ES2991059T3 - Vacunas contra el HBV y métodos de tratamiento del HBV - Google Patents

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Abstract

Se proporcionan polipéptidos inmunogénicos del VHB, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores que expresan dichos polipéptidos inmunogénicos para su uso en la obtención de una respuesta inmunitaria contra el VHB; composiciones farmacéuticas e inmunogénicas y kits que comprenden dichos polipéptidos, polinucleótidos o vectores, y métodos de uso en el tratamiento y/o prevención del VHB. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Vacunas contra el HBV y métodos de tratamiento del HBV
FONDO
[0001]Ha habido muchos intentos de utilizar la vacunación para tratar a pacientes con infección crónica por el virus de la hepatitis B (HBV) con el fin de mejorar las tasas de pérdida del antígeno de superficie del HBV (sAg), el principal marcador de curación funcional. Tales intentos han incluido la vacunación con proteínas recombinantes (Dikici, et al., J Gastroenterol Hepatol. (2003) 18(2):218-22; Pol, et al., J Hepatol. (2001) 34(6):917-21; Vandepapeliere, et al., Vaccine (2007) 25(51):8585-97; Yalcin, et al., J Clin Gastroenterol. (2003) 37(4):330-5; Al-Mahtab, Hepatol Int. (2013) 7(4):981-9; Hoa, et al., Antimicrob Agents Chemother. (2009) 53(12):5134-40; y Yalcin, et al., Infection. (2003) 31(4):221-5), ADN recombinante (Mancini-Bourgine, et al., Hepatology. (2004) 40(4):874-82; Yang, et al., World J Gastroenterol. (2017) 23(2):306-17; Yang, et al., J Viral Hepat. (2012) 19(8):581-93; Yoon, et al., Liver Int. (2015) 35(3):805-15; Cavenaugh, et al., PLoS One. (2011) 6(2):e14626; and Godon, et al., Mol Ther. (2014) 22(3):675-84), células dendríticas (Luo, et al., Vaccine. (2010) 28(13):2497-504; and Wei, et al., Int Immunopharmacol. (2015) 27(2):238-43), un vector de levadura (Gane. et al., J Hepatol. (2019) Epub 2019/07/16. doi: 10.1016/j.jhep.2019.06.028. PubMed PMID: 31306680), y algunos vectores virales (Cavenaugh,et al., supra;y Zoulim, et al., Hum Vaccin Immunother. (2019) Epub 2019/08/03. doi: 10.1080/21645515.2019.1651141. PubMed P<m>ID: 31373537). A pesar de estos numerosos intentos, hasta la fecha ningún enfoque de vacunación terapéutica ha mostrado un beneficio consistente en la infección crónica por HBV (CHB). Las deficiencias en los enfoques anteriores de las vacunas pueden explicar sus fracasos.
[0002]Tales déficits incluyen limitaciones en los diseños de antígenos y en las tecnologías de vacunas utilizadas. Un antígeno óptimo contendrá porciones altamente conservadas de las proteínas del HBV y excluirá las regiones poco conservadas, porque las regiones altamente conservadas pueden inducir respuestas contra epítopos que son idénticos en el antígeno de la vacuna y en el virus presente en el paciente tratado, mientras que las regiones poco conservadas pueden provocar respuestas inmunodominantes de células T contra epítopos que no están presentes en la cepa del virus infectante del paciente (Swadling, et al., Vaccines (Basilea). (2016) 4(3). Epub 2016/08/05. doi: 10.3390/vaccines4030027. PubMed PMID: 27490575). Sin embargo, algunas vacunas anteriores utilizaban diseños de antígenos que no cumplen estos criterios (Yalcin, et al., J Clin Gastroenterol. (2003) 37(4):330-5; Hoa,et al., supra;Yalcin, et al., Infection. (2003) 31(4):221-5; Mancini-Bourgine,et al., supra;Yang, et al., J Viral Hepat. (2012) 19(8):581-93; Cavenaugh, et al .,supra;Godon, etal., supra;Gane.et al., supra;y Obeng-Adjei, et al., Cancer Gene Ther. (2013) 20(12):652-62). Además, muchas vacunas anteriores no han logrado inducir una combinación completa de células T CD4+ específicas del virus, células T CD8+ y respuestas de anticuerpos (Dikici, et al.,supra;Pol,et al., supra;Vandepapeliere,et al., supra;Yalcin, et al., J Clin Gastroenterol. (2003) 37(4):330-5; Al-Mahtab,supra;Hoa,et al., supra;Yalcin, et al., Infection. (2003) 31(4):221-5; Mancini-Bourgine,et al., supra;Yang, et al., J Viral Hepat. (2012) 19(8):581-93; Gane.et al., supra;y Zoulim,et al., supra).Estos componentes inmunitarios son especialmente importantes para curar la infección crónica por HBV, ya que se ha demostrado que las células T CD8+ son las principales células efectoras responsables de la eliminación del virus durante la infección aguda por HBV en chimpancés (Thimme, et al., J Virol. (2003) 77(1):68-76). Además, los anticuerpos que se unen al antígeno de superficie del HBV (HBsAg) facilitan la eliminación del HBsAg y evitan la propagación del HBV residual. Además, es probable que se necesite una respuesta inmunitaria de gran magnitud para lograr un efecto terapéutico, pero muchas vacunas anteriores contra la CHB no han logrado inducir una respuesta tan robusta (Mancini-Bourgine,et al., supra;Yang, et al., J Viral Hepat. (2012) 19(8):581-93; Cavenaugh,et al., supra;Gane.et al., supra;y Zoulim,et al., supra).Por último, algunos antígenos de vacunas anteriores contra la CHB no han sido lo suficientemente estables en los vectores de administración como para permitir la fabricación de vacunas a escala comercial.
[0003]El documento WO2017/076988 divulga vectores arenavirales modificados genéticamente adecuados como vacunas para la prevención y el tratamiento de infecciones por el virus de la hepatitis B. También se divulgan composiciones farmacéuticas y métodos para el tratamiento de infecciones por el virus de la hepatitis B.
RESUMEN
[0004]La presente invención se define en las reivindicaciones adjuntas.
[0005]En el presente documento se describen polipéptidos de polimerasa del virus de la hepatitis B (HBV) truncados, p. ej., capaces de inducir o provocar una respuesta inmunitaria en un ser humano tras su administración. El polipéptido polimerasa truncado del HBV puede comprender un dominio de transcriptasa inversa inactivado y una ARNasa H inactivada, y puede, en algunos casos, no comprender todo el dominio de proteína terminal (TP) y todo o parte del dominio espaciador. El polipéptido puede tener una longitud no superior a 600 aminoácidos,p. ej.,no superior a 595, 590, 585, 580, 575, 570, 565, 560, 555, 550, 545, 540 o 535 aminoácidos. El dominio de la transcriptasa inversa no comprende un motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) y el dominio ARNasa H no incluye un motivo AELL (SEQ ID N.°: 98). El motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) en el dominio de la transcriptasa inversa se muta a YMHD (SEQ ID N.°: 99) y en el que el motivo AELL (SEQ ID N.°: 98) en el dominio ARNasa H se muta a AHLL (SEQ ID N.°: 100). El polipéptido puede ser de un genotipo A, B, C o D del HBV. El polipéptido puede ser del genotipo B del HBV y no comprender una secuencia polipeptídica (p. ej., la secuencia se elimina o suprime o no se incluye) de SEQ ID N.°: 50, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 50; o el polipéptido puede ser del genotipo D del HBV y no comprender una secuencia polipeptídica de SEQ ID N.°: 51, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 51. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14.
[0006]También se divulgan en el presente documento polipéptidos mutantes de deleción de polimerasa del HBV. El polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV puede comprender en orden secuencial desde el N-terminal al C-terminal, un dominio de proteína terminal (TP), un dominio de transcriptasa inversa inactivado y una ARNasa H inactivada, en el que el polipéptido mutante no comprende todo o parte de un dominio espaciador. El polipéptido puede tener una longitud no superior a 800 aminoácidos, p. ej., no superior a 795, 790, 785, 780, 775, 770, 765, 760, 755, 750, 745, 740, 735, 730, 725, 720, 715, 710 o 705 aminoácidos. El dominio de la transcriptasa inversa puede no comprender un motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) y el dominio ARNasa H puede no incluir un motivo AELL (SEQ ID N.°: 98). El motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) en el dominio de la transcriptasa inversa puede mutarse a YMHD (SEQ ID N.°: 99) y en el que el motivo AELL (SEQ ID N.°: 98) en el dominio ARNasa H puede mutarse a AHLL (SEQ ID N.°: 100). El polipéptido puede ser de un genotipo A, B, C o D del HBV. (a) El polipéptido puede ser del genotipo A del HBV y no comprender un polipéptido de SEQ ID N.°: 42 o 46, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 42 o 46; b) el polipéptido puede ser del genotipo B del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 43 o 47, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 43 o 47; c) el polipéptido puede ser del genotipo C del HBV y no comprende un polipéptido de S<e>Q ID N.°: 44 o 48, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 44 o 48; o d) el polipéptido puede ser del genotipo D del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 45 o 49, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 45, o 49. El polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5 12, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-12. El polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV puede comprender además(p. ej.,es una proteína de fusión que incluye) un polipéptido del núcleo del HBV. El polipéptido mutante de deleción de polimerasa del HBV puede comprender en orden secuencial desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido mutante de deleción de polimerasa del HBV, como se describe en el presente documento. El polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 19-26, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 19-26.
[0007]En el presente documento se describe una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV. La proteína de fusión núcleosAg puede comprender, en orden secuencial desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido del núcleo del HBV y un polipéptido del pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV. El polipéptido del núcleo puede ser de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo C del HBV. El polipéptido del núcleo puede ser de un genotipo D del HBV y el polipéptido sAg puede ser de un genotipo D del HBV. La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender: (a) un polipéptido del núcleo que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 65, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 65, y un polipéptido sAg que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 3, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica SEQ ID N.°: 3; o b) un polipéptido central que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 66, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 66, y un polipéptido sAg que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 4, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 4. El polipéptido del núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg puede comprender un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede no comprender un polipéptido pre-S1. El polipéptido sAg puede no comprender un polipéptido pre-S2. El polipéptido sAg puede no comprender un polipéptido pre-S2 del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 79-83, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 79-83. El polipéptido sAg no puede comprender tanto un polipéptido pre-S1 del HBV como un polipéptido pre-S2 del HBV. El polipéptido sAg puede no comprender un polipéptido pre-S1-pre-S2 del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 84-88, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 84-88. La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender un enlazador escindible unido operativamente y colocado entre el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV. El enlazador escindible puede ser un péptido escindible 2A. El enlazador escindible puede ser un péptido escindible 2A seleccionado entre el virus de la fiebre aftosa (F2A), el virus de la rinitis equina A (E2A), el teschovirus porcino-1 (P2A) y el virus Thosea asigna (T2A). El enlazador escindible puede ser un enlazador de teschovirus porcino-1 (P2A). El enlazador escindible puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 57), QCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 58), o EGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 59), o una secuencia de aminoácidos que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o al menos 99% idéntica a ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 57), QCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 58), o EGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 59). El enlazador escindible puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), o una secuencia de aminoácidos que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o al menos 99% idéntica a ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56). La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender un enlazador flexible y/o un sitio de reconocimiento/escisión de furina enlazado operablemente y situado N-terminal al enlazador escindible y C-terminal al polipéptido del núcleo del HBV. El sitio de reconocimiento/escisión de furina puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre RAKR (SEQ ID N.°: 60), REKR (SEQ ID N.°: 61) y RRKR (SEQ ID N.°: 62). El enlazador flexible puede comprender una secuencia de poliglicina o polialanina. El enlazador flexible puede comprender o consistir en una secuencia de poliglicina o polialanina seleccionada entre AA, AAA, AAY, GG, GGG, GGSy GGGS (SEQ ID N.°: 63). La proteína de fusión núcleo-sAg puede tener una longitud no superior a 450 aminoácidos,p. ej.,no superior a 445, 440, 435, 430, 425, 420, 415 o 410 aminoácidos. La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41,p. ej.,SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41,p. ej.,SEQ ID N.°:41. El polipéptido de fusión puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 74, un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:41. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede no comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de una proteína del HBV seleccionada del grupo formado por X, pre-núcleo, pre-S1 y pre-S2.
[0008]Con respecto a los polipéptidos inmunogénicos del HBV, el polipéptido truncado de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV o la proteína de fusión núcleo-sAg, según se describe en el presente documento, pueden comprender además un péptido señal N-terminal o una secuencia líder. El péptido señal o secuencia líder puede proceder de una proteína fuente seleccionada entre una proteína sérica, una citoquina, una quimioquina, una proteína chaperona, una proteína invariante y una proteína que dirige proteínas al compartimento lisosomal. El péptido señal o la secuencia líder puede proceder de una proteína fuente seleccionada entre el factor estimulante de colonias 2 (CSF2, GM-CSF), el activador tisular del plasminógeno (PLAT, t-PA), el ligando 7 de quimiocinas con motivo C-C (CCL7, Mc P-3), el ligando 10 de quimiocinas con motivo C-X-C (CXCL10, IP-10), la catenina beta 1 (CTNNB1), CD74 (p33; DHLa G; HLADG; Ia-GAMMA, cadena invariante), albúmina sérica (ALB), poliubiquitina B/C (UBB/UBC), calreticulina (CALR), proteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G), proteína de membrana asociada a lisosomas 1 (LAMP-1) y proteína de membrana asociada a lisosomas 2 (LAMP-2). El péptido señal o secuencia líder puede seleccionarse a partir de una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 67-78, o una secuencia que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 67-78. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV, y/o la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento, pueden producirse recombinantemente o sintetizarse químicamente. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del<h>B<v>y/o la proteína de fusión núcleo-sAg, tal como se describen en el presente documento, pueden ser capaces de inducir, promover o estimular una respuesta inmunitaria(p. ej.,expansión y/o activación de células T CD8+ y/o CD4+; producción de anticuerpos que se unen a y/o neutralizan uno o más de la polimerasa del HBV, el núcleo del HBV y el sAg del HBV) en un humano. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV y/o la proteína de fusión núcleo-sAg, tal como se describen en el presente documento, pueden ser capaces de inducir, promover o estimular una respuesta inmunitaria contra el HBV(p. ej.,que prevenga, retrase la progresión, inhiba y/o revierta la infección por HBV) en un humano. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV, y/o la proteína de fusión núcleo-sAg, según se describe en el presente documento, pueden ser capaces de inducir, promover o estimular la proliferación y/o activación de uno o más tipos celulares seleccionados entre células dendríticas (CD) derivadas de monocitos, células T CD8+ y células T CD4+.
[0009]También se divulgan en el presente documento polinucleótidos que codifican los polipéptidos inmunogénicos del HBV, como se describe en el presente documento. Por ejemplo, se divulgan en el presente documento polinucleótidos que codifican uno o más de los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV, o la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. El polinucleótido puede comprender ADNc, ARNm, ARN autoamplificante (SAM), ARN autorreplicante o ARN replicón autorreplicante (ARNrep). El polinucleótido puede comprender replicones de alfavirus autorreplicantes o autoamplificantes. El polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-37,p. ej.,SEQ ID N.°: 37 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-37,p. ej.,SEQ ID N.°:37 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90, o 92.
[0010]También se divulga en el presente documento una nanopartícula lipídica (LNP) que comprende uno o más de los polinucleótidos que codifican un polipéptido inmunogénico del HBV, como se describe en el presente documento.
[0011]También se divulgan en el presente documento casetes de expresión que comprenden uno o más de los polinucleótidos que codifican un polipéptido inmunogénico del HBV, como se describe en el presente documento, enlazados operablemente a una o más secuencias reguladoras. El polinucleótido puede estar unido de forma operable a un promotor constitutivo y bajo su control. El promotor puede seleccionarse entre el citomegalovirus principal inmediato temprano (CMV), el potenciador del CMV fusionado al promotor de beta-actina de pollo (CAG), el factor de elongación-la humano (HEF-1a), el citomegalovirus de ratón (CMV de ratón), el factor de elongación-la de hámster chino (CHEF-1a) y la fosfoglicerato quinasa (PGK).
[0012]Se divulgan en el presente documento vectores que comprenden uno o más de los polinucleótidos que codifican un polipéptido inmunogénico del HBV, como se describe en el presente documento, o uno o más casetes de expresión que comprenden dichos polinucleótidos. El vector puede ser un vector plasmídico, un vector bacteriano o un vector viral. El vector puede ser un vector viral. El vector viral puede ser un virus ADN o un virus ARN. El vector viral puede ser de un virus seleccionado entre adenovirus, virus adeno-asociado, arenavirus, alfavirus, poxvirus, citomegalovirus, rabdovirus, virus de la estomatitis vesicular, flavivirus, virus maraba y virus vaccinia. El vector viral puede ser de un virus de una familia taxonómica seleccionada entre Adenoviridae, Arenaviridae, Herpesviridae(p. ej..Citomegalovirus), Poxviridae(p. ej.Vaccinia virus,p. ej.,vaccinia modificada Ankara (MVA)), Flaviviridae(p. ej.,virus de la fiebre amarilla), Rhabdoviridae(p. ej.,Vesiculovirus,p. ej.,Maraba vesiculovirus), Togaviridae(p. ej.,Alphavirus). En la presente invención, el vector vírico es un vector arenavirus, y puede seleccionarse entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), mammarenavirus Cali (también conocido como Pichinde mammarenavirus o Pichinde arenavirus (PICV)), Guanarito virus (GTOV), Junin virus (Ju NV), Lassa virus (LASV), Lujo virus (LUJV), Machupo virus (MACV), Sabia virus (SABV) y Whitewater Arroyo virus (WWAV). En algunas realizaciones, el vector viral es un vector arenavirus seleccionado entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)). En el presente documento, el vector viral puede ser un adenovirus humano o un adenovirus simio(p. ej.,un adenovirus chimpancé, un adenovirus gorila o un adenovirus rhesus). El vector vírico puede ser un vector adenovírico seleccionado entre adenovirus de serotipo 5 (Ad5), adenovirus de serotipo 26 (Ad26), adenovirus de serotipo 34 (Ad34), adenovirus de serotipo 35 (Ad35), adenovirus de serotipo 48 (Ad48), adenovirus de chimpancé(porej.ChAdOxl, ChAdOx2, ChAd3 (AdC3), ChAd5 (AdC5), ChAd6 (AdC6), ChAd7 (AdC7), ChAd8 (AdC8), ChAd9 (AdC9), ChAd10 (AdC10), ChAd11 (AdC11), ChAd17 (AdC17), ChAd16 (AdC16), ChAd19 (AdC19), ChAd20 (AdC20), ChAd22 (AdC22), ChAd24 (AdC24), ChAdY25, ChAd26 (AdC26), ChAd28 (AdC28), ChAd30 (AdC30), ChAd31 (AdC31), ChAd37 (AdC37), ChAd38 (AdC38), ChAd43 (AdC43), ChAd44 (AdC44), ChAd55 (AdC55), ChAd63 (AdC63), ChAdV63, ChAd68 (AdC68), ChAd73 (AdC73), ChAd82 (AdC82), ChAd83 (AdC83), ChAd143 (AdC143), ChAd144 (AdC144), ChAd145 (AdC145), ChAd147 (AdC147)), adenovirus de gorila (p.ej.GC44, GC45, GC46) y adenovirus rhesus (p. ej., RhAd51, RhAd52, RhAd53, RhAd54, RhAd55, RhAd56, RhAd57, RhAd58, RhAd59, RhAd60, RhAd61, RhAd62, RhAd63, RhAd64, RhAd65, RhAd66). El vector viral puede ser de replicación defectuosa, de replicación deficiente, de replicación atenuada o de replicación competente. El vector viral puede ser un arenavirus de replicación defectuosa con un genoma bisegmentado. El vector viral puede ser un arenavirus de replicación atenuada con un genoma trisegmentado.
[0013]En el presente documento también se describen vectores de arenavirus. El vector arenavirus puede comprender un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión núcleo-sAg del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41,p. ej.,SEQ ID N.°:41y en el que el polipéptido sAg no comprende un polipéptido pre-S1 del HBV y/o un polipéptido pre-S2 del HBV. El polipéptido del núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición l2, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg puede comprender un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41. El polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37. El polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. El vector arenavirus puede tener un genoma bisegmentado y comprende además un polinucleótido que codifica una polimerasa truncada del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, y en el que la polimerasa del HBV truncada no comprende todo un dominio de proteína terminal (TP) de la polimerasa del HBV y no comprende todo o parte de un dominio espaciador de la polimerasa del HBV. La polimerasa truncada del HBV puede no comprender una secuencia polipeptídica de SEQ ID N.°: 50 o SEQ ID N.°: 51, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 50 o SEQ ID N.°: 51. El polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90, o 92. El vector arenavirus puede ser un vector Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus (LCMV) y el polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntico a cualquiera de las SEQ ID N.°: 29. El vector arenavirus puede ser un vector mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)) y el polinucleótido puede comprender o consistir en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90.
[0014]En otro aspecto de la invención, se proporciona un vector arenavirus que comprende un polinucleótido que codifica una polimerasa truncada del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14. También se divulga en el presente documento un vector arenavirus que comprende un polinucleótido que codifica una polimerasa truncada del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, y en el que la polimerasa del HBV truncada no comprende todo un dominio de proteína terminal (TP) de la polimerasa del HBV y no comprende todo o parte de un dominio espaciador de la polimerasa del HBV. La polimerasa truncada del HBV puede no comprender una secuencia polipeptídica de SEQ ID N.°: 50 o SEQ ID N.°:51, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 50 o SEQ ID N.°: 51. En algunas realizaciones, el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o que sea al menos un 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90, o 92. En algunas realizaciones, el vector arenavirus es un vector Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus (LCMV) y el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29. En algunas realizaciones, el vector arenavirus es un vector mammarenavirus Cali y el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o que sea al menos 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90. En algunas realizaciones, el vector arenavirus es de replicación defectuosa, de replicación deficiente o de replicación incompetente.
[0015]En otro aspecto de la invención, se proporcionan células huésped que comprenden uno o más vectores que comprenden los vectores arenavirus de la invención. También se divulgan en el presente documento células huésped que comprenden uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos del HBV como se divulga en el presente documento, o uno o más vectores que comprenden dichos polinucleótidos. Los uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos del HBV, tal como se describen en el presente documento, pueden no estar integrados en el genoma de la célula huésped,p. ej.,son episomales. El polinucleótido o polinucleótidos pueden integrarse en el genoma de la célula huésped. La célula huésped puede ser una célula de mamífero,p. ej.,una célula humana. La célula huésped puede serin vitrooin vivo.
[0016]También se divulgan en el presente documento composiciones inmunogénicas que comprenden uno o más de los polipéptidos inmunogénicos del HBV, como se describe en el presente documento. La composición inmunogénica puede comprender uno o más,p. ej.,dos o más, de los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV, uno o más,p. ej.,dos o más, de los polipéptidos mutantes de la deleción de la polimerasa del HBV, y/o uno o más, p. ej., dos o más, de la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. La composición inmunogénica puede comprender uno o más,p. ej.,dos o más, polinucleótidos que codifican uno o más,p. ej.,dos o más, de los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV, uno o más,p. ej.,dos o más, de los polipéptidos mutantes de deleción de la polimerasa del<h>B<v>, y/o uno o más,p. ej.,dos o más, de la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. La composición inmunogénica puede comprender uno o más,p. ej.,dos o más, uno o más,p. ej.,dos o más, vectores que comprenden uno o más,p. ej.,dos o más, polinucleótidos que codifican uno o más,p. ej.,dos o más de los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV, uno o más,p. ej.,dos o más, de los polipéptidos mutantes de deleción de la polimerasa del HBV, y/o uno o más,p. ej.,dos o más, de la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. Las composiciones inmunogénicas comprenden además un portador farmacéuticamente aceptable. La composición inmunogénica puede comprender uno o más polinucleótidos en forma de ADN, ADNc, ARNm o ARN autorreplicante. En un aspecto de la presente invención, se proporciona una composición inmunogénica que comprende uno o más vectores arenavirus de la presente invención. En diversas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en los que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido polimerasa de HBV truncado de la invención; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg de la presente invención. También se divulga en el presente documento una composición inmunogénica que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ iD N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. También se divulga en el presente documento una composición inmunogénica que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. En algunas realizaciones, las composiciones inmunogénicas comprenden un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en los que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41. El polipéptido del núcleo comprende un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg comprende un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. También divulgado en el presente documento, el polipéptido sAg puede comprender uno o más de un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41. En algunas realizaciones, las composiciones inmunogénicas comprenden un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en las que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94 ,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o una secuencia que sea al menos un 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94 ,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en los que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29 o 90, o una secuencia que es al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29 o al menos 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a<s>E<q>ID N.°: 37. Tal como se describe en el presente documento, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral pueden pertenecer independientemente a una familia taxonómica seleccionada entre Adenoviridae, Arenaviridae, Herpesviridae(p. ej..Cytomegalovirus), Poxviridae(p. ej.Vaccinia virus, p.e j.Vaccinia Ankara modificada (MVA)), Flaviviridae(p. ej.virus de la fiebre amarilla), Rhabdoviridae(p. ej.Vesiculovirus,p. ej.Maraba vesiculovirus), Togaviridae(p. ej.,Alphavirus). El primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica pueden ser de la misma familia taxonómica o de familias taxonómicas diferentes. En las composiciones inmunogénicas de la invención, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica son de Arenaviridae. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica son independientemente de un vector arenavirus seleccionado de Mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), Mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus de Pichinde o arenavirus de Pichinde (PICV)), virus Guanarito (GTOV), virus Junín (JUNV), virus Lassa (LASV), virus Lujo (LUJV), virus Machupo (MACV), virus Sabia (SABV) y virus Whitewater Arroyo (WWAV). En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son independientemente de un vector arenavirus seleccionado entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)). En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de replicación defectuosa o de replicación deficiente. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de replicación atenuada. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en los que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ<i>D N.°: 37. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en los que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37. En varias realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral se proporcionan en la composición inmunogénica en una proporción en el intervalo de 1:10 a 10:1,p. ej.,1:9 a 9:1, 1:8 a 8:1, 1:7 a 7:1, 1:6 a 6:1, 1:5 a 5:1, 1:4 a 4:1, 1:3 a 3:1, 1:2 a 2:1 o 1:1. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende entre103 y1012 unidades virales formadoras de foco (FFU) o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp) por mililitro,p. ej.,entre104 y 107 FFU o PFU o IU o vp virales por mililitro, p. ej., entre 103 y 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012. de aproximadamente104 a aproximadamente107 FFU o PFU o IU o vp virales por mililitro,p. ej.,de aproximadamente103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp virales por mililitro, de cada uno del primer vector de expresión viral y del segundo vector de expresión viral. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende además uno o más de un adyuvante, un detergente, un agente formador de micelas y un aceite. En diversas realizaciones, la composición inmunogénica está formulada para su administración por una vía seleccionada entre intravenosa, intramuscular, intradérmica, subcutánea y mucosa(p. ej.,bucal, intranasal, intrarrectal, intravaginal). En algunas realizaciones, la composición inmunogénica es una solución o suspensión acuosa,p. ej.,está formulada como un líquido. En algunas realizaciones, la composición inmunogénica está liofilizada.
[0017] En el presente documento también se describen kits. El kit puede comprender una o más,p. ej.,dos o más, dosis unitarias de uno o más,p. ej.,dos o más, de un polipéptido de polimerasa de HBV truncado, uno o más,p. ej.,dos o más, de un polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV y/o uno o más,p. ej.,dos o más, de una proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. El kit puede comprender una o más, p .e j . ,dos o más, dosis unitarias de uno o más, p .e j.,dos o más, polinucleótidos que codifican uno o más,p. e j .,dos o más, de un polipéptido de polimerasa de HBV truncado, uno o más,p. ej.,dos o más, de un polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV y/o uno o más, p .ej.,dos o más, de una proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. El kit puede comprender una o más, p. ej., dos o más, dosis unitarias de uno o más,p. ej.,dos o más, vectores que comprenden uno o más,p. ej.,dos o más, polinucleótidos que codifican uno o más,p. ej.,dos o más, de un polipéptido de polimerasa de HBV truncado, uno o más,p. e j.,dos o más, de un polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV y/o uno o más,p. ej.,dos o más, de una proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento.
El kit puede comprender una o más,p. ej.,dos o más, dosis unitarias de una o más,p. ej.,dos o más, composiciones inmunogénicas, como se describe en el presente documento. La una o más dosis unitarias del kit pueden estar en un único envase. La una o más dosis unitarias del kit pueden estar en dos o más envases separados. El kit puede comprender uno o más recipientes seleccionados entre viales, ampollas y jeringas precargadas. El kit puede comprender uno o más recipientes que contengan uno o más polipéptidos, uno o más polinucleótidos, uno o más vectores o una o más composiciones inmunogénicas en una solución o suspensión acuosa, o como una preparación liofilizada. La una o más dosis unitarias pueden ser iguales o diferentes. El kit puede comprender una o más dosis unitarias de uno o más vectores virales, como se describe en el presente documento, en el que las dosis unitarias están en el intervalo de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades formadoras de foco (FFU) virales o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp), porej.p .ej.de aproximadamente 104 a aproximadamente 107 FFU o PFU o IU o vp virales, p . ej . de aproximadamente 103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp virales. El kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores que expresan, o una composición inmunogénica que comprende, al menos dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del h Bv que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. El kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores que expresan, o una composición inmunogénica que comprende, al menos dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. El kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores que expresan, o una composición inmunogénica que comprende, al menos dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41. El polipéptido del núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. En algunas realizaciones, el polipéptido sAg comprende un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41. El kit puede comprender primero y segundo vectores que codifican primero y segundo polipéptidos inmunogénicos, respectivamente, los primero y segundo polipéptidos inmunogénicos que comprenden, respectivamente: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41. El kit puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en los que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37. El kit puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29 o 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29 o 90; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. El kit puede comprender una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica que comprende un primer y un segundo vectores de expresión viral, como se describe en el presente documento, en el que el primer y el segundo vectores de expresión viral comprenden un mammarenavirus Cali de replicación deficiente o de replicación defectuosa (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)). El kit puede comprender una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica que comprende primero y segundo vectores de expresión viral, como se describe en el presente documento, en el que el primero y segundo vectores de expresión viral comprenden un mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica de replicación deficiente o de replicación defectuosa (LCMV). El kit puede comprender (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica, como se describe en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Adenoviridae; y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica, como se describe en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Poxviridae(p. ej.,virus Vaccinia,p. ej.,Vaccinia Ankara modificado (MVA)). El kit puede comprender (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica, tal como se describe en el presente documento, en la que el primer y el segundo vectores de expresión viral son de Arenaviridae; y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica, tal como se describe en el presente documento, en la que el primer y el segundo vectores de expresión viral son de Adenoviridae. El kit puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en el que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. El kit puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en los que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. El kit puede comprender además una o más dosis unitarias de uno o más agentes terapéuticos adicionales. El kit puede comprender además uno o más agonistas o activadores de uno 0 más receptores tipoToll(TLR). El kit puede comprender además uno o más agonistas o activadores de TLR seleccionados entre un agonista de TLR2, un agonista de TLR3, un agonista de TLR4, un agonista de TLR5, un agonista de TLR7, un agonista de TLR8 y un agonista de TLR9. El kit puede comprender además un agonista de TLR7 seleccionado entre GS 9620 (vesatolimod), R848 (Resiquimod), DS-0509, LHC-165 y TMX-101 (imiquimod). El kit puede comprender además un agonista de TLR8 seleccionado entre GS-9688, R848 (Resiquimod) y NKTR-262 (agonista dual TLR7/TLR8). El kit puede comprender además uno o más agonistas del receptor de interleucina de un receptor de interleucina seleccionado entre IL-2, IL-7, IL-12 e IL-15. El kit puede comprender además una o más citocinas seleccionadas entre IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 y sus variantes. El kit puede comprender además uno o más activadores de la inmunidad innata. El kit puede comprender además uno o más activadores inmunitarios innatos que comprenden un agonista de un receptor seleccionado entre tirosina quinasa 3 relacionada con fms (FLT3), receptor estimulador de genes de interferón (STING), DExD/H-box helicasa 58 (DDX58; también conocido como RIG-I), dominio 2 que contiene oligomerización de unión a nucleótidos (NOD2). El kit puede comprender además una o más dosis unitarias de GS-3583 y/o GS-9992. El kit puede comprender además uno o más antagonistas o inhibidores de una proteína o receptor de punto de control inmunitario inhibitorio y/o uno o más activadores o agonistas de una proteína o receptor de punto de control inmunitario estimulador. El kit puede comprender además una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario seleccionados entre CD27, CD70; CD40, CD40LG; CD47, CD48 (SLAMF2), dominio 2 que contiene inmunoglobulina y transmembrana (TMIGD2, CD28H), CD84 (LY9B, SLAMF5), CD96, CD160, MS4A1 (CD20), CD244 (SLAMF4); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T que contiene dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); ligando 1 del receptor 3 de citotoxicidad de células asesinas naturales (NCR3LG1, B7H6); proteína 2 de asociación HERV-H LTR (HHLA2, B7H7); coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (T<n>F<r>SF4, OX40); miembro 4 de la superfamilia T<n>F (TNFSF4, OX40L); TNFRSF8 (CD30), TNFSF8 (CD30L); TNFRSF10A (CD261, DR4, TRAILR1), TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF10B (CD262, DR5, TRAILR2), TNFRSF10 (TRAIL); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); TNFRSF17 (BCMA, CD269), TNFSF13B (BAFF); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); secuencia A relacionada con el polipéptido de clase I del CMH (MICA); secuencia B relacionada con el polipéptido MHC de clase I (MICB); CD274 (CD274, Pd L1, PD-L1); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a los linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); Cd 80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular receptora de poliovirus (PVR, CD155); dominio de inmunoglobulina relacionado con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); dominio 4 que contiene inmunoglobulina de células T y mucina (TIMD4; TIM4); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina 9 (LGALS9); activador linfocítico 3 (LAG3, c D223); miembro de la familia 1 de la molécula de activación linfocítica de señalización (SLAMF1, SLAM, CD150); antígeno linfocítico 9 (LY9, CD229, SLAMF3); miembro de la familia 6 de SLAM (SLAMF6, CD352); miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7, CD319); proteína 1 de unión a UL16 (ULBP1); proteína 2 de unión a UL16 (ULBP2); proteína 3 de unión a u L16 (ULBP3); transcrito temprano 1E del ácido retinoico (RAET1E; ULBP4); transcrito temprano 1G del ácido retinoico (RAET1G; ULBP5); transcripción temprana del ácido retinoico 1L (RAET1L; ULBP6); activador de linfocitos 3 (CD223); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor C1 similar a la lectina de células asesinas (KLRC1, NKG2A,<c>D159A); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); receptor C2 similar a la lectina de células asesinas (KLRC2, CD159c, NKG2C); receptor similar a la lectina de células asesinas C3 (KLRC3, NKG2E); receptor similar a la lectina de células asesinas C4 (KLRC4, NKG2F); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); Receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); Receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1); y miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7). En algunas realizaciones, el kit comprende además uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T. El kit puede comprender además una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibidores de células T seleccionados entre CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); ligando 2 de muerte celular programada 1 (PDCD1LG2, PD-L2, CD273); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T con dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); dominio de inmunoglobulinas relacionado con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina 9 (LGALS9); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); y receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1). El kit puede comprender además uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T. El kit puede comprender además una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T seleccionados entre CD27, CD70; CD40, CD40LG; coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF4, OX40); miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR) (PVR, CD155). El kit puede comprender además una o más dosis unitarias de AGEN-2373 y/o AGEN-1223. El kit puede comprender además uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células NK. El kit puede comprender además una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibidores de células NK seleccionados entre receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas C1 (KLRC1, NKG2A, CD159A); y receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1, CD94). El kit puede comprender además uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK. El kit puede comprender además una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK seleccionados entre CD16, CD226 (DNAM-1); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); y miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7). El kit puede comprender además uno o más inhibidores proteínicos de PD-L1 (CD274), PD-1 (PDCD1) y/o CTLA4. El kit puede comprender además uno o más inhibidores proteínicos de CTLA4 seleccionados entre ipilimumab, tremelimumab, BMS-986218, AGEN1181, AGEN1884, BMS-986249, MK-1308, REGN-4659, ADU-1604, CS-1002, BCD-145, APL-509, JS-007, BA-3071, ONC-392, AGEN-2041, JHL-1155, KN-044, CG-0161, ATOR-1144, PBI-5D3H5, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/ CTLA4), MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4) y AK-104 (CTLA4/PD-1). El kit puede comprender además uno o más inhibidores proteínicos de PD-L1 (CD274) o PD-1 (PDCD1) seleccionados de entre zimberelimab (AB122), pembrolizumab, nivolumab, cemiplimab, pidilizumab, AMP-224, MEDI0680 (AMP-514), spartalizumab, atezolizumab, avelumab, ASC22, durvalumab, BMS-936559, CK-301, PF-06801591, BGB-A317 (tislelizumab), GLS-010 (WBP-3055), AK-103 (HX-008), AK-105, CS-1003, HLX-10, MGA-012, BI754091, AGEN-2034, JS-001 (toripalimab), JNJ-63723283, genolimzumab (CBT-501), LZM-009, BCD-100, LY-3300054, SHR-1201, SHR-1210 (camrelizumab), Sym-021, ABBV-181, PD1-PIK, BAT-1306, (MSB0010718C), CX-072, CBT-502, TSR-042 (dostarlimab), MSB-2311, JTX-4014, BGB-A333, SHR-1316, CS-1001 (WBP-3155, KN-035, IBI-308 (sintilimab), HLX-20, KL-A167, STI-A1014, STI-A1015 (IMC-001), BCD-135, FAZ-053, TQB-2450, MDX1105-01, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/ CTLA4), MGD-013 (PD-1/LAG-3), FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), RO-7121661 (PD-1/TIM-3), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4), AK-104 (CTLA4/PD-1), M7824 (PD-LI/dominio TGFp-EC), CA-170 (PD-L1/VISTA), CDX-527 (CD27/PD-L1), LY-3415244 (TIM3/PDL1) e INBRX-105 (4-1BB/PDL1). El kit puede comprender además una o más moléculas pequeñas inhibidoras de CD274 (PDL1, PD-L1), muerte celular programada 1 (P<d>C<d>1, PD1, PD-1) y/o CTLA4. El kit puede comprender además una o más moléculas pequeñas inhibidoras de CD274 o PDCD1 seleccionadas entre GS-4224, GS-4416, INCB086550 y MAX10181. El kit puede comprender además la pequeña molécula inhibidora de CTLA4, BPI-002. El kit puede comprender además uno o más agentes antivirales. El kit puede comprender además uno o más agentes antivirales seleccionados entre lamivudina (LAM), adefovir dipivoxil (ADV), entecavir (ETV), telbivudina (LdT), tenofovir disoproxil fumarato (TDF), tenofovir alafenamida (TAF o VEMLIDY®) y ledipasvir sofosbuvir (HARVONI®). El kit puede comprender además uno o más agentes terapéuticos seleccionados entre inhibidores del antígeno del HBV(p. ej.,inhibidores del antígeno del núcleo del HBV (HBcAg), inhibidores del antígeno de superficie del HBV (HBsAg), inhibidores de HBx, inhibidores del antígeno E del HBV), anticuerpos antiantígeno del HBV, ácidos nucleicos inhibidores dirigidos contra el HBV(p. ej.,oligonucleótidos antisentido, ARN de interferencia corta (ARNsi), ARN de interferencia dirigido al ADN (ddARNi)), editores de genes dirigidos al HBV(p. ej.,CRISPR-Cas(p. ej.,Cas9, Cas12, Cascade, Cas13), nucleasas de dedos de zinc, endonucleasashoming,meganucleasashoming (p. ej.,ARCUS), nucleasas sintéticas, TALEN), inhibidores de ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc) e inhibidores de la secreción o ensamblaje del HBsAg e inhibidores de la entrada viral del HBV.
