ES3042082T3 - Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells - Google Patents

Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells

Info

Publication number
ES3042082T3
ES3042082T3 ES19779634T ES19779634T ES3042082T3 ES 3042082 T3 ES3042082 T3 ES 3042082T3 ES 19779634 T ES19779634 T ES 19779634T ES 19779634 T ES19779634 T ES 19779634T ES 3042082 T3 ES3042082 T3 ES 3042082T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
acid sequence
seq
amino acid
cells
cell population
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES19779634T
Other languages
English (en)
Inventor
Louise Treanor
Michael R Greene
Jennifer Brogdon
Boris Engels
Glenn Dranoff
Olja Kodrasi
Hyungwook Lim
Akash Sohoni
Elizabeth Dorothy Pratico
Anniesha Hack
Aida Abujoub
Tony Fleming
Lu Huang
Connie Hong
John Blankenship
Brian Holmberg
Chonghui Zhang
Dexiu Bu
Andrew Price
Xu Zhu
Andrew Stein
Attilio Bondanza
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis AG
Original Assignee
Novartis AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis AG filed Critical Novartis AG
Application granted granted Critical
Publication of ES3042082T3 publication Critical patent/ES3042082T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2093—Leukaemia inhibitory factor [LIF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/421—Immunoglobulin superfamily
    • A61K40/4211—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4214—Receptors for cytokines
    • A61K40/4215—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G01N33/56972—White blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/10—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the structure of the chimeric antigen receptor [CAR]
    • A61K2239/11—Antigen recognition domain
    • A61K2239/13—Antibody-based
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2306—Interleukin-6 (IL-6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2307—Interleukin-7 (IL-7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/505—CD4; CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

La invención proporciona métodos para producir células efectoras inmunitarias (por ejemplo, células T, células NK) que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), y composiciones generadas por dichos métodos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DES
[0002] Métodos de preparación de células que expresan recept
[0003] Campo de la invención
[0004] SOLICITUDES RELACIONADAS
[0005] La presente solicitud reivindica prioridad a la solicitud pr
[0006] de 2018, la solicitud provisional de EE. UU. 62/773.679 pr
[0007] de EE. UU. 62/858.482 presentada el 7 de junio de 2019
[0008] LISTADO DE SECUENCIAS
[0009] La presente solicitud contiene un Listado de Secuencias
[0010] Dicha copia ASCII, creada el 16 de agosto de 2019, ti
[0011] 260.532 bytes.
[0012] CAMPO DE LA INVENCIÓN
[0013] La presente invención se refiere generalmente a méto
[0014] ejemplo, linfocitos T o células NK) modificadas por inge
[0015] antígeno (CAR).
[0016] ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
[0017] La terapia de transferencia de células adoptivas (ACT)
[0018] con receptores quiméricos para el antígeno (CAR), se ha
[0019] La fabricación de linfocitos T modificados génicamente e
[0020] WO2018/106732 se refiere a la producción de células mo
[0021] el documento de patente WO2018/067992 se refiere a r
[0022] cáncer, el documento de patente WO2017/165245 se re
[0023] su expansión regulada, y el documento de patente WO2
[0024] aparatos para los mismos. Ghassemi et al. (2018), Can
[0025] de linfocitos T-CAR, y Gattinoni et al. (2005), J Clin Inves
[0026] de linfocitos T CD8+ transferidos adoptivamente. Por lo t
[0027] la producción del producto de terapia celular que expres
[0028] eficacia terapéutica del producto.
[0029] SUMARIO DE LA INVENCIÓN
[0030] La presente invención proporciona un método de prepar
[0031] quimérico para el antígeno (CAR), comprendiendo el mé
[0032] (i) poner en contacto una población de células con un a
[0033] estimula una molécula coestimuladora en la superficie d
[0034] (ii) poner en contacto la población de células con una mo
[0035] así una población de células que comprenden la molécul
[0036] (iii) recoger la población de células para almacenamient
[0037] en donde la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i) o a
[0038] la etapa (iii) se realiza a más tardar 30 horas después d
[0039] Estas realizaciones y realizaciones adicionales se recog
[0040] DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0041] La información técnica que se expone a continuación pue
[0042] que se define exclusivamente por las reivindicaciones a
[0043] situar la invención real en un contexto técnico más amp
[0044] Además, no se debe interpretar que referencias secun
[0045] animal mediante cirugía o terapia y los métodos de diag
[0046] una reivindicación de protección para dicho método tal c
[0047] productos, en particular sustancias o composiciones, par
[0048] La presente divulgación se refiere a métodos de prepara
[0049] T, células NK) que se pueden modificar por ingeniería ge
[0050] usando dichos métodos son útiles para tratar una enferCIÓN
[0052] quiméricos para el antígeno
[0054] ional de EE. UU. 62/726.155 presentada el 31 de agosto tada el 30 de noviembre de 2018 y la solicitud provisional
[0056] ha sido presentado electrónicamente en formato ASCII. como nombre N2067-7153WO_SL.txt y un tamaño de
[0058] de preparación de células efectoras inmunitarias (por ía genética para expresar un receptor quimérico para el
[0060] linfocitos T, especialmente con linfocitos T transducidos trado prometedora en varios ensayos de cáncer hemático. tualmente un proceso complejo. El documento de patente adas por ingeniería genética para terapia celular adoptiva, tores quiméricos para el antígeno para el tratamiento del a métodos y composiciones para transducir linfocitos y 068421 se refiere a métodos para cultivar células y kits y mmunol Res.;6(9):1100-1109 se refiere al cultivoex vivo5(6):1616-1626 se refiere a la eficacia antitumoralin vivoexiste la necesidad de métodos y procesos para mejorar AR, mejorando la calidad del producto y maximizando la
[0062] n de una población de células que expresan un receptor :
[0063] e que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que células;
[0064] la de ácido nucleico que codifica el CAR, proporcionando ácido nucleico, y
[0065] dministración,
[0066] tardar 20 horas después del comienzo de la etapa (i), y mienzo de la etapa (i).
[0068] n las reivindicaciones adjuntas.
[0070] en algunos aspectos más allá del alcance de la invención, as. La información técnica adicional se proporciona para para ilustrar posibles desarrollos técnicos relacionados. s a métodos para el tratamiento del cuerpo humano o ico realizados en el cuerpo humano o animal constituyen sino que deben ser consideradas como una referencia a uso en cualquiera de estos métodos.
[0072] de células efectoras inmunitarias (por ejemplo, linfocitos a para expresar un CAR. Las composiciones generadas d, por ejemplo, cáncer, en un sujeto.
[0074] La invención proporciona un método de preparación de
[0075] en las reivindicaciones adjuntas. En algunas realizacio
[0076] una población de células (por ejemplo, linfocitos T) q
[0077] comprendiendo el método: (i) poner en contacto (por eje
[0078] por ejemplo, linfocitos T aislados de un producto de leu
[0079] complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una mol
[0080] en contacto la población de células (por ejemplo, linfoci
[0081] molécula de ADN o ARN) que codifica el CAR, proporci
[0082] linfocitos T) que comprende la molécula de ácido nucleic
[0083] T) para su almacenamiento (por ejemplo, reformulación
[0084] administración, en donde: la etapa (ii) se realiza junto c
[0085] de la etapa (i), por ejemplo, a más tardar 12, 13, 14, 15
[0086] ejemplo, a más tardar 18 horas después del comienzo
[0087] después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, a
[0088] etapa (i), por ejemplo, a más tardar 24 horas después d
[0089] (ii) se realiza junto con la etapa (i), y la etapa (iii) se rea
[0090] (ii). En algunas realizaciones, la etapa (iii) se realiza a
[0091] comienzo de la etapa (ii). En algunas realizaciones, l
[0092] expande en no más del 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,
[0093] de un 10 %, por ejemplo, según se evalúa por el número
[0094] al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, l
[0095] En algunas realizaciones, la molécula de ácido nucl
[0096] realizaciones, la molécula de ácido nucleico en la eta
[0097] elegido de un vector lentivírico, un vector adenovírico o
[0098] ácido nucleico en la etapa (ii) está en un vector no víric
[0099] la etapa (ii) está en un plásmido. En algunas realizacio
[0100] ningún vector. En algunas realizaciones, la etapa (ii)
[0101] linfocitos T) con un vector vírico que comprende una
[0102] realizaciones, la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i)
[0103] 20 horas después del comienzo de la etapa (i). En algu
[0104] 14, 15, 16, 17 o 18 horas después del comienzo de la et
[0105] tardar 18 horas después del comienzo de la etapa (i).
[0106] 26 horas después del comienzo de la etapa (i). En algu
[0107] 24 o 25 horas después del comienzo de la etapa (i). En
[0108] horas después del comienzo de la etapa (i).
[0110] En algunas realizaciones, la población de células de la et
[0111] de células de la etapa (iii) se expande en no más del 5,
[0112] o 40 %, por ejemplo, según se evalúa por el número de
[0113] comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la p
[0114] 10 %, por ejemplo, según se evalúa por el número de
[0115] comienzo de la etapa (i).
[0117] En algunas realizaciones, el agente que estimula un co
[0118] realizaciones, el agente que estimula una molécula co
[0119] HVEM, LIGHT, CD40, 4-1BB, OX40, DR3, GITR, CD30,
[0120] En algunas realizaciones, el agente que estimula una
[0121] algunas realizaciones, el agente que estimula un com
[0122] anticuerpo de un solo dominio (por ejemplo, un anticuer
[0123] fragmento Fab o un scFv), una molécula pequeña o un li
[0124] existe de forma natural). En algunas realizaciones, el a
[0125] un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo de un solo
[0126] cadena pesada), un pepticuerpo, un fragmento Fab o u
[0127] ligando recombinante o quimérico que existe de forma
[0128] complejo CD3/TCR no comprende una perla. En al
[0129] coestimuladora no comprende una perla. En algunas r
[0130] comprende un anticuerpo anti-CD3. En algunas realiza
[0131] comprende un anticuerpo anti-CD28. En algunas re
[0132] comprende un anticuerpo anti-CD3 unido covalente
[0133] realizaciones, el agente que estimula una molécula
[0134] covalentemente a una nanomatriz polimérica coloidal.
[0135] CD3/TCR y el agente que estimula una molécula coesti
[0137] En algunas realizaciones, el agente que estimula u
[0138] realizaciones, el agente que estimula una molécula coe blación de células que expresan un CAR como se define sta invención caracteriza un método de preparación de presan un receptor quimérico para el antígeno (CAR), unir) una población de células (por ejemplo, linfocitos T, sis congelado o fresco) con un agente que estimula un coestimuladora en la superficie de las células; (ii) poner ) con una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, una o de este modo una población de células (por ejemplo, iii) recoger la población de células (por ejemplo, linfocitos población de células en medios de crioconservación) o etapa (i) o a más tardar 20 horas después del comienzo 17 o 18 horas después del comienzo de la etapa (i), por etapa (i), y la etapa (iii) se realiza a más tardar 26 horas rdar 22, 23, 24 o 25 horas después del comienzo de la ienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la etapa más tardar 30 horas después del comienzo de la etapa ardar 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 o 29 horas después del lación de células de la etapa (iii) no se expande, o se , 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 o 40 %, por ejemplo, no más élulas vivas, en comparación con la población de células cula de ácido en la etapa (ii) es una molécula de ADN. n la etapa (ii) es una molécula de ARN. En algunas está en un vector vírico, por ejemplo, un vector vírico ctor retrovírico. En algunas realizaciones, la molécula de algunas realizaciones, la molécula de ácido nucleico en a molécula de ácido nucleico en la etapa (ii) no está en rende transducir la población de células (por ejemplo, ula de ácido nucleico que codifica el CAR. En algunas lgunas realizaciones, la etapa (ii) se realiza a más tardar ealizaciones, la etapa (ii) se realiza a más tardar 12, 13, ). En algunas realizaciones, la etapa (ii) se realiza a más unas realizaciones, la etapa (III) se realiza a más tardar alizaciones, la etapa (iii) se realiza a más tardar 22, 23, as realizaciones, la etapa (III) se realiza a más tardar 24
[0140] iii) no se expande. En algunas realizaciones, la población 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 as vivas, en comparación con la población de células al ón de células de la etapa (iii) se expande en no más del s vivas, en comparación con la población de células al
[0142] CD3/TCR es un agente que estimula CD3. En algunas ladora es un agente que estimula CD28, ICOS, CD27, , CD2, CD226, o cualquier combinación de los mismos. la coestimuladora es un agente que estimula CD28. En CD3/TCR se elige de un anticuerpo (por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada), un pepticuerpo, un (por ejemplo, un ligando recombinante o quimérico que que estimula una molécula coestimuladora se elige de io (por ejemplo, un anticuerpo de dominio variable de v), una molécula pequeña o un ligando (por ejemplo, un l). En algunas realizaciones, el agente que estimula un realizaciones, el agente que estimula una molécula ciones, el agente que estimula un complejo CD3/TCR s, el agente que estimula una molécula coestimuladora ones, el agente que estimula un complejo CD3/TCR a una nanomatriz polimérica coloidal. En algunas imuladora comprende un anticuerpo anti-CD28 unido unas realizaciones, el agente que estimula un complejo ora comprenden T Cell TransAct™.
[0144] plejo CD3/TCR no comprende hidrogel. En algunas adora no comprende hidrogel. En algunas realizaciones, el agente que estimula un complejo CD3/TCR no co
[0145] estimula una molécula coestimuladora no comprende al
[0147] En algunas realizaciones, el agente que estimula un com
[0148] el agente que estimula una molécula coestimuladora c
[0149] estimula un complejo CD3/TCR comprende alginato. En
[0150] coestimuladora comprende alginato. En algunas realiza
[0151] agente que estimula una molécula coestimuladora comp
[0153] En algunas realizaciones, la etapa (i) aumenta el porcen
[0154] de la etapa (iii), por ejemplo, la población de células d
[0155] expresan CAR (por ejemplo, al menos 10, 20, 30, 40, 50
[0156] mediante un método por lo demás similar sin la etapa (i).
[0158] En algunas realizaciones, el porcentaje de células intact
[0159] CD45RA+ CD45RO- CCR7+, en la población de célula
[0160] intactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, c
[0161] al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, el p
[0162] por ejemplo, linfocitos T CD45RA+ CD45RO- CCR7+, en
[0163] 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12% del porcentaje de cél
[0164] células CD45RA+ CD45RO- CCR7+, en la población de
[0165] el porcentaje de células intactas, por ejemplo, linfocito
[0166] CCR7+, en la población de células de la etapa (iii) difier
[0167] por ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, células
[0168] comienzo de la etapa (i).
[0170] En algunas realizaciones, la población de células de la et
[0171] ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T C
[0172] 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 o 40 % superior),
[0173] por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza
[0174] ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días despué
[0175] población de células de la etapa (iii) muestra un mayor p
[0176] por ejemplo, linfocitos T CD45RA+ CD45RO- CCR7+ (p
[0177] 25, 30, 35 o 40 % superior), en comparación con célula
[0178] comprende además, después de la etapa (ii) y antes de
[0179] linfocitos T)in vitrodurante más de 3 días, por ejemplo,
[0181] En algunas realizaciones, el porcentaje de células de m
[0182] por ejemplo, linfocitos T de memoria central CD95+, en
[0183] porcentaje de células de memoria central, por ejemplo,
[0184] memoria central CD95+, en la población de células al co
[0185] de células de memoria central, por ejemplo, linfocitos
[0186] central CD95+, en la población de células de la etapa (i
[0187] porcentaje de células de memoria central, por ejemplo,
[0188] memoria central CD95+, en la población de células al co
[0189] de células de memoria central, por ejemplo, linfocitos
[0190] central CD95+, en la población de células de la etapa (iii)
[0191] de memoria central, por ejemplo, linfocitos T de memoria
[0192] en la población de células al comienzo de la etapa (i).
[0194] En algunas realizaciones, la población de células de la et
[0195] central, por ejemplo, linfocitos T de memoria central, por
[0196] al menos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 3
[0197] mediante un método por lo demás similar en el que la et
[0198] la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o
[0199] realizaciones, la población de células de la etapa (iii) mu
[0200] ejemplo, linfocitos T de memoria central, por ejemplo, li
[0201] 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 o 40
[0202] un método por lo demás similar que comprende además
[0203] población de células (por ejemplo, linfocitos T)in vitrodu
[0205] En algunas realizaciones, el porcentaje de linfocitos T de
[0206] receptores de CD45RA+CD95+IL-2, en la población d
[0207] porcentaje de linfocitos T de memoria madre, por CD45RA+CD95+IL-2 , en la población de células al com
[0208] de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR, de alginato. En algunas realizaciones, el agente que .
[0210] D3/TCR comprende hidrogel. En algunas realizaciones, nde hidrogel. En algunas realizaciones, el agente que nas realizaciones, el agente que estimula una molécula s, el agente que estimula un complejo CD3/TCR o el n MagCloudz™ de Quad Technologies.
[0212] e células que expresan CAR en la población de células tapa (iii) muestra un mayor porcentaje de células que % superior), en comparación con las células preparadas
[0214] r ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T la etapa (iii) es el mismo que el porcentaje de células CD45RA+ CD45RO- CCR7+, en la población de células taje de células intactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, blación de células de la etapa (iii) difiere en no más del ntactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, s al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, ntactos, por ejemplo, linfocitos T CD45RA+ CD45RO-no más del 5 o 10 % del porcentaje de células intactas, RA+ CD45RO- CCR7+, en la población de células al
[0216] iii) muestra un mayor porcentaje de células intactas, por A+ CD45RO-CCR7+ (por ejemplo, al menos 10, 11, 12, mparación con células preparadas mediante un método e 26 horas después del comienzo de la etapa (i), por comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la aje de células intactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, plo, al menos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, paradas mediante un método por lo demás similar que apa (iii), expandir la población de células (por ejemplo, te 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0218] ia central, por ejemplo, linfocitos T de memoria central, blación de células de la etapa (iii) es el mismo que el itos T de memoria central, por ejemplo, linfocitos T de o de la etapa (i). En algunas realizaciones, el porcentaje memoria central, por ejemplo, linfocitos T de memoria iere en no más del 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 % del itos T de memoria central, por ejemplo, linfocitos T de o de la etapa (i). En algunas realizaciones, el porcentaje memoria central, por ejemplo, linfocitos T de memoria e en no más de un 5 o un 10 % del porcentaje de células ral, por ejemplo, linfocitos T de memoria central CD95+,
[0220] iii) muestra un porcentaje menor de células de memoria lo, linfocitos T de memoria central CD95+ (por ejemplo, o 40 % menor), en comparación con células preparadas ii) se realiza más de 26 horas después del comienzo de ías después del comienzo de la etapa (i). En algunas un porcentaje menor de células de memoria central, por s T de memoria central CD95+ (por ejemplo, al menos nor), en comparación con células preparadas mediante pués de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la más de 3 días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0221] oria madre, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ las de la etapa (iii) aumenta, en comparación con el mplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de de la etapa (i). En algunas realizaciones, el porcentaje ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2 que expresan CAR, en la població
[0222] porcentaje de linfocitos T de memoria madre que e
[0223] receptores de CD45RA+CD95+IL-2 que expresan CAR
[0224] algunas realizaciones, el porcentaje de linfocitos T de
[0225] receptores de CD45RA+CD95+IL-2, en la población de
[0226] T de memoria madre, por ejemplo, linfocitos T P+CC
[0227] preparadas mediante un método de otro modo similar e
[0228] comienzo de la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8,
[0229] algunas realizaciones, el porcentaje de linfocitos T de
[0230] P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2
[0231] es mayor que el porcentaje de linfocitos T de me
[0232] P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2 q
[0233] por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza
[0234] ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días despué
[0235] porcentaje de linfocitos T de memoria madre, po
[0236] CD45RA+CD95+IL-2, en la población de células de la et
[0237] madre, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ r
[0238] mediante un método de otro modo similar que compren
[0239] expandir la población de células (por ejemplo, linfocitos
[0240] 8 o 9 días. En algunas realizaciones, el porcentaje de lin
[0241] linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+
[0242] la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T d
[0243] T P+C<c>R7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL
[0244] método por lo demás similar que comprende además,
[0245] población de células (por ejemplo, linfocitos T)in vitrod
[0247] En algunas realizaciones, la mediana de GeneSetSc
[0248] población de células de la etapa (iii) es aproximadamente
[0249] en no más de) aproximadamente un 25, 50, 75, 100 o 12
[0250] a TSCM descendente) de la población de células al com
[0251] GeneSetScore (TEM ascendente frente a TSCM desce
[0252] (por ejemplo, al menos aproximadamente un 100, 150,
[0253] (TEM ascendente frente a TSCM descendente) de célul
[0254] que la etapa (iii) se realiza más de 26 horas después d
[0255] 10, 11 o 12 días después del comienzo de la etapa (i).
[0256] ascendente frente a TSCM descendente) de la població
[0257] aproximadamente 100, 150, 200, 250 o 300 % menor)
[0258] TSCM descendente) de células preparadas mediante
[0259] después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expan
[0260] durante más de 3 días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, 8 o 9
[0261] (Treg ascendente frente a Tef descendente) de la pobla
[0262] que o difiere en no más de (por ejemplo, aumentada en
[0263] la mediana de GeneSetScore (Treg ascendente frente
[0264] la etapa (i). En algunas realizaciones, la mediana de Ge
[0265] población de células de la etapa (iii) es menor (por ejem
[0266] menor) que la mediana de GeneSetScore (Treg ascende
[0267] un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) s
[0268] (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días de
[0269] la mediana de GeneSetScore (Treg ascendente frente
[0270] es menor (por ejemplo, al menos aproximadamente
[0271] GeneSetScore (Treg ascendente frente a Tef descende
[0272] similar que comprende además, después de la etapa (ii)
[0273] ejemplo, linfocitos T)in vitrodurante más de 3 días, por
[0274] la mediana de GeneSetScore (pluripotencialidad des
[0275] aproximadamente la misma que o difiere en no más de (
[0276] 25, 50, 100, 150, 200 o 250 % de la mediana de Gene
[0277] células al comienzo de la etapa (i). En algunas reali
[0278] descendente) de la población de células de la etapa (iii
[0279] 100 o 125% menor) que la mediana de GeneSetSc
[0280] mediante un método por lo demás similar en el que la et
[0281] la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11
[0282] realizaciones, la mediana de GeneSetScore (pluripoten
[0283] (iii) es menor (por ejemplo, al menos aproximadamente
[0284] (pluripotencialidad descendente) de células preparadas
[0285] además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii),
[0286] vitrodurante más de 3 días, por ejemplo, durante 5, células de la etapa (iii) aumenta, en comparación con el an CAR, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ la población de células al comienzo de la etapa (i). En oria madre, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ s de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos D62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2 , en células ue la etapa (iii) se realiza más de 26 horas después del , 11 o 12 días después del comienzo de la etapa (i). En ria madre que expresan CAR, por ejemplo, linfocitos T xpresan CAR, en la población de células de la etapa (iii) madre que expresan CAR, por ejemplo, linfocitos T presan CAR, en células preparadas mediante un método de 26 horas después del comienzo de la etapa (i), por l comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, el mplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T de memoria tores de CD45RA+CD95+IL-2, en células preparadas demás, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii),vitrodurante más de 3 días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, s T de memoria madre que expresan CAR, por ejemplo, IL-2 que expresan C<a>R, en la población de células de moria madre que expresan CAR, por ejemplo, linfocitos e expresan CAR, en células preparadas mediante un ués de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la e más de 3 días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0287] (TEM ascendente frente a TSCM descendente) de la isma que o difiere en no más de (por ejemplo, aumentada e la mediana de GeneSetScore (TEM ascendente frente de la etapa (i). En algunas realizaciones, la mediana de te) de la población de células de la etapa (iii) es menor 250 o 300 % menor) que la mediana de GeneSetScore eparadas mediante un método por lo demás similar en el mienzo de la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, unas realizaciones, la mediana de GeneSetScore (TEM células de la etapa (iii) es menor (por ejemplo, al menos a mediana de GeneSetScore (TEM ascendente frente a étodo por lo demás similar que comprende además, población de células (por ejemplo, linfocitos T)in vitro. En algunas realizaciones, la mediana de GeneSetScore e células de la etapa (iii) es aproximadamente la misma ás de) aproximadamente un 25, 50, 100, 150 o 200 % de descendente) de la población de células al comienzo de tScore (Treg ascendente frente a Tef descendente) de la l menos aproximadamente un 50, 100, 125, 150 o 175 % ente a Tef descendente) de células preparadas mediante liza más de 26 horas después del comienzo de la etapa s del comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, descendente) de la población de células de la etapa (iii) 100, 125, 150 o 175% menor) que la mediana de e células preparadas mediante un método por lo demás tes de la etapa (iii), expandir la población de células (por plo, durante 5, 6, 7, 8 o 9 días. En algunas realizaciones, ente) de la población de células de la etapa (iii) es jemplo, aumentada en no más de) aproximadamente un ore (pluripotencialidad descendente) de la población de nes, la mediana de GeneSetScore (pluripotencialidad menor (por ejemplo, al menos aproximadamente un 50, pluripotencialidad descendente) de células preparadas (iii) se realiza más de 26 horas después del comienzo de días después del comienzo de la etapa (i). En algunas ad descendente) de la población de células de la etapa 100 o 125 % menor) que la mediana de GeneSetScore diante un método por lo demás similar que comprende andir la población de células (por ejemplo, linfocitos T)in8 o 9 días. En algunas realizaciones, la mediana de GeneSetScore (hipoxia ascendente) de la población de
[0288] no más de (por ejemplo, aumentada en no más de) ap
[0289] GeneSetScore (hipoxia ascendente) de la población de
[0290] la mediana de GeneSetScore (hipoxia ascendente) de l
[0291] al menos aproximadamente un 40, 50, 60, 70 u 80 % m
[0292] de células preparadas mediante un método por lo dem
[0293] después del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, más
[0294] etapa (i). En algunas realizaciones, la mediana de Gen
[0295] la etapa (iii) es menor (por ejemplo, al menos aproxim
[0296] GeneSetScore (hipoxia ascendente) de células prepara
[0297] además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii)
[0298] vitrodurante más de 3 días, por ejemplo, durante 5,
[0299] GeneSetScore (autofagia ascendente) de la población
[0300] en no más de (por ejemplo, aumentada en no más de)
[0301] GeneSetScore (autofagia ascendente) de la población d
[0302] la mediana de GeneSetScore (autofagia ascendente) de
[0303] al menos aproximadamente 20, 30 o 40 % menor) que la
[0304] preparadas mediante un método por lo demás similar e
[0305] comienzo de la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7, 8,
[0306] algunas realizaciones, la mediana de GeneSetScore (au
[0307] es menor (por ejemplo, al menos aproximadamente 20,
[0308] ascendente) de células preparadas mediante un método
[0309] etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población
[0310] días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0312] En algunas realizaciones, la población de células de la
[0313] un antígeno reconocido por el CAR, secreta IL-2 a un
[0314] veces mayor) que las células preparadas mediante un
[0315] más de 26 horas después del comienzo de la etapa (i),
[0316] comienzo de la etapa (i), o células preparadas median
[0317] después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expa
[0318] durante más de 3 días, por ejemplo, durante 5, 6, 7, 8
[0319] descritos en el Ejemplo 8 con respecto a las FIG. 29C-2
[0321] En algunas realizaciones, la población de células de l
[0322] tiempo o se expande a un nivel más alto (por ejemplo,
[0323] o 90 % superior) (por ejemplo, tal como se evalúa usan
[0324] 4C), en comparación con células preparadas mediante u
[0325] más de 26 horas después del comienzo de la etapa (i),
[0326] comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la p
[0327] in vivo,persiste más tiempo o se expande a un nivel m
[0328] 60, 65, 70, 75, 80, 85 o 90 % superior) (por ejemplo, ta
[0329] con respecto a la FIG. 4C), en comparación con célula
[0330] comprende además, después de la etapa (ii) y antes d
[0331] linfocitos T)in vitrodurante más de 3 días, por ejemplo,
[0333] En algunas realizaciones, la población de células de l
[0334] actividad antitumoral más fuerte (por ejemplo, una activi
[0335] dosis no más de 0,15 * 106, 0,2 * 106, 0,25 * 106 o 0
[0336] preparadas mediante un método por lo demás similar e
[0337] comienzo de la etapa (i), por ejemplo, más de 5, 6, 7,
[0338] células preparadas mediante un método por lo demás si
[0339] de la etapa (iii), expandir la población de células (por eje
[0340] durante 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0342] En algunas realizaciones, la población de células de la
[0343] número de células vivas, en comparación con la po
[0344] realizaciones, la población de células de la etapa (iii) di
[0345] de células al comienzo de la etapa (i), por ejemplo, s
[0346] realizaciones, la población de células de la etapa (iii) se
[0347] 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 o 40 %, por ejemplo, no más
[0348] células vivas, en comparación con la población de célu
[0349] población de células de la etapa (iii) no se expande, o
[0350] menos de 1 o 1,5 horas, en comparación con la poblaci s de la etapa (iii) es aproximadamente igual o difiere en adamente un 125, 150, 175 o 200 % de la mediana de s al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, lación de células de la etapa (iii) es menor (por ejemplo, que la mediana de GeneSetScore (hipoxia ascendente) ilar en el que la etapa (iii) se realiza más de 26 horas 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días después del comienzo de la core (hipoxia ascendente) de la población de células de ente 40, 50, 60, 70 u 80 % menor) que la mediana de ediante un método por lo demás similar que comprende ndir la población de células (por ejemplo, linfocitos T)in8 o 9 días. En algunas realizaciones, la mediana de ulas de la etapa (iii) es aproximadamente igual o difiere adamente un 180, 190, 200 o 210 % de la mediana de las al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, lación de células de la etapa (iii) es menor (por ejemplo, ana de GeneSetScore (autofagia ascendente) de células ue la etapa (iii) se realiza más de 26 horas después del , 11 o 12 días después del comienzo de la etapa (i). En a ascendente) de la población de células de la etapa (iii) % menor) que la mediana de GeneSetScore (autofagia o demás similar que comprende además, después de la ulas (por ejemplo, linfocitos T)in vitrodurante más de 3
[0352] (iii), después de incubarse con una célula que expresa más alto (por ejemplo, al menos 2, 4, 6, 8, 10, 12 o 14 o por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza mplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días después del método por lo demás similar que comprende además, población de células (por ejemplo, linfocitos T)in vitroías, por ejemplo, tal como se evalúa usando métodos
[0354] a (iii), después de administrarsein vivo,persiste más os 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 étodos descritos en el Ejemplo 1 con respecto a la FIG. odo por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza mplo, más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días después del ón de células de la etapa (iii), después de administrarse o (por ejemplo, al menos 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, o se evalúa usando métodos descritos en el Ejemplo 1 paradas mediante un método por lo demás similar que tapa (iii), expandir la población de células (por ejemplo, te 5, 6, 7, 8 o 9 días.
[0356] a (iii), después de administrarsein vivo,muestra una ntitumoral más fuerte a una dosis baja, por ejemplo, una 06 células viables que expresan<c>A<r>) que las células ue la etapa (iii) se realiza más de 26 horas después del 0, 11 o 12 días después del comienzo de la etapa (i), o ue comprende además, después de la etapa (ii) y antes linfocitos T)in vitrodurante más de 3 días, por ejemplo,
[0358] (iii) no se expande, por ejemplo, según se evalúa por el de células al comienzo de la etapa (i). En algunas ye respecto al número de células vivas en la población se evalúa por el número de células vivas. En algunas de en no más del 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 10 %, por ejemplo, según se evalúa por el número de comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la pande en menos de 0,5, 1, 1,5 o 2 horas, por ejemplo, células al comienzo de la etapa (i).
[0360] En algunas realizaciones, las etapas (i) y (ii) se realiz
[0361] comprenden IL-2, IL-15 (por ejemplo, hetIL-15 (IL15/sIL-o un inhibidor de MALT1. En algunas realizaciones, las
[0362] medios sin suero) que comprenden IL-7, IL-21, o una co
[0363] (i) y (ii) se realizan en medios celulares (por ejemplo,
[0364] hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra)), IL-21, IL-7, IL-6 (por ejemplo,
[0365] una combinación de los mismos. En algunas realizacio
[0366] medios sin suero) que comprenden IL-2, IL-15 (por ejem
[0367] un inhibidor de LSD1 o un inhibidor de MALT1. En algu
[0368] (por ejemplo, medios exentos de suero) que comprende
[0369] ejemplo, IL-6/sIL-6Ra), un inhibidor de LSD1 o un inhibi
[0370] en medios celulares (por ejemplo, medios exentos de s
[0371] mismos. En algunas realizaciones, la etapa (ii) se realiz
[0372] que comprenden IL-7, IL-21, o una combinación de es
[0373] medios celulares (por ejemplo, medios exentos de suero
[0374] 15Ra)), IL-21, IL-7, IL-6 (por ejemplo, IL-6/sIL-6Ra), un
[0375] de los mismos. En algunas realizaciones, la etapa (ii) se
[0376] suero) que comprenden IL-2, IL-15 (por ejemplo, hetIL
[0377] 6Ra), un inhibidor de LSD1, un inhibidor de MALT1 o u
[0378] medio celular es un medio exento de suero que compren
[0379] de suero es el sustituto de suero de células inmunitarias
[0381] En algunas realizaciones, los métodos mencionados a
[0382] producto de leucaféresis en fresco (o una fuente alterna
[0383] completa en fresco, un producto de médula ósea en fre
[0384] (por ejemplo, un producto en fresco de la timectomía)
[0385] proveedor de atención médica.
[0387] En algunas realizaciones, los métodos mencionados a
[0388] población de células (por ejemplo, linfocitos T, por ejem
[0389] partir de un producto de leucaféresis en fresco (o una fu
[0390] de sangre completa en fresco, un producto de médula
[0391] en fresco (por ejemplo, un producto en fresco de la tim
[0392] más tardar 35 horas después del comienzo de la etapa
[0393] 35 horas después del comienzo de la etapa (v), por eje
[0394] (v). En algunas realizaciones, la población de células d
[0395] 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 %, por ejemplo, no más del
[0396] células vivas, en comparación con la población de célul
[0398] En algunas realizaciones, los métodos mencionados an
[0399] linfocitos T crioconservados aislados de un producto de l
[0400] tal como linfocitos T crioconservados aislados de sang
[0401] órgano (por ejemplo, timectomía)) de una entidad, por ej
[0403] En algunas realizaciones, los métodos mencionados a
[0404] producto de leucaféresis crioconservado (o una fuente
[0405] sangre completa crioconservado, un producto de médul
[0406] órgano crioconservada (por ejemplo, un producto crioc
[0407] laboratorio, hospital o un proveedor de atención médica.
[0409] En algunas realizaciones, los métodos mencionados a
[0410] población de células (por ejemplo, linfocitos T, por ejem
[0411] partir de un producto de leucaféresis crioconservado (o
[0412] producto de sangre completa crioconservado, un produc
[0413] de tumor u órgano crioconservada (por ejemplo, un
[0414] realizaciones, la etapa (iii) se realiza a más tardar 35 ho
[0415] tardar 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o 35 horas despué
[0416] horas después del comienzo de la etapa (v). En alguna
[0417] expande, o se expande en no más de 5, 10, 15, 20, 25
[0418] según se evalúa mediante el número de células vivas, e
[0419] (v).
[0421] En algunas realizaciones, la población de células al comi
[0422] IL6R (por ejemplo, células que son positivas para IL6Ra
[0423] al comienzo de la etapa (i) comprende no menos del 40,
[0424] ejemplo, células que son positivas para IL6Ra y/o IL6R medios celulares (por ejemplo, medios sin suero) que )), IL-6 (por ejemplo, IL-6/sIL-6Ra), un inhibidor de Ls D1 as (i) y (ii) se realizan en medios celulares (por ejemplo, ción de los mismos. En algunas realizaciones, las etapas s sin suero) que comprenden IL-2, IL-15 (por ejemplo, sIL-6Ra), un inhibidor de LSD1, un inhibidor de MALT1 o la etapa (i) es realiza en medios celulares (por ejemplo, etIL-15 (IL15/sIL-15Ra)), IL-6 (por ejemplo, IL-6/sIL-6Ra), ealizaciones, la etapa (ii) es realiza en medios celulares , IL-15 (por ejemplo, hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra)), IL-6 (por MALT1. En algunas realizaciones, la etapa (i) se realiza que comprenden IL-7, IL-21, o una combinación de es edios celulares (por ejemplo, medios exentos de suero) os. En algunas realizaciones, la etapa (i) se realiza en comprenden IL-2, IL-15 (por ejemplo, hetIL-15 (IL15/sIL-idor de LSD1, un inhibidor de MALT1 o una combinación za en medios celulares (por ejemplo, medios exentos de IL15/sIL-15Ra)), IL-21, IL-7, IL-6 (por ejemplo, IL-6/sIL-mbinación de los mismos. En algunas realizaciones, el sustituto de suero. En algunas realizaciones, el sustituto R) CTS™.
