ES2976567T3

ES2976567T3 - Formas cristalinas de (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico

Info

Publication number: ES2976567T3
Application number: ES19701240T
Authority: ES
Inventors: Philippe Guerry; Raumer Markus Von
Original assignee: Idorsia Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Idorsia Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2018-01-26
Filing date: 2019-01-25
Publication date: 2024-08-05
Anticipated expiration: 2039-01-25
Also published as: TW201932460A; CL2020001928A1; KR20200116115A; IL276227B1; WO2019145460A1; IL276227A; SG11202006943TA; EP3743422C0; CN111683945A; AU2019212888B8; RS65594B1; PH12020551121A1; CA3088478A1; ZA202005286B; CN111683945B; MY206631A; AU2019212888B2; HUE066704T2; JP7076010B2; MX392844B

Abstract

La solicitud se refiere a formas cristalinas del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida; procesos para su preparación y composiciones farmacéuticas que contienen dichas formas cristalinas. El compuesto actúa como modulador del receptor CXCR7 y, por tanto, es útil para el tratamiento del cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Formas cristalinas de (1-pirimidin-2-il-cidopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-([5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico

La presente invención se refiere a novedosas formas cristalinas de (1-pirimidin-2-il-cidopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-cidopropilmetil-4-[[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico (en lo sucesivo también denominado "COMPUESTO"):

procedimientos para la preparación del mismo, composiciones farmacéuticas que comprenden dichas formas cristalinas, composiciones farmacéuticas preparadas a partir de tales formas cristalinas y su uso como moduladores del receptor CXCR7 CXCL11/CXCL12, especialmente para el tratamiento de cáncer, trastornos autoinmunitarios, enfermedades inflamatorias, rechazo de trasplante o fibrosis. La invención se refiere además a dichas formas cristalinas como productos farmacéuticos en combinación con uno o más agentes terapéuticos y/o radioterapia y/o terapia dirigida en el tratamiento de cánceres (especialmente tumores cerebrales que incluyen gliomas malignos, glioblastoma multiforme; neuroblastoma; cáncer pancreático incluyendo adenocarcinoma pancreático/adenocarcinoma ductal pancreático; cánceres gastrointestinales incluyendo carcinoma de colon, carcinoma hepatocelular, cáncer gástrico; sarcoma de Kaposi; leucemias incluyendo leucemia de linfocitos T del adulto; linfoma; cáncer de pulmón; cáncer de mama; rabdomiosarcoma; cáncer de próstata; cáncer escamoso esofágico; carcinoma epidermoide oral; cáncer endometrial; carcinoma de tiroides incluyendo carcinoma papilar de tiroides; cánceres metastásicos; metástasis pulmonar; cáncer de piel incluyendo melanoma y melanoma metastásico; cáncer de vejiga; mielomas múltiples; osteosarcoma; cáncer de cabeza y cuello; y carcinomas renales incluyendo carcinoma renal de células claras, carcinoma renal metastásico de células claras).

Los receptores de quimiocinas son un grupo de receptores acoplados a proteína G (GPCR, por sus siglas en inglés) que se unen a ligandos de quimiocinas peptídicos con alta afinidad. La función predominante de los receptores de quimiocinas es guiar el tráfico de leucocitos a los órganos y tejidos linfoides en condiciones de reposo y durante la inflamación, pero también se ha reconocido la función de ciertos receptores de quimiocinas en células no hematopoyéticas y sus progenitores.

CXCR7 (alias ACKR3, alias RDC1, alias CMKOR1, alias GPR159) tiene dos ligandos de quimiocinas conocidos: CXCL12 (alias factor 1 derivado de células estromales, SDF-1; alias factor estimulante del crecimiento de células Pre-B, PBSF) y CXCL11 (alias I-TAC, alias INF-y-linfocito T inducible, un quimioatrayente).

CXCL12, un quimioatrayente derivado del estroma participa en la inmunovigilancia y en la regulación de las respuestas inflamatorias. CXCL12 se secreta por las células estromales de la médula ósea, las células endoteliales, el corazón, el músculo esquelético, el hígado, el cerebro, el riñón, las células parenquimatosas y desempeñan un papel esencial en la proliferación de células madre, supervivencia y localización del hematopoyético/progenitor en la médula ósea (Rankin SMy col.;Immunol let. 2012, 145(1-2):47-54). CXCL12 también recluta células progenitoras derivadas de la médula ósea en los sitios de formación de vasculatura. Por otra parte, desempeña un papel destacado en la carcinogénesis. CXCL12 promueve el reclutamiento de células progenitoras endoteliales y de células supresoras derivadas de mieloides en los sitios del tumor así como de otras células derivadas de la médula ósea. Adicionalmente, CXCL12 regula la angiogénesis/vasculogénesis relacionada con la progresión tumoral y desempeña un papel clave en la siembra de células tumorales circulantes en sitios metastásicos. Además de sus funciones quimiotácticas, se ha demostrado que CXCL12 regula la proliferación, motilidad y supervivencia de células tumorales (Kryczek Iy col.;Cancer Res. 2005, 65(2):465-72; Teicher BAy col.;Clin Can Res. 2010, 16(11):2927-31; Domanska UMy col.;European J of Cancer. 2013, 49(1):219-30).

Además de CXCR7, CXCL12 se une y activa CXCR4 (alias Fusina, alias receptor de siete dominios transmembrana derivado de leucocitos; LESTR, alias D2S201E, alias receptor de siete segmentos transmembrana, alias HM89, alias proteína 3 asociada a lipopolisacárido; Iap3, alias proteína 3 asociada a LPS) mientras que CXCL11 se une y activa CXCR3 (alias GPR9, alias CD183).

La interacción de CXCR7 y sus ligandos CXCL12 y CXCL11 (en adelante denominado eje CXCR7) participa, por tanto, en guiar las células portadoras de receptores a lugares específicos del cuerpo, particularmente a los sitios de inflamación, lesión inmunitaria y disfunción inmunitaria y también se asocia a daño tisular, la inducción de apoptosis, crecimiento celular y angioestasis. CXCR7 y sus ligandos están regulados positivamente y se expresan altamente en diversas situaciones patológicas incluyendo cáncer, trastornos autoinmunitarios, inflamación, infección, rechazo de trasplantes, fibrosis y neurodegeneración.

Los cánceres figuran entre las principales causas de muerte en todo el mundo. Los tumores se componen de células cancerosas malignas que proliferan anormalmente, pero también de un microambiente funcionalmente de apoyo. Este microambiente tumoral está compuesto por una compleja matriz de células, componentes de la matriz extracelular y moléculas de señalización y se establece mediante la comunicación alterada entre las células estromales y tumorales. A medida que los tumores aumentan de tamaño, provocan la producción de diversos factores que pueden ayudar a que el tumor crezca tales como factores angiogénicos (que promueven el crecimiento interno de vasos sanguíneos) o que pueden ayudar a evadir el ataque de la respuesta inmunitaria del hospedador. CXCL12 es un factor angiogénico e inmunomodulador producido en los tumores.

Los presentes moduladores cristalinos CXCR7 pueden ser útiles, solos o en combinación en cánceres donde la expresión del receptor CXCR7 CXCL11/CXCL12 se correlaciona con la progresión de la enfermedad en el cáncer (entre otros, en cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, cáncer de mama, cáncer de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, cáncer de cuello uterino, neoplasia intraepitelial cervical, carcinoma papilar de tiroides, cáncer de vejiga, sarcoma de Ewing, cáncer de colon, cánceres colorrectales, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico, meningiomas, linfoma MALT, carcinoma epidermoide cutáneo, tumores neuroendocrinos, carcinoma nasofaríngeo, glioblastoma multiforme, astrocitomas, gliomas, carcinoma hepatocelular, cáncer de mama positivo a estrógenos, osteosarcoma, cáncer de vesícula biliar, tumores de riñón y carcinoma de células renales). CXCR7 también se expresa en leucemias, adenocarcinomas, metástasis cerebrales, mielomas múltiples, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo primario, melanoma, melanoma metastásico, rabdomiosarcoma, adenoma pituitario, carcinoma oral de células escamosas, tumores orales, linfoma linfoplasmacítico, leucemia de linfocitos T en adultos, tumores cerebrales, cáncer escamoso esofágico, cáncer esofágico, carcinoma ovárico, linfoma, tumores inducidos por virus, neoplasia otorrinolaringológica, linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, cáncer de tiroides, carcinoma epidermoide del cuello uterino, cáncer endometrial, neuroblastoma, cáncer gastrointestinal, enfermedad linfoproliferativa, enfermedad de Paget extramamaria, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoide aguda, cáncer gástrico, tumores de la vaina nerviosa y coriocarcinoma, mesotelioma pleural maligno, neurilenoma, meningioma, linfoma difuso de linfocitos B grandes, leucoplasia oral, sarcoma de Kaposi y rabdomiosarcoma alveolar (para una revisión véase Suny col.;Cancer Metastasis Rev. 2010, 29(4), 709-722).

Los presentes moduladores CXCR7 pueden ser útiles, solos o en combinación, en enfermedades donde la modulación de CXCR7 usando ARNip, ARNhc, microARN, sobreexpresión, animales de inactivación génica para CXCR7, agonistas de CXCR7, antagonistas de CXCR7, anticuerpos o nanocuerpos se ha demostrado que altera el crecimiento tumoral en modelos experimentales de enfermedades como agentes únicos o en combinación con terapias citotóxicas que incluyen, entre otros, carcinoma hepatocelular (Xue TCy col.;Exp Ther Med. 2012, 3(1):117-123; Zhengy col.;Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 2010, 11;29:31), Sarcoma de Kaposi (Raggo Cy col.;Cancer Res. 2005, 65(12):5084-95), leucemia de linfocitos T (Jin Zy col.;Int J Cancer. 2009, 125(9):2229-35), linfoma (Burns JMy col.;J Exp Med. 2006, 203(9):2201 -13), carcinomas de pulmón, cáncer de mama (Miao Zy col.;PNAS. 2007, 104(40): 15735-40), cáncer gástrico (De-Min My col.;World J Surg Oncol. 2016, 14(1):256-266), rabdomiosarcoma (Grymula Ky col.;Int J cancer. 2010, 127(11):2554-68), cáncer de próstata (Wang Jy col.;J Biol Chem. 2008, 283(7):4283-94), cáncer pancreático (Shakir My col.;Pancreas. 2015, 44(4):528-34), cáncer escamoso esofágico (Zhou SMy col.;Oncol Rep. 2016, 35(6):3453-9), cáncer endometrial (Long Py col.;Tumour boil. 2016, 37(6):7473-80), carcinoma papilar de tiroides (Zhang Hy col.;Tumour boil. 2016, 37(2):2415-23), carcinoma epidermoide oral (Chen Ny col.;Tumour boil. 2016, 37(1):567-75), metástasis de pulmón (Goguet-Surmeniany col.;Br J Cancer. 2013, 109(6): 1579-85), melanoma (McConnell ATy col.;Br J Dermatol. 2016, doi: 10.1111/bjd.14720), cáncer de vejiga (Liu Ly col.;Mol Med Rep. 2013, 8(1): 140-6), mieloma múltiple (Azab AKy col.;Blood. 2014, 124(12): 1905-14), osteosarcoma (Zhang Yy col.;Oncol Rep. 2014, 32(3):965-72), cáncer de colon (Wang HXy col.;Mol Clin Oncol.

2015, 3(6): 1229-1232), astrocitomas de grado IV (Walters MJy col.;Br J Cancer. 2014, 110(5): 1179-88), cánceres de cabeza y cuello (Maussang Dy col.;J Biol Chem. 2013, 288(41):29562-72), neuroblastoma (Liberman Jy col.;Plos One. 2012, 7(8):e43665) y glioblastoma (Liu Y; Anticancer Res. 2015, 35(1):53-64; Walters M<j>y col.;Br J Cancer.

2014, 110(5): 1179-88; Ebsworth Ky col.;J Clin Oncol. 2012, 30(15) e13580); altera los vasos sanguíneos asociados a tumores (Miao Zy col.;PNAS. 2007, 104(40): 15735-40); y reduce la siembra de células tumorales (Grymula Ky col.;Int J cancer. 2010, 127(11):2554-68).

Los presentes moduladores CXCR7 pueden ser útiles, solos o en combinación, en enfermedades donde la modulación de CXCR7 (por ejemplo, usando ARNip, ARNhc, microARN, sobreexpresión, animales de inactivación génica para CXCR7, agonistas de CXCR7, antagonistas de CXCR7, anticuerpos o nanocuerpos) se ha demostrado que regula la migración de leucocitos (Berahovich RDy col.;Immunology. 2014, 141 (1): 111-22) y promueve la reparación de mielina/neuronal (Williams JLy col.;J Exp Med. 2014, 5; 211(5):791-9; Gottle Py col.;Ann Neurol. 2010, 68(6):915-24), proporcionando efectos beneficiosos en modelos experimentales de enfermedades inflamatorias, autoinmunitarias y desmielinizantes, incluyendo esclerosis múltiple y encefalomielitis autoinmunitaria (Cruz-Orengo Ly col.;J Neuroinflammation. 2011,6; 8:170; Bao Jy col.;Biochem Biophys Res Commun. 1 de enero de 2016; 469(1): 1-7), Síndrome de Guillain-Barré o neuritis autoinmunitaria (Brunn Ay col.;Neuropathol Appl Neurobiol. 2013, 39(7):772-87), artritis reumatoide (Watanabe Ky col.;Arthritis Rheum. 2010, 62(11):3211-20), inflamación pulmonar aguda/lesión pulmonar aguda (Ngamsri KCy col.;J Immunol. 2017, 198(6):2403-2413; Petty JMy col.;J Immunol.

2007, 178(12):8148-57), asma (Gasparik Vy col.;ACS Med Chem Lett. 12 de enero de 2012; 3(1):10-4; Chang HCy col.;Immunology. 2017 DOI: 10.1111/imm.12881); atenúa la hipertensión pulmonar crónica inducida por hipoxia (Sartina Ey col.;Pediatr Res. 2012, 71 (6):682-8); fibrosis pulmonar (Cao Zy col.;Nat Med. 2016; 22(2): 154-62); y aterosclerosis (Zhao Dy col.;Biochemistry. 2015, 17; 54(45):6806-14; Ma W.y col.;Biochem Pharmacol. 2014, 1; 89(1):99-108).

Adicionalmente, se ha propuesto que CXCR7 esté implicado en la migración de células madre cardíacas (Chen Dy col.;Sci Rep. 2015, 5:16813), vasculopatía crónica del aloinjerto (Thomas MN y col.; Transpl Int. 2015, 28(12):1426-35), enfermedad inflamatoria intestinal (Werner Ly col.;Theranostics. 2013, 3(1):40-6), rinosinusitis crónica (Patadia My col.;Am J Rhinol Allergy. 2010, 24(1): 11-6), enfermedades vasculares pulmonares humanas (Rafii Sy col.;Nat Cell Biol. 2015, 17(2): 123-36) y desarrollo de preeclampsia grave (Lu Jy col.;Exp Mol Pathol. 2016, 100(1):184-91); y mejora los efectos beneficiosos de las terapias basadas en células madre mesenquimales para la lesión por isquemia/reperfusión renal (Liu Hy col.;Plos One. 2012, 7(4):e34608) e induce un comportamiento ansiolítico (Ikeda Yy col.;Cell. 2013, 5; 155(6): 1323-36). Además de las enfermedades mencionadas anteriormente los moduladores de CXCR7 pueden ser útiles en el tratamiento del rechazo de aloinjerto renal, lupus eritematoso sistémico, artrosis, enfermedades vasculares pulmonares, insuficiencia renal aguda, isquemia incluyendo isquemia cerebral, rechazo crónico de aloinjertos, síndrome coronario agudo, sistema nervioso central lesionado; hiperlipidemia, trasplante de HSC, hipertensión, hipertensión pulmonar, Síndrome urémico hemolítico asociado a toxina Shiga, VIH/SIDA; cirrosis, trastornos relacionados con el estrés, retinopatía diabética proliferativa, encefalitis por el virus del Nilo Occidental, lesión vascular, fibrosis pulmonar, endometriosis, tiroiditis autoinmunitaria, enfermedades asociadas a la neovascularización coroidea, anemia aplásica, Enfermedad de Sjogren y vitíligo.

