ES2991429T3 - Compuestos de piridina bicíclicos para su uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

En el presente documento se describen piridinas bicíclicas, como tienopiridina, pirrolopiridina, compuestos de furopiridina, y métodos para tratar cánceres. El método puede comprender la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de las composiciones descritas en el presente documento. En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de próstata, una leucemia, un cáncer de mama, un cáncer de colon, un cáncer de ovario, un cáncer de páncreas o un melanoma. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos de piridina bicíclicos para su uso en el tratamiento del cáncer

Antecedentes

Las CDK8 y CDK19, dos cinasas reguladoras de la transcripción estrechamente relacionadas, se han convertido en un nuevo objetivo emergente de fármacos contra el cáncer (Philip, S.et al.,J Med Chem 2018, 61, 5073-5092). En particular, se ha demostrado que los inhibidores de las CDK8/19 son eficaces en el cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC) (Chen, Roninson, patente de EE. UU. 9.636.342, documento WO2014/071143), en la leucemia mieloide aguda (Pelishet al.,Nature. 8 de octubre de 2015; 526(7572): 273-276), en metástasis hepáticas del cáncer de colon (Lianget al.,Cancer Res. 1 de diciembre de 2018; 78 (23): 6594-6606), en el cáncer de mama positivo para el receptor de estrógenos cuando se combina con antiestrógenos (McDermottet al.,Oncotarget. 21 de febrero de 2017; 8 (8): 12558-12575) y en el cáncer de mama positivo para el HER2 cuando se combina con agentes dirigidos al HER2 (McDermottet al.,Publicación de Patente Internacional n.° WO 2016/018511). Asimismo, los inhibidores de las CDK8/19 previenen la inducción de los genes que promueven la metástasis y la resistencia farmacológica en células cancerosas de diferentes tipos de tumores, tratadas con antineoplásicos convencionales o radiación que dañan el ADN (Porter, D.C.,et al.,Proc Natl Acad Sci USA 2012, 109, 13799-804). La administraciónin vivode un inhibidor de las CDK8/19 también mejoró el efecto del antineoplásico doxorubicina en un modelo de cáncer de pulmón (Porteret al., ibid.),indicando la utilidad de los inhibidores de las CDK8/19 para el tratamiento de diferentes tipos de cáncer cuando se combinan con una variedad de agentes que dañan el ADN.

Aparte del cáncer, los inhibidores de las CDK8/19 resultan prometedores en las enfermedades asociadas a la inflamación (Publicación de Patente de EE. UU. n.° 2014/0309224 a favor de Porter, D. C.; Johnannessen, L.,et al.,Nat Chem Biol 2017, 13, 1102-1108); enfermedades cardiovasculares (Hall, D.,et al.,JCI Insight 2017, 2; Publicación de Patente Internacional n.°WO 2016/100782 a favor de Roninson, I.B.); ribosomopatías; afecciones caracterizadas por un número reducido de células madre hematopoyéticas y/o células progenitoras; y trastornos anabólicos óseos (Publicación de Patente Internacional n.°WO 2017/076968 a favor de Flygare, J.).

Se han notificado varios inhibidores de las CDK8/19 (Philipet al.,J Med Chem. 28 de junio de 2018; 61(12): 5073 5092. doi: 10.1021/acs.jmedchem.7b00901). Éstos incluyen ciertos compuestos basados en quinazolina desarrollados por algunos de los presentes inventores que son muy selectivos para las CDK8/19, tales como SNX2-1-53 (también conocido como Senexina A) (Porter, D.C.,et al.,Proc Natl Acad Sci USA 2012, 109, 13799-804; Patente de EE. UU. n.° 8.598.344 a favor de Porter, D.C.) y SNX2-1-165 (también conocido como Senexina B) (Patente de EE. UU. n.° 9.321.737 a favor de Roninson, I.B.), así como compuestos basados en quinolina muy selectivos para las CDK8/19 [Solicitudes de Patente de EE. UU. n.° 62/720774 y 62/720776). Recientemente se han notificado otros inhibidores de las CDK8/19 (Hatcher, J.M.et al.,ACS Med Chem Lett 2018, 9, 540-545; Nakamura, A.et al.,Oncotarget 2018, 9, 13474-13487; Han, X.,et al.,Bioorg Med Chem Lett 2017, 27, 4488-4492, documento US2016/000787A1, documento WO2015/100420 (análogos de cortistatina), documento WO2016/009076 (naftiridinas e isoquinolinas)).

Las tienopiridinas son una clase de compuestos que tienen un anillo aromático bicíclico. Se han divulgado diferentes tienopiridinas, incluidas en la Patente de EE. UU. 6.964.956, la Publicación de Patente de EE. UU. 2007/0219234, la Publicación de Patente Internacional WO 2017/076968, Saito, K.et al.,Bioorg Med Chem 2013, 21, 1628-42 y Saitoet al.,Bioorg Med Chem Lett 2019, 29, 1769-73. La Patente de EE. UU. 6.964.956 divulga varias tienopiridinas que inhiben el complejo de la cinasa IKB (IKK). Saito y la Publicación de Patente de EE. UU. 2007/021923 revelaron varias tienopiridinas que tienen una posible actividad anabólica ósea. Se demostró que el Compuesto comparativo 15w tiene la mayor actividad anabólica ósea en un ensayo basado en células (Saito, 2013). El análisis molecular Kinome también mostró que los Compuestos comparativos 15w (o DBA-7) y 15k (o DBA-6) eran inhibidores selectivos de la CDK8 y la CDK19 (documento WO 2017/076968). A pesar de que el Compuesto comparativo 15w muestra una alta actividad anabólica óseain vitro,el Compuesto comparativo 15w tuvo una farmacocinética (FC) deficiente con una Cmáx baja (Saito, 2013).

Ninguno de los inhibidores de las CDK8/19 ha demostrado aún eficacia clínica, que está determinada no sólo por la capacidad de un compuesto para inhibir las CDK8/19 sino también por sus actividades inespecíficas, lo que puede ser beneficioso para la terapia o puede causar efectos adversos, así como por la farmacocinética (FC) del compuesto.

Breve sumario de la invención

En el presente documento se divulgan compuestos de piridina bicíclicos para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto se selecciona entre:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de próstata, una leucemia, un cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de ovario, cáncer de páncreas o melanoma. En realizaciones particulares, el cáncer es un cáncer de próstata, tal como un cáncer de próstata resistente a la castración o un cáncer de próstata resistente a una terapia de privación de andrógenos. En otras realizaciones, el cáncer es una leucemia, tal como leucemia mieloide aguda. En otras realizaciones más, el cáncer es un cáncer de mama, tal como un cáncer de mama metastásico o un cáncer de mama triple negativo.

Breve descripción de los dibujos

Se describirán realizaciones no limitativas de la presente invención a modo de ejemplo con referencia a las figuras adjuntas, que son esquemáticas y no pretenden estar dibujadas a escala. En las figuras, cada componente idéntico o casi idéntico ilustrado se representa normalmente con un único número. Por razones de claridad, no todos los componentes están etiquetados en todas las figuras, tampoco se muestran todos los componentes de cada una de las realizaciones de la invención cuando la ilustración no sea necesaria para permitir que los expertos familiarizados con la materia comprendan la invención.

Las Figs. 1A muestran los efectos de diferentes concentraciones de en el ensayo indicador con NFkB en células indicadoras progenitoras y doblemente inactivadas para CDK8/19. La Fig. 1C compara los valores de la CI50 para diferentes tienopiridinas medidos en el ensayo indicador con NFkB en una estirpe celular indicadora derivada de la 293 progenitora con los valores de actividad basados en células medidos para los mismos compuestos por Saito (2013) en función de su efecto sobre la fosfatasa alcalina (ALPasa) en la estirpe de células estromales de médula ósea de ratón ST2.

Las Figuras 2A-2D muestran los perfiles farmacocinéticos y los parámetros calculados en ratones FVB hembras para el Compuesto comparativo 15k (Fig. 2A), el Compuesto comparativo 15v (Fig. 2B), 15u (Fig. 2C) y la Senexina B (Fig. 2D) administrados a ratones por vía intravenosa (i.v.) a 0,5 mg/kg de cada compuesto.

Las Figuras 3A-3E muestran las curvas farmacocinéticas y los parámetros calculados para el Compuesto comparativo 15k (Fig. 3A), el Compuesto comparativo 15v (Fig. 3B), 15u (Figura 3C), el Compuesto comparativo 15w (Fig. 3D) y la Senexina B (Fig. 3E), administrados a ratones por vía oral a 1 mg/kg de cada compuesto. Las Figuras 4A y 4B muestran las curvas farmacocinéticas y los parámetros calculados para una mezcla de 15u (Fig. 4A) y el Compuesto comparativo 15w (Fig. 4B), administrados a ratones CD1 hembras a 30 mg/kg de cada compuesto.

La Figura 5A muestra los perfiles farmacocinéticos de 15u_D6 deuterado y 15u no deuterado administrados a ratones CD-1 hembras a 30 mg/kg de cada compuesto. La Figura 5B muestra los perfiles farmacocinéticos del Compuesto comparativo 15w_D2 deuterado y del Compuesto comparativo 15w_D6 y del Compuesto comparativo 15w no deuterado administrados a ratones CD-1 hembras a 16 o 18 mg/kg de cada compuesto.

Las Figuras 6A-6C muestran los efectos de diferentes concentraciones de derivados de tienopiridina 15u (Fig. 6A) y del Compuesto comparativo 15w (Fig. 6B), así como de la Senexina B (Fig. 6C) sobre la expresión del PSA en el sobrenadante de cultivo celular de una estirpe celular C4-2 de CRPC.

Las Figuras 6D-6F muestran el efecto de una mezcla de 15u y el Compuesto comparativo 15w sobre el factor de cambio de la proteína sérica PSA (Fig. 6D) y la expresión del ARNm del PSA en muestras tumorales (Fig. 6E y Fig. 6F) en ratones NSG machos portadores de xenoinjertos de C4-2 después de 4 días de tratamiento con 30 mg/kg una vez al día de cada compuesto.

La Figura 7A muestra el efecto de 15u en el crecimiento del tumor del xenoinjerto de la estirpe celular 22rv1 de CRPC (estilo del valor de P: (*) 0,05-0,01; (**) 0,01-0,001; (***) <0,001).

La figura 7B muestra el peso de los tumores al final del mismo estudio.

La Figura 7C muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de control y los tratados con 15u en el mismo estudio.