[0426] rmente comprenden antes de la etapa (i): (iv) recibir un e tejido hematopoyético tal como un producto de sangre o una biopsia o extracción de tumor u órgano en fresco una entidad, por ejemplo, un laboratorio, hospital o un
[0428] rmente comprenden antes de la etapa (i): (v) aislar la infocitos T c D8+ y/o CD4+) en contacto en la etapa (i) a lternativa de tejido hematopoyético tal como un producto en fresco, o una biopsia o extracción de tumor u órgano ía)). En algunas realizaciones, la etapa (iii) se realiza a or ejemplo, a más tardar 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o a más tardar 30 horas después del comienzo de la etapa tapa (iii) no se expande, o se expande en no más de 5, , por ejemplo, según se evalúa mediante el número de final de la etapa (v).
[0430] mente comprenden además antes de la etapa (i): recibir féresis (o una fuente alternativa de tejido hematopoyético mpleta, médula ósea o biopsia o extracción de tumor u , un laboratorio, hospital o proveedor de atención médica.
[0431] rmente comprenden antes de la etapa (i): (iv) recibir un ativa de tejido hematopoyético tal como un producto de a crioconservado, o una biopsia o extracción de tumor u vado de la timectomía)) de una entidad, por ejemplo, un
[0433] rmente comprenden antes de la etapa (i): (v) aislar la infocitos T c D8+ y/o CD4+) en contacto en la etapa (i) a fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como un médula ósea crioconservado, o una biopsia o extracción ducto crioconservado de la timectomía)). En algunas espués del comienzo de la etapa (v), por ejemplo, a más comienzo de la etapa (v), por ejemplo, a más tardar 30 lizaciones, la población de células de la etapa (iii) no se 35 o 40 %, por ejemplo, no más del 10 %, por ejemplo, paración con la población de células al final de la etapa
[0435] de la etapa (i) se ha enriquecido en células que expresan L6Rp). En algunas realizaciones, la población de células 50, 55, 60, 65 o 70 % de células que expresan IL6R (por En algunas realizaciones, las etapas (i) y (ii) se realiza
[0436] hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra)). En algunas realizaciones, IL
[0437] expandirse, por ejemplo, 10, 15, 20 o 25 días después
[0438] células que expresan IL6Rp en la población de células.
[0440] En algunas realizaciones de los métodos mencionados a
[0441] En algunas realizaciones, la separación, la activación,
[0442] realiza en un sistema cerrado. En algunas realizaciones
[0443] realizan en dispositivos separados. En algunas realiz
[0444] incubación y el lavado de linfocitos T se realiza en dispo
[0446] En algunas realizaciones de los métodos mencionados
[0447] adyuvante o un reactivo de mejora de la transducción
[0448] transducción. En algunas realizaciones, el adyuvante o r
[0449] catiónico. En algunas realizaciones, el adyuvante o reac
[0450] (Sirion Biotech), vectofusina-1, F108, bromuro de hex
[0451] Synperonic o LentiTrans™. En algunas realizaciones, el
[0453] En algunas realizaciones de los métodos mencionados
[0454] ejemplo, linfocitos T) con un vector vírico comprende so
[0455] centrífuga en condiciones tales que se potencia la efic
[0456] transducen mediante espinoculación.
[0458] En algunas realizaciones de los métodos mencionados a
[0459] y transducen en un matraz de cultivo celular que compre
[0460] grandes volúmenes de medio sin comprometer sustanci
[0461] crecimiento celular se logra proporcionando acceso, por
[0462] mediante convección.
[0464] En algunas realizaciones de los métodos mencionados
[0465] antígeno, un dominio transmembranario y un dominio de
[0467] En algunas realizaciones, el dominio de unión al antígeno
[0468] mesotelina, EGFRvlII, GD2, antígeno Tn, antígeno sTn
[0469] TAG72, CD44v6, CEA, EPCAM, KIT, IL-13Ra2, legum
[0470] VEGFR2, LewisY, CD24, PDGFR-beta, SSEA-4, receptor
[0471] EGFR, NCAM, efrina B2, CAIX, LMP2, sLe, HMWMAA,
[0472] FAP, legumaína, HPV E6 o E7, ML-IAP, CLDN6, TSHR,
[0473] Fos, elastasa de neutrófilos, TRP-2, CYP1B1, proteína d
[0474] AFP, tiroglobulina, PLAC1, globoH, RAGE1, MN-CA I
[0475] esterasa intestinal, mut hsp 70-2, NA-17, NY-BR-1, U
[0476] OR51E2, TARP, GFRa4, o un péptido de cualquiera
[0477] realizaciones, el dominio de unión al antígeno comprend
[0478] el presente documento. En algunas realizaciones, el do
[0479] donde VH y VL están conectadas por un conector, opci
[0480] aminoácidos de SEQ ID NO: 63 o 104.
[0482] En algunas realizaciones, el dominio transmembranario
[0483] elegida de la cadena alfa, beta o zeta del receptor de li
[0484] CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD1
[0485] transmembranario comprende un dominio transmem
[0486] transmembranario comprende la secuencia de aminoáci
[0487] tiene al menos aproximadamente 85 %, 90 %, 95 % o
[0488] realizaciones, la molécula de ácido nucleico comprend
[0489] transmembranario, en donde la secuencia de ácido nuc
[0490] NO: 17 o una secuencia de ácido nucleico que tiene al
[0491] con la misma.
[0493] En algunas realizaciones, el dominio de unión al antígen
[0494] región bisagra. En algunas realizaciones, la región bisa
[0495] 2, 3 o 4, o una secuencia de aminoácidos que tiene al me
[0496] de secuencias de la misma. En algunas realizaciones, l
[0497] ácido nucleico que codifica la región bisagra, en donde
[0498] ácido nucleico de SEQ ID NO: 13, 14 o 15 o una secuen
[0499] 99 % de identidad de secuencia con la misma.
[0500] medios celulares que comprenden IL-15 (por ejemplo, aumenta la capacidad de la población de células para algunas realizaciones, IL-15 aumenta el porcentaje de
[0502] ormente, los métodos se realizan en un sistema cerrado. nsducción, la incubación y el lavado de linfocitos T se s métodos mencionados anteriormente, los métodos se es, la separación, la activación y la transducción, la s separados.
[0504] riormente, los métodos comprenden además añadir un l medio de cultivo celular para mejorar la eficacia de la vo de mejora de la transducción comprende un polímero de mejora de la transducción se elige de: LentiBOOST™ etrina (Polybrene), PEA, Pluronic F68, Pluronic F127, vante es LentiBOOST™ (Sirion Biotech).
[0506] iormente, la transducción de la población de células (por r la población de células y el vector vírico a una fuerza de la transducción. En una realización, las células se
[0508] ormente, las células (por ejemplo, linfocitos T) se activan una membrana permeable al gas en la base que soporta nte el intercambio de gas. En algunas realizaciones, el plo, acceso sustancialmente ininterrumpido, a nutrientes
[0510] riormente, el CAR comprende un dominio de unión al alización intracelular.
[0512] ne a un antígeno elegido de: CD19, CD20, CD22, BCMA, -O-Glucopéptidos, sTn-O-Glucopéptidos, PSMA, CD97, GD3, CD171, IL-11Ra, PSCA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, olato alfa, ERBB (por ejemplo, ERBB2), Her2/neu, MUC1, til-GD2, receptor de folato beta, TEM1/CD248, TEM7R, RC5D, ALK, ácido polisiálico, antígeno relacionado con permatozoide 17, gonadotropina coriónica humana beta, nscriptasa inversa de la telomerasa humana, carboxil HAVCR1, ADRB3, PANX3, NY-ESO-1, GPR20, Ly6k, stos antígenos presentados en el MHC. En algunas a secuencia de CDR, VH, VL, scFv o CAR divulgada en de unión al antígeno comprende una VH y una VL, en ente en donde el conector comprende la secuencia de
[0514] prende un dominio transmembranario de una proteína os T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, D137 y CD154. En algunas realizaciones, el dominio rio de CD8. En algunas realizaciones, el dominio de SEQ ID NO: 6, o una secuencia de aminoácidos que de identidad de secuencia con la misma. En algunas a secuencia de ácido nucleico que codifica el dominio comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID os 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad de secuencia
[0516] á conectado al dominio transmembranario mediante una omprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: aproximadamente 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad lécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ecuencia de ácido nucleico comprende la secuencia de e ácido nucleico que tiene al menos 85 %, 90 %, 95 % o En algunas realizaciones, el dominio de señalización int
[0517] algunas realizaciones, el dominio de señalización prima
[0518] de CD3 zeta, TCR zeta, FcR gamma, FcR beta, CD3 g
[0519] CD278 (ICOS), F<ce>RI, DAP10, DAP12 o CD66d. En
[0520] comprende un dominio de señalización funcional der
[0521] señalización primario comprende la secuencia de amino
[0522] que tiene al menos aproximadamente 85 %, 90 %, 95 %
[0523] realizaciones, la molécula de ácido nucleico compren
[0524] señalización primario, en donde la secuencia de ácido n
[0525] NO: 20 o 21, o una secuencia de ácido nucleico que tiene
[0526] con la misma.
[0528] En algunas realizaciones, el dominio de señalización intr
[0529] En algunas realizaciones, el dominio de señalización co
[0530] derivado de una molécula de MHC de clase I, una prot
[0531] receptor de citocinas, una integrina, una molécula de
[0532] receptor de células NK activador, BTLA, un receptor d
[0533] CDS, ICAM-1, 4-1BB (CD137), B7-H3, ICOS (CD278),
[0534] NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4,
[0535] VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD
[0536] ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2,
[0537] DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD9
[0538] PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, L
[0539] SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cb
[0540] específicamente con CD83. En algunas realizaciones
[0541] dominio de señalización funcional derivado de 4-1BB. E
[0542] comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID
[0543] aproximadamente 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de identid
[0544] molécula de ácido nucleico comprende una secuenc
[0545] coestimulador, en donde la secuencia de ácido nucleic
[0546] 18, o una secuencia de ácido nucleico que tiene al men
[0547] misma.
[0549] En algunas realizaciones, el dominio de señalización i
[0550] derivado de 4-1BB y un dominio de señalización funcion
[0551] de señalización intracelular comprende la secuencia
[0552] aminoácidos que tiene al menos aproximadamente 85 %
[0553] y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o
[0554] aproximadamente 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de identid
[0555] dominio señalización intracelular comprende la secue
[0556] aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o 10.
[0558] En algunas realizaciones, el CAR comprende además
[0559] aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
[0561] Los métodos de la invención producen una población de
[0562] NK autólogos o alógenos que expresan CAR). En algu
[0563] se formula en una composición farmacéutica con un ve
[0565] En algunas realizaciones, en el producto de celular CA
[0566] documento, la cantidad total de perlas (por ejemplo, pe
[0567] 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 o 0,5
[0568] de fabricación.
[0570] En algunas realizaciones, la población fabricada de célu
[0571] autólogos o alógenos que expresan CAR) comprend
[0572] aproximadamente el mismo porcentaje de células intact
[0573] CD45RO-CCR7+, en comparación con el porcentaje de
[0574] linfocitos CD45RO- CCR7+, en la misma población d
[0575] expresar el CAR; (b) un cambio dentro de aproximadam
[0576] por ejemplo, linfocitos T CD45RO- CCR7+, por ejempl
[0577] ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T
[0578] modificarse por ingeniería genética para expresar el
[0579] ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T
[0580] 1,4, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,6, 2,8 o 3 veces, en com lar comprende un dominio de señalización primario. En mprende un dominio de señalización funcional derivado , CD3 delta, CD3 épsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b, as realizaciones, el dominio de señalización primario de CD3 zeta. En algunas realizaciones, el dominio de SEQ ID NO: 9 o 10, o una secuencia de aminoácidos % de identidad de secuencia con la misma. En algunas secuencia de ácido nucleico que codifica el dominio o comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID nos 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad de secuencia
[0582] ar comprende un dominio de señalización coestimulador. ulador comprende un dominio de señalización funcional ceptora de TNF, una proteína tipo inmunoglobulina, un ación linfocítica de señalización (proteína SLAM), un do Toll, OX40, CD2, CD7, CD27, Cd 28, CD30, CD40, , BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, a, CD8beta, IL2R beta, IL2R gamma, IL7R alfa, ITGA4, TGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, , ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, til), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), , SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), 9a, CD28-OX40, CD28-4-1BB, o un ligando que se une ominio de señalización coestimulador comprende un as realizaciones, el dominio señalización coestimulador o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos secuencia con la misma. En algunas realizaciones, la ácido nucleico que codifica el dominio señalización prende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: %, 90 %, 95 % o 99 % de identidad de secuencia con la
[0584] lular comprende un dominio de señalización funcional ivado de CD3 zeta. En algunas realizaciones, el dominio minoácidos de SEQ ID NO: 7 (o una secuencia de , 95 % o 99 % de identidad de secuencia con la misma) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos secuencia con la misma). En algunas realizaciones, el e aminoácidos de SEQ ID NO: 7 y la secuencia de
[0586] ecuencia conductora que comprende la secuencia de
[0588] s que expresan CAR (por ejemplo, linfocitos T o células alizaciones, la población de células que expresan CAR farmacéuticamente aceptable.
[0590] fabricado usando los métodos descritos en el presente D4, perlas CD8 y/o perlas TransACT) no es superior al la cantidad total de perlas añadidas durante el proceso
[0592] e expresan CAR (por ejemplo, linfocitos T o células NK célula o más de las siguientes características: (a) r ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T s intactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, las antes de modificarse por ingeniería genética para n 5 % a aproximadamente un 10 % de células intactas, comparación con el porcentaje de células intactas, por O- CCR7+, en la misma población de células antes de (c) un porcentaje aumentado de células intactas, por O- CCR7+, por ejemplo, aumentado en al menos 1,2, ión con el porcentaje de células intactas, por ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, células CD45RO- CC
[0593] por ingeniería genética para expresar el CAR; (d) aproxim
[0594] por ejemplo, linfocitos T de memoria central, por ejem
[0595] porcentaje de células de memoria central, por ejemplo CCR7+CD45RO+, en la misma población de células an
[0596] CAR; (e) un cambio dentro de aproximadamente un 5 %
[0597] por ejemplo, linfocitos T de memoria central, por ejem
[0598] porcentaje de células de memoria central, por ejemplo CCR7+CD45RO+, en la misma población de células an
[0599] CAR; (f) un porcentaje reducido de células de memori
[0600] ejemplo, linfocitos T CCR7+CD45RO+, por ejemplo, r
[0601] comparación con el porcentaje de células de memoria ce
[0602] linfocitos T CCR7+CD45RO+, en la misma población d
[0603] expresar el CAR; (g) aproximadamente el mismo porcent
[0604] T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2,
[0605] madre, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ rece
[0606] células antes de modificarse genéticamente para expres
[0607] a aproximadamente un 10 % de linfocitos T de memoria
[0608] de CD45RA+CD95+IL-2, en comparación con el porcent
[0609] T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2,
[0610] ingeniería genética para expresar el CAR; o (i) un porc
[0611] linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA
[0612] modificarse por ingeniería genética para expresar el CA
[0614] En algunas realizaciones, en la población fabricada de c
[0615] NK autólogos o alógenos que expresan CAR): (a) la m
[0616] descendente) de la población de células es aproximad
[0617] aumentada en no más de) aproximadamente 25, 50,
[0618] ascendente frente a TSCM descendente) de la misma
[0619] genética para expresar el CAR; (b) la mediana de Gene
[0620] población de células es aproximadamente la misma que
[0621] de) aproximadamente 25, 50, 100, 150 o 200% de la
[0622] descendente) de la población de células antes de modi
[0623] mediana de GeneSetScore (pluripotencialidad descenden
[0624] o difiere en no más de (por ejemplo, aumentada en no
[0625] la mediana de GeneSetScore (pluripotencialidad desce
[0626] ingeniería genética para expresar el CAR; (d) la median
[0627] células es aproximadamente la misma o difiere en
[0628] aproximadamente 125, 150, 175 o 200 % de la mediana
[0629] células antes de modificarse por ingeniería genética p
[0630] (autofagia ascendente) de la población de células es apr
[0631] aumentada en no más de) aproximadamente 180, 190,
[0632] ascendente) de la población de células antes de modific
[0634] En algunas realizaciones, las células que expresan C
[0635] adecuadas para su uso en un método para aumentar
[0636] administrar una población de células que expresan CA
[0637] farmacéutica divulgada en el presente documento al suje
[0638] el sujeto.
[0640] En algunas realizaciones, las células que expresan CA
[0641] cáncer en un sujeto, que comprende administrar una pobl
[0642] documento o una composición farmacéutica divulgada
[0643] tratar el cáncer en el sujeto. En algunas realizaciones, e
[0644] más de mesotelioma, mesotelioma pleural maligno, cán
[0645] cáncer de pulmón de células escamosas, cáncer de pulm
[0646] ductal pancreático, adenocarcinoma esofágico, cáncer d
[0647] cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de
[0648] cerebro, timoma, sarcoma, carcinoma, cáncer uterino, c
[0649] de faringe, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de recto, c
[0650] mismos. El cáncer puede ser un cáncer líquido, por ejem
[0651] células del manto (MCL), mieloma múltiple, leucemia linfoi
[0652] de linfocitos B (BALL), leucemia linfoide aguda de linfo
[0653] prolinfocítica de linfocitos B, neoplasia de células dend
[0654] difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), DLBCL asociado mieloproliferativas, linfoma folicular, linfoma folicular pedi en la misma población de células antes de modificarse mente el mismo porcentaje de células de memoria central, linfocitos T CCR7+CD45RO+, en comparación con el focitos T de memoria central, por ejemplo, linfocitos T de modificarse por ingeniería genética para expresar el roximadamente un 10 % de células de memoria central, linfocitos T CCR7+CD45RO+, en comparación con el focitos T de memoria central, por ejemplo, linfocitos T de modificarse por ingeniería genética para expresar el ntral, por ejemplo, linfocitos T de memoria central, por cido en al menos 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 %, en por ejemplo, linfocitos T de memoria central, por ejemplo, lulas antes de modificarse por ingeniería genética para de linfocitos T de memoria madre, por ejemplo, linfocitos comparación con el porcentaje de linfocitos T de memoria es de CD45RA+CD95+IL-2, en la misma población de CAR; (h) un cambio dentro de aproximadamente un 5 % e, por ejemplo, linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de linfocitos T de memoria madre, por ejemplo, linfocitos n la misma población de células antes de modificarse por je aumentado de linfocitos T de memoria, por ejemplo, 95+IL-2, en la misma población de células antes de
[0656] s que expresan CAR (por ejemplo, linfocitos T o células na de GeneSetScore (TEM ascendente frente a TSCM nte la misma que o difiere en no más de (por ejemplo, 100 o 125% de la mediana de GeneSetScore (TEM blación de células antes de modificarse por ingeniería Score (Treg ascendente frente a Tef descendente) de la ifiere en no más de (por ejemplo, aumentada en no más diana de GeneSetScore (Treg ascendente frente a Tef se por ingeniería genética para expresar el CAR; (c) la de la población de células es aproximadamente la misma de) aproximadamente 25, 50, 100, 150, 200 o 250 % de te) de la población de células antes de modificarse por GeneSetScore (hipoxia ascendente) de la población de más de (por ejemplo, aumentada en no más de) GeneSetScore (hipoxia ascendente) de la población de expresar el CAR; o (e) la mediana de GeneSetScore adamente la misma o difiere en no más de (por ejemplo, o 210 % desde la mediana de GeneSetScore (autofagia por ingeniería genética para expresar el CAR.
[0657] preparadas mediante los métodos de la invención son a respuesta inmunitaria en un sujeto, que comprende vulgadas en el presente documento o una composición aumentando de este modo una respuesta inmunitaria en
[0659] n adecuadas para su uso en un método para tratar un n de células que expresan CAR divulgadas en el presente l presente documento al sujeto, tratando de este modo ncer es un cáncer sólido, por ejemplo, elegido de: uno o e pulmón no microcítico, cáncer de pulmón microcítico, de células grandes, cáncer pancreático, adenocarcinoma ama, glioblastoma, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, , melanoma, cáncer renal, cáncer de hígado, cáncer de er renal, cáncer gastrointestinal, cáncer urotelial, cáncer r de esófago o cáncer de vejiga, o una metástasis de los elegido de: leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de guda (ALL), linfoma de Hodgkin, leucemia linfoide aguda T (ALL), leucemia linfocítica pequeña (SLL), leucemia as plasmocitoides blásticas, linfoma de Burkitt, linfoma flamación crónica, leucemia mieloide crónica, neoplasias , leucemia de células pilosas, linfoma folicular de células pequeñas o de células grandes, afecciones linfoproliferati
[0660] la zona marginal del tejido linfoide asociado a la mucos
[0661] mielodisplásico, linfoma no Hodgkiniano, linfoma plasma macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma esplénico
[0662] esplénico de linfocitos B pequeños con infiltración difusa
[0663] linfoma linfoplasmacítico, una enfermedad de la cadena
[0664] solitario del hueso, plasmocitoma extraóseo, linfoma gang
[0665] la zona marginal, linfoma cutáneo primario del centro f
[0666] (tímico) primario de linfocitos B grandes, linfoma intravasc
[0667] ALK+, linfoma de linfocitos B grandes originado en la e
[0668] linfoma de derrame primario, linfoma de linfocitos B, leuce
[0670] En algunos casos, dicho método comprende además admi
[0671] casos, el segundo agente terapéutico es un agente terap
[0672] radioterapia o una terapia inmunorreguladora. En algunos
[0673] hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra)).
[0675] Aunque métodos y materiales similares o equivalentes a lo
[0676] práctica o prueba de la presente invención como se def
[0677] métodos y materiales adecuados. Para todas las secue
[0678] referencia en el presente documento, por ejemplo, en c
[0679] proteína hace referencia a una pluralidad de números de
[0680] secuencia.
[0682] Además, los materiales, métodos y ejemplos son únicam
[0683] subtítulos o elementos numerados o con letras, por ejempl
[0684] lectura. El uso de títulos o elementos numerados o con
[0685] elementos se realicen en orden alfabético o que las etapas
[0686] características, objetos y ventajas de la invención serán ev
[0687] está definida por las reivindicaciones adjuntas.
[0689] BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
[0691] FIG. 1A-1I:Cuando los linfocitos T purificados se incuba
[0692] predominante transducida. La FIG. 1A es un gráfico que m
[0693] 1B es un par de gráficos que muestran los porcentajes de
[0694] después de la transducción. La FIG. 1C es un conjunto de CD3+CCR7+CD45RO- en poblaciones estimuladas c
[0695] poblaciones de sólo citocinas (derecha) en dos donantes i
[0696] como "IL7+IL15 de estim. corta" en la FIG. 1C, las célul
[0697] eliminaron en presencia de IL7 e IL15. Las FIG. 1D, 1E y
[0698] muestran la transducción de subconjuntos de linfocitos T c
[0699] 1F) diariamente durante un periodo de tres días. La FIG.
[0700] muestran la diferenciación de linfocitos T el día 0 (izquier
[0701] la estimulación con IL2 (panel superior derecho) o IL-15 (p
[0702] gráficos que muestran los porcentajes de células
[0703] CD3+CCR7-RO- el día 0 o después de incubación de 24
[0705] FIG. 2A-2D:Los CART generados con un día de estimula
[0706] T purificados se transdujeron con una MOI de 1 y en todas
[0707] células que expresan CAR observados el día 1 y el día
[0708] expandieron mediante perlas CD3/CD28 después de la re
[0709] 2A es un par de gráficos que muestran los porcentajes pro
[0710] del día 1 (izquierda) y CAT del día 10 (derecha). FIG. 2B: L
[0711] de la expansión se midió usando Nalm6 como células di
[0712] CD19 positivas por CART a partir de cada condición. Los
[0713] marcan como "Día 10". Todas las demás muestras fueron
[0714] de los CART del día 1 expandidos en respuesta a célula
[0715] cantidad de secreción de IFN-gamma por CART de cada
[0716] CD19 negativas. FIG.2D: Se probó la capacidad proliferati
[0717] de EDU. La FIG. 2D es un gráfico que muestra los porcenta
[0718] Similar a la FIG. 2B, los CART del día 10 se marcan como
[0719] 1.
[0720] neoplásicas, linfoma MALT (linfoma extraganglionar de linfoma de la zona marginal, mielodisplasia, síndrome stico, neoplasia de células dendríticas plasmocitoides, la zona marginal, linfoma/leucemia esplénica, linfoma la pulpa roja, variante de leucemia de células pilosas, sada, mieloma de células plasmáticas, plasmocitoma ar de la zona marginal, linfoma ganglionar pediátrico de lar, granulomatosis linfomatoide, linfoma mediastínico de linfocitos B grandes, linfoma de linfocitos B grandes medad de Castleman multicéntrica asociada a VHH8, mieloide aguda (AML) o linfoma inclasificable.
[0722] trar un segundo agente terapéutico al sujeto. En algunos ico anticanceroso, por ejemplo, una quimioterapia, una os, el segundo agente terapéutico es IL-15 (por ejemplo,
[0724] escritos en el presente documento se pueden usar en la por las reivindicaciones, a continuación se describen s de GenBank, Unigene y Entrez a las que se hace quier tabla del presente documento, cuando un gen o ceso de secuencias, se incluyen todas las variantes de
[0726] e ilustrativos y no pretenden ser limitantes. Los títulos, ), (b), (i) etc., se presentan simplemente para facilitar la tras en este documento no requiere que las etapas o lementos sean necesariamente discretos entre sí. Otras ntes a partir de la descripción y los dibujos. La invención
[0728] con citocinas, las células intactas fueron la población tra un proceso de citocinas a modo de ejemplo. La FIG. las CD3+ y CD8+ en cada momento de tiempo indicado icos que muestran la transducción dentro de la población perlas CD3/CD28 (izquierda) en comparación con pendientes. Para la muestra a la que se hace referencia e estimularon con perlas durante 2 días y después se son un conjunto de gráficos de citometría de flujo que ados con IL2 (FIG. 1D), IL15 (FIG. 1E) e IL7+IL15 (FIG. es un conjunto de gráficos de citometría de flujo que y el día 1 (derecha) para CCR7 y CD45RO después de l inferior derecho). Las FIG. 1H y 1I son un conjunto de CCR7+RO-, c D3+CCR7+RO+, CD3+CCR7-RO+ y s con las citocinas indicadas.
[0730] de citocinas fueron funcionales. FIG. 2A: Los linfocitos condiciones de citocinas evaluadas, los porcentajes de fueron similares. Se generaron CART en un día y se ida durante 9 días para imitar el entornoin vivo.La FIG. dio de células CD3+ CAR+ en cada condición para CAR pacidad de citotoxicidad de los CART del día 1 después . La FIG. 2B es un gráfico que muestra el % de Nalm6 RT del día 10 expandidos usando perlas CD3/CD28 se RT del día 1. FIG. 2C: Se evaluó la secreción de IFNg iana Nalm6. La FIG. 2C es un gráfico que muestra la dición en presencia de células diana CD19 positivas o e CART del día 1 mediante medición de la incorporación promedio de células EDU-positivas para cada condición. ía 10" y todas las demás muestras fueron CART del díaFIG. 3A-3B:Impacto de MOI y composición de medi
[0731] purificados se transdujeron con un intervalo de MOI de
[0732] Independientemente de la citocina usada, se observó u
[0733] de gráficos donde se representan los porcentajes de cé
[0734] FIG. 3B: La composición de los medios afectó la trans
[0735] gráficos que muestran los porcentajes de células CD3
[0736] condición probada. "2,50" indica una MOI de 2,50. "5,00
[0738] FIG. 4A-4D:Los linfocitos T-CAR generados en 24 h
[0739] transdujeron con CAR19 y se recogieron 24 horas des
[0740] flujo que muestran la transducción de linfocitos T con C
[0741] la transducción con cada condición de citocinas. FIG.
[0742] superior al 80 % en todas las condiciones ensayadas.
[0743] periférica aumentain vivo encomparación con sus ho
[0744] CD3+CAR+ vivas en los momentos de tiempo indicad
[0745] CART del día 10 están marcados como "D10 1e6" o "
[0746] FIG. 4D: Los CART del día 1 podrían eliminar el tumori
[0747] los CART del día 10. La FIG. 4D es un gráfico que mues
[0748] de la inoculación tumoral para cada condición probada.
[0749] tumoral. Los CART del día 10 están marcados como "5
[0751] FIG. 5A-5B:El proceso de citocinas era escalable. F
[0752] Prodigy® y el compartimento de linfocitos B se redujo
[0753] citometría de flujo que muestran la tinción de células con
[0754] y un anticuerpo anti-CD14 (derecha) para células Le
[0755] CD4+CD8+ (inferior). FIG. 5B: Se transdujeron linfocito
[0756] placa de 24 pocillos o una bolsa PL30 después del en
[0757] FIG. 5B es un conjunto de gráficos de citometría de flujo
[0758] en presencia de<i>L2 o hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra).
[0760] FIG. 6A-6C:Los CART fabricados mediante el proceso
[0761] vivo.Las FIG. 6A y 6B son gráficos en los que la carg
[0762] después del implante tumoral. "d.1" indica CART fabr
[0763] fabricados con un protocolo de expansión tradicional d
[0764] FIG. 6C es un conjunto de imágenes representativas qu
[0766] FIG. 7A-7B:Las células que expresan IL6Ra y IL6R
[0767] diferenciada. Se tiñeron linfocitos T en fresco para l
[0768] determinar los niveles de expresión de IL6Ra y lL6Rp e
[0770] FIG. 8A y 8B:Tanto las células que expresan IL6Ra c
[0771] menos diferenciada. Se tiñeron linfocitos T en fresco pa
[0772] determinar los niveles de expresión de antígenos de s
[0773] 8A) y CD8 (FlG. 8B).
[0775] FIG. 9:Las células que expresan IL6Ra expresaron ma
[0776] tiñeron linfocitos T en fresco para los antígenos de sup
[0777] de expresión de diversos antígenos de superficie en sub
[0779] FIG. 10:Las células que expresan IL6Rp expresaron
[0780] Se tiñeron linfocitos T en fresco para los antígenos de su
[0781] de expresión de diversos antígenos de superficie en su
[0783] FIG. 11:La expresión de IL6Ra pero no de IL6Rp se r
[0784] linfocitos T se activaron con perlas de aCD3aCD28 el d
[0785] expresión de IL6Ra y IL6Rp en los puntos temporales i
[0787] FIG. 12:Multiplicación de la expansión de linfocitos T tr
[0788] linfocitos T se activaron con perlas de aCD3aCD28
[0789] monitorizaron para determinar el número de células en
[0791] FIG. 13A y 13B:El tratamiento con IL2, IL7 e IL15 n
[0792] acoplamiento con TCR. Los linfocitos T se activaron c
[0793] indicadas y después se monitorizaron para determinar
[0794] puntos temporales indicados.
[0795] la transducción en el día 0. FIG. 3A: Los linfocitos T 0 en presencia de IL15, IL2+IL15, IL2+IL7 o IL7+IL15. ento lineal en la transducción. La FIG. 3A es un conjunto D3+ CAR+ frente a MOI para cada condición probada. n en el proceso de citocinas. La FIG. 3B es un par de R+ el día 1 (izquierda) o el día 8 (derecha) para cada a una MOI de 5,00.
[0797] pueden eliminar el tumor. FIG. 4A: Los linfocitos T se La FIG. 4A es un conjunto de gráficos de citometría de que se cultivaron con IL2, IL15 e IL7+IL15, que ilustran n gráfico que muestra la viabilidad promedio que fue 4C: La expansión de los CART del día 1 en la sangre os del día 10. El porcentaje de células CD45+CD11bpués de la infusión para cada condición evaluada. Los 6" y todas las demás muestras fueron CART del día 1. aunque con una cinética retardada en comparación con flujo total en los momentos de tiempo indicados después Ar se administraron 4 días después de la inoculación 0" y todas las demás muestras fueron CART del día 1.
[0798] : Los linfocitos T se enriquecieron en un CliniMACS® os del 1 %. La FIG. 5A es un conjunto de gráficos de ticuerpo anti-CD3 (izquierda) o un anticuerpo anti-CD19 k (superior) o células después del enriquecimiento de rificados de una aféresis congelada con CAR19 en una imiento. Los CAR se recogieron 24 horas después. La uestran la tinción para CD3 y CAR de células fabricadas
[0800] ctivación mostraron una eficacia antitumoral superiorinral se representa frente al momento temporal indicado usando el proceso de activación. "d.9" indica CART as, que sirve como control positivo en este estudio. La stran la bioluminiscencia de ratones.
[0802] enriquecieron en una población de linfocitos T menos ígenos de superficie indicados y se examinaron para onjuntos de linfocitos T CD4 (FlG. 7A) y CD8 (FIG. 7B).
[0803] L6Rp se enriquecieron en una población de linfocitos T antígenos de superficie indicados y se examinaron para ie indicados en subconjuntos de linfocitos T CD4 (FlG.
[0805] res superficiales de linfocitos T menos diferenciados. Se indicados y se examinaron para determinar los niveles ntos de células de expresión alta, media y baja de L6Ra.
[0806] ores superficiales de linfocitos T menos diferenciados. ie indicados y se examinaron para determinar los niveles ntos celulares de expresión alta, media y baja de IL6Rp.
[0807] por disminución baja tras el acoplamiento de TCR. Los después se examinaron para determinar los niveles de os.
[0809] s con citocinas después del acoplamiento de TCR. Los 0 en presencia de citocinas indicadas y después se ntos temporales indicados.
[0811] tó el tamaño y la viabilidad de las células después del rlas de aCD3aCD28 el día 0 en presencia de citocinas año celular (FlG. 13A) y la viabilidad (FlG. 13B) en losFIG. 14:Cinética de expresión de diversas moléculas
[0812] citocinas. Los linfocitos T se activaron con perlas de
[0813] después se examinaron para determinar la expresión d
[0814] en los puntos temporales indicados.
[0816] FIG. 15:Cinética de expresión de diversas moléculas
[0817] citocinas. Los linfocitos T se activaron con perlas de
[0818] después se examinaron para determinar la expresión d
[0819] en los puntos temporales indicados.
[0821] FIG. 16:La expresión de IL6Rp se restringió principa
[0822] después del acoplamiento de<t>C<r>. Los linfocitos T se
[0823] citocinas indicadas y después se examinaron para det
[0824] día 15.
[0826] FIG. 17:La expresión de IL6Rp se restringió principal
[0827] después del acoplamiento de TCR. Los linfocitos T se
[0828] citocinas indicadas y después se examinaron para det
[0829] día 25.
[0831] FIG. 18:Los linfocitos T tratados con citocinas de cade
[0832] linfocitos T se activaron con perlas de aCD3aCD28
[0833] examinaron para determinar los porcentajes de linfocit
[0834] flujo el día 25.
[0836] FIG. 19A y 19B:Expresión de CAR para BCMA el día
[0837] sanos. La FIG. 19A es un panel de histogramas que
[0838] citometría de flujo. La FIG. 19B es una tabla en la que s
[0839] citometría de flujo.
[0841] FIG. 20A, 20B y 20C:Cinética de expresión de CARin
[0842] el proceso de ARM. Los CAR se expresaron establem
[0843] muestran la expresión de CAR en los puntos temporal
[0844] 20C son gráficos que muestran el % de CAR+ y los val
[0846] FIG. 21A y 21B:Triajein vivoen un modelo de ratón
[0847] recibió 1,5E6 del producto CART del día 1. La FIG. 21
[0848] CAR del día 1 y día 7 en los linfocitos T-CAR. La FIG. 2
[0849] BLI) después del tratamiento con CAR.
[0851] FIG. 22A, 22B y 22C:Triajein vivode CAR para BC
[0852] xenoinjerto de mieloma múltiple KMS-11-luc. La FIG. 2
[0853] CAR el día 1 y el día 3. La FIG. 22B es un gráfico que m
[0854] con CART usando dos dosis diferentes: una dosis de 1
[0855] Se normalizaron las dosis de células CAR+ basándose
[0856] que muestra la cinética del peso corporal durante el tra
[0858] FIG. 23A, 23B y 23C.Las FIG. 23A y 23B son gráfico
[0859] CAR en su superficie celular (FIG. 23A) y la intensidad d
[0860] observadas con el tiempo (las eficiencias replicadas se
[0861] FIG. 23C). La Figura 23C es un panel de gráficos de cit
[0862] expresión de CAR superficiales en células CD3+ viable
[0863] indican el porcentaje de CAR positivos.
[0865] FIG. 24A y 24B.La FIG. 24A es un gráfico que muestr
[0866] Prodigy®) y en la recogida en diversos puntos temporale
[0867] intactos (n), memoria central (cm), memoria efectora (
[0868] CD8, CCR7 y CD45RO o su ausencia. Se indica la com
[0869] muestra la composición celular de la población CD3+
[0870] celular de la fracción CAR+. La FIG. 24<b>es un panel d
[0871] clasificación aplicada en eventos CD3+ vivos para d
[0872] composición de CD4/CD8 (fila media) y subconjuntos d
[0873] granel) y la fracción CAR+.
