ES2988461T3 - Composición farmacéutica que comprende condroitinasa ABC liofilizada, envase y procedimiento de fabricación de los mismos - Google Patents

Composición farmacéutica que comprende condroitinasa ABC liofilizada, envase y procedimiento de fabricación de los mismos Download PDF

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Abstract

Se proporciona una composición farmacéutica que comprende una enzima glucolítica liofilizada que tiene un título excelente; y un envase que comprende dicha composición farmacéutica. Esta composición farmacéutica es una formulación de dosis unitaria que comprende una enzima glucolítica liofilizada que tiene un título de al menos 0,3 unidades/μg como ingrediente activo, y que contiene la enzima glucolítica en una cantidad de 2-8 μg. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Composición farmacéutica que comprende condroitinasa ABC liofilizada, envase y procedimiento de fabricación de los mismos
Campo técnico
La presente divulgación se refiere a una composición farmacéutica que incluye una enzima que degrada sacáridos como principio activo, a un envase que comprende la composición contenida en un recipiente y a un procedimiento para producirlos.
Técnica anterior
Las composiciones farmacéuticas que comprenden enzimas que degradan sacáridos como principios activos se emplean en diversos campos de enfermedades. Por ejemplo, se comercializan composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades lisosómicas, tales como Aldurazyme®, Elaprase®, Naglazyme®, Replagal® y Vimizim®, en donde los principios activos son enzimas que degradan sacáridos contenidas en aproximadamente 3 mg/vial a aproximadamente 10 mg/vial, en forma de preparados líquidos para inyección. Además, la publicación internacional n.°WO 2012/081227, por ejemplo, describe un agente terapéutico para la hernia discal que contiene una enzima que degrada sacáridos (en concreto, la condroitinasa ABC) como principio activo.
El documento EP 0875253 A2 describe composiciones farmacéuticas que contienen condroitasa y que presentan una pequeña disminución en la actividad enzimática después del almacenamiento a largo plazo.
El documento US 6001630 describe composiciones farmacéuticas que incluyen condroitasa y seroalbúmina, gelatina o un tensioactivo no iónico para tratar el desplazamiento de discos.
Sumario
Las preparaciones liofilizadas son mejores que las preparaciones líquidas desde el punto de vista de reducir el coste de distribución. Por otra parte, las valoraciones de la enzima a menudo se reducen significativamente debido a la liofilización e incluso en mayor medida si la enzima está presente en cantidad muy pequeña y, por esta razón, se han introducido algunas ideas en la producción de preparados liofilizados para poder obtener productos con la actividad enzimática deseada. Por ejemplo, los ejemplos de la publicación internacional n.° WO 2012/081227 describen un ejemplo en el que, teniendo en cuenta la drástica reducción de la valoración como resultado de la liofilización, se obtiene un preparado liofilizado mediante liofilización después de introducir en un recipiente la enzima en una cantidad mucho mayor al número de unidades necesarias para una única dosis. Como se describe en esta publicación, después de que el preparado liofilizado obtenido se haya disuelto y diluido, se separa la cantidad necesaria para la administración con el fin de preparar una disolución para la administración que contiene el componente activo en una cantidad necesaria para una única dosis.
En un procedimiento en el que, en primer lugar, se prepara un preparado liofilizado en una cantidad mucho mayor que la dosis unitaria y, a continuación, se separa una parte como dosis única, se desecha una gran cantidad restante de enzima que no se administra. Por tanto, hay casos en los que se desperdicia una gran cantidad restante de enzima cara.
Por tanto, un objeto de un aspecto de la presente divulgación consiste en proporcionar una composición farmacéutica que contiene una enzima que degrada sacáridos como principio activo, en donde se suprime la reducción en la valoración que es consecuencia de la preparación mediante liofilización.
Como resultado de intensas investigaciones del presente inventor teniendo en cuenta el problema mencionado anteriormente, se descubrió un medio para proporcionar una composición farmacéutica que contiene una enzima que degrada sacáridos en la que se suprime la reducción en la valoración antes y después de la liofilización y, por tanto, se completó el presente logro.
Un aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que es una formulación de dosis unitaria que contiene una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y que contiene la enzima en una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg, en donde la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento para producir un envase que comprende una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg, y un recipiente que contiene la composición farmacéutica, en donde el procedimiento comprende la etapa de introducir en el recipiente una disolución que comprende una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg de una enzima que degrada sacáridos, y una etapa de liofilizar la disolución, de modo que puede proporcionarse una dosis unitaria de la composición farmacéutica, en donde la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC.
Descripción de realizaciones
De acuerdo con un aspecto de la presente divulgación, es posible proporcionar una composición farmacéutica que contenga una enzima que degrada sacáridos liofilizada, en donde se suprime en gran medida la reducción en la valoración como consecuencia de la liofilización.
A continuación, la presente divulgación se describirá con detalle, entendiendo que la presente divulgación no se limita a las realizaciones descritas. Tal como se emplea en el presente documento, el término "etapa" se refiere no sólo a una etapa independiente, sino que también incluye cualquier etapa que no pueda distinguirse claramente de otras etapas, siempre que se logre el objetivo inicial de la etapa. Cuando están presentes en la composición múltiples sustancias que corresponden a cada componente, el contenido de cada componente en la composición significa el total de las múltiples sustancias en la composición, a menos que se indique lo contrario.
(1) Composición farmacéutica y envase
La composición farmacéutica es un preparado liofilizado que contiene una enzima que degrada sacáridos como principio activo. La composición farmacéutica es una formulación de dosis unitaria que contiene una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y que contiene la enzima que degrada sacáridos en una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg. Tal como se emplea en el presente documento, una "dosis unitaria" significa la cantidad necesaria preparada para una sola administración, estando la formulación de dosis unitaria formulada con la composición farmacéutica en la dosis unitaria. La dosis unitaria puede incluir una cantidad añadida necesaria para la preparación de una disolución de administración única, además de la dosis eficaz.
En esta composición farmacéutica, se suprime en gran medida la reducción de la valoración de la enzima que degrada sacáridos como consecuencia de la liofilización. También se suprime en gran medida la reducción de la valoración debida al almacenamiento. Además, puesto que la composición farmacéutica es un preparado liofilizado que se prepara antes de cada dosis unitaria, también es mejor desde el punto de vista de la comodidad, la higiene, la seguridad, etc., en un entorno médico.
