ES3048174T3 - Combination therapy with acetyl-leucine and miglustat for treating a lysosomal storage disease - Google Patents

Abstract

La presente divulgación proporciona métodos para tratar trastornos de almacenamiento lisosomal (LSD) en un sujeto que lo necesita mediante la administración de una combinación de acetilleucina y miglustat al sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento con miglustat. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Terapia de combinación con acetil-leucina y miglustat para tratar una enfermedad de almacenamiento lisosómico

[0004] Antecedentes de la invención

[0006] Campo de la invención

[0008] La presente divulgación proporciona una combinación de acetil-leucina y miglustat para tratar trastornos de almacenamiento lisosómico (LSD) en un sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat.

[0010] Antecedentes

[0012] Los trastornos de almacenamiento lisosómico (LSD) son un grupo de enfermedades metabólicas hereditarias causadas por defectos en la homeostasis lisosómica. Los LSD abarcan más de 70 enfermedades, con una frecuencia clínica colectiva de 1:5000 nacidos vivos. Estas enfermedades pueden clasificarse en dos grupos principales: trastornos de almacenamiento primarios que resultan de una deficiencia directa en las vías de degradación (típicamente trastornos de deficiencia de enzimas lisosómicas) y trastornos de almacenamiento secundarios que son causados por un mal funcionamiento de las proteínas lisosómicas aguas abajo o procedimientos que afectan al lisosoma (por ejemplo, defectos en las vías de tráfico).

[0014] La patología de los LSD afecta a muchos de los sistemas del cuerpo, pero más comúnmente al sistema nervioso. La neurodegeneración progresiva que da como resultado la discapacidad física y deterioro mental son síntomas comunes. Tales trastornos son generalmente severamente progresivos e incesantes. Tienden a presentarse en los primeros años de vida y la progresión severa resulta en hospitalizaciones frecuentes. Si no se trata, los pacientes a menudo mueren a mediados de la adolescencia. También se han descrito pacientes de inicio adulto.

[0015] Los enfoques terapéuticos actuales para tratar los LSD son limitados. Miglustat se considera la terapia de primera línea para tratar la enfermedad de Niemann-Pick tipo C (NPC), Patterson et al., Lancet Neurol 6:765-772 (2007); Hammond et al., Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids 1864(8):1109-1123 (2019); Platt: Nat Rev Drug Discov; 17(2): 133-150 (2018), pero este fármaco causa pérdida de peso no deseada y trastornos gastrointestinales en los sujetos de tratamiento. Champion et al., J Inherit Metab Dis 33 Suppl 3:S379-83 (2010). La acetil-DL-leucina también puede usarse para tratar NPC como un agente único, Bremova-Ertl et al., Eur J Neurol. Suppl 1:1-1228. vol. 27, (2020), y se ha administrado como terapia complementaria en sujetos NPC que reciben miglustat como terapia de primera línea. Bremova et al., Neurology 85:1368-1375 (2015); Cortina-Borja et al., Orphanet Journal of Rare Diseases 13:143 (2018); documento WO 2018/029657. Estos estudios complementarios no incluyeron sujetos NPC que no han recibido tratamiento previo con miglustat y no se diseñaron para medir los efectos terapéuticos combinados de acetil-DL-leucina y miglustat. Existe la necesidad de tratamientos mejorados de los LSD con mayor eficacia y un perfil de seguridad mejorado para la terapia de primera línea.

[0017] Breve resumen de la invención

[0019] El objeto de la invención es tal como se define en las reivindicaciones adjuntas.

[0021] En todos los casos, las divulgaciones relacionadas con métodos de tratamiento que comprenden administrar acetilleucina y miglustat deben entenderse como reivindicaciones de producto de propósito limitado, es decir, acetilleucina y miglustat para su uso en tales métodos de tratamiento.

[0023] El solicitante ha descubierto inesperadamente que la acetil-leucina produce sinergia con miglustat para tratar NPC, por ejemplo, progresión lenta de la enfermedad. Además, sin desear restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la combinación de acetil-leucina y miglustat disminuirá la toxicidad, por ejemplo, pérdida de peso y/o supresión del apetito, típicamente asociada con la administración de miglustat.

[0025] En un aspecto, la presente divulgación proporciona acetil-leucina en combinación con miglustat para su uso en el tratamiento de un LSD en un sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat.

[0027] En otro aspecto, la presente divulgación proporciona un método para tratar un LSD en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar una combinación de (i) una cantidad terapéuticamente eficaz de acetilleucina; y (ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de miglustat, al sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat.

[0029] En otro aspecto, la presente divulgación proporciona la combinación de acetil-leucina y miglustat para la terapia de primera línea para tratar un LSD.

[0031] En otro aspecto, la presente divulgación proporciona un kit que comprende acetil-leucina y miglustat para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad de almacenamiento lisosómico en un sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat.

[0033] Debe entenderse que tanto el sumario anterior como la siguiente descripción detallada son únicamente a modo de ejemplo y explicación y no son restrictivas de la invención, tal como se reivindica.

[0035] Descripción detallada de los dibujos

[0037] La Figura 1 es un gráfico lineal que muestra el desplazamiento de coordenadas Y de fase tardía de cada pie consecutivo a partir de una trayectoria en línea recta (Media ± DE, n = 6) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+/+UT)y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL) (mínimo 5 animales, máximo 7 animales para cada grupo).

[0039] La Figura 2 es un gráfico de dispersión en columna que muestra los SEM de fase tardía de los cambios de coordenadas Y (media ± DE, n = 6;p<0,0001, ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+/+UT)y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL).

[0041] La Figura 3 es un gráfico de líneas que muestra el desplazamiento de coordenadas Y de fase temprana de cada pie consecutivo a partir de una trayectoria en línea recta (media ± DE, n = 6)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y ratones NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/- ALL) y ADL(Npc1-/-ADL).

[0043] La Figura 4 es un gráfico de dispersión en columna que muestra los SEM de fase temprana de los cambios de coordenadas Y (media ± DE, n = 6;p<0,0001, ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1++UT)y ratones NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL).

[0045] La Figura 5 es un gráfico de dispersión en columna que muestra el ciclo de trabajo de fase temprana con mediciones del ciclo de trabajo delantero y trasero (media ± DE, * *p<0,032, * * *p<0,0005, ** **p <0,0001(ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y(Npc1-/-ADL) (mínimo 5 animales, máximo 7 animales para cada grupo).

[0047] La Figura 6 es un gráfico de dispersión en columna que muestra las mediciones medias de apoyo delantero y trasero de fase temprana (media ± DE,*p<0,026,**p<0,003 (ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/- ALL) y ADL(Npc1-/-ADL) (mínimo 5 animales, máximo 7 animales para cada grupo).

[0049] La Figura 7 es un gráfico de dispersión en columna que muestra las mediciones del rendimiento motor en fase temprana (media ± DE,* * p<0,009,** * *p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL) (mínimo 5 animales, máximo 7 animales para cada grupo).

[0051] La Figura 8 es un gráfico lineal que muestra los porcentajes de esperanza de vida (media ± DE,*p<0,046 (prueba de Gehan-Breslow-Wilcoxon) n = 6) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL).

[0053] La Figura 9 es un gráfico de dispersión en columna que muestra los perfiles de glicoesfingolípidos (GSL) en el cerebro (media ± DE,*p<0,024, **p<0,0019, ***p<0,0005, ****p<0,0001 (ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0055] La Figura 10A es un gráfico de dispersión de columnas que muestra los niveles de esfingosina en el cerebro (media ± DE,****p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0057] La Figura 10B es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles de esfinganina en el cerebro (media ± DE,*p<0,046, ** **p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0059] La Figura 11 es un gráfico de dispersión en columna que muestra los perfiles de GSL en el cerebelo (media ± DE,*p<0,026, **p<0,005, ***p<0,0009, ****p<0,0001 (ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+I+UT) y NPC1(Npc1-1-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-1-ADLL), ALL(Npc1-1-ALL), ADL(Npc1-1-ADL) y miglustat(Npc1-1-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0061] La Figura 12A es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles de esfingosina en el cerebelo (media ± DE,*p<0,046 ** **p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0063] La Figura 12b es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles de esfinganina en el cerebro sin el cerebelo (media ± DE, * *p<0,075, ** **p<0,0001(ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+AUT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALLNpc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0065] La Figura 13 es un gráfico de dispersión en columna que muestra la densidad de células de purkinje (media ± DE,*p<0,011, **p<0,028 (ANOVA unidireccional)) para ratones tratados con NPC1 no tratados(Npc1-/-UT) y ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), y ADL(Npc1-/-ADL) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos con AL n = 5 animales por grupo.

[0067] La Figura 14 es un gráfico de dispersión en columna que muestra la densidad celular de CD68 (media ± DE,*p<0,046, ***p<0,0009 (ANOVA unidireccional)) para ratones tratados con NPC1 no tratados(Npc1UT) y ADLL(Npc1-/-A d Ll ), ALL(Npc1-/-ALL), y ADL(Npc1-/-ADL) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos con AL n = 5 animales por grupo.

[0069] La Figura 15A es un gráfico de dispersión en columna que muestra el perfil de GSL en el hígado (media ± DE*p<0,038, * * *p<0,0002, ** **p<0,0001 (ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0071] La Figura 15B es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles de esfingosina en el hígado (media ± DE.*p<0,0393, ** **p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1 (Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0073] La Figura 15C es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles de esfinganina en el hígado (media ± DE,*p<0,04, ** **p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+'+UT) y NPC1 (Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustat(Npc1-/-MIG) a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0075] La Figura 15D es un gráfico de dispersión en columna que muestra el colesterol hepático (media ± DE,*p<0,034, **p =0,0091, ** **p<0,0001 (ANOVA unidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) y miglustatNpc1-/-MIG) t a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos de AL n = 5 animales por grupo, y para miglustat (control positivo) n = 2 o n = 1.

[0077] La Figura 16 es un gráfico de barras que muestra el verde lisotracker con respecto aNpc1+/+con tratamiento con AL 1 mM de 24 y 72 h (media ± DE,*p<0,018,**p<0,005, ****p<0,0001 (ANOVA de 2 vías)) en ratones a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos con AL n = 5 animales por grupo.

[0079] La Figura 17 es un gráfico de barras que muestra los niveles de esfingosina, GSL total y colesterol libre (72 h) con respecto aNpc1+/+con 72 h de tratamiento con AL 1 mM (media ± DE,*p<0,027,**p<0,0044, ***p <0,001***p<0,0001 (ANOVA bidireccional)) en ratones a los 59 días de edad. Para todos los tratamientos con AL n = 5 animales por grupo.

[0081] La Figura 18 es un gráfico lineal que muestra las curvas de supervivencia (media ± DE,*p= 0,0270,**p<0,0035,***p= 0,0007 (prueba de Gehan-Breslow-Wilcoxon)) y una tabla de análisis para ratones tratados con NPC1 no tratados(Npc1-/-UT), ADLL(Npc1-/-ADLL), miglustat(Npc1-/-MIG) y combinación(Npc1-/-miglustat & ADLL) con un mínimo de 5 animales para cada grupo.

[0083] La Figura 19 es un gráfico lineal que muestra las curvas de peso corporal a lo largo del tiempo (media ± DE) para ratones no tratados con NPC1(Npc1-/-UT), ADLL (Npc1-/-ADLL), miglustat(Npc1-/-MIG) y ratones tratados con combinación (Npc1-/-miglustat & ADLL) con un mínimo de 5 animales para cada grupo.

[0084] La Figura 20 es un gráfico de barras que muestra las mediciones del rendimiento motor a las 8, 10 y 12 semanas de edad (media ± DE,*p<0,043,**p<0,0036, ****p <0,0001 (ANOVA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1 (Npc1-/- UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL (Npc1-/- ADLL), Miglustat(Npc1-/-MIG) y (Npc1-/-ADL) mínimo 5 animales, máximo 5 animales para cada grupo.

[0085] La Figura 21 es un gráfico de dispersión de columnas que muestra las mediciones del ciclo de trabajo de las patas delanteras y traseras a las 10 semanas de edad (media ± DE, *p = 0,011, **p <0,0053, ***p 0,0002 (<a>N<o>VA bidireccional)) para ratones de tipo natural no tratados(Npc1+/+UT)y NPC1 NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con miglustat(Npc1-/-MIG) y combinación(Npc1-/-miglustat y ADLL) con un mínimo de 5 animales para cada grupo.

[0086] La Figura 22 es un gráfico de dispersión en columna que muestra las mediciones medias de apoyo en las patas delanteras y traseras a las 10 semanas de edad, (media ± DE,*p<0,033,**p<0,0016 (ANOVA bidireccional)) para ratones NPC1 no tratados de tipo natural (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con miglustat(Npc1-/-MIG) y combinación(Npc1-/-miglustat & ADLL) con un mínimo de 5 animales para cada grupo.

[0087] La Figura 23 es un gráfico lineal que muestra los datos clínicos de 13 pacientes adultos con NPC (para datos demográficos, véase el EJEMPLO 13 y Métodos generales) que muestran la progresión de la enfermedad (escala de gravedad clínica en el eje Y) a lo largo del tiempo (años, eje X) antes del inicio del tratamiento con ADLL (indicado por la línea vertical).

[0088] La Figura 24 es un gráfico lineal que muestra los cambios en la esperanza de vida ((%), media ± DE,*p= 0,0157 (prueba de Gehan-Breslow-Wilcoxon) n = 5) y una tabla de análisis en ratones tratados con Sandhoff no tratados(Hexb-/-UT) y ADLL(Hexb-/-ADLL).