[0875] FIG. 25.Cinética de subconjuntos de linfocitos T que ex
[0876] número de células viables en los subconjuntos respecti perficie en linfocitos T CD4 después del tratamiento con aCD28 el día 0 en presencia de citocinas indicadas y rsas moléculas de superficie mediante citometría de flujo
[0878] perficie en linfocitos T CD8 después del tratamiento con aCD28 el día 0 en presencia de citocinas indicadas y rsas moléculas de superficie mediante citometría de flujo
[0880] te en subconjuntos de linfocitos T que expresan CD27 ron con perlas de aCD3aCD28 el día 0 en presencia de ar la expresión de IL6Rp mediante citometría de flujo el
[0882] en subconjuntos de linfocitos T que no expresan CD57 ron con perlas de aCD3aCD28 el día 0 en presencia de ar la expresión de IL6Rp mediante citometría de flujo el
[0884] comunes produjeron citocinas funcionales el día 25. Los 0 en presencia de citocinas indicadas y después se que producen IL2, IFN<y>y TNFa mediante citometría de
[0886] ando ARM a MOI = 2,5 en linfocitos T de dos donantes an la expresión de CAR para BCMA como se mide por meran los reactivos/condiciones usados en el análisis de
[0888] esde el día 1 hasta el día 4 de células fabricadas usando el día 3. La FIG. 20A es un panel de histogramas que icados medidos por citometría de flujo. Las FIG. 20B y e MFI con el tiempo, respectivamente.
[0890] enoinjerto de mieloma múltiple KMS-11-luc. Cada ratón un panel de histogramas que muestran la expresión del un gráfico que muestra que la cinética tumoral (nivel de
[0892] sando titulación de la dosis en un modelo de ratón de un panel de histogramas que muestran la expresión de la cinética de la ingesta tumoral después del tratamiento linfocitos T-CAR+ y una dosis de 5e4 linfocitos T-CAR+. expresión de CAR del día 3. La FIG. 22C es un gráfico so de este estudio.
[0894] muestran el porcentaje de linfocitos T que expresan el rescencia media (MFI) de células CD3+CAR+ (FIG. 23B) edian a partir de los dos paneles de flujo mostrados en la ría de flujo que muestran la estrategia de puertas para la sado en muestras de UTD. Los números en los gráficos
[0896] omposición integral del material de partida (producto de pués del inicio del cultivo. Se definieron los subconjuntos efectora (ef) mediante la expresión superficial de CD4, ón de CD4. Para cada punto temporal, la barra izquierda l (a granel) y la barra derecha muestra la composición icos de citometría de flujo que muestran la estrategia de inar la eficiencia de transducción global (fila superior), moria (fila inferior) dentro de la población CD3+ global (a
[0898] n CAR superficial a lo largo del tiempo, expresada comoFIG. 26.Recuperación de células viables (número de cé
[0899] células viables sembradas) 12 a 24 horas después del
[0900] previos al lavado.
[0902] FIG. 27.Viabilidad de CART rápidos recogidos de 12 a
[0903] antes del lavado y después del lavado en el momento d
[0905] FIG. 28A, 28B, 28C y 28D.La FIG. 28A es un gráfico q
[0906] de donante sano; LKPK) y el producto enriquecido en lin
[0907] números indican el % de células progenitoras (vivas, i
[0908] CD56 (NK): células NK. La FIG. 28B es un panel de g
[0909] selección en eventos CD3+ vivos usados para determi
[0910] frente a CAR) y subconjuntos de linfocitos T (CD4 frente
[0911] (linfocitos T-CAr para CD19 fabricados usando el pro
[0912] CD19 (linfocitos T-CAR para CD19 fabricadas usando el
[0913] izquierdos representan cultivos a granel, mientras que lo
[0914] y "TM-UTD" se refieren a linfocitos T no transducidos
[0915] respectivamente. Los números en cuadrantes indican el
[0916] y TM-CAR para CD19 indican una inclinación hacia un
[0917] ARM-UTD y ARM-CAR para CD19 indican el mantenimi
[0918] NA: no aplicable. La FIG. 28C es un gráfico que muest
[0919] CD19 y TM-CAR para CD19. La composición se muestr
[0920] El porcentaje de las poblaciones respectivas se refiere a
[0921] Se indica el % de células CD4 de la masa o población
[0922] CD4+ y CD8+, respectivamente; ef: efector; em: memori
[0923] son representativos de 3 series a escala completa con
[0924] escala usadas para optimizar el proceso. La FIG. 28D e
[0925] 28C.
[0927] FIG. 29A, 29B, 29C y 29D.Concentración de citocinas
[0928] IL-2 (FIG. 29C y 29D). FIG. 29A y 29C: TM-CAR para C
[0929] con NALM6-WT (ALL), TMD-8 (DLBCL) o sin células ca
[0930] después. FIG. 29B y 29D: Se cocultivó ARM-CAR para
[0931] El sobrenadante se recogió después de 24 h o 48 h. Par
[0932] de antígeno, se cultivó ARM-<c>A<r>para CD19 solo dur
[0933] durante 24 h. Los datos mostrados se derivan de linf
[0934] experimentos con tres donantes en total.
[0936] FIG. 30A, 30B y 30C.La FIG. 30A es un gráfico que esbo
[0937] antitumoral de ARM-CAR para CD19. La FIG. 30B es
[0938] determinación de la expresión de CAR en células ARM-ARM-CAR para CD19 durante el periodo de tiempo des
[0939] selección de la expresión de CAR se basó en una tinci
[0940] muestra la eficaciain vivode ARM-CAR para CD19 en el
[0941] la línea NALM6 de pre-B ALL, que expresa el gen i
[0942] luminiscencia corporal total (p/s), representada como ca
[0943] día 7 después de la inoculación del tumor, los ratones s
[0944] las dosis respectivas (número de linfocitos T-CAR+ vi
[0945] sacrificado el día 33 debido a la aparición de X-GVHD.
[0946] sirvieron como controles negativos. n=5 ratones para to
[0947] 106 y todos los grupos de dosis de TM-CAR para CD19.
[0948] T generadas a partir de 5 donantes sanos diferentes, tres
[0949] CD19.
[0951] FIG. 31A, 31B, 31C y 31D.Niveles de citocinas plasmá
[0952] ARM-CAR para CDl9 o TM-CAR para CD19 a dosis res
[0953] y se midió la citocina plasmática mediante ensayo MSD.
[0954] para ratones tratados con T-CAR (FIG. 31A y 31C) o cél
[0955] cada dosis representan el nivel medio de citocinas d
[0956] izquierda: día 4, 7, 10, 12, 16, 19, 23 y 26). Las barras h
[0957] de cambio entre ARM-CAR para CD19 (grupo de dosis
[0958] descritas en el texto: 3 veces para IFN-y; y 10 veces p
[0959] pérdida de peso corporal no muestran los últimos puntos
[0960] para 2 estudios. sin tum: sin tumor.
[0961] viables recuperadas en la recogida frente al número de io del cultivo según se determinó a partir de recuentos
[0963] horas después del inicio del cultivo, según se determina ecogida.
[0965] uestra la composición del material de partida (Leucopak s T tal como se analiza mediante citometría de flujo. Los uales). T: linfocitos T; mono: monocitos; B: linfocitos B; os de citometría de flujo que muestran la estrategia de a velocidad de transducción (FSC de dispersión directa 8 y CCR7 frente a CD45RO). Para ARM-CAR para CD19 de fabricación rápida activada (ARM)) y TM-CAR para eso de fabricación tradicional (TM)), los paneles inferiores eles derecho representan linfocitos T-CAR+. "ARM-UTD" ) fabricados de acuerdo con los procesos ARM y TM, la población parental. Las cajas en los gráficos TM-UTD tipo T<cm>para el proceso TM. Las cajas en los gráficos de células similares a intactas mediante el proceso ARM. composición integral de linfocitos T de ARM-CAR para ra las poblaciones "a granel" y "CAR+" cuando proceda. de parental, ya sea CD3+ o CAR+CD3+, según proceda.
[0966] respectiva. LKPK: Material de partida Leukopak; 4 y 8: ctora; cm: memoria central; n: similar a intacto. Los datos antes sanos diferentes (n= 3) y varias series a pequeña table que muestra los porcentajes mostrados en la FIG.
[0968] brenadantes de cultivo celular. IFN-<y>(FIG. 29A y 29B) y ARM-CAR para CD19 y UTD respectiva se cocultivaron sas (linfocitos T solos). El sobrenadante se recogió 48 h con NALM6-WT, NALM6-19KO (CD19-negativo) o solo. aluar adicionalmente la secreción de citocinas específica 24 h, se lavó y después se cocultivó con células diana s T de 2 donantes sanos y son representativos de 2
[0970] l modelo de ratón de xenoinjerto para estudiar la actividad anel de gráficos de citometría de flujo que muestran la para CD19 de un vial de vigilancia. Se cultivaron células en la figura, antes del análisis por citometría de flujo. La control de isotipo (Iso). La FIG. 30C es un gráfico que elo de xenoinjerto de ratón. A ratones NSG se les inyectó dor de luciferasa; la carga tumoral se expresa como umoral media con un intervalo de confianza del 95 %. El taron con ARM-CAR para CD19 o TM-CAR para CD19 a ). El grupo de ARM-CAR para CD19 de alta dosis fue vehículo (PBS) y los linfocitos T no transducidos (UTD) los grupos, excepto n=4 para la dosis de ARM-UTD 1 * ealizaron cinco estudios de xenoinjerto con células CAR-los cuales incluyeron una comparación con TM-CAR para
[0972] de ratones portadores de tumores NALM6 tratados con vas de linfocitos T-CAR. Se extrajo sangre de los ratones muestran IFN-<y>(FIG. 31A y 31B) e IL-2 (FIG. 31C y 31D) ARM- y TM-<u>TD (FIG. 3 lB y 31D). Las barras dentro de del grupo en diferentes puntos temporales (desde la ntales y los números indican las comparaciones de veces 106) y TM-CAR para CD19 (grupo de dosis 0,5 * 106) L-2. Los grupos retirados debido a la carga tumoral o la porales. Los niveles de citocinas plasmáticas se midieronFIG. 32.Evolución temporal de las concentraciones de
[0973] NALM6 tratados con vehículo PBS, UTD, TM-CAR pa
[0974] sangre los días 4, 7, 14, 21 y 28 después de la inyecc
[0975] totales (CD3+, superior) y linfocitos T CAR+ (CD3+CA
[0976] momentos de tiempo diseñados, representados como c
[0978] FIG. 33A y 33B.Niveles de proteína IL-6 en sobren
[0979] cocultivadas ARM-CAR para<c>D19/K562 (FIG. 33A) o la
[0980] 33B), incubadas durante 6 o 24 horas a diferentes prop
[0981] diferenciadas por PMA durante otras 24 horas. Se muest
[0982] K562-CD19, linfocitos T-CAR cocultivados con células
[0983] no se muestran para mayor claridad. Solo las barras
[0984] representan cultivos de linfocitos T-CAR (6 h, 24 h) sin
[0985] para CD19) y n = 3 (ARM-CAR para CD19).
[0987] FIG. 34A, 34B y 34C.El proceso ARM conserva la plu
[0988] PI61, R1G5 y CART BCMA10 fabricadas usando el pro
[0989] en la descongelación (FIG. 34A) y 48 h después de la
[0990] también se evaluaron para el producto 48 h después de
[0991] representativos de dos experimentos realizados usando
[0993] FIG. 35A y 35B.El proceso de TM dio como result (CD45RO+/CCR7+), mientras que la población de linfoc
[0994] con el proceso TM. Se evaluaron células PI61, R1G5
[0995] determinar la expresión de CAR el día 9 (FIG. 35A). Lo
[0996] después de la descongelación del producto (FIG. 35
[0997] experimentos realizados usando linfocitos T de dos don
[0999] FIG. 36A, 36B, 36C y 36D.Los linfocitos T-CAR para B
[1000] para BCMA y secretan niveles más altos de IL2 e IFN-y.
[1001] celular. Las células PI61, R1G5 y CART BCMA10 fabric
[1002] cocultivaron con KMS-11 a una relación de 2,5:1. Los s
[1003] de ARM, las concentraciones de IFN-y se muestran en
[1004] FIG. 36B. Para los productos de TM, las concentracione
[1005] de IL-2 se muestran en la FIG. 36D. Los datos que se
[1006] usando linfocitos T de dos donantes.
[1008] FIG. 37A, 37B y 37C.Datos de secuenciación de ARN
[1009] células del día 1 (FIG. 37B) y células del día 9 (FIG.
[1010] expresados por célula. Los gráficos "nUMI" muestran el
[1012] FIG. 38A, 38B, 38C y 38D.Gráficos de incrustación de
[1013] células de entrada (FIG. 38A), células del día 1 (FIG.
[1014] proliferación, que se determinó basándose en la expresi
[1015] punto representa una célula en esa muestra. Las cél
[1016] proliferación mientras que las células sombreadas oscur
[1017] 38D es un gráfico de violín que muestra la distribución
[1018] genes que comprende genes que caracterizan un estad
[1019] día 1, células del día 9 y células de entrada. En la FIG. 3
[1020] ascendente frente a activados descendente) indica un f
[1021] puntuación más baja del conjunto de genes (en reposo
[1022] creciente de linfocitos T activados. Las células de entr
[1023] comparación con las células del día 9 y día 1. Las cél
[1024] genes de activación.
[1026] FIG. 39A, 39B, 39C, 39D y 39E.Análisis del conjunto de
[1027] día 9. En la FIG. 39A, una puntuación del conjunto de
[1028] frente a TSCM descendente" indica un fenotipo crecient
[1029] esa muestra, mientras que una puntuación del conjunto
[1030] de memoria de células madre (TSCM). En la FIG. 39B,
[1031] conjunto de genes "Treg ascendente frente a Tef descen
[1032] (Treg), mientras que una puntuación más baja del co
[1033] efectores (Tef). En la FIG. 39C, una puntuación má
[1034] "pluripotencialidad descendente" indica un fenotipo de
[1035] más alta del conjunto de genes para el conjunto de gene
[1036] En la FIG. 39E, una puntuación más alta del conjunto tos T totales y CAR+ en ratones portadores de tumores 19 o ARM-CAR para CD19. Se tomaron muestras de e linfocitos T-CAR. Las concentraciones de linfocitos T ferior) se analizaron mediante citometría de flujo en los medias con un intervalo de confianza del 95 %.
[1038] es de cocultivo de tres partes en pg/ml. Las células las cocultivadas TM-CAR para CD19/células K562 (FIG. es (1:1 y 1:2,5), se añadieron entonces a células THP-1 s resultados de linfocitos T-CAR cocultivados con células mesotelina y linfocitos T-CAR solos. Las relaciones 1:5 gnadas ARM-CAR para CD19 y TM-CAR para CD19 as diana. Media EEM, duplicados de n = 1 (TM-CAR
[1040] ncialidad de linfocitos T-CAR+ para BCMA. Las células RM se evaluaron para determinar la expresión de CAR ngelación (FIG. 34B). Los marcadores CCR7/CD45RO congelación (FIG. 34C). Los datos que se muestran son itos T de dos donantes.
[1042] rincipalmente linfocitos T de memoria central (TCM) similar a intacta casi se ha ido en los linfocitos T-CAR+ ART BCMA10 fabricadas usando el proceso TM para cadores CCR7/CD45RO también se evaluaron el día 9 s datos que se muestran son representativos de dos
[1044] procesadas con ARM demuestran activación específica entraciones de IL-2 e IFN-y en sobrenadantes de cultivo usando el proceso ARM o TM, y los UTD respectivos se dantes se recogieron 20 h después. Para los productos . 36A y las concentraciones de IL-2 se muestran en la IFN-y se muestran en la FIG. 36C y las concentraciones an son representativos de dos experimentos realizados
[1046] élulas individuales para células de entrada (FIG. 37A), . Los gráficos "nGene" muestran el número de genes o de identificadores moleculares únicos (UMI) por célula.
[1047] os estocásticos distribuidos en t (t-SNE) que comparan ) y células del día 9 (FIG. 38C) para un distintivo de genesCCNB1, CCND1, CCNE1, PLK1 y MKI67.Cada ostradas como gris claro no expresan los genes de presan uno o más de los genes de proliferación. La FIG. untuaciones de conjunto de genes para un conjunto de infocitos T en reposo frente a activados para células del a puntuación más alta del conjunto de genes (en reposo o creciente de linfocitos T en reposo, mientras que una ente frente a activados descendente) indica un fenotipo staban en general en más de un estado de reposo en el día 1 muestran la mayor puntuación del conjunto de
[1049] s para células de entrada, células del día 1 y células del más alta para el conjunto de genes "TEM ascendente infocitos T de memoria efectora (TEM) de las células en enes inferior indica un fenotipo creciente de linfocitos T ntuación más alta del conjunto de genes génico para el " indica un fenotipo creciente de linfocitos T reguladores de genes indica un fenotipo creciente de linfocitos T a del conjunto de genes para el conjunto de genes otencialidad creciente. En la FIG. 39D, una puntuación xia ascendente" indica un fenotipo de hipoxia creciente. nes para el conjunto de genes "autofagia ascendente" indica un fenotipo de autofagia creciente. Las células del
[1050] de distintivo de memoria, similar a tallo y diferenciación.
[1051] enriquecimiento para el estrés metabólico.
[1053] FIG. 40A, 40B y 40C.Análisis de agrupaciones génicas
[1054] violín que muestran las puntuaciones del conjunto de ge
[1055] de las células de entrada. Cada punto que se superpone
[1056] puntuación del conjunto de genes de una célula. En la FIG
[1057] ascendente frente a Tef descendente" indica un fenotipo cr
[1058] baja del conjunto de genes "Treg ascendente frente Tef d
[1059] la FIG. 40B, una puntuación de conjunto de genes más a
[1060] la diferenciación de memoria" indica un fenotipo crecie
[1061] puntuación del conjunto de genes "progresivamente asc
[1062] creciente de linfocitos T de memoria temprana. En la FIG.
[1063] ascendente frente a TN descendente" indica un fenotipo
[1064] una puntuación más baja del conjunto de genes "t Em
[1065] creciente de linfocitos T intactos. Se muestra que las
[1066] diferenciados adicionalmente, de memoria tardía, en com
[1067] en un estado de linfocitos T menos diferenciados, de
[1068] intermedio de linfocitos T. En conjunto, estos datos mue
[1069] dentro de las células de entrada.
[1071] FIG. 41A, 41B y 41C.Secuenciación de TCR y medición
[1072] una distribución más plana de frecuencias de clonotipo (
[1074] LaFIG. 42es un diagrama de flujo que muestra el diseñ
[1075] BCMA fabricadas usando el proceso ARM en pacientes a
[1077] LaFIG. 43es un gráfico que muestra los análisis de FAC
[1078] puntos temporales de recogida después de la adición víri
[1079] diferentes (30<j>M y 100<j>M). El vector lentivírico se añadió
[1080] de la activación y la siembra celular.
[1082] LasFIG. 44A y 44Bson gráficos que muestran la evalua
[1083] la descongelación (FIG. 44A) y 48 h después de la desco
[1084] de la descongelación del producto, así como el día 9 para
[1085] son representativos de dos experimentos realizados usan
[1087] LasFIG. 45A y 45Bson gráficos que muestran las conce
[1088] ARM-CAR para BCMA y TM-CAR para BCMA, y UTD re
[1089] recogió 24 h después. Los datos que se muestran son
[1090] linfocitos T de dos donantes.
[1092] LaFIG. 46es un gráfico que muestra el esquema del est
[1094] LaFIG. 47es un gráfico que compara la eficacia de AR
[1095] modelo de xenoinjerto. Se inyectó a ratones NSG con la lí
[1096] luciferasa. La carga tumoral se expresa como luminisce
[1097] media EEM. El día 8 después de la inoculación del tum
[1098] CAR para BCMA a las dosis respectivas (número de linf
[1099] UTD sirvieron de controles negativos. N=5 ratones para t
[1100] BCMA (1e4 células), PBS y UTD.
[1102] LasFIG. 48A, 48B y 48Cson gráficos que muestran la
[1103] CAR para BCMA o TM-CAR para BCMA. Niveles plasmát
[1104] tratados con UTD, ARM-CAR para BCMA o TM-CAR par
[1105] IFN-<y>se representaron como media ± EEM. Se extrajo san
[1106] el ensayo Meso Scale Discovery (MSD).
[1108] LaFIG. 49es un gráfico que muestra la cinética celular
[1109] Cinética celular en sangre periférica de ratones portador
[1110] ARM-CAR para BCMA y TM-CAR para BCMA a diferentes
[1111] medio d E. El día 8 después de la inoculación del tumo
[1112] CAR para BCMA a las dosis respectivas (número de linf
[1113] UTD sirvieron de controles negativos. Se tomaron muestr parecían similares a las células de entrada en términos s células del día 9, por otro lado, muestran un mayor
[1115] células de entrada. Las FIG. 40A-40C son gráficos de del análisis del conjunto de genes de los cuatro grupos os gráficos de violín en las FIG. 40A-40C representa la A, una puntuación más alta del conjunto de genes "Treg nte de linfocitos Treg, mientras que una puntuación más ndente" indica un fenotipo creciente de linfocitos Tef. En del conjunto de genes "progresivamente ascendente en de linfocitos T de memoria tardía, mientras que una nte en la diferenciación de memoria" indica un fenotipo , una puntuación más alta del conjunto de genes "TEM iente de linfocitos T de memoria efectora, mientras que endente frente a TN descendente" indica un fenotipo las en el grupo 3 están en un estado de linfocitos T ción con las células en el grupo 1 y el grupo 2 que están oria temprana. El grupo 0 parece estar en un estado n que existe un nivel considerable de heterogeneidad
[1117] la diversidad de clonotipos. Las células del día 9 tienen r diversidad).
[1119] e un ensayo clínico de fase I que prueba células CART os con mieloma múltiple recidivante y/o resistente.
[1120] ara la expresión de ARM-CAR para BCMA en diferentes en presencia o ausencia de AZT a dos concentraciones más tarde antes del tratamiento con AZT en el momento
[1122] de ARM-CAR para BCMA para la expresión de CAR en ación y marcadores CCR7/CD45RO a las 48 h después CAR para BCMA (FIG. 44B). Los datos que se muestran linfocitos T de dos donantes.
[1124] ciones de citocinas en sobrenadantes de cultivo celular. ctivos se cocultivaron con KMS-11. El sobrenadante se presentativos de dos experimentos realizados usando
[1126] de eficacia del xenoinjerto para probar ARM-BCMA.
[1128] AR para BCMA con la de TM-CAR para BCMA en un celular KMS11 de MM, que expresa el gen indicador de corporal total (p/s), representada como carga tumoral os ratones se trataron con ARM-CAR para BCMA o TM-os T-CAR+ viables). El vehículo (PBS) y los linfocitos T s los grupos, excepto N=4 para grupos ARM-CAR para
[1130] tica plasmática de IFN-y de ratones tratados con ARM-de IFN-y de ratones portadores de tumores KMS11-luc MA a dosis respectivas de T-CAR. Todos los niveles de de los ratones y se midió la citocina plasmática mediante
[1132] ARM-CAR para BCMA y TM-CAR para BCMAin vivo.de tumores KMS 11 tratados con TM UTD, ARM UTD, is. El recuento celular se expresa como recuento celular s ratones se trataron con ARM-CAR para BCMA o TM-os T-CAR+ viables). El vehículo (PBS) y los linfocitos T e sangre 7, 14 y 21 días después de la inyección de T-CAR y se analizaron mediante citometría de flujo en los
[1133] grupos, excepto N=4 para grupos ARM-CAR para BCMA
[1135] DESCRIPCIÓN DETALLADA ADICIONAL
[1137] Definiciones
[1139] A menos que se defina lo contrario, todos los términos té
[1140] el mismo significado que comúnmente es entendido por un
[1142] El término "un" y "una" se refieren a uno o más de uno
[1143] artículo. A modo de ejemplo, "un elemento" significa un el
[1145] El término "aproximadamente", cuando se refiere a un va
[1146] similares, pretende englobar variaciones de ±20 % o en a
[1147] casos ±1 %, o en algunos casos ±0,1 % del valor especifi
[1148] los métodos desvelados.
[1150] Los métodos de la presente invención abarcan polipéptido
[1151] o secuencias sustancialmente idénticas o similares a las
[1152] idénticas o superior a la secuencia especificada. En el
[1153] "sustancialmente idéntico" se usa en el presente docume
[1154] que contiene un número suficiente o mínimo de residuo
[1155] conservadoras de residuos de aminoácidos alineados en
[1156] primera y la segunda secuencias de aminoácidos pue
[1157] funcional común, por ejemplo, secuencias de aminoácid
[1158] menos aproximadamente un 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93
[1159] una secuencia de referencia, por ejemplo, una secuencia
[1161] En el contexto de una secuencia de nucleótidos, la ex
[1162] documento para referirse a una primera secuencia de áci
[1163] nucleótidos que son idénticos a los nucleótidos alineado
[1164] que la primera y la segunda secuencias de nucleótidos c
[1165] codifican un dominio de polipéptido estructural común o
[1166] secuencias de nucleótidos que tienen al menos aproxim
[1167] 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad con
[1168] proporcionada en el presente documento.
[1170] El término "variante" se refiere a un polipéptido que tiene
[1171] una secuencia de aminoácidos de referencia o está co
[1172] idéntica. En algunas realizaciones, la variante es una vari
[1174] La expresión "variante funcional" se refiere a un polipéptid
[1175] idéntica a una secuencia de aminoácidos de referen
[1176] sustancialmente idéntica y es capaz de tener una o más
[1178] El término citocina (por ejemplo, IL-2, IL-7, IL-15, IL-21 o I
[1179] por ejemplo, una variante funcional, de una citocina de ori
[1180] la misma que tienen al menos 10 %, 30 %, 50 % u 80 %
[1181] de la citocina de origen natural). En algunas realizacion
[1182] sustancialmente idéntica (por ejemplo, al menos aproxim
[1183] 97 %, 98 % o 99 % de identidad) con una citocina de orige
[1184] que es sustancialmente idéntica (por ejemplo, al menos a
[1185] 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad) con
[1186] una citocina. En algunas realizaciones, tal como se entien
[1187] receptor, por ejemplo, un dominio receptor de citocinas (p
[1189] La expresión "receptor quimérico para el antígeno" o, co
[1190] polipéptidos recombinante que comprende al menos u
[1191] transmembranario y un dominio de señalización citopl
[1192] "dominio de señalización intracelular") que comprende un
[1193] estimuladora. En algunas realizaciones, los dominios de
[1194] misma cadena de polipéptidos, por ejemplo, comprenden
[1195] los dominios en la construcción de polipéptidos CAR n
[1196] cadenas de polipéptidos, por ejemplo, como se proporcio tos temporales diseñados. N=5 ratones para todos los células), PBS y UTD.
[1198] s y científicos usados en el presente documento tienen erto habitual en la técnica a la que se refiere la invención.
[1199] decir, al menos a uno) de los objetos gramaticales del nto o más de un elemento.
[1201] edible tal como una cantidad, una duración temporal, y os casos ±10 %, o en algunos casos ±5 %, o en algunos , y que dichas variaciones son apropiadas para realizar
[1203] cidos nucleicos que tienen las secuencias especificadas, as, por ejemplo, secuencias al menos 85 %, 90 % o 95 % texto de una secuencia de aminoácidos, la expresión para referirse a una primera secuencia de aminoácidos aminoácidos que son i) idénticos a o ii) sustituciones segunda secuencia de aminoácidos de manera que la tener un dominio estructural común y/o una actividad e contienen un dominio estructural común que tiene al 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identidad con orcionada en el presente documento.
[1205] ión "sustancialmente idéntica" se usa en el presente ucleico que contiene un número suficiente o mínimo de una segunda secuencia de ácido nucleico de manera an un polipéptido que tiene actividad funcional común o actividad de polipéptido funcional común, por ejemplo, mente un 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, secuencia de referencia, por ejemplo, una secuencia
[1207] secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a do por una secuencia de nucleótidos sustancialmente funcional.
[1209] e tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente o está codificado por una secuencia de nucleótidos idades de la secuencia de aminoácidos de referencia.
[1210] incluye longitud completa, un fragmento o una variante, natural (incluidos fragmentos y variantes funcionales de actividad, por ejemplo, la actividad inmunomoduladora, la citocina tiene una secuencia de aminoácidos que es ente 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, tural, o está codificada por una secuencia de nucleótidos madamente 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, secuencia de nucleótidos de origen natural que codifica n el contexto, la citocina comprende además un dominio jemplo, una IL-15/IL-15R).
[1212] alternativa, un "CAR", se refiere a una construcción de ominio de unión al antígeno extracelular, un dominio ica (también denominado en el presente documento inio de señalización funcional derivado de una molécula construcción de polipéptidos CAR se encuentran en la proteína de fusión quimérica. En algunas realizaciones, n contiguos entre sí, por ejemplo, están en diferentes un RCAR como se describe en el presente documento.
[1214] En algunas realizaciones, el dominio de señalización
[1215] (por ejemplo, un dominio de señalización primario de C
[1216] citoplásmica comprende además uno o más dominios d
[1217] coestimuladora, como se define a continuación. En al
[1218] 41BB (es decir, CD137), CD27, ICOS y/o CD28. En alg
[1219] quimérica que comprende un dominio de reconocimient
[1220] dominio de señalización intracelular que comprende un
[1221] estimuladora. En algunas realizaciones, el CAR comp
[1222] dominio de reconocimiento al antígeno extracelular, u
[1223] intracelular que comprende un dominio de señalizació
[1224] dominio de señalización funcional derivado de una
[1225] comprende una proteína de fusión quimérica que comp
[1226] un dominio transmembranario y un dominio de señaliza
[1227] funcional derivados de una o más moléculas coestimula
[1228] coestimulador. En algunas realizaciones, el CAR com
[1229] dominio de reconocimiento al antígeno extracelular, u
[1230] intracelular que comprende al menos dos dominios d
[1231] coestimuladoras y un dominio de señalización funcio
[1232] realizaciones, el CAR comprende una secuencia condu
[1233] de fusión CAR. En algunas realizaciones, el CAR comp
[1234] dominio extracelular de reconocimiento de antígeno, en
[1235] dominio de reconocimiento de antígeno (por ejemplo, u
[1236] CAR en la membrana celular.
[1238] Un CAR que comprende un dominio de unión al antíg
[1239] TCR (por ejemplo, un dominio de unión a TCR alfa o
[1240] tumoral X específico, en donde X puede ser un marc
[1241] también se denomina XCAR. Por ejemplo, un CAR que
[1242] diana BCMA se denomina CAR para BCMA. El CAR se
[1243] efectora inmunitaria como se describe en la presente (p
[1245] La expresión "dominio de señalización" se refiere a l
[1246] información dentro de la célula para regular la actividad
[1247] segundos mensajeros o funcionando como efectores al
[1249] El término "anticuerpo", como se usa en este document
[1250] de una molécula de inmunoglobulina que se une es
[1251] policlonales o monoclonales, de cadena múltiple o sim
[1252] naturales o de fuentes recombinantes. Los anticuerpos
[1254] La expresión "fragmento de anticuerpo" se refiere al
[1255] recombinantes del mismo, y se refiere al dominio de uni
[1256] antigénica de un anticuerpo intacto, que es suficiente p
[1257] de anticuerpo a una diana, tal como un antígeno. Los
[1258] limitan a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv, fragmen
[1259] dominio único tales como sdAb (ya sea VL o VH), domi
[1260] a partir de fragmentos de anticuerpo, tales como un frag
[1261] fragmentos Fab ligados por un puente disulfuro en la re
[1262] u otros fragmentos de unión a epítopo de un anticue
[1263] incorporar en anticuerpos de dominio único, maxicu
[1264] triacuerpos, tetracuerpos, v-NAR y bis-scFv (véase, por
[1265] 1136, 2005). También se pueden injertar fragmentos de
[1266] una fibronectina de tipo IlI (Fn3) (véase la patente de E
[1267] de fibronectina).
[1269] El término "scFv" se refiere a una proteína de fusión
[1270] comprende una región variable de una cadena ligera
[1271] región variable de una cadena pesada, en donde las re
[1272] manera contigua a través de un conector polipeptídico
[1273] polipeptídica, y en donde el scFv conserva la especifici
[1274] especifique, como se usa en el presente documento, un
[1275] orden, por ejemplo, con respecto a los extremos ami
[1276] comprender VL-conector-VH o puede comprender
[1277] comprender la estructura de NH2-VL-conector-VH-COO plásmica comprende un dominio de señalización primario zeta). En algunas realizaciones, el dominio de señalización ñalización funcionales derivados de al menos una molécula as realizaciones, la molécula coestimuladora se elige de s realizaciones, el CAR comprende una proteína de fusión l antígeno extracelular, un dominio transmembranario y un minio de señalización funcional derivado de una molécula de una proteína de fusión quimérica que comprende un dominio transmembranario y un dominio de señalización funcional derivado de una molécula coestimuladora y un lécula estimuladora. En algunas realizaciones, el CAR de un dominio de reconocimiento al antígeno extracelular, intracelular que comprende dos dominios de señalización ras y un dominio de señalización funcional derivado de una nde una proteína de fusión quimérica que comprende un dominio transmembranario y un dominio de señalización eñalización funcional derivados de una o más moléculas l derivado de una molécula coestimuladora. En algunas ra opcional en el extremo amino (extremo N) de la proteína de además una secuencia conductora en el extremo N del que la secuencia conductora se escinde opcionalmente del cFv) durante el procesamiento celular y la localización del
[1279] (por ejemplo, un scFv, un anticuerpo de dominio único o inio de unión a TCR beta)) que se dirige a un marcador r tumoral como los descritos en el presente documento, mprende un dominio de unión al antígeno que tiene como uede expresar en cualquier célula, por ejemplo, una célula ejemplo, un linfocito T o una célula NK).
[1281] parte funcional de una proteína que actúa transmitiendo lular a través de vías de señalización definidas generando ponder a tales mensajeros.
[1283] e refiere a una proteína o secuencia polipeptídica derivada cíficamente a un antígeno. Los anticuerpos pueden ser o inmunoglobulinas intactas, y pueden derivar de fuentes den ser tetrámeros de moléculas de inmunoglobulina.
[1284] enos a una parte de un anticuerpo intacto, o variantes al antígeno, por ejemplo, una región variable determinante conferir reconocimiento y unión específica del fragmento mplos de fragmentos de anticuerpo incluyen, pero no se de anticuerpo scFv, anticuerpos lineales, anticuerpos de s VHH de camélido y moléculas multiespecíficas formadas nto bivalente que comprende dos o más, por ejemplo, dos, n de bisagra, o dos o más, por ejemplo, dos CDR aisladas ligados. Un fragmento de anticuerpo también se puede os, minicuerpos, nanocuerpos, intracuerpos, diacuerpos, emplo, Hollinger y Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-ticuerpo en esqueletos basados en polipéptidos tales como U. n.°: 6.703.199, que describe minicuerpos de polipéptido
[1286] e comprende al menos un fragmento de anticuerpo que l menos un fragmento de anticuerpo que comprende una nes variables de cadena ligera y pesada están ligadas de xible corto, y puede expresarse como una única cadena d del anticuerpo intacto del cual procede. A menos que se Fv puede tener las regiones variables VL y VH en cualquier terminal y carboxiterminal del polipéptido, el scFv puede conector-VL. En algunas realizaciones, el scFv puede NH2-VH-conector-VL-COOH.
[1288] Las expresiones "región determinante de la complement
[1289] se refieren a las secuencias de aminoácidos dentro
[1290] especificidad y afinidad de unión al antígeno. Por ejempl
[1291] pesada (por ejemplo, HCDR1, HCDR2 y HCDR3) y tres
[1292] y LCDR3). Los límites precisos de la secuencia de a
[1293] cualquiera de varios esquemas bien conocidos, incluido
[1294] of Immunological Interest", 5.a Ed. Public Health Servic
[1295] de numeración de "Kabat"), Al-Lazikani et al., (1997) JM
[1296] combinación de estos. En un esquema de numeración
[1297] CDR corresponden a los residuos de aminoácidos que
[1298] ambas.
