ES2987954T3 - Método para preparar rellenos dérmicos de ácido hialurónico, rellenos dérmicos obtenidos de ese modo y su uso - Google Patents

Método para preparar rellenos dérmicos de ácido hialurónico, rellenos dérmicos obtenidos de ese modo y su uso Download PDF

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Abstract

La presente invención se refiere en general al campo de los rellenos dérmicos de ácido hialurónico (AH), y más específicamente a métodos para preparar composiciones reticuladas a base de AH en forma de gel que comprenden diálisis a alta temperatura y/o reticulación en presencia de fosfato y una sal de haluro de metal alcalino. La presente invención se refiere además a composiciones de gel reticuladas a base de AH preparadas mediante dichos métodos y a su uso como rellenos dérmicos en aplicaciones estéticas, tales como tratamientos antiarrugas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Método para preparar rellenos dérmicos de ácido hialurónico, rellenos dérmicos obtenidos de ese modo y su uso
Campo de la invención
La presente invención se refiere en general al campo de los rellenos dérmicos de ácido hialurónico (HA), y más específicamente a métodos para preparar composiciones a base de HA reticulado en forma de un gel que comprende diálisis a alta temperatura y/o reticulación en presencia de fosfato y una sal de haluro de metal alcalino. La presente invención se refiere además a composiciones de gel a base de HA reticulado preparadas mediante dichos métodos y a su uso como rellenos dérmicos en aplicaciones estéticas tales como tratamientos de arrugas.
Antecedentes de la invención
Los procedimientos de rejuvenecimiento no quirúrgicos que usan rellenos dérmicos inyectables se consideran actualmente como los segundos tratamientos estéticos no quirúrgicos más comunes realizados en todo el mundo, detrás de las inyecciones de toxina botulínica. Aunque hay numerosos tipos de rellenos disponibles para el médico, el ácido hialurónico es con mucho el material de relleno más comúnmente utilizado hoy en día.
El ácido hialurónico es un polisacárido natural compuesto por unidades de repetición unidas de N-acetil-D-glucosamina y ácido D-glucurónico. Se encuentra en todo el cuerpo humano (por ejemplo, en la piel) y generalmente se tolera bien y es seguro. Debido a su capacidad para unirse a y retener agua, el ácido hialurónico también desempeña un papel de apoyo en la hidratación de la piel. Además, el ácido hialurónico presenta excelentes propiedades viscoelásticas y tiene una alta capacidad de elevación de tejido (efecto de dar volumen), haciendo que el ácido hialurónico sea el material de relleno dérmico de elección.
Desafortunadamente, el ácido hialurónico se degrada rápidamentein vivopor degradación enzimática y por radicales libres, y tiene una semividain vivode solo aproximadamente 24-48 horas. Por lo tanto, en la mayoría de los productos comerciales, el ácido hialurónico se reticula para aumentar su longevidad. Aunque se han investigado y usado muchos agentes de reticulación diferentes en productos de ácido hialurónico reticulado, el diglicidil éter de 1,4-butanodiol (BDDE) es hoy en día el agente de reticulación más comúnmente usado.
Sin embargo, aunque BDDE representa el “producto de referencia”, tiene algunas desventajas. Por ejemplo, cualquier producto de HA reticulado con BDDE siempre contendrá BDDE sin reaccionar (es decir, “ libre”), así como BDDE parcialmente hidrolizado (es decir, epoxidioles; EPD) y productos de degradación de BDDE como 2,6-dimetilanilina (DMA). BDDE y EPD contienen grupos epóxido reactivos y, por lo tanto, como DMA, se consideran generalmente tóxicos, e incluso se sospecha que BDDE es cancerígeno.
En vista de lo anterior, es necesario que la cantidad de compuestos tales como BDDE, EPD y DMA en el producto final se controle estrictamente a un nivel bajo para lograr el perfil de seguridad deseado y cumplir con los requisitos reguladores. Sin embargo, los procedimientos de purificación usados hoy en día para eliminar dichas impurezas no deseadas del gel no son totalmente satisfactorios. Por ejemplo, la diálisis a menudo es inadecuada en cuanto a coste y requisitos de mano de obra, eficiencia de purificación y/o tiempo de purificación.
Además, los procesos de reticulación empleados actualmente que usan BDDE como reticulante se llevan a cabo comúnmente usando una cantidad relativamente alta de BDDE en un intento por lograr el grado deseado de reticulación y propiedades reológicas del gel a base de HA final. De manera no deseable, esto da como resultado cantidades relativamente altas de BDDE, EPD y DMA tóxicos en el gel. En consecuencia, hay un gran interés en un método de reticulación altamente eficaz, que permita el uso de cantidades reducidas de BDDE al tiempo que se logran las mismas propiedades reológicas, disminuyendo de ese modo la cantidad de impurezas no deseadas, por ejemplo,<BDDE, EPD y>D<m>A,<en el gel.>
El documento WO 2014/064633 da a conocer la reticulación de HA en presencia de al menos una sal de haluro alcalino en una concentración de entre el 0,5 % y el 20 %, lo que hace posible mejorar las propiedades reológicas de un gel de HA reticulado. Además, el documento WO 2013/185934 da a conocer la reticulación de HA en presencia de un tampón fosfato, lo que conduce a un implante de gel de HA adecuado para aumentar el volumen de tejido cutáneo. A pesar de estos esfuerzos, existe la necesidad continua de un método de reticulación de HA mejorado que emplee menos BDDE, dando como resultado menores cantidades de BDDE sin reaccionar y productos de degradación del mismo en el producto final. Además, el documento WO 2016/096920 da a conocer un proceso para la preparación de un gel de ácido hialurónico reticulado. El proceso implica la provisión de una mezcla de reticulación alcalina acuosa que comprende ácido hialurónico no reticulado, un agente de reticulación (BDDE) y fosfato de sodio.
Objeto de la invención
Teniendo en cuenta lo anterior, un objeto de la presente invención es proporcionar un método para la preparación de geles de ácido hialurónico (HA) reticulado que tengan una cantidad disminuida de impurezas no deseadas al tiempo que proporcionen propiedades deseables para su uso como relleno dérmico.