El envase comprende al menos un recipiente y una composición farmacéutica contenida en el recipiente y, por tanto, presenta la composición farmacéutica contenida en el recipiente.
La "enzima que degrada sacáridos" es la condroitinasa ABC.
No existen restricciones concretas con respecto a la fuente de la enzima que degrada sacáridos. En una realización preferida, se emplea una enzima que degrada sacáridos microbiana. Por ejemplo, algunos ejemplos no restrictivos de microbios incluyen los que pertenecen al géneroBacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, Elizabethkingia, Streptomyces,etc. Cuando la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC, por ejemplo, un ejemplo de la misma puede ser una enzima derivada deProteus vulgaris(por ejemplo, la condroitinasa ABC deProteus vulgaris).
El procedimiento para producir la enzima que degrada sacáridos, etc., no presenta restricciones concretas. Un ejemplo de un procedimiento para producir la enzima que degrada sacáridos incluye una etapa de obtener un cultivo de microbios o células animales que producen la enzima que degrada sacáridos, y una etapa de recoger la enzima que degrada sacáridos del producto cultivado.
La enzima que degrada sacáridos producida por los microbios puede ser el producto original de los microbios o puede obtenerse tras modificar los microbios mediante un procedimiento de ingeniería genética, etc., como se describe a continuación, para producir la enzima diana. Por ejemplo, cuando la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC, ésta puede producirse cultivando un microbio, tal comoProteus vulgaris,o puede producirse mediante un procedimiento de ingeniería genética empleando un ADN que codifique la condroitinasa ABC, etc. La enzima que degrada sacáridos puede tener la misma secuencia de aminoácidos que el producto original del organismo, pero, como alternativa, puede contener una deleción, una sustitución y/o una adición, etc., de algunos de los aminoácidos, con la condición de que siga consiguiéndose el objetivo previsto del fármaco.
Algunos ejemplos de microbios pueden incluir, por ejemplo, microbios que pertenecen al géneroBacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, ElizabethkingiayStreptomyces.Los expertos en la materia pueden ajustar como deseen las condiciones de crecimiento para el microbio (por ejemplo, el medio de cultivo, las condiciones de cultivo, etc.), y se seleccionarán de modo adecuado en función del microbio utilizado. Al utilizar un microbio para producir la enzima que degrada sacáridos, se pueden producir cantidades mayores a menor coste que mediante la producción de la enzima que degrada sacáridos empleando células animales.
El procedimiento para producir la enzima que degrada sacáridos puede incluir una etapa de introducir en un hospedador un vector recombinante que exprese un gen que codifica la enzima que degrada sacáridos diana. El vector empleado puede ser, por ejemplo, un vector de expresión adecuado (un vector de fago, un vector plasmídico o similares) (preferentemente incluirá una secuencia reguladora, tal como un promotor), que pueda expresar el gen introducido. El vector se selecciona para que sea adecuado para las células hospedadoras. Más concretamente, algunos ejemplos de estos sistemas de hospedador-vector incluyen combinaciones deEscherichia coli (E. coli)con vectores de expresión de células procariotas, tales como la serie pET, pTrcHis, pGEX, pTrc99, pKK233-2, pEZZ18, pBAD, pRSET y pSE420; o combinaciones de células de mamífero, tales como células COS-7 o células HEK293, con vectores de expresión de células de mamífero, tales como la serie pCMV, la serie pME18S o pSVL; así como células hospedadoras de insecto, levadura yBacillus subtilis,etc., y sus diversos vectores correspondientes.
Además, en los vectores descritos anteriormente, se pueden usar vectores que se construyen para expresar proteínas de fusión de las proteínas codificadas por los genes transferidos, con péptidos marcadores o péptidos señal. Algunos ejemplos de dichos péptidos incluyen, por ejemplo, proteína A, la secuencia señal de la insulina, His, FLAG, CBP ("calmodulin-binding protein", proteína de unión a calmodulina), GST (glutatión-S-transferasa), etc. Independientemente del vector empleado, puede usarse un procedimiento habitual para el tratamiento con enzimas de restricción, etc., que consiga que se produzca el enlace posterior del inserto de secuencia de ácido nucleico y el vector y, en caso necesario, el enlace se producirá después de formar extremos romos o pegajosos.
La transformación del hospedador con el vector puede llevarse a cabo por medio de un procedimiento habitual. Por ejemplo, el vector puede introducirse en el hospedador mediante transformación, mediante un procedimiento que emplee un reactivo de transfección disponible en el mercado o mediante un procedimiento de DEAE-dextrano, un procedimiento de electroporación o un procedimiento con una pistola de genes, etc.
Las condiciones de crecimiento (medio de cultivo, condiciones de cultivo, etc.) de los microbios o células animales que producen la enzima que degrada sacáridos se seleccionan para que sean los adecuados para los microbios o células empleados. En el caso en que se empleeE. coli,por ejemplo, puede utilizarse un medio de cultivo preparado de modo adecuado con medio LB, etc., como componente principal. Además, por ejemplo, cuando se emplean células COS-7 como células hospedadoras, puede utilizarse medio DMEM con suero bovino fetal aproximadamente al 2 % (v/v) para el cultivo en condiciones de 37 °C.
La enzima que degrada sacáridos puede recogerse del producto del cultivo por medio de procedimientos conocidos para la extracción y purificación de proteínas, en función de la forma en que se ha producido la enzima que degrada sacáridos. Por ejemplo, cuando la enzima que degrada sacáridos se produce en forma soluble segregada hacia el medio (el sobrenadante del cultivo), el medio puede recogerse y usarse directamente como enzima que degrada sacáridos. Cuando la enzima que degrada sacáridos se produce en forma soluble segregada hacia el citoplasma, o en una forma insoluble (unida a la membrana), puede extraerse por medio de un procedimiento de tratamiento, tal como extracción con ruptura de las células, tal como un procedimiento con un dispositivo de cavitación de nitrógeno, homogeneización, un procedimiento de molino de esferas de vidrio, sonicación, un procedimiento de choque osmótico o un procedimiento de congelación-descongelación, o extracción con tensioactivos o una combinación de estos procedimientos. La enzima que degrada sacáridos también puede purificarse por medio de procesos convencionales y públicos de la técnica anterior, tales como desalado, fraccionamiento con sulfato de amonio, separación centrífuga, diálisis, ultrafiltración, cromatografía de adsorción, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía hidrófoba, cromatografía de fase inversa, cromatografía de permeación en gel, cromatografía de afinidad o electroforesis, o una combinación de estos procesos, etc.