La Figura 8A muestra el análisis de inmunotransferencia de la expresión de la proteína CDK8 en células TNBC 4T1 murinas y su derivado que expresa el ARNhc de la CDK8.

La Figura 8B muestra los pesos de los tumores primarios formados por las células 4T1 progenitoras y las que tienen la CDK8 inactivada.

La Figura 8C muestra la supervivencia de los ratones después de la eliminación de los tumores primarios formados por las células 4T1 progenitoras y las que tienen la CDK8 inactivada.

La Figura 8D muestra el volumen del tumor primario formado por las células 4T1 progenitoras en los grupos de ratones que se trataron posteriormente con vehículo o con 15u (25 mg/kg, dos veces al día).

La Figura 8E muestra la supervivencia de los ratones tratados con vehículo o con 15u (25 mg/kg, dos veces al día) después de la eliminación de los tumores primarios.

La Figura 8F muestra los pesos de los tumores primarios formados por las células 4T1 progenitoras en los grupos de ratones que se trataron posteriormente con vehículo o con Senexina B (50 mg/kg una vez al día 350 ppm de pienso medicado con SnxB).

La Figura 8G muestra la supervivencia de los ratones tratados con vehículo o con Senexina B (50 mg/kg una vez al día 350 ppm de pienso medicado con SnxB) después de la eliminación de los tumores primarios.

La Figura 9A examina el efecto de la combinación de Senexina B (SnxB) o 15u con enzalutamida (Enza) sobre el crecimiento de células MYC-CAP-CR en medios que contienen andrógenos. El panel superior muestra el efecto sobre el crecimiento celular en función de la concentración de Enza. El panel central muestra el efecto sobre el crecimiento celular en función de la concentración de SnxB. El panel inferior muestra el efecto sobre el crecimiento celular en función de la concentración de 15u.

La Figura 9B muestra los resultados de los ensayos clonogénicos que comparan los efectos del tratamiento con DMSO, Senexina B 1j M(SnxB), 15u 1j M,enzalutamida 5j M(Enza)), una combinación de Senexina B 1j My enzalutamida (Enza) 5j M,y una combinación de 15u 1j My enzalutamida (Enza) 5j M.

Las Figuras 9C y 9D comparan el volumen (Figura 9C) y el peso (Figura 9D) de los tumores MYC-CaP-CR que crecen subcutáneamente en ratones macho FVB intactos (sin castrar) durante el tratamiento con vehículo (veh), 15u, enzalutamida (Enza) o una combinación de 15u y enzalutamida (Comb).

La Figura 10A muestra el efecto de diferentes concentraciones de 15u y de Senexina B en el crecimiento de células MV4-11 que expresan luciferasa, como se detecta mediante imágenes de bioluminiscencia.

Las Figuras 10B-10D comparan el crecimiento del tumor en ratones a los que se les inyectaron con 2*10® células MV4-11 que expresan luciferasa después del tratamiento con vehículo por sonda gástrica, 30 mg/kg de 15u suspendido en vehículo por sonda gástrica dos veces al día y pienso medicado que contiene 1 g/kg de 15u. La Figura 10B muestra imágenes de bioluminiscenciain vivode ratones tratados. La Figura 10C muestra un gráfico lineal de la señal bioluminiscente como flujo total en fotones por segundo (p/s). La Figura 10D muestra una curva de supervivencia de los ratones tratados.

Las Figuras 11A-11C demuestran el efecto de 15u en el crecimientoin vivode xenoinjertos de cáncer de mama triple negativo (TNBC) MDA-MB-468. La Figura 11A es un gráfico que muestra la dinámica de los volúmenes tumorales en ratones de control y tratados con 15u. ***: p<0,02. La Figura 11B es un gráfico de barras que muestra los pesos tumorales finales después del tratamiento. La Figura 11C es un gráfico que muestra la dinámica de los pesos corporales de los ratones.

Las Figuras 12A y 12B muestran la dosis máxima tolerada (MTD) de 15u en ratones CD-1. La Figura 12A muestra la dinámica del peso corporal en ratones CD-1 machos y hembras tratados con una formulación de 15u en solución por sonda gástrica dos veces al día a diferentes dosis durante 2 semanas. La Figura 12B muestra la dinámica del peso corporal en ratones CD-1 machos y hembras tratados con 15u a través de una dieta medicada a diferentes dosis durante 4-5 semanas.

La Figura 13 muestra los modos de unión de 15u, el Compuesto comparativo 15w, el Compuesto comparativo 15w_APP, el Compuesto comparativo 15w_PP, el Compuesto comparativo 15w_CN con lac DK8superpuesta. Las Figuras 14A-14C confirman la síntesis de 15u_D6 mediante CLEM. La Figura 14A muestra un cromatógrafo UV de 15u_D6. La Figura 14B muestra un cromatógrafo ES TIC de 15u_D6. La Figura 14C muestra el ion original de 15u_D6 como una confirmación adicional de la síntesis de los compuestos.

Descripción detallada de la invención

En el presente documento se divulgan compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto se selecciona entre:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Las composiciones pueden inhibir selectivamente las cinasas CDK8 y CDK19 y, en algunos casos, también IOK2, CSNK1A1 y CSNK1E. La inhibición de cada una de estas cinasas es beneficiosa para el tratamiento de afecciones tales como el cáncer.

Los siguientes ejemplos demuestran la idoneidad de estos compuestos para la preparación de composiciones farmacéuticas basadas en la farmacocinética y para el tratamiento de sujetos que padecen cáncer. La administración intravenosa y oral de los compuestos divulgados en el presente documento da como resultado un AUC alta y un aclaramiento muy lento, lo que los hace adecuados para la preparación de composiciones farmacéuticas y para su uso en el tratamiento de cánceres. 15u, los compuestos deuterados 15u_D6 y el Compuesto comparativo 15w_D6, y el Compuesto comparativo 6304, muestran una farmacocinética sorprendentemente buena. 15u tiene un AUC alta y un aclaramiento muy lento, ya que la concentración sérica promedio de 15u en un punto temporal tardío (8 horas) fue del 64,4 % de la Cmáx (Ejemplo 3). El análogo deuterado 15u_D6 también tuvo un AUC alta, que es comparable o mejor que la de 15u (Ejemplos 4 y 12). El Compuesto comparativo 15w_D6 no solo tenía un mayor poder inhibidor que su homólogo no deuterado, el Compuesto comparativo 15w, sino que también tuvo un AUC superior (Ejemplos 4 y 12). Los compuestos divulgados en el presente documento también inhiben específicamente las cinasas CDK8 y CDK19. Por ejemplo, los compuestos 15u y 15u_D6 mostraron una alta especificidad por estas cinasas objetivo (Ejemplo 3).

Los compuestos divulgados en el presente documento muestran la capacidad de tratar o inhibir la progresión de diferentes cánceres. Por ejemplo, los compuestos divulgados en el presente documento han mostrado eficaciain vivocontra el cáncer de próstata, el cáncer de mama y la leucemia (Ejemplos 5 y -9).

Debido a que los compuestos divulgados en el presente documento poseen una farmacocinética favorable, la actividadin vivofrente a varios cánceres diferentes, junto con unos perfiles de kinoma favorables, los compuestos son inhibidores eficaces de las CDK8/19 para el tratamiento de cánceres relacionados con la actividad de las CDK8/19.

Compuestos de piridina bicíclicos

En el presente documento se divulgan compuestos de tienopiridina para su uso en el tratamiento del cáncer. El compuesto se selecciona entre:

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Como se demuestra en los siguientes ejemplos, algunos de los compuestos de piridina bicíclicos tienen una farmacocinética sorprendentemente buena. Por ejemplo, las tienopiridinas 15u y 15u_D6 muestran unas características farmacocinéticas adecuadas para la preparación de composiciones farmacéuticas y para su uso en el tratamiento de cánceres. Como se demuestra en los Ejemplos, la administración intravenosa y oral de estos compuestos da como resultado unas concentraciones elevadas de C0 y Cmáx, una eliminación lenta y grandes AUC en modelos de ratónin vivo.

Definiciones

Como se utiliza en el presente documento, se puede utilizar un asterisco "*" o un signo más "+" para designar el punto de unión de cualquier grupo radical o grupo sustituyente.

Los compuestos de la divulgación pueden contener uno o más centros quirales y/o dobles enlaces y, por lo tanto, existen como estereoisómeros, tales como isómeros geométricos, enantiómeros o diastereómeros. El término "estereoisómeros", cuando se utiliza en el presente documento, consiste en todos los isómeros geométricos, enantiómeros o diastereómeros. Estos compuestos pueden designarse mediante los símbolos "R" o "S", dependiendo de la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono estereogénico. La presente invención abarca diferentes estereoisómeros de estos compuestos y mezclas de los mismos. Los estereoisómeros incluyen enantiómeros y diastereómeros. Las mezclas de enantiómeros o de diastereómeros pueden designarse "(±)" en la nomenclatura, pero el experto reconocerá que una estructura puede indicar de manera implícita un centro quiral. Se entiende que las representaciones gráficas de estructuras químicas, por ejemplo, estructuras químicas genéricas, engloban todas las formas estereoisómeras de los compuestos especificados, salvo que se indique lo contrario. En el presente documento se contemplan composiciones que comprenden estereoisómeros, epímeros o enantiómeros sustancialmente purificados (por ejemplo, una composición que comprende al menos aproximadamente el 90 %, el 95 % o el 99 %. del estereoisómero, epímero o enantiómero puro).