[0018]También se divulgan en el presente documento métodos para provocar una respuesta inmunitaria al virus de la hepatitis B humana (HBV) en un sujeto que lo necesite. También se describen métodos para tratar o prevenir el virus de la hepatitis B humana (HBV) en un sujeto que lo necesite. Los métodos pueden comprender la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas, como se describe en el presente documento. Los métodos pueden comprender la administración de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de polimerasa de HBV truncado o un polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV, como se describe en el presente documento; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ iD N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41. El polipéptido del núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg puede comprender un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27 32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27 32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de SEQ ID N.°: 29 o 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29 o 90; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. En algunos métodos, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de Arenaviridae. En algunos métodos, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de un vector arenavirus seleccionado entre Mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), Mammarenavirus Cali (también conocido como Pichinde mammarenavirus o Pichinde arenavirus (PICV)), Guanarito virus (GTOV), Junin virus (Ju NV), Lassa virus (LASV), Lujo virus (LUJV), Machupo virus (MACV), Sabia virus (SABV), y Whitewater Arroyo virus (WWAV). En algunos métodos, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de un vector arenavirus seleccionado entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)). En los métodos, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de replicación defectuosa o de replicación deficiente. En algunos métodos, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de replicación atenuada. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en el que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. Los métodos pueden comprender administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más composiciones inmunogénicas que comprenden una mezcla que comprende un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en el que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de s Eq ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. En algunos métodos, el sujeto está infectado por el HBV, se sospecha que está infectado por el HBV o corre el riesgo de estar infectado por el HBV. En algunos métodos, el sujeto es asintomático. En algunos métodos, el sujeto está infectado crónicamente por el HBV. En algunos métodos, el sujeto presenta o experimenta uno o más síntomas seleccionados entre insuficiencia hepática, cáncer hepático, fibrosis hepática y cirrosis hepática. En algunos métodos, el sujeto está infectado agudamente por el HBV. En algunos métodos, el sujeto presenta o experimenta uno o más síntomas seleccionados entre ictericia, redes visibles de vasos sanguíneos hinchados en la piel, orina de color oscuro(p. ej.,naranja o marrón), heces de color claro, fiebre, fatiga persistente, malestar, dolor abdominal, líquido abdominal, pérdida de apetito, náuseas y vómitos. En algunos métodos, el sujeto está coinfectado con el virus de la hepatitis D (VHD). En algunos métodos, la composición se administra por una vía seleccionada entre intravenosa, intramuscular, intradérmica, subcutánea y mucosa(p. ej.,bucal, intranasal, intrarrectal, intravaginal). Los métodos pueden comprender la administración al sujeto de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades formadoras de foco (FFU) o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp) virales,p. ej.,de aproximadamente 104 a aproximadamente 107 FFU o PFU o IU o vp virales,p. ej.,de aproximadamente 103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp virales, por administración. En algunos métodos, la una o más composiciones se administran varias veces. Los métodos pueden implicar la administración intravenosa o intramuscular de aproximadamente 106 a aproximadamente 108 FFU o PFU o IU o vp virales por administración cada dos semanas (Q2W) o mensualmente (Q4W). Los métodos pueden implicar múltiples administraciones de una o más composiciones inmunogénicas durante un periodo de tiempo de al menos 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses, o más, o hasta que el sAg no sea detectable en el suero o plasma del sujeto. Los métodos pueden comprender una pauta de sensibilización y refuerzo que comprende la administración de una composición de sensibilización en un primer momento y la administración de una o más composiciones de refuerzo en uno o más momentos posteriores. Según proceda, los métodos pueden implicar la repetición de la pauta de sensibilización y refuerzo en una o más iteraciones. En algunos métodos, las administraciones de la composición de sensibilización y de una o más composiciones de refuerzo se espacian al menos 1 semana y hasta al menos 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses o 6 meses. En algunos métodos, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender la misma composición inmunogénica o pueden comprender diferentes composiciones inmunogénicas. En algunos métodos, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo comprenden el mismo uno o más polipéptidos y el mismo vector de expresión viral. En algunos métodos, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo comprenden diferentes polipéptidos y/o diferentes vectores de expresión viral. Los métodos pueden implicar la sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más(p. ej.,primero y segundo) vectores de expresión viral, y el refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más(p. ej.,tercero y cuarto) vectores de expresión viral. La pauta de sensibilización y refuerzo puede comprender: (a) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más polinucleótidos, donde el uno o más polinucleótidos comprenden ADN, ADNc, ARNm o ARN autorreplicante; (b) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más polinucleótidos, en la que uno o más polinucleótidos comprenden ADN, ADNc, ARNm o ARN autorreplicante, y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral; (c) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral, y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral, en la que el uno o más vectores de expresión viral en la composición de sensibilización y el uno o más vectores de expresión viral en la composición de refuerzo son de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas; (d) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación, en la que uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación en la composición de sensibilización y uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación en la composición de refuerzo son de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas; (e) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuada por replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuada por replicación, en la que uno o más vectores de expresión viral atenuada por replicación en la composición de sensibilización y uno o más vectores de expresión viral atenuada por replicación en la composición de refuerzo son de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas; (f) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuados en replicación; (g) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuados en replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación (h) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus de Pichinde (PICV); (i) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) (j) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente (k) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) deficientes en replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus pichinde (PICV) deficientes en replicación; (l) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus; (m) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus; n) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus; (o) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus; (p) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus; o q) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus. Los métodos pueden incluir una pauta de sensibilización y refuerzo que comprende: (a) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de Pichinde (PICV); (b) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV); (c) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente; d) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus de Pichinde (PICV) de replicación deficiente. La composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender una composición inmunogénica como la descrita en el presente documento. El sujeto puede no estar recibiendo terapia antiviral o ésta puede interrumpirse antes de la administración de una o más composiciones inmunogénicas. En algunos métodos, la terapia antiviral se interrumpe después de una o más administraciones de una o más composiciones inmunogénicas. Los métodos pueden comprender además la administración al sujeto de uno o más agentes terapéuticos adicionales,p. ej.,dos, tres, cuatro o más agentes terapéuticos adicionales. Los métodos pueden comprender la coadministración de uno o más agonistas o activadores de uno o más receptores tipoToll(TLR). Los métodos pueden comprender la coadministración de uno o más agonistas o activadores de TLR seleccionados de entre un agonista de TLR2, un agonista de TLR3, un agonista de TLR4, un agonista de TLR5, un agonista de TLR7, un agonista de TLR8 y un agonista de TLR9. En algunas realizaciones, los métodos implican la coadministración de un agonista de TLR7 seleccionado entre GS-9620 (vesatolimod), R848 (Resiquimod), DS-0509, LHC-165 y TMX-101 (imiquimod). Los métodos pueden implicar la coadministración de un agonista de TLR8 seleccionado entre GS-9688, R848 (Resiquimod) y NKTR-262 (agonista dual TLR7/TLR8). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más agonistas del receptor de interleucina de un receptor de interleucina seleccionado de entre IL-2, IL-7, IL-12 e IL-15. Los métodos pueden implicar la coadministración de una o más citocinas seleccionadas entre IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 y sus variantes. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más activadores de la inmunidad innata. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más activadores inmunitarios innatos que comprendan un agonista de un receptor seleccionado entre la tirosina quinasa 3 relacionada con fms (FLT3), el receptor estimulador de genes de interferón (STING), la DExD/H-box helicasa 58 (DDX58; también conocida como RIG-I), el dominio 2 que contiene oligomerización de unión a nucleótidos (NOD2). Los métodos pueden incluir la administración conjunta de GS-3583 y/o GS-9992. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más antagonistas o inhibidores de una proteína o receptor de punto de control inmunitario inhibitorio y/o uno o más activadores o agonistas de una proteína o receptor de punto de control inmunitario estimulador. Los métodos pueden implicar la coadministración de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario seleccionados entre: CD27, CD70; CD40, CD40LG; CD47, CD48 (SLAMF2), dominio 2 que contiene inmunoglobulina y transmembrana (TMIGD2, CD28H), CD84 (LY9B, SLAMF5), CD96, CD160, MS4A1 (CD20), CD244 (SLAMF4); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T que contiene dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); ligando 1 del receptor 3 de citotoxicidad de células asesinas naturales (NCR3LG1, B7H6); proteína 2 de asociación H<e>RV-H LTR (HHL<a>2, B7H7); coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (iCo SLG, B7H2); Miembro 4 de la superfamilia de receptores del TNF (TNFRSF4, OX40); Miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF8 (CD30), TNFSF8 (CD30L); TNFRSF10A (CD261, DR4, TRAILR1), TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF10B (CD262, DR5, TRAILR2), TNFRSF10 (TRAIL); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); TNFRSF17 (BCMA, CD269), TNFSF13B (BAFF); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); secuencia A relacionada con el polipéptido de clase I del CMH (MICA); secuencia B relacionada con el polipéptido de clase I del CMH (MICB); CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR, CD155); dominio de inmunoglobulina relacionado con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); Inmunoglobulina de células T y dominio de mucina 4 (TIMD4; TIM4); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina 9 (LGALS9); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); molécula de activación linfocítica señalizadora miembro 1 de la familia (SLAMF1, SLAM, CD150); antígeno linfocitario 9 (LY9, CD229, SLAMF3); miembro 6 de la familia SLAM (SLAMF6, CD352); miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7, CD319); proteína 1 de unión a UL16 (ULBP1); proteína 2 de unión a UL16 (U<l>B<p>2); proteína 3 de unión a UL16 (ULBP3); transcrito temprano 1E del ácido retinoico (RAET1E; ULBP4); transcrito temprano 1G del ácido retinoico (RAET1G; ULBP5); transcripción temprana del ácido retinoico 1L (RAET1L; ULBP6); activador de linfocitos 3 (CD223); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor C1 similar a la lectina de células asesinas (KLRC1, NKG2A, CD159A); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); receptor C2 similar a la lectina de células asesinas (KLRC2, CD159c, NKG2C); receptor similar a la lectina de células asesinas C3 (KLRC3, NKG2E); receptor similar a la lectina de células asesinas C4 (KLRC4, NKG2F); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios I cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); Receptor similar a la inmunoglobulina de célula asesinas, dos dominios I cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); Receptor similar a la inmunoglobulina de célula asesinas, dos dominios Ig cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de célula asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1); y miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más bloqueantes o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T.
Los métodos pueden implicar la coadministración de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibidores de células T seleccionados entre CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); ligando 2 de muerte celular programada 1 (PDCD1LG2, PD-L2, CD273); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T con dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); dominio de inmunoglobulinas relacionado con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina
9 (LGALS9); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmátic (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina células asesinas, dos dominios Ig cola citoplasmátic (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmátic (KIR2DL3); y receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T. Los métodos pueden implicar la coadministración de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T seleccionados entre CD27, CD70; CD40, CD40LG; coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF4, OX40); miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR) (PVR, CD155). Los métodos pueden incluir la coadministración de AGEN-2373 y/o AGEN-1223. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más bloqueantes o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células NK.
Los métodos pueden implicar la coadministración de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibidores de células<n>K seleccionados entre receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas C1 (KLRC1, NKG2A, CD159A); y receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1, CD94). En algunas realizaciones, los métodos implican la coadministración de uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK. En algunas realizaciones, los métodos implican la coadministración de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK seleccionados entre CD16, CD226 (DNAM-1); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); y miembro 7 de la familia
SLAM (SLAMF7). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más inhibidores proteínicos de PD-L1 (CD274), PD-1 (PDCD1) o CTLA4. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más inhibidores proteínicos de CT<l>A4 seleccionados de entre ipilimumab, tremelimumab, BMS-986218, AGEN1181, AGEN1884, BMS-986249, MK-1308, REGN-4659, ADU-1604, CS-1002, BCD-145, APL-509, JS-007, BA-3071, ONC-392, AGEN-2041, JHL-1155, KN-044, CG-0161, ATOR-1144, PBI-5D3H5, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/ CTLA4), MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4) y AK-104 (CTLA4/PD-1). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más inhibidores proteicos de PD-L1 (CD274) o PD-1 (PDCD1) seleccionados de entre zimberelimab (AB 122), pembrolizumab, nivolumab, cemiplimab, pidilizumab, AMP-224, MEDI0680 (AMP-514), spartalizumab, atezolizumab, avelumab, ASC22, durvalumab, BMS-936559, CK-301, PF-06801591, BGB-A317 (tislelizumab), GLS-010 (WBP-3055), AK-103 (HX-008), AK-105, CS-1003, HLX-10, MGA-012, BI-754091, AGEN-2034, JS-001 (toripalimab), JNJ-63723283, genolimzumab (CBT-501), LZM-009, BCD-100, LY-3300054,
SHR-1201, SHR-1210 (camrelizumab), Sym-021, ABBV-181, PD1-PIK, BAT-1306, (MSB0010718C), CX-072, CBT-502,
TSR-042 (dostarlimab), MSB-2311, JTX-4014, BGB-A333, SHR-1316, CS-1001 (WBP-3155, KN-035, IBI-308 (sintilimab),
HLX-20, KL-A167, STI-A1014, STI-A1015 (IMC-001), BCD-135, FAZ-053, TQB-2450, MDX1105-01, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/ CTLA4), MGD-013 (PD-1/LAG-3), FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), RO-7121661 (PD-1/TIM-3), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4), AK-104 (CTLA4/PD-1), M7824 (PD-L1/dominio TGFp-EC), CA-170 (PD-L1/VISTA), CDX-527 (CD27/PD-L1), LY-3415244 (TIM3/PDL1) e INBRX-105 (4-1BB/PDL1). Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más inhibidores de molécula pequeña de CD274 (PDL1, PD-L1), muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1) o CTLA4. Los métodos pueden implicar la coadministración de uno o más inhibidores de molécula pequeña de CD274 o PDCD1 seleccionados entre GS-4224, GS-4416, INCB086550 y MAX10181. Los métodos pueden incluir la coadministración de BPI-002 (una pequeña molécula inhibidora de CTLA4). Los métodos pueden comprender la coadministración al sujeto de uno o más agentes antivirales. Los métodos pueden comprender la coadministración de uno o más agentes antivirales seleccionados entre lamivudina (LAM), adefovir dipivoxil (ADV), entecavir (ETV), telbivudina (LdT), tenofovir disoproxil fumarato (TDF), tenofovir alafenamida (TAF o VEMLIDY®) y ledipasvir sofosbuvir (HARVONI®). Los métodos pueden comprender la coadministración al sujeto de uno o más agentes terapéuticos seleccionados entre inhibidores del antígeno del HBV(p. ej.,inhibidores del antígeno del núcleo del HBV (HBcAg), inhibidores del antígeno de superficie del HBV (HBsAg), inhibidores de HBx, inhibidores del antígeno E del HBV), anticuerpos antiantígeno del HBV, ácidos nucleicos inhibidores dirigidos contra el HBV(p. ej.,oligonucleótidos antisentido, ARN de interferencia corta (ARNsi), ARN de interferencia dirigido al ADN (ddARNi)), editores de genes dirigidos al HBV(p. ej.,CRISPR-Cas(p. ej.,Cas9, Cas12, Cascade, Cas13), nucleasas de dedos de zinc, endonucleasashoming,meganucleasashoming (p. ej.,ARCUS), nucleasas sintéticas, TALENs), inhibidores de ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc) e inhibidores de la secreción o ensamblaje del HBsAg e inhibidores de la entrada viral del HBV. El método puede activar en el sujeto células T CD8+ y/o células T CD4+ dirigidas a uno o más epítopos polipéptidos del HBV. El método puede provocar en el sujeto la producción de anticuerpos que se unen a uno o más polipéptidos del HBV.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
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La Figura 1 ilustra la inmunogenicidad de los vectores adenovirus que expresan HBsAg de los genotipos (GT) A, B, C y D en ratones DO. RatonesDiversity Outbred(DO) de cinco a siete semanas de edad (n=8 por grupo) fueron inyectados por vía intramuscular con 1*108 partículas virales (vp) de adenovirus que codifican secuencias consenso de HBsAg de los genotipos (GT)-A, B, C, D del HBV (SEQ ID N.°: 1-4, respectivamente). El día 14 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluaron las respuestas de las células T mediante ELISPOT de interferón (IFN)-<y>(kit ELISPOT de IFN-<y>de ratón de BD, catálogo N.° 551083). Cada símbolo corresponde a un ratón individual en el que se evaluaron las respuestas a grupos de péptidos superpuestos correspondientes a GT-A, B, C y D HBsAg.
La Figura 2 ilustra esquemas de cada diseño de antígeno que contiene Pol. Cada dominio Pol se indica por separado (TP, proteína terminal; RT, transcriptasa inversa; RNH, ARNasa H). Localización aproximada de la mutación de D a H en el motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) en RT y de la mutación E a H en el motivo AELL (SEQ ID N.°: 98) en la RNH se indican debajo de los dominios RT y RNH. La designación de cada constructo se muestra a la izquierda, y el intervalo de tamaño de aminoácidos de los constructos GT-A, B, C y D se muestra a la derecha. "YM<h>D" y "AHLL" divulgados como SEQ ID N.° 99 y 100, respectivamente.
La Figura 3 ilustra la inmunogenicidad de los vectores adenovirus que expresan la proteína de fusión Núcleo-Pol en ratones C57BL/6. Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad (n=5 por grupo) fueron inyectados con 1*108 partículas virales (vp) de adenovirus que codifican variantes de fusión núcleo-Pol de SEQ ID N.°: 15-26. El genotipo de cada antígeno se muestra encima de cada gráfico, mientras que las designaciones de los antígenos se muestran en el eje horizontal (Mut: núcleo'Pol™*, A1: núcleo'Polñ1, A3: núcleo-PolA3>. El día 14 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluó la respuesta de las células T mediante ELiSp OT de IFN-y (kit ELISPOT de IFN-y de ratón BD, catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos superpuestos correspondientes al núcleo y Pol del GT-D. Las barras muestran las respuestas geométricas medias apiladas de cada grupo. SFU, unidades formadoras de manchas.
Las Figuras 4A-4B ilustran la inmunogenicidad de los vectores adenovirus que expresan la proteína de fusión Núcleo-Pol en ratones DO. Ratones DO de cinco a siete semanas de edad (n=8 por grupo) fueron inyectados por vía intramuscular con 1*108 partículas virales (vp) de adenovirus que codifican núcleo'PolA3 del GT-A o núcleo' PolA1 del GT-B, C, o D. El día 14 después de la inyección, se cosecharon los esplenocitos y se evaluaron las respuestas de las células T mediante respuestas ELISPOT de IFN-y (kit ELISPOT de IFN-y de ratón BD, catálogo N.° 551083) a grupos de péptidos superpuestos correspondientes a núcleo y Pol del GT-A y D. Las comparaciones estadísticas entre las respuestas a péptidos de diferentes genotipos dentro de los ratones que recibieron la misma vacuna se evaluaron con pruebas de rangos con signo de Wilcoxon. Las comparaciones estadísticas entre los ratones que recibieron diferentes vacunas se evaluaron con las pruebas de Mann-Whitney. (A) Respuestas a los péptidos Pol. (B) Respuestas a péptidos del Núcleo. SFU, unidades formadoras de manchas.
La Figura 5 ilustra la inmunogenicidad de los vectores de adenovirus que expresan Pol. Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad (n=5 por grupo) fueron inyectados con 1*108 partículas virales (vp) de adenovirus que expresaban las variantes del antígeno Pol de las SEQ ID N.°: 8, 12, 13, 14, o una secuencia Pol del GT-D completa y no modificada (PolCtrl del GT-D). El día 14 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluó la respuesta de las células T mediante ELISPOT de IFN-y (kit ELISPOT de IFN-y de ratón Bd , catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos superpuestos correspondientes a Pol del GT-D. SFU: unidades formadoras de manchas.
La Figura 6 ilustra el diseño del estudio que evalúa la eficacia de los vectores Ad5 y vaccinia que expresan el HBV en el modelo de ratón AAV de la HBB (AAV-HBV). Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad fueron transducidos con 1012 copias genómicas de AAV-HBV el día -35. Los ratones se asignaron aleatoriamente a los grupos de tratamiento en función de los niveles séricos de HBsAg en el día -7. Las vacunas de cebado de adenovirus tipo 5 que expresaban antígenos del HBV se administraron por vía intramuscular (i.m.) en 50 pl el día 0, y las vacunas de refuerzo de vaccinia que expresaban los mismos antígenos del HBV se administraron por vía 1. m. en 50 |jl el día 32. Entre los días 46 y 67, se administró a los ratones el anticuerpo monoclonal anti-PD-1 (anti-CD279) RMP1-14 o un mAb de control del isotipo. Se recogieron muestras de sangre para el análisis de antígenos virales los días -7, 14, 27, 46, 60, 67 y 88. Los esplenocitos se cosecharon el día 88 y se evaluaron para ELISPOT de IFN-<y>.
La Figura 7 ilustra la inmunogenicidad de la vacunación de sensibilización Ad5-refuerzo vaccinia en ratones AAV-HBV. Los esplenocitos se recogieron el día 88 en el estudio mostrado en la Figura 6. Las respuestas de las células T al HBsAg y al Pol se evaluaron mediante ELISPOT de IFN-<y>(kit ELISPOT de IFN-<y>de ratón BD, catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos superpuestos correspondientes al sAg y al Pol del GT-D. La línea discontinua indica la señal más alta en la ELISPOT de HBsAg observada en los ratones que recibieron la vacuna de control. mAb: anticuerpo monoclonal administrado. Iso: control de isotipo. aPD-1: anti-PD-1. Vax: indica si la vacuna contenía antígenos del HBV o antígenos de control (Ctrl). SFU, unidades formadoras de manchas.
La Figura 8 ilustra los efectos de la vacunación de sensibilización Ad5-refuerzo vaccinia que expresa el HBV en combinación con el bloqueo de PD-1 en ratones AAV-HBV. Los niveles séricos de HBeAg en el estudio mostrado en la Figura 6 se determinaron mediante ELISA (International Immunodiagnostics) en los puntos temporales indicados. La línea discontinua indica el límite inferior de detección. Ad: vector de adenovirus 5. Vac: vector de vacunación. Ctrl: antígeno de control. Isotipo: anticuerpo de control del isotipo. aPD-1: anticuerpo anti-ratón PD-1.
Las Figuras 9A-9C ilustran una visión general de las plataformas de vectores de arenavirus demostradas en los ejemplos proporcionados en el presente documento. (A) Esquema de un árbol filogenético de la familia de los arenavirus (Arenaviridae). En los ejemplos proporcionados en el presente documento, se seleccionaron mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) (NCBI:txid11623) del clado del Viejo Mundo (OW) y mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)) (NCBI:txid2169993) del clado del Nuevo Mundo (NW) para la generación de vectores que codifican antígenos del HBV.Véase, p. ej.,Buchmeier et al., 2001, "Arenaviridae: Los virus y su replicación". La taxonomía de los arenavirus se revisa más recientemente en,p. ej., Radoshitzky, et al., Arch Virol. (2015) 160(7): 1851-74. La información filogenética de Arenaviridae también está disponible en el sitio web Virus Pathogen Resource, ubicado en viprbrc.org. (B) Esquema de vectores de arenavirus con replicación defectuosa que tienen un genoma bisegmentado, descritos en WO2009083210, y (C) vectores de arenavirus con replicación atenuada que tienen un genoma trisegmentado, descritos en WO2016075250 y WO2017198726. Los vectores arenavirus de replicación defectuosa que tienen un genoma bisegmentado, descritos en el documento WO2009083210 y utilizados en los ejemplos que aquí se proporcionan, codifican tres de las cuatro proteínas virales (L, Z y NP) y un marco de lectura abierto para la inserción de un polinucleótido heterólogo,p. ej.,que codifica un antígeno. Los vectores arenavirus de replicación defectuosa que tienen un genoma bisegmentado sólo pueden propagarse cuando la GP viral se administra en trans. Los vectores de arenavirus de replicación atenuada que tienen un genoma trisegmentado, descritos en los documentos WO2016075250 y WO2017198726, tienen una duplicación artificial del segmento S del genoma, codifican las cuatro proteínas virales (L, Z, NP y GP) y tienen dos marcos de lectura abiertos para la inserción de uno o dos polinucleótidos heterólogos, p. ej., que codifican uno o dos antígenos.
La Figura 10 ilustra la inmunogenicidad de los antígenos Pol en vectores de mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) incompetentes para la replicación. Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad (n=6 por grupo) fueron inyectados por vía intravenosa con 1*106 unidades formadoras de foco (FFU) de vectores LCMV incompetentes para la replicación que expresaban las variantes GT-D y GT-B del antígeno Polñ1 (SEQ ID N.°: 6 y 8), Polñ3 (SEQ ID N.°: 10 y 12), y Pol300 (SEQ ID N.°: 13 y 14), o con medios como control negativo. El día 7 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluaron las respuestas de las células T mediante ELISPOT de I<f>N-<y>(kit ELISPOT de IFN-<y>de ratón BD, catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos superpuestos Pol correspondientes al genotipo del antígeno de inmunización en cada grupo. SFU, unidades formadoras de manchas.
La Figura 11 ilustra la inmunogenicidad de los vectores LCMV que expresan la proteína de fusión núcleo-HBsAg en ratones C57BL/6. Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad (n=6 por grupo) fueron inyectados con 1*106 unidades formadoras de foco (FFU) de vectores LCMV incompetentes para la replicación que expresaban variantes de fusión núcleo-HBsAg de SEQ ID N.°: 38-41 o inmunización simulada como control negativo. El día 7 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluaron las respuestas de las células T mediante ELI<s>P<o>T de IFN-<y>(kit ELISPOT de IFN-<y>de ratón BD, catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos del núcleo y de HBsAg superpuestos correspondientes al genotipo del antígeno de inmunización en cada grupo. SFU, unidades formadoras de manchas.
La figura 12 ilustra la respuesta de anticuerpos frente al HBsAg obtenida en ratones administrados con vectores LCMV incompetentes para la replicación que expresan la proteína de fusión núcleo-sAg. Ratones C57BL/6 (izquierda) o Balb/c (derecha) de seis a ocho semanas de edad (n=5 por grupo) fueron inyectados con 1*106 unidades formadoras de foco (FFU) de vectores LCMV incompetentes para la replicación que expresaban variantes de fusión núcleo-sAg de SEQ ID N.°: 38-41 o con medios como control negativo. El día 17 después de la inyección, se recogió suero y se comprobó la presencia de anticuerpos anti-HBsAg mediante ELISA (International Immunodiagnostics). La línea discontinua indica el límite inferior de detección de 11 mUI/ml. *p<0,05 mediante la prueba de Mann-Whitney.
La Figura 13 ilustra el efecto de la modificación de la secuencia de nucleótidos sobre la inmunogenicidad en células T de las proteínas de fusión núcleo-P2A-sAg. Ratones C57BL/6 de seis a ocho semanas de edad (n=6 por grupo) fueron inyectados con 1*10® unidades formadoras de foco (FFU) de vectores LCMV incompetentes para la replicación con núcleo-P2A-sAg del GT-D (SEQ ID N.°:36) o iNúcleo-p2A-sAg del GT-D (SEQ ID N.°: 37), o inmunización simulada como control negativo. El día 7 después de la inyección, se recogieron los esplenocitos y se evaluaron las respuestas de las células T mediante ELISPOT de iFN-y (kit BD ratón ELISPOT de IFN-y, catálogo N.° 551083) utilizando grupos de péptidos del núcleo y sAg superpuestos. Los análisis estadísticos se realizaron con las pruebas de Mann-Whitney.
Las Figuras 14A-14B ilustran la inmunogenicidad de la vacunación de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV incompetentes para la replicación (VV1) que codifican Núcleo-P2A-sAg del GT-B/C o iNúcleo-P2A-sAg del GT-D (Fig 14A) y Polñ3 del GT-B o Pol300 delGT-B (Fig 14B) en ratonesdiversity outbred.A los animales se les administraron 2 dosis de cada vacuna el día 0 y el día 28, tal como se describe en la Tabla 9. Los esplenocitos se cosecharon en el día 42 y las respuestas de las células T a los antígenos del HBV se midieron mediante ELISPOT de IFN-y utilizando grupos de péptidos sAg, del núcleo y polimerasa de varios genotipos virales según se indica. Los datos se expresan como valores de fondo (sin péptido) restados. Los análisis estadísticos se realizaron con las pruebas de Mann-Whitney. ns: no significativo estadísticamente; *p<0,0332.
Las Figuras 15A-15B ilustran la amplitud de las respuestas de células T específicas del HBV generadas tras la vacunación de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (VV1) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D (Fig 15A) o Pol300 delGT-B (Fig 15B) en ratonesdiversity outbred.ELISPOT de IFN-y se realizó utilizando péptidos del mismo genotipo viral (círculos rellenos) o de un genotipo viral diferente (círculos abiertos).
Las Figuras 16A-16B ilustran la inmunogenicidad de la vacunación de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (VV1) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B cuando se administran como vectores únicos o como una mezcla coformulada en ratones C57BL/6. A los animales se les administraron 2 dosis de los vectores el día 0 y el día 21, tal y como se describe en la Tabla 10. Los esplenocitos se recogieron el día 28 y las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos del núcleo (16A), sAg (16B) y Pol (16C).
Las Figuras 17A-17F ilustran la inmunogenicidad de vacunaciones repetidas con vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B en macacos cynomolgus. También se vacunó a un grupo de animales con vectores Ad5 y vaccinia que codificaban los mismos antígenos del HBV. A los animales se les administraron los vectores tal y como se describe en la Tabla 11. 17A: Grupo 1; 17B: Grupo 2; 17C: Grupo 3; 17D; Grupo 4; 17E: Grupo 5; 17F: Grupo 6: Las respuestas de las células T a los antígenos del HBV se evaluaron mediante ELISPOT de IFN-y utilizando grupos de péptidos sAg, del núcleo y Pol en los puntos temporales indicados. Los datos se expresan en respuestas totales de células T específicas del HBV definidas como la suma de los valores ELISPOT de IFN-y obtenidos tras la estimulación con grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa.
Las Figuras 18A-18F ilustran la inmunogenicidad de vacunaciones repetidas con vectores de LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B en macacos cynomolgus como se describe en la Figura 17 y la Tabla 11. Las Figuras 18A-18F se centran en el ELISPOT de IFN-y obtenido tras la estimulación con grupos de péptidos centrales. 18A: Grupo 1; 18B: Grupo 2; 18C: Grupo 3; 18D; Grupo 4; 18E: Grupo 5; 18F: Grupo 6:
Las Figuras 19A-19F ilustran la inmunogenicidad de vacunaciones repetidas con vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B en macacos cynomolgus como se describe en la Figura 17 y en la Tabla 11. Las Figuras 19A-19F se centran en el ELISPOT de IFN-<y>obtenido tras la estimulación con grupos de péptidos sAg. 19A). Grupo 1; 19B: Grupo 2; 19C: Grupo 3; 19D; Grupo 4; 19E: Grupo 5; 19F: Grupo 6:
Las Figuras 20A-20F ilustran la inmunogenicidad de vacunaciones repetidas con vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B en macacos cynomolgus como se describe en la Figura 17 y la Tabla 11. Las figuras 20A-20F se centran en los ELISPOT de IFN-<y>obtenidos tras la estimulación con grupos de péptidos Pol. 20A: Grupo 1; 20B: Grupo 2; 20C: Grupo 3; 20D; Grupo 4; 20E: Grupo 5; 20F: Grupo 6:
Las Figuras 21A-21B ilustran la frecuencia de células T CD8+ IFN-<y>específicas del HBV periféricas (A) y células T CD4+ (B) en la semana 14 de macacos cynomolgus de los grupos 1, 2 y 6 descritos en la tabla 11. Los datos se obtuvieron a partir de PBMC recolectadas en la semana 14 y reestimuladas con grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa del HBV. A continuación, se analizaron los subconjuntos T CD4+ y c D8+ en busca de IFN-Y intracelular mediante citometría de flujo.
Las Figuras 22A-22C ilustran la respuesta de anticuerpos frente a HBsAg en macacos cynomolgus del grupo 1 (22A), del grupo 2 (22B) y del grupo 6 (22C), tal como se describe en la Tabla 11. Se recogieron muestras de suero en los momentos indicados y se cuantificaron los anticuerpos anti-HBsAg mediante ELISA. La línea discontinua indica el límite inferior de cuantificación del ensayo (5 mlU/mL).
La Figura 23 ilustra el diseño del estudio que evalúa la inmunogenicidad de los vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B (vacuna contra el HBV) solos o en combinación con los inmunomoduladores anti-PD1, anti-CTLA4, anti-CD137 y la fusión FLT3L-Fc en el modelo de ratón AAV-HBV. Ratones C57BL/6 de seis a diez semanas de edad fueron transducidos con 1011 copias genómicas de AAV-HBV el día -35. Los ratones fueron asignados aleatoriamente a los grupos de tratamiento en función de los niveles séricos de HBsAg en el día -11. Los vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B se administraron por vía intravenosa (i.v.) en 200 pl el día 0, el día 21 y el día 42. Los ratones recibieron por vía intraperitoneal 200 pl de i) solución salina los días 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 y 56; ii) anticuerpo monoclonal anti-PD-1 RMP1-14 los días 42, 46, 49, 53, 56 y 60; iii) anticuerpo monoclonal antiCTLA-4 clon 9D9 los días 0, 4, 7, 11, 14, 18, 21, 25, 28, 32, 35, 39, 42, 46, 49 y 53; iv) anticuerpo monoclonal anti-CD137 clon mAb8 (IgG2b) los días 0, 21 y 42; v) proteína de fusión FLT3L-Fc los días -7, 14 y 35. Los asteriscos representan las dosis de cada inmunomodulador. Los esplenocitos se recogieron el día 105 y se evaluaron para ELISPOT de IFN-y utilizando grupos de péptidos sAg, núcleo y Pol. Un grupo de ratones C57BL/6 a los que no se administró el AAV-HBV, sino únicamente los vectores LCMV incompetentes para la replicación, se utilizó como control positivo para el ELISPOT de IFN-<y>.
Las Figuras 24A-24C ilustran la inmunogenicidad de vacunaciones repetidas con vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B en ratones AAV-HBV como se describe en la Tabla 12 y la Figura 23. Los esplenocitos se cosecharon el día 105 y se evaluaron para ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos sAg (24A), núcleo (24B) y polimerasa (24C). Los análisis estadísticos se realizaron con las pruebas de Mann-Whitney. ns: no significativo estadísticamente; *p<0,0332, **p<0,0021, ***p<0,0002, ****p<0,0001.
La Figura 25 ilustra la inmunogenicidad de la vacunación de sensibilización/de refuerzo con vectores PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican Pol300 ori del GT-B o Pol300 dint del GT-B en ratones C57BL/6. A los animales se les administraron 2 dosis de vacuna el día 0 y el día 21. Los esplenocitos se recogieron el día 28 y las respuestas de las células T específicas de la polimerasa del HBV se midieron mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos Pol. Los datos se expresan como valores de fondo (sin péptido) restados. Los análisis estadísticos se realizaron con las pruebas de Mann-Whitney. **p<0.0021.
Las Figuras 26A-26C ilustran la inmunogenicidad de la vacunación homóloga y heteróloga de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D o Pol300 del GT-Ben ratones C57BL/6. A los animales se les administraron 2 dosis de vector el día 0 y el día 21, tal y como se describe en la Tabla 15. Los esplenocitos se recogieron el día 28 y las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos sAg (26A), núcleo (26B) y polimerasa (26C). Los datos se expresan como valores de fondo (sin péptido) restados.
La Figura 27 ilustra la respuesta de anticuerpos frente al HBsAg en ratones C57BL/6 administrados con vectores LCMV y PICV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D mediante vacunación homóloga (VV1/VV1) o heteróloga (VV2/VV1) de vacunación de sensibilización/de refuerzo en el día 0 y en el día 21. Se recogieron muestras de suero el día 28 y se cuantificaron los anticuerpos anti-HBsAg mediante ELISA. La línea discontinua indica el límite inferior de cuantificación del ensayo (20 mIU/mL). Los análisis estadísticos se realizaron con las pruebas de Mann-Whitney. ** p<0.0021.
Las Figuras 28A-28C ilustran la inmunogenicidad de la vacunación homóloga y heteróloga de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (TT1) y PICV (TT2) de replicación atenuada que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B en ratones C57BL/6. A los animales se les administraron 2 dosis de los vectores el día 0 y el día 21, tal y como se describe en la Tabla 16. Los esplenocitos se recogieron el día 28 y las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos sAg (28A), núcleo (28B) y polimerasa (28C).
La Figura 29 ilustra la inmunogenicidad de la vacunación homóloga y heteróloga de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) deficientes en replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B en macacos cynomolgus. A los animales se les administraron 2 dosis de los vectores, una en la semana 0 y otra en la 4. Se cosecharon PBMC en la semana 6 y se midieron las respuestas de células T específicas del HBV mediante ELISPOT de IFN-y utilizando grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa. Los datos se expresan en respuestas totales de células T específicas del HBV definidas como la suma de los valores ELISPOT de IFN-<y>obtenidos tras la estimulación con grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa. El límite inferior de cuantificación (LLOQ) ELISPOT (línea discontinua) se definió como 200 IFN-Y+ SFU/106 PBMC. El análisis estadístico se realizó con la prueba de Mann-Whitney.
La Figura 30 ilustra la inmunogenicidad de la vacunación homóloga y heteróloga de sensibilización/de refuerzo con vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) deficientes en replicación que codifican núcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B administrados cada semana en macacos cynomolgus. A los animales se les administraron 4 dosis de los vectores en la semana 0, 1, 2 y 3. Se cosecharon PBMC en la semana 4 y se midieron las respuestas de células T específicas del HBV mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa. Los datos se expresan en respuestas totales de células T específicas del<h>B<v>definidas como la suma de los valores ELISPOT de IFN-y obtenidos tras la estimulación con grupos de péptidos sAg, núcleo y polimerasa. El límite inferior de cuantificación (LLOQ) ELISPOT (línea discontinua) se definió como 200 IFN-Y+ SFU/106 PBMC.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
1. Introducción
[0020]En el presente documento se describen polipéptidos útiles para provocar una respuesta inmunitaria protectora contra uno o más antígenos del virus de la hepatitis B (HBV) en un ser humano. Los polipéptidos inmunogénicos aquí descritos son capaces de provocar respuestas inmunitarias preventivas y/o terapéuticas en un ser humano contra uno o más antígenos del virus de la hepatitis B (HBV). Generalmente, los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento contienen porciones altamente conservadas de proteínas del HBV para inducir respuestas contra epítopos que son idénticos en el antígeno de la vacuna y en el HBV infectante presente en el paciente, a la vez que excluyen regiones poco conservadas, evitando así provocar respuestas inmunodominantes de células T dirigidas a epítopos que no están presentes en la cepa del HBV infectante del paciente. Los polipéptidos inmunogénicos aquí descritos inducen además respuestas de células T CD4+ y CD8+ para facilitar la eliminación de células infectadas, y además respuestas de anticuerpos anti-sAg que facilitan la eliminación de sAg, reduciendo o eliminando así la propagación del virus residual si no se consigue completamente la eliminación viral esterilizante. Además, se ha demostrado que los polipéptidos inmunogénicos aquí descritos son inmunogénicos cuando se administran mediante tecnologías de vacunas capaces de inducir las respuestas deseadas en humanos, y estables en los vectores de administración a través de suficientes rondas de replicación del vector para permitir la fabricación de vacunas a escala comercial. Los polipéptidos inmunogénicos pueden utilizarse en varios sistemas de vectores conocidos por inducir respuestas de células T CD4+ y CD8+, y de anticuerpos en humanos y otros primates no humanos. Los polipéptidos inmunogénicos se expresan a partir de vectores de arenavirus que pueden dosificarse repetidamente sin inducir anticuerpos anti-vector, superando así una limitación de muchas tecnologías de vectores virales anteriores y ofreciendo la posibilidad de aumentar el beneficio terapéutico con la dosificación repetida.
2. Polipéptidos útiles para promover la respuesta inmunitaria contra el virus de la hepatitis B (HBV)
[0021]En el presente documento se describen polipéptidos inmunogénicos útiles para promover, inducir y/o provocar una respuesta inmunogénica contra uno o más antígenos del virus de la hepatitis B (HBV). Los polipéptidos inmunogénicos pueden comprender variantes y/o fragmentos de polipéptidos codificados por un gen de la polimerasa (Pol) del HBV y polipéptidos de fusión que tengan en orden secuencial, del N-terminal al C-terminal, una variante y/o fragmento de un polipéptido codificado por un gen del núcleo del HBV y una variante y/o fragmento de un polipéptido codificado por el gen del antígeno de superficie (sAg). Los polipéptidos inmunogénicos pueden contener secuencias de aminoácidos basadas en secuencias de consenso o casi consenso de los genotipos A, B, C o D del HBV, y combinaciones de las mismas. Generalmente, los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento no comprenden secuencias de la proteína X del HBV (HBx), pre-núcleo, pre-S 1, pre-S2, o fragmentos de los mismos.
