ES3033104T3 - Compounds and methods for reducing fus expression - Google Patents

Abstract

Se proporcionan compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas para reducir la cantidad o actividad del ARN FUS en una célula o sujeto, y en ciertos casos, la cantidad de proteína FUS en una célula o sujeto. Estos compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas son útiles para mejorar al menos un síntoma o característica distintiva de una enfermedad neurodegenerativa. Dichos síntomas y características distintivas incluyen debilidad muscular y fatiga, agregados proteicos en el sistema nervioso central, dificultades del habla y anomalías del comportamiento. Ejemplos no limitativos de enfermedades neurodegenerativas que se benefician de estos compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas son la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y la degeneración lobar frontotemporal (DLFT). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos y métodos para reducir la expresión de FUS

Lista de secuencias

La presente solicitud se presenta junto con un Listado de Secuencias en formato electrónico. El listado de secuencias se proporciona como un archivo titulado BIOL0360WOSEQ_ST25.txt, creado el 27 de mayo de 2020, que tiene un tamaño de 136 kb.

Campo

Las mutaciones en el fusionado en el gen del sarcoma(FUS)están asociadas con varias afecciones neurodegenerativas, tales como la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y la degeneración lobar frontotemporal (DLFT). En el presente documento se describen compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas para reducir una cantidad de ARN FUS en una célula o sujeto. En ciertos casos, los compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas reducen la cantidad de una proteína f Us en una célula o un sujeto. Dichos compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas son útiles para mejorar al menos un síntoma o característica distintiva de una enfermedad neurodegenerativa.

Antecedentes

La ELA, también conocida como enfermedad de Lou Gehrig, es una enfermedad neurodegenerativa que causa la muerte de las neuronas motoras. Los pacientes de ELA sufren rigidez muscular, fasciculaciones musculares, debilidad muscular y disminución de la masa muscular. La ELA progresa hasta que los pacientes son incapaces de caminar, hablar, tragar o respirar. Existen varios tipos de ELA y suelen clasificarse en ELA familiar o ELA esporádica. Un porcentaje significativo de casos familiares de ELA están asociados a una mutación en el genFUS,un gen que codifica la proteína de unión al ARN FUS/TLS (Fusionado en sarcoma/translocado en sarcoma). En los pacientes sanos, la mayor parte de la proteína FUS se localiza en el núcleo de las neuronas, donde funciona para procesar el ARN. Sin embargo, en los pacientes con ELA, una mutación enFUShace que la proteína FUS se agregue en el citoplasma, lo que provoca un mal plegamiento y agregación de la proteína. Aunque la edad de inicio de la ELA suele ser superior a los 40 años, hay algunos casos en los que los pacientes desarrollan síntomas de ELA antes de los 25 años. La ELA que se desarrolla en pacientes menores de 25 años se denomina "ELA juvenil". Las mutaciones más comunes en la ELA juvenil incluyen mutaciones en FUS.

FTLD, también conocida como enfermedad de Pick, es un término utilizado para describir varios trastornos que incluyen la demencia frontotemporal como variante conductual, la afasia primaria no fluente, la demencia semántica como variante del lenguaje, la esclerosis lateral amiotrófica con demencia frontotemporal (ALS+FTLD), el síndrome corticobasal y la parálisis supranuclear progresiva. La FTLD se caracteriza por la atrofia de los lóbulos frontal y temporal. En algunos casos, se observa acumulación de proteínas tau (Pick-bodies) y de la proteína 43 de unión al ADN TAR en el cerebro de pacientes con FTLD. Estos casos se clasifican como FTLD-tau o FTLD-TDp. En otros casos, se observan inclusiones citoplasmáticas positivas al FUS, inclusiones intranucleares e hilos neuríticos en la corteza, la médula, el hipocampo y las células motoras de la médula espinal en pacientes con FTLD, lo que se conoce como FTLD-FUS.

Sumario de la invención

La presente invención se define en el juego de reivindicaciones adjunto.

�

La invención también proporciona un oligonucleótido modificado de acuerdo con la estructura química:

(SEQ ID NO: 13).

La invención también proporciona un compuesto oligomérico que comprende un oligonucleótido modificado de acuerdo con la siguiente fórmula: Ges mCeo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Ads mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID NO: 13); en donde,

A = una adenina,

mC = a 5-metilcitosina

G = una guanina,

T = una timina,

e = un azúcar modificado 2'-O-metoxietilribosa

d = un azúcar 2'-desoxirribosa,

s = un enlace internucleósido fosforotioato, y

o = un enlace fosfodiéster internucleósido.

La invención también proporciona una población de oligonucleótidos modificados de la invención, en la que todos los enlaces internucleósidos fosforotioato del oligonucleótido modificado son estereorándomicos.

La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido modificado de la invención o la población de oligonucleótidos modificados de la invención y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Actualmente sigue existiendo la necesidad de terapias para tratar la ELA y las FTLDs. Por lo tanto, un objetivo del presente documento es proporcionar compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de dichas enfermedades.

Se divulgan en el presente documento compuestos, métodos y composiciones farmacéuticas para reducir una cantidad de ARN FUS, y en ciertas realizaciones reducir la cantidad o actividad de proteína FUS en una célula o un sujeto. En ciertas realizaciones, el sujeto padece una enfermedad neurodegenerativa. En ciertas realizaciones, el sujeto padece una enfermedad neurodegenerativa. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene ELA. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene un FTLD. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene una mutación enFUS.Los compuestos útiles para reducir la cantidad de ARN FUS y/o proteína FUS pueden componerse oligoméricos. Los compuestos oligoméricos pueden comprender oligonucleótidos modificados.

También se proporcionan en el presente documento composiciones farmacéuticas como se definen en las reivindicaciones para su uso en métodos para mejorar un síntoma o sello distintivo de una afección neurodegenerativa. Algunos de los síntomas y características de la ELA son, entre otros, debilidad muscular y fatiga, dificultad para hablar, espasmos, calambres y agregados de proteínas en el SNC. Algunos de los síntomas y características de la FTLD son, entre otros, dificultades en el habla y anomalías en el comportamiento.

Descripción detallada de la invención

Debe entenderse que tanto la descripción general precedente como la descripción detallada siguiente son únicamente ejemplares y explicativas. En el presente documento, el uso del singular incluye el plural a menos que se indique específicamente lo contrario. En el presente documento, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se indique lo contrario. Además, el uso del término "incluyendo", así como otras formas, tales como "que incluye" e "incluido", no es limitativo. Asimismo, términos como "elemento" o "componente" engloban tanto elementos y componentes que comprenden una unidad como elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, a menos que se indique específicamente lo contrario.

Definiciones

A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con, y los procedimientos y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética, y química medicinal y farmacéutica descritos en el presente documento son los bien conocidos y comúnmente utilizados en la técnica.

Salvo que se indique lo contrario, los siguientes términos tienen los significados que se indican a continuación:

DEFINICIONES

Tal como se utiliza en el presente documento, "2'-desoxinucleósido" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar desoxirribosil 2'-H(H). En ciertas realizaciones, un 2'-desoxinucleósido es un 2'-p-D-desoxinucleósido y comprende una fracción de azúcar 2'-p-D-desoxirribosil, que tiene la configuración p-D que se encuentra en los ácidos desoxirribonucleicos (ADN) naturales. En ciertas realizaciones, un 2'-desoxinucleósido o nucleósido que comprende una fracción de azúcar 2'-desoxirribosil no modificada puede comprender una nucleobase modificada o puede comprender una nucleobase de ARN (uracilo).

Como se utiliza en el presente documento, "2'-MOE" o "fracción de azúcar 2'-MOE" significa un grupo 2-OCH2CH2OCH3 en lugar del grupo 2'-OH de una fracción de azúcar ribosilo. "MOE" significa metoxietilo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido 2'-MOE" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar 2'-MOE.

Tal como se utiliza en el presente documento, "2'-OMe" o "fracción de azúcar 2'-O-metil " significa un grupo 2-OCH3 en lugar del grupo 2'-OH de una fracción de azúcar de ribosilo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido 2'-OMe" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar 2'-OMe.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido 2'-sustituido" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar 2'-sustituida. Tal como se utiliza en el presente documento, "2'-sustituido" en referencia a una fracción de azúcar significa una fracción de azúcar que comprende al menos un grupo 2'-sustituyente distinto de H u OH.

Tal como se utiliza en el presente documento, "5-metil citosina" significa una citosina modificada con un grupo metilo unido a la posición 5. Una 5-metil citosina es una nucleobase modificada.

Tal como se utiliza en el presente documento, "administrar" significa proporcionar un agente farmacéutico a un sujeto.

Tal como se utiliza en el presente documento, "actividad antisentido" significa cualquier cambio detectable y/o medible atribuible a la hibridación de un compuesto antisentido a su ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, la actividad antisentido es una disminución en la cantidad o expresión de un ácido nucleico objetivo o proteína codificada por dicho ácido nucleico objetivo en comparación con los niveles de ácido nucleico objetivo o niveles de proteína objetivo en ausencia del compuesto antisentido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "compuesto antisentido" significa un compuesto oligomérico capaz de lograr al menos una actividad antisentido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "mejorar" en referencia a un tratamiento significa mejora en al menos un síntoma en relación con el mismo síntoma en ausencia del tratamiento. En ciertas realizaciones, la mejoría es la reducción de la gravedad o frecuencia de un síntoma o el retraso en la aparición o ralentización de la progresión de la gravedad o frecuencia de un síntoma.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido bicíclico" o "BNA" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar bicíclica.

Tal como se utiliza en el presente documento, "azúcar bicíclico" o "fracción de azúcar bicíclica" significa una fracción de azúcar modificada que comprende dos anillos, en la que el segundo anillo se forma a través de un puente que conecta dos de los átomos del primer anillo formando así una estructura bicíclica. En ciertas realizaciones, el primer anillo de la fracción de azúcar bicíclica es una fracción de furanosilo. En ciertas realizaciones, la fracción de azúcar bicíclico no comprende una fracción de furanosilo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "fracción escindible" significa un enlace o grupo de átomos que se escinde en condiciones fisiológicas, por ejemplo, dentro de una célula o un sujeto.

Tal como se utiliza en el presente documento, "complementario" en referencia a un oligonucleótido significa que al menos el 70% de las nucleobases del oligonucleótido o de una o más regiones del mismo y las nucleobases de otro ácido nucleico o de una o más regiones del mismo son capaces de formar enlaces de hidrógeno entre sí cuando la secuencia de nucleobases del oligonucleótido y del otro ácido nucleico están alineadas en direcciones opuestas. Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleobases complementarias" significa nucleobases que son capaces de formar enlaces de hidrógeno entre sí. Los pares de nucleobases complementarias incluyen adenina (A) con timina (T), adenina (A) con uracilo (U), citosina (C) con guanina (G) y 5-metil citosina (mC) con guanina (G). No es necesario que los oligonucleótidos y/o ácidos nucleicos complementarios tengan complementariedad de nucleobase en cada nucleósido. Más bien se toleran algunos desajustes. Tal como se utiliza en el presente documento, "totalmente complementario" o "100% complementario" en referencia a un oligonucleótido, o parte del mismo, significa que ese oligonucleótido, o parte del mismo, es complementario a otro oligonucleótido o ácido nucleico en cada nucleobase del oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "grupo conjugado" significa un grupo de átomos que está unido directa o indirectamente a un oligonucleótido. Los grupos conjugados incluyen una fracción conjugada y un enlazador conjugado que une la fracción conjugada al oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "enlazador de conjugado" significa un enlace único o un grupo de átomos que comprende al menos un enlace que conecta una fracción de conjugado a un oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "fracción conjugada" significa un grupo de átomos que se une a un oligonucleótido mediante un enlazador conjugado.

Tal como se utiliza en el presente documento, "contiguo" en el contexto de un oligonucleótido se refiere a nucleósidos, nucleobases, fracciones de azúcar o enlaces internucleósidos que son inmediatamente adyacentes entre sí. Por ejemplo, "nucleobases contiguas" significa nucleobases que son inmediatamente adyacentes entre sí en una secuencia.

Tal como se utiliza en el presente documento, "etilo restringido" o "cEt" o "azúcar modificado con cEt" significa una fracción de azúcar bicíclico p-D ribosilo en la que el segundo anillo del azúcar bicíclico se forma a través de un puente que conecta el 4'-carbono y el 2'-carbono de la fracción de azúcar p-D ribosilo, en donde el puente tiene la fórmula 4'-CH(CH3)-O-2', y en donde el grupo metilo del puente está en la configuración S.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido cEt" significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar modificada con cEt.

Tal como se utiliza en el presente documento, "población quiralmente enriquecida" significa una pluralidad de moléculas de fórmula molecular idéntica, en la que el número o porcentaje de moléculas dentro de la población que contienen una configuración estereoquímica particular en un centro quiral particular es mayor que el número o porcentaje de moléculas que se espera que contengan la misma configuración estereoquímica particular en el mismo centro quiral particular dentro de la población si el centro quiral particular fuera estereorándomico. Las poblaciones enriquecidas quiralmente de moléculas que tienen múltiples centros quirales dentro de cada molécula pueden contener uno o más centros quirales estereorándomicos. En ciertas realizaciones, las moléculas son oligonucleótidos modificados. En ciertas realizaciones, las moléculas son compuestos que comprenden oligonucleótidos modificados.

Tal como se utiliza en el presente documento, "gapmer" significa un oligonucleótido modificado que comprende una región interna que tiene una pluralidad de nucleósidos que soportan la escisión de RNasa H posicionados entre regiones externas que tienen uno o más nucleósidos, en el que los nucleósidos que comprenden la región interna son químicamente distintos del nucleósido o nucleósidos que comprenden las regiones externas. La región interna puede denominarse "brecha" y las regiones externas pueden denominarse "alas". A menos que se indique lo contrario, "gapmer" se refiere a un motivo de azúcar. A menos que se indique lo contrario, la fracción de azúcar de cada nucleósido de la brecha es una fracción de azúcar 2'-p-D-desoxirribosil. Así, el término "gapmer MOE" indica un gapmer que tiene una brecha que comprende 2'-p-D-deoxinucleósidos y alas que comprenden nucleósidos 2'-MOE. A menos que se indique lo contrario, un gapmer MOE puede comprender uno o más enlaces internucleósidos modificados y/o nucleobases modificadas y tales modificaciones no siguen necesariamente el patrón gapmer de las modificaciones de azúcar.

Tal como se utiliza en el presente documento, "región caliente" es un intervalo de nucleobases en un ácido nucleico objetivo que es susceptible de reducción mediada por compuesto oligomérico de la cantidad o actividad del ácido nucleico objetivo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "hibridación" significa el apareamiento o fusión de oligonucleótidos y/o ácidos nucleicos complementarios. Aunque no se limita a un mecanismo concreto, el mecanismo más común de hibridación implica el enlace de hidrógeno, que puede ser enlace de hidrógeno Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen invertido, entre nucleobases complementarias.

Tal como se utiliza en el presente documento, "enlace internucleósido" significa el enlace covalente entre nucleósidos contiguos en un oligonucleótido. En el presente documento, por "enlace internucleósido modificado" se entiende cualquier enlace internucleósido distinto de un enlace internucleósido fosfodiéster. "Enlace internucleósido fosforotioato" es un enlace internucleósido modificado en el que uno de los átomos de oxígeno no puenteantes de un enlace internucleósido fosfodiéster se sustituye por un átomo de azufre.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido enlazador" significa un nucleósido que enlaza, directa o indirectamente, un oligonucleótido a una fracción conjugada. Los nucleósidos enlazadores se encuentran dentro del enlazador conjugado de un compuesto oligomérico. Los nucleósidos enlazadores no se consideran parte de la porción oligonucleotídica de un compuesto oligomérico aunque sean contiguos al oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "fracción de azúcar modificada no bicíclica" significa una fracción de azúcar modificada que comprende una modificación, tal como un sustituyente, que no forma un puente entre dos átomos del azúcar para formar un segundo anillo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "desajuste" o "no complementario" significa una nucleobase de un primer oligonucleótido que no es complementaria con la nucleobase correspondiente de un segundo oligonucleótido o ácido nucleico objetivo cuando el primer y el segundo oligonucleótido están alineados.

Tal como se utiliza en el presente documento, "motivo" significa el patrón de moléculas de azúcar no modificadas y/o modificadas, nucleobases, y/o enlaces internucleósidos, en un oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleobase" significa una nucleobase no modificada o una nucleobase modificada. Tal como se utiliza en el presente documento, una "nucleobase no modificada" es adenina (A), timina (T), citosina (C), uracilo (U) o guanina (G). Tal como se utiliza en el presente documento, una "nucleobase modificada" es un grupo de átomos distintos de A, T, C, U o G no modificados capaces de emparejarse con al menos una nucleobase no modificada. Una "5-metil citosina" es una nucleobase modificada. Una base universal es una nucleobase modificada que puede emparejarse con una cualquiera de las cinco nucleobases no modificadas. Tal como se utiliza en el presente documento, "secuencia de nucleobases" significa el orden de las nucleobases contiguas en un ácido nucleico u oligonucleótido independientemente de cualquier modificación de azúcar o enlace internucleósido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido" significa un compuesto que comprende una nucleobase y una fracción de azúcar. La nucleobase y la fracción de azúcar están, cada una independientemente, sin modificar o modificadas. Tal como se utiliza en el presente documento, "nucleósido modificado" significa un nucleósido que comprende una nucleobase modificada y/o una fracción de azúcar modificada. Los nucleósidos modificados incluyen los nucleósidos abásicos, que carecen de una nucleobase. "Nucleósidos enlazados" son nucleósidos que están conectados en una secuencia contigua (es decir, no se presentan nucleósidos adicionales entre los que están enlazados).

Tal como se utiliza en el presente documento, "compuesto oligomérico" significa un oligonucleótido y opcionalmente una o más características adicionales, tales como un grupo conjugado o un grupo terminal. Un compuesto oligomérico puede estar emparejado con un segundo compuesto oligomérico que sea complementario del primer compuesto oligomérico o puede no estar emparejado. Un "compuesto oligomérico monocatenario" es un compuesto oligomérico no apareado. Por "dúplex oligomérico" se entiende un dúplex formado por dos compuestos oligoméricos que tienen secuencias de nucleobases complementarias. Cada compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico puede denominarse "compuesto oligomérico duplexado".

Tal como se utiliza en el presente documento, "oligonucleótido" significa una cadena de nucleósidos enlazados conectados mediante enlaces internucleósidos, en la que cada nucleósido y enlace internucleósido puede estar modificado o sin modificar. A menos que se indique lo contrario, los oligonucleótidos están formados por 8-50 nucleósidos enlazados. Tal como se utiliza en el presente documento, "oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido, en el que al menos un nucleósido es un oligonucleósido modificado o al menos un enlace internucleósido es un enlace internucleósido modificado. Tal como se utiliza en el presente documento, "oligonucleótido no modificado" significa un oligonucleótido que no comprende ninguna modificación nucleosídica o modificación internucleosídica.

Tal como se utiliza en el presente documento, "portador o diluyente farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sustancia adecuada para su uso en la administración a un sujeto. Algunos de estos portadores permiten que las composiciones farmacéuticas se formulen, por ejemplo, como comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones y pastillas para la ingestión oral por un sujeto. En ciertas realizaciones, un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable es agua estéril, solución salina estéril, solución tampón estéril o líquido cefalorraquídeo artificial estéril.

Tal como se utiliza en el presente documento "sales farmacéuticamente aceptables" significa sales fisiológica y farmacéuticamente aceptables de compuestos. Las sales farmacéuticamente aceptables conservan la actividad biológica deseada del compuesto original y no le confieren efectos toxicológicos no deseados.

Tal como se utiliza en el presente documento "composición farmacéutica" significa una mezcla de sustancias adecuadas para administrar a un sujeto. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender un compuesto oligomérico y una solución acuosa estéril. En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica muestra actividad en un ensayo de captación libre en determinadas líneas celulares.

Tal como se utiliza en el presente documento "profármaco" significa un agente terapéutico en una forma externa al organismo que se convierte a una forma diferente dentro de un sujeto o células del mismo. Típicamente, la conversión de un profármaco dentro del sujeto es facilitada por la acción de una enzima (por ejemplo, enzima endógena o viral) o sustancias químicas presentes en células o tejidos y/o por condiciones fisiológicas.

Tal como se utiliza en el presente documento, "reducir o inhibir la cantidad o actividad" se refiere a una reducción o bloqueo de la expresión o actividad transcripcional en relación con la expresión o actividad transcripcional en una muestra no tratada o de control y no indica necesariamente una eliminación total de la expresión o actividad transcripcional.

Tal como se utiliza en el presente documento, "ARN" significa un transcrito de ARN e incluye ARNpre-m y ARNm maduro a menos que se especifique lo contrario.

Tal como se utiliza en el presente documento, "compuesto de ARNi" significa un compuesto antisentido que actúa, al menos en parte, a través de RISC o Ago2 para modular un ácido nucleico objetivo y/o proteína codificada por un ácido nucleico objetivo. Los compuestos de ARNi incluyen, entre otros, el ARNsi bicatenario, el ARN monocatenario (ARNs) y el microARN, incluidos los imitadores de microARN. En ciertas realizaciones, un compuesto de ARNi modula la cantidad, la actividad y/o el empalme de un ácido nucleico objetivo. El término compuesto de ARNi excluye los compuestos antisentido que actúan a través de la RNasa H.

Tal como se utiliza en el presente documento, "autocomplementario" en referencia a un oligonucleótido significa un oligonucleótido que al menos parcialmente hibrida consigo mismo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "ensayo celular estándar" significa el ensayo descrito en el Ejemplo 1 y variaciones razonables del mismo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "estereorándomico" en el contexto de una población de moléculas de fórmula molecular idéntica significa un centro quiral que tiene una configuración estereoquímica aleatoria. Por ejemplo, en una población de moléculas que comprenden un centro quiral estereorándomico, el número de moléculas que tienen la configuración (S) del centro quiral estereorándomico puede ser pero no es necesariamente el mismo que el número de moléculas que tienen la configuración(R)del centro quiral estereorándomico. La configuración estereoquímica de un centro quiral se considera aleatoria cuando es el resultado de un método sintético que no está diseñado para controlar la configuración estereoquímica. En ciertas realizaciones, un centro quiral estereorándomico es un enlace internucleósido fosforotioato estereorándomico.

Tal como se utiliza en el presente documento, "sujeto" significa un animal humano o no humano. En ciertas realizaciones, el sujeto es un ser humano. En ciertas realizaciones, el sujeto se ha diagnosticado de ELA. En ciertas realizaciones, el sujeto se ha diagnosticado con FTLD. En ciertas realizaciones, el sujeto está en riesgo de padecer ELA o FTLD. En ciertas realizaciones, el sujeto con riesgo de ELA o FTL tiene una mutación enFUS..En ciertas realizaciones, la mutación enFUSestá asociada con ELA o FTLD. En ciertas realizaciones, la mutación enFUSes causante de ELA o FTLD.

Tal como se utiliza en el presente documento, "fracción de azúcar" significa una fracción de azúcar no modificada o una fracción de azúcar modificada. En el presente documento, por "fracción de azúcar no modificada" se entiende una fracción de ribosilo 2'-OH(H), como la que se encuentra en el ARN (una "fracción de azúcar de ARN no modificada"), o una fracción de desoxirribosilo 2'-H(H), como la que se encuentra en el ADN (una "fracción de azúcar de ADN no modificada"). Las fracciones de azúcares no modificados tienen un hidrógeno en cada una de las posiciones 1', 3' y 4', un oxígeno en la posición 3' y dos hidrógenos en la posición 5'. En el presente documento, por "fracción de azúcar modificada" o "azúcar modificado" se entiende una fracción de azúcar furanosil modificada o un sucedáneo de azúcar.

Tal como se utiliza en el presente documento, "sustituto de azúcar" significa una fracción de azúcar modificada que tiene una fracción distinta de furanosilo que puede enlazar una nucleobase a otro grupo, tal como un enlace internucleósido, grupo conjugado o grupo terminal en un oligonucleótido. Los nucleósidos modificados que comprenden sustitutos de azúcar pueden incorporarse en una o más posiciones dentro de un oligonucleótido y dichos oligonucleótidos son capaces de hibridarse con compuestos oligoméricos o ácidos nucleicos complementarios.

Tal como se utiliza en el presente documento, "síntoma o sello distintivo" significa cualquier característica física o resultado de una prueba que indique la existencia o el alcance de una enfermedad o trastorno. En ciertas realizaciones, un síntoma es evidente para un sujeto o para un profesional médico que examina o realiza pruebas a dicho sujeto. En ciertas realizaciones, un sello distintivo es aparente tras pruebas diagnósticas invasivas, incluyendo, pero no limitado a, pruebas post-mortem.

Tal como se utiliza en el presente documento, "ácido nucleico objetivo" y "ARN objetivo" significan un ácido nucleico que un compuesto antisentido está diseñado para afectar.

Tal como se utiliza en el presente documento, "región objetivo" significa una porción de un ácido nucleico objetivo al que un compuesto oligomérico está diseñado para hibridar.

Tal como se utiliza en el presente documento, "grupo terminal" significa un grupo químico o grupo de átomos que está enlazado covalentemente a un extremo de un oligonucleótido.

Tal como se utiliza en el presente documento, "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un agente farmacéutico que proporciona un beneficio terapéutico a un sujeto. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz mejora un síntoma o sello distintivo de una enfermedad.

I. Ciertos oligonucleótidos

Se divulgan en el presente documento compuestos oligoméricos que comprenden oligonucleótidos, que consisten en nucleósidos enlazados. Los oligonucleótidos pueden ser oligonucleótidos no modificados (ARN o ADN) o pueden ser oligonucleótidos modificados. Los oligonucleótidos modificados comprenden al menos una modificación relativa al ARN o ADN no modificados. Es decir, los oligonucleótidos modificados comprenden al menos un nucleósido modificado (que comprende una fracción de azúcar modificada y/o una nucleobase modificada) y/o al menos un enlace internucleósido modificado.

A. Ciertos nucleósidos modificados.

Los nucleósidos modificados comprenden una fracción de azúcar modificada o una nucleobase modificada o ambas, una fracción de azúcar modificada y una nucleobase modificada.

1. Determinadas fracciones de azúcares

Las fracciones de azúcar modificadas pueden ser fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas. Las fracciones de azúcares modificadas pueden ser bicíclicos o tricíclicos. Las fracciones de azúcares modificadas son sustitutos del azúcar. Dichos sustitutos del azúcar pueden comprender una o más sustituciones correspondientes a las de otros tipos de fracciones de azúcar modificadas.

Las fracciones de azúcar modificadas pueden ser fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas que comprenden un anillo furanosilo con uno o más grupos sustituyentes ninguno de los cuales puentea dos átomos del anillo furanosilo para formar una estructura bicíclica. Dichos sustituyentes no puente pueden estar en cualquier posición del furanosilo, incluyendo pero no limitándose a sustituyentes en las posiciones 2', 4', y/o 5'. Uno o más sustituyentes sin puente de las fracciones de azúcares modificados no bicíclicos pueden ramificarse. Los ejemplos de grupos 2'-sustituyentes adecuados para las fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas incluyen, pero no se limitan a: 2'-F, 2-OCH3 ("OMe" u "O-metilo"), y 2'-O(CH2)2OCH3 ("MOE"). Los grupos2'-sustituyentes pueden seleccionarse entre: halo, alilo, amino, azido, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, alcoxi O-C1-C10, alcoxi sustituido O-C1-C10, alquilo O-C1-C10, alquilo sustituido O-C1-C10, S-alquilo, N(Rm)-alquilo, O-alquenilo, S-alquenilo, N(Rm)-alquenilo, O-alquinilo, S-alquinilo, N(Rm)-alquinilo, O-alquilenilo, O-alquilo, alquinilo, aralquilo, O-alcarilo, O-aralquilo, O(Ch 2^SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn) o OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn), donde cada Rmy Rn es, independientemente, H, un grupo amino protector, o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido, y los grupos 2'-sustituyentes descritos en Cook et al., U.S. 6,531,584; Cook et al, U.S. 5,859,221; y Cook et al., U.S. 6,005,087. Estos grupos 2'-sustituyentes pueden estar además sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados independientemente entre: hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro (NO2), tiol, tioalcoxi, tioalquilo, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo. Ejemplos de grupos 4'-sustituyentes adecuados para fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas incluyen, pero no se limitan a, alcoxi (por ejemplo, metoxi), alquilo, y los descritos en Manoharan et al., WO 2015/106128.. Los ejemplos de grupos 5'-sustituyentes adecuados para las fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas incluyen, pero no se limitan a: 5-metilo (R o S), 5'-vinilo y 5'-metoxi. Las fracciones de azúcar modificadas no bicíclicas pueden comprender más de un sustituyente de azúcar sin puente, por ejemplo, fracciones de azúcar 2'-F-5'-metil y las fracciones de azúcar modificadas y nucleósidos modificados descritos en Migawa et al, WO 2008/101157 y Rajeev et al., US2013/0203836)..

Un nucleósido modificado no bicíclico 2'-sustituido puede comprender una fracción de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente sin puente seleccionado de: F, NH2, N3, OCF3, OCH3, O(CH2)3NH2, CH2CH=CH2, OCH2CH=c H2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, y acetamida N-sustituida (OCH2C(=O)N(Rm)(Rn), donde cada Rm y Rn es, independientemente, H, un grupo amino protector, o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido.

Un nucleósido modificado no bicíclico 2'-sustituido puede comprender una fracción de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente sin puente seleccionado de: F, OCF3, OCH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3,<o>(<c>H2)2ON(CH3)2, O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, y OCH2C(=O)-N(H)CH3 ("n m a ").

Un nucleósido modificado no bicíclico 2'-sustituido puede comprender una fracción de azúcar que comprende un grupo 2'-sustituyente sin puente seleccionado de: F, OCH3, y OCH2CH2OCH3.

Ciertas fracciones de azúcar modificadas pueden comprender un sustituyente que puentea dos átomos del anillo furanosilo para formar un segundo anillo, dando como resultado unas fracciones de azúcar bicíclica. La fracción de azúcar bicíclica puede incluir un puente entre los átomos de anillo de la furanosa 4' y 2'. Ejemplos de tales sustituyentes de azúcares puente de 4' a 2' incluyen, pero no se limitan a: 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2' ("LNA"), 4-CH2-S-2', 4'-(CH2)2-O-2' ("ENA"), 4'-CH(CH3)-O-2' (denominado "etilo restringido" o "cEt"), 4'-CH2-O-CH2-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' ("MOE restringido" o "cMOE") y análogos de los mismos(véase, por ejemplo,Seth et al., U.S.

7,399,845, Bhat et al, U.S. 7,569,686, Swayze et al., U.S. 7,741,457, y Swayze et al, U.S. 8,022,193), 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' y análogos de los mismos(véase, por ejemplo,Seth et al, U.S. 8,278,283), 4'-CH2-N(OCH3)-2' y análogos de los mismos(véase, por ejemplo,Prakash et al., U.S. 8,278,425), 4'-CH2-ON(CH3)-2'(véase, por ejemplo,Allerson et al., U.S.

7,696,345 y Allerson et al, U.S. 8,124,745), 4'-CH2-C-(H)(CH3)-2'(véase, por ejemplo,Zhou, et al., J. Org.. Chem.,2009, 74, 118-134), 4'-CH2-C(=CH2)-2' y análogos de los mismos(véase, por ejemplo,,Seth et al, U.S. 8,278,426), 4'-C(RaRb)-N(R)-O-2', 4'-C(RaRb)-O-N(R)-2', 4'-CH2-ON(R)-2', y 4'-CH2-N(R)-O-2', en donde cada R, Ra, y Rb es, independientemente, H, un grupo protector, o C1-C12 alquilo(véase, por ejemploImanishi et al, U.S. 7,427,672).

Dichos puentes de 4' a 2' pueden comprender independientemente de 1 a 4 grupos enlazados seleccionados independientemente de: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, y -N(Ra)-; en donde:

x es 0, 1 o 2;

n es 1, 2, 3 o 4;

cada Ra y Rb es, independientemente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12, alquilo sustituido C1-C12, alquenilo C2-C12, alquenilo sustituido C2-C12, alquinilo C2-C12, alquinilo sustituido C2-C12, arilo C5-C20, arilo sustituido C5-C20, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicíclico C5-C7, radical alicíclico sustituido C5-C7, halógeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=O)2-J1), o sulfoxilo (S(=O)-J1); y

cada J1 y J2 es, independientemente, H, alquilo C1-C12, alquilo sustituido C1-C12, alquenilo C2-C12, alquenilo sustituido C2-C12, alquinilo C2-C12, alquinilo sustituido C2-C12, arilo C5-C20, arilo sustituido C5-C20, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo sustituido C1-C12, o un grupo protector.

Se conocen en la técnica fracciones de azúcar bicíclicos adicionales, véase, por ejemplo: Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443, Albaek et al., J. Org.. Chem., 2006, 71, 7731-7740, Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar et al., Bioorg.. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219 2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 8362-8379;Wengel et a., U.S. 7,053,207; Imanishi et al., U.S. 6,268,490; Imanishi et al. U.S. 6,770,748; Imanishi et al., U.S. RE44,779; Wengel et al., U.S. 6,794,499; Wengel et al., U.S. 6,670,461; Wengel et al., U.S. 7,034,133; Wengel et al., U.S.

8,080,644; Wengel et al., U.S. 8,034,909; Wengel et al., U.S. 8,153,365; Wengel et al., U.S. 7,572,582; y Ramasamy et al., U.S. 6,525,191; Torsten et al., WO 2004/106356;Wengel et al., WO 1999/014226; Seth et al., WO 2007/134181; Seth et al., U.S. 7,547,684; Seth et al., U.S. 7,666,854; Seth et al., U.S. 8,088,746; Seth et al., U.S. 7,750,131; Seth et al., U.S.

8,030,467; Seth et al., U.S. 8,268,980; Seth et al., U.S. 8,546,556; Seth et al., U.S. 8,530,640; Migawa et al., U.S.

9,012,421; Seth et al., U.S. 8,501,805; y Publicación de Patente de EE.UU. Nos. Allerson et al., US2008/0039618 y Migawa et al., US2015/0191727.

Las fracciones de azúcar bicíclicas y los nucleósidos que incorporan dichas fracciones de azúcar bicíclicas se definen además por configuración isomérica. Por ejemplo, un nucleósido de LNA (descrito en el presente documento) puede estar en la configuración a-L o en la configuración p-D.

LNA (configuración P-D ) a-L-LNA (configuración a-L )

puente = 4'-CH2-0-2' puente = 4'-CH2-0-2'

a-L-metilenooxi (4'-CH2-O-2') o nucleósidos bicíclicos de a-L-LNA se han incorporado en oligonucleótidos que mostraron actividad antisentido (Frieden et al, Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372). En el presente documento, las descripciones generales de los nucleósidos bicíclicos incluyen ambas configuraciones isoméricas. Cuando las posiciones de nucleósidos bicíclicos específicos (por ejemplo, LNA o cEt) se identifican en las realizaciones ejemplificadas en el presente documento, están en la configuración p-D, a menos que se especifique lo contrario.

Las moléculas de azúcar modificadas pueden comprender uno o más sustituyentes de azúcar sin puente y uno o más sustituyentes de azúcar sin puente (por ejemplo, azúcares 5'-sustituidos y 4'-2' con puente).

Las fracciones de azúcar modificadas pueden ser sustitutos de azúcar. El átomo de oxígeno de la fracción de azúcar puede sustituirse,por ejemplo,por un átomo de azufre, carbono o nitrógeno. Dichas fracciones de azúcar modificadas también pueden incluir sustituyentes con puente y/o sin puente, tal como se describe en el presente documento. Por ejemplo, ciertos sustitutos de azúcar comprenden un átomo de azufre 4' y una sustitución en la posición 2'(véase, por ejemplo,Bhat et al, U.S. 7,875,733 y Bhat et al., U.S. 7,939,677) y/o la posición 5'..

Los sustitutos del azúcar pueden comprender anillos que tengan menos de 5 átomos. Por ejemplo, un sustituto del azúcar puede comprender un tetrahidropirano de seis miembros ("THP"). Estos tetrahidropiranos pueden modificarse o sustituirse.

Los nucleósidos que comprenden tales tetrahidropiranos modificados incluyen, entre otros, el ácido nucleico de hexitol ("HNA"), el ácido nucleico de anitol ("ANA"), el ácido nucleico de manitol ("MNA")(véase, por ejemplo,Leumann, CJ..

Bioorg. & Med. Chem. 2002, 10, 841-854), HNA fluorado:

("F-HNA",véase, por ejemplo,Swayze et al, U.S. 8,088,904; Swayze et al., U.S. 8,440,803; Swayze et al., U.S. 8,796,437;

y Swayze et al, U.S. 9,005,906; el F-HNA también puede denominarse F-THP o 3'-fluoro tetrahidropirano), y nucleósidos que comprenden compuestos THP modificados adicionales que tienen la fórmula:

en donde, independientemente, para cada uno de dichos nucleósidos THP modificados:

Bx es una fracción de nucleobase;

T3 y T4 son cada uno, independientemente, un grupo de enlace internucleósido que une el nucleósido THP modificado al resto de un oligonucleótido o uno de T3 y T4 es un grupo de enlace internucleósido que une el nucleósido THP modificado al resto de un oligonucleótido y el otro de T3 y T4 es H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado enlazado, o un grupo 5' o 3'-terminal;

q-i, q2, q3, q4, q5, q6 y q7 son cada uno, independientemente, H, alquilo C1-C6, alquilo sustituido C1-C6, alquenilo sustituido C2-C6, alquinilo C2-C6, o alquinilo sustituid C2-C6 o; y cada uno de R1 y R2 se selecciona independientemente de: hidrógeno, halógeno, alcoxi sustituido o no sustituido, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJj2, NJ3C(=X)NJJ2, y CN, en donde X es O, S o NJ1, y cada J1, J2y J3 es, independientemente, H o alquilo C1-C6.

Se divulgan nucleósidos THP modificados en los que q1, q2, q3, q4, q5, q6 y q7 son cada uno H. Al menos uno de q1, q2, q3, q4, q5, q6 y q7 puede ser distinto de H. Al menos uno de q1, q2, q3, q4, q5, q6 y q7 puede ser metilo. Se dan a conocer nucleósidos THP modificados en los que uno de R1 y R2 es F. R1 puede ser F y R2 puede ser H, R1 puede ser metoxi y R2 puede ser H, y R1 puede ser metoxietoxi y R2 puede ser H.

Los sustitutos del azúcar pueden comprender anillos que tengan más de 5 átomos y más de un heteroátomo. Por ejemplo, se han descrito nucleósidos que comprenden moléculas de azúcar morfolino y su uso en oligonucleótidos(véase, por ejemplo,Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510 y Summerton et al, U.S. 5,698,685; Summerton et al., U.S.

5,166,315; Summerton et al., U.S. 5,185,444; y Summerton et al., U.S. 5,034,506). Tal como se utiliza en el presente documeti, el término "morfolino" significa un sustituto del azúcar que tiene la siguiente estructura:

Los morfolinos pueden modificarse, por ejemplo añadiendo o alterando diversos grupos sustituyentes de la estructura del morfolino anterior. Tales sustitutos del azúcar se denominan en el presente documento "morfolinos modificados".

Los sustitutos del azúcar pueden comprender fracciones acíclicas. Ejemplos de nucleósidos y oligonucleótidos que comprenden tales sustitutos de azúcar acíclico incluyen, pero no se limitan a: ácido nucleico peptídico ("PNA"), ácido nucleico butílico acíclico(véase, por ejemplo,Kumar et al., Org.. Biomol. Chem., 2013, 11, 5853-5865), y nucleósidos y oligonucleótidos descritos en Manoharan et al., WO2011/133876..

Se conocen en la técnica muchos otros sistemas de anillos de azúcar y sustitutos de azúcar bicíclicos y tricíclicos que pueden usarse en nucleósidos modificados.

2. Determinadas nucleobases modificadas

Los oligonucleótidos modificados de la invención comprenden uno o más nucleósidos que comprenden una nucleobase no modificada, como se define en las reivindicaciones. Los oligonucleótidos modificados pueden comprender uno o más nucleósidos que comprenden una nucleobase modificada. Los oligonucleótidos modificados pueden comprender uno o más nucleósidos que no comprenden una nucleobase, denominados nucleósidos abásicos.

Las nucleobases modificadas pueden seleccionarse de: pirimidinas 5-sustituidas, 6-azapirimidinas, pirimidinas alquilo o alquinilo sustituidas, purinas alquilo sustituidas y purinas N-2, N-6 y O-6 sustituidas. Las nucleobases modificadas pueden seleccionarse de: 2-aminopropiladenina, 5-hidroximetilcitosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-N-metilguanina, 6-N-metiladenina, 2-propiladenina, 2-tiouracilo, 2-tiotimina y 2-tiocitosina, 5-propinil (-CEC-CH3) uracilo, 5-propinilcitosina, 6- azouracilo, 6-azocitosina, 6-azotimina, 5-ribosiluracilo (pseudouracilo), 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquilo, 8-hidroxilo, 8-aza y otras purinas 8-sustituidas, 5-halo, en particular 5-bromo, 5-trifluorometil, 5-halouracilo y 5-halocitosina, 7- metilguanina, 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-aminoadenina, 7-deazaguanina, 7-deazaadenina, 3-deazaguanina, 3-deazaadenina, 6-N-benzoiladenina, 2-N-isobutirilguanina, 4-N-benzoilcitosina, 4-N-benzoiluracilo, 5-metil 4-N-benzoilcitosina, 5-metil 4-N-benzoiluracilo, bases universales, bases hidrofóbicas, bases promiscuas, bases de tamaño expandido y bases fluoradas. Otras nucleobases modificadas son las pirimidinas tricíclicas, tal como 1,3-diazafenoxazina-2-ona, 1,3-diazafenotiazina-2-ona y 9-(2-aminoetoxi)-1,3-diazafenoxazina-2-ona (G-clamp). Las nucleobases modificadas también pueden incluir aquellas en las que la base de purina o pirimidina se sustituye por otros heterociclos, por ejemplo 7-deaza-adenina, 7-deazaguanosina, 2-aminopiridina y 2-piridona. Otras nucleobases incluyen las divulgadas en Merigan et al., U.S. 3,687,808, las divulgadas en The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; Sanghvi, Y.S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. y Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288; y los divulgados en Capítulos 6 y 15, Antisense Drug Technology, Crooke S.T., Ed., CRC Press, 2008, 163-166 y 442-443.

Entre las publicaciones que enseñan la preparación de algunas de las nucleobases modificadas mencionadas anteriormente, así como otras nucleobases modificadas, se incluyen, sin limitación, Manoharan et al, US2003/0158403; Manoharan et al., US2003/0175906; Dinh et al., U.S. 4,845,205; Spielvogel et al., U.S. 5,130,302; Rogers et al., U.S.

5,134,066; Bischofberger et al., U.S. 5,175,273; Urdea et al., U.S. 5,367,066; Benner et al., U.S. 5,432,272; Matteucci et al., U.S. 5,434,257; Gmeiner et al., U.S. 5,457,187; Cook et al., U.S. 5,459,255; Froehler et al., U.S. 5,484,908; Matteucci et al., U.S. 5,502,177; Hawkins et al., U.S. 5,525,711; Haralambidis et al., U.S. 5,552,540; Cook et al., U.S. 5,587,469; Froehler et al., U.S. 5,594,121; Switzer et al., U.S. 5,596,091; Cook et al., U.S. 5,614,617; Froehler et al., U.S. 5,645,985; Cook et al., U.S. 5,681,941; Cook et al., U.S. 5,811,534; Cook et al., U.S. 5,750,692; Cook et al., U.S. 5,948,903; Cook et al., U.S. 5,587,470; Cook et al., U.S. 5,457,191; Matteucci et al., U.S. 5,763,588; Froehler et al., U.S. 5,830,653; Cook et al., U.S. 5,808,027; Cook et al., 6,166,199; y Matteucci et al., U.S. 6,005,096..

3. Determinados enlaces internucleósidos modificados

Los nucleósidos de oligonucleótidos modificados pueden unirse entre sí utilizando cualquier enlace internucleósido. Las dos clases principales de grupos de enlace internucleósido se definen por la presencia o ausencia de un átomo de fósforo. Los enlaces internucleósidos representativos que contienen fósforo incluyen, entre otros, los fosfatos, que contienen un enlace fosfodiéster ("P=O") (también denominados enlaces no modificados o naturales), fosfotriesteres, metilfosfonatos, fosforamidatos y fosforotioatos ("P=S"), y fosforoditioatos ("HS-P=S"). Los grupos enlazantes internucleósidos representativos que no contienen fósforo incluyen, entre otros, metilenmetilimino (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), tiodiéster, tionocarbamato (-O-C(=O)(NH)-S-); siloxano (-O-SH2-O-); y N,N'-dimetilhidrazina (-CH2-N(<c>H3)-N(CH3)-). Los enlaces internucleósidos modificados, en comparación con los enlaces fosfato naturales, pueden utilizarse para alterar, normalmente aumentar, la resistencia a las nucleasas del oligonucleótido. Los enlaces internucleósidos que tienen un átomo quiral pueden prepararse como una mezcla racémica o como enantiómeros separados. Los métodos de preparación de enlaces internucleósidos que contienen fósforo y que no contienen fósforo son bien conocidos por los expertos en la técnica.

Los enlaces intemucleósidos representativos que tienen un centro quiral incluyen pero no se limitan a alquilfosfonatos y fosforotioatos. Los oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces intemucleósidos que tienen un centro quiral pueden prepararse como poblaciones de oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces intemucleósidos estereorándomicos, o como poblaciones de oligonucleótidos modificados que comprenden enlaces fosforotioato en configuraciones estereoquímicas particulares. En ciertas realizaciones, las poblaciones de oligonucleótidos modificados comprenden enlaces intemucleósidos de fosforotioato en los que todos los enlaces intemucleósidos de fosforotioato son estereorándomicos. Tales oligonucleótidos modificados pueden generarse utilizando métodos sintéticos que dan lugar a una selección aleatoria de la configuración estereoquímica de cada enlace fosforotioato. No obstante, como bien saben los expertos en la técnica, cada fosforotioato individual de cada molécula de oligonucleótido individual tiene una estereoconfiguración definida. En ciertas realizaciones, las poblaciones de oligonucleótidos modificados se enriquecen para oligonucleótidos modificados que comprenden uno o más enlaces intemucleósidos de fosforotioato particulares en una configuración estereoquímica particular, seleccionada independientemente. En ciertas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos el 65% de las moléculas de la población. En ciertas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos el 70% de las moléculas de la población. En ciertas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos el 80% de las moléculas de la población. En ciertas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos el 90% de las moléculas de la población. En ciertas realizaciones, la configuración particular del enlace fosforotioato particular está presente en al menos el 99% de las moléculas de la población. Tales poblaciones quiralmente enriquecidas de oligonucleótidos modificados pueden generarse usando métodos sintéticos conocidos en la técnica,por ejemplo,métodos descritos en Oka et al., JACS 125, 8307 (2003), Wan et al.. Nuc. Acid. Res. 42, 13456 (2014), y el documento WO 2017/015555.. En ciertas realizaciones, una población de oligonucleótidos modificados se enriquece para oligonucleótidos modificados que tienen al menos un fosforotioato indicado en la configuración (Sp). En ciertas realizaciones, una población de oligonucleótidos modificados está enriquecida para oligonucleótidos modificados que tienen al menos un fosforotioato en la configuración (Rp). En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos modificados que comprenden (Rp) y/o (Sp) fosforotioatos comprenden una o más de las siguientes fórmulas, respectivamente, en las que "B" indica una nucleobase:

A menos que se indique lo contrario, los enlaces intemucleósidos quirales de los oligonucleótidos modificados descritos en el presente documento pueden ser estereorándomicos o estar en una configuración estereoquímica particular.

Los enlaces intemucleósidos neutros incluyen, sin limitación, fosfotriesteres, metilfosfonatos, MMI (3'-CH2-N(CH3)-O-5'), amida-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), amia-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), formacetal (3-O-CH2-O-5'), metoxipropilo y tioformacetal (3'-S-CH2-O-5'). Otros enlaces neutros intemucleósidos incluyen enlaces no iónicos que comprenden siloxano (dialquilsiloxano), éster de carboxilato, carboxamida, sulfuro, éster de sulfonato y amidas (Véase, por ejemplo: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi y P.D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Capítulos 3 y 4, 40-65).. Otros enlaces neutros intemucleósidos incluyen enlaces no iónicos que comprenden componentes mixtos N, O, S y CH2.

B. Ciertos motivos

Los oligonucleótidos modificados de la invención comprenden uno o más nucleósidos modificados que comprenden una fracción de azúcar modificada, como se define en las reivindicaciones. Los oligonucleótidos modificados de la invención comprenden uno o más nucleósidos modificados que comprenden una nucleobase modificada, como se define en las reivindicaciones. Los oligonucleótidos modificados de la invención comprenden uno o más enlaces intemucleósidos modificados, tal como se definen en las reivindicaciones. Las fracciones de azúcar, nucleobases y/o enlaces internucleósidos modificados, no modificados o modificados de forma diferente de un oligonucleótido modificado definen un patrón o motivo. Los patrones de fracciones de azúcares, nucleobases y enlaces internucleósidos pueden ser independientes entre sí. Así, un oligonucleótido modificado puede describirse por su motivo de azúcar, motivo de nucleobase y/o motivo de enlace internucleósido (tal como se utiliza en el presente documento, el motivo de nucleobase describe las modificaciones de las nucleobases independientemente de la secuencia de nucleobases).

1. Ciertos motivos azucareros

Los oligonucleótidos de la invención comprenden uno o más tipos de azúcar modificado y/o fracción de azúcar no modificado dispuestos a lo largo del oligonucleótido o región del mismo en un patrón definido o motivo de azúcar, como se define en las reivindicaciones. Tales motivos de azúcar pueden incluir, pero no se limitan a, cualquiera de las modificaciones de azúcar discutidas en el presente documento.

Los oligonucleótidos modificados pueden comprender o consistir en una región que tiene un motivo gapmer, que se define por dos regiones externas o "alas" y una región central o interna o "brecha". Las tres regiones de un motivo gapmer (el ala 5', la brecha y el ala 3') forman una secuencia contigua de nucleósidos en la que al menos algunas de las fracciones de azúcar de los nucleósidos de cada una de las alas difieren de al menos algunas de las fracciones de azúcar de los nucleósidos de la brecha. En concreto, al menos las fracciones de azúcar de los nucleósidos de cada ala que están más cerca de la brecha (el nucleósido 3'-most del ala 5'- y el nucleósido 5'-most del ala 3'-) difieren de las fracciones de azúcar de los nucleósidos vecinos de la brecha, definiendo así el límite entre las alas y la brecha (es decir, la unión ala/brecha). Las fracciones de azúcar dentro de la brecha pueden ser iguales entre sí. La brecha puede incluir uno o más nucleósidos que tengan una fracción de azúcar que difiera de la fracción de azúcar de uno o más nucleósidos de la brecha. Los motivos de azúcar de las dos alas pueden ser iguales entre sí (gapmer simétrico). El motivo de azúcar del ala 5' puede diferir del motivo de azúcar del ala 3' (gapmer asimétrico).

Las alas de un gapmer pueden comprender 1-5 nucleósidos. Cada nucleósido de cada ala de un gapmer puede ser un nucleósido modificado. Al menos un nucleósido de cada ala de un gapmer puede ser un nucleósido modificado. Al menos dos nucleósidos de cada ala de un gapmer pueden ser nucleósidos modificados. Al menos tres nucleósidos de cada ala de un gapmer pueden ser nucleósidos modificados. Al menos cuatro nucleósidos de cada ala de un gapmer pueden ser nucleósidos modificados.

La brecha de un gapmer puede comprender 7-12 nucleósidos. Cada nucleósido del gapmer puede ser un 2'-desoxinucleósido no modificado. Al menos un nucleósido de la brecha de un gapmer puede ser un nucleósido modificado.

El gapmer puede ser un gapmer deoxi. Los nucleósidos del lado de la brecha de cada unión ala/brecha pueden ser 2'-desoxinucleósidos no modificados y los nucleósidos de los lados del ala de cada unión ala/brecha pueden ser nucleósidos modificados. Cada nucleósido de la brecha puede ser un 2'-desoxinucleósido no modificado. Cada nucleósido de cada ala de un gapmer puede ser un nucleósido modificado.

Los oligonucleótidos modificados pueden comprender o consistir en una región que tiene un motivo de azúcar completamente modificado. Cada nucleósido de la región totalmente modificada del oligonucleótido modificado puede comprender una fracción de azúcar modificada. Cada nucleósido del oligonucleótido modificado completo puede comprender una fracción de azúcar modificada. Los oligonucleótidos modificados pueden comprender o consistir en una región con un motivo de azúcar totalmente modificado, en la que cada nucleósido dentro de la región totalmente modificada comprende la misma fracción de azúcar modificada, denominada en el presente documento motivo de azúcar uniformemente modificado. Un oligonucleótido totalmente modificado puede ser un oligonucleótido uniformemente modificado. Cada nucleósido de un oligonucleótido uniformemente modificado puede incluir la misma modificación 2'.

En el presente documento, las longitudes (número de nucleósidos) de las tres regiones de un gapmer pueden proporcionarse usando la notación [# de nucleósidos en el ala 5'-] - [# de nucleósidos en la brecha] - [# de nucleósidos en el ala 3'-]. Así, un gapmer 5-10-5 consta de 5 nucleósidos enlazados en cada ala y 10 nucleósidos enlazados en la brecha. Cuando dicha nomenclatura va seguida de una modificación específica, dicha modificación es la modificación en cada fracción de azúcar de cada ala y los nucleósidos de brecha comprenden azúcares desoxinucleósidos no modificados. Así, un gapmer 5-10-5 MOE consta de 5 nucleósidos modificados m Oe enlazados en el ala 5', 10 desoxinucleósidos enlazados en la brecha y 5 nucleósidos MOE enlazados en el ala 3'.

Los oligonucleótidos modificados pueden ser gapmers 5-10-5 MOE. Los oligonucleótidos modificados pueden ser gapmers 3-10-3 BNA. Los oligonucleótidos modificados pueden ser gapmers 3-10-3 cEt. Los oligonucleótidos modificados pueden ser gapmers 3-10-3 LNA.

2. Ciertos motivos nucleobásicos

Los oligonucleótidos de la invención comprenden nucleobases modificadas y/o no modificadas dispuestas a lo largo del oligonucleótido o región del mismo en un patrón o motivo definido, como se define en las reivindicaciones. Cada nucleobase puede modificarse. Ninguna de las nucleobases puede modificarse. Cada purina o cada pirimidina puede modificarse. Cada adenina puede modificarse. Cada guanina puede modificarse. Cada timina puede modificarse. Cada uracilo puede modificarse. Cada citosina puede modificarse. Algunas o todas las nucleobases de citosina en un oligonucleótido modificado pueden ser 5-metil citosinas. Todas las nucleobases de citosina pueden ser 5-metil citosinas y todas las demás nucleobases del oligonucleótido modificado pueden ser nucleobases no modificadas.

Los oligonucleótidos modificados pueden comprender un bloque de nucleobases modificadas. El bloque puede estar en el extremo 3' del oligonucleótido. El bloque puede estar dentro de los 3 nucleósidos del extremo 3'del oligonucleótido. El bloque puede estar en el extremo 5' del oligonucleótido. El bloque puede estar dentro de los 3 nucleósidos del extremo 5'del oligonucleótido.

Los oligonucleótidos que tienen un motivo gapmer pueden comprender un nucleósido que comprende una nucleobase modificada. Un nucleósido que comprende una nucleobase modificada puede estar en el hueco central de un oligonucleótido que tenga un motivo gapmer. La fracción de azúcar de dicho nucleósido puede ser una fracción de 2'-desoxirribosilo. La nucleobase modificada puede seleccionarse de: una 2-tiopirimidina y una 5-propinepirimidina.

3. Ciertos motivos de enlace internucleósido

Los oligonucleótidos de la invención comprenden enlaces internucleósidos modificados y/o no modificados dispuestos a lo largo del oligonucleótido o región del mismo en un patrón o motivo definido, como se define en las reivindicaciones. Cada grupo de enlace internucleósido puede ser un enlace internucleósido fosfodiéster (P=O). Cada grupo de enlace internucleósido de un oligonucleótido modificado puede ser un enlace internucleósido fosforotioato (P=S). Cada enlace internucleósido de un oligonucleótido modificado puede seleccionarse independientemente de un enlace internucleósido fosforotioato y un enlace internucleósido fosfodiéster. Cada enlace internucleósido fosforotioato puede seleccionarse independientemente de un fosforotioato estereorándomico, un (Sp) fosforotioato y un(Rp)fosforotioato. El motivo de azúcar de un oligonucleótido modificado puede ser un gapmer y los enlaces internucleósidos dentro de la brecha pueden estar todos modificados. Algunos o todos los enlaces internucleósidos de las alas pueden ser enlaces internucleósidos fosfodiéster no modificados. Los enlaces internucleósidos terminales pueden modificarse. El motivo de azúcar de un oligonucleótido modificado puede ser un gapmer, y el motivo de enlace internucleósido puede comprender al menos un enlace internucleósido fosfodiéster en al menos un ala, en el que el al menos un enlace fosfodiéster no es un enlace internucleósido terminal, y los enlaces internucleósidos restantes son enlaces internucleósidos fosforotioato. Todos los enlaces fosforotioato pueden ser estereorándomicos. Todos los enlaces fosforotioato en las alas pueden ser (Sp) fosforotioatos, y la brecha puede comprender al menos un motivoSp, Sp,Rp. Las poblaciones de oligonucleótidos modificados pueden estar enriquecidas para oligonucleótidos modificados que comprenden tales motivos de enlace internucleósido.

C. Ciertos oligonucleótidos modificados.

Las modificaciones anteriores (azúcar, nucleobase, enlace internucleósido) pueden incorporarse a un oligonucleótido modificado de la invención, tal como se define en las reivindicaciones. Los oligonucleótidos modificados pueden caracterizarse por sus motivos de modificación y longitudes totales. Estos parámetros pueden ser independientes entre sí. Así, a menos que se indique lo contrario, cada enlace internucleósido de un oligonucleótido que tenga un motivo de azúcar gapmer puede estar modificado o sin modificar y puede seguir o no el patrón de modificación gapmer de las modificaciones de azúcar. Por ejemplo, los enlaces internucleósidos dentro de las regiones de ala de un gapmer de azúcar pueden ser iguales o diferentes entre sí y pueden ser iguales o diferentes de los enlaces internucleósidos de la región de brecha del motivo de azúcar. Asimismo, dichos oligonucleótidos gapmer de azúcar pueden comprender una o más nucleobases modificadas independientes del patrón gapmer de las modificaciones de azúcar. A menos que se indique lo contrario, todas las modificaciones son independientes de la secuencia de nucleobases.

D. Ciertas poblaciones de oligonucleótidos modificados

Las poblaciones de oligonucleótidos modificados en las que todos los oligonucleótidos modificados de la población tienen la misma fórmula molecular pueden ser poblaciones estereorándomicas o poblaciones enriquecidas quiralmente. Todos los centros quirales de todos los oligonucleótidos modificados son estereorándomicos en una población estereorándomica. En una población quiralmente enriquecida, al menos un centro quiral particular no es estereorandomérico en los oligonucleótidos modificados de la población. Los oligonucleótidos modificados de una población enriquecida quiralmente pueden estar enriquecidos para restos de azúcares p-D ribosil, y todos los enlaces internucleósidos fosforotioato pueden ser estereorándomicos. Los oligonucleótidos modificados de una población enriquecida quiralmente pueden estar enriquecidos tanto para fracciones de azúcar p-D ribosil como para al menos un enlace internucleósido fosforotioato particular en una configuración estereoquímica particular.

E. Secuencia de nucleobase

Los oligonucleótidos (oligonucleótidos no modificados o modificados) pueden describirse además por su secuencia de nucleobases. Los oligonucleótidos pueden tener una secuencia de nucleobases complementaria a un segundo oligonucleótido o a un ácido nucleico de referencia identificado, tal como un ácido nucleico objetivo. Una región de un oligonucleótido puede tener una secuencia de nucleobases complementaria a un segundo oligonucleótido o a un ácido nucleico de referencia identificado, tal como un ácido nucleico objetivo. La secuencia de nucleobases de una región o de toda la longitud de un oligonucleótido puede ser al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, o 100% complementaria al segundo oligonucleótido o ácido nucleico, tal como un ácido nucleico objetivo.

II. Determinados compuestos oligoméricos

Se proporcionan en el presente documento compuestos oligoméricos, que consisten en un oligonucleótido modificado como se define en las reivindicaciones y opcionalmente uno o más grupos conjugados y/o grupos terminales. Los grupos conjugados constan de una o más fracciones conjugadas y un enlazador conjugado que une la fracción conjugada al oligonucleótido. Los grupos conjugados pueden unirse a uno o ambos extremos de un oligonucleótido y/o en cualquier posición interna. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados se unen a la posición 2'de un nucleósido de un oligonucleótido modificado. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados que se unen a uno o ambos extremos de un oligonucleótido son grupos terminales. En ciertas realizaciones, se unen grupos conjugados o grupos terminales en los extremos 3' y/o 5' de los oligonucleótidos. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados (o grupos terminales) se unen al extremo 3' de los oligonucleótidos. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados se unen cerca del extremo 3' de los oligonucleótidos. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados (o grupos terminales) se unen al extremo 5'de los oligonucleótidos. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados se unen cerca del extremo 5' de los oligonucleótidos.

Ejemplos de grupos terminales incluyen pero no se limitan a grupos conjugados, grupos de recubrimiento, fracciones de fosfato, grupos protectores, nucleósidos modificados o no modificados, y dos o más nucleósidos que están independientemente modificados o no modificados.

A. Ciertos grupos conjugados.

En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos están unidos covalentemente a uno o más grupos conjugados. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del oligonucleótido unido, incluyendo, pero sin limitarse a la farmacodinámica, farmacocinética, estabilidad, unión, absorción, distribución tisular, distribución celular, captación celular, carga y aclaramiento. En ciertas realizaciones, los grupos conjugados imparten una nueva propiedad al oligonucleótido unido,por ejemplo,fluoróforos o grupos informadores que permiten la detección del oligonucleótido. Ciertos grupos conjugados y moléculas conjugadas se han descrito anteriormente, por ejemplo: molécula de colesterol (Letsinger et al., Proc.). Natl. Acad. Sci. EE. UU., 1989, 86, 6553-6556), ácido cólico (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053-1060), un tioéter,por ejemplo,hexil-S-tritiol (Manoharan et al., Ann.. N.Y Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg.. Med. Chem. Lett., 1993, 3, 2765-2770), un tiocolesterol (Oberhauser et al., Nucl.). Acids Res., 1992, 20, 533-538), una cadena alifática,por ejemplo,do-decan-diol o residuos de undecilo (Saison-Behmoaras et al, EMBO J, 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75, 49-54), un fosfolípido,por ejemplo,di-hexadecil-rac-glicerol o 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietil-amonio (Manoharan et al, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl.. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), una poliamina o una cadena de polietilenglicol (Manoharan et al, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), o ácido adamantano acético una fracción de palmito (Mishra et al., Biochim.). Biophys. Acta, 1995, 1264, 229 237), una fracción de octadecilamina o hexilamino-carbonil-oxicolesterol (Crooke et al., J. Pharmacol.). Exp. Ther., 1996, 277, 923-937), un grupo de tocoferoles (Nishina et al, Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015, 4, e220; y Nishina et al, Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740), o un cúmulo de GalNAc(por ejemplo,el documento WO2014/179620).

1. Fracciones conjugadas

Las fracciones conjugadas incluyen, sin limitación, intercaladores, fracciones informadoras, poliaminas, poliamidas, péptidos, carbohidratos, fracciones vitamínicas, polietilenglicoles, tioéteres, poliéteres, colesteroles, tiocolesteroles, fracciones de ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas, fluoróforos y colorantes.

En ciertas realizaciones, una fracción conjugada comprende un principio activo, por ejemplo, aspirina, warfarina, fenilbutazona, ibuprofeno, suprofeno, fen-bufeno, ketoprofeno, (S)-(+)-pranoprofeno, carprofeno, dansilsarcosina, ácido 2,3,5-triyodobenzoico, fingolimod, ácido flufenámico, ácido folínico, una benzotiadiazida, una clorotiazida, una diazepina, una indo-meticina, un barbitúrico, una cefalosporina, una sulfamida, un antidiabético, un antibacteriano o un antibiótico.

2. Enlazadores conjugados

Las fracciones conjugadas se unen a oligonucleótidos a través de enlazadores conjugados. En ciertos compuestos oligoméricos, el enlazador conjugado es un enlace químico simple (es decir, la fracción conjugada está unida directamente a un oligonucleótido mediante un enlace simple). En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende una estructura de cadena, tal como una cadena de hidrocarbilo, o un oligómero de unidades repetitivas como etilenglicol, nucleósidos o unidades de aminoácidos.

En ciertas realizaciones, un enlazador conjugado comprende uno o más grupos seleccionados de alquilo, amino, oxo, amida, disulfuro, polietilenglicol, éter, tioéter e hidroxilamino. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende grupos seleccionados de alquilo, amino, oxo, amida y éter. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende grupos seleccionados de grupos alquilo y amida. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende grupos seleccionados de grupos alquilo y éter. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende al menos una fracción de fósforo. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado comprende al menos un grupo fosfato. En ciertas realizaciones, el enlazador conjugado incluye al menos un grupo enlazador neutro.

En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados, incluyendo los enlazadores conjugados descritos anteriormente, son fracciones de enlace bifuncionales,por ejemplo,aquellos conocidos en la técnica por ser útiles para unir grupos conjugados a compuestos parentales, tales como los oligonucleótidos proporcionados en el presente documento. En general, una fracción de enlace bifuncional comprende al menos dos grupos funcionales. Uno de los grupos funcionales se selecciona para unirse a un sitio concreto de un compuesto original y el otro se selecciona para unirse a un grupo conjugado. Los ejemplos de grupos funcionales utilizados en una fracción de enlace bifuncional incluyen, entre otros, electrófilos para reaccionar con grupos nucleófilos y nucleófilos para reaccionar con grupos electrófilos. En ciertas realizaciones, las fracciones de enlace bifuncionales comprenden uno o más grupos seleccionados de amino, hidroxilo, ácido carboxílico, tiol, alquilo, alquenilo y alquinilo.

Ejemplos de enlazadores conjugados incluyen pero no se limitan a pirrolidina, ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico (ADO), succinimidil 4-(N-maleimidometil) ciclohexano-1-carboxilato (SMCC) y ácido 6-aminohexanoico (AHEX o AHA). Otros enlazadores conjugados incluyen, pero no se limitan a alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido, alquenilo C2-C10 sustituido o no sustituido o alquinilo C2-C10 sustituido o no sustituido, en donde una lista no limitativa de grupos sustituyentes preferidos incluye hidroxilo, amino, alcoxi, carboxi, bencilo, fenilo, nitro, tiol, tioalcoxi, halógeno, alquilo, arilo, alquenilo y alquinilo.

En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden 1-10 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden 2-5 enlazadores-nucleósidos. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden exactamente 3 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden el motivo TCA. En ciertas realizaciones, dichos nucleósidos enlazadores son nucleósidos modificados. En ciertas realizaciones, dichos nucleósidos enlazadores comprenden una fracción de azúcar modificada. En ciertas realizaciones, los nucleósidos enlazadores no están modificados. En ciertas realizaciones, los nucleósidos enlazadores comprenden una base heterocíclica opcionalmente protegida seleccionada de una purina, una purina sustituida, una pirimidina o una pirimidina sustituida. En ciertas realizaciones, una fracción escindible es un nucleósido seleccionado de uracilo, timina, citosina, 4-N-benzoilcitosina, 5-metilcitosina, 4-N-benzoil-5-metilcitosina, adenina, 6-N-benzoiladenina, guanina y 2-N-isobutirilguanina. Por lo general, es deseable que los nucleósidos enlazadores se separen del compuesto oligomérico después de llegar al tejido objetivo. En consecuencia, los nucleósidos enlazadores suelen estar unidos entre sí y al resto del compuesto oligomérico mediante enlaces escindibles. En ciertas realizaciones, dichos enlaces escindibles son enlaces fosfodiéster.

En el presente documento, los nucleósidos enlazadores no se consideran parte del oligonucleótido. Por consiguiente, en las realizaciones en las que un compuesto oligomérico comprende un oligonucleótido que consiste en un número o rango especificado de nucleósidos enlazados y/o un porcentaje especificado de complementariedad con un ácido nucleico de referencia y el compuesto oligomérico también comprende un grupo conjugado que comprende un enlazador conjugado que comprende nucleósidos enlazadores, esos nucleósidos enlazadores no se cuentan para la longitud del oligonucleótido y no se usan para determinar el porcentaje de complementariedad del oligonucleótido con el ácido nucleico de referencia. Por ejemplo, un compuesto oligomérico puede comprender (1) un oligonucleótido modificado formado por 8-30 nucleósidos y (2) un grupo conjugado formado por 1-10 nucleósidos enlazadores contiguos a los nucleósidos del oligonucleótido modificado. El número total de nucleósidos enlazados contiguos en dicho compuesto oligomérico es superior a 30. Alternativamente, un compuesto oligomérico puede comprender un oligonucleótido modificado formado por 8-30 nucleósidos y sin grupo conjugado. El número total de nucleósidos enlazados contiguos en dicho compuesto oligomérico no es superior a 30. A menos que se indique lo contrario, los enlazadores conjugados no comprenden más de 10 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden no más de 5 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden no más de 3 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden no más de 2 nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, los enlazadores conjugados comprenden no más de 1 enlazador-nucleósido.

En ciertas realizaciones, es deseable que un grupo conjugado se escinda del oligonucleótido. Por ejemplo, en ciertas circunstancias, los compuestos oligoméricos que comprenden una fracción conjugada particular son mejor absorbidos por un tipo celular particular, pero una vez que el compuesto oligomérico se ha absorbido, es deseable que el grupo conjugado sea escindido para liberar el oligonucleótido no conjugado o parental. Así, ciertos enlazadores conjugados pueden comprender una o más fracciones escindibles. En ciertas realizaciones, una fracción escindible es un enlace escindible. En ciertas realizaciones, una fracción escindible es un grupo de átomos que comprende al menos un enlace escindible. En ciertas realizaciones, una fracción escindible comprende un grupo de átomos que tienen uno, dos, tres, cuatro o más de cuatro enlaces escindibles. En ciertas realizaciones, una fracción escindible se escinde selectivamente dentro de una célula o compartimento subcelular, tal como un lisosoma. En ciertas realizaciones, una fracción escindible es escindida selectivamente por enzimas endógenas, tales como nucleasas.

En ciertas realizaciones, un enlace escindible se selecciona de entre: una amida, un éster, un éter, uno o ambos ésteres de un fosfodiéster, un éster de fosfato, un carbamato o un disulfuro. En ciertas realizaciones, un enlace escindible es uno o ambos de los ésteres de un fosfodiéster. En ciertas realizaciones, una fracción escindible comprende un fosfato o un fosfodiéster. En ciertas realizaciones, la fracción escindible es un enlace fosfato entre un oligonucleótido y una fracción conjugada o grupo conjugado.

En ciertas realizaciones, una fracción escindible comprende o consiste en uno o más nucleósidos enlazadores. En ciertas realizaciones, uno o más nucleósidos enlazadores están unidos entre sí y/o al resto del compuesto oligomérico mediante enlaces escindibles. En ciertas realizaciones, dichos enlaces escindibles son enlaces fosfodiéster no modificados. En ciertas realizaciones, una fracción escindible es un 2'-desoxinucleósido que está unido al nucleósido 3' o 5'-terminal de un oligonucleótido mediante un enlace fosfato internucleósido y unido covalentemente al resto del enlazador conjugado o fracción conjugada mediante un enlace fosfato o fosforotioato. En ciertas realizaciones, la fracción escindible es 2'-desoxiadenosina.

B. Ciertos grupos de terminales

En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos comprenden uno o más grupos terminales. En ciertas realizaciones de este tipo, los compuestos oligoméricos comprenden un 5'-fosfato estabilizado. Los 5'-fosfatos estabilizados incluyen, entre otros, los 5'-fosfanatos, incluyendo, entre otros, los 5'-vinilfosfonatos. En ciertas realizaciones, los grupos terminales comprenden uno o más nucleósidos abásicos y/o nucleósidos invertidos. En ciertas realizaciones, los grupos terminales comprenden uno o más nucleósidos 2'-ligados. En ciertas realizaciones, el nucleósido 2'-ligado es un nucleósido abásico.

III. Dúplex oligoméricos

Los compuestos oligoméricos descritos en el presente documento pueden comprender un oligonucleótido, que tiene una secuencia de nucleobases complementaria a la de un ácido nucleico objetivo. Un compuesto oligomérico puede emparejarse con un segundo compuesto oligomérico para formar un dúplex oligomérico. Tales dúplex oligoméricos comprenden un primer compuesto oligomérico que tiene una región complementaria a un ácido nucleico objetivo y un segundo compuesto oligomérico que tiene una región complementaria al primer compuesto oligomérico. El primer compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico puede comprender o consistir en (1) un oligonucleótido modificado o no modificado y opcionalmente un grupo conjugado y (2) un segundo oligonucleótido modificado o no modificado y opcionalmente un grupo conjugado. Uno o ambos compuestos oligoméricos de un dúplex oligomérico pueden comprender un grupo conjugado. Los oligonucleótidos de cada compuesto oligomérico de un dúplex oligomérico pueden incluir nucleósidos salientes no complementarios.

IV. Actividad antisentido

Los compuestos oligoméricos y los dúplex oligoméricos pueden ser capaces de hibridarse a un ácido nucleico objetivo, dando como resultado al menos una actividad antisentido; tales compuestos oligoméricos y dúplex oligoméricos son compuestos antisentido. Los compuestos antisentido pueden tener actividad antisentido cuando reducen o inhiben la cantidad o actividad de un ácido nucleico objetivo en un 25% o más en el ensayo celular estándar. Los compuestos antisentido pueden afectar selectivamente a uno o más ácidos nucleicos objetivo. Dichos compuestos antisentido pueden comprender una secuencia de nucleobase que se hibrida con uno o más ácidos nucleicos objetivo, dando lugar a una o más actividades antisentido deseadas y no se hibrida con uno o más ácidos nucleicos no objetivo o no se hibrida con uno o más ácidos nucleicos no objetivo de tal manera que dé lugar a una actividad antisentido no deseada significativa.

En ciertas actividades antisentido, la hibridación de un compuesto antisentido a un ácido nucleico objetivo da lugar al reclutamiento de una proteína que escinde el ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, determinados compuestos antisentido provocan la escisión del ácido nucleico objetivo mediada por la RNasa H. La RNasa H es una endonucleasa celular que escinde la cadena de ARN de un dúplex de ARN:ADN. El ADN de dicho dúplex ARN:ADN no tiene por qué ser ADN no modificado. En el presente documento se describen compuestos antisentido que son lo suficientemente "similares al ADN" como para provocar la actividad de la RNasa H. Pueden tolerarse uno o más nucleósidos no similares al ADN en la brecha de un gapmer.

En ciertas actividades antisentido, un compuesto antisentido o una porción de un compuesto antisentido se carga en un complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC), dando como resultado en última instancia la escisión del ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, ciertos compuestos antisentido provocan la escisión del ácido nucleico objetivo por Argonauta. Los compuestos antisentido que se cargan en el RISC son compuestos de ARNi. Los compuestos de<a>R<ní>pueden ser bicatenarios (siARN) o monocatenarios (ssARN).

La hibridación de un compuesto antisentido a un ácido nucleico objetivo puede no dar lugar al reclutamiento de una proteína que escinde dicho ácido nucleico objetivo. La hibridación del compuesto antisentido con el ácido nucleico objetivo puede dar lugar a la alteración del empalme del ácido nucleico objetivo. La hibridación de un compuesto antisentido con un ácido nucleico objetivo puede provocar la inhibición de una interacción de unión entre el ácido nucleico objetivo y una proteína u otro ácido nucleico. La hibridación de un compuesto antisentido a un ácido nucleico objetivo puede dar lugar a la alteración de la traducción del ácido nucleico objetivo.

Las actividades antisentido pueden observarse directa o indirectamente. La observación o detección de una actividad antisentido puede implicar la observación o detección de un cambio en una cantidad de un ácido nucleico objetivo o proteína codificada por dicho ácido nucleico objetivo, un cambio en la proporción de variantes de empalme de un ácido nucleico o proteína y/o un cambio fenotípico en una célula o sujeto.

V. Ciertos ácidos nucleicos objetivo

Los compuestos oligoméricos pueden comprender o consistir en un oligonucleótido que comprende una región que es complementaria a un ácido nucleico objetivo. El ácido nucleico objetivo puede ser una molécula de ARN endógena. El ácido nucleico objetivo puede codificar una proteína. El ácido nucleico objetivo puede seleccionarse de: un ARNm maduro y un ARNpre-m, incluyendo regiones intrónicas, exónicas y no traducidas. El ARN objetivo puede ser un ARNm maduro. El ácido nucleico objetivo puede ser un ARNpre-m. El ácido nucleico objetivo puede ser el producto transcripcional ARN de un retrogén. El ácido nucleico objetivo puede ser un ARN no codificante. El ARN no codificante objetivo puede seleccionarse de: un ARN no codificante largo, un ARN no codificante corto, una molécula de ARN intrónico.

A. Complementariedad/desajustes con el ácido nucleico objetivo.

Es posible introducir bases de desajuste sin eliminar la actividad. Por ejemplo, Gautschi et al (J. Natl. Cáncer Inst. 93:463-471, marzo de 2001) demostraron la capacidad de un oligonucleótido con una complementariedad del 100% con el ARNm de bcl-2 y con 3 desajustes con el ARNm de bel-xL para reducir la expresión tanto de bcl-2 como de bel-xLin vitroe in vivo. Además, este oligonucleótido demostró una potente actividad antitumoral in vivo. Maher y Dolnick (Nuc. Acid. Res.

16:3341-3358, 1988) probaron una serie de oligonucleótidos en tándem de 14 nucleobases, y un oligonucleótido de 28 y 42 nucleobases compuesto por la secuencia de dos o tres de los oligonucleótidos en tándem, respectivamente, para determinar su capacidad de detener la traducción de la DHFR humana en un ensayo con reticulocitos de conejo.. Cada uno de los tres oligonucleótidos de 14 nucleobases por sí solo fue capaz de inhibir la traducción, aunque a un nivel más modesto que los oligonucleótidos de 28 o 42 nucleobases.

Los oligonucleótidos pueden ser complementarios al ácido nucleico objetivo en toda la longitud del oligonucleótido. Los oligonucleótidos pueden ser complementarios al ácido nucleico objetivo en un 99%, 95%, 90%, 85% u 80%. Los oligonucleótidos pueden ser al menos 80% complementarios al ácido nucleico objetivo en toda la longitud del oligonucleótido y pueden comprender una región que sea 100% o totalmente complementaria a un ácido nucleico objetivo. La región de complementariedad total puede tener una longitud de 6 a 20, de 10 a 18 o de 18 a 20 nucleobases.

Los oligonucleótidos pueden comprender una o más nucleobases desajustadas en relación con el ácido nucleico objetivo. La actividad antisentido contra la objetivo puede verse reducida por dicho desajuste, pero la actividad contra una no objetivo se reduce en mayor medida. De este modo, puede mejorarse la selectividad del oligonucleótido. El desajuste puede situarse específicamente dentro de un oligonucleótido que tenga un motivo gapmer. El desajuste puede estar en la posición 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 del extremo 5' de la región de brecha. El desajuste puede estar en la posición 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 desde el extremo 3' de la región de brecha. El desajuste puede estar en la posición 1, 2, 3 o 4 del extremo 5' de la región de ala. El desajuste puede estar en la posición 4, 3, 2 o 1 del extremo 3' de la región de ala.

B. FUS

Los compuestos oligoméricos de la invención comprenden o consisten en un oligonucleótido que comprende una región que es complementaria a un ácido nucleico FUS, como se define en las reivindicaciones. El ácido nucleico FUS puede tener la secuencia establecida en SEQ ID NO: 1 (Acceso a GENBANK No: NM_004960.3). El ácido nucleico FUS puede tener la secuencia establecida en SEQ ID NO: 2 (Acceso a GENBANK No: NC_000016.10 truncado de los nucleótidos 31176001 a 31198000).

Un compuesto oligomérico complementario de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 puede ser capaz de reducir un ARN FUS en una célula. Un compuesto oligomérico complementario de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 puede ser capaz de reducir una proteína FUS en una célula. La célula puede serin vitro.La célula puede estar en un sujeto. El compuesto oligomérico puede consistir en un oligonucleótido modificado. Un compuesto oligomérico complementario de SEQ I<d>NO: 1 o SEQ ID NO: 2 puede ser capaz de mejorar uno o más síntomas o rasgos distintivos de una enfermedad neurodegenerativa cuando se introduce en una célula de un sujeto. Algunos de los síntomas y características de la ELA son, entre otros, debilidad muscular y fatiga, dificultad para hablar, espasmos, calambres y agregados de proteínas en el SNC. Algunos de los síntomas y características de la FTLD son, entre otros, dificultades en el habla y anomalías en el comportamiento.

Un compuesto oligomérico complementario de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 puede ser capaz de reducir una cantidad detectable de ARN de FUS en el LCR de un sujeto cuando el compuesto oligomérico se administra al LCR del sujeto. La cantidad detectable del ARN FUS puede reducirse en al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% o al menos 90%. Un compuesto oligomérico complementario de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 puede ser capaz de reducir una cantidad detectable de una proteína FUS en el LCR del sujeto cuando el compuesto oligomérico se administra al LCR del sujeto. La cantidad detectable de la proteína FUS puede reducirse en al menos 10%, al menos 20%, al menos 30%, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% o al menos 90%.

VI. Determinados compuestos

Compuesto No. 1043680

El compuesto No. 1043680 puede caracterizarse como un gapmer 5-10-5 MOE, que tiene una secuencia de (de 5' a 3') GTTTATCTGAATTCGCCATA (incorporada en el presente documento como SEQ ID NO: 12), en el que cada uno de los nucleósidos 1 a 5 y 16 a 20 son nucleósidos 2'-O-metoxietil, y cada uno de los nucleósidos 6 a 15 son p-D-desoxirribonucleósidos, en el que los enlaces internucleósidos entre los nucleósidos 2 a 3, 3 a 4, 4 a 5, 5 a 6, 16 a 17 y 17 a 18 son enlaces fosfodiéster y los enlaces internucleósidos entre los nucleósidos 1 a 2, 6 a 7, 7 a 8, 8 a 9, 9 a 10, 10 a 11, 11 a 12, 12 a 13, 13 a 14, 14 a 15, y 15 a 16 son enlaces fosforotioato, y en los que cada citosina es una 5-metilcitosina.

El compuesto No. 1043680 puede describirse mediante la siguiente notación química: Ges Teo Teo Teo Aeo Tds mCds Tds Gds Ads Ads Tds Tds mCds Gds mCeo mCeo Aes Tes Ae (SEQ ID NO: 12); donde, A = una adenina, mC = una 5-metilcitosina, G = una guanina, T = una timina, e = un azúcar modificado 2'-O-metoxietilribosa, d = un azúcar 2'-desoxirribosa, s = un enlace internucleósido fosforotioato, y o = un enlace internucleósido fosfodiéster.

(SEQ ID NO: 12).

Compuesto No. 1044030

En ciertas realizaciones, el compuesto No. 1044030 se caracteriza como un gapmer 5-10-5 MOE, que tiene una secuencia de (de 5' a 3') GCAATGTCACCTTTCATACC (incorporada en el presente documento como SEQ ID NO: 13), en el que cada uno de los nucleósidos 1-5 y 16-20 son nucleósidos 2'-O-metoxietil, y cada uno de los nucleósidos 6-15 son p-D-desoxirribonucleósidos, en el que los enlaces internucleósidos entre los nucleósidos 2 a 3, 3 a 4, 4 a 5, 5 a 6, 16 a 17 y 17 a 18 son enlaces fosfodiéster y los enlaces internucleósidos entre los nucleósidos 1 a 2, 6 a 7, 7 a 8, 8 a 9, 9 a 10, 10 a 11, 11 a 12, 12 a 13, 13 a 14, 14 a 15, y 15 a 16 son enlaces fosforotioato, y en los que cada citosina es una 5-metilcitosina.

En ciertas realizaciones, el compuesto No. 1044030 se describe mediante la siguiente notación química: Ges mCeo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Ads mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID N<o>: 13); donde, A = una adenina, mC = una 5-metilcitosina, G = una guanina, T = una timina, e = un azúcar modificado 2'-O-metoxietilribosa, d = un azúcar 2'-desoxirribosa, s = un enlace internucleósido fosforotioato, y o = un enlace internucleósido fosfodiéster.

En ciertas realizaciones, el compuesto No. 1044030 se describe mediante la siguiente estructura química, o una sal de la misma:

(SEQ ID NO: 13).

En ciertas realizaciones, la sal de sodio del compuesto No. 1044030 se describe mediante la siguiente estructura química:

(SEQ ID NO: 13).

VII. Determinadas regiones críticas

Nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1 puede comprender una región de puntos calientes. Los oligonucleótidos modificados pueden ser complementarios a una porción de las nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1. Los oligonucleótidos modificados pueden tener una longitud de 20 nucleobases. Los oligonucleótidos modificados pueden ser gapmers. Los gapmers pueden ser gapmers MOE. Los enlaces internucleósidos de los oligonucleótidos modificados pueden ser enlaces internucleósidos fosforotioato y enlaces internucleósidos fosfodiéster.

Las secuencias de nucleobases de los SEQ ID NOs: 34, 35, 111, 112, 188, 265, 342 y 418 son complementarias a las nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1.

Las secuencias de nucleobases del compuesto Nos: 1043394, 1043395, 1043396, 1043397, 1043398, 1043399, 1043400 y 1043401 son complementarias a las nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1.

Oligonucleótidos modificados complementarios a las nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1 puede lograr una reducción media del 83% del ARNm del FUS in vitro en el ensayo celular estándar. Oligonucleótidos modificados complementarios a las nucleobases 1.786-1.841 de SEQ ID NO: 1 puede lograr una reducción mínima del 62% del ARNm del FUS in vitro en el ensayo celular estándar.

VIII. Determinadas composiciones farmacéuticas

Se proporcionan en el presente documento composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos oligoméricos de acuerdo con las reivindicaciones. En ciertas realizaciones, el uno o más compuestos oligoméricos consiste cada uno en un oligonucleótido modificado de acuerdo con las reivindicaciones. En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica comprende o consiste en una solución salina estéril y uno o más compuestos oligoméricos de acuerdo con las reivindicaciones. En ciertas realizaciones, la solución salina estéril es de grado farmacéutico. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica comprende o consiste en uno o más compuestos oligoméricos y agua estéril. En ciertas realizaciones, el agua estéril es agua de calidad farmacéutica. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica comprende o consiste en uno o más compuestos oligoméricos y solución salina tamponada con fosfato (PBS). En ciertas realizaciones, el PBS estéril es PBS de grado farmacéutico. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica comprende o consiste en uno o más compuestos oligoméricos y líquido cefalorraquídeo artificial. En ciertas realizaciones, el líquido cefalorraquídeo artificial es de calidad farmacéutica.

En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica comprende un oligonucleótido modificado de acuerdo con las reivindicaciones y líquido cefalorraquídeo artificial. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica consiste en un oligonucleótido modificado de acuerdo con las reivindicaciones y líquido cefalorraquídeo artificial. En ciertas realizaciones, una composición farmacéutica consiste esencialmente en un oligonucleótido modificado de acuerdo con las reivindicaciones y líquido cefalorraquídeo artificial. En ciertas realizaciones, el líquido cefalorraquídeo artificial es de calidad farmacéutica.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden uno o más compuestos oligoméricos de acuerdo con las reivindicaciones y uno o más excipientes. En ciertas realizaciones, los excipientes se seleccionan de agua, soluciones salinas, alcohol, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilasa, estearato de magnesio, talco, ácido silícico, parafina viscosa, hidroximetilcelulosa y polivinilpirrolidona.

En ciertas realizaciones, los compuestos oligoméricos de la invención pueden mezclarse con sustancias activas y/o inertes farmacéuticamente aceptables para la preparación de composiciones o formulaciones farmacéuticas. Las composiciones y los métodos para la formulación de composiciones farmacéuticas dependen de una serie de criterios, entre los que se incluyen la vía de administración, el alcance de la enfermedad o la dosis a administrar.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto oligomérico abarcan cualesquiera sales farmacéuticamente aceptables del compuesto oligomérico, ésteres del compuesto oligomérico o sales de tales ésteres. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos oligoméricos que comprenden uno o más oligonucleótidos, tras su administración a un sujeto, incluyendo un humano, son capaces de proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito biológicamente activo o residuo del mismo. En consecuencia, por ejemplo, la divulgación también se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de compuestos oligoméricos, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables de dichos profármacos y otros bioequivalentes. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, entre otras, las sales de sodio y potasio. En ciertas realizaciones, los profármacos comprenden uno o más grupos conjugados unidos a un oligonucleótido, en el que el grupo conjugado es escindido por nucleasas endógenas dentro del organismo.

Las fracciones lipídicas se han utilizado en terapias con ácidos nucleicos para su uso en una variedad de métodos. En algunos de estos usos, el ácido nucleico, tal como un compuesto oligomérico, se introduce en liposomas o lipoplejos preformados hechos de mezclas de lípidos catiónicos y lípidos neutros. En ciertos usos, se forman complejos de ADN con lípidos mono- o poli- catiónicos sin la presencia de un lípido neutro. En determinadas realizaciones, se selecciona una fracción lipídica para aumentar la distribución de un agente farmacéutico en una célula o tejido concreto. En ciertas realizaciones, se selecciona una fracción lipídica para aumentar la distribución de un agente farmacéutico en el tejido adiposo. En ciertas realizaciones, se selecciona una fracción lipídica para aumentar la distribución de un agente farmacéutico en el tejido muscular.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden un sistema de administración. Algunos ejemplos de sistemas de administración son, entre otros, los liposomas y las emulsiones. Ciertos sistemas de administración son útiles para preparar determinadas composiciones farmacéuticas, incluyendo las que comprenden compuestos hidrófobos. En determinadas realizaciones, se utilizan ciertos disolventes orgánicos tal como el dimetilsulfóxido.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden una o más moléculas de administración específicas de tejido diseñadas para administrar el uno o más agentes farmacéuticos de la presente invención a tejidos o tipos celulares específicos. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas incluyen liposomas recubiertos con un anticuerpo específico de tejido.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas comprenden un sistema co-solvente. Algunos de estos sistemas cosolventes incluyen, por ejemplo, alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa. En ciertas realizaciones, tales sistemas co-solventes se utilizan para compuestos hidrófobos. Un ejemplo no limitativo de tal sistema co-disolvente es el sistema co-disolvente VPD, que es una solución de etanol absoluto que comprende 3% p/v de alcohol bencílico, 8% p/v del tensioactivo no polar Polisorbato 80™ y 65% p/v de polietilenglicol 300. Las proporciones de dichos sistemas de co-disolventes pueden variar considerablemente sin alterar significativamente sus características de solubilidad y toxicidad. Además, puede variarse la identidad de los componentes del co-solvente: por ejemplo, pueden utilizarse otros tensioactivos en lugar de polisorbato 80™; puede variarse el tamaño de la fracción de polietilenglicol; otros polímeros biocompatibles pueden sustituir al polietilenglicol,por ejemplo,polivinilpirrolidona; y otros azúcares o polisacáridos pueden sustituir a la dextrosa.

En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se preparan para administración oral. En ciertas realizaciones, las composiciones farmacéuticas se preparan para administración bucal. En ciertas realizaciones, se prepara una composición farmacéutica para su administración por inyección (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intramuscular, intratecal (IT), intracerebroventricular (ICV), etc.). En algunas de dichas realizaciones, una composición farmacéutica comprende un portador y se formula en solución acuosa, tal como agua o tampones fisiológicamente compatibles, tal como solución de Hanks, solución de Ringer o tampón salino fisiológico. En ciertas realizaciones, se incluyen otros ingredientes (por ejemplo, ingredientes que ayudan a la solubilidad o sirven como conservantes). En ciertas realizaciones, las suspensiones inyectables se preparan utilizando portadores líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. Ciertas composiciones farmacéuticas inyectables se presentan en forma de dosificación unitaria,por ejemplo,en ampollas o en envases multidosis. Algunas composiciones farmacéuticas inyectables son suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Ciertos disolventes adecuados para su uso en composiciones farmacéuticas inyectables incluyen, entre otros, disolventes lipofílicos y aceites grasos, tal como el aceite de sésamo, ésteres sintéticos de ácidos grasos, tal como el oleato de etilo o los triglicéridos, y liposomas.

En determinadas condiciones, los compuestos descritos en el presente documento actúan como ácidos. Por ejemplo, aunque el Compuesto No. 1044030 puede dibujarse o describirse en forma protonada (ácido libre), o ionizada y en asociación con una forma catiónica (sal), las soluciones acuosas del Compuesto No. 1044030 existen en equilibrio entre dichas formas. Por ejemplo, un enlace fosfato del Compuesto No. 1044030 en solución acuosa existe en equilibrio entre las formas de ácido libre, anión y sal. A menos que se indique lo contrario, el término "Compuesto No. 1044030" incluye todas estas formas. Además, el Compuesto No. 1044030 tiene varios enlaces de este tipo, cada uno de los cuales está en equilibrio. Así pues, el Compuesto No. 1044030 existe en solución en un conjunto de formas en múltiples posiciones, todas ellas en equilibrio. El término "Compuesto No. 1044030" incluye todas estas formas. Las estructuras dibujadas representan necesariamente una única forma. No obstante, a menos que se indique lo contrario, dichos dibujos también pretenden incluir las formas correspondientes. En el presente documento, una estructura que represente el ácido libre del Compuesto No. 1044030 seguido del término "o una sal del mismo" incluye expresamente todas las formas que puedan estar total o parcialmente protonadas/desprotonadas/en asociación con un catión. En algunos casos, se identifican uno o más cationes específicos.

En ciertas realizaciones, los compuestos están en solución acuosa con sodio. En ciertas realizaciones, los compuestos están en solución acuosa con potasio. En ciertas realizaciones, los compuestos están en PBS. En ciertas realizaciones, los compuestos están en agua. En ciertas realizaciones, el pH de la solución se ajusta con NaOH y/o HCl para alcanzar el pH deseado.

En el presente documento se describen ciertas dosis específicas. Para mayor claridad y a modo de ejemplo, una dosis del Compuesto No. 1044030 en miligramos indica la masa de la forma ácida libre del Compuesto No. 1044030. Como se ha descrito anteriormente, en solución acuosa, el ácido libre está en equilibrio con las formas aniónica y salina. Sin embargo, a efectos del cálculo de la dosis, se supone que el Compuesto No. 1044030 existe como ácido libre de disolventes, libre de acetato sódico y anhidro. Por ejemplo, cuando el Compuesto No. 1044030 está en solución que comprende sodio (por ejemplo, solución salina), el Compuesto No. 1044030 puede estar parcial o totalmente desprotonado y en asociación con iones Na+. No obstante, la masa de los protones se tiene en cuenta para el peso de la dosis, y la masa de los iones Na+ no se tiene en cuenta para el peso de la dosis. Así, por ejemplo, una dosis de 100 mg del Compuesto No. 1044030 equivale al número de moléculas totalmente protonadas que pesan 100 mg. Esto equivaldría a 106 mg de Compuesto No. 1044030 sodado anhidro, sin disolvente y sin acetato de sodio.

IX. Cantidades de dosificación determinadas

Se proporcionan en el presente documento compuestos de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en métodos de administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 50 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 50 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 60 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 60 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 70 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 70 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 80 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 80 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 90 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 90 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 100 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 100 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 110 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 110 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 120 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 120 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 130 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 130 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 140 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 140 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 150 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 150 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 160 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 160 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 170 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 170 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 180 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 180 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 190 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 190 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de 200 mg. La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 200 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg, 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg, 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 mg, 240 mg, 245 mg, 250 mg, 255 mg, 260 mg, 265 mg, 270 mg, 275 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg y 300 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de aproximadamente 5 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 35 mg, aproximadamente 40 mg, aproximadamente 45 mg, aproximadamente 50 mg, aproximadamente 55 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 65 mg, aproximadamente 70 mg, aproximadamente 75 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 85 mg, aproximadamente 90 mg, aproximadamente 95 mg, aproximadamente 100 mg, aproximadamente 105 mg, aproximadamente 110 mg, aproximadamente 115 mg, aproximadamente 120 mg, aproximadamente 125 mg, aproximadamente 130 mg, aproximadamente 135 mg, aproximadamente 140 mg, aproximadamente 145 mg, aproximadamente 150 mg, aproximadamente 155 mg, aproximadamente 160 mg, aproximadamente 165 mg, aproximadamente 170 mg, aproximadamente 175 mg, aproximadamente 180 mg, aproximadamente 185 mg, aproximadamente 190 mg, aproximadamente 195 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 205 mg, aproximadamente 210 mg, aproximadamente 215 mg, aproximadamente 220 mg, aproximadamente 225 mg, aproximadamente 230 mg, aproximadamente 235 mg, aproximadamente 240 mg, aproximadamente 245 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 255 mg, aproximadamente 260 mg, aproximadamente 265 mg, aproximadamente 270 mg, aproximadamente 275 mg, aproximadamente 280 mg, aproximadamente 285 mg, aproximadamente 290 mg, aproximadamente 295 mg y aproximadamente 300 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de 95,0 mg, 95,1 mg, 95,2 mg, 95,3 mg, 95,4 mg, 95,5 mg, 95,6 mg, 95,7 mg, 95,8 mg, 95,9 mg, 96,0 mg, 96,1 mg, 96,2 mg, 96,3 mg, 96,4 mg, 96,5 mg, 96,6 mg, 96,7 mg, 96,8 mg, 96,9 mg, 97,0 mg, 97,1 mg, 97,2 mg, 97,3 mg, 97,4 mg, 97,5 mg, 97,6 mg, 97,7 mg, 97,8 mg, 97,9 mg, 98,0 mg, 98,1 mg, 98,2 mg, 98,3 mg, 98,4 mg, 98,5 mg, 98,6 mg, 98,7 mg, 98,8 mg, 98,9 mg, 99,0 mg, 99,1 mg, 99,2 mg, 99,3 mg, 99,4 mg, 99,5 mg, 99,6 mg, 99,7 mg, 99,8 mg, 99,9 mg, 100,0 mg, 100,1 mg, 100,2 mg, 100,3 mg, 100,4 mg, 100,5 mg, 100,6 mg, 100,7 mg, 100,8 mg, 100,9 mg, 101,0 mg, 101,1 mg, 101,2 mg, 101,3 mg, 101,4 mg, 101,5 mg, 101,6 mg, 101,7 mg, 101,8 mg,

101.9 mg, 102,0 mg, 102,1 mg, 102,2 mg, 102,3 mg. 102,4 mg, 102,5 mg, 102,6 mg, 102,7 mg, 102,8 mg, 102,9 mg, 103,0 mg, 103,1 mg, 103,2 mg, 103,3 mg, 103,4 mg, 103,5 mg, 103,6 mg, 103,7 mg, 103,8 mg, 103,9 mg, 104,0 mg, 104,1 mg,

104.2 mg, 104,3 mg, 104,4 mg, 104,5 mg, 104,6 mg, 104,7 mg, 104,8 mg, 104,9 mg y 105,0 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de aproximadamente 95,0 mg, aproximadamente 95,1 mg, aproximadamente 95,2 mg, aproximadamente 95,3 mg, aproximadamente 95,4 mg, aproximadamente 95,5 mg, aproximadamente 95,6 mg, aproximadamente 95,7 mg, aproximadamente 95,8 mg, aproximadamente 95,9 mg, aproximadamente 96,0 mg, aproximadamente 96,1 mg, aproximadamente 96,2 mg, aproximadamente 96,3 mg, aproximadamente 96,4 mg, aproximadamente 96,5 mg, aproximadamente 96,6 mg, aproximadamente 96,7 mg, aproximadamente 96,8 mg, aproximadamente 96,9 mg, aproximadamente 97,0 mg, aproximadamente 97,1 mg, aproximadamente 97,2 mg, aproximadamente 97,3 mg, aproximadamente 97,4 mg, aproximadamente 97,5 mg, aproximadamente 97,6 mg, aproximadamente 97,7 mg, aproximadamente 97,8 mg, aproximadamente 97,9 mg, aproximadamente 98,0 mg, aproximadamente 98,1 mg, aproximadamente 98,2 mg, aproximadamente 98,3 mg, 98,4 mg, aproximadamente 98,5 mg, aproximadamente 98,6 mg, aproximadamente 98,7 mg, aproximadamente 98,8 mg, aproximadamente 98,9 mg, aproximadamente 99,0 mg, aproximadamente 99,1 mg, aproximadamente 99,2 mg, aproximadamente 99,3 mg, aproximadamente 99,4 mg, aproximadamente 99,5 mg, aproximadamente 99,6 mg, aproximadamente 99,7 mg, aproximadamente 99,8 mg, aproximadamente 99,9 mg, aproximadamente 100,0 mg, aproximadamente 100,1 mg, aproximadamente 100,2 mg, aproximadamente 100,3 mg, 100,4 mg, aproximadamente

100.5 mg, aproximadamente 100,6 mg, aproximadamente 100,7 mg, aproximadamente 100,8 mg, aproximadamente

100.9 mg, aproximadamente 101,0 mg, aproximadamente 101,1 mg, aproximadamente 101,2 mg, aproximadamente

101.3 mg, aproximadamente 101,4 mg, aproximadamente 101,5 mg, aproximadamente 101,6 mg, aproximadamente

101,7 mg, aproximadamente 101,8 mg, aproximadamente 101,9 mg, aproximadamente 102,0 mg, aproximadamente

102,1 mg, aproximadamente 102,2 mg, aproximadamente 102,3 mg, 102,4 mg, aproximadamente 102,5 mg, aproximadamente 102,6 mg, aproximadamente 102,7 mg, aproximadamente 102,8 mg, aproximadamente 102,9 mg, aproximadamente 103,0 mg, aproximadamente 103,1 mg, aproximadamente 103,2 mg, aproximadamente 103,3 mg, aproximadamente 103,4 mg, aproximadamente 103,5 mg, aproximadamente 103,6 mg, aproximadamente 103,7 mg, aproximadamente 103,8 mg, aproximadamente 103,9 mg, aproximadamente 104,0 mg, aproximadamente 104,1 mg, aproximadamente 104,2 mg, aproximadamente 104,3 mg. 104,4 mg, aproximadamente 104,5 mg, aproximadamente

104.6 mg, aproximadamente 104,7 mg, aproximadamente 104,8 mg, aproximadamente 104,9 mg y aproximadamente

105.0 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de 115,0 mg, 115,1 mg, 115,2 mg, 115,3 mg, 115,4 mg, 115,5 mg, 115,6 mg, 115,7 mg, 115,8 mg, 115,9 mg, 116,0 mg, 116,1 mg, 116,2 mg, 116.3 mg, 116,4 mg, 116,5 mg, 116,6 mg,

116.7 mg, 116,8 mg, 116,9 mg, 117,0 mg, 117,1 mg, 117,2 mg, 117,3 mg, 117,4 mg, 117,5 mg, 117,6 mg, 117,7 mg, 117,8 mg, 117,9 mg, 118,0 mg, 118,1 mg, 118,2 mg, 118,3 mg. 118,4 mg, 118,5 mg, 118,6 mg, 118,7 mg, 118,8 mg, 118,9 mg,

119.0 mg, 119,1 mg, 119,2 mg, 119,3 mg, 119,4 mg, 119,5 mg, 119,6 mg, 119,7 mg, 119,8 mg, 119,9 mg, 120,0 mg, 120,1 mg, 120,2 mg, 120,3 mg, 120,4 mg, 120,5 mg, 120,6 mg, 120,7 mg, 120,8 mg, 120,9 mg, 121,0 mg, 121,1 mg, 121,2 mg,

121.3 mg, 121,4 mg, 121,5 mg, 121,6 mg, 121,7 mg, 121,8 mg, 121,9 mg, 122,0 mg, 122,1 mg, 122,2 mg, 122,3 mg. 122,4 mg, 122,5 mg, 122,6 mg, 122,7 mg, 122,8 mg, 122,9 mg, 123,0 mg, 123,1 mg, 123,2 mg, 123,3 mg, 123,4 mg, 123,5 mg,

123,6 mg, 123,7 mg, 123,8 mg, 123,9 mg, 124,0 mg, 124,1 mg, 124,2 mg, 124,3 mg, 124,4 mg, 124,5 mg, 124,6 mg, 124,7 mg, 124,8 mg, 124,9 mg y 125,0 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de aproximadamente 115,0 mg, aproximadamente 115,1 mg aproximadamente 115,2 mg, aproximadamente 115,3 mg, aproximadamente 115,4 mg, aproximadamente 115,5 mg aproximadamente 115.6 mg, aproximadamente 115,7 mg, aproximadamente 115.8 mg, aproximadamente 115,9 mg aproximadamente 116,0 mg, aproximadamente 116,1 mg, aproximadamente 116,2 mg, aproximadamente 116,3 mg aproximadamente 116.4 mg, aproximadamente 116,5 mg, aproximadamente 116,6 mg, aproximadamente 116,7 mg aproximadamente 116,8 mg, aproximadamente 116,9 mg, aproximadamente 117,0 mg, aproximadamente 117,1 mg aproximadamente 117,2 mg, aproximadamente 117,3 mg, aproximadamente 117,4 mg, aproximadamente 117,5 mg aproximadamente 117.6 mg, aproximadamente 117,7 mg, aproximadamente 117.8 mg, aproximadamente 117,9 mg aproximadamente 118,0 mg, aproximadamente 118,1 mg, aproximadamente 118,2 mg, aproximadamente 118,3 mg, 118,4 mg, aproximadamente 118,5 mg, aproximadamente 118,6 mg, aproximadamente 118,7 mg, aproximadamente 118,8 mg, aproximadamente 118,9 mg, aproximadamente 119,0 mg aproximadamente 119,1 mg, aproximadamente 119,2 mg, aproximadamente 119,3 mg, aproximadamente 119,4 mg aproximadamente 119,5 mg, aproximadamente 119,6 mg, aproximadamente 119,7 mg, aproximadamente 119,8 mg aproximadamente 119,9 mg, aproximadamente 120,0 mg, aproximadamente 120,1 mg, aproximadamente 120,2 mg aproximadamente 120,3 mg, 120,4 mg, aproximadamente 120,5 mg, aproximadamente 120,6 mg, aproximadamente 120,7 mg, aproximadamente 120,8 mg, aproximadamente 120,9 mg, aproximadamente 121,0 mg, aproximadamente 121,1 mg, aproximadamente 121,2 mg, aproximadamente 121,3 mg, aproximadamente 121,4 mg, aproximadamente 121,5 mg, aproximadamente 121,6 mg, aproximadamente 121,7 mg, aproximadamente 121,8 mg, aproximadamente 121,9 mg, aproximadamente 122,0 mg, aproximadamente 122,1 mg, aproximadamente 122,2 mg, aproximadamente 122,3 mg. 122,4 mg, aproximadamente 122,5 mg, aproximadamente 122,6 mg, aproximadamente 122,7 mg, aproximadamente 122,8 mg, aproximadamente 122,9 mg, aproximadamente 123,0 mg, aproximadamente 123,1 mg, aproximadamente 123,2 mg, aproximadamente 123,3 mg, aproximadamente 123,4 mg, aproximadamente 123,5 mg, aproximadamente 123,6 mg, aproximadamente 123,7 mg, aproximadamente 123,8 mg, aproximadamente 123,9 mg, aproximadamente 124,0 mg, aproximadamente 124,1 mg, aproximadamente 124,2 mg, aproximadamente 124,3 mg, 124,4 mg, aproximadamente 124,5 mg, aproximadamente 124,6 mg, aproximadamente 124,7 mg, aproximadamente 124,8 mg, aproximadamente 124,9 mg y aproximadamente 125,0 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de 40 mg a 200 mg, 40 mg a 190 mg, 40 mg a 180 mg, 40 mg a 170 mg, de 40 mg a 160 mg, 40 mg a 150 mg, 40 mg a 140 mg, 40 mg a 120 mg, 40 mg a 110 mg, 40 mg a 100 mg, 40 mg a 80 mg, 40 mg a 70 mg, 40 mg a 60 mg, 40 mg a 50 mg, 50 mg a 200 mg, 50 mg a 190 mg, 50 mg a 180 mg, 50 mg a 170 mg, 50 mg a 160 mg, 50 mg a 150 mg, 50 mg a 140 mg, 50 mg a 120 mg, 50 mg a 110 mg, 50 mg a 100 mg, 50 mg a 80 mg, 50 mg a 70 mg, 50 mg a 60 mg, 60 mg a 200 mg, 60 mg a 190 mg, 60 mg a 180 mg, 60 mg a 170 mg, 60 mg a 160 mg, 60 mg a 150 mg, 60 mg a 140 mg, 60 mg a 120 mg, 60 mg a 110 mg, 60 mg a 100 mg, 60 mg a 80 mg, 60 mg a 70 mg, 70 mg a 200 mg, 70 mg a 190 mg, 70 mg a 180 mg, 70 mg a 170 mg, 70 mg a 160 mg, 70 mg a 150 mg, 70 mg a 140 mg, 70 mg a 120 mg, 70 mg a 110 mg, 70 mg a 100 mg, 70 mg a 80 mg, 80 mg a 200 mg, 80 mg a 190 mg, 80 mg a 180 mg, 80 mg a 170 mg, 80 mg a 160 mg, 80 mg a 150 mg, 80 mg a 140 mg, 80 mg a 120 mg, 80 mg a 110 mg, 80 mg a 100 mg, 80 mg a 90 mg, 90 mg a 200 mg, 90 mg a 190 mg, 90 mg a 180 mg, 90 mg a 170 mg, 90 mg a 160 mg, 90 mg a 150 mg, 90 mg a 140 mg, 90 mg a 120 mg, 90 mg a 110 mg, 90 mg a 100 mg, 100 mg a 200 mg, 100 mg a 190 mg, 100 mg a 180 mg, 100 mg a 170 mg, 100 mg a 160 mg, 100 mg a 150 mg, 100 mg a 140 mg, 100 mg a 120 mg, 100 mg a 110 mg, 110 mg a 200 mg, 110 mg a 190 mg, 110 mg a 180 mg, 110 mg a 170 mg, 110 mg a 160 mg, 110 mg a 150 mg, 110 mg a 140 mg, 110 mg a 130 mg, 110 mg a 120 mg, 120 mg a 200 mg, 120 mg a 190 mg, 120 mg a 180 mg, 120 mg a 170 mg, 120 mg a 160 mg, 120 mg a 150 mg, 120 mg a 140 mg, 120 mg a 130 mg, 130 mg a 200 mg, 130 mg a 190 mg, 130 mg a 180 mg, 130 mg a 170 mg, 130 mg a 160 mg, 130 mg a 150 mg, 130 mg a 140 mg, 140 mg a 200 mg, 140 mg a 190 mg, 140 mg a 180 mg, 140 mg a 170 mg, 140 mg a 160 mg, 140 mg a 150 mg, 150 mg a 200 mg, 150 mg a 190 mg, 150 mg a 180 mg, 150 mg a 170 mg, 150 mg a 160 mg, 160 mg a 200 mg, 160 mg a 190 mg, 160 mg a 180 mg, 160 mg a 170 mg, 180 mg a 200 mg, 180 mg a 190 mg, 190 mg a 200 mg, 105 mg a 135 mg, 105 mg a 130 mg, 105 mg a 125 mg 105 mg a 120 mg, 110 mg a 135 mg, 110 mg a 130 mg, 110 mg a 125 mg, 110 mg a 120 mg, 115 mg a 135 mg, 115 mg a 130 mg, 115 mg a 125 mg, 115 mg a 120 mg, 115 mg a 125 mg, 115 mg a 120 mg, 120 mg a 135 mg, 120 mg a 125 mg, 125 mg a 140 mg, 125 mg a 130 mg, 130 mg a 135 mg, 135 mg a 140 mg, 120 mg a 129 mg, 120 mg a 128 mg, 120 mg a 127 mg, 120 mg a 86 mg, 120 mg a 124 mg, 120 mg a 123 mg, 120 mg a 122 mg, 120 mg a 121 mg, 121 mg a 130 mg, 122 mg a 129 mg, 122 mg a 128 mg, 122 mg a 127 mg, 122 mg a 126 mg, 122 mg a 125 mg, 122 mg a 124 mg, 122 mg a 123 mg, 123 mg a 130 mg, 123 mg a 129 mg, 123 mg a 128 mg, 123 mg a 127 mg, 123 mg a 126 mg, 123 mg a 125 mg, 123 mg a 124 mg, 124 mg a 130 mg, 124 mg a 129 mg, 124 mg a 128 mg, 124 mg a 127 mg, 124 mg a 126 mg, 124 mg a 125 mg, 125 mg a 129 mg, 125 mg a 128 mg, 125 mg a 127 mg, 125 mg a 126 mg, 126 mg a 130 mg, 126 mg a 129 mg, 126 mg a 128 mg, 126 mg a 127 mg, 127 mg a 130 mg, 127 mg a 129 mg, 127 mg a 128 mg, 128 mg a 130 mg, 128 mg a 129 mg y 129 mg a 130 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de menos de 300 mg, menos de 295 mg, menos de 290 mg, menos de 285 mg, menos de 280 mg, menos de 275 mg, menos de 270 mg, menos de 265 mg, menos de 260 mg, menos de 255 mg, menos de 250 mg, menos de 245 mg, menos de 240 mg, menos de 235 mg, menos de 230 mg, menos de 225 mg, menos de 220 mg, menos de 215 mg, menos de 210 mg, menos de 205 mg, menos de 200 mg, menos de 195 mg, menos de 190 mg, menos de 185 mg, menos de 180 mg, menos de 175 mg, menos de 170 mg, menos de 165 mg, menos de 160 mg, menos de 150 mg, menos de 145 mg, menos de 140 mg, menos de 135 mg, menos de 130 mg, menos de 125 mg, menos de 120 mg, menos de 115 mg, menos de 110 mg, menos de 105 mg, menos de 100 mg, menos de 95 mg, menos de 90 mg, menos de 85 mg, menos de 80 mg, menos de 75 mg, menos de 70 mg, menos de 65 mg, menos de 60 mg, menos de 55 mg, menos de 50 mg, menos de 45 mg, menos de 40 mg, menos de 35 mg, menos de 30 mg, menos de 25 mg, menos de 20 mg, menos de 15 mg, menos de 10 mg y menos de 5 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de menos de aproximadamente 300 mg, menos de aproximadamente 295 mg, menos de aproximadamente 290 mg menos de aproximadamente 285 mg, menos de aproximadamente 280 mg, menos de aproximadamente 275 mg, menos de aproximadamente 270 mg, menos de aproximadamente 265 mg, menos de aproximadamente 260 mg menos de aproximadamente 255 mg, menos de aproximadamente 250 mg, menos de aproximadamente 245 mg menos de aproximadamente 240 mg, menos de aproximadamente 235 mg, menos de aproximadamente 230 mg menos de aproximadamente 225 mg, menos de aproximadamente 220 mg, menos de aproximadamente 215 mg menos de aproximadamente 210 mg, menos de aproximadamente 205 mg, menos de aproximadamente 200 mg menos de aproximadamente 195 mg, menos de aproximadamente 190 mg, menos de aproximadamente 185 mg menos de aproximadamente 180 mg, menos de aproximadamente 175 mg, menos de aproximadamente 170 mg menos de aproximadamente 165 mg, menos de aproximadamente 160 mg, menos de aproximadamente 150 mg menos de aproximadamente 145 mg, menos de aproximadamente 140 mg, menos de aproximadamente 135 mg menos de aproximadamente 130 mg, menos de aproximadamente 125 mg, menos de aproximadamente 120 mg , menos de aproximadamente 115 mg, menos de aproximadamente 110 mg, menos de aproximadamente 105 mg, menos de aproximadamente 100 mg, menos de aproximadamente 95 mg, menos de aproximadamente 90 mg, menos de aproximadamente 85 mg, menos de aproximadamente 80 mg, menos de aproximadamente 75 mg, menos de aproximadamente 70 mg, menos de aproximadamente 65 mg, menos de aproximadamente 60 mg, menos de aproximadamente 55 mg, menos de aproximadamente 50 mg, menos de aproximadamente 45 mg, menos de aproximadamente 40 mg, menos de aproximadamente 35 mg, menos de aproximadamente 30 mg, menos de aproximadamente 25 mg, menos de aproximadamente 20 mg, menos de aproximadamente 15 mg, menos de aproximadamente 10 mg y menos de aproximadamente 5 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de al menos 5 mg, al menos 10 mg, al menos 15 mg, al menos 20 mg, al menos 25 mg, al menos 30 mg, al menos 35 mg, al menos 40 mg, al menos 45 mg, al menos 50 mg, al menos 55 mg, al menos 60 mg, al menos 65 mg, al menos 70 mg, al menos 75 mg, al menos 80 mg, al menos 85 mg, al menos 90 mg, al menos 95 mg, al menos 100 mg, al menos 105 mg, al menos 115 mg, al menos 120 mg, al menos 125 mg, al menos 130 mg, al menos 135 mg, al menos 140 mg, al menos 145 mg, al menos 150 mg, al menos 155 mg, al menos 160 mg, al menos 165 mg, al menos 170 mg, al menos 175 mg, al menos 180 mg, al menos 185, al menos 190 mg, al menos 195 mg, y al menos 200 mg.

La cantidad terapéuticamente eficaz puede ser cualquiera de al menos aproximadamente 5 mg, al menos aproximadamente 10 mg, al menos aproximadamente 15 mg, al menos aproximadamente 20 mg, al menos aproximadamente 25 mg, al menos aproximadamente 30 mg, al menos aproximadamente 35 mg, al menos aproximadamente 40 mg, al menos aproximadamente 45 mg, al menos aproximadamente 50 mg, al menos aproximadamente 55 mg, al menos aproximadamente 60 mg, al menos aproximadamente 65 mg, al menos aproximadamente 70 mg, al menos aproximadamente 75 mg, al menos aproximadamente 80 mg, al menos aproximadamente 85 mg, al menos aproximadamente 90 mg, al menos aproximadamente 95 mg, al menos aproximadamente 100 mg, al menos aproximadamente 105 mg, al menos aproximadamente 115 mg, al menos aproximadamente 120 mg, al menos aproximadamente 125 mg, al menos aproximadamente 130 mg, al menos aproximadamente 135 mg, al menos aproximadamente 140 mg, al menos aproximadamente 145 mg, o al menos aproximadamente 150 mg, al menos aproximadamente 155 mg, al menos aproximadamente 160 mg, al menos aproximadamente 165 mg, al menos aproximadamente 170 mg, al menos aproximadamente 175 mg, al menos aproximadamente 180 mg , al1 menos aproximadamente 185, al menos aproximadamente 190 mg, al menos aproximadamente 195 mg, y al menos aproximadamente 200 mg.

X. Ciertos regímenes de dosificación.

Se proporcionan en el presente documento compuestos de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en métodos de administración a un sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones una o más veces. Los métodos pueden comprender la administración de la cantidad terapéuticamente eficaz al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 veces. Los métodos pueden comprender la administración de la cantidad terapéuticamente eficaz una vez cada 4 semanas. Los métodos pueden comprender la administración de la cantidad terapéuticamente eficaz una vez cada 8 semanas. Los métodos pueden comprender la administración de la cantidad terapéuticamente eficaz una vez cada 12 semanas. Los métodos pueden comprender la administración de la cantidad terapéuticamente eficaz una vez cada 16 semanas.

Los métodos pueden comprender administrar la cantidad terapéuticamente eficaz aproximadamente cada 1 semana, aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada 3 semanas, aproximadamente cada 4 semanas, aproximadamente cada 5 semanas, aproximadamente cada 6 semanas, aproximadamente cada 7 semanas, aproximadamente cada 8 semanas, aproximadamente cada 9 semanas, aproximadamente cada 10 semanas, aproximadamente cada 11 semanas, aproximadamente cada 12 semanas, aproximadamente cada 13 semanas, aproximadamente cada 14 semanas, aproximadamente cada 15 semanas, aproximadamente cada 16 semanas, aproximadamente cada 17 semanas, aproximadamente cada 18 semanas, aproximadamente cada 19 semanas o aproximadamente cada 20 semanas.

Los métodos pueden comprender administrar la cantidad terapéuticamente eficaz durante al menos aproximadamente 1 mes, al menos aproximadamente 2 meses, al menos aproximadamente 3 meses, al menos aproximadamente 4 meses, al menos aproximadamente 5 meses, al menos aproximadamente 6 meses, al menos aproximadamente 7 meses, al menos aproximadamente 8 meses, al menos aproximadamente 9 meses, al menos aproximadamente 10 meses, al menos aproximadamente 11 meses, o al menos aproximadamente 12 meses.

Dosis de carga y mantenimiento

La cantidad terapéuticamente eficaz puede administrarse como una dosis de carga y/o una dosis de mantenimiento. Los métodos pueden comprender la administración de una o varias dosis de carga y la posterior administración de una o varias dosis de mantenimiento. Los métodos pueden comprender la administración de una dosis de carga una vez cada 4 semanas aproximadamente, y posteriormente administrar una dosis de mantenimiento una vez cada 8 semanas aproximadamente. Los métodos pueden comprender la administración de una dosis de carga una vez cada 4 semanas aproximadamente, y posteriormente administrar una dosis de mantenimiento una vez cada 16 semanas aproximadamente.

Los métodos pueden comprender administrar al menos 2 dosis de carga, al menos 3 dosis de carga, al menos 4 dosis de carga, al menos 5 dosis de carga, o al menos 6 dosis de carga. Los métodos pueden comprender la administración de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 dosis de carga. Los métodos pueden comprender la administración de una dosis o dosis de carga aproximadamente cada 1 semana, aproximadamente cada 2 semanas, aproximadamente cada 3 semanas, aproximadamente cada 4 semanas, aproximadamente cada 5 semanas, aproximadamente cada 6 semanas, aproximadamente cada 7 semanas, aproximadamente cada 8 semanas, aproximadamente cada 9 semanas, aproximadamente cada 10 semanas, aproximadamente cada 11 semanas o aproximadamente cada 12 semanas. Los métodos pueden comprender la administración de una dosis de carga inicial y la administración de una segunda dosis de carga aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas o aproximadamente 12 semanas después de la administración de la dosis de carga inicial.

Los métodos pueden comprender administrar al menos 2 dosis de mantenimiento, al menos 3 dosis de mantenimiento, al menos 4 dosis de mantenimiento, al menos 5 dosis de mantenimiento, o al menos 6 dosis de mantenimiento. Los métodos pueden comprender la administración de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 dosis de mantenimiento. Los métodos pueden comprender la administración de una dosis o dosis de mantenimiento aproximadamente cada 4 semanas, aproximadamente cada 5 semanas, aproximadamente cada 6 semanas, aproximadamente cada 7 semanas, aproximadamente cada 8 semanas, aproximadamente cada 9 semanas, aproximadamente cada 10 semanas, aproximadamente cada 11 semanas, aproximadamente cada 12 semanas, aproximadamente cada 13 semanas, aproximadamente cada 14 semanas, aproximadamente cada 15 semanas, aproximadamente cada 16 semanas, aproximadamente cada 17 semanas, aproximadamente cada 18 semanas, aproximadamente cada 19 semanas o aproximadamente cada 20 semanas. Los métodos pueden comprender la administración de una primera dosis de mantenimiento y la administración de una segunda dosis de mantenimiento aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 13 semanas, aproximadamente 14 semanas, aproximadamente 15 semanas, aproximadamente 16 semanas, aproximadamente 17 semanas, aproximadamente 18 semanas, aproximadamente 19 semanas o aproximadamente 20 semanas después de la administración de la primera dosis de mantenimiento.

Los métodos pueden comprender administrar una primera dosis o dosis de mantenimiento aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 13 semanas, aproximadamente 14 semanas, aproximadamente 15 semanas, aproximadamente 16 semanas, aproximadamente 17 semanas, aproximadamente 18 semanas, aproximadamente 19 semanas o aproximadamente 20 semanas después de administrar la última dosis de carga.

XI. Potencia y eficacia

Se proporciona en el presente documento el Compuesto No. 1044030 como se define en las reivindicaciones para su uso en métodos de reducción de ARN FUS y/o proteína FUS en una célula o fluido biológico de un sujeto humano, en los que los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del Compuesto No. 1044030 al sujeto. Los métodos pueden reducir el ARN del FUS y/o la proteína del FUS en el líquido cefalorraquídeo del sujeto humano. Se puede determinar si los métodos pueden o no reducir el ARN FUS y/o la proteína FUS,por ejemplo,detectando/cuantificando una primera cantidad de ARN FUS o proteína FUS en una primera muestra biológica obtenida antes de la administración y detectando/cuantificando una segunda cantidad de ARN FUS o proteína FUS en una segunda muestra biológica obtenida después de la administración, y detectando o cuantificando una reducción del ARN FUS o proteína FUS comparando la primera cantidad con la segunda cantidad.

Los métodos pueden comprender reducir el ARN FUS y/o la proteína FUS en un 1-100%, o un intervalo definido por cualquiera de estos dos valores. Los métodos pueden comprender reducir el ARN FUS y/o la proteína FUS en un 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%.

Los métodos pueden comprender reducir el ARN FUS o la proteína FUS en al menos aproximadamente 5%, al menos aproximadamente 10%, al menos aproximadamente 15%, al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 25%, al menos aproximadamente 30%, al menos aproximadamente 35%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 45%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 55%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 65%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, o al menos aproximadamente 95%.

Los métodos pueden comprender reducir el ARN FUS o la proteína FUS en aproximadamente 5% a aproximadamente 10%, aproximadamente 10% a aproximadamente 15%, aproximadamente 15% a aproximadamente 20%, aproximadamente 20% a aproximadamente 25%, aproximadamente 25% a aproximadamente 30%, aproximadamente 30% a aproximadamente 35%, aproximadamente 35% a aproximadamente 40%, aproximadamente 40% a aproximadamente 45%, aproximadamente 45% a aproximadamente 50%, aproximadamente 50% a aproximadamente 55%, aproximadamente 55% a aproximadamente 60%, aproximadamente 60% a aproximadamente 65%, aproximadamente 65% a aproximadamente 70%, aproximadamente 70% a aproximadamente 75%, aproximadamente 75% a aproximadamente 80%, aproximadamente 80% a aproximadamente 85%, aproximadamente 85% a aproximadamente 90%, aproximadamente 90% a aproximadamente 95%, o aproximadamente 95% a 100%.

Los métodos pueden comprender administrar el Compuesto No. 1044030 a un sujeto y detectar o cuantificar una cantidad de ARN FUS o proteína FUS en una célula o un fluido biológico del sujeto. Los métodos pueden comprender la detección/cuantificación de una primera cantidad de ARN FUS o proteína FUS en una primera muestra biológica obtenida antes de la administración y la detección/cuantificación de una segunda cantidad de ARN FUS o proteína FUS en una segunda muestra biológica obtenida después de la administración, y la detección o cuantificación de una reducción de ARN FUS o proteína FUS comparando la primera cantidad con la segunda. La segunda muestra biológica puede obtenerse menos de 24 horas después de la administración. La segunda muestra biológica puede obtenerse menos de aproximadamente 1 semana después de la administración. La segunda muestra biológica puede obtenerse aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas, aproximadamente 12 semanas, aproximadamente 13 semanas, aproximadamente 14 semanas, aproximadamente 15 semanas, aproximadamente 16 semanas, aproximadamente 17 semanas o aproximadamente 18 semanas después de la administración. Los métodos pueden comprender el aumento o la disminución de la dosis tras comparar la primera cantidad con la segunda cantidad. Los métodos pueden comprender la administración más frecuente o menos frecuente después de comparar la primera cantidad con la segunda cantidad.

XII. Algunas indicaciones

Se proporcionan en el presente documento compuestos oligoméricos y oligonucleótidos modificados de acuerdo con las reivindicaciones para su uso en métodos de administración a un sujeto que los necesita de un compuesto oligomérico dirigido a un ácido nucleico FUS de acuerdo con las reivindicaciones. El sujeto puede padecer una enfermedad neurodegenerativa. La enfermedad neurodegenerativa puede ser un trastorno por repetición de poliglutamina (poliQ). La enfermedad neurodegenerativa puede ser una enfermedad de cuerpos de inclusión intranucleares neuronales (NIIBD). La enfermedad neurodegenerativa puede ser ELA. La afección neurodegenerativa puede ser FTLD. El sujeto puede tener ELA juvenil, en la que el sujeto desarrolla al menos un síntoma o sello distintivo de ELA antes de los 25 años de edad.

El sujeto puede tener una mutación FUS (una mutación en un gen que codifica FUS). El sujeto puede padecer una enfermedad neurodegenerativa asociada a una mutación FUS. El sujeto puede tener una mutación FUS asociada a la ELA. La mutación de FUS asociada a la ELA puede dar lugar a una sobreexpresión de FUS en relación con la expresión de FUS en un sujeto de control que no tenga una mutación de FUS. La mutación FUS asociada a la ELA puede dar lugar a una ganancia de función de la proteína FUS en relación con la actividad de la proteína FUS en un sujeto de control que no tenga una mutación FUS. La mutación FUS puede hacer que una proteína<f>U<s>se agrupe en el citoplasma, se pliegue mal, se agregue, o cualquier combinación de las mismas. La mutación FUS puede ser una mutación sin sentido. La mutación FUS puede ser una mutación de truncamiento.

La mutación FUS asociada con ELA puede ser un polimorfismo de nucleótido único (SNP). El SNP puede seleccionarse de rs121909667 (C>G), rs121909668 (C>A / C>G / C>T), rs121909669 (G>A), rs121909671 (G>A / G>T), rs186547381 (C>T), rs267606831 (G>A), rs267606832 (C>G / C>T), rs267606833 (A>T), rs387906627 (C>T), rs387906628 (G>A), rs387907274 (C>T), rs752076094 (A>G), rs764487847 (C>G / C>T), rs886041389 (G>C), rs886041390 (C>T), rs886041577 (delGA), rs886041776 (dupGGTGG), rs1085308015 (A>C / A>G), rs1161032867 (delG / dupGGG), rs1555509569 (delA), rs1555509609 (A>C / A>G / A>T), rs1555509693 (A>G), rs1596908744 (delTT), rs1596912983 (dupAG), y rs121909668 (C>A / C>G / C>T), localizados en las posiciones 31191408, 31191418, 31191410, 31191419, 31190398, 31191089, 31185061, 31191427, 31191052, 31185031, 31189158, 31185175, 31183884, 31191429, 31191431, 31191073-31191074, 31191079-31191083, 31191407, 31191070-31191073, 31190961, 31191109, 31191421, 31189748 31189751, 31191076-31191079, y 31191418 del cromosoma 16, respectivamente, de acuerdo con la liberación de parche 12 de Genome Reference Consortium Human Build 38 (GRCh38.p12).

La mutación FUS asociada con ELA puede dar lugar a una modificación de una secuencia de aminoácidos de la proteína FUS en relación con una proteína FUS de tipo silvestre (por ejemplo, véase el número de referencia del NCBI NP_004951.1 (SEQ ID NO: 3)). La modificación de la secuencia de aminoácidos de la proteína FUS puede seleccionarse de S57del, S96del, G156E, G171-174del, G174-175del, G187S, G191S, G206S, R216C, G225V, G230C, R234C, R234L, R244C, M254V, S402_P411delinsGGGG, S462F, G466VfsX14, Y484AfsX514, R495X, R495EfsX527, G497AfsX527, G507D, K510WfsX517, K510E, S513P, R514S, R514G, G515C, E516V, H517D, H517P, H517Q, R518G, R518K, Q519IfsX9, R521C, R521G, R521H, R521L, R521S, R522G, R524S, R524T, R524W, y P525L. La mutación FUS puede dar lugar a una modificación de al menos uno de los 60 aminoácidos en el C-terminal de la secuencia de aminoácidos de la proteína FUS en relación con una proteína FUS de tipo silvestre. La mutación FUS puede dar lugar a una modificación de al menos uno de los 17 aminoácidos en el C-terminal de la secuencia de aminoácidos de la proteína FUS en relación con una proteína FUS de tipo silvestre. La mutación FUS puede dar lugar a la sustitución de la prolina en la posición de aminoácido 525 de SEQ ID NO: 3 con un aminoácido distinto de la prolina. La mutación FUS puede ser P525L.

Los métodos pueden comprender identificar una mutación FUS en un sujeto. Los métodos pueden comprender la identificación de una mutación FUS en un sujeto y la posterior administración al sujeto de un compuesto oligomérico divulgado en el presente documento. La identificación de la mutación FUS puede comprender la obtención de información sobre una secuencia de un ácido nucleico FUS en una muestra del sujeto. La obtención de información sobre la secuencia del ácido nucleico FUS puede comprender la obtención de una secuencia de un ácido nucleico FUS en una muestra del sujeto. La secuencia del ácido nucleico FUS puede obtenerse a partir de una reacción de secuenciación,por ejemplo,secuenciación Sanger o secuenciación de alto rendimiento. La identificación de una mutación FUS puede comprender el contacto del ácido nucleico FUS con un cebador o una sonda. El cebador o la sonda pueden hibridar con el ácido nucleico si la mutación está presente. El cebador o la sonda pueden no hibridar con el ácido nucleico si la mutación está presente.

XIII. Determinados compuestos de comparación

El compuesto de comparación No. 441522 se seleccionó como compuesto de comparación en el experimento descrito en el Ejemplo 8 de la presente memoria descriptiva. El compuesto de comparación No. 441522 es idéntico a un oligonucleótido modificado dirigido a FUS descrito por Lagier-Tourenne et al., Nat Neurosci.. 15(11):1488-1497 (2012). El compuesto No. 441522 es un gapmer que tiene un motivo de azúcar de (de 5' a 3') eeeeeddddddddddeeeee, en el que cada "e" representa una fracción de azúcar 2'-MOE y cada "d" representa una fracción de azúcar 2'-p-D-desoxirribosil; que tiene una secuencia de (de 5' a 3') CCTGGTTAt Tt CCCATGAGC (SEQ ID NO: 481) en el que cada "C" de la brecha es una 5-metilcitosina; y en el que cada enlace internucleósido es un enlace internucleósido fosforotioato.

En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento son más tolerables en relación con el Compuesto de Comparación No. 441522.

Por ejemplo, como se describe en el presente documento (véase el Ejemplo 5), el Compuesto de Comparación No.441522 tuvo una FOB a las 3 horas de 6,00 en ratones, mientras que el Compuesto No. 1044030 tuvo una FOB a las 3 horas de 0,00 en ratones. Un FOB de 6 indica que el ratón está inmóvil y no responde a los estímulos. Un FOB de 0 indica un ratón brillante, alerta y receptivo. Por lo tanto, ciertos compuestos en el presente documento descritos son más tolerables que el Compuesto de Comparación No. 441522.

Divulgación no limitativa e incorporación por referencia

Si bien ciertos compuestos, composiciones y métodos descritos en el presente documento se han descrito con especificidad de acuerdo con ciertas realizaciones, los ejemplos siguientes sirven únicamente para ilustrar los compuestos descritos en el presente documento y no pretenden limitar los mismos

Aunque el listado de secuencias que acompaña a esta presentación identifica cada secuencia como "ARN" o "ADN" según se requiera, en realidad, esas secuencias pueden modificarse con cualquier combinación de modificaciones químicas. Un experto en la técnica apreciará fácilmente que la designación como "ARN" o "ADN" para describir oligonucleótidos modificados es, en ciertos casos, arbitraria. Por ejemplo, un oligonucleótido que comprende un nucleósido que comprende una fracción de azúcar 2'-OH y una base de timina podría describirse como un ADN con un azúcar modificado (2'-OH en lugar de un 2'-H del ADN) o como un ARN que tiene una base modificada (timina (uracilo metilado) en lugar de un uracilo del ARN). En consecuencia, las secuencias de ácidos nucleicos proporcionadas en el presente documento, incluyendo, pero sin limitarse a las del listado de secuencias, pretenden abarcar ácidos nucleicos que contengan cualquier combinación de ARN y/o ADN natural o modificado, incluyendo, pero sin limitarse a tales ácidos nucleicos que tengan nucleobases modificadas. A modo de ejemplo adicional y sin limitación, un compuesto oligomérico que tiene la secuencia de nucleobase "ATCGATCG" abarca cualquier compuesto oligomérico que tenga dicha secuencia de nucleobase, modificada o no modificada, incluyendo, pero sin limitarse a, dichos compuestos que comprenden bases de ARN, tal como los que tienen la secuencia "AUCGAUCG" y los que tienen algunas bases de ADN y algunas bases de ARN tal como "AUCGATCG" y compuestos oligoméricos que tienen otras nucleobases modificadas, tal como "ATmCGAUCG", en la que mC indica una base citosina que comprende un grupo metilo en la posición 5.

Ciertos compuestos descritos en el presente documento (por ejemplo, oligonucleótidos modificados) tienen uno o más centros asimétricos y por tanto dan lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras configuraciones estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como(R)o (S), como a o p tal como para anómeros de azúcar, o como (D) o (L), tal como para aminoácidos, etc. Los compuestos proporcionados en el presente documento que se dibujan o describen como que tienen ciertas configuraciones estereoisoméricas incluyen sólo los compuestos indicados. Los compuestos proporcionados en el presente documento que se dibujan o describen con estereoquímica indefinida incluyen todos los isómeros posibles, incluyendo sus formas estereorándomicas y ópticamente puras, a menos que se especifique lo contrario. Asimismo, también se incluyen las formas tautoméricas de los compuestos incluidos en el presente documento, a menos que se indique lo contrario. Amenos que se indique lo contrario, los compuestos descritos en el presente documento pretenden incluir las formas salinas correspondientes.

Los compuestos descritos en el presente documento incluyen variaciones en las que uno o más átomos se sustituyen por un isótopo no radiactivo o un isótopo radiactivo del elemento indicado. Por ejemplo, los compuestos del presente documento que comprenden átomos de hidrógeno abarcan todas las posibles sustituciones de deuterio para cada uno de los átomos de hidrógeno 1H. Las sustituciones isotópicas abarcadas por los compuestos del presente documento incluyen, entre otras, las siguientes: 2H o 3H en lugar de 1H, 13C o 14C en lugar de 12C, 15N en lugar de 14N, 17O o 13O en lugar de 16O, y 33S, 34S, 35S, o 36S en lugar de 32S. En ciertas realizaciones, las sustituciones isotópicas no radiactivas pueden conferir nuevas propiedades al compuesto oligomérico que son beneficiosas para su uso como herramienta terapéutica o de investigación. En determinadas realizaciones, las sustituciones isotópicas radiactivas pueden hacer que el compuesto sea adecuado para fines de investigación o diagnóstico, tal como la obtención de imágenes.

EJEMPLOS

Los siguientes ejemplos ilustran ciertas realizaciones de la presente divulgación y no son limitativos. Además, cuando se describen realizaciones específicas, los inventores han contemplado la aplicación genérica de dichas realizaciones específicas. Por ejemplo, la divulgación de un oligonucleótido que tenga un motivo particular proporciona un apoyo razonable para oligonucleótidos adicionales que tengan el mismo motivo o uno similar. Y, por ejemplo, cuando una modificación particular de alta afinidad aparece en una posición concreta, otras modificaciones de alta afinidad en la misma posición se consideran adecuadas, a menos que se indique lo contrario.

Ejemplo 1: Efectos de oligonucleótidos modificados sobre el ARN FUS humano in vitro, dosis única

Se diseñaron oligonucleótidos modificados complementarios al FUS humano y se probaron sus efectos de dosis única sobre el ARNm FUS in vitro.

Los oligonucleótidos modificados son gapmers 5-10-5 MOE, en los que un segmento de brecha central consiste en diez 2'-p-D-desoxinucleósidos, el segmento de ala 5' consiste en cinco nucleósidos 2'-MOE, y el segmento de ala 3' consiste en cinco nucleósidos 2'-MOE. El motivo de azúcar de los gapmers es (de 5' a 3'): eeeeeddddddddddeeeee; en donde 'd' representa una fracción de azúcar 2'-p-D-desoxirribosil, y 'e' representa una fracción de azúcar 2'-MOE. Los gapmers tienen un motivo de enlace internucleósido de (de 5' a 3'): soooossssssssssooss; donde "s" representa un enlace internucleósido fosforotioato y "o" representa un enlace internucleósido fosfodiéster. Todos los residuos de citosina son 5-metilcitosinas.

Las secuencias de los oligonucleótidos modificados se muestran en las Tablas 1-6 a continuación. "Sitio de inicio" indica el nucleósido 5'-most al que el oligonucleótido modificado es complementario en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido 3'-most al que el oligonucleótido modificado es complementario en la secuencia del gen humano. Cada oligonucleótido modificado enumerado en las Tablas 1-6 es 100% complementario a SEQ ID NO: 2 (No. de acceso GENBANK NC_000016.10 truncado de los nucleótidos 31176001 a 31198000). N/A" indica que el oligonucleótido modificado no es 100% complementario a esa secuencia genética concreta. Los valores marcados con un asterisco (*) indican que el oligonucleótido modificado es complementario de la región del amplicón del conjunto de sondas de cebado.

Células A-431 cultivadas a una densidad de 10.000 células por pocillo, se trataron con oligonucleótido modificado a una concentración de 4.000 nM usando captación libre durante un periodo de tratamiento de 48 horas. Al final del periodo de tratamiento, se aisló el ARN total de las células y se midieron los niveles de ARN de FUS mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Los niveles de ARN de FUS se midieron mediante el conjunto de sondas de cebado de FUS humano RTS38562 (secuencia directa TGCTTGCTTGCCTGTGC, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 6; secuencia inversa ACTGTAACTCTGCTGTCCGT, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 7; secuencia de sonda TTGAGGCCATGTCCGCGC, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 8). Los niveles de ARN FUS se normalizaron con respecto al contenido total de ARN, medido con RIBOGREEN®.

Tabla 1. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al FUS humano

Tabla 2. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al ARN FUS humano

Tabla 3. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al ARN FUS humano

Tabla 4. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al ARN FUS humano

Tabla 5. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al ARN FUS humano

Tabla 6. Reducción del ARN FUS por gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al ARN FUS humano

Ejemplo 2: Efectos de oligonucleótidos modificados sobre el ARNm FUS humano in vitro, dosis múltiples.

Los oligonucleótidos modificados seleccionados de los ejemplos anteriores se ensayaron a diversas dosis en células A-431. Las células A-431 cultivadas a una densidad de 10.000 células por pocillo se trataron mediante captación libre con 185 nM, 556 nM, 1667 nM y 5000 nM de oligonucleótido modificado, tal como se especifica en la Tabla 3 siguiente. Tras un periodo de tratamiento de aproximadamente 48 horas, se aisló el ARN total de las células y se midieron los niveles de ARN FUS mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Para medir los niveles de ARN se utilizó el conjunto de sondas de cebado FUS humano RTS38562, tal como se ha descrito anteriormente. Los niveles de FUS se ajustaron de acuerdo con contenido total de ARN, medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan a continuación, en las Tablas 7-9, como reducción porcentual de la cantidad de ARN del FUS, en relación con el control no tratado. La concentración inhibitoria media máxima (IC50) se calculó mediante una regresión lineal en un gráfico logarítmico/lineal de los datos en Excel.

Tabla 7. Reducción porcentual dependiente de la dosis del ARN FUS humano mediante gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/Ps complementarios al FUS humano.

Tabla 8. Reducción porcentual dependiente de la dosis del ARN FUS humano mediante gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/Ps complementarios al FUS humano.

Tabla 9. Reducción porcentual dependiente de la dosis del ARN FUS humano mediante gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/Ps complementarios al FUS humano.

Ejemplo 3: Diseño de oligonucleótidos modificados complementarios a un ácido nucleico FUS humano

Se diseñaron oligonucleótidos modificados adicionales como se indica en la Tabla 10 a continuación.

Los oligonucleótidos modificados Tabla 10 a continuación son gapmers 5-10-5 MOE. Los gapmers tienen 20 nucleósidos de longitud, en los que el segmento gap central consiste en diez 2'-p-D-deoxinucleósidos, el segmento de ala 5' consiste en cinco nucleósidos 2'-MOE y el segmento de ala 3' consiste en cinco nucleósidos 2'-MOE. El motivo de azúcar de los gapmers es (de 5' a 3'): eeeeeddddddddddeeeee; en donde 'd' representa una fracción de azúcar 2'-p-D-desoxirribosil, y 'e' representa una fracción de azúcar 2'-MOE. Los gapmers tienen un motivo de enlace internucleósido de (de 5' a 3'): soooossssssssssooss; donde "s" representa un enlace internucleósido fosforotioato y "o" representa un enlace internucleósido fosfodiéster. Todos los residuos de citosina son 5-metilcitosinas.

"Sitio de inicio" indica el nucleósido 5'-most al que el oligonucleótido modificado es complementario en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido 3'-most al que el oligonucleótido modificado es complementario en la secuencia del gen humano. Cada oligonucleótido modificado enumerado en la Tabla 10 es 100% complementario a SEQ ID NO: 2 (No. de acceso GENBANK NC_000016.10 truncado de los nucleótidos 31176001 a 31198000). N/A" indica que el oligonucleótido modificado no es 100% complementario a esa secuencia genética concreta.

Tabla 10. 5-10-5 gapmers MOE con una mezcla de enlaces intemucleósidos PO/PS complementarios al FUS humano

Ejemplo 4: Efectos de oligonucleótidos modificados sobre el ARNm FUS humano in vitro, dosis múltiples

Los oligonucleótidos modificados seleccionados de los ejemplos anteriores se ensayaron a diversas dosis en células A-431. Las células A-431 cultivadas a una densidad de 10.000 células por pocillo se trataron mediante captación libre con diversas concentraciones de oligonucleótido modificado, tal como se especifica en la Tabla 11 siguiente. Tras un periodo de tratamiento de aproximadamente 48 horas, se aisló el ARN total de las células y se midieron los niveles de ARN FUS mediante RTPCR cuantitativa en tiempo real. Para medir los niveles de ARN se utilizó el conjunto de sondas de cebado FUS humano RTS38562, tal como se ha descrito anteriormente. Los niveles de FUS se ajustaron de acuerdo con contenido total de ARN, medido mediante RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en la Tabla 11 a continuación como reducción porcentual de la cantidad de ARN FUS, en relación con el control no tratado. Las concentraciones inhibitorias semimáximas (IC50) se calcularon mediante una regresión lineal en un gráfico logarítmico/lineal de los datos en Excel.

Tabla 11. Reducción porcentual dependiente de la dosis del ARN FUS humano mediante gapmers 5-10-5 MOE con enlaces mixtos PO/PS complementarios al FUS humano.

Ejemplo 5: Tolerabilidad de oligonucleótidos modificados en ratones de tipo silvestre

Los oligonucleótidos modificados descritos anteriormente se probaron en ratones C57/Bl6 hembra de tipo silvestre para evaluar la tolerabilidad de los oligonucleótidos. Además, el Compuesto de Comparación No. 441522 se probó en ratones C57/Bl6 hembra de tipo silvestre para evaluar la tolerabilidad de los oligonucleótidos. Los ratones C57/Bl6 hembra de tipo silvestre recibieron cada uno una dosis única ICV de 700 |jg o 500 |jg de oligonucleótido modificado en experimentos separados, como se indica en las Tablas 12-15 a continuación. Cada grupo de tratamiento constaba de 4 ratones. Un grupo de 4 ratones recibió PBS como control negativo para cada experimento (identificados en tablas separadas a continuación). A las 3 horas de la inyección, se evaluó a los ratones de acuerdo con siete criterios diferentes. Los criterios son (1) el ratón estaba brillante, alerta y receptivo; (2) el ratón estaba de pie o encorvado sin estímulos; (3) el ratón mostraba cualquier movimiento sin estímulos; (4) el ratón demostraba movimiento hacia delante después de levantarse; (5) el ratón demostraba cualquier movimiento después de levantarse; (6) el ratón respondía al pellizco de la cola; (7) respiración regular. Para cada uno de los 7 criterios, se asignó a un ratón una subpuntuación de 0 si cumplía los criterios y de 1 si no los cumplía (la puntuación de la batería de observación funcional o FOB). Una vez evaluados los 7 criterios, se sumaron las puntuaciones de cada ratón y se promediaron dentro de cada grupo de tratamiento.

Tabla 12. Puntuaciones de tolerabilidad en ratones a dosis de 700 pg

Tabla 13. Puntuaciones de tolerabilidad en ratones a dosis de 500 pg

Tabla 14. Puntuaciones de tolerabilidad en ratones a dosis de 700 pg

Tabla 15. Puntuaciones de tolerabilidad en ratones a dosis de 700 pg

Ejemplo 6: Actividad de oligonucleótidos modificados complementarios de FUS humano en ratones transgénicos

Líneas de ratones transgénicos (ratones que expresan el gen FUS humano de tipo silvestre hgFUSWT, o ratones que contienen las mutaciones FUS humanas R521C o R521H, hgFUSR521C y hgFUSR521H), descritos previamente en Lopez-Erauskin., et al., ALS/FTD-LinkedMutation in FUS Suppresses Intra-axonal Protein Synthesis and Drives Disease Without Nuclear Loss-of-Function of FUS, Neuron 2018, 100:816-830, se utilizaron para probar la actividad de los oligonucleótidos modificados descritos anteriormente.. Los ratones transgénicos FUS se dividieron en grupos de 3 ratones cada uno. Cada ratón recibió un único bolo ICV de 500pg de oligonucleótido modificado. Un grupo de 4 ratones recibió PBS como control negativo.

Cuatro semanas después del tratamiento, se sacrificaron los ratones, y se extrajo ARN del tejido cerebral cortical y de la médula espinal para el análisis qPCR en tiempo real de la expresión de ARN de FUS utilizando el conjunto de sonda de cebador RTS38562 como se ha descrito anteriormente. Los resultados se presentan como porcentaje de cambio de ARN, en relación con el control PBS, normalizado a GAPDH de ratón. La GAPDH de ratón se amplificó utilizando el conjunto de cebadores RTS 108 (secuencia directa GGCAAATTCAACGGCACAGT, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 9; secuencia inversa GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 10; secuencia de sonda AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC, designada en el presente documento como SEQ ID NO: 11). Se realizaron dos experimentos distintos en condiciones similares. Los resultados de cada experimento se presentan en las Tablas 16 y 17.

Tabla 16. Reducción del ARN FUS humano en ratones transgénicos

Tabla 17. Reducción del ARN FUS humano en ratones transgénicos

Ejemplo 7: Tolerabilidad de oligonucleótidos modificados en ratas, dosis de 3 mg

Los oligonucleótidos modificados descritos anteriormente se ensayaron en ratas para evaluar la tolerabilidad de los oligonucleótidos. Cada una de las ratas Sprague Dawley recibió una única dosis intratecal (IT) de 3 mg del oligonucleótido enumerado en la Tabla 9 siguiente. Cada grupo de tratamiento estaba formado por 3-4 ratas. Un grupo de 3-4 ratas recibió PBS como control negativo. A las 3 horas de la inyección, se evaluó el movimiento en 7 partes diferentes del cuerpo de cada rata. Las 7 partes del cuerpo son (1) la cola de la rata; (2) la postura posterior de la rata; (3) las extremidades posteriores de la rata; (4) las patas traseras de la rata; (5) las patas delanteras de la rata; (6) la postura anterior de la rata; (7) la cabeza de la rata. Para cada una de las 7 partes diferentes del cuerpo, se dio a cada rata una subpuntuación de 0 si la parte del cuerpo se movía o de 1 si la parte del cuerpo estaba paralizada. Después de evaluar cada una de las 7 partes del cuerpo, se sumaron las puntuaciones parciales de cada rata y se calculó la media de cada grupo (puntuación de la batería de observación funcional o FOB). Por ejemplo, si la cola, la cabeza y todas las demás partes del cuerpo evaluadas de una rata se movieran 3 horas después de la dosis de 3 mg de IT, obtendría una puntuación sumada de 0. Si otra rata no movía la cola 3 horas después de la dosis de 3 mg IT pero todas las demás partes del cuerpo evaluadas se movían, recibiría una puntuación de 1. Los resultados se presentan en la Tabla 18 como la puntuación media de cada grupo de tratamiento. Todos los compuestos enumerados en la Tabla 18 resultaron ser más tolerables en ratas en comparación con el Compuesto de Comparación No. 441522.

Tabla 18. Puntuaciones de tolerabilidad en ratas a dosis de 3 mg

Ejemplo 8. Ensayo clínico en humanos con el compuesto No. 1044030

A los pacientes que muestran uno o más síntomas de ELA y/o se identifica que tienen una mutación de ganancia de función en FUS se les administra el Compuesto No. 1044030 por vía intratecal. Los pacientes sintomáticos, presintomáticos y prodrómicos reciben entre 50 mg y 200 mg del Compuesto No. 1044030 aproximadamente cada 4 semanas, cada 8 semanas o cada 12 semanas.

La farmacodinámica y la eficacia se evalúan en múltiples puntos temporales. La eficacia del Compuesto No. 1044030 se evalúa monitorizando la función en las actividades diarias, la fuerza muscular y la función respiratoria. En algunos casos, la evaluación adopta la forma de un cuestionario, un resultado notificado por el paciente o una escala de valoración funcional de la e La . La seguridad del paciente se monitoriza estrechamente durante el estudio. Las evaluaciones de seguridad y tolerabilidad pueden incluir, por ejemplo, exploración física, signos vitales, acontecimientos adversos, medicaciones concomitantes y pruebas de laboratorio del plasma.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES

   química: (SEQ ID NO. 13), o una sal del mismo.
2. 2. El oligonucleótido modificado de la reivindicación 1 que es la sal sódica o la sal potásica.
3. química: (SEQ ID NO: 13).
4. 4. Un compuesto oligomérico que comprende un oligonucleótido modificado de acuerdo con la fórmula siguiente: Ges mCeo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Ads mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID NO: 13); en donde, A = una adenina, mC = a 5-metilcitosina G = una guanina, T = una timina, e = un azúcar modificado 2'-O-metoxietilribosa d = un azúcar 2'-desoxirribosa, s = un enlace internucleósido fosforotioato, y o = un enlace fosfodiéster internucleósido.
5. 5. Una población de oligonucleótidos modificados o compuestos oligoméricos de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que todos los enlaces internucleósidos fosforotioato del oligonucleótido modificado son estereorandoméricos.
6. 6. Una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido modificado de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, el compuesto oligomérico de la reivindicación 4 o la población de oligonucleótidos modificados de la reivindicación 5 y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
7. 7. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, en la que el diluyente farmacéuticamente aceptable es líquido cefalorraquídeo artificial o solución salina tamponada con fosfato (PBS).
8. 8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que la composición farmacéutica consiste esencialmente en el oligonucleótido modificado o la población de oligonucleótidos modificados, y líquido cefalorraquídeo artificial.
9. 9. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que la composición farmacéutica consiste esencialmente en el oligonucleótido modificado o la población de oligonucleótidos modificados, y PBS.