La enzima que degrada sacáridos puede utilizarse por sí sola o en forma de una combinación de dos o más tipos diferentes. A la enzima que degrada sacáridos también se le pueden añadir grupos químicamente modificados, de conocimiento público en la técnica anterior, tal como mediante acetilación, polialquilenglicolación (por ejemplo, polietilenglicolación), alquilación, acilación, biotinilación, marcaje (por ejemplo, marcaje con una sustancia fluorescente, una sustancia luminiscente, etc.), fosforilación o sulfación.
La composición farmacéutica puede incluir un vehículo farmacéuticamente aceptable. Tal como se emplea en el presente documento, un "vehículo farmacéuticamente aceptable" suele ser un componente que se emplea habitualmente en fármacos, tal como un excipiente, un aglutinante, un agente tamponante, agua para inyección, un agente de ajuste de la tonicidad, un conservante o un agente calmante que se emplean habitualmente.
Algunos ejemplos de agentes tamponantes incluyen, por ejemplo, agentes tamponantes que contienen uno o más de entre ácido clorhídrico, hidróxido de sodio, carbonato de sodio, hidrogenocarbonato de sodio, ácido fosfórico, dihidrogenofosfato de potasio, hidrogenofosfato dipotásico, hidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato disódico, ácido aminoacético, benzoato de sodio, ácido cítrico, citrato de sodio, ácido acético, acetato de sodio, ácido tartárico, tartrato de sodio, ácido láctico, lactato de sodio, etanolamina, arginina, etilendiamina, etc., siendo preferidos el dihidrogenofosfato de sodio y el hidrogenofosfato disódico.
Algunos ejemplos de agentes de ajuste de la tonicidad incluyen cloruro de sodio, cloruro de potasio, glicerina, manitol, sorbitol, ácido bórico, bórax, glucosa, propilenglicol, etc.
Por ejemplo, algunos ejemplos específicos de otros vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen dextranos, sacarosa, lactosa, maltosa, xilosa, trehalosa, manitol, xilitol, sorbitol, inositol, seroalbúmina, gelatina, creatinina, polialquilenglicol, tensioactivos no iónicos (por ejemplo, éster de ácido graso de sorbitán polioxietilenado, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado, éster de ácido graso de sacarosa y polioxietilen-polioxipropilenglicol), etc., entre los cuales se prefieren la sacarosa y/o un polialquilenglicol, y se prefieren aún más la sacarosa y/o el polietilenglicol. El polietilenglicol preferentemente tiene un peso molecular promedio no inferior a 200 ni superior a 25000, y más preferentemente es sólido a temperatura normal, por ejemplo, con un peso molecular promedio no inferior a 2000 ni superior a 9000, y aún más preferentemente no inferior a 3000 ni superior a 4000. Algunos ejemplos de polietilenglicol pueden incluir, por ejemplo, polietilenglicol con un peso molecular promedio de 3250, 3350 y 4000. Cuando se emplea una mezcla de polietilenglicol y sacarosa como vehículo farmacéuticamente aceptable, se mezclan preferentemente de modo que la proporción en peso de polietilenglicol/sacarosa suela estar en el intervalo de 1/10 a 10/1, y más preferentemente de modo que la proporción en peso de polietilenglicol/sacarosa sea de aproximadamente 2/1.
Tal como se emplea en el presente documento, el "recipiente" no presenta limitaciones concretas, siempre que pueda contener la composición farmacéutica. Algunos ejemplos de recipientes incluyen jeringas, viales, ampollas, inyectores, etc., siendo preferidos los viales. El material del recipiente puede ser vidrio, plástico, etc., por ejemplo, siendo preferido el vidrio. El vidrio incluye vidrio de borosilicato, vidrio de cal sodada, etc., por ejemplo. El recipiente preferentemente también tiene un elemento de tapón o tapa y, más preferentemente, tiene un tapón de goma. No existen restricciones concretas con respecto al tamaño del recipiente, que puede ser no inferior a 0,5 ml ni superior a 100 ml, por ejemplo, preferentemente no inferior a 1 ml ni superior a 10 ml, más preferentemente no inferior a 2 ml ni superior a 4 ml, y aún más preferentemente de 3 ml. El envase que comprende la composición farmacéutica contenida en el recipiente puede encapsular un gas inerte, tal como gas nitrógeno o gas argón, o puede desairearse.
El contenido en agua del preparado liofilizad puede ser no superior al 5 % (p/p), por ejemplo, preferentemente no superior al 3 % (p/p), y más preferentemente no superior al 2 % (p/p). El "contenido en agua", tal como se emplea en el presente documento, es un valor medido mediante un procedimiento de valoración culombimétrico.
La presente divulgación se caracteriza porque la cantidad de enzima que degrada sacáridos por dosis unitaria de la composición farmacéutica no es inferior a 2,5 |jg ni superior a 5 |jg. Aunque una menor abundancia de enzima se corresponde, en general, con una reducción más acusada en la valoración antes y después de la liofilización, los presentes inventores han descubierto, sorprendentemente, que al limitar la cantidad de enzima que degrada sacáridos por dosis unitaria de la composición farmacéutica a un intervalo no inferior a 2,5 jg ni superior a 5 jg, se puede suprimir significativamente la reducción en la valoración antes y después de la liofilización. En una realización especialmente preferida, la cantidad de enzima que degrada sacáridos por dosis unitaria de la composición farmacéutica no es inferior a 3 jg ni superior a 5 jg.
En una realización preferida, la cantidad de enzima que degrada sacáridos contenida por recipiente no es inferior a 2,5 jg ni superior a 5 jg. En una realización especialmente preferida, la cantidad de enzima que degrada sacáridos contenida por recipiente no es inferior a 3 jg ni superior a 5 jg.
El término "valoración" significa la actividad enzimática (unidades) por 1 jg de enzima que degrada sacáridos y se expresa en la unidad de unidades/ug. En la presente divulgación, la valoración de la enzima que degrada sacáridos no es inferior a 0,3 (unidades/jg). En una realización, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,3 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg). En otra realización, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,32 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg). En otra realización más preferida, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,34 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg). En otra realización aún más preferida, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg). En otra realización especialmente preferida, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,38 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg).
En una realización, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,3 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg). En otra realización, la valoración de la enzima que degrada sacáridos liofilizada no es inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg).
La "unidad (U)" indica la actividad de la enzima que degrada sacáridos, siendo 1 U la cantidad que libera el equivalente a 1 micromol de producto de descomposición desde el sustrato por unidad de tiempo, en condiciones óptimas de temperatura y pH. Por ejemplo, cuando la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC, 1 unidad es la cantidad que libera 1 micromol del disacárido insaturado por minuto desde el sulfato de condroitina sódico (sulfato de condroitina sódico de acuerdo con la Farmacopea Japonesa 2002), en condiciones de pH 8,0, 37 °C.
En una realización, la actividad enzimática (actividad de la enzima que degrada sacáridos) por dosis unitaria no es inferior a 4 unidades, por ejemplo. En otra realización, la actividad enzimática por dosis unitaria no es inferior a 0,1 unidades ni superior a 4 unidades, por ejemplo. En una realización preferida, la actividad enzimática por dosis unitaria no es inferior a 0,5 unidades ni superior a 3 unidades. En una realización más preferida, la actividad enzimática por dosis unitaria no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 3 unidades, o no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 2,5 unidades. En otra realización preferida, la actividad enzimática por dosis unitaria no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 2 unidades, o no es inferior a 1,25 unidades ni superior a 2 unidades, o es de 1,5 unidades.
En una realización, la actividad enzimática por recipiente no es superior a 4 unidades, por ejemplo. En otra realización, la actividad enzimática por recipiente no es inferior a 0,1 unidades ni superior a 4 unidades, por ejemplo. En una realización preferida, la actividad enzimática por recipiente no es inferior a 0,5 unidades ni superior a 3 unidades. En una realización más preferida, la actividad enzimática por recipiente no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 3 unidades, o no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 2,5 unidades. En otra realización preferida, la actividad enzimática por recipiente no es inferior a 0,9 unidades ni superior a 2 unidades, o no es inferior a 1,25 unidades ni superior a 2 unidades (por ejemplo, 1,5 unidades).
De acuerdo con la presente divulgación, se proporciona una composición farmacéutica en forma de una formulación de dosis unitaria liofilizada que contiene una pequeña cantidad de enzima que degrada sacáridos (no inferior a 2,5 |jg ni superior a 5 |jg) en una valoración alta (no inferior a 0,3 unidades/ug).
La actividad enzimática de la enzima que degrada sacáridos contenida en la composición farmacéutica en forma de un preparado liofilizado puede ser, por ejemplo, no inferior al 75 %, preferentemente no inferior al 80 %, más preferentemente no inferior al 85 % y aún más preferentemente no inferior al 90 %, definiéndose la actividad enzimática antes de la liofilización como el 100%. Un valor del 100% significa que la actividad enzimática es la misma antes y después de la liofilización.
De acuerdo con una realización de la presente divulgación, es posible proporcionar una composición farmacéutica con una estabilidad durante el almacenamiento de 12 meses o más, por ejemplo. En una realización preferida, la composición farmacéutica tiene una estabilidad durante el almacenamiento de 24 meses o más y, en una realización más preferida, la composición farmacéutica tiene una estabilidad durante el almacenamiento de 36 meses o más. Aunque el límite superior de la estabilidad durante el almacenamiento no presenta limitaciones concretas, puede ser de 48 meses o menos (tal como de 36 meses o menos), por ejemplo.
En el presente documento, la frase "tiene una estabilidad durante el almacenamiento" significa que la valoración (%) después de un almacenamiento protegido de la luz en las condiciones prescritas (por ejemplo, 12 meses o más a 5 °C ± 3 °C, 6 meses o más a 25 °C ± 2 °C, o 3 meses o más o 6 meses o más a 40 °C ± 2 °C) se mantiene a un nivel farmacéuticamente aceptable. La "estabilidad durante el almacenamiento" en el presente documento se evalúa como la tasa de retención de la valoración (%), por ejemplo. Por ejemplo, la tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 12 meses o más a 5 °C ± 3 °C es, por ejemplo, no inferior al 90 %, y preferentemente no inferior al 95 %. La tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 24 meses o más a 5 °C ± 3 °C es, por ejemplo, no inferior al 90 %, y preferentemente no inferior al 95 %. La tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 36 meses o más a 5 °C ± 3 °C es, por ejemplo, no inferior al 90 %, y preferentemente no inferior al 95 %. La tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 6 meses o más a 25 °C ± 2 °C es, por ejemplo, no inferior al 90 %, y preferentemente no inferior al 95 %. La tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 3 meses o más a 40 °C ± 2 °C es, por ejemplo, no inferior al 90 %, y preferentemente no inferior al 95 %. La tasa de retención de la valoración tras el almacenamiento protegido de la luz de la muestra durante 6 meses o más a 40 °C ± 2 °C es, por ejemplo, no inferior al 65 %, preferentemente no inferior al 70 %, y más preferentemente no inferior al 75 %. La expresión "tasa de retención de la valoración (%)" significa el valor de la valoración (%) después del almacenamiento protegido de la luz de la composición farmacéutica o el envase de la presente divulgación en condiciones con una temperatura prescrita (5 °C ± 3 °C, 25 °C ± 2 °C o 40 °C ± 2 °C), calculada frente al 100 % que es la valoración al inicio del almacenamiento. Un valor del 100 % significa que la actividad enzimática es la misma antes y después del inicio del almacenamiento.
De acuerdo con una realización de la presente divulgación, es posible proporcionar una composición farmacéutica con una vida útil de 12 meses o más. En una realización preferida, la composición farmacéutica tiene una vida útil de 24 meses o más y, en una realización más preferida, la composición farmacéutica tiene una vida útil de 36 meses o más. Aunque el límite superior de la vida útil no presenta limitaciones concretas, puede ser de 48 meses o menos (tal como de 36 meses o menos), por ejemplo.