[0089] La Figura 25 es un gráfico lineal que muestra la puntuación de cruce de barras (*p = 0,0343,**p= 0,0058, media ± DE, ANOVA bidireccional) en ratones tratados con Sandhoff sin tratar(Hexb-/-UT) y ADLL(Hexb-/-ADLL). La Figura 26 es un gráfico de barras que muestra el porcentaje de mejora en las puntuaciones clínicas en tres pacientes con gangliosidosis GM2 al inicio del estudio y después de un mes con medicación ADLL. La Escala de Evaluación y Calificación de la Ataxia (SARA) cambió en el 20,3 % y la Prueba de Caminata 8-M (8MWT) cambió en el 17,8 %. La función cognitiva, según lo evaluado por la Evaluación Cognitiva de Montreal (MoCA), cambió en el 42,0 %.

[0090] La Figura 27A es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles totales de GSL en el cerebro (media ± DE,*p<0,034, ***p =0,0004, (ANOVA bidireccional)) de ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) (5 animales por grupo) y miglustatNpc1-/-MIG) (1 o 2 animales por grupo) a los 59 días de edad.

[0091] La Figura 27B es una gráfica de dispersión en columna que muestra los niveles totales de GSL en el cerebelo (media ± DE, (ANOVA bidireccional)) de ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL) y ADL(Npc1-/-ADL) (5 animales por grupo) y miglustat (Npc1-/- MIG) (1 o 2 animales por grupo) a los 59 días de edad.

[0092] La Figura 27C es un gráfico de dispersión en columna que muestra los niveles totales de GSL en el hígado (media ± DE, (ANOVA bidireccional)) de ratones de tipo natural no tratados (Npc1+/+UT) y NPC1(Npc1-/-UT), y ratones NPC1 tratados con ADLL(Npc1-/-ADLL), ALL(Npc1-/-ALL), ADL(Npc1-/-ADL) (5 animales por grupo) y miglustat(Npc1-/-MIG) (1 o 2 animales por grupo) a los 59 días de edad.

[0093] Descripción detallada de la invención

[0094] En una realización, la presente divulgación proporciona acetil-leucina en combinación con miglustat para su uso en el tratamiento de una enfermedad de almacenamiento lisosómico (LSD) en un sujeto que lo necesita, en el que el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat

[0095] Definiciones

[0096] Tal como se usan en el presente documento, las formas en singular “un”, “una” y “el/la” incluyen la referencia en plural.

[0097] Tal como se usa en el presente documento, se debe entender generalmente que los términos "aproximadamente" y "alrededor de" abarcan ± el 20 % de una cantidad, frecuencia o valor especificado. Las cantidades numéricas proporcionadas en el presente documento son aproximadas a menos que se indique lo contrario, lo que significa que el término "alrededor de" o "aproximadamente" puede inferirse cuando no se indique expresamente.

[0099] Los términos “administrar”, “administración” o “que administra” tal como se usan en el presente documento se refieren a (1) proporcionar, administrar, dosificar y/o prescribir por un profesional de la salud o su agente autorizado o bajo su dirección, la combinación de acetil-leucina y miglustat, y (2) introducir, tomar o consumir por el propio sujeto o persona, acetil-leucina y miglustat. Cualquier referencia a acetil-leucina y miglustat incluye sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, incluso si no se indica expresamente.

[0101] Una "sal farmacéuticamente aceptable" tal como se denomina en el presente documento, es cualquier preparación de sal que es apropiada para su uso en una aplicación farmacéutica. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de amina, tales como N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, amoníaco, dietanolamina y otras hidroxialquilaminas, etilendiamina, N-metilglucamina, procaína, N-bencilfenetilamina, 1-para-clorobencil-2-pirrolidin-1' -ilmetilbencimidazol, dietilamina y otras alquilaminas, piperazina, tris(hidroximetil)aminometano y similares; sales de metales alcalinos, tales como litio, potasio, sodio y similares; sales de metales alcalinotérreos, tales como bario, calcio, magnesio y similares; sales de metales de transición, tales como zinc, aluminio y similares; otras sales de metales, tales como hidrogenofosfato de sodio, fosfato de disodio y similares; ácidos minerales, tales como clorhidratos, sulfatos y similares; y sales de ácidos orgánicos, tales como acetatos, lactatos, malatos, tartratos, citratos, ascorbatos, succinatos, butiratos, valeratos, fumaratos y similares.

[0103] La acetil-leucina y miglustat pueden formularse y administrarse a un sujeto de acuerdo con las enseñanzas conocidas en la técnica. Por ejemplo, la acetil-leucina y el miglustat pueden formularse como composiciones farmacéuticas separadas. Estas composiciones farmacéuticas pueden comprender el agente activo, es decir, acetil-leucina o miglustat, y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. La acetil-leucina y el miglustat también pueden formularse como una única composición farmacéutica que comprende tanto agentes activos como uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.

[0105] Las composiciones farmacéuticas que comprenden acetil-leucina y miglustat, ya sea por separado o juntas en una sola composición, pueden adoptar cualquiera de varias formas diferentes dependiendo de la manera en que se vayan a usar. Por tanto, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de un polvo, comprimido, cápsula, líquido, pomada, crema, gel, hidrogel, aerosol, pulverización, solución micelar, parche transdérmico, suspensión de liposomas, o cualquier otra forma adecuada que pueda administrarse a un sujeto que necesite tratamiento.

[0107] Un "portador farmacéuticamente aceptable", tal como se denomina en el presente documento, es cualquier compuesto conocido o combinación de compuestos conocidos, por ejemplo, excipientes, portadores, etc., que los expertos en la técnica conocen que son útiles en la formulación de composiciones farmacéuticas. Se apreciará que el portador de la composición farmacéutica debe ser uno que sea tolerado por el sujeto al que se administra.

[0108] En una realización, el portador farmacéuticamente aceptable puede ser un sólido, y la composición puede estar en forma de un polvo o comprimido. Un portador sólido farmacéuticamente aceptable puede incluir, pero no se limita a, una o más sustancias que también pueden actuar como agentes aromatizantes, amortiguadores, lubricantes, estabilizantes, solubilizantes, agentes de suspensión, agentes humectantes, emulsionantes, colorantes, cargas, deslizantes, adyuvantes de compresión, aglutinantes inertes, edulcorantes, conservantes, colorantes, recubrimientos o agentes desintegrantes de comprimidos. El portador también puede ser un material de encapsulación. En los polvos, el portador puede ser un sólido finamente dividido que está mezclado con los agentes activos finamente divididos según la invención. En los comprimidos, el agente activo puede mezclarse con un portador que tenga las propiedades de compresión necesarias en proporciones adecuadas y compactarse en la forma y el tamaño deseados. Los polvos y comprimidos pueden contener, por ejemplo, hasta el 99 % de los agentes activos. Los vehículos sólidos adecuados incluyen, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, polivinilpirrolidina, ceras de bajo punto de fusión y resinas de intercambio iónico. En otra realización, el portador farmacéuticamente aceptable puede ser un gel y la composición puede estar en forma de una crema o similar.

[0110] El portador puede incluir, pero no se limita a, uno o más excipientes o diluyentes. Los ejemplos de tales excipientes son gelatina, goma arábiga, lactosa, celulosa microcristalina, almidón, glicolato de almidón de sodio, hidrogenofosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, dióxido de silicio coloidal y similares.

[0112] En otra realización, el portador farmacéuticamente aceptable puede ser un líquido. En una realización, la composición farmacéutica se presenta en forma de solución. Los portadores líquidos se utilizan en la preparación de soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires y composiciones presurizadas. La acetil-leucina y/o miglustat pueden disolverse o suspenderse en un portador líquido farmacéuticamente aceptable tal como agua, un disolvente orgánico, una mezcla de ambos o aceites o grasas farmacéuticamente aceptables. El portador líquido puede contener otros aditivos farmacéuticos adecuados tales como solubilizantes, emulsionantes, tampones, conservantes, edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes de suspensión, agentes espesantes, colores, reguladores de viscosidad, estabilizadores u osmo-reguladores. Los ejemplos adecuados de portadores líquidos para administración oral y parenteral incluyen agua (que contiene parcialmente aditivos como los anteriores, por ejemplo, derivados de celulosa, tales como solución de carboximetilcelulosa de sodio), alcoholes (incluyendo alcoholes monohídricos y alcoholes polihídricos, por ejemplo, glicoles) y sus derivados, y aceites (por ejemplo, aceite de coco fraccionado y aceite de cacahuete). Para la administración parenteral, el portador también puede ser un éster oleoso tal como oleato de etilo y miristato de isopropilo. Los portadores líquidos estériles son útiles en composiciones en forma líquida estériles para administración parenteral. El portador líquido para composiciones presurizadas puede ser un hidrocarburo halogenado u otro propelente farmacéuticamente aceptable.

[0114] Las composiciones farmacéuticas líquidas, que son soluciones o suspensiones estériles, pueden utilizarse, por ejemplo, mediante inyección intramuscular, intratecal, epidural, intraperitoneal, intravenosa y subcutánea. El agente activo puede prepararse como una composición sólida estéril que puede disolverse o suspenderse en el momento de la administración usando agua estéril, solución salina u otro medio inyectable estéril apropiado.

[0115] Las composiciones pueden administrarse por vía oral en forma de una solución o suspensión estéril que contiene otros solutos o agentes de suspensión (por ejemplo, suficiente solución salina o glucosa para hacer que la solución sea isotónica), sales biliares, goma arábiga, gelatina, monooleato de sorbitán, polisorbato 80 (ésteres de oleato de sorbitol y sus anhídridos copolimerizados con óxido de etileno) y similares. Las composiciones también pueden administrarse por vía oral en forma de composición líquida o sólida. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen formas sólidas, tales como píldoras, cápsulas, gránulos, comprimidos y polvos, y formas líquidas, tales como soluciones, jarabes, elixires y suspensiones. Las formas útiles para la administración parenteral incluyen soluciones, emulsiones y suspensiones estériles.

[0117] En una realización, la composición farmacéutica de acetil-leucina y miglustat es una forma de dosificación oral sólida, tal como un comprimido. En los comprimidos, el agente activo puede mezclarse con un vehículo, tal como un portador farmacéuticamente aceptable, que tiene las propiedades de compresión necesarias en proporciones adecuadas y compactarse en la forma y el tamaño deseados. Los comprimidos pueden contener hasta el 99 % en peso de los agentes activos.

[0119] Las composiciones farmacéuticas en forma farmacéutica oral sólida, tales como comprimidos, pueden prepararse mediante cualquier método conocido en la técnica de la farmacia. Las composiciones farmacéuticas generalmente se preparan mezclando el agente activo con portadores farmacéuticamente aceptables convencionales.

[0121] Un comprimido puede formularse tal como se conoce en la técnica. Tanganil®, por ejemplo, incluye almidón de trigo, almidón de maíz (maíz) pregelatinizado, carbonato de calcio y estearato de magnesio como excipientes. Pueden emplearse excipientes iguales o similares, por ejemplo, con la presente descripción.

[0123] La composición de cada comprimido de Tanganil® de 700 mg es de la siguiente manera: 500 mg de acetil-DL-leucina, 88 mg de almidón de trigo, 88 mg de almidón de maíz (maíz) pregelatinizado, 13 mg de carbonato de calcio y 11 mg de estearato de magnesio. Los mismos comprimidos, por ejemplo, pueden emplearse en los métodos de la presente divulgación.

[0125] Tal como se comentó anteriormente, la acetil-leucina y el miglustat pueden formularse y administrarse como una composición farmacéutica que adopta cualquier número de formas diferentes. Por ejemplo, la acetil-leucina puede formularse como una composición farmacéutica para facilitar su administración a través de la barrera hematoencefálica. Como ejemplo adicional, la acetil-leucina puede formularse como una composición farmacéutica para evitar la barrera hematoencefálica.

[0127] En una realización, la composición farmacéutica, por ejemplo, que comprende acetil-L-leucina, o sal de la misma, se formula para nanodistribución, por ejemplo, sistemas de portador de fármaco coloidal. Los ejemplos adecuados incluyen, pero no se limitan a, liposomas, nanopartículas (por ejemplo, nanopartículas poliméricas, lipídicas e inorgánicas), nanogeles, dendrímeros, micelas, nanoemulsiones, polimerosomas, exosomas y puntos cuánticos. Véase, por ejemplo, Patel et al., "Crossing the Blood-Brain Barrier: Recent Advances in Drug Delivery to the Brain," CNS Drugs 31:109-133 (2017); Kabanov et al., "New Technologies for Drug Delivery across the Blood Brain Barrier ", Curr Pharm Des., 10(12):1355-1363 (2004); Cheng et al., "Highly Stabilized Curcumin Nanoparticles Tested in an In Vitro Blood-Brain Barrier Model and in Alzheimer's Disease Tg2576 Mice ", The AAPS Journal, vol. 15, no. 2, pp. 324-336 (2013); Lahde et al. "Production of L-Leucine Nanoparticles under Various Conditions Using an Aerosol Flow Reactor Method ", Journal of Nanomaterials, vol. 2008, artículo ID 680897 (2008).

[0129] En una realización, la composición farmacéutica, por ejemplo, que comprende N-acetil-L-leucina, o una sal de la misma, se formula para la administración directa al sistema nervioso central (SNC), tal como mediante inyección o infusión. En la técnica se conocen formulaciones y métodos de administración directa al SNC.Véase, por ejemplo, lapatente estadounidense n.° 9.283.181. Los ejemplos de dicha administración incluyen, pero no se limitan a, administración intranasal, intraventricular, intratecal, intracraneal y a través de injerto de mucosa nasal. En una realización, la composición farmacéutica se administra mediante infusión intracerebroventricular.

[0131] En una realización, la composición farmacéutica se formula para (y se administra mediante) administración intranasal. Véanse, por ejemplo, Hanson et al., "Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease", BMC Neurosci. 9(Supl.

[0132] 3):S5 (2008). En una realización, la composición farmacéutica se formula para (y se administra mediante) administración a través de un injerto de mucosa nasal. En una realización, la composición farmacéutica se formula para (y se administra mediante) inyección o infusión intracerebroventricular. En otra realización, la composición farmacéutica se formula para (y se administra mediante) inyección o infusión intracisternal intratecal. En una realización, la composición farmacéutica se formula para (y se administra mediante) inyección o infusión lumbar intratecal.

