ES2997266T3 - Psma ligands for imaging and endoradiotherapy - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a la obtención de imágenes y la endorradioterapia de enfermedades que involucran al antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA). Se proporcionan compuestos que se unen o inhiben al PSMA y además llevan al menos una fracción que es susceptible de radiomarcaje. También se proporcionan usos médicos de dichos compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Ligandos de PSMA para la formación de imágenes y endorradioterapia

La presente divulgación se refiere a la formación de imágenes y endorradioterapia de enfermedades que implican antígeno de membrana específico de próstata (PSMA). Se proporcionan compuestos que unen o inhiben PSMA y adicionalmente llevan al menos una fracción que es susceptible de radiomarcaje. También se proporcionan usos médicos de dichos compuestos y su uso en medicina, tal como se define en las reivindicaciones.

El cáncer de próstata (PCa) siguió siendo durante las últimas décadas la enfermedad maligna más común en hombres con alta incidencia de tasas de supervivencia pobres. Debido a su sobreexpresión en el cáncer de próstata (Silver, D.A., et al.,Prostate-specific membrane antigen expression in normal and malignant human tissues.Clinical Cancer Research, 1997. 3(1): p. 81-85), antígeno de membrana específico a próstata (PSMA) o la glutamato carboxipeptidasa II (GCP II) demostraron su elegibilidad como diana excelente para el desarrollo de agentes radiomarcados altamente sensibles para endorradioterapia y formación de imágenes de PCa (Afshar-Oromieh, A., et al.,The diagnostic value of PET/CTimaging with the 68Ga-labelled PSMA ligand HBED-CC in the diagnosis of recurrent prostate cancer.European journal of nuclear medicine and molecular imaging, 2015. 42(2): p. 197-209; Benesová, M., et al.,Preclinical Evaluation of a Tailor-Made DOTA-Conjugated PSMA Inhibitor with Optimized Linker Moiety for Imaging and Endoradiotherapy of Prostate Cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2015. 56(6): p. 914-920; Robu, S., et al.,Preclinical evaluation and first patient application of 99mTc-PSMA-I&S for SPECTimaging and radioguided surgery in prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2016: p. jnumed. 116,178939; Weineisen, M., et al.,Development and first in human evaluation of PSMA I&T-A ligand for diagnostic imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2014.

55(suplemento 1): p. 1083-1083; Rowe, S., et al.,PET imaging of prostate-specific membrane antigen in prostate cancer: current state of the art and future challenges.

Prostate cancer and prostatic diseases, 2016; Maurer, T., et al.,Current use of PSMA-PETin prostate cancer management.Nature Reviews Urology, 2016). El antígeno de membrana específico de próstata es una hidrolasa extracelular cuyo centro catalítico comprende dos iones de zinc (II) con un ligando de hidróxido puente. Está altamente regulada en los carcinomas de próstata metastásicos y resistentes a las hormonas, pero su expresión fisiológica también se ha informado en riñones, glándulas salivales, intestino delgado, cerebro y, en menor medida, también en tejido prostático sano. En el intestino, el PSMA facilita la absorción de folato mediante la conversión de pteroilpoli-Y-glutamato en pteroilglutamato (folato). En el cerebro, hidroliza N-acetil-Laspartil-L-glutamato (NAAG) a N-acetil-L-aspartato y glutamato. Aún no se ha aclarado la función enzimática de PSMA en próstata normal y enferma.

Las moléculas dirigidas a PSMA generalmente comprenden una unidad de unión que abarca un grupo de unión a zinc (tal como urea (Zhou, J., et al.,NAAG peptidase inhibitors and their potential for diagnosis and therapy.Nature Reviews Drug Discovery, 2005. 4(12): p. 1015-1026), fosfinato o fosforamidato) conectado a una fracción de glutamato P1', que garantiza una alta afinidad y especificidad para el PSMA y normalmente está conectado aún más a una funcionalidad efectora (Machulkin, A.E., et al.,Small-molecule PSMA ligands. Current state, SAR and perspectives.Journal of drug targeting, 2016: p. 1-15). La parte efectora es más flexible y hasta cierto punto tolerante a modificaciones estructurales. El túnel de entrada de PSMA acomoda otras dos características estructurales prominentes, que son importantes para la unión del ligando. La primera es un parche de arginina, un área cargada positivamente en la pared del embudo de entrada y la explicación estructural de la preferencia de funcionalidades cargadas negativamente en la posición P1 de PSMA. Al unirse, el reposicionamiento concertado de las cadenas laterales de arginina puede conducir a la apertura de una bolsa de accesorios hidrófobos S1, la segunda estructura importante, que se ha demostrado que acomoda un grupo yodo-bencilo de varios inhibidores en base a urea, contribuyendo así a su alta afinidad para PSMA (Barinka, C., et al.,Interactions between Human Glutamate Carboxipeptidase II and Urea-Based Inhibitors: Structural Characterizationf.Journal of medicinal chemistry, 2008. 51(24): p. 7737-7743).

Zhang et al. descubrieron un sitio de unión remoto de PSMA, que se puede emplear para el modo de unión bidentado (Zhang, A.X., et al.,A remote arene-binding site on prostate specific membrane antigen revealed by antibody-recruiting small molecules.Journal of the American Chemical Society, 2010. 132(36): p. 12711 12716). El llamado sitio de unión al areno es un motivo estructural simple formado por las cadenas laterales de Arg463, Arg511 y Trp541, y es parte de la tapa de entrada de PSMA. El acoplamiento del sitio de unión al areno por una fracción inhibidora distal puede dar como resultado un aumento sustancial en la afinidad del inhibidor por PSMA debido a los efectos de avidez. PSMA I&T (véase Figura 1) se desarrolló con la intención de interactuar de esta manera con PSMA, aunque no se dispone de un análisis de la estructura cristalina del modo de unión. Una característica necesaria según Zhang et al. es una unidad ligadora (ácido subérico en el caso de PSMA I&T) que facilita una conformación abierta de la tapa de entrada de PSMA y, por lo tanto, permite la accesibilidad del sitio de unión al areno. Se mostró adicionalmente que la composición estructural del ligador tiene un impacto significativo sobre la actividad biológica y dirigida al tumor, así como en el contraste de formación de imágenes y la farmacocinética (Liu, T., et al.,Spacerlength effects on in vitro imaging and surface accessibility of fluorescent inhibitors of prostate specific membrane antigen.Bioorganic & medicinal chemistry letters, 2011. 21(23): p. 7013-7016), propiedades que son cruciales para la alta calidad de imagen y la endorradioterapia dirigida eficiente.

Actualmente se utilizan dos categorías de inhibidores de la dirección de PSMA en entornos clínicos. Por un lado, hay un marcador con unidades quelantes para la formación de complejos de radionúclidos como PSMA I&T o compuestos relacionados (Kiess, A.P., et al.,Prostate-specific membrane antigen as a target for cáncer imaging and therapy.The quarterly journal of nuclear medicine and molecular imaging: oficial publication of the Italian Association of Nuclear Medicine (AIMN)[and] the International Association of Radiopharmacology (IAR),[and] Section of the Society of... 2015. 59(3): p. 241). En el otro lado están las moléculas pequeñas, que comprenden una unidad de direccionamiento y moléculas efectoras. Dependiendo del radionúclido/halógeno utilizado, los inhibidores de PSMA radiomarcados se pueden utilizar para formación de imágenes o endorradioterapia. Entre los inhibidores de moléculas pequeñas con quelantes para la formación de imágenes, los agentes más utilizados para la formación selectiva de formación de imágenes de PSMA son PSMA HBED-CC (Eder, M., et al.,68Ga-complex lipophilicity and the targeting property of a urea-based PSMA inhibitor for PET imaging.Bioconjugate chemistry, 2012. 23(4): p. 688-697), P<s>M<a>-617 (Benesová, M., et al.,Preclinical Evaluation of a Tailor-Made DOTA-Conjugated Inhibidor de PSMAr with Optimized Linker Moiety for Imaging and Endoradiotherapy of Prostate Cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2015. 56(6): p. 914-920) y PSMA I&T (Weineisen, M., et al.,Development and first in human evaluation of PSMA I&T-A ligand for diagnostic imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2014. 55(supplement 1): p. 1083-1083). El PSMA HBED-CC, o p SmA-11 fue uno de los primeros inhibidores de PSMA y actualmente se utiliza para la formación de imágenes, ya que las aplicaciones terapéuticas no son posibles con el quelante HBED-CC. Sin embargo, debido a las características físicas únicas y las ventajas de 18F para la formación de imágenes PET, como la vida media más larga, la baja energía de positrones, que resulta en una resolución de imagen más alta y la posibilidad de producción a gran escala en un ciclotrón, varios grupos se han centrado en el desarrollo de inhibidores en base a urea marcados con 18F para formación de imágenes de PCa. El marcado con inhibidor de PSMA en base a urea etiquetado 18F [18F]DCFPyl demostró resultados prometedores en la detección de PCa primario y (Rowe, S.P., et al.,PSMA-Based [18f] DCFPyL PET/CT Is Superior to Conventional Imaging for Lesion Detection in Patients with Metastatic Prostate Cancer.Molecular Imaging and Biology, 2016: p. 1-9) y superioridad a [68Ga]PSMA-HBED-CC en un estudio comparativo (Dietlein, M., et al.,Comparison of [18F] DCFPyL and [68Ga] Ga-PSMA-HBED-CC for PSMA-PET imaging in patients with relapsed prostate cancer.Molecular Imaging and Biology, 2015. 17(4): p. 575-584).

El PSMA DKFZ 617 (Benesová, M., et al.,Preclinical Evaluation of a Tailor-Made DOTA-Conjugated PSMA lnhibitor with Optimized Linker Moiety for Imaging and Endoradiotherapy of Prostate Cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2015. 56(6): p. 914-920, Becker, A., et al.,Nephro-and hepatotoxicity after radioligand therapy of metastatic castrate-resistant prostate cancer with 177Lu-PSMA-617.Journal of Nuclear Medicine, 2016.

57(supplement 2): p. 1430-1430;Rahbar, K., et al.,Response and tolerability of a single dose of 177Lu-PSMA-617in patients with metastatic castration-resistant prostate cancer: a multicenter retrospective analysis.Journal of Nuclear Medicine, 2016: p. jnumed. 116,173757) y PSMA I&T (Weineisen, M., et al.,Development and first in human evaluation of PSMa I&T-A ligand for diagnostic imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2014. 55(supplement 1): p. 1083-1083, Eiber, M., et al.,Systemic radioligand therapy with 177Lu-PSMA I&T in patients with metastatic castration-resistant prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2016. 57(supplement 2): p. 61-61; Schottelius, M., et al.,[111 In] PSMA-I&T: expanding the spectrum of PSMA-I&T applications towards SPECT and radioguided surgery.EJNMMI research, 2015. 5(1): p. 1) se aplican en entornos clínicos para el tratamiento paliativo de pacientes con cáncer de próstata. La unidad de quelación DOTA y la DOTAGA relacionada, permiten no solo formación de imágenes sino también aplicaciones terapéuticas, ya que el alcance de la posible quelación de radiometal abarca 111In, 177Lu, 90Y y 213Bi, entre otros. [111In]PSMA I&T ya se implementó clínicamente para cirugía radioguiada para ayudar al cirujano durante la escisión del tejido maligno (Schottelius, M., et al.,[111 In] PSMA-I&T: expanding the spectrum of PSMA-I&T applications towards SPECT and radioguided surgery.eJn MMI research, 2015. 5(1): p. 1). Del mismo modo, el reciente inhibidor de PSMA desarrollado y probado clínicamente PSMA I&S (formación de imágenes y cirugía) demostró resultados muy alentadores (Robu, S., et al.,Preclinical evaluation and first patient application of 99mTc-PSMA-I&S for SPECT imaging and radioguided surgery in prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2016: p. jnumed. 116,178939).

Los enfoques endoradioterapéuticos con [177Lu]PSMA I&T demostraron eficiencia, tolerabilidad y alto potencial de seguridad en pacientes que reciben hasta cuatro ciclos con 7,4 GBq. Los valores dosimétricos obtenidos para la radiación de órganos revelaron que especialmente los riñones y las glándulas salivales reciben la dosis más alta después de las lesiones tumorales. Se mostraron valores de radiación similares para PSMA DKFZ 617 y [18F]DCFPyL (Rowe, S.P., et al.,PSMA-Based [18F] DCFPyL PET/CT Is Superior to Conventional Imaging for Lesion Detection in Patients with Metastatic Prostate Cancer.Molecular Imaging and Biology, 2016: p. 1-9; Delker, A., et al.,Dosimetry for 177Lu-DKFZ-PSMA-617: a new radiopharmaceutical for the treatment of metastatic prostate cancer.European journal of nuclear medicine and molecular imaging, 2016. 43(1): p. 42 51; Kabasakal, L., et al.,Pre-therapeutic dosimetry of normal organs and tissues of 177Lu-PSMA-617 prostatespecific membrane antigen (PSMA) inhibitor in patients with castration-resistant prostate cancer.European journal of nuclear medicine and molecular imaging, 2015. 42(13): p. 1976-1983; Yadav, M.P., et al.,177Lu-DKFZ-PSMA-617 therapy in metastatic castration resistan prostate cáncer: safety, efficacy, and quality of life assessment.European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2016: p. 1-11). Estos números elevados son explicables por la expresión fisiológica de PSMA (Silver, D.A., et al.,Prostate-specific membrane antigen expression in normal and malignant human tissues.Clinical Cancer Research, 1997. 3(1): p. 81-85) y la excreción renal del compuesto radiomarcado. Las toxicidades renales y hematológicas ocasionales después de la administración generalmente son reversibles, aunque es una preocupación legítima sobre la toxicidad crónica, especialmente en pacientes con tasas de supervivencia general prolongadas, como en los pacientes con PCa. Por lo tanto, se necesita un concepto adecuado para reducir la radiación no deseada y al mismo tiempo para aumentar la absorción tumoral. El documento WO 2017/165473 A1 divulga un antígeno PSMA conjugado con un agente quelante.

En vista de lo anterior, el problema técnico subyacente a la presente invención puede verse en la provisión de medios y procedimientos para aliviar los efectos secundarios inducidos por la radiación de los diagnósticos y productos terapéuticos radiomarcados dirigidos a PSMA. Se puede ver un problema técnico adicional en la provisión de medios y procedimientos para aumentar la absorción tumoral de dichos diagnósticos y productos terapéuticos. En términos más generales, el problema técnico se puede ver en la provisión de agentes aglutinantes de PSMA mejorados.

El problema técnico se resuelve mediante el tema resumido en las reivindicaciones adjuntas y se explica con más detalle a continuación.

En particular, la presente invención proporciona, en un primer aspecto, una composición farmacéutica que comprende (a) un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en la que:

m es un entero de 2 a 6, preferiblemente 2 a 4, más preferiblemente 2;

n es un entero de 2 a 6, preferiblemente 2 a 4, más preferiblemente 2 o 4;

R<1L>es CH<2>, NH o O, preferiblemente NH;

R<2L>es C o P(OH), preferiblemente C;

R<3L>es CH<2>, NH o O, preferiblemente NH;

X<1>se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, y un enlace amina, y es preferiblemente un enlace amida;

L<1>es un grupo ligador divalente con una estructura seleccionada de una oligoamida, un oligoéter, un oligotioéter, un oligoéster, un oligotioéster, una oligourea, una oligo(éter-amida), una oligo(tioéter-amida), una oligo(éster-amida), una oligo(tioéster-amida), oligo(urea-amida), una oligo(éter-tioéter), un oligo(éter-éster), un oligo(éter-tioéster), una oligo(éter-urea), un oligo(tioéter-éster), un oligo(tioéter-tioéster), una oligo(tioéter-urea), un oligo(éster-tioéster), una oligo(éster-urea), y una oligo(tioéster-urea), preferiblemente con una estructura seleccionada de una oligoamida y una oligo(éster-amida), qué grupo de enlace puede llevar un EDS de grupo;

cuyo grupo ligador puede llevar un grupo EDS;

X2 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, y un enlace amina, y es preferiblemente un enlace amida;

R2es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, cuyo grupo arilo o grupo aralquilo se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH;

R3 es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, cuyo grupo arilo o grupo aralquilo se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH;

res 0 o 1, preferiblemente 1;

p es 0 o 1;

q es 0 o 1; y preferiblemente p+q = 1;

R4se selecciona de un grupo arilo y un grupo EDS;

X3 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, un enlace amina, y un grupo de la fórmula

, en la que el enlace marcado en el grupo carbonilo se adhiere a X3 a RM y el otro enlace marcado se adhiere a X3 al resto del compuesto de la fórmula (I);

y es preferiblemente un enlace amida;

RM es un grupo marcador que comprende un grupo quelante que contiene opcionalmente un catión no radiactivo o radiactivo quelado;

y en el que está contenido el grupo EDS al menos una vez en el compuesto de la fórmula (I) y tiene una estructura seleccionada de (E-1A), (E-1B), (E-2A) y (E-2B):

en la que

«AAAAA/*

marca el enlace que adhiere el grupo EDS, al resto del compuesto de la fórmula (I);

s es 1, 2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 1;

t es 1,2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 2;

R5A es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO2 y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R5A y el anillo fenilo indican que los s grupos R5A reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo;

R5B es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente adherido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1 B), cuyo sustituyente se selecciona preferiblemente de -OH y -NH2, y que es más preferiblemente -NH2, y en la que el enlace entre R5B y el anillo fenilo indican que los s grupos R5B reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo;

R6A es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO2 y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R6A y el anillo fenilo indican que los t grupos R6A reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; y

R6B es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente adherido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1 B), cuyo sustituyente se selecciona preferiblemente de -OH y -NH2, y que es más preferiblemente -OH, y en la que el enlace entre R6B y el anillo fenilo indican que los t grupos R6B reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; y (b) un vehículo, excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La introducción de un sustituyente EDS como se mostró anteriormente, en la que un anillo aromático lleva uno o más sustituyentes con una alta densidad de electrones seleccionados de un sustituyente aceptor electrones y un sustituyente que lleva un solo par de electrones conduce a varias ventajas inesperadas. Estas ventajas incluyen mayor afinidad, mejor internalización, retención de células tumorales elevada, menor unión inespecífica, acumulación renal reducida y una mayor tumoral.

Especialmente la absorción inespecífica reducida en órganos distintos de la próstata conduce a una radiación menos no deseada y reduce los efectos secundarios inducidos por la radiación.

Para ejemplificar estas ventajas, nos referimos a las propiedades de los compuestos particularmente preferentes en la presente memoria denominados PSMA-71 y PSMA-66 que se discuten con más detalle a continuación.

En particular, la afinidad nanomolar (5,3 ± 2,0 nM vs. 7,9 ± 2,4 nM), la internalización drásticamente mejorada (206,8 ± 1,7 % vs. 75,5 ± 1,6 %) demuestran la superioridad de [177Lu]PSMA-71 en comparación con [177Lu]PSMA I&T. Los datos de biodistribución revelaron que [177Lu]PSMA-71 exhibió una absorción tumoral notablemente más alta (14,29 ± 0,89 vs. 4,06 ± 12 % ID/g, respectivamente) en comparación con [177Lu]PSMA I&T mientras que la acumulación renal fue similar (32,36 ± 2,49 frente a 34,66 ± 17,20 % ID/g, respectivamente).