[0022]Los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento, y/o los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, pueden proporcionarse en forma aislada. Esto significa que dicho polipéptido o polinucleótido tiene una pureza de al menos el 50% p/p de proteínas interferentes, contaminantes celulares y de otro tipo derivados de su producción o purificación, pero no excluye la posibilidad de que el agente se combine con un exceso de portador(es) farmacéutico(s) aceptable(s) u otro vehículo destinado a facilitar su uso. El término "aislado", cuando se aplica a un polipéptido o polinucleótido, tal como se describe aquí, denota que el polipéptido o polinucleótido está esencialmente libre de componentes celulares con los que está asociado en estado natural. Puede estar, por ejemplo, en un estado homogéneo y puede estar en una solución seca o acuosa. La pureza y la homogeneidad pueden determinarse mediante métodos conocidos, p. ej., técnicas de química analítica como la electroforesis en gel de poliacrilamida, la cromatografía en columna, la cromatografía en capa fina o el análisis por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Una proteína que es la especie predominante presente en un preparado se considera sustancialmente purificada. Un polipéptido o polinucleótido "aislado" o "purificado" está sustancialmente libre de otro material celular, o medio de cultivo cuando se produce mediante técnicas recombinantes, o precursores químicos u otras sustancias químicas cuando se sintetiza químicamente. Los polipéptidos y/o polinucleótidos purificados pueden estar al menos en un 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, o 100% (p/p), separados de, purificados de, o libres de proteínas interferentes y contaminantes de la producción o purificación. A menudo, un agente es la especie macromolecular predominante que queda tras su purificación.
Variantes del Polipéptido Polimerasa del HBV
[0023]En el presente documento se describen polipéptidos de polimerasa del virus de la hepatitis B (HBV) truncados y/o mutantes de deleción interna.
[0024]La polimerasa del HBV de tipo salvaje tiene cuatro dominios, dispuestos en tándem en un único polipéptido desde el N-terminal hasta el C-terminal: el dominio de la proteína terminal (TP) conservado en todos los hepadnaviridae (residuos de aminoácidos 1 a 177), la región espaciadora (residuos de aminoácidos 178 a 335), que une la TP al dominio de la transcriptasa inversa (RT) (residuos de aminoácidos 336 a 678; que comprende el dominio conservado del NCBI pfam00078 o cd01645) y el dominio ARNasa H (RH) C-terminal (residuos de aminoácidos 679 a 832).Véase, p. ej.,Lanford, et al., J. Virol. (1999) 73(3): 1885-93; Voros, et al., J Virol. (2014) 88(5):2584-99 y Jones, et al., J Virol. (2014) 88(3): 1564-72. En las variantes de la polimerasa del HBV aquí descritas, se ha suprimido o eliminado la totalidad o parte de la región espaciadora. En los mutantes de truncamiento de la polimerasa del HBV aquí descritos, se ha suprimido o eliminado todo el dominio TP.
[0025]Generalmente, los dominios enzimáticos,es decir,los dominios transcriptasa inversa y ARNasa H, están inactivados en los mutantes de la proteína polimerasa del HBV aquí descritos. El dominio de la transcriptasa inversa no comprende un motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97). El motivo YMDD (SEQ ID N.°: 97) en el dominio de la transcriptasa inversa se cambia a YMHD (SEQ ID N.°: 99). El dominio ARNasa H no incluye un motivo AELL (SEQ ID N.°: 98). El motivo AELL (SEQ ID N.°: 98) en el dominio ARNasa H se cambia a AHLL (SEQ ID N.°: 100).
Mutantes de Polimerasa Truncados
[0026]Los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV divulgados en el presente documento pueden comprender un dominio de transcriptasa inversa inactivado y una ARNasa H inactivada, en los que el polipéptido no comprende todo el dominio de proteína terminal (TP) y no comprende todo o parte del dominio espaciador(es decir,el dominio de proteína terminal (TP) y todo o parte del dominio espaciador se eliminan, extirpan o excluyen). En los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV descritos en el presente documento, se suprime o elimina todo el dominio TP y todo o parte del dominio o región espaciadora. Por ejemplo, los 300 aminoácidos N-terminales de una polimerasa HBV nativa o de tipo salvaje se suprimen o eliminan de los polipéptidos de polimerasa HBV truncados descritos en el presente documento. El dominio de transcriptasa inversa inactivado y la ARNasa H inactivada pueden fusionarse directamente o unirse o conectarse de forma operable mediante un enlazador, como se describe en el presente documento. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV aquí descrito puede tener una longitud no superior a 600 aminoácidos,p. ej.,una longitud no superior a 595, 590, 585, 580, 575, 570, 565, 560, 555, 550, 545, 540 o 535 aminoácidos. Los polipéptidos truncados de la polimerasa del HBV pueden comprender los aminoácidos C-terminales 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534 o 535 de una polimerasa del HBV nativa o de tipo salvaje.
[0027]Los polipéptidos de polimerasa de HBV truncada aquí divulgados pueden comprender una secuencia de aminoácidos correspondiente a los residuos de aminoácidos 300-832, 301-832, 302-832, 303-832, 304-832, 305-832, 306-832, 307-832, 308-832, 309-832, 310-832, 311-832, 312-832, 313-832, 314-832, 315-832, 316-832, 317-832, 318 832, 319-832, 320-832, 325-832, 326-832, 327-832, 328-832, 329-832, 330-832, 331-832, 332-832, 333-832, 334-832, 335-832 o 336-832 de una polimerasa HBV nativa o de tipo salvaje. Tal como se utiliza en el presente documento, la numeración de un polímero de aminoácidos o de ácido nucleico dado "corresponde a", es "correspondiente a" o es "relativa a" la numeración de un polímero de aminoácidos o de ácido nucleico seleccionado o de referencia cuando la posición de cualquier componente polimérico dado(p. ej.,aminoácido, nucleótido, también denominado genéricamente "residuo") se designa por referencia a la misma posición o a una posición equivalente(p. ej.,basada en un alineamiento óptimo o una secuencia consenso) en el polímero de aminoácido o de ácido nucleico seleccionado, en lugar de por la posición numérica real del componente en el polímero dado. Los polipéptidos truncados de polimerasa del HBV divulgados en el presente documento pueden comprender una secuencia de aminoácidos correspondiente a los residuos de aminoácidos 300-832. En dichos polipéptidos, el N-terminal corresponde a la posición aminoacídica 300 de la proteína pol prototipo del genotipo D. Los 6 residuos aminoácidos N-terminales de esta secuencia son SARSQS (SEQ ID N.°: 95) en el antígeno Pol genotipo D, y SSRSQS (SEQ ID N.°: 96) en el antígeno Pol del genotipo B. Los informes bibliográficos han indicado que este sitio de inicio N-terminal permite la función del dominio RT(véase, p. ej.,Lanford,et al., supra)y la expresión de la proteína truncadain vitro (véase, p. ej.,Voros,et al., supra).
[0028]El polipéptido polimerasa truncado del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo B del HBV y comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV aquí descrito puede ser del genotipo B del HBV y no comprende una secuencia polipeptídica(es decir,la secuencia está excluida, extirpada o eliminada; la secuencia no está incluida) de SEQ ID N.°: 50, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 50.
[0029] El polipéptido polimerasa truncado del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo D del HBV y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 14. El polipéptido truncado de la polimerasa del HBV aquí descrito puede ser del genotipo D del HBV y no comprender una secuencia polipeptídica de SEQ ID N.°: 51, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 51.
[0030] Pueden realizarse modificaciones en la estructura de los polipéptidos y polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, descritos en el presente documento, y aun así obtener una molécula funcional que codifique una variante o polipéptido derivado con características deseables(p. ej.,inmunogénicas). Cuando se desea alterar la secuencia de aminoácidos de un polipéptido para crear una variante o porción equivalente, o incluso mejorada, de un polipéptido descrito en el presente documento, un experto en la materia cambiará normalmente uno o más de los codones de la secuencia de ADN codificante.
[0031] Por ejemplo, ciertos aminoácidos pueden sustituirse por otros aminoácidos en una estructura proteica sin pérdida apreciable de su capacidad para unirse a otros polipéptidos(p. ej.,antígenos) o células. Dado que es la capacidad de unión y la naturaleza de una proteína lo que define la actividad funcional biológica de esa proteína, se pueden realizar determinadas sustituciones de secuencias de aminoácidos en una secuencia proteica y, por supuesto, en su secuencia codificadora de ADN subyacente, y obtener, no obstante, una proteína con propiedades similares. Por tanto, se contempla la posibilidad de realizar diversos cambios en las secuencias polipeptídicas de los polipéptidos divulgados, o en las secuencias de ADN correspondientes que codifican dichos polipéptidos sin pérdida apreciable de su utilidad o actividad biológica.
[0032] Una "sustitución", tal como se utiliza aquí, denota la sustitución de uno o más aminoácidos o nucleótidos por aminoácidos o nucleótidos diferentes, respectivamente.
[0033] En muchos casos, una variante polipeptídica contendrá una o más sustituciones conservativas. Una "sustitución conservadora" es aquella en la que un aminoácido es sustituido por otro aminoácido que tiene propiedades similares, de tal forma que un experto en el arte de la química peptídica esperaría que la estructura secundaria y la naturaleza hidropática del polipéptido se mantuvieran sustancialmente inalteradas.
[0034] Tal como se utiliza aquí, "identidad" significa el porcentaje de residuos de nucleótidos o aminoácidos idénticos en posiciones correspondientes en dos o más secuencias cuando las secuencias se alinean para maximizar la coincidencia de secuencias,es decir,teniendo en cuenta los huecos y las inserciones. Por lo general, las secuencias se alinean para obtener la máxima correspondencia sobre una región designada,p. ej.una región de al menos 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 o más aminoácidos o nucleótidos de longitud, y puede llegar hasta la longitud completa de la secuencia polipeptídica o polinucleotídica de referencia. [0047] Para la comparación de secuencias, normalmente una secuencia actúa como secuencia de referencia, con la que se comparan las secuencias de prueba. Cuando se utiliza un algoritmo de comparación de secuencias, las secuencias de prueba y de referencia se introducen en un programa informático, se designan las coordenadas de la subsecuencia, si es necesario, y se designan los parámetros del programa del algoritmo de secuencias. De lo contrario, se pueden utilizar los parámetros estándar. A continuación, el algoritmo de comparación de secuencias calcula el porcentaje de identidad de secuencia de la(s) secuencia(s) de prueba con respecto a la secuencia de referencia, basándose en los parámetros designados del programa.
[0035] Cuando se comparan secuencias polinucleotídicas y polipeptídicas, se dice que dos secuencias son "idénticas" si la secuencia de nucleótidos o aminoácidos en las dos secuencias es la misma cuando se alinean para obtener la máxima correspondencia, como se describe a continuación. Las comparaciones entre dos secuencias se realizan normalmente comparando las secuencias a lo largo de una ventana de comparación para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencias. Una "ventana de comparación", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a un segmento de al menos unas 20 posiciones contiguas, normalmente de 30 a 75, de 40 a 50, o de toda la longitud de una secuencia, en el que una secuencia puede compararse con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de que las dos secuencias se hayan alineado de forma óptima.
[0036] La alineación óptima de las secuencias para la comparación puede realizarse utilizando el programa Megalign de la suite de software bioinformático Lasergene (DNASTAR, Inc., Madison, WI), utilizando los parámetros por defecto. Este programa incorpora varios esquemas de alineación descritos en las siguientes referencias: Dayhoff, M.O. (1978) Un modelo de cambio evolutivo en proteínas - Matrices para detectar relaciones distantes. En Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345 358; Hein J. (1990) Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. y Sharp, P.M. (1989) CABIOS 5: 151-153; Myers, E.W. y Muller W. (1988) CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D. (1971) Comb. Theor 77: 105; Santou, N. Nes, M. (1987) Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. y Sokal, R.R. (1973) Numerical Taxonomy - the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. y Lipman, D.J. (1983) Proc. Natl. Acad Sci. USA 80:726-730.
[0037] Alternativamente, el alineamiento óptimo de secuencias para comparación puede realizarse mediante el algoritmo de identidad local de Smith y Waterman (1981) Add. APL. Math 2:482, mediante el algoritmo de alineación de identidad de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, mediante los métodos de búsqueda de similitudes de Pearson y Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444, por implementaciones informáticas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), o por inspección.
[0038]Un ejemplo de algoritmos adecuados para determinar el porcentaje de identidad y similitud de secuencias son los algoritmos BLa St y BLAST 2.0, descritos en Altschul et al. (1977) Nucl. Acids Res. 25:3389-3402 y Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410, respectivamente. BLAST y BLAST 2.0 pueden utilizarse, por ejemplo con los parámetros aquí descritos, para determinar el porcentaje de identidad de secuencia de los polinucleótidos y polipéptidos aquí descritos. El software para realizar análisis BL<a>S<t>está disponible públicamente a través del Centro Nacional de Información Biotecnológica (blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
[0039]En un ejemplo ilustrativo, las puntuaciones acumulativas pueden calcularse utilizando, para secuencias de nucleótidos, los parámetros M (puntuación de recompensa para un par de residuos coincidentes; siempre >0) y N (puntuación de penalización para residuos no coincidentes; siempre <0). La extensión de los aciertos de palabra en cada dirección se detiene cuando: la puntuación acumulada del alineamiento cae en la cantidad X desde su valor máximo alcanzado; la puntuación acumulada llega a cero o menos, debido a la acumulación de uno o más alineamientos de residuos con puntuación negativa; o se alcanza el final de cualquiera de las secuencias. Los parámetros W, T y X del algoritmo BLAST determinan la sensibilidad y la velocidad del alineamiento. El programa BLASTN (para secuencias de nucleótidos) utiliza por defecto una longitud de palabra (W) de 11, y una expectativa (E) de 10, y la matriz de puntuación BLOSUM62 (véase Henikoff y Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915) alineaciones, (B) de 50, expectativa (E) de 10, M=5, N=-4 y una comparación de ambas cadenas.
[0040]Para las secuencias de aminoácidos, se puede utilizar una matriz de puntuación para calcular la puntuación acumulativa. La extensión de los aciertos de palabra en cada dirección se detiene cuando: la puntuación acumulada del alineamiento cae en la cantidad X desde su valor máximo alcanzado; la puntuación acumulada llega a cero o menos, debido a la acumulación de uno o más alineamientos de residuos con puntuación negativa; o se alcanza el final de cualquiera de las secuencias. Los parámetros W, T y X del algoritmo BL<a>S<t>determinan la sensibilidad y la velocidad del alineamiento.
[0041]En un enfoque, el "porcentaje de identidad de secuencia" se determina comparando dos secuencias alineadas óptimamente sobre una ventana de comparación de al menos 20 posiciones,p. ej.,al menos 50 posiciones, al menos 100 posiciones, o sobre toda la longitud de una secuencia de referencia, en la que la parte de la secuencia polinucleotídica o polipeptídica en la ventana de comparación puede comprender adiciones o supresionesfesdecir,huecos) del 20 por ciento o menos, normalmente del 5 al 15 por ciento, o del 10 al 12 por ciento, en comparación con las secuencias de referencia (que no comprenden adiciones o supresiones) para una alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que aparecen bases de ácido nucleico o residuos de aminoácidos idénticos en ambas secuencias para obtener el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en la secuencia de referencia(es decir,el tamaño de la ventana) y multiplicando los resultados por 100 para obtener el porcentaje de identidad de secuencia.
[0042]Una "variante polipeptídica", tal como se utiliza el término en el presente documento, es un polipéptido que difiere típicamente de un polipéptido específicamente divulgado en el presente documento en una o más sustituciones, supresiones, adiciones y/o inserciones. Dichas variantes pueden ser naturales o pueden generarse sintéticamente, por ejemplo, modificando una o más de las secuencias polipeptídicas descritas en el presente documento y evaluando una o más actividades biológicas del polipéptido como se describe en el presente documento y/o utilizando cualquiera de las técnicas conocidas en la técnica. El término "variante" también puede referirse a cualquier molécula natural o modificada que contenga una o más mutaciones de nucleótidos o aminoácidos.
[0043]En la Tabla A se proporcionan mutantes ilustrativos de truncamiento de la polimerasa del HBV para su uso en la promoción, inducción o provocación de una respuesta inmunogénica,p. ej.,contra un antígeno de polimerasa expresado por el HBV. En la Tabla B se proporcionan segmentos ilustrativos de secuencia N-terminal suprimidos o eliminados de, y por lo tanto no contenidos en, los mutantes de truncamiento de la polimerasa del HBV descritos en el presente documento.
[0044]El polipéptido polimerasa truncado del HBV aquí divulgado no puede comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de otra proteína del HBV. El polipéptido truncado de polimerasa del HBV aquí divulgado puede no comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de una proteína del HBV seleccionada del grupo que consiste en pre núcleo, núcleo, X y envoltura(p. ej.,antígeno de superficie pequeño, mediano o grande (sAg)).
Mutantes de polimerasa de deleción interna
[0045]En el presente documento se describen además polipéptidos mutantes de deleción interna de la polimerasa del HBV. Los polipéptidos mutantes de deleción interna de la polimerasa del HBV pueden comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, un dominio de proteína terminal (TP), un dominio de transcriptasa inversa inactivado, una ARNasa H inactivada, en el que el polipéptido mutante no comprende todo o parte de un dominio espaciador(es decir,todo o parte del dominio o región espadadora se suprime o elimina). El polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV puede tener una longitud no superior a 800 aminoácidos,p. ej.,no superior a 795, 790, 785, 780, 775, 770, 765, 760, 755, 750, 745, 740, 735, 730, 725, 720, 715, 710 o 705 aminoácidos. Los polipéptidos mutantes de deleción interna de la polimerasa del HBV pueden comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, un dominio de proteína terminal (TP), y una secuencia de aminoácidos correspondiente a los residuos de aminoácidos 300 832, 301-832, 302-832, 303-832, 304-832, 305-832, 306-832, 307-832, 308-832, 309-832, 310-832, 311-832, 312-832, 313-832, 314-832, 315-832, 316-832, 317-832, 318-832, 319-832, 320-832, 325-832, 326-832, 327-832, 328-832, 329 832, 330-832, 331-832, 332-832, 333-832, 334-832, 335-832 o 336-832 de una polimerasa HBV nativa o de tipo salvaje. El dominio de proteína terminal (TP), el dominio de transcriptasa inversa inactivada, y la ARNasa H inactivada de forma independiente pueden fusionarse directamente o unirse o conectarse de forma operable mediante un enlazador,p. ej.,como se describe en el presente documento,p. ej.,como se proporciona en la Tabla J.
[0046]El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo A del HBV y comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5 y 9, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5 y 9. El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV divulgado en el presente documento puede ser del genotipo A del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 42 o 46, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 42, o 46.
[0047]El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo B del HBV y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 6 y 10, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 6 y 10. El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV divulgado en el presente documento puede ser del genotipo B del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 43 o 47, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 43, o 47.
[0048]El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo C del HBV y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 8 y 11, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 8 y 11. El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV divulgado en el presente documento puede ser del genotipo C del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 44 o 48, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 44, o 48.
[0049]El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV aquí divulgado puede ser del genotipo D del HBV y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 9 y 12, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 9 y 12. El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV divulgado en el presente documento puede ser del genotipo D del HBV y no comprende un polipéptido de SEQ ID N.°: 45 o 49, o una secuencia que sea al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 45, o 49.
[0050]El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV aquí divulgado no puede comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de otra proteína del HBV. El polipéptido mutante de deleción interna de la polimerasa del HBV puede no comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de una proteína del HBV seleccionada del grupo que consiste en el pre-núcleo, núcleo, X y envoltura(p. ej.,antígeno de superficie pequeño, mediano o grande (sAg)).
[0051]En las Tablas C y E se proporcionan mutantes ilustrativos de deleción interna de la polimerasa del HBV para su uso en la promoción, inducción o elicitación de una respuesta inmunogénica,p. ej.,contra un antígeno de polimerasa expresado por el HBV. En las Tablas D y F se proporcionan segmentos ilustrativos de secuencia interna de aminoácidos suprimidos o eliminados de, y por lo tanto no contenidos en, los mutantes de deleción interna de la polimerasa del HBV descritos en el presente documento,p. ej.,correspondientes a la totalidad o parte de una región espaciadora de la polimerasa del HBV.
Polipéptidos de Fusión Núcleo-Polimerasa
[0052]Las variantes del polipéptido polimerasa del HBV truncado y de deleción interna descritas en el presente documento pueden fusionarse a un polipéptido del núcleo del HBV. El polipéptido del núcleo puede situarse N-terminal o C-terminal a la polimerasa del HBV. Se divulgan además polipéptidos de fusión que comprenden en orden secuencial desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido del núcleo del HBV y un mutante del polipéptido polimerasa del HBV truncado o con deleción interna, como se describe en el presente documento. El polipéptido de fusión núcleo-Pol comprende el polipéptido mutante de deleción de polimerasa del HBV, descrito en el presente documento, puede comprender en orden secuencial desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido núcleo del HBV y un mutante de polipéptido de deleción interna de polimerasa del HBV, como se describe en el presente documento.
[0053]El polipéptido de fusión núcleo-Pol puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 19-26, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 19-26.
[0054]La proteína de fusión mutante de deleción interna núcleo-polimerasa del HBV no puede comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de una proteína del HBV seleccionada del grupo que consiste en X, pre-núcleo y envoltura (p. ej., antígeno de superficie pequeño, mediano o grande (sAg)).
[0055]En la Tabla G se proporcionan proteínas de fusión de núcleo-polimerasa ilustrativas para su uso en la promoción, inducción o provocación de una respuesta inmunogénica, p. ej., contra un antígeno de núcleo y/o polimerasa expresado por el HBV.
Tabla E-Mutantes PolA3 - Los motivos que contienen mutaciones inactivadoras están subrayados (YMDD mutado a YMHD, AELL mutado a AHLL). Los aminoácidos en negrita subrayado cursiva marcan el sitio de eliminación (último aminoácido antes de la región eliminada y el primer aminoácido después de la región eliminada).
SEQGeno Longitud Secuencia de polipéptidos
MPLSYQHFRKLLLLDDETEAGPLEEELPRLADEDLNRRVAEDLNLGNLNVSIPWTHKVGNFTGLYSSTVPIFNPEWQTPSFP KIHLHEDIANRCQQFVGPLTVNEKRRLRLIMPARFYPNSTKYLPLDKGIKPYYPDHVVNHYFQTRHYLHTLWKAGILYKRET TRSASFCGSPYSWEQELHHCCWVÍLQFRNTQPCSKYCLSHLVNLLEDWGPCDEHGEHHIRIPRTPARVTGGVFLVDKNPHNTA ESRLWDFSQFSRGITRVSWPKFAVPNLQSLTNLLSSNLSWLSLDVSAAFYHIPLHPAAMPHLLVGSSGLSRYVARLSSNSR IHNNQHGTLQNLHDSCSRQLYVSLMLLYKTYGRKLHLYSHPIILGFRKIPMGVGLSPFLLAQFTSAICSVVRRAFPHCLAFS YMHDVVLGAKSVQHLESLYTAVTNFLLSLGIHLNPNKTKRWGYSLNFMGYVIGSWGTLPQDHIVQKIKHCFRKLPINRPIDW KVCQRIVGLLGFAAPFTQCGYPALMPLYACIQAKQAFTFSPTYKAFLSKQYLNLYPVARQRPGLCQVFADATPTGWGLAIGH QRMRGTFVAPLPIHTAHLLAACFARSRSGAKLIGTDNSWLSRKYTSFPWLLGCTANWILRGTSFVYVPSALNPADDPSRGR
LGLYRPLLRLPYRPTTGRTSLYAVSPSVPSHLPVRVHFASPLHVAWRPP
MPLSYQHFRKLLLLDDEAGPLEEELPRLADEGLNRRVAEDLNLGNLNVSIPWTHKVGNFTGLYSSTVPVFNPEWQTPSFPHI HLQEDIINRCQQYVGPLTVNEKRRLKLIMPARFYPNLTKYLPLDKGIKPYYPEHVVNHYFQTRHYLHTLWKAGILYKRESTR
SASFCGSPYSWEQDLQHGCWWL.QFRNSEPCSEYCLCHIVNLIEDWGPCTEHGEHRIRTPRTPARVTGGVFLVDKNPHNTTES
Proteínas de Fusión Núcleo-sAg
[0056]En el presente documento se describen además proteínas de fusión compuestas por una porción N-terminal que comprende un polipéptido del núcleo del HBV, o un fragmento inmunogénico del mismo, y una porción C-terminal que comprende un pequeño antígeno de superficie del HBV, o un fragmento inmunogénico del mismo. El polipéptido del núcleo del HBV o un fragmento del mismo y el pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV, o un fragmento del mismo, pueden fusionarse o unirse directamente. El polipéptido del núcleo del HBV o un fragmento del mismo y el pequeño antígeno de superficie del HBV, o un fragmento del mismo, pueden estar conectados mediante un enlazador.
Polipéptido del núcleo del HBV, o un fragmento inmunogénico del mismo
[0057]El polipéptido del núcleo del HBV, o fragmento inmunogénico del mismo, de la proteína de fusión núcleo-sAg independientemente puede ser de un genotipo A, B/C o D del HBV. En la Tabla H se proporcionan secuencias de aminoácidos del polipéptido del núcleo del HBV ilustrativas que pueden utilizarse en las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento.
[0058]El polipéptido del núcleo en el polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 64-66, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%,
85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ
ID N.°: 64-66. El polipéptido del núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66.
Pequeño antígeno de superficie del HBV, o un fragmento inmunogénico del mismo
[0059]El polipéptido sAg del HBV, o fragmento inmunogénico del mismo, de la proteína de fusión núcleo-sAg independientemente puede ser de un genotipo A, B, C o D del HBV. En la Tabla 1 se proporcionan secuencias de aminoácidos del polipéptido sAg del HBV ilustrativas que pueden utilizarse en las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento, en el Ejemplo 1 a continuación.
[0060]El polipéptido sAg en el polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las<s>E<q>ID N.°: 1-4, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%,
86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°:
1-4, p. ej. que comprenden uno o más de un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213.
[0061]Con respecto a las proteínas de fusión núcleo-sAg, el polipéptido núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV pueden ser del mismo genotipo del HBV o de genotipos diferentes. La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido del núcleo del HBV y un polipéptido del pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV, en el que:
el polipéptido del núcleo es de un genotipo A del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo A del HBV;
el polipéptido del núcleo es de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo B del HBV;
el polipéptido del núcleo es de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo C del HBV;
el polipéptido del núcleo es un genotipo D del el polipéptido sAg es de un genotipo D d el polipéptido del núcleo es un genotipo A del el polipéptido sAg es de un genotipo B d el polipéptido del núcleo es un genotipo A del el polipéptido sAg es de un genotipo C d el polipéptido del núcleo es de un genotipo A del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo D d el polipéptido del núcleo es de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo A del
HBV;
el polipéptido del núcleo es de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo D del HBV;
el polipéptido del núcleo es de un genotipo D del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo A del HBV; el polipéptido del núcleo es de un genotipo D del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo B del HBV; o
el polipéptido del núcleo es de un genotipo D del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo C del HBV.
[0062]La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, un polipéptido del núcleo del HBV y un polipéptido del pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV, en el que:
el polipéptido del núcleo es de un genotipo B o C del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo C del HBV; o
el polipéptido del núcleo es de un genotipo D del HBV y el polipéptido sAg es de un genotipo D del HBV.
[0063]La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, (i) un polipéptido del núcleo del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 65, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 65; y (ii) un polipéptido del pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 3, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 3.
[0064]La proteína de fusión núcleo-sAg puede comprender en orden secuencial, desde el N-terminal al C-terminal, (i) un polipéptido del núcleo del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 66, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 66; y (ii) un polipéptido del pequeño antígeno de superficie (sAg) del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 4, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 4.
[0065]Las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento pueden comprender una isoforma del pequeño antígeno de superficie del HBV, pero no comprenden una isoforma del antígeno de superficie medio del HBV ni una isoforma del antígeno de superficie grande del HBV. En consecuencia, las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento pueden no comprender un polipéptido pre-S1 del HBV. Las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento pueden no comprender un polipéptido HBVpre-S2. Las proteínas de fusión núcleosAg descritas en el presente documento no pueden comprender tanto un polipéptido pre-S1 del HBV como un polipéptido pre-S2 del HBV.
[0066]A continuación se proporciona un polipéptido ilustrativo pre-S2 del HBV no incluido en la proteína de fusión núcleosAg aquí descrita:
MQWNST[A/T]FHQ[T/A]LQDPRVR[A/G]LYFP[A/G]GGSS[L/S]G[A/T][V/I]NPV[
L/P]TT[A/V]S[P/H][L/l]SSIF[S/A]RIGDP[A/V][L/M/P/T]N (SEQ ID NO:
79) .
[0067]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S2 ilustrativo del HBV del genotipo A del HBV no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg descrita en el presente documento:
MQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTN (SEQ ID N.°: 80).
[0068]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S2 ilustrativo del HBV del genotipo B del HBV no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg descrita en el presente documento:
MQWNSTTFHQTLQDPRVRALYFPAGGSSSGTVSPAQNTVSAISSILSKTGDPVPN (SEQ ID N.°: 81).
[0069]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S2 ilustrativo del HBV del genotipo C del HBV no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg descrita en el presente documento:
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN (SEQ ID N.°: 82).
[0070]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S2 ilustrativo del HBV del genotipo D no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg aquí descrita:
MQWNSTTFHQTLQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRIGDPALN (SEQ ID N.°: 83).
[0071]Las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento no pueden comprender un polipéptido pre-S2 del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 79-83, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 79-83.
[0072]A continuación se proporciona un polipéptido pre-S1-pre-S2 del HBV ilustrativo no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg aquí descrita:
MGQNLSTSNPLGFFPDHQL[D/A]PAFRANT[A/G/R]NPDWDFNPNKDTWPDANKVGAGAFGL GFTPPHGGLLGWSPQAQGI[I/L]QT[L/V]PANPPPAS[T/A]NRQ[S/T]GRQPTPLSPPLR [N/D]THPQAMQWNST[A/T]FHQ[T/A]LQDPRVR[A/G]LYFP [A/G]GGSS[L/S]G [A/T ] [V/I]NPV[L/P]TT[A/V]S[P/H] [L/I]SSIF[S/A]RIGDP [A/V] [L/M/P/T]N (SEQ ID NO: 84) .
[0073]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S1-pre-S2 del HBV ilustrativo del genotipo A no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg aquí descrita:
MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFG PGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFH QALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTN (SEQ ID NO: 85).
[0074]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S1-pre-S2 del HBV ilustrativo del genotipo B no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg aquí descrita:
MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFKANSENPDWDLNPHKDNWPDANKVGVGAFG PGFTPPHGGLLGWSPQAQGLLTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPLSPPLRDTHPQAMQWNSTTFH QTLQDPRVRALYFPAGGSSSGTVSPAQNTVSAISSILSKTGDPVPN (SEQ ID NO: 86).
[0075]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S1-pre-S2 del HBV ilustrativo del genotipo C no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg descrita en el presente documento:
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFG PGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTTFH QALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN (SEQ ID NO: 87).
[0076]A continuación se proporciona un polipéptido consenso pre-S1-pre-S2 del HBV ilustrativo del genotipo D no incluido en la proteína de fusión núcleo-sAg aquí descrita:
MGQNLSTSNPLGFFPDHQLDPAFRANTANPDWDFNPNKDTWPDANKVGAGAFGLGFTPPHGGLL GWSPQAQGILQTLPANPPPASTNRQSGRQPTPLSPPLRNTHPQAMQWNSTTFHQTLQDPRVRGL YFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRIGDPALN (SEQ ID NO: 88).
[0077]Las proteínas de fusión núcleo-sAg descritas en el presente documento no pueden comprender un polipéptido pre-Sl-pre-S2 del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 84-88, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 84-88.
Enlazador Polipeptídico Opcional
[0078]Según proceda, el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV en la proteína de fusión núcleo-sAg pueden estar directamente adosados o fusionados, o pueden estar unidos, conectados o enlazados por uno o más enlazadores peptídicos. El uno o más enlazadores peptídicos pueden seleccionarse entre uno o más de un enlazador polialanina, un enlazador poliglicina, un enlazador escindible, un enlazador flexible, un enlazador rígido, y combinaciones de los mismos,p. ej.,dentro de un enlazador o dentro de un polipéptido de fusión de longitud completa. Los enlazadores de proteínas de fusión ilustrativos que pueden utilizarse en los presentes polipéptidos de fusión para conectar el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV se describen,p. ej.,en Chen, et al., Adv Drug Deliv Rev. (2013) 65(10): 1357-1369. El enlazador de polialanina puede comprender o consistir en 2 o 3 residuos de alanina contiguos,p. ej.AA, AAA, AAY o AAX, donde X es cualquier aminoácido(p. ej.,A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, y ). Puede utilizarse un enlazador de poliglicina,p. ej.,GG, g Gg , GGS, GSG o GGGS (SEQ ID N.°:63). El enlazador escindible puede seleccionarse entre un péptido escindible 2A. Los péptidos clivables 2A ilustrativos que pueden utilizarse para conectar el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV se describen,p. ej.,en Donnelly, et al., J. Gen. Virol (2001), 82, 1027-1041 y Chng, et al., mAbs (2015) 7:2, 403-412. Entre los péptidos clivables 2A ilustrativos que pueden utilizarse para unir el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del<h>B<v>se incluyen, sin limitación, secuencias de clivaje 2A(p. ej.,virus de la fiebre aftosa (F2A), virus de la rinitis equina A (E2A), teschovirus porcino-1 (P2A) y virus Thosea asigna (T2A)), opcionalmente en combinación con secuencias de reconocimiento/clivaje de furina(p. ej.RAKR (SEQ ID N.°: 60), REKR (SEQ ID N.°: 61) y RRKR (SEQ ID N.°: 62)). Una secuencia de reconocimiento/escisión de furina(p. ej.,RAKR (SEQ ID N.°: 60), REKR (SEQ ID N.°: 61) y RRKR (SEQ ID N.°: 62)) pueden combinarse o fusionarse con un péptido escindible 2A(p. ej.,virus de la fiebre aftosa (F2A), virus de la rinitis equina A (E2A), teschovirus porcino-1 (P2A) y virus Thosea asigna (T2A)) en un único enlazador.Véase, p. ej.,Chng, et al., mAbs (2015) 7:2, 403-412. El enlazador puede comprender un enlazador de teschovirus porcino-1 (P2A). El enlazador escindible 2A puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 57), QCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 58), o EGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 59), o una secuencia de aminoácidos que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o al menos 99% idéntica a ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 57), QCTNYALLKLAGDVESNPGP (SEQ ID N.°: 58), o EGRGSLLTCGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 59). El enlazador escindible 2A puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56), o una secuencia de aminoácidos que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o al menos 99% idéntica a ATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID N.°: 56). Según convenga, puede colocarse una secuencia de reconocimiento/eliminación de furina en el extremo N-terminal o en el extremo C-terminal de un enlazador 2A. El enlazador escindible puede comprender o consistir en un sitio de reconocimiento/escisión de furina seleccionado de RAKR (SEQ ID N.°: 60), REKR (Se Q ID N.°: 61) y RRKR (SEQ ID N.°: 62). En la Tabla J se proporcionan enlazadores ilustrativos que pueden utilizarse para enlazar o conectar el polipéptido del núcleo del HBV y el polipéptido sAg del HBV.
[0079]La proteína de fusión núcleo-sAg aquí divulgada puede tener una longitud no superior a 450 aminoácidos,p. ej.,una longitud no superior a 445, 440, 435, 430, 425, 420, 415 o 410 aminoácidos.
[0080]La proteína de fusión núcleo-sAg aquí divulgada no puede comprender una secuencia amino o fragmento de la misma de una proteína del HBV seleccionada del grupo que consiste en X, pre-núcleo, pre-S1, pre-S2 y polimerasa.
[0081]La proteína de fusión núcleo-sAg aquí divulgada puede comprender o consistir en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, p. ej., SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41/SEQ ID N.°: 41. El polipéptido de fusión puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 74, un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:41.
[0082]En la Tabla K se proporcionan proteínas de fusión núcleo-sAg ilustrativas,p. ej.,para su uso en la promoción, inducción o provocación de una respuesta inmunogénica,p. ej.,contra antígenos del núcleo y/o antígenos de superficie pequeños expresados por el HBV.
Secuencias de Señales o Secuencias Líderes
[0083]Los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento pueden comprender una secuencia señal o un péptido señal,p. ej.,para dirigir el tráfico intracelular del polipéptido a un compartimento proteasomal o lisosomal. El polipéptido inmunogénico puede comprender una secuencia señal en el N-terminal y/o en el C-terminal. El polipéptido inmunogénico puede incluir un péptido señal N-terminal o una secuencia líder. El péptido señal o secuencia líder puede proceder de una proteína fuente seleccionada entre una proteína sérica, una citoquina, una quimioquina, una proteína chaperona, una proteína invariante y una proteína que dirige proteínas al compartimento lisosomal. El péptido señal o la secuencia líder puede proceder de una proteína fuente seleccionada entre el factor estimulante de colonias 2 (CSF2, GM-CSF), el activador tisular del plasminógeno (PLAT, t-PA), el ligando 7 de quimiocinas con motivo C-C (CCL7, MCP-3), el ligando 10 de quimiocinas con motivo C-X-C (CXCL10,<i>P-10), la catenina beta 1 (CTNNB1), CD74 (p33; DHLAG; HL<a>D<g>; Ia-GAMMA, cadena invariante), albúmina sérica (ALB), poliubiquitina B/C (UBB/UBC), calreticulina (CALR), proteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G), proteína de membrana asociada a lisosomas 1 (LAMP-1) y proteína de membrana asociada a lisosomas 2 (LAMP-2). El péptido señal o secuencia líder puede seleccionarse a partir de una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las s Eq ID N.°: 67-76, o una secuencia que es al menos 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 67-76. El polipéptido inmunogénico puede comprender secuencias señal N-terminal y C-terminal de LAMP-1,por ejemplo,SEQ ID N.°: 77 y 78, respectivamente. En la Tabla L se proporcionan secuencias señal ilustrativas que pueden utilizarse en los presentes polipéptidos inmunogénicos.
[0084]En el presente documento se describen además métodos para fabricar los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento. Los métodos pueden comprender la construcción de los polipéptidos inmunogénicos mediante síntesis peptídica. Los métodos pueden comprender la construcción, mediante tecnología de ADN sintético o recombinante, de polinucleótidos que codifiquen cada uno de los polipéptidos del antígeno bivalente y la expresión de los polipéptidos a partir de un vector de expresión. Los métodos pueden comprender además la inserción de los polinucleótidos en uno o más vectores y la expresión de los polipéptidos codificados en una célula. Esto puede hacerse empleando técnicas recombinantes conocidas.
3. Polinucleótidos que Codifican Polipéptidos Inmunogénicos
[0085]Se divulgan en el presente documento polinucleótidos que codifican los polipéptidos inmunogénicos, descritos en el presente documento, vectores que comprenden dichos polinucleótidos, y células huésped(p. ej.,células humanas, células de mamífero, células de levadura, células vegetales, células de insecto, células bacterianas,p. ej., E. coli)que comprenden dichos polinucleótidos o vectores de expresión. Se divulgan en el presente documento polinucleótidos que comprenden secuencia(s) nucleotídica(s) que codifican cualquiera de los polipéptidos inmunogénicos proporcionados en el presente documento, así como casetes de expresión y vector(es) que comprenden dichas secuencias polinucleotídicas,p. ej.,vectores de expresión para su expresión eficiente en células huésped,p. ej.,células de mamífero. El polinucleótido puede ser un ADN, un ADNc, un ARNm, un ARN autoamplificante (s A m ), un ARN autorreplicante o un ARN replicón autorreplicante (ARNrep). El polinucleótido puede comprender o expresarse a partir de un ARN replicón (ARNrep) autorreplicante o autoamplificante de alfavirus. El ARN autorreplicante y el ARN replicón autoamplificante como modos de administración de vacunas se describen,p. ej.,en Tews, et al., Methods Mol Biol. (2017) 1499:15-35; Démoulins, et al., Methods Mol Biol. (2017) 1499:37-75; Englezou, et al., Mol Ther Nucleic Acids. (2018) 12:118-134; McCollough, et al., Vaccines (Basel). (2014) 2(4):735-54; y McCollough, et al., Mol Ther Nucleic Acids. (2014) 3:e173.