[0134] Pueden usarse diversas técnicas que incluyen, de modo no taxativo, inyección a través de un agujero de trepanación o punción cisternal o lumbar o similares tal como se conoce en la técnica. Pueden usarse diversos dispositivos, ya sean internos (por ejemplo, implantados) o externos, para administración tal como se conoce en la técnica, tales como bombas, catéteres, depósitos, etc. En una realización, el intervalo de administración es una vez cada dos semanas.

[0136] "Enfermedad de almacenamiento lisosómico" o "LSD" se refiere a cualquier trastorno que implica disfunción o alteración en el sistema endosómico/lisosómico tardío y la acumulación de macromoléculas no digeridas o parcialmente digeridas. El LSD puede implicar un mayor almacenamiento de lípidos o no lípidos. Todos los LSD están dentro del alcance de la presente divulgación.

[0138] En una realización, el LSD se elige de cualquiera de enfermedad de almacenamiento de glucógeno, mucopolisacaridosis, mucolipidosis, oligosacaridosis, lipidosis, esfingolipidosis y enfermedades de transporte lisosómico.

[0140] La enfermedad de almacenamiento de glucógeno puede elegirse de enfermedad de Pompe de inicio infantil, enfermedad de Pompe de inicio tardío y enfermedad de Danon.

[0142] Las mucopolisacaridosis pueden elegirse de cualquiera de MPS IH, MPS I H-S, MPS IS, MPS IIA, MPS IIB, MPS IIIA-D, MPS IVA, MPS VI, MPS VII y MPS IX. En una realización, la mucopolisacaridosis es MPS III o MPS VII. En una realización, la mucopolisacaridosis es MPS IIIB.

[0144] Las mucolipidosis pueden elegirse de cualquiera de mucolipidosis I, mucolipidosis II, mucolipidosis III y mucolipidosis IV. En una realización la mucolipidosis es mucolipidosis II o mucolipidosis III.

[0146] Las oligosacaridosis pueden elegirse de cualquiera de beta-manosidosis, alfafucosidosis y aspartilglucosaminuria. En una realización, la oligosacaridosis es aspartilglucosaminuria.

[0148] Las lipidosis pueden elegirse de cualquiera de la enfermedad de Niemann-Pick tipo C, la enfermedad de Niemann-Pick tipo D, las lipofuscinosis ceroides neuronales (tipo I a X inclusive) y la enfermedad de Wolman. En una realización, la lipidosis es enfermedad de Niemann-Pick de tipo C.

[0150] Las esfingolipidosis pueden elegirse de cualquiera de las enfermedades de Niemann-Pick tipo A/B, enfermedad de Gaucher tipos I, II y III, enfermedad de Krabbe, enfermedad de Fabry, enfermedad de Schindler, gangliosidosis GM1, enfermedad de Morquio B, gangliosidosis GM2, leucodistrofia metacromática, enfermedad de Farber, deficiencia múltiple de sulfatasa, deficiencia de lipasa ácida lisosómico y galactosialidosis. En una realización, las esfingolipidosis se eligen de enfermedad de Niemann-Pick de tipo A, gangliosidosis GM1, enfermedad de Tay-Sachs, la variante AB de enfermedad de Tay-Sachs y enfermedad de Sandhoff.

[0152] Las enfermedades de transporte lisosómico pueden elegirse de cistinosis, picnodisostosis, enfermedad de almacenamiento de ácido siálico y enfermedad infantil de almacenamiento de ácido siálico libre.

[0154] El LSD puede ser un defecto de hidrolasa lisosómica primaria, un defecto de procesamiento postraduccional de enzimas lisosómicas, un defecto de tráfico para enzimas lisosómicas, un defecto en la protección de enzimas lisosómicas, un defecto en proteínas lisosómicas no enzimáticas solubles, un defecto de proteína transmembrana (no enzimática) o un defecto no clasificado.

[0156] En una realización, el LSD se elige de un defecto de hidrolasa lisosómica primaria. Los defectos primarios de la hidrolasa lisosómica incluyen, entre otros, la enfermedad de Tay-Sachs (defecto de la p-hexosaminidasa A), la enfermedad de Sandhoff (defecto de la p-hexosaminidasa A+B), la enfermedad de Fabry (defecto de la agalactosidasa A), la enfermedad de Krabbe (defecto de la p-galactosil ceramidasa), Niemann-Pick tipo A y B (defecto de la esfingomielinasa), leucodistrofia metacromática (defecto de la arilsulfatasa A), MPS IH (síndrome de Hurler; defecto de la a-iduronidasa), MPS IS (síndrome de Scheie; defecto de la a-iduronidasa), MPS IH-S (síndrome de Hurler-Scheie; defecto de la a-iduronidasa), MPS II (síndrome de Hunter; defecto de la iduronato sulfatasa), MPS IIIA (síndrome de Sanfilippo A; defecto de la heparán sulfamidasa defecto), MPS IIIB (síndrome de Sanfilippo B; defecto de la acetil a-glucosaminidasa), MPS IIIC (síndrome de Sanfilippo C; defecto de la acetil CoA: a-glucosaminida N-acetiltransferasa), MPS IIID (síndrome de Sanfilippo D; defecto de la N-acetil glucosamina-6-sulfatasa), MPS IV A (enfermedad de Morquio A; defecto de la acetil galactosamina-6-sulfatasa), MPS IVB (enfermedad de Morquio B; defecto de la p-galactosidasa), MPS V (redesignada MPS IS), MPS VI (síndrome de Maroteaux Lamy; defecto de la acetil galactosamina-4-sulfatasa (arilsulfatasa B)), MPS VII (síndrome de Sly; defecto de la p-glucuronidasa), MPS IX (defecto de la hialuronidasa), Wolman/éster de colesterol enfermedad de almacenamiento (WD; defecto de la lipasa ácida), enfermedad de Pompe (tipo II; defecto de la a-1,4-glucosidasa), aspartilglucosaminuria (defecto de la glucosilasparaginasa), fucosidosis (defecto de la afucosidasa), a-manosidosis (defecto de la a-manosidasa), p-manosidosis 5 (defecto de la p-manosidasa), enfermedad de Schindler (defecto de la N-acetilgalactosaminidasa), sialidosis/ML I (defecto de la aneuraminidasa), lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil (CLN1; defecto de la palmitoil proteína tioesterasa), lipofuscinosis neuronal ceroidea infantil tardía (CLN2; defecto de la carboxipeptidasa), gangliosidosis GM1 infantil temprana, gangliosidosis GM1 infantil tardía, gangliosidosis GM1 infantil adulta, enfermedad de Gaucher tipo 1 (no neuronopática), enfermedad de Gaucher tipo 2/3 (neuronopática), lipofuscinosis neuronal ceroide tipo 4 (CLN4; enfermedad de Kufs; NCL del adulto; deficiencia de palmotoil-proteína tioesterasa-1 (tipo A); deficiencia de catepsina F (tipo B)), lipofuscinosis neuronal ceroide tipo 10 (CLN10; deficiencia congénita de catepsina D), picnodisostosis (defecto de catepsina K), enfermedad de Pompe de inicio infantil, enfermedad de Pompe de inicio tardío, enfermedad de Farber (lipogranulomatosis de Farber; deficiencia de ceramidasa; dismucopolisacaridosis fibrocítica; lipogranulomatosis) y galactosialidosis (defecto de la proteína protectora catepsina A, defecto de PPCA). En una realización, el defecto de hidrolasa lisosómica primaria se elige de enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Sandhoff, tipo A de Niemann-Pick, tipo B de Niemann-Pick, lipofuscinosis neuronal ceroide, enfermedad de Gaucher, enfermedad de Fabry, enfermedad de Krabbe, gangliosidosis GM1, gangliosidosis GM2, leucodistrofia metacromática y enfermedad de Farber. En una realización, el defecto de hidrolasa lisosómica primaria se elige de enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Sandhoff, tipo A de Niemann-Pick, tipo B de Niemann-Pick y gangliosidosis GM1.

[0158] En una realización, el LSD es NPC.

[0160] En una realización, el LSD es la enfermedad de Gaucher.

[0162] En una realización, el LSD es gangliosidosis GM1.

[0164] En una realización, el LSD es gangliosidosis GM1.

[0166] El término "acetil-leucina" se refiere colectivamente a N-acetil-DL-leucina (ADLL), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; N-acetil-D-leucina (ADL), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y N-acetil-L-leucina (ALL), o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. El término acetil-leucina incluye análogos marcados isotópicamente de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina y N-acetil-L-leucina, en donde uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporar incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno y oxígeno, tales como 2H (o deuterio (D)), 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, y 17O. En una realización, se proporciona un análogo de acetil-leucina marcado isotópicamente, en el que sustancialmente todos los átomos en una posición dentro de acetil-leucina se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente. En otra realización, se proporciona un análogo de acetil-leucina marcado isotópicamente, en el que se reemplaza una porción de los átomos en una posición dentro de acetil-leucina, por ejemplo, se enriquece acetil-leucina en una o más posiciones con un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente. La acetil-leucina marcada isotópicamente puede prepararse mediante métodos conocidos en la técnica.

[0168] En una realización, la N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina no está marcada isotópicamente.

[0169] En una realización, el análogo marcado isotópicamente es un análogo deuterado de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina, en donde uno o más átomos de hidrógeno se reemplazan con deuterio. En una realización, un átomo de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplaza con deuterio. En otra realización, dos átomos de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplazan con deuterio. En otra realización, tres átomos de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplazan con deuterio. En otra realización, cuatro átomos de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplazan con deuterio. En otra realización, cinco átomos de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplazan con deuterio. En otra realización, seis átomos de hidrógeno de N-acetil-DL-leucina, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina se reemplazan con deuterio.

[0171] En una realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-DL-leucina, o un análogo deuterado de la misma. En otra realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-D-leucina, o un análogo deuterado de la misma. En otra realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-L-leucina, o un análogo deuterado de la misma.

[0173] En otra realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-DL-leucina. En otra realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-D-leucina. En otra realización, la acetil-leucina usada en los métodos de la presente divulgación es N-acetil-L-leucina.

[0174] "Miglustat" se refiere a 1,5-(butilimino)-1,5-didesoxi-D-glucitol (también conocido como N-butil-desoxinojirimicina).

[0175] "Administrado en combinación" y frases similares significan que dos agentes, por ejemplo, (1) acetil-DL-leucina, acetil-D-leucina o acetil-L-leucina; y (2) miglustat, se administran simultáneamente al sujeto que se está tratando. En una realización, se administran acetil-DL-leucina, acetil-D-leucina o acetil-L-leucina y miglustat en combinación como una terapia de primera línea para tratar un LSD.

[0177] "Terapia de primera línea" significa un régimen de tratamiento generalmente aceptado o recomendado por el establecimiento médico o una autoridad reguladora, por ejemplo, la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos o la Agencia Europea de Medicamentos, para el tratamiento inicial de un estado, enfermedad o trastorno.

[0179] "Simultáneamente" significa que cada agente activo se administra ya sea (i) simultáneamente; o (ii) secuencialmente en cualquier orden en diferentes puntos en el tiempo. Se considera que una combinación de dos agentes se administra simultáneamente si cada agente se administra al sujeto con menos de 1 minuto de diferencia. Si no se administran simultáneamente, se entiende que ambos agentes se administran a un sujeto en una secuencia y suficientemente cerca en el tiempo para proporcionar el efecto terapéutico deseado y pueden actuar en concierto para tratar un LSD.

[0181] En una realización, la acetil-leucina y el miglustat se administran por separado, en cualquier forma apropiada y mediante cualquier vía adecuada. En una realización, tanto la acetil-leucina como el miglustat se administran por vía oral al sujeto como comprimidos.

[0183] En una realización, la acetil-leucina se administra al sujeto 1 minuto a 24 horas antes de la administración de miglustat al sujeto. Por ejemplo, la acetil-leucina se administra 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas o 12 horas antes de la administración de miglustat a un sujeto.

[0185] En otra realización, la acetil-leucina se administra simultáneamente con miglustat al sujeto.

[0187] En otra realización, la acetil-leucina se administra al sujeto 1 minuto a 24 horas después de la administración de miglustat al sujeto. Por ejemplo, la acetil-leucina se administra 5 minutos, 10 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas o 12 horas después de la administración de miglustat a un sujeto.

[0188] En otra realización, se administran acetil-leucina y miglustat al sujeto con un intervalo de aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 24 horas. Por ejemplo, la acetil-leucina y el miglustat se administran con aproximadamente 1 minuto de diferencia, 5 minutos de diferencia, 10 minutos de diferencia, 30 minutos de diferencia, 45 minutos de diferencia, 1 hora de diferencia, 1 hora a 2 horas de diferencia, 2 horas a 3 horas de diferencia, 3 horas a 4 horas de diferencia, 4 horas a 5 horas de diferencia, 5 horas a 6 horas de diferencia, 6 horas a 7 horas de diferencia, 7 horas a 8 horas de diferencia, 8 horas a 9 horas de diferencia, 9 horas a 10 horas de diferencia, 10 horas a 11 horas de diferencia, u 11 horas a 12 horas de diferencia.

[0190] “Pacientes que no han recibido tratamiento previo con miglustat” y frases similares significa que no se ha administrado previamente miglustat al sujeto para tratar un LSD.

[0192] "Sujeto" significa un ser humano.

[0194] "Sujeto que lo necesita" significa un ser humano que tiene un LSD y necesita tratamiento. El sujeto puede o no haber sido diagnosticado con LSD. Por ejemplo, es posible que el sujeto aún no tenga un diagnóstico (clínico o de otro tipo) de LSD, pero puede tener uno o más síntomas de LSD. El sujeto también puede tener un marcador bioquímico u otro marcador identificable similar de un LSD.

