ES3033734T3 - Compositions comprising extract of poplar buds and uses thereof - Google Patents

Compositions comprising extract of poplar buds and uses thereof

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Andrea Lugli
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Abstract

La presente invención se refiere a una composición que comprende extracto de yemas de álamo para su uso en el tratamiento de la cavidad orofaríngea, del aparato urinario, del aparato digestivo/excretor, de afecciones de la piel y de infecciones bacterianas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Composiciones que comprenden un extracto de yemas de álamo y utilizaciones de las mismas
DESCRIPCIÓN
La presente invención se refiere a una composición que comprende un extracto de yemas de álamo para su utilización en el tratamiento de la cavidad orofaríngea, del aparato urinario, del aparato digestivo/excretor, de afecciones de la piel y de infecciones bacterianas.
ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
Es conocido en la bibliografía que el exudado resinoso del álamo negro(Populus nigra)constituye el elemento base del propóleo europeo y, en general, del propóleo producido por las abejas en zonas templadas.
El propóleo, conocido por sus numerosas actividades farmacológicas, es una sustancia producida por las abejas después de la recogida por éstas de exudados resinosos (principalmente de álamo negro). En promedio, se compone del 25-35 % de cera de abejas, el 5 % de polen, el 5 % de diversas sustancias presentes en las patas de las abejas y aproximadamente el 50 % de resinas vegetales.
Se conocen en la técnica pastillas para la garganta, tales como Apopros, para la protección de la garganta en forma de comprimidos que comprenden azúcar, glucosa, cera de propóleo, miel, un complejo de glicosaminoglicanos hidrolizantes de propóleo y goma xantana, extracto de propóleo, mentol, aceite de yema de Eugenia caryophyllus y otros ingredientes.
ElTrattato compiuto di farmacia teórica e praticade JJ Virey, de 1836, da a conocer una pomada fabricada con amapola, beleño y solano oscuro preparada con grasa de cerdo licuada para su utilización en el tratamiento como calmante, para calmar dolores, inflamaciones, quemaduras, hemorroides, para la cicatrización de varias regiones de la piel, para disipar las obstrucciones de la leche y como un componente de enemas calmantes para las inflamaciones del intestino delgado.
También se conocen en la bibliografía diversas utilizaciones de fármacos a base de yemas de álamo.
Dado el interés constante y creciente por la utilización de sustancias de origen natural para el tratamiento de numerosas afecciones, y dado el drástico peligro actual de extinción al que están expuestas las abejas, es importante encontrar productos de origen natural que puedan reemplazar de manera comparable, o incluso de manera más eficaz, a las sustancias producidas por las abejas.
CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN
Los autores de la presente invención han analizado extractos de yemas de álamo a efectos de verificar la posible utilización de los mismos con fines terapéuticos como alternativa completamente de origen vegetal al propóleo. A diferencia del propóleo, los extractos de yemas de álamo presentan también la ventaja de no contener sustancias de origen animal ni sustancias alergénicas, tales como los pólenes.
Los autores de la presente invención han verificado de manera sorprendente que, con respecto al propóleo europeo, los extractos de yemas de álamo presentan propiedades mucoadhesivas comparables o incluso mayores.
Los autores de la presente invención han demostrado también por primera vez una actividad antibacteriana eficaz, en particular contraStreptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosayStaphylococcus aureus,de extractos de yemas de álamo, opcionalmente liofilizados, opcionalmente liofilizados conjuntamente con gomas naturales (soportados en goma).
Por lo tanto, el objetivo de la presente invención es una composición, tal como se define en las reivindicaciones, para su utilización en el tratamiento de afecciones de la cavidad orofaríngea.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS FIGURAS
Figura 1. Ensayo de mucoadhesión de diversas formulaciones, realizado tal como se describe en el Ejemplo 1. Figura 1A. Porcentaje de mucoadhesividad de la composición: ejemplo de composición sólida 4 diluida (1:2,5 y 1:5) hacia células bucales humanas. Figura 1B. Porcentaje de mucoadhesividad de la composición: ejemplo de composición sólida 3 diluida (1:2,5 y 1:5) hacia células bucales humanas. Figura 1C. porcentaje de mucoadhesividad de la composición: ejemplo de composición fluida 4 no diluida o diluida (1:2 y 1:5) hacia células bucales humanas. Figura 1D. Porcentaje de mucoadhesividad de la composición: ejemplo de composición fluida 3 no diluida o diluida (1:2 y 1:5) hacia células bucales humanas.
Figura 2. Resistencia de la capa mucoadhesiva (obtenida con las diferentes formulaciones de la presente invención a diversas diluciones y en diferentes tiempos) a diferentes tiempos a una solución salivar simulada (solución fisiológica de NaCl al 0,9 %).
Figura 2A. Composición: ejemplo de composición sólida 4 (diluida 1:2,5) a diferentes tiempos (0 horas, 0,5 horas, 1 horas y 2 horas) en una solución salival simulada (solución fisiológica de NaCl al 0,9 %). Figura 2B. Composición: ejemplo de composición sólida 3 (diluida 1:2,5) a diferentes tiempos (tiempo: 0 horas, 0,5 horas, 1 hora y 2 horas) en una solución salival simulada (solución fisiológica de NaCl al 0,9 %). Figura 2C. Composición: ejemplo de composición de fluido 4 (diluida 1:2) a diferentes tiempos (tiempo: 0 horas, 0,5 horas, 1 hora y 2 horas) en una solución salival artificial.
Figura 3. Producción de IL6 en ensayo de barrera; los gráficos muestran la protección ejercida por la composición de la presente invención sobre las células, y los datos se expresan en términos de multiplicidad (F.O. (“fold over”)) en comparación con el control C-. Multiplicidad sobre C- = [IL-6 medida]/[IL-6 de C-]
Figura 3A. Composición: ejemplo de composición sólida 4. Figura 3B. Composición: ejemplo de composición sólida 3. Figura 3C. Composición: ejemplo de composición de fluido 4. Figura 3D. Composición: ejemplo de composición de fluido 3.
La figura 4 representa gráficamente el efecto barrera calculado para las diversas realizaciones de la presente invención descrita en términos de porcentaje de inhibición de la liberación de IL6.
