ES2989088T3 - Forma de sal y forma de cristal que sirven como compuestos inhibidores de FGFR y VEGFR, y método de preparación de las mismas - Google Patents

Abstract

En la presente invención se describen una forma de sal y una forma de cristal que sirven como compuestos inhibidores de FGFR y VEGFR, un método de preparación para las mismas y usos médicos de las mismas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Forma de sal y forma de cristal que sirven como compuestos inhibidores de FGFR y VEGFR, y método de preparación de las mismas

Campo de la invención

La invención se refiere a la forma cristalina G que sirve como compuestos inhibidores de FGFR y VEGFR, y al método de preparación de la misma.

Técnicas anteriores

El factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) se ha reconocido como un mediador importante de muchos procesos fisiológicos, tales como la morfogénesis durante el desarrollo y la angiogénesis. La familia de receptores de factores de crecimiento de fibroblastos (FGFR) consiste en cuatro miembros (FGFR1-FGFR4), que son glicoproteínas compuestas de dominios extracelulares de tipo inmunoglobulina (Ig), una región transmembrana hidrófoba y una parte citoplásmica que contiene un dominio de tirosina quinasa. La unión a FGF conduce a la dimerización de FGFR, seguido de autofosforilación del receptor y activación de rutas de señalización aguas abajo. La activación del receptor es suficiente para la recuperación y activación de parejas de señalización aguas abajo específicas que participan en la regulación de diversos procesos tales como crecimiento celular, metabolismo celular y supervivencia celular. Por tanto, la ruta de señalización de FGF/FGFR tiene efectos pleiotrópicos sobre muchos procesos biológicos críticos para la proliferación, migración, invasión y angiogénesis de células tumorales.

Se conocen vinilindazoles en la técnica para el tratamiento del cáncer. Véanse, por ejemplo, los documentos WO0210137 y WO2003101968. También se conocen inhibidores de FGFR en la técnica. Véanse, por ejemplo, los documentos WO2002022598 y WO2017024968A1 que divulgan los compuestos de fórmulas (I) y (II) como se comenta a continuación.

Contenido de la presente invención

La presente invención se define por las reivindicaciones. Especialmente, la presente invención proporciona una forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1, un método de preparación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en la reivindicación 6, una forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) para su uso en un método de tratamiento de enfermedades relacionadas con inhibidores de tirosina quinasa como se define en la reivindicación 8, y una forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) para su uso en un método de tratamiento de un tumor como se define en la reivindicación 9.

La presente divulgación proporciona una forma cristalina A de un compuesto de fórmula (I) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 5,26±0,2°, 10,47±0,2° y 20,98±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 5,26±0,2°, 7,65±0,2°, 10,47±0,2°, 19,74±0,2°, 20,33±0,2°, 20,98±0,2°, 26,30±0,2° y 26,91±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina A puede ser como se muestra en la figura 1. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina A pueden ser como se muestra en la tabla 1:

Tabla 1: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I)

En la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina A puede tener un punto de inicio de un pico endotérmico a 42,97 °C ± 3 °C, 139,63 °C ± 3 °C y 203,56 °C ± 3 °C respectivamente, y tener un punto de inicio de un pico exotérmico a 147,45 °C ± 3 °C.

En la presente divulgación, el patrón de DSC de la forma cristalina A puede ser como se muestra en la figura 2. En la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina A puede tener una pérdida de peso del 7,074 % producida a 120,00 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 0,4317 % producida a 212,99 °C ± 3 °C. En la presente divulgación, el patrón de TGA de la forma cristalina A puede ser como se muestra en la figura 3. La presente divulgación proporciona una forma cristalina B del compuesto de fórmula (I) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 11,10±0,2°, 18,00±0,2° y 19,84±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 9,31±0,2°, 11,10±0,2°, 11,73±0,2°, 13,94±0,2°, 14,77±0,2°, 16,52±0,2°, 18,00±0,2° y 19,84±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina B puede ser como se muestra en la figura 4. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina B pueden ser como se muestra en la tabla 2:

Tabla 2: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I)

La presente divulgación proporciona una forma cristalina C del compuesto de fórmula (I) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 10,19±0,2°, 22,84±0,2° y 24,39±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 10,19±0,2°, 11,32±0,2°, 18,73±0,2°, 19,71±0,2°, 22,84±0,2°, 24,39±0,2°, 32,10±0,2° y 34,02±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina C puede ser como se muestra en la figura 5. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina C son como se muestran en la tabla 3:

Tabla 3: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I)

La presente divulgación proporciona una forma cristalina D del compuesto de fórmula (I) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 8,04±0,2°, 11,55±0,2° y 24,06±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina D puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 8,04±0,2°, 11,55±0,2°, 14,92±0,2°, 15,46±0,2°, 18,04±0,2°, 19,03±0,2°, 22,52±0,2° y 24,06±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina D puede ser como se muestra en la figura 6. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina D pueden ser como se muestra en la tabla 4:

Tabla 4: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina D del compuesto de fórmula (I)

La presente divulgación proporciona una forma cristalina E del compuesto de fórmula (I) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 5,30±0,2°, 15,93±0,2° y 18,79±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina E puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 5,30±0,2°, 10,62±0,2°, 11,16±0,2°, 14,47±0,2°, 15,93±0,2°, 17,33±0,2°, 18,79±0,2° y 32,16±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina E puede ser como se muestra en la figura 7. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina E pueden ser como se muestra en la tabla 5:

Tabla 5: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina E del compuesto de fórmula (I)

La presente divulgación se refiere a un compuesto de fórmula (II),

La presente divulgación proporciona una forma cristalina F del compuesto de fórmula (II) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,98±0,2°, 7,49±0,2° y 19,18±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina F puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,98±0,2°, 7,49±0,2°, 9,82±0,2°, 12,15±0,2°, 17,27±0,2°, 19,18±0,2°, 20,10±0,2° y 21,79±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina F puede ser como se muestra en la figura 8. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina F pueden ser como se muestra en la tabla 6:

Tabla 6: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II)

En la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina F puede tener un punto de inicio de un pico endotérmico a 172,07 °C ± 3 °C y 277,05 °C ± 3 °C respectivamente, y tener un punto de inicio de un pico exotérmico a 284,37 °C ± 3 °C.

En la presente divulgación, el patrón de DSC de la forma cristalina F puede ser como se muestra en la figura 9. En la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina F puede tener una pérdida de peso del 3,578 % producida a 153,13 °C ± 3 °C

En la presente divulgación, el patrón de TGA de la forma cristalina F puede ser como se muestra en la figura 10. La presente invención proporciona una forma cristalina G del compuesto de fórmula (II), en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 7,39±0,2°, 19,07±0,2° y 20,04±0,2°; en donde dicho patrón de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando rayos X K-alfa de cobre a una longitud de onda de 1,54056 Angstroms.