[0086]Los términos "polinucleótido" y "molécula de ácido nucleico" se refieren indistintamente a una forma polimérica de nucleótidos e incluyen tanto cadenas sentido como antisentido de ARN, ADNc, ADN genómico y formas sintéticas y polímeros mixtos de los anteriores. Tal y como se utiliza aquí, el término molécula de ácido nucleico puede ser intercambiable con el término polinucleótido. Un nucleótido puede referirse a un ribonucleótido, a un desoxinucleótido o a una forma modificada de cualquiera de los dos tipos de nucleótidos, así como a combinaciones de los mismos. Los términos también incluyen, sin limitación, formas de ADN monocatenario y bicatenario. Además, un polinucleótido,p. ej.,un ADNc o ARNm, puede incluir nucleótidos naturales o modificados unidos por enlaces nucleotídicos naturales y/o no naturales. Las moléculas de ácido nucleico pueden modificarse química o bioquímicamente o pueden contener bases nucleotídicas no naturales o derivatizadas, como podrán apreciar fácilmente los expertos en la materia. Tales modificaciones incluyen, por ejemplo, marcaciones, metilación, sustitución de uno o más de los nucleótidos naturales por un análogo, modificaciones internucleotídicas como enlaces no cargados(p. ej.,fosfonatos de metilo, fosfotriesteres, fosforamidatos, carbamatos, etc.), enlaces cargados(p. ej.,fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), elementos colgantes(p. ej.,polipéptidos), intercaladores(p. ej.,acridina, psoraleno, etc.), quelantes, alquiladores y enlaces modificados(p. ej.,ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.). El término anterior también incluye cualquier conformación topológica, incluidas las conformaciones monocatenarias, bicatenarias, parcialmente dúplex, tríplex, en horquilla, circulares y en candado. Una referencia a una secuencia de ácido nucleico incluye su complemento, a menos que se especifique lo contrario. Así, una referencia a una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia particular debe entenderse que abarca su cadena complementaria, con su secuencia complementaria. El término también incluye polinucleótidos codón-biased para la expresión mejorada en un vector de expresión viral deseado o célula huésped.
[0087]Una "sustitución", tal como se utiliza aquí, denota la sustitución de uno o más aminoácidos o nucleótidos por aminoácidos o nucleótidos diferentes, respectivamente.
[0088]Un ácido nucleico "aislado" se refiere a una molécula de ácido nucleico que ha sido separada de un componente de su entorno natural. Un ácido nucleico aislado incluye una molécula de ácido nucleico contenida en células que normalmente contienen la molécula de ácido nucleico, pero la molécula de ácido nucleico está presente extracromosómicamente o en una localización cromosómica diferente de su localización cromosómica natural. "Ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido inmunogénico" se refiere a una o más moléculas de ácido nucleico que codifican dichos polipéptidos inmunogénicos, incluyendo dicha(s) molécula(s) de ácido nucleico en un vector único o múltiples vectores separados, y dicha(s) molécula(s) de ácido nucleico presente(s) en una o más localizaciones en una célula huésped.
[0089]Una "variante de polinucleótido", tal como se utiliza el término en el presente documento, es un polinucleótido que difiere típicamente de un polinucleótido específicamente divulgado en el presente documento en una o más sustituciones, deleciones, adiciones y/o inserciones. Dichas variantes pueden ser naturales o pueden generarse sintéticamente, por ejemplo, modificando una o más de las secuencias polinucleotídicas descritas en el presente documento y evaluando una o más actividades biológicas del polipéptido codificado como se describe en el presente documento y/o utilizando cualquiera de las técnicas conocidas en la técnica.
[0090]La molécula de ácido nucleico aquí divulgada puede estar sesgada por codón para mejorar la expresión en una célula huésped deseada,p. ej.,en células humanas, células de mamífero, células de levadura, células vegetales, células de insecto o células bacterianas,p. ej.,células deE. coli.En consecuencia, se divulgan en el presente documento polinucleótidos que codifican un polipéptido inmunogénico, descrito en el presente documento, en el que los polinucleótidos son codón-biased, comprenden secuencias de señal heteróloga de reemplazo, y / o tienen elementos de inestabilidad de ARNm eliminados. Los métodos para generar ácidos nucleicos codón-biased pueden llevarse a cabo adaptando los métodos descritos en,p. ej.,Patentes de EE.UU. N.° 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132, y 6,794,498. En kazusa.or.jp/codon/; y genscript.com/tools/codonfrequency-table se proporciona el uso de codones preferido para la expresión de los polipéptidos inmunogénicos a partir de los vectores de expresión vírica deseados y/o en las células huésped deseadas.
[0091] El polinucleótido que codifica un polipéptido inmunogénico, como se describe en el presente documento, puede tener al menos un 80%, al menos un 85%, al menos un 90%, al menos un 91%, al menos un 92%, al menos un 93%, al menos un 94%, al menos un 95%, al menos un 96%, al menos un 97%, al menos un 98%, al menos un 99% idéntico, o un 100% idéntico a una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N.°: 27-37 y 89-94, como se indica en Tabla M.
[0092] Según proceda, el extremo 3' de un polinucleótido que codifica uno o más de los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento puede comprender uno o varios codones de parada en tándem,p. ej.,dos o más codones de parada en tándem TAG ("ámbar"), TAA ("ocre") o TGA ("ópalo" o "ámbar"). Los múltiples codones de parada en tándem pueden ser iguales o diferentes.
[0093] Además, se divulgan en el presente documento casetes de expresión, que comprenden un polinucleótido que codifica un polipéptido inmunogénico, como se describe en el presente documento, enlazado operablemente a una o más secuencias reguladoras. El polinucleótido puede estar unido de forma operable a un promotor constitutivo y bajo su control. El promotor puede seleccionarse entre el citomegalovirus principal inmediato temprano (CMV), el potenciador del CMV fusionado al promotor de beta-actina de pollo (CAG), el factor de elongación-la humano (HEF-1a), el citomegalovirus de ratón (CMV de ratón), el factor de elongación-la de hámster chino (CHEF-1a) y la fosfoglicerato quinasa (PGK).
Tabla M - PollnuclQ&tldos que codificar poLipcpticlos luninogAricos
seqGenoníHflbr Secuencias de polinúcleobidés
sAg CCMTGTGAMMCCT9CTGi3ACACTGCCECñ5CACTGTACA3?,GA03CCCTi3Oñ3AGCCCMAGCACTGCTC CCOCCACCACACAGCCCTGftGGCAGCCCArCCTCTGCTGGGGGGAGCIGATGRACCTGGCCÍ.CCT3GGTGGGC TCCAACCTGGASíjACCCTGCCTCAAGGGAGCTSGTGGTCAGCrATGT'ÍAATGTGAACATGSGCCTCAASATCA GGCAGCfGCTGTGGTTCCACATCTCCTGCCTGAOCTTTGGCAGGGAGACAGTCCTGGAGTACCTG3TGAGCTT TGGGGTGTGGArCAGGACCOOOCGTTÍXTACAGRÍZOCTCCAATCT^ClZCATGZTGTCíZAO'ZCTGGZAGAnACíZ AC'rGTGGTCAGSAGAAjCGGCCACCTCCeCCACGAGCAGAACCCCCCCrCCCAGCAGGACGACAAGZCAGTCCC CCAGGAGGAGGftGGAOCCAGAGCAGAGAGTCTCAGTGCATGGAGAGCACCACATCAGGCTTCCTGSQCCCCCT GCTGGTSCTCCAGGCBGGCTTCTTrCTGCTGACCfVGGAITCT'jJlCCñTCCCCCAGTCCCTGGJiCftGCTSGTGG A<l>L’i(JLilüAArillCTGGÜGGGGGLOCCTACCTGTCCTGGOGAGAACJ0TCAGTCTIXCACCTCGAftTCACT CACCAACCAGCTGTCOCCCCATCTGTCCTGGCTACÍiGGTGGñTGTGC^TGAGGÍiGATTCATCATCrTCCTGTG CA'TCCTGCTGCrGTGCCTGATCTTrCTGCTGGTGCTGCTGGACTACCAGGSCATGCIGCCAGTGTGCCCTCTC ATOCCAGGCAGCTCCACCACATCCACAGGACCTTGCAAGACATCCAC7ACACCAGCCCAGGGCACCAGCATGT TCCCCTCCTCCTCTTCCACCAACCCAACJVZJ'.TCCCAACTCCACJ'.TGCATTCCC/iTCCCCTOCACCTCCCOCTT TGOCAGGTTTCTCTGGGAGTGGGCCAGTGTGAGATTTTCCTGGCTGTZ'TCTTCTGGTGCC'ZTTCGTGCAGTGG TriGTütjGCCTGlCCOjlAtAGTürGGtlGAürGTCATÓTGGAlGATGfGGTAÓTGGGtjC'jÓC’i'CdCTGTÁCA ACATCCrCTCTGCCGTT CTGCCTCTGC7GCCAATC7TCTT TTGCCTGTGGGTGTACATC
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4. Vectores y células huésped
[0094]Además, se divulgan en el presente documento vectores que comprenden uno o más polinucleótidos que codifican uno o más de los polipéptidos inmunogénicos, descritos en el presente documento, o un casete de expresión que comprende dichos polinucleótidos. Un vector puede ser de cualquier tipo, por ejemplo, un vector recombinante como un vector de expresión. Los vectores incluyen, entre otros, plásmidos, cósmidos, cromosomas artificiales bacterianos (BAC) y cromosomas artificiales de levadura (YAC) y vectores derivados de bacteriófagos o virus vegetales o animales (incluidos los humanos). Los vectores pueden incluir un origen de replicación reconocido por la célula huésped propuesta y, en el caso de los vectores de expresión, un promotor y otras regiones reguladoras reconocidas por la célula huésped. Un vector puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos de la divulgación unidos de forma operable a un promotor y, opcionalmente, a elementos reguladores adicionales. Algunos vectores son capaces de replicarse de forma autónoma en el huésped en el que se introducen(p. ej.,los vectores que tienen un origen de replicación bacteriano pueden replicarse en bacterias). Otros vectores pueden integrarse en el genoma de un hospedador al introducirse en él, y de este modo se replican junto con el genoma del hospedador. Los vectores incluyen, sin limitación, aquellos adecuados para la producción recombinante de los polipéptidos inmunogénicos aquí divulgados.
[0095]El término "vector", como se usa aquí, se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de propagar otro ácido nucleico al cual está ligado. El término incluye el vector como estructura de ácido nucleico autorreplicante, así como el vector incorporado en el genoma de una célula huésped en la que se ha introducido. Algunos vectores son adecuados para administrar la molécula de ácido nucleico o el polinucleótido de la presente solicitud. Ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los ácidos nucleicos a los que están operativamente unidos. Dichos vectores se denominan en el presente documento vectores de expresión.
[0096]El término "enlazado operablemente" se refiere a dos o más elementos de secuencia de ácido nucleico o secuencia polipeptídica que suelen estar físicamente enlazados y se encuentran en una relación funcional entre sí. Por ejemplo, en el contexto de los elementos de secuencia de ácido nucleico, un promotor está vinculado de forma operativa a una secuencia codificante si el promotor es capaz de iniciar o regular la transcripción o expresión de una secuencia codificante, en cuyo caso, debe entenderse que la secuencia codificante está "bajo el control del" promotor.
[0097]La elección del vector depende de los procedimientos de recombinación seguidos y del huésped utilizado. La introducción de los vectores en las células huésped puede realizarse ,entre otras cosas,mediante transfección con fosfato cálcico, transfección mediada por DEAE-dextrano, transfección con lipofectamina, electroporación, infección vírica o mediante administración a un sujeto, como se describe en el presente documento. Los vectores pueden replicarse de forma autónoma o junto con el cromosoma en el que se han integrado. Los vectores pueden contener uno o varios marcadores de selección. La elección de los marcadores puede depender de las células huésped elegidas. Estos incluyen, sin limitación, kanamicina, neomicina, puromicina, higromicina, zeocina, gen de la timidina quinasa del virus del herpes simple (HSV-TK) y gen de la dihidrofolato reductasa de ratón (dhfr). Los vectores que comprenden una o más moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos inmunogénicos descritos en el presente documento, enlazadas operablemente a una o más moléculas de ácido nucleico que codifican proteínas o péptidos que pueden utilizarse para aislar los polipéptidos inmunogénicos, también están cubiertos por la divulgación. Estas proteínas o péptidos incluyen, sin limitación, la glutatión-S-transferasa, la proteína de unión a la maltosa, la polihistidina de unión a metales, la proteína verde fluorescente, la luciferasa y la beta-galactosidasa.
[0098]El vector utilizado puede ser pcDNA™3.1+ (ThermoFisher, MA).
[0099]El vector puede ser un vector viral. Según proceda, el vector viral puede ser un virus ADN o un virus ARN, incluido un virus ARN autorreplicante. Los virus ARN autorreplicantes incluyen los alfavirus, y se describen,p. ej.,en Lundstrom, Molecules. (2018) 23(12). pii: E3310 (PMID: 30551668); y Ljungberg, et al., Expert Rev Vaccines. (2015) 14(2):177-94). El vector viral puede ser de un virus seleccionado del grupo que consiste en adenovirus, virus adenoasociado, arenavirus, alfavirus, alfavirus autorreplicante, poxvirus, citomegalovirus, rabdovirus, virus de la estomatitis vesicular, flavivirus, virus maraba y virus vaccinia. El vector viral puede ser de una familia viral seleccionada del grupo que consiste en: Adenoviridae(p. ej.,Adenovirus, virus adeno-asociado), Arenaviridae(p. ej.,mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica, mammarenavirus de Cali (también conocido como Pichinde mammarenavirus (PICV)), Poxviridae(p. ej.,Vaccinia virus), Herpesviridae(p. ej.,Citomegalovirus, Herpesvirus,p. ej.,HSV-1), Parvoviridae(p. ej.,Parvovirus H1), Poxviridae(p. ej.,Parvovirus H1), Poxviridae(p. ej.,Parvovirus H1). Vaccinia virus,p. ej.vaccinia modificada Ankara (MVA)), Flaviviridae(p. ej.Virus de la fiebre amarilla), Reoviridae(p. ej.,Reovirus), Retroviridae(p. ej.,Lentivirus), Picornaviridae(p. ej.,Coxsackievirus, Seneca Valley Virus, Poliovirus), Paramyxoviridae(p. ej.,Virus del sarampión, Virus de la enfermedad de Newcastle (NDV)), Rhabdoviridae(p. ej.,Vesiculovirus, incluidos el vesiculovirus de Maraba y el virus de la estomatitis vesicular (VSV)), Togaviridae(p. ej.,Alphavirus,p. ej.,Alphavirus autorreplicante; virus Sindbis), Enteroviridae(p. ej.,Echovirus). Se describen vectores virales de vaccinia modificados ilustrativos de uso para expresar los presentes polipéptidos inmunogénicos,p. ej.,en documento WO 2019/134049.
[0100] En la presente invención, el vector de expresión viral es un vector arenavirus, y puede seleccionarse entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV)(NCBI:txid11623), mammarenavirus Cali (también conocido como Pichinde mammarenavirus o Pichinde arenavirus) (NCBI:txid2169993), Guanarito virus (GTOV) (NCBI:txid45219), Argentinian mammarenavirus (también conocido como Junín (JUNV))(NCBI:txid2169991), Virus Lassa (LASV)(NCBI:txid11620), Virus Lujo (LUJV)(NCBI:txid649188), Virus Machupo (MACV)(NCBI:txid11628), Mammarenavirus brasileño (también conocido como Sabia (SABV))(NCBI:txid2169992), y Whitewater Arroyo virus (WWAV)(NCBI:txid46919). En algunas realizaciones, el vector de expresión viral es un vector arenavirus seleccionado entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)). En los documentos WO 2009/083210; WO 2015/183895; WO 2016/075250; WO 2017/198726; y Patentes de EE.UU. N.° 9.943.585 y 10.342.861, que se incorporan aquí por referencia en su totalidad a todos los efectos.
[0101] El vector de expresión viral aquí divulgado puede ser un vector de adenovirus,p. ej.,de un adenovirus humano o de un adenovirus simiesco (p. ej., un adenovirus de chimpancé, un adenovirus de gorila o un adenovirus de mono rhesus). El vector adenovírico puede seleccionarse entre adenovirus de serotipo 5 (Ad5), adenovirus de serotipo 26 (Ad26), adenovirus de serotipo 34 (Ad34), adenovirus de serotipo 35 (Ad35), adenovirus de serotipo 48 (Ad48), adenovirus de chimpancé(p. ej.ChAdOx1, ChAdOx2, ChAd3 (AdC3), ChAd5 (AdC5), ChAd6 (AdC6), ChAd7 (AdC7), ChAd8 (AdC8), ChAd9 (AdC9), ChAd10 (AdC10), ChAd11 (AdC11), ChAd17 (AdC17), ChAd16 (AdC16), ChAd19 (AdC19), ChAd20 (AdC20), ChAd22 (AdC22), ChAd24 (AdC24), ChAdY25, ChAd26 (AdC26), ChAd28 (AdC28), ChAd30 (AdC30), ChAd31 (AdC31), ChAd37 (AdC37), ChAd38 (AdC38), ChAd43 (AdC43), ChAd44 (AdC44), ChAd55 (AdC55), ChAd63 (AdC63), ChAdV63, ChAd68 (AdC68), ChAd73 (AdC73), ChAd82 (AdC82), ChAd83 (AdC83), ChAd143 (AdC143), ChAd144 (AdC144), ChAd145 (AdC145), ChAd147 (AdC147)), adenovirus gorila (e.p. ej. GC44, GC45, GC46) y adenovirus rhesusfp. ej, RhAd51, RhAd52, RhAd53, RhAd54, RhAd55, RhAd56, RhAd57, RhAd58, RhAd59, RhAd60, RhAd61, RhAd62, RhAd63, RhAd64, RhAd65, RhAd66). En los documentos WO2012/172277 (ChAdOx1), WO2017/221031 (ChAdOx2), WO2019/076880; WO2019/076877; Andrabi et al., (2019) Cell Reports 27:2426-2441 Guo, et al., Hum Vaccin Immunother. (2018) 14(7):1679-1685; Abbink, et al., J Virol. (2015) 89(3):1512-22; y Abbink, et al., J Virol. (2018) 92(6). pii: e01924-17.
[0102] El vector de expresión viral puede ser incapaz de replicarse (es decir, de replicación defectuosa o de replicación deficiente), tiene una capacidad de replicación reducida o disminuida, p. ej., en comparación con un vector viral de tipo salvaje (es decir, de replicación atenuada) o es de replicación competente. El vector de expresión viral puede ser un vector arenavirus de replicación defectuosa o de replicación deficiente que tenga un genoma bisegmentado,p. ej.,como se describe en documento WO 2009/083210 y documento WO 2017/076988. El vector de expresión viral puede ser un vector arenavirus de replicación atenuada que tenga un genoma trisegmentado, p. ej., como se describe en documentos WO 2016/075250, WO 2017/076988 y WO 2017/198726.
[0103] Se proporcionan además células huésped que comprenden uno o más vectores que comprenden los vectores arenavirus de la invención. También se divulgan en el presente documento células huésped que comprenden uno o más polinucleótidos que codifican uno o más de los polipéptidos inmunogénicos o uno o más vectores que expresan los polipéptidos inmunogénicos, según se describe en el presente documento. Puede utilizarse cualquier tipo de célula huésped. La célula huésped puede ser una célula procariota, por ejemplo,E. coli.La célula huésped puede ser una célula eucariota, p. ej., una célula de levadura, una célula vegetal, una célula de insecto, una célula de mamífero, como una línea celular basada en ovario de hámster chino (CHO) o de origen CHO(p. ej.,CHO-S, CHO DG44, ExpiCHO™, línea celular CHOZN® ZFN-modificada GS-/- CHO, CHO-K1, CHO-K1a), células COS, células BHK, células NSO o células de melanoma Bowes. Ejemplos de células huésped humanas son,entre otras,HeLa, 911, AT1080, A549 y HEK293(p. ej.,HEK293E, HEK293F, h Ek293H, HEK293T, Expi293™). Además, los polipéptidos inmunogénicos pueden expresarse en una célula de levadura comoPichia(véase, p. ej., Powers et al., J Immunol Methods. 251:123-35 (2001)),Hanseula,oSaccharomyces.
[0104] Los términos "célula huésped", "línea celular huésped" y "cultivo celular huésped" se utilizan indistintamente y se refieren a células en las que se ha introducido ácido nucleico exógeno, incluida la progenie de dichas células. Las células huésped incluyen los "transformantes" y las "células transformadas", que incluyen la célula transformada primaria y la progenie derivada de ella sin tener en cuenta el número de pasajes. La progenie puede no ser completamente idéntica en contenido de ácido nucleico a una célula progenitora, sino que puede contener mutaciones. Se incluye aquí la progenie mutante que tiene la misma función o actividad biológica que la célula transformada originalmente.
[0105] Según proceda, las células huésped pueden transfectarse de forma estable o transitoria con uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos, según se describe en el presente documento. Según proceda, las células huésped pueden infectarse con uno o más vectores que expresen uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento. Las células huésped pueden ser capaces de infectarse y propagar uno o más vectores de replicación atenuada o replicación competente que expresen uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento. Células ilustrativas útiles para infectar con y/o propagar vectores virales incluyen sin limitación células BHK-21, A549, Vero y HEK293 (p. ej.,<h>E<k>293E, HEK293F, HEK293H, HEK293T, Expi293™). Las células huésped pueden expresar el receptor de Coxsackievirus y adenovirus (CAR),p. ej.,células huésped MDCK, Caco-2 o Calu-3. Los polinucleótidos pueden integrarse en el genoma de la célula huésped.
5. Composiciones Farmacéuticas/Composiciones Inmunogénicas
[0106]En el presente documento se describen composiciones farmacéuticas o composiciones inmunogénicas que comprenden uno o más de los polipéptidos inmunogénicos del HBV, como se describe en el presente documento, o un polinucleótido que codifica uno o más de los polipéptidos inmunogénicos del HBV, como se describe en el presente documento, o un vector de expresión viral que comprende uno o más de dichos polinucleótidos, y un diluyente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Un "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye, sin limitación, cualquier adyuvante, portador, excipiente, deslizante, agente edulcorante, diluyente, conservante, tinte/colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, estabilizador, agente isotónico, disolvente o emulsionante que haya sido aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos como aceptable para su uso en seres humanos o animales domésticos.
[0107]En general, las composiciones farmacéuticas aquí descritas son inmunogénicas. La composición farmacéutica puede comprender una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más(p. ej.,dos o más, tres o más) polipéptidos inmunogénicos del HBV, o uno o más(p. ej.,dos o más, tres o más) polinucleótidos que codifican uno o más (p. ej., dos o más, tres o más) de los polipéptidos inmunogénicos del HBV, o uno o más (p. ej., dos o más, tres o más) vectores de expresión viral que contengan uno o más (p. ej., dos o más, tres o más) de los polinucleótidos que codifican uno o más de los polipéptidos inmunogénicos del HBV.
[0108]Los expertos en la materia conocerán diversos diluyentes, portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables, así como técnicas para la preparación y el uso de composiciones farmacéuticas a la luz de la presente divulgación. También se describen composiciones farmacéuticas ilustrativas y diluyentes, portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables en,p. ej.,Loyd V. Allen Jr (Editor), "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press; Brunton, Knollman y Hilal-Dandan, "Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics," 13th Edition, 2017, McGraw-Hill Education / Medical; McNally y Hastedt (Editors), "Protein Formulation and Delivery, 2nd Edition, 2007, CRC Press; Banga, "Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing, and Delivery Systems", 3.a edición, 2015, CRC Press; Lars Hovgaard, Frokjaer y van de Weert (editores), "Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins", 2.a edición, 2012,<c>R<c>Press; Carpenter y Manning (editores), "Rational Design of Stable Protein Formulations: Theory and Practice," 2002, Springer (Pharmaceutical Biotechnology (Book 13)); Meyer (Editor), "Therapeutic Protein Drug Products: Practical Approaches to Formulation in the Laboratory, Manufacturing, and the Clinic, 2012, Woodhead Publishing.
[0109]Los polinucleótidos o vectores pueden formularse en nanopartículas lipídicas. Por ejemplo, cuando los polipéptidos inmunogénicos del HBV se expresan a partir de moléculas de ARN autorreplicantes o autoamplificantes, el ARN autorreplicante o autoamplificante puede formularse en nanopartículas lipídicas (LNP). Tal como se utiliza aquí, el término "nanopartícula lipídica" se refiere a una o más nanopartículas esféricas con un diámetro medio de entre unos 10 y unos 1000 nanómetros, y que comprenden una matriz central lipídica sólida que puede solubilizar moléculas lipofílicas. El núcleo lipídico puede estar estabilizado por tensioactivos (p. ej., emulgentes), y puede comprender uno o varios triglicéridos (p. ej., tristearina), diglicéridos (p. ej., bahenato de glicerol), monoglicéridos (p. ej., monoestearato de glicerol), ácidos grasos(p. ej.,ácido esteárico), esteroides(p. ej.,colesterol) y ceras(p. ej.,palmitato de cetilo), incluidas combinaciones de los mismos. Las nanopartículas lipídicas se describen, por ejemplo, en Petrilli et al., Curr Pharm Biotechnol. 15:847-55, 2014; y Patentes de EE.UU. N.° 6,217,912; 6,881,421; 7,402,573; 7,404,969; 7,550,441; 7,727,969; 8,003,621; 8,691,750; 8,871,509; 9,017,726; 9,173,853; 9,220,779; 9,227,917; y 9,278,130, cada una de las cuales se incorpora por referencia en su totalidad. Una molécula de ARN autorreplicante o autoamplificante que codifica uno o más de los polipéptidos inmunogénicos del HBV descritos en el presente documento puede formularse o condensarse en vehículos de administración de poliplejos de polietilenimina (PEI),p. ej.,como se describe en Démoulins, et al., Nanomedicine. (2016) Apr;12(3):711-722 and Démoulins, et al., J Control Release. (2017), que pueden ser nanopartículas.
[0110]Cuando los polipéptidos inmunogénicos del HBV se expresan a partir de un vector de expresión viral, el vector de expresión viral puede formularse para la vía de administración deseada, p. ej., como una solución o suspensión acuosa isotónica farmacéuticamente aceptable adecuada para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea o intradérmica. El vector de expresión viral puede formularse para administración mucosa, p. ej., bucal, intranasal, intravaginal o intra-rectal. En Manfredsson y Benskey, editores, "Viral Vectors for Gene Therapy: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology)", 2019, Book 1937 in Methods in Molecular Biology Series, Humana Press; WO 2017/013169 (formulación de vectores adenovirales en una mezcla acuosa o composición liofilizada en presencia de azúcar amorfo y baja concentración de sal); y Kumru, et al., J Pharm Sci. (2018) Nov;107(11):2764-2774 (formulaciones acuosas tamponadas en Tris y que contienen prolina, lactosa y manitol como aditivos estabilizadores). La formulación de vectores de arenavirus se describe, p. ej., en documentos WO 2009/083210; WO 2016075250 y WO 2017/198726. Los vectores de expresión viral pueden administrarse mediante microagujas,p. ej.,como se describe en Zaric, et al., Expert Opin Drug Deliv. (2017) Oct;14(10):1177-1187.
[0111]Cada portador, diluyente o excipiente puede ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la composición farmacéutica y no perjudicial para el sujeto. A menudo, el portador farmacéuticamente aceptable es una solución acuosa de pH tamponado. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen: agua; tampones,p. ej.,un tampón que tenga un pKa en el intervalo de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 8,0,p. ej.,un tampón fisiológicamente aceptable,p. ej.,seleccionado entre fosfato, carbonato, bicarbonato, citrato, maleato, glicina-glicina, HEPES, HEPPSO, HEPPS, imidazol, BICINA, TRICINA, Tris y BIS-Tris; azúcares, como lactosa, trehalosa, glucosa y sacarosa; almidones, como almidón de maíz y fécula de patata; celulosa, y sus derivados, como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites, como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, como propilenglicol; polioles, como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponadores, como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Hank, solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones tampón de fosfato; aminoácidos (p.ej.,aminoácidos cargados, incluyendo sin limitación, aspartato, asparagina, glutamato, glutamina, histidina, arginina, lisina); y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas. También pueden estar presentes en las composiciones agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, así como colorantes, agentes desmoldeantes, agentes de recubrimiento, edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes.
[0112]El vector arenavirus(p. ej.,un vector LCMV o un vector Pichinde mammarenavirus (PICV)) descrito en el presente documento puede formularse en una solución acuosa isotónica que comprende un tampón biológicamente compatible que tiene un pKa en el intervalo de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 8,0(p. ej.,HEPES y NaCl), a un pH neutro o casi neutro y un tensioactivo no iónico(p. ej.,PLURONIC® F68 (también conocido como poloxámero 188)). En una formulación particular, un vector arenavirus(p. ej.,un vector LCMV o Pichinde mammarenavirus) descrito en el presente documento se formula en una solución acuosa isotónica que comprende tampón HEPES a pH 7,4, NaCl y PLURONIC® F68 (también conocido como poloxámero 188). Schleiss, et al. (Clin Vaccine Immunol. 2017) describe una formulación de vectores LCMV LCMV en un diluyente de 25 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0,01% PLURONIC® F68; pH 7,4), que puede utilizarse para formular los vectores arenavirus aquí descritos. Se añadió una concentración final de sorbitol del 10% antes de la congelación por debajo de -60°C.
[0113]Por lo general, la formulación y los métodos de administración de las composiciones farmacéuticas se adaptarán en función del lugar y la enfermedad a tratar. Las formulaciones ejemplares incluyen, sin limitación, las adecuadas para la administración parenteral,p. ej.,intravenosa, intraarterial, intramuscular o subcutánea, incluidas las formulaciones encapsuladas en micelas, liposomas o cápsulas de liberación de fármacos (agentes activos incorporados dentro de un recubrimiento biocompatible diseñado para una liberación lenta); formulaciones ingeribles; formulaciones para uso tópico, como cremas, pomadas y geles; y otras formulaciones como inhalantes, aerosoles y pulverizadores. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse para administración parenteral,p. ej.,intravenosa, subcutánea u oral. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse para administración mucosa,p. ej.,bucal, intranasal, intrarrectal y/o intravaginal.
[0114]Las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas pueden ser estériles. La composición farmacéutica descrita en el presente documento puede tener un pH comprendido entre 4,5 y 8,5, 4,5 y 6,5, 6,5 y 8,5, 6,0 y 8,0, 6,5 y 8,5, o un pH de aproximadamente 5...0, aproximadamente 5,5, aproximadamente 6,0, aproximadamente 6,5, aproximadamente 6,6, aproximadamente 6,7, aproximadamente 6,8, aproximadamente 6,9.0, aproximadamente 5,5, aproximadamente 6,0, aproximadamente 6,5, aproximadamente 6,6, aproximadamente 6,7, aproximadamente 6,8, aproximadamente 6,9, aproximadamente 7,0, aproximadamente 7,1, aproximadamente 7,2, aproximadamente 7,3, aproximadamente 7,5, aproximadamente 8,0 o aproximadamente 8,5. La composición farmacéutica aquí divulgada puede tener una osmolaridad en el intervalo de 240-260 o 250-330 mOsmol/L. La composición farmacéutica aquí divulgada puede ser isotónica o casi isotónica.
[0115]Las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas pueden ser líquidas o sólidas. La composición farmacéutica aquí divulgada puede comprender una solución o suspensión acuosa. La composición farmacéutica aquí divulgada puede ser liofilizada o un líquido congelado.
[0116]La composición farmacéutica divulgada en el presente documento puede comprender además uno o más agentes terapéuticos adicionales,p. ej.,un segundo agente terapéutico, o un segundo y un tercer agentes terapéuticos, para su uso en terapias combinadas, como se describe en el presente documento.
[0117]La composición farmacéutica aquí divulgada puede comprender además un adyuvante. Los adyuvantes ilustrativos que pueden coformularse o coadministrarse con los polipéptidos inmunogénicos del HBV descritos en el presente documento, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV y los vectores que expresan dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV incluyen, sin limitación, citocinas, quimiocinas, moléculas inmunoestimuladoras, agonistas de receptores tipoTollo inhibidores de vías inmunosupresoras, como se describe en el presente documento y en Li, et al. (2017) 22:17-40. Otros adyuvantes que pueden coformularse o coadministrarse con los polipéptidos inmunogénicos del HBV aquí descritos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV y los vectores que expresan dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV incluyen, sin limitación, sales minerales(p. ej.,sales de aluminio(p. ej.,alumbre), fosfato de calcio, adyuvante incompleto de Freunds), partículas lipídicas(p. ej.,MF59, cocleatos, partículas similares a virus), micropartículas(p. ej.,virosomas, ácido poliláctico (PLA), poli[lactida-coglicolida] (PLG)), potenciadores inmunitarios(p. ej.,ARNds:Poli(I:C), Poli-IC:LC, Lípido monofosforilo A (MPL), LPS, Flagellina, Imidazoquinolinas: imiquimod (R837), resiquimod (848), CpG oligodesoxinucleótidos (ODN), Muramil dipéptido (MDP), Saponinas (QS-21)), y adyuvantes mucosos(p. ej.,toxina del cólera (CT), enterotoxina termolábil (LTK3 y LTR72), quitosano). Los adyuvantes que pueden coformularse o coadministrarse con los polipéptidos inmunogénicos del HBV aquí descritos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV y los vectores que expresan dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV se resumen en Apostólico, et al., J Immunol Res. (2016) 2016:1459394.
[0118]Las composiciones farmacéuticas o composiciones inmunogénicas aquí divulgadas pueden comprender mezclas de dos o más polipéptidos inmunogénicos del HBV, dos o más polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV, o dos o más vectores que expresan dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV. La composición farmacéutica puede comprender dos o más polipéptidos inmunogénicos del HBV, dos o más polinucleótidos que codifiquen dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV, o dos o más vectores que expresen dichos polipéptidos inmunogénicos del HBV.
[0119]La composición inmunogénica puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41.
[0120]La composición inmunogénica puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41.
[0121]La composición inmunogénica puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41.
[0122]Con respecto al polipéptido de fusión núcleo-sAg en la composición inmunogénica, el polipéptido núcleo comprende un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 67, en donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg comprende un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41.
[0123]La composición inmunogénica divulgada en el presente documento puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27 32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37 o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37.
[0124]La composición inmunogénica divulgada en el presente documento puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29 o 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37.
[0125]La composición inmunogénica divulgada en el presente documento puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en el que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37.
[0126]La composición inmunogénica divulgada en el presente documento puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en el que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37.
[0127]Según convenga o se desee, el mutante polipéptido de la polimerasa del HBV y la proteína de fusión núcleo-sAg del HBV pueden proporcionarse en la composición inmunogénica en una proporción en el intervalo de 1:10 a 10:1,p. ej.,en el intervalo de 1:9 a 9:1, 1:8 a 8:1, 1:7 a 7:1, 1:6 a 6:1, 1:5 a 5:1, 1:4 a 4:1, 1:3 a 3:1, 1:2 a 2:1 o 1:1. En varias realizaciones, las proporciones pueden medirse en unidades formadoras de placa (PFU), unidades formadoras de foco (FFU), unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp).
[0128]En varias realizaciones, uno o más polinucleótidos son ADN, ADNc, ARNm o ARN autorreplicante.
[0129]En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en los que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de polimerasa de HBV truncado o un polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV, como se describe en el presente documento; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento. Según convenga o se desee, el primer vector de expresión vírica y el segundo vector de expresión vírica pueden proporcionarse en una proporción en el intervalo de 1:10 a 10:1,p. ej.,en el intervalo de 1:9 a 9:1, 1:8 a 8:1, 1:7 a 7:1, 1:6 a 6:1, 1:5 a 5:1, 1:4 a 4:1, 1:3 a 3:1, 1:2 a 2:1 o 1:1.
[0130]En algunas realizaciones, la composición inmunogénica comprende en el intervalo de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades virales formadoras de foco (FFU) o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp),p. ej.de aproximadamente 104 a aproximadamente 107 FFU o PFU virales,p. ej.,de aproximadamente 103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp virales por mililitro, de cada uno del primer vector de expresión viral y del segundo vector de expresión viral.
[0131]Tal como se divulga en el presente documento, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica pueden ser independientemente de una familia taxonómica seleccionada de Adenoviridae, Arenaviridae, Herpesviridae(p. ej.Cytomegalovirus), Poxviridae(p. ej.Vaccinia virus,p. ej.,vaccinia modificada Ankara (MVA)), Flaviviridae(p. ej.,virus de la fiebre amarilla), Rhabdoviridae(p. ej.,Vesiculovirus,p. ej.,Maraba vesiculovirus), Togaviridae(p. ej.,Alphavirus). El primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral pueden ser de la misma familia taxonómica o de familias taxonómicas diferentes. Por ejemplo, tanto el primer vector de expresión viral como el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica son de Adenoviridae, Arenaviridae o Poxviridae(p. ej..Virus vaccinia,p. ej.,vaccinia modificada Ankara (MVA)).
[0132]En las composiciones inmunogénicas de la invención, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica son de Arenaviridae. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de un vector arenavirus seleccionado entre Mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), Mammarenavirus Cali (también conocido como Pichinde mammarenavirus o Pichinde arenavirus (PICV)), Guanarito virus (GTOV), Junin virus (JUNV), Lassa virus (LASV), Lujo virus (LUJV), Machupo virus (MACV), Sabia virus (SABV), y Whitewater Arroyo virus (WWAV). En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de un vector arenavirus seleccionado entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus Pichinde o arenavirus Pichinde (PICV)).
[0133]En varias realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica son de replicación defectuosa o de replicación deficiente. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral de la composición inmunogénica están atenuados en su replicación.
6. Métodos de tratamiento
[0134]En el presente documento se describen además métodos para provocar una respuesta inmunitaria protectora frente al virus de la hepatitis B humana (HBV) en un sujeto que lo necesite. También se proporcionan métodos para tratar o prevenir el virus de la hepatitis B humana (HBV) en un sujeto que lo necesite. También se describen métodos para inhibir la replicación del HBV en un individuo infectado. También se describen métodos para reducir la carga viral asociada a la infección por el HBV. Los métodos descritos en el presente documento pueden comprender la administración al sujeto de una cantidad eficaz de una composición inmunogénica, tal como se describe en el presente documento. El "sujeto" o el "individuo" puede ser un ser humano, una marmota, un pato de Pekín, un ratón o un primate no humano(p. ej.,un chimpancé).
[0135]"Tratamiento" o "tratar" como se usa aquí se refiere a un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados. A efectos de la presente divulgación, los resultados beneficiosos o deseados incluyen, entre otros, el alivio de un síntoma y/o la disminución de la extensión de un síntoma, el retraso de la progresión y/o la prevención del empeoramiento de un síntoma asociado a una enfermedad o afección. "a) inhibir la enfermedad o afección(p. ej.,disminuir uno o más síntomas resultantes de la enfermedad o afección, y/o disminuir la extensión de la enfermedad o afección); b) ralentizar o detener el desarrollo de uno o más síntomas asociados con la enfermedad o afección(p. ej.,estabilizar la enfermedad o afección, retrasar el empeoramiento o la progresión de la enfermedad o afección); y c) aliviar la enfermedad o afección,p. ej.,provocando la regresión de los síntomas clínicos, mejorando el estado de la enfermedad, retrasando la progresión de la enfermedad, aumentando la calidad de vida y/o prolongando la supervivencia.
[0136]"Retrasar", tal como se utiliza en el presente documento, en relación con el desarrollo de una enfermedad o afección significa diferir, obstaculizar, ralentizar, retrasar, estabilizar y/o posponer el desarrollo de la enfermedad o afección. Este retraso puede ser de duración variable, en función de los antecedentes de la enfermedad y/o del individuo tratado. Como es evidente para un experto en la materia, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, en el sentido de que el individuo no desarrolle la enfermedad o afección.
