ES2991503T3 - Inhibidores de bromodominios de molécula pequeña y usos de los mismos - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos que se unen y modulan de otro modo la actividad de proteínas que contienen bromodominios, a procesos para preparar estos compuestos, a composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y a métodos de uso de estos compuestos para tratar una amplia variedad de afecciones y trastornos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de bromodominios de molécula pequeña y usos de los mismos

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001]La presente invención se refiere a compuestos, tal como se reivindican, que inhiben proteínas que contienen un bromodominio de la unión con proteínas acetiladas, a los procesos de preparación de estos compuestos, a composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos y a compuestos, tal como se reivindican, para su usos en el tratamiento de una amplia variedad de afecciones médicas, enfermedades o trastornos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002]La remodelación de cromatina epigenética es un mecanismo central de la regulación de expresión génica. La modulación farmacológica de cambio epigenético representa un nuevo modelo de intervenciones terapéuticas para cáncer e inflamación. Las nuevas pruebas sugieren que dichas modulaciones epigenéticas pueden proporcionar también un medio terapéutico en el tratamiento de la obesidad, así como enfermedades metabólicas, cardiovasculares, neurodegenerativas, psiquiátricas e infecciosas.

[0003]El genoma eucariota se organiza en una unidad de empaquetamiento básica denominada nucleosoma, que está comprendida de aproximadamente 147 pares de bases de hélices de ADN bicatenario enrolladas alrededor de un octámero de histonas, que, a su vez, consiste en dos subunidades cada una de proteínas H2A, H2B, H3 y H4. Los nucleosomas se empaquetan además en estructuras de cromatina, que pueden existir en un estado de eucromatina relativamente libre o en una estructura de heterocromatina fuertemente empaquetada. La transición desde heterocromatina a eucromatina permite la transcripción de genes, aunque no todos los genes en la estructura de eurocromatina se transcriben. Esta transición desde heterocromatina a eucromatina se controla mediante modificaciones postraduccionales de proteínas de histonas, que incluyen la acetilación de residuos de lisina en proteínas H3/H4. La acetilación de histonas es catalizada por histona acetiltransferasas (HAT), que dan lugar a estructuras de eucromatina abiertas que permiten la transcripción de genes que incluyen genes supresores de tumores. En cambio, la desacetilación de histonas provoca la supresión de tales genes y esta actividad es catalizada por histona desacetilasas (HDAC). La inhibición de histona desacetilasas es un modo de tratamiento de cáncer y se ha demostrado que vorinostat (Zolinza®), un inhibidor de histona deacetilasa, es un fármaco eficaz para el linfoma de células T cutáneas en seres humanos.

[0004]La acetilación de histonas también es modulada por proteínas que contienen bromodominios. Un bromodominio es un haz de cuatro hélices alfa evolutivamente conservados de aproximadamente 110 aminoácidos de largo que se une a residuos de acetil lisina de proteínas acetiladas. Estos dominios están presentes en un conjunto de proteínas asociadas a cromatina que incluyen HATs. Los bromodominios se identificaron por primera vez como un motivo estructural novedoso en la proteína brahma, un regulador de genes homeóticos de Drosophila, pero también se encuentran en proteínas de seres humanos y levaduras como copias únicas o como dominios de repetición continua y se cree que confieren especificidad para el patrón complejo de modificaciones epigenéticas conocido como el código de histonas (Cell. 7 de febrero de 1992;68(3):561-72; J. Biomol. Screen. diciembre de 2011; 16(10): 1170-85). El genoma humano codifica aproximadamente 50 proteínas que contienen bromodominios (Bioinformatics. 12 de junio de 2004; 20(9): 1416-27), algunas de las cuales pueden estar involucradas en la etiología del cáncer, inflamación, obesidad, enfermedades metabólicas, cardiovasculares, neurodegenerativas, psiquiátricas e infecciosas (Med. Chem. Commun. 4 de enero de 2012 3(2): 123-134; Curr. Opin. Drug Discov. Devel. Septiembre de 2009; 12(5): 659-65; Discov. Med. Diciembre de 2010; 10(55): 489-99; FEBS Lett. 4 de agosto de 2010; 584(15): 3260-8; J. Virol. Septiembre de 2006; 80(18): 8909-19; J Virol. Julio de 2005; 79(14):8920-32; Curr. Opin. Pharmacol. Febrero de 2008; 8(1):57-64). De este modo, la inhibición y/o modulación de proteínas que contienen bromodominios puede presentar un modo nuevo de intervención farmacológica para tales enfermedades. De aproximadamente 50 proteínas que contienen bromodominios que son codificadas por el genoma humano, las proteínas BET representan una pequeña familia de proteínas que incluyen BRD2, BRD3, BRD4 y BRDT. Las proteínas BET contienen dos bromodominios en tándem seguidos de un dominio extraterminal (ET) para la interacción de proteína-proteína en la región del extremo carboxi terminal (J. Biol Chem. 4 de mayo de 2007; 282(18): 13141-5). Las proteínas BET se unen a nucleosomas acetilados y se piensa que funcionan abriendo la estructura de cromatina y/o facilitando el inicio de la transcripción (Front. Biosci. 1 de agosto de 2001; 6:D1008-18).

[0005]Previamente, la inhibición de BRD4, tanto por un ARNi específico de BRD4 o mediante un inhibidor de BET de molécula pequeña (JQ1), demostró de manera inequívoca la inducción de la supresión del oncogén MYC (Nature 3 de agosto de 2011; 478(7370):524-8). Esta supresión indirecta de la expresión del gen MYC como un efecto secundario de la inhibición de BRD4 comprende el mecanismo central de acción ejercido por un inhibidor de BET.

[0006]La inhibición de proteínas de BET demostró ser un modo eficaz de intervención en modelos de roedores con carcinoma de la línea media NUT humano, mieloma múltiple, linfoma de Burkitt y leucemia mieloide aguda mediante la supresión de la expresión del genMYC(Nature 23 de diciembre de 2010; 468(7327): 1067-73; Cell. 16 de septiembre de 2011; 146(6):904-1; Proc. Nat.I Acad. Sci. USA 4 de octubre de 2011; 108(40):16669-74), así como el genMYCN(Cáncer Discov. Marzo de 2013: 3(3) 308-23).MYCy genes homólogos son algunos de los genes más sobreexpresados en cánceres humanos; sin embargo, hasta la fecha no se ha desarrollado un compuesto farmacéutico que antagonice directamente la actividad de proteínas codificadas por el genMYCy genes homólogos, en parte debido a la carencia de sitios de unión a fármacos eficaces. Por consiguiente, existe una necesidad de un medio de supresión indirecta de la expresión delMYCy genes homólogos mediante la inhibición de bromodominios de proteínas BET que proporcionan un modo eficaz de tratamiento de diferentes enfermedades, trastornos o afecciones médicas, que incluyen diferentes cánceres.

[0007]Además de proteínas que contienen un bromodominio, CBP y p300 son dos histona acetiltransferasas (HATs) parálogas con funciones adicionales como coactivadoras de transcripción. Por medio de sus múltiples dominios que interactúan con proteínas que incluyen un bromodominio adyacente al dominio catalítico HAT, CBP y p300 interactúan con más de 400 proteínas, jugando de este modo papeles clave en diferentes procesos fisiológicos y patológicos (Cell Mol Life Sci. Noviembre de 2013;70(21):3989-4008; Chem Rev. 25 de marzo de 2015; 115(6):2419-52).

[0008]Actualmente CBP y p300 se reconocen como dianas terapéuticas para varios tipos de cáncer. Por ejemplo, se demostró que una molécula pequeña que se dirige a bromodominio de CBP/p300 tenía eficacia en modelos experimentales de leucemia (Cancer Res. 1 de diciembre de 2015; 75(23): 5106-5119), mientras que un inhibidor catalítico de HAT demostró eficacia en modelos experimentales de cáncer de próstata (Nature. 5 de octubre de 2017;550 (7674):128-132).

[0009]De manera importante se demostró que CBP y p300 constituían un par de dianas parálogas susceptibles de letalidad sintética, donde una mutación inactivante en un gen hace que las células cancerosas sean susceptibles a un fármaco que se dirige a un producto de un segundo gen debido a interdependencias de las vías (Cancer Discov. Abril 2016; 6(4): 430-45). Este tipo específico de letalidad sintética se denomina "reconocimiento de parálogos" y se espera que sea aplicable a una amplia gama de tipos de cáncer que albergan mutaciones de pérdida de función en los genes de CBP o p300. Por ejemplo, se encontró que los genes de CBP y p300 estaban mutados en el 33,3 % y el 8,8 % de los casos de linfoma folicular; en el 13,3 % de los casos de linfoma de células B de la zona marginal; en el 28,6 % y el 26,8 % de los casos de carcinoma de células escamosas de la piel; en el 8,0 % y el 7,2 % de los casos de carcinoma de endometrio; y en el 7,7 % y el 8,3 % de los casos de carcinoma de células pequeñas de pulmón, respectivamente (Cold Spring Harb Perspect Med. 1 de marzo de 2017; 7(3). pii: a026534; Cancer Discov. Abril 2016; 6(4): 430-45). Además, se ha demostrado que la inhibición del bromodominio de CBP/p300 suprimía la expresión del gen de IRF4, un factor de transcripción que se sabe que controla la expresión del oncogén de MYC, lo que da como resultado la inhibición del crecimiento de células de mieloma múltiple (Elife. 5 de enero de 2016;5. pii: e10483). De este modo, la inhibición de CBP/p300 con una molécula pequeña puede ser un modo potencial de terapia contra el cáncer independientemente del estado de mutación del gen de CBP o p300.