Mecánicamente, estudios recientes han proporcionado cada vez más pruebas de que la activación de la ruta de CXCL12 es un mecanismo potencial de resistencia tumoral tanto a las terapias convencionales como a los agentes biológicos a través de múltiples acciones complementarias: (i) promoviendo directamente la supervivencia de las células cancerosas, la invasión y el fenotipo de células madre cancerosas y/o iniciadoras de tumores; (ii) reclutando "estroma distal" (es decir, células mieloides derivadas de la médula ósea) para facilitar inmunosupresión, recurrencia tumoral y metástasis; y (iii) promoviendo la angiogénesis directamente o de manera paracrina (Duda DG y col.: CXCL12 (SDF1alpha)-CXCR4/CXCR7 pathway inhibition: an emerging sensitizer for anticancer therapies?; Clin Cancer Res; 2011,17(8); 2074—80)datos preclínicos y clínicos recientemente analizados que respaldan el uso potencial de agentes anti-CXCL12 incluyendo moduladores de CXCR7 como sensibilizadores de las terapias actualmente disponibles en los tratamientos contra el cáncer. Además, la mejora de la expresión de CXCR7 en el endotelio parece ser crítica para la infiltración inflamatoria en enfermedades autoinmunitarias. CXCL12 y CXCL11 son ligandos clave en la respuesta inmunitaria inflamatoria: (i) actuando sobre la migración celular, sobre la adhesión celular y la supervivencia celular (Kumar Ry col.;Cell Immunol. 2012, 272(2):230-41); (ii) impulsando la diferenciación, la maduración y la polarización de la célula, es decir, macrófagos (Ma W.y col.;Biochem Pharmacol. 2014, 1; 89(1):99-108), linfocitos T CD4+ (Zohar Yy col.;J Clin Invest. 2014, 124(5):2009-22), progenitores de oligodendrocitos (Gottle Py col.;Ann Neurol. 2010, 68(6):915-24); (iii) participando en procedimientos de migración dirigida (Lewellis SWy col.;J Cell Biol. 2013, 4; 200(3):337-55). Por lo tanto, dirigirse a CXCR7 y de esta manera regular el nivel de sus ligandos tendría un papel decisivo en la patogénesis de una amplia diversidad de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias. Sanchez-Martin y col. (Trends Mol Med. 2013, 19(1): 12-22) analizaron recientemente la desregulación de CXCR7 en la enfermedad y resaltaron el hecho de que este receptor es una diana terapéutica atractiva para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias e inflamación.

Por lo tanto, los presentes antagonistas de CXCR7 pueden ser útiles, solos, o en combinación con uno o más agentes terapéuticos y/o quimioterapia y/o radioterapia y/o inmunoterapia; en particular en combinación con quimioterapia, radioterapia, inhibidores de EGFR, inhibidores de la aromatasa, inmunoterapia tal como especialmente bloqueo de PD1 y/o PDL1 y/o bloqueo de CTLA4, u otras terapias dirigidas; para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de cánceres tales como carcinomas; adenocarcinomas; tumores neuroendocrinos; cáncer de piel incluyendo melanoma y melanoma metastásico; cáncer de pulmón incluyendo cáncer de pulmón no microcítico; cáncer metastásico; metástasis pulmonar; cáncer de vejiga incluyendo cáncer de vejiga urinaria; carcinoma de células uroteliales; carcinomas renales incluyendo carcinoma de células renales; carcinoma de células renales metastásico, carcinoma renal metastásico de células claras; cánceres gastrointestinales incluyendo carcinoma de colon, adenoma colorrectal, adenocarcinoma colorrectal, cáncer colorrectal, cáncer colorrectal metastásico, poliposis adenomatosa familiar (PAF), cáncer esofágico, carcinoma epidermoide oral; cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, colangiocarcinoma, carcinoma hepatocelular; cáncer pancreático tales como adenocarcinoma pancreático o (adeno)carcinoma ductal pancreático; cáncer endometrial; cáncer ovárico; cáncer de cuello uterino; neuroblastoma; cáncer de próstata incluyendo cáncer de próstata resistente a la castración; tumores cerebrales incluyendo metástasis cerebrales, gliomas malignos, glioblastoma multiforme, meduloblastoma, meningiomas; cáncer de mama incluyendo carcinoma de mama triple negativo; tumores orales; tumores nasofaríngeos; cáncer torácico; cáncer de cabeza y cuello; leucemias incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia de linfocitos T en adultos; carcinoma de tiroides incluyendo carcinoma papilar de tiroides; coriocarcinoma; sarcoma de Ewing; osteosarcoma; rabdomiosarcoma; sarcoma de Kaposi; linfoma incluyendo linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma MALT; linfoma intraocular primario de linfocitos B, mielomas múltiples y tumores inducidos por virus; y enfermedades que implican metástasis mediadas por CXCR7 y/o CXCL12 y/o CXCL11, quimiotaxis, adhesión celular, migración transendotelial, proliferación y/o supervivencia celular.

Específicamente, el papel potencial de CXCR7 en tumores cerebrales, glioma maligno y en glioblastoma multiforme se conoce de la bibliografía. Se han mencionado moduladores de la ruta de CXCL12 incluyendo moduladores de CXCR7 como agentes terapéuticos potenciales para tratar el cáncer de cerebro en combinación con agentes quimioterapéuticos o radioterapia. Por ejemplo, Hattermann y col. (Cancer research 2010, 70 (8):3299-3308) enseñan que la "estimulación de CXCL12 previno la apoptosis inducida por camptotecina y temozolomida y que un antagonista de CXCR7 redujo el efecto antiapoptótico de CXCL12". Los autores concluyeron que "CXCR7 es un receptor funcional para CXCL12 en astrocitomas/glioblastomas y media la resistencia a la apoptosis inducida por fármacos". Adicionalmente, Hattermann y col. (Oncol Rep. 2012, 27: 1348-1352) enseñan que "CXCL12 anula el efecto antiproliferativo de la temozolomida". Los autores también enseñan que este efecto podría eliminarse casi por completo mediante un antagonista específico de CXCR7, "lo que indica que el efecto antiapoptótico de CXCL12 está mediado principalmente por CXCR7". Ebsworth y col. (Neuro Oncol (2013) 15 (supl 3):iii37-iii61. ET-023) enseñan que un antagonista de CXCR7 prolonga significativamente la supervivencia cuando se administra en combinación con radioterapia en un modelo de glioblastoma en ratas. Este descubrimiento está respaldado por otros estudios (por ejemplo, Ebsworth Ky col.;J Clin Oncol. 2012, 30(15) e13580; Walters MJy col.;Br J Cancer. 2014, 110(5): 1179-88) desvelando quein vivola inhibición de CXCR7 junto con la radioterapia da como resultado una extensión significativa del tiempo de supervivencia en otro modelo de glioblastoma en ratas. Además, Liu SC y col. (Neuro-Oncology 2014; 16(1):21-28) enseñan que la inhibición de CXCL12 después de la irradiación inhibe la recurrencia del tumor en tumores cerebrales autóctonos en ratas. Liu SC y col. (Neuro Oncol. 2013, 16(1):21-8) también enseñan que la inhibición de CXCL12 en un modelo de metástasis cerebral después de la irradiación produjo una marcada inhibición del crecimiento tumoral y una prolongación de la vida útil en comparación con la irradiación sola. Calatozzolo C y col. (Cancer Biol Ther. 2011, 11(2), 1-12) enseñar en experimentosin vitroque los antagonistas de CXCR7 mostraron una inhibición completa de la proliferación de gliomas.

Específicamente, un papel para CXCR7 en tumores de páncreas, se ha descrito en la bibliografía. Shakiry col.(Pancreas. 2015, 44(4):528-34) observaron que CXCR4 y CXCR7, tras la interacción con CXCL12, activan las proteínas quinasas corriente abajo que promueven un comportamiento más agresivo. Por otra parte, la expresión de CXCR7 y CXCI12 se correlaciona con los grados histológicos del tumor (Liu Zy col.;World J Surg Oncol. 2014, 12:348). Estos descubrimientos fueron confirmados por Heinrich ELy col.(J Transl Med. 2012, 10:68). Por lo tanto, Los moduladores de CXCR7 pueden ser útiles en el tratamiento de los cánceres de páncreas.

Los moduladores de CXCR7 también pueden ser útiles en el tratamiento del carcinoma papilar de tiroides. Liu Zy col.(J Surg Res. 2014, 191 (2):379-88) describieron que los niveles de proteína y ARN mensajero de CXCR7 aumentaron notablemente en el carcinoma papilar de tiroides y se correlacionaron con la progresión del tumor. CXCR7 podría regular la proliferación, el ciclo celular, la apoptosis, la invasión y la expresión de proteínas reguladoras del ciclo celular implicadas en la transición de fase S-G2. La atenuación de CXCR7 en células de carcinoma papilar de tiroides suprimió la proliferación e invasión celular, indujo la detención de la fase S y promovió la apoptosis. Zhang H y col. (Tumor Biol.

2016, 37(2):2415-23) demostró además que CXCR7 afecta al crecimiento de las células del carcinoma papilar de tiroides y participa en la tumorigénesis del carcinoma papilar de tiroides, probablemente a través de la regulación de la angiogénesis por el VEGF proangiogénico o la IL-8. La expresión y la función del eje CXCR7 en cáncer de tiroides se confirmó por Zhu Xy col.(Int J Oncol. 2016, 48(6):2321-9)

Los moduladores de CXCR7 también pueden ser útiles en el tratamiento de cáncer de pulmón: Usando una combinación de sobreexpresión e interferencia de ARN, Miao Z y col. (PNAS. 2007, 104(40): 15735-40) establecieron que CXCR7 promueve el crecimiento de tumores formados a partir de células de cáncer de mama y pulmón y mejora las metástasis pulmonares experimentales. Iwakiri Sy col.(Iwakiri Sy col.;Cancer. 2009, 115(11):2580-93) observaron que una mayor expresión de CXCR7 está relacionada con la recurrencia temprana y metastásica en el cáncer de pulmón no microcítico en estadio patológico I.

Los moduladores de CXCR7 también pueden ser útiles en el tratamiento de carcinoma hepatocelular: se informó que la expresión de CXCR7 aumenta en los tejidos del carcinoma hepatocelular. La atenuación de la expresión de CXCR7 inhibió significativamente la invasión, la adhesión y la angiogénesis de células de carcinoma hepatocelular. Además, la regulación negativa de la expresión de CXCR7 conduce a una reducción del crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto de carcinoma hepatocelular (Zheng Ky col.;J Exp Clin Cancer Res. 2010, 29:31). Monnier Jy col.(Eur J Cancer. 2012, 48(1): 138-48) también observaron en una cohorte de 408 carcinomas hepatocelulares humanos, que CXCR7 era significativamente mayor en los tumores en comparación con los controles de hígado normales. La tinción inmunohistoquímica en secciones de carcinoma hepatocelular humano confirmó que la expresión de CXCR7 era mucho mayor en los tejidos cancerosos. Usando ARNi de CXCR7 en una línea celular de carcinoma hepatocelular, Xue TC y col. (Exp Ther Med. 2012, 3(1):117-123) observaron que la regulación negativa de CXCR7 disminuía el crecimiento de tumores y el número de metástasis pulmonares en ratones desnudos. Por otra parte, la micromatriz de tejido mostró que HCC con alta expresión de CXCR7 eran propensos a metastatizar en el pulmón. La regulación negativa de CXCR7 inhibe el crecimiento y la metástasis pulmonar de células de carcinoma hepatocelular humano con alto potencial metastásico.

Los moduladores de CXCR7 también pueden ser útiles en el tratamiento de cáncer de colon metastásico: Guillemoty col.(Br J Cancer. 2012, 107(12): 1944-9) observaron que después de la inyección de células de cáncer colorrectal, los ratones tratados con antagonistas de CXCR7 mostraron una reducción significativa en la metástasis pulmonar. Wang HX y col. (Mol Clin Oncol. 2015, 3(6): 1229-1232) estudiaron la expresión de CXCR7 en muestras de cáncer de colon y observaron que los niveles de CXCR7 eran significativamente más altos en tumores de colon en comparación con aquellos en tejido de colon normal. Además, los tumores de colon metastásicos en los ganglios linfáticos exhibieron una expresión de CXCR7 significativamente mayor en comparación con los tumores no metastásicos.

También se informa que CXCR7 se expresa en metástasis cerebrales (Salmaggiy col.;Cancer Biol Ther.2009, 8:17, 1-7). Los autores concluyeron que la ruta CXCL12/CXCR4/CXCR7 podría ser una diana interesante para futuras investigaciones que investiguen el papel de estas moléculas en la invasión y la proliferación de células metastásicas.

Específicamente, el impacto de CXCR7 en las enfermedades inflamatorias desmielinizantes se conoce de la bibliografía. CXCR7 se expresa en diversas regiones del cerebro del ratón adulto y su expresión está regulada positivamente en un modelo de ratón para la esclerosis múltiple (Banisadr Gy col.;J Neuroimmune Pharmacol. marzo de 2016; 11(1):26-35). Los patrones de expresión alterados de CXCL12 en la barrera hematoencefálica (BHE) están implicados en la esclerosis múltiple y se correlacionan con la gravedad de la enfermedad (McCandless EEy col.;Am J Pathol. 2008, 172(3):799-808). Se ha demostrado que el antagonismo de CXCR7 es eficaz en la encefalomielitis autoinmunitaria experimental en ratones. Esos estudios recientes implican fuertemente al CXCR7 como una molécula modificadora de la enfermedad en la esclerosis múltiple a través de mecanismos complementarios: (i) facilitando la entrada de leucocitos al espacio perivascular a través de la redistribución de CXCL12 en la BHE (Cruz-Orengo Ly col.;J Neuroinflammation. 2011, 6; 8:170; Cruz-Orengo Ly col.;J Exp Med. 2011, 14; 208(2):327-39) y regulando la activación de integrinas mediada por CXCR4 (Hartmann TNy col.;J Leukoc Biol. 2008; 84(4): 1130-40) (ii) por efecto directo sobre la quimiotaxis microglial (Bao Jy col.;Biochem Biophys Res Commun. 1 de enero de 2016; 469(1):1-7) y sobre monocitos inflamatorios, facilitando su entrada al cerebro (Douglas SDy col.;J Leukoc Biol. 2017; 102: 1155 1157) (iii) promoviendo la remielinización mediante niveles crecientes de CXCL12 que mejoran la maduración de las células progenitoras de oligodendrocitos mediadas por CXCR4 (Williams JLy col.;J Exp Med. 2014, 5; 211(5):791-9; Gottle Py col.;Ann Neurol. 2010, 68(6):915-24). Recientemente, Chu y col. (Neuroscientist. 2017, 23(6): 627-648) revisaron la importancia de dirigirse al eje CXCL12/CXCR4/CXCR7 para enfermedades desmielinizantes, debido a su papel central en la promoción de la migración, la proliferación y la diferenciación de células progenitoras de oligodendrocitos. Por lo tanto, el antagonismo de CXCR7 podría prevenir terapéuticamente la inflamación y mejorar la reparación de la mielina en el SNC adulto desmielinizado.