[0137]"Prevenir" o "prevención" como se usa aquí se refiere a un régimen que protege contra la aparición de la enfermedad o trastorno de tal manera que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollan. Así, "prevención" se refiere a la administración de una terapia(p. ej.,la administración de una sustancia terapéutica) a un sujeto antes de que los signos de la enfermedad sean detectables en el sujeto(p. ej., laadministración de una sustancia terapéutica a un sujeto en ausencia de un agente infeccioso detectable(p. ej., unvirus) en el sujeto). El sujeto puede ser un individuo en riesgo de desarrollar la enfermedad o trastorno, como un individuo que tiene uno o más factores de riesgo que se sabe que están asociados con el desarrollo o aparición de la enfermedad o trastorno. Así, el término "prevenir la infección por HBV" puede referirse a administrar a un sujeto que no tiene una infección por HBV detectable una sustancia terapéutica anti-HBV. Se entiende que el sujeto para la terapia preventiva anti-HBV puede ser un individuo en riesgo de contraer el virus HBV. También se entiende que la prevención no requiere una tasa de éxito del 100%. En algunos casos, la prevención puede entenderse como una reducción del riesgo de infección, pero no como una eliminación completa de la aparición de una infección.
[0138]"Cantidad terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una cantidad que es eficaz para provocar la respuesta biológica o médica deseada, incluida la cantidad de una composición inmunogénica que, cuando se administra a un sujeto para tratar una enfermedad, es suficiente para efectuar dicho tratamiento de la enfermedad. La cantidad eficaz variará en función de la composición inmunogénica, la enfermedad y su gravedad y la edad, peso, etc., del sujeto a tratar. La cantidad efectiva puede incluir un intervalo de cantidades. Una cantidad eficaz puede estar en una o más dosis,es decir,puede ser necesaria una dosis única o múltiples dosis para alcanzar el punto final de tratamiento deseado. Una cantidad eficaz puede considerarse en el contexto de la administración de uno o más agentes terapéuticos, y puede considerarse que un único agente se administra en una cantidad eficaz si, junto con uno o más agentes, puede obtenerse o se obtiene un resultado deseable o beneficioso. Las dosis adecuadas de cualquier compuesto coadministrado pueden reducirse opcionalmente debido a la acción combinada(p. ej.,efectos aditivos o sinérgicos) de los compuestos.
[0139]La composición inmunogénica administrada divulgada en el presente documento puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido de polimerasa de HBV truncado, como se describe en el presente documento, o el polipéptido mutante de deleción de polimerasa de HBV, como se describe en el presente documento; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg, como se describe en el presente documento.
[0140]La composición inmunogénica administrada divulgada en el presente documento puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0141]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleo-sAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0142]Con respecto al polipéptido de fusión núcleo-sAg en la composición inmunogénica administrada, el polipéptido núcleo comprende un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 67, en donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg comprende un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg comprende uno o más de un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg comprende uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 74, un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición de aminoácidos correspondiente a la posición 250 un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41.
[0143]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica un mutante de polipéptido de polimerasa de HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que codifica la proteína de fusión núcleosAg que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0144]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0145]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0146]También en el presente documento, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada pueden pertenecer independientemente a una familia taxonómica seleccionada entre Adenoviridae, Arenaviridae, Herpesviridae(p. ej.Cytomegalovirus), Poxviridae(p. ej.Vaccinia virus,p. ej.vaccinia modificada Ankara (MVA)), Flaviviridae(p. ej.Virus de la fiebre amarilla), Rhabdoviridae(p. ej.,Vesiculovirus,p. ej., Maraba vesiculovirus), Togaviridae(p. ej.,Alphavirus), como se describe anteriormente y en el presente documento. El primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral pueden ser de la misma familia taxonómica o de familias taxonómicas diferentes. Por ejemplo, tanto el primer vector de expresión viral como el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada son de Adenoviridae, Arenaviridae o Poxviridae(p. ej.Virus vaccinia,p. ej.,vaccinia modificada Ankara (MVA)).
[0147]En las composiciones inmunógenas administradas de la invención, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral son de Arenaviridae. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada son de un vector arenavirus seleccionado entre Mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), Mammarenavirus Cali (también conocido como mammarenavirus de Pichinde o arenavirus de Pichinde (PICV)), virus Guanarito (GTOV), virus Junín (JUNV), virus Lassa (LASV), virus Lujo (LUJV), virus Machupo (MACV), virus Sabia (SABV) y virus Whitewater Arroyo (Ww Av ). En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada son de un vector arenavirus seleccionado de Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus (LCMV) o Cali mammarenavirus (también conocido como Pichinde mammarenavirus o Pichinde arenavirus (PICV)).
[0148]En varias realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada son defectuosos en la replicación o deficientes en la replicación. En algunas realizaciones, el primer vector de expresión viral y el segundo vector de expresión viral en la composición inmunogénica administrada están atenuados en su replicación.
[0149]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión de arenavirus de LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus de LCMV, en el que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0150]También divulgado en el presente documento, la composición inmunogénica administrada puede comprender una mezcla que comprende un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en el que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia nucleica de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37. Dicha composición inmunogénica puede administrarse en una composición de sensibilización y/o en una composición de refuerzo.
[0151]También en el presente documento, el sujeto puede estar infectado por el HBV, puede ser sospechoso de estar infectado por el HBV o puede estar en riesgo de estar infectado por el HBV. Por "individuo en riesgo" se entiende un individuo que corre el riesgo de desarrollar una enfermedad que debe tratarse. Un individuo "en riesgo" puede o no tener una enfermedad o afección detectable, y puede o no haber mostrado una enfermedad detectable antes del tratamiento de los métodos aquí descritos. Por "en riesgo" se entiende que un individuo tiene uno o más de los denominados factores de riesgo, que son parámetros medibles que se correlacionan con el desarrollo de una enfermedad o afección y son conocidos en la técnica. Una persona que presenta uno o más de estos factores de riesgo tiene una mayor probabilidad de desarrollar la enfermedad o afección que una persona que no los presenta. El sujeto puede estar infectado crónicamente por el HBV,p. ej.,infectado por el HBV durante más de 6 meses. Típicamente, el individuo padece una infección crónica de hepatitis B, aunque está dentro del alcance de la presente divulgación tratar a personas que están infectadas agudamente con el HBV. En consecuencia, el sujeto puede estar infectado agudamente por el HBV. El sujeto puede estar coinfectado por el virus de la hepatitis D (VHD).
[0152]El sujeto puede ser asintomático. El sujeto puede estar experimentando o presentando síntomas asociados a la infección por HBV. Los síntomas del HBV pueden incluir, porejemplo,ictericia, redes visibles de vasos sanguíneos inflamados en la piel, orina de color oscuro(p. ej.,naranja o marrón), heces de color claro, fiebre, fatiga persistente, malestar, dolor abdominal, líquido abdominal, pérdida de apetito, náuseas y vómitos. La infección crónica por el HBV puede provocar uno o más síntomas,comoinsuficiencia hepática, cáncer hepático, fibrosis hepática y cirrosis hepática. Una o más administraciones de los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, PNL y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, según se describe en el presente documento, pueden prevenir, retrasar, aliviar, mitigar, inhibir, revertir o eliminar uno o más síntomas asociados con o causados por la infección por el HBV.
[0153]En algunas realizaciones, la composición inmunogénica se administra por una vía seleccionada entre intravenosa, intramuscular, intradérmica, subcutánea y mucosa(p. ej.,bucal, intranasal, intrarrectal, intravaginal).
[0154]En algunas realizaciones, la dosis administrada de la composición inmunogénica comprende en el intervalo de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades formadoras de foco (FFU) virales o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp),p. ej.,de aproximadamente 104 a aproximadamente 107 FFU o PFU,p. ej.,de aproximadamente 103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp por mililitro, de cada uno del primer vector de expresión viral y del segundo vector de expresión viral. Los métodos pueden implicar la administración intravenosa o intramuscular de aproximadamente 106 a aproximadamente 108 FFU o PFU o IU o vp virales por administración cada dos semanas (Q2W) o mensualmente (Q4W).
[0155]También en este documento, los métodos comprenden una pauta de sensibilización y refuerzo. La pauta de sensibilización y refuerzo puede implicar la administración de una composición de sensibilización en un primer momento y la administración de una o más composiciones de refuerzo en uno o más momentos posteriores. Según proceda, los métodos pueden implicar la repetición de la pauta de sensibilización y refuerzo en una o más iteraciones. Las administraciones de la composición de sensibilización y de una o más composiciones de refuerzo pueden espaciarse al menos 1 semana y hasta al menos 2 semanas, 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses o 6 meses. Según proceda, la dosis o la frecuencia de dosificación de la composición inmunogénica puede ajustarse a lo largo del tratamiento, según el criterio del médico que la administra. Según corresponda, un sujeto puede tratarse con administraciones múltiples durante un período de tiempo de al menos aproximadamente 2 semanas a 3 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses, o más tiempo, o hasta que el sAg ya no sea detectable en el suero o plasma del sujeto.
[0156]También descrito en el presente documento, después de una o más administraciones de uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, o uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, o uno o más vectores que expresan uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, opcionalmente con uno o más agentes terapéuticos adicionales, descritos en el presente documento, el sujeto puede no presentar síntomas del HBV en ausencia de tratamiento antivírico durante al menos 6 meses, al menos 1 año, al menos 2 años, al menos 3 años, o más. Tras una o más administraciones de uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, o uno o más polinucleótidos que codifican uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, o uno o más vectores que expresan uno o más polipéptidos inmunogénicos, como se describe en el presente documento, opcionalmente con uno o más agentes terapéuticos adicionales, descritos en el presente documento, el sAg puede dejar de ser detectable en el suero o plasma del sujeto, en ausencia de tratamiento antivírico durante al menos 6 meses,p. ej.,al menos 1 año, al menos 2 años, al menos 3 años, o más.
[0157]Según convenga o se desee, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender la misma composición inmunogénica o diferentes composiciones inmunogénicas. La composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender el mismo uno o más polipéptidos y el mismo vector de expresión(p. ej.,vector de expresión viral). La composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender diferentes polipéptidos y/o diferentes vectores de expresión(p. ej.,vectores de expresión viral). Por ejemplo, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender el mismo uno o más polipéptidos y diferentes vectores de expresión(p. ej.,vectores virales de diferentes especies de virus dentro de una familia taxonómica, vectores virales de diferentes familias taxonómicas, vectores virales con diferentes competencias de replicación). La composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender diferentes polipéptidos inmunogénicos y el mismo vector de expresión(p. ej.,vector de expresión viral).
[0158]También divulgados en el presente documento, los métodos pueden comprender Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral, y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral. La pauta de sensibilización y refuerzo puede comprender:
a) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más polinucleótidos, en los que el uno o más polinucleótidos comprenden ADN, ADNc, ARNm o a Rn autorreplicante;
b) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más polinucleótidos, en la que el uno o más polinucleótidos comprenden ADN, ADNc, ARNm o ARN autorreplicante, y refuerzo con una composición de refuerzo que comprende uno o más vectores de expresión viral;
c) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral, y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más vectores de expresión viral, en los que el uno o más vectores de expresión viral de la composición de sensibilización y el uno o más vectores de expresión viral de la composición de reforzamiento son de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas;
d) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación, en la que el uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación de la composición de sensibilización y el uno o más vectores de expresión viral deficientes en replicación de la composición de refuerzo sean de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas;
e) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuados por replicación y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más vectores de expresión viral atenuados por replicación, en la que el uno o más vectores de expresión viral atenuados por replicación de la composición de sensibilización y el uno o más vectores de expresión viral atenuados por replicación de la composición de reforzamiento son de familias taxonómicas idénticas, relacionadas o no relacionadas;
f) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral con replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral con replicación atenuada;
g) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de replicación atenuada y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de replicación deficiente;
h) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de Pichinde (PICV);
i) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV);
j) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente;
k) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente;
l) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus;
m) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus;
n) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus;
o) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de arenavirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus;
p) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión vírica de poxvirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión vírica de adenovirus; o
q) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral de adenovirus y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral de poxvirus.
[0159]También divulgados en el presente documento, los métodos pueden comprender sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral, y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más vectores de expresión viral. La pauta de sensibilización y refuerzo puede comprender:
a) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprende uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de Pichinde (PICV); b) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) y reforzamiento con una composición de reforzamiento que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV);
c) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión vírica del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente; o
d) Sensibilización con una composición de sensibilización que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente y refuerzo con una composición de refuerzo que comprenda uno o más vectores de expresión viral del mammarenavirus Pichinde (PICV) de replicación deficiente.
[0160]También en el presente documento, la composición de sensibilización y la composición de refuerzo pueden comprender una composición inmunogénica como se describe en el presente documento.
[0161]También en este caso, el sujeto puede no estar recibiendo terapia antiviral o la terapia antiviral se interrumpe antes de la administración de una o más composiciones inmunogénicas. La terapia antiviral puede interrumpirse tras una o más administraciones de las composiciones.
[0162]También descritos en el presente documento, los métodos de tratamiento pueden activar en el sujeto células T CD8+ dirigidas a uno o más epítopos polipéptidos del HBV. Los métodos de tratamiento pueden provocar en el sujeto la producción de anticuerpos que se unen a uno o más polipéptidos del HBV.
7. Terapias Combinadas
[0163]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno, dos, tres, cuatro o más agentes terapéuticos adicionales. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las PRL y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con dos agentes terapéuticos adicionales. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las PRL y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con tres agentes terapéuticos adicionales. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con cuatro agentes terapéuticos adicionales. Los uno, dos, tres, cuatro o más agentes terapéuticos adicionales pueden ser diferentes agentes terapéuticos seleccionados de la misma clase de agentes terapéuticos, y/o pueden seleccionarse de diferentes clases de agentes terapéuticos.
[0164]"Coadministración", tal como se utiliza aquí, se refiere a la administración de dosis unitarias de polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describe aquí, antes o después de la administración de dosis unitarias de uno o más agentes terapéuticos adicionales. Por ejemplo, la administración de la composición inmunogénica aquí descrita en segundos, minutos u horas tras la administración de uno o más agentes terapéuticos adicionales. Por ejemplo, puede administrarse primero una dosis unitaria de una composición inmunogénica de la presente divulgación, seguida en segundos o minutos por la administración de una dosis unitaria de uno o más agentes terapéuticos adicionales. Alternativamente, puede administrarse primero una dosis unitaria de uno o más agentes terapéuticos adicionales, seguida de la administración de una dosis unitaria de una composición inmunogénica de la presente divulgación en cuestión de segundos o minutos. Una dosis unitaria de los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, según se describe en el presente documento, puede administrarse primero, seguida, tras un periodo de horas(p. ej.,1-12 horas), por la administración de una dosis unitaria de uno o más agentes terapéuticos adicionales. Puede administrarse primero una dosis unitaria de uno o más agentes terapéuticos adicionales, seguida, tras un periodo de horas(p. ej.,de 1 a 12 horas), por la administración de una dosis unitaria de los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento.
[0165]La coadministración de los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, con uno o más agentes terapéuticos adicionales generalmente se refiere a la administración simultánea o secuencial de una composición inmunogénica divulgada en el presente documento y uno o más agentes terapéuticos adicionales, de tal manera que cantidades terapéuticamente eficaces de cada agente estén presentes en el cuerpo del paciente.
[0166]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agentes terapéuticos adicionales como se describe en el presente documento, los componentes de la composición se administran como un régimen simultáneo o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación puede administrarse en dos o más administraciones.
[0167]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno, dos, tres, cuatro o más agentes terapéuticos adicionales seleccionados entre fármacos combinados contra el HBV, vacunas contra el HBV, inhibidores de la ADN polimerasa del HBV, inmunomoduladores, moduladores del receptor tipoToll(TLR), ligandos del receptor de interferón alfa, inhibidores de la hialuronidasa, inhibidores del antígeno del HBV(p. ej.,inhibidores del antígeno central del HBV (HBcAg), inhibidores del antígeno de superficie del HBV (HBsAg), inhibidores de HBx, inhibidores del antígeno E del HBV), anticuerpos contra el antígeno del HBV, ácidos nucleicos inhibidores dirigidos contra el HBV(p. ej.,oligonucleótidos antisentido, ARN de interferencia corta (ARNsi), ARN de interferencia dirigido al ADN (ddARNi)), inhibidores de la secreción o ensamblaje del HBsAg, inhibidores de la entrada viral del HBV, inhibidor del punto de control inmunitario, inhibidores de la proteína 4 asociada a los linfocitos T citotóxicos (CTLA4), inhibidores de la ciclofilina, moduladores de endonucleasas, inhibidores de la ribonucleótido reductasa, inhibidores del ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc), agonistas del receptor X farnesoide (FXR), agonistas STING, anticuerpos anti-HBV, antagonistas de quimioquinas CCR2, agonistas de timosina, citoquinas, moduladores de nucleoproteínas, estimuladores del gen 1 inducible por ácido retinoico, estimuladores de NOD2, inhibidores de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), inhibidores de la vía de la indoleamina-2, 3-dioxigenasa (IDO), inhibidores de ZCCHC14, inductores de agregados linfoides terciarios, polímeros de ácidos nucleicospej.g.,NAP y STOPS), inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, timosina alfa-1 recombinante, inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton (BTK), inhibidores de la lisina desmetilasa (KDM), inhibidores de la replicación del HBV, inhibidores de arginasa, terapia génica y terapia celular, editores génicos, terapia celular, terapia celular TCR-T y otros fármacos contra el HBV.
[0168]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más de un agente quimioterapéutico, un inmunomodulador, un agente inmunoterapéutico, un anticuerpo terapéutico, una vacuna terapéutica, un anticuerpo biespecífico y una proteína terapéutica "proteína terapéutica similar a un anticuerpo" (como DARPins®, anticuerpos antipMHC similares al TCR, DARTs®, Duobodies®, Bites®, XmAbs®, TandAbs®, derivados Fab), un conjugado anticuerpofármaco (ADC), modificadores genéticos o editores genéticos dirigidos contra el HBV(p. ej.,CRISPR-Cas(p. ej.,Cas9, Cas12, Cascade, Cas13), nucleasas de dedos de zinc, endonucleasashoming,meganucleasashoming (p. ej.,ARCUS), nucleasas sintéticas, TALEN), terapias celulares(p. ej.,células T, células NK, macrófagos con un receptor de antígeno quimérico (CAR)), y TCR-T (un receptor de células T diseñado) o cualquier combinación de los mismos.
[0169]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno, dos, tres, cuatro o más agentes terapéuticos adicionales,p. ej.,como inhibidores de la 3-dioxigenasa (IDO), modulador de la apolipoproteína A1, inhibidores de la arginasa, inhibidores del atenuador de linfocitos B y T, inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton (BTK), antagonista de la quimiocina CCR2, inhibidores CD137, inhibidores CD160, inhibidores CD305, agonista y modulador de CD4, compuestos dirigidos contra el antígeno del núcleo de la hepatitis B (HBcAg), moduladores alostéricos de la proteína del núcleo, inhibidores del ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc), inhibidores de la ciclofilina, inhibidores de la proteína 4 asociada a los linfocitos T citotóxicos (CTLA4), inhibidores de la ADN polimerasa, moduladores de endonucleasas, modificadores epigenéticos, agonistas del receptor X farnesoide (FXR), inhibidores de la ADN polimerasa del HVB, inhibidores de la replicación del HVB, inhibidores del ARNasa del HVB, inhibidores de la entrada viral del HVB, inhibidores de la HBx, modulador de la proteína de la gran envoltura de la hepatitis B, estimulador de la proteína de la gran envoltura de la hepatitis B, modulador de la proteína estructural de la hepatitis B, inhibidores del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), inhibidores de la secreción o ensamblaje del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), inhibidores del antígeno E del virus de la hepatitis B, inhibidores de la replicación del virus de la hepatitis B, inhibidor de la proteína estructural del virus de la hepatitis, inhibidor de la transcriptasa inversa del VIH-1, inhibidor de la hialuronidasa, inhibidores de la familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP), agonista de la IL-2, agonista de la IL-7, inmunomoduladores, inhibidores de la indoleamina-2, inhibidores de la ribonucleótido reductasa, ligando de la interleucina-2, inhibidores de la ipi4, inhibidores de la lisina desmetilasa, inhibidores de la histona desmetilasa, inhibidores de la KDM1, inhibidores de la KDM5, inhibidores del receptor similar a la lectina de células asesinas subfamilia G miembro 1, inhibidores del gen 3 de activación de linfocitos, activadores del receptor beta de linfotoxina, moduladores de Axl, moduladores de B7-H3, moduladores de B7-H4, moduladores de CD160, moduladores de CD161, moduladores de CD27, moduladores de CD47, moduladores de CD70, moduladores de GITR, moduladores de HEVEM, moduladores de ICOS, moduladores de Mer, moduladores de NKG2A, moduladores de NKG2D, moduladores de OX40, moduladores de SIRPalpha, moduladores de TIGIT, moduladores de Tim-4, moduladores de Tyro, Inhibidores del polipéptido cotransportador de Na+-taurocolato (NTCP), inhibidores del receptor 2B4 de células asesinas naturalees, estimulador del gen NOD2, inhibidor de nucleoproteínas, moduladores de nucleoproteínas, agonista del receptor OX-40, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidor de la peptidilproil isomerasa, inhibidores de la fosfatidilinositol-3 quinasa (PI3K), estimulador del gen 1 inducible por ácido retinoico, inhibidor de la transcriptasa inversa, inhibidor de la ribonucleasa, inhibidor de la ARN ADN polimerasa, inhibidor del gen SLC10A1, miméticos de SMAC, inhibidor de la tirosina quinasa Src, agonistas del gen estimulador del interferón (STING), estimuladores de NOD 1, inhibidor de la glicoproteína de superficie de células T CD28, modulador de la glicoproteína de superficie de células T CD8, agonista de timosina, ligando de timosina alfa 1, inhibidores de Tim-3, agonistas de TLR-3, agonistas de TLR-7, agonistas de TLR-9, agonistas o estimuladores del gen TLR9, moduladores de receptores tipoToll(TLR), inhibidores de la ribonucleótido reductasa viral, y combinaciones de los mismos.
Fármacos Antivirales inhibidores del HBV
[0170]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agentes antivirales. El uno o más agentes antivirales pueden seleccionarse del grupo que consiste en lamivudina (LAM), adefovir dipivoxil (ADV), entecavir (ETV), telbivudina (LdT), tenofovir disoproxil fumarato (TDF), tenofovir disoproxil fumarato y emtricitabina (TRUVADA®), tenofovir alafenamida (<t>A<f>o VEMLIDY®) y ledipasvir y sofosbuvir (HARVONI®).
Otros Farmacos para HBV
[0171]Ejemplos de otros fármacos para el tratamiento del HVB que pueden combinarse o coadministrarse incluyen alfahidroxitropolonas, amdoxovir, antroquinonol, nucleósidos de beta-hidroxicitosina, ARB-199, CCC-0975, ccc-R08, elvucitabina, ezetimiba, ciclosporina A, gentiopicrina (gentiopicrósido), HH-003, hepalatida, JNJ-56136379, nitazoxanida, birinapant, NJK14047, NOV-205 (molixan, bAm -205), oligotida, mivotilato, feron, Gs T-HG-131, levamisol, Ka Shu Ning, alloferon, WS-007, Y-101 (Ti Fen Tai), rSIFN-co, PEG-IIFNm, KW-3, BP-Inter-014, ácido oleanólico, HepB-ARNn, cTP-5 (rTP-5), HSK-II-2, HEISCO-106-1, HEISCO-106, Hepbarna, IBPB-006IA, Hepuyinfen, DasKloster 0014-01, ISA-204, Jiangantai (Ganxikang), MIV-210, OB-AI-004, PF-06, picroside, DasKloster-0039, hepulantai, IMB-2613, NCO-48 Fumarate, XTYW-001, SFA-001, TCM-800B, glutatión reducido, RO-6864018, ENOB-HB-01, RG-7834, QL-007sofosbuvir, ledipasvir, UB-551, PA-1010, HPN-BV1, STSG-0002, y ZH-2N, y los compuestos divulgados en US20150210682, (Roche), US 2016/0122344 (Roche), WO2015173164, WO2016023877, US2015252057A (Roche), WO16128335A1 (Roche), WO16120186A1 (Roche), US2016237090A (Roche), WO16107833A1 (Roche), WO16107832A1 (Roche), US2016176899A (Roche), WO16102438A1 (Roche), WO16012470A1 (Roche), US2016220586A (Roche) y US2015031687A (Roche).
[0172]Ejemplos de fármacos combinados para el tratamiento del HBV que pueden combinarse o coadministrarse incluyen tenofovir disoproxil fumarato y emtricitabina (TRUVADA®), ledipasvir y sofosbuvir (HARVONI®); ABX-203 (NASVAC), lamivudina y PEG-IFNa; adefovir y PEG-IFNa; e INO-1800 (INO-9112 y RG7944).
Vacunas contra el HVB
[0173]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con una o más vacunas contra el HBV. Las vacunas contra el HBV que pueden combinarse o coadministrarse(p. ej.,en un régimen de prevención de pauta de sensibilización y refuerzo) incluyen tanto vacunas profilácticas como terapéuticas. Algunos ejemplos de vacunas profilácticas contra el HBV son Vaxelis, Hexaxim, Heplisav, Mosquirix, vacuna DTwP-HBV, Bio-Hep-B, D/T/P/HBV/M (LBVP-0101; LBVW-0101), vacuna DTwP-Hepb-Hib-IPV, Heberpenta L, DTwP-HepB-Hib, V-419, CVI-HBV-001, Tetrabhay, vacuna profiláctica contra la hepatitis B (Advax Super D), Hepatrol-07, GSK-223192A, ENGERIX B®, vacuna recombinante contra la hepatitis B (intramuscular, Kangtai Biological Products), vacuna recombinante contra la hepatitis B (levadura Hansenual polymorpha, intramuscular, Hualan Biological Engineering), vacuna recombinante contra el antígeno de superficie de la hepatitis B, Bimmugen, CARG-101, Euforavac, Eutravac, anrix-DTaP-IPV-Hep B, HBAI-20, Infanrix-DTaP-IPV-Hep B-Hib, Pentabio Vaksin DTP-HB-Hib, Comvac 4, Twinrix, Euvax-B, Tritanrix HB, Infanrix Hep B, Comvax, vacuna DTP-Hib-HBV, vacuna DTP-HBV, Yi Tai, Heberbiovac HB, Trivac HB, GerVax, vacuna DTwP-Hep B-Hib, Bilive, Hepavax-Gene, SUPERVAX, Comvac5, Shanvac-B, Hebsulin, Recombivax HB, Revac B mcf, Revac B+, Fendrix, DTwP-HepB-Hib, DNA-001, Shan5, Shan6, vacuna rhHBsAG, vacuna pentavalente HBI, LBVD, Infanrix HeXa, YS-HBV-001, IR-101H, TVAX-008, y vacuna DTaP-rHB-Hib.
[0174]Ejemplos de vacunas terapéuticas contra el HBV que pueden combinarse o coadministrarse(p. ej.,en una pauta de sensibilización y refuerzo) incluyen el complejo HBsAG-HBIG, ARB-1598, Bio-Hep-B, abi-HB (intravenosa), ABX-203 (NASVAC), Tetrabhay, GX-110E, GS-4774, vacuna peptídica (epsilonPA-44), Hepatrol-07, NASVAC (NASTERAP), IMP-321, BEVAC, Revac B mcf, Revac B+, MGN-1333, KW-2, CVI-HBV-002, AltraHepB, VGX-6200, FP-02, FP-02.2 (HepTcell), NU-500, HBVax, im/TriGrid/vacuna antigénica, Mega-CD40L-vacuna adyuvada, HepB-v, RG7944 (INO-1800), vacuna terapéutica recombinante basada en VLP (infección por HBV, VLP Biotech), AdTG-17909, AdTG-17910 AdTG-18202, ChronVac-B, TG-1050, VVX-001, GSK-3528869A (ChAd155-hli-HBV MVA-HBV Hbc-HBs/AS01B-4), VBI-2601, VTP-300 (ChAdOx1-SIi-HBV-CPmut-TPA-Ssh prime y MVA-SIi-HBV-CPmut-TPA-Ssh boost), Lm HBV y BM32 (Tulaeva, et al., EBioMedicine (2020) 102953). Las vacunas contra el Arenavirus HBV se describen,p. ej.,en los documentos WO2017076988 y WO2017198726.
Inhibidores de la ADN polimerasa del HBV
[0175]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la polimerasa. Algunos ejemplos de inhibidores de la ADN polimerasa del HBV que pueden combinarse o coadministrarse son adefovir (HEPSERA®), emtricitabina (EMTRIVA®), tenofovir disoproxil fumarato (VIREAD®), tenofovir alafenamida, tenofovir, tenofovir disoproxil, tenofovir alafenamida fumarato, tenofovir alafenamida hemifumarato, tenofovir dipivoxil, tenofovir dipivoxil fumarato, tenofovir octadeciloxietil éster, CMX-157, tenofovir exalidex, besifovir, entecavir (BARACLUDE®), entecavir maleato, telbivudina (TYZEKA®), filocilovir, pradefovir, clevudina, ribavirina, lamivudina (EPIVIR-HBV®), fosfazida, famciclovir, fusolina, metacavir, SNC-019754, FMCA, AGX-1009, AR-II-04-26, HIP-1302, tenofovir disoproxil aspartato, tenofovir disoproxil orotato, AiB-001 y HS-10234.
Inmunomoduladores
[0176]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inmunomoduladores(p. ej.,un inhibidor del punto de control inmunitario, un agonista de la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFRSF), un estimulador inmunitario,p. ej.,un agonista de TLR). Algunos ejemplos de inmunomoduladores que pueden combinarse o coadministrarse son rintatolimod, clorhidrato de imidol, ingaron, dermaVir, plaquenil (hidroxicloroquina), proleucina, hidroxiurea, micofenolato mofetilo (MPA) y su derivado éster micofenolato mofetilo (MMF), JNJ-440,WF-10, AB-452, ribavirina, IL-12, INO-9112, polímero polietilenimina (PEI), Gepon, VGV-1, MOR-22, CRV-431, JNJ-0535, TG-1050, ABI-H2158, BMS-936559, GS-9688, RO-7011785 y su correspondiente profármaco RO-702053, RG-7854, RO-6871765, AIC-649 e IR-103.
Agonistas de los receptores tipoToll(TLR)
[0177]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas o estimuladores de un receptor tipoToll(TLR). Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un agonista de un TLR,p. ej.,un agonista de TLR1 (N<c>B<i>Gene ID: 7096), T<l>R2 (NCBI Gene ID: 7097), TLR3 (NCBI Gene ID: 7098), TLR4 (NCBI Gene ID: 7099), TLR5 (NCBI Gene ID: 7100), TLR6 (NCBI Gene ID: 10333), TLR7 (NCBI Gene ID: 51284), TLR8 (NCBI Gene ID: 51311), TLR9 (NCBI Gene ID: 54106), y/o TLR10 (NCBI Gene ID: 81793), TLR11, TLR12 y TLR13.
[0178]Entre los ejemplos de agonistas de TLR3 que pueden combinarse o coadministrarse se incluyen rintatolimod, poli-ICLC, RIBOXXON®, Apoxxim, RIBOXXIM®, IPH-33, MCT-465, MCT-475 y ND-1. 1.
[0179]Ejemplos de agonistas de TLR4 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen G-100, y GSK-1795091.
[0180]Ejemplos de agonistas de TLR7 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, entre otros, AL-034, DSP-0509, GS-9620 (vesatolimod), LHC-165, TMX-101 (imiquimod), GSK-2245035, resiquimod, DSR-6434, DSP-3025, IMO-4200, MCT-465, telratolimod (MEDI-9197), 3M-051, SB-9922, 3M-052, Limtop, TMX-30X, TMX-202, RG-7863, RG-7854, RG-7795, RO-7011785 y el profármaco correspondiente RO-702053, y los compuestos divulgados en US20100143301 (Gilead Sciences), US20110098248 (Gilead Sciences) y US20090047249 (Gilead Sciences), US20140045849 (Janssen), US20140073642 (Janssen), WO2014/056953 (Janssen), WO2014/076221 (Janssen), WO2014/128189 (Janssen), US20140350031 (Janssen), WO2014/023813 (Janssen), US20080234251 (Array Biopharma), US20080306050 (Array Biopharma), US20100029585 (Ventirx Pharma), US20110092485 (Ventirx Pharma), US20110118235 (Ventirx Pharma), US20120082658 (Ventirx Pharma), US20120219615 (Ventirx Pharma), US20140066432 (Ventirx Pharma), US20140088085 (Ventirx Pharma), US20140275167 (Novira Therapeutics) y US20130251673 (Novira Therapeutics).
[0181]Ejemplos de agonistas duales TLR7/TLR8 que pueden combinarse o coadministrarse son NKTR-262, telratolimod y BDB-001.
[0182]Algunos ejemplos de agonistas de TLR8 que pueden coadministrarse incluyen, entre otros, E-6887, IMO-4200, IMO-8400, IMO-9200, MCT-465, telratolimod (Me Di-9197), motolimod, resiquimod, selgantolimod (GS-9688), HRS-9950, VTX-1463, VTX-763, 3M-051, 3M-052, SBT6050, y los compuestos divulgados en US2016289229 (Gilead Sciences), US20140045849 (Janssen), US20140073642 (Janssen), WO2014/056953 (Janssen), WO2014/076221 (Janssen), WO2014/128189 (Janssen), US20140350031 (Janssen), WO2014/023813 (Janssen), US20080234251 (Array Biopharma), US20080306050 (Array Biopharma), US20100029585 (Ventirx Pharma), US20110092485 (Ventirx Pharma), US20110118235 (Ventirx Pharma), US20120082658 (Ventirx Pharma), US20120219615 (Ventirx Pharma), US20140066432 (Ventirx Pharma), US20140088085 (Ventirx Pharma), US20140275167 (Novira Therapeutics) y US20130251673 (Novira Therapeutics), US Patent No. 9670205 (Gilead Sciences, Inc.), US20160289229 (Gilead Sciences, Inc.), WO2017/048727 (Gilead Sciences, Inc.), US20180065938 (Gilead Sciences, Inc.) y US20180086755 (Gilead Sciences, Inc.).
[0183]Ejemplos de agonistas TLR9 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, AST-008, cobitolimod, CMP-001, IMO-2055, IMO-2125, S-540956, litenimod, MGN-1601, BB-001, BB-006, IMO-3100, IMO-8400, IR-103, IMO-9200, agatolimod, DIMS-9054, DV-1079, DV-1179, AZD-1419, lefitolimod (MGN-1703), CYT-003, CYT-003-QbG10, tilsotolimod y PUL-042.
[0184]Ejemplos adicionales de moduladores de TLR7, TLR8 y TLR9 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen los compuestos divulgados en los documentos WO2017047769 (Teika Seiyaku), WO2015014815 (Janssen), WO2018045150(Gilead Sciences Inc), WO2018045144 (Gilead Sciences Inc), WO2015162075 (Roche), WO2017034986 (Universidad de Kansas), WO2018095426 (Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd), WO2016091698(Roche), WO2016075661 (GlaxoSmithKline Biologicals), WO2016180743 (Roche), WO2018089695 (Dynavax Technologies), WO2016055553 (Roche), WO2015168279 (Novartis), WO2016107536 (Medshine Discovery), WO2018086593 (Livo (Shanghai) Pharmaceutical), WO2017106607 (Merck), WO2017061532 (Sumitomo Dainippon Pharma), WO2016023511 (Chia Tai Tianqing Pharmaceutical), WO2017076346 (Chia Tai Tianqing Pharmaceutical), WO2017046112 (Roche), WO2018078149 (Roche), WO2017040233 (3M Co), WO2016141092 (Gilead Sciences), WO2018049089 (BristolMyers Squibb), WO2015057655 (Eisai Co Ltd), WO2017001307 (Roche), WO2018005586 (BristolMyers Squibb), WO201704023 (3M Co), WO2017163264 (Council of Scientific and Industrial Research (India)), WO2018046460 (GlaxoSmithKline Biologicals), WO2018047081 (Novartis), WO2016142250 (Roche), WO2015168269 (Novartis), WO201804163 (Roche), WO2018038877 (3M Co), WO2015057659 (Eisai Co Ltd), WO2017202704 (Roche), WO2018026620 (BristolMyers Squibb), WO2016029077 (Janus Biotherapeutics), WO201803143 (Merck), WO2016096778 (Roche), WO2017190669 (Shanghai De Novo Pharmatech), US09884866 (Universidad de Minnesota), WO2017219931 (Sichuan KelunBiotech Biopharmaceutical), WO2018002319 (Janssen Sciences), WO2017216054 (Roche), WO2017202703 (Roche), WO2017184735 (IFM Therapeutics), WO2017184746 (IFM Therapeutics), WO2015088045 (Takeda Pharmaceutical), WO2017038909 (Takeda Pharmaceutical), WO2015095780 (Universidad de Kansas), WO2015023958 (Universidad de Kansas).
[0185]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un agonista de TLR7, TLR8 o TLR9.
Ligandos del Receptor de Interferón Alfa
[0186]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más ligandos del receptor de interferón alfa. Ejemplos de ligandos del receptor de interferón alfa que pueden combinarse o coadministrarse incluyen interferón alfa-2b (INTRON A®), interferón pegilado alfa-2a (PEGASYS®), interferón pegilado alfa-1b, interferón alfa 1b (HAPGEN®), Veldona, Infradure, Roferon-A, YPEG-interferón alfa-2a (YPEG-rhIFNalfa-2a), P-22, Algeron, Alfarona, Ingaron (interferón gamma), rSIFN-co (interferón recombinante supercompuesto), Ypeginterferón alfa-2b (YPEG-rhIFNalfa-2b), Mo R-2, peginterferón alfa-2b (PEG-INTRON®), Bioferon, Novaferon, Inmutag (Inferon), MULTIFERON®, interferón alfa-n1 (HUMOFERON®), interferón beta-1a (AVONEX®), Shaferon, interferón alfa-2b (Axxo), Alfaferone, interferón alfa-2b (BioGeneric Pharma), interferón alfa 9216 (CJ), Laferonum, VIPEG, BLAUFERON-A, BLAUFERON-B, Intermax Alpha, Realdiron, Lanstion, Pegaferon, PDferon-B, interferón alfa-2b (IFN, Laboratorios Bioprofarma), alfainterferona 2b, Kalferon, Pegnano, Feronsure, PegiHep, interferón alfa 2b (Zydus-Cadila), interferón alfa 2a, Optipeg A, Realfa 2B, Reliferon, interferón alfa-2b (Amega), interferón alfa-2b (Virchow), ropeginterferón alfa-2b, PEG-IFN-alfa, rHSA-IFN alfa-2a (proteína de fusión intereferón alfa 2a de albúmina sérica humana recombinante), rHSA-IFN alfa 2b, interferón alfa humano recombinante (1b, 2a, 2b), peginterferón alfa-2b (Amega), peginterferón alfa-2a, Reaferon-EC, Proquiferon, Uniferon, Urifron, interferón alfa-2b (Instituto de Productos Biológicos de Changchun), Anterferon, Shanferon, Layfferon, Shang Sheng Lei Tai, INTEFEN, SINOGEN, Fukangtai, Pegstat, rHSA-IFN alfa-2b, SFR-9216, e Interapo (Interapa).
Inhibidores de la Hialuronidasa
[0187]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de hialuronidasa. Entre los ejemplos de inhibidores de la hialuronidasa que pueden combinarse o coadministrarse se incluye el astodrimer.
Inhibidores del Antígeno de Superficie de la Hepatitis B (HBsAg)
[0188]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de HBsAg. Algunos ejemplos de inhibidores del HBsAg que pueden combinarse o coadministrarse son AK-074, HBF-0259, GP-605, PBHBV-001, PBHBV-2-15, PBHBV-2-1, REP-9AC, REP-9C, REP-9, REP-2139, REP-2139-Ca, REP-2055, REP-2163, REP-2165, REP-2053, REP-2031 y REP-006, y REP-9AC'. Algunos ejemplos de inhibidores de la secreción de HBsAg que pueden combinarse o coadministrarse son BM601, GST-HG-131, AB-452 y ALG-010093.