[0010]La acumulación de pruebas que demuestran la importancia de CBP y p300 en la oncogénesis, junto con las señales tempranas de efectividad de inhibidores de BET en estudios clínicos indican de manera colectiva que inhibidores de multibromodominios que se dirigen de manera simultánea a proteínas BET/CBP/p300 pueden conferir una eficacia superior sobre inhibidores de BET, a la vez que impiden la aparición de resistencia a fármaco, especialmente en cáncer que alberga mutaciones en genes de CBP o p300. Yang et al. (Bioorg Med Chem Lett. 15 de mayo de 2019; 29(10): 1220 -1226) describe la optimización de fármacos candidatos y la evaluación de eficacia de inhibidores de familia BET basados en quinazolina para el potencial tratamiento de cáncer y enfermedades inflamatorias. El documento WO2017/091664A1 describe inhibidores de bromodominios de BET bicíclicos y sus usos.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

[0011]La presente invención se define en las reivindicaciones. La presente invención da a conocer, entre otros, compuestos de Formula (I):

y tautómero, un isómero óptico o estereoisómero de los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que:

X es O, NH, NC(O)alquilo C1-3,

o NS(O)2Me;

A es

E es

en la que R1 es H, halógeno o Me; n es 0, 1, 2 o 3; y

Q es:

[0012]En una realización, la presente invención da a conocer los compuestos de la Fórmula (II),

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

[0013]En la que los sustituyentes X, E, Q y A son tal como se definen en la Fórmula (I).

[0014]Preferiblemente, X es O, NC(O)Me o NS(O)2Me. Incluso más preferiblemente, X es O.

[0015]Preferiblemente A es

[0016]Preferiblemente E es

en las que R1 es H, F, Cl; n es 0, 1, 2 o 3.

[0017]Incluso más preferiblemente, E es

en la que R1 es H, F, Cl.

[0018]Preferiblemente Q es

Incluso más preferiblemente, Q es

[0019]Incluso más preferiblemente, el compuesto de la Fórmula (l) se selecciona entre el grupo que consiste en:

o un tautómero, un isómero óptico o estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: A es

en la que

R1 es H o halógeno.

[0021]En una realización, la presente invención da a conocer un compuesto de Fórmula (IIIa):

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que los sustituyentes R1 y A son tal como se definen en la Fórmula (III).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0022]Para un entendimiento adicional de la naturaleza, los objetos y las ventajas de la presente divulgación, se debería hacer referencia a la siguiente descripción detallada, leída junto con los siguientes dibujos, en los que los números de referencia similares representan elementos similares.

[0023]Las Figuras 1(A) y (B) muestran volumen de tumor y peso de tumor de los ratones para los resultados de xenoinjerto Kasumi-1.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0024]La presente invención se define en las reivindicaciones. Algunos de los compuestos descritos en el presente documento contienen uno o más centros quirales (por ejemplo, que incluyen las especies de compuesto de los ejemplos a menos que se indique de otro modo por el nombre químico) o de otro modo pueden ser capaces de existir como estereoisómeros múltiples. El alcance de la presente divulgación incluye las mezclas de estereoisómeros, así como enantiómeros purificados o mezclas enriquecidas enantiomérica y/o diastereoméricamente. En algunas realizaciones, los compuestos dados a conocer en el presente documento están presentes como el (S)-enantiómero. En algunas realizaciones, los compuestos dados a conocer en el presente documento están presentes como el (R)-enantiómero. También se incluyen en el alcance de la presente divulgación los estereoisómeros individuales de los compuestos representados por la Fórmula I, así como cualquier mezcla equilibrada completa o parcialmente de los mismos. La presente divulgación incluye también los estereoisómeros individuales de los compuestos representados mediante las fórmulas mencionadas anteriormente como mezclas con isómeros de los mismos en los que se invierten uno o más centros quirales.

[0025]En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención se dan a conocer como sales farmacéuticamente aceptables que incluyen sales no tóxicas de los compuestos expuestos en el presente documento. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen sales de adición de ácidos inorgánicos, tales como cloruro, bromuro, sulfato, fosfato y nitrato; sales de adición de ácidos orgánicos, tales como acetato, galactarato, propionato, succinato, lactato, glicolato, malato, tartrato, citrato, maleato, fumarato, metanosulfonato, ptoluenosulfonato y ascorbato; sales con aminoácido ácido, tales como aspartato y glutamato; sales de metales alcalinos, tales como sal sódica y sal de potasio; sales de metales alcalinotérreos, tales como sal de magnesio y sal de calcio; sal de amonio; sales básicas orgánicas, tales como sal de trimetilamina, sal de trietilamina, sal de piridina, sal de picolina, sal de diciclohexilamina y sal de N,N'-dibenciletilendiamina; y sales con aminoácido básico, tales como sal de lisina y sal de arginina.

[0026] En algunos casos las sales proporcionadas pueden ser hidratos o solvatos. La presente invención incluye una sal o un solvato de los compuestos descritos en el presente documento, que incluye combinaciones de los mismos, tales como un solvato o una sal. Los compuestos de la presente divulgación pueden existir en forma solvato, por ejemplo, hidratados o en complejo con etanol, así como en formas no solvatadas, y la presente invención abarca todas esas formas. Las sales de la presente divulgación pueden ser sales farmacéuticamente aceptables.

[0027] Los compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables tal como se dan a conocer en el presente documento se pueden cristalizar en más de una forma, una característica conocida como polimorfismo y tales formas polimórficas («polimorfos») se encuentran en el alcance de la presente divulgación. De manera general, el polimorfismo puede aparecer como una respuesta a cambios de temperatura, presión o ambos. El polimorfismo puede derivar también de variaciones en el proceso de cristalización. Los polimorfismos pueden distinguirse mediante diferentes características físicas conocidas en la técnica, tales como patrones de difracción de rayos x, solubilidad y punto de fusión.

[0028] Aunque es posible administrar los compuestos de la presente divulgación en forma de un compuesto químico activo en cantidades grandes, se prefiere la administración del compuesto en forma de una composición o formulación farmacéutica. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas que se dan a conocer incluyen uno o más compuestos de la Fórmula I y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

[0029] Las realizaciones adicionales de la presente invención dan a conocer un proceso de la preparación de una composición farmacéutica que incluye mezclar uno o más compuestos de la Fórmula I y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

[0030] En algunas realizaciones, se dan a conocer compuestos que se unen a y, de otro modo, modulan la unión de proteína acetilada a proteínas que contienen bromodominio. Tales compuestos incluyen al menos un compuesto seleccionado entre la Fórmula I tal como se da conocer en el presente documento. Los compuestos de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, aquellos compuestos expuestos anteriormente por medio de nombre o estructura.

[0031] En algunas realizaciones, se dan a conocer compuestos para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o una afección mediada por la inhibición de proteínas que contienen un bromodominio para unirse a proteínas acetiladas. En algunas realizaciones, se dan conocer compuestos para su uso en el tratamiento de una enfermedad o una afección mediada por la inhibición de las proteínas que contienen un bromodominio para unirse a proteínas acetiladas.

[0032] En algunas realizaciones, se da a conocer un compuesto, tal como se reivindica, para su uso en un procedimiento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad que incluye la etapa de administración de un compuesto, tal como se da a conocer en el presente documento, para inhibir la actividad de proteínas que contienen un bromodominio.

[0033] En algunas realizaciones, se da a conocer un compuesto, tal como se reivindica, para su uso en un procedimiento de tratamiento o prevención de una enfermedad que incluye la etapa de administración de un compuesto, tal como se da a conocer en el presente documento, para inhibir la actividad de proteínas que contienen un bromodominio mediante la inhibición de la unión a proteínas acetiladas. En algunas realizaciones, el procedimiento es un procedimiento de tratamiento de una enfermedad que incluye la etapa de administración de un compuesto, tal como se da a conocer en el presente documento, para inhibir la actividad de proteínas que contienen un bromodominio mediante la inhibición de unión a proteínas acetiladas.