[0196] Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de acetil-leucina o miglustat es cualquier cantidad de cualquier agente activo que, cuando se administra a un sujeto, es la cantidad que se necesita para producir el efecto deseado, que, para la presente divulgación, puede ser terapéutico y/o profiláctico. La dosis puede determinarse según diversos parámetros, tales como el agente activo específico usado; la edad, peso y estado del paciente que va a tratarse; la vía de administración; y el régimen requerido. Un médico podrá determinar la vía de administración y la dosis requeridas para cualquier paciente en particular. Por ejemplo, una dosis diaria de cualquier agente activo puede ser de desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 225 mg por kg, desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 150 mg por kg, o desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal.

[0198] Tal como se usa en el presente documento, “tratar” o “tratamiento” se refiere a cualquier indicio de éxito para prevenir, detener o mejorar una enfermedad, trastorno, estado o síndrome, por ejemplo, un LSD, en un sujeto, y/o prevenir, detener o mejorar uno o más síntomas de una enfermedad, trastorno, estado o síndrome, por ejemplo, un LSD, en un sujeto, incluyendo cualquier parámetro objetivo o subjetivo tal como disminución; remisión; prevenir, disminuir, inhibir o eliminar uno o más síntomas; hacer que la enfermedad, trastorno, estado o síndrome sea más tolerable para el sujeto; ralentizar el empeoramiento de la enfermedad, trastorno, estado o síndrome; o mejorar el bienestar físico o mental del sujeto que lo necesita.

[0200] Los términos “que trata” o “tratamiento” también abarcan inducir la inhibición, regresión o estasis de la enfermedad, trastorno, estado o síndrome, por ejemplo, un LSD. Por ejemplo, el tratamiento de un paciente o sujeto que necesita tratamiento para un LSD incluye reducir un síntoma del LSD en el sujeto, inducir respuesta clínica, inhibir o reducir la progresión del LSD, o inhibir o reducir una complicación del LSD.

[0202] La prevención, detención o mejora de una lesión o patología de una enfermedad, trastorno, estado o síndrome, por ejemplo, un LSD, por ejemplo, NPC, tal como la prevención, disminución, inhibición o eliminación de uno o más síntomas de enfermedad, trastorno, estado o síndrome puede basarse en parámetros objetivos y/o subjetivos, que incluyen, por ejemplo, los resultados de examen (es) físico (s), examen(es) neurológico (s) y/o evaluación(es) psiquiátrica (s). El éxito del tratamiento para determinadas enfermedades, por ejemplo, un LSD, puede medirse o evaluarse, por ejemplo, comparando la gravedad de la enfermedad, por ejemplo, parámetros objetivos y/o subjetivos del LSD, por ejemplo, NPC, antes de iniciar el tratamiento con acetil-leucina y miglustat, con la gravedad de la enfermedad después del inicio del tratamiento con acetil-leucina y miglustat. Por ejemplo, la gravedad de la NPC puede evaluarse usando una escala, un índice, una calificación o una puntuación. En una realización, el tratamiento descrito en la presente mejora una evaluación de este tipo de un valor o grado característico de un sujeto sintomático a un valor o grado característico de un sujeto no sintomático. En una realización, el tratamiento descrito en la presente mejora una evaluación de este tipo en comparación con una referencia. La referencia puede ser, por ejemplo, el estado del sujeto antes de iniciar cualquier tratamiento para la enfermedad, por ejemplo, NPC, o antes de iniciar el tratamiento para la enfermedad con una acetil-leucina y miglustat. Como alternativa, la línea basal puede ser, por ejemplo, el estado del sujeto después de un determinado periodo de tiempo en tratamiento para la enfermedad. En una realización, el tratamiento con acetil-leucina y miglustat como se describe en la presente mejora la evaluación del sujeto (por ejemplo, escala, índice, calificación o puntuación de parámetros objetivos y/o subjetivos) en comparación con una línea de base en al menos el 10 %, al menos el 20 %, al menos el 30 %, al menos el 40 % o al menos el 50 %. En una realización, la evaluación mejora en al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o el 100 %.

[0204] En una realización, la acetil-leucina se administra a una dosis que oscila de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 30 g al día. Por ejemplo, la acetil-leucina se administra a una dosis que oscila entre alrededor de 500 mg y alrededor de 15 g al día, una dosis que oscila entre alrededor de 1,5 g y alrededor de 10 g al día, opcionalmente por vía oral sólida o vía oral líquida. La N-acetil-DL-leucina, puede administrarse, por ejemplo, en una dosis según la de Tanganil®, que se prescribe a adultos en una dosis de 1,5 g a 2 g al día, 3-4 comprimidos en dos dosis, por la mañana y por la noche.

[0206] Si se administra un único enantiómero de acetil-leucina, es decir, N-acetil-D-leucina o N-acetil-L-leucina, las dosis pueden reducirse en consecuencia. Por ejemplo, si solo se administra N-acetil-L-leucina o si solo se administra N-acetil-D-leucina, la dosis puede oscilar entre aproximadamente 250 mg y aproximadamente 15 g al día, oscilar entre aproximadamente 250 mg y aproximadamente 10 g al día, u oscilar entre aproximadamente 250 mg y aproximadamente 5 g al día, tal como entre aproximadamente 0,75 g y aproximadamente 5 g al día.

[0208] En una realización, los intervalos de dosis administrados de acetil-leucina son de aproximadamente 1 g a aproximadamente 30 g al día. Por ejemplo, los intervalos de dosis administrados de acetil-leucina son de desde aproximadamente 1 g hasta aproximadamente 15 g al día, desde aproximadamente 1 g hasta aproximadamente 10 g al día, o desde aproximadamente 1,5 g hasta aproximadamente 7 g al día, desde 15,1 g hasta aproximadamente 30 g al día, desde 16 g hasta aproximadamente 30 g al día, desde 17 g hasta aproximadamente 30 g al día, desde 18 g hasta aproximadamente 30 g al día, desde 19 g hasta aproximadamente 30 g al día, o desde 20 g hasta aproximadamente 30 g al día. Puede ser de desde aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 g hasta aproximadamente 15 g al día. Puede ser de desde aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 g hasta aproximadamente 10 g al día. Puede ser de desde 15,1, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 25, 27, 28 o 29 g hasta aproximadamente 30 g al día. Puede ser más de aproximadamente 1,5 g al día, pero menos de aproximadamente 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 o 5 g al día. En una realización, la dosis oscila entre aproximadamente 4 g y aproximadamente 6 g al día. En una realización, la dosis oscila entre aproximadamente 4 g y aproximadamente 5 g al día. En una realización, la dosis es de aproximadamente 4,5 g al día. En una realización, la dosis es de aproximadamente 5 g al día. En una realización, la dosis es de aproximadamente 1 g al día, aproximadamente 2 g al día, aproximadamente 3 g al día, aproximadamente 4 g al día, aproximadamente 5 g al día, aproximadamente 6 g al día, aproximadamente 7 g al día, aproximadamente 8 g al día, aproximadamente 9 g al día, aproximadamente 10 g al día, aproximadamente 11 g al día, aproximadamente 12 g al día, aproximadamente 13 g al día, aproximadamente 14 g al día, o aproximadamente 15 g al día. En otra realización, la dosis es de aproximadamente 16 g al día, aproximadamente 17 g al día, aproximadamente 18 g al día, aproximadamente 19 g al día, o aproximadamente 20 g al día. En otra realización, la dosis es de aproximadamente 21 g al día, aproximadamente 22 g al día, aproximadamente 23 g al día, aproximadamente 24 g al día, aproximadamente 25 g al día, aproximadamente 26 g al día, aproximadamente 27 g al día, aproximadamente 28 g al día, aproximadamente 29 g al día, o aproximadamente 30 g al día. En una realización, estas dosis se administran en una forma farmacéutica oral sólida, en particular comprimidos. En otra realización, estas dosis son para acetil-leucina cuando está en su forma racémica. Las dosis de acetil-leucina cuando está presente un exceso enantiomérico pueden ser más bajas, por ejemplo, alrededor del 50 % más bajas. Por lo tanto, los intervalos de dosis mencionados anteriormente cuando se reducen a la mitad también están abarcados explícitamente por la presente divulgación.

[0210] En una realización, miglustat se administra a una dosis que oscila entre aproximadamente 0,01 g y aproximadamente 5 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,1 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,2 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,3 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,4 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,5 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,6 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,7 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,8 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 0,9 g al día. En otra realización, miglustat se administra a una dosis de aproximadamente 1 g al día.

[0212] En una realización, la dosis diaria total de acetil-leucina puede extenderse a través de múltiples administraciones, es decir, la administración puede ocurrir dos o más veces al día para lograr la dosis diaria total. Como ejemplo, el número requerido de comprimidos para proporcionar la dosis diaria total de una acetil-leucina puede dividirse en dos administraciones (por ejemplo, por la mañana y por la noche) o tres administraciones (por ejemplo, por la mañana, al mediodía y por la noche). Cada dosis puede administrarse adecuadamente con o sin alimentos. Por ejemplo, la N-acetil-L-leucina o la N-acetil-DL-leucina pueden dosificarse aproximadamente 1 o aproximadamente 2 horas antes de las comidas, tal como al menos aproximadamente 20 minutos, al menos aproximadamente 30 minutos, al menos aproximadamente 40 minutos, o al menos aproximadamente 1 hora antes de las comidas, o pueden dosificarse aproximadamente 1, aproximadamente 2, o aproximadamente 3 horas después de las comidas, tal como esperar al menos aproximadamente 20 minutos, al menos aproximadamente 30 minutos, al menos aproximadamente 1 hora, al menos aproximadamente 1,5 horas, al menos aproximadamente 2 horas, o al menos aproximadamente 2,5 horas después de las comidas. Por ejemplo, se puede administrar una dosis diaria total de 4,5 g de acetil-DL-leucina como tres comprimidos de Tanganil® (o equivalente) antes, con o después del desayuno, tres comprimidos adicionales antes, con o después del almuerzo y tres comprimidos adicionales antes, con o después de la cena.

[0214] La duración del tratamiento para la combinación de acetil-leucina y miglustat puede ser de aproximadamente siete días o más. Por ejemplo, la duración del tratamiento puede ser de aproximadamente dos semanas o más, aproximadamente tres semanas o más, aproximadamente un mes o más, aproximadamente seis semanas o más, aproximadamente siete semanas o más, o aproximadamente dos meses o más. En una realización, la duración del tratamiento es de aproximadamente tres meses o más, por ejemplo, aproximadamente cuatro meses o más, aproximadamente cinco meses o más o aproximadamente seis meses o más. La duración del tratamiento también puede ser de aproximadamente 1 año o más, aproximadamente 2 años o más, aproximadamente 4 años o más, aproximadamente 5 años o más, o aproximadamente 10 años o más. La duración del tratamiento también puede ser el tiempo de vida del sujeto.

[0216] Todas y cada una de las combinaciones de forma de dosificación, cantidad de dosis, programa de dosificación y duración del tratamiento para la combinación de acetil-leucina y miglustat están previstas y abarcadas por la divulgación. En una realización, la dosis de acetil-leucina es de desde aproximadamente 4 g hasta aproximadamente 10 g al día, tomada a través de una, dos o tres administraciones al día, durante una duración del tratamiento de aproximadamente dos meses o más. En otra realización, la dosis de acetil-leucina es más de 4 g pero no más de 5 g al día, tomada a través de una, dos o tres administraciones al día, durante una duración de tratamiento de aproximadamente seis meses o más. La forma de dosificación puede ser una forma de dosificación oral sólida, en particular comprimidos.

[0218] En una realización, la combinación de acetil-leucina y miglustat se usa para tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD. Tal como se usa en el presente documento, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" y similares se refiere a retrasar el inicio de un LSD o uno o más síntomas de un LSD que de otro modo se esperaría que se manifestaran de acuerdo con la progresión de la enfermedad típica, reducir la gravedad de un LSD o reducir la gravedad de o eliminar uno o más síntomas existentes asociados con un LSD, retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo en comparación con la progresión de la enfermedad típica, y/o revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo. "Tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" también puede hacer referencia a mejorar un marcador bioquímico de un LSD.

[0219] Tal como se usa en el presente documento, “progresión de enfermedad típica”, “progresión de enfermedad que normalmente se esperaría” y similares se refieren a la progresión típica o esperada de un LSD, uno o más síntomas asociados con un LSD, o un marcador bioquímico de un LSD si el sujeto no se trató. La progresión de la enfermedad típica o esperada puede basarse, por ejemplo, en una escala, índice, calificación o puntuación conocida, u otra prueba adecuada, para evaluar la progresión de un LSD, uno o más síntomas asociados con un LSD, o un marcador bioquímico de un LSD, tal como los descritos en el presente documento. La escala, índice, calificación, puntuación u otra prueba adecuada puede corresponder a la progresión del LSD en general o a la progresión de uno o más síntomas asociados con el LSD. Por ejemplo, la progresión de la enfermedad típica o esperada puede basarse en el inicio o la gravedad típica o esperada del LSD o un síntoma o conjunto de síntomas asociados con el LSD. La progresión de la enfermedad típica o esperada puede determinarse sujeto a sujeto o puede basarse en lo que se observa o experimenta típicamente por una colección de sujetos afectados por el LSD, tal como una población o subpoblación de sujetos. Las subpoblaciones pueden incluir, por ejemplo, subpoblaciones del mismo género, de la misma edad o similar, del mismo o similar momento para la aparición de uno o más síntomas, etc.