Composiciones farmacéuticas

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento pueden formularse como composiciones farmacéuticas que incluyen: (a) una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos como se divulga en el presente documento; y (b) uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables. La composición farmacéutica puede incluir el compuesto en un intervalo de aproximadamente 0,1 a 2000 mg (preferentemente de aproximadamente 0,5 a 500 mg, y más preferentemente de aproximadamente 1 a 100 mg). La composición farmacéutica se puede administrar para proporcionar el compuesto a una dosis diaria de aproximadamente 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal (preferentemente de aproximadamente 0,5 a 20 mg/kg de peso corporal, más preferentemente de aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal). En algunas realizaciones, después de administrar la composición farmacéutica a un paciente (por ejemplo, después de aproximadamente 1,2, 3, 4, 5 o 6 horas después de la administración), la concentración del compuesto en el sitio de acción es de aproximadamente 1 nM a 100 pM.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento se pueden formular como una composición farmacéutica en una forma farmacéutica sólida, aunque se puede utilizar cualquier forma farmacéutica farmacéuticamente aceptable. Algunas formas farmacéuticas sólidas ilustrativas incluyen, pero sin limitación, comprimidos, cápsulas, sobres, pastillas para chupar, polvos, píldoras o gránulos, y la forma farmacéutica sólida puede ser, por ejemplo, una forma farmacéutica de fusión rápida, una forma farmacéutica de liberación controlada, una forma farmacéutica liofilizada, una forma farmacéutica de liberación retardada, una forma farmacéutica de liberación prolongada, una forma farmacéutica de liberación pulsátil, una forma farmacéutica mixta de liberación inmediata y de liberación controlada, o una combinación de las mismas.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento pueden formularse como una composición farmacéutica que incluye un portador. Por ejemplo, el portador se puede seleccionar del grupo que consiste en proteínas, hidratos de carbono, azúcar, talco, estearato de magnesio, celulosa, carbonato de calcio y pasta de almidón y gelatina.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento pueden formularse como una composición farmacéutica que incluye uno o más agentes aglutinantes, agentes de relleno, agentes lubricantes, agentes de suspensión, edulcorantes, agentes saborizantes, conservantes, tampones, agentes humectantes, disgregantes y agentes efervescentes. Los agentes de relleno pueden incluir lactosa monohidratada, lactosa anhidra y diferentes almidones; algunos ejemplos de agentes aglutinantes son diferentes celulosas y polivinilpirrolidona reticulada, celulosa microcristalina, tal como Avicel® PH101 y Avicel® PH102, celulosa microcristalina y celulosa microcristalina silicificada (ProSolv SMCC™). Los lubricantes adecuados, incluidos los agentes que actúan sobre la fluidez del polvo que se va a comprimir, pueden incluir dióxido de silicio coloidal, tal como Aerosil®200, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, estearato de calcio y gel de sílice. Algunos ejemplos de edulcorantes pueden incluir cualquier edulcorante natural o artificial, tales como sacarosa, xilitol, sacarina sódica, ciclamato, aspartamo y acesulfamo. Algunos ejemplos de agentes saborizantes son Magnasweet® (marca registrada de MAFCO), sabor a chicle, sabores de frutas y similares. Algunos ejemplos de conservantes pueden incluir sorbato de potasio, metilparabeno, propilparabeno, ácido benzoico y sus sales, otros ésteres del ácido parahidroxibenzoico tales como butilparabeno, alcoholes tales como alcohol etílico o bencílico, compuestos fenólicos tales como fenol o compuestos cuaternarios tales como cloruro de benzalconio.

Algunos diluyentes adecuados pueden incluir rellenos inertes farmacéuticamente aceptables, tales como celulosa microcristalina, lactosa, fosfato cálcico dibásico, sacáridos, y mezclas de cualquiera de los anteriores. Algunos ejemplos de diluyentes incluyen celulosa microcristalina, tal como Avicel® PH101 y Avicel® PH102; lactosa, tal como lactosa monohidratada, lactosa anhidra y Pharmatose® DCL21; fosfato de calcio dibásico tal como Emcompress®; manitol; almidón; sorbitol; sacarosa; y glucosa.

Algunos disgregantes adecuados incluyen polivinilpirrolidona ligeramente reticulada, almidón de maíz, almidón de patata, almidón de maíz y almidones modificados, croscarmelosa sódica, povidona reticulada, carboximetilalmidón sódico y mezclas de los mismos.

Algunos ejemplos de agentes efervescentes son parejas efervescentes tales como un ácido orgánico y un carbonato o bicarbonato. Algunos ácidos orgánicos adecuados incluyen, por ejemplo, los ácidos cítrico, tartárico, málico, fumárico, adípico, succínico, algínico, y anhídridos y sales de ácido. Algunos carbonatos y bicarbonatos adecuados incluyen, por ejemplo, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de potasio, bicarbonato de potasio, carbonato de magnesio, carbonato de glicina sódica, carbonato de L-lisina y carbonato de arginina. Alternativamente, puede estar presente únicamente el componente de bicarbonato de sodio del par efervescente.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento se pueden formular como una composición farmacéutica para su administración a través de cualquier vía adecuada. Por ejemplo, la composición farmacéutica se puede administrar por vía oral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, tópica y pulmonar. Algunos ejemplos de composiciones farmacéuticas para administración oral incluyen cápsulas, jarabes, concentrados, polvos y gránulos.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento se pueden administrar en formas farmacéuticas convencionales preparadas combinando el principio activo con portadores o diluyentes farmacéuticos convencionales de acuerdo con procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica. Estos procedimientos pueden implicar mezclar, granular y comprimir o disolver los ingredientes según sea apropiado para la preparación deseada.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos pueden estar adaptadas para su administración por cualquier vía apropiada, por ejemplo, por vía oral (incluida bucal o sublingual), rectal, nasal, tópica (incluida bucal, sublingual o transdérmica), vaginal o parenteral (incluida subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica). Dichas formulaciones pueden prepararse mediante cualquier método conocido en la técnica de farmacia, por ejemplo, poniendo en asociación el principio activo con el o los portadores o excipientes.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral pueden presentarse como unidades individuales, tales como cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones líquidas de agua en aceite.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración transdérmica pueden presentarse en forma de parches individuales destinados a permanecer en contacto íntimo con la epidermis del receptor durante un período prolongado. Por ejemplo, el principio activo puede ser administrado desde el parche por iontoforesis.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración tópica pueden formularse en forma de pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, apósitos impregnados, nebulizadores, aerosoles o aceites, y pueden contener aditivos convencionales apropiados, tales como conservantes, disolventes, para facilitar la penetración de los fármacos, y emolientes en pomadas y cremas.

Para aplicaciones en el ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, la boca y la piel, las composiciones farmacéuticas se aplican preferentemente como una pomada o una crema tópica. Cuando se formula en una pomada, el compuesto puede emplearse con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el compuesto se puede formular en una crema con una base de aceite en agua o con una base de agua en aceite. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración tópica ocular incluyen colirios, donde el principio activo está disuelto o suspendido en un portador adecuado, especialmente un disolvente acuoso.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar, pastillas y enjuagues bucales.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración rectal pueden presentarse en forma de supositorios o enemas.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración nasal donde el portador es un sólido incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula (por ejemplo, en el intervalo de 20 a 500 micrómetros) que se administra de la misma manera en que se toma el rapé (es decir, mediante inhalación rápida a través del conducto nasal desde un recipiente con el polvo colocado cerca de la nariz). Las formulaciones adecuadas donde el vehículo es un líquido, para su administración en forma de pulverización nasal o en forma de gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del principio activo.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación incluyen polvos finos o brumas de partículas finas que pueden generarse por medio de diferentes tipos de aerosoles presurizados dosificadores, nebulizadores o insufladores.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración vaginal pueden presentarse en forma de óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol.

Las composiciones farmacéuticas adaptadas para su administración parenteral incluyen soluciones acuosas y no acuosas estériles para inyección, que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hagan que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes de dosis unitarias o de múltiples dosis, por ejemplo ampollas y viales cerrados herméticamente, y se pueden almacenar en un estado criodesecado (liofilizado) que requiere solamente la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para preparaciones inyectables, inmediatamente antes de su uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones extemporáneas para inyección a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

Los comprimidos y las cápsulas para su administración oral pueden encontrarse en una forma de presentación de dosis unitaria y pueden contener excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricantes de compresión, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por ejemplo, almidón de patata; o agentes humectantes aceptables tales como laurilsulfato de sodio. Los comprimidos pueden recubrirse de acuerdo con métodos bien conocidos en la práctica farmacéutica normal. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires, o pueden presentarse como un producto seco para su reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales, tales como agentes de suspensión, por ejemplo, sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio y/o grasas hidrogenadas comestibles, agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitano o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos, tales como glicerina, propilenglicol o alcohol etílico; conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido sórbico, y, si se desea, agentes colorantes o saborizantes convencionales.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento pueden administrarse como composiciones farmacéuticas y, por lo tanto, las composiciones farmacéuticas que incorporan los compuestos se consideran realizaciones de las composiciones divulgadas en el presente documento. Dichas composiciones pueden adoptar cualquier forma física que sea farmacéuticamente aceptable; de manera ilustrativa, pueden ser composiciones farmacéuticas para su administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas contienen una cantidad eficaz de un compuesto divulgado, cuya cantidad eficaz está relacionada con la dosis diaria del compuesto que se va a administrar. Cada unidad de dosificación puede contener la dosis diaria de un compuesto dado, o cada unidad de dosificación puede contener una fracción de la dosis diaria, tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de la dosis. La cantidad de cada compuesto que debe contener cada unidad de dosificación puede depender, en parte, de la identidad del compuesto particular elegido para la terapia y de otros factores, tales como la indicación para la cual se administra. Las composiciones farmacéuticas divulgadas en el presente documento pueden formularse para proporcionar una liberación rápida, sostenida o retardada del principio activo después de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos.

Los compuestos para su uso en el tratamiento del cáncer del presente documento se pueden administrar como un compuesto único o como una combinación de compuestos. Por ejemplo, un compuesto que trata la actividad cancerosa puede administrarse como compuesto único o junto con otro compuesto que trata el cáncer o que tiene una actividad farmacológica diferente.

Como se ha indicado anteriormente, se contemplan las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos, y también pueden utilizarse en los métodos divulgados. La expresión "sal farmacéuticamente aceptable", como se utiliza en el presente documento, se refiere a sales de los compuestos que no son sustancialmente tóxicas para los organismos vivos. Las sales farmacéuticamente aceptables clásicas incluyen aquellas sales preparadas mediante la reacción de los compuestos como se ha divulgado en el presente documento con un ácido mineral u orgánico o una base orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptables. Dichas sales se conocen como sales de adición de ácido y sales de adición de base. El lector experto apreciará que la mayoría o todos los compuestos divulgados en el presente documento son capaces de formar sales, y que las formas salinas de los productos farmacéuticos se utilizan habitualmente, a menudo porque se cristalizan y purifican más fácilmente que los ácidos o las bases libres.

Algunos ácidos empleados habitualmente para formar sales de adición de ácido puede incluir ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos, tales como, p-toluensulfónico, ácido metansulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético y similares. Algunos ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables adecuadas pueden incluir sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfato, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, clorhidrato, diclorhidrato, isobutirato, caproato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butin-1,4-dioato, hexin-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, xilensulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, alfa-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metansulfonato, propansulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, mandelato y similares.

