12 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Orn y K.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la A en la posición 13 está sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en Orn y K.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante que tiene (que comprende) una sustitución de aminoácidos en una o más de las posiciones 11 (Ser), 12 (Ile), 13 (Ala), 14 (Met), 15 (Asp), 16 (Lys), 18 (His) y 30 (Lys), incluyendo sustituciones conservativas y no conservativas de aminoácidos.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que uno o más residuos de aminoácido están sustituidos por ornitina. En una realización, una variante como se define en la presente memoria con referencia a la sustitución por un residuo de Lys puede estar igualmente sustituida por un residuo de Orn. Tanto Lys como Orn pueden modificarse en su grupo amino de cadena lateral (grupo épsilon- o deltaamino, respectivamente).

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que uno o más residuos de aminoácidos están sustituidos por ornitina, uniéndose una molécula de ácido graso a dicho residuo de ornitina.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que un residuo de aminoácido está sustituido por ornitina.

En una realización, una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 es una variante en la que la E (Glu) en la posición 3 está sustituida por pGlu (ácido piroglutámico).

En una realización, el péptido es de origen no natural.

En una realización, el péptido es sintético.

En una realización, el péptido es un péptido aislado.

Péptidos GIP(3-30)

En una realización se proporciona un análogo de péptido GIP, teniendo dicho péptido la secuencia EGTFISDYX<11>X<12>X<13>X<14>X<15>X<16>IX<18>QQDFVNWLLAQX<30>(SEQ ID NO:4), en donde

X<11>se selecciona del grupo que consiste en S, K y Orn,

X<12>se selecciona del grupo que consiste en I, K y Orn,

X<13>se selecciona del grupo que consiste en A, K y Orn,

X<14>se selecciona del grupo que consiste en M, K, L, S, Nle y Mox,

X<15>se selecciona del grupo que consiste en D, E, A, K y Orn,

X<16>se selecciona del grupo que consiste en K, R, A y E,

X<18>se selecciona del grupo que consiste en H, A, R, K y Orn, y

X<30>se selecciona del grupo que consiste en K, R, A y E

o una variante funcional del mismo que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con dicha secuencia, modificándose dicho péptido uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácido de dicha secuencia, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una a X<30>.

En una realización, el péptido del presente análogo de péptido GIP se selecciona del grupo que consiste en: EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO:2), EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K16R H18K K30R; SEQ ID NO:72), EGTFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K16R K30R; SEQ ID NO:73), EGTFISDYSIAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18A; SEQ ID NO:74), EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18K; SEQ ID NO:75), EGTFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E H18A; SEQ ID NO:76), EGTFISDYSIAMDAIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16A H18A; SEQ ID NO:77), EGTFISDYSIAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E; SEQ ID NO:78), EGTFISDYSIAMNKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15N; SEQ ID NO:79),

EGTFISDYSIAMDAIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16A; SEQ ID NO:80), EGTFISDYSIAMDHIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16H; SEQ ID NO:81), EGTFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16R; SEQ ID NO:82), EGTFISDYSIAMDKIFQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18F; SEQ ID NO:83), EGTFISDYSIAMDKIWQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18W; SEQ ID NO:84), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K30R; SEQ ID NO:85), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQH(hGIP(3-30)K30H; SEQ ID NO:86), EKTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)G4K, SEQ ID NO:87), EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)T5K, SEQ ID NO:88), EGTKISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)F6K, SEQ ID NO:89), EGTFKSDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I7K, SEQ ID NO:90), EGTFIKDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S8K, SEQ ID NO:91), EGTFISKYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D9K, SEQ ID NO:92), EGTFISDKSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Y10K, SEQ ID NO:93), EGTFISDYKIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K, SEQ ID NO:94),

EGTFISDYSKAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K, SEQ ID NO:95), EGTFISDYSIKMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K, SEQ ID NO:96), EGTFISDYSIAKDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)M14K, SEQ ID NO:97), EGTFISDYSIAMKKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15K, SEQ ID NO:98), EGTFISDYSIAMDKKHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I17K, SEQ ID NO:99), EGTFISDYSIAMDKIHKQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q19K, SEQ ID NO:100), EGTFISDYSIAMDKIHQKDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q20K, SEQ ID NO:101), EGTFISDYSIAMDKIHQQKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D21K, SEQ ID NO:102), EGTFISDYSIAMDKIHQQDKVNWLLAQK (hGIP(3-30)F22K, SEQ ID NO:103), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFKNWLLAQK (hGIP(3-30)V23K, SEQ ID NO:104), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVKWLLAQK (hGIP(3-30)N24K, SEQ ID NO:105), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNKLLAQK (hGIP(3-30)W25K, SEQ ID NO:106), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWKLAQK (hGIP(3-30)L26K, SEQ ID NO:107), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLKAQK (hGIP(3-30)L27K, SEQ ID NO:108), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLKQK (hGIP(3-30)A28K, SEQ ID NO:109), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAKK (hGIP(3-30)Q29K, SEQ ID NO:110), EGTFISDYKIAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K H18A, SEQ ID NO:111), EGTFISDYKIAMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K H18R, SEQ ID NO:112), EGTFISDYKIAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K D15E, SEQ ID NO:113), EGTFISDYKIANIeDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K M14Nle, SEQ ID NO:114), EGTFISDYKIALDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K M14L, SEQ ID NO:115), EGTFISDYSKAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K H18A, SEQ ID NO:116), EGTFISDYSKAMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K H18R, SEQ ID NO:117), EGTFISDYSKAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K D15E, SEQ ID NO:118), EGTFISDYSKANleDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K M14Nle, SEQ ID NO:119), EGTFISDYSKALDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K M14L, SEQ ID NO:120), EGTFISDYSIKMDKIAqQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K H18A, SEQ ID NO:121), EGTFISDYSIKMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K H18R, SEQ ID NO:122), EGTFISDYSIKMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K D15E, SEQ ID NO:123), EGTFISDYSIKNleDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K M14Nle, SEQ ID NO:124), EGTFISDYSIKLDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K M14L, SEQ ID NO:125), EGTFISDYSIAMEKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E H18K; SEQ ID NO:126), EGTFISDYSIANleDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30) M14Nle H18K; SEQ ID NO:127), EGTFISDYSIALDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30) M14L H18K; SEQ ID NO:128), EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)T5K K16R K30R, SEQ ID NO:129) EGTFISDYSIAMOrnKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15Orn, SEQ ID NO:130), EGTFISDYSIAMDKIOrnQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18Orn; SEQ ID NO:131), EGTFISDYSIALDRIKQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)M14L K16R H18K K30R; SEQ ID NO: 132) EGWFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK (SEQ ID NO:144), y EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR(SEQ ID NO: 146),

modificándose dicho péptido uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácido, tal como uniendo una molécula de ácido graso a un residuo de aminoácido, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30, tal como que no se una al residuo de aminoácido K o R en la posición 30.

En una realización, la molécula de ácido graso se une a un residuo de K dentro de la posición 4-29 de la SEQ ID NO: 2 y variantes de la misma.

En una realización, dicho péptido está amidado en el extremo C-terminal (-NH<2>).

Unión de moléculas de ácido graso

En una realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) que comprende o consiste en la secuencia peptídica

EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), opcionalmente amidado en el extremo C-terminal, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

modificándose dicho péptido uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2 o no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso no se une al residuo de aminoácido N-terminal en la posición 3 de la SEQ ID NO: 2, por ejemplo, no se une a la E N-terminal en la posición 3 de la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une a un residuo de aminoácido en una cualquiera de las posiciones 4 a 29 de la SEQ ID NO: 2 o una variante de la misma.

En una realización, la molécula de ácido graso se une a un residuo de aminoácido en la posición 4, posición 5, posición 6, posición 7, posición 8, posición 9, posición 10, posición 11, posición 12, posición 13, posición 14, posición 15, posición 16, posición 17, posición 18, posición 19, posición 20, posición 21, posición 22, posición 23, posición 24, posición 25, posición 26, posición 27, posición 28 o posición 29 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en la región media de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 11 a 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 11 a 12, 12 a 13, 13 a 14, 14 a 15, 15 a 16, 16 a 17, 17 a 18, 18 a 19, 19 a 20 o 20 a 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 11, 12 y 13 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma. En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos de la región N-terminal de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 3 de la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 4 a 10 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 4 a 5, 5 a 6, 6 a 7, 6 a 8, 8 a 9 o 9 a 10 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos de la región C-terminal de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2.

En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 22 a 29 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma. En una realización, dicha al menos una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos en una cualquiera de las posiciones 22 a 23, 23 a 24, 24 a 25, 25 a 26, 26 a 27, 27 a 28 o 28 a 29 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos que tienen un grupo amino-alquilo de cadena lateral (-CnH<2>nNH<2>).

En una realización, una molécula de ácido graso se une a uno o más residuos de aminoácidos que tienen un grupo amino de cadena lateral (NH<2>).

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo amino de cadena lateral de un residuo de aminoácido.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo amino de cadena lateral £ (épsilon) de un residuo de lisina (Lys, K).

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo amino de cadena lateral ó (delta) de un residuo de ornitina (Orn).

En una realización, el residuo de aminoácido que tiene una molécula de ácido graso unida se selecciona del grupo que consiste en Lys y Orn.

En una realización, el residuo de aminoácido que tiene una molécula de ácido graso unida es Lys.

En una realización, la molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de un residuo de Orn de una variante funcional de la SEQ ID NO: 2 que comprende un residuo de aminoácido Orn.

En una realización, la molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de un residuo de K de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une a K en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, por ejemplo, se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 18 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido H en la posición 18 por K (u Orn) en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 18 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 18 de EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18K; SEQ ID NO:75),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de un residuo de K en cualquier posición de la SEQ ID NO: 2, o variantes funcionales de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 18 de EGTFISDYSIAMDKIOrnQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18Orn; SEQ ID NO:131),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, la K en la posición 16, y/o la K en la posición 30, de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, se sustituyen individualmente por cualquier aminoácido cuando una molécula de ácido graso se une a un residuo de aminoácido en una posición diferente a la posición 16 y la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 15 de EGTFISDYSIAMKKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15K, SEQ ID NO:98),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 15 de EGTFISDYSIAMOrnKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15Orn, SEQ ID NO:130),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 11 de EGTFISDYKIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K, SEQ ID NO:94),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 11 de EGTFISDYOrnIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11Orn, SEQ ID NO:134),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 12 de EGTFISDYSKAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K, SEQ ID NO:95),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 12 de EGTFISDYSOrnAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12Orn, SEQ ID NO:136),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 13 de EGTFISDYSIKMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K, SEQ ID NO:96),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 13 de EGTFISDYSIOrnMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13Orn, SEQ ID NO:138),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 9 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido D en la posición 9 por K u Orn en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 9 de EGTFISKYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D9K, SEQ ID NO:92),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 9 de EGTFISKYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D9Orn, SEQ ID NO:92),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido D en la posición 21 por K u Orn en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 21 de EGTFISDYSIAMDKIHQQKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D21K, SEQ ID NO:102),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 21 de EGTFISDYSIAMDKIHQQOrnFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D21Orn, SEQ ID NO:140),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 5 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido T en la posición 5 por K u Orn en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 5 de un péptido de secuencia

EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)T5K, SEQ ID NO:88),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 5 de un péptido de secuencia

EGOrnFISDYSIAMDKIHQQKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)T5Orn, SEQ ID NO:141),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 15 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido D en la posición 15 por K u Orn en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 15 de un péptido de secuencia

EGTFISDYSIAMKKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15K, SEQ ID NO:98),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 15 de un péptido de secuencia

EGTFISDYSIAMOrnKIHQQKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15Orn, SEQ ID NO:142),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al residuo de aminoácido en la posición 20 de la SEQ ID NO: 2, o una variante de la misma, habiéndose sustituido Q en la posición 20 por K u Orn en la SEQ ID NO: 2.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de K en la posición 20 de un péptido de secuencia

EGTFISDYSIAMDKIHQKDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q20K, SEQ ID NO:101),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, una molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de Orn en la posición 20 de un péptido de secuencia

EGTFISDYSIAMDKIHQOrnKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q20Orn, SEQ ID NO:143),

o una variante funcional de la misma.

En una realización, dicho péptido se modifica uniendo una (sólo una) molécula de ácido graso a un (único) residuo de aminoácido de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma.