Figura 4A. Composición: ejemplo de composición sólida 4. Figura 4B. Composición: ejemplo de composición sólida 3. Figura 4C. Composición: ejemplo de composición de fluido 4. Figura 4D. Composición: ejemplo de composición de fluido 3.
La figura 5 representa gráficamente los valores de IL-6 producidos por las células en términos de multiplicidad sobre C- en el control interno.
Figura 5A. Composición: ejemplo de composición sólida 4. Figura 5B. Composición: ejemplo de composición sólida 3. Figura 5C. Composición: ejemplo de composición de fluido 4. Figura 5D. Composición: ejemplo de composición de fluido 3.
Figura 6. Actividad antioxidante del extracto de yemas de álamo, según la presente invención, en comparación con el ácido ascórbico.
Figura 7. Actividad inhibidora de la biopelícula bacteriana del extracto de yemas de álamo según la presente invención.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Por tanto, el objetivo de la presente invención es una composición que comprende:
extracto de yemas de álamo en un porcentaje en peso del 0,1 al 70 % y uno o más portadores, excipientes, aromas y conservantes aceptables farmacéuticamente para su utilización en el tratamiento de afecciones de la cavidad orofaríngea, en la que la composición está en forma de fluido o en forma sólida, en la que, cuando la composición está en forma de fluido, la composición consiste en:
extracto de yemas de álamo en un porcentaje en peso del 0,1 al 70 %,
excipientes en un porcentaje en peso del 1 al 80 %
disolventes en un porcentaje en peso del 0 al 80 %
zumos de frutas naturales o liofilizados en un porcentaje en peso del 0 al 50 %
aromas naturales o artificiales en un porcentaje en peso del 0,05 al 2 %
aceites esenciales en un porcentaje en peso del 0,01 al 1 %.
y cuando la composición está en forma sólida, la composición consiste en:
extracto de yemas de álamo secas liofilizadas en un porcentaje en peso del 0,5 al 10 %,
excipientes en un porcentaje en peso del 10 al 97 %
aromas naturales o artificiales en un porcentaje en peso del 0,5 al 3 %
aceites esenciales en un porcentaje en peso del 0,05 al 1 %
zumos de frutas y/o extractos naturales en polvo o liofilizados en un porcentaje en peso del 0,5 al 15 % edulcorantes en un porcentaje en peso del 1 al 10 %,
en la que dicho extracto de yemas de álamo es un extracto que se puede obtener mediante un procedimiento que comprende las siguientes etapas:
a. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 85°
b. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 13° c. obtener un extracto alcohólico con múltiples fracciones, mediante la mezcla de los extractos preparados en a. y b. d. decantar y/o centrifugar y filtrar dicho extracto alcohólico (c.) y recoger el sobrenadante
e. someter el sobrenadante filtrado obtenido en d. a concentración y liofilización y, opcionalmente,
f. añadir al sobrenadante filtrado obtenido en d. goma arábiga y, a continuación, someterlo a concentración y liofilización.
Por "extracto de yemas de álamo", a los efectos de la presente invención, se entiende un extracto preparado a partir de yemas de hojas, o principalmente de yemas de hojas, de álamo negro(Populus nigra).
En particular, el extracto, según la presente invención, es un extracto de yemas de hojas sin abrir. Las yemas se encuentran sin abrir principalmente en primavera, que en Europa suele ser de marzo a mayo.
Según una realización de la presente invención, el único principio activo de la composición está representado por el extracto de yemas de álamo.
En la composición, según cualquiera de las realizaciones descritas anteriormente, el extracto de yemas de álamo puede estar asociado con una goma natural en una relación extracto:goma comprendida en el intervalo de 1:2 -1:20.
La composición, tal como se ha definido anteriormente y se ejemplifica con más detalle en los ejemplos a continuación, puede utilizarse, como se menciona en el presente documento, para el tratamiento de afecciones de la cavidad orofaríngea. Dichas afecciones pueden seleccionarse, por ejemplo, entre dolor de garganta, faringitis, aftas, inflamación o infección de la cavidad oral.
Para la elaboración de la composición de la presente invención, se podría utilizar, de manera preferente, un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo con una graduación alcohólica de 35 a 70 grados. En una realización especialmente preferente, el extracto podría liofilizarse. Opcionalmente, el extracto podría liofilizarse conjuntamente con goma natural a efectos de aumentar la solubilidad del extracto en agua y facilitar el procesamiento del extracto seco.
Sin embargo, los datos obtenidos, y que pueden observarse en la sección experimental, muestran que la liofilización conjunta (soporte) con goma natural aumenta las características mucoadhesivas y protectoras del extracto, haciendo particularmente eficaces las composiciones de la presente invención que comprenden el extracto soportado en goma.
En particular, el extracto de yemas de álamo podría ser un extracto que se puede obtener mediante un proceso que comprende las siguientes etapas:
a. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 85°
b. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 13°
c. obtener un extracto alcohólico con múltiples fracciones mediante la mezcla de los extractos preparados en a. y b. d. decantar y/o centrifugar y filtrar dicho extracto alcohólico (c.) recogiendo el sobrenadante
e. el sobrenadante filtrado obtenido en d. se somete a concentración y liofilización y, opcionalmente,
f. al sobrenadante filtrado obtenido en d. se le añade una goma natural, (seleccionada entre las gomas indicadas a continuación en la descripción o sus combinaciones, en particular se le añade goma arábiga) y, por tanto, se somete a concentración y liofilización.
En particular, los extractos en a. y b. pueden prepararse mediante extracción por digestión del percolado con movimiento del único disolvente de extracción, y mediante extracción con un extractor provisto de agitador de paletas, y moviendo tanto el disolvente como las yemas. La extracción puede llevare a cabo a una temperatura comprendida entre 35 y 55 °C, por ejemplo, a una temperatura comprendida en el intervalo de 40 °C a 50 °C (incluidos los extremos), en particular a una temperatura de aproximadamente 40 °C o 50 °C.
La extracción se puede llevar a cabo durante un período de tiempo de 4 a 12 horas, por ejemplo, durante aproximadamente 8 horas.