Algunas sales de adición de base incluyen aquellas derivadas de bases inorgánicas, tales como, por ejemplo, hidróxidos de amonio o de metales alcalinos o alcalinotérreos, carbonatos, bicarbonatos y similares. Algunas bases útiles para preparar dichas sales incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de amonio, carbonato de potasio, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, bicarbonato de potasio, hidróxido de calcio, carbonato de calcio y similares.

El contraión particular que forma parte de cualquier sal de un compuesto divulgado en el presente documento puede no ser crítico para la actividad del compuesto, siempre que la sal en su conjunto sea farmacológicamente aceptable y siempre que el contraión no aporte cualidades no deseables a la sal en su conjunto. Las cualidades no deseables pueden incluir una solubilidad o una toxicidad no deseables.

En las composiciones y métodos divulgados en el presente documento también se pueden emplear ésteres y amidas farmacéuticamente aceptables de los compuestos. Algunos ejemplos de ésteres adecuados incluyen ésteres de alquilo, de arilo y de aralquilo, tales como ésteres de metilo, ésteres de etilo, ésteres de propilo, ésteres de dodecilo, ésteres de bencilo y similares. Algunos ejemplos de amidas adecuadas incluyen amidas no sustituidas, amidas monosustituidas y amidas disustituidas, tales como metilamida, dimetilamida, metiletilamida y similares.

Además, los métodos divulgados en el presente documento pueden llevarse a la práctica utilizando formas solvatadas de los compuestos o sales, ésteres y/o amidas, de los mismos. Las formas solvatadas pueden incluir solvatos de etanol, hidratos, y similares.

Métodos de tratamiento

Las composiciones descritas son para su uso en el tratamiento del cáncer. Como se utiliza en el presente documento, los términos "tratando" o "tratar" significan aliviar los síntomas, eliminar la causa de los síntomas resultantes, ya sea de forma temporal o permanente, y/o prevenir o retardar la aparición o revertir la progresión o la gravedad de los síntomas resultantes de la enfermedad o el trastorno mencionado. Como tales, los métodos divulgados en el presente documento engloban tanto la administración terapéutica como la profiláctica.

Como se utiliza en el presente documento, un "sujeto" puede ser intercambiable con "paciente" o "individuo" y significa un animal, que puede ser un animal humano o no humano, que necesita tratamiento. Un "sujeto que necesita tratamiento" es un sujeto que tiene cáncer.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad o dosis del compuesto, tras la administración de dosis únicas o múltiples al sujeto, que proporciona el efecto deseado en el sujeto en diagnóstico o en tratamiento.

El médico tratante puede determinar fácilmente una cantidad eficaz, como experto en la materia, mediante el uso de técnicas conocidas y observando los resultados obtenidos en circunstancias análogas. Para determinar la cantidad o dosis eficaz del compuesto administrado, el médico tratante puede considerar varios factores, tales como: la especie del sujeto; su tamaño, la edad y la salud general; el grado de afectación o la gravedad de la enfermedad o el trastorno implicado; la respuesta del sujeto individual; el compuesto administrado particular; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; la posología seleccionada; el uso de medicación simultánea; y otras circunstancias relevantes.

Una dosis diaria típica puede contener de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg (tal como de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg y/o de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg) de cada compuesto utilizado en el presente método de tratamiento.

Las composiciones se pueden formular en una forma farmacéutica unitaria, conteniendo cada dosis de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg de cada compuesto individualmente o en una única forma farmacéutica unitaria, tal como de aproximadamente 5 a aproximadamente 300 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg y/o aproximadamente 25 mg. La expresión "forma farmacéutica unitaria" se refiere a una unidad físicamente individual adecuada como dosis unitaria para un paciente, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un portador, diluyente o excipiente farmacéutico adecuado.

En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de próstata, adecuadamente, un cáncer de próstata resistente a la castración o un cáncer de próstata resistente a una terapia de privación de andrógenos. Como se utiliza en el presente documento, el "cáncer de próstata resistente a la castración" o "CRPC" es un cáncer de próstata que sigue creciendo incluso cuando la cantidad de testosterona en el cuerpo se reduce a niveles muy bajos. Muchos cánceres de próstata en fase temprana necesitan unos niveles sustancialmente normales de testosterona para crecer, mientras que el CRPC no lo hace.

La terapia de privación de andrógenos (o terapia de supresión de andrógenos) es una terapia hormonal para el cáncer de próstata. La terapia de privación de andrógenos puede incluir un tratamiento para reducir los niveles de andrógenos, tal como una castración quirúrgica o química, o un tratamiento para inhibir la actividad promotora del cáncer de los andrógenos. La reducción de los niveles de andrógenos o la inhibición de la actividad de los andrógenos puede provocar una ralentización del crecimiento del tumor de próstata y, en algunos casos, la reducción del tumor. Algunos tratamientos adecuados para inhibir la actividad de los andrógenos que promueven el cáncer incluyen la administración de antiandrógenos, que pueden unirse a un receptor de andrógenos. Algunos antiandrógenos incluyen, sin limitación, acetato de ciproterona, acetato de megestrol, acetato de clormadinona, espironolactona, oxendolona, flutamida, bicalutamida, nilutamida, topilutamida, enzalutamida, abiraterona o apalutamida.

Los compuestos actualmente divulgados pueden ser para su uso para tratar a sujetos que no responden a la terapia de privación de andrógenos. Algunos cánceres de próstata, tales como el CRPC, pueden no responder o se volverse resistentes a la terapia de privación de andrógenos. Como se demuestra en los Ejemplos, 15u es eficaz para suprimir el crecimiento del tumor de próstata CRPC. Como resultado, 15u puede utilizarse para tratar a un sujeto que se haya sometido previamente a una terapia de privación de andrógenos o a aquellos sujetos que no responden a la terapia de privación de andrógenos.

Los compuestos actualmente divulgados también pueden ser para su uso para tratar sujetos que actualmente se encuentran en terapia de privación de andrógenos. Como se demuestra en los Ejemplos, 15u es eficaz para suprimir el crecimiento del tumor de próstata CRPC cuando se coadministra con un antiandrógeno. Como resultado, 15u puede ser para su uso para tratar a un sujeto que actualmente esté recibiendo una terapia de privación de andrógenos.

En algunas realizaciones, el cáncer es una leucemia, adecuadamente una leucemia mieloide aguda.

En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de mama, adecuadamente un cáncer de mama metastásico.

Métodos para inhibir la CDK8 o la CDK19

Las composiciones descritas son útiles para inhibir la CDK8 y/o la CDK19. Como se utiliza en el presente documento, "inhibir la CDK8" o "inhibir la CDK19" significa inhibir la actividad de la CDK8 o de la CDK18, respectivamente, mediante cualquier mecanismo adecuado, incluida la unión competitiva. El método para inhibir la CDK8 y/o la CDK19 puede comprender poner en contacto cualquiera de los compuestos o composiciones descritos en el presente documento con la CDK8 o la CDK19. El grado de inhibición se puede medir mediante los ensayos enseñados en los Ejemplos de esta memoria descriptiva, incluidas las condiciones de ensayo empleadas por los proveedores de servicios utilizados en el presente documento. Los resultados de estos ensayos se expresan habitualmente en el presente documento como un porcentaje del control (POC), siendo el control que no haya compuesto presente. Alternativamente, los resultados pueden expresarse como la CI50. En algunas realizaciones, el POC es menor del 35 %, convenientemente menor del 3o %, del 25 %, del 20 %, del 15 %, del 10 %, del 5 % o del 1 % para una cantidad eficaz de cualquiera de los compuestos de las composiciones descritas en el presente documento. En algunas realizaciones, la CI50 es menor de 2000 nM, 1500 nM, 1000 nM, 750 nM, 500 nM, 250 nM, 200 nM, 150 nM, 100 nM, 75 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM o 25 nM.

En algunas realizaciones, los compuestos y las composiciones divulgados en el presente documento inhiben específicamente la CDK8 o la CDK19. Como se utiliza en el presente documento, un compuesto o una composición que "inhibe específicamente la CDK8" o "inhibe específicamente la CDK19" es un compuesto o una composición que inhibe una o más de la CDK8 o la CDK19, respectivamente, en mayor medida que inhibe otras ciertas CDK. En algunas realizaciones, dichos compuestos inhiben además la CDK8 y/o la CDK19 en mayor medida que la CDK2, la CDK3, la CDK4, la CDK5, la CDK7, la CDK9, la CDK11A, la CDK11B, la CDK13, la CDK14, la CDK15, la CDK16, la CDK17, la CDK18, la CDKL1, la CDKL3 o la CDKL5. En realizaciones preferidas, dicha mayor medida es al menos 2 veces mayor, o al menos 3 veces mayor, que la CDK2, la CDK3, la CDK4, la CDK5, la CDK7, la CDK9, la CDK11A, la CDK11B, la CDK13, la CDK14, la CDK15, la CDK16, la CDK17, la CDK18, la CDKL1, la CDKL3 o la CDKL5.

Miscelánea

Salvo que el contexto especifique o indique lo contrario, los términos "un", "uno/a" y "el/la" significan "uno/a o más". Por ejemplo, "una molécula" debe interpretarse en el sentido de "una o más moléculas".

Como se utiliza en el presente documento, "alrededor de", "aproximadamente", "sustancialmente", y "significativamente" serán entendidos por los expertos en la materia y variarán en cierta medida en función del contexto en el que se usen. Si hay usos del término que no estén claros para los expertos en la materia dado el contexto en el que se usan, "alrededor de" y "aproximadamente" significarán más o menos <10% del término particular, y "sustancialmente" y "significativamente" significarán más o menos >10 % del término particular.

Como se utiliza en el presente documento, los términos "incluye/n" e "incluido/a" tienen el mismo significado que los términos "comprende/n" y "comprendido/a". Los términos "comprende/n" y "comprendido/a" deben interpretarse como términos de transición "abiertos" que permiten la inclusión de otros componentes además de aquellos componentes mencionados en las reivindicaciones. Los términos "consiste/n" y "que consiste/n en" deben interpretarse como términos de transición "cerrados" que no permiten la inclusión de otros componentes distintos de los componentes mencionados en las reivindicaciones. La expresión "que consiste/n fundamentalmente en" debe interpretarse como parcialmente cerrada y que únicamente permite la inclusión de otros componentes que no alteren fundamentalmente la naturaleza de la materia objeto reivindicada.

Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado salvo que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o de expresiones ilustrativas (por ejemplo, "tal como") proporcionados en el presente documento, tiene como única finalidad aclarar mejor la invención y, salvo que se reivindique lo contrario, no supone una limitación del alcance de la invención. Ninguna expresión de la memoria descriptiva debe interpretarse como una indicación de que algún elemento no reivindicado sea esencial para la práctica de la invención.