[0221] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a retrasar el inicio de un LSD o uno o más síntomas de un LSD que de otro modo se esperaría que se manifestaran según la progresión típica de la enfermedad. Tal como se usa en el presente documento, "retrasar el inicio de un LSD o uno o más síntomas de un LSD" y similares se refieren a aumentar el tiempo hasta, o prevenir, el inicio del LSD o uno o más síntomas del LSD. Por ejemplo, puede decirse que el inicio se retrasa cuando el tiempo hasta la manifestación de un LSD o uno o más síntomas de un LSD tarda al menos el 5 % más que el observado según la progresión típica de la enfermedad. Además, por ejemplo, se observa un aumento en el tiempo de al menos el 10 %, al menos el 15 %, al menos el 20 %, al menos el 25 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 %. En una realización, el sujeto es asintomático. La administración de acetil-leucina y miglustat puede iniciarse en el momento en que el sujeto está asintomático para retrasar el inicio de un LSD o uno o más síntomas de un LSD que de otro modo se esperaría que se manifestaran según la progresión típica de la enfermedad. En otra realización, el sujeto es sintomático. La administración de acetil-leucina y miglustat puede iniciarse en el momento en que el sujeto tiene algunos síntomas con el fin de retrasar la aparición de uno o más síntomas adicionales de un LSD que de otro modo se esperaría que se manifestaran según la progresión típica de la enfermedad. El sujeto que lo necesite puede continuar recibiendo tratamiento con acetil-leucina y miglustat según las duraciones descritas en el presente documento. En una realización, el tratamiento previene el inicio de uno o más síntomas del LSD que de otro modo se esperaría que se manifestaran de acuerdo con la progresión típica de la enfermedad.

[0223] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a reducir la gravedad de un LSD o reducir la gravedad de o eliminar uno o más síntomas existentes asociados con un LSD. La gravedad de un LSD o del/de los síntoma(s) existente(s) puede evaluarse usando una escala, índice, calificación o puntuación conocidos, tales como los descritos como ejemplos en el presente documento, u otra prueba adecuada para evaluar la gravedad. Por ejemplo, la escala, índice, calificación, puntuación u otra prueba adecuada puede corresponder a la gravedad del LSD en general o a la gravedad de uno o más síntomas asociados con el LSD. En una realización, el tratamiento mejora dicha evaluación de un valor o grado característico de un paciente sintomático a un valor o grado característico de un paciente no sintomático.

[0225] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas asociados con un LSD a lo largo del tiempo en comparación con la progresión de enfermedad típica, o revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas asociados con un LSD a lo largo del tiempo. El tiempo durante el cual el tratamiento retrasa o revierte la progresión puede coincidir con la duración del tratamiento tal como se describe en el presente documento. El tratamiento puede retrasar o revertir la progresión durante una duración de, por ejemplo, aproximadamente siete días o más, aproximadamente dos semanas o más, aproximadamente tres semanas o más, aproximadamente un mes o más, aproximadamente seis semanas o más, aproximadamente siete semanas o más o aproximadamente dos meses o más. Por ejemplo, el tratamiento retrasa o revierte la progresión durante una duración de aproximadamente tres meses o más, aproximadamente cuatro meses o más, aproximadamente cinco meses o más o aproximadamente seis meses o más. Además, por ejemplo, retrasa o invierte la progresión durante una duración de aproximadamente 1 año o más, aproximadamente 2 años o más, aproximadamente 3 años o más, aproximadamente 4 años o más, aproximadamente 5 años o más, o aproximadamente 10 años o más. El tratamiento puede retrasar o revertir la progresión del LSD o uno o más síntomas asociados con el LSD a lo largo de la vida del paciente.

[0227] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo en comparación con la progresión típica de la enfermedad. Tal como se usa en el presente documento, "retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas asociados con un LSD a lo largo del tiempo" y similares se refieren a ralentizar y/o detener la progresión del LSD o uno o más síntomas del LSD(por ejemplo,ralentizar y/o detener el empeoramiento o aumento de la gravedad del LSD o uno o más síntomas del LSD) a lo largo del tiempo. La progresión de la enfermedad puede determinarse, por ejemplo, usando una escala, índice, calificación o puntuación conocidos, tales como los descritos como ejemplos en el presente documento, u otras pruebas adecuadas para evaluar la progresión. Por ejemplo, la escala, índice, calificación, puntuación u otra prueba adecuada puede corresponder a la progresión del LSD en general o a la progresión de uno o más síntomas asociados con el LSD. En una realización, "retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas asociados con un LSD" significa que el valor de gravedad de la enfermedad de un sujeto (por ejemplo, gravedad general o gravedad de uno o más síntomas) determinado por una escala, índice, calificación, puntuación, etc. conocidos, u otra prueba adecuada para evaluar la gravedad, no aumenta significativamente (por ejemplo, al menos permanece sustancialmente constante). En una realización, "retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD" significa evitar que el sujeto alcance, o aumente el tiempo que tarda un sujeto en alcanzar (por ejemplo, disminuir la tasa de cambio de gravedad creciente), un valor de gravedad de acuerdo con una escala, índice, calificación, puntuación, etc. conocidos, u otra prueba adecuada, para evaluar la progresión en comparación con un valor correspondiente a la progresión de enfermedad típica. Por ejemplo, puede decirse que la progresión se retrasa cuando el tiempo para alcanzar un valor de gravedad tarda al menos el 5 % más que el observado según la progresión típica de la enfermedad. Además, por ejemplo, se observa un aumento en el tiempo de al menos el 10 %, al menos el 15 %, al menos el 20 %, al menos el 25 %, al menos el 30 %, al menos el 40 %, al menos el 50 %, al menos el 60 %, al menos el 70 %, al menos el 80 %, al menos el 90 % o al menos el 100 %. El tiempo durante el cual el tratamiento retrasa la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD puede coincidir con la duración del tratamiento tal como se describe en el presente documento. En una realización, el tratamiento retrasa la progresión durante al menos aproximadamente tres meses, al menos aproximadamente cuatro meses, al menos aproximadamente cinco meses, o al menos aproximadamente seis meses. En otra realización, el tratamiento retrasa la progresión durante al menos aproximadamente 1 año, al menos aproximadamente 2 años, al menos aproximadamente 3 años, al menos aproximadamente 4 años, al menos aproximadamente 5 años, o al menos aproximadamente 10 años. El tratamiento puede retrasar la progresión a lo largo de la vida del paciente.

[0229] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo. Tal como se usa en el presente documento, "revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo" y similares se refieren a detener la progresión y reducir la gravedad del LSD o uno o más síntomas del LSD a lo largo del tiempo. La progresión y gravedad de la enfermedad pueden determinarse, por ejemplo, usando una escala, índice, clasificación o puntuación conocidos, tales como los descritos como ejemplos en el presente documento, u otra prueba adecuada para evaluar la progresión y gravedad. Por ejemplo, la escala, el índice, la calificación, la puntuación u otra prueba adecuada pueden corresponder a la progresión y la gravedad del LSD en general o a la progresión y la gravedad de uno o más síntomas asociados con el LSD. En una realización, "revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo" significa que el valor de gravedad de la enfermedad de un sujeto (por ejemplo, gravedad general o gravedad de uno o más síntomas) determinado por una escala, índice, calificación, puntuación, etc. conocidos, u otra prueba adecuada, para evaluar la gravedad, mejora a lo largo del tiempo (es decir, muestra una reducción en la gravedad a lo largo del tiempo). El tiempo durante el cual el tratamiento revierte la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD puede coincidir con la duración del tratamiento tal como se describe en el presente documento. En una realización, el tratamiento revierte la progresión durante al menos aproximadamente tres meses, al menos aproximadamente cuatro meses, al menos aproximadamente cinco meses, o al menos aproximadamente seis meses. En otra realización, el tratamiento invierte la progresión durante al menos aproximadamente 1 año, al menos aproximadamente 2 años, al menos aproximadamente 3 años, al menos aproximadamente 4 años, al menos aproximadamente 5 años, o al menos aproximadamente 10 años. El tratamiento puede revertir la progresión a lo largo de la vida del paciente.

[0231] En otra realización, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD" se refiere a mejorar en el sujeto un marcador bioquímico de un LSD (por ejemplo, niveles aumentados de lo(s) metabolito(s) de almacenamiento o cambios bioquímicos secundarios resultantes del almacenamiento primario). Un marcador bioquímico es una señal de actividad de la enfermedad y puede proporcionar indicaciones continuas de la gravedad y la progresión de la enfermedad a lo largo del tiempo. En una realización, el marcador bioquímico se mejora en vista de un valor de control. En una realización, el marcador bioquímico se elige entre el aumento del volumen lisosómico y el aumento de los niveles de glicoesfingolípidos (GSL). En una realización, el marcador bioquímico es volumen lisosómico aumentado y el tratamiento reduce el volumen lisosómico en el sujeto. En una realización, el marcador bioquímico es un aumento de los niveles de glicoesfingolípidos (GSL) y el tratamiento reduce los niveles de GSL en el sujeto. En una realización, el tratamiento mejora un marcador bioquímico a lo largo del tiempo. Por ejemplo, en una realización, mejorar un marcador bioquímico a lo largo del tiempo significa que el tratamiento mejora un marcador bioquímico a lo largo del tiempo hacia un valor de control, evita la progresión de un marcador bioquímico a lo largo del tiempo y/o retrasa la progresión del marcador bioquímico a lo largo del tiempo en comparación con la progresión de enfermedad típica. El tiempo durante el cual el tratamiento mejora un marcador bioquímico puede coincidir con la duración del tratamiento tal como se describe en el presente documento. En una realización, el tratamiento mejora un marcador bioquímico durante al menos aproximadamente tres meses, al menos aproximadamente cuatro meses, al menos aproximadamente cinco meses, o al menos aproximadamente seis meses. En una realización adicional, el tratamiento mejora un marcador bioquímico durante al menos aproximadamente 1 año, al menos aproximadamente 2 años, al menos aproximadamente 3 años, al menos aproximadamente 4 años, al menos aproximadamente 5 años, o al menos aproximadamente 10 años. El tratamiento puede mejorar el marcador bioquímico a lo largo de la vida del paciente.

[0233] Un "síntoma" de un LSD incluye cualquier manifestación clínica o de laboratorio asociada con un LSD y no se limita a lo que el sujeto puede sentir u observar. Los síntomas como se describen en la presente incluyen, pero no se limitan a, síntomas neurológicos y síntomas psiquiátricos. Los ejemplos de síntomas neurológicos incluyen ataxia, otros trastornos del movimiento como hipocinesia, rigor, temblor o distonía, trastornos motores oculares centrales como parálisis sacádica/de la mirada supranuclear vertical y horizontal y déficits neuropsicológicos como demencia. Los ejemplos de síntomas psiquiátricos incluyen depresión, trastornos del comportamiento o psicosis. La aparición de los síntomas puede variar desde el nacimiento hasta la edad adulta.

[0235] La progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo o a través del tratamiento puede controlarse, por ejemplo, usando una o más pruebas conocidas en dos o más puntos de tiempo y comparando los resultados. La progresión y/o gravedad de la enfermedad puede evaluarse, por ejemplo, usando la Escala para la Evaluación y Calificación de la Ataxia (SARA), el Índice Funcional de Ataxia Espinocerebelosa (SCAFI), la Escala de Calificación de Ataxia Cooperativa Internacional (ICARS), la escala de calificación de ataxia breve (BARRAS), la Escala de Calificación de Discapacidad modificada (mDRS), EuroQol 5Q-5D-5L (EQ-5D-5L), la escala analógica visual (vas), la Escala de Inteligencia para Adultos de Wechsler (WAIS-R), la Escala de Inteligencia de Wechsler para Niños-IV (WISC-IV), la Evaluación Cognitiva de Montreal (MoCA) u otras pruebas adecuadas. Para ciertos LSD, como NPC, se han desarrollado y validado puntuaciones particulares en las últimas décadas, por ejemplo, la puntuación de gravedad clínica (CSS) y la puntuación de incremento de gravedad anual (Asis)(véaseYanjanin et al., "Linear Clinical Progression, Independent of Age of Onset, in Niemann-Pick Disease, Type C,"Am J Med Genet Parí B153B:132-140) y la Escala de discapacidad NP-C de 6 dominios modificada (puntuación mDRS). Por ejemplo, la gravedad de un paciente con NPC puede cuantificarse asignando un CSS, que evalúa varios parámetros de la enfermedad (deambulación, convulsiones, movimiento ocular, etc.) y da a cada parámetro una puntuación de 5. Una puntuación más alta equivale a una mayor gravedad. El ASIS cuantifica la tasa de cambio anual en el CSS, calculada dividiendo el CSS por la edad del paciente. En este sentido, ciertas puntuaciones en estas pruebas son características de los pacientes con LSD sintomático y evidencian la progresión y/o gravedad de la enfermedad.

[0237] Por lo tanto, "tratar un LSD o uno o más síntomas de un LSD", por ejemplo, puede equipararse a lograr una evaluación mejorada, tal como las descritas en el presente documento, de una puntuación de SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, vas, WAIS-R, WISC-IV, CSS y/o MoCA, o el resultado de otra prueba adecuada para caracterizar a un sujeto con LSD. Por ejemplo, en una realización, "reducir la gravedad de un LSD o reducir la gravedad de o eliminar uno o más síntomas existentes de un LSD" significa mejorar una puntuación SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, vas, WAIS-R, WISC-IV, CSS y/o MoCA, o un resultado de otra prueba adecuada para evaluar la gravedad, tal como mejorar la puntuación o el resultado de un valor de gravedad característico de un sujeto sintomático a un valor característico de un sujeto no sintomático. En otra realización, "retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD" significa que la puntuación de SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, vas, WAIS-R, WISC-IV, CSS y/o MoCA de un sujeto, o un resultado de otra prueba adecuada para evaluar la progresión, no aumenta significativamente (por ejemplo, al menos permanece sustancialmente constante). En una realización adicional, "retrasar la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD" significa evitar que la puntuación SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, vas, WAIS-R, WISC-IV, CSS y/o MoCA de un sujeto, o un resultado de otra prueba adecuada para evaluar la progresión, alcance, o aumente el tiempo necesario para alcanzar, un valor en comparación con el de la progresión de la enfermedad típica. En otra realización, "revertir la progresión de un LSD o uno o más síntomas de un LSD a lo largo del tiempo" significa que la puntuación de SARA, SCAFI, ICARS, BARS, mDRS, EQ-5D-5L, vas, WAIS-R, WISC-IV, CSS y/o MoCA de un sujeto, o el resultado de otra prueba adecuada para evaluar la progresión, mejora a lo largo del tiempo (es decir, muestra una reducción en la gravedad a lo largo del tiempo).