De manera similar, una menor afinidad nanomolar (3,8 ± 0,3 nM vs. 7,9 ± 2,4 nM), una internalización drásticamente mejorada (297,8 ± 2,0 % vs. 75,5 ± 1,6 %), retención de células tumoralesin vitroelevada (90,1 ± 3,5 % vs. 62,8 ± 0,4 %, 60 minutos de incubación) junto con una unión inespecífica más bajain vivo,acumulación renal reducida (117,5 ± 6,9 % ID/g vs.128,9 ± 10,7 % ID/g) y un aumento de más del doble en la absorción tumoral (10,0 ± 0,4 % vs 4,7 ± 1,0 % ID/g), demuestran la superioridad de [177Lu]PSMA-66 en comparación directa con [177Lu]PSMA I&T.

Como se indicó anteriormente, las sales de los compuestos de la invención que incluyen compuestos de fórmula (I) (y que incluyen sus realizaciones preferentes) también son adecuadas para su uso en el contexto de la invención. Se entenderá que estas sales son generalmente formas de sal farmacéuticamente aceptables de estos compuestos que se pueden formar, por ejemplo, mediante protonación de un átomo que lleva un solo par de electrones que es susceptible de protonación, tal como un grupo amino, con un ácido inorgánico u orgánico, o como una sal de un grupo ácido carboxílico con un catión fisiológicamente aceptable como se conocen bien en la técnica. Las sales de adición de base ejemplares comprenden, por ejemplo, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio o potasio; sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio o magnesio; sales de amonio; sales de aminas alifáticas tales como trimetilamina, trietilamina, diciclohexilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, sales de procaína, sales de meglumina, sales de dietanolamina o sales de etilendiamina; sales de aralquilamina tales como sales de N,N-dibenciletilendiamina, sales de benetamina; sales de aminas aromáticas heterocíclicas tales como sales de piridina, sales de picolina, sales de quinolina o sales de isoquinolina; sales de amonio cuaternario tales como sales de tetrametilamonio, sales de tetraetilamonio, sales de benciltrimetilamonio, sales de benciltrietilamonio, sales de benciltributilamonio, sales de metiltrioctilamonio o sales de tetrabutilamonio; y sales de aminoácidos básicos tales como sales de arginina o sales de lisina. Las sales de adición de ácido ejemplares comprenden, por ejemplo, sales de ácido mineral tales como clorhidrato, bromhidrato, yodhirato, sales de sulfato, sales de nitrato, sales de fosfato (tales como, por ejemplo, sales de fosfato, hidrógeno fosfato o dihidrogenofosfato), sales de carbonato, sales de hidrogenocarbonato o sales de perclorato; sales de ácidos orgánicos tales como sales de acetato, propionato, butirato, pentanoato, hexanoato, heptanoato, octanoato, ciclopentanopropionato, undecanoato, lactato, maleato, oxalato, fumarato, tartrato, malato, citrato, nicotinato, benzoato, salicilato o ascorbato; sales de sulfonato tales como metanosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato (tosilato), 2-naftalenosulfonato, 3-fenilsulfonato o sales de alcanforsulfonato; y sales de aminoácidos ácidos tales como sales de aspartato o glutamato.

Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, acetato, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, butirato, edetato de calcio, camprato, canforsulfonato, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, clavulanato, ciclopentanopropionato, digluconato, diclorhidrato, dodecilsulfato, edetato, edisilato, estolato, esilato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucetato, glucoheptonato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, glicolilarsanilato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, hidroxifnafatoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, lauril sulfato, malato maleato, malonato, mandelato, mesilato, metanosulfonato, metilsulfato, mucato, 2-naftalenosulfonato, napsilato, nicotinato, nitrato, sal de amonio N-metilglucamina, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato/difosfato, picrato, pivalato, poligalacturonato, propionato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro, undecanoato, valerato y similares (véase, por ejemplo, S. M. Berge et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., 66, pp. 1-19 (1977)).

Se entiende que a lo largo de la presente memoria descriptiva, el término “compuesto” abarca solvatos, polimorfos, profármacos, cofármacos, cocristales, tautómeros, racematos, enantiómeros o diastereómeros o mezclas de los mismos, a menos que se mencione lo contrario.

Cuando los compuestos de la presente invención se proporcionan en forma cristalina, la estructura puede contener moléculas de disolvente. Los disolventes son normalmente disolventes farmacéuticamente aceptables e incluyen, entre otros, agua (hidratos) o disolventes orgánicos. Ejemplos de posibles solvatos incluyen etanolatos e iso-propanolatos.

El término “cofármaco” se refiere a dos o más compuestos terapéuticos unidos mediante un enlace químico covalente. Se puede encontrar una definición detallada, por ejemplo, en N. Das et al., European Journal of Pharmaceutical Sciences, 41, 2010, 571-588.

El término “cocristal” se refiere a un cristal de múltiples componentes en el que todos los componentes son sólidos en condiciones ambientales cuando están en su forma pura. Estos componentes coexisten como una relación estequiométrica o no estequiométrica de una molécula o ión diana (es decir, compuesto de la presente invención) y uno o más formadores de cocristales moleculares neutros. Se puede encontrar una discusión detallada, por ejemplo, en Ning Shan et al., Drug Discovery Today, 13(9/10), 2008, 440-446 y en D.J. Good et al., Cryst. Growth Des., 9(5), 2009, 2252-2264.

Los compuestos de la presente invención también se pueden proporcionar en forma de un profármaco, es decir, un compuesto que se metaboliza in vivo en el metabolito activo. Los profármacos adecuados son, por ejemplo, ésteres. Se dan ejemplos específicos de grupos adecuados, entre otros, en el documento US 2007/0072831 en los párrafos [0082] a [0118] bajo los encabezados profármacos y grupos protectores.

En la medida en que los compuestos de la invención exhiben un estado cargado dependiente del pH, se entiende que se abarcan todos los estados cargados posibles. Un intervalo de pH preferente a este respecto es desde 0 hasta 14.

En la medida en que un compuesto de acuerdo con la invención lleva una carga neta, se entiende que el compuesto se proporciona en forma electroneutral. Esto se logra mediante uno o más contraiones, los contraiones preferentes que se definieron anteriormente en relación con el término “sal” en la presente memoria.

En la fórmula (I), m es un entero de 2 a 6. Preferiblemente, m es 2 a 4, más preferiblemente 2. R1L es CH2, NH o O, preferiblemente NH. R2L es C o P(OH), preferiblemente C. R3L es CH2, NH o O, preferiblemente NH. Por lo tanto, también se prefieren los compuestos de la fórmula (I) o sus sales en los que m es 2, R1L es NH, R2L es C, y R3L es NH.

n es un entero de 2 a 6, preferiblemente 2 a 4, más preferiblemente 2 o 4, y aún más preferiblemente 2.

Por lo tanto, se prefieren particularmente los compuestos de la fórmula (I) o sus sales en los que m es 2, n es 2 o 4, R1L es n H, R2L es C, y R3L es NH. Se prefieren más los compuestos de la fórmula (I) o sus sales en los que m es 2, n es 2, R1L es NH, R2L es C, y R3L es NH.

X<1>en la fórmula (I) se selecciona de un enlace amida (es decir -C(O)-NH-), un enlace éter (es decir -O-), un enlace tioéter (es decir -S-), un enlace éster (es decir -C(O)-O-, un enlace tioéster (es decir -C(S)-O- o -C(O)-S-), un puente de urea (es decir -NH-C(O)-NH-), y un enlace amina (es decir -NH-). Preferente como X1 es el enlace amida.

Más aún, se prefiere adicionalmente en la fórmula (I) que n sea 2 y X<1>sea el enlace amida con el átomo de carbono del enlace amida -C(O)-NH- que se adhiere al grupo -(CH<2>V , o que n sea 4 y X<1>sea el enlace amida con el átomo de carbono del enlace amida -C(O)-NH- que se adhiere al grupo -(CH<2>)<n>-. Entre estos, se prefiere más la opción en la que n es 2 y X<1>es el enlace amida con el átomo de carbono del enlace amida -C(O)-NH-que se adhiere al grupo -(CH<2>)<n>-.

Por lo tanto, se prefieren particularmente los compuestos de la fórmula (I) y sus sales en los que, en la fórmula (I), m es 2, n es 2, R<1L>es NH, R<2L>es C, R<3L>es NH, y X<1>es un enlace amida con el átomo de carbono del enlace amida -C(O)-NH- que se adhiere al grupo -(CH<2>)<n>-.

L<1>en la fórmula (I) es un grupo ligador divalente con una estructura seleccionada de una oligoamida, un oligoéter, un oligotioéter, un oligoéster, un oligotioéster, una oligourea, una oligo(éter-amida), una oligo(tioéteramida), una oligo(éster-amida), una oligo(tioéster-amida), oligo(urea-amida), una oligo(éter-tioéter), un oligo(éter-éster), un oligo(éter-tioéster), una oligo(éter-urea), un oligo(tioéter-éster), un oligo(tioéter-tioéster), una oligo(tioéter-urea), un oligo(éster-tioéster), una oligo(éster-urea), y una oligo(tioéster-urea), preferiblemente con una estructura seleccionada de una oligoamida y una oligo(éster-amida), y más preferiblemente con una estructura de oligoamida, cuyo grupo ligador puede llevar un grupo EDS.

El término “oligo” como se utiliza en la definición de L<1>en los términos oligoamida, oligoéter, oligotioéter, oligoéster, oligotioéster, oligourea, oligo(éter-amida), oligo(tioéter-amida), oligo(éster-amida), oligo(tioésteramida), oligo(urea-amida), oligo(éter-tioéter), oligo(éter-éster), oligo(éter-tioéster), oligo (éter-urea), oligo(tioéter-éster), oligo(tioéter-tioéster), oligo(tioéter-urea), oligo(éster-tioéster), oligo(éster-urea), y oligo(tioéster-urea) es preferiblemente se entiende que se refiere a un grupo en el que 2 a 20, más preferiblemente en el que 2 a 10 subunidades están ligadas por el tipo de enlaces especificados en los mismos términos. Como lo entenderá el lector experto, cuando se indican dos tipos diferentes de enlaces entre paréntesis, ambos tipos de enlaces están contenidos en el grupo en cuestión (por ejemplo, en “oligo (ésteramida)”, están contenidos los enlaces éster y enlaces amida).

Es más preferente que L<1>tenga una estructura seleccionada de una oligoamida que comprenda un total de 1 a 5, más preferiblemente un total de 1 a 3, y aún más preferiblemente un total de 1 o 2 enlaces amida dentro de su estructura principal, y una oligo(éster-amida) que comprenda un total de 2 a 5, más preferiblemente un total de 2 a 3, y aún más preferiblemente un total de 2 enlaces amida y éster dentro de su estructura principal. En una realización particularmente preferente, L<1>representa un grupo ligador divalente con una estructura de oligoamida que comprende 1 o 2 enlaces amida dentro de su estructura principal.

Adicionalmente, L<1>puede llevar un grupo EDS (es decir un grupo que lleva un sustituyente con una alta densidad de electrones o “sustituyente denso en electrones”) como se define en la presente memoria, es decir un grupo EDS que se adhiere covalentemente a L<1>. Preferiblemente, el grupo EDS opcional se adhiere como un sustituyente a la estructura principal del grupo ligador divalente L<1>, L<1>que tiene una estructura como se definió anteriormente seleccionada de una oligoamida, un oligoéter, un oligotioéter, un oligoéster, un oligotioéster, una oligourea, una oligo(éter-amida), una oligo(tioéter-amida), una oligo(éster-amida), una oligo(tioéster-amida), oligo(urea-amida), una oligo(éter-tioéter), un oligo(éter-éster), un oligo(éter-tioéster), una oligo(éter-urea), un oligo(tioéter-éster), un oligo(tioéter-tioéster), una oligo(tioéter-urea), un oligo(éster-tioéster), una oligo(éster-urea), y una oligo(tioéster-urea), preferiblemente una estructura seleccionada de una oligoamida y una oligo(éster-amida), y aún más preferiblemente una estructura de oligoamida, cuya estructura se extiende entre X<1>y X<2>en el compuesto de la fórmula (I). También a este respecto, aplican las definiciones preferentes adicionales para L<1>, es decir se prefiere más L<1>que tiene una estructura seleccionada de una oligoamida que comprende un total de 1 a 5, más preferiblemente un total de 1 a 3, y aún más preferiblemente un total de 1 o 2 enlaces amida dentro de su estructura principal, y una oligo(éster-amida) que comprende un total de 2 a 5, más preferiblemente un total de 2 a 3, y aún más preferiblemente un total de 2 enlaces amida y éster dentro de su estructura principal. En una realización particularmente preferente, L<1>representa un grupo ligador divalente con una estructura de oligoamida que comprende 1 o 2 enlaces amida dentro de su estructura principal.

De acuerdo con lo anterior, L<1>puede llevar uno o más, por ejemplo 2 o 3, grupos EDS. Sin embargo, es preferente que L<1>no lleve un grupo EDS, o que L<1>lleve un grupo EDS, y es más preferente que L<1>lleve un grupo EDS.

Si L<1>lleva un grupo EDS (que incluye el caso más preferente que EDS lleva un grupo EDS), es preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-1A), (E-2A) y (E-2B). Es más preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-2A) y (E-2B), y aún más preferiblemente tenga la estructura (E-2A).

Como entenderá el lector experto, la indicación de que L<1>puede llevar un grupo EDS sirve como información sobre una posible posición de este grupo en los compuestos de acuerdo con la invención. El hecho de que L<1>pueda llevar un grupo EDS no impone una restricción a la presencia de otros grupos que pueden estar presentes, por ejemplo como sustituyentes alternativos o adicionales en la estructura principal de L<1>. Por ejemplo, es preferente que el grupo ligador L<1>contenga uno o más, tales como dos, grupos que se seleccionan independientemente de -OH, -OCH<3>, -COOH, -COOCH<3>, -NH<2>, y -NHC(NH)NH<2>adheridos como sustituyentes a su estructura principal. Más preferiblemente, el grupo ligador L<1>contiene uno o más, tal como dos, grupos -COOH, adheridos como sustituyentes a su estructura principal.

En la fórmula (I), X<2>se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, y un enlace amina, y es preferiblemente un enlace amida. Es más preferente que el átomo de nitrógeno del enlace amida -C(O)-NH- se adhiera a L1.

Por lo tanto, también es preferente que X<1>y X<2>sean ambos enlaces amida, especialmente enlaces amida dispuestos en las orientaciones preferentes adicionales definidas anteriormente.

En línea con lo anterior, es preferente que la fracción -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura seleccionada de:

*-C(O)-NH-R<7>-NH-C(O)-R<8>-C(O)-NH-(L-1),

*-C(O)-NH-R<9A>-NH-C(O)-R<10A>-C(O)-NH-R<11A>-NH-C(O)- (L-2A),

y

*-C(O)-NH-R<9B>-C(O)-NH-R<10B>-C(O)-NH-R<11B>-NH-C(O)-(L-2B);

en la que el enlace amida marcado con * se adhiere al átomo de carbono que lleva R<2>en la fórmula (I), y en la que

R<7>, R<8>, R<9A>, R<9B>, R<11A>y R<11B>se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C10 opcionalmente sustituido, preferiblemente alcanodiilo lineal C2 a C10 opcionalmente sustituido, cuyos grupos alcanodiilo se pueden sustituir cada uno por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de -OH, -OCH<3>, -COOH, -COOCH<3>, -NH<2>, -NHC(NH)NH<2>, y un grupo EDS, y

R<10A>y R<10B>se seleccionan de alcanodiilo C2 a C10 opcionalmente sustituido, preferiblemente alcanodiilo lineal C2 a C10 opcionalmente sustituido, y arenodiilo C6 a C10 opcionalmente sustituido, preferiblemente fenileno, cuyo grupo alcanodiilo y arenediilo puede cada uno ser sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de -O<h>, -OCH<3>, -COOH, -COOCH<3>, -NH<2>, -NHC(NH)NH<2>, y un grupo EDS. R<10A>es preferiblemente alcanodiilo C2 a C10 opcionalmente sustituido, más preferiblemente alcanodiilo lineal C2 a C10 opcionalmente sustituido como se definió anteriormente. R<10B>es preferiblemente arenodiilo C6 a C10 opcionalmente sustituido como se definió anteriormente, más preferiblemente un grupo fenileno, por ejemplo grupo para-fenileno.

En los grupos de la fórmula (L-1), (L-2A) y (L-2B), es preferente que el sustituyente opcional sobre R<7>sea -COOH, que el sustituyente opcional de R<8>sea un grupo EDS, que el sustituyente opcional sobre R<9A>y R<9B>sea -COOH, que el sustituyente opcional sobre R<10A>sea un grupo EDS, y que el sustituyente opcional sobre R<11A>y R<11B>sea -COOH.

También es preferente que cada uno de los grupos de la fórmula (L-1) y (L-2A) lleve un grupo EDS como al menos un sustituyente, como se explicó anteriormente preferiblemente como un sustituyente de R<8>y R<10A>. También en este contexto, es preferente que el grupo e Ds tenga una estructura seleccionada de (E-1A), (E-2A) y (E-2B). Es más preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-2A) y (E-2B), y aún más preferiblemente tenga la estructura (E-2A).

Adicionalmente, es preferente que el número total de átomos de carbono en R<7>y R<8>de la fórmula (L-1) sea 6 a 20, más preferiblemente 6 a 16, sin átomos de carbono contenidos en sustituyentes opcionales, que el número total de átomos de carbono en R<9A>, R<10A>y R<11A>de la fórmula (L-2A) sea 6 a 20, más preferiblemente 6 a 16, sin átomos de carbono contenidos en sustituyentes opcionales, y que el número total de átomos de carbono en R<9B>, R<10B>y R<11B>de la fórmula (L-2B) sea 6 a 20, más preferiblemente 6 a 16, sin átomos de carbono contenidos en sustituyentes opcionales.

Se entenderá a partir de la información proporcionada con respecto a los significados preferentes de n y X<1>anteriores que es aún adicionalmente preferible que -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura (L-1) si n es 4, y que -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura (L-2A) o (L-2B) si n es 2.

En línea con las definiciones anteriores, incluso adicionalmente es preferente que la fracción -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura seleccionada de:

*-C(O)-NH-CH(COOH)-R<12>-NH-C(O)-R<13>-C(O)-NH-(L-3),

*-C(O)-NH-CH(COOH)-R<14>-NH-C(O)-R<15>-C(O)-NH-R<16>-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-4),

y

*-C(O)-NH-CH(COOH)-R<17>-C(O)-NH-R<18>-C(O)-NH-R<19>-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-5);

en la que el enlace marcado con * se adhiere al átomo de carbono que lleva R<2>en la fórmula (I),

R<12>y R<14>se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C6 lineal, preferiblemente de alcanodiilo C3 a C6 lineal,

R<13>es un alcanodiilo lineal C2 a C10, preferiblemente un alcanodiilo C4 a C8 lineal,

R<15>y R<16>se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C6 lineal, preferiblemente de alcanodiilo C2 a C4 lineal,

y en la que cada uno de R<13>y R<15>pueden llevar un grupo EDS como un sustituyente y preferiblemente cada uno de R<13>y R<15>llevan un grupo EDS como un sustituyente,

R<17>es un alcanodiilo C2 a C6 lineal, preferiblemente un alcanodiilo C2 a C4 lineal,

R<18>es un grupo fenileno, por ejemplo un grupo para-fenileno, y

R<19>es un alcanodiilo C2 a C6 lineal, preferiblemente un alcanodiilo C2 a C4 lineal.