Los aspectos preferidos de esta invención se describen en el presente documento, incluido el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la invención. Las variaciones de estos aspectos preferidos pueden resultar evidentes para los expertos en la materia tras la lectura de la descripción anterior. Los inventores esperan que una persona experta habitual en la materia emplee dichas variaciones según sea apropiado. La invención es como se define en las reivindicaciones.

Ejemplos

Ejemplo 1. Los derivados de tienopiridina inhiben la actividad de las CDK8/19 en un ensayo basado en células.

Ensayo de actividad del NFkB.Utilizamos un ensayo basado en células para medir la inhibición de la actividad de las CDK8/19 por parte de derivados de tienopiridina. Este ensayo, basado en el papel de las CDK8/19 en la transcripción impulsada por el NFkB (Liet al.,Characterizing CDK8/19 Inhibitors through a NFKB-Dependent Cell-Based Assay, Cells 2019, 8 (10), 1208), mide los efectos de las CDK8/19 en la expresión del indicador de luciferasa de luciérnaga a partir de un promotor dependiente del NF<k>B en células 293. Se introdujo el vector lentivírico pHAGE-NFKB-TA-LUC-UBC-dTomato-W (Addgene n.° 49335) en células 293 y se estableció una estirpe celular clónica que mostraba la inducción más fuerte de la expresión de la luciferasa tras el tratamiento con TNFa, y se utilizó como estirpe celular indicadora. Como control de la dependencia de las CDK8/19 de la inhibición por parte del NF<k>B, también hemos introducido la mismo construcción indicadora en células 293 con una inactivación mediante CRISPR/CAS9 de la CDK8 y la CDK19.

Resultados de la actividad del NFkB.Las Figs. 1A y 1B muestran los efectos de diferentes concentraciones de 15u y del Compuesto comparativo 15w sobre la actividad indicadora del NFkB en células 293 progenitoras y en células indicadoras deficientes en CDK8/19 (doble inactivación). Si bien estos compuestos inhibieron la inducción del indicador a valores de CI50 de 10 y 4 nM, respectivamente, no tuvieron ningún efecto sobre la activación del NFkB en las células deficientes en CDK8/19, demostrando que los efectos inhibidores de ambos compuestos dependen de la presencia de las CDK8/19 y no de otros determinantes de la actividad del NF<k>B, tal como IKK.

La Fig. 1C y la Tabla 1 comparan los valores de la CI50 para diferentes tienopiridinas medidas en el ensayo indicador con NF<k>B en la estirpe celular indicadora derivada de la 293 progenitora con los valores de actividad basados en células medidos para los mismos compuestos por Saito (2013) en función de su efecto sobre la fosfatasa alcalina (ALPasa), un indicador de diferenciación a osteoblastos en la estirpe de células estromales de médula ósea de ratón ST2. Los últimos efectos se expresan como la CE200, una concentración que mejora la actividad ALPasa al 200 % del control. Los valores de la CI50 en el ensayo del NFkB con CDK8/19 están fuertemente correlacionados con los valores de la CE200 de la ALPasa (Fig. 1B), lo que indica que el efecto de la ALPasa probablemente esté mediado por la inhibición de las CDK8/19.

Tabla 1: com aración de la actividad de la ALP el NFkB

Ejemplo 2. Análisis molecular Kinome de derivados de tienopiridina.

La Tabla 2 muestra el análisis molecular Kinome de 15u_D6 y 15u medido a través del ensayo de unión competitiva dirigida al sitio KINOMEscan™ a una concentración de 2000 nM. Los compuestos que se unen al sitio activo de la cinasa y evitan directa (estéricamente) o indirectamente (alostéricamente) la unión de la cinasa al ligando inmovilizado reducirán la cantidad de cinasa capturada en el soporte sólido. Por el contrario, las moléculas de ensayo que no se unen a la cinasa no tienen ningún efecto sobre la cantidad de cinasa capturada en el soporte sólido. Las "coincidencias" de detección se identifican midiendo la cantidad de cinasa capturada en las muestras de ensayo frente a las de control mediante un método de qPCR de análisis cuantitativo, preciso y ultrasensible que detecta la etiqueta de ADN asociada. De manera similar, las constantes de disociación (Kd) para las interacciones del compuesto de ensayo con la cinasa se calculan midiendo la cantidad de cinasa capturada en el soporte sólido en función de la concentración del compuesto de ensayo. Una descripción detallada de la tecnología del ensayo se puede encontrar en Fabian, M.A.et al.A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors. Nat. Biotechnol. 23, 329-336 (2005).

Control porcentual (%del control).Los compuestos se cribaron a una concentración de 10 nM, y los resultados de las interacciones de unión del cribado primario se notifican como "% del control" o "POC", donde los números más bajos indican coincidencias más fuertes en la matriz. El % del control se define como (ecuación 1):

% del control = 100 x (TS - CPOS) / (CNEG - CPOS) (ecuación 1)

donde TS es la señal del compuesto de ensayo, CPOS es la señal de control positiva (0%del control), CNEG es el control negativo DMSO (100 % del control).

Resultados.En la Tabla 2 se comparan los resultados del análisis molecular Kinome entre 15u y 15u_D6. Tanto 15u como 15u_D6 son muy selectivos para la CDK8 y la CDK19. Aunque 15u_D6 mostró una inhibición algo mayor para la mayoría de las cinasas inespecíficas, el efecto de 15u_D6 sobre la CDK8 y la CDK19 fue mucho mayor que el efecto de 15u. Los % del control de 15u para la CDK8 y la CDK19 son de 2,6 y 13, respectivamente. Los % del control de 15u_D6 para la CDK8 y la CDK19 son de 0,25 y 0, respectivamente. Por lo tanto, la diferencia estructural entre 15u y 15u_D6 da como resultado una diferencia importante en la selectividad hacia el objetivo.

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

Los efectos sobre todas las cinasas que mostraron >65%de inhibición por parte de 15u 2000 nM en este cribado (CDK8, CDK19, RIOK2, CSNK1A1, CSNK1E, SCNK1D, HASPIN, GSK3A) se investigaron a continuación más a fondo midiendo los valores de la Kd de 15u en el ensayo DiscoverX. Los ensayos de la Kd se realizaron por duplicado, y los resultados se presentan en la Tabla 3. Esta tabla también muestra los resultados de la determinación de la Kd para el Compuesto comparativo 15w frente a CDK8, CDK19 y RIOK2.

Tabla 3. Valores de la Kd para 15u y el Compuesto comparativo 15w en ensayos de unión Elect de la Kd con cinasas susce tibles.

continuación

De manera notable, los valores de la Kd de CDK8 y CDK19 para 15u y el Compuesto comparativo 15w son casi un orden de magnitud superiores que sus valores de la CI50 para la inhibición de las CDK8/19 en un ensayo basado en células (Figs. 1A y 1B), lo que indica que la competición por la unión del análogo de ATP no refleja completamente la actividad inhibidora de estos compuestos. Las otras cinasas principales inhibidas por 15u con unos valores de la Kd menos de 4 veces superiores que para la CDK8 son RIOK2 (también fuertemente inhibida por el Compuesto Comparativo 15w). CSNK1A1 y CSNK1E no se ensayaron frente al Compuesto comparativo 15w.

Cabe destacar que la evidencia notificada sugiere que la inhibición de estas tres cinasas puede ser beneficiosa en lugar de perjudicial para el tratamiento del cáncer. Por lo tanto, se identificó RIOK2, una cinasa atípica que regula la biogénesis ribosómica, como el objetivo de un compuesto que inhibe selectivamente el crecimiento de estirpes celulares de cáncer de próstata que portan una fusión de genes oncogénicos que activa el gen ERG en muchos cánceres de próstata. El mismo compuesto de unión a la RIOK2 tuvo solo un efecto mínimo en las células endoteliales o de próstata normales o en las estirpes de células tumorales negativas para el ERG(Mohamed, AAet al.,Cancer Res. 1 de julio de 2018; 78 (13): 3659-3671. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-17-2949). Se ha implicado la CSNK1A1 como un factor oncogénico en una variedad de leucemias y tumores sólidos (Mannis, S.et al.J Hematol Oncol. 2 de octubre de 2017; 10 (1): 157. doi: 10.1186/s13045-017-0529-5; Richter, J.et al.,BMC Cancer. 6 de febrero de 2018; 18 (1): 140. doi: 10.1186/s12885-018-4019-0) y los inhibidores de la CSNK1A1 sinergizados con agentes lisosomotrópicos para inhibir el crecimiento y promover la muerte de células tumorales en cánceres impulsados por KRAS (Cheong, J.K.et al.,J Clin Invest. abril de 2015; 125 (4): 1401-18. doi: 10.1172/JCI78018). Se notificó que la inhibición de la CSNK1E tiene actividad antiproliferativa selectiva en varios tipos de células tumorales (Yang, WS,et al.,Genome Biol. 2008; 9 (6): R92. doi: 10.1186/gb-2008-9-6-r92; Kim, S.Y.et al.,PLoS One. 1 de febrero de 2010; 5 (2): e8979. doi: 10.1371/journal.pone.0008979; Toyoshima, M.,et al.,Proc Natl Acad Sci USA. 12 de junio de 2012; 109 (24): 9545-50. doi: 10.1073/pnas.1121119109; Varghese, R.T.,et al.,Sci Rep. 11 de septiembre de 2018; 8 (1): 13621. doi: 10.1038/s41598-018-31864-x.) Por lo tanto, 15u tiene actividades inesperadas para la terapia del cáncer además de la inhibición de las CDK8/19.

Ejemplo 3. Farmacocinética de los derivados de tienopiridina.

Ensayo de la farmacocinética (FC).Para medir la farmacocinética (FC) en el ratón, los derivados de tienopiridina se disolvieron en dextrosa al 5 % y se administraron a ratones FVB hembras en diferentes condiciones posológicas; se recogieron muestras de sangre en diferentes momentos y se midieron las concentraciones del compuesto en el suero mediante CL/EM/EM.

Resultados de la farmacocinética.Las Figuras 2A-2D y la Tabla 4 muestran las curvas farmacocinéticas y los parámetros calculados para el Compuesto comparativo 15k, El Compuesto comparativo 15v, y 15u, que se mezclaron y se administraron a ratones por vía intravenosa (i.v.) a 0,5 mg/kg de cada compuesto. En este ensayo, el compuesto 15u mostró la mayor, y el Compuesto comparativo 15k la menor, disponibilidad i.v., como indican los valores del área bajo la curva (AUC) y el semitiempo de eliminación (t-io).