Los extractos preparados en a. y b. se mezclan como en el punto c., de manera preferente, en una proporción de 50:50, pero también pueden mezclarse en una proporción de 35:65, 40:60, 45:55, 55:45, 60:40 o 65:35. La mezcla se lleva a cabo añadiendo gradualmente (velocidad de adición: 15 a 20 l/min) el extracto alcohólico de 13° al extracto alcohólico de 85°, aunque también es posible la adición inversa. La mezcla se lleva a cabo a una temperatura de 20 °C ± 5 °C.
El extracto con múltiples fracciones preparado en el punto c. se somete a clarificación mediante decantación en recipientes provistos de un fondo cónico durante un mínimo de 72 horas. Transcurridas dichas horas, el extracto se vierte y se filtra en un filtro de celulosa. Dicha filtración puede llevarse a cabo, por ejemplo, en un filtro de panel con un límite de corte de 0,5 a 50 mieras (incluidos los extremos), en una solo etapa o en varias etapas consecutivas, tales como, por ejemplo, un límite de corte de 0,5 micras, 15 micras, o un límite de corte de 30 micras o incluso superior. Al final del filtrado se controla la graduación alcohólica y se ajusta a los grados alcohólicos de 50° ± 15°.
Como alternativa a la decantación, el extracto se puede separar mediante centrifugación en una centrífuga vertical alimentada a un caudal de 5 a 20 l/min.
El extracto clarificado como en d. podría utilizarse tal cual como extracto alcohólico con múltiples fracciones.
El extracto clarificado como en d. se somete a un proceso de concentración y liofilización como en e. para proporcionar un extracto liofilizado que puede utilizarse para formulaciones sólidas.
El extracto clarificado como en d., al que se ha añadido goma arábiga o goma natural, se somete a concentración y liofilización como en f. para obtener un extracto liofilizado soportado en goma arábiga, que puede utilizarse para formulaciones sólidas. La goma arábiga, o una o más gomas naturales, se utilizan en una cantidad tal que se obtiene un porcentaje del 10-20 % sobre el sólido.
Diagrama 1: diagrama de bloques del extracto alcohólico con múltiples fracciones de yemas de álamo
Diagrama 2: diagrama de bloques del extracto con múltiples fracciones liofilizado de yemas de álamo
Diagrama 3: diagrama de bloques del extracto con múltiples fracciones liofilizado soportado en goma arábiga (o una o más gomas naturales, tal como se indica a continuación) de yemas de álamo.
El extracto obtenido según el procedimiento descrito anteriormente se caracteriza por la siguiente composición:
la siguiente composición:
Los valores se proporcionan mediante la media de análisis de diferentes extractos según la metodología indicada anteriormente.
Según una realización, el extracto de yemas de álamo en cualquier forma definida anteriormente, podría estar en un porcentaje en peso del 0,3 al 45 % en peso.
Por ejemplo, la composición en forma de fluido podría ser según los siguientes ejemplos.
Ejemplo de composición de fluido 1
Ejemplo de composición de fluido 2
Ejemplo de composición de fluido 3 (aerosol fuerte)
Ejemplo de composición de fluido 4 (aerosol sin alcohol)
Ejemplo de composición sólida 1
Ejemplo de composición sólida 2
Ejemplo de composición sólida 3 (comprimidos para adultos)
Ejemplo de composición sólida 4 (comprimidos infantiles)
La composición de la presente invención podría estar, por ejemplo, en forma de polvo, comprimido, cápsula, gelatina dura o blanda, jarabe, aerosol, suspensión.
Por lo tanto, se podrían utilizar uno o más de los portadores, excipientes, aromas y conservantes aceptables farmacéuticamente conocidos por un experto en la materia.
En sentido amplio, cuando se elabora en forma de fluido, la composición comprenderá como principio activo el extracto de yemas de álamo, en cualquier realización descrita en el presente documento, y uno o más excipientes, disolventes, aromas, conservantes, etc., conocidos por un experto en la materia. A modo de ejemplo no limitativo, se podrían utilizar como excipientes una o más gomas naturales, tales como, por ejemplo, goma arábiga, goma xantana, goma guar, goma tara o mezclas de las mismas; polialcoholes naturales y sintéticos, tales como, por ejemplo, sacarosa, manitol, sorbitol, xilitol o mezclas de los mismos; celulosa y derivados de celulosa, tales como, por ejemplo, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o mezclas de las mismas; polímeros sintéticos, tales como, por ejemplo, polivinilpirrolidona, polimetacrilatos o mezclas de los mismos; maltodextrinas, inulina y/o ciclodextrinas.
Como disolventes, siempre a modo de ejemplo no limitativo, se podrían utilizar etanol, isopropanol, glicerina, propilenglicol o mezclas de los mismos.
También se pueden utilizar zumos de frutas naturales o liofilizados, como, por ejemplo, zumo de manzana, pera, naranja, limón, frambuesa, arándano o mezclas de los mismos; aromas naturales o artificiales, tales como, por ejemplo, aroma de fresa, limón, naranja, frambuesa, melocotón, cereza, bayas mixtas, mandarina o mezclas de los mismos; aceites esenciales (A.E.), tales como, por ejemplo, aceite esencial de limón, naranja, menta, eucalipto o mezclas de los mismos.
En términos generales, cuando se elabora en forma sólida, la composición comprenderá, como principio activo, el extracto de yemas de álamo, en cualquier realización descrita en el presente documento, y uno o más excipientes, disolventes, aromas, conservantes, etc., conocidos por un experto en la materia. A modo de ejemplo no limitativo, se podrían utilizar como excipientes uno o más azúcares, tales como, por ejemplo, sacarosa, manitol, sorbitol, xilitol o mezclas de los mismos; celulosa y derivados de celulosa, tales como, por ejemplo, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa sódica o mezclas de los mismos; maltodextrinas, ciclodextrinas y/o inulina.
Se podrían utilizar uno o más almidones y derivados de almidón, tales como, por ejemplo, almidón de arroz, almidón de patata, almidón de maíz, almidón pregelatinizado o mezclas de los mismos; lubricantes, tales como, por ejemplo, ácido esteárico, estearato de magnesio, behenato de glicerilo o mezclas de los mismos; aromas naturales y sintéticos, tales como, por ejemplo, aroma de fresa, limón, naranja, frambuesa, melocotón, cereza, bayas mixtas o mezclas de los mismos; aceites esenciales, tales como, por ejemplo, aceite esencial de limón, naranja, menta, eucalipto o mezclas de los mismos; zumos de frutas liofilizados, tales como, por ejemplo, zumo de manzana, pera, naranja, limón, frambuesa, arándano, fresa, saúco o mezclas de los mismos; polvo o extractos naturales liofilizados de lima (árbol), malva, aloe, malvavisco o mezclas de los mismos; edulcorantes, tales como, por ejemplo, miel, azúcares, aspartamo, ciclamatos, acesulfamo K, extractos de estevia, sucralosa o mezclas de los mismos.