[1300] La porción de la composición de CAR preparada por lo
[1301] fragmento de anticuerpo de este puede existir en dive
[1302] antígeno se expresa como parte de una cadena polipept
[1303] dominio único (sdAb), un anticuerpo monocatenario (
[1304] (Harlow et al., 1999, en: Using Antibodies: A Laboratory
[1305] al., 1989, en: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spr
[1306] Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242
[1307] antígeno de una composición de CAR comprende un
[1308] comprende un fragmento de anticuerpo que comprende
[1310] Como se usa en el presente documento, la expresió
[1311] denominada en el presente documento "dominio de u
[1312] cadena de inmunoglobulina o fragmento de la misma,
[1313] de inmunoglobulina. El término "dominio de unión" o "
[1314] anticuerpos. En algunas realizaciones, una molécula de
[1315] ejemplo, comprende una pluralidad de secuencias de
[1316] secuencia de dominio variable de inmunoglobulina de la
[1317] y una segunda secuencia de dominio variable de inmu
[1318] un segundo epítopo. En algunas realizaciones, una
[1319] anticuerpo biespecífica. Un anticuerpo biespecífico tien
[1320] de anticuerpo biespecífica está caracterizada por una pr
[1321] tiene especificidad de unión para un primer epítopo y un
[1322] que tiene especificidad de unión por un segundo epítop
[1324] Las expresiones "anticuerpo biespecífico" y "anticuerpos
[1325] de unión al antígeno de dos anticuerpos dentro de una s
[1326] de unirse simultánea o secuencialmente a dos antíge
[1327] preparación de anticuerpos biespecíficos. También se
[1328] anticuerpos. Las formas de anticuerpos biespecíficos út
[1329] a, un diacuerpo, un diacuerpo monocatenario, dimeriza
[1330] tal como conocen los expertos en la técnica.
[1332] La expresión "cadena pesada de anticuerpo" se refiere a
[1333] en las moléculas de anticuerpo en sus conformaciones
[1334] que pertenece el anticuerpo.
[1336] La expresión "cadena ligera de anticuerpo" se refiere
[1337] presentes en las moléculas de anticuerpo en sus confor
[1338] kappa (<k>) y lambda (A) se refieren a los dos principales i
[1340] La expresión "anticuerpo recombinante" se refiere a
[1341] recombinante, tal como, por ejemplo, un anticuerpo e
[1342] levaduras. El término también debe interpretarse en el
[1343] por la síntesis de una molécula de ADN que codifica el
[1344] anticuerpo, o una secuencia de aminoácidos que esp
[1345] aminoácidos se ha obtenido utilizando tecnología de s
[1346] disponible y es bien conocida en la técnica.
[1348] El término "antígeno" o "Ag" se refiere a una molécu
[1349] inmunitaria puede implicar la producción de anticuerpo
[1350] específicas, o ambas. El experto comprenderá que
[1351] proteínas o péptidos, puede servir como antígeno. Ade
[1352] genómico. Un técnico experto entenderá que cualquie
[1353] secuencia parcial de nucleótidos que codifique una pro ad" o "CDR", tal como se usa en el presente documento, las regiones variables de anticuerpos que confieren general, hay tres CDR en cada región variable de cadena n cada región variable de cadena ligera (LCDR1, LCDR2 cidos de una CDR dada pueden determinarse usando descritos por Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins titutos Nacionales de la Salud, Bethesda, MD (esquema ,927-948 (esquema de numeración de "Chothia") o una inado de Kabat y Chothia, en algunas realizaciones, las an parte de una CDR de Kabat, una CDR de Chothia o
[1355] todos de la invención y que comprende un anticuerpo o formas, por ejemplo, en las que el dominio de unión al que incluye, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo de o, por ejemplo, un anticuerpo humano o humanizado al, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et arbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad.
[1356] 426). En algunas realizaciones, el dominio de unión al ento de anticuerpo. En algunas realizaciones, el CAR Fv.
[1358] minio de unión" o "molécula de anticuerpo" (también nti-diana") se refiere a una proteína, por ejemplo, una omprende al menos una secuencia del dominio variable ula de anticuerpo" abarca anticuerpos y fragmentos de erpo es una molécula de anticuerpo multiespecífica, por io variable de inmunoglobulina, en donde una primera lidad tiene especificidad de unión para un primer epítopo bulina de la pluralidad tiene especificidad de unión para ula de anticuerpo multiespecífica es una molécula de ecificidad para no más de dos antígenos. Una molécula secuencia de dominio variable de inmunoglobulina que unda secuencia de dominio variable de inmunoglobulina
[1360] ecíficos" se refieren a moléculas que combinan los sitios olécula. Por lo tanto, un anticuerpo biespecífico es capaz iferentes. Se bien conocen en la técnica métodos de en en la técnica diversos formatos para combinar dos n la práctica de la invención incluyen, pero no se limitan e Fab (Fab-Fab), Fab-scFv, y un anticuerpo en tándem,
[1362] yor de los dos tipos de cadenas polipeptídicas presentes rigen natural y que normalmente determina la clase a la
[1364] s pequeño de los dos tipos de cadenas polipeptídicas nes que se producen de forma natural. Cadenas ligeras s de cadenas ligeras de anticuerpos.
[1366] ticuerpo que se genera utilizando tecnología de ADN do por un bacteriófago o un sistema de expresión en o de que significa un anticuerpo que ha sido generado erpo y cuya molécula de ADN expresa una proteína de a el anticuerpo, en el que la secuencia de ADN o de ncia de ADN o de aminoácidos recombinante que está
[1368] e provoca una respuesta inmunitaria. Esta respuesta activación de células inmunológicamente competentes ier macromolécula, incluidas prácticamente todas las los antígenos pueden derivar de ADN recombinante o que comprenda una secuencia de nucleótidos o una que provoca una respuesta inmunitaria, codifica por lo tanto un "antígeno" tal como se utiliza ese término en
[1369] comprenderá que un antígeno no necesita estar codificad
[1370] completa de un gen. Es fácilmente evidente que la present
[1371] de nucleótidos parciales de más de un gen y que esta
[1372] combinaciones para codificar polipéptidos que provoca
[1373] entenderá que un antígeno no necesita ser codificado por
[1374] puede generarse, sintetizarse o derivarse de una muestr
[1375] polipéptido. Una muestra biológica de este tipo puede i
[1376] tumoral, una célula o un líquido con otros componentes b
[1378] Los términos "efecto antitumoral" o "efecto antineoplásico
[1379] que puede manifestarse por diversos medios, que incluy
[1380] volumen del tumor o volumen del cáncer, una disminuci
[1381] número de metástasis, un aumento en la esperanza de vi
[1382] una disminución en la supervivencia de células tumorale
[1383] con la afección cancerosa. Un "efecto antitumoral" o "efec
[1384] la capacidad de los péptidos, polinucleótidos, células y a
[1385] del tumor o cáncer en primer lugar.
[1387] El término "autólogo" se refiere a cualquier material deriv
[1388] en el individuo.
[1390] El término "alógeno" se refiere a cualquier material der
[1391] individuo al que se introduce el material. Se dice que dos
[1392] uno o más loci no son idénticos. En algunas realizacione
[1393] puede ser suficientemente distinto genéticamente para in
[1395] El término "xenógeno" se refiere a un injerto derivado de
[1397] El término "aféresis", como se usa en el presente docu
[1398] técnica mediante el cual la sangre de un donante o paci
[1399] un aparato que separa el o los componentes particulares
[1400] o paciente, por ejemplo, mediante retransfusión. Por lo ta
[1401] una muestra obtenida usando aféresis.
[1403] El término "cáncer" se refiere a una enfermedad caracte
[1404] aberrantes. Las células cancerosas se pueden disemina
[1405] linfático a otras partes del cuerpo. En el presente docu
[1406] incluyen, pero no se limitan a, cáncer de mama, cáncer d
[1407] de piel, cáncer de páncreas, cáncer colorrectal, cáncer r
[1408] cáncer de pulmón y similares. Los cánceres que pued
[1409] documento incluyen mieloma múltiple, linfoma de Hodgki
[1411] Los términos "tumor" y "cáncer" se usan indistintament
[1412] abarcan tumores sólidos y líquidos, por ejemplo, difusos
[1413] "cáncer" o "tumor" incluye cánceres y tumores tanto prem
[1415] "Derivado de", como se usa ese término en el present
[1416] segunda molécula. Se refiere de manera general a la si
[1417] molécula, y no connota ni incluye una limitación, en cua
[1418] procede de una segunda molécula. Por ejemplo, en el ca
[1419] de una molécula CD3zeta, el dominio de señalización in
[1420] tenga la función requerida, es decir, la capacidad de gen
[1421] incluye una limitación a un proceso particular para prod
[1422] significa que, para proporcionar el dominio de señaliza
[1423] CD3zeta y eliminar la secuencia no deseada, o impon
[1424] intracelular.
[1426] El término "modificaciones de secuencia conservadora" s
[1427] alteran significativamente las características de unión de
[1428] secuencia de aminoácidos. Dichas modificaciones cons
[1429] aminoácidos. Pueden introducirse modificaciones en u
[1430] mediante técnicas convencionales conocidas en este cam
[1431] por PCR. Las sustituciones conservadoras son unas en la
[1432] aminoacídico que tiene una cadena lateral similar. Los
[1433] laterales similares se han definido en la técnica. Estas f presente documento. Además, un experto en la técnica únicamente por una secuencia de nucleótidos de longitud nvención incluye, pero no se limita a, el uso de secuencias ecuencias de nucleótidos están dispuestas en diversas la respuesta inmunitaria deseada. Además, un experto "gen" en absoluto. Es fácilmente evidente que un antígeno iológica, o puede ser una macromolécula además de un ir, pero no se limita a, una muestra tisular, una muestra gicos.
[1435] e usan indistintamente y se refieren a un efecto biológico pero no se limitan a, por ejemplo, una disminución en el del número de células tumorales, una disminución en el una disminución en la proliferación de células tumorales, una mejora de diversos síntomas fisiológicos asociados antineoplásico" también se puede poner de manifiesto por uerpos de la divulgación en la prevención de la aparición
[1437] o del mismo individuo al que después se le reintroducirá
[1439] do de un animal diferente de la misma especie que el ás individuos son alógenos entre sí cuando los genes en l material alógeno de los individuos de la misma especie accionar antigénicamente.
[1441] animal de una especie diferente.
[1443] to, se refiere al proceso extracorpóreo reconocido en la e se extrae del donante o paciente y se pasa a través de ccionados y devuelve el resto a la circulación del donante , en el contexto de "una muestra de aféresis" se refiere a
[1445] ada por el crecimiento rápido y descontrolado de células calmente o a través del torrente sanguíneo y el sistema to se describen ejemplos de varios tipos de cáncer que róstata, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer l, cáncer de hígado, cáncer cerebral, linfoma, leucemia, ser tratados por los métodos descritos en el presente linfoma no Hodgkiniano.
[1447] n el presente documento, por ejemplo, ambos términos circulantes. Como se usa en este documento, el término gnos como malignos.
[1449] ocumento, indica una relación entre una primera y una itud estructural entre la primera molécula y una segunda a la fuente o el proceso, de una primera molécula que de un dominio de señalización intracelular que se deriva celular conserva suficiente estructura CD3zeta para que r una señal en las condiciones apropiadas. No connota ni r el dominio de señalización intracelular, por ejemplo, no intracelular, se deba comenzar con una secuencia de mutaciones, para conseguir el dominio de señalización
[1451] efiere a modificaciones de aminoácidos que no afectan ni nticuerpo o del fragmento de anticuerpo que contiene la adoras incluyen sustituciones, adiciones y deleciones de nticuerpo o fragmento de anticuerpo de la divulgación , tales como mutagénesis dirigida y mutagénesis mediada ue el residuo aminoacídico es reemplazado por un residuo milias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas lias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas lateral
[1452] cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicin
[1453] cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, v
[1454] cadenas laterales beta-ramificadas (por ejemplo, treoni
[1455] ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Por lo
[1456] usado en los métodos de la invención pueden reemplaz
[1457] de cadenas laterales y el CAR alterado puede analizarse
[1458] documento.
[1460] El término "estimulación" en el contexto de estimulación
[1461] a una respuesta, por ejemplo, una respuesta primaria o se
[1462] (por ejemplo, un complejo TCR/CD3) y/o una molécula c
[1463] afín, mediando de este modo en un evento de transducci
[1464] señales a través del complejo TCR/CD3. La estimulació
[1465] moléculas y/o l reorganización de estructuras citoesquelé
[1467] La expresión "molécula estimuladora" se refiere a una
[1468] secuencia o secuencias de señalización citoplásmica pri
[1469] manera estimuladora para al menos algún aspecto de la
[1470] el dominio que contiene ITAM dentro del c A r recapitul
[1471] complejos de TCR endógenos. En algunas realizaciones
[1472] de un complejo TCR/CD3 con una molécula de MHC c
[1473] respuesta de linfocitos T, que incluye, pero no se limita
[1474] secuencia de señalización citoplásmica primaria (también
[1475] de manera estimuladora puede contener un motivo de s
[1476] tirosina del inmunorreceptor o ITAM. Los ejemplos de
[1477] contiene ITAM que es de uso particular en la invención in
[1478] FcR gamma, FcR beta, CD3 gamma, CD3 delta, CD3 éps
[1479] como "ICOS"), F<ce>RI y CD66d, DAP10 y DAP12. En
[1480] señalización intracelular de cualquiera de uno o más
[1481] señalización intracelular, por ejemplo, una secuencia d
[1482] presentadora de antígeno" o "APC" se refiere a una célul
[1483] ejemplo, un linfocito B, una célula dendrítica y similares)
[1484] principales de histocompatibilidad (MHC) en su superficie
[1485] sus receptores de linfocitos T (TCR). Las APC procesan
[1487] Un "dominio de señalización intracelular", como se usa el
[1488] intracelular de una molécula. En las realizaciones, el d
[1489] función efectora y dirige a la célula para realizar una funci
[1490] de señalización intracelular, en muchos casos no es nec
[1491] una porción truncada del dominio de señalización intrace
[1492] cadena intacta siempre que transduce la señal de función
[1493] intracelular pretende incluir cualquier porción truncada
[1494] transducir la señal de la función efectora.
[1496] El dominio de señalización intracelular genera una señal
[1497] que contiene el CAR, por ejemplo, un linfocito T-CAR. L
[1498] un linfocito T-CAR, incluyen la actividad citolítica y la acti
[1500] En algunas realizaciones, el dominio de señalización i
[1501] intracelular primario. Los dominios de señalización intrac
[1502] las moléculas responsables de la estimulación prim
[1503] realizaciones, el dominio de señalización intracelular pu
[1504] dominios de señalización intracelular coestimuladores
[1505] responsables de señales coestimuladoras o de estimulac
[1506] un CART, un dominio de señalización intracelular prim
[1507] receptor de linfocitos T, y un dominio de señalización in
[1508] citoplásmica de un correceptor o una molécula coestimul
[1510] Un dominio de señalización intracelular primario puede c
[1511] de activación basado en tirosina del inmunorreceptor
[1512] citoplásmicas primarias que contienen ITAM incluyen, p
[1513] gamma, FcR beta, CD3 gamma, CD3 delta, CD3 épsilo
[1514] como "ICOS"), F<ce>RI, CD66d, DAP10 y DAP12.
[1515] ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), a, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por to, uno o más residuos de aminoácidos dentro de un CAR e por otros residuos de aminoácidos de la misma familia ilizando los ensayos funcionales descritos en el presente
[1517] una molécula estimuladora y/o coestimuladora se refiere daria, inducida por la unión de una molécula estimuladora stimuladora (por ejemplo, CD28 o 4-1BB) con su ligando de señales, tal como, pero no limitado a, transducción de puede mediar en la expresión alterada de determinadas s, y similares.
[1519] lécula expresada por un linfocito T que proporciona la ia que regulan la activación primaria del complejo TCR de de señalización de linfocitos T En algunas realizaciones, a señalización del TCR primario independientemente de señal primaria se inicia, por ejemplo, mediante la unión ada con péptido, y que da lugar a la mediación de una proliferación, activación, diferenciación y similares. Una enominada "dominio de señalización primaria") que actúa lización conocido como motivo de activación basado en a secuencia de señalización citoplásmica primaria que en, pero no se limitan a, aquellos derivados de TCR zeta, ,<c>D5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (también conocido CAR específico de uso en la invención, el dominio de de uso en la invención comprende una secuencia de eñalización primaria de CD3-zeta. La expresión "célula el sistema inmunitario, tal como una célula accesoria (por muestra un antígeno extraño complejado con complejos os linfocitos T pueden reconocer estos complejos usando ígenos y los presentan a los linfocitos T.
[1521] rmino en el presente documento, se refiere a una porción nio de señalización intracelular transduce la señal de la especializada. Aunque puede emplearse todo el dominio rio utilizar toda la cadena. En la medida en que se utilice ar, dicha porción truncada puede utilizarse en lugar de la ectora. Por lo tanto, la expresión dominio de señalización el dominio de señalización intracelular suficiente para
[1523] e promueve una función efectora inmunitaria de la célula ejemplos la función efectora inmunitaria, por ejemplo, en d de ayuda, incluyendo la secreción de citocinas.
[1524] celular puede comprender un dominio de señalización lar primaria a modo de ejemplo incluyen los derivados de o simulación dependiente de antígeno. En algunas comprender un dominio intracelular coestimulador. Los modo de ejemplo incluyen derivados de moléculas independiente del antígeno. Por ejemplo, en el caso de puede comprender una secuencia citoplásmica de un celular coestimulador puede comprender una secuencia ra.
[1526] prender un motivo de señalización conocido como motivo ITAM. Los ejemplos de secuencias de señalización no se limitan a, aquellos derivados de CD3 zeta, FcR CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (también conocido El término "zeta" o como alternativa "cadena zeta", "CD3
[1527] de Swiss-Prot P20963 proporciona secuencias de a
[1528] estimulador zeta" o como alternativa un "dominio estim
[1529] se refiere a un dominio estimulador de CD3-zeta o u
[1530] mutaciones, por ejemplo, mutaciones puntuales, fragme
[1531] el dominio citoplásmico de zeta comprende los residuos
[1532] variante del mismo (por ejemplo, una molécula que tiene
[1533] inserciones, o eliminaciones). En algunas realizaciones,
[1534] CD3-zeta" es la secuencia proporcionada como SEQ ID
[1535] que tiene mutaciones, por ejemplo, mutaciones puntuale
[1537] El término "molécula coestimuladora" se refiere al
[1538] específicamente con un ligando coestimulador, mediand
[1539] T, tal como, pero no se limita a, la proliferación. Las mol
[1540] distintas de los receptores de antígenos o sus ligandos q
[1541] moléculas coestimuladoras incluyen, pero no se limitan
[1542] TNF, proteínas de tipo inmunoglobulina, receptores de
[1543] señalización (proteínas SLAM), receptores de células
[1544] CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1
[1545] (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRD
[1546] CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gamma, IL7R
[1547] 6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD
[1548] ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2,
[1549] CD84, CD96 (táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229),
[1550] (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLA
[1551] PAG/Cbp, CD19a, CD28-OX40, CD28-4-1BB, y un ligan
[1553] Un dominio de señalización intracelular coestimulad
[1554] coestimuladora.
[1556] El dominio de señalización intracelular puede comprende
[1557] intracelular nativo, de la molécula de la que se deriva, o
[1559] El término "4-1BB" se refiere a CD137 o miembro 9 de l
[1560] número de acceso Swiss-Prot P20963 proporciona se
[1561] "dominio coestimulador de 4-1BB" se refiere a un domi
[1562] ejemplo, una molécula que tiene mutaciones, por ej
[1563] eliminaciones). En algunas realizaciones, el "dominio c
[1564] SEQ ID NO: 7 o una variante de la misma (por ejemplo,
[1565] puntuales, fragmentos, inserciones, o eliminaciones).
[1567] "Célula efectora inmunitaria", como se usa dicha expres
[1568] en una respuesta inmunitaria, por ejemplo, en la promo
[1569] células efectoras inmunitarias incluyen linfocitos T, po
[1570] linfocitos B, linfocitos citolíticos naturales (NK), linfocitos
[1571] mieloide.
[1573] La "función efectora inmunitaria o respuesta efectora
[1574] documento, se refiere a una función o respuesta, por
[1575] promueve un ataque inmunitario de una célula diana.
[1576] refiere a una propiedad de un linfocito T o célula NK
[1577] proliferación de una célula diana. En el caso de un linfocit
[1578] de función o respuesta efectora inmunitaria.
[1580] La expresión "función efectora" se refiere a una función e
[1581] T, por ejemplo, puede ser actividad citolítica o actividad
[1583] El término "codificación" se refiere a la propiedad i
[1584] polinucleótido, tales como un gen, un ADNc o un ARNm
[1585] y macromoléculas en procesos biológicos que tienen un
[1586] y ARNm) o una secuencia definida de aminoácidos y l
[1587] ADNc o ARN, codifica una proteína si la transcripción y
[1588] proteína en una célula u otro sistema biológico. Tanto la
[1589] a la secuencia del ARNm y que normalmente se prop
[1590] codificante, utilizada como plantilla para la transcripción
[1591] de la proteína u otro producto de ese gen o ADNc.
[1592] a" o "TCR-zeta" se refiere a CD247. El número de acceso ácidos de CD3 zeta humano ilustrativas. Un "dominio r de CD3-zeta" o un "dominio estimulador de TCR-zeta" ariante de este (por ejemplo, una molécula que tiene , inserciones, o eliminaciones). En algunas realizaciones, a 164 del n.° de acceso de GenBank BAG36664.1 o una taciones, por ejemplo, mutaciones puntuales, fragmentos, "dominio estimulador zeta" o un "dominio estimulador de 9 o 10 o una variante de esta (por ejemplo, una molécula agmentos, inserciones, o eliminaciones).
[1594] pañero de unión afín en un linfocito T que se une í en una respuesta coestimuladora por parte del linfocito s coestimuladoras son moléculas de la superficie celular on necesarias para una respuesta inmunitaria eficaz. Las na molécula del MHC de clase I, proteínas receptoras de cinas, integrinas, moléculas de activación linfocítica de ctivadores, BTLA, receptor de ligando Toll, OX40, CD2, 11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS LAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, NCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), 160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 LAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, ue se une específicamente con CD83.
[1596] e refiere a la porción intracelular de una molécula
[1598] a la porción intracelular, o todo el dominio de señalización ragmento funcional de la misma.
[1600] erfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral. El cias de aminoácidos de 4-1BB humano ilustrativas. Un coestimulador de 4-1BB, o una variante del mismo (por lo, mutaciones puntuales, fragmentos, inserciones, o mulador de 4-1BB" es la secuencia proporcionada como molécula que tiene mutaciones, por ejemplo, mutaciones
[1602] en este documento, se refiere a una célula que participa de una respuesta efectora inmunitaria. Los ejemplos de mplo, linfocitos T alfa/beta y linfocitos T gamma/delta, tolíticos naturales (NKT), mastocitos y fagocitos de origen
[1604] unitaria", como se usa dicha expresión en el presente plo, de una célula efectora inmunitaria, que potencia o jemplo, una función o respuesta efectora inmunitaria se promueve la muerte o la inhibición del crecimiento o la la estimulación primaria y la coestimulación son ejemplos
[1606] cializada de una célula. La función efectora de un linfocito liar que incluye la secreción de citocinas.
[1608] ente de secuencias específicas de nucleótidos en un servir como plantillas para la síntesis de otros polímeros cuencia definida de nucleótidos (por ejemplo, ARNr, ARNt ropiedades biológicas resultantes de ellas. Así, un gen, ucción del ARNm correspondiente a ese gen produce la na codificante, cuya secuencia de nucleótidos es idéntica ona en los listados de secuencias, como la cadena no un gen o ADNc, pueden considerarse como codificantes A menos que se especifique otra cosa, una «secuencia
[1609] incluye todas las secuencias de nucleótidos que son
[1610] secuencia de aminoácidos. La frase secuencia de nucle
[1611] incluir intrones en la medida en que la secuencia de nu
[1612] contener un intrón(es).
[1614] El término "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente
[1615] se refieren a una cantidad de un compuesto, formulació
[1616] documento, eficaz para lograr un resultado biológico parti
[1618] El término "endógeno" se refiere a cualquier material pro
[1619] sistema.
[1621] El término "exógeno" se refiere a cualquier material intr
[1622] sistema.
[1624] El término "expresión" se refiere a la transcripción y/o
[1625] algunas realizaciones, la expresión comprende la traducc
[1627] El término "vector de transferencia" se refiere a una comp
[1628] y que puede utilizarse para suministrar el ácido nucleic
[1629] vectores en la técnica, que incluyen, pero no se limitan
[1630] compuestos iónicos o anfifílicos, plásmidos y virus. Por ta
[1631] o un virus que se replica de forma autónoma. El término
[1632] compuestos no plasmídicos ni víricos que facilitan la tran
[1633] un compuesto de polilisina, un liposoma y similares. Los
[1634] no se limitan a, vectores adenovíricos, vectores de virus
[1635] similares.
[1637] El término "vector de expresión" se refiere a un vector que
[1638] secuencias de control de la expresión operativamente u
[1639] de expresión comprende elementos que actúan en cis suf
[1640] se pueden suministrar por la célula hospedadora o en u
[1641] incluyen todos aquellos conocidos en la técnica, incluido
[1642] en liposomas) y virus (por ejemplo, lentivirus, retroviru
[1643] polinucleótido recombinante.
[1645] El término "lentivirus" se refiere a un género de la famili
[1646] porque pueden infectar células que no se dividen; pu
[1647] genética al ADN de la célula huésped, por lo que son un
[1648] genes. VIH, VIS y VIF son ejemplos de lentivirus.
[1650] La expresión "vector lentivírico" se refiere a un vector de
[1651] incluyendo especialmente un vector lentivírico autoinactiv
[1652] 1453-1464 (2009). Otros ejemplos de vectores lentivíricos
[1653] a, por ejemplo, la tecnología de suministro de genes LE
[1654] LENTIMAX™ de Lentigen y similares. También están di
[1655] conocidos por un experto en la técnica.
[1657] El término "homólogo" o "identidad" se refiere a la ident
[1658] poliméricas, por ejemplo, entre dos moléculas de ácido n
[1659] de ARN, o entre dos moléculas de polipéptidos. Cuando u
[1660] por la misma subunidad monomérica; por ejemplo si un
[1661] ocupada por adenina, entonces son homólogas o idéntic
[1662] una función directa del número de posiciones coincident
[1663] posiciones en un polímero de diez subunidades de longit
[1664] dos secuencias son homólogas el 50%; si el 90% de
[1665] homólogas, las dos secuencias son homólogas el 90 %.
[1667] Las formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos
[1668] cadenas de inmunoglobulina o fragmentos de las mismas
[1669] unión al antígeno de anticuerpos) que contienen una sec
[1670] su mayor parte, los anticuerpos humanizados y sus fr
[1671] (anticuerpo receptor o fragmento de anticuerpo) en complementariedad (CDR) del receptor se reemplazan nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos» siones degeneradas entre sí y que codifican la misma dos que codifica una proteína o un ARN también puede ótidos que codifica la proteína puede en alguna versión
[1673] icaz" se usan indistintamente en el presente documento y aterial o composición, como se describe en el presente ar.
[1675] ente o producido dentro de un organismo, célula, tejido o
[1677] cido o producido fuera de un organismo, célula, tejido o
[1679] ducción de una secuencia de nucleótidos particular. En de un ARNm introducido en una célula.
[1681] ción de materia que comprende un ácido nucleico aislado islado al interior de una célula. Se conocen numerosos , polinucleótidos lineales, polinucleótidos asociados con , el término "vector de transferencia" incluye un plásmido bién debe interpretarse de manera que incluya además rencia de ácido nucleico a las células, como, por ejemplo, mplos de vectores de transferencia vírica incluyen, pero noasociados, vectores retrovíricos, vectores lentivíricos y
[1683] mprende un polinucleótido recombinante que comprende s a una secuencia de nucleótidos a expresar. Un vector ntes para la expresión; otros elementos para la expresión sistema de expresión in vitro. Los vectores de expresión ósmidos, plásmidos (por ejemplo, desnudos o contenidos adenovirus y virus adenoasociados) que incorporan el
[1685] etroviridae. Los lentivirus son únicos entre los retrovirus n suministrar una cantidad significativa de información e los métodos más eficientes de vector de suministro de
[1687] do de al menos una porción de un genoma de lentivirus, te como se proporciona en Milone et al., Mol. Ther. 17(8): e pueden usarse en la clínica incluyen, pero no se limitan iv Ec TOR® de Oxford BioMedica, el sistema de vectores nibles tipos no clínicos de vectores lentivíricos y serían
[1689] d de la secuencia de subunidades entre dos moléculas leico, tales como dos moléculas de ADN o dos moléculas posición de subunidad en ambas moléculas está ocupada osición en cada una de las dos moléculas de ADN está en esa posición. La homología entre dos secuencias es u homólogas; por ejemplo, si la mitad (por ejemplo cinco de las posiciones en dos secuencias son homólogas, las s posiciones (por ejemplo 9 de 10) son coincidentes u
[1691] or ejemplo, murinos) son inmunoglobulinas quiméricas, les como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 u otras subsecuencias de cia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En mentos de anticuerpos son inmunoglobulinas humanas s que los residuos de una región determinante de or residuos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo donante), como ratón, rata o conejo, que tiene
[1692] casos, los restos de la región estructural Fv (Fr ) de la in
[1693] correspondientes. Además, un anticuerpo/fragmento de
[1694] se encuentran ni en el anticuerpo receptor ni en las secue
[1695] refinar y optimizar aún más el rendimiento del anticuerp
[1696] humanizado o fragmento de anticuerpo del mismo com
[1697] normalmente dos, dominios variables, en los que todas o
[1698] de una inmunoglobulina no humana y todas o una porció
[1699] de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado
[1700] menos una porción de una región constante de inmunoglo
[1701] Para más detalles, véase Jones et al., Nature, 321: 522
[1702] Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596, 1992.
[1704] "Totalmente humano" se refiere a una inmunoglobulina, t
[1705] que la molécula completa es de origen humano o consi
[1706] humana del anticuerpo o inmunoglobulina.
[1708] El término "aislado" significa alterado o eliminado del e
[1709] presente de forma natural en un animal vivo no está "aisla
[1710] o completamente de los materiales coexistentes de su e
[1711] aislado puede existir en forma sustancialmente purificada
[1712] una célula huésped.
[1714] En el contexto de la presente invención, se usan las sigu
[1715] aparecen comúnmente. "A" se refiere a adenosina, "C" s
[1716] a timidina y "U" se refiere a uridina.
[1718] La expresión "unido operativamente" o "control transcrip
[1719] reguladora y una secuencia de ácido nucleico heterólog
[1720] primera secuencia del ácido nucleico está unida operativ
[1721] la primera secuencia del ácido nucleico se pone en un
[1722] nucleico. Por ejemplo, un promotor está unido operativa
[1723] transcripción o expresión de la secuencia codificante. L
[1724] contiguas entre sí y, por ejemplo cuando es necesario un
[1725] marco de lectura.
[1727] El término administración "parenteral" de una composició
[1728] (sc), intravenosa (iv), intramuscular (im) o intraesternal, i
[1730] Las expresiones "ácido nucleico", "molécula de ácido n
[1731] refiere a los ácidos desoxirribonucleicos (ADN) o ácidos
[1732] monocatenaria o bicatenaria. A menos que se limite espe
[1733] contienen análogos conocidos de nucleótidos naturales
[1734] nucleico de referencia y son metabolizados de un modo
[1735] un "ácido nucleico", "molécula de ácido nucleico", "poli
[1736] derivado o análogo de nucleótido/nucleósido. A menos q
[1737] particular también abarca implícitamente variantes modi
[1738] sustituciones de codones degenerados, por ejemplo,
[1739] secuencias complementarias, así como la secuencia in
[1740] sustituciones de codones degenerados, por ejemplo, sus
[1741] la tercera posición de uno o más codones seleccionados
[1742] inosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991
[1743] Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)).
[1745] Los términos "péptido", "polipéptido" y "proteína" se usan
[1746] residuos de aminoácidos enlazados covalentemente m
[1747] contener al menos dos aminoácidos, y no se establece n
[1748] pueden comprender la secuencia de una proteína o pép
[1749] que comprende dos o más aminoácidos unidos entre sí
[1750] documento, el término se refiere tanto a cadenas cortas
[1751] técnica como péptidos, oligopéptidos y oligómeros, por ej
[1752] se hace referencia en la técnica como proteínas, de las qu
[1753] fragmentos biológicamente activos, polipéptidos su
[1754] heterodímeros, variantes de polipéptidos, polipéptidos
[1755] otros. Un polipéptido incluye un péptido natural, un pépti specificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos globulina humana se sustituyen por restos no humanos uerpo humanizado puede comprender residuos que no CDR o marco importadas. Estas modificaciones pueden del fragmento de anticuerpo. En general, el anticuerpo derá sustancialmente la totalidad de al menos uno, y ancialmente todas las regiones CDR corresponden a las gnificativa de las regiones FR son las de una secuencia ragmento de anticuerpo también puede comprender al a (Fc), normalmente la de una inmunoglobulina humana. , 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323-329, 1988;
[1757] omo un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, en la n una secuencia de aminoácidos idéntica a una forma
[1759] o natural. Por ejemplo, un ácido nucleico o un péptido pero el mismo ácido nucleico o péptido separado parcial o natural sí está "aislado". Un ácido nucleico o proteína uede existir en un entorno no nativo como, por ejemplo,
[1761] es abreviaturas para las bases de ácidos nucleicos que iere a citosina, "G" se refiere a guanosina, "T" se refiere
[1763] l" se refiere a un enlace funcional entre una secuencia e da como resultado la expresión de esta última. Una nte a una segunda secuencia del ácido nucleico cuando lación funcional con una segunda secuencia del ácido te a una secuencia codificante si el promotor afecta a la ecuencias de ADN unidas operativamente pueden ser s regiones codificantes de proteínas, están en el mismo
[1765] munogénica incluye, por ejemplo, inyección subcutánea umoral, o técnicas de infusión.
[1767] ico", "polinucleótido" o "molécula de polinucleótido" se nucleicos (ARN) y a polímeros de los mismos en forma amente, las expresiones engloban ácidos nucleicos que tienen propiedades de unión similares a las del ácido ar a los nucleótidos naturales. En algunas realizaciones, eótido" o "molécula de polinucleótido" comprenden un e indique lo contrario, una secuencia de ácido nucleico das de forma conservadora de la misma (por ejemplo, stituciones conservadoras), alelos, ortólogos, SNP y da explícitamente. Específicamente, se pueden lograr iones conservadoras, generando secuencias en las que dos) se sustituye con residuos de base mixta y/o desoxihtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); y
[1769] tintamente y se refieren a un compuesto que comprende nte enlaces peptídicos. Una proteína o péptido debe na limitación en el número máximo de aminoácidos que . Los polipéptidos incluyen cualquier péptido o proteína diante enlaces peptídicos. Como se usa en el presente las que también se hace referencia comúnmente en la lo, como a cadenas más largas, a las que generalmente y muchos tipos. Los "polipéptidos" incluyen, por ejemplo, cialmente homólogos, oligopéptidos, homodímeros, icados, derivados, análogos, proteínas de fusión, entre combinante o una combinación de estos.
[1771] El término "promotor" se refiere a una secuencia de
[1772] maquinaria sintética introducida, necesaria para iniciar la
[1774] El término "secuencia promotora/reguladora" se refiere
[1775] expresión de un producto genético unido operativamente
[1776] secuencia puede ser la secuencia promotora central y
[1777] secuencia potenciadora y otros elementos reguladore
[1778] secuencia promotora/reguladora puede, por ejemplo,
[1779] específica del tejido.
[1781] El término promotor "constitutivo" se refiere a un
[1782] operativamente con un polinucleótido que codifica o es
[1783] produzca en una célula en la mayoría o en todas las co
[1785] El término promotor "inducible" se refiere a una secuenc
[1786] con un polinucleótido que codifica o especifica un produ
[1787] célula sustancialmente sólo cuando un inductor que corr
[1789] El término promotor "específico de tejido" se refiere a
[1790] operativamente con un polinucleótido codificado o espe
[1791] en una célula sustancialmente sólo si la célula es una c
[1793] Las expresiones "antígeno asociado al cáncer", "antíge
[1794] "antígeno asociado con un trastorno hiperproliferativo",
[1795] trastornos hiperproliferativos específicos. En algunas r
[1796] (normalmente una proteína, hidrato de carbono o lípido)
[1797] sea en su totalidad o como un fragmento (por ejemplo,
[1798] de un agente farmacológico a la célula cancerosa. En
[1799] expresado tanto por células normales como por células
[1800] c D19 en linfocitos B. En algunas realizaciones, un antí
[1801] expresa en exceso en una célula cancerosa en compara
[1802] de 1 vez, expresión en exceso de 2 veces, expresión
[1803] normal. En algunas realizaciones, un antígeno tumoral
[1804] forma inapropiada en la célula cancerosa, por ejemp
[1805] mutaciones en comparación con la molécula expresada
[1806] tumoral se expresará exclusivamente en la superficie
[1807] fragmento (por ejemplo, MHC/péptido), y no se sinteti
[1808] algunas realizaciones, los antígenos del trastorno hipe
[1809] limitan a, melanoma primario o metastásico, timoma, lin
[1810] no Hodgkiniano, linfoma de Hodgkin, leucemias, cáncer
[1811] riñón y adenocarcinomas, tales como cáncer de mama,
[1812] a la castración o resistente a la terapia, o cáncer de pr
[1813] similares, o un trastorno proliferativo de células plasm
[1814] asintomático o mieloma indolente), gammapatía mono
[1815] Waldenstrom, plasmacitomas (por ejemplo, discrasia de
[1816] plasmacitoma extramedular y plasmacitoma múltiple),
[1817] POEMS (también conocido como síndrome de Crow-Fu
[1818] realizaciones, los CAR de uso en la presente invención in
[1819] (por ejemplo, anticuerpo o fragmento de anticuerpo) que
[1820] péptidos derivados de proteínas endógenas llenan l
[1821] histocompatibilidad (MHC) y son reconocidos por recept
[1822] MHC de clase I se expresan constitutivamente por
[1823] péptidos/MHC específicos del virus y/o específicos del t
[1824] celular para la inmunoterapia. Se han descrito anticuerpo
[1825] víricos o tumorales en el contexto del antígeno leucocit
[1826] et al., J Virol. 2011 85(5):1935-1942; Sergeeva et al., B
[1827] 184(4):2156-2165; Willemsen et al., Gene Ther 20
[1828] 5(176) :176ra33; Tassev et al., Cancer Gene Ther 2012
[1829] puede identificar a partir del análisis de una biblioteca, t
[1831] La expresión "antígeno de refuerzo de tumor" o "antíg
[1832] molécula (normalmente una proteína, hidrato de carbon
[1833] de por sí, no es cancerosa, pero refuerza las célula
[1834] supervivencia, por ejemplo, resistencia a células inmu
[1835] estromales y células supresoras de origen mieloide (M reconocida por la maquinaria sintética de la célula, o nscripción específica de una secuencia de polinucleótidos.