En algunas realizaciones de la presente invención, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina G comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 7,39±0,2°, 19,07±0,2°, 20,04±0,2°, 21,05±0,2°, 21,76±0,2°, 25,64±0,2°, 26,23±0,2° y 27,16±0,2°; en donde dicho patrón de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando rayos X K-alfa de cobre a una longitud de onda de 1,54056 Angstroms.

En algunas realizaciones de la presente invención, el patrón de XRPD de la forma cristalina G es como se muestra en la figura 11.

En algunas realizaciones de la presente invención, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina G son como se muestra en la tabla 7:

Tabla 7: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II)

En algunas realizaciones de la presente invención, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina G tiene un punto de inicio de un pico endotérmico a 278,70 °C ± 3 °C, y tiene un punto de inicio de un pico exotérmico a 285,46 °C ± 3 °C.

En algunas realizaciones de la presente invención, el patrón de DSC de la forma cristalina G es como se muestra en la figura 12.

En algunas realizaciones de la presente invención, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina G tiene una pérdida de peso del 3,870 % producida a 120 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 1,170 % producida a 221,76 °C ± 3 °C.

En algunas realizaciones de la presente invención, el patrón de TGA de la forma cristalina G es como se muestra en la figura 13.

La presente divulgación proporciona una forma cristalina H del compuesto de fórmula (II) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,95±0,2°, 7,30±0,2° y 19,01±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina H puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,95±0,2°, 7,30±0,2°, 11,99±0,2°, 14,36±0,2°, 16,66±0,2°, 18,26±0,2°, 19,01±0,2° y 21,49±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina H puede ser como se muestra en la figura 14. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina H pueden ser como se muestra en la tabla 8:

Tabla 8: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II)

En la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina H puede tener un punto de inicio de un pico endotérmico a 172,97 °C ± 3 °C y 277,33 °C ± 3 °C respectivamente, y tener un punto de inicio de un pico exotérmico a 283,38 °C ± 3 °C.

En la presente divulgación, el patrón de DSC de la forma cristalina H puede ser como se muestra en la figura 15. En la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina H puede tener una pérdida de peso del 0,8819 % producida a 120 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 2,892 % producida a 206,30 °C ± 3 °C. En la presente divulgación, el patrón de TGA de la forma cristalina H puede ser como se muestra en la figura 16. La presente divulgación se refiere a un compuesto de fórmula (III),

La presente divulgación proporciona una forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 6,73±0,2°, 11,66±0,2° y 19,51±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina I puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 6,73±0,2°, 11,66±0,2°, 14,28±0,2°, 14,99±0,2°, 16,39±0,2°, 19,51±0,2°, 23,34±0,2° y 25,61±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina I puede ser como se muestra en la figura 17. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina I pueden ser como se muestra en la tabla 9:

Tabla 9: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (II)

En la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina I puede tener un punto de inicio de un pico endotérmico a 32,94 °C ± 3 °C y 204,62 °C ± 3 °C, respectivamente.

En la presente divulgación, el patrón de DSC de la forma cristalina I puede ser como se muestra en la figura 18. En la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina I puede tener una pérdida de peso del 0,8601 % producida a 85,39 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 2,264 % producida a 184,93 °C ± 3 °C. En la presente divulgación, el patrón de TGA de la forma cristalina I puede ser como se muestra en la figura 19. La presente divulgación se refiere a un compuesto de fórmula (IV),

La presente divulgación proporciona una forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) que no es parte de la presente invención, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo del mismo comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,99±0,2°, 11,32±0,2° y 19,95±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina J puede comprender picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 4,99±0,2°, 6,90±0,2°, 9,9±0,2°, 10,73±0,2°, 11,32±0,2°, 14,41±0,2°, 16,73±0,2° y 19,95±0,2°.

En la presente divulgación, el patrón de XRPD de la forma cristalina J puede ser como se muestra en la figura 21. En la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina J pueden ser como se muestra en la tabla 10:

Tabla 10: Datos de difracción de XRPD de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV)

En la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina J puede tener un punto de inicio de un pico endotérmico a 33,34 °C ± 3 °C y 194,84 °C ± 3 °C, respectivamente.

En la presente divulgación, el patrón de DSC de la forma cristalina J puede ser como se muestra en la figura 22. En la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina J puede tener una pérdida de peso del 1,357 % producida a 120 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 0,8330 % producida a 177,11 °C ± 3 °C. En la presente divulgación, el patrón de TGA de la forma cristalina J puede ser como se muestra en la figura 23. La presente divulgación proporciona un método de preparación de las formas cristalinas A, B, C, D, E, F, H, I y J de un compuesto de fórmula (I), (II), (III) o (IV), que no es parte de la presente invención, que comprende añadir el compuesto de fórmula (I), (II), (III) o (IV) a un disolvente respectivamente; y calentar y agitar, o recristalizar.

En la presente divulgación, el disolvente puede seleccionarse de metanol, etanol, acetona, tetrahidrofurano, acetato de etilo, acetato de etilo-etanol, isopropanol o etanol-agua.

En la presente divulgación, la agitación puede realizarse a una temperatura de 35 °C a 45 °C.

En la presente divulgación, el tiempo de suspensión puede ser de 12 horas a 36 horas.

En la presente divulgación, la razón en peso del compuesto con respecto al disolvente puede ser de 1:10 a 1:15. La presente invención proporciona un método de preparación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II), que comprende añadir el compuesto de fórmula (I) en etanol, añadir ácido clorhídrico/acetato de etilo gota a gota a la botella de reacción, calentar y agitar, enfriar hasta temperatura ambiente y filtrar.

En algunas realizaciones de la presente divulgación, el calentamiento y la agitación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) se realiza a una temperatura de 85 °C a 95 °C.

En algunas realizaciones de la presente invención, la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) es para su uso en un método para tratar enfermedades relacionadas con inhibidores de tirosina quinasa.

En algunas realizaciones de la presente invención, la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II), para su uso en un método para tratar un tumor.

Definiciones y explicaciones

A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y frases usados en el presente documento pretenden tener los siguientes significados. Un término o frase específica no debe considerarse indefinido o poco claro en ausencia de una definición particular, sino que debe entenderse en el sentido ordinario. Cuando aparece un nombre comercial en la presente memoria, se pretende que se refiera a su correspondiente producto o principio activo del mismo.

Los compuestos intermedios de la presente divulgación pueden prepararse mediante diversos métodos de síntesis conocidos por los expertos en la técnica, incluidas las realizaciones y realizaciones de referencia descritas a continuación, los métodos formados combinando las realizaciones y realizaciones de referencia descritas a continuación con otros métodos de síntesis química, y alternativas equivalentes bien conocidas por los expertos en la técnica.