[0239] Por ejemplo, para evaluar el estado neurológico general, puede aplicarse mDRS, una escala de cuatro dominios (deambulación, manipulación, lenguaje y deglución). La función cerebelosa puede evaluarse utilizando SARA, una escala de calificación clínica de ocho elementos (marcha, postura, sentado, habla, función motora fina y taxis; rango 0-40, donde 0 es el mejor estado neurológico y 40 el peor), y SCAFI, que comprende el tiempo de caminata de 8 m (8MW; realizado haciendo que los pacientes caminen dos veces más rápido de una línea a otra, excluyendo el giro), la prueba de clavija de 9 orificios (9HPT) y el número de repeticiones "PATA" durante 10 s. El deterioro subjetivo y la calidad de vida pueden evaluarse usando el cuestionario EQ-5D-5L y VAS. Para evaluar la función motora ocular, se puede usar una videooculografía tridimensional (EyeSeeCam) para medir la velocidad máxima de los movimientos sacádicos, la ganancia de una persecución suave, la velocidad máxima de fase lenta del nistagmo evocado por la mirada (función de retención de la mirada), la velocidad máxima de fase lenta del nistagmo optocinético y la ganancia del reflejo vestíbulo-ocular horizontal. Para evaluar el estado cognitivo, puede usarse WAIS-R o WISC-IV, y MoCA, evaluando diferentes dominios cognitivos, incluyendo atención y concentración, funciones ejecutivas, memoria, lenguaje, habilidades visuoconstructivas, pensamiento conceptual, cálculos y orientación con un máximo de 30 puntos y una puntuación de corte de 26. El experto sabrá cómo realizar estas y otras pruebas similares.

[0241] Ejemplos

[0243] Métodos generales

[0245] Animales y tratamientos

[0247] Los ratones BALBc/NPCnih y Sandhoff se criaron como heterocigotos para generar ratones afectados(Npc1-/-Hexb-'-)

y controles (Npc1+I+ Hexb+I+).Los ratones se alojaron en condiciones no estériles, con alimento y agua disponibles a voluntad. Todos los experimentos se realizaron usando protocolos aprobados por la Ley de Procedimientos Científicos para Animales del Ministerio del Interior del Reino Unido, 1986.

[0248] Células

[0249] Chris Wassif (NIH) proporcionó amablemente células de ovario de hámster chino (Cho) de tipo natural y nulas para NPC1.

[0250] Anticuerpos

[0251] Los anticuerpos usados en este estudio se resumen en la Tabla 2.

[0252] Tabla 2

[0255]

[0257] Acetil-leucina

[0258] ADLL y enantiómeros (ADLL: Molekula n.° 73891210, ALL: Sigma Aldrich n.° 441511, ADL: Sigma n.° A0876) se administraron como mezcla seca en dieta de ratón en polvo (PicoLab Roedor Diet 20/5053, LabDiet) a una dosis de 0,1 g/kg/día para estudiosin vivo.Los grupos de tratamiento para el estudioin vivoconsistieron en al menos 5 ratones por grupo. Se realizaron estudiosin vitrocon cada compuesto disuelto en PBS para generar una solución madre 50 mM y se diluyó a una concentración de trabajo 1 mM en medios (DMEM High Glucose-Gibco n.° 10566016).

[0260] Miglustat

[0262] Se administró Miglustat (Monsanto/Oxford GlycoSciences) como un sólido seco mezclado con pienso en polvo (600 mg/kg/día) (véase anteriormente) solo o en combinación con ADLL.

[0264] Análisis del comportamiento del ratón.

[0266] El peso y la actividad de cada ratón se registraron semanalmente hasta alcanzar el punto final humano (definido como una pérdida de 1 g de peso corporal en 24 h). El análisis de la marcha se realizó usando el sistema CatWalk 10.5 (Noldus) según las instrucciones del fabricante y se registraron cinco corridas por animal en cada punto de tiempo. La cámara se ajustó a 40 cm por debajo de la pasarela, la pasarela tenía aproximadamente 4 cm de ancho y los ajustes de detección se ajustaron a la ganancia de la cámara de 14,05 y la intensidad del verde de 0,12. La función motora se midió usando una varilla de rotación NG de aceleración para ratones (Ugo Basile) a partir de 1 rpm a 10 rpm, acelerando cada 30 segundos en una rpm. Se realizaron experimentos de cruce de barras en animales Sandhoff para medir la fuerza motora y la coordinación. El aparato usado se modificó a partir de estudios publicados. En resumen, se suspendió horizontalmente una barra de metal (1,2 mm de ancho y 26 cm de largo) entre dos soportes de madera de 30 cm de alto sobre una superficie acolchada y se permitió a los animales agarrar el centro de la barra solo con las patas delanteras, se soltó la cola y se puso en marcha el reloj. La latencia para cruzar o caer de la barra se puntuó, con 120 segundos, como máximo, hasta la finalización de cada prueba. Se dio una puntuación a cada animal entre 120 y -120. Si el tiempo de cruce fue mayor que 0, entonces la puntuación = 120- CT; si el tiempo de caída fue mayor que 0, la puntuación = FT-120.

[0268] Preparación de la muestra

[0270] Análisis bioquímicos e inmunohistoquímicos. Se perfundió solución salina a los ratones bajo anestesia terminal. Los tejidos para el análisis bioquímico se congelaron en isopentano helado. Para la tinción inmunofluorescente, los tejidos se perfundieron con PFA al 4 % seguido de PBS y se mantuvieron en PFA al 4 % durante 24 h y se almacenaron en PBS que contenía sacarosa al 20 % a largo plazo. Se cortaron los cerebros de forma parasagital (secciones de 20 micrómetros) y se almacenaron en 30 % de etilenglicol, 30 % de glicerol 0,1 M de tampón de fosfato de sodio (pH 7,4) a -20 °C. Se realizó un análisis bioquímico en tejidos homogeneizados con agua (50 mg/ml) y se determinó el contenido de proteína usando un ensayo de proteína BCA (Thermo Fisher n.° 23227) según las instrucciones del fabricante.

[0272] Análisis de inmunotransferencia de tipo Western. El análisis de inmunotransferencia de tipo Western se llevó a cabo homogeneizando medio cerebelo (que oscila de 15 a 30 mg de peso húmedo) en tampón RIPA (tampón Pierce RIPA, Thermo Fischer Scientific-89900) con cóctel inhibidor de proteasa/fosfatasa (cóctel inhibidor de fosfatasa y proteasa Halt™ 100X, n.° de cat: 78440) para lograr 50 mg/ml p/v. Las muestras luego se incubaron durante 30 minutos en hielo. Se centrifugaron a 13.000 g a 4 °C y los sobrenadantes se retuvieron para el ensayo de proteína BCA y la inmunotransferencia de tipo Western.

[0274] Extracción de ADP y ATP. El ADP y el ATP se extrajeron con Fenol-TE de los tejidos según los métodos publicados. En resumen, los tejidos recién preparados se homogeneizaron con 3,0 mL de fenol-TE enfriado con hielo (Sigma-77607) y se procesaron con tres ciclos de homogeneización de 30 s y enfriamiento de 30 s. Se transfirió un mL de homogeneizado a tubos que contenían 200 uL de cloroformo y 150 uL de agua desionizada. El homogeneizado se agitó a fondo durante 20 s y se centrifugó a 10.000 * g durante 5 min a 4 °C (estandarizar todas las temperaturas a este formato). El sobrenadante se diluyó 1000 veces con agua desionizada, el extracto diluido se usó para los análisis de ADP/ATP.

[0276] Extracción de NAD y NADH. Las extracciones de NAD y NADH se realizaron con 20 mg de tejido fresco que se lavó con PBS en hielo húmedo. Los tejidos se homogeneizaron con un homogeneizador Dounce con 400 uL de tampón de extracción NADH/NAD (kit de ensayo Abcam NAD/NADH-ab65348), seguido de centrifugación durante 5 min a 4 °C a 13.000 g. Los sobrenadantes se recogieron en un nuevo tubo y se filtraron a través de una columna de centrifugación de 10 kD (Abcam, n.° ab93349) a 10.000 g a 4 °C hasta que la mayoría del líquido había pasado a través (aproximadamente 20 min).

[0278] Análisis de muestras

[0280] Medidas de la base esfingoide: Las bases esfingoides (esfingosina y esfinganina) se extrajeron de 100 uL de homogeneizados de tejido en 500 uL de cloroformo: metanol (1:2v/v) seguido de sonicación durante 10 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente, se añadieron 500 ul de cloruro de sodio 1 M, 500 ul de cloroformo y 100 ul de hidróxido de sodio 3 M a las muestras, y se agitaron en vórtex cada cinco minutos durante 15 minutos a temperatura ambiente. Los homogeneizados se centrifugaron (13.000 g durante 10 minutos) y se retuvo la fase orgánica inferior. Las bases esfingoides se purificaron a partir de las muestras preequilibrando columnas de SPA-NH2 con 2 x 1 ml de cloroformo seguido de elución de la muestra con 3 x 300 ul de acetona. Las muestras se secaron bajo nitrógeno. Los lípidos se resuspendieron en 50 ul de etanol precalentado (37 °C) y se añadieron 50 ul de disolución de marcaje de OPA (1 mg de OPA/20 ul de etanol/1 ul de 2-mercaptoetanol; dilución 1:2000 en ácido bórico al 3 %, pH 10,5). Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente en la oscuridad durante 20 minutos y se agitaron en vórtex cada 10 minutos. Las muestras se tamponaron con 100 uL de metanol: Tris 5 mM pH 7 (9:1) y se centrifugó a 5.000 g durante 2 minutos. Los sobrenadantes (150 |<j>L) se cargaron en una HPLC de fase inversa. La cromatografía se llevó a cabo usando una fase móvil del 85 % de acetonitrilo/el 15 % de H<2>O a una velocidad de flujo de 1,0 ml/min. Los derivados marcados con ortoftaldehído se controlaron a una longitud de onda de excitación de 340 nm y una longitud de onda de emisión de 450 nm. La cuantificación del área del pico traza se llevó a cabo usando el software EZChrom Elite v3.2.1.

[0282] Mediciones de glicoesfingolípidos: Los glicoesfingolípidos se extrajeron y midieron mediante NP-HPLC según los métodos publicados. Homogeneizados de tejido en cloroformo/metanol (C:M) (1:2 v/v) durante la noche a 4 °C. La mezcla se centrifugó (3000 rpm/10 min) y se añadieron 1 ml de cloroformo y 1 ml de PBS al sobrenadante y se centrifugó (3000 rpm/10 min). La fase inferior se secó en N<2>, se resuspendió en 50 uL de C:M 1:3 v/v y se combinó con la fase superior. Posteriormente, los GSL se recuperaron usando columnas C18 Isolute (100 mg) (Biotage) preequilibradas con 4x1 ml de MeOH y 2x1 ml de H<2>O. Las muestras se lavaron con 3x1 mL de H<2>O y se eluyeron con 1 mL de C:M 98:2, 2x1 mL de C:M 1:3, 1 mL de MeOH. El eluato de la columna se secó en N<2>, se resuspendió en 100 ul de C:M 2:1, se secó de nuevo en N2 y se resuspendió en tampón de ceramida glucanasa (CGasa) (acetato de sodio 50 mM, pH 5,5, taurodesoxicolato de sodio 1 mg/ml). Se añadieron 50 mU de CGasa y las muestras se incubaron a 37 °C durante la noche. Los oligosacáridos liberados se marcaron con ácido antranílico (2-AA) y se purificaron mezclándolos con 1 ml de acetonitrilo: H<2>O 97:3 y se añadió a columnas Discovery DPA-6<s>(SUPE<l>C<o>, n.° 52625-U) preequilibradas con 1 mL de acetonitrilo, 2x1 mL de H<2>O y 2x1 mL de acetonitrilo. Las columnas se lavaron con 2x1 ml de acetonitrilo: H<2>O 95:5 v/v, y se eluyó en 2x 0,75 ml de H<2>O. Las muestras se cargaron 30:70 H<2>O: MeCN (v/v) para HPLC de fase normal. El disolvente A era acetonitrilo, el disolvente B era H<2>0 y el disolvente C era NH<4>OH 100 mM (pH 3,85) en H<2>0. La separación se llevó a cabo a 30 °C usando el módulo de separación Waters Alliance 2695, excitación 360, emisión 425 usando el detector de fluorescencia Waters 2475.

[0284] Mediciones de colesterol: Se midió el colesterol con el kit Amplex Red (Molecular Probes) según las instrucciones del fabricante. En resumen, los homogeneizados de células y tejidos en 100 uL de agua mQ se extrajeron con Folch y se secaron en nitrógeno. Los sedimentos que contenían colesterol se resuspendieron en amortiguador de reacción 1X y se cargaron 50 uL para cada muestra en una placa de 96 pocillos de fondo plano. La reacción se inició añadiendo disolución de trabajo por muestra (el 25 % de Amplex<®>Red, 2 U/ml de disolución madre de HRP, 2 U/ml de disolución madre de colesterol oxidasa, 0,2 U/ml de disolución madre de colesterol esterasa en tampón de reacción 1X). Las muestras se incubaron a 37 °C durante 30 minutos y la fluorescencia se midió en un lector de microplacas (Optima, BMG Labtech) usando excitación en el intervalo de 530-560 nm y detección de emisión a ~590 nm.