Específicamente, el papel potencial de CXCR7 en la artritis reumatoide se conoce de la bibliografía. Se informa que CXCR7 se expresa en células endoteliales de la membrana sinovial. También, se encontraron niveles elevados de ARNm de CXCL12 y CXCL11 en el tejido sinovial de pacientes con artritis reumatoide (Uenoy col.;Rheumatol Int.

2005, 25(5):361 -7). Se demostró que CXCL12 desempeña un papel central en la acumulación de linfocitos T CD4+ y monocitos en la membrana sinovial (Nanki Ty col.;J Immunol. 2000,165(11):6590-8; Bladas MCy col.;Arthritis Rheum. marzo de 2002; 46(3):824-36). Además, CXCL12 participa en el procedimiento de la artritis reumatoide a través de sus funciones proangiogénicas y su acción sobre el reclutamiento y la diferenciación de osteoclastos. Por lo tanto, se han propuesto moduladores de la ruta CXCL12 incluyendo moduladores de CXCR7 como posibles agentes terapéuticos para tratar la artritis reumatoide. Villalvilla y col. (Expert Opin Ther Targets. 2014, 18(9): 1077-87) analizaron recientemente datos preclínicos y clínicos que respaldan el uso potencial de agentes anti-CXCL12 en tratamientos de artritis reumatoide. Watanabe y col. (Arthritis Rheum. 2010, 62(11):3211-20) enseñan que un inhibidor de CXCR7 reduce profiláctica y terapéuticamente los signos clínicos de la enfermedad y la angiogénesis en un modelo de artritis inducida por colágeno en ratón.

Específicamente, CXCR7 está implicado en diversos trastornos inflamatorios. Por ejemplo, CXCL12 y CXCL11 están implicados en procedimientos inflamatorios pulmonares agudos y crónicos tales como enfermedad pulmonar obstructiva crónica (Petty JMy col.;J Immunol. 2007, 178(12):8148-57; Porter JCy col.;J Immunol. 2008, 180(3): 1866-77). CXCL12 se encontró regulado positivamente en el pulmón tanto en modelos humanos como animales (Phillips RJy col.;J Clin Invest. 2004, 114(3):438-46). Se ha demostrado que la atenuación de CXCR7 en el pulmón y los agentes anti-CXCL12 atenúan la inflamación pulmonar y la hiperreactividad de las vías respiratorias en modelos de asma (Gasparik Vy col.;ACS Med Chem Lett. 12 de enero de 2012; 3(1): 10-4; Lukacs<n>Wy col.;Am J Pathol.

2002, 160(4): 1353-60). Se demostró que el antagonismo de CXCR7 o el bloqueo de CXCL12 reducen la inflamación pulmonar, la estabilización de la barrera epitelial pulmonar en lesión pulmonar aguda en ratones (Ngamsri KCy col.;J Immunol. 2017, 198(6):2403-2413; Konrad FMy col.;Cell Death Dis. 2017, 8 (5)). Cao y col. (Nat Med. 2016; 22(2): 154-62) enseñan que el modulador de CXCR7 después de una lesión pulmonar "promueve la reparación alveolar y reduce la fibrosis" en un modelo de ratón de fibrosis pulmonar. También se describió un papel de CXCR7 en la fibrosis hepática (Ding BSy col.;Nature. 2014, 505(7481):97-102).

También se ha informado que CXCL12 y CXCL11 están regulados positivamente en enfermedades inflamatorias intestinales (Koelink PJy col.;Pharmacol Ther. 2012, 133(1):1-18). Se descubrió que CXCR7 estaba regulado positivamente en linfocitos T de sangre periférica en enfermedades inflamatorias intestinales (Werner Ly col.;J Leukoc Biol. 2011, 90(3):583-90). El autor plantea la hipótesis de que "la mayor expresión de CXCR7 en la sangre periférica de pacientes con enfermedades inflamatorias intestinales podría fomentar una mayor afluencia de linfocitos T a los sitios de inflamación de la mucosa" (Werner Ly col.;Theranostics. 2013, 3(1):40-6). En modelos de ratón para Enfermedad inflamatoria intestinal, los moduladores de la ruta CXCL12 podrían disminuir la infiltración de linfocitos T y reducir el daño tisular (Mikami Sy col.;J Pharmacol Exp Ther. 2008, 327(2):383-92; Xia XMy col.;PLoS One. 2011, 6(11):e27282).

También se han descubierto niveles elevados de CXCL12 y CXCL11 en piel psoriásica lesionada (Chen SCy col.;Arch Dermatol Res. 2010, 302(2): 113-23; Zgraggen Sy col.;PLoS One. 2014, 9(4):e93665). Zgraggen y col. enseñan que el bloqueo de CXCL12 mejoró el curso de la inflamación crónica de la piel en dos modelos diferentes de inflamación de la piel similar a la psoriasis.

Diversos trastornos autoinmunes diferentes como el lupus eritematoso sistémico (LES) muestran una expresión alterada de CXCR7/CXCR4 correlacionada con una migración alterada de linfocitos B de LES promovida por CXCL12 (Biajoux Vy col.;J Transl Med. 2012, 18; 10:251). Además, CXCL12 estaba significativamente regulado positivamente en los riñones nefríticos en múltiples modelos murinos de lupus. Wangy col.(J Immunol. 2009, 182(7):4448-58) enseñan que actuar sobre el eje CXCL12 es una buena diana terapéutica en el lupus, ya que un antagonista de CXCR4 mejora significativamente la enfermedad, prolongando la supervivencia y reduciendo la nefritis y la linfoproliferación.

CXCL12 y CXCR4 se encontraron regulados positivamente en tiroides de pacientes autoinmunitarios y en modelos animales (Armengol MPy col.;J Immunol. 2003, 170(12):6320-8). Liuy col.(Mol Med Rep. 2016, 13(4):3604-12) enseñan que el bloqueo de CXCR4 redujo la gravedad de la tiroiditis autoinmunitaria en ratones, disminuyendo la infiltración de linfocitos y la producción de autoanticuerpos.

Virani y col. (Virani Sy col.;AJRI. 2013, 70:386-397) enseñan que el bloqueo de CXCL12 limita la angiogénesis en las lesiones de endometriosis.

Las propiedades biológicas de los moduladores de CXCR7 también incluyen, pero no se limitan a, cualquier función fisiológica y/o función celular ligada y/o controlada por sus ligandos CXCL11, CXCL12, BAM22 y sus péptidos relacionados. Por tanto, el agotamiento de CXCL12 sensibiliza las células cancerosas a la quimioterapiain vivoy el tratamiento de CXCL12 bloquea la metástasis del carcinoma de colon (Duday col.;Clin. Cancer Res. 2011 17(8) 2074 2080; Naumanny col.;Plos One. 2010, 5(2) e9175). CXCR7 también es un receptor para CXCL11 (alias subfamilia b de citocinas pequeñas inducibles, miembro 11; scybl 1, alias proteína 9 inducible por interferón gamma; ip9, alias subfamilia b de citocinas inducibles pequeñas, miembro 9b; scyb9b) y, por lo tanto, los moduladores de la actividad de CXCR7 también pueden usarse en indicaciones con patología asociada a CXCL11 (Rupertus Ky col.;Clin Exp Metastasis. 2014, 31 (4):447-59; Zohar Yy col.;J Clin Invest. 2014, 124(5):2009-22; Antonelli Ay col.;Thyroid. 2013, 23(11):1461-9). CXCR7 también funciona como receptor del péptido opioide BAM22 y sus péptidos relacionados (péptido E, péptidos BAM12, BAM14, BAM18) y por lo tanto los moduladores de la actividad c Xc R7 posiblemente también puedan usarse en indicaciones con patologías asociadas a péptidos opioides (Ikeday col.;Cell. 2013, 155, 1323-1336). También se ha demostrado que CXCR7 funciona como un receptor eliminador de CXCI11 y CXCL12. Por lo tanto, se ha demostrado que la focalización en CXCR7 altera la concentración local de CXCI11 y CXCL12, lo que lleva a una desregulación de los gradientes de concentración de CXCI11 y CXCL12.

Determinadas compuestos de isoxazol que son bloqueadores de la proteína SMYD se conocen del documento WO2016/040515, en el que en los compuestos del documento WO2016/040515, el anillo de isoxazol está sustituido con determinados sustituyentes (ciclo-)alquilo en lugar del presente sustituyente fenilo; y el resto piperidina no lleva un sustituyente carboxamida. Determinadas compuestos de pirrol se conocen como agentes antibacterianos del documento WO2006/087543, el documento W02005/026149 y J. Med. Chem 2014, 57(14), 6060-6082. Las diaminas cíclicas como inhibidores del factor Xa se conocen del documento WO2005/032490.

El documento WO2004/050024 desvela compuestos de pirrolidina como moduladores del receptor de quimiocinas. El documento US 2014/154179A1 desvela antagonistas de CXCR7 útiles para el tratamiento de cáncer. Ninguno de los ejemplos desvelados en dicho documento contiene un anillo de isoxazol como el anillo heteroarilo de 5 miembros y todos los compuestos contienen un anillo central de pirrolidina de 5 miembros en lugar de un anillo de piperidina de 6 miembros.

La presente invención proporciona novedosas formas cristalinas de (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico que son moduladores del receptor CXCR7, es decir, actúan como antagonistas del receptor CXCR7 y son útiles para la prevención o el tratamiento de enfermedades que responden a la activación de los receptores CXCL12 y/o receptores CXCL11, especialmente cáncer. En la prevención o el tratamiento de cánceres, dichas formas cristalinas también pueden usarse en combinación con uno o más agentes de quimioterapia y/o radioterapia y/o terapia dirigida.

Descripción de las figuras

La Figura 1 muestra el diagrama de difracción de rayos X en polvo del COMPUESTO en forma cristalina 1 como se obtiene del Ejemplo 1. El diagrama de difracción de rayos X medido con el procedimiento 1 muestra picos que tienen una intensidad relativa, en comparación con el pico más intenso del diagrama, de los siguientes porcentajes (intensidades de pico relativas dadas entre paréntesis) en los ángulos de refracción 2theta indicados (se informan picos seleccionados del intervalo 3-40° 2theta con intensidad significativa): 3,6° (53 %), 7,2° (31 %), 8,2° (68 %), 8,7° (46 %), 9,1° (6 %), 10,8° (50 %), 13,9° (9 %), 17,0° (26 %), 17,5° (12 %), 18,3° (100 %).

La Figura 2 muestra el diagrama de difracción de rayos X en polvo del COMPUESTO en forma cristalina 2 como se obtiene del Ejemplo 2. El diagrama de difracción de rayos X medido con el procedimiento 1 muestra picos que tienen una intensidad relativa, en comparación con el pico más intenso del diagrama, de los siguientes porcentajes (intensidades de pico relativas dadas entre paréntesis) en los ángulos de refracción 2theta indicados (se informan picos seleccionados del intervalo 3-40° 2theta con intensidad significativa): 6,7° (46%), 8,5° (100%), 10,9° (19%), 13,2° (15 %), 14,1° (13 %), 14,5° (31 %), 16,0° (16 %), 17,4° (20 %), 18,4° (16 %), 20,8° (14 %).

La Figura 3 muestra el diagrama de difracción de rayos X en polvo del COMPUESTO en forma cristalina 3 como se obtiene del Ejemplo 3. El diagrama de difracción de rayos X medido con el procedimiento 2 muestra picos que tienen una intensidad relativa, en comparación con el pico más intenso del diagrama, de los siguientes porcentajes (intensidades de pico relativas dadas entre paréntesis) en los ángulos de refracción 2theta indicados (se informan picos seleccionados del intervalo 3-40° 2theta con intensidad significativa): 6,8° (26%), 8,2° (100%), 8,8° (11 %), 14,1° (27 %), 16,0° (16 %), 17,9° (31 %), 21,0° (26 %), 24,1° (17 %).

La Figura 4 muestra el diagrama de difracción de rayos X en polvo del COMPUESTO en forma cristalina 4 como se obtiene del Ejemplo 4. El diagrama de difracción de rayos X medido con el procedimiento 2 muestra picos que tienen una intensidad relativa, en comparación con el pico más intenso del diagrama, de los siguientes porcentajes (intensidades de pico relativas dadas entre paréntesis) en los ángulos de refracción 2theta indicados (se informan picos seleccionados del intervalo 3-40° 2theta con intensidad significativa): 6,4° (100%), 8,3° (38%), 8,9° (12%), 13,6° (20 %), 14,1° (9 %), 15,4° (14 %), 16,7° (28 %), 18,0° (32 %), 23,2° (42 %).

Para evitar cualquier duda, los picos enumerados anteriormente describen los resultados experimentales de la difracción de rayos X en polvo que se muestran en la Figura 1 a la Figura 4. Se comprende que, en contraste con la lista de picos anterior, sólo se requiere una selección de picos característicos para caracterizar completa e inequívocamente el COMPUESTO en la forma cristalina respectiva de la presente invención.

En los diagramas de difracción de rayos X de la Fig. 1 a la Fig. 4 el ángulo de refracción 2theta (20) se representa en el eje horizontal y los recuentos en el eje vertical.

Descripción detallada de la invención

1) Una primera realización de la invención se refiere a formas cristalinas del COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico

caracterizada por:

a. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20:3,6°, 8,2° y 18,3° (en particular 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7° y 18,3°; especialmente 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7°, 9,1°, 10,8°, 13,9°, 17,0°, 17,5° y 18,3°); o

b. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5° y 10,9° (en particular 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2° y 14,5°; especialmente 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2°, 14,1°, 14,5°, 16,0°, 17,4°, 18,4° y 20,8°); o

c. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 8,2°, 17,9° y 21,0° (en particular 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9° y 21,0°; especialmente 6,8°, 8,2°, 8,8°, 14,1°, 16,0°, 17,9°, 21,0° y 24,1°).

Se entiende, que las formas cristalinas de acuerdo con la realización 1) comprenden el COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico en una forma cristalina de la base libre (es decir, no en forma de sal). Adicionalmente, dichas formas cristalinas pueden comprender disolvente no coordinado y/o coordinado. En el presente documento se usa disolvente coordinado como término para un solvato cristalino. Análogamente, en el presente documento se usa disolvente no coordinado como término para disolvente fisiosorbido o atrapado físicamente (definiciones según Polymorphism in the Pharmaceutical Industry (Ed. R. Hilfiker, VCH, 2006), Capítulo 8: U.J. Griesser: The Importance of Solvates). La forma cristalina 1 en particular es un anhidrato, es decir, no comprende agua coordinada, pero puede comprender un disolvente no coordinado tal como isopropanol, metanol, etanol y/o agua. La forma cristalina 2 en particular es un anhidrato, es decir, no comprende agua coordinada, pero puede comprender un disolvente no coordinado tal como isopropanol, metanol, etanol y/o agua. La forma cristalina 3 en particular es un dihidrato, es decir, comprende aproximadamente 2 equivalentes de agua coordinada y puede comprender un disolvente no coordinado adicional tal como agua.

2) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con la realización 1), caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3°; en la que dicha forma cristalina se caracteriza notablemente por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7° y 18,3°.

3) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con la realización 2), en la que dicha forma cristalina se caracteriza especialmente por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7°, 9,1°, 10,8°, 13,9°, 17,0°, 17,5° y 18,3°.

4) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con la realización 2) o 3), que esencialmente muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo como se representa en la Figura 1.

5) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 2) a 4), que tiene un evento endotérmico a 259 °C ± 10 °C como se determina mediante calorimetría diferencial de barrido (por ejemplo, usando el procedimiento como se describe en el presente documento).

6) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 2) a 5), en la que dicha forma puede obtenerse:

a) mezclando 10 mg de COMPUESTO con 1 ml de metanol o mezclar 20 mg de COMPUESTO con 1 ml de una mezcla 3 a 1 de metanol y acetonitrilo;

b) disolviendo el COMPUESTO calentando a 65 °C ± 10 °C con una rampa de 0,1 °C/min;

c) enfriando la mezcla a 20 °C ± 10 °C usando una rampa de 0,1 °C/min; y

d) filtrar y secar el producto (por ejemplo, a temperatura ambiente y presión reducida de aproximadamente 1 kPa durante 4 horas).

7) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 2) a 6), en la que dicha forma cristalina es un anhidrato (es decir, no contiene agua coordinada).

8) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con la realización 1, caracterizada por:

a. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2° y 14,5°; o

b. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9° y 21,0°.

9) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con las realizaciones 1) u 8), caracterizada por:

a. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2°, 14,1°, 14,5°, 16,0°, 17,4°, 18,4° y 20,8°; o

b. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,8°, 8,2°, 8,8°, 14,1°, 16,0°, 17,9°, 21,0° y 24,1°.

10) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con las realizaciones 1) u 8), caracterizada por:

a. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9° (en particular 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2° y 14,5°); o a dicha forma cristalina de acuerdo con la realización 9), que esencialmente muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo como se representa en la Figura 2; o

b. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 8,2°, 17,9°, 21,0° (en particular 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9° y 21,0°); o a dicha forma cristalina de acuerdo con la realización 9), que esencialmente muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo como se representa en la Figura 3.

11) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con la realización 1, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2°, 14,5° (en particular 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2°, 14,1°, 14,5°, 16,0°, 17,4°, 18,4° y 20,8°).

12) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5° y 10,9° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 8) a 11), en la que dicha forma cristalina es un anhidrato (es decir, no contiene agua coordinada).

13) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO de acuerdo con la realización 1, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9°, 21,0° (en particular 6,8°, 8,2°, 8,8°, 14,1°, 16,0°, 17,9°, 21,0° y 24,1°).

14) Otra realización se refiere a una forma cristalina de COMPUESTO caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 8,2°, 17,9° y 21,0° de acuerdo con la realización 1); o a dicha forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 8) a 10) o 13), en la que dicha forma cristalina es un dihidrato (es decir, contiene aproximadamente 2 equivalentes de agua coordinada; en la que se entiende que dichos aproximadamente 2 equivalentes de agua coordinada corresponden a una forma cristalina de COMPUESTO que tiene un contenido de agua de aproximadamente 6,9 % (por ejemplo, de acuerdo con lo determinado mediante experimentos de GVS/sorción de humedad).

Se desvela además (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino)-piperidin-3-carboxílico en forma cristalina 4, cuya forma se caracteriza notablemente por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,4°, 8,3°, 16,7°, 18,0° y 23,2° (especialmente 6,4°, 8,3°, 8,9°, 13,6°, 14,1°, 15,4°, 16,7°, 18,0° y 23,2°); y que esencialmente muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo como se muestra en la Figura 4. En particular la forma cristalina 4 puede contener disolvente adicional coordinado o no coordinado tal como THF y/o agua.

Para evitar cualquier duda, siempre que una de las realizaciones anteriores se refiera a "picos en el diagrama de difracción de polvo de rayos X en los siguientes ángulos de refracción 20", dicho diagrama de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2; y debe entenderse que la precisión de los valores de 20 proporcionados en el presente documento está en el intervalo de /- 0,1-0,2°. De forma notable, al especificar un ángulo de refracción 2theta (20) para un pico en las realizaciones de la invención y las reivindicaciones, el valor de 20 dado debe entenderse como un intervalo desde dicho valor menos 0,2° hasta dicho valor más 0,2° (20 /- 0,2°); y preferentemente desde dicho valor menos 0,1° hasta dicho valor más 0,1° (20 /- 0,1°).

Cuando la forma plural se usa para compuestos, sólidos, composiciones farmacéuticas, enfermedades y similares, esto pretende significar también un compuesto, sólido o similar individual.

La expresión "enriquecido enantioméricamente" se entiende en el contexto de la presente invención especialmente que al menos el 90, preferentemente al menos el 95 y lo más preferentemente al menos el 99 por ciento en peso del COMPUESTO está presente en forma de un enantiómero del COMPUESTO. Se entiende que el COMPUESTO está presente en configuración absoluta (3S,4S) enantioméricamente enriquecida.

La expresión "esencialmente puro" se entiende en el contexto de la presente invención especialmente que al menos el 90, preferentemente al menos el 95 y lo más preferentemente al menos el 99 por ciento en peso de los cristales de un COMPUESTO están presentes en una forma cristalina de acuerdo con la presente invención, especialmente en una forma monocristalina de la presente invención.

Cuando se define la presencia de pico en, por ejemplo, un diagrama de difracción de rayos X en polvo, un enfoque común es hacer esto en términos de la relación S/N (S = señal, N = ruido). De acuerdo con esta definición, al afirmar que debe estar presente un pico en un diagrama de difracción de rayos X en polvo, se entiende que el pico en el diagrama de difracción de rayos X en polvo se define por tener una relación S/N (S = señal, N = ruido) mayor que x (siendo x un valor numérico mayor que 1), generalmente mayor que 2, especialmente mayor que 3.

En el contexto cuando se afirma que la forma cristalina muestra esencialmente un patrón de difracción de polvo de rayos X como se representa en la Fig. 1 a la Fig. 4, respectivamente, el término "esencialmente" significa que al menos los picos principales del diagrama representado en dichas figuras, es decir, aquellos que tienen una intensidad relativa de más del 10 %, especialmente más del 20 %, en comparación con el pico más intenso del diagrama, tiene que estar presente. Sin embargo, el experto en la materia de la difracción de rayos X en polvo reconocerá que las intensidades relativas en los diagramas de difracción de rayos X en polvo pueden estar sujetas a fuertes variaciones de intensidad debido a efectos de orientación preferidos.

A menos que se use con respecto a las temperaturas, el término "aproximadamente" colocado antes de un valor numérico "X" se refiere en la presente solicitud a un intervalo que se extiende desde X menos el 10 % de X hasta X más el 10 % de X, y preferentemente a un intervalo que se extiende desde X menos el 5 % de X a X más el 5 % de X. En el caso particular de las temperaturas, el término "aproximadamente" colocado antes de una temperatura "Y" se refiere en la presente solicitud a un intervalo que se extiende desde la temperatura Y menos 10 °C hasta Y más 10 °C, preferentemente a un intervalo que se extiende desde Y menos 5 °C hasta Y más 5 °C, en particular a un intervalo que se extiende desde Y menos 3 °C hasta Y más 3 °C. Temperatura ambiente significa una temperatura de aproximadamente 25 °C. Cuando en la presente solicitud se usa el término n equivalente o equivalentes en el que n es un número, se entiende y dentro del ámbito de la presente solicitud que n se refiere a aproximadamente el número n, preferentemente n se refiere al número exacto n.

Siempre que se use la palabra "entre" o "a" para describir un intervalo numérico, debe entenderse que los puntos extremos del intervalo indicado están incluidos explícitamente en el intervalo. Por ejemplo: si se describe que un intervalo de temperatura está entre 40 °C y 80 °C (o de 40 °C a 80 °C), esto significa que los puntos extremos 40 °C y 80 °C están incluidos en el intervalo; o si una variable se define como un número entero entre 1 y 4 (o de 1 a 4), esto significa que la variable es el número entero 1, 2, 3 o 4.

La expresión % p/p se refiere a un porcentaje en peso comparado con el peso total de la composición considerada. Análogamente, la expresión v/v se refiere a una relación en volumen de los dos componentes considerados. La expresión "vol" significa volúmenes (en l, por ejemplo de disolvente) por peso (en kg, por ejemplo de reactivo). Por ejemplo, 7 vol significa 7 litros (de disolvente) por kg (de reactivo).

Las formas cristalinas, especialmente las formas cristalinas esencialmente puras, de COMPUESTO de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) pueden usarse como medicamentos, por ejemplo, en forma de composiciones farmacéuticas para administración enteral o parenteral.

15) Otra realización se refiere por lo tanto a una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) para su uso como un medicamento.

El sólido cristalino, especialmente el sólido cristalino esencialmente puro, de COMPUESTO de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) puede usarse como componente individual o como mezclas con otras formas cristalinas o la forma amorfa de COMPUESTO.

La producción de las composiciones farmacéuticas puede realizarse de una manera que resultará familiar para cualquier experto en la materia (véase, por ejemplo, Remington,The Science and Practice of Pharmacy,21a Edición (2005), Parte 5, "Pharmaceutical Manufacturing" [publicado por Lippincott Williams & Wilkins]) al traer las formas cristalinas de la presente invención, opcionalmente en combinación con otras sustancias terapéuticamente valiosas, en una forma de administración galénica junto con materiales vehículo sólidos o líquidos adecuados, no tóxicos, inertes, farmacéuticamente aceptables y, si se desea, adyuvantes farmacéuticos habituales.

16) Una realización adicional de la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden como principio activo una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) y al menos un material vehículo farmacéuticamente aceptable.

Tales composiciones farmacéuticas de acuerdo con la realización 16) son especialmente útiles para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos.

17) Se desvela además una composición farmacéutica de acuerdo con la realización 14), en la que dicha composición farmacéutica está en forma de un comprimido.

18) Se desvela además una composición farmacéutica de acuerdo con la realización 14), en la que dicha composición farmacéutica está en forma de una cápsula.

19) Una realización adicional de la invención se refiere al uso de una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) [especialmente la forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 2) a 7)],

en la fabricación de una composición farmacéutica en la que dicha composición farmacéutica comprende como principio activo el COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico y al menos un material vehículo farmacéuticamente aceptable.

Para evitar cualquier duda, la realización 19) se refiere al uso de la forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) [especialmente la forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 2) a 7)] que es adecuada/que se usa como etapa de aislamiento final del COMPUESTO (por ejemplo, para cumplir con los requisitos de pureza de la producción farmacéutica), mientras que la composición farmacéutica final de acuerdo con la realización 17) puede contener o no dicha forma cristalina (por ejemplo, porque la forma originalmente cristalina del COMPUESTO se transforma adicionalmente durante el procedimiento de fabricación y/o se disuelve en el material o materiales vehículo farmacéuticamente aceptables); por lo tanto, en la composición farmacéutica final, COMPUESTO puede estar presente en forma no cristalina, en otra forma cristalina o en forma disuelta o similares).

20) Se desvela además, pero no de acuerdo con la invención, una composición farmacéutica que comprende como principio activo el COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico, en el que dicha composición farmacéutica se fabrica usando una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) [especialmente la forma cristalina de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 2) a 7)] y al menos un material vehículo farmacéuticamente aceptable.

21) Se desvela además una composición farmacéutica de acuerdo con la realización 20), en la que dicha composición farmacéutica está en forma de una cápsula.

22) Una realización adicional de la invención se refiere a una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-ilciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-([5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) para su uso en la prevención/la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos.

23) Una realización adicional de la invención se refiere a una forma cristalina del COMPUESTO (1-pirimidin-2-ilciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14), para su uso en la preparación de un medicamento para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos.

Las formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) son útiles para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos que son especialmente para trastornos relacionados con una disfunción del receptor CXCR7, o disfunción de los ligandos que señalan a través de CXCR7, o disfunción de los ligandos de CXCR7 (CXCL12 y CXCL11) que señalan a través de sus otros receptores (CXCR4 y CXCR3).

Tales enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos se seleccionan especialmente del grupo que consiste en

• cáncer (notablemente tumores cerebrales incluyendo gliomas malignos y glioblastoma multiforme); neuroblastoma; cáncer pancreático incluyendo adenocarcinoma pancreático/adenocarcinoma ductal pancreático; cánceres gastrointestinales incluyendo el carcinoma de colon, carcinoma hepatocelular y cáncer gástrico; sarcoma de Kaposi; leucemias incluyendo leucemia de linfocitos T del adulto; linfoma; cáncer de pulmón; cáncer de mama; rabdomiosarcoma; cáncer de próstata; cáncer escamoso esofágico; carcinoma epidermoide oral; cáncer endometrial; carcinoma de tiroides incluyendo carcinoma papilar de tiroides; cánceres metastásicos; metástasis pulmonar; cáncer de piel incluyendo melanoma y melanoma metastásico; cáncer de vejiga; mielomas múltiples; osteosarcoma; cáncer de cabeza y cuello; y carcinomas renales incluyendo carcinoma renal de células claras, carcinoma renal metastásico de células claras);

• enfermedades inflamatorias (notablemente rinosinusitis crónica, asma, trastorno pulmonar obstructivo crónico, aterosclerosis, miocarditis y sarcoidosis; especialmente rinosinusitis crónica, asma y aterosclerosis);

• trastornos autoinmunitarios (notablemente enfermedades desmielinizantes (inflamatorias); esclerosis múltiple (EM); síndrome de Guillain-Barré; artritis reumatoide (AR); enfermedades inflamatorias intestinales (EII, especialmente que comprenden enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); lupus eritematoso sistémico (LES); nefritis lúpica; cistitis intersticial; enfermedad celíaca; encefalomielitis autoinmunitaria; artrosis; y diabetes tipo I; especialmente trastornos autoinmunitarios que tienen un componente inflamatorio tales como enfermedades desmielinizantes (inflamatorias), esclerosis múltiple, síndrome de Guillain-Barré, artritis reumatoide, enfermedades inflamatorias intestinales, lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica y encefalomielitis autoinmunitaria);

• rechazo de trasplantes (notablemente rechazo de aloinjertos renales, rechazo de aloinjertos cardíacos y enfermedades de injerto contra hospedador provocadas por el trasplante de células madre hematopoyéticas); y

• fibrosis (notablemente fibrosis hepática, cirrosis hepática, fibrosis pulmonar, especialmente fibrosis pulmonar idiopática).

En particular, dichas enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos son cánceres, trastornos autoinmunitarios (especialmente trastornos autoinmunitarios que tienen un componente inflamatorio) y fibrosis.

Además, otras enfermedades o trastornos relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos son enfermedades que implican metástasis mediadas por CXCR7 y/o CXCL12 y/o CXCL11, quimiotaxis, adhesión celular, migración transendotelial, proliferación y/o supervivencia celular.

