ES2987596T3

ES2987596T3 - Pieza de prueba inmunocromatográfica capaz de controlar el desarrollo de muestras y de extraer y medir antígenos de carbohidratos

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Publication number: ES2987596T3
Application number: ES18768581T
Authority: ES
Original assignee: Denka Co Ltd
Current assignee: Denka Co Ltd
Priority date: 2017-03-14
Filing date: 2018-03-14
Publication date: 2024-11-15
Anticipated expiration: 2038-03-14
Also published as: KR20190120334A; TW201837465A; US20200038854A1; KR102267571B1; EP3598132A1; CN110418964A; JP2018151331A; EP3598132A4; CN110418964B; JP6709745B2; MY193496A; TWI683105B; US11906513B2; WO2018168907A1; EP3598132B1

Abstract

La presente invención tiene por objeto proporcionar un método o una pieza de ensayo inmunocromatográfico, mediante el cual se controla la velocidad o dirección de desarrollo de una muestra sobre la pieza de ensayo inmunocromatográfico y se controla apropiadamente el tratamiento con un reactivo ácido, un nitrito y un reactivo neutralizante. Una pieza de ensayo inmunocromatográfico que incluye una almohadilla de muestra a la que se añade una muestra que tiene nitrito o una solución ácida mezclada en la misma, una región de marcaje que incluye un anticuerpo marcado que es un anticuerpo para antígenos de carbohidratos que ha sido marcado, y una región de detección que tiene el anticuerpo para antígenos de carbohidratos inmovilizado en la misma. La pieza de ensayo inmunocromatográfico forma un complejo anticuerpo-antígeno de carbohidratos-anticuerpo marcado en la región de detección y mide antígenos de carbohidratos. La pieza de ensayo inmunocromatográfico es para extraer y medir antígenos de carbohidratos en una muestra y tiene: una región que tiene el reactivo neutralizante impregnado en la misma, aguas arriba de la región de marcaje; una región que tiene un reactivo ácido sólido impregnado en la misma cuando se utiliza una muestra que tiene nitrito mezclado en la misma, más arriba de la región que tiene el reactivo neutralizante impregnado en la misma; y una región que tiene nitrito impregnado en la misma, cuando se utiliza una muestra que tiene una solución ácida mezclada en la misma. La pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una lámina de resina interpuesta entre la región que tiene el reactivo ácido sólido o nitrito impregnado en la misma y la región que tiene el reactivo neutralizante impregnado en la misma, estando interpuesta la misma de manera que suprime el movimiento del reactivo o el movimiento de la solución de muestra entre las dos regiones. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Pieza de prueba inmunocromatográfica capaz de controlar el desarrollo de muestras y de extraer y medir antígenos de carbohidratos

Campo técnico

La presente invención se refiere a una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de la cadena de azúcar en una muestra de acuerdo con el preámbulo de la reivindicación 1. La invención se refiere además a un método para medir un antígeno de la cadena de azúcar en una muestra.

Estado de la técnica

La mayoría de los ensayos de diagnóstico rápido que implican un método de inmunocromatografía como principio se han utilizado ampliamente como un medio para medir rápida y de forma simple la infección viral o bacteriana y determinar un plan de tratamiento para la misma.

En el caso de tales agentes de diagnóstico rápido que implican un método de inmunocromatografía común como principio, se suspende una muestra en una suspensión de muestra y luego la suspensión se suministra a una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que la medición se pueda llevar a cabo de forma rápida y simple.

Para detectar microorganismos que pertenecen al géneroStreptococcus,tales como estreptococos p-hemolíticos del grupo A y estreptococos intraorales, es necesario extraer un antígeno de la cadena de azúcar y medir el antígeno de la cadena de azúcar.

Por ejemplo, se ha reportado un método, en donde se añaden previamente nitrito de sodio y un reactivo neutralizante a una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se pueda llevar a cabo una extracción con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica sólo mediante la operación de suspender una muestra en una solución ácida tal como ácido acético y para suministrar la suspensión a la pieza de prueba inmunocromatográfica (véase el documento WO 2005/121794 A1, correspondiente al documento EP 1767941 A1).

Además, existe un método en donde se añaden previamente un reactivo ácido y un reactivo neutralizante a una pieza de prueba inmunocromatográfica, y se suspende una muestra en nitrito y se suministra a la pieza de prueba inmunocromatográfica.

Para un método de inmunocromatografía, se ha reportado que puede ser necesario controlar una velocidad de desarrollo cromatográfico en una pieza de prueba inmunocromatográfica, y un método de inmunocromatografía para controlar la velocidad de desarrollo en base a la forma del dispositivo, una posición de adherencia, un material a usar (un material tal como una tela no tejida), un reactivo o similar (véanse los documentos JP 2005-331471 A y JP 2005 331463 A). Además, se ha reportado un método de control para acelerar el caudal con una lámina de<p>E<t>para su uso en un laminado (véase el documento JP 2016-102790 A).

El documento de la técnica anterior WO 93/15217 A1 divulga un método mediante el cual se extraen antígenos polisacáridos característicos de los estreptococos del grupo A o B para su uso en ensayos de inmunodiagnóstico. El método implica el uso de dos reactivos secos, nitrito de sodio y base Tris, y un reactivo líquido, ácido acético.

Se conoce más de la técnica a partir de los documentos EP 3598 130 y EP 3598 131 A1 que comparten la prioridad con la presente invención.

Resumen de la invención

Problema técnico

Un método para detectar estreptococos p-hemolíticos del grupo A y similares usando una pieza de prueba inmunocromatográfica incluye: un método, en donde se añaden previamente nitrito y un reactivo neutralizante a una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que pueda realizarse un tratamiento de extracción con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica únicamente mediante la operación de suspender una muestra en una solución ácida tal como ácido acético y suministrar la suspensión a la pieza de prueba inmunocromatográfica; y un método, en donde se añaden previamente un reactivo ácido y un reactivo neutralizante a una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se pueda llevar a cabo un tratamiento de extracción con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica sólo mediante la operación de suspender una muestra en nitrito y suministrar la suspensión a la pieza de prueba inmunocromatográfica. Las piezas de prueba inmunocromatográficas utilizadas en estos métodos son problemáticas porque durante la conservación a largo plazo en el estado en donde una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito en estado seco y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante (un reactivo básico) están en contacto con y adheridos entre sí, ambos reactivos reaccionan entre sí poco a poco, y sus respectivas actividades se reducen.

En la detección del estreptococo p-hemolítico del grupo A, se extrae un antígeno del estreptococo p-hemolítico del grupo A con ácido nitroso generado mezclando una solución de nitrito con una solución ácida. En el caso de utilizar una almohadilla impregnada con un reactivo ácido en estado seco, una muestra pasa en un corto período de tiempo desde la almohadilla impregnada con el reactivo ácido a una almohadilla posterior impregnada con un reactivo neutralizante. Esto es problemático porque, debido al corto tiempo de mezcla entre el nitrito y el reactivo ácido, no se puede realizar una extracción suficiente y no se puede obtener el rendimiento de sensibilidad necesario.

En una pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una forma en donde una almohadilla impregnada con un reactivo ácido en estado seco y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante se adhieren entre sí, una porción de una muestra se mueve después de la adición de la muestra del espécimen desde la almohadilla impregnada con el reactivo ácido a la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante. Una vez que se humedecen tanto la almohadilla impregnada con el reactivo ácido como la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante, el reactivo neutralizante fluye hacia atrás en dirección hacia la almohadilla impregnada con el reactivo ácido. Esto es riesgoso porque debido a una actividad reducida del reactivo ácido, un antígeno no se extrae eficientemente con ácido nitroso, lo que lleva a una reducción de la sensibilidad.

Si la porción superpuesta entre la almohadilla impregnada con el reactivo ácido y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante es demasiado pequeña (1 mm o menos) para evitar estos problemas, la producción es difícil de controlar y la porción superpuesta podría ser removida debido a un pequeño desplazamiento cuando estas dos almohadillas se laminan entre sí. Esto es problemático porque una muestra ya no fluye o fluye muy lentamente.

Puede ser posible garantizar la estabilidad de la conservación a largo plazo utilizando una almohadilla larga impregnada con un reactivo ácido y una almohadilla larga impregnada con un reactivo neutralizante, aumentando así físicamente la distancia entre el reactivo ácido y el reactivo neutralizante. Sin embargo, la cantidad de muestra del espécimen necesaria para el desarrollo en una pieza de prueba inmunocromatográfica aumenta con el aumento de las longitudes. La mayor cantidad de muestra necesaria para una prueba requiere una mayor cantidad de solución de nitrito para mezclar con una muestra preparada en pequeñas porciones en tubos. En este caso, una muestra recogida en un hisopo para la recogida de muestras se diluye, lo que reduce en consecuencia el rendimiento (sensibilidad).