[1836] una secuencia de ácido nucleico que se requiere para la a secuencia promotora/reguladora. En algunos casos, esta otros casos, esta secuencia también puede incluir una ecesarios para la expresión del producto genético. La una que exprese el producto genético de una manera
[1838] ecuencia de nucleótidos que, cuando está vinculada ifica un producto génico, hace que el producto génico se iones fisiológicas de la célula.
[1840] e nucleótidos que, cuando está enlazada operativamente génico, hace que el producto génico se produzca en una onde al promotor está presente en la célula.
[1842] a secuencia de nucleótidos que, cuando está vinculada ado por un gen, hace que el producto génico se produzca del tipo de tejido correspondiente al promotor.
[1843] tumoral" o "antígeno de un trastorno hiperproliferativo", y refieren indistintamente a antígenos que son comunes a zaciones, estas expresiones se refieren a una molécula e se expresa en la superficie de una célula cancerosa, ya /péptido) y que es útil para el direccionamiento preferente unas realizaciones, un antígeno tumoral es un marcador cerosas, por ejemplo, un marcador de linaje, por ejemplo, o tumoral es una molécula de la superficie celular que se con una célula normal, por ejemplo, expresión en exceso xceso de 3 veces o más en comparación con una célula una molécula de la superficie celular que se sintetiza de una molécula que contiene eliminaciones, adiciones o una célula normal. En algunas realizaciones, un antígeno lar de una célula cancerosa, en su totalidad o como un ni expresará en la superficie de una célula normal. En oliferativo derivan de cánceres que incluyen, pero no se a, sarcoma, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, linfoma rino, cáncer de cuello uterino, cáncer de vejiga, cáncer de cer de próstata (por ejemplo, cáncer de próstata resistente ta metastásico), cáncer de ovario, cáncer de páncreas y s, por ejemplo, mieloma asintomático (mieloma múltiple al de significado incierto (MGUS), macroglobulinemia de las plasmáticas, mieloma solitario, plasmacitoma solitario, iloidosis de cadena ligera amiloide sistémica y síndrome e, enfermedad de Takatsuki y síndrome PEP). En algunas yen CAR que comprenden un dominio de unión al antígeno une a un péptido presentado por MHC. Normalmente, los sitios de moléculas de clase I del complejo mayor de de linfocitos T (TCR) en linfocitos T CD8 . Los complejos as las células nucleadas. En el cáncer, los complejos or representan una clase única de dianas de la superficie imilares a TCR dirigidos a péptidos derivados de antígenos humano (HLA)-A1 o HLA-A2 (véase, por ejemplo, Sastry , 2011 117(16):4262-4272; Verma et al., J Immunol 2010 8(21) :1601-1608; Dao et al., Sci Transl Med 2013 (2):84-100). Por ejemplo, un anticuerpo similar a TCR se omo una biblioteca de fagos scFv humanos expuestos.
[1844] de refuerzo de cáncer" se refieren indistintamente a una lípido) que se expresa en la superficie de una célula que, ancerosas, por ejemplo, promoviendo su crecimiento o ias. Las células ilustrativas de este tipo incluyen células ). No es necesario que el propio antígeno de refuerzo de tumor desempeñe una función en el refuerzo de las célula
[1845] una célula que refuerce células cancerosas.
[1847] El término "conectar polipeptídico flexible" o "conectar", co
[1848] peptídico que consiste en aminoácidos como residuos de
[1849] regiones de cadena pesada variable y de cadena ligera v
[1850] flexible es un conector Gly/Ser y comprende la secuenc
[1851] número entero positivo igual a o mayor que 1 (SEQ ID NO:
[1852] n=9 y n=10. En algunas realizaciones, los conectores polip
[1853] (Se Q ID NO:27) o (Gly4 Ser)3 (SEQ ID NO:28). En
[1854] repeticiones de (Gly2Ser), (GlySer) o (Gly3Ser) (SEQ I
[1855] incluyen los conectores descritos en el documento de pate
[1857] Como se usa en el presente documento, una caperuza 5'
[1858] ARN 7-metilguanosina o una caperuza de ARN m7G) es
[1859] extremo "delantero" o 5' de un ARN mensajero eucariota
[1860] consiste en un grupo terminal que está unido al prim
[1861] reconocimiento por parte del ribosoma y la protección d
[1862] transcripción, y se produce cotranscripcionalmente, de mo
[1863] de la transcripción, el extremo 5' del ARNm que se está s
[1864] asociado con la ARN polimerasa. Este complejo enzim
[1865] protección del ARNm. La síntesis se desarrolla como u
[1866] protección se puede modificar para modular la funcionalida
[1868] Como se usa en el presente documento, el "ARN transcrit
[1869] ha sintetizadoin vitro.En algunas realizaciones, el ARN es
[1870] a partir de un vector de transcripciónin vitro.El vector d
[1871] para generar el ARN transcritoin vitro.
[1873] Como se usa en el presente documento, una "poli(A)" es
[1874] ARNm. En algunas realizaciones de una construcción par
[1875] algunas realizaciones, la poliA es mayor que 64. En algu
[1876] realizaciones, la poliA es mayor que 300. En algunas rea
[1877] poli(A) se pueden modificar química o enzimáticamente
[1878] localización, la estabilidad o la eficiencia de traducción.
[1880] Como se usa en el presente documento, "poliadenilación"
[1881] su variante modificada, a una molécula de ARN mensajer
[1882] de ARN mensajero (ARNm) están poliadeniladas en el e
[1883] nucleótidos de adenina (frecuentemente varios cientos) a
[1884] poliadenilato polimerasa. En los eucariotas superiores, la
[1885] una secuencia específica, la señal de poliadenilación. La
[1886] el ARNm de la degradación por exonucleasas. La poliad
[1887] transcripción, la exportación de ARNm desde el núcleo
[1888] inmediatamente después de la transcripción del ADN en A
[1889] Una vez finalizada la transcripción, la cadena de AR
[1890] endonucleasa asociado con ARN polimerasa. El sitio de e
[1891] secuencia de bases AAUAAA cerca del sitio de escisió
[1892] adenosina al extremo 3' libre en el sitio de escisión.
[1894] Como se usa en el presente documento, "transitorio" se re
[1895] período de horas, días o semanas, en donde el período d
[1896] para la expresión del gen si está integrado en el genoma
[1897] célula hospedadora.
[1899] Como se usan en el presente documento, los términos "tr
[1900] mejora de la progresión, gravedad y/o duración de un tr (preferentemente, uno o síntomas más discernibles) de u
[1901] una o más terapias (por ejemplo, uno o más agentes t
[1902] "tratamiento" y "que trata" se pueden referir a la mejora d
[1903] proliferativo, tal como el crecimiento de un tumor, no neces
[1904] "tratamiento" y "que trata" se pueden referir también a la
[1905] sea físicamente mediante, por ejemplo, la estabilización
[1906] ejemplo, la estabilización de un parámetro físico o ambos.
[1907] referir a también a la reducción o la estabilización del tam morales siempre y cuando el antígeno esté presente en
[1909] se usa en el contexto de un scFv, se refiere a un conector cina y/o serina usados solos o en combinación para unir ble. En algunas realizaciones, el conector polipeptídico de aminoácidos (Gly-Gly-Gly-Ser)n, en donde n es un ). Por ejemplo, n=1, n=2, n=3. n=4, n=5 y n=6, n=7, n=8, ídicos flexibles incluyen, pero no se limitan a, (Gly4 Ser)4 unas realizaciones, los conectores incluyen múltiples O:25). Dentro del alcance de la invención también se WO2012/138475.
[1911] mbién denominada caperuza de ARN, una caperuza de nucleótido de guanina modificado que se ha añadido al o después del inicio de la transcripción. La caperuza 5' nucleótido transcrito. Su presencia es crítica para el Nasas. La adición de la caperuza está acoplada a la que cada una influye en la otra. Poco después del inicio etizando se une a un complejo sintetizador de caperuza o cataliza las reacciones químicas necesarias para la reacción bioquímica de varias etapas. La fracción de el ARNm, como su estabilidad o eficiencia de traducción.
[1912] vitro"se refiere a ARN, preferentemente ARNm, que se Nm. Generalmente, el ARN transcritoin vitrose genera anscripciónin vitrocomprende una plantilla que se usa
[1914] serie de adenosinas unidas mediante poliadenilación al a expresión transitoria, la poliA está entre 50 y 5000. En s realizaciones, la poliA es mayor que 100. En algunas aciones, la poliA es mayor que 400. Las secuencias de ara modular la funcionalidad de ARNm, tales como la
[1916] refiere al enlace covalente de un resto de poliadenililo, o En organismos eucariotas, la mayoría de las moléculas mo 3'. La cola 3' de poli(A) es una larga secuencia de idos al pre-ARNm a través de la acción de una enzima, la poli(A) se añade a las transcripciones que contienen a de poli(A) y la proteína unida a ella ayudan a proteger lación también es importante para la terminación de la la traducción. La poliadenilación ocurre en el núcleo , pero también puede ocurrir más tarde en el citoplasma. se escinde mediante la acción de un complejo de isión se caracteriza generalmente por la presencia de la Una vez escindido el ARNm, se añaden residuos de
[1918] e a la expresión de un transgén no integrado durante un iempo de expresión es menor que el período de tiempo ontenido dentro de un replicón plasmídico estable en la
[1920] ", "tratamiento" y "que trata" se refieren a la reducción o orno proliferativo, o la mejora de uno o más síntomas rastorno proliferativo resultante de la administración de péuticos, tales como un CAR). Los términos "tratar", l menos un parámetro físico mensurable de un trastorno amente discernible por el paciente. Los términos "tratar", ibición de la progresión de un desorden proliferativo, ya un síntoma discernible, fisiológicamente mediante, por s términos "tratar", "tratamiento" y "que trata" se pueden del tumor o del recuento de células cancerosas.
[1922] El término "vía de transducción de señales" se refiere a
[1923] transducción de señales que desempeñan un papel en l
[1924] otra porción de una célula. La expresión "receptor de la s
[1925] capaces de recibir una señal y transmitir la señal a través
[1927] El término "sujeto" pretende incluir organismos vivos en
[1928] ejemplo, mamíferos, incluido el ser humano).
[1930] La expresión una "célula sustancialmente purificada" se
[1931] tipos de células. Una célula sustancialmente purificada t
[1932] tipos celulares con los que normalmente está asociada
[1933] células sustancialmente purificadas se refiere a una pobla
[1934] refiere simplemente a células que han sido separadas de
[1935] estado natural. En algunas realizaciones, las células se
[1936] cultivanin vitro.
[1938] El término "terapéutico", como se usa en el presente do
[1939] obtiene mediante la reducción, supresión, remisión o erra
[1941] El término "profilaxis", como se usa en el presente docum
[1942] enfermedad o estado patológico.
[1944] El término "transfectado", "transformado" o "transducido"
[1945] exógeno se transfiere o se introduce en la célula ho
[1946] "transducida" es una que se ha transfectado, transformado
[1947] la célula objeto primaria y su descendencia.
[1949] La expresión "se une específicamente" se refiere a un ant
[1950] compañero de unión afín y se une a esta (por ejemplo, u
[1951] linfocito T) presente en una muestra, pero cuyo anticuer
[1952] moléculas en la muestra.
[1954] "Receptor quimérico para el antígeno regulable (RCAR)
[1955] conjunto de polipéptidos, normalmente dos en las realizac
[1956] inmunitaria, proporcionan a la célula especificidad por
[1957] generación de señales intracelulares. En algunas realiza
[1958] al antígeno extracelular, un dominio transmembranar
[1959] denominado en la presente "un dominio de señalizació
[1960] funcional derivado de una molécula estimuladora y/o mo
[1961] contexto de una molécula CAR. En algunas realizacione
[1962] entre sí, por ejemplo, están en diferentes cadenas poli
[1963] interruptor de dimerización que, cuando está presente u
[1964] entre sí, por ejemplo, puede acoplar un dominio de unión
[1965] algunas realizaciones, el RCAR se expresa en una cél
[1966] describe en el presente documento, por ejemplo, una
[1967] presente documento "célula RCARX"). En algunas reali
[1968] linfocito T-RCAR. En algunas realizaciones, la célula RCA
[1969] puede proporcionar a la célula que expresa el RCAR e
[1970] cancerosa, y la proliferación o generación de señales in
[1971] efectora inmunitaria de la célula que expresa el RCAR. En
[1972] en parte, de un dominio de unión al antígeno para prop
[1973] antígeno al que se une el dominio de unión al antígeno.
[1975] "Anclaje de membrana" o "dominio de anclaje de membra
[1976] refiere a un polipéptido o resto, por ejemplo, un grupo
[1977] intracelular a la membrana plasmática.
[1979] "Dominio de conmutación", como se usa dicho término
[1980] referencia a un RCAR, se refiere a una entidad, normalm
[1981] de una molécula de dimerización, se asocia con otro do
[1982] acoplamiento funcional de una primera entidad vincul
[1983] conmutación, y una segunda entidad vinculada a, por eje
[1984] primer y un segundo dominio de conmutación se d
[1985] realizaciones, el primer y segundo dominio de conmutac
[1986] tienen la misma secuencia de aminoácidos primaria homodimerización. En realizaciones, el primer y segundo relación bioquímica entre una variedad de moléculas de ransmisión de una señal de una porción de una célula a rficie celular" incluye moléculas y complejos de moléculas la membrana de una célula.
[1988] s que se puede provocar una respuesta inmunitaria (por
[1990] fiere a una célula que está esencialmente libre de otros bién se refiere a una célula que se ha separado de otros su estado natural. En algunos casos, una población de n homogénea de células. En otros casos, este término se células con las que están naturalmente asociadas en su tivanin vitro.En algunas realizaciones, las células no se
[1992] mento, significa un tratamiento. Un efecto terapéutico se ación de un estado patológico.
[1994] o, significa la prevención o el tratamiento protector de una
[1996] refiere a un proceso mediante el cual el ácido nucleico dadora. Una célula "transfectada" o "transformada" o transducido con ácido nucleico exógeno. La célula incluye
[1998] erpo, o un ligando, que reconoce una proteína que es un molécula estimuladora y/o coestimuladora presente en un o ligando no reconoce sustancialmente ni se une a otras
[2000] como se usa en el presente documento, se refiere a un es más simples, que cuando están en una célula efectora célula diana, normalmente una célula cancerosa, y la nes, un RCAR comprende al menos un dominio de unión y un dominio de señalización citoplásmico (también tracelular") que comprende un dominio de señalización ula coestimuladora como se define en la presente en el l conjunto de polipéptidos en el RCAR no son contiguos ptídicas. En algunas realizaciones, el RCAR incluye un molécula de dimerización, puede acoplar los polipéptidos antígeno con un dominio de señalización intracelular. En (por ejemplo, una célula efectora inmunitaria) como se ula que expresa un RCAR (también denominada en el iones, la célula RCARX es un linfocito T y se denomina es un célula NK y se denomina célula N-RCAR. El RCAR ecificidad por una célula diana, normalmente una célula celulares regulables, que puede optimizar una propiedad gunas realizaciones, una célula RCAR depende, al menos ionar especificidad por la célula diana que comprende el
[2002] ", como se usa ese término en el presente documento, se ristoílo, suficiente para anclar un dominio extracelular o
[2004] el presente documento, por ejemplo, cuando se hace te una entidad basada en polipéptidos, que, en presencia io de conmutación. La asociación da como resultado un a a, por ejemplo, fusionada a, un primer dominio de lo, fusionada a, un segundo dominio de conmutación. Un minan colectivamente interruptor de dimerización. En son iguales entre sí, por ejemplo, son polipéptidos que y se les denomina colectivamente un interruptor de inio de conmutación son diferentes entre sí, por ejemplo, son polipéptidos que tienen diferentes secuencias de a
[2005] interruptor de heterodimerización. En algunas realizacio
[2006] la conmutación es extracelular. En realizaciones, el dom
[2007] por ejemplo, basada en FKBP o FRB, y la molécula
[2008] rapálogo. En realizaciones, el dominio de conmutación
[2009] que se une a un péptido myc, y la molécula de dimerizaci
[2010] de un polipéptido, por ejemplo, un ligando myc o multím
[2011] En realizaciones, el dominio de conmutación es una ent
[2012] molécula de dimerización es un anticuerpo o fragmentos
[2014] "Molécula de dimerización", como se usa dicho términ
[2015] referencia a un RCAR, se refiere a una molécula que pr
[2016] con un segundo dominio de conmutación. En realizacio
[2017] natural en el sujeto o no se encuentra en concentraci
[2018] realizaciones, la molécula de dimerización es una mol
[2019] ejemplo, RAD001.
[2021] La expresión "dosis baja, de potenciación inmunitaria",
[2022] un inhibidor de mTOR alostérico, por ejemplo, RAD001
[2023] una dosis de inhibidor de mTOR que inhibe parcialmente
[2024] medida por la inhibición de la actividad cinasa P70 S6. L
[2025] mediante inhibición de la cinasa P70 S6, se describen en
[2026] una supresión inmunitaria completa, pero es suficiente p
[2027] la dosis baja, de potenciación inmunitaria, del inhibidor d
[2028] linfocitos T PD-1 positivos y/o un aumento en el número
[2029] de linfocitos T PD-1 negativos/linfocitos T PD-1 positiv
[2030] inmunitaria, del inhibidor de mTOR da como resultado
[2031] realizaciones, la baja dosis, de potenciación inmunitaria,
[2032] siguientes:
[2034] un aumento en la expresión de uno o más de los sigui
[2035] ejemplo, en linfocitos T de memoria, por ejemplo, precur
[2037] una disminución en la expresión de KLRG1, por ejemp
[2038] linfocitos T de memoria; y
[2040] un aumento en el número de precursores de linfocitos T
[2041] de las siguientes características: aumento de CD62Lalto
[2042] KLRG1 y aumento de BCL2;
[2044] en donde se produce cualquiera de los cambios descrit
[2045] por ejemplo, en comparación con un sujeto no tratado.
[2047] "Refractario", como se usa en el presente documento,
[2048] responde a un tratamiento. Un cáncer refractario pue
[2049] tratamiento. Alternativamente, el cáncer refractario se
[2050] refractario también se denomina cáncer resistente.
[2052] Como se usa en el presente documento, "recurrente"
[2053] enfermedad (por ejemplo, cáncer) o las señales y sínto
[2054] período de mejora o respuesta, por ejemplo, después
[2055] contra el cáncer. El período inicial de respuesta puede i
[2056] un cierto umbral, por ejemplo, por debajo del 20 %, 1 %,
[2057] que el nivel de células cancerosas aumente por encima
[2058] 10 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 % o 1 %. Por ejemplo, en el co
[2059] una reaparición de blastos en la sangre, la médula ós
[2060] respuesta completa. Una respuesta completa, en este c
[2061] manera más general, una respuesta (por ejemplo, respu
[2062] de ERM detectable (enfermedad residual mínima). El pe
[2063] 6 días; al menos 1, 2, 3 o 4 semanas; al menos 1, 2, 3,
[2065] Intervalos: a lo largo de esta divulgación, se pueden pr
[2066] debe entender que la descripción en el formato de inter
[2067] interpretar como una limitación inflexible del alcance d
[2068] descripción de un intervalo ha desvelado específica
[2069] numéricos individuales dentro de ese intervalo. Por ejem oácidos primarias, y se les denomina colectivamente un la conmutación es intracelular. En algunas realizaciones, de conmutación es una entidad basada en polipéptidos, imerización es una molécula pequeña, por ejemplo, un na entidad basada en polipéptidos, por ejemplo, un scFv es un polipéptido, un fragmento del mismo o un multímero de un ligando myc que se unen a uno o más scFvs myc. basada en polipéptidos, por ejemplo, receptor myc, y la mismo, por ejemplo, anticuerpo myc.
[2071] el presente documento, por ejemplo, cuando se hace eve la asociación de un primer dominio de conmutación , la molécula de dimerización no se encuentra de forma s que darían lugar a una dimerización significativa. En a pequeña, por ejemplo, rapamicina o un rapálogo, por
[2073] do se usa junto con un inhibidor de mTOR, por ejemplo, pamicina, o un inhibidor de mTOR catalítico, se refiere a ro no completamente, la actividad de mTOR, por ejemplo, étodos para evaluar la actividad de mTOR, por ejemplo, resente documento. La dosis es insuficiente para producir ejorar la respuesta inmunitaria. En algunas realizaciones, TOR da como resultado una disminución en el número de linfocitos T PD-1 negativos, o un aumento en la relación En algunas realizaciones, la baja dosis, de potenciación umento del número de linfocitos T intactos. En algunas inhibidor de mTOR da como resultado uno o más de los
[2075] s marcadores: CD62Lalto, CD127alto, CD27+ y BCL2, por s de linfocitos T de memoria;
[2077] en linfocitos T de memoria, por ejemplo, precursores de
[2079] emoria, por ejemplo, células con una o una combinación mento de CD127alto, aumento de CD27+, disminución de
[2081] nteriormente, por ejemplo, al menos de forma transitoria,
[2083] refiere a una enfermedad, por ejemplo, cáncer, que no er resistente a un tratamiento antes o al comienzo del de volver resistente durante un tratamiento. Un cáncer
[2085] cidiva" se refiere a la recurrencia o reaparición de una de una enfermedad tal como el cáncer después de un tratamiento anterior de una terapia, por ejemplo, terapia ar que el nivel de células cancerosas caiga por debajo de , 5 %, 4 %, 3 %, 2 % o 1 %. La reaparición puede implicar un cierto umbral, por ejemplo, por encima del 20 %, 1 %, to de B-ALL, la reaparición puede implicar, por ejemplo, (> 5 %) o cualquier sitio extramedular, después de una xto, puede implicar < 5 % de blasto en médula ósea. De completa o respuesta parcial) puede implicar la ausencia o inicial de respuesta puede durar al menos 1, 2, 3, 4, 5 o 8, 10 o 12 meses; o al menos 1, 2, 3, 4 o 5 años.
[2087] tar en un formato de intervalo diversas realizaciones. Se es simplemente por comodidad y brevedad y no se debe invención. Por consiguiente, se debe considerar que la te todos los posibles subintervalos, así como valores la descripción de un intervalo, tal como desde 1 hasta 6, se debe considerar que ha desvelado específicamente su
[2088] desde 1 hasta 5, desde 2 hasta 4, desde 2 hasta 6, desde
[2089] ese intervalo, por ejemplo, 1, 2, 2,7, 3, 4, 5, 5,3 y 6. Como
[2090] incluye algo con 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de identi
[2091] 96-97 %, 97-99 %, 97-98 % y 98-99 % de identidad. Esto s
[2093] Un "sistema de corrección génica", como se usa la expresi
[2094] ejemplo, una o más moléculas, que dirigen y efectúan una
[2095] ácidos nucleicos en o cerca de un sitio del ADN genómico
[2096] génica son conocidos en la técnica y se describen más det
[2098] Administrado "en combinación", como se usa en el pres
[2099] diferentes se suministran al sujeto durante el transcurso de
[2100] o más tratamientos se suministran después de que el sujet
[2101] el trastorno haya sido curado o eliminado, o el tratamie
[2102] tratamiento puede estar todavía ocurriendo cuando empi
[2103] solapamiento en términos de administración. Esto se deno
[2104] "simultáneo" o "concurrente". Alternativamente, el suministr
[2105] el suministro del otro tratamiento. En cualquier caso, el trata
[2106] Por ejemplo, el segundo tratamiento es más eficaz, por e
[2107] segundo tratamiento, o el segundo tratamiento reduce los
[2108] segundo tratamiento fuera administrado en ausencia del pr
[2109] primer tratamiento. El suministro puede ser tal que la redu
[2110] trastorno, es mayor que lo que se observaría con un trata
[2111] dos tratamientos puede ser parcialmente aditivo, completa
[2112] tal que un efecto del primer tratamiento suministrado sea to
[2114] El término "depleción" o "depletar", como se usa en el pres
[2115] nivel o la cantidad de una célula, una proteína o macromolé
[2116] por ejemplo, una etapa de selección, por ejemplo, una s
[2117] parcial de la célula, proteína o macromolécula. En algunas
[2118] de al menos 1 %, 2 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %
[2119] 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 99 % del nivel o cantidad de una
[2120] el nivel o la cantidad de la célula, proteína o macromolécul
[2122] Como se usa en el presente documento, un "linfocito T inta
[2123] antígeno. En algunas realizaciones, un linfocito T sin expe
[2124] timo, pero no en la periferia. En algunas realizaciones, los li
[2125] En algunas realizaciones, los linfocitos T intactos expresan
[2126] En algunas realizaciones, los linfocitos T intactos pueden
[2127] CD45RA, CD28 y CD127, y la ausencia de CD95 o la iso
[2128] intactos expresan CD62L, receptor de IL-7-a, receptor de
[2129] CD45RO. En algunas realizaciones, los linfocitos T intacto
[2130] o el receptor p de IL-2. En algunas realizaciones, los nivel
[2131] usando citometría de flujo.
[2133] La expresión "linfocitos T de memoria central" se refiere a
[2134] positivos para CD45RO y expresan CCR7. En algunas re
[2135] CD95. En algunas realizaciones, los linfocitos T de memo
[2136] realizaciones, los linfocitos T de memoria central expresan
[2137] algunas realizaciones, los niveles de expresión superficial
[2139] La expresión "linfocitos T de memoria madre", "linfocitos T
[2140] similares a células madre", "linfocitos T madre de memo
[2141] linfocitos T de memoria" o "linfocitos TSCM" se refiere a
[2142] similar a células madre, por ejemplo, la capacidad de aut
[2143] subconjuntos de linfocitos T efectores y/o de memoria. En
[2144] expresan CD45RA, CD95, el receptor p de IL-2, CCR7 y
[2145] superficial de los marcadores se evalúan usando citometría
[2146] de memoria madre a modo de ejemplo en Gattinoni et al.,
[2148] A efectos de claridad, a menos que se indique lo contrario,
[2149] no expresa" o que tiene una "ausencia de" o que es "n
[2150] necesariamente una ausencia absoluta del marcador. El
[2151] frente a un control positivo y/o negativo, y/o establecer un
[2152] células como que no expresa o es negativa para el marcad tervalos, tales como desde 1 hasta 3, desde 1 hasta 4, hasta 6, etc., así como números individuales dentro de tro ejemplo, un intervalo tal como 95-99 % de identidad , e incluye subintervalos tales como 96-99 %, 96-98 %, plica independientemente de la amplitud del intervalo.
[2153] en el presente documento, se refiere a un sistema, por odificación, por ejemplo, una eliminación, de uno o más ue se dirige dicho sistema. Los sistemas de corrección damente a continuación.
[2155] te documento, significa que dos (o más) tratamientos aflicción del sujeto con el trastorno, por ejemplo, los dos aya sido diagnosticado con el trastorno y antes de que haya cesado por otros motivos. El suministro de un el suministro del segundo, de manera que existe un na algunas veces en el presente documento suministro e un tratamiento puede terminar antes de que empiece nto es más eficaz debido a la administración combinada. plo, se observa un efecto equivalente con menos del ntomas a un mayor grado, del que se observaría si el er tratamiento, o la situación análoga se observa con el ón en un síntoma, u otro parámetro relacionado con el nto suministrado en ausencia del otro. El efecto de los nte aditivo, o superior a aditivo. El suministro puede ser vía detectable cuando se suministra el segundo.
[2157] te documento, se refiere al descenso o la reducción del en una muestra después de que se realice un proceso, cción negativa. La depleción puede ser una depleción lizaciones, la depleción es una disminución o reducción 5 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, lula, una proteína o macromolécula en comparación con n la muestra antes de que se realice el proceso.
[2159] " se refiere a un linfocito T que no tiene experiencia con cia con antígeno ha encontrado su antígeno afín en el citos T intactos son precursores de células de memoria. nto CD45RA como CCR7, pero no expresan CD45RO. racterizarse por la expresión de CD62L, CD27, CCR7, ma CD45RO. En algunas realizaciones, los linfocitos T -6 y CD132, pero no expresan CD25, CD44, CD69 o xpresan CD45RA, CCR7 y CD62L y no expresan CD95 de expresión superficial de los marcadores se evalúan
[2161] subconjunto de linfocitos T que en seres humanos son zaciones, los linfocitos T de memoria central expresan central expresan IL-2R, IL-7R y/o IL-15R. En algunas 45RO, CD95, el receptor p de lL-2, CCR7 y CD62L. En los marcadores se evalúan usando citometría de flujo.
[2162] e memoria de células madre", "linfocitos T de memoria , "linfocitos T madre de memoria", "células madre de subconjunto de linfocitos T de memoria con capacidad enovarse y/o la capacidad multipotente de reconstituir gunas realizaciones, los linfocitos T de memoria madre 2L. En algunas realizaciones, los niveles de expresión flujo. En algunas realizaciones, se divulgan linfocitos T Med. 06 de enero de 2017; 23(1): 18-27.
[2164] sificar una célula o una población de células como "que tiva para" un marcador particular puede no significar erto en la técnica puede comparar fácilmente la célula ral predeterminado, y clasificar la célula o población de cuando la célula tiene un nivel de expresión por debajo del umbral predeterminado o una población de célula
[2165] predeterminado usando métodos de detección conven
[2166] describe en los Ejemplos en el presente documento. Por
[2167] en la FIG. 1G. Por ejemplo, las células CCR7 positivas
[2168] izquierdo en la FIG. 1G.
[2170] Como se usa en el presente documento, la expresión "G
[2171] de una célula se refiere a una puntuación que refleja el
[2172] memoria efector (TEM) frente a un fenotipo de linfocito
[2173] más alta (TEM ascendente frente a TSCM descenden
[2174] GeneSetScore más baja (TEM ascendente frente a TS
[2175] algunas realizaciones, el GeneSetScore (TEM ascende
[2176] expresión de uno o más genes que están regulados por
[2177] células TSCM, por ejemplo, uno o más genes selecci
[2178] TBC1D2B, GLCCI1, DUSP10, APOBEC3D, CACNB3,
[2179] MAN1A1, SLFN12L, SH2D2A, EIF2C4, CD58, MYO1
[2180] SLC4A4, PIK3AP1, PTGDR, MAF, PLEKHA5, ADRB2
[2181] FLJ16686, AUTS2, PTPRM, GNLY y GFPT2. En algun
[2182] TSCM descendente) se determina para cada célula us
[2183] ARN de una sola célula (scRNA-seq), por ejemplo, tal
[2184] 39A. En algunas realizaciones, GeneSetScore (TEM as
[2185] valor medio logarítmico de la expresión génica normaliz
[2187] Como se usa en el presente documento, la expresión "G
[2188] una célula se refiere a una puntuación que refleja el g
[2189] reguladores (Treg) frente a un fenotipo de linfocitos T ef
[2190] frente a Tef descendente) indica un fenotipo Treg cr
[2191] ascendente frente a Tef descendente) indica un fenotipo
[2192] ascendente frente a Tef descendente) se determina mid
[2193] por incremento en linfocitos Treg y/o regulados por di
[2194] seleccionados del grupo que consiste en C12orf75, SEL
[2195] C14orf145, CASP8, SYT11, ACTN4, ANXA5, GLRX,
[2196] FRMD4B, CCR3, TNFRSF13B, NTNG2, CLDND1, BAR
[2197] CDKN2A, SKAP2, GPR55, CDCA7, S100A4, GDPD5, P
[2198] IKZF4, CARD17, VAV3, OBFC2A, ITGB1, CIITA, SETD7,
[2199] FAM164A, PYHIN1, MYO1F, SLC1A4, MYBL2, PTTG1,
[2200] NCAPH, HLA-DPB2, SYT4, NINJ2, FAM46C, CCR4, GB
[2201] ARHGEF12, LOC100188949, FAS, HLA-DPB1, SELP, W
[2202] CCR6, HLA-DRB4, ANXA2P3, STAM, HLA-DQB2, L
[2203] ANXA2P1, ZNF365, LAIR2, LOC541471, RASGRP4,
[2204] NCF4, LGALS3, CEACAM4, JAKMIP1, TIGIT, HLA-DRA,
[2205] En algunas realizaciones, GeneSetScore (Treg asce
[2206] secuenciación de ARN, por ejemplo, secuenciación de A
[2207] ejemplifica en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. 39B.
[2208] frente a Tef descendente) se calcula tomando el valor m
[2209] los genes en el conjunto de genes.
[2211] Como se usa en el presente documento, la expresión "G
[2212] se refiere a una puntuación que refleja el grado en el
[2213] GeneSetScore más baja (pluripotencialidad descende
[2214] algunas realizaciones, GeneSetScore (pluripotencialidad
[2215] más genes que están regulados por incremento en
[2216] disminución en una célula madre hematopoyética, por eje
[2217] en ACE, BATF, CDK6, CHD2, ERCC2, HOXB4, MEOX1,
[2218] GeneSetScore (pluripotencialidad descendente) se
[2219] secuenciación de ARN de una sola célula (scRNA-seq),
[2220] respecto a la FIG. 39C. En algunas realizaciones, GeneS
[2221] el valor medio logarítmico de la expresión génica normal
[2223] Como se usa en el presente documento, la expresión "
[2224] a una puntuación que refleja el grado en el que la célula
[2225] (hipoxia ascendente) indica un fenotipo de hipoxia cre
[2226] ascendente) se determina midiendo la expresión de uno
[2227] que experimentan hipoxia, por ejemplo, uno o más gen
[2228] ADM, ADORA2B, AK2, AK3, ALDH1A1, ALDH1A3, ALD
[2229] ARHGAP5, ARSE, ART1, BACE2, BATF3, BCL2L1, BCL e un nivel de expresión global por debajo del umbral les, por ejemplo, usando citometría de flujo, como se plo, estrategias de apertura representativas se muestran 45RO negativas, se muestran en el cuadrante superior
[2231] etScore (TEM ascendente frente a TSCM descendente)" en el que la célula muestra un fenotipo de linfocito T de memoria de células madre (TSCM). Una GeneSetScore dica un fenotipo TEM en aumento, mientras que una escendente) indica un fenotipo TSCM en aumento. En rente a TSCM descendente) se determina midiendo la mento en células TEM y/o regulados por disminución en os del grupo que consiste en MXRA7, CLIC1, NAT13, A2P2, TPRG1, EOMES, MATK, ARHGAP10, ADAM8, AB27B, ERN1, NPC1, NBEAL2, APOBEC3G, SYTL2, XND1, GNAO1, THBS1, PPP2R2B, CYTH3, KLRF1, alizaciones, GeneSetScore (TEM ascendente frente a secuenciación de ARN, por ejemplo, secuenciación de se ejemplifica en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. nte frente a TSCM descendente) se calcula tomando el e todos los genes en el conjunto de genes.