Inhibidores de la Ciclofilina
[0189]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de ciclofilina. Algunos ejemplos de inhibidores de la ciclofilina que pueden combinarse o coadministrarse son CPI-431-32, EDP-494, OCB-030, SCY-635, NVP-015, NVP-018, NVP-019, STG-175 y los compuestos descritos en los documentos US8513184 (Gilead Sciences), US20140030221 (Gilead Sciences), US20130344030 (Gilead Sciences) y US20130344029 (Gilead Sciences).
Inhibidores de Entrada Viral de HBV
[0190]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la entrada viral del HBV. Algunos ejemplos de inhibidores de la entrada viral del HBV que pueden combinarse o coadministrarse son la bulevirtida (Hepcludex; Myrcludex B).
Ácidos nucleicos inhibidores
[0191]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más ácidos nucleicos inhibidores(p. ej.,oligonucleótido antisentido, ARN de interferencia corto (ARNSi), ARN de interferencia dirigido al ADN (ddARNi)) dirigido específicamente a un polinucleótido del HBV. El polinucleótido del HBV puede codificar una proteína del HBV(es decir,se encuentra en una región codificante dentro del genoma del HBV).
Oligonucleótido Antisentido de Marcación del ARNm Viral
[0192]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más oligonucleótidos antisentido. Ejemplos de oligonucleótidos antisentido dirigidos al ARNm viral que pueden combinarse o coadministrarse incluyen ISIS-HBVRx, IONIS-HBVRx, IONIS-HBV-LRx, IONIS-GSK6-LRx, GSK-3389404, BNC-1701 y RG-6004.
ARN de Interferencia Cortos (ARNsi)
[0193]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más ARNsi dirigidos específicamente a un polinucleótido del HBV. Entre los ejemplos de ARNsi dirigidos específicamente a un polinucleótido del HBV que pueden combinarse o coadministrarse se incluyen TKM-HBV (TKM-HepB), ALN-HBV, SR-008, HepB-ARNn, ARC-520, ARC-521, ARB-1740, ARB-1467, AB-729, DCR-HBVS, RG-6084 (PD-L1), RG-6217, ALN-HBV-02, JNJ-3989 (ARO-HBV), STSG-0002, LUNAR-HBV y DCR-HBVS (DCR-S219).
Interferencia de ARN dirigida al ADN (ddARNi)
[0194]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más ddARNi dirigidos específicamente a un polinucleótido del HBV. Entre los ejemplos de ddARNi dirigidos específicamente a un polinucleótido del HBV que pueden combinarse o coadministrarse se incluye BB-HB-331.
Moduladores de Endonucleasas
[0195]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más moduladores de endonucleasas. Entre los ejemplos de moduladores de endonucleasas que pueden combinarse o coadministrarse se incluye el PGN-514.
Inhibidores de la Ribonucleótido Reductasa
[0196]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la ribonucleótido reductasa. Algunos ejemplos de inhibidores de la ribonucleótido reductasa que pueden combinarse o coadministrarse son Trimidox.
Inhibidores No Nucleósidos de la Transcriptasa Inversa (ITINN)
[0197]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más NNRTI. Ejemplos de NNRTI que pueden combinarse o coadministrarse incluyen los compuestos divulgados en WO2018118826 (Merck), WO2018080903(Merck), WO2018119013 (Merck), WO2017100108 (Idenix), WO2017027434 (Merck), WO2017007701 (Merck), WO2008005555 (Gilead).
Inhibidores de la replicación del HBV
[0198]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la replicación del HBV. Algunos ejemplos de inhibidores de la replicación del HBV que pueden combinarse o coadministrarse son GP-31502, isotiafludina, IQP-HBV, RM-5038 y Xingantie.
Inhibidores del ADN Circular Covalentemente Cerrado (ADNccc)
[0199]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de cccADN. Algunos ejemplos de inhibidores del cccADN que pueden combinarse o coadministrarse son BSBI-25, ccc-R08 y CHR-101.
Agonistas del Receptor X Farnesoide (FXR)
[0200]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas FXR. Algunos ejemplos de agonistas del FXR que pueden combinarse o coadministrarse son EYP-001, cilofexor (GS-9674), EDP-305, MET-409, Tropifexor, AKN-083, RDX-023, BWD-100, LMB-763, INV-3, NTX-023-1, EP-024297 y GS-8670.
Anticuerpos anti-HBV
[0201]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más anticuerpos que se unen específicamente a un antígeno del HBV, incluido un péptido del HBV presentado en una molécula principal de histocompatibilidad (pMHC). Algunos ejemplos de anticuerpos contra el HBV dirigidos a los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B que pueden combinarse o coadministrarse son lenvervimab (GC-1102), XTL-17, XTL-19, KN-003, IV Hepabulin Sn y la terapia con anticuerpos monoclonales totalmente humanos (infección por el virus de la hepatitis B, Humabs BioMed). Los anticuerpos dirigidos contra la proteína X del HBV (HBx) que pueden combinarse o coadministrarse se describen,p. ej.,en Kornyeyev, et al., J Virol. 2019 Jul 30;93(16). pii: e00248-19.
[0202]Ejemplos de anticuerpos HBV, incluyendo anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales, que pueden ser combinados o coadministrados incluyen Zutectra, Shang Sheng Gan Di, Uman Big (Hepatitis B Hyperimmune), Omri-Hep-B, Nabi-HB, Hepatect CP, HepaGam B, igantibe, Niuliva, CT-P24, inmunoglobulina de la hepatitis B (intravenosa, pH4, infección por<v>H<b>, Shanghai R<a>AS Blood Products), y Fovepta (BT-088).
[0203]Entre los ejemplos de anticuerpos monoclonales contra el HBV totalmente humanos que pueden combinarse o coadministrarse se incluye el HBC-34.
[0204]Los anticuerpos contra los complejos péptido viral del HBV/complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) de clase I (pMHC) que pueden combinarse o coadministrarse se describen,p. ej.,en Sastry, et al., J Virol. 2011 Mar;85(5):1935-42 y en WO2011062562.
Antagonistas de la Quimiocina CCR2
[0205]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más antagonistas de quimiocina CCR2. Algunos ejemplos de antagonistas de la quimiocina CCR2 que pueden combinarse o coadministrarse son el propagermanio.
Agonistas de la Timosina
[0206]También divulgados aquí, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican tales polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden tales polipéptidos o polinucleótidos, como se describe aquí, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas de timosina,p. ej.,una timosina alfa-1 recombinante. Algunos ejemplos de agonistas de la timosina que pueden combinarse o coadministrarse son la timalfasina y la timosina alfa 1 recombinante (GeneScience). Ejemplos de timosina alfa-004 recombinante incluyen NL-1 y timosina alfa-1 PEGilada.
Agonistas del Receptor de Interleucina(p. ej.,Citocinas)
[0207]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas del receptor de interleucina de un receptor de interleucina seleccionado entre IL-2, IL-7, IL-12 e IL-15. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, según se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con una o más citocinas seleccionadas del grupo que consiste en IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, IL-24 y sus variantes. Ejemplos de agonistas del receptor de IL-2 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen proleucina (aldesleucina, IL-2); celmoleucina; IL-2 pegilada(p. ej.,NKTR-214); variantes modificadas de IL-2(p. ej.,THOR-707), bempegaldesleucina, AIC-284, ALKS-4230, CUI-101 y Neo-2/15. Ejemplos de agonistas del receptor de IL-15 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen ALT-803, NKTR-255, y hetIL-15, proteína de fusión interleucina-15/Fc, AM-0015, NIZ-985, SO-C101, IL-15 Synthorin (Il-15 pegilada), P-22339, y una proteína de fusión IL-15 -PD-1 N-809. Entre los ejemplos de agonistas del receptor de IL-7 que pueden combinarse o coadministrarse se incluye CYT-107.
Moduladores de Nucleoproteínas
[0208]También divulgados aquí, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican tales polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden tales polipéptidos o polinucleótidos, como se describe aquí, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más moduladores de nucleoproteína. Los moduladores de nucleoproteínas pueden ser inhibidores de la proteína del núcleo o de la cápside del HBV. Algunos ejemplos de moduladores nucleoproteicos que pueden combinarse o coadministrarse son GS-4882, AB-423, AB-836, AT-130, ALG-001075, ALG-001024, ALG-000184, EDP-514, GLS4, NVR-1221, NVR-3778, AL-3778, BAY 41-4109, mesilato de morfotiadina, ARB-168786, ARB-880, ARB-1820, GST-HG-141, JNJ-379, JNJ-632, RG-7907, GST-HG-141, HEC-72702, KL-060332, AB-506, ABI-H0731, ABI-H3733, JNJ-440, AK-0605, HRS-5091, VNRX-9945, ABI-H2158, CB-HBV-001, AK-0605, SOC-10, SOC-11 y DVR-23.
[0209]Ejemplos de inhibidores de cápside que pueden combinarse o coadministrarse incluyen ALG-000184, ABI-H0731, NVR 3-778, y compuestos divulgados en los documentos US2018161307 (Gilead Sciences), US20140275167 (Novira Therapeutics), US20130251673 (Novira Therapeutics), US20140343032 (Roche), WO2014037480 (Roche), US20130267517 (Roche), WO2014131847 (Janssen), WO2014033176 (Janssen), WO2014033170 (Janssen), WO2014033167 (Janssen), WO2015/059212 (Janssen), WO2015118057 (Janssen), WO2015011281 (Janssen), WO2014184365 (Janssen), WO2014184350 (Janssen), WO2014161888 (Janssen), WO2013096744 (Novira), US20150225355 (Novira), US20140178337 (Novira), US20150315159 (Novira), US20150197533 (Novira), US20150274652 (Novira), US20150259324, (Novira), US20150132258 (Novira), US9181288 (Novira), WO2014184350 (Janssen), WO2013144129 (Roche), WO2017198744 (Roche), US 20170334882 (Novira), US20170334898 (Roche), WO2017202798 (Roche), WO2017214395 (Enanta), WO2018001944 (Roche), WO2018001952 (Roche), WO2018005881 (Novira), WO2018005883 (Novira), WO2018011100 (Roche), WO2018011160 (Roche), WO2018011162 (Roche), WO2018011163 (Roche), WO2018036941 (Roche), WO2018043747 (Kyoto Univ), US20180065929 (Janssen), WO2016168619 (Indiana University), WO2016195982 (The Penn State Foundation), WO2017001655 (Janssen), WO2017048950 (Assembly Biosciences), WO2017048954 (Assembly Biosciences), WO2017048962 (Assembly Biosciences), US20170121328 (Novira), US20170121329 (Novira).
[0210]Ejemplos de inhibidores de transcripción que pueden combinarse o coadministrarse incluyen compuestos divulgados en WO2017013046 (Roche), WO2017016960 (Roche), WO2017017042 (Roche), WO2017017043 (Roche), WO2017061466 (Toyoma chemicals), WO2016177655 (Roche), WO2016161268 (Enanta). WO2017001853 (Redex Pharma), WO2017211791 (Roche), WO2017216685 (Novartis), WO2017216686 (Novartis), WO2018019297 (Ginkgo Pharma), WO2018022282 (Newave Pharma), US20180030053 (Novartis), WO2018045911 (Zhejiang Pharma).
Activadores Inmunitarios Innatos
[0211]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más activadores inmunitarios innatos. El uno o más activadores inmunitarios innatos puede comprender un agonista de un receptor seleccionado del grupo que consiste en tirosina quinasa 3 relacionada con fms (FLT3), receptor estimulador de genes de interferón (STING), DExD/H-box helicasa 58 (DDX58; también conocida como RIG-I), dominio 2 que contiene oligomerización de unión a nucleótidos (NOD2). Los métodos pueden incluir la administración conjunta de GS-3583 y/o GS-9992. Los métodos pueden implicar la combinación o coadministración de un agonista de FLT3,p. ej.,GS-3583 o CDX-301.
Agonistas de STING, moduladores de RIG-I y NOD2
[0212]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un estimulador del agonista del interaccionador 1 cGAMP de respuesta al interferón (STING o STING1; NCBI Gene ID: 340061). El agonista o activador de STING/STING1 puede seleccionarse del grupo formado por ADU-S100 (MIW-815), SB-11285, MK-1454, SR-8291, AdVCA0848, STINGVAX, GSK-532, SYN-STING, MSA-1, SR-8291, ácido 5,6-dimetilxantenona-4-acético (DMXAA), GAMP cíclico (cGAMP) y di-AMP cíclico. Ejemplos de agonistas de STING que pueden combinarse o coadministrarse incluyen los compuestos divulgados en documentos WO 2018065360 (Biolog Life Science Institute Forschungslabor und Biochemica-Vertrieb GmbH, Alemania), WO 2018009466 (Aduro Biotech), WO 2017186711 (InvivoGen), WO 2017161349 (Immune Sensor), WO 2017106740 (Aduro Biotech), US 20170158724 (Glaxo Smithkline), WO 2017075477 (Aduro Biotech), US 20170044206 (Merck), WO 2014179760 (University of California), WO2018098203 (Janssen), WO2018118665 (Merck), WO2018118664 (Merck), WO2018100558 (Takeda), WO2018067423 (Merck), WO2018060323 (Boehringer).
[0213]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con una DExD/H-box helicasa 58 (DDX58; también conocido como gen 1 inducible por ácido retinoico (RIG-I), RIG1, RIGI, RLR-1, SGMRT2; NCBI Gene ID: 23586). Entre los agonistas RIG-I ilustrativos que pueden combinarse o coadministrarse se incluyen inarigivir soproxil (SB-9200; GS-9992); SB-40, SB-44, ORI-7246, ORI-9350, ORI-7537, ORI-9020, ORI-9198, ORI-7170 y RGT-100.
[0214]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un dominio 2 que contiene oligomerización de unión a nucleótidos (NOD2; NCBI Gene ID: 64127), como el inarigivir soproxil (SB-9200; GS-9992) y el IR-103.
Inhibidores de la Fosfatidilinositol 3-Quinasa (PI3K)
[0215]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un inhibidor de una subunidad catalítica de fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato 3-quinasa, p .ej,fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato 3-quinasa subunidad catalítica alfa (PIK3CA, CLAPO, CLOVE, CWS5, MCAP, MCM, MCMTC, PI3K, PI3K-alfa, p110-alfa; NCBI Gene ID: 5290); fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato 3-quinasa subunidad catalítica beta (PIK3CB, P110BETA, PI3K, PI3KBETA, PIK3C1; NCBI Gene ID: 5291); subunidad catalítica gamma de la fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato-3-quinasa (PIK3CG, PI3CG, PI3K, PI3Kgamma, PIK3, p110gamma, p120-PI3K; Gene ID: 5494); y/o fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato 3-quinasa subunidad catalítica delta (PIK3CD, APDS, IMD14, P110DELTA, PI3K, p110D, NCBI Gene ID: 5293). El inhibidor de PI3K puede ser un inhibidor pan-PI3K. Ejemplos de inhibidores de PI3K incluyen, sin limitación, ACP-319, AEZA-129, A m G-319, AS252424, AZD8186, BAY 1082439, BEZ235, bimiralisib (PQR309), buparlisib (BKM120), BYI,719 (alpelisib), orotato de carboxiamidotriazol (CTO), CH5132799, CLR-457, CLR-1401, copanlisib (BAY 80-6946), DS-7423, duvelisib (IPI-145), fimepinostat (CUDC-907), gedatolisib (PF-05212384), GDC-0032, GDC-0084 (RG7666), GDC-0077, pictilisib (GDC-0941), GDC-0980, GSK2636771, GSK2269577, idelalisib (Zydelig®), INCB040093, INCB50465, IPI-443, IPI-549, KAR4141, LY294002, LY3023414, NERLYNX® (neratinib), nemiralisib (GSK2269557), omipalisib (GSK2126458, GSK458), OXY111A, panulisib (P7170, AK151761), PA799, perifosina (KRX-0401), Pilaralisib (SAR245408; XI,147), puquitinib mesilato (XC-302), SAR260301, seletalisib (UCB-5857), serabelisib (INK-1117, MLN-1117, TAK-117), SF1126, sonolisib (PX-866), RG7604, rigosertib sódico (ON-01910 sódico), RP5090, tenalisib (RP6530), RV-1729, SRX3177, taselisib, TG100115, umbralisib (TGR-1202), TGX221, voxtalisib (SAR245409), VS-5584, WX-037, X-339, X-414, XI,499, XI,756, wortmannin, ZSTK474, y los compuestos descritos en WO 2005/113556 (ICOS), WO 2013/052699 (Gilead Calistoga), WO 2013/116562 (Gilead Calistoga), WO 2014/100765 (Gilead Calistoga), WO 2014/100767 (Gilead Calistoga), y WO 2014/201409 (Gilead Sciences).
Moduladores del Punto de Control Inmunitario
[0216]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más bloqueadores o inhibidores de proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios y/o con uno o más estimuladores, activadores o agonistas de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores. El bloqueo o la inhibición de los puntos de control inmunitarios inhibitorios puede regular positivamente la activación de las células T o NK e impedir el escape inmunitario de las células infectadas. La activación o estimulación de puntos de control inmunitarios estimuladores puede aumentar el efecto de los inhibidores de puntos de control inmunitarios en la terapéutica infecciosa. Las proteínas o receptores del punto de control inmunitario pueden regular las respuestas de las células T(p. ej.,revisado en Xu, et al., J Exp Clin Cancer Res. (2018) 37:110). Las proteínas o receptores del punto de control inmunitario pueden regular las respuestas de las células NK(p. ej.,revisado en Davis, et al., Semin Immunol. (2017) 31:64-75 y Chiossone, et al., Nat Rev Immunol. (2018) 18(11):671-688).
[0217]Ejemplos de proteínas o receptores de punto de control inmunitario incluyen sin limitación CD27 (NCBI Gene ID: 939); CD70 (NCBI Gene ID: 970); CD40 (NCBI Gene ID: 958); CD40LG (NCBI Gene ID: 959); CD47 (NCBI Gene ID: 961); Cd 48 (SLa Mf2; NCBI Gene ID: 962); dominio 2 que contiene inmunoglobulina y transmembrana (TMIGD2, CD28H; NCBI Gene ID: 126259); CD84 (LY9B, SLAMF5; NCBI Gene ID: 8832); CD96 (NCBI Gene ID: 10225); CD160 (NCBI Gene ID: 11126); MS4A1 (CD20; NCBI Gene ID: 931); CD244 (SLAMF4; NCBI Gene ID: 51744); CD276 (B7H3; NCBI Gene ID: 80381); inhibidor 1 de la activación de células T que contiene dominio V-set (VTCN1, B7H4; NCBI Gene ID: 79679); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA; NCBI Gene ID: 64115); miembro 11 de la superfamilia de inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3; NCBI Gene ID: 152404); receptor de citotoxicidad de células asesinas naturales 3 ligando 1 (NCR3LG1, B7H6; NCBI Gene ID: 374383); proteína 2 de asociación HERV-H LTR (HHLA2, B7H7; NCBI Gene ID: 11148); coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278; NCBI Gene ID: 29851); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2; NCBI Gene ID: 23308); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF4, OX40; NCBI Gene ID: 7293); miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L; NCBI Gene ID: 7292); TNFRSF8 (CD30; NCBI Gene ID: 943); TNFSF8 (CD30L; NCBI Gene ID: 944); TNFRSF10A (CD261, DR4, TRAILR1; NCBI Gene ID: 8797); TNFRSF9 (CD137; NCBI Gene ID: 3604); TNFSF9 (CD137L; NCBI Gene ID: 8744); TNFRSF10B (CD262, DR5, TRAELR2; NCBI Gene ID: 8795); TNFRSF10 (TRAIL; NCBI Gene ID: 8743); TNFRSF14 (HVEM, CD270; NCBI Gene ID: 8764); TNFSF14 (HVEML; NCBI Gene ID: 8740); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA); NCBI Gene ID: 151888); TNFRSF17 (BCMA, CD269; NCBI Gene ID: 608); TNFSF13B (BAFF; NCBI Gene ID: 10673); TNFRSF18 (GITR; NCBI Gene ID: 8784); TNFSF18 (GITRL; NCBI Gene ID: 8995); secuencia A relacionada con el polipéptido MHC de clase I (MICA; NCBI Gene ID: 100507436); secuencia B relacionada con el polipéptido del CMH de clase I (MICB; NCBI Gene ID: 4277); CD274 (CD274, PDL1, PD-L1; NCBI Gene ID: 29126); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1; NCBI Gene ID: 5133); proteína 4 asociada a los linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152; NCBI Gene ID: 1493); CD80 (B7-1; NCBI Gene ID: 941); CD28 (NCBI Gene ID: 940); molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112; NCBI Gene ID: 5819); CD226 (D<n>AM-1; NCBI Gene ID: 10666); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR) (PVR, CD155; NCBI Gene ID: 5817); Dominio que contiene inmunoglobulina relacionada con PVR (PVRIG, CD112R; NCBI Gene ID: 79037); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT; NCBI Gene ID: 201633); dominio 4 que contiene inmunoglobulina de células T y mucina (TIMD4; TIM4; NCBI Gene ID: 91937); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3; NCBI Gene ID: 84868); galectina 9 (LGALS9; NCBI Gene ID: 3965); activador de linfocitos 3 (<l>A<g>3, CD223; NCBI Gene ID: 3902); molécula de activación linfocítica señalizadora miembro de la familia 1 (SLAMF1, SLAM, CD150; NCBI Gene ID: 6504); antígeno linfocitario 9 (LY9, CD229, SLAMF3; NCBI Gene ID: 4063); miembro 6 de la familia SLAM (SLAMF6, CD352; NCBI Gene ID: 114836); miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7, CD319; NCBI Gene ID: 57823); Proteína 1 de unión a UL16 (ULBP1; NCBI Gene ID: 80329); proteína de unión a UL162 (ULBP2; NCBI Gene ID: 80328); Proteína 3 de unión a UL16 (ULBP3; NCBI Gene ID: 79465); transcripción temprana del ácido retinoico 1E (RAET1E; ULBP4; NCBI Gene ID: 135250); transcripción temprana del ácido retinoico 1G (RAET1G; ULBP5; NCBI Gene ID: 353091); transcripción temprana del ácido retinoico 1L (<r>A<e>T1L; ULBP6; NCBI Gene<i>D: 154064); receptor C1 similar a la lectina de células asesinas (KLRC1, NKG2A, CD159A; NCBI Gene ID: 3821); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314; NCBI Gene ID: 22914); receptor C2 similar a la lectina de células asesinas (KLRC2, CD159c, Nk G2C; NCBI Gene ID: 3822); receptor C3 similar a la lectina de células asesinas (KLRC3, NKG2E; NCBI Gene ID: 3823); receptor C4 similar a la lectina de células asesinas (KLRC4, NKG2F; NCBI Gene ID: 8302); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1; NCBI Gene ID: 3802); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2; NCBI Gene ID: 3803); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3; NCBI Gene ID: 3804); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1, KIR, CD158E1; NCBI Gene ID: 3811)(p. ej.,Lirilumab (IPH2102BMS-986015), IPH-4102); y el receptor D1 similar a la lectina de células asesinas (KLRD1; Nc BI Gene ID: 3824).
[0218]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T ilustrativos incluyen, sin limitación, CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); ligando 2 de muerte celular programada 1 (PDCD1LG2, PD-L2, CD273); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T con dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); dominio de inmunoglobulinas relacionado con pVr (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina 9 (LGALS9); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); y receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1). Los agentes, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse con uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T ilustrativos incluyen, sin limitación, CD27, CD70; CD40, CD40LG; coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF4, OX40); miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNa M-1); CD244 (2B4, SLAm F4), molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR) (PVR, CD155). Véase,p. ej.,Xu, et al., J Exp Clin Cancer Res. (2018) 37:110.
[0219]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células NK. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células NK ilustrativos incluyen, sin limitación, receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas C1 (KLRC1, NKG2A, CD159A); y receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1, CD94).
[0220]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK ilustrativos incluyen, sin limitación, CD16, CD226 (DNAM-1); CD244 (2B4, SLAMF4); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); miembro 7 de la familia SLAM (SLAMF7). Véase,p. ej.,Davis, et al., Semin Immunol. (2017) 31:64-75; Fang, et al., Semin Immunol. (2017) 31:37-54; y Chiossone, et al., Nat Rev Immunol. (2018) 18(11):671 -688.
Inhibidores de la Proteína 4 Asociada a Linfocitos T Citotóxicos (CTLA4)
[0221]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (c TlA4) (CD152; NCBI Gene ID: 1493). Ejemplos de inhibidores de CTLA4 que pueden coadministrarse incluyen, sin limitación, ipilimumab, tremelimumab, b Ms -986218, AGEN1181, AGEN1884, AGEN2041, BMS-986249, MK-1308, REGN-4659, ADU-1604, CS-1002, BCD-145, APL-509, JS-007, BA-3071, ONC-392, JHL-1155, KN-044, CG-0161, ATOR-1144, PBI-5D3H5, BPI-002, belatacept, PSI-001, PRS-010, JHL-1155, así como los inhibidores multiespecíficos FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/CTLA4), MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4) y AK-104 (CTLA4/PD-1).
Inhibidores de PD-L1 (CD274) o PD-1 (PDCD1; CD279)
[0222]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores del ligando 1 de la muerte celular programada (PD-L1; CD274; NCBI Gene ID: 29126) o muerte celular programada 1 (PD-1; PDCD1; CD279; NCBI Gene ID: 5133). Ejemplos de inhibidores de PD-L1 (CD274) o PD-1 (PDCD1) que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, zimberelimab (AB122), pembrolizumab, nivolumab, cemiplimab, pidilizumab, AMP-224, MEDI0680 (A<m>P-514), spartalizumab, atezolizumab, avelumab (MSB0010718C), ASC22, durvalumab, ALN-PDL, BMS-936559, CK-301, PF-06801591, BGB-108, BGB-A317 (tislelizumab), GLS-010 (WBP-3055), AK-103 (HX-008), GB-226, AK-105, CS-1003, HLX-10, MGA-012, BI-754091, PDR-001, AGEN-2034, JS-001 (toripalimab), JNJ-63723283, genolimzumab (CBT-501), LZM-009, BCD-100, LY-3300054, SHR-1201, SHR-1210 (camrelizumab), Sym-021, ABBV-181, PD1-PIK, BAT-1306, RO-6084 (oligonucleótido antisentido PD-L1), STI-1110, GX-P2, RG-7446, mDX-400, CX-072, CBT-502, TSR-042 (dostarlimab), MSB-2311, JTX-4014, BGB-A333, SHR-1316, CS-1001 (WBP-3155), MEDI-0680, envafolimab (KN-035), KD-033, KY-1003, IBI-308 (sintilimab), HLX-20, KL-A167, STI-A1014, STI-A1015 (IMC-001), BCD-135, FAZ-053, TQB-2450, MDX1105-01, MSB-0010718C, GS-4224, GS-4416, INCB086550, MAX10181, así como los inhibidores multiespecíficos FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/CTLA4), MGD-013 (PD-1/LAG-3), FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), RO-7121661 (PD-1/TIM-3), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4), AK-104 (CTLA4/PD-1), M7824 (PD-L1/dominio TGFp-EC), CA-170 (PD-L1/VISTA), CDX-527 (CD27/PD-L1), LY-3415244 (T<i>M3/PDL1),<g>N<s>-1480 (antagonista del receptor del factor de crecimiento epidérmico; ligando 1 de la muerte celular programada), M-7824 (proteína de fusión bifuncional PD-L1/TGF-p) e INBRX-105 (4-1BB/PDL1).
[0223]Ejemplos de inhibidores de PD-1 que pueden combinarse o coadministrarse adicionalmente incluyen los compuestos divulgados en los documentos WO2017112730 (Incyte Corp), WO2017087777 (Incyte Corp), WO2017017624, WO2014151634 (BristolMyers Squibb Co), WO201317322 (BristolMyers Squibb Co), WO2018119286 (Incyte Corp), WO2018119266 (Incyte Corp), WO2018119263(Incyte Corp), WO2018119236 (Incyte Corp), WO2018119221(Incyte Corp), WO2018118848 (BristolMyers Squibb Co), WO20161266460(BristolMyers Squibb Co), WO2017087678 (BristolMyers Squibb Co), WO2016149351 (BristolMyers Squibb Co), WO2015033299 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015179615(Eisai Co Ltd; Eisai Research Institute), WO2017066227(BristolMyers Squibb Co), WO2016142886(Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2016142852(Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2016142835 (Aurigene Discovery Technologies Ltd; Individual), WO2016142833 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2018085750 (BristolMyers Squibb Co), WO2015033303 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2017205464 (Incyte Corp), WO2016019232 (3M Co; Individual; Texas A&M University System), WO2015160641 (BristolMyers Squibb Co), WO2017079669 (Incyte Corp), WO2015033301 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015034820 (BristolMyers Squibb Co), WO2018073754 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2016077518 (BristolMyers Squibb Co), WO2016057624 (BristolMyers Squibb Co), WO2018044783 (Incyte Corp), WO2016100608 (BristolMyers Squibb Co), WO2016100285 (BristolMyers Squibb Co), WO2016039749 (BristolMyers Squibb Co), WO2015019284 (Cambridge Enterprise Ltd), WO2016142894 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015134605 (BristolMyers Squibb Co), WO2018051255 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2018051254 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2017222976 (Incyte Corp), WO2017070089 (Incyte Corp), WO2018044963 (BristolMyers Squibb Co), WO2013144704 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2018013789 (Incyte Corp), WO2017176608 (BristolMyers Squibb Co), WO2018009505 (BristolMyers Squibb Co), WO2011161699 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015119944 (Incyte Corp; Merck Sharp & Dohme Corp), WO2017192961 (Incyte Corp), WO2017106634 (Incyte Corp), WO2013132317 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2012168944 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015036927 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2015044900 (Aurigene Discovery Technologies Ltd), WO2018026971 (Arising International).
[0224]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores proteináceos(p. ej.,anticuerpo o fragmento del mismo, o anticuerpo mimético) de PD-L1 (CD274), PD-1 (PDCD1) o CTLA4. El uno o más inhibidores de puntos de control inmunitarios puede comprender una pequeña molécula orgánica inhibidora de PD-L1 (CD274), PD-1 (PDCD1) o CTLA4. La molécula pequeña inhibidora de<c>D274 o PDCD1 puede seleccionarse del grupo formado por GS-4224, GS-4416, INCB086550 y MAX10181. Otros ejemplos de inhibidores de PD-L1 de molécula pequeña son los descritos en las Publicaciones N.° US2018305315 (Gilead Sciences), US2020017471 (Gilead Sciences) y US2019270727 (Gilead Sciences). La molécula pequeña inhibidora de CTLA4 puede comprender BPI-002.
Inhibidores del Inmunorreceptor de Células T con Dominios Ig e ITIM (TIGIT)
[0225]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores del inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT) (NCBI Gene ID: 201633). Algunos ejemplos de anticuerpos anti-TIGIT que pueden combinarse o coadministrarse son etigilimab, BMS-986207, tiragolumab (también conocido como MTIG-7192A; RG-6058; RO 7092284), AGEN1307, AGEN1327, AGEN1777, COM-902, IBI-939, AB154, MG1131 y EOS884448 (EOS-448).
Agonistas o Activadores Miembros de la Superfamilia de Receptores del TNF (TNFRSF)
[0226]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más agonistas de uno o más miembros de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF),p. ej.,un agonista de uno o más de los TNFRSF 1A (NCBI Gene ID: 7132), TNFRSF1B (NCBI Gene ID: 7133), TNFRSF4 (OX40, CD134; NCBI Gene ID: 7293), TNFRSF5 (CD40; NCBI Gene ID: 958), TNFRSF6 (FAS, NCBI Gene ID: 355), TNFRSF7 (CD27, NCBI Gene ID: 939), TNFRSF8 (CD30, NCBI Gene ID: 943), TNFRSF9 (4-1BB, CD137, NCBI Gene ID: 3604), TNFRSF10A (CD261, DR4, TRAILR1, NCBI Gene ID: 8797), TNFRSF10B (CD262, DR5, TRAILR2, NCBI Gene ID: 8795), TNFRSF10C (CD263, TRAILR3, NCBI Gene ID: 8794), TNFRSF10D (CD264, TRAILR4, NCBI Gene ID: 8793), TNFRSF 11A (CD265, RANK, NCBI Gene ID: 8792), TNFRSF 11B (NCBI Gene ID: 4982), TNFRSF 12A (CD266, NCBI Gene ID: 51330), TNFRSF 13B (CD267, NCBI Gene ID: 23495), TNFRSF13C (CD268, NCBI Gene ID: 115650), TNFRSF16 (NGFR, CD271, NCBI Gene ID: 4804), TNFRSF17 (BCMA, CD269, NCBI Gene ID: 608), TNFRSF18 (GITR, CD357, NCBI Gene ID: 8784), TNFRSF19 (NCBI Gene ID: 55504), TNFRSF21 (CD358, DR6, NCBI Gene ID: 27242), y TNFRSF25 (DR3, NCBI Gene ID: 8718).
[0227]Ejemplos de anticuerpos anti-TNFRSF4 (OX40) que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, MEDI6469, MEDI6383, MEDI0562 (tavolixizumab), MOXR0916, PF-04518600, RG-7888, GSK-3174998, INCAGN1949, BMS-986178, GBR-8383, ABBV-368, y los descritos en los documentos WO2016179517, WO2017096179, WO2017096182, WO2017096281 y WO2018089628.
[0228]Ejemplos de anticuerpos anti-TNFRSF5 (CD40) que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, RG7876, SEA-CD40, APX-005M y ABBV-428.
[0229]También divulgado aquí, el anticuerpo anti-TNFRSF7 (CD27) varlilumab (CDX-1127) puede combinarse o coadministrarse.
[0230]Ejemplos de anticuerpos anti-TNFRSF9 (4-1BB, CD137) que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, urelumab, utomilumab (PF-05082566), AGEN-2373 y ADG-106.
[0231]Ejemplos de anticuerpos anti-TNFRSF18 (GITR) que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, MEDI1873, FPA-154, INCAGN-1876, TRX-518, BMS-986156, MK-1248, GWN-323, y los descritos en WO2017096179, WO2017096276, WO2017096189, y WO2018089628. También se divulga en el presente documento, un anticuerpo, o fragmento del mismo, co-objetivo TNFRSF4 (OX40) y TNFRSF18 (GITR) puede ser co-administrado. Tales anticuerpos se describen,p. ej.,en los documentos WO2017096179 y WO2018089628.
Inhibidores de la ¡ndolam¡na-p¡rrol-2,3-d¡ox¡genasa (IDO1)
[0232]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con uno o más inhibidores de la indoleamina 2,3-dioxigenasa 1 (IDO1; NCBI Gene ID: 3620). Ejemplos de inhibidores de IDO1 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen, sin limitación, BLV-0801, epacadostat, resminostat, F-001287, GBV-1012, GBV-1028, GDC-0919, indoximod, NKt R-218, NLG-919 basado en la vacuna, PF-06840003, derivados de piranoantoquinona (SN-35837), SBLK-200802, BMS-986205, y shIDO-ST, EOS-200271, KHK-2455, LY-3381916, y los compuestos divulgados en US20100015178 (Incyte), US2016137652 (Flexus Biosciences, Inc.), WO2014073738 (Flexus Biosciences, Inc.) y WO2015188085(Flexus Biosciences, Inc.).
Inhibidores de LAG-3 y TIM-3
[0233]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un anticuerpo anti-TIM-3, como TSR-022, LY-3321367, MBG-453, INCAGN-2390. Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un anticuerpo anti-LAG-3 (activación linfocitaria), como relatlimab (ONO-4482), LAG-525, MK-4280, REGN-3767, INCAGN2385.
Proteínas de la familia de los inhibidores de la apoptosis (IAP)
[0234]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con una proteína de la familia de las proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP). Entre los ejemplos de inhibidores de IAP se incluye APG-1387.
Inhibidores de Tirosina Quinasa de Bruton (BTK)
[0235]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton (BTK, AGMX1, AT, ATK, BPK, IGHD3, IMD1, PSCTK1, XLA; NCBI Gene ID: 695). Ejemplos de inhibidores de BTK incluyen sin limitación, (S)-6-amino-9-(1-(but-2-inoil)pirrolidin-3-il)-7-(4-fenoxifenil)-7H-purin-8(9H)-ona, ABBV-105, acalabrutinib (ACP-196), AC-058, AC-0025, ARQ-531, BMS-986142, dasatinib, ibrutinib (PCI-32765, CRA-032765), GDC-0853, PRN-1008, SNS-062, BGB-3111, CB988, HM71224, KBP-7536, M-2951 (evobrutinib), M7583, tirabrutinib (ONO-4059), ML-319, MSC-2364447, PRN-1008, RDX-022, RG-7845, spebrutinib (CC-292), TAK-020, TAS-5315, TP-0158, TP-4207, vecabrutinib (SNS-062), ARQ-531, SHR-1459, DTRMWXHS-12 y los compuestos descritos en los documentos US20140330015 (Ono Pharmaceutical), US20130079327 (Ono Pharmaceutical) y US20130217880 (Ono Pharmaceutical).
Inhibidores de la Lisina Desmetilasa (KDM)
[0236]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un inhibidor de una lisina desmetilasa (KDM). Entre los ejemplos de inhibidores de KDM5 que pueden combinarse o coadministrarse se incluyen los compuestos descritos en los documentos WO2016057924 (Genentech/Constellation Pharmaceuticals), US20140275092 (Genentech/Constellation Pharmaceuticals), US20140371195 (Epitherapeutics), US20140371214 (Epitherapeutics), US20160102096 (Epitherapeutics), US20140194469 (Quanticel), US20140171432, US20140213591 (Quanticel), US20160039808 (Quanticel), US20140275084 (Quanticel) y WO2014164708 (Quanticel).
[0237]Ejemplos de inhibidores de KDM1 que pueden combinarse o coadministrarse incluyen los compuestos divulgados en US9186337B2 (Oryzon Genomics), GSK-2879552, RG-6016, y ORY-2001.
Inhibidores de Arginasa
[0238]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un inhibidor de arginasa.[1158]Ejemplos de inhibidores de arginasa incluyen CB-201, C-201, y resminostat.
Activadores Biespecíficos y Triespecíficos de Células Asesinas Naturales (NK)
[0239]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un activador de células NK bi-específico (BiKE) o un activador de células NK tri-específico (TriKE)(p. ej.,sin Fc) o un anticuerpo biespecífico(p. ej.,con Fc) contra un receptor activador de células NK,p. ej.,CD16A, receptores de lectina de tipo C (CD94/NK<g>2<c>, NKG2D, NKG2E/H y NKG2F), receptores de citotoxicidad natural (NKp30, NKp44 y NKp46), receptor de lectina de tipo C de células asesinas (NKp65, NKp80), receptor Fc FcyR (que media la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos), receptores de la familia SL<a>M(p. ej.,2B4, SLAM6 y SLAM7), receptores tipo inmunoglobulina de células asesinas (K<i>R) (KIR-2DS y KIR-3DS), DNAM-1 y CD137 (41BB). Según proceda, las moléculas biespecíficas de unión anti-CD16 pueden tener o no un Fc. Los captadores de células NK biespecíficos ilustrativos que pueden coadministrarse se dirigen a CD16 y a uno o más antígenos asociados al HBV como se describe en el presente documento. Las BiKE y TriKE se describen,p. ej.,en Felices, et al., Methods Mol Biol. (2016) 1441:333-346; Fang, et al., Semin Immunol. (2017) 31:37-54.
Tratamientos de Acción Prolongada
[0240]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un tratamiento de acción prolongada. Entecavir de acción prolongada (depósito subcutáneo), tenofovir de acción prolongada (TFD y TAF) implantes (dispositivos) o depósito subcutáneo. Un ejemplo de entecavir de acción prolongada se describe en Henry, et al., Eur J Pharm Sci. (2019) 136:104958.
Terapia Genética y Terapia Celular
[0241]También divulgados aquí, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican tales polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden tales polipéptidos o polinucleótidos, como se describe aquí, pueden combinarse o coadministrarse con un régimen de terapia génica o celular. La terapia génica y la terapia celular incluyen, sin limitación, la modificación genética para silenciar un gen; enfoques genéticos para eliminar directamente las células infectadas; la infusión de células inmunitarias diseñadas para sustituir la mayor parte del propio sistema inmunitario del paciente con el fin de mejorar la respuesta inmunitaria a las células infectadas, o activar el propio sistema inmunitario del paciente para eliminar las células infectadas, o encontrar y eliminar las células infectadas; enfoques genéticos para modificar la actividad celular con el fin de alterar aún más la respuesta inmunitaria endógena contra la infección.