También puede ser posible aplicar un reactivo ácido y un reactivo neutralizante a una única almohadilla larga, que luego se seca para que no se extiendan ni se mezclen entre sí, y para evitar el contacto entre las respectivas porciones secas de la reactivos. Sin embargo, los reactivos secos se disuelven y esparcen debido a la humedad del aire durante la conservación a largo plazo, de modo que el reactivo ácido y el reactivo neutralizante entran en contacto entre sí para provocar una reacción de neutralización. Esto es problemático porque, en consecuencia, se perjudica la eficacia de un tratamiento con ácido nitroso.

Los problemas descritos anteriormente son problemas que pueden surgir cuando se impregna nitrito en lugar de un reactivo ácido en una pieza de prueba inmunocromatográfica.

Para resolver los diversos problemas descritos anteriormente, un objeto de la presente invención es proporcionar un método o una pieza de prueba inmunocromatográfica, que controla una velocidad o una dirección de desarrollo de una muestra en la pieza de prueba inmunocromatográfica, de manera que se controle adecuadamente un tratamiento con un reactivo ácido, nitrito y un reactivo neutralizante.

Solución al problema

Los presentes inventores han realizado estudios intensivos sobre un método para controlar el desarrollo de una muestra en una pieza de prueba inmunocromatográfica, de manera que se controle adecuadamente un tratamiento con un reactivo ácido, nitrito y un reactivo neutralizante.

Como resultado, los presentes inventores han descubierto que una lámina fabricada con resina tal como una lámina de PET (tereftalato de polietileno) se intercala entre una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante, y así, se minimiza el ancho con el que la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante entran en contacto entre sí (a 2 mm o menos), mejorando así la estabilidad de conservación a largo plazo de las almohadillas de ambos reactivos.

Los presentes inventores han descubierto además que una lámina de PET se establece de manera que la lámina de PET se intercala en una superposición entre una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante para minimizar el ancho de superficie de contacto entre estas almohadillas y, por lo tanto, la almohadilla impregnada con el nitrito y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante entran en contacto parcial entre sí, y por esta estructura donde una muestra no se mueve inmediatamente a la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante y, además, una muestra difícilmente fluye hacia atrás desde la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante a la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito, el tiempo de extracción del antígeno de la muestra se puede obtener suficientemente y, como resultado, se puede mejorar la sensibilidad de detección.

Sobre la base de estos hallazgos, los presentes inventores han producido una pieza de prueba inmunocromatográfica, en donde una lámina fabricada con resina se intercala entre una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante, sin o con un pequeño contacto entre estas almohadillas, completando así la presente invención.

Específicamente, la presente invención incluye los siguientes aspectos:

[1] Una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra, comprendiendo la pieza de prueba inmunocromatográfica: una almohadilla de muestra a la que se añade una muestra mezclada con nitrito o una solución ácida; una región de marcación que comprende un anticuerpo marcado obtenido marcando un anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar; y una región de detección en donde se inmoviliza el anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar, en donde se forma un complejo de anticuerpo marcado con antígeno de la cadena de azúcar del anticuerpo en la región de detección para medir el antígeno de la cadena de azúcar, y la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región impregnada con un reactivo neutralizante más adelante de la región de marcación, y que además tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido cuando se usa la muestra mezclada con el nitrito, o una región impregnada con nitrito cuando se usa la muestra mezclada con la solución ácida, más adelante de la región impregnada con el reactivo neutralizante, en donde

se intercala una lámina fabricada con resina entre la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región impregnada con el reactivo neutralizante para suprimir el movimiento de un reactivo o el movimiento de una solución de muestra entre las regiones, en donde

la lámina fabricada con resina se intercala de tal manera que la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región impregnada con el reactivo neutralizante entran en contacto parcial entre sí, o en donde la lámina fabricada con resina se intercala de manera que la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región impregnada con el reactivo neutralizante no entren en contacto entre sí y que la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito tenga una forma que sobresale de la lámina fabricada con resina de modo que un líquido dentro de la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito fluye sobre la lámina fabricada con resina hacia la región impregnada con el reactivo neutralizante.

[2] La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con el punto [1] anterior, en donde la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente en la almohadilla de muestra.

[3] La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con [1] o [2], en donde la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente en una almohadilla de muestra situada más adelante en la pieza de prueba inmunocromatográfica, las regiones excepto la almohadilla de muestra están recubiertas con una lámina fabricada con resina, y la almohadilla de muestra impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente encima de la lámina fabricada con resina ubicada sobre la región impregnada con el reactivo neutralizante.

[4] La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con cualquiera de los puntos [1] a [3] anteriores, en donde el reactivo ácido sólido se selecciona del grupo que consiste en ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.

[5] La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos [1] a [4] anteriores, en donde el reactivo neutralizante es tris(hidroximetil)aminometano o hidróxido de sodio.

[6] La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos [1] a [5] anteriores, en donde el antígeno de la cadena de azúcar es el antígeno de la cadena de azúcar de protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia o virus.

[7] Un método para medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra de acuerdo con un método de inmunocromatografía usando la pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos [1] a [6] anteriores,

el método que comprende

mezclar la muestra con una solución de ácido nitroso cuando la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido, o mezclar la muestra con una solución ácida cuando la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región impregnada con nitrito, y agregar la mezcla a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica, en donde en el método de inmunocromatografía, el antígeno de la cadena de azúcar se extrae de la muestra mediante la acción del ácido nitroso generado a través de una reacción del nitrito con el reactivo ácido sólido en la región impregnada con el reactivo ácido sólido o la región impregnada con el nitrito, la solución ácida que contiene el antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en una región impregnada con un reactivo neutralizante, y

se forma un complejo de anticuerpo marcado con antígeno de la cadena de azúcar del anticuerpo en una región de detección, y en donde

se controla la velocidad o una dirección de desarrollo de la muestra sobre la pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se controla un tratamiento con el reactivo ácido, el nitrito y el reactivo neutralizante.

La presente descripción incluye el contenido tal como se divulga en la solicitud de patente japonesa n.° 2017-049213, que es un documento prioritario de la presente solicitud.

Efectos ventajosos de la invención

Una lámina fabricada con resina se intercala entre una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante, con poco o ningún contacto entre estas almohadillas, de modo que la estabilidad de conservación se puede mejorar en un estado en donde se adhieren entre sí una almohadilla impregnada con un reactivo ácido o nitrito en estado seco y una almohadilla impregnada con un reactivo neutralizante. Además, se puede alargar el tiempo necesario para que una muestra se mueva desde la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito hasta la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante, o se puede evitar que una muestra fluya hacia atrás desde la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante a la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito. Como resultado, se extrae eficazmente un antígeno con ácido nitroso y, por lo tanto, se obtiene un efecto de mejora de la sensibilidad.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una vista que muestra esquemáticamente una estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica (pieza de prueba de dos almohadillas) que tiene una región del reactivo ácido sólido y una región de reactivo neutralizante.

La Figura 2 es una vista que muestra esquemáticamente una estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región del reactivo ácido sólido y una región reactiva ácida neutralizante, en la que se adhiere una lámina de PET entre la región de reactivo ácido sólido y la región reactiva ácida neutralizante.

La Figura 3 es una vista que muestra esquemáticamente una estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región del reactivo ácido sólido y una región reactiva ácida neutralizante, en la que se adhiere una lámina de PET entre la región de reactivo ácido sólido y la región de reactivo neutralizante, y es una vista que muestra las respectivas distancias entre las piezas.

Descripción de las realizaciones

A continuación, la presente invención se describirá en detalle.

La presente invención se refiere a una pieza de prueba inmunocromatográfica que simplifica un tratamiento de extracción de un antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso en una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que el antígeno de la cadena de azúcar usado como sustancia a detectar se pueda medir de manera rápida y precisa.

La pieza de prueba inmunocromatográfica comprende un soporte que tiene una región de detección, sobre la cual se inmoviliza un anticuerpo (Anticuerpo 1) que captura una sustancia a detectar (antígeno, etc.), una región de marcación que tiene un anticuerpo marcado móvil (Anticuerpo 2), una almohadilla de muestra a la que se añade una muestra, una banda de absorción que absorbe una solución de muestra desarrollada, una lámina de respaldo para adherir estos elementos entre sí, y similares.

La pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención se puede alojar en un recipiente de almacenamiento. Un recipiente de almacenamiento de este tipo puede evitar la degradación de la pieza de prueba, que es causada, por ejemplo, por los rayos ultravioleta o la humedad contenida en el aire. Además, en el caso de tratar un espécimen o una muestra que tiene contaminación o infectividad, dicho recipiente de almacenamiento puede evitar que un evaluador que realiza un ensayo se contamine o infecte con el espécimen o la muestra. Por ejemplo, se puede utilizar como recipiente de almacenamiento un estuche fabricado en resina que tenga un tamaño adecuado, y el dispositivo de la presente invención se puede acomodar en el estuche. De lo contrario, la superficie de una pieza de prueba, sobre la cual se ha inmovilizado un antígeno o un anticuerpo, puede recubrirse con una película hecha de resina o similar (lámina de PET). Hay un caso en donde un recipiente de almacenamiento y una pieza de prueba alojada en el recipiente de almacenamiento se denominan colectivamente dispositivo inmunocromatográfico.

Cabe señalar que el número de regiones de detección y el tipo de anticuerpo marcado contenido en la región de marcación no se limitan a uno, y que, usando anticuerpos correspondientes a una pluralidad de sustancias a detectar, se pueden medir dos o más antígenos en una sola pieza de prueba.

El soporte es un material que tiene la propiedad de inmovilizar un anticuerpo utilizado para capturar una sustancia a detectar (un antígeno) y, además, no impide el movimiento de un líquido en dirección horizontal. Preferiblemente, el soporte es una membrana delgada porosa (una membrana) que tiene acción capilar, y es un material capaz de transportar un líquido y componentes dispersos en el líquido de acuerdo con la absorción. El material usado para el soporte no está particularmente limitado, y ejemplos del material incluyen celulosa, nitrocelulosa, acetato de celulosa, difluoruro de polivinilideno (PVDF), fibra de vidrio, nailon y policetona. Entre estos materiales, es más preferible una membrana delgada o una membrana de nitrocelulosa. Una membrana sobre la cual se inmoviliza un anticuerpo se denomina "membrana con anticuerpo inmovilizado".

La región de marcación consiste en un sustrato poroso que comprende un anticuerpo marcado, y una fibra de vidrio comúnmente utilizada, una tela no tejida y similares se pueden usarse en el presente documento como material para el sustrato. El sustrato es preferiblemente una almohadilla que tiene un espesor de aproximadamente 0.3 mm a 0.6 mm, para que el sustrato quede impregnado con una gran cantidad de anticuerpo marcado. Un sustrato poroso que se impregna con un anticuerpo marcado y luego se seca también se denomina almohadilla seca.

Para el marcaje de un anticuerpo marcado, se utilizan en muchos casos enzimas tales como fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano picante, coloides metálicos tales como coloides de oro, partículas de sílice, partículas de celulosa, partículas de poliestireno coloreadas, partículas de látex coloreadas, etc. Cuando se utilizan partículas coloidales metálicas o partículas coloreadas tales como partículas de poliestireno coloreadas o partículas de látex coloreadas, el color se desarrolla mediante la aglomeración de estos reactivos de marcación. Entonces, se mide el color así desarrollado. Las partículas sobre las que están inmovilizados los anticuerpos se denominan partículas con anticuerpo inmovilizado.

La región de detección indica una región del soporte en donde se inmoviliza un anticuerpo utilizado para capturar una sustancia a detectar (un antígeno). En la región de detección está establecida al menos una región en la que está inmovilizado un anticuerpo utilizado para capturar un antígeno. La región de detección puede estar comprendida en el soporte y un anticuerpo puede estar inmovilizado en el soporte.

La almohadilla de muestra es un sitio al que se añade un espécimen y es un material poroso. La almohadilla de muestra es un sitio ubicado más arriba de la pieza de prueba inmunocromatográfica. Como material para la almohadilla de muestra, se puede utilizar un filtro de uso común, fibra de vidrio, tela no tejida, etc. Para utilizar una gran cantidad de muestra en un inmunoensayo, la almohadilla de muestra es preferiblemente una almohadilla que tiene un espesor de aproximadamente 0.3 mm a 1 mm. La muestra también incluye una muestra preparada usando el espécimen, tal como una muestra obtenida suspendiendo la muestra en otra solución.

La banda de absorción es un elemento para absorber componentes que se suministran al soporte y no están asociados con la reacción en la zona de detección. Como material para la banda de absorción, se puede utilizar un filtro, una esponja o similar con alta capacidad de retención de agua, que consiste en un compuesto natural común de alto peso molecular, un compuesto sintético de alto peso molecular, etc. Para favorecer el desarrollo de la muestra se utiliza preferentemente como banda absorbente un material altamente absorbible en agua.

La lámina de respaldo es un elemento usado para la adhesión y/o inmovilización de todos los materiales mencionados anteriormente, concretamente, el soporte, la almohadilla de muestra, la región de marcación, la banda de absorción y similares, en la que estos materiales se superponen parcialmente uno con el otro. La lámina de soporte no es necesariamente necesaria si estos materiales se disponen e inmovilizan a intervalos óptimos. Sin embargo, en general, la lámina de respaldo se usa preferiblemente por conveniencia o facilidad de producción o uso.

En la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, puede estar presente además una región de visualización de control (un elemento). La región de visualización de control es un sitio que muestra que una prueba se lleva a cabo con precisión. Por ejemplo, la región de visualización de control está situada detrás de la región de detección y emite señales tales como coloración, cuando una muestra de espécimen pasa a través de la región de detección y llega a la región de visualización de control. En la región de visualización de control, una sustancia que se une a un anticuerpo marcado unido a un portador puede estar en fase sólida, o un reactivo tal como un indicador de pH, cuyo color cambia cuando una muestra llega, también puede estar en fase sólida. Cuando dicho anticuerpo marcado unido a un portador es un anticuerpo monoclonal de ratón, se puede utilizar un anticuerpo anti-IgG de ratón.

El tamaño de una pieza de prueba inmunocromatográfica no está limitado. Por ejemplo, su altura es de varios cm a más de diez y menos de 20 cm, y su anchura es de aproximadamente de varios mm a varios cm.

En la pieza de prueba que tiene la forma descrita anteriormente, la muestra se pasa a través de un canal de flujo poroso formado conectando una serie de elementos, tales como la almohadilla de muestra, la región de marcación, el soporte, la región de detección, la banda de absorción y similares, entre sí. Por consiguiente, en la presente realización, todos estos componentes constituyen una región en movimiento de la muestra. También puede haber una realización en donde la muestra no penetre en diversos materiales constitutivos, sino que atraviese la interfaz, dependiendo de los materiales o formas de los materiales constitutivos. Sin embargo, dado que la región de movimiento de la muestra definida en la presente descripción es irrelevante respecto de si la muestra pasa al material o pasa a través de la interfaz, la pieza de prueba que tiene la realización antes mencionada también está incluida en el alcance de la presente descripción.

En el caso de medir un antígeno de la cadena de azúcar en una muestra usando la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, es necesario extraer primero el antígeno de la cadena de azúcar en la muestra. La extracción del antígeno de la cadena de azúcar se realiza tratando la muestra que contiene el antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso. El ácido nitroso se puede generar mezclando nitrito tal como nitrito de sodio con un ácido, y la muestra que contiene el antígeno de la cadena de azúcar se puede tratar con el ácido nitroso así generado. El antígeno extraído se une mediante una reacción antígeno-anticuerpo al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica. En este sentido, el sistema de reacción se vuelve fuertemente ácido si permanece ácido nitroso en el sistema de reacción, de modo que se inhibe la reacción antígeno-anticuerpo. Por lo tanto, es necesario neutralizar el ácido nitroso en el sistema de reacción.

En el método de medir un antígeno de la cadena de azúcar mezclando nitrito con un ácido para generar ácido nitroso, extrayendo el antígeno de la cadena de azúcar de una muestra con el ácido nitroso, neutralizando el ácido nitroso y luego permitiendo que el antígeno de la cadena de azúcar se una al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica, de acuerdo con la presente invención, los ejemplos del método de extracción y medición del antígeno de la cadena de azúcar incluyen los siguientes métodos. En cualquiera de los métodos, la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso y la neutralización se realizan sobre la pieza de prueba inmunocromatográfica. Para realizar la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso en la pieza de prueba inmunocromatográfica, se puede impregnar la pieza de prueba inmunocromatográfica con un reactivo ácido o nitrito. Para realizar la neutralización en la pieza de prueba inmunocromatográfica, la pieza de prueba inmunocromatográfica se puede impregnar con un reactivo neutralizante.