En cualquier lugar de la descripción y en las reivindicaciones, la expresión "que comprende" podría ser reemplazada por la expresión "que consiste en" o "fabricado de".
Los siguientes ejemplos se proporcionan a efectos de aclarar adicionalmente la presente invención y no con fines limitativos.
EJEMPLOS
1. Ensayo de mucoadhesión
Un buen efecto mucoadhesivo es un requisito de importancia fundamental para que el producto pueda permanecer en el sitio de acción previsto (mucosa faríngea) y lleve a cabo mecánicamente en el mismo sus efectos protectores y curativos, tal como ya se ha explicado en la descripción anterior. El objetivo principal de este ensayo es evaluar la adhesiónin vitrode la composición de la presente invención en diferentes formulaciones en un modelo celular adecuado, que prevé la utilización de células bucales. Un segundo objetivo del ensayo es determinar la resistencia a la bioadhesión a lo largo del tiempo frente a un flujo de solución salival artificial. La mucoadhesión de la composición de la presente invención en diferentes formulaciones se determinó mediante la evaluación de la capacidad del producto para adherirse a las células mediante la inhibición de la unión de la lectina (una proteína con alta afinidad por los residuos de glucósido y manósido) con las glucoproteínas de membrana. El grado de mucoadhesión se mide mediante una reacción colorimétrica que permite cuantificar los sitios de las glucoproteínas no unidos por la lectina, como unidos por el producto mucoadhesivo. La reacción colorimétrica es posible gracias a un peculiar sistema de marcaje de lectinas, ilustrado en el siguiente diagrama:
La disminución del valor de absorbencia es proporcional a la capacidad del producto para adherirse ("mucoadherirse") a las células. La capacidad mucoadhesiva se expresa como un porcentaje de inhibición de la unión glucoproteína/lectina y representa el porcentaje de sitios de mucosa ocupados por el producto, según la ecuación:
Porcentaje de mucoadhesión del producto = (1 - absorbencia de la muestra/absorbencia de control) x 100El producto se aplica después de la dilución, teniendo en cuenta el hecho de que, en condiciones reales de uso, inmediatamente después de la administración, tiene lugar la mezcla con la saliva presente en la cavidad orofaríngea.
Los siguientes gráficos muestran los resultados obtenidos con diferentes muestras de la composición según la presente invención en diferentes formulaciones.
Tabla 1 - Porcentaje de mucoadhesión del producto en forma de comprimidos para disolución por vía oral según el ejemplo (ejemplo de composición sólida 3) diluido 1:2,5 hacia células bucales humanas
Dilución 1:2,5 frente a 1:5 p < 0,01
Tabla 2 - Porcentaje de mucoadhesión del producto (ejemplo de composición sólida 4) diluido 1:2,5 y 1:5 hacia células bucales humanas
Dilución 1:2,5 frente a 1:5 p < 0,01
Tabla 3 - Porcentaje de mucoadhesión del producto (ejemplo de composición de fluido 4) no diluido o diluido (1:2 y 1:5) hacia células bucales humanas
No diluida frente a diluida 1:2 p > 0,05. No diluida frente a 1:5 p < 0,05. Diluida 1:2 frente a diluida 1:5 p > 0,05.
Tabla 4 - Porcentaje de mucoadhesión del producto (ejemplo de composición de fluido 3) no diluido o diluido (1:2 y 1:5) hacia células bucales humanas
No diluida frente a diluida 1:2p < 0,01. Diluida 1:2 frente a diluida 1:5p < 0,01
En la segunda fase del experimento, se evaluó la capacidad de la composición para permanecer adherida a la membrana mucosa a lo largo del tiempo, sometiendo el sistema a un flujo de 2 ml/min de saliva artificial, compuesta por una solución acuosa isotónica que contenía un tampón de fosfato a pH 7 y mucina al 0,5 %. Los resultados obtenidos destacaron la interesante capacidad del producto para permanecer bioadherido a las membranas mucosas durante la primera hora de aplicación.
La resistencia de la capa mucoadhesiva obtenida con la composición ejemplo de composición sólida 3, diluida 1:2,5 en diferentes tiempos, 0,5 horas, 1 hora y 2 horas frente a una solución salival simulada (solución fisiológica de NaCl al 0,9 %) se describe en la tabla 5, a continuación.
Tiempo 0 horas frente a tiempo 0,5 horas p < 0,05; tiempo 0,5 horas frente a tiempo 1 hora p > 0,05
Tiempo 2 horas frente a tiempo 1 hora p < 0,05
Tabla 6: resistencia de la capa mucoadhesiva obtenida con la composición fórmula 150728/1 de comprimidos infantiles, diluida 1:2,5 en diferentes tiempos, 0,5 horas, 1 hora y 2 horas frente a una solución salival simulada (solución fisiológica de NaCl al 0,9 %).
Tiempo 0 horas frente a tiempo 0,5 horas p > 0,05; tiempo 0,5 horas frente a tiempo 1 hora p < 0,05
Tiempo 2 horas frente a tiempo 1 hora p < 0,01
Tabla 7: resistencia de la capa mucoadhesiva obtenida con la composición ejemplo de composición de fluido 4, diluida 1:2 en diferentes tiempos (0,5-2 horas) frente a una solución salival simulada.
Tiempo 0 horas frente a tiempo 0,5 horas p > 0,05; tiempo 0,5 horas frente a tiempo 1 hora p < 0,05
Tiempo 1 hora frente a tiempo 0 horass p < 0,01; tiempo 2 horas frente a tiempo 1 hora p > 0,05
Tabla 8: resistencia de la capa mucoadhesiva obtenida con el producto ejemplo de composición de fluido 3, diluido 1:2 en diferentes tiempos (0,5-2 horas) frente a una solución salival simulada.