[0286] Tinción con verde lisotracker y yoduro de propidio de células CHO: Se realizaron experimentos de FACSin vitropara medir el volumen de compartimento ácido relativo que tiñe células vivas con LysoTracker<™>Green DND-26 (Thermo Fisher-L7526) a 250 nM durante 10 minutos en PBS a TA, se centrifugó a 1200 rpm durante 10 minutos y las células se resuspendieron en tampón de FACS (PBS, BSA al 1 %, azida de sodio NaN3 al 0,1 %). Las células se tiñeron con yoduro de propidio (20 nM) (Invitrogen-P3566) inmediatamente antes del análisis en el FACS para la discriminación de células muertas. Se realizó un análisis FACS en 10.000 células registradas usando FACS Canto (Becton Dickinson, (BD)) con software BD.

[0288] Tinción filipina: El colesterol celular libre en las células CHO se visualizó con filipina (deStreptomyces filipinensis(Sigma)). Las células se fijaron con paraformaldehído al 4 %, se lavaron con PBS 3 x y se incubaron con glicina 1,5 mg/ml durante 10 min para extinguir la autofluorescencia. Las células se incubaron con filipina (0,05 mg/ml en PBS/FBS al 10 %/Triton x100 al 0,2 %) durante 2 horas, se lavaron 3xPBS y se visualizaron mediante un microscopio confocal Leica-SP8.

[0290] Inmunohistoquímica: Las secciones de cerebro que flotan libremente en glicerol/etileno se enjuagaron 3 veces con PBS y se bloquearon con suero de cabra al 2 % en PBS Triton al 0,3 % a temperatura ambiente. Las secciones se tiñeron con anticuerpos primarios; calbindina de conejo (1:2000) y CD68 de rata (1:500) en suero de cabra al 2 % en PBS al 0,3 % durante 16 horas a 4 °C, seguido de lavado con PBS Triton al 0,3 %, luego 3 veces con PBS. La tinción con anticuerpos secundarios (Alexa Fluor 597 anti conejo de cabra Far Red, Alexa Fluor 488 anti rata de cabra) se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 2 horas. Los anticuerpos usados se resumen en la Tabla 2. Las muestras se lavaron una vez con PBS Triton al 0,3 %, 3 veces con PBS y se montaron manualmente en portaobjetos. Los portaobjetos se dejan en el banco durante la noche para secar las secciones, seguido de la aplicación de ProLong Gold (Invitrogen, n.° P36930).

[0291] Inmunotransferencia de tipo Western: Se almacenaron homogeneizados de cerebelo (50 mg/ml) con Igepal CA al 1 %, desoxicolato de sodio al 0,5 %, SDS al 0,1 % y cóctel inhibidor de proteasa-fosfatasa al 1 %. Las muestras se resolvieron usando electroforesis en gel de<s>D<s>Tris-Glicina (Biorad) al 4-12 % y se transfirieron a una membrana de PVDF de baja fluorescencia (papel de PVDF de baja fluorescencia de inmunotransferencia de Biorad - n.° 1620262) usando un aparato de transferencia semiseca (Trans-Blot Turbo Transfer System (Biorad #1704150)). Los anticuerpos usados se resumen en la Tabla 2.

[0293] Adquisición y cuantificación de imágenes: Las secciones cerebrales y las imágenes de células CHO se realizaron con un microscopio confocal Leica-SP8 en modo de imágenes en mosaico. La adquisición de datos de inmunotransferencia de tipo Western se realizó con el sistema de imágenes por infrarrojos LiCOR Odyssey modelo n.° 9120. Los valores medios de fluorescencia, los diámetros y áreas del cerebelo y las cuantificaciones celulares se calcularon con el software Fuji Versión 1.0.

[0295] Mediciones de ADP/ATP: Las mediciones de ADP/ATP se realizaron usando un kit (Sigma Aldrich, MAK135) según las instrucciones del fabricante. La relación ADP/ATP se calculó con la ecuación: (RLU-C-RLUB)/RLU-A.

[0297] Mediciones de NAD y NADH: Se midieron NAD, NADH y NAD total (NADt) (NAD+NADH = NADt) con el kit de ensayo NAD/NADH (Abcam-ab65348). Las muestras frescas se procesaron para la extracción de ADP ATP. Se dividió cada muestra en 2: 1) muestras normales 2) muestras descompuestas. La descomposición de cada muestra se logró calentando muestras a 60 °C durante 30 minutos en un bloque de calentamiento. Se cargaron 30 uL de extractos en placas de 96 pocillos transparentes de fondo plano, cada muestra comprende 3 pocillos: 1) Fondo 2) NADt 3) Muestras descompuestas (contiene solo NADH). La mezcla de reacción de fondo (60 uL) se cargó en "pocillos de fondo", y la mezcla de reacción se cargó en pocillos "NADt" y "muestra descompuesta". La placa se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos, y se añadieron 6 ul de disolución de revelador de NADH a los pocillos de "muestra descompuesta". Las lecturas de absorbancia se tomaron a intervalos de 30 min durante 3 h a 450 nm.

[0299] Análisis demográfico y estadístico de un estudio clínico observacional de pacientes adultos con NPC tratados con ADLL: La cohorte estaba compuesta por 3 mujeres y 10 hombres. Se obtuvo el consentimiento de todos los participantes. Doce de los pacientes con NPC estaban en terapia con miglustat (exposición mínima 2,65, 1er cuartil 3,44, mediana 4,92, media 4,87, 3er cuartil 5,80 y máximo 7,98 años). Los trece pacientes con NPC1 participaron en un estudio observacional tratado con 5 g/día de acetil-DL-leucina (Tanganil™). Tres pacientes tuvieron cuatro mediciones prospectivas de puntuación de gravedad clínica y diez pacientes tuvieron cinco mediciones tomadas durante este estudio observacional (NIH, CSS). Se usaron datos retrospectivos para calcular las tasas de progresión de la enfermedad antes del reclutamiento para este estudio. La edad media al inicio del tratamiento con acetil-DL-leucina (Tanganil™) fue de 26,59 años. La edad mínima fue 15,44, 1er cuartil 20,97, mediana 26,98 y tercer cuartil 30,79 con edad máxima 37,37 años. El tiempo en el estudio de tratamiento observacional fue una media de 0,53, 1er cuartil 0,81, mediana 1, media 0,95, tercer cuartil 1,13 y máximo 1,21 años.

[0301] Estudios observacionales en pacientes con gangliosidosis GM2: En una serie de casos observacionales prospectivos en tres pacientes con gangliosidosis GM2 genéticamente probada (2 pacientes con enfermedad de Tay-Sachs, 1 paciente con enfermedad de Sandhoff), se evaluaron los efectos sintomáticos de la ADLL. Los pacientes se trataron con 0,1 g por kg de peso corporal al día, durante al menos cuatro semanas y los efectos clínicos se determinaron utilizando la Escala para la Evaluación y Gravedad de la Ataxia (SARA), la prueba de marcha de 8 metros (8MWT) y la Evaluación Cognitiva de Montreal (MoCA). Se obtuvo el consentimiento de todos los participantes.

[0303] Paciente 1:

[0305] Un paciente masculino de 28 años de edad con un diagnóstico genéticamente confirmado de enfermedad de Tay-Sachs presentó disartrofonía, temblor, ataxia de la postura y la marcha, paraparesia y atrofia muscular. Antes del tratamiento, el paciente requería el apoyo de un cuidador en un lado y una pared en el otro para caminar por un pasillo. El paciente estaba recibiendo valproato de sodio (500 mg/d), litio (450 mg/d) y risperidona (3 mg/d) (medicamentos para el trastorno bipolar diagnosticado clínicamente), y continuó haciéndolo durante el tratamiento con N-acetil-DL-Leucina. El paciente también recibía fisioterapia, ergoterapia y logoterapia dos veces por semana.

[0307] Paciente 2:

[0309] Una paciente de 32 años con un diagnóstico genéticamente confirmado de enfermedad de Tay-Sachs presentó ataxia de la postura y la marcha, deterioro de la motricidad fina, paraparesia de las extremidades inferiores y atrofia muscular. Estaba recibiendo fisioterapia, ergoterapia y logoterapia y continuó haciéndolo durante el tratamiento con N-acetil-DL-leucina.

[0311] Paciente 3:

[0312] Paciente masculino de 8 años que padece enfermedad de Sandhoff, con hipotrofia muscular, calambres epilépticos (tónico-clónicos, unos 10 segundos, autolimitantes), movimiento ocular desordenado y anartria. Sus actividades diarias eran muy limitadas, ya que no podía comer, lavarse o vestirse solo. Estaba recibiendo levetiracetam (1 g/d), lamotrigina (100 mg/d), omeprazol (20 mg/d) y miglustat (300 mg/d), además de fisioterapia, ergoterapia y logoterapia, y continuó haciéndolo durante el tratamiento con N-acetil-DL-Leucina.

[0314] Análisis estadísticos: estudios murinos

[0316] Las diferencias entre los grupos se identificaron mediante análisis de varianzas uno o bidireccional (ANOVA); las comparaciones de los grupos se realizaron después de los ANOVA bidireccional con la prueba de LSD de Fisher. Las pruebas estadísticas se realizaron usando el software GraphPad Prism 6 (La Jolla, CA).

[0318] Ejemplo 1

[0320] ADLL, ALL y ADL administradas durante la fase sintomática de la enfermedad mejoran la ataxia en ratonesNpc1-/-

[0321] Los ratonesNpc1-/-tienen una vida útil de 10-12 semanas, con aparición de síntomas (anomalías en la marcha, temblor y pérdida de peso) a partir de las 6-7 semanas de edad. Williams et al., Neurobiol. Dis. 67: 9 - 17 (2014). ADLL, ALL y ADL se administraron a ratonesNpc1-/-en la dieta (0,1 g/kg/día), una dosis similar a la usada en estudios clínicos observacionales. Bremova, T. et al, Neurology 85:1368-1375 (2015). Los ratonesNpc1-/-de 9 semanas de edad no tratados muestran ataxia estadísticamente significativa (p <0,0001) que se presenta como una marcha sigmoidea, en relación con los ratones de tipo natural, mientras que los ratonesNpc1-/-de 9 semanas de edad tratados con ADLL, ALL o ADL a partir de las 8 semanas de edad (1 semana de tratamiento) mostraron ataxia significativamente reducida según se determina midiendo el desplazamiento lateral desde una trayectoria recta en un sistema de análisis de marcha automatizado (Figura 1 y Figura 2)(p<0,0001, todos los tratamientos).

[0323] Ejemplo 2

[0325] El tratamiento presintomático con ADLL, ALL y ADL mejora la ataxia en ratones Npc1-/-

[0326] Los ratonesNpc1-/-se trataron pre-sintomáticamente desde el destete (3 semanas de edad) y se evaluaron a las 9 semanas de edad (6 semanas de tratamiento). ADLL, ALL y ADL redujeron significativamente la magnitud de la ataxia (figura 3 y figura 4) con una magnitud comparable a los efectos observados con una semana de tratamiento.

[0328] Ejemplo 3

[0330] El tratamiento presintomático con ADLL y ALL MEJORA LAS anomalías de la marcha, la función motora y extiende modestamente la supervivencia en ratones Npc1-/-

[0331] Los ratones Npc1'/_ desarrollan disfunción motora (medida por Rotarod) y anomalías en la colocación de la pata cuando son ambulatorios (medida con CatWalk). Los ratones Npc1'/' se trataron pre-sintomáticamente desde el destete (3 semanas de edad) y se evaluaron los ratones a las 8 semanas de edad. Los ratones Npc1'/' no tratados tuvieron un ciclo de trabajo de la pata trasera significativamente mayor (Figura 5) (porcentaje de patas traseras en contacto con la plataforma con respecto al tiempo transcurrido entre dos contactos consecutivos de la misma pata) y una media reducida del apoyo en la pata trasera (duración media de la pata en contacto con la plataforma) con respecto a los ratones de tipo natural. (Figura 6). El tratamiento presintomático con ADLL y ALL de ratones Npc1 /_ dio como resultado una reducción significativa (mejora funcional) del ciclo de trabajo de las patas traseras (ADLL: p = 0,0005, ALL: p <0,0001) (Figura 5) y de la media de apoyo en las patas traseras (indicativa de mejora funcional) (ADLL: p = 0,0179, ALL: p = 0,0014) en relación con los ratones Npc1'/' no tratados (Figura 6). El rendimiento de Rotarod se vio significativamente afectado en ratones Npc1'/' no tratados en relación con los miembros de la camada de tipo natural (p <0,0001). El tratamiento con ADLL (p = 0,0088) y ALL (p = 0,0070) dio como resultado una mejora significativa en el rendimiento de Rotarod por ratones Npc1'/' (Figura 7). El tratamiento con ADL no tuvo ningún beneficio significativo en la función motora del ratón Npc1'/_, según lo evaluado usando Catwalk (p <0,95) o Rotarod (p = 0,2218), lo que sugiere que el enantiómero D no tiene ningún beneficio en estos parámetros funcionales específicos. Con respecto a los ratones Npc1'/_ no tratados, la vida útil de los animales tratados desde el destete aumentó significativamente en 8 días (9,1 %) con tratamiento con ALL (p = 0,0334), 4 días con ADLL (p = 0,0305) (4,5 %) y no cambió con ADL (p = 0,6908) (Figura 8).