[0034] En algunas realizaciones, se da a conocer un compuesto para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o una afección mediada por la inhibición de proteínas que contienen un bromodominio para unirse a proteínas acetiladas. En algunas realizaciones, se da a conocer un compuesto, tal como se reivindica, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o una afección mediada por la inhibición de proteínas que contienen un bromodominio para unirse a proteínas acetiladas. En algunas realizaciones, la proteína acetilada es una histona acetilada.

[0035] En algunas realizaciones, la proteína acetilada es una histona acetilada implicada en la regulación o la desregulación de la expresión génica.

[0036] Los compuestos de la presente invención, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus composiciones farmacéuticas se pueden utilizar en el tratamiento o la prevención de una gran variedad de afecciones o trastornos. En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención, sus sales farmacéuticamente aceptables y sus composiciones farmacéuticas se pueden utilizar en el tratamiento de una gran variedad de afecciones o trastornos.

[0037]En algunas realizaciones, la enfermedad se selecciona entre cáncer, fibrosis, inflamación o un trastorno inflamatorio.

[0038]En algunas realizaciones, la enfermedad es cáncer. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona entre carcinoma de línea media NUT humano, mieloma múltiple, linfoma de Burkitt, leucemia mieloide, leucemia con mutante NPM1c, leucemia linfoblástica de células T, carcinoma hepatocelular, glioblastoma, neuroblastoma, sarcoma, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, tumores neuroendocrinos, carcinoma de células de Merkel y cáncer de próstata. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona entre linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica y leucemia linfocítica aguda. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia a virus de leucemia de células T humanas, tipo 1 (HTLV-1), que incluye leucemia/linfoma de células T adultas (ATLL) o mielopatía asociada a HTLV-1/paraparesis espástica tropical (HAM/TSP).

[0039]En algunas realizaciones, la enfermedad es fibrosis. En algunas realizaciones, la fibrosis se selecciona entre fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática (IPF,idiopathic pulmonar/ fibrosis),fibrosis renal, fibrosis intestinal, fibrosis hepática y cirrosis hepática. En algunas realizaciones, la enfermedad es fibrosis pulmonar idiopática (IPF). La IPF es una enfermedad de pulmón huérfana devastadora que roba a los pacientes su función pulmonar. Este declive en la capacidad respiratoria provoca una mortalidad superior al 50 % en un periodo de 2-3 años desde el diagnóstico. Este pronóstico es incluso peor en pacientes moderados a graves que progresan rápidament, cuando no hay tratamientos disponibles.

[0040]En algunas realizaciones, la enfermedad es inflamación o un trastorno inflamatorio. En algunas realizaciones, la inflamación o el trastorno inflamatorio se selecciona entre alergia, asma, una enfermedad autoinmune, enfermedad celíaca, glomerulonefritis, hepatitis, enfermedad inflamatoria intestinal, lesión por reperfusión y rechazo al trasplante, úlcera péptica crónica, tuberculosis, artritis reumatoide, periodontitis, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, sinusitis, hepatitis activa, ateroesclerosis, periodontitis, artritis reumatoide juvenil, enfermedad pulmonar con fibrosis quística, síndrome de Guillain-Barre, oftalmopatía de Graves y esteatohepatitis no alcohólica (NASH,non alcoholic steatohepatitis).En algunas realizaciones, la enfermedad es inflamación. En algunas realizaciones, la enfermedad es un trastorno inflamatorio.

[0041]En algunas realizaciones, la enfermedad es una inflamación y/o fibrosis asociada con la exposición aguda a la radiación. En algunas realizaciones, la enfermedad es una inflamación asociada con la exposición aguda a la radiación. En algunas realizaciones, la enfermedad es fibrosis asociada con la exposición aguda a la radiación. En algunas realizaciones, la enfermedad es una inflamación y fibrosis asociadas con la exposición aguda a la radiación. En algunas realizaciones, la enfermedad es una inflamación y/o fibrosis asociadas con la exposición aguda a la radiación y el paciente ha sido identificado por haberse expuesto a niveles anormalmente altos de radiación (por ejemplo, víctima de un accidente nuclear).

[0042]En algunas realizaciones, un compuesto tal como se reivindica para su uso en el procedimiento que se da a conocer en el presente documento es un procedimiento de tratamiento de la enfermedad.

[0043]En algunas realizaciones, un compuesto tal como se reivindica para su uso en el procedimiento que se da a conocer en el presente documento es un procedimiento de prevención de la enfermedad.

[0044]La manera en la que los compuestos o su composición farmacéutica expuestos en el presente documento se pueden administrar, puede variar. En algunas realizaciones, los compuestos se pueden administrar por la vía oral. Las composiciones farmacéuticas preferidas se pueden formular para la administración oral en forma de comprimidos, cápsulas, comprimidos en forma ovalada (“caplet”), jarabes, soluciones y suspensiones. Dichas formulaciones orales se pueden proporcionar en formas de dosificación de liberación modificada, tales como formulaciones de comprimidos y cápsulas de liberación temporal. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar también mediante administración/inyección parenteral, a saber, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraperitoneal, intraarterial, intratecal y intracerebroventricular. La administración intravenosa es un método de inyección preferido. Los portadores adecuados para la inyección son conocidos bien por los expertos en la técnica e incluyen soluciones de dextrosa al 5 %, solución salina y solución salina tamponada con fosfato.

[0045]Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar también utilizando otros medios, por ejemplo, administración rectal. Las formulaciones útiles para la administración rectal, tales como supositorios, son conocidas bien por los expertos en la técnica.

[0046]Los compuestos se pueden administrar también mediante la administración por inhalación u otra aplicación directa al tejido afectado, por ejemplo, en forma de administración por inhalación oral pulmonar o intranasal o administración por inhalación nebulizada, que comprende formulaciones de administración por aerosol, por ejemplo, por medio de un nebulizador, inhalación de polvo seco (DPI,d r/ powderinhalation),inhalador dosificado presurizado (MDI,metered-dose inhaler),etc, y procedimientos del uso del nebulizador, DPI, MDI, etc. mediante la administración de los compuestos indicados en el presente documento con un nebulizador, un DPI o un MDI, etc, así como regímenes de dosificación, que se indican en los documentos US 2015/0044288 y AU 2018206852 (que reivindica la prioridad de los documentos US 61/675.286, US 61/756.983 y US 61/824.818).

[0047] Se puede administrar el compuesto también por la vía tópica, tal como en forma de loción; por la vía transdérmica, tal como utilizando un parche transdérmico (por ejemplo, utilizando la tecnología que está disponible comercialmente en Novartis y Alza Corporation); mediante la inyección de polvo o mediante la absorción bucal, sublingual o intranasal. Las composiciones farmacéuticas se pueden formular en forma de dosis unitaria o en múltiples dosis o subunidades.

[0048] La administración de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento puede ser intermitente o en un intervalo gradual, continuo, constante o controlado. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar a un sujeto. Adicionalmente, la hora del día y el número de veces por día cuando se administra la composición farmacéutica pueden variar.

[0049] Un objeto adicional de la divulgación es un conjunto que comprende una composición que contiene al menos un compuesto divulgado en el presente documento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o morbilidades relacionadas con enfermedades. La composición del kit puede comprender al menos un portador, al menos un aglutinante, al menos un diluyente, al menos un excipiente, al menos uno de otro agente terapéutico o mezclas de los mismos.

[0050] Los compuestos, tal como se dan a conocer en el presente documento, se pueden utilizar también en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o una afección que se caracterizan por proteínas que contienen un bromodominio que se unen a proteínas acetiladas y que alteran la expresión génica normal. En algunas realizaciones, los compuestos, tal como se dan a conocer en el presente documento, se pueden utilizar en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o una afección que se caracteriza por proteínas que contienen un bromodominio que se unen a proteínas acetiladas y que alteran la expresión génica normal. También se da a conocer un compuesto tal como se reivindica para su uso en los procedimientos de tratamiento, prevención o retraso del comienzo de o ralentización de la progresión de trastornos mediados por proteínas acetiladas implicadas en la regulación o desregulación de expresión génica en un sujeto que necesita dicho tratamiento. Los procedimientos implican la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, tal como se da a conocer en el presente documento, a un sujeto, que incluye una sal del mismo o una composición farmacéutica que incluye dichos compuestos.

[0051] En algunas realizaciones, el compuesto, tal como se reivindica para su uso en los procedimientos de tratamiento, prevención, retraso del comienzo de o ralentización de la progresión de trastornos mediados por proteínas acetiladas implicadas en la regulación o la desregulación de la expresión génica en un sujeto que necesita dicho tratamiento, incluye la administración de al menos un compuesto, tal como se da a conocer en el presente documento, que incluye, pero no se limita a, los compuestos proporcionados de acuerdo con la Fórmula I, Fórmula II, Fórmula III y Fórmula III(a).