Tiempo 0 horas frente a tiempo 0,5 horas p < 0,05; tiempo 0,5 horas frente a tiempo 1 hora p > 0,05
Tiempo 1 hora frente a tiempo 0 horass p = 0,01; tiempo 2 horas frente a tiempo 1 hora p > 0,05
Los resultados obtenidos en este experimento demuestran que las diferentes formulaciones de la composición de la presente invención poseen una alta capacidad mucoadhesiva hacia las células bucales. Además, la evaluación de la resistencia de la capa protectora mucoadhesiva al fluir con una solución salival artificial permitió destacar una buena capacidad de retención de la mucoadhesión durante la primera hora de aplicación.
A la luz de los resultados obtenidos, es posible afirmar que la composición de la presente invención, demostrando poseer una buena y resistente mucoadhesividad, puede desempeñar un verdadero papel protector sobre la membrana mucosa orofaríngea.
2. Ensayo de barrera
El objetivo del ensayo es demostrar el mecanismo de acción de la composición de la presente invención mediante el análisis de su capacidad filmogénica y protectora en comparación con un agente irritante conocido: el agente utilizado es la membrana de lipopolisacárido (LPS), un modelo clásico de inducción inflamatoria. Dicho ensayo tiene como objetivo destacar la capacidad eficaz del producto para limitar el contacto entre la membrana mucosa y los agentes irritantes externos.
El agente irritante seleccionado se aisló de la membrana celular deEscherichia coli.Las dimensiones del LPS son tales que permiten considerar la barrera eficaz para proteger la membrana mucosa del polvo, el smog, el polen y otros agentes que concurren a la irritación y, por lo tanto, la aparición de diversas patologías que afectan a este entorno particular y delicado.
Analizando el protocolo experimental con más detalle, se evalúa la capacidad de la muestra para actuar como barrera midiendo la producción de IL6 y su consecuencia del contacto entre una capa de células (fibroblastos) y el LPS. El sistema experimental utiliza pocillos Transwell especiales, equipados con una membrana semipermeable recubierta de colágeno que impide el contacto directo entre las células, depositadas en el fondo, y la muestra, estratificada sobre la membrana semipermeable saliente, que representa la única vía de comunicación entre las dos partes del pocillo. El LPS se inocula en el espacio sobre la muestra, por lo que el cruce de la membrana será tanto más difícil cuanto mayor sea el efecto barrera ejercido por la propia muestra. Por lo tanto, la cuantificación de las interleucinas producidas a las 24 horas de la adición del LPS proporciona una evidencia directa del efecto barrera ejercido por la muestra analizada. La inhibición de IL6 es una medición directa del efecto barrera.
El efecto barrera (EB) se expresa como un porcentaje de la reducción de la liberación de IL-6 y se obtiene a través de la comparación con el valor obtenido del Control Positivo (C+), es decir, de células tratadas con el único LPS en ausencia de la muestra.
% EB = % de inhibición de IL-6 (pg/ml) producida
Los resultados obtenidos en el experimento realizado por triplicado con diferentes realizaciones de la composición de la presente invención se presentan en las siguientes tablas. Debido a la presencia de resinas en altas concentraciones, el ensayo de barrera se llevó a cabo tanto con el producto diluido 1:2,5 como con el producto diluido 1:5. En primer lugar, se presentan los picogramos de IL6 secretada por las células después de la exposición a LPS y, en la siguiente tabla, el porcentaje de inhibición en comparación con el control positivo.
TABLA 9: Producción de L6 en ensayo barrera con una formulación de la composición de la presente invención en comprimidos para adultos (ejemplo de composición sólida 3) según los ejemplos descritos en la sección detallada de la presente invención
Muestra IL-6 (pg/uL) Media Desv. Est.
Comprimidos1:5 LPS 1 330,41
para adultos
1:5 LPS 2 357,924 343,814 13,77
1:5 LPS 3 343,109
1:2,5 LPS 1 314,184
1:2,5 LPS 2 339,581 329,234 13,336 1:2,5 LPS 3 333,938
1:5 LPS 1 281,027
1:5 LPS 2 328,999 308,54 24,752
1:5 LPS 3 315,595
1:2,5 LPS 1 326,883
1:2,5 LPS 2 362,862 350,399 20,378 1:2,5 LPS 3 361,451
Control 1 (LPS) 638,705
Control 2 (LPS) 689,499 675,86 32,554 Control 3 (LPS) 699,376
Control - 1 (MEM) 62,328
Control - 2 (MEM) 63,033 64,679 3,48 Control - 3 (MEM) 68,677
A partir de los resultados, es evidente una notable reducción de la concentración de IL-6 producida en los experimentos en los que está presente el producto de ensayo, en ambas diluciones, exhibiendo una barrera prolongada en el tiempo, eficaz también en caso de pérdida parcial de producto debido a la incapacidad de disolver lentamente el comprimido en la boca.
El valor de IL-6, igual a 64,6 pg/pt, detectado para el control negativo, es asimilable a un valor basal normal, es decir, a una afección no inflamatoria. El gráfico en la figura 2A muestra claramente la protección ejercida por el producto sobre las células: los datos se expresan en términos de multiplicidad sobre (F.O.) en comparación con el control C-. A partir de los valores medios de IL-6 medidos en el ensayo de barrera y en el control positivo, se calcula el porcentaje de reducción de la liberación de IL-6:
100 - [(IL-6 MUESTRA)/(IL-6 C+) X 100]
Por lo tanto, aplicando la fórmula se obtiene un valor de reducción de la producción de IL-6, en presencia de la muestra de ensayo, que es del 54 % a diluciones 1:5 y del 48 % a diluciones 1:2,5, en comparación con el control positivo descrito en la tabla 10 para la composición de la presente invención fabricada en forma de comprimidos para adultos (ejemplo de composición sólida 3), tal como se describe en la sección detallada anteriormente.
Efecto barrera
Muestra % de inhibición de Media Desv. Est.
liberación de IL-6
Comprimidos para1:5 LPS 1 58,419
adultos
1:5 LPS 2 51,321 54,348 3,662 1:5 LPS 3 53,305
Muestra % de inhibición de Media Desv. Est.
liberación de IL-6
1:2,5 LPS 1 51,635
1:2,5 LPS 2 46,311 48.155 3,015 1:2,5 LPS 3 46,52
CONTROL 1 (LPS) 0
CONTROL 2 (LPS) 0 0 0 CONTROL 3 (LPS) 0
Tabla 11. Producción de IL6 en el ensayo de barrera con formulación de la composición de la presente invención en comprimidos infantiles (ejemplo de composición sólida 4) según los ejemplos descritos en la sección detallada de la presente invención.