Editores Genéticos
[0242]El sistema de edición del genoma puede seleccionarse del grupo que consiste en: un sistema CRISPR/Cas9, un sistema de nucleasas de dedos de zinc, un sistema TALEN, un sistema de endonucleasashomingy un sistema de meganucleasas(p. ej.,un sistema ARCUS);p. ej.,eliminación de ADNccc mediante escisión dirigida y alteración de uno o más de los genes virales del virus de la hepatitis B (HVB). La alteración(p. ej., knocking outy/oknocking down)del genPreC,C, X,PreSI, PreS2,S,P o SPse refiere a (1) reducir o eliminar la expresión del genPreC,C, X,PreSI, PreS2,S,P o SP,(2) interferir con la proteína Prenúcleo, Núcleo, X, proteína de superficie larga, proteína de superficie media, S (también conocida como antígeno HBs y HBsAg), proteína polimerasa, y/o la función de la proteína empalmada de la hepatitis B (HBe, HBc, HBx, PreS 3, PreS1, S, Pol, y/o HBSP o (3) reducir o eliminar los niveles intracelulares, séricos y/o intraparenquimatosos de las proteínas HBe, HBc, HBx, LHBs, MHBs, SHBs, Pol, y/o HBSP. La supresión de uno o más de los genes PreC, C, X, PreSI, PreS2, S, P y/o SP se lleva a cabo dirigiendo el gen o genes dentro del ADNccc del VHB y/o del ADN integrado del VHB. Otros ejemplos de sistemas de edición del genoma incluyen, entre otros, los divulgados en los documentos US2019284543 (Gilead Sciences) y documento US2019338263 (Gilead Sciences).
[0243]Ejemplos de terapia génica, como la terapia génica anti-HBV dirigida al hígado (utilizando la tecnología ARCUS), o utilizando la tecnología de edición génica CRISPR/Cas9, o EBT-106 (nucleasa CRISPR/CasX administrada por PNL.
Terapia Celular CAR-T
[0244]La terapia celular CAR-T incluye una población de células efectoras inmunitarias diseñadas para expresar un receptor de antígeno quimérico (CAR), en el que el CAR incluye un dominio de unión a antígeno del h Bv . El dominio de unión a antígeno puede ser un dominio descrito en el presente documento. El dominio de unión a antígeno puede ser distinto de un dominio descrito en el presente documento. El antígeno puede ser el HBsAg (es decir, HbsAg-CART). La célula efectora inmunitaria es una célula T o una célula NK. La célula T puede ser una célula T CD4+, una célula T CD8+, una célula NK o una combinación de las mismas. Las células pueden ser autólogas o alogénicas. Un ejemplo de CART dirigido al HBV se describe en Kruse, et al., Cytotherapy. (2018) 20(5):697-705.
Terapia Celular TCR-T
[0245]La terapia con células TCR-T incluye células T que expresan receptores de células T específicos del HBV. Las células TCR-T están diseñadas para dirigirse a los péptidos derivados del HBV que se presentan en la superficie de las células infectadas por el virus. Un ejemplo de TCR dirigido al HBV se describe en Wisskirchen, et al., J Clin Invest. (2019) 129(7):2932-2945.
[0246]La terapia con células TCR-T incluye células T que expresan un TCR específico para el antígeno de superficie del HBV (HBsAg), como IMC-I109V.
[0247]La terapia celular TCR-T incluye la terapia TCR-T dirigida al tratamiento del HBV, como la LTCR-H2-1.
[0248]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con un inhibidor de la ADN polimerasa del HBV, uno o dos agentes terapéuticos adicionales seleccionados del grupo que consiste en inmunomoduladores, moduladores de TLR, inhibidores de HBsAg, inhibidores de la secreción o ensamblaje de HBsAg, vacunas terapéuticas contra el HBV, anticuerpos contra el HBV, incluidos anticuerpos contra el HBV dirigidos a los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B y anticuerpos biespecíficos y "similares a anticuerpos" proteínas terapéuticas (como DARTs®, DUOBODIES®, BITES®, XmAbs®, TandAbs®, derivados Fab o anticuerpos similares a TCR), inhibidores de ciclofilina, estimuladores del gen 1 inducible por ácido retinoico, estimuladores de receptores similares a RIG-I, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidores de arginasa, inhibidores de PI3K, inhibidores de IDO y estimuladores de NOD2, y uno o dos agentes terapéuticos adicionales seleccionados del grupo que consiste en inhibidores de la entrada viral del HBV, inhibidores de NTCP, inhibidores de HBx, inhibidores de ADNccc, anticuerpos del HBV dirigidos a los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B, ARNsi, agentes de terapia génica ARNmi, ARNssh, inhibidores de KDM5 y moduladores de nucleoproteínas (moduladores de proteínas del núcleo o de la cápside del HBV).
[0249]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con al menos un segundo agente terapéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en: Inhibidores de la ADN polimerasa del HBV, inmunomoduladores, moduladores de TLR, inhibidores del HBsAg, vacunas terapéuticas contra el HBV, anticuerpos contra el HBV, incluidos los anticuerpos contra el HBV dirigidos contra los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B y anticuerpos biespecíficos y proteínas terapéuticas similares a anticuerpos (como DARPins®, anticuerpos anti-pMHC similares a Tc R, DARTs®, DUOBODIES®, B iTe S®, XmAbs®, TandAbs®, derivados Fab o anticuerpos similares a TCR), inhibidores de ciclofilina, estimuladores del gen 1 inducible por ácido retinoico, estimuladores de receptores similares a RIG-I, inhibidores de PD-1, inhibidores de PD-L1, inhibidores de arginasa, inhibidores de PI3K, inhibidores de IDO y estimuladores de NOD2.
[0250]También divulgados en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con al menos un segundo agente terapéutico adicional seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la ADN polimerasa del HBV, inhibidores de la entrada viral del HBV, inhibidores de NTCP, inhibidores de HBx, inhibidores de ADNccc, anticuerpos del HBV dirigidos a los antígenos de superficie del virus de la hepatitis B, ARNsi, agentes de terapia génica ARNmi, ARNssh, inhibidores de KDM5 y moduladores de nucleoproteínas (inhibidores de proteínas del núcleo o de la cápside del HBV).
[0251]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con compuestos tales como los descritos en la Publicación de EE.UU. n.° 2010/0143301 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. n.° 2011/0098248 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. N.° 2009/0047249 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. N.° 8722054 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0045849 (Janssen), Publicación de EE.UU. N.° 2014/0073642 (Janssen), WO2014/056953 (Janssen), WO2014/076221 (Janssen), WO2014/128189 (Janssen), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0350031 (Janssen), WO2014/023813 (Janssen), Publicación de EE.UU. N.° 2008/0234251 (Array Biopharma), Publicación de E<e>.UU. N.° 2008/0306050 (Array Biopharma), Publicación de EE.UU. N.° 2010/0029585 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. N.° 2011/0092485 (Ventirx Pharma), US2011/0118235 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. n.° 2012/0082658 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. n.° 2012/0219615 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0066432 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0088085 (Ventirx Pharma), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0275167 (Novira Therapeutics), Publicación de EE.UU. n.° 2013/0251673 (Novira Therapeutics), Patente de EE.UU. N.° 8513184 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0030221 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. n.° 2013/0344030 (Gilead Sciences), Publicación de EE.UU. n.° 2013/0344029 (Gilead Sciences), US20140275167 (Novira Therapeutics), US20130251673 (Novira Therapeutics), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0343032 (Roche), WO2014037480 (Roche), Publicación de EE.UU. No. 2013/0267517 (Roche), WO2014131847 (Janssen), WO2014033176 (Janssen), WO2014033170 (Janssen), WO2014033167 (Janssen), WO2015/059212 (Janssen), WO2015118057 (Janssen), WO2015011281 (Janssen), WO2014184365 (Janssen), WO2014184350 (Janssen), WO2014161888 (Janssen), WO2013096744 (Novira), US20150225355 (Novira), US20140178337 (Novira), US20150315159 (Novira), US20150197533 (Novira), US20150274652 (Novira), US20150259324, (Novira), US20150132258 (Novira), US9181288 (Novira), WO2014184350 (Janssen), WO2013144129 (Roche), US20100015178 (Incyte), US2016137652 (Flexus Biosciences, Inc.), WO2014073738 (Flexus Biosciences, Inc.), WO2015188085 (Flexus Biosciences, Inc.), Publicación de EE.UU. n.° 2014/0330015 (Ono Pharmaceutical), Publicación de EE.Uu . n.° 2013/0079327 (Ono Pharmaceutical), Publicación de EE.UU. N.°. 2013/0217880 (Ono pharmaceutical), WO2016057924 (Genentech/Constellation Pharmaceuticals), US20140275092 (Genentech/Constellation Pharmaceuticals), US20140371195 (Epitherapeutics) y US20140371214 (Epitherapeutics), US20160102096 (Epitherapeutics), US20140194469 (Quanticel), US20140171432, US20140213591 (Quanticel), US20160039808 (Quanticel), US20140275084 (Quanticel), WO2014164708 (Quanticel), US9186337B2 (Oryzon Genomics), y otros medicamentos para el tratamiento del HBV, y combinaciones de los mismos.
[0252]Asimismo, los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, según se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con 5-30 mg de fumarato de alafenamida de tenofovir, hemifumarato de alafenamida de tenofovir o alafenamida de tenofovir. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las PNL y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con 5-10; 5-15; 5-20; 5-25; 25-30; 20-30; 15-30; o 10-30 mg de fumarato de alafenamida de tenofovir, hemifumarato de alafenamida de tenofovir o alafenamida de tenofovir. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las LNP y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con 10 mg de fumarato de tenofovir alafenamida, hemifumarato de tenofovir alafenamida o tenofovir alafenamida. Los polipéptidos inmunogénicos, los polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, los vectores, las PRL y las composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, tal como se describen en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con 25 mg de fumarato de tenofovir alafenamida, hemifumarato de tenofovir alafenamida o tenofovir alafenamida. Un agente como el descrito en el presente documento puede combinarse con los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, en cualquier cantidad de dosificación del compuesto(p. ej.,de 50 mg a 500 mg de compuesto) igual que si cada combinación de dosificaciones se enumerara específica e individualmente.
[0253]También descritos en el presente documento, los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, pueden combinarse o coadministrarse con 100-400 mg de fumarato de disoproxilo de tenofovir, hemifumarato de disoproxilo de tenofovir o disoproxilo de tenofovir. Un agente descrito aquí, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede combinarse con 100-150; 100-200, 100-250; 100-300; 100-350; 150-200; 150-250; 150-300; 150-350; 150-400; 200-250; 200-300; 200-350; 200-400; 250-350; 250-400; 350-400 o 300-400 mg de fumarato de disoproxilo de tenofovir, hemifumarato de disoproxilo de tenofovir o disoproxilo de tenofovir. Un agente descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede combinarse con 300 mg de fumarato de disoproxilo de tenofovir, hemifumarato de disoproxilo de tenofovir o disoproxilo de tenofovir. Un agente descrito en el presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede combinarse con 250 mg de fumarato de disoproxilo de tenofovir, hemifumarato de disoproxilo de tenofovir o disoproxilo de tenofovir. Un agente del presente documento, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede combinarse con 150 mg de fumarato de disoproxilo de tenofovir, hemifumarato de disoproxilo de tenofovir o disoproxilo de tenofovir. Un agente como el descrito en el presente documento puede combinarse con los polipéptidos inmunogénicos, polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos, vectores, LNP y composiciones inmunogénicas que comprenden dichos polipéptidos o polinucleótidos, como se describe en el presente documento, en cualquier cantidad de dosificación del compuesto(p. ej.,de 50 mg a 500 mg de compuesto) igual que si cada combinación de dosificaciones se enumerara específica e individualmente.
8.Kits
[0254]Se divulga además en el presente documento un kit que comprende una o más dosis unitarias de uno o más del polipéptido polimerasa truncada del HBV, uno o más del polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV, uno o más de la proteína de fusión núcleo-sAg, uno o más polinucleótidos, uno o más vectores, o una o más composiciones inmunogénicas, como se describe en el presente documento. El kit puede comprender una o más dosis unitarias de dos o más del polipéptido polimerasa truncada del HBV, el polipéptido mutante de deleción de la polimerasa del HBV, la proteína de fusión núcleo-sAg, los polinucleótidos, los vectores o las composiciones inmunogénicas, descritos en el presente documento.
[0255]Según convenga o se desee, la una o más dosis unitarias pueden estar en un solo recipiente o en dos o más recipientes separados. El uno o más contenedores pueden seleccionarse del grupo formado por viales, ampollas y jeringas precargadas.
[0256]También divulgados aquí, el uno o más contenedores pueden comprender el uno o más polipéptidos, uno o más polinucleótidos, uno o más vectores o una o más composiciones inmunogénicas en una solución acuosa. El uno o más contenedores pueden comprender el uno o más polipéptidos, el uno o más polinucleótidos, el uno o más vectores o el uno o más composiciones inmunogénicas como una preparación liofilizada.
[0257]Según convenga o se desee, la una o más dosis unitarias pueden ser iguales o diferentes. El kit puede comprender una o más dosis unitarias de uno o más vectores virales capaces de expresar los polipéptidos inmunogénicos. En los kits que comprenden vectores virales, las dosis unitarias pueden estar en el intervalo de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades formadoras de foco (FFU) virales o unidades formadoras de placa (PFU) o unidades infecciosas (IU) o partículas virales (vp),p. e j.,de aproximadamente 104 a aproximadamente 107 FFU o PFU virales,p. ej.,de aproximadamente103 a aproximadamente 104, 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011 o 1012 FFU o PFU o IU o vp virales.
[0258]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, o una composición inmunogénica que comprende, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 5-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41.
[0259]El kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, o una composición inmunogénica que comprende, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41.
[0260]El kit puede comprender uno o más polinucleótidos que codifican, o uno o más vectores capaces de expresar, o una composición inmunogénica que comprende, dos polipéptidos inmunogénicos, los polipéptidos inmunogénicos que comprenden: (a) un mutante del polipéptido polimerasa del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 13, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 13; y b) una proteína de fusión núcleo-sAg del HBV que comprenda o consista en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 41.
[0261]Con respecto al polipéptido de fusión núcleo-sAg del kit (p. ej., expresable a partir de un vector; en una composición inmunogénica), el polipéptido núcleo puede comprender un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 12, y un residuo de asparagina (N) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 67, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:65 o SEQ ID N.°:66. El polipéptido sAg puede comprender un residuo de isoleucina (I) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 68, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido sAg puede comprender uno o más de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 53, un residuo de isoleucina (I) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 68, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 125, un residuo de prolina (P) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 127 un residuo de fenilalanina (F) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 161, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 200, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 210, y un residuo de leucina (L) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 213, donde los números de posición son con referencia a SEQ ID N.°:3 o SEQ ID N.°:4. El polipéptido de fusión núcleo-sAg puede comprender uno o varios de los siguientes residuos: un residuo de serina (S) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 12, un residuo de asparagina (N) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 67, un residuo de valina (V) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 74 un residuo de fenilalanina (F) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 97, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 249, un residuo de treonina (T) en la posición aminoácida correspondiente a la posición 250, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 317, un residuo de serina (S) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 318, un residuo de arginina (R) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 326, un residuo de tirosina (Y) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 338, un residuo de glicina (G) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 363, y un residuo de alanina (A) en la posición de aminoácido correspondiente a la posición 372, donde los números de posición se refieren a SEQ ID N.°:41.
[0262]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92, o una secuencia que sea al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 27-32 y 89-94,p. ej.,SEQ ID N.°: 29, 89, 90 y 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37.
[0263]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender un primer vector de expresión viral y un segundo vector de expresión viral, en el que: (a) el primer vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29, 89, 90 o 92; y (b) el segundo vector de expresión viral comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37.
[0264]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender: (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en el que el primer y segundo vectores de expresión viral comprenden un mammarenavirus Cali de replicación deficiente o de replicación defectuosa (también conocido como mammarenavirus de Pichinde o arenavirus de Pichinde (PICV)); y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral comprenden un mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) de replicación deficiente o de replicación defectuosa.
[0265]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender: (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Adenoviridae; y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Poxviridae(p. ej.,virus Vaccinia,p. ej.,Vaccinia Ankara modificado (MVA)).
[0266]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender: (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Arenaviridae; y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Adenoviridae.
[0267]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender: (a) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Arenaviridae; y (b) una o más dosis unitarias de una composición inmunogénica como se describe anteriormente y en el presente documento, en la que el primer y segundo vectores de expresión viral son de Poxviridae(p. ej.,virus Vaccinia,p. ej.,Vaccinia Ankara modificado (MVA)).
[0268]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en el que: (a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37.
[0269]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en el que: (a) el primer vector de expresión de Pichinde arenavirus comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o una secuencia que es al menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 37.
[0270]También divulgado aquí, el kit puede comprender una o más dosis unitarias de uno o más agentes terapéuticos adicionales.
[0271]Por ejemplo, el kit puede comprender uno o más agonistas o activadores de uno o más receptores tipoToll(TLR). En diversas realizaciones, el agonista o activador de TLR se selecciona del grupo que consiste en un agonista de TLR2, un agonista de TLR3, un agonista de TLR4, un agonista de TLR5, un agonista de TLR7, un agonista de TLR8 y un agonista de TLR9. El agonista de TLR7 puede seleccionarse del grupo formado por GS 9620 (vesatolimod), R848 (Resiquimod), DS-0509, LHC-165 y TMX-101 (imiquimod), y/o en el que el agonista de TLR8 se selecciona del grupo formado por GS-9688, R848 (Resiquimod) y NKTR-262 (agonista dual de TLR7/TLR8).
[0272]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más agonistas del receptor de interleucina de un receptor de interleucina seleccionado de IL-2, IL-7, IL-12 e IL-15. El kit puede comprender una o más citocinas seleccionadas del grupo formado por IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 y sus variantes.
[0273]También divulgado aquí, el kit puede comprender uno o más activadores inmunes innatos. El uno o más activadores inmunitarios innatos puede comprender un agonista de un receptor seleccionado del grupo que consiste en tirosina quinasa 3 relacionada con fms (FLT3), receptor estimulador de genes de interferón (STING), DExD/H-box helicasa 58 (DDX58; también conocida como RIG-I), dominio 2 que contiene oligomerización de unión a nucleótidos (NOD2). El kit puede comprender una o más dosis unitarias de GS-3583 y/o GS-9992.
[0274]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más antagonistas o inhibidores de una proteína o receptor de punto de control inmunitario inhibitorio y/o uno o más activadores o agonistas de una proteína
0 receptor de punto de control inmunitario estimulador. La una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario pueden seleccionarse del grupo que consiste en: CD27, CD70; CD40, CD40LG; CD47, Cd 48 (SLAMF2), dominio 2 que contiene inmunoglobulina y transmembrana (TMIGD2, CD28H), CD84 (LY9B, SLAMF5), CD96, CD160, MS4A1 (CD20), CD244 (SLAMF4); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T que contiene dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3); ligando 1 del receptor 3 de citotoxicidad de células asesinas naturales (NCR3LG1, B7H6); proteína 2 de asociación He RV-H LTR (HHLA2, B7H7); coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); Miembro 4 de la superfamilia de receptores del TNF (TNFRSF4, OX40); Miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF8 (CD30), TNFSF8 (CD30L);
TNFRSF10A (CD261, DR4, TRAILR1), TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF10B (CD262, DR5, TRAILR2), TNFRSF10 (TRAIL); TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA));
TNFRSF17 (BCMA, CD269), TNFSF13B (BAFF); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); secuencia A relacionada con el polipéptido de clase I del CMH (MICA); secuencia B relacionada con el polipéptido de clase I del CMH (MICB); CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR, CD155); dominio de inmunoglobulina relacionado con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); Inmunoglobulina de células T y dominio de mucina 4 (TIMD4; TIM4); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina 9 (LGALS9); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); molécula de activación linfocítica señalizadora miembro 1 de la familia (SLAMF1, SLAM, CD150); antígeno linfocitario 9 (LY9, CD229, SLAMF3); miembro 6 de la familia SLAM (SLAMF6, CD352); miembro
7 de la familia SLAM (SLAMF7, CD319); proteína 1 de unión a UL16 (ULBP1); proteína 2 de unión a UL16 (ULBP2); proteína 3 de unión a UL16 (ULBP3); transcrito temprano 1E del ácido retinoico (RAET1E; ULBP4); transcrito temprano
1G del ácido retinoico (RAET1G; ULBP5); transcripción temprana del ácido retinoico 1L (RAET1L; ULBP6); activador de linfocitos 3 (CD223); receptor de células asesinas similar a la inmunoglobulina, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga
1 (KIR, CD158E1); receptor C1 similar a la lectina de células asesinas (KLRC1, NKG2A, CD159A); receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKG2D, CD314); receptor C2 similar a la lectina de células asesinas (KLRC2, CD159c, NKG2C); receptor similar a la lectina de células asesinas C3 (KLRC3, NKG2E); receptor similar a la lectina de células asesinas C4 (KLRC4, NKG2F); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); Receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); Receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1); y miembro 7 de la familia
SLAM (SLAMF7).
[0275]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T. Los bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células T pueden seleccionarse del grupo que consiste en CD274 (CD274, PDL1, PD-L1); ligando 2 de muerte celular programada 1 (PDCD1LG2, PD-L2, CD273); muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1); proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA4, CD152); CD276 (B7H3); inhibidor 1 de la activación de células T que contiene dominio V-set (VTCN1, B7H4); receptor inmunorregulador V-set (VSIR, B7H5, VISTA); miembro 11 de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IGSF11, VSIG3);
TNFRSF14 (HVEM, CD270), TNFSF14 (HVEML); CD272 (asociado a linfocitos B y T (BTLA)); Dominio que contiene inmunoglobulina relacionada con PVR (PVRIG, CD112R); inmunorreceptor de células T con dominios Ig e ITIM (TIGIT); activador de linfocitos 3 (LAG3, CD223); receptor celular 2 del virus de la hepatitis A (HAVCR2, TIMD3, TIM3); galectina
9 (LGALS9); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); y receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1).
[0276]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T. Los agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células T pueden seleccionarse del grupo que consiste en C<d>27, CD70; CD40, CD40LG; coestimulador inducible de células T (ICOS, CD278); ligando coestimulador inducible de células T (ICOSLG, B7H2); miembro 4 de la superfamilia de receptores TNF (TNFRSF4, OX40); miembro 4 de la superfamilia TNF (TNFSF4, OX40L); TNFRSF9 (CD137), TNFSF9 (CD137L); TNFRSF18 (GITR), TNFSF18 (GITRL); CD80 (B7-1), CD28; molécula 2 de adhesión celular nectina (NECTIN2, CD112); CD226 (DNAM-1); molécula de adhesión celular del receptor de poliovirus (PVR) (PVR, CD155). El kit puede comprender una o más dosis unitarias de AGEN-2373 y/o AGEN-1223.
[0277]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más bloqueadores o inhibidores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibitorios de células NK. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario inhibidores de células NK pueden seleccionarse del grupo formado por receptor similar a
la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR, CD158E1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR2DL1); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 2 (KIR2DL2); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, dos dominios Ig y cola citoplasmática larga 3 (KIR2DL3); receptor similar a la inmunoglobulina de células asesinas, tres dominios Ig y cola citoplasmática larga 1 (KIR3DL1); receptor similar a la lectina de células asesinas C1 (KLRC1, NKG2A, CD159A); y receptor similar a la lectina de células asesinas D1 (KLRD1, CD94).
[0278]También divulgado en el presente documento, el kit puede comprender uno o más agonistas o activadores de una o más proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK. Las proteínas o receptores de punto de control inmunitario estimuladores de células NK pueden seleccionarse entre CD16, CD226 (DNAM-1); el receptor K1 similar a la lectina de células asesinas (KLRK1, NKg 2d , CD314); y el miembro 7 de la familia SLAM (SlA m F7).
[0279]En el kit aquí divulgado, el uno o más inhibidores de puntos de control inmunitarios puede comprender un inhibidor proteínico de PD-L1 (CD274), PD-1 (PDCD1) o CTLA4. El inhibidor proteínico de CTLA4 puede seleccionarse del grupo que consiste en ipilimumab, tremelimumab, BMS-986218, AGEN1181, AGEN1884, BMS-986249, MK-1308, REGN-4659, ADU-1604, CS-1002, BCD-145, APL-509, JS-007, BA-3071, ONC-392, AGEN-2041, JHL-1155, KN-044, CG-0161, ATOR-1144, PBI-5D3H5, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/CTLA4), MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4) y AK-104 (CTLA4/PD-1). El inhibidor proteínico de PD-L1 (CD274) o PD-1 (PDCD1) puede seleccionarse del grupo formado por zimberelimab (AB122), pembrolizumab, nivolumab, cemiplimab, pidilizumab, AMP-224, MEDI0680 (<a>M<p>-514), spartalizumab, atezolizumab, avelumab, ASC22, durvalumab, BMS-936559, CK-301, PF-06801591, BGB-A317 (tislelizumab), GLS-010 (WBP-3055), AK-103 (HX-008), AK-105, CS-1003, HLX-10, MGA-012, BI-754091, AGEN-2034, JS-001 (toripalimab), JNJ-63723283, genolimzumab (CBT-501), LZM-009, BCD-100, LY-3300054, SHR-1201, SHR-1210 (camrelizumab), Sym-021, ABBV-181, PD1-PIK, BAT-1306, (MSB0010718C), CX-072, CBT-502, TSR-042 (dostarlimab), MSB-2311, JTX-4014, BGB-A333, SHR-1316, CS-1001 (WBP-3155, KN-035, IBI-308 (sintilimab), HLX-20, KL-A167, STI-A1014, STI-A1015 (IMC-001), BCD-135, FAZ-053, TQB-2450, MDX1105-01, FPT-155 (CTLA4/PD-L1/CD28), PF-06936308 (PD-1/ CTLA4), MGD-013 (PD-1/LAG-3), FS-118 (LAG-3/PD-L1) MGD-019 (PD-1/CTLA4), KN-046 (PD-1/CTLA4), MEDI-5752 (CTLA4/PD-1), RO-7121661 (PD-1/TIM-3), XmAb-20717 (PD-1/CTLA4), AK-104 (CTLA4/PD-1), M7824 (PD-L1/dominio TGFp-EC), CA-170 (PD-L1/VISTA), CDX-527 (CD27/PD-L1), LY-3415244 (TIM3/PDL1) e INBRX-105 (4-1BB/PDL1). El uno o más inhibidores de puntos de control inmunitarios puede comprender una molécula pequeña inhibidora de CD274 (PDL1, PD-L1), muerte celular programada 1 (PDCD1, PD1, PD-1) o CTLA4. La molécula pequeña inhibidora de<c>D274 o PDCD1 puede seleccionarse del grupo formado por GS-4224, GS-4416, INCB086550 y MAX10181. La molécula pequeña inhibidora de CTLA4 puede comprender BPI-002.
[0280]También divulgado aquí, el kit puede comprender uno o más agentes antivirales. Los agentes antivirales ilustrativos que pueden estar en el kit incluyen lamivudina (LAM), adefovir dipivoxil (ADV), entecavir (ETV), telbivudina (LdT), tenofovir disoproxil fumarato (TDF), tenofovir alafenamida (TAF o VEMLIDY®) y ledipasvir sofosbuvir (HARVONI®). El kit puede comprender uno o más agentes terapéuticos seleccionados del grupo que consiste en inhibidores del antígeno del HBV (p. ej., inhibidores del antígeno del núcleo del HBV (HBcAg), inhibidores del antígeno de superficie del HBV (HBsAg), inhibidores de HBx, inhibidores del antígeno E del HBV), anticuerpos antiantígeno del HBV, ácidos nucleicos inhibidores dirigidos contra el HBV(p. ej.,oligonucleótidos antisentido, ARN de interferencia corta (ARNsi), ARN de interferencia dirigido al ADN (ddARNi)), editores de genes dirigidos al HBV(p. ej.,CRISPR-Cas(p. ej.,Cas9, Cas12, Cascade, Cas13), nucleasas de dedos de zinc, endonucleasashoming,meganucleasashoming (p. ej.,ARCUS), nucleasas sintéticas, TALEN), inhibidores de ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc) e inhibidores de la secreción o ensamblaje del HBsAg e inhibidores de la entrada viral del HBV.
[0281]Opcionalmente, puede asociarse a dicho(s) contenedor(es) un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regule la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, aviso que refleja la aprobación por parte de la agencia de la fabricación, uso o venta para administración humana.
EJEMPLOS
[0282]Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, pero no para limitar la invención reivindicada.
Ejemplo 1
Identificación de Secuencias del sAg del HBV que Inducen Respuestas de Células T Robustas y con Reactividad Cruzada Entre Genotipos
[0283]En este ejemplo, identificamos secuencias naturales de casi consenso del sAg del HBV en los genotipos A, B, C y D, generamos vectores de adenovirus tipo 5 que codifican cada antígeno y probamos la magnitud y la reactividad cruzada de genotipo de las células T inducidas por cada uno de estos vectores en ratones no consanguíneos.
[0284]Selección de secuencias de HBVsAg naturales de casi consenso.Al seleccionar la secuencia específica de aminoácidos de un sAg del HBV para su uso en la vacunación terapéutica, buscamos una secuencia de sAg que se expresara y procesara eficientemente para la presentación del antígeno, y que al mismo tiempo indujera respuestas de células T que reaccionaran ampliamente a través de una gama de genotipos del HBV. Aunque se pueden diseñar secuencias consenso o antígenos mosaico para intentar mejorar la reactividad del genotipo de células T, tales secuencias no se dan en la naturaleza y tienen el riesgo de expresarse de forma ineficaz o de procesarse mal en epítopos de células T. En consecuencia, identificamos secuencias de sAg del HBV de los genotipos (GT) A, B, C y D de casi consenso y de origen natural. Utilizando una base de datos de secuencias de sAg de 14207 individuos infectados con estos genotipos del HBV, construimos secuencias de consenso para cada genotipo y, a continuación, identificamos la secuencia de sAg de origen natural más cercana al consenso para cada genotipo. Las secuencias de sAg naturales, de casi consenso, para los genotipos A, B, C y D del HBV se proporcionan en la Tabla 1 como SEQ ID N.°: 1-4, respectivamente.
Métodos
[0285]Para evaluar la inmunogenicidad de cada antígeno y evaluar la reactividad cruzada del genotipo de las células T inducidas a través de una amplia gama de epítoposin vivo,se utilizaron ratonesDiversity Outbred(ratones DO) de Jackson Laboratories para la vacunación. Los ratones DO se desarrollaron mediante cruces aleatorios de 160 líneas de ratones endocriados recombinantes de Collaborative Cross, y la colonia se mantiene mediante cruces aleatorios continuos que evitan los cruces entre hermanos. Las líneas parentales DO, las cepas del cruce colaborativo, se desarrollaron cruzando ocho cepas endocriadas de ratón únicas y genéticamente diversas (A/J, C57BL/6J, 129S1/SvImJ, NOD/ShiLtJ, NZO/HILtJ, CAS<t>/<eí>J, PWK/PhJ y WSB/EiJ). Por lo tanto, los ratones DO capturan la diversidad de selección de epítopos y la magnitud de las respuestas de las células T presentes en una población genéticamente muy diversa.
Resultados
[0286]Las cuatro secuencias naturales, de casi consenso, del sAg del HBV fueron robustamente inmunogénicas en ratones DO (Fig. 1). Las células T inducidas reaccionaron a los péptidos sAg del HBV GT-A, B, C y D con aproximadamente la misma magnitud, lo que demuestra una excelente reactividad cruzada de genotipos de la respuesta de las células T. La magnitud de la respuesta media geométrica fue mayor para sAg del GT-C y GT-D .
Ejemplo 2
Identificación de Secuencias Pol y de Núcleo del HBV que Inducen Respuestas de Células T Robustas y con Reactividad Cruzada Entre Genotipos
[0287]En este ejemplo, identificamos secuencias naturales de casi consenso del núcleo del HBV y la polimerasa (Pol) del HBV en los genotipos A, B, C y D, generamos vectores de expresión de Adenovirus tipo 5 que codifican antígenos Pol o proteínas de fusión núcleo-Pol, y probamos la magnitud y la reactividad cruzada de genotipo de las células T inducidas en animales consanguíneos y no consanguíneos.
[0288]Selección de secuencias de núcleo y Pol del HBV de casi consenso y naturales.Al seleccionar la secuencia específica de aminoácidos de los antígenos del núcleo y Pol del HBV que se utilizarían para la vacunación terapéutica, buscamos secuencias del núcleo y Pol que se expresaran y procesaran eficientemente para la presentación del antígeno, y que al mismo tiempo indujeran respuestas de células T que reaccionaran ampliamente a través de una gama de genotipos del HBV. Aunque se pueden diseñar secuencias consenso o antígenos mosaico para intentar mejorar la reactividad del genotipo de células T, tales secuencias no se dan en la naturaleza y tienen el riesgo de expresarse de forma ineficaz o de procesarse mal en epítopos de células T. En consecuencia, identificamos secuencias del núcleo y de la pol del HBV de los genotipos A, B, C y D que se producen de forma natural y que están próximas al consenso. Utilizando una base de datos de secuencias del núcleo de 5.528 individuos infectados por los genotipos A-D del HBV y de secuencias de la pol de 4.713 individuos infectados por los genotipos A-D del HBV, construimos secuencias de consenso para el núcleo y la pol de cada genotipo y, a continuación, identificamos las secuencias del núcleo y de la pol que se producen de forma natural y que están más próximas al consenso de cada genotipo.
[0289]A continuación se modificaron las secuencias Pol del GT-A, B, C y D para mejorar el rendimiento del antígeno. La actividad enzimática de las polimerasas puede inducir toxicidad cuando se sobreexpresan, por lo que la actividad enzimática de los dominios de la transcriptasa inversa (RT) y de la ARNasa H (RNH) se eliminó mediante mutaciones en los dominios catalíticos. El motivo YMDD en RT mutó a YMHd , y el motivo AELL en RNH mutó a AHLL (Radziwill, et al., J Virol. (1990) 64(2):613-20). Las secuencias Pol resultantes se denominan Polmut. Las secuencias Polmut para los genotipos A, B, C y D del HBV se proporcionan en la Tabla 2 como SEQ ID N.°: 52-55, respectivamente.
[0290]Las secuencias Polmut se modificaron posteriormente para eliminar regiones de aminoácidos poco conservadas entre cepas y genotipos del HBV, para generar secuencias Pol de longitud variable para acomodar vectores virales con diferentes restricciones en el tamaño del antígeno codificado, y para crear fusiones núcleo-Pol con el fin de codificar dos antígenos con un único marco de lectura abierto. Pol consta de cuatro dominios funcionales, Proteína Terminal (TP), Espaciador, RT y RNH. De estos tres, TP, RT y RNH están muy conservados entre las cepas y genotipos del HBV, por lo que es probable que induzcan células T con reactividad cruzada entre cepas y genotipos, mientras que el dominio espaciador es muy variable. Generamos secuencias Pol del GT-A, B, C y D con deleciones en la región espaciadora. En un conjunto de secuencias, designado Polñ1, la deleción se basó en un mutante de deleción previamente notificado que conserva la función enzimáticain vitro, loque indica que la deleción no altera la expresión, estructura y plegamiento de la proteína restante (Radziwill, et al., J Virol. (1990) 64(2):613-20). En un segundo conjunto de vectores designados Polñ3, se identificó mediante alineación de secuencias toda la región poco conservada y se eliminó. Las fusiones núcleo-Pol se generaron fusionando las secuencias Núcleo de casi consenso a las secuencias Polmut, Polñ1 y Polñ3 para GT-A, B, C y D. Por último, para adaptarnos a vectores virales con límites de empaquetamiento más pequeños, construimos versiones más cortas de cada secuencia Pol inactivada de casi consenso, designadas como P°l300. Las variantes Pol30° tienen grandes deleciones N-terminales en las que se elimina todo el TP y la mayor parte del dominio Spacer, pero se mantienen los dominios RT y ARNasa (Lanford et al., J Virol. (1999);73(3): 1885-93). En la Tabla 3 y la Fig 2 se muestra un listado de las secuencias de antígenos que contienen Pol probadas en vectores de adenovirus o arenavirus. Las secuencias de los aminoácidos eliminados de cada construcción de deleción Pol se proporcionan en SEQ ID N.°: 42-51.
Métodos
[0291]La inmunogenicidad de cada construcción de fusión núcleo-Pol del GT-A, B, C y D se probó inicialmente en ratones C57BL/6 para la inducción de respuestas de células T reactivas con el núcleo del<g>T-D y los conjuntos de péptidos Pol, para identificar la variante dentro de cada genotipo que induce la mayor respuesta inmunogénica (Fig 3). En todos los genotipos se detectó una respuesta Pol robusta, pero las respuestas del núcleo fueron más débiles o inexistentes. Las respuestas débiles o ausentes al núcleo probablemente se debieron al hecho de que se sabe que los ratones C57BL/6 sólo responden a un único péptido del núcleo GT-D del HBV, a saber, MGLKFRQ<l>(Chiale, et al., Antiviral Res. 2019 Aug;168:156-167). Las respuestas a este péptido en ratones C57BL/6 suelen ser débiles o inexistentes, y el péptido tiene una secuencia alternativa en las secuencias centrales GT-A, B y C de MGLKIRQL.
Resultados
[0292]Todos los genotipos de antígenos mostraron pocos cambios en la inmunogenicidad entre el núcleo-Pol™* y el núcleo-Polñ1. El antígeno GT-A tuvo una mayor respuesta al núcleo-Polñ3 frente al núcleo-Polmuty al núcleo-Polñ1, mientras que los GT-B, C y D demostraron todos una inmunogenicidad reducida con el núcleo-Polñ3.
[0293]Las respuestas de las células T en cepas de ratones endocriados no son ideales para comparar la inmunogenicidad de antígenos entre diferentes genotipos porque las respuestas pueden estar dominadas por uno o unos pocos epítopos, que podrían variar en secuencia entre los antígenos. Para comparar mejor la inmunogenicidad de los antígenos núcleo-Pol entre genotipos, se probó la inmunogenicidad en ratones DO para captar respuestas en una amplia gama de epítopos. Los ratones DO fueron inmunizados con núcleo-Polñ3 del GT-A o núcleo-Polñ1 del GT-B, C, o D, y se evaluaron las respuestas de las células T para ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos GT-A y GT-D (Fig 4). Núcleo-Polñ1 de GT-B dio las mejores respuestas globales a Pol, con respuestas ELISPOT igualmente robustas a los grupos de péptidos GT-A y GT-D (Fig 4A). Las respuestas Pol a núcleo-Polñ1 del GT-B fueron estadísticamente significativamente mayores que las respuestas a núcleo-Polñ3 del GT-A utilizando péptidos GT-D, y a núcleo-Polñ1 del GT-C utilizando ambos genotipos de péptidos. La media geométrica de las respuestas Pol ELISPOT a núcleo-Polñ1 del GT-D fue numéricamente inferior a núcleo-Polñ1 del GT-B, pero la diferencia no fue estadísticamente significativa. Las respuestas al núcleo fueron claramente detectables en los ratones DO para los cuatro genotipos de antígeno (Fig 4B). El patrón de respuestas al núcleo fue similar al de las respuestas a Pol, con núcleo-Polñ1 del GT-B obteniendo los mejores resultados globales, aunque en el caso del núcleo ninguna comparación entre genotipos de antígenos alcanzó significación estadística.Ejemplo 3
Identificación de Antígenos Pol Inmunogénicos Más Pequeños
[0294]Diferentes sistemas de vectores virales tienen diferentes límites en el tamaño máximo de los antígenos codificados. Métodos
[0295]Para identificar variantes Pol adicionales de menor tamaño y que, por tanto, pudieran utilizarse en una gama más amplia de sistemas de vectores, evaluamos la inmunogenicidad de variantes Pol expresadas sin fusión con el núcleo. Se inmunizó a ratones C57BL/6 con vectores Adenovirus de tipo 5 que codificaban Polñ1 del GT-D, PolA3, y Pol300, y Pol300 delGT-B, y se comparó con un vector de control que codificaba una GT-D Polimerasa de longitud completa y no modificada (PoFrl del GT-D) y una vacunación simulada con solución salina tamponada con fosfato (PBS) como control negativo. Las respuestas ELISPOT de IFN-y se midieron 14 días después de la inmunización con conjuntos de péptidos Pol del GT-D (Fig. 5).