También en este contexto, es preferente que el grupo EDS que se puede adherir a R<13>y R<15>tenga una estructura seleccionada de (E-1A), (E-2A) y (E-2B). Es más preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-2A) y (E-2B), y aún más preferiblemente tenga la estructura (E-2A).

Adicionalmente, es preferente que el número total de átomos de carbono en R<12>y R<13>en la fórmula (L-3), sin átomos de carbono contenidos en el grupo EDS como sustituyente, sea 6 a 16, más preferiblemente 6 a 14, y el número total de átomos de carbono en R<14>, R<15>y R<16>en la fórmula (L-4), sin átomos de carbono contenidos en el grupo EDS como sustituyente, sea 6 a 16, más preferiblemente 6 a 14.

Se entenderá a partir de la información proporcionada con respecto a los significados preferentes de n y X<1>anteriores que se prefiere particularmente que -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura (L-3) si n es 4, y que -X<2>-L<1>-X<1>- en la fórmula (I) tenga una estructura (L-4) o (L-5) si n es 2.

Se prefiere específicamente que, en la fórmula (I), n sea 2 y la fracción -X<2>-L<1>-X<1>-tenga una de las siguientes estructuras:

*-C(O)-NH-CH(COOH)-(CH<2>)<4>-NH-C(O)-CH(EDS)-CH<2>-C(O)-NH-(CH<2>)<3>-CH(COOH)-NH-C(O)-

(L-6)

*-C(O)-NH-CH(COOH)-(CH<2>)<2>-C(O)-NH-Ph-C(O)-NH-(CH<2>)<3>-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-7) en la que el enlace marcado con * se adhiere al átomo de carbono que lleva R<2>en la fórmula (I), EDS es un grupo EDS como se define en la presente memoria, que incluye sus realizaciones preferentes, y Ph es un grupo para-fenileno.

También en este contexto, es preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-1A), (E-2A) y (E-2B). Es más preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-2A) y (E-2B), y aún más preferiblemente tenga la estructura (E-2A).

En la fórmula (I), R<2>es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, preferiblemente un grupo aralquilo opcionalmente sustituido. Como se entenderá, el término “grupo aralquilo” como se utiliza en la presente memoria se refiere a un grupo alquilo en el que un átomo de hidrógeno se reemplaza por un grupo arilo como un sustituyente. Preferiblemente, el grupo aralquilo es un grupo en el que un grupo arilo se une a un grupo alcanodiilo. El grupo arilo o grupo aralquilo representado por R<2>se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH. El arillo y la porción de arilo del grupo aralquilo se seleccionan preferiblemente de fenilo y naftilo, tal como 2-naftilo. La porción alcanodiilo del grupo aralquilo es preferiblemente un grupo alcanodiilo C1-C4, más preferiblemente un grupo -CH<2>-. Por lo tanto, R<2>se selecciona más preferiblemente de -CH<2>-fenilo opcionalmente sustituido, y -CH<2>-naftilo opcionalmente sustituido, en particular -CH<2>-(2-naftilo) opcionalmente sustituido. El -CH<2>-(2-naftilo) opcionalmente sustituido es una opción particularmente preferente para R<2>.

El grupo arilo opcionalmente sustituido y la porción arilo del grupo aralquilo opcionalmente sustituido, que incluye sus realizaciones preferentes, se puede sustituir con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH. Por lo tanto, pueden estar presentes uno o más de uno, por ejemplo 2 o 3, sustituyente(s) seleccionado(s) de halógeno, preferiblemente I, y -OH. Sin embargo, es preferente que R<2>no sea sustituido.

En vista de lo anterior, se entenderá que, R<2>es aún más preferiblemente -CH<2>- (naftilo) no sustituido, y que el grupo naftilo es aún más preferiblemente un grupo 2-naftilo para proporcionar R<2>como -CH<2>-(2-naftilo).

En la fórmula (I), R<3>es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, preferiblemente un grupo aralquilo opcionalmente sustituido. El grupo arilo o grupo aralquilo se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH. El arilo y la porción arilo del grupo aralquilo se seleccionan preferiblemente de fenilo y naftilo, tal como 2-naftilo. Es más preferente que el arilo y la porción arilo del aralquilo sean fenilo. La porción alcanodiilo del grupo aralquilo es preferiblemente un grupo alcanodiilo C1-C4, más preferiblemente un grupo -CH<2>-. Por lo tanto, R<3>es más preferiblemente -CH<2>-fenilo opcionalmente sustituido.

El grupo arilo opcionalmente sustituido y la porción arilo del grupo aralquilo opcionalmente sustituido, que incluye sus realizaciones preferentes, se puede sustituir con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno, preferiblemente I, y -OH. Por lo tanto, pueden estar presentes uno o más de uno, por ejemplo 2 o 3, sustituyente(s) seleccionado(s) de halógeno, preferiblemente I, y -OH.

Preferiblemente, R<3>se sustituye con un sustituyente que es -OH, o con una combinación de un sustituyente -OH y un sustituyente -I.

Por lo tanto, se prefiere particularmente que R<3>es -CH<2>-fenilo sustituido sobre el anillo fenilo con un sustituyente que es -OH, o con una combinación de un sustituyente -OH y un sustituyente -I, y es aún más preferente que el sustituyente -OH está presente en la posición para del anillo fenilo relacionado con el grupo -CH<2>-.

En línea con lo anterior, se prefiere en la fórmula (I) que R<2>sea un grupo de la fórmula

y R3 es un grupo de la fórmula

en la que

marca el enlace que adhiere R2 y R3, respectivamente, al resto del compuesto de la fórmula (I).

Incluso más fuertemente preferente es la combinación de R2 y R3 en la que R2 es un grupo de la fórmula

Y R3 es un grupo de la fórmula

en la que

,A /W W W >

marca el enlace que adhiere R2 y R3, respectivamente, al resto del compuesto.

En la fórmula (I), r puede ser 0 o 1, y es preferente que r sea 1.

Adicionalmente, como se explicó anteriormente, p es 0 o 1 y q es 0 o 1, y es preferente que p+q = 1. Más preferiblemente, p es 0 y q es 1.

R4 en la fórmula (I) se selecciona de un grupo arilo y un grupo EDS,. El arilo se selecciona preferiblemente de fenilo y naftilo, tal como 2-naftilo. Por lo tanto, R4 se selecciona más preferiblemente de fenilo, naftilo, tal como 2-naftilo, y un grupo EDS. Es aún más preferiblemente un grupo EDS.

Si R4 es un grupo EDS, es preferente que el grupo EDS tenga una estructura seleccionada de (E-1A), (E-2A) y (E-1B).

X3 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, un enlace amina, y un grupo de la fórmula

en la que el enlace marcado en el grupo carbonilo se adhiere a X3 a RM y el otro enlace marcado se adhiere a X3 al resto de la molécula.

Preferiblemente, X3 se selecciona de un enlace amida y un grupo de la fórmula

en la que el enlace marcado en el grupo carbonilo se adhiere a X3 a RM y el otro enlace marcado se adhiere a X3 al resto de la molécula.

En una realización más preferente, X3 es un enlace amida -C(O)-NH- con el átomo de carbono adherido a RM. RM es un grupo marcador que comprende un grupo quelante que contiene opcionalmente un catión no radiactivo o radiactivo quelado.

Como se entenderá por el lector experto, la definición anterior de acuerdo con la cual RM comprende un grupo quelante abarca el caso de que RM es un grupo quelante; en este caso el grupo quelante normalmente se une directamente a X3; y el caso en la que RM comprende, junto con el grupo quelante, por ejemplo una fracción ligadora adicional; en este caso el grupo quelante se puede unir indirectamente a través de esta fracción ligadora adicional a X3.

El grupo quelante proporcionado por RM es adecuado para formar un quelato con un catión radiactivo o no radiactivo. Los grupos quelantes adecuados para diversos cationes son bien conocidos en la técnica y se pueden utilizar en el contexto de la presente invención.

El grupo quelante que contiene opcionalmente un catión no radiactivo o radiactivo quelado se selecciona preferiblemente de un grupo quelante que comprende al menos uno de

(i) una estructura de anillo macrocíclico con 8 a 20 átomos en el anillo de los cuales 2 o más, preferiblemente 3 o más, se seleccionan de átomos de oxígeno, átomos de azufre y átomos de nitrógeno; y

(ii) una estructura quelante de cadena abierta acíclica con 8 a 20 átomos de la cadena principal de los cuales 2 o más, preferiblemente 3 o más son heteroátomos seleccionados de átomos de oxígeno, átomos de azufre y átomos de nitrógeno.

Un grupo quelante ejemplar, y por lo tanto también un grupo ejemplar R<M>, es a residuo de un agente quelante seleccionado de bis(carboximetil)-1,4,8,11-tetraazabiciclo[6.6,2]hexadecano (CBTE2a), ácido ciclohexil-1,2-diaminatetraacético (CDTA), ácido 4-(1,4,8,11-tetraazaciclotetradec-1-il)-metilbenzoico (CPTA), N'-[5-[acetil(hidroxi)amino]pentil]-N-[5-[[4-[5-aminopentil-(hidroxi)amino]-4-oxobutanoil]amino]pentil]-N-hidroxibutandiamida (DFO), ácido 4,11-bis(carboximetil)-1,4,8,11-tetraazabiciclo[6.6,2]hexadecan (DO2A) 1.4.7.10- tetraazaciclododecan-N,N',N” ,N” '-tetraacético (DOTA), ácido 2-[ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-4,7,10-triacético]-pentanedioico (DOTAGA), N,N'-dipiridoxiletilendiamina-N,N'-diacetato-5,5'-bis(fosfat) (DPDP), ácido dietilenotriaminapentaacético (DTPA), ácido etilenodiamina-N,N'-tetraacético (EDTA), ácido etilenoglicol-O,O-bis(2-aminoetil)-N,N,N',N'-tetraacético (EGTA), ácido N,N-bis(hidroxibencil)-etilenodiamina-N,N'-diacético (HBED), ácido hidroxietildiaminatriacético (HEDTA), 1-(pnitrobencil)-1,4,7,10-tetraazaciclodecan-4,7,10-triacetato (HP-DOA3), 6-hidrazinil-N-metilpiridina-3-carboxamida (HYNIC), ácido 1,4,7-triazaciclononan-1-succínico -ácido 4,7-diacético (NODASA), 1-(1-carboxi-3-carboxipropil)-4,7-(carbooxi)-1,4,7-triazaciclononano (NODAGA), ácido 1,4,7-triazaciclononanotriacético (NOTA), 4,11-bis(carboximetil)-1,4,8,11-tetraazabiciclo[6.6,2]hexadecano (TE2A), ácido 1,4,8,11-tetraazaciclododecano-1,4,8,11-tetraacético (TETA), ácido terpiridin-bis(metilenoamintetraacético (TMT), ácido 1.4.7.10- tetraazaciclotridecan-N,N',N” ,N” '-tetraacético (TRITA), ácido trietilenotetraaminahexaacético (TTHA), W,W-bis[(6-carboxi-2-piridil)metil]-4,13-diaza-18-corona-6 (H<2>macropa) y bis-[(3-hidroxi-1,6-dimetil-4-oxo-1,4-dihidro-piridin- 2-ilmetil)-amida] de ácido 4-amino-4-{2-[(3-hidroxi-1,6-dimetil-4-oxo-1,4-dihidro-piridin-2-ilmetil)-carbamoil]-etil}heptanedioico (THP);

cuyo residuo se proporciona al unir covalentemente un grupo carboxilo contenido en el agente quelante al resto del compuesto a través de un enlace éster o amida, preferiblemente un enlace amida. Se entenderá por el lector experto que, en la fórmula (I), este enlace éster o amida en este caso puede ser abarcado por X<3>o preferiblemente se puede representar por X<3>.

Entre estos agentes quelantes, se prefieren DOTA y DOTAGA.

Por lo tanto, también es preferente que R<M>-X<3>- en la fórmula (I) es un grupo de la fórmula

en la que el enlace marcado conm»*»se adhiere al resto del compuesto de la fórmula (I), y en la que el grupo quelante puede contener un catión no radiactivo o radiactivo quelado.

Los cationes radioactivos ejemplares que se quelan opcionalmente por el grupo quelante se seleccionan de los cationes de 44Sc, 47Sc, 51Cr, 52mMn, 58Co, 52Fe, 56Ni, 57Ni, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 68Ga, 67Ga, 89Zr, 90Y, 89Y, 94mTc, 99mTc, 97Ru, 105Rh, 109Pd, 111Ag,110mIn, 111In, 113mIn, 114mIn, 117mSn, 121Sn, 127Te, 142Pr, 143Pr, 149Pm, 151Pm, 149Tb, 153Sm, 157Gd, 161Tb, 166Ho, 165Dy, 169Er, 169Yb, 175Yb, 172Tm, 177Lu, 186Re, 188Re, 191Pt, 197Hg, 198Au, 199Au, 2i 2pb, 203pb, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, y 227Th, o una molécula catiónica que comprende 18F, tal como 18F-[AlF]2+.

Los cationes quelados preferentes se seleccionan de los cationes de 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 90Y, 111In, 161Tb, 166Ho, 177Lu, 188Re, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 225Ac, y 227Th, o una molécula catiónica que comprende 18F.

En la fórmula (I), el grupo EDS está contenido al menos una vez, de tal manera que por ejemplo pueden estar contenidos uno, dos o tres grupos EDS. Preferiblemente, los compuestos o sales de acuerdo con la invención contienen un grupo o dos grupos EDS. Como se explicó anteriormente, los grupo(s) EDS se pueden llevar por L1, y/o pueden ser representados por R4

Los compuestos aún más preferentes de la fórmula (I) o sus sales son aquellos que contienen un grupo EDS que es llevado por el grupo ligador L1, que incluye sus realizaciones preferentes como se estableció anteriormente, y aquellos que contienen dos grupos EDS, uno que se representa por R4 (es decir r es 1) y uno que se lleva por L1, que incluye sus realizaciones preferentes como se estableció anteriormente.

Como se estableció anteriormente, el grupo EDS tiene una estructura seleccionada de (E-1a), (E-1B), (E-2a) y (E-2B):

en la que

marca el enlace que adhiere el grupo EDS, al resto del compuesto de la fórmula (I);

s es 1, 2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 1;

t es 1, 2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 2;

R<5A>es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO<2>y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R<5A>y el anillo fenilo indican que los s grupos R<5A>reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo;

R<5B>es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente adherido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1B), cuyo sustituyente se selecciona preferiblemente de -OH y -NH<2>, y que es más preferiblemente -NH<2>, y en la que el enlace entre R<5B>y el anillo fenilo indican que los s grupos R<5B>reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo;

R<6A>es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO<2>y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R<6A>y el anillo fenilo indican que los t grupos R<6A>reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; y

R<6B>es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente adherido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1B), cuyo sustituyente se selecciona preferiblemente de -OH y -NH<2>, y que es más preferiblemente -OH, y en la que el enlace entre R<6B>y el anillo fenilo indican que los t grupos R<6B>reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo.

Generalmente es preferente que, en el grupo EDS (E-1A), los sustituyentes R<5A>son los mismos para s > 1 y se seleccionan de -NO<2>y -COOH, y son más preferiblemente -COOH, y que, en el grupo EDS (E-2A), los sustituyentes R<6A>son los mismos para t > 1 y se seleccionan de -NO<2>y -COOH, y son más preferiblemente -COOH.

Asimismo, generalmente es preferente que, en el grupo EDS (E-1B), los sustituyentes R<5B>son los mismos para s > 1 y se seleccionan de -OH y -NH<2>, y son más preferiblemente -NH<2>, y que, en el grupo EDS (E-2B), los sustituyentes R<6B>son los mismos para t > 1 y se seleccionan de -OH y -NH<2>, y son más preferiblemente -OH. Por lo tanto, adicionalmente es preferente que el compuesto de la fórmula (I) contenga un grupo EDS que tiene la fórmula (E-2A):

en la que

marca el enlace que adhiere el grupo EDS al resto del compuesto de la fórmula (I); y

t es 1 o 2, y R<6A>es -NO<2>o -COOH.

Es aún más preferente como grupo EDS en el contexto de la presente invención es el grupo

En línea con lo anterior, los compuestos preferentes de la fórmula (I) se ilustran por la siguiente fórmula (la)

en la que n, X1, L1, X2, R2, R3, R4, q, p, X3 y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en el que está contenido el grupo EDS al menos una vez y tiene una estructura como se definió anteriormente, que incluye las realizaciones preferentes.

Los compuestos más preferentes de la fórmula (I) se ilustran por la siguiente fórmula (Ib)

en la que n, X1, L1, X2, R2, R3, R4, X3 y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en el que está contenido el grupo EDS al menos una vez y tiene una estructura como se definió anteriormente, que incluye las realizaciones preferentes.

Los compuestos aún más preferentes de la fórmula (I) se ilustran por la siguiente fórmula (Ic)

en la que n, X1, L1, X2, R4, X3 y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en el que está contenido el grupo EDS al menos una vez y tiene una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes.

Los compuestos aún más preferentes de la fórmula (I) se ilustran por las siguientes fórmulas (Id) y (Ie):

en la que R9A, R10A, R11A, R4, X3y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en la que ya sea (i) R4 es un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, o (ii) R10A lleve un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, o aplican ambos (i) y (ii);

en la que R9B, R10B, R11B, R4, X3y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en la que R4 es un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes.

Los compuestos particularmente preferentes de la fórmula (I) se ilustran por las siguientes fórmulas (If) y (Ig)

en la que R9A, R10A, R11A, R4, X3y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en la que ya sea (i) R4 es un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, o (ii) R10A lleve un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, o aplican ambos (i) y (ii);

en la que R9B, R10B, R11B, R4, X3y RM se definen como anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes, y en la que R4 es un grupo EDS con una estructura como se definió anteriormente, que incluye sus realizaciones preferentes.

En una realización preferente, dicho grupo quelante tiene un radionúclido unido cuyo radionúclido emite radiación a. Los radionúclidos que emiten la radiación a incluyen 212Bi, 213Bi y 225Ac.

Como se señaló anteriormente, la introducción de los sustituyentes deficientes en electrones aumentó drásticamente las capacidades de internalización. Esta característica da como resultado una mayor absorción tumoral y una retención especialmente más larga en el tejido tumoral, como lo demuestran los experimentosin vitro(ver ejemplos). Dado que el complejo del radionucleido que emite partículas de quelato alfa es propenso a la descomplejamiento a través del efecto de retroceso físico, la característica de retención intracelular alargada reducirá la probabilidad de radionucleidos que circulan librementein vivoy, por lo tanto, aumentará la seguridad y reducirá la radiación no deseada.

