TW202111123A - 用於減少fus 表現之化合物及方法 - Google Patents

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Abstract

提供用於減少細胞或個體中之FUS RNA之量或活性且在某些情況下減少細胞或個體中之FUS蛋白之量之化合物、方法及醫藥組合物。該等化合物、方法及醫藥組合物可用於改善神經退化性疾患之至少一個症狀或標誌。此類症狀及標誌包括肌肉無力及疲勞、中樞神經系統中之蛋白聚集體以及說話困難及行為異常。受益於該等化合物、方法及醫藥組合物的神經退化性疾病之非限制性實例為肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)及額顳葉退化症(FTLD)。

Description

用於減少FUS表現之化合物及方法
肉瘤融合(Fused in Sarcoma gene；FUS )基因中之突變與若干神經退化性疾病有關，諸如肌萎縮性側索硬化症(ALS)及額顳葉變性(FTLD)。提供了用於減少細胞或個體中之FUS RNA之量的化合物、方法及醫藥組合物。在某些情況下，化合物、方法及醫藥組合物減少細胞或個體中之FUS蛋白之量。此類化合物、方法及醫藥組合物可用於改善神經退化性疾患之至少一個症狀或標誌。
ALS，亦稱為路格里克氏病(Lou Gehrig’s disease)，為造成運動神經元死亡的神經退化性疾病。ALS患者罹患肌肉僵硬、肌肉抽搐、肌肉無力及肌肉質量減少。ALS進展直至患者不能走路、說話、吞嚥或呼吸。ALS有若干類型且它們一般經分類為家族性ALS或散發性ALS。較大百分比的家族性ALS病例與FUS 基因中之突變有關，該基因編碼RNA結合蛋白FUS/TLS (肉瘤融合/肉瘤易位(Translocated in Sarcoma))。在健康患者中，大多數FUS蛋白定位於神經元之細胞核中，在這裡它們起加工RNA的作用。然而，在ALS患者中，FUS 中之突變造成FUS蛋白在細胞質中聚集，引起蛋白錯誤折疊及聚集。儘管ALS之發作年齡通常大於40歲，但存在患者在25歲之前發展出ALS症狀的一些情況。在25歲以下的患者中發展的ALS被稱為「青少年型ALS」。青少年型ALS中最常見的突變包括FUS中之突變。
FTLD，亦稱為匹克氏病(Pick’s disease)，該術語用於描述若干病症，包括行為變異的額顳葉失智症(frontotemporal dementia as behavioral variant)、原發性非流利型失語症、語言變異的語意型失智症(semantic dementia as language variants)、肌萎縮性側索硬化症伴額顳葉癡呆 (ALS+FTLD)、皮質基底核症候群及進行性核上神經麻痺症。FTLD之特徵在於額葉及顳葉萎縮。在一些情況下，在FTLD患者之腦中觀察到tau蛋白(Pick抗體)及TAR DNA結合蛋白43之累積。這些病理經分類為FTLD-tau或FTLD-TDP。在其他情況下，在FTLD患者之脊髓之皮質、髓質、海馬迴及運動細胞中觀察到FUS陽性細胞質包涵體、核內包涵體及神經炎線(neuritic thread)，稱為FTLD-FUS。
目前，仍然需要治療ALS及FTLD之療法。因此，本文之目的為提供用於治療此類疾病之化合物、方法及醫藥組合物。
本文提供了用於減少細胞活個體中之FUS RNA之量，且在某些實施例中減少FUS蛋白之量或活性之化合物、方法及醫藥組合物。在某些實施例中，個體患有神經退化性疾患。在某些實施例中，個體患有ALS。在某些實施例中，個體患有FTLD。在某些實施例中，個體具有FUS 中之突變。在某些實施例中，可用於減少FUS RNA及/或FUS蛋白之量的化合物為寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚化合物包含修經修飾之寡核苷酸。
本文亦提供了可用於改善神經退化性疾患之症狀或標誌的方法。ALS之示範性症狀及標誌包括但不限於肌肉無力及疲勞、口齒不清、抽搐、痙攣及CNS中之蛋白聚集。FTLD之示範性症狀及標誌包括但不限於說話困難及行為異常。
序列表
本申請案正連同電子格式之序列表一起申請。序列表係提供為2020年5月27日創建之大小為136 kb之標題為BIOL0360WOSEQ_ST25.txt的檔案。該序列表之電子格式中之資訊以全文引用之方式併入本文。
應理解，前述一般性描述及以下詳細描述僅具有示範性及解釋性且不具有限制性。在本文中，除非另外明確陳述，否則單數之使用包括複數。如本文所用，除非另外陳述，否則「或」之使用意謂「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及其他形式(諸如「包括(includes)」及「包括(included)」)之使用不具有限制性。此外，除非另外明確陳述，否則諸如「元件」或「組分」之術語涵蓋包含一個單元之要素及組分以及包含多於一個次單元之元件及組分。
本文所用之章節標題僅出於組織目的且不應解釋為限制所述標的物。本申請案中引用之所有文獻或文獻之部分(包括但不限於專利、專利申請案、文章、書籍及論文)均據此針對本文所討論之文獻之部分明確地以引用之方式併入以及以全文引用之方式併入。定義
除非提供特定定義，否則結合本文所述之分析化學、合成有機化學以及醫療與醫藥化學使用的命名法以及該等領域之程序及技術為此項技術中所熟知及常用者。允許時，本揭露通篇提及之所有專利、申請案、公開申請案及其他公開案以及其他資料均以全文引用方式併入本文。
除非另外指示，否則以下術語具有以下含義：定義
如本文所用，「2’-去氧核苷」意謂包含2’-H(H)去氧核糖基糖部分的核苷。在某些實施例中，2’-去氧核苷為2’-β-D-去氧核苷且包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分，其具有如在天然存在之去氧核糖核酸(DNA)中存在的β-D組態。在某些實施例中，包含未修飾之2’-去氧核糖基糖部分的2’-去氧核苷或核苷可包含經修飾之核鹼基或可包含RNA核鹼基(尿嘧啶)。
如本文所用，「2’-MOE」或「2’-MOE糖部分」意謂代替核糖基糖部分之2’-OH基團的2’-OCH2 CH2 OCH3 基團。「MOE」意謂甲氧基乙基。
如本文所用，「2’-MOE核苷」意謂包含2’-MOE糖部分的核苷。
如本文所用，「2’-OMe」或「2’-O-甲基糖部分」意謂代替核糖基糖部分之2’-OH基團的2’-OCH3 基團。
如本文所用，「2’-OMe核苷」意謂包含2’-OMe糖部分的核苷。
如本文所用，「2’-取代之核苷」意謂包含2’-取代之糖部分的核苷。如本文所用，關於糖部分之「2’-取代之」意謂糖部分包含至少一個除H或OH之外的2’-取代基。
本文所用，「5-甲基胞嘧啶」意謂經連接至5位之甲基修飾之胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶為經修飾之核鹼基。
如本文所用，「投與」意謂向個體投與藥劑。
如本文所用，「反義活性」意謂可歸因於反義化合物與其靶核酸雜交的任何可偵測及/或可量測變化。在某些實施例中，反義活性為靶核酸或由此一靶核酸編碼之蛋白之量或表現與不存在該反義化合物時靶核酸水準或靶蛋白水準相比而減少。
如本文所用，「反義化合物」意謂能夠達成至少一種反義活性的寡聚化合物。
如本文所用，關於治療之「改善」意謂至少一個症狀相對於不存在治療時相同症狀而改良。在某些實施例中，改善為症狀之嚴重性或頻率降低、或者症狀之發作延遲、或者其嚴重性或頻率之進展減緩。
如本文所用，「雙環核苷」或「BNA」意謂包含雙環糖部分之核苷。
如本文所用，「雙環糖」或「雙環糖部分」意謂包含兩個環的經修飾之糖部分，其中第二環係經由一橋形成，該橋連接第一環中之兩個原子從而形成雙環結構。在某些實施例中，雙環糖部分之第一環為呋喃糖基部分。在某些實施例中，雙環糖部分不包含呋喃糖基部分。
如本文所用，「可裂解部分」意謂在生理條件下(例如在細胞或個體內)裂解的鍵或原子團。
如本文所用，關於寡核苷酸之「互補」意謂當將寡核苷酸及另一核酸之核鹼基序列在相反方向上進行比對時，該寡核苷酸或其一或多個區之至少70%的核鹼基及該另一核酸或其一或多個區之核鹼基能夠彼此氫鍵結。如本文所用，「互補核鹼基」意謂能夠彼此形成氫鍵的核鹼基。互補核鹼基對包括腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)以及5-甲基胞嘧啶(mC)與鳥嘌呤(G)。互補寡核苷酸及/或核酸不必在各核苷處均具有核鹼基互補性。相反，容許一些錯配。如本文所用，關於寡核苷酸或其部分之「完全互補」或「100%互補」意謂寡核苷酸或其部分在該寡核苷酸之各核苷處與另一寡核苷酸或核酸互補。
如本文所用，「結合基團」意謂直接或間接連接至寡核苷酸的原子團。結合基團包括結合部分及將結合部分連接至寡核苷酸的結合連接子。
如本文所用，「結合連接子」意謂單鍵或者包含至少一個將結合部分連接至寡核苷酸的鍵的原子團。
如本文所用，「結合部分」意謂經由結合連接子連接至寡核苷酸的原子團。
如本文所用，在寡核苷酸之情境中之「連續」係指核苷、核鹼基、糖部分或核苷間鍵聯彼此緊鄰。例如，「連續核鹼基」意謂在序列中彼此緊鄰的核鹼基。
如本文所用，「限制性乙基」或「cEt」或「cEt修飾之糖」意謂β-D核糖基雙環糖部分，其中該雙環糖之第二環係經由連接β-D核糖基糖部分之4’-碳及2’-碳的橋而形成，其中該橋具有式4’-CH(CH3 )-O-2’，且其中該橋之甲基處於S 組態。
如本文所用，「cEt核苷」意謂包含cEt修飾之糖部分的核苷。
如本文所用，「掌性富集群體」 意謂複數個具有相同分子式之分子，其中群體內在具體掌性中心處含有具體立體化學組態的分子之數目或百分比大於預期當該具體掌性中心為無規立構時群體內在相同具體掌性中心處含有相同具體立體化學組態的分子之數目或百分比。在各分子內具有多個掌性中心的分子之掌性富集群體可含有一或多個無規立構掌性中心。在某些實施例中，分子為經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，分子為包含經修飾之寡核苷酸之化合物。
如本文所用，「間隔體(gapmer)」意謂一種經修飾之寡核苷酸，其包含具有複數個核苷的內部區，該複數個核苷支持位於具有一或多個核苷的外部區之間的核糖核酸酶H裂解，其中構成內部區的核苷在化學上不同於構成外部區的一或多個核苷。內部區可稱為「間隙」且外部區可稱為「側翼」。除非另外指示，否則「間隔體」係指糖模體。除非另外指示，否則間隙之各核苷之糖模體為2’-β-D-去氧核糖基糖部分。因此，術語「MOE間隔體」指示具有包含2’-β-D-去氧核苷的間隔體及包含2’-MOE核苷的側翼的間隔體。除非另外指示，否則MOE間隔體可包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯及/或經修飾之核鹼基，且此類修飾不一定遵循糖修飾之間隔體模式。
如本文所用，「熱點區」為靶核酸上易受靶核酸之量或活性之寡聚化合物介導之減少影響的一系列核鹼基。
如本文所用，「雜交」意謂互補寡核苷酸及/或核酸之配對或黏合(annealing)。儘管不限於具體機制，但是最常見的雜交機制涉及互補核鹼基之間的氫鍵結，其可為瓦生-克立克(Watson-Crick)氫鍵結、胡思町(Hoogsteen)氫鍵結或反向胡思町氫鍵結。
如本文所用，「核苷間鍵聯」意謂在寡核苷酸中之連續核苷之間的共價鍵聯。如本文所用，「經修飾之核苷間鍵聯」意謂除磷酸二酯核苷間鍵聯之外的任何核苷間鍵聯。「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」為磷酸二酯核苷間鍵聯之非橋聯氧原子之一經硫原子置換的經修飾之核苷間鍵聯。
如本文所用，「連接子-核苷」意謂核苷直接或間接地將寡核苷酸連接至結合部分。連接子-核苷定位於寡聚化合物之結合連接子內。連接子-核苷不被視為寡聚化合物之寡核苷酸部分之一部分，即使其與寡核苷酸連續亦如此。
如本文所用，「非雙環經修飾之糖部分」意謂包含不在糖之兩個原子之間形成橋以形成第二環的修飾(諸如取代)的經修飾之糖部分。
如本文所用，「錯配」或「非互補」意謂當將第一寡核苷酸及第二寡核苷酸進行比對時第一寡核苷酸之核鹼基不與第二寡核苷酸或靶核酸之對應核鹼基互補。
如本文所用，「模體」意謂寡核苷酸中未修飾及/或經修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯的模式。
如本文所用，「核鹼基」意謂未修飾之核鹼基或經修飾之核鹼基。如本文所用，「未修飾之核鹼基」為腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)及鳥嘌呤(G)。如本文所用，「經修飾之核鹼基」為能夠與至少一個未修飾之核鹼基配對的、除經修飾之A、T、C、U或G之外的原子團。「5-甲基胞嘧啶」為經修飾之核鹼基。通用鹼基為可與五種未修飾之核鹼基中之任一者配對的未修飾之核鹼基。如本文所用，「核鹼基序列」意謂核酸或寡核苷酸中獨立於任何糖或核苷間鍵聯修飾的連續核鹼基之次序。
如本文所用，「核苷」意謂包含核鹼基及糖部分之化合物。核鹼基及糖部分各自獨立地未經修飾或經修飾。如本文所用，「經修飾之核苷」意謂包含經修飾之核鹼基及/或經修飾之糖部分之核苷。經修飾之核苷包括缺乏核鹼基的無鹼基核苷。「連接之核苷」為在連續序列中連接之核苷(即，在連接之核苷之間不存在額外的核苷)。
如本文所用，「寡聚化合物」意謂寡核苷酸及視情況一或多個額外特徵，諸如結合基團或端基。寡聚化合物可與互補於第一寡聚化合物的第二寡聚化合物配對或可為不成對的。「單股寡聚化合物」為不成對寡聚化合物。術語「寡聚雙螺旋」意謂由具有互補核鹼基序列的兩種寡聚化合物形成的雙螺旋。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物可稱為「雙螺旋寡聚化合物」。
如本文所用，「寡核苷酸」意謂經由核苷間鍵聯連接的連接之核苷之股，其中各核苷及核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾。除非另外指示，否則寡核苷酸由8-50個連接之核苷組成。如本文所用，「經修飾之寡核苷酸」意謂一寡核苷酸，其中至少一個核苷為經修飾之寡核苷或者至少一個核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。如本文所用，「未修飾之寡核苷酸」意謂不包含任何核苷修飾或核苷間修飾的寡核苷酸。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑」意謂合適於用於向個體投與之任何物質。某些此類載劑使醫藥組合物能夠調配成例如由個體經口攝取之錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿、漿液、懸液劑及口含錠。在某些實施例中，醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑為無菌水、無菌鹽水、無菌緩衝溶液或無菌人工腦脊髓液。
如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」意謂化合物之生理學上及醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽保留親體化合物之所要生物活性且不對其產生非所要毒理學作用。
如本文所用，「醫藥組合物」意謂合適於向個體投與之物質之混合物。例如，醫藥組合物可包含寡聚化合物及無菌水溶液。在某些實施例中，醫藥組合物在對某些細胞株之自由吸收檢定中顯示出活性。
如本文所用，「前藥」意謂在體外以一形式、在個體或其細胞內轉化成不同形式的治療劑。通常，前藥在個體內的轉化係藉由細胞或組織中存在之酶(例如 ，內源酶或病毒酶)或化學物質之作用及/或藉由生理學條件促進。
如本文所用，「減少或抑制量或活性」係指相對於未處理或對照樣品中之轉錄表現或活性而降低或阻斷轉錄表現或活性且不一定指示轉錄表現或活性之完全消除。
除非另外指定，否則如本文所用，「RNA」意謂RNA轉錄物且包括前驅mRNA及成熟mRNA。
如本文所用，「RNAi化合物」意謂至少部分地透過RISC或Ago2起作用以調節靶核酸及/或靶核酸所編碼之蛋白的反義化合物。RNAi化合物包括但不限於雙股siRNA、單股RNA (ssRNA)及微小RNA (包括微小RNA模擬物)。在某些實施例中，RNAi化合物調節靶核酸之量、活性及/或剪接。術語RNAi化合物不包括透過核糖核酸酶H起作用的反義化合物酸。
如本文所用，關於寡核苷酸之「自身互補」意謂寡核苷酸至少部分地與自身雜交。
如本文所用，「標準細胞檢定」意謂實例1中所述之檢定及其合理的變化。
如本文所用，在具有相同分子式之分子群體之情境下，「無規立構」意謂掌性中心具有隨機立體化學組態。例如，在包含無規立構掌性中心之分子群體中，具有無規立構掌性中心之(S )組態之分子數可與具有無規立構掌性中心之(R )組態之分子數相同但不一定相同。當掌性中心之立體化學組態為未設計成控制立體化學組態的合成方法之結果時，其被視為隨機的。在某些實施例中，無規立構掌性中心為無規立構硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如本文所用，「個體」意謂人類或非人類動物。在某些實施例中，個體為人類。在某些實施例中，個體經診斷為患有ALS。在某些實施例中，個體經診斷為患有FTLD。在某些實施例中，個體處於ALS或FTLD之風險。在某些實施例中，處於ALS或FTL之風險的個體具有FUS 中之突變。在某些實施例中，FUS 中之突變與ALS或FTLD有關。在某些實施例中，FUS 中之突變引起ALS或FTLD。
如本文所用，「糖部分」意謂未修飾之糖部分或經修飾之糖部分。如本文所用，「未修飾之糖部分」意謂2’-OH(H)核糖基部分，如見於RNA (「未修飾之RNA糖部分」)中；或2’-H(H)去氧核糖基部分，如見於DNA (「未修飾之DNA糖部分」)。未修飾之糖部分在1’、3’及4’位中之各者處均具有一個氫，在3’位處具有氧且在5’位處具有兩個氫。如本文所用，「經修飾之糖部分」或「經修飾之糖」意謂經修飾之呋喃糖基糖部分或糖替代物。
如本文所用，「糖替代物」意謂具有除呋喃糖基部分之外、可將核鹼基連接至另一基團(諸如寡核苷酸中之核苷間鍵聯、結合基團或端基)的經修飾之糖部分。包含糖替代物之經修飾之核苷可併入至寡核苷酸內之一或多個位置中，且此類寡核苷酸能夠與互補寡聚化合物或核酸雜交。
如本文所用，「症狀或標誌」意謂指示疾病或病症之存在或程度的任何身體特徵或測試結果。在某些實施例中，症狀對於個體或者檢查或測試該個體之醫療專業人員為顯而易見的。在某些實施例中，標誌在包括但不限於死後測試的侵入性診斷測時為顯而易見的。
如本文所用，「靶核酸」及「靶RNA」意謂反義化合物經設計以起作用的核酸。
如本文所用，「靶區」意謂反義化合物經設計以與之雜交的靶核酸之一部分。
如本文所用，「端基」意謂共價連接至寡核苷酸之末端的化學基團或原子團。
如本文所用，「治療有效量」意謂向個體提供治療益處的藥劑之量。例如，治療有效量改良疾病之症狀或標誌。某些實施例
本揭露提供了以下非限制性經編號之實施例：
實施例1. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與FUS核酸之相等長度部分至少90%互補，且其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯之修飾。
實施例2. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個SEQ ID NO: 12-480 中任一者之連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
實施例3. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個與SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 13相同的連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
實施例4. 一種寡聚化合物，其包含由20個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列SEQ ID NO: 12。
實施例5. 一種寡聚化合物，其包含由20個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列SEQ ID NO: 13。
實施例6. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786至1,841之相等長度部分互補的連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
實施例7. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個SEQ ID NO: 34、35、111、112、188、265、342及418中任一者之連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
實施例8. 如實施例1-7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含經修飾之糖部分。
實施例9. 如實施例1-7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含雙環糖部分。
實施例10. 如實施例9之寡聚化合物，其中該雙環糖部分包含選自–O-CH2 -及–O-CH(CH3 )-之2’-4’橋。
實施例11. 如實施例1-10中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含非雙環經修飾之糖部分。
實施例12. 如實施例11之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分包含2’-MOE糖部分或2’-OMe糖部分。
實施例13. 如實施例1-12中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含糖替代物。
實施例14. 如實施例13之寡聚化合物，其中該糖替代物選自N-嗎啉基及PNA。
實施例15. 如實施例1-14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有糖模體，其包含：(a) 5’-區，其由1-5個連接之5’-區核苷組成；(b)中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及(c) 3’-區，其由1-5個連接之3’-區核苷組成，其中該等5’-區核苷中之各者及該等3’-區核苷中之各者包含經修飾之糖部分且該等中央區中之各者包含經修飾之2’-去氧核糖基糖部分。
實施例16. 如實施例1-15中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
實施例17. 如實施例16之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
實施例18. 如實施例16或17之寡聚化合物，其中該至少一個經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例19. 如實施例16-18中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例20. 如實施例18或19之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例21. 如實施例1-16中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸基本上由20個連接之核苷組成且具有核苷間鍵聯模體soooossssssssssooss，其中「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例22. 如實施例1-21中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。
實施例23. 如實施例22之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
實施例24. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸為由5’側翼區段、中央間隙區段及3’側翼區段組成之間隔體，其中：該5’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成，該中央間隙區段由10個β-D-去氧核糖核苷組成，且該3’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成，其中該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列5’- GTTTATCTGAATTCGCCATA -3’ (SEQ ID NO. 12)，其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶，其中該經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯從5’至3’為soooossssssssssooss，且其中各s為硫代磷酸酯鍵聯且各o為磷酸二酯鍵。
實施例25. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸為由5’側翼區段、中央間隙區段及3’側翼區段組成之間隔體，其中：該5’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成，該中央間隙區段由10個β-D-去氧核糖核苷組成，且該3’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成，其中該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列5’- GCAATGTCACCTTTCATACC -3’ (SEQ ID NO. 13)，其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶，其中該經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯從5’至3’為soooossssssssssooss，且其中各s為硫代磷酸酯鍵聯且各o為磷酸二酯鍵。
實施例26. 如實施例1-25中任一項之寡聚化合物，其基本上由該經修飾之寡核苷酸組成。
實施例27. 如實施例1-25中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
實施例28. 如實施例1-25中任一項之寡聚化合物，其包含結合基團，其中該結合基團基本上由結合部分及結合連接子組成。
實施例29. 如實施例28之寡聚化合物，其中該結合連接子由單鍵組成。
實施例30. 如實施例28或29之寡聚化合物，其中該結合連接子為可裂解的。
實施例31. 如實施例28-30中任一項之寡聚化合物，其中該結合連接子包含1-3個連接子-核苷。
實施例32. 如實施例28-30中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團不包含核苷。
實施例33. 如實施例28-32中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之5’-末端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
實施例34. 如實施例28-32中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之3’-末端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
實施例35. 如實施例1-34中任一項之寡聚化合物，其包含端基。
實施例36. 如實施例1-35中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸為單股經修飾之寡核苷酸。
實施例37. 一種寡聚雙螺旋，其包含如實施例1-35中任一項之寡聚化合物。
實施例38. 一種反義化合物，其包含如實施例1-36中任一項之寡聚化合物或如實施例37之寡聚雙螺旋或者由其組成。
實施例39. 一種根據下式之經修飾之寡核苷酸：Ges Teo Teo Teo Aeo Tds mCds Tds Gds Ads Ads Tds Tds mCds Gds mCeo mCeo Aes Tes Ae (SEQ ID NO: 12)；其中A = 腺嘌呤，mC = 5’-甲基胞嘧啶，G = 鳥嘌呤，T = 胸腺嘧啶 ，e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖，d = 2’-去氧核糖，s = 硫代磷酸酯核苷間鍵，且o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例40. 一種根據下式之經修飾之寡核苷酸：Ges Ceo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Adsd mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID NO: 13)；其中A = 腺嘌呤，mC = 5’-甲基胞嘧啶，G = 鳥嘌呤，T = 胸腺嘧啶，e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖，d = 2’-去氧核糖，s = 硫代磷酸酯核苷間鍵，且o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例41. 一種根據以下化學結構或其鹽之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image001
(SEQ ID NO. 12)。
實施例42. 如實施例41之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例43. 一種根據以下化學結構或其鹽之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image003
(SEQ ID NO. 13)。
實施例44. 如實施例43之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
實施例45. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image005
(SEQ ID NO: 12)。
實施例46. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
Figure 02_image007
(SEQ ID NO: 13)。
實施例47. 一種醫藥組合物，其包含：如實施例1-36中任一項之寡聚化合物、如實施例37之寡聚雙螺旋、如實施例38之反義化合物及如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者；以及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
實施例48. 如實施例47之醫藥組合物，其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工腦脊髓液或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
實施例49. 如實施例48之醫藥組合物，其中該醫藥組合物基本上由以下組成：該寡聚化合物、寡聚雙螺旋、反義化合物或經修飾之寡核苷酸；及人工腦脊髓液。
實施例50. 一種方法，其包含向個體投與以下中之至少一者：如實施例1-36中任一項之寡聚化合物；如實施例37之寡聚雙螺旋；如實施例38之反義化合物；如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如實施例47-49中任一項之醫藥組合物。
實施例51. 一種治療神經退化性疾患之方法，其包含向患有該神經退化性疾患或處於發展該神經退化性疾患之風險之個體投與治療有效量之以下中之至少一者：如實施例1-36中任一項之寡聚化合物；如實施例37之寡聚雙螺旋；如實施例38之反義化合物；如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如實施例47-49中任一項之醫藥組合物；從而治療該神經退化性疾患。
實施例52. 一種減少患有神經退化性疾患或處於發展該神經退化性疾患之風險之個體之中樞神經系統中之FUS RNA或FUS蛋白之方法，其包含投與治療有效量之以下中之一或多者：如實施例1-36中任一項之寡聚化合物；如實施例37之寡聚雙螺旋；如實施例38之反義化合物；如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如實施例47-49中任一項之醫藥組合物，從而減少中樞神經系統中之FUS RNA或FUS蛋白。
實施例53. 如實施例51或52之方法，其中該神經退化性疾患為肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
實施例54. 如實施例51或52之方法，其中該神經退化性疾患為額顳葉退化症(FTLD)。
實施例55. 如實施例51或52之方法，其中該神經退化性疾患為FTLD-FUS。
實施例56. 如實施例51或52之方法，其中該神經退化性疾患為ALS伴FTLD。
實施例57. 一種治療與FUS突變有關之神經退化性疾患之方法，其包含鑑別個體中之該FUS突變及向該個體投與治療有效量之以下中之至少一者：如實施例1-36中任一項之寡聚化合物；如實施例37之寡聚雙螺旋；如實施例38之反義化合物；如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如實施例47-49中任一項之醫藥組合物。
實施例58. 如實施例57之方法，其中該FUS突變為選自以下之單核苷酸多型性：rs121909667、rs121909668、rs121909669、rs121909671、rs186547381、rs267606831、rs267606832、rs267606833、rs387906627、rs387906628、rs387907274、rs752076094、rs764487847、rs886041389、rs886041390、rs886041577、rs886041776、rs1085308015、rs1161032867、rs1555509569、rs1555509609、rs1555509693、rs1596908744、rs1596912983及rs121909668。