En una realización, el péptido del análogo de péptido GIP comprende no más de un residuo de aminoácido K, residuo de aminoácido K que se modifica uniendo una molécula de ácido graso al grupo épsilon-amino de K. En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es un ácido graso de cadena lineal.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es un ácido graso ramificado. En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es una molécula de ácido graso monoacílico, que comprende un ácido graso.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es una molécula de ácido graso diacílico.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es una molécula de ácido graso diacílico que comprende dos ácidos grasos.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación es una molécula de ácido graso diacílico que contiene dos grupos carboxilo funcionales.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación comprende un grupo acilo de fórmula CH<3>(CH<2>)nCO-, en donde n es un número entero de 4 a 24.

En una realización, dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo seleccionado del grupo que consiste en CHa(CH<2>)<6>CO-, CHa(CH<2>)<8>CO-, CH3(CH<2>)<10>CO- CH3(CH<2>)-i<2>CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH<2>)<16>CO-, CH3(CH<2>)<18>CO-, CH3(CH<2>)<2>qCO- y CH3(CH<2>)<22>CO-.

En una realización, dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo seleccionado del grupo que consiste en CH<3>(CH<2>)<10>CO- (laurilo, C12), CH<3>(CH<2>)<12>CO- (miristoilo, C14), CH<3>(CH<2>)-mcO- (palmitoilo, C16) y CH<3>(CH<2>)<16>CO- (estearilo, C18).

En una realización, dicha molécula de ácido graso es un ácido graso monoacílico seleccionado del grupo que consiste en CH<3>(CH<2>)^CO- (laurilo, C12), CH<3>(CH<2>)<12>CO- (miristoilo, C14), CH<3>(CH<2>)-mcO- (palmitoilo, C16) y CH<3>(CH<2>)<16>CO- (estearilo, C18).

En una realización, dicha molécula de ácido graso comprende dos ácidos grasos seleccionados cada uno del grupo que consiste en CH<3>(CH<2>)^CO- (laurilo, C12), CH<3>(CH<2>)<12>CO- (miristoilo, C14), CH<3>(CH<2>)-mcO-(palmitoilo, C16) y CH<3>(CH<2>)<16>CO- (estearilo, C18).

En una realización, dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo de fórmula COOH(CH<2>)nCO-(ácido dicarboxílico), en donde n es un número entero de 4 a 24.

En una realización, dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo seleccionado del grupo que consiste en COOH(CH<2>><m>CO-, COOH(CH<2>)<16>CO-, COOH(CH<2>)<18>CO- y COOH(CH<2>)<20>CO-.

En una realización, dicha molécula de ácido graso se selecciona entre C12, C14, C16 y C18.

En una realización, dicha molécula de ácido graso se selecciona entre diácido C14, diácido C16 y diácido C18. En una realización, dicha molécula de ácido graso es palmitoilo.

En una realización, dicha molécula de ácido graso es ácido 1,16-hexadecanodioico/ácido hexadecanodioico. En una realización, dicha molécula de ácido graso es estearilo.

En una realización, dicha molécula de ácido graso es ácido 1,18-octadecanodioico/ácido octadecanodioico. Una molécula de ácido graso puede unirse a un residuo de aminoácido de tal manera que un grupo carboxilo de la molécula de ácido graso forme un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido.

La unión de moléculas de ácido graso a un péptido en la presente memoria puede ocurrir ya sea directa o indirectamente, es decir, a través de un enlazador o espaciador.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une directamente a un residuo de aminoácido.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une directamente al grupo alfa-amino de un residuo de aminoácido, siendo dicho residuo de aminoácido el residuo de aminoácido N-terminal.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une directamente al grupo épsilon-amino de un residuo de Lys.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une directamente al grupo delta-amino de un residuo de Orn.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une a un residuo de aminoácido a través de un enlazador o espaciador.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une al grupo alfa-amino de un residuo de aminoácido a través de un enlazador o espaciador, siendo dicho residuo de aminoácido el residuo de aminoácido N-terminal.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une al grupo épsilon-amino de un residuo de Lys a través de un enlazador o espaciador.

En una realización, la molécula de ácido graso según la presente divulgación se une al grupo delta-amino de un residuo de Orn a través de un enlazador o espaciador.

En una realización, la molécula de ácido graso puede unirse a un residuo de aminoácido por medio de un espaciador (o enlazador) de tal manera que un grupo carboxilo del espaciador forme un enlace amida con un grupo amino de la molécula de ácido graso.

En una realización, el espaciador es un a ,u>-aminoácido. Ejemplos de espaciadores adecuados son ácido succínico, Lys, Glu o Asp, o un dipéptido tal como Gly-Lys. Cuando el espaciador es ácido succínico, un grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el otro grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino de la molécula de ácido graso. Cuando el espaciador es Lys, Glu o Asp, el grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el grupo amino del mismo puede formar un enlace amida con un grupo carboxilo de la molécula de ácido graso. Cuando se usa Lys como espaciador, en algunos casos se puede insertar un espaciador adicional entre el grupo £-amino de Lys y la molécula de ácido graso. En una realización, tal espaciador adicional es ácido succínico que forma un enlace amida con el grupo £-amino de Lys y con un grupo amino presente en la molécula de ácido graso. Otros espaciadores son N£-(Y-L-glutamilo), N£-(p-L-asparagilo), N£-glicilo, y N£-(a -(Y-aminobutanoilo)).

En una realización, el espaciador es un enlazador hidrófilo. En una realización, el espaciador es un enlazador hidrófilo de aminoácido no natural.

En una realización, el espaciador se selecciona del grupo que consiste en Y-aminobutanoilo (ácido<y>-aminobutírico), Y-glutamilo (ácido Y-glutámico), p-asparagilo, p-alanilo y glicilo. En una realización, el espaciador comprende uno o más de los siguientes: Y-aminobutanoilo (ácido Y-aminobutírico), Y-glutamilo (ácido Y-glutámico), p-asparagilo, p-alanilo y glicilo.

En una realización, el espaciador es una repetición de restos espaciadores individuales. En una realización, el espaciador es una repetición de restos espaciadores idénticos. En una realización, el espaciador es una repetición de restos espaciadores diferentes.

En una realización, el espaciador es ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (Y-Glu)-AEEAc), o una repetición del mismo.

En una realización, el espaciador comprende una o más repeticiones de ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (Y-Glu)-AEEAcn).

En una realización, el espaciador es [ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico]n (Y-Glu)-AEEAcn), en donde n es un número entero entre 1 y 50.

En una realización, el espaciador es [ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico]n (Y-Glu)-AEEAcn), en donde n es un número entero entre 1 y 50, tal como un número entero entre 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7 8, 8-9, 9-10, 10-11, 11-12, 12-13, 13-14, 14-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, 45-50.

En una realización, el espaciador es [ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico]n (Y-Glu)-AEEAcn), en donde n es un número entero seleccionado del grupo que consiste en 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 y 50.

En una realización, el espaciador es un residuo de aminoácido excepto Cys. En una realización, el espaciador es 4-Abu. En una realización, el espaciador es ácido y-aminobutúrico.

En otra realización, el espaciador es un dipéptido, tal como un dipéptido en donde el residuo de aminoácido C-terminal es Lys, His o Trp, preferiblemente Lys, y en donde el residuo de aminoácido N-terminal se selecciona del grupo que comprende Ala, Arg, Asp, Asn, Gly, Glu, Gln, Ile, Leu, Val, Phe y Pro. En una realización, el espaciador dipeptídico es Gly-Lys.

En una realización, el espaciador comprende uno o más restos seleccionados del grupo que consiste en yaminobutanoilo (ácido Y-aminobutírico), Y-glutamilo (ácido Y-glutámico), p-asparagilo, p-alanilo y glicilo. En una realización, el espaciador comprende uno o más de los siguientes: Y-aminobutanoilo (ácido Y-aminobutírico), Y-glutamilo (ácido Y-glutámico), p-asparagilo, p-alanilo, glicilo, ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (Y-Glu- AEEAcn, en donde n es un número entero entre 1 y 50), un residuo de aminoácido excepto Cys, 4-Abu, ácido y-aminobutúrico y un dipéptido.

En otra realización, el espaciador es un grupo de ácido alcano a ,w -dicarboxílico no ramificado que tiene de 1 a 7 grupos metileno, preferiblemente dos grupos metileno, espaciador que forma un puente entre un grupo amino del péptido precursor y un grupo amino de la molécula de ácido graso.

Péptidos GIP(3-30) con ácido graso

En una realización, el análogo de GIP como se define en la presente memoria se selecciona del grupo que consiste en:

EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C12/K16

EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C16/K16

EGWFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK -C16/K16

EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C14/K16

EGTFISDYSIAM DKI HQQDFVNWLLAQK-C18/K16

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C12/K18

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C16/K18,

EGTFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK-C16/K16,

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K18,

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C18/K18,

EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K18,

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR-C18/K18,

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR-C16/K18,

EGTFISDYSIALDKIKQQDFVNWLLAQK-C16/K18,

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K18

EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K18, y

EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C18/K18,

EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K5,

EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K5,

EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-diácido-C18/K5,

EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR-diácido-C18/K5, y

EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C18/K18,

o una variante funcional de los mismos,

en donde dicho ácido graso se une directamente o a través de un enlazador/espaciador como se define en la presente memoria.

En una realización, el análogo de GIP se selecciona del grupo que consiste en:

AT164 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/K18+ácido y-glutámico],

AT165 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/K18+ácido y-aminobutúrico],

AT166 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/K18+p-alanina], y

AT167 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/K18+ácido y-glutámico+ una o más repeticiones de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico].

[hGIP(3-30)NH2[H18K]-diácido-C16/K18+ácido y-glutámico],

[hGIP(3-30)NH2[H18K]-diácido-C16/K18+ácido y-aminobutúrico],

[hGIP(3-30)NH2[H18K]-diácido-C16/K18+p-alanina], y

[hGIP(3-30)NH2[H18K]-diácido-C16/K18+ácido y-glutámico+ una o más repeticiones de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico.

Compuesto

Un aspecto adicional es proporcionar un compuesto que comprende o que consiste en un péptido como se define en la presente memoria. En una realización, dicho compuesto se formula como un monómero peptídico (es decir, que comprende 1 copia del péptido), mientras que en otra realización dicho compuesto se formula como un multímero peptídico.

Compuesto multimérico

En una realización, el péptido según la presente divulgación se formula como un multímero. Un multímero es una proteína que comprende o consiste en múltiples monómeros peptídicos. Un multímero es un agregado de múltiples moléculas que generalmente se mantienen unidas con enlaces no covalentes. Esta definición distingue un multímero de un polímero, que es una serie de monómeros que se mantienen unidos con enlaces covalentes.

En una realización, una secuencia peptídica de la presente divulgación se conecta a otra secuencia peptídica (idéntica o no idéntica) de la presente divulgación mediante un enlace químico o a través de un grupo enlazador. En algunas realizaciones, un péptido de la divulgación se formula como un oligómero o multímero de monómeros, en donde cada monómero es como una secuencia peptídica como se define según la presente divulgación.

Por lo tanto, según la divulgación, un compuesto multimérico es, en una realización, un polímero que comprende dos o más secuencias peptídicas de la divulgación, siendo dichas secuencias peptídicas idénticas o no idénticas, siendo al menos una de las dos o más secuencias peptídicas un péptido según la presente divulgación. Preferiblemente, ambas secuencias peptídicas son un péptido según la presente divulgación. En una realización, el compuesto multimérico es un dímero, que comprende dos péptidos según la presente divulgación, siendo dichos dos péptidos idénticos o no idénticos uno con respecto a otro.

En otra realización, el compuesto multimérico es un trímero, que comprende tres péptidos según la presente divulgación, siendo dichos péptidos idénticos o no idénticos unos con respecto a otros.

En otra realización, el compuesto multimérico es un tetrámero, que comprende cuatro péptidos según la presente divulgación, siendo dichos péptidos idénticos o no idénticos unos con respecto a otros.

En una realización, el compuesto multimérico es un dendrímero, tal como un dendrímero tetramérico u octamérico. Los dendrímeros son moléculas grandes, aproximadamente esféricas, repetidamente ramificadas, típicamente simétricas alrededor del núcleo, y con frecuencia adoptan una morfología tridimensional esférica. Los dendrímeros según la presente divulgación pueden comprender 4 péptidos, 8 péptidos, 16 péptidos o 32 péptidos. En una realización concreta, dicho dendrímero comprende cuatro péptidos (es decir, un dendrímero tetramérico) u ocho péptidos (dendrímero octamérico).