Los compuestos particularmente preferentes de la invención son los siguientes:

DOTAGA-y(3-I)fk(L-Asu[KuE]-2,4-DNBA) (PSMA-36):

DOTAGA-F(4-NO2)-y-2-nal-k(Suc-N5-om-C4-EuE) (PSMA-52):

2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)y-2-nal-e(Abz-W5-om -C-EuE) (PSMA-65):

Las propiedades ventajosas de estos compuestos de la invención se pueden ver a partir de los datos en las Tablas 1 y 2 a continuación, cuyos datos se presentan gráficamente en la Figura 1,

Tabla 1. Resumen de todos los parámetros investigadosin vitropara los inhibidores de PSMA en base a EuK. E designa Glu, u urea y K designa Lys. Las letras simples en minúsculas (tales como “y”) designan formas D del aminoácido respectivo. La concentración inhibidora media máxima (IC<50>) de los inhibidores de PSMA se determinó en un ensayo de unión competitiva utilizando células LNCaP (1,5 * 10<5>células/pocillo, 1 h, 4°C, HBSS BSA al 1 %) y ([<125>I]I-BA) KuE como radioligando. La actividad internalizada se expresa en [%] como absorción celular relativa a ([<125>I] I-BA) KuE (1,25 * 10<5>células/pocillo, placas recubiertas con PLL, c = 0,2 nm para ([<125>I]I-BA) KuE y c = 1,0 nm para inhibidores de PSMA marcados con<177>Lu. DMEM/F-12 BSA al 5 %, 37°C, 60 min). Los datos se corrigen para la unión no específica (2-PMPA 10 |jm). Los datos /C<50>y de intemalización se expresan como media ± DE (n=3). La lipofilia se expresa como logP (coeficiente de distribución en n-octanol/pBS) de inhibidores de PSMA radiomarcados. Datos para logP se expresan como media ± DE (n=6). La unión de albúmina (HSA) se expresa en [%] después del graficado logarítmico y la calibración (n=1). La configuración describe la composición estructuralN-a C-terminal simplificada del separador y el ligador de péptidos sin el quelante. n.d. = no determinado. “-II-” indica una conjugación simplificada.

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónI C 50[nM]Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA I&T -y(3-I)fk- 7,9 ± 2,4 75,5 ± 1,6 -4,12 ± 0,11 78,6

[nat/177Lu]PSMA-617 3,8 ± 1,7 160,1 ± 1,5 n.d. 74,7

[nat/177Lu]PSMA-36 -y(3-I)fk-1| -2,4-DNBA- 5,3 ± 1,0 189,8 ± 37,5 n.d. 82,5

Tabla 2. Resumen de todos los parámetros investigadosin vitropara los inhibidores de PSMA en base a EuE. La concentración inhibidora media máxima (/C<50>) de los inhibidores de PSMA se determinó en un ensayo de unión competitiva utilizando células LNCaP (1,5 * 10<5>células/pocillo, 1 h, 4°C, HBSS BSA al 1 %) y ([<125>I]I-BA) KuE como radioligando. La actividad internalizada se expresa en [%] como absorción celular relativa a ([<125>I]I-BA) KuE (1,25 * 10<5>células/pocillo, placas recubiertas con PLL, c = 0,2 nm para ([<125>I]I-BA) KuE y c = 1,0 nm para inhibidores de PSMA marcados con<177>Lu. DMEM/F-12 BSA al 5 %, 37°C, 60 min). Los datos se corrigen para la unión no específica (2-PMPA 10 jm ). Los datos/C<50>y de internalización se expresan como media ± DE (n=3). La lipofilia se expresa como logP (coeficiente de distribución en noctanol/PBS) de inhibidores de PSMA radiomarcados. Los datos para logP se expresan como media ± DE (n=6). La unión de albúmina (HSA) se expresa en [%] después del graficado logarítmico y la calibración (n=1). La configuración describe la composición estructuralN-aC-terminal simplificada del separador y el ligador de péptidos sin el quelante. n.d. = no determinado. “-II-” indica una conjugación simplificada.

Inhibidor PSMA ConfiguraciónI C o[nM] Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA I&T -y(3-I)fk-1| -KuE 7,9 ± 2,4 75,5 ± 1,6 -4,12 ± 0,11 78,6

[nat/177Lu]PSMA-46 -y-2-nal-k-1| -EuE 3,2 ± 1,1 216,2 ± 9,2 -4,21 ± 0,08 57,7

[nat/177Lu]PSMA-617 3,8 ± 1,7 160,1 ± 1,5 n.d. 74,7

-F(4-NO -nal-k(Suc-[<nat/177>Lu]PSMA-52<2>)-y-2

N5-orn-C4-EuE)3,4 ± 0,2 229,0 ± 8,0 -4,11 ± 0,07 95,4

2,4-DNBA-<[nat/177>Lu]PSMA-53 Dap(DOTAGA)-y-2-nal- 3,2 ± 0,5 293,6 ± 10,0 -4,08 ± 0,04 95,0

k(Suc-N5-orn-C4-EuE)

[nat/<1>77Lu]PSMA-61<-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[N5->orn-C4-EuE]-2,4-DNBA)4,5 ± 0,4 359,5 ± 22,6 -4,07 ± 0,05 63,3

[nat/i 77Lu]PSMA-62<-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[N5->orn-C4-EuE]-TMA)4,0 ± 0,2 343,0 ± 6,0 -4,12 ± 0,05 > 91,0

[<nat/i 77>Lu]PSMA-66<-Dap(TMA)y-2-nal->k(d[N5-orn-C4-EuE]-TMA)3,8 ± 0,3 297,8 ± 2,0 -4,25 ± 0,14 64,4

[nat/177Lu]PSMA-71<-2-Nal-y-2-nal-k(d[N5-orn->C4-EuE]-TMA)5,3 ± 2,0 206,8 ± 1,7 -4,13 ± 0,09 98,2

[nat/177Lu]PSMA-49<-F(4-NH2)y-2-nal-k(Suc->N5-orn-C4-EuE)2,5 ± 0,6 245,0 ± 4,2 -4,01 ± 0,11, 74,2,

-F(4-NH<2>)y-2-nal-e(Abz-[<nat/177>Lu]PSMA-60N5-orn-C4-6,6 ± 1,5<267,4 ± 7,9 -3,85 ± 0,13 n>9<o>8,<c ,>n.d.5 n.d. EuE)

Inhibidor PSMA Configuración/C ^[nM] Internalización logP HSA [%] j% ]__________

[<natí177>Lu]pSMA-78 -F(4-NH<2>)y-2-nal-k(d[N5- 289,0 ± 6,2 n.d. N.d.

orn-C4-EuE]-3,5-DHBA)<3,0 ± 0,6,>

2,4-DNBA-[<natí177>Lu]pSMA-65 Dap(DOTAGA)y-2-nal- 3,5 ± 0,3 340,2 ± 19,0 -4,15 ±<0,08>98,7 n.d.

n.d. n.d.

e(Abz-N5-orn-C4-EuE)

Los esquemas de etiquetado preferentes para estos compuestos aún más preferentes son como se define en la presente memoria anteriormente.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende o que consiste en uno o más compuestos o sales de la invención como se divulgó en la presente memoria anteriormente.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición diagnóstica que comprende o que consiste en uno o más compuestos o sales de la invención como se divulgó en la presente memoria anteriormente.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición terapéutica que comprende o que consiste en uno o más compuestos o sales de la invención como se divulgó en la presente memoria anteriormente.

La composición farmacéutica comprende adicionalmente vehículos, excipientes y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de vehículos, excipientes y/o diluyentes farmacéuticos adecuados son bien conocidos en la técnica e incluyen soluciones salinas tamponadas con fosfato, agua, emulsiones, tales como emulsiones de aceite/agua, diversos tipos de agentes humectantes, soluciones estériles, etc. Las composiciones que comprenden tales vehículos pueden ser formulado por procedimientos convencionales bien conocidos. Estas composiciones farmacéuticas se pueden administrar al sujeto a una dosis adecuada. La administración de las composiciones adecuadas se puede realizar de diferentes maneras, por ejemplo, por administración intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, tópica, intradérmica, intranasal o intrabronquial. Se prefiere particularmente que dicha administración se lleve a cabo mediante inyección y/o suministro, por ejemplo, a un sitio en el páncreas o en una arteria cerebral o directamente en el tejido cerebral. Las composiciones también se pueden administrar directamente al sitio objetivo, por ejemplo, mediante suministro biolístico a un sitio diana externo o interno, como el páncreas o el cerebro. El régimen de dosificación será determinado por el médico tratante y los factores clínicos. Como es bien sabido en las técnicas médicas, las dosificaciones para cualquier paciente dependen de muchos factores, que incluyen el tamaño del paciente, el área de la superficie corporal, la edad, el compuesto particular que se va a administrar, el sexo, el tiempo y la ruta de administración, la salud general y otros fármacos administrados simultáneamente. La materia farmacéuticamente activa puede estar presente en cantidades entre 0,1 ng y 10 mg/kg de peso corporal por dosis; sin embargo, se prevén dosis inferiores o superiores a este intervalo ejemplar, especialmente teniendo en cuenta los factores antes mencionados.

En la medida en que la composición farmacéutica, composición de diagnóstico y composición terapéutica divulgadas anteriormente comprenden uno o más compuestos de la invención, es preferente que no estén presentes más compuestos farmacéuticamente activos, compuestos diagnósticos activos o compuestos terapéuticamente activos. Como alternativa, pueden estar presentes otros compuestos terapéuticamente activos, diagnósticamente activos o farmacéuticamente activos, por ejemplo, agentes anticancerígenos.

La combinación de un tratamiento terapéutico con los compuestos de la presente invención podría tener un efecto de tratamiento sinérgico o acumulativo, similar al tratamiento de tumores neuroendocrinos con radioterapia [177Lu]DOTATATE en combinación con quimioterapia o inmunoterapias. Se ha iniciado un primer estudio de fase 3 que compara la combinación de 177Lu PRRT y capecitabina (Xeloda; Genentech), un agente de quimioterapia oral, con solo [177Lu]DOTATATE en Erasmus M<c>, Rotterdam en 2017 (van Essen M, Krenning EP, Kam BL, de Herder WW, van Aken MO, Kwekkeboom DJ. Report on short-term side effects of treatments with 177Lu-octreotate in combination with capecitabine in seven patients with gastroenteropancreatic neuroendocrine tumours. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2008;35:743-748).

Recientemente se han publicado estudios adicionales sobre terapias combinadas, denominadas terapia con quimiorradionucleidos del receptor de péptidos (PRCRT) (Kong G, Callahan J, Hofman MS, et al. High clinical and morphologic response using 90Y-DOTA-octreotate sequenced with 177Lu-DOTA-octreotate induction peptide receptor chemoradionuclide therapy (PRCRT) for bulky neuroendocrine tumours. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2017;44:476-489). En el futuro cercano se llevarán a cabo “enfoques de tratamiento combinado” similares para mejorar la eficiencia de las terapias de radioligando dirigidas a PSMA.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona uno o más compuestos o sales de la invención como se divulgó en la presente memoria anteriormente para uso en medicina.

Los usos preferentes en medicina son en medicina nuclear, tales como formación de imágenes de diagnóstico nuclear, también denominadas formación de imágenes moleculares nucleares, y/o radioterapia dirigida de enfermedades asociadas con una sobreexpresión, preferiblemente de PSMA en el tejido enfermo.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto o sal de la invención como se definió en la presente memoria anteriormente para utilizar en un procedimiento de diagnóstico y/o estadificación del cáncer, preferiblemente cáncer de próstata.

Las indicaciones preferentes son la detección o estadificación del cáncer, como, entre otros, gliomas de alto grado, cáncer de pulmón y especialmente cáncer de próstata y cáncer de próstata con metástasis, la detección de enfermedad metastásica en pacientes con cáncer de próstata primario de riesgo intermedio a alto riesgo, y la detección de sitios metastásicos, incluso a valores bajos de PSA en suero en pacientes con cáncer de próstata bioquímicamente recurrente. Otra indicación preferente es la formación de imágenes y la visualización de la neoangiogenia.

En términos de indicaciones médicas a ser sometidas a terapia, especialmente radioterapia, el cáncer es una indicación preferente. El cáncer de próstata es una indicación particularmente preferente.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto o sal de la invención como se definió en la presente memoria anteriormente para utilizar en un procedimiento de diagnóstico y/o estadificación del cáncer, preferiblemente cáncer de próstata.

Las figuras muestran:

Figura 1: Gráfico de telaraña de características para [nat/177Lu] PSMA I&T y [nat/177Lu] PSMA-62 y [nat/177Lu] PSMA-66.

Figura 2: Cinética de externalización de inhibidores de PSMA marcados con 177Lu seleccionados de células LNCaP. 1,25 * 105 células/pocillo se incubaron 1 h con el radioligando respectivo (c = 1,0 nm) a 37°C en solución DMEM (BSA al 5 %). Luego, se eliminó el sobrenadante y una vez se lavó con solución de DMEM (BSA al 5 %, 37°C). Posteriormente, ya sea A) solo se agregó solución DMEM (BSA al 5 %) o B) solución DMEM de bloqueo (BSA al 5 %, 10 pm de 2-PMPA) para reemplazo. La actividad internalizada celular total en t = 0 min se corrigió para la unión no específica (10 pm de 2-PMPA) y se normalizó al 100 %. Todos los datos se expresan como media ± d E (n = 3).

Figura 3: Biodistribución (en % ID/g) de 2,5 a 3,0 MBq (0,15 a 0,25 nmol) de [177Lu]PSMA-66 y [177Lu]PSMA I&T en ratones SCID CB-17 portadores de tumor LNCaP (n = 4, respectivamente).

Figura 4: Proyección de intensidad máxima (MIP) de una exploración pPET en ratones CB-17 SCID portadores de tumor LNCaP después de la inyección de aproximadamente 10,3 MBq (0,19 nmol de trazador) de [68Ga]PSMA-36 (exploración dinámica, cuadros resumidos de 1 a 1,5 h p.i.) (parte superior izquierda). TAC (gráfica logarítmica) en % ID/ml de [68Ga]PSMA-36 derivado de datos de PET dinámicos (tiempo de adquisición 90 min, reconstrucción OSEM 3D) en un ratón CB-17 SCID portador de tumor LNCaP de acumulación de sangre (corazón), riñón, tumor, músculo, glándula lagrimal y salival.

Figura 5: Proyección de intensidad máxima (MIP) de exploraciones pPET en ratones CB-17 SCID portadores de tumor LNCaP después de la inyección de aproximadamente 11 y 13 MBq (trazador de 0,15 a 0,25 nmol) del inhibidor de PSMA marcado con 68Ga PSMA-62 y PSmA-66, respectivamente (exploración dinámica, cuadros resumidos de 1 a 1,5 h p.i.) (arriba a la izquierda). TAC (gráfico logarítmico) en % ID/ml del respectivo inhibidor de PSMA marcado con 68Ga derivado de datos de PET dinámicos (90 min de tiempo de adquisición, reconstrucción OSEM 3D) en ratones SCID CB-17 portadores de tumor LNCaP de acumulación de sangre (corazón), riñón, tumor y músculo para ambos trazadores marcados con 68Ga.

Figura 6: Biodistribución (en % ID/g) de 2,5 a 6,0 MBq (0,15 a 0,25 nmol) de [177Lu]PSMA-62, [177Lu]PSMA-66, [177Lu]PSMA-71 y [177Lu]PSMA I&T en ratones SCID CB-17 portadores de tumor LNCaP (n = 4, respectivamente).

Los ejemplos ilustran la invención.

Ejemplo 1: Materiales y procedimientos

1. Información general

El Fmoc-(9-fluorenilmetoxicarbonil-) y todos los demás análogos de aminoácidos protegidos se adquirieron de Bachem (Bubendorf, Suiza) o Iris Biotech (Marktredwitz, Alemania). La resina de cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC) se obtuvo de PepChem (Tübingen, Alemania). Chematech (Dijon, Francia) suministró el quelante DOTAGA-anhídrido. El PSMA-DKFZ-617 se adquirió de compuestos químicos avanzados ABX (Radeberg, Alemania). Todos los disolventes necesarios y otros reactivos orgánicos se adquirieron de Alfa Aesar (Karlsruhe, Alemania), Sigma-Aldrich (Munich, Alemania) o VWR (Darmstadt, Alemania). La síntesis en fase sólida de los péptidos se realizó por operación manual utilizando un agitador de jeringa Intelli-Mixer (Neolab, Heidelberg, Alemania). La cromatografía líquida analítica de alto rendimiento en fase inversa (RP-HPLC) se realizó en una columna Nucleosil 100 C18 (5 pm, 125 * 4,0 mm, CS GmbH, Langerwehe, Alemania) utilizando un sistema de gradiente Shimadzu RP-HPLC (Shimadzu Deutschland GmbH, Neufahrn, Alemania). El análisis de los péptidos se realizó mediante la aplicación de diferentes gradientes de 0,1%(v/v)de ácido trifluoroacético (TFA) en H2O (disolvente A) y TFA al 0,1 % junto con(v/v)en acetonitrilo (MeCN) (disolvente B) con un flujo constante de 1 ml/min (los gradientes específicos se citan en el texto). El detector de UV/VIS Shimadzu SPD 20 A (Shimadzu Deutschland GmbH) se utilizó a A = 220 nm y 254 nm. La unión de HSA se determinó utilizando una columna analítica Chiralpak HSA (5 jm , 50 x 3 mm) conectada a un cartucho protector Chiralpak HSA (5 |jm, 10 x 3 mm) (Daicel Chemical Industries) comprado en Chiral Technologies Europe (Illkirch, Francia). La regresión no lineal para la unión de HSA se realizó utilizando OriginPro 2016G (Northampron, EE. UU.). Tiempos de retencióntRasí como los factores de capacidadKse citan en el texto. La RP-HPLC preparativa de los péptidos se logró en un sistema Shimadzu RP-HPLC utilizando una columna Multospher 100 Rp 18-5 (250 x 20 mm, CS GmbH) con un flujo constante de 5 ml/min. El Radio RP-HPLC analítico y preparativo del ligando de referencia radioyodado se realizó utilizando una columna Nucleosil 100 C18 (5 pm, 125 x 4,0 mm). Se detectó radiactividad a través de la conexión de la salida del fotómetro UV a un contador de centelleo de tipo pocillo de NaI(Tl) de EG&G Ortec (Munich, Alemania). Los compuestos marcados con 68Ga y 177Lu se analizaron como se publicó anteriormente [1, 2]. Los espectros de espectrometría de masas por ionización por electroaspersión (ESl-MS) se adquirieron en un espectrómetro de masas de CMS (Advion Ltd., Harlow, Reino Unido) y en un espectrómetro de masas Varian 500-MS IT (Agilent Technologies, Santa Clara, EE.UU.). Para el ensayo Bradford, se utilizó un espectrofotómetro V-630 UV-Vis de JASCO Germany GmbH (Gross-Umstadt, Alemania) y se realizó la centrifugación de las fracciones S9 en una centrífuga Avanti JXN-26 de Beckman Coulter GmbH (Krefeld, Alemania)) La centrifugación de los ensayos radiactivos del metabolito S9 se realizó utilizando una centrífuga Heraeus PICO 17 de Thermo Fisher Scientific Messtechnik GmbH (Munich, Alemania). Los datos de RMN se obtuvieron aplicando 300 K utilizando un AV 300 (300 MHz) o un<a>V 400 (400 MHz) deBruker(Billerica, EE. UU.). La incubación de las fracciones S9 para elex vivoanálisis de metabolitos se realizó en un Biometra UNO Thermoblock(Biometra,Gottingen, Deutschland).

2. Protocolos de síntesis (SP)

SP-1: Carga de resina 2-CTC: la resina 2-CTC (1,6 mmol/g) se carga con Fmoc-AA-OH (1,5 eq.) En diclorometano anhidro (DCM) con N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (4,5 eq.) A temperatura ambiente (RT) durante 2 h. El cloruro de tritilo restante se protege mediante la adición de 2 ml/g de metanol (MeOH) durante 15 min. Después de eso, la resina se filtra y se lava a fondo con DCM (2X), con dimetilformamida (DMF) (2X) y MeOH (2X), respectivamente, y se almacena al vacío durante la noche. La carga se determina utilizando las diferencias de peso:

(mto ta r mpeso-neto)x100 ° _mmol/g

(MAS ' m hci) x mpeso de resina

Fórmula 1. Determinación de la carga de resina: mtotai: masa de resina cargada (Fmoc-AA-OH y HCl); Mas: masa molar de aminoácido; peso mnet0: masa de resina utilizada; Mhci: masa molar de ácido clorhídrico

SP-2: Síntesis de péptidos mediante el acoplamiento TBTU/HOBt: Una solución de Fmoc-AA-OH (2,0 eq.), tetrafluoroborato deN,N,N’,N ’-Tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)uronio (TBTU) (2,0 eq.), N-Hidroxibenzotriazol (HOBt) (2,0 eq.), DIPEA (4,5 eq.) en DMF (8 ml/g de resina) se agregó al péptido de amina libre unido a resina y se agitó durante 2 h a RT y se lavó con DMF (6X).El acoplamiento con aminas secundarias o aromáticas se realizó empleando un protocolo diferente. Se disolvió Fmoc-AA-OH (3,0 eq.) en DMF (8 ml/g de resina) junto con 3-óxido hexafluorofosfato de 1 -[bis (dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU) (3,0 eq.), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (HOAt) (3,0 eq.) y DIPEA (6,0 eq.) y se agitó durante 15 min. La solución preactivada se agregó al péptido unido a la resina y se agitó durante 2 h a RT. Después de la terminación de la reacción, la resina se lavó con DMF (6X).En general, todos los andamios peptídicos se sintetizaron como se describió previamente (Weineisen, M.; Schottelius, M.; Simecek, J.; Eiber, M.; Schwaiger, M.; Wester, H. Development and first in human evaluation of PSMA I&T-A ligand for diagnostic imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine2014, 55, 1083-1083; Weineisen, M.; Simecek, J.; Schottelius, M.; Schwaiger, M.; Wester, H.-J. Synthesis and preclinical evaluation of DOTAGA-conjugated PSMA ligands for functional imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.EJNMMI research2014,4,1.).

SP-3: Desprotección de Fmoc en resina: el péptido protegido con Fmoc unido a resina se trató con piperidina al 20 % en DMF(v/v)durante 5 min y una segunda vez durante 15 min. Posteriormente, la resina se lavó a fondo con DMF (8X).

SP-4: Desprotección de Dde en resina: El péptido protegido con A/-(1-(4,4-dimet¡l-2,6-d¡oxoddohex¡l¡deno)et¡l) (Dde) (1,0 eq.) se disolvió en una solución de monohidrato de hidrazina al 2,0 % (N2H4- H2O) en DMF (v/v). Después de 15 min, el péptido desprotegido, si se une a resina, se lavó con DMF (6X) o precipitado en éter dietílico (Et2O) para dar el producto crudo. Si estaban presentes los grupos protectores de Fmoc- y Dde y solo era necesaria la desprotección de Dde, el péptido cargado de resina se trató con una solución que contenía NH2OH HCl (630 mg), imidazol (460 mg), DCM (0,5 ml), DMF (0,5 ml) y W-metil-2-pirrolidona (NMP) (2,5 ml) durante 3 h a RT. Posteriormente, el péptido cargado de resina se lavó con DMF (6X).

SP-5: Desprotección Alloc/Alilo en resina: El grupo protector Alloc/Alilo se eliminó del péptido unido a la resina utilizando una solución de DCM (6,0 ml) que contiene triisopropilsilano (TIPS) (50,0 eq.) y (trifenil)paladio (0) (Pd(PPh3)4) (0,3 eq.). La resina se trató con esta solución durante 1,5 h a RT. Finalmente, la resina se lavó con DCM (3X) para eliminar el Pd(PPh3)4.

SP-6: Desprotección de tBu/Boc: La eliminación de los grupos protectores de tert-butilo (tBu)/tertbutiloxicarbonilo (Boc) se realizó al disolver el producto crudo en TFA (aproximadamente 500 pl) y agitar durante 40 min a RT. Posteriormente, el TFA se eliminó casi por completo utilizando corriente de nitrógeno. Después de la precipitación en Et2O, el producto crudo se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El sedimento seco se utilizó adicionalmente para las siguientes etapas de síntesis.

SP-7.1:A) División del péptido de la resina con la preservación de los grupos protectores de cadena lateral:El péptido unido a la resina totalmente protegido se disolvió en una mezcla de DCM/trifluoroetanol (TFE)/ácido acético (AcOH) (6/3/1; v/v/v) y se agitó durante 30 min. La solución se filtró y la resina se disolvió en otra solución de división durante otros 30 min. Las fracciones se combinaron y el disolvente se concentró bajo presión reducida. El filtrado se redisolvió en tolueno y se concentró bajo presión reducida para eliminar el AcOH. La precipitación en agua o Et2O dio como resultado el péptido protegido de cadena lateral crudo.

SP-7.2:B) División de péptido de la resina con desprotección concurrente de todos los grupos protectores lábiles de ácido:El péptido unido a resina completamente protegido se disolvió en una mezcla de TFA/TIPS/agua (95/2,5/2,5; v/v/v) y agitó durante 30 min. La solución se filtró y la resina se trató de la misma manera durante otros 30 min. Posteriormente, las fracciones se combinaron y el disolvente se concentró bajo un flujo constante de nitrógeno. El péptido crudo se precipitó en Et2O y se dejó secar durante la noche.

SP-8: Desacetilación de fracciones de carbohidratos: La desacetilación se logró al disolver el inhibidor de PSMA en MeOH que contiene KCN (0,5 eq.) (Herzig, J.; Nudelman, A.; Gottlieb, H. E.; Fischer, B. Studies in sugar chemistry. 2. A simple method for O-deacylation of polyacylated sugars.The Journal of Organic Chemistry1986,51,727-730.) con agitación concomitante durante la noche a RT. El producto final se purificó mediante RP-HPLC.

SP-9: Preparación de inhibidores de PSMA no radioactivos con complejos metálicos:

SP-9.1:Compuestos natGa:Para la preparación de los complejos natGam, una solución acuosa (ac.) de 2,0 mm del inhibidor de PSMA (50 pl) y una solución ac. 2,0 mm de Ga(NO3)3 (50 pl) se mezcló y calentó a 40°C durante 30 min. La formación de quelatos se evaluó utilizando RP-HPLC y ESI-MS. La solución resultante de 1,0 mm se diluyó y se utilizó para determinación deIC50 in vitroy unión de HSA.

SP-9.2:Compuestos natLU:Los complejos natLum correspondientes se prepararon a partir de una solución acuosa 2,0 mm del inhibidor de PSMA con un exceso molar 2,5 de LuCh y se calentó a 95°C durante 30 min (solución ac. de 20 mm). Después de enfriar, la formación de quelato natLum se confirmó utilizando RP-HPLC y ESI-MS. Luego las soluciones acuosas de 1,0 mm resultantes de los respectivos complejos natLu se diluyeron y se utilizaron en estudiosIC50 in vitrosin procesamiento adicional.

3. Bloques de construcción para PSMA-36 y los inhibidores de PSMA en base a EuE

Di-ferf-butil (((s)-6-ammo-1-(ferf-butoxi)-1-oxohexan-2-il) carbamoil)-L-glutamato

Fórmula química C<24>H<45>N<3>O<7>

Peso molecular 487,64

((OíBu)KuE(OíBu)2) (1): La síntesis del motivo de unión a Lys-urea-Glu protegido con ferf-butilo (EuK) se sintetizó como se describió previamente mediante síntesis en fase de solución [3]. En resumen, una solución de DCM que contenía L-di-ferf-butil-glutamato HCl (2,0 g, 7,71 mmol, 1,0 eq.) se enfrió en hielo durante 30 min y luego se trató con trimetilamina (TEA) (2,69 ml, 19,28 mmol, 2,5 eq.) y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP) (3,3 mg, 0,3 mmol, 0,04 eq.). Después de agitación adicional durante 5,0 min, se disolvió 1,1'-carbonildiimidazol (CDI) (1,38 g, 8,84 mmol, 1,1 eq.) en DCM y se agregó lentamente durante un período de 30 min. La mezcla de reacción se agitó adicionalmente durante la noche y se dejó calentar a RT. La reacción se detuvo utilizando una solución de NaHCO<3>saturada (sat.) de (8 ml) con etapas de lavado concomitantes de agua (2X) y solución salina (2X) y se secó sobre solución de Na<2>SO<4>sat. El disolvente restante se eliminóin vacuoy el producto crudo (s)Di-ferf-butil 2-(1H-imidazol-1-carboxamido)pentanodioato se utilizó sin purificación adicional. RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):fR= 12,2 min;K= 5,8. Masa monoisotópica calculada (C<17>H<27>N<3>O<5>): 353,4; encontrado:m/z= 376,1 [M+Na]<+>. El producto crudo(s)Di-ferf-butil2-(1H-imidazol-1-carboxamido)pentanodioato (2,72 g, 7,71 mmol, 1,0 eq.) se disolvió en 1,2-dicloroetano (DCE) y se enfrió en hielo durante 30 min. A esta solución se le agregó TEA (2,15 ml, 15,42 mmol, 2,0 eq.) y H-Lys (Cbz)-OfBuHCl (2,87 g, 7,71 mmol, 1,0 eq.) y la solución se agitó durante la noche a 40 °C. El disolvente restante se evaporó y el producto crudo se purificó utilizando cromatografía flash sobre gel de sílice con una mezcla eluyente que contenía acetato de etilo (EtOAc)/hexano/TEA (500/500/0,8; v/v/v). Después de la eliminación del disolvente,(9R,13S)tri-ferf-butil-3,11 -dioxo-1 -fenil-2-oxa-4,10,12-triazapentadecano-9,13,15-tricarboxilato se obtuvo como aceite incoloro. RP-HPLC (40 a 100 % de B en 15 min):fR= 14,5 min;K= 6,25. Masa monoisotópica calculada (C<32>H<51>N<3>O<9>) = 621,8; encontrado:m/z= 622,3 [M+H]<+>. Para sintetizar (OfBu)KuE(OfBu)<2>se disolvió (1),(9R,13S)tri-ferf-butil-3,11 -dioxo-1 -fenil-2-oxa-4,10,12-triazapentadecano-9,13,15-tricarboxilato (3,4 g, 5,47 mmol, 1,0 eq.) en etanol (EtOH) (75 ml) y paladio sobre carbón activado (0,34 g, 0,57 mmol, 0,1 eq.) (10 %) se le dio a esta solución. El matraz que contenía la mezcla de reacción se purgó inicialmente con corriente de hidrógeno y la solución se dejó agitar durante la noche a RT bajo presión de hidrógeno ligera (globo). El producto crudo se purificó a través de celita y el disolvente se evaporóin vacuo.El producto deseado 1 se obtuvo como un sólido ceroso (1,9 g, 3,89 mmol, 71,6 % de rendimiento). RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):fR= 12,6 min;K= 6,4. Masa monoisotópica calculada (C<24>H<45>N<3>O<7>) = 487,6; encontrado: m/z = 488,3 [M+H]<+>, 510,3 [M+Na]<+>.

Ácido (s)-5-(ferí-butoxi)-4-(3-((s)-1,5-di-íert-butoxM,5-dioxopentan-2-N)ureido)-5-oxopentanoico ((OíBu) EuE (OíBu)2) (2):

Fórmula química: C<23>H<40>N<2>O<9>

Peso molecular: 488,58

La síntesis del motivo de unión a Glu-urea-Glu protegido con ferf-butilo (EuE) se sintetizó de manera similar como se describe para 1 [3] utilizando H-<L>-Glu(OBzl)-OfBuHCl en lugar de H-<L>-Lys-(Cbz)-OfBuHCl. El producto deseado se obtuvo como un sólido ceroso y fuertemente higroscópico (4,10 g, 8,39 mmol, 84 % de rendimiento). RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):fR= 11,3 min;K '= 7,69. Masa monoisotópica calculada (C<23>H<49>N<2>O<9>) = 488,3; encontrado: m/z = 489,4 [M+H]<+>, 516,4 [M+Na]<+>.

(s)-NHFmoc-Asu (OíBu)-OBzl (5): A una solución de (s)-Fmoc-Asu(OfBu)-OH (50 mg, 107,0 jmol, 1,0 eq.) en DMF se agregó HOAt (21,8 mg, 0,16 mmol, 1,5 eq.), Ha TU (61,0 mg, 161,0 jmol, 1,5 eq.) y DIPEA (73,2 |jl, 0,48 mmol, 4,5 eq.). Después de 15 min de agitación a RT, se agregó adicionalmente alcohol bencílico (22,2 |jlL, 0,32 mmol, 3,0 eq.) y la solución se agitó durante la noche. Finalmente, el disolvente se eliminóin vacuo.La finalización de la reacción de 5 se analizó mediante RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):fR= 17,1 min;K’= 7,55. Masa monoisotópica calculada para 5 (C<34>H<39>NO<6>) = 557,28; encontrado:m/z= 580,7 [M+Na]<+>.

(s)-NHFmoc-Asu-OBzl (6): La desprotección de fBu del producto crudo 5 se realizó con una mezcla de agitación (v/v) de TFA (95 %) y DCM (5 %) a RT durante 45 min. Después de la evaporación del disolvente, el producto crudo 6 se purificó utilizando RP-HPLC preparativa (60 a 80 % de B en 15 min):fR= 9,3 min;K’= 8,9. Masa monoisotópica calculada para 6 (C<30>H<31>NO<6>) = 501,22; encontradom/z= 524,5 [M+Na]<+>.

OBzl-(s)-Fmoc-Asu[(OíBu)KuE(OíBu)2](7):A una solución de 6 (51,8 mg, 10,3 |jmol, 1,0 eq.) en DMF se agregó HOBt (20,9 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq.), TBTU (36,3 mg, 15,5 jmol, 1,5 eq.) y DIPEA (79,4 j l , 59,7 mg, 0,46 mmol, 4,5 eq.). Después de 15 min de agitación, se agregó 1 (75,6 mg, 15,5 jmol, 1,5 eq.) y se agitó adicionalmente durante 20 h a RT. El producto bruto 7 se purificó utilizando RP-HPLC preparativa (70 a 80 % de B en 15 min):ír= 8,9 min;K= 1,97. Masa monoisotópica calculada para 7 (C54H74N4O12) = 970,53; encontrado:m/z= 971,8 [M+H]+.

(s)-Fmoc-Asu[(OíBu)KuE(OíBu)2] (8): Para la desprotección de alcohol bencílico (Bzl), 7 se disolvió (57,2 mg, 65,0 jmol, 1,0 eq.) en EtoH (2,0 ml) y se agregó paladio sobre carbón activado (10 %) (5,72 mg, 9,0 jmol, 0,1 eq.). El matraz se purgó previamente con corriente de hidrógeno y la solución se agitó bajo una ligera presión de hidrógeno (globo). Después de 70 min de agitación, el producto crudo se filtró a través de celita, el EtOH se evaporóin vacuoy el producto se purificó utilizando RP-HPLC preparativa (70 a 70,5 % B en 15 min):ír= 6,5 min;K= 0,54. Masa monoisotópica calculada para 5 (C47H68N4O12) = 880,48; encontrado:m/z= 881,8 [M+H]+.

OPfp-(s)-Fmoc-Asu[(OíBu)KuE(OíBu)2] (9):

A una solución de 8 (13,6 mg, 15,4 jmol, 1,0 eq.) en DMF seco se le agregó DIC (4,77 jl, 1,94 mg, 30,8 jmol, 2,0 eq.) y PfpOH (5,67 mg, 30,8 jmol, 2,0 eq.). Después de 5 min de agitación, se agregó piridina (2,49 jl, 31,0 jmol, 2,0 eq.) y la solución se dejó agitar durante la noche a RT. La finalización de la reacción, de 9 se analizó mediante<r>P-H<p>LC (10 a 90 % de B en 15 min):ír= 17,2 min;K= 7,6. Masa monoisotópica calculada para 9 (C53H67F5N4O12) = 1046,47; encontrado:m/z= 1069,8 [M+Na]+.

NHS-2,4-dinitrobenzoato (NHS-DNBA) (27):

Peso molecular: 309,02

A una solución de ácido 2,4-dinitrobenzoico (DNBA) (10,0 mg, 47,1 jmol, 1,0 eq.) en THF seco se le dioN,N-diciclohexilcarbodiimida (DCC) (9,7 mg, 47,1 jmol, 1,0 eq.) y N-hidroxisuccinimida (NHS) (10,8 mg, 94,3 jmol, 2,0 eq.) y la mezcla de reacción se dejó agitar durante la noche. El producto crudo se purificó utilizando RP-HPLC. Rp-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):ír= 10,21 minK= 4,1. Calculado masa monoisotópica (C11H7N3Os)= 309,02; encontrado: no detectable en ESI-MS

DOTAGA-3-yodo-d-Tyr-d-Phe-d-Lys-OH (DOTAGA-y(3-I) fk) (30) :

La síntesis de 30 se realizó a través de la estrategia de fase sólida como se describió anteriormente [2, 3]. En resumen: el punto de partida inicial fue la carga de resina de 2-CTC de acuerdo con SP-1 de Fmoc-<D>-Lys (Boc)-OH. Después de la conjugación de lisina, el Fmoc se desprotegió de acuerdo con SP-3 y la Fmoc-<D>-fenilalanina se acopló aplicando SP-2. Se utilizó el mismo procedimiento para acoplar Fmoc-<D>-Tyr (3-I)-OH. Después de completar la reacción, el grupo protector Fmoc se dividió de acuerdo con SP-3 y el péptido unido a la resina se condensó con el quelante utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.) en DMF. La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Por último, el producto crudo se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2 y se precipitó en Et<2>O y se centrifugó. El sobrenadante se eliminó y 30 se purificó utilizando RP-HPLC. RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):tR= 6,2 minK= 2,1. Masa monoisotópica calculada (C<43>H<61>IN<8>O<14>) = 1.040,34; encontrado:m/z= 1.040,5 [M+H]<+>,m/z= 521,3 [M+2H]<2+>,m/z= 1.063,4 = [M+Na]<+>.

DOTAGA-y(3-I)fk(L-Asu[KuE]) (PSMA-8):

A una solución de DMF que contiene 30 (5,0 mg, 4,8 pmol, 1,0 eq.), se agregaron 9 (7,5 mg, 7,2 pmol, 1,5 eq.) y DIPEA (3,3 pl, 21,6 pmol, 4,0 eq.). La solución de reacción se dejó agitar durante la noche a RT. Una vez completada la reacción, el disolvente se eliminóin vacuoy el producto crudo se trató con una mezcla de piperidina en DMF (20/80; v/v) durante 15 min para lograr la desprotección de Fmoc. El disolvente se redujo a aproximadamente 300 pl mediante evaporaciónin vacuo,se precipitó en Et2O y se centrifugó. Con el sedimento resultante se procesó de acuerdo con SP-6 para la eliminación de tBu. El producto final se purificó mediante RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):tR= 6,09 minK=2,05. Masa monoisotópica calculada (C63H93IN12O23) = 1.512,55; encontrado:m/z= 1.513,9 [M+H]+, 757,8 [M+2H]2+.

DOTAGA-y(3-I)fk(L-Asu[KuE]-2,4-DNBA) (PSMA-36):

Fórmula química: C70H95IN14O28

Peso molecular: 1707,50

La síntesis de PSMA-36 se logró al disolver PSMA-8 (3,0 mg, 3,3 |jmol, 1,0 eq.) en DMF y la adición de 27 (4,1 mg, 13,2 jmol, 4,0 eq.) y DIPEA (2,3 jl, 13,2 jmol, 4,0 eq.). La solución se agitó durante 10 h a RT y el producto final se purificó mediante RP-HPLC (10 a 50 % de B en 15 min):tR= 12,12 minK=5,06. Masa monoisotópica calculada (C70H95IN14O28) = 1.706,55; encontrado:m/z= 1.707,8 [M+H]+, 854,7 [M+2H]2+.

[natLu] DOTAGA-y(3-I)fk(L-Asu[KuE]-2,4-DNBA) ([natLu] PSMA-36): RP-HPLC (10 a 60 % de B en 15 min):ír= 9,81 minK=3,91. Masa monoisotópica calculada (C70H92IN-m028Lu) = 1.878,47; encontrado:m/z= 1.879,9 [M+H]+.

La ilustración esquemática de la síntesis de PSMA-36. (a) HOAt, HATU, DIPEA, alcohol bencílico, [DMF]; (b) TFA al 95 %, DCM al 5 %; (c) 1, HOBt, TBTU, DIPEA, [DMF]; (d) Pd/C (10 %), H2, [EtOH]; (e) DIC, PFP, piridina, [DMF]; (f) 30, DIPEA, [DMF]; (g) piperidina al 20 % en DMF, [DMF]; (h) TFA; (i) 27, DIPEA [DMF]

4. Síntesis de inhibidores de PSMA en base a EuE PSMA-52 y PSMA-53

DOTAGA-F(4-NO2)-y-2-nal-k(Suc-N5-orn-C4-EuE) (PSMA-52):

La carga de resina inicial con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre tratado con anhídrido succínico (4,0 eq.) y DIPEA (1,5 eq.) disuelto en DMF. La mezcla de reacción se dejó reaccionar durante la noche a RT. A continuación, Fmoc-<D>-Lys-OtBu • HCl (1,5 eq.) se acopló de acuerdo con SP-2 y se desprotegió con Fmoc como se describe en SP-3. Las siguientes conjugaciones con los aminoácidos protegidos con Fmoc Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc-<L>-Phe(4-NO<2>)-OH se realizaron como se describe en SP-2. El aminoácido desprotegido Fmoc W-terminal se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-h PlC. RP-HPLC (10 a 60 % de B en 15 min):tR= 9,71 minK=3,86. Masa monoisotópica calculada (C<76>H<100>N<14>O<29>) = 1,672,68; encontrado:m/z= 1,673,0 [M+H]<+>.

[<nat>Lu] DOTAGA-F(4-NO<2>)-y-2-nal-k(Suc-N5-orn-C4-EuE) ([<nat>Lu] PSMA-52): RP-HPLC (10 a 60 % B en 15 min):}r= 9,4 minK=3,7. Masa monoisotópica calculada (C76H97N-m029Lu) = 1.844,6; encontrado:m/z= 1.846,0 [M+H]<+>.

2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)-y-2-nal-k(Suc-W5-orn-C4-EuE) (PSMA-53):

La carga inicial de resina con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con anhídrido succínico (4,0 eq.) y DIPEA (1,5 eq.) disuelto en DMF. La mezcla de reacción se dejó reaccionar durante la noche a RT. A continuación, Fmoc-<D>-Lys-OtBu • HCl (1,5 eq.) se acopló de acuerdo con SP-2 y se desprotegió con Fmoc como se describe en SP-3. Las siguientes conjugaciones con los aminoácidos protegidos con Fmoc Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y de Fmoc-<L>-Dap(NHDde)-OH se realizaron como se describe en SP-2. Después del acoplamiento de Fmoc-<L>-Dap(NHDde)-OH, se logró la desprotección de Fmoc como se describe en SP-3. A continuación, el grupo amino libre se conjugó con ácido 2,4-dintrobenzoico (2,4-DNBA) utilizando 2,4-DNBA (2,0 eq.), HOBt (2,0 eq.), TBTU (2,0 eq.) y DIPEA (4,0eq.) en DMF. Después de completar la reacción, se logró la desprotección de Dde utilizandos P-5. El aminoácido libre N-terminal<L>-Dap se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando DOTAGA-anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-HPLC.

RP-HPLC (10 a 60 % de B en 15 min):tR= 11,71 minK=4,86. Masa monoisotópica calculada (C<77>H<100>N<16>O<32>) = 1.760,67; encontrado:m/z= 1.762,1 [M+H]<+>.

[natLu] 2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)-y-2-nal-k(Suc-W5-orn-C4-EuE) ([natLu] PSMA-53): RP-HPLC (10 a 60 % B en 15 min):tR= 8,3 minK=3,15. Masa monoisotópica calculada (C<77>H<97>N-<i6>O<32>Lu) = 1.932,59; encontrado:m/z= 1.933,7 [M+H]<+>.

La lustración esquemática del procedimiento de síntesis general de los inhibidores de PSMA en base a EuE PSMA-52 y PSMA-53 ejemplificados por PSMA-52. (a) piperidina al 20 % en DMF, 2, HOBt, TBTU, DIPEA [DMF]; (b) anhídrido succínico, DIPEA [DMF]; (c) Fmoc<.D/L->Lys-OAN ■ HCl, HOBt, TBTU, DIPEA [DMF]; (d) piperidina al 20 % en DMF, Fmoc-<D>-2-Nal-OH, HOBt, TBTU, DIPEA [DMF]; (e) piperidina al 20 % en DMF, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA [DMF]; (f) piperidina al 20 % en DMF, Fmoc-D-Phe(4-NH2)-OH, HOBt, TBTU, DIPEA [DMF]; (g) DOTAGA anhídrido, DIPEA [DMF]; (h) TFA;

5. Síntesis de PSMA-61 y PSMA-62

DOTAGA-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[W5-orn-C-EuE]-2,4-DNBA) (PSMA-61):

Fórmula química: C83H105N17O32

Peso molecular: 1852.84

La carga inicial de resina con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con Fmoc-<D>-Asp-OAllHCl (1,5 eq.) de acuerdo con SP-2. El grupo amino de Fmoc-<D>-Asp-OAllHCl se desprotegió de acuerdo con SP-3 y se conjugó con 2,4-DNBA utilizando 2,4-DNBA (1,5 eq.), HOBt (2,0 eq.), TBTU (2,0 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en DMF. Después de completar la reacción, se logró la desprotección de alilo de acuerdo con SP-5. Las siguientes etapas incluyeron la conjugación repetitiva con Fmoc-<D>-Lys-OtBuHCl (1,5 eq.), Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc-<L>-Phe(4-NHBoc)-OH de acuerdo con SP-2. El aminoácido desprotegido con Fmoc W-terminal<L>-Phe(4-NHBoc)-OH se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se divide de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-h PlC.

RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):tR= 6,40 minK=2,2. Masa monoisotópica calculada (C<83>H<105>N<17>O<32>) = 1.851,71; encontrado:m/z= 1.852,5 [M+H]<+>, 926,7 [M+2H]<2+>. [natLu] DOTAGA-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[W5-orn-C*-EuE]-2,4-DNBA) ([natLu] PSMA-61): RP-HPLC (10 a 90 % de B en 15 min):tR= 8,22 minK=3,11. Masa monoisotópica calculada (C<s3>H<102>N<17>O<32>Lu) = 2.023,63; encontrado:m/z= 1.013,1 [M+2H]<2+>.

DOTAGA-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[W5-orn-C-EuE]-TMA) (PSMA-62):

La carga inicial de resina con Fmoc-D-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a D-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con Fmoc-<D>-Asp-OAll • HCl (1,5 eq.) de acuerdo con SP-2. El grupo amino de Fmoc-<D>-Asp-OAll • HCl fue desprotegido con Fmoc de acuerdo con SP-3 y protegido con Dde-OH (2,0 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en DMF a RT. La reacción se dejó agitar durante la noche. Posteriormente, se logró la desprotección de alilo de<D>-Asp aplicando SP-5. Las siguientes etapas incluyeron la conjugación repetitiva con Fmoc-<D>-Lys-OtBuHCl (1,5 eq.), Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc-<L>-Phe(4-NHBoc)-OH de acuerdo con SP-2. Para conjugar TMA con<D>-Asp, se logró la desprotección selectiva de Dde aplicando SP-4 para proporcionar el grupo amino libre. TMA se acopló utilizando TMA (2,0 eq.), HOBt (1,5 eq.), TBTU (1,5 eq.) y DIPEA (10 eq.) en DMF. La reacción se dejó agitar durante 8 h a RT. Después de la conjugación de t Ma , se logró la desprotección de Fmoc de Fmoc-<D>-Phe(4-NHBoc)-OH utilizando SP-3. El aminoácido desprotegido con Fmoc W-terminal<l>-Phe(4-NHBoc)-OH se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando<d>O<t>AGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-HPLC. RP-HPLC (10 a 70 % de B en 15 min):tR= 7,48 minK=2,74. Masa monoisotópica calculada (C<85>H<107>N<15>O<32>) = 1.849,72; encontrado:m/z= 1.850,5 [M+H]<+>, 925,7 [M+2H]<2+>.

[natLu] DOTAGA-F(4-NH2)y-2-nal-k(d[W5-om-C*-EuE]-TMA) ([natLu] PSMA-62): RP-HPLC (10 a 70 % B en 15 min):tR= 7,27 minK=2,64. Masa monoisotópica calculada (C<s5>H<104>N<15>O<32>Lu) = 2.021,64; encontrado:m/z= 1.012,3 [M+2H]<2+>.

6. Síntesis de PSMA-65, PSMA-66 y PSMA-71

2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)y-2-nal-e(Abz-W5-orn-C-EuE) (PSMA-65):

Fórmula química: C79H96N16O32

Peso molecular 1781,72

La carga inicial de resina con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con Fmoc-4-Abz-OH (1,5 eq.), HOAt (1,5 eq.), HATU (1,5 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en DMF. La reacción se dejó agitar durante la noche a RT. En la siguiente etapa, el residuo de Abz se desprotegió con Fmoc de acuerdo con SP-3. Las siguientes etapas incluyeron la conjugación repetitiva con Fmoc-<D>-Glu-OtBu, Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc-<L>-Dap(Dde)-OH de acuerdo con SP-2. Después de la desprotección con Fmoc de Fmoc-<L>-Dap(Dde)-OH de acuerdo con SP-3, se acopló 2,4-DNBA utilizando 2,4-DNBA (1,5 eq.), HOBt (2,0 eq.), TBTU (2,0 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en DMF. Una vez completada la reacción, el residuo de<L>-Dap(Dde) se desprotegió en Dde de acuerdo con SP-4 y se conjugó con el quelante utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-HPLC. RP-HPLC (10 a 60 % de B en 15 min):tR= 10,2 minK=4,1. Masa monoisotópica calculada (C<79>H<96>N<16>O<32>) = 1.780,64; encontrado:m/z= 1.781,3 [M+H]<+>.

[natLu] 2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)y-2-nal-e(Abz-W5-om-C*-EuE) ([natLu] PSMA-65): RP-HPLC (10 a 60 % B en 15 min):tR= 9,8 minK=3,9. Masa monoisotópica calculada (C<79>H<93>N-<i6>O<32>Lu) = 1.952,56; encontrado:m/z= 1.954,0 [M+H]<+>.

DOTAGA-Dap(TMA)y-2-nal-k(d[W5-om-C*-EuE]-TMA) (PSMA-66):

Fórmula química: C88H107N15O37

Peso molecular: 1966,89

La carga inicial de resina con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con Fmoc-<D>-Asp-OAll-HCl (1,5 eq.) de acuerdo con SP-2. El grupo amino de Fmoc-<D>-Asp-OAll-HCl se desprotegió con Fmoc de acuerdo con SP-3 y se protegió con 2,0 eq. Dde-OH y 4,0 eq. DIPEA en DMF. La reacción se dejó agitar durante la noche. Posteriormente, se logró la desprotección de alilo de<D>-Asp aplicando SP-5. Las siguientes etapas incluyeron la conjugación repetitiva con Fmoc-<D>-Lys-OtBuHCl (1,5 eq.), Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc- 1-Dap(Dde)-OH de acuerdo con SP-2. Para conjugar TMA con<D>-Asp y<L>-Dap, se logró la desprotección selectiva de Dde aplicando SP-4 para proporcionar los grupos amino libres. TMA se acopló utilizando TMA (4,0 eq.), HOBt (3,0 eq.), TBTU (3,0 eq.) y DIPEA (20 eq.) en DMF. La reacción se dejó agitar durante 8 h a RT. Después de la conjugación de TMA, se logró la desprotección de Fmoc de Fmoc-<L>-Dap(TMA)-OH utilizando SP-3. El aminoácido desprotegido con Fmoc W-terminal<L>-Dap se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et<2>O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-Hp LC. RP-HPLC (10 a 70 % de B en 15 min):tR= 7,48 minK=2,74. Masa monoisotópica calculada (C<88>H<107>N<15>O<37>) = 1.965,70; encontrado:m/z= 1.966,4 [M+H]<+>, 984,1 [M+2H]<2+>.

[natLu] DOTAGA-Dap(TMA)y-2-nal-k(d[W5-orn-C-EuE]-TMA) (PSMA-66) RP-HPLC (10 a 70 % de B en 15 min ):tR= 7,46 minK=2,73. Masa monoisotópica calculada (C<88>H<108>N<15>O<37>Lu) = 2.137,62; encontrado:m/z= 1.070,4 [M+2H]<2+>.

DOTAGA-2-Nal-y-2-nal-k(d[W5-orn-C-EuE]-TMA) (PSMA-71):

La carga inicial de resina con Fmoc-<D>-Orn(NHDde)-OH se realizó como se describe en SP-1. Después de la desprotección de Fmoc de acuerdo con SP-3, 2 (1,5 eq.) se acopló a<D>-Orn(NHDde) de acuerdo con SP-2. En la siguiente etapa, el grupo protector de Dde se dividió de acuerdo con SP-4 y el grupo amino libre se trató con Fmoc-<D>-Asp-OAll • HCl (1,5 eq.) de acuerdo con SP-2. El grupo amino de Fmoc-<D>-Asp-OAll • HCl fue desprotegido con Fmoc de acuerdo con SP-3 y protegido con Dde-OH (2,0 eq.) y DIPEA (4,0 eq.) en DMF a RT. La reacción se dejó agitar durante la noche. Posteriormente, se logró la desprotección de alilo de<D>-Asp aplicando SP-5. Las siguientes etapas incluyeron la conjugación repetitiva con Fmoc-<D>-Lys-OtBuHCl (1,5 eq.), Fmoc-<D>-2-Nal-OH, Fmoc-<D>-Tyr(OtBu)-OH y Fmoc-<L>-2-Nal-OH de acuerdo con SP-2. Para conjugar TMA con<d>-Asp, se logró la desprotección selectiva de Dde aplicando SP-4 para proporcionar el grupo amino libre. TMA se acopló utilizando TMA (2,0 eq.), HOBt (1,5 eq.), TBTU (1,5 eq.) y DiPEA (10 eq.) en Dm F. La reacción se dejó agitar durante 8 h a RT. Después de la conjugación de TMA, se logró la desprotección de Fmoc de Fmoc-<D>-2-Nal-OH utilizando SP-3. El aminoácido desprotegido con W-terminal Fmoc<L>-2-Nal-OH se conjugó con el quelante en la etapa final utilizando DOTAGA anhídrido (2,0 eq.) y DIPEA (2,0 eq.). La reacción se dejó agitar durante 48 h a RT. Después de la terminación de la reacción con DOTAGA-anhídrido, el péptido se dividió de la resina de acuerdo con SP-7.2, el producto crudo precipitado en Et2O, se centrifugó y se eliminó el sobrenadante. El producto final se purificó mediante RP-Hp LC. RP-HPLC (10 a 80 % de B en 15 min):tR= 7,57 minK=2,79. Masa monoisotópica calculada (C89H108N14O32) = 1.884,73; encontrado:m/z= 1.886,1 [M+H]+, 943,5 [M+2H]2+.

[natLu] DOTAGA-2-Nal-y-2-nal-k(d[W5-om-C*-EuE]-TMA) ([natLu] PSMA-67): RP-HPLC (10 a 90 % B en 15 min):tR= 7,81 minK=2,91. Masa monoisotópica calculada (C89H105N-<m>O32L<u>) = 2,056,64; encontrado:m/z= 1,029,7 [M+2H]2+.