實施例59. 如實施例57之方法，其中該FUS突變選自S57del、S96del、G156E、G171-174del、G174-175del、G187S、G191S、G206S、R216C、G225V、G230C、R234C、R234L、R244C、M254V、S402_P411delinsGGGG、S462F、G466VfsX14、Y484AfsX514、R495X、R495EfsX527、G497AfsX527、G507D、K510WfsX517、K510E、S513P、R514S、R514G、G515C、E516V、H517D、H517P、H517Q、R518G、R518K、Q519IfsX9、R521C、R521G、R521H、R521L、R521S、R522G、R524S、R524T、R524W及P525L。
實施例60. 如實施例57之方法，其中鑑別該FUS突變包含定序來自該個體之FUS核酸或者將來自該個體之該FUS核酸與核酸探針接觸，該核酸探針與包含該突變之該FUS核酸之一部分互補。
實施例61. 如實施例50-60中任一項之方法，其中該投與係藉由鞘內投與。
實施例62. 如實施例55-61中任一項之方法，其中該神經退化性疾患之至少一個症狀或標誌經改善。
實施例63. 如實施例62之方法，其中該神經退化性疾患為ALS且該至少一個症狀或標誌選自肌肉無力、肌肉疲勞、口齒不清、抽搐、痙攣、該個體之中樞神經系統中之蛋白聚集體及其組合。
實施例64. 如實施例62之方法，其中該神經退化性疾患為FTLD且該至少一個症狀或標誌選自說話困難及行為異常。
實施例65. 如實施例50-64中任一項之方法，其中該方法預防或減緩疾病退行。
實施例66. 如實施例50-65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之症狀發生前個體。
實施例67. 如實施例50-65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之症狀性個體。
實施例68. 如實施例50-65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之先驅性個體。
實施例69. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為50 mg。
實施例70. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為60 mg。
實施例71. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為70 mg。
實施例72. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為80 mg。
實施例73. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為90 mg。
實施例74. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為100 mg。
實施例75. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為110 mg。
實施例76. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為120 mg。
實施例77. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為130 mg。
實施例78. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為140 mg。
實施例79. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為150 mg。
實施例80. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為160 mg。
實施例81. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為170 mg。
實施例82. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為180 mg。
實施例83. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為190 mg。
實施例84. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為200 mg。
實施例85. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約50 mg。
實施例86. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約60 mg。
實施例87. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約70 mg。
實施例88. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約80 mg。
實施例89. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約90 mg。
實施例90. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約100 mg。
實施例91. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約110 mg。
實施例92. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約120 mg。
實施例93. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約130 mg。
實施例94. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約140 mg。
實施例95. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約150 mg。
實施例96. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約160 mg。
實施例97. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約170 mg。
實施例98. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約180 mg。
實施例99. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約190 mg。
實施例100. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為約200 mg。
實施例101. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、35 mg、40 mg、45 mg、50 mg、55 mg、60 mg、65 mg、70 mg、75 mg、80 mg、85 mg、90 mg、95 mg、100 mg、105 mg、110 mg、115 mg、120 mg、125 mg、130 mg、135 mg、140 mg、145 mg、150 mg、155 mg、160 mg、165 mg、170 mg、175 mg、180 mg、185 mg、190 mg、195 mg、200 mg、205 mg、210 mg、215 mg、220 mg、225 mg、230 mg、235 mg、240 mg、245 mg、250 mg、255 mg、260 mg、265 mg、270 mg、275 mg、280 mg、285 mg、290 mg、295 mg及300 mg。
實施例102. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：約5 mg、約10 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約105 mg、約110 mg、約115 mg、約120 mg、約125 mg、約130 mg、約135 mg、約140 mg、約145 mg、約150 mg、約155 mg、約160 mg、約165 mg、約170 mg、約175 mg、約180 mg、約185 mg、約190 mg、約195 mg、約200 mg、約205 mg、約210 mg、約215 mg、約220 mg、約225 mg、約230 mg、約235 mg、約240 mg、約245 mg、約250 mg、約255 mg、約260 mg、約265 mg、約270 mg、約275 mg、約280 mg、約285 mg、約290 mg、約295 mg及約300 mg。
實施例103. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：115.0 mg、115.1 mg、115.2 mg、115.3 mg、115.4 mg、115.5 mg、115.6 mg、115.7 mg、115.8 mg、115.9 mg、116.0 mg、116.1 mg、116.2 mg、116.3 mg、116.4 mg、116.5 mg、116.6 mg、116.7 mg、116.8 mg、116.9 mg、117.0 mg、117.1 mg、117.2 mg、117.3 mg、117.4 mg、117.5 mg、117.6 mg、117.7 mg、117.8 mg、117.9 mg、118.0 mg、118.1 mg、118.2 mg、118.3 mg、118.4 mg、118.5 mg、118.6 mg、118.7 mg、118.8 mg、118.9 mg、119.0 mg、119.1 mg、119.2 mg、119.3 mg、119.4 mg、119.5 mg、119.6 mg、119.7 mg、119.8 mg、119.9 mg、120.0 mg、120.1 mg、120.2 mg、120.3 mg、120.4 mg、120.5 mg、120.6 mg、120.7 mg、120.8 mg、120.9 mg、121.0 mg、121.1 mg、121.2 mg、121.3 mg、121.4 mg、121.5 mg、121.6 mg、121.7 mg、121.8 mg、121.9 mg、122.0 mg、122.1 mg、122.2 mg、122.3 mg、122.4 mg、122.5 mg、122.6 mg、122.7 mg、122.8 mg、122.9 mg、123.0 mg、123.1 mg、123.2 mg、123.3 mg、123.4 mg、123.5 mg、123.6 mg、123.7 mg、123.8 mg、123.9 mg、124.0 mg、124.1 mg、124.2 mg、124.3 mg、124.4 mg、124.5 mg、124.6 mg、124.7 mg、124.8 mg、124.9 mg及125.0 mg。
實施例104. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：約115.0 mg、約115.1 mg、約115.2 mg、約115.3 mg、約115.4 mg、約115.5 mg、約115.6 mg、約115.7 mg、約115.8 mg、約115.9 mg、約116.0 mg、約116.1 mg、約116.2 mg、約116.3 mg、約116.4 mg、約116.5 mg、約116.6 mg、約116.7 mg、約116.8 mg、約116.9 mg、約117.0 mg、約117.1 mg、約117.2 mg、約117.3 mg、約117.4 mg、約117.5 mg、約117.6 mg、約117.7 mg、約117.8 mg、約117.9 mg、約118.0 mg、約118.1 mg、約118.2 mg、約118.3 mg、118.4 mg、約118.5 mg、約118.6 mg、約118.7 mg、約118.8 mg、約118.9 mg、約119.0 mg、約119.1 mg、約119.2 mg、約119.3 mg、約119.4 mg、約119.5 mg、約119.6 mg、約119.7 mg、約119.8 mg、約119.9 mg、約120.0 mg、約120.1 mg、約120.2 mg、約120.3 mg、120.4 mg、約120.5 mg、約120.6 mg、約120.7 mg、約120.8 mg、約120.9 mg、約121.0 mg、約121.1 mg、約121.2 mg、約121.3 mg、約121.4 mg、約121.5 mg、約121.6 mg、約121.7 mg、約121.8 mg、約121.9 mg、約122.0 mg、約122.1 mg、約122.2 mg、約122.3 mg、122.4 mg、約122.5 mg、約122.6 mg、約122.7 mg、約122.8 mg、約122.9 mg、約123.0 mg、約123.1 mg、約123.2 mg、約123.3 mg、約123.4 mg、約123.5 mg、約123.6 mg、約123.7 mg、約123.8 mg、約123.9 mg、約124.0 mg、約124.1 mg、約124.2 mg、約124.3 mg、124.4 mg、約124.5 mg、約124.6 mg、約124.7 mg、約124.8 mg、約124.9 mg及約125.0 mg。
實施例105. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：95.0 mg、95.1 mg、95.2 mg、95.3 mg、95.4 mg、95.5 mg、95.6 mg、95.7 mg、95.8 mg、95.9 mg、96.0 mg、96.1 mg、96.2 mg、96.3 mg、96.4 mg、96.5 mg、96.6 mg、96.7 mg、96.8 mg、96.9 mg、97.0 mg、97.1 mg、97.2 mg、97.3 mg、97.4 mg、97.5 mg、97.6 mg、97.7 mg、97.8 mg、97.9 mg、98.0 mg、98.1 mg、98.2 mg、98.3 mg、98.4 mg、98.5 mg、98.6 mg、98.7 mg、98.8 mg、98.9 mg、99.0 mg、99.1 mg、99.2 mg、99.3 mg、99.4 mg、99.5 mg、99.6 mg、99.7 mg、99.8 mg、99.9 mg、100.0 mg、100.1 mg、100.2 mg、100.3 mg、100.4 mg、100.5 mg、100.6 mg、100.7 mg、100.8 mg、100.9 mg、101.0 mg、101.1 mg、101.2 mg、101.3 mg、101.4 mg、101.5 mg、101.6 mg、101.7 mg、101.8 mg、101.9 mg、102.0 mg、102.1 mg、102.2 mg、102.3 mg、102.4 mg、102.5 mg、102.6 mg、102.7 mg、102.8 mg, 102.9 mg、103.0 mg、103.1 mg、103.2 mg、103.3 mg、103.4 mg、103.5 mg、103.6 mg、103.7 mg、103.8 mg、103.9 mg、104.0 mg、104.1 mg、104.2 mg、104.3 mg、104.4 mg、104.5 mg、104.6 mg、104.7 mg、104.8 mg、104.9 mg及105.0 mg。
實施例106. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：約95.0 mg、約95.1 mg、約95.2 mg、約95.3 mg、約95.4 mg、約95.5 mg、約95.6 mg、約95.7 mg、約95.8 mg、約95.9 mg、約96.0 mg、約96.1 mg、約96.2 mg、約96.3 mg、約96.4 mg、約96.5 mg、約96.6 mg、約96.7 mg、約96.8 mg、約96.9 mg、約97.0 mg、約97.1 mg、約97.2 mg、約97.3 mg、約97.4 mg、約97.5 mg、約97.6 mg、約97.7 mg、約97.8 mg、約97.9 mg、約98.0 mg、約98.1 mg、約98.2 mg、約98.3 mg、98.4 mg、約98.5 mg、約98.6 mg、約98.7 mg、約98.8 mg、約98.9 mg、約99.0 mg、約99.1 mg、約99.2 mg、約99.3 mg、約99.4 mg、約99.5 mg、約99.6 mg、約99.7 mg、約99.8 mg、約99.9 mg、約100.0 mg、約100.1 mg、約100.2 mg、約100.3 mg、100.4 mg、約100.5 mg、約100.6 mg、約100.7 mg、約100.8 mg、約100.9 mg、約101.0 mg、約101.1 mg、約101.2 mg、約101.3 mg、約101.4 mg、約101.5 mg、約101.6 mg、約101.7 mg、約101.8 mg、約101.9 mg、約102.0 mg、約102.1 mg、約102.2 mg、約102.3 mg、102.4 mg、約102.5 mg、約102.6 mg、約102.7 mg、約102.8 mg、約102.9 mg、約103.0 mg、約103.1 mg、約103.2 mg、約103.3 mg、約103.4 mg、約103.5 mg、約103.6 mg、約103.7 mg、約103.8 mg、約103.9 mg、約104.0 mg、約104.1 mg、約104.2 mg、約104.3 mg、104.4 mg、約104.5 mg、約104.6 mg、約104.7 mg、約104.8 mg、約104.9 mg及約105.0 mg。
實施例107. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量在以下任一者之範圍內：40 mg至200 mg、40 mg至190 mg、40 mg至180 mg、40 mg至170 mg、40 mg至160 mg、40 mg至150 mg、40 mg至140 mg、40 mg至120 mg、40 mg至110 mg、40 mg至100 mg、40 mg至80 mg、40 mg至70 mg、40 mg至60 mg、40 mg至50 mg、50 mg至200 mg、50 mg至190 mg、50 mg至180 mg、50 mg至170 mg、50 mg至160 mg、50 mg至150 mg、50 mg至140 mg、50 mg至120 mg、50 mg至110 mg、50 mg至100 mg、50 mg至80 mg、50 mg至70 mg、50 mg至60 mg、60 mg至200 mg、60 mg至190 mg、60 mg至180 mg、60 mg至170 mg、60 mg至160 mg、60 mg至150 mg、60 mg至140 mg、60 mg至120 mg、60 mg至110 mg、60 mg至100 mg、60 mg至80 mg、60 mg至70 mg、70 mg至200 mg、70 mg至190 mg、70 mg至180 mg、70 mg至170 mg、70 mg至160 mg、70 mg至150 mg、70 mg至140 mg、70 mg至120 mg、70 mg至110 mg、70 mg至100 mg、70 mg至80 mg、80 mg至200 mg、80 mg至190 mg、80 mg至180 mg、80 mg至170 mg、80 mg至160 mg、80 mg至150 mg、80 mg至140 mg、80 mg至120 mg、80 mg至110 mg、80 mg至100 mg、80 mg至90 mg、90 mg至200 mg、90 mg至190 mg、90 mg至180 mg、90 mg至170 mg、90 mg至160 mg、90 mg至150 mg、90 mg至140 mg、90 mg至120 mg、90 mg至110 mg、90 mg至100 mg、100 mg至200 mg、100 mg至190 mg、100 mg至180 mg、100 mg至170 mg、100 mg至160 mg、100 mg至150 mg、100 mg至140 mg、100 mg至120 mg、100 mg至110 mg、110 mg至200 mg、110 mg至190 mg、110 mg至180 mg、110 mg至170 mg、110 mg至160 mg、110 mg至150 mg、110 mg至140 mg、110 mg至130 mg、110 mg至120 mg、120 mg至200 mg、120 mg至190 mg、120 mg至180 mg、120 mg至170 mg、120 mg至160 mg、120 mg至150 mg、120 mg至140 mg、120 mg至130 mg、130 mg至200 mg、130 mg至190 mg、130 mg至180 mg、130 mg至170 mg、130 mg至160 mg、130 mg至150 mg、130 mg至140 mg、140 mg至200 mg、140 mg至190 mg、140 mg至180 mg、140 mg至170 mg、140 mg至160 mg、140 mg至150 mg、150 mg至200 mg、150 mg至190 mg、150 mg至180 mg、150 mg至170 mg、150 mg至160 mg、160 mg至200 mg、160 mg至190 mg、160 mg至180 mg、160 mg至170 mg、180 mg至200 mg、180 mg至190 mg、190 mg至200 mg、105 mg至135 mg、105 mg至130 mg、105 mg至125 mg 105 mg至120 mg、110 mg至135 mg、110 mg至130 mg、110 mg至125 mg、110 mg至120 mg、115 mg至135 mg、115 mg至130 mg、115 mg至125 mg、115 mg至120 mg、115 mg至125 mg、115 mg至120 mg、120 mg至135 mg、120 mg至125 mg、125 mg至140 mg、125 mg至130 mg、130 mg至135 mg、135 mg至140 mg、120 mg至129 mg、120 mg至128 mg、120 mg至127 mg、120 mg至86 mg、120 mg至124 mg、120 mg至123 mg、120 mg至122 mg、120 mg至121 mg、121 mg至130 mg、122 mg至129 mg、122 mg至128 mg、122 mg至127 mg、122 mg至126 mg、122 mg至125 mg、122 mg至124 mg、122 mg至123 mg、123 mg至130 mg、123 mg至129 mg、123 mg至128 mg、123 mg至127 mg、123 mg至126 mg、123 mg至125 mg、123 mg至124 mg、124 mg至130 mg、124 mg至129 mg、124 mg至128 mg、124 mg至127 mg、124 mg至126 mg、124 mg至125 mg、125 mg至129 mg、125 mg至128 mg、125 mg至127 mg、125 mg至126 mg、126 mg至130 mg、126 mg至129 mg、126 mg至128 mg、126 mg至127 mg、127 mg至130 mg、127 mg至129 mg、127 mg至128 mg、128 mg至130 mg、128 mg至129 mg及129 mg至130 mg。
實施例108. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：少於300 mg、少於295 mg、少於290 mg、少於285 mg、少於280 mg、少於275 mg、少於270 mg、少於265 mg、少於260 mg、少於255 mg、少於250 mg、少於245 mg、少於240 mg、少於235 mg、少於230 mg、少於225 mg、少於220 mg、少於215 mg、少於210 mg、少於205 mg、少於200 mg、少於195 mg、少於190 mg、少於185 mg、少於180 mg、少於175 mg、少於170 mg、少於165 mg、少於160 mg、少於150 mg、少於145 mg、少於140 mg、少於135 mg、少於130 mg、少於125 mg、少於120 mg、少於115 mg、少於110 mg、少於105 mg、少於100 mg、少於95 mg、少於90 mg、少於85 mg、少於80 mg、少於75 mg、少於70 mg、少於65 mg、少於60 mg、少於55 mg、少於50 mg、少於45 mg、少於40 mg、少於35 mg、少於30 mg、少於25 mg、少於20 mg、少於15 mg、少於10 mg及少於5 mg。
實施例109. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：少於約300 mg、少於約295 mg、少於約290 mg、少於約285 mg、少於約280 mg、少於約275 mg、少於約270 mg、少於約265 mg、少於約260 mg、少於約255 mg、少於約250 mg、少於約245 mg、少於約240 mg、少於約235 mg、少於約230 mg、少於約225 mg、少於約220 mg、少於約215 mg、少於約210 mg、少於約205 mg、少於約200 mg、少於約195 mg、少於約190 mg、少於約185 mg、少於約180 mg、少於約175 mg、少於約170 mg、少於約165 mg、少於約160 mg、少於約150 mg、少於約145 mg、少於約140 mg、少於約135 mg、少於約130 mg、少於約125 mg、少於約120 mg、少於約115 mg、少於約110 mg、少於約105 mg、少於約100 mg、少於約 95 mg、少於約 90 mg、少於約 85 mg、少於約 80 mg、少於約 75 mg、少於約 70 mg、少於約 65 mg、少於約 60 mg、少於約 55 mg、少於約 50 mg、少於約 45 mg、少於約 40 mg、少於約35 mg、少於約30 mg、少於約25 mg、少於約20 mg、少於約15 mg、少於約10 mg及少於約 5 mg。
實施例110. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：至少5 mg、至少10 mg、至少15 mg、至少20 mg、至少25 mg、至少30 mg、至少35 mg、至少40 mg、至少45 mg、至少50 mg、至少55 mg、至少60 mg、至少65 mg、至少70 mg、至少75 mg、至少80 mg、至少85 mg、至少90 mg、至少95 mg、至少約100 mg、至少105 mg、至少115 mg、至少120 mg、至少125 mg、至少130 mg、至少135 mg、至少140 mg、至少145 mg、至少150 mg、至少155 mg、至少160 mg、至少165 mg、至少170 mg、至少175 mg、至少180 mg、至少185、至少190 mg、至少195 mg及至少200 mg。
實施例111. 如實施例51-68中任一項之方法，其中該治療有效量為以下中之任一者：至少約5 mg、至少約10 mg、至少約15 mg、至少約20 mg、至少約25 mg、至少約30 mg、至少約35 mg、至少約40 mg、至少約45 mg、至少約50 mg、至少約55 mg、至少約60 mg、至少約65 mg、至少約70 mg、至少約75 mg、至少約80 mg、至少約85 mg、至少約90 mg、至少約95 mg、至少約100 mg、至少約105 mg、至少約115 mg、至少約120 mg、至少約125 mg、至少約130 mg、至少約135 mg、至少約140 mg、至少約145 mg或至少約150 mg、至少約155 mg、至少約160 mg、至少約165 mg、至少約170 mg、至少約175 mg、至少約180 mg、至少約185、至少約190 mg、至少約195 mg及至少約200 mg。
實施例112. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸每4週一次。
實施例113. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸每8週一次。
實施例114. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸每12週一次。
實施例115. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸每16週一次。
實施例116. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸約每4週一次。
實施例117. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸約每8週一次。
實施例118. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸約每12週一次。
實施例119. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸約每16週一次。
實施例120. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸以下中之任一者：每1週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、每5週一次、每6週一次、每7週一次、每8週一次、每9週一次、每10週一次、每11週一次、每12週一次、每13週一次、每14週一次、每15週一次、每16週一次、每17週一次、每18週一次、每19週一次及每20週一次。
實施例121. 如實施例51-111中任一項之方法，其包含投與該經修飾之寡核苷酸以下中之任一者：約每1週一次、約每2週一次、約每3週一次、約每4週一次、約每5週一次、約每6週一次、約每7週一次、約每8週一次、約每9週一次、約每10週一次、約每11週一次、約每12週一次、約每13週一次、約每14週一次、約每15週一次、約每16週一次、約每17週一次、約每18週一次、約每19週一次及約每20週一次。
實施例122. 一種減少細胞中之FUS RNA之方法，其包含將該細胞與如實施例1-36中任一項之寡聚化合物、如實施例37之寡聚雙螺旋、如實施例38之反義化合物及如實施例39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者接觸，從而減少該細胞中之FUS RNA。
實施例123. 一種減少細胞中之FUS蛋白之方法，其包含將該細胞與如請求項1-36中任一項之寡聚化合物、如請求項37之寡聚雙螺旋、如請求項38之反義化合物及如請求項39-46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者接觸，從而減少該細胞中之FUS蛋白。I. 某些寡核苷酸
在某些實施例中，本文提供包含寡核苷酸之寡聚化合物，該等寡核苷酸由連接之核苷組成。寡核苷酸可為未修飾之寡核苷酸(RNA或DNA)或可為經修飾之寡核苷酸。經修飾之寡核苷酸包含至少一個相對於未修飾之RNA或DNA的修飾。即，經修飾之寡核苷酸包含至少一個未修飾之核苷(包含經修飾之糖部分及/或經修飾之核鹼基)及/或至少一個經修飾之核苷間鍵聯。A. 某些經修飾之核苷
經修飾之核苷包含經修飾之糖部分、或經修飾之核鹼基、或經修飾之糖部分及經修飾之核鹼基兩者。1. 某些糖部分
在某些實施例中，經修飾之糖部分為非雙環經修飾之糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為雙環或三環糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。此類糖替代物可包含一或多個對應於其他類型經修飾之糖部分之取代的取代。
在某些實施例中，經修飾之糖部分為包含具有一或多個取代基之呋喃糖基環之非雙環經修飾之糖部分，該一或多個取代基均不橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成雙環結構。此類非橋聯取代基可位於呋喃糖基之任何位置，包括但不限於在2’、4’及/或5’位之取代基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分之一或多個非橋聯取代基為具支鏈的。合適於非雙環經修飾之糖部分的2’-取代基之實例包括但不限於：2’-F、2’-OCH3 (「OMe」或「O-甲基」)及2’-O(CH2 )2 OCH3 (「MOE」)。在某些實施例中，2’-取代基選自以下：鹵基、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF3 、OCF3 、O-C1 -C10 烷氧基、O-C1 -C10 經取代之烷氧基、O-C1 -C10 烷基、O-C1 -C10 經取代之烷基、S-烷基、N(Rm )-烷基、O-烯基、S-烯基、N(Rm )-烯基、O-炔基、S-炔基、N(Rm )-炔基、O-伸烷基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(Rm )(Rn )或OCH2 C(=O)-N(Rm )(Rn )，其中各Rm 及Rn 獨立地為H、胺基保護基或經取代或未取代之C1 -C10 烷基、以及以下中所述之2’-取代基：Cook等人, U.S. 6,531,584；Cook等人, U.S. 5,859,221；及Cook等人, U.S. 6,005,087。這些2’-取代基之某些實施例可進一步經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基(NO2 )、硫醇、硫烷氧基、硫烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。合適於非雙環經修飾之糖部分的4’-取代基之實例包括但不限於烷氧基(例如 ，甲氧基)、烷基以及Manoharan等人, WO 2015/106128中所述者。合適於非雙環經修飾之糖部分的5’-取代基之實例包括但不限於：5-甲基(R或S)、5’-乙烯基及5’-甲氧基。在某些實施例中，非雙環經修飾之糖部分包含多於一個非橋聯糖取代基例如2’-F-5’-甲基糖部分以及以下中所述之經修飾之糖部分及經修飾之核苷：Migawa等人, WO 2008/101157及Rajeev等人, US2013/0203836。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋聯2’-取代基：F、NH2 、N3 、OCF3 、 OCH3 、O(CH2 )3 NH2 、CH2 CH=CH2 、OCH2 CH=CH2 、OCH2 CH2 OCH3 、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(Rm )(Rn )、O(CH2 )2 O(CH2 )2 N(CH3 )2 及N-取代之乙醯胺(OCH2 C(=O)-N(Rm )(Rn ))，其中各Rm 及Rn 獨立地為H、胺基保護基或者經取代或未取代之C1 -C10 烷基。