En algunas realizaciones concretas, el compuesto multimérico comprende dos secuencias de aminoácidos idénticas de la presente invención (dímero) o el compuesto comprende cuatro copias idénticas de una secuencia de aminoácidos de la presente divulgación (dendrímero tetramérico).

Los multímeros según la divulgación se producen, en una realización, enlazando dos o más monómeros peptídicos a través de un enlace peptídico o un grupo enlazador. En una realización, se enlazan a una cadena principal de lisina, tal como un residuo de lisina (cada cadena peptídica se enlaza a un único residuo de lisina) o se acoplan a un soporte polimérico, por ejemplo, un soporte proteico. En una realización, dicho grupo enlazador comprende una pluralidad de residuos de lisina, tal como un resto nuclear que tiene una pluralidad de residuos de lisina, tal como se ve en una estructura dendromérica a base de lisina que contiene tres, siete, quince y más residuos de lisina. Sin embargo, se puede prever cualquier otro enlace de monómeros peptídicos conocido por el experto en la materia.

En una realización, el enlace aparece en el extremo N-terminal y/o C-terminal de los monómeros peptídicos. En una realización se proporciona un compuesto multimérico, que consiste en A) uno o más análogos de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

H - Q - Q - D - F - V - N - W - L - L - A - Q - K

en donde dicho péptido comprende además el dipéptido E - G en el extremo N (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con una cualquiera de las SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2,

en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, y B) opcionalmente uno o más grupos enlazadores.

Determinación de afinidad y propiedades antagonistas

Con el fin de determinar si un péptido es un antagonista del GIPR, se pueden emplear métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, determinando la CI50 del péptido. Esto se puede hacer construyendo una curva de dosis-respuesta y examinando el efecto de diferentes concentraciones del péptido sobre la inversión de la actividad agonista. El agonista puede ser GIP1-42, por ejemplo, hGIP-1-42 o hGIP1 -30. El GIPR puede ser hGIPR, rGIPR, mGIPR, GIPR de perro, GIPR de cerdo o el GIPR de Macaca mulatta. Pueden calcularse los valores CI50 para un antagonista dado determinando la concentración necesaria para inhibir la mitad de la respuesta biológica máxima del agonista. Un método para determinar si un péptido es un antagonista se describe en el Ejemplo 4, pero también se pueden usar otros métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede realizar un análisis de la representación gráfica de Schild en curvas de dosis-respuesta de AMPc de hGIP1-42 con concentraciones crecientes de péptidos obtenidos de GIP. De esta manera, también se puede determinar el tipo de actividad antagonista.

Pueden realizarse experimentos de unión competitiva heteróloga con el fin de medir la afinidad del péptido por un GIPR, es decir, la eficacia con la que el péptido es capaz de desplazar un GIP1-42 dado, por ejemplo, hGIP1-42. Estos experimentos de unión competitiva se pueden realizar por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el GIP1-42 se puede marcar radioactivamente, por ejemplo, con 125I. El experto en la técnica conoce otros isótopos adecuados.

Método de tratamiento

También es un aspecto proporcionar un péptido como se define en la presente memoria, o una composición que comprende el péptido, para su uso como un medicamento.

En una realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

para su uso como medicamento.

En otra realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

para su uso en un método para inhibir o reducir uno o más de los siguientes: i) secreción de glucagón inducida por GIP, ii) secreción de insulina inducida por GIP, iii) secreción de somatostatina inducida por GIP, iv) absorción de glucosa inducida por GIP, v) síntesis de ácido graso y/o incorporación de ácido graso inducidas por GIP, vi) expresión o actividad altas o aumentadas de un GIPR, vii) liberación de GIP posprandial, viii) niveles séricos de triglicéridos y/o ácidos grasos libres, ix) reducción de resorción ósea inducida por GIP. En otra realización se proporciona un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

H -Q-Q- D - F - V - N - W - L - L - A -Q- K

para su uso en un método para tratar un estado seleccionado del grupo que consiste en síndrome metabólico, obesidad, sobrepeso, un trastorno relacionado con la obesidad, prediabetes (glucosa en ayunas empeorada), diabetes mellitus (tipo I y tipo 2), un trastorno relacionado con la diabetes, resistencia a la insulina, glucosa en ayunas elevada (hiperglucemia), nivel de triglicéridos en suero en ayunas elevado (triglicérido VLDL), niveles bajos de lipoproteínas de alta densidad (HDL, por sus siglas en inglés), un trastorno del metabolismo de los ácidos grasos, una enfermedad cardiovascular, presión sanguínea elevada y aterosclerosis.

En una realización concreta se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento de la obesidad.

En una realización concreta se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento de la diabetes mellitus, incluyendo diabetes mellitus tipo I y tipo II.

En una realización concreta se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento de la resistencia a la insulina.

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

H -Q-Q- D - F - V - N - W - L - L - A -Q- K

para su uso en un método para inducir pérdida de peso.

Un aspecto adicional es proporcionar un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento del cáncer.

En una realización, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de colon, un cáncer neuroendocrino y adenoma suprarrenal.

Un aspecto adicional es proporcionar un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento de un trastorno de densidad ósea (o un trastorno de volumen óseo).

En una realización se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método para inhibir la actividad de las células óseas. En una realización se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método para inhibir (o antagonizar) la reducción posprandial inducida por GIP en la resorción ósea. En una realización se proporciona un péptido como se define en la presente memoria para su uso en un método de tratamiento del cáncer de hueso.

En una realización, el trastorno de densidad ósea (o volumen óseo) se selecciona del grupo que consiste en osteoporosis, trastornos caracterizados por baja densidad ósea y/o volumen óseo reducido, trastornos caracterizados por alta densidad ósea y/o volumen óseo aumentado y osteoporosis.

Un aspecto adicional es proporcionar un análogo de péptido GIP como se define en la presente memoria para su uso en un método para caracterizar o examinar aspectos de un trastorno, y/o caracterizar o examinar aspectos de la fisiología humana asociados con un trastorno, en donde dicho trastorno, en una realización, se selecciona entre trastorno o síndrome metabólico, tal como obesidad, diabetes mellitus, resistencia a la insulina o trastorno del metabolismo de ácidos grasos. En otros aspectos, la invención se refiere a métodos para tratar el cáncer, tal como cáncer de colon o adenoma suprarrenal. En otros aspectos, la invención se refiere a métodos para tratar un trastorno de densidad ósea caracterizado por alta densidad ósea y/o volumen óseo aumentado u osteoporosis. En otros aspectos, la invención se refiere a métodos para tratar la aterosclerosis. En otra realización se proporciona el uso de un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) de fórmula 1 (hGIP5-30, SEQ ID NO: 1):

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

H - Q - Q - D - F - V - N - W - L - L - A - Q - K

en donde dicho péptido comprende además el dipéptido E - G en el extremo N (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), 0 una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2,

en la fabricación de un medicamento para

- tratar un estado seleccionado del grupo que consiste en síndrome metabólico, obesidad, sobrepeso, un trastorno relacionado con la obesidad, prediabetes (glucosa en ayunas empeorada), diabetes mellitus (tipo 1 y tipo 2), un trastorno relacionado con la diabetes, resistencia a la insulina, glucosa en ayunas elevada (hiperglucemia), nivel de triglicéridos en suero en ayunas elevado (triglicérido VLDL), niveles bajos de lipoproteínas de alta densidad (HDL), un trastorno del metabolismo de los ácidos grasos, una enfermedad cardiovascular, presión sanguínea elevada y aterosclerosis, o

- inducir la pérdida de peso, o

- tratar el cáncer, incluyendo, pero sin limitarse a, cáncer de colon, un cáncer neuroendocrino y adenoma suprarrenal, o

- tratar un trastorno de densidad ósea, que incluye, pero no se limita a, osteoporosis, trastornos caracterizados por baja densidad ósea y/o volumen óseo reducido, trastornos caracterizados por alta densidad ósea y/o volumen óseo aumentado y osteoporosis.

También se proporciona un método para tratar un síndrome metabólico tal como obesidad, sobrepeso, diabetes mellitus, resistencia a la insulina o trastorno del metabolismo de ácidos grasos; un cáncer tal como cáncer de colon o adenoma suprarrenal; un trastorno de densidad ósea, tal como trastornos de densidad ósea caracterizados por alta densidad ósea y/o volumen óseo aumentado; o aterosclerosis; comprendiendo dicho método la etapa de administrar a un individuo que lo necesite una cantidad eficaz de un péptido como se define en la presente memoria.

Un individuo que lo necesite, tal como se denomina en la presente memoria, es un individuo que pueda beneficiarse de la administración de un péptido o composición farmacéutica según la presente divulgación. Tal individuo puede padecer de un trastorno metabólico tal como obesidad, sobrepeso, diabetes, resistencia a la insulina o trastorno del metabolismo de ácidos grasos, un cáncer tal como cáncer de colon o adenoma suprarrenal, un trastorno de densidad ósea, o estar en riesgo de padecerlo. El individuo puede ser cualquier ser humano, masculino o femenino, bebé, de mediana edad o anciano. El trastorno que se ha de tratar o prevenir en el individuo puede estar relacionado con la edad del individuo, la salud general del individuo, las medicaciones usadas para tratar al individuo o si el individuo tiene o no un historial previo de padecimiento de enfermedades o trastornos que pudieran haber o hayan inducido un trastorno metabólico tal como obesidad, sobrepeso, diabetes, resistencia a la insulina o trastorno del metabolismo de ácidos grasos, un cáncer tal como cáncer de colon o adenoma suprarrenal, aterosclerosis, un trastorno de densidad ósea. En algunas realizaciones, el trastorno que se ha de tratar está relacionado con la secreción de glucagón inducida por GIP, la secreción de insulina inducida por GIP, la secreción de somatostatina inducida por GIP, la absorción de glucosa inducida por GIP, la síntesis de ácidos grasos y/o la incorporación de ácidos grasos inducidas por GIP, la expresión y/o actividad altas de un GIPR, la liberación de GIP después de una comida; debiendo interpretarse el término "altas" como referencia a niveles mayores que los niveles correspondientes observados en individuos que no necesitan tratamiento.

Las referencias a métodos de tratamiento en la presente descripción se han de interpretar como referencias a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del individuo mediante terapia.

Método de preparación (péptido)

Los péptidos según la presente divulgación se pueden preparar mediante cualesquiera métodos conocidos en la técnica. Por tanto, los péptidos obtenidos de GIP pueden prepararse mediante técnicas estándar de preparación de péptidos, tales como síntesis en solución o síntesis en fase sólida de tipo Merrifield.

En una realización, un péptido como se define en la presente memoria es un péptido de origen no natural; que se obtiene de GIP nativo de proteína de origen natural, tal como GIP1-42.

En una realización, un péptido según la presente divulgación se purifica a partir de una fuente de origen natural del mismo, tal como suero. La purificación de proteínas es una serie de procesos destinados a aislar un solo tipo de proteína de una mezcla compleja. El material de partida suele ser un tejido biológico. Las diversas etapas en el proceso de purificación pueden liberar la proteína de una matriz que la encierra, separar las partes proteicas y no proteicas de la mezcla y finalmente separar la proteína deseada de todas las demás proteínas. Las etapas de separación pueden aprovechar las diferencias (por ejemplo) en el tamaño de la proteína, las propiedades físico-químicas, la afinidad de unión y la actividad biológica.

En una realización, un péptido según la divulgación se fabrica o produce sintéticamente.

Los métodos para la producción sintética de péptidos son bien conocidos en la técnica. Se pueden encontrar descripciones detalladas, así como consejos prácticos, para producir péptidos sintéticos en Synthetic Peptides: A User's Guide (Advances in Molecular Biology), Grant G. A. ed., Oxford University Press, 2002, o en: Pharmaceutical Formulation: Development of Peptides and Proteins, Frokjaer and Hovgaard eds., Taylor and Francis, 1999.

En una realización, el péptido o las secuencias peptídicas de la invención se producen sintéticamente, en particular, mediante el método de Síntesis Peptídica Asistida por Secuencia (SAPS, por sus siglas en inglés), por síntesis en solución, por Síntesis peptídica en fase sólida (SPPS, por sus siglas en inglés), tal como la síntesis en fase sólida de tipo Merrifield, mediante técnicas recombinantes (producción por células hospedadoras que comprenden una primera secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido operativamente asociada con un segundo ácido nucleico capaz de dirigir la expresión en dichas células hospedadoras) o síntesis enzimática. Éstos son bien conocidos por los expertos en la técnica.

Los péptidos pueden sintetizarse por lotes en un sintetizador de péptidos completamente automatizado usando 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc) o terc-butiloxicarbonilo (Boc) como grupo protector de N-a-amino y grupos de protección comunes adecuados para funcionalidades de cadena lateral.

Después de la purificación, tal como mediante HPLC de fase inversa, los péptidos pueden procesarse adicionalmente para obtener, por ejemplo, isoformas modificadas cíclicas o C- o N-terminales. Los métodos de ciclización y modificación terminal son bien conocidos en la técnica.

Los péptidos según la invención pueden sintetizarse como monómeros o multímeros tales como dímeros o tetrámeros.

Composición farmacéutica y formulación

Si bien es posible que el agente bioactivo de la presente divulgación se administre como producto químico (péptido) en bruto, a veces se prefiere presentarlo en forma de una formulación farmacéutica. Tal formulación farmacéutica puede denominarse composición farmacéutica, composición farmacéuticamente aceptable o una composición farmacéuticamente segura.

Por consiguiente, se proporciona además una formulación farmacéutica, que comprende un agente bioactivo de la presente invención, o una sal o éster farmacéuticamente aceptables del mismo, y un soporte, excipiente y/o diluente farmacéuticamente aceptables. Las formulaciones farmacéuticas pueden prepararse mediante técnicas convencionales, por ejemplo, como se describe en Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2005, Lippincott, Williams & Wilkins.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos peptídicos, cuando pueden prepararse, también están destinadas a estar cubiertas por esta invención. Estas sales serán las que sean aceptables en su aplicación para un uso farmacéutico. Con esto quiere decirse que la sal retendrá la actividad biológica del compuesto precursor y que la sal no tendrá efectos adversos o perjudiciales en su aplicación y uso en el tratamiento de enfermedades.

Las sales farmacéuticamente aceptables se preparan de una manera estándar. Si el compuesto precursor es una base, se trata con un exceso de un ácido orgánico o inorgánico en un disolvente adecuado. Si el compuesto precursor es un ácido, se trata con una base inorgánica u orgánica en un disolvente adecuado.

Los compuestos peptídicos como se divulgan en la presente memoria pueden administrarse en forma de una sal de metal alcalino o metal alcalinotérreo de los mismos, de manera concurrente, simultáneamente o junto con un soporte o diluente farmacéuticamente aceptables, especialmente y preferiblemente en forma de una composición farmacéutica de los mismos, ya sea por vía oral, rectal o parenteral (incluida la subcutánea), en una cantidad eficaz.

Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables para su uso en la presente composición farmacéutica de la invención incluyen las obtenidas de ácidos minerales, tales como los ácidos clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico y sulfúrico, y ácidos orgánicos, tales como los ácidos tartárico, acético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucónico, succínico, p-toluenosulfónico y arilsulfónico, por ejemplo.

En una realización concreta, el péptido según la divulgación se formula como una sal de acetato o una sal de TFA (trifluoroacetato).

Administración y dosificación

Según la presente divulgación, un péptido, o una composición que comprende un péptido como se define en la presente memoria, se administra a individuos que necesiten tratamiento en dosis farmacéuticamente eficaces o una cantidad terapéuticamente eficaz. Los requisitos de dosificación variarán con la composición de fármaco concreta empleada, la vía de administración y el individuo concreto que se esté tratando, lo que depende de la gravedad y el tipo de trastorno, así como del peso y el estado general del individuo. Un experto en la técnica también reconocerá que la cantidad y la separación óptimas de las dosis individuales de un compuesto peptídico estarán determinadas por la naturaleza y el alcance del estado que se esté tratando, la forma, la vía y el sitio de administración, y el paciente concreto que esté siendo tratado, y que tales parámetros óptimos pueden ser determinados por técnicas convencionales. Un experto en la técnica también apreciará que el curso óptimo de tratamiento, es decir, el número de dosis de un compuesto administradas por día durante un número definido de días, puede determinarse usando pruebas de determinación del curso de tratamiento convencionales.

En una realización, el agente bioactivo se administra al menos una vez al día, tal como una vez al día, tal como dos veces al día, tal como tres veces al día, tal como cuatro veces al día, tal como cinco veces al día.

Una dosis también puede administrarse en intervalos intermitentes o intervalos en los que una dosis no se administra todos los días. Más bien, se pueden administrar una o más dosis cada dos días, cada tres días, cada cuatro días, cada cinco días, cada seis días, cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, cada cuatro semanas, cada cinco semanas, cada seis semanas, o intervalos dentro de esos rangos (tal como cada 2 a 4 semanas o 4 a 6 semanas).

En una realización, el agente bioactivo se administra en dosis de al menos 30 000 pmol/kg/día, tal como al menos 60000 pmol/kg/día, tal como al menos 72000 pmol/kg/día, tal como al menos 90000 pmol/kg/día, tal como al menos 120 000 pmol/kg/día, tal como al menos 150 000 pmol/kg/día, tal como al menos 30 000 pmol/kg/día, preferiblemente tal como al menos 60 000 pmol/kg/día. En una realización concreta, el agente bioactivo se administra en una dosis de 72000 pmol/kg/día.

En una realización, el agente bioactivo se administra en una dosis diaria de 30000 pmol/kg a 40000 pmol/kg, tal como de 40000 pmol/kg a 50000 pmol/kg, tal como de 50000 pmol/kg a 60000 pmol/kg, tal como de 60 000 pmol/kg a 70000 pmol/kg, tal como de 70000 pmol/kg a 80000 pmol/kg, tal como de 80000 pmol/kg a 90 000 pmol/kg, tal como de 90 000 pmol/kg a 100 000 pmol/kg, tal como de 100 000 pmol/kg a 110 000 pmol/kg, tal como de 110000 pmol/kg a 120000 pmol/kg. En una realización concreta, el agente bioactivo es un péptido y se administra en una dosis diaria de 60000 pmol/kg o 72000 pmol/kg.

En una realización, el agente bioactivo se administra por infusión. En una realización, el agente bioactivo es un péptido y la infusión tiene lugar durante un tiempo de al menos 15 min, tal como al menos 20 min, tal como al menos 30 min, tal como al menos 40 min, tal como al menos 50 min, tal como al menos 60 min, tal como al menos 90 min, tal como al menos 120 min, preferiblemente tal como 60 min.

En una realización, el agente bioactivo se administra durante un tiempo de entre 15 y 120 min, tal como entre 15 y 20 min, tal como entre 20 y 30 min, tal como entre 30 y 40 min, tal como entre 40 y 50 min, tal como entre 50 y 60 min, tal como entre 60 y 90 min, tal como entre 90 y 120 min.

En una realización, el agente bioactivo se administra una vez al día durante un tiempo de 60 min, o dos veces al día durante un tiempo de 30 min, o tres veces al día durante un tiempo de 20 min, o cuatro veces al día durante un tiempo de 15 min, o cinco veces al día durante un tiempo de 12 min, donde el tiempo es la duración de cada administración individual.

En una realización, el agente bioactivo se administra en una dosis de al menos 500 pmol/kg/min, tal como al menos 1000 pmol/kg/min, tal como al menos 1200 pmol/kg/min, tal como al menos 1500 pmol/kg/min, tal como al menos 2000 pmol/kg/min, tal como al menos 2500 pmol/kg/min, tal como al menos 5000 pmol/kg/min.

El experto en la técnica sabe que si se aumenta el número de administraciones diarias, la dosis que se ha de administrar en cada administración puede disminuirse en consecuencia. Asimismo, si se disminuye la duración de cada administración, la dosis puede aumentarse en consecuencia.

El agente bioactivo que se ha de administrar es un péptido según la presente divulgación. En realizaciones preferidas, el péptido es la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene al menos un 75% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 2, modificándose dicho péptido uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma, con la condición de que dicha al menos una molécula de ácido graso no se una al residuo de aminoácido en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2.

En una realización, el agente bioactivo se administra con uno o más ingredientes activos adicionales. Estos otros ingredientes pueden ser farmacéuticamente activos. En algunas realizaciones, el agente bioactivo es un péptido como se ha definido anteriormente y el otro ingrediente es hGIP1-42 o una variante del mismo.

Vías de administración

Se apreciará que la vía de administración preferida dependerá del estado general y la edad del individuo que se ha de tratar, la naturaleza del estado que se ha de tratar, la ubicación del tejido que se ha de tratar en el cuerpo y el ingrediente activo elegido.

Tratamiento sistémico

Para el tratamiento sistémico según la presente divulgación, la vía de administración es capaz de introducir el agente bioactivo en el torrente sanguíneo para finalmente dirigirlo a los sitios de acción deseados.

Tales vías de administración son cualesquiera vías adecuadas, tales como una vía enteral (que incluye la administración oral, rectal, nasal, pulmonar, bucal, sublingual, transdérmica, intracisternal e intraperitoneal) y/o una vía parenteral (que incluye la administración subcutánea, intramuscular, intratecal, intracerebral, intravenosa e intradérmica).

Administración parenteral

La administración parenteral es cualquier vía de administración que no sea la vía oral/enteral mediante la que el medicamento evite la degradación de primer paso en el hígado. Por consiguiente, la administración parenteral incluye cualesquiera inyecciones e infusiones, por ejemplo, inyección en bolo o infusión continua, tal como administración intravenosa, administración intramuscular o administración subcutánea. Además, la administración parenteral incluye inhalaciones y administración tópica.

Por consiguiente, el agente bioactivo puede administrarse por vía tópica para atravesar cualquier membrana mucosa de un animal al que se le haya de dar la sustancia biológicamente activa, por ejemplo, en la nariz, vagina, ojo, boca, tracto genital, pulmones, tracto gastrointestinal o recto, preferiblemente la mucosa de la nariz o la boca, y, por consiguiente, la administración parenteral también puede incluir la administración bucal, sublingual, nasal, rectal, vaginal e intraperitoneal, así como la administración pulmonar y bronquial por inhalación o instalación. Asimismo, el agente puede administrarse por vía tópica para atravesar la piel.

Tratamiento local

El agente bioactivo según la invención puede, en una realización, utilizarse como tratamiento local, es decir, introducirse directamente en el o los sitios de acción. Por consiguiente, el agente bioactivo se puede aplicar directamente en la piel o la mucosa o el agente bioactivo se puede inyectar en el sitio de acción, por ejemplo, en el tejido enfermo o en una arteria terminal que conduzca directamente al tejido enfermo. Estas formas de administración preferiblemente evitan la barrera hematoencefálica.

Estuche de partes

La presente divulgación también se refiere a un estuche de partes que comprende uno o más de los agentes bioactivos descritos anteriormente y al menos un componente adicional o suplementario, tal como uno o más segundos ingredientes activos.

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Ejemplos

Los presentes ejemplos respaldan las siguientes conclusiones:

1) Las propiedades antagonistas de GIP(3-30)NH2 humano se conservan después de la lipidación (acilo graso) en la región media, pero no en la posición 3 y la posición 3023456

2) Las propiedades antagonistas de GIP(5-30)NH2 humano se conservan después de la lipidación (acilo graso) en el extremo N (posición 5) y la región media, pero no en la posición 30

3) Varios sitios de acilación muestran un gran potencial tanto en GIP(3-30)NH2 como en GIP(5-30)NH2 4) La adición de enlazadores (moléculas que enlazan los ácidos grasos a los péptidos) puede mejorar el perfil antagonista

5) La lipidación aumenta la unión de albúmina de análogos de GIP

6) La lipidación aumenta la semivida de eliminación de los análogos de GIP.

Materiales y métodos

La generación y acción de los péptidos GIP(3-30) y GIP(5-30)per se,se divulga en el documento WO 2016/034186.

Materiales

El GIP(1-42) humano se adquirió de Bachem, Bubendorf, Suiza (H5645), mientras que los ligandos restantes fueron sintetizados por Caslo™, Lyngby, Dinamarca y Almac Group, Craigavon, Reino Unido. El ADNc del receptor de GIP humano se adquirió de Origene, Rockville, Maryland, EE.UU. (SC110906) y se clonó en un vector pCMV-Script. El GIP(1-42) humano yodado se adquirió de PerkinElmer Life Sciences, Skovlunde, Dinamarca (NEX402025UC).

Animales

Se alojaron minicerdos o cerdos de la cepa LYH/LYD en la instalación de animales de la Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud.

Transfecciones y cultivo tisular

Se cultivaron células COS-7 a un 10% de CO<2>y 37 °C en medio de Eagle modificado de Dulbecco 1885 suplementado con un 10% de suero bovino fetal, glutamina 2 mM, 180 unidades/ml de penicilina y 45 g/ml de estreptomicina. La transfección transitoria de las células COS-7 para la acumulación de AMPc y la unión competitiva se realizó usando el método de precipitación de fosfato de calcio con la adición de cloroquina46-47.

Ensayo de AMPc

Las células COS-7 transfectadas de manera transitoria que expresaban el receptor de GIP humano se sembraron en placas blancas de 96 pocillos con una densidad de 3.5*104/pocillo. El día después, las células se lavaron dos veces con tampón de solución salina tamponada con Hepes (HBS, por sus siglas en inglés) y se incubaron con HBS y 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) 1 mM durante 30 min a 37 °C. Para ensayar las propiedades agonistas, se añadieron ligandos y se incubaron durante 30 min a 37 °C. Con el fin de ensayar las propiedades antagonistas, las células se preincubaron con los antagonistas durante 10 min antes de la adición del agonista y se incubaron posteriormente durante 20 min adicionales. El ensayo HitHunterTM cAMP XS (DiscoveRx) se llevó a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. ;;125Ensayo de unión competitiva de GIP I-humano ;;Las células COS-7 transfectadas de manera transitoria que expresaban el receptor de GIP humano se sembraron en placas transparentes de 96 pocillos el día después de la transfección usando varias células/pocillo que obtuvieron una unión específica del 5-10% del ligando radiactivo añadido. Al día siguiente, las células se ensayaron por unión competitiva durante 3 h a 4 °C usando 15-40 pM de GIP 125 I-humano, así como concentraciones crecientes de ligando no marcado en tampón Hepes 50 mM (pH 7.2) en presencia y ausencia de HSA al 2%. Después de la incubación, las células se lavaron dos veces en tampón de unión helado (+/- 2% de HSA) y se lisaron usando NaOH 200 mM con SDS al 1% durante 30 min. La unión no específica se determinó como la unión del ligando radiactivo a células no transfectadas. ;;Semivida de eliminación (T<1/2>) estimada en cerdos ;;Se administró por vía subcutánea a un cerdo uno de los análogos de GIP(3-30)NH2 lipidados (compuesto AT117) (1-10 nmol/kg, volumen total 2-6 mL), después de lo cual se recogieron 10-18 muestras de sangre antes y hasta 57 horas después de la administración subcutánea) de un catéter venoso central. El catéter se limpió con solución salina y heparina entre muestras. La sangre se recogió en tubos de EDTA fríos, se centrifugó y el plasma se mantuvo a -20 °C en espera de los análisis. Cuando se completen los experimentos, los animales serán sacrificados. ;;Análisis hormonal ;;Las concentraciones de los análogos de GIP(3-30)NH2 o GIP(5-30)NH2 lipidados en muestras de sangre de cerdos se analizaron por RIA. La inmunorreactividad de los análogos se determinó usando antisuero Ab95234, Ab95235, Ab95236, un anticuerpo policlonal interno criado en conejos específico, bien para la región media de GIP(1-30)NH2, bien para el extremo C amidado de GIP(3-30)NH2. ;;Análisis de datos ;;Los valores de CI<50>, CE<50>y K se determinaron mediante regresión no lineal. Ésta se llevó a cabo con elsoftwareGraphPad Prism 6.0 (GraphPad, San Diego, California, EE. UU.) y Microsoft Excel™. Los valores de Ki se basaron en la fórmula para una clase de sitios de unión en estudios de unión competitiva homóloga y la fórmula de Cheng Prussoffs, respectivamente (DeBlasi et al., 1989). Para determinar el potencial de unión de HSA, el cambio de plegamiento en afinidad (determinado por CI<50>) se calculó como CI<50>(más<hsa>)/CI<50>(menos<hsa>). ;;Ejemplo 1 - Las propiedades antagonistas de GIP(3-30)NH2 humano se conservan después de la lipidación en posiciones de aminoácidos seleccionadas y, por ejemplo, en la región media, pero no en la posición 3 y la posición 30 ;;Previamente hemos demostrado que el GIP(3-30)NH2 tiene una semivida (T<1/2>) de 7.5 min en seres humanos y cerdos. Con el fin de desarrollar un antagonista del receptor de GIP de acción prolongada, se lipidó GIP(330)NH2 en diferentes regiones con diferentes longitudes de ácidos grasos (diácido C12-C18, C16). En particular, el GIP(3-30)NH2 se lipidó en el extremo N, las lisinas de origen natural en la posición 16 o 30, o las últimas posiciones de aminoácidos en las que los GIP(3-30)NH2 se sustituyeron por lisina antes de la lipidación (Figura 1 y Tabla 1). Tanto el perfil agonista como el antagonista de los compuestos se ensayaron en experimentos de acumulación de AMPc realizados en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresaban el receptor de GIP humano. Para investigar si estos análogos lipidados aún conservaban sus propiedades antagonistas después de la lipidación, se examinó su capacidad para inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP correspondiente al 50-80% de activación máxima. Además, para los análogos seleccionados, se midieron sus afinidades en ausencia y presencia de albúmina humana al 2% como una estimación aproximada de la capacidad de los compuestos para unirse a albúmina humana (HSA, por sus siglas en inglés). El aumento de la capacidad para unirse a HSA sería una estimación de un posible aumento de la T<1/2>in vivo,ya que la unión a albúmina en plasma disminuirá la eliminación. ; ;; �� ; ;; �� ; ;; �� ; ; ; ; Tabla 2. Unión competitiva heteróloga en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano después de la incubación con el hGIP(3-30)NH2 lipidado (acilo graso) y hGIP(5-30)NH2. ;ID Unión;Fórmula log ETM nM nNA hGIP(3-30)NH2 ;AT10 1 [hGIP(3-30)NH2-C12/3] -8.0 -0.3 9.9 3 AT102 [hGIP(3-30)NH2-C12/16] -7.2 -0.4 59.1 3 AT10 3 [hGIP(3-30)NH2-C12/30] -5.3 -0.4 4709.8 3 AT104 [hGIP(3-30)NH2-C16/3] -7.1 -0.3 75.0 3 AT10 5 [hGIP(3-30)NH2-C16/16] -6.3 -0.3 522.0 3 AT106 [hGIP(3-30)NH2-C16/30] -5.9 na 1409.3 1 AT10 7 [hGIP(3-30)NH2[T5W;D15E;H18A]-C16/16] -5.3 -0.2 5220.0 3 AT11 0 [hGIP(3-30)NH2-C14/3] -7.3 -0.1 55.5 3 AT11 1 [hGIP(3-30)NH2-C14/16] -6.6 -0.2 261.2 3 AT11 2 [hGIP(3-30)NH2-C14/30] -6.3 -0.4 450.8 2 AT11 3 [hGIP(3-30)NH2-C18/3] -4.4 -1.1 41 400. 0 3 AT11 4 [hGIP(3-30)NH2-C18/16] -6.2 -0.1 622.3 3 AT11 5 [hGIP(3-30)NH2-C18/30] -5.8 -0.1 1515.3 2 AT11 6 [hGIP(3-30)NH2-C12/18] -7.1 -0.2 71.2 3 AT11 7 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/18] -6.5 -0.2 292.2 3 AT13 0 [hGIP(3-30)NH2[D15E;H18A]-C12/30] -5.9 -0.2 1213.4 3 AT13 1 [hGIP(3-30)NH2[D15E;H18A]-C16/16] -5.2 -0.9 6511.3 3 AT14 3 [hGIP(3-30)NH2[M14L;H18K]-C16/18] 80.0 AT144 [hGIP(3-30)NH2[K16R;H18K;K30R]-C16/18] - 6.528 0.2138 297.0 3 AT14 8 [hGIP(3-30)NH2-C12/3] -8 0.0750 1 24.0 3 AT14 9 [hGIP(3-30)NH2[H18R;K30R]-diácidoC12/3] -7 0.164 103.0 3 AT15 0 [hGIP(3-30)NH2[H18R;K30R]-C16/3] ;AT15 3 [hGIP(3-30)NH2[H18R;K30R]-C12/16] -7 0.1388 316.0 3 AT154 [hGIP(3-30)NH2-C12/16] -8 0.08655 27.0 3 AT15 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-diácidoC16/18] 8.2 3 8 ;;AT15 9 [hGIP(3-30)NH2[K16R;H18K;K30R]-diácidoC16/18]<18.0 3>AT16 0 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C18/18] 49.0 3 AT162 [hGIP(3-30)NH2[H18R;K30R]-C18/16] 85.0 3ID Unión;Fórmula log ETM nM nAT16 3 [hGIP(3-30)NH2[H18K]-C16/16] 205.0 3 AT11 8 [hGIP(5-30)NH2-C12/5] -7.0 -0.09 102.0 3 AT11 9 [hGIP(5-30)NH2-C12/16] -6.7 -0.18 193.8 3 AT12 0 [hGIP(5-30)NH2-C12/30] -6.0 -0.05 1085.2 2 AT12 1 [hGIP(5-30)NH2-C14/5] -6.8 -0.24 172.8 3 AT122 [hGIP(5-30)NH2-C14/16] -6.2 -0.10 591.1 3 AT12 3 [hGIP(5-30)NH2-C14/30] -6.2 -0.12 673.5 3 AT124 [hGIP(5-30)NH2-C16/5] -6.4 -0.12 360.6 2 AT12 5 [hGIP(5-30)NH2-C16/16] -6.1 -0.18 713.9 3 AT126 [hGIP(5-30)NH2-C16/30] -5.1 -0.20 7786.3 3 AT12 7 [hGIP(5-30)NH2-C18/5] -5.7 -0.14 2041.7 2 AT12 8 [hGIP(5-30)NH2-C18/16] -6.3 -0.27 466.3 3 AT12 9 [hGIP(5-30)NH2-C18/30] -3.9 -1.02 3 AT13 3 [hGIP(5-30)NH2[K16R;H18K;K30R]-C16/5] -5.8 -0.03 1719.2 3 AT134 [hGIP(5-30)NH2[K16R;H18K;K30R]-C16/18] -6.1 -0.05 882.4 3 AT13 5 [hGIP(5-30)NH2[K16R;K30R]-C16/5] -5.2 -0.21 5938.4 3 AT136 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC14/5] -7.3 -0.11 45.4 3 AT13 7 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC16/5] -6.5 -0.14 285.5 3 AT13 8 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC18/5] -5.6 -0.17 2638.4 3 AT13 9 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC14/16] -6.8 -0.08 153.2 3 AT14 0 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC16/16] -5.7 2162.7 3 AT14 1 [hGIP(5-30)NH2-diácidoC18/16] -5.7 1899.6 3 AT14 [hGIP(5-30)NH2[H18K]-C16/18] -6.8 0.1891 155.3 3 5 ;AT16 8 [hGIP(5-30)NH2[F6K]-diácidoC16/6] -7.3 0.05 48 3 AT16 9 [hGIP(5-30)NH2[I7K]-diácidoC16/7] -7.5 0.1 28 3 AT17 0 [hGIP(5-30)NH2[S8K]-diácidoC16/8] -6.2 0.08 628 3 AT17 1 [hGIP(5-30)NH2[D9K]-diácidoC16/9] -7.1 0.1 86 3 AT172 [hGIP(5-30)NH2[Y10K]-diácidoC16/10] -6.6 0.05 252 3 AT17 3 [hGIP(5-30)NH2[S11K]-diácidoC16/11] -8.1 0.1 8 3 AT174 [hGIP(5-30)NH2[I12K]-diácidoC16/12] -7.1 0.13 80 3 AT17 5 [hGIP(5-30)NH2[A13K]-diácidoC16/13] -7.1 0.1 73 3 AT176 [hGIP(5-30)NH2[M14K]-diácidoC16/14] -6.9 0.10 114 3ID Unión;Fórmula log ETM nM nAT17 7 [hGIP(5-30)NH2[D15K]-diácidoC16/15] -6.9 0.1 134 3 AT17 8 [hGIP(5-30)NH2[I17K]-diácidoC16/17] -7.2 0.07 66 3 AT156 [hGIP(5-30)NH2[H18K]-diácidoC16/18] 3 AT17 9 [hGIP(5-30)NH2[Q19K]-diácidoC16/19] -6.3 0.1 453 3 AT18 0 [hGIP(5-30)NH2[Q20K]-diácidoC16/20] -7.0 0.09 106 3 AT18 1 [hGIP(5-30)NH2[D21 K]-diácidoC16/21] -7.3 0.1 48 3 AT182 [hGIP(5-30)NH2[F22K]-diácidoC16/22] -6.0 0.09 962 3 AT18 3 [hGIP(5-30)NH2[V23K]-diácidoC16/23] -5.1 0.3 7129 3 AT184 [hGIP(5-30)NH2[N24K]-diácidoC16/24] -6.6 0.12 247 3 AT18 5 [hGIP(5-30)NH2[W25K]-diácidoC16/25] -7.1 0.1 87 3 AT186 [hGIP(5-30)NH2[L26K]-diácidoC16/26] -6.8 0.11 144 3 AT18 7 [hGIP(5-30)NH2[L27K]-diácidoC16/27] -4.6 0.8 26485 3 AT18 8 [hGIP(5-30)NH2[A28K]-diácidoC16/28] -6.7 0.12 183 3 AT18 9 [hGIP(5-30)NH2[Q29K]-diácidoC16/29] -6.9 0.1 118 3 AT186 [hGIP(5-30)NH2[L26K]-diácidoC16/26] - 6.842 0.11 144 3 AT18 7 [hGIP(5-30)NH2[L27K]-diácidoC16/27] - 4.577 0.8 26485 3 AT18 [hGIP(5-30)NH2[A28K]-diácidoC16/28] - 0.12 183 3 8 6.737 ;AT18 9 [hGIP(5-30)NH2[Q29K]-diácidoC16/29] - 6.928 0.12 118 3 ;;Tabla 3. Valores T<1/2>y CI<50>de estudios de unión en presencia y ausencia de HSA al 2% y cambio de plegamiento calculado correspondiente. ;IDT / ,HSA de unión (2%) /Caseína (0.1%) ;horas;logC I50 logC I50 logC I50 logC I50 Cambio de Fórmula HSA al HSA al 2% caseína al HSA al 2% plegamiento HSA 2% (nM) 0.1% (nM) (2%)/Caseína (0.1%)AT [hGIP(3-30)NH2- -5.7 209 1 -6.4 407 5.1 111 C14/16] ;AT [hGIP(3-30)NH2- -5.3 5458 -6.3 489 11.2 114 C18/16] ;AT [hGIP(3-30)NH2-115 C18/30] ;AT [hGIP(3-30)NH2- -6.5 321 -7.2 62 5.2 116 C12/18] ;AT [hGIP(3- 8 -5.8 173 1 -7.0 110 15.7 117 30)NH2[H18K]-C16/18] ;IDT%,HSA de unión (2%) /Caseína (0.1%) ;horas;logC I50 logC I50 logC I50 logC I50 Cambio de Fórmula HSA al HSA al 2% caseína al HSA al 2% plegamiento HSA 2% (nM) 0.1% (nM) (2%)/Caseína (0.1%)AT [hGIP(3- 6 ;159 30)NH2[K16R;H1 ;8K;K30R]-diácidoC16/18] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -6.1 881 -6.9 115 7.7 118 C12/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -5.6 266 3 -6.4 369 7.2 119 C12/16] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -6.0 966 -6.8 170 5.7 121 C14/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -5.2 608 1 -5.9 1234 4.9 122 C14/16] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -5.1 824 1 -5.8 1594 5.2 124 C16/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- 0.0 -5.8 1469 0.0 127 C18/5] ;AT [hGIP(5- -5.7 220 5 -5.8 171 9 1.3 133 30)NH2[K16R;H1 ;8K;K30R]-C16/5] ;AT [hGIP(5- -5.3 488 7 -6.1 882 5.5 134 30)NH2[K16R;H1 ;8K;K30R]-C16/18] ;AT [hGIP(5- -6.0 977 -5.2 5938 0.2 135 30)NH2[K16R;K3 ;0R]-C16/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -6.1 713 -7.3 45 15.7 diácidoC14/5] ;136 ;AT [hGIP(5-30)NH2- -6.3 555 -6.5 286 1.9 137 diácidoC16/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -5.0 10093 -5.6 2638 3.8 138 diácidoC18/5] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -6.4 401 -6.8 153 2.6 139 diácidoC14/16] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -5.5 3278 -5.7 2163 1.5 140 diácidoC16/16] ;AT [hGIP(5-30)NH2- -4.9 12359 -5.7 1900 6.5 141 diácidoC18/16] ;AT [hG!P(5- -7.0 100. 0 -7.3 50.1 2.0 168 30)NH2[F6K]-diácidoC16/6] ;IDT%,HSA de unión (2%) /Caseína (0.1%) ;horas;logC I50 logC I50 logC I50 logC I50 Cambio de Fórmula HSA al HSA al 2% caseína al HSA al 2% plegamiento HSA 2% (nM) 0.1% (nM) (2%)/Caseína (0.1%)AT [hGIP(5- -6.8 166. 0 -7.5 28.8 5.8 169 30)NH2[I7K]-diácidoC16/7] ;AT [hGIP(5- -5.9 1380.4 -6.2 631. 0 2.2 170 30)NH2[S8K]-diácidoC16/8] ;AT [hGIP(5- -6.2 660. 7 -7.1 79.4 8.3 171 30)NH2[D9K]-diácidoC16/9] ;AT [hGIP(5- -6.0 955. 0 -6.6 251. 2 3.8 172 30)NH2[Y10K]-diácidoC16/10] ;AT [hGIP(5- -7.2 60.3 -8.1 8.1 7.4 173 30)NH2[S11K]-diácidoC16/11] ;AT [hG!P(5- -6.6 281. 8 -7.1 79.4 3.5 174 30)NH2[!12K]-diácidoC16/12] ;AT [hGIP(5- 6 -6.3 562. 3 -7.1 72.4 7.8 175 30)NH2[A13K]-diácidoC16/13] ;AT [hGIP(5- -6.3 562. 3 -6.9 114. 8 4.9 176 30)NH2[M14K]-diácidoC16/14] ;AT [hGIP(5- - 6.29 512. 9 - 6.87 134. 9 3.8 177 30)NH2[D15K]-diácidoC16/15] ;AT [hG!P(5- -6.7 195. 0 -7.2 66.1 3.0 178 30)NH2[|17K]-diácidoC16/17] ;AT [hGIP(5- - 7.42 38.0 - 7.98 10.5 3.6 179 30)NH2[Q19K]-diácidoC16/19] ;AT [hGIP(5- -5.8 1698.2 -6.3 457. 1 3.7 180 30)NH2[Q20K]-diácidoC16/20] ;AT [hGIP(5- -6.3 549. 5 -7.0 104. 7 5.2 181 30)NH2[D21K]-diácidoC16/21] ;AT [hGIP(5- -6.9 141. 3 -7.3 47.9 3.0 182 30)NH2[F22K]-diácidoC16/22] ;AT [hGIP(5- -5.8 1698.2 -6.0 955. 0 1.8 183 30)NH2[V23K]-diácidoC16/23] ;IDVA,HSA de unión (2%) /Caseína (0.1%) ;horas;logC I50 logC I50 logC I50 logC I50 Cambio de Fórmula HSA al HSA al 2% caseína al HSA al 2% plegamiento HSA 2% (nM) 0.1% (nM) (2%)/Caseína (0.1%)AT [hGIP(5- -5.0 11220.2 -5.2 7079.5 1.6 184 30)NH2[N24K]-diácidoC16/24] ;AT [hGIP(5- -5.9 1148.2 -6.6 245. 5 4.7 185 30)NH2[W25K]-diácidoC16/25] ;AT [hGIP(5- -6.5 331. 1 -7.1 87.1 3.8 186 30)NH2[L26K]-diácidoC16/26] ;AT [hGIP(5- -6.2 676. 1 -6.8 144. 5 4.7 187 30)NH2[L27K]-diácidoC16/27] ;AT [hGIP(5- 0.0 0.0 -4.6 263 0.0 ;30)NH2[A28K]-188 diácidoC16/28] 02.7 ;AT [hGIP(5- -6.2 575. 4 -6.7 182. 0 3.2 189 30)NH2[Q29K]-diácidoC16/29] ;;Las tablas siguientes (Tabla 3b) resumen los datos iniciales para el cambio de plegamiento en la afinidad en ausencia y presencia de HSA al 2% y las potencias antagonistas para cada uno de los péptidos ensayados: ;; ;;;; ; ;;; Tabla 3b ;;Resultados: ;;La lipidación del extremo N de GIP(3-30)NH2 dio como resultado una disminución de la afinidad, que se correlacionó con el aumento de la longitud de los lípidos (véase la Tabla 1 para la disminución de plegamiento en la afinidad en comparación con GIP(3-30)NH2) y un perfil antagonista completamente anulado debido a la mayor propensión agonista (Tabla 1). Se observó el mismo patrón para la lipidación del extremo C (Figura 1 y Tabla 1). De nuevo, las afinidades de los análogos lipidados disminuyeron espectacularmente en comparación con GIP(3-30)NH2 y no se obtuvieron perfiles antagonistas de alta potencia a medida que se observó una mayor tendencia al agonismo. Por otra parte, la lipidación de las posiciones 5, 7, 9, 11 y de la región media (posiciones 15 a 21) de GIP(3-30)NH2 dio como resultado antagonistas del receptor de GIP de potencia sorprendentemente alta (Figura 1 y Tabla 1). Las potencias antagonistas para los análogos lipidados en la posición 5, 7, 9, 11, 15, 17, 19, 20 y 21 fueron 14, 33, 22, 69, 53, 93, 132, 36 y 49 nM, respectivamente. AT105, AT111, AT114, AT162 y AT370 se lipidaron en la posición 16 y las potencias antagonistas correspondientes fueron 24, 22, 29, 26 y 25 nM, respectivamente, mientras que para la posición 18 todos los análogos lipidados tenían una potencia antagonista mejorada en comparación con GIP(3-30)NH2 (valores CI<50>de 12, 15, 15, 5, 6 y 38 nM para AT116, AT117, AT143, AT158, a T159 y AT160, respectivamente) (Figura 1). Esto muestra claramente que las posiciones 3 y 30 son menos útiles para la lipidación de GIP(3-30)NH2, mientras que la lipidación de otras regiones y en particular la posición 18 da como resultado antagonistas del receptor de GIP altamente potentes. ;;Ejemplo 2 - Las propiedades antagonistas de GIP(5-30)NH2 humano se conservan después de la lipidación en el extremo N (posición 5) y la región media, pero no en la posición 30 ;;Como se hizo para GIP(3-30)NH2, GIP(5-30)NH2 lipidó en diferentes regiones con diferentes longitudes de ácidos grasos (diácido C12-C18, C14-C18) para desarrollar un antagonista del receptor de GIP de acción prolongada. Al igual que los análogos de GIP(3-30)NH2 lipidados, sus propiedades antagonistas después de la lipidación se examinaron estudiando su capacidad para inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP que corresponde al 50-80% de la activación máxima realizada en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano. Además, medimos las afinidades de los análogos seleccionados en ausencia y presencia de albúmina humana al 2% como una estimación aproximada de la capacidad de los compuestos para unirse a albúmina humana (HSA) (Tabla 3). ;;La Tabla 3b anterior resume los datos iniciales para el cambio de plegamiento en la afinidad en ausencia y presencia de HSA al 2% y las potencias antagonistas para cada uno de los péptidos ensayados. ;;Resultados: ;;A diferencia de la lipidación del extremo N de GIP(3-30)NH2, las propiedades antagonistas se conservaron para la mayoría de los análogos tras la lipidación del extremo N de GIP(5-30)NH2 (Tabla 1). Las potencias antagonistas para AT118, AT121 y AT293 fueron 29, 54 y 14 nm, respectivamente. ;;Muchos de los análogos lipidados tenían afinidades disminuidas en comparación con GIP(3-30)NH2 y sus potencias antagonistas también disminuyeron. AT133, AT135 y AT138 no antagonizaron la respuesta de AMPc mediada por GIP. Por el contrario, AT118, AT121, AT136 y AT137 tenían afinidades en el mismo intervalo que GIP(3-30)NH2 y eran antagonistas de alta potencia con potencias inhibidoras. Al igual que GIP(3-30)NH2, la lipidación del extremo C (posición 30) de GIP(5-30)NH2 anula el perfil antagonista o disminuye en gran medida la capacidad de inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP (Tabla 1). ;;Los análogos de GIP(5-30)NH2 lipidados en la región media (posiciones 16 y 18) demostraron propiedades antagonistas impresionantes, ya que algunas de las variantes mostraron mejoras sorprendentes en comparación con el perfil antagonista de GIP(5-30)NH2 (AT119, AT156 y AT157 con valores CI<50>de 26, 12 y 7 nm en comparación con 25.8 nM para el de GIP(5-30)NH2). ;;En conjunto, esto muestra que la posición 30 no es óptima para la lipidación de GIP(5-30)NH2 donde se requiere antagonismo, sin embargo, otras regiones demuestran perfiles antagonistas conservados e incluso mejorados, incluyendo posiciones en la región N-terminal. ;;Ejemplo 3 - Varios sitios de acilación en GIP(5-30)NH2 muestran un gran potencial ;;Como se hizo para GIP(3-30)NH2 (véase el Ejemplo 1), para identificar sitios de acilación óptimos en GIP(5-30)NH2 se realizó un examen de lisina (Lys) a través de todo el péptido al que se acopló un diácido C16. Tanto el perfil agonista como el antagonista de los análogos se ensayaron en experimentos de acumulación de AMPc realizados en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresaban el receptor de GIP humano. Las propiedades agonistas se estudiaron por la capacidad de las variantes lipidadas para inducir una respuesta de AMPc por sí mismas, mientras que las propiedades antagonistas se estudiaron por la capacidad para inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP que corresponde al 50-80% de activación máxima. Además, medimos su capacidad para unirse a la albúmina humana (HSA) como una estimación de un posible aumento en T<1/2>in vivo.;;Resultados: ;;Todas las variantes ensayadas fueron capaces de inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP y sólo unas pocas de las variantes demostraron baja actividad de AMPc intrínseca con un máximo de un 32% de actividad a 10 pM (Tabla 1). En comparación con GIP(5-30)NH2, se mejoraron las potencias antagonistas para análogos lipidados en las posiciones 5, 11, 12, 13, 18, 21 (14, 10, 23, 17, 12 y 16 nM, respectivamente). Las potencias antagonistas más altas se observaron para AT173, AT174, AT175 y AT181, que superaron todos ellos las de GIP(5-30)NH2. Al estudiar la capacidad de los diferentes análogos para unirse a HSA, observamos que la posición de lipidación en el péptido desempeña un papel importante. Dependiendo del sitio de lipidación, los valores CI<50>variaron en presencia y ausencia de HSA al 2% y dieron como resultado diferencias de plegamiento que oscilaban entre 1.6 y 8.3 (Tabla 3). La lipidación en la posición 7, 9, 11, 13 y 21 (AT169, AT171, AT173, AT175 y AT181, respectivamente) tuvo los cambios de plegamiento más altos en los valores CI<50>entre la presencia y ausencia de HSA al 2% con los valores de 5.8, 8.3, 7.4, 7.8 y 5.2, respectivamente. La lipidación en la posición 7, 9, 11, 12, 13, 18 y 21 produjo análogos con las mejores potencias antagonistas, lo que indica claramente que estos sitios de lipidación son sitios de lipidación altamente prometedores para el desarrollo de antagonistas del receptor de GIP de acción prolongada, de alta potencia. ;;La tabla siguiente (Tabla 4) resume los datos iniciales para propiedades antagonistas con el cambio de plegamiento de GIP(5-30)NH2 (valores CI<50>de estudios de unión en presencia y ausencia de HSA al 2% y el correspondiente cambio de plegamiento calculado): ;;Tabla 4.Propiedades antagonistas con el cambio de plegamiento de GIP(5-30)NH2. Además, valores CI<50>de estudios de unión en presencia y ausencia de HSA al 2% y cambio de plegamiento calculado correspondiente. ;; ; ; ;;; Ejemplo 4 - La adición de enlazadores (moléculas que enlazan los ácidos grasos a los péptidos) mejora el perfil antagonista ;;Añadimos diferentes moléculas menores que enlazan los péptidos a los ácidos grasos a uno de nuestros antagonistas prometedores (AT117). Un enlazador podría aumentar potencialmente la posibilidad de una disolución fácil. Las propiedades antagonistas se estudiaron por la capacidad de inhibir una respuesta de AMPc mediada por GIP que corresponde al 50-80% de la activación máxima realizada en células COS-7 transfectadas transitoriamente que expresan el receptor de GIP humano. ;;Resultados: ;;Observamos que AT164 (ácido Y-glutámico enlazador) y AT167 (ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico, ácido yaminobutúrico y p-alanina enlazadores) tenían solubilidad mejorada, ya que los análogos eran solubles a concentraciones de 200 pM, mientras que AT166 (ácido Y-aminobutúrico enlazador) y AT167 (p-alanina enlazadora) sólo podían obtener concentraciones de 63.2 pM. Además, se observó que todos los análogos tenían un perfil antagonista mejorado en comparación con GIP(3-30)NH2 (Figura 3) con un aumento de potencia de 2.9 a 14.8 veces (Tabla 5). En resumen, este análisis identificó que la adición de enlazadores específicos al sitio de lipidación da como resultado antagonistas del receptor de GIP con potencias antagonistas sorprendentemente altas. ;;Tabla 5. Propiedades antagonistas (Figura 3) con el cambio de plegamiento de GIP(3-30)NH2. ;; ; Ejemplo 5 - La lipidación aumenta la unión a albúmina de análogos de GIP ;El objetivo de lipidar los antagonistas del receptor de GIP es conseguir una T<1/2>más larga. Como se ha descrito anteriormente, hemos utilizado la capacidad de los análogos lipidados para unirse a la albúmina sérica humana (HSA) para evaluar el potencial de un aumento de T<1/2>in vivo.Se realizó una unión competitiva heteróloga en células COS-7 que expresaban transitoriamente el receptor de GIP humano en ausencia y presencia de HSA al 2%. ;Resultados: ;Como se ve en las Tablas 1, 2 y 3, varios de los análogos lipidados tienen una unión a albúmina muy alta, ya que la afinidad cambia hasta por un factor de 15.7 tanto para AT117 como para AT136. ;Ejemplo 6 - La lipidación aumenta la semivida de eliminación de los análogos de GIP ;Para evaluar cómo la lipidación afecta a T<1/2>, se midió la T<1/2>de AT117, AT159 y AT175 en cerdos. Esto se hizo mediante una administración subcutánea de 1-10 nmol/kg en un volumen total de 2-6 mL, seguida de la recogida de muestras de sangre en puntos de tiempo desde 15 min antes de la administración de AT117 hasta 57 h después de la administración. Como se presenta en la Figura 4, previamente hemos determinado que la T<1/2>de GIP(3-30)NH2 es de 7.5 min en humanos. ;Resultados: ;La lipidación aumentó la T<1/2>a 8 horas como se observa para AT117 (Figura 4) y 6 horas para AT159 y AT175 (Tabla 3). Por lo tanto, la lipidación es una estrategia eficaz para mejorar las propiedades farmacocinéticas de los péptidos GIP y, por consiguiente, puede permitir el desarrollo de antagonistas del receptor de GIP de acción prolongada. ;Ejemplo 7 - Protocolo para la síntesis de péptidos ;Todos los péptidos se prepararon mediante síntesis de péptidos en fase sólida manual basada en Fmoc usando resina MBHA de amida Rink con una carga inicial de 0.35 mmol/g. Los grupos Fmoc para la protección de N a se escindieron mediante un tratamiento de 8 min con piperidina al 20% en N,N-dimetilformamida (DMF), seguido de un segundo tratamiento con el mismo reactivo durante 10 min. Después de la escisión de Fmoc, la resina peptídica se lavó con DMF (* 6). El residuo siguiente se incorporó después con el protocolo de acoplamiento DIPC/HOBt [Fmoc-aminoácido (3 equiv), DIPC (3 equiv) y HOBt (3 equiv)]. Después de una agitación suave (1 h) y un lavado con DMF (x 6), parte de la resina peptídica se sometió a la prueba de Kaiser. Si la prueba de Kaiser muestra un resultado positivo, se llevó a cabo un reacoplamiento [Fmoc-aminoácido (2 equiv), HATU (2 equiv), y DIEA (4 equiv)]. Las etapas para todos los péptidos se repitieron hasta que se terminaron las secuencias peptídicas. Se realizó una acilación de los péptidos después de que se terminaran las secuencias peptídicas, pero mientras los péptidos todavía estaban unidos a la resina. Lote No: P170117-01-08:

Secuencia: (ácido 1,16-hexadecanodioico)-TFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-NH2

Método de conjugación de ácidos grasos:

Después de eliminar el último N-Fmoc N-terminal, el grupo amino N-terminal se aciló mediante el tratamiento de 3 equiv de ácido 1,16-hexadecanodioico en presencia de 3 equiv de HATU y 6 equiv de DIPEA.

Lote No: P290716-01-10B

Secuencia: EGTFISDYSIAMDKI-K(Palm)-QQDFVNWLLAQK-NH2

Lote No: P280317-01-22

Secuencia: TFISDYSIAMDKI-K(ácido 1,16-hexadecanodioico)-QQDFVNWLLAQK-NH2 Lote No: P290716-01-16

Secuencia: TFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK(Palm)-NH2

Lote No: P280317-01-30

Secuencia: EGTFISDYSIAMDKI-K[(Y-Glu)-Palm]-QQDFVNWLLAQK-NH2

Lote No: P280317-01-31

Secuencia: EGTFISDYSIAMDKI-K[(4-Abu)-Palm]-QQDFVNWLLAQK-NH2

Lote No: P280317-01-32

Secuencia: EGTFISDYSIAMDKI-K[(p-Ala)-Palm]-QQDFVNWLLAQK-NH2

Lote No: P280317-01-33

Secuencia: EGTFISDYSIAMDKI-K[(Y-Glu)-AEEAc-Palm]-QQDFVNWLLAQK-NH2

Métodos de conjugación de ácidos grasos:

Se usó lisina con cadena lateral protegida con Dde para la síntesis de péptidos en fase sólida en la posición de acilación. Después de ensamblar la cadena peptídica, el grupo amino N-terminal se remató con 3 equiv de Boc2O en presencia de 6 equiv de DIPEA. A continuación, se eliminó el grupo de protección Dde mediante el tratamiento de hidrazina al 2%/DMF (v/v).

Para el lote nro. P290716-01-10B y P290716-01-16:

Se usaron 3 equiv de cloruro de palmitoilo para palmitoilación en presencia de 6 equiv de DIPEA. Para P280317-01-22, 3 equiv de ácido 1,16-hexadecanodioico se activaron mediante HATU/DIPEA y después se conjugaron a la cadena lateral de lisina.

Para el Lote No: P280317-01-30/31/32/33:

Se conjugaron Fmoc-Y-Glu(tBu)-OH o Fmoc-4-Abu-OH o Fmoc-p-Ala-OH o Fmoc-AEEAc-OH a la cadena lateral de Lys usando un protocolo estándar de DIC/HOBT. Los grupos amino N-terminales de estos aminoácidos no naturales se palmitoilaron después mediante el tratamiento de 3 equiv de cloruro de palmitoilo en presencia de 6 equiv de DIPEA.

Todos los péptidos fueron finalmente liberados de la resina mediante TFA, que también liberó los grupos de protección restantes. Los péptidos se purificaron usando HPLC preparativa y se controlaron en cuanto a la calidad mediante HPLC analítica y espectrometría de masas MALDI-TOF.

Claims

RE IVINDICACIONES 1. Un análogo de péptido insulinotrópico dependiente de la glucosa (GIP) que consiste en (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2):

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 h - q - q - d - f - v - n - w - l - l - a - q - k o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso al grupo amino de cadena lateral en uno o más residuos de aminoácidos de las posiciones 4 a 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde dicho péptido es un antagonista del receptor de hGIP.
2. El análogo de péptido GIP según la reivindicación 1, en donde i) la K en la posición 30 de la SEQ ID NO: 2 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como una sustitución de aminoácido conservativa, tal como sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E; y/o ii) la K en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como una sustitución de aminoácido conservativa, tal como sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en R, A y E; y/o iii) la M en la posición 14 de la SEQ ID NO: 2 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como sustituida por L, S, K, norleucina (Nle) o metoxinina (Mox); y/o iv) la D en la posición 15 de la SEQ ID NO: 2 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en E, A, K y Orn; y/o v) la H en la posición 18 de la SEQ ID NO: 2 está sustituida por cualquier aminoácido, tal como sustituida por un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en A, R, K y Orn.
3. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde una molécula de ácido graso se une al grupo épsilon-amino de un residuo de K de una cualquiera de las posiciones 4 a 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2 que comprende al menos un residuo de K; y/o en donde la molécula de ácido graso se une al grupo delta-amino de un residuo de Orn de una cualquiera de las posiciones 4 a 21 de una variante de la SEQ ID NO: 2 que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2 que comprende al menos un residuo de Orn.
4. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde una molécula de ácido graso se une a i) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, por ejemplo, se une a K en la posición 16 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2; y/o ii) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 18 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la H en la posición 18 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o iii) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 11 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la S en la posición 11 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o iv) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 12 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la I en la posición 12 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o v) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 13 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la A en la posición 13 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o vi) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 7 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la I en la posición 7 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o vii) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 9 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la D en la posición 9 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o viii) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la D en la posición 21 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn; y/o ix) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 5 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la T en la posición 5 de la SEQ ID NO: 5 ha sido sustituida por K u Orn; y/o x) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 15 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la D en la posición 15 de la SEQ ID NO: 23 ha sido sustituida por K u Orn; y/o xi) el grupo amino de cadena lateral del residuo de aminoácido en la posición 20 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional de la misma que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, en donde la Q en la posición 20 de la SEQ ID NO: 2 ha sido sustituida por K u Orn.
5. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la K en la posición 16, y/o la K en la posición 30, de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2, se sustituyen individualmente por cualquier aminoácido cuando una molécula de ácido graso se une a un residuo de aminoácido en una cualquiera de las posiciones 4 a 15 o 17 a 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2.
6. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo de fórmula CH<3>(CH<2>)nCO-, en donde n es un número entero de 4 a 24; por ejemplo, en donde dicha molécula de ácido graso comprende uno o más grupos acilos seleccionados del grupo que consiste en CH<3>(CH<2>)<6>CO-, CH<3>(CH<2>)<8>CO-, CH<3>(CH<2>)<10>CO-, CH<3>(C<h 2>)<12>CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO- y CH3(CH2)22CO-.
7. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo de fórmula COOH(CH<2>)nCO-(ácido dicarboxílico), en donde n es un número entero de 4 a 24; por ejemplo, en donde dicha molécula de ácido graso comprende un grupo acilo seleccionado del grupo que consiste en COOH(CH<2>)-<m>CO-, COOH(CH<2>)<16>CO-, C<o>O<h>(CH<2>)<18>CO- y COOH(CH2)20CO-.
8. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha molécula de ácido graso se une a un residuo de aminoácido directamente o a través de un espaciador.
9. El análogo de péptido GIP según la reivindicación 8, en donde dicho espaciador comprende uno o más restos seleccionados, individualmente, del grupo que consiste en: a. uno o más a,u>-aminoácidos, b. uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en ácido succínico, Lys, Glu, Asp, c. 4-Abu, d. ácido Y-aminobutúrico e. un dipéptido, tal como un dipéptido en donde el residuo de aminoácido C-terminal es Lys, His o Trp, preferiblemente Lys, y en donde el residuo de aminoácido N-terminal se selecciona del grupo que comprende Ala, Arg, Asp, Asn, Gly, Glu, Gln, Ile, Leu, Val, Phe y Pro, tal como Gly-Lys, f. uno o más de los siguientes: Y-aminobutanoilo (ácido Y-aminobutírico), Y-glutamilo (ácido Y-glutámico), pasparagilo, p-alanilo y glicilo, y g. [ácido Y-glutámico - ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico]n (YGlu-AEEAcn), en donde n es un número entero entre 1 y 50, tal como un número entero entre 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5-6, 6-7, 7-8, 8-9, 9-10, 10-11, 11-12, 12-13, 13-14, 14-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-35, 35-40, 40-45, 45-50.
10. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido tiene una secuencia de aminoácidos que consiste en: EGTFISDYX<11>X<12>X<13>X<14>X<15>X<16>IX<18>QQDFVNWLLAQX<30>(SEQ ID NO:4), en donde X<11>se selecciona del grupo que consiste en S, K y Orn, X<12>se selecciona del grupo que consiste en I, K y Orn, X<13>se selecciona del grupo que consiste en A, K y Orn, X<14>se selecciona del grupo que consiste en M, K, L, S, Nle y Mox, X<15>se selecciona del grupo que consiste en D, E, A, K y Orn, X<16>se selecciona del grupo que consiste en K, R, A y E, X<18>se selecciona del grupo que consiste en H, A, R, K y Orn, y X<30>se selecciona del grupo que consiste en K, R, A y E o una variante funcional de la misma que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en dicha secuencia, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácido de las posiciones 4 a 21 de la SEQ ID NO: 4.
11. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido se selecciona del grupo que consiste en: EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP3-30, SEQ ID NO: 2), EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K16R H18K K30R; SEQ ID NO:72), EGTFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K16R K30R; SEQ ID NO:73), EGTFISDYSIAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18A; SEQ ID NO:74), EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18K; SEQ ID NO:75), EGTFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E H18A; SEQ ID NO:76), EGTFISDYSIAMDAIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16A H18A; SEQ ID NO:77), EGTFISDYSIAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E; SEQ ID NO:78), EGTFISDYSIAMNKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15N; SEQ ID NO:79), EGTFISDYSIAMDAIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16A; SEQ ID NO:80), EGTFISDYSIAMDHIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16H; SEQ ID NO:81), EGTFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)K16R; SEQ ID NO:82), EGTFISDYSIAMDKIFQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18F; SEQ ID NO:83), EGTFISDYSIAMDKIWQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18W; SEQ ID NO:84), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)K30R; SEQ ID NO:85), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQH(hGIP(3-30)K30H; SEQ ID NO:86), EKTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)G4K, SEQ ID NO:87), EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)T5K, SEQ ID NO:88), EGTKISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)F6K, SEQ ID NO:89), EGTFKSDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hG!P(3-30)!7K, SEQ ID NO:90), EGTFIKDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S8K, SEQ ID NO:91), EGTFISKYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D9K, SEQ ID NO:92), EGTFISDKSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Y10K, SEQ ID NO:93), EGTFISDYKIAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K, SEQ ID NO:94), EGTFISDYSKAMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K, SEQ ID NO:95), EGTFISDYSIKMDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K, SEQ ID NO:96), EGTFISDYSIAKDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)M14K, SEQ ID NO:97), EGTFISDYSIAMKKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15K, SEQ ID NO:98), EGTFISDYSIAMDKKHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I17K, SEQ ID NO:99), EGTFISDYSIAMDKIHKQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q19K, SEQ ID NO:100), EGTFISDYSIAMDKIHQKDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)Q20K, SEQ ID NO:101), EGTFISDYSIAMDKIHQQKFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D21K, SEQ ID NO:102), EGTFISDYSIAMDKIHQQDKVNWLLAQK (hGIP(3-30)F22K, SEQ ID NO:103), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFKNWLLAQK (hGIP(3-30)V23K, SEQ ID NO:104), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVKWLLAQK (hGIP(3-30)N24K, SEQ ID NO:105), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNKLLAQK (hGIP(3-30)W25K, SEQ ID NO:106), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWKLAQK (hGIP(3-30)L26K, SEQ ID NO:107), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLKAQK (hGIP(3-30)L27K, SEQ ID NO:108), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLKQK (hGIP(3-30)A28K, SEQ ID NO:109), EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAKK (hGIP(3-30)Q29K, SEQ ID NO:110), EGTFISDYKIAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K H18A, SEQ ID NO:111), EGTFISDYKIAMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K H18R, SEQ ID NO: 112), EGTFISDYKIAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K D15E, SEQ ID NO: 113), EGTFISDYKIANIeDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K M14Nle, SEQ ID NO: 114), EGTFISDYKIALDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)S11K M14L, SEQ ID NO: 115), EGTFISDYSKAMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K H18A, SEQ ID NO: 116), EGTFISDYSKAMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K H18R, SEQ ID NO: 117), EGTFISDYSKAMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K D15E, SEQ ID NO: 118), EGTFISDYSKANIeDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K M14Nle, SEQ ID NO: 119), EGTFISDYSKALDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)I12K M14L, SEQ ID NO:120), EGTFISDYSIKMDKIAQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K H18A, SEQ ID NO:121), EGTFISDYSIKMDKIRQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K H18R, SEQ ID NO:122), EGTFISDYSIKMEKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K D15E, SEQ ID NO:123), EGTFISDYSIKNIeDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K M14Nle, SEQ ID NO:124), EGTFISDYSIKLDKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)A13K M14L, SEQ ID NO:125), EGTFISDYSIAMEKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15E H18K; SEQ ID NO:126), EGTFISDYSIANIeDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30) M14NIe H18K; SEQ ID NO:127), EGTFISDYSIALDKIKQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30) M14L H18K; SEQ ID NO:128), EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)T5K K16R K30R, SEQ ID NO:129), EGTFISDYSIAMOrnKIHQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)D15Orn, SEQ ID NO:130), EGTFISDYSIAMDKIOrnQQDFVNWLLAQK (hGIP(3-30)H18Orn; SEQ ID NO:131), EGTFISDYSIALDRIKQQDFVNWLLAQR(hGIP(3-30)M14L K16R H18K K30R; (SEQ ID NO:132), EGWFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK (SEQ ID NO:144), y EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR(SEQ ID NO: 146), en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso a uno o más residuos de aminoácido de las posiciones 4 a 21 de dicho péptido, tal como uniendo una molécula de ácido graso a un residuo de aminoácido de las posiciones 4 a 21 de dicho péptido.
12. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, seleccionado del grupo que consiste en EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C12/K16, EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C16/K16, EGWFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK -C16/K16, EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C14/K16, EGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-C18/K16, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C12/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C16/K18, EGTFISDYSIAMEKIAQQDFVNWLLAQK-C16/K16, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C18/K18, EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR-C18/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQR-C16/K18, EGTFISDYSIALDKIKQQDFVNWLLAQK-C16/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K18 EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K18, EGTFISDYSIAMDKIKQQDFVNWLLAQK-C18/K18, EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-diácido-C16/K5, EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR-diácido-C16/K5, EGKFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQK-diácido-C18/K5, EGKFISDYSIAMDRIHQQDFVNWLLAQR-diácido-C18/K5, y EGTFISDYSIAMDRIKQQDFVNWLLAQR-diácido-C18/K18, o una variante funcional del mismo que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con dicha secuencia de aminoácidos, en donde dicho ácido graso está unido directamente o a través de un espaciador.
13. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido se modifica uniendo al menos una molécula de ácido graso al grupo amino de cadena lateral en uno o más residuos de aminoácidos de las posiciones 5, 7, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20 y 21 de la SEQ ID NO: 2, o una variante funcional que tiene de 1 a 6 sustituciones de aminoácidos individuales en comparación con la secuencia de aminoácidos que consiste en la SEQ ID NO: 2.
14. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho péptido está amidado en el extremo C-terminal (-NH<2>).
15. El análogo de péptido GIP según cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en un método para inhibir o reducir uno o más de los siguientes: i) secreción de glucagón inducida por GIP, ii) secreción de insulina inducida por GIP, iii) secreción de somatostatina inducida por GIP, iv) absorción de glucosa inducida por GIP, v) síntesis de ácido graso y/o incorporación de ácido graso inducidas por GIP, vi) expresión o actividad altas o aumentadas de un GIPR, vii) liberación de GIP posprandial, viii) niveles séricos de triglicéridos y/o ácidos grasos libres, ix) reducción de resorción ósea inducida por GIP; y/o para su uso en un método de tratamiento de un estado seleccionado del grupo que consiste en síndrome metabólico, obesidad, sobrepeso, un trastorno relacionado con la obesidad, prediabetes (glucosa en ayunas empeorada), diabetes mellitus (tipo I y tipo 2), un trastorno relacionado con la diabetes, resistencia a la insulina, glucosa en ayunas elevada (hiperglucemia), nivel de triglicéridos en suero en ayunas elevado (triglicérido VLDL), niveles bajos de lipoproteínas de alta densidad (HDL), un trastorno del metabolismo de los ácidos grasos, una enfermedad cardiovascular, presión sanguínea elevada y aterosclerosis.