[0052] Los compuestos por sí solos o en una composición farmacéutica, tal como se dan a conocer en el presente documento, se pueden utilizar en el tratamiento de una variedad de trastornos y afecciones y, como tales, se pueden utilizar en combinación con una variedad de otros agentes terapéuticos adecuados útiles para el tratamiento o la profilaxis de estos trastornos o afecciones. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la presente divulgación incluye la administración del compuesto de la presente divulgación en combinación con otros compuestos terapéuticos. Dicha combinación de agentes farmacéuticamente activos se puede administrar en conjunto o por separado y cuando se administran por separado, la administración puede tener lugar de forma simultánea o secuencial en cualquier orden. Las cantidades de los compuestos o agentes y los tiempos relativos de administración se seleccionarán para alcanzar el efecto terapéutico deseado. La administración en combinación de un compuesto de la presente divulgación con otros agentes de tratamiento puede ser en combinación por medio de una administración simultánea en: (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye dos o más compuestos; o (2) composiciones farmacéuticas separadas donde cada una incluye uno de los compuestos. De manera alternativa, la combinación se puede administrar por separado de una manera secuencial en donde un agente de tratamiento se administra primero y el otro segundo. Dicha administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o lejana en el tiempo.

[0053] En algunas realizaciones, la presente divulgación incluye un compuesto, tal como se reivindica, para su uso en una terapia de combinación que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la presente divulgación al sujeto y una o más de otras terapias que incluyen quimioterapia, terapia de radiación, terapia génica o inmunoterapia.

[0054] Se contempla y por lo tanto se encuentra en el alcance de la presente invención que cualquier característica que se describe anteriormente se puede combinar con cualquier otra característica que se describe anteriormente.

[0055] También se contempla y por lo tanto se encuentra en el alcance de la presente invención que se pueden añadir condicionantes negativos para excluir cualquier compuesto o eliminar cualquier característica.

[0056] Tal como se utiliza en el presente documento, el término «halógeno» hace referencia a flúor, cloro, bromo o yodo.

[0057] Tal como se utiliza en el presente documento, los términos «cantidad eficaz», «cantidad terapéutica» y «dosis eficaz» hacen referencia a una cantidad del compuesto de la presente divulgación suficiente para provocar los efectos farmacológicos o terapéuticos deseados, dando lugar de este modo a una prevención o tratamiento eficaz de un trastorno. El tratamiento de un trastorno se puede manifestar retrasando o previniendo el comienzo o la progresión del trastorno, así como el comienzo o la progresión de síntomas asociados con el trastorno. El tratamiento de un trastorno se puede manifestar mediante una disminución o una eliminación de síntomas, una inversión de la progresión del trastorno, así como cualquier otra contribución al bienestar del paciente. La dosis eficaz puede variar dependiendo de los factores, tales como la condición del paciente, la gravedad de los síntomas del trastorno y la vía por la que se administra la composición farmacéutica.

[0058] Tal como se utiliza en el presente documento, el término «farmacéuticamente aceptable» hace referencia a un portador o portadores, un diluyente o diluyentes, un excipiente o excipientes o formas de sal de los compuestos de la presente divulgación que son compatibles con los otros ingredientes de la formulación de la composición farmacéutica.

[0059] Tal como se utiliza en el presente documento, el término «composición farmacéutica» hace referencia a un compuesto de la presente divulgación que se añade a la mezcla de manera opcional con uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas muestran un nivel de estabilidad a condiciones ambientales de tal modo que las convierten en adecuadas para los objetivos de fabricación y comercialización.

[0060] Tal como se utiliza en el presente documento, «que trata» significa la administración a un sujeto de un compuesto de la presente divulgación o una composición farmacéutica para mejorar, reducir o disminuir los síntomas de una enfermedad. Tal como se utiliza en el presente documento, «que trata» o «tratar» describe la gestión y el cuidado de un sujeto con el fin de combatir una enfermedad, una afección o un trastorno e incluye la administración de un compuesto descrito en el presente documento o una sal farmacéuticamente aceptable para mitigar los síntomas o las complicaciones de una enfermedad, una afección o un trastorno o para eliminar la enfermedad, la afección o el trastorno. Tal como se utiliza en el presente documento, «prevenir» significa administrar a un sujeto un compuesto de la presente divulgación o la composición farmacéutica para evitar que la enfermedad aparezca o para retrasar el comienzo de una enfermedad. El término «tratar» puede incluir también un tratamiento de una célula in vitro o de un modelo animal.

[0061] Tal como se utiliza en el presente documento, «sujeto» o «sujetos» hace referencia a cualquier animal, tal como animal de sangre caliente, es decir, mamíferos que incluyen a roedores (por ejemplo, ratones o ratas), perros, primates, lémures o humanos.

[0062] Se puede encontrar procedimientos y materiales adicionales, por ejemplo, en la publicación de la patente de EE. UU. número 2018/0305344.

EJEMPLOS

[0063] Se dan a conocer a continuación compuestos de la Fórmula (I) de ejemplo y los datos de ensayo correspondientes.

Tabla 1. Estructura y nombre del compuesto de ejemplos. Los compuestos 1, 3 y 6-12 son ejemplos de referencia.

Procedimientos sintéticos para los ejemplos 1-15. Los compuestos 1, 3 y 6-12 son ejemplos de referencia.

[0064] Procedimientos Generales:Todas las reacciones sensibles a aire o humedad se llevaron a cabo bajo presión positiva de nitrógeno con utensilios de cristal secados al horno. Los reactivos químicos y los disolventes anhidros se obtuvieron de fuentes comerciales y se utilizaron tal cual. La purificación preparativa se llevó a cabo en HPLC semipreparativo de Walters. La columna utilizada fue una Phenomenex Luna C18 (5 micras, 30 x 75 mm) a un caudal de 45 ml/min. La fase móvil consistió en acetonitrilo y agua (cada uno contenía 0,1 % de ácido trifluoroacético). Se utilizó un gradiente de acetonitrilo del 10 % al 50 % durante un periodo de 8 minutos durante la purificación. Se desencadenó la recogida de fracciones mediante la detección UV (220 nm). Se determinó el análisis analítico de la pureza mediante dos procedimientos diferentes indicados como procedimientos QC finales 1 y 2. Procedimiento 1: El análisis se llevó a cabo en una HPLC Infinity Series Agilent 1290. Equivalente de gradiente largo de UHPLC con acetonitrilo desde el 4 % hasta el 100 % (ácido trifluoroacético al 0,05 %) en agua durante 3 minutos, tiempo de ejecución de 4,5 minutos con un caudal de 0,8 ml/min. Se utilizó una columna Phenomenex Luna C18 (3 micras, 3 x 75 mm) a una temperatura de 50 °C. Procedimiento 2: el análisis se llevó a cabo en una Agilent 1260 con un gradiente de 7 minutos de acetonitrilo desde el 4 % hasta el 100 % (que contenía ácido trifluoroacético al 0,025 %) en agua (que contenía ácido trifluoroacético al 0,05 %) durante un periodo de 8 minutos de tiempo de ejecución a un caudal de 1 ml/min. Se utilizó una columna Phenomenex Luna C18 (3 micras, 3 x 75 mm) a una temperatura de 50 °C. La determinación de pureza se llevó a cabo utilizando un detector con un conjunto de de diodos Agilent para el procedimiento 1 y el procedimiento 2. Se llevó a cabo una determinación de masas utilizando un espectrómetro de masas Agilent 6130 con ionización por electrospray en el modo positivo. Todos los análogos del ensayo tienen una pureza superior al 95 % basándose en los dos procedimientos analíticos. Se registró el espectro de 1H en espectrómetros Varían 400 (100) y 600 MHz. Se registró la espectrometría de masas de alta resolución en un sistema LC/MS con tiempo de vuelo Agilent 6210.

Ejemplo 1. (S)-5-(2-(1-(2-hidroxi-2-metNpropN)-1H-pirazol-4-N)-4-(3-fenNmorfoNno)qumazoNn-5-N)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 1)

[0065]

Etapa 1: Síntesis de (S)-4-(6-bromo-2-doroquinazolin-4-il)-3-fenilmorfolina

[0066]A una mezcla de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina (8,34 g, 30 mmol) y (S)-3-fenilmorfolina (5,14 g, 31,5 mmol) en THF (50 ml) se añadió trietilamina (4,55 g, 45,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en EtOAc/H2O (100 mL/100 mL). La capa orgánica se secó (Na2SO4) y se filtró. Después de la eliminación de disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 20-50%de EtOAc/hexano como diluyente para producir (S)-4-(6-bromo-2-cloroquinazolin-4-il)-3-fenilmorfolina (8,8 g, 21,74 mmol, 72,5 % de rendimiento). LC-MS(Procedimiento 1): fe = 3,70 min, m/z (M+H)+ = 406.