在某些實施例中，2’-取代之核苷非雙環經修飾之核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋聯2’-取代基：F、OCF3 、 OCH3 、OCH2 CH2 OCH3 、O(CH2 )2 SCH3 、O(CH2 )2 ON(CH3 )2 、O(CH2 )2 O(CH2 )2 N(CH3 )2 及OCH2 C(=O)-N(H)CH3 (「NMA」)。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環經修飾之核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋聯2’-取代基：F、OCH3 及OCH2 CH2 OCH3 。
某些經修飾之糖部分包含橋聯呋喃糖基環之兩個原子以形成第二環從而得到雙環糖部分的取代基。在某些此類實施例中，雙環糖部分在4’與2’呋喃糖環原子之間包含橋。此類4’至2’橋聯糖取代基之實例包括但不限於：4’-CH2 -2’、4’-(CH2 )2 -2’、4’-(CH2 )3 -2’、4’-CH2 -O-2’ (「LNA」)、4’-CH2 -S-2’、4’-(CH2 )2 -O-2’ (「ENA」)、4’-CH(CH3 )-O-2’ (稱為「限制性乙基」或「cEt」)、4’-CH2 -O-CH2 -2’、4’-CH2 -N(R)-2’、4’-CH(CH2 OCH3 )-O-2’ (「限制性MOE」或「cMOE」) 及其類似物(參見例如 ，Seth等人, U.S. 7,399,845；Bhat等人, U.S. 7,569,686；Swayze等人, U.S. 7,741,457；及Swayze等人, U.S. 8,022,193)、4’-C(CH3 )(CH3 )-O-2’及其類似物(參見例如 ，Seth等人, U.S. 8,278,283)、4’-CH2 -N(OCH3 )-2’及其類似物(參見例如 ，Prakash等人, U.S. 8,278,425)、4’-CH2 -O-N(CH3 )-2’ (參見例如 ，Allerson等人, U.S. 7,696,345及Allerson等人, U.S. 8,124,745)、4’-CH2 -C(H)(CH3 )-2’ (參見例如 ，Zhou等人,J. Org. Chem., 2009,74 , 118-134)、4’-CH2 -C(=CH2 )-2’及其類似物(參見例如 , Seth等人, U.S. 8,278,426)、4’-C(Ra Rb )-N(R)-O-2’、4’-C(Ra Rb )-O-N(R)-2’、4’-CH2 -O-N(R)-2’及4’-CH2 -N(R)-O-2’，其中各R、Ra 及Rb 獨立地為H、保護基或C1 -C12 烷基(參見例如 Imanishi等人, U.S. 7,427,672)。
在某些實施例中，此類4’至2’橋獨立地包含1至4個獨立地選自以下之連接之基團：-[C(Ra )(Rb )]n -、-[C(Ra )(Rb )]n -O-、-C(Ra )=C(Rb )-、-C(Ra )=N-、-C(=NRa )-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(Ra )2 -、-S(=O)x -及-N(Ra )-； 其中： x為0、1或 2； n為1、2、3或 4； 各Ra 及Rb 獨立地為H、保護基、羥基、C1 -C12 烷基、經取代之C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、經取代之C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、經取代之C2 -C12 炔基、C5 -C20 芳基、經取代之C5 -C20 芳基、雜環基、經取代之雜環基、雜芳基、經取代之雜芳基、C5 -C7 脂環基、經取代之C5 -C7 脂環基、鹵素、OJ1 、NJ1 J2 、SJ1 、N3 、COOJ1 、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、CN、磺醯基(S(=O)2 -J1 )或亞磺醯基(S(=O)-J1 )；且 各J1 及J2 獨立地為H、C1 -C12 烷基、經取代之C1 -C12 烷基、C2 -C12 烯基、經取代之C2 -C12 烯基、C2 -C12 炔基、經取代之C2 -C12 炔基、C5 -C20 芳基、經取代之C5 -C20 芳基、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、雜環基、經取代之雜環基、C1 -C12 胺基烷基、經取代之C1 -C12 胺基烷基或保護基。
額外雙環糖部分為此項技術中已知的，參見例如：Freier等人 , Nucleic Acids Research , 1997,25 (22 ), 4429-4443；Albaek等人 , J. Org. Chem ., 2006,71 , 7731-7740；Singh等人,Chem. Commun. , 1998,4 , 455-456；Koshkin等人,Tetrahedron , 1998,54 , 3607-3630；Kumar等人,Bioorg. Med. Chem. Lett ., 1998,8 , 2219-2222；Singh等人,J. Org. Chem ., 1998,63 , 10035-10039；Srivastava等人,J. Am. Chem. Soc ., 2007,129, 8362-8379；Wengel等人, U.S. 7,053,207；Imanishi等人, U.S. 6,268,490；Imanishi等人 U.S. 6,770,748；Imanishi等人, U.S. RE44,779；Wengel等人, U.S. 6,794,499；Wengel等人, U.S. 6,670,461；Wengel等人, U.S. 7,034,133；Wengel等人, U.S. 8,080,644；Wengel等人, U.S. 8,034,909；Wengel等人, U.S. 8,153,365；Wengel等人, U.S. 7,572,582；及Ramasamy等人, U.S. 6,525,191；Torsten等人, WO 2004/106356；Wengel等人, WO 1999/014226；Seth等人, WO 2007/134181；Seth等人, U.S. 7,547,684；Seth等人, U.S. 7,666,854；Seth等人, U.S. 8,088,746；Seth等人, U.S. 7,750,131；Seth等人, U.S. 8,030,467；Seth等人, U.S. 8,268,980；Seth等人, U.S. 8,546,556；Seth等人, U.S. 8,530,640；Migawa等人, U.S. 9,012,421；Seth等人, U.S. 8,501,805；以及Allerson 等人, 美國專利公開案第US2008/0039618號及Migawa 等人, 美國專利公開案第US2015/0191727號。
在某些實施例中，雙環糖部分及併入此類雙糖部分之核苷進一步由異構組態定義。例如，LNA核苷(本文所述)可處於α-L組態或處於β-D組態。
Figure 02_image009
α-L-亞甲氧基(4’-CH2 -O-2’)或α-L-LNA雙環核苷已併入顯示反義活性之寡核苷酸中(Frieden等人,Nucleic Acids Research, 2003,21 , 6365-6372)。因此，雙環核苷之一般描述包括兩種異構組態。除非另外指定，否則當在本文所例示之實施例中鑑別特定雙環核苷(例如 ，LNA或cEt)之位置時，其處於β-D組態。
在某些實施例中，經修飾之糖部分包含一或多個非橋聯糖取代基及一或多個橋聯糖取代基(例如 ，5’-取代及4’-2’橋聯之糖)。
在某些實施例中，經修飾之糖部分為糖替代物。在某些此類實施例中，糖部分之氧原子經例如 硫、碳或氮原子置換。在某些此類實施例中，此類經修飾之糖部分亦包含如本文所述之橋聯及/或非橋聯取代基。例如，某些糖替代物包含4’-硫原子及在2’-位(參見例如 ，Bhat等人, U.S. 7,875,733及Bhat等人, U.S. 7,939,677)及/或5’位之取代。
在某些實施例中，糖替代物包含具有除5個原子之外的環。例如，在某些實施例中，糖替代物包含六員四氫哌喃(「THP」)。此類四氫哌喃可進一步經修飾或取代。包含此類經修飾之四氫哌喃之核苷包括但不限於己醣醇核酸(「HNA」)、anitol核酸(「ANA」)、甘露醇核酸(「MNA」)(參見例如 ，Leumann, CJ.Bioorg. & Med. Chem. 2002,10 , 841-854)、氟HNA:
Figure 02_image011
(「F-HNA」，參見例如 Swayze等人, U.S. 8,088,904；Swayze等人, U.S. 8,440,803；Swayze等人, U.S. 8,796,437；及Swayze等人, U.S. 9,005,906；F-HNA亦可稱為F-THP或3’-氟四氫哌喃)以及包含具有下式之額外經修飾之THP化合物之核苷：
Figure 02_image012
其中，對於該等經修飾之THP核苷中之各者，獨立地： Bx為核鹼基部分； T3 及T4 各自獨立地為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基，或者T3 及T4 之一為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基且T3 及T4 之另一者為H、羥基保護基、連接之結合基團或者5’或3’-末端基； q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 各自獨立地為H、C1 -C6 烷基、經取代之C1 -C6 烷基、C2 -C6 烯基、經取代之C2 -C6 烯基、C2 -C6 炔基或經取代之C2 -C6 炔基；且 R1 及R2 中之各者獨立地選自：氫、鹵素、經取代或未取代之烷氧基、NJ1 J2 、SJ1 、N3 、OC(=X)J1 、OC(=X)NJ1 J2 、NJ3 C(=X)NJ1 J2 及CN，其中X為O、S或NJ1 ，且各J1 、J2 及J3 獨立地為H或C1 -C6 烷基。
在某些實施例中，提供了經修飾之THP核苷，其中q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 各自為氫。在某些實施例中，q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 中之至少一者不為氫。在某些實施例中，q1 、q2 、q3 、q4 、q5 、q6 及q7 中之至少一者為甲基。在某些實施例中，提供了經修飾之THP核苷，其中R1 及R2 之一為F。在某些實施例中，R1 為F且R2 為H，在某些實施例中，R1 為甲氧基且R2 為H，且在某些實施例中，R1 為甲氧基乙氧基且R2 為H。
在某些實施例中，糖替代物包含具有多於5個原子及多於一個雜原子之環。例如，已報導了包含N-嗎啉基糖部分之糖苷及其在寡核苷酸中之使用(參見例如 ，Braasch等人, Biochemistry, 2002,41 , 4503-4510及Summerton等人, U.S. 5,698,685；Summerton等人, U.S. 5,166,315；Summerton等人, U.S. 5,185,444；及Summerton等人, U.S. 5,034,506)。如此處所用，術語「N-嗎啉基」意謂具有以下結構之糖替代物：
Figure 02_image014
。
在某些實施例中，N-嗎啉基可例如藉由添加或改變來自以上N-嗎啉基結構之各種取代基來修飾。此類糖替代物在本文中稱為「經修飾之N-嗎啉基」。
在某些實施例中，糖替代物包含非環部分。包含此類非環糖替代物之核苷及寡核苷酸之實例包括但不限於：肽核酸(「PNA」)、非環丁基核酸(參見例如， Kumar等人,Org. Biomol. Chem. , 2013,11 , 5853-5865)以及Manoharan等人, WO2011/133876中所述之核苷及寡核苷酸。
許多其他雙環及三環糖及糖替代物環系為可用於經修飾之核苷之技術中已知的。2. 某些經修飾之核鹼基
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含未修飾之核鹼基之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個不包含核鹼基之核苷，稱為無鹼基核苷。
在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：5-取代之嘧啶、6-氮嘧啶、烷基或炔基取代之嘧啶、烷基取代之嘌呤以及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-胺基丙基腺嘌呤；5-羥基甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤；2-胺基腺嘌呤；6-N-甲基鳥嘌呤；6-N-甲基腺嘌呤；2-丙基腺嘌呤；2-硫尿嘧啶；2-硫胸腺嘧啶；及2-硫胞嘧啶；5-丙炔基(-C
Figure 02_image016
C-CH3 )尿嘧啶；5-丙炔基胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶；6-偶氮胞嘧啶；6-偶氮胸腺嘧啶；5-核糖基尿嘧啶(偽尿嘧啶)；4-硫尿嘧啶；8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基、8-氮雜、及其他8-取代之嘌呤；5-鹵基特別是5-溴、5-三氟甲基、5-鹵基尿嘧啶及5-鹵基胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤；7-甲基腺嘌呤；2-F-腺嘌呤；2-胺基腺嘌呤；7-去氮鳥嘌呤；7-去氮腺嘌呤；3-去氮鳥嘌呤；3-去氮腺嘌呤；6-N-苯甲醯基腺嘌呤；2-N-異丁醯基鳥嘌呤；4-N-苯甲醯基胞嘧啶；4-N-苯甲醯基尿嘧啶；5-甲基4-N-苯甲醯基胞嘧啶；5-甲基4-N-苯甲醯基尿嘧啶；通用鹼基；疏水性鹼基；雜亂鹼基；大小擴大的鹼基；及氟化鹼基。另外經修飾之核鹼基包括三環嘧啶，諸如1,3-二氮吩噁嗪-2-酮、1,3-二氮吩噻嗪-2-酮及9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮吩噁嗪-2-酮(G-clamp)。經修飾之核鹼基亦可包括嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換者，例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶及2-吡啶酮。另外的核鹼基包括以下中所揭示者：Merigan等人, U.S. 3,687,808；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering , Kroschwitz, J.I.編, John Wiley & Sons, 1990, 858-859；Englisch等人,Angewandte Chemie , 國際版, 1991,30 , 613；Sanghvi, Y.S., 第15章, Antisense Research and Applications , Crooke, S.T.及Lebleu, B.編, CRC Press, 1993, 273-288；及第6及15章,Antisense Drug Technology , Crooke S.T.編, CRC Press, 2008, 163-166及442-443。
教導某些上文所說明之經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基之製備的公開案包括但不限於：Manohara等人, US2003/0158403；Manoharan等人, US2003/0175906；Dinh等人, U.S. 4,845,205；Spielvogel等人, U.S. 5,130,302；Rogers等人, U.S. 5,134,066；Bischofberger等人, U.S. 5,175,273；Urdea等人, U.S. 5,367,066；Benner等人, U.S. 5,432,272；Matteucci等人, U.S. 5,434,257；Gmeiner等人, U.S. 5,457,187；Cook等人, U.S. 5,459,255；Froehler等人, U.S. 5,484,908；Matteucci等人, U.S. 5,502,177；Hawkins等人, U.S. 5,525,711；Haralambidis等人, U.S. 5,552,540；Cook等人, U.S. 5,587,469；Froehler等人, U.S. 5,594,121；Switzer等人, U.S. 5,596,091；Cook等人, U.S. 5,614,617；Froehler等人, U.S. 5,645,985；Cook等人, U.S. 5,681,941；Cook等人, U.S. 5,811,534；Cook等人, U.S. 5,750,692；Cook等人, U.S. 5,948,903；Cook等人, U.S. 5,587,470；Cook等人, U.S. 5,457,191；Matteucci等人, U.S. 5,763,588；Froehler等人, U.S. 5,830,653；Cook等人, U.S. 5,808,027；Cook等人, 6,166,199；及Matteucci等人, U.S. 6,005,096。3. 某些經修飾之核苷間鍵聯
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之核苷可使用任何核苷間鍵聯連接在一起。兩種主要類別的核苷間連接基係藉由存在或不存在磷原子來界定。代表性含磷核苷間鍵聯包括但不限於磷酸酯(其含有磷酸二酯鍵(「P=O」)(亦稱為未修飾或天然存在之鍵聯))、磷酸三酯、甲基磷酸酯、胺基磷酸酯及硫代磷酸酯(「P=S」)以及二硫代磷酸酯(「HS-P=S」)。代表性非含磷核苷間連接基包括但不限於亞甲基甲基亞胺基(-CH2 -N(CH3 )-O-CH2 -)、硫二酯、硫羰胺基甲酸酯(-O-C(=O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-SiH2 -O-)；及N,N’-二甲基肼(-CH2 -N(CH3 )-N(CH3 )-)。與天然存在之磷酸酯鍵聯相比，經修飾之核苷間鍵聯可用於改變(通常增加)寡核苷酸之核酸酶抗性。在某些實施例中，具有掌性原子之核苷間鍵聯可經製備為外消旋混合物或單獨鏡像異構物。製備含磷及非含磷核苷間鍵聯之方法為熟習此項技術者熟知的。
具有掌性中心之代表性核苷間鍵聯包括但不限於烷基磷酸酯及硫代磷酸酯。包含具有掌性中心之核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸可製備為包含無規立構核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸群體或包含處於具體立體化學組態之硫代磷酸酯鍵聯之經修飾之寡核苷酸群體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸群體包含硫代磷酸酯核苷間鍵聯，其中所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯為無規立構。此類經修飾之寡核苷酸可使用導致任意選擇各硫代磷酸酯鍵聯之立體化學組態的合成方法來生成。然而，如熟習此項技術者所理解，各個別寡核苷酸分子之各個別硫代磷酸酯具有定義之立體組態。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸群體富含包含一或多個處於具體的經獨立選擇之立體化學組態之具體硫代磷酸酯核苷間鍵聯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，具體硫代磷酸酯鍵聯之具體組態存在於群體中至少65%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯鍵的特定構型存在於群體中至少70%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯鍵的特定構型存在於群體中至少80%的分子中。在某些實施例中，具體硫代磷酸酯鍵聯之具體組態存在於群體中至少90%的分子中。在某些實施例中，特定硫代磷酸酯鍵的特定構型存在於群體中至少99%的分子中。經修飾之寡核苷酸之此類掌性富集群體可使用此項技術中已知的合成方法生成，例如 以下中所述之方法：Oka等人,JACS 125, 8307 (2003)；Wan等人,Nuc. Acid. Res . 42, 13456 (2014)；及WO 2017/015555。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸群體富含具有至少一個處於(S p)組態之指示硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸群體富含具有至少一個處於(R p)組態之硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，包含(R p)及/或(S p)硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸分別包含下式之一或多者，其中「B」指示核鹼基：
Figure 02_image017
除非另外指示，否則本文所述之經修飾之寡核苷酸之掌性核苷間鍵聯可為無規立構或處於具體立體化學組態。
中性核苷間鍵聯包括但不限於磷酸三酯、甲基磷酸酯、MMI (3’-CH2 -N(CH3 )-O-5’)、醯胺-3 (3’-CH2 -C(=O)-N(H)-5’)、醯胺-4 (3’-CH2 -N(H)-C(=O)-5’)、甲乙縮醛(formacetal)(3’-O-CH2 -O-5’)、甲氧基丙基及硫甲乙縮醛(3’-S-CH2 -O-5’)。另外中性核苷間鍵聯包括包含矽氧烷(二烷基矽氧烷)、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯及醯胺之非離子型鍵聯(參見例如：Carbohydrate Modifications in Antisense Research ; Y.S. Sanghvi及P.D. Cook編, ACS Symposium Series 580; 第3及4章, 40-65)。另外中性核苷間鍵聯包括包含混合之N、O、S及CH2 組分部分之非離子型鍵聯。B. 某些模體
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之糖部分之經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基之經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。在此類實施例中，經修飾之寡核苷酸之經修飾、未修飾及經不同修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯定義模式或模體。在某些實施例中，糖部分、核鹼基及核苷間鍵聯之模式各自彼此獨立。因此，經修飾之寡核苷酸可藉由其糖模體、核鹼基模體及/或核苷間鍵聯模體進行描述(如本文所用，核鹼基模體描述獨立於核鹼基序列對核鹼基進行之修飾)。1. 某些糖模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含一或多種類型的以定義之模式或糖模體之形式沿寡核苷酸或其區排列的經修飾之糖及/或未修飾之糖部分。在某些情況下，此類糖模體包括但不限於本文所討論之任何糖修飾。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有間隔體模體之區或由其組成，該間隔體模體藉由兩個外部區或「側翼」及中央或內部區或「間隙」所定義。間隔體模體之三個區(5’-側翼區、間隙區及3’-側翼區)形成連續的核苷序列，其中各側翼之核苷之至少一些糖部分不同於間隙之核苷之至少一些糖部分。特定言之，至少各側翼之最靠近間隙之核苷(5’-側翼之3’-最末端核苷及3’-側翼之5’-最末端核苷)的糖部分不同於相鄰間隙核苷之糖部分，因此定義側翼與間隙之間的邊界(即，側翼/間隙接點)。在某些實施例中，間隙內之糖部分彼此相同。在某些實施例中，間隙包括一或多個具有糖部分之核苷，該糖部分不同於間隙之一或多個其他核苷之糖部分。在某些實施例中，兩個側翼之糖模體彼此相同(對稱間隔體)。在某些實施例中，5’-側翼之糖模體不同於3’-側翼之糖模體(不對稱間隔體)。
在某些實施例中，間隔體之側翼包含1-5個核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之各核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少一個核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少兩個核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少三個核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之至少四個核苷為經修飾之核苷。
在某些實施例中，間隔體之間隙包含7-12個核苷。在某些實施例中，間隔體之間隙之各核苷為未修飾之2’-去氧核苷。在某些實施例中，間隔體之間隙之至少一個核苷為經修飾之核苷。
在某些實施例中，間隔體為去氧間隔體。在某些實施例中，各側翼/間隙接點之間隙側的核苷為未修飾之2’-去氧核苷，且各側翼/間隙接點之側翼側的核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，間隙之各核苷為未修飾之2’-去氧核苷。在某些實施例中，間隔體之各側翼之各核苷為經修飾之核苷。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有經完全修飾之糖模體之區或由其組成。在此類實施例中，經修飾之寡核苷酸之經完全修飾之區之各核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，整個經修飾之寡核苷酸之各核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有經完全修飾之糖模體之區或由其組成，其中經完全修飾之區內之各核苷包含相同經修飾之糖部分，本文中稱為經均勻修飾之糖模體。在某些實施例中，經完全修飾之寡核苷酸為經均勻修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，經均勻修飾之寡核苷酸之各核苷包含相同的2’-修飾。
在本文中，間隔體之三個區之長度(核苷數)可使用記號編[5’-側翼中之核苷數]-[間隙中之核苷數]-[3’-側翼中之核苷數]來提供。因此，5-10-5間隔體由各側翼中之5個連接之核苷及間隙中之10個連接之核苷組成。在特定修飾遵循此類命名法之情況下，該修飾為各側翼之各糖部分中之修飾，且間隙核苷包含未修飾之去氧核苷糖。因此，5-10-5 MOE間隔體由5’-側翼中之5個連接之MOE修飾之核苷、間隙中之10個連接之去氧核苷及3’-側翼中之5個連接之MOE核苷組成。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為5-10-5 MOE間隔體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為3-10-3 BNA間隔體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為3-10-3 cEt間隔體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為3-10-3 LNA間隔體。2. 某些核鹼基模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義之模式或模體之形式沿寡核苷酸或其區排列的經修飾及/或未修飾之核鹼基。在某些實施例中，各核鹼基經修飾。在某些實施例中，沒有核鹼基經修飾。在某些實施例中，各嘌呤或各嘧啶經修飾。在某些實施例中，各腺嘌呤經修飾。在某些實施例中，各鳥嘌呤經修飾。在某些實施例中，各胸腺嘧啶經修飾。在某些實施例中，各尿嘧啶經修飾。在某些實施例中，各胞嘧啶經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸中之一些或全部胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。在某些實施例中，全部胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶，且經修飾之寡核苷酸之全部其他核鹼基為未修飾之核鹼基。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基之區塊。在某些此類實施例中，區塊在寡核苷酸之3’-末端處。在某些實施例中，區塊在寡核苷酸之3’-末端之3個核苷內。在某些實施例中，區塊在寡核苷酸之5’-末端處。在某些實施例中，區塊在寡核苷酸之5’-末端之3個核苷內。
在某些實施例中，具有間隔體模體之寡核苷酸包含有包含經修飾之核鹼基之核苷。在某些此類實施例中，一個包含經修飾之核鹼基之核苷在具有間隔體模體之寡核苷酸之中央間隙中。在某些此類實施例中，該核苷之糖部分為2’-去氧核糖基部分。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-硫嘧啶及5-丙炔嘧啶。3. 某些核苷間鍵聯模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以定義之模式或模體之形式沿寡核苷酸或其區排列的經修飾及/或未修飾之核苷間鍵聯。在某些實施例中，各核苷間連接基為磷酸二酯核苷間鍵聯(P=O)。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間連接基為硫代磷酸酯核苷間鍵聯(P=S)。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，各硫代磷酸酯核苷間鍵聯獨立地選自無規立構硫代磷酸酯、(S p)硫代磷酸酯及(R p)硫代磷酸酯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體，且間隙內之核苷間鍵聯全部經修飾。在某些此類實施例中，側翼中之一些或全部核苷間鍵聯為未修飾之磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，末端核苷間鍵聯經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隔體，且核苷間鍵聯模體在至少一個側翼中包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯，其中該至少一個磷酸二酯鍵聯不為末端核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些此類實施例中，所有硫代磷酸酯鍵聯為無規立構。在某些實施例中，側翼中之所有硫代磷酸酯鍵聯為(S p)硫代磷酸酯，且間隙包含至少一個S p、S p、R p模體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸群體富集包含此類核苷間鍵聯模體之經修飾之寡核苷酸。C. 某些經修飾之寡核苷酸
在某些實施例中，將上文修飾(糖、核鹼基、核苷間鍵聯)併入經修飾之寡核苷酸中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特徵為其修飾模體及總體長度。在某些實施例中，此類參數各自彼此獨立。因此，除非另外指示，否則具有間隔體糖模體之寡核苷酸之各核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾且可遵循或不遵循糖修飾之間隔體修飾模式。例如，糖間隔體之側翼區內的核苷間鍵聯可彼此相同或不同且可與糖模體之間隙區之核苷間鍵聯相同或不同。同樣，此類糖間隔體寡核苷酸可包含一或多個獨立於糖修飾之間隔體模式的經修飾之核鹼基。除非另外指示，否則所有修飾均獨立於核鹼基序列。D. 某些經修飾之寡核苷酸群體
群體之所有經修飾之寡核苷酸具有相同分子式的經修飾之寡核苷酸群體可為無規立構群體或掌性富集群體。無規立構群體中所有經修飾之寡核苷酸之所有掌性中心均為無規立構。在掌性富集群體中，群體之經修飾之寡核苷酸中至少一個具體掌性中心不為無規立構。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分，且所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為無規立構。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分及至少一個處於具體立體化學組態的具體硫代磷酸酯核苷間鍵聯。E. 核鹼基序列