[2233] etScore (Treg ascendente frente a Tef descendente)" de en el que la célula muestra un fenotipo de linfocitos T es (Tef). Una GeneSetScore más alta (Treg ascendente te, mientras que una GeneSetScore más baja (Treg reciente. En algunas realizaciones, GeneSetScore (Treg la expresión de uno o más genes que están regulados ción en linfocitos Tef, por ejemplo, uno o más genes , SWAP70, RGS1, PRR11, SPATS2L, SPATS2L, TSHR, DMB, PMCH, RAB11FIP1, IL32, FAM160B1, SHMT2, FCER1G, TYMS, ATP1B1, GJB6, FGL2, TK1, SLC2A8, 1, ACOT9, CEP55, SGMS1, ADPRH, AKAP2, HDAC9, -DMA, CCR10, KIAA0101, SLC14A1, PTTG3P, DUSP10, 2, TP53INP1, CCR5, ST8SIA6, TOX, BFSP2, ITPRIPL1, 15orf53, LMCD1, MKI67, NUSAP1, PDE4A, E2F2, CD58, HLA-DPA1, FCRL1, ICA1, CNTNAP1, OAS1, METTL7A, 1, ANXA2, PI16, DUSP4, LAYN, ANXA2P2, PTPLA, 1, UTS2, MIAT, PRDM1, SEMA3G, FAM129A, HPGD, 2, HLA-DRB1, FANK1, RTKN2, TRIB1, FCRL3 y FOXP3. te frente a Tef descendente) se determina usando e una sola célula (scRNA-seq), por ejemplo, tal como se lgunas realizaciones, GeneSetScore (Treg ascendente logarítmico de la expresión génica normalizada de todos
[2235] etScore (pluripotencialidad descendente)" de una célula a célula muestra un fenotipo de pluripotencialidad. Una indica un fenotipo de pluripotencialidad creciente. En cendente) se determina midiendo la expresión de uno o élula madre diferenciadora frente a la regulación por , uno o más genes seleccionados del grupo que consiste 1, SP7, SRF, TAL1 y XRCC5. En algunas realizaciones, mina usando secuenciación de ARN, por ejemplo, ejemplo, tal como se ejemplifica en el Ejemplo 10 con ore (pluripotencialidad descendente) se calcula tomando de todos los genes en el conjunto de genes.
[2237] SetScore (hipoxia ascendente)" de una célula se refiere stra un fenotipo de hipoxia. Una GeneSetScore más alta . En algunas realizaciones, la GeneSetScore (hipoxia s genes que están regulados por incremento en células leccionados del grupo que consiste en ABCB1, ACAT1, ALDOC, ANGPT2, ANGPTL4, ANXA1, ANXA2, ANXA5, BHLHE40, BHLHE41, BIK, BIRC2, BNIP3, BNIP3L, BPI, BTG1, C11orf2, C7orf68, CA12, CA9, CALD1, CCNG2,
[2238] CNOT7, COL4A5, COL5A1, COL5A2, COL5A3, CP, C
[2239] EDN1, EDN2, EFNA1, EGF, EGR1, EIF4A3, ELF3, EL
[2240] FABP5, FGF3, FKBP4, FLT1, FN1, FOS, FTL, GAPDH,
[2241] HERC3, HERPUD1, HGF, HIF1A, HK1, HK2, HLA-DQB1
[2242] ID2, IFI27, IGF2, IGFBP1, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP5,
[2243] KRT19, LDHA, LDHB, LEP, LGALS1, LONP1, LOX, L
[2244] MTL3P, MUC1, MXI1, NDRG1, NFIL3, NFKB1, NFKB2,
[2245] NT5E, ODC1, P4HA1, P4HA2, PAICS, PDGFB, PDK3
[2246] PGK2, PGM1, PIM1, PIM2, PKM2, PLAU, PLAUR, PLIN
[2247] PSMD9, PTGS1, PTGS2, QSOX1, RBPJ, RELA, RIOK
[2248] SGSM2, SIAH2, SIN3A, SIRPA, SLC16A1, SLC16A2, S
[2249] SLC6A6, SLC6A8, SORL1, SPP1, SRSF6, SSSCA1, ST
[2250] TGFA, TGFB1, TGFB3, TGFBI, TGM2, TH, THBS1, TH
[2251] TXNIP, UMPS, VEGFA, VEGFB, VEGFC, VIM, VPS11
[2252] ascendente) se determina usando secuenciación de a
[2253] (scRNA-seq), por ejemplo, tal como se ejemplifica e
[2254] realizaciones, GeneSetScore (hipoxia ascendente) se
[2255] génica normalizada de todos los genes en el conjunto d
[2257] Como se usa en el presente documento, la expresión "G
[2258] a una puntuación que refleja el grado en el que la célul
[2259] alta (autofagia ascendente) indica un fenotipo de aut
[2260] (autofagia ascendente) se determina midiendo la expres
[2261] en células que se someten a autofagia, por ejemplo, uno
[2262] ACBD5, ACIN1, ACTRT1, ADAMTS7, AKR1E2, ALKBH
[2263] ATG12, ATG13, ATG14, ATG16L1, ATG16L2, ATG2A, A
[2264] ATG9A, ATG9B, ATP13A2, ATP1B1, ATPAF1-AS1, ATPI
[2265] BOC, C11orf2, C11orf41, C12orf44, C12orf5, C14orf133,
[2266] CA7, CALCB, CALCOCO2, CAPS, CCDC36, CD163L
[2267] CHMP3, CHMP4A, CHMP4B, CHMP4C, CHMP6, CHST
[2268] CRNKL1, CSPG5, CTSA, CTSB, CTSD, CXCR7, DAP,
[2269] DZANK1, EI24, EIF2S1, EPG5, EPM2A, FABP1, FAM
[2270] FAM48A, FANCC, FANCF, FANCL, FBXO7, FCGR3B,
[2271] FUNDC2, FXR2, GABARAP, GABARAPL1, GABARAP
[2272] HBXIP, HCAR1, HDAC6, HGS, HIST1H3A, HIST1H3B,
[2273] HIST1H3H, HIST1H3I, HIST1H3J, HK2, HMGB1, HPR,
[2274] ITPKC, KCNK3, KCNQ1, KIAA0226, KIAA1324, KRCC
[2275] LAMTOR3, LARP1B, LENG9, LGALS8, LIX1, LIX1L,
[2276] MAP1LC3B, MAP1LC3B2, MAP1LC3C, MAP1S, MAP2
[2277] MLST8, MRPS10, MRPS2, MSTN, MTERFD1, MTMR1
[2278] NDUFB9, NEFM, NHLRC1, NME2, NPC1, NR2C2, NRB
[2279] PARK7, PDK1, PDK4, PEX13, PEX3, PFKP, PGK2, P
[2280] PINK1, PLEKHM1, PLOD2, PNPO, PPARGC1A, PPY,
[2281] PRKAG3, PRKD2, PRKG1, PSEN1, PTPN22, RAB12,
[2282] RB1CC1, RBM18, REEP2, REP15, RFWD3, RGS19,
[2283] RRAGB, RRAGC, RRAGD, S100A8, S100A9, SCN1A,
[2284] SLC1A4, SLC22A3, SLC25A19, SLC35B3, SLC35C1,
[2285] SNF8, SNRPB, SNRPB2, SNRPD1, SNRPF, SNTG1,
[2286] STBD1, STK11, STK32A, STOM, STX12, STX17, S
[2287] TECPR1, TECPR2, TFEB, TM9SF1, TMBIM6, TMEM2
[2288] TMEM93, TNIK, TOLLIP, TOMM20, TOMM22, TOM
[2289] TP53INP2, TRAPPC8, TREMI, TRIM17, TRIM5, TSG10
[2290] ULK1, ULK2, ULK3, USP10, USP13, USP30, UVRAG,
[2291] VPS25, VPS28, VPS33A, VPS33B, VPS36, VPS37A, V
[2292] VTA1, VTI1A, VTI1B, WDFY3, WDR45, WDR45L, WI
[2293] ZNF189, ZNF593 y ZNF681. En algunas realizaciones,
[2294] secuenciación de ARN, por ejemplo, secuenciación de A
[2295] ejemplifica en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG.
[2296] ascendente) se calcula tomando el valor medio logarítmi
[2297] el conjunto de genes.
[2299] Como se usa en el presente documento, la expresión
[2300] descendente)" de una célula se refiere a una puntuació
[2301] de linfocitos T en reposo frente a un fenotipo de linfo
[2302] ascendente frente a activados descendente) indica un f 6A, CD99, CDK1, CDKN1A, CDKN1B, CITED2, CLK1, CXCR4, D4S234E, DDIT3, DDIT4, 1-Dec, DKC1, DR1, NG, ENO1, ENO3, ENPEP, EPO, ERRFI1, ETS1, F3, , GLRX, GPI, GPRC5A, HAP1, HBP1, HDAC1, HDAC9, X1, HMOX2, HSPA5, HSPD1, HSPH1, HYOU1, ICAM1, L8, INSIG1, IRF6, ITGA5, JUN, KDR, KRT14, KRT18, MAP4, MET, MIF, MMP13, MMP2, MMP7, MPI, MT1L, 1, NOS2, NOS2P1, NOS2P2, NOS3, NR3C1, NR4A1, FB1, PFKFB3, PFKFB4, PFKL, PGAM1, PGF, PGK1, D2, PNN, PNP, POLM, PPARA, PPAT, PROK1, PSMA3, ASEL, RPL36A, RRP9, SAT1, SERPINB2, SERPINE1, A1, SLC2A1, SLC2A3, SLC3A2, SLC6A10P, SLC6A16, TRA13, SYT7, TBPL1, TCEAL1, TEK, TF, TFF3, TFRC, TIMM17A, TNFAIP3, TP53, TPBG, TPD52, TPI1, TXN, C6. En algunas realizaciones, GeneSetScore (hipoxia or ejemplo, secuenciación de ARN de una sola célula jemplo 10 con respecto a la FIG. 39D. En algunas a tomando el valor medio logarítmico de la expresión s.
[2304] etScore (autofagia ascendente)" de una célula se refiere stra un fenotipo de autofagia. Una GeneSetScore más creciente. En algunas realizaciones, GeneSetScore e uno o más genes que están regulados por incremento s genes seleccionados del grupo que consiste en ABL1, PK1, AMBRA1, ANXA5, ANXA7, ARSB, ASB2, ATG10, , ATG3, ATG4A, ATG4B, ATG4C, ATG4D, ATG5, ATG7, ECN1, BECN1P1, BLOC1S1, BMP2KL, BNIP1, BNIP3, 210, C5, C6orf106, C7orf59, C7orf68, C8orf59, C9orf72, 93, CDC37, CDKN2A, CHAF1B, CHMP2A, CHMP2B, SD2, CLDN7, CLEC16A, CLN3, CLVS1, COX8A, CPA3, , DNAAF2, DPF3, DRAM1, DRAM2, DYNLL1, DYNLL2, FAM131B, FAM134B, FAM13B, FAM176A, FAM176B, 4, FGF7, FGFBP1, FIS1, FNBP1L, FOXO1, FUNDC1, ABARAPL3, GABRA5, GDF5, GMIP, HAP1, HAPLN1, 1H3C, HIST1H3D, HIST1H3E, HIST1H3F, HIST1H3G, P, HSP90AA1, HSPA8, IFI16, IPPK, IRGM, IST1, ITGB4, T15, KRT73, LAMP1, LAMP2, LAMTOR1, LAMTOR2, D1, LRRK2, LRSAM1, LSM4, MAP1A, MAP1LC3A, P3K12, MARK2, MBD5, MDH1, MEX3C, MFN1, MFN2, MR3, MTOR, MTSS1, MYH11, MYLK, MYOM1, NBR1, HL1, NUP93, OBSCN, OPTN, P2RX5, PACS2, PARK2, PHYHIP, PI4K2A, PIK3C3, PIK3CA, PIK3CB, PIK3R4, A1, PRKAA2, PRKAB1, PRKAB2, PRKAG1, PRKAG2, A, RAB1B, RAB23, RAB24, RAB33B, RAB39, RAB7A, RIMS3, RNF185, RNF41, RPS27A, RPTOR, RRAGA, PINB10, SESN2, SFRP4, SH3GLB1, SIRT2, SLC1A3, A4, SLC6A1, SLCO1A2, SMURF1, SNAP29, SNAPIN, 4, SPATA18, SQSTM1, SRPX, STAM, STAM2, STAT2, H, TBC1D17, TBC1D25, TBC1D5, TCIRG1, TEAD4, MEM208, TMEM39A, TMEM39B, TMEM59, TMEM74, TOMM5, TOMM6, TOMM7, TOMM70A, TP53INP1, LNA, UBA52, UBB, UBC, UBQLN1, UBQLN2, UBQLN4, P7, VAMP8, VDAC1, VMP1, VPS11, VPS16, VPS18, B, VPS37C, VPS37D, VPS39, VPS41, VPS4A, VPS4B, IPI2, XBP1, YIPF1, ZCCHC17, ZFYVE1, ZKSCAN3, SetScore (autofagia ascendente) se determina usando e una sola célula (scRNA-seq), por ejemplo, tal como se En algunas realizaciones, GeneSetScore (autofagia la expresión génica normalizada de todos los genes en
[2306] eSetScore (en reposo ascendente frente a activados refleja el grado en el que la célula muestra un fenotipo T activados. Una GeneSetScore más alta (en reposo o creciente de linfocitos T en reposo, mientras que una GeneSetScore más baja (en reposo ascendente frent
[2307] linfocitos T activados. En algunas realizaciones, GeneSe
[2308] se determina midiendo la expresión de uno o más genes
[2309] y/o regulados por disminución en linfocitos T activados,
[2310] consiste en ABCA7, ABCF3, ACAP2, AMT, ANKH, AT
[2311] BSDC1, BTG1, BTG2, BTN3A1, C11orf21, C19orf22,
[2312] CEP164, CHKB, CLK1, CLK4, CTSL1, DBP, DCLTN1D2
[2313] ERBB2IP, FAM117A, FAM134B, FAM134C, FAM169A,
[2314] FXYD5, FYB, HLA-E, HSPA1L, HYAL2, ICAM2, IFIT5, I
[2315] KLF9, KRT18, LEF1, LINC00342, LIPA, LIPT1, LLGL2,
[2316] MAP3K1, MARCH8, MAU2, MGEA5, MMP8, MPO, M
[2317] NLRP1, NOSIP, NPIP, NUMA1, PAIP2B, PAPD7, PB
[2318] PPFIBP2, PRKCA, PRKCZ, PRKD3, PRMT2, PTP4A3,
[2319] RNF44, ROR1, RPL30, RPL32, RPLP1, RPS20, RPS
[2320] SETD1B, SETD6, SETX, SF3B1, SH2B1, SLC2A4RG,
[2321] SP140L, SPATA6, SPG7, SREK1IP1, SRSF5, STAT5B
[2322] TES, TMEM127, TMEM159, TMEM30B, TMEM66, TME
[2323] TSC22D3, TSPYL2, TTC9, TTN, UBE2G2, USP33, USP
[2324] ZC3H3, ZFP161, ZFP36L1, ZFP36L2, ZHX2, ZMYM5,
[2325] ZNF652, ZNF83, ZNF862 y ZNF91. En algunas real
[2326] activados descendente) se determina usando secuencia
[2327] célula (scRNA-seq), por ejemplo, tal como se ejemplific
[2328] realizaciones, GeneSetScore (en reposo ascendente fr
[2329] medio logarítmico de la expresión génica normalizada d
[2331] Como se usa en el presente documento, la expre
[2332] diferenciación de memoria)" de una célula se refiere
[2333] diferenciación de memoria. Una GeneSetScore más
[2334] memoria) indica un fenotipo creciente de linfocitos T d
[2335] (progresivamente ascendente en la diferenciación de m
[2336] temprana. En algunas realizaciones, GeneSetScore (a
[2337] uno o más genes que están regulados por incremento d
[2338] genes seleccionados del grupo que consiste en MTCH2,
[2339] SELT, TNIP1, CBFA2T2, LRP10, PRKCI, BRE, ANKS1
[2340] MAP1LC3B2, PIP4K2A, HCN3, GTPBP1, TLN1, C4orf34
[2341] WIPF1, FAM108A1, MYL6, NRM, SPCS2, GGT3P, GAL
[2342] DMPK, ST6GALNAC6, REEP5, ABHD6, KIAA0247, E
[2343] LPIN2, SETD8, ZC3H12A, ULBP3, IL15RA, HLA-DQB
[2344] TMEM39A, PCBP4, PLCD1, CHST12, RASGRP1, C1or
[2345] ITPR3, BTG3, C4orf50, CNNM3, IFI16, AK1, CDK2AP1
[2346] FANCA, CDCA4, FUCA2, MFSD10, TBCD, CAPN2, I
[2347] RALGDS, S1PR5, WSB2, CCR3, TIPARP, SP140, CD15
[2348] LIMK1, CACNB1, TMX4, SLC6A6, LBA1, SV2A, LLG
[2349] FOXP4, SLA2, TBC1D2B, ST7, JAZF1, GGA2, PI4K2A
[2350] APOBEC3F, TGFBI, DNAJC1, GPR114, LRP8, CD69,
[2351] NTNG2, RDX, MLLT4, GPRIN3, ADCY9, CD300A, SCD
[2352] RASGEF1A, GCNT1, GABARAPL1, STOM, CALHM2, A
[2353] APOBEC3C, CLSTN3, ACOT9, HIP1, LAG3, TNFAIP3,
[2354] APOBEC3D, TNFRSF1B, ACTN4, TBKBP1, ATXN1, A
[2355] GRLF1, SRGN, HLA-DRB5, B4GALT5, WIPI1, PTPRJ,
[2356] MAP3K5, IL2RB, PLEKHG1, MYO6, GTDC1, EDARAD
[2357] NHSL2, MATK, ARHGAP18, SLFN12L, SPATS2L, R
[2358] FAM46C, ZC3HAV1L, ANXA2P2, CTNNA1, NPC1, C3A
[2359] PHACTR2, GALNT3, ADRB2, PIK3AP1, TLR3, PLEKH
[2360] CADM1, MAF, TPRG1, NBEAL2, PPP2R2B, PELO, SLC
[2361] C17orf66, MICAL2, CYTH3, TOX, HLA-DRA, SYNE1,
[2362] CXCR6, ST6GALNAC2, DUSP4, AUTS2, C1orf21, KL
[2363] PTPRM, GFPT2, MYBL1, SLAMF7, FLJ16686, GNLY,
[2364] realizaciones, GeneSetScore (progresivamente ascend
[2365] secuenciación de ARN, por ejemplo, secuenciación de A
[2366] ejemplifica en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. 40B
[2367] ascendente en la diferenciación de memoria) se calcul
[2368] normalizada de todos los genes en el conjunto de genes
[2370] Como se usa en el presente documento, la expresión "G
[2371] una célula se refiere a una puntuación que refleja el gr tivados descendente) indica un fenotipo creciente de (en reposo ascendente frente a activados descendente) stán regulados por incremento en linfocitos T en reposo jemplo, uno o más genes seleccionados del grupo que ATG14, ATP1A1, ATXN7, ATXN7L3B, BCL7A, BEX4, rf2, CAMK2G, CARS2, CCNL2, CD248, CD5, CD55, ND1C, DGKD, DLG1, DUSP1, EAPP, ECE1, ECHDC2, 0B, FAU, FLJ10038, FOXJ2, FOXJ3, FOXL1, FOXO1, IKBKB, IQSEC1, IRS4, KIAA0664L3, KIAA0748, KLF3, L, LPAR2, LTBP3, LYPD3, LZTFL1, MANBA, MAP2K6, SL3, MYH3, MYLIP, NAGPA, NDST2, NISCH, NKTR, PCIF1, PI4KA, PLCL2, PLEKHA1, PLEKHF2, PNISR, RASA2, RASA3, RASGRP2, RBM38, REPIN1, RNF38, S27, RPS6, RPS9, RXRA, RYK, SCAND2, SEMA4C, 5E2B, SLC46A3, SMAGP, SMARCE1, SMPD1, SNPH, , SYF2, SYNJ2BP, TAF1C, TBC1D4, TCF20, TECTA, TP53TG1, TPCN1, TRIM22, TRIM44, TSC1, TSC22D1, MP1, VILL, VIPR1, VPS13C, ZBED5, ZBTB25, ZBTB40, 136, ZNF148, ZNF318, ZNF350, ZNF512B, ZNF609, nes, GeneSetScore (en reposo ascendente frente a e ARN, por ejemplo, secuenciación de ARN de una sola el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. 38D. En algunas a activados descendente) se calcula tomando el valor s los genes en el conjunto de genes.
[2373] "GeneSetScore (progresivamente ascendente en la a puntuación que refleja la etapa de la célula en la progresivamente ascendente en la diferenciación de oria tardía, mientras que una GeneSetScore más baja ) indica un fenotipo creciente de linfocitos T de memoria ia ascendente) se determina midiendo la expresión de la diferenciación de memoria, por ejemplo, uno o más C, KIAA0195, SETD2, C2orf24, NRD1, GnA13, COPA, PLA6, ARL6IP1, WDFY1, MAPK1, GPR153, SHKBP1, B, TCIRG1, PPP3CA, ATG4D, TYMP, TRAF6, C17orf76, IP4, ARL4C, YWHAQ, LPCAT4, ATG2A, IDS, TBC1D5, SEN54, SPIRE2, PIWIL4, ZSCAN22, ICAM1, CHD9, P1, CHP, RUNX3, TMEM43, REEP4, MEF2D, ABL1, 11orf63, C6orf129, FHOD1, DKFZp434F142, PIK3CG, , BCL2L1, MVD, TTC39C, PLEKHA2, FKBP11, EML4, , CHST11, PIK3R1, MYO5A, KIR2DL3, DLG3, MXD4, X13, KRTAP5-2, NF1, PEA15, PARP8, RNF166, UEVLD, F1, PPP2R5C, CD99, RAPGEF1, PPP4R1, OSBPL7, 8, LPGAT1, STX11, ZAK, FAM160B1, RORA, C8orf80, AT13, TGFB1, FLJ00049, ANTXR2, NR4A3, IL12RB1, , PTPN22, LGALS1, SYTL3, BMPR1A, TBK1, PMAIP1, , PPP1R16B, SYNE2, PAM, C12orf75, CLCF1, MXRA7, D1, KLF6, CACNB3, RNF19A, RAB27A, FADS3, DLG5, , ARHGEF12, FAM53B, MAN1A1, FAM38A, PLXNC1, 11, DUSP2, ANXA5, AHNAK, NEO1, CLIC1, EIF2C4, LM, TARP, ADAM8, MSC, HNRPLL, SYT11, ATP2B4, B, PIK3R3, TP53INP1, MBOAT1, GYG1, KATNAL1, IM1, SH2D2A, ERN1, YPEL1, TBX21, SLC1A4, FASLG, USP10, GNAO1, PTGDR, FRMD4B, ANXA2, EOMES, LRF1, FOSL2, RGS2, TGFBR3, PRF1, MYO1F, GAB3, , PYHIN1, F2R, PLD1, THBS1, CD58, FAS, NETO2, TNIP3, GZMA, PRR5L, PRDM1, ST8SIA6, PLXND1, CST7, IL18RAP, CCL5, KLRD1 y KLRB1. En algunas n la diferenciación de memoria) se determina usando una sola célula (scRNA-seq), por ejemplo, tal como se lgunas realizaciones, GeneSetScore (progresivamente ndo el valor medio logarítmico de la expresión génica
[2375] tScore (TEM ascendente frente a TN descendente)" de n el que la célula muestra un fenotipo de linfocito T de memoria efector (TEM) frente a un fenotipo de linfocito T
[2376] frente a TN descendente) indica un fenotipo TEM en a
[2377] ascendente frente a TN descendente) indica un fenotipo
[2378] (TEM ascendente frente a TN descendente) se determi
[2379] regulados por incremento en linfocitos TEM y/o regulado
[2380] genes seleccionados del grupo que consiste en MYO5A,
[2381] PEA15, PARP8, RNF166, UEVLD, LIMK1, SLC6A6, SV2A
[2382] TGFBI, DNAJC1, JOSD1, ZFYVE28, LRP8, OSBPL3, CM
[2383] CD300A, SCD5, PTPN22, LGALS1, RASGEF1A, GCNT1
[2384] ACOT9, METRNL, BMPR1A, LRIG1, APOBEC3G, CACN
[2385] MAN1A1, FAM38A, GRLF1, B4GALT5, WIPI1, DUSP2, A
[2386] MATK, SLFN12L, PIK3R3, FAM46C, ANXA2P2, CTNNA1,
[2387] GBP5, ADRB2, PIK3AP1, DUSP10, PTGDR, EOMES,
[2388] TGFBR3, MYO1F, C17orf66, CYTH3, WEE1, PYHIN1, F2
[2389] PRDM1, PLXND1, PTPRM, GFPT2, MYBL1, SLAMF7, ZE
[2390] GeneSetScore (TEM ascendente frente a TN descendent
[2391] secuenciación de ARN de una sola célula (scRNA-seq),
[2392] respecto a la FIG. 40C. En algunas realizaciones, Gen
[2393] calcula tomando el valor medio logarítmico de la expresi
[2394] genes.
[2396] En el contexto de los valores de GeneSetScore (por ej
[2397] GeneSetScore positivo se reduce en un 100 %, el valor se
[2398] un 100 %, el valor se convierte en 0. Por ejemplo, en la F
[2399] 1 es -0,084; la mediana de GeneSetScore de la muestr
[2400] muestra de entrada es -0,1. En la FIG. 39A, el aumento d
[2401] un 100 % conduce a un valor GeneSetScore de 0; y el
[2402] entrada en un 200 % conduce a un valor GeneSetScore d
[2403] de la muestra del día 9 en un 100% conduce a un
[2404] GeneSetScore de la muestra del día 9 en un 200 % cond
[2406] Como se usa en el presente documento, el término "perla
[2407] que varía en tamaño de aproximadamente 0,1 pm a vari
[2408] (por ejemplo, microesferas) o tener una forma irregular. L
[2409] que incluyen, pero no se limitan a, materiales paramagn
[2410] polímeros acrílicos, titanio, látex, Sepharose™, celulosa,
[2411] perlas de poliestireno superparamagnéticas esféricas,
[2412] diámetro, por ejemplo, recubiertas, por ejemplo, acoplad
[2413] CD3 (por ejemplo, CD3 épsilon) y CD28. En alguna
[2414] realizaciones, tanto los anticuerpos anti-CD3 como a
[2415] estimulación de linfocitos T por parte de células presenta
[2416] Dynabeads® para el aislamiento y expansión celular son
[2417] et al., Cell Isolation and Expansion Using Dynabeads, Ad
[2419] Como se usa en el presente documento, la expresión "n
[2420] una matriz de cadenas poliméricas móviles. La nanomatri
[2421] En algunas realizaciones, la matriz de cadenas poli
[2422] proporcionan señales de activación a linfocitos T, por e
[2423] algunas realizaciones, la nanomatriz comprende una
[2424] covalentemente, a un agonista de una o más molécula
[2425] coestimuladoras. En algunas realizaciones, el agonista de
[2426] (por ejemplo, un anticuerpo agonista anti-CD3). En al
[2427] coestimuladoras es un agonista de CD28 (por ejemplo, u
[2428] la nanomatriz se caracteriza por la ausencia de una sup
[2429] agonistas, tales como anticuerpos anti-CD3 y/o anti-CD2
[2430] divulgada en el documento de patente WO2014/048920
[2431] TransAct™ de Miltenyi Biotec GmbH. MACS® GMP T Cel
[2432] unida covalentemente a anticuerpos agonistas recombina
[2434] Varios casos de las composiciones y realizaciones de l
[2435] detalle a continuación. A lo largo de la memoria descriptiv
[2437] Descripción
[2439] La presente invención proporciona métodos de fabricació
[2440] o células NK) modificadas por ingeniería genética para cto (TN). Una GeneSetScore más alta (TEM ascendente nto, mientras que una GeneSetScore más baja (TEM en aumento. En algunas realizaciones, GeneSetScore midiendo la expresión de uno o más genes que están or disminución en linfocitos TN, por ejemplo, uno o más D4, STK3, S1PR5, GLCCI1, CCR3, SOX13, KRTAP5-2, NA2, OSBPL7, ST7, GGA2, PI4K2A, CD68, ZAK, RORA, NAT13, TGFB1, ANTXR2, NR4A3, RDX, ADCY9, CHN1, UL, ABCA2, CLDND1, PAM, CLCF1, MXRA7, CLSTN3, RNF19A, RAB27A, FADS3, ACTN4, TBKBP1, FAM53B, A5, AHNAK, CLIC1, MAP3K5, ST8SIA1, TARP, ADAM8, C1, SH2D2A, ERN1, YPEL1, TBX21, STOM, PHACTR2, , TPRG1, NBEAL2, NCAPH, SLC4A4, FOSL2, RGS2, HBS1, CD58, AUTS2, FAM129A, TNIP3, GZMA, PRR5L, CST7, CCL5, GZMK y KLRB1. En algunas realizaciones, e determina usando secuenciación de ARN, por ejemplo, ejemplo, tal como se ejemplifica en el Ejemplo 10 con tScore (TEM ascendente frente a TN descendente) se énica normalizada de todos los genes en el conjunto de
[2442] lo, mediana de valores de GeneSetScore), cuando un vierte en 0. Cuando un GeneSetScore negativo aumenta 39A, la mediana de GeneSetScore de la muestra del día l día 9 es 0,035; y la mediana de GeneSetScore de la mediana de GeneSetScore de la muestra de entrada en ento de la mediana de GeneSetScore de la muestra de . En la FIG. 39A, disminuir la mediana de GeneSetScore r de GeneSetScore de 0; y disminuir la mediana de a un valor GeneSetScore de -0,035.
[2444] refiere a una partícula discreta con una superficie sólida, ilímetros de diámetro. Las perlas pueden ser esféricas perlas pueden comprender una diversidad de materiales s, cerámica, plástico, vidrio, poliestireno, metilestireno, on y similares. En algunas realizaciones, las perlas son tivamente uniformes, de aproximadamente 4,5 pm de covalentemente, con una mezcla de anticuerpos contra alizaciones, las perlas son Dynabeads®. En algunas D28 están acoplados a la misma perla, imitando la s de antígeno. La propiedad de Dynabeads® y el uso de conocidos en la técnica, por ejemplo, véase, Neurauter ochem Eng Biotechnol. 2007;106:41-73.
[2446] matriz" se refiere a una nanoestructura que comprende de 1 a 500 nm, por ejemplo, de 10 a 200 nm, de tamaño. as móviles está unida a uno o más agonistas que plo, anticuerpos anti-CD3 y/o anti-CD28 agonistas. En omatriz polimérica coloidal unida, por ejemplo, unida stimuladoras y/o un agonista de una o más moléculas o más moléculas estimuladoras es un agonista de CD3 s realizaciones, el agonista de una o más moléculas ticuerpo agonista anti-CD28). En algunas realizaciones, ie sólida, por ejemplo, como el punto de unión para los n algunas realizaciones, la nanomatriz es la nanomatriz tal como se proporciona en el kit MACS® GMP T Cell nsAct™ consiste en una nanomatriz polimérica coloidal s humanizados contra CD3 y CD28 humanos.
[2448] étodos del presente documento se describen con más exponen definiciones adicionales.
[2450] células efectoras inmunitarias (por ejemplo, linfocitos T resar un CAR y formularlas en composiciones como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunas reali
[2451] una enfermedad, tal como cáncer, en un sujeto. En alg
[2452] documento pueden fabricar células efectoras inmunitarias
[2453] en menos de 24 horas. Sin desear quedar ligado a teorí
[2454] documento conservan el fenotipo indiferenciado de linfoci
[2455] fabricación. Estas células que expresan CAR con un
[2456] expandirse mejorin vivodespués de la infusión. En algu
[2457] los métodos de fabricación proporcionados en el present
[2458] T de memoria de células madre, en comparación con linf
[2459] tradicional, por ejemplo, según se mide usando scRNA-s
[2460] en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. 39A). En algunas
[2461] métodos de fabricación proporcionados en el presente d
[2462] efectores, en comparación con linfocitos T-CAR producido
[2463] según se mide usando scRNA-seq (por ejemplo, según
[2464] respecto a la FIG. 39B). En algunas realizaciones, los linfo
[2465] proporcionados en el presente documento conservan m
[2466] con los linfocitos T-CA<r>producidos mediante el proce
[2467] utilizando scRNA-seq (por ejemplo, según se mide usand
[2468] 39C). En algunas realizaciones, los linfocitos T-CAR prod
[2469] en el presente documento muestran un menor nivel de
[2470] mediante el proceso de fabricación tradicional, por ejem
[2471] se mide usando métodos descritos en el Ejemplo 10 c
[2472] linfocitos T-CAR producidos mediante los métodos de fabr
[2473] un menor nivel de autofagia, en comparación con linfoc
[2474] tradicional, por ejemplo, según se mide usando scRNA-s
[2475] en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. 39E).
[2477] En algunas realizaciones, los métodos divulgados en el pr Dynabeads®(por ejemplo, Dynabeads CD3/CD28®), y no
[2478] los linfocitos T-CAR fabricados mediante los métodos divu
[2479] a un sujeto con una expansiónex vivomínima, por ejemp
[2480] menos de 6 horas, menos de 4 horas, menos de 3 horas
[2481] ex vivo.En consecuencia, los métodos descritos en el p
[2482] rápido para la producción de productos celulares que ex
[2483] enfermedad en un sujeto.
[2485] Proceso de activación
[2487] En algunas realizaciones, la presente divulgación propor
[2488] (por ejemplo, linfocitos T) que expresan un receptor quim
[2489] contacto una población de células (por ejemplo, linfocit
[2490] leucaféresis congelado o en fresco) con un agente que
[2491] una molécula coestimuladora en la superficie de las célula
[2492] linfocitos T) con una molécula de ácido nucleico (por ej
[2493] proporcionando de este modo una población de células
[2494] ácido nucleico, y (iii) recoger la población de células (por
[2495] reformulación de la población de células en medios de cr
[2496] se realiza junto con la etapa (i) o a más tardar 20 horas
[2497] tardar 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 horas después del co
[2498] después del comienzo de la etapa (i), y la etapa (iii) se rea
[2499] (i), por ejemplo, a más tardar 22, 23 o 24 horas después
[2500] horas después del comienzo de la etapa (i). En algunas r
[2501] etapa (iii) se realiza a más tardar 30 horas después del co
[2502] 25, 26, 27, 28, 29 o 30 horas después del comienzo de la
[2503] de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más
[2504] 10 %, por ejemplo, según se evalúa mediante el número
[2505] al comienzo de la etapa (i). En algunas realizaciones, la
[2506] En algunas realizaciones, la molécula de ácido nuclei
[2507] realizaciones, la molécula de ácido nucleico en la etapa
[2508] elegido de un vector lentivírico, un vector adenovírico o u
[2509] ácido nucleico en la etapa (ii) está en un vector no vírico.
[2510] la etapa (ii) está en un plásmido. En algunas realizacion
[2511] ningún vector. En algunas realizaciones, la etapa (ii) c
[2512] linfocitos T) con un vector vírico que comprende una mol iones, las células fabricadas son adecuadas para tratar s realizaciones, los métodos divulgados en el presente odificadas por ingeniería genética para expresar un CAR se cree que los métodos proporcionados en el presente T, tales como linfocitos T intactos, durante el proceso de notipo indiferenciado pueden persistir más tiempo y/o realizaciones, los linfocitos T-CAR producidos mediante ocumento comprenden un mayor porcentaje de linfocitos os T-CAR producidos mediante el proceso de fabricación (por ejemplo, según se mide usando métodos descritos alizaciones, los linfocitos T-CAR producidos mediante los umento comprenden un mayor porcentaje de linfocitos T ediante el proceso de fabricación tradicional, por ejemplo, mide usando métodos descritos en el Ejemplo 10 con s T-CAR producidos mediante los métodos de fabricación la pluripotencialidad de los linfocitos T, en comparación de fabricación tradicional, por ejemplo, según se mide étodos descritos en el Ejemplo 10 con respecto a la FIG. dos mediante los métodos de fabricación proporcionados poxia, en comparación con linfocitos T-CAR producidos según se mide usando scRNA-seq (por ejemplo, según respecto a la FIG. 39D). En algunas realizaciones, los ción proporcionados en el presente documento muestran T-CAR producidos mediante el proceso de fabricación (por ejemplo, según se mide usando métodos descritos
[2514] ente documento no implican el uso de una perla, tal como lican una etapa de desperlado. En algunas realizaciones, dos en la presente son adecuados para la administración menos de 1 día, menos de 12 horas, menos de 8 horas, enos de 2 horas, menos de 1 hora o ninguna expansión ente documento proporcionan un proceso de fabricación san CAR mejorados para uso en el tratamiento de una
[2516] na métodos de preparación de una población de células co para el antígeno (CAR) que comprenden: (i) poner en T, por ejemplo, linfocitos T aislados de un producto de imula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula (ii) poner en contacto la población de células (por ejemplo, plo, una molécula de ADN o ARN) que codifica el<c>A<r>, r ejemplo, linfocitos T) que comprenden la molécula de mplo, linfocitos T) para su almacenamiento (por ejemplo, onservación) o administración, en donde: (a) la etapa (ii) spués del comienzo de la etapa (i), por ejemplo, a más nzo de la etapa (i), por ejemplo, a más tardar 18 horas a más tardar 26 horas después del comienzo de la etapa l comienzo de la etapa (i), por ejemplo, a más tardar 24 izaciones, la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i), y la enzo de la etapa (ii), por ejemplo, a más tardar 22, 23, 24, apa (ii). En algunas realizaciones, la población de células 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 %, por ejemplo, no más del células vivas, en comparación con la población de células lécula de ácido en la etapa (ii) es una molécula de ADN. en la etapa (ii) es una molécula de ARN. En algunas i) está en un vector vírico, por ejemplo, un vector vírico ctor retrovírico. En algunas realizaciones, la molécula de algunas realizaciones, la molécula de ácido nucleico en la molécula de ácido nucleico en la etapa (ii) no está en prende transducir la población de células (por ejemplo, la de ácido nucleico que codifica el CAR.