Muestra IL-6 (pg/uL) Media Desv. Est. Comprimidos1:5 LPS 1 330,41
infantiles
1:5 LPS 2 357,924 343,814 13,77 1:5 LPS 3 343,109
1:2,5 LPS 1 314,184
1:2,5 LPS 2 339,581 329,234 13,336 1:2,5 LPS 3 333,938
CONTROL 1 (LPS) 638,705
CONTROL 2 (LPS) 689,499 675,86 32,554 CONTROL 3 (LPS) 699,376
CONTROL - 1 (MEM) 62,328
CONTROL - 2 (MEM) 63,033 64,679 3,48 CONTROL - 3 (MEM) 68,677
A partir de los valores medios de IL-6 medidos en el ensayo de barrera y en el control positivo, se calcula el porcentaje de reducción de la liberación de IL-6: 100 - [(IL-MUESTRA)/(IL-6 C+) X 100]
Por lo tanto, aplicando la fórmula se obtiene un valor de reducción de la producción de IL-6, en presencia de la muestra de ensayo, que es del 49 % a diluciones 1:5 y del 51 % a diluciones 1:2,5, en comparación con el control positivo descrito en la tabla 12 para la composición de la presente invención fabricada en forma de comprimidos infantiles (ejemplo de composición sólida 4), tal como se describe en la sección detallada anteriormente.
Efecto barrera
Muestra % de inhibición de Media Desv. Est.
liberación de IL-6
Comprimidos1:5 LPS 1 51,113
infantiles
1:5 LPS 2 47,042 49,129 2,037 1:5 LPS 3 49,234
1:2,5 LPS 1 53,513
1:2,5 LPS 2 49,756 51,287 1,973 1:2,5 LPS 3 50,591
CONTROL 1 (LPS) 0
CONTROL 2 (LPS) 0 0 0 CONTROL 3 (LPS) 0
Valores redondeados a 3 cifras decimales
Tabla 13: producción de IL-6 en el ensayo de barrera con la formulación de la composición de la presente invención en un aerosol fuerte (ejemplo de composición de fluido 3), según los ejemplos descritos en la sección detallada de la presente invención.
A partir de los valores medios de IL-6 medidos en el ensayo de barrera y en el control positivo, se calcula el porcentaje de reducción de la liberación de IL-6: 100 - [(IL-MUESTRA)/(IL-6 C+) X 100]. Por lo tanto, aplicando la fórmula se obtiene un valor de reducción de la producción de IL-6, en presencia de la muestra de ensayo, que es del 39 % en comparación con el control positivo indicado en la tabla 14 para la composición de la presente invención elaborada en forma de aerosol fuerte (ejemplo de composición de fluido 3), tal como se describe en la sección detallada anteriormente.
Tabla 15, a continuación, producción de IL-6 en el ensayo de barrera con la formulación de la composición de la presente invención en un aerosol sin alcohol (ejemplo de composición de fluido 4), según los ejemplos descritos en la sección detallada de la presente invención.
A partir de los valores medios de IL-6 medidos en el ensayo de barrera y en el control positivo, se calcula el porcentaje de reducción de la liberación de IL-6: 100 - [(IL-MUESTRA)/(IL-6 C+) X 100]. Por lo tanto, aplicando la fórmula se obtiene un valor de reducción de la producción de IL-6, en presencia de la muestra de ensayo, que es del 56 % en comparación con el control positivo indicado en la tabla 16 para la composición de la presente invención elaborada en forma de aerosol sin alcohol (ejemplo de composición de fluido 4), tal como se describe en la sección detallada anteriormente.
Para validar el procedimiento utilizado, y para verificar que los resultados dependen únicamente del efecto barrera de las muestras de ensayo y excluyen cualquier efecto farmacológico, inmunológico o metabólico (por ejemplo, modulación de la síntesis de citocinas), el ensayo de barrera fue asistido por un CONTROL INTERNO (CI) llevado a cabo concomitantemente en cada muestra.
En el ensayo del CI, en primer lugar, las células se estimulan con el LPS, mientras que la muestra se añade al Transwell sólo posteriormente: en este caso, un 0 % de inhibición de IL6 indicaría claramente que la presencia de la composición de ensayo proporciona una protección mecánica, sin interferir de ninguna manera con la síntesis de citocinas celulares.
Los valores de concentración de IL-6 medidos en experimentos de control interno, en los que dicho tratamiento con la composición en forma de comprimidos para adultos (ejemplo de composición sólida 3) se lleva a cabo después de la exposición a LPS, se describen en la tabla 17, a continuación:
Multiplicidad en comparación con C- en el control interno
MUESTRA F.O. (C-) Media (%) Desv. Est. (%) Comprimidos para1:5 LPS 1 11,821
adultos
1:5 LPS 2 12,278 12,059 0,229 1:5 LPS 3 12,076
1:2,5 LPS 1 10,97
1:2,5 LPS 2 11,321 11,112 0,185 1:2,5 LPS 3 11,045
CONTROL 1 (LPS) 13,767
CONTROL 2 (LPS) 12,087 12,427 1,207 CONTROL 3 (LPS) 11,427
CONTROL - 1 (MEM) 1,099
CONTROL - 2 (MEM) 0,908 1 0,096 CONTROL - 3 (MEM) 0,993
Valores redondeados a 3 cifras decimales
Los valores de concentración de IL-6 medidos en experimentos de control interno, en los que dicho tratamiento con la composición en forma de comprimidos infantiles (ejemplo de composición sólida 4) se lleva a cabo después de la exposición a LPS, se describen en la tabla 18 a continuación:
Multiplicidad en comparación con C- en el control interno
MUESTRA F.O. (C-) Media (%) Desv. Est. (%) Comprimidos+ LPS 1 11,172
infantiles
LPS 2 9,481 10,002 1,015 LPS 3 9,353
,5 LPS 1 11,598
,5 LPS 2 12,268 11,903 0,339 ,5 LPS 3 11,842
CONTROL 1 (LPS) 13,767
CONTROL 2 (LPS) 12,087 12,427 1,207 CONTROL 3 (LPS) 11,427
CONTROL - 1 (MEM) 1,099
CONTROL - 2 (MEM) 0,908 1 0,096 CONTROL - 3 (MEM) 0,993
Valores redondeados a 3 cifras decimales
Los valores de concentración de IL-6 medidos en experimentos de control interno, en los que dicho tratamiento con la composición en forma de aerosol fuerte (ejemplo de composición sólida 3) se lleva a cabo después de la exposición a LPS, se describen en la tabla 19 a continuación:
Los valores de concentración de IL-6 medidos en experimentos de control interno, en los que dicho tratamiento con la composición en forma de un aerosol sin alcohol (ejemplo de composición de fluido 4) se lleva a cabo después de la exposición a LPS, se indican en la tabla 20 a continuación:
Se encuentra que los valores obtenidos en estos experimentos son homogéneos con los del control positivo del ensayo de barrera (ausencia de muestra) y confirman que la muestra aplicada después de la exposición a LPS no influye en la producción de mediadores de la inflamación y, por lo tanto, no tiene un efecto antiinflamatorio directo. Esto se representa mejor en los gráficos presentados en la figura 5, que expresan los valores de IL-6 producida por células en términos de multiplicidad sobre C.