Tabla 4: Comparación de la farmacocinética del Compuesto comparativo 15k, el Compuesto comparativo 15v 15u administrados or vía intravenosa

Las Figs. 3A-3C y la Tabla 5 muestran las curvas farmacocinéticas y los parámetros calculados para la misma mezcla del Compuesto comparativo 15k, El Compuesto comparativo 15v, y 15u, administrados por vía oral (por sonda gástrica) a 1 mg/kg de cada compuesto. En un estudio individual que se muestra en la Fig. 3D, el Compuesto comparativo 15w también se administró por vía oral a 1 mg/kg. En estos ensayos, 15u mostró con diferencia la mayor disponibilidad (valor del AUC), seguido del Compuesto comparativo 15w, el Compuesto comparativo 15v y el Compuesto comparativo 15k. La SnxB mostró un AUC similar a la del Compuesto comparativo 15w (Fig. 3E).

Tabla 5. Comparación de la farmacocinética del Compuesto comparativo 15k, el Compuesto comparativo ________________ 15v, 15u y el Compuesto comparativo 15w, administrados por vía oral________________

Compuesto comparativo Compuesto comparativo Compuesto comparativo 15k15v15u

15w

Cmáx (ng/ml) 6,7 7,2 35,1 35,0

t* (h) 0,3 1,2 1,3 0,3

AUC (ng*h/ml 7,6 21,8 79,3 29,2 Biodisponibilidad (% de 9 % 18 % 43 %

F)___________________

La farmacocinética oral también se determinó con dosis más altas, aproximando las dosis terapéuticas esperadas, para una mezcla de los dos compuestos más activos, el Compuesto comparativo 15w y 15u, administrados a ratones CD1 hembras a 30 mg/kg de cada compuesto en carboximetilcelulosa al 0,5 %. Los resultados que se muestran en las Figs. 4A y 4B demuestran que 15u (pero no el Compuesto comparativo 15w) muestra una farmacocinética excelente, con un AUC alta (6,9 veces mayor que el AUC del Compuesto comparativo 15w) y un aclaramiento muy lento, ya que la concentración sérica promedio de 15u en el último punto temporal (8 horas) era del 64,4 % de la Cmáx (frente al 11,5 % para el Compuesto comparativo 15w).

Este análisis farmacocinético demostró que 15u, el único de los derivados de tienopiridina ensayados, presentaba unas propiedades farmacocinéticas muy atractivas, con biodisponibilidad y estabilidad muy altas después de la administración oral.

Ejemplo 4. Perfil farmacocinético de los derivados deuterados de 15u y del Compuesto comparativo 15w

Para determinar las farmacocinéticas de los derivados deuterados de 15u y del Compuesto comparativo 15w, se trataron ratones CD-1 hembras de ocho a doce semanas de edad con 15u o 15u-D6 a 30 mg/kg o con el Compuesto Comparativo 15w, el Compuesto comparativo 15w-D2, el Compuesto comparativo 15w-D6 a 16 o 18 mg/kg por sonda gástrica oral en solución. Se recogieron muestras de sangre (70~100|jl) en tubos de recolección de sangre BD Microtainer para la separación del suero en diferentes momentos (1, 2, 6, 8 horas después de la administración) con tubos capilares de microhematocrito heparinizados a partir de las venas retroorbitales de animales anestesiados. Las muestras de suero se procesaron para CL/EM/EM para determinar la concentración de fármaco utilizando MRM específicos del compuesto (15u: 439-394; 15u-D6: 445-394; Compuesto comparativo 15w: 453-436; Compuesto comparativo 15w-D2: 455-438; Compuesto comparativo 15w-D6: 459-442). Las concentraciones de fármaco se representaron gráficamente en función de los puntos temporales para generar curvas farmacocinéticas con el programa informático GraphPad, y las AUC (área bajo la curva) de las primeras ocho horas posteriores a la administración se calcularon con el programa informático Excel para comparar los perfiles farmacocinéticos de los compuestos deuterados y no deuterados. Estos dos estudios farmacocinéticos indican que la sustitución de los hidrógenos del grupo dimetilamina por deuterio (los derivados D6) mejoró ligeramente la farmacocinética de 15u (Figura 5A) y mejoró mucho la farmacocinética del Compuesto comparativo 15w (Figura 5B). A diferencia de D6, el derivado D2 no mejoró la farmacocinética del Compuesto comparativo 15w (Figura 5B).

Ejemplo 5. Efectos in vivo de 15U en el cáncer de próstata resistente a la castración.

La inhibición de las CDK8/19 disminuye la expresión de ciertos genes inducibles por el receptor de andrógenos (AR), incluidos el PSA, el marcador más común del cáncer de próstata, y el crecimiento de los cánceres de próstata resistentes a la castración (CRPC). Las Figs. 6A-6C muestran los efectos de diferentes concentraciones de tres inhibidores de las CDK8/19, los derivados de tienopiridina 15u y el Compuesto comparativo 15w, y la Senexina B, sobre la expresión del PSA en el sobrenadante del cultivo celular de una estirpe celular C4-2 de CRPC después de un tratamiento de 4 días en medio normal suplementado con FBS. Los 3 inhibidores suprimieron la expresión del PSA, con unos valores de la CI50 de 27,6 nM para 15u, 15,7 nM para el Compuesto comparativo 15w y 255 nM para la Senexina B.

Se analizó el efectoin vivode una mezcla de 15u y el Compuesto Comparativo 15w (la misma mezcla utilizada para los estudios farmacocinéticos del Ejemplo 3) sobre la expresión del PSA mediante células C4-2 después del tratamiento de ratones NSG machos portadores de xenoinjertos de C4-2 (agrupados según el nivel inicial de PSA sérico) durante 4 días a 30 mg/kg administrados por vía oral diariamente durante 4 días. Tanto los niveles de la proteína PSA en suero como los niveles del ARNm de PSA en el tumor disminuyeron fuertemente mediante el tratamiento con la mezcla de 15u y el Compuesto comparativo 15w (Figs. 6D-6F). Dada la farmacocinética drásticamente diferente de 15u y del Compuesto comparativo 15w (Ejemplo 3), parece probable que el efecto sobre el PSA estuviera mediado por 15u.

En otro estudioin vivo,se cultivó la estirpe celular 22rv1 de CRPC como un xenoinjerto en ratones atímicos machos castrados. Cuando los tumores alcanzaron un tamaño promedio de 150-200 mm3, los ratones se distribuyeron aleatoriamente en dos grupos (n = 13) y se trataron con vehículo de control (carboximetilcelulosa al 0,5 %) o con 50 mg/kg 15u, administrados diariamente por vía oral. Como se muestra en la Fig. 7A, el tratamiento con 15u suprimió fuertemente el crecimiento del tumor, como también demuestra el peso de los tumores al final del estudio (Fig. 7B). De manera notable, el tratamiento con 15u no mostró efectos adversos evidentes ni una disminución del peso corporal del ratón (Fig. 7C).

Ejemplo 6. Efectos de 15u sobre la metástasis del cáncer de mama.

La 4T1 es una estirpe celular murina de cáncer de mama triple negativo (TNBC), que es muy metastásico en los pulmones. El efecto de la CDK8 sobre la metástasis pulmonar en este modelo se demostró en el estudio que se muestra en las Figs. 8A-8C. Se utilizó ARNhc dirigido a la CDK8 para inactivar casi por completo la expresión de la CDK8 en células 4T1 (Fig. 8A; estas células no expresan proteína CDK19 detectable). Se inyectaron células 4T1 progenitoras e inactivadas para la CDK8 (n = 10) de forma ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria, y los tumores primarios se extirparon 17 días después. Después de la cirugía, todos los ratones murieron finalmente con metástasis pulmonares. Los pesos de los tumores primarios no mostraron un efecto significativo de la inactivación de la CDK8 sobre el crecimiento del tumor (Fig. 8B). Sin embargo, la pérdida de la CDK8 se asoció a un fuerte aumento de la supervivencia de los ratones (Fig. 8C).

En un estudio similar, tras la extirpación del tumor primario, los ratones se separaron en tres grupos (Fig. 8D, n = 8), que a continuación se trataron con vehículo (dextrosa al 5 %) o 15u (25 mg/kg, en carboximetilcelulosa al 5 %, oral, dos veces al día). 15u aumentó significativamente la supervivencia de los ratones con enfermedad metastásica (Fig. 8E), con un efecto similar al de la eliminación de la CDK8 (Fig. 8C).

En otro estudio con este modelo, se eliminaron los tumores formados por las células 4T1 progenitoras y los ratones se distribuyeron aleatoriamente en dos grupos (Fig. 8F, n = 8), se trataron con Senexina B (administrada en comida medicada (350 ppm) junto con una dosis oral de 50 mg/kg, como se describe en (Liang, 2018)) o recibiendo comida de control y vehículo. El tratamiento con Senexina B proporcionó un aumento estadísticamente significativo pero moderado en la supervivencia (Fig. 8G).

En resumen, la farmacocinética favorable de 15u (Ejemplo 3) y sus actividadesin vivo(Ejemplos 4,5), junto con su perfil de kinoma favorable (Ejemplo 2) indican que 15u es un inhibidor eficaz de las CDK8/19 y una composición para su uso en el tratamiento de cánceres relacionados con la actividad de las CDK8/19.