(A) Se mezcla previamente una muestra con una solución ácida y la mezcla se agrega a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrito y un reactivo neutralizante. Cuando la solución mixta llega a la región impregnada con el nitrito, el nitrito reacciona con el ácido para generar ácido nitroso, de modo que se extrae un antígeno de la cadena de azúcar en la muestra. El extracto del antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en la región impregnada con el reactivo neutralizante en la pieza de prueba inmunocromatográfica, y el antígeno de la cadena de azúcar se une al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica y así puede detectarse. En este método, los ejemplos de la solución ácida utilizada incluyen ácido acético, ácido clorhídrico, ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.

(B) Se mezcla previamente una muestra con una solución de nitrito y la mezcla se agrega a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con un reactivo ácido y un reactivo neutralizante. Cuando la solución mixta llega a la región impregnada con el reactivo ácido, el nitrito reacciona con el ácido para generar ácido nitroso, de modo que se extrae un antígeno de la cadena de azúcar en la muestra. El extracto del antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en la región impregnada con el reactivo neutralizante en la pieza de prueba inmunocromatográfica neutralizante, y el antígeno de la cadena de azúcar se une al anticuerpo inmovilizado en la pieza de prueba inmunocromatográfica y así puede detectarse.

En la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención para realizar el método (A) o (B) descrito anteriormente, el reactivo ácido sólido o el nitrito se impregna más adelante de la región de marcación (en el lado más adelante a lo largo del flujo de la muestra, donde está presente la almohadilla de muestra), es decir, dentro de la almohadilla de muestra. De lo contrario, la pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que el nitrito está impregnado dentro de la almohadilla de muestra, se puede utilizar en el método (A) descrito anteriormente. Además, la pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que el reactivo ácido está impregnado dentro de la almohadilla de muestra, se puede utilizar en el método (B) descrito anteriormente. Cabe señalar que como reactivo ácido se utiliza un reactivo ácido sólido. De acuerdo con estos métodos, una sustancia que se va a detectar en una muestra de prueba se puede medir de manera precisa y específica, independientemente de la cantidad de muestra de prueba sometida a prueba.

El reactivo ácido sólido o el nitrito se pueden impregnar en la almohadilla de muestra, o se pueden impregnar en una almohadilla hecha de un material poroso que sea diferente de la almohadilla de muestra, tal como una tela no tejida, y el material poroso impregnado con el reactivo ácido sólido obtenido o material el poroso impregnado con nitrito entre la almohadilla de muestra y la región de marcación, es decir, en el lado más adelante de la región de marcación. En este caso, la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito puede ponerse en contacto o no con la almohadilla de muestra o la región de marcación.

En la presente invención, la región impregnada con un reactivo también se denomina almohadilla impregnada con un reactivo.

El reactivo neutralizante se dispone detrás de la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito. El reactivo neutralizante se puede impregnar en el soporte, o se puede impregnar en una almohadilla hecha de un material poroso que es diferente del soporte, tal como una tela no tejida, y el material poroso impregnado con el reactivo neutralizante obtenido se puede disponer entre la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región de marcación. Es decir, la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región impregnada con un reactivo neutralizante más adelante de la región de marcación, y además tiene una región impregnada con un reactivo ácido sólido o nitrito más adelante de la región impregnada con el reactivo neutralizante.

En este caso, la región impregnada con el reactivo neutralizante puede ponerse en contacto o no con la región impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito o la región de marcación.

Los ejemplos del material poroso que se utilizará en la región impregnada con el reactivo neutralizante incluyen un material poroso que es una tela tejida que tiene un peso base de 10 a 400 g/m2 y un espesor de 0.1 a 2.0 mm, absorbe agua en una cantidad de 10 a l00 pL/cm2 por cm/m2, tiene una velocidad de absorción de agua de 1.0 a 5.0 pL/s, retiene agua en una cantidad de 10 a 100 pL/cm2 después de que se permite que un fragmento de 1 cm/m2 entre en contacto en estado húmedo con una membrana y se deja reposar durante 5 minutos, y preferiblemente tiene un área de dispersión líquida de 20 mm2 o menor después de que se deja que un fragmento de 1 cm/m2 entre en contacto en estado húmedo con una membrana y se deja reposar durante 5 minutos, concretamente tiene tres propiedades: ser altamente absorbible en agua y ser altamente retenible en agua (retenible en líquido) y ser de baja liberación de líquido o de liberación continua de líquido. Ejemplos específicos del mismo incluyen un filtro hecho de fibra de algodón de celulosa y un filtro de vidrio hecho de fibra de vidrio. Ejemplos de dicho filtro incluyen el n.° 26-3 de Toyo Roshi Kaisha, Ltd. Además, el filtro a usar tiene una gran capacidad y puede retener suficientemente una solución ácida que llega al filtro más tarde que una muestra de la porción más adelante. Al utilizar dicho material poroso, el reactivo neutralizante se puede impregnar en el mismo en una cantidad que pueda neutralizar suficientemente una muestra de la que se ha extraído un antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso generado mediante una reacción de nitrito con el reactivo ácido. Además, la almohadilla puede absorber y retener una gran cantidad de líquido y mantiene la propiedad liberable. Por lo tanto, si se revela un líquido que contiene ácido nitroso que permanece más adelante de la pieza de prueba inmunocromatográfica en el momento de la evaluación o después, la almohadilla puede tener una capacidad neutralizante suficiente y puede evitar que la solución ácida llegue a la región de detección en donde se encuentra el anticuerpo inmovilizado. Como resultado, se suprime una reacción no específica y se puede detectar el antígeno de la cadena de azúcar sin provocar la reacción no específica. Por otro lado, ejemplos específicos de filtro de vidrio altamente absorbible, altamente retenible en agua y de baja liberación incluyen GS-25 de Toyo Roshi Kaisha, Ltd., que puede impregnarse con una mayor cantidad de reactivo neutralizante debido a la propiedad de ser muy absorbible en agua, y evita que la solución ácida llegue a la región de detección inmovilizada debido a la propiedad de alta retención de agua y la propiedad de baja liberación de agua. Como resultado, se puede suprimir una reacción no específica en un caso negativo, y se puede evitar el desarrollo de color de una línea en o después del juzgamiento en caso positivo.

El "peso base" del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante es de 10 a 400 g/m2. En el presente documento, el "peso base" indica un peso por unidad de área (1 m2) de un tejido o similar. El peso base se puede cambiar apropiadamente ajustando la cantidad o composición del reactivo neutralizante impregnado en la almohadilla. Si el peso base es 30 g/m2 o menos, el material poroso tiene una alta porosidad y se rompe fácilmente cuando se impregna con el reactivo neutralizante y, por lo tanto, es difícil de manipular durante la producción inmunocromatográfica. Por lo tanto, el peso base es preferiblemente de 50 g/m2 o más. Si el peso base es de 300 g/m2 o más, el material poroso tiene una porosidad baja y no permite una penetración suave de una muestra en el material, aunque dependiendo de la composición del reactivo neutralizante, de modo que la muestra no puede mezclarse con el reactivo neutralizante. Por lo tanto, el peso base es preferiblemente de 300 g/m2 o menos. El peso base es lo más preferiblemente de 250 a 270 g/m2.

El "espesor" del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante es preferiblemente de 0.1 a 2.0 mm. El espesor se puede cambiar apropiadamente ajustando la cantidad o composición del reactivo neutralizante impregnado en la almohadilla. Si el espesor es de 0.4 mm o menos, el material poroso se rompe fácilmente cuando se impregna con el reactivo neutralizante y, por lo tanto, es difícil de manipular durante la producción inmunocromatográfica. Por lo tanto, el espesor es preferiblemente de 0.4 a 0.8 mm y más preferiblemente es de aproximadamente 0.6 mm teniendo en cuenta la facilidad con la que se ajusta la cantidad del reactivo neutralizante impregnado y la facilidad de manipulación durante la producción inmunocromatográfica.