Etapa 2. Síntesis de (S)-5-(2-cloro-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona

[0067]En un matraz con 2 bocas se colocó (S)-4-(6-bromo-2-cloroquinazolin-4-il)-3-fenilmorfolina (1619 mg, 4 mmol), 1,3-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2(1H)-ona (1096 mg, 4,40 mmol), aducto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (327 mg, 0,400 mmol) y carbonato de potasio (1824 mg, 13,20 mmol). Se extrajo el aire y se volvió a rellenar con N2 (3 veces). A continuación, se añadió 1,4-dioxano (12 ml)/agua (6 ml) y se calentó a 70 °C durante 1,5 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la capa se separó y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml x 2). La fase orgánica combinada se secó (Na2SO4) y se filtró. Después de la eliminación del disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 0-5-10 % MeOH/CH2Ch como eluyente para producir (S)-5-(2-cloro-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin- 6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1505 mg, 3,37 mmol, 84 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 58,01 (dd,J= 8,8, 1,9 Hz, 1H), 7,84 (d,J= 2,6 Hz, 1H), 7,75 (d,J= 1,9 Hz, 1H), 7,73 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 7,59 (d,J= 7,7 Hz, 2H), 7,45 (t,J =7,6 Hz, 2H), 7,35 (t,J= 7,3 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 5,63 (s, 1H), 4,45 (d,J= 13,3 Hz, 1H), 4,39 -4,27 (m, 1H), 3,97 - 3,90 (m, 2H), 3,72 (td,J= 10,9, 2,4 Hz, 1H), 3,63 (t,J= 12,0 Hz, 1H), 3,41 (s, 3H), 1,91 (s, 3H); LC-MS (Procedimiento 1): fe = 3,34 min, m/z (M+H)+ = 447.

Etapa 3. Síntesis de (S)-5-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)- 1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona(Compuesto 1)

[0068]En un tubo microondas se colocó (S)-5-(2-cloro-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1500 mg, 3,36 mmol), 2-metil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)propan-2-ol (1340 mg, 5,03 mmol), aducto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (274 mg, 0,336 mmol) y K2CO3 (2087 mg, 15,10 mmol). Se extrajo el aire y se volvió a rellenar con N2 (3 veces). A continuación, se añadió 1,4-dioxano (12 ml)/agua (6 ml) y se calentó a 90 °C durante 1,5 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, la capa se separó y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 ml x 2). La fase orgánica combinada se secó (Na2SO4) y se filtró por medio de resina PL-Tiol MP y, a continuación, se eluyó con EtOAc/MeOH. Después de la eliminación del disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 0-10 % de MeOH/EtOAc como eluyente y una segunda columna utilizando 0 10 % de MeOH/CH2Cl2 para producir (S)-5-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1293 mg, 2,348 mmol, 70,0 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-C6) 58,24 (s, 1H), 7,98 - 7,93 (m, 3H), 7,90 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 7,76 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 7,57 (d,J= 7,6 Hz, 2H), 7,41 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 7,34 (t,J= 7,6 Hz, 2H), 7,22 (t,J =7,4 Hz, 1H), 5,34 (t,J =4,5 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,05 (s, 2H), 4,14 - 3,96 (m, 3H), 3,93 - 3,83 (m, 2H), 3,78 - 3,66 (m, 1H), 3,46 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,07 (s, 6H); LC- MS (Procedimiento 2): fe = 4,25 min, m/z (M+H)+ = 551.

Ejemplo 2. (S)-4-(2-(9-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1,6-dihidro-7H- pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (Compuesto 2)

[0069]

Etapa 1. Síntesis de (S)-4-(2-doro-4-(3-fenNmorfoNno)quinazoNn-6-N)-6-metiM-tosiM,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona

[0070]En un matraz con 2 bocas se colocó (S)-4-(6-bromo-2-doroquinazolin-4-il)-3-fenilmorfolina (2,428 g, 6 mmol), 6-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (2,83 g, 6,60 mmol), aducto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0,49 g, 0,60 mmol) y carbonato de potasio (2,74 g, 19,80 mmol). Se extrajo el aire y se volvió a rellenar con N2 (3 veces). A continuación, se añadió 1,4-dioxano (24 ml)/agua (10 ml) y se calentó a 70 °C durante 1,5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la capa se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml x 2). La capa orgánica combinada se secó (Na2SO4) y se filtró. Después de la eliminación del disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 20-90%de EtOAc/hexano como eluyente para producir (S)-4-(2-cloro-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1 -tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (3,412 g, 5,45 mmol, 91 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 57,94 (dd,J= 8,6, 1,8 Hz, 1H), 7,91 - 7,86 (m, 3H), 7,82 (s, 1H), 7,80 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,7 Hz, 2H), 7,48 (s, 1H), 7,44 - 7,33 (m, 4H), 7,27 (t,J =7,3 Hz, 1H), 6,51 (d,J= 3,5 Hz, 1H), 5,66 (s, 1H), 4,44 -4,31 (m, 2H), 3,91 (dd,J= 12,3, 3,7 Hz, 1H), 3,88 - 3,81 (m, 1H), 3,72 (td,J= 11,0, 2,5 Hz, 1H), 3,59 (t,J =12,4 Hz, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,36 (s, 3H); LC-MS (Procedimiento 1): I<r>= 3,67 min, m/z (M+H)+ = 626.

Etapa 2. Síntesis de (S)-4-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1-tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona

[0071]En un tubo de microondas se colocó (S)-4-(2-cloro-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1 -tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (3412 mg, 5,45 mmol), 2-metil-1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)propan-2-ol (1741 mg, 6,54 mmol), aducto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (445 mg, 0,545 mmol) y K2CO3 (2712 mg, 19,62 mmol). Se extrajo el aire y se volvió a rellenar con N2 (3 veces). A continuación, se añadió 1,4-dioxano (20 ml)/agua (10 ml) y se calentó a 90 °C durante 1,5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la capa se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 ml x 2). La capa orgánica combinada se secó (Na2SO4) y se filtró a través de una resina PL-Thiol MP y, a continuación, se eluyó con EtOAc/MeOH. Después de eliminar el disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 0-10 % de MeOH/EtOAc como eluyente para producir (S)-4-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1-tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (3111 mg, 4,26 mmol, 78 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-C6) 5 8,25 (s, 1H), 7,99 - 7,94 (m, 3H), 7,92 (d,J= 8,2 Hz, 2H), 7,88 (dd,J= 8,6, 1,8 Hz, 1H), 7,82 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 2H), 7,42 (d,J= 8,1 Hz, 2H), 7,28 (t,J= 7,6 Hz, 2H), 7,17 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 6,61 (d,J= 3,5 Hz, 1H), 5,35 (t,J= 4,5 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,11 -3,81 (m, 5H), 3,78 -3,66 (m, 1H), 3,43 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 1,07 (s, 6H); LC-MS (Procedimiento 1): I<r>= 3,08 min, m/z (M+H)+ = 730.

Etapa 3. Síntesis de (S)-4-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6- metil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona(Compuesto 2)

[0072]A una solución de (S)-4-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6metil-1-tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (3111 mg, 4,26 mmol) en THF (22 ml) se añadió NaOH(aq) (1 M, 21,3 mmol, 21,3 ml, 5 equiv). La mezcla se selló y, a continuación, se calentó hasta 75 °C durante 36 horas (completa y sin productos secundarios). La capa se separó y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (5 ml x 5). La capa orgánica combinada se secó, se filtró y se concentró. Después de eliminar el disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 0-5-10 % de MeOH/EtOAc como eluyente para producir (S)-4-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-fenilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (2026 mg, 3,52 mmol, 83 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 812,16 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,10 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 8,00 (dd,J= 8,8, 1,9 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,83 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,52 (d,J= 7,6 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,31 (d,J= 2,6 Hz, 1H), 7,26 (t,J= 7,6 Hz, 2H), 7,15 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 6,39 (t,J= 2,2 Hz, 1H), 5,32 (t,J= 4,7 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,03 (d,J= 5,7 Hz, 1H), 3,97 - 3,68 (m, 5H), 3,54 (s, 3H), 1,07 (s, 6H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,18 min, m/z (M+H)+= 576.

Ejemplo 3. (S)-5-(4-(3-ciclopropilmorfolino)-2-(1-(2-hidroxi-2- metilpropil)-1H-pirazol-4-il)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 3)

[0073]

[0074]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-ciclopropilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, DMsO-cfe) 88,25 (s, 1H), 8,05 (d,J= 2,6 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,94 (dd,J= 8,8, 1,9 Hz, 1H), 7,87 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 7,78 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 7,75 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 3,98 - 3,83 (m, 6H), 3,72 - 3,58 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 1,62-1,58 (m, 1H), 1,07 (s, 6H), 0,49 - 0,36 (m, 1H), 0,36 - 0,23 (m, 2H), -0,21 - -0,25 (m, 1H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,00 min, m/z (M+H)+= 515.