Ejemplo 7. Efectos in vivo del tratamiento combinado con 15U y enzalutamida en el cáncer de próstata resistente a la castración

Se analizaron los efectos combinatorios de 15u y el antiandrógeno enzalutamida en el CRPC en un modelo murino de MYC-Cap-CR. Las células MYC-CaP-CR (Ellis L.et al.,2012. Prostate 72 (6): 587-591) se seleccionaron para la resistencia a la castración a partir de células MYC-CaP genomodificadas que expresan el MYC a partir de un promotor sensible al AR (Watson PA,et al.,2005. Cancer Res 65 (24): 11565-11571). La resistencia a la castración en estas células está asociada con la sobreexpresión del AR completo en lugar de una variante del AR, tal como AR-V7 en 22rv1 (Olson BM,et al.,2017. Cancer immunology research 5 (12): 1074-1085). En un ensayo de proliferación celular a corto plazo, los inhibidores de las CDK8/19, Senexina B y 15u, mostraron poco efecto sobre el crecimiento de las células MYC-CAP-CR en medios que contenían andrógenos, mientras que la enzalutamida, paradójicamente, estimuló el crecimiento de estas células (Figura 9A). Sin embargo, cuando se combinó enzalutamida con un inhibidor de las CDK8/19, el crecimiento de células MYC-CAP-CR se inhibió fuertemente (Figura 9A), lo que indica que la inhibición de las CDK8/19 puede superar la resistencia a la enzalutamida. En un ensayo clonogénico a largo plazo, tanto los inhibidores de la enzalutamida como los de las CDK8/19 disminuyeron la formación de colonias de MYC-CaP-CR, y su combinación produjo un efecto aparentemente sinérgico (Figura 9B). Se ensayaron los efectosin vivode 15u junto con enzalutamida en tumores de MYC-CaP-CR que crecían subcutáneamente en ratones machos FVB intactos (sin castrar). Tanto la enzalutamida como 15u por sí solos tuvieron un efecto modesto sobre el volumen (Figura 9C) y el peso (Figura 9D) tumorales cuando se usaron solos, pero su combinación produjo una supresión tumoral significativa (p = 0,02).

Estos resultados sugieren que 15u se puede combinar ventajosamente con enzalutamida (u otros antiandrógenos) en el tratamiento del CRPC. La actividad más fuertein vivoen el CRPC se observó con 15u como agente único en células 22rv1 que expresaban el AR-V7, lo que sugiere que los cánceres de próstata que expresan el AR-V7, y posiblemente otras variantes del AR independientes de los andrógenos, pueden ser especialmente susceptibles a la inhibición de las CDK8/19in vivo.

Ejemplo 8. Efectos antileucémicos de los derivados de tienopiridina

Se investigaron las propiedades antileucémicas de 15u en una estirpe celular de leucemia mieloide aguda (LMA), la MV4-11, que previamente se ha demostrado que es sensible a la inhibición de las CDK8/19in vitroein vivo(Pelish HE,et al.,2015. Nature 526 (7572): 273-276). La población de células MV4-11 utilizada para los estudiosin vivose creó para que expresara luciferasa y ZsGreen mediante infección lenvírica con pHIV-Luc-ZsGreen, para permitir el análisis del crecimiento de la leucemia mediante imágenes de bioluminiscencia (BLI). La población inicial de células transducidas con luciferasa-ZsGreen se clasificó según la positividad de ZsGreen mediante una clasificación de células activada por fluorescencia. Se ensayó la sensibilidad de esta población de células MV4-11 a 15u. 15u inhibió fuertemente la proliferación de MV4-11 y se consideró antiproliferativo con un valor de la CI50 de 25 nM (Figura 10A).

Protocolo del ensayo.Para los estudiosin vivo,a ratones NSG hembras de 7 semanas de edad (Jackson Laboratories) se les inyectaron 2 * 106 células MV4-11 que expresan luciferasa en la vena de la cola. Después del prendimiento del injerto, se obtuvieron las BLI de los ratones inoculados 5 días después de la inoculación celular. Después de obtener las BLI, los ratones se clasificaron en dos cohortes iguales de 10 ratones y una cohorte de 5 ratones. La detección de las BLI se realizó con un equipo de la serie IVIS Lumina II para imágenes in vivo con lente XFOV opcional y el programa informático Living Image. La configuración del IVIS para clasificar los ratones en cohortes se estableció para una alta sensibilidad: Bin 8, F1.2, 180 s. Las exposiciones posteriores (semanas 1 a 5) se configuraron para una mayor resolución: Bin 4, F1.2, 120 s.

El tratamiento se inició el día 6 después de la inoculación celular y continuó durante 23 días. Diez ratones recibieron únicamente vehículo (carboximetilcelulosa al 5 %) por sonda gástrica (200 jl). Diez ratones recibieron 30 mg/kg de 15u suspendidos en el vehículo dos veces al día por sonda gástrica (200 jl). Se trataron 5 ratones con comida medicada (pienso) que contenía 15u a 1 g/kg en una dieta Teklad individualizada preparada por Envigo (Madison, WI). Esta dieta coincide con la dieta utilizada para la alimentación normal de ratones, con excepción del colorante añadido y de 15u. Los ratones xenoinjertados con MV4-11 de control (vehículo) desarrollaron una vigorosa población tumoral detectada mediante las BLI (Figura 10B-10C). El grupo de tratamiento con 15u por sonda gástrica muestra una respuesta notable, con una inhibición del crecimiento de la leucemia del 94 %, p = 0,001. El grupo de tratamiento con 15u mediante el pienso muestra una supresión de la leucemia aún más notable, con una inhibición del crecimiento de la leucemia del 99,7 %, p = 0,002. Se controló la supervivencia de los ratones después del tratamiento.

Resultados.Como se muestra en la Figura 10D, los ratones tratados con 15u por sonda gástrica oral mostraron unas tasas de supervivencia superiores.

Ejemplo 9. Efecto de 15u sobre el crecimiento in vivo de xenoinjertos de MDA-MB-468 de cáncer de mama triple negativo (TNBC)

Se descubrió que las células MDA-MB-468 de cáncer de mama triple negativo (TNBC) humano respondían a 15u y a otros inhibidores de las CDK8/19 tras un tratamiento a largo plazoin vitro.Para evaluar el efecto de la inhibición de las CDK8/19 en xenoinjertos de MDA-MB-468 con crecimientoin vivo,se inyectaron 1 millón de células con Matrigel al 40 % (volumen total de 100 ml) por vía s.c. en los costados derechos de ratones hembras NSG inmunodeficientes (9 semanas de edad). 11 días después de la inoculación, los ratones se distribuyeron aleatoriamente según el tamaño tumoral en dos grupos (n = 9), con un volumen tumoral medio de 115 mm3 en cada grupo. Los ratones del primer grupo (control) recibieron una dieta normal, y los ratones del segundo grupo (tratamiento) recibieron una dieta medicada que contenía 250 ppm de 15u. 13 días después del inicio del tratamiento, la dieta medicada se complementó con una sonda gástrica oral diaria que proporcionaba una solución con 5 mg/kg de 15u en el grupo de tratamiento o solo con vehículo (grupo de control). 37 días después del inicio del tratamiento, la dosis administrada por sonda gástrica en el grupo de tratamiento se aumentó hasta 8 mg/kg; el tratamiento continuó durante un total de 66 días. Los volúmenes tumorales se midieron con calibradores dos veces por semana (Fig. 11A), mostrando una reducción significativa del volumen tumoral en el grupo de tratamiento con 15u. Al final del estudio, los ratones fueron sacrificados y los tumores disecados y pesados; los pesos de los tumores fueron significativamente menores en el grupo de tratamiento con 15u (Fig. 11B). Los pesos corporales de los ratones (Fig. 11C) no mostraron efectos perjudiciales por el tratamiento con 15u a largo plazo.

Ejemplo 10. Determinación de la dosis máxima tolerada (MTD) de 15u en ratones CD-1

Para determinar la dosis máxima tolerada (MTD), se asignaron aleatoriamente ratones CD-1 machos o hembras de 8 semanas de edad a diferentes grupos de dosis, y se trataron con 15u en dosis crecientes a través de sonda gástrica oral en solución o en comida medicada. En un estudio de la MTDin vivo,los ratones CD-1 hembras se trataron con sonda gástrica dos veces al día administrando 5, 10, 15, 30, 60 o 120 mg/kg de 15u, y los ratones CD-1 machos se trataron con sonda gástrica dos veces al día administrando 60 o 120 mg/kg durante 14 días. No se observaron efectos perjudiciales en los ratones machos de ninguno de los grupos tratados (60 y 120 mg/kg dos veces al día) ni en ratones hembras de los grupos tratados con 15u con unas dosis de hasta 60 mg/kg dos veces al día. (Figura 12A). La dosis más alta (120 mg/kg dos veces al día) provocó una pérdida de peso corporal de aproximadamente el 10 % en ratones hembras después de 7-10 días de tratamiento, pero no se observó ningún deterioro adicional durante el resto del período de tratamiento (Figura 12A).

En otro ensayo de la MTD a largo plazoin vivo,se alimentaron grupos de ratones CD-1 machos y hembras con una dieta normal (control) o una dieta medicada con 15u (500 ppm o 1000 ppm) durante 4 o 5 semanas (Figura 12B). Se estimó que las dosis diarias de los grupos con 500 ppm y 1000 ppm eran de aproximadamente 50-100 mg/kg y 100 200 mg/kg, respectivamente, tomando como base el consumo dietético diario. Únicamente la dosis más alta (1000 ppm) provocó una pérdida de peso significativa (5-10 %) en los ratones hembras durante la primera semana, mientras que no se observaron otros efectos perjudiciales durante el resto del período de tratamiento.

Considerando que los efectos terapéuticos máximos se pueden lograr con una dosis diaria de 30 mg/kg en varios modelos de xenoinjerto de ratón, estos dos ensayos de la MTD sugirieron un alto índice terapéutico para 15u.

Ejemplo 11. Modelado in silico de la unión de tienopiridina y pirrolopiridina a la CDK8

Se generó un modelo de acoplamiento para los compuestos 15u, el Compuesto comparativo 15w, el Compuesto comparativo 15w_APP, el Compuesto comparativo 15w_PP y el Compuesto comparativo 15u_CN que se unen a la CDK8 utilizando el acoplamiento de ajuste inducido por Schrodinger. El protocolo de ajuste inducido acopla un ligando activo con Glide y a continuación genera un conjunto diverso de orientaciones del ligando, el procedimiento utiliza radios de van der Waals reducidos y un valor de corte de Coulomb-vdW aumentado, para eliminar temporalmente las cadenas laterales muy flexibles durante la etapa de acoplamiento. Para cada orientación, se utiliza a continuación una predicción de la estructura principal para acomodar el ligando reorientando las cadenas laterales cercanas. Estos restos y el ligando se minimizan a continuación. Finalmente, cada ligando se vuelve a acoplar a sus estructuras proteicas de baja energía correspondientes, y los complejos resultantes se clasifican de acuerdo con GlideScore. Este modelo se utilizó para guiar el diseño de las siguientes estructuras novedosas previstas.