La propiedad "absorbible en agua" es preferentemente de 10 a 100 pL/cm2 en términos de una cantidad de agua absorbida por cm/m2, y de 1.0 a 5.0 pL/s en términos de velocidad de absorción de agua. La cantidad de agua absorbida y la velocidad de absorción de agua se determinan preparando 200 pL de una solución coloreada (1% Tween 20 Red n.° 102) en una celda de una placa EIA de 96 pocillos, colocando en ella una pieza de prueba, en donde un material que tiene un tamaño de 5 * 60 mm se adhiere a una lámina de respaldo, midiendo el tiempo que tarda la solución en llegar al extremo superior de la pieza de prueba (un extremo de la pieza de prueba sumergido en la solución se define como un extremo inferior), sacando además la pieza de prueba de la solución inmediatamente después de que la solución alcance el extremo superior y midiendo la cantidad de líquido que queda en la celda. La cantidad de agua absorbida es la cantidad de líquido calculada restando la cantidad de líquido que queda en la celda de 200 pL y dividiendo el valor obtenido por 1 cm2 del área del material. La velocidad de absorción de agua se determina de acuerdo con la cantidad de agua absorbida/el tiempo necesario para alcanzar el extremo superior. El material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante es preferiblemente un material que tiene una mayor cantidad de agua absorbida y una velocidad de absorción de agua más lenta. Si la cantidad de agua absorbida es de 30 pL/cm2 o menos, aunque dependiendo de la concentración y del contenido de agua del reactivo ácido sólido, se considera que la cantidad de reactivo neutralizante impregnado puede no alcanzar una cantidad necesaria para la pieza de prueba inmunocromatográfica. Específicamente, la cantidad de agua absorbida es preferiblemente 30 pL/cm2 o más. La velocidad de absorción de agua del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante influye en el tiempo necesario para extraer un antígeno de cadena de azúcar de una muestra y en el tiempo necesario para neutralizar una solución de prueba después de la extracción. El tiempo necesario para extraer un antígeno de cadena de azúcar se puede ajustar hasta cierto punto, pero no completamente, ajustando el material o la composición del reactivo ácido sólido. Por lo tanto, la velocidad de absorción de agua del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante es un factor importante para una extracción suficiente del antígeno de la cadena de azúcar y la neutralización. Específicamente, la velocidad de absorción de agua es preferiblemente de 1.0 a 5.0 pL/s. La velocidad de absorción de agua es más preferiblemente de 2.0 pL/s o menos.

La propiedad de "retención de agua" se determina colocando, sobre una membrana, un fragmento de 1 cm/m2 obtenido del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante, añadiendo al mismo 70 pL de una solución (1% Tween 20 Red n.° 102), y midiendo el peso de la membrana antes y después de dejar reposar la membrana durante 5 minutos. La cantidad de líquido con la propiedad de retener agua varía de acuerdo con la composición (un tensioactivo o una proteína) de la solución que se va a agregar. En el caso de una prueba que utiliza una solución de 1 % de Tween 20, la cantidad de agua retenida es preferiblemente de 10 a 100 pL/cm2. La cantidad de agua retenida es más preferentemente de 15 pL/cm2 o más.

La propiedad "liberable" se mide colocando, sobre una membrana, un fragmento de 1 cm/m2 obtenido del material poroso a utilizar en la región impregnada con el reactivo neutralizante, añadiendo al mismo 70 pL de un solución (1% Tween 20 Red n.° 102), y determinar el área de un líquido esparcido sobre la membrana después de que la membrana se deja reposar durante 5 minutos. El área varía de acuerdo con la composición (un tensioactivo o una proteína) de la solución que se va a añadir. En el caso de una prueba que utiliza una solución de 1 % de Tween 20, el área es de 30 mm2 o menos. La propiedad liberable es más preferiblemente de 20 mm2 o menos que esta área.

Específicamente, la presente invención se define en las reivindicaciones.

[1] La región impregnada con el reactivo ácido sólido se denomina una región del reactivo ácido sólido, la región impregnada con nitrito se denomina región de nitrito y la región impregnada con el reactivo neutralizante se denomina región del reactivo neutralizante o una región de reactivo básico.

La pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región del reactivo ácido sólido o una región de nitrito y una región de reactivo neutralizante tiene, sobre el soporte, una almohadilla de muestra, una región del reactivo ácido sólido o una región de nitrito, una región de reactivo neutralizante, una región de marcación, una región de detección y una banda de absorción, desde la parte superior de la misma, y la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito pueden ubicarse en la almohadilla de muestra. Además, la almohadilla de muestra, la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito, la región del reactivo neutralizante, la región de marcación, la región de detección y la banda de absorción pueden estar en contacto o no con una región adyacente a la misma.

El reactivo ácido sólido usado en la presente invención está en estado sólido a temperatura normal y no se volatiliza a alta temperatura.

Los ejemplos del reactivo ácido sólido que se usa preferiblemente en la presente invención pueden incluir ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.

Si se usa un ácido con una valencia más alta, por ejemplo, ácido cítrico, como reactivo ácido sólido preferido en la presente invención, la extracción se puede realizar con una cantidad menor de ácido. Por otro lado, si la valencia de un ácido es la misma, por ejemplo, el ácido maleico o el ácido tartárico que tienen una constante de disociación ácida más pequeña son más eficientes.

Además, el reactivo ácido sólido usado en la presente invención es preferiblemente un reactivo que no está coloreado en la pieza de prueba inmunocromatográfica, y más específicamente, un reactivo que tiene un color blanco en estado seco o apenas se colorea mediante calor seco u oxidación.

Los ejemplos del nitrito utilizado en la presente invención incluyen nitrito de sodio y nitrito de potasio.

La cantidad de reactivo ácido sólido o nitrito usado en la presente invención, es decir, la cantidad de reactivo ácido sólido o nitrito impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica no está particularmente limitada. En general, la cantidad de reactivo ácido sólido o nitrito es de aproximadamente 0.01 pg a 1 mg, y preferiblemente es de aproximadamente 0.1 pg a 0.1 mg, con respecto a una única pieza de prueba inmunocromatográfica. Sin embargo, es preferible seleccionar una cantidad óptima, en donde se puedan obtener efectos dependiendo del tipo de reactivo ácido sólido o nitrito a utilizar, la composición de la suspensión de una muestra, la cantidad añadida, etc.

Para impregnar una almohadilla de muestra o un material poroso con el reactivo ácido sólido o el nitrito, el reactivo ácido sólido o el nitrito se disuelve una vez en una solución, y la solución obtenida luego se aplica a la almohadilla de muestra o al material poroso y luego se seca.

El reactivo neutralizante utilizado en la presente invención está en estado sólido a temperatura normal y no se volatiliza a alta temperatura.

Los ejemplos del reactivo neutralizante que se usa preferiblemente en la presente invención incluyen base Tris (tris(hidroximetil)aminometano), hidróxido de sodio, hidrogenofosfato dipotásico, citrato trisódico y un tampón de Good que tiene una capacidad de tamponamiento en el rango alcalino.

La cantidad de reactivo neutralizante usado en la presente invención, concretamente, la cantidad de reactivo neutralizante impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica, no está particularmente limitada. En general, el reactivo neutralizante se usa en una cantidad de aproximadamente 0.01 |jg a 1 mg, y preferiblemente aproximadamente 0.1 jg a 0.1 mg, para una única pieza de prueba inmunocromatográfica. Sin embargo, es preferible seleccionar una cantidad óptima, en donde se puedan obtener efectos dependiendo del tipo de reactivo neutralizante utilizado, la composición de la suspensión de la muestra, la cantidad añadida, etc.

Para impregnar un material poroso con el reactivo neutralizante, el reactivo neutralizante se puede disolver una vez en una solución, la solución obtenida se puede aplicar luego al material poroso y, posteriormente, se puede secar.

La Figura 1 es una vista que muestra una realización preferida de una pieza de prueba inmunocromatográfica típica. La pieza de prueba inmunocromatográfica que se muestra en la Figura 1 es una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con un reactivo ácido sólido y un reactivo neutralizante. Sin embargo, se puede impregnar nitrito en lugar del reactivo ácido sólido, y el resultado es una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrito y un reactivo neutralizante. Los expertos en la técnica podrán diseñar y producir adecuadamente una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrito y un reactivo neutralizante. Cabe señalar que la pieza de prueba inmunocromatográfica no se limita a la que se muestra en la Figura 1. En la Figura 1, el número de referencia 1 indica un soporte, el número de referencia 2 indica una región de marcación, el número de referencia 3 indica una región de detección, el número de referencia 7 indica una banda de absorción y el número de referencia 8 indica una lámina de respaldo.

La Figura 1A es una vista superior y la Figura 1B es una vista en sección transversal. En el ejemplo mostrado en la Figura 1, la región 5 de reactivo ácido sólido y/o la región 6 de reactivo de neutralización están presentes más adelante de la región 2 de marcador, y estas se superponen entre sí, de modo que se forma un canal de flujo de un flujo lateral continuo. En la pieza de prueba que se muestra en la Figura 1, la región 5 de reactivo ácido sólido también sirve como almohadilla de muestra. Es decir, la región del reactivo ácido sólido está presente en la almohadilla de muestra. En esta pieza de prueba, en donde la región del reactivo ácido sólido y la región del reactivo neutralizante se establecen como dos materiales porosos diferentes (almohadillas), también se denomina pieza de prueba de dos almohadillas. Además, puede haber una almohadilla de muestra presente más adelante de la región del reactivo ácido sólido.