Resultados
[0296]Todos los diseños de antígenos Pol probados fueron inmunogénicos, sin diferencias estadísticamente significativas entre los grupos.
Ejemplo 4
Eficacia de la Vacunación con Antígenos de Casi Consenso en Combinación con Anti-PD-1 en Ratones con Virus Adeno-Asociado (AAV)-HBV
[0297]Utilizamos un modelo de virus adeno-asociado (AAV)-HBV (Dion, et al., J Virol. (2013) 87(10):5554-63; y Yang, et al., Cell Mol Immunol. (2014) 11(1):71-8) para determinar si nuestros diseños de antígenos de casi consenso podrían tener efectos antivirales en un modelo de infección crónica por HBV.
Métodos
[0298]En este modelo, se transdujeron ratones C57BL/6 con vectores AAV que codificaban un genoma del HBV del GT-D de longitud 1,2x, lo que dio lugar a una producción persistente de proteínas y viriones del HBV en los hepatocitos, acompañada de antigenemia y viremia en el suero. Las pautas de sensibilización y refuerzo de vectores virales heterólogos consistentes en un refuerzo de adenovirus (Ad) y un refuerzo de poxvirus han dado lugar a fuertes respuestas de células T en humanos(véase, p. ej.,Barnes, et al., Sci TranslMed. (2012) 4(115):115ra1; Ewer, et al., N Engl J Med. (2016) 374(17):1635-46; Ewer, et al. Nat Commun. (2013) 4:2836; Green, et al., Sci Transl Med. (2015) 7(300):300ra126; Swadling, et al., Sci Transl Med. (2014) 6(261):261ra153), por lo que generamos vectores vaccinia basados en la cepa Western Reserve (NCBI:txid696871) que expresan sAg del GT-C y núcleo-Polñ1 del GT-B. Los ratones AAV-HBV fueron vacunados con vectores de sensibilización Ad5 y de refuerzo vaccinia que codificaban GT-C sAg y GT-B núcle°-Pola1 o antígenos de control irrelevantes beta-galactosidasa y proteína verde fluorescente. Después de la vacunación de refuerzo, los ratones fueron tratados con un anticuerpo monoclonal anti-ratón PD-1 o con un anticuerpo isotipo de control. En la Figura 6 se muestra un diagrama del estudio de eficacia de AAV-HBV, y los grupos de tratamiento se muestran en la Tabla 4. Un grupo de control recibió la vacuna contra el HBV pero no el AAV-HBV para determinar si las respuestas a la vacuna se reducían en presencia de HBV persistente.
Tabla 4
Grupos de Estudio en el Estudio de Eficacia AAV-HBV
Ad: vector de Adoxjvkus S. V id vectoi de vwcüiníi. p-gaL beta-galactosidisa, GFP: piscina
flúortsceme vende.
Resultados
[0299]La Figura 7 muestra las respuestas ELISPOT de IFN-y en cada grupo. Nótese que las respuestas se evaluaron utilizando conjuntos de péptidos del GT-D emparejados con la cepa del HBV en el vector AAV-HBV, por lo que las respuestas de las células T sólo se detectan si reaccionan con el virus presente en los ratones AAV-HBV. Se probaron las respuestas al núcleo, pero no se detectó ninguna en ningún grupo, lo que concuerda con la escasa inmunogenicidad del núcleo en ratones C57BL/6 (Chiale,et al., supra).Se detectaron respuestas Pol ELISPOT robustas en todos los grupos que recibieron vectores de sensibilización Ad y de refuerzo vaccinia que codificaban antígenos del HBV. La magnitud de Pol ELISPOT fue similar en los ratones AAV-HBV y en los ratones de control que no recibieron AAV-HBV, lo que indica que el AAV-HBV no produce tolerancia de las células T a Pol. Por el contrario, las respuestas ELISPOT al sAg se redujeron considerablemente en los ratones AAV-HBV en comparación con los ratones de control, lo que demuestra que el AAV-HBV induce la tolerancia de las células T al sAg. No obstante, en los ratones que recibieron la vacuna AAV-HBV y Adenovirus de sensibilización-vaccinia de refuerzo contra el HBV, 2-3 ratones por grupo demostraron respuestas sAg ELISPOT superiores a las detectadas en los ratones vacunados como control. Las magnitudes de respuesta ELISPOT no se modificaron con el tratamiento anti-PD-1.03
[0300]Para evaluar cualquier efecto antiviral de las células T específicas del HBV inducidas por la vacunación, medimos el antígeno e sérico (HBeAg). El HBeAg sérico es un mejor marcador de la eficacia antivírica mediada por células T que el HBsAg sérico, ya que este último puede verse reducido por la acción de los anticuerpos anti-HBsAg inducidos por la vacunación. Ni la vacuna contra el HBV por sí sola ni el anti-PD-1 por sí solo causaron ninguna reducción del HBeAg sérico en comparación con los ratones que recibieron la vacuna de control y el anticuerpo de control del isotipo. Sin embargo, la combinación de vacuna HBV anti-PD-1 resultó en la pérdida de HBeAg detectable en suero en 4 de 12 ratones (Fig. 8). Estos datos demuestran que la vacunación con vectores virales que codifican nuestras secuencias de antígenos mejoradas contribuyó a la eliminación del HBV como parte de una estrategia de terapia combinada.
Ejemplo 5
Inmunogenicidad de los Antígenos Pol en los Vectores de Arenavirus
[0301] Mejoramos aún más nuestros diseños de antígenos del HBV para su uso en vectores de arenavirus. A diferencia de los vectores adenovirus y de la mayoría de los demás sistemas de vectores virales, los vectores arenavirus pueden administrarse repetidamente sin inducir anticuerpos neutralizantes contra el vector. Además, los vectores de arenavirus pueden producirse en diversas variantes que difieren en el virus fuente utilizado para generar el vector, p. ej., incompetente para la replicación con un genoma de dos segmentos(es decir,bisegmentado) (Flatz, et al., Nat Med. (2010) 16(3):339-45), o atenuado por replicación con un genoma de tres segmentos (es decir, trisegmentado) (Kallert, et al., Nat Commun. (2017) 8:15327) (Figura 9). Ciertos antígenos del HBV se expresaron en plataformas de arenavirus de replicación atenuada trisegmentada o de replicación defectuosa bisegmentada con un esqueleto de vector mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) o un mammarenavirus de Cali (también conocido como mammarenavirus de Pichinde o arenavirus de Pichinde (PICV)). Los vectores arenavirus de replicación defectuosa utilizados se describen en el documento WO 2009/083210. Los vectores de arenavirus de replicación atenuada utilizados se describen en WO 2016075250 (LCMV) y WO 2017/198726 (Pichinde).
[0302] Los vectores de arenavirus pueden albergar antígenos de aproximadamente 500-800 aminoácidos por marco de lectura abierto. Por lo tanto, probamos Polñ1 del GT-D y GT-B (SEQ ID N.°: 6 y 8), Polñ3 (SEQ ID N.°: 10 y 12), y Pol300 (SEQ ID N.°: 13 y 14) para la inmunogenicidad en vectores LCMV incompetentes para la replicación. Se inmunizó a ratones C57BL/6 por vía intravenosa con 106 unidades formadoras de foco (FFU) de vectores LCMV incompetentes para la replicación y se midieron las respuestas ELISPOT de IFN-<y>al séptimo día tras la inmunización. Todos los antígenos Pol300 del GT-B y GT-D indujeron respuestas robustas de células T, mientras que Polñ1 y Polñ3 del GT-D provocaron respuestas ELISPOT reducidas en comparación con los otros diseños de antígenos (Fig 10).
Ejemplo 6
Identificación de Vectores LCMV Genéticamente Estables e Incompetentes para la Replicación que Codifican Antígenos Pol Inmunogénicos
[0303] La estabilidad de varios transgenes Pol inmunogénicos dentro de vectores LCMV incompetentes para la replicación (VV1) se evaluó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) tras el paso en serie del sobrenadante que contenía el vector. La estabilidad genética se definió por la banda principal que mostraba el tamaño correcto del transgén de longitud completa (TG). Los resultados figuran en la Tabla 6.
Tabla 6
Cuadro General para la Lv ni unción de la Ecstahiliílnd Genética de Trun sienes Pol
*W1 se refieren vectores LCMV de replicación incompetente.
L,Píf" indica el número de pasajes (por ejemplo. P] es igUfll a 1 pasaje),
Ejemplo 7
Inmunogenicidad de las Proteínas de Fusión Núcleo-sAg en Vectores LCMV Incompetentes para la Replicación
[0304] Habiendo identificado vectores Arenavirus estables e inmunogénicos que codifican HBV Pol, probamos adicionalmente una serie de proteínas de fusión núcleo-sAg para inmunogenicidad en vectores LCMV incompetentes para replicación. Las fusiones núcleo-sAg se generaron fusionando el núcleo GT-B de casi consenso y el sAg del GT-C, o el núcleo del GT-D y el sAg del GT-D, con el núcleo en el extremo N-terminal y el sAg en el extremo C-terminal. Se espera que las fusiones directas provoquen respuestas de células T, pero puede que no induzcan anticuerpos anti-sAg, ya que la proteína de fusión no secretará sAg. Por lo tanto, se probaron diseños de antígenos adicionales con el núcleo y el sAg separados por un enlazador GSG seguido de un sitio de omisión traslacional 2A derivado del teschovirus-1 porcino (P2A) (Kim, et al., PLoS ONE. (2011) 6: e18556). Esta orientación producirá una extensión de 21 aminoácidos en el C-terminal del núcleo, permitiendo al mismo tiempo la secreción normal de sAg para provocar respuestas de anticuerpos. Los números de identificación de las secuencias de aminoácidos de los antígenos probados en los vectores Arenavirus y las secuencias de nucleótidos utilizadas para codificar los antígenos en los vectores Arenavirus se muestran en la Tabla 7.
Tabla 7
Secuencias dtL a ni ¡ni nos de vectores y genes que codifican
antígenos ulilizndus en vectores tic LCMV
[0305]Se probó la inmunogenicidad de vectores LCMV incompetentes para la replicación que codificaban variantes del núcleo-sAg inmunizando ratones C57BL/6 (Fig 11). Las respuestas totales ELISPOt de IFN-y específicas del HBV fueron indistinguibles para todos los vectores probados, y la inclusión de un sitio P2A no tuvo impacto en las respuestas ELISPOT para los antígenos GT-B/C o GT-D. Se observaron respuestas tanto al núcleo como al sAg en todos los vectores probados. La detección de respuestas de núcleo fue notable, ya que las respuestas de células T de núcleo tienden a ser débiles y difíciles de detectar en esta cepa de ratones (Chiale,et al., supra).Se observaron resultados similares en ratones Balb/c inmunizados con los mismos vectores.
[0306]Las respuestas de anticuerpos se desarrollan más lentamente que las respuestas de células T después de la vacunación con vector LCMV incompetente para replicación, por lo que se inmunizó un conjunto adicional de ratones C57BL/6 y se midieron las respuestas de anticuerpos al día 17 posinmunización (Fig 12). Como era de esperar, las fusiones directas núcleo-sAg no provocaron respuestas de anticuerpos anti-sAg. Entre las construcciones que contenían P2A, sólo el vector núcleo-P2A-sAg del GT-D indujo de forma consistente anticuerpos anti-sAg, mientras que sólo se observaron anticuerpos anti-sAg en uno de los cinco ratones inmunizados con núcleo-P2A-sAg del GT-B/C. Este resultado fue inesperado, ya que las inmunoelectrotransferencias mostraron una separación eficaz del núcleo y el sAg tanto en los vectores núcleo-P2A-sAg de GT-D como GT-B/C. Para confirmar que la diferencia en las respuestas de anticuerpos antisAg no era un artefacto de la cepa de ratón seleccionada, se realizó el mismo experimento en ratones Balb/c. Los resultados en los ratones Balb/c fueron similares a los de los ratones C57BL/6: se detectaron anticuerpos anti-sAg en 4 de 5 ratones Balb/c inmunizados con núcleo-P2A-sAg del GT-D, pero sólo en 1 de 5 ratones inmunizados con núcleo-P2A-sAg del GT-B/C (Figura 12).
Ejemplo 8
Identificación de Vectores LCMV Genéticamente Estables e Incompetentes para la Replicación que Codifican Proteínas de Fusión Núcleo-sAg Inmunogénicas
[0307]La estabilidad de varios transgenes de fusión núcleo-sAg inmunogénicos dentro de vectores LCMV incompetentes para la replicación (VV1) se evaluó mediante PCR tras el paso en serie del sobrenadante que contenía el vector. La estabilidad genética se definió por la banda principal que mostraba el tamaño correcto del transgén de longitud completa (TG). Los resultados figuran en la Tabla 8.
Tabla 8
TahLi (icntra l para ta Fvaluación de l¡i Estabilidad Genética de los Transgcnii Núcleo
*Ag
"I'#1'indica el número de pasajes (por ejemplo, Pl equivale a I pasaje)
[0308]Núcleo-P2A sAg del GT-D indujo respuestas de células T robustas y las respuestas de anticuerpos anti-sAg más altas de los diseños de fusión núcleo-sAg probados, pero no tuvo una estabilidad genética favorable en este análisis. Sin embargo, el transgén modificado iNúcleo-P2A-sAg del GT-D (polinucleótido SEQ ID N.°:37, que codifica el polipéptido SEQ ID N.°:41) mostró una estabilidad genética mejorada en un vector LCMV incompetente para la replicación (Tabla 8).
[0309]Para confirmar que el transgén modificado no afectaba a la inmunogenicidad de células T del iNúcleo-P2A-sAg del GT-D, se inmunizó a ratones C57BL/6 usando vectores LCMV incompetentes para la replicación con los diseños núcleo-P2A-sAg del GT-D y iNúcleo-P2A-sAg del GT-D, o se inmunizó a ratones simulados, y se midieron las respuestas de células T 7 días después mediante ELISPOT de IFN-<y>(Fig. 13). 13). Las respuestas sAg ELISPOT fueron significativamente superiores con iNúcleo-P2A-sAg del GT-D, y las respuestas ELISPOT del núcleo también fueron numéricamente superiores. Así pues, el transgén modificado de iNúcleo-P2A-sAg del GT-D dio lugar tanto a una mejora de la estabilidad genética como de la inmunogenicidad.
EJEMPLO 9:
Inmunogenicidad de Vectores LCMV Incompetentes para la Replicación en Ratones No Consanguíneos [0310]La inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) incompetentes para la replicación que codifican varios antígenos del h Bv se evaluó en ratonesDiversity Outbred(DO). Estos ratones tienen alelos MHC más diversos que los ratones consanguíneos C57BL/6, por lo que son mejores para evaluar la reactividad cruzada genotipo de las respuestas de células T inducidas por la vacunación.
Métodos
[0311]Los ratones DO fueron inmunizados dos veces en el día 0 y en el día 28 con vectores LCMV incompetentes a la replicación como se indica en la Tabla 9. Las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron en el día 42 mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando esplenocitos.
Tabla 9
Grupos de Estudio en el Estudio de Inmunogenicidad
Resultados
[0312]Los vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican Núcleo-P2A-sAg del GT-B/C y iNúcleo-P2A-sAg del GT-D indujeron respuestas de células T comparables específicas para su antígeno central respectivo (Fig. 14A). El vector que codifica iNúcleo-P2A-sAg del GT-D indujo una mayor frecuencia de células T específicas para su antígeno sAg respectivo en comparación con el vector que codifica Núcleo-P2A-sAg del GT-B/C (Fig. 14A). El vector que codifica Pol300 delGT-B indujo una respuesta de células T específica de antígenos pol numéricamente superior a la del vector que codifica Polñ3 del<g>T-B (Fig. 14B). Así, los vectores que codifican para iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B son más inmunogénicos que los vectores que codifican para Núcleo-P2A-sAg del GT-B/C y Polñ3 del GT-B en ratones no consanguíneos.
[0313]Además de inducir respuestas de células T específicas para sus antígenos afines(es decir,antígenos núcleo del GT-D, sAg del GT-D, Pol del GT-B), los vectores iNúcleo-sAg del y Pol300 del GT-B también fueron capaces de generar respuestas de células T específicas para antígenos obtenidos de diferentes genotipos virales del HBV(es decir,antígenos núcleo del GT-B, sAg del Gt -B, Pol del GT-D) (Fig. 15A y 15B). Así, los vectores que codifican iNúcleo-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B producen células T que son reactivas cruzadas para diferentes genotipos del HBV.
Ejemplo 10
Inmunogenicidad de Vectores LCMV Incompetentes para la Replicación Administrados como Vector Único o Coformulados en Ratones C57BL/6
[0314]Los vectores LCMV incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B son inmunogénicos en ratones. A continuación, comparamos la inmunogenicidad de ambos vectores cuando se administraron como vectores únicos o como una mezcla coformulada en ratones C57BL/6.
Métodos
[0315]Los ratones C57BL/6 fueron inmunizados dos veces en el día 0 y en el día 21 con vectores LCMV incompetentes a la replicación como se indica en la Tabla 10. Las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron en el día 28 mediante ELISPOT de IFN-y utilizando esplenocitos.
Tabla 10
( ¡ r u p i i » J e b ' í t u ü i n e n K i t u J i n d e I m i i u n o g c n í e i i í n d
Resultados
[0316]En consonancia con los datos descritos anteriormente, los vectores que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B indujeron respuestas de células T específicas para sAg, núcleo y Pol cuando se administraron como vectores únicos (Figuras 16A-16C). La administración de los mismos vectores como mezcla coformulada indujo respuestas de células T comparables (Figuras 16A-C). Así pues, la coformulación de los vectores LCMV que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B no interfiere con su inmunogenicidad en ratones C57BL/6.
Ejemplo 11
Inmunogenicidad de Vectores LCMV Incompetentes para la Replicación en Macacos Cynomolgus.
[0317]Evaluamos la inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) incompetentes a la replicación iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B en macacos cynomolgus. También se ensayaron vectores Ad5 y vaccinia que codifican los antígenos núcleo, sAg y Pol300.
Métodos
[0318]Los macacos Cynomolgus fueron inmunizados utilizando diferentes rutas, diferentes dosis y diferentes esquemas de inmunización como se indica en la Tabla 11. Las respuestas de células T específicas del HBV se midieron utilizando PBMC cada 2 semanas mediante ELISPOT de IFN-y. También se realizaron tinciones de citocinas intracelulares en células T CD4+ y CD8+ en la semana 14 mediante citometría de flujo. Las respuestas de anticuerpos anti-sAg se cuantificaron cada 4 semanas mediante ELISA.
Tabla 11
Grupo* de Estudio en Estudio de In mu nóteme idad
Resultados
[0319]Las respuestas totales de células T específicas del HBV (definidas como la suma de las respuestas específicas del núcleo, sAg y polimerasa mostradas en las Figuras 18A-18F a 20A-20F) a los vectores VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B fueron mayores cuando se administraron por vía intramuscular (i.m.) y cada 4 semanas (grupos 1 y 2) (Figuras 17A-B). Los vectores Ad5 y vaccinia que codifican para los mismos antígenos también indujeron respuestas de células T comparables. Se detectaron respuestas inmunitarias específicas del HBV tras la primera dosis de los vectores VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B, y las dosis dos a cuatro indujeron aumentos progresivos de la magnitud ELISPOT específica del HBV. Las dosis quinta y sexta no aumentaron más las respuestas, lo que indica que la respuesta máxima a nuestros vectores se alcanzó después de la cuarta dosis. La respuesta media geométrica en la semana 14 fue de 1206 SFU/106 PBMC en los animales a los que se administró la dosis humana completa (108 FFU, grupo 2), y aproximadamente 2 veces inferior en la dosis más baja de 5*10® FFU (grupo 1), lo que indica una sensibilidad a la dosis.
[0320]Para cuantificar la contribución de las células T CD4+ y CD8+ a la respuesta total de células T, se analizaron PBMC de animales de los grupos 1, 2 y 6 mediante tinción intracelular de citocinas (ICS) en la semana 14 del estudio, cuando las respuestas de células T fueron las más altas. Tanto el grupo 1 como el 2 presentaron mayores niveles de células T CD8+ IFN-Y+ en respuesta a la estimulación con péptidos del HBV. La frecuencia corregida de fondo de estas células osciló entre el 0,8% y el 1,9% en el Grupo 1 y entre el 0,2% y el 4% en el Grupo 2 (Fig. 21A). Por el contrario, se detectaron células T CD4+ IFN-Y+ específicas para el HBV, pero en menos del 0,1% del total de células T CD4+ (Fig. 21B). Así pues, la respuesta de células T inducida por nuestros vectores en primates no humanos está compuesta predominantemente por células T CD8+.
[0321]También se indujeron anticuerpos anti-HBsAg mediante la dosificación con nuestros vectores. Las respuestas antisAg aumentaron con el nivel de dosis y con la administración repetida de los vectores (Fig. 22).
Ejemplo 12
Inmunogenicidad de Vectores LCMV Incompetentes para la Replicación en Combinación con Inmunomoduladores en Ratones C57BL/6
[0322]Evaluamos la inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) incompetentes para la replicación iNúcleo-P2A-sAg del<g>T-D y Pol300 del GT-B solos o en combinación con varios inmunomoduladores (anti-PD-1, anti-CTLA-4 y anti-CD137 y ligando FLT3) en el modelo de ratón AAV-HBV.
Métodos
[0323]A los ratones C57BL/6 AAV-HBV se les administraron 3 dosis de vectores W1-iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del g T-B en el día 0, día 21 y día 42. Los ratones también fueron tratados con solución salina, anticuerpo PD-1 inhibidor anti-ratón, anticuerpo CTLA-4 inhibidor anti-ratón, anticuerpo CD137 estimulador anti-ratón y FLT3-L de ratón como se indica en la Tabla 12 y en la Fig 23. Un grupo de ratones de control recibió únicamente la vacuna contra el HBV, pero no el AAV-HBV, para determinar cómo se veía afectada la inmunogenicidad de la vacuna contra el HBV en el contexto del HBV crónico. Las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron en el día 105 tras la primera vacunación mediante ELISPOT de IFN-y utilizando esplenocitos. Los datos se expresan tras sustraer la señal de fondo en los pocillos de control sin péptidos. Los niveles séricos de HBeAg se midieron el día 11 y el día 105 mediante ELISA.
Tabla 12
í»m|WS i l t K>1 ud¡n «ii h*luíl¡o lie I mu n ungen ¡cid jiiI A A V -V H Ii
Resultados
[0324]Se observaron respuestas ELISPOT de IFN-<y>robustas para los 3 antígenos del HBV en ratones en ausencia de HBV persistente (Fig 24). Las respuestas ELISPOT de IFN-y obtenidas de ratones AAV-HBV que recibieron la vacuna contra el HBV sola se redujeron, pero seguían presentes, lo que demuestra que VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B eran inmunogénicos incluso en el contexto de un sistema inmunitario tolerado al HBV. La administración combinada de VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B con anticuerpos anti-PD-1, anti-CTLA-4 o anti-CD137 mejoró aún más las respuestas ELISPOT de IFN-y específicas del HBV al núcleo y al sAg, mientras que la combinación de VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B con FLT3-L dio la mayor magnitud ELISPOT para los 3 antígenos del HBV.
[0325]Además, la administración de VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B redujo los niveles séricos de HBeAg en esos ratones AAV-HBV medidos en el día -11 basal y en el día 105 (Tabla 13). Es importante destacar que la administración combinada de los vectores VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B con anticuerpos anti-PD-1, anti-CTLA-4, anti-CD137 o FTL3-L redujo aún más los niveles séricos de HBeAg (Tabla 13). Así pues, los vectores VV1 iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B muestran una eficacia antivírica en el modelo de ratón AAV-HBV que puede potenciarse en combinación con algunos inmunomoduladores.
Tabla 13
Tu til ii tícncral de Iw Niveles de H l k \ u Sérico co Retenes AAV-VHB
Ejemplo 13
Identificación de Vectores de Pichinde Incompetentes para la Replicación (PICV) que Codifican Antígenos Inmunogénicos del HBV Optimizados para Nucleótidos
[0326]Generamos vectores PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican el antígeno GT-D núcleo-P2A-sAg (Se Q ID N.°: 41) y el antígeno Pol300 del Gt -B (SEQ ID N.°: 13), utilizando inicialmente las mismas secuencias de nucleótidos identificadas como estables e inmunogénicas en los vectores LCMV (VV1) incompetentes para la replicación. La estabilidad del transgén iNúcleo-P2A-sAg en los vectores VV2 (SEQ ID N.°: 37) se evaluó mediante PCR tras el paso en serie del sobrenadante que contenía el vector y se comprobó que era suficientemente estable para su fabricación (Tabla 13). La estabilidad genética se definió por la banda principal que mostraba el tamaño correcto del transgén de longitud completa (TG).
[0327]Por el contrario, cuando el mismo transgén Pol300 del GT-B utilizado en los vectores VV1 (SEQ ID N.°: 29) en los vectores VV2, el transgén se volvió rápidamente inestable durante los pases seriados (Tabla 14). Para identificar vectores VV2 con suficiente estabilidad genética para la fabricación, generamos tres vectores VV2 adicionales que codifican el mismo antígeno Pol300 del GT-B utilizando diferentes secuencias de nucleótidos, designados VV2-Pol300_IDT_CpGdel (SEQ ID N.°: 94), Pol300 ori (SEQ ID N.°: 89), y Pol300 dint (SEQ ID N.°: 90), Pol300 huCo low GC (SEQ ID N.°: 91), y Pol300 oridel CpG (SEQ ID N.°: 92). Se evaluó la estabilidad transgénica de cada vector mediante PCR tras pases seriados del sobrenadante que contenía el vector, definiéndose la estabilidad genética por la banda principal que mostraba el tamaño correcto del transgén de longitud completa (TG). Los resultados figuran en la Tabla 14. Sorprendentemente, se evidenciaron grandes diferencias en la estabilidad de los transgenes Pol30° en los vectores VV2 entre las diferentes secuencias de nucleótidos a pesar de codificar el antígeno polipeptídico idéntico, siendo las secuencias de polinucleótidos CpG Pol300 dint, Pol300 ori y Pol300 oridel las que demostraron una mayor estabilidad,p. ej.,al menos durante cinco pases.
Tabla 14
Tahh (ic n c o l para la Evaluación de lu Esta bi hitad (¡i'nclit» de los Trans|>cni‘s V V2-
PÍ6cleo-P2A-sAg yPdUOO
*VV2se re fien; a vccUtrcs PICV (te rcpliesKiin ¡iicdiupclcnlc-“P#* indica el número de pasajes (por ejemplo. I’l equivale a I pasaje).
[0328]A continuación, para evaluar las posibles diferencias de inmunogenicidad entre los vectores portadores de los transgenes Pol300 dint y Pol300 ori, se inmunizó a ratones C57BL/6 dos veces en el día 0 y en el día 21 con vectores PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codificaban Pol300 ori delGT-B o Pol300 dint delGT-B. A continuación, se midieron las respuestas de células T específicas del HBV a partir de esplenocitos mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando grupos de péptidos Pol. Sorprendentemente, Pol300 dint del VV2-GT-B indujo una respuesta de células T mucho más fuerte que Pol300 ori del VV2-GT-B a pesar de codificar idénticas secuencias de aminoácidos (Fig. 25). Así pues, Pol300 dint del VV2-GT-B es más inmunogénico que Pol300 ori del VV2-GT-B en ratones C57BL/6.
Ejemplo 14
Inmunogenicidad de vectores de arenavirus LCMV y PICV incompetentes para la replicación utilizando regímenes de inmunización de sensibilización y refuerzo homólogos o heterólogos en ratones C57BL/6
[0329]Evaluamos la inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B utilizando regímenes de inmunización homólogos de sensibilización y refuerzo (vector VV1 seguido de vector VV1) o heterólogos de cebado/reforzamiento (vector VV2 seguido de vector VV1) en ratones C57BL/6.
Métodos
[0330]Ratones C57BL/6 fueron inmunizados dos veces con vectores LCMV y PICV incompetentes a la replicación que codificaban iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B como se indica en la Tabla 15. Las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron en el día 28 mediante ELISPOT de IFN-<y>utilizando esplenocitos. Las respuestas de anticuerpos anti-sAg se cuantificaron en el día 28 mediante ELISA.
Tabla 15
Crvtpo* de EsluUio en Ksímlm de l nimiflogenkRIad
Resultados
[0331]La administración del vector LCMV incompetente a la replicación (VV1) que codifica iNúcleo-P2A-sAg del GT-D o que codifica Pol300 delGT-B utilizando un régimen homólogo de sensibilización y refuerzo (VV1/VV1) indujo respuestas robustas de células T en ratones C57BL/6 (Figuras 26A-C). La administración del vector PICV incompetente para la replicación (VV2) seguida de la administración de VV1 (pauta de sensibilización y refuerzo heteróloga VV2/VV1) produjo una mayor respuesta de células T específicas de sAg (Fig. 26A) y respuestas similares de células T específicas de núcleo y Pol (Figs. 26B-26C) en comparación con el régimen VV1/VV1. Además, mientras que la administración del vector LCMV incompetente para la replicación utilizando una pauta de sensibilización y refuerzo (VV1/VV1) indujo inconsistentemente anticuerpos anti-sAg a niveles bajos, la inmunización utilizando la pauta heteróloga de sensibilización y refuerzo (VV2/VV1) condujo inesperadamente a una inducción robusta y consistente de anticuerpos anti-sAg en todos los animales y a un aumento de aproximadamente 1000 veces en el título medio de anticuerpos anti-sAg (Fig. 27).
Ejemplo 15
Inmunogenicidad de vectores de arenavirus LCMV y PICV atenuados por replicación utilizando pautas de sensibilización y refuerzo homólogas o heterólogas en ratones C57BL/6
[0332]Además de los vectores arenavirus incompetentes para la replicación LCMV (VV1) y PICV (VV2), también pueden diseñarse vectores competentes para la replicación pero atenuados LCMV (TT1) y PICV (TT2) que codifican antígenos del HBV. A diferencia de los vectores VV1 y VV2, los vectores TT1 y TT2 contienen tres segmentos genómicos que dejan espacio genómico para insertar los dos antígenos del HBV (la proteína de fusión núcleo-P2A-sAg del GT-D y la proteína Pol300 del GT-B) en el mismo vector. Dado que cada antígeno puede insertarse en dos segmentos genómicos diferentes, se generaron vectores que cubrían las distintas combinaciones de inserción dentro de ambos vectores arenavirus de la siguiente manera: i) GT-D núcleo-P2A-sAg insertado en el segmento 1 y Pol300 del GT-B insertado en el segmento 2 en el esqueleto del lCm V (núcleo-P2A-sAg del TT1-GT-D/Pol300 del GT-B), ii) núcleo-P2A-sAg del GT-D insertado en el segmento 1 y Pol300 del Gt -B insertado en el segmento 2 en el esqueleto del PICV (núcleo-P2A-sAg del TT2-GT-D/Pol300 del GT-B), iii) núcleo-P2A-sAg del GT-D insertado en el segmento 2 y Pol300 del GT-B insertado en el segmento 1 en el esqueleto del LCMV (Pol300 del TT1-GT-B/núcleo-P2A-sAg del GT-D) y iv) núcleo-P2A-sAg del GT-D insertado en el segmento 2 y Pol300 del GT-B insertado en el segmento 1 en el esqueleto del PICV (Pol300 delTT2-GT-B/núcleo-P2A-sAg del GT-D). A continuación evaluamos la inmunogenicidad de estos 4 vectores utilizando pautas de inmunización de sensibilización y refuerzo homólogas o heterólogas en ratones C57BL/6.
Métodos
[0333]Ratones C57BL/6 fueron inmunizados dos veces con vectores LCMV y PICV atenuados en replicación que codifican núcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B como se indica en la Tabla 16. Las respuestas de las células T específicas del HBV se midieron en el día 28 mediante ELISPOT de IFN-y utilizando esplenocitos.
Tabla 16
Grupos de Fistiuliu en Estudio (k Inrmi trocen i riditd
Resultados
[0334] La administración de todos los vectores competentes en replicación resultó en respuestas robustas de células T específicas para los 3 antígenos del HBV sAg, núcleo y Pol (Figuras 28A-28C). Así pues, los vectores TT1 y TT2 que expresan antígenos del HBV son fuertemente inmunogénicos en ratones C57BL/6.
Ejemplo 16
Inmunogenicidad de vectores de arenavirus LCMV y PICV incompetentes para la replicación mediante pautas de sensibilización y refuerzo homólogas o heterólogas en macacos Cynomolgus
[0335] Evaluamos la inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 delGT-B utilizando regímenes de inmunización homólogos de sensibilización y refuerzo (vector VV1 seguido de vector VV1) o heterólogos de cebado/reforzamiento (vector VV2 seguido de vector VV1) en macacos cynomolgus.
Métodos
[0336] Los macacos Cynomolgus (n=5) fueron inmunizados con vectores VV2 (5*10® FFU/vector) en la semana 0 y luego inmunizados con vectores VV1 (5*10® FFU/vector) en la semana 4, y las respuestas de células T específicas del HBV se midieron utilizando PBMC por ELISPOT de IFN-y en la semana 6. Los datos se compararon con ELISPOT de 10 macacos cynomolgus inmunizados únicamente con vectores VV1 (5*10® FFU/vector) tanto en la semana 0 como en la 4 (régimen de refuerzo de cebado homólogo).
Resultados
[0337] La administración de los vectores LCMV incompetentes para la replicación (VV1) que codifican iNúcleo-P2A-sAg del g T-D y Pol300 del GT-B utilizando un régimen homólogo de sensibilización y refuerzo (VV1/VV1) indujo respuestas de células T específicas del HBV en 5 de 10 macacos cynomolgus (Fig. 29). Por el contrario, la administración del vector PICV incompetente para la replicación (VV2) seguido de VV1 (régimen heterólogo de sensibilización y refuerzo VV2/VV1) produjo respuestas de células T específicas del HBV estadísticamente mayores en los 5 animales en comparación con el régimen homólogo de sensibilización y refuerzo VV1/VV1 (Fig. 29).
Ejemplo 17
Inmunogenicidad de vectores de arenavirus LCMV y PICV incompetentes para la replicación utilizando regímenesde inmunización de sensibilización y refuerzo homólogos o heterólogos con intervalos de dosificación de 1 semana en macacos Cynomolgus.
[0338]Se evaluó la inmunogenicidad de los vectores LCMV (VV1) y PICV (VV2) incompetentes para la replicación que codifican iNúcleo-P2A-sAg del GT-D y Pol300 del GT-B utilizando regímenes de inmunización de sensibilización y refuerzo homólogos (vector VV1 seguido de vector VV1) o sensibilización y refuerzo heterólogos (vector VV2 seguido de vector VV1) administrados con un intervalo de dosificación de 1 semana en macacos cynomolgus.
Métodos
[0339]Los macacos Cynomolgus fueron inmunizados como se describe en la Tabla 17. Las respuestas de células T específicas del HBV se midieron utilizando PBMC mediante ELISPOT de IFN-y en la semana 4.
Tabla 17
fr r jp v de Estudio en Estudio de ln mu nocente idad
Resultados
[0340]La administración del vector PICV incompetente para la replicación (VV2) seguido de VV1 (régimen heterólogo de sensibilización y refuerzo VV2/VV1) produjo mayores respuestas de células T específicas del HBV en comparación con la vacunación con el vector VV1 solo (Fig. 30).
[0341]Se entiende que los ejemplos y realizaciones descritos en el presente documento tienen únicamente fines ilustrativos y que se sugerirán diversas modificaciones o cambios a la luz de los mismos a los expertos en la materia dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
[0342]Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

Claims (20)

REIVINDICACIONES
1. Un vector arenavirus que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión núcleo-sAg del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, en el que el polipéptido de fusión núcleo-sAg del HBV no tiene más de 450 aminoácidos de longitud, y en el que el polipéptido sAg no comprende un polipéptido pre-S1 del HBV y/o un polipéptido pre-S2 del HBV.
2. El vector arenavirus según la reivindicación 1, en el que el polinucleótido que codifica el polipéptido de fusión núcleosAg del HBV comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N.°: 41.
3. El vector arenavirus de la reivindicación 1 o 2, en el que el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la longitud completa de cualquiera de las SEQ ID N.°: 33-37, preferentemente en el que el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la longitud completa de SEQ ID N.°: 37.
4. Un vector arenavirus que comprende un polinucleótido que codifica una polimerasa truncada del HBV consistente en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14.
5. El vector arenavirus de la reivindicación 4, en el que el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94, o una secuencia de ácido nucleico que sea al menos un 99% idéntica a la longitud completa de cualquiera de las SEQ ID N.°: 29 y 89-94.
6. El vector arenavirus de la reivindicación 4 o 5, en el que el vector arenavirus es un vector mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) y el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la longitud completa de SEQ ID N.°: 29.
7. El vector arenavirus de cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que el vector arenavirus es un vector mammarenavirus Cali y el polinucleótido comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o que sea al menos 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la longitud completa de SEQ ID N.°: 90.
8. El vector arenavirus de cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en el que el vector arenavirus es de replicación defectuosa, de replicación deficiente o de replicación incompetente.
9. Una célula huésped que comprende uno o más vectores arenavirus de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.
10. Una composición inmunogénica que comprende uno o más vectores de arenavirus de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; y un portador farmacéuticamente aceptable.
11. La composición inmunogénica de la reivindicación 10, que comprende un primer vector arenavirus y un segundo vector arenavirus, en la que:
(a) el primer vector arenavirus comprende un polinucleótido que codifica una polimerasa truncada del HBV consistente en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 13-14; y
(b) el segundo vector arenavirus comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de fusión núcleo-sAg del HBV que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID N.°: 38-41, en el que la proteína de fusión no tiene más de 450 aminoácidos de longitud, y en el que el polipéptido sAg no comprende un polipéptido pre-S1 del HBV y/o un polipéptido pre-S2 del HBV.
12. La composición inmunogénica de la reivindicación 11, en la que el primer vector arenavirus y el segundo vector arenavirus se seleccionan independientemente entre mammarenavirus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV), mammarenavirus de Cali, virus Guanarito (GTOV), virus Junín (JUNV), virus Lassa (LASV), virus Lujo (LUJV), virus Machupo (MACV), virus Sabia (SABV) y virus Whitewater Arroyo (WWa V).
13. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12, que comprende un primer vector de expresión de arenavirus LCMV y un segundo vector de expresión de arenavirus LCMV, en la que:
a) el primer vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 29, o una secuencia que es al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 29; y
b) el segundo vector de expresión de arenavirus LCMV comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37.
14. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12, que comprende un primer vector de expresión de arenavirus de Pichinde y un segundo vector de expresión de arenavirus de Pichinde, en la que:
a) el primer vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 90, o una secuencia que es al menos 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a SEQ ID N.°: 90; y
b) el segundo vector de expresión del arenavirus Pichinde comprende un polinucleótido que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID N.°: 37 o una secuencia que sea al menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a cualquiera de las SEQ ID N.°: 37.
15. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en la que el primer vector arenavirus y el segundo vector arenavirus se proporcionan en una proporción comprendida entre 1:10 y 10:1.
16. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, que comprende en el intervalo de aproximadamente 103 a aproximadamente 1012 unidades formadoras de focos virales (ffu) o unidades formadoras de placas (pfu) o unidades infecciosas (iu) o partículas virales (vp) por mililitro, de cada uno del primer vector arenavirus y del segundo vector arenavirus.
17. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 16, formulada para su administración por una vía seleccionada del grupo que consiste en intravenosa, intramuscular, intradérmica, subcutánea y mucosa, opcionalmente, bucal, intranasal, intrarrectal o intravaginal.
18. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 17, formulada como líquido, opcionalmente, como solución acuosa o suspensión.
19. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 18, en la que la composición está liofilizada.
20. La composición inmunogénica de cualquiera de las reivindicaciones 10 a 19 para su uso en la provocación de una respuesta inmunitaria protectora frente al virus de la hepatitis B humana (HBV) o en el tratamiento o prevención del virus de la hepatitis B humana (HBV).
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