在某些實施例中，藉由核鹼基序列進一步描述寡核苷酸(未修飾或經修飾之寡核苷酸)。在某些實施例中，寡核苷酸具有與第二寡核苷酸或鑑別之參考核酸(諸如靶核酸)互補的核鹼基序列。在某些此類實施例中，寡核苷酸之區具有與第二寡核苷酸或鑑別之參考核酸(諸如靶核酸)互補的核鹼基序列。在某些實施例中，寡核苷酸之區或整個長度之核鹼基序列與第二寡核苷酸或核酸(諸如靶核酸)至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補。II. 某些寡聚化合物
在某些實施例中，本文提供寡聚化合物，其由寡核苷酸(經修飾或未修飾)及視情況一或多個結合基團及/或端基組成。結合基團由一或多個結合部分及將結合部分連接至寡核苷酸的結合連接子組成。結合基團可連接至寡核苷酸之任一末端或兩個末端及/或連接在任何內部位置。在某些實施例中，結合基團連接至經修飾之寡核苷酸之核苷之2’-位。在某些實施例中，連接至寡核苷酸之任一末端或兩個末端的結合基團為端基。在某些此類實施例中，結合基團或端基連接在寡核苷酸之3’-末端及/或5’-末端。在某些此類實施例中，結合基團(或端基)連接在寡核苷酸之3’-末端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之3’-末端附近。在某些實施例中，結合基團(或端基)連接在寡核苷酸之5’-末端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之5’-末端附近。
端基之實例包括但不限於結合基團、加帽基團、磷酸酯部分、保護基、經修飾或未修飾之核苷及二或更多個獨立地經修飾或未經修飾之核苷。A. 某些結合基團
在某些實施例中，寡核苷酸共價連接至一或多個結合基團。在某些實施例中，結合基團修改所連接之寡核苷酸之一或多種性質，包括但不限於藥效學性質、藥物動力學性質、穩定性、結合性、吸收性、組織分佈、細胞分佈、細胞吸收、電荷及清除率。在某些實施例中，結合基團為所連接之寡核苷酸賦予新的性質，例如 能夠偵測寡核苷酸之螢光團或信息基團。先前已描述某些結合基團及結合部分，例如：膽固醇部分(Letsinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556)；膽酸(Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett ., 1994,4 , 1053-1060)；硫醚，例如 己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人,Ann. N.Y. Acad. Sci ., 1992,660 , 306-309；Manoharan等人,Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993,3 , 2765-2770)；硫膽固醇(Oberhauser等人,Nucl. Acids Res ., 1992,20 , 533-538)；脂族鏈，例如 十二烷二醇或十一基(Saison-Behmoaras等人,EMBO J., 1991,10 , 1111-1118；Kabanov等人,FEBS Lett ., 1990,259 , 327-330；Svinarchuk等人,Biochimie , 1993,75 , 49-54)；磷脂，例如 二-十六基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六基-外消旋-甘油-3-H-磷酸三乙銨(Manoharan等人,Tetrahedron Lett ., 1995,36 , 3651-3654；Shea等人,Nucl. Acids Res. , 1990,18 , 3777-3783)；多胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人,Nucleosides & Nucleotides , 1995,14 , 969-973)；或金剛烷乙酸，棕櫚基部分(Mishra等人,Biochim. Biophys. Acta , 1995,1264, 229-237)；十八胺或己胺基-羰基-氧基膽固醇部分(Crooke等人,J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996,277 , 923-937)；生育酚基團(Nishina等人,Molecular Therapy Nucleic Acids , 2015,4 , e220；及Nishina等人,Molecular Therapy, 2008,16 , 734-740)；或GalNAc叢集(例如 ，WO2014/179620)。1. 結合部分
結合部分包括但不限於嵌入物、報告分子、多胺、聚醯胺、肽、醣、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫膽固醇、膽酸部分、葉酸、脂質、磷脂、生物素、吩嗪、啡啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光素、羅丹明、香豆素、螢光團及染料。
在某些實施例中，結合部分包含活性原料藥，例如阿司匹靈、華法林、丁二苯吡唑二酮、伊布洛芬、舒洛芬、芬布芬、可洛酚、(S )-(+)-普拉洛芬、卡普芬、丹醯基肌胺酸、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德、氟芳鈉蜜酸、亞葉酸、苯丙噻二嗪(benzothiadiazide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、二氮呯、吲哚美辛(indo­methicin)、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺藥、抗糖尿病藥、抗菌劑或抗生素。2. 結合連接子
結合部分透過結合連接子連接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中，結合連接子為單化學鍵(即，結合部分透過單鍵直接連接至寡核苷酸)。在某些實施例中，結合連接子包含鏈結構，諸如烴基鏈；或重複單元之寡聚物，重複單元諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元。
在某些實施例中，結合連接子包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥胺基。在某些此類實施例中，結合連接子包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺基及醚基。在某些實施例中，結合連接子包含選自以下之基團：烷基及醯胺基。在某些實施例中，結合連接子包含選自以下之基團：烷基及醚基。在某些實施例中，結合連接子包含至少一個磷部分。在某些實施例中，結合連接子包含至少一個磷酸酯基。在某些實施例中，結合連接子包括至少一個中性連接基。
在某些實施例中，結合連接子包括上文所述之結合連接子，為雙官能連接部分，例如 ，此項技術中已知可用於將結合基團連接至親體化合物的結合連接子，諸如本文所提供之寡核苷酸。一般而言，雙官能連接部分包含至少兩個官能基。官能基之一經選擇以結合至親體化合物之具體位點，且另一官能基經選擇以結合至結合基團。雙官能連接部分中所用之官能基之實例包括但不限於用於與親核基團反應的親電子劑及用於與親電子基團反應的親核劑。在某些實施例中，雙官能連接部分包含一或多個選自以下之基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基。
結合連接子之實例包括但不限於吡咯啶、8-胺基-3,6-二噁辛酸(ADO)、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他結合連接子包括但不限於經取代或未取代之C1 -C10 烷基、經取代或未取代之C2 -C10 烯基或經取代或未取代之C2 -C10 炔基，其中較佳取代基之非限制性清單包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基、硫醇、硫烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。
在某些實施例中，結合連接子包含1-10個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含2-5個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子精確地包含3個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含TCA模體。在某些實施例中，此類連接子-核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，此類連接子-核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，連接子-核苷未經修飾。在某些實施例中，連接子-核苷包含視情況保護之雜環鹼基，其選自嘌呤、經取代之嘌呤、嘧啶或經取代之嘧啶。在某些實施例中，可裂解部分為選自以下之核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基-胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常期望連接子-核苷在化合物到達目標組織之後從寡聚化合物裂解。據此，連接子-核苷通常連接彼此連接且透過可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此類可裂解鍵為磷酸二酯鍵。
在本文中，連接子-核苷不視為寡核苷酸之一部分。據此，在寡聚化合物包含由指定數目或範圍的連接之核苷組成及/或與參考核酸具有指定互補性百分比的寡核苷酸且寡聚化合物亦包含連接子-核苷的實施例中，那些連接子-核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定參考核酸之寡核苷酸之互補性百分比。例如，寡聚化合物可包含(1)由8-30個核苷組成之經修飾之寡核苷酸及(2)包含1-10個與經修飾之寡核苷酸之核苷連續的連接子-核苷。此一寡聚化合物中連續連接之核苷之總數多於30。替代地，寡聚化合物可包含由8-30個核苷組成且無結合基團的經修飾之寡核苷酸。此一寡聚化合物中連續連接之核苷之總數不多於30。除非另外指示，否則結合連接子包含不多於10個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含不多於5個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含不多於3個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含不多於2個連接子-核苷。在某些實施例中，結合連接子包含不多於1個連接子-核苷。
在某些實施例中，期望結合基團自寡核苷酸裂解。例如，在某些情形下，包含具體結合部分之寡聚化合物較佳由具體細胞型吸收，但是一旦寡聚化合物經吸收，期望該結合基團裂解以釋放未結合或親體寡核苷酸。因此，某些結合連接子可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中，可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中，可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或多於四個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分在細胞或亞細胞區室諸如溶酶體內經選擇性裂解。在某些實施例中，可裂解部分由內源性酶諸如核酸酶選擇性裂解。
在某些實施例中，可裂解鍵選自：醯胺鍵、酯鍵、醚鍵、磷酸二酯之一個或兩個酯鍵、磷酸酯鍵、胺甲酸酯鍵或二硫鍵。在某些實施例中，可裂解鍵為磷酸二酯之一個或兩個酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中，可裂解部分為寡核苷酸與結合部分或結合基團之間的磷酸酯鍵聯。
在某些實施例中，可裂解部分包含一或多個連接子-核苷或由其組成。在某些此類實施例中，該一或多個連接子-核苷彼此連接及/或透過可裂解鍵連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此類可裂解鍵為未修飾之磷酸二酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分為2’-去氧核苷，其藉由磷酸酯核苷間鍵聯連接至寡核苷酸之3’或5’-末端核苷且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯鍵聯共價連接至結合連接子或結合部分之其餘部分。在某些此類實施例中，可裂解部分為2’-去氧腺苷。B. 某些端基
在某些實施例中，寡聚化合物包含一或多個端基。在某些此類實施例中，寡聚化合物包含穩定化5’-磷酸酯。穩定化5’-磷酸酯包括但不限於5’-膦酸酯，包括但不限於5’-乙烯基膦酸酯。在某些實施例中，端基包含一或多個無鹼基核苷及/或反向核苷。在某些實施例中，端基包含一或多個2’-連接之核苷。在某些此類實施例中，2’-連接之核苷為無鹼基核苷。III. 寡聚雙螺旋
在某些實施例中，本文所述之寡聚化合物包含寡核苷酸，其具有與靶核酸之核鹼基序列互補的核鹼基序列。在某些實施例中，寡聚化合物與第二寡聚化合物配對以形成寡聚雙螺旋。此類寡聚雙螺旋包含第一寡聚化合物及第二寡聚化合物，該第一寡聚化合物具有與靶核酸互補之區，該第二寡聚化合物具有與該第一寡聚化合物互補之區。在某些實施例中，寡聚雙螺旋之第一寡聚化合物包含以下或由以下組成：(1)經修飾或未修飾之寡核苷酸及視情況結合基團及(2)第二經修飾或未修飾之寡核苷酸及視情況結合基團。寡聚雙螺旋之任一或兩種寡聚化合物可包含結合基團。寡聚雙螺旋之各寡聚化合物之寡核苷酸可包括非互補突出(overhanging)核苷。IV. 反義活性
在某些實施例中，寡聚化合物及寡聚雙螺旋能夠與靶核酸雜交，產生至少一種反義活性；此類寡聚化合物及寡聚雙螺旋為反義化合物。在某些實施例中，當反義化合物在標準細胞檢定中降低或抑制靶核酸之量或活性25%或更多時，其具有反義活性。在某些實施例中，反義化合物選擇性影響一或多種靶核酸。此類反義化合物包含核鹼基序列，該核鹼基序列與一或多種靶核酸雜交，產生一或多種所要反義活性，且不與一或多種非靶核酸雜交或不以此產生顯著非所要反義活性之方式與一或多種非靶核酸雜交。
在某些反義活性中，反義化合物與靶核酸之雜交產生裂解靶核酸的蛋白之補充。例如，某些反義化合物導致靶核酸之核糖核酸酶H介導之裂解。核糖核酸酶H為裂解RNA:DNA雙螺旋之RNA股的細胞內切酶。此一RNA:DNA雙螺旋中之DNA不一定為未修飾之DNA。在某些實施例中，本文描述足夠「像DNA」以引出核糖核酸酶H活性的反義化合物。在某些實施例中，間隔體之間隙中之一或多個不像DNA的核苷為耐受的。
在某些反義活性中，反義化合物或反義化合物之一部分經加載至RNA誘導之靜默複合物(RISC)中，最終導致靶核酸之裂解。例如，某些反義化合物導致靶核酸由Argonaute裂解。加載至RISC中的反義化合物為RNAi化合物。RNAi化合物可為雙股化合物(siRNA)或單股化合物(ssRNA)。
在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交不導致裂解靶核酸的蛋白之補充。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致靶核酸之剪接之改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致靶核酸與蛋白或另一核酸之間的結合相互作用之抑制。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致靶核酸之轉譯之改變。
可直接或間接地觀察到反義活性。在某些實施例中，觀察或偵測反義活性涉及觀察或偵測靶核酸或此類靶核酸所編碼之蛋白之量之變化、核酸或蛋白之剪接變異體之比率之變化及/或細胞或個體中之表現型變化。V. 某些靶核酸
在某些實施例中，寡聚化合物包含以下寡核苷酸或由其組成，該寡核苷酸包含與靶核酸互補的區。在某些實施例中，靶核酸為內源RNA分子。在某些實施例中，靶核酸編碼蛋白。在某些此類實施例中，靶核酸分子係選自：成熟RNA及前驅mRNA，包括內含子區、外顯子區及未轉譯區。在某些實施例中，靶RNA為成熟mRNA。在某些實施例中，靶核酸為前驅mRNA。在某些實施例中，靶核酸為反轉錄基因(retrogene)之RNA轉錄產物。在某些實施例中，靶核酸為非編碼RNA。在某些此類實施例案中，靶非編碼RNA選自：長非編碼RNA、短非編碼RNA、內含子RNA分子。A. 與靶核酸之互補性 / 錯配
有可能引入錯配鹼基而不消除活性。例如，Gautschi等人(J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, 2001年3月)表明與bcl-2 mRNA具有100%互補性且與bcl-xL mRNA具有3個錯配之寡核苷酸在體外 及體內減少bcl-2及bcl-xL之表現的能力。此外，此寡核苷酸展現有效的體內抗腫瘤活性。Maher及Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)分別測試一系列具有14個核鹼基之串聯寡核苷酸以及包含該等串聯寡核苷酸中之兩者或三者之序列的具有28個及42個核鹼基之寡核苷酸在兔網狀紅血球檢定中阻止人類DHFR轉譯的能力。3種具有14個核鹼基之寡核苷酸中之各者單獨能夠抑制轉譯，但程度相較於具有28個或42個核鹼基之寡核苷酸而言較適中。
在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸互補。在某些實施例中，寡核苷酸與靶核酸99%、95%、90%、85%或80%互補。在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸至少80%互補，且包含與靶核酸100%或完全互補的區。在某些實施例中，完全互補之區之長度為6至20、10至18或18至20個核鹼基。
在某些實施例中，寡核苷酸包含一或多個相對於靶序列錯配的核鹼基。在某些實施例中，針對靶標的反義活性因此類錯配而降低，但是針對非靶標的活性降低的量較大。因此，在某些實施例中，寡核苷酸之選擇性經改良。在某些實施例中，錯配特別位於具有間隔體模體之寡核苷酸內。在某些實施例中，錯配在自間隔區之5’-末端之1、2、3、4、5、6、7或8位。在某些實施例中，錯配在自間隔區之3’-末端之9、8、7、6、5、4、3、2、1位。在某些實施例中，錯配在自側翼區之5’-末端之1、2、3或4位。在某些實施例中，錯配在自側翼區之3’-末端之4、3、2或1位。B. FUS
在某些實施例中，寡聚化合物包含以下寡核苷酸或由其組成，該寡核苷酸包含與FUS核酸互補的區。在某些實施例中，FUS核酸具有SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號: NM_004960.3)中所示之序列。在某些實施例中，FUS核酸具有SEQ ID NO: 2 (GENBANK登錄號: NC_000016.10，自核苷酸31176001至31198000截斷)中所示之序列。
在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補的寡聚化合物能夠減少細胞中之FUS RNA。在某些實施例中，與SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2互補的寡聚化合物能夠還原細胞中的FUS蛋白。在某些實施例中，細胞在體外 。在某些實施例中，細胞在個體中。在某些實施例中，寡聚化合物由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，當將與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補之寡聚化合物引入至個體中之細胞時，其能夠改善神經退化性疾患之一或多種症狀或標誌。ALS之示範性症狀及標誌包括但不限於肌肉無力及疲勞、口齒不清、抽搐、痙攣及CNS中之蛋白聚集。FTLD之示範性症狀及標誌包括但不限於說話困難及行為異常。
在某些實施例中，當向個體之CSF投與與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補之寡聚化合物時，該寡聚化合物能夠減少個體之CSF中之FUS RNA之可偵測量。FUS RNA之可偵測量可減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中，當向個體之CSF投與與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補之寡聚化合物時，該寡聚化合物能夠減少個體之CSF中之FUS蛋白之可偵測量。FUS蛋白之可偵測量可減少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。VI. 某些化合物 化合物編號1043680
在某些實施例中，化合物編號1043680之特徵為5-10-5 MOE間隔體，其具有序列(從5’至3’) GTTTATCTGAATTCGCCATA (本文中呈SEQ ID NO: 12併入)，其中核苷1-5及16-20中之各者為2’-O-甲氧基乙基核苷，且核苷6-15中之各者為β-D-去氧核苷，其中核苷2至3、3至4、4至5、5至6、16至17及17至18之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯且核苷1至2、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15及15至16之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1043680由以下化學記號描述：Ges Teo Teo Teo Aeo Tds mCds Tds Gds Ads Ads Tds Tds mCds Gds mCeo mCeo Aes Tes Ae (SEQ ID NO: 12)；其中A = 腺嘌呤，mC = 5’-甲基胞嘧啶，G = 鳥嘌呤，T = 胸腺嘧啶 ，e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖，d = 2’-去氧核糖，s = 硫代磷酸酯核苷間鍵，且o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1043680由以下化學結構或其鹽描述：
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 12)。
在某些實施例中，化合物編號1043680之鈉鹽由以下化學結構描述：
Figure 02_image005
(SEQ ID NO: 12)。 化合物編號1044030
在某些實施例中，化合物編號1044030之特徵為5-10-5 MOE間隔體，其具有序列(從5’至3’) GCAATGTCACCTTTCATACC (本文中呈SEQ ID NO: 13併入)，其中核苷1-5及16-20中之各者為2’-O-甲氧基乙基核苷，且核苷6-15中之各者為β-D-去氧核苷，其中核苷2至3、3至4、4至5、5至6、16至17及17至18之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯且核苷1至2、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15及15至16之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中各胞嘧啶為5’-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，化合物編號1044030由以下化學記號描述：Ges Ceo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Adsd mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID NO: 13)；其中A = 腺嘌呤，mC = 5’-甲基胞嘧啶，G = 鳥嘌呤，T = 胸腺嘧啶 ，e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖，d = 2’-去氧核糖，s = 硫代磷酸酯核苷間鍵，且o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，化合物編號1044030由以下化學結構或其鹽描述：
Figure 02_image003
(SEQ ID NO: 13)。
在某些實施例中，化合物編號1044030之鈉鹽由以下化學結構描述：
Figure 02_image007
(SEQ ID NO: 13)。VII. 某些熱點區
在某些實施例中，SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841包含熱點區。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841互補。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之長度為20個核鹼基。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為間隔體。在某些實施例中，間隔體為MOE間隔體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。
核鹼基序列SEQ ID NO: 34、35、111、112、188、265、342及418與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841互補。
化合物編號：1043394、1043395、1043396、1043397、1043398、1043399、1043400及1043401之核鹼基序列與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841互補。
在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841互補之經修飾之寡核苷酸在標準細胞檢定中達成體外FUS mRNA之平均83%減少。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786-1,841互補之經修飾之寡核苷酸在標準細胞檢定中達成體外FUS mRNA之最小62%減少。VIII. 某些醫藥組合物
在某些實施例中，本文描述包含一或多種寡聚化合物之醫藥組合物。在某些實施例中，該一或多種寡聚化合物各自由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。在某些實施例中，醫藥組合物包含無菌鹽水溶液及一或多種寡聚化合物或由其組成。在某些實施例中，無菌鹽水為醫藥級鹽水。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及無菌水或由其組成。在某些實施例中，無菌水為醫藥級水。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或由其組成。在某些實施例中，無菌PBS為醫藥級PBS。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及人工腦脊髓液或由其組成。在某些實施例中，人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中，醫藥組合物包含經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液。在某些實施例中，醫藥組合物由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，醫藥組合物基本上由經修飾之寡核苷酸及人工腦脊髓液組成。在某些實施例中，人工腦脊髓液為醫藥級。
在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及一或多種賦形劑。在某些實施例中，賦形劑選自：水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。
在某些實施例中，寡聚化合物可與醫藥學上可接受之活性及/或惰性物質混合以用於製備醫藥組合物或調配物。組合物及用於調配醫藥組合物之方法取決於許多準則，包括但不限於投與途徑、疾病程度或所投與之劑量。
在某些實施例中，包含寡聚化合物之醫藥組合物涵蓋寡聚化合物之任何醫藥學上可接受之鹽、寡聚化合物之酯或此類酯之鹽。在某些實施例中，在向個體包括人類投與時，包含有包含一或多種寡核苷酸之寡聚化合物之醫藥組合物能夠提供(直接或間接地)生物活性代謝物或其殘餘物。據此，例如，本揭露亦關於寡聚化合物之醫藥學上可接受之鹽、前藥、此類前藥之醫藥學上可接受之鹽及其他生物等效物。合適之醫藥學上可接受之鹽包括但不限於鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸的結合基團，其中結合基團藉由體內的內源核酸酶經裂解。
脂質部分已用於各種方法中之核酸治療劑中。在某些此類方法中，將核酸諸如寡聚化合物引入至由陽離子脂質及中性脂質之混合物製成之預成型脂質體或脂複合體(lipoplex)中。在某些方法中，在無中性脂質存在之情況下形成具有單陽離子脂質或聚陽離子脂質之DNA複合體。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向具體細胞或組織之分佈。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向脂肪組織之分佈。在某些實施例中，脂質部分經選擇以增加藥劑向肌肉組織之分佈。
在某些實施例中，醫藥組合物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體及乳液。某些遞送系統可用於製備某些醫藥組合物，包括包含疏水性化合物之醫藥組合物。在某些實施例中，使用某些有機溶劑，諸如二甲亞碸。
在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種經設計以將本發明之一或多種藥劑遞送至特定組織或細胞型的組織特異性遞送分子。例如，在某些實施例中，醫藥組合物包括包覆有組織特異性抗體之脂質體。
在某些實施例中，醫藥組合物包含共溶劑系統。某些此類共溶劑系統包含例如苄醇、非極性界面活性劑、水可混溶性有機聚合物及水相。在某些實施例中，此類共溶劑系統用於疏水性化合物。此一共溶劑系統之非限制性實例為VPD共溶劑系統，其為包含3% w/v苄醇、8% w/v非極性界面活性劑Polysorbate 80™及65% w/v聚乙二醇300之絕對乙醇溶液。此類共溶劑系統之比例可在不顯著改變其溶解度及毒性特徵之情況下顯著變化。此外，共溶劑組分之身份可變化：例如，可使用其他界面活性劑替代Polysorbate 80™；聚乙二醇之大小分率可變化；其他生物相容性聚合物可置換聚乙二醇，例如 聚乙烯吡咯啶酮；且其他糖或多醣可取代右旋糖。
在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於經口投與。在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於經頰投與。在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於藉由注射(例如 靜脈內、皮下、肌肉內、鞘內(IT)、腦室內(ICV)等)投與。在某些此類實施例中，醫藥組合物包含載劑且於水溶液中調配，諸如水或生理上相容之緩衝液，諸如漢克氏溶液(Hanks’s solution)、林格氏溶液(Ringer’s solution)或生理鹽水緩衝液。在某些實施例中，包括其他成分(例如 有助於溶解或充當防腐劑之成分)。在某些實施例中，可注射懸液劑係使用適當液體載劑、懸浮劑及其類似物製備。某些注射用醫藥組合物係以單位劑型存在於例如 安瓿或多劑量容器中。某些注射用醫藥組合物為於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。某些適用於注射用醫藥組合物中之溶劑包括但不限於親脂性溶劑及脂肪油諸如芝麻油、合成脂肪酸酯諸如油酸乙酯或三酸甘油酯以及脂質體。
在某些條件下，本文所述之某些化合物充當酸。例如，儘管化合物編號1044030可以以質子化(游離酸)形式或離子化且結合陽離子(鹽)形式來繪製或描述，但是化合物編號1044030之水溶液以在此類形式之間平衡的狀態存在。例如，水溶液中之化合物編號1044030之磷酸酯鍵聯以在游離酸、陰離子及鹽形式之間平衡的狀態存在。除非另外指示，否則術語「化合物編號1044030」意欲包括所有此類形式。此外，化合物編號1044030具有若干此類鍵聯，各鍵聯處於平衡狀態。因此，化合物編號1044030以在多個位置處之形式之整體形式存在於溶液中，該多個位置處之形式全部為平衡狀態。術語「化合物編號1044030」意欲包括所有此類形式。所繪製之結構必然描繪單一形式。然而，除非另外指示，否則此類圖式同樣意欲包括對應形式。在本文中，描繪化合物編號1044030之遊離酸(後接術語「或其鹽」)的結構明確包括可完全或部分質子化/去質子化/結合陽離子之所有此類形式。在某些情況下，鑑別出一或多個特定陽離子。
在某些實施例中，化合物在具有鈉之水溶液中。在某些實施例中，化合物在具有鉀之水溶液中。在某些實施例中，化合物在PBS中。在某些實施例中，化合物在水中。在某些此類實施例中，用NaOH及/或HCl調整溶液之pH以達成所要pH。
在本文中，描述了某些特定劑量。為清楚起見且舉例而言，以毫克為單位之化合物編號1044030劑量指示化合物編號1044030之遊離酸形式之質量。如上文所述，在水溶液中，遊離酸與陰離子及鹽形式處於平衡狀態。然而，出於計算劑量之目的，假設化合物編號1044030呈無溶劑、無乙酸鈉、無水遊離酸而存在。例如，當化合物編號1044030在包含鈉之溶液(例如鹽水)中時，化合物編號1044030可經部分或完全去質子化且結合Na+離子。然而，質子之質量仍然計入劑量之重量，且Na+離子之質量不計入劑量之重量。因此，例如，100 mg化合物編號1044030之劑量等於重100 mg的經完全質子化之分子之數目。這等效於106 mg無溶劑、無乙酸鈉、無水鈉化(sodiated)化合物編號1044030。IX. 某些劑量