En la presente invención, cuando la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región de reactivo neutralizante se superponen y se ponen en contacto entre sí, se establece una lámina impermeable a un líquido de manera que la lámina quede intercalada entre la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región de reactivo neutralizante. El establecimiento de la lámina puede producir los tres efectos siguientes.

(A) El movimiento de un reactivo entre dos regiones adyacentes se puede suprimir durante la conservación de la pieza de prueba. Como resultado, se puede evitar la reacción de un reactivo ácido sólido o nitrito con un reactivo neutralizante por contacto. Como resultado, se puede mejorar la estabilidad del reactivo.

(B) Cuando se agrega una muestra mezclada con nitrito o un reactivo ácido, se puede evitar la extracción insuficiente de un antígeno de cadena de azúcar atribuible a la muestra que alcanza la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito e inmediatamente después pasa a la región del reactivo neutralizante. Es decir, la velocidad a la que un líquido que contiene la muestra se mueve desde la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito a la región de reactivo neutralizante disminuye y el tiempo durante el cual el líquido que contiene la muestra permanece en la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito se alarga. Como resultado, se extrae suficientemente un antígeno de la cadena de azúcar y se mejora la sensibilidad de la medición.

(C) Cuando se agrega una muestra mezclada con nitrito o un reactivo ácido, se puede evitar que un líquido que contiene la muestra que ha alcanzado la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito e inmediatamente después se ha movido a la región del reactivo neutralizante fluya hacia atrás a la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito, reduciendo la actividad del reactivo ácido sólido o el nitrito, y reduciendo la eficiencia de extracción. Es decir, se evita que un líquido que contiene la muestra que una vez ha alcanzado la región del reactivo neutralizante fluya hacia atrás a la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito y se evita que reduzca la actividad del reactivo ácido sólido o del nitrito. De este modo, se permite que la extracción del antígeno de la cadena de azúcar con ácido nitroso se desarrolle de manera eficiente y se mejore la sensibilidad de la medición.

El material para la lámina que se establecerá entre la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región de reactivo neutralizante no está limitado siempre que el material sea impermeable a un líquido. Por ejemplo, se puede utilizar una lámina fabricada con resina tal como una lámina de PET (tereftalato de polietileno) o una lámina de polietileno. La lámina fabricada con resina también se denomina película fabricada con resina.

La lámina se puede establecer de manera que la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región del reactivo neutralizante estén parcialmente en contacto y se superpongan entre sí. En este caso, la longitud de la porción superpuesta entre la región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región del reactivo neutralizante se minimiza preferiblemente y es, por ejemplo, de 5 mm o menos, preferiblemente de 3 mm o menos, más preferiblemente de 2 mm o menos.

La lámina se puede establecer de manera que no permita que la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región reactiva de neutralización entren en contacto entre sí, y la almohadilla impregnada con el reactivo ácido o el nitrito puede tener una forma que sobresalga de una lámina de PET. En este caso, la región de neutralización puede recubrirse completamente con la lámina, y la región de reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso puede establecerse en la lámina. En este caso, un líquido dentro de la región del reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso fluye sobre la lámina sin moverse directamente a la región de neutralización, y luego llega a la región de reactivo neutralizante.

La lámina puede establecerse, por ejemplo, sólo entre la región de reactivo ácido sólido o la región de nitrito y la región de reactivo neutralizante. Por otro lado, cuando la lámina fabricada con resina se adhiere, como una lámina laminada superior, y cubre el lado superior de la pieza de prueba inmunocromatográfica, la lámina laminada superior se adhiere y cubre la región del reactivo neutralizante, la región de marcación, el soporte, la región de detección y la banda de absorción excluyendo la región del reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso y excluyendo además la almohadilla de muestra cuando la región del reactivo ácido sólido o la región de ácido nitroso también sirve como almohadilla de muestra. La región del reactivo ácido sólido o la región de nitrito pueden adherirse a la parte superior de la lámina laminada superior que se adhiere a la parte superior de la porción de reactivo neutralizante. Las Figuras 2 y 3 muestran la estructura de una pieza de prueba inmunocromatográfica de este tipo.

Se describirá un método para utilizar la pieza de prueba de la presente invención basándose en la forma mostrada en la Figura 2 y la Figura 3. El siguiente método de uso es un método para mezclar una muestra con una solución de ácido nitroso y realizar mediciones mediante el uso de una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con un reactivo ácido sólido y un reactivo neutralizante. También se puede realizar un método para mezclar una muestra con una solución ácida y realizar mediciones mediante el uso de una pieza de prueba inmunocromatográfica impregnada con nitrito y un reactivo neutralizante con referencia a la descripción del siguiente método de uso.

Un espécimen o una muestra preparada usando el espécimen se pone en contacto y se mezcla con una solución de nitrito, y el espécimen se suspende en la solución de nitrito, y luego la suspensión se agrega a una región 5 del reactivo ácido sólido que también sirve como almohadilla de muestra, para que se inicie la medición. Esta vez, se pueden mezclar de 5 a 100 pL de una muestra con 0.01 a 2 mL de nitrito de 0.1 M a 8 M, y luego se pueden agregar de 5 a 200 pL de la mezcla a la región 5 del reactivo ácido sólido que también sirve como almohadilla de muestra. Ejemplos de nitrito incluyen nitrito de sodio y nitrito de potasio.

Una muestra que contiene un antígeno de cadena de azúcar como sustancia a detectar, que se somete a la región 5 de reactivo ácido sólido que también sirve como almohadilla de muestra, se desarrolla hasta la región 5 de reactivo ácido sólido que también sirve como almohadilla de muestra, y una región 6 de reactivo neutralizante de acuerdo con la acción capilar. Esta vez, una lámina laminada superior, que es una lámina de PET, está presente entre la región 5 de reactivo ácido sólido y la región 6 de reactivo neutralizante. Mediante esta lámina, el flujo de la muestra desde la región 5 de reactivo ácido sólido hasta la región 6 del reactivo neutralizante se suprime, y se puede evitar que la muestra que una vez ha entrado en la región 6 del reactivo neutralizante fluya hacia atrás a la región 5 del reactivo ácido sólido. Posteriormente, la muestra se desarrolla sucesivamente hasta una región 2 de marcación, un soporte 1 y una banda 7 de absorción en dirección horizontal. En la región 5 del reactivo ácido sólido, el nitrito mezclado con la muestra reacciona con un reactivo ácido sólido en la región 5 del reactivo ácido sólido para generar ácido nitroso libre, de modo que se extrae un antígeno de la cadena de azúcar de la muestra mediante la acción del ácido nitroso. El antígeno de la cadena de azúcar extraído se desarrolla y se mueve, junto con una solución de desarrollo ácida, a la región 6 del reactivo neutralizante, y el pH de la solución de desarrollo ácida que contiene el antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en la región 6 del reactivo neutralizante, de modo que se ajusta al rango neutral. Como resultado, el antígeno de la cadena de azúcar se desarrolla aún más y se mueve a la región detrás en condiciones neutrales. En la región 2 de marcación, con el desarrollo de una muestra de espécimen, se libera un anticuerpo marcado en el líquido y luego se desarrolla en el soporte 1. Cuando un antígeno de la cadena de azúcar está presente en una muestra de espécimen, el antígeno de la cadena de azúcar se captura específicamente por un anticuerpo de captura en una región 3 de detección en el soporte 1, y el antígeno de la cadena de azúcar también tiene una reacción específica con un anticuerpo marcado para formar un complejo. De este modo, en la región 3 de detección, se logra el intercalado del anticuerpo a través del antígeno de la cadena de azúcar, de modo que se puede medir un complejo marcado de anticuerpo-antígeno de cadena de azúcar en la región 3 de detección.

De acuerdo con el método que utiliza la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, dado que la extracción de un antígeno de la cadena de azúcar de una muestra se lleva a cabo en la pieza de prueba inmunocromatográfica, no es necesario extraer previamente el antígeno de la cadena de azúcar de la muestra antes de la medición utilizando la pieza de prueba inmunocromatográfica, sino que el antígeno de la cadena de azúcar en la muestra se puede medir en una sola etapa.

En el método de la presente invención, una muestra biológica utilizada como espécimen no está particularmente limitada. Ejemplos de dicha muestra biológica incluyen fluido corporal y similares tales como suero, plasma, sangre, orina, heces, saliva, fluido tisular, líquido cefalorraquídeo o hisopado, y un producto diluido de los mismos.