7) . Radiomarcaje

etiquetadode68Ga:El generador 68Ge/68Ga se eluyó con HCl aq (1,0 m), del cual una fracción de 1,25 ml, que contenía aproximadamente el 80 % de la actividad (600 a 800 MBq), se transfirió a un frasco de reacción (ALLTECH, 5 ml). El frasco se cargó previamente con el compuesto respectivo (5,0 nmol) y un solución ac. de ácido 2-(4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil)-etanosulfónico (HEPES) (950 pl, 2,7 m). El frasco de reacción se calentó durante 5 min a 95°C con la fijación posterior del compuesto radiomarcado en un cartucho SPE preacondicionado (luz C8, SepPak). Después de purgar el cartucho con agua (10 ml) de antemano, la elución del inhibidor de PSMA radiomarcado del cartucho se logró con una mezcla de EtOH y agua (1/1;v/v),solución salina tamponada con fosfato (PBS) (1,0 ml) y nuevamente agua (1,0 ml). Al final del radiomarcado, el EtOH se evaporóin vacuoy el marcador se utilizó sin ninguna purificación adicional. La pureza radioquímica se controló utilizando Radio-TLC (tampón de citrato de sodio 1,0 M y tampón de NH4OAc/MeOH 0,06 M (1/1; v/v)).

etiquetado de 177Lu:Los compuestos marcados con 177Lu se prepararon como se describió previamente [5] con modificaciones menores y se utilizaron sin purificación adicional. En resumen, se agregó tampón NH4OAc (10 pl, 1,0 m, pH = 5,9) el marcador respectivo (0,75 a 1,0 nmol, 7,5 a 10 pl), 177LuCl3 (10 a 40 MBq; > 3000 GBq/mg, 740 MBq/ml, 0,04 m HCl, iTg , Garching, Alemania) y finalmente se llenó con agua pura con trazas (hasta 100 pl) (Merck, Darmstadt, Alemania). La mezcla de reacción se calentó durante 40 min a 95°C y la pureza radioquímica se determinó utilizando radio-TLC.

etiquetado 125I:Brevemente, el precursor estanilado (SnBu3-BA)(OtBu)KuE(OtBu)2 (PSMA-45) (aproximadamente 0,1 mg) se disolvió en una solución que contenía ácido peracético (20 pl), [125I]NaI (5,0 pl, aproximadamente 21,0 MBq) (74 TBq/mmol, 3,1 GBq/ml, NaOH 40 mm, Hartmann Analytic, Braunschweig, Alemania), MeCN (20 pl) y AcOH (10 pl). La solución de reacción se incubó durante 10 min a RT, se cargó en un cartucho (C18 Sep Pak Plus, preacondicionado con 10 ml de MeOH y 10 ml de agua) y se enjuagó con agua (10 ml). Después de elución con una mezcla 1/1 (v/v) de EtOH y MeCN (2,0 ml), la solución se evaporó a sequedad bajo una corriente de nitrógeno suave y se trató con TFA (200 pl) durante 30 min con posterior evaporación de TFA. El producto en bruto de ([125I]I-BA)KuE se purificó mediante radio-RP-HPLC (20 a 40 % de B en 20 min):tR= 13,0 min;K= 6,2.

8) . Determinación de la unión de HSA

Se realizaron experimentos de unión a HSA tal como se describió anteriormente [6]. La fase móvil consistió en un sistema de gradiente binario con un caudal total constante de 0,5 ml/min. La fase móvil A fue una solución de NH4OAC pH 6,9 de 50 mm, la fase móvil B fue 2-propanol (grado RP-HPLC, VWR, Alemania). El gradiente de la fase móvil A fue 100 % desde 0 hasta 3 min y desde 3 min hasta el final de cada ejecución, la fase móvil B se ajustó al 20 %. En cada día experimental, la columna se calibró con nueve sustancias de referencia para confirmar el rendimiento y establecer la regresión no lineal. Los inhibidores de PSMA se disolvieron en una concentración de 0,5 mg/ml en una mezcla de 2-propanol y tampón de NH4OAc (50 mM, pH 6,9) (1/1;v/v).Para cada serie, se inyectaron 10 pl de la solución que contenía el inhibidor en el sistema RP-HPLC y se midió el tiempo de retención. La literatura del [%] de unión de HSA se obtuvo de Valko et. Alabama. o Yamazaki et al.

[6, 7]. La regresión no lineal se estableció con OriginPro 2016G.

9) . Determinación de lipofilia

Lipofilia:El inhibidor de PSMA radiomarcado (0,5 a 1,0 MBq) disuelto en PBS (500 pl, pH = 7,4), se agregó a n-octanol (500 pl) en un frasco de reacción (1,5 ml), que se sometió a agotación en vórtice rigurosa durante 3 min (n = 6) Para la separación cuantitativa de fases, la mezcla se centrifugó a 6.000 g durante 5 min (Biofuge 15, Heraus Sepatech, Osterode, Alemania). La actividad de las muestras de cada fase (100 pl) se midió en un contador y para obtener el valor de logP(o/w).

10) . Experimentos celulares

Cultivo celular:Se cultivaron células LNCAP positivas para PSMA (300265; Cell Lines Service GmbH) en medio Eagle modificado por Dulbecco/Mezcla Nutricional F-12 (1/1) (DMEM-F12, Biochrom) suplementado con suero de ternera fetal (FCS) (10 %, Biochrom) y se mantuvo a 37°C en una atmósfera de CO2 humidificada (5 %). Un día (24 h ± 2 h) antes de todos los experimentos con células LNCaP, las células cultivadas se recolectaron utilizando una mezcla de tripsina/tetraacetato de etilendiamino (0,05 %/0,02 %) y PBS y se centrifugaron. Después de la centrifugación, se eliminó el sobrenadante y el sedimento celular se resuspendió en medio de cultivo. Posteriormente, las células se contaron con un hemocitómetro (Neubauer) y se sembraron en placas de 24 pocillos. Los valoresIC50se determinaron transfiriendo 150,000 células/ml por pocillo a placas de 24 pocillos, mientras que las tasas de internalización se obtuvieron transfiriendo 125.000 células/ml por pocillo en placas recubiertas con PLL de 24 pocillos.

11. Afinidad (ICsn)

Después de la eliminación del medio de cultivo, las células se trataron una vez con HBSS (500 pl, solución salina equilibrada de Hank, Biochrom, Berlín, Alemania, con adición de BSA al 1 %) y se dejaron 15 min en hielo para equilibrar en HBSS (200 pl, BSA al 1 %). A continuación, se agregaron las soluciones (25 pl por pocillo) que contenían HBSS (BSA al 1 %, control) o el ligando respectivo en concentración creciente (10-10 a 10-4 m en HBSS (BSA al 1 %)) con la adición posterior de ([125I]I-BA)KuE(25 pl, 2,0 nm) en HBSS (BSA al 1 %). Todos los experimentos se realizaron al menos tres veces para cada concentración. Después de 60 min de incubación en hielo, el experimento se terminó mediante la eliminación del medio y el enjuague consecutivo con HBSS (200 pl). Los medios de ambas etapas se combinaron en una fracción y representan la cantidad de radioligando libre. Posteriormente, las células se lisaron con NaOH (250 pl, 1,0 m) y se unieron con el HBSS (200 pl) de la siguiente etapa de lavado. La cuantificación del radioligando unido y libre se realizó en un contador Y.

12. Internalización

Después de la eliminación del medio de cultivo, las células se lavaron una vez con solución DMEM-F12 (500 pl, BSA al 5 %) y se dejaron equilibrar durante al menos 15 min a 37°C en solución DMEM-F12 (200 pl, BSA al 5 %). Posteriormente, cada pocillo se trató con solución DMEM-F12 (25 pl, BSA al 5 %) o solución 2-PMPA (25 pl, 100 pm) para el bloqueo. A continuación, se agregó el respectivo inhibidor de PSMA marcado con 68Ga o 177 Lu (25 pl; 2,0 nm y 10 nm, respectivamente) y las células se incubaron a 37°C durante 5, 15, 30 y 60 min, respectivamente. El experimento se terminó colocando la placa de 24 pocillos en hielo durante 3 min y la eliminación consecutiva del medio. Cada pocillo se enjuagó con HBSS (250 pl) y las fracciones de estas dos primeras etapas se combinaron, lo que representa la cantidad de radioligando libre. La eliminación de la actividad unida a la superficie se realizó por incubación de las células con solución de 2-PMPA enfriada con hielo (250 pl, 10 pm en PBS) durante 5 min y enjuague posterior con PBS enfriado con hielo (250 pl). La actividad internalizada se determinó a través de la incubación de las células en NaOH (250 pl, 1,0 m) y la combinación con la fracción de la etapa de lavado posterior con nuevamente NaOH (250 pl, 1,0 m). Cada experimento (control y bloqueo) se realizó por triplicado para cada punto de tiempo. La actividad libre, unida a superficie e internalizada se cuantificó en un contador Y.

13. Externalización

La cinética de externalización de los inhibidores de PSMA radiomarcados se determinó utilizando células LNCaP, que se prepararon de manera similar a la descrita para el ensayo de internalización. Después de una etapa inicial de lavado de células con solución DMEM-F12 (BSA al 5 %), las células se dejaron reacondicionar durante al menos 15 min a 37°C. Posteriormente, las células LNCaP se incubaron con el péptido radiomarcado respectivo (25 pl, 10,0 nm) a 37°C durante 60 min en un volumen total de 250 pl en cada pocillo. Después de 60 min, se eliminó el sobrenadante con la fracción libre no unida y se midió en un contador y para el cálculo de la radiactividad agregada total. Se evitó una etapa de lavado con ácido para garantizar la integridad de la enzima durante el siguiente estudio de externalización y reciclaje. Para determinar la velocidad de reciclaje, se administró una solución nueva de DMEM-F12 (250 pl, BSA al 5 %) a las células para permitir la internalización. Por el contrario, la re-internalización se inhibió mediante la adición de una solución DMEM-F12 que contenía 2-PMPA (225 pl DMEM-F12 (BSA al 5 %) y 25 pl de 100 pm de solución 2-PMPA (PBS)). Las células fueron incubadas durante 0, 20, 40 y 60 min a 37°C. En consecuencia, se eliminó el sobrenadante y las células se lavaron con HBSS enfriado con hielo (250 pl). La combinación del sobrenadante y el volumen de la etapa de lavado concomitante con HBSS (200 pl) representan el radioligando externo en el punto de tiempo investigado. Adicionalmente, las células se lavaron con una solución de 2-PMPA HBSS enfriada con hielo (250 pl, 10 pm) dos veces, se combinaron y representaron así la fracción de radioligando unido a la membrana. La determinación de la fracción internalizada se logró por lisis como se describe para el ensayo de internalización con NaOH (250 pl, 1,0 m). Las actividades de radioligando libre, externo, unido a membrana e internalizado se cuantificaron en un contador Y.

14. Experimentos con animales

Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las regulaciones generales de bienestar animal en Alemania (Deutsches Tierschutzgesetz, aprobación # 55.2-1-54-2532-71-13). Para el modelo tumoral, las células LNCaP (aproximadamente 107 células) se suspendieron en medio DMEM-F12 sin suero y Matrigel (1/1;v/v)(BD Biosciences, Alemania) y se inocularon en el hombro derecho de ratones SCID CB-17 de 6 a 8 semanas de edad, machos (Charles River Laboratories, Sulzfeld, Alemania). Se utilizaron animales después de que el tamaño del tumor alcanzara de 4 a 8 mm de diámetro para los experimentos.

15. PET

Los experimentos de formación de imágenes se llevaron a cabo utilizando un PET de animales pequeños Inveon de Siemens y los datos se analizaron por el software Inveon Research Workplace asociado. Los ratones se anestesiaron con isoflurano y aproximadamente 4,0 a 17 MBq de los compuestos marcados con 68Ga se inyectaron a través de la vena de la cola (aproximadamente 150 a 300 jl). La formación de imágenes dinámica se llevó a cabo después de la inyección en cama durante 90 min. La formación de imágenes de bloqueo estático se obtuvo después de 1 h p.i. con 15 min de tiempo de adquisición. El bloqueo de PSMA se logró mediante coinyección de 8 mg/kg de solución de 2-PMPA (PBS). Todas las imágenes fueron reconstruidas utilizando un algoritmo OSEM3D sin escáner y corrección de atenuación.

16. Biodistribución

Aproximadamente 4,0 a 12,0 MBq (aproximadamente 150 a 300 j l ) de los respectivos inhibidores de PSMA marcados con 68Ga o 177Lu se inyectaron en la vena de la cola de ratones SCID CB-17 machos portadores de tumor LNCaP, que se sacrificaron después de un marco temporal específico (n = 4, respectivamente). Los órganos seleccionados se extrajeron, se pesaron y se midieron en un contador y.

17. Referencias en el Ejemplo 1

1.Simecek, J., et al.,A Monoreactive Bifunctional Triazacyclononane Phosphinate Chelator with High Selectivity for Gallium-68.ChemMedChem, 2012. 7(8): p. 1375-1378.

2. Weineisen, M., et al.,Development and first in human evaluation of PSMA I&T-A ligand for diagnostic imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.Journal of Nuclear Medicine, 2014. 55(supplement 1): p. 1083-1083.

3. Weineisen, M., et al.,Synthesis and preclinical evaluation of DOTAGA-conjugated PSMA ligands for functional imaging and endoradiotherapy of prostate cancer.EJNMMI research, 2014. 4(1): p. 1.

4. Weineisen, M., et al.,68Ga- and 177Lu-Labeled PSMA I&T: Optimization of a PSMA-Targeted Theranostic Concept and First Proof-of-Concept Human Studies.Journal of Nuclear Medicine, 2015.

56(8): p. 1169-1176.

5.Sosabowski, J.K. and S.J.Mather, Conjugation of DOTA-like chelating agents to peptides and radiolabeling with trivalent metallic isotopes.Nat. Protocols, 2006. 1(2): p. 972-976.

6. Valko, K., et al.,Fast gradient HPLC method to determine compounds binding to human serum albumin. Relationships with octanol/water and immobilized artificial membrane lipophilicity.Journal of pharmaceutical sciences, 2003. 92(11): p. 2236-2248.

7. Yamazaki, K. and M. Kanaoka,Computational prediction of the plasma protein-binding percent of diverse pharmaceutical compounds.Journal of pharmaceutical sciences, 2004. 93(6): p. 1480-1494.

Ejemplo 2: Resultados

1. Efecto de la introducción de ácido 2,4-dinitrobenzoico en el área de ligador de PSMA I&T

DOTAGA-y(3-I)fk(Sub-KuE) (PSMA I&T):

DOTAGA-y(3-I)fk(L-Asu[KuE]-2,4-DNBA) (PSMA-36):

Tabla 3

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónIC[nM] Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA I&T - 7,9 ± 2,4* 75,5 ± 1,6* -4,12 ± 0,11*78,6

[nat/177Lu]PSMA-36 2,4-DNBA- 5,3 ± 1,0 189,8 ± 37,5 n.d. 82,5

^ Afinidad ligeramente mayor y aumento de internalización en 251 %.

2. El motivo de unión se cambió de EuK a EuE y el separador de péptidos de -y(3-I)fk- a -y-2-nal-k-DOTAGA-y(3-I)fk(Sub-KuE) (PSMA I&T):

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónI C 50[nM]Intemalizació logP HSA [%] n [%]

[nat/177Lu]PSMA I&T -y(3-I)fk-1| -KuE 7,9 ± 2,4 75,5 ± 1,6 -4,12 ± 0,11 78,6 [nat/177Lu]PSMA-46 -y-2-nal-k-1| -EuE 3,2 ± 1,1 216,2 ± 9,2 -4,21 ± 0,08 57,7

^ En comparación con el PSMA I&T de referencia, el compuesto de referencia mejorado PSMA-46 mostró una mayor internalización y exhibió una afinidad mejorada. Por lo tanto, en base a en la estructura PSMA-46, se introdujeron residuos aromáticos deficientes en electrones en una etapa de desarrollo adicional.

3). Se introdujeron 4-nitrofenilalanina y 2,4-DNBA en el separador peptídico de PSMA-46

DOTAGA-y-2-nal-k(Suc-W5-orn-C4-EuE) (PSMA-46):

2,4-DNBA-Dap(DOTAGA)-y-2-nal-k(Suc-N5-on-C-EuE)(PSMA-53):

Inhibidor deConfiguraciónIC0[nM]Intemalización [%] logP HSA [%] PSMA

-nat/177.

[ Lu]PSM -y-2-nal-k-1| -EuE 3,2 ± 1,1 216,2 ± 9,2 57,7 A-46

-nat/177.

^ Lu]PSM -F(4-NO2)y-2-nal-k- 3,4 ± 0,2 229,0 ± 8,0 95,4 [nat/177Lu]PSM 2,4 DNBA-Dap-y-2-nal-A-53 k-3,2 ± 0,5 293,6 ± 10,0 95,9

^ Si bien la afinidad se mantuvo similar, la introducción de 4-nitrofenilalanina aumentó ligeramente la intemalización, sin embargo, mediante la introducción de un grupo nitro adicional a través de 2,4-DNBA, fue posible un aumento significativo de la internalización.

^ Se prefieren dos grupos aceptores de electrones para aumentar la intemalización.

4). Introducción de 4-amino-fenilalanina

DOTAGA-F(4-NH2)y-2 -nal-k(Suc-N5-orn-C4-EuE) (PSMA-49):

*

DOTAGA-F(4-NH2)y-2 -nal-k(d[N5-om -C-EuE]-2 ,4-DNBA) (PSMA-61):

DOTAGA-F(4-NH2)y-2 -nal-k(d[N5-om-C-EuE]-TMA) (PSMA-62):

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónI C o[nM] Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA I&T -k(Sub-£-KuE) 7,9 ± 2,4 75,5 ± 1,6 -4,12 ± 0,11 78,6 [nat/177Lu]PSMA-49 -k(Suc-8-on(Y-EuE)) 2,5 ± 0,6 245,0 ± 4,2 -4,01 ± 0,11 74,2 -k((2,4-DNBA)-d-8-[nat/177Lu]PSMA-61on(Y-EuE))4,5 ± 0,4 359,5 ± 22,6 -4,07 ± 0,05 63,3

[nat/177Lu]PSMA-62<-k((TMA)-d-8-on(Y->EuE))4,0 ± 0,2 343,9 ± 6,0 -4,12 ± 0,05 > 91,0

^ Ambas modificaciones, 2,4-DNBA y ácido trimésico, pudieron aumentar aún más la intemalización.

5). Introducción de un grupo deficiente en electrones en el separador peptídico

DOTAGA-F(4-NH2)y-2-nal-e(Abz-W5-orn-C4-EuE)(PSMA-60):

Tabla 7

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónI C o[nM] Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA-60 -e(Abz-5-on(Y-EuE)) 6,6 ± 1,5 267,4 ± 7,9 -3,85 ± 0,13 98,5

2,4-DNBA-Dap

(DOTAGA)-y-2-nal-[nat/177Lu]PSMA-65 3,5 ± 0,3 340,2 ± 18,9 -4,15 ± 0,08 98,7

e(Abz-[HO-8-orn-[Y-EuE]])-OH

^ La modificación aromática deficiente en electrones 2,4-DNBA fue capaz de aumentar la internalización.

6). El ácido trimésico se incorporó en el conector y el separador peptídico de los inhibidores de PSMA.

DOTAGA-F(4-NH2)y-2 -nal-k(d[W5-om-C-EuE]-TMA) (PSMA-62):

DOTAGA-Dap(TMA)y-2-nal-k(d[W5-orn-C4-EuE]-TMA) (PSMA-66):

Inhibidor de PSMA ConfiguraciónI C 50[nM]Internalización logP HSA [%]

[%]

[nat/177Lu]PSMA I&T -k(Sub-£-KuE) 7,9 ± 2,4* 75,5 ± 1,6* -4,12 ± 0,11*78,6

[nat/177Lu]PSMA-62<-k((TMA)-d-5-on(Y->EuE))4,0 ± 0,2 343,9 ± 6,0 -4,12 ± 0,05 > 91,0

DOTAGA-Dap(TMA)y-2-nal-[nat/177Lu]PSMA-66k(d[N5-orn-C4-3,8 ± 0,3 297,8 ± 2,0 -4,25 ± 0,14 64,4 EuE]-TMA)

^ El intercambio de 4-amino-fenilalanina a Dap(TMA) dio como resultado una afinidad similar pero una capacidad de internalización ligeramente reducida. Dado que ambos ligandos parecían muy prometedores, ambos marcadores se evaluaron en experimentos adicionales.