Ejemplo 4. (S)-4-(4-(3-cidopropMmorfolmo)-2-(9-(2-hidroxi-2-metMpropM)-1H-pirazol-4-M)qumazoMn-6-M)-6-metil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (Compuesto 4)

[0075]

[0076]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-ciclopropilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 12,19 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,99 (d,J= 1 , 9 Hz, 1H), 7,95 (dd,J= 8,7, 1,8 Hz, 1H), 7,80 (d,J= 8,6 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,38 (t,J= 2,6 Hz, 1H), 6,42 (t,J= 2,2 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,07 (s, 2H), 3,99 - 3,80 (m, 6H), 3,70 - 3,60 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 1,61 - 1,59 (m, 1H), 1,08 (m, 6H), 0,47 -0,43 (m, 1H), 0,37 -0,24 (m, 2H), -0,14 --0,17 (m, 1H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 3,99 min, m/z (M+H)+ = 540.

Ejemplo 5. (S)-4-(4-(3-(4-fluorofenil)morfolino)-2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)quinazolin-6-il)-6-metil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (Compuesto 5)

[0077]

[0078]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-(4-fluorofenil)morfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 6 12,17 (s, 1H), 8,24 (d,J= 2,9 Hz, 1H), 8,11 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 8,00 (dt,J= 8,7, 2,6 Hz, 1H), 7,97 (d,J= 2,9 Hz, 1H), 7,83 (dd,J= 8,7, 2,9 Hz, 1H), 7,57 - 7,53 (m, 2H), 7,44 (d,J= 2,9 Hz, 1H), 7,32 (q,J= 2,9 Hz, 1H), 7,07 (td,J= 8,8, 2,9 Hz, 2H), 6,40 - 6,38 (m, 1H), 5,28 (p,J= 3,3 Hz, 1H), 4,74 (d,J= 2,9 Hz, 1H), 4,06 (d,J= 2,9 Hz, 2H), 4,05 -3,89 (m, 4H), 3,77 - 3,74 (m, 2H), 3,56 (s, 3H), 1,08 (s, 6H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,20 min, m/z (M+H)+ = 594.

Ejemplo 6. (S)-5-(4-(3-(4-fluorofenil)morfolino)-2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 6)

[0079]

[0080]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-(4-fluorofenil)morfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H R<m>N (400 MHz, DMSO-cfe) 68,23 (s, 1H), 8,02 - 7,94 (m, 3H), 7,91 (d,J= 2,0 Hz, 1H), 7,77 (d,J =8,7 Hz, 1H), 7,60 (dd,J= 8,5, 5,5 Hz, 2H), 7,48 (s, 1H), 7,14 (t,J= 8,7 Hz, 2H), 5,30 (t,J= 4,7 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,03 - 3,99 (m, 2H), 3,93 - 3,84 (m, 3H), 3,79 - 3,69 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,07 (d,J= 2,9 Hz, 6H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,24 min, m/z (M+H)+ = 569.

Ejemplo 7. (R)-5-(2-(1-(2-hidroxi-2-metilpropil)-1H-pirazol-4-il)-4-(3-(tiofen-2-il)morfolino)quinazolin- 6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 7)

[0081]

[0082]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (R)-3-(tiofen-2-il)morfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H r Mn (400 MHz, DMSO-cfe) 68,29 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 8,02 - 7,91 (m, 3H), 7,79 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,57 (d,J= 2,9 Hz, 1H), 7,48 - 7,40 (m, 1H), 7,18 (d,J= 3,5 Hz, 1H), 7,01 (dd,J= 5,1, 3,5 Hz, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,19 (dd,J =11,9, 2,5 Hz, 1H), 4,13 (d,J =13,4 Hz, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,02 (dd,J =12,0, 3,2 Hz, 1H), 3,97 (d,J =11,2 Hz, 1H), 3,89 - 3,76 (m, 1H), 3,66 (ddd,J =13,9, 10,6, 3,3 Hz, 1H), 3,48 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,07 (s, 6H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,00 min, m/z (M+H)+ = 557.

Ejemplo 8. (S)-5-(4-(3-cidobutMmorfolmo)-2-(1-(2-hidroxi-2-metMpropM)-1H-pirazol-4-M)qumazolm-6-M)- 1,3 dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 8)

[0083]

[0084]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-didoroquinazolina y (S)-3-cidobutilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, DMSo-cfe) 68,26 (s, 1H), 8,04 (d,J= 2,6 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,93 (dd,J= 8,8, 2,1 Hz, 1H), 7,89 (d,J= 2,1 Hz, 1H), 7,80 - 7,76 (m, 1H), 7,74 (d,J= 8,8 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,60 (d,J= 10,5 Hz, 1H), 4,07 (s, 2H), 3,87- 3,72 (m, 5H), 3,53 (s, 3H), 3,22 3,15 (m, 1H), 2,09 (s, 3H), 1,97- 1,96 (m, 1H), 1,78- 1,68 (m, 3H), 1,57 (d,J =6,9 Hz, 1H), 1,31 - 1,16 (m, 2H), 1,08 (s, 6H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 3,97 min, m/z (M+H)+ = 529.

Ejemplo 9. (S)-5-(4-(3-(4-dorofeml)morfolmo)-2-(1-(2-hidroxi-2-metNpropM)-1H-pirazol-4-N)qumazolm-6-M)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 9)

[0085]

[0086]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-(4-clorofenil)morfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H Rm N (400 MHz, DMSO-cfe) 68,23 (s, 1H), 8,02 - 7,93 (m, 3H), 7,90 (d,J= 2,2 Hz, 1H), 7,77 (d,J =8,8 Hz, 1H), 7,59 (d,J= 8,1 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,37 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 5,29 (t,J= 4,8 Hz, 1H), 4,73 (s, 1H), 4,06 (s, 2H), 4,01 (q,J =4,9, 3,8 Hz, 2H), 3,97 - 3,81 (m, 3H), 3,80 -3,68 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,07 (d,J =3,3 Hz, 6H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 4,54 min, m/z (M+H)+ = 585.

Ejemplo 10. 5-(4-((S)-3-ciclohexilmorfolino)-2-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)quinazolin-6-il)-1,3- dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 10)

[0087]

[0088]El material de partida, (S)-5-(2-doro-4-(3-cidohexilmorfolino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin- 2(1H)-ona, se preparó a partir de 6-bromo-2,4-didoroquinazolina y (S)-3-ddohexNmorfoNna siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1.

[0089]En un tubo de microondas se colocaron (S)-5-(2-cloro-4-(3-ciclohexilmor1:olino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpindin-2(1H)-ona (453 mg, 1 mmol) y (S)-morfolin-2-il-metanol, HCl (461 mg, 3,00 mmol) y, a continuación, se añadieron EtOH (2 ml) y la base de Hunig (0,873 ml, 5,00 mmol). El tubo se selló y se calentó a 90 °C durante la noche. Después de enfriamiento hasta la temperatura ambiente, la mezcla se concentró para eliminar la mayor parte de EtOH. A continuación, se añadió EtOAc/H2O (5 ml/ 5 ml). La capa orgánica se secó (Na2SO4) y se filtró. Después de eliminar el disolvente, el producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice utilizando 0-5-10 % de MeOH/EtOAc como eluyente para producir 5-(4-((S)-3-ciclohexilmor1:olino)-2-((S)-2-(hidroximetil)morfolino)quinazolin-6-il)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (349 mg, 0,654 mmol, 65,4 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,90 (d,J= 2,7 Hz, 1H), 7,74-7,71 (m, 2H), 7,67 (dd,J= 2,7, 1,3 Hz, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 1H), 4,77 (t,J= 5,5 Hz, 1H), 4,59 (d,J= 13,0 Hz, 1H), 4,44 (d,J= 13,1 Hz, 1H), 4,28 (d,J= 10,3 Hz, 1H), 4,00 (t,J= 11,4 Hz, 2H), 3,94 - 3,85 (m, 1H), 3,84 - 3,70 (m, 2H), 3,61 (dd,J= 11,9, 2,8 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,55 - 3,34 (m, 5H), 3,00 -2,82 (m, 1H), 2,67 (dd,J= 13,1, 9,7 Hz, 1H), 2,18 (dd,J= 12,5, 9,1 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 1,90 - 1,52 (m, 5H), 1,32 - 0,71 (m, 5H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4,30 min, m/z (M+H)+ = 534.