En el método que utiliza la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, una sustancia que se va a detectar como analito es un antígeno de cadena de azúcar, que se puede medir mediante un inmunoensayo, concretamente, un ensayo que utiliza una reacción antígeno-anticuerpo. Un ejemplo de antígeno es un polisacárido que es un antígeno de cadena de azúcar presente en la pared celular de bacterias extraído mediante un tratamiento de extracción con ácido nitroso. También se pueden medir protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia, virus y otros que comprenden la sustancia antes mencionada. De acuerdo con el método que utiliza una pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, se puede determinar si un antígeno de cadena de azúcar derivado de protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia, virus, etc. está contenido o no en la muestra biológica de un sujeto que se va a confirmar. Cuando dicho antígeno de cadena de azúcar está contenido en la muestra biológica, se puede determinar que el sujeto está afectado por una infección causada por protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia, virus, etc. Por ejemplo, estreptococos p-hemolíticos del grupo A(Streptococcus pyogenes),se puede detectar la presencia o ausencia de infección porEscherichia coli,Legionela, Campilobacter, etc.

El método de la presente invención no está limitado por el caso de impregnar la pieza de prueba inmunocromatográfica con un reactivo ácido y un reactivo básico, y también se puede utilizar cuando se impregna una pluralidad, concretamente, de 2 a n reactivos que tienen diferentes efectos y deben evitar una reacción durante la conservación en la pieza de prueba inmunocromatográfica.

La pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención se almacena en un dispositivo inmunocromatográfico, en donde se puede establecer un puerto de adición amplio.

Por ejemplo, el puerto de adición de un dispositivo inmunocromatográfico convencional (QuickNavi™-Strep A, Denka Seiken Co., Ltd ), en donde se almacena una pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una longitud de 5 a 9 cm, preferiblemente de 7 cm, y un ancho de 0.3 a 0.7 cm, preferiblemente de 0.5 cm, se establece como un puerto de adición sustancialmente rectangular que tiene un tamaño de aproximadamente 3.5 mm x aproximadamente 5.5 mm (19.25 mm2). El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico con la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, en donde se almacena la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene el mismo tamaño que el anterior, se establece como un puerto de adición sustancialmente rectangular que tiene un tamaño de aproximadamente 3.5 mm x aproximadamente 11 mm (38.5 mm2). Dado que el dispositivo inmunocromatográfico y la pieza de prueba inmunocromatográfica almacenada en el mismo tienen generalmente tamaños similares, un dispositivo inmunocromatográfico de 3 cm de ancho y 9 cm de largo que tiene un puerto de adición sustancialmente rectangular de 3 a 5 mm x 8 a 15 mm (24 a 75 mm2) es un dispositivo inmunocromatográfico que tiene un puerto de adición amplio y es capaz de ejercer los efectos del dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención. Los lados más largos del puerto de adición son lados paralelos a los lados más largos de la pieza de prueba cromatográfica, es decir, lados a lo largo de la dirección del flujo de una solución de muestra del espécimen. La longitud del lado más largo del puerto de adición también se denomina longitud del puerto de adición, y la longitud del lado más corto del mismo también se denomina ancho del puerto de adición. En el ejemplo descrito anteriormente, se utiliza un puerto de adición sustancialmente rectangular. Sin embargo, la forma del puerto de adición puede ser triangular o redonda. Cuando el tamaño del puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico de la presente invención se indica por área, el área es de 24 a 75 mm2, preferiblemente de 35 a 75 mm2.

Cuando una muestra se trata con un reactivo de tratamiento de muestras establecido en una pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con un método de inmunocromatografía convencional, la capacidad de tratamiento de muestras es débil debido a una pequeña área en donde una solución de muestra se pone en contacto con una región impregnada con el reactivo de tratamiento de muestras. Además, el tratamiento de la muestra se realiza mientras se desarrolla gradualmente la pieza de prueba inmunocromatográfica. Por lo tanto, una solución de muestra desarrollada primero y una solución de muestra desarrollada después difieren en la concentración del reactivo de tratamiento de muestras. En consecuencia, el tratamiento de la muestra no puede realizarse de forma fiable.

El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico con la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención se establece como un puerto de adición amplio y, por lo tanto, puede suministrar una gran cantidad de solución de muestra de espécimen en un corto tiempo de una vez a una región impregnada con un reactivo de tratamiento de la muestra, a saber, una región impregnada con un reactivo ácido sólido o una región impregnada con un ácido nitroso, mediante inmunocromatografía. Como resultado, se puede promover la extracción del antígeno de la cadena de azúcar en la pieza de prueba inmunocromatográfica. La cantidad de solución de muestra del espécimen que se puede suministrar de una vez es de 10 pL a 200 pL.

Como resultado, no se produce la diferencia en la concentración del reactivo de tratamiento de muestras causada por la diferencia temporal. Por lo tanto, el tratamiento de muestras mediante inmunocromatografía puede promoverse y realizarse de manera confiable y eficiente.

El dispositivo inmunocromatográfico con la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención está configurado para no tener espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra colocada debajo para evitar que una muestra se escape del puerto de adición.

El puerto de adición del dispositivo inmunocromatográfico con la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención se establece como un puerto de adición amplio y suministra una gran cantidad de solución de muestra de espécimen en un corto tiempo a la vez. La porción del borde, que es un contorno, de un puerto de adición tiene una altura determinada (1 a 5 mm) y una solución de muestra del espécimen suministrado se mantiene temporalmente dentro del puerto de adición.

Como resultado, la solución de muestra del espécimen tarda mucho en absorberse completamente en una pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que la solución de muestra puede escapar al exterior de la pieza de prueba inmunocromatográfica sin ser absorbida en la pieza de prueba inmunocromatográfica.

En la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, la almohadilla de muestra está soportada por una lámina de respaldo que tiene un tamaño de contorno equivalente o mayor que el del puerto de adición, como una lámina de respaldo que soporta la almohadilla de muestra, para evitar que una muestra se escape por el puerto de adición. Por lo tanto, la lámina de respaldo puede funcionar para presionar la almohadilla de muestra contra el puerto de adición para despejar el espacio entre el puerto de adición y la almohadilla de muestra. La pieza de prueba inmunocromatográfica así configurada puede evitar que se escape una solución de muestra.

Si la almohadilla de muestra tiene un espesor desigual, una porción delgada de la almohadilla de muestra forma fácilmente un espacio desde el puerto de adición y hace que se escape fácilmente una solución de muestra.

En la presente invención, un pedestal para el contenedor del dispositivo puede diseñarse como un pedestal alto para la porción delgada de la almohadilla de muestra y diseñarse como un pedestal bajo para la porción gruesa para eliminar el espacio entre el puerto de adición y la almohadilla nivelada que tiene un espesor desigual. La pieza de prueba inmunocromatográfica así configurada puede evitar que se escape una solución de muestra.

Como resultado, la extracción del antígeno de la cadena de azúcar en la pieza de prueba inmunocromatográfica se puede llevar a cabo de manera eficiente.

Ejemplo

La presente invención se describirá específicamente en el siguiente ejemplo. Sin embargo, este ejemplo no pretende limitar el alcance de la presente invención. En el siguiente ejemplo, % representa % p/v a menos que se especifique lo contrario.

Ejemplo de pieza de prueba inmunocromatográfica para medir el estreptococo p-hemolítico del grupo A

Nitrito (reactivo líquido): nitrito de sodio 2.0 M, Tween 20 al 1%

Reactivo ácido sólido (impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica): ácido orgánico 1.0 M (ácido tartárico), Triton X-100 al 0.2 %

Reactivo neutralizante (impregnado en la pieza de prueba inmunocromatográfica): Tris HCl 3.0 M (pH 9.0), Triton X-100 al 1.5 %

1. Inmovilización de anticuerpoanti-Streptococcus pyogenes(estreptococo p-hemolítico del grupo A) sobre una membrana de nitrocelulosa (soporte)

Se preparó una solución obtenida diluyendo un anticuerpo anti-Streptococcus pyogenescon agua purificada hasta una concentración de 1.0 mg/mL y un anticuerpo anti-IgG de conejo. El anticuerpoanti-Streptococcus pyogenesse aplicó linealmente al lado de la almohadilla de muestra de una membrana de nitrocelulosa respaldada con una película de PET, y el anticuerpo anti-IgG de conejo se aplicó linealmente al lado de la banda de absorción de la misma. A continuación, la membrana de nitrocelulosa se secó a 45 °C durante 30 minutos para obtener una membrana con anticuerpoanti-Streptococcus pyogenesinmovilizado. Esta membrana se denomina "membrana con anticuerpo inmovilizado" en el presente ejemplo.