[0333] Ejemplo 4

[0335] Mejora de la neuropatología y el almacenamiento de lípidos en el cerebro de ratones Npc1-/- de manera estereoselectiva

[0337] A la luz de los beneficios de ADLL y ALL en la marcha, la función motora y la supervivencia cuando se inició el tratamiento en el período presintomático, se evaluó el impacto de los AL en el almacenamiento de lípidos en ratones Npc1-/-. Dado que la enfermedad de NPC1 se caracteriza por la acumulación de bases esfingoides (esfingosina y esfinganina), colesterol, esfingomielina, ácidos grasos libres y glicoesfingolípidos (GSL), se midió el impacto de los AL administrados a ratones Npc1-/- a partir de las 3 semanas de edad midiendo el almacenamiento de lípidos en el cerebro. A los 59 días de edad, los ratones Npc1-/- mostraron niveles de lípidos aumentados con respecto al tipo natural (Figuras 9, 10A, 10B, 11, 12A y 12b). Con el fin de evaluar el impacto diferencial de los análogos de AL en el SNC, el cerebelo y el prosencéfalo (denominado cerebro en las figuras) se midieron por separado. Los GSL totales en el prosencéfalo no se alteraron significativamente por ninguno de los tratamientos con AL (Figura 27A), mientras que ALL redujo selectivamente GM1a (20,1 %; p = 0,0018) y GM2 (19,6 %; p = 0,0222) (Figura 9). Curiosamente, aunque los niveles de esfingosina no se vieron afectados significativamente, la ADLL y la ADL redujeron los niveles de esfinganina en el 13,5 % (p = 0,0456) y el 18,2 % (p = 0,0111) respectivamente (Figura 10A y 10B). El análisis del cerebelo confirmó que no hubo diferencias significativas en los<g>S<l>totales en relación con los ratones Npc1-/- no tratados con cualquiera de los análogos de AL sometidos a prueba (Figura 27B). Sin embargo, el tratamiento con ADLL y ALL redujo significativamente los niveles de GSL específicos, incluido GA2 (ADLL: 21,3 %, p = 0,0102; ALL: 23,8 %, p = 0,0042), mientras que solo se observó una reducción significativa en GA1 con tratamiento con ALL (23,5 %, p = 0,0254) (Figura 11). Comparable con los resultados para el prosencéfalo, la esfingosina no cambió en el cerebelo, pero la esfinganina se redujo significativamente después del tratamiento con ADL (42,3 %, p = 0,0074) (Figura 12A y figura 12B).

[0339] Ejemplo 5

[0341] La ADLL mejora la neurodegeneración y la ALL reduce la neuroinflamación en el cerebelo

[0343] Los ratonesNpc1-/-presentan neurodegeneración progresiva, con pérdida de células de Purkinje cerebelosas que progresa de los lóbulos anterior a posterior, acompañada de activación microglial. El tratamiento con ADLL aumentó la supervivencia de las células de Purkinje a los 59 días de edad en relación con los miembros de la camadaNpc1-/-no tratados: El 133 % más de células de Purkinje estaban presentes en los lóbulos I y II (p = 0,0027), y un 402 % más de células de Purkinje en el lóbulo III(p= 0,0108) (Figura 13). Otros tratamientos no mejoraron significativamente la supervivencia de las células de Purkinje en ninguno de los lóbulos cerebelosos (Npc1-/-ALL Lóbulo I-IIp = 0,107, Lóbulo IIIp= 0,157, Lóbulo IV-Vp= 0,533;Npc1-/-ADL Lóbulo I-IIp= 0,60, Lóbulo IIIp= 0,11, Lóbulo IV-Vp= 0,766, en comparación conNpc1-/-UT) (Figura 13). Además, solo el tratamiento con ALL redujo significativamente (en el 20 %,p= 0,0177) la frecuencia de microglía activada positiva para CD68 (Figura 14), mientras que otros tratamientos no tuvieron un impacto significativo (p = 0,1353 paraNpc1-/-ADLL, p = 0,0553 para Npc1-/-ADL en comparación conNpc1-/-UT). ADL no mediaba ningún efecto neuroprotector a largo plazo.

[0345] Ejemplo 6

[0347] Los tratamientos con AL alivian el almacenamiento de lípidos en tejidos y células no neuronales

[0349] Los niveles de GSL hepática en los ratones Npc1-/- se redujeron significativamente en los ratones Npc1-/- tratados con ADLL (26,9 %, p = 0,03), ADL (26,9 %, p = 0,0253) y 45,6 % para ALL (p = 0,0003) (Figura 27C). La cuantificación de las principales especies de g Sl confirmó que los niveles de GM2Gc (el GSL más abundante en el hígado de ratón) disminuyeron significativamente con todos los análogos de AL sometidos a prueba (26,7 % de ADLL: p = 0,0002, 45 % de ALL: p <0,0001,29 % de ADL: p <0,0001), mientras que los niveles de GM3Gc solo se redujeron significativamente en ALL (54,8 %: p = 0,0314) en relación con los ratones Npc1-/- no tratados (Figura 15A). Todos los análogos sometidos a prueba causaron niveles significativos y comparables de reducción de esfingosina (el producto de descomposición catabólica de la ceramida) (29,5 % de ADLL, p = 0,0233; 33,2 % de ALL, p = 0,0148; 33,6 % de ADL p = 0,0103) y su precursor de novo esfinganina (32,5 % de ADLL p = 0,0365; 37,4 % de ALL p = 0,0189; 38,5 % de ADL p = 0,0163) (Figura 15B y Figura 15C). El colesterol libre total en el hígado Npc1-/- también disminuyó significativamente después del tratamiento con ADLL, ALL o ADL (18,2 % de ADLL p = 0,0346; 23,4 % de A<l>L p = 0,0091; 16,2 % de ADL p = 0,0210) (Figura 15D). Para explorar si otros tipos de células no neuronales fueron corregidos por AL, se evaluó el volumen lisosómico como sustituto para el almacenamiento en células de ovario de hámster chino (CHO) Npc1-/-. Tratamiento con ADLL 1 mM y ALL el volumen lisosómico relativo reducido después de 24 h (16,9 % de ADLL, p = 0,0137; 16 % de ALL, p = 0,0177); sin embargo, este efecto beneficioso se observó con los tres tratamientos con acetil leucina después de 72 h de tratamiento (24 % de ADLL p = 0,0026; 22,8 % de ALL p = 0,0036; 22,3 % de ADL p = 0,0042) (Figura 16). Después de 72 horas de tratamiento con AL, los niveles de esfingosina se redujeron significativamente en un 22 % con ADLL (p = 0,0009), 29 % con ALL (p <0,0001) y 14 % con ADL (p = 0,0149) (Figura 17). Los niveles totales de GSL se redujeron significativamente con todos los tratamientos en un grado comparable (26 % con ADLL p = 0,0007; 25 % con ALL p = 0,0010; y 22 % con ADL p = 0,0024) (figura 17). Asimismo, el contenido de colesterol se redujo significativamente (18 % con ADLL p = 0,0043; 13 % con ALL p = 0,0263; y 14 % con ADL p = 0,0212) (Figura 17).

[0351] Ejemplo 7

[0353] ADLL sinergiza con miglustat en ratones Npc1-/-

[0354] Los ratonesN pcl--se trataron con ADLL en combinación con el fármaco de referencia miglustat, dando como resultado una esperanza de vida más larga estadísticamente significativa que los animales en monoterapia(Npc1/_ miglustat frente aN p c tAmiglustat y ADLLp= 0,0016;N p c 1ADLL frente aNpc1- -miglustat y ADLLp= 0,0063; mediana de supervivencia; NpcI^UT: 87 días,N pct^ lADLL: 91 días;Npc1--miglustat: 117 días,N pct^miglustat y ADLL: 138 días) (Figura 18). Se sabe que el miglustat causa pérdida de peso a través de la supresión del apetito. Cuando se usó ADLL en combinación con miglustat, se evitó la pérdida de peso asociada con el tratamiento con miglustat (Figura 19), pero no la pérdida de peso resultante de la progresión de la enfermedad. La terapia de combinación aumentó significativamente el rendimiento de la prueba Rotarod (8 semanas:p= 0,0007; 10,12 semanasp <0,0001frente aN pct^no tratado), con terapia de combinación asociada con mayor beneficio en relación con ratones que recibieron miglustat (10 semanas: p = 0,0299; 12 semanas:p= 0,0232) o monoterapia con ADLL (10,12 semanas:p <0,0001)(Figura 20). El análisis de la marcha a las 10 semanas de edad demostró que los porcentajes del ciclo de trabajo posterior mejoraron significativamente con la terapia de combinación (p = 0,0028), mientras que la monoterapia con miglustat no mostró ningún beneficio (Figura 21). La media de apoyo mejoró significativamente en ratones tratados con terapia de combinación(p= 0,0250) o con miglustat en monoterapia (p = 0,0196) (Figura 22).

[0356] Ejemplo 8

[0358] Efectos neuroprotectores de ADLL en estudios clínicos observacionales en pacientes con NPC

[0360] Se descubrieron efectos beneficiosos inesperados de AL en ratonesNpc1-/-.Se investigó si los efectos neuroprotectores también ocurren en pacientes con NPC tratados con ADLL inscritos en un estudio clínico observacional. Las puntuaciones totales de gravedad clínica (puntuación máxima 50, con valores más altos que equivalen a niveles crecientes de discapacidad) se trazaron antes del inicio del tratamiento con Tanganil™, incluyendo los datos retrospectivos disponibles (Figura 23). Los 13 pacientes tuvieron pendientes positivas de progresión de la enfermedad antes del tratamiento con ADLL (1,8 unidades de gravedad/año fue la pendiente promedio). Después del inicio del tratamiento con ADLL, la pendiente promedio fue de -1,78 (3 pacientes no tenían pendiente, 10 tenían pendientes negativas), lo que equivale a una reducción significativa en la progresión de la enfermedad y la mejora en la mayoría de los pacientes (prueba de signos unilateralp= 0,0002). Los datos también se calcularon como puntuaciones de incremento de gravedad anual que miden la tasa de progresión de la enfermedad y se observó una media de -9,1 %/ año(p<0,001) en las puntuaciones de ASIS. Cuando los datos de los pacientes tratados se analizaron por subdominio neurológico, la mayoría de los pacientes mejoraron o se estabilizaron con el tratamiento, independientemente del subdominio neurológico medido (Tabla 1).

[0362] Tabla 1

[0365]

[0368] Ejemplo 9

[0370] ADLL muestra beneficio en ratones Sandhoff y pacientes con gangliosidosis GM2

[0372] El modelo de ratón Sandhoff (Hexb-/-) es pre-sintomático hasta las 6-8 semanas de edad. Posteriormente, estos ratones desarrollan temblor y su función motora comienza a declinar. En las últimas etapas de la enfermedad (12­ 15 semanas) están inactivos y no pueden completar las pruebas de función motora, como el cruce de barras. Se trataron animalesHexb-/-desde el destete con ADLL (0,1 mg/kg/día, la misma dosis utilizada para el tratamiento de ratonesNpc1--).Se observó una supervivencia prolongada, con un aumento medio de la esperanza de vida de 8 días (p = 0,0157) (Figura 24). El rendimiento de la prueba de cruce de barras también mejoró significativamente (12 semanas:p= 0,0343; 13 semanas: p = 0,0058), lo que es indicativo de un deterioro retardado de la función motora (Figura 25).

[0374] Estos hallazgos en ratones Sandhoff se extendieron a estudios clínicos observacionales en tres pacientes con un diagnóstico confirmado de gangliosidosis GM2 (2 Tay-Sachs y 1 enfermedad de Sandhoff) tratados con ADLL. Se encontró una mejora media de la Escala de Evaluación y Calificación de Ataxia (SARA) en el 20,3 %, la Prueba de Caminata 8-M (8MWT) en el 17,8 % y la Evaluación Cognitiva de Montreal (MoCA) en el 42 % como se muestra en la Figura 26. Todos los pacientes y cuidadores también informaron una mejora subjetiva y todavía están en tratamiento con la misma dosis.

[0375] Bibliografía

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Claims (15)

1. REIVINDICACIONES

i. Acetil-leucina y miglustat para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad de almacenamiento lisosómico en un sujeto que lo necesita, comprendiendo el método administrar una combinación de:

(i) una cantidad terapéuticamente eficaz de acetil-leucina; y

(ii) una cantidad terapéuticamente eficaz de miglustat,

al sujeto, en donde el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat.

2. Acetil-leucina y miglustat para su uso según la reivindicación 1, en donde acetil-leucina y miglustat se administran simultáneamente.

3. Acetil-leucina y miglustat para su uso según la reivindicación 2, en donde acetil-leucina y miglustat se administran como una única formulación farmacéutica o como dos formulaciones farmacéuticas independientes.

4. Acetil-leucina y miglustat para su uso según la reivindicación 1, en donde acetil-leucina y miglustat se administran secuencialmente.

5. Acetil-leucina y miglustat para su uso según la reivindicación 4, en donde la acetil-leucina se administra antes o después de miglustat.

6. Acetil-leucina y miglustat para su uso según la reivindicación 5, en donde acetil-leucina y miglustat se administran con un intervalo de aproximadamente 1 minuto a aproximadamente 6 horas, preferiblemente en donde acetil-leucina y miglustat se administran con un intervalo de aproximadamente 1 minuto a 3 horas, más preferiblemente con un intervalo de aproximadamente 1 minuto a 1 hora.

7. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde acetilleucina y miglustat se administran por vía oral.

8. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la acetil-leucina se administra una, dos o tres veces al día.

9. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde miglustat se administra una, dos o tres veces al día.

10. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde se administran de aproximadamente 3 g a aproximadamente 15 g de acetil-leucina al día.

11. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde se administran de aproximadamente 0,05 g a aproximadamente 2 g de miglustat al día.

12. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde acetilleucina y miglustat se administran como terapia de primera línea para tratar la enfermedad de almacenamiento lisosómico.

13. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde la enfermedad de almacenamiento lisosómico es enfermedad de Niemann-Pick de tipo C.

14. Acetil-leucina y miglustat para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde la acetil-leucina es N-acetil-DL-leucina o N-acetil-L-leucina.

15. Un kit que comprende acetil-leucina y miglustat para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad de almacenamiento lisosómico en un sujeto, en el que el sujeto no ha recibido tratamiento previo con miglustat, opcionalmente en donde dicho kit comprende además instrucciones para administrar la acetil-leucina y miglustat al sujeto.