在某些實施例中，本文描述向個體投與治療有效量之本文所揭示之化合物之方法。在某些實施例中，治療有效量為50 mg。在某些實施例中，治療有效量為約50 mg。在某些實施例中，治療有效量為60 mg。在某些實施例中，治療有效量為約60 mg。在某些實施例中，治療有效量為70 mg。在某些實施例中，治療有效量為約70 mg。在某些實施例中，治療有效量為80 mg。在某些實施例中，治療有效量為約80 mg。在某些實施例中，治療有效量為90 mg。在某些實施例中，治療有效量為約90 mg。在某些實施例中，治療有效量為100 mg。在某些實施例中，治療有效量為約100 mg。在某些實施例中，治療有效量為110 mg。在某些實施例中，治療有效量為約110 mg。在某些實施例中，治療有效量為120 mg。在某些實施例中，治療有效量為約120 mg。在某些實施例中，治療有效量為130 mg。在某些實施例中，治療有效量為約130 mg。在某些實施例中，治療有效量為140 mg。在某些實施例中，治療有效量為約140 mg。在某些實施例中，治療有效量為150 mg。在某些實施例中，治療有效量為約150 mg。在某些實施例中，治療有效量為160 mg。在某些實施例中，治療有效量為約160 mg。在某些實施例中，治療有效量為170 mg。在某些實施例中，治療有效量為約170 mg。在某些實施例中，治療有效量為180 mg。在某些實施例中，治療有效量為約180 mg。在某些實施例中，治療有效量為190 mg。在某些實施例中，治療有效量為約190 mg。在某些實施例中，治療有效量為200 mg。在某些實施例中，治療有效量為約200 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、35 mg、40 mg、45 mg、50 mg、55 mg、60 mg、65 mg、70 mg、75 mg、80 mg、85 mg、90 mg、95 mg、100 mg、105 mg、110 mg、115 mg、120 mg、125 mg、130 mg、135 mg、140 mg、145 mg、150 mg、155 mg、160 mg、165 mg、170 mg、175 mg、180 mg、185 mg、190 mg、195 mg、200 mg、205 mg、210 mg、215 mg、220 mg、225 mg、230 mg、235 mg、240 mg、245 mg、250 mg、255 mg、260 mg、265 mg、270 mg、275 mg、280 mg、285 mg、290 mg、295 mg及300 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：約5 mg、約10 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約105 mg、約110 mg、約115 mg、約120 mg、約125 mg、約130 mg、約135 mg、約140 mg、約145 mg、約150 mg、約155 mg、約160 mg、約165 mg、約170 mg、約175 mg、約180 mg、約185 mg、約190 mg、約195 mg、約200 mg、約205 mg、約210 mg、約215 mg、約220 mg、約225 mg、約230 mg、約235 mg、約240 mg、約245 mg、約250 mg、約255 mg、約260 mg、約265 mg、約270 mg、約275 mg、約280 mg、約285 mg、約290 mg、約295 mg及約300 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：95.0 mg、95.1 mg、95.2 mg、95.3 mg、95.4 mg、95.5 mg、95.6 mg、95.7 mg、95.8 mg、95.9 mg、96.0 mg、96.1 mg、96.2 mg、96.3 mg、96.4 mg、96.5 mg、96.6 mg、96.7 mg、96.8 mg、96.9 mg、97.0 mg、97.1 mg、97.2 mg、97.3 mg、97.4 mg、97.5 mg、97.6 mg、97.7 mg、97.8 mg、97.9 mg、98.0 mg、98.1 mg、98.2 mg、98.3 mg、98.4 mg、98.5 mg、98.6 mg、98.7 mg、98.8 mg、98.9 mg、99.0 mg、99.1 mg、99.2 mg、99.3 mg、99.4 mg、99.5 mg、99.6 mg、99.7 mg、99.8 mg、99.9 mg、100.0 mg、100.1 mg、100.2 mg、100.3 mg、100.4 mg、100.5 mg、100.6 mg、100.7 mg、100.8 mg、100.9 mg、101.0 mg、101.1 mg、101.2 mg、101.3 mg、101.4 mg、101.5 mg、101.6 mg、101.7 mg、101.8 mg、101.9 mg、102.0 mg、102.1 mg、102.2 mg、102.3 mg、102.4 mg、102.5 mg、102.6 mg、102.7 mg、102.8 mg, 102.9 mg、103.0 mg、103.1 mg、103.2 mg、103.3 mg、103.4 mg、103.5 mg、103.6 mg、103.7 mg、103.8 mg、103.9 mg、104.0 mg、104.1 mg、104.2 mg、104.3 mg、104.4 mg、104.5 mg、104.6 mg、104.7 mg、104.8 mg、104.9 mg及105.0 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：約95.0 mg、約95.1 mg、約95.2 mg、約95.3 mg、約95.4 mg、約95.5 mg、約95.6 mg、約95.7 mg、約95.8 mg、約95.9 mg、約96.0 mg、約96.1 mg、約96.2 mg、約96.3 mg、約96.4 mg、約96.5 mg、約96.6 mg、約96.7 mg、約96.8 mg、約96.9 mg、約97.0 mg、約97.1 mg、約97.2 mg、約97.3 mg、約97.4 mg、約97.5 mg、約97.6 mg、約97.7 mg、約97.8 mg、約97.9 mg、約98.0 mg、約98.1 mg、約98.2 mg、約98.3 mg、98.4 mg、約98.5 mg、約98.6 mg、約98.7 mg、約98.8 mg、約98.9 mg、約99.0 mg、約99.1 mg、約99.2 mg、約99.3 mg、約99.4 mg、約99.5 mg、約99.6 mg、約99.7 mg、約99.8 mg、約99.9 mg、約100.0 mg、約100.1 mg、約100.2 mg、約100.3 mg、100.4 mg、約100.5 mg、約100.6 mg、約100.7 mg、約100.8 mg、約100.9 mg、約101.0 mg、約101.1 mg、約101.2 mg、約101.3 mg、約101.4 mg、約101.5 mg、約101.6 mg、約101.7 mg、約101.8 mg、約101.9 mg、約102.0 mg、約102.1 mg、約102.2 mg、約102.3 mg、102.4 mg、約102.5 mg、約102.6 mg、約102.7 mg、約102.8 mg、約102.9 mg、約103.0 mg、約103.1 mg、約103.2 mg、約103.3 mg、約103.4 mg、約103.5 mg、約103.6 mg、約103.7 mg、約103.8 mg、約103.9 mg、約104.0 mg、約104.1 mg、約104.2 mg、約104.3 mg、104.4 mg、約104.5 mg、約104.6 mg、約104.7 mg、約104.8 mg、約104.9 mg及約105.0 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：115.0 mg、115.1 mg、115.2 mg、115.3 mg、115.4 mg、115.5 mg、115.6 mg、115.7 mg、115.8 mg、115.9 mg、116.0 mg、116.1 mg、116.2 mg、116.3 mg、116.4 mg、116.5 mg、116.6 mg、116.7 mg、116.8 mg、116.9 mg、117.0 mg、117.1 mg、117.2 mg、117.3 mg、117.4 mg、117.5 mg、117.6 mg、117.7 mg、117.8 mg、117.9 mg、118.0 mg、118.1 mg、118.2 mg、118.3 mg、118.4 mg、118.5 mg、118.6 mg、118.7 mg、118.8 mg、118.9 mg、119.0 mg、119.1 mg、119.2 mg、119.3 mg、119.4 mg、119.5 mg、119.6 mg、119.7 mg、119.8 mg、119.9 mg、120.0 mg、120.1 mg、120.2 mg、120.3 mg、120.4 mg、120.5 mg、120.6 mg、120.7 mg、120.8 mg、120.9 mg、121.0 mg、121.1 mg、121.2 mg、121.3 mg、121.4 mg、121.5 mg、121.6 mg、121.7 mg、121.8 mg、121.9 mg、122.0 mg、122.1 mg、122.2 mg、122.3 mg、122.4 mg、122.5 mg、122.6 mg、122.7 mg、122.8 mg、122.9 mg、123.0 mg、123.1 mg、123.2 mg、123.3 mg、123.4 mg、123.5 mg、123.6 mg、123.7 mg、123.8 mg、123.9 mg、124.0 mg、124.1 mg、124.2 mg、124.3 mg、124.4 mg、124.5 mg、124.6 mg、124.7 mg、124.8 mg、124.9 mg及125.0 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：約115.0 mg、約115.1 mg、約115.2 mg、約115.3 mg、約115.4 mg、約115.5 mg、約115.6 mg、約115.7 mg、約115.8 mg、約115.9 mg、約116.0 mg、約116.1 mg、約116.2 mg、約116.3 mg、約116.4 mg、約116.5 mg、約116.6 mg、約116.7 mg、約116.8 mg、約116.9 mg、約117.0 mg、約117.1 mg、約117.2 mg、約117.3 mg、約117.4 mg、約117.5 mg、約117.6 mg、約117.7 mg、約117.8 mg、約117.9 mg、約118.0 mg、約118.1 mg、約118.2 mg、約118.3 mg、118.4 mg、約118.5 mg、約118.6 mg、約118.7 mg、約118.8 mg、約118.9 mg、約119.0 mg、約119.1 mg、約119.2 mg、約119.3 mg、約119.4 mg、約119.5 mg、約119.6 mg、約119.7 mg、約119.8 mg、約119.9 mg、約120.0 mg、約120.1 mg、約120.2 mg、約120.3 mg、120.4 mg、約120.5 mg、約120.6 mg、約120.7 mg、約120.8 mg、約120.9 mg、約121.0 mg、約121.1 mg、約121.2 mg、約121.3 mg、約121.4 mg、約121.5 mg、約121.6 mg、約121.7 mg、約121.8 mg、約121.9 mg、約122.0 mg、約122.1 mg、約122.2 mg、約122.3 mg、122.4 mg、約122.5 mg、約122.6 mg、約122.7 mg、約122.8 mg、約122.9 mg、約123.0 mg、約123.1 mg、約123.2 mg、約123.3 mg、約123.4 mg、約123.5 mg、約123.6 mg、約123.7 mg、約123.8 mg、約123.9 mg、約124.0 mg、約124.1 mg、約124.2 mg、約124.3 mg、124.4 mg、約124.5 mg、約124.6 mg、約124.7 mg、約124.8 mg、約124.9 mg及約125.0 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：40 mg至200 mg、40 mg至190 mg、40 mg至180 mg、40 mg至170 mg、40 mg至160 mg、40 mg至150 mg、40 mg至140 mg、40 mg至120 mg、40 mg至110 mg、40 mg至100 mg、40 mg至80 mg、40 mg至70 mg、40 mg至60 mg、40 mg至50 mg、50 mg至200 mg、50 mg至190 mg、50 mg至180 mg、50 mg至170 mg、50 mg至160 mg、50 mg至150 mg、50 mg至140 mg、50 mg至120 mg、50 mg至110 mg、50 mg至100 mg、50 mg至80 mg、50 mg至70 mg、50 mg至60 mg、60 mg至200 mg、60 mg至190 mg、60 mg至180 mg、60 mg至170 mg、60 mg至160 mg、60 mg至150 mg、60 mg至140 mg、60 mg至120 mg、60 mg至110 mg、60 mg至100 mg、60 mg至80 mg、60 mg至70 mg、70 mg至200 mg、70 mg至190 mg、70 mg至180 mg、70 mg至170 mg、70 mg至160 mg、70 mg至150 mg、70 mg至140 mg、70 mg至120 mg、70 mg至110 mg、70 mg至100 mg、70 mg至80 mg、80 mg至200 mg、80 mg至190 mg、80 mg至180 mg、80 mg至170 mg、80 mg至160 mg、80 mg至150 mg、80 mg至140 mg、80 mg至120 mg、80 mg至110 mg、80 mg至100 mg、80 mg至90 mg、90 mg至200 mg、90 mg至190 mg、90 mg至180 mg、90 mg至170 mg、90 mg至160 mg、90 mg至150 mg、90 mg至140 mg、90 mg至120 mg、90 mg至110 mg、90 mg至100 mg、100 mg至200 mg、100 mg至190 mg、100 mg至180 mg、100 mg至170 mg、100 mg至160 mg、100 mg至150 mg、100 mg至140 mg、100 mg至120 mg、100 mg至110 mg、110 mg至200 mg、110 mg至190 mg、110 mg至180 mg、110 mg至170 mg、110 mg至160 mg、110 mg至150 mg、110 mg至140 mg、110 mg至130 mg、110 mg至120 mg、120 mg至200 mg、120 mg至190 mg、120 mg至180 mg、120 mg至170 mg、120 mg至160 mg、120 mg至150 mg、120 mg至140 mg、120 mg至130 mg、130 mg至200 mg、130 mg至190 mg、130 mg至180 mg、130 mg至170 mg、130 mg至160 mg、130 mg至150 mg、130 mg至140 mg、140 mg至200 mg、140 mg至190 mg、140 mg至180 mg、140 mg至170 mg、140 mg至160 mg、140 mg至150 mg、150 mg至200 mg、150 mg至190 mg、150 mg至180 mg、150 mg至170 mg、150 mg至160 mg、160 mg至200 mg、160 mg至190 mg、160 mg至180 mg、160 mg至170 mg、180 mg至200 mg、180 mg至190 mg、190 mg至200 mg、105 mg至135 mg、105 mg至130 mg、105 mg至125 mg 105 mg至120 mg、110 mg至135 mg、110 mg至130 mg、110 mg至125 mg、110 mg至120 mg、115 mg至135 mg、115 mg至130 mg、115 mg至125 mg、115 mg至120 mg、115 mg至125 mg、115 mg至120 mg、120 mg至135 mg、120 mg至125 mg、125 mg至140 mg、125 mg至130 mg、130 mg至135 mg、135 mg至140 mg、120 mg至129 mg、120 mg至128 mg、120 mg至127 mg、120 mg至86 mg、120 mg至124 mg、120 mg至123 mg、120 mg至122 mg、120 mg至121 mg、121 mg至130 mg、122 mg至129 mg、122 mg至128 mg、122 mg至127 mg、122 mg至126 mg、122 mg至125 mg、122 mg至124 mg、122 mg至123 mg、123 mg至130 mg、123 mg至129 mg、123 mg至128 mg、123 mg至127 mg、123 mg至126 mg、123 mg至125 mg、123 mg至124 mg、124 mg至130 mg、124 mg至129 mg、124 mg至128 mg、124 mg至127 mg、124 mg至126 mg、124 mg至125 mg、125 mg至129 mg、125 mg至128 mg、125 mg至127 mg、125 mg至126 mg、126 mg至130 mg、126 mg至129 mg、126 mg至128 mg、126 mg至127 mg、127 mg至130 mg、127 mg至129 mg、127 mg至128 mg、128 mg至130 mg、128 mg至129 mg及129 mg至130 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：少於300 mg、少於295 mg、少於290 mg、少於285 mg、少於280 mg、少於275 mg、少於270 mg、少於265 mg、少於260 mg、少於255 mg、少於250 mg、少於245 mg、少於240 mg、少於235 mg、少於230 mg、少於225 mg、少於220 mg、少於215 mg、少於210 mg、少於205 mg、少於200 mg、少於195 mg、少於190 mg、少於185 mg、少於180 mg、少於175 mg、少於170 mg、少於165 mg、少於160 mg、少於150 mg、少於145 mg、少於140 mg、少於135 mg、少於130 mg、少於125 mg、少於120 mg、少於115 mg、少於110 mg、少於105 mg、少於100 mg、少於95 mg、少於90 mg、少於85 mg、少於80 mg、少於75 mg、少於70 mg、少於65 mg、少於60 mg、少於55 mg、少於50 mg、少於45 mg、少於40 mg、少於35 mg、少於30 mg、少於25 mg、少於20 mg、少於15 mg、少於10 mg及少於5 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：少於約300 mg、少於約295 mg、少於約290 mg、少於約285 mg、少於約280 mg、少於約275 mg、少於約270 mg、少於約265 mg、少於約260 mg、少於約255 mg、少於約250 mg、少於約245 mg、少於約240 mg、少於約235 mg、少於約230 mg、少於約225 mg、少於約220 mg、少於約215 mg、少於約210 mg、少於約205 mg、少於約200 mg、少於約195 mg、少於約190 mg、少於約185 mg、少於約180 mg、少於約175 mg、少於約170 mg、少於約165 mg、少於約160 mg、少於約150 mg、少於約145 mg、少於約140 mg、少於約135 mg、少於約130 mg、少於約125 mg、少於約120 mg、少於約115 mg、少於約110 mg、少於約105 mg、少於約100 mg、少於約 95 mg、少於約 90 mg、少於約 85 mg、少於約 80 mg、少於約 75 mg、少於約 70 mg、少於約 65 mg、少於約 60 mg、少於約 55 mg、少於約 50 mg、少於約 45 mg、少於約 40 mg、少於約35 mg、少於約30 mg、少於約25 mg、少於約20 mg、少於約15 mg、少於約10 mg及少於約 5 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：至少5 mg、至少10 mg、至少15 mg、至少20 mg、至少25 mg、至少30 mg、至少35 mg、至少40 mg、至少45 mg、至少50 mg、至少55 mg、至少60 mg、至少65 mg、至少70 mg、至少75 mg、至少80 mg、至少85 mg、至少90 mg、至少95 mg、至少100 mg、至少105 mg、至少115 mg、至少120 mg、至少125 mg、至少130 mg、至少135 mg、至少140 mg、至少145 mg、至少150 mg、至少155 mg、至少160 mg、至少165 mg、至少170 mg、至少175 mg、至少180 mg、至少185、至少190 mg、至少195 mg及至少200 mg。
在某些實施例中，治療有效量為以下中之任一者：至少約5 mg、至少約10 mg、至少約15 mg、至少約20 mg、至少約25 mg、至少約30 mg、至少約35 mg、至少約40 mg、至少約45 mg、至少約50 mg、至少約55 mg、至少約60 mg、至少約65 mg、至少約70 mg、至少約75 mg、至少約80 mg、至少約85 mg、至少約90 mg、至少約95 mg、至少約100 mg、至少約105 mg、至少約115 mg、至少約120 mg、至少約125 mg、至少約130 mg、至少約135 mg、至少約140 mg、至少約145 mg或至少約150 mg、至少約155 mg、至少約160 mg、至少約165 mg、至少約170 mg、至少約175 mg、至少約180 mg、至少約185、至少約190 mg、至少約195 mg及至少約200 mg。X. 某些給藥方案
在某些實施例中，本文描述向個體投與治療有效量之本文所揭示之化合物一或多次之方法。在某些實施例中，方法包含投與治療有效量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。在某些實施例中，方法包含投與治療有效量每4週一次。在某些實施例中，方法包含投與治療有效量每8週一次。在某些實施例中，方法包括給予治療有效量每12週一次。在某些實施例中，方法包含投與治療有效量每16週一次。
在某些實施例中，方法包含約每1週、約每2週、約每3週、約每4週、約每5週、約每6週、約每7週、約每8週、約每9週、約每10週、約每11週、約每12週、約每13週、約每14週、約每15週、約每16週、約每17週、約每18週、約每19週或約每20週投與治療有效量。
在某些實施例中，方法包含投與治療有效量達至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月、至少約6個月、至少約7個月、至少約8個月、至少約9個月、至少約10個月、至少約11個月或至少約12個月。負載劑量及維持劑量
在某些實施例中，治療有效量呈負載劑量及/或維持劑量投與。在某些實施例中，方法包含投與一或多個負載劑量，且隨後投與一或多個維持劑量。在某些實施例中，方法包含投與負載劑量約每4週一次，且隨後投與維持劑量約每8週一次。在某些實施例中，方法包含投與負載劑量約每4週一次，且隨後投與維持劑量約每16週一次。
在某些實施例中，方法包含投與至少2個負載劑量、至少3個負載劑量、至少4個負載劑量、至少5個負載劑量或至少6個負載劑量。在某些實施例中，方法包含投與2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個負載劑量。在某些實施例中，方法包含約每1週、約每2週、約每3週、約每4週、約每5週、約每6週、約每7週、約每8週、約每9週、約每10週、約每11週或約每12週投與一或多個負載劑量。在某些實施例中，方法包含投與初始負載劑量及在投與初始負載劑量之後約1週、約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週或約12週投與第二負載劑量。
在某些實施例中，方法包含投與至少2個維持劑量、至少3個維持劑量、至少4個維持劑量、至少5個維持劑量或至少6個維持劑量。在某些實施例中，方法包含投與2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個維持劑量。在一些情況下，方法包含約每4週、約每5週、約每6週、約每7週、約每8週、約每9週、約每10週、約每11週、約每12週、約每13週、約每14週、約每15週、約每16週、約每17週、約每18週、約每19週或約每20週投與一或多個維持劑量。在某些實施例中，方法包含投與第一維持劑量及在投與第一維持劑量之後約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16週、約17週、約18週、約19週或約20週投與第二維持劑量。
在某些實施例中，方法包含投與在投與最後一次負載劑量之後約1週、約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16週、約17週、約18週、約19週或約20週投與一或多個第一維持劑量。XI. 效力及功效
在某些實施例中，本文描述減少人類個體之細胞或生物流體中之FUS RNA及/或FUS蛋白之方法，其中該等方法包含向個體投與治療有效量之化合物編號1044030。在某些實施例中，方法減少人類個體之腦脊髓液中之FUS RNA及/或FUS蛋白。可例如 藉由以下方式偵測方法是否減少FUS RNA及/或FUS蛋白：偵測/定量投與之前獲得之第一生物樣品中之FUS RNA或FUS蛋白之第一量及偵測/定量投與之後獲得之第二生物樣品中之FUS RNA或FUS蛋白之第二量；以及藉由比較第一量與第二量來偵測或定量FUS RNA或FUS蛋白之減少。
在某些實施例中，方法包含使FUS RNA及/或FUS蛋白減少1-100%或者此等值之任何兩者所定義之範圍。在某些實施例中，方法包含使FUS RNA及/或FUS蛋白減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在某些實施例中，方法包含使FUS RNA或FUS蛋白減少至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約 75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。
在某些實施例中，方法包含使FUS RNA或FUS蛋白減少約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約 25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%、約90%至約95%或約95%至100%。
在某些實施例中，方法包含向個體投與化合物編號1044030及偵測或定量個體之細胞或生物流體中之FUS RNA或FUS蛋白之量。在某些實施例中，方法包含偵測/定量投與之前獲得之第一生物樣品中之FUS RNA或FUS蛋白之第一量及偵測/定量投與之後獲得之第二生物樣品中之FUS RNA或FUS蛋白之第二量；以及藉由比較第一量與第二量來偵測或定量FUS RNA或FUS蛋白之減少。在某些實施例中，第二生物樣品在投與之後少於約24小時獲得。在某些實施例中，第二生物樣品在投與之後少於約1週獲得。在某些實施例中，第二生物樣品在投與之後約1週、約2週、約3週、約4週、約5週、約6週、約7週、約8週、約9週、約10週、約11週、約12週、約13週、約14週、約15週、約16週、約17週或約18週獲得。在某些實施例中，方法包含在比較第一量與第二量之後增加或減少劑量。在某些實施例中，方法包含在比較第一量與第二量之後更頻繁或較不頻繁投與。XII. 某些適應症
在某些實施例中，本文提供了向有需要之個體投與靶向FUS核酸之寡聚化合物之方法。此類寡聚化合物在本文中描述。在某些實施例中，個體患有神經退化性疾患。在某些實施例中，神經退化性疾患為聚麩醯胺(polyQ)重複病症。在某些實施例中，神經退化性疾患為神經元核內包涵體疾病(NIIBD)。在某些實施例中，神經退化性疾患為ALS。在某些實施例中，神經退化性疾患為FTLD。在某些實施例中，個體患有青少年型ALS，其中個體在25歲之前發展出ALS之至少一個症狀或標誌。
在某些實施例中，個體具有FUS突變(編碼FUS之基因中之突變)。在某些實施例中，個體患有與FUS突變有關之神經退化性疾患。在某些實施例中，個體具有與ALS有關之FUS突變。在某些實施例中，相對於不具有FUS突變之對照個體中之FUS表現，與ALS有關之FUS突變導致FUS過表現。在某些實施例中，相對於不具有FUS突變之對照個體中之FUS蛋白之活性，與ALS有關之FUS突變導致FUS蛋白之功能獲得。在某些實施例中，FUS突變造成FUS蛋白在細胞質中聚集、錯誤折疊、聚集或其任何組合。在某些實施例中，FUS突變為錯義突變。在某些實施例中，FUS突變為截斷突變。
在某些實施例中，與ALS有關的FUS突變為單核苷酸多型性(SNP)。在某些實施例中，根據基因體參考聯盟人類基因組38版第12次補充版(Genome Reference Consortium Human Build 38 patch release 12；GRCh38.p12)，SNP選自：rs121909667 (C＞G)、rs121909668 (C＞A / C＞G / C＞T)、rs121909669 (G＞A)、rs121909671 (G＞A / G＞T)、rs186547381 (C＞T)、rs267606831 (G＞A)、rs267606832 (C＞G / C＞T)、rs267606833 (A＞T)、rs387906627 (C＞T)、rs387906628 (G＞A)、rs387907274 (C＞T)、rs752076094 (A＞G)、rs764487847 (C＞G / C＞T)、rs886041389 (G＞C)、rs886041390 (C＞T)、rs886041577 (delGA)、rs886041776 (dupGGTGG)、rs1085308015 (A＞C / A＞G)、rs1161032867 (delG / dupGGG)、rs1555509569 (delA)、rs1555509609 (A＞C / A＞G / A＞T)、rs1555509693 (A＞G)、rs1596908744 (delTT)、rs1596912983 (dupAG)及rs121909668 (C＞A / C＞G / C＞T)，其分別定位於染色體16之位置31191408、31191418、31191410、31191419、31190398、31191089、31185061、31191427、31191052、31185031、31189158、31185175、31183884、31191429、31191431、31191073-31191074、31191079-31191083、31191407、31191070-31191073、31190961、31191109、31191421、31189748-31189751、31191076-31191079及31191418。
在某些實施例中，與ALS有關之FUS突變導致相對於野生型FUS蛋白(例如 ，參見NCBI參考編號NP_004951.1) (SEQ ID NO: 3)的FUS蛋白胺基酸序列之修飾。在某些實施例中，FUS蛋白胺基酸序列之修飾選自S57del、S96del、G156E、G171-174del、G174-175del、G187S、G191S、G206S、R216C、G225V、G230C、R234C、R234L、R244C、M254V、S402_P411delinsGGGG、S462F、G466VfsX14、Y484AfsX514、R495X、R495EfsX527、G497AfsX527、G507D、K510WfsX517、K510E、S513P、R514S、R514G、G515C、E516V、H517D、H517P、H517Q、R518G、R518K、Q519IfsX9、R521C、R521G、R521H、R521L、R521S、R522G、R524S、R524T、R524W及P525L。在某些實施例中，FUS突變導致相對於野生型FUS蛋白的FUS蛋白胺基酸序列之C-末端處60個胺基酸中之至少一者之修飾。在某些實施例中，FUS突變導致相對於野生型FUS蛋白的FUS蛋白胺基酸序列之C-末端處17個胺基酸中之至少一者之修飾。在某些實施例中，FUS突變導致SEQ ID NO: 3之胺基酸位置525處之脯胺酸經除脯胺酸之外的胺基酸取代。在某些實施例中，FUS突變為P525L。
在某些實施例中，方法包含鑑別個體中之FUS突變。在某些實施例中，方法包含鑑別個體中之FUS突變及隨後向個體投與本文所揭示之寡聚化合物。在某些實施例中，鑑別FUS突變可包含獲得關於來自個體之樣品中之FUS核酸之序列的資訊。在某些實施例中，獲得關於FUS核酸之序列的資訊包含獲得來自個體之樣品中之FUS核酸之序列。在某些實施例中，自定序反應例如 桑格定序或高通量定序獲得FUS核酸之序列。在某些實施例中，鑑別FUS突變包含將FUS核酸與引子或探針接觸。在某些實施例中，若存在突變，則引子或探針與核酸雜交。在某些實施例中，若存在突變，則引子或探針不與核酸雜交。XIII. 某些比較化合物
選擇比較化合物編號441522為本說明書中之實例8中所述之實驗中之比較化合物。比較化合物編號441522與Lagier-Tourenne等人, Nat Neurosci. 15(11):1488-1497 (2012)所述之靶向FUS之經修飾之寡核苷酸相同，該參考文獻以引用之方式併入本文。化合物編號441522為一間隔體，其具有糖模體(從5’至3’) eeeeeddddddddddeeeee，其中各「e」表示2’-MOE糖部分且各「d」表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分；具有序列(從5’至3’) CCTGGTTATTTCCCATGAGC (SEQ ID NO: 481)，其中間隙之各「C」為5-甲基胞嘧啶；且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，本文所述之化合物相對於比較化合物編號441522更耐受。
例如，如本文所述(參見實例5)，比較化合物編號441522在小鼠中之3小時FOB為6.00，而化合物編號1044030在小鼠中之3小時FOB為0.00。FOB為6指示小鼠不能動且對刺激無反應。FOB為0指示 小鼠機靈、警覺且反應快。因此，本文所述之某些化合物與比較化合物編號441522相比更耐受。 非限制性揭露及以引用方式併入
本文所列出之各文獻及專利公開案均以全文引用之方式併入本文。
儘管本文所述之某些化合物、組合物及方法已根據某些實施例經特定描述，但以下實例僅用於說明本文所述之化合物且不意欲對其加以限制。本申請案中所引用之各參考文獻、GenBank登錄號及其類似者均以全文引用之方式併入本文。
儘管隨附於此申請之序列表根據需要將各序列鑑別為「RNA」或「DNA」，但實際上，那些序列可用任何化學修飾組合進行修改。熟習此項技術者將易於瞭解諸如「RNA」或「DNA」之描經修飾之寡核苷酸之名稱在某些情況下為隨意的。例如，包含有包含2'-OH糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷之寡核苷酸可描述為具有經修飾之糖(2'-OH代替DNA之一個2'-H)之DNA或具有經修飾之鹼基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)代替RNA之尿嘧啶)之RNA。據此，本文所提供之核酸序列(包括但不限於序列表中之核酸序列)意欲涵蓋含有天然或經修飾之RNA及/或DNA之任何組合之核酸，包括但不限於具有經修飾之核鹼基之此類核酸。進一步舉例且不加限制，具有核鹼基序列「ATCGATCG」之寡聚化合物涵蓋具有此一核鹼基序列(無論經修飾或未修飾)之任何寡聚化合物，包括但不限於包含RNA鹼基之此類化合物，諸如具有序列「AUCGAUCG」者及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基者(諸如「AUCGATCG」)及具有其他經修飾之鹼基之寡聚化合物，諸如「ATm CGAUCG」，其中m C指示在5位包含甲基之胞嘧啶鹼基。
某些本文所述之化合物(例如 ，經修飾之寡核苷酸)具有一或多個不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構組態，該等立體異構組態可定義為(R )或(S ) (就絕對立體化學而言)、α或β (諸如針對糖變旋異構物)或者(D)或(L) (諸如針對胺基酸)等等。畫出或描述為具有某些立體異構組態的本文所提供之化合物僅包括所指示化合物。除非另外指定，否則畫出或描述為具有未定義立體化學的本文所提供之化合物包括所有此類可能的異構物，包括其無規立構及視情況純形式。同樣，除非另外指示，否則本文中之化合物之互變異構形式亦包括在內。除非另外指示，否則本文所述之化合物意欲包括對應的鹽形式。
本文所述之化合物包括以下變化，在該等變化中一或多個原子經所指示元素之非放射性同位素或放射性同位素置換。例如，包含氫原子之本文中之化合物涵蓋各1 H氫原子之所有可能的氘取代。本文中之化合物所涵蓋之同位素取代包括但不限於：2 H或3 H代替1 H；13 C或14 C代替12 C；15 N代替14 N；17 O或18 O代替16 O；及33 S、34 S、35 S或36 S代替32 S。在某些實施例中，非放射性同位素取代可對寡聚化合物賦予新的有利於用作治療或研究工具的性質。在某些實施例中，放射性同位素取代可使化合物合適於研究或診斷目的諸如成像。實例
以下實例說明本揭露之某些實施例但不具有限制性。此外，當提供特定實施例時，發明人已考慮到那些特定實施例之一般應用。例如，具有具體模體之寡核苷酸之揭露為具有相同或類似模體之額外寡核苷酸提供合理的支持。並且，除非另外指示，否則例如當在特定位置出現具體高親和力修飾時，在相同位置的其他高親和力修飾被視為合適的。實例 1 ：經修飾之寡核苷酸在體外對人類 FUS RNA 的作用，單一劑量
設計了與人類FUS 互補的經修飾之寡核苷酸，且測試了其單一劑量在體外 對FUS mRNA的作用。
經修飾之寡核苷酸為5-10-5 MOE間隔體，其中中央間隙區段由10個2’-β-D-去氧核苷組成，5’側翼區段由5個2’-MOE核苷組成，且3’側翼區段由5個2’-MOE核苷組成。間隔體之糖模體為(從5’ 至3’)：eeeeeddddddddddeeeee；其中『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分，且『e』表示2’-MOE糖部分。間隔體具有核苷間鍵聯模體(從5’ 至3’)：soooossssssssssooss；其中「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。
經修飾之寡核苷酸之序列顯示於以下表1-6中。「開始位點」指示在人類基因序列中與經修飾之寡核苷酸互補的5’-最末端核苷。「停止位點」指示在人類基因序列中與經修飾之寡核苷酸互補的3’-最末端核苷。表1-6中所列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 2 (GENBANK登錄號NC_000016.10，自核苷31176001至31198000截斷) 100%互補。『N/A』指示經修飾之寡核苷酸不與該具體基因序列100%互補。標記有星號(*)之值指示經修飾之寡核苷酸與引子探針組之擴增子區互補。
使用自由吸收，用濃度為4,000 nM之經修飾之寡核苷酸處理密度為每孔10,000個細胞之經培養之A-431細胞，達48小時之處理期。在處理期結束時，從細胞分離出總RNA且藉由定量即時PCR量測FUS RNA水準。藉由人類FUS引子探針組RTS38562 (正向序列TGCTTGCTTGCCTGTGC，本文中指定為SEQ ID NO: 6；反向序列ACTGTAACTCTGCTGTCCGT，本文中指定為SEQ ID NO: 7；探針序列TTGAGGCCATGTCCGCGC，本文中指定為SEQ ID NO: 8)量測FUS RNA水準。將FUS RNA水準正規化至總RNA含量，如藉由RIBOGREEN® 所量測。表 1 .藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043279 51 70 4160 4179 AGTTCCAACACCGCTGAGTA 40 14
1043285 91 110 4200 4219 GCCATGTCCGCGCACGCGCG 7* 15
1043291 218 237 6587 6606 GGACTGGCTATAACCACTGT 74* 16
1043297 266 285 6635 6654 CTGGCCATAAGAAGAATAGC 111 17
1043303 330 349 7892 7911 CATAGCCGCCAGTCGAGCCA 98 18
1043309 362 381 7924 7943 CCCGTAAGACGATTGGGAGC 105 19
1043315 439 458 8207 8226 TGAGAACTGCTACCGTAACT 43 20
1043321 505 524 8273 8292 TGCTGTCCACCATAGCTAGG 74 21
1043327 648 667 8958 8977 CACCACTACTCATGGAGGAT 36 22
1043333 719 738 9029 9048 CTGCTGTCCATAGCCACCGC 53 23
1043339 788 807 9098 9117 GCGGTTGTAACCACCACCGC 87 24
1043345 1198 1217 14066 14085 CGAGTAGCAAATGAGACCTT 67 25
1043351 1225 1244 14093 14112 CCACCACCCCGATTAAAGTC 55 26
1043357 1320 1339 14321 14340 TGGGAAATCCTCCTCGGCCA 96 27
1043363 1505 1524 14969 14988 ACGACGATCATCCCCGTAGT 55 28
1043369 1534 1553 14998 15017 CCGCCTCGATCATAGCCTCC 52 29
1043375 1544 1563 15008 15027 GCCCCGGTAGCCGCCTCGAT 68 30
1043381 1667 1686 15419 15438 TTAATACGGCCTCTCCCTGC 87 31
1043387 1676 1695 15428 15447 CCAGGCTAATTAATACGGCC 105 32
1043393 1781 1800 15533 15552 TAGTCCGACACAAAAAAACC 66 33
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 6 34
1043400 1808 1827 15560 15579 GGAACCAGAGGTATAGTTAC 35 35
1043406 1883 1902 15635 15654 TCGGGACATCGATCTTCCAG 103 36
1043412 1922 1941 15674 15693 GCAGGGTAATCTGAACAGGA 91 37
1043418 1964 1983 15716 15735 ATTTGGCCTTCTCCCCGAAC 104 38
1043424 2061 2080 15813 15832 TAGGCCAACACTCATGACAT 76 39
1043430 2334 2353 16086 16105 GAGTCACTCACCTCCTAGAT 107 40
1043436 2448 2467 16200 16219 GTCAATGACCTCAAGCCCTC 63 41
1043442 2606 2625 16358 16377 CGTGCAAGTTTACAACCACA 72 42
1043448 2718 2737 16470 16489 TCTTACAAACCAAGTTCGAA 94 43
1043454 3471 3490 17223 17242 GGAAGTAAACCTGCTATTCC 98 44
1043460 3519 3538 17271 17290 ACCACTCTCCGCCTACTGTT 79 45
1043466 3531 3550 17283 17302 TTAATACGCCAGACCACTCT 105 46
1043472 3553 3572 17305 17324 CCCACTTGACGATCCTTTGT 83 47
1043478 3681 3700 17433 17452 AGTGAACTACTCAAATATCG 71 48
1043484 3794 3813 17546 17565 GGTCCCAGTAATCATATCTT 81 49
1043490 3841 3860 17593 17612 GGCCAATCACATATGCCATT 96 50
1043496 3895 3914 17647 17666 ACTGGACCTACCCACTAAAC 99 51
1043502 4232 4251 17984 18003 TGGGACACCTAATGCTTCAA 78 52
1043508 4404 4423 18156 18175 GCAGCCCTACATCCAAGTAC 94 53
1043514 4434 4453 18186 18205 CTGGTCAATCTACCCACCAC 92 54
1043520 4450 4469 18202 18221 CCCTAGACCTTAATTCCTGG 102 55
1043526 4841 4860 18593 18612 ATTTTCATAGCCGGACACAG 77 56
1043532 N/A N/A 3749 3768 TGGCCGGGCCCCTTCGCTGG 91 57
1043538 N/A N/A 3887 3906 CGATCTATCTCCACCCCCAT 114 58
1043544 N/A N/A 3901 3920 GCAGGACTAGCCCACGATCT 84 59
1043550 N/A N/A 4104 4123 GTCGAAGCTTAAGTACGCTC 113 60
1043556 N/A N/A 4225 4244 CTCGCGCCCTTACCTACCGT 98* 61
1043562 N/A N/A 4290 4309 CCCGGTCCCACTGAAAACGA 97 62
1043568 N/A N/A 4417 4436 AGACTTCCCGCCCCGCGCGC 88 63
1043574 N/A N/A 4755 4774 GGAGCGATCCCGCCCATTCG 104 64
1043580 N/A N/A 4838 4857 CCACCGCCGCCAAACCGTTA 101 65
1043586 N/A N/A 4871 4890 GGGCCGTCCCCAAGTCCGTT 106 66
1043592 N/A N/A 5238 5257 CGGCCGTTCTTCTCCGTCCC 94 67
1043598 N/A N/A 5543 5562 GGCTTTTTAGTGCAAAGCCA 81 68
1043604 N/A N/A 5775 5794 GTGATTGCTCTAAAACATCG 72 69
1043610 N/A N/A 7636 7655 AGTTCCAATTTCACCCCGCC 38 70
1043616 N/A N/A 7989 8008 CCGTACCTTCCCGAGGTGCT 111 71
1043622 N/A N/A 7999 8018 ATCAACACCACCGTACCTTC 94 72
1043628 N/A N/A 8931 8950 GGCCATAGTTACCTGTGAGA 80 73
1043634 N/A N/A 9507 9526 ATCATCGGTTTCCCTTGCAG 5 74
1043640 N/A N/A 9721 9740 GCTTACTTCAGTCAGCTGGC 19 75
1043646 N/A N/A 10220 10239 GTCACCCCTTCTACACTGCG 15 76
1043652 N/A N/A 10443 10462 GTTGGTTTAAAAACCCTACC 80 77
1043658 N/A N/A 10999 11018 TACCTGCTCCAGGTTAGCAC 80 78
1043664 N/A N/A 11075 11094 TCCAAGGCCTACTAGACCCC 71 79
1043670 N/A N/A 11315 11334 TCATTGACACCATTCCGTAC 25 80
1043676 N/A N/A 11467 11486 GGTCCACGAATTCAGTTTGT 47 81
1043682 N/A N/A 11812 11831 GTTGTTTCCCCGAAACCACA 85 82
1043688 N/A N/A 11932 11951 TGGGCTCGCCACCAGCCATG 75 83
1043694 N/A N/A 12159 12178 CCAAACCCTTTCCTGGGTCG 96 84
1043700 N/A N/A 12564 12583 GGGTCCTCTCAGACCTAAAT 99 85
1043706 N/A N/A 13418 13437 GGTACTCTGATAAGTTATAC 51 86
1043712 N/A N/A 13842 13861 GGCTTGTTTCCTAAGGCTTG 101 87
1043718 N/A N/A 14454 14473 CGCACATACCTCAGTACCAA 53 88
1043724 N/A N/A 14899 14918 GTTCCCCGAGCCTCCCCGCT 102 89
1043730 N/A N/A 15154 15173 ACCCTGTTATCCTATGGCCT 83 90
1043736 N/A N/A 15301 15320 CCCTCCTACCTAACCCAGCG 90 91
表 2 .藉由與人類 FUS RNA 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043280 54 73 4163 4182 CGAAGTTCCAACACCGCTGA 45 92
1043286 98 117 4207 4226 GTTTGAGGCCATGTCCGCGC 15* 93
1043292 233 252 6602 6621 GCCTGAAGTGTCCGTGGACT 86 94
1043298 321 340 7883 7902 CAGTCGAGCCATATCCCTGG 74 95
1043304 333 352 7895 7914 TGCCATAGCCGCCAGTCGAG 82 96
1043310 363 382 7925 7944 GCCCGTAAGACGATTGGGAG 94 97
1043316 494 513 8262 8281 ATAGCTAGGCTGCTGGCTGT 89 98
1043322 506 525 8274 8293 CTGCTGTCCACCATAGCTAG 88 99
1043328 678 697 8988 9007 CTTGATTGCCATAACCGCCA 37 100
1043334 720 739 9030 9049 CCTGCTGTCCATAGCCACCG 36 101
1043340 789 808 9099 9118 TGCGGTTGTAACCACCACCG 48 102
1043346 1199 1218 14067 14086 GCGAGTAGCAAATGAGACCT 52 103
1043352 1226 1245 14094 14113 GCCACCACCCCGATTAAAGT 36 104
1043358 1322 1341 14323 14342 ACTGGGAAATCCTCCTCGGC 94 105
1043364 1506 1525 14970 14989 CACGACGATCATCCCCGTAG 56 106
1043370 1535 1554 14999 15018 GCCGCCTCGATCATAGCCTC 91 107
1043376 1567 1586 15031 15050 AAGCCTCCACGGTCCCCGCC 83 108
1043382 1668 1687 15420 15439 ATTAATACGGCCTCTCCCTG 92 109
1043388 1677 1696 15429 15448 GCCAGGCTAATTAATACGGC 89 110
1043394 1786 1805 15538 15557 TTACATAGTCCGACACAAAA 38 111
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 6 34
1043401 1822 1841 15574 15593 GGTCACTTTTAATGGGAACC 9 112
1043407 1885 1904 15637 15656 GATCGGGACATCGATCTTCC 121 113
1043413 1958 1977 15710 15729 CCTTCTCCCCGAACACTGTA 78 114
1043419 1965 1984 15717 15736 CATTTGGCCTTCTCCCCGAA 94 115
1043425 2062 2081 15814 15833 TTAGGCCAACACTCATGACA 84 116
1043431 2335 2354 16087 16106 GGAGTCACTCACCTCCTAGA 103 117
1043437 2487 2506 16239 16258 CCTCCAATCAAAAAGGGATC 94 118
1043443 2661 2680 16413 16432 GTTACGCTCTGTGTAACTAA 84 119
1043449 2719 2738 16471 16490 GTCTTACAAACCAAGTTCGA 82 120
1043455 3494 3513 17246 17265 GAGAGCACCCCAATGCTGGC 110 121
1043461 3520 3539 17272 17291 GACCACTCTCCGCCTACTGT 90 122
1043467 3533 3552 17285 17304 TTTTAATACGCCAGACCACT 85 123
1043473 3554 3573 17306 17325 GCCCACTTGACGATCCTTTG 103 124
1043479 3689 3708 17441 17460 GCACCAACAGTGAACTACTC 101 125
1043485 3796 3815 17548 17567 ATGGTCCCAGTAATCATATC 104 126
1043491 3846 3865 17598 17617 GTCAAGGCCAATCACATATG 86 127
1043497 3896 3915 17648 17667 AACTGGACCTACCCACTAAA 98 128
1043503 4233 4252 17985 18004 ATGGGACACCTAATGCTTCA 73 129
1043509 4405 4424 18157 18176 TGCAGCCCTACATCCAAGTA 98 130
1043515 4444 4463 18196 18215 ACCTTAATTCCTGGTCAATC 91 131
1043521 4452 4471 18204 18223 GACCCTAGACCTTAATTCCT 118 132
1043527 N/A N/A 3462 3481 CCCGGATCCTCATGGCTTTG 105 133
1043533 N/A N/A 3750 3769 GTGGCCGGGCCCCTTCGCTG 102 134
1043539 N/A N/A 3892 3911 GCCCACGATCTATCTCCACC 107 135
1043545 N/A N/A 4029 4048 GGAACGCACTCCGCCCCCTT 75 136
1043551 N/A N/A 4220 4239 GCCCTTACCTACCGTTTGAG 99* 137
1043557 N/A N/A 4226 4245 CCTCGCGCCCTTACCTACCG 89* 138
1043563 N/A N/A 4304 4323 CACGGGATCGCCGCCCCGGT 90 139
1043569 N/A N/A 4672 4691 CTCGCGACAGAAAGCTGAAC 106 140
1043575 N/A N/A 4756 4775 CGGAGCGATCCCGCCCATTC 71 141
1043581 N/A N/A 4839 4858 ACCACCGCCGCCAAACCGTT 82 142
1043587 N/A N/A 4873 4892 TCGGGCCGTCCCCAAGTCCG 108 143
1043593 N/A N/A 5239 5258 GCGGCCGTTCTTCTCCGTCC 113 144
1043599 N/A N/A 5572 5591 ACTCTTTGACCAATCCCGGA 76 145
1043605 N/A N/A 5815 5834 GGTGGACATCCACAATTTTC 93 146
1043611 N/A N/A 7637 7656 CAGTTCCAATTTCACCCCGC 42 147
1043617 N/A N/A 7990 8009 ACCGTACCTTCCCGAGGTGC 94 148
1043623 N/A N/A 8004 8023 CCGACATCAACACCACCGTA 103 149
1043629 N/A N/A 8933 8952 TTGGCCATAGTTACCTGTGA 89 150
1043635 N/A N/A 9587 9606 TCAGGTTAACCATTACCAAC 41 151
1043641 N/A N/A 9926 9945 GTAGGGTCCTTCAAATCTTA 7 152
1043647 N/A N/A 10221 10240 GGTCACCCCTTCTACACTGC 17 153
1043653 N/A N/A 10459 10478 GGTTGACAACCAAGTAGTTG 9 154
1043659 N/A N/A 11014 11033 ATTGAGTCTTACCCCTACCT 49 155
1043665 N/A N/A 11076 11095 GTCCAAGGCCTACTAGACCC 52 156
1043671 N/A N/A 11316 11335 TTCATTGACACCATTCCGTA 25 157
1043677 N/A N/A 11621 11640 CACCTAAGTCATGAACCCAC 52 158
1043683 N/A N/A 11816 11835 CCGTGTTGTTTCCCCGAAAC 9 159
1043689 N/A N/A 11935 11954 AGATGGGCTCGCCACCAGCC 86 160
1043695 N/A N/A 12309 12328 GGGCCTTTAGTGACATGGAA 117 161
1043701 N/A N/A 12794 12813 GGTCCCCGAATTAAATAAGA 89 162
1043707 N/A N/A 13608 13627 GCTACAGTACTCCCTTTCCA 91 163
1043713 N/A N/A 13985 14004 GCAAGACACATTAATCCGAA 106 164
1043719 N/A N/A 14455 14474 ACGCACATACCTCAGTACCA 31 165
1043725 N/A N/A 14911 14930 CCATTCCCCTATGTTCCCCG 107 166
1043731 N/A N/A 15155 15174 AACCCTGTTATCCTATGGCC 81 167
1043737 N/A N/A 15318 15337 CTAGATATCCTATCTGCCCC 84 168
表 3. 藉由與人類 FUS RNA 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043281 55 74 4164 4183 ACGAAGTTCCAACACCGCTG 18 169
1043287 167 186 6536 6555 CTGGGAATAGCCCTGCCCGG 48* 170
1043293 236 255 6605 6624 ATAGCCTGAAGTGTCCGTGG 54 171
1043299 322 341 7884 7903 CCAGTCGAGCCATATCCCTG 59 172
1043305 335 354 7897 7916 ACTGCCATAGCCGCCAGTCG 104 173
1043311 364 383 7926 7945 TGCCCGTAAGACGATTGGGA 97 174
1043317 496 515 8264 8283 CCATAGCTAGGCTGCTGGCT 63 175
1043323 507 526 8275 8294 GCTGCTGTCCACCATAGCTA 44 176
1043329 679 698 8989 9008 TCTTGATTGCCATAACCGCC 64 177
1043335 724 743 9034 9053 CGGTCCTGCTGTCCATAGCC 62 178
1043341 991 1010 13176 13195 GCCACAGACTCAATTGTAAC 36 179
1043347 1215 1234 14083 14102 GATTAAAGTCTGCCCGGCGA 102 180
1043353 1227 1246 14095 14114 TGCCACCACCCCGATTAAAG 53 181
1043359 1323 1342 14324 14343 CACTGGGAAATCCTCCTCGG 100 182
1043365 1507 1526 14971 14990 CCACGACGATCATCCCCGTA 78 183
1043371 1536 1555 15000 15019 AGCCGCCTCGATCATAGCCT 62 184
1043377 1572 1591 15036 15055 CTCGGAAGCCTCCACGGTCC 93 185
1043383 1670 1689 15422 15441 TAATTAATACGGCCTCTCCC 88 186
1043389 1678 1697 15430 15449 AGCCAGGCTAATTAATACGG 121 187
1043395 1788 1807 15540 15559 AATTACATAGTCCGACACAA 8 188
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 6 34
1043402 1876 1895 15628 15647 ATCGATCTTCCAGGAAAGTG 106 189
1043408 1896 1915 15648 15667 TCTACCTTCCTGATCGGGAC 76 190
1043414 1959 1978 15711 15730 GCCTTCTCCCCGAACACTGT 105 191
1043420 1966 1985 15718 15737 TCATTTGGCCTTCTCCCCGA 78 192
1043426 2186 2205 15938 15957 GCCTCACCATTAAAAGGGCC 94 193
1043432 2336 2355 16088 16107 GGGAGTCACTCACCTCCTAG 100 194
1043438 2503 2522 16255 16274 TAGGAGGGCCTTCCACCCTC 122 195
1043444 2666 2685 16418 16437 TTAATGTTACGCTCTGTGTA 88 196
1043450 2720 2739 16472 16491 TGTCTTACAAACCAAGTTCG 104 197
1043456 3514 3533 17266 17285 TCTCCGCCTACTGTTGCTTA 104 198
1043462 3525 3544 17277 17296 CGCCAGACCACTCTCCGCCT 28 199
1043468 3534 3553 17286 17305 TTTTTAATACGCCAGACCAC 112 200
1043474 3557 3576 17309 17328 AAGGCCCACTTGACGATCCT 92 201
1043480 3711 3730 17463 17482 GATTAGAATCCTGCTAGGCA 89 202
1043486 3807 3826 17559 17578 ACTTGACACTAATGGTCCCA 91 203
1043492 3891 3910 17643 17662 GACCTACCCACTAAACAGTC 97 204
1043498 3898 3917 17650 17669 CAAACTGGACCTACCCACTA 102 205
1043504 4263 4282 18015 18034 CTTAGCCTGTCCCAATTCCA 106 206
1043510 4406 4425 18158 18177 CTGCAGCCCTACATCCAAGT 109 207
1043516 4445 4464 18197 18216 GACCTTAATTCCTGGTCAAT 129 208
1043522 4453 4472 18205 18224 GGACCCTAGACCTTAATTCC 104 209
1043528 N/A N/A 3463 3482 ACCCGGATCCTCATGGCTTT 100 210
1043534 N/A N/A 3762 3781 ACCGAGATTCCTGTGGCCGG 96 211
1043540 N/A N/A 3893 3912 AGCCCACGATCTATCTCCAC 75 212
1043546 N/A N/A 4087 4106 CTCCGCCGCCTACGCACCGC 97 213
1043552 N/A N/A 4221 4240 CGCCCTTACCTACCGTTTGA 94* 214
1043558 N/A N/A 4227 4246 GCCTCGCGCCCTTACCTACC 90* 215
1043564 N/A N/A 4340 4359 CGCGGCTTCCCGCCACAGGG 95 216
1043570 N/A N/A 4710 4729 CACACCGGACGCGCGCCGCC 103 217
1043576 N/A N/A 4760 4779 GGAACGGAGCGATCCCGCCC 133 218
1043582 N/A N/A 4848 4867 CGAACCCTGACCACCGCCGC 100 219
1043588 N/A N/A 4877 4896 ACTCTCGGGCCGTCCCCAAG 115 220
1043594 N/A N/A 5349 5368 AGCCCCACTTAAGATACACG 115 221
1043600 N/A N/A 5664 5683 CAGGTTTGAATTCGAACAGT 48 222
1043606 N/A N/A 5914 5933 CGTTATCAGCCAAGTGTTCT 85 223
1043612 N/A N/A 7654 7673 CTACCAACTCTTTAGTACAG 58 224
1043618 N/A N/A 7991 8010 CACCGTACCTTCCCGAGGTG 85 225
1043624 N/A N/A 8005 8024 CCCGACATCAACACCACCGT 97 226
1043630 N/A N/A 9178 9197 GGCTCATGAGACACCTACCC 75 227
1043636 N/A N/A 9588 9607 GTCAGGTTAACCATTACCAA 9 228
1043642 N/A N/A 10012 10031 CTTACCATTTCCAAACTCGG 36 229
1043648 N/A N/A 10222 10241 GGGTCACCCCTTCTACACTG 95 230
1043654 N/A N/A 10956 10975 TACCCTACCCCTTTCTGGAG 76 231
1043660 N/A N/A 11060 11079 ACCCCTCTTATTAACCTGGG 56 232
1043666 N/A N/A 11087 11106 GCAACGGCCCAGTCCAAGGC 67 233
1043672 N/A N/A 11368 11387 GAGCTAGTTTCTATTTGCCC 24 234
1043678 N/A N/A 11623 11642 GACACCTAAGTCATGAACCC 35 235
1043684 N/A N/A 11829 11848 ACCATCCTTAAAACCGTGTT 7 236
1043690 N/A N/A 11961 11980 CCCGGTTCTCTCACCCGAGA 96 237
1043696 N/A N/A 12314 12333 CCCGAGGGCCTTTAGTGACA 62 238
1043702 N/A N/A 13033 13052 CCTAGTATCCATCAAGCAAC 69 239
1043708 N/A N/A 13791 13810 GCCTTCTCATACATACCATC 105 240
1043714 N/A N/A 13986 14005 TGCAAGACACATTAATCCGA 129 241
1043720 N/A N/A 14534 14553 ACATCAACCTTACCTAGGTA 82 242
1043726 N/A N/A 14957 14976 CCCGTAGTTACCCCCTAGGA 75 243
1043732 N/A N/A 15284 15303 GCGAGTATCTTATCTCAAGT 54 244
1043738 N/A N/A 15319 15338 CCTAGATATCCTATCTGCCC 87 245
表 4 .藉由與人類 FUS RNA 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043282 56 75 4165 4184 AACGAAGTTCCAACACCGCT 49* 246
1043288 197 216 6566 6585 ACTCTGCTGTCCGTAGGGCT 8* 247
1043294 240 259 6609 6628 GGCCATAGCCTGAAGTGTCC 85 248
1043300 323 342 7885 7904 GCCAGTCGAGCCATATCCCT 59 249
1043306 339 358 7901 7920 GGCTACTGCCATAGCCGCCA 97 250
1043312 370 389 7932 7951 GACTGCTGCCCGTAAGACGA 48 251
1043318 497 516 8265 8284 ACCATAGCTAGGCTGCTGGC 56 252
1043324 627 646 8937 8956 GATCTTGGCCATAGTTACCT 40 253
1043330 680 699 8990 9009 GTCTTGATTGCCATAACCGC 44 254
1043336 727 746 9037 9056 CCACGGTCCTGCTGTCCATA 45 255
1043342 1045 1064 13668 13687 GGCTGTCCCGTTTTCTTGTT 55 256
1043348 1221 1240 14089 14108 CACCCCGATTAAAGTCTGCC 97 257
1043354 1243 1262 14111 14130 CGGCCTCCACGACCATTGCC 95 258
1043360 1377 1396 14378 14397 GATTAGGACACTTCCAGTCA 92 259
1043366 1508 1527 14972 14991 ACCACGACGATCATCCCCGT 71 260
1043372 1537 1556 15001 15020 TAGCCGCCTCGATCATAGCC 68 261
1043378 1573 1592 15037 15056 CCTCGGAAGCCTCCACGGTC 87 262
1043384 1671 1690 15423 15442 CTAATTAATACGGCCTCTCC 103 263
1043390 1739 1758 15491 15510 GGTTACAAAATAACGAGGGT 5 264
1043396 1789 1808 15541 15560 CAATTACATAGTCCGACACA 33 265
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 6 34
1043403 1879 1898 15631 15650 GACATCGATCTTCCAGGAAA 80 266
1043409 1897 1916 15649 15668 CTCTACCTTCCTGATCGGGA 111 267
1043415 1960 1979 15712 15731 GGCCTTCTCCCCGAACACTG 62 268
1043421 1976 1995 15728 15747 CTCAAGGATATCATTTGGCC 81 269
1043427 2242 2261 15994 16013 CGCTCTCCACCATGGTCAAA 80 270
1043433 2396 2415 16148 16167 CAGACCAGTCTCCTTATAGC 62 271
1043439 2504 2523 16256 16275 TTAGGAGGGCCTTCCACCCT 112 272
1043445 2668 2687 16420 16439 GGTTAATGTTACGCTCTGTG 24 273
1043451 3153 3172 16905 16924 GCAACTCTTCAGTAGAGAAC 81 274
1043457 3516 3535 17268 17287 ACTCTCCGCCTACTGTTGCT 99 275
1043463 3526 3545 17278 17297 ACGCCAGACCACTCTCCGCC 92 276
1043469 3535 3554 17287 17306 GTTTTTAATACGCCAGACCA 71 277
1043475 3560 3579 17312 17331 GGGAAGGCCCACTTGACGAT 92 278
1043481 3712 3731 17464 17483 AGATTAGAATCCTGCTAGGC 116 279
1043487 3808 3827 17560 17579 AACTTGACACTAATGGTCCC 110 280
1043493 3892 3911 17644 17663 GGACCTACCCACTAAACAGT 96 281
1043499 3907 3926 17659 17678 AGATCCCCCCAAACTGGACC 62 282
1043505 4267 4286 18019 18038 CCTACTTAGCCTGTCCCAAT 94 283
1043511 4431 4450 18183 18202 GTCAATCTACCCACCACTGA 94 284
1043517 4446 4465 18198 18217 AGACCTTAATTCCTGGTCAA 125 285
1043523 4458 4477 18210 18229 GGGCTGGACCCTAGACCTTA 118 286
1043529 N/A N/A 3464 3483 CACCCGGATCCTCATGGCTT 80 287
1043535 N/A N/A 3763 3782 AACCGAGATTCCTGTGGCCG 134 288
1043541 N/A N/A 3894 3913 TAGCCCACGATCTATCTCCA 87 289
1043547 N/A N/A 4088 4107 GCTCCGCCGCCTACGCACCG 94 290
1043553 N/A N/A 4222 4241 GCGCCCTTACCTACCGTTTG 83* 291
1043559 N/A N/A 4229 4248 TCGCCTCGCGCCCTTACCTA 91 292
1043565 N/A N/A 4341 4360 CCGCGGCTTCCCGCCACAGG 104 293
1043571 N/A N/A 4716 4735 AAGGCTCACACCGGACGCGC 89 294
1043577 N/A N/A 4802 4821 CGATCCCGAGCCTCCGCCCC 92 295
1043583 N/A N/A 4851 4870 GGTCGAACCCTGACCACCGC 90 296
1043589 N/A N/A 5234 5253 CGTTCTTCTCCGTCCCTATC 112 297
1043595 N/A N/A 5428 5447 TGGGACTCCAGATGGTTCCG 99 298
1043601 N/A N/A 5727 5746 AGCCATTATCGCCAGGAGTC 32 299
1043607 N/A N/A 6473 6492 CGTGATCAGAAAACATGGCG 96 300
1043613 N/A N/A 7703 7722 GCAAAGATAGTTACCCTCCT 10 301
1043619 N/A N/A 7992 8011 CCACCGTACCTTCCCGAGGT 72 302
1043625 N/A N/A 8011 8030 GCCTTCCCCGACATCAACAC 79 303
1043631 N/A N/A 9282 9301 GCCCTCACAGATCCCTAGAC 68 304
1043637 N/A N/A 9589 9608 AGTCAGGTTAACCATTACCA 6 305
1043643 N/A N/A 10177 10196 GTCACCTTTCATACCTGTGG 3 306
1043649 N/A N/A 10263 10282 GTCCTAACTACTGAGCTGTT 29 307
1043655 N/A N/A 10963 10982 GGCATTCTACCCTACCCCTT 9 308
1043661 N/A N/A 11061 11080 GACCCCTCTTATTAACCTGG 19 309
1043667 N/A N/A 11089 11108 TGGCAACGGCCCAGTCCAAG 76 310
1043673 N/A N/A 11438 11457 GACCTGGTTATTTCCCATGA 22 311
1043679 N/A N/A 11628 11647 GCAATGACACCTAAGTCATG 62 312
1043685 N/A N/A 11830 11849 AACCATCCTTAAAACCGTGT 7 313
1043691 N/A N/A 11962 11981 GCCCGGTTCTCTCACCCGAG 87 314
1043697 N/A N/A 12323 12342 ATCCTTGGTCCCGAGGGCCT 100 315
1043703 N/A N/A 13036 13055 GCACCTAGTATCCATCAAGC 35 316
1043709 N/A N/A 13795 13814 GCCAGCCTTCTCATACATAC 119 317
1043715 N/A N/A 14038 14057 TTCCGGAGAATTCTTTACCT 61 318
1043721 N/A N/A 14535 14554 TACATCAACCTTACCTAGGT 83 319
1043727 N/A N/A 14958 14977 CCCCGTAGTTACCCCCTAGG 98 320
1043733 N/A N/A 15285 15304 AGCGAGTATCTTATCTCAAG 61 321
1043739 N/A N/A 15320 15339 GCCTAGATATCCTATCTGCC 95 322
表 5. 藉由與人類 FUS RNA 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043283 57 76 4166 4185 CAACGAAGTTCCAACACCGC 48* 323
1043289 213 232 6582 6601 GGCTATAACCACTGTAACTC 11* 324
1043295 241 260 6610 6629 TGGCCATAGCCTGAAGTGTC 115 325
1043301 328 347 7890 7909 TAGCCGCCAGTCGAGCCATA 119 326
1043307 340 359 7902 7921 TGGCTACTGCCATAGCCGCC 113 327
1043313 371 390 7933 7952 GGACTGCTGCCCGTAAGACG 57 328
1043319 501 520 8269 8288 GTCCACCATAGCTAGGCTGC 59 329
1043325 638 657 8948 8967 CATGGAGGATTGATCTTGGC 65 330
1043331 682 701 8992 9011 TGGTCTTGATTGCCATAACC 101 331
1043337 737 756 9047 9066 GCCGCGGCCTCCACGGTCCT 101 332
1043343 1046 1065 13669 13688 GGGCTGTCCCGTTTTCTTGT 85 333
1043349 1223 1242 14091 14110 ACCACCCCGATTAAAGTCTG 69 334
1043355 1244 1263 14112 14131 TCGGCCTCCACGACCATTGC 58 335
1043361 1502 1521 14966 14985 ACGATCATCCCCGTAGTTAC 48 336
1043367 1509 1528 14973 14992 CACCACGACGATCATCCCCG 88 337
1043373 1539 1558 15003 15022 GGTAGCCGCCTCGATCATAG 57 338
1043379 1586 1605 15050 15069 ACCACCCCGGCCCCCTCGGA 111 339
1043385 1673 1692 15425 15444 GGCTAATTAATACGGCCTCT 78 340
1043391 1740 1759 15492 15511 AGGTTACAAAATAACGAGGG 6 341
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 9 34
1043398 1793 1812 15545 15564 GTTACAATTACATAGTCCGA 5 342
1043404 1881 1900 15633 15652 GGGACATCGATCTTCCAGGA 110 343
1043410 1898 1917 15650 15669 TCTCTACCTTCCTGATCGGG 90 344
1043416 1962 1981 15714 15733 TTGGCCTTCTCCCCGAACAC 122 345
1043422 2058 2077 15810 15829 GCCAACACTCATGACATCCC 75 346
1043428 2243 2262 15995 16014 GCGCTCTCCACCATGGTCAA 113 347
1043434 2398 2417 16150 16169 GCCAGACCAGTCTCCTTATA 87 348
1043440 2557 2576 16309 16328 GGTTTTAACTCATTGGCTGC 56 349
1043446 2673 2692 16425 16444 TCTTGGGTTAATGTTACGCT 56 350
1043452 3305 3324 17057 17076 TCCCAGCTATCGCTTGAACC 98 351
1043458 3517 3536 17269 17288 CACTCTCCGCCTACTGTTGC 112 352
1043464 3528 3547 17280 17299 ATACGCCAGACCACTCTCCG 102 353
1043470 3536 3555 17288 17307 TGTTTTTAATACGCCAGACC 121 354
1043476 3561 3580 17313 17332 TGGGAAGGCCCACTTGACGA 92 355
1043482 3753 3772 17505 17524 CACTCCTAACAGGAGGGCAT 94 356
1043488 3809 3828 17561 17580 GAACTTGACACTAATGGTCC 101 357
1043494 3893 3912 17645 17664 TGGACCTACCCACTAAACAG 143 358
1043500 3935 3954 17687 17706 GCTAGGTGTCTCTATCCATT 85 359
1043506 4268 4287 18020 18039 TCCTACTTAGCCTGTCCCAA 97 360
1043512 4432 4451 18184 18203 GGTCAATCTACCCACCACTG 106 361
1043518 4447 4466 18199 18218 TAGACCTTAATTCCTGGTCA 105 362
1043524 4472 4491 18224 18243 GTCAAGTCTCACATGGGCTG 115 363
1043530 N/A N/A 3465 3484 TCACCCGGATCCTCATGGCT 144 364
1043536 N/A N/A 3765 3784 GGAACCGAGATTCCTGTGGC 89 365
1043542 N/A N/A 3896 3915 ACTAGCCCACGATCTATCTC 109 366
1043548 N/A N/A 4092 4111 GTACGCTCCGCCGCCTACGC 108 367
1043554 N/A N/A 4223 4242 CGCGCCCTTACCTACCGTTT 100* 368
1043560 N/A N/A 4232 4251 CCGTCGCCTCGCGCCCTTAC 123 369
1043566 N/A N/A 4342 4361 TCCGCGGCTTCCCGCCACAG 129 370
1043572 N/A N/A 4746 4765 CCGCCCATTCGCGAAGGACC 100 371
1043578 N/A N/A 4813 4832 GAGGGCGGCCCCGATCCCGA 88 372
1043584 N/A N/A 4852 4871 TGGTCGAACCCTGACCACCG 127 373
1043590 N/A N/A 5235 5254 CCGTTCTTCTCCGTCCCTAT 105 374
1043596 N/A N/A 5479 5498 AACTGCTCGCCTTAGGAGGC 96 375
1043602 N/A N/A 5773 5792 GATTGCTCTAAAACATCGCG 73 376
1043608 N/A N/A 7535 7554 CGTGCAGTATCTACAGGACA 21 377
1043614 N/A N/A 7729 7748 GCTGTTAGTGATGTTGCAAC 72 378
1043620 N/A N/A 7993 8012 ACCACCGTACCTTCCCGAGG 94 379
1043626 N/A N/A 8015 8034 TCAAGCCTTCCCCGACATCA 81 380
1043632 N/A N/A 9458 9477 GCCTAGGATATTAATGACTC 57 381
1043638 N/A N/A 9704 9723 GGCCCCATAAACCAAGTCAC 62 382
1043644 N/A N/A 10193 10212 CGGAGTATTTTGCAATGTCA 2 383
1043650 N/A N/A 10305 10324 AGGCAACTTCCCCTTAAAGC 11 384
1043656 N/A N/A 10967 10986 AGGTGGCATTCTACCCTACC 111 385
1043662 N/A N/A 11063 11082 TAGACCCCTCTTATTAACCT 36 386
1043668 N/A N/A 11184 11203 ACAACGATCAAAAGGATCCT 91 387
1043674 N/A N/A 11465 11484 TCCACGAATTCAGTTTGTGC 14 388
1043680 N/A N/A 11668 11687 GTTTATCTGAATTCGCCATA 4 12
1043686 N/A N/A 11926 11945 CGCCACCAGCCATGCGATGT 55 389
1043692 N/A N/A 11963 11982 GGCCCGGTTCTCTCACCCGA 69 390
1043698 N/A N/A 12389 12408 GTCTTGATACCACTTTAGCC 39 391
1043704 N/A N/A 13296 13315 GGCAACCATTAAAGACTTGC 46 392
1043710 N/A N/A 13827 13846 GCTTGCTGCCCTATATCCCC 89 393
1043716 N/A N/A 14193 14212 CCATGCAAGCCTTTACCATC 78 394
1043722 N/A N/A 14540 14559 CCCATTACATCAACCTTACC 85 395
1043728 N/A N/A 14960 14979 ATCCCCGTAGTTACCCCCTA 41 396
1043734 N/A N/A 15294 15313 ACCTAACCCAGCGAGTATCT 108 397
1043740 N/A N/A 15321 15340 AGCCTAGATATCCTATCTGC 111 398
表 6. 藉由與人類 FUS RNA 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之 FUS RNA 之減少
化合物編號 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 序列 (5’ 至 3’) FUS (UTC%) SEQ ID NO
1043284 78 97 4187 4206 ACGCGCGCACAGGCAAGCAA 13* 399
1043290 215 234 6584 6603 CTGGCTATAACCACTGTAAC 29* 400
1043296 242 261 6611 6630 CTGGCCATAGCCTGAAGTGT 101 401
1043302 329 348 7891 7910 ATAGCCGCCAGTCGAGCCAT 108 402
1043308 341 360 7903 7922 CTGGCTACTGCCATAGCCGC 75 403
1043314 372 391 7934 7953 AGGACTGCTGCCCGTAAGAC 73 404
1043320 504 523 8272 8291 GCTGTCCACCATAGCTAGGC 41 405
1043326 647 666 8957 8976 ACCACTACTCATGGAGGATT 65 406
1043332 717 736 9027 9046 GCTGTCCATAGCCACCGCTG 81 407
1043338 738 757 9048 9067 TGCCGCGGCCTCCACGGTCC 83 408
1043344 1107 1126 13730 13749 AAGAGACCGTTGCCTCTCCC 111 409
1043350 1224 1243 14092 14111 CACCACCCCGATTAAAGTCT 46 410
1043356 1245 1264 14113 14132 CTCGGCCTCCACGACCATTG 121 411
1043362 1503 1522 14967 14986 GACGATCATCCCCGTAGTTA 47 412
1043368 1529 1548 14993 15012 TCGATCATAGCCTCCTCTGC 69 413
1043374 1540 1559 15004 15023 CGGTAGCCGCCTCGATCATA 73 414
1043380 1664 1683 15416 15435 ATACGGCCTCTCCCTGCGAT 65 415
1043386 1675 1694 15427 15446 CAGGCTAATTAATACGGCCT 116 416
1043392 1763 1782 15515 15534 CCCTTGGGTGATCAGGAATT 67 417
1043397 1792 1811 15544 15563 TTACAATTACATAGTCCGAC 5 34
1043399 1794 1813 15546 15565 AGTTACAATTACATAGTCCG 4 418
1043405 1882 1901 15634 15653 CGGGACATCGATCTTCCAGG 94 419
1043411 1899 1918 15651 15670 CTCTCTACCTTCCTGATCGG 102 420
1043417 1963 1982 15715 15734 TTTGGCCTTCTCCCCGAACA 90 421
1043423 2059 2078 15811 15830 GGCCAACACTCATGACATCC 91 422
1043429 2329 2348 16081 16100 ACTCACCTCCTAGATCCTGA 93 423
1043435 2406 2425 16158 16177 GTAACCCAGCCAGACCAGTC 107 424
1043441 2558 2577 16310 16329 AGGTTTTAACTCATTGGCTG 83 425
1043447 2674 2693 16426 16445 CTCTTGGGTTAATGTTACGC 62 426
1043453 3306 3325 17058 17077 ATCCCAGCTATCGCTTGAAC 110 427
1043459 3518 3537 17270 17289 CCACTCTCCGCCTACTGTTG 81 428
1043465 3529 3548 17281 17300 AATACGCCAGACCACTCTCC 124 429
1043471 3551 3570 17303 17322 CACTTGACGATCCTTTGTTT 77 430
1043477 3662 3681 17414 17433 GTATCAGGCCATTTCAACTA 62 431
1043483 3773 3792 17525 17544 CAAGGAGCTTCGACCTCCTC 150 432
1043489 3810 3829 17562 17581 GGAACTTGACACTAATGGTC 106 433
1043495 3894 3913 17646 17665 CTGGACCTACCCACTAAACA 119 434
1043501 3937 3956 17689 17708 CTGCTAGGTGTCTCTATCCA 91 435
1043507 4401 4420 18153 18172 GCCCTACATCCAAGTACTGA 114 436
1043513 4433 4452 18185 18204 TGGTCAATCTACCCACCACT 80 437
1043519 4448 4467 18200 18219 CTAGACCTTAATTCCTGGTC 119 438
1043525 4474 4493 18226 18245 GAGTCAAGTCTCACATGGGC 91 439
1043531 N/A N/A 3578 3597 GTTGCCTTGCCTTTCGGCCT 125 440
1043537 N/A N/A 3858 3877 GTGGTACGGCCTGAGTGCCC 104 441
1043543 N/A N/A 3899 3918 AGGACTAGCCCACGATCTAT 120 442
1043549 N/A N/A 4098 4117 GCTTAAGTACGCTCCGCCGC 89 443
1043555 N/A N/A 4224 4243 TCGCGCCCTTACCTACCGTT 103* 444
1043561 N/A N/A 4234 4253 CGCCGTCGCCTCGCGCCCTT 104 445
1043567 N/A N/A 4415 4434 ACTTCCCGCCCCGCGCGCGA 118 446
1043573 N/A N/A 4752 4771 GCGATCCCGCCCATTCGCGA 98 447
1043579 N/A N/A 4814 4833 AGAGGGCGGCCCCGATCCCG 127 448
1043585 N/A N/A 4857 4876 TCCGTTGGTCGAACCCTGAC 90 449
1043591 N/A N/A 5236 5255 GCCGTTCTTCTCCGTCCCTA 87 450
1043597 N/A N/A 5481 5500 GCAACTGCTCGCCTTAGGAG 30 451
1043603 N/A N/A 5774 5793 TGATTGCTCTAAAACATCGC 100 452
1043609 N/A N/A 7635 7654 GTTCCAATTTCACCCCGCCA 29 453
1043615 N/A N/A 7857 7876 GACTGAGTTCCATAGCCTGC 67 454
1043621 N/A N/A 7994 8013 CACCACCGTACCTTCCCGAG 80 455
1043627 N/A N/A 8096 8115 AGGCTCCCCTACCCCAATTA 110 456
1043633 N/A N/A 9506 9525 TCATCGGTTTCCCTTGCAGA 7 457
1043639 N/A N/A 9710 9729 TCAGCTGGCCCCATAAACCA 51 458
1043645 N/A N/A 10218 10237 CACCCCTTCTACACTGCGAG 49 459
1043651 N/A N/A 10432 10451 AACCCTACCCCAATTTACCC 82 460
1043657 N/A N/A 10969 10988 ACAGGTGGCATTCTACCCTA 72 461
1043663 N/A N/A 11069 11088 GCCTACTAGACCCCTCTTAT 41 462
1043669 N/A N/A 11286 11305 GTATACCAACTTCACCATCC 10 463
1043675 N/A N/A 11466 11485 GTCCACGAATTCAGTTTGTG 21 464
1043681 N/A N/A 11669 11688 TGTTTATCTGAATTCGCCAT 7 465
1043687 N/A N/A 11928 11947 CTCGCCACCAGCCATGCGAT 95 466
1043693 N/A N/A 12115 12134 GCAGGCCCCTTAAGATCTGT 105 467
1043699 N/A N/A 12390 12409 AGTCTTGATACCACTTTAGC 49 468
1043705 N/A N/A 13327 13346 GCAACAACCACTAAGACTTG 91 469
1043711 N/A N/A 13841 13860 GCTTGTTTCCTAAGGCTTGC 103 470
1043717 N/A N/A 14391 14410 AGTTTCACTCACGGATTAGG 101 471
1043723 N/A N/A 14886 14905 CCCCGCTGAAAAATTAAGGA 136 472
1043729 N/A N/A 15153 15172 CCCTGTTATCCTATGGCCTC 103 473
1043735 N/A N/A 15298 15317 TCCTACCTAACCCAGCGAGT 101 474
1043741 N/A N/A 15324 15343 CCAAGCCTAGATATCCTATC 80 475
實例 2 ：經修飾之寡核苷酸在體外 對人類 FUS mRNA 的作用，多個劑量
測試了A-431細胞中在各種劑量下選自上文實例之經修飾之寡核苷酸。使用自由吸收，用如以下表3中所指定之185 nM、556 nM、1667 nM及5000 nM經修飾之寡核苷酸處理密度為每孔10,000個細胞之經培養之A-431細胞。在約48小時之處理期結束之後，從細胞分離出總RNA且藉由定量即時PCR量測FUS RNA水準。使用人類FUS引子探針組RTS38562量測RNA水準，如上文所述。根據總RNA含量調整FUS水準，如藉由RIBOGREEN®所量測。結果在以下表7-9中顯示為相對於未處理對照的FUS RNA之量的減少百分比。對excel中之資料之對數/線性圖使用線性迴歸來計算半數最大抑制濃度(IC50 ) 。表 7. 藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之人類 FUS RNA 之劑量依賴性減少百分比
化合物編號 UTC% IC50 (µM)
185 nM 556 nM 1667 nM 5000 nM
1043279 96 75 56 42 2.8
1043327 85 67 52 N.D. N.C.
1043334 87 81 63 47 4.6
1043352 95 76 56 46 3.2
1043397 64 26 11 5 0.3
1043400 92 72 52 45 2.7
1043401 36 22 17 12 ＜ 0.2
1043610 75 73 50 40 2.2
1043634 48 19 11 8 ＜ 0.2
1043640 80 61 37 24 1.0
1043641 61 23 11 6  0.2
1043646 96 55 31 19 1.0
1043647 77 51 30 18 0.7
1043653 52 29 13 7 ＜ 0.2
1043670 82 62 43 28 1.2
1043671 76 59 36 19 0.8
1043683 64 28 12 8 0.3
1043684 58 26 10 6 0.2
1043719 79 71 62 49 ＞5.0
表 8. 藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之人類 FUS RNA 之劑量依賴性減少百分比
化合物編號 UTC% IC50 (µM)
185 nM 556 nM 1667 nM 5000 nM
1043323 119 95 97 76 ＞5.0
1043341 70 65 45 32 1.2
1043390 55 16 7 4 ＜ 0.2
1043395 81 47 20 9 0.6
1043396 96 59 39 22 1.2
1043397 63 28 9 4 0.3
1043445 88 67 37 21 1.1
1043462 98 109 111 108 ＞5.0
1043613 55 33 15 7 0.2
1043636 61 40 17 11 0.3
1043637 57 24 8 3 ＜ 0.2
1043642 82 60 46 30 1.3
1043643 29 8 4 2 ＜ 0.2
1043655 71 43 16 8 0.4
1043661 61 39 30 17 0.3
1043672 62 44 28 21 0.4
1043673 67 46 34 23 0.5
1043678 83 58 36 29 1.1
1043685 82 38 13 5 0.5
表 9. 藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之人類 FUS RNA 之劑量依賴性減少百分比
化合物編號 UTC% IC50 (µM)
185 nM 556 nM 1667 nM 5000 nM
1043320 106 90 58 48 3.8
1043391 70 25 7 5 0.3
1043397 68 28 11 5 0.3
1043398 42 15 9 4 ＜ 0.2
1043399 34 13 5 3 ＜ 0.2
1043608 97 72 51 39 2.2
1043609 83 62 38 25 1.1
1043633 54 21 8 6 ＜ 0.2
1043644 67 19 4 2 0.2
1043649 84 59 40 26 1.1
1043650 73 32 18 12 0.4
1043662 89 58 47 28 1.3
1043669 65 38 22 10 0.4
1043674 59 39 22 14 0.3
1043675 89 67 46 29 1.5
1043680 46 17 6 3 ＜ 0.2
1043681 69 39 18 8 0.4
1043698 95 85 59 35 2.6
1043728 99 84 64 51 ＞5.0
實例 3 ：與人類 FUS 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計
如以下表10中所指示設計額外經修飾之寡核苷酸。
以下表10之經修飾之寡核苷酸為5-10-5 MOE間隔體。間隔體之長度為20個核苷，其中中央間隙區段由10個2’-β-D-去氧核苷組成，5’側翼區段由5個2’-MOE核苷組成，且3’側翼區段由5個2’-MOE核苷組成。間隔體之糖模體為(從5’至3’)：eeeeeddddddddddeeeee；其中『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分，且『e』表示2’-MOE糖部分。間隔體具有核苷間鍵聯模體(從5’至3’)：soooossssssssssooss；其中「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。
「開始位點」指示在人類基因序列中與經修飾之寡核苷酸互補的5’-最末端核苷。「停止位點」指示在人類基因序列中與經修飾之寡核苷酸互補的3’-最末端核苷。表10中所列出之各經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 2 (GENBANK登錄號NC_000016.10，自核苷31176001至31198000截斷) 100%互補。『N/A』指示經修飾之寡核苷酸不與該具體基因序列100%互補。表 10. 藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體
化合物編號 序列 SEQ ID NO: 1 開始位點 SEQ ID NO: 1 停止位點 SEQ ID NO: 2 開始位點 SEQ ID NO: 2 停止位點 SEQ ID NO.
1044028 GGCACATAAAATGCAGAGCA N/A N/A 10159 10178 476
1044030 GCAATGTCACCTTTCATACC N/A N/A 10182 10201 13
1044031 GAGTATTTTGCAATGTCACC N/A N/A 10191 10210 477
1044032 GGAGTATTTTGCAATGTCAC N/A N/A 10192 10211 478
1044033 GCGGAGTATTTTGCAATGTC N/A N/A 10194 10213 479
1044075 GTGCATCCATCCAGTTTCTC N/A N/A 11908 11927 480
實例 4 ：經修飾之寡核苷酸在體外對人類 FUS mRNA 的作用，多個劑量
測試了A-431細胞中在各種劑量下選自上文實例之經修飾之寡核苷酸。使用自由吸收，用如以下表11中所指定之各種濃度之經修飾之寡核苷酸處理密度為每孔10,000個細胞之經培養之A-431細胞。在約48小時之處理期結束之後，從細胞分離出總RNA且藉由定量即時RTPCR量測FUS RNA水準。使用人類FUS引子探針組RTS38562量測RNA水準，如上文所述。根據總RNA含量調整FUS水準，如藉由RIBOGREEN®所量測。結果在以下表11中顯示為相對於未處理對照的FUS RNA之量的減少百分比。對excel中之資料之對數/線性圖使用線性迴歸來計算半數最大抑制濃度(IC50 ) 。表 11. 藉由與人類 FUS 互補之具有混合 PO/PS 鍵聯之 5-10-5 MOE 間隔體之人類 FUS RNA 之劑量依賴性減少百分比
化合物編號 UTC% IC50 (µM)
5 nM 20 nM 78 nM 313 nM 1250 nM 5000 nM
1043643 87 75 56 29 18 12 0.1
1043644 77 73 57 38 19 9 0.1
1043678 118 133 105 95 76 53 ＞5.0
1044028 78 76 71 56 39 35 0.6
1044030 70 73 48 31 16 9 0.1
1044031 75 82 58 42 26 17 0.2
1044032 95 92 92 56 35 18 0.5
1044033 118 105 102 83 54 40 2.8
1044075 108 95 80 59 40 29 0.7
實例 5 ：野生型小鼠中經修飾之寡核苷酸之耐受性
在野生型雌性C57/Bl6小鼠中測試了上文所述之經修飾之寡核苷酸以評估寡核苷酸之耐受性。此外，在野生型雌性C57/Bl6 小鼠中測試了 比較化合物編號 441522以評估寡核苷酸之耐受性。野生型雌性C57/Bl6小鼠在單獨實驗中各自接受700 µg或500 µg經修飾之寡核苷酸之單一ICV劑量，如以下表12-15中所列出。各治療組由4隻小鼠組成。對於各實驗，一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照(於以下單獨的表中鑑別)。注射後3小時，根據七個不同的標準評估小鼠。標準為(1)小鼠機靈、警覺且反應快；(2)在無刺激之情況下小鼠站立或弓背；(3)在無刺激之情況下小鼠顯示任何運動；(4)將小鼠提起後小鼠顯示向前運動；(5)將小鼠提起後小鼠顯示任何運動；(6)小鼠對捏尾巴有反應；(7)規律呼吸。對於7個標準中之各者，若滿足標準，則給予小鼠子分數0，若不滿足標準，則給予小鼠子分數1 (功能觀察組合試驗(functional observational battery)分數或FOB分數)。在評估所有7個標準之後，對各小鼠之分數求和並在每個各治療組內取平均值。表 12. 在 700 µg 劑量下小鼠中之耐受性分數
化合物編號 3 小時 FOB
PBS 0.00
1043341 1.00
1043390 3.00
1043391 5.75
1043397 2.00
1043398 4.50
1043399 4.00
1043401 4.75
1043613 1.00
1043633 2.25
1043634 5.50
1043636 2.50
1043637 1.00
1043641 1.00
1043650 1.00
1043653 5.00
1043655 1.00
1043661 4.00
1043669 1.00
1043672 0.00
1043674 4.00
1043680 5.25
1043681 3.00
1043683 1.00
1043684 1.00
表 13. 在 500 µg 劑量下小鼠中之耐受性分數
化合物編號 3 小時 FOB
PBS 0.00
1043678 1.00
1044022 0.00
1044023 0.00
1044024 2.00
1044025 0.00
1044030 0.00
1044049 1.00
1044053 0.00
表 14. 在 700 µg 劑量下小鼠中之耐受性分數
化合物編號 3 小時 FOB
PBS 0.00
441522 6.00
表 15. 在 700 µg 劑量下小鼠中之耐受性分數
化合物編號 3 小時 FOB
PBS 0.00
1044030 0.00
實例 6 ：基因轉殖小鼠中與人類 FUS 互補之經修飾之寡核苷酸之活性
使用先前於Lopez-Erauskin.等人,ALS/FTD-Linked Mutation in FUS Suppresses Intra-axonal Protein Synthesis and Drives Disease Without Nuclear Loss-of-Function of FUS, Neuron 2018, 100:816-830中描述之基因轉殖小鼠系(表現人類FUS野生型基因之小鼠hgFUSWT 、或者含有人類FUS突變R521C或R521H之小鼠hgFUSR521C 及hgFUSR521H )測試上文所述之經修飾之寡核苷酸之活性。將FUS基因轉殖小鼠分成各有3隻小鼠的組。各小鼠接受500 μg經修飾之寡核苷酸之單一ICV推注。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。
治療後四週，殺死小鼠，且從皮質腦組織及脊髓提取出RNA以用於使用如上文所述之引子探針組RTS38562之FUS之RNA表現之即時qPCR分析。結果呈現為相對於PBS對照之RNA變化百分比，將其正規化至小鼠GAPDH。使用引子探針組RTS108 (正向序列GGCAAATTCAACGGCACAGT，在本文中稱為SEQ ID NO: 9；反向序列GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT，在本文中稱為SEQ ID NO: 10；探針序列AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC，在本文中稱為SEQ ID NO: 11)將小鼠GAPDH擴增。在類似條件下進行兩個單獨實驗。各實驗之結果呈現於以下表16及17中。表 16. 基因轉殖小鼠中人類 FUS RNA 之減少
小鼠系 化合物 ID FUS RNA ( 對照 %)
脊髓 皮質
WT PBS 100 100
1043341 55 78
1043390 62 81
1043398 57 89
1043399 64 94
1043613 44 60
1043636 60 106
R521H PBS 100 100
1043397 42 56
1043637 33 103
1043672 32 78
1043674 49 88
1043680 14 19
1043681 35 52
表 17. 基因轉殖小鼠中人類 FUS RNA 之減少
小鼠系 化合物 ID FUS RNA ( 對照 %)
脊髓 皮質
R521H PBS 100 100
1043643 51 96
1043678 48 112
1044028 83 159
1044030 23 57
1044033 59 84
1043644 67 133
R521C PBS 100 100
1044032 48 96
WT PBS 100 100
1044031 28 66
實例 7 ：大鼠中經修飾之寡核苷酸之耐受性， 3 mg 劑量
在大鼠中測試了上文所述之經修飾之寡核苷酸以評估寡核苷酸之耐受性。史-道二氏大鼠各自接受以下表9中所列出之3 mg寡核苷酸之單一鞘內(IT)劑量。各治療組由3-4隻大鼠組成。一組3-4隻大鼠接受PBS作為陰性對照。注射後3小時，評估各大鼠之7個不同身體部分的運動。7個身體部分為(1)大鼠尾巴；(2)大鼠後部姿勢；(3)大鼠後肢；(4)大鼠後爪；(5)大鼠前爪；(6)大鼠前部姿勢；(7)大鼠頭部。對於7個不同身體部分中之各者，若身體部分運動，則給予大鼠子分數0，若身體部分麻痺，則給予大鼠子分數1。在評估7個身體部分中之各者之後，對各大鼠之子分數求和，然後對各組取平均值(功能觀察組合試驗分數或FPB)。例如，若在3 mg IT劑量之後3小時大鼠尾巴、頭部及所有其他評估的身體部分運動，則其總分為0。若另一大鼠在3 mg IT劑量之後3小時尾巴不運動，但所有其他評估的身體部分運動，則其分數為1。結果呈各治療組之平均分數呈現於表18中。與對照化合物編號441522相比，發現表18中所列出之所有化合物在大鼠中耐受性較大。表 18. 在 3 mg 劑量下大鼠中之耐受性分數
化合物編號 3 小時 FOB
PBS 0.00
1043613 1.00
1043680 2.33
1044030 0.67
實例 8. 用化合物編號 1044030 之人類臨床試驗
將展示ALS之一或多種症狀及/或鑑別為具有FUS之功能獲得突變的患者鞘內投與化合物編號1044030。症狀性、症狀發生前及先驅性患者約每4週、約每8週或約每12週接受50 mg至200 mg化合物編號1044030。
在多個時間點評估藥效學及功效。藉由監測每日活動之功能、肌力及呼吸功能來評估化合物編號1044030之功效。在一些情況下，評估採取問卷、患者報導結果或ALS功能評定量表之形式。在研究期間密切監測患者安全。安全及耐受性評估可包括例如 身體檢查、生命徵象、伴隨用藥及血漿實驗室測試。
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Claims (70)

  1. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸之核鹼基序列與FUS核酸之相等長度部分至少90%互補，且其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯之修飾。
  2. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個SEQ ID NO: 12-480中任一者之連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
  3. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個與SEQ ID NO: 12及13中任一者相同的連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
  4. 一種寡聚化合物，其包含由20個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列SEQ ID NO: 12。
  5. 一種寡聚化合物，其包含由20個連接之核苷組成之經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列SEQ ID NO: 13。
  6. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個與SEQ ID NO: 1之核鹼基1,786至1,841之相等長度部分互補的連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
  7. 一種寡聚化合物，其包含由12至50個連接之核苷組成且具有包含至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個SEQ ID NO: 34、35、111、112、188、265、342及418中任一者之連續核鹼基之核鹼基序列之經修飾之寡核苷酸。
  8. 如請求項1至7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含經修飾之糖部分。
  9. 如請求項1至7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含雙環糖部分。
  10. 如請求項9之寡聚化合物，其中該雙環糖部分包含選自–O-CH2 -及–O-CH(CH3 )-之2’-4’橋。
  11. 如請求項1至10中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含非雙環經修飾之糖部分。
  12. 如請求項11之寡聚化合物，其中該非雙環經修飾之糖部分包含2’-MOE糖部分或2’-OMe糖部分。
  13. 如請求項1至12中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含糖替代物。
  14. 如請求項13之寡聚化合物，其中該糖替代物選自N-嗎啉基及PNA。
  15. 如請求項1至14中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： a)  5’-區，其由1-5個連接之5’-區核苷組成； b) 中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及 c)  3’-區，其由1-5個連接之3’-區核苷組成， 其中該等5’-區核苷中之各者及該等3’-區核苷中之各者包含經修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之各者包含未修飾之2’-去氧核糖基糖部分。
  16. 如請求項1至15中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
  17. 如請求項16之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
  18. 如請求項16或17之寡聚化合物，其中該至少一個經修飾之核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  19. 如請求項16至18中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
  20. 如請求項18或19之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之各核苷間鍵聯獨立地選自磷酸二酯核苷間鍵聯及硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  21. 如請求項1至16中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸基本上由20個連接之核苷組成且具有核苷間鍵聯模體soooossssssssssooss，其中「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。
  22. 如請求項1至21中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。
  23. 如請求項22之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
  24. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸為由5’側翼區段、中央間隙區段及3’側翼區段組成之間隔體，其中： 該5’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成， 該中央間隙區段由10個β-D-去氧核糖核苷組成，且 該3’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成， 其中該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列5’- GTTTATCTGAATTCGCCATA -3’ (SEQ ID NO. 12)，其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶，其中該經修飾之寡核苷酸之該等核苷間鍵聯從5’至3’為soooossssssssssooss，且其中各s為硫代磷酸酯鍵聯且各o為磷酸二酯鍵聯。
  25. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，其中該經修飾之寡核苷酸為由5’側翼區段、中央間隙區段及3’側翼區段組成之間隔體，其中： 該5’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成， 該中央間隙區段由10個β-D-去氧核糖核苷組成，且 該3’側翼區段由5個2’-O-甲氧基乙基核苷組成， 其中該經修飾之寡核苷酸具有核鹼基序列5’- GCAATGTCACCTTTCATACC -3’ (SEQ ID NO. 13)，其中各胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶，其中該經修飾之寡核苷酸之該等核苷間鍵聯從5’至3’為soooossssssssssooss，且其中各s為硫代磷酸酯鍵聯且各o為磷酸二酯鍵聯。
  26. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物，其基本上由該經修飾之寡核苷酸組成。
  27. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
  28. 如請求項1至25中任一項之寡聚化合物，其包含結合基團，其中該結合基團基本上由結合部分及結合連接子組成。
  29. 如請求項28之寡聚化合物，其中該結合連接子由單鍵組成。
  30. 如請求項28或29之寡聚化合物，其中該結合連接子為可裂解的。
  31. 如請求項28至30中任一項之寡聚化合物，其中該結合連接子包含1-3個連接子-核苷。
  32. 如請求項28至30中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團不包含核苷。
  33. 如請求項28至32中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之5’-末端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
  34. 如請求項28至32中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之3’-末端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
  35. 如請求項1至34中任一項之寡聚化合物，其包含端基。
  36. 如請求項1至35中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸為單股經修飾之寡核苷酸。
  37. 一種寡聚雙螺旋，其包含如請求項1至35中任一項之寡聚化合物。
  38. 一種反義化合物，其包含如請求項1至36中任一項之寡聚化合物或如請求項37之寡聚雙螺旋或者由其組成。
  39. 一種根據下式之經修飾之寡核苷酸： Ges Teo Teo Teo Aeo Tds mCds Tds Gds Ads Ads Tds Tds mCds Gds mCeo mCeo Aes Tes Ae (SEQ ID NO: 12)；其中， A = 腺嘌呤， mC = 5’-甲基胞嘧啶 G = 鳥嘌呤， T = 胸腺嘧啶， e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖 d = 2’-去氧核糖， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
  40. 一種根據下式之經修飾之寡核苷酸： Ges Ceo Aeo Aeo Teo Gds Tds mCds Adsd mCds mCds Tds Tds Tds mCds Aeo Teo Aes mCes mCe (SEQ ID NO: 13)；其中， A = 腺嘌呤， mC = 5’-甲基胞嘧啶 G = 鳥嘌呤， T = 胸腺嘧啶， e = 2’-O-甲氧基乙基核糖修飾糖 d = 2’-去氧核糖， s = 硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o = 磷酸二酯核苷間鍵聯。
  41. 一種根據以下化學結構或其鹽之經修飾之寡核苷酸：
    Figure 03_image001
    (SEQ ID NO. 12)。
  42. 如請求項41之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  43. 一種根據以下化學結構或其鹽之經修飾之寡核苷酸：
    Figure 03_image003
    (SEQ ID NO. 13)。
  44. 如請求項43之經修飾之寡核苷酸，其為鈉鹽或鉀鹽。
  45. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
    Figure 03_image005
    (SEQ ID NO: 12)。
  46. 一種根據以下化學結構之經修飾之寡核苷酸：
    Figure 03_image007
    (SEQ ID NO: 13)。
  47. 一種醫藥組合物，其包含：如請求項1至36中任一項之寡聚化合物、如請求項37之寡聚雙螺旋、如請求項38之反義化合物及如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者；以及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
  48. 如請求項47之醫藥組合物，其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為人工腦脊髓液或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
  49. 如請求項48之醫藥組合物，其中該醫藥組合物基本上由以下組成：該寡聚化合物、寡聚雙螺旋、反義化合物或經修飾之寡核苷酸；及人工腦脊髓液。
  50. 一種方法，其包含向個體投與以下中之至少一者：如請求項1至36中任一項之寡聚化合物；如請求項37之寡聚雙螺旋；如請求項38之反義化合物；如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如請求項47至49中任一項之醫藥組合物。
  51. 一種治療神經退化性疾患之方法，其包含向患有該神經退化性疾患或處於發展該神經退化性疾患之風險之個體投與治療有效量之以下中之至少一者：如請求項1至36中任一項之寡聚化合物；如請求項37之寡聚雙螺旋；如請求項38之反義化合物；如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如請求項47至49中任一項之醫藥組合物；從而治療該神經退化性疾患。
  52. 一種減少患有神經退化性疾患或處於發展該神經退化性疾患之風險之個體之中樞神經系統中之FUS RNA或FUS蛋白之方法，其包含投與治療有效量之以下中之至少一者：如請求項1至36中任一項之寡聚化合物；如請求項37之寡聚雙螺旋；如請求項38之反義化合物；如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如請求項47至49中任一項之醫藥組合物，從而減少中樞神經系統中之FUS RNA或FUS蛋白。
  53. 如請求項51或52之方法，其中該神經退化性疾患為肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
  54. 如請求項51或52之方法，其中該神經退化性疾患為額顳葉退化症(FTLD)。
  55. 如請求項51或52之方法，其中該神經退化性疾患為FTLD-FUS。
  56. 如請求項51或52之方法，其中該神經退化性疾患為ALS伴FTLD。
  57. 一種治療與FUS突變有關之神經退化性疾患之方法，其包含鑑別個體中之該FUS突變及向該個體投與治療有效量之以下中之至少一者：如請求項1至36中任一項之寡聚化合物；如請求項37之寡聚雙螺旋；如請求項38之反義化合物；如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸；及如請求項47至49中任一項之醫藥組合物。
  58. 如請求項57之方法，其中該FUS突變為選自以下之單核苷酸多型性：rs121909667、rs121909668、rs121909669、rs121909671、rs186547381、rs267606831、rs267606832、rs267606833、rs387906627、rs387906628、rs387907274、rs752076094、rs764487847、rs886041389、rs886041390、rs886041577、rs886041776、rs1085308015、rs1161032867、rs1555509569、rs1555509609、rs1555509693、rs1596908744、rs1596912983及rs121909668。
  59. 如請求項57之方法，其中該FUS突變選自S57del、S96del、G156E、G171-174del、G174-175del、G187S、G191S、G206S、R216C、G225V、G230C、R234C、R234L、R244C、M254V、S402_P411delinsGGGG、S462F、G466VfsX14、Y484AfsX514、R495X、R495EfsX527、G497AfsX527、G507D、K510WfsX517、K510E、S513P、R514S、R514G、G515C、E516V、H517D、H517P、H517Q、R518G、R518K、Q519IfsX9、R521C、R521G、R521H、R521L、R521S、R522G、R524S、R524T、R524W及P525L。
  60. 如請求項57之方法，其中鑑別該FUS突變包含定序來自該個體之FUS核酸或者將來自該個體之該FUS核酸與核酸探針接觸，該核酸探針與包含該突變之該FUS核酸之一部分互補。
  61. 如請求項50至60中任一項之方法，其中該投與係藉由鞘內投與。
  62. 如請求項55至61中任一項之方法，其中該神經退化性疾患之至少一個症狀或標誌經改善。
  63. 如請求項62之方法，其中該神經退化性疾患為ALS且該至少一個症狀或標誌選自肌肉無力、肌肉疲勞、口齒不清、抽搐、痙攣、該個體之中樞神經系統中之蛋白聚集體及其組合。
  64. 如請求項62之方法，其中該神經退化性疾患為FTLD且該至少一個症狀或標誌選自說話困難及行為異常。
  65. 如請求項50至64中任一項之方法，其中該方法預防或減緩疾病退行。
  66. 如請求項50至65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之症狀發生前個體。
  67. 如請求項50至65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之症狀性個體。
  68. 如請求項50至65中任一項之方法，其中該個體為該神經退化性疾患之先驅性個體。
  69. 一種減少細胞中之FUS RNA之方法，其包含將該細胞與如請求項1至36中任一項之寡聚化合物、如請求項37之寡聚雙螺旋、如請求項38之反義化合物及如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者接觸，從而減少該細胞中之FUS RNA。
  70. 一種減少細胞中之FUS蛋白之方法，其包含將該細胞與如請求項1至36中任一項之寡聚化合物、如請求項37之寡聚雙螺旋、如請求項38之反義化合物及如請求項39至46中任一項之經修飾之寡核苷酸中之至少一者接觸，從而減少該細胞中之FUS蛋白。
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