2. Inmovilización de anticuerposanti-Streptococcus pyogenessobre partículas de poliestireno coloreadas.

Se diluyó un anticuerpoanti-Streptococcus pyogenescon agua purificada hasta una concentración de 1.0 mg/mL y después se añadieron partículas de poliestireno coloreadas a la solución obtenida hasta una concentración del 0.1%, seguido de agitación. Después, se añadió carbodiimida a la solución mezclada hasta una concentración del 1% y la mezcla obtenida se agitó adicionalmente. Se eliminó el sobrenadante de la mezcla de reacción mediante una operación centrífuga y luego se resuspendió en Tris 50 mM (pH 9.0) y BSA al 3 % para obtener una suspensión de partículas de poliestireno coloreadas unidas a anticuerpoanti-Streptococcus pyogenesal 0.04 %. Estas partículas se denominan "partículas con anticuerpo inmovilizado" en el presente ejemplo.

3. Aplicación y secado de partículas de poliestireno coloreadas unidas a anticuerpo anti-StreptococcuspyogenesLa suspensión de partículas con anticuerpo inmovilizado producida en el punto 2 anterior se aplicó en una cantidad predeterminada a una tela no tejida y luego se secó a 45 °C durante 30 minutos. La tela no tejida obtenida se denomina "almohadilla seca" en el presente ejemplo.

4. Aplicación de reactivo neutralizante (reactivo básico)

Se aplicó el reactivo neutralizante (reactivo básico) descrito anteriormente en una concentración de 30 pL/cm a un filtro (Toyo Roshi Kaisha, Ltd.; n.° 26-3).

5. Producción de telas no tejidas impregnadas de reactivo ácido sólido

El reactivo ácido sólido descrito anteriormente se aplicó en una concentración de 13 pL/cm a una tela no tejida (Unitika, Ltd.; Elves). Inmediatamente después de la aplicación, la tela no tejida se secó a 45 °C durante 1 hora para obtener una tela no tejida impregnada con reactivo ácido sólido.

6. Producción de una pieza de prueba inmunocromatográfica para la detección deStreptococcus pyogenesEn primer lugar, la membrana (soporte) (30 mm de ancho) se adhirió a una porción de 20 mm desde la porción detrás de una lámina de soporte de una tira.

Se adhirió una banda de absorción para absorber un líquido detrás de la membrana.

Se adhirió fibra de vidrio (Almohadilla C) de 10 mm de ancho a la que se aplicó látex de unión a anticuerpos más adelante de la membrana, con un solapamiento de 2 mm con la membrana.

La almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante se adhirió al mismo con una superposición de 4 mm entre la Almohadilla C y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante.

Se adhirió a ella una lámina laminada superior (60 mm), que era una lámina de PET, para alinearla perfectamente con la parte superior de la pieza de prueba inmunocromatográfica.

Finalmente, la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido se adhirió encima de la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante para alinearse perfectamente con la porción más adelante (extremo inferior) de la pieza de prueba inmunocromatográfica de modo que la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante entrara en contacto entre sí con la lámina laminada superior interpuesta entre ellas.

La estructura de la pieza de prueba inmunocromatográfica así producida se muestra en la Figura 2. La Figura 3 es una vista esquemática que muestra también las respectivas distancias (mm) entre las piezas. En la Figura 2 y la Figura 3, la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante se representan como si estas almohadillas estuvieran aisladas sin contacto incluso en un sitio donde el laminado superior está ausente entre las almohadillas, pero en realidad, las almohadillas están en contacto entre sí en la parte libre del laminado superior.

Una pieza de prueba inmunocromatográfica, en la que una lámina de PET que no estaba intercalada entre la región impregnada con el reactivo ácido sólido y la región impregnada con el reactivo neutralizante, se usó como pieza de prueba inmunocromatográfica de una técnica convencional.

Los resultados se muestran en la Tabla 1. La Tabla 1 muestra la intensidad del desarrollo del color durante la evaluación durante 5 minutos.

El término "Sobre" mostrado en la Tabla 1 denota los resultados de la prueba utilizando la pieza de prueba, en la que el laminado superior se adhirió mediante el método convencional y estaba presente encima de la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido. Sin embargo, el laminado superior no cubre toda la superficie de la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido y cubre una porción de aproximadamente 3 mm en la porción detrás de la almohadilla.

El término "Entre" que se muestra en la Tabla 1 denota los resultados sobre la pieza de prueba de la presente invención, en la que el laminado superior se adhirió entre la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante. La superficie de contacto en la que la almohadilla impregnada con el reactivo ácido sólido y la almohadilla impregnada con el reactivo neutralizante entran en contacto directo entre sí es de 2 mm.

Como se muestra en la Tabla 1, la prueba que utiliza la pieza de prueba de la presente invención ("entre") fue más sensible de 1 a 2.

T l 11

Utilizando la pieza de prueba inmunocromatográfica de la presente invención, se puede detectar el estreptococo phemolítico del grupo A con alta sensibilidad.

Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente descripción se incorporan en el presente documento como referencia en su totalidad.

Listado de signos de referencia

1 Soporte (que comprende una región de detección)

2 Región de marcación

3 Región de detección

5 Región de reactivo ácido sólido (almohadilla de muestra)

6 Región del reactivo neutralizante

7 Banda de absorción

8 Lámina de respaldo

9 Lámina de laminado superior

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una pieza de prueba inmunocromatográfica para extraer y medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra, comprendiendo la pieza de prueba inmunocromatográfica: una almohadilla de muestra a la que se agrega una muestra mezclada con nitrito o una solución ácida; una región (2) de marcación que comprende un anticuerpo marcado obtenido marcando un anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar; y una región (3) de detección en la que se inmoviliza el anticuerpo contra el antígeno de la cadena de azúcar, en donde se forma un complejo de anticuerpo marcado con antígeno de la cadena de azúcar del anticuerpo en la región (3) de detección para medir el antígeno de la cadena de azúcar, y la pieza de prueba inmunocromatográfica que tiene una región (6) impregnada con un reactivo neutralizante más adelante de la región (2) de marcación, y que además tiene una región (5) impregnada con un reactivo ácido sólido cuando se usa la muestra mezclada con el nitrito, o una región (5) impregnada con nitrito cuando se utiliza la muestra mezclada con la solución ácida, más adelante de la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante, caracterizada porque

una lámina (9) fabricada con resina está intercalada entre la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante para suprimir el movimiento de un reactivo o el movimiento de un solución de muestra entre las regiones (5, 6), en donde

la lámina (9) fabricada con resina está intercalada de manera que la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante entran en contacto parcial entre sí, o en donde la lámina (9) fabricada con resina está intercalada de manera que la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito y la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante no entren en contacto entre sí y que la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito tiene una forma que sobresale de la lámina (9) fabricada con resina de modo que un líquido dentro de la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito fluye sobre la lámina (9) fabricada con resina a la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante.

2. La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente en la almohadilla de muestra.

3. La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente en una almohadilla de muestra situada más adelante en la pieza de prueba inmunocromatográfica, las regiones excepto la almohadilla de muestra están recubiertas con la lámina (9) fabricada con resina, y la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o el nitrito está presente encima de la lámina (9) fabricada con resina ubicada sobre la región (6) impregnada con el reactivo neutralizante.

4. La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el reactivo ácido sólido se selecciona del grupo que consiste en ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido cítrico y ácido tartárico.

5. La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el reactivo neutralizante es tris(hidroximetil)aminometano o hidróxido de sodio.

6. La pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el antígeno de la cadena de azúcar es el antígeno de la cadena de azúcar de protozoos, hongos, bacterias, micoplasmas, rickettsias, clamidia o virus.

7. Un método para medir un antígeno de cadena de azúcar en una muestra de acuerdo con un método de inmunocromatografía usando la pieza de prueba inmunocromatográfica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, comprendiendo el método:

mezclar la muestra con una solución de ácido nitroso cuando la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región (5) impregnada con un reactivo ácido sólido, o mezclar la muestra con una solución ácida cuando la pieza de prueba inmunocromatográfica tiene una región (5) impregnada con nitrito, y agregar la mezcla a una almohadilla de muestra de la pieza de prueba inmunocromatográfica, en donde

el antígeno de la cadena de azúcar se extrae de la muestra mediante la acción del ácido nitroso generado a través de una reacción del nitrito con el reactivo ácido sólido en la región (5) impregnada con el reactivo ácido sólido o la región (5) impregnada con el nitrito, la solución ácida que contiene el antígeno de la cadena de azúcar se neutraliza en una región (6) impregnada con un reactivo neutralizante, y

se forma un complejo de anticuerpo marcado con antígeno de la cadena de azúcar del anticuerpo en una región (3) de detección, y en donde

se controla una velocidad o una dirección de desarrollo de la muestra sobre la pieza de prueba inmunocromatográfica, de modo que se controla un tratamiento con el reactivo ácido, el nitrito y el reactivo neutralizante.