Sumario de la invención
El objeto anterior se logra mediante la provisión de un procedimiento de diálisis a alta temperatura que tiene una velocidad y eficiencia de diálisis aumentadas de geles a base de ácido hialurónico (HA), y la provisión de un método altamente eficiente para la reticulación de la composición a base de ácido hialurónico (HA) usando un tampón fosfato como medio de reacción de reticulación.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
(a) proporcionar una composición a base de ácido hialurónico (HA) reticulado en forma de un gel, estando el HA reticulado con un agente de reticulación de epóxido, y
(b) dializar el gel a base de HA reticulado, en el que la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 35 °C. La diálisis a temperaturas elevadas (“diálisis a alta temperatura”) da como resultado una velocidad y eficiencia de diálisis mejoradas. Esto permite ventajosamente la reducción del tiempo de diálisis requerido para lograr un nivel especificado de impurezas. Preferiblemente, la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 40 °C, y lo más preferiblemente a una temperatura de al menos 45 °C o al menos 50 °C.
En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar un material de relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
(a) proporcionar una composición que comprende agua, HA no reticulado y al menos un agente de reticulación de epóxido, y
(b) hacer reaccionar la composición en condiciones que permiten la reticulación del HA no reticulado para formar una composición a base de HA reticulado en forma de un gel,
en el que dicha composición comprende además al menos una sal de haluro de metal alcalino y fosfato, proporcionándose el fosfato por al menos una sal de fosfato y opcionalmente ácido fosfórico, en el que la sal de fosfato es una sal de fosfato de metal alcalino, una sal de fosfato de metal alcalinotérreo, o una combinación de las mismas, y
en el que la cantidad de la al menos una sal de haluro de metal alcalino en la composición es menor del 0,5 % en peso y la cantidad de fosfato en la composición es del 0,001 % en peso al 5 % en peso, calculándose la cantidad de fosfato como la cantidad total de dicha al menos una sal de fosfato y dicho ácido fosfórico opcional.
La reticulación en presencia de fosfato y una sal de haluro de metal alcalino da como resultado una mayor eficiencia de reticulación, lo que hace posible usar menos agente de reticulación y/o menores concentraciones de HA al tiempo que se mantienen las propiedades reológicas deseadas del producto de gel final.
En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) preparado mediante el método según el primer y/o segundo aspecto de la presente invención. El gel a base de HA así obtenido contiene cantidades muy bajas de impurezas no deseadas como reticulante de epóxido residual sin reaccionar o reticulante de epóxido parcialmente reaccionado o productos de degradación del mismo. Por lo tanto, presenta un perfil de seguridad muy favorable.
En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona un kit que comprende un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la presente invención, y opcionalmente instrucciones de uso.
El kit contiene preferiblemente al menos una jeringa precargada que contiene el gel a base de HA según el primer o segundo aspecto de la presente invención, y opcionalmente instrucciones de uso. El kit es adecuado para su uso en diversos tratamientos cosméticos (estéticos).
En un quinto aspecto, la presente invención se refiere al uso de un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la presente invención para aplicaciones cosméticas.
Las aplicaciones cosméticas no limitantes incluyen tratamientos cosméticos de líneas faciales, arrugas faciales, líneas glabelares, pliegues nasolabiales, líneas de marioneta, comisuras bucales, arrugas perilabiales, patas de gallo, soporte subdérmico de las cejas, almohadillas de grasa malar y bucal, depresiones lagrimales, nariz, labios, mejillas, región peroral, región infraorbital, asimetrías faciales, líneas de mandíbula y mentón.
En un sexto aspecto, la presente invención proporciona un método para reemplazar o rellenar un tejido biológico o aumentar el volumen de un tejido biológico con fines cosméticos, en particular para tratamientos cosméticos de líneas y arrugas de la piel, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz del relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la presente invención.
Se exponen realizaciones preferidas de la presente invención en las reivindicaciones adjuntas. Realizaciones adicionales y otros objetos, ventajas y características de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la invención y los ejemplos.
Descripción detallada de la invención
Sorprendentemente, se descubrió que la diálisis de un gel a base de ácido hialurónico (HA) a temperaturas elevadas presenta una velocidad y eficiencia mucho más altas que la diálisis convencional realizada a baja temperatura (por ejemplo a 5-8 °C) y que el gel a base de HA permanece estable a pesar de la temperatura relativamente alta usada durante la diálisis. Se descubrió además que la reticulación de HA con un agente de reticulación de epóxido en presencia de fosfato y al menos una sal de haluro de metal alcalino (por ejemplo, cloruro de litio) da como resultado inesperadamente un módulo de elasticidad (G') significativamente mejorado. Esto permite el uso de menos agente de reticulación de epóxido que, como la diálisis a alta temperatura, hace posible preparar geles de HA reticulados que contienen niveles disminuidos de reticulante de epóxido residual no deseado y productos de degradación del mismo.
Como se usa en el presente documento, el término “relleno dérmico” generalmente se refiere a un material diseñado para añadir volumen a, o reemplazar o aumentar el volumen de, áreas de tejido blando de la piel. El relleno dérmico descrito en el presente documento es normalmente estéril y generalmente inyectable, es decir, puede dispensarse a partir de jeringas o dispositivos similares en condiciones normales bajo presión normal al sitio diana deseado (por ejemplo, en la dermis y la hipodermis).
El término “gel”, como se usa en el presente documento, se refiere habitualmente a un material que tiene fluidez a temperatura ambiente o corporal entre la de un líquido y un sólido. Dado que generalmente es capaz de absorber agua, también puede denominarse “hidrogel” en el presente documento. El gel es preferiblemente “cohesivo”, lo que significa que el gel tiene la capacidad de no disociarse debido a la afinidad de sus moléculas entre sí. La cohesividad es importante con respecto a la integridad del gel y, para los fines de la presente invención, puede determinarse usando la escala de cohesividad de Gavard-Sundaram (GSC) (Sundaramet al.,Plast. Reconstr. Surg. 136:678-686, 2015). Preferiblemente, el relleno dérmico de la presente invención tiene una cohesividad de 3, 4 o 5 en la escala de GSC de cinco puntos.
El término “ácido hialurónico” o “HA”, como se usa en el presente documento, incluye ácido hialurónico, hialuronato, y cualquiera de sus sales de hialuronato, tales como sales de hialuronato y sodio, potasio, litio, magnesio, calcio, o combinaciones de los mismos. El término “no reticulado”, como se usa en el presente documento, se refiere a moléculas de HA que no están reticuladas, o muy ligeramente reticuladas (grado muy bajo de reticulación o esencialmente no reticuladas, por ejemplo, un grado de modificación de menos del 1 % o menos del 0,1 %).
Además, el término “comprender”, como se usa en el presente documento, por ejemplo, en el contexto de “una composición que comprende...” o “un método que comprende...” pretende abarcar tanto el término abierto “incluye” como la frase cerrada “que consiste en”.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para preparar un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
(a) proporcionar una composición a base de ácido hialurónico (HA) reticulado en forma de un gel, estando el HA reticulado con un agente de reticulación de epóxido, y
(b) dializar el gel a base de HA reticulado, en el que la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 35 °C.
En la etapa (a), la composición a base de HA reticulado proporcionada no está particularmente restringida e incluye, por ejemplo, HA monoreticulados (es decir, reticulados en una única reacción de reticulación), HA doblemente reticulados y triplemente reticulados, como se da a conocer en, por ejemplo, el documento WO 2005/085329 (geles de HA polidensificados) y el documento WO 2014/198406 A1 (geles de<h>A triplemente reticulados).
El término “agente de reticulación de epóxido”, como se usa en el presente documento, se refiere a un agente de reticulación de diepóxido o multiepóxido, es decir, un agente de reticulación que tiene dos o más grupos funcionales epóxido capaces de reaccionar con polímeros de polisacárido (por ejemplo, ácido hialurónico) para formar reticulaciones covalentes (intra- y/o intermoleculares). Preferiblemente, el reticulante es un reticulante de diepóxido tal como diglicidil éter de 1,4-butanodiol (BDDE), diglicidil éter de etilenglicol (EGDGE), diglicidil éter de 1,6-hexanodiol, diglicidil éter de polietilenglicol, diglicidil éter de polipropilenglicol, diglicidil éter de politetrametilenglicol, diglicidil éter de neopentilglicol, poliglicidil éter de poliglicerol, 1,2,7,8-diepoxioctano, 3-(bis(glicidoximetil)-metoxi)-1,2-propanodiol, diglicidil éter de 1,4-ciclohexanodimetanol, diepóxido de 4-vinil-1-ciclohexeno, 1,2,5,6-diepoxiciclooctano y diglicidil éter de bisfenol A. Se prefiere particularmente para su uso en el presente documento diglicidil éter de 1,4-butanodiol (BDDE).
Dentro del contexto de la presente invención, la masa molecular de HA no está particularmente limitada y puede ser, por ejemplo, de entre 2,0 x 10<5>Da y 5,0 x 10<6>Da, preferiblemente entre 5,0 x 10<5>Da y 4,0 x 10<6>Da, más preferiblemente entre 1,0 x 10<6>Da y 3,5 x 10<6>Da, y lo más preferiblemente entre 2,0 x 10<6>Da y 3,0 x 10<6>Da. El HA también puede comprender una mezcla de HA de alto peso molecular que tiene un peso molecular de, por ejemplo, de 2,0 x 10<6>Da a 4,0 x 10<6>Da, y un HA de bajo peso molecular que tiene un peso molecular de, por ejemplo, 0,2 x 10<6>Da a 1,0 x 10<6>Da, en una razón de, por ejemplo, entre 10:90 y 90:10.
La referencia a “peso molecular” o “masa molecular” de HA, para los fines de la presente invención, ha de entenderse que indica la masa molecular promedio en viscosidad (M<v>). La masa molecular promedio en viscosidad puede calcularse relacionando la viscosidad intrínseca medida (•q) con el peso molecular promedio (M<v>) mediante la siguiente ecuación de Mark-Houwink: [^] = K x M<va>, en donde [^] = viscosidad intrínseca en m<3>/kg, Mv = masa molecular, K = 2,26 x 10<-5>m<3>/kg, y a = 0,796. La viscosidad intrínseca puede medirse a 25 °C usando una disolución tampón de cloruro de sodio 0,15 M en disolución de tampón fosfato 0,01 M (pH 7,0) por medio de un viscosímetro de nivel suspendido (viscosímetro de tipo Ubbelohde) según el procedimiento definido en la Farmacopea Europea 7.0 (véase la monografía de hialuronato de sodio 01/2011:1472).
El grado de modificación (MoD) del HA reticulado en la composición de relleno dérmico, expresado como la razón de la suma de reticulantes de epóxido mono- y doblemente reticulados (por ejemplo, reticulantes de BDDE) con respecto a la suma de unidades de disacárido de repetición de HA, es preferiblemente desde el 0,5 % hasta el 50 %, desde el 1 % hasta el 20 %, desde el 5 % hasta el 15 %, o aproximadamente del 10 %. El grado de modificación puede determinarse mediante RMN según métodos conocidos en la técnica (Edsmanet al.,Gel Properties of Hyaluronic Acid Dermal Fillers, Dermatol. Surg. 2012, 38:1170-1179; Guariseet al.,SEC determination of cross-linking efficiency in hyaluronan fillers, Carbohydrate Polymers 2012, 88:428-434; Kenneet al.,Modification and cross-linking parameters in hyaluronic acid hydrogels - Definitions and analytical methods, Carbohydrate Polymers 2013, 91:410-418).
En la etapa (b), la diálisis se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de al menos 40 °C, y lo más preferiblemente a una temperatura de al menos 45 °C o al menos 50 °C. El límite superior está determinado por la tendencia de los geles de HA a degradarse a temperaturas excesivamente altas. Los expertos en la técnica podrán seleccionar fácilmente temperaturas apropiadas para limitar la degradación a un nivel aceptable. Aunque no pretende ser limitante, el límite de temperatura superior puede ser, por ejemplo, 60 °C, 65 °C, 70 °C, 75 °C u 80 °C. Por lo tanto, intervalos de temperatura adecuados a modo de ejemplo son de 35 °C a 75 °C, o de 40 °C a 70 °C, o de 45 °C a 65 °C, o de 50 °C a 60 °C.
El tampón de diálisis usado en la diálisis tiene comúnmente un pH de aproximadamente 6,2 a 7,9, particularmente un pH de aproximadamente 6,5 a 7,8, más particularmente un pH de aproximadamente 6,8 a 7,4. El tampón usado puede ser un tampón fosfato, y en particular un tampón fosfato con un pH dentro de los intervalos mencionados anteriormente. Los tampones fosfato adecuados tienen preferiblemente una concentración de fosfato de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 120 mM, más preferiblemente de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 100 mM y lo más preferiblemente de aproximadamente 1,0 mM a aproximadamente 75 mM.
Dentro del contexto de la presente invención, la concentración de fosfato se refiere a la concentración total de todas las especies de fosfato (es decir, PO<43'>, HPO<42'>, H<2>PO<4 '>, H<3>PO<4>) presentes en el tampón de diálisis. Se calcula como la cantidad total (en moles) de sales de fosfato, y opcionalmente ácido fosfórico, añadida al tampón de diálisis dividida entre el volumen del tampón de diálisis (en litros) y expresada en mM o M.
Además, el tampón de diálisis, especialmente el tampón fosfato descrito anteriormente, tiene generalmente una osmolalidad en el intervalo de 200 a 400 mOsm, particularmente en el intervalo de 250 mOsm/kg a 350 mOsm/kg. Si el tampón de diálisis es un tampón fosfato, contiene preferiblemente cloruro de sodio en una cantidad tal que la osmolalidad del tampón de diálisis es de entre aproximadamente 220 mOsm/kg y aproximadamente 390 mOsm/kg, más preferiblemente entre aproximadamente 250 mOsm/kg y aproximadamente 350 mOsm/kg, y lo más preferiblemente entre aproximadamente 270 mOsm/kg y aproximadamente 300 mOsm/kg.
Generalmente, la diálisis se lleva a cabo durante de 6 h a 96 h, normalmente durante de aproximadamente 20 h a 50 h. El volumen del tampón de diálisis es comúnmente de al menos 50 veces, preferiblemente al menos 75 veces a 200 veces, el volumen de la muestra de gel que va a dializarse. Además, el tampón de diálisis se intercambia generalmente al menos una vez, habitualmente dos, tres, cuatro, cinco o seis veces, particularmente dos o tres veces. Otras condiciones adecuadas para la diálisis resultarán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica.
El relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) de la presente invención (es decir, el relleno dérmico de HA preparado según el primer aspecto y el segundo aspecto de la presente invención) contiene generalmente HA reticulado en una cantidad de entre 1 mg/ml y 50 mg/ml, preferiblemente entre 5 mg/ml y 40 mg/ml, más preferiblemente entre 10 mg/ml y 35 mg/ml, aún más preferiblemente entre 15 mg/ml y 30 mg/ml, y lo más preferiblemente entre 20 mg/ml y 25 mg/ml.
Preferiblemente, el método según el primer aspecto de la presente invención puede comprender además la etapa (c) de esterilización del gel de HA reticulado. Esta etapa puede llevarse a cabo sometiendo el gel de HA reticulado a esterilización por calor húmedo, tal como a una temperatura de 121 a 130 °C durante de 1 a 20 minutos, por ejemplo a 121 °C durante 5 minutos. Normalmente, el gel de HA reticulado se carga en una jeringa que luego se esteriliza como se describe. Los expertos en la técnica saben cómo seleccionar las condiciones de esterilización apropiadas para obtener el resultado deseado.
Además, el método de la presente invención puede comprender etapa(s) adicional(es) de adición de compuestos o sustancias opcionales que dan como resultado un relleno dérmico de HA que comprende dichos compuestos o sustancias opcionales. En particular, la composición de relleno dérmico de HA preparada según la presente invención (es decir, según el método del primer aspecto y segundo aspecto de la presente invención) puede comprender además HA no reticulado, por ejemplo, como lubricante para mejorar las propiedades reológicas del relleno, tal como para reducir su fuerza de extrusión. El peso molecular del HA no reticulado está preferiblemente entre 3,0 x 105 Da y 4,0 x 106 Da, en particular entre 1,0 x 106 Da y 3,0 x 106 Da.
La cantidad de HA no reticulado presente en el relleno dérmico no está específicamente limitada, sino que es preferiblemente de desde 0,001 mg/g hasta 100 mg/g, en particular de desde 0,1 mg/g hasta 50 mg/g, y más particularmente de desde 1 mg/g hasta 10 mg/g. Alternativamente, el relleno dérmico de la presente invención también puede estar libre de cualquier HA no reticulado añadido, es decir, estando desprovisto o esencialmente desprovisto de cualquier HA no reticulado.
Además, el material de relleno dérmico puede comprender opcionalmente un anestésico, particularmente un anestésico local. El anestésico se añade para reducir el dolor provocado por la inyección del relleno dérmico. Generalmente, la cantidad total de agente(s) anestésico(s) incluido(s) en el relleno dérmico está en el intervalo del 0,01 % en peso al 5 % en peso y, en particular, en el intervalo del 0,1 % en peso al 2 % en peso.
Los anestésicos locales adecuados para su uso en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, ambucaína, amolanona, amilocaína, benoxinato, benzocaína, betoxicaína, bifenamina, bupivacaína, butacaína, butambeno, butanilicaína, butetamina, butoxicaína, carticaína, cloroprocaína, cocaetileno, cocaína, ciclometicaína, dibucaína, dimetisoquina, dimetocaína, diperodón, diciclonina, ecgonidina, ecgonina, cloruro de etilo, etidocaína, beta-eucaína, euprocina, fenalcomina, formocaína, hexilcaína, hidroxitetracaína, p-aminobenzoato de isobutilo, mesilato de leucinocaína, levoxadrol, lidocaína, mepivacaína, meprilcaína, metabutoxicaína, cloruro de metilo, mirtecaína, naepaína, octacaína, ortocaína, oxetazaína, paretoxicaína, fenacaína, fenol, piperocaína, piridocaína, polidocanol, pramoxina, prilocaína, procaína, propanocaína, proparacaína, propipocaína, propoxicaína, pseudococaína, pirrocaína, ropivacaína, alcohol salicílico, tetracaína, tolicaína, trimecaína, zolamina, y sales de los mismos. También pueden usarse en el presente documento combinaciones de dos o más de los agentes anestésicos mencionados, por ejemplo, una combinación de lidocaína y otro(s) anestésico(s) de “-caína” como prilocaína.
Preferiblemente, el al menos un agente anestésico es lidocaína o una sal del mismo, tal como clorhidrato de lidocaína (lidocaína HCl). La concentración de lidocaína en el relleno dérmico descrito en el presente documento puede estar en el intervalo del 0,05 % en peso al 5 % en peso, por ejemplo, desde el 0,1 % en peso hasta el 2,0 % en peso o desde el 0,2 % hasta el 1,0 % en peso. Preferiblemente, la concentración de lidocaína es de aproximadamente el 0,3 % en peso.
La composición de relleno dérmico de la presente invención puede comprender además no más del 10 % en peso, por ejemplo, no más del 5 % en peso, de uno o más compuestos seleccionados del grupo que consiste en antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico y derivados del mismo, tocoferoles, carotenoides y derivados de los mismos, retinol, glutatión y ubiquinonas), aminoácidos (por ejemplo, prolina, lisina, arginina, leucina, isoleucina y metionina), sales metálicas (por ejemplo, una sal de zinc), partículas de hidroxiapatita (por ejemplo, partículas de hidroxiapatita cálcica, preferiblemente que tienen un diámetro medio de menos de aproximadamente 200 |im, por ejemplo, de 10 |im a 80 |im), polioles (por ejemplo, glicerol, manitol, sorbitol, propilenglicol, eritritol, xilitol, maltitol y lactitol), vitaminas (por ejemplo, vitamina C, vitamina E y vitaminas del grupo B), y uno o más polisacáridos reticulados y/o no reticulados distintos de HA (por ejemplo, heparosano o un derivado de celulosa como carboximetilcelulosa (CMC)). En una realización, la composición de relleno dérmico no contiene ninguno del uno o más compuestos mencionados en este párrafo.
En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un método para preparar un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
(a) proporcionar una composición que comprende agua, HA no reticulado y al menos un agente de reticulación de epóxido, y
(b) hacer reaccionar la composición en condiciones que permiten la reticulación del HA no reticulado para formar una composición a base de HA reticulado en forma de un gel,
en el que dicha composición comprende además al menos una sal de haluro de metal alcalino y fosfato. El fosfato se proporciona por al menos una sal de fosfato, y opcionalmente ácido fosfórico, y es una sal de fosfato de metal alcalino, una sal de fosfato de metal alcalinotérreo, o una combinación de las mismas. Preferiblemente, la sal de fosfato es una sal de fosfato de metal alcalino, y
en el que la cantidad de la al menos una sal de haluro de metal alcalino en la composición es menor del 0,5 % en peso y la cantidad de fosfato en la composición es desde el 0,001 % en peso hasta el 5 % en peso, calculándose la cantidad de fosfato como la cantidad total de dicha al menos una sal de fosfato y dicho ácido fosfórico opcional.
Los ejemplos de sales de fosfato de metal alcalino adecuadas para su uso en el presente documento incluyen sales de fosfato y litio, sodio, potasio, o una combinación de los mismos. Preferiblemente, la sal de fosfato de metal alcalino es una sal de fosfato y sodio, potasio, o una combinación de los mismos, en particular una sal de fosfato y sodio. La sal de fosfato de metal alcalinotérreo es preferiblemente una sal de fosfato de magnesio, calcio, o una combinación de los mismos.
Las sales de haluro de metal alcalino adecuadas para su uso en el presente documento incluyen aquellas en las que el metal alcalino de la sal de haluro es litio, sodio, potasio, o una combinación de los mismos, particularmente litio, sodio, o una combinación de los mismos, y más particularmente litio. El halógeno de sales de haluro adecuadas para su uso en el presente documento incluye flúor, cloro, bromo o yodo, o una combinación de los mismos, particularmente cloro, bromo, o una combinación de los mismos, más particularmente cloro. Se prefiere particularmente para su uso en el presente documento cloruro de litio (LiCl), cloruro de sodio (NaCl) y cloruro de potasio (KCl), o una combinación de los mismos. Lo más preferido es cloruro de litio (LiCl).
La cantidad de la al menos una sal de haluro en la composición proporcionada en la etapa (a) y/o sometida a reticulación en la etapa (b) es menor del 0,5 % en peso y puede menor del 0,45, 0,40, 0,30, 0,20 o 0,10 % en peso, particularmente menor del 0,09, 0,08, 0,07, 0,06 % en peso, más particularmente menor del 0,05, 0,04, 0,03, 0,02 o 0,01 % en peso. El límite inferior de la cantidad de la al menos sal de haluro en dicha composición no está específicamente limitado y pueden determinarlo fácilmente los expertos en la técnica. Por ejemplo, el límite inferior puede definirse como la cantidad de la al menos una sal de haluro que da como resultado un aumento en el módulo elástico (G') del relleno dérmico de HA reticulado final después de la esterilización de al menos un 5 %, en comparación con antes de la esterilización. El límite inferior puede ser, por ejemplo, el 0,001 % en peso o el 0,005 % en peso.
Preferiblemente, la cantidad de la al menos una sal de haluro está dentro del intervalo del 0,01 % en peso a menos del 0,5 % en peso, del 0,02 % en peso al 0,45 % en peso, del 0,03 % en peso al 0,4 % en peso, del 0,04 % en peso al 0,3 % en peso, del 0,05 % en peso al 0,2 % en peso, del 0,06 % en peso al 0,15 % en peso o del 0,07 % en peso al 0,10 % en peso.
La cantidad de fosfato en la composición proporcionada en la etapa (a) y/o sometida a reticulación en la etapa (b) es desde el 0,001 % en peso hasta el 5 % en peso, particularmente desde el 0,01 % en peso hasta el 2,5 % en peso, más particularmente desde el 0,1 % en peso hasta el 2,0 % en peso o desde el 0,25 % en peso hasta el 1,5 % en peso o desde el 0,5 % en peso hasta el 1,0 % en peso. Dentro del marco de la presente invención, la cantidad de fosfato se calcula como la cantidad total de dicha al menos una sal de fosfato y ácido fosfórico (fuente de fosfato) añadida a la composición.
En la etapa (b), la reticulación se lleva a cabo comúnmente en condiciones de una temperatura (T<x>) de al menos 25 °C, particularmente al menos 30 °C o al menos 40 °C, en donde la temperatura (T<x>) y el tiempo de reticulación (t<x>) satisfacen preferiblemente la ecuación: (T<x>)<2>t<x>= y, estando y en el intervalo de desde 2 x 10<4>(°C)<2>h hasta 2 x 10<5>(°C)<2>h, en particular en el intervalo de 1 x 10<4>(°C)<2>h a 3 x 10<5>(°C)<2>h. La temperatura de reticulación está preferiblemente en el intervalo de 25 °C a 70-80 °C, en particular en el intervalo de 30 °C a 60 °C, de 35 °C a 55 °C o de 40 °C a 50 °C. Además, el pH de reticulación puede ser al menos 10,0, al menos 11,0, al menos 12,0 o al menos 13,0.
La concentración de HA durante la reticulación (es decir, en la composición proporcionada en la etapa (a)) está normalmente entre 50 mg/ml y 150 mg/ml, particularmente entre 75 mg/ml y 125 mg/ml, más particularmente 100 mg/ml aproximadamente. El grado de reticulación, expresado como la razón en peso del agente de reticulación de epóxido (por ejemplo, BDDE) presente en la mezcla acuosa proporcionada en la etapa (a) y sometida a reticulación en la etapa (b) con respecto a las unidades de disacárido de repetición de HA presentes en la mezcla acuosa proporcionada en la etapa (a) y sometida a reticulación en la etapa (b) puede estar en el intervalo del 1 % al 20 % y habitualmente está en el intervalo del 4 % al 12 % o del 6 % al 10 %.
Después de la reticulación, la mezcla de reacción obtenida de la etapa (b) se neutraliza generalmente añadiendo una cantidad apropiada de una disolución acuosa que contiene un ácido o base. Por ejemplo, puede usarse una disolución de HCl en agua, tampón fosfato o solución salina tamponada con fosfato. Sin embargo, la etapa de neutralización también puede producirse simultáneamente con la purificación, tal como en el curso de la diálisis.
Opcionalmente, puede llevarse a cabo una etapa de hinchamiento antes de la purificación (y después de la etapa de neutralización, si está presente) en la que se permite que el gel de HA reticulado e hidratado se hinche en una disolución acuosa (por ejemplo en un tampón fosfato, especialmente en una solución salina tamponada con fosfato) durante un tiempo (por ejemplo, de 6 h a 50 h) y una temperatura (por ejemplo, de 2 °C a 8 °C) dados. Alternativamente, el hinchamiento no es una etapa separada, sino que puede producirse simultáneamente con la purificación, tal como durante la diálisis.
Como se mencionó anteriormente, la composición a base de HA reticulado obtenida de la etapa (b) generalmente se purifica, por ejemplo, por diálisis. En una variación del método según el segundo aspecto de la presente invención, el método puede comprender además, después de la etapa (b), la etapa (c) de dializar la composición a base de HA reticulado, en el que la diálisis se lleva a cabo a temperaturas elevadas de, por ejemplo, al menos 10 °C, al menos 15 °C, al menos 20 °C, al menos 25 °C o al menos 30 °C, particularmente a una temperatura de al menos 35 °C o al menos 40 °C, más particularmente a una temperatura de al menos 45 °C o al menos 50 °C. Todas las definiciones y explicaciones facilitadas anteriormente con respecto a la etapa de diálisis en relación con el primer aspecto de la presente invención se aplican igualmente en este caso en relación con el método según el segundo aspecto de la presente invención.
El método puede comprender además, después de la etapa (c), la etapa (d) de esterilización de la composición a base de HA reticulado. Esta etapa se logra comúnmente esterilizando con calor húmedo como se explica en relación con el método según el primer aspecto de la presente invención, por ejemplo, por autoclave en condiciones apropiadas, tal como a una temperatura de 121 a 130 °C durante de 1 a 20 minutos, por ejemplo a 121 °C durante 5 minutos.
Además, como se explicó anteriormente en relación con el método según el primer aspecto de la invención, el relleno dérmico puede contener opcionalmente uno o más compuestos adicionales, incluidos HA no reticulado, polisacáridos reticulados y/o no reticulados distintos de HA, anestésicos locales tales como lidocaína, antioxidantes, aminoácidos, sales metálicas, partículas de hidroxiapatita, polioles y vitaminas. Estos compuestos opcionales pueden añadirse al gel de HA reticulado en cualquier fase de proceso apropiada antes de la esterilización final, pero se añaden preferiblemente después de la diálisis y antes de la esterilización. Las explicaciones y definiciones facilitadas anteriormente con respecto a estos compuestos adicionales se aplican, cambiando lo que se tenga que cambiar, también al método según el segundo aspecto de la presente invención.
En un tercer aspecto, la presente invención se refiere a un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) preparado mediante el método según el primer aspecto y/o el segundo aspecto de la presente invención.
El relleno dérmico es preferiblemente una preparación de relleno dérmico que se ha esterilizado por calor húmedo, como se describió anteriormente en el presente documento. Las condiciones de esterilización por calor húmedo se seleccionan preferiblemente de modo que el relleno dérmico resultante sea estéril y sus propiedades reológicas no disminuyan indebidamente debido a la exposición a altas temperaturas. Por ejemplo, el módulo de elasticidad (G') después de la esterilización preferiblemente no disminuye en más del 60 %, el 50 % o el 40 %, y más preferiblemente no disminuye en más del 30 % o el 20 %, en comparación con el valor de G' antes de la esterilización.
En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un kit que comprende un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según el tercer aspecto de la presente invención, o preparado según el método del primer aspecto o segundo aspecto de la presente invención, y opcionalmente instrucciones de uso.
El kit comprende preferiblemente una jeringa precargada con el relleno dérmico de la presente invención. Las instrucciones de uso prescriben preferiblemente que el uso previsto del kit sea para aplicaciones cosméticas, en particular las descritas en el presente documento. El término “cosmético” se usa indistintamente en el presente documento con el término “estético”.
En un quinto aspecto, la presente invención se refiere al uso de un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la presente invención para aplicaciones cosméticas.
Las aplicaciones cosméticas a modo de ejemplo según la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aumento o relleno de arrugas y líneas de la piel, en particular de líneas faciales y arrugas faciales (por ejemplo, líneas glabelares, pliegues nasolabiales, pliegues de la barbilla, líneas de marioneta, comisuras bucales, arrugas periorales, arrugas perilabiales y patas de gallo). Otras aplicaciones cosméticas a modo de ejemplo incluyen el tratamiento de la región perioral, asimetrías faciales, líneas de mandíbula, barbilla, mejillas, nariz, labios y región infraorbital, así como mejorar la hidratación de la piel y/o la textura de la piel.
En un sexto aspecto, la presente invención se refiere a un método para reemplazar o rellenar un tejido biológico o aumentar el volumen de un tejido biológico con fines cosméticos, en particular para tratamientos cosméticos de líneas y arrugas de la piel, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz del relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la presente invención.
El término “cantidad eficaz”, como se usa en el presente documento, generalmente pretende referirse a la cantidad de la composición de relleno dérmico suficiente para efectuar los resultados cosméticos (estéticos) beneficiosos o deseados. Un “sujeto”, en el sentido de la presente invención, es cualquier individuo o paciente, habitualmente un ser humano, que necesita un tratamiento de una afección particular.
La composición de relleno dérmico de la presente invención se administra generalmente mediante inyección, más específicamente mediante inyección subcutánea o intradérmica, usando técnicas conocidas en la técnica, tales como la técnica de punción en serie. En particular, la composición de relleno dérmico puede inyectarse en la dermis y/o la hipodermis (del inglés,subcutis),preferiblemente en la dermis profunda y/o hipodermis superior.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran adicionalmente la presente invención.
Ejemplo 1
Módulo elástico aumentado (G') mediante el uso de tampón fosfato durante la síntesis
Se prepararon geles de HA añadiendo fibras de HA secas (Mw = 2,5 a 2,9 x 106 Da) en agua (gel A), un tampón bajo en fosfato (gel B) o un tampón alto en fosfato (gel C) (véase la tabla 1).
Tabla 1.
Las mezclas resultantes se mezclaron dos veces durante 60 min a 250 rpm y 50 °C. La temperatura se ajustó entonces a 5 °C, se añadió una solución de NaOH y las mezclas se mezclaron durante de 30 a 40 min a 250 rpm. A continuación, se añadió una disolución de BDDE al 6 % de NaOH en agua (gel A), tampón bajo en fosfato (gel B) o tampón alto en fosfato (gel C), seguido de mezclado durante de 10 a 15 min a 500 rpm.
Las mezclas de reacción resultantes tenían un pH de al menos 13, una concentración de HA de 117 mg/g y una cantidad de BDDE del 6 % en peso, basándose en el peso de HA seco (7 mg/g). Las mezclas de reacción de alto y bajo contenido de fosfato contenían además NaH2PO4-2 H<2>O (0,04 mg/g y 1,95 mg/g, respectivamente), Na2HPO4'2 H<2>O (0,19 mg/ml y 4,53 mg/ml, respectivamente) y NaCl (4,80 mg/g y 1,74 mg/g, respectivamente).
Entonces, la temperatura se ajustó a 34 °C, y se realizó un mezclado lento (100 rpm) hasta que se alcanzó la temperatura establecida de 34 °C. Las mezclas de reacción se dejaron reticular durante de 240 a 250 min a 34 °C. Los productos de torta resultantes se homogeneizaron y neutralizaron a pH de 7,0 a 7,4 usando una disolución de HCl en agua (gel A), tampón bajo en fosfato (gel B) o tampón alto en fosfato (gel C). Los geles neutralizados se extruyeron luego a través de un primer tamiz, se mezclaron durante 60 min a 250 rpm y 5 °C, se extruyeron a través de un segundo tamiz y luego se extruyeron a través de un tercer tamiz en membranas de diálisis.
Las membranas de diálisis se colocaron en un recipiente de tampón de diálisis bajo en fosfato (para todas las muestras, es decir, geles A, B y C) y se dializaron durante 40 h a una temperatura de 50+1 °C con tres intercambios de tampón. El tampón de diálisis bajo en fosfato corresponde al tampón bajo en fosfato definido anteriormente, excepto que el contenido de NaCl se adaptó de desde 5,7 g/l hasta 8,5 g/l para aumentar la osmolalidad a un valor fisiológico de 270 mOsm/kg. Se observa que la diálisis también puede realizarse a temperaturas más bajas (por ejemplo, 4 °C o 20 °C), aunque durante un tiempo prolongado, para obtener los mismos efectos de diálisis o similares.
Finalmente, los geles se retiraron entonces de las membranas de diálisis y se homogeneizaron mediante cribado. La concentración de HA de los geles finales fue de 23 mg/g. Los geles se cargaron luego en jeringas de vidrio BD de 1 ml y se esterilizaron por calor húmedo durante 4 minutos a 127 °C, dando como resultado los geles A, B y C.
Los parámetros reológicos (módulo elástico (G'), tangente de pérdida (tan 8 = G”/G') y viscosidad compleja (^*)) se determinaron usando un reómetro Anton Paar (MRC 302), equipado con una placa y una geometría de placa de 35 mm de diámetro y un hueco de 1 mm, en un intervalo de frecuencia de 10 a 0,1 Hz con un esfuerzo cortante de 5 Pa. Los valores reológicos indicados están a 1 Hz. Todas las mediciones se realizaron a una temperatura de 30 °C. Los resultados se resumen en la tabla 2. ;;Tabla 2. ; ;;; Ejemplo 2 ;;Mejora de G' mediante la adición de LiCI;;Se preparó un gel de HA (gel D) como se describió anteriormente para el gel C usando el tampón alto en fosfato (tampón alto en P) en la reacción de reticulación. Se preparó otro gel de HA (gel E) de la misma manera que para el gel D, excepto que se usó un tampón en la reacción de reticulación que era idéntico al tampón alto en fosfato pero que contenía adicionalmente cloruro de litio (LiCl) al 0,03 % (p/p). Los resultados de las mediciones reológicas se muestran en la tabla 3. ;;Tabla 3. ;;; ;;; Como resulta evidente a partir de la tabla 3, la adición de LiCl en una cantidad tan baja como el 0,03 % (p/p) conduce sorprendentemente a una mejora significativa de G'. ;;Por lo tanto, los resultados muestran que las propiedades reológicas de un gel de HA fabricado usando un tampón de reticulación alto en fosfato (véase el ejemplo 1) pueden mejorarse aún más por la presencia de bajas cantidades de una sal de haluro de metal alcalino durante la reticulación. Esto, a su vez, permite el uso de cantidades más bajas de BDDE para lograr las mismas propiedades reológicas o similares (por ejemplo, G'), dando como resultado cantidades más bajas de BDDE residual y productos de degradación del mismo en el producto de gel de HA reticulado. ;;Ejemplo 3 ;;Eliminación mejorada de BDDE residual;;Se preparó un gel de HA (gel F) como se describe en el ejemplo 1, excepto que se usó BDDE en una cantidad del 9 % y se usó el tampón alto en fosfato definido en la tabla 1 como tampón de diálisis. Con el gel de HA reticulado producido se llenaron membranas de celulosa (Spectrum, EE.UU.) que tenían un corte de peso molecular (MWCO) de 12-14 kDa, y una longitud de 80 cm y una anchura de 45 mm. La razón de llenado fue de 8,0 a 8,3 g de gel/cm de membrana. ;Las membranas llenadas se colocaron luego en una torre de diálisis (Spectrum, EE.UU.) llena de 6-7 l del tampón alto en fosfato mencionado anteriormente, conectada a un tanque de depósito lleno de 30 l del tampón alto en fosfato. El tampón se hizo circular continuamente a través de un baño de agua caliente usando una bomba peristáltica para ajustar la temperatura según se desee y se intercambió dos veces durante la diálisis. La diálisis se llevó a cabo durante 40 h a una temperatura de 40+1 °C (gel F1; cuatro mediciones) o 50+1 °C (gel F2; seis mediciones). ;;Como comparación, el gel de HA se pone en las mismas membranas de celulosa Spectrum mencionadas anteriormente con la misma razón de llenado y se somete a un procedimiento de diálisis estática estándar. Más específicamente, las membranas llenas de gel se colocaron en un recipiente lleno de 10 l de dicho tampón alto en fosfato y se dializaron durante 40 h a 5-8 °C. El tampón se intercambió dos veces. ;;El contenido de BDDE de los geles dializados se determinó por cromatografía de gases (GC) según procedimientos estándar. Los resultados se muestran en la tabla 4. ;;Tabla 4. ; ;;; Como puede observarse a partir de la tabla 4, la diálisis de flujo a temperaturas de 40 °C y 50 °C dio como resultado contenidos de BDDE drásticamente reducidos (reducción en aproximadamente un 87 % y 96 %, respectivamente) en comparación con la diálisis estándar. Notablemente, aumentar la temperatura de desde 40 °C hasta 50 °C dio como resultado una reducción adicional del contenido de BDDE de desde 36 ppm hasta 11 ppm, correspondiente a una disminución de aproximadamente un 69 %. También se obtuvieron resultados similares para la diálisis estándar al comparar el contenido residual de BDDE después de la diálisis a 40 °C y 5-8 °C, así como después de la diálisis a 50 °C y 40 °C (resultados no mostrados). ;;Sorprendentemente, los geles dializados a temperaturas elevadas de 40 °C, e incluso a 50 °C, no mostraron ningún signo de degradación potenciada, como puede deducirse del progreso de las propiedades reológicas (G', tan 8, q*), fuerza de extrusión, pH y osmolalidad a lo largo del tiempo. Las propiedades reológicas a lo largo del tiempo siguieron un perfil típico para geles de HA y permanecieron dentro de la especificación.
Por lo tanto, la diálisis a alta temperatura de la presente invención ofrece las ventajas de una velocidad y eficiencia de diálisis aumentadas. Esto permite acortar el tiempo de diálisis, dando como resultado un proceso de fabricación mejorado de geles de HA.

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    i.Método para preparar un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
    (a) proporcionar una composición a base de ácido hialurónico (HA) reticulado en forma de un gel, estando el HA reticulado con un agente de reticulación de epóxido, y
    (b) dializar el gel a base de HA reticulado, en el que la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 35 °C.
  2. 2. Método según la reivindicación 1, en el que la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 40 °C, particularmente a una temperatura de al menos 45 °C.
  3. 3. Método según la reivindicación 1 o 2, en el que la diálisis se lleva a cabo contra un tampón fosfato, particularmente un tampón fosfato que tiene un pH de desde 6,2 hasta 7,9, y en el que dicho tampón fosfato tiene preferiblemente una concentración de fosfato de 0,01 mM a 100 mM y/o contiene cloruro de sodio en una cantidad de tal manera que la osmolalidad del tampón fosfato está entre 220 mOsm/kg y 390 mOsm/kg.
  4. 4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende además, después de la etapa (b) , la etapa de:
    (c) esterilizar el gel a base de HA reticulado.
  5. 5. Método para preparar un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) que comprende las etapas de:
    (a) proporcionar una composición que comprende agua, HA no reticulado y al menos un agente de reticulación de epóxido, y
    (b) hacer reaccionar la composición en condiciones que permiten la reticulación del HA no reticulado para formar una composición a base de HA reticulado en forma de un gel,
    en el que dicha composición comprende además al menos una sal de haluro de metal alcalino y fosfato, proporcionándose el fosfato por al menos una sal de fosfato y opcionalmente ácido fosfórico, en el que la sal de fosfato es una sal de fosfato de metal alcalino, una sal de fosfato de metal alcalinotérreo, o una combinación de las mismas, y
    en el que la cantidad de la al menos una sal de haluro de metal alcalino en la composición es menor del 0,5 % en peso y la cantidad de fosfato en la composición es de desde el 0,001 % en peso hasta el 5 % en peso, calculándose la cantidad de fosfato como la cantidad total de dicha al menos una sal de fosfato y dicho ácido fosfórico opcional.
  6. 6. Método según la reivindicación 5, en el que el metal alcalino de la sal de haluro es litio, sodio, potasio, o una combinación de los mismos, y el halógeno de la sal de haluro es flúor, cloro, bromo o yodo, o una combinación de los mismos.
  7. 7. Método según la reivindicación 5 o 6, en el que la sal de fosfato de metal alcalino es una sal de fosfato y litio, sodio, potasio, o una combinación de los mismos, y la sal de fosfato de metal alcalinotérreo es una sal de fosfato de magnesio, calcio, o una combinación de los mismos.
  8. 8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que la cantidad de la al menos una sal de haluro de metal alcalino en la composición es menor del 0,1 % en peso, y/o en el que la cantidad de fosfato en la composición es de desde el 0,1 % en peso hasta el 2 % en peso, calculándose la cantidad de fosfato como la cantidad total de dicha al menos una sal de fosfato y dicho ácido fosfórico opcional.
  9. 9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, que comprende además, después de la etapa (b) , la etapa de:
    (c) dializar la composición a base de HA reticulado, en el que la diálisis se lleva a cabo a una temperatura de al menos 20 °C, particularmente a una temperatura de al menos 30 °C.
  10. 10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, que comprende además, después de la etapa (c) , la etapa de:
    (d) esterilizar la composición a base de HA reticulado.
  11. 11. Relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) preparado mediante el método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
  12. 12. Kit que comprende un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la reivindicación 11, y opcionalmente instrucciones de uso.
  13. 13. Uso de un relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la reivindicación 11 para aplicaciones cosméticas.
  14. 14. Método para reemplazar o rellenar un tejido biológico o aumentar el volumen de un tejido biológico con fines cosméticos que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz del relleno dérmico de ácido hialurónico (HA) según la reivindicación 11.
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