Las reacciones químicas de las realizaciones y realizaciones de referencia de la presente divulgación se llevan a cabo en un disolvente adecuado, y el disolvente debe ser adecuado para el cambio químico, y los reactivos y materiales requeridos para ello de la presente divulgación. Para obtener los compuestos de la presente divulgación, a veces es necesario para los expertos en la técnica modificar o seleccionar las etapas de síntesis o esquemas de reacción basándose en las realizaciones existentes y realizaciones de referencia.

La presente invención se describirá específicamente a continuación por medio de realizaciones.

Todos los disolventes usados en la presente divulgación están disponibles comercialmente y pueden usarse directamente sin purificación adicional.

La presente divulgación emplea las siguientes abreviaturas: t.a. representa temperatura ambiente; THF representa tetrahidrofurano; NMP representa W-metilpirrolidona; MeSO<3>H representa ácido metanosulfónico; DME representa dimetoxietano; DCM representa diclorometano; Xphos representa 2-diciclohexilfosfo-2',4',6'-triisopropilbifenilo; EtOAc representa acetato de etilo; MeOH representa metanol; acetona representa propanona; 2-Me-THF representa 2-metiltetrahidrofurano; IPA representa isopropanol; m-CPBA representa ácido 3-cloroperoxibenzoico; Pd(dppf)Cl<2>representa dicloruro de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio; DIEA representa W,W-diisopropiletilamina; DMSO representa dimetilsulfóxido; HEPES representa ácido 2-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]etanosulfónico; EGTA representa ácido etilenglicol bis(2-aminoetil éter)tetraacético; THP representa tetrahid ropiranilo.

Los compuestos se nombran manualmente o mediante el software ChemDraw® y los compuestos disponibles comercialmente usan sus nombres de directorio de vendedor.

Método de difractómetro de rayos X de polvo (XRPD) de la presente divulgación

Modelo de instrumento: difractómetro de rayos X Bruker D8 advance

Método de detección: se usaron aproximadamente 10-20 mg de la muestra para la detección por XRPD.

Los parámetros de XRPD detallados fueron los siguientes:

Tubo de rayos X: Cu, ka, ( l = 1,54056 Á).

Tensión del tubo de rayos X: 40 kV, corriente del tubo de rayos X: 40 mA

Ranura de divergencia: 0,60 mm

Rendija de detector: 10,50 mm

Rendija antidispersión: 7,10 mm

Intervalo de exploración: 4-40 grados

Tamaño de etapa: 0,02 grados

Tiempo de etapa: 0,12 segundos

Velocidad de rotación de la bandeja de muestras: 15 rpm

Método de calorímetro diferencial de barrido (DSC) de la presente divulgación

Modelo de instrumento: calorímetro diferencial de barrido TA Q2000

Método de detección: las muestras (aproximadamente 1 mg) se colocaron en un crisol de aluminio de DSC para la detección, y se calentaron de 30 °C (temperatura ambiente) a 300 °C (o 350 °C) con una velocidad de calentamiento de 10 °C/min en condiciones de 50 ml/min de N<2>.

Método de analizador termogravimétrico (TGA) de la presente divulgación

Modelo de instrumento: analizador termogravimétrico TA Q5000IR

Método de detección: las muestras (de 2 mg a 5 mg) se colocaron en un crisol de platino de TGA para la detección, y se calentaron con una velocidad de calentamiento de 10 °C/min en condiciones de 25 ml/min de N<2>de temperatura ambiente a 300 °C o hasta que se perdió el 20 % en peso de las mismas.

Sorción dinámica de vapor (DVS) de la presente divulgación

Modelo de instrumento: Analizador de sorción dinámica de vapor SMS DVS Advantage

Condiciones de detección: las muestras (de 10 mg a 15 mg) se colocaron en una bandeja de muestras de DVS para la detección.

Los parámetros detallados de DVS son los siguientes:

Temperatura: 25 °C

Equilibrio: dm/dt = 0,01 %/min (más corto: 10 min, más largo: 180 min)

Secado: 120 minutos a 0 % de HR

Gradiente de HR (%) para los ensayos: 10 %

Intervalo de HR (%) para los ensayos de gradiente: 0 %-90 %-0 %

La higroscopicidad se evaluó usando las siguientes escalas:

* Ganancia de peso higroscópico a 25 ± 1 °C y 80 ± 2 % de HR ;;Cromatógrafo de líquidos de alto rendimiento (HPLC) ;Las condiciones de cromatografía para el método de análisis del contenido del compuesto son como se muestra en la tabla 11. ;Tabla 11: Método de análisis por HPLC para detectar el contenido ;; ; Efecto técnico ;Los compuestos de la presente divulgación tienen una excelente actividad inhibidora de la quinasa FGFR1 y actividad inhibidora de células SNU-16in vitro, y pueden usarse como inhibidor de tirosina quinasa de molécula pequeña; pueden inhibir la proliferación celular y la angiogénesis, tienen una excelente actividad antitumoral y tienen un excelente efecto en el tratamiento de diversos mamíferos (incluidos seres humanos). ;Los datos de solubilidad de las sales de la presente divulgación muestran que el clorhidrato tiene la mayor solubilidad en la fase acuosa, y las tres sales tienen una solubilidad similar en el fluido intestinal simulado y el fluido gástrico simulado; y la base libre tiene una buena solubilidad en los tres vehículos biológicos, pero es extremadamente difícil de disolver en agua. Las formas cristalinas G, I y J (las formas cristalinas I y J no son parte de la presente invención) tienen una excelente estabilidad térmica y estabilidad en condiciones aceleradas, generan ligeras impurezas en condiciones de irradiación de luz y presentan buena estabilidad en condiciones de oscuridad. ;Breve descripción de los dibujos ;Figura 1: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I). Figura 2: el patrón de DSC de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I). ;Figura 3: el patrón de TGA de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I). ;Figura 4: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I). Figura 5: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I). Figura 6: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina D del compuesto de fórmula (I). Figura 7: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina E del compuesto de fórmula (I). Figura 8: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II). Figura 9: el patrón de DSC de la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II). ;Figura 10: el patrón de TGA de la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II). ;Figura 11: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II). Figura 12: el patrón de DSC de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II). ;Figura 13: el patrón de TGA de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II). ;Figura 14: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II). Figura 15: el patrón de DSC de la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II). ;Figura 16: el patrón de TGA de la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II). ;Figura 17: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III). Figura 18: el patrón de DSC de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III). ;Figura 19: el patrón de TGA de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III). ;Figura 20: la isoterma de DVS de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III). ;Figura 21: el patrón de XRPD medido por radiación Cu-Ka de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV). Figura 22: el patrón de DSC de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV). ;Figura 23: el patrón de TGA de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV). ;Figura 24: la isoterma de DVS de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV). ;Nota: las figuras 1-10 y 14-24 son solamente para referencia y no son parte de la presente invención. ;Descripción detallada de la realización preferida ;Para comprender mejor el contenido de la presente divulgación, las siguientes realizaciones y realizaciones de referencia ilustran adicionalmente la presente divulgación. ;Síntesis de la realización de referencia 1 ;;Nota: Las realizaciones 1A a 1L son solo para referencia y no son parte de la presente invención ;;; ;;; Realización 1A ;;; ;;; A una solución de 6-carboxilato de metilo-1-picolina (20 g, 0,13 mol) en W,A/-dimetilsulfóxido (200 ml) se le añadieron yodo (33,5 g, 0,13 mmol) y ácido trifluoroacético (35,3 ml, 0,4 mmol) a 0 °C. La mezcla obtenida se agitó durante 1 hora y después se calentó hasta 140 °C y se agitó durante 2,5 horas. Después de enfriarse hasta 0 °C, la reacción se terminó con una solución saturada de tiosulfato de sodio (30 ml) y se agitó durante 30 minutos. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (150 mlx3) y las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera saturada (50 mlx2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron, se concentraron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice para obtener la realización 1A. 1H-RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm: 10,14 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,47 (dd, J= 1,3, 8,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,0 Hz, 1H), 4,05 3,94 (s, 3H). ;;Realización 1B ;;; ;;; A una solución de la realización 1A (20 g, 120 mmol) en ortoformiato de trimetilo (400 ml) se le añadió lentamente ácido fórmico (40 ml) gota a gota a 0 °C. La mezcla obtenida se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, seguido de la adición gota a gota de ácido sulfúrico concentrado (1,2 ml). Después de la adición, la mezcla se calentó hasta 50 °C y se agitó durante 30 minutos, después se enfrió hasta 25 °C y se agitó durante 3 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió a agua (100 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 mlx2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener la realización 1B, que se usó directamente en la siguiente etapa. ;;Realización 1C ;;; ;;; A una solución de la realización 1B (8 g, 38 mmol) en tetrahidrofurano (120 ml) se le añadió hidruro de litio y aluminio (4,4 g, 114 mmol) en porciones a 0 °C bajo la protección de nitrógeno. Después de la adición, la mezcla obtenida se agitó durante 1 hora a esta temperatura. La reacción se terminó con agua (4,4 ml) e hidróxido de sodio al 15 % (4,4 ml) seguido de agua (13,2 ml), se agitó durante 30 minutos, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener la realización 1C, que se usó directamente en la siguiente etapa. ;Realización 1D ;;; ;;; A una solución de la realización 1C (5 g, 27 mmol) en diclorometano (120 ml) se le añadió dióxido de manganeso (19 g, 216 mmol) y después la mezcla obtenida se calentó hasta 40 °C y se agitó durante 16 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice para obtener la realización 1D. 1H-RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ppm 10,1 (s, 1H), 9,04-9,13 (m, 1H), 8,22 (dd, J= 2,01,8,03 Hz, 1H), 7,75 (d, J=8,03 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 3,43 (s, 6H). ;;Realización 1E ;;; ;;; A una solución de la realización 1D (2,7 g, 5 mmol) en tetrahidrofurano (80 ml) se le añadió hidruro de sodio (600 mg, 60 %, 14,5 mmol) en porciones a 5 °C bajo atmósfera de nitrógeno. Después de la adición, la mezcla se agitó durante 30 minutos a esta temperatura, se añadió a la misma la realización 1J (2 g, 10,6 mmol), y la mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó durante 16 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se vertió en agua con hielo (50 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (40 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (20 mlx2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna para obtener la realización 1E. ;;Esta mezcla se resolvió por HPLC quiral para obtener isómeros cis y trans, columna quiral: Chiralcel OD-3 150x4,6 mm D.I., 3 mm, fase móvil: etanol (DEA al 0,05 %)-CO<2>, del 5 % al 40 %, caudal: 2,5 ml/min, longitud de onda: 220 nm. ;Realización 1F ;;; ;;; A una solución mixta de la realización 1E (900 mg, 1,53 mmol) en acetona (4 ml) y agua (4 ml) se le añadió ácido ptoluenosulfónico monohidratado (291 mg, 1,53 mmol) a temperatura ambiente. La solución de reacción se calentó hasta 50 °C y se agitó durante 10 horas. Después de la finalización de la reacción, se añadió agua (4 ml) y se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para obtener la realización 1F como un sólido amarillo. CLEM (IEN) m/z: 541 [M+1]+. ;Realización 1G ;;; ;;; A una solución de la realización 1F (850 mg, 1,57 mmol) en metanol (8 ml) se le añadió borohidruro de sodio (119 mg, 3,14 mmol) en porciones en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La solución de reacción se agitó durante 1 hora. Se añadió agua (30 ml) para terminar la reacción y se añadió acetato de etilo (40 mlx3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera saturada (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron para obtener la realización 1G como un líquido amarillo. CLEM (IEN) m/z: 543 [M+1]+. ;;Realización 1H ;;; ;;; A una solución de la realización 1G (900 mg, producto en bruto) en metanol (2 ml) se le añadió una solución recién preparada de cloruro de acetilo (2 ml) en metanol (6 ml) a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno. La solución de reacción se agitó a 40 °C durante 3 horas. El disolvente se retiró a presión reducida para obtener la realización 1H en forma de un sólido de color amarillo. CLEM (IEN) m/z: 459 [M+1]+. ;;Realización 1I ;;; ;;; A una solución de la realización 1H (748 mg, 1,63 mmol) en diclorometano (12 ml) se le añadieron trietilamina (495 mg, 4,89 mmol), dicarbonato de di-terc-butilo (356 mg, 1,63 mmol) y DMAP (20 mg, 0,16 mmol). La solución de reacción obtenida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de la finalización de la reacción, la mezcla se ajustó a aproximadamente pH de 7 con ácido clorhídrico 1 M y se extrajo con diclorometano (20 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron, y se lavaron con salmuera saturada (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron, y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice para obtener la realización 11 en forma de un sólido de color amarillo. CLEM (IEN) m/z: 559 [M+1]+. ;Realización 1J ;;; ;;; A una solución de la realización 11 (280 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (6 ml) se le añadió reactivo de Dess-Martin (318 mg, 0,75 mmol) en porciones a temperatura ambiente. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de la finalización de la reacción, la solución de reacción se enfrió en un baño de agua helada y precipitó un sólido blanco. La solución de reacción se filtró y el filtrado se evaporó hasta sequedad para obtener la realización 1J en forma de un sólido de color amarillo. CLEM (IEN) m/z: 557 [M+1]+. ;;Realización 1K ;;; ;;; A una solución de la realización 1J (50 mg, 90 mmol) y tetrahidro-2-hidropiran-4-amina (18 mg, 180 mmol) en 1,2-dicloroetano (2,5 ml) se le añadió ácido acético (aproximadamente 0,1 ml) a temperatura ambiente hasta que el valor de pH de la solución es aproximadamente 5. La solución de reacción se agitó durante 2 horas. Se añadió cianoborohidruro de sodio (12 mg, 180 mmol) a la solución de reacción a temperatura ambiente, y la solución de reacción se continuó agitando durante 1 hora. Se añadió agua (5 ml) a una solución de reacción, seguido de la adición de diclorometano (20 mlx3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron, y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice para obtener la realización 1K. La muestra sólida se sometió a resolución de columna quiral para obtener la configuración 1K-R de la realización (8 mg) y la configuración 1K-S de la realización (8 mg). ;;CLEM (IEN) m/z: 642 [M+1]+. ;;Método de columna quiral: Columna quiral, Chiralcel OJ-H 250x4,6 mm D.I., 5 mm; fase móvil, metanol (DEA (dietilamina) al 0,05 %))-CO<2>del 5 % al 40 %; caudal, 2,35 ml/min; longitud de onda, 280 nm. ;;Realización 1L ;;; ;;; A una solución de la configuración 1K-S de la realización (15 mg, 23 mmol) (se obtuvieron 15 mg de producto de la configuración 1K-S mediante una reacción amplificada de escala de 200 mg según el método de preparación de la realización 1K) en metanol (1 ml) se le añadió una solución recién preparada de cloruro de acetilo (1 ml) en metanol (3 ml) bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La solución de reacción se agitó a 40 °C durante 3 horas. La solución se eliminó al vacío para obtener la realización 1L. CLEM (IEN) m/z: 542 [M+1]+. 1H-RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 9,04 (s, 1H), 8,50 (s a, 2H), 8,23 (d, J= 7,03 Hz, 1H), 7,64 (d, J=8,03 Hz, 1H), 7,49 (d, J=8,53 Hz, 1H), 7,18-7,26 (m, 2H), 7,04 (s, 2H), 6,12 (q, J= 6,53 Hz, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,08 (dd, J= 4,02, 11,54 Hz, 2H), 3,56-3,66 (m, 7H), 2,15 (d, J=11,04 Hz, 2H), 1,83 (d, J= 6,53 Hz, 4H), 1,18 (t, J= 7,03 Hz, 9H). ;Realización de referencia 1 ;;; ;;; Como método descrito en la realización 1L, se añadió una solución recién preparada de cloruro de acetilo (1 ml) en metanol (3 ml) a una solución de la configuración 1K-R de la realización (15 mg, 23 pmol) (se obtuvieron 15 mg de producto de la configuración 1K-R mediante una reacción amplificada de escala de 200 mg) en metanol (1 ml) bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La solución de reacción se agitó a 40 °C durante 3 horas. La solución se eliminó al vacío para obtener la realización de referencia 1. CLEM (IEN) m/z: 542 [M+1]+. 1H-RMN (400 MHz, METANOL-d4) ppm 8,95-9,12 (m, 1H), 8,44-8,59 (m, 1H), 8,25 (s a, 1H), 7,68 (s a, 1H), 7,51 (d, J=8,78 Hz, 1H), 7,25 (d, J= 15,06 Hz, 2H), 6,91-7,10 (m, 1H), 6,13 (d, J= 5,77 Hz, 1H), 4,54 (s a, 2H), 4,07 (d, J=10,54 Hz, 2H), 3,42-3,57 (m, 3H), 2,15 (d, J=10,79 Hz, 2H), 1,83 (m, 5H). ;;La realización de referencia 1 se disolvió en metanol, se disoció con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se sometió a evaporación rotatoria hasta sequedad para obtener un compuesto de fórmula (I). ;;Realización de referencia 2: Preparación de la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I) ;;La realización de referencia 1 se disolvió en metanol, se disoció con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se sometió a evaporación rotatoria hasta sequedad, seguido de suspensión con una pequeña cantidad de metanol para la purificación, y se filtró para obtener un sólido. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina A del compuesto de fórmula (I). ;Realización de referencia 3: preparación de la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I) ;;Se pesaron 30 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio, seguido de la adición de 400 pl de metanol para obtener una suspensión. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético (40 °C) y se sometió a un ensayo de agitación en la oscuridad. La muestra de suspensión se agitó a 40 °C durante 2 días y después se centrifugó, y después la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina B del compuesto de fórmula (I). ;Realización de referencia 4: Preparación de la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I) ;;Se pesaron 30 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio, seguido de la adición de 400 pl de acetato de etilo-etanol (3:2) para obtener una suspensión. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético (40 °C) y se sometió a un ensayo de agitación en la oscuridad. La muestra de suspensión se agitó a 40 °C durante 2 días y después se centrifugó, y después la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina C del compuesto de fórmula (I). ;;Realización de referencia 5: Preparación de la forma cristalina D del compuesto de fórmula (I) ;;Se pesaron 30 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio, seguido de la adición de 400 pl de acetona para obtener una suspensión. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético (40 °C) y se sometió a un ensayo de agitación en la oscuridad. La muestra de suspensión se agitó a 40 °C durante 2 días y después se centrifugó, y después la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina D del compuesto de fórmula (I). ;Realización de referencia 6: Preparación de la forma cristalina E del compuesto de fórmula (I) ;;Se pesaron 30 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio, seguido de la adición de 400 pl de isopropanol para obtener una suspensión. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético (40 °C) y se sometió a un ensayo de agitación en la oscuridad. La muestra de suspensión se agitó a 40 °C durante 2 días y después se centrifugó, y después la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina E del compuesto de fórmula (I). ;Realización de referencia 7: Preparación de la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II) ;;Se pesaron 60 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio con una barra de agitación magnética. La botella de vidrio se colocó en un agitador magnético. Se añadieron 1,8 ml de acetato de etilo y la mezcla obtenida se calentó hasta 50 °C para obtener una solución transparente. Se añadió lentamente una cantidad apropiada de una solución de ácido clorhídrico en etanol (1,2 ml) (con la razón molar del compuesto de fórmula (I) con respecto a ácido de 1:2), y se observó. Después de la adición de ácido clorhídrico, la solución se agitó a 50 °C durante 2 horas y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se formó precipitación, y la solución se centrifugó. A continuación, la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina F del compuesto de fórmula (II). ;;Realización 8: Preparación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) ;;Se pesaron 30 mg de clorhidrato del compuesto de fórmula (I) (realización de referencia 1) y se colocaron en una botella de vidrio, y se añadieron 400 ml de metanol. La muestra disuelta se centrifugó rápidamente. El sobrenadante se colocó en un tubo de centrífuga, y el tubo de centrífuga se selló con una lámina de aluminio empapada con poros. El tubo de centrífuga se colocó en una campana extractora para su volatilización. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético, se agitó (40 °C) (en la oscuridad) y se centrifugó rápidamente después de 2 días. El sobrenadante se puso en una campana extractora para volatilizarse hasta sequedad. La muestra residual obtenida por centrifugación y el sólido obtenido por volatilización se recogieron y se secaron en un horno de vacío a 30 °C durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II). ;;Realización 9: Preparación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) ;;Se añadió etanol (1,25 l) al matraz de tres bocas (3 l) que contenía el compuesto de fórmula (I) (41,7 g); la solución de reacción se calentó hasta 90 °C y se añadió gota a gota ácido clorhídrico/acetato de etilo (38,4 ml) al matraz. Después de agitar a 90 °C durante 2 horas, la solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó durante 20 horas; la solución de reacción se filtró y el sólido obtenido se lavó con 0,1 l de etanol; el sólido obtenido finalmente se trató con un evaporador rotatorio (50 °C, 6 horas) para eliminar una pequeña cantidad de etanol contenido en el mismo para obtener la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II). ;;Realización de referencia 10: Preparación de la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II) ;;Se pesaron 30 mg del clorhidrato del compuesto de fórmula (I) (realización de referencia 1) y se colocaron en una botella de vidrio, y se añadieron 400 ml de etanol. La muestra disuelta se centrifugó rápidamente, y el sobrenadante se colocó en un tubo de centrífuga. El tubo de centrífuga se selló con una lámina de aluminio empapada con poros. El tubo de centrífuga se colocó en una campana extractora para su volatilización. La muestra de suspensión se colocó en un agitador magnético, se agitó (40 °C) (en la oscuridad) y se centrifugó rápidamente después de 2 días. El sobrenadante se puso en una campana extractora para volatilizarse hasta sequedad. La muestra residual obtenida por centrifugación y el sólido obtenido por volatilización se recogieron y se secaron en un horno de vacío a 30 °C durante la noche. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina H del compuesto de fórmula (II). ;;Realización de referencia 11: Preparación de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) ;;Se pesaron 60 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio con una barra de agitación magnética. La botella de vidrio se colocó en un agitador magnético. Se añadieron 1,8 ml de acetato de etilo y la mezcla obtenida se calentó hasta 50 °C para obtener una solución transparente. Se añadió lentamente una cantidad apropiada de una solución de ácido cítrico en etanol (1,2 ml) (con la razón molar del compuesto de fórmula (I) con respecto a ácido de 1:2), y se observó. Después de la adición de ácido clorhídrico, la solución se agitó a 50 °C durante 2 horas y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se formó precipitación, y la solución se centrifugó. A continuación, la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III). ;;Realización de referencia 12: Preparación de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) ;;Se pesaron 60 mg del compuesto de fórmula (I) y se añadieron a una botella de vidrio con una barra de agitación magnética. La botella de vidrio se colocó en un agitador magnético. Se añadieron 1,8 ml de acetato de etilo y la mezcla obtenida se calentó hasta 50 °C para obtener una solución transparente. Se añadió lentamente una cantidad apropiada de una solución de ácido L-málico en etanol (1,2 ml) (con la razón molar del compuesto de fórmula (I) con respecto a ácido de 1:2), y se observó. Después de la adición de ácido clorhídrico, la solución se agitó a 50 °C durante 2 horas y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se formó precipitación, y la solución se centrifugó. A continuación, la muestra residual se colocó en un horno de vacío (40 °C) y se secó. Se usó XRPD para detectar el estado de la forma cristalina, y se obtuvo la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV). ;;Ejemplo de ensayo de referencia 1: Ensayo de solubilidad de los compuestos de fórmula (I), (II), (III) o (IV) ;Preparación de la solución de muestra de control (usando el compuesto de fórmula (I) como muestra de control) ;Se pesaron con precisión aproximadamente 5 mg del compuesto de fórmula (I), y se colocaron en una botella de muestra. Se añadieron 10 ml de acetonitrilo. La mezcla se sometió a sonicación durante 5 minutos, se enfrió hasta temperatura ambiente y se mezcló bien. Se prepararon dos soluciones de muestra de control en paralelo y se marcaron como STD-1 y STD-2, respectivamente. ;;Preparación de solución lineal ;;La solución de muestra de control STD-1 se diluyó en serie 1, 5, 10, 100 y 1000 veces y se marcó como soluciones lineales L1, L2, L3, L4 y L5. ;;Ensayo de solubilidad del compuesto (I) y su sal ;;Se sometió a ensayo la solubilidad del compuesto de fórmula (I) y su sal en 4 vehículos con diferentes pH. Se pesaron aproximadamente 10 mg de los compuestos de fórmula (I)-(IV) respectivamente, luego se añadieron 5,0 ml de diferentes vehículos (agua, SGF, FaSSIF, FeSSIF) a los mismos, respectivamente, y se mezclaron bien para obtener suspensiones. Se añadieron barras de agitación magnéticas a las suspensiones, y las suspensiones se colocaron en un agitador magnético para la agitación. Después de agitar durante 2 horas, 4 horas y 24 horas, las muestras se recogieron y centrifugaron. Las muestras sólidas residuales en la capa inferior se detectaron mediante XRPD. Las concentraciones de las muestras en la capa superior se determinaron por HPLC, y también se detectó el valor de pH de las muestras. Los resultados del ensayo de solubilidad son como se muestran en la tabla 12 y la tabla 13. ;;Tabla 12: Resultado del ensayo de solubilidad de los compuestos de fórmula (I) y (II) en 4 vehículos ;; ;; Nota: <LOQ significa por debajo del límite de detección ;;• FaSSIF: (1) se pesaron 0,042 g de hidróxido de sodio, 0,3438 g de dihidrogenofosfato de sodio y 0,6186 g de cloruro de sodio, y se añadieron 90 ml de agua purificada y se mezclaron bien. El valor de pH de la solución obtenida se ajustó a 6,5 con ácido clorhídrico 1 N o hidróxido sódico 1 N, y la solución se diluyó con agua purificada hasta un volumen final de 100 ml. (2) Se tomaron 50 ml de la solución tampón anterior, seguido de la adición de 0,224 g de polvo de FaSSIF/FeSSIF/FaSSGF disponible comercialmente (Biorelevant.com). La solución tampón se agitó hasta que se disolvió, y se diluyó con agua purificada hasta un volumen final de 100 ml. La solución tampón se puso a temperatura ambiente. Después de reposar durante dos horas, se observó que la solución tampón era ligeramente blanca lechosa y estaba lista para su uso. ;;• FeSSIF: (1) se pesaron 0,404 g de hidróxido de sodio, 0,865 g de ácido acético glacial, 1,1874 g de cloruro de sodio, y se añadieron 90 ml de agua purificada y se mezclaron bien. El valor de pH de la solución obtenida se ajustó a 5,0 con ácido clorhídrico 1 N o hidróxido de sodio 1 N, y la solución se diluyó con agua purificada hasta un volumen final de 100 ml. (2) Se tomaron 50 ml de la solución tampón anterior, seguido de la adición de 1,12 g de polvo de FaSSIF/FeSSIF/FaSSGF disponible comercialmente (Biorelevant.com). La solución tampón se agitó hasta que se disolvió, y se diluyó con agua purificada hasta un volumen final de 100 ml. La solución tampón se puso a temperatura ambiente. Después de reposar durante dos horas, se observó que la solución tampón era un líquido transparente y estaba lista para su uso. ;;FaSSGF (SGF): (1) se añadieron 0,2 g de cloruro de sodio a 90 ml de agua purificada y se mezclaron bien. El valor de pH del mismo se ajustó a 1,8 con ácido clorhídrico 1 N y la solución se diluyó con agua purificada hasta un volumen final de 100 ml. La solución obtenida se dejó reposar a temperatura ambiente. ;Tabla 13 Resultados del ensayo de solubilidad de los compuestos de fórmula (III) y (IV) en 4 vehículos ;; ;;; Conclusión: los datos de solubilidad de las sales en vehículo biológico muestran que el clorhidrato tiene la mayor solubilidad en la fase acuosa, y las tres sales tienen una solubilidad similar en líquido intestinal simulado y líquido gástrico simulado; y la base libre tiene una buena solubilidad en los tres vehículos biológicos, pero es extremadamente difícil de disolver en agua. ;;Ejemplo de ensayo 2: Ensayo de estabilidad sólida de la forma cristalina G, la forma cristalina I y la forma cristalina J (las formas cristalinas I y J no son parte de la presente invención) ;;Se pesaron con precisión aproximadamente 10 mg de forma cristalina G, forma cristalina I o forma cristalina J, y se colocaron en el fondo de una botella de muestra de vidrio de 40 ml y se extendieron en una capa fina. Para una muestra abierta, la boca de la botella de la misma se selló con papel de aluminio empapado con poros para garantizar que la muestra pueda entrar en contacto completamente con el aire ambiente. Para una muestra sellada, la boca de la botella de la misma se selló con una tapa de botella, y se envolvió con una película de sellado. Se pesaron dos muestras duplicadas en cada punto de tiempo de cada condición en paralelo, y se tomó una cantidad apropiada de muestra (no pesada) adicionalmente para la detección de XRPD. Las muestras preparadas se colocaron en cada condición y se tomaron muestras y se analizaron cuando llegó el punto de tiempo. El día 0, se pesaron 5 muestras de control en paralelo y se almacenaron en un refrigerador a -20 °C hasta el análisis. Las muestras sometidas a irradiación de luz se prepararon mediante el mismo método, y se colocaron en el fondo de una botella de muestra de vidrio de 40 ml. La botella de vidrio se dejó abierta y se colocó en la posición vertical en una caja de irradiación de luz. Además, se tomaron dos muestras en una cantidad apropiada como muestras en la oscuridad, y las botellas de vidrio que contenían las mismas se dejaron abiertas, se colocaron en la posición vertical y se envolvieron con lámina de estaño, y se irradiaron con una luminancia total de 1,2x106 Lux.h y una potencia ultravioleta cercana de 200 w.h/m2. Después de la irradiación, las muestras se almacenaron en el refrigerador a -20 °C para su análisis. ;;Los compuestos se colocaron en las siguientes condiciones y se tomaron muestras en diferentes puntos de tiempo para detectar las propiedades físicas, y el contenido y las impurezas totales se analizaron por HPLC. Las condiciones de investigación y los elementos de ensayo se muestran en la tabla 14 a la tabla 16. ;;Tabla 14: Ensayo de estabilidad sólida de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) ;; ; ;; Tabla 15: Ensayo de estabilidad sólida de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) ; ; Tabla 16: Ensayo de estabilidad sólida de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) ;;; ;; Conclusión: tanto los factores influyentes como los ensayos aceleradao muestran que las formas cristalinas G, I y J tienen una excelente estabilidad térmica y estabilidad en condiciones aceleradas, generan ligeras impurezas en condiciones de irradiación de luz y presentan buena estabilidad en condiciones de oscuridad. ;Ejemplo de ensayo de referencia 3: Ensayo de higroscopicidad de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) Materiales experimentales: ;Analizador sorción dinámica de vapor SMS DVS Advantage ;Método experimental: ;Se tomaron de 10 a 15 mg de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) y se colocaron en una bandeja de muestras de DVS para someterse a ensayo. ;Resultados experimentales: ;El patrón de DVS de la forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) es como se muestra en la figura 20, DW=2,134 %. ;Resultados experimentales: ;La forma cristalina I del compuesto de fórmula (III) tiene una ganancia de peso higroscópico del 2,134 % a 25 ± 1 °C y 80 ± 2 % de HR, que es higroscópico. ;Ejemplo de ensayo de referencia 4: Ensayo de higroscopicidad de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) Materiales experimentales: ;Analizador de sorción dinámica de vapor SMS DVS Advantage ;Método experimental: ;Se tomaron de 10 a 15 mg de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) y se colocaron en una bandeja de muestras de DVS para someterse a ensayo. ;Resultados experimentales: ;El patrón de DVS de la forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) es como se muestra en la figura 24, DW=5,227 %. ;Resultados experimentales: ;La forma cristalina J del compuesto de fórmula (IV) tiene una ganancia de peso higroscópico del 5,227 % a 25 ± 1 °C y 80 ± 2 % de HR, que es higroscópico. ;Ejemplo de ensayo de referencia 5: Ensayo de actividad enzimáticain vitrodel compuesto de la presente divulgación Propósito experimental: ;La actividad enzimática se detectó mediante el ensayo de detección de quinasas Z'-LYTE™ y se usó el valor de CI<50>del compuesto como indicador para evaluar el efecto inhibidor del compuesto contra FGFR1. ;Materiales experimentales: ;FGFR1 (Invitrogen n.2 PV4105) ;Tyr4 (Invitrogen-PR5053U) ;ATP (Sigma-A7699) ;DMSO (n.° de cat. de Sigma 34869-100ML) ;Solución tampón de reacción: Hepes 50 mM (pH 7,5), MgCl<2>10 mM, EGTA 1 mM, Brij-35 al 0,01%, DTT 1 mM, MnCl<2>2 mM; ;Placa de reacción 384 (Corning Costar 3573) ;Placa de compuesto 384 (Greiner n.° 781280) ;Reactivo de desarrollo B (Invitrogen n.° PR5193D) ;Tampón de desarrollo (Invitrogen n.° PR4876B) ;Centrífuga (Eppendorf n. 5810R) ;Pistola de carga electrónica (Eppendorf) ;Estación de trabajo de líquidos de múltiples gotas (ThermoScientific) ;Estación de trabajo automática de líquidos Bravo (Agilent) ;Envision (Perkin Elmer) ;Procedimientos y métodos experimentales: ;A. Preparación de la mezcla de enzima/sustrato ;FGFR1 0,6 nM, péptido Tyr<4>2 pm y ATP 10 pm en solución tampón de reacción (Hepes 50 mM, pH 7,5, MgCl<2>10 mM, BRIJ-35 al 0,01%, EGTA 1 mM, MnCl<2>4 mM, DTT 2 mM). ;B. Carga del compuesto: ;a. Diluir el compuesto con DMSO hasta 10 mM, dilución de 3 veces, 11 gradientes, dos pocilios duplicados; b. transferir el compuesto diluido con una razón de 1:25 a la placa media en la estación de trabajo automática de líquidos Bravo. Después transferir 2,5 ul a la placa de reacción para garantizar que la concentración final de DMSO sea del 1 %; ;c. transferir 5 gl de enzima/tampón sustrato a cada pocillo; ;d. añadir solución de ATP a cada pocillo secuencialmente con la estación de trabajo de líquidos de múltiples gotas; e. centrifugar a 1000 rpm durante 1 minuto; ;f. colocar la placa de reacción en una incubadora a 23 °C y dejar reaccionar durante 60 minutos. ;C. Experimento de reacción de color: ;a. Preparar una mezcla de reactivo de desarrollo B y tampón de desarrollo con una razón de 1:128; ;b. Añadir 5 ul a cada pocillo y centrifugar a 1000 rpm durante 1 minuto; ;c. Colocar la placa de reacción en una incubadora (23 °C) durante 90 minutos después de la centrifugación, sacarla y leerla en el lector de placas Envision (Perkin Elmer) ;D. Análisis de datos: usar XLFIT (IDBS) para analizar los datos y calcular el valor de CI<50>del compuesto. ;Los resultados experimentales se muestran en la tabla 17: ;Tabla 17: Resultados del ensayo de CI<50>Z'-LYTE™ ;;; ;; Nota: 50 nM<A<1 pm, 10 nM<AA<50 nM, AAA < 10 nM, N/A significa no medido. ;Conclusión: El compuesto de la presente divulgación tiene un efecto inhibidor significativo contra FGFR1. ;Ejemplo de ensayo de referencia 6: Análisis de inhibición del crecimiento tumoral (TGI) del compuesto de la presente divulgación ;El potencial de crecimiento evolutivo de los tumores se evaluó mediante la relación entre el volumen tumoral y el tiempo. El eje largo (L) y el eje corto (W) del tumor subcutáneo se midieron dos veces a la semana con el calibrador y el volumen tumoral (TV) se calculó mediante la fórmula ((L*W2)/2). Se calculó la TGI a partir de la diferencia entre la mediana del volumen tumoral en los ratones del grupo de disolvente y la mediana del volumen tumoral en los ratones del grupo de fármaco, expresado como un recuento porcentual para la mediana del volumen tumoral en el grupo de control de disolvente, calculado mediante la siguiente fórmula:

% de TGI = ((mediana del volumen tumoral (control) - mediana del volumen tumoral (grupo de dosificación))/mediana del volumen tumoral (grupo de control)) x 100

El análisis estadístico original se realizó repitiendo el análisis de varianza, seguido del método de ensayo de Scheffe a posteriori para comparaciones múltiples, con disolvente solo (metilcelulosa al 0,5% Tween al 0,2% en agua) como control negativo.

Los resultados experimentales se muestran en la tabla 18:

El compuesto de la presente divulgación tiene excelente actividad inhibidora de la quinasa FGFR1in vitroy puede usarse como inhibidor de tirosina quinasa de molécula pequeña; y puede inhibir la proliferación celular y la angiogénesis, teniendo una excelente actividad antitumoral, y teniendo excelentes resultados para el tratamiento de diversos mamíferos (incluidos seres humanos).

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES 1. Una forma cristalina G del compuesto de fórmula (II), en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 7,39±0,2°, 19,07±0,2° y 20,04±0,2°; en donde dicho patrón de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando rayos X K-alfa de cobre a una longitud de onda de 1,54056 Angstroms
2. 2. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en la reivindicación 1, en donde el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) comprende picos de difracción característicos en el siguiente ángulo 20: 7,39±0,2°, 19,07±0,2°, 20,04±0,2°, 21,05±0,2°, 21,76±0,2°, 25,64±0,2°, 26,23±0,2° y 27,16±0,2°; en donde dicho patrón de difracción de rayos X en polvo se obtiene usando rayos X K-alfa de cobre a una longitud de onda de 1,54056 Angstroms.
3. 3. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en la reivindicación 2, en donde el patrón de XRPD de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) es como se muestra en la figura 11.
4. 4. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, en donde la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) tiene un punto de inicio de un pico endotérmico a 278,70 °C ± 3 °C, y tiene un punto de inicio de un pico exotérmico a 285,46 °C ± 3 °C; y/o, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) tiene una pérdida de peso del 3,870 % producida a 120 °C ± 3 °C y una pérdida de peso del 1,170 % producida a 221,76 °C ± 3 °C.
5. 5. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en la reivindicación 4, en donde el patrón de DSC de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) es como se muestra en la figura 12; y/o, el patrón de TGA de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) es como se muestra en la figura 13.
6. 6. Un método de preparación de la forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, que comprende añadir el compuesto de fórmula (I) en etanol, añadir ácido clorhídrico/acetato de etilo gota a gota a la botella de reacción, calentar y agitar, enfriar hasta temperatura ambiente y filtrar;
7. 7. El método de preparación como se define en la reivindicación 6, en donde el calentamiento y la agitación se realizan a una temperatura de 85 °C a 95 °C.
8. 8. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en al menos una de las reivindicaciones 1 -5 para su uso en un método para tratar enfermedades relacionadas con inhibidores de tirosina quinasa;
9. 9. La forma cristalina G del compuesto de fórmula (II) como se define en al menos una de las reivindicaciones 1 -5 para su uso en un método para tratar un tumor;