La Figura 13 presenta una superposición de los modos de unión de 15u, el Compuesto comparativo 15w, el Compuesto comparativo 15w_APP, el Compuesto comparativo 15w_PP, el Compuesto comparativo 15w_CN con la CDK8. Los resultados indican similitud en la unión entre las diferentes tienopiridinas y pirrolopiridinas. La comparación de 15u y el Compuesto comparativo 15w con el Compuesto comparativo 15w_APP indica que el grupo -NH- que reemplaza al azufre no altera el modo de unión. Además, el Compuesto comparativo 15w_App proporciona un donante de puente de hidrógeno adicional a la región de bisagra de la CDK8. Los compuestos PP presentan interacciones de unión similares a los análogos de APP. El modelo de acoplamiento predice que el -NH- proporciona un donante de puente de hidrógeno adicional a la región de bisagra de la CDK8, aumentando la potencia y compensando al mismo tiempo la pérdida del grupo 3-amino. La comparación del compuesto comparativo 15u_CN con el 15u y el compuesto comparativo 15w sugiere que el carbonitrilo realiza interacciones similares a la amida.

Ejemplo 12. Relaciones entre estructura y actividad

La Tabla 6 resume la relación entre estructura y actividad de las composiciones descritas en el presente documento. Para determinar la potencia de inhibición, el ensayo de actividad del NFkB (ensayo HEK238-NFkB-Luc) como se describe en el Ejemplo 1 y el ensayo con MV4-11 (ensayo MV4-11-Luc) como se describe en el Ejemplo 8. Para determinar la farmacocinética, se trataron ratones CD-1 hembras de ocho a doce semanas de edad con inhibidores ensayados a las dosis indicadas (15-30 mg/kg) mediante sonda gástrica oral en una formulación de solución (N-metil-2-pirrolidona (NMP) al 10%), propilenglicol (PG) al 27%, polietilenglicol 400 (PEG-400) al 63%). Se recogieron muestras de sangre (70~100 j l ) en tubos de recolección de sangre BD Microtainer para la separación del suero en diferentes momentos (1, 2, 6, 8 horas después de la administración) con tubos capilares de microhematocrito heparinizados a partir de las venas retroorbitales de animales anestesiados. Las muestras de suero se procesaron para CL/EM/EM para determinar la concentración de fármaco utilizando MRM específicos del compuesto (15u: 439 394; 15u-D6: 445-394; Compuesto comparativo 15w: 453-436; Compuesto comparativo 15w-D2: 455-438; Compuesto comparativo 15w-D6: 459-442). Las concentraciones de fármaco se representaron gráficamente en función de los puntos temporales para generar curvas farmacocinéticas con el programa informático GraphPad, y las AUC (área bajo la curva) de las primeras ocho horas posteriores a la administración se calcularon con el programa informático Excel para comparar los perfiles farmacocinéticos de los diferentes compuestos.

Fórmula I

��Ejemplo 13. Esquemas de síntesis

El esquema 1 muestra un procedimiento sintético general para preparar los compuestos divulgados en el presente documento. A continuación se proporciona la preparación de compuestos específicos.

Esquema 1. Síntesis a pequeña escala de derivados de tienopiridina. 15q,n,w,v, y k son, todos, Compuestos comparativos.

Un esquema alternativo para preparar los compuestos de tienopiridina se describe en Saito, K.et al.,Bioorg Med Chem 2013, 21, 1628-42.

Síntesis de 3-ammo-4-(4-(4-(2-(dimetNammo)-2-oxoetN)fenM)-1,4-diazepan-1-N)tieno[2,3-b]piridm-2-carboxamida (Compuesto comparativo 15w)

A la solución de 2-(4-bromofenil)-N,N-dimetil-acetamida (1 eq) y 1,4-diazepan-1-carboxilato de tere-butilo (1,2 eq) en t-BuOH y 1,4-dioxano se añadieron 2-diciclohexilfosfino-2'-(N,N-dimetilamino)bifenilo (0,15 eq), t-BuONa (1,4 eq) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0,05 eq). La mezcla se desgasificó y se protegió con nitrógeno, a continuación se dejó a reflujo durante 1 hora. Después de esto, la mezcla se enfrió hasta la t.a. y se añadió agua, la mezcla se extrajo con EA, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron con Na2SO4, se condensaron y se purificaron mediante una columna ultrarrápida para obtener el 4-[4-[2-(dimetilamino)-2-oxoetil]fenil]-1,4-diazepan-1-carboxilato de tere-butilo (rendimiento del 92 %), ESI-EM m/z: 362 ([M H]+); a la solución de 4-[4-[2-(dimetilamino)-2-oxo-etil]fenil]-1,4-diazepan-1-carboxilato de tere-butilo (1 eq) en DCM se añadió a continuación TFA (5 eq) y la mezcla se agitó a la t.a. durante 3 h, después de esto, la mezcla se condensó para eliminar el TFA y dio como resultado la 2-(4-(1,4-diazepan-1-il)fenil)-N,N-dimetilacetamida, que se utilizó sin purificación adicional, ESI-EM m/z: 262 ([M H]+); a la solución de 2-(4-(1,4-diazepan-1-il)fenil)-N,N-dimetilacetamida (1 eq) en acetonitrilo se añadió 2,4-dicloronicotinonitrilo (1 eq) y DIPEA (2 eq). La mezcla se agitó a continuación a 80 °C durante la noche. Después de esto, la mezcla se enfrió hasta la t.a. y se condensó, a continuación, la mezcla se disolvió en DCM y se añadió agua, la mezcla se extrajo con DCM, las capas orgánicas se recogieron y se lavaron con salmuera y se secaron con Na2SO4, se condensaron y se purificaron mediante una columna ultrarrápida para obtener la 2-(4-(4-(2-cloro-3-cianopiridin-4-il)-1,4-diazepan-1-il)fenil)-N,N-dimetilacetamida (rendimiento del 55 %), ESI-EM m/z: 398 ([M H]+); a la solución de 2-(4-(4-(2-cloro-3-cianopiridin-4-il)-1,4-diazepan-1-il)fenil)-N,N-dimetilacetamida (1 eq) en MeOH se añadió MeONa (2 eq) y tioglicolato de metilo (2 eq), a continuación la mezcla se agitó a 100 °C durante la noche. Después de esto, la mezcla se enfrió hasta la t.a. y se condensó y purificó mediante una columna ultrarrápida para obtener el 3-amino-4-(4-(4-(2-(dimetilamino)-2-oxoetil)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxilato de metilo (rendimiento del 72 %), ESI-EM m/z: 468 ([M H]+); a la solución de 3-amino-4-(4-(4-(2-(dimetilamino)-2-oxoetil)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxilato de metilo (1 eq) en THF y agua, se añadió a continuación LiOH (2 eq) y la mezcla se agitó a 60 °C durante la noche. Después de esto, la mezcla se enfrió hasta la t.a. y se condensó y disolvió en DMF, a continuación, se añadieron HATU (1,5 eq) y DIPEA (2 eq) y la mezcla se agitó a la t.a. durante 15 min, a continuación, se añadió NH4OH (6 eq) a la mezcla anterior y se agitó a la t.a. durante otras 2 h. Después de esto, se añadió agua y la mezcla se extrajo con DCM, las capas orgánicas se combinaron y se secaron con Na2SO4, se condensaron y se purificaron mediante una columna ultrarrápida para obtener la 3-amino-4-(4-(4-(2-(dimetilamino)-2-oxoetil)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxamida (rendimiento del 45 %) en forma de un sólido de color amarillo claro, ESI-EM m/z: 453 ([M H]+).

Síntesis de 3-ammo-4-(4-(4-(2-(bis(metN-d3)ammo)-2-oxoetN)fenM)-1,4-diazepan-1-N)tieno[2,3-b]pmdm-2-carboxamida (15w_D6)

Síntesis de 3-amino-4-(4-(4-(2-(dimetilamino)-2-oxoetil-1,1-d2)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxamida (15w_ D2)

Síntesis de 3-amino-4-(4-(4-(dimetilcarbamoil)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxamida (15u)

Para el procedimiento experimental, véase 15w más arriba. Se obtuvo un sólido de color amarillo claro. ESI-EM m/z: 439 ([M+H]+).

Síntesis de 3-amino-4-(4-(4-(bis(metil-d3)carbamoil)fenil)-1,4-diazepan-1-il)tieno[2,3-b]piridin-2-carboxamida (15u_D6)

Para el procedimiento experimental, véase 15w más arriba. La síntesis de 15u_D6 se confirmó mediante un análisis con una HPLC-EM de Waters (detector LCA-232 SQ MS). El tiempo de retención fue de 21,40 minutos (5-95 % de TFA, 0,1 % de ácido fórmico), y el ion parental (M+1) se observó a 445,1919. La Figura 14A muestra un cromatógrafo UV del compuesto 15u_D6 que eluye alrededor de 21 minutos. La Figura 14B muestra un cromatógrafo ESI del compuesto 15u_D6 que eluye alrededor de los 21 minutos. La Figura 14C confirma la síntesis de 15u_D6, ESI-EM m/z: 445 ([M+H]+).

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto se selecciona entre:

   o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
2. 2. El compuesto para su uso de la reivindicación 1, en donde el cáncer es un cáncer de próstata, una leucemia, un cáncer de mama, un cáncer de colon, un cáncer de ovario, un cáncer de páncreas o un melanoma.
3. 3. El compuesto para su uso de la reivindicación 2, en donde el cáncer es un cáncer de próstata, opcionalmente en donde el cáncer de próstata es un cáncer de próstata resistente a la castración o es resistente a una terapia de privación de andrógenos.
4. 4. El compuesto para su uso de la reivindicación 3, en donde el cáncer de próstata es un cáncer de próstata resistente a la castración.
5. 5. El compuesto para su uso de la reivindicación 3, en donde el cáncer de próstata es resistente a una terapia de privación de andrógenos.
6. 6. El compuesto para su uso de la reivindicación 2, en donde el cáncer es una leucemia, opcionalmente en donde la leucemia es una leucemia mieloide aguda.
7. 7. El compuesto para su uso de la reivindicación 6, en donde la leucemia es una leucemia mieloide aguda.
8. 8. El compuesto para su uso de la reivindicación 2, en donde el cáncer es un cáncer de mama, opcionalmente en donde el cáncer de mama es un cáncer de mama metastásico o un cáncer de mama triple negativo.
9. 9. El compuesto para su uso de la reivindicación 8, en donde el cáncer de mama es un cáncer de mama metastásico.
10. 10. El compuesto para su uso de la reivindicación 8, en donde el cáncer de mama es un cáncer de mama triple negativo.
11. 11. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el compuesto es
12. 12. El compuesto para su uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el compuesto es
13. 13. Un compuesto de fórmula
14. o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. 14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el compuesto es
15. 15. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 14 y un excipiente, un portador o un diluyente farmacéuticamente aceptables.