3. Ensayo de DPPH para la actividad atrapadora de radicales
La actividad antioxidante atrapadora dirigida por el extracto de yemas de álamo, según la presente descripción (obtenido con el procedimiento descrito anteriormente y que tiene las características descritas anteriormente), se evaluó mediante el ensayo de DPPH (2,2-difenil-1 -picrilhidrazilo); el DPPH es un radical coloreado estable: cambia de color al reaccionar químicamente con un compuesto antioxidante y puede detectarse mediante lectura espectrofotométrica. Por lo tanto, el objetivo de este ensayo es demostrar que las muestras analizadas poseen una buena actividad antioxidante, la cual se lleva a cabo de forma puramente química (transferencia de hidrógeno a un radical libre) sin involucrar mecanismos farmacológicos, inmunológicos o metabólicos cuando se aplican sobre sustratos biológicos. La muestra analizada es el extracto de yemas de álamo, según la presente descripción, en concentraciones de 1.000, 100 y 10 ug/ml. La actividad se comparó con la de la vitamina C, utilizada como control positivo. Tal como se puede observar en la figura 6, el extracto de yemas de álamo, según la presente invención, presenta una excelente actividad antioxidante en las concentraciones más altas de 1.000 y 100 ug/ml y una buena actividad en la concentración más baja de 10 ug/ml.
4. Ensayo de inhibición de la formación de biopelículas
La metodología utilizada en este ensayo aprovecha la capacidad de los microorganismos para adherirse y formar biopelículas en pocillos de placas de poliestireno: la masa de la biopelícula se determinará, a continuación, mediante tinción con violeta cristal. La bacteria utilizada en el ensayo es la que con mayor frecuencia implica infecciones de la membrana mucosa faríngea, es decir,Streptococcus pyogenes,la muestra analizada es el extracto de yemas de álamo, según la presente descripción, (que se puede obtener con el procedimiento descrito anteriormente y que tiene las características descritas anteriormente). La primera fase del ensayo consiste en la evaluación de la concentración mínima inhibitoria (CMI), es decir, la concentración de muestra más baja que inhibe el crecimiento de microorganismos. El antibiótico gentamicina se seleccionó como control positivo. En la segunda fase, se mide la capacidad de inhibir la formación de biopelículas; las muestras de ensayo se añaden al medio en concentraciones iguales o inferiores a la CMI, para descartar que la actividad antibiopelícula sea atribuible a una inhibición del crecimiento microbiano. Después de un periodo de incubación adecuado, la biopelícula formada se tiñó con violeta cristal; después de la tinción, el exceso de colorante se eliminó con agua y el adherido a la biopelícula se disolvió en etanol. La solución resultante se analizó mediante espectrofotómetro a 570 nm: la intensidad de la absorbancia de este análisis será tanto mayor cuanto mayor sea la masa de la biopelícula formada; por consiguiente, la actividad antibiopelícula y la absorbancia registrada son inversamente proporcionales entre sí. Para cada muestra, las concentraciones utilizadas fueron 1 x CMI, 0,5 x CMI y 0,1 CMI. Los datos indicados son la media de 9 mediciones realizadas por triplicado. La significancia estadística se calculó con la prueba t, *p < 0,01 y *p < 0,001 (bacterias tratadas frente a bacterias no tratadas). El ensayo muestra cómo el extracto de la presente invención es más eficaz en comparación con un extracto hidroalcohólico estándar al 50 %.
5. Ensayo comparativo de mucoadhesión y resistencia al lavado entre la composición según la presente invención, en diferentes realizaciones de la misma, y el aerosol de propóleo.
Aerosol de propóleo
agua desionizada en 3,3 %
extracto de propóleo diluido con múltiples fracciones 41,6 %
glicerina vegetal en 55 %
aceite esencial de limón diluido 0,1 %
aerosol de propóleo sin alcohol, agua desionizada en 57,2 %
extracto de propóleo liofilizado e 4 %
AROMA DE CEREZA natural p 0,8 %
aroma natural de fresa 1,2 %
zumo de limón claro 1,8 %
glicerina vegetal en 35 %
Los ensayos se llevaron a cabo, tal como se ha descrito anteriormente para el ejemplo 1, ensayando las composiciones de la presente invención y un aerosol de propóleo a diferentes diluciones.
Los datos indicados en las tablas muestran cómo, sobre todo a diluciones más altas, las composiciones de la presente invención tienen mayor efecto mucoadhesivo en comparación con el propóleo.
Tabla 21
Tabla 22
Tabla 23
Tabla 24
Tal como es evidente a partir de los ensayos descritos anteriormente, las composiciones de ensayo muestran cómo, en cualquier realización ensayada (sólida, aerosol con alcohol, aerosol sin alcohol), el extracto de yemas de álamo posee una capacidad mucoadhesiva superior a la del propóleo, apreciable, en particular, a diluciones más elevadas de los productos de ensayo, tal como es evidente a partir de los datos obtenidos con diluciones 1:5.