Ejemplo 11. 5-(2-((S)-2-(hidroximetN)morfolmo)-4-((S)-3-fenMmorfolmo)qumazoMn-8-M)-1,3-dimetN-piridin-2(1H)-ona (Compuesto 11)

[0090]

[0091]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-fenilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 10. 1H RMN (400 MHz, DMSo-cfe) 87,86 (d,J= 2,7 Hz, 1H), 7,80-7,78 (m, 2H), 7,49 (d,J= 7,3 Hz, 2H), 7,45 - 7,39 (m, 2H), 7,32 (t,J= 7,5 Hz, 2H), 7,26 - 7,19 (m, 1H), 5,10 (t,J =5,0 Hz, 1H), 4,78 (t,J =5,7 Hz, 1H), 4,53 (d,J= 12,9 Hz, 1H), 4,40 (d,J =13,2 Hz, 1H), 4,04 - 3,92 (m, 2H), 3,95-3,83 (m, 3H), 3,78 - 3,62 (m, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,55 - 3,34 (m, 3H), 3,26 (s, 1H), 2,80 (t,J= 12,3 Hz, 1H), 2,64 (dd,J= 13,1, 10,5 Hz, 1H), 2,00 (s, 3H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 3,93 min, m/z (M+H)+ = 528.

Ejemplo 12. (S)-5-(4-(3-ciclohexilmorfolino)-2-(1-(2-hidroxi-2- metNpropN)-1H-pirazol-4-N)qumazolm-6-M)-1,3-dimetilpiridin-2(1H)-ona (Compuesto 12)

[0092]

[0093]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-ciclohexilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,24 (s, 1H), 8,01 (d,J= 2,7 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,91 (dd,J= 8,7, 2,0 Hz, 1H), 7,86 (d,J= 2,1 Hz, 1H), 7,75-7,72 (m, 2H), 4,73 (s, 1H), 4,51 (d,J= 10,5 Hz, 1H), 4,12-4,08 (m, 4H), 3,93 - 3,78 (m, 2H), 3,68 (dd,J= 11,9, 2,8 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H), 3,57 - 3,46 (m, 1H), 2,27-2,19 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,89 (d,J= 12,7 Hz, 1H), 1,79-1,70 (m, 2H), 1,59-1,56 (m, 2H), 1,08 (s, 6H), 1,31 - 0,71 (m, 5H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 4,43 min, m/z (M+H)+ = 557.

Ejemplo 13. 4-(4-((S)-3-ciclohexilmorfolino)-2-((S)-2-(hidroximetil) morfolino)quinazolin-6-il)-6-metil- 1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3- c]piridin-7-ona(Compuesto 13)

[0094]

[0095]El material de partida, (S)-4-(2-doro-4-(3-cidohexilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1-tosil-1,6-dihidro- 7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona, se preparó a partir de 6-bromo-2,4-didoroquinazolina y (S)-3-ddohexNmorfoNna siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 1. El compuesto del título se preparó a partir de (S)-4-(2-cloro-4-(3-ciclohexilmorfolino)quinazolin-6-il)-6-metil-1-tosil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-1-ona y (S)-morfolin-2-ilmetanol, HCl siguiendo el procedimiento similar tal como se describen en el Ejemplo 10 y el Ejemplo 2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 812,14 (s, 1H), 7,83 (d,J =2,1 Hz, 1H), 7,74 (dd,J= 8,7, 1,9 Hz, 1H), 7,46 (d,J= 8,7 Hz, 1H), 7,39 - 7,32 (m, 2H), 6,37 (t,J= 2,4 Hz, 1H), 4,77 (t,J= 5,5 Hz, 1H), 4,61 (d,J= 12,9 Hz, 1H), 4,46 (d,J= 13,1 Hz, 1H), 4,25 (d,J= 10,3 Hz, 1H), 4,00 (t,J= 12,4 Hz, 2H), 3,94 - 3,86 (m, 1H), 3,79 (dd,J= 10,9, 3,2 Hz, 1H), 3,73 - 3,59 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,54 - 3,34 (m, 5H), 2,92 (td,J= 12,6, 3,5 Hz, 1H), 2,69 (dd,J= 13,1, 9,7 Hz, 1H), 2,25 -2,10 (m, 1H), 1,90 - 1,48 (m, 5H), 1,31 - 0,68 (m, 5H); LC-MS (Procedimiento 2):<ír>= 4,15 min, m/z (M+H)+ = 559.

Ejemplo 14. (S)-4-(4-(3-cidohexMmorfolmo)-2-(1-(2-hidroxi-2-metMpropM)-1H-pirazol-4-M)qumazoMn-6- il)-6-metil-1,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (Compuesto 14)

[0096]

[0097]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-ciclohexilmorfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 12,19 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,99 (d,J =2,1 Hz, 1H), 7,93 (dd,J= 8,7, 2,0 Hz, 1H), 7,79 (d,J= 8,5 Hz, 1H), 7,47 (d,J= 1,9 Hz, 1H), 7,38 (t,J= 2,7 Hz, 1H), 6,42 (t,J= 2,5 Hz, 1H), 4,73 (d,J =1,4 Hz, 1H), 4,47 (d,J =10,3 Hz, 1H), 4,12-4,08 (m, 4H), 3,87 - 3,64 (m, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,52 (dt,J= 12,6, 6,6 Hz, 1H), 2,22 (d,J= 10,7 Hz, 1H), 1,95 - 1,49 (m, 5H), 1,09 (s, 6H), 1,32 - 0,68 (m, 5H); LC-MS (Procedimiento 2): í<r>= 4,42 min, m/z (M+H)+ = 582.

Ejemplo 15. 4-(4-((S)-3-(4-fluorofenil)morfolino)-2-((S)-2-(hidroximetil) morfolmo)qumazolm-6-M)-6-metiM,6-dihidro-7H-pirrolo[2,3-c]piridin-7-ona (Compuesto 15)

[0098]

[0099]El compuesto del título se preparó a partir de 6-bromo-2,4-dicloroquinazolina y (S)-3-(4-fluorofenil)morfolina siguiendo el procedimiento similar tal como se describe en el Ejemplo 13. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 612,13 (s, 1H), 7,99 (d,J= 2,2 Hz, 1H), 7,82 (dd,J= 8,7, 2,0 Hz, 1H), 7,53 - 7,42 (m, 3H), 7,36 (s, 1H), 7,32 (t,J= 2,8 Hz, 1H), 7,07 (t,J= 8,8 Hz, 2H), 6,37 (t,J =2,4 Hz, 1H), 5,03 (t,J= 5,3 Hz, 1H), 4,80 (t,J= 5,8 Hz, 1H), 4,53 (d,J= 13.0 Hz, 1H), 4,40 (d,J= 13,2 Hz, 1H), 3,92-3,86 (m, 5H), 3,72 (dt,J= 13,5, 4,0 Hz, 1H), 3,56 (s, 3H), 3,54-3,41 (m, 4H), 3,26 (br s, 1H), 2,80 (t,J =12,7 Hz, 1H), 2,65 (dd,J =13,1, 10,5 Hz, 1H); LC-MS (Procedimiento 2): ír = 4.00 min, m/z (M+H)+ = 571.

Ejemplo 16. Ensayo de BROMOscan.

[0100]Los ensayos de unión a ligando competitiva contra bromodominios de proteínas de familia BET, CBP y proteínas p300 se llevaron a cabo con el servicio de BROMOscan® en Eurofins DiscoverX Corporation (San Diego, CA).

[0101]De manera resumida, los fagos T7 que expresan bromodominios en tándem de proteínas de familia BET, CBP y p300 se cultivaron en paralelo en bloques de 24 pocillos en un huésped E.coliobtenido de la cepa BL21. Se infectaronE. colicon el fago T7 y se incubaron con agitación a 32 °C hasta la lisis (90-150 minutos). A continuación, se centrifugaron los lisados (5.000 x g) y se filtraron (0,2 pm) para eliminar los restos de células. Para generar resinas de afinidad para los ensayos, se trataron microesferas magnéticas recubiertas con estreptavidina molécula pequeña biotinilada o ligandos de péptidos acetilados durante un periodo de 30 minutos a temperatura ambiente. Las microesferas con ,ligando se bloquearon con exceso de biotina y se lavaron con un tampón bloqueador SEA BLOCK (Thermo Fisher, Rockford, IL), BSA al 1 %, Tween 20 al 0,05 %, DTT 1 mM) para eliminar el ligando no unido y reducir la unión de fagos no específicos. Las reacciones de unión se ensamblaron mediante la combinación de proteína etiquetada con ADN, microesferas de afinidad a ligando y compuestos de prueba en 1x tampón de unión (SeaBlock al 17 %, 0,33 x PBS, Tween 20 al 0,04 %, BSA al 0,02 %, azida de sodio al 0,004 %, DTT 7,4 mM). Los compuestos de prueba se prepararon como 1000 x soluciones madre en DMSO y posteriormente se diluyeron para asegurar una concentración final en DMSO del 0,1 %. Las placas de ensayo se incubaron a temperatura ambiente con agitación durante un periodo de 1 hora y las microesferas de afinidad se lavaron con tampón de lavado (1 x PBS, Tween 20 al 0,05 %). A continuación, las microesferas se volvieron a suspender en el tampón de elución (1 x PBS, Tween 20 al 0,05 %, ligando de afinidad no biotinilado 2 pM) y se incubaron a temperatura ambiente con agitación durante 30 minutos. A continuación, se midieron las concentraciones de proteínas etiquetadas con ADN en los eluatos mediante PCRq. Los valores Kd se obtuvieron utilizando una dilución en serie de 3 veces con 11 concentraciones de compuestos que variaban entre 0 pM y 10 pM. Los valores Kd se calcularon con una curva estándar de dosis - respuesta utilizando una ecuación de Hill con una pendiente de -1. Las curvas se ajustaron utilizando un ajuste de mínimos cuadrados no lineal con el algoritmo de Levenberg- Marquardt.