Tal como se emplea en el presente documento, la "vida útil" significa el periodo durante el cual se prevé que un fármaco presente la misma eficacia que el momento en que se confirma que presenta dicha eficacia, tras una conservación por medio de un procedimiento de almacenamiento específico (por ejemplo, protegido de la luz a 5 °C ± 3 °C, protegido de la luz a 25 °C ± 2 °C, o protegido de la luz a 40 °C12 °C).
Las referencias a la composición farmacéutica en el presente documento pueden incluir las "composiciones farmacéuticas contenidas en el recipiente". La composición farmacéutica contenida en el recipiente incluye una dosis unitaria de la enzima que degrada sacáridos.
El uso de la composición farmacéutica como se describe en el presente documento puede seleccionarse entre diversos usos conocidos para enzimas que degradan sacáridos. Por ejemplo, algunos ejemplos de usos de composiciones farmacéuticas que contienen enzimas que degradan sacáridos como principios activos pueden incluir, entre otros, el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular y lesiones de la médula espinal. En una realización preferida, la composición farmacéutica se emplea para el tratamiento de hernias. En una realización más preferida, se usa para el tratamiento de la hernia discal (por ejemplo, hernia del disco lumbar).
Tal como se emplea en el presente documento, un "tratamiento" incluye no solo la curación completa, sino también la mejoría de todos o algunos de los síntomas de una enfermedad, y la supresión (incluidos el mantenimiento y el freno de la progresión) de la progresión o la prevención de una enfermedad. En el presente documento, la prevención incluye prevenir la aparición de síntomas asociados con una enfermedad, cuando los síntomas no son manifiestos. La prevención también incluye, por ejemplo, prevenir la aparición de lesiones orgánicas o suprimir el desarrollo de síntomas que aún no se han manifestado, cuando los síntomas asociados con una enfermedad están presentes, aunque no haya lesiones orgánicas claras evidentes.
Las expresiones "como principio activo" y "dosis eficaz", tal como se emplean en el presente documento, significan una cantidad de un ingrediente adecuada para una proporción de riesgo/beneficio razonable, y suficiente para obtener la respuesta deseada sin excesivos efectos secundarios perjudiciales (toxicidad, irritación, etc.). Las expresiones "como principio activo" y "dosis eficaz" pueden variar en función de diversos factores, tales como los síntomas, la constitución física, la edad y el sexo del paciente que se va a tratar. Sin embargo, los expertos en la materia pueden determinar la dosis eficaz basándose en los resultados de uno o más ejemplos de ensayo específicos, junto con el conocimiento técnico general ordinario, sin tener que llevar a cabo un ensayo distinto para cada combinación de los diversos factores.
Tal como se emplea en el presente documento, un "paciente" significa un animal, y preferentemente un mamífero (por ejemplo, un ser humano, un ratón, una rata, un hámster, una cobaya, un conejo, un perro, un gato, un caballo, etc.), y más preferentemente un ser humano.
En una realización preferida, la composición farmacéutica contenida en el recipiente se proporciona en estado estéril. No existen restricciones concretas con respecto al procedimiento de esterilización para la composición farmacéutica y la esterilización puede llevarse a cabo con cualquier procedimiento conocido en la técnica anterior, tal como esterilización por filtración o esterilización con calor seco.
La forma de administración de la composición farmacéutica tampoco presenta restricciones concretas y puede seleccionarse en función de la enfermedad que se va a tratar, los síntomas, la gravedad, los atributos del paciente (por ejemplo, edad, etc.), etc. La preparación liofilizada puede emplearse en forma de disolución en cualquier disolvente deseado (por ejemplo, agua para inyección, solución salina fisiológica, etc.). La forma de administración puede ser por medio de cualquier vía de administración, tal como, por ejemplo, inyección intradiscal, inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección hipodérmica o infusión por goteo. Los expertos en la materia también pueden ajustar de modo adecuado la dosis de la composición farmacéutica en función de la enfermedad que se va a tratar, los síntomas, la gravedad, los atributos del paciente (por ejemplo, edad, etc.), etc.
A continuación, se describirán a modo de ejemplo modos específicos preferidos de la presente divulgación, entendiendo que no pretenden limitar el alcance técnico de la presente divulgación. Se puede explicar como ejemplo una composición farmacéutica para el tratamiento de la hernia discal, como se indica a continuación, aunque es normal que el uso de las composiciones farmacéuticas no tenga limitaciones.
(Composición farmacéutica 1)
Principio activo: Condroitinasa ABC
Cantidad de enzima por dosis unitaria: no inferior a 2 |jg ni superior a 7 |jg
Valoración de la enzima: no inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 1 (unidades/jg)
Actividad enzimática por dosis unitaria: no inferior a 0,9 unidades ni superior a 3 unidades
Aplicación: Hernia discal
(Composición farmacéutica 2)
Principio activo: Condroitinasa ABC
Cantidad de enzima por dosis unitaria: no inferior a 2 jg ni superior a 5 jg
Valoración de la enzima: no inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg)
Actividad enzimática por dosis unitaria: no inferior a 0,9 unidades ni superior a 2,5 unidades
Aplicación: Hernia discal
(Composición farmacéutica 3)
Principio activo: Condroitinasa ABC
Cantidad de enzima por dosis unitaria: no inferior a 2 |jg ni superior a 5 |jg
Valoración de la enzima: no inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg)
Actividad enzimática por dosis unitaria: no inferior a 0,9 unidades ni superior a 2 unidades
Aplicación: Hernia discal
(Composición farmacéutica 4)
Principio activo: Condroitinasa ABC
Cantidad de enzima por dosis unitaria: no inferior a 2 jg ni superior a 5 jg
Valoración de la enzima: no inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg)
Actividad enzimática por dosis unitaria: no inferior a 1,25 unidades ni superior a 2 unidades
Aplicación: Hernia discal
(Composición farmacéutica 5)
Principio activo: Condroitinasa ABC
Cantidad de enzima por dosis unitaria: no inferior a 3 jg ni superior a 5 jg
Valoración de la enzima: no inferior a 0,36 (unidades/jg) ni superior a 0,5 (unidades/jg)
Actividad enzimática por dosis unitaria: 1,5 unidades
Aplicación: Hernia discal
(2) Kit
En una realización, se proporciona un kit que contiene un envase que comprende la composición farmacéutica contenida en un recipiente, y un prospecto o etiqueta que explica el uso de la composición farmacéutica para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal.
Es suficiente que el kit contenga un envase que comprenda la composición farmacéutica contenida en un recipiente, y un prospecto o etiqueta que explique el uso de la composición farmacéutica para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal. En otras palabras, también puede contener otros componentes constituyentes.
(3) Procedimiento de producción
Un aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento para producir un envase que comprende una composición farmacéutica contenida en un recipiente, en donde la composición farmacéutica comprende una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/jg, incluyendo el procedimiento de producción una primera etapa de introducir en el recipiente una disolución que contiene una cantidad no inferior a 2,5 jg ni superior a 5 jg de una enzima que degrada sacáridos, y una segunda etapa de liofilizar la disolución para obtener una composición farmacéutica de una dosis unitaria, en donde la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC.
En la primera etapa, aunque el disolvente empleado para la preparación que contiene la enzima que degrada sacáridos no presenta limitaciones concretas, puede utilizarse, por ejemplo, una disolución tampón, tal como agua, solución salina fisiológica o tampón fosfato. La disolución también puede incluir un vehículo farmacéuticamente aceptable como se ha mencionado anteriormente. Aunque el pH de la disolución que contiene la enzima que degrada sacáridos contenida en el recipiente no presenta limitaciones concretas, preferentemente está en el intervalo de 6,5 o superior y 7,5 o inferior.
En una realización preferida, la solución que contiene la enzima que degrada sacáridos está contenida en el recipiente en la primera etapa para conseguir que la actividad enzimática por recipiente no sea superior a 4 unidades. En una realización más preferida, la solución está contenida en el recipiente para conseguir que la actividad enzimática por recipiente no sea inferior a 0,5 unidades ni superior a 4 unidades. En una realización aún más preferida, la solución está contenida en el recipiente para conseguir que la actividad enzimática por recipiente no sea inferior a 1 unidad ni superior a 3 unidades. En una realización especialmente preferida, la solución está contenida en el recipiente para conseguir que la actividad enzimática por recipiente no sea inferior a 1,25 unidades ni superior a 5 unidades.
La segunda etapa incluye una etapa de liofilización, en la que la solución que contiene la enzima que degrada sacáridos se congela y se elimina la humedad mediante sublimación mientras está en estado congelado para el secado. En la segunda etapa, el secado se lleva a cabo hasta que el contenido en agua de la composición farmacéutica después de la liofilización no sea superior al 5 % (p/p), por ejemplo. El secado en la segunda etapa se lleva a cabo preferentemente hasta que el contenido en agua de la composición farmacéutica después de la liofilización no sea superior al 3 % (p/p), y más preferentemente, el secado se lleva a cabo hasta que el contenido en agua no sea superior al 2 % (p/p).
El procedimiento de producción de acuerdo con la presente divulgación puede emplear directamente las descripciones, los ejemplos, los intervalos preferidos, etc., para "(1) composición y envase" descrito anteriormente o "(2) kit" descrito anteriormente.
Como otro modo, la presente descripción también incluye el uso de una formulación de dosis unitaria en la producción de una composición farmacéutica que se va a usar para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal, que es el uso de una formulación de dosis unitaria que contiene una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y que contiene la enzima que degrada sacáridos en una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg. Además, como otro modo, la presente descripción también incluye el uso de una formulación de dosis unitaria para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal, que es el uso de una formulación de dosis unitaria que contiene una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y que contiene la enzima que degrada sacáridos en una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg. Además, como otro modo, la presente descripción también incluye una formulación de dosis unitaria que se va a usar para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal, que es la formulación de dosis unitaria que contiene una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y que contiene la enzima que degrada sacáridos en una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg.
La presente divulgación también describe los siguientes puntos <1> a <24>. En este contexto, se enfatiza que el alcance de la protección es definido por las reivindicaciones adjuntas.
<1> Una composición farmacéutica que comprende una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y
la composición farmacéutica es una formulación de dosis unitaria en la que la cantidad de la enzima que degrada sacáridos no es inferior a 2 pg ni superior a 8 pg.
<2> La composición farmacéutica de acuerdo con el punto <1>, en donde la actividad enzimática no es superior a 4 unidades.
<3> La composición farmacéutica de acuerdo con los puntos <1> o <2>, en donde la actividad enzimática de la enzima que degrada sacáridos no es inferior al 75%, en donde el 100% se define como el valor anterior a la liofilización.
<4> La composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <3>, en donde la composición tiene una estabilidad durante el almacenamiento no inferior a 12 meses a 5 °C ± 3 °C.
<5> La composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <4>, en donde la enzima que degrada sacáridos es una enzima que degrada glucosaminoglucanos.
<6> La composición farmacéutica de acuerdo con el punto <5>, en donde la enzima que degrada glucosaminoglucanos es una condroitinasa.
<7> La composición farmacéutica de acuerdo con el punto <6>, en donde la condroitinasa es la condroitinasa ABC. <8> La composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <7>, en donde la composición farmacéutica incluye un vehículo farmacéuticamente aceptable.
<9> La composición farmacéutica de acuerdo con el punto <8>, en donde el vehículo incluye al menos cualquiera de un polialquilenglicol y sacarosa.
<10> La composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <9>, en donde la composición farmacéutica es para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal.
<11> Un envase que comprende la composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <10> contenida en un recipiente.
<12> El envase de acuerdo con el punto <11>, en donde el recipiente es un vial, una jeringa o una ampolla.
<13> Un kit que contiene un envase que comprende la composición farmacéutica de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <1> a <10> contenida en un recipiente, y un prospecto o etiqueta que explica el uso de la composición farmacéutica para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal.
<14> Un procedimiento para producir un envase que comprende un recipiente que contiene una composición farmacéutica, comprendiendo el procedimiento:
una etapa de introducir en el recipiente una disolución que comprende una cantidad no inferior a 2 |jg ni superior a 8 jg de una enzima que degrada sacáridos, y
una etapa de liofilizar la disolución para poder proporcionar una dosis unitaria de la composición farmacéutica.
<15> El procedimiento de producción de acuerdo con el punto <14>, en donde la composición farmacéutica comprende la enzima que degrada sacáridos con una valoración no inferior a 0,3 unidades/ug.
<16> El procedimiento de producción de acuerdo con los puntos <14> o <15>, en donde la actividad enzimática de la disolución contenida en el recipiente no es superior a 4 unidades.
<17> El procedimiento de producción de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <14> a <16>, en donde la actividad enzimática de la enzima que degrada sacáridos después de la liofilización no es inferior al 75 %, en donde el 100 % se define como la actividad enzimática antes de la liofilización.
<18> El procedimiento de producción de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <14> a <17>, en donde la enzima que degrada sacáridos es una enzima que degrada glucosaminoglucanos.
<19> El procedimiento de producción de acuerdo con el punto <18>, en donde la enzima que degrada glucosaminoglucanos es una condroitinasa.
<20> El procedimiento de producción de acuerdo con el punto <19>, en donde la condroitinasa es la condroitinasa ABC.
<21> El procedimiento de producción de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <14> a <20>, en donde la composición farmacéutica incluye un vehículo farmacéuticamente aceptable.
<22> El procedimiento de producción de acuerdo con el punto <21>, en donde el vehículo incluye al menos cualquiera de un polialquilenglicol y sacarosa.
<23> El procedimiento de producción de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <14> a <22>, en donde la composición farmacéutica es para el tratamiento de hernias, enfermedades lisosómicas, queloides, cicatrices hipertróficas, distrofia muscular o lesiones de la médula espinal.
<24> El procedimiento de producción de acuerdo con uno cualquiera de los puntos <14> a <23>, en donde el recipiente es un vial, una jeringa o una ampolla.
Ejemplos
La presente divulgación se describirá a continuación con más detalle. Sin embargo, esta descripción no pretende restringir el alcance técnico de la presente divulgación.
<Ejemplo de preparación>
1) Preparación de condroitinasa ABC
Se preparó la condroitinasa ABC de acuerdo con el procedimiento descrito en la solicitud de patente no examinada publicada japonesa n.° H6-153947. Es decir, se produjo mediante purificación a partir del sobrenadante de un cultivo deProteus vulgaris.La valoración de la condroitinasa ABC obtenida fuera de 0,4 U/jg.
2) Medición de la actividad enzimática y medición de la concentración de la condroitinasa ABC
Se midió la actividad enzimática de la condroitinasa ABC por medio del siguiente procedimiento.
La muestra de la enzima (condroitinasa ABC) se diluyó 4000 veces con reactivo de caseína al 0,01 % (p/v) (tampón fosfato 20 mM). A 100 j l de la muestra de la enzima diluida se le añadieron 400 j l de disolución de sustrato (sulfato de condroitina sódico 3 mg/ml (Farmacopea Japonesa), 2-amino-2-hidroximetil-1,3-propanodiol 50 mM, acetato de sodio 50 mM, pH 8) y se mezcló. Después de hacer reaccionar la disolución a 37 °C durante 20 minutos, se calentó durante 1 minuto en un baño de agua a 100 °C. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se añadieron 5,0 ml de ácido clorhídrico 0,05 M para preparar una disolución de muestra. Una condroitinasa ABC patrón se diluyó 400 veces con reactivo de caseína al 0,01 % (p/v). Se llevó a cabo el mismo procedimiento realizado para la preparación de la disolución de muestra con 100 pl de la disolución de patrón de condroitinasa ABC diluida para preparar una disolución patrón. Se llevó a cabo el mismo procedimiento realizado para la preparación de la disolución de muestra con 100 pl del reactivo de caseína al 0,01 % (p/v) para preparar una disolución de control. Se midió la absorbancia A<t>, A<s>y A<b>a una longitud de onda de 232 nm para la disolución de muestra, la disolución patrón y la disolución de control usando espectrofotometría de luz ultravioleta-visible, y se determinó la actividad enzimática de cada disolución (U/ml) por medio de la siguiente fórmula. En este caso, la actividad enzimática de la disolución es la actividad enzimática por unidad de volumen líquido.
Actividad enzimática de la disolución (U/ml) = (A<t>-A<b>)/(A<s>- A<b>)<x>4000/400 * Us
A<t>: Absorbancia de la disolución de muestra
A<b>: Absorbancia de la disolución de control
A<s>: Absorbancia de la disolución patrón
Us: Actividad enzimática de la disolución de condroitinasa ABC patrón (U/ml)
Se define 1 U (unidad) como el valor de actividad enzimática que cataliza una reacción que libera 1 micromol de disacárido insaturado en 1 minuto, en las condiciones de reacción especificadas anteriormente. Los valores de la actividad enzimática utilizados en el presente documento se determinaron basándose en la actividad enzimática de la solución.
La cantidad de enzima condroitinasa ABC (proteína, pg) se midió de acuerdo con el procedimiento de Lowry. Es decir, se añadieron y mezclaron 2,5 ml de reactivo de cobre alcalino con 0,5 ml de la muestra de la enzima (condroitinasa ABC) diluida 50 veces con agua pura, y la mezcla se dejó en reposo durante 10 minutos a temperatura ambiente (20 °C o superior y 25 °C o inferior). A continuación, se añadieron al líquido 0,25 ml de reactivo de fenol 1 mol/l y se dejó en reposo durante 30 minutos a temperatura ambiente para preparar una disolución de muestra. Se disolvió seroalbúmina bovina en agua para preparar una disolución con una concentración de 30 pg/ml, 40 ug/ml, 50 pg/ml, 60 pg/ml o 70 pg/ml, y se llevó a cabo el mismo procedimiento para la muestra de enzima diluida 50 veces con 0,5 ml de cada disolución para preparar una disolución patrón. También se llevó a cabo el mismo procedimiento para la muestra de enzima diluida 50 veces con 0,5 ml de agua para preparar una disolución de blanco. Se midió la absorbancia de cada disolución a una longitud de onda de 750 nm. La absorbancia y la concentración de proteínas de la disolución patrón se representaron gráficamente por medio de un procedimiento de regresión lineal para formar una curva patrón que se aproxima lo más posible a cada punto. Se determinó la cantidad de proteína en cada disolución de muestra a partir de la curva patrón obtenida y la absorbancia de la disolución de muestra.
3) Preparación de un tampón para la disolución de enzima
Se preparó un tampón para la disolución de enzima con la siguiente composición (por 1 l de agua destilada para inyección):
Hidrogenofosfato de sodio hidratado (hidrogenofosfato disódico): 1,125 mg
Dihidrogenofosfato de sodio: 0,3 mg
Sacarosa: 5 mg
Polietilenglicol 3350: 10 mg
pH: 6,5 o superior y 7,5 o inferior
<Ejemplo de ensayo 1>
Una disolución de condroitinasa ABC preparada empleando el tampón para la disolución de enzima se introdujo en viales de vidrio de 3 ml (producto de Schott AG) hasta alcanzar las siguientes cantidades de enzima.
Muestra 1: 1,3 pg/vial (0,5 U/vial)
Muestra 2: 2,5 pg/vial (1,00 U/vial)
Muestra 3: 5,0 pg/vial (2,00 U/vial)
Muestra 4: 9,1 pg/vial (3,63 U/vial)
La disolución de enzima contenida en cada vial se liofilizó (hasta alcanzar un contenido en agua no superior al 2 % (p/p)) en las siguientes condiciones. Después de la liofilización, se recuperó la presión dentro del vial con gas nitrógeno y se selló con un tampón de goma para obtener una formulación de dosis unitaria.
(Condiciones de liofilización)
Etapa 1: La temperatura se enfrió desde la temperatura ambiente hasta menos 35 °C a presión normal para congelar la muestra.
Etapa 2: En el estado de menos 35 °C de temperatura, la presión normal se mantuvo durante 30 minutos.
Etapa 3: En el estado de menos 35 °C de temperatura, se mantuvo un vacío de 13,3 Pa durante 5 horas.
Etapa 4: Mientras se mantenía un vacío de 13,3 Pa, la temperatura aumentó desde menos 35 °C a 25 °C.
Etapa 5: En el estado de 25 °C de temperatura, se mantuvo un vacío de 13,3 Pa durante 5 horas.
Cada vial se midió para determinar la actividad enzimática (U/dosis unitaria) después de la liofilización. También se calcularon la valoración (U/|jg) y la actividad enzimática relativa (la actividad enzimática después de la liofilización, en donde el 100 % se define como la actividad enzimática antes de la liofilización) (%). Los resultados se muestran en la tabla 1.
Los resultados de la tabla 1 demuestran que, al limitar la cantidad de enzima que degrada sacáridos por dosis unitaria a un intervalo específico (no inferior a 2,5 jg ni superior a 5 jg), se pudo proporcionar un preparado liofilizado con una titulación muy alta.
<Ejemplo de ensayo 2>
Se usó el tampón para la disolución de enzima para preparar una disolución de condroitinasa ABC. La disolución de enzima preparada se introdujo en un vial de vidrio de la misma manera que en el ejemplo de ensayo 1 para conseguir una cantidad de enzima de 1,5 U/vial, y se liofilizó (hasta alcanzar un contenido en agua no superior al 2 % (p/p)). Después de la liofilización, se recuperó la presión dentro del vial con gas nitrógeno y se selló con un tampón de goma para obtener una formulación de dosis unitaria.
Cada formulación de dosis unitaria obtenida se midió para determinar la actividad enzimática (U/vial) después de la liofilización. Como resultado, se determinó que se mantuvo una actividad enzimática de 1,5 U/vial incluso después de la liofilización.
<Ejemplo de ensayo 3>
Se obtuvo una formulación de dosis unitaria (1,5 U/vial) de acuerdo con el procedimiento del ejemplo de ensayo 1. La formulación de dosis unitaria obtenida se almacenó en las siguientes condiciones 1 o 2. Se determinó la valoración de la enzima después de cada periodo de almacenamiento.
Condiciones 1): 25 °C ± 2 °C, protegido de la luz
Condiciones 2): 5 °C ± 3 °C, protegido de la luz
Como resultado, se determinó que, en las condiciones 1, la tasa de retención de la valoración durante 1 mes, 3 meses y 6 meses desde el inicio del almacenamiento no fue inferior al 95 % con respecto al 100 % de la valoración al inicio del almacenamiento. En las condiciones 2, la tasa de retención de la valoración durante 3 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses y 36 meses desde el inicio del almacenamiento no fue inferior al 95%con respecto al 100%de la valoración al inicio del almacenamiento.
Aunque la presente invención se ha descrito con respecto a ejemplos específicos y diversas realizaciones, los expertos en la materia apreciarán con facilidad que pueden realizarse numerosas modificaciones y aplicaciones de las realizaciones descritas en el presente documento dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente japonesa n.° 2018-35884, que se presentó en la Oficina de Patentes de Japón el 28 de febrero de 2018.

Claims (8)

REIVINDICACIONES
1. Una composición farmacéutica que comprende una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/pg como principio activo, y
la composición farmacéutica es una formulación de dosis unitaria en la que la cantidad de la enzima que degrada sacáridos no es inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg,
en donde la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC.
2. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la actividad enzimática no es superior a 4 unidades.
3. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde la composición tiene una estabilidad durante el almacenamiento no inferior a 12 meses a 5 °C ± 3 °C.
4. La composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la composición comprende además al menos uno de sacarosa y polietilenglicol.
5. Un envase que comprende la composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 contenida en un recipiente.
6. Un procedimiento de producción de un envase que comprende una composición farmacéutica, en donde la composición farmacéutica comprende una enzima que degrada sacáridos liofilizada con una valoración no inferior a 0,3 unidades/ug, comprendiendo dicho procedimiento:
una etapa de introducir en el recipiente una disolución que comprende una cantidad no inferior a 2,5 pg ni superior a 5 pg de una enzima que degrada sacáridos, y
una etapa de liofilizar la disolución para poder proporcionar una dosis unitaria de la composición farmacéutica,
en donde la enzima que degrada sacáridos es la condroitinasa ABC.
7. El procedimiento de producción de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la actividad enzimática de la disolución que se va a introducir en el recipiente no es superior a 4 unidades.
8. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en donde la composición comprende además al menos uno de sacarosa y polietilenglicol.
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