6. Preparación del extracto hidroalcohólico con múltiples fracciones
Se fragmentaron yemas de álamo negro(Populus nigra)y se sometieron a dos etapas de extracción, mediante un extractor equipado con agitador mecánico, en etanol a concentraciones decrecientes, realizando la primera etapa con etanol al 85 % y una segunda etapa con etanol al 13 %. La proporción D/S utilizada es igual a 1:6. La temperatura de extracción es igual a 40 °C. La duración de la extracción con etanol de 85° es igual a 8 horas y la duración de la extracción con etanol de 13° es igual a 8 horas.
Los extractos alcohólicos obtenidos según lo descrito se agruparon en una proporción 50:50. La mezcla consistió en añadir el extracto alcohólico de 13° al extracto alcohólico de 85° (con una velocidad de adición igual a 16 l/min). La mezcla se llevó a cabo a 20° ± 5 °C. Al finalizar la adición, la mezcla se sometió a decantación durante 72 horas a 20° ± 5 °C, a continuación, se recuperó el sobrenadante y se filtró posteriormente en un filtro de panel equipado con un filtro de celulosa con un límite de corte de 30 p.m. Al finalizar la filtración, se comprueba la graduación del alcohol y se ajusta a 62° ± 1 ° grados alcohólicos.
7. Preparación del extracto con múltiples fracciones liofilizado
El extracto alcohólico clarificado obtenido tal como se describe en el ejemplo 1, sin corrección de la graduación alcohólica, se concentra mediante evaporación de etanol utilizando un sistema de destilación de película delgada, según un protocolo estándar, previendo un caudal de alimentación del extracto a concentrar de aproximadamente 500 l/h; la operación se lleva a cabo estableciendo un vacío residual de 0,6-0,8 bar y el fluido que calienta las paredes de evaporación se ajusta a 140 °C, obteniendo así, después de la eliminación del etanol, un extracto acuoso concentrado. El extracto acuoso así obtenido se sometió a liofilización.
8. Preparación del extracto con múltiples fracciones liofilizado soportado en goma arábiga
El extracto alcohólico clarificado obtenido, tal como se describe en el ejemplo 1, se mezcla con goma arábiga y se somete a concentración y liofilización, tal como se describe en el ejemplo 2.

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES 1. Composición para su utilización en el tratamiento de afecciones de la cavidad orofaríngea, en la que la composición está en forma de fluido o en forma sólida, en la que, cuando la composición está en forma de fluido, la composición consiste en extracto de yemas de álamo en un porcentaje en peso del 0,1 al 70 %, excipientes en un porcentaje en peso del 1 al 80 % disolventes en un porcentaje en peso del 0 al 80 % zumos de frutas naturales o liofilizados en un porcentaje en peso del 0 al 50 % aromas naturales o artificiales en un porcentaje en peso del 0,05 al 2 % aceites esenciales en un porcentaje en peso del 0,01 al 1 %. y cuando la composición está en forma sólida, la composición consiste en: extracto de yemas de álamo secas en un porcentaje en peso del 0,5 al 10 %, excipientes en un porcentaje en peso del 10 al 97 % aromas naturales o artificiales en un porcentaje en peso del 0,5 al 3 % aceites esenciales en un porcentaje en peso del 0,05 al 1 % zumos de frutas y/o extractos naturales en polvo o liofilizados en un porcentaje en peso del 0,5 al 15 % edulcorantes en un porcentaje en peso del 1 al 10 %, en la que dicho extracto de yemas de álamo es un extracto que se puede obtener mediante un procedimiento que comprende las siguientes etapas: a. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 85° b. preparar un extracto hidroalcohólico de yemas de álamo mediante extracción con etanol de 13° c. obtener un extracto alcohólico con múltiples fracciones, mediante la mezcla de los extractos preparados en a. y b. d. decantar y/o centrifugar y filtrar dicho extracto alcohólico (c.) y recoger el sobrenadante e. someter el sobrenadante filtrado obtenido en d. a concentración y liofilización y, opcionalmente, f. añadir al sobrenadante filtrado obtenido en d. goma arábiga y, a continuación, someterlo a concentración y liofilización.
  2. 2. Composición para su utilización, según la reivindicación 1, que consiste en:
    o
    o
    o
    en la que dicha composición está en forma de fluido.
  3. 3. Composición para su utilización, según la reivindicación 1, que consiste en:
    o
    o
    o
    en la que dicha composición está en forma sólida.
  4. 4. Composición para su utilización, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dichas afecciones de la cavidad orofaríngea se seleccionan entre dolor de garganta, faringitis, aftas, inflamación o infección de la cavidad oral.
  5. 5. Composición para su utilización, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en forma de polvo, comprimido, cápsula, gelatina dura o blanda, jarabe, aerosol o suspensión.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2135201C1 (ru) * 1998-01-20 1999-08-27 Куркин Владимир Александрович Способ получения настойки тополя для лечения гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей
JP3091962B2 (ja) * 1998-09-25 2000-09-25 アルプス薬品工業株式会社 テストステロン−５α−レダクターゼ阻害剤
FR2793141B1 (fr) * 1999-05-05 2003-08-08 Fabre Pierre Dermo Cosmetique Extrait de bourgeons de peuplier et son association avec le squalane pour son utilisation en tant que medicament anti-inflammatoire et dans un procede de traitement cosmetique
CN1666753A (zh) * 2004-03-12 2005-09-14 北京大学 一种有抗癌活性的杨属植物芽或芽鳞提取物
JP5414776B2 (ja) * 2004-06-17 2014-02-12 森川健康堂株式会社 プロポリス抽出物の粉末状組成物及びその製造方法
GB201001412D0 (en) * 2010-01-28 2010-03-17 Natures Lab Ltd Propolis and process for the treatment thereof
CN105307665B (zh) * 2013-04-05 2021-09-28 蜜纽康新西兰有限公司 治疗性组合物和其用途
CN103315191B (zh) * 2013-07-18 2014-09-03 广南(湛江)家丰饲料有限公司 一种猪用免疫增强剂及其制备方法
ITRM20130592A1 (it) * 2013-10-25 2015-04-26 Aboca Spa Societa Agricola Composizione per la tosse.
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