^ La conclusión de estos experimentos es que un residuo aromático deficiente en electrones es transferible y puede aumentar la internalización mientras se mantiene una alta afinidad.

7). La influencia de la internalización sobre la retención celularin vitrose evaluó para los compuestos í177Lu1PSMA-62 y [177Lu]PSMA-66 en comparación con [177Lu]PSMA I&T y [177Lu]PSMA-617

[177Lu]PSMA-66 demostró la mayor actividad intracelular en las células tumorales después de 1 h seguido de [177Lu]PSMA-62, aunque la internalización de [177Lu]PSMA-62 se encontró que fue mayor que para [177Lu]PSMA-66 (343,9 % vs. 297,8 %; respectivamente). Curiosamente, incluso cuando la reinternalización solución 2-PMPA se bloqueó con 100<j>M, la depuración intracelular [177Lu]PSMA-66 fue menor que para todos los demás compuestos investigados. La diferencia en comparación con la referencia [177Lu]PSMA I&T fue más del doble, si la reinternalización fue bloqueada.

[177Lu]PSMA-66tiene nueve grupos carboxílicos libres, que equivalen a nueve cargas negativasin vivo(pH = 7,4). El carácter ampliamente cargado de este compuesto podría ser una posible explicación para la retención intracelular prolongada debido a los efectos repulsivos electrostáticos de las membranas celulares cargadas negativamente.

8). Experimentos in vivo: Biodistribución

Tabla 9:Datos de biodistribución de [177Lu]PSMA-49, [177Lu]PSMA-62y [177Lu]PSMA-66 (en % ID/g) en ratones CB-17 SCID portadores de xenoinjerto de tumor LNCaP a 1 h p.i. (n = 4, respectivamente). Se inyectaron entre 3,5 MBq y 5,5 MBq del respectivo radioligando marcado con 177Lu (trazador de 0,15 a 0,25 nmol).

A-661

riñón 128,90 ± 10,74 162,96 ± 23,20 106,45 ± 17,18 117,47 ± 6,86

glándula suprarrenal 6,25 ± 2,59 5,66 ± 1,66 1,92 ± 0,80 0,78 ± 0,07

músculo 0,18 ± 0,07 0,17 ± 0,02 0,12 ± 0,03 0,19 ± 0,07

hueso 0,14 ± 0,04 0,29 ± 0,14 0,30 ± 0,08 0,37 ± 0,13

cerebro 0,03 ± 0,01 0,03 ± 0,01 0,03 ± 0,01 0,02 ± 0,01

tumor 4,69 ± 0,95 8,21 ± 0,23 8,00 ± 0,78 10,00 ± 0,44

tumor/sangre 12,7 17,8 15,4 20,0

tumor/riñón 0,04 0,05 0.08 0,09

tumor/músculo 26,1 48,3 66,7 52,6

En comparación con la absorción tumoral de [177Lu]PSMA I&Tdespués de 1 h p.i. (4,69 ± 0,95 %), se logró un aumento significativo en la actividad tumoral mediante la mejora de la internalización y la afinidad. Como ya se observó para [177Lu]PSMA-16, [177Lu]PSMA-40y [177L<u>]Ps Ma -41, la extensión del separador peptídico con 4-amino-D-fenilalanina condujo a una alta absorción renal y confirmó que esta modificación aumenta la acumulación renal.

La introducción de ácido trimésico en el ligador de [177Lu]PSMA-62condujo a una reducción de la absorción renal (106,45 ± 17,18 % frente a 162,96 ± 23,20 %, respectivamente) y una absorción tumoral ligeramente menor en comparación con la referencia. Dado que la internalización de [177Lu]PSMA-62fue mayor en comparación directa con [177Lu]PSMA-49, la absorción tumoral inferior fue inesperada. No está claro en qué medida la intemalización contribuye a la absorción tumoral y si es menos importante que la afinidad. La comparación directa de [177Lu]PSMA-49 y [177Lu]PSMA-62 indica que la afinidad es más crucial ya que [177Lu]PSMA-49 era más afín hacia PSMA (2,5 ± 0,6 nM vs. 4,0 ± 0,2 nM, respectivamente).

Tabla 10: Datos de biodistribución de [177Lu]PSMA I&T, [177Lu]PSMA-62 y [177Lu]PSMA-66 y [177Lu]PSMA-71 (en % ID/g) en ratones CB-17 SCID portadores de xenoinjerto de tumor LNCaP después de 24 h p.i. (n = 4, respectivamente). Se inyectaron entre 3,5 MBq y 5,5 MBq del respectivo radioligando marcado con 177Lu (trazador de 0,15 a 0,25 nmol).

Los resultados en la Tabla 10 muestran diferencias claras entre el marcador evaluado [177Lu]PSMA-62, [177Lu]PSMA-66 y [177Lu]PSMA-71. Con respecto a la depuración renal, fue visible que para todos los ligandos se observó una disminución en la absorción renal en comparación con 1 h p.i. (Tabla 9). Mientras que [177Lu]PSMA I&T demostró después de 24 h p.i. la absorción renal más alta, [177Lu]PSMA-62 mostró la más baja, lo que está en concordancia con la depuración renal observada en el estudio PET. La absorción tumoral de [177Lu]PSMA-61 después de 24 h p.i. permaneció casi estable durante 23 h (8,00 ± 0,75 vs. 7,70 ± 1,35 % ID/g, 1 h p.i. y 24 h p.i., respectivamente). Aunque [177Lu]PSMA-62 y [177Lu]PSMA-66 demostraron parámetros in vitro similares con respecto a la intemalización y la afinidad, la absorción tumoral de [177Lu]PSMA-66 disminuyó en mayor medida de 1 h p.i. a 24 h p.i. (10,00 ± 0,44 vs. 5,73 ± 1,39 % ID/g, 1 h p.i. y 24 h p.i., respectivamente) en comparación con [177Lu]PSMA-62. La retención tumoral más fuerte junto con las relaciones más beneficiosas de tumor a hígado y tumor a músculo hacen que [177Lu]PSMA-62 sea superior en comparación con [177Lu]PSMA-66. La mayor absorción de tumor se observó para PSMA-71, que también exhibió el mayor valor de unión a HSA. Mientras que la absorción renal 24 h p.i. fue similar a [177Lu]PSMA I&T, la absorción tumoral fue más de tres veces mayor para [177Lu]PSMA-71 (4,06 ± 1,12 vs. 14,29 ± 0,89 % ID/g, [177Lu]PSMA I&T y [177Lu]PSMA-71, respectivamente).

A este respecto, [177Lu]PSMA-71 puede considerarse como un marcador particularmente valioso para la aplicación endorradioterapéutica y es un candidato para la aplicación clínica.

9). Experimentos in vivo: formación de imágenes PET

Efecto de la sustitución del ligador 2,4-dinitrobenzoico sobre inhibidores en base a EuK

El inhibidor en base a EuK PSMA-36 se evaluó en una exploración PET de animales pequeños para examinar la influencia del ácido 2,4-dinitrobenzoico en el ligador sobre la distribuciónin vivo.

La gráfica de TAC logarítmica muestra la absorción renal y tumoral específica de [68Ga]PSMA-36. La disminución lineal de la actividad de la acumulación de sangre y en la región muscular implica una baja unión inespecífica y una rápida excreción. La acumulación en el tumor se mantuvo estable durante el período observado. Aunque [177Lu]PSMA-36 exhibió una tasa de internalización más de tres veces mayor que [177Lu]PSMA I&T, la absorción tumoral fue moderada con 3,5 % ID/ml después de 85 min p.i. La diferencia más significativa en comparación con [68Ga]PSMA I&T fue la absorción alta y constante en la glándula lagrimal y salival, que muestra aproximadamente 2 % ID/ml en ambas regiones. Dado que la única diferencia estructural con la referencia [68Ga]PSMA I&T es la introducción del ácido 2,4-dinitrobenzoico, la modificación del ligador debe ser la razón de esta absorción mejorada. Sin embargo, se necesitan más estudios para confirmar este efecto.

También es interesante que la depuración en estas regiones fue más lenta en comparación con la acumulación de sangre y el músculo, lo que implica que está involucrado un mecanismo de retención distinto. Se informó que PSMA participa en la angiogenia durante la neovascularización ocular en ratones y, por lo tanto, podría explicar la absorción de [68Ga]PSMA-36 [1]. La acumulación de trazadores en las glándulas salivales es un problema común durante los enfoques terapéuticos clínicos con inhibidores de PSMA marcados 177Lu [2]. La absorción de fármacos en las glándulas salivales depende de las rutas intra o extracelulares y, más comúnmente, de la difusión simple entre la bicapa de fosfolípidos de las células acinares. Las concentraciones de fármaco en la saliva se reflejan predominantemente por la fracción libre no ionizada en el plasma sanguíneo con respecto a la difusión pasiva [3-5]. A este respecto, parece altamente improbable que la difusión pasiva sea responsable de la absorción de la glándula salival. Otros mecanismos tienen que estar involucrados ya que los inhibidores de PSMA en base a EuK están altamente cargadosin vivoy, por lo tanto, exhiben una alta polaridad. Adicionalmente, la difusión pasiva se visualizaría durante las exploraciones PET en cada región como actividad de fondo alta, lo que no ocurre para la mayoría de los ligandos de PSMA ya que la eliminación rápida elimina el marcador de la aumulación de sangre.

Efecto del ácido trim ésico en inhibidores en base a EuE

La sustitución de los ligandos de PSMA con sistemas aromáticos deficientes en electrones dio como resultado tasas de internalización mejoradas de [177Lu]PSMA-62 y [177Lu]PSMA-66 (343,9 % y 297,8 %, respectivamente). Por lo tanto, ambos ligandos fueron evaluados y comparados entre sí en estudios de PET.

Ambos trazadores exhibieron una excelente cinética de trazadores con respecto a la absorción renal, muscular y acumulación de sangre. La absorción específica en los riñones fue ligeramente mayor para [68Ga]PSMA-66 en comparación con [68Ga]PSMA-62 (45,3 % ID/ml vs. 34,8 % ID/ml, respectivamente). La mayor acumulación renal en la exploración PET de [68Ga]PSMA-66 en comparación con [68Ga]PSMA-62 se correlacionó muy bien con los experimentos de biodistribución. Los TAC para la actividad muscular y de la acumulación de sangre mostraron una absorción lineal y una eliminación continua de estos compartimentos.

10. Referencias en el Ejemplo 2

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Claims (21)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición farmacéutica que comprende: a) un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

   en la que: m es un número entero de 2 a 6; n es un número entero de 2 a 6; R1L es CH2, NH o O; R2L es C o P(OH); R3L es CH2, NH o O; X1 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, y un enlace amina; L1 es un grupo ligador divalente con una estructura seleccionada de una oligoamida, un oligoéter, un oligotioéter, un oligoéster, un oligotioéster, una oligourea, una oligo(éter-amida), una oligo(tioéter-amida), una oligo(éster-amida), una oligo(tioéster-amida), oligo(urea-amida), una oligo(éter-tioéter), un oligo(éteréster), un oligo(éter-tioéster), una oligo(éter-urea), un oligo(tioéter-éster), un oligo(tioéter-tioéster), una oligo(tioéter-urea), un oligo(éster-tioéster), una oligo(éster-urea), y una oligo(tioéster-urea), grupo ligador que puede llevar un grupo EDS; X2 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, y un enlace amina; R2 es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, grupo arilo o grupo aralquilo que se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno y -OH; R3 es un grupo arilo opcionalmente sustituido o un grupo aralquilo opcionalmente sustituido, grupo arilo o grupo aralquilo que se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno y -OH; r es 0 o 1 ; p es 0 o 1 ; q es 0 o 1 ; R4se selecciona de un grupo arilo opcionalmente sustituido y un grupo EDS, grupo arilo que se puede sustituir en su anillo aromático con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno,-OH y -NH2; X3 se selecciona de un enlace amida, un enlace éter, un enlace tioéter, un enlace éster, un enlace tioéster, un puente de urea, un enlace amina, y un grupo de fórmula

   en la que el enlace marcado en el grupo carbonilo une X3 a RM y el otro enlace marcado une X3 al resto del compuesto de fórmula (I); RM es un grupo marcador que comprende un grupo quelante que contiene opcionalmente un catión no radiactivo o radiactivo quelado; y en el que está contenido el grupo EDS al menos una vez en el compuesto de fórmula (I) y tiene una estructura seleccionada de (E-1A), (E-1B), (E-2A) y (E-2B):

   en las que " ww' marca el enlace que une el grupo EDS, al resto del compuesto de fórmula (I); s es 1, 2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 1; t es 1, 2 o 3, preferiblemente 1 o 2, y más preferiblemente 2; R5A es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO2 y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R5A y el anillo fenilo indica que los s grupos R5A reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; R5B es, independientemente cada vez que aparece para s > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente unido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1B), sustituyente que se selecciona preferiblemente de -OH y -NH2, y que es más preferiblemente -NH2, y en la que el enlace entre R5B y el anillo fenilo indican que los s grupos R5B reemplazan s átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; R6A es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente aceptor de electrones, que se selecciona preferiblemente de -NO2 y -COOH, y que es más preferiblemente -COOH, y en la que el enlace entre R6A y el anillo fenilo indican que los t grupos R6A reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; y R6B es, independientemente cada vez que aparece para t > 1, un sustituyente que lleva un par solitario de electrones en el átomo directamente unido al anillo fenilo mostrado en la fórmula (E-1B), sustituyente que se selecciona preferiblemente de -OH y -NH2, y que es más preferiblemente -OH, y en la que el enlace entre R6B y el anillo fenilo indican que los t grupos R6B reemplazan t átomos de hidrógeno en cualquier posición sobre el anillo fenilo; y b) un vehículo, excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.
2. 2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en el que m es 2, n es 2 o 4, R1L es NH, R2L es C, y R3L es NH.
3. 3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o 2, en el que L1 es un grupo ligador divalente con una estructura seleccionada de una oligoamida que comprende un total de 1 a 5, más preferiblemente un total de 1 a 3, y aún más preferiblemente un total de 1 o 2 enlaces amida dentro de su estructura principal, y una oligo(éster-amida) que comprende un total de 2 a 5, más preferiblemente un total de 2 a 3, y aún más preferiblemente un total de 2 enlaces amida y éster dentro de su estructura principal, grupo ligador que puede llevar un grupo EDS.
4. 4. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la fracción -X2-L1-X1-en la fórmula (I) tiene una estructura seleccionada de: *-C(O)-NH-R567-NH-C(O)-R8-C(O)-NH-(L-1), *-C(O)-NH-R9A-NH-C(O)-R10A-C(O)-NH-R11A-NH-C(O)- (L-2A), y *-C(O)-NH-R9B-C(O)-NH-R10B-C(O)-NH-R11B-NH-C(O)- (L-2B); en las que el enlace amida marcado con * se une al átomo de carbono que lleva R2 en la fórmula (I), y en las que R7, R8, R9A, R9B, R11A y R11B se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C10 opcionalmente sustituido, grupos alcanodiilo que se pueden sustituir cada uno por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de -OH, -OCH3, -COOH, -COOCH3, -NH2, -NHC(NH)NH2, y un grupo EDS, y R10A y R10B se seleccionan de alcanodiilo C2 a C10 opcionalmente sustituido, y arenodiilo C6 a C10 opcionalmente sustituido, grupo alcanodiilo y arenediilo que puede cada uno ser sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados independientemente de -OH, -OCH3, -COOH, -COOCH3, -NH2, -NHC(NH)NH2, y un grupo EDS.
5. 5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, en el que la fracción -X2-L1-X1- tiene una estructura seleccionada de: *-C(O)-NH-CH(COOH)-R12-NH-C(O)-R13-C(O)-NH-(L-3), *-C(O)-NH-CH(COOH)-R14-NH-C(O)-R15-C(O)-NH-R16-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-4), y *-C(O)-NH-CH(COOH)-R17-C(O)-NH-R18-C(O)-NH-R19-CH(COOH)-NH-C(O)- (L-5); en las que el enlace marcado con * se une al átomo de carbono que lleva R2 en la fórmula (I), R12 y R14 se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C6 lineal, R13 es un alcanodiilo lineal C2 a C10, R15 y R16 se seleccionan independientemente de alcanodiilo C2 a C6 lineal, y en las que cada uno de R13 y R15 pueden llevar un grupo EDS como un sustituyente, R17 es un alcanodiilo C2 a C6 lineal, R18 es un grupo fenileno, y R19 es un alcanodiilo C2 a C6 lineal.
6. 6. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R2 es un grupo aralquilo opcionalmente sustituido seleccionado de -CH2-fenilo opcionalmente sustituido y -CH2-naftilo opcionalmente sustituido, en las que el grupo fenilo y naftilo se sustituyen opcionalmente con un sustituyente seleccionado de halógeno, preferiblemente I, y -OH.
7. 7. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R3 es un grupo aralquilo opcionalmente sustituido seleccionado de -CH2-fenilo opcionalmente sustituido y -CH2-naftilo opcionalmente sustituido, en las que el grupo fenilo y naftilo se sustituyen opcionalmente con un sustituyente seleccionado de halógeno y -OH.
8. 8. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que r es 1, y en el que R4 se selecciona de fenilo opcionalmente sustituido, naftilo opcionalmente sustituido, y un grupo EDS, grupo fenilo y grupo naftilo que se sustituyen opcionalmente con un sustituyente seleccionado de halógeno, -OH y -NH2.
9. 9. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que X3 es un enlace amida o un grupo de fórmula

   en la que el enlace marcado en el grupo carbonilo une X3 a RM y el otro enlace marcado une X3 al resto de la molécula.
10. 10. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que RM es un grupo quelante que contiene opcionalmente un catión no radiactivo o radiactivo quelado.
11. 11. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el compuesto de fórmula (I) contiene bien un grupo EDS que es llevado por el grupo ligador L1, o bien contiene dos grupos EDS, uno que se representa por R4 y uno que se lleva por L1.
12. 12. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que contiene un grupo EDS que tiene la fórmula (E-2A):

    en la que '/w'/w' marca el enlace que une el grupo EDS al resto del compuesto de fórmula (I); y t es 1 o 2, y R6A se selecciona de -NO2 y -COOH.
13. 13. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que dicho compuesto o sal tiene una de las siguientes fórmulas:
14. 14. Una composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un compuesto que comprende una estructura de la siguiente fórmula:
15. o una sal del mismo. 15. Un acomposición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un compuesto que comprende una estructura de la siguiente fórmula:
16. 16. Una composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un compuesto que comprende una estructura de la siguiente fórmula:
17. 17. Una composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un compuesto que comprende una estructura de la siguiente fórmula:
18. 18. Una composición farmacéutica de de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para su uso en medicina.
19. 19. La composición farmacéutica para su uso de la reivindicación 18, en la que la medicina es radioterapia de una enfermedad asociada con la sobreexpresión del antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA).
20. 20. Una composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17 para su uso en el tratamiento del cáncer.
21. 21. La composición farmacéutica de la reivindicación 20, en la que el cáncer es cáncer de próstata.