Ejemplo 17. Ensayo AlphaScreen

[0102]Se llevó a cabo un ensayo AlphaScreen®, un ensayo basado en transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET,Fluorescence Resonance Energy Transfer),según el protocolo del fabricante (PerkinElmer, Waltham, MA) en Reaction Biology (Malvern, PA) utilizando un BRD4 humano recombinante de longitud completa que corresponde a la posición de aminoácido 2-1362 (Secuencia de referencia de NCBI: NM_058243) expresado en las células de insectos Sf9 con una etiqueta de His en el extremo N-terminal (Número de catálogo de Reaction Biology RD-21-153) y péptido histona H4 (1-21) que contenía residuos de lisina acetilados en las posiciones 5, 8, 12 y 16 como ligando. De manera resumida, el BRD4 y los compuestos de prueba se incubaron previamente durante 30 minutos a temperatura ambiente en HEPES 50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, CHAPS al 0,05 %, BSA al 0,1 % con 11 concentraciones de compuesto que variaban entre 0 pM y 20 pM obtenidas con una dilución en serie de 3 veces. A continuación, se añadió el péptido de ligando H4 y la mezcla se incubó durante 30 minutos adicionales a temperatura ambiente. A continuación, se añadieron microesferas donantes recubiertas con estreptavidina y microesferas aceptoras de Ni y la mezcla se incubó durante 60 minutos adicionales. Se tomaron mediciones fluorescentes (Ex/Em = 680/520-620 nm) y los datos se ajustaron a la ecuación de Hill con pendientes variables para obtener valores de 1C<50>.

Ejemplo 18. Ensayo con MV4-11.

[0103] Líneas celulares:Se obtuvo la línea celular MV4-11 de la colección de cultivos de tipo americano (ATCC, Manassas, VA, EE. UU.) y se cultivó en un medio de cultivo RPMI 1640 (Invitrogen 11879020) suplementado con suero bovino fetal al 10 % y 100 unidades/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina y se mantuvo a 37° C, en una incubadora con el 5% de CO<2>/95% de aire humidificado.

[0104] Ensayo de citotoxicidad:Las células MV4-11 se cultivaron tal como se describe anteriormente y se colocaron en placas de cultivo de tejido sólido blanco con 1536 pocillos utilizando un dispensador peristáltico Multidrop Combi (ThermoFisher, Waltham, MA) a una densidad de 500 células/pocillo en 5 pl de medio de cultivo de RPMI 1640 (Invitrogen 11879020) suplementado con suero bovino fetal al 10 % y 100 unidades/ml de penicilina, 100 pg/ml de estreptomicina. Se utilizó un dispensador de aguja con 1536 pocillos equipado con agujas de 20 nl (Wako Automation, San Diego, CA) para transferir 23 nl del compuesto en DMSO a las placas de ensayo con 1536 pocillos. Después de 72 horas de incubación a 37 °C, se dispensaron 2,5 pl de CellTiter-Glo (Promega) en cada pocillo utilizando un dispensador BioRAPTR FRD (Beckman Coulter, Brea, CA). Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos, se transfirieron a un generador de imágenes de microplacas ViewLux (PerkinElmer, Waltham, MA) y se midió la luminiscencia acoplada a ATP utilizando la exposición de 1 segundo.

Ejemplo 19. Ensayo con Kasumi-1.

[0105] Ensayo de viabilidad de células:Se llevó a cabo un ensayo de viabilidad celular para obtener GI<50>, la concentración del compuesto que da lugar a un 50 % de inhibición de crecimiento, utilizando una línea celular de leucemia mieloide aguda Kasumi-1 (ATCC® CRL-2724™) (ATCC, Manassas, VA). De forma resumida, las células se sembraron en una placa de cultivo celular con fondo plano de 96 pocillos a una densidad de 30.000 células por pocillo (MV-4-11) o 10.000 células por pocillo (Kasumi-1) en RPMI suplementado con suero bovino fetal al 10 % y L-glutamina más penicilina y estreptomicina. Las células se mantuvieron a 37 °C con el 5 % de CO<2>durante 24 horas, a continuación, se expusieron a un compuesto determinado o bien a 11 o 21 concentraciones que variaban de 0 pM a 20 pM en un volumen de 150 pl en presencia del dimetilsulfóxido al 0,2 %, el disolvente utilizado en una dilución en serie del compuesto. La exposición se mantuvo durante aproximadamente 72 horas y se midió la viabilidad celular utilizando CellTiter-Blue<®>(Promega, Madison, WI) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se calcularon los valors Gl<50>utilizando un modelo de dosis-respuesta de cuatro parámetros GraphPad Prism (La Jolla, CA).

Tabla 2. Datos del ensa o bioló ico.

Tabla 3. Datos de ensayo biológico de compuestos seleccionados frente a bromodominio de proteínas de familia BET.

Ejemplo 20. Estudio de xenoinjerto de Kasumi-1 de ratón.

[0106]Se llevó a cabo el estudio de xenoinjerto de Kasumi-1 por HD Biosciences (Shanghai, China) en su instalación acreditada por AAALAC. Se aprobaron todos los procedimientos de estudio en animales por el Comité de cuidados y uso de animales en instituciones (IACUC,Institutional Animal Care and Use Committee)de HD Biosciences. Se estableció el modelo de tumor de leucemia humana Kasumi-1 en ratones hembra CB-17 SICD mediante inyección subcutánea en el costado derecho con una suspensión de células de Kasumi-1 (1x107/0,2 ml de 1:1 DPBS y BD Matrigel). Se dejó que los tumores creciesen hasta 100-150 mm3 y los ratones se dividieron al azar en 6 grupos (8 animales/grupo) con volumen de tumor y peso corporal promedio similares. Los compuestos se formularon como una solución en 30 % de solutol en agua y se ajustó el pH con 1,05 equivalentes de HCl (utilizando HCl(aq) 0,1 N) in situ, mientras que el compuesto de referencia, I-BET762, se formuló con 2 % de DMSO 98 % (HP-p-CD al 20 % en agua). Los compuestos se administraron a los ratones mediante una sonda oral una vez al día y se tomaron mediciones de los tumores cada día durante las 4 semanas siguientes. Los volúmenes de los tumores se monitorizaron y se midieron dos veces por semana. A continuación, los animales se sacrificaron al final del estudio para obtener las masas tumorales (Figura 1).

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES 1. Compuesto de fórmula (I), en la que:

   X es O, NH, NC(O)alquilo C1-3,

   J > í J o NS(O)<2>Me; A es

   E es

   en la que R1 es H, halógeno o Me; n es 0, 1,2 o 3; y Q es uno de los siguientes:

   y/o tautomero, un isómero optico o estereoisomero del mismo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. 2. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que el compuesto es de Fórmula (II),

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X, A, E y Q se definen en la reivindicación 1.
3. 3. Compuesto de Fórmula (I), según la reivindicación 1, o de Fórmula (II), según la reivindicación 2, en el que: X es O, NC(O)Me o NS(O)2Me; A es

   E es

   en la que R1 es H, F, Cl; n es 0, 1, 2 o 3; y Q es
4. 4. Compuesto de Fórmula (II), según la reivindicación 2, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
5. 5. Compuesto de Fórmula (II), según la reivindicación 2, en el que el compuesto es
6. 6. Composición farmacéutica que comprende un compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
7. 7. Compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica, según la reivindicación 6, para su utilización en el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en cáncer, fibrosis, inflamación y trastorno inflamatorio.
8. 8. Compuesto para su utilización, según la reivindicación 7, en el que la enfermedad es fibrosis.
9. 9. Compuesto para su utilización, según la reivindicación 8, en el que la fibrosis se selecciona del grupo que consiste en fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis renal, fibrosis intestinal, fibrosis hepática y cirrosis hepática.
10. 10. Compuesto para su utilización, según la reivindicación 7, en el que la enfermedad es fibrosis pulmonar idiopática.
11. 11. Compuesto para su utilización, según la reivindicación 10, en el que el compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra mediante administración por inhalación, administración por vía pulmonar oral, administración por inhalación intranasal o administración por inhalación nebulizada.
12. 12. Compuesto para su utilización, según la reivindicación 7, en el que el compuesto, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, está formulado para administración en aerosol mediante un nebulizador, inhalación de polvo seco (DPI) o inhalador dosificado presurizado (MDI).