Además, enfermedades o trastornos particulares adicionales relacionados con el receptor CXCR7 o sus ligandos son retinopatía diabética proliferativa; encefalitis por el virus del Nilo Occidental; enfermedades vasculares pulmonares, insuficiencia renal aguda, isquemia incluyendo isquemia cerebral, síndrome coronario agudo, sistema nervioso central lesionado, hiperlipidemia, hipertensión, hipertensión pulmonar, Síndrome urémico hemolítico asociado a toxina Shiga, preeclampsia, lesión vascular, VIH/SIDA, angiogénesis y disfunciones cerebrales y neuronales (tales como los componentes inflamatorios de la enfermedad de Alzheimer), trastornos relacionados con el estrés (tales como ansiedad, depresión y trastorno de estrés postraumático) y enfermedades que implican receptores de opioides, endometriosis, tiroiditis autoinmunitaria, enfermedades asociadas a la neovascularización coroidea, anemia aplásica, enfermedad de Sjogren y vitíligo. En una subrealización, una enfermedad o trastorno particular adicional relacionado con el receptor CXCR7 o sus ligandos es la hipertensión pulmonar.

El término "cáncer" se refiere a todo tipo de cánceres tales como carcinomas; adenocarcinomas; leucemias; sarcomas; linfomas; mielomas; cánceres metastásicos; tumores cerebrales; neuroblastomas; cánceres pancreáticos; cánceres gastrointestinales; cánceres de pulmón; cánceres de mama; cánceres de próstata; cánceres endometriales; cánceres de piel; cánceres de vejiga; cánceres de cabeza y cuello; tumores neuroendocrinos; cánceres ováricos; cánceres de cuello uterino; tumores orales; tumores nasofaríngeos; cánceres torácicos; y tumores inducidos víricamente.

Notablemente el término se refiere a tumores cerebrales incluyendo metástasis cerebrales, gliomas malignos, glioblastoma multiforme, meduloblastoma, meningiomas; neuroblastoma; cáncer pancreático incluyendo adenocarcinoma pancreático/adenocarcinoma ductal pancreático; cánceres gastrointestinales incluyendo carcinoma de colon, adenoma colorrectal, adenocarcinoma colorrectal, cáncer colorrectal metastásico, poliposis adenomatosa familiar (PAF), cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, colangiocarcinoma, carcinoma hepatocelular; sarcoma de Kaposi; leucemias incluyendo leucemia mieloide aguda, leucemia de linfocitos T en adultos; linfomas incluyendo linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin, linfoma MALT y linfoma intraocular primario de linfocitos B; cáncer de pulmón incluyendo cáncer de pulmón no microcítico; cáncer de mama incluyendo carcinoma de mama triple negativo; rabdomiosarcoma; cáncer de próstata incluyendo cáncer de próstata resistente a la castración; cáncer escamoso esofágico; carcinoma epidermoide (oral); cáncer endometrial; carcinoma de tiroides incluyendo carcinoma papilar de tiroides; cánceres metastásicos; metástasis pulmonar; cáncer de piel incluyendo melanoma y melanoma metastásico; cáncer de vejiga incluyendo cáncer de vejiga urinaria, carcinoma de células uroteliales; mielomas múltiples; osteosarcoma; cáncer de cabeza y cuello; y carcinomas renales incluyendo carcinoma de células renales, carcinoma de células claras renales, carcinoma de células renales metastásico, carcinoma renal metastásico de células claras; así como tumores neuroendocrinos; cáncer ovárico; cáncer de cuello uterino; tumores orales; tumores nasofaríngeos; cáncer torácico; coriocarcinoma; sarcoma de Ewing; y tumores inducidos víricamente. Especialmente el término "cáncer" se refiere a glioma maligno, en particular, glioblastoma multiforme, neuroblastoma; cánceres pancreáticos, en particular, adenocarcinoma ductal de páncreas; sarcoma de Kaposi; leucemia de linfocitos T en adultos, linfoma; cáncer de pulmón; cáncer de mama; rabdomiosarcoma; cáncer de próstata; cáncer escamoso esofágico; carcinoma epidermoide (oral); cáncer endometrial; carcinoma papilar de tiroides; cáncer metastásico; metástasis pulmonar; melanoma; cáncer de vejiga; mielomas múltiples; osteosarcoma; cánceres gastrointestinales, en particular, carcinoma de colon, carcinoma hepatocelular y cáncer gástrico; cáncer de cabeza y cuello; y carcinoma renal de células claras. Preferentemente el término "cáncer" se refiere a glioma maligno, en particular, glioblastoma multiforme; cánceres pancreáticos, en particular, adenocarcinoma ductal pancreático; carcinoma papilar de tiroides; carcinoma hepatocelular; cáncer de pulmón; cáncer de mama; cánceres metastásicos; metástasis pulmonar; melanoma; carcinoma de colon; cáncer de cabeza y cuello; y carcinoma renal de células claras.

Las formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) pueden ser en particular útiles como agentes terapéuticos para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de un cáncer como se definió anteriormente, qué cáncer es un cáncer metastásico/un cáncer que forma metástasis.

Las formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) pueden ser en particular útiles como agentes terapéuticos para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de un cáncer. Pueden usarse como agentes terapéuticos únicos o en combinación con uno o más agentes de quimioterapia y/o radioterapia y/o terapia dirigida. En una subrealización, cuando un compuesto de fórmula (I) se usa para la prevención/la profilaxis o el tratamiento de un cáncer en combinación con uno o más agentes de quimioterapia y/o radioterapia y/o terapia dirigida, dicho cáncer es especialmente un glioma maligno, en particular, un glioblastoma multiforme; cáncer pancreático, especialmente adenocarcinoma ductal pancreático; carcinoma papilar de tiroides; metástasis pulmonar; melanoma;

cáncer de pulmón; cánceres metastásicos; carcinoma hepatocelular; cáncer de mama; cáncer colorrectal; o cáncer de cabeza y cuello. Dicho tratamiento combinado podrá efectuarse simultáneamente, por separado o durante un período de tiempo.

La invención, por lo tanto, también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un material vehículo farmacéuticamente aceptable y:

• una forma cristalina de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14);

• y uno o más agentes quimioterapéuticos citotóxicos.

Además se desvela un kit que comprende

• una composición farmacéutica, comprendiendo dicha composición un material vehículo farmacéuticamente aceptable y formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14);

• e instrucciones sobre cómo usar dicha composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de un cáncer (especialmente de un glioma maligno, en particular de un glioblastoma multiforme), en combinación con quimioterapia y/o radioterapia y/o terapia dirigida.

Los términos y expresiones "radioterapia" o "terapia de radiación" u "oncología radioterápica", se refieren al uso médico de radiaciones ionizantes en la prevención (terapia adyuvante) y/o el tratamiento del cáncer; incluyendo radioterapia externa e interna.

La expresión "terapia dirigida" se refiere a la prevención/la profilaxis (terapia adyuvante) y/o el tratamiento del cáncer con uno o más agentes antineoplásicos tales como moléculas pequeñas o anticuerpos que actúan sobre tipos específicos de células cancerosas o células estromales. Algunas terapias dirigidas bloquean la acción de determinadas enzimas, proteínas u otras moléculas implicadas en el crecimiento y la propagación de las células cancerosas. Otros tipos de terapias dirigidas ayudan al sistema inmunitario a destruir las células cancerosas (inmunoterapias); o a suministrar sustancias tóxicas directamente a las células cancerosas y destruirlas. Un ejemplo de una terapia dirigida que es en particular adecuada para combinarse con los compuestos de la presente invención es la inmunoterapia, especialmente la inmunoterapia dirigida al receptor 1 de muerte celular programada (receptor PD-1) o su ligando PD-L1 (Feig C y col., PNAS 2013).

Cuando se usa en combinación con los compuestos de fórmula (I), la expresión "terapia dirigida" se refiere especialmente a agentes tales como:

a) Inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) o anticuerpos bloqueantes (por ejemplo, Gefitinib, Erlotinib, Afatinib, Icotinib, Lapatinib, Panitumumab, Zalutumumab, Nimotuzumab, Matuzumab y Cetuximab);

b) inhibidores de B-RAF (por ejemplo Vemurafenib, Sorafenib, Dabrafenib,GDC-0879, PLX-4720, LGX818);

c) Inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, Exemestano, Letrozol, Anastrozol, Vorozol, Formestano, Fadrozol);

d) Inhibidores de puntos de control inmunitario (por ejemplo, anticuerpos anti-PD1 tales como Pembrolizumab (Lambrolizumab, MK-3475), Nivolumab, Pidilizumab, AMP-514/MED10680; agentes anti PD1 de molécula pequeña tales como, por ejemplo, compuestos desvelados en el documento WO2015/033299, el documento WO2015/044900 y el documento WO2015/034820; anticuerpos anti-PD1L, tales como BMS-936559, atezolizumab (MPDL3280A), MEDI4736, avelumab (MSB0010718C); anti-PDL2, tales como AMP224, anticuerpos anti-CTLA-4, tales como ipilimumab, tremilmumab);

e) Enfoques de vacunación (por ejemplo, vacunación con células dendríticas, vacunación con péptidos o proteínas (por ejemplo, con péptido gp100 o péptido MAGE-A3);

f) Reintroducción de células cancerosas derivadas del paciente o alogénicas (no propias) genéticamente modificadas para secretar factores inmunomoduladores tales como la vacuna de células tumorales transfectadas con el gen del factor estimulante de colonias de monocitos de granulocitos (GMCSF) (GVAX) o vacuna de células tumorales transfectadas con el gen ligando de tirosina quinasa 3 relacionada con Fms (Flt-3) (FVAX), o vacuna basada en tumores GM-CSF potenciada con receptor tipo Toll (TEGVAX);

g) inmunoterapias adoptivas basadas en linfocitos T, incluyendo linfocitos T modificados por ingeniería genética con receptor de antígeno quimérico (CAR) (por ejemplo, CTL019);

h) Terapia basada en citocinas o inmunocitocinas (por ejemplo, Interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interleucina 2, interleucina 15);

i) Agonistas del receptor tipo Toll (TLR) (por ejemplo, resiquimod, imiquimod, glucopiranosil lípido A, oligodesoxinucleótidos CpG);

j) Aanálogos de talidomida (por ejemplo, Lenalidomida, Pomalidomida);

k) Inhibidores de la lndolamina-2,3-dioxgenasa (IDO) y/o de la Triptófano-2,3-dioxigenasa (TDO) (por ejemplo, NLG919/lndoximod, 1MT (1-metiltriptófano), INCB024360);

l) Activadores de receptores coestimuladores de linfocitos T (por ejemplo, anticuerpos anti-gen de activación de linfocitos 3 (LAG-3) (tales como BMS-986016); anticuerpos anti-inmunoglobulina mucina-3 (TIM-3) de linfocitos T, anticuerpos anti-CD137/4-1BB (por ejemplo, BMS-663513/urelumab), receptores similares a inmunoglobulinas (KIR) anti-células asesinas, por ejemplo Lirilumab (IPH2102/BMS-986015); anti-OX40/CD134 (superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral, miembro 4), anti-ligando OX40/CD252; gen relacionado con la familia TNFR inducido por antiglucocorticoides (GITR) (tal como TRX518), anticuerpos anti-CD40 (miembro 5 de la superfamilia del receptor de TNF) (tales como CP-870.893); anticuerpos anti-ligando C<d>40 (tales como BG9588); anticuerpos anti-CD28);

m) Moléculas que se unen a un antígeno específico del tumor, así como a un marcador de superficie de linfocitos T tales como anticuerpos biespecíficos o fragmentos de anticuerpos, proteínas miméticas de anticuerpos tales como las proteínas de repetición de anquirina diseñadas (DARPINS), enganchador biespecífico de linfocitos T (BITE, por ejemplo, AMG103, AMG330);

n) Anticuerpos o inhibidores de peso molecular pequeño dirigidos al receptor del factor 1 estimulante de colonias (CSF-1R) (por ejemplo, RG7155 o PLX3397).

Cuando se usan en combinación con las formas cristalinas del COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14), se prefieren inhibidores de puntos de control inmunitario tales como aquellos enumerados en d), y especialmente aquellos dirigidos al receptor de muerte celular programada 1 (receptor PD-1) o su ligando PD-L1.

El término "quimioterapia" se refiere al tratamiento del cáncer con uno o más agentes antineoplásicos citotóxicos ("agentes de quimioterapia citotóxicos"). La quimioterapia se usa a menudo junto con otros tratamientos contra el cáncer, tales como radioterapia o cirugía. El término se refiere especialmente a agentes quimioterapéuticos convencionales que actúan destruyendo células que se dividen rápidamente, una de las principales propiedades de la mayoría de las células cancerosas. La quimioterapia puede usar un fármaco a la vez (quimioterapia de agente único) o varios fármacos a la vez (quimioterapia combinada o poliquimioterapia). La quimioterapia que usa medicamentos que se convierten en actividad citotóxica solo tras la exposición a la luz se llama fotoquimioterapia o terapia fotodinámica.

La expresión "agente de quimioterapia citotóxico" o "agente de quimioterapia" como se usa en el presente documento se refiere a un agente antineoplásico activo que induce apoptosis o muerte celular necrótica. Cuando se usa en combinación con los compuestos de fórmula (I), la expresión se refiere especialmente a agentes de quimioterapia citotóxicos convencionales tales como:

a) agentes alquilantes (por ejemplo, mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, estreptozocina, carmustina, lomustina, melfalán, busulfán, dacarbazina, temozolomida, tiotepa o altretamina; en particular temozolomida);

b) fármacos que contienen platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino u oxaliplatino);

c) fármacos antimetabolitos (por ejemplo, 5-fluorouracilo, capecitabina, 6-mercaptopurina, metotrexato, gemcitabina, citarabina, fludarabina o pemetrexed);

d) antibióticos antitumorales (por ejemplo, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, actinomicina-D, bleomicina, mitomicina-C o mitoxantrona);

e) inhibidores mitóticos (por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, ixabepilona, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vindesina o estramustina); o

f) inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, etopósido, tenipósido, topotecán, irinotecán, diflomotecán o elomotecán).

Cuando se usan en combinación con las formas cristalinas del COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14), los agentes de quimioterapia citotóxicos preferidos son los agentes alquilantes mencionados anteriormente (notablemente mecloretamina, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, estreptozocina, carmustina, lomustina, melfalán, busulfán, dacarbazina, 3-metil-(triazen-1-il)imidazol-4-carboxamida (MTIC) y profármacos de los mismos tales como, especialmente, temozolomida, tiotepa, altretamina; o sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos; en particular temozolomida); e inhibidores mitóticos (notablemente paclitaxel, docetaxel, ixabepilona, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vindesina, estramustina; o sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos; en particular, paclitaxel). Los agentes de quimioterapia citotóxicos más preferidos para su uso en combinación con los compuestos de fórmula (I) son los usados rutinariamente en el tratamiento del glioblastoma multiforme, en particular, temozolomida. Se prefiere igualmente la radioterapia.

La quimioterapia puede darse con un fin curativo o puede tener como objetivo prolongar la vida o paliar los síntomas.

a) La quimioterapia de modalidad combinada es el uso de fármacos con otros tratamientos contra el cáncer, tales como radioterapia o cirugía.

b) La quimioterapia de inducción es el tratamiento de primera línea del cáncer con un fármaco quimioterapéutico. Este tipo de quimioterapia se usa con fines curativos.

c) La quimioterapia de consolidación se administra después de la remisión para prolongar el tiempo libre de enfermedad y mejorar la supervivencia general. El fármaco que se administra es el mismo que el fármaco que logró la remisión.

d) La quimioterapia de intensificación es idéntica a la quimioterapia de consolidación, pero se usa un fármaco diferente al de la quimioterapia de inducción.

e) La quimioterapia combinada implica tratar a un paciente con varios fármacos diferentes simultáneamente. Los fármacos difieren en su mecanismo y efectos secundarios. La mayor ventaja es minimizar las posibilidades de que se desarrolle resistencia a cualquier agente. También, los medicamentos a menudo pueden usarse en dosis más bajas, reduciendo la toxicidad.

f) La quimioterapia neoadyuvante se da antes de un tratamiento local tal como cirugía y está diseñada para encoger el tamaño del tumor primario. También se da a cánceres con alto riesgo de enfermedad micrometastásica.

g) La quimioterapia adyuvante se administra después de un tratamiento local (radioterapia o cirugía). Puede usarse cuando hay poca evidencia de cáncer presente, pero existe riesgo de recurrencia. También es útil para destruir células cancerosas que se hayan diseminado a otras partes del cuerpo. Estas micrometástasis pueden tratarse con quimioterapia adyuvante y pueden reducir las tasas de recaída provocadas por estas células diseminadas.

h) La quimioterapia de mantenimiento es un tratamiento repetido de dosis bajas para prolongar la remisión.

i) La quimioterapia de rescate o la quimioterapia paliativa se dan sin intención curativa, sino simplemente para disminuir la carga tumoral y aumentar la esperanza de vida. Para estos regímenes, se espera generalmente un mejor perfil de toxicidad.

Cuando se combinan con las formas cristalinas del COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14), se prefieren formas preventivas o curativas de quimioterapia (o cambiando lo que haya que cambiar, radioterapia) tales como las enumeradas en a), b), c), d), e), y especialmente g) y/o h) anteriores.

"Simultáneamente", cuando se refiere a un tipo de administración, significa en la presente solicitud que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de dos o más principios activos y/o tratamientos aproximadamente al mismo tiempo; en el que se entiende que una administración simultánea conducirá a la exposición del sujeto a los dos o más principios activos y/o tratamientos al mismo tiempo. Cuando se administran simultáneamente, dichos dos o más principios activos pueden administrarse en una combinación de dosis fija, o en una combinación de dosis no fija equivalente (por ejemplo, usando dos o más composiciones farmacéuticas diferentes para administrarse por la misma vía de administración aproximadamente al mismo tiempo), o mediante una combinación de dosis no fija usando dos o más vías de administración diferentes; en el que dicha administración conduce a una exposición esencialmente simultánea del sujeto a los dos o más principios activos y/o tratamientos.

"Combinación de dosis fija", cuando se refiere a un tipo de administración, significa en la presente solicitud que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de una composición farmacéutica individual que comprende los dos o más principios activos.

"Por separado", cuando se refiere a un tipo de administración, significa en la presente solicitud que el tipo de administración en cuestión consiste en la administración de dos o más principios activos y/o tratamientos en diferentes momentos en el tiempo; en el que se entiende que una administración separada conducirá a una fase de tratamiento (por ejemplo, al menos 1 hora, en particular al menos 6 horas, especialmente al menos 12 horas) cuando el sujeto está expuesto a los dos o más principios activos y/o tratamientos al mismo tiempo; en donde dicha "administración separada" puede, bajo ciertas circunstancias, también abarcar una fase de tratamiento en la que durante un cierto período de tiempo (por ejemplo, al menos 12 horas, especialmente al menos un día) el sujeto está expuesto a sólo uno de los dos o más principios activos y/o tratamientos. Por tanto, la administración separada se refiere especialmente a situaciones en las que se administra un principio activo y/o tratamiento, por ejemplo, una vez al día, y se da otra, por ejemplo dos veces al día, tres veces al día, cada dos días, en la que, como consecuencia de dicho tipo de administración, el sujeto está expuesto a los dos o más principios activos y/o tratamientos al mismo tiempo durante esencialmente todo el período de tratamiento. La administración separada también se refiere a situaciones en las que al menos uno de los principios activos y/o tratamientos se da con una periodicidad sustancialmente más larga que la administración diaria (tal como una o dos veces al día) (por ejemplo, en las que un principio activo y/o tratamiento se administra, por ejemplo, una vez o dos veces al día, y otra se da una vez a la semana). Por ejemplo, cuando se usan en combinación con radioterapia (por ejemplo, semanal o quincenal), las presentes formas cristalinas del COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) posiblemente se usarían "por separado".

Por administración "durante un período de tiempo" se entiende en la presente solicitud la administración posterior de dos o más principios activos y/o tratamientos en momentos diferentes. El término en particular se refiere a un procedimiento de administración de acuerdo con el cual la administración completa de uno de los principios activos y/o tratamientos se completa antes de que comience la administración del otro/los demás. De esta manera es posible administrar uno de los principios activos y/o tratamientos durante varios meses antes de administrar el otro principio o principios activos y/o tratamiento o tratamientos.

La administración "durante un período de tiempo" también abarca situaciones en las que las formas cristalinas del COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) se usarían en un tratamiento que comienza después de la terminación de un tratamiento quimioterapéutico o radioterapéutico inicial o terapia dirigida (por ejemplo, una quimioterapia de inducción), en el que opcionalmente dicho tratamiento estaría en combinación con un tratamiento/adicional quimioterapéutico o radioterapéutico en curso o un tratamiento de terapia dirigida (por ejemplo, en combinación con una quimioterapia de consolidación, una quimioterapia de intensificación, una quimioterapia adyuvante o una quimioterapia de mantenimiento; o equivalentes radioterapéuticos de los mismos); en el que dicho tratamiento quimioterapéutico o radioterapéutico adicional/en curso o terapia dirigida sería simultáneo o separado con el tratamiento que usa las formas cristalinas del COMPUESTO como se define en cualquiera de las realizaciones 1) a 14).

Los trastornos autoinmunitarios pueden definirse comprendiendo enfermedades desmielinizantes (inflamatorias); esclerosis múltiple (EM); síndrome de Guillain-Barré; artritis reumatoide (AR); enfermedad inflamatoria intestinal (EII, especialmente que comprende enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); lupus eritematoso sistémico (LES); nefritis lúpica; cistitis intersticial; enfermedad celíaca; encefalomielitis autoinmunitaria; artrosis; y diabetes tipo I. Además, las enfermedades autoinmunitarias comprenden además trastornos tales como psoriasis; artritis psoriásica; síndrome antifosfolípido; tiroiditis tales como tiroiditis de Hashimoto; tiroiditis linfocítica; miastenia grave; uveítis; epiescleritis; escleritis; enfermedad de Kawasaki; uveoretinitis; uveítis posterior; uveítis asociada a enfermedad de Behcet; síndrome de uveomeningitis; encefalomielitis alérgica; enfermedades atópicas tales como rinitis, conjuntivitis, dermatitis; y enfermedades autoinmunitarias post-infecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis post infecciosa. En una subrealización, los trastornos autoinmunitarios se refieren especialmente a trastornos autoinmunitarios que tienen un componente inflamatorio en los que ejemplos particulares son enfermedades desmielinizantes (inflamatorias), esclerosis múltiple (EM), síndrome de Guillain-Barré, artritis reumatoide (AR), enfermedad inflamatoria intestinal (EII, especialmente que comprende enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), lupus eritematoso sistémico (LES), nefritis lúpica y encefalomielitis autoinmunitaria.

Las enfermedades inflamatorias pueden definirse comprendiendo especialmente rinusitis crónica, así como asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), aterosclerosis, miocarditis, enfermedad del ojo seco, sarcoidosis, miopatías inflamatorias y lesión pulmonar aguda.

El rechazo de trasplantes puede definirse comprendiendo rechazo de órganos trasplantados tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas, córnea y piel; enfermedades de injerto contra hospedador provocadas por el trasplante de células madre hematopoyéticas; rechazo crónico de aloinjerto y vasculopatía crónica de aloinjerto.

La fibrosis puede definirse comprendiendo especialmente fibrosis hepática, cirrosis hepática, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis renal, fibrosis endomiocárdica y artrofibrosis.

Las formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) también son útiles en un procedimiento de profilaxis o tratamiento de tumores que comprende administrar una cantidad eficaz de dicha forma cristalina en el que dicha cantidad eficaz conduce a un cambio de las propiedades del tumor, y en el que dicha modificación se logra modulando la ruta del receptor CXCL11/CXCL12; en el que dicha profilaxis o tratamiento puede realizarse opcionalmente en combinación con un tratamiento quimioterapéutico o radioterapéutico convencional (en cuyo caso el tumor es en particular un glioma maligno, en particular, un glioblastoma multiforme). Dicho tratamiento combinado podrá efectuarse simultáneamente, por separado y/o durante un período de tiempo.

Las formas cristalinas de COMPUESTO como se define en una cualquiera de las realizaciones 1) a 14) también son útiles en un procedimiento para modular una respuesta inmunitaria que comprende la administración de una cantidad eficaz de dicha forma cristalina en el que dicha cantidad eficaz modula una enfermedad inflamatoria y en el que dicha respuesta está mediado por la ruta del receptor CXCL11/CXCL12.

Se desvela además un procedimiento para la preparación de COMPUESTO en forma enantioméricamente enriquecida y procedimientos para la preparación y la caracterización de las formas cristalinas de COMPUESTO de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones 1) a 14). Dichos procedimientos se describen en los procedimientos de la parte experimental a continuación.

Procedimientos experimentales:

Todas las temperaturas se expresan en °C. Los materiales de partida disponibles en el mercado se usan según se recibieron sin purificación adicional. Salvo que se indique lo contrario, todas las reacciones se llevan a cabo en material de vidrio secado al horno en una atmósfera de nitrógeno o argón. Los compuestos se purifican mediante cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice o mediante HPLC preparativa. Los compuestos descritos en la invención se caracterizan por datos de CL-EM (tiempo de retención tR se da en min; el peso molecular obtenido del espectro de masas se da en g/mol) usando las condiciones que se enumeran a continuación. En los casos en los que los compuestos de la presente invención aparecen como una mezcla de isómeros conformacionales, particularmente visibles en sus espectros de CL-EM, se da el tiempo de retención del confórmero más abundante.

Espectroscopia de RMN

Espectrómetro Bruker Avarice II equipado con un Imán 400 MHz (1H) Ultrashield™ y un cabezal de sonda BBO de 5 mm o un cabezal de sonda PAXT<i>de 1 mm, o un imán Bruker Avance III HD Ascend de 500 MHz (1H), equipado con criosonda DCH. Los desplazamientos químicos (8) se informan en partes por millón (ppm) con respecto a las resonancias de protones resultantes de la deuteración incompleta del disolvente de RMn , por ejemplo, para dimetilsulfóxido 8(H) 2,49 ppm, para cloroformo 8(H) 7,24 ppm. Las abreviaturas s,d, t, cymse refieren a singlete, doblete, triplete, cuartete, multiplete yaa amplio, respectivamente. Las constantes de acoplamientoJse informan en Hz.

CL-EM analítica de control de calidad (CC):

Equipo y condiciones:

Bomba: Waters Acquity Binary, Solvent Manager, EM: Detector Waters SQ, DAD: Detector Acquity UPLC PDA, ELSD: Acquity UPLC ELSD. Columnas: Acquity UPLC CSH C18 1,7 pm 2,1x50 mm o Acquity UPLC HSS T3 C18 1,8 pm 2,1x50 mm de Waters, termostatizado en el Acquity UPLC Column Manager a 60 °C. Eluyentes: A1: H2O FA al 0,05 %; B1: AcCN FA al 0,045 %. Procedimiento: Gradiente: 2 % de B 98 % de B durante 2,0 min. Flujo: 1,0 ml/min. Detección: UV 214 nm y ELSD y EM, tR se da en min.

CL-EM analítica

Equipo:

Bomba de gradiente binario Agilent G4220A o equivalente con detección por espectrometría de masas (analizador de masas cuádruple individual, Thermo Finnigan MSQPIus o equivalente).

Condiciones:

Procedimiento A (condiciones ácidas):Columna: Zorbax SB-aq (3,5 pm, 4,6 x 50 mm); condiciones: MeCN [eluyente A]; agua TFA al 0,04 % [eluyente B]; gradiente: 95 % de B ^ 5 % de B durante 1,5 min (flujo: 4,5 ml/min). Detección: UV/Vis EM.

CL-EM preparativa

Equipo:

Bomba de gradiente binario Gilson 333/334 o equivalente con detección por espectrometría de masas (analizador de masas cuádruple individual, Thermo Finnigan MSQPIus o equivalente).

Condiciones:

Procedimiento B (condiciones básicas):Columna: Waters XBridge C18 (10 pm, 30 x 75 mm); condiciones: MeCN [eluyente A]; agua NH<4>OH al 0,5 % (25 % ac.) [eluyente B]; gradiente: 95 % de B ^ 5 % de B, durante 6,5 min (flujo: 75 ml/min). Detección: UV/Vis EM.

Cromatografía analítica quiral

Equipo:

HPLC:Bomba Dionex HPG-3200SD con detector UV Dionex DAD-3000.

SFC:suministro de CO<2>: Aurora Fusion A5 Evolution; bomba: Agilent G4302A; detector UV: Agilent G1315C.

Condiciones:

HPLC:Columnas: ChiralPak AY-H, 5 pm, 250x4,6 mm o Regis (R,R) Whelk-01 250x4,6 mm, 5 pm; eluyente: A: Hept, DEA al 0,05 %, B: Etanol, DEA al 0,05 %, flujo de 0,8 a 1,2 ml/min.

ColumnaSFC: Regis (R,R) Whelk-01, 4,6x250 mm, 5 pM; eluyente: A: CO<2>al 60 %, B: 40 % de DCM/EtOH/DEA 50:50:0.1

Cromatografía preparativa quiral

Equipo:

HPLC:2 bombas Varian SD1 con un detector UV Dionex DAD-3000.

SFC:suministro de CO<2>: Maximator DLE15-GG-C; bombas: 2 SSI HF CP 300; detector UV: Dionex DAD-3000. Condiciones:

HPLC:Columnas: ChiralPak IA, IB, IC, IE o IF, 5 pm, 20x250 mm o Regis (R,R) Whelk-01, 21,1x250 mm, 5 pm; eluyente: mezcla apropiada de A (0%al 90%de Hept) y B (10%al 100%de EtOH, DEA al 0,1 %), flujo: flujo apropiado de 16, 23 o 34 ml/min.

SFC:Columnas: Regis (R,R) Whelk-01, 30x250 mm, 5|jm o ChiralPak IC, 30x250 mm, 5|jm; eluyente: mezcla adecuada de A (60 % al 80 % de CO2) y B (30 % al 40 % de DCM/EtOH/DEA 50:50:0,1), flujo 160 ml/min.

Análisis de difracción de rayos X en polvo (XRPD)

Procedimiento 1 de XRPD:

Los patrones de difracción de rayos X en polvo se recogen en un difractómetro de rayos X Bruker D8 Advance equipado con un detector Lynxeye operado con radiación CuKoc en modo de reflexión (acoplado dos Theta/Theta). Normalmente, el tubo de rayos X funciona a 40 kV/40 mA. Se aplica un tamaño de etapa de 0,02° (20) y un tiempo de etapa de 76,8 segundos en un intervalo de barrido de 3 - 50° en 20. La rendija de divergencia se fija en 0,3. Los polvos se presionan ligeramente en un portamuestras de cristal individual de silicio con una profundidad de 0,5 mm y las muestras se hacen girar en su propio plano durante la medición. Los datos de difracción se informan usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2. La precisión de los valores de 20 como se proporcionan en el presente documento está en el intervalo de /- 0,1-0,2° como suele ser el caso de los patrones de difracción de rayos X en polvo registrados convencionalmente.

Procedimiento 2 de XRPD:

Los patrones de difracción de rayos X en polvo se recogen en un difractómetro Bruker D8 GADDS-HTS equipado con un vídeo microscopio láser de fase XYZ automatizado para posicionamiento automático de muestras y un detector Vantec-500 operado con radiación CuKa en modo reflexión. Normalmente, el tubo de rayos X funciona a 40 kV/40 mA. La óptica de rayos X consiste en un único espejo multicapa Gobel acoplado a un colimador estenopeico de 0,5 mm. Normalmente se registra un solo frame en 180 s con posiciones del goniómetro de theta1 a 4° y theta2 a 16° y una distancia del detector de 20 cm. El frame está integrado en el intervalo de 5-35° 20. Las muestras analizadas en condiciones ambientales se preparan como muestras de placa plana usando el polvo como se recibe sin triturar. Aproximadamente 5-10 mg de muestra se presionan ligeramente sobre un portaobjetos de vidrio para obtener una superficie plana. La muestra no se mueve durante el tiempo de medición. Los datos de difracción se informan usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2. La precisión de los valores de 20 como se proporcionan en el presente documento está en el intervalo de /- 0,1-0,2° como suele ser el caso de los patrones de difracción de rayos X en polvo registrados convencionalmente.

Análisis gravimétrico de sorción de vapor (GVS)

Las mediciones se realizan en un instrumento multimuestra SPS-100n (Projekt Messtechnik, Ulm, Alemania) operado en modo escalonado a 25 °C. Se permite que la muestra se equilibre al 40 % de HR antes de iniciar un programa de humedad predefinido (40-0-95-0-95-40 % de HR, se aplican etapas de 5 % ARH y con un tiempo máximo de equilibrio de 24 horas por etapa. Se de aproximadamente 20 a 30 mg de cada muestra. La clasificación higroscópica se realiza de acuerdo con la Guía Técnica de la Farmacopea Europea (1999, página 86), por ejemplo, ligeramente higroscópica: el aumento de masa es inferior al 2 % e igual a o superior al 0,2 % masa/masa; higroscópica: el aumento de masa es inferior al 15 % e igual a o superior al 2 % masa/masa. Se considera el cambio de masa entre el 40 % de humedad relativa y el 80 % de humedad relativa en el primer barrido de adsorción.

Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

Los datos de DSC se recopilan en un sistema STARe de Mettler Toledo (módulo DSC822e, celda de medición con sensor cerámico y software STAR versión 9.20) equipado con un muestreador automático de 34 posiciones. El instrumento está calibrado en energía y temperatura usando indio certificado. Normalmente 1-5 mg de cada muestra, en una cubeta de aluminio perforada automáticamente, se calienta a 10 °C min'1, salvo que se indique lo contrario, de -20 °C a 280 °C. Una purga de nitrógeno a 20 ml min’1 se mantiene sobre la muestra. Las temperaturas máximas se informan para los puntos de fusión.

Análisis termogravimétrico (TGA)

Los datos de TGA se recopilan en un sistema STARe de Mettler Toledo (módulo TGA851e y software STAR versión 9.20) equipado con un muestreador automático de 34 posiciones. Normalmente 5 mg aproximadamente de una muestra, en una cubeta de aluminio perforada automáticamente, se calienta a 10 °C min1, salvo que se indique lo contrario, de 30 °C a 250 °C. Una purga de nitrógeno a 10 ml min_1 se mantiene sobre la muestra.

Abreviaturas(como se usa aquí anteriormente en el presente documento o en lo sucesivo en el presente documento):

ac. acuoso

Boc butiloxicarbonilo

d días

DCM diclorometano

DEA dietilamina

DIPEA diisopropiletilamina. base de Hünig. etil-diisopropilamina

DMF dimetilformamida

DMSO dimetilsulfóxido

Et etilo

EtOAc acetato de etilo

EtOH etanol

FC cromatografía ultrarrápida

h hora u horas

HATU hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1.1.3.3-tetrametiluronio

Hept heptano

HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

HV condiciones de alto vacío

CL-EM cromatografía líquida - espectrometría de masas

Me metilo

MeCN acetonitrilo

MeOH metanol

ml mililitro

min minuto o minutos

N.° número

Ph fenilo

prep. Preparativa

rpm rondas por minuto

TA temperatura ambiente

s segundos o segundos

sat. Saturada

SFC cromatografía de fluidos supercríticos

tBu ferc-butilo = butilo terciario

TEA trietilamina

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

T3P Anhídrido propilfosfónico

tR tiempo de retención

Ejemplo de referencia 1: (1-Pirimidm-2-M-cidopropM)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropMmetN-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico

1-Terc-butil éster 3-etil éster del ácido 4-((S)-1-fenil-etilamino)-5.6-dihidro-2H-piridin-1.3-dicarboxílico

En un matraz seco equipado con una trampa Dean-Stark y un condensador de reflujo. 1 -t-butil éster 3-etil éster del ácido 4-oxopiperidin-1.3-dicarboxílico (10 g. 37 mmol) se disuelve en tolueno (150 ml). Se añaden (S)-(-)-ametilbencilamina (6.71 g. 55.4 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (0.36 g. 1.85 mmol) y la mezcla se calienta a reflujo durante 3 h. La mezcla se enfría después a TA. se lava tres veces con NaHCO<3>ac. sat. (3 X 100 ml) y se secó sobre MgSO<4>. se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto como un aceite amarillo espeso. Procedimiento CL-EM A: t<R>= 1.01 min; [M+H]<+>= 375.18. RMN<1>H (400 MHz. CDCI<3>) 8: 9.28 (d.J =7.4 Hz. 1 H). 7.25-7.38 (m. 5 H). 4.63 (m. 1 H). 4.19 (c.J = 7Hz. 2 H). 4.07 (s. 2 H) 3.46-3.38 (m. 1 H) 3.33-3.26 (m. 1 H). 2.43 35 (m. 1 H). 2.09-1.99 (m. 1 H). 1.50 (d. J = 7.4 Hz. 3 H). 1.43 (s. 9 H). 1.29 (t. J = 7.0 Hz. 3 H).

1-Terc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R.4S)-4-((S)-1-fen¡l-et¡lamino)-p¡per¡d¡n-1.3-d¡carboxíl¡co

Se disuelve borohidruro sódico (1.43 g. 37.85 mmol) en THF (100 ml) a -15 °C en N<2>. Se añade TFA (10.7 ml.

0.14 mmol) gota a gota durante 20 min. 1-Terc-butil éster 3-etil éster del ácido 4-((S)-1-fenil-etilamino)-5.6-dihidro-2H-piridin-1.3-dicarboxílico (10.5 g. 28 mmol) se añade durante 10 min a -14 a -18 °C. La mezcla resultante se agita durante 60 min a 0 °C. Se añade con cuidado agua helada (100 ml) y la mezcla de reacción se agita durante 10 min a TA. Una solución de NaOH 3 M ac. se añade para llevar la mezcla a pH 11. La mezcla de reacción se extrae con DCM (2 X 100 ml). las capas orgánicas combinadas se lavan con salmuera (2 X 100 ml). se secan sobre MgSO<4>y el disolvente se evapora a presión reducida. El aceite resultante se purifica por FC sobre 120 g de gel de sílice con un sistema heptano/EtOAc (1:0 a 4:1) como eluyente para dar el producto del título como un aceite amarillento (9.5 g). El compuesto del título está contaminado con ~10 % del isómero (3S.4R) correspondiente. Procedimiento CL-EM A: t<R>= 0.71 min; [M+H]<+>= 377.33. RMN<1>H (400 MHz. CDCI<3>) 8: 7.31-7.41 (m. 5 H). 4.14-4.27 (m. 3 H). 4.02 (c.J =6.6 Hz. 1 H). 3.74-3.85 (m. 3 H). 3.00-3.10 (m. 2 H). 2.89-2.94 (m. 2 H). 1.88 (m. 1 H). 1.60-1.65 (m. 1 H). 1.42-1.46 (m. 11 H).

1.28-1.38 (m. 3H).

1-Terc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R.4S)-4-amino-p¡per¡d¡n-1.3-d¡carboxíl¡co

Una solución de 1-ferc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R.4S)-4-((S)-1-fenil-etilamino)-piperidin-1.3-dicarboxílico (9.6 g. 25.5 mmol) en MeOH (250 ml) se añade a una suspensión de Pd(OH)<2>al 20 % sobre carbón activado (1 g) en H<2>. La mezcla se agita durante 18 h a TA. La suspensión se filtra a través de Celite y el filtrado se concentra al vacío para obtener el producto del título como un aceite ligeramente amarillo (5,65 g). El compuesto del título contiene ~10 % del isómero (3S,4R) correspondiente. Procedimiento CL-EM A: t<R>= 0,54 min; [M+H]<+>= 273,26. RMN<1>H (400 MHz, CDCI<3>) 8: 4,56-4,65 (m, 1 H), 4,40-4,65 (m, 2 H), 4,04-4,30 (m, 3 H), 3,59-3,72 (m, 1 H), 3,01-3,21 (m, 2 H), 2,51-2,68

(m, 2 H), 1,98-2,11 (m, 1 H), 1,73-1,77 (m, 1 H), 1,46 (m, 8 H), 1,26-1,39 (m, 3 H).

1-Terc-butil éster 3-ethyl éster del ácido (3R.4S)-4-([(5-(2.4-D¡fluoro-fen¡l)-¡soxazol-3-carbon¡l1-am¡no)-p¡per¡d¡n-1,3-dicarboxílico

A una solución de 1-ferc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R,4S)-4-amino-piperidin-1,3-dicarboxílico (12,15 g,

27,2 mmol) en DCM (200 ml) a TA se añade ácido 5-(2,4-difluorofenil)isoxazol-3-carboxílico (6,1 g, 26,3 mmol).

Después se añade TEA (15,2 ml, 109 mmol) seguido de T3P al 50 % en DCM (32,4 ml, 54,4 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 24 h a TA. La mezcla de reacción se lava dos veces con NaHCO<3>ac. sat. (2 X 100 ml). La capa orgánica se seca sobre MgSO<4>y se evapora. El residuo bruto se purifica por FC sobre 100 g de gel de sílice con un sistema heptano/EtOAc (1:0 a 85:15) como eluyente para producir el compuesto del título como un polvo blanco

(10,25 g); El compuesto del título contiene ~10 % del isómero (3S,4R) correspondiente; Procedimiento CL-EM A: t<R>=

1,15 min; [M+H]<+>= 480,1. RMN<1>H (400 MHz, CDCI<3>) 8: 7,96-8,00 (m, 1 H), 7,81-7,89 (m, 1 H), 6,98-7,13 (m, 2 H),

4,54-4,62 (m, 1 H), 4,42-4,52 (m, 1 H), 3,97-4,28 (m, 2 H), 3,14-3,21 (m, 1 H), 2,88-3,08 (m, 2 H), 2,03-2,18 (m, 1 H),

1,78-1,87 (m, 1 H), 1,58 (s, 2 H), 1,48-1,52 (m, 9 H), 1,28-1,37 (m, 3 H).

1-Terc-butil éster 3-ethyl éster del ácido (3S,4S)-4-{[(5-(2,4-Difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil1-amino)-piperidin-1,3-dicarboxílico

Se añade etóxido sódico (3,225 g, 45 mmol) a una solución de 1-ferc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-1,3-dicarboxílico (3,6 g, 7,5 mmol) en una mezcla de EtOH

(40 ml) y EtOAc (20 ml). La mezcla se agita a T<a>durante 1 día. La mezcla de reacción se trata con NH<4>CI ac. sat.

(25 ml). Se añade DCM (50 ml). La fase orgánica se separa y la capa ac. se extrae tres veces con DCM (3 X 50 ml).

Las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgSO<4>, se filtran y se concentran. El residuo bruto se purifica mediante CL-EM prep. con condiciones básicas (procedimiento B). El compuesto del título se obtiene como un polvo incoloro (1,91 g), que contiene ~10 % del isómero (3S,4R) correspondiente.

El compuesto del título enantioméricamente puro se obtiene mediante SFC preparativa quiral de la mezcla de 1-tercbutil éster 3-etil éster del ácido (3S,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino)-piperidin-1,3-dicarboxílico que contiene ~10% de 1-terc-butil éster 3-etil éster del ácido (3R,4R)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-1,3-dicarboxílico usando una columna ChiralPak IC, 5 pm, 30x250 mm; con una mezcla de A (CO<2>al

80 %) y B (DCM al 50 %, MeOH al 20 %, DEA al 0,1 %) como eluyente y un flujo de 160 ml/min. HPLC quiral: t<R>=

3,29 min. Procedimiento CL-EM A: t<R>= 1,06 min; [M+H]<+>= 480,08. RMN<1>H (400 MHz, CDCI<3>) 8: 8,90-8,94 (m, 1 H),

8,04-8,10 (m, 1 H), 7,57-7,62 (m, 1 H), 7,31-7,38 (m, 1 H), 7,11-7,16 (m, 1 H), 4,23-4,32 (m, 1 H), 4,05-4,13 (m, 1 H), 4,03 (c,J =7,1 Hz, 2 H), 3,92-3,97 (m, 1 H), 2,80-3,06 (m, 2 H), 2,61-2,69 (m, 1 H), 1,77-1,81 (m, 1 H), 1,48-1,58 (m, 1 H), 1,40-1,46 (m, 9 H), 1,08 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).

1-Terc-butil éster del ácido (3S.4S)-4-{[(5-(2.4-d¡fluoro-fen¡l)-¡soxazol-3-carbon¡l1-am¡no)-p¡per¡d¡n-1.3-d¡carboxíl¡co

1-Terc-butil éster 3-etil éster del ácido (3S,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-1,3-dicarboxílico (4,98 g, 10,7 mmol) se disuelve en THF (80 ml). Una solución de NaOH Ac. 1 M (20 ml, 20 mmol) se añade después y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se acidifica a alrededor de pH = 3 con solución de HCl ac. 2 M (10 ml) y se extrae tres veces con DCM (3 X 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secan sobre MgSO<4>, se filtran y se concentran. El compuesto del título se obtiene como un polvo blanco (4,56 g); Procedimiento CL-EM A t<R>= 0,99 min; [M+H]<+>= 452,33. RMN<1>H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 12,51 (s, 1

H), 8,90 (d,J =8,8 Hz, 1 H), 8,07 (td, J<1>= 8,6 Hz, J<2>= 6,4 Hz, 1 H), 7,60 (m, 1 H), 7,34 (td, J<1>= 8,5 Hz, J<2>= 2,2 Hz, H), 7,15 (d,J =2,9 Hz, 1 H), 4,26 (m, 1 H), 4,04-4,17 (m, 1 H), 3,92-3,95 (m, 1 H), 2,79-3,01 (m, 2 H), 2,60 (td, J<1>=

11,0 Hz, J<2>= 4,0 Hz, 1 H), 1,75-1,82 (m, 1 H), 1,36-1,54 (m, 10 H).

Terc-butil éster del ácido (3S,4S)-4-{[(5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil1-amino)-3-(1-pirimidin-2-ilc¡cloprop¡lcarbamoil)-p¡per¡d¡n-1-carboxíl¡co

A una solución de 1-ferc-butil éster del ácido (3S,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-1,3-dicarboxílico (400 mg, 0,88 mmol) en DMF (15 ml) se añade clorhidrato de 1-(pirimidin-2-il)ciclopropan-1-amina

(171 mg, 0,975 mmol), DIPEA (0,805 ml, 4,61 mmol) y HATU (404 mg, 1,06 mmol). La mezcla de reacción se agita a

TA durante 4 h. Los componentes volátiles se evaporan y la bruta cruda se purifica mediante CL-EM prep. con condiciones básicas (Procedimiento B) para dar el compuesto del título (419 mg); Procedimiento CL-EM A t<R>=

0,95 min; [M+H]<+>= 568,97. RMN<1>H (500 MHz, DMSO-d6) 8: 8,62 (d,J=8,6 Hz, 1 H), 8,53 (d,J=4,8 Hz, 3 H), 8,08 (d,

J=6,4 Hz, 1 H), 7,34 (d,J=2,4 Hz, 1 H), 7,19-7,21 (m, 1 H), 7,17 (d,J =3,0 Hz, 1 H), 3,92-4,1 (m, 2 H) 3,63 (m, 1 H),

3,35-3,45 (m, 1 H), 3,15-3,26 (m, 2 H), 2,75-2,92 (m, 1H), 1,42-154 (m, 4 H), 1,22-1,44 (m, 11 H).

Clorhidrato de (1-p¡rim¡d¡n-2-¡l-c¡cloprop¡l)-am¡da del ácido (3S,4S)-4-{[(5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil1-amino}-p¡per¡d¡n-3-carboxíl¡co

Terc-butil éster del ácido (3S,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil1-amino}-3-(1-pirimidin-2-ilciclopropilcarbamoil)-piperidin-1-carboxílico (419 mg, 0,74 mmol) se disuelve en dioxano (10 ml). Se añade HCl en dioxano 4 M (5 ml, 20 mmol) gota a gota. La mezcla se agita a TA durante 1 h. Los disolventes se evaporan y el residuo se seca a HV para proporcionar el compuesto bruto del título como un polvo blanco (365 mg). Procedimiento CL-EM A: tR = 0,64 min; [M+H]+ = 469,17. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 9,38-9,41 (m, 1 H), 9,27-9,29 (m, 1 H), 9,00 (d,J =8,5 Hz, 1 H), 8,93 (s, 1 H), 8,57 (d,J =4,8 Hz, 2 H), 8,06 (c,J =7,8 Hz, 1 H), 7,59 (t, J = 10,5 Hz, 1 H), 7,31-7,39 (m, 2 H), 7,25 (t,J =4,8 Hz, 1 H), 4,27 (d,J =9,8 Hz, 1 H), 3,34 (m, 2 H), 3,07-3,20 (m, 3 H), 2,03 (m, 1 H), 1,86-1,89 (m, 1 H), 1,51 (m, 1 H), 1,37-1,41 (m, 1 H), 1,03-1,11 (m, 2 H).

(1-P¡r¡m¡d¡n-2-¡l-c¡cloprop¡l)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[(5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil1-amino)-p¡per¡d¡n-3-carboxíl¡co

A una suspensión de clorhidrato de metil éster del ácido (3S,4S)-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico (200 mg, 0,396 mmol) en DCM (20 ml) a TA se añade ciclopropanocarboxaldehído (0,03 ml, 0,396 mmol) seguido de DIPEA (0,2 ml, 1,2 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (221 mg, 1 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 2 h a TA. La mezcla de reacción se trata con NaHCO3 ac. sat. dos veces (50 ml). La fase orgánica se seca sobre MgSO4y se evapora. El residuo bruto se purifica mediante CL-EM prep. en condiciones básicas (procedimiento B) para producir el compuesto del título como un sólido incoloro (148 mg); HPLC quiral: tR = 2,42 min; Procedimiento CL-EM A: tR = 0,69 min; [M+H]+ = 523,04. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 8: 8,57 (d,J =8,4 Hz, 1 H), 8,51 (d,J =4,7 Hz, 2 H), 8,47 (s, 1 H), 8,08 (dd, J1 = 8,2 Hz, J2 = 15,7 Hz, 1 H), 7,59 (t,J =9,8 Hz, 1 H), 7,34 (t,J =8.3 Hz, 1 H), 7,12-7,23 (m, 2 H), 3,95-4,06 (m, 1 H), 3,14 (d,J= 10,0 Hz, 1 H), 2,99 (d,J =10,3 Hz, 1 H), 2,72 (t,J= 9.3 Hz, 1 H), 2,18-2,27 (m, 2 H), 2,12 (t,J= 11,4 Hz, 1 H), 2,01 (t,J=11,5 Hz, 1 H), 1,85 (d,J =11,0 Hz. 1 H), 1,54 1,66 (m, 1 H), 1,45-1,51 (m, 1 H), 1,31-1,41 (m, 1 H), 1,04-1,16 (m, 2 H), 0,79-0,90 (m, 1 H), 0,49 (d,J =7,6 Hz, 2 H), 0,10 (d, J = 4,1 Hz, 2 H).

II. Ensayos biológicos

Ensayoin vitro

El efecto antagonista del COMPUESTO sobre el receptor CXCR7 se determina de acuerdo con el siguiente procedimiento experimental.

El ensayo usa la línea celular Tango CXCR7-bla U2OS de Invitrogen. Estas células contienen el receptor de quimiocina humano CXCR7 enlazado a un sitio de proteasa TEV y un factor de transcripción Gal4-VP16 integrado de forma estable en la línea celular progenitora Tango GPCR-bla U2OS. Esta línea celular progenitora expresa de manera estable una proteína de fusión de beta-arrestina/proteasa TEV y el gen indicador de beta-lactamasa bajo el control de un elemento de respuesta UAS.

Tras la unión del ligando y la activación del receptor, la molécula de beta-arrestina marcada con proteasa se recluta en CXCR7, que está enlazado en el extremo C terminal mediante un sitio de escisión de proteasa a un factor de transcripción. La proteasa escinde el factor de transcripción de CXCR7, que se transloca al núcleo y activa la expresión de beta-lactamasa. Un sustrato habilitado para FRET permite detectar la expresión de beta-lactamasas.

Las células Tango CXCR7-bla U2OS se separan de las placas de cultivo con tripsina-EDTA al 0,05 % y se recogen en medio de cultivo (McCoy's 5A al 90 % (v/v), FCS dializado al 10 % (v/v), NeAa 0,1 mM, HEPES 25 mm (pH 7,3), piruvato sódico 1 mM, P/S al 1 % (v/v) Higromicina 50 pg/ml, Geneticina 100 pg/ml, Zeocina 200 pg/ml), se centrifugan y se resuspenden en medio de ensayo (McCoy's 5A al 90 % (v/v), FCS dializado al 1 % (v/v), NEAA 0,1 mM, HEPES 25 mm (pH 7,3), P/S al 1 % (v/v)). Se siembran 10.000 células por pocillo (en 30 pl) en una placa de 384 pocillos (paredes negras, fondo transparente). La placa se incuba a 37 °C/CO2 al 5 % durante 24 horas. Los compuestos de prueba se disuelven a 10 mM en DMSO y se diluyen en serie en DMSO hasta 500X la concentración final para las curvas de respuesta a la dosis. Los compuestos se diluyen después 1:100 en medio de ensayo hasta 5X la concentración final. Se añaden 10 pl/pocillo de compuestos diluidos a la placa de ensayo y se incuban durante 15 minutos a 37 °C. En lo sucesivo se diluye CXCL12/SDF1-a en medio de ensayo hasta 5X la concentración final (su valor de EC80 para la activación del receptor) y se añaden 10 pl/pocillo a la placa de ensayo. El agonista conduce a la activación del receptor y, por lo tanto, al reclutamiento de b-arrestina. Los compuestos que actúan como antagonistas reducen esta activación. La placa se incuba durante 22 h a 37 °C. Se transfieren 10 pl/pocillo de reactivo de detección (sustrato LiveBLAzer™-FRET B/G (CCF4-AM)) a la placa de ensayo y la placa se incuba durante 2 horas a temperatura ambiente protegida de la luz. Se determinan los recuentos de fluorescencia (Barrido 1: Ex 409/20 nm, Em 460/30 nm, Barrido 2: Ex 409/20 nm, Em 530/30 nm). La relación de emisión calculada se usa para la determinación de CI50. Los valores de CI50 calculados pueden fluctuar dependiendo del rendimiento diario del ensayo celular. Este tipo de fluctuaciones son conocidas por los expertos en la materia. Los valores promedio de CI50 de varias mediciones se dan como valores medios geométricos. Se probó que el compuesto del Ejemplo de referencia 1 tenía una CI50 de 3 nM en este ensayo.

III. Ejemplos

Ejemplo 1: (1-Pirimidm-2-N-ciclopropM)-amida del ácido (3S,4S)-1-cidopropMmetN-4-{[5-(2,4-difluoro-feml)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico en forma cristalina 1

Se añade 1 ml de MeOH a 10 mg de COMPUESTO (por ejemplo, como se obtiene en el Ejemplo de referencia 1) en un vial de HPLC convencional, la suspensión se disuelve calentando a 65 °C con una rampa de 0,1 °C/min mientras se agita con una barra magnética a 500 rpm usando un dispositivo Crystal 16 (Crystallization Systems, NL). La solución se enfría después a 20 °C con una rampa de 0,1 °C/min. El sólido obtenido es el COMPUESTO en forma cristalina 1.

Como alternativa, se añade 1 ml de MeOH/MeCN 3/1 a 20 mg de COMPUESTO (por ejemplo, como se obtiene en el Ejemplo de referencia 1) en un vial de HPLC convencional, la suspensión se disuelve calentando a 65 °C con una rampa de 0,1 °C/min mientras se agita con una barra magnética a 500 rpm usando un dispositivo Crystal 16 (Crystallization Systems, NL). La solución se enfría después a 20 °C con una rampa de 0,1 °C/min. El sólido obtenido es el COMPUESTO en forma cristalina 1.

Ejemplo 2: (1-Pirimidm-2-il-ciclopropM)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropMmetN-4-{[5-(2,4-difluoro-feml)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico en forma cristalina 2

Se suspenden 100 mg de COMPUESTO en la Forma 1 en 1 ml de DCM y se agita suavemente a TA con una barra agitadora magnética colocada en un vial de vidrio de 4 ml. Después de 1 semana, el sólido se aísla y el sólido es COMPUESTO en forma cristalina 2.

Ejemplo 3: (1-Pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico en forma cristalina 3

Se suspenden 50 mg de COMPUESTO en la Forma 2 en 0,4 ml de agua en un vial de vidrio de 4 ml y se agitan suavemente a TA en un agitador orbital. Después de 1 día, el sólido obtenido, cuando se mide en estado húmedo, es COMPUESTO en forma cristalina 3_La forma cristalina 3 es un dihidrato.

| Procedimiento 2 de XRPD_____________________ | Forma 3, Figura 3______ |

Ejemplo 4: (1-Pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico en forma cristalina 4

Se disuelven 10 mg de COMPUESTO en 3 ml de THF en un vial de vidrio de 4 ml y se deja evaporar en condiciones ambientales. Después de la evaporación completa del sólido (después de 3 días), el sólido medido es el COMPUESTO en forma cristalina 4.

Como alternativa, se suspenden 10 mg de COMPUESTO en Forma 2 en 0,02 ml de THF/H<2>O 9/1 y el vial se deja reposar_cerrado a TA. Después de 6 días el sólido obtenido es COMPUESTO en forma cristalina 4.

Procedimiento 2 de XRPD______________________ | Forma 4, Figura 4

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una forma cristalina de (1-pirimidin-2-il-cidopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-([5-(2,4-difluorofenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico

a. en la que dicha forma cristalina es la forma cristalina 1 caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 8,2° y 18,3°; o b. en la que dicha forma cristalina es la forma cristalina 2 caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5° y 10,9°; o c. en la que dicha forma cristalina es la forma cristalina 3 caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 8,2° 17,9° y 21,0°; en la que dicho diagrama de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2; y la precisión de los valores de 20 está en el intervalo de 20 /- 0,2°.
2. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7° y 18,3°; en la que dicho diagrama de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2; y la precisión de los valores de 20 está en el intervalo de 20 /-0,2 °.
3. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 3,6°, 7,2°, 8,2°, 8,7°, 9,1°, 10,8°, 13,9°, 17,0°, 17,5° y 18,3°; en la que dicho diagrama de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2; y la precisión de los valores de 20 está en el intervalo de 20 /- 0,2°.
4. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 3, que tiene un evento endotérmico a 259 °C ± 10 °C como se determina por calorimetría diferencial de barrido.
5. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en la que dicha forma cristalina es un anhidrato.
6. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, obtenible: a) mezclando 10 mg de (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluorofenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico con 1 ml de metanol, o mezclando 20 mg de (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico con 1 ml de una mezcla 3 a 1 de metanol y acetonitrilo; b) disolviendo (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico calentando a 65 °C ± 10 °C con una rampa de 0,1 °C/min; c) enfriando la mezcla a 20 °C ± 10 °C usando una rampa de 0,1 °C/min; y d) filtrando y secando el producto.
7. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-cidopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-([5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por a. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2° y 14,5°; o b. la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9° y 21,0°; en la que dicho diagrama de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando radiación combinada de Cu Ka1 y Ka2, sin extracción de Ka2; y la precisión de los valores de 20 está en el intervalo de 20 /- 0,2°.
8. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,7°, 8,5°, 10,9°, 13,2° y 14,5°, en la que dicha forma cristalina es un anhidrato.
9. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada por la presencia de picos en el diagrama de difracción de rayos X en polvo en los siguientes ángulos de refracción 20: 6,8°, 8,2°, 14,1°, 17,9° y 21,0°, en la que dicha forma cristalina es un dihidrato.
10. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso como un medicamento.
11. Una composición farmacéutica que comprende como principio activo una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. Uso de una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la fabricación de una composición farmacéutica, en donde dicha composición farmacéutica comprende como principio activo el compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico y al menos un material vehículo farmacéuticamente aceptable.
13. Una forma cristalina del compuesto (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida del ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino}-piperidin-3-carboxílico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para su uso en la prevención o el tratamiento del cáncer, trastornos autoinmunitarios, enfermedades inflamatorias, rechazo de trasplante o fibrosis.
14. Uso de una forma cristalina del compuesto ácido (3S,4S)-1-ciclopropilmetil-4-{[5-(2,4-difluoro-fenil)-isoxazol-3-carbonil]-amino]-piperidin-3-carboxílico (1-pirimidin-2-il-ciclopropil)-amida de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento del cáncer, trastornos autoinmunitarios, enfermedades inflamatorias, rechazo de trasplante o fibrosis.