[2518] En algunas realizaciones, la población de células (por eje
[2519] ejemplo, una muestra de leucaféresis) de un sujeto.
[2521] En algunas realizaciones, la muestra de aféresis (por ejem
[2522] envía como una muestra congelada (por ejemplo, una mue
[2523] A continuación, la muestra de aféresis congelada se desc
[2524] linfocitos T CD8+) se seleccionan de la muestra de aféresi
[2525] (por ejemplo, un dispositivo CliniMACS® Prodigy®). A c
[2526] linfocitos T CD4+ y/o linfocitos T CD8+) se siembran par
[2527] descrito en el presente documento. En algunas realizacio
[2528] CD4+ y/o linfocitos T CD8+) se someten a una o más rond
[2529] la fabricación de CART.
[2531] En algunas realizaciones, la muestra de aféresis (por ejem
[2532] envía como un producto fresco (por ejemplo, un product
[2533] celular. Los linfocitos T (por ejemplo, linfocitos T c D4+ y/o
[2534] por ejemplo, usando una máquina de clasificación celu
[2535] continuación, los linfocitos T seleccionados (por ejemplo, l
[2536] fabricación de CART usando el proceso de activación de
[2537] los linfocitos T seleccionados (por ejemplo, linfocitos T C
[2538] de congelación-descongelación antes de sembrarse para
[2540] En algunas realizaciones, la muestra de aféresis (por ejem
[2541] linfocitos T (por ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o linfocitos T
[2542] usando una máquina de clasificación celular (por ejem
[2543] seleccionados (por ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o linfocitos
[2544] (por ejemplo, una muestra crioconservada) a una instalaci
[2545] ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o linfocitos T CD8+) se desco
[2546] CART usando el proceso de activación descrito en el pres
[2548] En algunas realizaciones, las células (por ejemplo, linfocit
[2549] CD28 durante, por ejemplo, 12 horas, seguido de la transd
[2550] codifica un CAR. 24 horas después del inicio del cultivo, la
[2551] administración.
[2553] Sin desear quedar ligado a teoría, la estimulación breve d
[2554] linfocitos T autorrenovables. En comparación con las estr
[2555] activación proporcionado en el presente documento no im
[2556] proporcionado en el presente documento también conserv
[2558] La población de células se pone en contacto con un age
[2559] estimula una molécula coestimuladora en la superficie de
[2561] En algunas realizaciones, el agente que estimula un comp
[2562] realizaciones, el agente que estimula una molécula coest
[2563] HVEM, LIGHT, CD40, 4-1BB, OX40, DR3, GITR, CD30, T
[2564] En algunas realizaciones, el agente que estimula una mol
[2565] algunas realizaciones, el agente que estimula un compl
[2566] anticuerpo de un solo dominio (por ejemplo, un anticuerpo
[2567] fragmento Fab o un scFv), una molécula pequeña o un liga
[2568] existe de forma natural). En algunas realizaciones, el ag
[2569] En algunas realizaciones, el agente que estimula un co
[2570] realizaciones, el agente que estimula una molécula co
[2571] anticuerpo de un solo dominio (por ejemplo, un anticuerpo
[2572] fragmento Fab o un scFv), una molécula pequeña o un liga
[2573] existe de forma natural). En algunas realizaciones, el
[2574] anticuerpo. En algunas realizaciones, el agente que estimu
[2575] En algunas realizaciones, el agente que estimula un co
[2576] coestimuladora no comprende una perla. En algunas re
[2577] comprende un anticuerpo anti-CD3 unido covalentem
[2578] realizaciones, el agente que estimula una molécula co
[2579] covalentemente a una nanomatriz polimérica coloidal. En
[2580] CD3/TCR y el agente que estimula una molécula coestim
[2582] En algunas realizaciones, la matriz comprende o consiste
[2583] o biocompatible, por ejemplo, que no es tóxico para las c o, linfocitos T) se recoge de una muestra de aféresis (por
[2585] , una muestra de leucaféresis) se recoge del sujeto y se crioconservada) a una instalación de fabricación celular. gela y los linfocitos T (por ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o por ejemplo, usando una máquina de clasificación celular tinuación, los linfocitos T seleccionados (por ejemplo, a fabricación de CART usando el proceso de activación , los linfocitos T seleccionados (por ejemplo, linfocitos T de congelación-descongelación antes de sembrarse para
[2587] , una muestra de leucaféresis) se recoge del sujeto y se ue no está congelado) a una instalación de fabricación ocitos T CD8+) se seleccionan de la muestra de aféresis, (por ejemplo, un dispositivo CliniMACS® Prodigy®). A citos T CD4+ y/o linfocitos T CD8+) se siembran para la ito en el presente documento. En algunas realizaciones, y/o linfocitos T CD8+) se someten a una o más rondas abricación de CART.
[2589] , una muestra de leucaféresis) se recoge del sujeto. Los ) se seleccionan de la muestra de aféresis, por ejemplo, un dispositivo CliniMACS® Prodigy®). Los linfocitos T CD8+) se envían entonces como una muestra congelada de fabricación celular. Los linfocitos T seleccionados (por elan posteriormente y se siembran para la fabricación de te documento.
[2591] ) se ponen en contacto con anticuerpos anti-CD3 y antición con un vector (por ejemplo, un vector lentivírico) que élulas se lavan y se formulan para su almacenamiento o
[2593] D3 y CD28 puede promover una transducción eficaz de gias de fabricación de CART tradicionales, el proceso de a expansiónex vivoprolongada. El proceso de activación nfocitos T indiferenciados durante la fabricación de CART.
[2594] que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que células.
[2596] o CD3/TCR es un agente que estimula CD3. En algunas uladora es un agente que estimula CD28, ICOS, CD27, , CD2, CD226, o cualquier combinación de los mismos. ula coestimuladora es un agente que estimula CD28. En CD3/TCR se elige de un anticuerpo (por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada), un pepticuerpo, un o (por ejemplo, un ligando recombinante o quimérico que que estimula un complejo CD3/TCR es un anticuerpo. lejo CD3/TCR es un anticuerpo anti-CD3. En algunas imuladora se elige de un anticuerpo (por ejemplo, un dominio variable de cadena pesada), un pepticuerpo, un o (por ejemplo, un ligando recombinante o quimérico que nte que estimula una molécula coestimuladora es un una molécula coestimuladora es un anticuerpo anti-CD28. lejo CD3/TCR o el agente que estimula una molécula aciones, el agente que estimula un complejo CD3/TCR e a una nanomatriz polimérica coloidal. En algunas timuladora comprende un anticuerpo anti-CD28 unido unas realizaciones, el agente que estimula un complejo ora comprenden T Cell TransAct™.
[2598] un material inerte polimérico, por ejemplo, biodegradable las. En algunas realizaciones, la matriz está compuesta por cadenas poliméricas hidrófilas, que obtienen la máxi
[2599] las cadenas. En algunas realizaciones, la matriz mó
[2600] purificados, polisacáridos, glucosaminoglicanos, o comp
[2601] por ejemplo, éteres de celulosa, almidón, goma arábig
[2602] xantano, goma guar o alginato. Otros polímeros puede
[2603] poliaminas, polietileniminas, polímeros policuaternios, p polivinilpirrolidonas, copolímeros en bloque o poliuretan
[2604] de dextrano.
[2606] La población de células se pone en contacto con una m
[2607] población de células se transduce con una molécula de
[2609] En algunas realizaciones, el poner en contacto la pobla
[2610] el CAR ocurre simultáneamente con el poner en cont
[2611] complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una mol
[2612] anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en con
[2613] que codifica el CAR ocurre a más tardar 20, 19, 18, 17,
[2614] después del comienzo del contacto de la población de
[2615] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2616] algunas realizaciones, el poner en contacto la població
[2617] CAR ocurre a más tardar 20 horas después del comien
[2618] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estim
[2619] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el p
[2620] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar
[2621] de células con el agente que estimula un complejo CD3/
[2622] en la superficie de las células descritas anteriormente.
[2623] células con la molécula de ácido nucleico que codifica el
[2624] contacto de la población de células con el agente que e
[2625] molécula coestimuladora en la superficie de las células
[2626] contacto la población de células con la molécula de áci
[2627] después del comienzo del contacto de la población de
[2628] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2629] algunas realizaciones, el poner en contacto la població
[2630] CAR ocurre a más tardar 16 horas después del comien
[2631] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estim
[2632] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el p
[2633] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar
[2634] de células con el agente que estimula un complejo CD3/
[2635] en la superficie de las células descritas anteriormente.
[2636] células con la molécula de ácido nucleico que codifica el
[2637] contacto de la población de células con el agente que e
[2638] molécula coestimuladora en la superficie de las células
[2639] contacto la población de células con la molécula de áci
[2640] después del comienzo del contacto de la población de
[2641] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2642] algunas realizaciones, el poner en contacto la població
[2643] CAR ocurre a más tardar 13 horas después del comien
[2644] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estim
[2645] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el p
[2646] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar
[2647] de células con el agente que estimula un complejo CD3/
[2648] en la superficie de las células descritas anteriormente.
[2649] células con la molécula de ácido nucleico que codifica el
[2650] contacto de la población de células con el agente que e
[2651] molécula coestimuladora en la superficie de las células
[2652] contacto la población de células con la molécula de áci
[2653] después del comienzo del contacto de la población de
[2654] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2655] algunas realizaciones, el poner en contacto la població
[2656] CAR ocurre a más tardar 9 horas después del comien
[2657] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estim
[2658] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el p
[2659] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar
[2660] células con el agente que estimula un complejo CD3/T
[2661] en la superficie de las células descritas anteriormente.
[2662] células con la molécula de ácido nucleico que codifica movilidad en disolución acuosa debido a la hidratación de uede ser de colágeno, proteínas purificadas, péptidos iones de matriz extracelular. Un polisacárido puede incluir, garosa, dextrano, quitosano, ácido hialurónico, pectinas, cluir poliésteres, poliéteres, poliacrilatos, poliacrilamidas, sfacenos, poli(alcoholes vinílicos), poli(acetatos de vinilo), En algunas realizaciones, la matriz móvil es un polímero
[2664] ula de ácido nucleico o CAR. En algunas realizaciones, la que codifica un CAR.
[2666] de células con la molécula de ácido nucleico que codifica la población de células con el agente que estimula un la coestimuladora en la superficie de las células descritas la población de células con la molécula de ácido nucleico 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 o 0,5 horas as con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o la superficie de las células descritas anteriormente. En células con la molécula de ácido nucleico que codifica el el contacto de la población de células con el agente que na molécula coestimuladora en la superficie de las células r en contacto la población de células con la molécula de oras después del comienzo del contacto de la población y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora gunas realizaciones, el poner en contacto la población de ocurre a más tardar 18 horas después del comienzo del la un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una ritas anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en ucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 17 horas as con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o la superficie de las células descritas anteriormente. En células con la molécula de ácido nucleico que codifica el el contacto de la población de células con el agente que na molécula coestimuladora en la superficie de las células r en contacto la población de células con la molécula de oras después del comienzo del contacto de la población y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora gunas realizaciones, el poner en contacto la población de R ocurre a más tardar 14 horas después del comienzo del la un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una ritas anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en ucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 14 horas as con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o la superficie de las células descritas anteriormente. En células con la molécula de ácido nucleico que codifica el el contacto de la población de células con el agente que na molécula coestimuladora en la superficie de las células r en contacto la población de células con la molécula de oras después del comienzo del contacto de la población y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora gunas realizaciones, el poner en contacto la población de R ocurre a más tardar 11 horas después del comienzo del la un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una ritas anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en ucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 10 horas as con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o la superficie de las células descritas anteriormente. En células con la molécula de ácido nucleico que codifica el el contacto de la población de células con el agente que na molécula coestimuladora en la superficie de las células r en contacto la población de células con la molécula de ras después del comienzo del contacto de la población de /o un agente que estimula una molécula coestimuladora gunas realizaciones, el poner en contacto la población de R ocurre a más tardar 7 horas después del comienzo del contacto de la población de células con el agente que esti
[2667] molécula coestimuladora en la superficie de las células d
[2668] contacto la población de células con la molécula de ácid
[2669] después del comienzo del contacto de la población de c
[2670] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2671] algunas realizaciones, el poner en contacto la población
[2672] CAR ocurre a más tardar 5 horas después del comienz
[2673] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimul
[2674] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el po
[2675] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 4
[2676] células con el agente que estimula un complejo CD3/TC
[2677] en la superficie de las células descritas anteriormente. En
[2678] células con la molécula de ácido nucleico que codifica el
[2679] contacto de la población de células con el agente que esti
[2680] molécula coestimuladora en la superficie de las células d
[2681] contacto la población de células con la molécula de ácid
[2682] después del comienzo del contacto de la población de c
[2683] un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2684] algunas realizaciones, el poner en contacto la población
[2685] CAR ocurre a más tardar 1 horas después del comienz
[2686] estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimul
[2687] descritas anteriormente. En algunas realizaciones, el po
[2688] ácido nucleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 3
[2689] de células con el agente que estimula un complejo CD3/T
[2690] en la superficie de las células descritas anteriormente.
[2692] En los métodos de la invención, la población de células s
[2694] En los métodos de la invención, la población de células
[2695] tardar 30 horas, por ejemplo, a más tardar 29, 28, 27, 26,
[2696] del contacto de la población de células con el agente que
[2697] una molécula coestimuladora en la superficie de las célul
[2698] la población de células se recoge para su almacenami
[2699] comienzo del contacto de la población de células con el a
[2700] estimula una molécula coestimuladora en la superficie d
[2701] invención, la población de células se recoge para su alma
[2702] del comienzo del contacto de la población de células con
[2703] que estimula una molécula coestimuladora en la superfici
[2704] la invención, la población de células se recoge para s
[2705] después del comienzo del contacto de la población de c
[2706] un agente que estimula una molécula coestimuladora en
[2707] métodos de la invención, la población de células se recog
[2708] horas después del comienzo del contacto de la población
[2709] y/o un agente que estimula una molécula coestimulador
[2710] algunas realizaciones, la población de células se recoge
[2711] horas después del comienzo del contacto de la población
[2712] y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2714] En algunas realizaciones, la población de células no se e
[2716] En algunas realizaciones, la población de células se exp
[2717] 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 o 60 %, por eje
[2718] comparación con población de células antes de que se
[2719] CD3/TCR y/o un agente que estimula una molécula
[2720] anteriormente. En algunas realizaciones, la población de
[2721] se evalúa por del número del células vivas, en compar
[2722] contacto con el agente que estimula un complejo CD3/T
[2723] en la superficie de las células descritas anteriormente. E
[2724] en no más del 10 %, por ejemplo, según se evalúa por
[2725] de células antes de que se ponga en contacto con el ag
[2726] estimula una molécula coestimuladora en la superficie de
[2727] la población de células se expande en no más del 15
[2728] vivas, en comparación con población de células antes d
[2729] complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una molé
[2730] anteriormente. En algunas realizaciones, la población de
[2731] se evalúa por del número del células vivas, en compar a un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una itas anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en cleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 6 horas s con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o a superficie de las células descritas anteriormente. En élulas con la molécula de ácido nucleico que codifica el l contacto de la población de células con el agente que a molécula coestimuladora en la superficie de las células en contacto la población de células con la molécula de s después del comienzo del contacto de la población de o un agente que estimula una molécula coestimuladora unas realizaciones, el poner en contacto la población de ocurre a más tardar 3 horas después del comienzo del a un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una itas anteriormente. En algunas realizaciones, el poner en cleico que codifica el CAR ocurre a más tardar 2 horas s con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o a superficie de las células descritas anteriormente. En élulas con la molécula de ácido nucleico que codifica el l contacto de la población de células con el agente que a molécula coestimuladora en la superficie de las células en contacto la población de células con la molécula de nutos después del comienzo del contacto de la población y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora
[2733] coge para su almacenamiento o administración.
[2734] ecoge para su almacenamiento o administración a más 24, 23, 22, 21, 20, 19 o 18 horas después del comienzo imula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula escritas anteriormente. En los métodos de la invención, o administración a más tardar 26 horas después del e que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que s células descritas anteriormente. En los métodos de la amiento o administración a más tardar 25 horas después gente que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente las células descritas anteriormente. En los métodos de acenamiento o administración a más tardar 24 horas s con el agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o superficie de las células descritas anteriormente. En los ra su almacenamiento o administración a más tardar 23 élulas con el agente que estimula un complejo CD3/TCR la superficie de las células descritas anteriormente. En a su almacenamiento o administración a más tardar 22 élulas con el agente que estimula un complejo CD3/TCR la superficie de las células descritas anteriormente.
[2735] ndeex vivo.
[2737] e en no más del 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, o, según se evalúa por del número del células vivas, en ga en contacto con el agente que estimula un complejo stimuladora en la superficie de las células descritas las se expande en no más del 5 %, por ejemplo, según n con población de células antes de que se ponga en /o un agente que estimula una molécula coestimuladora unas realizaciones, la población de células se expande úmero del células vivas, en comparación con población que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que élulas descritas anteriormente. En algunas realizaciones, r ejemplo, según se evalúa por del número del células e se ponga en contacto con el agente que estimula un coestimuladora en la superficie de las células descritas las se expande en no más del 20 %, por ejemplo, según n con población de células antes de que se ponga en contacto con el agente que estimula un complejo CD3/TC
[2738] en la superficie de las células descritas anteriormente. E
[2739] en no más del 25 %, por ejemplo, según se evalúa por d
[2740] de células antes de que se ponga en contacto con el ag
[2741] estimula una molécula coestimuladora en la superficie de l
[2742] la población de células se expande en no más del 30 %
[2743] vivas, en comparación con población de células antes d
[2744] complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una molé
[2745] anteriormente. En algunas realizaciones, la población de
[2746] se evalúa por del número del células vivas, en compar
[2747] contacto con el agente que estimula un complejo CD3/TC
[2748] en la superficie de las células descritas anteriormente. E
[2749] en no más del 40 %, por ejemplo, según se evalúa por d
[2750] de células antes de que se ponga en contacto con el ag
[2751] estimula una molécula coestimuladora en la superficie de
[2753] En algunas realizaciones, el proceso de activación se lle
[2754] realizaciones, el proceso de activación se lleva a cabo
[2755] elegidas de: IL-2, IL-15 (por ejemplo, hetIL-15 (IL15/s
[2756] realizaciones, hetIL-15 comprende la secuencia de amino
[2758] NW VNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCK
[2759] SIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEK
[2760] CPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYTCNSGFKRKA
[2761] PSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPS
[2762] VPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKN
[2764] (SEQ ID NO: 309). En algunas realizaciones, hetIL-15 c
[2765] aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 99 % de identid
[2766] de activación se lleva a cabo en medios celulares que co
[2767] el proceso de activación se lleva a cabo en medios celu
[2768] realizaciones, el medio celular libre de suero comprende
[2769] de suero es el sustituto de suero de células inmunitarias
[2770] puede ser, por ejemplo, hasta 5 %, por ejemplo, aproxima
[2771] a teoría, el uso de medios celulares, por ejemplo, me
[2772] comprenden ICSR, por ejemplo, ICSR al 2 %, puede me
[2773] descrito en el presente documento.
[2775] En algunas realizaciones, la presente divulgación propor
[2776] (por ejemplo, linfocitos T) que expresan un receptor
[2777] proporcionar una muestra de aféresis (por ejemplo, una
[2778] de un sujeto; (b) seleccionar linfocitos T de la muestra de
[2779] positiva o selección sin perlas); (c) sembrar linfocitos T a
[2780] en contacto linfocitos T con un agente que estimula un c
[2781] coestimuladora en la superficie de las células (por ejempl
[2782] anti-CD28, por ejemplo, poner en contacto linfocitos T
[2783] molécula de ácido nucleico (por ejemplo, una molécula
[2784] contacto linfocitos T con un virus que comprende una m
[2785] ejemplo, 20-28 horas; y (f) lavar y recoger linfocitos T par
[2786] medios de crioconservación) o administración. En los mé
[2787] horas después del comienzo de la etapa (d), por ejemp
[2788] después del comienzo de la etapa (d).
[2790] Población de células que expresan CAR fabricada
[2791] documento
[2793] En algunas realizaciones, una célula efectora inmunitaria
[2794] métodos de fabricación de la invención, manipulada po
[2795] propiedad antitumoral. En algunas realizaciones, el CA
[2796] transmembranario y un dominio de señalización intracelul
[2797] con el cáncer descrito en el presente documento. En algu
[2798] NK) se transforma con el<c>A<r>y el CAR se expresa en l
[2799] ejemplo, linfocito T o célula NK) se transduce con un ve y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora lgunas realizaciones, la población de células se expande número del células vivas, en comparación con población e que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que células descritas anteriormente. En algunas realizaciones, or ejemplo, según se evalúa por del número del células ue se ponga en contacto con el agente que estimula un a coestimuladora en la superficie de las células descritas ulas se expande en no más del 35 %, por ejemplo, según ón con población de células antes de que se ponga en y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora lgunas realizaciones, la población de células se expande número del células vivas, en comparación con población e que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que células descritas anteriormente.
[2801] a cabo en medios celulares libres de suero. En algunas medios celulares que comprenden una o más citocinas 15Ra)) o IL-6 (por ejemplo, IL-6/sIL-6Ra). En algunas idos de
[2803] AMKCFLLELQVISLESGDA
[2804] KEFLQSFVHIVQMFINTSIT
[2805] SSLTECVLNKATNVAHWTT
[2807] .EPAASSPSSNNTAATTAAI
[2809] LTASASHQPPGVYPQG
[2811] prende la secuencia de aminoácidos que tiene al menos con SEQ ID NO: 309. En algunas realizaciones, el proceso renden un inhibidor de LSD1. En algunas realizaciones, es que comprenden un inhibidor de MALT1. En algunas sustituto de suero. En algunas realizaciones, el sustituto CSR) CTS™. En algunas realizaciones, el nivel de ICSR ente 1 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 %. Sin desear quedar ligado rápidos mostrados en la Tabla 21 o la Tabla 25, que ar la viabilidad celular durante un proceso de fabricación
[2813] na métodos de preparación de una población de células imérico para el antígeno (CAR) que comprenden: (a) stra de leucaféresis en fresco o crioconservada) recogida resis (por ejemplo, usando selección negativa, selección dos, por ejemplo, 1 * 106 a 1 * 107 células/ml; (d) poner plejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una molécula oner en contacto linfocitos T con anticuerpo anti-CD3 y/o TransAct); (e) poner en contacto linfocitos T con una DN o ARN) que codifica el CAR (por ejemplo, poner en cula de ácido nucleico que codifica el CAR) durante, por u almacenamiento (por ejemplo, reformular linfocitos T en os de la invención, la etapa (f) se realiza a más tardar 30 a más tardar 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 horas
[2815] mediante los procesos divulgados en el presente
[2817] r ejemplo, linfocito T o célula NK) preparada mediante los geniería genética para expresar un CAR, presenta una omprende un dominio de unión al antígeno, un dominio Un antígeno a modo de ejemplo es un antígeno asociado s realizaciones, la célula (por ejemplo, linfocito T o célula uperficie celular. En algunas realizaciones, la célula (por r vírico que codifica el CAR. En algunas realizaciones, el vector vírico es un vector retrovírico. En algunas realiz
[2818] realizaciones de este tipo, la célula puede expresar de fo
[2819] (por ejemplo, linfocito T o célula NK) se transfecta co
[2820] codifica un CAR. En algunas realizaciones de este tipo,
[2822] Los métodos de la invención proporcionan una població
[2823] ejemplo, linfocitos T o células NK) modificadas por ingeni
[2824] el porcentaje de células intactas, por ejemplo, linfocit
[2825] CCR7+, en la población de células al final del proceso d
[2826] no más del 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 %, de
[2827] 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24 o 25
[2828] ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, células CD45
[2829] proceso de fabricación. En algunas realizaciones, la po
[2830] un mayor porcentaje de células intactas, por ejemplo, linf
[2831] CCR7+ (por ejemplo, al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13
[2832] en comparación con células preparadas mediante un m
[2833] horas (por ejemplo, que dura más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1
[2834] vitrodurante, por ejemplo, más de 3 días (por ejemplo,
[2835] 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días).
[2837] En algunas realizaciones, el porcentaje de células intact
[2838] CD45RA+ CD45RO- CCR7+, en la población de célula
[2839] proceso de citocinas o el proceso de activación descrito
[2840] o 60 %.
[2842] En algunas realizaciones, el porcentaje de células de
[2843] por ejemplo, linfocitos T de memoria central CD95+, en
[2844] es el mismo que, (2) difiere, por ejemplo, en no más del
[2845] por ejemplo, en al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,
[2846] con, el porcentaje de células de memoria central, por ej
[2847] T de memoria central CD95+, en la población de cé
[2848] realizaciones, la población de células al final del proces
[2849] memoria central, por ejemplo, linfocitos T de memoria ce
[2850] ejemplo, al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15
[2851] comparación con células preparadas mediante un mét
[2852] horas (por ejemplo, que dura más de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1
[2853] vitrodurante, por ejemplo, más de 3 días (por ejemplo,
[2854] 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días).
[2856] En algunas realizaciones, el porcentaje de células de
[2857] por ejemplo, linfocitos T de memoria central CD95+, en
[2858] es superior al 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 o 80%.
[2860] En algunas realizaciones, la población de células al final
[2861] persiste más tiempo o se expande a un nivel más alto (
[2862] 70, 75, 80, 85 o 90 % superior) (por ejemplo, tal com
[2863] respecto a la FIG. 4C), en comparación con células pre
[2864] por ejemplo, más de 26 horas (por ejemplo, que dura m
[2865] población de célulasin vitrodurante, por ejemplo, más d
[2866] durante 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 días).
[2868] En algunas realizaciones, la población de células se ha e
[2869] que son positivas para IL6Ra y/o IL6Rp) antes del ini
[2870] población de células comprende, por ejemplo, no meno
[2871] que expresan IL6R (por ejemplo, células que son po
[2872] fabricación (por ejemplo, al comienzo del proceso de cit
[2874] Composición farmacéutica
[2876] Además, los métodos de la presente invención propo
[2877] pueden ser adecuadas para su uso en medicamentos
[2878] cualquier tumor maligno o enfermedad autoinmune que i
[2879] como se describe en el presente documento. En algu
[2880] farmacéuticas que comprenden una pluralidad de células
[2881] diluyentes o excipientes farmacéuticamente o fisiológica es, el vector vírico es un vector lentivírico. En algunas stable el CAR. En los métodos de la invención, la célula ácido nucleico, por ejemplo, ARNm, ADNc o ADN, que ula puede expresar de forma transitoria el CAR.
[2882] células (por ejemplo, células efectoras inmunitarias, por enética para expresar un CAR. En algunas realizaciones, intactos, por ejemplo, linfocitos T CD45RA+ CD45RO-ricación (1) es el mismo que, (2) difiere, por ejemplo, en e incrementa, por ejemplo, en al menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, comparación con, el porcentaje de células intactas, por CD45RO-CCR7+, en la población de células al inicio del n de células al final del proceso de fabricación muestra T intactos, por ejemplo, linfocitos T CD45RA+ CD45RO-15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 % superior), por lo demás similar que dura, por ejemplo, más de 26 días) o que implica expandir la población de célulasindir la población de célulasin vitrodurante 3, 4, 5, 6, 7, 8,
[2884] or ejemplo, linfocitos T intactos, por ejemplo, linfocitos T inal del proceso de fabricación (por ejemplo, al final del presente) no es menor de 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55
[2886] ia central, por ejemplo, linfocitos T de memoria central, blación de células al final del proceso de fabricación (1) 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 % de, o (3) se reduce, 6, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 %, en comparación , linfocitos T de memoria central, por ejemplo, linfocitos al comienzo del proceso de fabricación. En algunas fabricación muestra un porcentaje menor de células de por ejemplo, linfocitos T de memoria central CD95+ (por 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50% inferior), en or lo demás similar que dura, por ejemplo, más de 26 días) o que implica expandir la población de célulasindir la población de células in vitro durante 3, 4, 5, 6, 7, 8,
[2888] ia central, por ejemplo, linfocitos T de memoria central, blación de células al final del proceso de fabricación no
[2890] roceso de fabricación después de administrarsein vivo, jemplo, al menos 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, evalúa usando métodos descritos en el Ejemplo 1 con as mediante un método por lo demás similar que dura, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 días) o que implica expandir la ías (por ejemplo, expandir la población de célulasin vitro
[2892] ecido en células que expresan IL6R (por ejemplo, células l proceso de fabricación. En algunas realizaciones, la 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 u 80 % de células s para IL6Ra y/o IL6Rp) al comienzo del proceso de s o del proceso de activación descrito en la presente).
[2894] n composiciones de células que expresan CAR, que todos para tratar, entre otras enfermedades, cáncer o cre a células o tejidos que expresan un antígeno tumoral ealizaciones, los métodos proporcionan composiciones expresan CAR en combinación con uno o más vehículos, e aceptables.

Claims (24)

1. REIVINDICACIONES
1. Un método de preparación de una población de células que expresan un receptor quimérico para el antígeno (CAR), comprendiendo el método:
(i) poner en contacto una población de células con un agente que estimula un complejo CD3/TCR y/o un agente que estimula una molécula coestimuladora en la superficie de las células;
(ii) poner en contacto la población de células con una molécula de ácido nucleico que codifica el CAR, proporcionando así una población de células que comprenden la molécula de ácido nucleico, y
(iii) recoger la población de células para almacenamiento o administración,
en donde la etapa (ii) se realiza junto con la etapa (i) o a más tardar 20 horas después del comienzo de la etapa (i), y la etapa (iii) se realiza a más tardar 30 horas después del comienzo de la etapa (i).
2. El método de la reivindicación 1, en donde la molécula de ácido nucleico en la etapa (ii) está en un vector vírico.
3. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde
(a) la población de células comprende una población de linfocitos T, opcionalmente en donde la población de linfocitos T se aísla de un producto de leucaféresis congelado o en fresco;
(b) la población de células en contacto en la etapa (i) comprende linfocitos T CD4+ y/o CD8+ seleccionados de una muestra de aféresis, por ejemplo, usando una máquina de clasificación celular; y/o
(c) el almacenamiento de la etapa (iii) comprende reformular la población de células en medios de crioconservación.
4. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el agente que estimula el complejo CD3/TCR es un agente que estimula CD3.
5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el agente que estimula una molécula coestimuladora es un agente que estimula CD28, ICOS, CD27, HVEM, LIGHT, CD40, 4-1BB, OX40, DR3, GITR, CD30, TIM1, CD2, CD226, o cualquier combinación de los mismos.
6. El método de la reivindicación 4 o 5, en donde el agente que estimula un complejo CD3/TCR o el agente que estimula una molécula coestimuladora se elige de un anticuerpo, una molécula pequeña o un ligando.
7. El método de la reivindicación 6, en donde el anticuerpo es un anticuerpo de un solo dominio, un anticuerpo de dominio variable de cadena pesada, pepticuerpo, un fragmento Fab o un scFv.
8. El método de la reivindicación 6, en donde el ligando es un ligando natural, recombinante o quimérico.
9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en donde el agente que estimula un complejo CD3/TCR es un anticuerpo anti-CD3.
10. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9, en donde el agente que estimula un complejo CD3/TCR o el agente que estimula una molécula coestimuladora no comprende una perla.
11. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, en donde el agente que estimula un complejo CD3/TCR comprende un anticuerpo anti-CD3 y el agente que estimula una molécula coestimuladora comprende un anticuerpo anti-CD28, opcionalmente en donde el agente que estimula un complejo CD3/TCR comprende un anticuerpo anti-CD3 unido covalentemente a una nanomatriz polimérica coloidal y el agente que estimula una molécula coestimuladora comprende un anticuerpo anti-CD28 unido covalentemente a una nanomatriz polimérica coloidal.
12. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde:
(I)
(a) el porcentaje de células intactas en la población de células de la etapa (iii) es igual o difiere en no más de un 5 o un 10 % del porcentaje de células intactas en la población de células al comienzo de la etapa (i); o
(b) el porcentaje de células intactas en la población de células de la etapa (iii) no disminuye, o disminuye en no más de un 5 o un 10 %, en comparación con el porcentaje de células intactas en la población de células al comienzo de la etapa (i); y/o
(II)
(a) el porcentaje de células de memoria central en la población de células de la etapa (iii) es igual o difiere en no más de un 5 o un 10 % del porcentaje de células de memoria central en la población de células al comienzo de la etapa (i); o
(b) el porcentaje de células de memoria central en la población de células de la etapa (iii) no aumenta, o aumenta en no más de un 5 o un 10 %, en comparación con el porcentaje de células de memoria central en la población de células al comienzo de la etapa (i);
opcionalmente, en donde:
dichas células intactas son linfocitos T intactos o linfocitos T CD45RA+ CD45RO- CCR7+; y/o
dichas células de memoria central son linfocitos T de memoria central, linfocitos T de memoria central CD95+ o células CCR7+CD45RO+.
13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde:
(I) la etapa (i) aumenta el porcentaje de células que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii), por ejemplo, la población de células de la etapa (iii) muestra un mayor porcentaje de células que expresan CAR en comparación con las células preparadas mediante un método por lo demás similar sin la etapa (i); y/o
(II)
(a) el porcentaje de células intactas en la población de células de la etapa (iii) aumenta, por ejemplo, al menos 1,2 veces, en comparación con el porcentaje de células intactas, en la población de células al comienzo de la etapa (i); o (b) el porcentaje de linfocitos T intactos que expresan CAR en la población de células aumenta durante la duración de la etapa (ii) o entre 18-24 horas después del inicio de la etapa (ii); y/o
(III)
(a) la población de células de la etapa (iii) muestra un mayor porcentaje de células intactas en comparación con células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(b) el porcentaje de células intactas en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de células intactas en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(c) el porcentaje de linfocitos T intactos que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T intactos que expresan CAR en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(d) la población de células de la etapa (iii) muestra un mayor porcentaje de células intactas en comparación con células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días;
(e) el porcentaje de células intactas en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de células intactas en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; o
(f) el porcentaje de linfocitos T intactos que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T intactos que expresan CAR en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; y/o
(IV)
(a) el porcentaje de células de memoria central en la población de células de la etapa (iii) se reduce en al menos un 20 %, en comparación con el porcentaje de células de memoria centrales en la población de células al comienzo de la etapa (i); o
(b) el porcentaje de linfocitos T de memoria central que expresan CAR disminuye durante la duración de la etapa (ii) o entre 18-24 horas después del inicio de la etapa (ii); y/o
(V)
(a) la población de células de la etapa (iii) muestra un porcentaje menor de células de memoria central en comparación con células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(b) el porcentaje de células de memoria centrales en la población de células de la etapa (iii) es menor que el porcentaje de células de memoria centrales en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(c) el porcentaje de linfocitos T de memoria centrales que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es menor que el porcentaje de linfocitos T de memoria centrales que expresan CAR, en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i); (d) la población de células de la etapa (iii) muestra un porcentaje menor de células de memoria central en comparación con células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días;
(e) el porcentaje de células de memoria centrales en la población de células de la etapa (iii) es menor que el porcentaje de células de memoria centrales en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; o
(f) el porcentaje de linfocitos T de memoria centrales que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es menor que el porcentaje de linfocitos T de memoria centrales que expresan c A r en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; y/o
(VI)
(a) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre en la población de células de la etapa (iii) aumenta, en comparación con el porcentaje de linfocitos T de memoria madre en la población de células al comienzo de la etapa (i);
(b) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) aumenta, en comparación con el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR en la población de células al comienzo de la etapa (i);
(c) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre, en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T de memoria madre en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i);
(d) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan c A r en células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i); (e) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T de memoria madre en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; o
(f) el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR en la población de células de la etapa (iii) es mayor que el porcentaje de linfocitos T de memoria madre que expresan CAR en células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días;
opcionalmente, en donde:
dichas células intactas son linfocitos T intactos o linfocitos T CD45RA+ CD45RO- CCR7+;
dichas células de memoria central son linfocitos T de memoria central, linfocitos T de memoria central CD95+ o células CCR7+CD45RO+; y/o
dichos linfocitos T de memoria madre son linfocitos T P+CCR7+CD62L+ receptores de CD45RA+CD95+IL-2.
14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde:
(a) la población de células de la etapa (iii), después de incubarse con una célula que expresa un antígeno reconocido por el CAR, secreta IL-2 a un nivel más alto que las células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i), o células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días;
(b) la población de células de la etapa (iii), después de administrarse in vivo, persiste más o se expande a un nivel más alto, en comparación con células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i), o se compara con células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días; y/o
(c) la población de células de la etapa (iii), después de administrarse in vivo, muestra una actividad antitumoral más fuerte que las células preparadas mediante un método por lo demás similar en el que la etapa (iii) se realiza más de 5 días después del comienzo de la etapa (i), o células preparadas mediante un método por lo demás similar que comprende además, después de la etapa (ii) y antes de la etapa (iii), expandir la población de célulasin vitrodurante más de 3 días.
15. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde:
(a) la población de células de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 %, en comparación con la población de células al comienzo de la etapa (i);
(b) la población de células de la etapa (iii) se expande en no más de un 10 %, en comparación con la población de células al comienzo de la etapa (i);
(c) la población de células de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 %, según se evalúa mediante el número de células vivas, en comparación con la población de células al comienzo de la etapa (i), opcionalmente en donde el número de células vivas en la población de células de la etapa (iii) disminuye respecto al número de células vivas en la población de células al comienzo de la etapa (i);
(d) la etapa (ii) se realiza después del comienzo de la etapa (i);
(e) la etapa (ii) se realiza a más tardar 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 horas después del comienzo de la etapa (i) y/o la etapa (iii) se realiza a más tardar 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 horas después del comienzo de la etapa (i); y/o (f) la etapa (ii) se realiza a más tardar 18 horas después del inicio de la etapa (i), y/o la etapa (iii) se realiza a más tardar 24 horas después del comienzo de la etapa (i).
16. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde:
(a) las etapas (i) y/o (ii) se realizan en medios celulares que comprenden IL-2, IL-15, IL-7, IL-21, IL-6, un inhibidor de LSD1, un inhibidor de MALT1, o una combinación de los mismos, opcionalmente en donde dicha IL-15 es hetIL-15 o IL15/sIL15Ra y/o dicha IL-6 es IL-6/IL-6Ra;
(b) las etapas (i) y/o (ii) se realizan en medios sin suero que comprenden IL-2, IL-15, IL-7, IL-21, IL-6, un inhibidor de LSD1, un inhibidor de MALT1, o una combinación de los mismos, opcionalmente en donde dicha IL-15 es hetIL-15 o IL15/sIL15Ra y/o dicha IL-6 es IL-6/IL-6Ra; y/o
(c) las etapas (i) y/o (ii) se realizan en medios celulares sin suero que comprenden un reemplazo de suero.
17. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-16, que comprende además antes de la etapa (i):
(I)(iv) opcionalmente recibir un producto de leucaféresis en fresco o una fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como un producto de sangre completa en fresco, un producto de médula ósea en fresco, una biopsia o extracción de tumor u órgano en fresco o un producto en fresco de la timectomía, de una entidad, por ejemplo, un laboratorio, hospital o un proveedor de atención médica, y
(v) aislar la población de células en contacto en la etapa (i) a partir de un producto de leucaféresis en fresco o una fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como un producto de sangre completa en fresco, un producto de médula
ósea en fresco, una biopsia o extracción de tumor u órgano en fresco o un producto en fresco de la timectomía, opcionalmente en donde:
la etapa (III) se realiza a más tardar 35 horas después del comienzo de la etapa (v), o
la población de células de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más de un 40 %, en comparación con la población de células al final de la etapa (v); o
(II) recibir linfocitos T crioconservados aislados de un producto de leucaféresis (o una fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como linfocitos T crioconservados aislados de sangre completa, médula ósea, biopsia o extracción de tumor u órgano, o timectomía, de una entidad, por ejemplo, un laboratorio, hospital o proveedor de atención médica; (III) (iv) opcionalmente recibir un producto de leucaféresis crioconservado (o una fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como un producto de sangre completa crioconservado, un producto de médula ósea crioconservado, una biopsia o extracción de tumor u órgano crioconservado o un producto crioconservado de la timectomía, de una entidad, por ejemplo, un laboratorio, hospital o un proveedor de atención médica, y
(v) aislar la población de células en contacto en la etapa (i) a partir de un producto de leucaféresis crioconservado o una fuente alternativa de tejido hematopoyético tal como un producto de sangre completa crioconservado, un producto de médula ósea crioconservado, una biopsia o extracción de tumor u órgano crioconservado o un producto crioconservado de la timectomía, opcionalmente en donde:
la etapa (III) se realiza a más tardar 35 horas después del comienzo de la etapa (v), o
la población de células de la etapa (iii) no se expande, o se expande en no más de un 40 %, en comparación con la población de células al final de la etapa (v);
(IV) proporcionar una muestra de aféresis de un sujeto, como una muestra de leucaféresis;
enviar la muestra de aféresis a una instalación de fabricación de células, bien como muestra congelada y después descongelarla o como muestra no congelada;
seleccionar linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o linfocitos T CD8+, de la muestra de aféresis, por ejemplo, usando una máquina de clasificación celular; y
sembrar la población seleccionada de células para la fabricación de linfocitos T-CAR;
opcionalmente, en donde las células seleccionadas experimentan una o más rondas de congelación-descongelación antes de sembrarse; o
(V) proporcionar una muestra de aféresis de un sujeto, como una muestra de leucaféresis;
seleccionar linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T CD4+ y/o linfocitos T CD8+, de la muestra de aféresis, por ejemplo, usando una máquina de clasificación celular;
enviar la población seleccionada de células a una instalación de fabricación de células como una muestra congelada; y
descongelar la muestra congelada y sembrar la población seleccionada de células para la fabricación de linfocitos T-CAR.
18. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en donde:
(a) la población de células al comienzo de la etapa (i) se ha enriquecido en células que expresan IL6R, opcionalmente células que son positivas para IL6Ra y/o IL6Rp;
(b) la población de células al comienzo de la etapa (i) comprende no menos de un 50 % de células que expresan IL6R, opcionalmente células que son positivas para IL6Ra y/o IL6Rp; y/o
(c) las etapas (i) y (ii) se realizan en medios celulares que comprenden IL-15, por ejemplo, hetIL-15 (IL15/sIL-15Ra), opcionalmente en donde IL-15 aumenta la capacidad de la población de células para expandirse, por ejemplo, 10, 15, 20, o 25 días después, o donde IL-15 aumenta el porcentaje de células que expresan IL6Rp en la población de células.
19. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en donde el CAR comprende un dominio de unión al antígeno, un dominio transmembranario y un dominio de señalización intracelular, opcionalmente en donde:
(I) el dominio de unión al antígeno se une a un antígeno elegido de: CD19, CD20, CD22, BCMA, mesotelina, EGFRvIII, GD2, antígeno Tn, antígeno sTn, Tn-O-Glucopéptidos, sTn-O-Glucopéptidos, PSMA, CD97, TAG72, CD44v6, CEA, EPCAM, KIT, IL-13Ra2, leguman, GD3, CD171, IL-11 Ra, PSCA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, VEGFR2, LewisY, CD24, PDGFR-beta, SSEA-4, receptor de folato alfa, ERBB (por ejemplo, ERBB2), Her2/neu, MUC1, EGFR, NCAM, efrina B2, CAIX, LMP2, sLe, HMWMAA, o-acetil-GD2, receptor de folato beta, TEM1/CD248, TEM7R, FAP, legumaína, HPV E6 o E7, ML-IAP, CLDN6, TSHR, GPRC5D, ALK, ácido polisiálico, antígeno relacionado con Fos, elastasa de neutrófilos, TRP-2, CYP1B1, proteína de espermatozoide 17, gonadotropina coriónica humana beta, AFP, tiroglobulina, PLAC1, globoH, RAGE1, MN-CA IX, transcriptasa inversa de la telomerasa humana, carboxil esterasa intestinal, mut hsp 70-2, NA-17, NY-BR-1, UPK2, HAVCR1, ADRB3, PANX3, NY-ESO-1, GPR20, Ly6k, OR51E2, TARP, GFRa4, o un péptido de cualquiera de estos antígenos presentados en el MHC; y/o
(II) el dominio de unión al antígeno comprende una VH y una VL, en donde VH y VL están conectadas por un conector, opcionalmente en donde el conector comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63 o 104; y/o (III)
(a) el dominio transmembranario comprende un dominio transmembranario de una proteína elegida de la cadena alfa, beta o zeta del receptor de linfocitos T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 y CD154,
(b) el dominio transmembranario comprende un dominio transmembranario de CD8,
(c) el dominio transmembranario comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 85 % de identidad de secuencia con la misma, o
(d) la molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el dominio transmembranario, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 17 o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con la misma; y/o (IV) el dominio de unión al antígeno está conectado al dominio transmembranario mediante una región bisagra, opcionalmente en donde:
(a) la región bisagra comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 3 o 4, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 85 % de identidad de secuencia con la misma, o
(b) la molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica la región bisagra, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 13, 14 o 15 o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con la misma; y/o
(V) el dominio de señalización intracelular comprende un dominio de señalización primario, opcionalmente en donde el dominio de señalización primario comprende un dominio de señalización funcional derivado de CD3 zeta, TCR zeta, FcR gamma, FcR beta, c D3 gamma, Cd 3 delta, CD3 épsilon, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278 (ICOS), FceRI, DAP10, DAP12 o CD66d, opcionalmente en donde:
(a) el dominio de señalización primario comprende un dominio de señalización funcional derivado de CD3 zeta, (b) el dominio de señalización primario comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o 10, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 85 % de identidad de secuencia con la misma, o (c) la molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el dominio de señalización primario, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 20 o 21 o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con la misma; y/o
(VI) el dominio de señalización intracelular comprende un dominio de señalización coestimulador, opcionalmente en donde el dominio de señalización coestimulador comprende un dominio de señalización funcional derivado de una molécula de MHC de clase I, una proteína receptora de TNF, una proteína tipo inmunoglobulina, un receptor de citocinas, una integrina, una molécula de activación linfocítica de señalización (proteína SLAM), un receptor de células NK activador, BTLA, un receptor de ligando Toll, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, 4-1BB (CD137), B7-H3, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gamma, IL7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (táctil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, CD28-OX40, CD28-4-1BB, o un ligando que se une específicamente con CD83, opcionalmente en donde:
(a) el dominio de señalización coestimulador comprende un dominio de señalización funcional derivado de 4-1BB, (b) el dominio de señalización coestimulador comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente un 85 % de identidad de secuencia con la misma, o (c) la molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el dominio de señalización coestimulador, en donde la secuencia de ácido nucleico comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 18, o una secuencia de ácido nucleico que tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con la misma; y/o (Vil) el dominio de señalización intracelular comprende un dominio de señalización funcional derivado de 4-1BB y un dominio de señalización funcional derivado de CD3 zeta, opcionalmente en donde el dominio de señalización intracelular comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 (o una secuencia de aminoácidos que tenga al menos aproximadamente un 85 % de identidad de secuencia con la misma) y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o 10 (o una secuencia de aminoácidos que tenga al menos aproximadamente un 85% de identidad de secuencia con la misma), opcionalmente en donde el dominio de señalización intracelular comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 y la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9 o 10; y/o
(Vlll) el CAR comprende además una secuencia conductora que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
20. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-19, en donde el CAR comprende un dominio de unión al antígeno, un dominio transmembranario y un dominio de señalización intracelular, y en donde:
(a) el dominio de unión al antígeno se une a BCMA y comprende:
(i) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 44, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 45, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 46, 68 o 76, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 54, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 55 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 56;
(ii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 48, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 46, 68 o 76, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 57, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 58 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 59;
(iii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 50, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 51, 69 o 77, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 60, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 58 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 56;
(iv) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 86, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 87, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 88, una secuencia de aminoácidos de LCDR1
de SEQ ID NO: 95, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 96 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 97;
(v) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 89, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 88, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 98, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 99 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 100;
(vi) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 90, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 91, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 92, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 101, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 99 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 97;
(vii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 86, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 109, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 88, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 95, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 114 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 97 o 115;
(viii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 110, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 88, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 98, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 116 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 100 o 117;
(ix) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 90, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 111, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 92, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 101, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 116 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 97 o 115;
(x) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 137, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 138, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 139, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 147, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 148 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 149;
(xi) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 140, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 141, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 139, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 150, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 151 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 152;
(xii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 142, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 143, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 144, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 153, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 151 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 149;
(xiii) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 160, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 161, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 162, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 147, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 170 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 171;
(xiv) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 163, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 164, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 162, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 150, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 151 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 172;
(xv) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 165, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 166, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 167, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 153, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 151 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 171;
(xvi) una secuencia de aminoácidos VH y VL de, respectivamente, SEQ ID NO: 52 y 61, SEQ ID NO: 70 y 61, SEQ ID NO: 78 y 61, SEQ ID NO: 93 y 102, SEQ ID NO: 112 y 118, SEQ ID NO: 112 y 124, SEQ ID NO: 145 y 154, o SEQ ID NO: 168 y 173; o
(xvii) una secuencia de aminoácidos de scFv de SEQ ID NO: 64, 72, 80, 105, 120, 126, 156 o 175;
(b) el dominio de unión al antígeno se une a CD19 y comprende:
(i) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 295, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 296 o 304, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 297, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 298, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 299 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 300; o
(ii) la secuencia de aminoácidos de scFv de SEQ ID NO: 293 o 303; o
(c) el dominio de unión al antígeno se une a CD22 y comprende:
(i) una secuencia de aminoácidos de HCDR1 de SEQ ID NO: 288 o 289, una secuencia de aminoácidos de HCDR2 de SEQ ID NO: 290, una secuencia de aminoácidos de HCDR3 de SEQ ID NO: 291, una secuencia de aminoácidos de LCDR1 de SEQ ID NO: 95, una secuencia de aminoácidos de LCDR2 de SEQ ID NO: 96 y una secuencia de aminoácidos de LCDR3 de SEQ ID NO: 97;
(ii) una secuencia de aminoácidos VH de SEQ ID NO: 286 y una secuencia de aminoácidos VL de SEQ ID NO: 287; o
(iii) una secuencia de aminoácidos de scFv de SEQ ID NO: 285.
21. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, en donde el CAR comprende un dominio de unión al antígeno, un dominio transmembranario y un dominio de señalización intracelular, en donde el dominio de unión al antígeno se une a CD19 y comprende el conjunto de CDR:
a) HCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:295;
b) HCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:296;
c) HCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:297;
d) LCDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:298;
e) LCDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO; 299; y
f) LCDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:300.
22. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en donde el CAR comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66, 74, 82, 107, 122, 128, 158, 177, 257, 292, 294, 301 o 306.
23. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en donde la molécula de ácido nucleico que codifica el CAR comprende la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 302.
24. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-23, en donde el método comprende además formular las células recogidas en una composición farmacéutica, opcionalmente en combinación con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente o fisiológicamente aceptables.
ES19779634T 2018-08-31 2019-08-30 Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells Active ES3042082T3 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862726155P 2018-08-31 2018-08-31
US201862773679P 2018-11-30 2018-11-30
US201962858482P 2019-06-07 2019-06-07
PCT/US2019/049127 WO2020047452A2 (en) 2018-08-31 2019-08-30 Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES3042082T3 true ES3042082T3 (en) 2025-11-18

Family

ID=68084936

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES19779634T Active ES3042082T3 (en) 2018-08-31 2019-08-30 Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells

Country Status (24)

Country Link
US (1) US20220364055A1 (es)
EP (2) EP4635978A2 (es)
JP (2) JP2021534783A (es)
KR (1) KR20210055046A (es)
CN (1) CN112639083A (es)
AU (1) AU2019331496B2 (es)
BR (1) BR112021003305A2 (es)
CA (1) CA3109959A1 (es)
CL (1) CL2021000479A1 (es)
DK (1) DK3844267T3 (es)
ES (1) ES3042082T3 (es)
FI (1) FI3844267T3 (es)
HR (1) HRP20251135T1 (es)
HU (1) HUE072765T2 (es)
IL (1) IL281059A (es)
LT (1) LT3844267T (es)
MX (1) MX2021002393A (es)
PH (1) PH12021550419A1 (es)
PL (1) PL3844267T3 (es)
PT (1) PT3844267T (es)
SG (1) SG11202101825QA (es)
SI (1) SI3844267T1 (es)
TW (2) TW202538050A (es)
WO (1) WO2020047452A2 (es)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6647868B2 (ja) 2013-02-20 2020-02-14 ノバルティス アーゲー ヒト化抗ＥＧＦＲｖＩＩＩキメラ抗原受容体を用いたがんの処置
WO2014145252A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Milone Michael C Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
WO2015112626A1 (en) 2014-01-21 2015-07-30 June Carl H Enhanced antigen presenting ability of car t cells by co-introduction of costimulatory molecules
BR112017001183A2 (pt) 2014-07-21 2017-11-28 Novartis Ag tratamento de câncer usando receptor de antígeno quimérico anti-bcma humanizado
JP6961490B2 (ja) 2015-04-08 2021-11-05 ノバルティス アーゲー Ｃｄ２０療法、ｃｄ２２療法、およびｃｄ１９キメラ抗原受容体（ｃａｒ）発現細胞との併用療法
AU2016249005B2 (en) 2015-04-17 2022-06-16 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
CA2992551A1 (en) 2015-07-21 2017-01-26 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
WO2017040930A2 (en) 2015-09-03 2017-03-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Biomarkers predictive of cytokine release syndrome
BR112019006781A2 (pt) 2016-10-07 2019-07-30 Novartis Ag receptores de antígeno quiméricos para o tratamento de câncer
AU2018351050B2 (en) 2017-10-18 2025-09-18 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
TWI890660B (zh) 2018-06-13 2025-07-21 瑞士商諾華公司 Bcma 嵌合抗原受體及其用途
CR20210155A (es) 2018-08-31 2021-05-10 Alector Llc Anticuerpos anti-cd33 y métodos para usarlos
AU2019372673A1 (en) 2018-11-01 2021-05-27 Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. Compositions and methods for T cell engineering
EP3773918A4 (en) 2019-03-05 2022-01-05 Nkarta, Inc. CD19 DIRECTED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND THEIR USES IN IMMUNOTHERAPY
US11840575B2 (en) 2019-05-07 2023-12-12 Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. Engineered immune cells targeting BCMA and their uses thereof
IL293215A (en) * 2019-11-26 2022-07-01 Novartis Ag Chimeric antigen receptors that bind bcma and cd19 and their uses
EP4065157A1 (en) 2019-11-26 2022-10-05 Novartis AG Cd19 and cd22 chimeric antigen receptors and uses thereof
EP4110376A2 (en) * 2020-02-27 2023-01-04 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
CN115397863A (zh) * 2020-04-01 2022-11-25 基因医疗免疫疗法有限责任公司 Cd3融合蛋白及其用途
CA3158133A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing cells
CN111944758B (zh) * 2020-07-08 2023-04-28 华东师范大学 一种增强t细胞对肿瘤细胞杀伤能力的方法、产品及应用
CN113416253B (zh) * 2021-05-24 2022-12-13 复旦大学 分离的抗原itpripl1结合蛋白及其用途
KR20230129485A (ko) * 2021-01-10 2023-09-08 카이트 파마 인코포레이티드 T 세포 요법
WO2022229853A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Novartis Ag Viral vector production system
CN117529551A (zh) * 2021-04-27 2024-02-06 贝勒医学院 表达嵌合抗原受体的病毒特异性免疫细胞
CN113527464B (zh) * 2021-07-19 2024-10-18 新景智源生物科技(苏州)有限公司 识别mboat2的tcr
CN115728483B (zh) * 2021-08-26 2025-09-02 湖南大学 Ubqln4检测和抑制剂在免疫治疗以及疗效评价中的应用
WO2023081894A2 (en) * 2021-11-08 2023-05-11 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Pre-effector car-t cell gene signatures
CN116178562A (zh) * 2021-11-29 2023-05-30 四川大学华西医院 基于efna1构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用
CN114578048B (zh) * 2021-12-22 2023-08-08 重庆医科大学附属儿童医院 一种t淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒
KR20230143764A (ko) * 2022-04-06 2023-10-13 주식회사 지씨셀 면역세포에 대한 표적 유전자 도입 방법
CN114752615B (zh) * 2022-04-21 2023-09-22 新乡医学院 过表达atp5if1基因的靶向cd19的car-t细胞及其应用
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
KR20250013199A (ko) * 2022-05-27 2025-01-31 카이트 파마 인코포레이티드 세포 요법 작제물의 비-바이러스 전달
CA3266372A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Novartis Ag TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISORDERS USING CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR THERAPY
EP4596684A1 (en) * 2022-09-26 2025-08-06 Regcell Co., Ltd. Induced regulatory t cells containing chimeric antigen receptor (car)
AU2023369684A1 (en) 2022-10-26 2025-04-17 Novartis Ag Lentiviral formulations
JP2026503536A (ja) * 2023-01-24 2026-01-29 エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ ディベロップメント 生着中の一過性のｓｔａｔ５ｂ活性化によって媒介されるリンパ球が充足している宿主におけるｔ細胞養子移入
CN116286828B (zh) * 2023-05-12 2023-08-18 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种寡聚核酸siRNA及其在制备用于预防和治疗肝癌的药物中的应用
WO2025011609A1 (zh) * 2023-07-11 2025-01-16 重庆精准生物技术有限公司 细胞治疗产品制备工艺及其应用
WO2025081193A1 (en) * 2023-10-13 2025-04-17 Northwestern University Antigen specific expansion of regulatory t cells
CN120041501A (zh) * 2023-11-10 2025-05-27 上海细胞治疗集团药物技术有限公司 一种表达嵌合抗原受体的细胞的制备方法
CN117603916B (zh) * 2023-11-17 2024-07-23 赛业（苏州）生物科技有限公司 一种基于全人源化抗体鼠的人b7-h3抗体及其制备方法和应用
CN117349764B (zh) * 2023-12-05 2024-02-27 河北三臧生物科技有限公司 一种干细胞诱导数据智能分析方法
CN120210284A (zh) * 2023-12-19 2025-06-27 上海细胞治疗集团股份有限公司 一种冻存细胞制备表达嵌合抗原受体的细胞的方法
WO2025191300A1 (en) 2024-03-12 2025-09-18 Novartis Ag Rapcabtagene autoleucel for use in treating systemic lupus erythematosus
CN118406718B (zh) * 2024-03-22 2025-06-06 山东大学 一种提高nk细胞功能的方法
CN120718955A (zh) * 2024-03-28 2025-09-30 上海细胞治疗集团药物技术有限公司 一种电穿孔制备嵌合抗原受体细胞的方法
US12595460B2 (en) 2024-04-05 2026-04-07 Applied Cells Inc. Method and apparatus for producing CAR T cells
WO2026069200A1 (en) 2024-09-25 2026-04-02 Novartis Ag Treatment of neuroimmune diseases using a population of cd19 car-expressing cells

Family Cites Families (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
EP0090505B1 (en) 1982-03-03 1990-08-08 Genentech, Inc. Human antithrombin iii, dna sequences therefor, expression vehicles and cloning vectors containing such sequences and cell cultures transformed thereby, a process for expressing human antithrombin iii, and pharmaceutical compositions comprising it
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
DK1621554T4 (da) 1992-08-21 2012-12-17 Univ Bruxelles Immunoglobuliner blottet for lette kæder
US5350674A (en) 1992-09-04 1994-09-27 Becton, Dickinson And Company Intrinsic factor - horse peroxidase conjugates and a method for increasing the stability thereof
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5786464C1 (en) 1994-09-19 2012-04-24 Gen Hospital Corp Overexpression of mammalian and viral proteins
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
AU731826B2 (en) 1996-02-28 2001-04-05 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Synthetic Multimerizing Agents
ES2308787T3 (es) 1996-08-16 2008-12-01 Schering Corporation Antigenos de superficie de celular de mamiferos; reactivos relacionados.
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
EP1958962A3 (en) 1997-06-12 2013-05-01 Novartis International Pharmaceutical Ltd. Artificial antibody polypeptides
JP2001520039A (ja) 1997-10-21 2001-10-30 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヒト腫瘍壊死因子レセプター様タンパク質、ｔｒ１１，ｔｒ１１ｓｖ１およびｔｒ１１ｓｖ２
AU2591599A (en) 1998-02-09 1999-08-23 Genentech Inc. Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
US20040040047A1 (en) 1998-03-30 2004-02-26 Spencer David M. Regulated apoptosis using chemically induced dimerization of apoptosis factors
WO2001003720A2 (en) 1999-07-12 2001-01-18 Genentech, Inc. Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
CN100447244C (zh) 1999-08-17 2008-12-31 比奥根艾迪克Ma公司 Baff受体(bcma),一种免疫调节剂
HK1047109A1 (zh) 1999-10-15 2003-02-07 University Of Massachusetts 作为指定基因干预工具的rna干预轨迹基因
US6326193B1 (en) 1999-11-05 2001-12-04 Cambria Biosciences, Llc Insect control agent
KR20030032922A (ko) 2000-02-24 2003-04-26 싸이트 테라피스 인코포레이티드 세포의 동시 자극 및 농축
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
AU2001275474A1 (en) 2000-06-12 2001-12-24 Akkadix Corporation Materials and methods for the control of nematodes
WO2002066516A2 (en) 2001-02-20 2002-08-29 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind both bcma and taci
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
PT1419179E (pt) 2001-08-10 2010-03-16 Univ Aberdeen Domínios de ligação de antigenes
US7745140B2 (en) 2002-01-03 2010-06-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of T-cells using an engineered multivalent signaling platform as a research tool
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
US7618632B2 (en) 2003-05-23 2009-11-17 Wyeth Method of treating or ameliorating an immune cell associated pathology using GITR ligand antibodies
KR20060041205A (ko) 2003-07-01 2006-05-11 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 양특이성 항체들의 다가 담체들
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
WO2005118788A2 (en) 2004-05-27 2005-12-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel artificial antigen presenting cells and uses therefor
US20060002932A1 (en) 2004-06-04 2006-01-05 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
EP1786918A4 (en) 2004-07-17 2009-02-11 Imclone Systems Inc NEW BISPECIFIC ANTIBODY TETRAVALENT
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
NZ612578A (en) 2005-08-19 2014-11-28 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
US8591886B2 (en) 2007-07-12 2013-11-26 Gitr, Inc. Combination therapies employing GITR binding molecules
NZ590667A (en) 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
CN102149820B (zh) 2008-09-12 2014-07-23 国立大学法人三重大学 能够表达外源gitr配体的细胞
MX341884B (es) 2009-03-10 2016-09-07 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-antigeno de maduracion de celulas b (bcma).
KR101790802B1 (ko) 2009-09-03 2017-10-27 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-ｇｉｔｒ 항체
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
TR201904484T4 (tr) 2009-11-03 2019-05-21 Hope City Transdüse T hücre seçimine yönelik kesik epiderimal büyüme faktörü reseptörü (EGFRt).
CA2785907A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Ron binding constructs and methods of use thereof
US9089520B2 (en) 2010-05-21 2015-07-28 Baylor College Of Medicine Methods for inducing selective apoptosis
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3974453A3 (en) 2010-11-16 2022-08-03 Amgen Inc. Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CA2832540C (en) 2011-04-08 2020-09-15 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-epidermal growth factor receptor variant iii chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer
US20130101599A1 (en) 2011-04-21 2013-04-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bcma-based stratification and therapy for multiple myeloma patients
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
KR101972446B1 (ko) 2011-05-27 2019-04-25 글락소 그룹 리미티드 Ｂｃｍａ（ｃｄ２６９／ｔｎｆｒｓｆ１７）­결합 단백질
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
CA3018046A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
CA3285826A1 (en) 2012-02-22 2026-03-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for generating a persisting population of t cells useful for the treatment of cancer
RU2766608C2 (ru) 2012-04-11 2022-03-15 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на антиген созревания b-клеток
JP6509724B2 (ja) 2012-04-20 2019-05-08 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー Ｃｄ３結合ポリペプチド
EP2711418B1 (en) 2012-09-25 2017-08-23 Miltenyi Biotec GmbH Method for polyclonal stimulation of T cells by flexible nanomatrices
WO2014055442A2 (en) 2012-10-01 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for targeting stromal cells for the treatment of cancer
WO2014055657A1 (en) 2012-10-05 2014-04-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
US20150359853A1 (en) 2012-10-24 2015-12-17 Admune Therapeutics Llc Il-15r alpha forms, cells expressing il-15r alpha forms, and therapeutic uses of il-15r alpha and il-15/il-15r alpha complexes
WO2014068079A1 (en) 2012-11-01 2014-05-08 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin An antibody that binds cd269 (bcma) suitable for use in the treatment of plasma cell diseases such as multiple myeloma and autoimmune diseases
US9243058B2 (en) 2012-12-07 2016-01-26 Amgen, Inc. BCMA antigen binding proteins
WO2014122143A1 (en) 2013-02-05 2014-08-14 Engmab Ag Method for the selection of antibodies against bcma
DK2956175T3 (da) 2013-02-15 2017-11-27 Univ California Kimærisk antigenreceptor og fremgangsmåder til anvendelse deraf
JP6647868B2 (ja) 2013-02-20 2020-02-14 ノバルティス アーゲー ヒト化抗ＥＧＦＲｖＩＩＩキメラ抗原受容体を用いたがんの処置
US9573988B2 (en) 2013-02-20 2017-02-21 Novartis Ag Effective targeting of primary human leukemia using anti-CD123 chimeric antigen receptor engineered T cells
AU2014218667A1 (en) 2013-02-22 2015-10-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compounds, compositions, methods, and kits relating to telomere extension
US9434935B2 (en) 2013-03-10 2016-09-06 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Modified caspase polypeptides and uses thereof
CA2905352A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for controlling t cell proliferation
AR095374A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Amgen Res Munich Gmbh Moléculas de unión para bcma y cd3
WO2014145252A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Milone Michael C Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
WO2015172800A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 Numab Ag Novel multispecific molecules and novel treatment methods based on such multispecific molecules
CA2913052A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
ES2791598T3 (es) 2013-06-05 2020-11-05 Bellicum Pharmaceuticals Inc Métodos para inducir apoptosis parcial utilizando polipéptidos de caspasa
ES2918501T3 (es) 2013-12-19 2022-07-18 Novartis Ag Receptores de antígenos quiméricos de mesotelina humana y usos de los mismos
EP3087101B1 (en) 2013-12-20 2024-06-05 Novartis AG Regulatable chimeric antigen receptor
AU2015214145A1 (en) 2014-02-04 2016-08-25 Kite Pharma. Inc. Methods for producing autologous T cells useful to treat B cell malignancies and other cancers and compositions thereof
US20170335281A1 (en) 2014-03-15 2017-11-23 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
AU2015244039B2 (en) 2014-04-07 2021-10-21 Novartis Ag Treatment of cancer using anti-CD19 chimeric antigen receptor
EP3131927B8 (en) 2014-04-14 2020-12-23 Cellectis Bcma (cd269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
PL3134432T3 (pl) 2014-04-25 2020-10-19 Bluebird Bio, Inc. Promotor mnd chimeryczne receptory antygenowe
HUE049514T2 (hu) 2014-04-25 2020-09-28 Bluebird Bio Inc Javított eljárások adoptív sejtterápiák kialakítására
KR102526945B1 (ko) 2014-04-30 2023-04-27 막스-델부뤽-센트럼 퓌어 몰레쿨라레 메디친 인 데어 헬름홀츠-게마인샤프트 Ｃｄ269에 대한 인간화 항체
SI3151672T1 (sl) 2014-06-06 2021-03-31 Bluebird Bio, Inc. Izboljšani T-celični sestavki
SG10201913782UA (en) 2014-07-21 2020-03-30 Novartis Ag Treatment of cancer using a cll-1 chimeric antigen receptor
BR112017001183A2 (pt) 2014-07-21 2017-11-28 Novartis Ag tratamento de câncer usando receptor de antígeno quimérico anti-bcma humanizado
TWI719942B (zh) 2014-07-21 2021-03-01 瑞士商諾華公司 使用ｃｄ３３嵌合抗原受體治療癌症
ES2878449T3 (es) 2014-07-24 2021-11-18 2Seventy Bio Inc Receptores antigénicos quiméricos de BCMA
EP2982692A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
MX2017002205A (es) 2014-08-19 2017-08-21 Novartis Ag Receptor quimerico de antigeno (car) anti-cd123 para uso en el tratamiento de cancer.
EP3023437A1 (en) 2014-11-20 2016-05-25 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
EP3029068A1 (en) 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
SI3226897T1 (sl) 2014-12-05 2021-08-31 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Protitelesa, ki ciljajo na B-celični maturacijski antigen, in postopki uporabe
MY191537A (en) 2014-12-05 2022-06-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof
HRP20191873T1 (hr) 2014-12-12 2020-01-24 Bluebird Bio, Inc. Kimerni antigenski receptori
RU2021118125A (ru) 2014-12-29 2022-04-06 Новартис Аг Способы получения экспрессирующих химерный антигенный рецептор клеток
EP3256492A4 (en) 2015-02-09 2018-07-11 University of Florida Research Foundation, Inc. Bi-specific chimeric antigen receptor and uses thereof
WO2016154055A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Bluebird Bio, Inc. Vector formulations
JP6961490B2 (ja) 2015-04-08 2021-11-05 ノバルティス アーゲー Ｃｄ２０療法、ｃｄ２２療法、およびｃｄ１９キメラ抗原受容体（ｃａｒ）発現細胞との併用療法
US10294304B2 (en) 2015-04-13 2019-05-21 Pfizer Inc. Chimeric antigen receptors targeting B-cell maturation antigen
TWI703159B (zh) 2015-04-13 2020-09-01 美商輝瑞股份有限公司 Bcma特異性治療性抗體及其用途
US11655452B2 (en) 2015-06-25 2023-05-23 Icell Gene Therapeutics Inc. Chimeric antigen receptors (CARs), compositions and methods of use thereof
US9914777B2 (en) 2015-07-10 2018-03-13 Merus N.V. Human CD3 binding antibody
EP3322735A4 (en) 2015-07-15 2019-03-13 Zymeworks Inc. ACTIVE CONJUGATED BIS-SPECIFIC ANTIGEN-BONDING CONSTRUCTS
HK1255161A1 (zh) 2015-07-15 2019-08-09 Juno Therapeutics, Inc. 用於过继性细胞治疗的工程细胞
SI3331910T1 (sl) 2015-08-03 2020-07-31 Engmab Sarl Monoklonska protitelesa proti humani antigen dozorevanja limfocitov B (BCMA)
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
MX2018002043A (es) 2015-08-17 2018-07-06 Janssen Pharmaceutica Nv ANTICUERPOS ANTI-BCMA, MOLí‰CULAS DE UNIí“N A ANTíGENOS BIESPECíFICAS QUE SE UNEN A BCMA Y CD3, Y USOS DE ESTOS.
AU2016341529B2 (en) * 2015-10-22 2023-03-30 Juno Therapeutics Gmbh Methods for culturing cells and kits and apparatus for same
EP4643874A3 (en) 2015-12-22 2026-02-11 Novartis AG Mesothelin chimeric antigen receptor (car) and antibody against pd-l1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
CN109153975A (zh) 2015-12-28 2019-01-04 诺华股份有限公司 制备嵌合抗原受体表达细胞的方法
CU24649B1 (es) * 2016-03-19 2023-02-13 Exuma Biotech Corp Retrovirus recombinantes incompetentes de replicación para la transducción de linfocitos y expansión regulada de los mismos
BR112019006781A2 (pt) * 2016-10-07 2019-07-30 Novartis Ag receptores de antígeno quiméricos para o tratamento de câncer
KR20190098747A (ko) * 2016-12-05 2019-08-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 치료법을 위한 조작된 세포의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020047452A2 (en) 2020-03-05
JP2021534783A (ja) 2021-12-16
CN112639083A (zh) 2021-04-09
TW202538050A (zh) 2025-10-01
WO2020047452A8 (en) 2020-11-19
WO2020047452A3 (en) 2020-04-09
EP4635978A2 (en) 2025-10-22
EP3844267B1 (en) 2025-06-25
LT3844267T (lt) 2025-10-10
SG11202101825QA (en) 2021-03-30
DK3844267T3 (da) 2025-09-22
AU2019331496B2 (en) 2026-03-19
CA3109959A1 (en) 2020-03-05
EP3844267A2 (en) 2021-07-07
KR20210055046A (ko) 2021-05-14
BR112021003305A2 (pt) 2021-05-25
PH12021550419A1 (en) 2021-09-27
TWI875709B (zh) 2025-03-11
FI3844267T3 (fi) 2025-09-25
HUE072765T2 (hu) 2025-12-28
IL281059A (en) 2021-04-29
JP2025063046A (ja) 2025-04-15
SI3844267T1 (sl) 2025-10-30
PT3844267T (pt) 2025-09-30
PL3844267T3 (pl) 2025-12-22
TW202030323A (zh) 2020-08-16
MX2021002393A (es) 2021-07-15
US20220364055A1 (en) 2022-11-17
HRP20251135T1 (hr) 2025-11-21
AU2019331496A1 (en) 2021-03-18
CL2021000479A1 (es) 2021-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES3042082T3 (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
US20260034195A1 (en) Chimeric antigen receptors and uses thereof
US20230256017A1 (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
BR112020007710A2 (pt) métodos para produzir células que expressam receptor de antígeno quimérico
KR20250067174A (ko) 키메라 항원 수용체 요법을 사용한 자가면역 장애의 치료
US20250000973A1 (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
RU2841244C2 (ru) Химерные антигенные рецепторы и пути их применения
RU2822196C2 (ru) Способы получения клеток, экспрессирующих химерный антигенный рецептор
HK40048881B (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
HK40048881A (en) Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells